CN1649497A - 低尼古丁和亚硝胺的烟草 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于制备消费者烟草制品的含有低尼古丁和亚硝胺的烟草，以及该烟草的制造方法。更具体地说，具体包括在烟草作物的培育期间施用生长素、生长素类似物和茉莉酮酸酯拮抗剂来减少烟草作物中尼古丁和亚硝胺的方法。还具体涉及用所述方法生产的烟草和由此获得的消费者烟草制品。

Description

低尼古丁和亚硝胺的烟草
                        发明领域
本发明涉及低尼古丁和亚硝胺的烟草及生产这种烟草的方法。更具体地，本发明涉及通过在烟草培养期间应用调节基因表达的化合物来降低培养后给消费者生产烟草制品的烟草中的尼古丁和亚硝胺。
                        发明背景
大家都知道烟草消费的健康后果，但很多人仍然继续使用烟草制品。烟草制品的成瘾性大部分归因于尼古丁的存在。尼古丁除了是已知的最成瘾的物质之一以外，它还是烟草和人体中存在的大量致癌化合物的前体。
烟草制品的成瘾性也部分归因于经常使用传输系统(如与吸烟或嚼烟、抽烟以及尝烟行为有关的口腔固定)。很多戒烟计划包括使用尼古丁的替代疗法(NRT)，其中，给予个体各种剂量的尼古丁作为烟草使用的替代品。目前可以利用各种类型的戒烟产品(包括NRT)。例如，尼古丁贴剂、口香糖、胶囊、吸入剂、鼻腔喷雾剂以及糖块都是常用的NRT产品。尽管这些常用的NRT产品可以帮助烟草使用者抑制尼古丁戒断症状，他们却不能满足烟草使用者对使用经常使用传输系统的渴望。与经常使用传输系统有关的因素以下称为“成瘾的第二个因素”。这些成瘾的第二个因素包括可能和尼古丁化学依赖无关的心理因素。
除了常规NRT不能抑制成瘾的第二个因素以外，NRT本身也可能是难以克服的习惯。常规NRT要故意依赖于烟草使用者逐渐减少他们的每日尼古丁摄取，同时他们要精神上克制对成瘾的第二个因素的渴望。然而实际上，很多计划参与者只是用昂贵得多的对NRT产品的成瘾来替代对烟草的成瘾。在很多情况下，计划参与者摄取了比他们从传统烟草使用可以摄取到的多得多的尼古丁来补偿成瘾的第二个因素的不满足。在其它情况下，计划参与者在最初计划结束后的很长时间还在继续使用NRT产品。
大量摄取尼古丁以及长期使用NRT都引起了严重的健康问题。在很多情况下，尼古丁过量可能与过分热心使用NRT产品同时发生。尼古丁过量的症状包括恶心和/或呕吐、流口水增加(严重)、腹痛或胃痛(严重)、腹泻(严重)、脸色苍白、出冷汗、头痛(严重)、头昏(严重)、听觉和视觉模糊、震颤、精神混乱、体虚(严重)、精疲力竭、昏厥、低血压、呼吸困难(严重)、不规则心跳或抽搐(癫痫发作)。
长期使用NRT的个体还可能产生心理压力，因为尼古丁释放肾上腺素——一种刺激机体应激反应的激素。尼古丁的心理效应包括兴奋、焦虑、睡眠障碍、神经质、情绪失调和急躁、头痛、疲劳、恶心以及对烟草的长期渴望。此外，最近的研究已经证实，尼古丁刺激炎症期间血管生长，促进血管生成、动脉硬化和肿瘤生长(Heeschen等人，NatureMedicine 7：833，2001)。尼古丁也可能是通过身体自身的代谢系统内源形成的致癌物质如4-(甲基亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)的前体(Hecht等人，Proc.Nat.Acad.Sci 97：12493-12497，2000)。
研究者已经开发了数种降低烟草制品的尼古丁含量或尼古丁输送的方法。一些方法例如在烟草收割后通过微生物酶促降解、化学处理或高压萃取来降低烟草的尼古丁含量(参见美国专利号4,557,280、4,561,452、4,848,373、4,183,364和4,215,706)。考虑到以上所述，尽管背景技术中例证了各种成就，仍然存在对低尼古丁和亚硝胺的烟草及烟草制品，以及制造这种组合物的方法的需求。
                        发明概述
已经发现了数种生产低尼古丁和/或亚硝胺含量的烟草及烟草制品的方法。一些方法是，用常规技术培育生长在田间的烟草(如烟草作物)，在特定的时间和/或特定的植物年龄给所述烟草施用生长素、生长素类似物或茉莉酮酸酯拮抗剂，以抑制尼古丁和/或亚硝胺、尤其是烟草特异的亚硝胺(TSNA)的产生。在一些实施方案中，在给所述烟草摘尖(topping)之前的大约21天到摘尖之后的大约21天施用生长素、生长素类似物或茉莉酮酸酯拮抗剂。更具体地说，在摘尖的当天施用生长素、生长素类似物或茉莉酮酸酯拮抗剂，任选在收割前(如摘尖后21天)第二次、第三次或第四次施用生长素、生长素类似物或茉莉酮酸酯拮抗剂。优选地，将生长素、生长素类似物或茉莉酮酸酯拮抗剂直接施用到植物的摘尖部位(受伤部位)，同时施用或不施用提高化合物的可利用性或保持力的载体或物质，然而，应当理解的是，上面的实例只是本发明所包括的众多实施方案中的少数。
在一些上下文中，术语“烟草”是一个集中的含义，指的是烟草作物(如田间生长的多数烟草植物，也就是非水培生长的烟草)，烟草植物及其部分，包括但并不限于此处所描述的制备的和/或获得的根、茎、叶、花及种子。可以用本发明公开的方法处理的烟草品种包括但并不限于深色品种(dark varieties)(如白莱烟)(Burley)、烟道品种或浅色品种(Bright varieties)(如弗吉尼亚烟道烟(Virginia flue))、东方(Oriental)或土耳其品种(Turkish)以及普通改良品种(如Vector21-41)。在一些上下文中，术语“烟草制品”指的是消费的烟草产品，包括但并不限于吸烟原料(如香烟、雪茄、烟管)、鼻烟、嚼烟、口香糖和糖块。这些烟草制品优选用收割自上述处理过的烟草的烟叶和烟茎制造，并用烟草制备领域的常用技术切割、干燥、加工和/或发酵。
在某些实施方案中，此处描述的烟草及烟草制品降低了尼古丁的含量和/或降低了至少一种亚硝胺的含量，所述亚硝胺包括但并不限于N′-亚硝基降烟碱(NNN)、N′-亚硝基新烟草碱(NAT)、以及N′-亚硝基假木贼碱(N-nitrosoana-basine)(NAB)、4-(N-亚硝基甲氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)、4-(N-亚硝基甲氨基)-4-(3-吡啶基)-1-丁醇(NNA)、4-N-亚硝基甲氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁醇(NNAL)、4-N-亚硝基甲氨基)-4-(3-吡啶基)-1-丁醇(异-NNAL)以及4-(N-亚硝基甲氨基)-4-(3-吡啶基)-丁酸(异-NNAC)。希望得到的是，本发明的烟草和烟草制品与相同品种的烟草和传统技术培育的烟草或传统烟草制备的烟草制品相比，降低了至少一种选自NNN、NNK、NAT和NAB的TSNA的含量。
本发明的另一方面涉及通过施用生长素、生长素类似物或茉莉酮酸酯拮抗剂来完全抑制、消除或降低烟草中尼古丁和/或亚硝胺含量的方法。在优选的实施方案中，在烟草植物收割前一个月或摘尖以后，通过给成熟烟草植物施用生长素、生长素类似物或茉莉酮酸酯拮抗剂来减少烟草和/或烟草制品中的包括但并不限于NNN、NNK、NAT和NAB的TSNA。包括但并不限于从所述处理过的烟草植物制备的吸烟原料(如香烟、雪茄、烟管)、鼻烟、嚼烟、口香糖和糖块的烟草制品也是本发明的实施方案。
更具体的实施方案涉及降低烟草制品包括香烟、雪茄、嚼烟、鼻烟、含烟草的口香糖和糖块的致癌效力的方法。一些方法包括例如如上所述，用生长素、生长素类似物或茉莉酮酸酯拮抗剂处理所述烟草来制备低亚硝胺和/或尼古丁含量的烟草以及制造含有所述烟草的烟草制品。用这种方法处理的烟草植物可以被收割、加工并处理成烟草制品，其显示出降低的致癌效力。
本发明的另一方面涉及减少亚硝胺，优选TSNAs，更优选NNN和NNK，及其代谢物在吸食、消费或摄取烟草的人身体中的含量。该方法是通过将此处描述的一种方法制备的低含量烟草特异的亚硝胺的烟草制品提供给所述的人来降低该制品在所述人身体中的致癌效力的。烟草制品可以是香烟、雪茄、嚼烟、鼻烟或含烟草的口香糖或糖块。
本发明的另一方面涉及一系列戒烟产品及其使用方法。这些新的戒烟产品可以是烟草消费者已经熟悉了的烟草制品品种，包括香烟、雪茄、管烟、嚼烟、鼻烟或含烟草的口香糖或糖块。这些新的戒烟产品是以上述方法制造的烟草为特征的，相对于标准烟草制品具有低的尼古丁和/或亚硝胺含量。此外，这些戒烟产品可以制成具有不同尼古丁和/或亚硝胺水平，以使个体以逐步、渐进的方式来更换具有更低尼古丁和/或亚硝胺含量的烟草制品。
                        发明详述
已经发现了数种生产低尼古丁和/或亚硝胺含量的烟草及烟草制品的方法。一些方法是，在一个或多个特定的时间用生长素、生长素类似物或茉莉酮酸酯拮抗剂处理烟草植物，尤其是田间的烟草植物(烟草作物)来生产低尼古丁和亚硝胺水平的烟草。从所述处理过的烟草植物收割的烟草然后被用于制造各种烟草制品。因此，本发明的多个方面涉及通过化学处理降低烟草植物中尼古丁含量而使烟草中亚硝胺含量降低。共悬而未决的申请名称为“减少戒烟计划的有害效果的方法”(代理人登记号VTOB.138PR)。
2，4-二氯苯氧基乙酸，通常称为2，4-D，是一种除草剂和植物生长调节剂。它被用于控制宽叶杂草、草及其它单子叶植物、木本植物、水草和无花植物。在烟草作物周围使用2，4-D有很大阻碍，因为已知它会极大地伤害烟草。″Alittle triazine or growth regulator-type(2，4-D)herbicide is very likely to injure tobacco.″B.Maksymowicz & G.Palmer，Agriculture & Natural Resources，158：14(1995)。已经观察到在例如花期的早期，2，4-D对烟草植物是最有害的(参见Fung等人，Australian Journal of ExperimentalAgriculture and Animal Husbandry，13：330-31(1973))。然而却发现，在收割前某个时刻(例如烟草植物收割前一个月或摘尖后，优选摘尖前大约21天到摘尖后大约21天)给成熟烟草植物施用生长素、生长素类似物和/或茉莉酮酸酯拮抗剂可以减少烟草中的尼古丁和亚硝胺。
生长素与植物中的数种生理反应有关，如顶端优势、向性运动、根的生长和嫩芽伸长(参见综述，Bandurski，Plant Hormones，P.J.Davies(ed.)Kluwer Academic Publishers；Netherlands pp.39-65(1995))。植物中的主要生长素是吲哚乙酸(IAA)。两种合成生长素类似物--2，4-D和萘-1-乙酸(NAA)--目前被用于诱导生根和促进果实发育。2，4-D也广泛用于控制作物和非作物状况下的宽叶杂草、草、木本植物、水草和无花植物。虽然取决于植物的年龄，2，4-D对烟草可以是有毒的(Fung等人，Australian Journal of ExperimentalAgriculture and Animal Husbandry，13：328(1973)和Maksymowicz andPalmer，Online publications，AGR 158(4/26/01))，出乎意料的是，与2，4-D接触的田间的成熟烟草植物与未处理过的烟草植物相比，显示出尼古丁和TSNA水平降低。
使烟草植物与茉莉酮酸拮抗剂接触也可以降低烟草中的尼古丁和亚硝胺水平。茉莉酮酸是植物响应急性创伤而产生的一种激素(如叶片挤压)。茉莉酮酸(也称为茉莉酮酸酯)启动烟草的基因表达，最终产生尼古丁。与茉莉酮酸酯拮抗剂如水杨酸或tetcyclacis相接触的田间烟草植物与未处理过的烟草植物相比，也显示出尼古丁和TSNA的含量降低。此外，使植物与阻断导致茉莉酮酸产生的octadecanoid途径的分子如脂氧合酶抑制剂相接触，可以产生低尼古丁水平的烟草，伴随地，亚硝胺含量降低。下面部分描述数种减少烟草中尼古丁和亚硝胺的方法。
降低烟草中尼古丁和亚硝胺的含量
尼古丁首先是在烟草植物的根里形成的，接着转移到叶，在那里储存(Tso，Physiology and Biochemistry of Tobacco Plants，pp.233-34，Dowden，Hutchinson & Ross，Stroudsburg，Pa.(1972))。标准作物繁殖技术已经生产出了较低尼古丁水平的烟草，包括和野生型烟草中发现的8％的尼古丁含量一样低的品种。尽管此处描述的很多方法可以被用于任何烟草品种，仍然优选低尼古丁的栽培品种。
在烟草植物中，是将烟酸与4-甲基氨基正丁醛缩合来生产尼古丁的。两个调节位点(Nic1和Nic2)是尼古丁生产的等显性调节子。对单和双Nic突变体的根的酶分析表明，两种酶——喹啉酸磷酸核糖基转移酶(“QPT酶”)和腐败甲基转移酶(PMT酶)——的活性与尼古丁生物合成水平成直接比例。尼古丁生物合成中的必需步骤是从喹啉酸形成烟酸。QPT酶似乎是为烟草中尼古丁合成提供烟酸的途径中的限速酶。(参见Feth等人，Planta，168：402-07(1986)以及Wagner等人，Physio.Plant.，68：667-72(1986))。烟草组织(根和愈伤组织)中的酶活性与尼古丁合成的不同能力的比较表明，QPT酶活性确实与尼古丁含量有关(Wagner和Wagner，Planta 165：532(1985))。事实上，Saunders和Bush(Plant Physiol.，64：236(1979))显示了低尼古丁突变体的根中的QPT酶水平与叶子中的尼古丁水平成比例。
如上所述，亚硝胺(尤其是TSNA)和尼古丁是致癌效力以及烟草和烟草制品的成瘾性的主要原因。因此，具有低亚硝胺(尤其是TSNA)和尼古丁含量的烟草及烟草制品是很有用的。不用参照任何特定理论，可以预期的是，具有低尼古丁含量的烟草植物、烟草和烟草制品的产生也具有降低的亚硝胺含量。也就是说，通过从烟草植物、烟草和烟草制品中去除尼古丁，用于亚硝胺形成的生物碱尤其是用于TSNA形成的物质也被去除了。出乎意料的是，此处描述的方法不仅可以用于生产低成瘾性的烟草，也可以用于生产低致癌效力的烟草。
需要强调的是术语“降低”或短语“降低含量”有意指的是处理过的烟草植物、烟草或烟草制品中的尼古丁和/或亚硝胺的含量低于来源于用相同方法加工、但未经低尼古丁和/或亚硝胺处理的相同品种烟草的烟草植物、烟草或烟草制品中发现的尼古丁和/或亚硝胺的含量。因而在一些上下文中，用相同方法加工过的相同品种的野生型烟草被用作对照，通过它来衡量此处描述的本发明方法是否获得了尼古丁和/或亚硝胺减少。
根据品种、它的培育、收割和加工方式，野生型烟草的亚硝胺和尼古丁含量有很大区别。例如，通常的白莱烟(Burley)烤烟叶含有大约百万分之30,000(ppm)的尼古丁和大约十亿分之8,000(ppb)的亚硝胺；通常的白莱烟烟道烤烟叶(Hue Cured Burley leaf)含有大约20,000ppm的尼古丁和大约300ppb的亚硝胺；通常的东方型烤烟叶含有大约10,000ppm尼古丁和大约100ppb亚硝胺。根据本发明，低尼古丁和/或亚硝胺含量的烟草植物或其部分可以含有检测不到的尼古丁和/或亚硝胺，或者可以含有微检出量的一种或多种亚硝胺和/或尼古丁，只要尼古丁和/或亚硝胺的量低于相同品种的对照植物中所发现的尼古丁和/或亚硝胺的量。也就是说，用此处描述的本发明的方法处理过的白莱烟叶可以含有低含量的尼古丁，大约0到大约30,000ppm的尼古丁和大约0到大约8,000ppb的亚硝胺，希望是大约0到大约20,000ppm的尼古丁和大约0到大约6,000ppb的亚硝胺，更希望是大约0到大约10,000ppm的尼古丁和大约0到大约5,000ppb的亚硝胺，优选大约0到大约5,000ppm的尼古丁和大约0到大约4,000ppb的亚硝胺，更优选大约0到大约2,500ppm的尼古丁和大约0到大约2,000ppb的亚硝胺，最优选大约0到大约1,000ppm的尼古丁和大约0到大约1,000ppb的亚硝胺。用此处描述的方法制备的白莱烟叶也可以含有大约0到大约500ppm的尼古丁和大约0到大约500ppb的亚硝胺，用此处描述的方法制备的白莱烟叶的某些实施方案实际上不含可检测含量的尼古丁或亚硝胺。
类似地，用此处描述的方法处理的白莱烟烟道烤烟叶可以含有低含量的尼古丁，大约0到大约20,000ppm的尼古丁和大约0到大约300ppb的亚硝胺，希望是大约0到大约15,000ppm的尼古丁和大约0到大约250ppb的亚硝胺，更希望是大约0到大约10,000ppm的尼古丁和大约0到大约200ppb的亚硝胺，优选大约0到大约5,000ppm的尼古丁和大约0到大约150ppb的亚硝胺，更优选大约0到大约2,500ppm的尼古丁和大约0到大约100ppb的亚硝胺，最优选大约0到大约1,000ppm的尼古丁和大约0到大约50ppb的亚硝胺。用此处描述的方法制备的白莱烟烟道烤烟叶的某些实例也可以含有大约0到大约500ppm的尼古丁和大约0到大约25ppb的亚硝胺，用此处描述的方法制备的白莱烟烟道烤烟叶的某些实施方案实际上不含可检测含量的尼古丁或亚硝胺。
此外，用此处描述的方法处理的东方型烤烟叶可以含有低含量的尼古丁，大约0到大约10,000ppm的尼古丁和大约0到大约100ppb的亚硝胺，希望是大约0到大约7,000ppm的尼古丁和大约0到大约75ppb的亚硝胺，更希望是大约0到大约5,000ppm的尼古丁和大约0到大约50ppb的亚硝胺，优选大约0到大约3,000ppm的尼古丁和大约0到大约25ppb的亚硝胺，更优选大约0到大约1,500ppm的尼古丁和大约0到大约10ppb的亚硝胺，最优选大约0到大约500ppm的尼古丁和不含亚硝胺。用此处描述的方法制备的白莱烟烟道烤烟叶的某些实施方案也可以含有大约0到大约250ppm的尼古丁和不含亚硝胺，用此处描述的方法制备的白莱烟烟道烤烟叶的某些实施方案实际上不含可检测含量的尼古丁或亚硝胺。
在一些上下文中，短语“低含量的尼古丁和/或亚硝胺”指的是烟草植物、烟草和烟草制品，其与用相同方法种植、处理和加工的相同品种的烟草相比，尼古丁和/或亚硝胺的重量较低。例如，依据其生长、收割和加工方式，野生型烟草含有大约1-4％干重的尼古丁和大约0.2％-0.8％干重的亚硝胺。通常的香烟含有11mg尼古丁和2.2mg亚硝胺。因此，本发明的烟草植物、烟草和烟草制品可以含有例如低于0.01％、0.015％、0.02％、0.025％、0.03％、0.035％、0.04％、0.045％、0.05％、0.055％、0.06％、0.065％、0.07％、0.075％、0.08％、0.085％、0.09％、0.095％、0.1％、0.15％、0.175％、0.2％、0.225％、0.25％、0.275％、0.3％、0.325％、0.35％、0.375％、0.4％、0.425％、0.45％、0.47 5％、0.5％、0.55％、0.6％、0.65％、0.7％、0.75％、0.8％、0.85％、0.9％、0.95％和1.0％干重的尼古丁和低于0.01％、0.015％、0.02％、0.025％、0.03％、0.035％、0.04％、0.045％、0.05％、0.05 5％、0.06％、0.065％、0.07％、0.075％和0.08％干重的亚硝胺。
另外，本发明的香烟可以含有例如低于0.1mg、0.15mg、0.2mg、0.25mg、0.3mg、0.35mg、0.4mg、0.45mg、0.5mg、0.55mg、0.6mg、0.65mg、0.7mg、0.75mg、0.8mg、0.85mg、0.9mg、0.95mg、1.0mg、1.1mg、1.15mg、1.2mg、1.25mg、1.3mg、1.35mg、1.4mg、1.45mg、1.5mg、1.55mg、1.6mg、1.65mg、1.7mg、1.75mg、1.8mg、1.85mg、1.9mg、1.95mg、2.0mg、2.1mg、2.15mg、2.2mg、2.25mg、2.3mg、2.35mg、2.4mg、2.45mg、2.5mg、2.55mg、2.6mg、2.65mg、2.7mg、2.75mg、2.8mg、2.85mg、2.9mg、2.95mg、3.0mg、3.1mg、3.15mg、3.2mg、3.25mg、3.3mg、3.35mg、3.4mg、3.45mg、3.5mg、3.55mg、3.6mg、3.65mg、3.7mg、3.75mg、3.8mg、3.85mg、3.9mg、3.95mg、4.0mg、4.1mg、4.15mg、4.2mg、4.25mg、4.3mg、4.35mg、4.4mg、4.45mg、4.4mg、4.45mg、4.5mg、4.55mg、4.6mg、4.65mg、4.7mg、4.75mg、4.8mg、4.85mg、4.9mg、4.95mg、5.0mg、5.5mg、5.7mg、6.0mg、6.5mg、6.7mg、7.0mg、7.5mg、7.7mg、8.0mg、8.5mg、8.7mg、9.0mg、9.5mg、9.7mg、10.0mg、10.5mg、10.7mg和11.0mg尼古丁和低于0.1mg、0.15mg、0.2mg、0.25mg、0.3mg、0.35mg、0.4mg、0.45mg、0.5mg、0.55mg、0.6mg、0.65mg、0.7mg、0.75mg、0.8mg、0.85mg、0.9mg、0.95mg、1.0mg、1.1mg、1.15mg、1.2mg、1.25mg、1.3mg、1.35mg、1.4mg、1.45mg、1.5mg、1.55mg、1.6mg、1.65mg、1.7mg、1.75mg、1.8mg、1.85mg、1.9mg、1.95mg、2.0mg、2.1mg、2.15mg、2.2mg的亚硝胺。
任何降低植物中尼古丁水平的方法都适用于生产低含量尼古丁和亚硝胺尤其是TSNA含量的烟草。更特别地，任何降低植物中内源尼古丁水平的方法都适用于生产完全不含亚硝胺尤其是TSNA的烟草。任何降低其它生物碱包括norniticotine水平的方法都同样适用于生产完全不含亚硝胺尤其是TSNA的烟草。生产低含量尼古丁和亚硝胺尤其是TSNA的烟草的优选方法包括用生长素、生长素类似物或茉莉酮酸酯拮抗剂处理至少一种烟草植物。下面部分描述了生长素和/或生长素类似物在生产与在相似生长条件下培育的、未经生长素或生长素类似物处理的同龄烟草相比，具有较低尼古丁和TSNA水平的烟草及烟草制品中的应用。
生长素
生长素是天然生成的植物调节分子。在植物组织培养过程中，添加激素例如生长素已经被长期用作培养基的组成。对烟草愈伤组织生长的研究显示，在组织培养基中添加生长素或其类似物对尼古丁含量的调节似乎有作用(Saunders，Drug Info.Jour.，32：609(1998))。最普通的内源生长素是吲哚-3-乙酸(IAA)。除了IAA，在不同品种中还存在很多内源的生长素衍生物。在这些生长素衍生物中，是AA与不同的糖和氨基酸结合。生长素也可能与多肽相连接。已经分离出的生长素分子有：
a)吲哚-3-乙酰基衍生物，如吲哚-3-乙酸甲酯、吲哚-3-乙酸乙酯、吲哚-3-乙酰胺、2-O-(吲哚-3-乙酰基)-肌醇、5-O-β-L-阿拉伯吡喃糖基-2-O-吲哚-3-乙酰基-肌醇、5-O-β-D-乳吡喃糖基-2-O-吲哚-3-乙酰基-肌醇、2-O-(吲哚-3-乙酰基)-D-吡喃葡萄糖、4-O-(吲哚-3-乙酰基)-D-吡喃葡萄糖、6-O-(吲哚-3-乙酰基)-D-吡喃葡萄糖、二-O-(吲哚-3-乙酰基)-肌醇和三-O-(吲哚-3-乙酰基)-肌醇；
b)氯吲哚，如4-氯吲哚-3-乙酸、4-氯吲哚-3-乙酸甲酯、4-氯吲哚-3-乙酰基-L-天冬氨酸单甲酯、α-N-羧甲氧基乙酰基-D-4-氯色氨酸和α-N-羧乙氧基乙酰基-D-4-氯色氨酸；
c)吲哚-3-乙腈，如吲哚-3-乙腈、4-甲氧基吲哚-3-乙腈和1-甲氧基吲哚-3-乙腈；
d)吲哚衍生物，吲哚-3-乙醇、吲哚-3-乙醛、吲哚-3-丙酮肟、色胺、α-N-丙二酰-D-色氨酸、吲哚-3-羧醛(carboxaldehyde)和吲哚-3-羧酸；
e)其它吲哚复合物，如吲哚-3-甲基葡糖酸酯(methylglucosinolate)、1-甲氧基吲哚-3-甲基葡糖酸酯和1-硫代吲哚-3-甲基葡糖酸酯。
另外，还存在其它具有生长素活性的化合物，如吲哚-3-乙酰基天冬氨酸酯、吲哚-3-乙酰基-1-b-葡萄糖、苯乙酸、苯乙腈。这些化合物也通常称为生长素类似物。
其它的合成生长素的商品名为：2，4-D、2，4-D(胺或LV酯)、2，4-DB、Clopyralid、麦草畏(3，6-二氯大茴香酸)、Banvel(麦草畏-DMA盐)、Clarity(麦草畏DGA盐)、2-甲基-4-氯苯氧基乙酸(MCPA)、毒莠定(picloram)(4-氨基-3，5，6-三氯吡啶甲酸)、triclopyr和flumetsulam。可以预期的是，上述任何或所有的生长素或生长素类似物单独使用或联用都可以用于降低或减少烟草及烟草制品中尼古丁和/或亚硝胺的水平。下面部分更详细地描述了如何使用生长素及生长素类似物来降低烟草中的尼古丁和TSNA水平。
生长素及生长素类似物的应用
有数种方法能用于使有减少尼古丁需求的烟草植物(优选作物或摘尖烟草)与生长素和/或生长素类似物相接触。生长素类似物2，4-D用作生长刺激剂的实例有，授予Bonner的美国专利4,519,163号，授予Henderson的美国专利4,274,861号，授予MacMurray的3,967,953号。优选地，用生长素或生长素类似物水溶液喷洒植物，尤其覆盖植物的受伤部位(如摘尖部位)。惰性成分如表面活性剂或粘附剂可以加到溶液中以改变化合物对植物的可利用性或保持力。生长素或生长素类似物也可以以溶液或干粉的形式直接施用于植物周围的土壤。另一个实施方案中，包含生长素和/或生长素类似物的组合物以缓慢溶解的原料块的一部分的形式放置在土壤中或表面上。
所施用的生长素或生长素类似物的范围取决于施用时间和烟草植物的品种。适当的量也取决于生长条件(如土壤中的氮)。可以将各种量的2，4-D施用给试验田中不同位置生长的不同年龄的作物来对合适的量进行实验测定。在许多实施方案中，例如，所施用的生长素或生长素类似物的范围介于大约0.005ppm到大约200ppm之间。也就是说，生长素或生长素类似物的量大约是0.005ppm、0.007ppm、0.01ppm、0.02ppm、0.05ppm、0.07ppm、0.1ppm、0.2ppm、0.5ppm、0.7ppm、1ppm、2ppm、5ppm、7ppm、10ppm、20ppm、50ppm、75ppm、100ppm、125ppm、150ppm、175ppm或200ppm或更多。应当理解的是，所施用的组合物的范围也可能取决于环境条件如土壤类型、盐度、干旱、温度以及营养水平。在一些实施方案中，可以使用任何生长素类似物包括生长素类似物的盐。另外，生长素和/或生长素类似物与乙醇也可以联用。如上所述，组合物也可以包括惰性成分，表面活性剂或粘附剂，在这些实施方案中，可以使用任何合适的表面活性剂如吐温20以及任何熟知的粘附剂。
在一些实施方案中，与有减少尼古丁需求的烟草植物如摘尖的烟草植物相接触的生长素和/或生长素类似物的量要足以将所述摘尖烟草植物或其部分中的生长素浓度调节至大约等于在相似条件下生长的、未被摘尖的相同品种烟草植物的生长素浓度的水平。在某些情况下，处理过的、摘尖的烟草植物中的生长素水平要稍微低于未处理过的、未摘尖的烟草植物中的生长素水平，在另一些情况下，处理过的、摘尖的烟草植物中的生长素水平要稍微高于未处理过的、未摘尖的烟草植物中的生长素水平。因此，本发明的实施方案是摘尖的烟草植物含有的生长素(结合的与非结合的)的量与在相似条件下生长的、未摘尖的相同品种烟草植物中的生长素的量几乎相似。从所述摘尖的烟草植物生产的烟草及烟草制品也是本发明的实施方案。相关的实施方案包括，包含非结合的与结合的的生长素的量与在相似条件下生长的、未摘尖的相同品种烟草植物中的量几乎完全相似的烟草植物(以及由此生产的烟草制品)。
为了确定处理过的、摘尖的烟草植物相对于未处理过的、未摘尖的烟草植物中的生长素或生长素类似物的水平，优选比较相同年龄及在相似生长条件下培育的植物。生长素水平的分析也优选在近似相同的植物组织中进行。也就是说，最好分析处理过的、摘尖的烟草植物和未处理过的、未摘尖的烟草植物中距离顶点相同编号的叶子或结间部，因为烟草植物中的生长素水平随着距离顶点的距离增加而降低(参见例如Sitbon等人，Physiol.Plant 98：677(1996)以及Sitbon等人，PlantPhysio.99：1062(1992).)。
经由实施例，一些实施方案包括从摘尖的、已经用生长素或生长素类似物处理过的烟草植物生产的烟草及烟草制品，其中，所述处理过的、摘尖的烟草植物或其部分中的生长素或生长素类似物(结合的与非结合的)的量是大约5到大约40ng/g鲜重(FW)或干重(DW)。也就是说，一些实施方案中，所述处理过的、摘尖的烟草植物或其部分中的生长素或生长素类似物的量是大约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40ng/g FW或DW。
在处理过的、摘尖的烟草植物的实施方案中，例如，所述植物的第2片或第3片叶子(从顶点计算)中的生长素(结合的与非结合的)的量是大约21ng/g FW，第7片叶子中大约是6ng/g FW，第1-3个结间部大约是31ng/g FW，第7-8个结间部大约是25ng/g FW。在处理过的、摘尖的烟草植物的其它实施方案中，顶点处的游离IAA的量是大约52ng/g FW，结合IAA大约是25ng/g FW，第1-3片叶子中大约是30ng/gFW游离IAA、16ng/g FW结合IAA，第7片叶子中大约是20ng/g FW游离IAA、26ng/g FW结合IAA，第1-3个结间部大约是60ng/g FW游离IAA、30ng/g FW结合IAA，第5个结间部大约是53ng/g FW游离IAA、15ng/g FW结合IAA。
在其它实施方案中，所述处理过的、摘尖的烟草植物或其部分中的生长素的量大于未处理过的、未摘尖的烟草植物或其部分中的生长素的量。也就是说，例如，从摘尖的、已经用生长素或生长素类似物处理过的烟草植物中产生的烟草及烟草制品，其中，所述处理过的、摘尖的烟草植物或其部分中的生长素或生长素类似物(结合的与非结合的)的量大于40ng/g鲜重(FW)或干重(DW)。也就是说，在某些实施方案中，所述处理过的、摘尖的烟草植物或其部分中的生长素或生长素类似物的具体的量是大约41、42、43、44、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90或100ng/g FW或DW。
在摘尖的、处理过的烟草植物的实施方案中，例如，所述植物中的第2片或第3片叶子(从顶点计算)中的生长素(结合的与非结合的)的量是21-100ng/g FW，第7片叶子中是6-100ng/g FW，第1-3个结间部是31-100ng/g FW，第7-8个结间部是25-100ng/g FW。在摘尖的、处理过的烟草植物的其它实施方案中，顶点处的游离IAA的量是52-100ng/g FW，结合IAA是25-100ng/g FW，第1-3片叶子是30-100ng/g FW游离IAA、16-100ng/g FW结合IAA，第7片叶子是20-100ng/g FW游离IAA、26-100ng/g FW结合IAA，第1-3个结间部是60-100ng/g FW游离IAA、30-100ng/g FW结合IAA，第5个结间部是53-100ng/g FW游离IAA、15-100ng/g FW。
摘尖或去尖(decapitation)导致烟草植物及其部分相对于摘尖或去尖前存在大约50％的生长素(参见例如Wolbang和Ross，Planta 214：13(2001))。因此，本发明的一些实施方案包括摘尖的烟草植物、其部分及由此生产的烟草制品，其中，用生长素和/或生长素类似物处理过的所述植物或其部分中生长素的水平是摘尖前植物或其部分中生长素的量的大约51％到100％，或者是未经生长素或生长素类似物处理过的、没有被摘尖但在和处理过、摘尖的烟草植物相类似的生长环境下培养的相似年龄的烟草植物或其部中存在的生长素的量的大约51％到100％。也就是说，所述摘尖的、用生长素和/或生长素类似物处理过的烟草植物或其部分中的生长素水平可以是未经生长素或生长素类似物处理过的、没有被摘尖但在和处理过、摘尖的烟草植物相类似的生长条件下培养的相似年龄的烟草植物或其部分中存在的生长素的量的51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％。下面部分描述了茉莉酮酸酯拮抗剂在降低烟草植物中尼古丁和TSNA水平中的应用，以及从所述茉莉酮酸酯拮抗剂处理过的烟草植物制备的烟草及烟草制品。
茉莉酮酸酯拮抗剂
“茉莉酮酸酯拮抗剂”是干扰生物合成步骤使得茉莉酮酸酯不能在植物中合成或无法提供给植物利用的分子。“茉莉酮酸酯拮抗剂”也可能是一种阻断茉莉酮酸受体，从而降低茉莉酮酸活性的化合物。因此，“茉莉酮酸酯拮抗剂”可能以降低植物中茉莉酮酸酯、茉莉酮酸或甲基茉莉酮酸酯水平或利用度的机能为特征。“茉莉酮酸酯拮抗剂”也包括阻止或抑制通常与创伤或其它应激反应有关的茉莉酮酸水平增加的分子，以及对脂氧合酶——导致茉莉酮酸合成途径中的一种酶——具有抑制作用的分子。茉莉酮酸拮抗剂也可能是使茉莉酮酸水平降低的octadecanoid途径中的任何步骤的抑制剂。
在某些实施方案中，干扰茉莉酮酸酯信号途径或对食草动物和昆虫饲养有通常植物响应的分子被用于降低烟草中的尼古丁和/或亚硝胺水平。该茉莉酮酸途径可以被非甾体抗炎药(NSAIDS)如布洛芬、萘普生和水杨酸所阻断。另外，茉莉酮酸途径可以通过施用包含苯并[1，2，3]噻重氮-7-硫代羟酸(商购自Syngenta)的化合物所干扰。包含苯并[1，2，3]噻重氮-7-硫代羟酸的化合物包括acibenzolar-S-甲基、acibenzolarS-甲基fenopropidin或actigard 50wp或bion。Actigard 50wp已经给白莱烟施用以控制青霉病(参见Nesmith，″Actigard-A New BlueMold Control Tool″，Tobacco Disease Article From KY Pest News(在线公开))。
茉莉酮酸酯拮抗剂的施用量取决于施用时间和烟草植物的品种。适当的量也取决于生长条件(如土壤中的氮)。优选地，茉莉酮酸酯拮抗剂的施用量要足以将摘尖的、处理过的烟草植物或其部分中的茉莉酮酸水平降低至大概等于相似年龄的、在相似生长条件下培养的、未处理过且未摘尖的烟草植物或其部分中的茉莉酮酸水平。
处理过的、摘尖的烟草植物中的茉莉酮酸水平可以稍微高于未处理过的、未摘尖的烟草植物中的水平，或者处理过的、摘尖的烟草植物中的茉莉酮酸水平可以稍微低于未处理过的、未剪过枝的烟草植物中的水平。因此，本发明的实施方案是包含茉莉酮酸的量与在相似条件下生长、未摘尖的相同品种烟草植物中的茉莉酮酸的量几乎相似的摘尖的烟草植物。从所述摘尖的烟草植物生产的烟草作物和烟草制品也是本发明的实施方案。相关的实施方案包括，包含茉莉酮酸的量与在相似条件下生长、未摘尖的相同品种烟草植物中的茉莉酮酸的量几乎相似的烟草作物和植物(以及由此生产的烟草制品)。
同上，为了测定处理过的、摘尖的烟草植物相对于未处理过的、未摘尖的烟草植物中茉莉酮酸的水平，优选比较相同年龄和在相似生长条件下培育的植物。另外，优选分析大约相同的植物组织中的茉莉酮酸水平。通常地，在烟草植物创伤后的90分钟内，茉莉酮酸的量增加到5-500ng/g(参见例如Kahl等人，Planta 210：336(2000))。因此，本发明的一些实施方案包括从摘尖的、已经用茉莉酮酸拮抗剂处理过的烟草植物中获得的烟草作物、烟草植物和烟草制品，其中所述处理过的、摘尖的烟草植物或其部分中茉莉酮酸的量是大约0到大约500ng/g鲜重(FW)或干重(DW)。也就是说，在一些实施方案，所述处理过的、摘尖的烟草植物或其部分中的茉莉酮酸的量是大约1、2、3、4、5、10、20、30、40、50、100、125、150、175、200、250、300、350、400、450和500ng/g FW或DW，只要所述的量低于未摘尖的、在相似生长条件下培养的相同年龄的烟草植物中存在的茉莉酮酸的量。
茉莉酮酸酯拮抗剂的合适的施用量可以通过给试验田中多个位置处生长的不同年龄的作物施用不同的量来实验地确定。在许多实施方案中，茉莉酮酸酯拮抗剂的范围可以是大约0.005ppm到大约200ppm。也就是说，茉莉酮酸酯拮抗剂的量可以是大约0.005ppm、0.007ppm、0.01ppm、0.02ppm、0.05ppm、0.07ppm、0.1ppm、0.2ppm、0.5ppm、0.7ppm、1ppm、2ppm、5ppm、7ppm、10ppm、20ppm、50ppm、75ppm、100ppm、125ppm、150ppm、175ppm或200ppm或更高。应当可以理解的是，组合物的施用范围也可能取决于周围环境如土壤类型、盐度、干旱、温度和营养水平。在许多实施方案中，可以使用任何茉莉酮酸酯拮抗剂。另外，茉莉酮酸酯拮抗剂与乙醇也可以联用。组合物可以包括惰性成分，表面活性剂或粘附剂。可以使用任何合适的表面活性剂例如吐温20以及任何熟知的粘附剂。茉莉酮酸酯拮抗剂可以以水溶液、乳剂或干粉的形式存在。
其它起茉莉酮酸酯拮抗剂作用的分子
在本发明的其它实施方案中，任何诱导植物致病防御反应的分子可能诱导水杨酸，其可能妨碍茉莉酮酸酯诱导的反应。可以在开始摘尖之前用水杨酸预处理植物几个小时，以改善茉莉酮酸反应，从而降低尼古丁水平。水杨酸是病毒感染的烟草中的全身信号和发病相关蛋白诱导剂，还是获得抗病性的诱导剂(Uknes，S.等人，Plant Cell，4：645-656(1992))。水杨酸在导致防御反应的途径中似乎起着信号的作用。此外，诱导免疫以后，内源水杨酸水平增加了。
此处所用的术语“水杨酸化合物”包括水杨酸及其苯甲酸类似物。该术语包括但并不限于这些化合物如2-羟基苯甲酸(水杨酸)、乙酰水杨酸(阿司匹林)、水杨酸甲酯、2，6-二羟基苯甲酸、3-羟基苯甲酸、4-羟基苯甲酸、2，3-二羟基苯甲酸、2，4-二羟基苯甲酸和2，5-二羟基苯甲酸。其它水杨酸衍生物包括溴水杨醇、芬度柳(fendosal)、乙二醇水杨酸酯、mesalamine、1-萘基水杨酸酯、奥沙拉秦(olsalazine)和柳氮磺吡啶(sulfasalazine)。
如上所述，增加植物中SA水平的方法包括使植物与病原体接触。然而这可能不是商业可用的方法，因为通过植物-病原体接触而诱导植物产生防御信号如SA可能会削弱或杀死植物。然而却可以使用能产生响应、导致内源SA水平增加和继发的茉莉酮酸酯拮抗而不引起植物疾病的诱导剂。这可以通过数种方式实现，包括：1)使植物与衍生自细菌或病毒的化合物接触，2)使植物与一定量的完整细菌或病毒接触，其导致SA水平增加，以及3)使植物与细菌或病毒的粗提物或上清液接触。在一个实施方案中，优选用来处理而不伤害植物的细菌或病毒物质制剂可以施用于叶子或植物周围的土壤，以诱导内源水杨酸的产生，其然后抑制茉莉酮酸合成及其相应途径。
创伤或咀嚼昆虫侵袭触发了十八烷酸信号途径，其导致植物调节分子茉莉酮酸的合成。Schaller在J.Exp.Bot.，52：11(2001)中综述了参与植物十八烷酸信号途径的酶。通过加入能阻断茉莉酮酸合成途径的分子有可能阻断导致茉莉酮酸合成途径。除了水杨酸及其衍生物以外，通过阻断茉莉酮酸合成途径来降低尼古丁和/或亚硝胺水平的化合物包括：Esculentin、水杨基羟肟酸、5，8，11-eicosatriynoic acid、5，8，11，14-eicosatriynoic acid、酮康唑(ketoconazole)、黄芩素(baicalein)、咖啡酸(caffeic acid)、α-戊基-3-(2-喹啉基甲氧基)苯甲醇、姜黄素(curcumin)、布洛芬和萘普生。在哺乳动物研究中，这些分子中很多都是公知的脂氧合酶活性抑制剂，也可能有效抑制植物中茉莉酮酸蓄积。非甾体抗炎药(如布洛芬、萘普生和氟比洛芬)能用于拮抗创伤应答。萘普生已经被用于抑制马铃薯(Kolomiets等人，Plant Cell，13：613(2001))和大豆(Creelman，Plant Physiol，99：1258(1992))中的脂氧合酶活性。已经发现了多个其它脂氧合酶抑制剂在植物中有效(Sircar，Prostaglandins，25：393(1983))。此外，已经发现其它分子如tetcyclacis(或tetcyclacis)能抑制植物中的茉莉酮酸水平(Schweizer等人，Plant Physiol，114：79(1997))。
脂氧合酶抑制剂的施用范围取决于施用时间和烟草植物的品种。使用量也可能取决于生长条件(如土壤中的氮)。可以将各种量的脂氧合酶抑制剂(如萘普生)施用到试验田中各种位置生长的不同年龄的作物上来对合适的量进行实验测定。在许多实施方案中，脂氧合酶抑制剂的范围介于大约0.005ppm到大约200ppm之间。也就是说，脂氧合酶抑制剂的量可以是大约0.005ppm、0.007ppm、0.01ppm、0.02ppm、0.05ppm、0.07ppm、0.1ppm、0.2ppm、0.5ppm、0.7ppm、1ppm、2ppm、5ppm、7ppm、10ppm、20ppm、50ppm、75ppm、100ppm、125ppm、150ppm、175ppm或200ppm或更高。应当可以理解的是，组合物的施用范围也可能取决于周围环境如土壤类型、盐度、干旱、温度和营养水平。在很多实施方案中，可以使用任何脂氧合酶抑制剂。另外，脂氧合酶可以与乙醇联用。组合物可以包括惰性成分，表面活性剂或粘附剂。可以使用任何合适的表面活性剂例如吐温20以及很多熟知的粘附剂。脂氧合酶抑制剂可以以水溶液、乳剂或干粉的形式存在。
除了生长素及其类似物以外，其它植物调节分子可以用于降低烟草中尼古丁和/或亚硝胺水平。已知各种发展的、环境的和化学的因素所触发的信号途径可以控制尼古丁及其它烟草生物碱的合成和蓄积。机械损伤、昆虫吃草或动物吃草常诱导植物中参与茉莉酮酸信号分子的创伤应答。Staswick在″jasmonate Activity in Plants，″Plant Hormones，P.J.Davies(ed.)，Kluwer Academic出版社，pp.179-187(1995)中作了莉酮酸的综述。参与这些信号途径的植物调节分子与其它信号途径之间有交叉，从而产生了复杂的应答。参与创伤应答和茉莉酮酸蓄积的各种相互交叉的信号途径的综述参见Walling，J Plant GrowthRegul.，19：195(2000)。例如，在利马豆(lima bean)中已经发现了茉莉酮酸酯和水杨酸途径之间的交叉应答(Engelberth等人，PlantPhysiol.，125：369(2001))。此外，已经发现植物调节分子乙烯与茉莉酮酸酯相互作用，从而改变Nicotiana attenuata中的尼古丁水平(Winz等人，Plant Physio.，125：2189(2001))。也已经发现，烟草被烟草花叶病毒(TMV)接种产生了不具有普通创伤应答的植物。这个发现被认为包括了病原诱导的水杨酸途径和创伤诱导的茉莉酮酸途径之间的交叉应答(Preston等人，Planta，209：87(1999))。
生长素、生长素类似物和/或茉莉酮酸酯拮抗剂的混和剂(cocktail)
除了使用生长素、生长素类似物或茉莉酮酸酯拮抗剂以外，可以使用两种或多种尼古丁和/或亚硝胺降低剂的混合物或“混和剂”。在这样的混和剂中，生长素、生长素类似物和/或茉莉酮酸酯拮抗剂可以在一起作为一个混合物给植物一次或多次施用。或者，混合物的组成可以改变，以在处理过程中给烟草植物使用不同的组合物。具体地说，混和剂中的生长素、生长素类似物和/或茉莉酮酸酯拮抗剂的范围可以是大约0.005ppm到大约200ppm。也就是说，不同组合中的生长素、生长素类似物或茉莉酮酸酯拮抗剂的量可以是大约：混和剂的每一个生长素、生长素类似物和/或茉莉酮酸酯拮抗剂组分为0.005ppm、0.007ppm、0.01ppm、0.02ppm、0.05ppm、0.07ppm、0.1ppm、0.2ppm、0.5ppm、0.7ppm、1ppm、2ppm、5ppm、7ppm、10ppm、20ppm、50ppm、75ppm、100ppm、125ppm、150ppm、175ppm或200ppm或更高。下面部分更详细地描述了摘尖以及生长素、生长素类似物和茉莉酮酸酯拮抗剂或其混和剂的施用时间。
摘尖和处理时间
收割前给烟草植物摘尖的农艺过程在调节烟草中的尼古丁水平中发挥了关键作用。由于摘尖所导致的对烟草的机械创伤诱导了茉莉酮酸产生，其依次刺激尼古丁(一种亚硝胺底物)的产生。另外，烟草摘尖去除了产生生长素的植物细胞，其下调尼古丁的产生。结果是，摘尖抑制了植物中的尼古丁水平。然而就其它原因来说，摘尖是有利的。摘尖促进了植物生长，其增加了作物产量并阻止了植物结果实。因此，通过实施此处描述的方法，可以给烟草植物摘尖而不引起尼古丁合成抑制，其结果是去除了生长素源和茉莉酮酸的产生。也就是说，可以给烟草作物摘尖并在田间施用生长素、生长素类似物或茉莉酮酸酯拮抗剂，优选施用一种或多种生长素、生长素类似物或茉莉酮酸酯拮抗剂的混和剂，从而生产可收割的烟草，并用其生产低尼古丁和/或亚硝胺的烟草制品。
具体地说，当植物处于生长的成熟阶段时，在前和/或收割后立即给植物施用生长素、生长素类似物、茉莉酮酸酯拮抗剂或其混和剂。希望地，仅在使烟草受伤(如摘尖或去尖)之前加入生长素、生长素类似物、茉莉酮酸酯拮抗剂，从此避免烟草植物的创伤应答。由于在烟草植物创伤以后的头6小时之内，生长素的水平下降得很显著，优选生长素、生长素类似物、茉莉酮酸酯拮抗剂的处理伴随着田间摘尖(参见例如Thornberg等人，Plant Physiol.96：802(1991))。然而，应当可以理解的是，生长素、生长素类似物、茉莉酮酸酯拮抗剂的处理可以在摘尖前大约21天直到一个月进行、摘尖当天到摘尖后大约21天直到收割当天进行。在某些实施方案中，处理可以在收割以后进行。
也就是说，可以在收割前大约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天和/或大约31天，或摘尖当天，或收割前1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天和/或31天加入生长素、生长素类似物、茉莉酮酸酯拮抗剂或其混和剂。同样地，可以在收割前大约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天和/或大约31天，或摘尖当天，或摘尖后1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天和/或31天加入生长素、生长素类似物、茉莉酮酸酯拮抗剂或其混和剂。生长素、生长素类似物、茉莉酮酸酯拮抗剂或其混和剂也可以早一些施用，在某些情况下可以在收割后施用。所需的生长素、生长素类似物、茉莉酮酸酯拮抗剂或其混和剂的浓度可以凭经验确定，因为某些因素如植物年龄、品种、敏感性和周围压力的存在会对应答有影响。
生长素、生长素类似物、茉莉酮酸酯拮抗剂或其混和剂可以在收割前施用一次，收割前每天施用，或其间以任意频率施用。生长素、生长素类似物、茉莉酮酸酯拮抗剂或其混和剂的施用也可以在植物摘尖以后，通常直到摘尖后31天，优选摘尖当天。生长素、生长素类似物、茉莉酮酸酯拮抗剂或其混和剂也可以在摘尖后施用一次，摘尖后每天施用，或其间以任意频率施用。
生长素、生长素类似物、茉莉酮酸酯拮抗剂或其混和剂可以和尼古丁水平已经相对较低的烟草植物接触。可以使用低尼古丁水平的烟草品种。另外，可以使用遗传工程来降低参与尼古丁生物合成途径的酶的水平，结果得到能被用作本发明实施方案的低尼古丁的烟草植物。优选的实施方案是遗传修饰的烟草Vector 21-41，其是用QPT酶基因反义破坏创造的。参见例如WO 9856923、WO 0067558和PCT/US01/26788。下面部分描述了处理过的烟草的收割以及由此生产的烟草制品的制备。
产品的收割和制备
此处描述的烟草处理适合于传统栽培和收割技术(如摘尖或不摘尖、将花装袋或不装袋、在肥土中培育或不在肥土中培育)，所收割的叶和茎适用于进行任何传统处理包括切割、干燥、加工、发酵和制造用于消费的传统烟草制品，包括但并不限于管烟、雪茄和香烟、嚼烟，可以是任何形式包括烟叶、烟碎、或烟丝、含烟草的口香糖或糖块。可以预期的是，此处描述的低尼古丁和/或亚硝胺的烟草可以与传统烟草一起加工和混和，以制造不同尼古丁和/或亚硝胺含量的大量烟草制品。这些混和的烟草制品可以用于烟草制品戒断疗法以将消费者从高尼古丁和亚硝胺制品逐渐转移到低尼古丁和亚硝胺制品。
例如，吸烟者可以从含有10mg尼古丁和1.5mg亚硝胺的混和香烟开始执行这一计划，逐渐转移到吸食含有7mg尼古丁和1mg亚硝胺的香烟，接着是含5.0mg尼古丁和0.5mg亚硝胺的香烟，接着是含2.0mg尼古丁和0.25mg亚硝胺的香烟，接着是含1.0mg尼古丁和不含亚硝胺的香烟，直到消费者决定只吸食完全不含尼古丁和亚硝胺的香烟或完全戒烟。因此，此处描述的混和香烟提供了逐步减少对人的致癌效力的基本方法。
就象此处所用的，作物含有大量的本发明植物和在一块农田中一起种植的相同品种的植物。“农田”指的是普通土壤块或温室。因此，本发明提供了生产用生长素、生长素类似物或茉莉酮酸酯拮抗剂处理过的，从而与相同品种和种类的未处理过的相似植物作物相比，减少了尼古丁和/或亚硝胺水平的植物作物的生产方法。下列实施例是对本发明的举例说明，不应看作是对本发明的限制。
                       实施例1
           用2，4-D减少烟草中的尼古丁和亚硝胺水平
为了减少培育作物或田间烟草(field of tobacco)中的尼古丁和/或亚硝胺水平，制备2，4-D与润湿剂″Agral 60″(如0.0006％v/v易混和的油乳剂)的浓缩水溶液(如10％溶液)。也制备含润湿剂但不含2，4-D的对照溶液。这些溶液被稀释至在最终喷雾溶液中含0.1、1、10或100ppm的2，4-D。用平行稀释的润湿剂单独喷洒不同成熟度(其中有些已经摘尖)的烟草(如在单独试验田中用特定品种的常规技术培育的白莱烟、维吉尼亚烟道和东方烟品种)的对照田或实验田。然后用上述溶液喷洒植物至溶液滴落。允许植物继续正常地生长14天。然后收割植物，用液氮快速冻干样品叶子(来自相同年龄植物的相同部位)。用标准技术测量这些样品叶子中的尼古丁水平。
采用快速烘干加工技术或针对试验品种的常规加工技术来获得加工过的叶子(非绿色或黄色干燥的叶子)。然后在加工过的叶子和茎和/或其部分(如叶片或叶脉)上进行常规TSNA分析。通过这个方法，很容易地测量到了给特定烟草品种施用，以使田间特定年龄的植物(摘尖的或未摘尖的)实现低尼古丁和/或亚硝胺水平的2，4-D的量。在下列实施例中，用乙烯前体如ethephon来降低烟草中茉莉酮酸酯诱导的尼古丁和/或亚硝胺水平。
                     实施例2
       用ethephon减少烟草中的尼古丁和亚硝胺水平
培育不同成熟度(其中有些已经摘尖)的烟草(如在单独试验田中用特殊品种的常规技术培育的白莱烟、维吉尼亚烟道和东方烟品种)的对照田或实验田。单独用甲基茉莉酮酸酯(MeJA)或用MeJA和ethephon处理一些未摘尖的植物，用ethephon处理摘尖的植物。各种量的MeJA和ethephon被施用，实施例1中制备的″Agral 60″被用于某些实验田。处理后1、2、3、4和5天收割植物。用液氮快速冻干样品叶子，测定样品叶子中的尼古丁浓度(pg/mg干重)。采用快速烘干加工技术或针对试验品种的常规加工技术获得加工叶子(非绿色或黄色干燥叶子)。然后在加工过的叶子和茎和/或其部分(如叶片或叶脉)上进行常规TSNA分析。通过上述方法，很容易地测量到了给特定烟草品种施用，以使田间特定年龄的植物(摘尖的或未摘尖的)实现低尼古丁和/或亚硝胺水平的etephon的量。在下列实施例中，用含苯并[1，2，3]噻重氮-7-硫代羟酸的化合物来减少烟草中茉莉酮酸酯诱导的尼古丁和/或亚硝胺水平。
                        实施例3
用苯并[1，2，3]噻重氮-7-硫代羟酸减少烟草中的尼古丁和亚硝胺
                       水平
培育不同成熟度(其中有些已经摘尖)的烟草(如在单独试验田中用特殊品种的常规技术培育的白莱烟、维吉尼亚烟道和东方烟品种)的对照田或实验田。根据厂商的指示，用不同稀释度的含苯并[1，2，3]噻重氮-7-硫代羟酸的化合物Actigard给烟草田施用。处理烟草后5、10、14和21天收割烟草，用液氮快速冻干样品叶子。用常规化验分析样品叶子中的尼古丁水平。采用快速烘干法或针对试验品种的加工技术常规加工收割的茎和叶子，以获得加工叶子(非绿色或黄色干燥叶子)。然后在加工过的叶子和茎和/或其部位(如叶片或叶脉)上进行常规TSNA分析。通过上述方法，很容易地测量到了给特定烟草品种施用，以使田间特定年龄的植物(摘尖的或未摘尖的)实现低尼古丁和/或亚硝胺水平的苯并[1，2，3]噻重氮-7-硫代羟酸的量。在下列实施例中，用2，4-D和含苯并[1，2，3]噻重氮-7-硫代羟酸的化合物的混和剂来减少烟草中茉莉酮酸酯诱导的尼古丁和/或亚硝胺水平。
                       实施例4
用2，4-D和苯并[1，2，3]噻重氮-7-硫代羟酸减少烟草中的尼古丁
                     和亚硝胺水平
培育不同成熟度(其中有些已经摘尖)的烟草(如在单独试验田中用处理特殊品种的常规技术培育的白莱烟、维吉尼亚烟道和东方烟品种)的对照田或实验田。如实施例1所述制备含或不含Agral 60的2，4-D溶液(不同稀释度)。根据厂商的指示，制备含苯并[1，2，3]噻重氮-7-硫代羟酸的化合物Actigard。用2，4-D喷洒实验田(摘尖的或未摘尖的)，接着用Actigard喷洒。处理烟草后5、10、14和21天收割，用液氮快速冻干样品叶子。用常规化验分析样品叶子中的尼古丁水平。采用快速烘干法或针对试验品种的加工技术常规加工收割的茎和叶子，以获得加工叶子(非绿色或黄色干燥叶子)。然后在加工过的叶子和茎和/或其部位(如叶片或叶脉)上进行常规TSNA分析。通过上述方法，很容易地测量到了给特定烟草品种施用，以使田间特定年龄的植物(摘尖的或未摘尖的)实现低尼古丁和/或亚硝胺水平的2，4-D与苯并[1，2，3]噻重氮-7-硫代羟酸联用的量。在下列实施例中，描述了低尼古丁和低亚硝胺烟草混合物产品。
                         实施例5
               低尼古丁和亚硝胺混和的烟草
下列实施例描述了数种方法通过混和制造具有特定量的尼古丁和/或TSNA的烟草制品。一些混和方法是从具有相当低尼古丁和/或TSNA含量的品种制备的烟草开始的。通过将低尼古丁/TSNA品种制备的烟草(如检查不到水平的尼古丁和/或TSNA)和传统烟草(如白莱烟，其含有30,000ppm尼古丁和每十亿8,000份(ppb)的TSNA；Flue-Cured，其含有20000ppm尼古丁和300ppb TSNA；以及东方烟，其含有10,000ppm尼古丁和100ppb TSNA)混和，可以制备事实上含有任何需要量的尼古丁和/或TSNA的烟草制品。可以将含有各种量尼古丁和/或TSNA的烟草制品掺入戒烟专用的药盒和程序中，以帮助烟草使用者减少或消除其对尼古丁的依赖，并减少致癌效力。
例如，步骤1的烟草制品可以由大约25％低尼古丁/TSNA烟草和75％传统烟草组成；步骤2的烟草制品可以由大约50％低尼古丁/TSNA烟草和50％传统烟草组成；步骤3的烟草制品可以由大约75％低尼古丁/TSNA烟草和25％传统烟草组成；步骤4的烟草制品可以由大约100％低尼古丁/TSNA烟草和0％传统烟草组成。戒烟专用的试剂盒(kit)可以包含每一个上述混和物中的一定量烟草制品，以满足消费者一个月疗程。也就是说，例如如果消费者是一天吸一包烟的吸烟者，一个月的试剂盒将提供每个步骤7包香烟，总共28包香烟。每个戒烟专用的试剂盒中要包括一套使用说明书，其通过一步接一步的方法，详细地指导消费者。当然，具有特定量尼古丁和/或TSNA的烟草制品将被制成便利包装的量(如雪茄盒、香烟包、鼻烟听和嚼烟袋或盘)，使得消费者可以选择他们个人需要的尼古丁和/或TSNA的量。用此处描述的教导，有很多方法获得各种低尼古丁/低TSNA的烟草混合物，下面仅仅是给指导本领域技术人员指导了一种可行的方法。
为了获得步骤1的烟草制品，其是25％低尼古丁/TSNA混合物，从大约0ppm尼古丁/TSNA烟草制备的烟草可以与传统的白莱烟、烟道烟或东方烟以25％/75％比例分别混和，以获得含有22,500ppm尼古丁和6,000ppb TSNA的白莱烟烟草制品，含有15,000ppm尼古丁和225ppbTSNA的烟道烟制品，和含有7,500ppm尼古丁和75ppb TSNA的东方烟制品。相似地，为了获得步骤2的烟草制品，其是50％低尼古丁/TSNA混合物，从大约0ppm尼古丁/TSNA烟草制备的烟草可以与传统的白莱烟、烟道烟或东方烟以50％/50％比例分别混和，以获得含有15,000ppm尼古丁和4,000ppb TSNA的白莱烟烟草制品，含有10,000ppm尼古丁和150ppb TSNA的烟道烟制品，和含有5,000ppm尼古丁和50ppb TSNA的东方烟制品。此外，步骤3的烟草制品，其是75％/25％低尼古丁/TSNA混合物，从大约0ppm尼古丁/TSNA烟草制备的烟草可以与传统的白莱烟、烟道烟或东方烟以75％/25％比例分别混和，以获得含有7,500ppm尼古丁和2,000ppb TSNA的白莱烟烟草制品，含有5,000ppm尼古丁和75ppb TSNA的烟道烟制品，和含有2,500ppm尼古丁和25ppb TSNA的东方烟制品。
应当意识到烟草制品经常是很多不同种类烟草的混合物，其在不同生长条件下生长在世界的很多不同地方。结果是，尼古丁和TSNA的量在作物之间会不同。然而，用常规技术可以很容易地测定用来进行所需要的混和的每个作物中的尼古丁和TSNA的平均含量。通过调节组成混合物的每种烟草的量，技术人员可以平衡尼古丁和/或TSNA的量与其它因素如外观、口味和可吸食性。用这种方法可以创造不同种类的含有不同水平尼古丁和/或亚硝胺的烟草制品，以及外观、口味和可吸食性。
                     实施例6
         含低尼古丁和亚硝胺水平的戒烟产品
下列实施例描述了利用本发明低尼古丁、低TSNA烟草制品的戒烟产品。将含有极低水平TSNA和完全不含尼古丁的处理过的烟草与合成制备的尼古丁混和以使每支香烟中含特定的、渐变水平的尼古丁。例如，每支香烟可能含5mg、4、3、2、1、0.5、0.1或0mg尼古丁。香烟的渐变包装被清楚地标明其尼古丁含量，逐步尼古丁减少程序中的步骤也被清楚地标注在包装上。每个星期，使用者购买装有下一个更低水平尼古丁香烟的包装，但限制他自己每天不吸食比之前消费的更多的香烟。使用者可以根据自身情况，通过选择a)每天吸食香烟的数量，b)开始的尼古丁水平，c)各个星期每支香烟中尼古丁水平的变化，以及d)最后每天消费的尼古丁水平，来定义他/她自己的戒烟速度。为了更好的进行尼古丁减少程序，各人保持每日尼古丁摄取记录以及每天消费的香烟数量。最后，个人将消费完全不含尼古丁的烟草制品。由于最后步骤的不含尼古丁的烟草制品是非成瘾性的，完全戒除烟草制品的使用应该容易得多。
                        实施例7
含低TSNA水平和逐步减少的尼古丁水平的香烟包的戒烟试剂盒
制备适合重度、中度或轻度吸烟者的不同的戒烟试剂盒。试剂盒提供了戒烟所需的所有材料，以两周(快)、一个月(中)或两个月(慢)的形式，这取决于试剂盒。每个试剂盒含有根据本发明制备的一组数量的香烟包，每支香烟含有5mg、4、3、2、1、0.5、0.1或0mg的尼古丁。例如，一天一包的吸烟者将接受7包香烟，每包中每支香烟含有上述量的尼古丁。试剂盒中也要提供含0mg/香烟的另外的几个星期香烟，以使消费者熟悉吸食不含尼古丁的香烟。试剂盒中也应该包含记录每日尼古丁摄取的日记、促动的文学作品以促使个体持续戒烟计划、有关戒烟好处的健康资料、以及寻找其它抗烟消息的网站地址如聊天组、会议、时事通讯、最近的出版物及其它有关的链接。
尽管参考了实施方案和实施例来描述本发明，应该可以理解的是，可以作各种修改而不偏离本发明精神。

Claims (30)

1.一种降低烟草植物中尼古丁含量的方法，包括：使烟草植物与选自生长素、生长素类似物和茉莉酮酸酯拮抗剂的组合物在所述烟草植物摘尖前大约21天到摘尖后大约21天相接触，其中，与所述组合物接触过的所述摘尖的烟草植物中的尼古丁的量低于相同品种的摘尖的、但没有与所述组合物接触过的烟草植物中的尼古丁的量。
2.一种降低烤烟叶中尼古丁含量的方法，包括：使烟草植物与选自生长素、生长素类似物和茉莉酮酸酯拮抗剂的组合物在所述烟草植物摘尖前大约21天到摘尖后大约21天相接触，收割所述烟草植物；和加工所述收割的烟草植物的叶子，其中，所述烤烟中的尼古丁的量低于从相同品种的摘尖的、但没有与所述组合物接触过的烟草植物制备的烤烟中的尼古丁的量。
3.一种降低烤烟叶中TSNA含量的方法，包括：使烟草植物与选自生长素、生长素类似物和茉莉酮酸酯拮抗剂的组合物在所述烟草植物摘尖前大约21天到摘尖后大约21天相接触，其中，与所述组合物接触过的所述摘尖的烟草植物中的尼古丁的量低于相同品种的摘尖的、但没有与所述组合物接触过的烟草植物中的尼古丁的量；收割所述低尼古丁含量的烟草植物；并且加工所述低尼古丁含量的烟草，由此，低尼古丁含量的烤烟含有的TSNA水平低于从相同品种的摘尖的、但没有与所述组合物接触过的烟草植物制备的烤烟中的TSNA水平。
4.一种降低烟草植物中尼古丁含量的方法，包括：使烟草植物与选自生长素、生长素类似物和茉莉酮酸酯拮抗剂的组合物，以能使所述烟草植物摘尖后形成的尼古丁的量降低至低于相同品种的未经处理的烟草植物摘尖后形成的尼古丁的量的有效量相接触。
5.一种降低烤烟中TSNA含量的方法，包括：使烟草植物与能有效地使所述烟草植物中的尼古丁的量降低至低于相同品种的未经处理的烟草植物中尼古丁的量的选自生长素、生长素类似物和茉莉酮酸酯拮抗剂的组合物相接触；
收割所述低尼古丁含量的烟草植物；以及
加工所述低尼古丁含量的烟草，
由此，低尼古丁含量的烤烟含有的TSNA水平低于从相同品种的摘尖的、但没有与所述组合物接触过的烟草植物制备的烤烟中的TSNA水平。
6.包含低尼古丁烟草的烟草制品，包含通过使烟草植物与选自生长素、生长素类似物和茉莉酮酸酯拮抗剂的组合物，以能使所述烟草植物摘尖后形成的尼古丁的量降低至低于相同品种的未经处理的烟草植物摘尖后形成的尼古丁的量的有效量相接触所制备的烟草。
7.包含低TSNA烟草的烟草制品，包含通过下列方法所制备的烟草，所述方法包括使烟草植物与能有效地使所述烟草植物中的尼古丁的量降低至低于相同品种的未经处理的烟草植物中尼古丁的量的选自生长素、生长素类似物和茉莉酮酸酯拮抗剂的组合物相接触；收割所述低尼古丁含量的烟草植物；以及加工所述低尼古丁含量的烟草，
由此，低尼古丁含量的烤烟含有的TSNA水平低于从相同品种的摘尖的、但没有与所述组合物接触过的烟草植物制备的烤烟中的TSNA水平。
8.一种戒烟疗法，包括：给寻求停止吸食传统烟草制品和戒断尼古丁消费的人提供低尼古丁的烟草，提供的时间要足以使该人停止吸食传统的烟草制品并戒断尼古丁消费，该低尼古丁的烟草是使烟草植物与选自生长素、生长素类似物和茉莉酮酸酯拮抗剂的组合物，以能使所述烟草植物摘尖后形成的尼古丁的量降低至低于相同品种的未经处理的烟草植物摘尖后形成的尼古丁的量的有效量相接触来制备的。
9.一种降低尼古丁毒性作用的方法，包括权利要求8的给烟草消费者提供烟草制品的步骤。
10.一种降低尼古丁毒性作用的方法，包括：
给烟草消费者提供通过使烟草植物与选自生长素、生长素类似物和茉莉酮酸酯拮抗剂的组合物，以能使所述烟草植物摘尖后形成的尼古丁的量降低至低于相同品种的未经处理的烟草植物摘尖后形成的尼古丁的量的有效量相接触来制备的烟草制品，其中，所述烟草制品至少以两种组合物提供：(a)第一种混和烟草组合物，其包含的尼古丁含量低于从所述未处理的烟草植物制备的烟草中发现的尼古丁的水平，但尼古丁含量高于能产生成瘾性的尼古丁的水平；以及(b)第二种烟草组合物，其包含的尼古丁含量低于能产生成瘾性的尼古丁水平；
并教导所述烟草消费者消费第一种组合物一段时间，这一段时间足以减少传统烟草制品的使用；并教导所述烟草消费者消费第二种组合物一段时间，这一段时间足以减少所述第一种组合物的使用，由此降低所述尼古丁的毒性作用。
11.一种减少烟草消费者暴露于TSNA的毒性作用的方法，包括给烟草消费者提供含有低TSNA烟草的烟草制品的步骤，所述低TSNA烟草包含通过下方法制备的烟草：使烟草植物与选自生长素、生长素类似物和茉莉酮酸酯拮抗剂的组合物，以能使所述烟草植物中的尼古丁量降低至低于相同品种的未经处理的烟草植物中的尼古丁的量的有效量相接触；
收割所述低尼古丁含量的烟草植物；以及
加工所述低尼古丁含量的烟草，
由此，低尼古丁含量的烤烟含有的TSNA水平低于从相同品种的摘尖的、但没有与所述组合物接触过的烟草植物制备的烤烟中的TSNA水平。
12.一种处理烟草植物以降低或消除尼古丁形成的方法，该方法包括：
使第一个品种的烟草植物与至少一种包含选自生长素、生长素类似物和茉莉酮酸酯拮抗剂的药剂的组合物相接触，其中，接触发生在摘尖前大约21天到摘尖后大约21天；并
获得所述烟草植物的叶子，该叶子中含有的尼古丁水平低于相同品种的摘尖的、在相同生长条件下培育的、但没有与组合物接触的植物的相似叶子中的尼古丁水平。
13.权利要求12的方法，其中，重复接触步骤。
14.权利要求12或13的方法，其中，所述烟草植物与多种选自生长素、生长素类似物或茉莉酮酸酯拮抗剂的物质相接触。
15.权利要求12、13或14的方法，其中，所述烟草植物是维吉尼亚烟道烟品种、东方品种或白莱烟品种。
16.权利要求12、13或14的方法，其中，所述烟草植物是遗传修饰的烟草植物。
17.权利要求16的方法，其中，所述遗传修饰的烟草植物是Vector21-41。
18.用生长素或生长素类似物处理过的摘尖的烟草植物，其中，摘尖两天以后，所述摘尖的烟草植物的叶子中的生长素的量是大约5到大约40ng/g鲜重。
19.权利要求18的摘尖的烟草植物，其中，所述摘尖的烟草植物的所述叶子中的生长素的量是大约10到大约40ng/g鲜重。
20.权利要求18的摘尖的烟草植物，其中，所述摘尖的烟草植物的所述叶子中的生长素的量是大约15到大约40ng/g鲜重。
21.权利要求18的摘尖的烟草植物，其中，所述摘尖的烟草植物的所述叶子中的生长素的量是大约20到大约40ng/g鲜重。
22.权利要求18的摘尖的烟草植物，其中，所述摘尖的烟草植物的所述叶子中的生长素的量是大约25到大约40ng/g鲜重。
23.权利要求18的摘尖的烟草植物，其中，所述摘尖的烟草植物的所述叶子中的生长素的量是大约30到大约40ng/g鲜重。
24.权利要求18的摘尖的烟草植物，其中，所述摘尖的烟草植物的所述叶子中的生长素的量是大约35到大约40ng/g鲜重。
25.生长素、生长素类似物或茉莉酮酸酯拮抗剂在降低摘尖的烟草植物的尼古丁含量中的应用。
26.生长素、生长素类似物或茉莉酮酸酯拮抗剂在制备低尼古丁含量的烟草制品中的应用。
27.生长素、生长素类似物或茉莉酮酸酯拮抗剂在降低烤烟的TSNA含量中的应用。
28.生长素、生长素类似物或茉莉酮酸酯拮抗剂在制备低TSNA含量的烟草制品中的应用。
29.生长素、生长素类似物或茉莉酮酸酯拮抗剂在降低烤烟的尼古丁和TSNA含量中的应用。
30.生长素、生长素类似物或茉莉酮酸酯拮抗剂在制备低尼古丁和TSNA含量的烟草制品中的应用。
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