CN118086094A - 一种用于白酒糟发酵用的复合菌剂及其应用 - Google Patents
一种用于白酒糟发酵用的复合菌剂及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN118086094A CN118086094A CN202311711903.6A CN202311711903A CN118086094A CN 118086094 A CN118086094 A CN 118086094A CN 202311711903 A CN202311711903 A CN 202311711903A CN 118086094 A CN118086094 A CN 118086094A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fermentation
- liquid
- grains
- vinasse
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims abstract description 112
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims abstract description 112
- 239000002131 composite material Substances 0.000 title claims abstract description 24
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 title claims abstract description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 48
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 claims abstract description 33
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 claims abstract description 28
- 241000194107 Bacillus megaterium Species 0.000 claims abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 27
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 26
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 15
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 claims description 47
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 8
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 5
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 5
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 claims description 5
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 5
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims description 4
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 4
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 claims description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 2
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000011868 grain product Nutrition 0.000 claims 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 abstract description 9
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 abstract description 7
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 abstract description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 5
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 abstract description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 abstract description 2
- 235000020097 white wine Nutrition 0.000 abstract 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 17
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 14
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 240000006394 Sorghum bicolor Species 0.000 description 5
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 5
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 5
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 5
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 5
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012880 LB liquid culture medium Substances 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 4
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 3
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- OBMBUODDCOAJQP-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-4-phenylquinoline Chemical compound C=12C=CC=CC2=NC(Cl)=CC=1C1=CC=CC=C1 OBMBUODDCOAJQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000723346 Cinnamomum camphora Species 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 101710089042 Demethyl-4-deoxygadusol synthase Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 description 1
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 1
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- UGXQOOQUZRUVSS-ZZXKWVIFSA-N [5-[3,5-dihydroxy-2-(1,3,4-trihydroxy-5-oxopentan-2-yl)oxyoxan-4-yl]oxy-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl (e)-3-(4-hydroxyphenyl)prop-2-enoate Chemical compound OC1C(OC(CO)C(O)C(O)C=O)OCC(O)C1OC1C(O)C(O)C(COC(=O)\C=C\C=2C=CC(O)=CC=2)O1 UGXQOOQUZRUVSS-ZZXKWVIFSA-N 0.000 description 1
- GNCMKSUAVMQXHN-UHFFFAOYSA-M [Cr](=O)(=O)([O-])O[Cr](=O)(=O)O.[K+].S(=O)(=O)(O)O Chemical compound [Cr](=O)(=O)([O-])O[Cr](=O)(=O)O.[K+].S(=O)(=O)(O)O GNCMKSUAVMQXHN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 1
- 229920000617 arabinoxylan Polymers 0.000 description 1
- 238000013124 brewing process Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L congo red Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=CC2=C(N)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3)C3=CC=C(C=C3)/N=N/C3=C(C4=CC=CC=C4C(=C3)S([O-])(=O)=O)N)=CC(S([O-])(=O)=O)=C21 IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 1
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000004460 silage Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XOSXWYQMOYSSKB-LDKJGXKFSA-L water blue Chemical compound CC1=CC(/C(\C(C=C2)=CC=C2NC(C=C2)=CC=C2S([O-])(=O)=O)=C(\C=C2)/C=C/C\2=N\C(C=C2)=CC=C2S([O-])(=O)=O)=CC(S(O)(=O)=O)=C1N.[Na+].[Na+] XOSXWYQMOYSSKB-LDKJGXKFSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/12—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes by fermentation of natural products, e.g. of vegetable material, animal waste material or biomass
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/30—Animal feeding-stuffs from material of plant origin, e.g. roots, seeds or hay; from material of fungal origin, e.g. mushrooms
- A23K10/37—Animal feeding-stuffs from material of plant origin, e.g. roots, seeds or hay; from material of fungal origin, e.g. mushrooms from waste material
- A23K10/38—Animal feeding-stuffs from material of plant origin, e.g. roots, seeds or hay; from material of fungal origin, e.g. mushrooms from waste material from distillers' or brewers' waste
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
- C12R2001/11—Bacillus megaterium
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
- C12R2001/125—Bacillus subtilis ; Hay bacillus; Grass bacillus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P60/00—Technologies relating to agriculture, livestock or agroalimentary industries
- Y02P60/80—Food processing, e.g. use of renewable energies or variable speed drives in handling, conveying or stacking
- Y02P60/87—Re-use of by-products of food processing for fodder production
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Physiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Botany (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明提供了一种用于白酒糟发酵用的复合菌剂及应用，属于白酒酿造废弃物再利用技术领域。该复合菌剂包括巨大芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌。本发明提供的采用复合菌剂处理白酒糟的方法：S1，巨大芽孢杆菌液态发酵，得到第一发酵菌液，取第一发酵菌液至酒糟进行第一发酵培养，得第一发酵酒糟；S2，枯草芽孢杆菌液态发酵，得到第二发酵菌液，取第二发酵菌液至第一发酵酒糟中进行第二发酵培养，其中第一发酵酒糟用氨水调pH6.0‑7.0，得第二发酵酒糟。经巨大芽孢杆菌酶解后的第一发酵酒糟，更有利于枯草芽孢杆菌的生长，促进酒糟中粗纤维的降解和提高粗蛋白的产生，粗蛋白的含量到达40％，足以应用于生产动物饲料。
Description
技术领域
本发明属于白酒酿造废弃物再利用技术领域，具体涉及一种用于白酒糟发酵用的复合菌剂及其应用。
背景技术
目前，酒糟利用的有效途径之一是使用微生物发酵的方法处理酒糟。然而现阶段专用在白酒糟的菌剂很少，大部分可应用饲料的菌种都不适合在白酒糟中生长。此外，在白酒生产酿造过程中掺杂一定比例的谷壳，以致酒糟中有较高含量的粗纤维，因其致密的结构，难以被动物消化，营养价值不高，限制其在单胃动物（猪）中应用。
因此，如何能提高白酒糟的了利用率，很好的应用于饲料，是科研工作者亟需解决的技术问题。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的上述不足，提供一种用于白酒糟发酵用的复合菌剂及其应用。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
本发明的第一目的是提供用于白酒糟发酵用的复合菌剂，所述复合菌剂包括巨大芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌，所述巨大芽孢杆菌Bacillu megaterium，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC NO.26025；所述枯草芽孢杆菌Bacillu subtilis，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC NO.26024。
本发明的第二目的是提供一种采用上述的复合菌剂处理白酒糟的方法，包括以下步骤：
步骤S1，巨大芽孢杆菌液态发酵，得到第一发酵菌液，取所述第一发酵菌液至酒糟进行第一发酵培养，得第一发酵酒糟；
步骤S2，枯草芽孢杆菌液态发酵，得到第二发酵菌液，取所述第二发酵菌液至第一发酵酒糟中进行第二发酵培养，其中第一发酵酒糟用氨水调pH6.0-7.0，得第二发酵酒糟。
进一步的，巨大芽孢杆菌液态发酵的液体培养基配方为羧甲基纤维素钠3.75g、鱼粉蛋白胨3g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁0.25g，500ml水。
进一步的，所述的液态发酵的条件为，温度29℃~30℃、170r/min~180r/min恒温摇床中培养48-72 h。
进一步的，枯草芽孢杆菌液态发酵的液体培养基为LB液体培养基。
进一步的，所述枯草芽孢杆菌液态发酵的条件为，29℃~30℃、170r/min~180r/min恒温摇床中培养48-72 h。
进一步的，所述的第一发酵培养和第二发酵培养的条件为，30℃下恒温培养52-72h。
本发明的第三目的是提供一种采用上述的方法制备得到的发酵酒糟产品。
本发明的第四目的是提供一种采用上述的发酵酒糟产品在制备饲料中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明提供的一种用于白酒糟发酵用的复合菌剂，其包括巨大芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌。本发明还提供了采用上述的复合菌剂处理白酒糟的方法： S1，巨大芽孢杆菌液态发酵，得到第一发酵菌液，取第一发酵菌液至酒糟进行第一发酵培养，得第一发酵酒糟；S2，枯草芽孢杆菌液态发酵，得到第二发酵菌液，取第二发酵菌液至第一发酵酒糟中进行第二发酵培养，其中第一发酵酒糟用氨水调pH6.0-7.0，得第二发酵酒糟。经巨大芽孢杆菌酶解后的第一发酵酒糟，更有利于枯草芽孢杆菌的生长，促进酒糟中粗纤维的降解和提高粗蛋白的产量，粗蛋白的含量到达40%，足以应用于生产动物饲料。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合具体实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
本实施例中用到的干酒糟指的是高粱干酒糟，由安徽古井贡酒股份有限公司提供。
需要说明的是，高粱干酒糟的营养特性主要由低发酵的阿拉伯木糖、纤维素和木质素等不溶性淀粉多糖组成，同时含有高水平的纤维，DDGS的质量往往取决于作物的质量、发酵工艺、干燥温度和时间等因素。与玉米干酒糟相比高粱干酒糟含量有更高的粗蛋白、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维。
本发明中用到的巨大芽孢杆菌的分类命名为巨大芽孢杆菌Bacillu megaterium，已送至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏日期为2022年11月02日，保藏编号为CGMCC No.26025。
本发明中用到的枯草芽孢杆菌的分类命名为枯草芽孢杆菌Bacillu subtilis，已送至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏日期为2022年11月02日，保藏编号为CGMCC No.26024。
实施例1
本实施例提供一种白酒糟发酵用的复合菌剂，复合菌剂包括巨大芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌，巨大芽孢杆菌Bacillu megaterium，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC NO.26025；枯草芽孢杆菌Bacillu subtilis，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC NO.26024。
（1）巨大芽孢杆菌的筛选和鉴定。
土壤采集：淮北师范大学校园逸夫楼对面的松树和樟树下的富含枯枝败叶的下层土壤。
菌株初筛：将采集的10g土壤样品分别置入无菌三角瓶中, 加入适量无菌水, 至100ml，于 30 °C、180 r/min 摇床振荡打散均匀后, 静置 30 min，用无菌水分别稀释至10−4、10−5、10−6 倍, 涂布到LB培养基平板上, 于 30 °C 培养箱培养, 待长出菌落后,挑取培养基上的不同菌种于LB养基上划线分离, 得到单菌落。然后将菌种转接到纤维素刚果红培养基和苯胺蓝培养基上培养 3-4d，依据透明圈直径选择高产酶菌株，然后筛选出34株菌株。
菌株发现和鉴定：将34株菌株分别在自制的液体培养基（羧甲基纤维素钠含3.75g、鱼粉蛋白胨3g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁0.25g，500ml水）进行发酵，培养条件为30℃、180r/min恒温摇床中培养48-72 h；分别得到34个菌株的发酵液。
取10g高粱干酒糟于250ml的锥形瓶中（安徽古井贡酒股份有限公司白酒酿造后产生的高粱酒糟经过80℃烘干，不调pH），而后从34个菌株的发酵液中各取1mL发酵液接种于锥形瓶中；再取1mL高温灭活酶解发酵液于锥形瓶中，作为空白对照，在30℃下恒温下培养6-8天，得到不同的酒糟发酵物。
将酒糟发酵物烘干磨碎，称取0.1g样品于250mL锥形瓶中，分别倒入25mL水和石油醚，静置脱脂3小时后过滤，烘干后称重。将样品装入烘干后的10毫升离心管中，加入混合酸5ml，置沸水浴中煮沸25分钟。然后在3500r/min离心10分钟，弃上清。然后向沉淀物中加10毫升蒸馏水，混匀。用同样的方法离心10分钟，弃上清，如此反复三次。用移液管移取10ml0.5mol/L硫酸-重铬酸钾溶液于沉淀物的离心管中。置沸水浴中水解10分钟。取出后稍冷却。将溶液转移到150毫升三角瓶中。同时用15毫升蒸馏水洗净离心管。洗涤液并入三角瓶中加林菲罗啉指示剂2至3滴，用0.1mol/L硫酸亚铁氨溶液滴定，以溶液颜色从绿色突变到棕红色为反应终点，以此测定粗纤维含量。发现18号菌降解纤维素能力最好，结果见表1。
表1.
然后对18号菌株进行DNA提取，进行PCR扩增，再利用一代测序平台3730对扩增产物进行测序，每个样品测序得到.abl格式的峰图文件如27F端测序部分峰图和1492R端测序部分峰图。一般测序两端的序列质量较差，通过质量剪切去除两端测序低质量的序列，对质控后的双端测序结果进行组装，组装得到16S rRNA序列或26S rDNA。NCBI数据库比对确认种属：用样品的组装序列去进行数据库比对，根据比对结果的覆盖度，相似性等进行判断，确定样本的种属。选取比对得分最高的，构建进化树，鉴定为巨大芽孢杆菌。
（2）枯草芽孢杆菌的筛选和鉴定。
菌株初筛：通过平板划线的方式，安徽正大源发酵饲料、华畜复合型饲料，南华秸秆发酵剂，酵黄金混合型饲料添加剂，活力99发酵剂，青储黄储饲料发酵剂，农盛乐EM菌种，用接种环蘸取少许，在自制LB固体培养基（鱼粉蛋白胨 10g/L，酵母提取物(Yeastextract) 5g/L，氯化钠(NaCl) 10g/L，pH自然）上进行三区划线，置于30℃恒温培养箱中培养36 h，将不同菌株再次用相同方法分别划线培养，将分离得到的纯菌种进行试管斜面培养，在30℃下恒温培养3天，并保藏于4℃冰箱。将上一步纯化得到的30株不同的菌株于自制LB液体培养基中进行接种，置于30℃恒温摇床中、180r/min培养一天，用移液枪吸取1mL发酵液于灭菌10g酒糟（用氨水调pH6.0-7.0）培养基中，30℃下恒温培养3天。用稀释涂布的方法，取1000mg接种酒糟且发酵0天酒糟稀释到原来的10-6倍，涂布在LB培养基平板上；取1000mg发酵3天后的酒糟培养基，稀释到原来的10-6倍，涂布在LB固体培养基平板上。上述培养基均置于30℃下恒温培养一天半，而后数菌落数，结果对比发现其中有12株菌株（见表2的菌种编号为1-12）在酒糟培养基中生长性能较好。
将筛出12株菌种，依次种于LB液体培养基中，于30℃、180r/min恒温摇床中培养24h，而后取1mL发酵液接种于经巨大芽孢杆菌发酵的酒糟（用氨水调pH6.0-7.0）中；再取1mL灭菌发酵液于经巨大芽孢杆菌发酵的酒糟（用氨水调pH6.0-7.0）中，作为空白对照。上述各培养基均置于30℃下恒温培养72h。经过测定，发现菌种编号8具有较高粗蛋白和较低粗纤维，综合表现好，结果见表2。
表2.
然后对8号菌株进行DNA提取，进行PCR扩增，再利用一代测序平台3730对扩增产物进行测序，每个样品测序得到.abl格式的峰图文件如27F端测序部分峰图和1492R端测序部分峰图。一般测序两端的序列质量较差，通过质量剪切去除两端测序低质量的序列，对质控后的双端测序结果进行组装，组装得到16S rRNA序列或26S rDNA。NCBI数据库比对确认种属：用样品的组装序列去进行数据库比对，根据比对结果的覆盖度，相似性等进行判断，确定样本的种属。选取比对得分最高的，构建进化树，鉴定为枯草芽孢杆菌。
（3）采用复合菌剂处理白酒糟
步骤S1，巨大芽孢杆菌液态发酵，得到第一发酵菌液，取第一发酵菌液1mL至10g酒糟中于30℃下恒温培养52h，得第一发酵培养，得第一发酵酒糟；酒糟为安徽古井贡酒股份有限公司白酒酿造后产生的高粱酒糟经过80℃烘干，不调pH。
步骤S2，枯草芽孢杆菌液态发酵，得到第二发酵菌液，取第二发酵菌液1mL至10g第一发酵酒糟中于30℃下恒温培养72h，进行第二发酵培养，其中第一发酵酒糟用氨水调pH7.0，得第二发酵酒糟。
巨大芽孢杆菌液态发酵的液体培养基配方为羧甲基纤维素钠3.75g、鱼粉蛋白胨3g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁0.25g，500ml水；液态发酵的条件为，温度30℃、180r/min恒温摇床中培养48 h。
枯草芽孢杆菌液态发酵的液体培养基为LB液体培养基。枯草芽孢杆菌液态发酵的条件为，30℃、180r/min恒温摇床中培养48 h。
两株菌液体菌种的含量1×108~1×109CFU/mL。
实施例2
与实施例1中的采用复合菌剂处理白酒糟的方法基本相同，不同之处在于：第一发酵培养的恒温培养时间为72h，第二发酵培养的恒温培养时间为72h。
实施例3
与实施例1中的采用复合菌剂处理白酒糟的方法基本相同，不同之处在于：第一发酵培养的恒温培养时间为60h，第二发酵培养的恒温培养时间为60h。
实施例4
与实施例1中的采用复合菌剂处理白酒糟的方法基本相同，不同之处在于：第一发酵培养的恒温培养时间为72h，第二发酵培养的恒温培养时间为52h。
实施例5
与实施例1中的采用复合菌剂处理白酒糟的方法基本相同，不同之处在于：巨大芽孢杆菌液态发酵的条件为温度29℃、170r/min恒温摇床中培养72h，枯草芽孢杆菌液态发酵的条件为温度29℃、170r/min恒温摇床中培养72h。
实施例6
与实施例1中的采用复合菌剂处理白酒糟的方法基本相同，不同之处在于：取第一发酵菌液1mL至12g酒糟中；取第二发酵菌液1mL至12g第一发酵酒糟中。
对比例1
与实施例1中的采用复合菌剂处理白酒糟的方法基本相同，不同之处在于，步骤S1采用枯草芽孢杆菌，步骤S2采用巨大芽孢杆菌。
对比例2
与实施例1中的采用复合菌剂处理白酒糟的方法基本相同，不同之处在于，采用单一菌剂枯草芽孢杆菌。
对比例3
与实施例1中的采用复合菌剂处理白酒糟的方法基本相同，不同之处在于，采用单一菌剂巨大芽孢杆菌。
对实施例1-实施例5得到的发酵酒糟产品进行粗纤维和粗蛋白测量，结果如表3所示。先采用巨大芽孢杆菌对酒糟进行酶解过后在利用枯草芽孢杆菌进行发酵使得酒糟中大量的纤维素降解进而转化为蛋白质，蛋白含量高达40%，足以用于生产动物饲料。
表3.
以上未涉及之处，适用于现有技术。
虽然已经通过示例对本发明的一些特定实施例进行了详细说明，但是本领域的技术人员应该理解，以上示例仅是为了进行说明，而不是为了限制本发明的范围，本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例来做出各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的方向或者超越所附权利要求书所定义的范围。本领域的技术人员应该理解，凡是依据本发明的技术实质对以上实施方式所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种用于白酒糟发酵用的复合菌剂，其特征在于，所述复合菌剂包括巨大芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌，所述巨大芽孢杆菌Bacillu megaterium，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC NO.26025；所述枯草芽孢杆菌Bacillu subtilis，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC NO.26024。
2.一种采用如权利要求1所述的复合菌剂处理白酒糟的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、巨大芽孢杆菌液态发酵，得到第一发酵菌液，取所述第一发酵菌液至酒糟进行第一发酵培养，得第一发酵酒糟；
S2、枯草芽孢杆菌液态发酵，得到第二发酵菌液，取所述第二发酵菌液至第一发酵酒糟中进行第二发酵培养，其中第一发酵酒糟用氨水调pH6.0-7.0，得第二发酵酒糟。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，巨大芽孢杆菌液态发酵的液体培养基配方为羧甲基纤维素钠3.75g、鱼粉蛋白胨3g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁0.25g，500ml水。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的液态发酵的条件为，温度29℃～30℃、170r/min～180r/min恒温摇床中培养48-72h。
5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，枯草芽孢杆菌液态发酵的液体培养基为LB液体培养基。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌液态发酵的条件为，29℃～30℃、170r/min～180r/min恒温摇床中培养48-72h。
7.如权利要求4或6所述的方法，其特征在于，所述的第一发酵培养和第二发酵培养的条件为，30℃下恒温培养52-72h。
8.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述酒糟与所述第一发酵菌液的质量体积比为(10～12)g：1mL；所述第一发酵酒糟与所述第二发酵菌液的质量体积比为(10～12)g：1mL。
9.一种采用如权利要求2-8所述的方法制备得到的发酵酒糟产品。
10.一种如权利要求9所述的发酵酒糟产品在制备饲料中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311711903.6A CN118086094A (zh) | 2023-12-13 | 2023-12-13 | 一种用于白酒糟发酵用的复合菌剂及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311711903.6A CN118086094A (zh) | 2023-12-13 | 2023-12-13 | 一种用于白酒糟发酵用的复合菌剂及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN118086094A true CN118086094A (zh) | 2024-05-28 |
Family
ID=91161968
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311711903.6A Pending CN118086094A (zh) | 2023-12-13 | 2023-12-13 | 一种用于白酒糟发酵用的复合菌剂及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN118086094A (zh) |
-
2023
- 2023-12-13 CN CN202311711903.6A patent/CN118086094A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103627662B (zh) | 一种花生慢生根瘤菌及其用途 | |
| US20220033762A1 (en) | Penicillium oxalicum SDF-25 strain and application thereof | |
| CN110183252B (zh) | 利用生物降解羽毛制备复合氨基酸液肥的方法及应用 | |
| CN110317748B (zh) | 一株链霉菌菌株及其在降解羽毛中的应用 | |
| CN113061555A (zh) | 一株产纤维素酶的芽孢杆菌菌株筛选及其应用 | |
| CN116463238B (zh) | 一株可降解纤维素的枯草芽孢杆菌及应用 | |
| CN108865927B (zh) | 低温酵解玉米秸秆的细菌菌株及其发酵培养方法和应用 | |
| CN118064325A (zh) | 一种具有促进坛紫菜丝状体孢子囊枝形成功效的嗜温粘杆菌 | |
| CN111893065B (zh) | 一株低温纤维素降解细菌 | |
| CN103114057B (zh) | 一株高效降解纤维素的门多萨假单孢菌 | |
| CN109055280B (zh) | 一种角蛋白酶高产菌株及其应用 | |
| CN108841743B (zh) | 寒地秸秆腐熟细菌菌株及其制备方法和应用 | |
| CN108893414B (zh) | 寒地小麦秸秆腐熟真菌产红青霉菌株及其发酵培养方法和应用 | |
| CN115959931A (zh) | 一种畜禽粪污和秸秆深度发酵制备有机肥方法 | |
| CN113957024B (zh) | 一株根瘤菌GL-1803及其在制备不溶性β-葡聚糖中的应用 | |
| CN112226380B (zh) | 一株降解纤维素生防芽孢杆菌及其应用和制剂 | |
| CN105567608B (zh) | 一株耐高温园林废弃物分解菌st1及其应用 | |
| CN118086094A (zh) | 一种用于白酒糟发酵用的复合菌剂及其应用 | |
| CN108823103B (zh) | 寒地玉米秸秆腐熟真菌雷斯青霉菌株及其发酵培养方法和应用 | |
| CN110835607B (zh) | 一种含酿酒酵母菌的低温高效降解秸秆复合菌及其应用 | |
| CN108795796B (zh) | 含解淀粉芽孢杆菌的低温降解秸秆微生物复合菌剂及应用 | |
| CN112646740A (zh) | 甲酸基单细胞蛋白菌株ma5及其应用 | |
| CN116286548B (zh) | 一株降解纤维的微杆菌属新菌种及其应用 | |
| CN117363520B (zh) | 一种枯草芽孢杆菌gj231及其应用 | |
| CN110835610A (zh) | 一种适用于降解秸秆的复合菌剂及制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |