CN1410054A - Ii型胶原水溶性分散组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种II型胶原水溶性分散组合物及其制备方法和应用。本发明公开的II型胶原水溶性分散组合物由重量百分比为0.001～90％的II型胶原和10％～99.999％水溶性固体分散载体材料组成。该分散组合物可直接给药或制成各种药物制剂形式给药，克服了现有II型胶原制剂的不足，提供了一种在水中能迅速溶解，并可通过呼吸道及鼻粘膜给药的新型治疗类风湿关节炎、骨关节炎的药物。

Description

II型胶原水溶性分散组合物及其制备方法和应用

技术领域：

本发明涉及一种药物组合物及制备方法和应用。具体涉及一种II型胶原水溶性分散组合物及其制备方法和应用。

背景技术：

类风湿关节炎是一种免疫功能紊乱引起的自身免疫病。临床基础研究已确认人体免疫系统对关节软骨中II型胶原的免疫应答与类风湿性关节炎的发生与发展有密切关系。免疫学基础研究发现小分子可溶性抗原在粘膜的淋巴样组织中可诱导产生对该抗原有特异性的免疫调节细胞，迁徙到有该抗原参与免疫应答的靶组织，通过释出各种细胞因子，调节、抑制免疫应答的强度，遂可使相应的自身免疫病得到缓解。这种免疫耐受作用是生物进化过程中形成的一种自我保护措施。小分子抗原如被粘膜以固体颗粒形式吸收，则会产生截然相反的生物效应，可引发以体液免疫为主的免疫应答。因此，作为耐受原的抗原的溶解性在免疫耐受中就显得非常关键。

II型胶原是一种动物蛋白，作为细胞间质的组成部分存在于软骨组织中。由于II型胶原免疫耐受作用产生的免疫抑制仅限于由该抗原引起免疫应答的靶组织微环境中，不会发生常规治疗药的全身性免疫功能抑制等不良副作用，因此国内外现有多种动物软骨制得的II型胶原已作为新颖的生物治疗剂用于类风湿关节炎(RA)的临床试验。但II型胶原是一种纤维状蛋白质，难溶于水、稀酸及稀碱，仅可在水中或酸中慢慢溶胀成胶体溶液，溶胀时间大大超过药物在胃肠道停留时间。国内外现有称之为“可溶性II型胶原”的RA治疗剂皆因胶原在水中溶出速率较低，需制成溶液后才供服用。如美国直接采用其醋酸液口服作为制剂，但携带不便，保存期较短。国内已进入临床试验的II型胶原“冻干口服剂”，也不能直接口服，临用前需加水慢慢使溶解，不仅为使用带来不便，而且也难以保障胶原能充分溶胀后溶出。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题在于克服上述II型胶原制剂的不足，提供一种在水中能迅速溶解，并可直接给药或制成各种药物制剂形式给药的II型胶原水溶性分散组合物。

本发明公开的II型胶原水溶性分散组合物由重量百分比为0.001～90％的II型胶原和10％～99.999％水溶性固体分散载体材料组成。

所述的水溶性固体分散载体材料为聚乙二醇类、聚维酮类、表面活性剂类、有机酸类、糖类或醇类等，其中有机酸类选自枸橼酸、酒石酸、琥珀酸、胆酸或脱氧胆酸等；糖类选自半乳糖或蔗糖等；醇类选自甘露醇、山梨醇、或木糖醇等，尤以甘露醇为佳。

本发明所要解决的另一技术问题是公开上述II型胶原水溶性分散组合物的制备方法。

本发明公开的上述II型胶原水溶性分散组合物通过下述技术方案获得：

在II型胶原中加入0.001-1.0mol/L醋酸，及处方量的水溶性固体分散载体，溶解后用固体分散技术制得分散组合物。

所述的固体分散技术为溶剂-冷冻干燥法。

本发明所要解决的再一技术问题是公开上述II型胶原水溶性分散组合物在制备治疗类风湿关节炎及骨关节炎药物中的应用。

本发明的II型胶原水溶性分散组合物可与常规药物辅料组合制备各种形式的治疗类风湿关节炎及骨关节炎的药物制剂，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、微囊、喷雾剂、气雾剂或吸入粉雾剂。特别是喷雾剂、气雾剂或吸入粉雾剂。

II型胶原是一种难溶于水及稀酸稀碱的蛋白质，制成的药物的吸收速率及生物利用度取决于溶出速率，未经处理的II型胶原生物利用度不高且难于分散混匀，影响制剂含量均匀度。药物的吸收速率随分散度的增加而提高，因此，药物颗粒减小，比表面积增加，溶出速率就提高。固体分散技术是固体分散在固体中的新技术，通常是一种难溶性药物以分子、胶态、微晶或无定形状态，分散在另一种易溶性材料中呈固体分散体。如果使药物呈分子分散体，而载体材料为水溶性的，则可大大改善药物的溶出与吸收，从而提高生物利用度。固体分散体中载体材料对药物溶出的促进作用表现在提高药物的可润湿性，保证药物的高度分散及对药物有抑晶性三个方面。

本发明即采用了这种分散技术，在II型胶原溶液中加入适宜的易溶物质后再行冻干，冻干后II型胶原高度均匀分布于易溶物质的凝块之中，在水中即可迅速溶出。控制易溶物的加量即可得到不同溶出速率的II型胶原制品，大大提高了药物制剂的生物利用度。

口服抗原由肠道粘膜引发机体产生免疫耐受状态虽然简单易行，但涉及抗原对消化道酶系的耐受力、多种慢性肠胃疾病、创伤应激及药物副作用等的限制，影响疗效。如果以喷雾剂、气雾剂或吸入粉雾剂形式致由呼吸道或鼻腔给药则可不受上述诸项限制。制备喷雾剂、气雾剂及吸入粉雾剂的II型胶原必须是可溶及易分散的原料，本发明的II型胶原固体分散体具备了上述条件，用其制备成喷雾剂、气雾剂及粉雾剂药效与口服制剂相当，提供了呼吸道给予II型胶原治疗类风湿关节炎、骨关节炎的新的给药途径。

用本方法制得的几种不同II型胶原含量的固体分散体药物II型胶原在37℃溶出率见表一。

表一：不同含量的II型胶原固体分散体II型胶原溶出率％

用本发明II型胶原固体分散组合物进行有关药效试验

一、用本发明的II型胶原固体分散体进行口服给药预防和治疗大鼠佐剂性关节炎(AA)的动物试验：

1、口服(ig)II型胶原(CII)预防试验：igCH5、10、20ug/(kg.d)或强的松2mg/(kg·d)，连续7d，2d后致炎。d16、d20、d24、d28时两药均能明显抑制继发性足爪肿胀(表2)。对照组为正常动物组，佐剂性关节炎(AA)模型组给溶媒，溶媒均为水。表2：ig CII预防给药对佐剂性关节炎大鼠继发性足爪肿胀的影响组别      剂量                            △ml

      (ug/kg)    d16             d20             d24             d28对照组    -          0.21±0.07      0.27±0.08      0.35±0.09      0.43±0.16AA        -          0.49±0.13^**   0.74±0.18^**   0.83±0.19^**   0.75±0.19^**CII       5          0.33±0.13△    0.43±0.19△△  0.45±0.21△△  0.42±0.21△△

      10         0.33±0.10△    0.42±0.11△△  0.50±0.13△△  0.41±0.16△△

      20         0.32±0.09△△  0.38±0.11△△  0.45±0.14△△  0.43±0.13△△强的松    2000       0.31±0.07△△  0.36±0.10△△  0.43±0.13△△  0.41±0.10△△n＝9～10，X|±S.^**P＜0.01，与对照组比较；△P＜0.05，△△P＜0.01，与AA组比较。

2、igCII治疗给药试验：致炎后d14开始igCII及强的松，连续7d、d24、d28时能明显抑制继发性足爪肿胀(表3)。对照组为正常动物组，AA组给溶媒，溶媒均为水。表3：ig CII治疗给药对佐剂性关节炎大鼠继发性足爪肿胀的影响组别     剂量                            △ml

   (ug/kg        d20                 d24                   d28对照组   -        0.25±0.05          0.34±0.05            0.37±0.04AA       -        0.50±0.10^**       0.74±0.12^**         0.69±0.16^**CII      5        0.46±0.11          0.48±0.11△△        0.46±0.11△△

     10       0.49±0.10          0.51±0.09△△        0.45±0.11△△

     20       0.50±0.11          0.51±0.08△△        0.47±0.15△△强的松   2000     0.36±0.14          0.41±0.11△△        0.35±0.11△△n＝9～10，X±S.，^**P＜0.01，与对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01，与AA组比较。

二、用本发明的II型胶原固体分散体进行口服给药治疗小鼠胶原性关节炎(CIA)的动物试验：将实验小鼠分为6组(见表4)。小鼠于致炎后d26关节开始出现肿胀，并于d27给予II型胶原(CII)5、10、20ug/(kg·d)或强的松2mg/(kg·d)，连续7d。结果发现，于致炎后d37小鼠关节肿胀达高峰，此后便逐渐消退。从致炎后d37开始，CII三个剂量[5、10、20ug/(kg·d)]均可明显减轻CIA小鼠的关节肿胀，同时CII上述三个剂量均可明显抑制CIA小鼠关节的病理改变，提示igCII对CIA模型小鼠具有治疗作用。表4：CII对CIA小鼠的多发性关节炎的影响(X±S，n＝13～15)

        剂量                    不同时间的关节评分组别        ug·kg^-1  d29         d33          d37         d41         d45         d49溶媒对照组  -          0.1±0.3    0.1±0.3     0.3±0.5    0.3±0.5    0.4±0.6    0.3±0.6CIA模型组   -          6.6±3.8^** 7.0±3.9^**  7.5±4.2^** 7.4±4.4^** 6.9±4.5^** 6.3±4.0^**

        5          7.2±3.8    5.2±1.9     3.9±2.0##  3.2±1.9##  2.5±1.5##  2.5±1.3##CII组       10         7.3±3.1    5.0±1.4     4.1±1.2#   3.3±0.9##  2.9±0.8##  2.2±0.4##

        0          7.1±2.3    5.8±1.6     4.4±1 5#   3.4±1.0##  2.8±1.0##  2.4±1.2##强的松组    2000       6.1±3.7    4.01±1.4#   3.5±1.3##  3.1±1.1##  2.8±1.2##  2.5±1.2##

与溶媒对照组比较，^*P＜0.01；与CIA模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。CII：II型胶原；CIA：小鼠胶原性关节炎

三、用本发明的II型胶原固体分散体进行喷雾给药治疗大鼠佐剂性关节炎的动物试验。

1.于致炎后d14(继发性炎症已出现)，喷雾给予不同剂量的CII5、10、20ug/(kg·d)，连续7d。结果发现，致炎后d20，喷雾CII10、20ug/(kg·d)及ig强的松对AA大鼠的继发性炎症有明显的抑制作用。致炎后d24，CIIig组作用出现，至d28时CII10ug/(kg·d)组作用消失(表5)，CII20ug/(kg·d)喷雾或ig及强的松仍对AA大鼠的继发性炎症有抑制作用。表5：CII喷雾给药对大鼠佐剂性关节炎继发性足爪肿胀的影响组别    剂量                       肿胀度(△ml)

      ug·kg^-1  d14           d16            d20          d24           d28对照组    -          0.05±0.02^** 0.06±0.02^** 0.09±0.02^** 0.12±0.02^** 0.15±0.01^**AA组      -          0.19±0.06    0.36±0.10    0.46±0.08    0.56±0.09    0.60±0.13CII       5          0.22±0.08    0.35±0.07    0.41±0.07    0.46±0.06    0.51±0.09

      10         0.14±0.06    0.37±0.07    0.29±0.08^** 0.38±0.09^** 0.39±0.04

      20         0.17±0.05    0.27±0.05    0.26±0.06^** 0.26±0.03^** 0.27±0.03^**igCII     10         0.20±0.07    0.41±0.13    0.33±0.08    0.32±0.06^** 0.33±0.03^**强的松组  2000       0.19±0.03    0.32±0.08    0.27±0.05^** 0.21±0.06^** 0.21±0.01^**n＝9～10，X|±S.，^**P＜0.01，与AA组比较。CII：II型胶原；AA：佐剂性关节炎。

2.CII喷雾给药对AA大鼠关节病理改变的影响

AA大鼠膝关节病理切片经HE染色后发现，滑膜增生变厚，血管翳形成，并侵蚀和破坏软骨。喷雾及ig给予不同剂量的CII和强的松均可完全抑制AA大鼠关节的病理改变。强的松组大鼠还见到滑膜组织脂肪细胞增多。

四、用本发明的II型胶原固体分散体进行喷雾给药治疗小鼠胶原性关节炎的动物试验。

1、CII对CIA小鼠的多发性关节炎的影响

将实验小鼠随机分为7组(见表6)。小鼠于致炎后d35关节出现肿胀，并开始喷雾给予CII(5、10、20μg·kg^-1)和强的松(2mg·kg^-1，ig)，连续10d。结果发现，于致炎后d37，小鼠关节肿胀达高峰，此后便逐渐消退。从致炎后d37开始，CII三各个剂量(5、10、20μg·kg^-1，ig)均可明显减轻CIA小鼠的关节肿胀。而强的松起效较快，从致炎后d31开始对CIA小鼠的关节肿胀有抑制作用(见表6)。表6：CII喷雾给药对CIA小鼠的多发性关节炎的影响(X±S，n＝13～15)

       剂量                       不同时间的关节评分组别       ug·kg^-1   d29        d33         d37           d41           d45            d49溶媒对照组 -         0.2±0.4     0.3±0.5    0.3±0.5      0.4±0.6      0.4±0.6       0.3±0.5CIA模型组  -         3.0±1.25##  7.4±2.0##  10.0±1.2##   9.5±1.6##    10.2±1.9##    9.2±1.9##CII        5         2.6±1.5     5.1±2.0^*  4.8±2.1^**   5.5±1.9^**   5.5±1.8^**    5.5±1.7^**

       10        3.1±0.9     4.5±2.2^** 4.8±1.9^**   4.6±1.9^**   4.9±2.1^**    4.7±1.2^**

       20        3.1±2.3     5.3±2.7^*  4.5±2.3^**   4.9±1.7^**   4.7±1.1^**    4.9±1.4^**CII组      10        2.8±1.5     4.8±2.6^** 4.4±2.3^**   4.3±2.0^**   4.1±1.7^**    4.7±2.0^**强的松组   2000      2.5±1.8     4.5±2.9^** 4.7±3.3^**   5.0±3.1^**   4.9±2.9^**    5.2±3.1^**与溶媒对照组比较，##P＜0.01；与CIA模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01。CII：II型胶原；CIA：小鼠胶原性关节炎。

2、CII喷雾给药对CIA小鼠关节病理改变的影响

CIA小鼠膝关节病理切片经HE染色后发现，滑膜增生变厚，血管翳形成，并侵蚀和破坏软骨。喷雾及ig给予不同剂量的CII和强的松均可不同程度地抑制AA大鼠关节的病理改变。

3、CII喷雾给药还可以明显抑制CIA小鼠异常的免疫功能

上述试验结果证明II型胶原除口服途径外，呼吸道及鼻粘膜可以成为类风湿关节炎新的给药途径，与口服途径相比具有影响因素少，个体差异小，有效率高的特点，且安全、有效、方便、保质期长，具有良好的开发应用前景。

具体实施方式：实例1：制备II型胶原水溶性分散组合物

1克II型胶原加1000ml 0.01mol/L醋酸液搅拌使溶，加入99克甘露醇搅拌使溶，含固量10％，冷冻干燥即得含II型胶原为1％的水溶性固体分散体。实例2：制备II型胶原胶囊

10克II型胶原水溶性分散组合物(含II型胶原100mg)，3克滑石粉1.5克硬脂酸镁，120.5克甘露醇，粉碎混匀制成胶囊1000粒。实例3：制备II型胶原散剂或颗粒剂

10克II型胶原水溶性分散组合物(含II型胶原100mg)，加入药用辅料最终使每一剂量实际II型胶原含量为10～500ug，无菌分装包装即可。实例4：制备II型胶原片剂

10克II型胶原水溶性分散组合物(含II型胶原100mg)，淀粉56克，糖粉28克，硬脂酸镁4克，淀粉浆(17％)适量。

将上述原料粉碎混匀，加适量淀粉浆制粒，干燥后用100毫克的冲模压制成片，即得。实例5：制备II型胶原吸入粉雾剂

10克II型胶原水溶性分散组合物(含II型胶原100毫克)，气流粉碎至粒径小于10um且大多在5um左右，加入38克甘露醇，2克润滑剂，混匀后制成小胶囊或泡囊或多剂量储库，配上特制的干粉吸入装置即得。实例6：制备II型胶原喷雾剂

50克II型胶原水溶性分散组合物(含II型胶原500毫克)，加水500毫升使溶，充入特定的喷雾瓶中，每瓶5毫升，装好后充入氮气，控制内压在617.85～686.5Kpa(表压)即得。每喷100ul，含II型胶原100ug。

Claims (10)

1、一种II型胶原水溶性分散组合物，其特征在于该组合物由重量百分比为0.001～90％的II型胶原和10％～99.999％水溶性固体分散载体材料组成。

2、一种如权利要求1所述的II型胶原水溶性分散组合物，其特征在于其中所述的水溶性固体分散载体材料为聚乙二醇类、聚维酮类、表面活性剂类、有机酸类、糖类或醇类。

3、一种如权利要求1或2所述的II型胶原水溶性分散组合物，其特征在于其中所述的水溶性固体分散载体材料中有机酸类材料选自枸橼酸、酒石酸、琥珀酸、胆酸或脱氧胆酸；糖类选自半乳糖或蔗糖；醇类选自甘露醇、山梨醇、或木糖醇。

4、一种如权利要求3所述的II型胶原水溶性分散组合物，其特征在于其中所述的水溶性固体分散载体材料中醇类材料选自甘露醇。

5、一种如权利要求1所述的II型胶原水溶性分散组合物的制备方法，其特征在于所述的II型胶原水溶性分散组合物通过在II型胶原中加入0.001-1.0mol/L醋酸，及处方量的水溶性固体分散载体，溶解后用固体分散技术制得。

6、一种如权利要求5所述的II型胶原水溶性分散组合物的制备方法，其特征在于其中所述的固体分散技术为溶剂-冷冻干燥法。

7、一种如权利要求1所述的II型胶原水溶性分散组合物在药物制备中的应用，该药物用于治疗类风湿关节炎或骨关节炎。

8、一种如权利要求7所述的II型胶原水溶性分散组合物的应用，其特征在于该II型胶原水溶性分散组合物可与常规药物辅料组合制备各种形式的治疗类风湿关节炎或骨关节炎的药物制剂。

9、一种如权利要求8所述的II型胶原水溶性分散组合物的应用，其特征在于其中所述的药物制剂形式为片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、微囊、喷雾剂、气雾剂或吸入粉雾剂。

10、一种如权利要求8所述的II型胶原水溶性分散组合物的应用，其特征在于其中所述的药物制剂形式为喷雾剂、气雾剂或吸入粉雾剂。