CN117957245A - 识别p53中的c135y、r175h或m237i突变的t细胞受体 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了对人p53C135Y、人p53R175H或人p53M237I具有抗原特异性的经分离或经纯化的T细胞受体(TCR)。还提供了相关的多肽和蛋白质，以及相关的核酸、重组表达载体、宿主细胞、细胞群和药物组合物。还公开了检测哺乳动物中癌症存在的方法以及治疗或预防哺乳动物中癌症的方法。

Description

识别P53中的C135Y、R175H或M237I突变的T细胞受体
相关申请的交叉引用
本专利申请要求2021年5月7日提交的美国临时专利申请No.63/185,805的权益，该临时专利申请的全部内容通过引用并入本文。
关于联邦政府资助的研究或开发的声明
本申请是在美国国立卫生研究院、国家癌症研究所的项目编号BC010985的政府支持下完成的。政府对本申请享有某些权利。
通过引用合并以电子方式提交的材料
通过引用将与本文同时提交的计算机可读核苷酸/氨基酸序列表全文并入本文，并标识如下:一个名为“759875_ST25.txt”的133,457字节的ASCII(文本)文件，日期为2022年4月21日。
背景技术
一些癌症的治疗选项可能非常有限，特别是当癌症发生转移且无法切除时。尽管在诸如手术、化疗和放疗等治疗方面取得了进展，但许多癌症，诸如胰腺癌、结直肠癌、肺癌、子宫内膜癌、卵巢癌和前列腺癌的预后可能很差。因此，对于癌症的额外治疗存在未满足的需求。
发明内容
本申请的一方面提供了对人p53C135Y、人p53R175H或人p53M237I氨基酸序列具有抗原特异性的经分离的或经纯化的T细胞受体(TCR)，其中所述TCR包含氨基酸序列：(1)SEQ IDNO:2-4的全部；(2)SEQ ID NO:5-7的全部；(3)SEQ ID NO:2-7的全部；(4)SEQ ID NO:17-19的全部；(5)SEQ ID NO:20-22的全部；(6)SEQ ID NO:17-22的全部；(7)SEQ ID NO:32-34的全部；(8)SEQ ID NO:35-37的全部；(9)SEQ ID NO:32-37的全部；(10)SEQ ID NO:47-49的全部；(11)SEQ ID NO:50-52的全部；(12)SEQ ID NO:47-52的全部；(13)SEQ ID NO:62-64的全部；(14)SEQ ID NO:65-67的全部；或(15)SEQ ID NO:62-67的全部。
本申请的其他方面提供了与本申请的TCR有关的多肽、蛋白质、核酸、重组表达载体、宿主细胞、细胞群和药物组合物。
本申请的又一方面提供了检测哺乳动物中癌症的存在的方法、在哺乳动物中诱导针对癌症的免疫应答的方法、以及治疗或预防哺乳动物中的癌症的方法。
本申请的另外的方面提供了产生表达TCR的宿主细胞的方法以及产生TCR、多肽或蛋白质的方法。
附图的若干视图的简要说明
图1A是显示来自肿瘤片段编号F1-F24的患者4316TIL与靶细胞共培养后测量的IFN-γ斑点数量(每2e4细胞)的图。靶细胞是自体树突状细胞(DC)，其(i)用包含p53 C135Y的肽池(PP)脉冲；(ii)用编码p53 C135Y的串联小基因(TMG)RNA或无关TMG转染；或(iii)用DMSO处理(对照)处理。用PMS/离子霉素处理的TIL作为阳性对照。带有p53反应性突变体的片段22被加框。
图1B显示了将来自患者4316的TIL与用DMSO(载体)、无关肽KIAA1328 K386R或所指示的p53-C135Y突变体肽脉冲的自体DC共培养后，通过流式细胞术测量的表达4-1BB和CD4的TIL百分比。用PMA/离子霉素处理的TIL作为阳性对照。
图1C是显示用4316-D TCR转导的PBL与用系列稀释的25聚体肽p53-C135Y或WTp53-C135脉冲的自体未成熟DC共培养后，表达4-1BB的表达鼠源TCR恒定区T细胞(mTCR+)的百分比的图。
图2显示了在针对p53 R175H的体外致敏(IVS)(右列)或不IVS(左列)后，将来自患者4141的TIL与靶细胞共培养后，通过流式细胞术测得的表达OX40和4-1BB的T细胞的百分比。靶细胞是用DMSO、p53 R175H突变体肽或相应的WT p53 R175肽脉冲的自体DC。T细胞活化标记物4-1BB和OX40上调的活化T细胞以粗体标出。ME，最小表位。图3A是显示来自肿瘤片段编号F1-F24的患者4304 TIL与靶细胞共培养后测量的IFN-γ斑点数量(每2e4细胞)的图。靶细胞是自体DC，其(i)用包括p53 M237I的PP脉冲；(ii)用编码p53 M237I的TMG RNA或无关TMG转染；或(iii)用DMSO处理(对照)。用PMS/离子霉素处理的TIL作为阳性对照。
图3B显示了通过流式细胞术测量的从患者4304的肿瘤消化物中分选的表达CD39和CD103的CD4+T细胞的百分比。
图3C是显示靶细胞与效应细胞共培养后测量的IFN-γ斑点数量(每2e4细胞)的图。效应细胞是从4304号患者的肿瘤中分选的CD4+CD103+CD39+(正方形)、CD4+CD103-CD39+(三角形)或CD4+CD103-CD39-(圆圈)细胞。靶细胞是自体DC，其(i)用包括p53 M237I的PP脉冲；(ii)用编码p53 M237I的TMG RNA或对照TMG转染；或(iii)用DMSO处理(对照)。单独培养的TIL(仅TIL)作为对照。
图3D-3F是显示在用连续稀释的25聚体肽p53-M237I或WTp53-M237脉冲的自体未成熟DC与效应细胞共培养之后，表达鼠源TCR恒定区、表达4-1BB的CD3+CD4+T细胞(mTCR+)的百分比的图。所述效应细胞是用编码4304 TCR-2(图3D)、4304 TCR-4(图3E)或4304T CR-K(图3F)的重组表达载体独立转导的PBL。
图4A-4B显示4141 IVS TCR转导细胞与肿瘤细胞系SK-MEL-5(4A)、SAOS2(4A)、SAOS2 R175H(4A)、CEM/C1(4B)、TYK-nu(4B)、或KLE(4B)共培养后表达4-1BB和OX40的4141IVS TCR转导细胞的百分比。所述细胞系被标示为p53 R175H和HLA-A*02:01表达呈阳性(+)或阴性(-)。
图5A-5B显示九个p53剪接变体的氨基酸序列的比对。SP|P04637|P53_HUMAN(SEQID NO:1)；SP|P04637-2|P53_HUMAN(SEQ ID NO:81)；SP|P04637-3|P53_HUMAN(SEQ ID NO:82)；SP|P04637-4|P53_HUMAN(SEQ ID NO:83)；SP|P04637-5|P53_HUMAN(SEQ ID NO:84)；SP|P04637-6|P53_HUMAN(SEQ ID NO:85)；SP|P04637-7|P53_HUMAN(SEQ ID NO:86)；SP|P04637-8|P53_HUMAN(SEQ ID NO:87)；和SP|P04637-9|P53_HUMAN(SEQ ID NO:88)。比对从图5A中所示的N末端开始，并继续通过图5B中所示的C末端。
图6显示了通过流式细胞术测量的4316-D TCR转导细胞与靶细胞共培养后表达4-1BB和OX40的4316-D TCR转导细胞的百分比。靶细胞是4316自体患者来源的异种移植(PDX)肿瘤细胞，在不存在IFN-γ(顶行)或存在IFN-γ(底行)的情况下，用DMSO(左列)、WTp53(中列)或p53突变体肽(右列)脉冲。
图7A是说明临床前期异种移植小鼠的产生和治疗方案的示意图。免疫受损的雌性NSG(NOD scid gamma)小鼠被注射了200万个天然表达p53R175H突变和HLA-A*02:01的TYK-nu卵巢细胞。两周后，这些小鼠接受了载体或1000万个T细胞的治疗。然后评估接下来30天内的肿瘤生长。
图7B-7C是显示在转导细胞的过继细胞转移(ACT)后30天进程中测量的荷瘤小鼠的平均肿瘤大小(mm2)的图。来自两个健康供体(健康供体1(7B)和健康供体2(7C))的PBL使用指示的TCR独立转导。小鼠分为三个治疗组：PBS载体(圆)、用靶向p53 Y220C的无关TCR转导的T细胞(三角形)、用n为5的4141 IVS TCR转导的T细胞(方形)。将这些小鼠与用4141-TCR1a2(星形)转导的T细胞治疗的小鼠进行比较。获得的结果与从两位健康供体获得的细胞一致。
本申请的具体实施方式
肿瘤蛋白P53(也称为“TP53”或“p53”)通过例如调节细胞分裂发挥肿瘤抑制因子的作用。p53蛋白位于细胞核中，直接与DNA结合。当DNA受损时，p53蛋白参与决定DNA是否会被修复或受损细胞是否会发生凋亡。如果DNA可以被修复，p53就会激活其他基因来修复损伤。如果DNA无法修复，p53蛋白就会阻止细胞分裂，并向其发出凋亡信号。通过阻止DNA突变或受损的细胞分裂，p53有助于预防肿瘤的发展。WT(正常)全长p53包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。
p53蛋白的突变可能会降低或消除p53蛋白的肿瘤抑制功能。可替换地或者额外地，p53突变可以是通过以显性失活方式干扰WTp53的功能获得性突变。突变的p53蛋白可以在多种人类癌症的任一种中表达，例如胆管癌、黑素瘤、结肠癌、直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、胶质母细胞瘤、宫颈癌、头颈癌、乳腺癌、胰腺癌或膀胱癌。
本申请的一方面提供了对人p53C135Y、人p53R175H或人p53M237I氨基酸序列(下文中，“突变的p53”)具有抗原特异性的经分离的或经纯化的T细胞受体(TCR)。在下文中，除非另有说明，否则对“TCR”的引用也指TCR的功能性部分和功能性变体。p53的突变在本文中参考全长WTp53的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)来定义。本文通过参考特定位置处存在的氨基酸残基、随后的位置编号、随后的在所讨论的特定突变中该残基已被取代的氨基酸来描述p53的突变。p53氨基酸序列(例如p53肽)可以包含少于全长WTp53蛋白全部氨基酸残基的氨基酸残基。因此，本文参考WT全长p53蛋白(即SEQ ID NO:1)定义位置号，并理解p53氨基酸序列的特定实例中相应残基的实际位置可以是不同的。因为位置如SEQ ID NO:1所定义，所以术语“C135Y”表示SEQ ID NO:1的位置135处存在的半胱氨酸被酪氨酸取代，“R175H”表示SEQID NO:1的位置175处存在的精氨酸被组氨酸取代，“M237I”表示SEQ ID NO:1的第237位存在的甲硫氨酸被异亮氨酸取代。例如，当p53氨基酸序列的具体实例是例如(SEQ ID NO:89)(对应于SEQ ID NO:1的连续氨基酸残基123至147的示例性WTp53肽)时，“C135Y”是指SEQ ID NO:89中带下划线的半胱氨酸被酪氨酸取代，即使SEQ ID NO:89中带下划线的精氨酸的实际位置是13。具有C135Y突变的人p53氨基酸序列在下文中称为“C135Y”或“p53C135Y”。具有R175H突变的人p53氨基酸序列在下文中称为“R175H”或“p53R175H”。具有M237I突变的人p53氨基酸序列在下文中称为“M237I”或“p53M237I”。如本文所用，“突变的p53”是指人p53C135Y、人p53R175H或人p53M237I。
P53有九种已知的剪接变体。本文描述的p53突变在所有九种p53剪接变体中都是保守的。九种p53剪接变体的比对如图5所示。因此，本申请的TCR可以对由九种p53剪接变体中的任一种编码的本文所述的任何突变的p53氨基酸序列具有抗原特异性。因为位置如SEQID NO:1所定义，则p53的特定剪接变体的氨基酸序列的实际位置是相对于SEQ ID NO:1的相应位置来定义的，并且如SEQ ID NO:1所定义的位置可能与特定剪接变体中的实际位置不同。因此，例如，突变是指p53的特定剪接变体的氨基酸序列中对应于SEQ ID NO:1的393个氨基酸序列的指示位置的氨基酸残基的取代，应理解，剪接变体中的实际位置可能不同。
在本申请的一方面，TCR对在位置135处具有突变的人p53具有抗原特异性，位置如SEQ ID NO:1所定义。p53第135位的突变可能是错义突变。因此，位置135处的突变可以是位置135处存在的天然(WT)半胱氨酸残基被除半胱氨酸之外的任何氨基酸残基取代。在本申请的一方面，TCR对人p53C135Y氨基酸序列具有抗原特异性。例如，TCR可以对人p53C135Y氨基酸序列(SEQ ID NO:90)具有抗原特异性。在本申请的一方面，TCR对野生型人p53氨基酸序列(SEQ ID NO:89)不具有抗原特异性。
在本申请的一方面，TCR对在位置175处具有突变的人p53具有抗原特异性，位置如SEQ ID NO:1所定义。p53第175位的突变可能是错义突变。因此，位置175处的突变可以是位置175处存在的天然(WT)精氨酸残基被除精氨酸之外的任何氨基酸残基取代。在本申请的一方面，TCR对人p53R175H氨基酸序列具有抗原特异性。例如，TCR可以对(SEQID NO:92)的人p53R175H氨基酸序列具有抗原特异性。在本申请的一方面，TCR对(SEQ ID NO:91)的野生型人p53氨基酸序列不具有抗原特异性。
在本申请的一方面，TCR对在位置237处具有突变的人p53具有抗原特异性，位置如SEQ ID NO:1所定义。p53第237位的突变可能是错义突变。因此，位置237处的突变可以是位置237处存在的天然(WT)甲硫氨酸残基被除甲硫氨酸之外的任何氨基酸残基取代。在本申请的一方面，TCR对人p53M237I氨基酸序列具有抗原特异性。例如，TCR可以对人p53M237I氨基酸序列(SEQ ID NO:94)具有抗原特异性。在本申请的一方面，TCR对野生型人p53氨基酸序列(SEQ ID NO:93)不具有抗原特异性。
在本申请的一方面，本申请的TCR能够以HLA(人类白细胞抗原)分子依赖性方式识别突变的p53。如本文所用，“HLA分子依赖性方式”是指TCR在HLA分子背景下与突变的p53结合后引发免疫应答，所述HLA分子由分离出该TCR的患者表达。本申请的TCR或许能够识别由适用的HLA分子呈递的突变的p53，并且除了突变的p53之外还可以结合HLA分子。
在本申请的一方面，本申请的TCR能够识别HLA II类分子呈递的C135Y。在这方面，TCR在HLA II类分子的背景下与C135Y结合后可能会引发免疫应答。本申请的TCR能够识别由HLA II类分子呈递的C135Y并且除了C135Y之外还可能结合HLA II类分子。
在本申请的一方面，本申请的TCR能够识别由HLA II类分子呈递的M237I。在这方面，TCR可能在HLA II类分子的背景下与M237I结合后引发免疫应答。本申请的TCR能够识别由HLA II类分子呈递的M237I并且除了M237I之外还可以结合HLA II类分子。
在本申请的一方面，所述HLA II类分子是HLA-DR异二聚体。所述HLA-DR异二聚体是细胞表面受体，包括α链和β链。所述HLA-DRα链由HLA-DRA基因编码。HLA-DRβ链由HLA-DRB1基因、HLA-DRB3基因、HLA-DRB4基因或HLA-DRB5基因编码。HLA-DRB1基因编码的分子的实例可包括但不限于HLA-DR1、HLA-DR2、HLA-DR3、HLA-DR4、HLA-DR5、HLA-DR6、HLA-DR7、HLA-DR8、HLA-DR9、HLA-DR10、HLA-DR11、HLA-DR12、HLA-DR13、HLA-DR14、HLA-DR15、HLA-DR16和HLA-DR17。HLA-DRB3基因编码HLA-DR52。HLA-DRB4基因编码HLA-DR53。HLA-DRB5基因编码HLA-DR51。
在一方面，所述HLA II类分子的α链由HLA-DRA1*01:01等位基因表达。在一方面，所述HLA II类分子的β链由HLA-DRB1*07:01等位基因表达。在本申请的一方面，所述HLA II类分子是HLA-DRB7:HLA-DRA异二聚体。在一个优选的方面，所述HLA II类分子是HLA-DRA1*01:01链和HLA-DRB1*07:01链的异二聚体。在一个特别优选的方面，突变的p53是C135Y并且HLA II类分子是HLA-DRA1*01:01链和HLA-DRB1*07:01链的异二聚体。
在一方面，所述HLA II类分子的α链由HLA-DRA1*01:01等位基因表达。在一方面，所述HLA II类分子的β链由HLA-DRB1*01:01等位基因表达。在本申请的一方面，所述HLA II类分子是HLA-DRB1:HLA-DRA异二聚体。在一个优选的方面，所述HLA II类分子是HLA-DRA1*01:01链和HLA-DRB1*01:01链的异二聚体。在一个特别优选的方面，所述突变的p53是M237I并且所述HLA II类分子是HLA-DRA1*01:01链和HLA-DRB1*01:01链的异二聚体。
在本申请的一方面，本申请的TCR能够识别由HLA I类分子呈递的R175H。在此角度，所述TCR可能在HLA I类分子的背景下与R175H结合后引发免疫应答。本申请的TCR能够识别由所述HLA I类分子呈递的R175H并且除了R175H之外还可以结合HLA I类分子。
在本申请的一个实施方案中，所述HLA I类分子是HLA-A分子。所述HLA-A分子是α链和β2微球蛋白的异二聚体。所述HLA-Aα链可以由HLA-A基因编码。所述β2微球蛋白与α链的α1、α2和α3结构域非共价结合，构建HLA-A复合物。所述HLA-A分子可以是任何HLA-A分子。在本申请的一个实施方案中，所述HLAI类分子是HLA-A2分子。所述HLA-A2分子可以是任何HLA-A2分子。HLA-A2分子的实例可包括但不限于由HLA-A*02:01、HLA-A*02:02、HLA-A*02:03等位基因、HLA-A*02:05、HLA-A*02:06、HLA-A*02:07等位基因或HLA-A*02:11等位基因编码的那些。优选地，所述HLA I类分子由HLA-A*02:01等位基因编码。
本申请的TCR可提供许多优点中的任何一种或多种，包括当由用于过继细胞转移的细胞表达时。经突变的p53由癌细胞表达，但正常的非癌细胞不表达。不受特定理论或机制的束缚，据信本申请的TCR有利地靶向癌细胞的破坏，同时最小化或消除对正常非癌细胞的破坏，从而例如通过最小化或消除毒性来降低毒性。此外，本申请的TCR可以有利地成功治疗或预防对其他类型的治疗诸如化疗、手术或放射没有响应的突变p53阳性癌症。另外，本申请的TCR可以提供对突变p53的高亲和的识别，这可以提供识别未操作的肿瘤细胞(例如，未经干扰素(IFN)-γ处理的、用编码突变的p53和适用的HLA分子之一或两者的载体转染的、用具有p53突变的p53肽脉冲的肿瘤细胞，或其组合)的能力。p53突变在不同肿瘤类型中很常见。大约一半的肿瘤含有p53突变，其中大约一半是错义突变。R175H突变很常见，影响约5％的实体癌患者。C135Y和M237I突变也具有高度复发性，每种突变均影响所有癌症患者中的约0.4％。因此，本申请的TCR可以增加有资格接受免疫疗法治疗的患者的数量。
本文使用的短语“抗原特异性”是指TCR能够以高亲和力特异性结合并免疫学识别突变的p53。例如，将表达TCR的约1x104至约1x105T细胞与(a)抗原阴性的、用突变的p53肽(例如，约0.1ng/mL至约10,000ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、100ng/mL、500ng/mL、1,000ng/mL、5,000ng/mL、10,000ng/mL或由前述值中任意两个定义的范围)脉冲的适用的HLA分子阳性靶细胞，或(b)抗原阴性的、其中已引入编码突变p53的核苷酸序列以使靶细胞表达突变p53的适用的HLA分子阳性靶细胞共培养后，如果所述表达TCR的T细胞分泌至少约200pg/mL或更多(例如，200pg/mL或更多、300pg/mL或更多、400pg/mL或更多、500pg/mL或更多、600pg/mL或更多、700pg/mL或更多、1000pg/mL或更多、5,000pg/mL或更多、7,000pg/mL或更多、10,000pg/mL或更多、20,000pg/mL或更多，或者由前述值中的任意两个定义的范围)的IFN-γ，则TCR可以被认为对突变p53具有“抗原特异性”。表达本申请的TCR的细胞在与用更高浓度的突变p53肽脉冲的抗原阴性、适用的HLA分子阳性靶细胞共培养后也可以分泌IFN-γ。
替选地或者额外地，将表达TCR的T细胞在与(a)抗原阴性、用突变p53肽脉冲的适用的HLA分子阳性靶细胞，或(b)抗原阴性、其中已引入编码突变p53的核苷酸序列使得靶细胞表达突变p53的适用的HLA分子阳性的靶细胞共培养后，如果所述表达TCR的T细胞分泌与阴性对照表达的IFN-γ的量相比至少两倍的IFN-γ，则可以认为TCR对突变p53具有“抗原特异性”。所述阴性对照可以是例如，(i)表达TCR的T细胞，其与(a)抗原阴性、用相同浓度的无关肽(例如，与突变p53肽具有不同序列的别的肽)脉冲的适用的HLA分子阳性靶细胞，或(b)抗原阴性、其中已引入编码无关肽的核苷酸序列使得靶细胞表达无关肽的适用的HLA分子阳性靶细胞共培养；或(ii)未转导的T细胞(例如，源自PBMC，其不表达TCR)，其与(a)抗原阴性、用相同浓度的突变p53肽脉冲的适用的HLA分子阳性靶细胞，或(b)抗原阴性、其中已引入编码突变p53的核苷酸序列使得靶细胞表达突变p53适用的HLA分子阳性靶细胞共培养。IFN-γ分泌可以通过本领域已知的方法来测量，诸如，例如酶联免疫吸附测定(ELISA)。脉冲肽的浓度可以如本文关于本申请的其他方面所描述的。
替选地或者额外地，将表达TCR的T细胞在与(a)抗原阴性、用突变的p53肽脉冲的适用的HLA分子阳性靶细胞，或(b)抗原阴性、其中已引入编码突变的p53的核苷酸序列使得所述靶细胞表达突变的p53的适用的HLA分子阳性的靶细胞共培养后，如果表达TCR的分泌IFN-γ的T细胞数量与分泌IFN-γ的阴性对照T细胞数量相比为至少两倍，则TCR可被认为对突变的p53具有“抗原特异性”。肽和阴性对照的浓度可以如本文关于本申请的其他方面所描述的。分泌IFN-γ的细胞的数量可以通过本领域已知的方法来测量，例如酶联免疫斑点(ELISOT)测定。
替选地或者额外地，将表达TCR的T细胞与(a)抗原阴性、用突变p53肽脉冲的适用的HLA分子阳性靶细胞，或者(b)抗原阴性、其中已引入编码突变p53的核苷酸序列使得靶细胞表达突变p53的适用的HLA分子阳性靶细胞共培养，如果其与用相同靶细胞共培养得到的阴性对照T细胞的通过ELISPOT检测到斑点数量相比具有至少两倍的斑点，则TCR可被认为对突变的p53具有“抗原特异性”。肽和阴性对照的浓度可以如本文关于本申请的其他方面所描述的。
替选地或者额外地，如果表达TCR的T细胞在表达突变p53的靶细胞刺激后通过例如流式细胞术测得上调了4-1BB和OX40之一或两者的表达，则可以认为TCR对突变的p53具有“抗原特异性”。
本申请的一方面提供了包含两条多肽(即多肽链)的TCR，诸如TCR的alpha(α)链、TCR的beta(β)链、TCR的gamma(γ)链、TCR的delta(δ)链或其组合。本申请的TCR的多肽可以包含任何氨基酸序列，只要TCR对突变的p53具有抗原特异性。
在本申请的一方面，所述TCR包含两条多肽链，每条多肽链包含可变区，所述可变区包含TCR的互补决定区(CDR)1、CDR2和CDR3。在本申请的一方面，所述TCR包含第一多肽链和第二多肽链，所述第一多肽链包含α链CDR1(CDR1α)、α链CDR2(CDR2α)和α链CDR3(CDR3α)，所述第二多肽链包含β链CDR1(CDR1β)、β链CDR2(CDR2β)和β链CDR3(CDR3β)。在本申请的一方面，所述TCR包含以下氨基酸序列：(1)SEQ ID NO:2-7(4316-D TCR)的全部；(2)SEQ IDNO:17-22(4141 IVS TCR)的全部；(3)SEQ ID NO:32-37(4304 TCR-2)的全部；(4)SEQ IDNO:47-52(4304 TCR-4)的全部；或(5)SEQ ID NO:62-67(4304 TCR-K)的全部。本段中前述五组氨基酸序列中的每一个阐述了对突变的人p53具有抗原特异性的五种不同TCR中每一种的六个CDR区。每个集合中的六个氨基酸序列分别对应于TCR的CDR1α、CDR2α、CDR3α、CDR1β、CDR2β和CDR3β。
所述TCR可包含以下任意一项或多项的氨基酸序列：SEQ ID NO:2-7、17-22、32-37、47-52和62-67。在本申请的一方面，所述TCR包含对人p53C135Y、人p53R175H或人p53M237I氨基酸序列具有抗原特异性的经分离的或经纯化的TCR，其中所述TCR包含以下氨基酸序列:(1)SEQ ID NO:2-4的全部；(2)SEQ ID NO:5-7的全部；(3)SEQ ID NO:2-7的全部；(4)SEQID NO:17-19的全部；(5)SEQ ID NO:20-22的全部；(6)SEQ ID NO:17-22的全部；(7)SEQ IDNO:32-34的全部；(8)SEQ ID NO:35-37的全部；(9)SEQ ID NO:32-37的全部；(10)SEQ IDNO:47-49的全部；(11)SEQ ID NO:50-52的全部；(12)SEQ ID NO:47-52的全部；(13)SEQ IDNO:62-64的全部；(14)SEQ ID NO:65-67的全部；或(15)SEQ ID NO:62-67的全部。
在本申请的一方面，所述TCR包含α链可变区氨基酸序列和β链可变区氨基酸序列，它们一起包含上述CDR组集合中的一个组。就此而言，所述TCR可包含以下氨基酸序列：(1)SEQ ID NO:8和9两者；(2)SEQ ID NO:10和11两者；(3)SEQ ID NO:23和24两者；(4)SEQ IDNO:25和26两者；(5)SEQ ID NO:38和39两者；(6)SEQ ID NO:40和41两者；(7)SEQ ID NO:53和54两者；(8)SEQ ID NO:55和56两者；(9)SEQ ID NO:68和69两者；(10)SEQ ID NO:70和71两者。本段中前述氨基酸序列集合中的每一个阐述了对突变的人p53具有抗原特异性的五种不同TCR中每一种的两个可变区。每个集合中的两个氨基酸序列分别对应于TCR的α链可变区和β链可变区。
所述TCR可以例如包含SEQ ID NO:8、9、10、11、23、24、25、26、38、39、40、41、53、54、55、56、68、69、70和71中任一个或多个的氨基酸序列。在本申请的一方面，所述TCR包含以下氨基酸序列:(1)SEQ ID NO:8；(2)SEQ ID NO:9；(3)SEQ ID NO:8和9两者；(4)SEQ ID NO:10；(5)SEQ ID NO:11；(6)SEQ ID NO:10和11两者；(7)SEQ ID NO:23；(8)SEQ ID NO:24；(9)SEQ ID NO:23和24两者；(10)SEQ ID NO:25；(11)SEQ ID NO:26；(12)SEQ ID NO:25和26两者；(13)SEQ ID NO:38；(14)SEQ ID NO:39；(15)SEQ ID NO:38和39两者；(16)SEQ IDNO:40；(17)SEQ ID NO:41；(18)SEQ ID NO:40和41两者；(19)SEQ ID NO:53；(20)SEQ IDNO:54；(21)SEQ ID NO:53和54两者；(22)SEQ ID NO:55；(23)SEQ ID NO:56；(24)SEQ IDNO:55和56两者；(25)SEQ ID NO:68；(26)SEQ ID NO:69；(27)SEQ ID NO:68和69两者；(28)SEQ ID NO:70；(29)SEQ ID NO:71；(30)SEQ ID NO:70和71两者。
本申请的TCR还可包含恒定区。所述恒定区可以源自任意合适的物种，例如人或小鼠。在本申请的一方面，所述TCR还包含鼠恒定区。如本文所用，术语“小鼠”或“人”当指本文描述的TCR或TCR的任何组分时(例如，互补决定区(CDR)、可变区、恒定区、α链和/或β链)，是指分别源自小鼠或人类的TCR(或其组分)，即源自或为，曾由小鼠T细胞或人类T细胞分别表达的TCR(或其组分)。在本申请的一方面，所述TCR可以包含小鼠α链恒定区和小鼠β链恒定区。所述小鼠α链恒定区可以是修饰的或未修饰的。经修饰的小鼠α链恒定区可以是例如半胱氨酸取代的、LVL修饰的、或半胱氨酸取代且LVL修饰的，例如，如美国专利第10,174,098号中所述。所述小鼠β链恒定区可以是修饰的或未修饰的。经修饰的小鼠β链恒定区可以是例如半胱氨酸取代的，例如在美国专利第10,174,098号中所述。在本申请的一方面，所述TCR包含半胱氨酸取代、LVL修饰的小鼠α链恒定区，所述小鼠α链恒定区包含SEQ ID NO:77或78的氨基酸序列。在本申请的一方面，所述TCR包含半胱氨酸取代的小鼠β链恒定区，所述小鼠β链恒定区包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列。
在本申请的一方面，本申请的TCR可包含TCR的α链和TCR的β链。所述TCR的α链可以包含α链可变区和α链恒定区。这种类型的α链可以与TCR的任何β链配对。所述β链可以包含β链可变区和β链恒定区。
在一些方面，本文公开的任何α链和/或β链的氨基酸序列进一步包含在C末端的氨基酸序列RAKR(SEQ ID NO:95)。
在本申请的一方面，所述TCR可以包含以下氨基酸序列:(1)SEQ ID NO:12和13两者；(2)SEQ ID NO:14和15两者；(3)SEQ ID NO:27和28两者；(4)SEQ ID NO:29和30两者；(5)SEQ ID NO:42和43两者；(6)SEQ ID NO:44和45两者；(7)SEQ ID NO:57和58两者；(8)SEQ ID NO:59和60两者；(9)SEQ ID NO:72和73两者；(10)SEQ ID NO:74和75两者。本段中前述氨基酸序列集合中的每一个阐述了对突变的人p53具有抗原特异性的五种不同TCR中每一种的α链和β链。每个集合中的两个氨基酸序列分别对应于TCR的α链和β链。
所述TCR可包含氨基酸序列SEQ ID NO:12、13、14、15、27、28、29、30、42、43、44、45、57、58、59、60、72、73、74和75中的任一个或更多个。在本申请的一方面，所述TCR包含氨基酸序列:(1)SEQ ID NO:12；(2)SEQ ID NO:13；(3)SEQ ID NO:12和13两者；(4)SEQ ID NO:14；(5)SEQ ID NO:15；(6)SEQ ID NO:14和15两者；(7)SEQ ID NO:27；(8)SEQ ID NO:28；(9)SEQ ID NO:27和28两者；(10)SEQ ID NO:29；(11)SEQ ID NO:30；(12)SEQ ID NO:29和30两者；(13)SEQ ID NO:42；(14)SEQ ID NO:43；(15)SEQ ID NO:42和43两者；(16)SEQ ID NO:44；(17)SEQ ID NO:45；(18)SEQ ID NO:44和45两者；(19)SEQ ID NO:57；(20)SEQ ID NO:58；(21)SEQ ID NO:57和58两者；(22)SEQ ID NO:59；(23)SEQ ID NO:60；(24)SEQ ID NO:59和60两者；(25)SEQ ID NO:72；(26)SEQ ID NO:73；(27)SEQ ID NO:72和73两者；(28)SEQID NO:74；(29)SEQ ID NO:75；(30)SEQ ID NO:74和75两者。
本申请的范围包括本文所述的本申请的TCR的功能性变体。本文所用的术语“功能性变体”是指与亲本TCR、多肽或蛋白质具有实质或显著序列同一性或相似性的TCR、多肽或蛋白质，该功能性变体保留了(变体来自其的)TCR、多肽或蛋白质的生物活性。功能性变体涵盖例如本文所述的TCR、多肽或蛋白质(亲本TCR、多肽或蛋白质)的那些变体，其保留特异性结合突变p53的能力，其中亲本TCR对所述突变p53具有抗原特异性或亲本多肽或蛋白质以与亲本TCR、多肽或蛋白质类似的程度、相同的程度或更高的程度与所述突变p53特异性结合。就亲本TCR、多肽或蛋白质而言，所述功能性变体可以例如分别与所述亲本TCR、多肽或蛋白质具有至少约30％、至少约50％、至少约75％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或更高的氨基酸序列同一性。所述功能性变体可以例如包含具有至少一个保守氨基酸取代的亲本TCR、多肽或蛋白质的氨基酸序列。保守氨基酸取代是本领域已知的，并且包括其中具有某些物理和/或化学性质的一个氨基酸被交换为具有相同化学或物理性质的另一种氨基酸的氨基酸取代。例如，保守氨基酸取代可以是酸性氨基酸取代另一酸性氨基酸(例如，Asp或Glu)、具有非极性侧链的氨基酸取代另一具有非极性侧链的氨基酸(例如，Ala、Gly、Val、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Trp、Val等)、碱性氨基酸取代另一碱性氨基酸(Lys、Arg等)、具有极性侧链的氨基酸取代另一具有极性侧链的氨基酸(Asn、Cys、Gln、Ser、Thr、Tyr等)等。
替选地或额外地，所述功能性变体可包含具有至少一个非保守氨基酸取代的亲本TCR、多肽或蛋白质的氨基酸序列。在这种情况下，优选非保守氨基酸取代不干扰或抑制功能性变体的生物活性。优选地，所述非保守氨基酸取代增强功能性变体的生物活性，使得功能性变体的生物活性与亲本TCR、多肽或蛋白质相比有所增加。
所述TCR、多肽或蛋白质可以基本上由指定的氨基酸序列或本文描述的序列组成，使得所述TCR、多肽或蛋白质的其他组分，例如其他氨基酸，不会实质上改变所述TCR、多肽或蛋白质的生物活性。
本申请还提供了包含本文所述的任何TCR的功能性部分的多肽。本文所用的术语“多肽”包括寡肽并且指通过一个或多个肽键连接的单链氨基酸。
对于本申请的多肽，所述功能性部分可以是包含其所属的TCR的连续氨基酸的任何部分，前提是该功能性部分特异性结合突变的p53。术语“功能性部分”当用于提及TCR时，指本申请的TCR的任何部分或片段，该部分或片段保留其源自的TCR(亲本TCR)的生物活性。功能性部分涵盖例如TCR的那些部分，其保留特异性结合突变p53的能力(例如，以适用的HLA分子依赖性方式)，或以与亲代TCR相似、相同或更高的程度检测、治疗或预防癌症的能力。相对于亲本TCR而言，所述功能性部分可包含例如约10％、约25％、约30％、约50％、约70％、约80％、约90％、约95％或更多的亲本TCR。
所述功能性部分可以在该部分的氨基或羧基末端或两个末端包含额外的氨基酸，这些额外的氨基酸在亲本TCR的氨基酸序列中未发现。理想地，额外的氨基酸不干扰所述功能性部分的生物学功能，例如特异性结合突变的p53；和/或具有检测癌症、治疗或预防癌症等的能力。更理想地，与亲本TCR的生物活性相比，额外的氨基酸增强了生物活性。
所述多肽可以包含本申请TCR的α链和β链之一或两者的功能性部分，诸如包含本申请TCR的α链和/或β链的可变区的CDR1、CDR2和CDR3中的一个或多个的功能性部分。在本申请的一方面，所述多肽可以包含以下氨基酸序列：(1)SEQ ID NO:2-7的全部；(2)SEQ IDNO:17-22的全部；(3)SEQ ID NO:32-37的全部；(4)SEQ ID NO:47-52的全部；或(5)SEQ IDNO:62-67的全部。所述多肽可包含以下任意一个或多个氨基酸序列:SEQ ID NO:2-7、17-22、32-37、47-52和62-67。在本申请的一方面，所述多肽包含以下氨基酸序列:(1)SEQ IDNO:2-4的全部；(2)SEQ ID NO:5-7的全部；(3)SEQ ID NO:2-7全部；(4)SEQ ID NO:17-19的全部；(5)SEQ ID NO:20-22的全部；(6)SEQ ID NO:17-22的全部；(7)SEQ ID NO:32-34的全部；(8)SEQ ID NO:35-37的全部；(9)SEQ ID NO:32-37的全部；(10)SEQ ID NO:47-49的全部；(11)SEQ ID NO:50-52的全部；(12)SEQ ID NO:47-52的全部；(13)SEQ ID NO:62-64的全部；(14)SEQ ID NO:65-67的全部；或(15)SEQ ID NO:62-67的全部。
在本申请的一方面，本申请的多肽可以包含，例如，本申请的TCR的可变区，其包含上述CDR区的组合。就此而言，所述多肽可包含例如以下氨基酸序列:(1)SEQ ID NO:8和9两者；(2)SEQ ID NO:10和11两者；(3)SEQ ID NO:23和24两者；(4)SEQ ID NO:25和26两者；(5)SEQ ID NO:38和39两者；(6)SEQ ID NO:40和41两者；(7)SEQ ID NO:53和54两者；(8)SEQ ID NO:55和56两者；(9)SEQ ID NO:68和69两者；(10)SEQ ID NO:70和71两者。所述多肽可以例如包含氨基酸序列SEQ ID NO:8、9、10、11、23、24、25、26、38、39、40、41、53、54、55、56、68、69、70和71中的任一个或多个。在本申请的一方面，所述多肽包含以下氨基酸序列:(1)SEQ ID NO:8；(2)SEQ ID NO:9；(3)SEQ ID NO:8和9两者；(4)SEQ ID NO:10；(5)SEQ IDNO:11；(6)SEQ ID NO:10和11两者；(7)SEQ ID NO:23；(8)SEQ ID NO:24；(9)SEQ ID NO:23和24两者；(10)SEQ ID NO:25；(11)SEQ ID NO:26；(12)SEQ ID NO:25和26两者；(13)SEQID NO:38；(14)SEQ ID NO:39；(15)SEQ ID NO:38和39两者；(16)SEQ ID NO:40；(17)SEQID NO:41；(18)SEQ ID NO:40和41两者；(19)SEQ ID NO:53；(20)SEQ ID NO:54；(21)SEQID NO:53和54两者；(22)SEQ ID NO:55；(23)SEQ ID NO:56；(24)SEQ ID NO:55和56两者；(25)SEQ ID NO:68；(26)SEQ ID NO:69；(27)SEQ ID NO:68和69两者；(28)SEQ ID NO:70；(29)SEQ ID NO:71；(30)SEQ ID NO:70和71两者。
在本申请的一方面，本申请的多肽还可包含上述本申请的TCR的恒定区。在这一点而言，所述多肽可包含例如(i)SEQ ID NO:77-79之一、或(ii)SEQ ID NO:79以及SEQ IDNO:77和78之一的氨基酸序列。
在本申请的一方面，本申请的多肽可以包含本申请的TCR的α链和β链。就这一点而言，所述多肽可包含例如以下氨基酸序列:(1)SEQ ID NO:12和13两者；(2)SEQ ID NO:14和15两者；(3)SEQ ID NO:27和28两者；(4)SEQ ID NO:29和30两者；(5)SEQ ID NO:42和43两者；(6)SEQ ID NO:44和45两者；(7)SEQ ID NO:57和58两者；(8)SEQ ID NO:59和60两者；(9)SEQ ID NO:72和73两者；(10)SEQ ID NO:74和75两者。所述多肽可包含氨基酸序列SEQID NO:12、13、14、15、27、28、29、30、42、43、44、45、57、58、59、60、72、73、74和75中的任一个或多个。在本申请的一方面，所述多肽包含以下氨基酸序列:(1)SEQ ID NO:12；(2)SEQ IDNO:13；(3)SEQ ID NO:12和13两者；(4)SEQ ID NO:14；(5)SEQ ID NO:15；(6)SEQ ID NO:14和15两者；(7)SEQ ID NO:27；(8)SEQ ID NO:28；(9)SEQ ID NO:27和28两者；(10)SEQ IDNO:29；(11)SEQ ID NO:30；(12)SEQ ID NO:29和30两者；(13)SEQ ID NO:42；(14)SEQ IDNO:43；(15)SEQ ID NO:42和43两者；(16)SEQ ID NO:44；(17)SEQ ID NO:45；(18)SEQ IDNO:44和45两者；(19)SEQ ID NO:57；(20)SEQ ID NO:58；(21)SEQ ID NO:57和58两者；(22)SEQ ID NO:59；(23)SEQ ID NO:60；(24)SEQ ID NO:59和60两者；(25)SEQ ID NO:72；(26)SEQ ID NO:73；(27)SEQ ID NO:72和73两者；(28)SEQ ID NO:74；(29)SEQ ID NO:75；(30)SEQ ID NO:74和75两者。
本申请的一方面进一步提供了包含至少一种本文所述多肽的蛋白质。“蛋白质”是指包含一条或多条多肽链的分子。在一方面，本申请的蛋白质可以包含:第一和第二多肽链，其中:(1)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:2-4全部的氨基酸序列；(2)第二多肽链包含SEQ ID NO:5-7全部的氨基酸序列；(3)第一多肽链包含SEQ ID NO:2-4全部的氨基酸序列，并且第二多肽链包含SEQ ID NO:5-7全部的氨基酸序列；(4)第一多肽链包含SEQ ID NO:17-19全部的氨基酸序列；(5)第二多肽链包含SEQ ID NO:20-22全部的氨基酸序列；(6)第一多肽链包含SEQ ID NO:17-19全部的氨基酸序列，并且第二多肽链包含SEQ ID NO:20-22全部的氨基酸序列；(7)第一多肽链包含SEQ ID NO:32-34全部的氨基酸序列；(8)第二多肽链包含SEQ ID NO:35-37全部的氨基酸序列；(9)第一多肽链包含SEQ ID NO:32-34全部的氨基酸序列，并且第二多肽链包含SEQ ID NO:35-37全部的氨基酸序列；(10)第一多肽链包含SEQ ID NO:47-49全部的氨基酸序列；(11)第二多肽链包含SEQ ID NO:50-52全部的氨基酸序列；(12)第一多肽链包含SEQ ID NO:47-49全部的氨基酸序列，并且第二多肽链包含SEQ ID NO:50-52全部的氨基酸序列；(13)第一多肽链包含SEQ ID NO:62-64全部的氨基酸序列；(14)第二多肽链包含SEQ ID NO:65-67全部的氨基酸序列；或者(15)第一多肽链包含SEQ ID NO:62-64全部的氨基酸序列，并且第二多肽链包含SEQ ID NO:65-67全部的氨基酸序列。
在本申请的一方面，所述蛋白质包含第一和第二多肽链，其中:(1)第一多肽链包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；(2)第二多肽链包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；(3)第一多肽链包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列并且第二多肽链包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；(4)第一多肽链包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列；(5)第二多肽链包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；(6)第一多肽链包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列并且第二多肽链包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；(7)第一多肽链包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；(8)第二多肽链包含SEQID NO:24的氨基酸序列；(9)第一多肽链包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列并且第二多肽链包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列；(10)第一多肽链包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；(11)第二多肽链包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列；(12)第一多肽链包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列并且第二多肽链包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列；(13)第一多肽链包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；(14)第二多肽链包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列；(15)第一多肽链包含SEQID NO:38的氨基酸序列并且第二多肽链包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列；(16)第一多肽链包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列；(17)第二多肽链包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；(18)第一多肽链包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列并且第二多肽链包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；(19)第一多肽链包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列；(20)第二多肽链包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列；(21)第一多肽链包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列并且第二多肽链包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列；(22)第一多肽链包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列；(23)第二多肽链包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列；(24)第一多肽链包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列并且第二多肽链包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列；(25)第一多肽链包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列；(26)第二多肽链包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列；(27)第一多肽链包含SEQ IDNO:68的氨基酸序列并且第二多肽链包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列；(28)第一多肽链包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列；(29)第二多肽链包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列；(30)第一多肽链包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列并且第二多肽链包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列。
在本申请的一方面，所述蛋白质包括包含第一和第二多肽链的蛋白质，其中：(1)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；(2)第二多肽链包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；(3)第一多肽链包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列并且第二多肽链包含SEQ IDNO:13的氨基酸序列；(4)第一多肽链包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；(5)第二多肽链包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列；(6)第一多肽链包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列并且第二多肽链包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列；(7)第一多肽链包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列；(8)第二多肽链包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；(9)第一多肽链包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列并且第二多肽链包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；(10)第一多肽链包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列；(11)第二多肽链包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列；(12)第一多肽链包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列并且第二多肽链包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列；(13)第一多肽链包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列；(14)第二多肽链包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列；(15)第一多肽链包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列并且第二多肽链包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列；(16)第一多肽链包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列；(17)第二多肽链包含SEQ IDNO:45的氨基酸序列；(18)第一多肽链包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列并且第二多肽链包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；(19)第一多肽链包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列；(20)第二多肽链包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(21)第一多肽链包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列并且第二多肽链包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(22)第一多肽链包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列；(23)第二多肽链包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；(24)第一多肽链包含SEQID NO:59的氨基酸序列并且第二多肽链包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；(25)第一多肽链包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列；(26)第二多肽链包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列；(27)第一多肽链包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列并且第二多肽链包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列；(28)第一多肽链包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列；(29)第二多肽链包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列；(30)第一多肽链包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列并且第二多肽链包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列。
本申请的蛋白质可以是TCR。替选地，如果所述蛋白质的第一和/或第二多肽链还包含其他氨基酸序列，例如编码免疫球蛋白或其部分的氨基酸序列，则本申请的蛋白质可以是融合蛋白。在这方面，本申请的一方面还提供了融合蛋白，其包含至少一种本文所述的本申请的多肽以及至少一种其他多肽。其他多肽可以作为融合蛋白的单独多肽存在，或者可以作为与本文描述的本申请多肽之一框内(串联)表达的多肽存在。其他多肽可编码任何肽或蛋白质分子或其部分，包括但不限于免疫球蛋白、CD3、CD4、CD8、MHC分子、CD1分子，例如CD1a、CD1b、CD1c、CD1d等。
所述融合蛋白可以包含本申请的多肽的一个或多个拷贝和/或其他多肽的一个或多个拷贝。例如，所述融合蛋白可包含1、2、3、4、5个或更多个拷贝的本申请多肽和/或其他多肽。制备融合蛋白的合适方法是本领域已知的，并且包括例如重组方法。
在本申请的一些方面，本申请的TCR、多肽和蛋白质可以表达为包含连接α链和β链的接头肽的单一蛋白质。在这点上，本申请的TCR、多肽和蛋白质还可以包含接头肽。所述接头肽可以有利地促进重组TCR、多肽和/或蛋白质在宿主细胞中的表达。所述接头肽可以包含任意合适的氨基酸序列。例如，所述接头肽可以包含氨基酸序列RAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGP(SEQ ID NO:80)。当包含所述接头肽的构建体被宿主细胞表达时，所述接头肽可被切割，产生分离的α链和β链。在本申请的一方面，所述TCR、多肽或蛋白质可包含氨基酸序列，所述氨基酸序列包含全长α链、全长β链和位于α和β链之间的接头肽。
在一些方面，本文公开的TCR、多肽或蛋白质包含如本文公开的α链和/或β链，其包含信号肽。在一些方面，本文公开的任何α链和/或β链的信号肽的序列包含取代位置2处的野生型残基的亮氨酸、赖氨酸、丙氨酸或组氨酸残基。
在一些方面，本文公开的TCR、多肽或蛋白质包含如本文公开的缺乏信号肽的α链和/或β链的成熟形式。
本申请的蛋白质可以是重组抗体或其抗原结合部分，其包含至少一种本文所述的本申请的多肽。如本文所用，“重组抗体”是指包含至少一种本申请的多肽和抗体的多肽链或其抗原结合部分的重组的(例如基因工程化的)蛋白质。抗体或其抗原结合部分的多肽可以是重链、轻链、重链或轻链的可变区或恒定区、单链可变片段(scFv)、或Fc、Fab或抗体的F(ab)2'片段等。抗体的多肽链或其抗原结合部分可以作为重组抗体的单独的多肽存在。替选地，抗体的多肽链或其抗原结合部分可以作为下述多肽存在：其与本申请的多肽框内(串联)表达。抗体或其抗原结合部分的多肽可以是任何抗体或任何抗体片段的多肽，包括本文所述的任何抗体和抗体片段。
本申请的TCR、多肽和蛋白质可以是任何长度，即，可以包含任何数量的氨基酸，前提是TCR、多肽或蛋白质保留其生物活性，例如特异性结合突变的p53、检测哺乳动物的癌症、或治疗或预防哺乳动物的癌症等的能力。例如，所述多肽的长度可以在约50至约5000个氨基酸的范围内，诸如50、70、75、100、125、150、175、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或更多个氨基酸。在这方面，本申请的多肽还包括寡肽。
本申请的TCR、多肽和蛋白质可以包含代替一种或多种天然存在的氨基酸的合成氨基酸。此类合成氨基酸是本领域已知的，并且包括例如氨基环己烷羧酸、正亮氨酸、a-氨基正癸酸、高丝氨酸、S-乙酰氨基甲基-半胱氨酸、反式-3-和反式-4-羟基脯氨酸、4-氨基苯丙氨酸、4-硝基苯丙氨酸、4-氯苯丙氨酸、4-羧基苯丙氨酸、b-苯基丝氨酸、b-羟基苯丙氨酸、苯基甘氨酸、a-萘基丙氨酸、环己基丙氨酸、环己基甘氨酸、二氢吲哚-2-羧酸、1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸、氨基丙二酸、氨基丙二酸单酰胺、N'-苄基-N'-甲基-赖氨酸、N'，N'-二苄基-赖氨酸、6-羟基赖氨酸、鸟氨酸、α氨基环戊烷羧酸、α-氨基环己烷羧酸、α-氨基环庚烷羧酸、α-(2-氨基-2-降莰烷)-羧酸、α,γ-二氨基丁酸、α,β-二氨基丙酸、高苯丙氨酸和α氨叔丁基甘氨酸。
本申请的TCR、多肽和蛋白质可以被例如糖基化、酰胺化、羧化、磷酸化、酯化、N-酰化、经由例如二硫桥环化、或转化成酸加成盐和/或任选地为二聚化的或聚合的或共轭的。
本申请的TCR、多肽和/或蛋白质可以通过本领域已知的方法获得，例如从头合成。此外，可以使用本文描述的核酸使用标准重组方法重组产生多肽和蛋白质。参见例如，Green and Sambrook,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,4th ed.,Cold SpringHarborPress,Cold Spring Harbor,NY(2012)。替选地，本文所述的TCR、多肽和/或蛋白质可由多个商业实体中的任一个合成。在这方面，本申请的TCR、多肽和蛋白质可以是合成的、重组的、分离的和/或经纯化的。
本申请的一方面提供了包含编码本文所述的任何TCR、多肽或蛋白质的核苷酸序列的核酸。本文所用的“核酸”包括“多核苷酸”、“寡核苷酸”和“核酸分子”，并且通常是指DNA或RNA的聚合物，其可以是单链或双链的，其可以含有天然核酸、非天然或改变的核苷酸，并且其可以含有天然的、非天然的或改变的核苷酸间键，例如磷酸酰胺键或硫代磷酸键，而非在未修饰寡核苷酸的核苷酸之间发现的磷酸二酯。在一方面，所述核酸包含互补DNA(cDNA)。通常优选所述核酸不包含任何插入、缺失、倒位和/或取代。然而，在一些情况下，如本文所讨论的，所述核酸包含一个或多个插入、缺失、倒位和/或取代可能是合适的。
本申请的一方面提供了经分离的或经纯化的核酸，其从5'至3'包含第一核酸序列和第二核苷酸序列，其中第一和第二核苷酸序列分别编码下述氨基酸序列:SEQ ID NO.8和9；9和8；10和11；11和10；12和13；13和12；14和15；15和14；23和24；24和23；25和26；26和25；27和28；28和27；29和30；30和29；38和39；39和38；40和41；41和40；42和43；43和42；44和45；45和44；53和54；54和53；55和56；56和55；57和58；58和57；59和60；60和59；68和69；69和68；70和71；71和70；72和73；73和72；74和75；或75和74。
在本申请的一方面，所述核酸还包含插入第一和第二核苷酸序列之间的第三核苷酸序列，其中第三核苷酸序列编码可切割的接头肽。例如，可切割接头肽可包含氨基酸序列RAKRSGSGATNFSLLKQAGDVENPGP(SEQ ID NO:80)。在本申请的一方面，核酸编码选自下组的氨基酸序列:SEQ ID NO:16、31、46、61和76。
优选地，本申请的核酸是重组的。如本文所用，术语“重组”是指：(i)通过将天然或合成的核酸片段连接至可在活细胞中复制的核酸分子而在活细胞外构建的分子，或(ii)由复制上面(i)中描述的那些而产生的分子。出于本文的目的，所述复制可以是体外复制或体内复制。
可以使用本领域已知的方法基于化学合成和/或酶连接反应来构建核酸。参见例如，Green and Sambrook et al.,supra。例如，可以使用天然存在的核苷酸或设计用于增加分子的生物稳定性或增加杂交时形成的双链体的物理稳定性的各种修饰的核苷酸(例如，硫代磷酸酯衍生物和吖啶取代的核苷酸)来化学合成核酸。可用于产生核酸的修饰核苷酸的实例包括但不限于5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、4-乙酰基胞嘧啶、5-(羧基羟甲基)尿嘧啶、5-羧甲基氨基甲基-2-硫尿苷、5-羧甲基氨基甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、β-D-半乳糖基鸟苷、肌苷、N6-异戊烯基腺嘌呤、1-甲基鸟嘌呤、1-甲基肌苷、2,2-二甲基鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-取代腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲氨基甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨基甲基-2-硫尿嘧啶、β-D-甘露糖基奎因、5'-甲氧基羧甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N6-异戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-羟基乙酸(v)、wybutoxosine、假尿嘧啶、奎奥辛、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-羟基乙酸甲酯、3-(3-氨基-3-N-2-羧丙基)尿嘧啶、和2,6-二氨基嘌呤。替选地，本申请的一种或多种核酸可以由多个商业实体中的任一个合成。
在本申请的一方面，所述核酸包含编码本文所述的任何TCR、多肽或蛋白质的密码子优化的核苷酸序列。不受任何特定理论或机制的束缚，据信核苷酸序列的密码子优化增加了mRNA转录物的翻译效率。核苷酸序列的密码子优化可能涉及用编码相同氨基酸但可以由细胞内更容易获得的由tRNA翻译的密码子取代天然密码子，从而提高翻译效率。核苷酸序列的优化还可以减少干扰翻译的二级mRNA结构，从而提高翻译效率。
本申请的一个方面还提供了核酸，其包含与本文所述的任何核酸的核苷酸序列互补的核苷酸序列、或在严格条件下与本文所述的任何核酸的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。
在严格条件下杂交的核苷酸序列优选在高严格条件下杂交。“高严格条件”是指核苷酸序列以可检测地强于非特异性杂交的量与靶序列(本文描述的任何核酸的核苷酸序列)特异性杂交。高严格性条件包括将具有精确互补序列的多核苷酸、或仅包含少数分散错配的多核苷酸与恰好具有与核苷酸序列匹配的几个小区域(例如，3-10个碱基)的随机序列区分开来的条件。如此小的互补区域比14-17个或更多碱基的全长互补区域更容易解链，并且高严格杂交使它们易于区分。相对高的严格条件将包括例如低盐和/或高温条件，例如在约50-70℃的温度下由约0.02-0.1MNaCl或等同物提供。这样的高严格条件容忍很少任意错配，如果在核苷酸序列与模板或靶链之间有的话，并且特别适合于检测任何本申请的TCR的表达。一般认为，通过添加更多量的甲酰胺可以使条件变得更加严格。
本申请的一方面还提供了包含与本文所述的任何核酸具有至少约70％或更多，例如约80％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％同一性的核苷酸序列的核酸。在这方面，所述核酸可以基本上由本文描述的任何核苷酸序列组成。
本申请的核酸可以掺入重组表达载体中。在这方面，本申请的一方面提供了包含本申请的任何核酸的重组表达载体。在本申请的一方面，所述重组表达载体包含编码α链、β链和接头肽的核苷酸序列。
出于本文的目的，术语“重组表达载体”意指当构建体包含编码mRNA、蛋白质、多肽或肽的核苷酸序列，并且所述载体在足以使所述mRNA、蛋白质、肽或肽在所述细胞内表达的条件下与所述细胞接触时，允许宿主细胞表达所述mRNA、蛋白质、多肽或肽的遗传修饰的寡核苷酸或多核苷酸构建体。本申请的载体整体上不是天然存在的。然而，所述载体的部分可以是天然存在的。本申请的重组表达载体可以包含任何类型的核苷酸，包括但不限于DNA和RNA，其可以是单链或双链的、合成的或部分从天然来源获得的，并且其可以含有天然的、非天然或改变的核苷酸。所述重组表达载体可包含天然存在的、非天然存在的核苷酸间键、或两种类型的键。优选地，所述非天然存在的或改变的核苷酸或核苷酸间的键不阻碍所述载体的转录或复制。
本申请的重组表达载体可以是任意合适的重组表达载体，并且可以用于转化或转染任意合适的宿主细胞。合适的载体包括设计用于增殖和扩增或表达或两者的那些载体，诸如质粒和病毒。所述载体可以选自下组:转座子/转座酶系列、pUC系列(Fermentas LifeSciences)、pBluescript系列(Stratagene，LaJolla，CA)、pET系列(Novagen，Madison，WI)、pGEX系列(PharmaciaBiotech,Uppsala,Sweden)和pEX系列(Clontech,PaloAlto,CA)。也可以使用噬菌体载体，例如λGT10、λGT11、λZapII(Stratagene)、λEMBL4和λNM1149。植物表达载体的实例包括pBI01、pBI101.2、pBI101.3、pBI121和pBIN19(Clontech)。动物表达载体的实例包括pEUK-Cl、pMAM和pMAMneo(Clontech)。优选地，重组表达载体是转座子或病毒载体，例如慢病毒载体或逆转录病毒载体。
本申请的重组表达载体可以使用例如上文Green和Sambrook等人中描述的标准重组DNA技术来制备。可以制备环状或线性表达载体的构建体以包含在原核或真核宿主细胞中起作用的复制系统。复制系统可以衍生自例如ColE1、2μ质粒、λ、SV40、牛乳头瘤病毒等。
期望的是，所述重组表达载体包含调节序列，例如转录和翻译起始密码子和终止密码子，其对于载体要引入其中的宿主细胞类型(例如，细菌、真菌、植物或动物)是特异性的，酌情考虑所述载体是基于DNA还是基于RNA的。
所述重组表达载体可以包括一种或多种标记基因，其允许选择转化或转染的宿主细胞。标记基因包括杀生体抗性，例如对抗生素、重金属等的抗性、在营养缺陷型宿主细胞中的互补以提供原营养等。用于本申请的表达载体的合适的标记基因包括例如新霉素/G418抗性基因、潮霉素抗性基因、组氨醇抗性基因、四环素抗性基因和氨苄青霉素抗性基因。
所述重组表达载体可包含天然或非天然启动子，其可操作地连接至编码TCR、多肽或蛋白质的核苷酸序列，或连接至与编码TCR、多肽或蛋白质的核苷酸序列互补或杂交的核苷酸序列。启动子的选择，例如强启动子、弱启动子、诱导型启动子、组织特异性启动子和发育特异性启动子，在本领域技术人员的常规手段范围内。类似地，核苷酸序列与启动子的组合也在本领域技术人员的常规手段范围内。所述启动子可以是非病毒启动子例如人延伸因子-1α启动子，或病毒启动子例如巨细胞病毒(CMV)启动子、SV40启动子、RSV启动子和鼠干细胞病毒的长末端重复中发现的启动子。
本申请的重组表达载体可被设计用于瞬时表达、稳定表达或两者。此外，所述重组表达载体可被制备用于组成型表达或诱导型表达。
此外，可以使所述重组表达载体包含自杀基因。如本文所用，术语“自杀基因”是指表达自杀基因而导致细胞死亡的基因。所述自杀基因可以是这样的基因，其赋予表达该基因的细胞对试剂例如药物的敏感性，并且当细胞与该试剂接触或暴露于该试剂时引起细胞死亡。自杀基因是本领域已知的并且包括例如单纯疱疹病毒(HSV)胸苷激酶(TK)基因、胞嘧啶脱氨酶、嘌呤核苷磷酸化酶和硝基还原酶。
本申请的另一方面提供了由本文关于本申请的其他方面描述的任何核酸或载体编码的经分离的或经纯化的TCR、多肽或蛋白质。
本申请的又一方面提供了经分离的或经纯化的TCR、多肽或蛋白质，其由本文关于本申请的其他方面描述的任意核酸或载体的表达产生。
本申请的另一方面进一步提供了包含本文所述的任意核酸或任意重组表达载体的宿主细胞。如本文所用，术语“宿主细胞”是指可以含有本申请的重组表达载体的任何类型的细胞。所述宿主细胞可以是真核细胞，例如植物、动物、真菌或藻类，或者可以是原核细胞，例如细菌或原生动物。所述宿主细胞可以是培养的细胞或原代细胞，即直接从生物体例如人分离的细胞。所述宿主细胞可以是贴壁细胞或悬浮细胞，即在悬浮液中生长的细胞。合适的宿主细胞是本领域已知的并且包括例如DH5α大肠杆菌细胞、中国仓鼠卵巢细胞、猴VERO细胞、COS细胞、HEK293细胞等。为了扩增或复制重组表达载体的目的，所述宿主细胞优选是原核细胞，例如DH5α细胞。为了产生重组TCR、多肽或蛋白质的目的，所述宿主细胞优选是哺乳动物细胞。最优选地，所述宿主细胞是人细胞。例如，所述宿主细胞可以是人淋巴细胞。在本申请的一方面，所述宿主细胞选自下组:T细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、恒定自然杀伤T(iNKT)细胞和自然杀伤(NK)细胞。虽然所述宿主细胞可以是任何细胞类型，可以源自任何类型的组织，并且可以处于任何发育阶段，但所述宿主细胞优选是外周血淋巴细胞(PBL)或外周血单核细胞(PBMC)。更优选地，所述宿主细胞是T细胞。
出于本文的目的，所述T细胞可以是任何T细胞，例如培养的T细胞，例如原代T细胞，或来自培养的T细胞系的T细胞，例如Jurkat、SupT1等，或从哺乳动物获得的T细胞。如果是从哺乳动物获得的，所述T细胞可以从多种来源获得，包括但不限于血液、骨髓、淋巴结、胸腺或其他组织或体液。T细胞也可以被富集或纯化。优选地，所述T细胞是人T细胞。所述T细胞可以是任何类型的T细胞并且可以处于任何发育阶段，包括但不限于CD4+/CD8+双阳性T细胞、CD4+辅助T细胞，例如Th1和Th2细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞(例如，细胞毒性T细胞)、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、记忆T细胞(例如，中央记忆T细胞和效应记忆T细胞)、幼稚T细胞等。
本申请的一方面还提供了包含至少一种本文所述的宿主细胞的细胞群。所述细胞群可以是异质群，其包含含有任何所描述的重组表达载体的宿主细胞以及至少一种其他细胞，例如不包含任何重组表达载体的宿主细胞(例如T细胞)，或T细胞以外的细胞，例如B细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、红细胞、肝细胞、内皮细胞、上皮细胞、肌细胞、脑细胞等。替选地，所述细胞群可以是基本上同质的群，其中该群主要包含含有重组表达载体的宿主细胞(例如基本上由其组成)。所述群还可以是细胞的克隆群，其中所述群的所有细胞都是包含重组表达载体的单个宿主细胞的克隆，使得该群的所有细胞包含重组表达载体。在本申请的一方面，所述细胞群是包含宿主细胞的克隆群，所述宿主细胞包含本文所述的重组表达载体。
在本申请的一方面，所述群中的细胞数量可以快速扩增。T细胞数量的扩增可以通过本领域已知的多种方法中的任何一种来完成，如例如美国专利8,034,334、美国专利8,383,099、美国专利申请公开号2012/0244133、Dudley等(J.Immunother.，26:332-42(2003))、和Riddell等(J.Immunol.Methods，128:189-201(1990))中所述。在一方面，T细胞数量的扩增通过用OKT3抗体、IL-2和饲养层PBMC(例如，经照射的同种异体PBMC)培养T细胞来进行。
本申请的一方面提供了产生本文所述的任何TCR、多肽或蛋白质的方法，该方法包括培养本文所述的任何宿主细胞或宿主细胞群，以便产生所述TCR、多肽或蛋白质。
可以分离和/或纯化本申请的TCR、多肽、蛋白质、核酸、重组表达载体和宿主细胞(包括它的群)。本文所用的术语“经分离的”是指已从其自然环境中移出。本文所用的术语“经纯化的”是指纯度增加，其中“纯度”是相对术语，不一定解释为绝对纯度。例如，纯度可以是至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、或可以是约100％。
本申请的TCR、多肽、蛋白质、核酸、重组表达载体和宿主细胞(包括它的群)，所有这些在下文统称为“本申请的TCR材料”，可以配制成组合物，例如药物组合物。在这方面，本申请的一方面提供了药物组合物，其包含本文所述的任何TCR、多肽、蛋白质、核酸、表达载体和宿主细胞(包括它的群)和药学上可接受的载体。含有任何本申请的TCR材料的本申请的药物组合物可包含多于一种本申请TCR材料，例如多肽和核酸，或两种或更多种不同TCR。替选地，所述药物组合物可包含与另一种药学活性剂或药物组合的本申请TCR材料，所述另一种药学活性剂或药物例如为化疗剂，例如天冬酰胺酶、白消安、卡铂、顺铂、柔红霉素、多柔比星、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、甲氨蝶呤、紫杉醇、利妥昔单抗、长春花碱、长春新碱等。
优选地，所述载体是药学上可接受的载体。对于药物组合物，所述载体可以是任何常规用于所考虑的具体的本申请的TCR材料的载体。制备可施用组合物的方法对于本领域技术人员来说是已知的或显而易见的，并且更详细地描述于例如Remington:The ScienceandPractice ofPharmacy，第22版，Pharmaceutical Press(2012)中。优选药学上可接受的载体是在使用条件下不具有有害副作用或毒性的载体。
载体的选择将部分地由特定的本申请的TCR材料、以及用于施用本申请的TCR材料的特定方法决定。因此，本申请的药物组合物有多种合适的制剂。合适的制剂可包括用于肠胃外、皮下、静脉内、肌内、动脉内、鞘内、瘤内或腹膜内施用的任何制剂。可以使用多于一种的途径来施用本申请的TCR材料，并且在某些情况下，特定途径可以提供比另一种途径更直接和更有效的应答。
优选地，本申请的TCR材料通过注射施用，例如静脉内注射。当本申请的TCR材料是表达本申请的TCR的宿主细胞时，用于注射的细胞的药学上可接受的载体可以包括任何等渗载体，例如生理盐水(约0.90％w/v的氯化钠水溶液，约300mOsm/L的氯化钠水溶液，或每升水约9.0克氯化钠)、NORMOSOLR电解质溶液(Abbott，芝加哥，伊利诺伊州)、PLASMA-LYTEA(Baxter，迪尔菲尔德，伊利诺伊州)、约5％葡萄糖水溶液，或林格氏乳酸盐。在一方面，所述药学上可接受的载体补充有人血清白蛋白。
施用的本申请TCR材料的量或剂量(例如，当本申请TCR材料是一个或多个细胞时，细胞的数量)应当足以在合理时间框架内在受试者或动物中实现例如治疗或预防应答。例如，本申请的TCR材料的剂量应当足以在从给药时间算起的约2小时或更长(例如12至24小时或更长)的时间内结合癌抗原(例如突变的p53)或检测、治疗或预防癌症。在某些方面，所述时间可能会更长。所述剂量将由具体的本申请的TCR材料的功效和待治疗的动物(例如，人)的状况以及待治疗的动物(例如，人)的体重来确定。
许多用于确定施用剂量的测定法是本领域已知的。例如，在对一组哺乳动物(其中每一种都被给予不同剂量的T细胞)中的某种哺乳动物施用给定剂量的T细胞后，通过比较靶细胞裂解的程度或所述表达本申请的TCR、多肽或蛋白质的T细胞分泌IFN-γ的程度的测定法可以用于确定给予哺乳动物的起始剂量。施用一定剂量后靶细胞被裂解或IFN-γ被分泌的程度可以通过本领域已知的方法测定。本申请的TCR材料的剂量也将由可能伴随本申请特定的TCR材料的施用的任何不良副作用的存在、性质和程度来确定。通常，主治医师将考虑多种因素，例如年龄、体重、一般健康状况、饮食、性别、待施用的本申请的TCR材料、给药途径以及所治疗癌症的严重程度，决定用于治疗每个个体患者的本申请的TCR材料的剂量。在本申请的TCR材料是细胞群这方面，每次输注施用的细胞数量可以变化，例如从约1×106至约1×1012个细胞或更多。在某些方面，可以施用少于1×106个细胞。
本领域普通技术人员将容易理解，本申请的TCR材料可以以多种方式进行修饰，使得本申请的TCR材料的治疗或预防功效通过修饰而增加。例如，本申请的TCR材料可以直接或通过桥间接地与化疗剂缀合。将化合物与化疗剂缀合的实践是本领域已知的。本领域普通技术人员认识到，本申请的TCR材料上的位点(对于本申请的TCR材料的功能不是必需的)是用于连接桥和/或化疗剂的理想位点，条件是所述桥和/或化疗剂一旦连接到本申请的TCR材料上，不干扰本申请的TCR材料的功能，即结合突变的p53或检测、治疗或预防癌症的能力。
预期本申请的药物组合物、TCR、多肽、蛋白质、核酸、重组表达载体、宿主细胞或细胞群可以用于治疗或预防癌症的方法中。不受特定理论的束缚，据信本申请的TCR特异性结合突变的p53，使得TCR(或相关的本申请的多肽或蛋白质)在由细胞表达时能够介导针对表达突变的p53的靶细胞的免疫应答。在这方面，本申请的一方面提供了治疗或预防哺乳动物中的癌症的方法，包括以在哺乳动物中有效治疗或预防癌症的量向哺乳动物施用以下物质：本文所述的任何药物组合物、TCR、多肽或蛋白质、任何核酸，或包含编码本文所述的任何TCR、多肽、蛋白质的核苷酸序列的重组表达载体，或包含编码本文所述的任何TCR、多肽或蛋白质的重组载体的任何宿主细胞或细胞群。
本申请的一方面提供：本文所述的任何药物组合物、TCR、多肽或蛋白质；包含编码本文所述的任何TCR、多肽、蛋白质的核苷酸序列的任何核酸或重组表达载体；或包含编码本文所述的任何TCR、多肽或蛋白质的重组载体的细胞任何宿主细胞或细胞群，用于治疗或预防哺乳动物中的癌症。
本文使用的术语“治疗”和“预防”以及由此衍生的词语不一定暗示100％或完全治疗或预防。相反，存在本领域普通技术人员认为具有潜在益处或治疗效果的不同程度的治疗或预防。在这方面，本申请的方法可以提供任何量、任何水平的哺乳动物癌症的治疗或预防。此外，由本申请的方法提供的治疗或预防可以包括治疗或预防所治疗或预防的癌症的一种或多种病症或症状。例如，治疗或预防可以包括促进肿瘤的消退。此外，出于本文的目的，“预防”可以涵盖延迟癌症或其症状或病症的发作。替选地或者额外地，“预防”可涵盖预防或延迟癌症或其症状或病症的复发。
还预期本申请的药物组合物、TCR、多肽、蛋白质、核酸、重组表达载体、宿主细胞或细胞群可以用于在哺乳动物中诱导针对癌症的免疫应答的方法。在这方面，本申请的一方面提供了在哺乳动物中诱导针对癌症的免疫应答的方法，包括以有效诱导哺乳动物针对癌症的免疫应答的量向哺乳动物施用本文所述的任何药物组合物、TCR、多肽或蛋白质，或者包含编码本文所述的任何TCR、多肽、蛋白质的核苷酸序列的任何核酸或重组表达载体，或包含编码本文所述的任何TCR、多肽或蛋白质的重组载体的任何宿主细胞或细胞群。
本申请的一方面提供：本文所述的任何药物组合物、TCR、多肽或蛋白质，包含编码本文所述的任何TCR、多肽、蛋白质的核苷酸序列的任何核酸或重组表达载体，或包含编码本文所述的任何TCR、多肽或蛋白质的重组载体的任何宿主细胞或细胞群，用于在哺乳动物中诱导针对癌症的免疫应答。
本申请的一方面还提供了检测哺乳动物中癌症的存在的方法。该方法包括：(i)使包含一种或多种来自哺乳动物的细胞的样品与本文所述的任何本申请的TCR、多肽、蛋白质、核酸、重组表达载体、宿主细胞、细胞群或药物组合物接触从而形成复合物，和(ii)检测该复合物，其中检测到复合物表明该哺乳动物中存在癌症。
就本申请的检测哺乳动物中的癌症的方法而言，细胞样品可以为包含全细胞、其裂解物或全细胞裂解物的级分的样品，例如细胞核或细胞质级分、全蛋白质级分、或核酸级分。
为了本申请的检测方法的目的，所述接触可以在哺乳动物体外或体内进行。优选地，所述接触是在体外进行的。
此外，复合物的检测可以通过本领域已知的多种方式进行。例如，本文所述的本申请的TCR、多肽、蛋白质、核酸、重组表达载体、宿主细胞或细胞群可以使用可检测标签标记，例如使用放射性同位素、荧光团(例如，异硫氰酸荧光素(FITC)、藻红蛋白(PE))、酶(例如碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶)和元素颗粒(例如金颗粒)标记。
为了本申请的方法的目的，在此施用宿主细胞或细胞群，所述细胞可以是哺乳动物同种异体或自体的细胞。优选地，所述细胞是哺乳动物自体的。
就本申请的方法而言，所述癌症可以是任何癌症，包括例如以下癌症中的任一种：急性淋巴细胞癌、急性髓系白血病、肺泡横纹肌肉瘤、骨癌、脑癌、乳腺癌、肛门癌、肛管癌或肛门直肠癌、眼癌、肝内胆管癌、关节癌、颈部癌、胆囊癌或胸膜癌、鼻癌、鼻腔癌或中耳癌、口腔癌、阴道癌、外阴癌、慢性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、宫颈癌、胃肠道类癌、神经胶质瘤、霍奇金淋巴瘤、下咽癌、肾癌、喉癌、肝癌、肺癌、恶性间皮瘤、黑色素瘤、多发性骨髓瘤、鼻咽癌、非霍奇金淋巴瘤、口咽癌、卵巢癌、阴茎癌、胰腺癌、腹膜癌、大网膜癌和肠系膜癌、咽癌、前列腺癌、直肠癌、肾癌、皮肤癌、小肠癌、软组织癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、输尿管癌和膀胱癌。在优选的方面，所述癌症是表达突变的p53的癌症。所述癌症可以表达在位置135、175和237中的一处或多处具有突变的p53，所述位置如SEQ ID NO:1所定义。所述癌症可表达具有以下一种或多种人类p53突变的p53:C135Y、R175H或M237I。在本申请的一方面，所述癌症是上皮癌。在本申请的一方面，所述癌症是胆管癌、黑色素瘤、结肠癌、直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、胶质母细胞瘤、宫颈癌、头颈癌、乳腺癌、胰腺癌或膀胱癌。已知所述癌症包含人p53中的C135Y、R175H或M237I突变。
本申请方法中所指的哺乳动物可以是任何哺乳动物。如本文所用，术语“哺乳动物”是指任何哺乳动物，包括但不限于啮齿目哺乳动物，例如小鼠和仓鼠，以及兔形目哺乳动物，例如兔子。优选地，所述哺乳动物来自食肉目，包括猫科动物(猫)和犬科动物(狗)。更优选地，所述哺乳动物来自偶蹄目，包括牛科动物(奶牛)和猪科动物(猪)，或者属于奇蹄目，包括马科动物(马)。最优选的是，所述哺乳动物属于灵长目、猿目(ceboids)或猴目(Simoids)(猴子)或类人目(anthropoids)(人和猿)。特别优选的哺乳动物是人。
以下实施例进一步说明本申请，但当然不应解释为以任何方式限制其范围。
实施例1
此实施例演示了4316号患者的TIL中抗p53-C135Y反应性的鉴定。
将从4316号患者的结直肠癌切除的肿瘤切成24个片段，并在细胞因子IL-2存在的情况下进行培养，以离体培养TIL。通过将TIL与靶细胞共培养，针对患者肿瘤中发现的体细胞突变(包括p53 C135Y)筛选所述片段(编号为F1-F24)。靶细胞是自体DC，其(i)用包括p53C135Y的PP脉冲；(ii)用编码p53C135Y的TMG RNA或无关TMG转染；或(iii)用DMSO(二甲基亚砜)处理(对照)。用PMA(佛波醇12-肉豆蔻酸13-乙酸酯)/离子霉素处理的TIL作为阳性对照。IFN-γ的产生通过ELISpot分析来测量。结果如图1A所示。片段编号F22被鉴定为含有识别p53-C135Y的TIL。
解析片段22的TIL并测试其针对p53-C135Y的反应性。所述靶细胞是自体DC，用表1所示的p53-C135Y肽之一进行脉冲。用无关肽KIAA1328K386R或DMSO(载体)脉冲的靶细胞作为阴性对照。用PMA/离子霉素处理的TIL作为阳性对照。共培养后，通过流式细胞术分析细胞表面4-1BB表达(T细胞激活标记物)来测量反应性。结果如图1B所示。如图1B所示，TIL与表1中所示的三种p53-C135Y肽中的任何一种共培养后观察到反应性。
表1
TP53-1 典型的 TCTYSPANKMFYQLAKTCPVQLWV SEQ ID NO:90
TP53-2 剪接变体-1 NVLYSPANKMFYQLAKTCPVQLWV SEQ ID NO:96
TP53-3 剪接变体-2 SGTAKSVTCTMFYQLAKTCPVQLWV SEQ ID NO:97
实施例2
本实施例展示了从实施例1的反应性TIL中分离抗p53-C135YTCR。
反应性TIL被重新刺激并通过4-1BB上调分选到96孔板中进行单细胞T细胞受体(TCR)测序。发现了一个TCR，即4316-D TCR。
通过单细胞TCR测序鉴定TCRα和β链可变区的序列。α链和β链可变区的氨基酸序列如表2所示。CDR带有下划线。N-末端信号肽以粗体显示。
表2
实施例3
此实施例演示了在4141号患者的TIL中抗p53-R175H反应性的鉴定。
对来自结直肠癌患者4141的TIL进行体外致敏以富集新抗原反应性T细胞，然后针对DMSO、突变型p53 R175H肽(SEQ ID NO:92)、或相应的WT p53 R175肽(SEQ ID NO:91)进行测试。通过流式细胞术测量T细胞活化标记物4-1BB和OX40。结果如图2所示。
实施例4
本实施例展示了从实施例3的反应性TIL中分离抗p53-R175H TCR。
反应性TIL被重新刺激并通过4-1BB上调分选到96孔板中进行单细胞TCR测序。发现了一个TCR，即4141 IVS TCR。
通过单细胞TCR测序鉴定TCRα和β链可变区的序列。α链和β链可变区的氨基酸序列如表3所示。CDR带有下划线。N-末端信号肽以粗体显示。
表3
实施例5
本实施例演示了4304号患者的TIL中抗p53-M237I反应性的鉴定。
将从4304号患者的结直肠癌切除的肿瘤切成24个片段，并在细胞因子IL-2存在的情况下进行培养，以离体培养TIL。通过将TIL与靶细胞共培养，针对患者肿瘤中发现的体细胞突变(包括p53 M237I)筛选所述片段(编号为F1-F24)。所述靶细胞是自体DC，其(i)用包括p53 M237I的PP脉冲；(ii)用编码p53 M237I的TMG RNA或无关TMG转染；或(iii)用DMSO处理(对照)。用PMA/离子霉素处理的TIL作为阳性对照。IFN-γ的产生通过ELISpot分析来测量。结果如图3A所示。片段编号F24被鉴定为含有识别p53-M237I的TIL。
解析片段24的TIL并测试其针对p53-M237I的反应性。所述靶细胞是用构成图3A肽池的各个突变肽独立脉冲的自体DC。用PMA/离子霉素处理的TIL作为阳性对照。单独的培养基和用DMSO脉冲的DC作为对照。共培养后，通过ELISPOT分析测量IFN-γ表达来测试反应性。IFN-γ阳性斑点数如表4所示。如表4所示，在TIL与突变的p53肽(p53-M237I)(SEQ ID NO:94)共培养后观察到反应性。在表4中，“空白”表示没有任何T细胞或靶细胞的空白孔。
表4
突变肽 IFN-γ斑点数量
ZFN469 40
MAP2K2 ～52
SCN4A ～46
PPP1R13L 15
P53 ～712
PEG3 34
DNAH17 ～86
DMSO 15
NTN1 ～33
仅培养基 1
SMAD2 23
空白 2
CPAMD8 15
空白 3
NCAN 28
PMA/离子霉素 多得难以数清
通过流式细胞术从来自患者4304的肿瘤消化物中分选CD4+CD103+CD39+、CD4+CD103-CD39+或CD4+CD103-CD39-细胞。用于此分选的选通方案如图3B所示。
通过将分选的细胞群与靶细胞独立共培养来扩大分选群中的细胞数量。所述靶细胞是自体DC，其(i)用包括p53 M237I的PP脉冲；(ii)用编码p53M237I的TMG RNA或TMG对照转染；或(iii)用DMSO处理(对照)。所述TMG对照编码了其他患者表达的无关突变，这些患者与4304号患者不具有相同的突变。单独培养的TIL作为对照。共培养后，通过ELISPOT测量IFN-γ分泌来测试反应性。结果如图3C所示。将经分选的CD4+CD103+CD39+或CD4+CD103-CD39+细胞与用含有p53 M237I的PP脉冲的靶细胞共培养后观察反应性。
实施例6
该实施例演示了从实施例5的反应性TIL中分离出抗p53-M237I TCR。
反应性TIL被重新刺激并通过4-1BB上调分选到96孔板中进行单细胞TCR测序。发现了3个TCR，即4304 TCR-2、4304 TCR-4和4304 TCR-K。
通过单细胞TCR测序鉴定TCRα和β链可变区的序列。α链和β链可变区的氨基酸序列如表5所示。所述CDR带有下划线。N-末端信号肽以粗体显示。
表5
实施例7
本实施例展示了编码实施例2、4和6各自TCR的逆转录病毒载体的构建。
获得编码表2、3和5的TCR的α和β链可变区的核苷酸序列并进行密码子优化。TCRβVDJ区域与小鼠TCRβ恒定链融合。TCRαVJ区与小鼠TCRα恒定链融合。不受特定理论或机制的束缚，据信用相应的小鼠恒定区替换人TCRα和TCRβ链的恒定区改善TCR的表达和功能性(Cohen等，CancerRes.，66(17):8878-86(2006))。
此外，所述鼠源TCR和TCR恒定链经过半胱氨酸修饰。将跨膜疏水性突变引入鼠源TCRα恒定链中。不受特定理论或机制的束缚，据信这些修饰导致引入的TCR链的优先配对以及增强的TCR表面表达和功能性(Cohen等，Cancer Res.，67(8):3898-903(2007)；Haga-Friedman等，J.Immu.，188:5538–5546(2012))。
为了便于将TCR表达盒克隆到MSGV1载体的5'NcoI位点，并引入Kozak序列，TCRVα链N端信号肽中的第二个氨基酸改为组氨酸(H)、亮氨酸(L)或赖氨酸(K)，并且TCRVβ链N端信号肽中的第二个氨基酸改为丙氨酸(A)。
五个TCR中每一个的全长α和β链，包括对恒定区的这些修饰，如表6所示。在表6中，所述CDR用下划线表示，恒定区用斜体表示，恒定区的修饰氨基酸残基加下划线并用粗体表示。
表6
将编码表6的TCR的α和β链的核苷酸序列克隆到具有以下表达盒配置的基于MSGV1的逆转录病毒载体中:5'NcoI-VDJβ-mCβ-Furin/SerGly/P2A-VJα-mCα-EcoRI3'。
所述TCRβ和TCRα链由弗林蛋白酶Ser/Gly P2A接头RAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGP(SEQ ID NO:80)分开。不受特定理论或机制的束缚，据信所述接头提供了两条链相当的表达效率(Szymczak等，Nat.Biotechnol.，22(5):589-94(2004))。
所述逆转录病毒载体的TCR表达盒从5'到3'编码由接头分开的TCRβ和TCRα链。由各个TCR表达盒编码的氨基酸序列显示于表7中。在表7中，所述CDR用下划线表示，恒定区用斜体表示，接头用粗体表示。
表7
实施例8
该实施例演示了由实施例7的逆转录病毒载体编码的4316-D TCR的亲合力。
用实施例7的4316-D TCR逆转录病毒载体转导健康供体外周血淋巴细胞(PBL)(效应细胞)。靶细胞是用连续稀释的25聚体肽p53-C135Y TCTYSPALNKMFYQLAKTCPVQLWV(SEQID NO:90)或WT p53-C135TCTYSPALNKMFCQLAKTCPVQLWV(SEQ ID NO:89)脉冲的自体未成熟DC。
CD44316-D TCR的亲合力通过效应细胞与靶细胞共培养来确定。通过测定表达4-1BB的小鼠TCR恒定区T细胞的百分比来测量反应性。结果如图1C所示。转导的细胞识别p53-C135Y。
实施例9
该实施例表明由实施例7的逆转录病毒载体编码的4316-D TCR识别由HLA-DRB1*07:01/HLA-DRA1*01:01异二聚体呈递的p53-C135Y。
使用外显子组和mRNA测序确定了4316号患者表达的MHC II类分子。表达的MHC II类分子如表8所示。
表8
4316号患者表达的MHCII类分子
DPA1*01:03-DPB1*02:01
DPA1*01:03-DPB1*11:01
DPA1*02:01-DPB1*02:01
DPA1*02:01-DPB1*11:01
DQA1*01:01-DQB1*02:01
DQA1*01:01-DQB1*02:02
DQA1*01:01-DQB1*05:01
DQA1*02:01-DQB1*02:01
DQA1*02:01-DQB1*02:02
DQA1*02:01-DQB1*05:01
DRA*01:01-DRB1*07:01
DRA*01:01-DRB3*01:01
DQA*01:01-DRB4*01:01
效应细胞是用实施例7的4316-D TCR逆转录病毒载体转导的同种异体PBL。靶细胞是用表8中所示的HLA II类异二聚体之一独立转染并用DMSO、野生型p53-C13525聚体肽(SEQ ID NO:89)(1μg/mL)、或p53-C135Y 25聚体肽(SEQ ID NO:90)(1μg/mL)脉冲的30,000个COS7细胞。
将20,000个效应细胞与靶细胞共培养18小时后，通过ELISPOT分析测量IFN-γ表达来测试反应性。仅在4316-D TCR转导细胞与p53-C135Y 25聚体负载靶细胞共培养时观察到反应性，该靶细胞已用编码HLA-DRA*01:01/HLA-DRB1*07:01异二聚体的核苷酸序列转导。这些数据表明4316-D TCR受到DRB1*07:01的限制。
实施例10
该实施例表明了实施例7的逆转录病毒载体编码的4141 IVS TCR的亲合力和特异性。
效应细胞是用实施例7的4141 IVS TCR逆转录病毒载体转导的健康供体PBL。靶细胞是用系列稀释的ME p53-R175H肽(SEQ ID NO:92)或WTp53-R175肽(SEQ ID NO:91)以表9所示浓度脉冲的HLA-A*02+T2白血病细胞。
表9
脉冲的肽的浓度
10μg/mL
1μg/mL
100ng/mL
10ng/mL
1ng/mL
100pg/mL
10pg/mL
4141 IVS TCR的亲合力和特异性通过将20,000个效应细胞与100,000个靶细胞共培养18小时来确定。通过ELISPOT分析(N＝3)测量IFN-γ的产生。结果显示，用4141 IVS TCR转导的细胞识别以100pg/mL或更高浓度脉冲的MEp53-R175H肽。用4141 IVS TCR转导的细胞不识别WTp53-R175肽。这些数据表明4141 IVS TCR对突变体p53 R175H具有高度特异性。
实施例11
该实施例表明实施例7的逆转录病毒载体编码的4141 IVS TCR识别HLA-A*02:01呈递的p53-R175H。
使用外显子组和mRNA测序确定了4141号患者表达的MHC I类分子。表达的MHC I类分子如表10所示。
表10
4141号患者表达的MHCI类分子
A02:01
A23:01
B08:01
B44:03
C04:01
C07:01
HLA-全部
效应细胞是用实施例7的4141 IVS TCR逆转录病毒载体转导的健康供体PBL。靶细胞是用表10中所示的HLA I类分子之一独立转染并用DMSO、ME p53-R175H肽(SEQ ID NO:92)(1μg/mL)或WT p53-R175肽(SEQ IDNO:91)(1μg/mL)脉冲的30,000个COS7细胞。表10中的HLA-全部是指表达表10中所示的所有六种HLA I类分子的靶细胞，其用作阳性对照。
将20,000个效应细胞与靶细胞共培养18小时后，通过ELISPOT分析测量IFN-γ表达来测试反应性。仅在4141 IVS TCR转导细胞与已用编码HLA-A*02:01的核苷酸序列转导的p53-R175H 9聚体负载靶细胞共培养时观察到反应性。这些数据表明4141 IVS TCR受到HLA-A*02:01的限制。
实施例12
该实施例表明了由实施例7的相应逆转录病毒载体编码的4304TCR-4、4304TCR-K或4304TCR-2的亲合力。
健康供体PBL独立地用实施例7的4304TCR-4、4304TCR-K或4304TCR-2逆转录病毒载体转导(效应细胞)。靶细胞是用连续稀释的25聚体肽p53-M237IVGSDCTTIHYNYICNSSCMGGMNRR(SEQ ID NO:94)或WT p53-M237VGSDCTTIHYNYMCNSSCMGGMNRR(SEQ ID NO:93)脉冲的自体未成熟DC。
TCR的亲合力通过将效应细胞与靶细胞共培养来测定。通过测定表达小鼠TCR恒定区、表达4-1BB的CD3+CD4+T细胞的百分比来测量反应性。结果如图3D-F所示。经转导的细胞识别p53-M237I。
实施例13
该实施例表明由实施例7的相应逆转录病毒载体编码的4304TCR-4、4304TCR-K或4304TCR-2识别由HLA-DRB1*01:01/HLA-DRA1*01:01异二聚体呈递的p53-M237I。
使用外显子组和mRNA测序确定了4304号患者表达的MHC II类分子。表达的MHC II类分子示于表11中。
表11
效应细胞是用实施例7的相应逆转录病毒载体编码的4304TCR-4、4304TCR-K或4304TCR-2转导的健康供体PBL。靶细胞是用表11中所示的HLA II类异二聚体之一独立转染并用DMSO、p53-M237I肽(SEQ ID NO:94)(1μg/mL)或WT p53-M237肽(SEQ ID NO:93)(1μg/mL)脉冲的30,000个COS7细胞。单独培养的效应细胞和用PMA/离子霉素处理的效应细胞作为对照。用DMSO处理并用表11中所示的所有HLA II类异二聚体转染的靶细胞用作对照。还用表11中所示的所有HLA II类异二聚体转染、并用WTp53-M237肽脉冲的靶细胞作为对照。
将20,000个效应细胞与靶细胞共培养18小时后，通过ELISPOT分析测量IFN-γ表达来测试反应性。仅在4304 TCR-4、4304 TCR-K或4304 TCR-2转导的细胞与已用编码HLA-DRA1*01:01/HLA-DRB1*01:01异二聚体的核苷酸序列转导的p53-M237I 25聚体加载的靶细胞共培养后观察到反应性。这些数据表明，4304 TCR-4、4304 TCR-K和4304 TCR-2受到HLA-DRA1*01:01/HLA-DRB1*01:01异二聚体的限制。
实施例14
此实施例表明4141 IVS TCR以HLA和p53突变特异性方式识别肿瘤细胞。
将用实施例7的4141 IVS TCR逆转录病毒载体转导的健康供体T细胞与p53 R175H或HLA-A*02:01或两者均呈阳性的一组肿瘤细胞系共培养。通过流式细胞术测量4141 IVSTCR+CD8+T细胞中的T细胞激活标记物4-1BB和OX40。结果如图4A-4B所示。结果显示，TCR转导细胞识别p53R175H和HLA-A*02:01均呈阳性的肿瘤细胞系。TCR转导的细胞不识别p53R175H或HLA-A*02:01均呈阴性的肿瘤细胞系。
实施例15
此实施例表明p53 C135Y反应性4316-D TCR对自体肿瘤细胞的识别。
用实施例7的4316-D TCR逆转录病毒载体(逆转录病毒)转导了健康供体外周血淋巴细胞。通过将转导细胞与靶细胞共培养16小时来测试转导细胞识别自体肿瘤细胞的能力。所述靶细胞是在不存在IFN-γ或存在IFN-γ的情况下用DMSO、实施例8的WT p53或实施例8的突变体p53肽脉冲的来自患者4316的自体PDX肿瘤细胞。使用T细胞活化标记物4-1BB和OX40通过流式细胞术测量T细胞活化。结果如图6所示。结果表明，当与用IFN-γ和突变p53肽处理的靶细胞共培养时，转导的T细胞上调4-1BB和OX40表达。
实施例16
此实施例表明4141 IVS TCR在临床前异种移植小鼠模型中发挥抗肿瘤活性。
来自两个健康供体(健康供体1和健康供体2)的PBL用实施例7的4141IVS TCR逆转录病毒载体独立转导。使用临床前小鼠模型将转导细胞的抗肿瘤活性与用4141-TCR1a2转导的PBL(美国专利申请号17/620,942中公开)进行比较。雌性NSG小鼠被植入200万个自然表达p53 R175H突变和HLA-A*02:01的TYK-nu卵巢癌细胞。2周后，当植入的肿瘤大小达到约30mm2时，将小鼠随机分组并用载体(PBS)、用靶向p53 Y220C的无关TCR转导的1000万个T细胞、或用4141 IVS TCR转导的1000万个T细胞进行处理(N＝5)。ACT处理后，这些小鼠每天静脉注射3次人重组白细胞介素2(IL-2)(180,000IU)。该过程如图7A所示。在ACT后的30天内，评估了小鼠的平均肿瘤大小，并与用4141-TCR1a2转导的细胞治疗的小鼠的平均肿瘤大小进行比较。该实验使用来自两个健康供体(健康供体1和健康供体2)的转导PBL进行两次。这些实验的结果如图7B-7C所示。在健康供体1和健康供体2实验中，与PBS或无关TCR处理的小鼠相比，用4141 IVS TCR表达T细胞处理的小鼠显示出显著延迟的肿瘤生长。与4141-TCR1a2处理相比，4141 IVS TCR处理具有更优异的抗肿瘤活性。
本文引用的所有参考文献，包括出版物、专利申请和专利，均通过引用并入本文，其程度如同每篇参考文献单独且具体地指示通过引用并入，并在本文中整体阐述。
在描述本申请的上下文中(特别是在所附权利要求的上下文中)术语“一”和“一个”以及“该”和“至少一个”以及类似指示物的使用应被解释为涵盖单数和复数，除非本文另有说明或与上下文明显矛盾。使用术语“至少一个”前跟一个或多个项目的列表(例如，“A和B中的至少一个”)应被解释为意指选自所列出的项目(A或B)的一个项目或所列项目(A和B)中的两个或多个的任意组合，除非本文另有说明或与上下文明显矛盾。除非另有说明，术语“包括”、“具有”、“包含”和“含有”应被解释为开放式术语(即，意思是“包括但不限于”)。除非本文另有说明，本文中数值范围的列举仅旨在用作单独提及落入该范围内的每个单独值的速记方法，并且每个单独值被并入说明书中，如同其在本文中被单独引用一样。本文描述的所有方法可以以任意合适的顺序执行，除非本文另外指示或除非与上下文明显矛盾。除非另有说明，本文提供的任何和所有实施例或示例性语言(例如，“诸如”)的使用仅旨在更好地阐明本申请，并且不对本申请的范围构成限制。说明书中的任何语言均不应被解释为表明任何未声明的元素对于本申请的实践是必要的。
本文描述了本申请的优选方面，包括发明人已知的用于实施本申请的最佳模式。在阅读前述描述后，那些优选方面的变化对于本领域普通技术人员来说是显而易见的。发明人期望技术人员适当地采用此类变化，并且发明人意图以不同于本文具体描述的方式来实践本申请。因此，本申请包括适用法律允许的所附权利要求中记载的主题的所有修改和等同物。此外，除非本文另有说明或与上下文明显矛盾，否则本申请涵盖上述元件在其所有可能变型中的任何组合。
序列表
<110> 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表)
<120> 识别P53中C135Y、R175H或M237I突变的T细胞受体
<130> TPG03464A
<150> US 63/185,805
<151> 2021-05-07
<160> 97
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 393
<212> PRT
<213> 人类
<400> 1
Met Glu Glu Pro Gln Ser Asp Pro Ser Val Glu Pro Pro Leu Ser Gln
1 5 10 15
Glu Thr Phe Ser Asp Leu Trp Lys Leu Leu Pro Glu Asn Asn Val Leu
20 25 30
Ser Pro Leu Pro Ser Gln Ala Met Asp Asp Leu Met Leu Ser Pro Asp
35 40 45
Asp Ile Glu Gln Trp Phe Thr Glu Asp Pro Gly Pro Asp Glu Ala Pro
50 55 60
Arg Met Pro Glu Ala Ala Pro Pro Val Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro
65 70 75 80
Thr Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ser Trp Pro Leu Ser Ser Ser
85 90 95
Val Pro Ser Gln Lys Thr Tyr Gln Gly Ser Tyr Gly Phe Arg Leu Gly
100 105 110
Phe Leu His Ser Gly Thr Ala Lys Ser Val Thr Cys Thr Tyr Ser Pro
115 120 125
Ala Leu Asn Lys Met Phe Cys Gln Leu Ala Lys Thr Cys Pro Val Gln
130 135 140
Leu Trp Val Asp Ser Thr Pro Pro Pro Gly Thr Arg Val Arg Ala Met
145 150 155 160
Ala Ile Tyr Lys Gln Ser Gln His Met Thr Glu Val Val Arg Arg Cys
165 170 175
Pro His His Glu Arg Cys Ser Asp Ser Asp Gly Leu Ala Pro Pro Gln
180 185 190
His Leu Ile Arg Val Glu Gly Asn Leu Arg Val Glu Tyr Leu Asp Asp
195 200 205
Arg Asn Thr Phe Arg His Ser Val Val Val Pro Tyr Glu Pro Pro Glu
210 215 220
Val Gly Ser Asp Cys Thr Thr Ile His Tyr Asn Tyr Met Cys Asn Ser
225 230 235 240
Ser Cys Met Gly Gly Met Asn Arg Arg Pro Ile Leu Thr Ile Ile Thr
245 250 255
Leu Glu Asp Ser Ser Gly Asn Leu Leu Gly Arg Asn Ser Phe Glu Val
260 265 270
Arg Val Cys Ala Cys Pro Gly Arg Asp Arg Arg Thr Glu Glu Glu Asn
275 280 285
Leu Arg Lys Lys Gly Glu Pro His His Glu Leu Pro Pro Gly Ser Thr
290 295 300
Lys Arg Ala Leu Pro Asn Asn Thr Ser Ser Ser Pro Gln Pro Lys Lys
305 310 315 320
Lys Pro Leu Asp Gly Glu Tyr Phe Thr Leu Gln Ile Arg Gly Arg Glu
325 330 335
Arg Phe Glu Met Phe Arg Glu Leu Asn Glu Ala Leu Glu Leu Lys Asp
340 345 350
Ala Gln Ala Gly Lys Glu Pro Gly Gly Ser Arg Ala His Ser Ser His
355 360 365
Leu Lys Ser Lys Lys Gly Gln Ser Thr Ser Arg His Lys Lys Leu Met
370 375 380
Phe Lys Thr Glu Gly Pro Asp Ser Asp
385 390
<210> 2
<211> 5
<212> PRT
<213> 人类
<400> 2
Thr Thr Leu Ser Asn
1 5
<210> 3
<211> 7
<212> PRT
<213> 人类
<400> 3
Leu Val Lys Ser Gly Glu Val
1 5
<210> 4
<211> 14
<212> PRT
<213> 人类
<400> 4
Cys Ala Glu Ser Tyr Ser Gly Gly Tyr Gln Lys Val Thr Phe
1 5 10
<210> 5
<211> 6
<212> PRT
<213> 人类
<400> 5
Ile Ser Asn His Leu Tyr
1 5
<210> 6
<211> 6
<212> PRT
<213> 人类
<400> 6
Phe Tyr Asn Asn Glu Ile
1 5
<210> 7
<211> 12
<212> PRT
<213> 人类
<400> 7
Cys Ala Ser Ser Ser Phe Ser Asn Glu Gln Phe Phe
1 5 10
<210> 8
<211> 111
<212> PRT
<213> 人类
<400> 8
Gln Gln Val Met Gln Ile Pro Gln Tyr Gln His Val Gln Glu Gly Glu
1 5 10 15
Asp Phe Thr Thr Tyr Cys Asn Ser Ser Thr Thr Leu Ser Asn Ile Gln
20 25 30
Trp Tyr Lys Gln Arg Pro Gly Gly His Pro Val Phe Leu Ile Gln Leu
35 40 45
Val Lys Ser Gly Glu Val Lys Lys Gln Lys Arg Leu Thr Phe Gln Phe
50 55 60
Gly Glu Ala Lys Lys Asn Ser Ser Leu His Ile Thr Ala Thr Gln Thr
65 70 75 80
Thr Asp Val Gly Thr Tyr Phe Cys Ala Glu Ser Tyr Ser Gly Gly Tyr
85 90 95
Gln Lys Val Thr Phe Gly Ile Gly Thr Lys Leu Gln Val Ile Pro
100 105 110
<210> 9
<211> 112
<212> PRT
<213> 人类
<400> 9
Glu Pro Glu Val Thr Gln Thr Pro Ser His Gln Val Thr Gln Met Gly
1 5 10 15
Gln Glu Val Ile Leu Arg Cys Val Pro Ile Ser Asn His Leu Tyr Phe
20 25 30
Tyr Trp Tyr Arg Gln Ile Leu Gly Gln Lys Val Glu Phe Leu Val Ser
35 40 45
Phe Tyr Asn Asn Glu Ile Ser Glu Lys Ser Glu Ile Phe Asp Asp Gln
50 55 60
Phe Ser Val Glu Arg Pro Asp Gly Ser Asn Phe Thr Leu Lys Ile Arg
65 70 75 80
Ser Thr Lys Leu Glu Asp Ser Ala Met Tyr Phe Cys Ala Ser Ser Ser
85 90 95
Phe Ser Asn Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 10
<211> 130
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 10
Met His Leu Ile Thr Ser Met Leu Val Leu Trp Met Gln Leu Ser Gln
1 5 10 15
Val Asn Gly Gln Gln Val Met Gln Ile Pro Gln Tyr Gln His Val Gln
20 25 30
Glu Gly Glu Asp Phe Thr Thr Tyr Cys Asn Ser Ser Thr Thr Leu Ser
35 40 45
Asn Ile Gln Trp Tyr Lys Gln Arg Pro Gly Gly His Pro Val Phe Leu
50 55 60
Ile Gln Leu Val Lys Ser Gly Glu Val Lys Lys Gln Lys Arg Leu Thr
65 70 75 80
Phe Gln Phe Gly Glu Ala Lys Lys Asn Ser Ser Leu His Ile Thr Ala
85 90 95
Thr Gln Thr Thr Asp Val Gly Thr Tyr Phe Cys Ala Glu Ser Tyr Ser
100 105 110
Gly Gly Tyr Gln Lys Val Thr Phe Gly Ile Gly Thr Lys Leu Gln Val
115 120 125
Ile Pro
130
<210> 11
<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 11
Met Ala Thr Trp Leu Val Cys Trp Ala Ile Phe Ser Leu Leu Lys Ala
1 5 10 15
Gly Leu Thr Glu Pro Glu Val Thr Gln Thr Pro Ser His Gln Val Thr
20 25 30
Gln Met Gly Gln Glu Val Ile Leu Arg Cys Val Pro Ile Ser Asn His
35 40 45
Leu Tyr Phe Tyr Trp Tyr Arg Gln Ile Leu Gly Gln Lys Val Glu Phe
50 55 60
Leu Val Ser Phe Tyr Asn Asn Glu Ile Ser Glu Lys Ser Glu Ile Phe
65 70 75 80
Asp Asp Gln Phe Ser Val Glu Arg Pro Asp Gly Ser Asn Phe Thr Leu
85 90 95
Lys Ile Arg Ser Thr Lys Leu Glu Asp Ser Ala Met Tyr Phe Cys Ala
100 105 110
Ser Ser Ser Phe Ser Asn Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu
115 120 125
Thr Val Leu
130
<210> 12
<211> 267
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 12
Met His Leu Ile Thr Ser Met Leu Val Leu Trp Met Gln Leu Ser Gln
1 5 10 15
Val Asn Gly Gln Gln Val Met Gln Ile Pro Gln Tyr Gln His Val Gln
20 25 30
Glu Gly Glu Asp Phe Thr Thr Tyr Cys Asn Ser Ser Thr Thr Leu Ser
35 40 45
Asn Ile Gln Trp Tyr Lys Gln Arg Pro Gly Gly His Pro Val Phe Leu
50 55 60
Ile Gln Leu Val Lys Ser Gly Glu Val Lys Lys Gln Lys Arg Leu Thr
65 70 75 80
Phe Gln Phe Gly Glu Ala Lys Lys Asn Ser Ser Leu His Ile Thr Ala
85 90 95
Thr Gln Thr Thr Asp Val Gly Thr Tyr Phe Cys Ala Glu Ser Tyr Ser
100 105 110
Gly Gly Tyr Gln Lys Val Thr Phe Gly Ile Gly Thr Lys Leu Gln Val
115 120 125
Ile Pro Asn Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val Tyr Gln Leu Lys Asp
130 135 140
Pro Arg Ser Gln Asp Ser Thr Leu Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser
145 150 155 160
Gln Ile Asn Val Pro Lys Thr Met Glu Ser Gly Thr Phe Ile Thr Asp
165 170 175
Lys Cys Val Leu Asp Met Lys Ala Met Asp Ser Lys Ser Asn Gly Ala
180 185 190
Ile Ala Trp Ser Asn Gln Thr Ser Phe Thr Cys Gln Asp Ile Phe Lys
195 200 205
Glu Thr Asn Ala Thr Tyr Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Ala Thr
210 215 220
Leu Thr Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Met Asn Leu Asn Phe Gln Asn
225 230 235 240
Leu Leu Val Ile Val Leu Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe
245 250 255
Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
260 265
<210> 13
<211> 304
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 13
Met Ala Thr Trp Leu Val Cys Trp Ala Ile Phe Ser Leu Leu Lys Ala
1 5 10 15
Gly Leu Thr Glu Pro Glu Val Thr Gln Thr Pro Ser His Gln Val Thr
20 25 30
Gln Met Gly Gln Glu Val Ile Leu Arg Cys Val Pro Ile Ser Asn His
35 40 45
Leu Tyr Phe Tyr Trp Tyr Arg Gln Ile Leu Gly Gln Lys Val Glu Phe
50 55 60
Leu Val Ser Phe Tyr Asn Asn Glu Ile Ser Glu Lys Ser Glu Ile Phe
65 70 75 80
Asp Asp Gln Phe Ser Val Glu Arg Pro Asp Gly Ser Asn Phe Thr Leu
85 90 95
Lys Ile Arg Ser Thr Lys Leu Glu Asp Ser Ala Met Tyr Phe Cys Ala
100 105 110
Ser Ser Ser Phe Ser Asn Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu
115 120 125
Thr Val Leu Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val Ser Leu
130 135 140
Phe Glu Pro Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr Leu
145 150 155 160
Val Cys Leu Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp
165 170 175
Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro Gln
180 185 190
Ala Tyr Lys Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg
195 200 205
Val Ser Ala Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln
210 215 220
Val Gln Phe His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu Gly Ser
225 230 235 240
Pro Lys Pro Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala
245 250 255
Asp Cys Gly Ile Thr Ser Ala Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala
260 265 270
Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val
275 280 285
Leu Val Ser Thr Leu Val Val Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asn Ser
290 295 300
<210> 14
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 14
Gln Gln Val Met Gln Ile Pro Gln Tyr Gln His Val Gln Glu Gly Glu
1 5 10 15
Asp Phe Thr Thr Tyr Cys Asn Ser Ser Thr Thr Leu Ser Asn Ile Gln
20 25 30
Trp Tyr Lys Gln Arg Pro Gly Gly His Pro Val Phe Leu Ile Gln Leu
35 40 45
Val Lys Ser Gly Glu Val Lys Lys Gln Lys Arg Leu Thr Phe Gln Phe
50 55 60
Gly Glu Ala Lys Lys Asn Ser Ser Leu His Ile Thr Ala Thr Gln Thr
65 70 75 80
Thr Asp Val Gly Thr Tyr Phe Cys Ala Glu Ser Tyr Ser Gly Gly Tyr
85 90 95
Gln Lys Val Thr Phe Gly Ile Gly Thr Lys Leu Gln Val Ile Pro Asn
100 105 110
Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val Tyr Gln Leu Lys Asp Pro Arg Ser
115 120 125
Gln Asp Ser Thr Leu Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Ile Asn
130 135 140
Val Pro Lys Thr Met Glu Ser Gly Thr Phe Ile Thr Asp Lys Cys Val
145 150 155 160
Leu Asp Met Lys Ala Met Asp Ser Lys Ser Asn Gly Ala Ile Ala Trp
165 170 175
Ser Asn Gln Thr Ser Phe Thr Cys Gln Asp Ile Phe Lys Glu Thr Asn
180 185 190
Ala Thr Tyr Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Ala Thr Leu Thr Glu
195 200 205
Lys Ser Phe Glu Thr Asp Met Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Leu Val
210 215 220
Ile Val Leu Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu
225 230 235 240
Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
245
<210> 15
<211> 285
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 15
Glu Pro Glu Val Thr Gln Thr Pro Ser His Gln Val Thr Gln Met Gly
1 5 10 15
Gln Glu Val Ile Leu Arg Cys Val Pro Ile Ser Asn His Leu Tyr Phe
20 25 30
Tyr Trp Tyr Arg Gln Ile Leu Gly Gln Lys Val Glu Phe Leu Val Ser
35 40 45
Phe Tyr Asn Asn Glu Ile Ser Glu Lys Ser Glu Ile Phe Asp Asp Gln
50 55 60
Phe Ser Val Glu Arg Pro Asp Gly Ser Asn Phe Thr Leu Lys Ile Arg
65 70 75 80
Ser Thr Lys Leu Glu Asp Ser Ala Met Tyr Phe Cys Ala Ser Ser Ser
85 90 95
Phe Ser Asn Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu
100 105 110
Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val Ser Leu Phe Glu Pro
115 120 125
Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu
130 135 140
Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn
145 150 155 160
Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro Gln Ala Tyr Lys
165 170 175
Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala
180 185 190
Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe
195 200 205
His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu Gly Ser Pro Lys Pro
210 215 220
Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly
225 230 235 240
Ile Thr Ser Ala Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu
245 250 255
Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser
260 265 270
Thr Leu Val Val Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asn Ser
275 280 285
<210> 16
<211> 598
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 16
Met Ala Thr Trp Leu Val Cys Trp Ala Ile Phe Ser Leu Leu Lys Ala
1 5 10 15
Gly Leu Thr Glu Pro Glu Val Thr Gln Thr Pro Ser His Gln Val Thr
20 25 30
Gln Met Gly Gln Glu Val Ile Leu Arg Cys Val Pro Ile Ser Asn His
35 40 45
Leu Tyr Phe Tyr Trp Tyr Arg Gln Ile Leu Gly Gln Lys Val Glu Phe
50 55 60
Leu Val Ser Phe Tyr Asn Asn Glu Ile Ser Glu Lys Ser Glu Ile Phe
65 70 75 80
Asp Asp Gln Phe Ser Val Glu Arg Pro Asp Gly Ser Asn Phe Thr Leu
85 90 95
Lys Ile Arg Ser Thr Lys Leu Glu Asp Ser Ala Met Tyr Phe Cys Ala
100 105 110
Ser Ser Ser Phe Ser Asn Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu
115 120 125
Thr Val Leu Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val Ser Leu
130 135 140
Phe Glu Pro Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr Leu
145 150 155 160
Val Cys Leu Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp
165 170 175
Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro Gln
180 185 190
Ala Tyr Lys Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg
195 200 205
Val Ser Ala Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln
210 215 220
Val Gln Phe His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu Gly Ser
225 230 235 240
Pro Lys Pro Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala
245 250 255
Asp Cys Gly Ile Thr Ser Ala Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala
260 265 270
Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val
275 280 285
Leu Val Ser Thr Leu Val Val Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asn Ser
290 295 300
Arg Ala Lys Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys
305 310 315 320
Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met His Leu Ile Thr
325 330 335
Ser Met Leu Val Leu Trp Met Gln Leu Ser Gln Val Asn Gly Gln Gln
340 345 350
Val Met Gln Ile Pro Gln Tyr Gln His Val Gln Glu Gly Glu Asp Phe
355 360 365
Thr Thr Tyr Cys Asn Ser Ser Thr Thr Leu Ser Asn Ile Gln Trp Tyr
370 375 380
Lys Gln Arg Pro Gly Gly His Pro Val Phe Leu Ile Gln Leu Val Lys
385 390 395 400
Ser Gly Glu Val Lys Lys Gln Lys Arg Leu Thr Phe Gln Phe Gly Glu
405 410 415
Ala Lys Lys Asn Ser Ser Leu His Ile Thr Ala Thr Gln Thr Thr Asp
420 425 430
Val Gly Thr Tyr Phe Cys Ala Glu Ser Tyr Ser Gly Gly Tyr Gln Lys
435 440 445
Val Thr Phe Gly Ile Gly Thr Lys Leu Gln Val Ile Pro Asn Ile Gln
450 455 460
Asn Pro Glu Pro Ala Val Tyr Gln Leu Lys Asp Pro Arg Ser Gln Asp
465 470 475 480
Ser Thr Leu Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Ile Asn Val Pro
485 490 495
Lys Thr Met Glu Ser Gly Thr Phe Ile Thr Asp Lys Cys Val Leu Asp
500 505 510
Met Lys Ala Met Asp Ser Lys Ser Asn Gly Ala Ile Ala Trp Ser Asn
515 520 525
Gln Thr Ser Phe Thr Cys Gln Asp Ile Phe Lys Glu Thr Asn Ala Thr
530 535 540
Tyr Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Ala Thr Leu Thr Glu Lys Ser
545 550 555 560
Phe Glu Thr Asp Met Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Leu Val Ile Val
565 570 575
Leu Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr
580 585 590
Leu Arg Leu Trp Ser Ser
595
<210> 17
<211> 7
<212> PRT
<213> 人类
<400> 17
Thr Ser Glu Asn Asn Tyr Tyr
1 5
<210> 18
<211> 8
<212> PRT
<213> 人类
<400> 18
Gln Glu Ala Tyr Lys Gln Gln Asn
1 5
<210> 19
<211> 15
<212> PRT
<213> 人类
<400> 19
Cys Ala Phe Met Ala Tyr Met Glu Tyr Gly Asn Lys Leu Val Phe
1 5 10 15
<210> 20
<211> 5
<212> PRT
<213> 人类
<400> 20
Ser Asn His Leu Tyr
1 5
<210> 21
<211> 6
<212> PRT
<213> 人类
<400> 21
Phe Tyr Asn Asn Glu Ile
1 5
<210> 22
<211> 12
<212> PRT
<213> 人类
<400> 22
Cys Ala Cys Lys Gly Ile Thr Asp Thr Gln Tyr Phe
1 5 10
<210> 23
<211> 115
<212> PRT
<213> 人类
<400> 23
Gln Thr Val Thr Gln Ser Gln Pro Glu Met Ser Val Gln Glu Ala Glu
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Ser Cys Thr Tyr Asp Thr Ser Glu Asn Asn Tyr Tyr
20 25 30
Leu Phe Trp Tyr Lys Gln Pro Pro Ser Arg Gln Met Ile Leu Val Ile
35 40 45
Arg Gln Glu Ala Tyr Lys Gln Gln Asn Ala Thr Glu Asn Arg Phe Ser
50 55 60
Val Asn Phe Gln Lys Ala Ala Lys Ser Phe Ser Leu Lys Ile Ser Asp
65 70 75 80
Ser Gln Leu Gly Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Ala Phe Met Ala Tyr
85 90 95
Met Glu Tyr Gly Asn Lys Leu Val Phe Gly Ala Gly Thr Ile Leu Arg
100 105 110
Val Lys Ser
115
<210> 24
<211> 112
<212> PRT
<213> 人类
<400> 24
Glu Pro Glu Val Thr Gln Thr Pro Ser His Gln Val Thr Gln Met Gly
1 5 10 15
Gln Glu Val Ile Leu Arg Cys Val Pro Ile Ser Asn His Leu Tyr Phe
20 25 30
Tyr Trp Tyr Arg Gln Ile Leu Gly Gln Lys Val Glu Phe Leu Val Ser
35 40 45
Phe Tyr Asn Asn Glu Ile Ser Glu Lys Ser Glu Ile Phe Asp Asp Gln
50 55 60
Phe Ser Val Glu Arg Pro Asp Gly Ser Asn Phe Thr Leu Lys Ile Arg
65 70 75 80
Ser Thr Lys Leu Glu Asp Ser Ala Met Tyr Phe Cys Ala Cys Lys Gly
85 90 95
Ile Thr Asp Thr Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 25
<211> 136
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 25
Met His Arg Val Ser Leu Leu Trp Ala Val Val Val Ser Thr Cys Leu
1 5 10 15
Glu Ser Gly Met Ala Gln Thr Val Thr Gln Ser Gln Pro Glu Met Ser
20 25 30
Val Gln Glu Ala Glu Thr Val Thr Leu Ser Cys Thr Tyr Asp Thr Ser
35 40 45
Glu Asn Asn Tyr Tyr Leu Phe Trp Tyr Lys Gln Pro Pro Ser Arg Gln
50 55 60
Met Ile Leu Val Ile Arg Gln Glu Ala Tyr Lys Gln Gln Asn Ala Thr
65 70 75 80
Glu Asn Arg Phe Ser Val Asn Phe Gln Lys Ala Ala Lys Ser Phe Ser
85 90 95
Leu Lys Ile Ser Asp Ser Gln Leu Gly Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
100 105 110
Ala Phe Met Ala Tyr Met Glu Tyr Gly Asn Lys Leu Val Phe Gly Ala
115 120 125
Gly Thr Ile Leu Arg Val Lys Ser
130 135
<210> 26
<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 26
Met Ala Thr Trp Leu Val Cys Trp Ala Ile Phe Ser Leu Leu Lys Ala
1 5 10 15
Gly Leu Thr Glu Pro Glu Val Thr Gln Thr Pro Ser His Gln Val Thr
20 25 30
Gln Met Gly Gln Glu Val Ile Leu Arg Cys Val Pro Ile Ser Asn His
35 40 45
Leu Tyr Phe Tyr Trp Tyr Arg Gln Ile Leu Gly Gln Lys Val Glu Phe
50 55 60
Leu Val Ser Phe Tyr Asn Asn Glu Ile Ser Glu Lys Ser Glu Ile Phe
65 70 75 80
Asp Asp Gln Phe Ser Val Glu Arg Pro Asp Gly Ser Asn Phe Thr Leu
85 90 95
Lys Ile Arg Ser Thr Lys Leu Glu Asp Ser Ala Met Tyr Phe Cys Ala
100 105 110
Cys Lys Gly Ile Thr Asp Thr Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu
115 120 125
Thr Val Leu
130
<210> 27
<211> 273
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 27
Met His Arg Val Ser Leu Leu Trp Ala Val Val Val Ser Thr Cys Leu
1 5 10 15
Glu Ser Gly Met Ala Gln Thr Val Thr Gln Ser Gln Pro Glu Met Ser
20 25 30
Val Gln Glu Ala Glu Thr Val Thr Leu Ser Cys Thr Tyr Asp Thr Ser
35 40 45
Glu Asn Asn Tyr Tyr Leu Phe Trp Tyr Lys Gln Pro Pro Ser Arg Gln
50 55 60
Met Ile Leu Val Ile Arg Gln Glu Ala Tyr Lys Gln Gln Asn Ala Thr
65 70 75 80
Glu Asn Arg Phe Ser Val Asn Phe Gln Lys Ala Ala Lys Ser Phe Ser
85 90 95
Leu Lys Ile Ser Asp Ser Gln Leu Gly Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
100 105 110
Ala Phe Met Ala Tyr Met Glu Tyr Gly Asn Lys Leu Val Phe Gly Ala
115 120 125
Gly Thr Ile Leu Arg Val Lys Ser Asn Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala
130 135 140
Val Tyr Gln Leu Lys Asp Pro Arg Ser Gln Asp Ser Thr Leu Cys Leu
145 150 155 160
Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Ile Asn Val Pro Lys Thr Met Glu Ser
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Gly Thr Phe Ile Thr Asp Lys Cys Val Leu Asp Met Lys Ala Met Asp
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Ser Lys Ser Asn Gly Ala Ile Ala Trp Ser Asn Gln Thr Ser Phe Thr
195 200 205
Cys Gln Asp Ile Phe Lys Glu Thr Asn Ala Thr Tyr Pro Ser Ser Asp
210 215 220
Val Pro Cys Asp Ala Thr Leu Thr Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Met
225 230 235 240
Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Leu Val Ile Val Leu Arg Ile Leu Leu
245 250 255
Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser
260 265 270
Ser
<210> 28
<211> 304
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 28
Met Ala Thr Trp Leu Val Cys Trp Ala Ile Phe Ser Leu Leu Lys Ala
1 5 10 15
Gly Leu Thr Glu Pro Glu Val Thr Gln Thr Pro Ser His Gln Val Thr
20 25 30
Gln Met Gly Gln Glu Val Ile Leu Arg Cys Val Pro Ile Ser Asn His
35 40 45
Leu Tyr Phe Tyr Trp Tyr Arg Gln Ile Leu Gly Gln Lys Val Glu Phe
50 55 60
Leu Val Ser Phe Tyr Asn Asn Glu Ile Ser Glu Lys Ser Glu Ile Phe
65 70 75 80
Asp Asp Gln Phe Ser Val Glu Arg Pro Asp Gly Ser Asn Phe Thr Leu
85 90 95
Lys Ile Arg Ser Thr Lys Leu Glu Asp Ser Ala Met Tyr Phe Cys Ala
100 105 110
Cys Lys Gly Ile Thr Asp Thr Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu
115 120 125
Thr Val Leu Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val Ser Leu
130 135 140
Phe Glu Pro Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr Leu
145 150 155 160
Val Cys Leu Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp
165 170 175
Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro Gln
180 185 190
Ala Tyr Lys Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg
195 200 205
Val Ser Ala Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln
210 215 220
Val Gln Phe His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu Gly Ser
225 230 235 240
Pro Lys Pro Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala
245 250 255
Asp Cys Gly Ile Thr Ser Ala Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala
260 265 270
Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val
275 280 285
Leu Val Ser Thr Leu Val Val Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asn Ser
290 295 300
<210> 29
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 29
Gln Thr Val Thr Gln Ser Gln Pro Glu Met Ser Val Gln Glu Ala Glu
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Ser Cys Thr Tyr Asp Thr Ser Glu Asn Asn Tyr Tyr
20 25 30
Leu Phe Trp Tyr Lys Gln Pro Pro Ser Arg Gln Met Ile Leu Val Ile
35 40 45
Arg Gln Glu Ala Tyr Lys Gln Gln Asn Ala Thr Glu Asn Arg Phe Ser
50 55 60
Val Asn Phe Gln Lys Ala Ala Lys Ser Phe Ser Leu Lys Ile Ser Asp
65 70 75 80
Ser Gln Leu Gly Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Ala Phe Met Ala Tyr
85 90 95
Met Glu Tyr Gly Asn Lys Leu Val Phe Gly Ala Gly Thr Ile Leu Arg
100 105 110
Val Lys Ser Asn Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val Tyr Gln Leu Lys
115 120 125
Asp Pro Arg Ser Gln Asp Ser Thr Leu Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp
130 135 140
Ser Gln Ile Asn Val Pro Lys Thr Met Glu Ser Gly Thr Phe Ile Thr
145 150 155 160
Asp Lys Cys Val Leu Asp Met Lys Ala Met Asp Ser Lys Ser Asn Gly
165 170 175
Ala Ile Ala Trp Ser Asn Gln Thr Ser Phe Thr Cys Gln Asp Ile Phe
180 185 190
Lys Glu Thr Asn Ala Thr Tyr Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Ala
195 200 205
Thr Leu Thr Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Met Asn Leu Asn Phe Gln
210 215 220
Asn Leu Leu Val Ile Val Leu Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly
225 230 235 240
Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
245 250
<210> 30
<211> 285
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 30
Glu Pro Glu Val Thr Gln Thr Pro Ser His Gln Val Thr Gln Met Gly
1 5 10 15
Gln Glu Val Ile Leu Arg Cys Val Pro Ile Ser Asn His Leu Tyr Phe
20 25 30
Tyr Trp Tyr Arg Gln Ile Leu Gly Gln Lys Val Glu Phe Leu Val Ser
35 40 45
Phe Tyr Asn Asn Glu Ile Ser Glu Lys Ser Glu Ile Phe Asp Asp Gln
50 55 60
Phe Ser Val Glu Arg Pro Asp Gly Ser Asn Phe Thr Leu Lys Ile Arg
65 70 75 80
Ser Thr Lys Leu Glu Asp Ser Ala Met Tyr Phe Cys Ala Cys Lys Gly
85 90 95
Ile Thr Asp Thr Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu
100 105 110
Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val Ser Leu Phe Glu Pro
115 120 125
Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu
130 135 140
Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn
145 150 155 160
Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro Gln Ala Tyr Lys
165 170 175
Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala
180 185 190
Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe
195 200 205
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210 215 220
Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly
225 230 235 240
Ile Thr Ser Ala Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu
245 250 255
Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser
260 265 270
Thr Leu Val Val Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asn Ser
275 280 285
<210> 31
<211> 604
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 31
Met Ala Thr Trp Leu Val Cys Trp Ala Ile Phe Ser Leu Leu Lys Ala
1 5 10 15
Gly Leu Thr Glu Pro Glu Val Thr Gln Thr Pro Ser His Gln Val Thr
20 25 30
Gln Met Gly Gln Glu Val Ile Leu Arg Cys Val Pro Ile Ser Asn His
35 40 45
Leu Tyr Phe Tyr Trp Tyr Arg Gln Ile Leu Gly Gln Lys Val Glu Phe
50 55 60
Leu Val Ser Phe Tyr Asn Asn Glu Ile Ser Glu Lys Ser Glu Ile Phe
65 70 75 80
Asp Asp Gln Phe Ser Val Glu Arg Pro Asp Gly Ser Asn Phe Thr Leu
85 90 95
Lys Ile Arg Ser Thr Lys Leu Glu Asp Ser Ala Met Tyr Phe Cys Ala
100 105 110
Cys Lys Gly Ile Thr Asp Thr Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu
115 120 125
Thr Val Leu Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val Ser Leu
130 135 140
Phe Glu Pro Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr Leu
145 150 155 160
Val Cys Leu Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp
165 170 175
Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro Gln
180 185 190
Ala Tyr Lys Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg
195 200 205
Val Ser Ala Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln
210 215 220
Val Gln Phe His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu Gly Ser
225 230 235 240
Pro Lys Pro Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala
245 250 255
Asp Cys Gly Ile Thr Ser Ala Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala
260 265 270
Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val
275 280 285
Leu Val Ser Thr Leu Val Val Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asn Ser
290 295 300
Arg Ala Lys Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys
305 310 315 320
Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met His Arg Val Ser
325 330 335
Leu Leu Trp Ala Val Val Val Ser Thr Cys Leu Glu Ser Gly Met Ala
340 345 350
Gln Thr Val Thr Gln Ser Gln Pro Glu Met Ser Val Gln Glu Ala Glu
355 360 365
Thr Val Thr Leu Ser Cys Thr Tyr Asp Thr Ser Glu Asn Asn Tyr Tyr
370 375 380
Leu Phe Trp Tyr Lys Gln Pro Pro Ser Arg Gln Met Ile Leu Val Ile
385 390 395 400
Arg Gln Glu Ala Tyr Lys Gln Gln Asn Ala Thr Glu Asn Arg Phe Ser
405 410 415
Val Asn Phe Gln Lys Ala Ala Lys Ser Phe Ser Leu Lys Ile Ser Asp
420 425 430
Ser Gln Leu Gly Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Ala Phe Met Ala Tyr
435 440 445
Met Glu Tyr Gly Asn Lys Leu Val Phe Gly Ala Gly Thr Ile Leu Arg
450 455 460
Val Lys Ser Asn Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val Tyr Gln Leu Lys
465 470 475 480
Asp Pro Arg Ser Gln Asp Ser Thr Leu Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp
485 490 495
Ser Gln Ile Asn Val Pro Lys Thr Met Glu Ser Gly Thr Phe Ile Thr
500 505 510
Asp Lys Cys Val Leu Asp Met Lys Ala Met Asp Ser Lys Ser Asn Gly
515 520 525
Ala Ile Ala Trp Ser Asn Gln Thr Ser Phe Thr Cys Gln Asp Ile Phe
530 535 540
Lys Glu Thr Asn Ala Thr Tyr Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Ala
545 550 555 560
Thr Leu Thr Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Met Asn Leu Asn Phe Gln
565 570 575
Asn Leu Leu Val Ile Val Leu Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly
580 585 590
Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
595 600
<210> 32
<211> 6
<212> PRT
<213> 人类
<400> 32
Tyr Gly Gly Thr Val Asn
1 5
<210> 33
<211> 8
<212> PRT
<213> 人类
<400> 33
Tyr Phe Ser Gly Asp Pro Leu Val
1 5
<210> 34
<211> 15
<212> PRT
<213> 人类
<400> 34
Cys Ala Val Thr Phe Met Asp Thr Gly Arg Arg Ala Leu Thr Phe
1 5 10 15
<210> 35
<211> 5
<212> PRT
<213> 人类
<400> 35
Ser Gly His Thr Ala
1 5
<210> 36
<211> 6
<212> PRT
<213> 人类
<400> 36
Phe Gln Gly Asn Ser Ala
1 5
<210> 37
<211> 14
<212> PRT
<213> 人类
<400> 37
Cys Ala Ser Ser Pro Arg Gly Gly Asp Tyr Glu Gln Tyr Phe
1 5 10
<210> 38
<211> 114
<212> PRT
<213> 人类
<400> 38
Gln Ser Val Ser Gln His Asn His His Val Ile Leu Ser Glu Ala Ala
1 5 10 15
Ser Leu Glu Leu Gly Cys Asn Tyr Ser Tyr Gly Gly Thr Val Asn Leu
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Thr Gly Arg Arg Ala Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Arg Leu Gln Val
100 105 110
Gln Pro
<210> 39
<211> 112
<212> PRT
<213> 人类
<400> 39
Gly Val Ser Gln Ser Pro Ser Asn Lys Val Thr Glu Lys Gly Lys Asp
1 5 10 15
Val Glu Leu Arg Cys Asp Pro Ile Ser Gly His Thr Ala Leu Tyr Trp
20 25 30
Tyr Arg Gln Ser Leu Gly Gln Gly Leu Glu Phe Leu Ile Tyr Phe Gln
35 40 45
Gly Asn Ser Ala Pro Asp Lys Ser Gly Leu Pro Ser Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Ala Glu Arg Thr Gly Gly Ser Val Ser Thr Leu Thr Ile Gln Arg Thr
65 70 75 80
Gln Gln Glu Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala Ser Ser Pro Arg Gly
85 90 95
Gly Asp Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Thr
100 105 110
<210> 40
<211> 134
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 40
Met Leu Leu Leu Leu Ile Pro Val Leu Gly Met Ile Phe Ala Leu Arg
1 5 10 15
Asp Ala Arg Ala Gln Ser Val Ser Gln His Asn His His Val Ile Leu
20 25 30
Ser Glu Ala Ala Ser Leu Glu Leu Gly Cys Asn Tyr Ser Tyr Gly Gly
35 40 45
Thr Val Asn Leu Phe Trp Tyr Val Gln Tyr Pro Gly Gln His Leu Gln
50 55 60
Leu Leu Leu Lys Tyr Phe Ser Gly Asp Pro Leu Val Lys Gly Ile Lys
65 70 75 80
Gly Phe Glu Ala Glu Phe Ile Lys Ser Lys Phe Ser Phe Asn Leu Arg
85 90 95
Lys Pro Ser Val Gln Trp Ser Asp Thr Ala Glu Tyr Phe Cys Ala Val
100 105 110
Thr Phe Met Asp Thr Gly Arg Arg Ala Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr
115 120 125
Arg Leu Gln Val Gln Pro
130
<210> 41
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 41
Met Ala Thr Arg Leu Leu Phe Trp Val Ala Phe Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Asp His Thr Gly Ala Gly Val Ser Gln Ser Pro Ser Asn Lys Val Thr
20 25 30
Glu Lys Gly Lys Asp Val Glu Leu Arg Cys Asp Pro Ile Ser Gly His
35 40 45
Thr Ala Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Ser Leu Gly Gln Gly Leu Glu Phe
50 55 60
Leu Ile Tyr Phe Gln Gly Asn Ser Ala Pro Asp Lys Ser Gly Leu Pro
65 70 75 80
Ser Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Thr Gly Gly Ser Val Ser Thr Leu
85 90 95
Thr Ile Gln Arg Thr Gln Gln Glu Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala
100 105 110
Ser Ser Pro Arg Gly Gly Asp Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr
115 120 125
Arg Leu Thr Val Thr
130
<210> 42
<211> 271
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 42
Met Leu Leu Leu Leu Ile Pro Val Leu Gly Met Ile Phe Ala Leu Arg
1 5 10 15
Asp Ala Arg Ala Gln Ser Val Ser Gln His Asn His His Val Ile Leu
20 25 30
Ser Glu Ala Ala Ser Leu Glu Leu Gly Cys Asn Tyr Ser Tyr Gly Gly
35 40 45
Thr Val Asn Leu Phe Trp Tyr Val Gln Tyr Pro Gly Gln His Leu Gln
50 55 60
Leu Leu Leu Lys Tyr Phe Ser Gly Asp Pro Leu Val Lys Gly Ile Lys
65 70 75 80
Gly Phe Glu Ala Glu Phe Ile Lys Ser Lys Phe Ser Phe Asn Leu Arg
85 90 95
Lys Pro Ser Val Gln Trp Ser Asp Thr Ala Glu Tyr Phe Cys Ala Val
100 105 110
Thr Phe Met Asp Thr Gly Arg Arg Ala Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr
115 120 125
Arg Leu Gln Val Gln Pro Asn Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val Tyr
130 135 140
Gln Leu Lys Asp Pro Arg Ser Gln Asp Ser Thr Leu Cys Leu Phe Thr
145 150 155 160
Asp Phe Asp Ser Gln Ile Asn Val Pro Lys Thr Met Glu Ser Gly Thr
165 170 175
Phe Ile Thr Asp Lys Cys Val Leu Asp Met Lys Ala Met Asp Ser Lys
180 185 190
Ser Asn Gly Ala Ile Ala Trp Ser Asn Gln Thr Ser Phe Thr Cys Gln
195 200 205
Asp Ile Phe Lys Glu Thr Asn Ala Thr Tyr Pro Ser Ser Asp Val Pro
210 215 220
Cys Asp Ala Thr Leu Thr Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Met Asn Leu
225 230 235 240
Asn Phe Gln Asn Leu Leu Val Ile Val Leu Arg Ile Leu Leu Leu Lys
245 250 255
Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
260 265 270
<210> 43
<211> 306
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 43
Met Ala Thr Arg Leu Leu Phe Trp Val Ala Phe Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Asp His Thr Gly Ala Gly Val Ser Gln Ser Pro Ser Asn Lys Val Thr
20 25 30
Glu Lys Gly Lys Asp Val Glu Leu Arg Cys Asp Pro Ile Ser Gly His
35 40 45
Thr Ala Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Ser Leu Gly Gln Gly Leu Glu Phe
50 55 60
Leu Ile Tyr Phe Gln Gly Asn Ser Ala Pro Asp Lys Ser Gly Leu Pro
65 70 75 80
Ser Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Thr Gly Gly Ser Val Ser Thr Leu
85 90 95
Thr Ile Gln Arg Thr Gln Gln Glu Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala
100 105 110
Ser Ser Pro Arg Gly Gly Asp Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr
115 120 125
Arg Leu Thr Val Thr Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val
130 135 140
Ser Leu Phe Glu Pro Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala
145 150 155 160
Thr Leu Val Cys Leu Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu
165 170 175
Ser Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp
180 185 190
Pro Gln Ala Tyr Lys Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg
195 200 205
Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg
210 215 220
Cys Gln Val Gln Phe His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu
225 230 235 240
Gly Ser Pro Lys Pro Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly
245 250 255
Arg Ala Asp Cys Gly Ile Thr Ser Ala Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu
260 265 270
Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr
275 280 285
Ala Val Leu Val Ser Thr Leu Val Val Met Ala Met Val Lys Arg Lys
290 295 300
Asn Ser
305
<210> 44
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 44
Gln Ser Val Ser Gln His Asn His His Val Ile Leu Ser Glu Ala Ala
1 5 10 15
Ser Leu Glu Leu Gly Cys Asn Tyr Ser Tyr Gly Gly Thr Val Asn Leu
20 25 30
Phe Trp Tyr Val Gln Tyr Pro Gly Gln His Leu Gln Leu Leu Leu Lys
35 40 45
Tyr Phe Ser Gly Asp Pro Leu Val Lys Gly Ile Lys Gly Phe Glu Ala
50 55 60
Glu Phe Ile Lys Ser Lys Phe Ser Phe Asn Leu Arg Lys Pro Ser Val
65 70 75 80
Gln Trp Ser Asp Thr Ala Glu Tyr Phe Cys Ala Val Thr Phe Met Asp
85 90 95
Thr Gly Arg Arg Ala Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Arg Leu Gln Val
100 105 110
Gln Pro Asn Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val Tyr Gln Leu Lys Asp
115 120 125
Pro Arg Ser Gln Asp Ser Thr Leu Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser
130 135 140
Gln Ile Asn Val Pro Lys Thr Met Glu Ser Gly Thr Phe Ile Thr Asp
145 150 155 160
Lys Cys Val Leu Asp Met Lys Ala Met Asp Ser Lys Ser Asn Gly Ala
165 170 175
Ile Ala Trp Ser Asn Gln Thr Ser Phe Thr Cys Gln Asp Ile Phe Lys
180 185 190
Glu Thr Asn Ala Thr Tyr Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Ala Thr
195 200 205
Leu Thr Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Met Asn Leu Asn Phe Gln Asn
210 215 220
Leu Leu Val Ile Val Leu Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe
225 230 235 240
Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
245 250
<210> 45
<211> 285
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 45
Gly Val Ser Gln Ser Pro Ser Asn Lys Val Thr Glu Lys Gly Lys Asp
1 5 10 15
Val Glu Leu Arg Cys Asp Pro Ile Ser Gly His Thr Ala Leu Tyr Trp
20 25 30
Tyr Arg Gln Ser Leu Gly Gln Gly Leu Glu Phe Leu Ile Tyr Phe Gln
35 40 45
Gly Asn Ser Ala Pro Asp Lys Ser Gly Leu Pro Ser Asp Arg Phe Ser
50 55 60
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65 70 75 80
Gln Gln Glu Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala Ser Ser Pro Arg Gly
85 90 95
Gly Asp Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Thr
100 105 110
Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val Ser Leu Phe Glu Pro
115 120 125
Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu
130 135 140
Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn
145 150 155 160
Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro Gln Ala Tyr Lys
165 170 175
Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala
180 185 190
Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe
195 200 205
His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu Gly Ser Pro Lys Pro
210 215 220
Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly
225 230 235 240
Ile Thr Ser Ala Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu
245 250 255
Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser
260 265 270
Thr Leu Val Val Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asn Ser
275 280 285
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<211> 604
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 46
Met Ala Thr Arg Leu Leu Phe Trp Val Ala Phe Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Asp His Thr Gly Ala Gly Val Ser Gln Ser Pro Ser Asn Lys Val Thr
20 25 30
Glu Lys Gly Lys Asp Val Glu Leu Arg Cys Asp Pro Ile Ser Gly His
35 40 45
Thr Ala Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Ser Leu Gly Gln Gly Leu Glu Phe
50 55 60
Leu Ile Tyr Phe Gln Gly Asn Ser Ala Pro Asp Lys Ser Gly Leu Pro
65 70 75 80
Ser Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Thr Gly Gly Ser Val Ser Thr Leu
85 90 95
Thr Ile Gln Arg Thr Gln Gln Glu Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala
100 105 110
Ser Ser Pro Arg Gly Gly Asp Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr
115 120 125
Arg Leu Thr Val Thr Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val
130 135 140
Ser Leu Phe Glu Pro Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala
145 150 155 160
Thr Leu Val Cys Leu Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu
165 170 175
Ser Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp
180 185 190
Pro Gln Ala Tyr Lys Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg
195 200 205
Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg
210 215 220
Cys Gln Val Gln Phe His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu
225 230 235 240
Gly Ser Pro Lys Pro Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly
245 250 255
Arg Ala Asp Cys Gly Ile Thr Ser Ala Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu
260 265 270
Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr
275 280 285
Ala Val Leu Val Ser Thr Leu Val Val Met Ala Met Val Lys Arg Lys
290 295 300
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Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Leu Leu
325 330 335
Leu Leu Ile Pro Val Leu Gly Met Ile Phe Ala Leu Arg Asp Ala Arg
340 345 350
Ala Gln Ser Val Ser Gln His Asn His His Val Ile Leu Ser Glu Ala
355 360 365
Ala Ser Leu Glu Leu Gly Cys Asn Tyr Ser Tyr Gly Gly Thr Val Asn
370 375 380
Leu Phe Trp Tyr Val Gln Tyr Pro Gly Gln His Leu Gln Leu Leu Leu
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Lys Tyr Phe Ser Gly Asp Pro Leu Val Lys Gly Ile Lys Gly Phe Glu
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Ala Glu Phe Ile Lys Ser Lys Phe Ser Phe Asn Leu Arg Lys Pro Ser
420 425 430
Val Gln Trp Ser Asp Thr Ala Glu Tyr Phe Cys Ala Val Thr Phe Met
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Asp Thr Gly Arg Arg Ala Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Arg Leu Gln
450 455 460
Val Gln Pro Asn Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val Tyr Gln Leu Lys
465 470 475 480
Asp Pro Arg Ser Gln Asp Ser Thr Leu Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp
485 490 495
Ser Gln Ile Asn Val Pro Lys Thr Met Glu Ser Gly Thr Phe Ile Thr
500 505 510
Asp Lys Cys Val Leu Asp Met Lys Ala Met Asp Ser Lys Ser Asn Gly
515 520 525
Ala Ile Ala Trp Ser Asn Gln Thr Ser Phe Thr Cys Gln Asp Ile Phe
530 535 540
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545 550 555 560
Thr Leu Thr Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Met Asn Leu Asn Phe Gln
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Asn Leu Leu Val Ile Val Leu Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly
580 585 590
Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
595 600
<210> 47
<211> 6
<212> PRT
<213> 人类
<400> 47
Asp Arg Gly Ser Gln Ser
1 5
<210> 48
<211> 6
<212> PRT
<213> 人类
<400> 48
Ile Tyr Ser Asn Gly Asp
1 5
<210> 49
<211> 15
<212> PRT
<213> 人类
<400> 49
Cys Ala Val Arg Gly Gly Asn Thr Gly Phe Gln Lys Leu Val Phe
1 5 10 15
<210> 50
<211> 5
<212> PRT
<213> 人类
<400> 50
Ser Gln Val Thr Met
1 5
<210> 51
<211> 7
<212> PRT
<213> 人类
<400> 51
Ala Asn Gln Gly Ser Glu Ala
1 5
<210> 52
<211> 11
<212> PRT
<213> 人类
<400> 52
Cys Ser Val Arg Ser Glu Asp Thr Gln Tyr Phe
1 5 10
<210> 53
<211> 114
<212> PRT
<213> 人类
<400> 53
Gln Gln Lys Glu Val Glu Gln Asn Ser Gly Pro Leu Ser Val Pro Glu
1 5 10 15
Gly Ala Ile Ala Ser Leu Asn Cys Thr Tyr Ser Asp Arg Gly Ser Gln
20 25 30
Ser Phe Phe Trp Tyr Arg Gln Tyr Ser Gly Lys Ser Pro Glu Leu Ile
35 40 45
Met Phe Ile Tyr Ser Asn Gly Asp Lys Glu Asp Gly Arg Phe Thr Ala
50 55 60
Gln Leu Asn Lys Ala Ser Gln Tyr Val Ser Leu Leu Ile Arg Asp Ser
65 70 75 80
Gln Pro Ser Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Arg Gly Gly Asn
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100 105 110
Ser Pro
<210> 54
<211> 111
<212> PRT
<213> 人类
<400> 54
Ala Val Ile Ser Gln Lys Pro Ser Arg Asp Ile Cys Gln Arg Gly Thr
1 5 10 15
Ser Leu Thr Ile Gln Cys Gln Val Asp Ser Gln Val Thr Met Met Phe
20 25 30
Trp Tyr Arg Gln Gln Pro Gly Gln Ser Leu Thr Leu Ile Ala Thr Ala
35 40 45
Asn Gln Gly Ser Glu Ala Thr Tyr Glu Ser Gly Phe Val Ile Asp Lys
50 55 60
Phe Pro Ile Ser Arg Pro Asn Leu Thr Phe Ser Thr Leu Thr Val Ser
65 70 75 80
Asn Met Ser Pro Glu Asp Ser Ser Ile Tyr Leu Cys Ser Val Arg Ser
85 90 95
Glu Asp Thr Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 55
<211> 134
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 55
Met Lys Ser Leu Arg Val Leu Leu Val Ile Leu Trp Leu Gln Leu Ser
1 5 10 15
Trp Val Trp Ser Gln Gln Lys Glu Val Glu Gln Asn Ser Gly Pro Leu
20 25 30
Ser Val Pro Glu Gly Ala Ile Ala Ser Leu Asn Cys Thr Tyr Ser Asp
35 40 45
Arg Gly Ser Gln Ser Phe Phe Trp Tyr Arg Gln Tyr Ser Gly Lys Ser
50 55 60
Pro Glu Leu Ile Met Phe Ile Tyr Ser Asn Gly Asp Lys Glu Asp Gly
65 70 75 80
Arg Phe Thr Ala Gln Leu Asn Lys Ala Ser Gln Tyr Val Ser Leu Leu
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Ile Arg Asp Ser Gln Pro Ser Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val
100 105 110
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115 120 125
Arg Leu Leu Val Ser Pro
130
<210> 56
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 56
Met Ala Ser Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Leu Gly Ser Val Phe Ser
1 5 10 15
Ala Val Ile Ser Gln Lys Pro Ser Arg Asp Ile Cys Gln Arg Gly Thr
20 25 30
Ser Leu Thr Ile Gln Cys Gln Val Asp Ser Gln Val Thr Met Met Phe
35 40 45
Trp Tyr Arg Gln Gln Pro Gly Gln Ser Leu Thr Leu Ile Ala Thr Ala
50 55 60
Asn Gln Gly Ser Glu Ala Thr Tyr Glu Ser Gly Phe Val Ile Asp Lys
65 70 75 80
Phe Pro Ile Ser Arg Pro Asn Leu Thr Phe Ser Thr Leu Thr Val Ser
85 90 95
Asn Met Ser Pro Glu Asp Ser Ser Ile Tyr Leu Cys Ser Val Arg Ser
100 105 110
Glu Asp Thr Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu
115 120 125
<210> 57
<211> 271
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 57
Met Lys Ser Leu Arg Val Leu Leu Val Ile Leu Trp Leu Gln Leu Ser
1 5 10 15
Trp Val Trp Ser Gln Gln Lys Glu Val Glu Gln Asn Ser Gly Pro Leu
20 25 30
Ser Val Pro Glu Gly Ala Ile Ala Ser Leu Asn Cys Thr Tyr Ser Asp
35 40 45
Arg Gly Ser Gln Ser Phe Phe Trp Tyr Arg Gln Tyr Ser Gly Lys Ser
50 55 60
Pro Glu Leu Ile Met Phe Ile Tyr Ser Asn Gly Asp Lys Glu Asp Gly
65 70 75 80
Arg Phe Thr Ala Gln Leu Asn Lys Ala Ser Gln Tyr Val Ser Leu Leu
85 90 95
Ile Arg Asp Ser Gln Pro Ser Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val
100 105 110
Arg Gly Gly Asn Thr Gly Phe Gln Lys Leu Val Phe Gly Thr Gly Thr
115 120 125
Arg Leu Leu Val Ser Pro Asn Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val Tyr
130 135 140
Gln Leu Lys Asp Pro Arg Ser Gln Asp Ser Thr Leu Cys Leu Phe Thr
145 150 155 160
Asp Phe Asp Ser Gln Ile Asn Val Pro Lys Thr Met Glu Ser Gly Thr
165 170 175
Phe Ile Thr Asp Lys Cys Val Leu Asp Met Lys Ala Met Asp Ser Lys
180 185 190
Ser Asn Gly Ala Ile Ala Trp Ser Asn Gln Thr Ser Phe Thr Cys Gln
195 200 205
Asp Ile Phe Lys Glu Thr Asn Ala Thr Tyr Pro Ser Ser Asp Val Pro
210 215 220
Cys Asp Ala Thr Leu Thr Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Met Asn Leu
225 230 235 240
Asn Phe Gln Asn Leu Leu Val Ile Val Leu Arg Ile Leu Leu Leu Lys
245 250 255
Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
260 265 270
<210> 58
<211> 300
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 58
Met Ala Ser Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Leu Gly Ser Val Phe Ser
1 5 10 15
Ala Val Ile Ser Gln Lys Pro Ser Arg Asp Ile Cys Gln Arg Gly Thr
20 25 30
Ser Leu Thr Ile Gln Cys Gln Val Asp Ser Gln Val Thr Met Met Phe
35 40 45
Trp Tyr Arg Gln Gln Pro Gly Gln Ser Leu Thr Leu Ile Ala Thr Ala
50 55 60
Asn Gln Gly Ser Glu Ala Thr Tyr Glu Ser Gly Phe Val Ile Asp Lys
65 70 75 80
Phe Pro Ile Ser Arg Pro Asn Leu Thr Phe Ser Thr Leu Thr Val Ser
85 90 95
Asn Met Ser Pro Glu Asp Ser Ser Ile Tyr Leu Cys Ser Val Arg Ser
100 105 110
Glu Asp Thr Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu Glu
115 120 125
Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val Ser Leu Phe Glu Pro Ser
130 135 140
Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ala
145 150 155 160
Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn Gly
165 170 175
Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro Gln Ala Tyr Lys Glu
180 185 190
Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr
195 200 205
Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe His
210 215 220
Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu Gly Ser Pro Lys Pro Val
225 230 235 240
Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Ile
245 250 255
Thr Ser Ala Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr
260 265 270
Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Thr
275 280 285
Leu Val Val Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asn Ser
290 295 300
<210> 59
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 59
Gln Gln Lys Glu Val Glu Gln Asn Ser Gly Pro Leu Ser Val Pro Glu
1 5 10 15
Gly Ala Ile Ala Ser Leu Asn Cys Thr Tyr Ser Asp Arg Gly Ser Gln
20 25 30
Ser Phe Phe Trp Tyr Arg Gln Tyr Ser Gly Lys Ser Pro Glu Leu Ile
35 40 45
Met Phe Ile Tyr Ser Asn Gly Asp Lys Glu Asp Gly Arg Phe Thr Ala
50 55 60
Gln Leu Asn Lys Ala Ser Gln Tyr Val Ser Leu Leu Ile Arg Asp Ser
65 70 75 80
Gln Pro Ser Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Arg Gly Gly Asn
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Thr Gly Phe Gln Lys Leu Val Phe Gly Thr Gly Thr Arg Leu Leu Val
100 105 110
Ser Pro Asn Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val Tyr Gln Leu Lys Asp
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Pro Arg Ser Gln Asp Ser Thr Leu Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser
130 135 140
Gln Ile Asn Val Pro Lys Thr Met Glu Ser Gly Thr Phe Ile Thr Asp
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Lys Cys Val Leu Asp Met Lys Ala Met Asp Ser Lys Ser Asn Gly Ala
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Ile Ala Trp Ser Asn Gln Thr Ser Phe Thr Cys Gln Asp Ile Phe Lys
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195 200 205
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Leu Leu Val Ile Val Leu Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe
225 230 235 240
Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
245 250
<210> 60
<211> 284
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 60
Ala Val Ile Ser Gln Lys Pro Ser Arg Asp Ile Cys Gln Arg Gly Thr
1 5 10 15
Ser Leu Thr Ile Gln Cys Gln Val Asp Ser Gln Val Thr Met Met Phe
20 25 30
Trp Tyr Arg Gln Gln Pro Gly Gln Ser Leu Thr Leu Ile Ala Thr Ala
35 40 45
Asn Gln Gly Ser Glu Ala Thr Tyr Glu Ser Gly Phe Val Ile Asp Lys
50 55 60
Phe Pro Ile Ser Arg Pro Asn Leu Thr Phe Ser Thr Leu Thr Val Ser
65 70 75 80
Asn Met Ser Pro Glu Asp Ser Ser Ile Tyr Leu Cys Ser Val Arg Ser
85 90 95
Glu Asp Thr Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu Glu
100 105 110
Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val Ser Leu Phe Glu Pro Ser
115 120 125
Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ala
130 135 140
Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn Gly
145 150 155 160
Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro Gln Ala Tyr Lys Glu
165 170 175
Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr
180 185 190
Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe His
195 200 205
Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu Gly Ser Pro Lys Pro Val
210 215 220
Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Ile
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Leu Val Val Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asn Ser
275 280
<210> 61
<211> 598
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 61
Met Ala Ser Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Leu Gly Ser Val Phe Ser
1 5 10 15
Ala Val Ile Ser Gln Lys Pro Ser Arg Asp Ile Cys Gln Arg Gly Thr
20 25 30
Ser Leu Thr Ile Gln Cys Gln Val Asp Ser Gln Val Thr Met Met Phe
35 40 45
Trp Tyr Arg Gln Gln Pro Gly Gln Ser Leu Thr Leu Ile Ala Thr Ala
50 55 60
Asn Gln Gly Ser Glu Ala Thr Tyr Glu Ser Gly Phe Val Ile Asp Lys
65 70 75 80
Phe Pro Ile Ser Arg Pro Asn Leu Thr Phe Ser Thr Leu Thr Val Ser
85 90 95
Asn Met Ser Pro Glu Asp Ser Ser Ile Tyr Leu Cys Ser Val Arg Ser
100 105 110
Glu Asp Thr Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu Glu
115 120 125
Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val Ser Leu Phe Glu Pro Ser
130 135 140
Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ala
145 150 155 160
Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn Gly
165 170 175
Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro Gln Ala Tyr Lys Glu
180 185 190
Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr
195 200 205
Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe His
210 215 220
Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu Gly Ser Pro Lys Pro Val
225 230 235 240
Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Ile
245 250 255
Thr Ser Ala Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr
260 265 270
Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Thr
275 280 285
Leu Val Val Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asn Ser Arg Ala Lys Arg
290 295 300
Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp
305 310 315 320
Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Lys Ser Leu Arg Val Leu Leu Val
325 330 335
Ile Leu Trp Leu Gln Leu Ser Trp Val Trp Ser Gln Gln Lys Glu Val
340 345 350
Glu Gln Asn Ser Gly Pro Leu Ser Val Pro Glu Gly Ala Ile Ala Ser
355 360 365
Leu Asn Cys Thr Tyr Ser Asp Arg Gly Ser Gln Ser Phe Phe Trp Tyr
370 375 380
Arg Gln Tyr Ser Gly Lys Ser Pro Glu Leu Ile Met Phe Ile Tyr Ser
385 390 395 400
Asn Gly Asp Lys Glu Asp Gly Arg Phe Thr Ala Gln Leu Asn Lys Ala
405 410 415
Ser Gln Tyr Val Ser Leu Leu Ile Arg Asp Ser Gln Pro Ser Asp Ser
420 425 430
Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Arg Gly Gly Asn Thr Gly Phe Gln Lys
435 440 445
Leu Val Phe Gly Thr Gly Thr Arg Leu Leu Val Ser Pro Asn Ile Gln
450 455 460
Asn Pro Glu Pro Ala Val Tyr Gln Leu Lys Asp Pro Arg Ser Gln Asp
465 470 475 480
Ser Thr Leu Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Ile Asn Val Pro
485 490 495
Lys Thr Met Glu Ser Gly Thr Phe Ile Thr Asp Lys Cys Val Leu Asp
500 505 510
Met Lys Ala Met Asp Ser Lys Ser Asn Gly Ala Ile Ala Trp Ser Asn
515 520 525
Gln Thr Ser Phe Thr Cys Gln Asp Ile Phe Lys Glu Thr Asn Ala Thr
530 535 540
Tyr Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Ala Thr Leu Thr Glu Lys Ser
545 550 555 560
Phe Glu Thr Asp Met Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Leu Val Ile Val
565 570 575
Leu Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr
580 585 590
Leu Arg Leu Trp Ser Ser
595
<210> 62
<211> 6
<212> PRT
<213> 人类
<400> 62
Val Ser Asn Ala Tyr Asn
1 5
<210> 63
<211> 4
<212> PRT
<213> 人类
<400> 63
Gly Ser Lys Pro
1
<210> 64
<211> 16
<212> PRT
<213> 人类
<400> 64
Cys Ala Val Ser Gly Tyr Gln Leu Ile Trp Gly Ala Gly Thr Lys Leu
1 5 10 15
<210> 65
<211> 5
<212> PRT
<213> 人类
<400> 65
Ser Gly His Ala Thr
1 5
<210> 66
<211> 6
<212> PRT
<213> 人类
<400> 66
Phe Gln Asn Asn Gly Val
1 5
<210> 67
<211> 16
<212> PRT
<213> 人类
<400> 67
Cys Ala Ser Ser Leu Asp Arg Arg Gly Gly Arg Glu Thr Gln Tyr Phe
1 5 10 15
<210> 68
<211> 112
<212> PRT
<213> 人类
<400> 68
Lys Asp Gln Val Phe Gln Pro Ser Thr Val Ala Ser Ser Glu Gly Ala
1 5 10 15
Val Val Glu Ile Phe Cys Asn His Ser Val Ser Asn Ala Tyr Asn Phe
20 25 30
Phe Trp Tyr Leu His Phe Pro Gly Cys Ala Pro Arg Leu Leu Val Lys
35 40 45
Gly Ser Lys Pro Ser Gln Gln Gly Arg Tyr Asn Met Thr Tyr Glu Arg
50 55 60
Phe Ser Ser Ser Leu Leu Ile Leu Gln Val Arg Glu Ala Asp Ala Ala
65 70 75 80
Val Tyr Tyr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Gln Leu Ile Trp Gly Ala Gly
85 90 95
Thr Lys Leu Ile Ile Lys Pro Asn Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val
100 105 110
<210> 69
<211> 114
<212> PRT
<213> 人类
<400> 69
Gly Val Ala Gln Ser Pro Arg Tyr Lys Ile Ile Glu Lys Arg Gln Ser
1 5 10 15
Val Ala Phe Trp Cys Asn Pro Ile Ser Gly His Ala Thr Leu Tyr Trp
20 25 30
Tyr Gln Gln Ile Leu Gly Gln Gly Pro Lys Leu Leu Ile Gln Phe Gln
35 40 45
Asn Asn Gly Val Val Asp Asp Ser Gln Leu Pro Lys Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Ala Glu Arg Leu Lys Gly Val Asp Ser Thr Leu Lys Ile Gln Pro Ala
65 70 75 80
Lys Leu Glu Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala Ser Ser Leu Asp Arg
85 90 95
Arg Gly Gly Arg Glu Thr Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Leu
100 105 110
Val Leu
<210> 70
<211> 137
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 70
Met His Leu Gln Ser Thr Leu Gly Ala Val Trp Leu Gly Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Ser Leu Trp Lys Val Ala Glu Ser Lys Asp Gln Val Phe Gln Pro
20 25 30
Ser Thr Val Ala Ser Ser Glu Gly Ala Val Val Glu Ile Phe Cys Asn
35 40 45
His Ser Val Ser Asn Ala Tyr Asn Phe Phe Trp Tyr Leu His Phe Pro
50 55 60
Gly Cys Ala Pro Arg Leu Leu Val Lys Gly Ser Lys Pro Ser Gln Gln
65 70 75 80
Gly Arg Tyr Asn Met Thr Tyr Glu Arg Phe Ser Ser Ser Leu Leu Ile
85 90 95
Leu Gln Val Arg Glu Ala Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Val Ser
100 105 110
Gly Tyr Gln Leu Ile Trp Gly Ala Gly Thr Lys Leu Ile Ile Lys Pro
115 120 125
Asn Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val
130 135
<210> 71
<211> 135
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 71
Met Ala Thr Arg Leu Leu Cys Trp Ala Ala Leu Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Glu Leu Thr Glu Ala Gly Val Ala Gln Ser Pro Arg Tyr Lys Ile Ile
20 25 30
Glu Lys Arg Gln Ser Val Ala Phe Trp Cys Asn Pro Ile Ser Gly His
35 40 45
Ala Thr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Ile Leu Gly Gln Gly Pro Lys Leu
50 55 60
Leu Ile Gln Phe Gln Asn Asn Gly Val Val Asp Asp Ser Gln Leu Pro
65 70 75 80
Lys Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Leu Lys Gly Val Asp Ser Thr Leu
85 90 95
Lys Ile Gln Pro Ala Lys Leu Glu Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala
100 105 110
Ser Ser Leu Asp Arg Arg Gly Gly Arg Glu Thr Gln Tyr Phe Gly Pro
115 120 125
Gly Thr Arg Leu Leu Val Leu
130 135
<210> 72
<211> 274
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 72
Met His Leu Gln Ser Thr Leu Gly Ala Val Trp Leu Gly Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Ser Leu Trp Lys Val Ala Glu Ser Lys Asp Gln Val Phe Gln Pro
20 25 30
Ser Thr Val Ala Ser Ser Glu Gly Ala Val Val Glu Ile Phe Cys Asn
35 40 45
His Ser Val Ser Asn Ala Tyr Asn Phe Phe Trp Tyr Leu His Phe Pro
50 55 60
Gly Cys Ala Pro Arg Leu Leu Val Lys Gly Ser Lys Pro Ser Gln Gln
65 70 75 80
Gly Arg Tyr Asn Met Thr Tyr Glu Arg Phe Ser Ser Ser Leu Leu Ile
85 90 95
Leu Gln Val Arg Glu Ala Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Val Ser
100 105 110
Gly Tyr Gln Leu Ile Trp Gly Ala Gly Thr Lys Leu Ile Ile Lys Pro
115 120 125
Asn Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val Asn Ile Gln Asn Pro Glu Pro
130 135 140
Ala Val Tyr Gln Leu Lys Asp Pro Arg Ser Gln Asp Ser Thr Leu Cys
145 150 155 160
Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Ile Asn Val Pro Lys Thr Met Glu
165 170 175
Ser Gly Thr Phe Ile Thr Asp Lys Cys Val Leu Asp Met Lys Ala Met
180 185 190
Asp Ser Lys Ser Asn Gly Ala Ile Ala Trp Ser Asn Gln Thr Ser Phe
195 200 205
Thr Cys Gln Asp Ile Phe Lys Glu Thr Asn Ala Thr Tyr Pro Ser Ser
210 215 220
Asp Val Pro Cys Asp Ala Thr Leu Thr Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp
225 230 235 240
Met Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Leu Val Ile Val Leu Arg Ile Leu
245 250 255
Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp
260 265 270
Ser Ser
<210> 73
<211> 308
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 73
Met Ala Thr Arg Leu Leu Cys Trp Ala Ala Leu Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Glu Leu Thr Glu Ala Gly Val Ala Gln Ser Pro Arg Tyr Lys Ile Ile
20 25 30
Glu Lys Arg Gln Ser Val Ala Phe Trp Cys Asn Pro Ile Ser Gly His
35 40 45
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50 55 60
Leu Ile Gln Phe Gln Asn Asn Gly Val Val Asp Asp Ser Gln Leu Pro
65 70 75 80
Lys Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Leu Lys Gly Val Asp Ser Thr Leu
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Lys Ile Gln Pro Ala Lys Leu Glu Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala
100 105 110
Ser Ser Leu Asp Arg Arg Gly Gly Arg Glu Thr Gln Tyr Phe Gly Pro
115 120 125
Gly Thr Arg Leu Leu Val Leu Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro
130 135 140
Lys Val Ser Leu Phe Glu Pro Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln
145 150 155 160
Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val
165 170 175
Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys
180 185 190
Thr Asp Pro Gln Ala Tyr Lys Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser
195 200 205
Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His
210 215 220
Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp
225 230 235 240
Pro Glu Gly Ser Pro Lys Pro Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala
245 250 255
Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Ile Thr Ser Ala Ser Tyr Gln Gln Gly
260 265 270
Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr
275 280 285
Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Thr Leu Val Val Met Ala Met Val Lys
290 295 300
Arg Lys Asn Ser
305
<210> 74
<211> 249
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 74
Lys Asp Gln Val Phe Gln Pro Ser Thr Val Ala Ser Ser Glu Gly Ala
1 5 10 15
Val Val Glu Ile Phe Cys Asn His Ser Val Ser Asn Ala Tyr Asn Phe
20 25 30
Phe Trp Tyr Leu His Phe Pro Gly Cys Ala Pro Arg Leu Leu Val Lys
35 40 45
Gly Ser Lys Pro Ser Gln Gln Gly Arg Tyr Asn Met Thr Tyr Glu Arg
50 55 60
Phe Ser Ser Ser Leu Leu Ile Leu Gln Val Arg Glu Ala Asp Ala Ala
65 70 75 80
Val Tyr Tyr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Gln Leu Ile Trp Gly Ala Gly
85 90 95
Thr Lys Leu Ile Ile Lys Pro Asn Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val
100 105 110
Asn Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val Tyr Gln Leu Lys Asp Pro Arg
115 120 125
Ser Gln Asp Ser Thr Leu Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Ile
130 135 140
Asn Val Pro Lys Thr Met Glu Ser Gly Thr Phe Ile Thr Asp Lys Cys
145 150 155 160
Val Leu Asp Met Lys Ala Met Asp Ser Lys Ser Asn Gly Ala Ile Ala
165 170 175
Trp Ser Asn Gln Thr Ser Phe Thr Cys Gln Asp Ile Phe Lys Glu Thr
180 185 190
Asn Ala Thr Tyr Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Ala Thr Leu Thr
195 200 205
Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Met Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Leu
210 215 220
Val Ile Val Leu Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu
225 230 235 240
Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
245
<210> 75
<211> 287
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 75
Gly Val Ala Gln Ser Pro Arg Tyr Lys Ile Ile Glu Lys Arg Gln Ser
1 5 10 15
Val Ala Phe Trp Cys Asn Pro Ile Ser Gly His Ala Thr Leu Tyr Trp
20 25 30
Tyr Gln Gln Ile Leu Gly Gln Gly Pro Lys Leu Leu Ile Gln Phe Gln
35 40 45
Asn Asn Gly Val Val Asp Asp Ser Gln Leu Pro Lys Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Ala Glu Arg Leu Lys Gly Val Asp Ser Thr Leu Lys Ile Gln Pro Ala
65 70 75 80
Lys Leu Glu Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala Ser Ser Leu Asp Arg
85 90 95
Arg Gly Gly Arg Glu Thr Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Leu
100 105 110
Val Leu Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val Ser Leu Phe
115 120 125
Glu Pro Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr Leu Val
130 135 140
Cys Leu Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp
145 150 155 160
Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro Gln Ala
165 170 175
Tyr Lys Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val
180 185 190
Ser Ala Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln Val
195 200 205
Gln Phe His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu Gly Ser Pro
210 215 220
Lys Pro Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala Asp
225 230 235 240
Cys Gly Ile Thr Ser Ala Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala Thr
245 250 255
Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val Leu
260 265 270
Val Ser Thr Leu Val Val Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asn Ser
275 280 285
<210> 76
<211> 609
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 76
Met Ala Thr Arg Leu Leu Cys Trp Ala Ala Leu Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Glu Leu Thr Glu Ala Gly Val Ala Gln Ser Pro Arg Tyr Lys Ile Ile
20 25 30
Glu Lys Arg Gln Ser Val Ala Phe Trp Cys Asn Pro Ile Ser Gly His
35 40 45
Ala Thr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Ile Leu Gly Gln Gly Pro Lys Leu
50 55 60
Leu Ile Gln Phe Gln Asn Asn Gly Val Val Asp Asp Ser Gln Leu Pro
65 70 75 80
Lys Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Leu Lys Gly Val Asp Ser Thr Leu
85 90 95
Lys Ile Gln Pro Ala Lys Leu Glu Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala
100 105 110
Ser Ser Leu Asp Arg Arg Gly Gly Arg Glu Thr Gln Tyr Phe Gly Pro
115 120 125
Gly Thr Arg Leu Leu Val Leu Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro
130 135 140
Lys Val Ser Leu Phe Glu Pro Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln
145 150 155 160
Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val
165 170 175
Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys
180 185 190
Thr Asp Pro Gln Ala Tyr Lys Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser
195 200 205
Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His
210 215 220
Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp
225 230 235 240
Pro Glu Gly Ser Pro Lys Pro Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala
245 250 255
Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Ile Thr Ser Ala Ser Tyr Gln Gln Gly
260 265 270
Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr
275 280 285
Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Thr Leu Val Val Met Ala Met Val Lys
290 295 300
Arg Lys Asn Ser Arg Ala Lys Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe
305 310 315 320
Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met
325 330 335
His Leu Gln Ser Thr Leu Gly Ala Val Trp Leu Gly Leu Leu Leu Asn
340 345 350
Ser Leu Trp Lys Val Ala Glu Ser Lys Asp Gln Val Phe Gln Pro Ser
355 360 365
Thr Val Ala Ser Ser Glu Gly Ala Val Val Glu Ile Phe Cys Asn His
370 375 380
Ser Val Ser Asn Ala Tyr Asn Phe Phe Trp Tyr Leu His Phe Pro Gly
385 390 395 400
Cys Ala Pro Arg Leu Leu Val Lys Gly Ser Lys Pro Ser Gln Gln Gly
405 410 415
Arg Tyr Asn Met Thr Tyr Glu Arg Phe Ser Ser Ser Leu Leu Ile Leu
420 425 430
Gln Val Arg Glu Ala Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Val Ser Gly
435 440 445
Tyr Gln Leu Ile Trp Gly Ala Gly Thr Lys Leu Ile Ile Lys Pro Asn
450 455 460
Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val Asn Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala
465 470 475 480
Val Tyr Gln Leu Lys Asp Pro Arg Ser Gln Asp Ser Thr Leu Cys Leu
485 490 495
Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Ile Asn Val Pro Lys Thr Met Glu Ser
500 505 510
Gly Thr Phe Ile Thr Asp Lys Cys Val Leu Asp Met Lys Ala Met Asp
515 520 525
Ser Lys Ser Asn Gly Ala Ile Ala Trp Ser Asn Gln Thr Ser Phe Thr
530 535 540
Cys Gln Asp Ile Phe Lys Glu Thr Asn Ala Thr Tyr Pro Ser Ser Asp
545 550 555 560
Val Pro Cys Asp Ala Thr Leu Thr Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Met
565 570 575
Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Leu Val Ile Val Leu Arg Ile Leu Leu
580 585 590
Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser
595 600 605
Ser
<210> 77
<211> 137
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 77
Asn Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val Tyr Gln Leu Lys Asp Pro Arg
1 5 10 15
Ser Gln Asp Ser Thr Leu Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Ile
20 25 30
Asn Val Pro Lys Thr Met Glu Ser Gly Thr Phe Ile Thr Asp Lys Cys
35 40 45
Val Leu Asp Met Lys Ala Met Asp Ser Lys Ser Asn Gly Ala Ile Ala
50 55 60
Trp Ser Asn Gln Thr Ser Phe Thr Cys Gln Asp Ile Phe Lys Glu Thr
65 70 75 80
Asn Ala Thr Tyr Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Ala Thr Leu Thr
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Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Met Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Leu
100 105 110
Val Ile Val Leu Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu
115 120 125
Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
130 135
<210> 78
<211> 137
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 78
Asp Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val Tyr Gln Leu Lys Asp Pro Arg
1 5 10 15
Ser Gln Asp Ser Thr Leu Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Ile
20 25 30
Asn Val Pro Lys Thr Met Glu Ser Gly Thr Phe Ile Thr Asp Lys Cys
35 40 45
Val Leu Asp Met Lys Ala Met Asp Ser Lys Ser Asn Gly Ala Ile Ala
50 55 60
Trp Ser Asn Gln Thr Ser Phe Thr Cys Gln Asp Ile Phe Lys Glu Thr
65 70 75 80
Asn Ala Thr Tyr Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Ala Thr Leu Thr
85 90 95
Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Met Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Leu
100 105 110
Val Ile Val Leu Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu
115 120 125
Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
130 135
<210> 79
<211> 173
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 79
Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val Ser Leu Phe Glu Pro
1 5 10 15
Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu
20 25 30
Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn
35 40 45
Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro Gln Ala Tyr Lys
50 55 60
Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala
65 70 75 80
Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe
85 90 95
His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu Gly Ser Pro Lys Pro
100 105 110
Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly
115 120 125
Ile Thr Ser Ala Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu
130 135 140
Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser
145 150 155 160
Thr Leu Val Val Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asn Ser
165 170
<210> 80
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 80
Arg Ala Lys Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys
1 5 10 15
Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro
20 25
<210> 81
<211> 341
<212> PRT
<213> 人类
<400> 81
Met Glu Glu Pro Gln Ser Asp Pro Ser Val Glu Pro Pro Leu Ser Gln
1 5 10 15
Glu Thr Phe Ser Asp Leu Trp Lys Leu Leu Pro Glu Asn Asn Val Leu
20 25 30
Ser Pro Leu Pro Ser Gln Ala Met Asp Asp Leu Met Leu Ser Pro Asp
35 40 45
Asp Ile Glu Gln Trp Phe Thr Glu Asp Pro Gly Pro Asp Glu Ala Pro
50 55 60
Arg Met Pro Glu Ala Ala Pro Pro Val Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro
65 70 75 80
Thr Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ser Trp Pro Leu Ser Ser Ser
85 90 95
Val Pro Ser Gln Lys Thr Tyr Gln Gly Ser Tyr Gly Phe Arg Leu Gly
100 105 110
Phe Leu His Ser Gly Thr Ala Lys Ser Val Thr Cys Thr Tyr Ser Pro
115 120 125
Ala Leu Asn Lys Met Phe Cys Gln Leu Ala Lys Thr Cys Pro Val Gln
130 135 140
Leu Trp Val Asp Ser Thr Pro Pro Pro Gly Thr Arg Val Arg Ala Met
145 150 155 160
Ala Ile Tyr Lys Gln Ser Gln His Met Thr Glu Val Val Arg Arg Cys
165 170 175
Pro His His Glu Arg Cys Ser Asp Ser Asp Gly Leu Ala Pro Pro Gln
180 185 190
His Leu Ile Arg Val Glu Gly Asn Leu Arg Val Glu Tyr Leu Asp Asp
195 200 205
Arg Asn Thr Phe Arg His Ser Val Val Val Pro Tyr Glu Pro Pro Glu
210 215 220
Val Gly Ser Asp Cys Thr Thr Ile His Tyr Asn Tyr Met Cys Asn Ser
225 230 235 240
Ser Cys Met Gly Gly Met Asn Arg Arg Pro Ile Leu Thr Ile Ile Thr
245 250 255
Leu Glu Asp Ser Ser Gly Asn Leu Leu Gly Arg Asn Ser Phe Glu Val
260 265 270
Arg Val Cys Ala Cys Pro Gly Arg Asp Arg Arg Thr Glu Glu Glu Asn
275 280 285
Leu Arg Lys Lys Gly Glu Pro His His Glu Leu Pro Pro Gly Ser Thr
290 295 300
Lys Arg Ala Leu Pro Asn Asn Thr Ser Ser Ser Pro Gln Pro Lys Lys
305 310 315 320
Lys Pro Leu Asp Gly Glu Tyr Phe Thr Leu Gln Asp Gln Thr Ser Phe
325 330 335
Gln Lys Glu Asn Cys
340
<210> 82
<211> 346
<212> PRT
<213> 人类
<400> 82
Met Glu Glu Pro Gln Ser Asp Pro Ser Val Glu Pro Pro Leu Ser Gln
1 5 10 15
Glu Thr Phe Ser Asp Leu Trp Lys Leu Leu Pro Glu Asn Asn Val Leu
20 25 30
Ser Pro Leu Pro Ser Gln Ala Met Asp Asp Leu Met Leu Ser Pro Asp
35 40 45
Asp Ile Glu Gln Trp Phe Thr Glu Asp Pro Gly Pro Asp Glu Ala Pro
50 55 60
Arg Met Pro Glu Ala Ala Pro Pro Val Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro
65 70 75 80
Thr Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ser Trp Pro Leu Ser Ser Ser
85 90 95
Val Pro Ser Gln Lys Thr Tyr Gln Gly Ser Tyr Gly Phe Arg Leu Gly
100 105 110
Phe Leu His Ser Gly Thr Ala Lys Ser Val Thr Cys Thr Tyr Ser Pro
115 120 125
Ala Leu Asn Lys Met Phe Cys Gln Leu Ala Lys Thr Cys Pro Val Gln
130 135 140
Leu Trp Val Asp Ser Thr Pro Pro Pro Gly Thr Arg Val Arg Ala Met
145 150 155 160
Ala Ile Tyr Lys Gln Ser Gln His Met Thr Glu Val Val Arg Arg Cys
165 170 175
Pro His His Glu Arg Cys Ser Asp Ser Asp Gly Leu Ala Pro Pro Gln
180 185 190
His Leu Ile Arg Val Glu Gly Asn Leu Arg Val Glu Tyr Leu Asp Asp
195 200 205
Arg Asn Thr Phe Arg His Ser Val Val Val Pro Tyr Glu Pro Pro Glu
210 215 220
Val Gly Ser Asp Cys Thr Thr Ile His Tyr Asn Tyr Met Cys Asn Ser
225 230 235 240
Ser Cys Met Gly Gly Met Asn Arg Arg Pro Ile Leu Thr Ile Ile Thr
245 250 255
Leu Glu Asp Ser Ser Gly Asn Leu Leu Gly Arg Asn Ser Phe Glu Val
260 265 270
Arg Val Cys Ala Cys Pro Gly Arg Asp Arg Arg Thr Glu Glu Glu Asn
275 280 285
Leu Arg Lys Lys Gly Glu Pro His His Glu Leu Pro Pro Gly Ser Thr
290 295 300
Lys Arg Ala Leu Pro Asn Asn Thr Ser Ser Ser Pro Gln Pro Lys Lys
305 310 315 320
Lys Pro Leu Asp Gly Glu Tyr Phe Thr Leu Gln Met Leu Leu Asp Leu
325 330 335
Arg Trp Cys Tyr Phe Leu Ile Asn Ser Ser
340 345
<210> 83
<211> 354
<212> PRT
<213> 人类
<400> 83
Met Asp Asp Leu Met Leu Ser Pro Asp Asp Ile Glu Gln Trp Phe Thr
1 5 10 15
Glu Asp Pro Gly Pro Asp Glu Ala Pro Arg Met Pro Glu Ala Ala Pro
20 25 30
Pro Val Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Thr Pro Ala Ala Pro Ala Pro
35 40 45
Ala Pro Ser Trp Pro Leu Ser Ser Ser Val Pro Ser Gln Lys Thr Tyr
50 55 60
Gln Gly Ser Tyr Gly Phe Arg Leu Gly Phe Leu His Ser Gly Thr Ala
65 70 75 80
Lys Ser Val Thr Cys Thr Tyr Ser Pro Ala Leu Asn Lys Met Phe Cys
85 90 95
Gln Leu Ala Lys Thr Cys Pro Val Gln Leu Trp Val Asp Ser Thr Pro
100 105 110
Pro Pro Gly Thr Arg Val Arg Ala Met Ala Ile Tyr Lys Gln Ser Gln
115 120 125
His Met Thr Glu Val Val Arg Arg Cys Pro His His Glu Arg Cys Ser
130 135 140
Asp Ser Asp Gly Leu Ala Pro Pro Gln His Leu Ile Arg Val Glu Gly
145 150 155 160
Asn Leu Arg Val Glu Tyr Leu Asp Asp Arg Asn Thr Phe Arg His Ser
165 170 175
Val Val Val Pro Tyr Glu Pro Pro Glu Val Gly Ser Asp Cys Thr Thr
180 185 190
Ile His Tyr Asn Tyr Met Cys Asn Ser Ser Cys Met Gly Gly Met Asn
195 200 205
Arg Arg Pro Ile Leu Thr Ile Ile Thr Leu Glu Asp Ser Ser Gly Asn
210 215 220
Leu Leu Gly Arg Asn Ser Phe Glu Val Arg Val Cys Ala Cys Pro Gly
225 230 235 240
Arg Asp Arg Arg Thr Glu Glu Glu Asn Leu Arg Lys Lys Gly Glu Pro
245 250 255
His His Glu Leu Pro Pro Gly Ser Thr Lys Arg Ala Leu Pro Asn Asn
260 265 270
Thr Ser Ser Ser Pro Gln Pro Lys Lys Lys Pro Leu Asp Gly Glu Tyr
275 280 285
Phe Thr Leu Gln Ile Arg Gly Arg Glu Arg Phe Glu Met Phe Arg Glu
290 295 300
Leu Asn Glu Ala Leu Glu Leu Lys Asp Ala Gln Ala Gly Lys Glu Pro
305 310 315 320
Gly Gly Ser Arg Ala His Ser Ser His Leu Lys Ser Lys Lys Gly Gln
325 330 335
Ser Thr Ser Arg His Lys Lys Leu Met Phe Lys Thr Glu Gly Pro Asp
340 345 350
Ser Asp
<210> 84
<211> 302
<212> PRT
<213> 人类
<400> 84
Met Asp Asp Leu Met Leu Ser Pro Asp Asp Ile Glu Gln Trp Phe Thr
1 5 10 15
Glu Asp Pro Gly Pro Asp Glu Ala Pro Arg Met Pro Glu Ala Ala Pro
20 25 30
Pro Val Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Thr Pro Ala Ala Pro Ala Pro
35 40 45
Ala Pro Ser Trp Pro Leu Ser Ser Ser Val Pro Ser Gln Lys Thr Tyr
50 55 60
Gln Gly Ser Tyr Gly Phe Arg Leu Gly Phe Leu His Ser Gly Thr Ala
65 70 75 80
Lys Ser Val Thr Cys Thr Tyr Ser Pro Ala Leu Asn Lys Met Phe Cys
85 90 95
Gln Leu Ala Lys Thr Cys Pro Val Gln Leu Trp Val Asp Ser Thr Pro
100 105 110
Pro Pro Gly Thr Arg Val Arg Ala Met Ala Ile Tyr Lys Gln Ser Gln
115 120 125
His Met Thr Glu Val Val Arg Arg Cys Pro His His Glu Arg Cys Ser
130 135 140
Asp Ser Asp Gly Leu Ala Pro Pro Gln His Leu Ile Arg Val Glu Gly
145 150 155 160
Asn Leu Arg Val Glu Tyr Leu Asp Asp Arg Asn Thr Phe Arg His Ser
165 170 175
Val Val Val Pro Tyr Glu Pro Pro Glu Val Gly Ser Asp Cys Thr Thr
180 185 190
Ile His Tyr Asn Tyr Met Cys Asn Ser Ser Cys Met Gly Gly Met Asn
195 200 205
Arg Arg Pro Ile Leu Thr Ile Ile Thr Leu Glu Asp Ser Ser Gly Asn
210 215 220
Leu Leu Gly Arg Asn Ser Phe Glu Val Arg Val Cys Ala Cys Pro Gly
225 230 235 240
Arg Asp Arg Arg Thr Glu Glu Glu Asn Leu Arg Lys Lys Gly Glu Pro
245 250 255
His His Glu Leu Pro Pro Gly Ser Thr Lys Arg Ala Leu Pro Asn Asn
260 265 270
Thr Ser Ser Ser Pro Gln Pro Lys Lys Lys Pro Leu Asp Gly Glu Tyr
275 280 285
Phe Thr Leu Gln Asp Gln Thr Ser Phe Gln Lys Glu Asn Cys
290 295 300
<210> 85
<211> 307
<212> PRT
<213> 人类
<400> 85
Met Asp Asp Leu Met Leu Ser Pro Asp Asp Ile Glu Gln Trp Phe Thr
1 5 10 15
Glu Asp Pro Gly Pro Asp Glu Ala Pro Arg Met Pro Glu Ala Ala Pro
20 25 30
Pro Val Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Thr Pro Ala Ala Pro Ala Pro
35 40 45
Ala Pro Ser Trp Pro Leu Ser Ser Ser Val Pro Ser Gln Lys Thr Tyr
50 55 60
Gln Gly Ser Tyr Gly Phe Arg Leu Gly Phe Leu His Ser Gly Thr Ala
65 70 75 80
Lys Ser Val Thr Cys Thr Tyr Ser Pro Ala Leu Asn Lys Met Phe Cys
85 90 95
Gln Leu Ala Lys Thr Cys Pro Val Gln Leu Trp Val Asp Ser Thr Pro
100 105 110
Pro Pro Gly Thr Arg Val Arg Ala Met Ala Ile Tyr Lys Gln Ser Gln
115 120 125
His Met Thr Glu Val Val Arg Arg Cys Pro His His Glu Arg Cys Ser
130 135 140
Asp Ser Asp Gly Leu Ala Pro Pro Gln His Leu Ile Arg Val Glu Gly
145 150 155 160
Asn Leu Arg Val Glu Tyr Leu Asp Asp Arg Asn Thr Phe Arg His Ser
165 170 175
Val Val Val Pro Tyr Glu Pro Pro Glu Val Gly Ser Asp Cys Thr Thr
180 185 190
Ile His Tyr Asn Tyr Met Cys Asn Ser Ser Cys Met Gly Gly Met Asn
195 200 205
Arg Arg Pro Ile Leu Thr Ile Ile Thr Leu Glu Asp Ser Ser Gly Asn
210 215 220
Leu Leu Gly Arg Asn Ser Phe Glu Val Arg Val Cys Ala Cys Pro Gly
225 230 235 240
Arg Asp Arg Arg Thr Glu Glu Glu Asn Leu Arg Lys Lys Gly Glu Pro
245 250 255
His His Glu Leu Pro Pro Gly Ser Thr Lys Arg Ala Leu Pro Asn Asn
260 265 270
Thr Ser Ser Ser Pro Gln Pro Lys Lys Lys Pro Leu Asp Gly Glu Tyr
275 280 285
Phe Thr Leu Gln Met Leu Leu Asp Leu Arg Trp Cys Tyr Phe Leu Ile
290 295 300
Asn Ser Ser
305
<210> 86
<211> 261
<212> PRT
<213> 人类
<400> 86
Met Phe Cys Gln Leu Ala Lys Thr Cys Pro Val Gln Leu Trp Val Asp
1 5 10 15
Ser Thr Pro Pro Pro Gly Thr Arg Val Arg Ala Met Ala Ile Tyr Lys
20 25 30
Gln Ser Gln His Met Thr Glu Val Val Arg Arg Cys Pro His His Glu
35 40 45
Arg Cys Ser Asp Ser Asp Gly Leu Ala Pro Pro Gln His Leu Ile Arg
50 55 60
Val Glu Gly Asn Leu Arg Val Glu Tyr Leu Asp Asp Arg Asn Thr Phe
65 70 75 80
Arg His Ser Val Val Val Pro Tyr Glu Pro Pro Glu Val Gly Ser Asp
85 90 95
Cys Thr Thr Ile His Tyr Asn Tyr Met Cys Asn Ser Ser Cys Met Gly
100 105 110
Gly Met Asn Arg Arg Pro Ile Leu Thr Ile Ile Thr Leu Glu Asp Ser
115 120 125
Ser Gly Asn Leu Leu Gly Arg Asn Ser Phe Glu Val Arg Val Cys Ala
130 135 140
Cys Pro Gly Arg Asp Arg Arg Thr Glu Glu Glu Asn Leu Arg Lys Lys
145 150 155 160
Gly Glu Pro His His Glu Leu Pro Pro Gly Ser Thr Lys Arg Ala Leu
165 170 175
Pro Asn Asn Thr Ser Ser Ser Pro Gln Pro Lys Lys Lys Pro Leu Asp
180 185 190
Gly Glu Tyr Phe Thr Leu Gln Ile Arg Gly Arg Glu Arg Phe Glu Met
195 200 205
Phe Arg Glu Leu Asn Glu Ala Leu Glu Leu Lys Asp Ala Gln Ala Gly
210 215 220
Lys Glu Pro Gly Gly Ser Arg Ala His Ser Ser His Leu Lys Ser Lys
225 230 235 240
Lys Gly Gln Ser Thr Ser Arg His Lys Lys Leu Met Phe Lys Thr Glu
245 250 255
Gly Pro Asp Ser Asp
260
<210> 87
<211> 209
<212> PRT
<213> 人类
<400> 87
Met Phe Cys Gln Leu Ala Lys Thr Cys Pro Val Gln Leu Trp Val Asp
1 5 10 15
Ser Thr Pro Pro Pro Gly Thr Arg Val Arg Ala Met Ala Ile Tyr Lys
20 25 30
Gln Ser Gln His Met Thr Glu Val Val Arg Arg Cys Pro His His Glu
35 40 45
Arg Cys Ser Asp Ser Asp Gly Leu Ala Pro Pro Gln His Leu Ile Arg
50 55 60
Val Glu Gly Asn Leu Arg Val Glu Tyr Leu Asp Asp Arg Asn Thr Phe
65 70 75 80
Arg His Ser Val Val Val Pro Tyr Glu Pro Pro Glu Val Gly Ser Asp
85 90 95
Cys Thr Thr Ile His Tyr Asn Tyr Met Cys Asn Ser Ser Cys Met Gly
100 105 110
Gly Met Asn Arg Arg Pro Ile Leu Thr Ile Ile Thr Leu Glu Asp Ser
115 120 125
Ser Gly Asn Leu Leu Gly Arg Asn Ser Phe Glu Val Arg Val Cys Ala
130 135 140
Cys Pro Gly Arg Asp Arg Arg Thr Glu Glu Glu Asn Leu Arg Lys Lys
145 150 155 160
Gly Glu Pro His His Glu Leu Pro Pro Gly Ser Thr Lys Arg Ala Leu
165 170 175
Pro Asn Asn Thr Ser Ser Ser Pro Gln Pro Lys Lys Lys Pro Leu Asp
180 185 190
Gly Glu Tyr Phe Thr Leu Gln Asp Gln Thr Ser Phe Gln Lys Glu Asn
195 200 205
Cys
<210> 88
<211> 214
<212> PRT
<213> 人类
<400> 88
Met Phe Cys Gln Leu Ala Lys Thr Cys Pro Val Gln Leu Trp Val Asp
1 5 10 15
Ser Thr Pro Pro Pro Gly Thr Arg Val Arg Ala Met Ala Ile Tyr Lys
20 25 30
Gln Ser Gln His Met Thr Glu Val Val Arg Arg Cys Pro His His Glu
35 40 45
Arg Cys Ser Asp Ser Asp Gly Leu Ala Pro Pro Gln His Leu Ile Arg
50 55 60
Val Glu Gly Asn Leu Arg Val Glu Tyr Leu Asp Asp Arg Asn Thr Phe
65 70 75 80
Arg His Ser Val Val Val Pro Tyr Glu Pro Pro Glu Val Gly Ser Asp
85 90 95
Cys Thr Thr Ile His Tyr Asn Tyr Met Cys Asn Ser Ser Cys Met Gly
100 105 110
Gly Met Asn Arg Arg Pro Ile Leu Thr Ile Ile Thr Leu Glu Asp Ser
115 120 125
Ser Gly Asn Leu Leu Gly Arg Asn Ser Phe Glu Val Arg Val Cys Ala
130 135 140
Cys Pro Gly Arg Asp Arg Arg Thr Glu Glu Glu Asn Leu Arg Lys Lys
145 150 155 160
Gly Glu Pro His His Glu Leu Pro Pro Gly Ser Thr Lys Arg Ala Leu
165 170 175
Pro Asn Asn Thr Ser Ser Ser Pro Gln Pro Lys Lys Lys Pro Leu Asp
180 185 190
Gly Glu Tyr Phe Thr Leu Gln Met Leu Leu Asp Leu Arg Trp Cys Tyr
195 200 205
Phe Leu Ile Asn Ser Ser
210
<210> 89
<211> 25
<212> PRT
<213> 人类
<400> 89
Thr Cys Thr Tyr Ser Pro Ala Leu Asn Lys Met Phe Cys Gln Leu Ala
1 5 10 15
Lys Thr Cys Pro Val Gln Leu Trp Val
20 25
<210> 90
<211> 25
<212> PRT
<213> 人类
<400> 90
Thr Cys Thr Tyr Ser Pro Ala Leu Asn Lys Met Phe Tyr Gln Leu Ala
1 5 10 15
Lys Thr Cys Pro Val Gln Leu Trp Val
20 25
<210> 91
<211> 9
<212> PRT
<213> 人类
<400> 91
His Met Thr Glu Val Val Arg Arg Cys
1 5
<210> 92
<211> 9
<212> PRT
<213> 人类
<400> 92
His Met Thr Glu Val Val Arg His Cys
1 5
<210> 93
<211> 25
<212> PRT
<213> 人类
<400> 93
Val Gly Ser Asp Cys Thr Thr Ile His Tyr Asn Tyr Met Cys Asn Ser
1 5 10 15
Ser Cys Met Gly Gly Met Asn Arg Arg
20 25
<210> 94
<211> 25
<212> PRT
<213> 人类
<400> 94
Val Gly Ser Asp Cys Thr Thr Ile His Tyr Asn Tyr Ile Cys Asn Ser
1 5 10 15
Ser Cys Met Gly Gly Met Asn Arg Arg
20 25
<210> 95
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 95
Arg Ala Lys Arg
1
<210> 96
<211> 25
<212> PRT
<213> 人类
<400> 96
Asn Val Leu Tyr Ser Pro Ala Leu Asn Lys Met Phe Tyr Gln Leu Ala
1 5 10 15
Lys Thr Cys Pro Val Gln Leu Trp Val
20 25
<210> 97
<211> 25
<212> PRT
<213> 人类
<400> 97
Ser Gly Thr Ala Lys Ser Val Thr Cys Thr Met Phe Tyr Gln Leu Ala
1 5 10 15
Lys Thr Cys Pro Val Gln Leu Trp Val
20 25

Claims (39)

1.一种经分离的或经纯化的T细胞受体(TCR)，其对人p53C135Y、人p53R175H或人p53M237I氨基酸序列具有抗原特异性，其中所述TCR包含以下氨基酸序列:
(1)SEQ ID NO:2-4的全部；
(2)SEQ ID NO:5-7的全部；
(3)SEQ ID NO:2-7的全部；
(4)SEQ ID NO:17-19的全部；
(5)SEQ ID NO:20-22的全部；
(6)SEQ ID NO:17-22的全部；
(7)SEQ ID NO:32-34的全部；
(8)SEQ ID NO:35-37的全部；
(9)SEQ ID NO:32-37的全部；
(10)SEQ ID NO:47-49的全部；
(11)SEQ ID NO:50-52的全部；
(12)SEQ ID NO:47-52的全部；
(13)SEQ ID NO:62-64的全部；
(14)SEQ ID NO:65-67的全部；或者
(15)SEQ ID NO:62-67的全部。
2.根据权利要求1所述的TCR，其中所述TCR包含以下氨基酸序列:
(1)SEQ ID NO:8；
(2)SEQ ID NO:9；
(3)SEQ ID NO:8和9两者；
(4)SEQ ID NO:10；
(5)SEQ ID NO:11；
(6)SEQ ID NO:10和11两者；
(7)SEQ ID NO:23；
(8)SEQ ID NO:24；
(9)SEQ ID NO:23和24两者；
(10)SEQ ID NO:25；
(11)SEQ ID NO:26；
(12)SEQ ID NO:25和26两者；
(13)SEQ ID NO:38；
(14)SEQ ID NO:39；
(15)SEQ ID NO:38和39两者；
(16)SEQ ID NO:40；
(17)SEQ ID NO:41；
(18)SEQ ID NO:40和41两者；
(19)SEQ ID NO:53；
(20)SEQ ID NO:54；
(21)SEQ ID NO:53和54两者；
(22)SEQ ID NO:55；
(23)SEQ ID NO:56；
(24)SEQ ID NO:55和56两者；
(25)SEQ ID NO:68；
(26)SEQ ID NO:69；
(27)SEQ ID NO:68和69两者；
(28)SEQ ID NO:70；
(29)SEQ ID NO:71；或者
(30)SEQ ID NO:70和71两者。
3.根据权利要求1或2所述的TCR，其中所述TCR包含以下氨基酸序列:
(1)SEQ ID NO:12；
(2)SEQ ID NO:13；
(3)SEQ ID NO:12和13两者；
(4)SEQ ID NO:14；
(5)SEQ ID NO:15；
(6)SEQ ID NO:14和15两者；
(7)SEQ ID NO:27；
(8)SEQ ID NO:28；
(9)SEQ ID NO:27和28两者；
(10)SEQ ID NO:29；
(11)SEQ ID NO:30；
(12)SEQ ID NO:29和30两者；
(13)SEQ ID NO:42；
(14)SEQ ID NO:43；
(15)SEQ ID NO:42和43两者；
(16)SEQ ID NO:44；
(17)SEQ ID NO:45；
(18)SEQ ID NO:44和45两者；
(19)SEQ ID NO:57；
(20)SEQ ID NO:58；
(21)SEQ ID NO:57和58两者；
(22)SEQ ID NO:59；
(23)SEQ ID NO:60；
(24)SEQ ID NO:59和60两者；
(25)SEQ ID NO:72；
(26)SEQ ID NO:73；
(27)SEQ ID NO:72和73两者；
(28)SEQ ID NO:74；
(29)SEQ ID NO:75；或者
(30)SEQ ID NO:74和75两者。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的TCR，其中所述人p53C135Y氨基酸序列是TCTYSPALNKMFYQLAKTCPVQLWV(SEQ ID NO:90)。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的TCR，其中所述TCR对野生型人p53氨基酸序列TCTYSALNKMFCQLAKTCPVQLWV(SEQ ID NO:89)不具有抗原特异性。
6.根据权利要求1-3中任一项所述的TCR，其中所述人p53R175H氨基酸序列是HMTEVVRHC(SEQ ID NO:92)。
7.根据权利要求1-3和6中任一项所述的TCR，其中所述TCR对野生型人p53氨基酸序列HMTEVVRRC(SEQ ID NO:91)不具有抗原特异性。
8.根据权利要求1-3中任一项所述的TCR，其中所述人p53M237I氨基酸序列是VGSDCTTIHYNYICNSSCMGGMNRR(SEQ ID NO:94)。
9.根据权利要求1-3和8中任一项所述的TCR，其中所述TCR对野生型人p53氨基酸序列VGSDCTTIHYNYMCNSSCMGGMNRR(SEQ ID NO:93)不具有抗原特异性。
10.一种经分离的或经纯化的多肽，其包含权利要求1-9中任一项所述的TCR的功能性部分，其中所述多肽包含以下氨基酸序列:
(1)SEQ ID NO:2-4的全部；
(2)SEQ ID NO:5-7的全部；
(3)SEQ ID NO:2-7的全部；
(4)SEQ ID NO:17-19的全部；
(5)SEQ ID NO:20-22的全部；
(6)SEQ ID NO:17-22的全部；
(7)SEQ ID NO:32-34的全部；
(8)SEQ ID NO:35-37的全部；
(9)SEQ ID NO:32-37的全部；
(10)SEQ ID NO:47-49的全部；
(11)SEQ ID NO:50-52的全部；
(12)SEQ ID NO:47-52的全部；
(13)SEQ ID NO:62-64的全部；
(14)SEQ ID NO:65-67的全部；或者
(15)SEQ ID NO:62-67的全部。
11.根据权利要求10所述的多肽，其中所述多肽包含以下氨基酸序列:
(1)SEQ ID NO:8；
(2)SEQ ID NO:9；
(3)SEQ ID NO:8和9两者；
(4)SEQ ID NO:10；
(5)SEQ ID NO:11；
(6)SEQ ID NO:10和11两者；
(7)SEQ ID NO:23；
(8)SEQ ID NO:24；
(9)SEQ ID NO:23和24两者；
(10)SEQ ID NO:25；
(11)SEQ ID NO:26；
(12)SEQ ID NO:25和26两者；
(13)SEQ ID NO:38；
(14)SEQ ID NO:39；
(15)SEQ ID NO:38和39两者；
(16)SEQ ID NO:40；
(17)SEQ ID NO:41；
(18)SEQ ID NO:40和41两者；
(19)SEQ ID NO:53；
(20)SEQ ID NO:54；
(21)SEQ ID NO:53和54两者；
(22)SEQ ID NO:55；
(23)SEQ ID NO:56；
(24)SEQ ID NO:55和56两者；
(25)SEQ ID NO:68；
(26)SEQ ID NO:69；
(27)SEQ ID NO:68和69两者；
(28)SEQ ID NO:70；
(29)SEQ ID NO:71；或者
(30)SEQ ID NO:70和71两者。
12.根据权利要求10或11所述的多肽，其中所述多肽包含以下氨基酸序列:
(1)SEQ ID NO:12；
(2)SEQ ID NO:13；
(3)SEQ ID NO:12和13两者；
(4)SEQ ID NO:14；
(5)SEQ ID NO:15；
(6)SEQ ID NO:14和15两者；
(7)SEQ ID NO:27；
(8)SEQ ID NO:28；
(9)SEQ ID NO:27和28两者；
(10)SEQ ID NO:29；
(11)SEQ ID NO:30；
(12)SEQ ID NO:29和30两者；
(13)SEQ ID NO:42；
(14)SEQ ID NO:43；
(15)SEQ ID NO:42和43两者；
(16)SEQ ID NO:44；
(17)SEQ ID NO:45；
(18)SEQ ID NO:44和45两者；
(19)SEQ ID NO:57；
(20)SEQ ID NO:58；
(21)SEQ ID NO:57和58两者；
(22)SEQ ID NO:59；
(23)SEQ ID NO:60；
(24)SEQ ID NO:59和60两者；
(25)SEQ ID NO:72；
(26)SEQ ID NO:73；
(27)SEQ ID NO:72和73两者；
(28)SEQ ID NO:74；
(29)SEQ ID NO:75；或者
(30)SEQ ID NO:74和75两者。
13.一种经分离的或经纯化的蛋白质，其包含第一和第二多肽链，其中:
(1)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:2-4的全部的氨基酸序列；
(2)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:5-7的全部的氨基酸序列；
(3)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:2-4的全部的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQ ID NO:5-7的全部的氨基酸序列；
(4)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:17-19的全部的氨基酸序列；
(5)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:20-22的全部的氨基酸序列；
(6)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:17-19的全部的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQ ID NO:20-22的全部的氨基酸序列；
(7)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:32-34的全部的氨基酸序列；
(8)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:35-37的全部的氨基酸序列；
(9)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:32-34的全部的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQ ID NO:35-37的全部的氨基酸序列；
(10)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:47-49的全部的氨基酸序列；
(11)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:50-52的全部的氨基酸序列；
(12)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:47-49的全部的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQ ID NO:50-52的全部的氨基酸序列；
(13)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:62-64的全部的氨基酸序列；
(14)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:65-67的全部的氨基酸序列；或者
(15)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:62-64的全部的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQ ID NO:65-67的全部的氨基酸序列。
14.根据权利要求13所述的蛋白质，其中:
(1)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；
(2)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；
(3)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQ IDNO:9的氨基酸序列；
(4)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列；
(5)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；
(6)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQID NO:11的氨基酸序列；
(7)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；
(8)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列；
(9)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQID NO:24的氨基酸序列；
(10)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；
(11)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列；
(12)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQID NO:26的氨基酸序列；
(13)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；
(14)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列；
(15)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQID NO:39的氨基酸序列；
(16)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列；
(17)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；
(18)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQID NO:41的氨基酸序列；
(19)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列；
(20)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列；
(21)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQID NO:54的氨基酸序列；
(22)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列；
(23)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列；
(24)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQID NO:56的氨基酸序列；
(25)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列；
(26)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列；
(27)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQID NO:69的氨基酸序列；
(28)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列；
(29)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列；或者
(30)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQID NO:71的氨基酸序列。
15.根据权利要求13或14所述的蛋白质，其中:
(1)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；
(2)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；
(3)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQID NO:13的氨基酸序列；
(4)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；
(5)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列；
(6)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQID NO:15的氨基酸序列；
(7)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列；
(8)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；
(9)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQID NO:28的氨基酸序列；
(10)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列；
(11)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列；
(12)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQID NO:30的氨基酸序列；
(13)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列；
(14)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列；
(15)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQID NO:43的氨基酸序列；
(16)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列；
(17)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；
(18)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQID NO:45的氨基酸序列；
(19)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列；
(20)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；
(21)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQID NO:58的氨基酸序列；
(22)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列；
(23)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；
(24)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQID NO:60的氨基酸序列；
(25)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列；
(26)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列；
(27)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQID NO:73的氨基酸序列；
(28)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列；
(29)所述第二多肽链包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列；或者
(30)所述第一多肽链包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列，并且所述第二多肽链包含SEQID NO:75的氨基酸序列。
16.一种经分离或经纯化的核酸，其包含编码权利要求1-9中任一项所述的TCR、权利要求10-12中任一项所述的多肽、或权利要求13-15中任一项所述的蛋白质的核苷酸序列。
17.一种经分离或经纯化的核酸，其从5'至3'包含第一核酸序列和第二核苷酸序列，其中所述第一和第二核苷酸序列分别编码下述氨基酸序列：SEQ ID NO:8和9；9和8；10和11；11和10；12和13；13和12；14和15；15和14；23和24；24和23；25和26；26和25；27和28；28和27；29和30；30和29；38和39；39和38；40和41；41和40；42和43；43和42；44和45；45和44；53和54；54和53；55和56；56和55；57和58；58和57；59和60；60和59；68和69；69和68；70和71；71和70；72和73；73和72；74和75；或75和74。
18.根据权利要求17所述的经分离或经纯化的核酸，其进一步包含插入所述第一和第二核苷酸序列之间的第三核苷酸序列，其中所述第三核苷酸序列编码可切割的接头肽。
19.根据权利要求18所述的经分离或经纯化的核酸，其中所述可切割的接头肽包含氨基酸序列RAKRSGSGATNFSLLKQAGDVENPGP(SEQ ID NO:80)。
20.根据权利要求19所述的经分离或经纯化的核酸，其编码选自SEQ ID NO:16、31、46、61和76的氨基酸序列。
21.一种重组表达载体，其包含根据权利要求16-20中任一项所述的核酸。
22.根据权利要求21所述的重组表达载体，其为转座子或慢病毒载体。
23.一种经分离的或经纯化的TCR、多肽或蛋白质，其由根据权利要求16-20中任一项所述的核酸或根据权利要求21或22所述的载体编码。
24.一种经分离的或经纯化的TCR、多肽或蛋白质，其由根据权利要求16-20中任一项所述的核酸或根据权利要求21或22所述的载体在细胞中表达而产生。
25.一种产生表达对人p53C135Y、人p53R175H或人p53M237I氨基酸序列具有抗原特异性的TCR的宿主细胞的方法，所述方法包括使细胞在体外与根据权利要求21或22所述的载体在允许将所述载体引入所述细胞的条件下接触。
26.一种经分离的或经纯化的宿主细胞，其包含根据权利要求16-20中任一项所述的核酸或根据权利要求21或22所述的重组表达载体。
27.根据权利要求26所述的宿主细胞，其中所述细胞是人淋巴细胞。
28.根据权利要求26所述的宿主细胞，其中所述细胞选自下组:T细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、恒定自然杀伤T(iNKT)细胞和自然杀伤(NK)细胞。
29.一种经分离的或经纯化的细胞群，其包含根据权利要求26-28中任一项所述的宿主细胞。
30.一种产生根据权利要求1-9、23或24中任一项所述的TCR，根据权利要求10-12、23或24中任一项所述的多肽，或根据权利要求13-15、23或24中任一项所述的蛋白质的方法，所述方法包括培养根据权利要求26-28中任一项所述的宿主细胞或根据权利要求29所述的宿主细胞群，以便产生所述TCR、多肽或蛋白质。
31.一种药物组合物，其包含：(a)根据权利要求1-9、23或24中任一项所述的TCR，根据权利要求10-12、23或24中任一项所述的多肽，根据权利要求13-15、23或24中任一项所述的蛋白质，根据权利要求16-20中任一项所述的核酸，根据权利要求21或22所述的重组表达载体，根据权利要求26-28中任一项所述的宿主细胞，或根据权利要求29所述的宿主细胞群，以及(b)药学上可接受的载体。
32.一种检测在哺乳动物中癌症存在的方法，所述方法包括:
(a)使包含癌症细胞的样品与根据权利要求1-9、23或24中任一项所述的TCR，根据权利要求10-12、23或24中任一项所述的多肽，根据权利要求13-15、23或24中任一项所述的蛋白质，根据权利要求16-20中任一项所述的核酸，根据权利要求21或22所述的重组表达载体，根据权利要求26-28中任一项所述的宿主细胞，根据权利要求29所述的宿主细胞群，或根据权利要求31的所述的药物组合物相接触，从而形成复合物；以及
(b)检测所述复合物，
其中检测到所述复合物表明所述哺乳动物中存在癌症。
33.根据权利要求1-9、23或24中任一项所述的TCR，根据权利要求10-12、23或24中任一项所述的多肽，根据权利要求13-15、23或24中任一项所述的蛋白质，根据权利要求16-20中任一项所述的核酸，根据权利要求21或22所述的重组表达载体，根据权利要求26-28中任一项所述的宿主细胞，根据权利要求29所述的宿主细胞群，或根据权利要求31所述的药物组合物，其用于在哺乳动物中诱导针对癌症的免疫应答。
34.根据权利要求1-9、23或24中任一项所述的TCR，根据权利要求10-12、23或24中任一项所述的多肽，根据权利要求13-15、23或24中任一项所述的蛋白质，根据权利要求16-20中任一项所述的核酸，根据权利要求21或22所述的重组表达载体，根据权利要求26-28中任一项的宿主细胞，根据权利要求29所述的宿主细胞群、或根据权利要求31的药物组合物，其用于治疗或预防哺乳动物的癌症。
35.用于根据权利要求33或34所述用途的细胞群，其中所述细胞群是所述哺乳动物自体的。
36.用于根据权利要求33或34所述用途的细胞群，其中所述细胞群是所述哺乳动物同种异体的。
37.根据权利要求32所述的方法，或用于根据权利要求33-36中任一项所述的用途的TCR、多肽、蛋白质、核酸、重组表达载体、宿主细胞、细胞群、或药物组合物，其中所述癌症是上皮癌。
38.根据权利要求32所述的方法，或用于根据权利要求33-36中任一项所述的用途的TCR、多肽、蛋白质、核酸、重组表达载体、宿主细胞、细胞群、或药物组合物，其中所述癌症是胆管癌，黑色素瘤、结肠癌、直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、胶质母细胞瘤、宫颈癌、头颈癌、乳腺癌、胰腺癌或膀胱癌。
39.根据权利要求32所述的方法，或用于根据权利要求33-38中任一项所述的用途的TCR、多肽、蛋白质、核酸、重组表达载体、宿主细胞、细胞群、或药物组合物，其中已知所述癌症包含人p53中的C135Y、R175H或M237I突变。
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