CN118516257A - 一种降血脂的益生菌组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种降血脂的益生菌组合物及其应用，所述降血脂的益生菌组合物包括瑞士乳杆菌Lactobacillus helveticus LH76菌株和短双歧杆菌Bifidobacterium breve BBr16菌株。本发明创造性地开发了一种全新的益生菌复配方式和一种全新的防治高脂血症的策略，发现LH76菌株和BBr16菌株两者能够相互配合、相互促进、在降低血脂方面的效果上协同增效，具体体现在：能够降低高脂血症患者的总胆固醇和甘油三脂水平；能够降低高脂血症患者的低密度脂蛋白水平、提高高密度脂蛋白的水平；能够降低高脂血症患者的体重增长率和脂肪系数，提高肝系数。
Description
技术领域
本发明属于益生菌技术领域，涉及一种降血脂的益生菌组合物及其应用，具体涉及一种降血脂的益生菌组合物、降血脂的益生菌剂及其在制备预防、改善或治疗高脂血症的产品中的应用。
背景技术
高脂血症是心脑血管疾病的主要风险，其中心肌梗死和脑血栓形成是死亡的主要原因之一。因此，高脂血症已成为公共卫生的一个严重问题。在心血管和脑血管疾病的早期阶段降低胆固醇已被证明对预防疾病发展有效。使用辛瓦斯汀等低脂药物一直是大多数高血脂患者的主要治疗方法。然而，因为他汀类药物导致的副作用，一些患有轻度高脂血症的人在心理上不愿意服用此类药物。因此，寻找此类药物绿色安全的替代品，以最小的副作用减少血脂变得尤为重要。初步研究表明，益生菌可能是值得研究的候选药物之一。
益生菌被广泛用于治疗代谢疾病。研究表明，许多益生菌具有降低胆固醇的特性，其中大多数是乳酸杆菌和双歧杆菌属。例如，副干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌能够通过调节肠道微生物群的组成来缓解高脂肪饮食喂养小鼠的肥胖并发症；植物乳杆菌通过改变肠道微生物群和肝脏转录组的组成来降低血清胆固醇。因此，寻找和开发更多的益生菌干预策略尤其是益生菌联用策略是非常有意义的。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种降血脂的益生菌组合物及其应用，具体提供一种降血脂的益生菌组合物、降血脂的益生菌剂及其在制备预防、改善或治疗高脂血症的产品中的应用。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种降血脂的益生菌组合物，所述降血脂的益生菌组合物包括保藏编号为CGMCC No.18796的瑞士乳杆菌Lactobacillus helveticus LH76菌株和保藏编号为CGMCC No.24471的短双歧杆菌Bifidobacterium breve BBr16菌株。
本发明创造性地开发了一种全新的益生菌复配方式和一种全新的防治高脂血症的策略，即将瑞士乳杆菌Lactobacillus helveticus LH76菌株和短双歧杆菌Bifidobacterium breve BBr16菌株进行复配联用，发现两者能够相互配合、相互促进、在降低血脂方面的效果上协同增效，具体体现在：(1)能够降低高脂血症患者的总胆固醇和甘油三脂水平；(2)能够降低高脂血症患者的低密度脂蛋白水平、提高高密度脂蛋白的水平；(3)能够降低高脂血症患者的体重增长率和脂肪系数，提高肝系数。
在使用菌量一致的情况下，与单一的LH76菌株或单一的BBr16菌株干预方式相比，两种菌的复配在上述效果上显著提高。因此，将该益生菌组合物用于制备预防、改善或治疗高脂血症的产品中具有很好的前景。同时，两种菌均为益生菌，产品的安全性高，且不易产生抗性。
优选地，所述瑞士乳杆菌Lactobacillus helveticus LH76菌株与短双歧杆菌Bifidobacterium breve BBr16菌株的活菌数之比为1:10-10:1，例如1:10、1:9、1:8、1:7、1:6、1:5、1:4、1:3、1:2、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
第二方面，本发明提供一种降血脂的益生菌剂，所述益生菌剂中的菌株包括第一方面所述的益生菌组合物。
优选地，在所述益生菌剂中，活菌总数不低于1×109CFU/mL或1×109CFU/g，例如1×109CFU/g(CFU/mL)、2×109CFU/g(CFU/mL)、5×109CFU/g(CFU/mL)、8×109CFU/g(CFU/mL)、1×1010CFU/g(CFU/mL)、5×1010CFU/g(CFU/mL)、1×1011CFU/g(CFU/mL)、1×1012CFU/g(CFU/mL)、1×1013CFU/g(CFU/mL)等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述益生菌剂的剂型包括溶液剂、冻干粉剂、胶囊剂、片剂或颗粒剂。
优选地，所述益生菌剂的剂型为溶液剂，其由如下的方法制得：
将LH76菌株和BBr16菌株分别接种于培养基中依次进行活化和发酵培养，得到发酵液；发酵液分别离心，用溶剂重悬，得到LH76菌悬液和BBr16菌悬液；将LH76菌悬液和BBr16菌悬液按照活菌数配比进行混合，得到所述益生菌剂。
优选地，所述益生菌剂的剂型为冻干粉剂，其由如下的方法制得：
将LH76菌株和BBr16菌株分别接种于培养基中依次进行活化和发酵培养，得到发酵液；发酵液分别离心，与保护剂混合后进行冷冻干燥，得到LH76菌粉和BBr16菌粉；将LH76菌粉和BBr16菌粉按照活菌数配比进行混合，得到所述益生菌剂。
优选地，所述保护剂选自脱脂乳、明胶、糊精、阿拉伯胶、右旋糖酐、藻胶钠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、乳糖、海藻糖、山梨醇或木糖醇中的任意一种或至少两种的组合。
第三方面，本发明提供第一方面所述的益生菌组合物或第二方面所述的益生菌剂在制备预防、改善或治疗高脂血症的产品中的应用。
优选地，所述产品中还包括辅料，所述辅料选自填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、乳化剂、助溶剂、增溶剂、渗透压调节剂、着色剂、pH调节剂、抗氧剂、抑菌剂或缓冲剂中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述产品中还包括功能助剂，所述功能助剂选自低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、低聚异麦芽糖、大豆低聚糖、菊粉、螺旋藻、节旋藻、云芝多糖、水苏糖、聚葡萄糖、α-乳清蛋白或乳铁蛋白中的任意一种或至少两种的组合。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
本发明创造性地开发了一种全新的益生菌复配方式和一种全新的防治高脂血症的策略，即将瑞士乳杆菌Lactobacillus helveticus LH76菌株和短双歧杆菌Bifidobacterium breve BBr16菌株进行复配联用，发现两者能够相互配合、相互促进、在降低血脂方面的效果上协同增效，具体体现在：(1)能够降低高脂血症患者的总胆固醇和甘油三脂水平；(2)能够降低高脂血症患者的低密度脂蛋白水平、提高高密度脂蛋白的水平；(3)能够降低高脂血症患者的体重增长率和脂肪系数，提高肝系数。
在使用菌量一致的情况下，与单一的LH76菌株或单一的BBr16菌株干预方式相比，两种菌的复配在上述效果上显著提高。因此，将该益生菌组合物用于制备预防、改善或治疗高脂血症的产品中具有很好的前景。同时，两种菌均为益生菌，产品的安全性高，且不易产生抗性。
本发明所涉及的LH76菌株的分类命名为瑞士乳杆菌Lactobacillus helveticus，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2019年11月04日，保藏编号为CGMCC No.18796，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
本发明所涉及的BBr16菌株的分类命名为短双歧杆菌Bifidobacterium breve，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2022年03月07日，保藏编号为CGMCC No.24471，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
附图说明
图1是各组小鼠的血清总胆固醇水平统计结果图；
图2是各组小鼠的血清甘油三脂水平统计结果图；
图3是各组小鼠的血清低密度脂蛋白水平统计结果图；
图4是各组小鼠的血清高密度脂蛋白水平统计结果图；
图5是各组小鼠的体重增长率统计结果图；
图6是各组小鼠的脂肪系数统计结果图；
图7是各组小鼠的肝系数统计结果图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
下述实施例中涉及的培养基如下：
MRS培养基(g/L)：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、葡萄糖15g/L、乳糖15g/L、酵母粉5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、K2PO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O 0.1g/L、MnSO4 0.05g/L、吐温80 1mL/L、半胱氨酸氨酸盐0.5g/L。
下述实施例所涉及的LH76菌株的分类命名为瑞士乳杆菌Lactobacillushelveticus，保藏时间为2019年11月04日，保藏编号为CGMCC No.18796。
下述实施例所涉及的BBr16菌株的分类命名为短双歧杆菌Bifidobacteriumbreve，保藏时间为2022年03月07日，保藏编号为CGMCC No.24471。
下述实施例中涉及的菌悬液：将所需菌株接种于MRS液体培养基中，37℃下培养24h进行活化，得到活化液；将活化液按3％(v/v)的接种量接种于MRS液体培养基中，37℃下培养24h，得到菌液；将菌液在6000g下离心6min，使用PBS重悬菌体，即得。
实施例
本实施例探究益生菌组合物对高脂模型小鼠症状的改善能力：
(1)试验动物：雄性ICR小鼠(4周龄)(70只，从上海实验动物中心采购)，这些小鼠在受控环境下饲养，室温维持在22±2℃，湿度为55％±5％，遵循12h光/暗循环，可以随意进食和饮水。所有涉及小鼠的实验程序均符合上海实验动物护理与动物实验中心规定的动物护理和使用伦理指南。
(2)动物分组：按上述小鼠适应性喂养1周后，将70只小鼠随机分为7组(每组10只)：空白对照组、高脂模型组、LH76组(LH76)、BBr16组(BBr16)、市售短双歧杆菌组(ATCC15700)、复合菌组1(LH76+BBr16，活菌数比为1:1)、复合菌组2(LH76+ATCC15700组，活菌数比为1:1)。
(3)动物建模及干预方法：
空白对照组饲喂普通饲料+正常纯化水，高脂模型组饲喂含有60％脂肪的高脂饲料+正常纯化水，各益生菌干预组饲喂含有60％脂肪的高脂饲料+各组益生菌菌液(各组给菌总量均为109CFU/天/只)，连续饲喂4周。
(4)指标分析：
(4.1)对总胆固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白水平的影响：
干预结束后，将小鼠处死，眼球采血，离心1200×g 10min后，提取血清，存放在-80℃中。使用酶联免疫吸附测定试剂盒检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)的水平。
结果如图1-图4所示，由图可知，与空白对照组相比，高脂模型组小鼠的总胆固醇水平和甘油三脂水平明显升高，益生菌干预后，能够发生不同程度的逆转效果，且复合菌组1的逆转效果更好，能够明显降低高脂模型组小鼠的总胆固醇水平和甘油三脂水平。
与空白对照组相比，高脂模型组小鼠的低密度脂蛋白水平明显升高，高密度脂蛋白水平明显降低，益生菌干预后，能够发生不同程度的逆转效果，且复合菌组1的逆转效果更好，能够使低密度脂蛋白和高密度脂蛋白水平更加接近正常水平。说明本发明所涉及的益生菌组合物具有很好地降低血脂的效果。
(4.2)对体重增长率、肝系数和脂肪系数的影响：
干预结束后，称量各组小鼠的体重，计算小鼠的体重增长率(％)，处死后解剖内脏，摘取肝脏和腹脂，分别称重，计算小鼠的肝系数和脂肪系数。其中，肝系数(％)＝肝脏重量/体重×100％，脂肪系数(％)＝腹脂/体重×100％。
结果如图5-图7所示，由图可知，与空白对照组相比，高脂模型组小鼠的体重增长率和脂肪系数明显升高，益生菌干预后，能够发生不同程度的逆转效果，且复合菌组1的逆转效果更好，能够明显降低高脂模型组小鼠的体重增长率和脂肪系数。
与空白对照组相比，高脂模型组小鼠的肝系数明显降低，益生菌干预后，能够发生不同程度的逆转效果，且复合菌组1的逆转效果更好，能够明显提升高脂模型组小鼠的肝系数。说明本发明所涉及的益生菌组合物具有很好地改善高脂血症的效果。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的技术方案，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
Claims (10)
1.一种降血脂的益生菌组合物，其特征在于，所述降血脂的益生菌组合物包括保藏编号为CGMCC No.18796的瑞士乳杆菌Lactobacillus helveticus LH76菌株和保藏编号为CGMCC No.24471的短双歧杆菌Bifidobacterium breve BBr16菌株。
2.根据权利要求1所述的降血脂的益生菌组合物，其特征在于，所述瑞士乳杆菌Lactobacillus helveticus LH76菌株与短双歧杆菌Bifidobacterium breve BBr16菌株的活菌数之比为1:10-10:1。
3.一种降血脂的益生菌剂，其特征在于，所述益生菌剂中的菌株包括权利要求1或2所述的益生菌组合物。
4.根据权利要求3所述的益生菌剂，其特征在于，在所述益生菌剂中，活菌总数不低于1×109CFU/mL或1×109CFU/g。
5.根据权利要求3所述的益生菌剂，其特征在于，所述益生菌剂的剂型包括溶液剂、冻干粉剂、胶囊剂、片剂或颗粒剂。
6.根据权利要求5所述的益生菌剂，其特征在于，所述益生菌剂的剂型为溶液剂，其由如下的方法制得：
将LH76菌株和BBr16菌株分别接种于培养基中依次进行活化和发酵培养，得到发酵液；发酵液分别离心，用溶剂重悬，得到LH76菌悬液和BBr16菌悬液；将LH76菌悬液和BBr16菌悬液按照活菌数配比进行混合，得到所述益生菌剂；
优选地，所述益生菌剂的剂型为冻干粉剂，其由如下的方法制得：
将LH76菌株和BBr16菌株分别接种于培养基中依次进行活化和发酵培养，得到发酵液；发酵液分别离心，与保护剂混合后进行冷冻干燥，得到LH76菌粉和BBr16菌粉；将LH76菌粉和BBr16菌粉按照活菌数配比进行混合，得到所述益生菌剂。
7.根据权利要求6所述的益生菌剂，其特征在于，所述保护剂选自脱脂乳、明胶、糊精、阿拉伯胶、右旋糖酐、藻胶钠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、乳糖、海藻糖、山梨醇或木糖醇中的任意一种或至少两种的组合。
8.权利要求1或2所述的益生菌组合物或权利要求3-7中任一项所述的益生菌剂在制备预防、改善或治疗高脂血症的产品中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述产品中还包括辅料，所述辅料选自填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、乳化剂、助溶剂、增溶剂、渗透压调节剂、着色剂、pH调节剂、抗氧剂、抑菌剂或缓冲剂中的任意一种或至少两种的组合。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述产品中还包括功能助剂，所述功能助剂选自低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、低聚异麦芽糖、大豆低聚糖、菊粉、螺旋藻、节旋藻、云芝多糖、水苏糖、聚葡萄糖、α-乳清蛋白或乳铁蛋白中的任意一种或至少两种的组合。
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