CN117957252A - 抗eacam5/6抗原结合分子及其治疗方法 - Google Patents

抗eacam5/6抗原结合分子及其治疗方法 Download PDF

Info

Publication number
CN117957252A
CN117957252A CN202280050256.6A CN202280050256A CN117957252A CN 117957252 A CN117957252 A CN 117957252A CN 202280050256 A CN202280050256 A CN 202280050256A CN 117957252 A CN117957252 A CN 117957252A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
amino acid
acid sequence
ser
antigen binding
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202280050256.6A
Other languages
English (en)
Inventor
徐文华
吴婷晖
陈美仪
梁巧尹
S·多夫穆勒
陈孟雄
林洁诗
W·斯顿科尔
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Agency for Science Technology and Research Singapore
Original Assignee
Agency for Science Technology and Research Singapore
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Agency for Science Technology and Research Singapore filed Critical Agency for Science Technology and Research Singapore
Publication of CN117957252A publication Critical patent/CN117957252A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3007—Carcino-embryonic Antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明涉及抗CEACAM5/6抗原结合分子及其人源化变体，所述抗CEACAM5/6抗原结合分子及其人源化变体结合在N256糖基化的CEACAM5/6。本发明还涉及所述抗原结合分子在检测和医学治疗的方法中的用途。

Description

抗EACAM5/6抗原结合分子及其治疗方法
技术领域
本发明一般涉及抗体技术领域。具体地，本发明涉及抗CEACAM5/6抗原结合分子及其治疗方法。
背景技术
癌胚抗原相关细胞粘附分子5(CACAM5)和癌胚抗原相关性细胞粘附分子6(CEACAM6)属于癌胚抗原(CEA)家族。CEACAM5和CEACAM6是糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定的细胞表面糖蛋白，已知其在多种癌症中高表达，包括胃癌、乳腺癌、胰腺癌、结肠癌和非小细胞肺癌(NSCL)。
CEACAM的翻译后糖基化是一种细胞类型依赖性和物种依赖性的过程，其可改变CEACAM的二聚化特性。在口腔鳞状细胞癌中，N-糖基化的CEACAM6是一种与复发相关的肿瘤标志物，是增强细胞迁移和侵袭所必需的。N-末端糖基化的CEACAM5在结直肠癌症(CRC)中上调。此外，N-糖基化CEACAM种类的蛋白表达主要存在于CRC细胞的顶膜上，而其主要位于正常结肠细胞内。
虽然CEACAM5和CEACAM6是有前途的癌症靶点，但目前开发用于人类癌症治疗的抗-CACAM5和抗-CACAM6单克隆抗体的数量有限。因此，需要开发针对这些靶点的有效用作癌症治疗剂的新抗体。
抗体人源化是将抗体应用于人类临床治疗的关键步骤。小鼠抗体的抗体人源化包括将恒定区中的小鼠IgG骨架和可变区中的框架区替换为人版本，同时保留负责抗原结合的原始互补决定区(CDR)。抗体人源化降低了排斥反应和人类抗小鼠抗体(HAMA)反应的风险，已知这些反应是在使用小鼠来源的治疗性抗体时发生的。然而，这一过程往往会损害抗体的原始功能和/或特异性。
因此，一般需要克服或改善一个或多个上述的困难。
发明内容
本文公开了一种抗原结合分子，其包含：(i)重链可变区(VH)，其包含SEQ ID NO:1的VHCDR1氨基酸序列，以及SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列，以及SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列，和(ii)轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO:4的VLCDR1氨基酸序列，SEQ IDNO:5的VLCDR2氨基酸序列，以及SEQ ID NO:6的VLCDR3氨基酸序列；其中(1)中定义的VH包含与SEQ ID NO:10或7所述的VH氨基酸序列的CDR以外的至少一个区至少90％的序列同一性，并且(1)中所定义的VL包含与SEQ ID NO:17或13所述的VL氨基酸序列的CDR以外的至少一个区至少90％的序列同一性。
本文公开了一种分离的多核苷酸，其包含编码本文定义的抗原结合分子的核酸序列。
本文公开了一种构建体，其包含与一个或多个控制序列可操作地连接的如本文所定义的多核苷酸。
本文公开了包含如本文所定义的构建体的宿主细胞。
本文公开了包含本文定义的抗原结合分子和药学上可接受的运载体的组合物。
本文公开了如本文所定义的抗原结合分子或组合物用作药物。
本文公开了一种治疗或预防受试者的癌症或炎性疾病的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本文定义的抗原结合分子或组合物。
本文公开了本文所定义的抗原结合分子或组合物用于治疗或预防受试者的癌症或炎性疾病。
本文公开了本文定义的抗原结合分子或组合物在制备用于治疗或预防受试者的癌症或炎性疾病的药物中的用途。
本文公开了一种用于检测受试者的癌症或炎性疾病的方法，所述方法包括：将从受试者获得的样品与本文定义的抗原结合分子接触，其中样品中抗原结合分子的结合水平与参考相比的增加表明存在癌症或炎性疾病。
本文公开了一种用于鉴定易患癌症或炎性疾病的受试者的方法，所述方法包括：将从受试者获得的样品与本文定义的抗原结合分子接触，其中样品中结合水平与参考相比的增加表明受试者易患癌症或炎性疾病。
本文公开了在本文定义的方法中使用的试剂盒，其包含本文定义的抗原结合分子以及使用说明书。
附图说明
以下仅通过非限制性举例的方式，参考附图来描述本发明的实施方案，在附图中：
图1显示潜在可变重链(VH)框架翻译序列，其中CDR用下划线标出。
图2显示潜在可变轻链(VL)框架翻译序列，其中CDR用下划线标出。
图3显示A)筛选工作流程和B)筛选工作流程的结果。
图4显示A)筛选结果的汇总和B)-C)可变重链(VH)框架序列和可变轻链(VL)框架序列中导致特异性降低的关键变化(黄色突出显示)。保留了特异性的可变重链(VH)和可变轻链(VL)以斜体表示。
图5显示AB1抗体的重链序列和轻链序列。AB1抗体包含如图1和图2所示的LPH1 VH和LPL2 VL序列。AB2抗体(未显示)包含AH1 VH和AL1VL序列。可变重链(VH)和可变轻链(VL)以粗体显示，其中CDR用下划线标出。
图6显示人CEACAM5(SEQ ID NO:86的氨基酸1-360)与人CEACAM6(SEQ ID NO:87的氨基酸1-344)的翻译序列比对，二者带有保守的N256糖基化位点。
图7显示AB1抗原的表征。AB1在A549细胞裂解物中检测到2个条带：75kDa的条带和180kDa的条带。对A549细胞进行CEACAM5和CEACAM6的单一和双重siRNA敲低。(A)siRNA处理的细胞裂解物的蛋白质印迹分析显示AB1不与CEACAM5单一敲低或双重敲低样品中的180kDa条带结合。此外，进一步表明AB1不与CEACAM6单一敲低或双重敲低样品中的75kDa条带结合。AB1在scrambled基因(scrambled gene)siRNA敲低的细胞裂解物和未处理的细胞(模拟样品，mock sample)中检测到75kDa和180kDa的条带。在单一敲低和双重敲低的样品中，CEACAM5的敲低效率低于CEACAM6。检测持家基因GAPDH作为上样对照。(B)通过基因表达分析监测siRNA敲低的效率。在单一和双重敲低样品中，CEACAM5的敲低效率均低于CEACAM6。
图8显示AB1抗原识别的N-糖基化依赖性。将A549细胞裂解物还原、变性并用PNGase F处理以除去N-连接的糖基化，并用AB1和商业CEACAM5和CEACAM6抗体探测。蛋白质印迹分析表明，还原后和PNGase F处理后，AB1与75kDa的条带(CEACAM6)和180kDa的条带(CEACAM5)的结合被消除。商业CEACAM6抗体检测到75kDa的被还原的蛋白质和较小尺寸(37kDa)的去糖基化的CEACAM6，而商业CEACAM5抗体似乎也是N-聚糖依赖性的，因为未检测到去糖基化的CEACAM5。持家基因GAPDH的检测可作为上样对照。
图9显示AB1识别的N256-糖基化依赖性。不表达CEACAM5和CEACAM6的肺癌细胞系NCI-H1299用CEACAM5或CEACAM6序列以及用其中N-糖基化位置256突变(N256A)的CEACAM5或CEACAM6突变序列转染。该突变消除了N256位置的N-糖基化。针对人IgG1同种型对照将平均荧光强度(MFI)标准化(nMFI)(参见图9A和B中的表格)。将AB1的流式细胞术结合与商业CEACAM5和CEACAM6抗体以及竞争抗体进行比较。竞争抗体包括：CEACAM6特异性替奴瑞利单抗(Tinurilimab)(Bayer)、CEACAM5特异性特赛妥单抗(Tusamitamab)(Sanofi)、N-糖基化CEACAM5和N-糖基化CEACAM6特异性NEO-201(Precision Biologics)以及CEACAM5和CEACAM6特异性EBC-123的生物仿制药。EBC-123是L-DOS47(Helix Biopharma Corp)的生物仿制药，其中将原始的单体骆驼科(camelid)单结构域VHH 2A3移植到人Fc上。结果表明，AB1确实与表达CEACAM5或CEACAM6的NCI-H1299细胞结合(A)，但不与表达N256A突变的CEACAM5或N256A突变的CEACAM6的细胞结合(B)。这表明CEACAM5和CEACAM6的N256糖基化对于AB1与CEACAM5或CEACAM6的结合很重要。没有一种CEACAM6特异性竞争抗体(替奴瑞利单抗、EBC-123和NEO-201)显示出这种对CEACAM6 N256糖基化的依赖性(图9A)。
图10显示AB1、AB2和AB3与人原代外周血细胞(上图)或人原代骨髓白细胞(下图)不同群体的流式细胞术结合与商业和竞争抗体的比较。将裂解了红细胞的原代细胞与靶向CEACAM5和CEACAM6的不同一级抗体孵育。用针对粒细胞(CD15+)、T细胞(CD3+)或B细胞(CD19+)的荧光标记的谱系标志物(linage marker)来标记细胞。显示原代外周血细胞的3个供体/2次重复实验和原代人骨髓白细胞的1个供体/3次重复实验的平均荧光强度(MFI，上图)或标准化MFI(下图)(右侧)。AB1、AB2或AB3未观察到与CD3+T细胞的结合(即可忽略不计)。与CEACAM6特异性抗体如替奴瑞利单抗(Bayer)、NEO-201(Precision Biologics)和EBC-123(Helix Biopharma Corp)相比，发现AB1、AB2和AB3与外周血中的粒细胞(CD15+细胞群体)或B细胞(CD19+群体)结合较少。CEACAM5特异性特赛妥单抗(Sanofi)未显示出与人类白细胞的结合。
图11显示通过生物膜干涉技术对(A)CEACAM5和N256A突变的CEACAM5以及(B)CEACAM6和N256A突变的CEACAM6进行的亲和力测量。将内部制备的带有Avi标签的CEACAM5、CEACAM6和N256A突变的CEACAM5以及N256A突变的CEACAM6固定在Dip和Read SA生物传感器上。抗体AB1和竞争抗体EBC-123(Helix Biopharma Corp)、NEO-201(PrecisionBiologics)和特赛妥单抗(Sanofi)被用作分析物。结果表明，AB1以2位数纳摩尔范围内的可比亲和力常数(KD)与CEACAM5和CECAM6结合。与野生型CEACAM5和CEACAM6蛋白相比，AB1针对N256A突变的CEACAM5和N256A突变的CEACAM6的KD小10-100倍。竞争抗体以相似的亲和力与CEACAM5、CEACAM6、N256A突变的CEACAM5和N256A突变的CEACAM6结合。
图12显示抗体AB1和竞争抗体在抗原阳性和抗原阴性细胞系中的内化。A)显示在NCI-H1299和过表达CEACAM5或CEACAM6或N256A突变的CEACAM5或N256A突变的CEACAM6的NCI-H1299中的AB1内化。B)与IgG1同种型对照和对CEACAM5和/或CEACAM6特异的竞争抗体相比，显示在NCI-H1299和过表达CEACAM5或CEACAM6的NCI-H1299细胞中的AB1内化。AB1在表达CEACAM5或CEACAM6的NCI-H1299中内化，但不在NCI-H1299或者表达N256A突变的CEACAM5或N256A突变的CEACAM6的NCI-H1299中内化(A)。CEACAM6特异性替奴瑞利单抗(Bayer)非特异性内化到NCI-H1299细胞中。CEACAM5特异性特赛妥单抗(Sanofi)仅内化到过表达CEACAM5的NCI-H1299中，而CEACAM5和CEACAM6特异性NEO-201(PrecisionBiologics)和EBC-123(Helix Biopharma Corp)以与AB1相当的速率内化到过表达CEACAM5或CEACAM6的NCI-H1299中(B)。
图13显示缀合的抗体AB3。AB3由下述组成：AB1通过蛋白酶可裂解马来酰亚胺基己酰基缬氨酸-瓜氨酸(vc-PAB)接头与单甲基澳瑞他汀E(MMAE)结合
图14显示CellTiterGloTM活力测定和剂量反应曲线(估测细胞孵育72小时后的IC50)检测的体外功能性。A)左图显示AB3与NCI-H1299相较于与过表达CEACAM6的NCI-H1299(克隆细胞系12)或过表达突变的N256ACEACAM6的NCI-H1299(克隆细胞系19)的剂量反应曲线。A)右图显示AB3与NCI-H1299相较于与过表达CEACAM5的NCI-H1299(克隆细胞系2F3)或过表达突变的N256A CEACAM5的NCI-H1299(克隆细胞系6)的剂量反应曲线。B)显示用AB3、IgG1同种型对照-MMAE和游离MMAE与NCI-H1299细胞和过表达CEACAM5、CEACAM6、N256A突变的CEACAM5和N256A突变的CEACAM6的NCI-H1299细胞获得的IC50。表达膜结合的CEACAM5或CEACAM6的NCI-H1299细胞获得2位数的纳摩尔IC50，而不表达CEACAM5和CEACAM6的NCI-H1299细胞和表达N256A突变的CEACAM5或N256A突变的CEACAM6的NCI-H1299细胞获得更高的IC50。对于所有细胞系，用IgG1-MMAE同种型对照获得了可比较的高IC50，这证明了AB3的特异性。游离MMAE的IC50在皮摩尔范围内。C)显示AB3与缀合至MMAE的CEACAM5特异性竞争抗体特赛妥单抗(Sanofi)相比的IC50。比较了AB3和特赛妥单抗-MMAE对癌细胞系Capan-1、CFPAC-1、HCC4006、SNU-16和HT-29的IC50。由于AB3对N256糖基化CEACAM5和N256糖基化CEACAM6的双重特异性，AB3靶向更广泛的癌症适应症。
图15显示胃异种移植模型中的AB3。SNU-16细胞表达AB1抗原CEACAM5和CEACAM6。在雌性Balb/c裸鼠(n＝10只/组)中植入SNU-16细胞并通过静脉内注射治疗一次(或多西他赛每周一次x3)。AB3以1、3或5mg/kg的剂量施用，仅在第0天单次施用。AB3在第35天分别达到154％、147％和114％的肿瘤生长抑制(TGI)。治疗耐受性良好，没有观察到体重减轻。用5mg/kg或1mg/kg的IgG1-MMAE治疗具有统计学显著(p＝0.05)较低的TGI(分别为123％和95％)。此外，只有AB治疗的小鼠以剂量依赖性方式显示完全反应，分别在5、3和1mg/kg AB3的单次剂量给药后，6/10、3/10和1/10小鼠无肿瘤，但仅用IgG1-MMAE治疗后未观察到无肿瘤动物。方差分析(Anova)：单因素方差分析(ANOVA)检验，然后进行Bonferroni多重比较检验，显示与G1相比的显著性水平：p<0.0001＝****，p<0.001＝**，p<0.05＝*，ns＝不显著；NA＝不适用；BW，体重(第0天接种时每只动物的体重设定为100％，显示组平均值％)；MTV，所有动物的平均肿瘤体积/剩余动物的平均肿瘤体积；n＝数字；PR，部分回归；CR，完全回归；TGI，肿瘤生长抑制＝平均肿瘤体积(对照第35天-治疗第35天)/(对照第21天-对照第0天)；TRD，治疗相关的死亡；NTRD，非治疗相关的死亡(例如溃疡性肿瘤，剂量给药错误)。
图16显示胰腺异种移植模型Capan-1中的AB3。Capan-1细胞表达AB1抗原CEACAM5和CEACAM6。在雌性NSG小鼠(n＝10只/组)中植入Capan-1细胞并通过静脉内注射治疗一次。仅在第0天单次施用，以5mg/kg的剂量施用AB3。AB3在第21天达到110％的TGI。治疗耐受性良好，没有观察到体重减轻。用5、3或1mg/kg的IgG1-MMAE治疗具有统计学显著(p＝0.05)较低的TGI(分别为28％、185％和-8％)。方差分析：单因素方差分析检验，然后进行Bonferroni多重比较检验，显示与G1相比的显著性水平：p<0.0001＝****，p<0.001＝**，p<0.05＝*，ns＝不显著；BW，体重(第0天接种时每只动物的体重设定为100％，显示组平均值％)；MTV，所有动物的平均肿瘤体积/剩余动物的平均肿瘤体积；n＝数字；PR，部分回归；CR，完全回归；TGI，肿瘤生长抑制＝平均肿瘤体积(对照第21天-治疗第21天)/(对照第21天-对照第0天)；TRD，治疗相关的死亡；NTRD，非治疗相关的死亡(例如溃疡性肿瘤，剂量给药错误)。
图17显示胰腺异种移植模型BxPC-3中的AB3。BxPC-3细胞表达AB1抗原CEACAM5和CEACAM6。在雌性NOD-SCID小鼠(n＝8只/组)中植入BxPC-3细胞并通过静脉内注射治疗一次。仅在第0天单次施用，以1或5mg/kg的剂量施用AB3。AB3在第21天分别达到107％和21％的TGI。治疗耐受性良好，没有观察到体重减轻。用5mg/kg的IgG1-MMAE治疗具有统计显著(p＝0.05)的较低TGI(6％)。方差分析：单因素方差分析检验，然后进行Bonferroni多重比较检验，显示与G1相比的显著性水平：p<0.0001＝****，p<0.001＝**，p<0.05＝*，ns＝不显著；BW，体重(第0天接种时每只动物的体重设定为100％，显示组平均值％)；MTV，所有动物的平均肿瘤体积/剩余动物的平均肿瘤体积；n＝数字；PR，部分回归；CR，完全回归；TGI，肿瘤生长抑制＝平均肿瘤体积(对照第21天-治疗第21天)/(对照第21天-对照第0天)；TRD，治疗相关的死亡；NTRD，非治疗相关的死亡(例如溃疡性肿瘤，剂量给药错误)。
图18显示抗原阴性NCI-H1299和过表达N256A突变的CEACAM5或N256A突变的CEACAM6的NCI-H1299与过表达CEACAM5或CEACAM6的抗原阳性NCI-H1299的肿瘤生长模式。在雌性NOD-SCID小鼠(n＝6只/组)中植入NCI-H1299细胞，每周测量肿瘤体积3次，直至75天。对于NCI-H299、过表达CEACAM6的NCI-H1299或过表达N256A突变的CEACAM6的NCI-H1299，未观察到肿瘤发生或倍增时间的差异。对于过表达CEACAM5的NCI-H1299观察到早期肿瘤发生，而过表达N256A突变的CEACAM5的NCI-H1299的肿瘤发生延迟了35天。肿瘤发生后，所有细胞系的肿瘤倍增时间相当。
图19显示在使用抗原阴性NCI-H1299和过表达N256A突变的CEACAM5的NCI-H1299对比过表达CEACAM5或CEACAM6的抗原阳性NCI-H1299细胞的异种移植模型中的AB3。在雌性NOD-SCID小鼠(n＝6只/组)中植入NCI-H1299细胞并通过静脉内注射治疗一次。AB3以5mg/kg施用，仅第0天单次施用。在第21天时，AB3对抗原阴性细胞NCI-H1299和过表达N256A突变的CEACAM5的NCI-H1299分别达到32％和28％的TGI。对于过表达CEACAM5或CEACAM6的抗原阳性NCI-H1299细胞，AB3分别达到109％和110％的TGI。治疗耐受性良好，没有观察到体重减轻。方差分析：单因素方差分析检验，然后进行Bonferroni多重比较检验，显示与G1相比的显著性水平：p<0.0001＝****，p<0.001＝**，p<0.05＝*，ns＝不显著；BW，体重(第0天接种时每只动物的体重设定为100％，显示组平均值％)；MTV，所有动物的平均肿瘤体积/剩余动物的平均肿瘤体积；n＝数字；PR，部分回归；CR，完全回归；TGI，肿瘤生长抑制＝平均肿瘤体积(对照第21天-治疗第21天)/(对照第21天-对照第0天)；TRD，治疗相关的死亡；NTRD，非治疗相关的死亡(例如溃疡性肿瘤，剂量给药错误)。
具体实施方式
本说明书教导一种与CEACAM 5和/或CEACAM6结合的人源化抗原结合分子。本说明书教导一种人源化抗原结合分子，其包含：(i)重链可变区(VH)，其包含GNTFTSYVMH(SEQ IDNO:1)的VHCDR1氨基酸序列、YINPYNDGTKYNEKFKG(SEQ ID NO:2)的VHCDR2氨基酸序列和STARATPYFYAMDY(SEQ ID NO:3)的VHCDR3氨基酸序列；以及(ii)轻链可变区(VL)，其包含KSSQSLLWSVNQNSYLS(SEQ ID NO:4)的VLCDRl氨基酸序列、GASIRES(SEQ ID NO:5)的VLCDR2氨基酸序列和QHNHGSFLPYT(SEQ ID NO:6)的VLCDR3氨基酸序列。
本文公开了一种抗原结合分子，其包括：(1)重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区(VH)包含：SEQ ID NO:1的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列以及SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列，所述轻链可变区(VL)包含：SEQ ID NO:4的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:5的VLCDR2氨基酸序列以及SEQ ID NO:6的VLCDR3氨基酸序列；其中(1)中定义的VH包含与SEQ ID NO:10或7所述的VH氨基酸序列的CDR以外的至少一个区至少90％(包括至少91％至99％及其之间的所有整数百分比)的序列同一性，(1)中定义的VL包含与SEQ ID NO:17或13所述的VL氨基酸序列的CDR以外的至少一个区至少90％(包括至少91％至99％及其之间的所有整数百分比)的序列同一性。
在不受理论约束的情况下，本发明人已经发现，在将鼠抗体转化为人源化抗体的过程中，与亲本鼠形式和嵌合形式相比，许多变体显示出降低的特异性和/或功能。鉴定了几个关键标准来对计算机人源化优化产生的人源化变体进行排序。重要的是，正是聚集和位点特异性读数能够消除有问题的基序，并能够快速筛选出三个最终分子，以进行进一步的临床前评估。
在一个实施方案中，抗原结合分子与CEACAM5和/或CEACAM6结合。在一个实施方案中，抗原结合分子与CEACAM5结合。在一个实施方案中，抗原结合分子与CEACAM6结合。在一个实施方案中，抗原结合分子与CEACAM5和CEACAM6结合。
在一个实施方案中，抗原结合分子与在N256位置糖基化的CEACAM5和/或在N256位置糖基化的CEACAM6结合。在一个实施方案中，当CEACAM5在N256位置被糖基化时，抗原结合分子与该CEACAM5结合。在一个实施方案中，当CEACAM6在N256位置被糖基化时，抗原结合分子与该CEACAM6结合。在一个实施方案中，当CEACAM5和CEACAM6均在N256位糖基化时，抗原结合分子与该CEACAM5和该CEACAM6结合。
本发明的抗原结合分子可以是分离的、纯化的、合成的或重组的形式。合适的抗原结合分子可从抗体及其抗原结合片段中选择，包括单克隆抗体(MAb)、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体和这些抗体的抗原结合片段。抗原结合分子可以是多价的(例如二价)或单价的。在一些实施方案中，抗原结合分子包含Fc结构域。在其他实施方案中，抗原结合分子缺乏Fc结构域。在一些实施方案中，抗原结合分子是单价抗原结合分子(例如Fab、scFab、Fab'、scFv、单臂抗体等)。
“抗原结合分子”是指对靶抗原具有结合亲和力的分子。应该理解，该术语扩展到表现出抗原结合活性的免疫球蛋白、免疫球蛋白片段和非免疫球蛋白来源的蛋白质框架。在本发明的实践中有用的代表性抗原结合分子包括抗体及其抗原结合片段。术语“抗原结合分子”包括抗体和抗体的抗原结合片段。
如本文所用，术语“抗体”被理解为是指包含至少一个互补决定区(CDR)的任何抗原结合分子或分子复合物，其特异性结合靶抗原或与靶抗原特异性相互作用。术语“抗体”包括全长免疫球蛋白分子，其包含通过二硫键相互连接的两条重(H)链和两条轻(L)链，以及其多聚体(例如IgM)。每条重链包含一个重链可变区(可缩写为HCVR、VH)和一个重链恒定区。重链恒定区一般包含三个结构域：CH1、CH2和CH3。每条轻链包括一个轻链可变区(可缩写为LCVR或VL)和一个轻链恒定区。轻链恒定区典型地包含一个结构域(CL1)。VH和VL区可进一步细分为高变异性区，称为互补决定区(CDR)，期间散布着更保守的区，也称为框架区(FR)。每个VH和VL典型地包含三个CDR和四个FR，按以下顺序从氨基末端到羧基末端排列：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。在一些实施方案中，本文所述的抗原结合分子的FR可与目标物种(即，如本文所述，将给予抗原结合分子或其抗原结合片段的物种)的种系序列的FR相同。在一些实施方案中，FR可天然地或人为地修饰。虽然一般希望每个FR序列与源自目标物种的免疫球蛋白分子的FR序列相同，包括最小化在施用给目标物种的受试者时针对结合分子产生的免疫应答，但在一些实施方案中，抗原结合分子或其抗原结合片段可以在其一个或多个FR序列中包含在目标物种的一个或多个FR的相应位置是外来的一个或多个氨基酸残基。
抗体包括任何类别的抗体，例如IgG、IgA或IgM(或其亚类)，并且抗体不需要是任何特定类别。根据其重链恒定区的抗体氨基酸序列，免疫球蛋白可分为不同的类别。免疫球蛋白有五大类：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中一些可进一步分为亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定区分别称为α、δ、ε、γ和μ。本领域技术人员熟知不同类别免疫球蛋白的亚基结构和三维构型。轻链可分为κ和λ轻链。
在一个实施方案中，本发明的抗原结合分子具有选自由IgG1、IgG2、IgG3和IgG4组成的组的同种型。重链恒定区可以是野生型人Fc区，或是包含一个或多个氨基酸置换的人Fc区。如本领域所公开的，抗体可以具有稳定免疫球蛋白的两条重链之间的二硫键的突变，例如IgG4铰链区的突变(例如Angal等人，1993.Mol.Immunol.,30:105-08)。另见，例如，US2005/0037000。重链恒定区还可以具有改进抗原结合分子性质的置换(例如，减少下述的一种或多种：Fc受体结合、抗原结合分子糖基化、脱酰胺、与补体的结合或蛋氨酸氧化)。在某些情况下，抗原结合分子可能具有突变，例如美国专利号5,624,821和5,648,260中描述的那些突变。在一些实施方案中，修饰抗原结合分子以减少或消除效应子功能。重链恒定区可以是嵌合的，例如，Fc区可包含IgG4同种型的IgG抗体的CH1和CH2结构域，以及来自IgG1同种型的IgG抗体的CH3结构域(参见例如美国专利申请号2012/0100140A1)。
如本文所用，术语“互补决定区”(CDR；即CDR1、CDR2和CDR3)是指抗体可变结构域的氨基酸残基，其存在对于抗原结合是必需的。每个可变结构域一般具有三个CDR区，分别鉴定为CDR1、CDR2和CDR3。每个互补决定区可包含来自例如由Kabat定义的“互补决定区”的氨基酸残基(即，关于轻链可变结构域中的残基24-34(L1)、50-56(L2)和89-97(L3)，以及重链可变结构域中的残基31-35(H1)、50-65(H2)和95-102(H3)；Kabat等人，Sequences ofProteins of Immunological Interest,第5版.Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda,Md.(1991))和/或来自“高变环”的那些残基(即，关于轻链可变结构域中的残基26-32(L1)、50-52(L2)和91-96(L3)，以及重链可变结构域中的残基26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)；Chothia和Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。在一些情况下，互补决定区可包括来自根据Kabat定义的CDR区和高变环的氨基酸。
“抗原结合位点”(或互补位)是指提供与抗原相互作用的抗原结合分子的位点，即一个或多个氨基酸残基。例如，抗体的抗原结合位点包含来自互补决定区(CDR)的氨基酸残基。天然免疫球蛋白分子典型地具有两个抗原结合位点，Fab分子典型地具有单个抗原结合位点。本文所述的抗原结合分子的抗原结合位点典型地特异性结合抗原，更特别地结合抗原的表位。
术语“抗原结合片段”、“抗原结合部分”、“抗原结合结构域”和“抗原结合位点”在本文中可互换使用，以指代抗原结合分子参与抗原结合的部分。这些术语包括任何天然存在的、酶促可获得的、合成的或基因改造的多肽或糖蛋白，其特异性结合抗原以形成复合物。
抗体的抗原结合片段可例如使用任何合适的标准技术(例如蛋白水解消化或涉及操作和表达编码抗体可变结构域和任选恒定结构域的DNA的重组基因改造技术)从完整抗体分子衍生而来。这种DNA是已知的和/或容易从例如商业来源、DNA文库(包括例如噬菌体抗体文库)获得，或者可合成。DNA可通过化学方法或使用分子生物学技术进行测序和操作，例如，将一个或多个可变和/或恒定结构域排列成合适的构型，或引入密码子、产生半胱氨酸残基、修饰、添加或缺失氨基酸等。
抗原结合片段的非限制性例子包括：(i)Fab片段；(ii)F(ab’)2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)单链Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；(vii)最小识别单元，其由模拟抗体高变区(例如，分离的互补决定区(CDR)，例如CDR3肽)的氨基酸残基或限制性FR3-CDR3-FR4肽组成。其他改造的分子，例如结构域特异性抗体、单结构域抗体、结构域缺失抗体、嵌合抗体、CDR移植抗体、单臂抗体、双抗体、三抗体、四抗体、微抗体、纳米抗体(例如单价纳米体、二价纳米体等)、小型模块化免疫药物(SMIP)、骆驼科VHH和鲨鱼可变IgNAR结构域，也包含在本文使用的表述“抗原结合片段”中。
抗体的抗原结合片段典型地包含至少一个可变结构域。可变结构域可为任何大小或任何氨基酸组成，并且一般将包含至少一个与一个或多个框架序列相邻或在框架内的CDR。在具有与VL结构域相关联的VH结构域的抗原结合片段中，VH和VL结构域可以以任何合适的排列相对彼此定位。例如，可变区可为二聚体并且包含VH-VH、VH-VL或VL-VL二聚体。备选地，抗体的抗原结合片段可含有单体VH或VL结构域。
在某些实施方案中，抗体的抗原结合片段可包含与至少一个恒定结构域共价连接的至少一个可变结构域。可在本发明抗体的抗原结合片段内发现的可变结构域和恒定结构域的非限制性示例构型包括：(i)VH-CH1；(ii)VH-CH2；(iii)VH-CH3；(iv)VH-CH1-CH2；(v)VH-CH1-CH2-CH3，(vi)VH-CH2-CH3；(vii)VH-CL；(viii)VL-CH1；(ix)VL-CH2，(x)VL-CH3；(xi)VL-CH1-CH2；(xii)VL-CH1-CH2-CH3；(xiii)VL-CH2-CH3；和(xiv)VL-CL。在可变结构域和恒定结构域的任何构型中，包括上面列出的任何示例构型，可变结构域和恒定结构域可直接彼此链接，也可通过完整或部分铰链或接头区链接。铰链区可由至少2个(例如，5、10、15、20、40、60或更多)氨基酸组成，其导致单个多肽分子中相邻可变结构域和/或恒定结构域之间的柔性或半柔性连接。此外，本发明抗体的抗原结合片段可包含上述任何可变结构域和恒定结构域构型的同二聚体或异二聚体(或其他多聚体)，它们彼此和/或与一个或多个单体VH或VL结构域非共价(例如，通过二硫键)缔合。多特异性抗原结合分子典型地将包含至少两个不同的可变结构域，其中每个可变结构域能够特异性结合单独的抗原或同一抗原上的不同表位。任何多特异性抗原结合分子形式，包括双特异性抗原结合分子形式，都可使用本领域可用的常规技术在本发明抗体的抗原结合片段的情形中使用。
术语“可变区”或“可变结构域”是指参与将抗原结合分子与抗原结合的抗体重链或轻链的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为VH和VL)一般具有相似的结构，每个结构域包含四个保守框架区(FR)和三个高变区(或CDR)。例如，参见Kindt等人，Kuby Immunology,第6版，W.H.Freeman and Co.,第91页(2007)。单个VH或VL结构域可能足以赋予抗原结合特异性。
本文使用的术语“恒定结构域”或“恒定区”表示除可变区之外的抗体结构域的总和。恒定区不直接参与抗原的结合，但表现出各种免疫效应功能。
在一个实施方案中，抗原结合分子或其抗原结合片段是人源化的。“人源化”意味着抗原结合分子包含与人类相容的氨基酸序列，使得该氨基酸序列不太可能被人类受试者的免疫系统视为外来的。在一个实施方案中，人源化抗原结合分子包含衍生自一个或多个人免疫球蛋白分子的一个或多个免疫球蛋白骨架区。在一些实施方案中，人源化抗原结合分子的所有框架区将衍生自一个或多个人免疫球蛋白分子。人源化抗体可任选地包含衍生自人免疫球蛋白分子的抗体恒定区的至少一部分。
短语“特异性结合”或“特异结合”是指在生理条件下，两个分子之间的结合反应至少是背景的两倍，更典型地是背景分子缔合的10至100倍。当使用一种或多种可检测的蛋白质结合剂时，特异性结合取决于该蛋白质在蛋白质和其他生物制剂的异质群体中的存在。因此，在指定的免疫测定条件下，指定的抗原结合分子与特定的抗原决定簇结合，从而鉴定其存在。在这种条件下与抗原决定簇的特异性结合需要根据其对该决定簇的特异性而选择的抗原结合分子。这种选择可通过减去与其他分子交叉反应的抗原结合分子来实现。可使用多种免疫测定形式来选择抗原结合分子(例如免疫球蛋白)，使得它们与特定抗原具有特异性免疫反应性。例如，固相ELISA免疫测定常规地用于选择与蛋白质特异性免疫反应的抗体(参见例如Harlow&Lane，Antibodies，ALaboratory Manual(1988)，了解可用于确定特异性免疫反应性的免疫测定形式和条件的描述)。确定结合亲和力和特异性的方法在本领域也是众所周知的(例如，参见上文Harlow和Lane，同前所述；Friefelder,“PhysicalBiochemistry:Applications to biochemistry and molecular biology”(W.H.Freemanand Co.1976))。
“亲和力”或“结合亲和力”是指分子(例如抗原结合分子)的单个结合位点与其结合伴侣(例如抗原)之间的非共价相互作用总和的强度。除非另有说明，否则如本文所用，“结合亲和力”是指反映结合对成员(例如抗原结合分子)之间1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其伴侣Y的亲和力可用解离常数(Kd)表示，它是解离和缔合速率常数(分别为koff和kon)的比率。因此，只要速率常数的比率保持不变，等效亲和力可包含不同的速率常数。亲和力可通过本领域已知的常用方法测量，包括本文所述的方法。测量亲和力的一种具体方法是表面等离子体共振(SPR)。亲和力也可使用生物膜干涉技术(BLI)测量。在另一实施方案中，使用基于细胞的亲和力测量技术确定用于测量亲和力的方法。
术语“多肽”、“肽”或“蛋白质”在本文中可互换使用，以表示通过相邻残基的α-氨基和羧基之间的肽键彼此连接的线性氨基酸残基系列。氨基酸残基一般是天然的“L”异构体形式。然而，“D”异构体形式的残基可以置换任何L-氨基酸残基，只要多肽保留所需的功能特性即可。
如本文所用，术语“修饰的抗体”包括合成形式的抗体，其被改变使得它们不是天然存在的，例如，包含至少两个重链部分但不包含两个完整重链的抗体(例如结构域缺失的抗体或小体)；多特异性形式的抗体(例如双特异性、三特异性等)，其被改变以结合两种或更多种不同的抗原或单个抗原上的不同表位；与scFv分子连接的重链分子，等等。ScFv分子在本领域中是已知的，并且例如在美国专利中号5,892,019中进行了描述。另外，术语“修饰的抗体”包括多价形式的抗体(例如，与三个或更多拷贝的相同抗原结合的三价、四价等或更高价的抗体)。
在一个实施方案中，a)(1)中定义的所述VH包含与SEQ ID NO:10所述的VH氨基酸序列的CDR以外的至少一个区至少90％的序列同一性，并且(1)中定义的所述VL包含与SEQID NO:17所述的VL氨基酸序列的CDR以外的至少一个区至少90％的序列同一性；b)(1)中定义的所述VH包含与SEQ ID NO:10所述的VH氨基酸序列的CDR以外的至少一个区至少90％的序列同一性，并且(1)中定义的所述VL包含与SEQ ID NO:13所述的VL氨基酸序列的CDR以外的至少一个区至少90％的序列同一性；c)(1)中定义的所述VH包含与SEQ ID NO:7所述的VH氨基酸序列的CDR以外的至少一个区至少90％的序列同一性，并且(1)中定义的所述VL包含与SEQ ID NO:17所述的VL氨基酸序列的CDR以外的至少一个区至少90％的序列同一性；或d)(1)中定义的所述VH包含与SEQ ID NO:7所述的VH氨基酸序列的CDR以外的至少一个区至少90％的序列同一性，并且(1)中定义的所述VL包含与SEQ ID NO:13所述的VL氨基酸序列的CDR以外的至少一个区至少90％的序列同一性。
在一个实施方案中，a)所述VH与SEQ ID NO:10所述的VH氨基酸序列的区别在于在SEQ ID NO:10所述的VH氨基酸序列的CDR以外的至少一个区中的一个或多个氨基酸(例如1、2、3、4或5个)的缺失、置换或添加，并且所述VL与SEQ ID NO:17所述的VL氨基酸序列的区别在于在SEQ ID NO:17所述的VL氨基酸序列的CDR以外的至少一个区中的一个或多个氨基酸(例如1、2、3、4或5个)的缺失、置换或添加；b)所述VH与SEQ ID NO:10所述的VH氨基酸序列的区别在于在SEQ ID NO:10所述的VH氨基酸序列的CDR以外的至少一个区中的一个或多个氨基酸(例如1、2、3、4或5个)的缺失、置换或添加，并且所述VL与SEQ ID NO:13所述的VL氨基酸序列的区别在于在SEQ ID NO:13所述的VL氨基酸序列的CDR以外的至少一个区中的一个或多个氨基酸(例如1、2、3、4或5个)的缺失、置换或添加；c)所述VH与SEQ ID NO:7所述的VH氨基酸序列的区别在于在SEQ ID NO:7所述的VH氨基酸序列的CDR以外的至少一个区中的一个或多个氨基酸(例如1、2、3、4或5个)的缺失、置换或添加，并且所述VL与SEQ IDNO:17所述的VL氨基酸序列的区别在于在SEQ ID NO:17所述的VL氨基酸序列的CDR以外的至少一个区中的一个或多个氨基酸(例如1、2、3、4或5个)的缺失、置换或添加；或d)所述VH与SEQ ID NO:7所述的VH氨基酸序列的区别在于在SEQ ID NO:7所述的VH氨基酸序列的CDR以外的至少一个区中的一个或多个氨基酸(例如1、2、3、4或5个)的缺失、置换或添加，并且所述VL与SEQ ID NO:13所述的VL氨基酸序列的区别在于在SEQ ID NO:13所述的VL氨基酸序列的CDR以外的至少一个区中的一个或多个氨基酸(例如1、2、3、4或5个)的缺失、置换或添加。
在一个实施方案中，抗原结合分子包含：
a)VHFR1，其与QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKAS(SEQ ID NO:19)或QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS(SEQ ID NO:20)所述的VHFR1氨基酸序列的区别在于一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加；
b)VHFR2，其与WVRQAPGQGLEWMA(SEQ ID NO:21)或WVRQAPGQGLEWMG(SEQ ID NO:22)所述的VHFR2氨基酸序列的区别在于一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加；
c)VHFR3，其与RVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCAR(SEQ ID NO:23)或RVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:24)所述的VHFR3氨基酸序列的区别在于一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加；
d)VHFR4，其与YWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:25)所述的VHFR4氨基酸序列的区别在于一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加；
e)VLFR1，其与DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO:26)或DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC(SEQ ID NO:27)所述的VLFR1氨基酸序列的区别在于一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加；
f)VLFR2，其与WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO:28)或WYQLKPGQPPKLLLY(SEQ ID NO:29)所述的VLFR2氨基酸序列的区别在于一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加；
g)VLFR3，其与GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO:30)或GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC(SEQ ID NO:31)所述的VLFR3氨基酸序列的区别在于一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加；和/或
h)VLFR4，其与FGQGTKVEIK(SEQ ID NO:32)或FGGGTKLEIK(SEQ ID NO:33)所述的VLFR2氨基酸序列的区别在于一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加。
在一个实施方案中，抗原结合分子包含：
a)VHFR1氨基酸序列QVQLVQSGX1EVKKPGASVKVSCKAS(SEQ ID NO:34)，其中X1是V或A；
b)VHFR2氨基酸序列WVRQAPGQGLEWMX2(SEQ ID NO:35)，其中X2是A或G；
c)VHFR3氨基酸序列RVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCAR(SEQ ID NO:23)或RVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:24)；
d)VHFR4氨基酸序列YWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:25)；
e)VLFR1氨基酸序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO:26)或DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC(SEQ ID NO:27)；
f)VLFR2氨基酸序列WYQKPGKAPKLLY(SEQ ID NO:28)或WYQLKPGQPPKLLY(SEQ IDNO:29)；
g)VLFR3氨基酸序列GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO:30)或GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC(SEQ ID NO:31)；和/或
h)VLFR4氨基酸序列FGQGTKVEIK(SEQ ID NO:32)或FGGGTKLEIK(SEQ ID NO:33)。
在一个实施方案中，抗原结合分子包含SEQ ID NO:10或7的VH氨基酸序列和SEQID NO:17或13的VL氨基酸序列。
在一个实施方案中，a)抗原结合分子包含SEQ ID NO:10的VH氨基酸序列和SEQ IDNO:17的VL氨基酸序列；b)抗原结合分子包含SEQ ID NO:10的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:13的VL氨基酸序列；c)抗原结合分子包含SEQ ID NO:7的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:17的VL氨基酸序列；或d)抗原结合分子包含SEQ ID NO:7的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:13的VL氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗原结合分子是抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段是全长抗体、基本上完整的抗体、Fab片段、scFab、Fab'，单链可变片段(scFv)或单臂抗体。
在一个实施方案中，抗原结合分子是全长抗体。在一个实施方案中，全长抗体是IgG(例如IgG1)抗体。
在一个实施方案中，抗原结合分子包含与SEQ ID NO:84具有至少70％(包括至少71％至99％及其之间的所有整数百分比)序列同一性的轻链序列，以及与SEQ ID NO:85具有至少70％(包括至少71％至99％及其之间的所有整数百分比)序列同一性的重链序列。
本文使用的术语“序列同一性”是指序列在比较窗口内逐个核苷酸或逐个氨基酸相同的程度。因此，“序列同一性百分比”按下述计算：通过在比较窗口上比较两个最佳比对的序列，确定两个序列中出现相同核酸碱基(例如A、T、C、G和I)或相同氨基酸残基(例如：Ala，Pro，Ser，Thr，Gly，Val，Leu，Ile，Phe，Tyr，Trp，Lys，Arg，His，Asp，Glu，Asn，Gln，Cys和Met)的位置数，以生成匹配位置的数量，将匹配位置的数量除以比较窗口中的位置总数(即窗口大小)，并将结果乘以100以得出序列同一性的百分比。
本文定义的抗原结合分子可包含一个或多个保守氨基酸置换。
“保守氨基酸置换”被理解为意指氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基替换的置换。本领域已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基家族，其一般可如下表“氨基酸的分类”所示进行细分：
氨基酸细分
保守氨基酸置换还包括基于侧链的分组。例如，具有脂族侧链的一组氨基酸是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；具有脂族羟基侧链的一组氨基酸是丝氨酸和苏氨酸；具有含酰胺侧链的一组氨基酸是天冬酰胺和谷氨酰胺；具有芳香侧链的一组氨基酸是苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；具有碱性侧链的一组氨基酸是赖氨酸、精氨酸和组氨酸；以及具有含硫侧链的一组氨基酸是半胱氨酸和蛋氨酸。例如，可合理地预期，用异亮氨酸或缬氨酸替换亮氨酸、用谷氨酸替换天冬氨酸、用丝氨酸替换苏氨酸或用结构相关的氨基酸类似替换氨基酸不会对所得变体多肽的性质产生主要影响。氨基酸变化是否导致功能多肽可通过测定其活性来容易地确定。
保守置换也显示在下表中(示例性和优选的氨基酸置换)。一般来说，落入本发明范围内的氨基酸置换是通过选择在维持(a)置换区中肽骨架的结构、(b)分子在靶位点的电荷或疏水性或(c)侧链的空间占位的效果方面没有显著差异的置换来实现的。在引入置换后，可以使用本领域技术人员已知的方法，包括本文别处描述的那些方法，来筛选变体特异性结合抗原的能力。
示例性和优选的氨基酸置换
在一个实施方案中，抗原结合分子与放射性同位素或细胞毒素缀合。
在一个实施方案中，抗原结合分子是与细胞毒素缀合的全长IgG(如IgG1)抗体。抗原结合分子可通过蛋白酶可裂解的马来酰亚胺基己酰基缬氨酸瓜氨酸(vc-PAB)接头与细胞毒素缀合。
在一个实施方案中，抗原结合分子由以下组成：AB1通过马来酰亚胺基己酰基缬氨酸瓜氨酸(vc-PAB)接头与单甲基澳瑞他汀E(MMAE)缀合(即AB3，如图13所示)。在一个实施方案中，接头-毒素组合具有化学式C58H94N10O12，化学名称为L-缬氨酰胺，N-甲基-N-[[[4-[[L-缬氨酰-N5-(氨基羰基)-L-鸟氨酰]氨基]苯基]甲氧基]羰基]-L-缬氨酰-N-[(1S,2R)-4-[(2S)-2-[(1R,2R)-3-[[(1R,2S)-2-羟基-1-甲基-2-苯基乙基]氨基]-1-甲氧基-2-甲基-3-氧丙基]-1-吡咯烷基]-2-甲氧基-1-[(1S)-1-甲基丙基]-4-氧丁基]-N-甲基。缀合可通过基于马来酰亚胺-半胱氨酸的方法进行，首先在37℃下用TCEP还原mAb链间二硫键，然后将药物的马来酰亚胺部分连接到还原的半胱氨酸上。药物抗体比率(DAR)可在疏水相互作用色谱(HIC)上进行分析。DAR比率例如可在3和4之间。
在另一方面，提供了下式(I)的抗原结合分子或抗原-药物缀合物(ADC)：
Ab-(L-D)n (I)
或其药学上可接受的盐，
其中：
Ab是如本文所定义的抗体或其抗体片段；
L是接头；
D是细胞毒素。
在本发明的一个实施方案中，本发明涉及ADC，其中L是下式(II)的接头：
其中：
L2是亚环烷基-羰基、(C2-C6)烷基或(C2-C6)烷基-羰基；
W是氨基酸单元；w是由0到5组成的整数；
Y为PAB-羰基，其中PAB为
x可为H或
y是0或1；
星号表示与D的连接点；和
波浪线表示与Ab的连接点。
本发明的一个实施例涉及一种ADC，其中L2是下式：
/>
其中：
星号表示与(W)W的连接点；和
波浪线表示与下式的马来酰亚胺部分的氮原子的连接点：
在本发明的一个实施方案中，w＝0，或w＝2，则(W)w选自：
其中：
星号表示与(Y)y的连接点；和
波浪线表示与L2的连接点。
本发明的一个实施方案涉及一种ADC，其中L选自：
/>
其中星号表示与D的连接点，并且所述波浪线表示与Ab的连接点。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种ADC，其中L是下式(III)的接头：
其中：
L’2是亚环烷基-羰基、(C2-C6)亚烷基或(C2-C6)亚烷基羰基；
W’是一个氨基酸单元；
w’是0至5的整数；
Y’是PAB-羰基，其中PAB为
x可为H或
y’是0或1；
R’是C1-C3烯基或H。
在一个实施方案中，式(III)的化合物是式(III’)的化合物：
在一个实施方案中，式(III’)化合物的特征在于L2’为C2亚烷基羰基，并且w’为2。
在一个实施方案中，式(III’)的接头化合物是：
在另一个实施方案中，式(III’)的接头化合物是：
在另一个实施方案中，式(III’)的接头化合物是：
本发明的接头可使用酰胺键偶联来合成。酰胺合成有许多方法。一些方法，但不限于，描述于Montalbetti,Christian A.G.N(Tetrahedron 61(46),2005,10827-10852)。备选地，可使用例如肽或蛋白质合成器，使用一个或多个残基的标准逐步添加来合成接头。备选地，可用于酰胺形成的其他方法包括但不限于Beckmann重排、Schmidt反应、腈水解、Willgerodt-Kindler反应、Passerini反应、Ugi反应、Bodroux反应、Chapman重排、Leuckart酰胺合成、Ritter反应、酯氨解、Schotten-Baumann反应、醇和胺的钌基催化或甲酰胺向烯烃的光解加成。
在一个实施方案中，细胞毒素选自由单甲基澳瑞他汀E(MMAE)、单甲基澳瑞他汀F(MMAF)、美登素(DM-1)、皂草素、吉西他滨、伊立替康、依托泊苷、长春花碱、培美曲塞、多西他赛、紫杉醇、铂类药物(例如顺铂、奥沙利铂和卡铂)、长春瑞滨、卡培他滨、米托蒽醌、伊沙匹隆、艾日布林、5-氟尿嘧啶、三氟尿苷和替吡嘧啶组成的组。
抗原结合分子也可与可检测部分缀合。
本发明设想的可检测部分包括例如本领域中已知的适用于诊断检测(包括体外检测和体内成像)的任何种类。可检测部分可为，例如，荧光团、放射性核素报告子、含金属的纳米颗粒或微粒、超声造影剂(例如，纳米气泡或微气泡)或光学成像染料。这也包括在磁共振成像(MRI)和磁性粒子成像(MPI)中可见的对比粒子。例如，可通过下述来检测和/或成像荧光团：荧光偏振、荧光激活的细胞分选和荧光显微镜，其可与或可不与电喷雾电离-质谱(ESI-MS)检测以及荧光发射计算机断层扫描(FLECT)成像相结合。放射性核素报告子可通过放射性核素(核)检测来检测和成像，例如单光子发射计算机断层扫描(SPECT)、正电子发射断层扫描(PET)或闪烁扫描成像。可使用光学成像来检测含金属的纳米粒子或微粒，包括典型地与顺磁性纳米粒子或微粒一起使用的MRI和一般与超顺磁性粒子一起使用的MPI。可使用包括对比增强超声(CEU)的超声成像来检测超声造影剂。
可检测标记也可为酶-底物标记。该酶一般可以催化生色底物的化学改变，该化学改变可使用各种技术进行测量。例如，该酶可以催化生色底物的化学改变，该化学改变可使用各种技术进行测量。例如，该实施例可催化底物中的颜色变化，这可用分光光度法测量。备选地，酶可以改变底物的荧光或化学发光。用于量化荧光变化的技术如上文所述。化学发光底物通过化学反应被电子激发，然后可以发射能被测量的光(例如使用化学发光计)或将能量提供给荧光受体。酶标记的例子包括萤光素酶(例如萤火虫萤光素酶和细菌萤光素酶；美国专利号4,737,456)、荧光素、2,3-二氢酞嗪二酮、苹果酸脱氢酶、脲酶、过氧化物酶如辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、溶菌酶、糖氧化酶(例如，葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶)、杂环氧化酶(例如脲酶和黄嘌呤氧化酶)、乳过氧化物酶、微过氧化物酶等。
酶-底物组合的例子包括，例如：
1)辣根过氧化物酶(HRP)利用过氧化氢氧化染料前体(例如，邻苯二胺(OPD)或3,3',5,5'-四甲基联苯胺盐酸盐(TMB))；
2)碱性磷酸酶(AP)，其以对硝基苯基磷酸酯为生色底物；和
3)β-D-半乳糖苷酶(β-D-Gal)与生色底物(例如，对硝基苯基-β-D-乳糖糖苷酶)或荧光底物4-甲基伞形酮-β-D-半乳糖苷酶。
在本发明的另一个实施方案中，抗原结合分子不需要被标记，并且其存在可使用与抗原结合分子结合的标记抗体来检测。本发明的抗原结合分子可用于任何已知的测定方法，例如竞争性结合测定、直接和间接夹心测定、免疫组织化学和免疫沉淀测定。
在一个实施方案中，抗原结合分子选择性结合耐吉非替尼的肺癌细胞、耐奥希替尼的肺癌细胞、非小细胞肺癌细胞、乳腺癌细胞、胰腺癌细胞、胃(或胃部)癌细胞、小肠癌细胞、食管癌细胞或结直肠癌细胞。
本文公开了一种分离的多核苷酸，其包含编码本文定义的抗原结合分子的核酸序列。
术语“多核苷酸”或“核酸”在本文中可互换使用，用于指核苷酸的聚合物，其可为mRNA、RNA、cRNA、cDNA或DNA。该术语一般指长度为至少10个碱基的核苷酸的聚合形式，可以是核糖核苷酸或脱氧核苷酸，或任一类型核苷酸的修饰的形式。该术语包括单链和双链形式的DNA。
本文还公开了一种载体，其包含编码如本文所述的抗原结合分子的核酸。
所谓“载体”是指核酸分子，优选例如衍生自质粒、噬菌体或病毒的DNA分子，核酸序列可插入或克隆到该分子中。载体优选地包含一个或多个独特的限制性位点，并且能够在包括靶细胞或组织或其祖细胞或组织的限定的宿主细胞中自主复制，或者能够与限定的宿主的基因组整合，使得克隆的序列是可复制的。因此，载体可以是自主复制的载体(即作为染色体外实体存在的载体，其复制独立于染色体复制，例如线性或闭环质粒)、染色体外元件、迷你染色体或人工染色体。载体可包含任何确保自我复制的手段。备选地，载体可以是当被引入宿主细胞时被整合到基因组中并与整合到其中的染色体一起复制的载体。载体系统可包括单个载体或质粒、两个或更多个载体或质粒，它们一起包含要引入宿主细胞基因组的总DNA或转座子。载体的选择一般取决于载体与要引入载体的宿主细胞的兼容性。载体还可以包括选择性标志物，例如抗生素抗性基因，其可用于选择合适的转化体。这种抗性基因的例子对于本领域技术人员来说是众所周知的。
本文公开了一种构建体，其包含与一个或多个控制序列可操作地连接的如本文所定义的多核苷酸。
术语“构建体”是指包括一个或多个来自不同来源的分离的核酸序列的重组遗传分子。因此，构建体是其中两个或更多个不同来源的核酸序列组装成单个核酸分子的嵌合分子，包括含有下述的任意构建体：(1)核酸序列，包括在自然界中没有一起发现的调控和编码序列(即，至少一个核苷酸序列相对于其至少一个其他核苷酸序列是异源的)，或(2)编码功能性RNA分子或蛋白质的非天然连接部分的序列，或(3)非天然结合的启动子的部分。代表性构建体包括任何重组核酸分子，如质粒、粘粒、病毒、自主复制的多核苷酸分子、噬菌体或线性或环状单链或双链DNA或RNA核酸分子，来源于任何来源，能够进行基因组整合或自主复制，包括其中一个或多个核酸分子已经可操作地连接的核酸分子。本发明的构建体一般包括指导也包含在构建体中的感兴趣核酸序列表达的必要元件，例如靶核酸序列或调控性核酸序列。这样的元件可包括控制元件或调控序列，例如与感兴趣的核酸序列可操作地连接(从而指导转录)的启动子，并且一般也包括多腺苷酸化序列。在本发明的某些实施方案中，构建体可包含在载体内。除了构建体的组分之外，载体可包括例如一个或多个选择性标志物、一个或多个复制起点(例如原核和真核起点)、至少一个多克隆位点和/或促进构建体稳定整合到宿主细胞基因组中的元件。两种或更多种构建体可包含在单个核酸分子内，例如单个载体，或者可包含在两种或更多种分离的核酸分子内(例如两种或更多种分离的载体)。“表达构建体”一般至少包括与感兴趣的核苷酸序列可操作地连接的控制序列。以这种方式，例如，在表达构建体中提供与待表达的核苷酸序列可操作地连接的启动子，用于在包括宿主细胞的生物体或其部分中表达。对于本发明的实施，制备和使用构建体和宿主细胞的常规组合物和方法是本领域技术人员所熟知的，参见例如Molecular Cloning:ALaboratory Manual,第3版第1、2和3卷.J.F.Sambrook,D.W.Russell和N.Irwin,ColdSpring Harbor Laboratory Press,2000。
本文所用的“控制元件”、“控制序列”、“调控序列”等是指在特定宿主细胞中表达可操作地连接的编码序列所必需的核酸序列(例如DNA)。适用于原核细胞的控制序列，例如，包括启动子，以及任选的顺式作用序列，例如操纵子序列和核糖体结合位点。适用于真核细胞的控制序列包括转录控制序列如启动子、多腺苷酸化信号、转录增强子、翻译控制序列如翻译增强子和内部核糖体结合位点(IRES)、调节mRNA稳定性的核酸序列以及靶向序列，所述靶向序列将由转录的多核苷酸编码的产物靶向细胞内的细胞内室或靶向细胞外环境。
本文公开的是包含如本文所定义的构建体的宿主细胞。
术语“宿主”、“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用，指的是引入外源核酸的细胞，包括这些细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“转化细胞”，包括初级转化细胞及其来源的子代，而不考虑传代次数。子代的核酸含量可能与亲本细胞不完全相同，而是可能含有突变。本文包括具有与在最初转化的细胞中筛选或选择的功能或生物活性相同的突变子代。宿主细胞是可用于产生本发明的抗原结合分子的任何类型的细胞系统。宿主细胞包括培养细胞，例如哺乳动物培养细胞，如CHO细胞、BHK细胞、NS0细胞、SP2/0细胞、YO骨髓瘤细胞、P3X63小鼠骨髓瘤细胞、PER细胞、PER.C6细胞或杂交瘤细胞、酵母细胞、昆虫细胞和植物细胞，仅举几个例子，但也包含转基因动物、转基因植物或培养的植物或动物组织内的细胞。
本文公开了一种药物组合物，其包含本文定义的抗原结合分子和药学上可接受的运载体。
所谓“药学上可接受的运载体”是指由在生物学上或其他方面不是不合需要的材料组成的药物媒介物，即，该材料可与所选活性剂一起施用于受试者，而不会引起任何或实质性的不良反应。运载体可包括赋形剂和其他添加剂，例如稀释剂、洗涤剂、着色剂、润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂、防腐剂等。
代表性的药学上可接受的运载体包括任何和所有溶剂、分散介质、涂层、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如，抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、延迟吸收剂、盐、防腐剂、药物、药物稳定剂、凝胶、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、染料等类似材料及其组合，如本领域普通技术人员所知(例如参见Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Printing Company，1990，pp.1289-1329，通过引用并入本文)。除非任何常规运载体与活性成分不相容，否则其在药物组合物中的用途是可考虑的。
药物组合物可为多种形式。这些包括，例如，液体、半固体和固体剂型，例如液体溶液(例如，可注射和可输注的溶液)、分散体或悬浮液、脂质体和栓剂。优选的形式取决于预期的施用方式和治疗应用。合适的药物组合物可以静脉内、皮下或肌内施用。在一些实施方案中，组合物是可注射或可输注的溶液的形式。优选的施用方式是胃肠外施用(例如，静脉内、皮下、腹膜内、肌内)。在具体实施方案中，药物组合物通过静脉内输注或注射施用。在其他实施方案中，所述药物组合物通过肌内或皮下注射施用。
此处使用的短语“胃肠外施用”和“通过胃肠外施用”是指除肠内和局部施用以外的施用模式，通常通过注射，包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、包膜下、蛛网膜下腔、椎管内、硬膜外和胸骨内注射和输注。
胃肠外施用的制剂包括无菌水溶液剂或非水溶液、混悬剂和乳剂。非水溶剂的例子是丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油和可注射的有机酯如油酸乙酯。水性运载体包括水、醇/水溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和缓冲介质。在本发明中，药学上可接受的运载体包括但不限于0.01-0.1M、优选0.05M磷酸盐缓冲液或0.8％盐水。其他常见的胃肠外媒介物包括磷酸钠溶液、林格葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸林格或不挥发油。静脉内媒介物包括流体和营养补充剂、电解质补充剂，例如基于林格葡萄糖的那些，等等。防腐剂和其他添加剂也可以存在，例如抗菌剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体等。
更具体地，适合注射使用的药物组合物包括无菌水溶液(其为水溶性)或分散液以及用于即时制备无菌注射溶液或分散液的无菌粉末。在这种情况下，组合物必须是无菌的，并且应该是流动的，达到存在易于注射的程度。它在制造和储存条件下应该是稳定的，并且优选能防止微生物(如细菌和真菌)的污染作用。运载体可为含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其合适的混合物的溶剂或分散介质。例如，可通过使用诸如卵磷脂的涂层和/或通过保持所需的粒度来保持适当的流动性。在具体实施方案中，本公开的药剂可缀合到用于细胞递送的媒介物上。在这些实施方案中，所述药剂可被封装在合适的媒介物中，以帮助将所述药剂递送到靶细胞，增加所述药剂的稳定性，或将所述药剂的潜在毒性最小化。如本领域技术人员将理解的，多种媒介物适合于递送本公开的药剂。合适的结构化流体递送系统的非限制性例子可包括纳米颗粒、脂质体、微乳液、胶束、树状大分子和其他含磷脂的系统。将本公开的药剂掺入递送媒介物的方法在本领域是已知的。尽管下面给出了各种实施方案，但应理解的是，本领域已知的将抗原结合分子(如本文所述)掺入递送载体的其他方法也是可考虑的。
调整剂量方案以提供最佳的期望的反应(例如治疗反应)。例如，可单次大丸剂施用、可随着时间的推移分次施用几个剂量，或者可根据治疗情况的紧急情况按比例减少或增加剂量。本公开的抗原结合分子可在多种情况下施用。单次剂量之间的间隔可为每天、每周、每月或每年。间隔也可根据通过测量患者体内血液中修饰的多肽或抗原水平的指示而不规则。备选地，抗原结合分子可作为缓释制剂施用，在这种情况下需要较小的施用频率。剂量和频率因多肽在患者体内的半衰期而异。
为了易于施用和剂量的均匀性，以单位剂型配制组合物可能是有利的。本文所用的单位剂型是指适合作为待治疗受试者的单位剂量的物理上不连续的单元；每个单元包含预定量的活性化合物，该活性化合物被计算为与所需的药学上可接受的运载体相关联地产生所需的治疗效果。本发明的单位剂型的说明书取决于以及直接依赖于：(a)活性化合物的独特特性和要达到的特定治疗效果，以及(b)制备这种活性化合物用于治疗个体敏感性的技术中固有的局限性。
抗原结合分子的剂量和治疗方案可由技术人员确定。在某些实施方案中，抗原结合分子以：约0.01至50mg/kg，例如0.01至0.1mg/kg，例如约0.1至1mg/kg，约1至5mg/kg，约5至25mg/kg，约10至50mg/kg的剂量通过注射(例如皮下或静脉内)施用。施用时间表可从例如每周一次到每2、3或4周一次不等。
需要注意的是，剂量值可随着待缓解的病症的类型和严重程度而变化。应进一步理解的是，对于任何特定的受试者，应根据个人需要和施用或监督组合物施用的人的专业判断，随着时间的推移调整特定的剂量方案，并且本文所述的剂量范围仅是示例性的，并不旨在限制所要求保护的组合物的范围或实践。
本文公开了用作药物的如本文所定义的抗原结合分子或组合物。
本文公开了一种治疗或预防受试者的癌症或炎性疾病的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的本文定义的抗原结合分子或组合物。
术语“进行治疗”、“治疗”等在本文中可互换地用于表示缓解、减少、减轻、改善或以其他方式抑制病况，包括病况的一种或多种症状。术语“进行预防”、“预防”、“预防的”、“预防疾病的”、“预防性的”等在本文中可互换使用，意指预防或延迟病况的发作或发展病况的风险。
术语“进行治疗”、“治疗”等还包括在至少一段时间内缓解、减少、减轻、改善或以其他方式抑制病况的影响。还应理解的是，术语“进行治疗”、“治疗”等并不意味着该病况或其症状被永久缓解、减少、减轻、改善或以其他方式抑制，因此也包括该病况或症状的暂时缓解、减少、减轻、改善或以其他方式抑制。
本文可互换使用的术语“受试者”、“患者”、“宿主”或“个体”是指任何需要治疗或预防的受试者，特别是脊椎动物，甚至更特别是哺乳动物。落入本发明范围内的合适的脊椎动物包括但不限于脊索亚门的任何成员，包括灵长类动物(例如，人类、猴子和猿类)，并且包括猴子物种，例如：猕猴属(例如，食蟹猴，例如食蟹猕猴(Macaca fascicularis)，和/或恒河猴(rhesus monkeys)(猕猴(Macaca mulatta)))和狒狒(豚尾狒狒(Papio ursinus))，以及狨(Callithrix属物种)、松鼠猴(Saimiri属物种)和绢毛猴(Saguinus属物种)，以及猿类物种，如黑猩猩(Pan troglodytes)、啮齿类动物(如小鼠、大鼠、豚鼠)、兔形目动物(如兔子、野兔)、牛类(如牛)、绵羊类(如绵羊)、山羊类(如山羊)、猪类(如猪)，马类(如马)、犬科动物(如狗)、猫科动物(如猫)、鸟类(如鸡、火鸡、鸭、鹅，金丝雀、虎皮鹦鹉等宠物鸟类)、海洋哺乳动物(如海豚、鲸鱼)、爬行动物(蛇、青蛙、蜥蜴等)和鱼类。在一个实施方案中，受试者是人类受试者。
术语“癌症”和“癌性”是指或描述哺乳动物的生理状况，通常部分以不受调节的细胞生长为特征。如本文所用，术语“癌症”是指非转移和转移性癌症，包括早期和晚期癌症。“非转移性”是指保留在原发部位的癌症，尚未渗透到淋巴管或血管系统或原发部位以外的组织。“转移性癌症”是指已经或能够从身体的一个部位扩散到另一个部位的癌症。一般来说，非转移癌症是癌症0、I或II期任何癌症，偶尔是癌症III期。另一方面，转移性癌症经常是癌症IV期。
术语“癌症”包括但不限于乳腺癌、大肠癌、肺癌、小细胞肺癌、胃(胃部)癌、肝癌、血液癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头和/或颈癌、皮肤或眼内黑色素瘤、子宫肉瘤、卵巢癌、直肠或结直肠癌、肛门癌、结肠癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、外阴癌、鳞状细胞癌、阴道癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、食管癌、小肠癌、内分泌癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肿瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞淋巴瘤、膀胱癌、肾癌、输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统肿瘤、神经胶质瘤、星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、骨髓瘤、脑干神经瘤、垂体瘤、葡萄膜黑色素瘤(也称为眼内黑色素瘤)、睾丸癌、口腔癌、咽癌或其组合。
在一个实施方案中，癌细胞是实体癌或血液学癌的细胞。
术语“血液癌”可指白血病、淋巴瘤、慢性骨髓增生性疾病、朗格汉斯细胞组织细胞增多症、多发性骨髓瘤/浆细胞肿瘤、骨髓增生异常综合征、骨髓增生畸形/骨髓增生异常肿瘤或其组合中的一种或多种。在一些实施方案中，白血病是急性成淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓细胞白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性粒细胞白血病(CML)、毛细胞白血病(HCL)或其组合中的任何一种或多种。在一些实施方案中，淋巴瘤是艾滋病相关淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、真菌样肉芽肿、非霍奇金淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、Sezary综合征、T细胞淋巴瘤(皮肤)、Waldenstrom巨球蛋白血症、B细胞淋巴瘤或其组合中的任何一种或多种。
术语“实体癌”可指乳腺癌、大肠癌、肺癌、小细胞肺癌、胃(胃部)癌、肝癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头和/或颈癌、皮肤或眼内黑色素瘤、子宫肉瘤、卵巢癌、直肠或结直肠癌、肛门癌、结肠癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、外阴癌、鳞状细胞癌、阴道癌、食管癌、小肠癌、内分泌癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肿瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、膀胱癌、肾癌、输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统肿瘤、神经胶质瘤、星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、骨髓瘤、脑干神经胶质瘤、垂体瘤、葡萄膜黑色素瘤(也称为眼内黑色素瘤)、睾丸癌、口腔癌、咽癌、肉瘤或或其组合中的任何一种或多种。
在一个实施方案中，癌症是转移性癌症。癌症可能是难治性或复发性癌症。
在一个实施方案中，癌症选自由耐吉非替尼的癌症、耐奥希替尼的癌症、非小细胞肺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃(或胃部)癌、小肠癌、食道癌和结直肠癌组成的组。
在一个实施方案中，癌症是与CEACAM5和/或CEACAM6的过表达相关的癌症。在一个实施方案中，癌症是与糖基化CEACAM5和/或CEACAM6的过表达相关的癌症。在一个实施方案中，癌症是与糖基化CEACAM5的过表达相关的癌症。在一个实施方案中，癌症是与糖基化CEACAM6的过表达相关的癌症。在一个实施方案中，癌症是与糖基化CEACAM5和CEACAM6的度表达相关的癌症。CEACAM5和/或CEACAM6可在位置N256处被糖基化。
在一个实施方案中，炎性疾病是克罗恩病或哮喘。哮喘可能是由中性粒细胞炎症引起的。
本文公开的方法可包括向受试者施用“治疗有效量”的药剂(例如抗原结合分子、多核苷酸、构建体、载体、宿主细胞或药物组合物)。如本文所用，术语“治疗有效量”在其含义内包括无毒但足够量的试剂或化合物以提供所需的治疗效果。所需的确切剂量因受试者而异，具体取决于受试者的种类、年龄和一般状况、治疗的病况的严重程度、施用的特定药剂和施用方式等因素。因此，无法具体说明确切的“有效量”。然而，对于任何给定的情况，适当的“有效量”可由本领域的普通技术人员仅使用常规实验来确定。
本文公开了用于治疗或预防受试者的癌症或炎性疾病的如本文所定义的抗原结合分子或组合物。
本文公开了本文定义的抗原结合分子或组合物在制备用于治疗或预防受试者的癌症或炎性疾病的药物中的用途。
该药物可与一种或多种另外的活性药物成分一起施用。在一个实施方案中，所述药物将与化学疗法一起施用。
本文公开了一种用于检测受试者的癌症或炎性疾病的方法，该方法包括：将从受试者获得的样品与本文定义的抗原结合分子接触，其中样品中抗原结合分子的结合水平与参考相比的增加表明存在癌症或炎性疾病。
本文公开了一种鉴定易患癌症或炎性疾病的受试者的方法，该方法包括：将从受试者获得的样品与本文定义的抗原结合分子接触，其中样品中结合水平与参考相比的增加表明受试者易患癌症或炎性疾病。
在一个实施方案中，样品是细胞、组织或血液样品。
在一个实施方案中，抗原结合分子包含可检测标记。可检测标记可选自荧光标记、化学发光标记、酶标记和放射性核素标记。可检测标记可选自生物素、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、FITC、PE和Cy-Deyes。可检测标记可在选自流式细胞术、组织切片、免疫荧光、免疫细胞化学或免疫组织化学的测定中检测。
本文公开了在本文定义的方法中使用的试剂盒，其包含本文定义的抗原结合分子以及使用说明书。
在整个说明书和随后的陈述中，除非上下文另有要求，否则“包含/包括”一词以及诸如“包含有”和“含有”的变化形式将被理解为包括所述整数或步骤或者整数或步骤组，而不排除任何其他整数或步骤或者整数或步骤组。
本说明书中对任何先前出版物(或从其获得的信息)的引用，或对任何已知事项的引用，不是，并且不应被视为是对先前出版物(或从其获得的信息)或已知物质形成本说明书所涉及的尝试领域的公知常识的一部分的承认或认可或任何形式的暗示。
本领域技术人员将理解，本文所描述的本发明易受除具体描述的那些之外的变化和修改的影响。应当理解，本发明包括落入精神和范围内的所有这样的变化和修改。本发明还包括本说明书中单独或共同提及或指示的所有步骤、特征、组合物和化合物，以及任何两个或更多个所述步骤或特征的任何和所有组合。
现在将参考以下实施例来描述本发明的某些实施方案，这些实施例仅用于说明的目的，而不旨在限制上文所描述的一般性的范围。
实施例
实施例1生成人源化变体
GR6A04是一种先前描述的针对NSCLC开发的小鼠IgG1κ单克隆抗体，在流式细胞术和癌症组织样品上对结直肠癌、胃癌和乳腺癌细胞系具有特异性。作为与单甲基澳瑞他汀E(MMAE)缀合的抗体药物缀合物和作为裸抗体，它在体外和体内都表现出细胞毒性活性。
在将鼠抗体转化为适合临床治疗应用的人源化抗体的过程中，发现与典型的抗体人源化过程不同，与亲代鼠和嵌合形式相比，许多变体显示出降低的特异性和/或功能。鉴定了几个关键标准来对来自计算机人源化优化的人源化变体进行排序。重要的是，正是聚集和位点特异性读数能够消除有问题的基序，并能够快速列出三个最终分子，以进行进一步的临床前评估。
6个框架重链和6个框架轻链序列由计算机人源化得出，产生17种独特的重链/轻链组合(见图1-3)，用于含有鼠抗体GR6A04的CDR的人源化变体，GR6A04是一种抗N-糖基化-CACAM5/6治疗性抗体，其特别地结合在N256上糖基化的CEACAM5/6。
为了筛选这些变体保留原始功能和下游可开发性，确定了4个关键标准，并按以下顺序进行评估(见图4A)：(1)3个癌细胞系的流式细胞术结合(2个结合和1个不结合)；(2)用SEC检测聚集倾向；(3)与1个癌细胞系的基于细胞的结合亲和力；和(4)通过使用在256位具有N(天冬氨酸)至A(丙氨酸)氨基酸转换而突变N-聚糖结合位点的CEACAM6突变体检测表位位点特异性。
重要的是，与大多数标准的人源化方案(其中将CDR移植到人类框架相对简单，并且筛选主要基于结合和/或亲和力)不同，我们的工作流程是独特的，因为它通过SEC的聚集测量和表位位点特异性来补充早期可开发性筛选。值得注意表位位点特异性测定，因为它消除了一些在流式细胞术结合和亲和力测试中表现良好的有希望的候选者。正是这两个标准产生了关键的特异性和可制造性信息，否则在简单的结合和/或亲和力筛选中会被忽视。
通过在筛选过程的每个阶段消除克隆，鉴定出3个最终分子，它们通过了所有4个关键标准，从而保留了与原始鼠抗体最相似的功能。这3个最终分子是AH1/AL1、LPH1/LPL2和AH1/LPL2。用稳定表达的人源化抗体进行进一步评估，并对直接缀合的抗体药物缀合物进行体外疗效评估，将有助于最终先导分子的入围，以继续进行临床测试。
实施例2表征人源化变体
比对研究
CEACAM5和CEACAM6的比对显示保守N256糖基化位点(图6)。
蛋白质印迹研究
在使用A549裂解物的蛋白质印迹分析中，AB1(重链和轻链序列如图5所示)在75kDa和180kDa处检测到2个条带。
为了确定在蛋白质印迹中看到的2个条带是CEACAM5和CEACAM6，对A549细胞进行CEACAM5与CEACAM6的单一siRNA和双重siRNA敲低。siRNA处理的细胞裂解物的蛋白质印迹分析显示AB1不与CEACAM5单一敲低或双重敲低样品中的180kDA条带结合。此外，在CEACAM6单一敲低或双重敲低样品中，AB1不与75kDA条带结合(图7A)。这表明AB1的抗原是CEACAM5和CEACAM6。通过基因表达分析监测siRNA敲低的效率(图7B)。CEACAM5在单一敲低和双重敲低样品中的敲低效率低于CEACAM6。这就解释了为什么商业抗CEACAM5抗体在单一敲低和双重敲低样品中仍然检测到CEACAM5，但强度较小(图7A)。商业抗CEACAM6抗体检测到CEACAM6，其在单一敲低和双重敲低中的强度显著降低(图7A)。
进一步表明N-糖基化对于AB1与CEACAM5和CEACAM6的结合是重要的。A549细胞裂解物被还原、变性并用PNGase F处理以去除N-连接的聚糖(图8)。用AB1抗体和商业抗CEACAM5和抗CEACAM6抗体探测细胞裂解物。蛋白质印迹分析显示，AB1与75kDA条带(CEACAM6)和180kDa条带(CEACAM5)的结合在还原后和PNGase F处理后被消除。商业抗CEACAM6抗体在检测到75kDa的被还原的蛋白质和较小尺寸(37kDa)的去糖基化的CEACAM6。商业抗CEACAM5抗体确实以较小的强度与还原的CEACAM5结合，但似乎也是N-聚糖依赖性的，因为没有检测到去糖基化的CEACAM5。这表明N-糖基化对于AB1与CEACAM5和CEACAM6的结合是重要的。
FACS结合分析
流式细胞仪分析显示AB1识别的N256糖基化依赖性。对NCI-H1299或过表达N256A突变的CEACAM5的NCI-H1239或NCI-H2299 N256A突变的CEACAM6或NCI-H1299 CEACAM5和NCI-H1293 CEACAM6进行流式结合分析(图9)。
用CEACAM5或CEACAM6序列和其中N-糖基化位置N256突变(N256A，天冬酰胺到丙氨酸)的CEACAM5或CEACAM6突变序列转染不表达CEACAM5和CEACAM6的肺癌细胞系NCI-H1299。这种突变消除了N-糖基化。针对人IgG1同种型对照，将平均荧光强度(MFI)标准化(nMFI)(见图9A和B中的表格)。将AB1的流式细胞术结合与商业抗CEACAM5和CEACAM6抗体以及竞争抗体进行比较。竞争抗体包括CEACAM6特异性替奴瑞利单抗(Bayer)、CEACAM5特异性特赛妥单抗(Sanofi)、N-糖基化CEACAM5和CEACAM6特异性NEO-201(Precision Biologics)以及CEACAM5或CEACAM6特异性EBC-123的生物仿制药。EBC-123是L-DOS47(Helix BiopharmaCorp)的生物仿制药，其中将原始单体骆驼科单结构域VHH 2A3植入人Fc上。结果表明，AB1确实与表达CEACAM5或CEACAM6的NCI-H1299细胞结合(图9A)，但不与表达N256A突变的CEACAM5和N256A变异的CEACAM6的细胞结合(图9B)。这表明CEACAM6的N256糖基化对于AB1与其抗原识别基序的结合是重要的。没有一种CEACAM6特异性竞争抗体(替奴瑞利单抗、EBC-123和NEO-201)显示出对CEACAM6的N256糖基化的依赖性(图9A)。
粒细胞结合
通过与外周血或骨髓细胞中的粒细胞(CD15+细胞群体)或B细胞(CD19+群体)结合较少，人源化优秀候选物(leads)与测试竞争性化合物区分开(图10)。
AB1、AB2和AB3与原代外周血细胞(图10上部)或原代骨髓白细胞(图10下部)不同群体的流式细胞术结合与竞争抗体比较。将裂解了红细胞的原代细胞与靶向CEACAM5和CEACAM6的不同一级抗体孵育。用针对粒细胞(CD15+)、T细胞(CD3+)或B细胞(CD19+)的荧光标记的谱系标志物(linage marker)来标记细胞。显示原代外周血细胞的3个供体/2次重复实验和原代人骨髓白细胞的1个供体/3次重复实验的平均荧光强度(MFI，上图)或归一化MFI(nMFI)(下图)。AB1、AB2或AB3未观察到与CD3+T细胞的结合(即可忽略不计)。与CEACAM6特异性抗体如替奴瑞利单抗(Bayer)、NEO-201(Precision Biologics)和EBC-123(HelixBiopharma Corp)相比，发现AB1、AB2和AB3与外周血中的粒细胞(CD15+细胞群体)或B细胞(CD19+群体)结合较少。CEACAM5特异性特赛妥单抗(sanofi)未显示出与人类白细胞的结合。
亲和力研究
AB1的亲和力测量是通过使用Octet 384Red的生物膜干涉技术完成的(图11)。将内部制备的带有Avi标签的CEACAM5、CEACAM6和N256A突变的CEACAM5和N256A突变的CEACAM6固定在Dip和Read SA生物传感器上。抗体AB1和竞争抗体EBC-123(HelixBiopharma Corp)、NEO-201(Precision Biologics)和特赛妥单抗(Sanofi)被用作分析物。
结果表明，AB1以2位数纳摩尔范围内的可比亲和力常数(KD)与CEACAM5和CECAM6结合。与CEACAM5和CEACAM6蛋白相比，AB1针对N256A突变的CEACAM5和N256A突变的CEACAM6的KD小10-100倍。竞争抗体以相似的亲和力与野生型和突变型CEACAM5和CEACAM6结合。
内化研究
评估了AB1和竞争抗体在抗原阳性和抗原阴性细胞系中的内化(图12)。图12A显示在过表达CEACAM5或CEACAM6或N256A突变的CEACAM5或N256A突变的CEACAM6的NCI-H1299中AB1的内化。图12B显示与IgG1同种型对照和对CEACAM5和/或CEACAM6特异的竞争抗体相比，AB1在NCI-H1299和过表达CEACAM5或CEACAM6的NCI-H1299细胞中的内化。将细胞与抗体和抗人FabFluor pH Red抗体一起孵育。抗体-FabFluor pH Red复合物在低pH下显示红色荧光。监测内化长达24小时，并绘制累积强度。图12A显示AB1在表达CEACAM5或CEACAM6的NCI-H1299中内化，但不在表达N256A突变的CEACAM5或N256A突变的CEACAM6的NCI-H1299或NCI-H1299中内化。图12B显示CEACAM6特异性替奴瑞利单抗(Bayer)非特异性地内化到NCI-H1299细胞中。CEACAM5特异性特赛妥单抗(Sanofi)仅内化到过表达CEACAM5的NCI-H1299中，而CEACAM5和CEACAM6特异性NEO-201(Precision Biologics)和EBC-123(HelixBiopharma Corp)以与AB1相当的速率内化到过表达CEACAM5或CEACAM6的NCI-H1299中。
体外细胞杀伤数据(CellTiterGloTM活力测定)
通过CellTiterGloTM活力测定和剂量反应曲线(估测细胞孵育72小时后的IC50)证实了AB3的体外细胞功能。图14A左图显示AB3与NCI-H1299相较于与过表达CEACAM6的NCI-H1299(克隆细胞系12)或过表达突变的N256ACEACAM6的NCI-H1299(克隆细胞系19)的剂量反应曲线。图14A)右图显示AB3与NCI-H1299相较于与过表达CEACAM5的NCI-H1299(克隆细胞系2F3)或过表达突变的N256A CEACAM5的NCI-H1299(克隆细胞系6)的剂量反应曲线。图14B显示用AB3、IgG1同种型对照-MMAE和游离MMAE与NCI-H1299细胞和过表达CEACAM5、CEACAM6、N256A突变的CEACAM5和N256A突变的CEACAM6的NCI-H1299细胞获得的IC50。表达膜结合的CEACAM5或CEACAM6的NCI-H1299细胞获得了2位数的纳摩尔IC50，而不表达CEACAM5和CEACAM6的NCI-H1299细胞和表达N256A突变的CEACAM5或N256A突变的CEACAM6的NCI-H1299细胞获得了更高的IC50。对于所有细胞系，用IgG1-MMAE同种型对照获得了可比较的高的IC50，证明了AB3的特异性。游离MMAE的IC50在皮摩尔范围内，这证明了AB3的特异性。图14C显示AB3与缀合MMAE的CEACAM5特异性竞争抗体特赛妥单抗(Sanofi)相比的IC50。由于AB3对N256糖基化CEACAM5和N256糖基化CEACAM6的双重特异性，AB3靶向更广泛的癌症适应症。
体内数据
在使用SNU-16的一个胃癌异种移植模型(图15)和2个胰腺模型(Capan-1，见图16，和BxPC-3，见图17)中在体内显示了AB3。功效研究的终点是在治疗组中观察到的肿瘤生长抑制(TGI)、耐受性(通过体重测量监测和临床体征监测)，以及在一些研究中，在整个研究中也监测了肿瘤细胞上的AB1抗原水平(数据未显示)。
SNU-16、Capan-1和BxPC-3细胞同时表达AB1抗原CEACAM5和CEACAM6。在雌性Balb/c裸鼠(n＝10只/组)中植入SNU-16细胞，在雌性NSG小鼠(n＝10只/组)中植入Capan-1细胞，在雌性NOD-SCID小鼠(n＝8只/组)中植入BxPC-3细胞。小鼠通过静脉内注射治疗一次(或多西他赛每周一次x3)。对于SNU-16和Capan-1，AB3以1、3或5mg/kg的剂量施用，仅在第0天单次施用。对于BxPC-3模型，省略了3mg/kg的剂量。在第35天，在SNU-16模型中，AB3分别达到154％、147％和114％的TGI。用5或1mg/kg的HuIgG1-MMAE(同种型对照)治疗具有统计学显著(p＝0.05)较低的TGI(分别为123％和95％)。此外，只有AB3治疗的小鼠以剂量依赖性方式显示完全反应，分别在5、3和1mg/kg AB3的单次剂量给药后，6/10、3/10和1/10小鼠无肿瘤，但仅用HuIgG1-MMAE治疗后未观察到无肿瘤动物(见图15)。
在Capan-1模型中，AB3在第21天达到110％的TGI，用5、3或1mg/kg的HuIgG1-MMAE治疗具有统计学显著(p＝0.05)较低的TGI(分别为28％、185％和-8％)(见图16)。
在BxPC-3模型中，AB3在第21天分别达到107％和21％的TGI。用5mg/kg的HuIgG1-MMAE治疗具有统计显著(p＝0.05)的较低TGI(6％)。治疗耐受性良好，没有观察到体重减轻(见图17)。
证明了CEACAM5、CEACAM6、N256A突变的CEACAM5和N256A突变的CEACAM6在肿瘤生长中的表达(见图18)。将细胞植入雌性NOD-SCID小鼠中，并在二维随机化后使用卡尺每周测量3次肿瘤体积。使用以下公式以mm3表示体积：V＝(L x W x W)/2，其中V是肿瘤体积，L是肿瘤长度(最长的肿瘤尺寸)，W是肿瘤宽度(垂直于L的最长肿瘤尺寸)。测量肿瘤体积长达75天，并绘制在图18中。对于NCI-H299、过表达CEACAM6的NCI-H1299或过表达N256A突变的CEACAM6的NCI-H1299，未观察到肿瘤发生或倍增时间的差异。对于过表达CEACAM5的NCI-H1299观察到早期肿瘤发生，而过表达N256A突变的CEACAM5的NCI-H1299的肿瘤发生延迟了35天。肿瘤发生后，所有细胞系的肿瘤倍增时间相当。
使用NCI-H1299细胞系和过表达CEACAM5或CEACAM6或N256A突变的CEACAM5的NCI-H1299在肺癌异种移植模型中显示体内功效(见图19)。在雌性NOD-SCID小鼠(n＝6只/组)中植入NCI-H1299或过表达N256A突变的CEACAM5或CEACAM5或CEACAM6的NCI-H1299细胞，并通过静脉内注射治疗一次。AB3以5mg/kg施用，仅第0天单次施用。AB3在第21天对抗原阴性细胞NCI-H1299和过表达N256A突变的CEACAM5的NCI-H1299分别实现了32％和28％的TGI。对于过表达CEACAM5或
CEACAM6的抗原阳性NCI-H1299细胞，AB3分别达到109％和110％的TGI
(见图19)。治疗耐受性良好，没有观察到体重减轻。
序列表
<110> 新加坡科技研究局（Agency for Science, Technology and Research）
<120> 抗CEACAM5/6抗原结合分子及其治疗方法
<130> S61016530
<160> 87
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VHCDR1
<400> 1
Gly Asn Thr Phe Thr Ser Tyr Val Met His
1 5 10
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VHCDR2
<400> 2
Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 3
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VHCDR3
<400> 3
Ser Thr Ala Arg Ala Thr Pro Tyr Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 4
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VLCDR1
<400> 4
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Trp Ser Val Asn Gln Asn Ser Tyr Leu
1 5 10 15
Ser
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VLCDR2
<400> 5
Gly Ala Ser Ile Arg Glu Ser
1 5
<210> 6
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VLCDR3
<400> 6
Gln His Asn His Gly Ser Phe Leu Pro Tyr Thr
1 5 10
<210> 7
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AH1
<400> 7
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asn Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Ala Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Ala Arg Ala Thr Pro Tyr Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 8
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AH2
<400> 8
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Asn Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Ala Arg Ala Thr Pro Tyr Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 9
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AH3
<400> 9
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Asn Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Leu Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Ala Arg Ala Thr Pro Tyr Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 10
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPH1
<400> 10
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asn Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Ala Arg Ala Thr Pro Tyr Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 11
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPH2
<400> 11
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asn Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Ala Arg Ala Thr Pro Tyr Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 12
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPH4
<400> 12
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asn Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ser Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Ala Arg Ala Thr Pro Tyr Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 13
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AL1
<400> 13
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Trp Ser
20 25 30
Val Asn Gln Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ile Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His
85 90 95
Asn His Gly Ser Phe Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
100 105 110
Glu Ile Lys
115
<210> 14
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AL2
<400> 14
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Trp Ser
20 25 30
Val Asn Gln Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ile Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His
85 90 95
Asn His Gly Ser Phe Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
100 105 110
Glu Ile Lys
115
<210> 15
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AL3
<400> 15
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Trp Ser
20 25 30
Val Asn Gln Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ile Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His
85 90 95
Asn His Gly Ser Phe Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
100 105 110
Glu Ile Lys
115
<210> 16
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPL1
<400> 16
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Trp Ser
20 25 30
Val Asn Gln Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ile Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His
85 90 95
Asn His Gly Ser Phe Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu
100 105 110
Glu Ile Lys
115
<210> 17
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPL2
<400> 17
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Trp Ser
20 25 30
Val Asn Gln Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Leu Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Leu Tyr Gly Ala Ser Ile Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His
85 90 95
Asn His Gly Ser Phe Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
100 105 110
Glu Ile Lys
115
<210> 18
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPL4
<400> 18
Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Trp Ser
20 25 30
Val Asn Gln Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Leu Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Leu Tyr Gly Ala Ser Ile Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His
85 90 95
Asn His Gly Ser Phe Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
100 105 110
Glu Ile Lys
115
<210> 19
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VHFR1序列
<400> 19
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 20
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VHFR1序列
<400> 20
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 21
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VHFR2序列
<400> 21
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Ala
1 5 10
<210> 22
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VHFR2序列
<400> 22
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 23
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VHFR3序列
<400> 23
Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 24
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VHFR3序列
<400> 24
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 25
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VHFR4序列
<400> 25
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 26
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VLFR1序列
<400> 26
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 27
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VLFR1序列
<400> 27
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
20
<210> 28
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VLFR2序列
<400> 28
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 29
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VLFR2序列
<400> 29
Trp Tyr Gln Leu Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Leu Tyr
1 5 10 15
<210> 30
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VLFR3序列
<400> 30
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 31
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VLFR3序列
<400> 31
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 32
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VLFR4序列
<400> 32
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 33
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VLFR4序列
<400> 33
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 34
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VHFR1序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> wherein Xaa is V or A
<400> 34
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Xaa Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 35
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VHFR2序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)..(14)
<223> wherein Xaa is A or G
<400> 35
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Xaa
1 5 10
<210> 36
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AH1 FR1
<400> 36
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 37
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AH2 FR1
<400> 37
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 38
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AH3 FR1
<400> 38
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser
20 25
<210> 39
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPH1 FR1
<400> 39
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 40
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPH2 FR1
<400> 40
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 41
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPH4 FR1
<400> 41
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 42
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AH1 FR2
<400> 42
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Ala
1 5 10
<210> 43
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AH2 FR2
<400> 43
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 44
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AH3 FR2
<400> 44
Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile Ala
1 5 10
<210> 45
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPH1 FR2
<400> 45
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 46
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPH2 FR2
<400> 46
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 47
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPH4 FR2
<400> 47
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 48
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AH1 FR3
<400> 48
Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 49
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AH2 FR3
<400> 49
Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 50
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AH3 FR3
<400> 50
Arg Val Thr Met Leu Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Arg
1 5 10 15
Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 51
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPH1 FR3
<400> 51
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 52
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPH2 FR3
<400> 52
Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 53
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPH4 FR3
<400> 53
Arg Val Thr Ile Thr Ser Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 54
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AH1 FR4
<400> 54
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 55
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AH2 FR4
<400> 55
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 56
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AH3 FR4
<400> 56
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 57
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPH1 FR4
<400> 57
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 58
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPH2 FR4
<400> 58
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 59
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPH4 FR4
<400> 59
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 60
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AL1 FR1
<400> 60
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 61
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AL2 FR1
<400> 61
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
20
<210> 62
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AL3 FR1
<400> 62
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
20
<210> 63
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPL1 FR1
<400> 63
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
20
<210> 64
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPL2 FR1
<400> 64
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
20
<210> 65
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPL4 FR1
<400> 65
Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 66
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AL1 FR2
<400> 66
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 67
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AL2 FR2
<400> 67
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 68
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AL3 FR2
<400> 68
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 69
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPL1 FR2
<400> 69
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 70
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPL2 FR2
<400> 70
Trp Tyr Gln Leu Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Leu Tyr
1 5 10 15
<210> 71
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPL4 FR2
<400> 71
Trp Tyr Gln Leu Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Leu Tyr
1 5 10 15
<210> 72
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AL1 FR3
<400> 72
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
1 5 10 15
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 73
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AL2 FR3
<400> 73
Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 74
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AL3 FR3
<400> 74
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 75
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPL1 FR3
<400> 75
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 76
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPL2 FR3
<400> 76
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 77
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPL4 FR3
<400> 77
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 78
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AL1 FR4
<400> 78
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 79
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AL2 FR4
<400> 79
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 80
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AL3 FR4
<400> 80
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 81
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPL1 FR4
<400> 81
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 82
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPL2 FR4
<400> 82
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 83
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LPL4 FR4
<400> 83
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 84
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Light chain序列
<400> 84
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Trp Ser
20 25 30
Val Asn Gln Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Leu Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Leu Tyr Gly Ala Ser Ile Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His
85 90 95
Asn His Gly Ser Phe Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
100 105 110
Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
115 120 125
Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
130 135 140
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
145 150 155 160
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
165 170 175
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
180 185 190
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
195 200 205
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 85
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Heavy chain序列
<400> 85
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asn Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Ala Arg Ala Thr Pro Tyr Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly
450
<210> 86
<211> 702
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CEACAM5
<400> 86
Met Glu Ser Pro Ser Ala Pro Pro His Arg Trp Cys Ile Pro Trp Gln
1 5 10 15
Arg Leu Leu Leu Thr Ala Ser Leu Leu Thr Phe Trp Asn Pro Pro Thr
20 25 30
Thr Ala Lys Leu Thr Ile Glu Ser Thr Pro Phe Asn Val Ala Glu Gly
35 40 45
Lys Glu Val Leu Leu Leu Val His Asn Leu Pro Gln His Leu Phe Gly
50 55 60
Tyr Ser Trp Tyr Lys Gly Glu Arg Val Asp Gly Asn Arg Gln Ile Ile
65 70 75 80
Gly Tyr Val Ile Gly Thr Gln Gln Ala Thr Pro Gly Pro Ala Tyr Ser
85 90 95
Gly Arg Glu Ile Ile Tyr Pro Asn Ala Ser Leu Leu Ile Gln Asn Ile
100 105 110
Ile Gln Asn Asp Thr Gly Phe Tyr Thr Leu His Val Ile Lys Ser Asp
115 120 125
Leu Val Asn Glu Glu Ala Thr Gly Gln Phe Arg Val Tyr Pro Glu Leu
130 135 140
Pro Lys Pro Ser Ile Ser Ser Asn Asn Ser Lys Pro Val Glu Asp Lys
145 150 155 160
Asp Ala Val Ala Phe Thr Cys Glu Pro Glu Thr Gln Asp Ala Thr Tyr
165 170 175
Leu Trp Trp Val Asn Asn Gln Ser Leu Pro Val Ser Pro Arg Leu Gln
180 185 190
Leu Ser Asn Gly Asn Arg Thr Leu Thr Leu Phe Asn Val Thr Arg Asn
195 200 205
Asp Thr Ala Ser Tyr Lys Cys Glu Thr Gln Asn Pro Val Ser Ala Arg
210 215 220
Arg Ser Asp Ser Val Ile Leu Asn Val Leu Tyr Gly Pro Asp Ala Pro
225 230 235 240
Thr Ile Ser Pro Leu Asn Thr Ser Tyr Arg Ser Gly Glu Asn Leu Asn
245 250 255
Leu Ser Cys His Ala Ala Ser Asn Pro Pro Ala Gln Tyr Ser Trp Phe
260 265 270
Val Asn Gly Thr Phe Gln Gln Ser Thr Gln Glu Leu Phe Ile Pro Asn
275 280 285
Ile Thr Val Asn Asn Ser Gly Ser Tyr Thr Cys Gln Ala His Asn Ser
290 295 300
Asp Thr Gly Leu Asn Arg Thr Thr Val Thr Thr Ile Thr Val Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Pro Pro Lys Pro Phe Ile Thr Ser Asn Asn Ser Asn Pro Val Glu
325 330 335
Asp Glu Asp Ala Val Ala Leu Thr Cys Glu Pro Glu Ile Gln Asn Thr
340 345 350
Thr Tyr Leu Trp Trp Val Asn Asn Gln Ser Leu Pro Val Ser Pro Arg
355 360 365
Leu Gln Leu Ser Asn Asp Asn Arg Thr Leu Thr Leu Leu Ser Val Thr
370 375 380
Arg Asn Asp Val Gly Pro Tyr Glu Cys Gly Ile Gln Asn Glu Leu Ser
385 390 395 400
Val Asp His Ser Asp Pro Val Ile Leu Asn Val Leu Tyr Gly Pro Asp
405 410 415
Asp Pro Thr Ile Ser Pro Ser Tyr Thr Tyr Tyr Arg Pro Gly Val Asn
420 425 430
Leu Ser Leu Ser Cys His Ala Ala Ser Asn Pro Pro Ala Gln Tyr Ser
435 440 445
Trp Leu Ile Asp Gly Asn Ile Gln Gln His Thr Gln Glu Leu Phe Ile
450 455 460
Ser Asn Ile Thr Glu Lys Asn Ser Gly Leu Tyr Thr Cys Gln Ala Asn
465 470 475 480
Asn Ser Ala Ser Gly His Ser Arg Thr Thr Val Lys Thr Ile Thr Val
485 490 495
Ser Ala Glu Leu Pro Lys Pro Ser Ile Ser Ser Asn Asn Ser Lys Pro
500 505 510
Val Glu Asp Lys Asp Ala Val Ala Phe Thr Cys Glu Pro Glu Ala Gln
515 520 525
Asn Thr Thr Tyr Leu Trp Trp Val Asn Gly Gln Ser Leu Pro Val Ser
530 535 540
Pro Arg Leu Gln Leu Ser Asn Gly Asn Arg Thr Leu Thr Leu Phe Asn
545 550 555 560
Val Thr Arg Asn Asp Ala Arg Ala Tyr Val Cys Gly Ile Gln Asn Ser
565 570 575
Val Ser Ala Asn Arg Ser Asp Pro Val Thr Leu Asp Val Leu Tyr Gly
580 585 590
Pro Asp Thr Pro Ile Ile Ser Pro Pro Asp Ser Ser Tyr Leu Ser Gly
595 600 605
Ala Asn Leu Asn Leu Ser Cys His Ser Ala Ser Asn Pro Ser Pro Gln
610 615 620
Tyr Ser Trp Arg Ile Asn Gly Ile Pro Gln Gln His Thr Gln Val Leu
625 630 635 640
Phe Ile Ala Lys Ile Thr Pro Asn Asn Asn Gly Thr Tyr Ala Cys Phe
645 650 655
Val Ser Asn Leu Ala Thr Gly Arg Asn Asn Ser Ile Val Lys Ser Ile
660 665 670
Thr Val Ser Ala Ser Gly Thr Ser Pro Gly Leu Ser Ala Gly Ala Thr
675 680 685
Val Gly Ile Met Ile Gly Val Leu Val Gly Val Ala Leu Ile
690 695 700
<210> 87
<211> 344
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CEACAM6
<400> 87
Met Gly Pro Pro Ser Ala Pro Pro Cys Arg Leu His Val Pro Trp Lys
1 5 10 15
Glu Val Leu Leu Thr Ala Ser Leu Leu Thr Phe Trp Asn Pro Pro Thr
20 25 30
Thr Ala Lys Leu Thr Ile Glu Ser Thr Pro Phe Asn Val Ala Glu Gly
35 40 45
Lys Glu Val Leu Leu Leu Ala His Asn Leu Pro Gln Asn Arg Ile Gly
50 55 60
Tyr Ser Trp Tyr Lys Gly Glu Arg Val Asp Gly Asn Ser Leu Ile Val
65 70 75 80
Gly Tyr Val Ile Gly Thr Gln Gln Ala Thr Pro Gly Pro Ala Tyr Ser
85 90 95
Gly Arg Glu Thr Ile Tyr Pro Asn Ala Ser Leu Leu Ile Gln Asn Val
100 105 110
Thr Gln Asn Asp Thr Gly Phe Tyr Thr Leu Gln Val Ile Lys Ser Asp
115 120 125
Leu Val Asn Glu Glu Ala Thr Gly Gln Phe His Val Tyr Pro Glu Leu
130 135 140
Pro Lys Pro Ser Ile Ser Ser Asn Asn Ser Asn Pro Val Glu Asp Lys
145 150 155 160
Asp Ala Val Ala Phe Thr Cys Glu Pro Glu Val Gln Asn Thr Thr Tyr
165 170 175
Leu Trp Trp Val Asn Gly Gln Ser Leu Pro Val Ser Pro Arg Leu Gln
180 185 190
Leu Ser Asn Gly Asn Met Thr Leu Thr Leu Leu Ser Val Lys Arg Asn
195 200 205
Asp Ala Gly Ser Tyr Glu Cys Glu Ile Gln Asn Pro Ala Ser Ala Asn
210 215 220
Arg Ser Asp Pro Val Thr Leu Asn Val Leu Tyr Gly Pro Asp Val Pro
225 230 235 240
Thr Ile Ser Pro Ser Lys Ala Asn Tyr Arg Pro Gly Glu Asn Leu Asn
245 250 255
Leu Ser Cys His Ala Ala Ser Asn Pro Pro Ala Gln Tyr Ser Trp Phe
260 265 270
Ile Asn Gly Thr Phe Gln Gln Ser Thr Gln Glu Leu Phe Ile Pro Asn
275 280 285
Ile Thr Val Asn Asn Ser Gly Ser Tyr Met Cys Gln Ala His Asn Ser
290 295 300
Ala Thr Gly Leu Asn Arg Thr Thr Val Thr Met Ile Thr Val Ser Gly
305 310 315 320
Ser Ala Pro Val Leu Ser Ala Val Ala Thr Val Gly Ile Thr Ile Gly
325 330 335
Val Leu Ala Arg Val Ala Leu Ile
340

Claims (28)

1.一种抗原结合分子，其包含：
(1)重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区(VH)包含：SEQ ID NO:1的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列以及SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列，所述轻链可变区(VL)包含：SEQ ID NO:4的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:5的VLCDR2氨基酸序列以及SEQ ID NO:6的VLCDR3氨基酸序列；
其中(1)中定义的所述VH包含与SEQ ID NO:10或7所述的VH氨基酸序列的CDR以外的至少一个区至少90％的序列同一性，并且(1)中定义的所述VL包含与SEQ ID NO:17或13所述的VL氨基酸序列的CDR以外的至少一个区至少90％的序列同一性。
2.根据权利要求1所述的抗原结合分子，其中：
a)(1)中定义的所述VH包含与SEQ ID NO:10所述的VH氨基酸序列的CDR以外的至少一个区至少90％的序列同一性，并且(1)中定义的所述VL包含与SEQ ID NO:17所述的VL氨基酸序列的CDR以外的至少一个区至少90％的序列同一性；
b)(1)中定义的所述VH包含与SEQ ID NO:10所述的VH氨基酸序列的CDR以外的至少一个区至少90％的序列同一性，并且(1)中定义的所述VL包含与SEQ ID NO:13所述的VL氨基酸序列的CDR以外的至少一个区至少90％的序列同一性；
c)(1)中定义的所述VH包含与SEQ ID NO:7所述的VH氨基酸序列的CDR以外的至少一个区至少90％的序列同一性，并且(1)中定义的所述VL包含与SEQ ID NO:17所述的VL氨基酸序列的CDR以外的至少一个区至少90％的序列同一性；或
d)(1)中定义的所述VH包含与SEQ ID NO:7所述的VH氨基酸序列的CDR以外的至少一个区至少90％的序列同一性，并且(1)中定义的所述VL包含与SEQ ID NO:13所述的VL氨基酸序列的CDR以外的至少一个区至少90％的序列同一性。
3.根据权利要求1或2任一项所述的抗原结合分子，其中：
a)所述VH与SEQ ID NO:10所述的VH氨基酸序列的区别在于在SEQ ID NO:10所述的VH氨基酸序列的CDR以外的至少一个区中的一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加，并且所述VL与SEQ ID NO:17所述的VL氨基酸序列的区别在于在SEQ ID NO:17所述的VL氨基酸序列的CDR以外的至少一个区中的一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加；
b)所述VH与SEQ ID NO:10所述的VH氨基酸序列的区别在于在SEQID NO:10中所述的VH氨基酸序列的CDR以外的至少一个区中的一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加，并且所述VL与SEQ ID NO:
13所述的VL氨基酸序列的区别在于在SEQ ID NO:13所述的VL氨基酸序列的CDR以外的至少一个区中的一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加；
c)所述VH与SEQ ID NO:7所述的VH氨基酸序列的区别在于在SEQ ID NO:7所述的VH氨基酸序列的CDR以外的至少一个区中的一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加，并且所述VL与SEQ ID NO:17所述的VL氨基酸序列的区别在于在SEQ ID NO:17所述的VL氨基酸序列的CDR以外的至少一个区中的一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加；或
d)所述VH与SEQ ID NO:7所述的VH氨基酸序列的区别在于在SEQ ID NO:7所述的VH氨基酸序列的CDR以外的至少一个区中的一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加，并且所述VL与SEQ ID NO:13所述的VL氨基酸序列的区别在于在SEQ ID NO:13所述的VL氨基酸序列的CDR以外的至少一个区中的一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：
a)VHFR1，其与QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKAS(SEQ ID NO:19)或QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS(SEQ ID NO:20)所述的VHFR1氨基酸序列的区别在于一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加；
b)VHFR2，其与WVRQAPGQGLEWMA(SEQ ID NO:21)或WVRQAPGQGLEWMG(SEQ ID NO:22)所述的VHFR2氨基酸序列的区别在于一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加；
c)VHFR3，其与RVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCAR(SEQ ID NO:23)或RVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:24)所述的VHFR3氨基酸序列的区别在于一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加；
d)VHFR4，其与YWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:25)所述的VHFR4氨基酸序列的区别在于一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加；
e)VLFR1，其与DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO:26)或DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC(SEQ ID NO:27)所述的VHFR2氨基酸序列的区别在于一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加；
f)VLFR2，其与WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO:28)或WYQLKPGQPPKLLLY(SEQ ID NO:29)所述的VLFR2氨基酸序列的区别在于一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加；
g)VLFR3，其与GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO:30)或GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC(SEQ ID NO:31)所述的VLFR3氨基酸序列的区别在于一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加；和/或
h)VLFR4，其与FGQGTKVEIK(SEQ ID NO:32)或FGGGTKLEIK(SEQ ID NO:33)所述的VLFR4氨基酸序列的区别在于一个或多个氨基酸的缺失、置换或添加。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：
a)VHFR1氨基酸序列QVQLVQSGX1EVKKPGASVKVSCKAS(SEQ ID NO:34)，其中X1是V或A；
b)VHFR2氨基酸序列WVRQAPGQGLEWMX2(SEQ ID NO:35)，其中X2是A或G；
c)VHFR3氨基酸序列RVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCAR(SEQ ID NO:23)或RVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:24)；
d)VHFR4氨基酸序列YWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:25)；
e)VLFR1氨基酸序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO:26)或DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC(SEQ ID NO:27)；
f)VLFR2氨基酸序列WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO:28)或WYQLKPGQPPKLLLY(SEQ IDNO:29)；
g)VLFR3氨基酸序列GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO:30)或GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC(SEQ ID NO:31)；和/或
h)VLFR4氨基酸序列FGQGTKVEIK(SEQ ID NO:32)或FGGGTKLEIK(SEQ ID NO:33)。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含SEQID NO:10或7的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:17或13的VL氨基酸序列。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的抗原结合分子，其中
a)所述抗原结合分子包含SEQ ID NO:10的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:
17的VL氨基酸序列；
b)所述抗原结合分子包含SEQ ID NO:10的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:
13的VL氨基酸序列；
c)所述抗原结合分子包含SEQ ID NO:7的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:
17的VL氨基酸序列；或
d)所述抗原结合分子包含SEQ ID NO:7的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:
13的VL氨基酸序列。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子是抗体或其抗原结合片段。
9.根据权利要求8所述的抗原结合分子，其中所述抗体或其抗原结合片段是全长抗体、基本上完整的抗体、Fab片段、scFab、Fab'、单链可变片段(scFv)或单臂抗体。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含与SEQ ID NO:84具有至少70％序列同一性的轻链序列和与SEQ ID NO:85具有至少70％序列同一性的重链序列。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子与CEACAM5和/或CEACAM6结合。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子缀合至放射性同位素或细胞毒素。
13.根据权利要求12所述的抗原结合分子，其中所述细胞毒素选自由单甲基澳瑞他汀E(MMAE)、单甲基澳瑞他汀F(MMAF)、美登素(DM-1)、皂草素、吉西他滨、伊立替康、依托泊苷、长春花碱、培美曲塞、多西他赛、紫杉醇、铂类药物(例如顺铂、奥沙利铂和卡铂)、长春瑞滨、卡培他滨、米托蒽醌、伊沙匹隆、艾日布林、5-氟尿嘧啶、三氟尿苷和替吡嘧啶组成的组。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子选择性结合耐吉非替尼的肺癌细胞、耐奥希替尼的肺癌细胞、非小细胞肺癌细胞、乳腺癌细胞、胰腺癌细胞、胃(或胃部)癌细胞、小肠癌细胞、食管癌细胞或结直肠癌细胞。
15.一种分离的多核苷酸，其包含编码根据权利要求1-14中任一项所述的抗原结合分子的核酸序列。
16.一种构建体，其包含与一个或多个控制序列可操作地连接的权利要求15所述的多核苷酸。
17.一种宿主细胞，其含有权利要求16所述的构建体。
18.一种组合物，其包含权利要求1-14中任一项所述的抗原结合分子和药学上可接受的运载体。
19.根据权利要求1-14中任一项所述的抗原结合分子或根据权利要求18所述的组合物，其用作药物。
20.一种治疗或预防受试者的癌症或炎性疾病的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的权利要求1-14中任一项所述的抗原结合分子或权利要求18所述的组合物。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述癌症选自由耐吉非替尼的肺癌、耐奥希替尼的肺癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃(或胃部)癌、小肠癌、食道癌和结直肠癌组成的组。
22.根据权利要求20所述的方法，其中所述炎性疾病是克罗恩病或哮喘。
23.权利要求1-14中任一项所述的抗原结合分子或权利要求18所述的组合物，其用于治疗或预防受试者中的癌症。
24.权利要求1-14中任一项所述的抗原结合分子或权利要求18所述的组合物在制备用于治疗或预防癌症的药物中的用途。
25.一种检测受试者的癌症的方法，所述方法包括：将从所述受试者获得的样品与权利要求1-14中任一项所述的抗原结合分子接触，其中样品中所述抗原结合分子结合水平与参考相比的增加表明存在癌症。
26.一种鉴定易患癌症的受试者的方法，所述方法包括：将从所述受试者获得的样品与权利要求1-14中任一项所述的抗原结合分子接触，其中样品中的结合水平与参考相比的增加表明所述受试者易患癌症。
27.根据权利要求25或26所述的方法，其中所述抗原结合分子包含可检测的标记。
28.用于权利要求25-27中任一项所述方法的试剂盒，其包含权利要求1-14中任一项所述的抗原结合分子以及使用说明书。
CN202280050256.6A 2021-05-21 2022-05-20 抗eacam5/6抗原结合分子及其治疗方法 Pending CN117957252A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SG10202105379W 2021-05-21
SG10202105379W 2021-05-21
PCT/SG2022/050336 WO2022245299A2 (en) 2021-05-21 2022-05-20 Anti-ceacam5/6 antigen-binding molecules and methods of treatment thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN117957252A true CN117957252A (zh) 2024-04-30

Family

ID=84141986

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202280050256.6A Pending CN117957252A (zh) 2021-05-21 2022-05-20 抗eacam5/6抗原结合分子及其治疗方法

Country Status (7)

Country Link
EP (1) EP4341295A2 (zh)
KR (1) KR20240012458A (zh)
CN (1) CN117957252A (zh)
AU (1) AU2022277056A1 (zh)
BR (1) BR112023024141A2 (zh)
CA (1) CA3218876A1 (zh)
WO (1) WO2022245299A2 (zh)

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG11201903178QA (en) * 2016-10-10 2019-05-30 Singhealth Services Pte Ltd Anti-ceacam6 antibodies and methods of use

Also Published As

Publication number Publication date
CA3218876A1 (en) 2022-11-24
AU2022277056A1 (en) 2023-12-21
KR20240012458A (ko) 2024-01-29
BR112023024141A2 (pt) 2024-01-30
AU2022277056A9 (en) 2024-01-25
WO2022245299A2 (en) 2022-11-24
EP4341295A2 (en) 2024-03-27
WO2022245299A3 (en) 2023-02-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6679762B2 (ja) 抗ｇｐｒ２０抗体及び抗ｇｐｒ２０抗体−薬物コンジュゲート
JP6506280B2 (ja) 抗ｃｘｃｒ４抗体および抗体−薬剤コンジュゲート
TWI526223B (zh) 人化ａｘｌ抗體類
CA2995673A1 (en) Internalizing moieties for treatment of cancer
EP2603527A1 (en) Humanized egfr antibodies
AU2021337687A1 (en) Nectin-4 antibodies and uses thereof
US20240132614A1 (en) Crtam antibodies and methods of treating cancer
CN102083861B (zh) 使用结合EphB4的人源化抗体的癌症治疗
JP2022514786A (ja) Ｍｕｃ１８に特異的な抗体
KR20240021294A (ko) 항-her3 항체, 이를 함유하는 항체-약물 접합체 및 그 용도
US9051370B2 (en) Humanized EGFR antibodies
CN117957252A (zh) 抗eacam5/6抗原结合分子及其治疗方法
US20240132595A1 (en) Antigen binding molecules and methods thereof ii
CN116249547A (zh) 脑特异性血管生成抑制剂1(bai1)抗体及其用途
CN117178000A (zh) 抗原结合分子及其方法i
US20230080224A1 (en) Antigen-binding molecules against alppl2 and/or alpp and uses thereof
US20230235080A1 (en) Trophoblast cell-surface antigen-2 (trop-2) antibodies
TW202317630A (zh) 抗gfral抗體及其應用
EP4237446A1 (en) Antigen binding molecules and uses thereof

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination