CN118222489A - 一种胚胎培养液及提高胚胎健康的培养方法 - Google Patents
一种胚胎培养液及提高胚胎健康的培养方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于生物技术领域，本发明具体公开了一种胚胎培养液及提高胚胎健康的培养方法，由岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸和基础培养基组成；所述岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸、基础培养基的用量比为（100~300）μg：（100~300）μg：（50~200）μg：1mL。本发明将岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸作为胚胎培养液，能够有效的保持细胞功能和细胞形态的完整性，防止细胞免受体内外的氧自由基和细胞毒素物质的损害，保护线粒体酶、修复线粒体，促进线粒体的融合直接影响线粒体功能，调节线粒体介导的细胞能量产生、自噬及凋亡，促进体外培养胚胎健康发育，提高囊胚形成数和优胚数。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种胚胎培养液及提高胚胎健康的培养方法。
背景技术
研究表明，先天缺陷、营养不良、激素失调或生殖系统疾病等多方面因素均可导致不孕不育，辅助生殖技术的出现改善了这一局面。辅助生殖技术主要有常规体外受精/胚胎移植、人工授精、卵子体外成熟、卵胞浆内单精子注射、胚胎冻融技术、植入前遗传学诊断等。
胚胎培养液是一种特殊的液体介质，用于在实验室条件下支持胚胎的体外发育。它除了含有必需的无机离子、糖类以及蛋白质外，还含有氨基酸、维生素、核苷酸、辅酶等成分。这些成分能够提供胚胎发育所需的营养物质，促进胚胎的健康成长。
CN115011551A公开了一种改良的全程胚胎培养液及其制备方法，其包括基础物料及用于溶解的水，改良的全程胚胎培养液还包括关键物料，该关键物料包括磷脂酰丝氨酸或/和连翘酯苷A。改良的全程胚胎培养液提高了胚胎体外培养96小时后的囊胚形成率。但其囊胚形成率仍然较低。
鉴于此，提出本申请。
发明内容
本发明提供一种胚胎培养液及提高胚胎健康的培养方法，所述的胚胎培养液能够显著的提高囊胚形成数和优胚数，具有广泛的应用前景。
本发明解决其技术问题采用以下技术方案：
一种胚胎培养液，由岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸和基础培养基组成；所述岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸、基础培养基的用量比为（100~300）μg：（100~300）μg：（50~200）μg：1mL。
本发明创造性的将岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸作为胚胎培养液，所述的岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸，能够有效的保持细胞功能和细胞形态的完整性，防止细胞免受体内外的氧自由基和细胞毒素物质的损害，保护线粒体酶、修复线粒体，促进线粒体的融合直接影响线粒体功能，调节线粒体介导的细胞能量产生、自噬及凋亡，促进体外培养胚胎健康发育，提高囊胚形成数和优胚数。
作为本发明的优选实施方案，所述岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸、基础培养基的用量比为（150~180）μg：（250~280）μg：（100~120）μg：1mL。
作为本发明的优选实施方案，所述岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸、基础培养基的用量比为180μg：250μg：120μg：1mL。
作为本发明的优选实施方案，所述鱼腥草提取物的制备方法为：
（1）将鱼腥草粉碎，得到鱼腥草粉；
（2）将鱼腥草粉、纤维素酶、风味蛋白酶、β-葡聚糖酶加入到水中，酶解，过滤，得到酶解液；
（3）将酶解液以0.5~2BV/h流速通过大孔吸附树脂，洗脱速度为1~2BV/h，以水洗1~2BV，以70~80wt%乙醇溶液洗1~2BV，收集乙醇溶液洗脱液，干燥，得到鱼腥草提取物。
本发明的发明人研究发现，不同的鱼腥草提取物的制备方法制备得到的鱼腥草提取物对于囊胚形成数和优胚数的提高幅度是不同的，即鱼腥草提取物的制备方法对于囊胚形成数和优胚数具有一定的影响，通过采用本发明的方法制备得到的鱼腥草提取物相比于其他方法制备得到的鱼腥草提取物具有更佳的效果，能够更佳显著的提高囊胚形成数和优胚数。
作为本发明的优选实施方案，所述鱼腥草粉、纤维素酶、风味蛋白酶、β-葡聚糖酶、水的质量比为1：（0.005~0.03）：（0.005~0.02）：（0.005~0.02）：（5~12）。
作为本发明的优选实施方案，所述大孔吸附树脂为D101大孔吸附树脂。
作为本发明的优选实施方案，所述酶解的温度为48~55℃，酶解的时间为4~8h。
作为本发明的优选实施方案，每百毫升所述基础培养基包括以下成分：螯合剂0.1~0.3mg、氯化钠200~500mg、氯化钾20~50mg、磷酸二氢钠2~10mg、硫酸镁1~4mg、葡萄糖2~20mg、半乳糖酸钙10~20mg、生育酚0.5~2mg、抗坏血酸0.5~5mg、L-盐酸精氨酸10~30mg、L-苯丙氨酸10~30mg、L-苏氨酸5~20mg、L-色氨酸5~20mg、L-酪氨酸5~15mg、L-天冬氨酸5~20mg、L-谷氨酸5~12mg、甘氨酸5~20mg、L-脯氨酸2~12mg、L-丝氨酸5~20mg、5~10mg青霉素、2~10mg链霉素、余量的水。
作为本发明的优选实施方案，每百毫升所述基础培养基包括以下成分：螯合剂0.2mg、氯化钠400mg、氯化钾30mg、磷酸二氢钠5mg、硫酸镁2mg、葡萄糖10mg、半乳糖酸钙15mg、生育酚1mg、抗坏血酸3mg、L-盐酸精氨酸20mg、L-苯丙氨酸20mg、L-苏氨酸10mg、L-色氨酸12mg、L-酪氨酸12mg、L-天冬氨酸10mg、L-谷氨酸8mg、甘氨酸15mg、L-脯氨酸6mg、L-丝氨酸10mg、8mg青霉素、5mg链霉素、余量的水。
作为本发明的优选实施方案，所述螯合剂为谷氨酸二乙酸四钠。
本发明还提供了一种提高胚胎健康的培养方法，采用胚胎培养液进行培养，所述胚胎培养液为上述所述的胚胎培养液。
本发明的有益效果：本发明将岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸作为胚胎培养液，所述的岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸，能够有效的保持细胞功能和细胞形态的完整性，防止细胞免受体内外的氧自由基和细胞毒素物质的损害，保护线粒体酶、修复线粒体，促进线粒体的融合直接影响线粒体功能，调节线粒体介导的细胞能量产生、自噬及凋亡，促进体外培养胚胎健康发育，提高囊胚形成数和优胚数。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。
本发明中，涉及到数值区间，如无特别说明，上述数值区间内视为连续，且包括该范围的最小值及最大值，以及这种最小值与最大值之间的每一个值。进一步地，当范围是指整数时，包括该范围的最小值与最大值之间的每一个整数。此外，当提供多个范围描述特征或特性时，可以合并该范围。换言之，除非另有指明，否则本文中所公开之所有范围应理解为包括其中所归入的任何及所有的子范围。
在本发明中，具体的分散、搅拌处理方式没有特别限制。
本发明所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品各对比例所用原料与各实施例平行实验所用原料除特定说明外均为同一市售产品。
实施例1
一种胚胎培养液，由岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸和基础培养基组成；所述岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸、基础培养基的用量比为180μg：250μg：120μg：1mL。
每百毫升所述基础培养基包括以下成分：谷氨酸二乙酸四钠0.2mg、氯化钠400mg、氯化钾30mg、磷酸二氢钠5mg、硫酸镁2mg、葡萄糖10mg、半乳糖酸钙15mg、生育酚1mg、抗坏血酸3mg、L-盐酸精氨酸20mg、L-苯丙氨酸20mg、L-苏氨酸10mg、L-色氨酸12mg、L-酪氨酸12mg、L-天冬氨酸10mg、L-谷氨酸8mg、甘氨酸15mg、L-脯氨酸6mg、L-丝氨酸10mg、8mg青霉素、5mg链霉素、余量的水。
所述鱼腥草提取物的制备方法为：
（1）将鱼腥草粉碎至100目，得到鱼腥草粉；
（2）将鱼腥草粉、纤维素酶、风味蛋白酶、β-葡聚糖酶加入到水中，在50℃下酶解5h，过滤，得到酶解液；所述鱼腥草粉、纤维素酶、风味蛋白酶、β-葡聚糖酶、水的重量比为1：0.015：0.01：0.01：8；
（3）将酶解液以1BV/h流速通过D101大孔吸附树脂，洗脱速度为1.5BV/h，以水洗1.5BV，以75wt%乙醇溶液洗1.5BV，收集乙醇溶液洗脱液，干燥，得到鱼腥草提取物。
实施例2
一种胚胎培养液，由岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸和基础培养基组成；所述岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸、基础培养基的用量比为300μg：100μg：50μg：1mL。
每百毫升所述基础培养基包括以下成分：谷氨酸二乙酸四钠0.2mg、氯化钠400mg、氯化钾30mg、磷酸二氢钠5mg、硫酸镁2mg、葡萄糖10mg、半乳糖酸钙15mg、生育酚1mg、抗坏血酸3mg、L-盐酸精氨酸20mg、L-苯丙氨酸20mg、L-苏氨酸10mg、L-色氨酸12mg、L-酪氨酸12mg、L-天冬氨酸10mg、L-谷氨酸8mg、甘氨酸15mg、L-脯氨酸6mg、L-丝氨酸10mg、8mg青霉素、5mg链霉素、余量的水。
所述鱼腥草提取物的制备方法为：
（1）将鱼腥草粉碎至100目，得到鱼腥草粉；
（2）将鱼腥草粉、纤维素酶、风味蛋白酶、β-葡聚糖酶加入到水中，在50℃下酶解5h，过滤，得到酶解液；所述鱼腥草粉、纤维素酶、风味蛋白酶、β-葡聚糖酶、水的重量比为1：0.015：0.01：0.01：8；
（3）将酶解液以1BV/h流速通过D101大孔吸附树脂，洗脱速度为1.5BV/h，以水洗1.5BV，以75wt%乙醇溶液洗1.5BV，收集乙醇溶液洗脱液，干燥，得到鱼腥草提取物。
实施例3
一种胚胎培养液，由岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸和基础培养基组成；所述岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸、基础培养基的用量比为100μg：300μg：200μg：1mL。
每百毫升所述基础培养基包括以下成分：谷氨酸二乙酸四钠0.2mg、氯化钠400mg、氯化钾30mg、磷酸二氢钠5mg、硫酸镁2mg、葡萄糖10mg、半乳糖酸钙15mg、生育酚1mg、抗坏血酸3mg、L-盐酸精氨酸20mg、L-苯丙氨酸20mg、L-苏氨酸10mg、L-色氨酸12mg、L-酪氨酸12mg、L-天冬氨酸10mg、L-谷氨酸8mg、甘氨酸15mg、L-脯氨酸6mg、L-丝氨酸10mg、8mg青霉素、5mg链霉素、余量的水。
所述鱼腥草提取物的制备方法为：
（1）将鱼腥草粉碎至100目，得到鱼腥草粉；
（2）将鱼腥草粉、纤维素酶、风味蛋白酶、β-葡聚糖酶加入到水中，在50℃下酶解5h，过滤，得到酶解液；所述鱼腥草粉、纤维素酶、风味蛋白酶、β-葡聚糖酶、水的重量比为1：0.015：0.01：0.01：8；
（3）将酶解液以1BV/h流速通过D101大孔吸附树脂，洗脱速度为1.5BV/h，以水洗1.5BV，以75wt%乙醇溶液洗1.5BV，收集乙醇溶液洗脱液，干燥，得到鱼腥草提取物。
实施例4
一种胚胎培养液，由岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸和基础培养基组成；所述岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸、基础培养基的用量比为150μg：280μg：100μg：1mL。
每百毫升所述基础培养基包括以下成分：谷氨酸二乙酸四钠0.2mg、氯化钠400mg、氯化钾30mg、磷酸二氢钠5mg、硫酸镁2mg、葡萄糖10mg、半乳糖酸钙15mg、生育酚1mg、抗坏血酸3mg、L-盐酸精氨酸20mg、L-苯丙氨酸20mg、L-苏氨酸10mg、L-色氨酸12mg、L-酪氨酸12mg、L-天冬氨酸10mg、L-谷氨酸8mg、甘氨酸15mg、L-脯氨酸6mg、L-丝氨酸10mg、8mg青霉素、5mg链霉素、余量的水。
所述鱼腥草提取物的制备方法为：
（1）将鱼腥草粉碎至100目，得到鱼腥草粉；
（2）将鱼腥草粉、纤维素酶、风味蛋白酶、β-葡聚糖酶加入到水中，在50℃下酶解5h，过滤，得到酶解液；所述鱼腥草粉、纤维素酶、风味蛋白酶、β-葡聚糖酶、水的重量比为1：0.015：0.01：0.01：8；
（3）将酶解液以1BV/h流速通过D101大孔吸附树脂，洗脱速度为1.5BV/h，以水洗1.5BV，以75wt%乙醇溶液洗1.5BV，收集乙醇溶液洗脱液，干燥，得到鱼腥草提取物。
实施例5
一种胚胎培养液，由岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸和基础培养基组成；所述岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸、基础培养基的用量比为180μg：250μg：120μg：1mL。
每百毫升所述基础培养基包括以下成分：谷氨酸二乙酸四钠0.2mg、氯化钠400mg、氯化钾30mg、磷酸二氢钠5mg、硫酸镁2mg、葡萄糖10mg、半乳糖酸钙15mg、生育酚1mg、抗坏血酸3mg、L-盐酸精氨酸20mg、L-苯丙氨酸20mg、L-苏氨酸10mg、L-色氨酸12mg、L-酪氨酸12mg、L-天冬氨酸10mg、L-谷氨酸8mg、甘氨酸15mg、L-脯氨酸6mg、L-丝氨酸10mg、8mg青霉素、5mg链霉素、余量的水。
所述鱼腥草提取物的制备方法为：
（1）将鱼腥草粉碎至100目，得到鱼腥草粉；
（2）将鱼腥草粉、纤维素酶、风味蛋白酶、β-葡聚糖酶加入到水中，在50℃下酶解5h，过滤，得到酶解液；所述鱼腥草粉、纤维素酶、风味蛋白酶、β-葡聚糖酶、水的重量比为1：0.03：0.005：0.005：12；
（3）将酶解液以1BV/h流速通过D101大孔吸附树脂，洗脱速度为1.5BV/h，以水洗1.5BV，以75wt%乙醇溶液洗1.5BV，收集乙醇溶液洗脱液，干燥，得到鱼腥草提取物。
实施例6
一种胚胎培养液，由岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸和基础培养基组成；所述岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸、基础培养基的用量比为180μg：250μg：120μg：1mL。
每百毫升所述基础培养基包括以下成分：谷氨酸二乙酸四钠0.2mg、氯化钠400mg、氯化钾30mg、磷酸二氢钠5mg、硫酸镁2mg、葡萄糖10mg、半乳糖酸钙15mg、生育酚1mg、抗坏血酸3mg、L-盐酸精氨酸20mg、L-苯丙氨酸20mg、L-苏氨酸10mg、L-色氨酸12mg、L-酪氨酸12mg、L-天冬氨酸10mg、L-谷氨酸8mg、甘氨酸15mg、L-脯氨酸6mg、L-丝氨酸10mg、8mg青霉素、5mg链霉素、余量的水。
所述鱼腥草提取物的制备方法为：
（1）将鱼腥草粉碎至100目，得到鱼腥草粉；
（2）将鱼腥草粉、纤维素酶、风味蛋白酶、β-葡聚糖酶加入到水中，在50℃下酶解5h，过滤，得到酶解液；所述鱼腥草粉、纤维素酶、风味蛋白酶、β-葡聚糖酶、水的重量比为1：0.005：0.02：0.02：5；
（3）将酶解液以1BV/h流速通过D101大孔吸附树脂，洗脱速度为1.5BV/h，以水洗1.5BV，以75wt%乙醇溶液洗1.5BV，收集乙醇溶液洗脱液，干燥，得到鱼腥草提取物。
对比例1
对比例1与实施例1不同之处在于，对比例1不含有岩白菜素，采用等量的鱼腥草提取物替换岩白菜素（总量相同），其他都相同。
一种胚胎培养液，由鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸和基础培养基组成；所述鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸、基础培养基的用量比为430μg：120μg：1mL。
对比例2
对比例2与实施例1不同之处在于，对比例1不含有鱼腥草提取物，采用等量的岩白菜素替换鱼腥草提取物，其他都相同。
一种胚胎培养液，由岩白菜素、辛酰甘氨酸和基础培养基组成；所述岩白菜素、辛酰甘氨酸、基础培养基的用量比为430μg：120μg：1mL。
对比例3
对比例3与实施例1不同之处在于，岩白菜素、鱼腥草提取物的用量不同，其他都相同。
一种胚胎培养液，由岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸和基础培养基组成；所述岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸、基础培养基的用量比为30μg：400μg：120μg：1mL。
对比例4
对比例4与实施例1不同之处在于，岩白菜素、鱼腥草提取物的用量不同，其他都相同。
一种胚胎培养液，由岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸和基础培养基组成；所述岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸、基础培养基的用量比为400μg：30μg：120μg：1mL。
对比例5
对比例5与实施例1不同之处在于，鱼腥草提取物的制备方法不同，其他都相同。
所述鱼腥草提取物的制备方法为：
（1）将鱼腥草粉碎至100目，得到鱼腥草粉；
（2）将鱼腥草粉和70wt%乙醇溶液（固液比为1g：10mL）置于索氏提取器中，加热回流提取，过滤，得滤液，滤液干燥，得到鱼腥草提取物。
对比例6
对比例6与实施例1不同之处在于，鱼腥草提取物的制备方法不同，其他都相同。
所述鱼腥草提取物的制备方法为：
（1）将鱼腥草粉碎至100目，得到鱼腥草粉；
（2）将鱼腥草粉和水（固液比为1g：10mL）索氏提取器中，加热回流提取，过滤，得滤液，滤液干燥，得到鱼腥草提取物。
对比例7
对比例7与实施例1不同之处在于，鱼腥草提取物的制备方法不同于实施例1，其他都相同。
所述鱼腥草提取物的制备方法为：
（1）将鱼腥草粉碎至100目，得到鱼腥草粉；
（2）将鱼腥草粉、果胶酶、β-淀粉酶加入到水中，在50℃下酶解5h，过滤，得到酶解液；所述鱼腥草粉、果胶酶、β-淀粉酶、水的重量比为1：0.015：0.01：8；
（3）将酶解液以1BV/h流速通过D101大孔吸附树脂，洗脱速度为1.5BV/h，以水洗1.5BV，以75wt%乙醇溶液洗1.5BV，收集乙醇溶液洗脱液，干燥，得到鱼腥草提取物。
测试例
准备见栓的雌鼠，注射hCG后24小时后处死见栓雌鼠，输卵管收集受精卵团。将收集到的絮状受精卵团放置到37℃提前预热好的透明质酸酶中，当胚胎周围的卵丘和颗粒细胞被消化分离后立即转移、清洗后，挑选出正常形态的受精胚胎，采用微滴法培养，将收集到的鼠胚随机分成13组，为方便统计每组100个，分别置于实施例和对比例的培养液中，于37℃，5％CO2，饱和湿度的培养箱中培养，培养96小时后记录囊胚数量，并在24h时记录胚胎发育情况，记录受精卵优胚的个数：细胞数量为3-5个卵裂球细胞，卵裂球形态大小正常均一或有轻微不均，无无核碎片或碎片比例小于细胞团块体积1/3。
表1
从表1中可看出，本发明所述的胚胎培养液能够有效的提高囊胚形成数和优胚数。
对比实施例1~7可看出，实施例1为本发明的最佳实施方式，有着最佳的效果，能够最为有效的提高囊胚形成数和优胚数。
对比实施例1~4可看出，本发明通过控制岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸、基础培养基的用量比为（150~180）μg：（250~280）μg：（100~120）μg：1mL，进一步提高了囊胚形成数和优胚数。
对比实施例1与对比例1~2可看出，本发明所述的岩白菜素、鱼腥草提取物在提高囊胚形成数和优胚数方面具有协同增效作用，缺少岩白菜素、鱼腥草提取物中的任一一种，将导致效果显著下降。
对比实施例1与对比例3~4可看出，本发明通过控制岩白菜素、鱼腥草提取物的用量比在本发明的范围，进一步提高了囊胚形成数和优胚数。
对比实施例1与对比例5~7可看出，不同的鱼腥草提取物的制备方法制备得到的鱼腥草提取物对于囊胚形成数和优胚数的提高幅度是不同的，即鱼腥草提取物的制备方法对于囊胚形成数和优胚数具有一定的影响，通过采用本发明的方法制备得到的鱼腥草提取物相比于其他方法制备得到的鱼腥草提取物具有更佳的效果，能够更佳显著的提高囊胚形成数和优胚数。
最后应当说明的是，以上实施例以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (10)
1.一种胚胎培养液，其特征在于，由岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸和基础培养基组成；所述岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸、基础培养基的用量比为（100~300）μg：（100~300）μg：（50~200）μg：1mL。
2.根据权利要求1所述的胚胎培养液，其特征在于，所述岩白菜素、鱼腥草提取物、辛酰甘氨酸、基础培养基的用量比为180μg：250μg：120μg：1mL。
3.根据权利要求1所述的胚胎培养液，其特征在于，所述鱼腥草提取物的制备方法为：
（1）将鱼腥草粉碎，得到鱼腥草粉；
（2）将鱼腥草粉、纤维素酶、风味蛋白酶、β-葡聚糖酶加入到水中，酶解，过滤，得到酶解液；
（3）将酶解液以0.5~2BV/h流速通过大孔吸附树脂，洗脱速度为1~2BV/h，以水洗1~2BV，以70~80wt%乙醇溶液洗1~2BV，收集乙醇溶液洗脱液，干燥，得到鱼腥草提取物。
4.根据权利要求3所述的胚胎培养液，其特征在于，所述鱼腥草粉、纤维素酶、风味蛋白酶、β-葡聚糖酶、水的质量比为1：（0.005~0.03）：（0.005~0.02）：（0.005~0.02）：（5~12）。
5.根据权利要求3所述的胚胎培养液，其特征在于，所述大孔吸附树脂为D101大孔吸附树脂。
6.根据权利要求3所述的胚胎培养液，其特征在于，所述酶解的温度为48~55℃，酶解的时间为4~8h。
7.根据权利要求1所述的胚胎培养液，其特征在于，每百毫升所述基础培养基包括以下成分：螯合剂0.1~0.3mg、氯化钠200~500mg、氯化钾20~50mg、磷酸二氢钠2~10mg、硫酸镁1~4mg、葡萄糖2~20mg、半乳糖酸钙10~20mg、生育酚0.5~2mg、抗坏血酸0.5~5mg、L-盐酸精氨酸10~30mg、L-苯丙氨酸10~30mg、L-苏氨酸5~20mg、L-色氨酸5~20mg、L-酪氨酸5~15mg、L-天冬氨酸5~20mg、L-谷氨酸5~12mg、甘氨酸5~20mg、L-脯氨酸2~12mg、L-丝氨酸5~20mg、5~10mg青霉素、2~10mg链霉素、余量的水。
8.根据权利要求1所述的胚胎培养液，其特征在于，每百毫升所述基础培养基包括以下成分：螯合剂0.2mg、氯化钠400mg、氯化钾30mg、磷酸二氢钠5mg、硫酸镁2mg、葡萄糖10mg、半乳糖酸钙15mg、生育酚1mg、抗坏血酸3mg、L-盐酸精氨酸20mg、L-苯丙氨酸20mg、L-苏氨酸10mg、L-色氨酸12mg、L-酪氨酸12mg、L-天冬氨酸10mg、L-谷氨酸8mg、甘氨酸15mg、L-脯氨酸6mg、L-丝氨酸10mg、8mg青霉素、5mg链霉素、余量的水。
9.根据权利要求7所述的胚胎培养液，其特征在于，所述螯合剂为谷氨酸二乙酸四钠。
10.一种提高胚胎健康的培养方法，其特征在于，采用胚胎培养液进行培养，所述胚胎培养液为权利要求1~9任一所述的胚胎培养液。
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