CN118076377A - 人类表皮生长因子第二型受体疫苗组成物 - Google Patents

Abstract

本发明是有关于一种HER2‑ICD DNA疫苗组成物。根据本发明的疫苗组成物可在移植有表现HER2的人类胃癌细胞株的动物模型中有效地抑制胃癌生长而无严重副作用，且因此可有效地用于治疗胃癌。

Description

人类表皮生长因子第二型受体疫苗组成物

技术领域

本申请案主张2021年7月28日在韩国智慧财产局中申请的韩国专利申请案第10-2021-0099411号的权益，所述申请案的揭露内容以全文引用的方式并入本文中。

本发明是有关于一种用于治疗胃癌的HER2疫苗组成物。

背景技术

胃癌原则上是指在胃中出现的所有类型的癌症，且可以各种形式出现，诸如主要出现在胃黏膜中的腺癌(adenocarcinoma)、出现在胃的基质细胞中的胃肠肿瘤(gastricintesrinal tumor)以及其类似形式。与其他癌症一样，胃癌可扩散至其他器官，包含食道、肺脏及肝脏。胃癌为全球就诊断频率而言第4最常诊断出的癌症，且在2002年已诊断出930,000个胃癌病例。胃癌的高发病率导致高死亡率(每年约800,000例)，且胃癌为继肺癌之后的全球癌症死亡的第二最常见病因。此癌症在男性中的出现频率高于女性，且更常出现在亚洲及发展中国家中。

胃癌的治疗选项包含手术、化学疗法、放射疗法或同步化学放射疗法。手术为胃癌的一线疗法。对于II期患者的患者，出于治疗目的的手术切除的5年存活率似乎在约30％至约50％范围内，且对于III期患者，所述存活率似乎在约10％至约25％范围内。然而，由于手术切除及诸如化学疗法之后续抗癌疗法会降低患者的生活质量，诸如体重减轻，因此需要其他治疗选项。

疫苗藉由训练免疫系统识别及破坏有害物质及病变细胞而帮助身体对抗疾病。疫苗可大体上分成两种类型，亦即预防性疫苗及治疗性疫苗。预防性疫苗是提供给健康人群以预防某些疾病产生的传统疫苗形式，而治疗性疫苗(亦称为免疫疗法)作为防治措施提供或经提供以帮助阻止疾病在诊断患有所述疾病的人中的生长及扩散。治疗性疫苗的代表性形式为癌症疫苗。

癌症疫苗可活化细胞毒性T细胞，使得经活化T细胞可识别且作用于表现特定类型的抗原的癌细胞，或癌症疫苗可经设计以诱导与癌细胞表面上存在的抗原结合的抗体的产生。癌症疫苗的基本治疗目标为减小癌症患者中已经存在的癌组织的大小，或在藉由外科手术或化学疗法自癌症患者移除癌组织之后遏制癌症再发。

尽管在过去几年已对疫苗进行深入研究以治疗癌症或预防癌症再发，但除了作为前列腺癌的疫苗的西普鲁塞-T(sipuleucel-T， )以外，尚不存在成功案例。据描述，此低成功率的原因为：尽管抗原特异性地表现于某些类型的肿瘤细胞中，但所述抗原可视个体而定以低水平表现；或在转移性肿瘤的情况下，最初出现的肿瘤与转移性肿瘤之间的抗原特征可改变。此外，亦将肿瘤细胞的免疫逃避机制解释为低成功率的原因。

较佳疫苗抗原应仅表现于肿瘤细胞中或至少以升高的水平表现于肿瘤细胞中。HER2/neu(下文称为“HER2”)为EGFR(e表皮生长因子受体)家族中的一者(EGFR2)，且在许多癌症中观测到EGFR的过度表现。特别地，已知全部胃癌患者中约20％的患者经诊断患有HER2阳性晚期胃癌。

HER2为具有胺基酸序列SEQ ID NO:1的跨膜蛋白，且由具有蛋白酪胺酸激酶活性的胞内域((intracellular domain:ICD，HER2 aa 676-1255)、跨膜域(transmembranedomain:TM，HER2 aa 653-675)以及胞外域(extracellular domain:ECM，HER2 aa 22-652)组成。

已在乳癌中对HER2疫苗进行了相当深入的研究，且已发现数种免疫原性肽。举例而言，在HER2蛋白的胺基酸369-377的肽(莱尼哌吗-S[NeuVax；HER2 aa369-377；E75(NP-S)])的情况下，已以将肽负载至树突状细胞中之后再注射的方式尝试免疫疗法。然而，在患有晚期乳癌的女性中未报导有临床上显著的治疗性或保护性作用。另外，在最近的大规模III期临床试验中，已中断临床试验，因为治疗组与安慰剂组之间不存在无病存活期(Disease Free Survival；DFS)差异。

HER2肽疫苗的其他实例包含：AE37(LRMK-GVGSPYVSRLLGICL：LRMK-HER2 aa 776-790)，其为HER2-ICD肽疫苗；GP2(HER2 aa 654-662)，其为HER2-TM肽疫苗；以及其类似者。已报导用疫苗增加存活率的作用的一些报导。另外，在动物实验中已报导，针对HER2-ICD片段(下文称为“HER2-ICD”)的疫苗与针对HER2-ECD片段(下文称为“HER2-ECD”)的疫苗相比减小肿瘤的大小。已存在将HER2-ICD DNA疫苗应用于乳癌患者的案例。然而，尚未报导将HER2-ICD DNA疫苗应用于胃癌而非乳癌的任何结果。

因此，在胃癌患者中，需要开发HER2-ICD DNA疫苗的免疫作用及治疗潜力以产生将提供胃癌治疗或再发的可靠作用的疫苗。

[先前技术文献]

[专利文献]

韩国专利10-1572474(发布日期：2015年11月30日)

美国公开专利2002/0193329(揭露日期：2002年12月19日)

[非专利文献]

乳腺疗理(Breast Care)2016年；11:116-121

临床癌症研究(Clin Cancer Res)；25(14)2019年7月15日

发明内容

技术问题

因此，本发明人进行研究以解决上述问题，且其结果是，藉由证实包括有包括编码HER2-ICD的核酸序列的质体的DNA疫苗组成物可有效地抑制移植有人类胃癌细胞株的肿瘤小鼠模型中的肿瘤生长来完成本发明。

本发明的目标为提供一种疫苗组成物(下文称为“HER2-ICD DNA疫苗组成物”)，其包括有包括编码HER2-ICD的核酸序列的质体。

本发明的目标为提供一种用于治疗胃癌的包括HER2-ICD DNA疫苗组成物的套组。

本发明的目标为提供一种藉由向个体投与疫苗组成物或套组来抑制胃癌的进展及/或再发的方法。

本发明的目标为提供组成物或套组在制造用于治疗胃癌的医疗用品中的用途。

问题解决方案

为了达成上述目标，本发明提供一种包括有包括编码HER2-ICD的核酸序列的质体的DNA疫苗组成物。

根据本发明的实施例，所述疫苗组成物可用于胃癌患者群体。

根据本发明的实施例，所述胃癌患者群体可为表现HER2蛋白的患者群体。

根据本发明的一个实施例，所述疫苗组成物可另外包含佐剂。

根据本发明的实施例，所述疫苗组成物可与一或多种选自化学抗癌剂、靶向抗癌剂以及免疫抗癌剂的抗癌剂组合投与。

根据本发明的实施例，所述胃癌患者群体可为人类患者群体。

本揭露的有利作用

根据本发明的疫苗组成物为包括有包括编码HER2-ICD的核酸序列的质体的疫苗组成物，且可有效地抑制胃癌动物模型中的肿瘤生长，且因此可有效地用于治疗胃癌。

附图说明

图1示出当投与HER2-ICD DNA疫苗(Vaccine)、抗HER2治疗抗体(贺癌平(Herceptin))以及DNA疫苗及贺癌平组合(疫苗+贺癌平)时，移植有胃癌细胞株的异种移植小鼠模型中各个体的体重变化。

图2至图4示出当投与HER2-ICD DNA疫苗(疫苗)、抗HER2治疗抗体(贺癌平)以及DNA疫苗及贺癌平组合(疫苗+贺癌平)时，对移植有胃癌细胞株的异种移植小鼠模型中的肿瘤生长的抑制作用。

图5至图7示出当投与HER2-ICD DNA疫苗(疫苗)、抗HER2治疗抗体(贺癌平)以及DNA疫苗及贺癌平组合(疫苗+贺癌平)时，移植有胃癌细胞株的异种移植小鼠模型中的脾脏变化。

具体实施方式

在下文中，将更详细地描述本发明。

在描述及主张本揭露的特定特征时，除非另外指示，否则以下术语将根据下文所阐述的定义使用。

应理解，尽管本文中的某些态样用术语“包括”描述，但亦提供以术语“由……组成”及/或“基本上由……组成”描述的其他类似态样。

术语“治疗”是指在癌症患者接种本发明的疫苗组成物之后，当藉由放射或物理方法检查癌症患者时肿瘤生长得到抑制或减少的结果或其迹象。此外，所述术语亦指在藉由进行手术或向癌症患者投与抗癌药物而移除癌症患者的癌组织且随后接种本发明的疫苗组成物之后，当藉由放射或物理方法检查癌症患者时癌症的再发/复发(recurrence/relapse)得到预防的结果或其迹象。

术语“抗癌作用”是指当向癌症患者投与本发明的疫苗组成物时预防或减少肿瘤生长的作用。此外，所述术语亦指在藉由进行手术或向癌症患者投与抗癌药物而移除癌症患者的癌组织且随后接种本发明的疫苗组成物之后预防癌症的再发/复发的作用。

术语“保护性免疫”是指以如下方式减少个体的癌症进展或癌症再发/复发：个体引发针对HER2-ICD抗原的免疫反应，且个体的免疫系统可靶向及破坏表现与HER2-ICD抗原相同的抗原的细胞。在本发明中，保护性免疫表现为抑制肿瘤生长的抗癌作用。

术语“抗HER2治疗抗体”是指能够藉由靶向HER2受体且阻断表现HER2的肿瘤细胞的增殖来治疗癌症的单株抗体。抗HER2治疗抗体的实例包含曲妥珠单抗其生物类似物以及其类似者，但不限于此。

术语“加强剂”是指向患者投与以增强、延长或维持保护性免疫且克服由调节性T细胞介导的“T细胞反应下调”的特定剂量的免疫原。

术语“医药学上可接受”是指就组成、调配、安全性以及其类似者而言，在药理学/毒理学观点中患者可接受的物质。术语“医药学上可接受的载剂”是指不干扰活性成分的生物活性作用的介质，且医药学上可接受的载剂在投与时对个体无毒。

术语“患者”或“个体”是指处于可藉由投与本发明的疫苗组成物来预防或治疗疾病的情形中，诸如处于罹患胃癌、已治疗胃癌或易患胃癌的情形中的活有机体，且可包含人类及动物两者。个体的实例包含哺乳动物(例如小鼠、猴、马、奶牛、猪、狗、猫等)，但不限于此，且个体较佳可为人类。另外，本发明中的术语“患者”或“个体”包含(但不加以区别)患有胃癌的患者或患有表现HER2的胃癌的患者。

术语“投与”是指藉由使用所属领域中已知的各种方法及递送系统中的任一者向个体引入疫苗组成物。投与途径的实例包含静脉内、肌肉内、皮下(intradermal)、腹膜内、脊椎或其他非经肠投与途径，诸如注射或输注。本说明书中所使用的术语“投与”是指通常藉由注射进行的皮内投与方式，且可包含(但不限于)静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内或淋巴管内注射及输注。其他非经肠途径可包含局部、上皮或经黏膜投与途径，诸如鼻内、经阴道、经直肠或舌下途径。在本发明书中，术语“疫苗注射”、“治疗(treatment)”以及“疫苗接种(vaccination)”就向个体投与疫苗的动作而言不加区分地使用。

在本发明中，术语“表现HER2”是指在癌症组织中表现HER2基因或蛋白质。HER2基因或蛋白质的表现量不区分高表现与低表现。

在本发明中，术语“癌症免疫疗法药物”是指不同于攻击癌症本身的现有抗癌药物，藉由刺激免疫系统以诱导免疫细胞选择性地仅攻击癌细胞的治疗药物。换言之，其为具有如下机制的抗癌药物：其恢复或加强免疫系统的肿瘤识别或破坏能力以克服癌细胞所获得的免疫遏制或免疫逃避机制。癌症免疫疗法药物包含免疫检查点抑制剂、免疫细胞治疗剂以及免疫病毒治疗剂，但不限于此。

在本发明中，术语“免疫检查点抑制剂”是指当一些癌细胞逃避免疫同时利用作为体内免疫细胞的T细胞的免疫检查点(Immune Checkpoint Protein)时，藉由阻断T细胞抑制中所涉及的免疫检查点蛋白的活化并且活化T细胞来攻击癌细胞的一类癌症免疫疗法药物。免疫检查点抑制剂的实例包含CTLA-4抑制剂、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、LAG-3抑制剂、TIM-3抑制剂、TIGIT抑制剂以及VISTA抑制剂，但不限于此。另外，作为拮抗剂的免疫检查点抑制剂可为拮抗性抗体或小分子化合物。

本说明书中所揭露的组成物可制备为DNA疫苗。在本发明的一些实施例中，DNA疫苗可包含质体，所述质体包含启动子(promoter)、适当的转录及转译控制因子以及编码本发明的一或多种多肽的核酸序列。在一些实施例中，所述质体可另外包含强化子序列，例如增强(enhance)表现量、胞内靶向以及其类似者的序列。

在本发明的一些实施例中，DNA疫苗可包含质体载体，所述质体载体包含编码本发明的HER2-ICD的核酸序列。在一些实施例中，质体可为pUMVC3质体(习知名称为“pNGVL3”，且因此两个名称可互换使用)。编码HER2-ICD的核酸序列可与SEQ ID NO:3的核酸序列具有100％同源性，或者，可与SEQ ID NO:3的核酸序列具有99％或高于99％、95％或高于95％、90％或高于90％、85％或高于85％、80％或高于80％的同源性。然而，在同源性限于上述特定值的情况下，藉由疫苗接种产生的针对HER2-ICD的免疫原性可具有与具有100％同源性的序列相同或等效的作用。

在本发明的一些实施例中，表现HER2蛋白的人类胃癌NCI-N87细胞株可移植至无胸腺裸小鼠中以制备异种移植胃癌小鼠模型，所述小鼠模型随后可分成4个组且用如下药物治疗：对照组(Control)；用HER2-ICD DNA疫苗(疫苗)治疗的组；用贺癌平治疗的组(贺癌平)，其作为抗HER2治疗抗体治疗组；以及用HER2-ICD DNA疫苗与贺癌平的组合(疫苗+贺癌平)治疗的组。

所有三个药物治疗组中的肿瘤生长与对照组中的肿瘤生长相比均得到抑制(直至药物治疗后第31天)。单独投与“HER2-ICD DNA疫苗”的组显示对肿瘤生长的抑制作用最大，由此与单独投与贺癌平的测试组以及组合投与贺癌平与“HER2-ICD DNA疫苗”的测试组中的作用相比展现出极佳的结果。

关于表现HER2的晚期胃癌，鉴于使用抗HER2治疗抗体或抗HER2治疗抗体与化学疗法的组合疗法(5-氟尿嘧啶与顺铂的组合或卡培他滨与奥沙利铂的组合)的HER2直接靶向疗法(HER2-direct Targeting therapy)为常见治疗，单独投与本发明的HER2-ICD DNA疫苗与单独投与贺癌平相比展现出更佳肿瘤生长抑制作用的事实可被视为提出了一种治疗表现HER2的胃癌的新可能性。

特别地，本发明的HER2-ICD DNA疫苗的安全性已在1期临床试验(NCT00436254)中得到证实，且因此本发明的DNA疫苗治疗可作为与现有治疗相比可减轻患者负担的治疗来应用。

在本发明的一些实施例中，DNA疫苗可另外编码调节所产生免疫反应，诸如增强疫苗功效、刺激免疫系统或减轻免疫抑制的免疫调节分子(immunomodulatory molecules)。

由于本发明的疫苗组成物旨在诱导及/或维持对胃癌的生长或再发的治疗作用，因此本发明的疫苗组成物可根据适合于诱导及/或维持对HER2-ICD的细胞毒性T细胞反应的任何时程向患者投与。举例而言，在按时程向患者投与如本文中所描述及例示的疫苗组成物作为初次疫苗接种之后，可投与加强剂以诱导及/或维持保护性免疫。

在本发明的一些实施例中，疫苗组成物可一个月一次、一个月两次或一个月多次向患者投与。在完成疫苗接种时程之后，加强剂可以规则时间间隔投与一次或多次，例如以1个月的时间间隔投与一次或多次，或以6个月或更多时间的时段投与一次或多次。在本发明的一些实施例中，HER2-ICD疫苗可一个月投与三次作为初次疫苗接种，且可在6个月或1年之后投与额外加强剂。

此处，加强剂可以相同剂量使用，且可具有与用于初次疫苗接种的疫苗组成物相同的组成，或加强剂的剂量及/或组成可变化。

除了包含编码HER2-ICD的DNA的质体以外，本说明书中描述的疫苗组成物可亦包含医药学上可接受的赋形剂(excipient)、载剂、稀释剂、缓冲剂(buffer)、稳定剂(stabilizer)、防腐剂、佐剂(adjuvant)、所属领域中熟知的其他物质。这些物质可为无毒的，且可不干扰活性成分的医药活性。医药载剂或稀释剂可例如为水溶液。本发明的疫苗组成物中可包含的载剂或其他物质可视投与途径(例如经口、静脉内、经皮或皮下、经鼻、肌肉内、皮内以及腹膜内投与途径)而不同地选择。

本发明的疫苗组成物可包含一或多种“医药学上可接受的载剂”。医药学上可接受的载剂的典型实例包含蛋白质、醣类(saccharides)、聚乳酸(polylactic acids)、聚乙醇酸(polyglycolic acids)、高分子(polymeric)胺基酸、胺基酸共聚物、蔗糖(sucrose)及海藻糖(trehalose)以及其类似者。此类载剂为所属领域中熟知的。疫苗组成物亦可包含稀释剂，诸如水、盐水、甘油以及其类似者。另外，疫苗组成物中可存在辅助物质，诸如润湿剂、乳化剂、pH缓冲剂物质以及其类似者。无菌且无热原质的磷酸盐缓冲盐水(PBS)及缓血酸胺(Tris)为代表性载剂。

本发明的一态样是有关于一种如上文所描述的疫苗组成物或套组，其包含一或多种质体DNA作为活性成分。本发明的套组可包含本发明的疫苗组成物、使用所述疫苗组成物的说明书以及其类似者。

本发明的疫苗组成物或套组可用于在个体中诱导免疫反应或提供治疗、疫苗接种或免疫疗法的方法中，且疫苗组成物可为疫苗或免疫治疗组成物。此类治疗或疫苗接种(vaccinating)可包含向个体投与本发明的疫苗组成物。疫苗组成物可按固定时程向个体投与。

本发明的疫苗组成物或套组可用于治疗个体的胃癌。所述个体可为人类，且所述胃癌可为表现HER2蛋白的胃癌。

本发明的疫苗组成物可冻干或可呈水溶液形式，诸如水溶液(aqueous form)或悬浮液。此类类型的液体调配物(Liquid formulations)对于注射而言可为理想的，因为其能够以封装形式直接投与而无需在水性介质(aqueous medium)中复原(reconstitution)组成物。疫苗组成物可提供于小瓶(vials)中，或可提供于预填充注射器中。注射器可提供有或未提供有针头。注射器可含有单次剂量，而小瓶可含有单次剂量或多次(multiple)剂量。另外，本发明的疫苗组成物可藉由使用微针进行投与。

另外，本发明的疫苗组成物可调配为延迟释放媒剂或储槽式(depot)制剂。此类长效调配物可藉由接种或植入(例如皮下或肌肉内)或藉由注射来投与。因此，举例而言，疫苗组成物可用适合的聚合或疏水性材料(例如于可接受油中的乳液)或离子交换树脂调配，或可调配为水难溶性衍生物(例如水难溶性盐)。脂质体及乳液为作为适用作载剂的递送媒剂的熟知实例。

本发明的疫苗组成物在以多剂量(multiple)形式封装(multipledose format)时可包含抗微生物剂(antimicrobial)。抗微生物剂可选自2-苯氧基乙醇(2-phenoxyethanol)或对羟苯甲酸酯(parabens)(例如对羟苯甲酸甲酯、对羟苯甲酸乙酯或对羟苯甲酸丙酯)。视情况存在的防腐剂可较佳以低水平存在。防腐剂可以外源方式添加及/或可为经混合以形成组成物的主体抗原的组分。

本发明的疫苗组成物可以包含说明书及其类似者的套组形式提供。

另外，本发明的套组可包含本发明的疫苗组成物、说明书以及其类似者，但可不包含抗HER2治疗抗体。

本发明的疫苗组成物可包含一或多种佐剂(adjuvant)以提高组成物的免疫原性。

在本发明中，组成物可另外包含抗癌佐剂。更佳地，抗癌佐剂的实例包含干扰素基因刺激蛋白STING(Stimulator of Interferon Gene)促效剂，但不限于此。

适合的佐剂(adjuvant)可包含铝盐，诸如氢氧化铝或磷酸铝，但可为钙、铁或锌的盐。或者，适合的佐剂可为酰基化酪胺酸或酰基化醣的不可溶悬浮液，或可选自阳离子型或阴离子型诱导醣类以及其类似者，但不限于此。另外，佐剂可包含用作免疫调节剂的细胞介素。

适用作免疫调节剂的细胞介素可选自介白素(interleukin)(例如IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12等)、巨噬细胞群落刺激因子(macrophage colony stimulatingfactor；M-CSF)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor；TNF)、颗粒球巨噬细胞群落刺激因子(granulocyte macrophage colony stimulating factor；GM-CSF)以及其类似者，但不限于此。

本发明的疫苗组成物可与一或多种选自化学抗癌剂、靶向抗癌剂以及免疫抗癌剂的抗癌剂组合投与。可与本发明的疫苗组成物组合投与的一或多种选自化学抗癌剂、靶向抗癌剂以及免疫抗癌剂的抗癌剂可同时投与或以一定时间间隔依序投与，且可视适当的时间及周期而选择。

在本发明中，化学抗癌剂亦可被称为细胞毒性抗癌剂或化学抗癌剂。化学抗癌剂可例如为吉西他滨(gemcitabine)、阿糖胞苷(cytarabine)、卡铂(carboplatin)(铂尔定(Paraplatin))、顺铂(普拉迪诺(Platinol)、普拉迪诺-AQ))、克唑替尼(Crizotinib)(Zalkori)、环磷酰胺(cyclophosphamide)(癌得星(Cytoxane)、尼欧萨(Neosar))、多西他赛(docetaxel)(克癌易(Taxotere))、小红莓(doxorubicin)(阿德力霉素(Adriamycin))、依托泊苷(etoposide)(BePesid)、氟尿嘧啶(5-氟尿嘧啶，5-FU)、伊立替康(irinotecan)(开普拓(Camptosar))、脂质体囊封的小红莓(Doxyl)、甲胺喋呤(methotrexate)(Polex、美西特(Mexate)、胺甲喋呤(Amethopterin))、紫杉醇(paclitaxel)(紫杉醇(Taxol)、阿布拉生(Abraxane))、拓朴替康(topotecan)(和美新(Hycamtin))、曲贝替定(trabectedin)(Yondelis)、长春新碱(vincristine)(Oncobin、Vincasar PFS)、长春花碱(vinbrastine)(维尔邦)、卡培他滨(capecitabine)、奥沙利铂(oxaliplatin)以及其类似者，但不限于此。

在本发明中，靶向抗癌剂可为一或多种由以下所构成的族群中选出的靶向抗癌剂：曲美替尼(trametinib)、维罗非尼(vemurafenib)、阿吡利塞(alpelisib)、达托利塞(dactolisib)、吉非替尼(gefitinib)、埃罗替尼(erlotinib)、拉帕替尼(lapatinib)、舒尼替尼(sunitinib)、索拉非尼(sorafenib)、克唑替尼(crizotinib)、达拉非尼(dabrafenib)、曲妥珠单抗、西妥昔单抗(cetuximab)、贝伐单抗(bevacizumab)、帕尼单抗(panitumumab)、伊匹单抗(ipilimumab)、帕妥株单抗(pertuzumab)、托法替尼(tofacitinib)、伊马替尼(imatinib)、硼替佐米(bortezomib)、奥伐木单抗(ofatumumab)以及阿仑单抗(alemtuzumab)，但不限于此。

靶向抗癌剂可包含作为下一代靶向抗癌剂的抗体-药物结合物(antibody-drugconjugate；ADC)。

在本发明中，免疫抗癌剂可为由以下所构成的族群中选出的任一者的免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitor)：细胞毒性T淋巴球相关蛋白4CTLA-4(cytotoxicT lymphocyte-associated protein 4)、计划性细胞死亡蛋白1PD-1(programmed celldeath protein 1)、计划性死亡配体1PD-L1(programmed death ligand 1)、淋巴球活化基因-3LAG3(lymphocyte activation gene-3)、T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域蛋白-3TIM-3(T-cell immunoglobulin and mucin-domain containing-3)、具有IG及ITIM域的T细胞免疫受体TIGIT(T-cell Immunoreceptor with IG and ITIM domain)以及T细胞活化的V域Ig抑制因子VISTA(V domain Ig suppressor of T cell activation)，但不限于此。

在本发明的一些实施例中，HER2-ICD DNA疫苗组成物的投与可与其他癌症治疗剂的治疗同时进行。对于癌症治疗剂，可使用标准物质，诸如氟尿嘧啶、小红莓、紫杉醇以及其类似者，但不限于此。

除非另外指明，否则本说明书及申请专利范围中所用的所有数目应理解为在所有情况下均可由术语“约”修饰，无论是否如此叙述。另外，本说明书及申请专利范围中所用的精确数目应理解为形成本揭露的其他实施例。已努力确保以下实例中所揭露的数值的准确性。然而，所有量测值可隐含地包含由藉由各别量测技术量测的标准偏差产生的某些误差值。

揭露模式

在下文中，将经由以下实例更详细地描述本发明。以下实例仅用于更详细地说明本发明，且所属领域中具通常知识者将显而易见的是，根据本发明的要旨，本发明的范畴不受以下实例限制。

实例

藉由单独或与贺癌平(抗HER2抗体)组合投与HER2-ICD DNA疫苗来量测HER2-ICDDNA疫苗的抗肿瘤功效。其中无胸腺小鼠移植有NCI-N87(ATCC CRL-2855)(其为表现HER2蛋白的人类衍生胃癌细胞株)的异种移植小鼠模型用作胃癌的动物模型的实例。

所有动物测试均在欧松医学创新基金会的实验室动物设施的机构动物护理及使用委员会(KBIO-IACUC)(KBIO-IACUC-2020-120)的批准下合乎伦理地进行。

制备胃癌的异种移植小鼠模型

自KOATECH购买体重约16公克至18公克且年龄约5周的无胸腺裸小鼠(无胸腺-NCr-nu品系)，且随后使其适应至少1周。

每个体将人类衍生胃癌细胞株NCI-N87的5×10⁶个细胞悬浮于200微升PBS中，且随后皮下注射至小鼠右侧的肩胛骨与胸壁之间的腋窝区中。

为了分析HER2-ICD DNA疫苗的抗肿瘤作用，自移植有NCI-N87细胞的小鼠中选择在细胞移植之后第11天肿瘤大小达到150立方毫米(平均肿瘤大小为150.5±16.4立方毫米)的24只小鼠，且将六只小鼠分配至各组中。

疫苗调配物

将编码HER2-ICD的DNA序列(SEQ ID NO:3)插入至pNGVL3(pUMVC3)质体载体中且藉由DNA定序证实。

质体DNA疫苗pNGVL3-hICD在GMP条件下扩增及定量，且随后在小瓶(vial)中制备。单次剂量小瓶含有悬浮于作为稳定缓冲剂的缓血酸胺/EDTA(1.2毫升)中的质体DNA(pNGVL3-HER2 ICD)。小瓶是由美国的VGXI公司制造，且在经历微生物、无菌性以及稳定性测试之后根据美国药典标准藉由使用主细胞库MCB(master cell bank)储存在-20℃下。

对于各小鼠，疫苗调配物用PBS稀释且以5毫克/公斤(100微克/20公克/150微升)的最终剂量投与。贺癌平(罗氏(Roche))在溶解于生理盐水中之后以40微克/20公克/100微升的剂量投与。

药物投与及投与时程

HER2-ICD DNA疫苗经皮内(intradermal)投与，且贺癌平经腹膜内投与。

对于已移植有NCI-N87细胞且确认产生肿瘤的小鼠，HER2-ICD DNA疫苗在第0、7以及14天皮内投与三次，且贺癌平在第0、7、14、21以及28天腹膜内投与5次。

作为对照组，向小鼠投与PBS。

观测结果及检查项目

每天一次观测所有小鼠的一般症状。

在测试期期间，将小鼠总计称重14次(第0、3、5、7、10、12、14、17、19、21、24、26、28以及31天)，且直至第31天，基于投与开始日的体重(100％)观测体重的变化。

在癌细胞移植第8天至第32天，使用光标测径规在三个方向上量测各个体的肿瘤大小及肿瘤生长抑制率，共计8次(第8、11、15、18、22、25、30以及32天)，且计算肿瘤大小。自癌细胞移植第11天肿瘤大小变成150立方毫米的时间开始(第0天)，计算各个体的肿瘤大小，共计14次(第0、3、5、7、10、12、14、17、19、21、24、26、28以及31天)，且与各测试组中的对照组比较以计算肿瘤生长的变化率。

剖检及检查项目

在测试最后一天，向小鼠肌肉内注射麻醉剂(50毫克/公斤的Zoletil50与10毫克/公斤的Rompun的混合物)以在划痕后在麻醉诱导的状态下诱导安乐死。随后，切除肿瘤及脾脏，称重且拍照。

HER2-ICD DNA疫苗的抗肿瘤作用的分析

在测试期间，在测试组中的任一者中无动物死亡，且当单独或组合投与测试物质时未观测到异常症状。

在测试期期间观测体重变化的结果为，与对照组(PBS治疗组)相比，贺癌平治疗组以及用贺癌平及HER2-ICD DNA疫苗治疗的组(下文称为疫苗+贺癌平治疗组)中出现体重减轻的倾向。在所有测试组中，在第5天至最后一天(第31天)出现逐渐体重减轻的倾向，但不存在统计显著性。在最后一天观测到的体重分别为：对照组中为94.4±5.8％，用HER2 ICDDNA疫苗治疗的组(下文称为“疫苗治疗组”)中为97.0±5.2％，贺癌平治疗组中为92.8±7.7％，且疫苗+贺癌平治疗组中为96.9±3.6％(图1)。

量测肿瘤生长的大小变化率的结果为，与对照组相比，在所有疫苗治疗组、贺癌平治疗组以及疫苗+贺癌平治疗组中，在第3天至最后一天均连续观测到肿瘤生长抑制。特别地，在疫苗治疗组的一些点(第7、12、21以及26天)，显示以统计显著性识别的对肿瘤生长的抑制作用(p<0.05)(图2)。自各小鼠提取的肿瘤展示于图3中。

因此，证实了HER2-ICD疫苗能够藉由在异种移植胃癌小鼠模型中诱导保护性免疫反应来抑制其中的肿瘤生长。

对肿瘤称重的结果为，与对照组相比，在疫苗治疗组及疫苗+贺癌平治疗组中观测到肿瘤重量的减小。然而，在肿瘤重量减小方面未观测到统计显著性(图4)。

肉眼检查脾脏及对脾脏称重的结果为，观测到与对照组相比，疫苗治疗组及疫苗+贺癌平治疗组中的脾脏大小增加(图5)，且与对照组相比，就绝对重量及相对重量而言，疫苗治疗组、贺癌平治疗组及疫苗+贺癌平治疗组中的脾脏重量较高。特别地，在疫苗+贺癌平治疗组中观测到最高脾脏重量，但未证实统计显著性(图6及图7)。

总体考虑以上结果，未观测到归因于向移植有NCI-N87胃癌细胞的动物模型单独投与HER2-ICD DNA疫苗或共同投与HER2-ICD DNA疫苗及贺癌平而引起的异常症状。

另外，根据对移植有NCI-N87胃癌细胞的动物中的抗肿瘤作用的分析，在单独投与HER2-ICD DNA疫苗及共同投与HER2-ICD DNA疫苗及贺癌平时观测到抑制肿瘤生长的抗肿瘤作用，而在单独投与贺癌平时未观测到。特别地，单独投与HER2-ICD DNA疫苗的情形与单独投与贺癌平或组合投与HER2-ICD DNA疫苗及贺癌平的情形相比，更显著地展现抗肿瘤作用。因此，本发明提出单独使用HER2-ICD DNA疫苗可在治疗表现HER2蛋白的胃癌中有效治疗胃癌的可能性。

自由文本

SEQ ID NO:1(HER2基因的全长氨基酸序列)

SEQ ID NO:2(HER2-ICD氨基酸序列)

SEQ ID NO:3(HER2-ICD核苷酸序列)

/>

Claims (10)

1.一种疫苗组成物，用于诱导个体中的抗癌作用，所述疫苗组成物包括医药学上可接受的载剂及质体载体，所述质体载体包括具有SEQ ID NO:2或与其具有80％或高于80％序列同源性的编码HER2-ICD区的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的疫苗组成物，其中所述核苷酸序列具有SEQ ID NO:3或与其具有80％或高于80％序列同源性。

3.根据权利要求1或2所述的疫苗组成物，其中所述个体为表现HER2蛋白的胃癌患者。

4.根据权利要求3所述的疫苗组成物，其中所述个体为人类。

5.根据权利要求4所述的疫苗组成物，其中抗HER2治疗性抗体不与所述疫苗组成物组合施用于所述个体。

6.根据权利要求1或2所述的疫苗组成物，其更包括佐剂。

7.根据权利要求1或2所述的疫苗组成物，其中所述疫苗组成物藉由注射或接种投与。

8.根据权利要求7所述的疫苗组成物，其中所述疫苗组成物藉由皮内(intradermal)注射投与。

9.一种套组，用于治疗表现HER2的胃癌，所述套组包括根据权利要求1或2所述的用于诱导个体中的抗癌作用的疫苗组成物及说明书。

10.根据权利要求9所述的套组，其中所述套组不包括抗HER2治疗性抗体。