CN118373857A

CN118373857A - 一种双胍-钌配合物及其制备方法与应用

Info

Publication number: CN118373857A
Application number: CN202410539837.7A
Authority: CN
Inventors: 陈兰美; 陈锦灿; 高杰; 胡天玲; 朱家乐; 朱旭峰
Original assignee: Guangdong Zhanjiang Institute Of Marine Medicine; Guangdong Medical University
Current assignee: Guangdong Zhanjiang Institute Of Marine Medicine; Guangdong Medical University
Priority date: 2024-04-30
Filing date: 2024-04-30
Publication date: 2024-07-23

Abstract

本发明涉及有机物合成技术领域，特别是涉及一种双胍‑钌配合物及其制备方法与应用。该双胍‑钌配合物的结构式如式Ⅰ或式Ⅱ所示；本发明双胍‑钌配合物可以有效地被细菌吸收，从而具有显著的抗菌活性。此外，以双胍为主配体的系列配合物具有光活化的理化性质，经过光照照射后会发生配体的裂解，并且细菌与配合物孵育后进行光照，较光照前配合物的抗菌活性具有明显的提升。通过相关实验结果表明，配合物具有PDT、PACT活性，可以产生ROS，导致细菌的氧化还原代谢失衡，从而达到抑菌和杀菌效果。

Description

一种双胍-钌配合物及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及有机物合成技术领域，特别是涉及一种双胍-钌配合物及其制备方法与应用。

背景技术

抗生素-青霉素问世，开创了传染病治疗的新时代。但是，这存在两面性，一方面，抗生素的出现对于人类历史来说是一大进步，由细菌感染引起的疾病得到了控制，极大程度降低了死亡率；另一方面，由于抗生素的滥用及误用，导致细菌耐药性增加，出现“超级细菌”。尽管如此，传统的有机药物化学未能填补的抗菌药物所存在的空缺：2022年的一项分析显示，截至2021年6月，临床开发中也只有45种“传统”抗生素。因此，迫切需要开发新一代抗生素。

发明内容

基于上述内容，本发明提供一种双胍-钌配合物及其制备方法与应用。本发明双胍-钌配合物具有光动力抗菌和光活化抗菌效果，并且能够有效的杀伤细菌。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明技术方案之一，一种双胍-钌配合物，结构式如式Ⅰ或式Ⅱ所示；

本发明技术方案之二，一种上述双胍-钌配合物的制备方法，为方法一或方法二；当所述双胍-钌配合物为式Ⅰ所示的结构时，采用方法一，包括以下步骤；

将钌盐与锂盐加入到有机溶剂中加热回流，之后加入2,2-联喹啉回流反应得到物质2；

将所述物质2与双胍衍生物加热反应，得到式Ⅰ所示结构的双胍-钌配合物；

当所述双胍-钌配合物为式Ⅱ所示的结构时，采用方法二，包括以下步骤；

将钌盐溶解于有机溶剂中，之后加入异丙醇回流，得到产物4；

将所述产物4与双胍衍生物溶于混合溶剂中回流，得到产物5；

将所述产物5与辅助配体回流反应，得到所述双胍-钌配合物。

在本发明优选的实施方式中，所述方法一中，所述钌盐与所述锂盐的摩尔比为1:15；所述钌盐与所述2,2-联喹啉的摩尔比为1:2；所述加热回流的温度为90℃，时间为2h；所述回流反应的温度为140℃，时间为8h；所述钌盐为三氯化钌；所述锂盐为氯化锂；所述有机溶剂为N,N’-二甲基甲酰胺。所述回流反应结束后还包括依次丙酮沉淀，抽滤后冷水、冷丙酮洗涤，抽滤的步骤。

在本发明优选的实施方式中，所述方法一中，所述物质2与所述双胍衍生物的摩尔比为1:1；所述双胍衍生物为1-邻甲苯双胍；所述加热反应的温度为90℃，时间为8h。所述加热反应时还添加了无水乙醇，即将所述物质2与所述双胍衍生物溶解于无水乙醇中加热反应；所述加热反应后还包括依次加水稀释，用饱和六氟磷酸钾KPF₆溶液沉淀，抽滤，中性氧化铝柱层析纯化的步骤。

在本发明优选的实施方式中，所述方法二中，所述钌盐为三氯化钌；所述有机溶剂为二甲基亚砜；所述双胍衍生物为1-邻甲苯双胍；所述辅助配体为2,9-二甲基联吡啶；所述混合溶剂为乙醇和二甲基亚砜体积比9:1的混合物。

在本发明优选的实施方式中，所述方法二中，制备所述产物4时，回流的温度为85℃，时间为30h；制备所述产物4时，所述回流结束后还包括冷却到室温后，抽滤收集固体，用异丙醇洗涤所述固体，真空干燥的步骤；制备所述产物5时，所述回流的温度为90℃，时间为3h；制备所述产物5时，所述回流结束后还包括冷却至室温，旋去溶剂的步骤；所述回流反应的温度为130℃，时间为12h；所述回流反应结束后还包括冷却至室温，加入适量水，滴加六氟磷酸钾饱和溶液，冰箱静置，抽滤干燥，粗产物用中性氧化铝柱纯化的步骤。

本发明技术方案之三，上述的双胍-钌配合物在制备抗菌药物中的应用。

本发明技术方案之四，一种抗菌药物，原料包括上述的双胍-钌配合物。

在本发明优选的实施方式中，所述抗菌药物为抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、阴沟肠杆菌和/或肺炎克雷伯菌的药物。

本发明公开了以下技术效果：

本发明提供一种双胍-钌配合物，该配合物具有光动力抗菌和光活化抗菌效果，并且能够有效的杀伤细菌，光照后可以显著提高配合物的抗菌效果。

本发明以双胍类化合物的衍生物为起始原料，合成1-邻甲苯双胍的钌金属配合物。本发明进一步用不同配体和钌配合物组合合成Ru2。本发明方法简单，易于操作制备。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明实施例1制备的Ru1的质谱图；

图2为本发明实施例2制备的Ru2的质谱图；

图3为本发明实施例2制备的Ru2的光照后质谱图；

图4为本发明效果验证例1中在PBS缓冲液中Ru1的紫外可见光吸收光谱；

图5为本发明效果验证例1中在PBS缓冲液中Ru2的紫外可见光吸收光谱；

图6为本发明效果验证例1中在PBS缓冲液中Ru2经不同时间光照照射的紫外吸收曲线；

图7为本发明效果验证例2中Ru1，Ru2的平板涂布；

图8为本发明效果验证例2中Ru2的抑制生物被膜形成及其量化分析；

图9为本发明效果验证例2中经Ru2处理后的MRSA的活死染色；

图10为本发明效果验证例2中经Ru2处理后的MRSA的扫描电镜图；

图11为本发明效果验证例2中经Ru2处理后的MRSA的ROS检测；

图12为本发明效果验证例2中用DPBF检测Ru1，Ru2的单线态氧¹O₂的产生；其中，(a)，(c)，分别为[Ru(bpy)₃]²⁺,Ru2存在时的经520nm光源照射后的DPBF的荧光强度变化图；(b)，(d)分别为[Ru(bpy)₃]²⁺,Ru1存在时的经630nm光源照射后的DPBF的荧光强度变化图；(e)为DPBF在479nm处的荧光强度随520nm光源照射不同时间的变化，(f)为DPBF在479nm处的荧光强度随630nm光源照射不同时间的变化；

图13为本发明效果验证例2中Ru1和Ru2溶血性实验；其中，(a)，(b)分别为Ru1、Ru2的不同浓度下的溶血情况；(c)为Ru1、Ru2的溶血率的量化统计。

具体实施方式

现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。

应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。

除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。

在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。

关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。

本发明检测到上述式Ⅰ、式Ⅱ所示的双胍-钌配合物(Ru1，Ru2)处理后的细菌生物被膜的形成受到了抑制，而双胍衍生物几乎没有抗菌和抑制生物被膜的效果。最终Ru1，Ru2可通过破坏细菌细胞膜，干扰细菌胞内氧化还原失衡等多重方式诱导细菌细胞死亡。并且配合物可以抑制细菌生物被膜的形成，可有效的降低由细菌生物被膜屏障而造成抗生素用量大而产生的细菌耐药性的产生。

本发明技术方案之二，一种上述双胍-钌配合物的制备方法，当所述双胍-钌配合物为式Ⅰ所示的结构时，制备方法包括以下步骤；

(1)将三氯化钌，无水氯化锂加入到N,N’-二甲基甲酰胺DMF中，90℃加热回流2h，加入2,9-二甲基联吡啶，程序升温至140℃，回流8h，反应完毕后，丙酮沉淀，抽滤后冷水、冷丙酮洗涤，抽滤得到物质2；

(2)将物质2和1-邻甲苯双胍溶解在无水乙醇中，加热反应8h,结束后加水稀释，饱和六氟磷酸钾溶液沉淀，抽滤，中性氧化铝柱层析纯化，得到产物3，即式Ⅰ所示结构的双胍-钌配合物(Ru1)；

当所述双胍-钌配合物为式Ⅱ所示的结构时，制备方法包括以下步骤；

(1)将三氯化钌溶于二甲基亚砜DMSO中，之后加入异丙醇，加热回流反应30h，反应完毕后，抽滤后异丙醇洗涤，抽滤得到物质4；

(2)将物质4和1-邻甲苯双胍溶解在无水乙醇中，加热反应，减压下旋干，得到产物5；

(3)将产物5和2,2’-联喹啉，加入到乙二醇中，加热搅拌过夜；加水稀释，滴加饱和六氟磷酸钾溶液，静置沉淀，抽滤干燥，中性氧化铝柱层析纯化得到产物6，即式Ⅱ所示结构的双胍-钌配合物(Ru2)。

本发明双胍-钌配合物可以有效地被细菌吸收，从而具有显著的抗菌活性。此外，本发明以双胍为主配体的系列配合物具有光活化的理化性质，经过光照照射后会发生配体的裂解，并且细菌与配合物孵育后进行光照，较光照前配合物的抗菌活性具有明显的提升。通过相关实验结果表明，本发明双胍-钌配合物具有PDT、PACT活性，可以产生ROS，导致细菌的氧化还原代谢失衡，从而达到抑菌和杀菌效果。

本发明技术方案之四，一种抗菌药物，原料包括上述的双胍-钌配合物；所述抗菌药物为抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、阴沟肠杆菌和/或肺炎克雷伯菌的药物。

以下通过实施例对本发明做进一步说明。

实施例1

(1)将三氯化钌RuCl₃·nH₂O(MW＝260.84，1mmol)，无水氯化锂LiCl(MW＝42.39，15mmol)加入到5mL，N,N’-二甲基甲酰胺DMF中，90℃加热回流2h，加入2,2-联喹啉biq(MW＝256.31，2mmol)，程序升温至140℃，回流8h，反应完毕后，丙酮沉淀，抽滤后冷水、冷丙酮洗涤，抽滤得到物质2，产率60.8％。

(2)将物质2((MW＝684.04，0.1mmol))和1-邻甲苯双胍(MW＝191.11,0.1mmol)溶解在10mL无水乙醇中，90℃加热反应8h，结束后加水稀释，饱和六氟磷酸钾KPF₆溶液沉淀，抽滤，中性氧化铝柱层析纯化，得到产物3，即双胍-钌配合物(简称配合物，记为Ru1)，产率75.1％。

本实施例中Ru1合成路线如下：

实施例2

先取2ml二甲基亚砜DMSO溶液于反应管中通氩气，除去其中氧气后加入RuCl₃·nH₂O(1.0mmol)待其溶解后加入约5ml异丙醇，在氩气保护下于反应管中85℃回流30h。反应结束冷却到室温后，抽滤收集固体，用异丙醇洗涤，真空干燥。最后得浅黄色固体即为产物4，产率62.2％。取产物4(MW＝483，0.1mmol)、1-邻甲苯双胍TolBig(0.1mmol)溶于4.5ml乙醇和0.5ml DMSO混合溶剂，氩气下90℃回流3h，反应结束后冷却至室温，旋去溶剂即为产物5(MW＝423)。取产物5(0.1mmol)、辅助配体2,9-二甲基联吡啶dmb(MW＝184.1,0.2mmol)溶于5ml乙二醇，130℃反应回流12h(反应过夜)，反应结束冷却至室温，加入适量水，滴加六氟磷酸钾饱和溶液，冰箱静置，抽滤干燥，粗产物用中性氧化铝柱纯化，即得产物6，即双胍-钌配合物(简称配合物，记为Ru2)，产率69.6％。

本实施例中Ru2合成路线如下：

效果验证例1

将实施例1和实施例2所得配合物Ru1、Ru2进行相关实验表征，如图1和图2所示，质谱表征Ru1、Ru2，证明其合成成功：Ru1-ESI-MS(CH₃CN):m/z calc.for([M-2(PF₆)]²⁺)805.2215；found:([M-H⁺]⁺)804.2169.(1/2[M]²⁺)402.6070，Ru2-ESI-MS(CH₃CN):m/zcalc.for([M-2(PF₆)]²⁺)661.2215；found:([M-H⁺]⁺)660.2120。(1/2[M]²⁺)330.6081.其中，对于Ru2，若对其增加520nm的光照，其会发生配体的解离，正如图3所示，除了Ru2的相关分子离子峰的存在之外，亦发现配体dmb的碎片峰：([dmb+H⁺]⁺)：185.1093，和dmb解离后的剩余Ru2碎片峰([M-dmb-H⁺]⁺)476.1166。

进一步的，检测了配合物Ru1，Ru2的紫外可见光吸收光谱，如图4、5所示其在黑暗下具有良好的稳定性，但经光照照射后，Ru2的紫外吸收曲线中出现多个等吸收点，如图6所示，表示Ru2经光照照射后发生了解离，产生了新的物质。而往往配体解离会产生游离的配体和钌水合物，前者会以插入或嵌入等非共价方式结合DNA，后者往往会以共价方式结合DNA，从而干扰核酸代谢实现其抗菌效果。

效果验证例2生物活性实验

细菌培养

四种常见致病菌：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ATCC 33591(MRSA)、金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003(S.aureus)和大肠杆菌ATCC 8739(E.coli)、阴沟肠杆菌ATCC 700323(E.cloa)、肺炎克雷伯菌ATCC 700603(K.peneu)均来源于广东省菌种保藏中心。将细菌放在LB培养基中，在37℃、180rpm摇床中培养，并在LB琼脂上来维持培养。

最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的测量

根据半倍稀释法研究了配合物Ru1，Ru2对多种革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌的MIC和MBC。将过夜培养的细菌稀释至1×10⁶CFU/mL，每孔加入100μL菌液，随后每孔加入100μL稀释后的不同浓度的配合物溶液，配合物浓度在0.25-256μM的范围内，将96孔板在37℃下孵育2h后，相应波长激发光分别光照0min、30min，继续孵育至24h。孵育完成后，使用多功能酶标仪测量OD₆₀₀，同一板上的空白培养基为阴性对照，只含有菌液的孔为阳性对照，当抑制率大于90％时认为产生了抑菌效果。对比光照前后配合物抗菌活性差异。每个孔取出50μL菌液，涂布平板，来确定最小杀菌浓度(MBC)。

表1配合物Ru1，Ru2对不同菌种的抗菌活性检测

稀释涂布平板法

将含有不同浓度配合物Ru1，Ru2和5×10⁵CFU/mL的细菌(n＝3)LB培养基200μL加入96孔板，培养12h后，取不同浓度梯度的菌液，将悬浮液稀释1000倍，并将50μL菌液涂在LB琼脂板上，在37℃下培养24h，对菌落进行计数。

2种钌配合物抗菌效果均强于双胍衍生物：1-邻甲苯双胍；Ru1抗菌活性优于Ru2，且2种配合物(Ru1，Ru2)经光照照射后抗菌活性均有明显提升，这可能归因于其独特的结构而产生的ROS所致。

生物被膜形成抑制试验

生物被膜的生物量是通过结晶紫染色确定的。将MRSA(2×10⁷CFU/mL，250μL)加入到12孔板中，然后在LB培养基中加入等量的不同成分(PBS，Ru1，Ru2)。混合后，在37℃下培养，每隔24h丢弃上清液和悬浮细菌，并重新加药。分别在48h和72h后丢弃培养基，用PBS清洗3次。待12孔板干燥后，用结晶紫(0.1％，500μL)对生物被膜进行30min的染色。去除多余的结晶紫染料，用PBS清洗多次至上清液澄清。之后，加入冰醋酸水溶液(33％，500μL)溶解结晶紫染料，测量OD600。

图8显示，与对照组(磷酸盐缓冲液PBS)的质密且厚实的生物被膜相比，经Ru1处理后的生物被膜比较松散，且经过增加光照，生物被膜的抑制效果更加明显，这些结果表明，Ru1可以抑制生物被膜形成，而在破坏生物被膜的能力方面较差。可能原因是，当细菌处于悬浮状态时，Ru1紧密结合MRSA，近距离催化产生ROS，从而消灭MRSA，抑制生物被膜的形成。

配合物对细菌死活染色的研究

采用由两种染色剂(SYTO9和PI)组成的细菌活力试剂盒，借助激光共聚焦荧光显微镜评估细菌细胞活力。100μL MRSA悬液(1×10⁶CFU/mL)用100μL配合物在2倍MIC给药浓度下，37℃孵育2h，相应波长激发光分别光照0min、30min，离心、洗涤后，在200μL的细菌悬液中加入3μL 1:1(v/v)SYTO9(0.5mM)和PI(1mM)的混合物，37℃暗孵育20-30min后，用PBS缓冲液洗涤细菌样品。然后将10μL染色的细菌悬液滴入一个干净的载玻片中，使用40倍物镜用荧光显微镜进行成像。用不含任何配合物的S.aureus菌液作为阴性对照。

如图9显示，相比于对照组，经Ru1处理后的MRSA的死细胞的红色荧光明显增强，且呈浓度依赖型，表明Ru1具有较好的抗菌活性，低浓度下即具有抑菌或杀菌效果。

配合物对细菌及生物膜细胞形态影响的研究。

取对数生长期的菌液MRSA与2×MIC浓度的配合物在37℃孵育2h，相应波长激发光分别光照0min、30min。处理后的细菌在8000rpm下离心3min后，收集细菌，用PBS洗涤，然后用2.5％戊二醛在4℃下固定4h，去除戊二醛后，收集到的细胞依次在不同梯度的乙醇中分级脱水(30％、50％、70％、90％和100％，各脱水15min)。最后，将脱水后的细胞滴在清洗干净的锡箔纸上，冷冻干燥后，喷镀金，并在扫描电镜下观察。同时观察未经处理的细菌进行比较。

基于体外优异的抗菌活性，为此进一步评估配合物Ru2的抗菌机制。首先，使用扫描电子显微镜(SEM)观察细菌形貌。如图10所示，相比于对照组细菌的光滑圆润的细菌形态，Ru2和Ru2加光照组能够破坏细菌细胞壁膜，而且相对于Ru2组的少量褶皱现象，Ru2加光照组的细菌细胞膜出现了明显的褶皱，塌陷和破损。

活性氧水平检测

取对数生长期的菌液MRSA，与所合成的配合物在37℃下共孵育2h，相应波长激发光分别光照0min、30min，离心、洗涤，加入DCFH-DA工作液，培养箱内避光孵育0.5h，PBS清洗2-3遍，用倒置荧光显微镜观察拍照。

由图11、12可知，配合物Ru1与MRSA孵育后可以产生ROS，但经光照照射之后，其ROS荧光强度明显提升：即低浓度Ru1经光照后荧光强度高于高浓度Ru1的不加光照组；进一步的，使用DPBF检测了ROS的种类：为单线态氧。推测可能是由于光照，Ru1产生了更多的ROS造成MRSA胞内的氧化还原失衡而导致其死亡。

生物安全性

新鲜红细胞经3500rpm离心5min分离，PBS洗涤3次，稀释至终浓度(5％，v/v)。将不同浓度的Ru1和Ru2分别添加到450μL的红细胞中，37℃孵育4h以150rpm的速度轻轻摇动。孵育结束时，将溶液以3500rpm离心5min，并使用酶标仪在540nm处测定溶血活性。能够完全裂解红细胞的Triton X-100(PBS中的0.1％)用作阳性对照，而PBS用作阴性对照。红细胞的溶血率由以下等式计算：溶血率(％)＝(样品组-阴性对照)/(阳性对照-阴性对照)×100％。

结果如图13中显示，2MIC时Ru1和Ru2所测得溶血率均小于5％，说明配合物在所用浓度范围相对安全。

以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims

1.一种双胍-钌配合物，其特征在于，结构式如式Ⅰ或式Ⅱ所示；

2.一种权利要求1所述的双胍-钌配合物的制备方法，其特征在于，为方法一或方法二；当所述双胍-钌配合物为式Ⅰ所示的结构时，采用方法一，包括以下步骤；

3.根据权利要求2所述的双胍-钌配合物的制备方法，其特征在于，所述方法一中，所述钌盐与所述锂盐的摩尔比为1:15；所述钌盐与所述2,2-联喹啉的摩尔比为1:2；所述加热回流的温度为90℃，时间为2h；所述回流反应的温度为140℃，时间为8h；所述钌盐为三氯化钌；所述锂盐为氯化锂；所述有机溶剂为N,N’-二甲基甲酰胺。

4.根据权利要求2所述的双胍-钌配合物的制备方法，其特征在于，所述方法一中，所述物质2与所述双胍衍生物的摩尔比为1:1；所述双胍衍生物为1-邻甲苯双胍；所述加热反应的温度为90℃，时间为8h。

5.根据权利要求2所述的双胍-钌配合物的制备方法，其特征在于，所述方法二中，所述钌盐为三氯化钌；所述有机溶剂为二甲基亚砜；所述双胍衍生物为1-邻甲苯双胍；所述辅助配体为2,9-二甲基联吡啶；所述混合溶剂为乙醇和二甲基亚砜体积比9:1的混合物。

6.根据权利要求2所述的双胍-钌配合物的制备方法，其特征在于，所述方法二中，制备所述产物4时，回流的温度为85℃，时间为30h；制备所述产物4时，所述回流结束后还包括冷却到室温后，抽滤收集固体，用异丙醇洗涤所述固体，真空干燥的步骤。

7.根据权利要求2所述的双胍-钌配合物的制备方法，其特征在于，所述方法二中，制备所述产物5时，所述回流的温度为90℃，时间为3h；制备所述产物5时，所述回流结束后还包括冷却至室温，旋去溶剂的步骤；所述回流反应的温度为130℃，时间为12h；所述回流反应结束后还包括冷却至室温，加入适量水，滴加六氟磷酸钾饱和溶液，冰箱静置，抽滤干燥，粗产物用中性氧化铝柱纯化的步骤。

8.如权利要求1所述的双胍-钌配合物在制备抗菌药物中的应用。

9.一种抗菌药物，其特征在于，原料包括权利要求1所述的双胍-钌配合物。

10.根据权利要求9所述的抗菌药物，其特征在于，为抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、阴沟肠杆菌和/或肺炎克雷伯菌的药物。