CN118373911A - 抗白介素11抗体及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及抗白介素11抗体及其应用。具体地，本发明涉及特异性结合IL‑11的新型抗体或其抗原结合片段以及含有所述抗体或其抗原结合片段的组合物。此外，本发明涉及编码所述抗体或其抗原结合片段的核酸、包含所述多核苷酸的载体、包含所述核酸或载体的宿主细胞、包含所述抗体或其抗原结合片段的免疫缀合物和药物组合物。此外，本发明涉及这些抗体或其抗原结合片段在疾病的免疫治疗、预防和/或诊断上的应用。

Description

抗白介素11抗体及其应用
技术领域
本发明总体上涉及免疫学和抗体工程领域。具体而言，本发明涉及特异性结合IL-11的新型抗体或其抗原结合片段以及含有所述抗体或其抗原结合片段的组合物。此外，本发明涉及编码所述抗体或其抗原结合片段的核酸、包含所述多核苷酸的载体、包含所述核酸或载体的宿主细胞、包含所述抗体或其抗原结合片段的免疫缀合物和药物组合物。此外，本发明涉及这些抗体或其抗原结合片段在疾病的免疫治疗、预防和/或诊断上的应用。
背景技术
纤维化是慢性进展和不可逆的病理过程，可以发生在多种器官并最终造成器官衰竭，在发达国家45％的死亡与纤维化相关。纤维化通常伴随组织损伤后的修复，如在慢性炎症病理过程中，产生过多的细胞外基质包括胶原，纤维蛋白原等等。目前针对纤维化的有效预防和治疗药物非常有限，找到病理过程中的关键通路将为治疗提供有效治疗。多种细胞和分子通路参与纤维化病理过程，其中一些通路为多种器官所共有，例如TGF-β等，靶向这些通路的治疗将有希望扩展到多种器官纤维化。
IL-11是IL-6家族的成员之一，该家族成员需要通过共同的辅助受体GP130介导下游信号传导，因而又被称为GP130家族。
IL-11在正常组织很少表达，通常由基质细胞分泌，包括滑膜细胞、成纤维细胞、上皮细胞以及嗜酸性粒细胞等。此外，TGF-β、FGF、PDGF、CTGF和IL-13等促纤维化的因子均可诱导IL-11的产生。
IL-11信号通路包括经典信号通路、反式信号通路和集群信号通路。经典信号通路，也称为顺式信号通路，其中IL-11可与同一细胞表面的IL-11Rα和GP130形成异源三聚体，两个三聚体相互作用形成六聚体，进而介导下游的信号传导。
在反式信号通路中，膜表面的IL-11Rα可以被一些蛋白酶切割成为可溶性受体。IL-11可与可溶性IL-11Rα结合，形成异源二聚体，二聚体再与细胞表面的GP130以2:2的形式结合，产生六聚体而介导信号传导。
在集群信号通路中，表达有IL-11Rα的细胞可以与IL-11结合，这些细胞被称为递质细胞(transmitter cell))，然后，这些递质细胞可与附件表达有GP130的细胞(称为接收细胞)相互作用，以诱导IL-11介导的信号传导。
六聚体复合物通过激活附着于GP130胞内段的JAK及其下游的STAT3进行信号传导，另外其他信号通路如ERK和PI3K也有报导。
IL-11与其他细胞因子(如IL-3、SCF、GM-CSF、EPO)协同，可以促进造血干细胞、血小板的生成，因此临床上重组人IL-11被开发为治疗血小板减少症，出血性紫癜等疾病的药物。有报道称IL-11还可作用于破骨细胞，促进骨的再吸收和生成。此外，动物实验研究表明IL-11在胚胎着床过程中也发挥重要作用。
近年来，越来越多的研究表明IL-11在机体纤维化和急性炎症过程中发挥着举足轻重的作用。
在体外实验中，IL-11在TGF-β诱导后在多种成纤维细胞中表达，其他已知的促纤维化因子如PDGF、CTGF、bFGF、IL-13也可以诱导IL-11的蛋白和mRNA水平。IL-11受体也同时表达在成纤维细胞，通过自分泌激活的形式促进肌成纤维细胞生长及其运动，收缩，侵袭，产生细胞外基质等等重要功能。在多种动物模型中，IL-11过表达小鼠和重组IL-11诱发包括心、肾、肺、皮肤等在内的纤维化，而敲除IL-11或其特异性受体IL-11Rα可以起到减缓组织纤维化的病理进程，并改善器官功能的效果。
IL-11在多种纤维化相关疾病中高表达。在肺相关纤维化疾病中，IL-11在SSc-ILD和IPF肺成纤维细胞中、HPS-相关间质性肺炎(HPS-associated interstitial pneumonia，HPSIP)来源的肺上皮细胞和成纤维细胞中的表达显著升高(J Clin Invest.1996；98(12):2845-53)；Cell Rep.2019,27(12):3709-3723.e5)。在溃疡性结肠炎和克罗恩氏病的scRNAseq研究中，IL-11在肠道成纤维细胞中高表达并且特异性地表达在一群炎症相关成纤维细胞中，并且与anti-TNFα治疗抵抗相关(Cell.2019,178(3):714-730.e22；Cell.2019,178(6):1493-1508.e20)。在增生性疤痕和SSc病理皮肤，IL-11的表达也显著上升(J Invest Dermatol.2022,142(4):1065-1076.e19)。另外，IL-11在慢性心衰中升高，15％的病人在接受rhIL-11药物Neumega治疗后引起房颤。
综上所述，目前的证据显示，纤维化相关疾病存在以下两种途径：以先天免疫为主由多种炎症因子如IL-1、IL-6、TNF-α协同TGF-β引发的纤维化是一种重要途径，另外还存在由以2型免疫反应的细胞因子如TSLP、IL-5、IL-25等不依赖TGF-β为主的促发纤维化的途径，而IL-11可以被以上多种细胞因子激活，是众多促纤维化因子下游信号通路的枢纽。因而，抑制IL-11及其引起的下游信号通路有潜力成为新型抗纤维化治疗。
在专利申请CN112399856A中公开了IL-11介导的信号传导的拮抗剂在治疗纤维化疾病中的用途；CN114364693A公开了抑制白介素11(IL-11)介导的信号传导的试剂在治疗或预防代谢性疾病中的用途；CN113677706A公开了抑制白细胞介素11(IL-11)介导的信号传导在治疗和预防肝毒性中的用途；CN113748131A公开了抑制白介素11(IL-11)介导的信号传导在治疗和预防肾损伤中的用途。
发明内容
本发明人提供了具有良好的结合亲和力和阻断IL-11信号的能力的抗IL-11抗体，并且证实了本发明的抗体能够在体外抑制成纤维细胞功能相关的α-SMA和胶原蛋白产生，并且在体内实验中能够良好地预防和治疗以纤维化为特征的相关疾病。
因而，在一个方面，本发明提供一种抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其包含：
i)如SEQ ID NO:25、65-67、101-102和104中任一项所示的重链可变区的3个互补决定区HCDR，以及如SEQ ID NO:26、68-70、103和105所示的轻链可变区的3个互补决定区LCDR，或者
ii)如SEQ ID NO:27、44、46、48、50、52、54、56、58和59中任一项所示的重链可变区的3个互补决定区HCDR，以及如SEQ ID NO:28、45、47、49、51、53、55、57和60中任一项所示的轻链可变区的3个互补决定区LCDR，或者
iii)如SEQ ID NO:29、61、62和99-100中任一项所示的重链可变区的3个互补决定区HCDR，以及如SEQ ID NO:30、63和64中任一项所示的轻链可变区的3个互补决定区LCDR，或者
iv)如SEQ ID NO:31、36-39和135中任一项所示的重链可变区的3个互补决定区HCDR，以及如SEQ ID NO:32、40-43和136-137中任一项所示的轻链可变区的3个互补决定区LCDR。
在具体的实施方案中，提供了一种抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区，其中：
i)所述重链可变区包含与SEQ ID NO：1、2和3相比，包含不超过5、4、3、2或1个氨基酸改变(优选氨基酸置换，优选保守置换)的HCDR1、HCDR2和HCDR3，或者
ii)所述重链可变区包含与SEQ ID NO：7、8和9相比，包含不超过5、4、3、2或1个氨基酸改变(优选氨基酸置换，优选保守置换)的HCDR1、HCDR2和HCDR3，或者
iii)所述重链可变区包含与SEQ ID NO：13、14和15相比，包含不超过5、4、3、2或1个氨基酸改变(优选氨基酸置换，优选保守置换)的HCDR1、HCDR2和HCDR3，或者
iv)所述重链可变区包含与SEQ ID NO：19、20和21相比，包含不超过5、4、3、2或1个氨基酸改变(优选氨基酸置换，优选保守置换)的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
在具体的实施方案中，提供了一种抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区，其中：
i-1)所述重链可变区包含SEQ ID NO：111、112和113所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或者
i-2)所述重链可变区包含SEQ ID NO：106、107和108所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或者，
i-3)所述重链可变区包含SEQ ID NO：106、107和108所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或者，
i-4)所述重链可变区包含SEQ ID NO：1、2和3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，或者
ii-1)所述重链可变区包含SEQ ID NO：7、8和9所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，或者
ii-2)所述重链可变区包含SEQ ID NO：93、94和95所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，或者
ii-3)所述重链可变区包含SEQ ID NO：120、94和122所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，或者
ii-4)所述重链可变区包含SEQ ID NO：120、94和95所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，或者，
ii-5)所述重链可变区包含SEQ ID NO：120、121和95所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，或者，
ii-6)所述重链可变区包含SEQ ID NO：129、121和131所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，或者，
ii-7)所述重链可变区包含SEQ ID NO：130、8和9所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，或者，
ii-8)所述重链可变区包含SEQ ID NO：7、133和122所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，或者，
ii-9)所述重链可变区包含SEQ ID NO：130、134和122所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，或者，
iii)所述重链可变区包含SEQ ID NO：13和14所示的HCDR1和HCDR2、和SEQ ID NO：15、73或74所示的HCDR3，或者
iv-1)所述重链可变区包含SEQ ID NO：19和21所示的HCDR1和HCDR3，和SEQ IDNO：20或71所示的HCDR2，或者，
iv-2)所述重链可变区包含SEQ ID NO：19或116所示的HCDR1，SEQ ID NO：20或117所示的HCDR2，和SEQ ID NO：21所示的HCDR3。
在具体的实施方案中，提供了一种抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变区，其中：
i)所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：4、5和6相比，包含不超过5、4、3、2或1个氨基酸改变(优选氨基酸置换，优选保守置换)的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii)所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：10、11和12相比，包含不超过5、4、3、2或1个氨基酸改变(优选氨基酸置换，优选保守置换)的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
iii)所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：16、17和18相比，包含不超过5、4、3、2或1个氨基酸改变(优选氨基酸置换，优选保守置换)的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
iv)所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：22、23和24相比，包含不超过5、4、3、2或1个氨基酸改变(优选氨基酸置换，优选保守置换)的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在具体的实施方案中，提供了一种抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变区，其中：
i)所述轻链可变区包含SEQ ID NO：114、115和6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
i-2)所述轻链可变区包含SEQ ID NO：4、5和6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
i-3)所述轻链可变区包含SEQ ID NO：109、110和6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-1)所述轻链可变区包含SEQ ID NO：10、11和12所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-2)所述轻链可变区包含SEQ ID NO：96、97和98所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-3)所述轻链可变区包含SEQ ID NO：123、125和127所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-4)所述轻链可变区包含SEQ ID NO：96、11和98所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-5)所述轻链可变区包含SEQ ID NO：124、126和128所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-6)所述轻链可变区包含SEQ ID NO：10、132和127所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-7)所述轻链可变区包含SEQ ID NO：96、97和12所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-8)所述轻链可变区包含SEQ ID NO：96、11和12所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
iii)所述轻链可变区包含SEQ ID NO：16、17和18所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
iv-1)所述轻链可变区包含SEQ ID NO：22和24所示的LCDR1和LCDR3，和SEQ IDNO：23或72所示的LCDR2，或者
iv-2)所述轻链可变区包含SEQ ID NO：22、118或119所示的LCDR1，和SEQ ID NO：23和24所示的LCDR2和LCDR3。
在具体的实施方案中，提供了一种抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：
i)所述重链可变区包含与SEQ ID NO：1、2和3相比，包含不超过5、4、3、2或1个氨基酸改变(优选氨基酸置换，优选保守置换)的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：4、5和6相比，包含不超过5、4、3、2或1个氨基酸改变(优选氨基酸置换，优选保守置换)的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii)所述重链可变区包含与SEQ ID NO：7、8和9相比，包含不超过5、4、3、2或1个氨基酸改变(优选氨基酸置换，优选保守置换)的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：10、11和12相比，包含不超过5、4、3、2或1个氨基酸改变(优选氨基酸置换，优选保守置换)的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
iii)所述重链可变区包含与SEQ ID NO：13、14和15相比，包含不超过5、4、3、2或1个氨基酸改变(优选氨基酸置换，优选保守置换)的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：16、17和18相比，包含不超过5、4、3、2或1个氨基酸改变(优选氨基酸置换，优选保守置换)的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
iv)所述重链可变区包含与SEQ ID NO：19、20和21相比，包含不超过5、4、3、2或1个氨基酸改变(优选氨基酸置换，优选保守置换)的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：22、23和24相比，包含不超过5、4、3、2或1个氨基酸改变(优选氨基酸置换，优选保守置换)的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在具体的实施方案中，提供了一种抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：
i-1)所述重链可变区包含SEQ ID NO：111、112和113所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：114、115和6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
i-2)所述重链可变区包含SEQ ID NO：106、107和108所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：4、5和6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
i-3)所述重链可变区包含SEQ ID NO：106、107和108所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：109、110和6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
i-4)所述重链可变区包含SEQ ID NO：1、2和3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：4、5和6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-1)所述重链可变区包含SEQ ID NO：7、8和9所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：10、11和12所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-2)所述重链可变区包含SEQ ID NO：93、94和95所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：96、97和98所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-3)所述重链可变区包含SEQ ID NO：120、94和122所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：123、125和127所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-4)所述重链可变区包含SEQ ID NO：120、94和95所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：96、11和98所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-5)所述重链可变区包含SEQ ID NO：120、121和95所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：124、126和128所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-6)所述重链可变区包含SEQ ID NO：129、121和131所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：10、132和127所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-7)所述重链可变区包含SEQ ID NO：130、8和9所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：96、97和12所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-8)所述重链可变区包含SEQ ID NO：7、133和122所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：96、11和12所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-9)所述重链可变区包含SEQ ID NO：130、134和122所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：10、11和12所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
iii)所述重链可变区包含SEQ ID NO：13和14所示的HCDR1和HCDR2、和SEQ ID NO：15、73或74所示的HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：16、17和18所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
iv-1)所述重链可变区包含SEQ ID NO：19和21所示的HCDR1和HCDR3，和SEQ IDNO：20或71所示的HCDR2，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：22和24所示的LCDR1和LCDR3，和SEQ ID NO：23或72所示的LCDR2，或者
iv-2)所述重链可变区包含SEQ ID NO：19或116所示的HCDR1，SEQ ID NO：20或117所示的HCDR2，和SEQ ID NO：21所示的HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：22、118或119所示的LCDR1，和SEQ ID NO：23和24所示的LCDR2和LCDR3。
在一些实施方案中，前述CDR序列根据CCG编号系统定义。在一些实施方案中，所述CDR还可以由其他编号系统定义，例如，根据IMGT、Chothia、AbM或Contact编号系统定义。
在具体的实施方案中，本发明的抗IL-11抗体或其抗原结合片段具有至少一种以下的活性：
1)以高亲和力阻断或增强IL-11与IL-11Rα的结合，
2)阻断IL-11介导的细胞增殖，
3)以高亲和力阻断hyper IL-11与GP130的结合，
4)阻断IL-11或hyper IL-11介导的细胞增殖和ERK磷酸化，和
5)抑制或防止细胞纤维化。
在具体的实施方案中，本发明的抗IL-11抗体为鼠源抗体。在具体的实施方案中，所述抗IL-11抗体进一步包含鼠源κ、λ链或其变体的轻链框架区(FR区)或轻链恒定区。在一些实施方案中，所述抗IL-11抗体进一步包含鼠源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体的重链框架区(FR区)或重链恒定区。
在具体的实施方案中，提供了一种抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其：
1)包含与SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
2)包含与SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
3)包含与SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；或者
4)包含与SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL。
在具体的实施方案中，提供了一种抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其：
1)包含SEQ ID NO:25所示的重链可变区VH，和SEQ ID NO:26所示的轻链可变区VL；
2)包含SEQ ID NO:27所示的重链可变区VH，和SEQ ID NO:28所示的轻链可变区VL；
3)包含SEQ ID NO:29所示的重链可变区VH，和SEQ ID NO:30所示的轻链可变区VL；或者
4)包含SEQ ID NO:31所示的重链可变区VH，和SEQ ID NO:32所示的轻链可变区VL。
在具体的实施方案中，本发明的抗IL-11抗体或其抗原结合片段进一步包含鼠源κ、λ链或其变体的轻链框架区(FR区)或轻链恒定区。在一些实施方案中，所述抗IL-11抗体进一步包含鼠源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体的重链框架区(FR区)或重链恒定区。
在具体的实施方案中，所述抗IL-11抗体为嵌合抗体。在具体实施方案中，所述抗IL-11抗体包含鼠源抗体的重链可变区和人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链恒定区。在具体的实施方案中，所述抗IL-11抗体包含鼠源抗体的重链可变区和人源IgG1重链恒定区。在具体的实施方案中，所述抗IL-11抗体包含鼠源抗体的轻链可变区和人源κ或λ链或其变体的轻链恒定区。在具体的实施方案中，所述抗IL-11抗体包含鼠源抗体的轻链可变区和人源κ链的轻链恒定区。
在具体的实施方案中，本发明的抗IL-11抗体进一步包含如SEQ ID NO：33或34所示的重链恒定区。在具体的实施方案中，本发明的抗IL-11抗体进一步包含如SEQ ID NO：35所示的轻链恒定区。在具体的实施方案中，本发明的抗IL-11抗体进一步包含如SEQ ID NO：33或34所示的重链恒定区和如SEQ ID NO：35所示的轻链恒定区。
在具体的实施方案中，所述抗IL-11抗体为人源化抗体。在具体的实施方案中，所述抗IL-11抗体包含鼠源的HCDR1、HCDR2和HCDR3区以及来源于人重链模板IGHV1-3*01、人重链模板IGHV1-46、人重链模板IGHV3-7*01或人重链模板IGHV7-4-1*02的框架区。在具体的实施方案中，所述抗IL-11抗体还包含去除潜在脱酰胺化位点的突变。在具体的实施方案中，所述抗IL-11抗体还包含将HCDR3上的氨基酸“DG”突变为“DA”或“EG”。在具体的实施方案中，所述抗IL-11抗体还包含将HCDR2上的氨基酸“DG”突变为“DA”或“EG”。
在具体的实施方案中，所述抗IL-11抗体为人源化抗体。在具体的实施方案中，所述抗IL-11抗体包含鼠源的LCDR1、LCDR2和LCDR3区以及来源于人源轻链模板IGKV1-16*01、人源轻链模板IGKV3-15、人源轻链模板IGKV1-17*02、人源轻链模板IGKV1-33*01或IGKV4-1*01的框架区。在具体的实施方案中，所述抗IL-11抗体还包含将LCDR2上的氨基酸“DG”突变为“DA”或“EG”。
在具体的实施方案中，提供了一种抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其：
5)包含与SEQ ID NO:36-39和135中任一项所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:40-43和136-137中任一项所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
6)包含与SEQ ID NO:44、46、48、50、52、54、56、58和59中任一项所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:45、47、49、51、53、55、57和60中任一项所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
7)包含与SEQ ID NO:61、62和99-100所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:63或64所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；或者
8)包含与SEQ ID NO:65-67中任一项所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:68-70中任一项所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL。
9)包含与SEQ ID NO:101-102和104中任一项所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:70、103和105中任一项所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL。
在具体的实施方案中，提供了一种抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其：
10)包含与SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:40所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
11)包含与SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:40所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
12)包含与SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:41所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
13)包含与SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:42所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
14)包含与SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:43所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
15)包含与SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:43所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
16)包含与SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:43所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
17)包含与SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:45所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
18)包含与SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:47所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
19)包含与SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:49所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
20)包含与SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:51所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
21)包含与SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:53所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
22)包含与SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:55所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
23)包含与SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:57所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
24)包含与SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:53所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
25)包含与SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:60所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
26)包含与SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:63所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
27)包含与SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:64所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
28)包含与SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:63所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
29)包含与SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:64所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
30)包含与SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:68所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
31)包含与SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:69所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
32)包含与SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:70所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
33)包含与SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:68所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
34)包含与SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:69所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
35)包含与SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:70所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
36)包含与SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:68所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
37)包含与SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:69所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
38)包含与SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:70所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
39)包含与SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:70所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
40)包含与SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:103所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
41)包含与SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:105所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
42)包含与SEQ ID NO:135所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:136所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
43)包含与SEQ ID NO:135所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:137所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
44)包含与SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:63所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；或者
45)包含与SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:63所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL。
在具体的实施方案中，提供了一种抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其：
5)包含SEQ ID NO:36-39和135中任一项所示的重链可变区VH，和SEQ ID NO:40-43和136-137中任一项所示的轻链可变区VL；
6)包含SEQ ID NO:44、46、48、50、52、54、56、58和59中任一项所示的重链可变区VH，和SEQ ID NO:45、47、49、51、53、55、57和60中任一项所示的轻链可变区VL；
7)包含SEQ ID NO:61、62和99-100中任一项所示的重链可变区VH，和SEQ ID NO:30、63或64所示的轻链可变区VL；或者
8)包含SEQ ID NO:65-67、101-102和104中任一项所示的重链可变区VH，和SEQ IDNO:68-70、103和105中任一项所示的轻链可变区VL。
在具体的实施方案中，提供了一种抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其：
10)包含与SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:40所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
11)包含与SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:40所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
12)包含与SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:41所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
13)包含与SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:42所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
14)包含与SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:43所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
15)包含与SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:43所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
16)包含与SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:43所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
17)包含与SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:45所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
18)包含与SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:47所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
19)包含与SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:49所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
20)包含与SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:51所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
21)包含与SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:53所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
22)包含与SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:55所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
23)包含与SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:57所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
24)包含与SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:53所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
25)包含与SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:60所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
26)包含与SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:63所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
27)包含与SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:64所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
28)包含与SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:63所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
29)包含与SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:64所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
30)包含与SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:68所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
31)包含与SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:69所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
32)包含与SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:70所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
33)包含与SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:68所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
34)包含与SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:69所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
35)包含与SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:70所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
36)包含与SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:68所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
37)包含与SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:69所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
38)包含与SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:70所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
39)包含与SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:70所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
40)包含与SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:103所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
41)包含与SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:105所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
42)包含与SEQ ID NO:135所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:136所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
43)包含与SEQ ID NO:135所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:137所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；
44)包含与SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:63所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；或者
45)包含与SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ IDNO:63所示的氨基酸序列的轻链可变区VL。
在具体的实施方案中，本发明的抗IL-11抗体进一步包含如SEQ ID NO：33或34所示的重链恒定区。在具体的实施方案中，本发明的抗IL-11抗体进一步包含如SEQ ID NO：35所示的轻链恒定区。在具体的实施方案中，本发明的抗IL-11抗体进一步包含如SEQ ID NO：33或34所示的重链恒定区和如SEQ ID NO：35所示的轻链恒定区。
在具体的实施方案中，提供了一种抗IL-11抗体或其抗原结合片段，包含：
如SEQ ID NO：75所示的重链，和/或如SEQ ID NO：76所示的轻链；
如SEQ ID NO：75所示的重链，和/或如SEQ ID NO：77所示的轻链；
如SEQ ID NO：78所示的重链，和/或如SEQ ID NO：77所示的轻链；
如SEQ ID NO：79所示的重链，和/或如SEQ ID NO：80所示的轻链；
如SEQ ID NO：81所示的重链，和/或如SEQ ID NO：82所示的轻链；
如SEQ ID NO：83所示的重链，和/或如SEQ ID NO：84所示的轻链；
如SEQ ID NO：85所示的重链，和/或如SEQ ID NO：86所示的轻链；
如SEQ ID NO：87所示的重链，和/或如SEQ ID NO：88所示的轻链；
如SEQ ID NO：89所示的重链，和/或如SEQ ID NO：90所示的轻链；或，
如SEQ ID NO：91所示的重链，和/或如SEQ ID NO：92所示的轻链。
在具体的实施方案中，本发明提供了抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗原结合片段为Fab、Fv、sFv、F(ab’)2、线性抗体、单链抗体、纳米抗体、结构域抗体和多特异性抗体。
在具体的实施方案中，本发明提供了分离的核酸，其编码本发明的抗IL-11抗体或其抗原结合片段。
在具体的实施方案中，本发明提供了包含所述核酸的载体。
在具体的实施方案中，本发明提供了包含所述核酸或所述载体的宿主细胞。
在具体实施方案中，所述宿主细胞为原核细胞或真核细胞。在具体的实施方案中，所述宿主细胞不能发展为个体。在具体的实施方案中，所述细胞包括但不限于细菌、真菌、病毒、酵母菌、哺乳动物细胞，具体为大肠杆菌、毕赤酵母、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或人胚肾(HEK)293细胞。
在具体的实施方案中，本发明提供了抗体-药物偶联物，其包含本发明的抗IL-11抗体或其抗原结合片段。所述的抗体-药物偶联物是本领域公知的，其由抗体-接头-药物相互连接形成，已知的接头包括裂解接头、分裂解接头，例如接头包括但不限于SMCC、SPDP等等。药物也是本领域公知的，例如DM1、DM4、MMAE、MMAF等。
在具体的实施方案中，本发明提供了药物组合物，其含有如上所述的抗IL-11抗体或其抗原结合片段，以及药学上的赋形剂、稀释或载体。
在另一方面，本发明提供了包含本发明的抗IL-11抗体或其抗原结合片段的多特异性抗体，包括但不局限于，双特异性抗体、三特异性抗体。
在一些具体实施方式中，所述药物组合物单位剂量中可含有0.01至99重量％的抗IL-11抗体或其片段，或药物组合物单位剂量中含抗IL-11抗体或其片段的量为0.1-2000mg，在一些具体实施方式中为1-1000mg。
在具体实施方案中，本发明提供了制备本发明抗IL-11抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括在适于表达编码本发明所述的核酸的条件下培养本发明所述的宿主细胞。
在具体实施方案中，本发明进一步提供一种生产抗IL-11抗体或其抗原结合片段的方法，包括步骤：
a)培养本发明所述的宿主细胞；
b)从培养物中分离抗体或其抗原结合片段；以及，
c)对步骤b)中的抗体或其抗原结合片段进行纯化。
在另一个实施方案中，本发明提供了由上述方法制备的抗IL-11抗体及其抗原结合片段。
在具体的实施方案中，本发明提供了根据本发明的抗IL-11抗体及其抗原结合片段或包含所述抗IL-11抗体及其抗原结合片段的药物组合物在制备用于治疗疾病或病症的药物中的用途，其中所述疾病或病症是IL-11介导的疾病或病症，优选地，所述疾病或病症是以纤维化为特征的疾病或肿瘤及骨质疏松等。
在具体的实施方案中，所述以纤维化为特征的疾病/病状包括但不限于：眼病、例如格雷夫氏眼病、视网膜上纤维化、视网膜纤维化、特发性黄斑前纤维化、视网膜下纤维化(例如与视网膜脱离或黄斑变性相关，例如湿性老年黄斑变性(AMD))、脉络膜新生血管形成(CNV)、糖尿病性视网膜病变、青光眼、地图样萎缩(老年性黄斑变性(AMD))、角膜纤维化、手术后纤维化(例如后囊白内障手术后、或青光眼小梁切除术后的水泡)、结膜纤维化或结膜下纤维化；呼吸系统疾病、如肺纤维化、囊性纤维化、特发性肺纤维化、进行性大块纤维化、硬皮病、闭塞性细支气管炎、赫曼斯基-普德拉克综合征、石棉肺、慢性肺动脉高压、艾滋病相关性肺动脉高压紧张、结节病、肺部肿瘤基质和哮喘；慢性肝病、非酒精性脂肪肝(NASH)、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、血吸虫肝病、肝硬化；心血管疾病、例如肥厚型心肌病、扩张型心肌病(DCM)、心房纤维化、房颤、心室纤维化、心室纤颤、心肌纤维化、布鲁加综合征、心肌炎、心肌内膜纤维化、心肌梗塞、纤维化性血管病、致心律失常性右室心肌病(ARVC)、肾小管间质和肾小球纤维化、动脉粥样硬化、静脉曲张、脑梗塞；神经系统疾病、例如神经胶质病和阿尔茨海默氏病；肌营养不良症、例如杜兴氏肌营养不良症(DMD)或贝克尔肌营养不良症(BMD)；胃肠道疾病、例如慢性病、微观结肠炎和原发性硬化性胆管炎(PSC)；皮肤疾病如硬皮病、肾源性全身纤维化和皮肤瘢痕疙瘩；关节纤维化杜普伊特伦的挛缩；纵隔纤维化腹膜后纤维化；骨髓纤维化；佩罗尼氏病；粘膜囊炎肾脏疾病(例如、肾纤维化、肾病综合征、阿尔波特综合征、HIV相关性肾病、多囊肾、法布里氏病、糖尿病肾病、慢性肾小球肾炎、与系统性狼疮相关的肾炎)；进行性全身性硬化症(PSS)；慢性移植物抗宿主病；关节炎；纤维化前肿瘤性和纤维化肿瘤性疾病；以及化学或环境(例如癌症化学疗法、农药、放射/癌症放射疗法)引起的纤维化。
在具体的实施方案中，所述肿瘤选自B淋巴细胞癌、三阴乳腺癌、肝癌、乳腺癌、结直肠癌、胰腺癌、胃癌、肾癌、成神经管细胞瘤、黑素瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、子宫颈癌、卵巢癌、膀胱癌、甲状腺癌、头颈癌、前列腺癌、成纤维细胞瘤、白血病、骨髓瘤和淋巴瘤。
在具体的实施方案中，本发明进一步提供一种治疗或预防IL-11介导的疾病的方法，包括步骤：向有需要的受试者提供治疗有效量或预防有效量的本发明的抗IL-11抗体或其抗原结合片段；或者向有需要的受试者提供治疗有效量或预防有效量的本发明的药物组合物；其中所述IL-11介导的疾病为以纤维化为特征的疾病或肿瘤。
再一方面，本公开提供检测IL-11的组合物，所述组合物包含抗IL-11抗体或其抗原结合片段。本公开还提供用于体内或体外检测IL-11的方法、系统或装置，其包括处理抗IL-11抗体。
附图说明
图1显示本发明的抗体在抑制肺原代成纤维细胞的纤维化中的作用。
图2显示本发明的抗体在抑制皮肤原代成纤维细胞的纤维化中的作用。
图3为肺组织病理染色的评分和纤维化区域统计结果，证实了本发明的抗体在小鼠肺纤维化疾病动物模型的治疗作用，且明显优于对照抗体。与模型组相比，****P<0.0001；*P<0.05。
图4的A为BLM诱导肺纤维化模型中各组小鼠的存活率，图4的B为肺组织病理染色的评分统计结果，证实了本发明的抗体在小鼠肺纤维化疾病动物模型的治疗作用。与模型组相比，****P<0.0001；*P<0.05。
图5显示BLM诱导肺纤维化模型中各组小鼠第21天的肺功能情况，证实了本发明的抗体在小鼠肺纤维化疾病动物模型的治疗作用，与模型组相比，****P<0.0001；**P<0.01；*P<0.05。
图6显示本发明的抗体(88H2L3、3Dh11)的抗体功能检测结果，其中A为抗体阻断IL-11与IL-11Rα结合的检测结果，B为抗体抑制IL-11介导的Baf3-GP130-huIL-11Rα细胞的增殖的检测结果，C为抗体阻断hyper IL-11介导的Baf3_GP130的细胞增殖。
图7显示3Dh12抗体的药代动力学检测结果。
图8显示3Dh12抗体对小鼠肺纤维化模型的改善结果。
具体实施方式
本发明以人源IL-11蛋白作为免疫原，采用传统的杂交瘤制备技术(Kohler andMilstein，Nature，1975，256:495)，通过一系列的优化和筛选，获得IL-11抗体的先导抗体。再通过对先导抗体的初步生产、纯化和鉴定，获得具备与人源IL-11蛋白等蛋白具有高度亲和力的IL-11抗体，然后通过分子生物学方法测序获知所得的IL-11抗体的重链可变区和IL-11抗体的轻链可变区的氨基酸序列，并构建嵌合抗体和人源化抗体。体外功能实验表明，本发明获得了分别识别多种不同表位的抗IL-11单克隆抗体。本专利中使用的阳性对照(Positive Control)采用了专利US20200031918A1中的3C6抗体序列(重链可变区SEQ IDNO.117，轻链可变区SEQ ID NO.122；无特殊备注则均使用人IgG1/Kappa的恒定区，有备注的恒定区则以备注为准)。其中：1)mAb074能够很好的阻断IL-11与IL-11Rα的结合，同时阻断IL-11介导的Baf3细胞增殖，mAb074可以很好的竞争阳性对照抗体，mAb074的亲和力以及IC50均显著优于阳性对照；更重要的，mAb074体内抗纤维化能力显著优于阳性对照。2)mAb008和mAb080能够很好的阻断hyper IL-11与GP130的结合，同时阻断IL-11或hyper IL-11介导的Baf3细胞增殖和ERK磷酸化，mAb008和mAb080与阳性对照识别了不同的表位，可以阻断阳性抗体无法阻断的hyper IL-11介导的信号，同时亲和力显著高于阳性对照。3)mAb088能够很好的阻断IL-11与IL-11Rα的结合，并优于对照抗体，且识别了与上述抗体以及阳性对照抗体不同的表位，在原代细胞纤维化实验和体内药效模型中，mAb088展现出显著优于阳性对照的抗纤维化能力。综上，本发明获得了识别多种不同表位的抗体，且每个抗体均显著优于阳性对照。
术语
为了更容易理解本公开，以下具体定义了某些技术和科学术语。除显而易见在本文件中的它处另有明确定义，否则本文使用的所有其它技术和科学术语都具有本公开所属领域的一般技术人员通常理解的含义。
本公开所用氨基酸三字母代码和单字母代码如J.Biol.Chem,243,p3558(1968)中所述。
本公开所述的术语“抗体”指免疫球蛋白，是由两条相同的重链和两条相同的轻链通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。免疫球蛋白重链恒定区的氨基酸组成和排列顺序不同，故其抗原性也不同。据此，可将免疫球蛋白分为五类，或称为免疫球蛋白的同种型，即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE，其相应的重链分别为μ链、δ链、γ链、α链和ε链。同一类Ig根据其铰链区氨基酸组成和重链二硫键的数目和位置的差别，又可分为不同的亚类，如IgG可分为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。轻链通过恒定区的不同分为κ链或λ链。五类Ig中第每类Ig都可以有κ链或λ链。
抗体重链和轻链靠近N端的约110个氨基酸的序列变化很大，为可变区(V区)；靠近C端的其余氨基酸序列相对稳定，为恒定区(C区)。可变区包括3个高变区(HVR)和4个序列相对保守的骨架区(FR)。3个高变区决定抗体的特异性，又称为互补性决定区(CDR)。每条轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)由3个CDR区4个FR区组成，从氨基端到羧基端依次排列的顺序依次为：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3以及FR4。轻链的3个CDR区指LCDR1、LCDR2和LCDR3；重链的3个CDR区指HCDR1、HCDR2和HCDR3。
“互补决定区”或“CDR区”或“CDR”或“高变区”，是抗体可变结构域中在序列上高度可变并且形成在结构上确定的环(“超变环”)和/或含有抗原接触残基(“抗原接触点”)的区域。CDR主要负责与抗原表位结合。重链和轻链的CDR从N-端开始顺序编号，通常称作CDR1、CDR2和CDR3。位于抗体重链可变结构域内的CDR也称作HCDR1、HCDR2和HCDR3，而位于抗体轻链可变结构域内的CDR则称作LCDR1、LCDR2和LCDR3。在一个给定的轻链可变区或重链可变区氨基酸序列中，可以采用本领域公知的多种方案确定其CDR序列，例如：基于抗体的三维结构和CDR环的拓扑学的Chothia(Chothia等人.(1989)Nature 342:877-883，Al-Lazikani等人,“Standard conformations for the canonical structures ofimmunoglobulins”,Journal of Molecular Biology,273,927-948(1997))，基于抗体序列可变性的Kabat(Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第4版,U.S.Department of Health and Human Services,National Institutes of Health(1987)),AbM(University of Bath)，Contact(University College London)，国际ImMunoGeneTics database(IMGT)(国际免疫遗传学信息系统,万维网imgt.cines.fr/)，以及基于利用大量晶体结构的近邻传播聚类(affinity propagation clustering)的NorthCDR定义(North等，“ANew Clustering of Antibody CDR Loop Conformations”，Journalof Molecular Biology，406，228-256(2011))。
例如，使用Kabat和Chothia等编号的CDR区域的不同定义范围。
在本文中所述“IL-11”，是指来自任何物种的IL-11，并且包括来自任何物种的IL-11的同工型、片段、变体或同源物。在优选的实施方案中，该物种是人。IL-11的同工型、片段、变体或同源物可任选地表征为与来自给定物种(例如，人)的未成熟或成熟IL-11的氨基酸序列具有至少70％，优选地80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性。IL-11的同工型、片段、变体或同源物可任选地以结合IL-11Rα(优选地来自相同物种)并刺激表达IL-11Rα和GP130的细胞中的信号转导的能力为特征。
IL-11通过遍在表达的糖蛋白130(GP130；也称为糖蛋白130、IL-6ST、IL-6-β或CD130)的同源二聚体传导信号。GP130是与IL-6受体家族形成I型细胞因子受体的一个亚基的跨膜蛋白。特异性是通过单个白介素11受体亚基α(IL-11Rα)获得的，该亚基不直接参与信号转导，但最初α-受体的细胞因子结合事件导致与GP130形成最终复合物。
本发明的抗IL-11抗体或其抗原结合片段能够以较高的亲和力与IL-11结合，阻断IL-11与IL-11Rα的结合，或阻断hyper IL-11与GP130的结合，从而阻断IL-11介导的细胞增殖，对抗细胞的纤维化。
在本说明书中，IL-11受体(IL-11R)指能够结合IL-11的多肽或多肽复合物。在一些实施方案中，IL-11受体能够结合IL-11并在表达该受体的细胞中诱导信号转导。
本发明的hyper IL-11是引用专利WO2019238882中的序列4，指IL-11和IL-11Rα融合蛋白。具体的，Hyper IL-11是由IL-11Rα的胞外域和IL-11通过连接子相连接而形成的融合蛋白。
IL-11受体可来自任何物种，并且包括来自任何物种的IL-11受体的同工型、片段、变体或同源物。在优选的实施方案中，该物种是人。
在一些实施方案中，IL-11受体可为IL-11Rα。在一些实施方案中，IL-11受体可为包含IL-11Rα的多肽复合物。在一些实施方案中，IL-11受体可为包含IL-11Rα和GP130的多肽复合物。在一些实施方案中，IL-11受体可为GP130或包含与IL-11结合的GP130的复合物。
如本文所用，术语“抗原结合片段”指与完整抗体不同的分子，其包含完整抗体的一部分且结合完整抗体所结合的抗原。抗原结合片段的例子包括但不限于Fv，Fab，Fab’，Fab’-SH，F(ab’)2；双抗体(diabodies,dAb)；线性抗体；单链抗体(例如scFv)；单结构域抗体(单域抗体)；双价或双特异性抗体的抗原结合片段；骆驼科抗体；和表现出所需的结合抗原(例如IL-11)能力的其它片段。
术语“鼠源抗体”在本公开中为根据本领域知识和技能制备的对人IL-11的单克隆抗体。制备时用IL-11的抗原注射试验对象，然后分离表达具有所需序列或功能特性的抗体的杂交瘤。在本公开一个优选的实施方案中，所述的鼠源IL-11的抗体或其抗原结合片段，可进一步包含鼠源κ、λ链或其变体的轻链恒定区，或进一步包含鼠源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链恒定区。
术语“嵌合抗体”，是将第一物种(如鼠源)抗体的可变区与另一物种(如人)抗体的恒定区融合而成的抗体，可以减轻异源抗体诱发的免疫应答反应。建立鼠-人嵌合抗体，要选建立分泌鼠源性特异性单抗的杂交瘤，然后从小鼠杂交瘤细胞中克隆可变区基因，再克隆人抗体的恒定区基因，将小鼠可变区基因与人恒定区基因连接成嵌合基因后插入人载体中，最后在真核工业系统或原核工业系统中表达嵌合抗体分子。人抗体的恒定区可选自人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链恒定区，优选包含人源IgG1或IgG2重链恒定区。
术语“人源化抗体”，也称为CDR移植抗体(CDR-grafted antibody)，是指将非人的CDR序列移植到人的抗体可变区框架中产生的抗体。可以克服嵌合抗体由于携带大量异种蛋白成分，从而诱导的强烈的免疫应答反应。为避免在免疫原性下降的同时引起活性的下降，可对所述抗体的可变区可进行最少反向突变，以保持活性。
术语“表位”是指抗原上与免疫球蛋白或抗体特异性结合的位点。表位可以由相邻的氨基酸、或通过蛋白质的三级折叠而并列的不相邻的氨基酸形成。由相邻的氨基酸形成的表位通常在暴露于变性溶剂后保持，而通过三级折叠形成的表位通常在变性溶剂处理后丧失。表位通常以独特的空间构象包括至少3-15个氨基酸。确定什么表位由给定的抗体结合的方法在本领域中是熟知的，包括免疫印迹和免疫沉淀检测分析等。确定表位的空间构象的方法包括本领域中的技术和本文所述的技术，例如X射线晶体分析法和二维核磁共振等。
本公开所用的术语“特异性结合”、“选择性结合”是指抗体与预定的抗原上的表位结合。通常，当使用人IL-11作为分析物并使用抗体作为配体，在仪器中通过表面等离子体共振(SPR)技术测定时，抗体以大约低于10-7M或甚至更小的平衡解离常数(KD)与预定的抗原结合，并且其与预定抗原结合的亲和力是其与预定抗原或紧密相关的抗原之外的非特异性抗原(如BSA等)结合的亲和力的至少两倍。术语“识别抗原的抗体”在本文中可以与术语“特异性结合的抗体”互换使用。
术语“抑制”或“阻断”可互换使用，并涵盖部分和完全抑制/阻断这两者。配体的抑制/阻断优选地降低或改变无抑制或阻断的情况下发生配体结合时出现活性的正常水平或类型。抑制和阻断也旨在包括与抗IL-11抗体接触时，与未与抗IL-11抗体接触的配体相比，任何可测量的配体结合亲和力降低。
“保守修饰”或“保守置换或取代”是指具有类似特征(例如电荷、侧链大小、疏水性/亲水性、主链构象和刚性等)的其它氨基酸置换蛋白中的氨基酸，使得可频繁进行改变而不改变蛋白的生物学活性。本领域技术人员知晓，一般而言，多肽的非必需区域中的单个氨基酸置换基本上不改变生物学活性(参见例如Watson等(1987)Molecμlar Biology ofthe Gene,The Benjamin/Cummings Pub.Co.,第224页，(第4版))。另外，结构或功能类似的氨基酸的置换不大可能破环生物学活性。氨基酸常见的保守取代如下：
如本文所用，术语“多特异性抗体”指能够对两个或更多个靶标抗原或靶标抗原表位特异性结合的，包含抗体或抗体的抗原结合片段(如单链抗体)的蛋白分子。该术语涵盖，例如，双特异性抗体、三特异性抗体等。在本文中的多特异性抗体能够特异性结合IL-11和另外的一个或多个其他靶点，其包含本文所述的抗IL-11抗体或其抗原结合片段和能够特异性结合其他靶点的抗体部分。
如本文所用，术语“细胞毒性剂”，是指在靶细胞(例如，肿瘤细胞)内具有较强的破坏其正常生长活性的化学分子。细胞毒性剂原则上在足够高的浓度下都可以杀死细胞，但是由于缺乏特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时，也会导致正常细胞的凋亡，导致严重的副作用。该术语包括如细菌、真菌、植物或动物来源的小分子毒素或酶活性毒素，放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32和Lu的放射性同位素)，化疗药物，抗生素和核溶酶。
“有效量”包含足以改善或预防医学症状或病症的量。有效量还意指足以允许或促进诊断的量。用于特定所述或兽医学受试者的有效量可依据以下因素而变化：如待治疗的病症、所述的总体健康情况、给药的方法途径和剂量以及副作用严重性。有效量可以是避免显著副作用或毒性作用的最大剂量或给药方案。
“同源性”或“同一性”是指两个多核苷酸序列之间或两个多肽之间的序列相似性。当两个比较序列中的位置均被相同碱基或氨基酸残基占据时(例如如果两个DNA分子的每一个位置都被腺嘌呤占据时)，那么所述分子在该位置是同源的。两个序列之间的同源性百分率是两个序列共有的匹配或同源位置数除以比较的位置数×100％的函数。例如，在序列最佳比对时，如果两个序列中的10个位置有6个匹配或同源，那么两个序列为60％同源。一般而言，当比对两个序列而得到最大的同源性百分率时进行比较。
以下结合实施例用于进一步描述本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。本发明实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，如冷泉港的抗体技术实验手册，分子克隆手册；或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。
实施例
实施例1.识别IL-11的杂交瘤抗体的获得和ELISA检测
1.1杂交瘤抗体的获得
采用人IL-11重组蛋白免疫小鼠，并用ELISA方法检测小鼠血清中的IL-11蛋白的抗体效价和特异性。选择血清中IL-11效价好的小鼠进行脾细胞融合。用结合ELISA方法检测96孔板内的杂交瘤培养上清，并将结合ELISA检测的阳性孔细胞扩大至24孔板。培养3天后取上清检测人、猴、小鼠IL-11的结合ELISA以及受体阻断实验，具体方法参见以下1.2及实施例2的内容。综合ELISA和受体阻断实验的数据，挑取阳性克隆进行亚克隆，亚克隆的细胞经过96孔板初筛和24孔板复筛之后，选取最优克隆冻存保种，并用于生产。
获得四种鼠源抗体mAb088、mAb074、mAb080和mAb008。将杂交瘤细胞株进行测序，获得其可变区基因。其CDR序列如下表1所示：
表1.抗体的重链和轻链CDR序列
上述CDR是根据CCG编号系统定义的。
上述四种鼠源抗体mAb088、mAb074、mAb080和mAb008的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)序列如以下表2所示。
表2.抗体的重链和轻链可变区序列
1.2ELISA法检测抗体与人、猴、小鼠IL-11的结合
采用ELISA法检测了鼠抗与人、猴、小鼠IL-11的交叉反应性，具体操作如下，以1μg/ml链霉亲和素包被96孔高吸附酶标板，4℃孵育过夜，1x PBST洗涤6次，PBST+1％ BSA室温封闭2h，PBST洗涤3次。加入100μl生物素标记的相应抗原(人、猴或小鼠IL-11，1μg/ml)室温孵育2小时，PBST洗涤6次，加入100μl梯度稀释的抗体室温孵育2小时，PBST洗涤6次，加入100μl山羊抗小鼠完全(H+L)HRP(Jackson immunores,115-035-146,1:5000)室温避光孵育45分钟，PBST洗涤6次，加入100μl TMB底物室温反应3-5分钟，然后加入50μl 1.0N盐酸终止反应，用酶标仪读取OD 450nm-OD 540nm的数值，计算抗体对抗原结合的EC50值。结果见表3，四个抗体均可以很好的结合人和猴IL-11，其中mAb008、mAb074和mAb088与小鼠IL-11也有很好的结合。
表3.杂交瘤抗体与人、猴和小鼠IL-11结合(ELISA)
N/A，未测出有效值
实施例2.受体结合和Baf3细胞增殖实验鉴定鼠抗体功能
为了进一步鉴定鼠抗体的功能，检测了受体结合阻断实验和Baf3细胞增殖实验。
2.1受体结合实验
为检测抗体是否影响受体结合，本发明开发了两种不同的受体结合实验用以模拟经典信号通路或者反式信号通路。
2.1.1抗体对经典信号通路的影响
以1μg/ml人IL-11Rα(义翘神州，10252-H08H)包被96孔高吸附酶标板，4℃孵育过夜，1x PBST洗涤3次，PBST+1％ BSA室温封闭2h，PBST洗涤3次。加入梯度稀释的抗体和生物素标记的的IL-11室温孵育2小时(检测抗体阻断作用使用EC80浓度，检测抗体增强作用则采用EC20浓度)，PBST洗涤3次，加入100μl链霉亲和素-HRP(Sigma,S2438,1:5000)二抗室温避光孵育45分钟，PBST洗涤6次，加入100μl TMB底物室温反应3-5分钟，然后加入50μl 1.0N盐酸终止反应，用酶标仪读取OD 450nm-OD 540nm的数值。不加抗体的孔定义为0％，不加IL-11的孔定义为100％，计算抗体对IL-11和IL-11Rα结合的抑制效率和IC50值。除mAb088及其嵌合、人源化抗体外，其他抗体均采用上述阻断方法。由于特殊的作用机制，mAb088及其嵌合、人源化抗体对经典信号通路的影响则采用包被IL-11，加入梯度稀释的抗体和IL-11Rα-his，二抗用anti-his-HRP，其他步骤相似。
2.1.2抗体对反式信号通路的阻断
以1μg/ml人GP130(义翘神州，10974-HCCH)包被96孔高吸附酶标板，4℃孵育过夜，1x PBST洗涤3次，PBST+1％ BSA室温封闭2h，PBST洗涤3次。加入梯度稀释的抗体和带有his标签的hyper IL-11(序列参照专利WO2019238882中的SEQ ID NO 4,终浓度0.1μg/ml)室温孵育2小时，PBST洗涤3次，加入100μl anti-his-HRP(金斯瑞,A00612,1:5000)二抗室温避光孵育45分钟，PBST洗涤6次，加入100μl TMB底物室温反应3-5分钟，然后加入100μl 1.0N盐酸终止反应，用酶标仪读取OD 450nm-OD540nm的数值。不加抗体的孔定义为0％，不加hyper IL-11的孔定义为100％，计算抗体对hyper IL-11和GP130结合的抑制效率和IC50值。
本专利中使用的阳性对照(Positive Control)采用了专利US20200031918A1中的3C6抗体序列(重链可变区SEQ ID NO.117，轻链可变区SEQ ID NO.122；无特殊备注则均使用人IgG1/Kappa的恒定区，有备注的恒定区则以备注为准)。如表4所示，mAb074和mAb088可以阻断IL-11和IL-11Rα的结合，且阻断效果明显优于对照抗体3C6；mAb008和mAb080可以抑制hyper IL-11与GP130的结合，而对照抗体3C6则不能。
表4.受体结合实验鉴定鼠抗体功能
N/A，未测出有效值；a，在EC80抗原浓度下无阻断效果，在EC20抗原浓度下随着抗体浓度的增高OD值不断增加最终达到饱和。
2.2Baf3细胞增殖实验检测细胞功能
利用细胞增殖法检测抗体对IL-11经典和反式信号通路的作用。选取Baf3细胞构建受体过表达细胞系，Baf3细胞常规培养基为RPMI 1640(Gibco,A1049101)+10％FBS(Gibco,10091148)+1％PS(Gibco，15140163)+10ng/ml mIL3+1μg/ml puromycin(Gibco，A1113803)。
为检测反式信号通路，将人GP130基因(Gene ID:P40189-1)构建至慢病毒载体，包装成为慢病毒，并感染Baf3细胞，构建人GP130的过表达细胞系Baf3-huGP130，采用有限稀释法挑取单克隆细胞株。
为检测经典信号通路，将人IL-11Rα基因(Gene ID:Q14626-1)构建至慢病毒载体，包装成为慢病毒，并感染Baf3-huGP130细胞系，构建同时过表达人GP130和人IL-11Rα的细胞系Baf3-huGP130-huIL-11Rα。采用有限稀释法挑取单克隆细胞株。
2.2.1Baf3-huGP130-huIL-11Rα细胞增殖实验
收取细胞用PBS洗两遍后重悬至无生长因子的培养基(RPMI1640+10％ FBS)中过夜培养或培养3h。在96孔板中每孔铺入1x104个无生长因子培养的细胞(384孔板每孔铺2000个细胞)，加入梯度稀释的抗体和终浓度为的0.4ng/ml的IL-11。37℃培养72h后，按照厂家说明加入CellTiter-Glo(Promega,7558)并读值。不加抗体的孔定义为0％，不加IL-11的孔定义为100％，计算抗体对IL-11介导的Baf3-huGP130-huIL-11Rα细胞增殖的抑制效率和IC50值。
2.2.2Baf3-huGP130细胞增殖实验
收取细胞用PBS洗两遍后重悬至无生长因子的培养基(RPMI1640+10％ FBS)中过夜培养。96孔板每孔铺1x104个无生长因子培养的细胞(384孔板每孔铺2000个细胞)，加入梯度稀释的抗体和终浓度为的20ng/ml的hyperIL-11。37℃培养72h后，按照试剂盒说明加入CellTiter-Glo(Promega,7558)并读值。不加抗体的孔定义为0％，不加hyper IL-11的孔定义为100％，计算抗体对hyper IL-11介导的Baf3-huGP130细胞增殖的抑制效率和IC50值。
结果如表5，mAb074、mAb008和mAb080可以很好的抑制IL-11介导的Baf3-huGP130-huIL-11Rα细胞的增殖，IC50显著优于对照抗体3C6；mAb088对IL-11介导的Baf3-huGP130-huIL-11Rα细胞增殖抑制作用较弱。mAb008和mAb080还可以抑制hyper IL-11介导的Baf3-huGP130细胞的增殖。
表5.细胞增殖实验鉴定鼠抗体功能
N/A，未测出有效值。
2.2.3Baf3细胞ERK磷酸化实验
收取细胞撤掉生长因子和血清培养3h。96孔板每孔铺2x105细胞，加入梯度稀释的抗体和终浓度为的100ng/ml的hyperIL-11。37℃培养30min后加入裂解液，取16μl裂解液至384孔板，按照试剂盒(Advanced p-ERK(Thr202/Tyr204)HTRF kit,cisbio,64AERPEG)说明操作并读值。不加抗体的孔定义为0％，不加hyper IL-11的孔定义为100％，并以此计算抗体对hyper IL-11介导的Baf3-huGP130细胞ERK磷酸化的抑制效率。结果如表6所示，其表明mAb008和mAb080可以很好的抑制hyper IL-11介导的Baf3-huGP130细胞的ERK磷酸化。
表6.ERK磷酸化实验
综合受体结合阻断实验和Baf3细胞增殖实验的结果，本发明获得了多种不同表现形式的抗体，这些抗体可能识别了不同的抗原表位。
实施例3.嵌合抗体功能鉴定
将抗体重链可变区克隆至带有信号肽和hIgG1重链恒定区的pcDNA3.4载体中，将抗体轻链DNA序列克隆至带有信号肽和人Kappa轻链恒定区的pcDNA3.4载体中。轻、重链共同转染293或CHO细胞，培养一周后收集上清，采用亲和柱纯化抗体并对这些抗体进行鉴定。抗体的重链恒定区(CH)和轻链恒定区(CL)的序列如下表7所示。所有抗体使用了如SEQ IDNO：35所示的轻链恒定区；mAb008-hFc、mAb080-hFc和mAb074-hFc选用了SEQ ID NO：33所示的重链恒定区，mAb088-hFc选用了SEQ ID NO：34所示的重链恒定区。
表7.抗体的重链和轻链恒定区
3.1抗体与人、猴、小鼠IL-11的结合及亲和力测定
3.1.1ELISA法检测嵌合抗体与人、猴、小鼠IL-11的结合
通过前述实施例1的方法，对嵌合抗体进行ELISA活性检测，不同的是用山羊抗人Fc HRP(Jackson immunores,109-035-098)作为二抗。数据见表8。结果显示，四个嵌合抗体均可以识别人和猴IL-11，其中的mAb008-hFc、mAb074-hFc、mAb088-hFc还可以识别小鼠IL-11。
表8.嵌合抗体与人、猴和小鼠IL-11结合(ELISA)
N/A，未测出有效值
3.1.2BLI法检测嵌合抗体与人、猴、小鼠IL-11的亲和力
通过Octet(REDR8)检测嵌合抗体对人、猴和小鼠IL-11结合的亲和力。采用AHC生物传感器捕获抗体，分析物为人IL-11蛋白(Novoprotein，C006)或猴IL-11蛋白(SinoBiological，90925-CNCE)或小鼠IL-11蛋白(义翘神州，50117-MNCE)，实时检测反应信号从而获得结合和解离曲线。实验中用到的分析缓冲液为：PBS+0.025％Tween20，pH7.4(无特殊备注时使用的溶液均为pH7.4；有备注的情况下以备注为准)。每个循环解离完成后，用pH 1.5的甘氨酸-盐酸再生溶液将生物传感器再生。数据以Masson模型进行global拟合，得出亲和力数值。结果如表9所示，mAb008-hFc、mAb074-hFc、mAb080-hFc与人IL-11的亲和力远高于对照抗体3C6；mAb088-hFc与人IL-11的亲和力与对照抗体相当，与小鼠IL-11的亲和力明显优于对照抗体。
表9.嵌合抗体的亲和力测定(BLI)
N/A，未测出有效值
3.2受体结合阻断实验
经前述实施例2的方法，对嵌合抗体进行受体结合阻断实验的检测。结果见表10，嵌合抗体mAb074-hFc和mAb088-hFc可以抑制IL-11和IL-11Rα的结合，且抑制效果明显优于对照抗体。mAb008-hFc和mAb080-hFc可以很好的阻断hyper IL-11和GP130的结合。
表10.受体结合阻断鉴定嵌合抗体功能
N/A，未测出有效值；a，在EC80抗原浓度下无阻断效果，在EC20抗原浓度下随着抗体浓度的增高OD值不断增加最终达到饱和。
3.3Baf3细胞增殖和ERK磷酸化实验
为了进一步鉴定嵌合抗体的功能，检测了受体结合阻断实验和Baf3细胞增殖实验，具体方法同实施例2。结果如表11。嵌合抗体mAb008-hFc、mAb074-hFc和mAb080-hFc均可抑制IL-11介导的Baf3细胞增殖，且抑制效率明显优于对照抗体3C6。此外，嵌合抗体mAb008-hFc和mAb080-hFc还可以抑制hyper IL-11介导的Baf3细胞增殖和ERK磷酸化。
表11.Baf3细胞实验鉴定嵌合抗体功能
N/A，未测出有效值；ND，没有检测。
实施例4.抗体人源化及鉴定
采用CDR移植加回复突变的方法对抗体mAb008、mAb080、mAb088进行人源化设计。将抗体可变区序列与人抗体Germline数据库比较，获得同源性高的人源模板，将抗体的CDR区移植到选择的人源模板上，并将FR区中影响CDR区结构形态的特定位点进行回复突变，在保留功能的同时使其序列更接近人种系基因，从而得到一系列人源化分子。利用分子克隆技术，将人源化抗体的序列插入到相应的表达载体中。利用CHO细胞表达系统表达生产，即可获得相应的人源化抗体。经实例二和五中的方法，对人源化抗体进行了鉴定。
4.1mAb008的人源化及鉴定
优选了人源重链模板:IGHV1-3*01和人源轻链模板IGKV1-16*01对mAb008进行人源化，设计的序列和回复突变方式如表12。为了提高人源化程度，在部分CDR上也设计了突变，详见见表12中008-VH8，008-VL5，008-VL6序列。人源化抗体008-H2L2的重链为008-VH2，轻链为008-VL2；008-H4L2的重链为008-VH4，轻链为008-VL2；以此类推，并适用于mAb080和mAb088的人源化抗体。mAb008的人源化抗体选用了SEQ ID NO：33所示的重链恒定区，和SEQID NO：35所示的轻链恒定区。
表12.mAb008的人源化设计序列
008-VH8中的HCDR1为GYTFTSYVMH(SEQ ID NO:116)，HCDR2为YINLHNDGTKYNEKFQG(SEQ ID NO:117)；008-VL5中的LCDR1为RASQDIISYLS(SEQ ID NO:118)，008-VL6中的LCDR1为RASQDIISYLA(SEQ ID NO:119)。
4.1.1人源化抗体亲和力的检测
用Biacore测定待测人源化抗IL-11抗体与人IL-11的亲和力。用Protein A生物传感芯片(Cat.#29-1275-55，GE)亲和捕获一定量的待测抗体，然后于芯片表面流经IL-11抗原，利用Biacore 8K实时检测反应信号从而获得结合和解离曲线。实验中用到的缓冲液为HBS-EP+10×缓冲溶液(Cat.#BR-1006-69，GE)。每个循环解离完成后，用人抗捕获试剂盒里配置的再生溶液或pH 1.5的甘氨酸-盐酸再生溶液将生物芯片洗净再生。数据以(1:1)Langmuir模型进行拟合，得出亲和力数值，结果见表13。008-H4L2和008-H4L3两个人源化抗体的亲和力与母本差异在3倍之内。
表13.SPR检测mAb008人源化抗体亲和力
为了提高人源化程度，在008-H4L2的基础上设计突变，得到008-H4L5、008-H4L6、008-H7L6、008-H8L6，经实施例3中相同的BLI方法测得其亲和力见表14，几个人源化抗体的亲和力略微优于母本嵌合抗体。
表14.BLI检测mAb008人源化抗体亲和力
此外，对mAb008做翻译后修饰(PTM)位点分析，其重链CDR2上有一个高风险的脱酰胺化位点‘DG’，将重链CDR2的氨基酸‘DG’突变为‘EG’；轻链HCDR2和FR3连接处也有一个高风险的脱酰胺化位点‘DG’，将其突变为‘DA’或‘EG’，利用Biacore检测突变体对人IL-11亲和力的影响，结果如表15，突变之后对亲和力影响不大。
表15.SPR检测mAb008 CDR突变的亲和力
抗体 CDR突变位点 ka(1/Ms) kd(1/s) KD(M)
mAb008-hFc 野生型 5.33E+06 5.18E-05 9.72E-12
mAb008-hFc VH-EG，VL-EG 6.44E+06 1.14E-04 1.77E-11
mAb008-hFc VH-EG，VL-DA 5.72E+06 4.67E-05 8.16E-12
去除潜在的脱酰胺化位点的mAb008-hFc的HCDR2氨基酸序列如下：
YINLHNEGTKYNEKFKG(SEQ ID NO:71)；
去除潜在的脱酰胺化位点的008-H4L6的VH氨基酸序列如下：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYVLHWVKQAPGQGLEWIGYINLHNEGTKYNEKFKGRATLTSDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCAREGESYGPAWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:135)；
去除潜在的脱酰胺化位点的mAb008-hFc的LCDR2氨基酸序列如下：
RANRLAE(SEQ ID NO:72)；
去除潜在的脱酰胺化位点的008-H4L6的VL氨基酸序列如下：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIISYLAWFQQKPGKAPKTLIYRANRLADAVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCLQYDDFPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:136)；或者
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIISYLAWFQQKPGKAPKTLIYRANRLAEGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCLQYDDFPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:137)
4.1.2mAb008人源化抗体的功能鉴定
通过与实施例2中相同的方法，对上述人源化抗体进行功能鉴定。结果见表16-19，在受体结合实验中，人源化抗体及母本嵌合抗体均可以很好的抑制hyper IL-11和GP130的结合。在Baf3细胞增殖和ERK磷酸化实验中人源化抗体不仅可以很好的抑制IL-11诱导的Baf3-huGP130-huIL-11Rα细胞增殖，还可以抑制hyper IL-11介导的Baf3-huGP130细胞的增殖和ERK磷酸化。综上，mAb008的人源化抗体很好的保持了亲和力和功能，部分人源化抗体较母本有所提升。
表16.Hyper IL-11与GP130受体结合阻断鉴定mAb008人源化抗体功能
抗体 IC50(nM) 最大抑制率
mAb008-hFc 2.36 78％
008-H2L2 2.65 67％
008-H4L2 2.32 67％
008-H4L3 1.80 75％
N/A，未测出有效值
表17.Baf3细胞实验鉴定mAb008人源化抗体功能
表18.Hyper IL-11与GP130受体结合阻断鉴定mAb008人源化抗体功能
抗体 IC50(nM) 最大抑制率
mAb008-hFc 0.60 99％
008-H4L6 0.55 99％
008-H8L6 0.51 97％
表19.Baf3细胞实验鉴定mAb008人源化抗体功能
4.2mAb 074的人源化及鉴定
鼠源抗体mAb074的人源化则采用噬菌体建库的方法。具体的，将抗体可变区序列与人抗体Germline数据库比较，获得同源性高的人源模板，同时考虑轻重链搭配，重链模板选用了IGHV1-46，轻链选用IGKV3-15为模板，将抗体的CDR区移植到选择的人源模板上，同时以此为模板，在CDR上设计突变，构建噬菌体展示文库。为了增强抗体在体内清除抗原的能力，文库淘选和筛选过程中出除了采用常规的方法外，还加入了pH依赖的淘选和筛选过程，以期筛选到在中性pH与抗原结合能力强而在酸性pH与抗原结合能力弱或者不结合的抗体。经过淘选和筛选，获得了一系列人源化分子，所述序列如表20-1和表20-2所示。
其中，074-4P1D09V2的HCDR1，HCDR2，HCDR3的氨基酸序列分别为GYTFTHYWMN(SEQID NO:93)，DISPHSGGTTYNQKFQG(SEQ ID NO:94)，DEGGYSHMAH(SEQ ID NO:95)；
074-4P1D09V2的LCDR1，LCDR2，LCDR3的氨基酸序列分别为RASSSISNNLH(SEQ IDNO：96)，HASQSIS(SEQ ID NO:97)，QQSDNWPIT(SEQ ID NO:98)。
利用分子克隆技术，将人源化抗体的序列插入到相应的表达载体中，利用CHO细胞表达系统表达生产，即可获得相应的人源化抗体。mAb074的人源化抗体选用了SEQ ID NO：34所示的重链恒定区，和SEQ ID NO：35所示的轻链恒定区。
表20-1.mAb074人源化抗体序列
表20-2.mAb074人源化抗体序列的CDR序列
4.2.1BLI测定mAb074人源化抗体的亲和力
经实施例3相同的方法检测了mAb074人源化抗体的亲和力，表21展示了中性解离条件下人源化抗体与人、猴、小鼠IL-11的亲和力。表22展示了人源化抗体在中性和酸性解离条件下对人IL-11的亲和力，酸性条件下抗体与抗原的亲和力较中性条件明显降低，其中074-4P1D09、074-4P2B10、074-4P1D09V2三个人源化抗体对人IL-11的亲和力在酸性条件下降低了30-40倍。综上，本发明筛选到了在中性pH与抗原结合能力强而在酸性pH与抗原结合能力弱的抗体，这种抗体有利于提高抗原在体内的清除效率。
表21.BLI测定mAb074人源化抗体对IL-11蛋白的亲和力
抗体 分析物 ka(1/Ms) kd(1/s) KD(M)
mAb074-hFc 人IL-11 8.34E+05 1.58E-05 1.90E-11
074-4P4A06V1 人IL-11 1.01E+06 1.58E-04 1.57E-10
074-4P2B08V1 人IL-11 9.41E+05 3.17E-04 3.37E-10
074-4P2E08V1 人IL-11 2.08E+06 3.91E-04 1.88E-10
mAb074-hFc 猴IL-11 5.66E+05 2.35E-04 4.16E-10
074-4P4A06V1 猴IL-11 7.47E+05 4.26E-04 5.71E-10
074-4P2B08V1 猴IL-11 4.43E+05 7.03E-04 1.59E-09
074-2D1 猴IL-11 7.30E+05 3.62E-04 4.96E-10
074-4P2E08V1 猴IL-11 1.27E+06 1.31E-03 1.03E-09
074-4P1D09V2 猴IL-11 1.72E+05 2.03E-04 1.18E-09
mAb074-hFc 小鼠IL-11 8.62E+05 2.33E-04 2.71E-10
074-2D1 小鼠IL-11 8.71E+05 3.66E-04 4.20E-10
074-4P1D09V2 小鼠IL-11 7.24E+04 3.49E-04 4.82E-09
表22.BLI测定mAb074人源化抗体在同解离pH条件下对人IL-11蛋白的亲和力
4.2.2mAb074人源化抗体的功能鉴定
通过与实施例2中相同的方法对人源化抗体进行功能鉴定。结果见表23，074嵌合抗体和人源化变体可以很好的抑制IL-11诱导的Baf3-huGP130-huIL-11Rα细胞增殖。074-2D1亲和力和功能均与母本嵌合抗体相当；074-4P1D09V2对人和猴IL-11的亲和力与母本差异不大，对细胞增殖的抑制作用也与母本相当。
表23.mAb074人源化抗体的功能鉴定
4.3mAb 080的人源化及鉴定
优选了人源重链模板:IGHV3-7*01和人源轻链模板IGKV1-17*02对mAb080进行人源化，设计的序列和回复突变方式如表24。人源化抗体080-H2L3的重链为080-VH2，轻链为080-VL3，以此类推。080-VH2，080-VH4选用了SEQ ID：NO 33所示的重链恒定区，080-VL3和080-VL4选用了SEQ ID NO：35所示的轻链恒定区。
表24.mAb80人源化抗体序列
4.3.1亲和力和表达量，如表
用Biacore测定人源化抗体与IL-11的亲和力，具体方法同4.1.1。结果见表25。结果显示人源化变体080-H2L3、080-H2L4、080-H4L3的亲和力均略高于母本嵌合抗体。此外，对mAb080做PTM位点分析，其重链CDR3上有一个高风险的脱酰胺化位点‘DG’，为降低脱酰胺化风险，将其突变为‘DA’或者‘EG’，得到抗体080-VH-DA或080-VH-EG。利用Biacore检测突变体对人IL-11亲和力的影响，结果如表25，‘EG’突变之后对亲和力影响不大，‘DA’突变后亲和力较母本有显著提升。将080-H2L3抗体的HCDR3上的‘DG’位点突变为‘DA’，产生新的人源化抗体080-H2AL3，其中重链可变区序列如SEQ ID NO:99所示。
表25.SPR测定mAb080人源化抗体和移除PTM位点抗体对人IL-11蛋白(多浓度)的亲和力
去除潜在的脱酰胺化位点的mAb080-hFc的HCDR3氨基酸序列如下：
EEYDYDAGG(SEQ ID NO:73)；或
EEYDYEGGG(SEQ ID NO:74)。
去除潜在的脱酰胺化位点的080-H2L3的VH氨基酸序列如下：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMNWVRQAPGKGLEWVAQIRLKSDNYATHYAESVKGRFTISRDDSKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTGEEYDYDAGGWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:99)；或
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMNWVRQAPGKGLEWVAQIRLKSDNYATHYAESVKGRFTISRDDSKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTGEEYDYEGGGWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:100)。
4.3.2功能鉴定
通过与实施例2中相同的方法对人源化抗体进行功能鉴定。结果如表26所示，在受体结合阻断实验中，mAb080嵌合抗体和人源化变体可以阻断hyper IL-11和GP130的结合。在Baf3细胞增殖和ERK磷酸化实验中mAb080嵌合抗体和人源化变体不仅可以很好的抑制IL-11诱导的Baf3-huGP130-huIL-11Rα细胞增殖，还可以抑制hyper IL-11介导的Baf3-huGP130细胞的增殖和ERK磷酸化。人源化抗体080-H2AL3在功能实验中优于母本嵌合抗体。
表26.受体结合和Baf3细胞实验鉴定mAb080人源化抗体的功能
4.4mAb088抗体人源化和鉴定
优选了人源重链模板:IGHV7-4-1*02和人源轻链模板IGKV1-33*01或IGKV4-1*01对mAb088进行人源化，设计的序列和回复突变方式如表27。人源化抗体088-H1L1的重链为088-VH1，轻链为088-VL1，以此类推。
表27.mAb088人源化抗体序列
4.4.1BLI测定mAb088人源化抗体的亲和力
通过与实施例2中相同的方法采用BLI方法测定了mAb088人源化抗体与IL-11的亲和力，表28展示了抗体的亲和力，结果显示所有人源化变体的对人和猴IL-11的亲和力均与母本相当。
表28.BLI测定mAb088人源化抗体对IL-11蛋白的亲和力
抗体 分析物 ka(1/Ms) kd(1/s) KD(M)
mAb088-hFc 人IL-11 1.03E+06 1.35E-03 1.30E-09
088-H1L1 人IL-11 1.09E+06 1.35E-03 1.24E-09
088-H1L2 人IL-11 9.34E+05 1.22E-03 1.30E-09
088-H1L3 人IL-11 1.22E+06 1.39E-03 1.14E-09
088-H2L1 人IL-11 1.16E+06 1.33E-03 1.15E-09
088-H2L2 人IL-11 9.75E+05 1.18E-03 1.21E-09
088-H2L3 人IL-11 1.23E+06 1.29E-03 1.05E-09
088-H3L1 人IL-11 8.16E+05 1.19E-03 1.45E-09
088-H3L2 人IL-11 8.34E+05 1.18E-03 1.41E-09
088-H3L3 人IL-11 1.04E+06 1.35E-03 1.30E-09
mAb088-hFc 猴IL-11 1.23E+05 6.40E-03 5.19E-08
088-H1L1 猴IL-11 1.45E+05 6.88E-03 4.74E-08
088-H2L3 猴IL-11 1.54E+05 7.12E-03 4.63E-08
mAb088-hFc 小鼠IL-11 6.97E+05 6.42E-04 9.22E-10
088-H1L1 小鼠IL-11 7.42E+05 5.21E-04 7.02E-10
088-H2L3 小鼠IL-11 9.09E+05 6.37E-04 7.01E-10
实施例5.抗体理化性质分析(Tm，SEC)
对人源化后的分子进行理化性质分析，包含以下几种方法。
5.1Tm值的测定
利用DSF法测试分子的Tm值，测定仪器：Applied Biosystems实时荧光定量PCR仪QuantStudio 7Flex，荧光染料SYPRO Orange。升温速率为0.9℃/min，温度变化范围25℃到95℃，记录荧光信号，数据使用QuantStadio Real-time PCR(v1.3)软件分析，测得Tm值如表29所示。
表29.人源化抗体的Tm测定
名称 浓度 溶液 Tm1(℃) Tm2(℃)
088-H1L1 1mg/ml 1xPBS 67.9 -
074-2D1 1mg/ml 1xPBS 64.6 70.7
080-H2AL3 1mg/ml 1xPBS 70.7 -
5.2SEC分子排阻色谱法
根据凝胶孔隙的孔径大小与高分子样品分子的线团尺寸间的相对关系而对溶质进行分离的分析的方法。SEC测定用仪器：安捷伦1260Infinity II；柱子：TSKgelG3000SWXL(TOSOH-0008541)。SEC单体含量百分比＝A单体/A总*100％(A单体为样品中主峰单体的峰面积，A总为所有峰面积之和)。
5.3iCIEF成像毛细管等点聚焦电泳
根据蛋白质等电点pI不同进行分离的技术。iCIEF测定所用仪器厂家ProteinSimple，型号ICE3+prinCE+IQOQ。iCIEF中性峰含量百分比＝中性峰面积/总面积*100％(总面积为酸性峰、中性峰和碱性峰面积之和)。
5.4动态光散射测定KD值
采用粒度分析仪(型号Dynapro plate Reader III)测定KD，KD值描述了在不同浓度条件下扩散系数(Dt)的变化速率。将样品浓缩至20mg/ml，并稀释至2.5mg/mL,5mg/mL,10mg/mL,15mg/mL,20mg/mL几个梯度，加入板内离心并上机测试。KD值如表30所示。
表30.动态光散射测定人源化抗体的KD
5.5稳定性测试
为检测抗体的冻融稳定性，将抗体在-80反复冻融5次(-80℃和室温各1小时为一次冻融)，检测处理前后样品的变化，结果见表31。
表31.人源化抗体反复冻融稳定性
无色(CL)，无颗粒(PF)。
为检测抗体的加速稳定性，将抗体4℃或40℃处理14天，检测处理前后样品的变化，结果见表32。
表32.人源化抗体的加速稳定性
无色(CL)，无颗粒(PF)。
由表32可见，经40℃14天处理的080-H2AL3主峰和酸碱性峰存在明显的偏移，为了检测峰的偏移对样品的活性是否有影响，采用直接ELISA法鉴定了4℃和40℃14天处理的样品，方法与实施例二中间接法类似，不同的包被物是人IL-11。以未经处理的样品为对照，结果见表33，根据结果，经4℃和40℃14天处理的样品以及未经处理的样品与人IL-11的结合能力无明显差异。
表33.ELISA检测40℃14天处理后的抗体与人IL-11的结合
5.6脱酰胺压力测试
074-2D1重链CDR2上包含‘NG’酰胺化位点，为检测该位点是否有脱酰胺风险，将样品置于碱性缓冲液(20mM Tris,150mM NaCl,pH 8.5)中2天，利用iCIEF方法检测主峰的偏移，主峰偏移<10％则定义为脱酰胺风险较低。由表34中的结果可知，074-2D1脱酰胺风险较低。
表34.加压测试074-2D1的脱酰胺化
5.7血清稳定性
将抗体加入血清，混匀后分成五等分，分别标记为第0、1、4、7、14天。将抗体孵育在37℃和5％CO2培养箱，在相应的时间点将相应标记的样品用液氮终止并冻存于-80℃。经5.5中相同的ELISA方法，检测样品与人IL-11的结合，以未经血清处理的抗体作为阳性对照。
血清稳定性结果见表35，各样品经血清处理前后与人IL-11的结合能力没有明显变化，由此可见074-2D1、080-H2AL3、088-H1L1三个样品在人血清里均展示了很好的稳定性。
表35.人源化抗体的血清稳定性
在以上实施例中所示的部分抗体的全长序列如下表36所示：
表.36
实施例6.原代细胞纤维化实验
取3代以内的原代人肺成纤维细胞(或原代人皮肤成纤维细胞)，在12孔板每孔内铺入1x105个细胞；待细胞密度达到70％-80％后，用无血清的培养基洗两遍，并在无血清培养基中饥饿过夜；加入终浓度为5ng/ml的TGFβ1和7.5μg/ml或15μg/ml抗体(每张图片加入抗体量相同)，继续培养24h后，收集上清冻存备用，细胞用冷的PBS洗两遍，加入含有蛋白酶抑制的RIPA裂解液冰上裂解10min，收集裂解液离心取上清；用BCA法检测上清中总蛋白量，每个样品取等量的蛋白上样做蛋白印迹，检测样品中胶原蛋白的量，一抗胶原蛋白I抗体(3G3)、mIgG3同种型、SANTACRUZ、sc-293182 1:500-1000，二抗山羊抗小鼠完全(H+L)HRP,1:10k-20k，选用GAPDH、或β-肌动蛋白、或Vinculin作为内参。
结果见图1和2，由图可知，TGF-β1可以刺激胶原蛋白的产生，mAb088在肺和皮肤原代成纤维细胞上均可明显抑制胶原蛋白的产生，且抑制作用显著优于对照抗体3C6-mFc(该对照抗体恒定区选用mIgG1，kappa)。在肺的成纤维细胞纤维化实验中，人源化抗体074-2D1和088-H1L1可以很好的抑制肺成纤维细胞胶原蛋白的产生，074-2D1的抑制率略微优于对照抗体3C6，而088-H1L1对胶原蛋白的抑制率则明显优于对照抗体3C6(图1)。在皮肤成纤维细胞的纤维化实验中，与mIgG1对照相比，mAb088抗体可以明显抑制皮肤成纤维细胞胶原蛋白的产生，且抑制效果优于3C6-mFc(图2)。
实施例7.博来霉素诱导的小鼠肺纤维化模型
7.1mAb074-hFc和mAb088对小鼠肺纤维化模型的保护作用
测试了mAb074-hFc和mAb088在气管注射BLM的小鼠肺纤维化模型中的效果。实验方法如下：选取10-12周雄性C57BL/6小鼠，麻醉后气管内注射50μl 1.0U/kg的BLM，建立肺纤维化小鼠模型；正常对照组注射同等剂量的溶媒；造模日为第0天(Day0)，终点为第21天。正常对照组和模型组第7、10、13、16和19天分别腹腔注射10mg/kg的IgG抗体；三个mAb074-hFc剂量组，第7、10、13、16和19天分别腹腔注射不同浓度的mAb074-hFc(10mg/kg、1mg/kg、0.1mg/kg)；对照抗体3C6组第7、10、13、16和19天腹腔注射10mg/kg的3C6抗体；mAb088组第7和14天腹腔注射1mg/kg的mAb088。实验终点取样进行Masson染色。
结果见图3，与正常组相比，模型组评分和纤维化区域显著升高；与模型组相比，mAb074-hFc组评分随着抗体浓度的增加呈现逐渐下降的趋势，对照抗体3C6组没有看到下降，mAb088组评分显著下降，纤维化区域也明显减少。由此可见，mAb074-hFc在小鼠肺纤维化疾病动物模型的治疗中显示出一定的效果，mAb088治疗小鼠肺纤维化效果尤为显著；两种抗体的效果都明显优于对照抗体3C6。
7.2 088-H1L1对小鼠肺纤维化模型的保护作用采用了上述类似的方法检测了人源化抗体088-H1L1对小鼠肺纤维化模型的保护作用。选取10-12周雄性C57BL/6小鼠，麻醉后气管内注射50μl 1.0U/kg的BLM，建立肺纤维化小鼠模型；正常对照组注射同等剂量的溶媒；造模日为第0天(Day0)，终点为第28天。正常对照组和模型组第7、10、13、16、19、22和25天分别腹腔注射10mg/kg的IgG抗体；三个088-H1L1剂量组，第7、10、13、16 19、22和25天分别腹腔注射不同浓度的088-H1L1(3mg/kg、1mg/kg、0.3mg/kg)；为了测试088-H1L1对纤维化的逆转作用，另外加入造模第14天开始给药的组，在第14、17、20、23和26天分别腹腔注射10mg/kg的088-H1L1。每天记录小鼠体重变化和死亡率情况，第21天检测肺功能，实验终点取样进行Masson染色。生存率和病理评分如图4所示，肺功能结果如图5所示。与模型组相比，088-H1L1无论是从第7天还是从第14天开始给药，均显著降低了死亡率；088-H1L1给药组的肺功能和病理评分也都明显改善。
实施例8.人源化抗体088-H2L3抗体改造和鉴定
对人源化抗体088-H2L3进行亲和力成熟和改造，得到3Dh11，3Dh12，3Dh52抗体。具体抗体的全长序列如下表37所示。
表37.088-H2L3亲和力成熟和抗体改造得到的抗体序列
注：下划线为CDR序列
表38. 088-H2L3亲和力成熟改造的抗体可变区序列
表39. 088-H2L3亲和力成熟改造的抗体CDR序列
mAb088，人源化抗体088(088-H1L1、088-H1L2、088-H1L3、088-H2L1、088-H2L2、088-H2L3、088-H3L1、088-H3L2、088-H3L3)，人源化抗体088-H2L3经亲和力成熟改造的抗体(3Dh11、3Dh12、3Dh52)的CDR序列如下：
HCDR1，GYTFTX1YGMN(SEQ ID NO:111)，其中，X1选自N或H；
HCDR2，WINTX2TGEPTYAEEFRG(SEQ ID NO:112)，其中，X2选自E或N；
HCDR3，EDX3YGMDX4(SEQ ID NO:113)，其中，X3选自F或Y，X4选自S或Y；
LCDR1，KASQSVX5NDVV(SEQ ID NO:114)，其中，X5选自S或E；
LCDR2，X6ASNRYT(SEQ ID NO:115)，其中，X6选自R或Y；
LCDR3，QQDYSSPWT(SEQ ID NO:6)。
上述CDR是根据CCG编号系统定义的。
8.1BLI测定改造后抗体的亲和力
通过与实施例2中相同的方法采用BLI方法测定了088-H2L3改造后抗体与IL-11的亲和力，表40展示了改造后抗体的亲和力。3Dh12、3Dh52结合人IL-11的亲和力KD(M)分别为7.95E-11，3.34E-11。3Dh12、3Dh52结合猴IL-11的亲和力KD(M)分别为4.08E-09、8.01E-10。结果显示改造后3Dh11，3Dh12，3Dh52对人、猴和/或鼠IL-11亲和力有明显提升。
表40.BLI测定088-H2L3改造后抗体对IL-11蛋白的亲和力
8.2抗体理化性质分析
对088-H2L3改造后抗体进行理化性质分析，结果如下:
8.2.1Tm值的测定
采用与实施例5.1中Tm值测定的相同方法，测得Tm值如表41所示。
表41.改造后抗体的Tm测定
名称 浓度 溶液 Tm1(℃) Tm2(℃)
3Dh11 1mg/ml 1×PBS 64.9 76.7
3Dh12 1mg/ml 1×PBS 64.6 75.4
3Dh52 1mg/ml 1×PBS 73 -
8.2.2血清稳定性
将抗体加入血清，混匀后分成五等分，分别标记为第0、1、4、7、14天。将抗体孵育在37℃和5％CO2培养箱，在相应的时间点将相应标记的样品用液氮终止并冻存于-80℃。经5.5中相同的ELISA方法，检测样品与人IL-11的结合，以未经血清处理的抗体作为阳性对照。
血清稳定性结果见表42，样品经血清处理前后与人IL-11的结合能力没有明显变化，由此可见3Dh12在人血清里展示了很好的稳定性。
表42.改造后抗体的血清稳定性
实施例9.改造后抗体功能鉴定
9.1受体结合阻断实验
经前述实施例2的方法，对088-H2L3抗体改造后的3Dh11，3Dh12进行受体结合阻断实验和Balf3细胞增殖实验的检测。结果见图6，表43，改造后抗体3Dh11，3Dh12可以抑制IL-11和IL-11Rα的结合，其水平同088-H2L3抗体相当。3Dh11，3Dh12抑制IL-11介导的Baf3-GP130-huIL-11Ra细胞的增殖，且抑制效果明显优于088-H2L3。088-H2L3不阻断hyper IL-11介导的Baf3_GP130的细胞增殖。综上所述，3Dh11的作用机制是通过阻断IL-11和IL-11Rα的相互作用来实现的。
表43.受体结合阻断及Balf3细胞增殖鉴定3Dh11、3Dh12抗体功能
9.2药代动力学(PK)
为了探索3Dh12抗体在大鼠体内单次静脉给药后的药代动力学特征，本实验方案中所有对动物的操作都经上海润诺实验动物福利与使用管理委员会IACUC批准。具体操作如下：所有动物都将剪脚趾编号，9只大鼠经一周的适应后，按体重随机分为3组，每个组3只。所有大鼠将单次尾静脉注射抗体，药剂量分别为0.4，2，10mg/kg。从实验开始到结束每天对大鼠进行临床观察，不同时间采血，结果如图7和表44。结果显示以0.4～10mg/kg剂量第一次和第二次注射后均呈现线性PK，且总体上3Dh12均表现出十分优异的药代动力学表现。
表44.3Dh12抗体在大鼠中的药代动力学参数
9.3 3Dh12抗体对小鼠肺纤维化模型的保护作用
经前述实施例7所示方法，测试了3Dh12在气管注射BLM的小鼠肺纤维化模型中的效果。肺功能结果如图8所示。与模型组相比，3Dh12给药组在肺功能上有改善。

Claims (17)

1.抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其包含：
i)如SEQ ID NO:25、65-67、101-102和104中任一项所示的重链可变区的3个互补决定区HCDR，以及如SEQ ID NO:26、68-70、103和105所示的轻链可变区的3个互补决定区LCDR，或者
ii)如SEQ ID NO:27、44、46、48、50、52、54、56、58和59中任一项所示的重链可变区的3个互补决定区HCDR，以及如SEQ ID NO:28、45、47、49、51、53、55、57和60中任一项所示的轻链可变区的3个互补决定区LCDR，或者
iii)如SEQ ID NO:29、61、62和99-100中任一项所示的重链可变区的3个互补决定区HCDR，以及如SEQ ID NO:30、63和64中任一项所示的轻链可变区的3个互补决定区LCDR，或者
iv)如SEQ ID NO:31、36-39和135中任一项所示的重链可变区的3个互补决定区HCDR，以及如SEQ ID NO:32、40-43和136-137中任一项所示的轻链可变区的3个互补决定区LCDR；
优选地，所述的抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：
i-1)所述重链可变区包含SEQ ID NO：111、112和113所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：114、115和6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
i-2)所述重链可变区包含SEQ ID NO：106、107和108所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：4、5和6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
i-3)所述重链可变区包含SEQ ID NO：106、107和108所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：109、110和6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
i-4)所述重链可变区包含SEQ ID NO：1、2和3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：4、5和6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-1)所述重链可变区包含SEQ ID NO：7、8和9所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：10、11和12所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-2)所述重链可变区包含SEQ ID NO：93、94和95所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：96、97和98所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-3)所述重链可变区包含SEQ ID NO：120、94和122所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：123、125和127所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-4)所述重链可变区包含SEQ ID NO：120、94和95所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：96、11和98所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-5)所述重链可变区包含SEQ ID NO：120、121和95所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：124、126和128所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-6)所述重链可变区包含SEQ ID NO：129、121和131所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：10、132和127所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-7)所述重链可变区包含SEQ ID NO：130、8和9所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：96、97和12所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-8)所述重链可变区包含SEQ ID NO：7、133和122所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：96、11和12所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
ii-9)所述重链可变区包含SEQ ID NO：130、134和122所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：10、11和12所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
iii)所述重链可变区包含SEQ ID NO：13和14所示的HCDR1和HCDR2、和SEQ ID NO：15、73或74所示的HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：16、17和18所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，或者
iv-1)所述重链可变区包含SEQ ID NO：19和21所示的HCDR1和HCDR3，和SEQ ID NO：20或71所示的HCDR2，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：22和24所示的LCDR1和LCDR3，和SEQID NO：23或72所示的LCDR2，或者
iv-2)所述重链可变区包含SEQ ID NO：19或116所示的HCDR1，SEQ ID NO：20或117所示的HCDR2，和SEQ ID NO：21所示的HCDR3，和所述轻链可变区包含SEQ ID NO：22、118或119所示的LCDR1，和SEQ ID NO：23和24所示的LCDR2和LCDR3。
2.根据权利要求1所述的抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其具有至少一种以下的活性：
1)阻断或增强IL-11与IL-11Rα的结合，
2)阻断IL-11介导的细胞增殖，
3)阻断hyper IL-11与GP130的结合，
4)阻断IL-11或hyper IL-11介导的细胞增殖和ERK磷酸化，和
5)抑制或防止细胞纤维化。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体为鼠源抗体、嵌合抗体或人源化抗体。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其
1)包含与SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
2)包含与SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
3)包含与SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；或者
4)包含与SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL。
5.根据权利要求3或4所述的抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其中：
所述的抗IL-11抗体或其抗原结合片段进一步包含鼠源κ、λ链或其变体的轻链框架区(FR区)或轻链恒定区，优选地，所述抗IL-11抗体进一步包含鼠源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体的重链框架区(FR区)或重链恒定区；
或，所述抗IL-11抗体或其抗原结合片段进一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链恒定区，和/或人源κ或λ链或其变体的轻链恒定区；
优选地，所述抗IL-11抗体或其抗原结合片段进一步包含如SEQ ID NO：33或34所示的重链恒定区，和/或如SEQ ID NO：35所示的轻链恒定区。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其
5)包含与SEQ ID NO:36-39、135中任一项所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:40-43、136-137中任一项所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
6)包含与SEQ ID NO:44、46、48、50、52、54、56、58和59中任一项所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:45、47、49、51、53、55、57和60中任一项所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
7)包含与SEQ ID NO:61、62、99或100所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:63或64所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；或者
8)包含与SEQ ID NO:65-67中任一项所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:68-70中任一项所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；或者，
9)包含与SEQ ID NO:101-102和104中任一项所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:70、103和105中任一项所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL。
7.根据权利要求6所述的抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其
10)包含与SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
11)包含与SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
12)包含与SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
13)包含与SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
14)包含与SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
15)包含与SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
16)包含与SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
17)包含与SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
18)包含与SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
19)包含与SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
20)包含与SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
21)包含与SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
22)包含与SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
23)包含与SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
24)包含与SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
25)包含与SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
26)包含与SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
27)包含与SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
28)包含与SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
29)包含与SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
30)包含与SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
31)包含与SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:69所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
32)包含与SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
33)包含与SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
34)包含与SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:69所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
35)包含与SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
36)包含与SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
37)包含与SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:69所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
38)包含与SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
39)包含与SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
40)包含与SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
41)包含与SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:105所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
42)包含与SEQ ID NO:135所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:136所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
43)包含与SEQ ID NO:135所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:137所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；
44)包含与SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL；或者
45)包含与SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区VH，和包含与SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区VL。
8.根据权利要求6-7中任一项所述的抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其中所述抗IL-11抗体或其抗原结合片段进一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链恒定区，和/或人源κ或λ链或其变体的轻链恒定区。
9.根据权利要求8所述的抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其中所述抗IL-11抗体或其抗原结合片段进一步包含如SEQ ID NO：33或34所示的重链恒定区，和/或如SEQ ID NO：35所示的轻链恒定区。
10.根据权利要求6-9中任一项所述的抗IL-11抗体或其抗原结合片段，其中所述抗IL-11抗体包含
如SEQ ID NO：75所示的重链，和/或如SEQ ID NO：76所示的轻链；
如SEQ ID NO：75所示的重链，和/或如SEQ ID NO：77所示的轻链；
如SEQ ID NO：78所示的重链，和/或如SEQ ID NO：77所示的轻链；
如SEQ ID NO：79所示的重链，和/或如SEQ ID NO：80所示的轻链；
如SEQ ID NO：81所示的重链，和/或如SEQ ID NO：82所示的轻链；
如SEQ ID NO：83所示的重链，和/或如SEQ ID NO：84所示的轻链；
如SEQ ID NO：85所示的重链，和/或如SEQ ID NO：86所示的轻链；
如SEQ ID NO：87所示的重链，和/或如SEQ ID NO：88所示的轻链；
如SEQ ID NO：89所示的重链，和/或如SEQ ID NO：90所示的轻链；或，
如SEQ ID NO：91所示的重链，和/或如SEQ ID NO：92所示的轻链。
11.分离的核酸，其编码权利要求1-10中任一项的抗IL-11抗体或其抗原结合片段。
12.载体，其包含权利要求11所述的分离的核酸。
13.宿主细胞，其包含权利要求11所述的分离的核酸或权利要求12所述的载体，优选地，所述宿主细胞为原核细胞或真核细胞，优选地，所述细胞选自细菌、真菌、病毒、酵母菌、哺乳动物细胞，更优选地，选自大肠杆菌、毕赤酵母、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或人胚肾(HEK)293细胞。
14.药物组合物，其包含权利要求1-10中任一项所述的抗IL-11抗体或其抗原结合片段，以及药学上的赋形剂、稀释或载体。
15.多特异性抗体，其包含权利要求1-10中任一项所述的抗IL-11抗体或其抗原结合片段。
16.抗体药物偶联物，其包含与细胞毒性剂偶联的如权利要求1-10中任一项所述的抗IL-11抗体或其抗原结合片段，优选地，如权利要求1-10中任一项所述的抗IL-11抗体或其抗原结合片段通过接头与细胞毒性剂偶联。
17.如权利要求1-10中任一项所述的抗IL-11抗体或其抗原结合片段、或如权利要求14所述的药物组合物、如权利要求15所述的多特异性抗体、或如权利要求16所述的抗体药物偶联物在制备用于治疗疾病或病症的药物中的用途，其中所述疾病或病症是IL-11介导的疾病或病症，优选地，所述疾病或病症是以纤维化为特征的疾病、肿瘤或骨质疏松；
优选地，所述以纤维化为特征的疾病/病状选自：眼病、例如格雷夫氏眼病、视网膜上纤维化、视网膜纤维化、特发性黄斑前纤维化、视网膜下纤维化(例如与视网膜脱离或黄斑变性相关，例如湿性老年黄斑变性(AMD))、脉络膜新生血管形成(CNV)、糖尿病性视网膜病变、青光眼、地图样萎缩(老年性黄斑变性(AMD))、角膜纤维化、手术后纤维化(例如后囊白内障手术后、或青光眼小梁切除术后的水泡)、结膜纤维化或结膜下纤维化；呼吸系统疾病、如肺纤维化、囊性纤维化、特发性肺纤维化、进行性大块纤维化、硬皮病、闭塞性细支气管炎、赫曼斯基-普德拉克综合征、石棉肺、慢性肺动脉高压、艾滋病相关性肺动脉高压紧张、结节病、肺部肿瘤基质和哮喘；慢性肝病、非酒精性脂肪肝(NASH)、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、血吸虫肝病、肝硬化；心血管疾病、例如肥厚型心肌病、扩张型心肌病(DCM)、心房纤维化、房颤、心室纤维化、心室纤颤、心肌纤维化、布鲁加综合征、心肌炎、心肌内膜纤维化、心肌梗塞、纤维化性血管病、致心律失常性右室心肌病(ARVC)、肾小管间质和肾小球纤维化、动脉粥样硬化、静脉曲张、脑梗塞；神经系统疾病、例如神经胶质病和阿尔茨海默氏病；肌营养不良症、例如杜兴氏肌营养不良症(DMD)或贝克尔肌营养不良症(BMD)；胃肠道疾病、例如慢性病、微观结肠炎和原发性硬化性胆管炎(PSC)；皮肤疾病如硬皮病、肾源性全身纤维化和皮肤瘢痕疙瘩；关节纤维化杜普伊特伦的挛缩；纵隔纤维化腹膜后纤维化；骨髓纤维化；佩罗尼氏病；粘膜囊炎肾脏疾病(例如、肾纤维化、肾病综合征、阿尔波特综合征、HIV相关性肾病、多囊肾、法布里氏病、糖尿病肾病、慢性肾小球肾炎、与系统性狼疮相关的肾炎)；进行性全身性硬化症(PSS)；慢性移植物抗宿主病；关节炎；纤维化前肿瘤性和纤维化肿瘤性疾病；以及化学或环境(例如癌症化学疗法、农药、放射/癌症放射疗法)引起的纤维化；
优选地，所述肿瘤选自B淋巴细胞癌、三阴乳腺癌、肝癌、乳腺癌、结直肠癌、胰腺癌、胃癌、肾癌、成神经管细胞瘤、黑素瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、子宫颈癌、卵巢癌、膀胱癌、甲状腺癌、头颈癌、前列腺癌、成纤维细胞瘤、白血病、骨髓瘤和淋巴瘤。
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