CN1738644A - 胃泌素组合物和制剂及其使用和制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供的实施方案是包含胃泌素化合物的药物组合物，所述胃泌素化合物与天然胃泌素相比，在给药于患者后具有延长的活性。提供了使胃泌素的部分氨基酸序列与多种载体部分进行偶合的方法，所述胃泌素具有结合胃泌素/CCK、受体的功能活性，该方法包括使用氨基酸间隔区和使用双功能交联剂。提供了使用组合物治疗糖尿病患者的方法。

Description

胃泌素组合物和制剂及其使用和制备方法
发明领域
本发明以多种实施方案提供了具有比胃泌素肽更长的体内活性机能的胃泌素组合物、制备方法以及使用胃泌素组合物治疗糖尿病的方法。
发明背景
治疗剂，例如疾病治疗中用到的肽和低分子蛋白质，受到很多的限制。这些治疗剂通常在短时间内通过肾脏得到排除，或通过蛋白酶得到降解，因此限制了它们的生物利用度，导致短的血浆半衰期和比疗效所需更低的药物浓度。就需要维持长时间的高血清水平以获得最大疗效而言，治疗药物的高清除率不是最理想的。增加剂量或提高给药频率通常带来更高疗效，但也带来更高的副作用风险，因此限制了投放剂量或投放频率。
一些肽激素在血流中的半衰期极短，导致给药后不久就丧失了生物活性。已证实胃泌素是联合其他生长因子来有效地治疗糖尿病的肽激素。然而，单独投放胃泌素时，疗效受到限制。此外，已发现胃泌素具有比较短的半衰期。例如胃泌素-17具有约5-9分钟的循环半衰期，而胃泌素-34具有约35分钟的循环半衰期。
因此需要含有具有延长或长效的作用的胃泌素化合物的组合物。
简述
本发明的特征实施例提供了包含胃泌素化合物的药物组合物，该胃泌素化合物与天然胃泌素相比，在给药给患者后具有延长的活性。该实施方案中的胃泌素成分含有至少选自于下列的氨基酸：SEQ IDNO：1中的29-34位、SEQ ID NO：2中的29-34位、SEQ ID NO：3中的12-17位、和SEQ ID NO：4中的12-17位，并且胃泌素进一步与蛋白质、聚合物、脂质或碳水化合物缔合。
选择性的特征实施方案提供了包含Z-Ym-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6的胃泌素化合物，其中AA1是Tyr或Phe，AA2是Gly、Ala或Ser，AA3是Trp、Val或Ile，AA4是Met或Leu，AA5是Asp或Glu，以及AA6是Phe或Tyr，AA6被酰胺化；其中Z是聚合物，当该聚合物是蛋白质时，Z是该蛋白质的氨基酸序列；Ym是任选的间隔区，包括m个小分子中性氨基酸的氨基酸残基，并且X选自于下列任意的连续部分：SEQ ID NO：1的1-28位残基，SEQ ID NO：2的1-28位残基，SEQ ID NO：3的1-11位残基，和SEQ ID NO：4的1-11位残基，条件是该胃泌素化合物结合胃泌素/CCK受体。例如AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6是Tyr-Gly-Trp-Met-Asp-Phe。或者AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6是Tyr-Gly-Trp-Leu-Asp-Phe。在此通式中，Z是蛋白质，例如，Z是人血清清蛋白。
Y是包含m个碱基的氨基酸序列，其具有交替的甘氨酸和丙氨酸，例如[Gly-Ala]5，或者具有甘氨酸和丙氨酸的随机序列。当m大于1时，在Y氨基酸末端，或当m为0时，在X氨基酸末端，该胃泌素化合物还具有半胱氨酸残基。胃泌素化合物还包括用于键合Z的双功能交联剂。一般地，m是0至约20个残基。在某个实施方案中，如果m是0，其中Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6还包括用于键合Z的双功能交联剂。
在某个实施方案中，X选自于下列序列：SEQ ID NO：3的1位至11位；SEQ ID NO：4的1位至11位；SEQ ID NO：3的2位至11位；以及SEQ ID NO：4的2位至11位。其中Z是蛋白质的胃泌素化合物可以以重组方式产生。
本申请提供的另一个实施方案是编码其中Z是蛋白质的胃泌素化合物的核酸序列。还提供携带该核酸序列的细胞。该细胞是细菌或酵母细胞。当该细胞是细菌细胞时，它可以是，例如，埃希氏菌属、芽孢杆菌属或链霉菌属的种的细胞。当该细胞是酵母细胞时，它可以是酵母属、克鲁维酵母属、裂殖酵母属或毕赤酵母种的细胞。
胃泌素化合物通常含有最小胃泌素成分，该成分至少是SEQ IDNO：2的29-34位氨基酸或SEQ ID NO：4的12-17位氨基酸。它们位于循环中出现的胃泌素的羧基末端，在多种实施方案中，可以存在例如来自胃泌素的附加氨基酸。
聚合物成分不必限于蛋白质，还可以是例如聚乙二醇(PEG)或葡聚糖的化学合成聚合物。当聚合物是蛋白质时，在多种实施方案中，其是血清蛋白，例如血清清蛋白，例如人血清清蛋白。
本申请提供的胃泌素化合物的另一个实施方案具有C-Ym-X结构，其中C是Cys或Lys，Ym是任选的包含m个中性小氨基酸的氨基酸残基的间隔区，X是至少六个氨基酸残基，其包含选自于胃泌素-17(SEQ ID NO：3和4)的至少位点12-17的序列以及胃泌素-34(SEQID NO：1和2)的至少29-34位点的序列。胃泌素化合物还与聚合物进行偶合，例如，与聚乙二醇(PEG)或葡聚糖进行偶合。胃泌素化合物还选择性地与蛋白质偶合。在某个实施方案中，胃泌素化合物还包括双功能交联剂，其中交联剂的第一个反应末端与C共价结合。交联剂的第二个反应末端与聚合物或蛋白质共价结合。C-Ym-X可以以重组方式生产，或通过肽合成法得以合成。
在某个实施方案中，本申请提供的任意胃泌素化合物是以有效剂量得以提供的。本申请提供的胃泌素化合物还包括免疫抑制剂。本申请提供的胃泌素化合物还包括降血糖剂。本申请提供的胃泌素化合物还包括药学上可接受的载体。本申请提供的胃泌素化合物还包括生长因子。例如，在某个实施方案中，生长因子是胰高血糖素样肽1受体配体。或者，在某个实施方案中，生长因子是EGF受体配体。
本申请还提供本发明的实施方案，其包括用于治疗患有糖尿病的患者的药物的制备方法，包括配制根据说明书描述的任一胃泌素化合物，以及将胃泌素化合物给药于患者。在该方法的某个实施方案中，胃泌素化合物的给药频率少于天然胃泌素的给药频率。该方法还包括测量胰岛再生的生理指示剂，例如，测量空腹血糖(FBG)。该方法包括降低胰岛素的依赖性。
本发明的另一个实施方案还提供胃泌素化合物的制备方法，该方法为将胃泌素的氨基酸序列与一种载体成分组合物缔合。相应地，在胃泌素与载体缔合前，修饰胃泌素使其包含半胱氨酸替换或附加的半胱氨酸残基。半胱氨酸替换是焦谷氨酸替换。胃泌素氨基酸序列包括至少选自于：氨基酸序列SEQ ID NO：1中29-34位残基；氨基酸序列SEQ ID NO：2中的29-34位残基；氨基酸序列SEQ ID NO：3中的12-17残基；以及氨基酸序列SEQ ID NO：4的12-17残基。在某个实施方案中，半胱氨酸是在胃泌素的氨基酸末端；或者，在胃泌素与载体缔合前，该方法包括修饰胃泌素使其进一步包括双功能交联剂。
本发明的另一个实施方案还提供了用于治疗糖尿病病人的药物的制备方法，该方法包括配制能与血清蛋白共价反应的修饰的胃泌素化合物，以及给病人给药修饰的胃泌素。修饰的胃泌素包括能结合胃泌素/CCK受体以及半胱氨酸或赖氨酸的氨基酸末端的天然胃泌素序列。相应地，天然胃泌素序列选自于：氨基酸序列SEQ ID NO：1中的29-34位残基；氨基酸序列SEQ ID NO：2中的29-34位残基；氨基酸序列SEQ ID NO：3中的12-17位残基；以及氨基酸序列SEQ ID NO：4中的12-17位残基。
本申请还提供了与具有胃泌素的氨基酸序列的肽的血清水平相比，用于长时间地维持增长的胃泌素血清水平的药物的制备方法，该方法包括配制定义如上所述的胃泌素化合物，以及给药该胃泌素化合物。
本申请还提供包含如本申请描述的、至少一种有效剂量的胃泌素化合物的试剂盒。
附图简介
图1显示在14天处理后，未修饰的胃泌素对最近糖尿病发作的NOD小鼠的空腹血糖水平的影响。
图2显示在14天处理后，未修饰的胃泌素对最近糖尿病发作的NOD小鼠的胰腺胰岛素水平的影响。
发明详叙
使用长效作用的胃泌素化合物，能导致通过酶降低胃泌素的清除率或减少胃泌素的降解，从而长期维持高浓度的血浆胃泌素和/或提高胃泌素的半衰期，因此导致疗效得以提高。通过使用较低剂量和/或降低对糖尿病病人给药胃泌素的频率而改进剂量方案。此外，当胃泌素与载体轭合时，有可能一些载体也能屏蔽胃泌素而不被免疫系统识别，因此减少或抑制胃泌素激发免疫反应，以及提高血清胃泌素的半衰期和/或维持高浓度的血清胃泌素。
本发明的常规实施方案提供了具有胃泌素样活性的组合物，本文中是指胃泌素化合物。如此处所用的术语“胃泌素化合物”，意指结合、刺激或与胃泌素/CCK受体相互作用的制剂。胃泌素化合物包括能与胃泌素/CCK受体相互作用的胃泌素衍生物和偶合物以及肽同系物。此处所用的术语“衍生物”和“偶合物”是等效的，其用于指示化学性质关联的组合物，并且其通过合成的、生物的、重组的或化学的方法得以制备。
在多个实施方案中，制备“修饰的”胃泌素并用于治疗患有糖尿病的病人。如此处所用的术语“糖尿病”，是指胰岛素缺乏、抗胰岛素抗体的生成、或血糖过量的任何生理迹象，或者包括实验动物模型的任何哺乳动物、以及包括例如I型和II型糖尿病的人模式的任何明显糖尿病症状，早期糖尿病和糖尿病的前期症状以温和减少胰岛素或温和提高血糖水平为特征。如此处所用的，术语“哺乳动物”具有哺乳类的任何一员，并且包括人的普通含义。
修饰的胃泌素可以是胃泌素衍生物或类似物，包括6个氨基酸(来自C-末端)的最小序列，以及还可添加例如能经受加成反应的半胱氨酸残基(涉及SEQ ID 1-4)的反应性基团。在多个实施方案中，胃泌素可延伸至34个氨基酸(“大”胃泌素或胃泌素-34)，其中至少1个反应性氨基酸，例如半胱氨酸残基或赖氨酸残基，在N-末端被添加或替换。例如半胱氨酸的反应性氨基酸的添加可以在末端区，并且在有关的实施方案中，间隔区可以任选地位于添加的反应性氨基酸之前。例如，间隔区可以作为胃泌素氨基酸序列的一部分被生物合成或可以化学结合于胃泌素的氨基酸序列上，形成具有胃泌素序列-间隔区-半胱氨酸的结构。例如，间隔区是由几个例如丙氨酸或甘氨酸组成的氨基酸序列。氨基酸序列可以是交替的氨基酸(如甘氨酸/丙氨酸)或是非交替的，即可以是随机序列或特定的序列。序列至少由一个氨基酸组成。
在选择性的实施方案中，将作为反应性成分的双功能交联剂添加到修饰的胃泌素，特别是添加到在氨基酸末端具有添加的反应性基团(如，半胱氨酸)，或添加到具有间隔区的修饰胃泌素中，通过交联剂的同双功能或异双功能部分而在一个末端上生成具有例如硫醇或氨基的反应性基团的修饰的胃泌素(例如，以形成如下列羧基末端所列出的，具有暴露的反应性基团的胃泌素-间隔区-cys-交联剂-载体、胃泌素-cys-交联剂-载体、胃泌素-间隔区-cys/-交联剂，以及具有暴露的反应性基团的胃泌素-cys-交联剂)。
然后在这种情形下将修饰的胃泌素注射到病人中，或者在注射前，在体外将其偶合到例如从病人中获得的全血浆或分馏的血清的一种或多种血浆成分，或结合例如清蛋白、转铁蛋白或免疫球蛋白的一种或多种纯化的血清蛋白(质)，或结合脂质/亲脂性部分/疏水性部分、或结合例如葡聚糖或PEG的聚合物载体。如此处所用的和权利要求中的术语聚合物，包括氨基酸、糖、核苷的聚合物、合成聚合物(例如PEG)及其混合物。例如在结合之前，可通过双功能交联剂或通过其他化学方法活化聚合物。与给药天然胃泌素相比，给药活化的胃泌素化合物或胃泌素偶合物导致提高血清的半衰期和/或长期维持胃泌素的高血药浓度。
本发明的一般性实施方案提供具有部分的胃泌素组合物，所述部分是胃泌素化合物，并与大分子例如聚合物或融合蛋白以非共价方式或以共价轭合物形式缔合或以与具有氨基酸序列的其他肽化合物的融合蛋白的形式缔合。与天然胃泌素形式相比，本文中提及的胃泌素化合物在患病动物或病人中具有更长的循环半衰期，和/或维持更高的胃泌素化合物体内浓度。此外，本发明在其他实施方案中提供了组合物和制备及实验胃泌素化合物的方法，既可单独提供给病人或者联合至少一种生长因子、联合降血糖剂、或联合免疫抑制剂来治疗糖尿病。生长因子的实例包括但不限于例如EGF的EGF受体配体、例如GLP-1的GLP-1受体配体，例如促乳泌素的促乳泌素受体配体和例如生长激素的生长激素受体配体。免疫抑制剂的实例包括但不限于环孢霉素、FK506、雷帕霉素和daclizumab。降血糖剂的非限制型实例包括磺胺尿素、meglitinide、双胍、噻唑烷二酮和α-葡糖苷酶抑制剂。
在一个实施方案中，胃泌素化合物可在血液中结合比较大的结构或多个结构，并且依然保持结合靶蛋白的能力，例如胃泌素/CCK受体。通常，胃泌素，其在体内以别的方式快速降解，结合于载体蛋白；使用该组合物，可获得更长期的药效。或者胃泌素化合物可以偶合到聚合物载体例如聚乙二醇(PEG)或葡聚糖上，可达到相似的目的。
在某个实施方案中，对胃泌素的化学修饰用于提供能在体外或体内与载体蛋白或聚合物载体共价或非共价反应的化合物。在相关的实施方案中，非共价相互作用是静电的或疏水的。在其他的实施方案中，以所述的方式修饰胃泌素，使得当注射它时具有在血流中对载体的增强的亲和力。在另一个实施方案中，无需载体蛋白，在体内或体外通过化学修饰来制备长效的胃泌素化合物。
在某个实施方案中，载体蛋白是血浆蛋白。在相关的实施方案中，血浆蛋白是清蛋白或免疫球蛋白或免疫球蛋白的成分。在结合之前，可修饰或部分缺失免疫球蛋白或免疫球蛋白的成分。在某个实施方案中，聚合物载体是聚乙二醇或葡聚糖。例如，通过胃泌素化合物中的氨基，将活化的PEG结合于胃泌素化合物(Vernonese，FM.Biomaterials 22(2001)-405-417)。
在其他实施方案中，在注射前，使用标准的重组遗传技术，将作为氨基酸序列的胃泌素化合物与载体蛋白进行遗传工程融合，其中所述蛋白也作为氨基酸序列。将胃泌素与具有或不具有交联剂/间隔区的载体蛋白，例如包括小分子中性不带电的氨基酸重组融合。编码胃泌素的核酸可与全部或部分的载体蛋白进行重组融合或直接合成，并且该核酸构建体或融合蛋白，可编码或插入许多作为两个蛋白之间的间隔区的附加氨基酸。重组的融合蛋白可在酵母(酵母属、毕赤酵母)或标准的细菌系统中表达，或者可使用哺乳类或昆虫细胞系统。在表达和/或纯化的标准程序之后，融合蛋白可用于治疗上。在融合蛋白的构建中，如果需要，可引入对胃泌素化合物的多肽序列的修饰。
在一个实施方案中，修饰胃泌素化合物，以引入例如那些存在于氨基酸例如赖氨酸或半胱氨酸上的的反应性基团，以致于还与例如载体蛋白或载体非蛋白质的聚合物的其他化合物相接触的反应性基团，能与载体蛋白或聚合物形成共价相互作用。例如，使用琥珀酰亚氨基丙酸-3-2-吡啶二硫基酯(SPDP)，通过在赖氨酸的氨基添加反应硫醇基至胃泌素分子上，随后用DTT还原以释放活性硫醇基((″Proteinthiolation and reversible protein-protein conjugation.N-Succinimidyl3-(2-pyridyldithio)propionate，a new heterobifunctional reagent.″Carlsson J，Drevin H，Axen R.Biochem J 173，723-737(1978))。此外，在添加了半胱氨酸或赖氨酸后，还可添加双功能基团，以致于交联剂的一个反应性末端与半胱氨酸/赖氨酸进行反应，同时在另一末端的另一个反应性末端保持暴露或与载体偶合。
通过EDAC介导的与胱胺的反应，随后使用DTT还原二硫化物，也可在羧基插入硫醇(″Introduction of sulffiydryl groups into proteinsat carboxyl sites.″Lin CM，Mihal KA，Krueger RJ.Biochim BiophysActa 1038，382-385(1990)。在非限制性的实施例中，通过使反式-4-(马来酰亚胺甲基)环己胺-1-羧酸琥珀酰亚胺基酯(″Conjugation ofglucose oxidase from Aspergillus niger and rabbit antibodies using N-hydroxysuccinimide ester of N-(4-carboxycyclohexylmethyl)-maleimide.″Yoshitake S，Yamada Y，Ishikawa E，Masseyeff R.Eur JBiochem 101，395-399(1979))，与胃泌素中的赖氨酸残基上的氨基反应，在胃泌素的氨基酸位点引入硫醇反应性基团，所述胃泌素随后与载体蛋白或无硫醇基的活化聚合物的半胱氨酸残基反应。
胃泌素化合物-载体复合物包括附加的模式成分，其含有容易制备或分离胃泌素化合物-载体复合物的、或增强或维持胃泌素化合物的功能活性的间隔臂或元件或其他成分。间隔臂可以是一个或多个氨基酸、肽、多肽模拟物、或有机小分子，以及可以包括同双功能或异双功能交联剂或几丁质寡居物或聚乙二醇或相关的聚合物。
在另一个实施方案中，载体和胃泌素化合物可以与或不与间隔臂进行共价交联。非间隔臂(零长度的交联剂)的实例包括EDC。例如，生成间隔臂的同双功能交联剂是辛二酸二琥珀酰亚胺基酯，生成间隔臂的异双功能交联剂是2-亚氨基硫杂环戊烷、6-琥珀酰亚氨基[3-(2-吡啶二硫基)丙酰氨基]己酸(LC-SPDP)和4-(N-甲基马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸酯(SMCC)。
在多个实施方案中，胃泌素化合物可与更大的载体部分如聚合物，例如蛋白质缔合。由于缔合可以是共价或非共价的，蛋白质可以被认为是载体蛋白。载体蛋白的种类可以具有非抗原的性质，即，是天然的人蛋白，以及能在循环中维持保养。理想的载体蛋白是一种通常在人循环系统中发现的普通物质。
如此处所用的，术语“胃泌素/CCK受体配体”包括结合、刺激或与胃泌素CCK受体相互反应的任何化合物。美国专利6,288,301(2001年9月11日公开)给出了所述胃泌素/CCK受体配体的实例，该实例包括多种形态的胃泌素，例如胃泌素34(大胃泌素)、胃泌素17(小胃泌素或短胃泌素)、胃泌素14、胃泌素13、胃泌素10、和胃泌素8、五肽胃泌素、四肽胃泌素；多种形态的缩胆囊素，如CCK58、CCK33、CCK22、CCK12和CCK8；以及其他胃泌素/CCK受体配体。通常，胃泌素/CCK配体共有羧基末端氨基酸序列Trp-Met-Asp-Phe-酰胺。前述的甲硫氨酸(Met)可被亮氨酸取代。预期还可以是活化的类似物、片段和其他以上的修饰物，包括肽和非肽激动剂、或胃泌素/CCK受体的局部激动剂，例如A71378(Lin等，Am.J.Physiol.258(4Pt 1)：G648，1990)。
通过肽合成，可经济地制备小的胃泌素形式例如胃泌素17，并且合成肽是商业上可利用的。合成的人胃泌素17，例如在位点15具有甲硫氨酸或亮氨酸的人胃泌素17，也可从Bachem AG，Bubendorf，瑞士和从Researchplus中获得。自然界中发现的胃泌素肽是羧基末端酰胺化的肽，并且羧基末端的氨基酸的酰胺化在本文中胃泌素化合物的范围内。
胃泌素/CCK受体配体还包括有活性的类似物、片段和其他以上配体的修饰物，其共有内源哺乳动物胃泌素的氨基酸序列，例如，共有60％的序列同一性，或70％的同一性，或80％的同一性。所述的配体也包括可促进内源胃泌素分泌的化合物、来自组织储藏位点的缩胆囊素或类似的活化肽。这些实例是胃泌素释放肽、抑制胃泌素酸分泌的奥美拉唑和促进CCK刺激的大豆胰蛋白酶。
此处显示了大的胃泌素34和小的胃泌素17的序列。大胃泌素-34基本上是在N末端具有附加的氨基酸序列的小胃泌素-17的延伸形态。大胃泌素在体内被清除以释放胃泌素-17。在N末端的符号“Glp”是焦谷氨酸残基，其是谷氨酸的天然环化形态。在多个实施方案中，通过使用谷氨酸或谷氨酰胺替换焦谷氨酸，或缺失焦谷氨酸，来修饰具有N末端焦谷氨酸残基的胃泌素，以含有N末端半胱氨酸或赖氨酸残基。此外，各个胃泌素34和胃泌素-17以分别如此处SEQ ID No：1-2所示的位点32、或分别如SEQ ID No：3-4所示的位点15具有甲硫氨酸或亮氨酸的修饰形态得以使用。
N末端Glp-Leu-Gly-Pro-Gln-Gly-Pro-Pro-His-Leu-Val-Ala-Asp-Pro-Ser-Lys-Lys- Gln-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH2(SEQ ID NO：1)。
N末端Glp-Leu-Gly-Pro-Gln-Gly-Pro-Pro-His-Leu-Val-Ala-Asp-Pro-Ser-Lys-Lys-Gln-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gly-TrD-Leu-Asp-Phe-NH2
(SEQ ID NO：2)。
N末端Glp-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gly-′Trp-Met-Asp-Phe-NH2(SEQ ID NO：3)。
N末端Glp-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gly-Trp-Leu-Asp-Phe-NH2(SEQ ID NO：4)。
在某个实施方案中，作为胃泌素氨基酸序列与在胃泌素序列的氨基末端的任选氨基酸间隔区的融合蛋白、并具有蛋白载体的胃泌素化合物，可以被转基因施用于患者。在用于转基因表达所述融合蛋白的核酸构建体的实施方案中，通过类似于美国专利号5,885,956所公开的技术，将人胃泌素原的肽前体基因融合于具有或不具有间隔区的编码载体蛋白的基因。
治疗需要治疗的糖尿病个体的方法包括给药个体组合物，该组合物提供了胃泌素化合物和例如EGF、GLP-1、泌乳刺激素和生长激素的FACGINT。还包括这些FACGINT的衍生物、类似物和偶合物。如此处所用的，术语“FACGINT”是指补充胃泌素用于胰岛素再生疗法的因子。如此处所用的词语“FACGINT”也指“一个或多个FACGINT”或“至少一个FACGINT”。
术语“FACGINT”包括大量的生长因子和生长激素的变体、调节一种或多种激素因子的制剂、一种或多种受体的配体和效应物，所述受体涉及与这些生长激素和生长因子的结合，通常可以理解、举例说明这些术语，但其不限于：EGF受体配体；例如PTHrP(PTHrP；Garcia-Ocana，A.等，2001，J.clin.Endocrin.Metab.86：984-988)的PTH相关蛋白(PTHrP)受体配体；例如HGF(HGF；Nielsen，J.等，1999，J Mol Med 77：62-66)的肝细胞生长因子(HGF)受体配体；例如FGF的纤维原细胞生长因子，例如KGF的角化细胞生长因子(KGF)受体配体；例如NGF的神经生长因子(NGF)受体配体；例如GIP的抑胃肽(GIP)受体；例如TGFss(美国申请专利2002/0072115，2002年6月13日公开)的转化生长因子β(TGFss)受体配体；例如昆布氨酸的昆布氨酸受体配体；例如INGAP的胰岛再生相关蛋白(INGAP)受体配体；例如BMP-2的骨形态发生因子(BMP)受体配体；例如VIP的血管活性肠肽(VIP)受体配体；例如GLP-1和毒蜥外泌肽-4的胰高血糖素样肽-1受体配体；例如GLP-2的胰高血糖素样肽2(GLP-2)受体配体；二肽酰肽酶IV抑制物，其通过抑制与其完整性相关的酶来间接影响GLP-1水平(Hughes，T.等，2002，Am Diabetes Assoc Abstract 272-或)；例如REG蛋白的REG受体配体；例如GH的生长激素(GH)受体配体，例如PRL和胎盘催乳质(PL)的促乳泌素(PRL)受体配体；例如IGF1和IGF2的胰岛素样生长因子(1型和2型)受体配体；例如EPO( http：//www.drinet.ort/html/august_2002_.htm)的促红细胞生成素(EPO)受体配体；betacellunin(也认为其是EGF家族的成员)；例如活化素A的活化素A受体配体；例如VEGF的血管内皮生长因子(VEGF)受体配体；例如BMP-2的骨形态发生因子(BMP)受体配体；例如VIP的血管活性肠肽(VIP)受体配体；例如VEGF的血管内皮生长因子(VEGF)受体配体；例如PACAP的垂体腺苷酸环化酶活化肽(PACAP)受体配体；例如G-CSF的粒细胞集落刺激因子(G-CSF)受体配体；例如GM-CSH的粒细胞-巨嗜细胞集落刺激因子(GM-CSF)受体配体；例如PDGF的血小板源生长因子(PDGF)受体配体；和例如胰泌素的胰泌素受体配体。
对于本文中任何表现出典型的FACGINT的生长因子、酶、酶抑制物、肽、蛋白质和激素化合物，及其所有已知的类似物和衍生物，无论是天然存在或通过诱变制备或设计合成的，都应该视为FACGINT的等价物。这些等价物也可视为是偶合物，即，通过添加一个或多个化学基团衍生的组合物，及其混合物。可变化编码基因，例如通过指导突变发生的寡核苷酸来生成FACGINT类似物，如人重组类似物。此外，通过靶突变发生，可改变一个以上的氨基酸残基的身份或位置。蛋白质的一级氨基酸序列可通过偶合得以增加，如通过糖基化、酰基化、或添加任何其他的互补分子，例如一个或多个脂质、磷酸、硫酸和/或乙酰基。此外，链中的单个氨基酸残基可通过氧化作用、还原作用或其他衍生作用得以修饰。可剪切FACGINT以获得保持活性的任意片段。FACGINT的前体药物或代谢物等价于FACGINT。完整的多肽或蛋白质或任何片段可与任何的其他肽或蛋白质，例如免疫球蛋白和其他细胞因子融合。偶合物包括，例如，含有偶合非天然存在的聚合物的FACGINT的组合物，所述聚合物含有聚乙二醇部分。术语也包括通过化学修饰亲本肽的一个或多个氨基酸残基而制备的衍生物，所述化学修饰例如是烷基化、酰基化、酯形成作用或酰胺形成作用。或者，可考虑将诱导FACGINT的形成或模拟FACGINT的作用的制剂作为等效化合物。单一形式的“FACGINT”，意指任何一个或多个如此处所示的典型的FACGINT的化合物。如此处所用的术语“衍生物”和“偶合物”是等效的，并用于表示化学上相关的，并通过人工合成、生物、或重组或化学方法制备的组合物。
如此处所用的术语“受体配体”，其与具体配体的受体有关，意指与受体结合、刺激或相互作用的任意组合物。
受体胚胎包括受体激动剂的定义范围，对于任意具体的FACGINT的受体，无论激动剂是否与FACGINT的结构有关。
如此处所用的术语“泌乳刺激素”，意指共有相似于内源性哺乳类泌乳刺激素的基本序列的任意肽，该术语是本领域公知的具有泌乳刺激素活性的蛋白因子，例如，人泌乳刺激素。内源性人泌乳刺激素是由垂体产生的199个氨基酸的多肽。该术语包括内源性泌乳刺激素发生缺失、插入、或替换突变并保持活性的泌乳刺激素类似物，并且包括来自其他物种和天然存在的变体的泌乳刺激素。功能性泌乳刺激素包括，如美国专利号6,333,031(活化氨基酸序列)和6,413,952(金属复合物受体配体激动剂)公开的对泌乳刺激素受体具有激动剂活性的组合物，作为泌乳刺激素激动剂的人生长激素的类似物的G120RhGH(Mode等，1966，Endocrinol.137(2)：447-454)，和如美国专利5,506,107和5,837,460公开的泌乳刺激素的配体。
PRL、GH和PL都是多肽激素家族的成员，其共有相同的结构、免疫学和生物学功能(参见：″Pancreatic Growth and Regeneration″，Ed.N.Sarvetnick，Ch.1.Brejie，T.等，1997)，因此这里指的是PRL/GH/PL家族。PRL和GH通过脊椎动物的垂体前叶得以分泌。PRL与广范的生物学功能有关，包括渗透调节、生殖、泌乳和免疫调节。GH与涉及生长和形态发生的生理过程有关。有关的受体配体指″PRL/GH/PL″受体配体。基于肽和蛋白质的结构相似性、关于胃泌素互补作用的功能相似性、关于结合一个或多个受体的功能相似性，可将FACGINTs分为多组，并且这些组分别在本发明的多种实施方案的范围内。
胰高血糖样肽-1以GLP-1分子形式(具有常规指定位点7-36的残基)在小肠内的分泌细胞中合成，该GLP-1是相似于GLP-1(7-37)的酰胺。GLP-1生物学活性的最初研究，发现GLP-1的全长N末端的扩展形式的用途(1-37和1-36，后者是酰胺)。较大GLP-1分子通常缺乏生物活性。后来发现在除去前6氨基酸后，将带来具有充分增强的生物活性的较短形式的GLP-1分子。
具有循环生物活性的GLP-1中的多数是以GLP-1(7-36)酰胺形式得以发现的，同时也有较少量的生物活性GLP-1(7-37)形式。参见Orskov，C.等，Diabetes 1994，43：335-339。两种肽都表现了同样的生物学功能。GLP-1在消化道内分泌细胞中得以分泌，所述细胞响应于营养摄取，并在营养吸收后的代谢动态平衡中发挥多重作用。通过二肽基肽酶(DPP-IV)介导的在丙氨酸残基的位点2的剪切，来降解肽的N末端，实现GLP-1的调节。总的概括，可参见DPP-IV。GLP-1的生物学活性包括刺激葡萄糖依赖型胰岛素分泌和胰岛素的生物合成，抑制胰高血糖素分泌和胃排空，以及抑制食物摄取。GLP-1在胃肠道和中枢神经系统呈现许多附加的效果，参见Drucker，D.，Endocrin 142：521-527，2001。典型的GLP-1组合物包括：BIM 51077(抗DPP-IV消化的GLP-1类似物，购自于Beaufour Ipsen)、AC2592(GLP-1，购自于Amylin，San Diego CA)、ThGLP-1(GLP-1，修饰氨基酸和脂肪酸附属物，购自于Theratechnologies，Saint-Laurent，Quebec，Canada)、DAC：GLP-1(Conjuchem，Montreal，Quebec，Canada)、CJC-1131或DACTM：GLP-l(用于共价偶合清蛋白的GLP-1遗传工程类似物，Conjuchem)，LY315902和持续释放LY315902(DDP-IV抗性的GLP-1类似物，购自于Eli Lilly，Indianapolis，IN)、低分子量的GLP-1模拟物、Albugon(清蛋白：GLP-1融合肽，购自于Human Genome Sciences，Rockville，MD)、Liraglutide或NN2211(通过GLP-1分子的酰化作用制备的长效GLP-1衍生物，进入血流后，广泛结合清蛋白，所述清蛋白可保护其不受DPPIV降解，并降低其肾清除率；Elbrond等，Diabetes Care 2002 Aug 25(8)：1398-404)。
毒蜥外泌肽-4是来自Heloderma suspectum(希拉毒蜥)毒液的新肽，与GLP-1(7-36)酰胺具有53％的同源性。由于它抗DDP-IV的降解，因此它起胰高血糖素样肽1(GLP-1)受体的长效蛋白的作用。毒蜥外泌肽-4具有类似于GLP-1的性质，并调节胃排空、胰岛素分泌、食物摄取和slucagon分泌。毒蜥外泌肽-4的实例包括exenatide(被称为AC2993的合成形式，Amylin)、exenatide LAR(长效作用形式)、ZP10(修饰的毒蜥外泌肽-4，其具有附加的六个赖氨酸残基，Aventis/ZealandPharma)、和AP10(长效作用配制剂，Alkermes，Cambridge MA)。生理学研究显示毒蜥外泌肽-4在转基因哺乳动物中的持续表达不会干扰葡萄糖的动态平衡、细胞团块或食物摄取(Biaggio，L.等，J Biol Chem 275：34472-34477，2000)，以致于没有完全明白毒蜥外泌肽-4的生理学作用。
二肽基肽酶IV(DPP-IV)抑制物，是指抑制DPP-IV和766个氨基酸的与膜相关的肽酶的活性的化合物，所述氨基酸包括其底物GLP-1、GLP-2和GIP。DPP-IV介导GLP-1的失活是体内GLP-1生物活性的决定因素。DPP-IV抑制物的实例包括异亮氨酸噻唑酰胺、缬氨酸purrolidide、NVP-DPP738(Novartis，Cambridge，MA)、LAF237(Novartis)、P32/98(Probiodrug AG，Halle，Germany)、和P93/01(Probiodrug)。
如此处所用的，术语“EGF受体配体”包括刺激EGF受体的化合物，因此当胃泌素/CCK受体在同一或相邻组织或相同个体中受到刺激时，产生胰岛素的胰岛细胞将受到诱导。所述EGF受体配体的实例包括是EGF1-53D的全长EGF，以及还包括EGF1-48、EGF1-49、EGF1-52，及其片段和活性类似物。EGF受体配体的其他实例是TGF形式，包括1-48、1-47、1-51、双调蛋白和痘病毒生长因子，以及任何表现与胃泌素/CCK受体配体相同的协同活性的EGF受体配体。这些包括以上的活化类似物、片段和变体。也可参见：Carpenter和Wahl，Chapter 4，in Peptide Growth Factors(Eds.Sporn andRoberts)，Springer Verlag，1990。
该组化合物包括EGF受体配体，进一步包括“修饰的EGF”，其包括普通或野生型EGF的变体。变体显示出可影响一种或多种生物学活性，例如EGF的清除率。该术语包括具有基本相似于人EGF的氨基酸序列的肽，例如，在多个残基位点替换了一个或几个氨基酸的肽。
已经通过基因工程构建了重组EGF形式，来改变结构和活性，例如，已经描述了用亮氨酸残基替换了位点21处的甲硫氨酸(美国专利号4,760,023)的EGF。具有51个残基的重组人EGF(hEGF)，即，缺少在hEGF位点52和53处的两个C末端残基、和具有在位点51中性氨基酸的替换，在生产微生物的过程中以及在给药患者后，保持EGF活性并抗蛋白酶降解。许多核酸分子被描述为编码非常相似于EGF和TGFα(WO 00/29438)的蛋白家族。也描述了在位点16发生中性或酸性氨基酸取代组氨酸的EGF突变蛋白(突变的EGF)(WO 93/03757)，所述形式在低pH时保持活性。EGF和TGFα的化学类似物和片段，保持了结合EGF受体家族的多种成员的能力(美国专利号4,686,283)。EGF或TGFα的多种变体可赋予影响一种或多种重组蛋白生产的有利性质、体外和体内的稳定性、以及体内的活性。如实施例中所用的，典型的重组修饰的EGF受体配体是长度为51氨基酸的人EGF的C端缺失形式并具有位点51的天冬酰胺(本文中称为EGF51N)，其基本保持了全长I.N.T.TM的活性，并具有体内和/或体外稳定性，即稳定性至少大于普通或野生型hEGF(S.Magil等，PCT/US02/33907，2003年5月15日公开，此处全部引入作为参考)。
如此处所用的术语“生长因子”，包括共有与内源性哺乳类生长激素相同的基本氨基酸序列和具有哺乳类生长激素的生物学活性的任意肽。人生长激素是单链中含有191氨基酸的多肽，分子量约为22千道尔顿(Goeddel等，1979，Nature 281：544-548；Gray等，1985，Gene 39：247-254)。该术语包括具有缺失、插入或替换的类似物，和来自其他物种及天然存在的变体的生长激素。参见Cunningham等，1989，Science 243：1330-1336，和1989，Science 244：1081-1085；和WO 90/05185，和美国专利号5,506,107。
如此处所用的术语“治疗”或“改进”，意指减轻或消除糖尿病的一种或多种症状。如此处所用的术语“糖尿病”，指胰岛素缺乏、抗胰岛素抗体的生成、或血糖过量的任何生理迹象，或者包括实验动物模型的任何哺乳动物、以及包括例如I型和II型糖尿病的人模式的任何明显的糖尿病症状，早期糖尿病和糖尿病的前期症状以温和减少胰岛素或温和提高血糖水平为特征。“糖尿病的前期症状”被描述为怀疑患有糖尿病或相关症状的哺乳动物，例如，没有确诊为糖尿病，但表现出胰岛素或葡萄糖水平的相应症状，并且由于家族史或遗传倾向性容易患上糖尿病或相关的病症、或关于II型糖尿病的肥胖症、或以前患上糖尿病或相关病症而现在有复发的风险。
如此处所用的，术语“免疫抑制剂”或“用于免疫抑制的制剂”意指抑制免疫应答的任何制剂。表1显示典型的免疫抑制剂，并且认为这些制剂或功能等价物的任何衍生物可适用于此处描述的本发明和权利要求书中的实施方案。将生产商提供的表1中的免疫抑制剂或其他等效制剂，按照药学领域的技术人员公知的患者体重标准进行给药。例如，Tacrolimus通常通过注射或口服进行给药，而Sirolimus通常是口服给药。
表1.用于免疫抑制的实例性的制剂以及商业来源
    名称   公司   性质
    2-氨基-1，3-丙二醇衍生物   Novartis   用于抑制或治疗接受同种异体或异种异体移植器官或组织的病人的慢性排斥反应
    2-氨基-2[2-(4-辛基苯基)乙基丙烷-1，3-二醇盐酸盐   YoshitomiPharmaceuticalsCo Ltd   来自加速的自归位淋巴细胞的免疫抑制反应
    40-O-(2-羟基乙基)-雷帕霉素，SDZ-RAD，Everolimus(Certican)   NovartisPharmaceuticals   Sirolimus(雷帕霉素)衍生物，用于急性肾脏排斥反应；在心脏移植后通过抑制细胞增殖以减少排斥和移植血管病变
    6-(3-二甲基-氨基丙酰基)福斯可林   Matsumori AkiaNippon Kayaju CoLtd   免疫抑制作用，还可用于治疗自身免疫疾病
    6-巯基嘌呤(巯基嘌呤，6-MP)   Glaxo SmithKline   用于治疗Crohn′s疾病、炎症性肠病和用于器官移植手术
  ABX-CBL(CBL-1)   Abgenix   靶向于人T细胞、B细胞、NK细胞和单核细胞的小鼠单克隆AB，用于治疗抗类固醇移植与宿主疾病，可能应用于治疗炎症和自身免疫病症
  Alefacept(人LFA-3 IgG1融合蛋白，AMEVIVE)   犹他大学皮肤病学系/BIOGEN   敲除致病的记忆性T淋巴细胞；用于治疗牛皮癣，T细胞介导的炎性疾病
  HLA-B2702肽(Allotrap)   SangStat Medical   人肽，NK细胞和T细胞介导的毒性的封闭作用，用于抑制首次肾同种异体移植的排斥反应
  反义ICAM-1抑制物(ISIS2302)，(Enlimomab，BIRR1Alicaforsen)   ISIS-BoehringerIngleheim   小鼠单克隆AB封闭黏附于T细胞表面分子(ICAM-lr)的白血球；治疗肾移植的排斥反应
  咪唑硫嘌呤(Imuran，Azasan)   Generic，GlaxoSmithKline，PrometheusLaboratories，aaiPharma   治疗类风湿性关节炎，和抑制肾移植的排斥反应，以及其他自身免疫或炎性疾病例如炎症性肠病
  BTI-322   MedImmune   靶向于CD2受体的鼠源单克隆AB；用于预防首次肾移植的排斥反应，并治疗抗性排斥反应
  克拉屈滨(Leustatin)   BoehringerIngleheim   与淋巴细胞选择性相关的代谢拮抗剂和免疫抑制剂；用于治疗淋巴恶心肿瘤，如，毛细胞白血病
 环磷酰胺(CTX，Neosar，Cytoxane，Procytoxe)  Generic  用于治疗关节炎和其他自身免疫病症和癌症的免疫抑制剂
 环孢霉素(环孢子菌素A，环抱子菌素)(Sandimmune，Neorale，SangCya)  Novartis  11基酸环肽；T细胞封闭助细胞；用于器官移植疗法和其他免疫疾病的免疫抑制剂
 Demethimmunomycin″(L-683,742；31-脱甲氧基-31-羟基-L-683,590)  Merck & Co  治疗自身免疫疾病、传染病，和/或预防器官移植的排斥反应
 地塞米松(地塞米松，Dexone，Dexasone)  Generic  肾上腺类皮质激素，多种病症的有效免疫抑制剂
 二十二碳六烯酸(DHA)  未应用  通过降低表达CD4或CD8的T细胞比例，免疫抑制剂封闭抗原识别过程；Taku等，Journal of Agriculturaland Food Chemistry，2000；48(4)：1047
 FTY720(口服多壳球菌素衍生物)  NovartisPharmaceuticals  改变淋巴细胞渗入移植的组织中；用于预防肾移植中器官的排斥反应
 Glatiramer醋酸盐(共聚物-1，Copaxone)  TevaPharmaceuticals  合成的肽共聚物；模拟髓磷脂的结构以引诱免疫细胞结合Copaxone而不是髓磷脂；用于多发性硬化
 胶质纤维酸性蛋白(GFAP)  CalBiochem；SynxPharma  在糖尿病动物模型中具有免疫抑制活性；Winer等，Nature Medicine 9：198(2003)
 Gusperimus，(15-脱氧精液蛋白(Spanidin)  Bristol Myers-Squibb  静脉免疫抑制剂；抑制细胞毒素的T细胞、中粒白细胞和巨嗜细胞的产生
Hu1124(抗-CD11a) XOMA 人源单克隆抗体；在T细胞表面上靶向CD11受体，来选择性抑制移植器官的免疫系统的排斥
Infliximab(Remicade) Centocor(Johnson&Johnson联营公司) 结合并失活人TNF-α的单克隆AB；用于治疗Crohn′s疾病和类风湿性关节炎
干扰素 包括Serono，Biogen etc在内的多个公司 免疫调节性质
ISAtx247 Isotechnika 用于治疗自身免疫疾病，例如类风湿性关节炎和牛皮癣
异维甲酸 免疫抑制剂，降低T细胞响应免疫激发的增殖能力。Vergelii等，Immunopharmacology，1997，31：191。
Medi-500(T10B9) MedImmune 靶向人T细胞的静脉内单克隆AB；治疗急性肾排斥反应和移植-vs-宿主疾病
Medi-507 MedImmune/Bio-Transplant 靶向CD2 T细胞的静脉内人源AB；用于治疗皮质类固醇抗性移植vs宿主疾病和预防肾排斥反应
氨甲蝶呤(Rheumatrex，氨甲蝶呤，Trexall) Wyeth Lederie，Generic 用于治疗Crohn′s疾病、几种牛皮癣、和成人类风湿性关节炎(以及如抗癌药)的抗代谢物
米托蒽醌(Novantrone) Immunex 对包括T细胞、B细胞和巨嗜细胞的细胞免疫系统有抗增殖效果；用于治疗激素抗性前列腺癌症、急性骨髓性白血病和多发性硬化
霉酚酸吗啉乙酯(CellCept) Roche 通过封闭嘌呤核苷酸的合成来增殖T和B淋巴细胞；用于器官移植疗法和炎症性肠病
OKT4A R.W.JohnsonPharmaceuticalResearch Institute 靶向人CD4 T细胞的小鼠单克隆AB；当与其他免疫抑制药物联合使用时，用于预防肾移植排斥反应
Muromonab-CD3(OrthocloneOKT3) R.W.JohnsonPharmaceuticalResearch Institute 结合T细胞上的受体位点的单克隆AB，抑制移植组织的活化
脱氢皮质醇(Deltasone，Oraoneo) 皮质类固醇，抑制移植排斥反应并发的炎症
basiliximab(Simulect) NovartisPharmaceuticals 结合T细胞上的受体位点的单克隆AB，抑制移植组织(肾移植)的活化
S100β 神经胶质蛋白 具有在糖尿病动物模型的免疫抑制活性
Sirolimus，雷帕霉素(Rapamune) Wyeth-AyerstLaboratories 免疫抑制剂和细胞因子的蛋白抑制物(如IL-2)-依赖型T细胞增殖(肾移植)
Tacrolimus(Prograf FK-506) Fujisawa 干扰IL-2 TCR交流
抗胸腺细胞免疫球蛋白(ATGAM，胸腺球蛋白) SangStat MedicalCorporation，Pharmacia andUpjohn 抗人胸腺细胞免疫球蛋白；用于逆转急性肾移植排斥，可预期用于移植诱导疗法的标识外使用
efalizumab(Xanelim) XOMA T细胞调节物，其通过与内皮细胞表面的黏附分子相互作用而靶向T细胞，定向T细胞的迁入皮肤以及靶向T细胞的活化；用于治疗牛皮癣
Daclizumab(Zenapax)，HAT(人源AntiTac)，SMART抗-Tac，抗-CD25，和人源抗IL-2受体 Protein DesignLaboratories/Roche 通过结合于IL-2受体，单克隆AB抑制IL-2与IL-2受体结合；对同种异体移植(肾移植)抑制T细胞活性
降血糖剂或药是胰岛素应答的增强因子，通常用于糖尿病病人的糖血控制。这些制剂包括但不限于磺酰脲类(如乙酰苯磺酰环己脲、氯磺丙脲、甲磺氮草脲、甲苯磺丁脲、优降糖、格列甲嗪、谷胱苷肽)，meglitinide类(如瑞格列奈、那格列奈)，双胍(如甲福明二甲双胍)，噻唑烷二酮(如匹格列酮、罗格列酮)，α-葡糖苷酶抑制物(如米格列醇)，胰高血糖素拮抗剂，钾离子通道开放剂，胰岛素增敏剂，肝酶抑制物，葡萄糖摄取调剂物，调节脂质代谢的化合物和降低食物摄取的化合物。本文中提及的这些制剂以与胃泌素化合物组合的方式来使用。
如此处所用的，术语“哺乳动物”应包括不受任何限制的哺乳类，例如人、猿、啮齿动物如小鼠或大鼠、狗、猫、农业上重要的动物或肉猪、山羊、绵羊、马，或猿如大猩猩或黑猩猩。如此处详细说明的，个别哺乳动物是非糖尿病患者、前期糖尿病患者或糖尿病患者。
全身给药模式包括，但不限于透皮、鞘内、肌内、腹膜、静脉、皮下、鼻内和口服途径。以任何方便的途径对化合物进行给药，例如，通过灌输或弹丸注射、通过上皮或粘膜与皮肤的衬里(如口腔粘膜、直肠粘膜、阴道粘膜、鼻粘膜、肠粘膜，等)的吸收，并且可联合其他生物活性制剂进行给药。典型的给药途径是全身的，例如，通过皮下注射。如果联合FACGINT或免疫抑制剂或降血糖剂给药，则胃泌素化合物可以以单一的组合剂量进行给药，或者这些成分可以以任何顺序进行单独给药。
组合物的制备方法
胃泌素肽的合成
通过任何合适的方法来生产胃泌素肽，例如在重组的宿主细胞中表达或通过化学合成生产。对于后者，例如胃泌素肽，通过在聚二甲基丙稀酰胺凝胶树脂上使用固相Fomc(芴甲氧羰基)肽合成而得以合成。然后通过标准方法纯化多肽。
偶合配对物/载体
偶合配对物/载体包括：血浆成分例如获得于病人的血清、纯化的血清蛋白(质)如清蛋白、转铁蛋白或免疫球蛋白、红血球蛋白例如血型糖蛋白A和AE-1、糖结合蛋白例如血凝素、钝化的酶、磷酸盐和硫酸盐结合蛋白、胆酸、脂质结合蛋白、脂质/亲脂性部分；聚合物载体例如葡聚糖或聚乙二醇。当胃泌素偶合于脂质/亲脂性部分时，一旦被注射，有可能这些偶合物与血清蛋白发生非共价作用或共价的相互作用，所述血清蛋白例如是以结合脂肪酸而为人所知的清蛋白，或例如血清中的脂质结合蛋白。对于此处的组合物和方法的目的，可习惯性地将血清和血浆进行互换使用。为了将胃泌素偶合于载体，首先需要通过引入反应性基团将载体活化。在一些情况中，载体已经包含至少一个反应性基团，例如清蛋白的半胱氨酸34。在活化载体后(如果需要)，将载体与胃泌素化合物进行偶合。通常，通过蛋白链中的反应性基团，例如硫醇基、α-和ε-氨基、羧基或芳香环，载体可与蛋白共价结合，其中所有的反应性基团都已经存在，或使用已知的分子生物学方法通过蛋白的预先化学修饰而得以加入，即在化学合成中得以加入，或通过化学修饰已有的胃泌素肽或通过修饰蛋白的氨基酸序列而得以加入。例如，载体可结合蛋白质的位于N末端的赖氨酸残基或半胱氨酸残基的硫醇基的ε-氨基。或者，通过异双功能或同双功能交联剂使载体与蛋白质结合。
血浆蛋白
血浆蛋白结合是提高其他短寿命分子如胃泌素的药物动力学性质的有效方法。血浆蛋白的一方面是大于肾过滤界限(45kDa)的天然分子量，因此在血浆中有延长的滞留时间。血浆蛋白包括但不限于：清蛋白、α-1酸性糖蛋白、α-1-抗胰凝乳蛋白酶、α-1-抗胰蛋白酶、α-2-抗血纤维蛋白酶、α-2-HS-糖蛋白、α-2-巨球蛋白、血管紧张素原、抗凝血酶III、阿朴脂蛋白AI(HDL)、阿朴脂蛋白All(HDL)、阿朴脂蛋白B(LDL)、阿朴脂蛋白CI(VLDL)、阿朴脂蛋白CII(VLDL)、阿朴脂蛋白CIII(VLDL)、阿朴脂蛋白E(VLDL)、脱铁转铁蛋白、Cl酯酶抑制物、血浆铜铁蛋白、铁蛋白、纤维蛋白原、GC球蛋白、结合珠蛋白(混合型)、血色素、免疫球蛋白A、免疫球蛋白Al、免疫球蛋白Al、免疫球蛋白A2、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G、Fab片段、免疫球蛋白G、Fc片段、免疫球蛋白G、免疫球蛋白G1、免疫球蛋白G2、免疫球蛋白G3、免疫球蛋白G4、免疫球蛋白M、μ链、免疫球蛋白M、FC5μ、免疫球蛋白M、免疫球蛋白重链(H)、免疫球蛋白轻链(L)-K-轻链、γ-轻链、免疫球蛋白Fab片段、免疫球蛋白Fc片段、乳铁传递蛋白、脂蛋白a、[Lp(a)]、脂蛋白(高密度)、脂蛋白(低密度)、脂蛋白(极低密度)、前清蛋白、凝血素、胸腺素原-α、类风湿因子、类固醇结合蛋白、皮质素传递蛋白、甲状腺素结合球蛋白、铁传递蛋白和α-胎蛋白。血浆蛋白的列表可参见Anderson and Anderson，Molecular and CellularProteomics 2002，1.11：845。
人血清清蛋白的分子量为67kDa，在循环中的半衰期为19天，是人血浆中最丰富的蛋白。清蛋白由形成单多肽链的585个氨基酸组成。清蛋白与大量的化合物相互作用，包括例如长链脂肪酸的生理学配体、某种治疗剂例如丙酮苄羟香豆素和2-丙基戊酸钠和无机配体例如钙。
抗体/免疫球蛋白包括完全免疫球蛋白或其片段，其中免疫球蛋白包括多种型和同种型，例如IgA、IgD、IgE、IgGI、IgG2a、IgG2b和IgG3、IgM等。其片段包括Fab、Fv和F(ab′)2、Fab′和类似物。此外，合适时可使用片段、凝集物、聚合物、或免疫球蛋白偶合物。抗体是单克隆或多克隆抗体，通过常规使用的技术如宿主免疫法和血清收集法(多克隆)、或通过制备连续的杂交细胞系和收集分泌蛋白(单克隆)、或可通过克隆和表达核酸序列或其编码至少特异地结合天然抗体所需的氨基酸序列的突变型序列来制备抗体。
聚合物载体
偶合配对体可包括聚合物，其在多个实施方案中是天然存在的或人工合成的。聚合物的实例包括蛋白质、糖肽、多糖例如葡聚糖，例如氨基葡聚糖或羧基甲基葡聚糖，和葡聚糖的生物聚合物衍生物例如硫酸葡聚糖、羟乙基淀粉、纤维素纤维素原，包括甲基纤维素和羧甲基、淀粉和淀粉衍生物菊粉、肝磷脂、肝磷脂片段；合成聚合物例如烷基二醇(PAG)，例如PEG及其衍生物、聚氧乙烯多元醇(POP)例如聚氧乙烯甘油(POG)、聚三亚甲基二醇(PTG)、聚丙二醇(PPG)、聚甲基丙烯酸羟乙酯、聚乙烯醇(PVA)、聚丙烯酸、聚乙基噁唑啉、聚丙稀酰胺、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚氨基酸、聚氨酯和聚磷腈、聚(乳酸-共-乙二醇)PLA-PEG、聚(D、L-乳酸-共-乙醇酸)PLGA、聚(原酸酯)、聚(乳酸-共-乙交酯)-嵌段-聚(乙二醇)、聚氧乙烯多元醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚甲基丙烯酸羟乙酯、聚乙烯醇、和聚氨酯醇)-嵌段-聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA-PEG-PLGA)、聚(N-异丙基丙烯酰胺、聚氧乙烯多元醇、聚甲基丙烯酸羟乙酯、N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)；腙、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚氨基酸、二乙烯基醚马来酸酐、N-(2-羟丙基)-甲基丙烯酰胺、聚丙二醇、聚烷二醇及其衍生物的合成共聚物；聚烷二醇及其衍生物的共聚物，聚乙烯基乙基醚和α，β-聚[(2-羟乙基)-DL-天冬酰氨，聚(N-丙烯酰吗啉)(PacM)。通常，合成的聚合物可以是线性的或分支的、取代的或未取代的、两个或多个不同的合成单体的均聚物或共聚物。
肽和蛋白质的聚乙二醇化可导致在保留生物学功能的同时，疗效得以增强。通过增加分子的大小和通过蛋白水解酶的降解，与PEG偶合(或与其他聚合物，如葡聚糖)，可降低肾过滤或免疫应答的过程，所有这些可增强在体内的稳定性。PEG(聚乙二醇)是标准线性的重复单体，可以在游离的羟基末端上对其进行化学活化。所述活化可带来与大量功能基团的反应，包括巯基和氨基。为了抑制交联剂，两个末端羟基中的一个可用甲氧基(mPEG)加帽。为了允许在单个PEG分子有多个结合肽的位点，也可合成具有多个叉或分支的PEG。
通过用马来酰亚胺修饰至少一个mPEG，含游离巯基的肽(如半胱氨酸，使用3字母氨基酸符号的缩写Cys)将很容易发生烷基化反应，而形成稳定的硫酯键。就胃泌素来说，可使用具有将半胱苷肽引入不是其生物学活性必需的肽区域(例如，在其N端)的合成胃泌素化合物。
含游离胺的肽(如赖氨酸或N末端氨基)可与被琥珀酰亚氨酯修饰的PEG反应，以生产稳定的酰胺键。由于缺乏化学反应的特异性，如就含有3赖氨酸残基的胃泌素-34来说，任一个或更多的赖氨酸残基可与修饰的PEG反应，导致化学性质或者功能性质的偶合肽的不均匀混合物，因此其纯化并非不重要。在肽合成中，通过引入其中PEG已经链接于ε-氨基酸侧链上的赖氨酸残基(如Felix(1997)描述)，容易实现特殊赖氨酸残基的位点特异的聚乙二醇化。Felix，A.M.(1997)Site-Specific Poly(ethylene glycol)ylation of Peptides.In″Poly(ethylene glycol).Chemistry and Biological Applications.″Harris，J.M.& Zalipsky S.Eds.
“活化的PEG”(或“聚乙二醇化制剂”)是任何的PEG衍生物，其可用作蛋白调节物，因为它含有能与蛋白质/肽中的一些官能团进行反应的官能团，以生产PEG-蛋白质/肽偶合物。活化的PEG包括烷基化的PEG、酰化的PEG和具有氨基酸臂的PEG。通过使用PEG马来酰亚胺(如mPEG-马来酰亚胺-20000，来自于ShearwaterCorporation，Huntsville，AL)可在半胱氨酸残基上进行聚乙二醇化。氨基PEG可用于将羧基聚乙二醇化。活化的PEG的实例包括甲氧基聚乙二醇、二氨基甲氧基-聚乙二醇、甲氧基聚乙二醇-对-硝基-苯基碳酸盐、甲氧基聚乙二醇琥珀亚酰胺琥珀酸盐、甲氧基聚乙二醇tresylate、甲氧基-聚氧乙烯胺(氨基PEG)、甲氧基聚氧乙烯-羧酸、单甲氧基-PEG对-硝基苯碳酸酯、N-N′-羰二咪唑-活化的PEG和甲氧基聚氧乙烯咪唑-羰基。不同分子量的PEG可从商业上获得。反应物PEG的平均分子量的范围介于约5,000到约100,000道尔顿之间。连接方法不是决定性的，但优选不改变，或仅仅最低限度地改变生物学活性分子的活性。优选连接方法是通过N末端链接于多肽。参见Veronese，Biomaterials 22(5)：：405(2001)，其综述了对PEG的不同活化策略。或者，通过在偶合前先用糖分子将胃泌素与衍化而发生糖聚乙二醇化，可将PEG偶合于肽/蛋白质(即，糖基聚乙二醇化方法，如，使用Neose′s Glyco聚乙二醇化技术)。
葡聚糖是天然存在的聚合物，其主要由彼此以糖苷键链接的D-葡萄糖的重复单位的线性多糖组成。在葡聚糖聚合物中存在分支点，分支类型和分支程度根据物种而不同。葡聚糖可用于偶合胃泌素化合物。可溶性葡聚糖的平均分子量范围介于约10,000至500,000道尔顿之间。葡聚糖聚合物在各个葡萄糖单体上含有相邻的羟基，所述单体通过高碘酸钠而氧化来释放能与氨基反应的官能团醛基。通过席夫碱形成随后发生还原胺化作用以构建稳定的结合，可将聚乙醛葡聚糖偶合于氨基上，例如赖氨酸残基上的ε氨基上。通过与一氯乙酸反应以产生羧甲氧基葡聚糖，使葡聚糖得以羧甲氧基化，其在与酰肼缩合中可形成葡聚糖-酰肼，该酰肼可与羰基或醛基反应。巯基反应性葡聚糖衍生物可以通过使用异双功能交联剂来制备，所述交联剂在一末端含有例如吡啶基二硫化物、马来酰亚胺或碘乙酰基以将偶合反应定向于巯基上。
与亲脂性部分的偶联
亲脂性取代基可在胃泌素化合物的N末端结合于氨基酸的反应性基团，或任选地结合于通过异双功能或同双功能交联剂基团生成的反应性基团。例如，亲脂性取代基的羧基可与赖氨酸上的氨基反应。例如，亲脂性取代基具体是含有如8-40个碳原子的长链基团。例如，亲脂性取代基可以是直链或支链烷基、直链或支链脂肪酸的酰基、直链或支链烷烃α，ω-二羧酸的酰基。例如，胃泌素的亲脂性衍生物可通过与氨基化学结合而得以合成，例如使用多种脂肪酸与N末端的氨基进行连接所述脂肪酸包括月桂酸(正-十二烷酸)、肉豆蔻酸(正-十四烷酸)、棕榈酸(正-十六烷酸)、棕榈油酸(正-十六烯酸)、硬脂酸(正-十八烷酸)、油酸(正-十八烯酸)、乙酸、亚油酸和花生四烯酸。
或者，刚性构象的疏水性部分(即存在双键、三键、或饱和或不饱和环)可结合于胃泌素肽。例如，包含羧基的长链脂肪酸可结合于例如存在于赖氨酸残基上的氨基。
双功能交联剂
交联剂的实例包括但不限于下列：氨基定向的同功能交联剂包括：二酰亚胺酯(二亚胺酸酯)，例如，乙酰亚胺酸甲酯-HCl、辛二酰亚胺酸二甲酯-2HCl；二-N-琥珀酰亚胺基衍生物，例如，二(硫代琥珀酰亚胺基-辛二酸盐)(BSSS)、琥珀酸二-(N-羟基-琥珀酰亚胺)酯；双功能芳基卤，例如，1，5，-二氯-2，4-二硝基苯；双功能酰化剂，例如，二异氰酸酯和二异硫氰酸酯，如，1，6，-亚己基二异氰酸酯；双功能磺酰卤，例如，苯酚-2，4，-二磺酰氯；二硝基苯酚酯，例如，羧酸二-(对-硝基苯)酯；和双功能酰叠氮，例如，酒石酰二叠氮；二醛，例如，戊二醛；二酮，例如，2，5-己二酮；和其他例如苯醌、2-亚氨基硫杂环戊烷、季戊四醇二碳酸酯、粘溴酸、粘氯酸、氯代甲酸乙酯、氯代甲酸对硝基苯基酯、6-肼基烟酸琥珀酰亚胺基酯、丙酮腙和4-甲酰基苯甲酸琥珀酰亚胺酯(例如首先用肼接头修饰胺，其次将胺修饰到乙醛接头上，然后彼此交联在一起)。
另一组双功能交联剂是硫氢基定向的同双功能交联剂，其包括：汞试剂，例如，1，4，-二(溴代汞基)丁烷；二硫化物形成剂，例如，聚亚甲基二(甲硫基磺酸盐)；双马来酰亚胺，例如，N，N’-亚甲基双马来酰亚胺、二(N-马来酰亚胺甲基)酯、双-马来酰亚胺乙烷，1，4-双-马来酰亚胺基丁烷、1，4-二-马来酰亚胺基-2，3，-二羟基丁烷、二-马来酰亚胺基己烷、1，8-二-马来酰亚胺三亚乙基二醇。还有另一组是烷基化剂，例如二-乙酰卤，如1，3-二溴丙酮；二(烷基卤)，例如，二(2-氯乙基)硫化物；均-三嗪，例如，2，4，-二氯-6-甲氧基-均三嗪；氮丙啶，例如，2，3，4，-三(亚乙基亚氨基)-均三嗪；和二-环氧化物，例如，1，2，3，4-二环氧丁烷；以及其他，如乙烯砜。
其他基团定向的同双功能交联剂是化学交联剂领域公知的，例如羧基定向试剂，如，双偶氮己烷；酚盐和咪唑基定向试剂，例如二联苯胺；精氨酸试剂，例如，对-亚苯基双乙二醛；和其他试剂，如顺式-二氯二氨合铂(II)(用于将α2-巨球蛋白与在识别位点或邻近识别位点的一个或多个甲硫氨酸残基交联，可交联DNA的己二酸二酰肼的互补链，以及交联糖蛋白、酸式磷酸酶和蔗糖酶)、N，N’-二(b-氨基乙酸)-酒石酰胺。
基团选择性的异双功能交联剂也是本领域公知的，其包括：氨基和巯基定向的双功能剂，例如，3-(2-吡啶二硫基丙酸)-N-琥珀酰亚胺基酯(SPDP)及其类似物(LC-SPDP，硫代-LC-SPDP)、琥珀酰亚胺基氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶二硫基)甲苯(SMPT)及其类似物硫代琥珀酰亚胺-6-{α-甲基-α-(2-吡啶二硫基)甲苯甲酰胺基}己酸酯(硫代-LC-SMPT)、琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸酯(SMCC)及其类似物、硫代琥珀酰二亚胺基-4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸酯(硫代MCC)、间-马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基-琥珀酰亚胺酯(MBS)及其类似物间-马来酰亚胺基苯甲酰-N-羟基-硫代琥珀酰亚胺酯(硫代-MBS)、N-琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰基)-氨基苯甲酸酯(SIAB)及其类似物硫代琥珀酰亚胺基(4-碘代乙酰基-氨基苯甲酸酯(硫代-SIAB)、琥珀酰亚胺基-4-(对-马来酰亚胺基苯基)丁酸酯(SMBP)及其类似物、硫代琥珀酰亚胺基-4-(对-马来酰亚胺基苯基)丁酸盐(硫代SMBP)、N-γ-马来酰亚胺基丁酰-氧基琥珀酰亚胺酯(GMBS)及其类似物(硫代-GMBS)、琥珀酰亚胺基-6-[(碘代乙酰基)-氨基]己酸酯(SIAX)及其类似物琥珀酰亚胺基-6-[6-((碘代乙酰基)氨基)-己酰基]氨基]己酸盐(SIAXX)、琥珀酰亚胺基-4-(((碘代乙酰基)氨基)甲基)-环己烷-1-羧基酯(SIAC)及其类似物琥珀酰亚胺基-6-((((4-(碘代乙酰基)氨基)甲基)-环己烷-1-羰基)氨基)己酸酯(SIACX)、N-琥珀酰亚胺基-4-马来酰亚胺基丁酸酯；羧基以及巯基或氨基定向的双功能试剂，例如，重氮乙酸对-硝基苯基酯；羰基和巯基定向的双功能试剂，例如，1-(氨基氧基)-4-[(3-硝基-2-吡啶基)二硫基)]丁烷；4-(-4-N-马来酰亚胺基苯基)丁酸肼盐酸盐(MPBH)、4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧基-肼(M2C2H)、3-(2-吡啶二硫基)丙酰基肼(PDPH)和其他例如2-甲基-N′-苯磺酰基-N4-溴代乙酰基醌二亚酰胺、N-羟基琥珀酰亚胺基-对甲酰基-苯甲酸酯、甲基-4-(6-甲酰基-3-叠氮基-苯氧基)丁酰亚胺酸酯HCl、丙烯醛。
此外包含在实施方案中的合适的交联剂还有零长度的交联剂的基团，其包括：羧基活化剂，例如碳化二亚胺，如1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙烷)-碳化二亚胺盐酸盐(EDC)(活化可以与NH2基团交联的羧基)；噁唑鎓衍生物；氯代甲酸酯；羰基二咪唑；和N-烷酯基二氢喹啉；二硫化物形成剂，如二价铜二(1，10邻二氮杂菲)；酶，例如转谷氨酰胺酶、过氧化物酶(在赖氨酸残基间)、黄嘌呤氧化酶(形成二硫键)；以及其他，例如吡咯并喹啉醌(将赖氨酸转换为可与其他赖氨酸残基反应的半乙醛)。
药物组合物
在多种实施方案中本发明提供药物组合物，其包含治疗有效量的单独的胃泌素化合物或FACGINT的组合，或含有胃泌素化合物的降血糖剂。本文中描述的所有药物组合物可以使用或不使用用于免疫抑制的制剂，使用或不使用用于持续释放、局部或全身给药的成分或装置进行配制。可添加药学上可接受的载体或赋性剂。所述载体包括但不限于盐溶液、缓冲盐溶液、葡聚糖、水、甘油、乙醇，及其组合。剂型应当适合于给药方式。在这种情况下此处所用的术语“有效量”是足以达到可治疗糖尿病症状的可识别的医疗目的的治疗剂或制剂的组合。如本文中所述，技术人员根据测量有关参数的现有方法，可凭经验确定有效量。
本文中的组合物还包括润湿剂或乳化剂，或pH缓冲剂。组合物可以是液体溶液、悬浮液、乳化液、片剂、丸剂、胶囊剂、缓释制剂，或粉剂。通过常规的粘合剂和载体例如甘油三酸酯，可以将组合物配制成栓剂。口服制剂可以包括标准载体，例如医药级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁，等。多种给药系统是已知的，并能用于给药本发明的组合物，例如，包裹于脂质体、微粒、微胶囊中等。
在示范性的实施方案中，根据适合于药物组合物的常规方法，例如用于人的皮下给药方法，可以配制本文中的组合物。典型地，用于皮下给药的组合物是无菌等渗的水缓冲溶液。如果需要，组合物还包括增溶剂和用于减轻注射部位疼痛的局部麻醉剂。通常，这些成分或单独地或以一起混和在单位剂型形式提供，例如，在密封容器中的干粉末、冻干粉末或无水浓缩物，所述密封容器如安瓿或如指明活化剂数量的扁囊。如果通过输液给药组合物，则可通过含有无菌医药级水、缓冲液或盐溶液配制组合物。如果通过注射给药组合物，可提供用于注射的无菌水或盐溶液的安培，以便给药前混和这些成分。本文中的组合物能以多种成分被配制成栓剂，其含有按重量计算约为0.5％至10％范围的活性成分；口服配制剂优选含有按重量计算约为10％至95％范围的活性成分。日剂量以单次剂量进行给药，或分成多个较小的分剂量来进行每日多次的给药。
如此处所用的，剂量时间表是指用于任何组合物的给药方法，其中组合物包括例如本文中提供的修饰的胃泌素化合物，或联合FACGINT或联合降血糖剂和/或免疫抑制剂的修饰胃泌素，各组合物以有效剂量同时给药或在各自单独的时间间隔中给药，所述时间间隔例如在各自的一天中，或作为组合制剂给药或单独给药，该方法还包括在例如每天的每单位时间中给药的组合物的量，以及给药各个组合物持续的时间或周期时间。
在一个方面中，发明提供用于抑制或治疗糖尿病的方法，该方法包括对需要胃泌素化合物的组合物的哺乳动物，单独地给药胃泌素化合物或联合FACGINT或联合降血糖剂和/或联合免疫抑制剂给药，每次给药量足以提高哺乳动物中分泌胰岛素β的细胞的数量；以及确定胰岛再生的总数，从而治疗或抑制糖尿病。确定胰岛再生的总数是测量选自下列的参数：血糖、血清葡萄糖、血液糖化血色素、胰岛素β细胞块、血清胰岛素和胰岛素的含量。与给药组合物之前的血糖测定比较，给药此处描述的组合物可减少血糖，例如与给药组合物之前的血糖测定相比较，给药这些组合物可减少血糖约50％，或70％。与哺乳动物中在给药组合物前测定的糖化血色素的浓度比较，糖化血色素的浓度得以降低。与哺乳动物中在给药组合物前测定的血清胰岛素浓度比较，血清胰岛素浓度得以提高。与哺乳动物中在给药组合物前测定的胰岛素浓度比较，胰岛素浓度得以提高。
可以将本发明的组合物配制成中性或盐形式。药学上可接受的盐包括与游离氨基形成的盐，例如衍生于盐酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等的盐，以及与游离羧基形成的盐，例如衍生于钠、钾、铵、钙、氢氧化铁、异丙胺、三乙胺、2-乙胺乙醇、组氨酸、普鲁卡因等的盐。
可有效治疗特殊病症或病情的本发明的治疗剂的量，取决于病症或病情的本性，并且可通过标准的临床技术得以确定。制剂中所用的准确剂量也取决于给药途径、疾病或病症的严重程度，并根据医师的判断和各个病人的详情而得以确定。本领域普通技术人员可确定胰岛素或C肽的血液水平，以及葡萄糖或葡萄糖刺激的空腹水平的常规测定。通过源自体外或动物模型测试系统的剂量应答曲线，药学领域的普通技术人员可以推断有效剂量。使用标准数据，所述数据包含循环、
代谢、排泄中的吸收、分布、半衰期动力学以及本文的实施方案的受体配体的毒理学的标准，对给药于患者的组合物剂量，针对物种至物种的已知变化进行调节。合适的给药剂量范围，通常是对各个活性化合物为每天每千克体重约0.01微克至10,000微克，例如，每天约0.01微克至1微克/kg、约0.1微克至10微克/kg、约1微克至500微克/kg、约10微克至10mg/kg。因此合适的给药剂量范围通常是约0.01微克/kg体重/天至10mg/kg体重/天。
在其他实施方案中本发明提供了药品包或试剂盒，它们包含一个或多个填充有本发明的药物组合物的一种或多种成份的容器。在所述包裹或试剂盒中，可找到含有扩大用途的胃泌素化合物的单位剂量的容器。与这种容器相关联的可以是多种书写材料，如说明书，或者管理药物和生物制品制造、使用或销售的政府机构所规定形式的告示，这一告示反映了制造、使用或销售人用药品的政府机构的准许。
除非另外限定，本文中所有的技术和科学术语，可被本发明所属领域的技术人员正常理解成具有相同的含义。类似于或等价于本文中描述的那些方法和材料，可用于实现本发明。本发明通过多种实施方案得以充分描述，并且附加的实施方案可作为随后的实施例和权利要求的例子进行说明，其中它们并不意味作为进一步限制而进行解释。所有引用的参考文献内容在此作为参考得以全部引用。
实施例
实施例1.在通过静脉注射对雄恒河猴给药后，未修饰的胃泌素的药物动力学实施例
在通过单独静脉注射对雄恒河猴给药后，进行该实施例以评估未修饰的胃泌素(指文中的化合物B；参见表3)的药物动力学(PK)曲线图。所用到的17个氨基酸的胃泌素类似物具有在位点15的单氨基酸突变，其中甲硫氨酸被替换为亮氨酸。因此虽然化合物B不同于天然存在的胃泌素，但是所有的有效证据表明它是胃泌素的功能等价物。
下列限定了与PK分析术语有关的术语：
Cmax-观测到的血浆浓度的最大值。
tmax*-最大浓度对应的时间。
AUC-曲线下方的面积，作为对一段时间内暴露于药物的总的量度。
血浆t1/2-测量药物停留在血液中直至血药浓度降至50％所需的多长时间。
胃泌素的给药
本实施例中使用雄性动物。每只动物通过静脉给药(3μg/kg、10μg/kg和30μg/kg)而接受胃泌素。用于静脉注射的配量溶液以单团剂量，通过隐静脉按1ml/kg的剂量进行给药。在为了确保全部剂量体积的给药的定量给药后，施用0.2ml的盐水洗液。给药于每只动物的实际体积取决于于动物最近的体重。
血液收集
通过臂静脉或股静脉，按下列时点收集连续的血样(大约每时点0.5ml)：0(给药前)、1、3、5、10、15、30分钟，1、2和4小时(给药后)。
将每份样品收集到含有EDTA的试管中，放置冰上直至离心。以1,500g(RCF)将样品最少冷冻离心10分钟，将所得血浆转入另一个试管中并置于干冰中。将用于如下描述的PK分析的所有样品都冷冻保藏。
分析胃泌素水平
通过制定完善的、用于定量测定胃泌素的竞争放射性免疫测定法，来检测血浆样品中的胃泌素(Russell et al.，Postgraduate MedicalJournal 52：645，1976)。检测中所用的抗体是在兔抗合成的人胃泌素I中产生的，所述胃泌素I通过碳化二亚胺偶合于牛血清蛋白。用125I标记抗原，并在该抗原的存在下，使用γ射线计数器探测抗体反应。
药物动力学分析
为了计算药物动力学参数，将每只动物的各时点的胃泌素血液水平数据输入Graphpad Prism 3.0(GraphPad Software，San Diego，California，USA，www.graphpad.com)。
表2静脉注射后，灵长类的胃泌素的平均PK参数的汇总表
  给药化合物B(μg/kg)   t1/2(min)   Cmax(pg/ml)   Tmax(min)   AUC(ng.ml/min)
  3   5   27000   2   251
  10   4   127487   1   939
  30   5   267625   1   2526
表2的数据表明化合物B的较短血浆t1/2，对于三个给药组其平均约为4-5分钟。在单团剂量给药后，化合物B表现出从灵长类血流中很快地被清除。随着化合物B的静脉给药剂量的提高，可观测到Cmax和AUC值的提高，然而提高给药剂量对t1/2值并没有影响。这些数据显示加大化合物B的给药量不能增强该肽在循环中的短生存期。总之，这些数据表明胃泌素在数分钟内从血流中被清除。因此，由于血清中胃泌素的快速清除，限制了血清中生物活性化合物的存在。
实施例2.未修饰的胃泌素对近期发作糖尿病的NOD小鼠的空腹血糖水平和胰岛素含量的影响。
根据空腹血糖(FBG)水平＞6.6mmol/l确定糖尿病的发病，从而监控未发作糖尿病(NOD)的雌鼠。在糖尿病发作后，以(i)赋形剂(n＝4)；或(ii)胃泌素(如表3所列的化合物B)按3ug/kg/day的剂量，每天给药一次(n＝5)共14天，来处理小鼠。小鼠未接受胰岛素补给处理。在第0天和第35天(停止处理后的第21天)评估两个处理组的空腹血糖水平和胰岛素含量。
图1显示35天后赋形剂处理的对照动物的空腹血糖水平(FBG)。相反地，胃泌素的处理可抑制一些糖尿病NOD小鼠中的血糖水平上升，然而，FBG剩余水平显著地高于在普通小鼠中所观察到的水平(约3-7mM)。这些数据表明，为了将水平降至正常水平，人们需要提高胃泌素的功效。
由于β-细胞被破坏，赋形剂处理组的胰岛素水平在第35天下降，然而与预处理值相比，用胃泌素处理的动物显著地表现出胰岛素水平的上升。参见图2。然而，在以0.6μg/ml的化合物B处理后，胰岛素水平的上升仍然明显低于普通小鼠的水平(12μg/胰腺)。这些数据连同实施例1中的药物动力学分析一起，表明使用未修饰的胃泌素来处理糖尿病NOD小鼠的效果，受到血浆胃泌素的较短生存期的限制(5分钟)。因此，利用长效胃泌素可更有效地刺激胰岛细胞的新生，提高胰岛素和抑制NOD小鼠中糖尿病的进展。
实施例3：胃泌素肽的肽合成
使用固相肽的标准技术，例如Steward，J.M.and Young，J.D.(1984)in″Solid Phase Peptide Synthesis″，2nded.，Pierce ChemicalCompany描述的，本领域中任何普通技术人员可容易地合成胃泌素肽。使用标准技术，例如使用反向HPLC和由0.1％TFA的H2O和0.1％TFA的乙腈组成的挥发性双元系统，可进行胃泌素肽的纯化。通过紫外吸收来监测洗脱，以收集纯化的肽，然后将其冷冻干燥，随后根据需要将其溶解，用于给药或测试，或用于进一步的偶合反应。
人工合成胃泌素合成肽，其含有除SEQ ID NO：1或2的29-34残基之外的1-28残基的任何连续部分，或含有除SEQ ID NO：3或4的12-17残基之外的1-11残基的任何连续部分。此外，人工合成具有N末端的间隔区的胃泌素肽，所述间隔区包括例如Gly和Ala的中性小氨基酸残基。也可合成具有N末端Cys残基的胃泌素合成肽，该肽具有或不具有间隔区。
表3列出了一些被合成用于胃泌素组合物的胃泌素肽的汇总表，并包括“大”胃泌素-34(A)、“小”或“短”胃泌素-17(B)，以及胃泌素-13(C)。
表3.胃泌素组合物及其成分的汇总表
  化合物   聚合物   N末端Cys残基   交联剂   胃泌素肽   残基来自SEQID NO：
  A   无   无   无   1-34   2
  B   无   无   无   1-17   4
  C   无   有   无   5-17   4
  D   无   有   无   2-34   2
  E   无   有   无   2-17   4
  F   无   有   无   5-17   4
  G   无   有   (GA)5   2-17   4
  H   无   有   (GA)5   5-17   4
  I   PEG   有   无   2-34   2
  J   PEG   有   无   2-17   4
  K   PEG   有   无   5-17   4
  L   PEG   有   (GA)5   2-17   4
  M   PEG   有   (GA)5   5-17   4
  N   PEG   有   无   2-34   2
  O   HAS   有   无   2-17   4
  P   HSA   有   无   5-17   4
  Q   HAS   有   (GA)5   2-17   4
  R   HSA   有   (GA)5   5-17   4
PEG是聚(乙二醇)-20000；HAS是人血清清蛋白；(GA)5是Gly-Ala-Gly-Ala-Gly-Ala-Gly-Ala-Gly-Ala间隔区。
实施例4：胃泌素与PEG-20000的偶合
将N端被Cys修饰的胃泌素肽(表3中的化合物D、E、F、G和H)，在接近中性的条件下与摩尔过量的三[2-羧乙基]膦盐酸盐(TCEP；具有马来酰亚胺部分的无活性的还原剂)一起温育30分钟(缓冲pH6.5-7.5)，以确保Cys残基处于还原态，并可用于反应。
逐步加入摩尔过量的mPEG-马来酰亚胺-20000(平均分子量20000；从Shearwater Corporation，Huntsville AL，USA获得)，同时混匀促进溶解，当充分溶解后，将溶液额外混匀1至4小时，以完成偶合反应。使用阴离子交换剂，例如中性pH的Q-琼脂糖，进行偶合物的纯化直到偶合物和任何未反应的胃泌素紧密结合，由于胃泌素的理论上的等电点(pI)是3.4，而中性未反应的mPEG-马来酰亚胺不能结合。为了进一步的纯化，基于它们分子量的巨大差异，使用大小排阻层析法，例如Sephadex G-5，和适于治疗用途的缓冲液，例如PBS，很容易地将偶合物从未反应的胃泌素中分离出来。
这些反应导致表3中化合物I、J、K、L和M的生成。使用针对肽含量的缩二脲反应和针对PEG含量的比色法(Habeeb，A.E S.A.(1966)Anal.Biochem.14：328-336)，以及确定偶合物总分子量的电喷雾质谱，来检验偶合反应的成功。
实施例5：与人血清清蛋白的偶合
血清清蛋白含有单个可接近的半胱氨酸还原残基(Cys-34)，所述残基是人血清蛋白中最主要的反应性硫醇基(Pedersen等(1980)Eur.J.Biochem.106：291-295)。该性质可允许包括肽的配体特异地偶合于血清清蛋白。
将人血清清蛋白于接近中性条件下与摩尔过量的三[2-羧乙基]膦盐酸盐(TCEP；具有马来酰亚胺部分的无活性的还原剂)一起温育30分钟(缓冲pH6.5-7.5)，以确保Cys残基处于还原态，并可用于反应。将摩尔过量的二-马来酰亚胺基乙烷(具有短间隔区和对巯基反应性的同双功能交联剂)加入以活化Cys-34。在单独的反应中，加入N端被Cys修饰的胃泌素肽(表3中的化合物D、E、F、G和H)，将所得溶液额外混匀1至4小时，以完成偶合反应。基于分子量的巨大差异，使用大小排阻层析法，和使用治疗用途的缓冲液，例如PBS，很容易地将偶合物从未反应的胃泌素(和形成的任何胃泌素二聚物)中分离出来。从胃泌素肽偶合的HAS中无法进一步分离未反应的HAS。
这些反应导致表3中化合物N、O、P、Q和R的生成。使用测定偶合物总分子量的电喷雾质谱，来检验偶合反应的成功。
实施例6.通过静脉注射对Wistar大鼠给药后，在未修饰和修饰的胃泌素化合物之间的药物动力学比较
引入该实施例以评估对Wistar大鼠静脉注射后，未修饰和修饰的胃泌素衍生物/偶合物的药物动力学曲线图。
胃泌素的给药
大鼠(三组)接受如实施例3中合成的多种测试化合物，将胃泌素等价物按10μg/kg的剂量水平进行静脉给药。以下所用的测试化合物都是以上表3列出的化合物。详情请参见表3。
血液收集
按下列时点收集连续的血样(大约每时点0.4ml)：在注射所有动物后的5、60、180、480分钟。在各个时点，从每组的3只动物采集血液。
将每份样品收集到含有EDTA的试管中，放置冰上直至离心。以1,500g(RCF)将样品最少冷冻离心10分钟，将所得血浆转入另一个试管中并置于干冰中。冷冻保藏所有样品以备PK分析。
分析胃泌素水平
使用来自R & D systems，catalog number DE3400的人胃泌素1(G-17)免疫测定试剂盒，通过ELISA方法，来测定血浆中化合物B水平。该测定基于竞争结合技术，其中存在于样品中的胃泌素I与定额的碱性磷酸酶标记的胃泌素I竞争兔多克隆抗体上的位点。在温育中，抗体结合羊抗兔抗体，并包埋于微量培养板上。洗涤除去过量的偶合物和未结合的样品之后，向培养孔中加入底物溶液以确定结合酶的活性。颜色的亮度与样品中胃泌素I的浓度成反比例。
药物动力学分析
使用PK Functions for Microsoft Excel(Usansky JI，Desai A，Tang-Liu D，Department of Pharmacokinetics and Drug Metabolism，Irvine，CA)，分析胃泌素(化合物B)及其不同的衍生物/偶合物的血药浓度。为了评估PK曲线图，计算多种测试化合物和下列PK值：Cmax、tmax、AUC和t1/2。
由于胃泌素(如化合物B)在血液中是以可检测水平而天然存在的，因此从给药化合物B后获得的血浆水平值中减去给药前获得的基值。数据以平均值±SD表示。
数据显示与天然胃泌素相比，具有半胱氨酸(作为N末端的功能基团)的修饰的胃泌素，或在N末端偶合于PEG或HAS的修饰胃泌素化合物，具有显著长的半衰期。与天然胃泌素17或胃泌素34相比，修饰的胃泌素化合物/偶合物以高浓度长期存在于血清中。这些数据还表明AUC也可促进胃泌素分子的化学修饰。可以预想，可最长时间地维持最大浓度的修饰的胃泌素衍生物/偶合物，对于糖尿病动物的胰岛细胞再生和葡萄糖水平的调节所要求的功效，具有最大的潜力。
实施例7.比较修饰的胃泌素化合物和未修饰的胃泌素抑制近期发作糖尿病的NOD小鼠的糖尿病进展
在该实施例中，在近期发作糖尿病的NOD小鼠中，检查未修饰的胃泌素和修饰的胃泌素化合物/偶合物的治疗效果，以确定与未修饰的胃泌素相比，多种修饰的胃泌素衍生物/偶合物是否更有效于抑制严重高血糖症以及提高近期发作糖尿病的NOD小鼠的胰岛素含量。以下所示用到的修饰的胃泌素化合物/偶合物(详情参见表3)：化合物B，其是被制备成具有17个氨基酸残基同时在氨基酸位点15具有Leu的合成的人胃泌素I的胃泌素，和化合物E、化合物G、化合物J、化合物L、化合物O、化合物Q。
对12-14周龄的非肥胖型糖尿病(NOD)的雌鼠，监测其糖尿病发作的进展(空腹血糖＞8.0至15mmol/l)，并且在出现症状的48小时内，将不同组的小鼠各自进行3或10μg/kg/天的胃泌素等价物的处理，通过每日腹腔注射进行给药处理。
治疗是进行给药14天。每周监测动物的空腹血糖(FBG)水平。在停止进食后约12小时和在最近的肽或赋形剂注射后24小时，测量FBG水平。一旦停止治疗，就于下一个4周(2-6周)内检测所有小鼠的FBG水平，以确定终止治疗处理后，是否对高血糖症的预防得以持续。在第14天停止处理。
方法包括在第6周对这些小鼠重复取样、采集用于分析FBG和血浆C肽的血液，并处死小鼠以测定胰岛素和对胰岛炎症(胰岛炎)记分。在最初处理时，小鼠既没有接受胰岛素替换疗法也没有接受免疫抑制。评估下列参数：存活率、胰岛素水平、胰岛炎的存在和空腹血糖水平。
数据表明具有更长半衰期和AUC的修饰的胃泌素衍生物/偶合物，更有效于抑制糖尿病NOD小鼠的高血糖症。在一些情况中，修饰的胃泌素化合物/偶合物将葡萄糖水平完全逆转至正常水平，表明在该模型中刺激了显著水平的胰岛再生的。
实施例8.比较修饰的胃泌素化合物和未修饰的胃泌素连同GLP-1一起抑制近期发作糖尿病的NOD小鼠的糖尿病进展
在该实施例中，对近期发作糖尿病的NOD小鼠，检测GLP-1与未修饰的胃泌素的组合以及GLP-1与修饰胃泌素化合物/偶合物的组合的治疗效果，以确定GLP-1和胃泌素的给药是否抑制严重的高血糖症，以及是否提高近期发作糖尿病的小鼠中的胰岛素含量。所用的GLP-1是作为人/小鼠GLP-1的生物活性片段的GLP-1(与来自由其加工该片段的前体相比，其具有位点7-36的残基；获得于BachemH6795)。以下是所用的修饰的胃泌素化合物/偶合物：化合物B-化合物B-胃泌素，如具有17个氨基酸残基同时在氨基酸位点15处具有Leu的合成人胃泌素I，和化合物E、化合物Q。
对12-14周龄的非肥胖型糖尿病(NOD)的雌鼠，监测其糖尿病发作的进展(空腹血糖＞8.0至15mmol/l)，并且在出现症状的48小时内，将四组小鼠各自进行如下处理：一组仅用赋形剂进行处理；其他组联合GLP-1(100μg/kg/天)和胃泌素化合物(3μg/kg/天的胃泌素等价物)进行处理，通过每日腹腔注射对各组进行给药处理。
治疗是进行给药14天。每周监测动物的空腹血糖(FBG)水平。在停止进食后约12小时和在最近的肽或赋形剂注射后24小时，测量FBG水平。一旦停止治疗，就于下一个4周(2-6周)内检测所有小鼠的FBG水平，以确定终止治疗处理后，是否高血糖症的预防得以持续。在第14天停止处理。
方法包括在第6周对这些小鼠重复取样、采集用于分析FBG和血浆C肽的血液，并处死小鼠以测定胰岛素和对胰岛炎症(胰岛炎)记分。最初处理时，小鼠既没有接受胰岛素替换疗法也没有接受免疫抑制。评估下列参数：存活率、胰岛素水平、胰岛炎的存在和空腹血糖水平。
数据表明与结合了天然胃泌素(化合物B)的GLP-1相比，与具有更长半衰期的修饰的胃泌素化合物/偶合物(化合物E或Q)组合的GLP-1，可更有效地降低糖尿病动物的血糖水平。这些数据证实了具有更长寿命的修饰的胃泌素化合物/与GLP-1或其他生长因子的偶合物的用途。
                       序列表
<110>WARATAH PHARMACEUTICALS，INC.
     CRUZ，Antonio
<120>胃泌素组合物和制剂及其使用和制备方法
<130>82629-3
<140>还未指定的
<141>2003-11-21
<150>US 60/428,100
<151>2002-11-21
<150>US 60/428,562
<151>2002-11-22
<150>US 60/530,590
<151>2002-12-03
<150>美国还未指定的
<151>2003-11-14
<160>8
<170>PatentIn version 3.2
<210>1
<211>34
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>合成肽
<220>
<221>混杂的特征
<222>(1)..(1)
<223>Xaa＝焦谷氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(34)..(34)
<223>酰胺化作用
<400>1
Xaa Leu Gly Pro Gln Gly Pro Pro His Leu Val Ala Asp Pro Ser Lys
1               5                   10                  15
Lys Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp Met
            20                  25                  30
Asp Phe
<210>2
<211>34
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>合成肽
<220>
<221>混杂的特征
<222>(1)..(1)
<223>Xaa＝焦谷氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(34)..(34)
<223>酰胺化作用
<400>2
Xaa Leu Gly Pro Gln Gly Pro Pro His Leu Val Ala Asp Pro Ser Lys
1               5                   10                  15
Lys Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp Leu
            20                  25                  30
Asp Phe
<210>3
<211>17
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>合成肽
<220>
<221>混杂的特征
<222>(1)..(1)
<223>Xaa＝焦谷氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>酰胺化作用
<400>3
Xaa Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp Met Asp
1               5                   10                  15
Phe
<210>4
<211>17
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>合成肽
<220>
<221>混杂的特征
<222>(1)..(1)
<223>Xaa＝焦谷氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(17)..(17)
<223>酰胺化作用
<400>4
Xaa Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp Leu Asp
1               5                   10                 15
Phe
<210>5
<211>6
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>合成肽
<400>5
Tyr Gly Trp Met Asp Phe
1               5
<210>6
<211>6
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>合成肽
<400>6
Tyr Gly Trp Leu Asp Phe
1               5
<210>7
<211>4
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>普通胃泌素/CCK受体配体的羧基末端的氨基酸序列
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>酰胺化作用
<400>7
Trp Met Asp Phe
1
<210>8
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>间隔臂
<400>8
Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala
1               5                   10

Claims (53)

1.包含胃泌素化合物的药物组合物，所述胃泌素化合物与天然胃泌素相比，在给药于患者后具有延长的活性。
2.包含Z-Ym-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6的胃泌素化合物，其中AA1是Tyr或Phe，AA2是Gly、Ala或Ser，AA3是Trp、Val或Ile，AA4是Met或Leu，AA5是Asp或Glu，以及AA6是Phe或Tyr，AA6是酰胺化的；其中Z是聚合物，当该聚合物是蛋白质时，则Z是该蛋白质的氨基酸序列；Ym是任选的间隔区，包括m个小分子中性氨基酸的氨基酸残基，并且X选自于下列任意的连续部分：SEQID NO：1的1-28位残基，SEQ ID NO：2的1-28位残基，SEQ ID NO：3的1-11位残基，和SEQ ID NO：4的1-11位残基，条件是胃泌素化合物结合胃泌素/CCK受体。
3.根据权利要求2的胃泌素化合物，其中AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6是Tyr-Gly-Trp-Met-Asp-Phe。
4.根据权利要求2的胃泌素化合物，其中AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6是Tyr-Gly-Trp-Leu-Asp-Phe。
5.根据权利要求2的胃泌素化合物，其中Z是蛋白质。
6.根据权利要求5的胃泌素化合物，其中Z是人血清清蛋白。
7.根据权利要求2的胃泌素化合物，其中Y是包含m个残基的序列，所述残基具有交替的甘氨酸和丙氨酸，或具有甘氨酸和丙氨酸的随机序列。
8.根据权利要求2的胃泌素化合物，其中X选自于以下序列：SEQ ID NO：3的1位至11位、SEQ ID NO：4的1位至11位、SEQ IDNO：3的2位至11位、SEQ ID NO：4的2位至11位。
9.根据权利要求2的胃泌素化合物，当m大于1时其进一步地包含位于Y的氨基末端的半胱氨酸残基，或当m是0时其进一步包含位于X的氨基末端的半胱氨酸残基。
10.根据权利要求2的胃泌素化合物，其中m是0至约20残基。
11.根据权利要求2的胃泌素化合物，其中如果m是0，则Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6进一步包含用于链接Z的双功能交联剂。
12.根据权利要求2的胃泌素化合物，其是以重组方式产生的。
13.编码根据权利要求2的胃泌素化合物的核苷酸序列。
14.携带根据权利要求13的核苷酸序列的细胞。
15.根据权利要求14的细胞，其是细菌或酵母细胞。
16.根据权利要求15的细菌细胞，其选自于埃希氏菌属、芽孢杆菌属和链霉菌属。
17.根据权利要求15的酵母细胞，其选自于酵母属、克鲁维酵母菌属、裂殖酵母属和毕赤酵母。
18.根据权利要求1的胃泌素化合物，其中胃泌素成分含有至少一个选自于下列的氨基酸：SEQ ID NO：1的29-34位、SEQ ID NO：2的29-34位、SEQ ID NO：3的12-17位、SEQ ID NO：4的12-17位，并且该胃泌素进一步与蛋白质、聚合物、脂质或碳水化合物缔合。
19.根据权利要求2或18的胃泌素化合物，其中该胃泌素成分至少含有SEQ ID NO：2的29-34位或SEQ ID NO：4的12-17位的氨基酸。
20.根据权利要求18的胃泌素化合物，其中所述的聚合物是聚乙二醇(PEG)或葡聚糖。
21.根据权利要求18的胃泌素化合物，其中所述的蛋白质是血清清蛋白。
22.根据权利要求21的胃泌素化合物，其中血清清蛋白是人血清清蛋白。
23.包含C-Ym-X结构的胃泌素化合物，其中C是Cys或Lys，Ym是任选的包含m个中性小氨基酸的氨基酸残基的间隔区，X是至少六个氨基酸的残基，其包含选自于胃泌素-17(SEQ ID NO：3和4)的至少12-17位，以及胃泌素-34(SEQ ID NO：1和2)的至少29-34位的序列。
24.根据权利要求23的胃泌素化合物，它进一步与一种聚合物缀合。
25.根据权利要求23的胃泌素化合物，它进一步与聚乙二醇(PEG)或葡聚糖缀合。
26.根据权利要求23的胃泌素化合物，它进一步与一种蛋白质缀合。
27.根据权利要求23的胃泌素化合物，它进一步包含双功能交联剂，其中交联剂的第一个反应末端与C共价结合。
28.根据权利要求23的胃泌素化合物，其中交联剂的第二个反应末端与聚合物或蛋白质共价结合。
29.根据权利要求23的胃泌素化合物，其中C-Ym-X是通过重组方式产生的或通过肽合成来合成的。
30.根据权利要求1、2和23中任一项的胃泌素化合物，处于有效的剂量中。
31.根据权利要求1、2和23中任一项的胃泌素化合物，它进一步包含用于免疫抑制的制剂。
32.根据权利要求1、2和23中任一项的胃泌素化合物，它进一步包含生长因子。
33.根据权利要求32的胃泌素，其中生长因子是胰高血糖素样肽1受体配体。
34.根据权利要求32的胃泌素化合物，其中生长因子是EGF受体配体。
35.根据权利要求1、2和23中任一项的胃泌素化合物，它进一步包含降血糖剂。
36.根据权利要求1、2和23中任一项的胃泌素化合物，它进一步包含药学上可接受的载体。
37.治疗患有糖尿病的患者的方法，包括给药权利要求1、2和23中任一项的胃泌素化合物。
38.根据权利要求37的方法，其中胃泌素化合物的给药频率低于天然胃泌素的给药频率。
39.根据权利要求37的方法，进一步包括测量胰岛新生的生理指示剂。
40.根据权利要求37的方法，进一步包括测量空腹血糖(FBG)。
41.根据权利要求37的方法，进一步包括降低胰岛素依赖性。
42.制备胃泌素化合物的方法，包括使胃泌素的氨基酸序列与载体组合物缔合。
43.根据权利要求42的方法，其中在使胃泌素与载体缔合前，对胃泌素进行修饰使其包含半胱氨酸替换或附加的半胱氨酸残基。
44.根据权利要求43的方法，其中半胱氨酸替换是替换焦谷氨酸。
45.根据权利要求42的方法，其中胃泌素氨基酸序列包含至少选自于以下的位点：氨基酸序列SEQ ID NO：1的29-34位残基；氨基酸序列SEQ ID NO：2的29-34位残基；氨基酸序列SEQ ID NO：3的12-17位残基；和氨基酸序列SEQ ID NO：4的12-17位残基。
46.根据权利要求43的方法，其中半胱氨酸位于胃泌素的氨基末端。
47.根据权利要求42的方法，进一步包括在使胃泌素与载体缔合之前，对胃泌素进行修饰以使其进一步包含双功能交联剂。
48.治疗糖尿病患者的方法，包括对患者给药能与清蛋白共价反应的经过修饰的胃泌素。
49.根据权利要求48的方法，其中经过修饰的胃泌素包含能结合胃泌素/CCK受体的半胱氨酸或赖氨酸氨基末端的天然胃泌素序列。
50.根据权利要求42的方法，其中天然胃泌素序列选自于：氨基酸序列SEQ ID NO：1的29-34位残基；氨基酸序列SEQ ID NO：2的29-34位残基；氨基酸序列SEQ ID NO：3的12-17位残基；和氨基酸序列SEQ ID NO：4的12-17位残基。
51.用于长时间地维持与具有胃泌素氨基酸序列的肽的血清水平相比时，增高的胃泌素血清水平的方法，该方法包括给药权利要求1、2和23中任一项的胃泌素化合物。
52.含有至少一种有效剂量的根据权利要求1、2和23中任一项的胃泌素化合物的试剂盒。
53.根据权利要求9的胃泌素化合物，它进一步包含用于链接Z的双功能交联剂。
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