CN1715912B - 转基因大豆检测能力验证样品及制备方法 - Google Patents

Abstract

转基因大豆检测能力验证样品及制备方法，含有转基因大豆粉0.01～20％重量百分比，样品可以是A、B两个样品组成，2个样品中都均匀、稳定地含有2.8％、3.2％含量的转基因大豆。本项发明采用分割水平设计方法设计了样品中转基因大豆含量，可以有效地防止能力验证活动中各参试实验室间的串通行为，制法科学合理，成功率高，保证了实验室间能力验证样品的均匀性和稳定性。本发明更加全面、准确地反映出各参试实验室测试结果的的重现性和再现性，该组样品不仅可以用于转基因大豆检测的实验室间能力验证活动，同时，也可以做为质控样品用于食品实验室的日常检验工作。

Description

转基因大豆检测能力验证样品及制备方法

技术领域

本发明涉及实验室间能力验证技术领域，特别是能力验证样品，以及其制备方法。

背景技术

实验室间能力验证活动是评价参试实验室测试能力的重要手段之一，而组织者提供给各参试实验室的测试样品则是保证能力验证计划顺利实施的前提条件。能力验证计划通常分为单样本和分割样本测试方案，在分割样本测试方案中，组织者提供给参试实验室的样本可能是由多个含量水平不同的测试样品组成，这些样品一方面应保证具备均匀和稳定的特征，同时还应满足能力验证方案的统计设计和统计评价程序的要求。能力验证样品不同于实验室日常测试的样品和一般工业化的产品，它是用于实验室间能力验证活动和实验室内部测试质量控制活动的特殊样品。因此，其设计、制备方法有其独特之处，目前在能力验证样品及其制备领域仍是较难以实现的。

发明内容

本发明的目的是克服现有能力验证样品缺乏，制法不完善的问题，提供一组均匀、稳定地含有不同含量的转基因大豆成分的转基因大豆能力验证样品，另外还提供该转基因大豆能力验证样品的制备方法，制备样品的成功率很高。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：转基因大豆检测能力验证样品，含有转基因大豆粉0.01～20％重量百分比。

所述样品为A样和B样，A样为大豆粉样品中含有2.8％的转基因大豆粉，B样为大豆粉样品中含有3.2％的转基因大豆粉。

所述转基因大豆检测能力验证样品的制备方法：

(1)首先根据转基因大豆的偏倚实验数据和重复性、再现性标准偏差，设计样品水平差；

(2)分别选取完整、无破损、无害虫危害的转基因大豆和非转基因大豆样品，于-80℃或低于-80℃预冷冻20min～1h，进行低温冷冻干燥，然后进行研磨，过80～100目筛后，在-80℃或低于-80℃低温冷冻真空脱水24～48h，使其成不粘连的干燥粉末状；

(3)在恒温恒湿、无菌操作间中，按设计量的重量百分比称取转基因大豆粉和非转基因大豆粉，混匀24～30h转基因大豆粉和非转基因大豆粉；

(4)再次在-80℃或低于-80℃低温冷冻真空干燥12～24h；

(5)将上述转基因大豆粉样品分装于棕色玻璃瓶中封盖密封；

(6)最后经⁶⁰CO 4kGy辐照30min～1h；

(7)复核、登记，随机抽取一定数量的样品进行均匀性、稳定性测试，符合有关能力验证方案和标准要求后，即可制得所需的含有转基因大豆成分的大豆粉能力验证样品。

本发明所述能力验证样品，能保证含有转基因大豆成分的转基因大豆检测能力验证样品中均匀、稳定地含有转基因大豆成分，尤其是保证了转基因大豆成分的稳定性，符合实验室间能力验证要求，且利于统计分析，本发明制法科学合理，该方法既符合能力验证分割水平样品的设计要求，同时其均匀性、稳定性等各项评价指标均可满足实验室间能力验证活动的需要。采用分割水平设计方法设计了A、B样品中转基因大豆成分，可以有效地防止能力验证活动中各参试实验室间的串通行为。用于转基因成分检测的实验室间能力验证活动能更加全面、准确地反映出各参试实验室测试结果的的重现性和再现性，该组样品不仅可以用于转基因大豆检测的实验室间能力验证活动，同时，也可以做为质控样品用于食品实验室的日常检验工作。

四、具体实施方式

实施例1

(1)首先根据转基因大豆的偏倚实验数据和重复性、再现性标准偏差，设计样品水平差。

(2)分别选取完整、无破损、无害虫危害的GTS 40-3-2转基因大豆和非转基因大豆样品，置于-80℃预冷冻至少1h进行低温冷冻干燥，之后进行组织研磨、预粉碎。

(3)再进行高铝瓷球磨机细磨，过100目筛(通过部分占99％)。之后进行低温冷冻真空脱水(-80℃，48h)，使其成不粘连的干燥粉末状。

(4)在恒温恒湿、无菌操作间中，分别按2.8％和3.2％的重量百分比称取转基因大豆粉和非转基因大豆粉，各自混匀(30h)该转基因大豆粉和非转基医大豆粉。

(5)再次低温真空冷冻干燥(-80℃，24h)

(6)将按上述方式获得的转基因大豆粉样品分装于经160℃干热处理2h的洁净的7mL棕色玻璃瓶中封盖密封，每瓶内装大豆粉1g。

(7)最后经⁶⁰CO 4kGy辐照1h。

(8)两批含有分割水平的转基因大豆样品，经双人复核、登记，并加以唯一性标识。

(9)随机抽取一定数量的样品进行均匀性、稳定性测试。

(10)评价测试数据，符合有关能力验证方案和标准要求后，即可制得所需的含有转基因大豆成分的大豆粉能力验证样品组。

均匀性、稳定性测试：

1均匀性测试

从每个大样中分别随机选取19个样品进行均匀性检查。每个样品分成两份试料，所有试料以随机次序在重复性条件下测试，即在同一实验室中由相同的人员使用相同的测试方法和仪器在较短时间内测试。测试结果见表1。

对于每种组分，样品平均值为x_t＝(x_t1+x_t2)/2；

试料间极差为w_t＝|x_t1-x_t2|；

总平均值为 $\stackrel{\‾}{\stackrel{\‾}{x}}=\mathrm{\Σ}{\stackrel{\‾}{x}}_t/g;$

总平均值的标准偏差为 $s_x=\sqrt{\mathrm{\Σ}{({\stackrel{\‾}{x}}_t-\stackrel{\‾}{\stackrel{\‾}{x}})}^2/(g-1)};$

样品内标准偏差为 $s_w=\sqrt{\mathrm{\Σ}{w}_t^2/2g};$

样品间标准偏差为 $s_s=\sqrt{s_s^2-s_w^2/2}.$

与用于每种组分的能力评价用稳健标准偏差(Robust SD)相比较，上述两个样品间标准偏差均小于0.3Robust SD，这表明采用本方法所制备的样品是足够均匀的。

2稳定性测试

分别从每个大样中选取用于稳定性测试的包装好的样品，分别历经了温度变化和辐照。对每个大样，随机选取的一组12个样品被放置在室温下(18～25℃)18天，然后放置在50℃保温箱中4天，再放置再室温下28天，从均匀性测试开始计算，在第10，20，30，40和50天，每天选取3个样品测试。另一组3个样品在测试前通过机场安全检查的X-光仪6次。

在全部稳定性测试中，所用人员、仪器、测试方法和实验室均与均匀性测试相同。样品的测试结果见表2，稳定性测试中样品的测试结果与均匀性测试中的总平均值的绝对差值由下式计算：

对每个组分，样品均值y_t＝(y_t1+y_t2)/2；

总平均值 $\stackrel{\‾}{\stackrel{\‾}{y}}=\mathrm{\Σ}{\stackrel{\‾}{y}}_t/g;$

均匀性和稳定性测试结果之间的绝对差值 $\left|d\right|=|\stackrel{\‾}{\stackrel{\‾}{y}}-\stackrel{\‾}{\stackrel{\‾}{x}}|$

与能力评价用稳健标准偏差相比较，3个样品的每个组分的稳定性测试结果分别与该组分均匀性测试结果之间的两个最大绝对差值均远小于相应的稳健标准偏差的0.3倍，这表明采用本方法所制备的样品可以忽略样品在上述条件下的变化所带来的影响。所有样品是足够稳定的。

均匀性、稳定性测试结果见表1、表2。

实施例2

按照实施例1所述方法制备转基因大豆检测能力验证样品，含有转基因大豆重量百分比为20％以内的任意值，如10％，5.6％，2.5％，0.05％等。

表1转基因大豆粉样品的均匀性测试结果

表2转基因大豆粉样品的稳定性测试结果

Claims (3)

1.转基因大豆检测能力验证样品，其特征是：样品含有转基因大豆粉0.01～20％重量百分比，按下述制备方法制备：

(1)首先根据转基因大豆的偏倚实验数据和重复性、再现性标准偏差，设计样品水平差；

(2)分别选取完整、无破损、无害虫危害的转基因大豆和非转基因大豆样品，于-80℃或低于-80℃预冷冻20min～1h，进行低温冷冻干燥，然后进行研磨，过80～100目筛后，在-80℃或低于-80℃低温冷冻真空脱水24～48h，使其成不粘连的干燥粉末状；

(3)在恒温恒湿、无菌操作间中，按设计量的重量百分比称取转基因大豆粉和非转基因大豆粉，混匀转基因大豆粉和非转基因大豆粉；

(4)再次在-80℃或低于-80℃低温冷冻真空干燥12～24h；

(5)将上述转基因大豆粉样品分装于棕色玻璃瓶中封盖密封；

(6)最后经⁶⁰CO 4kGy辐照30min～1h；

(7)复核、登记，随机抽取一定数量的样品进行均匀性、稳定性测试，符合有关能力验证方案和标准要求后，即制得转基因大豆检测能力验证样品。

2.根据权利要求1所述的转基因大豆检测能力验证样品，其特征是：样品为A样和B样，A样为大豆粉样品中含有2.8％的转基因大豆粉，B样为大豆粉样品中含有3.2％的转基因大豆粉。

3.根据权利要求1或2所述转基因大豆检测能力验证样品的制备方法，其特征是：

(1)首先根据转基因大豆的偏倚实验数据和重复性、再现性标准偏差，设计样品水平差；

(2)分别选取完整、无破损、无害虫危害的转基因大豆和非转基因大豆样品，于-80℃或低于-80℃预冷冻20min～1h，进行低温冷冻干燥，然后进行研磨，过80～100目筛后，在-80℃或低于-80℃低温冷冻真空脱水24～48h，使其成不粘连的干燥粉末状；

(3)在恒温恒湿、无菌操作间中，按设计量的重量百分比称取转基因大豆粉和非转基因大豆粉，混匀转基因大豆粉和非转基因大豆粉；

(4)再次在-80℃或低于-80℃低温冷冻真空干燥12～24h；

(5)将上述转基因大豆粉样品分装于棕色玻璃瓶中封盖密封；

(6)最后经⁶⁰CO 4kGy辐照30min～1h；

(7)复核、登记，随机抽取一定数量的样品进行均匀性、稳定性测试，符合有关能力验证方案和标准要求后，即制得转基因大豆检测能力验证样品。