CN1708484A - 用于治疗高眼压症的眼用组合物 - Google Patents

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CN1708484A CN 200380102578 CN200380102578A CN1708484A CN 1708484 A CN1708484 A CN 1708484A CN 200380102578 CN200380102578 CN 200380102578 CN 200380102578 A CN200380102578 A CN 200380102578A CN 1708484 A CN1708484 A CN 1708484A
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Abstract

本发明涉及强效的钾通道阻滞剂式I化合物或它的制剂用于治疗青光眼及其他导致病人眼睛内压增加的病症。本发明还涉及使用这样的化合物以提供对哺乳动物特别是人的眼睛的神经保护作用。

Description

用于治疗高眼压症的眼用组合物
背景技术
青光眼是一种眼睛的变性性疾病，其中眼内压太高以致不能发挥正常的眼功能。其结果可能损害视神经末梢，并导致视觉功能不可逆转的损伤。如果未经治疗，青光眼可能最后导致失明。高眼压症，也就是眼内压升高而没有视神经末梢损害或青光眼性视野缺损特性的病症，现在大多数眼科医师认为该病症只是在青光眼发作的最早阶段才存在。
有一些治疗青光眼和升高的眼压的疗法，这些试剂的功效和副作用概况并不理想。最近发现钾通道阻断剂可降低眼睛的眼内压，因此可提供另一个治疗眼睛的血压过高和相应的眼睛状况退化的方法。钾通道的阻塞可以减少液体分泌，并且在一些情形下会增加平滑肌收缩，并被期待可以降低IOP以及对眼睛具有神经保护作用。(参见美国专利US5,573,758以及US5,925,342；Moore等Invest.Ophthalmol.Vis.Sci 38，1997；WO 89/10757，WO94/28900，以及WO96/33719)。
发明概述
本发明涉及利用有效的钾通道阻断剂或它们的制剂治疗青光眼以及与病人眼睛的眼压升高了有关的其它病症。本发明还涉及利用这些化合物提供针对哺乳动物尤其是人的眼睛的神经保护作用。更具体地讲，本发明涉及使用具有式I结构的新吲唑化合物：
Figure A20038010257800061
式I
或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体或它们的混合物治疗青光眼和/或高眼压症(升高了的眼内压)。
其中，
R代表氢或C1-6烷基；
Ry代表H或C1-6烷基；
Rw代表H、C1-6烷基、-C(O)C1-6烷基、-C(O)OC1-6烷基、-SO2N(R)2、-SO2C1-6烷基、-SO2C6-10芳基、硝基、氰基或-C(O)N(R)2；
R2代表氢、C1-10烷基、羟基、C2-6链烯基、-(CH2)nO(CH2)mOR、-(CH2)nC1-6烷氧基、-(CH2)nC3-8环烷基、-(CH2)nC3-10杂环基或-(CH2)nC6-10芳基，所述的烷基、杂环基或芳基任选被1-3个选自Ra的基团取代；
R3代表氢、C1-10烷基、-(CH2)nC3-8环烷基、-(CH2)nC3-10杂环基、-(CH2)nCOOR、-(CH2)nC6-10芳基、硝基、氰基或卤素，所述的烷基、杂环基或芳基任选被1-3个Ra基取代；
R4和R5独立地代表氢、C1-6烷氧基、羟基、C1-6烷基、COOR、SOqC1-6烷基、COC1-6烷基、SO3H、-O(CH2)nN(R)2、-O(CH2)nCO2R、-OPO(OH)2、CF3、OCF3-N(R)2、硝基、氰基、C1-6烷基氨基或卤素；以及
R6表示氢、C1-10烷基、-(CH2)nC6-10芳基、-(CH2)nC3-10杂环基、-(CH2)nC3-8环烷基，所述的芳基、杂环基和烷基任选被1-3个选自Ra的基团取代，其中Ra(s)可以与任何碳原子或选自N和S的杂原子连接；
R8表示-(CH2)nC3-8环烷基、-(CH2)n3-10杂环基、C1-6烷氧基或-(CH2)nC5-10杂芳基、-(CH2)nC6-10芳基，所述的杂环基、芳基或杂芳基任选被1-3个选自Ra的基团取代；
Ra表示F、Cl、Br、I、CF3、N(R)2、NO2、CN、O-、-COR8、-CONHR8、-CON(R8)2、-O(CH2)nCOOR、-NH(CH2)nOR、-COOR、-OCF3、CF2CH2OR、-NHCOR、-SO2R、-SO2NR2、-SR、(C1-C6烷基)O-、-(CH2)nO(CH2)mOR、-(CH2)nC1-6烷氧基、(芳基)O-、-(CH2)nOH、(C1-C6烷基)S(O)m-、H2N-C(NH)-、(C1-C6)烷基)C(O)-、(C1-C6烷基)OC(O)NH-、-(C1-C6烷基)NRw(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C1-C6烷基)O(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C1-C6烷基)S(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C1-C6烷基)-C3-10杂环基-Rw、-(CH2)n-Z1-C(＝Z2)N(R)2、-(C2-6链烯基)NRw(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C2-6链烯)O(CH2)nC3-10杂环基Rw、-(C2-6链烯基)S(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C2-6链烯基)-C3-10杂环基-Rw、-(C2-6链烯基)-Z1-C(＝Z2)N(R)2、-(CH2)nSO2R、-(CH2)nSO3H、-(CH2)nPO(OR)2、C3-10环烷基、C6-10芳基、C3-10杂环基、C2-6链烯基、和C1-C10烷基，所述的烷基、链烯基、烷氧基、杂环基和芳基任选被1-3个选自C1-C6烷基、卤素、(CH2)nOH、CN、NO2、CON(R)2和COOR的基团；
Z1和Z2独立地代表NRw、O、CH2、或S；
m是0-3；
n是0-3，以及
q是0-2。
对本发明总体上的考查将会认识本发明的这个方面以及其他方面。
发明的详细说明
本发明涉及式I的新的钾通道阻断剂。本发明还涉及降低升高了的眼内压或治疗青光眼的方法，该方法通过施用含有上文描述的式I的钾通路阻断剂和药学上可接受的载体的组合物给药，优选局部给药或内部camaral给药。
在另一个实施方案中，Rw选自H、C1-6烷基、-C(O)C1-6烷基和-C(O)N(R)2，并且所有其它变量如原先描述。
本发明的另一个实施方案可以这样实现：当R6是C1-10烷基，(CH2)nC3-8环烷基，所述的烷基任选被1-3个选自Ra的基团取代，并且所有其它变量如原先描述时。
本发明的另一个实施方案可以这样实现：当R6是任选被1-3个选自Ra的基团取代的C1-10烷基，并且所有其它变量如原先描述时。
当Ry是C1-6烷基时，并且所有其它变量如原先描述时，本发明的另一个
实施方案可以实现。
当R2是C1-10烷基或-(CH2)nC3-8环烷基，并且R3是C1-10烷基(CH2)nC3-10杂环基，所述的杂环基、烷基任选被1-3个选自Ra的基团取代时，本发明的另一个实施方案可以实现。当n是0时，本发明的一个子实施方案可以实现。
当Ra选自F、Cl、Br、I、CF3、N(R)2、NO2、CN、O-、-CONHR8，-CON(R8)、-O(CH2)nCOOR、-NH(CH2)nOR、-COOR、-OCF3、-NHCOR、-SO2R、-SO2NR2、-SR、(C1-C6烷基)O-、-(CH2)nO(CH2)mOR、-(CH2)nC1-6烷氧基、(芳基)O-、-OH、(C1-C6烷基)S(O)m-、H2N-C(NH)-、(C1-C6烷基)C(O)-、(C1-C6烷基)OC(O)NH-、-(C1-C6烷基)NRw(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(CH2)n-Z1-C(＝Z2)N(R)2、-(C2-6链烯基)NRw(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C2-6链烯基)-Z1-C(＝Z2)N(R)2、-(CH2)nSO2R、-(CH2)nSO3H、-(CH2)nPO(OR)2、C2-6链烯基和C1-C10烷基，所述的烷基、链烯基任选被1-3个选自C1-C6烷基、COOR的基团取代时，发明的另一个实施例可以实现。
在表1可以找到本发明所使用化合物的例子，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体或其混合物。
表1
除非另作说明，使用下文所定义的术语详细描述本发明。
本发明的化合物可具有不对称中心、手性轴和手性面，并且可以以外消旋物、外消旋物的混合物、单个非对映异构体的形式存在，所有可能的异构体，包括光学异构体在内，都被归入本发明。(参见E.L.Eliel和S.H.WilenStereochemistry of Carbon Compounds(John Wiley and Sons，New York 1994)，特别是第1119-1190页)。
当任何变量(例如，芳基、杂环、R1、R6等)在任何结构中出现多于一次时，每次出现的定义与其它次出现的定义彼此独立。而且，取代基/或变量的各种结合是允许的，且只有当这些结合的结果能形成稳定的化合物时才允许。
当Ra是-O-并且和碳原子相连时，它被称为羰基；当它和氮原子相连时(例如 吡啶基上的氮原子)或硫原子时它分别被称为N-氧化物和亚砜基。
除非另作定义，术语“烷基”是指含有1到10个碳原子的从单价烷基(烃)中衍生的基团。它可以是直链、支链或环状的。优选的烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、环丙基、环戊基和环己基。当烷基被称为被烷基取代时，它可和“支链烷基”交换使用。
除非另作定义，环烷基是一类含有3-15个碳原子的烷基，碳原子之间没有交替的或共振的双键。它可含有1-4个稠合的环。这样的环烷基的例子包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
链烯基是C2-C6链烯基。
烷氧基是指含所指明数目的碳原子的烷基与氧桥连接。烷基任选被此处描述取代。所述的基团是那些直链或支链构型的指定长度的基团，如果链中有两个或更多个碳原子，它们可能包括双键或三键。这些烷氧基的例子是甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、异戊氧基、己氧基、异己氧基、烯丙氧基、炔丙氧基等等。
卤素(卤代)是指氯、氟、碘或溴。
芳基是指芳香环，例如苯基，取代的苯基等等，以及稠合的环例如萘基、菲基等等。芳基因而包括含有至少一个至少6原子的环，直至五个这样的环，可含有最多22个原子，相邻的碳原子或合适的杂原子相互之间交替着(共振的)双键。芳基的例子是苯基，萘基，四氢萘基，2，3-二氢茚基，联苯基，菲基，蒽基或苊和菲基，优选苯基，萘基或菲基。芳基可以同样地被所定义的基团取代。被取代的芳基优选包括苯基和萘基。
这里使用的术语杂环基或杂环代表稳定的3至7元单环或稳定的8至11元的双环杂环，它是饱和的或不饱和的，并且它包括碳原子和一个至四个选自N，O和S的杂原子，并且包括任何二环基，其中上述定义的任何杂环与苯环稠合。杂环可与任何杂原子或碳原子连接形成稳定结构。稠合的杂环体系可能包括碳环，并且必需包括唯一的一个杂环。术语杂芳基或杂环包括杂芳基部分。这样的杂环基的例子包括，但是不局限于吖庚因基、苯并咪唑基、苯并异噁唑基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并噻喃基、氧茚基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并二氢吡喃基、噌啉基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并噻喃基、二氢苯并噻喃砜、二氢吡咯基、1，3-二氧戊环基、呋喃基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、异苯并二氢吡喃基、异二氢氮杂茚基、异喹啉基、异噻唑烷基(isothiazdingl)、异噻唑基、异噻唑烷基、吗啉基、1，5-二氮杂萘基、噁二唑基、2-氧氮杂、噁唑基、2-氧哌嗪基、2-氧哌啶基、2-氧吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吡啶基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四氢呋喃基、四氢异喹啉、四氢喹啉基、硫代吗啉亚砜、噻唑基、噻唑啉基、噻吩并呋喃基、噻吩并噻吩基和噻吩基。优选地，杂环基选自2-氮杂酮基(azepinonyl)、苯并咪唑基、2-diazapinonyl、二氢咪唑基、二氢吡咯基、咪唑基、2-咪唑烷酮基、吲哚基、异喹啉基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡啶基、吡咯烷基、2-哌啶酮基、2-嘧啶酮基、2-吡咯烷酮基、喹啉基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基和噻吩基。
术语“杂原子”独立地选自O、S或N。
术语“杂芳基”是指具有5或6个环原子的单环芳烃基团，或具有8至10个原子的二环芳基，包含至少一个杂原子O、S或N，其中碳原子或氮原子是联结点，并且其中一个或两个另外的碳原子任选被一个选自O或S的杂原子替代，并且其中1到3个另外的碳原子任选被氮杂原子替代，所述的杂芳基任选被这里描述的取代基取代。这样的杂环基的例子包括，但是不局限于苯并咪唑基、苯并异噁唑基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并噻喃基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并二氢吡喃基、噌啉基、二羟基苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并噻喃基、二氢苯并噻喃基砜、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、异苯并二氢吡喃基、异二氢氮杂茚基、异喹啉基、异噻唑基、1，5-二氮杂萘基、噁二唑基、吡啶基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉、喹喔啉基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、噻唑基、噻吩并呋喃基、噻吩并噻吩基、噻吩基和三唑基。另外的氮原子可以和第一个氮、氧或硫原子同时存在，例如形成噻二唑。
本发明还涉及治疗高眼压症或青光眼的组合物和方法，该方法通过给需要的病人服用式I的一个化合物并联合β-肾上腺素阻滞剂例如噻吗洛尔、倍他索洛尔、左倍他洛尔、卡替洛尔、左布诺洛尔，拟副交感神经功能试剂例如肾上腺素、iopidine、溴莫尼定、可乐宁、对-氨基可乐宁，碳酸酐酶抑制剂例如多佐胺、乙酰唑胺、甲醋唑胺或布林唑胺，EP4激动剂(例如在WO 02/24647，WO02/42268，EP1114816，WO 01/46140和WO 01/72268中公开)，前列腺素例如拉坦前列素、travaprost、乌诺前列酮、去氯羟嗪、S1033(美国专利US5,889,052；5,296,504；5,422,368和5,151,444中提出的化合物)；降血压类脂例如lumigan和美国专利US5,352,708中所提出的化合物；在美国专利US4,690,931中公开的神经保护剂，尤其是如WO 94/13275中提出的依利罗地和R-依利罗地，包括美金刚在内；或如PCT/US00/31247中提出的5-HT2受体激动剂，尤其是1-(2-氨基丙基)-3-甲基-1H-咪唑-6-醇富马酸酯和2-(3-氯-6-甲氧基-吲唑-1-基)-1-甲基乙胺。降血压类脂的(基本的前列腺素结构的α-链节上的羧基被电化学中性的取代基代替)一个例子是其中羧基被C1-6烷氧基如OCH3(PGF2a1-OCH3)或羟基(PGF2a1-OH)取代。
优选的钾通道阻断剂是被钙活化的钾通道阻断剂。更优选钾通道阻断剂是高电导的、被钙活化的钾(Maxi-K)通道阻断剂。Maxi-K通道是一类一般存在于神经元、平滑肌和上皮组织的离子通道，并且它们被膜电位和细胞内的钙离子(Ca2+)控制开启。
本发明基于下述发现：maxi-K通道如果被阻隔，通过阻碍网状溶解物和水流出而阻碍(眼球的)水状体的产生，从而降低IOP。本发现意味着maxi-K通道阻断剂具有治疗另外的眼科功能紊乱如有斑点的水肿以及黄斑变性的用途。众所周知降低IOP会促进血液流至视网膜以及视神经。相应地，本发明的化合物具有治疗有斑点的水肿和/或黄斑变性的用途。
可以相信的是降低IOP的maxi-K通道阻断剂能提供神经保护作用。它们还被认为通过降低IOP从而在增加视网膜以及视神经末梢的血流速度以及增加视网膜和视神经氧张力方面是有效的，它们连接在一起时有益于视神经的健康。因此，本发明还涉及增加视网膜和视神经末梢流血速度的方法、增加视网膜和视神经氧张力的方法以及提供神经保护作用的方法或者它们的组合。
许多上市药物起钾通道拮抗物的作用。其中最重要的包括化合物优降糖(Glyburide)，格列吡嗪(Glipizide)和甲糖宁(Tolbutamide)。这些钾通道拮抗剂被用作抗糖尿试剂。本发明的化合物可以与这些化合物中的一个或多个相结合用于治疗糖尿病。
钾通道拮抗剂还可被用作第3类抗心律失常药来治疗人类的急性梗死。已知许多天然存在的毒素可以阻遏钾通道，它们包括蜂毒明肽、iberiotoxin、北非蝎毒素、解毒菌素、kaliotoxin、树突毒素，柱状细胞degranuating(MCD)肽，和β-银环蛇毒素(β-二甲苯)。本发明的化合物可以与这些化合物中的一个或多个相结合用于治疗心律失常。
抑郁症与在神经传递介质排放下降有关。当前对抑郁症的治疗包括神经传递介质摄取的阻断剂，以及涉及神经传递介质退化的酶抑制剂——它们起着延长神经传递介质寿命的作用。
阿尔茨海默氏病也是以削弱神经传递介质释放为特征的。三类药物正在被研究用于治疗阿尔茨海默氏病胆碱能增效剂例如抗胆碱脂酶药(例如)毒扁豆素(physostigmine)(毒扁豆碱(eserine))，和塔克林(四氢氨基吖啶))；那些影响神经原新陈代谢并对其它地方作用很小的促智药(例如吡拉西坦，奥拉西坦；和那些影响脑脉管系统的药物例如二氢麦角碱甲磺酸盐和包括尼莫地平在内的钙离子通道阻遏剂组成的混合物。丙炔苯丙胺，增加脑多巴胺的单胺氧化酶B抑制剂，以及新肾上素——据报道在一些阿尔茨海默氏病人中有缓和的改进作用。那些认为阿尔茨海默氏病应归因于铝毒性的人对铝螯合剂感兴趣。已经使用那些影响行为的药物，这些药物包括神经安定药和抗焦虑药。抗焦虑药是缓和的镇静剂，它们的效果比不上神经安定药。本发明涉及可用作钾通道拮抗剂的新化合物。
本发明范围内的化合物呈现出钾通道拮抗剂活性，因而在治疗与钾通道机能紊乱有联系的病症上有用。许多认知紊乱例如阿尔茨海默氏病，记忆损失或者抑郁症可能受益于增强神经传递介质例如血清素，多巴胺或者乙酰胆碱等等的释放。Maxi-钾通道的阻塞保持着细胞的去极化作用，因此提高这些有活力的神经传递介质的分泌。
在医治阿尔茨海默氏病时，本发明的化合物可以与抗胆碱脂酶药例如毒扁豆素(依色林)以及塔克林(tetrahydroaminocridine)，促智药例如吡乙酰胺，奥拉西坦，二氢麦角碱甲磺酸盐，有选择性的钙离子通道阻断剂例如尼莫地平，或者单胺氧化酶B抑制剂例如丙炔苯丙胺相结合。在治疗arrytthmias时，本发明的化合物还可与蜂毒明肽、iberiotoxin、北非蝎毒素、解毒菌素、kaliotoxin、树突毒素、柱状细胞degranuating(MCD)肽、β-银环蛇毒素(β-BTX二甲苯)或者它们的组合组合在一起。在治疗糖尿病时，本发明的化合物还可进一步的与优降糖，格列吡嗪，甲糖宁或者它们的组合结合起来使用。
此处的实施例只是用于举例说明，而不限制本发明的权利要求。每个权利要求的化合物都是钾通道拮抗剂，因而对所描述的神经系统紊乱会有用，在其中它合乎需要的将细胞保持在一种去极化状态以实现最大的神经传递介质释放。本发明中生产的化合物可以容易的与合适的和已知的药学上可接受的赋形剂相结合，生成组合物，这些组合物可以给哺乳动物包括人类服用，以实现有效的钾通道堵塞。
当作为药物使用时，式I化合物的盐是药学上可接受的盐。然而，根据本发明，其它的盐在制备化合物或者它们药学上可接受的盐时也可能有用。当本发明的化合物呈酸性时，合适的“药学上可接受的盐”是指从药学上可接受的无毒的碱包括无机碱和有机碱制备形成的盐。盐来自于包括铝、铵、钙、铜、亚铁、三价铁、锂、镁、锰盐，二价锰，钾，钠，锌等等的无机碱。尤其优选是铵，钙，镁，钾和钠的盐。从包括：伯胺、仲胺和叔胺的盐，取代胺包括天然存在的取代胺，环胺和碱性离子交换树脂，例如精氨酸、甜菜碱咖啡因、胆碱、N，N1-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡糖、组氨酸、哈胺(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等等药学上可接受的无毒的有机碱衍生的盐。
当本发明的化合物呈碱性时，可以从药学上可接受的无毒的酸包括无机酸和有机酸制备得到盐。这些的酸包括醋酸、苯磺酸、安息香酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡萄糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙基磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、苦杏仁酸、甲基磺酸、粘酸、硝酸、扑酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等等。尤其优选是柠檬酸、氢溴酸、盐酸、马来酸、磷酸、硫酸和酒石酸。
上述的药学上可接受的盐的制备以及其它一般的药学上可接受的盐的制备，在Berg等的论文“Pharmaceutical Salts”J.Pharm.Sci.，1977∶66∶1-19中有更全面地描述。
这里所使用的术语“组合物”是指包含包括指定数量指定成分的产品，以及直接或者间接地由指定数量指定成分的组合得到的任何产品。
当将根据本发明的化合物给受试验的人用药时，每天的剂量通常由开处方医师根据病人的年龄、体重、性别、具体病人的反应，以及病人症状的严重程度进行剂量的变化。
所用的maxi-钾通道阻断剂可以以静脉内、皮下、局部、经皮、肠胃外或者本领域熟练技术人员所知的任何其它方法以治疗有效量用药。
眼用药物组合物优选以溶液、悬浮液、软膏、乳膏剂或者固体插入件的形式适用于对眼睛的局部给药。该化合物的眼用制剂可含有0.01ppm至1％，尤其是0.1ppm至1％的药物。可以使用更高的剂量例如大约10％或者更低的剂量，只要该剂量在降低眼内压、治疗青光眼、增加血流速度或者氧张力方面有效。就单个剂量而言，0.01至5000ng，优选0.1至500ng，尤其优选1到100ng的化合物可施用于人眼。
含有该化合物的药物制剂可以方便地和无毒的药物有机载体或者和无毒的药物无机载体混合。典型的药学上可接受的载体是，例如：水，水和可与水混溶的溶剂的混合物及其它常用的可接受的载体。可与水混溶的溶剂例如是低级烷醇或者芳基烷醇、植物油、聚(亚烷基)二醇、基于石油的凡士林、乙基纤维素、油酸乙酯、羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、十四烷酸异丙酯。所述的药物制剂还可包含无毒的辅助物质例如乳化剂、防腐剂、润湿剂、增稠剂等等，它们的实例有聚乙二醇200、300、400和600，聚乙二醇(carbowax)1,000、1,500、4,000、6,000和10,000，抗菌组分例如季铵化合物，已知的具有冷灭菌特性的苯基汞盐——它们使用时是无害的，硫汞撒，甲基和对羟苯甲酸丙酯，苯甲醇，苯乙醇，缓冲液成分例如四硼酸钠，乙酸钠，葡糖酸盐缓冲液，及其他常规的成分例如单月桂酸山梨醇酐酯、三乙醇胺、油酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐单棕榈酸酯、二辛基磺基琥珀酸钠、单硫代甘油、硫代山梨糖醇(thiosorbitol)、乙二胺四乙酸等等。另外，合适的眼用赋形剂可以作为载体介质用来实现本发明的目的，它们包括常规的磷酸盐缓冲液赋形剂体系，等渗压的硼酸赋形剂，等渗压的氯化钠赋形剂，等渗压的四硼酸钠赋形剂等等。药物制剂还可以微粒制剂的形式存在。药物制剂还可以固体插入件的形式存在。例如可以使用固态水溶性聚合物作为载体用于药剂。用于形成插入件的聚合物可以是任何水溶性的无毒的聚合物，例如纤维素衍生物例如纤维素甲醚、羧甲基纤维素钠盐、羟基低级烷基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素；丙烯酸酯例如聚丙烯酸盐，丙烯酸乙酯，聚乙酰水杨酰胺；天然产品例如凝胶、藻酸盐、果胶、黄芪胶、刺梧桐树胶、角叉菜属、琼脂、洋槐；淀粉衍生物例如淀粉醋酸酯，羟甲基淀粉醚，羟丙基淀粉，以及其它的合成的衍生物例如聚乙烯醇，聚乙烯基吡咯烷酮，聚乙烯甲醚，聚乙烯基氧化物，中性的carbopol和黄原胶，洁冷胶，以及所述的聚合物的混合物。
本发明制剂合适的给药受体包括灵长类动物，人及其它动物，尤其是人和驯养的动物例如猫和狗。
该药物制剂可能包含无毒的辅助物质例如抗菌组分，它们在使用中是无害的，例如硫汞撒、氯化苄烷铵、对羟苯甲酸甲酯和丙酯，苄基dodecinium溴化物，苯甲醇，或苯乙醇；缓冲液成分例如氯化钠，四硼酸钠，乙酸钠，柠檬酸钠，或葡糖酸盐缓冲液；及其它常规成分例如单月桂酸山梨醇酐酯、三乙醇胺、聚氧乙烯山梨糖醇单棕榈酸酯、乙二胺四乙酸等等。
眼用溶液或者悬浮液可以每当必需时用药以在眼睛里保持可接受的IOP浓度。预期给哺乳动物眼睛上药以每天大约一次或者两次。
本发明的新制剂可以以溶液、凝胶剂、软膏、悬浮液或者固体插入件的形式对眼睛局部给药，可以使一个单位剂量包含治疗有效量的活性组分或者在组合治疗的情况下包含多倍的治疗有效量的活性组分配制配方。
下面用示例性实施例说明本发明。
实施例中所用的术语定义如下：
SM-原术材料，
DMSO-二甲亚砜，
TLC-薄层色谱法，
SGC-硅胶柱色谱法，
PhMgBr-苯基溴化镁
h＝hr＝小时，
THE-四氢呋喃，
DMF-二甲基甲酰胺，
min-分钟，
LC/MS-液相色谱法/质谱法，
HPLC-高效液相色谱，
PyBOP-苯并三唑-1-基-氧-三-(二甲基氨基)鏻六氟磷酸，
equiv＝eq＝当量，
NBS-N-溴丁二酰亚胺和
AIBN-2，2′-偶氮二异丁腈。
可根据方案1进行合适的改进制造本发明的化合物。根据方案1也可制备
实施例1-3。
方案1
在方案1中使用NBS、AIBN和过氧化苯甲酰使硝基茴香醚溴化。用氰化钾处理溴化硝基茴香醚得到氰基硝基茴香醚。通过氢化将硝基转化为胺。然后用亚硝酸钠和盐酸处理该胺得到吲唑环。在该反应中，一旦通过苯胺部分的亚硝化反应产生重氮鎓，就用酸性苄基氰在分子内捕获该重氮鎓。所得衍生物的互变异构就得到吲唑环。用Gringard试剂处理该腈，之后将所得到的亚氨基-镁络合物进行水解，得到希望得到的烷基/芳基酮。
制备实施例1
Figure A20038010257800181
在500ml的烧瓶中装入336毫摩尔(13.44g；60％)的氢化钠。在氩气氛下加入150mlDMSO，然后在50℃下滴加32ml氰乙酸乙酯(2.2当量；352毫摩尔)。全部加毕后，在1小时内将反应温热至室温。以粉末的形式加入30克硝基苯衍生物(160毫摩尔)。在封闭的系统中在90℃加热反应混合物反应8小时。酸化和标准处理后得到一粗油状残渣，经硅胶柱纯化后得到39克希望得到的结晶产物，将该结晶产物脱羧，得到如下的苄腈。将上述得到的38克SM溶于400ml的1N碳酸钠中。在室温下搅拌该均相溶液两天。薄层色谱分析表明反应已经完成。将反应混合物酸化，并用乙酸乙酯(100ml×4)萃取。合并有机相，用硫
酸钠干燥，浓缩，残渣经SGC分离得到希望得到的产物。1H NMRCDCl3：7.72(1H，d，J＝3Hz)；7.61(1H，d，J＝8.5Hz)；7.25(1H，dd，J＝3和8.5Hz)；4.17(2H，s)；3.94(3H，s).LCMS[M+H]＝193.
制备实施例2
Figure A20038010257800182
将10克苄腈衍生物溶于20mlTHF中，然后用50ml甲醇稀释。将反应混合物转入一压力管中，加入钯-碳(10％重量/10摩尔量％)，反应混合物在40psi下进行氢化。在消耗了还原硝基所必需的氢气量之后，停止反应。TLC分析表明斑点已经是转化了的斑点。用硅藻土垫过滤反应混合物，将滤液浓缩至一固体并直接用于下一步。将粗苯胺衍生物(52毫摩尔)溶解/悬浮在2N盐酸(150ml)中，冷却至5℃，然后加入5.4克亚硝酸钠的10ml水溶液。将反应混合物搅拌1小时并逐步升至室温。TLC分析表明SM已经消耗完并形成了一新的斑点。反应混合物用乙酸乙酯(100ml×4)萃取；收集有机相，干燥和浓缩。通过柱色谱纯化残渣得到希望得到的产物。LCMS[M+H]＝174
制备实施例3
称取4.15克吲唑和共沸的水和2甲苯(100ml)洗涤物，通过旋转蒸发脱去甲苯共沸物。在高真空下充分地干燥并且用氩气吹扫。在氩气氛下溶于40ml干的THF和92ml干的醚中。在冰水浴中冷却至5℃。装入3当量的异丙基氯化镁(6ml的2MTHF溶液)，并在室温下搅拌0.5小时。小心地加入1N盐酸(240ml)并搅拌1小时。用薄层色谱监视反应进程。用乙酸乙酯萃取，旋转蒸发，生成希望的产物。
LCMS[M+H]＝219
制备实施例4
步骤A：将在400ml乙二醇中的100克2-氟-4-甲氧基-乙酰苯和肼(0.624摩尔，20克)在室温下搅拌4小时，随后将反应混合物加热至150℃反应48小时。TLC分析表明反应已经完成。将反应混合物分配到二氯甲烷和盐水中。用硫酸钠干燥有机相，蒸发至固体。用己烷/二氯甲烷重结晶得到6-甲氧基-3-甲基-1H-吲唑。
1H NMR(CDCl3)：7.5(1H，d，7.5Hz)；6.8(2H，m)；3.8(3H，s)；2.55(3H，s)LCMS[M+H]＝163
将78克6-甲氧基-3-甲基-1H-吲唑溶于1升含有1.1当量三乙胺的乙腈中，将0.2当量的DMAP冷却至-5℃；然后慢慢加入Boc2O(1.1当量)的200ml乙腈溶液。在室温下搅拌反应2小时之后蒸发反应混合物成一油状物，将其分配在乙酸乙酯和盐水中以后，用硫酸钠干燥并蒸发。将残渣置于短的柱色谱上，用含15％乙酸乙酯的己烷洗脱。
蒸发得到Boc保护的产物。
1H NMR(CDCl3)：7.6(1H，bs)；7.42(1H，d，J＝7.5Hz)；6.85(1H，dd)；3.8(3H，s)；2.5(3H，s)；1.7(9H，s)
LCMS[M+H]＝263
将100gBOC-保护的吲唑溶于600mlCCl4中，然后加入1.1当量的NBS和0.2当量的Bz2O。用氩气真空吹扫反应混合物，并在日光灯照射下回流5小时。用SG垫过滤反应混合物并浓缩。用短SGC纯化残余油。得到二溴衍生物的一溴化物和混合组分。
一溴化物：1H NMR(CDCl3)：7.7(1H，d，7.5Hz)；7.6(1H，bs)；6.95(1H，dd)；4.7(2H，s)；3.9(3H，s)；1.7(9H，s)；
二-溴化物：1H NMR(CDCl3)：8.05(1H，d，J＝7.5Hz)；7.6(1H，bs)；7.0(1H，dd)；6.85(1H，s)；3.9(3H，s)；1.7(9H，s)；
向二溴化物(23.2g)的乙酸溶液中加入乙酸钠(22.5g)。将混合物置于油浴下回流数小时直到反应完成。将混合物冷却至室温，然后倒入冰/水中，得到希望得到的化合物，为一米色固体。通过过滤分离该固体，在氮气氛下干燥。
1HNMR(CDCl3)：δ10.23(1H，s)；8.19(1H，d)；7.02(1H，dd)；6.96(1H，d)；3.90(3H，s)。
步骤B：
向从步骤A得到的中间体中加入原甲酸三乙酯(40ml)，并加热到130℃反应数小时。浓缩所得混合物，干燥，得到标题化合物，为褐色固体。
1H NMR(DMSO)：δ10.08(1H，s)；7.98(1H，d)；7.25(1H，d)；7.02(1H，dd)；6.81(1H，s)；3.82(3H，s)；3.52(4H，q)；1.11(6H，t)。
制备实施例5
将从制备实施例2得到的中间体(1.00克，5.75毫摩尔)溶于THF(15ml)中，在0℃向该溶液中加入环戊基溴化镁(6.32ml，12.65毫摩尔)。将反应升温至室温，用饱和氯化铵淬灭反应。用乙酸乙酯萃取所得的反应混合物，合并有机层，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，并在真空下浓缩。该产物通过硅胶色谱纯化，得到580mg希望的产物。
1H NMR(CDCl3)δ：1.702(2H，m)，1.803(2H，m)，2.005(4H，m)，3.904(3H，s)，4.070(1H，m)，6.915(1H，s)，7.010(1H，d)，8.272(1H，d).
制备实施例6
通过类似于制备实施例5所描述的步骤制备得到所希望的化合物，但是用环己基溴化镁代替环戊基溴化镁。1H NMR(CDCl3)δ：1.327(1H，m)，1.479(2H，m)，1.604(2H，m)，1.781(1H，m)，1.861(2H，m)，2.000(2H，m)，3.641(1H，m)，3.902(3H，s)，6.923(1H，s)，7.008(1H，d)，8.259(1H，d).
实施例1
将从如上得到的吲唑(从制备实施例3得到的0.60毫摩尔)原材料溶于DMF(3ml)，然后加入氢化钠(0.88毫摩尔)。在室温下搅拌反应15分钟，然后加入叔丁基溴代醋酸盐(0.669毫摩尔)。在室温下搅拌反应30分钟。薄层色谱和LC-MS分析表明原材料已经消耗完，而同时形成新产品的斑点。通过加入水骤冷反应混合物。标准水相处理，然后通过硅胶柱色谱纯化粗产物，得到希望的产物，为白色固体。
1HNMR在CDCl3中：8.22(1H，d，J＝9Hz)；6.97(1H，dd，J＝2和9Hz)；6.5(1H，d J＝2Hz)；5.4(2H，s)；3.94(3H，s)；2.8(1H，m)；1.38(9H，s)；1.27(6H，d，J＝6.5Hz).
LCMS＝[M+H]＝317
实施例2
1-(3-{[6-(2-羟乙基)吡啶-3-基]羰基}-6-甲氧基-1H-吲唑-1-基)-3，3-二甲基丁-2-酮
步骤A：
在氮保护气氛下，向2，5-二溴吡啶(2.4g)的甲苯溶液中加入三丁基烯丙基锡(3.4ml)和二氯二(三苯膦)钯(0.7g)。混合物回流数小时并在减压下浓缩。将残渣重新溶于“湿醚”中，并慢慢地加入DBU(3ml)，得到浑浊的溶液。用硅胶垫过滤混合物并浓缩。将残渣溶于二氯甲烷/甲醇＝1/1溶液，并冷却至-78℃。向此溶液中鼓入臭氧直到反应混合物变成蓝色为止。将反应温热至0℃，并分批加入硼氢化钠(0.5g)。在0℃搅拌1小时以后，将混合物倒入水中，用乙酸乙酯萃取。用1N氢氧化钠水溶液、盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，并且在减压下浓缩获得粗醇。通过硅胶柱(二氯甲烷/乙酸乙酯＝1/1)纯化，得到希望的醇。在0℃向醇的二氯甲烷溶液中加入咪唑(0.4g)和TBS-C1(0.8g)。搅拌混合物1小时。将反应物倒入0.1N盐酸水溶液中，用二氯甲烷萃取。用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，并蒸发。用硅胶柱(100％二氯甲烷)纯化残余物，得到所希望的化合物。
1H NMR(CDCl3)：δ8.61(1H，d)；7.73(1H，dd)；7.14(1H，d)；3.97(2H，t)；2.96(2H，t)；0.86(9H，s)；-0.02(6H，s).
步骤B：
Figure A20038010257800231
用类似于实施例5、步骤5、6、7和8所描述的方法，制备得到所希望的化合物。通过硅胶柱(己烷/乙酸乙酯＝1/3)纯化化合物。
1H NMR(CHCl3)：δ9.53(1H，d)；8.54(1H，dd)；8.35(1H，d)；7.37(1H，d)；7.07(1H，dd)；6.56(1H，d)；5.45(2H，s)；4.11(2H，t)；3.90(3H，s)；3.18(2H，t)；1.38(9H，s).
LC-MS(M+H)＝396.2.
如同下文所示进行实施例3-5，对制备实施例6的所需化合物的一些改进，如实施例1所描述的对吲唑进行烷基化。另外，实施例1和4的类似物可以通过使用制备实施例4的吲唑或按照此处描述的方法制备得到的另一种吲唑替代物使用类似的方法制备得到。
实施例3
Figure A20038010257800241
向195mg氢化钠(在用己烷洗过的油中的60％的分散体)中加入DMF(10ml)和中间体3(597mg，2.44毫摩尔)。在加入1-氯代频哪酮(3.81ml，2.92毫摩尔)之前，在室温下搅拌反应30分钟。在反应20分钟之后用水淬灭，用乙酸乙酯进行稀释。用乙酸乙酯萃取水层，合并有机层，用水、盐水洗涤，用MgSO4干燥，并在真空下浓缩。原料通过硅胶柱色谱纯化至得到(产品)。
1HNMR(CDCl3)δ：1.361(9H，s)，1.683(2H，m)，1.788(2H，m)，1.974(4H，m)，3.872(3H，s)，4.029(1H，m)，5.372(2H，s)，6.514(1H，s)，6.986(1H，d)，8.267(1H，d).
实施例4
Figure A20038010257800242
使用制备实施例8，如实施例3所述制备本化合物。通过硅胶制备型板色谱纯化标题化合物。1H NMR(CDCl3)δ：1.285-1.575(15H，m)，1.833(2H，d)，1.994(2H，d)，3.615(1H，m)，3.860(3H，s)，5.372(2H，s)，6.490(1H，s)，6.981(1H，d)，8.254(1H，d).
实施例5
二-叔丁基4-{[1-(3，3-二甲基-2-氧代丁基)-6-甲氧基-1H-吲唑-3-基]羰基}-羟基乙基苄基
步骤1
将在400ml乙二醇中的100g氟-苯乙酮和肼(0.624摩尔，20克)在室温下搅拌4小时，随后将反应混合物加热至150℃反应48小时。TLC分析表明反应已经完成。将反应混合物分配到二氯甲烷和盐水中。用硫酸钠干燥有机相，蒸发至固体。从己烷/二氯甲烷重结晶得到吲唑。
1H NMR(CDCl3)：7.5(1H，d，7.5Hz)；6.8(2H，m)；3.8(3H，s)；2.55(3H，s)
LCMS[M+H]＝163
步骤2
Figure A20038010257800253
6-甲氧基-3-甲基-1-H-吲唑  叔丁基-6-甲氧-3-甲基-1-吲唑-羧酸
将78克吲唑溶于含有1.1当量的三乙胺的1升乙腈中，将0.2当量的DMAP冷却至-5℃；然后慢慢加入的Boc2O(1.1当量)的200ml乙腈溶液。在室温下搅拌反应2小时之后蒸发反应混合物成一油状物，将其分配在乙酸乙酯和盐水中以后，用硫酸钠干燥并蒸发。将残渣置于短SGC上，用含15％乙酸乙酯的己烷洗脱。蒸发得到产品。
1H NMR(CDCl3)：7.6(1H，bs)；7.42(1H，d，J＝7.5Hz)；6.85(1H，dd)；3.8(3H，s)；2.5(3H，s)；1.7(9H，s)
LCMS[M+H]＝263
步骤3
Figure A20038010257800261
将100g的吲唑溶于600ml的CCl4，然后加入1.1当量的N-溴丁二酰亚胺和0.2当量的Bz2O。用氩气真空吹扫反应混合物，并在日光灯的照射下回流5小时。用一层硅胶(SG)过滤反应混合物并浓缩。用短的硅胶柱色谱纯化残余的油状物。得到85克纯的溴化物。由混合部分得到二溴衍生物
一溴化物：1H NMR(CDCl3)：7.7(1H，d，7.5Hz)；7.6(1H，bs)；6.95(1H，dd)；4.7(2H，s)；3.9(3H，s)；1.7(9H，s)；
二溴化物：1H NMR(CDCl3)：8.05(1H，d，J＝7.5Hz)；7.6(1H，bs)；7.0(1H，dd)；6.85(1H，s)；3.9(3H，s)；1.7(9H，s)；
步骤4
3-(溴甲基)-6-甲氧基-1-H-吲唑                  叔丁基-3-甲酰基-6-甲氧基1-H-吲唑-1-羧酸
将5克溴化物溶于10mlDMSO中，冷却至0℃，然后加入2.5当量的TMANO(三甲胺N-氧化物)。搅拌反应0.5小时，然后标准后处理，用SG垫过滤，定量地得到希望的产物。LCMS[M+H]＝277
1H NMR(CDCl3)：10.2(1H，s)；8.1(1H，d，J＝7.5Hz)；7.6(1H，bs)；7.0(1H，dd)；3.9(3H，s)；1.7(9H，s)；
步骤5
Figure A20038010257800271
在高真空下将玻璃器具火焰干燥。
向在烧瓶内的纯的碘代苯甲醇衍生物(3.6克，10毫摩尔)中慢慢地加入异丙基氯化镁(5ml，2M溶液)。在室温下搅拌2小时以后，加入吲唑衍生物(1.1克，4毫摩尔)的15mlTHF溶液。在室温下搅拌反应混合物2小时。LC-MS显示反应已经完成。将反应混合物倾到至30ml的饱和氯化铵溶液，然后加入40ml醚。分离出有机层，用醚(40ml)萃取水层。合并有机相，用饱和的碳酸钾溶液(2x 30ml)、水(40ml)和盐水(20ml)洗涤。除去溶剂，残余物无需进一步纯化即可用于下一步反应。LCMS[M+H]＝499
步聚6和7
Figure A20038010257800272
向吲唑(从步骤5得到的粗产品)的20ml二氯甲烷溶液中加入5克硅藻土和4.3克的PCC(MW 215.56，～2当量)。在室温下搅拌反应混合物2小时。LC-MS显示反应已经完成。LCMS[M+H]＝497。过滤反应混合物。除去溶剂，将残余物溶于10ml甲醇中，并且加入20ml 2N盐酸。在室温下搅拌1小时之后，LCMS和TLC分析表明反应已经完成。用乙酸乙酯(2×30ml)萃取反应混合物。除去溶剂，残余物无需进一步纯化即可用于下一步反应。LCMS[M+H]＝283
步骤8
向在15ml丙酮中的吲唑(从步骤7得到的342毫克粗产品，～10毫摩尔)溶液中加入1.5克碳酸钾和1.5ml溴代频哪酮(Mw 179.06，d 1.326，2.0克，11毫摩尔)。在一个密封管中在80℃搅拌反应混合物2小时。将盐过滤掉后，除去溶剂，用HPFC纯化残余物，得到白色固态产物。
1H NMR(CDCl3)＝8.3(3H，m)；7.5(1H，d，J＝7.5Hz)；7.05(1H，dd)；7.6(1H，bs)；5.4(2H，s)；4.8(2H，bs)；3.9(3H，s)；1.38(9H，s)
LCMS[M+H]＝381
功能试验
A  Maxi-钾通道
对Maxi-钾通道的抑制剂的鉴定可以利用Aurora生物科学技术实现，并且基于表达Maxi-钾通道的能力来在TsA-201细胞中通道的α和β亚组都经过短暂的转染之后设定细胞的静止电位。在没有抑制剂的情况下，细胞显示出过极化膜电位、内侧负值、接近于EK(-80毫伏)，这是Maxi-钾通道活跃的结果。阻塞Maxi-钾通道将使得细胞去极化。在膜电位上的变化可以通过压敏荧光能量共振转移(FRET)染料对来确定，也就是使用两个组分：一个是供体香豆素(CC2DMPE)，另一个是受体oxanol(DiSBAC2(3))。oxanol是一亲脂性阴离子，并且根据膜电位穿过薄膜进行分布。在正常情况下，当内部细胞相对于外面细胞是负值时，oxanol就堆积在薄膜外部的小叶，并且刺激香豆素将使得FRET发生。导致薄膜去极化的条件将使得oxanol在细胞内部重新进行分配，并因此减少FRET。因此，比例变化(供体/受体)在薄膜去极化以后增大了。
TsA-201细胞中Maxi-钾通道的短暂转染可以如先前的描述(Hanner等人(1998)J.Biol.Chem.273，16289-16296)使用FUGENE6TM作为转染试剂进行。在转染后二十四个小时，将细胞收集在无Ca2+-Mg2+的Dulbecco′s磷酸盐缓冲盐水(D-PBS)中，进行离心分离，以60,000个细胞/孔的密度平铺在96-孔涂聚-d-赖氨酸板上，培育过夜。然后用D-PBS洗涤细胞一次，并且装载100微升的4μM的在D-PBS中的CC2DMPE-0.02％普卢兰尼克-127。细胞在黑暗中在室温下孵化30分钟。然后，用D-PBS洗涤细胞二次，并且装载100微升的6μMDiSBAC2(3)(mM)：140NaCl、0.1KCl、2CaCl2、1MgCl2、20Hepes-NaOH，pH7.4，10葡萄糖。将测试化合物稀释到此溶液中，并且同时被加入。在黑暗中细胞在室温下孵化30分钟。
板被装在电压/离子探针读数器(VIPR)仪器上，记录10秒内CC2DMPE和DiSBAC2(3)的荧光发射。在这里，100微升的高-钾溶液(mM)：140KCl、2CaCl2、1MgCl2、20Hepes-KOH，pH 7.4，10葡萄糖被加入，并且再追加10秒记录两种染料的荧光发射。在高-钾溶液加入之前，CC2DMPE/DISBAC2(3)的比率等于1。在没有任何抑制剂的情况下，在加入高-钾溶液之后，该比例在1.65-2.0之间变化。当Maxi-钾通道完全被已知的标准化合物或测试化合物抑制时，该比率仍然是1。因此，有可能通过监测浓度随荧光比变化的依赖关系用滴定法测量Maxi-钾通道抑制剂的活性。
本发明的化合物被发现：当IC50在约1nM至约20uM之间/更优选在约10nM至约500nM之间时，获得浓度对荧光比抑制的依赖关系。
B. 化合物对高-电导钙活化的钾通道的影响的电生理学试验
人无色素的睫状体 上皮细胞
在人无色素的睫状体上皮细胞中，使用电生理学的方法来确定高电导钙活化的钾(maxi-K)通道的活性。通过maxi-钾通道的电流被记录在金属补片夹钳装置的里向外翻的表面装置中，其中移液管溶液面对通道的细胞外侧，电解液面向细胞内侧。切除的金属补片包含一至大约五十个maxi-钾通道。通过它们的大规模的单通道电导(250-300pS)，以及通道开启对膜电位和细胞内的灵敏性可以确定Maxi-钾通道。膜电流记录使用标准电生理学的技巧。利用Kopf牵引器将玻璃移液管(Gamer 7052)接通两相，并且当装满生理盐水时，电极电阻是1-3兆欧姆。用EPC9(HEKA Instruments)或Axopatch ID(Axon Instruments)放大器记录膜电流，并且使用ITC-16连接设备(Instrutech Corp)完成数字转换。移液管充满着(mM)；150KCl，10Hepes，1MgCl2，0.01CaCl2，3.65KOH，pH 7.20。除了一些情形外电解液(细胞内的)是同一的，移去钙，加入1mM EGTA，用20mM KF替换20mM KCl以除去钙来测试通道闸对通道的钙灵敏性。通过浴室灌注液，药物被施加到通道的细胞内侧。
如文献(Martin-Vasallo，P.，Ghosh，S.，和Coca-Prados，M.，1989，J.Cell.Physiol.141，243-252)所述，使人无色素的睫状体上皮细胞在组织培养生长，并且在使用之前沉积在玻璃罩上。在移液管和细胞表面之间形成高电阻密封(＞1Gohm)，并且彻底地切除金属补片。通过它们的闸特性识别金属补片中的Maxi-钾通道；通道开放的可能性增加响应于薄膜去极化和细胞内钙的增加。在被用来药理分析的金属补片中，细胞内钙的移去消除电压-栅电流。在去极化电压步骤或引起通道开放的斜坡之后，测量Maxi-钾电流。
本发明的化合物以合适的浓度(0.001至100μM)被施加到通道的细胞内一侧。化合物降低了通道开放的可能性，并且该效果反过来冲蚀实验舱中的化合物。在这些条件下用于阻滞maxi-钾通道的本发明的化合物其IC50的范围为约0.5nM至约10μM。

Claims (12)

1.式I结构的化合物或它们的药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体或混合物：
式I
其中：
R代表氢或C1-6烷基；
Ry代表H或C1-6烷基；
Rw代表H，C1-6烷基，-C(O)C1-6烷基，-C(O)OC1-6烷基，-SO2N(R)2，-SO2C1-6烷基，-SO2C6-10芳基，NO2，CN或-C(O)N(R)2；
R2代表氢，C1-10烷基，OH，C2-6链烯基，-(CH2)nO(CH2)mOR，-(CH2)nC1-6烷氧基，-(CH2)nC3-8环烷基，-(CH2)nC3-10杂环基，或-(CH2)nC6-10芳基，所述的烷基，杂环基或芳基任选被1-3个选自Ra的基团取代；
R3代表氢，C1-10烷基，-(CH2)nC3-8环烷基，-(CH2)nC3-10杂环基，-(CH2)nCOOR，-(CH2)nC6-10芳基，硝基，氰基或卤素，所述的烷基，杂环基或芳基任选被1-3个选自Ra的基团取代；
R4和R5独立地代表氢、C1-6烷氧基、OH、C1-6烷基、COOR、SOqC1-6烷基、COC1-6烷基、SO3H、-O(CH2)nN(R)2、-O(CH2)nCO2R、-OPO(OH)2、CR3、OCF3-N(R)2、硝基、氰基、C1-6烷基氨基或卤素；和
R6代表氢、C1-10烷基、-(CH2)nC6-10芳基、-(CH2)nC3-10杂环基、-(CH2)nC3-8环烷基，所述的芳基、杂环基和烷基任选被1-3个选自Ra的基团取代，其中Ra(s)可与任何碳原子或选自N和S的杂原子相连；
R8代表-(CH2)nC3-8环烷基、-(CH2)nC3-10杂环基、C1-6烷氧基或-(CH2)nC5-10杂芳基，-(CH2)nC6-10芳基，所述的杂环基、芳基或杂芳基任选被1-3个选自Ra的基团取代；
Ra代表F、Cl、Br、I、CF3、N(R)2、NO2、CN、O-、-COR8、-CONHR8、-CON(R8)2、-O(CH2)nCOOR、-NH(CH2)nOR、-COOR、-OCR3、CF2CH2OR、-NHCOR、-SO2R、-SO2NR2、-SR、(C1-C6烷基)O-、-(CH2)nO(CH2)mOR、-(CH2)nC1-6烷氧基、(芳基)O-、-(CH2)nOH、(C1-C6烷基)S(O)m-、H2N-C(NH)-、(C1-C6烷基)C(O)-、(C1-C6烷基)OC(O)NH-、-(C1-C6烷基)NRw(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C1-C6烷基)O(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C1-C6烷基)S(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C1-C6烷基)-C3-10杂环基-Rw、-(CH2)n-Z1-C(＝Z2)N(R)2、-(C2-6链烯基)NRw(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C2-6链烯基)O(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C2-6链烯基)S(CH2)nC3-10杂环基-Rw、-(C2-6链烯基)-C3-10杂环基-Rw、-(C2-6链烯基)-Z1-C(＝Z2)N(R2)、-(CH2)nSO2R、-(CH2)nSO3H、-(CH2)nPO(OR)2、C3-10环烷基、C6-10芳基、C3-10杂环基、C2-6链烯基和C1-C10烷基，所述的烷基、链烯基、烷氧基、杂环基和芳基任选被1-3个选自C1-C6烷基、卤素、(CH2)nOH、CN、NO2，CON(R)2和COOR的基团所取代；
Z1和Z2独立地代表NRw、O、CH2或S；
m是0-3；
n是0-3和
q是0-2。
2.根据权利要求1的化合物，其中R6是C1-10烷基或(CH2)nC3-8环烷基，并且Ry是C1-6烷基，所述的烷基任选被1-3个选自Ra的基团取代。
3.根据权利要求1的化合物，其中R2是C1-10烷基或-(CH2)nC3-8环烷基，并且R3是C1-10烷基或(CH2)nC3-10杂环基，所述的杂环基和烷基任选被1-3个选自Ra的基团取代。
4.化合物，其是：
表1
Figure A2003801025780003C1
或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体或混合物。
5.治疗高眼压症或者青光眼的方法，包括给有此需要的病人施用治疗有效量的权利要求1的式I化合物。
6.治疗有斑点水肿、黄斑变性、增加视网膜和视神经末梢流血速度、增加视网膜和视神经氧张力和/或神经保护的方法，该方法包括给有此需要的病人施用药学上有效量的权利要求1的化合物；或者其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体或者混合物。
7.防止包含钾通道的哺乳动物细胞复极化或者过极化的方法，或治疗阿尔茨海默氏病、忧郁症、认知障碍和/或心律失常疾病的方法，包括对需要的病人施用药学上有效量的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体或混合物。
8.治疗糖尿病的方法，包括对需要的病人施用药学上有效量的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体或混合物。
9.组合物，包括权利要求1的式I的化合物和药学上可接受的载体。
10.根据权利要求9的组合物，其中式I的化合物以局部制剂用药，所述的局部制剂是以溶液或悬浮剂的形式给药，任选包含黄原胶或洁冷胶。
11.根据权利要求9的组合物，其中活性成分选自：β-肾上腺素能阻滞剂，副交感神经-模拟试剂，拟交感神经试剂、碳酸酐酶抑制剂、EP4激动剂、前列腺素或它们的衍生物、降血压类脂、神经保护剂，和/或任选加入5-HT2受体兴奋剂。
12.根据权利要求11的组合物，其中β-肾上腺素能阻滞剂是噻吗洛尔、倍他洛尔、左倍他洛尔、卡替洛尔，或左布诺洛尔；拟交感神经剂是毛果芸香碱；拟交感试剂是肾上腺素、溴莫尼定、艾普罗里定、可乐宁，或对-氨基可乐宁，碳酸脱水酶抑制剂是多佐胺、乙酰唑胺、甲醋唑胺或布林唑胺；前列腺素是拉坦前列素、travaprost、乌诺前列酮、去氯羟嗪或S1033，降血压类脂是lumigan、神经保护剂是依利罗地、R-依利罗地或美金刚；以及5-HT2受体兴奋剂是1-(2-氨基丙基)-3-甲基-1H-咪唑-6-醇富马酸酯或2-(3-氯-6-甲氧基-吲唑-1-基)-1-甲基-乙胺。
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