CN1332971C - 木犀草素－7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷及其提取方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种新化合物木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷，它具有治疗心血管疾病、改善微循环和降脂的功效。本发明还涉及该化合物的制备方法和在制备治疗心血管疾病、改善微循环和降脂药物的用途，在测定抱茎苦荬菜有效成分含量方法中的用途，以及在测定苦碟子注射液有效成分含量方法中的用途。

Description

木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷及其提取方法和用途

技术领域

本发明涉及一种新化合物，具体来说，是木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷，本发明还涉及该化合物的制备和用途。

背景技术

抱茎苦荬菜俗称苦碟子，为菊科植物抱茎苦荬菜[Ixerissonchifolia(Bge.)Hance]两年生的干燥地上部分，主要分布于东北、内蒙等地。具有清热解毒、消肿止痛之功效。经多年研究，现已开发成中药注射液[苦碟子注射液]，在临床广泛用于心脑血管疾病，取得了良好的疗效。现已从中分离出多种黄酮类、内酯类、腺苷类等化合物。据报道，其含有的腺苷-腺嘌呤核苷具有扩冠作用，为苦碟子注射液的有效成分之一。但我们在工作中发现腺苷在苦碟子注射液中的含量很低，仅为0.0025mg/ml，另外，其中尚含有大量的黄酮类成分。该注射液中总黄酮含量达0.4mg/ml以上，为腺苷含量的160倍。现已报导，多种黄酮类化合物具有扩冠，增加心肌耗氧量，改善微循环等作用，为此，我们进行了以下的工作，以确证苦碟子注射液的有效成分。结果发现一种新化合物木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷，它的药理研究尚未见报道，从而完成了本发明。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种新化合物。

本发明的另外一种目的是提供该化合物的制备方法。

本发明的又一个目的是提供该化合物在制备治疗心血管疾病，尤其是急性心肌缺血的药物的用途。

本发明的另一个目的是提供该化合物在测定抱茎苦荬菜有效成分含量方法中的用途。

本发明的又一个目的是提供该化合物在测定苦碟子注射液有效成分含量方法中的用途。

本发明所述的新化合物是木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷，为黄色粉末。结构式为：

本发明所述化合物的提取分离方法为：

将苦碟子为菊科植物抱茎苦荬菜[Ixeris sonchifolia(Bge.)Hance]两年生的干燥地上部分，加水煎煮两次，第一次1小时，第二次0.5小时，合并煎煮液，浓缩至每1ml相当于原生药0.5g，放冷至40℃以下，在搅拌下加10％氢氧化钙乳调节pH值至10，放置12小时，离心，离心沉淀物称重，悬浮于5.3倍量95％乙醇中(使含醇量达80％)，加50％硫酸溶液调节pH值至3～4，充分搅拌使反应完全，离心，上清液加40％氢氧化钠溶液中和pH值至7.0，滤过，滤液回收乙醇，并挥尽乙醇，加0.5倍量醋酸乙酯脱脂两次，水液用0.5倍量水饱和正丁醇提取三次，合并正丁醇提取液，减压回收至干，得到粗黄酮提取物，干法上硅胶(薄层层析用硅胶H)柱，以氯仿-甲醇-醋酸(70∶35∶10)洗脱，应用TLC法监测，截取第四组分，经甲醇处理，应用C₁₈半制备柱(250×10mm，5μ)，以乙腈-1％冰醋酸溶液(17∶83)为流动相，进行HPLC分离制备，得黄色无定型粉末。经HPLC分析，证明纯度均在95％以上。

该粉末可溶于甲醇，易溶于甲醇-水混合溶剂，盐酸-镁粉反应和Molish反应均呈阳性，提示为黄酮苷类化合物。

薄层色谱检查：取上述黄色无定形粉末适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液。作为供试品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液5μl，点于硅胶H预制板，以氯仿-甲醇-醋酸(70∶35∶10)为展开剂，展开，喷以10％三氯化铝乙醇溶液，105℃加热数分钟，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，应呈单一的黄色荧光斑点，表明本品为单一化合物。

结构鉴定方法：

1、仪器和材料

熔点测定用YB-1型药物熔点测定仪；红外光谱用岛津FTIR-8400型傅立叶红外转换分光光度计；紫外吸收光谱用岛津UV-2550紫外分光光度计；质谱用IonSpec HiResESI型质谱仪测定，采用正离子检测；核磁共振BrukerAV600型核磁共振仪测定；薄层层析及柱层析硅胶均为青岛海洋化工厂产品；溶剂和显色剂均为分析纯。

2、结构鉴定

化合物II(2号)为黄色粉未，可溶于甲醇、水，HCL-Mg粉反应和Molish反应均呈阳性，提示可能为黄酮苷类化合物。

水解：①取2号样品1mg，配制成2mg/ml的溶液，吸取4μl，点样于高效薄层板上，架置于带盖容器中，加入盐酸5ml，密闭后，置60℃水浴1.5hr，取出挥尽盐酸，备用。取2号样品，木犀草素对照品溶液(2mg/ml)，芹菜素对照品溶液(2mg/ml)，分别点于同一高效薄层板上，展开。展开剂为：氯仿-甲醇-水(26∶12∶4)在分液漏斗中充分振摇后取下层9ml，加入1ml的冰醋酸。水解后，以10％三氯化铝乙醇溶液显色，结果2号样品水解后，在与木犀草素相同的位置，有相同颜色的斑点，表明2号样品的甙元为木犀草素。

②取2号样品5mg，加入2mol/L的三氟乙酸1ml，密闭，置121℃烘箱中水解1.5hr。水解后，以N₂气流吹干，加入甲醇2ml，吹干，重复5次，置于85℃烘箱中干燥3hr，放于保干器中过夜。加氨水1ml，NaBH₄ 15mg，室温放置1.5hr，不时振摇。滴加冰醋酸至无气泡产生，以N₂吹干，加入10％乙酸甲醇溶液2ml，吹干，重复5次，加入吡啶0.5ml，醋酐1ml溶解后，密封并于121℃加热3hr，冷却至室温。N₂吹干，加甲醇1ml，吹干，重复5次，加入水3ml溶解后以CHCl₃萃取三次，合并CHCl₃层，吹干，加入几滴丙酮溶解，进行气相层析(条件略)，与标准糖醇乙酰化物对比，证明其糖的部分为葡萄糖或葡萄糖醛酸。

紫外光谱分析：2号样品的紫外光谱图见图1。

在205nm、256nm、266nm(肩)、348nm处分别显于最大吸收峰，与木犀草素的紫外图谱基本一致，进一步确认其苷元为木犀草素。

高分辨质谱：2号样品的高分辨质谱见图2。

高分辨质谱给出，该化合物的M+1峰为463.08515，经检索分子式应为C₂₁H₁₈O₁₂，与木犀草素的葡萄醛酸苷分子式相同。

H-NMR谱见图3。

H-NMR(DMSO-d₆，600MH₂)显示：7.42(1H，H-2)，7.39(1H，H-6’)，6.48(1H，H-5’)是构成B环ABX耦合系统质子；6.76，6.70，6.40为黄酮母核8.3.6位质子信号；5.08为糖的端基质子信号。

¹³C-NMR；2号样品的¹³C-NMR谱见图4。

¹³C-NMR(DMSO-d₆)显示有21个碳，其中99.54为双碳信号重叠，DEPT谱证实了这一点(见图5)，这些糖的信号和归属见表1。与文献报道的木犀草素7-O-β-D葡萄糖醛酸苷(Luteolin7-O-β-D-glucuronide)的数据基本一致，COSY谱(图6)进一步证实了其结构。

经UV、IR、MS、NMR光谱和水解、TLC、GC鉴别证明分别为木犀草苷和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷。

木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷对照品系可从苦碟子注射液中分离出来，纯度可达98％以上。木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷在苦碟子注射液中含量相对较高，故选其为定量质控指标，采用高效液相色谱法测定其含量，方法简便，重现性好，且灵敏度高，专属性强。具体方法如下：

1、仪器与试药

Agilent 1100 Series高效液相色谱仪；乙腈为色谱纯，磷酸为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷对照品(由吉林省药品检验所提供，批号040520，纯度98.60％)。

2、色谱条件  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.4％磷酸溶液(18∶82)为流动相；检测波长为348nm；流速：0.9ml/min；柱温40℃。理论板数按木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷峰计算应不低于3000。

3、对照品溶液和供试品溶液的制备

3.1对照品溶液的制备  精密称取木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷对照品适量，加水制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。(必要时超声5分钟)。

3.2供试品溶液的制备  取本品，作为供试品溶液。

4、方法学考察

4.1、色谱条件的考察

色谱柱的选择：曾选用Diamonsil-C₁₈(5μ，4.6×250mm)、Kromasil-C₁₈(5μ，4.6×250mm)、Luna C₁₈(5μ，4.6×250mm)三种色谱柱，木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷均可达到基线分离，以第三根色谱柱柱效最高。

检测波长的选择：取木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷对照品溶液于200～400nm波长范围内进行紫外扫描。结果木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷在210nm、255nm、348nm波长处有最大吸收，以在348nm下，供试品色谱中杂质峰少。因此选定检测波长为348nm。

流动相的选择：根据黄酮类成分的性质及其在十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱上的分离行为，为防止色谱峰拖尾，流动相中选用酸溶液。曾试验四种流动相系统：①乙腈-0.4％磷酸溶液(18∶82)②乙腈-0.4％磷酸溶液，10～31％乙腈梯度洗脱③乙腈-1％冰醋酸溶液(20∶80)④甲醇-1％冰醋酸溶液(30∶70)，结果显示，以第①②中流动相系统分离效果好，其中，第①种流动相对仪器要求较低，适用性更广，因此，采用乙腈-0.4％磷酸溶液(18∶82)为该方法的流动相。

4.2、标准曲线的制备精密称取木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷对照品适量，用水溶解并定量稀释制成每1ml含0.1972mg的溶液。精密吸取上述溶液1、3、5、7、9、13、15、20ul注入液相色谱仪，测定，以进样量(μg)对峰面积绘制标准曲线，其回归方程为y＝-3.2748+2075.45C(γ＝0.99999).结果表明，在上述色谱条件下，木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷进样量在0.1972～3.944μg范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，符合外标法定量测定的要求，结果见下表1。

表1

进样体积(ul)	1	3	5	7	9	13	15	20
									进样量(ug)	0.1972	0.5916	0.9860	1.3804	1.7748	2.5636	2.958	3.944
积分值	406.6	1220.8	2064.2	2852.7	3671.0	5311.9	6134.4	8189.5

4.3、空白试验  为进一步考察实验设计的合理性，按原处方工艺制成不含抱茎苦荬菜阴性对照样品。按样品测定方法进行测定，记录色谱图。结果表明，在与木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷对照品相应的保留时间处无干扰峰出现，从而证明本法是合理可行的。

4.4、稳定性试验  精密吸取同一批号样品溶液5μl，按上述色谱条件，分别于0、2、7、1 2、22小时进样1次，结果见下表2。

表2稳定性试验结果

时间(小时)	0	2	7	12	22
						峰面积积分值均值RSD％	1445.60	1446.75	1445.701448.500.26	1449.77	1454.67

结果表明，在22小时内，供试品溶液中木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷的含量基本稳定。

4.5重现性试验  取同一批号样品，按正文方法操作，独立测定五次，结果见下表。表明该方法重现性良好。

表3重现性试验结果

NO	测得值(mg/ml)	平均值(mg/ml)	RSD％
				12345	0.13900.13880.13910.13890.1383	0.13882	0.224

4.6、精密度试验  精密吸取同一批号样品溶液5μl，按上述色谱条件，重复进样5次，测定峰面积值分别为1445.59839、1447.43665、1444.11670、1445.71313、1446.75452，A＝1445.92，RSD＝0.087％。结果表明，所用仪器具良好的精密性。

4.7、回收率试验  取已知含量的样品5份，每份5ml，置10ml量瓶中，精密加入木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷对照品溶液，用水稀释至刻度，摇匀，即得，制得供试品溶液，同法进行测定，计算回收率，结果见下表。

表4加样回收率测定结果

试验号	取样量(ml)	样品中已知量(mg)	加入量(mg)	测得量(mg)	回收率(％)
						1	5	0.6941	0.649	1.341	99.68
2	5	0.6941	0.649	1.344	100.1
						3	5	0.6941	0.649	1.344	100.1
4	5	0.6941	0.649	1.340	99.52
						5	5	0.6941	0.649	1.345	100.3
平均回收率＝99.94％RSD＝0.33％

如上表所示，测得木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷平均回收率为99.94％RSD＝0.33％，结果表明，本法回收率较好，准确度较高。

5、样品测定结果及含量限度确定  依法测定两个生产企业生产的二十二批样品，按正文方法操作，在上述色谱条件下，用外标法测定，结果见下表5。

表5样品含量测定结果

生产企业	批号	木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷含量(mg/ml)
			通化华夏药业	030711	0.2381
通化华夏药业	030819	0.2478
			通化华夏药业	030822	0.2315
通化华夏药业	030825	0.2518
			通化华夏药业	030831	0.2398
通化华夏药业	040101	0.1447
			通化华夏药业	040104	0.1413
通化华夏药业	040105	0.1406
			通化华夏药业	040107	0.1411
通化华夏药业	040106	0.1402

根据上述样品测定结果，并参照抱茎苦荬菜药材测定结果及其转移率(按转移率为60％计算)，暂定本品每1ml含抱茎苦荬菜以木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷(C₂₁H₁₇O₁₂)计，不得少于0.080mg。

本发明所述的化合物还可以作为药材抱茎苦荬菜定量质控指标用于该药材的质控测定方法中。具体测定方法如下：

测定方法照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定。

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.4％磷酸溶液(18∶82)为流动相；检测波长为348nm；柱温40℃。理论板数按木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备  精密称取木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷对照品适量，加水制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。(必要时超声5分钟)。

供试品溶液的制备  从每批药材中，分不同部位取出20g，碎断，混匀，取5g，精密称定，加水100ml，煮沸1.5小时，滤过，滤液浓缩并定容至50ml量瓶中，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品含木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷(C₂₁H₁₇O₁₂)不得低于0.13％。

按照上述方法测定不同产地的药材，测定结果如下：

表6药材测定结果

产地	木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸含量(％)
		海城030601	0.131
海城030602	0.130
		海城030603	0.169
海城030604	0.0855
		海城030605	0.141
海城030606	0.115
		海城030607	0.139
海城030608	0.175
		海城030609	0.166
海城030610	0.213
		2003年中部	0.0989
白山前部	0.246
		白山后部	0.165

白山中部	0.221
		2003年后部	0.140
2002年后部	0.134
		2003年前部	0.152
2002年前部	0.137

根据上述试验结果，暂定本品含木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷(C₂₁H₁₇O₁₂)不得低于0.13％。

本发明所述化合物具有治疗心血管疾病、改善微循环和降脂等作用，尤其是对急性心肌缺血和急性心肌梗死有明显保护作用，它能够对急性心肌缺血性心电图变化(T波高耸及ST段抬高)有明显的改善作用，亦能明显缩小急性心肌梗死大鼠的MIS，降低血清CPK及LDH活性，并能明显降低全血及血浆粘度。

药效实验如下：

试验动物  Wistar大白鼠，雌雄兼用，体重180～280g，合格证号为：医动字第10-5112，由长春高新医学动物研究中心供给。

试验药品  本发明化合物(0.2mg/ml)：吉林省中医中药研究院供给，批号：20041005。氯化钠注射液：长春天诚药业有限公司生产，批号：20031005。

统计方法  实验数据以均值±标准差(x±s)表示，采用两组样本均数比较的t检验进行统计分析。

方法与结果

1、对垂体后叶素诱发大鼠心肌缺血性心电图的影响

1.1方法

经心电筛选合格的Wistar大鼠60只，雌雄各半，体重142～157g，随机分为6组，即：对照组、阳性药组、本发明化合物2.4、4.8mg/kg组，每组10只。本发明化合物各组分别腹腔注射(ip)给药，阳性药组ip硝苯地平10mg/kg，对照组ip氯化钠注射液，注射容量均为2ml/kg，每日1次，连续3日。末次给药后30min，各组均自舌下静脉注射垂体后叶素(上海禾丰制药有限公司产品，试验时以生理盐水稀释)lu/kg，于10秒内注射完毕，描记5分钟的心电图，测量给垂体后叶素30秒内ST段、T波变化及1、2、3、4、5分钟的心率变化。

结果

对照组舌下静脉注射垂体后叶素后，可见大鼠ST段及T波均明显抬高，表明垂体后叶素能诱发大鼠急性心肌缺血性心电图改变。本发明化合物组对静脉注射垂体后叶素诱发的大鼠急性心肌缺血性心电图变化有明显的改善作用(p＜0.05)，但作用强度不如硝苯地平。本发明化合物各剂量组对垂体后叶素能诱发大鼠心率减慢则无明显影响，见表7、8。

表7本发明化合物对垂体后叶素诱发大鼠急性心肌缺血心电图的影响(x±s，n＝10)

组别	剂量(mg/kg)	T波变化(mv)		ST段变化(mv)
						药前	抬高值	药前	抬高值
		对照组本发明化合物硝苯地平	-2.44.810	0.203±0.1160.233±0.0570.250±0.0540.226±0.053	0.108±0.092-0.056±0.085**-0.050±0.052**-0.099±0.079***					0.041±0.0810.034±0.0740.050±0.0790.034±0.072	0.088±0.0720.011±0.061*0.010±0.074*0.001±0.0811**

与对照组比较^*p＜0.05，^**p＜0.01

表8本发明化合物对垂体后叶素诱发大鼠急性心肌缺血心率的影响(x±s，n＝10)

组别	药前(次/min)	药后不同时间变化百分率(％)
							1min	2min	3min	4min	5min
		对照组-本发明化合物2.4mg/kg4.8mg/kg硝苯地平10mg/kg	309±52309±71298±77308±67	-24.3±13.5-19.0±23.9-30.8±26.3-11.3±11.4*	-27.9±16.0-26.0±14.8-19.4±15.9-13.5±9.11*	-27.1±12.4-24.8±10.8-24.6±12.0-14.7±9.23*						-24.4±14.7-23.4±12.1-26.6±9.29-17.6±10.0	-26.5±18.7-23.8±12.3-25.1±10.5-20.3±9.93

与对照组比较*p＜0.05

2、对大鼠急性心肌梗死的保护作用

2.1方法

Wistar大鼠105只，雌雄兼用，体重242～266g，随机分为7组，即：假手术组、梗死模型组、阳性药物组及本发明化合物2.4、4.8mg/kg组，每组15只。本发明化合物各组分别ip给药，假手术组及梗死模型组ip氯化钠注射液，阳性药组ip硝苯地平10mg/kg，注射容量均为2ml/kg，每日1次，连续5日。末次给药后30min时测定大鼠正常心电图，按文献方法制作心肌梗死模型^[1]。在乙醚麻醉下，将大鼠仰位，固定于手术台上，自左侧3～4肋间开胸，暴露心脏，于肺动脉圆锥及左心房间找出冠脉左前降支，用0号线立即结扎之，将心脏送回胸腔，并挤出胸腔内血液和气体，迅速关闭胸腔，整个开胸时间不超过30秒，假手术组不结扎而只置手术线。待结扎冠脉24小时后，用戊巴比妥钠30mg/kg i.p麻醉，测定大鼠II导联心电图。然后，腹主动脉插管取血，测血清天门冬氨酸氨基转换酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)及乳酸脱氢酶(LDH)活性。用LDZ5-2离心机3500转/秒离心血液，取血浆，测定血浆粘度，并测全血低切、中切、高切粘度。迅速取出大鼠心脏，用生理盐水洗去心腔内血液，去除心房和脂肪组织，称重。将心室横切4～5片，置氯化硝基四氮唑蓝(NB-T)磷酸缓冲液中，于37℃恒温水浴染色完全后取出。正常组织染色，缺血组织不染色。切下缺血组织称重，以缺血心肌与心室湿重的百分比计算心肌梗死范围(MIS)。

2.2结果

2.2.1对急性心肌梗死大鼠MIS及血清AST、CPK、LDH活性的影响

与假手术组比较，梗死模型组MIS及AST、血清CPK、LDH活性均明显增加(p＜0.05～0.001)，提示大鼠急性心肌梗死模型建立成功。与梗死模型组相比，本发明化合物两剂量均能明显缩小MIS(p＜0.05或p＜0.01)，明显降低血清CPK、AST及LDH活性(p＜0.05或p＜0.01)，见表9。

表9本发明化合物对急性心肌梗死大鼠MIS及血清AST、CPK、LDH活性的影响(x±s，n＝10)

组别	MIS(％)	AST(u/L)	CPK(u/L)	LDH(u/L)
					假手术组梗死模型组本发明化合物2.4mg/kg4.8mg/kg硝苯地平10mg/kg	1.41±1.2***33.7±6.624.5±6.6**21.6±4.8**13.9±5.8***	737.92±110.78*1069.4±325.45821.96±233.26796.16±137.72*787.17±150.48*	663.79±184.58**1226.8±567.92743.07±207.46*731.44±150.42*582.36±142.05**	1575.55±569.56**2601.33±629.081956.42±717.43*1936.41±377.80*1737.07±580.70**

与梗死模型组比较*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001

2.2.2对急性心肌梗死大鼠全血及血浆粘度的影响

与假手术组比较，梗死对照组全血低切、中切、高切及血浆粘度均明显增加(p＜0.05～0.01)，提示大鼠急性心肌梗死时伴有血液粘度的增高。与梗死模型组相比，本发明化合物两剂量能明显降低全血低切、中切、高切及血浆粘度(p＜0.05～0.01)，其作用与硝苯地平相当，见表10。

表10本发明化合物对急性心肌梗死大鼠全血及血浆粘度的影响(x±s，n＝10)

组别	剂量(mg/kg)	全血粘度			血浆粘度(120/s)
						10/s	60/s	150/s
		假手术组梗死模型组本发明化合物硝苯地平	--2.44.810	12.30±3.03**19.78±5.3715.08±3.68*14.91±3.87*15.38±3.21*					5.30±1.81*7.38±2.065.46±1.06*5.43±0.86*5.85±1.11	4.50±0.78**5.99±1.374.67±0.54*4.58±0.51**4.72±0.44*	1.70±0.33**2.44±0.681.74±0.28**1.76±0.59*1.81±0.30*

与梗死模型组比较*p＜0.05，**p＜0.01

附图说明

图1发明化合物UV光谱图；

图2发明化合物高分辨质谱；

图3发明化合物H-NMR谱图；

图4发明化合物¹³C-NMR谱图；

图5发明化合物DEPT谱图；

图6发明化合物COSY谱图。

Claims (9)

1.木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷，结构式为：

2.木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的提取方法，其特征是抱茎苦荬菜药材加水煎煮两次，第一次1小时，第二次0.5小时，合并煎煮液，浓缩至每1ml相当于原生药0.5g，放冷至40℃以下，在搅拌下加10％氢氧化钙乳调节pH值至10，放置12小时，离心，离心沉淀物称重，悬浮于5.3倍量95％乙醇中，使含醇量达80％，加50％硫酸溶液调节pH值至3～4，充分搅拌使反应完全，离心，上清液加40％氢氧化钠溶液中和pH值至7.0，过滤，滤液回收乙醇，并挥尽乙醇，加0.5倍量醋酸乙酯脱脂两次，水液用0.5倍量水饱和正丁醇提取三次，合并正丁醇提取液，减压回收至干，得到粗黄酮提取物，干法上硅胶柱，以70∶35∶10的氯仿—甲醇—醋酸溶液洗脱，应用TLC法监测，截取第四组分，经甲醇处理，应用250×10mm半制备柱，以17∶83的乙腈-1％冰醋酸溶液为流动相，进行HPLC分离制备，得黄色无定型粉末。

3.木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷在制备治疗心血管疾病、改善微循环、降血脂药物的用途。

4.根据权利要求3所述的用途，其中所述的心血管疾病为急性心肌缺血或急性心肌梗死。

5.木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷在测定抱茎苦荬菜质量控制方法中的用途。

6.根据权利要求5所述的用途，其中测定抱茎苦荬菜

方法为

a)对照品溶液的制备精密称取木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷对照品适量，加水制成每1ml含0.5mg的溶液，即得；必要时超声5分钟；

b)供试品溶液的制备从每批药材中，分不同部位取出20g，碎断，混匀，取5g，精密称定，加水100ml，煮沸1.5小时，过滤，滤液浓缩并定容至50ml量瓶中，摇匀，用0.45μm滤膜过滤即得；

c)色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.4％磷酸溶液(18∶82)为流动相；检测波长为348nm；柱温40℃。理论板数按木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷峰计算应不低于3000；

d)测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品含木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷(C₂₁H₁₇O₁₂)不得低于0.13％。

7.木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷在测定苦碟子制剂质量控制中的用途。

8.根据权利要求7所述的用途，其中所述的苦碟子制剂为苦碟子注射液或冻干粉针剂。

9.根据权利要求7或8所述的用途，其中所述的测定苦碟子制剂质量控制方法为

a)对照品溶液的制备  精密称取木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷对照品适量，加水制成每1ml含0.5mg的溶液，即得；必要时超声5分钟；

b)供试品溶液的制备取本品，作为供试品溶液；

c)色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.4％磷酸溶液(18∶82)为流动相；检测波长为348nm；流速：0.9ml/min；柱温40℃。理论板数按木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷峰计算应不低于3000；

d)测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每1ml含抱茎苦荬菜以木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷(C₂₁H₁₇O₁₂)计，不得少于0.080mg。

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