CN1738896A - 用于治疗狼疮性肾炎的组合物和方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了新的分离的BFLP1698多核苷酸以及由该BFLP1698多核苷酸编码的多肽。同样提供的有与BFLP1698多肽免疫特异性地结合的抗体，或者所述BFLP1698多肽、多核苷酸或抗体的任何衍生物(包括融合衍生物)、变体、突变体或片段。本发明另外提供了将所述BFLP1698多肽、多核苷酸及抗体用于检测和治疗广泛的病理学状态以及其它用途的方法。
Description
发明领域
本发明一般地涉及核酸和多肽，并且更具体地涉及编码可用于检测和治疗狼疮性肾炎、以及可用于鉴定用以治疗该病的治疗剂的多肽的核酸及多肽。
发明背景
狼疮性肾炎为其中患者的免疫系统攻击他/她的自身器官的“经典”自身免疫病的实例。据估计45-75％的狼疮患者最终遭受某些或其它形式的肾脏损伤。狼疮在严重程度上从需要最小限度干预的轻度病例到重要器官如肺、肾、心和脑发生重大损伤且最后可以是致命的那些病例而变化极大。狼疮主要地为女性疾病，大概的女性与男性比率为9∶1。在北美洲，据估计它侵袭五百分之一的主要在20到40岁之间的女性。
对于狼疮尚无公知的疗法。治疗一般涉及控制症状，寄希望于使疾病减轻。最近，已在狼疮性肾炎的小鼠模型中证明抗生素雷帕霉素是治疗该病的有效疗法。
发明概述
本发明部分地是基于命名为BFLP1698的基因的发现，其表达在患狼疮性肾炎小鼠的肾组织中升高；可是，该基因的表达水平并不响应雷帕霉素的治疗而显著降低。这种表达特征表明，当施用抗生素雷帕霉素以改善狼疮性肾炎症状时，BFLP1698基因的产物与这种抗生素相互作用。在不存在雷帕霉素时，该基因产物可不受约束地导致疾病状态，且其作用可包括导致疾病状态所必需的基因激活。在存在雷帕霉素时，BFLP1698基因产物失活，而疾病状态减小。因此，BFLP1698蛋白可用作用于鉴定可用以治疗狼疮性肾炎症状的试剂如雷帕霉素的靶标。
在一个方面，本发明提供了分离的核酸分子，其包括编码BFLP1698基因产物的核苷酸序列的序列。在优选的实施方案中，所述核苷酸序列包括SEQ ID NO：1的序列，或其片段、同系物、类似物或衍生物。所述核酸可包括例如编码与包括SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽至少70％，例如80％、85％、90％、95％、98％、或者甚至99％、或者更高同一性的多肽的核酸序列。所述核酸可以是例如基因组DNA片段，或cDNA分子。
同样包括在本发明之中的，是含有本文中所述的一种或多种核酸的载体、以及含有本文中所述载体或核酸的细胞。
本发明也涉及转化有包含了上文所述的任何核酸分子的载体的宿主细胞。
在另一个方面，本发明包括药物组合物，其包括BFLP1698核酸以及药学上可接受的载体或稀释剂。
在另一方面，本发明包括基本上纯化的BFLP1698多肽，例如由BFLP1698核酸编码的任何BFLP1698多肽，及其片段、同系物、类似物及衍生物。本发明也包括药物组合物，其包括BFLP1698多肽以及药学上可接受的载体或稀释剂。
又在另一方面，本发明提供了与BFLP1698多肽特异性结合的抗体。所述抗体可以是，例如单克隆或多克隆抗体，及其片段、同系物、类似物及衍生物。本发明也包括药物组合物，包括BFLP1698抗体以及药学上可接受的载体或稀释剂。本发明也涉及分离的与由上文所述的任何核酸分子所编码的多肽上的表位结合的抗体。
本发明也包括试剂盒，其在一个或多个容器内包含一种或多种化合物，所述化合物为BFLP1698核酸、BFLP1698多肽和/或抗BFLP1698多肽的抗体。所述试剂盒优选提供有使用说明书。如果期望，试剂盒中的化合物连同药学上可接受的载体一起提供。
本发明还提供了用于生产BFLP多肽的方法，所述方法包括提供含BFLP1698核酸、例如包括BFLP1698核酸的载体的细胞，并在足以表达由该核酸编码的BFLP1698多肽的条件下培养所述细胞。然后从细胞中回收所表达的BFLP1698多肽。优选地，所述细胞产生很少或不产生内源BFLP1698多肽。所述细胞可以是例如原核细胞或真核细胞。
本发明也涉及通过使样品同与BFLP1698多肽或核酸特异性结合的化合物接触，并且如果存在的话，检测复合物的形成来鉴定样品中的所述多肽或核酸的方法。
本发明还提供了通过使BFLP1698多肽与化合物接触并测定BFLP1698多肽活性是否被修饰而鉴定调节BFLP1698多肽活性的化合物的方法。
本发明也涉及通过使BFLP1698多肽与化合物接触并测定该化合物是否修饰BFLP1698多肽活性、是否结合BFLP1698多肽、或者是否结合编码BFLP1698多肽的核酸分子鉴定的调节BFLP1698多肽活性的化合物。
在另一个方面，本发明提供了确定受试者中BFLP1698相关紊乱的存在或易感性的方法。该方法包括提供来自受试者的样品，并测量受试者样品中BFLP1698多肽的量。然后将受试者样品中BFLP1698多肽的量与对照样品中BFLP1698多肽的量进行比较。受试者蛋白样品中BFLP1698多肽的量相对于对照蛋白样品中BFLP1698多肽的量的改变表明受试者具有组织增生相关的状况。对照样品优选取自匹配的个体，即具有相似的年龄、性别或其它一般条件但并不怀疑其具有组织增生相关状况的个体。或者，对照样品可在不怀疑受试者具有组织增生相关紊乱的时候取自受试者。在有些实施方案中，利用BFLP1698抗体检测BFLP1698。
在另一方面，本发明提供了确定受试者中BFLP1698相关紊乱的存在或易感性的方法。该方法包括提供来自受试者的核酸样品，例如RNA或DNA或两者兼有，并测量受试者核酸样品中BFLP1698核酸的量。然后将受试者核酸样品中BFLP1698核酸的量与对照样品中BFLP1698核酸的量进行比较。样品中BFLP1698核酸的量相对于对照样品中BFLP1698量的改变表明受试者具有组织增生相关的紊乱。
又在另一方面，本发明提供了治疗或预防或延缓BFLP1698相关紊乱的方法。该方法包括向期望此类治疗或预防或延缓的受试者施用足以治疗、预防或延缓受试者组织增生相关紊乱的量的BFLP1698核酸、BFLP1698多肽或BFLP1698抗体。此类紊乱的实例包括类风湿关节炎和多发性硬化。
除非另行定义，所有本文所用的技术和科学术语具有同本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的一样的含义。尽管可利用类似于或等同于本文所述那些的方法和材料来实施或检验本发明，下文仍描述了合适的方法和材料。特此将本文提及的所有出版物、专利申请、专利及其它参考文献整体并入作为参考。在冲突的情况下，将以本说明书(包括定义)为准。另外，所述材料、方法和实施例仅仅是举例说明性的而并非旨在限制。
本发明的其它特征和优点将会由于如下的详细说明和权利要求而变得显而易见。
附图简述
图1为表示人BFLP1698基因的小鼠直向同源物(ortholog)在雷帕霉素治疗之前、期间和之后，在NZBx NZWF1肾中、以及在各种对照小鼠品系和条件下的基因表达相对水平的柱形图。
发明内容
本文所公开的BFLP1698核酸序列是根据狼疮性肾炎模型小鼠肾脏中的基因表达较之于非疾病小鼠肾脏中基因表达的变化而鉴定的。更特别地，该基因在年轻小鼠以及不表现出狼疮性肾炎症状的小鼠中以相对低的水平表达。基因表达在具有狼疮性肾炎的小鼠中升高，并且在已用雷帕霉素或抗-B7抗体成功治疗的小鼠中较低。当肾脏功能正常时表达水平回归正常的观察现象表明升高的水平与疾病的发展有关并有诊断价值。封闭这些基因的功能可能抑制或者阻止疾病的发展。表达水平也可用于评估和比较各种治疗性干预的有效性。
因此，所述BFLP1698核酸序列可用于检测受试者中狼疮性肾炎的存在。BFLP01698转录物或多肽水平相对于对照样品中水平的升高表明受试者中狼疮性肾炎的存在。BFLP1698核酸序列也可用于监控狼疮性肾炎治疗的有效性：BFLP1698基因表达相对于疾病的治疗中水平的下降证明该治疗是有效的。
BFLP1698序列可另外用于鉴定用以治疗或预防受试者中狼疮性肾炎的治疗剂。例如，可使BFLP1698多肽与测试剂进行接触。BFLP1698多肽与测试剂的结合揭示该测试剂调节BFLP1698的活性。可进一步对所述BFLP1698结合剂进行测试，以确定其是否在测试生物(如，NZBXNZW小鼠)中起促进或抑制狼疮症状的作用。狼疮症状的抑制揭示该试剂可用于治疗或预防狼疮性肾炎、或者与狼疮性肾炎相关的症状。本文中公开了另外的效用。
包括人BFLP1698核酸的3652个核苷酸的序列示于表1之中(SEQID NO：1)。该人序列被鉴定为鼠基因的人类直向同源物，其表达在具有狼疮性肾炎样症状的NZB X NZW小鼠中提高。
表1所示序列的核苷酸1-3486编码1162个氨基酸的多肽，其序列示于表2之中(SEQ ID NO：2)。
表1
ATGGCCCTTGTGCCAGGGAGAAGCAAGGAGGATGGGCTTTGGACTAGAAATAGCCCAGGCTCCTCCCAGCATCCAGAA
AGTCCCAGGCTGCCCAACCCTCTCTGGGACAGAGGAAAAATTGGCAAGGTTGAAGGTCACCAGCACATTCAGGATTTC
TCTCAAAAGTCCCATCTGCCGTCTATTGTGGTGGAATCCAGTGAGGTGAATGAAGAGAGTGGGGATCTCCATTTGCCC
CATGAGGAGCTGCTGCTGCTCACTGATGGTGAGGAAGAGGATGCTGAGGCCTTCTTCCAAGACCAAAGTGAAGAGCCA
GGGGCGGCACGTCCCCATCATCAGGCTCGGCAAGTGGAGCATTCGACGCAGCGCGGCCATCTGGAGATTCGGGAGCTG
AAGAAGAAGCTGTTCAAACGCCGGCGGGTGTTGAATCGGGAGCGGCGTCTGAGGCACCGGGTGGTCGGGGCTGTGATA
GACCAAGGGCTGATCACGCGGCACCACCTCAAGAAGCGGGCTGCTCAGGAGCTGTCCCAGGAAATCAAGGCTTTTCTG
ACTGGCGTAGACCCCATTCTGGGCCACCAACTCTCAGCCCGGGAACATGCTCGCTGTGGTCTTCTCCTGCTCCGTTCT
TTGCCACCTGCTCGGGCTGCTGTGCTTGACCACTTGAGAGGTGTCTTTGATGAGAGTGTCCGGGCCCACCTGGCTGCC
CTGGATGAAACCCCTGTGGCTGGTCCACCTCACCTCCGTCCACCTCCACCCTCTCATGTCCCTGCTGGTGGACCTGGT
CTAGAGGATGTGGTTCAGGAAGTGCAGCAGGTGCTGTCTGAGTTTATCCGGGCCAACCCAAAGGCCTGGGCACCTGTG
ATTAGTGCATGGTCCATTGACCTCATGGGGCAACTGAGCAGCACGTACTCAGGCCAGCACCAGCGTGTTCCCCACGCT
ACTGGCGCTCTTAATGAACTGCTACAGCTGTGGATGGGTTGTAGGGCCACGCGTACATTAATGGACATCTATGTGCAG
TGCCTCTCGGCTCTCATTGGTAGCTGCCCAGATGCGTGTGTGGATGCCTTGCTGGATACCTCTGTTCAGCATTCTCCA
CACTTTGACTGGGTTGTGGCACATATTGGCTCCTCTTTTCCTGGCACCATCATTTCCCGGGTTCTCTCCTGTGGCCTT
AAGGACTTTTGTGTCCATGGTGGGGCTGGAGGTGGAGCTGGCAGTAGTGGTGGAAGCTCTTCTCAGACCCCCTCTACA
GACCCCTTCCCTGGATCTCCTGCCATTCCTGCGGAGAAACGGGTGCCCAAGATTGCCTCAGTTGTAGGCATCCTAGGT
CACCTGGCCTCCCGCCACGGAGATAGCATCCGACGGGAGCTCCTGCGAATGTTCCATGATAGCCTGGCAGGGGGATCT
GGAGGCCGCAGTGGGGACCCCTCCCTTCAGGCCACGGTTCCGTTCCTACTGCAGCTGGCAGTCATGTCACCAGCTTTG
CTGGGCACTGTCTCTGGAGAGCTTGTGGATTGCCTCAAGCCCCCAGCTGTGCTGAGCCAGCTGCAGCAACACCTTCAA
GGATTCCCCCGAGAGGAGCTGGACAACATGTTGAACCTGGCTGTGCACCTGGTGAGCCAGGCCTCTGGGGCAGGTGCC
TAGCGCTTGCTGCAGTTCCTGGTGGACACAGCTATGCCTGCTTCGGTCATTACCACCCAGGGCCTGGCTGTGCCAGAC
ACCGTGCGTGAGGCTTGTGACCGGCTAATCCAGCTGCTGCTGCTGCACCTGCAAAAACTGGTTCATCACCGGGGAGGG
TCTCCTGGGGAAGGGGTGCTAGGCCCGCCCCCACCTCCCCGCTTGGTGCCCTTTTTAGATGCGCTCAAAAACCATGTT
GGAGAGCTGTGTGGAGAGACGTTACGATTGGAACGGAAGCGCTTCCTCTGGCAGCACCAGCTCTTGGGCCTGCTGTCT
GTCTATACCCGGCCTAGCTGTGGACCTGAGGCCTTGGGCCATCTGCTGAGCCGAGCCCGAAGCCCTGAAGAGTTGAGT
TTGGCCACCCAGTTATATGCAGGGCTAGTGGTCAGCCTCTCTGGCCTCCTGCCCCTGGCTTTCCGAAGCTGTCTGGCT
CGGGTGCATGCAGGGACATTACAGCCTCCCTTCACGGCCCGGTTCCTGCGCAACTTGGCACTGCTAGTAGGGTGGGAA
CAGCAGGGTGGCGAGGGCCCTGCAGCCCTAGGGGCGCACTTTGGGGAATCTGCCTCAGCCCATCTGTCTGACCTGGCT
CCTCTCCTGCTACATCCTGAGGAGGAAGTAGCTGAAGCTGCTGCCTCTCTCCTGGCCATTTGTCCCTTTCCTTCTGAA
GCCTTATCCCCCTCCCAGCTCCTGGGACTGGTAAGGGCTGGGGTGCACCGCTTCTTTGCCTCTCTGAGGCTGCATGGA
CCCCCAGGTGTGGCCTCAGCCTGTCAGCTTCTCACCCGCCTGTCTCAGACATCCCCAGCTGGGCTCAAGGCTGTCCTG
CAGCTGCTGGTTGAAGGAGCCTTACATCGAGGCAACACAGAACTGTTTGGTGGGCAAGTAGATGGGGACAATGAGACT
CTCTCAGTTGTTTCAGCTTCTTTGGCTTCTGCCTCCCTGTTGGACACTAACCGGAGGCACACTGCAGCTGTGCCAGGT
CCTGGAGGGATTTGGTCAGTTTTCCATGCTGGAGTCATCGGCCGTGGCTTAAAGCCACCCAAGTTTGTCCAGTCACGA
AATCAGCAGGAAGTGATCTATAACACCCAGAGCCTCCTCAGCCTCCTGGTTCACTGCTGCAGTGCCCCAGGGGGCACT
GAATGTGGGGAATGCTGGGGGGCACCCATCTTGAGTCCAGAGGCAGCCAAAGCAGTGGCAGTGACCTTGGTGGAGAGT
GTGTGTCCCGATGCAGCTGGTGCAGAGCTGGCCTGGCCCCCCGAGGAACACGCCCGGGCCACCGTGGAGCGGGATCTC
CGCATTGGCCGGCGCTTCCGCGAACAGCCCCTGCTCTTTGAGCTGTTAAAGCTGGTAGCAGCTGCACCCCCAGCCCTG
TGCTACTGTTCCGTGCTGCTTCGGGGGCTGCTGGCCGCCCTCTTGGGCCATTGGGAAGCCTCTCGCCACCCTGACACG
ACCCACTCCCCCTGGCACCTGGAGGCATCCTGCACCTTAGTGGCTGTCATGGCTGAGGGAAGCCTCCTGCCTCCGGCC
CTGGGTAATATGCATGAAGTATTTAGCCAACTGGCACCTTTCGAGGTGCGTCTGCTGCTGCTCAGTGTCTGGGGTTTT
CTCCGGGAGCATGGGCCCTTGCCTCAGAAGTTCATCTTCCAATCAGAGCGGGGTCGCTTCATTCGGGACTTCTCCAGG
GAGGGTGGAGGTGAGGGTGGACCCCATCTGGCTGTGCTGCACAGTGTCCTCCACCGCAACATCGACCGCCTAGGTCTT
TTCTCTGGCCGTTTCCAGGCACCTTCACCGTCCACTCTCCTTCGACAGGGGACGTAGCCTTTTCTTGCTCTGGAAGCC
CAGGGAGGTTGAGCAGTGAGAGAGGGAAGGGACTAACGTGCTCCGGAAGGGTGGAGGTTTCTCTTCTAAGTCCTTGGT
CTAAAGAGCGCTGTCACTTTTTTCTCTCCCACTTTTTTTTTTCTAAATAAAATTTGCCAACTTG(SEQ ID NO：1)
表2
MALVPGRSKEDGLWTRNSPGSSQHPESPRLPNPLWDRGKIGKVEGHQHIQDFSQKSHLPSIVVESSEVNEESGDLHLP
HEELLLLTDGEEEDAEAFFQDQSEEPGAARPHHQARQVEHSTQRGHLEIRELKKKLFKRRRVLNRERRLRHRVVGAVI
DQGLITRHHLKKRAAQELSQEIKAFLTGVDPILGHQLSAREHARCGLLLLRSLPPARAAVLDHLRGVFDESVRAHLAA
LDETPVAGPPHLRPPPPSHVPAGGPGLEDVVQEVQQVLSEFIRANPKAWAPVISAWSIDLMGQLSSTYSGQHQRVPHA
TGALNELLQLWMGCRATRTLMDIYVQCLSALIGSCPDACVDALLDTSVQHSPHFDWVVAHIGSSFPGTIISRVLSCGL
KDFCVHGGAGGGAGSSGGSSSQTPSTDPFPGSPAIPAEKRVPKIASVVGILGHLASRHGDSIRRELLRMFHDSLAGGS
GGRSGDPSLQATVPFLLQLAVMSPALLGTVSGELVDCLKPPAVLSQLQQHLQGFPREELDNMLNLAVHLVSQASGAGA
YRLLQFLVDTAMPASVITTQGLAVPDTVREACDRLIQLLLLHLQKLVHHRGGSPGEGVLGPPPPPRLVPFLDALKNHV
GELCGETLRLERKRFLWQHQLLGLLSVYTRPSCGPEALGHLLSRARSPEELSLATQLYAGLVVSLSGLLPLAFRSCLA
RVHAGTLQPPFTARFLRNLALLVGWEQQGGEGPAALGAHFGESASAHLSDLAPLLLHPEEEVAEAAASLLAICPFPSE
ALSPSQLLGLVRAGVHRFFASLRLHGPPGVASACQLLTRLSQTSPAGLKAVLQLLVEGALHRGNTELFGGQVDGDNET
LSVVSASLASASLLDTNRRHTAAVPGPGGIWSVFHAGVIGRGLKPPKFVQSRNQQEVIYNTQSLLSLLVHCCSAPGGT
ECGECWGAPILSPEAAKAVAVTLVESVCPDAAGAELAWPPEEHARATVERDLRIGRRFREQPLLFELLKLVAAAPPAL
CYCSVLLRGLLAALLGHWEASRHPDTTHSPWHLEASCTLVAVMAEGSLLPPALGNMHEVFSQLAPFEVRLLLLSVWGF
LREHGPLPQKFIFQSERGRFIRDFSREGGGEGGPHLAVLHSVLHRNIDRLGLFSGRFQAPSPSTLLRQGT(SEQ ID
NO：2)
本发明的BFLP1698样核酸和多肽(包括表1中所示的那些)在文中被称为“BFLP1698”核酸和多肽。
根据本发明，BFLP1698核酸以及所编码的多肽可用于多种应用和环境中。
BFLP1698表现出与其它蛋白的同源性，如表3所描述的BLAST结果中所示的。KIAA0169、IMAGE：3461492和3598686以及cDNA：FLJ21639都是由见于基因组DNA的部分读框(已表达序列标志(ESTs))编码的蛋白。因为BFLP1698与这些蛋白具有同源性，所以它也由完整的可读框或者较大可读框的一部分(EST)编码。
| 表3：KIAA1698的Blast结果 | |||||
| 基因索引/标识符 | 蛋白/生物 | 长度(aa) | 同一性(％) | 阳性(％) | 期望值 |
| gi|20480454|ref|XP_167747.1|(XM 167747) | 类似于KIAA1698蛋白[智人(Homo sapiens)] | 1019 | 823/993(82％) | 824/993(82％) | 0.0 |
| gi|12697941|dbj|BAB21789.1|(AB051485) | KIAA1698蛋白[智人] | 908 | 770/902(85％) | 770/902(858) | 0.0 |
| gi|20380408|gb|AAH28025.1|(BC028025) | 类似于KIAA1698蛋白[智人] | 833 | 705/829(85％) | 705/829(85％) | 0.0 |
| gi|20849521|ref|XP_144111.1|(XM_144111) | 类似于KIAA1698蛋白[智人][小鼠(Mus musculus)] | 963 | 169/229(73％) | 175/229(75％) | 3e-87 |
| gi|21296297|gb|EAA08442.1|(AAAB01008879) | agCP2919[冈比亚按蚊(Anopheles gambiae)str.PEST] | 900 | 80/292(27％) | 121/292(41％) | 1e-16 |
表4显示了BFLP1698(SEQ ID NO：2)针对上文表3中所述蛋白的ClustalW比对。
表4.SEQ ID NO：2的ClustalW分析
1)SEQ ID NO：2
2)gi|20480454|ref|XP_167747.1|(XM_167747)(SEQ ID NO：17)
3)gi|12697941|dbj|BAB21789.1|(AB051485)(SEQ ID NO：18)
4)gi|20380408|gb|AAH28025.1|(BC028025)(SEQ ID NO：19)
5)gi|20849521|ref|XP_144111.1|(XM_144111)(SEQ ID NO：20)
6)gi|21296297|gb|EAA08442.1|(AAAB01008879)(SEQ ID NO：21)
10 20 30 40 50 60
....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|
SEQ ID NO：2 MALVPGRSKEDGLWTRNSPGSSQHPESPRLPNPLWDRGKIGKVEGHQHIQDFSQKSHLPS 60
gi|20480454|ref ------------------------------------------------------------ 1
gi|12697941|dbj ------------------------------------------------------------ 1
gi|20380408|gb| ------------------------------------------------------------ 1
gi|20849521|ref ----------MILMITLFTTATFLVLGVSVWVLIKEILTVHVPPPIPQRVKFHMLHYFFQ 50
gi|21296297|gb| ------------------------------------------------------------ 1
70 80 90 100 110 120
....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|
SEQ ID NO：2 IVVESSEVNEESGDLHLPHEELLLLTDGEEEDAEAFFQDQSEEPGAARPHHQARQVEHST 120
gi|20480454|ref ------------------------------------MSALCDPPGAPGPPGPAPATHG-- 22
gi|12697941|dbj ------------------------------------------------------------ 1
gi|20380408|gb| ------------------------------------------------------------ 1
gi|20849521|ref LTIALGNVLEKMKICPMPRFFCFIQDLLVSKNNFGVLVKNMHFGTIPVRLFQPKATSSGP 110
gi|21296297|gb| ------------------------------------------------------------ 1
130 140 150 160 170 180
....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|SEQ ID NO：2 QRGHLEIRELKKKLFKRRRVLNRERRLRHRVVGAVIDQGLITRHHLKKRAAQELSQEIKA 180
gi|20480454|ref ---------------------PAP--LS----------------------AQELSQEIKA 37
gi|12697941|dbj ------------------------------------------------------------ 1
gi|20380408|gb| ------------------------------------------------------------ 1
gi|20849521|ref RKGIIFYHGGGGVFGSLDSYHNTCSYLAHET------------------DSVVMAVGYRK 152
gi|21296297|gb| ------------------------------------------------------------ 1
190 200 210 220 230 240
....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|
SEQ ID NO：2 FLTGVDPILGHQLSAREHARCGLLLLRSLPPARAAVLDNLRGVFDESVRAHLAALDETPV 240
gi|20480454|ref FLTGVDPILGHQLSAREHARCGLLLLRSLPPARAAVLDRLRGVFDESVRAHLAALDETPV 97
gi|12697941|dbj ------------------------------------------------------------ 1
gi|20380408|gb| ------------------------------------------------------------ 1
gi|20849521|ref LPDHHHPTAYHDCLNATVHFLKELKTYGVDPARVVVSGESIGAGAAAIIAQVVLARRDLP 212
gi|21296297|gb| ------------------------------------------------------------ 1
SEQ ID NO：2的残基1-170在本文中称为SEQ ID NO：16。包括氨基酸1-27的SEQ ID NO：17片段在本文中称为SEQ ID NO：22。
BFLP1698核酸
本发明的核酸包括编码BFLP1698多肽或蛋白的那些核酸。如本文所用，术语多肽和蛋白是可互换的。
在有些实施方案中，BFLP1698核酸编码成熟BFLP1698多肽。如本文所用，本文中所述“成熟”形式的多肽或蛋白涉及天然存在的多肽产物或前体形式或蛋白原。天然存在的多肽、前体或蛋白原，作为非限制性的实例，包括由相应基因编码的全长基因产物。或者，其可定义为由本文中所述的可读框编码的多肽、前体或蛋白原。产物的“成熟”形式，再次地作为非限制性的实例，由于一种或多种天然发生的加工步骤而产生，所述加工步骤可能在产生该基因产物的细胞内发生。导致产生“成熟”形式的多肽或蛋白的此类加工步骤的实例包括由可读框起始密码子编码的N-末端甲硫氨酸残基的切割，或者信号肽或前导序列的蛋白酶剪切。从而由具有残基1到N、其中残基1为N-末端甲硫氨酸的的前体多肽或蛋白产生的成熟形式，在去除N-末端甲硫氨酸之后将保留残基2至N。或者，由具有残基1到N、其中自残基1到残基M的N-末端信号序列被切割的前体多肽或蛋白产生的成熟形式，将保留自残基M+1到残基N的残基。此外如本文所用，“成熟”形式的多肽或蛋白可由除蛋白酶剪切事件之外的翻译后修饰步骤产生。此类额外加工，作为非限制性的实例，包括糖基化、豆蔻酰化或磷酸化。一般而言，成熟多肽或蛋白可仅仅由进行这些加工过程中的一个而产生，或者由它们任何的组合而产生。
本发明包括SEQ ID NO：1或其片段的突变或变体核酸，其任何碱基都可能由SEQ ID NO：1中所示的相应碱基发生变化，同时仍然编码维持了至少一种其BFLP1698样活性及生理学功能(即调节血管发生、神经元发育)的蛋白。本发明还包括SEQ ID NO：1核酸序列的互补物，包括其片段、衍生物、类似物及同系物。本发明另外还包括在其结构上包括了化学修饰的核酸或核酸片段或它们的互补物。
本发明的一个方面涉及分离的编码BFLP1698蛋白或其生物学活性部分的核酸分子。同样包括在内的有足以用作为杂交探针以鉴定编码BFLP1698的核酸(如BFLP1698 mRNA)的核酸片段，以及用作为聚合酶链反应(PCR)引物以用于扩增或突变BFLP1698核酸分子的片段。如本文所用，术语“核酸分子”旨在包括DNA分子(如cDNA或基因组DNA)、RNA分子(如mRNA)、利用核苷酸类似物产生的DNA或RNA类似物、及其衍生物、片段和同系物。所述核酸分子可以是单链或双链的，但优选为双链DNA。
“探针”是指具有可变长度的核酸序列，优选在至少大约10个核苷酸(nt)、100nt或者多至大约如6,000nt之间，视用途而定。探针用于相同、相似或互补核酸序列的检测中。较长长度的探针通常由天然或重组来源获得，是高度特异性的，且杂交比寡聚体慢得多。探针可以是单链或双链的，并设计为在PCR、基于膜的杂交技术或ELISA-类技术中具有特异性。
“分离的”核酸分子是从该核酸的天然来源中存在的其它核酸分子中分离出来的核酸分子。分离的核酸分子的实例包括但不限于：包含在载体之中的重组DNA分子、维持在异种宿主细胞之中的重组DNA分子、部分或基本上纯化的核酸分子、以及合成的DNA或RNA分子。优选地，“分离的”核酸不含在得到该核酸的生物的基因组DNA中天然位于该核酸侧面的序列(即位于该核酸5′和3′端的序列)。例如，在各种实施方案中，分离的BFLP1698核酸分子可含有小于大约50kb、25kb、5kb、4kb、3kb、2kb、1kb、0.5kb或0.1kb的核苷酸序列，其在得到该核酸的细胞的基因组DNA中天然位于该核酸分子的侧面。而且，“分离的”核酸分子如cDNA分子，当由重组技术生产时可基本上不含其它细胞材料或培养基，或者当化学合成时可基本上不含化学前体或其它化学制剂。
本发明的核酸分子，例如具有SEQ ID NO：1的核苷酸序列的核酸分子，或其互补物可利用标准分子生物学技术和本文提供的序列信息分离。使用所有或部分SEQ ID NO：1的核酸序列作为杂交探针，BFLP1698核酸序列可利用标准杂交和克隆技术分离(例如，如在Sambrook等，编辑，MOLECULAR CLONING：A LABORATORY MANUAL2nd Ed.，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY，1989以及Ausubel等，编辑，CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULARBIOLOGY，John Wiley & Sons，New York，NY，1993中所描述的那样)。
本发明的核酸可利用cDNA、mRNA或者备选地基因组DNA作为模板以及合适的寡核苷酸引物根据标准PCR扩增技术来扩增。可将如此扩增的核酸克隆到合适的载体中，并通过DNA序列分析予以表征。此外，可通过标准合成技术如利用自动化DNA合成仪制备与BFLP1698核苷酸序列对应的寡核苷酸。
如本文所用，术语“寡核苷酸”是指一串相连的核苷酸残基，该寡核苷酸具有足够数目的核苷酸碱基以用于PCR反应。短寡核苷酸序列可根据或由基因组或cDNA序列设计，并用于扩增、确认或揭示特定细胞或组织中存在相同、相似或互补的DNA或RNA。寡核苷酸包括具有长度约为10nt、50nt或100nt、优选长度约为15nt到30nt的部分核酸序列。在一个实施方案中，包括长度小于100nt的核酸分子的寡核苷酸还将包括SEQ ID NO：1的至少6个邻接的核苷酸或其互补物。寡核苷酸可以化学合成并且可用作为探针。
在另一个实施方案中，本发明分离的核酸分子包括为SEQ IDNO：1所示核苷酸序列的互补物的核酸分子，或该核苷酸序列的一部分。与SEQ ID NO：1所示核苷酸序列互补的核酸分子为与SEQ IDNO：1所示核苷酸序列足够互补的核酸分子，从而其能够以很少或没有错配地与SEQ ID NO：1所示核苷酸序列以氢键键合，由此形成稳定的双链体。
如本文所用，术语“互补”是指核酸分子核苷酸单位之间的沃森-克里克(Watson-Crick)或Hoogsteen碱基配对，并且术语“结合”意味着两多肽或化合物或相关多肽或化合物或其组合之间的物理或化学相互作用。结合包括离子、非离子、范德瓦耳斯、疏水相互作用等。物理相互作用可以是直接或者间接的。间接相互作用可能通过或者归因于另一多肽或化合物的作用。直接结合是指不通过或者归因于另一多肽或化合物的作用而发生的相互作用，相反其无需其它实质的化学中间物。
而且，本发明的核酸分子可仅仅包括SEQ ID NO：1的核酸序列的一部分，例如可用作为探针或引物的片段、或者编码BFLP1698生物学活性部分的片段。本文提供的片段定义为具有至少6个(邻接的)核酸或者至少4个(邻接的)氨基酸的序列，该长度分别地，在核酸的情况下足以允许特异性杂交，或者在氨基酸的情况下足以允许特异性识别表位，并且至多为小于全长序列的某一部分。片段可来源于所选核酸或氨基酸序列的任何邻接的部分。片段可包括多至4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸。衍生物为由天然化合物直接地或者通过修饰或部分取代形成的核酸序列或氨基酸序列。类似物为具有类似于但不同于天然化合物的结构、但就某些成分或侧链而言有别于天然化合物的结构的核酸序列或氨基酸序列。类似物可以是合成的或者来自于不同的进化起源，并且与野生型相比可能具有类似或相反的代谢活性。
衍生物和类似物可以是全长或不同于全长的，如果所述衍生物或类似物含有修饰核酸或氨基酸的话，如下文所述。本发明核酸或蛋白的衍生物或类似物包括但不限于：包括与本发明的核酸或蛋白基本上同源的区域的分子，其在各种实施方案中相对于相同大小的核酸或氨基酸序列或者当与比对序列进行比较时(其中所述比对由本领域公知的计算机同源程序进行)，具有至少大约70％、80％、85％、90％、95％、98％或者甚至99％的同一性(优选为80-99％的同一性)，或其编码核酸能够在严格、中度严格或低度严格条件下与编码前述蛋白的序列的互补物杂交。例示性的程序为采用缺省设置的Gap程序(Wisconsin序列分析包，Version 8 for UNIX，Genetics Computer Group，UniversityResearch Park，Madison，WI)，其使用Smith和Waterman的算法。
“同源核酸序列”或“同源氨基酸序列”或其变异是指如上文所讨论的以核苷酸水平或氨基酸水平上的同源性为特征的序列。同源核苷酸序列编码为BFLP1698多肽同工型编码的那些序列。作为例如RNA可变剪接的结果，同工型可在同一生物的不同组织中表达。或者，同工型可由不同的基因编码。在本发明中，同源核苷酸序列包括编码除人以外物种的BFLP1698多肽的核苷酸序列，所述物种包括但不限于哺乳动物，并因而可包括例如小鼠、大鼠、兔、狗、猫、母牛、马及其它生物。同源核苷酸序列也包括但不限于天然存在的本文所列核苷酸序列的等位基因变异和突变。然而，同源核苷酸序列并不包括编码人BFLP1698蛋白的核苷酸序列。同源核酸序列包括编码SEQ IDNO：2中的保守氨基酸取代(见下文)以及具有BFLP1698活性的多肽的那些核酸序列。BFLP1698蛋白的生物学活性在下文描述。同源氨基酸序列并不编码人BFLP1698多肽的氨基酸序列。
由人BFLP1698基因的克隆所确定的核苷酸序列使得能够产生设计用来鉴定和/或克隆其它细胞类型(如来自其它组织)中的BFLP1698同系物、以及来自其它哺乳动物的BFLP1698同系物的探针和引物。所述探针/引物一般包含基本上纯的寡核苷酸。所述寡核苷酸一般包括在严格条件下与至少大约12、25、50、100、150、200、250、300、350或400或者更长的连续的SEQ ID NO：1有义链核苷酸序列或SEQ IDNO：1反义链核苷酸序列杂交的核苷酸序列区域或天然存在的SEQ IDNO：1突变体的核苷酸序列区域。
基于人BFLP1698核苷酸序列的探针可用于检测编码相同或同源蛋白的转录物或基因组序列。在各种实施方案中，所述探针进一步包括与之附着的标记基团，例如标记基团可以是放射性同位素、荧光化合物、酶或酶辅因子。此类探针可用作为诊断检验试剂盒的一部分，用以鉴定错误表达BFLP1698蛋白的细胞或组织，例如通过测量来自受试者的细胞样品中的编码BFLP1698的核酸的水平，例如检测BFLP1698 mRNA水平或确定基因组BFLP1698基因是否已被突变或缺失。
“具有BFLP1698生物学活性部分的多肽”是指如在特定的生物学测定中所测量的那样，以或不以剂量依赖性地表现出与本发明的多肽(包括成熟形式)的活性相似、但并非必然完全相同的活性的多肽。编码“BFLP1698生物学活性部分”的核酸片段可通过如下方法制备，即分离SEQ ID NO：1中编码具有BFLP1698生物学活性(BFLP1698蛋白的生物学活性如下文所述)的多肽的部分、表达编码的部分BFLP1698蛋白(如通过体外重组表达)并评估编码的部分BFLP1698的活性。
本发明也提供了多态形式的BFLP1698核酸序列，以及检测BFLP1698序列中的多态序列的方法。所述多态形式包括对应于与BFLP1698相关的外显子和/或内含子的基因组序列。
携带本发明的多态等位基因的个体可在DNA、RNA或蛋白水平利用本领域熟知的多种技术检测。现有的方法通常使用预先表征过的多态性。也就是说，存在于某位点上的多态形式的基因型分布和性质早已确定。这种信息的可获得性使得能够设计探针组以特异性地鉴定已知的多态形式。
用于诊断的基因组DNA可由躯体的任何有核细胞获得，例如存在于外周血、尿、唾液、口腔样品、外科手术样品以及尸体解剖样品的那些有核细胞。所述DNA可直接使用，或者可在突变分析前，通过使用PCR或其它体外扩增法如连接酶链反应(LCR)、链置换扩增(SDA)、自动维持序列扩增(3SR)在体外酶促扩增。
特定DNA序列中多态性的检测可通过多种方法完成，包括但不限于：基于等位基因特异性的限制性内切核酸酶切割的限制性片段长度多态性检测、与等位基因特异性的寡核苷酸探针(包括固定的寡核苷酸或寡核苷酸阵列)杂交、等位基因特异性PCR、错配修复检测(MRD)、MutS蛋白的结合、变性梯度凝胶电泳(DGGE)、单链构象多态性检测、错配碱基对上的RNA酶切割、异源双链体DNA的化学或酶促切割、基于等位基因特异性引物延伸的方法、遗传位分析(geneticbit analysis)(GBA)、寡核苷酸连接测定(OLA)、等位基因特异性连接链反应(LCR)、缺口-LCR、使用本领域熟知的标准操作的放射性和/或荧光DNA测序以及肽核酸(PNA)测定。
BFLP1698变体
本发明还包含由于遗传密码简并性而不同于SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的核酸分子。因而这些核酸编码与SEQ ID NO：1所示核苷酸序列编码的蛋白相同的BFLP1698蛋白，如SEQ ID NO：2的多肽。在另一个实施方案中，本发明分离的核酸分子具有编码具有SEQID NO：2所示氨基酸序列的蛋白的核苷酸序列。
除了SEQ ID NO：1所示的人BFLP1698核苷酸序列之外，本领域技术人员将会理解，群体(如人群)内可能存在着导致BFLP1698氨基酸序列变化的DNA序列多态性。BFLP1698基因中的此种遗传多态性可能由于天然等位基因变异而在群体内的个体中存在。如本文所用，术语“基因”和“重组基因”是指包括编码BFLP1698蛋白、优选为哺乳动物BFLP1698蛋白的可读框的核酸分子。此类天然等位基因变异一般地可导致BFLP1698基因核苷酸序列中1-5％的变异。任何和所有此类核苷酸变异以及所造成的因天然等位基因变异产生的、且不改变的BFLP1698功能活性的BFLP1698氨基酸多态性都落入本发明的范围之内。
而且，编码来自其它物种的BFLP1698蛋白的核酸分子，并且从而具有不同于SEQ ID NO：1的人序列的核苷酸序列的核酸分子都落入本发明的范围之内。与本发明的BFLP1698 cDNA的天然等位基因变体和同系物对应的核酸分子可基于其与本文所公开的人BFLP1698核酸的同源性，利用人cDNA或其部分作为杂交探针，根据标准的杂交技术在严格杂交条件下进行分离。例如，可溶的人BFLP1698 cDNA可基于其与人膜结合的BFLP1698的同源性进行分离。同样地，膜结合的人BFLP1698 cDNA可基于其与可溶的人BFLP1698的同源性进行分离。
因此，在另一个实施方案中，本发明分离的核酸分子长度至少为6个核苷酸，且在严格条件下与包括SEQ ID NO：1核苷酸序列的核酸分子杂交。在另一个实施方案中，所述核酸长度至少为10、25、50、100、250、500或750个核苷酸。在另一个实施方案中，本发明分离的核酸分子与编码区杂交。如本文所用，术语“在严格条件下杂交”旨在描述用于杂交和洗涤的条件，在此条件下，彼此至少60％同源的核苷酸序列一般保持相互杂交。
同系物(即编码来源于人以外的物种的BFLP1698蛋白的核酸)或其它相关序列(如平行进化同源物(paralog))可利用核酸杂交和克隆领域所熟知的方法通过与作为探针的全部或部分特定人序列的低度、中度或高度严格杂交获得。
从而，本发明也包括能够与本文所述的多核苷酸在降低的严格条件下、更优选在严格条件下、并且更优选在高度严格条件下杂交的多核苷酸。严格条件的实例示于下表：高度严格条件为至少同例如条件A-F一样严格的那些条件；严格条件至少同例如条件G-L一样严格；而降低的严格条件至少同例如条件M-R一样严格。
表4.严格条件
| 严格条件 | 多核苷酸杂交体 | 杂交体长度(bp)1 | 杂交温度和缓冲液H | 洗涤温度和缓冲液H |
| A | DNA:DNA | ≥50 | 65℃；1xSSC-或-42℃；1xSSC，50％甲酰胺 | 65℃；0.3xSSC |
| B | DNA:DNA | ＜50 | TB *；1xSSC | TB *；1xSSC67℃；0.3xSSC |
| C | DNA:RNA | ≥50 | 67℃；1xSSC-或-45℃；1xSSC，50％甲酰胺 | |
| D | DNA:RNA | ＜50 | TD *；1xSSC | TD *；1xSSC70℃；0.3xSSC |
| E | RNA:RNA | ≥50 | 70℃；1xSSC-或-50℃；1xSSC，50％甲酰胺 | |
| F | RNA:RNA | ＜50 | TF *；1xSSC | Tf *；1xSSC65℃；1xSSC |
| G | DNA:DNA | ≥50 | 65℃；4xSSC-或-42℃；4xSSC，50％甲酰胺 | |
| H | DNA:DNA | ＜50 | TH *；4xSSC | TH *；4xSSC67℃；1xSSC |
| I | DNA:RNA | ≥50 | 67℃；4xSSC-或-45℃；4xSSC，50％甲酰胺 | |
| J | DNA:RNA | ＜50 | TJ *；4xSSC | TJ *；4xSSC67℃；1xSSC |
| K | RNA:RNA | ≥50 | 70℃；4xSSC-或-50℃；4xSSC，50％甲酰胺 | |
| L | RNA:RNA | ＜50 | TL *；2xSSC | TL *；2xSSC50℃；2xSSC |
| M | DNA:DNA | ＞50 | 50℃；4xSSC-或-40℃；6xSSC，50％甲酰胺 |
| 严格条件 | 多核苷酸杂交体 | 杂交体长度(bp)1 | 杂交温度和缓冲液H | 洗涤温度和缓冲液H |
| N | DNA:DNA | ＜50 | TN *；6xSSC | TN *；6xSSC55℃；2xSSC |
| O | DNA:RNA | ＞50 | 55℃；4xSSC-或-42℃；6xSSC，50％甲酰胺 | |
| P | DNA:RNA | ＜50 | TP *；6xSSC | TP *；6xSSC60℃；2xSSC |
| Q | RNA:RNA | ＞50 | 60℃；4xSSC-或-45℃；6xSSC，50％甲酰胺 | |
| R | RNA:RNA | ＜50 | TR *；4xSSC | TR *；4xSSC |
1：杂交体长度为预期的杂交多核苷酸杂交区域的长度。当将多核苷酸与未知序列的靶多核苷酸进行杂交时，杂交体长度被假定为杂交多核苷酸的长度。当已知序列的多核苷酸进行杂交时，杂交体长度可通过比对所述多核苷酸的序列并鉴定具有最佳序列互补性的区域(或多个区域)来确定。
H：SSPE(1xSSPE为0.15M NaCl、10mM NaH2PO4和1.25mMEDTA，pH7.4)可用以替代杂交和缓冲液中的SSC(1xSSC为0.15MNaCl和15mM柠檬酸钠)；洗涤于杂交完成之后进行15分钟。
TB *-TR *：预期长度小于50个碱基对的杂交体的杂交温度应当比该杂交体的解链温度(Tm)低5-10℃，其中Tm根据如下方程式确定。对于长度小于18个碱基对的杂交体，Tm(℃)＝2(A+T碱基的数目)+4(G+C碱基的数目)。对于长度在18和49个碱基对之间的杂交体，Tm(℃)＝81.5+16.6(log10Na+)+0.41(％G+C)-(600/N)，其中N为杂交体中的碱基数目，而Na+为杂交缓冲液中钠离子的浓度(对于1xSSC，Na+＝0.165M)。
优选地，每一个这样的杂交多核苷酸具有与之杂交的本发明多核苷酸长度的至少25％(更优选至少50％，并且最优选至少75％)的长度，并且同与之杂交的本发明多核苷酸具有至少60％的序列同一性(更优选至少75％的同一性；最优选至少90％或95％的同一性)，其中序列同一性是通过在比对时对杂交多核苷酸进行比较，从而使重叠和同一性最大化、同时又使序列缺口最小化来确定的。
严格杂交条件的非限制性实例为在包括6X SSC、50mM Tris-HCl(pH7.5)、1mM EDTA、0.02％PVP、0.02％Ficoll、0.02％BSA和500mg/ml变性鲑精DNA的高盐缓冲液中于65℃杂交。该杂交之后跟着在0.2X SSC、0.01％BSA中于50℃进行一次或多次洗涤。本发明分离的在严格条件下与SEQ ID NO：1的序列杂交的核酸分子对应于天然存在的核酸分子。如本文所用，“天然存在的”核酸分子是指具有天然存在的核苷酸序列(如编码天然蛋白)的RNA或DNA分子。
在第二实施方案中，提供了在中度严格条件下与包含SEQ IDNO：1的核苷酸序列的核酸分子、或者其片段、类似物或衍生物杂交的核酸序列。中度严格杂交条件的非限制性实例为在6X SSC，5XDenhardt′s溶液、0.5％SDS和100mg/ml变性鲑精DNA中于55℃杂交，随后的37℃下1X SSC、0.1％SDS中的一次或多次洗涤。
在第三实施方案中，提供了在低度严格条件下与包含SEQ IDNO：1的核苷酸序列的核酸分子、或者其片段、类似物或衍生物杂交的核酸。低度严格杂交条件的非限制性实例为在35％甲酰胺、5X SSC、50mM Tris-HCl(pH7.5)、5mM EDTA、0.02％PVP、0.02％ Ficoll、0.2％ BSA、100mg/ml变性鲑精DNA、10％(重量/体积)硫酸葡聚糖中于40℃杂交，随后为50℃下2XSSC、25mM Tris-HCl(pH7.4)、5mM EDTA和0.1％SDS中的一次或多次洗涤。
保守突变
除了可能存在于群体中的天然存在的BFLP1698序列等位基因变体之外，熟练技术人员将会进一步理解可通过突变SEQ ID NO：1的核苷酸序列而引入变化，由此导致所编码的BFLP1698蛋白氨基酸序列的变化，而不会改变所述BFLP1698蛋白的功能能力。例如，可在SEQ ID NO：1序列中进行导致“非必需”氨基酸残基处的氨基酸取代的核苷酸取代。“非必需”氨基酸残基为可自野生型BFLP1698序列改变而不会改变所述生物学活性的残基，而“必需”氨基酸残基是生物学活性所必需的。例如，改变本发明的BFLP1698蛋白中保守的氨基酸残基，很可能导致该BFLP1698蛋白活性的丧失。
本发明的另一个方面涉及编码包含了对于活性并非必需的氨基酸残基的改变的BFLP1698蛋白的核酸分子。此类BFLP1698蛋白与SEQID NO：2存在着氨基酸序列的差异，但仍保留生物学活性。在一个实施方案中，所述分离的核酸分子包括编码蛋白的核苷酸序列，其中所述蛋白包含与SEQ ID NO：2的氨基酸序列至少大约75％同源的氨基酸序列。 优选地，由该核酸编码的蛋白与SEQ ID NO：2至少为大约80％同源的，更优选至少大约90％、95％、98％并且最优选与SEQ IDNO：2至少为大约99％同源的。
分离的编码与SEQ ID NO：2的蛋白同源的BFLP1698蛋白的核酸分子可通过向SEQ ID NO：1的核苷酸序列中引入一个或多个核苷酸取代、添加或缺失而生成，从而向所编码的蛋白之中引入了一个或多个氨基酸取代、添加或缺失。
可通过标准技术向SEQ ID NO：1的核苷酸序列中引入突变，例如定点诱变和PCR介导的诱变。优选地，在一个或多个预测的非必需氨基酸残基上进行保守氨基酸取代。“保守氨基酸取代”是一种其中氨基酸残基被置换为具有相似侧链的氨基酸残基的取代。具有相似侧链的氨基酸残基家族在本领域业已定义。这些家族包括具有碱性侧链(如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-分支的侧链(如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳族侧链(如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。从而，预测的BFLP1698中的非必需氨基酸残基被置换为来自相同侧链家族的另一个氨基酸残基。备选地，在另一个实施方案中，可例如通过饱和诱变沿全部或部分BFLP1698编码序列随机引入突变，并且所得的突变体可进行BFLP1698生物学活性的筛选，以鉴定保留活性的突变体。继SEQ IDNO：1诱变之后，可通过任何本领域公知的重组技术表达所编码的蛋白，并且可测定该蛋白的活性。
在一个实施方案中，可对突变BFLP1698蛋白进行如下测定：(1)与其它BFLP1698蛋白、其它细胞表面蛋白或其生物学活性部分形成蛋白：蛋白相互作用的能力；(2)突变BFLP1698蛋白和BFLP1698受体之间复合物的形成；(3)突变BFLP1698蛋白与胞内靶蛋白或其生物学活性部分(如抗生物素蛋白)结合的能力；(4)与BFLP1698蛋白结合的能力；或(5)与抗-BFLP1698蛋白抗体特异性结合的能力。反义BFLP1698核酸
本发明的另一个方面涉及分离的反义核酸分子或者其片段、类似物或衍生物，其可与包含SEQ ID NO：1的核苷酸序列的核酸分子杂交或与之互补。“反义”核酸包含互补于编码蛋白的“有义”核酸(例如互补于双链cDNA分子的编码链或互补于mRNA序列)的核苷酸序列。在具体的方面，提供了包含互补于至少约10、25、50、100、250或500个核苷酸或完整的BFLP1698编码链、或仅与其部分互补的序列的反义核酸分子。另外提供了编码SEQ ID NO：2的BFLP1698蛋白的片段、同系物、衍生物和类似物的核酸分子或互补于SEQ ID NO：1的BFLP1698核酸序列的反义核酸。
在一个实施方案中，反义核酸分子与编码BFLP1698的核苷酸序列编码链的“编码区”反义。术语“编码区”是指包含了翻译成氨基酸残基的密码子的核苷酸序列的区域(如对应于SEQ ID NO：2的人BFLP1698的蛋白编码区)。在另一个实施方案中，反义核酸分子与编码BFLP1698的核苷酸序列编码链的“非编码区”反义。术语“非编码区”是指位于编码区侧面并不翻译成氨基酸的5′和3′序列(即，也称为5′和3′非翻译区)。
给定编码本文公开的BFLP1698的编码链序列(如SEQ IDNO：1)，则可根据沃森-克里克或Hoogsteen碱基配对规则来设计本发明的反义核酸。所述反义核酸分子可与BFLP1698 mRNA的整个编码区互补，但更优选为仅与BFLP1698 mRNA的部分编码或非编码区反义的寡核苷酸。例如，所述反义寡核苷酸可与BFLP1698 mRNA翻译起始位点周围的区域互补。例如，反义寡核苷酸长度可以为约5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个核苷酸。本发明的反义核酸可利用本领域公知的操作利用化学合成或酶促连接反应构建。例如，反义核酸(如反义寡核苷酸)可利用天然存在的核苷酸、或设计用以提高该分子的生物学稳定性或提高反义和有义核酸之间形成的双链体的物理稳定性的各式各样的修饰核苷酸化学合成，例如可使用硫代磷酸酯衍生物及吖啶取代的核苷酸。
可用于产生反义核酸的修饰核苷酸的实例包括：5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、4-乙酰胞嘧啶、5-(羧基羟甲基)尿嘧啶、5-羧甲基氨甲基-2-硫尿苷、5-羧甲基氨甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、β-D-galactosylqueosine、肌苷、N6-异戊烯腺嘌呤、1-甲基鸟嘌呤、1-甲基肌苷、2，2-二甲基鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲基氨甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨甲基-2-硫尿嘧啶、β-D-mannosylqueosine、5′-甲氧基羧甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲基硫代-N6-异戊烯腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、wybutoxosine、假尿嘧啶、queosine、2-硫代胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧乙酸甲酯、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、5-甲基-2-硫尿嘧啶、3-(3-氨基-3-N-2-羧丙基)尿嘧啶、(acp3)w以及2，6-二氨基嘌呤。备选地，反义核酸可利用已向其中以反义方向亚克隆了核酸的表达载体(即，由插入核酸转录的RNA将具有与目的靶核酸反义的方向，在以下的分节中进一步描述)生物学产生。
本发明的反义核酸分子一般向受试者施用或原位产生，从而它们与编码BFLP1698蛋白的细胞mRNA和/或基因组DNA杂交或结合，由此例如通过抑制转录和/或翻译来抑制蛋白的表达。杂交可以是通过常规的核苷酸互补以形成稳定的双链体来进行的，或者，例如，在与DNA双链体结合的反义核酸分子的情况下，是通过双螺旋大沟中的特异性相互作用来进行的。施用本发明的反义核酸分子的途径的实例包括在组织位点上直接注射。备选地，可修饰反义核酸分子以靶向选择的细胞，然后全身性施用。例如，为全身性施用，可修饰反义分子从而它们与表达在所选细胞表面上的受体或抗原特异性地结合，例如通过将反义核酸分子连接于与细胞表面受体或抗原结合的肽或抗体。反义核酸分子也可以利用本文所述的载体送递到细胞中。为实现反义分子足够的胞内浓度，优选其中将反义核酸分子置于强polII或polIII启动子控制之下的载体构建体。
而在另一个实施方案中，本发明的反义核酸分子为α-异头核酸分子。α-异头核酸分子与互补RNA形成特异性的双链杂交体，其中与常见的β-单位相反，两链彼此平行。反义核酸分子也可以包括2′-o-甲基核糖核苷酸。
作为非限制性的实例，此类修饰包括修饰的碱基以及其糖磷酸主链被修饰或衍生化的核酸。实施这些修饰至少部分地是为了增强修饰的核酸的化学稳定性，从而它们可以，例如在对受试者的治疗应用中用作反义结合核酸。
BFLP1698核酶和PNA部分
又在另一实施方案中，本发明的反义核酸为核酶。核酶为具有核糖核酸酶活性的催化性RNA分子，其能够切割它们与之具有互补区的单链核酸如mRNA。因而，核酶(如锤头状核酶)可用于催化性地切割BFLP1698 mRNA转录物，由此抑制BFLP1698 mRNA的翻译。对编码BFLP1698的核酸具有特异性的核酶可基于本文所公开的BFLP1698 DNA的核苷酸序列设计(即SEQ ID NO：1)。例如，可构建四膜虫(Tetrahymena)L-19 IVS RNA衍生物，其中活性位点的核苷酸序列互补于编码BFLP1698的mRNA中待切割的核苷酸序列。备选地，可利用BFLP1698 mRNA从RNA分子库中选择具有特异性核糖核酸酶活性的催化性RNA。
备选地，BFLP1698基因的表达可通过靶向互补于BFLP1698调控区(如BFLP1698启动子和/或增强子)的核苷酸序列以在靶细胞中形成防止BFLP1698基因转录的三螺旋结构而抑制。
在各种实施方案中，BFLP1698的核酸可在碱基部分、糖部分或磷酸主链上进行修饰，以改善例如分子的稳定性、杂交或溶解度。例如，可修饰核酸的脱氧核糖磷酸主链以产生肽核酸。如本文所用，术语“肽核酸”或“PNA”是指核酸模拟物如DNA模拟物，其中脱氧核糖磷酸主链被置换为假肽主链，并且只保留了四种天然核碱基(nucleobase)。PNA的中性主链已显示能够与DNA和RNA在低离子强度的条件下特异性杂交。PNA寡聚体的合成可利用标准固相肽合成方案进行。
BFLP1698的PNA可用在治疗和诊断应用中。例如，通过如诱导转录或翻译停滞或抑制复制，PNA可用作为反义或抗基因剂(antigeneagent)用于基因表达的序列特异性调节。BFLP1698的PNA也可通过例如PNA指导的PCR锁止技术(PCR clamping)而用于例如基因中单碱基对突变的分析中；当与其它酶如S1核酸酶联用时用作人工限制性内切酶；或者用作用于DNA序列分析和杂交的探针或引物。
在另一个实施方案中，可通过在PNA上附着亲脂或其它辅助基团、通过形成PNA-DNA嵌合体、或通过利用脂质体或本领域公知的其它药物送递技术来修饰BFLP1698的PNA，以例如增强其稳定性或细胞吸收。例如，可产生可能结合了PNA和DNA有利性质的BFLP1698的PNA-DNA嵌合体。
寡核苷酸可包括其它附加基团，例如肽(如用于在体内靶向宿主细胞受体)或促进跨细胞膜或血-脑屏障运输的试剂。另外，寡核苷酸可用杂交触发的切割剂或嵌入剂修饰。为此目的，可将寡核苷酸与另一分子缀合，如肽、杂交触发的交联剂、转运剂、杂交触发的切割剂等。
BFLP1698干涉核酸
同样由本发明提供的是分离的双链核酸(DNA或RNA)，其能够介导BFLP1698基因表达的特异性抑制。在优选的实施方案中，该双链分子的一条或两条链均为RNA分子。优选地，每一条RNA链具有19-25，特别是19-23个核苷酸、更特别是20-22个核苷酸的长度，并且能够介导BFLP1698靶特异性的核酸修饰，特别是RNA干涉和/或DNA甲基化。双链BFLP1698分子可以是双链的，或者在5’和/或3’末端之一或两端均具有突出端。例如，所述分子可具有3’突出端。3’突出端的长度可以是例如1-6个核苷酸、2-5个核苷酸、3-4个核苷酸或2个核苷酸。对于每条链，突出端的长度可以相同或不同。在一个实施方案中，dsRNA由配对的两条21个核苷酸的链组成，从而在该双链RNA的两端都存在着1、2或3个核苷酸的突出端。
RNA链优选具有3’-羟基基团。5’-末端优选包括磷酸、二磷酸、三磷酸或羟基基团。如果期望，3-’突出端可被稳定化以防降解。例如，可对其进行选择，从而它们由嘌呤核苷酸、特别是腺嘌呤或鸟嘌呤核苷酸组成。备选地，嘧啶核苷酸可用修饰的类似物置换，例如将尿苷-2核苷酸3’突出端置换为2’-脱氧胸苷可被耐受，且并不影响RNA干涉的效率。RNA分子可含有至少一个修饰的核苷酸类似物。所述核苷酸类似物可位于其中靶特异性的活性如介导RNAi的活性基本上不受影响的位置上。修饰的核苷酸优选存在于位于双链RNA分子5’-端/或3’-端的区域。在有些实施方案中，突出端通过整合入修饰的核苷酸类似物予以稳定。
核苷酸类似物可包括糖或主链修饰的核糖核苷酸。其它合适的核苷酸包括非天然存在的核碱基而非天然存在的核碱基。例如，类似物可包括于在5-位修饰的尿苷或胞苷，如5-(2-氨基)丙基尿苷、5-溴尿苷；于8-位修饰的腺苷和鸟苷，如8-溴鸟苷；脱氮核苷酸，如7-脱氮-腺苷；O-及N-烷化核苷酸，如N6-甲基腺苷是适合的。在优选的糖修饰的核糖核苷酸中，2’OH-基团由选自H、OR、R、卤素、SH、SR、NH2、NHR、NR2或CN的基团置换，其中R为C1-C6烃基、链烯基或炔基，而卤素为F、Cl、Br或I。在优选的实施方案中，当主链修饰的核糖核苷酸被用作为连接于邻近核糖核苷酸的磷酸酯基团时，它们被置换为修饰基团，如硫代磷酸酯基团。应当指出，上述修饰可以组合起来。
所述BFLP1698干涉RNA分子可以是天然分离的RNA分子，或者可以是合成的RNA分子。优选地，所述BFLP1698干涉RNA分子基本上不含细胞提取物中存在的如来自果蝇(Drosophila)胚的污染物。此外，所述BFLP1698干涉RNA分子优选基本上不含任何非靶特异性的污染物，特别是非靶特异性的RNA分子，如基本上不含细胞提取物中存在的污染物。
分离的双链BFLP1698干涉分子可用于介导哺乳动物细胞中尤其是人细胞中BFLP1698靶特异性的核酸修饰，尤其是RNAi。
本发明双链BFLP1698干涉分子的序列与核酸BFLP1698靶分子具有足够的同一性，以实现BFLP1698基因表达和/或DNA甲基化的靶特异性干涉。优选地，该序列与RNA分子双链部分中期望的靶分子具有至少50％、特别是至少70％的同一性。更优选地，RNA分子双链部分中的同一性至少为85％并且最优选100％。BFLP1698双链干涉RNA分子与预定核酸靶分子例如具有SEQ ID NO：1所示序列的BFLP1698 mRNA靶分子的同一性，可利用方程式：I＝(n/L)×100确定，其中I为同一性百分比，n为ds RNA双链部分和靶中相同核苷酸的数目，而L为ds RNA双链部分和靶中序列重叠的长度。
备选地，双链RNA分子相对于靶序列的同一性也可以定义为包括3’突出端，特别是具有1-3个核苷酸长度的突出端。在这种情况下，与靶序列的序列同一性优选至少为50％，更优选至少70％，并且最优选至少85％。例如，来自3’突出端的核苷酸以及距双链5’和/或3’末端最多2个的核苷酸可被修饰而没有显著的活性丧失。
双链BFLP1698RNA分子可通过如下方法制备，包括合成分别具有19-25如19-23个核苷酸长度的两条RNA链，其中所述RNA链能够形成双链RNA分子，其中优选至少一条链具有1-5个核苷酸的3’-突出端，并且(b)使合成的RNA链在双链RNA分子得以形成的条件下结合。所述双链RNA分子能够介导靶特异性的核酸修饰，特别是RNA干涉和/或DNA甲基化。
合成RNA分子的方法是本领域公知的。单链RNA也可以通过酶促转录由合成的DNA模板或由从重组细菌中分离的DNA质粒制备。一般地，使用噬菌体RNA聚合酶，例如T7、T3或SP6 RNA聚合酶。
本发明的另一方面涉及通过使细胞或生物与本发明的双链RNA分子在其中靶特异性核酸修饰可能发生的条件下进行接触，介导细胞或生物中BFLP1698特异性核酸修饰、特别是RNA干涉和/或DNA甲基化以及介导由双链RNA对BFLP1698靶核酸施加的靶特异性核酸修饰的方法。
BFLP1698多肽
本发明的BFLP1698多肽包括BFLP1698样蛋白，其序列在SEQID NO：2中提供。本发明也包括所公开的BFLP1698多肽或本文公开的BFLP1698多肽序列的任何片段的突变体或变体形式。
从而，BFLP1698多肽包括其中任何残基可能由SEQ ID NO：2所示的对应残基发生改变而同时仍编码保留其BFLP1698样活性和生理学功能的蛋白或其功能性片段的多肽。在有些实施方案中，突变体或变体蛋白中最多20％或更多的残基可能如此改变。在有些实施方案中，根据本发明的BFLP1698多肽为成熟多肽。
雷帕霉素结合结构域
为鉴定BFLP1698多肽序列(如包括全部或部分SEQ ID NO：2的多肽)中包含雷帕霉素结合结构域的区域，测试了完整的编码序列或BFLP1698多肽序列的片段结合雷帕霉素的能力。可使用本领域公知的用于测定多肽与小分子结合的任何技术。例如，可标记雷帕霉素(即用非放射性标记或用放射性标记(如14C、32P、3H或125I)、并与包含某些或全部BFLP1698多肽序列的多肽混合。多肽任选地包括促进检测的部分，例如多肽可以是包括BFLP1698序列和非BFLP1698多肽序列的融合多肽。
向混合物中添加特异于含BFLP1698多肽序列的多肽的试剂(如特异于BFLP1698的抗体或在融合多肽的情况下特异于非BFLP1698多肽的探针)。分离与试剂结合的复合物，并测定揭示着雷帕霉素存在的标记的存在。
一般而言，保持了BFLP1698样功能的BFLP1698样变体包括其中序列中特定位置上的残基已被另一氨基酸取代的任何变体，并且还包括在亲本蛋白两残基之间插入另外一个残基或多个残基的可能性，以及从亲本序列中缺失一个或多个残基的可能性。任何氨基酸取代、插入或缺失都包含在本发明中。在有利的情形下，取代为如上文所定义的保守取代。
本发明的一个方面涉及分离的BFLP1698蛋白及其生物学活性部分，或其衍生物、片段、类似物或同系物。片段可包括邻接的一段SEQID NO：2，或SEQ ID NO：2的散布的片段。同样提供的有适合用作为免疫原以产生抗-BFLP1698抗体的多肽片段。在一个实施方案中，可通过合适的纯化方案利用标准蛋白纯化技术从细胞或组织来源中分离天然BFLP1698蛋白。在另一个实施方案中，BFLP1698蛋白是通过重组DNA技术产生的。作为重组表达的备选方法，BFLP1698蛋白或多肽可利用标准肽合成技术化学合成。
“纯化的”蛋白或其生物学活性部分基本上不含细胞材料或来自取得BFLP1698蛋白的细胞或组织来源的其它污染蛋白，或者当化学合成时基本上不含化学前体或其它化学制剂。用语“基本上不含细胞材料”包括其中蛋白与分离或重组产生该蛋白的细胞的细胞组分分离开来的BFLP1698蛋白制剂。在一个实施方案中，用语“基本上不含细胞材料”包括具有少于大约30％(干重)的非BFLP1698蛋白(本文中也称为“污染蛋白”)、更优选少于大约20％的非BFLP1698蛋白、还更优选少于大约10％的非BFLP1698蛋白、并且最优选少于大约5％的非BFLP1698蛋白的BFLP1698蛋白制剂。当BFLP1698蛋白或其生物学活性部分是重组产生的时候，也优选基本上不含培养基，也就是说，培养基构成少于大约20％、更优选少于大约10％、并且最优选少于大约5％的蛋白制剂体积。
用语“基本上不含化学前体或其它化学制剂”包括其中蛋白与参与该蛋白合成的化学前体或其它化学制剂分离开来的BFLP1698蛋白制剂。在一个实施方案中，用语“基本上不含化学前体或其它化学制剂”包括具有少于大约30％(干重)的化学前体或非BFLP1698化学制剂、更优选少于大约20％的化学前体或非BFLP1698化学制剂、还更优选少于大约10％的化学前体或非BFLP1698化学制剂、并且最优选少于大约5％的化学前体或非BFLP1698化学制剂的BFLP1698蛋白制剂。
BFLP1698蛋白的生物学活性部分包括这样的肽，其包含有与BFLP1698蛋白的氨基酸序列足够同源或由其衍生的氨基酸序列，例如比全长BFLP1698蛋白包括更少氨基酸的SEQ ID NO：2中所示的氨基酸序列，并且表现出BFLP1698蛋白的至少一种活性。一般地，生物学活性部分包含具有BFLP1698蛋白的至少一种活性的结构域或基序。BFLP1698蛋白的生物学活性部分可以是例如长度为10、25、50、100或更多个氨基酸的多肽。
本发明BFLP1698蛋白的生物学活性部分可含有至少一个上文所鉴定到的在BFLP1698蛋白之间保守的结构域。而且，其中蛋白其它区域缺失的其它生物学活性部分可通过重组技术制备，并评价其天然BFLP1698蛋白的一种或多种功能活性。
在一实施方案中，BFLP1698蛋白具有SEQ ID NO：2中所示的氨基酸序列。在其它实施方案中，BFLP1698蛋白与SEQ ID NO：2基本上同源，并保留SEQ ID NO：2蛋白的功能活性，然而由于天然等位基因变异或诱变而在氨基酸序列上有差别，如下文所详述的那样。因此，在另一个实施方案中，BFLP1698蛋白为包含与SEQ ID NO：2的氨基酸序列至少大约45％同源的氨基酸序列且保留了SEQ ID NO：2的BFLP1698蛋白的功能活性的蛋白。
确定两个或多个序列之间的同源性
为确定两氨基酸序列或两核酸序列的百分比同源性，为最佳比较的目的将序列进行比对(例如可在进行比较的任一序列中引入缺口以取得序列间的最佳比对)。然后比较对应氨基酸位置或核苷酸位置上的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中的某位置为与第二序列对应位置上相同的氨基酸残基或核苷酸所占据时，则所述分子在该位置上是同源的(也就是说，如本文所用的氨基酸或核酸“同源性”等同于氨基酸或核酸“同一性”)。
核酸序列同源性可确定为两序列间的同一性程度。同源性可以利用本领域公知的计算机程序确定，例如GCG程序包中提供的GAP软件。使用具有如下设置的GCG GAP软件用于核酸序列比较：5.0的GAP建立罚分(creation penalty)和0.3的GAP延伸罚分(elongationpenalty)，上述类似核酸序列的编码区表现出与SEQ ID NO：1中所示DNA序列的CDS(编码)部分优选至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的同一性程度。
术语“序列同一性”是指两多核苷酸或多肽序列在特定的比较区域上基于逐个残基完全相同的程度。术语“序列同一性百分比”是通过如下方法计算的，即在所述比较区域上比较两最佳比对的序列、确定两序列中出现的完全相同的核酸碱基(例如在核酸情况下的A、T、C、G、U或I)的位置数目以得出匹配位置的数目、用匹配位置的数目除以比较区域中的位置总数目(即窗口大小)、并用结果乘以100以得出序列同一性百分比。如本文所用的术语“基本同一性”表示多核苷酸序列的特征，其中多核苷酸包含与参照序列在比较区域上相比具有至少80％序列同一性、优选至少85％同一性并且通常90％到95％序列同一性、更通常至少99％序列同一性的序列。术语“阳性残基百分比”是通过如下方法计算的，即在所述比较区域上比较两最佳比对的序列、确定两序列中出现的如上文所定义的完全相同以及保守氨基酸取代的位置数目以得出匹配位置的数目、用匹配位置的数目除以比较区域中的位置总数目(即窗口大小)、并用结果乘以100以得出阳性残基百分比。
嵌合及融合蛋白
本发明也提供了BFLP1698嵌合或融合蛋白。如本文所用，BFLP1698“嵌合蛋白”或“融合蛋白”包括可操作地连接于非BFLP1698多肽的BFLP1698多肽。“BFLP1698多肽”是指具有与BFLP1698相应的氨基酸序列的多肽，而“非BFLP1698多肽”是指具有与并不基本上与BFLP1698蛋白同源的蛋白(如不同于BFLP1698蛋白且来源于相同或不同生物的蛋白)相应的氨基酸序列的多肽。在BFLP1698融合蛋白内，BFLP1698多肽可对应于全部或部分BFLP1698蛋白。BFLP1698融合多肽的实例是包括SEQ ID NO：2的氨基酸21-230的多肽(如包括SEQ ID NO：2的氨基酸1-246或氨基酸21-246的多肽)。在一个实施方案中，BFLP1698融合蛋白包含BFLP1698蛋白的至少一个生物学活性部分。在另一个实施方案中，BFLP1698融合蛋白包含BFLP1698蛋白的至少两个生物学活性部分。在融合蛋白内，术语“可操作地连接”旨在表明BFLP1698多肽和非BFLP1698多肽是以框内彼此融合的。非BFLP1698多肽可融合于BFLP1698多肽的N-末端或C-末端。
例如，在一个实施方案中，BFLP1698融合蛋白包含可操作地连接于第二蛋白(即非BFLP1698蛋白)的胞外结构域或第二蛋白(即非BFLP1698蛋白)的跨膜和胞内结构域的BFLP1698多肽。此类融合蛋白可进一步用于调节BFLP1698活性的化合物的筛选测定(此类测定在下文详细描述)。
在另一个实施方案中，融合蛋白为GST-BFLP1698融合蛋白，其中BFLP1698序列融合于GST(即谷胱甘肽S-转移酶)序列的C-端。此类融合蛋白可促进重组BFLP1698的纯化。
在另一个实施方案中，融合蛋白为BFLP1698-免疫球蛋白融合蛋白，其中包含一个或多个结构域的BFLP1698序列融合于来自于免疫球蛋白蛋白家族成员的序列。
BFLP1698配体/BFLP1698相互作用的抑制通过改变细胞因子和趋化因子级联机制可在治疗上用于治疗增生及分化紊乱如癌症，以及调节(如促进或抑制)细胞存活以及免疫调节紊乱、自身免疫、移植和炎症。而且，本发明的BFLP1698-免疫球蛋白融合蛋白可用作免疫原以在受试者中产生抗-BFLP1698抗体、纯化BFLP1698配体、以及在筛选测定中鉴定抑制BFLP1698与BFLP1698配体相互作用的分子。
本发明的BFLP1698嵌合或融合蛋白可通过标准重组DNA技术产生。例如，根据常规技术将编码不同多肽序列的DNA片段框内连接在一起，例如通过使用平头末端或交错末端用于连接、限制性内切酶消化以提供合适的末端、适用时粘性末端的填充、碱性磷酸酶处理以避免不期望的连接以及酶促连接。在另一个实施方案中，融合基因可通过常规技术包括自动化DNA合成仪合成。备选地，可利用锚定引物进行基因片段的PCR扩增，所述锚定引物在能够随后进行退火和再扩增以产生嵌合基因序列的两连续基因片段之间产生互补突出端。而且，许多早已编码融合部分(如GST多肽)的表达载体是商业上可获得的。可将编码BFLP1698的核酸克隆到这样的表达载体中，从而融合部分框内连接于BFLP1698蛋白。
如果期望，可利用BFLP1698蛋白编码序列片段的文库产生多样化的BFLP1698片段群，以用于BFLP1698蛋白变体的筛选以及随后的选择。
BFLP1698抗体
同样包含在本发明中的有抗BFLP1698蛋白或BFLP1698蛋白片段的抗体。如本文所用的术语“抗体”是指免疫球蛋白分子以及免疫球蛋白(Ig)分子的免疫学活性部分，即含有与抗原特异性结合(与之免疫反应)的抗原结合部位的分子。此类抗体包括但不限于多克隆、单克隆、嵌合、单链、Fab、Fab’和F(ab′)2片段、以及Fab表达文库。通常，由人类获得的抗体分子涉及IgG、IgM、IgA、IgE和IgD类中的任何一种，它们因存在于分子中的重链性质而彼此不同。某些类还有亚类，如IgG1、IgG2等。此外，在人类中，轻链可以是κ链或λ链。本文提及的抗体包括提及的人抗体种类的所有类、亚类和型。
本发明分离的BFLP1698相关蛋白可旨在用作为抗原或其部分或片段，并且另外可用作为免疫原，以利用多克隆和单克隆抗体制备的标准技术产生与抗原免疫特异性结合的抗体。可使用全长蛋白，或者备选地，本发明提供了抗原的抗原性肽片段用作为免疫原。抗原性肽片段包含全长蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列的至少6个氨基酸残基，并包含其表位，从而针对该肽所产生的抗体与全长蛋白或与含此表位的任何片段形成特异性的免疫复合物。优选地，抗原性肽包含至少10个氨基酸残基、或至少15个氨基酸残基、或至少20个氨基酸残基、或至少30个氨基酸残基。优选的为抗原性肽所包含的表位是位于其表面的蛋白区域；通常这些为亲水区。
在本发明的某些实施方案中，至少一个为抗原性肽所包含的表位是位于蛋白表面的BFLP1698相关蛋白区域，如亲水区。BFLP1698相关蛋白序列的疏水性分析将表明BFLP1698相关蛋白的哪些区域是特别亲水的，因而很可能编码可用于靶向抗体生产的表面残基。作为靶向抗体生产的工具，亲水性图显示亲水性和疏水性区域，并且可通过本领域众所周知的任何方法产生，包括例如，有或无傅里叶变换的Kyte Doolittle或Hopp Woods方法。已产生了关于BFLP1698蛋白的Kylte & Doolitle图，并示于下文表5。
表5.BFLP1698的Kyte & Doolittle图
编码本发明BFLP1698蛋白的新核酸或其片段还可用于诊断应用，其中核酸或蛋白的存在或量有待评估。这些材料还可用于产生与本发明的新物质免疫特异性结合的抗体，以用于治疗或诊断方法中。所公开的BFLP1698蛋白具有多个亲水区，其中每一个都可用作为免疫原。在一个实施方案中，所预期的BFLP1698表位来自于大约氨基酸1到60。在另一个实施方案中，BFLP1698表位来自于大约氨基酸70到80。在另外的实施方案中，BFLP1698表位来自于大约氨基酸85到170、来自于大约氨基酸180到190、来自于大约氨基酸210到220、来自于大约氨基酸230到260、来自于大约氨基酸290到310、来自于大约氨基酸350到360、来自于大约氨基酸370到380、来自于大约氨基酸400到430、来自于大约氨基酸450到480、来自于大约氨基酸520到540、来自于大约氨基酸600到620、来自于大约氨基酸630到640、来自于大约氨基酸680到690、来自于大约氨基酸730到740、来自于大约氨基酸850到860、来自于大约氨基酸870到890、来自于大约氨基酸970到1010、来自于大约氨基酸1030到1050、来自于大约氨基酸1080到1130、来自于大约氨基酸1150到1160，以及来自于大约氨基酸1180到1190。
本文也提供了特异于抗原性蛋白或其衍生物、片段、类似物或者同系物内一个或多个结构域的抗体。
本发明的蛋白或其衍生物、片段、类似物、同系物或者直向同源物可用作为免疫原，以产生与这些蛋白成分免疫特异性结合的抗体。
本领域内公知的各种方法可用于生产抗本发明的蛋白或者抗其衍生物、片段、类似物、同系物或直向同源物的多克隆或单克隆抗体。如本文所用，术语“单克隆抗体”(MAb)或“单克隆抗体组合物”是指仅含有一种分子种类的由唯一的轻链基因产物和唯一的重链基因产物组成的抗体分子的抗体分子群。
抗本发明蛋白抗原的抗体可进一步包括人源化抗体或人抗体。人源化形式的抗体包括主要由人免疫球蛋白序列组成、且含有最小限度的衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(例如Fv、Fab、Fab′、F(ab′)2或抗体的其它抗原结合亚序列)。
抗体也可以是人抗体，如，其中基本上轻链和重链两者的整个序列包括CDRs都是来自于人基因的抗体分子。人单克隆抗体可通过三体瘤(trioma)技术、人B细胞杂交瘤技术和EBV杂交瘤技术制备。
人抗体也可利用噬菌体展示文库、或通过将人免疫球蛋白基因座引入到其中内源免疫球蛋白基因已被部分或完全灭活的转基因动物如小鼠中生产。人抗体可另外利用修饰的转基因非人动物生产，从而响应抗原攻击产生完全人抗体而不是动物的内源抗体。
本发明也提供了对本发明的抗原性蛋白特异性的单链抗体。另外，可对方法加以改造以适应Fab表达文库的构建，以使得能够快速和有效地鉴定对蛋白或其衍生物、片段、类似物或者同系物具有期望的特异性的单克隆Fab片段。含蛋白抗原独特型的抗体片段可通过本领域公知的技术生产，包括但不限于：(i)由抗体分子的胃蛋白酶消化生产的F(ab′)2片段；(ii)通过还原F(ab′)2片段的二硫桥产生的Fab片段；(iii)通过用木瓜蛋白酶和还原剂处理抗体分子产生的Fab片段以及(iv)Fv片段。
同样由本发明所提供的有双特异性抗体。双特异性抗体为对至少两个不同抗原具有结合特异性的单克隆抗体，优选为人或人源化抗体。结合特异性之一是针对本发明的抗原性蛋白的。第二结合靶为任何其它抗原，并且有利地是细胞表面蛋白或受体或受体亚单位。
如果期望，可将具有期望的结合特异性的抗体可变结构域(抗体-抗原结合位点)融合于免疫球蛋白恒定结构域序列。融合优选与免疫球蛋白重链恒定结构域融合，包含至少部分铰链区、CH2和CH3区。优选使含有轻链结合必需位点的第一重链恒定区(CH1)存在于至少一个融合物中。
双特异性抗体可作为全长抗体或抗体片段(如F(ab’)2双特异性抗体)提供。
同样落在本发明之内的是具有多于两效价的抗体(例如三特异性抗体)。
例示性的双特异性抗体结合两个不同的表位，至少其中一个来源于本发明的蛋白抗原。
本发明也包括异缀合(heteroconjugate)抗体，其包括两个共价结合的抗体。
本发明的抗体可加以修饰以改变(如增强或减小)其功能。例如，可将半胱氨酸残基引入到Fc区，由此使得该区域能够形成链间二硫键。本发明也包括免疫缀合物，其包括与细胞毒性剂缀合的抗体，例如化疗剂、毒素(如细菌、真菌、植物或动物来源的酶促活性毒素或其片段)、或放射性同位素(即放射性缀合物(radioconjugate))。
能够使用的酶促活性毒素及其片段包括白喉A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自于铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa))、蓖麻毒蛋白A链、相思豆毒蛋白A链、莫迪素(modeccin)A链、α-帚曲霉素、油酮(Aleurites fordii)蛋白、dianthin蛋白、垂序商陆(phytolaca americana)蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(Momordica charantia)抑制剂、麻风树毒蛋白、巴豆毒素、肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制剂、白树素(gelonin)、mitogellin、局限曲菌素、酚霉素、依诺霉素以及单端孢霉菌烯醇(tricothecenes)。可获得多种放射性核素用于生产放射性缀合的抗体。实例包括212Bi、131I、131In、90Y和186Re。
抗体可与“受体”(如链霉抗生物素蛋白)缀合用于肿瘤预靶向，其中向患者施用抗体-受体缀合物，紧接着利用清除剂从循环中除去未结合的缀合物，然后施用“配体”(如抗生物素蛋白)，其依次与细胞毒性剂缀合。
BFLP1698重组表达载体和宿主细胞
本发明的另一个方面涉及含编码BFLP1698蛋白、或其衍生物、片段、类似物或同系物的核酸的载体，优选为表达载体。如本文所用，术语“载体”是指能够运送已与之相连的另一核酸的核酸分子。一类载体为“质粒”，它是指环形双链DNA环，其内可连接附加的DNA片段。另一类载体为病毒载体，其中附加的DNA片段可连接到此病毒基因组中。某些载体能够在引入了它们的宿主细胞中自主复制(如，具有细菌复制起点的细菌载体以及附加型哺乳动物载体)。其它载体(如非附加型哺乳动物载体)一经引入到宿主细胞内就整合到宿主细胞的基因组中，由此与整合了它们的宿主基因组序列一起复制。而且，某些载体能够指导它们与之可操作连接的基因的表达。此类载体在文中称为“表达载体”。“质粒”和“载体”可互换使用，因为质粒是最常用的载体形式。不过，本发明旨在包括其它形式的表达载体如病毒载体(如复制缺陷型逆转录病毒、腺病毒和腺伴随病毒)，它们可作等同功能之用。
在重组表达载体内，“可操作地连接”旨在表示目的核苷酸序列以允许该核苷酸序列表达(如在体外转录/翻译系统中，或当载体被引入到宿主细胞中时在宿主细胞中)的方式连接于调控序列。术语“调控序列”旨在包括启动子、增强子及其它表达控制元件(如多聚腺苷酸化信号)。调控序列包括指导核苷酸序列在许多类型的宿主细胞中组成型表达的那些以及指导核苷酸序列仅在某些宿主细胞中表达的那些(如组织特异性调控序列)。可将本发明的表达载体引入到宿主细胞中，由此生产由如本文所述的核酸编码的蛋白或肽，包括融合蛋白或肽(如BFLP1698蛋白、突变形式的BFLP1698蛋白、融合蛋白等)。
本发明的重组表达载体可设计为用于在原核或真核细胞中表达BFLP1698蛋白。例如，BFLP1698蛋白可在细菌细胞如大肠杆菌(Escherichia coli)、昆虫细胞(利用杆状病毒表达载体)、酵母细胞或哺乳动物细胞中表达。备选地，例如，使用T7启动子调控序列和T7聚合酶，重组表达载体可在体外转录和翻译。
又在另一实施方案中，本发明的核酸利用哺乳动物表达载体在哺乳动物细胞中表达。哺乳动物表达载体的实例包括pCDM8和pMT2PC。当在哺乳动物细胞中使用时，表达载体的控制功能通常是由病毒调控元件提供的。例如，通常使用的启动子衍生自多瘤病毒(polyoma)、腺病毒2、巨细胞病毒以及猿猴病毒40。见关于其它合适的用于原核和真核细胞两者的表达载体系统。
在另一个实施方案中，重组哺乳动物表达载体能够指导核酸优选在特定的细胞类型中表达(如使用组织特异性调控元件表达核酸)。组织特异性调控元件是本领域公知的。合适的组织特异性启动子的非限制性实例包括清蛋白启动子(肝特异性)，淋巴样特异性启动子，特别是T细胞受体和免疫球蛋白启动子，神经元特异性启动子(如神经丝启动子)、胰腺特异性启动子以及乳腺特异性启动子(如乳汁乳清启动子)。也包括发育调控启动子，如鼠hox启动子和甲胎蛋白启动子。
本发明还提供了包含以反义方向克隆到表达载体中的本发明的DNA分子的重组表达载体。也就是说，DNA分子以允许表达(通过该DNA分子的转录)对BFLP1698mRNA而言反义的RNA分子的方式可操作地连接于调控序列。可选择指导反义RNA分子在多种细胞类型中持续表达的可操作地连接于以反义方向克隆的核酸的调控序列，例如病毒启动子和/或增强子，或者可选择指导反义RNA组成型、组织特异性或细胞类型特异性表达的调控序列。反义表达载体可以是重组质粒、噬菌粒或减毒病毒的形式，其中反义核酸在高效调控区的控制下产生，其活性可由引入了载体的细胞类型决定。
本发明的另一方面涉及业已引入了本发明的重组表达载体的宿主细胞。术语“宿主细胞”和“重组宿主细胞”在本文中互换使用。人们理解此类术语不仅指特定的受试细胞，而且也指此细胞的子代或潜在子代。由于后代中因突变或环境影响可能会发生某些修饰，所以此子代可能事实上与亲代细胞并不完全相同，但仍包括在如本文所用术语的范围之内。
宿主细胞可以是任何原核或真核细胞。例如，BFLP1698蛋白可在细菌细胞如大肠杆菌、昆虫细胞、酵母或哺乳动物细胞(例如人、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)或COS细胞)中表达。其它合适的宿主细胞是本领域技术人员公知的。
一般将编码可选择标记(如对抗生素的抗性)的基因与目的基因一起引入到宿主细胞之中。各种可选择标记包括赋予对药物抗性的那些标记，所述药物如G418、潮霉素和氨甲蝶呤。编码可选择标记的核酸可在编码BFLP1698的同一载体上引入到宿主细胞中，或者在不同的载体上引入。稳定转染有引入的核酸的细胞可通过药物选择鉴定(如，已整合入可选择标记基因的细胞将存活，而其它细胞死亡)。
本发明的宿主细胞如培养物中的原核或真核宿主细胞可用来生产(即表达)BFLP1698蛋白。从而，本发明还提供了利用本发明的宿主细胞生产BFLP1698蛋白的方法。在一个实施方案中，该方法包括在合适的培养基中培养本发明的宿主细胞(其中业已引入编码BFLP1698蛋白的重组表达载体)，从而BFLP1698蛋白得以产生。在另一个实施方案中，该方法还包括从培养基或宿主细胞中分离BFLP1698蛋白。转基因BFLP1698动物
本发明的宿主细胞也可用于产生非人转基因动物。例如，在一个实施方案中，本发明的宿主细胞为其中已引入了BFLP1698蛋白编码序列的受精卵母细胞或胚胎干细胞。然后可利用此类宿主细胞生成其中外源BFLP1698序列已被引入到其基因组中的非人转基因动物，或者其中内源BFLP1698序列已被改变了的同源重组动物。此类动物可用于研究BFLP1698蛋白的功能和/或活性，以及用于鉴定和/或评价BFLP1698蛋白活性的调节剂。如本文所用，“转基因动物”为非人动物，优选为哺乳动物，更优选为啮齿类动物如大鼠或小鼠，其中该动物的一个或多个细胞包括转基因。转基因动物的其它实例包括非人灵长类动物、绵羊、狗、母牛、山羊、鸡、两栖动物等。转基因为整合到转基因动物由之发育而来的细胞基因组中、并且保留在成熟动物的基因组中的外源DNA，由此指导编码的基因产物在该转基因动物的一种或多种细胞类型或组织中表达。如本文所用，“同源重组动物”为非人动物，优选为优选为哺乳动物，更优选为小鼠，其中内源BFLP1698基因业已通过内源基因和在动物发育前引入到该动物细胞如动物胚胎细胞中的外源DNA分子之间的同源重组而被改变。
本发明的转基因动物可通过将编码BFLP1698的核酸引入到受精卵母细胞的雄性前核(如通过微注射、逆转录病毒感染)中，并允许卵母细胞在假孕雌性代孕动物中发育而生成。包括SEQ ID NO：1在内的序列可作为转基因引入到非人动物的基因组中。备选地，人BFLP1698基因的非人同系物如小鼠BFLP1698基因可基于与人BFLP1698cDNA的杂交(前文进一步描述)而分离，并用作为转基因。内含子序列和多聚腺苷酸化信号也可包括在转基因之中，以提高转基因的表达效率。可将组织特异性调控序列可操作地连接于BFLP1698转基因以指导BFLP1698蛋白表达至特定细胞。经由胚胎操作和微注射产生转基因动物的方法，尤其是诸如小鼠的动物，在本领域中已变得很常规。类似的方法用于产生其它转基因动物。转基因起始动物可基于其基因组中BFLP1698转基因的存在和/或该动物组织或细胞中BFLP1698 mRNA的表达鉴定。然后可利用转基因起始动物繁育另外的携带该转基因的动物。而且，携带编码BFLP1698蛋白的转基因的转基因动物可进一步繁育为携带其它转基因的其它转基因动物。
为生成同源重组动物，制备含有至少一部分已向其中引入缺失、添加或取代的BFLP1698基因的载体，由此改变如功能性破坏BFLP1698基因。BFLP1698基因可以是人基因(如SEQ ID NO：1的DNA)，但是更优选地，为人BFLP1698基因的非人同系物。例如，SEQID NO：1人BFLP1698基因的小鼠同系物可用于构建适用于改变小鼠基因组中内源BFLP1698基因的同源重组载体。在一个实施方案中，如此设计载体，从而一经同源重组，内源BFLP1698基因就在功能上被破坏(即不再编码功能性蛋白；也称为“敲除(knock out)”载体)。
备选地，可如此设计载体，从而一经同源重组，内源BFLP1698基因被突变或以其它方式改变，但仍然编码功能性蛋白(如可改变上游调控区，由此改变内源BFLP1698蛋白的表达)。在同源重组载体中，BFLP1698基因改变的部分在其5′-和3′-末端由BFLP1698基因另外的核酸在侧面相接，以使得载体所携带的外源BFLP1698基因与胚胎干细胞中的内源BFLP1698基因之间能够发生同源重组。另外的侧面相接的BFLP1698核酸具有足够的长度，以与内源基因成功地重组。一般地，数千碱基的侧面相接的DNA(在5′-和3′-末端)包含在载体中。然后将载体引入到胚胎干细胞系中(如通过电穿孔)，并选择其中引入的BFLP1698基因已与内源BFLP1698基因发生了同源重组的细胞。
然后将选择的细胞注射到动物(如小鼠)胚泡中以形成聚集嵌合体。然后可将嵌合体胚胎植入到合适的假孕雌性代孕动物中，并使胚胎生长到足月。其生殖细胞中具有同源重组DNA的子代可通过转基因的种系传递而用于繁育其中动物的所有细胞都含有同源重组DNA的动物。
在另一个实施方案中，可产生含有允许转基因受调控地表达的选择系统的转基因非人动物。此种系统的一个实例为噬菌体P1的cre/loxP重组酶系统。见关于cre/loxP重组酶系统的描述。重组酶系统的另一个实例为酿酒糖酵母(Saccharomyces cerevisiae)的FLP重组酶系统。如果利用cre/loxP重组酶系统调控转基因的表达，则需要含有编码Cre重组酶和选择蛋白两者的转基因的动物。此类动物可通过构建“双”转基因动物提供，例如，通过使两转基因动物交配，一个含有编码选择蛋白的转基因，而另一个含有编码重组酶的转基因。
本文描述的非人转基因动物的克隆也可根据本领域描述的方法产生。简要地，可分离来自转基因动物的细胞(如体细胞)，并诱导退出生长周期和进入G0期。然后可例如通过使用电脉冲使该休眠细胞与来自分离该休眠细胞的同一物种的去核卵母细胞融合。然后培养重建的卵母细胞，从而其发育成桑椹胚或胚细胞，然后转移到假孕雌性代孕动物中。由该雌性代孕动物所生的后代将是由之分离细胞(如体细胞)的动物的克隆。
检测BFLP1698核酸及诊断狼疮性肾炎的方法
检测BFLP1698核酸和/或多肽的试剂可用于检测样品中BFLP1698 RNA和/或蛋白序列的水平。由于升高的BFLP1698 RNA水平见于狼疮性肾炎动物之中，所以BFLP1698 RNA和/或BFLP1698多肽增高的水平的检测指示着受试者中狼疮的存在或易感性。另外，与未治疗的狼疮相比，治疗过的狼疮受试者中降低的BFLP1698 RNA水平意味着非狼疮状态的恢复。从而，狼疮治疗的效力可通过将来自治疗群体的样品中BFLP1698 RNA或蛋白的水平与患病但未治疗样品中的样品(或来自业已经过短期治疗的个体的样品)进行比较予以监控。
BFLP1698 RNA的水平可通过将来自其狼疮状态未知受试者的测试细胞群中的水平与其狼疮状态已知的参照细胞群中的水平进行比较予以评估。从而，测试细胞群一般将包括至少一个能够表达BFLP1698基因的细胞。“能够表达”是指基因以完整的形式存在于细胞之中且能够得以表达。若存在的话，则检测BFLP1698序列的表达，并且优选地利用本领域公知的方法进行测量。例如，本文公开的BFLP1698序列可用以构建用于检测BFLP1698RNA序列的探针，例如在RNA印迹杂交分析中或在特异性且优选地定量扩增BFLP1698特异性核酸序列的方法中。备选地，所述序列可用以构建用于特异性扩增BFLP1698序列的引物，例如在基于扩增的检测方法中，如基于递转录的聚合酶链反应。
BFLP1698表达也可在蛋白水平，即通过测量BFLP1698多肽的水平来测量。此类方法是本领域众所周知的，并且包括例如基于针对由基因编码的蛋白的抗体的免疫测定。
测试及对照细胞群中序列的表达可利用任何本领域公认的用于比较核酸序列表达的方法进行比较。测试细胞群中基因表达特征与参照细胞群中的比较是否能够揭示测量参数的存在或程度，依赖于参照细胞群的组成。例如，如果参照细胞群由来自无狼疮受试者的细胞组成，那么测试细胞群和参照细胞群中相似的基因表达水平意味着测试细胞群来自无狼疮受试者。相反，如果参照细胞群由来自患病受试者的细胞构成，那么测试细胞群和参照细胞群之间相似的基因表达特征意味着测试细胞群来自狼疮受试者。
在各种实施方案中，如果测试细胞群中BFLP1698序列的表达水平以2.0、1.5或1.0倍于参照细胞群中BFLP1698转录物水平的因数变动，则认为其在表达水平上与参照细胞群中ADIPO序列的表达水平是相当的。在各种实施方案中，如果测试细胞群中BFLP1698序列的表达水平与参照细胞群的区别大于参照细胞群中相应BFLP1698序列的表达水平的1.0、1.5、2.0或更多倍，则可认为其在表达水平上改变了。
如果期望，测试细胞群和参照细胞群之间差异表达序列的比较可关于其表达不依赖于所测参数或条件的对照核酸来进行。测试和参照核酸中对照核酸的表达水平可用于标准化比较群中的信号水平。合适的对照核酸可由本领域的普通技术人员容易地确定。
在有些实施方案中，测试细胞群与多个参照细胞群进行比较。多个参照细胞群中的每一个都可能在已知参数上有所不同。因而，测试细胞群可能与来自已知具有狼疮的受试者的第一参照细胞群、以及已知没有狼疮的第二参照群进行比较。
所暴露的测试细胞群可以是任意数目的细胞，即一个或多个细胞，并且可在体外、体内或离体提供。
优选地，参照细胞群中的细胞来源于与测试细胞尽可能相似的组织类型，如肾组织。在有些实施方案中，对照细胞来源于与测试细胞相同的受试者。在其它实施方案中，参照细胞群来源于来自多个受试者的多个细胞。例如，参照细胞群可以是来自以前测试的细胞的表达模式的数据库。
受试者优选为哺乳动物。哺乳动物可以是例如人、非人灵长类动物、小鼠、大鼠、狗、猫、马或母牛。
药物组合物
本发明的BFLP1698核酸分子、BFLP1698蛋白以及抗-BFLP1698抗体(本文中也称为“活性化合物”)及其衍生物、片段、类似物和同系物可整合入适合于施用的药物组合物之中。此类组合物一般包括核酸分子、蛋白或抗体以及药学上可接受的载体。如本文所用，“药学上可接受的载体”旨在包括任何以及所有的与药物施用相容的溶剂、分散介质、涂层、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸附延缓剂等。合适的载体描述在最近版本的Remington’s Pharmaceutical Sciences中，它是本领域的标准参考教科书，特此将其并入作为参考。此类载体或稀释剂优选的实例包括但不限于：水、盐水、林格液、葡萄糖溶液以及5％人血清清蛋白。也可使用脂质体和非水载体如固定油。此类介质和试剂用于药学活性物质的用途是本领域众所周知的。除了任何常规介质或试剂与活性化合物不相容之外，都将预期其在组合物中用途。补充活性化合物也可整合到组合物中。
本发明的药物组合物配制为与其预期施用途径相容。施用途径的实例包括肠胃外，如静脉内，皮内，皮下，口腔(如吸入)，经皮(即局部)，跨粘膜以及直肠施用。
适于注射用的药物组合物包括无菌水溶液(其中水可溶)或分散体，以及用于临时制备无菌注射液或分散体的无菌粉末。
如本文所用的剂量单位形式是指物理上分离的适合作为用于待治疗受试者的单位剂量的单位；每个单位含预定量的经计算结合所需药物载体可产生期望疗效的活性化合物。本发明剂量单位形式的规格受控于且直接地依赖于活性化合物的独特特征和待实现的特定疗效、以及为治疗个体组合此种活性化合物领域所固有的局限性。
可制备持续释放制剂。合适的持续释放制剂实例包括含抗体的固体疏水聚合物的半透性基质，该基质为成型制品的形式，例如膜或微囊。持续释放基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如，聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯、L-谷氨酸和γ乙基-L-谷氨酰胺的共聚物、不可降解的乙烯乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸(glycolicacid)共聚物如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)组成的可注射微球体)以及聚-D-(-)-3-羟基丁酸。虽然聚合物如乙烯乙酸乙烯酯和乳酸-乙醇酸能够超过100天释放分子，但某些水凝胶以更短的时间周期释放蛋白。
药物组合物可连同施用说明书一起包含在容器、包装或分配器中。
筛选和检测方法
本发明分离的核酸分子可用于表达BFLP1698蛋白(如在基因治疗应用中经由宿主细胞中的重组表达载体)、检测BFLP1698mRNA(如生物学样品中的)或BFLP1698基因中的遗传病变以及调节BFLP1698活性，如下文进一步描述的那样。另外，BFLP1698蛋白可用于筛选调节BFLP1698蛋白活性或表达的药物或化合物，以及治疗以BFLP1698蛋白产生不足或过度或者产生与BFLP1698野生型蛋白相比活性降低或异常的BFLP1698蛋白形式为特征的紊乱。另外，本发明的抗-BFLP1698抗体可用于检测和分离BFLP1698蛋白以及调节BFLP1698活性。例如，BFLP1698活性包括T细胞或NK细胞生长及分化、抗体产生以及肿瘤生长。
本发明进一步涉及通过本文描述的筛选测定鉴定的新试剂及其用于如前所述的治疗的用途。
筛选测定
本发明提供了用于鉴定调节剂的方法(本文中也称为“筛选测定”)，所述调节剂即与BFLP1698蛋白结合或例如对BFLP1698蛋白表达或BFLP1698蛋白活性具有刺激或抑制作用的候选或测试化合物或试剂(如肽、肽模拟物(peptidomimetic)、小分子或其它药物)。本发明也包括在此所述的筛选测定中鉴定到的化合物。
在一个实施方案中，利用所述筛选测定鉴定用于治疗自身免疫病的治疗试剂。自身免疫病可以是例如狼疮，包括狼疮性肾炎。
在一个实施方案中，本发明提供了用于筛选结合膜结合形式的BFLP1698蛋白或多肽或其生物学活性部分或调节其活性的候选或测试化合物的测定。本发明的测试化合物可利用本领域公知的组合文库法的众多途径的任何一种获得，包括：生物学文库、空间可寻址的并行固相或液相文库、需要去卷积(deconvolution)的合成文库法、“一珠一化合物(one-bead one-compound)”文库法以及利用亲和层析选择的合成文库法。生物学文库途径限于肽文库，而其它四种途径适用于肽、非肽寡聚体或小分子化合物文库。
如本文所用的“小分子”意在指具有小于约5kD且最优选小于约4kD分子量的组合物。小分子可以是例如雷帕霉素、核酸、肽、多肽、肽模拟物、碳水化合物、脂质或其它有机或无机分子。化学和/或生物学混合物文库如真菌、细菌或藻类提取物是本领域公知的，并且可用任何本发明的测定进行筛选。化合物文库可存在于溶液中、或在珠子上、在芯片、细菌、孢子、质粒上或在噬菌体上。
在一个实施方案中，测定是基于细胞的测定，其中将在其细胞表面表达膜结合形式的BFLP1698蛋白或其生物学活性部分的细胞与测试化合物进行接触，并测定测试化合物结合BFLP1698蛋白的能力。例如，细胞可以是哺乳动物来源的或酵母细胞。例如，测试化合物结合BFLP1698蛋白能力的测定可通过将测试化合物与放射性同位素或酶标记偶联来实现，从而测试化合物与BFLP1698蛋白或其生物学活性部分的结合可通过检测复合物中的标记化合物测定。例如，测试化合物可直接或间接地由125I、35S、14C或3H标记，且放射性同位素可通过直接计数放射性发射(radioemission)或通过闪烁计数来检测。备选地，测试化合物可用例如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶或萤光素酶进行酶标记，且酶标记可通过确定合适底物向产物的转化来检测。在一个实施方案中，测定包括将在其细胞表面表达膜结合形式的BFLP1698蛋白或其生物学活性部分的细胞与已知结合BFLP1698的化合物进行接触，以形成测定混合物，将该测定混合物与测试化合物进行接触，并测定测试化合物与BFLP1698蛋白相互作用的能力，其中测试化合物与BFLP1698蛋白相互作用能力的测定包括测定测试化合物与已知化合物相比优选结合BFLP1698蛋白或其生物学活性部分的能力。
在另一个实施方案中，测定是基于细胞的测定，包括将在其细胞表面表达膜结合形式的BFLP1698蛋白或其生物学活性部分的细胞与测试化合物进行接触，并测定该测试化合物调节(如刺激或抑制)BFLP1698蛋白或其生物学活性部分活性的能力。例如，测试化合物调节BFLP1698蛋白或其生物学活性部分活性能力的测定可通过测定BFLP1698蛋白结合或与BFLP1698靶分子相互作用的能力来实现。如本文所用，“靶分子”是BFLP1698蛋白与之天然地结合或相互作用的分子，例如，表达BFLP1698相互作用蛋白的细胞表面上的分子、第二细胞表面上的分子、胞外环境中的分子、与细胞膜内表面结合的分子或胞质分子。BFLP1698靶分子可以是非BFLP1698分子或本发明的BFLP1698蛋白或多肽。在一个实施方案中，BFLP1698靶分子是信号转导途径的组分，其促进胞外信号(如由化合物与膜结合的BFLP1698分子的结合所产生的信号)穿过细胞膜和进入细胞的转导。例如，靶可以是具有催化活性的第二胞间蛋白或者促进下游信号传导分子与BFLP1698结合的蛋白。
BFLP1698蛋白结合或与BFLP1698靶分子相互作用能力的测定可通过上文所述的用于确定直接结合的方法来实现。在一个实施方案中，BFLP1698蛋白结合或与BFLP1698靶分子相互作用能力的测定可通过测定靶分子的活性实现。例如，靶分子的活性可通过如下方法来测定，即检测靶中细胞第二信使(即胞内Ca2+、二酰甘油、IP3等)的诱导、检测靶对合适底物的催化/酶促活性、检测报告基因(包含可操作地连接于编码可检测标记如萤光素酶的核酸的BFLP1698应答调控元件)的诱导、或检测细胞应答如细胞存活、细胞分化或细胞增殖。
在另一实施方案中，本发明的测定是无细胞测定，包括将BFLP1698蛋白或其生物学活性部分与测试化合物进行接触，并测定测试化合物结合BFLP1698蛋白或其生物学活性部分的能力。测试化合物与BFLP1698蛋白的结合可如上所述直接或间接地测定。在一个这样的实施方案中，测定包括将BFLP1698蛋白或其生物学活性部分与结合BFLP1698的已知化合物进行接触，以形成测定混合物，将该测定混合物与测试化合物进行接触，并测定测试化合物与BFLP1698蛋白相互作用的能力，其中测试化合物与BFLP1698蛋白相互作用能力的测定包括测定测试化合物与已知化合物相比优选结合BFLP1698或其生物学活性部分的能力。
又在另一个实施方案中，测定是无细胞测定，包括将BFLP1698蛋白或其生物学活性部分与测试化合物进行接触，并测定该测试化合物调节(如刺激或抑制)BFLP1698蛋白或其生物学活性部分活性的能力。例如，测试化合物调节BFLP1698蛋白活性能力的测定可通过利用上文所述用于确定直接结合的方法之一测定BFLP1698蛋白结合BFLP1698靶分子的能力来实现。在备选的实施方案中，测试化合物调节BFLP1698蛋白活性能力的测定可通过测定BFLP1698蛋白进一步调节BFLP1698靶分子的能力来实现。例如，靶分子对合适底物的催化/酶促活性可如上所述予以测定。
在另一实施方案中，无细胞测定包括将BFLP1698蛋白或其生物学活性部分与结合BFLP1698蛋白的已知化合物进行接触，以形成测定混合物，将该测定混合物与测试化合物进行接触，并测定测试化合物与BFLP1698蛋白相互作用的能力，其中测试化合物与BFLP1698蛋白相互作用能力的测定包括测定BFLP1698蛋白优选结合BFLP1698靶分子或调节其活性的能力。
本发明的无细胞测定可应用于可溶形式或膜结合形式的BFLP1698蛋白。在包含膜结合形式的BFLP1698蛋白的无细胞测定的情况下，可能期望使用增溶剂，从而膜结合形式的BFLP1698蛋白得以维持在溶液之中。此类增溶剂的实例包括非离子去污剂如正辛基葡糖苷、正十二烷基葡糖苷、正十二烷基麦芽糖苷(maltoside)、辛酰基-N-甲基葡糖酰胺(glucamide)、癸酰基-N-甲基葡糖酰胺、TritonX-100、TritonX-114、Thesit、异十三烷基聚(乙二醇醚)n、N-十二烷基-N，N-二甲基-3-氨-1-丙磺酸盐、3-(3-胆酰胺基丙基)二甲氨基-1-丙磺酸盐(CHAPS)或3-(3-胆酰胺基丙基)二甲氨基-2-羟基-1-丙磺酸盐(CHAPSO)。
在本发明上述测定法的多于一个实施方案中，可能期望固定BFLP1698蛋白或其靶分子以促进复合形式的与非复合形式的一种或两种蛋白分离，以及适应测定的自动化。测试化合物与BFLP1698蛋白的结合、或存在或不存在候选化合物时BFLP1698蛋白与靶分子的相互作用，可在适合于容纳反应物的任何容器中实现。此类容器的实例包括微量滴定板、试管以及微量离心管。在一个实施方案中，可提供添加了允许一个或两个蛋白结合于基质的结构域的融合蛋白。例如，可将GST-BFLP1698融合蛋白或GST-靶融合蛋白吸附到谷胱甘肽琼脂糖凝胶珠(Sigma Chemical，St.Louis，MO)或谷胱甘肽衍生的微量滴定板上，然后将它们与测试化合物、或与测试化合物和未吸附的靶蛋白或BFLP1698蛋白组合，并在有助于复合物形成的条件下(如在生理条件的盐和pH下)温育混合物。温育后，洗涤珠子或微量滴定板孔以除去任何未结合的成分，在珠子的情况下固定基质，直接或间接地测定复合物，例如，如前文所描述的那样。备选地，复合物可从基质中解离下来，并利用标准技术测定BFLP1698蛋白结合或活性水平。
用于将蛋白固定在基质上的其它技术也可用在本发明的筛选测定中。例如，BFLP1698蛋白或其靶分子都可利用生物素和链霉抗生物素蛋白的缀合予以固定。生物素化的BFLP1698蛋白或靶分子可由生物素-NHS(N-羟基-琥珀酰亚胺)利用本领域内众所周知的技术(如生物素化试剂盒，Pierce Chemicals，Rockford，III.)制备，并固定在链霉抗生物素蛋白涂覆的96孔板(Pierce Chemical)的孔中。备选地，可将与BFLP1698蛋白或靶分子反应、但并不干扰BFLP1698蛋白与其靶分子结合的抗体衍生化到此板的孔中，并通过抗体缀合将未结合的靶或BFLP1698蛋白俘获到孔中。用于检测此类复合物的方法，除上文所述用于GST-固定化复合物的那些之外，包括利用与BFLP1698蛋白或靶分子起反应的抗体免疫检测复合物，以及有赖于检测与BFLP1698蛋白或靶分子相关的酶活性的酶联测定。
在另一个实施方案中，在这样的方法中鉴定BFLP1698蛋白表达的调节剂，其中将细胞与候选化合物进行接触，并测定细胞中BFLP1698mRNA或蛋白的表达。将候选化合物存在下BFLP1698mRNA或蛋白的表达水平与不存在该候选化合物下BFLP1698mRNA或蛋白的表达水平进行比较。然后可基于这种比较将候选化合物鉴定为BFLP1698mRNA或蛋白表达的调节剂。例如，若BFLP1698mRNA或蛋白的表达在候选化合物存在时比其不存在时更高(即统计学意义上显著更高)，则将候选化合物鉴定为BFLP1698mRNA或蛋白表达的刺激剂。备选地，若BFLP1698mRNA或蛋白的表达在候选化合物存在时比其不存在时更低(统计学意义上显著更低)，则将候选化合物鉴定为BFLP1698mRNA或蛋白表达的抑制剂。细胞中BFLP1698mRNA或蛋白表达的水平可通过本文所述的用于检测BFLP1698mRNA或蛋白的方法测定。
在本发明的另一方面，BFLP1698蛋白可用作为双杂交测定或三杂交测定中的“饵蛋白”，以鉴定结合或与BFLP1698相互作用(“BFLP1698结合蛋白”或“BFLP1698-bp”)并调节BFLP1698活性的其它蛋白。此类BFLP1698结合蛋白作为例如BFLP1698途径的上游或下游元件，也很可能参与通过BFLP1698蛋白的信号传播。
双杂交系统是以多数转录因子的调节性质为基础的，其由分开的DNA结合结构域及激活结构域组成。简言之，该测定利用两个不同的DNA构建体。在一个构建体中，将编码BFLP1698的基因融合于编码已知转录因子(如GAL-4)DNA结合结构域的基因。在另一个构建体中，将来自DNA序列文库的编码未鉴定蛋白(“猎物”或“样品”)的DNA序列融合于编码已知转录因子激活结构域的基因。如果“饵”和“猎物”蛋白能够在体内相互作用，形成BFLP1698依赖性复合物，则使得该转录因子的DNA结合结构域及激活结构域极为接近。这种接近允许可操作地连接于响应于转录因子的转录调控位点的报告基因(如LacZ)进行转录。可检测报告基因的表达，分离含功能性转录因子的细胞群体，并将其用于获得所克隆的编码与BFLP1698相互作用的蛋白的基因。
本发明还涉及由前述筛选测定鉴定到的新试剂及其用于如本文所述的治疗的用途。
本发明将在如下非限制性的实施例中举例说明。
实施例1.无病、狼疮性肾炎模拟病及雷帕霉素治疗的患病小鼠中鼠BFLP1698序列的表达模式
在NZBXNZW鼠模型中发展了狼疮性肾炎样症状的小鼠中研究了鼠BFLP1698序列的表达。将患病小鼠中的表达与不同年龄的非患病小鼠中、以及在雷帕霉素或抗-B7抗体治疗后其狼疮性肾炎样症状减轻的小鼠中序列的表达进行了比较。
小鼠在6至8周龄获自于Jackson Laboratories，并在现场(onsite)变老。数据得自于小鼠肾脏，并在所示的时间点收集：C57BL/6雌性小鼠在第8和32周，F1(NZBxNZW)雌性小鼠在第12、25和42周，雷帕霉素治疗小鼠在第42和55周，用抗B7.1和B7.2的抗体治疗的小鼠在第52周。每组含3只小鼠。
雷帕霉素治疗的小鼠自29周龄起8周内每周3次接受5mg/kg雷帕霉素皮下注射。对照小鼠以同样的日程表接受载体(甲基纤维素)注射。治疗效力通过蛋白尿的标准化和肾脏组织学来确定(数据未显示)。对疗程结束时(36周龄，数据未显示)以及42周(治疗后6周)和55周(治疗后20周)杀死的小鼠进行基因表达分析。
用抗-B7治疗的小鼠自29周龄起2周内每周3次接受200μg抗-B7.1(1G10F9单克隆)和200μg抗-B7.2(GL1单克隆)腹膜内注射。治疗后21周进行基因表达分析。
RNA分离及与寡核苷酸阵列的杂交
收集来自雄性和雌性小鼠的肾脏，并骤冻进行RNA分离。每肾利用一半。对于每一个体动物使用左肾的纵向切片和右肾的横向切片。
将骤冻的小鼠肾脏组织利用匀浆器悬浮于RLT缓冲液加上2ME中进行30到45秒的匀浆。总RNA利用Qiagen Midi试剂盒按照制造商的方案制备。将RNA悬浮于DEPC处理的水中，并由OD 280定量。
cDNA利用Superscript试剂盒(BRL)由5ug总RNA合成。cDNA利用酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)和Phage lock凝胶管按照Phage lock方案纯化。收集上清，并用EtOH清洗。将样品重悬于DEPC处理的水中。
在体外T7聚合酶驱动用于合成和生物素标记反义cRNA的转录反应。利用Qiagen RNeasy旋转柱纯化来纯化cRNA。GeneChip杂交混合物按照制造商的说明，在200ul总体积的1X MES缓冲液中含15ug片段化的cRNA、0.5mg/ml乙酰化的BSA、0.1mg/ml鲑精DNA。反应混合物于45℃与Affymetrix Mu11 KsubA和Mu11 KsubB寡核苷酸阵列杂交16小时。除去杂交混合物，洗涤阵列并利用GeneChipFluidics Station 400由链霉抗生物素蛋白R-藻红蛋白(MolecularProbes)进行染色，且用Hewlett Packard GeneArray Scanner按制造商的说明进行扫描。收集荧光数据并利用MicroArray Suite软件转换为基因特异性差异平均值。
寡核苷酸阵列数据的分析
将由来源于克隆的细菌和噬菌体序列的基因片段组成的11份标准曲线以0.5pM到150pM的浓度范围掺合(spike)到各杂交混合物中，所述浓度范围代表了大约3.3到1000百万分率(ppm)的RNA频率。生物素化的标准曲线片段通过T7聚合酶驱动的IVT反应由基于质粒的模板合成。掺合的生物素化RNA片段既可用作评估芯片灵敏度的内部标准，又可用作如Hill等所述的将所测量的来自单个基因的荧光差异平均值转换为以ppm表示的RNA频率的标准曲线。
测量了来自每一个体小鼠肾脏的基因表达频率，并对表达数据进行统计学分析。对由给定组的小鼠的个别测量所确定的频率值进行平均。在12和32周龄C57B16肾脏之间频率显著差异的基因被归类为因正常变老过程而非病程的变化。
显示了在Affymetrix Murine 11K芯片上由限定器(qualifier)aa002653_s_at鉴定的寡核苷酸序列在年轻(无病)、老龄(患病)以及有效治疗的老龄(无病)F1(NZBxNZW)小鼠和C57BL6对照小鼠中的表达频率。该序列代表了未知的小鼠基因。
结果示于图1。所示为表示来自所示小鼠肾脏中的基因表达水平的柱形图。BFLP1698表达水平在12周龄的C57BL/6肾脏和32周龄的肾脏之间并不显著不同，表明在非患病小鼠的肾脏中，该表达水平并不随年龄而升高。在(NXBxNZW)F1肾脏中，基因在疾病发作前(12周龄)以正常水平表达。随着小鼠年龄和疾病的发展，在25周、36周(对于36周数据未显示)和42周观察到升高的表达水平。到55周龄，小鼠由于肾衰竭而死去。自29周龄起用雷帕霉素治疗8周的小鼠在55周龄后依然健康。接受有效治疗(雷帕霉素治疗或抗-B7治疗)的小鼠肾脏表达正常水平的BFLP1698，且这些正常水平在停止雷帕霉素治疗后20周以及停止抗-B7治疗后15周的无症状肾脏中持续存在。当肾功能正常时表达水平回复正常的观察现象表明升高的水平与病程有关且有诊断价值。阻断这些基因的功能可能抑制或延缓病程。表达水平也可用于评估和比较各种治疗干预的效力。
实施例2.表2所示人BFLP1698多肽序列的变体
与表2中所列BFLP1698氨基酸序列有1个氨基酸变化的多肽序列示于下文。关于所示序列，表2所示BFLP1698序列97位上的F已被替换为L，其以粗体表示。
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NO：4)
实施例3.表2所示人BFLP1698多肽序列的变体
与表2中所列BFLP1698氨基酸序列有1个氨基酸变化的多肽序列示于下文。关于所示序列，表2所示BFLP1698序列192位上的Q已被替换为N，其以粗体表示。
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实施例4.表2所示人BFLP1698多肽序列的变体
与表2中所列BFLP1698氨基酸序列有1个氨基酸变化的多肽序列示于下文。关于所示序列，表2所示BFLP1698序列288位上的S已被替换为G，其以粗体表示。
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实施例5.表2所示人BFLP1698多肽序列的变体
与表2中所列BFLP1698氨基酸序列有1个氨基酸变化的多肽序列示于下文。关于所示序列，表2所示BFLP1698序列365位上的H已被替换为R，其以粗体表示。
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实施例6.表2所示人BFLP1698多肽序列的变体
与表2中所列BFLP1698氨基酸序列有1个氨基酸变化的多肽序列示于下文。关于所示序列，表2所示BFLP1698序列481位上的V已被替换为M，其以粗体表示。
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实施例7.表2所示人BFLP1698多肽序列的变体
与表2中所列BFLP1698氨基酸序列有1个氨基酸变化的多肽序列示于下文。关于所示序列，表2所示BFLP1698序列556位上的T已被替换为Y，其以粗体表示。
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LDETPVAGPPHLRPPPPSHVPAGGPGLEDVVQEVQQVLSEFIRANPKAWAPVISAWSIDLMGQLSSTYSGQHQRVPHA
TGALNELLQLWMGCRATRTLMDIYVQCLSALIGSCPDACVDALLDTSVQHSPHFDWVVAHIGSSFPGTIISRVLSCGL
KDFCVHGGAGGGAGSSGGSSSQTPSTDPFPGSPAIPAEKRVPKIASVVGILGHLASRHGDSIRRELLRMFHDSLAGGS
GGRSGDPSLQATVPFLLQLAVMSPALLGTVSGELVDCLKPPAVLSQLQQHLQGFPREELDNMLNLAVHLVSQASGAGA
YRLLQFLVDYAMPASVITTQGLAVPDTVREACDRLIQLLLLHLQKLVHHRGGSPGEGVLGPPPPPRLVPFLDALKNHV
GELCGETLRLERKRFLWQHQLLGLLSVYTRPSCGPEALGHLLSRARSPEELSLATQLYAGLVVSLSGLLPLAFRSCLA
RVHAGTLQPPFTARFLRNLALLVGWEQQGGEGPAALGAHFGESASAHLSDLAPLLLHPEEEVAEAAASLLAICPFPSE
ALSPSQLLGLVRAGVHRFFASLRLHGPPGVASACQLLTRLSQTSPAGLKAVLQLLVEGALHRGNTELFGGQVDGDNET
LSVVSASLASASLLDTNRRHTAAVPGPGGIWSVFHAGVIGRGLKPPKFVQSRNQQEVIYNTQSLLSLLVHCCSAPGGT
ECGECWGAPILSPEAAKAVAVTLVESVCPDAAGAELAWPPEEHARATVERDLRIGRRFREQPLLFELLKLVAAAPPAL
CYCSVLLRGLLAALLGHWEASRHPDTTHSPWHLEASCTLVAVMAEGSLLPPALGNMHEVFSQLAPFEVRLLLLSVWGF
LREHGPLPQKFIFQSERGRFIRDFSREGGGEGGPHLAVLHSVLHRNIDRLGLFSGRFQAPSPSTLLRQGT(SEQ ID
NO：9)
实施例8.表2所示人BFLP1698多肽序列的变体
与表2中所列BFLP1698氨基酸序列有1个氨基酸变化的多肽序列示于下文。关于所示序列，表2所示BFLP1698序列663位上的G已被替换为P，其以粗体表示。
MALVPGRSKEDGLWTRNSPGSSQHPESPRLPNPLWDRGKIGKVEGHQHIQDFSQKSHLPSIVVESSEVNEESGDLHLP
HEELLLLTDGEEEDAEAFFQDQSEEPGAARPHHQARQVEHSTQRGHLEIRELKKKLFKRRRVLNRERRLRHRVVGAVI
DQGLITRHHLKKRAAQELSQEIKAFLTGVDPILGHQLSAREHARCGLLLLRSLPPARAAVLDHLRGVFDESVRAHLAA
LDETPVAGPPHLRPPPPSHVPAGGPGLEDVVQEVQQVLSEFIRANPKAWAPVISAWSIDLMGQLSSTYSGQHQRVPHA
TGALNELLQLWMGCRATRTLMDIYVQCLSALIGSCPDACVDALLDTSVQHSPHFDWVVAHIGSSFPGTIISRVLSCGL
KDFCVHGGAGGGAGSSGGSSSQTPSTDPFPGSPAIPAEKRVPKIASVVGILGHLASRHGDSIRRELLRMFHDSLAGGS
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LREHGPLPQKFIFQSERGRFIRDFSREGGGEGGPHLAVLHSVLHRNIDRLGLFSGRFQAPSPSTLLRQGT(SEQ ID
NO：10)
实施例9.表2所示人BFLP1698多肽序列的变体
与表2中所列BFLP1698氨基酸序列有1个氨基酸变化的多肽序列示于下文。关于所示序列，表2所示BFLP1698序列733位上的E已被替换为D，其以粗体表示。
MALVPGRSKEDGLWTRNSPGSSQHPESPRLPNPLWDRGKIGKVEGHQHIQDFSQKSHLPSIVVESSEVNEESGDLHLP
HEELLLLTDGEEEDAEAFFQDQSEEPGAARPHHQARQVEHSTQRGHLEIRELKKKLFKRRRVLNRERRLRHRVVGAVI
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CYCSVLLRGLLAALLGHWEASRHPDTTHSPWHLEASCTLVAVMAEGSLLPPALGNMHEVFSQLAPFEVRLLLLSVWGF
LREHGPLPQKFIFQSERGRFIRDFSREGGGEGGPHLAVLHSVLHRNIDRLGLFSGRFQAPSPSTLLRQGT(SEQ ID
NO：11)
实施例10.表2所示人BFLP1698多肽序列的变体
与表2中所列BFLP1698氨基酸序列有1个氨基酸变化的多肽序列示于下文。关于所示序列，表2所示BFLP1698序列858位上的T已被替换为A，其以粗体表示。
MALVPGRSKEDGLWTRNSPGSSQHPESPRLPNPLWDRGKIGKVEGHQHIQDFSQKSHLPSIVVESSEVNEESGDLHLP
HEELLLLTDGEEEDAEAFFQDQSEEPGAARPHHQARQVEHSTQRGHLEIRELKKKLFKRRRVLNRERRLRHRVVGAVI
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NO：12)
实施例11.表2所示人BFLP1698多肽序列的变体
与表2中所列BFLP1698氨基酸序列有1个氨基酸变化的多肽序列示于下文。关于所示序列，表2所示BFLP1698序列974位上的W已被替换为H，其以粗体表示。
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HEELLLLTDGEEEDAEAFFQDQSEEPGAARPHHQARQVEHSTQRGHLEIRELKKKLFKRRRVLNRERRLRHRVVGAVI
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LDETPVAGPPHLRPPPPSHVPAGGPGLEDVVQEVQQVLSEFIRANPKAWAPVISAWSIDLMGQLSSTYSGQHQRVPHA
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LSVVSASLASASLLDTNRRHTAAVPGPGGIWSVFHAGVIGRGLKPPKFVQSRNQQEVIYNTQSLLSLLVHCCSAPGGT
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CYCSVLLRGLLAALLGHWEASRHPDTTHSPWHLEASCTLVAVMAEGSLLPPALGNMHEVFSQLAPFEVRLLLLSVWGF
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NO：13)
实施例12.表2所示人BFLP1698多肽序列的变体
与表2中所列BFLP1698氨基酸序列有1个氨基酸变化的多肽序列示于下文。关于所示序列，表2所示BFLP1698序列1038位上的P已被替换为T，其以粗体表示。
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CYCSVLLRGLLAALLGHWEASRHTDTTHSPWHLEASCTLVAVMAEGSLLPPALGNMHEVFSQLAPFEVRLLLLSVWGF
LREHGPLPQKFIFQSERGRFIRDFSREGGGEGGPHLAVLHSVLHRNIDRLGLFSGRFQAPSPSTLLRQGT(SEQ ID
NO：14)
实施例13.表2所示人BFLP1698多肽序列的变体
与表2中所列BFLP1698氨基酸序列有1个氨基酸变化的多肽序列示于下文。关于所示序列，表2所示BFLP1698序列1139上位的I已被替换为L，其以粗体表示。
MALVPGRSKEDGLWTRNSPGSSQHPESPRLPNPLWDRGKIGKVEGHQHIQDFSQKSHLPSIVVESSEVNEESGDLHLP
HEELLLLTDGEEEDAEAFFQDQSEEPGAARPHHQARQVEHSTQRGHLEIRELKKKLFKRRRVLNRERRLRHRVVGAVI
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LDETPVAGPPHLRPPPPSHVPAGGPGLEDVVQEVQQVLSEFIRANPKAWAPVISAWSIDLMGQLSSTYSGQHQRVPHA
TGALNELLQLWMGCRATRTLMDIYVQCLSALIGSCPDACVDALLDTSVQHSPHFDWVVAHIGSSFPGTIISRVLSCGL
KDFCVHGGAGGGAGSSGGSSSQTPSTDPFPGSPAIPAEKRVPKIASVVGILGHLASRHGDSIRRELLRMFHDSLAGGS
GGRSGDPSLQATVPFLLQLAVMSPALLGTVSGELVDCLKPPAVLSQLQQHLQGFPREELDNMLNLAVHLVSQASGAGA
YRLLQFLVDTAMPASVITTQGLAVPDTVREACDRLIQLLLLHLQKLVHHRGGSPGEGVLGPPPPPRLVPFLDALKNHV
GELCGETLRLERKRFLWQHQLLGLLSVYTRPSCGPEALGHLLSRARSPEELSLATQLYAGLVVSLSGLLPLAFRSCLA
RVHAGTLQPPFTARFLRNLALLVGWEQQGGEGPAALGAHFGESASAHLSDLAPLLLHPEEEVAEAAASLLAICPFPSE
ALSPSQLLGLVRAGVHRFFASLRLHGPPGVASACQLLTRLSQTSPAGLKAVLQLLVEGALHRGNTELFGGQVDGDNET
LSVVSASLASASLLDTNRRHTAAVPGPGGIWSVFHAGVIGRGLKPPKFVQSRNQQEVIYNTQSLLSLLVHCCSAPGGT
ECGECWGAPILSPEAAKAVAVTLVESVCPDAAGAELAWPPEEHARATVERDLRIGRRFREQPLLFELLKLVAAAPPAL
CYCSVLLRGLLAALLGHWEASRHTDTTHSPWHLEASCTLVAVMAEGSLLPPALGNMHEVFSQLAPFEVRLLLLSVWGF
LREHGPLPQKFIFQSERGRFIRDFSREGGGEGGPHLAVLHSVLHRNLDRLGLFSGRFQAPSPSTLLRQGT(SEQ ID
NO：15)
其它实施方案
尽管本发明已结合其详述进行了描述，但前述描述旨在举例说明，而并非限制本发明的范围，所述范围是由所附权利要求书的范围限定的。其它方面、优点和修饰落在如下权利要求书的范围之内。
序列表
<110>Wyeth
O’Toole，Margot
Mounts，William M
Shojaee，Negin
<120>用于治疗狼疮性肾炎的组合和方法
<130>22058-581-061
<140>PCT/US03/37317
<141>2003-11-21
<150>60/428,065
<151>2002-11-21
<160>22
<170>PatentIn Ver.2.1
<210>1
<211>3652
<212>DNA
<213>智人
<400>1
atggcccttg tgccagggag aagcaaggag gatgggcttt ggactagaaa tagcccaggc 60
tcctcccagc atccagaaag tcccaggctg cccaaccctc tctgggacag aggaaaaatt 120
ggcaaggttg aaggtcacca gcacattcag gatttctctc aaaagtccca tctgccgtct 180
attgtggtgg aatccagtga ggtgaatgaa gagagtgggg atctccattt gccccatgag 240
gagctgctgc tgctcactga tggtgaggaa gaggatgctg aggccttctt ccaagaccaa 300
agtgaagagc caggggcggc acgtccccat catcaggctc ggcaagtgga gcattcgacg 360
cagcgcggcc atctggagat tcgggagctg aagaagaagc tgttcaaacg ccggcgggtg 420
ttgaatcggg agcggcgtct gaggcaccgg gtggtcgggg ctgtgataga ccaagggctg 480
atcacgcggc accacctcaa gaagcgggct gctcaggagc tgtcccagga aatcaaggct 540
tttctgactg gcgtagaccc cattctgggc caccaactct cagcccggga acatgctcgc 600
tgtggtcttc tcctgctccg ttctttgcca cctgctcggg ctgctgtgct tgaccacttg 660
agaggtgtct ttgatgagag tgtccgggcc cacctggctg ccctggatga aacccctgtg 720
gctggtccac ctcacctccg tccacctcca ccctctcatg tccctgctgg tggacctggt 780
ctagaggatg tggttcagga agtgcagcag gtgctgtctg agtttatccg ggccaaccca 840
aaggcctggg cacctgtgat tagtgcatgg tccattgacc tcatggggca actgagcagc 900
acgtactcag gccagcacca gcgtgttccc cacgctactg gcgctcttaa tgaactgcta 960
cagctgtgga tgggttgtag ggccacgcgt acattaatgg acatctatgt gcagtgcctc 1020
tcggctctca ttggtagctg cccagatgcg tgtgtggatg ccttgctgga tacctctgtt 1080
cagcattctc cacactttga ctgggttgtg gcacatattg gctcctcttt tcctggcacc 1140
atcatttccc gggttctctc ctgtggcctt aaggactttt gtgtccatgg tggggctgga 1200
ggtggagctg gcagtagtgg tggaagctct tctcagaccc cctctacaga ccccttccct 1260
ggatctcctg ccattcctgc ggagaaacgg gtgcccaaga ttgcctcagt tgtaggcatc 1320
ctaggtcacc tggcctcccg ccacggagat agcatccgac gggagctcct gcgaatgttc 1380
catgatagcc tggcaggggg atctggaggc cgcagtgggg acccctccct tcaggccacg 1440
gttccgttcc tactgcagct ggcagtcatg tcaccagctt tgctgggcac tgtctctgga 1500
gagcttgtgg attgcctcaa gcccccagct gtgctgagcc agctgcagca acaccttcaa 1560
ggattccccc gagaggagct ggacaacatg ttgaacctgg ctgtgcacct ggtgagccag 1620
gcctctgggg caggtgccta ccgcttgctg cagttcctgg tggacacagc tatgcctgct 1680
tcggtcatta ccacccaggg cctggctgtg ccagacaccg tgcgtgaggc ttgtgaccgg 1740
ctaatccagc tgctgctgct gcacctgcaa aaactggttc atcaccgggg agggtctcct 1800
ggggaagggg tgctaggccc gcccccacct ccccgcttgg tgcccttttt agatgcgctc 1860
aaaaaccatg ttggagagct gtgtggagag acgttacgat tggaacggaa gcgcttcctc 1920
tggcagcacc agctcttggg cctgctgtct gtctataccc ggcctagctg tggacctgag 1980
gccttgggcc atctgctgag ccgagcccga agccctgaag agttgagttt ggccacccag 2040
ttatatgcag ggctagtggt cagcctctct ggcctcctgc ccctggcttt ccgaagctgt 2100
ctggctcggg tgcatgcagg gacattacag cctcccttca cggcccggtt cctgcgcaac 2160
ttggcactgc tagtagggtg ggaacagcag ggtggcgagg gccctgcagc cctaggggcg 2220
cactttgggg aatctgcctc agcccatctg tctgacctgg ctcctctcct gctacatcct 2280
gaggaggaag tagctgaagc tgctgcctct ctcctggcca tttgtccctt tccttctgaa 2340
gccttatccc cctcccagct cctgggactg gtaagggctg gggtgcaccg cttctttgcc 2400
tctctgaggc tgcatggacc cccaggtgtg gcctcagcct gtcagcttct cacccgcctg 2460
tctcagacat ccccagctgg gctcaaggct gtcctgcagc tgctggttga aggagcctta 2520
catcgaggca acacagaact gtttggtggg caagtagatg gggacaatga gactctctca 2580
gttgtttcag cttctttggc ttctgcctcc ctgttggaca ctaaccggag gcacactgca 2640
gctgtgccag gtcctggagg gatttggtca gttttccatg ctggagtcat cggccgtggc 2700
ttaaagccac ccaagtttgt ccagtcacga aatcagcagg aagtgatcta taacacccag 2760
agcctcctca gcctcctggt tcactgctgc agtgccccag ggggcactga atgtggggaa 2820
tgctgggggg cacccatctt gagtccagag gcagccaaag cagtggcagt gaccttggtg 2880
gagagtgtgt gtcccgatgc agctggtgca gagctggcct ggccccccga ggaacacgcc 2940
cgggccaccg tggagcggga tctccgcatt ggccggcgct tccgcgaaca gcccctgctc 3000
tttgagctgt taaagctggt agcagctgca cccccagccc tgtgctactg ttccgtgctg 3060
cttcgggggc tgctggccgc cctcttgggc cattgggaag cctctcgcca ccctgacacg 3120
acccactccc cctggcacct ggaggcatcc tgcaccttag tggctgtcat ggctgaggga 3180
agcctcctgc ctccggccct gggtaatatg catgaagtat ttagccaact ggcacctttc 3240
gaggtgcgtc tgctgctgct cagtgtctgg ggttttctcc gggagcatgg gcccttgcct 3300
cagaagttca tcttccaatc agagcggggt cgcttcattc gggacttctc cagggagggt 3360
ggaggtgagg gtggacccca tctggctgtg ctgcacagtg tcctccaccg caacatcgac 3420
cgcctaggtc ttttctctgg ccgtttccag gcaccttcac cgtccactct ccttcgacag 3480
gggacgtagc cttttcttgc tctggaagcc cagggaggtt gagcagtgag agagggaagg 3540
gactaacgtg ctccggaagg gtggaggttt ctcttctaag tccttggtct aaagagcgct 3600
gtcacttttt tctctcccac tttttttttt ctaaataaaa tttgccaact tg 3652
<210>2
<211>1162
<212>PRT
<213>智人
<400>2
Met Ala Leu Val Pro Gly Arg Ser Lys Glu Asp Gly Leu Trp Thr Arg
1 5 10 15
Asn Ser Pro Gly Ser Ser Gln His Pro Glu Ser Pro Arg Leu Pro Asn
20 25 30
Pro Leu Trp Asp Arg Gly Lys Ile Gly Lys Val Glu Gly His Gln His
35 40 45
Ile Gln Asp Phe Ser Gln Lys Ser His Leu Pro Ser Ile Val Val Glu
50 55 60
Ser Ser Glu Val Asn Glu Glu Ser Gly Asp Leu His Leu Pro His Glu
65 70 75 80
Glu Leu Leu Leu Leu Thr Asp Gly Glu Glu Glu Asp Ala Glu Ala Phe
85 90 95
Phe Gln Asp Gln Ser Glu Glu Pro Gly Ala Ala Arg Pro His His Gln
100 105 110
Ala Arg Gln Val Glu His Ser Thr Gln Arg Gly His Leu Glu Ile Arg
115 120 125
Glu Leu Lys Lys Lys Leu Phe Lys Arg Arg Arg Val Leu Asn Arg Glu
130 135 140
Arg Arg Leu Arg His Arg Val Val Gly Ala Val Ile Asp Gln Gly Leu
145 150 155 160
Ile Thr Arg His His Leu Lys Lys Arg Ala Ala Gln Glu Leu Ser Gln
165 170 175
Glu Ile Lys Ala Phe Leu Thr Gly Val Asp Pro Ile Leu Gly His Gln
180 185 190
Leu Ser Ala Arg Glu His Ala Arg Cys Gly Leu Leu Leu Leu Arg Ser
195 200 205
Leu Pro Pro Ala Arg Ala Ala Val Leu Asp His Leu Arg Gly Val Phe
210 215 220
Asp Glu Ser Val Arg Ala His Leu Ala Ala Leu Asp Glu Thr Pro Val
225 230 235 240
Ala Gly Pro Pro His Leu Arg Pro Pro Pro Pro Ser His Val Pro Ala
245 250 255
Gly Gly Pro Gly Leu Glu Asp Val Val Gln Glu Val Gln Gln Val Leu
260 265 270
Ser Glu Phe Ile Arg Ala Asn Pro Lys Ala Trp Ala Pro Val Ile Ser
275 280 285
Ala Trp Ser Ile Asp Leu Met Gly Gln Leu Ser Ser Thr Tyr Ser Gly
290 295 300
Gln His Gln Arg Val Pro His Ala Thr Gly Ala Leu Asn Glu Leu Leu
305 310 315 320
Gln Leu Trp Met Gly Cys Arg Ala Thr Arg Thr Leu Met Asp Ile Tyr
325 330 335
Val Gln Cys Leu Ser Ala Leu Ile Gly Ser Cys Pro Asp Ala Cys Val
340 345 350
Asp Ala Leu Leu Asp Thr Ser Val Gln His Ser Pro His Phe Asp Trp
355 360 365
Val Val Ala His Ile Gly Ser Ser Phe Pro Gly Thr Ile Ile Ser Arg
370 375 380
Val Leu Ser Cys Gly Leu Lys Asp Phe Cys Val His Gly Gly Ala Gly
385 390 395 400
Gly Gly Ala Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser Ser Gln Thr Pro Ser Thr
405 410 415
Asp Pro Phe Pro Gly Ser Pro Ala Ile Pro Ala Glu Lys Arg Val Pro
420 425 430
Lys Ile Ala Ser Val Val Gly Ile Leu Gly His Leu Ala Ser Arg His
435 440 445
Gly Asp Ser Ile Arg Arg Glu Leu Leu Arg Met Phe His Asp Ser Leu
450 455 460
Ala Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ser Gly Asp Pro Ser Leu Gln Ala Thr
465 470 475 480
Val Pro Phe Leu Leu Gln Leu Ala Val Met Ser Pro Ala Leu Leu Gly
485 490 495
Thr Val Ser Gly Glu Leu Val Asp Cys Leu Lys Pro Pro Ala Val Leu
500 505 510
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Met Ala Leu Val Pro Gly Arg Ser Lys Glu Asp Gly Leu Trp Thr Arg
1 5 10 15
Asn Ser Pro Gly Ser Ser
20
Claims (53)
1.分离的核酸分子，其编码包括与SEQ ID NO：2的氨基酸序列至少95％同一性的氨基酸序列的多肽。
2.权利要求1的分离的核酸分子，其中所述核酸分子编码结合雷帕霉素的多肽。
3.权利要求1的分离的核酸分子，其中所述核酸分子编码与SEQID NO：2的氨基酸序列有至少98％同一性的多肽。
4.权利要求1的分离的核酸分子，其中所述分子在严格条件下与互补于包括SEQ ID NO：1的核苷酸1-3486的核酸分子的核酸序列杂交。
5.权利要求1的分离的核酸分子，其中所述核酸分子编码包括SEQ ID NO：2的氨基酸序列的多肽。
6.权利要求1的分离的核酸分子，其中所述核酸分子包括SEQID NO：1的核苷酸1-3486。
7.包含权利要求1的核酸分子的载体。
8.包括权利要求7的载体的细胞。
9.基本上纯化的多肽，其包括与SEQ ID NO：2的氨基酸序列至少95％同一性的氨基酸序列。
10.权利要求9的多肽，其中所述多肽结合雷帕霉素。
11.权利要求9的多肽，其中所述多肽的氨基酸序列与SEQ IDNO：2的氨基酸序列有至少98％的同一性。
12.权利要求9的多肽，其中所述多肽的氨基酸序列与SEQ IDNO：2的氨基酸序列具有至少99％的同一性。
13.权利要求9的多肽，其中所述多肽的氨基酸序列包括SEQ IDNO：2的氨基酸序列。
14.权利要求9的多肽，其中所述多肽的氨基酸序列由SEQ IDNO：2的氨基酸序列组成。
15.融合多肽，其包括与非BFLP1698多肽可操作地连接的权利要求9的多肽。
16.权利要求9的融合多肽，其中所述非BFLP1698多肽包括选自免疫球蛋白分子Fc区或FLAG表位、HIS标签及MYC标签的至少一个成员。
17.包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的雷帕霉素结合结构域的多肽。
18.长度至少为993个氨基酸的多肽，其包括SEQ ID NO：2的至少5个连续的氨基酸，前提是所述多肽包括除SEQ ID NO：22之外的氨基酸序列。
19.权利要求18的多肽，其中所述多肽包含雷帕霉素结合结构域。
20.包括SEQ ID NO：16的至少5个连续的氨基酸的多肽。
21.权利要求20的多肽，其中所述多肽包含雷帕霉素结合结构域。
22.权利要求20的多肽，其中所述多肽的长度至少为50个氨基酸。
23.权利要求20的多肽，其中所述多肽的长度至少为100个氨基酸。
24.权利要求20的多肽，其中所述多肽的长度至少为220个氨基酸。
25.药物组合物，其包括权利要求17的多肽以及药学上可接受的载体。
26.融合多肽，其包括与非BFLP1698多肽可操作地连接的BFLP1698多肽的雷帕霉素结合结构域。
27.权利要求26的融合多肽，其中所述非BFLP1698多肽包括选自免疫球蛋白分子Fc区或FLAG表位、HIS标签及MYC标签中的至少一个成员。
28.药物组合物，其包括权利要求26的融合多肽以及药学上可接受的载体。
29.与权利要求9的多肽选择性地结合的抗体。
30.权利要求29的抗体，其中所述抗体抑制 BFLP1698多肽与雷帕霉素的结合。
31.权利要求29的抗体，其中所述抗体为多克隆抗体。
32.权利要求29的抗体，其中所述抗体为单克隆抗体。
33.权利要求32的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体选自鼠单克隆抗体以及人源化单克隆抗体。
34.生产BFLP1698多肽的方法，所述方法包括在允许由所述核酸分子编码的BFLP1698多肽表达的条件下培养包括权利要求1的核酸分子的细胞。
35.检测生物学样品中BFLP1698核酸分子的存在的方法，所述方法包括：
使样品同与BFLP1698核酸特异性结合的核酸探针进行接触；和
如果存在的话，鉴定结合的探针，
由此检测所述样品中BFLP1698核酸分子的存在。
36.检测样品中BFLP1698多肽的存在的方法，所述方法包括：
使样品同与所述多肽选择性结合的化合物在允许所述多肽和所述化合物之间形成复合物的条件下进行接触；和
如果存在的话，检测所述复合物，由此鉴定所述样品中的所述多肽。
37.权利要求36的方法，其中所述化合物为雷帕霉素。
38.权利要求36的方法，其中所述化合物为抗-BFLP1698抗体。
39.用于确定受试者中狼疮性肾炎的存在或易感性的方法，所述方法包括：
a)测量来自所述受试者的样品中BFLP1698核酸分子的量；和
b)将步骤(a)中所述核酸的量与来自没有狼疮性肾炎的受试者的对照样品中存在的核酸的量进行比较，
其中步骤(a)中所述BLP1698核酸水平较之于对照样品中核酸水平的提高表明所述受试者中狼疮性肾炎的存在或易感性。
40.权利要求39的方法，其中所述受试者为人。
41.用于确定受试者中狼疮性肾炎的存在或易感性的方法，所述方法包括：
a)测量来自所述受试者的样品中BFLP1698多肽的量；和
b)将所述多肽的量与来自没有狼疮性肾炎的受试者的对照样品中存在的核酸的量进行比较，
其中所述BLP1698多肽的水平较之于对照样品中多肽水平的提高表明所述受试者中狼疮性肾炎的存在或易感性。
42.权利要求41的方法，其中所述受试者为人。
43.用于筛选用以治疗自身免疫紊乱的治疗剂的方法，所述方法包括：
使测试化合物与BFLP1698多肽进行接触；和
确定所述测试化合物是否与所述BFLP1698多肽结合，
其中所述测试化合物与所述多肽的结合表明该测试化合物为自身免疫紊乱的治疗剂。
44.权利要求43的方法，其中所述免疫紊乱为自身免疫紊乱。
45.权利要求44的方法，其中所述自身免疫紊乱为狼疮。
46.权利要求44的方法，其中所述自身免疫紊乱为狼疮性肾炎。
47.权利要求43的方法，其中所述BFLP1698在无细胞提取物中提供。
48.权利要求43的方法，其中所述BFLP1069在细胞中提供。
49.治疗受试者的狼疮性肾炎的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的抑制所述受试者中BFLP1698多肽活性的试剂。
50.权利要求49的方法，其中所述受试者为人。
51.权利要求49的方法，其中所述试剂为抗-BFLP1698抗体。
52.药物组合物，其包括抑制受试者中BFLP1698多肽活性的试剂以及药学上可接受的载体。
53.权利要求52的药物组合物，其中所述试剂为抗-BFLP1698抗体。
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