CN118325759A - 一种副地衣芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种副地衣芽孢杆菌及其应用，属于功能性微生物技术领域。本发明副地衣芽孢杆菌HMPM220325可产生醋酸，能形成生物膜有效对抗外界环境刺激，能够缓解UC结肠缩短和疾病活动指数的增加，改善结肠组织病理损伤，抑制杯状细胞的丢失和黏液层的破损，上调紧密连接相关蛋白ZO‑1、Occludin和Claudin‑1mRNA的表达水平，改变肠道微生物组成，增加瘤胃球菌属的相对丰度，对溃疡性结肠炎具有很好的治疗效果。

Description

一种副地衣芽孢杆菌及其应用
技术领域
本发明涉及一种副地衣芽孢杆菌及其应用，属于功能性微生物技术领域。
背景技术
溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)是炎症性肠病(inflammatory boweldisease，IBD)临床亚型的一种，是一种慢性、非特异性、复发性消化道疾病，患者临床表现主要为食欲不振、腹痛、腹泻和便血，直肠和结肠出现慢性、非特异性、且反复发作的炎症。从临床数据来看，UC已成为一种全球流行性疾病，UC在北欧和美国发病率最高，但在过去10年里发展中国家的UC患者数量呈指数级增长。UC的病程长，易复发，不仅给患者造成精神和肉体的痛苦，增加了患者的经济负担，严重者还会增加罹患肠癌的风险。尽管UC的发病机制目前尚不完全清楚，但大量研究表明，遗传因素、环境因素和肠道微生态与UC的发生和发展息息相关。健康生理条件下的肠道屏障完整性是由肠道黏液层和上皮细胞中的紧密连接蛋白(TJs，包含Claudins、Occludin和Zonula occlusions)共同维持。UC患者肠道内黏液层呈破损状态，炎症反应导致TJs表达水平下调使得肠道通透性增加，肠道中的共生菌和病原菌能穿过黏液层进入肠上皮，与其中的Paneth细胞、先天免疫细胞和上皮细胞直接接触，激活宿主免疫反应，进一步加重肠道炎症。目前针对UC治疗的临床一线药物主要为免疫抑制剂、皮质类固醇、生物制剂、抗生素和对抗疗法药物(如布地奈德、5-氨基水杨酸和氢化可的松等)。然而，这些药物大多疗效有限，长期使用还可能会引起高烧、过敏、胃肠道不适、骨质疏松、糖尿病、高血压以及肾损伤等不良反应。因此，寻找更多长期有效、副作用少的UC疗法十分必要。
益生菌疗法作为一种具有多种益生功能的治疗策略，如改善肠道屏障功能、调节肠道菌群平衡和抑制致病菌生长等，在UC治疗领域正受到越来越多的关注。芽孢杆菌是一种兼性厌氧或好氧的可产芽孢的革兰氏阳性细菌，通常存在于土壤、水体、空气以及动物肠道中。芽孢杆菌是当前应用较多的功能性细菌，其抗逆性强，能有效抵抗干燥、酸碱和高温等不良环境。部分芽孢杆菌已被发现具有益生特性，可抑制多种致病细菌的生长繁殖，恢复UC患者肠道稳态。然而值得注意的是芽孢杆菌的这种肠道改善作用并非是普遍性的，不同菌株的作用和功能均存在差异具有菌株特异性，因此有必要筛选出更多具有高活性、显著益生作用的芽孢杆菌菌株应用于UC的预防与治疗。此外，虽然已发现了不少可以被用来作为UC治疗的益生菌，但大多益生菌均存在环境适应性差，治疗效果弱等不足，因而需要寻找更多环境适应性强和缓解UC效果好的益生菌，以期在具备UC缓解功能的同时降低菌株储存成本。目前还未有关于副地衣芽孢杆菌具有缓解UC作用的报道。
发明内容
本发明提供了一种副地衣芽孢杆菌及其应用。本发明提供的菌株可以显著抑制UC小鼠结肠的缩短，减轻UC小鼠结肠部位的炎症细胞浸润和粘膜破坏程度，调节肠道菌群的紊乱，对UC具有良好的治疗和预防作用。
本发明提供了一株副地衣芽孢杆菌(Bacillus paralicheniformis)HMPM220325，于2023年5月14日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为GDMCC No:63458。
本发明提供了副地衣芽孢杆菌HMPM220325具备生产醋酸的能力。
本发明提供了副地衣芽孢杆菌HMPM220325具备形成生物膜的能力。
本发明中所述形成生物膜的条件为：37℃，有氧/厌氧，静置培养12小时以上。
本发明提供了含所述副地衣芽孢杆菌HMPM220325的功能性菌剂。
在本发明的一种实施方式中，所述菌剂为含有副地衣芽孢杆菌HMPM220325的菌液，或将菌液冷冻干燥得到的粉剂，含有不低于2.0×108CFU/g或2.0×108CFU/mL的活性副地衣芽孢杆菌。
在本发明的一种实施方式中，所述微生物制剂还含有100g/L-150g/L脱脂奶粉、和/或100g/L-150g/L麦芽糊精、和/或140g/L-160g/L海藻糖。
本发明还提供了制备所述微生物制剂的方法，其特征在于，将所述副地衣芽孢杆菌HMPM220325在培养基中发酵。
在本发明的一种实施方式中，将副地衣芽孢杆菌HMPM220325菌种按照以所述培养基的1-5％(v/v)的接种量接种到在110-125℃条件下灭菌15-30分钟后的培养基中，然后在温度20-50℃的氧气或厌氧条件下培养12-36小时，用pH为7.0-7.4的磷酸盐缓冲液清洗2-4次，用所述的保护剂重悬，使菌浓度达到1012CFU/mL，在-15～-20℃预冻8-14小时，进行真空冷冻干燥得到所述的发酵菌剂。
在本发明的一种实施方式中，副地衣芽孢杆菌HMPM220325的培养基为LB或BHI培养基。
本发明还提供副地衣芽孢杆菌HMPM220325在制备改善溃疡性结肠炎症状的功能性菌剂或药品中的应用。
在本发明的一种实施方式中，所述功能性菌剂或药品中副地衣芽孢杆菌HMPM220325的活菌数为不低于2.0×108CFU/mL或者2.0×108CFU/g。
在本发明的一种实施方式中，所述改善溃疡性结肠炎症状包括(a)～(f)至少一方面：
(a)抑制结肠缩短；
(b)改善结肠粘膜损伤；
(c)增加紧密连接蛋白表达；
(d)减少结肠中促炎因子的表达，增加抗炎因子表达；
(e)改变肠道菌群组成；
(f)增加瘤胃球菌属菌株的相对丰度。
在本发明的一种实施方式中，所述改善结肠粘膜损伤包括改善结肠组织病理损伤，抑制杯状细胞的丢失和黏液层的破损。
在本发明的一种实施方式中，所述紧密连接蛋白包括ZO-1、Occludin和Claudin-1。
在本发明的一种实施方式中，所述促炎因子包括TNF-α、IL-1β和IL-6，所述抗炎因子包括IL-10。
有益效果：
本发明副地衣芽孢杆菌HMPM220325可产生醋酸，能形成生物膜有效对抗外界环境刺激，能够缓解UC结肠缩短(将模型组结肠由5.45cm延长至9.93cm)和疾病活动指数的增加(由11.67降低至5.00)，改善结肠组织病理损伤(由9.33降低至2.83)，抑制杯状细胞的丢失和黏液层的破损，使得紧密连接相关蛋白ZO-1(上调2.5倍)、Occludin(上调2.8倍)和Claudin-1(上调2.9倍)mRNA的表达水平相较模型组显著上调，改变肠道微生物组成，增加瘤胃球菌属的相对丰度(是模型组的1.7倍)，具有很好的UC治疗效果。
生物材料保藏
一株副地衣芽孢杆菌(Bacillus paralicheniformis)HMPM220325，分类学命名为Bacillus paralicheniformis，已于2023年5月14日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No:63458，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
附图说明
图1是副地衣芽孢杆菌HMPM220325的菌落形态图；
图2是副地衣芽孢杆菌HMPM220325形成生物膜形态图；
图3是副地衣芽孢杆菌HMPM220325的PCR扩增产物的电泳图；
图4是副地衣芽孢杆菌HMPM220325发酵液HPLC检测图谱；
图5是副地衣芽孢杆菌HMPM220325对UC小鼠疾病活动指数(DAI)影响结果；
图6是副地衣芽孢杆菌HMPM220325对UC小鼠结肠长度影响图；
图7是副地衣芽孢杆菌HMPM220325对UC小鼠结肠粘膜损伤的影响图；
图8是副地衣芽孢杆菌HMPM220325对UC小鼠结肠组织病理评分图；
图9是副地衣芽孢杆菌HMPM220325对UC小鼠结肠紧密连接相关蛋白转录水平的影响图；
图10是副地衣芽孢杆菌HMPM220325对UC小鼠结肠炎症相关细胞因子转录水平的影响图；
图11是副地衣芽孢杆菌HMPM220325对UC小鼠肠道菌群β多样性影响图；图中HMPM220325为副地衣芽孢杆菌HMPM220325组；
图12是副地衣芽孢杆菌HMPM220325对UC小鼠粪便中瘤胃球菌属相对丰度的影响图。
具体实施方式
副地衣芽孢杆菌HMPM220325具有下述生物学特性：
(1)菌体特征：呈革兰氏染色阳性，可形成孢子。
(2)菌落特征：有氧或厌氧培养12小时形成明显的菌落，直径在0.5-2mm之间，正面形态叶形，侧面形态呈突起状，边缘不齐，乳白色，不透明，表面光滑，不产生色素，参见附图1。
(3)生长特性：在37℃恒温有氧或厌氧的条件下，在LB或BHI培养基中培养约12小时达到对数生长末期。
(4)生物膜形成特性：在37℃恒温有氧或厌氧的条件下，在LB或BHI培养基中静置培养12小时即于气液表面形成致密的生物膜，生物膜形态参见附图2。
下述实施例中涉及的葡聚糖硫酸钠(DSS)购自美国MP Biomedicals公司。副地衣芽孢杆菌(Bacillus paralicheniformis)ATCC11091购自广东省微生物菌种保藏中心(保藏编号为GDMCC 1.182)。
实施例1副地衣芽孢杆菌HMPM220325的分离、鉴定
购自超市的橘子采用75％的酒精擦拭外表面后于紫外超净台内切块，取6.5g果肉与45.0g鲜牛奶、6.0g蔗糖混合，置于63℃水浴锅中加热30分钟，而后密封放置阴凉处7天。将发酵乳进行梯度稀释后涂布于LB固体平板上，培养12小时，挑取单菌落进行平板划线纯化，即得菌株HMPM220325。
其中，LB固体培养基成分：酵母提取物5g，胰蛋白胨10g，氯化钠10g，琼脂粉15g，NaOH调pH至7.0，121℃、20分钟高压灭菌即得。
菌株HMPM220325的遗传学特征：
用细菌基因组试剂盒提取细菌基因DNA后，利用通用引物进行PCR扩增，扩增产物经琼脂糖凝胶回收纯化后，连接质粒载体，然后将连接产物转化到感受态细胞中，进行阳性克隆的筛选，培养后测序。
PCR扩增产物的电泳图见附图3，该菌株的16S rDNA基因序列如SEQ ID No.1所示。将该序列与GenBank中已登录的部分菌株的16S rDNA基因序列进行相似性比较，同源性达到98.2％，结合上述形态学鉴定结果，表明该菌株HMPM220325属于副地衣芽孢杆菌(Bacillus paralicheniformis)。
实施例2副地衣芽孢杆菌HMPM220325发酵液的制备
将HMPM220325菌株以1:100(V/V)的比例接种于5mLBHI培养基中，37℃，220rpm培养6小时，得种子液。取1mL种子液接种于100mLBHI培养基中，培养条件同上，接种后12-24小时，OD600达到1.5-2.0时可停止培养，得到发酵液。
经检测，副地衣芽孢杆菌HMPM220325发酵液中含有醋酸29.24μM/L，检测图谱见附图4。
实施例3副地衣芽孢杆菌HMPM220325对C57BL/6J小鼠无毒副作用
将实施例2中的发酵液5000g离心10min，获得副地衣芽孢杆菌HMPM220325菌体，将菌体重悬于PBS溶液中，制成浓度为1.0×109CFU/mL的菌悬液。取体重16-18g左右的健康雄性C57BL/6J小鼠6只，适应环境一周后，每日给予浓度1.0×109CFU/mL的菌悬液灌胃一次(每次灌胃0.2mL)，观察两周，记录死亡和体重情况。
这些试验结果列于表1中。这些结果表明，喂食浓度1.0×109CFU/mL的副地衣芽孢杆菌HMPM220325未对小鼠造成明显影响，体重无显著变化，无死亡现象产生。小鼠外观无明显病理症状。
表1小鼠体重变化及死亡情况
实施例4：副地衣芽孢杆菌HMPM220325对UC小鼠疾病症状的影响
取体重16-18g的健康雄性C57BL/6J小鼠18只，适应环境1周，每组6只小鼠，随机分为3组：空白组、模型组、副地衣芽孢杆菌HMPM220325干预组(副地衣芽孢杆菌HMPM220325)和副地衣芽孢杆菌ATCC11091干预组(副地衣芽孢杆菌ATCC11091)。干预组灌胃菌悬液的剂量为1.0×109CFU/mL，重悬于PBS溶液中，每日灌胃0.2mL，灌胃2周，空白组和模型组灌胃不含菌液的等剂量PBS溶液。第4周在饮水中添加2.5％(w/v)的葡聚糖硫酸钠(dextransulphate sodium，DSS)持续7天以诱导小鼠结肠炎。实验动物分组及处理方法见表2。
表2动物实验设计
第4周，即造模期间(DSS处理)，每天定时称量小鼠体重并计算其变化的百分比，同时观察小鼠的粪便性状和粪便隐血情况，根据小鼠体重、粪便性状和便血情况，计算小鼠的疾病活动指数(Disease activity index，DAI)，具体评分细则见表3。在第28天处死小鼠后，收集小鼠结肠组织，测定结肠长度。
表3动物疾病活动指数(DAI)评分系统
体重下降百分比 粪便性状 便血情况 分数
0 正常 正常 0
1-5 / / 1
6-10 松散 便血阳性 2
11-15 / / 3
>15 稀便 肉眼血便 4
实验结果如附图5、图6和表4所示。图5结果显示空白组小鼠无结肠炎迹象，其他三组(模型组和副地衣芽孢杆菌HMPM220325组)的DAI值随着时间的推移均显著增加(P<0.01，P<0.01)。在第28天实验结束时，模型组的平均DAI达到最大值11.67±0.82，而给予2×108CFU的副地衣芽孢杆菌HMPM220325组和副地衣芽孢杆菌ATCC11091组DAI评分分别降低至5.00±2.10和9.00±0.89。图6结果显示模型组小鼠结肠明显短于空白组小鼠，灌胃副地衣芽孢杆菌HMPM220325和副地衣芽孢杆菌ATCC11091后均能增加UC小鼠的结肠长度，其中副地衣芽孢杆菌HMPM220325改善效果更好。这些结果表明本发明筛选的副地衣芽孢杆菌HMPM220325具有缓解UC小鼠疾病症状的功能。
表4结肠长度统计表
分组 结肠长度(cm)
空白组 9.15±0.63
模型组 5.45±0.26**
副地衣芽孢杆菌HMPM220325 6.93±0.39##
副地衣芽孢杆菌ATCC11091 6.01±0.32##
注：**表示模型组与空白组相比P<0.01，##表示副地衣芽孢杆菌HMPM220325组与模型组相比P<0.01。
实施例5：副地衣芽孢杆菌HMPM220325可改善小鼠结肠粘膜损伤
C57BL/6J小鼠分组、造模及处理方法同实施例4。
在第28天处死小鼠后，收集小鼠结肠组织，制作结肠石蜡切片并进行HE染色，实验步骤为：(1)取距肛门1cm处的远端结肠中1段用4％多聚甲醛固定48小时；(2)将固定好的结肠组织冲洗干净后依次经70％、80％、90％、95％、100％的乙醇溶液进行脱水，每次20min；(3)将结肠样品放入1∶1的二甲苯和酒精混合液中15分钟，然后放入二甲苯I和二甲苯II各15分钟；(4)将结肠组织转移至二甲苯和石蜡各半的混合液15分钟，再放入石蜡Ⅰ、石蜡Ⅱ透蜡各1小时，温度保持60℃。(5)用石蜡包埋机将结肠包埋于重新融化的蜡块中。(6)用组织切片机对组织蜡块进行切片，厚度为5μm；(7)切片置于62℃烘箱中烘干1小时，而后按照H&E试剂盒说明书操作。
实验结果如图7和图8所示。图7中空白组小鼠结肠黏膜完整，肠绒毛整洁，隐窝完整，杯状细胞丰富，无炎症细胞浸润。而模型组结肠组织中出现上皮细胞严重受损，单核细胞明显浸润，黏膜损伤和隐窝丢失，灌胃副地衣芽孢杆菌HMPM220325和副地衣芽孢杆菌ATCC11091均显著改善UC小鼠结肠粘膜损伤，灌胃副地衣芽孢杆菌HMPM220325组的小鼠结肠结构更接近于空白组(图7)，灌胃副地衣芽孢杆菌HMPM220325显著降低结肠组织损伤评分(图8)，说明副地衣芽孢杆菌HMPM220325能够显著改善UC小鼠的结肠粘膜损伤。
实施例6：副地衣芽孢杆菌HMPM220325可增强肠道屏障功能
C57BL/6J小鼠分组、造模及处理方法同实施例4。
在第28天处死小鼠后，收集小鼠结肠组织测定结肠中紧密连接相关蛋白ZO-1，Occludin和Claudin-1的转录水平。测定方法如下：合成ZO-1、Occludin、Claudin-1和β-actin的引物序列，引物信息如表5。取各组小鼠相同部位结肠组织1cm，迅速放入液氮中，置于负80℃冰箱冻存，取出冻存结肠组织放入已加入1mLTRIzol和3粒锆珠的1.5mL无酶离心管中，用组织研磨匀浆机充分匀浆，室温静置5分钟。加入0.2mL氯仿，剧烈振荡30秒，静置10分钟。接着以12000g，4℃离心15分钟。小心吸取上层水相至新的无酶1.5mL离心管中，加入等体积异丙醇，上下轻轻颠倒混匀，室温静置10分钟。接着以12000g，4℃离心15分钟。弃去上清，加入1mL预冷75％乙醇，震荡洗涤沉淀。以12000g，4℃离心5分钟，弃去上清，于超净台内吹干沉淀，加入50μL无酶超纯水溶解RNA。使用酶标仪测定提取的RNA浓度，OD260/OD280在1.9～2.0之间表明质量合格。以提取质量合格的总RNA为模板，按照反转录试剂盒说明书的步骤合成cDNA。反转录得到的cDNA进行qRT-PCR检测，PCR体系为：5μL SYBRGreenSupermix，3μL去离子水，0.5μL上游引物(10μmol/L)，0.5μL下游引物(10μmol/L)和1μL的cDNA模板(100ng/μL)。qPCR运行程序设定：94℃，2min，(94℃，30s；61℃，30s；72℃，20s)39个循环；目的基因经过qPCR检测后，以β-actin为内参基因，采用2-ΔΔct法进行相对基因表达分析。
表5引物序列
实验结果如附图9所示。由图9可以看出，模型组小鼠结肠中3种主要紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-1的mRNA表达水平均发生显著下调，灌胃副地衣芽孢杆菌HMPM220325和副地衣芽孢杆菌ATCC11091均显著提高了结肠中3种紧密连接相关蛋白的转录水平，其中副地衣芽孢杆菌HMPM220325的改善效果优于副地衣芽孢杆菌ATCC11091，其中副地衣芽孢杆菌HMPM220325组小鼠肠道ZO-1mRNA表达水平是副地衣芽孢杆菌ATCC11091组的1.37倍，Occludin mRNA表达水平是副地衣芽孢杆菌ATCC11091组的1.40倍，Claudin-1mRNA表达水平是副地衣芽孢杆菌ATCC11091组的1.43倍，这些结果均说明副地衣芽孢杆菌HMPM220325能够增强UC小鼠的肠道屏障功能。
实施例7：副地衣芽孢杆菌HMPM220325在降低结肠中促炎细胞因子和增加抗炎细胞因子中的应用
C57BL/6J小鼠分组、造模及处理方法同实施例4。
在第28天处死小鼠后，收集小鼠结肠组织测定结肠中炎症相关细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-10的转录水平。测定方法如下：合成IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10和β-actin的引物序列，引物信息如表6。同实施例6处理结肠组织和qPCR检测，并进行炎症相关细胞因子相对基因表达分析。
表6引物序列
实验结果如附图10所示，模型组小鼠结肠中促炎细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA表达水平均发生显著上调，抗炎细胞因子IL-10的mRNA表达水平发生显著下调。灌胃副地衣芽孢杆菌HMPM220325和副地衣芽孢杆菌ATCC11091均显著降低了小鼠结肠中促炎细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA表达水平，显著上调抗炎细胞因子IL-10的mRNA表达水平。其中灌胃副地衣芽孢杆菌HMPM220325的小鼠结肠中促炎细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA表达水平分别是副地衣芽孢杆菌ATCC11091组的0.57、0.61和0.75倍，抗炎细胞因子IL-10的mRNA表达水平是副地衣芽孢杆菌ATCC11091组的1.43倍。说明副地衣芽孢杆菌HMPM220325能降低结肠中促炎细胞因子和增加抗炎细胞因子表达水平。
实施例8：副地衣芽孢杆菌HMPM220325能够改变UC小鼠肠道菌群组成
C57BL/6J小鼠分组、造模及处理方法同实施例4。
试验末期收集小鼠新鲜粪便冻存于-80℃，用DNA快速提取试剂盒按说明书方法步骤提取粪便中的DNA，对样本16S rDNA的V3-V4区进行PCR扩增，用胶回收试剂盒对扩增片段进行纯化回收，在Illuminamiseqpe300平台进行高通量测序，采用QIIME2分析平台对扩增子进行分析。
实验结果如附图11所示。由图11的UPGMA(非加权配对平均法)聚类树和细菌丰度直方图可以看出，空白组和模型组之间发生明显的聚类分离，表明两组之间的细菌群落组成具有较大差异。副地衣芽孢杆菌HMPM220325组的菌落组成相较模型组，更接近空白组。说明副地衣芽孢杆菌HMPM220325干预后改变了UC小鼠肠道菌群组成，并使其与空白组小鼠肠道菌群组成更相似。
实施例9：副地衣芽孢杆菌HMPM220325能够增加UC小鼠粪便中瘤胃球菌属的相对丰度
C57BL/6J小鼠分组、造模及处理方法同实施例4。
肠道细菌相对丰度检测方法同实施例8。
实验结果如附图12所示。由实验结果可以看出，与空白组相比，模型组小鼠粪便中瘤胃球菌属(Ruminococcaceae)的相对丰度显著下降，副地衣芽孢杆菌HMPM220325干预后显著增加了瘤胃球菌属的相对丰度。瘤胃球菌属细菌与UC的发展密切相关，据统计瘤胃球菌属的成员Ruminococcus albus的丰度与UC发展呈负相关，瘤胃球菌属的另一成员R.bromii能降解抗性淀粉为其它细菌提供营养，并产生具有抗炎效应的丁酸盐。本研究结果提示副地衣芽孢杆菌HMPM220325可能通过瘤胃球菌属的相对丰度，进而富集丁酸盐来改善肠道微生态。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (10)

1.一株副地衣芽孢杆菌(Bacillusparalicheniformis)HMPM220325，其特征在于，所述副地衣芽孢杆菌HMPM220325保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCCNo:63458，保藏日期为2023年5月14日。
2.含权利要求1所述副地衣芽孢杆菌HMPM220325的微生物制剂。
3.如权利要求2所述的微生物制剂，其特征在于，所述微生物制剂为含有副地衣芽孢杆菌HMPM220325的液体或固体制剂。
4.如权利要求3所述的微生物制剂，其特征在于，所述微生物制剂中副地衣芽孢杆菌HMPM220325活菌数≥2.0×108CFU/mL或者≥2.0×108CFU/g。
5.如权利要求4所述的微生物制剂，其特征在于，所述微生物制剂还含有脱脂奶粉、麦芽糊精或海藻糖。
6.制备权利要求2～5任一所述微生物制剂的方法，其特征在于，将权利要求1所述副地衣芽孢杆菌HMPM220325在培养基中发酵。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，在20-50℃，发酵至少12小时。
8.权利要求1所述副地衣芽孢杆菌HMPM220325，或权利要求2～5任一所述微生物制剂在制备改善溃疡性结肠炎症状的功能性菌剂或药品中的应用。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述功能性菌剂或药品中副地衣芽孢杆菌HMPM220325的活菌数不低于2.0×108CFU/mL或者2.0×108CFU/g。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述改善溃疡性结肠炎症状包括(a)～(f)至少一方面：
(a)抑制结肠缩短；
(b)改善结肠粘膜损伤；
(c)增加紧密连接蛋白表达；
(d)减少结肠中促炎因子的表达，增加抗炎因子表达；
(e)改变肠道菌群组成；
(f)增加瘤胃球菌属菌株的相对丰度。
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