CN117940133A - 用于突变braf的降解的治疗剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了化合物或其药学上可接受的盐及其药物组合物，其可被施用于有需要的宿主如人用于治疗由突变型BRAF介导的疾病如癌症。该化合物高效降解I类、II类和III类突变BRAF蛋白。

Description

用于突变BRAF的降解的治疗剂
相关申请的交叉引用
本申请要求2021年6月8日提交的欧洲专利申请EP21178145.5、EP21178150.5和EP21178152.1以及2021年11月10日提交的美国临时申请63/277,973的利益；其各自的全部内容均出于所有目的通过引用并入本文。
技术领域
本发明提供了降解突变BRAF(例如I类、II类和/或III类突变BRAF)的化合物及其药学上可接受的盐、用途、组合物和制造方法。本发明的化合物可施用于需要由突变BRAF介导的疾病(例如癌症)的治疗性和/或预防性治疗的宿主(例如人类)。
背景技术
BRAF是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，其是信号转导蛋白激酶的成员。BRAF在MAPK信号传导通路中起着关键作用，且在所有人类癌症的约8％中发生了突变，包括黑素瘤(约60％)、甲状腺癌(约60％)和肺腺癌(约10％)。在甲状腺癌、结肠直肠癌、肺癌和其他癌症中也观察到BRAF突变。在BRAF中最常见的突变是V600E(I类)，其在一半的恶性黑素瘤中发生。该突变使ERK过度激活，并作为RAF抑制剂敏感的单体发出信号。其他常见的激活突变包括II类突变如G469A和III类突变如G466V。II类和III类突变通过促进RAF同二聚化或异二聚化激活ERK。
尽管可获得的BRAF抑制剂具有治疗益处，但对这些药物的抗肿瘤反应的持续时间可能受限于耐药性的获得。
BRAF蛋白提供了用于信号传播的机制，其要求蛋白同二聚化(BRAF-BRAF)或与其他RAF蛋白的异二聚化(BRAF-RAF1或BRAF-ARAF)。当BRAF突变时，如在具有BRAF V600E/K置换的肿瘤学适应症中观察到的，BRAF信号传导变得独立于同二聚体和/或异二聚体。激酶活性作为单体蛋白变为过度激活，并驱动细胞增殖信号。
已经描述了几种可抑制单体BRAF但不抑制二聚体BRAF的BRAF抑制剂，包括维莫非尼、达拉非尼和康奈非尼，但是，通常在一年内出现耐药性，包括RAS突变、BRAFV600E扩增和BRAFV600E基因内缺失或剪接变体。这些抑制剂对通过促进RAF同二聚化或异二聚化激活ERK的非V600 BRAF突变体(II类和III类)也无效。
WO2021/116055和WO2021/116050中描述了BRAF抑制剂的例子。
BRAF降解化合物的非限制性例子包括WO2018/119448、WO2019/199816、WO2020/051564和WO2022/047145中所述的那些化合物。
尽管作出了这些努力，仍然需要新的治疗药物来治疗BRAF介导的癌症，特别是治疗突变BRAF介导的癌症的药物。
发明内容
本发明提供了通过泛素蛋白酶体途径降解突变BRAF(例如I类、II类和/或III类突变BRAF)的化合物及其药学上可接受的盐、用途、组合物和制造方法。本文所述化合物不显著降解野生型BRAF。这些化合物与普遍表达的E3连接酶蛋白cereblon(CRBN)结合，并改变了CRBN·E3泛素连接酶复合物的底物特异性，从而导致突变BRAF(例如BRAF V600E)的募集和泛素化。本发明的化合物也是WT BRAF、RAF1和ARAF的结合物，但是这些化合物对突变BRAF(例如I类突变BRAF如V600E、II类突变BRAF如G469A、III类突变BRAF如G466V)和剪接变体如p61-BRAFV600E(参见实施例231)触发了更有效的靶向降解。
通过降解突变BRAF，本发明的化合物可用于治疗突变BRAF介导的癌症，例如黑素瘤、肺癌(包括例如非小细胞肺癌)、结肠直肠癌(包括例如微卫星稳定结肠直肠癌)、甲状腺癌(包括例如间变性甲状腺癌)或卵巢癌。在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗由V600X突变BRAF介导的实体肿瘤。可用本发明化合物治疗的病症的其他非限制性例子包括黑素瘤、非小细胞肺癌、甲状腺癌、结肠直肠癌和具有突变BRAF驱动因子的其他实体肿瘤恶性肿瘤。
在某些实施方案中，本发明的化合物，例如化合物157，对于突变BRAF的降解具有比WT BRAF、KRAS和/或CRAF高约10倍、100倍或甚至1000倍的选择性(参见实施例234)。例如，在A375细胞中，化合物157有力地降解BRAFV600E(Emax＝26％(即74％的BRAF蛋白被降解)；24小时的DC50＝14nM)，抑制ERK磷酸化(24小时的IC50＝11nM)和细胞生长(96小时的GI50＝94nM)，但在突变的KRAS驱动细胞系HCT-116中无作用(参见实施例235和236)。在A375异种移植物中，化合物157的口服递送比临床相关剂量的康奈非尼更有效，并且当以10mg/kgBID给药时，导致明显的肿瘤消退(参见实施例241)。
化合物157/实施例157
本发明的化合物可用于治疗难以治疗的双突变癌症，其中一个突变在BRAF中。例如，化合物157在BRAF抑制剂抗性的工程化A375-BRAFV600E/NRASQ61K双突变模型中，在降解BRAF方面比康奈非尼有效得多(参见实施例231和241)。在该模型中，单一药剂化合物157的体内给药导致了强有力的肿瘤生长抑制，并且与MEK抑制剂曲美替尼联合导致了肿瘤消退。康奈非尼和曲美替尼的组合在同一模型中未显示活性。在某些实施方案中，本发明的化合物可用于降解I类、II类、III类的BRAF突变体及其剪接变体。例如，化合物157能够利用在HEK293T细胞中的异源表达降解额外的BRAF突变蛋白，包括G469A(II类)、G466V(III类)和p61-BRAFV600E剪接变体。
在某些实施方案中，本发明的化合物可以治疗已经对BRAF抑制剂产生抗性的癌症。例如，化合物157有效处理其中康奈非尼无活性的G466V突变BRAF肺肿瘤细胞系(参见实施例231)。在某些实施方案中，本发明的化合物，例如化合物157，是口服可生物利用的。
在某些方面，提供了式I或式II的化合物，例如化合物157。
或其药学上可接受的盐。
在其他方面，提供了式III、式IV、式V或式VI的化合物。
或其药学上可接受的盐。
其中
A1选自-NR2-和-CHR2’-；
R1选自氢、烷基和环烷基；
R2选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被一个或两个R3取代的杂环烷基；
R2’选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成任选被一个或两个R3取代的环烷基；
每个R3独立地选自氢、卤素(例如F)、烷基、环烷基和烷氧基；
R4选自氢、烷基、氰基和卤素(例如F)；
R5选自氢、烷基、氰基和卤素(例如F)；
A2选自-O-、-NH-和-(C＝O)-；
A22选自-O和-NH-；
W1选自-N-和-CH-；
W2选自-N-和-CR26-；
R6选自氢、卤素(例如F)、羟基、氨基、二烷基氨基、烷氧基、烷基和烷氧基烷基；
R26选自氢、卤素、羟基、氨基、烷氧基和烷基；
A3选自键、-CH2-、-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-、-CH(CH3)-CH2-CH2-、-CH2-CH(CH3)-CH2-、-CH2-CH2-CH(CH3)-、-CH2-CH2-CH2-CH2-和-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-；
A23选自键、-O-和-CH2-；
A选自键、嘧啶基、吡啶基、吡唑基和3-氮杂双环[3.1.0]己基；
A30选自键、-CH2-、嘧啶基、吡啶基、吡唑基和3-氮杂双环[3.1.0]己基；
B选自苯基、哌啶基、哌嗪基、1,4-氮杂环庚烷基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基、1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂螺[4.5]癸基、1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸基、1,8-二氮杂螺[4.5]癸基和8-氮杂螺[4.5]癸基；其中B任选被一个或两个独立选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代；
B2选自苯基、哌啶基、哌嗪基、1,4-氮杂环庚烷基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基和8-氮杂螺[4.5]癸基；其中B2任选被一个或两个独立选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代；
B3选自苯基、哌啶基、哌嗪基、1,4-氮杂环庚烷基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基、1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂螺[4.5]癸基、1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸基、1,8-二氮杂螺[4.5]癸基和8-氮杂螺[4.5]癸基；
n为0或1；
A4选自键、-CH2-、-(SO2)-CH2-、-CH(CH2OH)-、-NH-和-O-；
A14选自键、-CH2-、-CH2-CH2-、-CH(CH2OH)-、-NH-、-O-、环烷基和烷基氨基；
C选自氮杂环庚烷基、氮杂环丁烷基、环烷基、哌嗪基和哌啶基；其中C任选被一个或两个独立选自卤素(例如F)、羟基、烷基和烷氧基的取代基取代；
D选自
R7选自氢、烷基、氰基、卤素(例如F)和烷氧基；
R8选自氢、烷基、氰基、卤素(例如F)和烷氧基；
R9选自氢、烷基、氰基、卤素(例如F)和烷氧基；
R17选自氢、烷基、氰基、羟基、环烷基、卤素和烷氧基；
R18选自氢、烷基、氰基、羟基、环烷基、卤素和烷氧基；
R19选自氢、烷基、氰基、羟基、环烷基、卤素和烷氧基；
A5为-CH-或-N-；
A15选自键、-O-和-NH-；
A6为-CH-或-N-；和
接头是二价化学基团。
在某些实施方案中，接头选自
其中:
X1和X2在每次出现时独立地选自键、杂环、NR2、C(R2)2、O、C(O)和S；
R20、R21、R22、R23和R24在每次出现时独立地选自由二价部分组成的组，该二价部分选自键烷基、-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-SO2-、-S(O)-、-C(S)-、-C(O)NR2-、-NR2C(O)-、-O-、-S-、-NR2-、-C(R40R40)-，-P(O)(OR36)O-，-P(O)(OR36)-、双环、烯烃、炔烃、卤代烷基、烷氧基、芳基、杂环、脂族基、杂脂族基、杂芳基、乳酸、乙醇酸和碳环；其中每一个任选被1、2、3或4个独立选自R40的取代基取代；
R36在每次出现时独立地选自氢、烷基、芳烷基、杂芳烷基、烯烃、炔烃、芳基、杂芳基、杂环、脂族基和杂脂族基；和
R40在每次出现时独立地选自氢、烷基、烯烃、炔烃、氟、溴、氯、羟基、烷氧基、叠氮基、氨基、氰基、-NH(脂族基，包括烷基)、-N(脂族基，包括烷基)2、-NHSO2(脂族基，包括烷基)、-N(脂族基，包括烷基)SO2烷基、-NHSO2(芳基、杂芳基或杂环)、-N(烷基)SO2(芳基、杂芳基或杂环)、-NHSO2烯基、-N(烷基)SO2烯基、-NHSO2炔基、-N(烷基)SO2炔基、卤代烷基、脂族基、杂脂族基、芳基、杂芳基、杂环和环烷基。
在某些实施方案中，接头是
式I和式II化合物的非限制性例子包括:
或其药学上可接受的盐。
本发明提供了通过BRAF蛋白的靶向泛素化和随后的蛋白酶体降解而特异性地降解突变BRAF，例如具有突变V600E的BRAF的化合物。本发明的化合物与普遍表达的E3连接酶蛋白cerebon(CRBN)结合，并改变了CRBN E3泛素连接酶复合物的底物特异性，从而导致突变BRAF(例如BRAF V600E)的募集和泛素化。本发明的化合物也是WT BRAF、RAF1和ARAF的有效结合物，但是这些化合物对突变BRAF(例如BRAF V600E)触发有效的靶向降解。
在某些方面，本发明的化合物被用于治疗BRAF介导的癌症，其中BRAF已从野生型突变。BRAF突变存在多种可能性。在某些非限制性实施方案中，突变为I类突变、II类突变或III类突变，或其任何组合。I类突变的非限制性例子包括V600突变，例如V600E、V600K、V600R、V600D和V600N。II类突变的非限制性例子包括G469A、G469V、G469L、G469R、L597Q和K601E。III类突变的非限制性例子包括G466A、G466E、G466R、G466V、S467L、G469E、N581I、D594E、D594G和D594N。
在某些实施方案中，本发明的化合物治疗BRAF突变介导的病症，其中该突变不是I类、II类或III类突变。突变的非限制性例子包括G464I、G464R、N581T、L584F、E586K、G593D、G596C、L597R、L597S、S605I、S607F、N684T、E26A、V130M、L745L和D284E。
在某些实施方案中，本发明的化合物治疗BRAF突变介导的病症，其中该突变为剪接变体，例如p61-BRAFV600E。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗由两种或更多种突变蛋白介导的病症，例如由BRAFV600E/NRASQ61K双突变体介导的癌症。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗对至少一种BRAF抑制剂具有抗性的癌症，例如对选自达拉非尼、曲美替尼、维莫非尼和康奈非尼的BRAF抑制剂具有抗性或已经获得其抗性的癌症。
在某些实施方案中，本文所述的化合物用于治疗已发生逃逸突变的癌症，例如BRAF V600E/NRASQ61K双突变体癌症。
在某些实施方案中，本文所述的化合物用于治疗黑素瘤。
在某些实施方案中，相对于至少一种已知的BRAF抑制剂，本发明的选定化合物提供了改进的功效和/或安全性特征。例如，本发明的降解剂具有与cereblon激活的蛋白酶体降解的催化降解活性结合的仅蛋白质结合部分的抑制剂的效力。这通过可快速“恢复作用”并重复催化功能的活性部分提供了针对突变BRAF介导的癌症的快速活性。通过这种方式，BRAF被快速破坏，如同共价自杀抑制剂一样，但不会同时破坏活性药物。
在某些实施方案中，与仅使用酶抑制剂相比，本发明的降解剂化合物在治疗BRAF介导的病症方面具有一个或多个优势。
在某些实施方案中，治疗BRAF介导的病症所需的本文所述化合物的摩尔数少于单独的BRAF靶向配体部分的摩尔数。
在某些实施方案中，本发明的化合物在治疗BRAF介导的病症中的至少一种副作用少于单独的BRAF靶向配体部分的摩尔数。
本发明的另一方面提供了一种如本文所述的化合物，或其对映异构体、非对映异构体或立体异构体，或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，或药物组合物，用于制备用于抑制或预防由BRAF介导的病症或用于调节或减少BRAF的量的药物。
本发明的另一方面提供了一种如本文所述的化合物，或其对映异构体、非对映异构体或立体异构体，或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，或其药物组合物，用于制备治疗或预防由BRAF介导的疾病的药物。
在某些实施方案中，选定的本文所述的化合物可用于治疗包含异常细胞增殖的病症，例如肿瘤或癌症，其中BRAF是异常细胞增殖途径的致瘤蛋白或信号传导介质，且其降解降低了异常细胞生长。
在某些实施方案中，本发明的化合物具有至少一个所需的原子同位素取代，其量高于同位素的自然丰度，即被富集。
在某些实施方案中，本发明的化合物包括一个氘原子或多个氘原子。
在某些实施方案中，本发明的化合物可用于癌症的治疗性和/或预防性治疗。
在某些方面，本发明的化合物与本文所述的第二活性剂组合使用以治疗突变BRAF介导的癌症。可与本发明化合物组合使用的分子类别的非限制性例子包括MEK抑制剂、免疫检查点抑制剂和EGFR抗体。在某些实施方案中，本发明的化合物与曲美替尼联合用于治疗突变BRAF介导的癌症，例如黑素瘤或非小细胞肺癌。在某些实施方案中，本发明的化合物与免疫检查点抑制剂联合使用以治疗突变BRAF介导的癌症。在某些实施方案中，本发明的化合物与西妥昔单抗或派姆单抗联合使用以治疗突变BRAF介导的癌症，例如结肠直肠癌。在某些实施方案中，本发明的化合物与纳武单抗、派姆单抗、西米普利单抗、伊匹单抗、relatlimab、阿特珠单抗、阿维鲁单抗或德瓦鲁单抗联合使用以治疗突变BRAF介导的癌症，例如结肠直肠癌、黑素瘤或非小细胞肺癌。
在其他方面，本发明的化合物与本文所述的两种或更多种额外的活性剂组合使用以治疗突变BRAF介导的癌症。在某些实施方案中，本文所述的化合物与MEK抑制剂和免疫检查点抑制剂联合使用以治疗黑素瘤或非小细胞肺癌。
通过以下详细描述，本申请的其他特征和优点将变得明显。
因此，本发明至少包括以下特征:
(a)式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物或其药学上可接受的盐或同位素衍生物(包括氘代衍生物)；
(b)一种治疗突变BRAF介导的病症(例如异常细胞增殖，包括癌症)的方法，包括向有此需要的患者施用有效量的如本文所述的式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物或其药学上可接受的盐；
(c)式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物或其药学上可接受的盐或同位素衍生物(包括氘代衍生物)，用于治疗由突变BRAF介导的病症，例如异常细胞增殖，如肿瘤或癌症；
(d)式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物或其药学上可接受的盐以有效量在具有突变BRAF介导的病症，例如异常细胞增殖，例如肿瘤或癌症的有需要的患者(通常为人类)的治疗中的用途；
(e)式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物或其药学上可接受的盐或同位素衍生物(包括氘代衍生物)在制备用于治疗突变BRAF介导的病症(例如异常细胞增殖，例如肿瘤或癌症)的药物中的用途；
(f)式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物或其药学上可接受的盐以有效量在具有突变BRAF介导的病症，例如异常细胞增殖，例如肿瘤或癌症的有需要的患者(通常为人类)的治疗中的用途；
(g)一种药物组合物，其包含有效患者治疗量的式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物或其药学上可接受的盐、同位素衍生物；和任选地药学上可接受的载体或稀释剂；
(h)本文所述的式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物，作为对映异构体或非对映异构体(视情况而定)的混合物，包括作为外消旋物；
(i)对映异构体或非对映异构体(视情况而定)富集形式的本文所述的式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物，包括分离的对映异构体或非对映异构体(即，纯度约大于85％、90％、95％、97％或99％)；和
(j)一种制备治疗产品的方法，该治疗产品包含有效量的如本文所述的式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物或其药学上可接受的盐。
附图说明
如附图中使用的，化合物157和实施例157均指
在美国临时申请63/277,973和欧洲专利申请21178150.5中，化合物157被称为化合物14/实施例14。
图1是显示用化合物157处理24小时后的HiBiT-BRAFV600E蛋白水平的线形图。化合物157的DC50约为100nM，降解Emax约为25％，同时伴有磷酸-ERK(pERK)的损失，表明IC50<5nM的MAPK途径阻断。y轴是以％测量的剩余蛋白质。x轴为化合物157的浓度，单位为纳摩尔。实施例229和实施例230中提供了实验程序。
图2是显示用各种不同浓度的化合物157处理后的稳态GSPT1蛋白水平的线形图。y轴是以％测量的剩余蛋白质。x轴为化合物157的浓度，单位为纳摩尔。实验程序提供于实施例229。
图3是显示用各种不同浓度的化合物157处理后的稳态SALL4蛋白水平的线形图。y轴是以％测量的剩余蛋白质。x轴为化合物157的浓度，单位为纳摩尔。实验程序提供于实施例229。
图4为蛋白质印迹，描绘了在通过与蛋白酶体依赖分子的功能相关的抑制剂或竞争剂攻击的同时，A375细胞中响应于降解剂化合物157的BRAF V600E水平。(-/+)指示样品中化合物157的存在。当用单独DMSO处理时，BRAF V600E处于正常水平，但在暴露于化合物157 24小时后，BRAF V600E水平显著下降。通过添加过量的靶向配体阻断该降解，从而防止降解剂与BRAF V600E结合。当细胞用对cerebon上的结合位点特异性的化合物(IMID)进行预处理时，降解也被阻断。总的看来，这表明降解剂必须同时与BRAF和CRBN结合以降解BRAFV600E。此外，当细胞用与化合物157组合的类泛素化(neddylation)抑制剂MLN4962或蛋白酶体抑制剂硼替佐米处理时，降解被阻断，表明化合物157导致的BRAF V600E的损失取决于类泛素化和蛋白酶体系统。实验程序提供于实施例231。
图5是显示BRAF V600E和cereblon与各种不同浓度的化合物157或化合物157NMe的三元复合物形成的线形图。y轴是三元复合物的分数。x轴为化合物157的浓度，单位为纳摩尔。化合物157NMe是化合物157的类似物，其与cereblon的相互作用很小或没有，因此不是功能性降解剂。实验程序提供于实施例232。
图6是TREEspotTM相互作用图，显示了10nM化合物157与几种蛋白质结合的相对量。显示与化合物157结合的激酶用黑色圆圈突出显示。圆的大小反映了％抑制。实验程序提供于实施例233。
图7是TREEspotTM相互作用图，显示了1000nM化合物157与多种蛋白质结合的相对量。显示与化合物157结合的激酶用黑色圆圈突出显示。圆的大小反映了％抑制。实验程序提供于实施例233。
图8是散点图，显示了通过用300nM化合物157处理24小时的A375或JURKAT细胞的多重定量蛋白质组学分析的细胞裂解物的数据(实验方法见下文)。对每一实验数据通过将化合物157处理的样品(生物学重复)与用300nM达拉非尼(A375细胞)或DMSO(JURKAT细胞)处理的对照样品进行比较进行分析，并在所得散点图中描述相对丰度的倍数变化。x轴上显示Log2倍数变化，y轴上显示负Log10调节的p-值(化合物157vs DMSO对照的T检验，通过Benjamini-Hochberg校正进行调节)。水平虚线标示统计学显著性(p-值≤0.001)，垂直虚线标示≥2的倍数变化截止值。实验程序提供于实施例234。
图9为蛋白质印迹，描绘了A375细胞中响应于降解剂化合物157和无效降解剂化合物157NMe的BRAF V600E和pERK水平。BRAF V600E水平对于化合物157以剂量依赖的方式下降直至以1μM达到转折(hook)，这是双功能降解剂的特征。通过ERK磷酸化读出的MAPK信号传导在化合物157处理后显著下降。化合物157NMe是化合物157的类似物，其与cereblon的结合最小，且因此不是功能性降解剂。如预期的，BRAF V600E水平保持不变，且ERK磷酸化的损失不如功能性降解剂明显。用无效降解剂观察到的对ERK磷酸化的影响是由于双功能降解剂的配体靶向侧的抑制性影响。实验程序提供于实施例231。
图10是描绘通过活细胞成像用化合物157和化合物157NMe培养的A375细胞在7天的时间内的细胞汇合的线形图。DMSO处理的细胞快速生长，具有预期的倍增时间，并在第5天左右达到100％汇合。在BRAF降解化合物157处理后，细胞生长明显受阻，到7天实验结束时仅仅达到20％的汇合。用cereblon无效化合物157NMe处理的细胞最初以正常速率生长，但生长被抑制至约70％汇合。这两种化合物之间的转换表明，与单独的等同BRAF V600E抑制相比，BRAF V600E降解对抑制细胞生长有影响。实验程序提供于实施例231。
图11是描绘在第5天通过活细胞成像用化合物157和化合物157NMe培养的A375细胞的细胞汇合的线形图。通过在固定时间点(第5天)按浓度观察细胞生长进一步证明了BRAFV600E降解对细胞生长抑制的影响(与单独的等同BRAF V600E对细胞生长的抑制相比)，注意到，降解剂从其cereblon无效对应物右偏移。实验程序提供于实施例231。
图12是蛋白质印迹，描绘了在具有内源性WT BRAF的HCT-116细胞中响应于降解剂化合物157的WT BRAF和pERK水平。如预期的，对WT BRAF水平和ERK磷酸化的影响极小。实验程序提供于实施例231。
图13是说明用化合物157或泛RAF抑制剂处理后的HCT-116WT BRAF细胞的随时间生长实验。该细胞系在文献中被描述为依赖于RAF信号传导，并且细胞生长通过泛RAF抑制剂处理显著阻碍。化合物157对细胞生长没有影响，因为处理的细胞的曲线直接与DMSO处理的细胞重叠，支持了化合物157的表型结果对突变BRAF是特异性的假设。实验程序提供于实施例236。
图14是显示化合物157和康奈非尼在治疗携带A375肿瘤的雌性BALB/c裸鼠中的体内效力的线形图。如指示的，小鼠通过口服灌胃法(PO)，一天一次(QD)、两次(BID)或三次(TID)用溶媒对照、康奈非尼(35mg/kg)或化合物157(0.1、0.3、1、2、3或10mg/kg)治疗。功效数据以平均值±SEM表示。虚线代表无给药进展。x轴是以天计的时间，y轴是以mm3测量的A375肿瘤体积。实验程序提供于实施例238。
图15是显示化合物157和康奈非尼在治疗携带A375肿瘤的雌性BALB/c裸鼠中的体重变化的线形图。如指示的，小鼠通过口服灌胃法(PO)，一天一次(QD)、两次(BID)或三次(TID)用溶媒对照、康奈非尼(35mg/kg)或化合物157(0.1、0.3、1、2、3或10mg/kg)治疗。功效数据以平均值±SEM表示。虚线代表无给药进展。x轴是以天计的时间，y轴是以百分比计的体重变化。实验程序提供于实施例238。
图16是显示化合物157在0.3、1、3或10mg/kg单次口服(PO)剂量后在血浆中的体内药代动力学活性的线形图。在指定时间点采集血浆和肿瘤，并注入LC/MS/MS系统中进行定量分析。血浆(ng/ml)和肿瘤(ng/g)中的化合物157浓度以平均值±SEM表示。实验程序提供于实施例239。
图17是显示化合物157在0.3、1、3或10mg/kg的单次口服(PO)剂量后在A375异种移植肿瘤中的体内药代动力学活性的线形图。在指定时间点采集血浆和肿瘤，并注入LC/MS/MS系统中进行定量分析。血浆(ng/ml)和肿瘤(ng/g)中的化合物157浓度以平均值±SEM表示。实验程序提供于实施例239。
图18是显示B-RAF在A375异种移植肿瘤中的相对蛋白表达的线形图。将A375肿瘤细胞注入BALB/c裸鼠的右侧腹中。化合物157以0.3、1、3或10mg/kg的单次口服(PO)剂量施用，在指定时间点收获A375肿瘤，并通过蛋白质印迹测量B-RAF的蛋白表达。x轴是单剂量施用后以小时计的时间，y轴是相对于载体溶媒治疗的肿瘤的蛋白质百分比。数据以平均值±SEM表示。实验程序提供于实施例239。
图19是显示A375异种移植肿瘤中磷酸ERK的相对蛋白表达的线形图。将A375肿瘤细胞注入BALB/c裸鼠的右侧腹中。化合物157以0.3、1、3或10mg/kg的单次口服(PO)剂量施用，在指定时间点收获A375肿瘤，并通过蛋白质印迹测量pERK的蛋白表达。x轴是单剂量施用后以小时计的时间，y轴是相对于溶媒治疗肿瘤的蛋白质百分比。数据以平均值±SEM表示。实验程序提供于实施例239。
图20是在添加或不添加1nM曲美替尼的情况下用化合物157或康奈非尼以5点剂量反应处理24小时的表达致癌NRASQ61K突变体的A375细胞的蛋白质印迹。除BRAF V600E外还表达NRASQ61K代表了在患者中观察到的抗性机制，并且对于抑制MAPK信号传导提出了待克服的更大的挑战。单独的降解剂化合物157可以抑制MAPK信号传导，如通过ERK磷酸化读出的。与MEK抑制剂曲美替尼组合，ERK激活被10nM的化合物157完全抑制。相比之下，在与曲美替尼组合或不组合的情况下，BRAF V600E抑制剂康奈非尼无法显著抑制ERK磷酸化水平。该数据表明，化合物157可能有利于控制BRAF V600E抗性情况中的MAPK信号传导。实验程序提供于实施例231。
图21是描绘表达致癌NRASQ61K突变的A375细胞随时间的细胞生长的线形图。用单独DMSO处理的细胞表现出正常的倍增时间。当用BRAF V600E降解剂化合物157处理时，细胞生长受到抑制，且细胞不能达到超过50％的汇合。当用与cereblon结合最小或无结合的匹配对化合物157NMe处理时，细胞生长不受抑制。康奈非尼在抗性模型细胞系中不抑制细胞生长。实验程序提供于实施例235。
图22是显示各种不同浓度下化合物对携带A375 NRASQ61K突变黑素瘤细胞系异种移植物的雌性BALBc/裸鼠中的肿瘤的影响的线形图。小鼠通过口服灌胃施用溶媒、曲美替尼(MEK抑制剂(MEKi)0.1mg/kg，每日两次(BID))、康奈非尼(35mg/kg，每日一次(QD)+MEKi)、化合物157(BID 1、3、10或30mg/kg)或相同剂量的化合物157(与0.1mg/kg BID的MEKi组合)。化合物157在10和30mg/kg BID剂量下作为单一药剂是有效的，并且当与0.1mg/kg BID的MEKi联合给药时导致消退。功效数据以平均肿瘤体积±SEM表示。所有剂量均具有良好的耐受性，因为在整个研究过程中，没有任何组的体重减轻超过平均4.5％。实验程序提供于实施例241。
图23是蛋白质印迹，证明了化合物157在BRAF V600E之外的降解潜力。利用慢病毒对HEK-293T(ATCC，CRL-3216)细胞进行工程化以表达BRAF V600E、WT、p61剪接变体、II类突变体G469A和III类突变体G466V。化合物157能够降解除WT BRAF以外的所有突变体。实验程序提供于实施例231。
图24是内源表达III类突变G466V的细胞系H1666(ATCC，CRL-5885)的蛋白质印迹。用化合物157处理H1666细胞24小时。用化合物157处理H1666细胞导致BRAF信号降低53％，包括可能由于细胞对于突变为杂合而存在的任何WT BRAF，并且化合物157不降解WT BRAF。磷酸化ERK信号也降低，表明MAPK途径的抑制。实验程序提供于实施例231。
图25是说明在内源性表达III类BRAF突变G466V的H1666细胞中的随时间细胞生长的线形图。用单独DMSO处理的细胞表现出正常的倍增时间。当用BRAF降解剂化合物157处理时，细胞生长受到抑制，并且细胞在7天的时间内不能达到超过30％的汇合。当用与cereblon结合很少或没有结合的匹配对化合物157NMe处理时，细胞生长未受明显抑制。此外，康奈非尼不抑制BRAF III类突变细胞系的细胞生长。对细胞生长的最显著破坏是化合物157与1nM剂量的MEK抑制剂曲美替尼的组合。细胞未能扩增，且增殖严重受损。实验程序提供于实施例242。
具体实施方式
在某些实施方案中，本发明提供了式I化合物
其中取代基和变量如本文所述，或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，式I化合物是式I-A的化合物
其中A2为-O-，n为1，R4为氰基，R5为氟，其余取代基和变量如本文所述，或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，式I化合物是式I-B的化合物
其中A2为-NH-，n为1，R4为氰基，R5为氟，其余取代基和变量如本文所述，或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，式I化合物是式I-C的化合物
其中A2是-O-，A3是键，A是键，n是0，A4是键，R4是氰基，R5是氟，其余取代基和变量如本文所述，或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，式I化合物是式I-D的化合物
其中A2是-(C＝O)-，A3是键，A是键，其余取代基和变量如本文所述，或其药学上可接受的盐。
本发明化合物可用于癌症的治疗性和/或预防性治疗。
本发明提供了式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物或其药学上可接受的盐、上述化合物的制备、包含它们的药物及其制备以及上述化合物在癌症的治疗性和/或预防性治疗中的用途。
术语
无论所讨论的术语是单独出现还是与其他术语组合出现，本说明书中使用的一般术语的以下定义均适用。
除非另有说明，否则本申请(包括说明书和权利要求书)中使用的以下术语具有下面给出的定义。必须指出，如说明书和附随的权利要求书中所用，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指代，上下文另有明确指出除外。
术语“烷基”单独或组合表示具有1-8个碳原子的直链或支链烷基，特别是具有1-6个碳原子的直链或支链烷基，更特别是具有1-4个碳原子的直链或支链烷基。直链或支链C1-C8烷基的实例是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、异构戊基、异构己基、异构庚基和异构辛基，特别地甲基、乙基、丙基、丁基和戊基。甲基和乙基是“烷基”的特定实例。
术语"氰基"，单独地或与其他基团组合地，表示基团-C≡N。
术语“卤素”或“卤代”指氟、氯、溴或碘，且特别是氟、氯或溴，更特别是氟。术语“卤代”，与另一个基团结合，表示所述基团被至少一个卤素取代，特别是被一至五个卤素，特别是一至四个卤素，即一、二、三或四个卤素取代。
术语“卤代烷基”，单独或与其他基团组合，表示其中烷基的至少一个氢原子被相同或不同的卤原子取代的烷基。卤代烷基的例子包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氟乙基、二氟乙基和三氟乙基。特定的卤代烷基包括氟乙基和二氟乙基。
术语“羟基”和“氢氧基”单独或组合地表示-OH基团。
术语“氨基”单独或组合地表示伯氨基(-NH2)、仲氨基(-NH-)或叔氨基(-N-)。
术语“羰基”单独或组合地表示-(C＝O)-基团。
术语“烷基氨基”是连接到-NH-基团的烷基。术语“二烷基氨基”指与-N-原子连接的两个烷基。
术语“烷氧基”或“烷基氧基”单独或组合地表示式为烷基-O-的基团，其中术语“烷基”具有前述含义，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。“烷氧基”的具体实例是甲氧基。
术语“环烷基”，单独或与其他基团组合，表示3-8个环碳原子，特别是3-6个环碳原子的单价饱和单环或双环烃基团。双环指由具有一个或两个共同碳原子的两个饱和碳环组成的环体系。单环“环烷基”的例子是环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。“双环”的例子是螺[3.3]庚烷基。单环“环烷基”的更具体的例子是环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
术语“杂环烷基”，单独或与其他基团组合，表示单价饱和的或部分不饱和的4-10个环原子的单环或双环体系，包含1、2或3个选自N、O和S的环杂原子，其余环原子为任选被氧代取代的碳。双环指由具有一个或两个共同环原子的两个环组成。杂环烷基优选为4-7个环原子的单价饱和的部分不饱和的单环环体系，包含1或2个选自N、O和S的环杂原子(4-7元杂环烷基)。单环饱和杂环烷基的例子包括4,5-二氢-噁唑基、氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、2-氧代-吡咯烷-4-基、3-氧代-吗啉-6-基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡唑烷基、咪唑烷基、噁唑烷基、异噁唑烷基、噻唑烷基、哌啶基、四氢吡喃基、四氢硫代吡喃基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、1,1-二氧代-硫代吗啉-4-基、氮杂环庚烷基、高哌嗪基和氧氮杂环庚烷基。双环饱和杂环烷基的例子包括3-氮杂双环[3.1.0]己基、氧杂双环[2.2.1]庚烷基、氧杂螺[3.3]庚烷基、8-氮杂-双环[3.2.1]辛基、奎宁环基、8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛基、7-氮杂螺[3.5]壬基、9-氮杂-双环[3.3.1]壬基、3-氧杂-9-氮杂-双环[3.3.1]壬基、3-硫杂-9-氮杂-双环[3.3.1]壬基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基和3-氮杂螺[5.5]十一烷基。部分不饱和的杂环烷基的例子包括二氢呋喃基、咪唑啉基、二氢噁唑基、四氢吡啶基和二氢吡喃基。“杂环烷基”的具体例子是氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌嗪基、哌啶基和3-氮杂双环[3.1.0]己基。
术语“磺酰基”，单独或与其他基团组合，是-SO2-基团。
术语“药学上可接受的”指可用于制备药物组合物的材料的属性，其通常是安全的、无毒性的、在生物学上或其他方面均不是不希望的，并且对于兽医学和人类药物用途是可接受的。
术语“药学上可接受的盐”指适合用于与人和动物组织接触的盐。与无机酸和有机酸的合适盐的例子包括但不限于乙酸、柠檬酸、甲酸、富马酸、盐酸、乳酸、马来酸、苹果酸、甲磺酸、硝酸、磷酸、对甲苯磺酸、琥珀酸、硫酸(硫磺酸)、酒石酸、三氟乙酸等。特定的酸为甲酸、三氟乙酸和盐酸。
术语“药学上可接受的辅助物质”指与制剂的其他成分相容的载体和辅助物质，例如稀释剂或赋形剂。
术语“药物组合物”包括包含预定量或比例的特定成分的产品，以及直接或间接地由组合特定量的特定成分而得到的任何产品。具体而言，其包括包含一种或多种活性成分的产品和包含惰性成分的任选载体，以及直接或间接地由任何两种或更多种成分的组合、复合或聚集，或由一种或多种成分的解离，或由一种或多种成分的其他类型的反应或相互作用得到的任何产品。
“治疗有效量”指当施用于受试者以治疗疾病状态时足以实现该疾病状态的治疗的化合物的量。“治疗有效量”将根据化合物、所治疗的疾病状态、所治疗疾病的严重程度、受试者的年龄和相对健康状况、施用途径和形式、主治医生或兽医的判断以及其他因素而变化。
当提及一个变量时，术语“如本文所定义”和“如本文所述”通过引用包含了该变量的广义定义，以及特别的，更特别的和最特别的定义(如果有)。
当提及化学反应时，术语“处理”、“接触”和“反应”指在适当的条件下加入或混合两种或更多种试剂以产生所指示和/或所需的产品。应当理解，产生所指示和/或所需产品的反应不一定直接由最初加入的两种试剂的组合产生，即可能存在在混合物中产生的一种或多种中间体，其最终导致所指示和/或所需产品的形成。
术语“药学上可接受的赋形剂”指不具有治疗活性且无毒性的任何成分，例如用于配制药物产品的崩解剂、粘合剂、填充剂、溶剂、缓冲剂、张力剂、稳定剂、抗氧化剂、表面活性剂或润滑剂。
术语“抑制剂”指与特定配体竞争与特定受体结合、减少或阻止特定配体与特定受体结合，或者减少或阻止特定蛋白质的功能的化合物。
如果式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的起始原料或化合物之一含有一个或多个在一个或多个反应步骤的反应条件下不稳定或具有反应性的官能团，则合适的保护基团(如T.W.Greene和P.G.M.Wuts在“Protective Groups in Organic Chemistry”第3版,1999,Wiley,New York中所述)可以在关键步骤之前应用本领域熟知的方法引入。这种保护基团可以在合成的后期使用文献中描述的标准方法去除。保护基团的例子是叔丁氧羰基(Boc)、9-芴基甲基氨基甲酸酯(Fmoc)、2-三甲基甲硅烷基乙基氨基甲酸酯(Teoc)、苄氧羰基(Cbz)和对甲氧基苄氧基羰基(Moz)。
通式I、通式II、通式III、通式IV、通式V和通式VI的化合物可以含有多个不对称中心，并且可以以光学纯对映异构体、对映异构体混合物(例如外消旋物)、非对映异构体混合物、非对映异构体外消旋物或非对映异构体外消旋物混合物的形式存在。
术语“不对称碳原子”指具有四个不同取代基的碳原子。根据Cahn-Ingold-Prelog规则，不对称碳原子可以是“R”或“S”构型。
每当化学结构中存在手性碳时，该结构旨在将与该手性碳相关的所有立体异构体作为纯立体异构体及其混合物涵盖。
本发明的化合物可以互变异构体存在，即与本文中所描绘的式I、式II、式III、式IV、式V或式VI化合物相互转化的结构异构体，特别是在溶液中。式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物旨在涵盖其所有现有的互变异构形式。
本发明的化合物可以作为溶剂合物存在。式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物旨在包含其所有现有的溶剂合物。
本发明还提供了药物组合物、使用方法和制备前述化合物的方法。
本发明的化合物可含有一个或多个不对称中心，且因此可作为外消旋体、对映异构体的混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单个非对映异构体存在。根据分子上各个不同取代基的性质，可以存在额外的不对称中心。每一个这样的不对称中心将独立地产生两种光学异构体，并且旨在将混合物中所有可能的光学异构体和非对映异构体以及纯的或部分纯化的化合物包括在本发明中。本发明意在涵盖这些化合物的所有这些异构形式。如本领域所知的，这些非对映异构体的独立合成或其色谱分离可通过适当修改本文公开的方法实现。它们的绝对立体化学可以通过结晶产物或结晶中间体的x射线晶体学来确定，如有必要，该结晶产物或结晶中间体可以用含有已知绝对构型的不对称中心的试剂衍生化。如果需要，可以分离化合物的外消旋混合物，使得分离单个对映异构体。分离可以通过本领域熟知的方法进行，例如将化合物的外消旋混合物与对映异构体纯的化合物偶联以形成非对映异构体混合物，然后通过标准方法(例如分级结晶或色谱法)分离单个非对映异构体。
在提供光学纯对映异构体的实施方案中，光学纯对映异构体指化合物包含大于90％重量的所需异构体，特别是大于95％重量的所需异构体，或更特别是大于99％重量的所需异构体，所述重量百分比基于化合物的异构体的总重量。可以通过手性选择性合成或通过对映异构体的分离制备手性纯的或手性富集的化合物。对映异构体的分离可以在最终产物上进行，或者在合适的中间体上进行。
式I和式II的实施方案
在某些实施方案中，式I化合物选自
/>
或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，式II化合物选自
或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，本发明的化合物选自:
或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，本发明的化合物选自:
/>
或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，本发明的化合物选自:
/>
/>
或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，本发明的化合物选自:
/>
/>
/>
或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，本发明的化合物选自:
/>
或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，本发明的化合物选自:
/>
或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，本发明的化合物选自:
/>
/>
/>
或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，本发明的化合物选自:
/>
或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，提供了式I化合物
其中
A1选自-NR2-和-CHR2’-；
R1选自氢、烷基和环烷基；
R2选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选地被一个或两个R3取代的杂环烷基；
R2'选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2'与它们所连接的碳原子一起形成任选被一个或两个R3取代的环烷基；
每个R3独立地选自氢、卤素、烷基、环烷基和烷氧基；
R4选自氢、烷基、氰基和卤素；
R5选自氢、烷基、氰基和卤素；
A2选自-O-、-NH-和-(C＝O)-；
R6选自氢、卤素、羟基、氨基、二烷基氨基、烷氧基、烷基和烷氧基烷基；
A3选自键、-CH2-、-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-、-CH(CH3)-CH2-CH2-、-CH2-CH(CH3)-CH2-、-CH2-CH2-CH(CH3)-、-CH2-CH2-CH2-CH2-和-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-；
A选自键、嘧啶基、吡啶基、吡唑基和3-氮杂双环[3.1.0]己基；
B选自苯基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚烷基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基、1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂螺[4.5]癸基、1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸基、1,8-二氮杂螺[4.5]癸基和8-氮杂螺[4.5]癸基；其中B任选地被独立地选自卤素、烷基和烷氧基的一个或两个取代基取代；
n是0或1；
A4选自键、-CH2-、-(SO2)-CH2-、-CH(CH2OH)-、-NH-和-O-；
C选自氮杂环庚烷基、氮杂环丁烷基、环烷基、哌嗪基和哌啶基；其中C任选被一个或两个独立选自卤素、羟基、烷基和烷氧基的取代基取代；
R7选自氢、烷基、氰基、卤素和烷氧基；
R8选自氢、烷基、氰基、卤素和烷氧基；
R9选自氢、烷基、氰基、卤素和烷氧基；和
A5是-CH-或-N-；
或其药学上可接受的盐。
本发明的一个实施方案提供了式I化合物，其中
A1选自-NR2-和-CHR2’-；
R1选自氢、烷基和环烷基；
R2选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被一个或两个R3取代的杂环烷基；
R2’选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成任选被一个或两个R3取代的环烷基；
每个R3独立地选自氢、卤素、烷基、环烷基和烷氧基；
R4选自氢、烷基、氰基和卤素；
R5选自氢、烷基、氰基和卤素；
A2选自-O-、-NH-和-(C＝O)-；
R6选自氢、卤素、羟基、氨基、二烷基氨基、烷氧基、烷基和烷氧基烷基；
A3选自键、-CH2-、-CH2-CH2-和-CH2-CH2-CH2-；
A选自键、嘧啶基、吡啶基、吡唑基和3-氮杂双环[3.1.0]己基；
B选自苯基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基、1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂螺[4.5]癸基、1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸基、1,8-二氮杂螺[4.5]癸基和8-氮杂螺[4.5]癸基；
n是0或1；
A4选自键、-CH2-、-(SO2)-CH2-、-CH(CH2OH)-、-NH-和-O-；
C选自氮杂环丁烷基、环烷基、哌嗪基、卤代哌啶基、羟基哌啶基和哌啶基；
R7选自氢、烷基、氰基、卤素和烷氧基；
R8选自氢、烷基、氰基、卤素和烷氧基；
R9选自氢、烷基、氰基、卤素和烷氧基；和
A5为-CH-或-N-；
或其药学上可接受的盐。
本发明的一个实施方案提供了式I化合物，其中
A1选自-NR2-和-CHR2’-；
R1是烷基；
R2选自烷基和环烷基；
或R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被一个或两个R3取代的杂环烷基；
R2’是烷基；
或R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成环烷基；
每个R3独立地选自卤素和烷氧基。
本发明的一个实施方案提供了式I化合物，其中
A1选自-NR2-和-CHR2’-；
R1是甲基；
R2选自乙基、叔丁基和环丙基；
或R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被一个或两个R3取代的杂环烷基；
R2’是甲基；
或R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成环烷基；
每个R3独立地选自氟和甲氧基。
本发明进一步提供:
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R1为甲基；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R2选自乙基、叔丁基和环丙基；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中A1为-NR2-；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中A1为-CHR2’-；
式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中由R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成的杂环烷基选自吡咯烷基、哌啶基、氮杂环丁烷基和3-氮杂双环[3.1.0]己基，并且其中该杂环烷基在每种情况下任选被一个或两个独立地选自氟和甲氧基的R3取代；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中由R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成的环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基和环己基；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中每个R3独立地选自氟和甲氧基；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R4为氰基；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R4为氟；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R5为卤素；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R5为氟；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中A2选自-O-和-NH-；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中A2为-O-；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中A2为-NH-；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R6选自氢、卤素、羟基、氨基、烷氧基和二烷基氨基；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R6选自氢、氟、氯、羟基、氨基、甲氧基和二甲基氨基；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中A3选自键、-CH2-CH2-和-CH2-CH2-CH2-；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中A3为键；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中A选自键和嘧啶基；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中A为键；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中A为嘧啶基；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中B选自哌啶基、哌嗪基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基、1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂螺[4.5]癸基、1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸基和8-氮杂螺[4.5]癸基；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中B选自哌啶-4-基、哌嗪-1-基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基、1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂螺[4.5]癸基、1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸基和8-氮杂螺[4.5]癸基；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中B选自1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基和8-氮杂螺[4.5]癸基；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中B为8-氮杂螺[4.5]癸基；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中A4选自键、-CH2-和-(SO2)-CH2-；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中A4为-CH2-；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中C选自氮杂环丁烷基、环己基、哌嗪基、二氟哌啶基、羟基哌啶基、磷酸哌啶基(phosphatepiperidine)和哌啶基；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中C选自氮杂环丁烷基、环己基、哌嗪基、二氟哌啶基、羟基哌啶基和哌啶基；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中C选自氮杂环丁烷-1-基、环己基、哌嗪-1-基、3,3-二氟哌啶-1-基、4-羟基哌啶-4-基、哌啶-1-基和哌啶-4-基；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中C选自羟基哌啶基和哌啶基；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中C选自羟基哌啶-4-基、哌啶-1-基和哌啶-4-基；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R7为烷基；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R7为甲基；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R8选自氢和卤素；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R8选自氢和氟；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R9选自氢和卤素；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R9选自氢和氟；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中A5为-NH-；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中A5为-CH-；
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中n为1；和
式I化合物或其药学上可接受的盐，其中n为0。
本发明进一步提供了式I化合物，其选自
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]乙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]丙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]吡唑-4-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[7-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]-4-氧代喹唑啉；
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[7-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-3-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷；
9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-3-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-3-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]-3,3-二氟哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]-3,3-二氟哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-3-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酰基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺；
6-[2-氯-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环戊烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]丙烷-2-磺酰胺；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]环己基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]环己基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[3-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]氮杂环丁-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-7-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-7-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-氟-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺；
(3S)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺；
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯胺基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-(二甲基氨基)-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-甲氧基-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯胺基]-5-氟-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯胺基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-羟基-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]哌啶-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环己烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]丙烷-2-磺酰胺；
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环戊烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丙烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基氮杂环丁烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-磺酰胺
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]吡咯烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]氮杂环丁烷-1-磺酰胺；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[环丙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丁烷磺酰胺；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-氟哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯胺基]-5-氟-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-3,3-二氟哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[(4S)-4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-3,3-二氟哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-8-[2-[1-[5-氯-3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]甲磺酰基]-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-3-[6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟苯甲酰基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[3-[[叔丁基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2-氰基-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]环己基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]环己基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；和
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-丙-2-基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
或其药学上可接受的盐。
本发明进一步提供了式I化合物，其选自
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺；
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯胺基]-5-氟-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]哌啶-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环己烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]丙烷-2-磺酰胺；
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环戊烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丙烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]吡咯烷-1-磺酰胺；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[环丙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；和
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丁烷磺酰胺；
或其药学上可接受的盐。
本发明进一步提供:
用作治疗活性物质的式I化合物或其药学上可接受的盐。
包含式I化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体的药物组合物；
式I化合物或其药学上可接受的盐在癌症的治疗性和/或预防性治疗中的用途；
用于治疗和/或预防癌症的式I化合物或其药学上可接受的盐；
式I化合物或其药学上可接受的盐在制备用于癌症的治疗性和/或预防性治疗的药物中的用途；
一种癌症的治疗性和/或预防性治疗的方法，该方法包括向有需要的患者施用有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐；
在一些实施方案中，癌症为BRAF V600X突变的肿瘤；
在一些实施方案中，癌症为BRAF V600E/K突变的肿瘤；
在一些实施方案中，癌症是未经历靶向治疗的；和
在一些实施方案中，癌症选自黑素瘤、结肠直肠癌和肺癌，特别是非小细胞肺癌。
在某些实施方案中，本发明的化合物是
或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，本发明的化合物是
或其药学上可接受的盐。
式I的另外实施方案
1.式I的化合物
其中
A1选自-NR2-和-CHR2’-；
R1选自氢、烷基和环烷基；
R2选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被一个或两个R3取代的杂环烷基；
R2’选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成任选被一个或两个R3取代的环烷基；
每个R3独立地选自氢、卤素、烷基、环烷基和烷氧基；
R4选自氢、烷基、氰基和卤素；
R5选自氢、烷基、氰基和卤素；
A2选自-O-、-NH-和-(C＝O)-；
R6选自氢、卤素、羟基、氨基、二烷基氨基、烷氧基、烷基和烷氧基烷基；
A3选自键、-CH2-、-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-、-CH(CH3)-CH2-CH2-、-CH2-CH(CH3)-CH2-、-CH2-CH2-CH(CH3)-、-CH2-CH2-CH2-CH2-和-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-；
A选自键、嘧啶基、吡啶基、吡唑基和3-氮杂双环[3.1.0]己基；
B选自苯基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基、1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂螺[4.5]癸基、1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸基、1,8-二氮杂螺[4.5]癸基和8-氮杂螺[4.5]癸基；其中B任选被一个或两个独立选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代；
n是0或1；
A4选自键、-CH2-、-(SO2)-CH2-、-CH(CH2OH)-、-NH-和-O-；
C选自氮杂环庚基、氮杂环丁基、环烷基、哌嗪基和哌啶基；其中C任选被一个或两个独立选自卤素、羟基、烷基和烷氧基的取代基取代；
R7选自氢、烷基、氰基、卤素和烷氧基；
R8选自氢、烷基、氰基、卤素和烷氧基；
R9选自氢、烷基、氰基、卤素和烷氧基；和
A5为-CH-或-N-；
或其药学上可接受的盐。
2.根据实施方案1的化合物，其中
A1选自-NR2-和-CHR2’-；
R1选自氢、烷基和环烷基；
R2选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被一个或两个R3取代的杂环烷基；
R2’选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成任选被一个或两个R3取代的环烷基；
每个R3独立地选自氢、卤素、烷基、环烷基和烷氧基；
R4选自氢、烷基、氰基和卤素；
R5选自氢、烷基、氰基和卤素；
A2选自-O-、-NH-和-(C＝O)-；
R6选自氢、卤素、羟基、氨基、二烷基氨基、烷氧基、烷基和烷氧基烷基；
A3选自键、-CH2-、-CH2-CH2-和-CH2-CH2-CH2-；
A选自键、嘧啶基、吡啶基、吡唑基和3-氮杂双环[3.1.0]己基；
B选自苯基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基、1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂螺[4.5]癸基、1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸基、1,8-二氮杂螺[4.5]癸基和8-氮杂螺[4.5]癸基；
n是0或1；
A4选自键、-CH2-、-(SO2)-CH2-、-CH(CH2OH)-、-NH-和-O-；
C选自氮杂环丁基、环烷基、哌嗪基、卤代哌啶基、羟基哌啶基和哌啶基；
R7选自氢、烷基、氰基、卤素和烷氧基；
R8选自氢、烷基、氰基、卤素和烷氧基；
R9选自氢、烷基、氰基、卤素和烷氧基；和
A5为-CH-或-N-；
或其药学上可接受的盐。
3.根据实施方案1或2的化合物，其中
A1选自-NR2-和-CHR2’-；
R1是烷基；
R2选自烷基和环烷基；
或R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被一个或两个R3取代的杂环烷基；
R2’是烷基；
或R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成环烷基；
每个R3独立地选自卤素和烷氧基。
4.根据实施方案1至3中任一项的化合物，其中
A1选自-NR2-和-CHR2’-；
R1是甲基；
R2选自乙基、叔丁基和环丙基；
或R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被一个或两个R3取代的杂环烷基；
R2’是甲基；
或R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成环烷基；
每个R3独立地选自氟和甲氧基。
5.根据实施方案1至4中任一项的化合物，其中R1是甲基。
6.根据实施方案1至5中任一项的化合物，其中R2选自乙基、叔丁基和环丙基。
7.根据实施方案1至6中任一项的化合物，其中A1为-NR2-。
8.根据实施方案1至6中任一项的化合物，其中A1为-CHR2’-。
9.根据实施方案1至8中任一项的化合物，其中由R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成的杂环烷基选自吡咯烷基、哌啶基、氮杂环丁烷基和3-氮杂双环[3.1.0]己基，并且其中该杂环烷基在每种情况下任选被一个或两个独立地选自氟和甲氧基的R3取代。
10.根据实施方案1至9中任一项的化合物，其中由R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成的环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
11.根据实施方案1至10中任一项的化合物，其中每个R3独立地选自氟和甲氧基。
12.根据实施方案1至11中任一项的化合物，其中R4是氰基。
13.根据实施方案1至12中任一项的化合物，其中R5是卤素。
14.根据实施方案1至13中任一项的化合物，其中R5是氟。
15.根据实施方案1至14中任一项的化合物，其中A2选自-O-和-NH-。
16.根据实施方案1至15中任一项的化合物，其中A2为-O-。
17.根据实施方案1至16中任一项的化合物，其中R6选自氢、卤素、羟基、氨基、烷氧基和二烷基氨基。
18.根据实施方案1至17中任一项的化合物，其中R6选自氢、氟、氯、羟基、氨基、甲氧基和二甲基氨基。
19.根据实施方案1至18中任一项所述的化合物，其中A3选自键、-CH2-CH2-和-CH2-CH2-CH2-，
20.根据实施方案1至19中任一项的化合物，其中A3是键。
21.根据实施方案1至20中任一项的化合物，其中A选自键和嘧啶基。
22.根据实施方案1至21中任一项的化合物，其中A是键。
23.根据实施方案1至22中任一项的化合物，其中B选自哌啶基、哌嗪基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基、1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂螺[4.5]癸基、1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸基和8-氮杂螺[4.5]癸基。
24.根据实施方案1至23中任一项的化合物，其中B选自1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基和8-氮杂螺[4.5]癸基。
25.根据实施方案1至24中任一项所述的化合物，其中A4选自键、-CH2-和-(SO2)-CH2-。
26.根据实施方案1至25中任一项的化合物，其中A4为-CH2-。
27.根据实施方案1至26中任一项的化合物，其中C选自氮杂环丁基、环己基、哌嗪基、二氟哌啶基、羟基哌啶基和哌啶基。
28.根据实施方案1至27中任一项的化合物，其中C选自羟基哌啶基和哌啶基。
29.根据实施方案1至28中任一项的化合物，其中R7是烷基。
30.根据实施方案1至29中任一项的化合物，其中R7是甲基。
31.根据实施方案1至30中任一项的化合物，其中R8选自氢和卤素。
32.根据实施方案1至31中任一项的化合物，其中R8选自氢和氟。
33.根据实施方案1至32中任一项的化合物，其中R9选自氢和卤素。
34.根据实施方案1至33中任一项的化合物，其中R9选自氢和氟。
35.根据实施方案1至34中任一项的化合物，其中A5为-NH-。
36.根据实施方案1至34中任一项的化合物，其中A5为-CH-。
37.根据实施方案1至36中任一项的化合物，其中n为1。
38.根据实施方案1至37中任一项的化合物，其选自
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]乙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]丙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]吡唑-4-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[7-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]-4-氧代喹唑啉；
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[7-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-3-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷；
9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-3-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-3-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]-3,3-二氟哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]-3,3-二氟哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-3-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酰基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺；
6-[2-氯-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环戊烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]丙烷-2-磺酰胺；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]环己基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]环己基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[3-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]氮杂环丁-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-7-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-7-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-氟-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺；
(3S)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺；
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯胺基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-(二甲基氨基)-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-甲氧基-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯胺基]-5-氟-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯胺基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-羟基-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]哌啶-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环己烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]丙烷-2-磺酰胺；
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环戊烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丙烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基氮杂环丁烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-磺酰胺
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]吡咯烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]氮杂环丁烷-1-磺酰胺；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[环丙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丁烷磺酰胺；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-氟哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯胺基]-5-氟-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-3,3-二氟哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[(4S)-4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-3,3-二氟哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-8-[2-[1-[5-氯-3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]甲磺酰基]-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-3-[6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟苯甲酰基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[3-[[叔丁基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2-氰基-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]环己基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]环己基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；和
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-丙-2-基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
或其药学上可接受的盐。
39.根据实施方案1至38中任一项的化合物，其选自
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺；
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯胺基]-5-氟-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]哌啶-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环己烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]丙烷-2-磺酰胺；
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环戊烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丙烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]吡咯烷-1-磺酰胺；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[环丙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；和
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丁烷磺酰胺；
或其药学上可接受的盐。
40.根据实施方案1至39中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，用作治疗活性物质。
41.一种药物组合物，其包含根据实施方案1至39中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
42.实施方案1至39中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在癌症的治疗性和/或预防性治疗中的用途。
43.用于癌症的治疗性和/或预防性治疗的根据实施方案1至39中任一项的化合物或其药学上可接受的盐。
44.实施方案1至39中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于癌症的治疗性和/或预防性治疗的药物中的用途。
45.一种用于癌症的治疗性和/或预防性治疗的方法，该方法包括向有需要的患者施用有效量的实施方案1至39中任一项的化合物或其药学上可接受的盐。
46.本文所描述的发明。
式III和式IV的实施方案
在某些实施方案中，式III化合物是式III-A的化合物
其中A2为-O-，n为1，R4为氰基，其余取代基和变量如本文所述，或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，式III化合物是式III-B的化合物
其中A2为-NH-，n为1，R4为氰基，R5为氟，其余取代基和变量如本文所述，或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，式III化合物是式III-C的化合物
其中A1为-NR2-，A2为-O-，n为1，A14为-CH2-，A15为-NH-，A6为-CH-，其余取代基和变量如本文所述，或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，式IV化合物选自:
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或其药学上可接受的盐。
在某些方面，提供式III化合物
其中
A1选自-NR2-和-CHR2’-；
R1选自氢、烷基和环烷基；
R2选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被一个或两个R3取代的杂环烷基；
R2’选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成任选被一个或两个R3取代的环烷基；
每个R3独立地选自氢、卤素、烷基、环烷基和烷氧基；
R4选自氢、烷基、氰基和卤素；
R5选自氢、烷基、氰基和卤素；
A2选自-O-、-NH-和-(C＝O)-；
R6选自氢、卤素、羟基、氨基、二烷基氨基、烷氧基、烷基和烷氧基烷基；
A3选自键、-CH2-、-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-、-CH(CH3)-CH2-CH2-、-CH2-CH(CH3)-CH2-、-CH2-CH2-CH(CH3)-、-CH2-CH2-CH2-CH2-和-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-；
A选自键、嘧啶基、吡啶基、吡唑基和3-氮杂双环[3.1.0]己基；
B2选自苯基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基和8-氮杂螺[4.5]癸基，其中B2任选被一个或两个独立选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代；
n是0或1；
A14选自键、-CH2-、-CH2-CH2-、-CH(CH2OH)-、-NH-、-O-、环烷基和烷基氨基；
C选自氮杂环庚烷基、氮杂环丁烷基、环烷基、哌嗪基和哌啶基；其中C任选被一个或两个独立选自卤素、羟基、烷基和烷氧基的取代基取代；
R17选自氢、烷基、氰基、羟基、环烷基、卤素和烷氧基；
R18选自氢、烷基、氰基、羟基、环烷基、卤素和烷氧基；
R19选自氢、烷基、氰基、羟基、环烷基、卤素和烷氧基；
A15选自键、O-和-NH-；和
A6是-CH-或-N-；
或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，本发明是式III的化合物，其中
A1选自-NR2-和-CHR2’-；
R1选自氢、烷基和环烷基；
R2选自烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被一个或两个R3取代的杂环烷基；
R2’选自烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成任选被一个或两个R3取代的环烷基；
每个R3独立地选自氢、卤素和烷氧基；
R4选自氢、烷基、氰基和卤素；
R5选自氢、烷基、氰基和卤素；
A2选自-O-、-NH-和-(C＝O)-；
R6选自氢、卤素、羟基、氨基、二烷基氨基、烷氧基、烷基和烷氧基烷基；
A3选自键、-CH2-、-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-、-CH(CH3)-CH2-CH2-、-CH2-CH(CH3)-CH2-、-CH2-CH2-CH(CH3)-、-CH2-CH2-CH2-CH2-和-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-；
A选自键、嘧啶基、吡啶基、吡唑基和3-氮杂双环[3.1.0]己基；
B2选自苯基、哌啶基、哌嗪基、卤代哌啶基、1,4-二氮杂环庚基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基和8-氮杂螺[4.5]癸基；
n是0或1；
A14选自键、-CH2-、-CH2-CH2-、-CH(CH2OH)-、-NH-、-O-、环烷基和烷基氨基；
C选自氮杂环庚基、氮杂环丁基、环烷基、卤代哌啶基、羟基哌啶基、烷氧基哌啶基、哌嗪基和哌啶基；
R17选自氢、卤素和烷氧基；
R18选自氢、卤素和烷氧基；
R19选自氢、卤素和烷氧基；
A15选自键、O-和-NH-；和
A6是-CH-或-N-；
或其药学上可接受的盐。
在本发明的其他实施方案中，是式III的化合物，其中
A1选自-NR2-和-CHR2’-；
R1是烷基；
R2选自烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被一个或两个R3取代的杂环烷基；
R2’是烷基；
或R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成环烷基；
每个R3独立地选自卤素和烷氧基。
本发明的一个实施方案是式III的化合物，其中
A1选自-NR2-和-CHR2’-；
R1是甲基；
R2选自乙基、氟乙基、二氟乙基和环丙基；
或R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被一个或两个R3取代的杂环烷基；
R2’是烷基；
或R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成环烷基；
每个R3独立地选自氟和甲氧基。
本发明的另外的实施方案包括:
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中R1为甲基；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中R2选自乙基、氟乙基、二氟乙基和环丙基；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中A1为-NR2-；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中A1为-CHR2’-；
式III的化合物或其药学上可接受的盐，其中由R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成的杂环烷基选自吡咯烷基、哌啶基、氮杂环丁烷基和3-氮杂双环[3.1.0]己基，并且其中该杂环烷基在每种情况下任选被一个或两个独立地选自氟和甲氧基的R3取代；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中由R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成的环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基和环己基；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中每个R3独立地选自氟和甲氧基；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中R4为氰基；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中R5选自氰基和卤素；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中R5选自氰基和氟；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中R5选自氢和卤素；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中R5选自氢和氟；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中R5为卤素；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中R5为氟；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中R5为氰基；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中A2选自-O-和-NH-；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中A2为-O-；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中R6选自氢、氟、氯、溴、羟基、氨基、甲氧基、甲基和甲氧基甲基；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中R6是氢；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中A3选自键、-CH2-、-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-、-CH(CH3)-CH2-CH2-、-CH2-CH(CH3)-CH2-和-CH2-CH2-CH(CH3)-；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中A3为键；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中A选自键、吡啶基和嘧啶基；
式III的化合物或其药学上可接受的盐，其中B2选自苯基、哌啶-4-基、4-氟-哌啶-4-基、哌嗪-1-基、1,4-二氮杂环庚基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基和8-氮杂螺[4.5]癸基；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中B2选自苯基、哌啶基、哌嗪基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、7-氮杂螺[3.5]壬基和8-氮杂螺[4.5]癸基；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中B2选自苯基、哌啶-4-基、哌嗪-1-基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、7-氮杂螺[3.5]壬基和8-氮杂螺[4.5]癸基；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中B2选自哌嗪基和1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中B2选自哌嗪-1-基和1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中A14为-CH2-；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中C选自氮杂环庚烷-1-基、氮杂环丁烷-1-基、环烷基、哌嗪-1-基、哌嗪-1-基、哌啶-4-基、4-羟基哌啶-4-基、3,3-二氟哌啶-1-基和3-甲氧基哌啶-1-基；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中C选自二氟哌啶基、羟基哌啶基、甲氧基哌啶基、哌嗪基和哌啶基；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中C选自二氟哌啶基、羟基哌啶基、甲氧基哌啶基、哌嗪基和哌啶基；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中C为哌啶-1-基；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中R17选自氢、氟和甲氧基；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中R17为氟；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中R18选自氢和氟；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中R18为氢；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中R19选自氢、氟和甲氧基；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中R19为氢；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中A15为-NH-；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中A15为-CH-；
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中n为1；和
式III化合物或其药学上可接受的盐，其中n为0。
一个实施方案是选自以下的式III化合物:
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]乙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]乙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-3-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]乙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]丙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]丙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]丙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]苯基]哌啶-1-基]-2-氧代乙基]哌啶-4-基]丙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]乙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]乙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[4-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]丁-2-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]丁基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-4-甲基哌啶-4-基]丙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-4-氟哌啶-4-基]乙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]-2-甲基丙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-4-氟哌啶-4-基]丙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]吡唑-4-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]吡唑-4-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]吡唑-4-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-3-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]吡唑-4-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2,6-二氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]吡唑-4-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]苯基]哌啶-1-基]-2-氧代乙基]哌啶-4-基]吡唑-4-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[7-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[7-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]-4-氧代喹唑啉；
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]苯氧基]-3-[7-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]-4-氧代喹唑啉；
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
4-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-9-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷；
9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-3-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[[7-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]甲基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-2-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-4-氧代喹唑啉；
(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
4-[6-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]-N-[1-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-4-基]苯甲酰胺；
3-[[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]甲基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
2-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-N-[1-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-4-基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺；
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-N-[1-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-4-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酰胺；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[7-[3-[3-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]氮杂环丁烷-1-基]环丁烷羰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌嗪-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌嗪-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-氟-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-5-氟-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-3-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-3-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]哌嗪-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环戊烷磺酰胺；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-5-甲基-4-氧代喹唑啉；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]-3,3-二氟哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-甲基-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]哌嗪-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]丙烷-2-磺酰胺；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2.5-二氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2.3-二氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2.3-二氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]-3,3-二氟哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]-3,3-二氟哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2,5-二氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-氟-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3S)-3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟-5-甲氧基苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]氮杂环庚烷-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3S)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
3-[5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯胺基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]环己基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-氟-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟-6-甲氧基苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟-5-甲氧基苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟-6-甲氧基苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟-5-甲氧基苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]-3-羟基丙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[6-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[6-[4-[2-[4-[4-[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺；
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[(2S)-2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]-3-羟基丙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-甲氧基-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-甲氧基-4-氧代喹唑啉；
5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[(3R,4R)-4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]-3-甲氧基哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[(3S,4S)-4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]-3-甲氧基哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环己烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]哌啶-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]吡咯烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环戊烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环戊烷磺酰胺；
(3S)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺；
(3S)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]丙烷-2-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]哌啶-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丙烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丙烷磺酰胺；
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基氮杂环丁烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]丙烷-2-磺酰胺；
6-[2-氰基-3-[[2,2-二氟乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-6-氟-3-[[2-氟乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-6-氟-3-[[2-氟乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[2,2-二氟乙基(甲基)氨磺酰]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3,3-二氟吡咯烷-1-磺酰胺；
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]氮杂环丁烷-1-磺酰胺；
6-[2-氰基-3-[[环丙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[环丙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
(1S,5R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-磺酰胺；
(3R,4R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3,4-二氟吡咯烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]氮杂环丁烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丁烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丁烷磺酰胺；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-(甲氧基甲基)-4-氧代喹唑啉；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]环己基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
N-[3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-2,4-二氟苯基]环戊烷磺酰胺；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-(甲氧基甲基)-4-氧代喹唑啉；
3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉；
3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-羟基-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-羟基-4-氧代喹唑啉；
3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟苯甲酰基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]乙基]-4-氧代-喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]乙基]-4-氧代-喹唑啉；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]乙基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]环戊烷磺酰胺；
6-[3-[[叔丁基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2-氰基-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；和
6-[3-[[叔丁基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2-氰基-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
或其药学上可接受的盐。
本发明的一个实施方案是式III的化合物，其选自
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]吡咯烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环戊烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]丙烷-2-磺酰胺；和
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丙烷磺酰胺；
或其药学上可接受的盐。
本发明进一步涉及
用作治疗活性物质的式III化合物或其药学上可接受的盐。
包含式III化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体的药物组合物；
式III化合物或其药学上可接受的盐用于癌症的治疗性和/或预防性治疗的用途；
用于癌症的治疗性和/或预防性治疗的式III化合物或其药学上可接受的盐；
式III化合物或其药学上可接受的盐在制备用于癌症的治疗性和/或预防性治疗的药物中的用途；
一种癌症的治疗性和/或预防性治疗的方法，该方法包括向有需要的患者施用有效量的式III化合物或其药学上可接受的盐；
在一些实施方案中，癌症为BRAF V600X突变的肿瘤；
在一些实施方案中，癌症为BRAF V600E/K突变的肿瘤；
在一些实施方案中，癌症是未经靶向治疗的；和
在一些实施方案中，癌症选自黑素瘤、结肠直肠癌和肺癌，特别是非小细胞肺癌。
式III的另外的实施方案
1.式III化合物
其中
A1选自-NR2-和-CHR2’-；
R1选自氢、烷基和环烷基；
R2选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被一个或两个R3取代的杂环烷基；
R2’选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成任选被一个或两个R3取代的环烷基；
每个R3独立地选自氢、卤素、烷基、环烷基和烷氧基；
R4选自氢、烷基、氰基和卤素；
R5选自氢、烷基、氰基和卤素；
A2选自-O-、-NH-和-(C＝O)-；
R6选自氢、卤素、羟基、氨基、二烷基氨基、烷氧基、烷基和烷氧基烷基；
A3选自键、-CH2-、-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-、-CH(CH3)-CH2-CH2-、-CH2-CH(CH3)-CH2-、-CH2-CH2-CH(CH3)-、-CH2-CH2-CH2-CH2-和-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-；
A选自键、嘧啶基、吡啶基、吡唑基和3-氮杂双环[3.1.0]己基；
B2选自苯基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基和8-氮杂螺[4.5]癸基，其中B2任选被一个或两个独立选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代；
n是0或1；
A14选自键、-CH2-、-CH2-CH2-、-CH(CH2OH)-、-NH-、-O-、环烷基和烷基氨基；
C选自氮杂环庚烷基、氮杂环丁烷基、环烷基、哌嗪基和哌啶基；其中C任选被一个或两个独立选自卤素、羟基、烷基和烷氧基的取代基取代；
R17选自氢、烷基、氰基、羟基、环烷基、卤素和烷氧基；
R18选自氢、烷基、氰基、羟基、环烷基、卤素和烷氧基；
R19选自氢、烷基、氰基、羟基、环烷基、卤素和烷氧基；
A15选自键、O-和-NH-；和
A6是-CH-或-N-；
或其药学上可接受的盐。
2.根据实施方案1的化合物，其中
A1选自-NR2-和-CHR2’-；
R1选自氢、烷基和环烷基；
R2选自烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被一个或两个R3取代的杂环烷基；
R2’选自烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成任选被一个或两个R3取代的环烷基；
每个R3独立地选自氢、卤素和烷氧基；
R4选自氢、烷基、氰基和卤素；
R5选自氢、烷基、氰基和卤素；
A2选自-O-、-NH-和-(C＝O)-；
R6选自氢、卤素、羟基、氨基、二烷基氨基、烷氧基、烷基和烷氧基烷基；
A3选自键、-CH2-、-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-、-CH(CH3)-CH2-CH2-、-CH2-CH(CH3)-CH2-、-CH2-CH2-CH(CH3)-、-CH2-CH2-CH2-CH2-和-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-；
A选自键、嘧啶基、吡啶基、吡唑基和3-氮杂双环[3.1.0]己基；
B2选自苯基、哌啶基、哌嗪基、卤代哌啶基、1,4-二氮杂环庚基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基和8-氮杂螺[4.5]癸基；
n是0或1；
A14选自键、-CH2-、-CH2-CH2-、-CH(CH2OH)-、-NH-、-O-、-环烷基和烷基氨基；
C选自氮杂环庚烷基、氮杂环丁烷基、环烷基、卤代哌啶基、羟基哌啶基、烷氧基哌啶基、哌嗪基和哌啶基；
R17选自氢、卤素和烷氧基；
R18选自氢、卤素和烷氧基；
R19选自氢、卤素和烷氧基；
A15选自键、O-和-NH-；和
A6是CH-或-N-；
或其药学上可接受的盐。
3.根据实施方案1或2的化合物，其中
A1选自-NR2-和-CHR2’-；
R1是烷基；
R2选自烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被一个或两个R3取代的杂环烷基；
R2’是烷基；
或R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成环烷基；
每个R3独立地选自卤素和烷氧基。
4.根据实施方案1至3中任一项的化合物，其中
A1选自-NR2-和-CHR2’-；
R1是甲基；
R2选自乙基、氟乙基、二氟乙基和环丙基；
或R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被一个或两个R3取代的杂环烷基；
R2’是烷基；
或R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成环烷基；
每个R3独立地选自氟和甲氧基。
5.根据实施方案1至4中任一项的化合物，其中R1是甲基。
6.根据实施方案1至5中任一项的化合物，其中R2选自乙基、氟乙基、二氟乙基和环丙基。
7.根据实施方案1至6中任一项的化合物，其中A1为-NR2-。
8.根据实施方案1至6中任一项的化合物，其中A1为-CHR2’-。
9.根据实施方案1至8中任一项的化合物，其中由R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成的杂环烷基选自吡咯烷基、哌啶基、氮杂环丁烷基和3-氮杂双环[3.1.0]己基，并且其中该杂环烷基在每种情况下任选被一个或两个独立地选自氟和甲氧基的R3取代。
10.根据实施方案1至9中任一项的化合物，其中由R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成的环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
11.根据实施方案1至10中任一项的化合物，其中每个R3独立地选自氟和甲氧基。
12.根据实施方案1至11中任一项的化合物，其中R4是氰基。
13.根据实施方案1至12中任一项的化合物，其中R5选自氢和卤素。
14.根据实施方案1至13中任一项的化合物，其中R5选自氢和氟。
15.根据实施方案1至14中任一项的化合物，其中A2选自-O-和-NH-。
16.根据实施方案1至15中任一项的化合物，其中A2为-O-。
17.根据实施方案1至16中任一项的化合物，其中R6选自氢、氟、氯、溴、羟基、氨基、甲氧基、甲基和甲氧基甲基。
18.根据实施方案1至17中任一项的化合物，其中R6是氢。
19.根据实施方案1至18中任一项所述的化合物，其中A3选自键、-CH2-、-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-、-CH(CH3)-CH2-CH2-、-CH2-CH(CH3)-CH2-和-CH2-CH2-CH(CH3)-。
20.根据实施方案1至19中任一项的化合物，其中A3是键。
21.根据实施方案1至20中任一项的化合物，其中A选自键、吡啶基和嘧啶基。
22.根据实施方案1至21中任一项的化合物，其中B2选自苯基、哌啶基、哌嗪基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、7-氮杂螺[3.5]壬基和8-氮杂螺[4.5]癸基。
23.根据实施方案1至22中任一项的化合物，其中B2选自哌嗪基和1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基。
24.根据实施方案1至23中任一项的化合物，其中A14为-CH2-。
25.根据实施方案1至24中任一项的化合物，其中C选自二氟哌啶基、羟基哌啶基、甲氧基哌啶基、哌嗪基和哌啶基。
26.根据实施方案1至25中任一项的化合物，其中C是哌啶基。
27.根据实施方案1至26中任一项的化合物，其中R17选自氢、氟和甲氧基。
28.根据实施方案1至27中任一项的化合物，其中R18选自氢和氟。
29.根据实施方案1至28中任一项的化合物，其中R19选自氢、氟和甲氧基。
30.根据实施方案1至29中任一项的化合物，其中A15为-NH-。
31.根据实施方案1至29中任一项的化合物，其中A15为-CH-。
32.根据实施方案1至31中任一项的化合物，其中n为1。
33.根据实施方案1至32中任一项的化合物，其选自
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]乙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]乙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-3-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]乙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]丙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]丙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]丙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]苯基]哌啶-1-基]-2-氧代乙基]哌啶-4-基]丙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]乙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]乙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[4-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]丁-2-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]丁基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-4-甲基哌啶-4-基]丙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-4-氟哌啶-4-基]乙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]-2-甲基丙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-4-氟哌啶-4-基]丙基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]吡唑-4-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]吡唑-4-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]吡唑-4-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-3-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]吡唑-4-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2,6-二氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]吡唑-4-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]苯基]哌啶-1-基]-2-氧代乙基]哌啶-4-基]吡唑-4-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[7-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[7-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]-4-氧代喹唑啉；
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]苯氧基]-3-[7-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]-4-氧代喹唑啉；
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
4-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-9-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷；
9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-3-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[[7-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]甲基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-2-氮杂螺[4.5]癸-8-基]-4-氧代喹唑啉；
(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
4-[6-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]-N-[1-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-4-基]苯甲酰胺；
3-[[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]甲基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
2-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-N-[1-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-4-基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺；
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-N-[1-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-4-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酰胺；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[7-[3-[3-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]氮杂环丁烷-1-基]环丁烷羰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌嗪-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌嗪-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-氟-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸-3-基]-5-氟-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-3-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸-3-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-3-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]哌嗪-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环戊烷磺酰胺；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸-3-基]-5-甲基-4-氧代喹唑啉；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]-3,3-二氟哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-甲基-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]哌嗪-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]丙烷-2-磺酰胺；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2,5-二氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2,3-二氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2,3-二氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]-3,3-二氟哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]-3,3-二氟哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2,5-二氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉；
3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-氟-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3S)-3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟-5-甲氧基苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]氮杂环庚烷-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3S)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸-3-基]-4-氧代喹唑啉；
5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸-3-基]-4-氧代喹唑啉；
3-[5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯胺基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]环己基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-氟-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟-6-甲氧基苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟-5-甲氧基苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟-6-甲氧基苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟-5-甲氧基苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]-3-羟基丙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[6-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[6-[4-[2-[4-[4-[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺；
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[(2S)-2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]-3-羟基丙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-甲氧基-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-甲氧基-4-氧代喹唑啉；
5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[(3R,4R)-4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]-3-甲氧基哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[(3S,4S)-4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]-3-甲氧基哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环己烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]哌啶-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]吡咯烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环戊烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环戊烷磺酰胺；
(3S)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺；
(3S)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]丙烷-2-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]哌啶-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丙烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丙烷磺酰胺；
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基氮杂环丁烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]丙烷-2-磺酰胺；
6-[2-氰基-3-[[2,2-二氟乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-6-氟-3-[[2-氟乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-6-氟-3-[[2-氟乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[2,2-二氟乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3,3-二氟吡咯烷-1-磺酰胺；
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]氮杂环丁烷-1-磺酰胺；
6-[2-氰基-3-[[环丙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[环丙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
(1S,5R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-磺酰胺；
(3R,4R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3,4-二氟吡咯烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]氮杂环丁烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丁烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丁烷磺酰胺；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-(甲氧基甲基)-4-氧代喹唑啉；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]环己基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
N-[3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-2,4-二氟苯基]环戊烷磺酰胺；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-(甲氧基甲基)-4-氧代喹唑啉；
3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉；
3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-羟基-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-羟基-4-氧代喹唑啉；
3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟苯甲酰基]-4-氧代喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]乙基]-4-氧代-喹唑啉；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]乙基]-4-氧代-喹唑啉；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]乙基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]环戊烷磺酰胺；
6-[3-[[叔丁基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2-氰基-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；和
6-[3-[[叔丁基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2-氰基-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
或其药学上可接受的盐。
34.根据实施方案1至33中任一项的化合物，其选自
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉；
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]吡咯烷-1-磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环戊烷磺酰胺；
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]丙烷-2-磺酰胺；和
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丙烷磺酰胺；
或其药学上可接受的盐。
35.根据实施方案1至34中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，用作治疗活性物质。
36.一种药物组合物，其包含根据实施方案1至34中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
37.根据实施方案1至34中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于癌症的治疗性和/或预防性治疗。
38.根据实施方案1至34中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗和/或预防癌症。
39.根据实施方案1至34中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于癌症的治疗性和/或预防性治疗的药物中的用途。
40.一种用于癌症的治疗性和/或预防性治疗的方法，该方法包括向有需要的患者施用有效量的根据实施方案1至34中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
式V和式VI的实施方案
在某些实施方案中，式V化合物是式V-A的化合物
其中取代基和变量如本文所述，或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，式V化合物是式V-B的化合物
其中取代基和变量如本文所述，或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，式V化合物是式V-C的化合物
其中取代基和变量如本文所述，或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，式V化合物是式V-D的化合物
其中取代基和变量如本文所述，或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，式V化合物是式V-E的化合物
其中取代基和变量如本文所述，或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，式V化合物是式V-F的化合物
其中取代基和变量如本文所述，或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，式VI化合物选自:
或其药学上可接受的盐。
式V的化合物
其中
A1选自-NR2-和-CHR2’-；
R1选自氢、烷基和环烷基；
R2选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被一个或两个R3取代的杂环烷基；
R2’选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成任选被一个或两个R3取代的环烷基；
每个R3独立地选自氢、卤素、烷基、环烷基和烷氧基；
R4选自氢、烷基、氰基和卤素；
R5选自氢、烷基、氰基和卤素；
A22选自-O和-NH-；
W1选自-N-和-CH-；
W2选自-N-和-CR26-；
R26选自氢、卤素、羟基、氨基、烷氧基和烷基；
A23选自键、-O-和-CH2-；
A30选自键、-CH2-、嘧啶基、吡啶基、吡唑基和3-氮杂双环[3.1.0]己基；
B3选自苯基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基、1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂螺[4.5]癸基、1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸基、1,8-二氮杂螺[4.5]癸基和8-氮杂螺[4.5]癸基；
A24选自键、-CH2-、-NH-和-O-；
C选自氮杂环庚基、氮杂环丁基、环烷基、哌嗪基和哌啶基；其中C任选被一个或两个独立选自卤素、羟基、烷基和烷氧基的取代基取代；和
D选自
或其药学上可接受的盐。
本发明的一个实施方案涉及式V化合物，其中
A1选自-NR2-；
R1选自氢、烷基和环烷基；
R2选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被一个或两个R3取代的杂环烷基；
每个R3独立地选自卤素和烷氧基；
R4选自氢、烷基、氰基和卤素；
R5选自氢、烷基、氰基和卤素；
A22选自-O和-NH-；
W1选自-N-和-CH-；
W2选自-N-和-CR26-；
R26选自氢、卤素、羟基、氨基、烷氧基和烷基；
A23选自键、-O-和-CH2-；
A30选自键、-CH2-、嘧啶基、吡啶基、吡唑基和3-氮杂双环[3.1.0]己基；
B3选自苯基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基、1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂螺[4.5]癸基、1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸基、1,8-二氮杂螺[4.5]癸基和8-氮杂螺[4.5]癸基；
A24选自键、-CH2-、-NH-和-O-；
C选自羟基哌啶基和哌啶基；和
D选自
或其药学上可接受的盐。
本发明的一个实施方案涉及式V化合物，其中
A1是-NR2-；
R1是烷基；和
R2是烷基。
本发明的一个实施方案涉及式V化合物，其中
A1是-NR2-；
R1是甲基；和
R2选自乙基、叔丁基和环丙基。
本发明进一步涉及:
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中R1为甲基；
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中R2为乙基；
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中A1为-NR2-；
式V的化合物或其药学上可接受的盐，其中由R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成的杂环烷基选自吡咯烷基、哌啶基、氮杂环丁基和3-氮杂双环[3.1.0]己基，并且其中该杂环烷基在每种情况下任选被一个或两个独立地选自氟和甲氧基的R3取代；
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中由R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成的环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基和环己基；
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中每个R3独立地选自氟和甲氧基；
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中R4为氰基；
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中R5为卤素；
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中R5为氟；
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中A22为-O-；
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中W1为-CH-；
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中W2为-N-；
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中W2为-CR26-；
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中R26选自氢和烷氧基；
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中R26选自氢和甲氧基；
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中A23选自键和-O-；
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中A23为键；
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中A30选自键、-CH2-和吡唑基；
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中A30为键；
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中A30为-CH2-；
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中A30为吡唑基；
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中B3选自哌啶基、1,4-二氮杂环庚基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基和8-氮杂螺[4.5]癸基；
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中B3是1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基；
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中A24为-CH2-；
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中C选自羟基哌啶基和哌啶基。
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中D为和
式V化合物或其药学上可接受的盐，其中D为
本发明进一步涉及式V化合物，其选自
7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-2-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1,4-二氮杂环庚烷-1-基]吡唑-1-基]喹喔啉；
7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-2-[[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]甲氧基]喹喔啉；
7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-2-[(1R,5S)-3-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基]甲氧基]喹喔啉；
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-2-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-2-基]喹喔啉；
7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-2-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]喹喔啉；
3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3S)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3S)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-甲氧基喹啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-甲氧基喹啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；和
(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]噌啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
或其药学上可接受的盐。
本发明进一步涉及
式V化合物或其药学上可接受的盐，用作治疗活性物质。
包含式V的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体的药物组合物；
式V化合物或其药学上可接受的盐用于癌症的治疗性和/或预防性治疗的用途；
式V化合物或其药学上可接受的盐，用于癌症的治疗性和/或预防性治疗；
式V化合物或其药学上可接受的盐在制备用于癌症的治疗性和/或预防性治疗的药物中的用途；
一种用于癌症的治疗性和/或预防性治疗的方法，该方法包括向有需要的患者施用有效量的式V化合物或其药学上可接受的盐；
在一些实施方案中，癌症为BRAF V600X突变的肿瘤；
在一些实施方案中，癌症为BRAF V600E/K突变的肿瘤；
在一些实施方案中，癌症是未经靶向治疗的；和
在一些实施方案中，癌症选自黑素瘤、结肠直肠癌和肺癌，特别是非小细胞肺癌。
式V的另外的实施方案
1.式V的化合物
其中
A1选自-NR2-和-CHR2’-；
R1选自氢、烷基和环烷基；
R2选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被一个或两个R3取代的杂环烷基；
R2’选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成任选被一个或两个R3取代的环烷基；
每个R3独立地选自氢、卤素、烷基、环烷基和烷氧基；
R4选自氢、烷基、氰基和卤素；
R5选自氢、烷基、氰基和卤素；
A22选自-O和-NH-；
W1选自-N-和-CH-；
W2选自-N-和-CR26-；
R26选自氢、卤素、羟基、氨基、烷氧基和烷基；
A23选自键、-O-和-CH2-；
A30选自键、-CH2-、嘧啶基、吡啶基、吡唑基和3-氮杂双环[3.1.0]己基；
B3选自苯基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基、1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂螺[4.5]癸基、1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸基、1,8-二氮杂螺[4.5]癸基和8-氮杂螺[4.5]癸基；
A24选自键、-CH2-、-NH-和-O-；
C选自氮杂环庚基、氮杂环丁基、环烷基、哌嗪基和哌啶基；其中C任选被一个或两个独立选自卤素、羟基、烷基和烷氧基的取代基取代；和
D选自
或其药学上可接受的盐。
2.根据实施方案1的化合物，其中
A1是-NR2-；
R1选自氢、烷基和环烷基；
R2选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被一个或两个R3取代的杂环烷基；
每个R3独立地选自卤素和烷氧基；
R4选自氢、烷基、氰基和卤素；
R5选自氢、烷基、氰基和卤素；
A22选自-O和-NH-；
W1选自-N-和-CH-；
W2选自-N-和-CR26-；
R26选自氢、卤素、羟基、氨基、烷氧基和烷基；
A23选自键、-O-和-CH2-；
A30选自键、-CH2-、嘧啶基、吡啶基、吡唑基和3-氮杂双环[3.1.0]己基；
B3选自苯基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基、1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂螺[4.5]癸基、1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸基、1,8-二氮杂螺[4.5]癸基和8-氮杂螺[4.5]癸基；
A24选自键、-CH2-、-NH-和-O-；
C选自羟基哌啶基和哌啶基；和
D选自
或其药学上可接受的盐。
3.根据实施方案1或2的化合物，其中
A1是-NR2-；
R1是烷基；和
R2是烷基。
4.根据实施方案1至3中任一项的化合物，其中
A1是-NR2-；
R1是甲基；和
R2是乙基。
5.根据实施方案1至4中任一项的化合物，其中R4是氰基。
6.根据实施方案1至5中任一项的化合物，其中R5是卤素。
7.根据实施方案1至6中任一项的化合物，其中R5是氟。
8.根据实施方案1至7中任一项的化合物，其中A22为-O-。
9.根据实施方案1至8中任一项的化合物，其中W1为-CH-。
10.根据实施方案1至9中任一项的化合物，其中W2为-N-。
11.根据实施方案1至10中任一项的化合物，其中W2为-CR26-。
12.根据实施方案1至11中任一项的化合物，其中R26选自氢和烷氧基。
13.根据实施方案1至12中任一项的化合物，其中R26选自氢和甲氧基。
14.根据实施方案1至13中任一项的化合物，其中A23选自键和-O-。
15.根据实施方案1至14中任一项的化合物，其中A23是键。
16.根据实施方案1至15中任一项的化合物，其中A30选自键、-CH2-和吡唑基。
17.根据实施方案1至16中任一项的化合物，其中A30是键。
18.根据实施方案1至17中任一项的化合物，其中B3选自哌啶基、1,4-二氮杂环庚基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基和8-氮杂螺[4.5]癸基。
19.根据实施方案1至18中任一项的化合物，其中A24为-CH2-。
20.根据实施方案1至19中任一项的化合物，其中C选自羟基哌啶基和哌啶基。
21.根据实施方案1至20中任一项的化合物，
其中D为
22.根据实施方案1至20中任一项的化合物，
其中D为
23.根据实施方案1至22中任一项的化合物，其选自
7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-2-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1,4-二氮杂环庚烷-1-基]吡唑-1-基]喹喔啉；
7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-2-[[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]甲氧基]喹喔啉；
7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-2-[(1R,5S)-3-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基]甲氧基]喹喔啉；
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-2-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-2-基]喹喔啉；
7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-2-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸-3-基]喹喔啉；
3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3S)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3S)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-甲氧基喹啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-甲氧基喹啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；和
(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]噌啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；
或其药学上可接受的盐。
24.根据实施方案1至23中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用作治疗活性物质。
25.一种药物组合物，其包含根据实施方案1至23中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
26.实施方案1至23中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在癌症的治疗性和/或预防性治疗中的用途。
27.根据实施方案1至23中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于癌症的治疗性和/或预防性治疗。
28.根据实施方案1至23中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于癌症的治疗性和/或预防性治疗的药物中的用途。
29.一种用于癌症的治疗性和/或预防性治疗的方法，该方法包括向有需要的患者施用有效量的根据实施方案1至23中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
式I、式II、式III、式IV、式V和式VI的实施方案
1.式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物:
或其药学上可接受的盐；
其中
A1选自-NR2-和-CHR2’-；
R1选自氢、烷基和环烷基；
R2选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被一个或两个R3取代的杂环烷基；
R2’选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成任选被一个或两个R3取代的环烷基；
每个R3独立地选自氢、卤素、烷基、环烷基和烷氧基；
R4选自氢、烷基、氰基和卤素；
R5选自氢、烷基、氰基和卤素；
A2选自-O-、-NH-和-(C＝O)；
A22选自-O-和-NH-；
W1选自-N-和-CH-；
W2选自-N-和-CR26-；
R6选自氢、卤素、羟基、氨基、二烷基氨基、烷氧基、烷基和烷氧基烷基；
R26选自氢、卤素、羟基、氨基、烷氧基和烷基；
A3选自-CH2-、-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-、-CH(CH3)-CH2-CH2-、-CH2-CH(CH3)-CH2-、-CH2-CH2-CH(CH3)-、-CH2-CH2-CH2-CH2-和-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-；
A23选自-O-和-CH2-；
A选自键、嘧啶基、吡啶基、吡唑基和3-氮杂双环[3.1.0]己基；
A30选自键、-CH2-、嘧啶基、吡啶基、吡唑基和3-氮杂双环[3.1.0]己基；
B选自苯基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基、1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂螺[4.5]癸基、1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸基、1,8-二氮杂螺[4.5]癸基和8-氮杂螺[4.5]癸基；其中B任选被一个或两个独立选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代；
B2选自苯基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基和8-氮杂螺[4.5]癸基；其中B2任选被一个或两个独立选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代；
B3选自苯基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基、1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂螺[4.5]癸基、1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸基、1,8-二氮杂螺[4.5]癸基和8-氮杂螺[4.5]癸基；
n为0或1；
A4选自-CH2-、-(SO2)-CH2-、-CH(CH2OH)-、-NH-和-O-；
A14选自键、-CH2-、-CH2-CH2-、-CH(CH2OH)-、-NH-、-O-、-环烷基和烷基氨基；
C选自氮杂环庚烷基、氮杂环丁烷基、环烷基、哌嗪基和哌啶基；其中C任选被一个或两个独立选自羟基、烷基和烷氧基的取代基取代；
D选自
R7选自氢、烷基、氰基、卤素和烷氧基；
R8选自氢、烷基、氰基、卤素和烷氧基；
R9选自氢、烷基、氰基、卤素和烷氧基；
R17选自氢、烷基、氰基、羟基、环烷基、卤素和烷氧基；
R18选自氢、烷基、氰基、羟基、环烷基、卤素和烷氧基；
R19选自氢、烷基、氰基、羟基、环烷基、卤素和烷氧基；
A5为-CH-或-N-；
A15选自键、-O-和-NH-；
A6为-CH-或-N-；和
接头是二价化学基团。
2.根据实施方案1的化合物，其中该化合物具有下式:
或其药学上可接受的盐。
3.根据实施方案1或2的化合物，其中A4是键。
4.根据实施方案1或2的化合物，其中A4是-NH-。
5.根据实施方案1或2的化合物，其中A4是-O-。
6.根据实施方案1-5中任一项的化合物，其中A5为-CH-。
7.根据实施方案1-5中任一项的化合物，其中A5为-N-。
8.根据实施方案1-7中任一项的化合物，其中R7是氢。
9.根据实施方案1-7中任一项的化合物，其中R7是烷基。
10.根据实施方案1-7中任一项的化合物，其中R7是甲基。
11.根据实施方案1-10中任一项的化合物，其中R8是氢。
12.根据实施方案1-10中任一项的化合物，其中R8是烷基。
13.根据实施方案1-10中任一项的化合物，其中R8是卤素。
14.根据实施方案1-13中任一项的化合物，其中R9是氢。
15.根据实施方案1-13中任一项的化合物，其中R9是烷基。
16.根据实施方案1-13中任一项的化合物，其中R9是卤素。
17.根据实施方案1-13中任一项的化合物，其中R9是氟。
18.根据实施方案1-17中任一项的化合物，其中B为
19.根据实施方案1-17中任一项的化合物，其中B为
20.根据实施方案1-17中任一项的化合物，其中B是任选被一个或两个独立选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代的苯基、哌啶基或哌嗪基。
21.根据实施方案1-17中任一项的化合物，其中B是苯基、哌啶基或哌嗪基。
22.根据实施方案1-17中任一项的化合物，其中B是1,4-二氮杂环庚基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基、1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂螺[4.5]癸基、1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸基、1,8-二氮杂螺[4.5]癸基或8-氮杂螺[4.5]癸基。
23.根据实施方案1的化合物，其中该化合物具有下式:
或其药学上可接受的盐。
24.根据实施方案1或实施方案23的化合物，其中A6为-CH-。
25.根据实施方案1或实施方案23的化合物，其中A6为-N-。
26.根据实施方案23-25中任一项的化合物，其中A14是键。
27.根据实施方案23-25中任一项的化合物，其中A14为-CH2-、-CH2-CH2-或-CH(CH2OH)-。
28.根据实施方案23-25中任一项的化合物，其中A14为-NH-。
29.根据实施方案23-25中任一项的化合物，其中A14为-O-。
30.根据实施方案23-25中任一项的化合物，其中A14是环烷基。
31.根据实施方案23-25中任一项的化合物，其中A14是烷基氨基。
32.根据实施方案23-31中任一项的化合物，其中R17是氢。
33.根据实施方案23-31中任一项的化合物，其中R17是烷基。
34.根据实施方案23-31中任一项的化合物，其中R17是卤素。
35.根据实施方案23-31中任一项的化合物，其中R17是氟。
36.根据实施方案23-35中任一项的化合物，其中R18是氢。
37.根据实施方案23-35中任一项的化合物，其中R18是烷基。
38.根据实施方案23-35中任一项的化合物，其中R18是卤素。
39.根据实施方案23-35中任一项的化合物，其中R18是氟。
40.根据实施方案23-39中任一项的化合物，其中R19是氢。
41.根据实施方案23-39中任一项的化合物，其中R19是烷基。
42.根据实施方案23-39中任一项的化合物，其中R19是卤素。
43.根据实施方案23-39中任一项的化合物，其中R19是氟。
44.根据实施方案1-43中任一项的化合物，其中A2是-O-。
45.根据实施方案1-43中任一项的化合物，其中A2是-NH-。
46.根据实施方案1-43中任一项的化合物，其中A2是-(C＝O)-。
47.根据实施方案1-46中任一项的化合物，其中A3是键。
48.根据实施方案1-46中任一项的化合物，其中A3是-CH2-。
49.根据实施方案1-46中任一项的化合物，其中A3是-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-、-CH(CH3)-CH2-CH2-、-CH2-CH(CH3)-CH2-、-CH2-CH2-CH(CH3)-、-CH2-CH2-CH2-CH2-和-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-。
50.根据实施方案1-49中任一项的化合物，其中n为0。
51.根据实施方案1-49中任一项的化合物，其中n为1。
52.根据实施方案1-51中任一项的化合物，其中R6是氢。
53.根据实施方案1-51中任一项的化合物，其中R6是卤素。
54.根据实施方案1-51中任一项的化合物，其中R6是氨基或二烷基氨基。
55.根据实施方案1-51中任一项的化合物，其中R6是羟基或烷氧基。
56.根据实施方案1的化合物，其中该化合物具有下式:
或其药学上可接受的盐。
57.根据实施方案56的化合物，其中D为
58.根据实施方案56的化合物，其中D为
59.根据实施方案56-58中任一项的化合物，其中W1为-N-。
60.根据实施方案56-58中任一项的化合物，其中W1为-CH-。
61.根据实施方案56-60中任一项的化合物，其中W2为-N-。
62.根据实施方案56-60中任一项的化合物，其中W2为-CR26-。
63.根据实施方案56-62中任一项的化合物，其中R26是氢。
64.根据实施方案56-62中任一项的化合物，其中R26是卤素。
65.根据实施方案56-64中任一项的化合物，其中A23是键。
66.根据实施方案56-64中任一项的化合物，其中A23为-O-。
67.根据实施方案56-64中任一项的化合物，其中A23为-CH2-。
68.根据实施方案56-67中任一项的化合物，其中A30是键。
69.根据实施方案56-67中任一项的化合物，其中A30为-CH2-。
70.根据实施方案56-67中任一项的化合物，其中A30为嘧啶基或吡啶基。
71.根据实施方案56-67中任一项的化合物，其中A30为吡唑基。
72.根据实施方案56-67中任一项的化合物，其中A30是3-氮杂双环[3.1.0]己基。
73.根据实施方案56-72中任一项的化合物，其中B3是苯基。
74.根据实施方案56-72中任一项的化合物，其中B3是哌啶基或哌嗪基。
75.根据实施方案56-72中任一项的化合物，其中B3是1,4-二氮杂环庚基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基、1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂螺[4.5]癸基、1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸基、1,8-二氮杂螺[4.5]癸基或8-氮杂螺[4.5]癸基。
76.根据实施方案56-75中任一项的化合物，其中A22为-O-。
77.根据实施方案56-75中任一项的化合物，其中A22为-NH-。
78.根据实施方案1的化合物，其中该化合物具有下式:
或其药学上可接受的盐。
79.根据实施方案78的化合物，其中A5是-CH-。
80.根据实施方案78的化合物，其中A5是-N-。
81.根据实施方案78-80中任一项的化合物，其中R7是氢。
82.根据实施方案78-80中任一项的化合物，其中R7是烷基。
83.根据实施方案78-80中任一项的化合物，其中R7是甲基。
84.根据实施方案78-83中任一项的化合物，其中R8是氢。
85.根据实施方案78-83中任一项的化合物，其中R8是烷基。
86.根据实施方案78-83中任一项的化合物，其中R8是卤素。
87.根据实施方案78-86中任一项的化合物，其中R9是氢。
88.根据实施方案78-86中任一项的化合物，其中R9是烷基。
89.根据实施方案78-86中任一项的化合物，其中R9是卤素。
90.根据实施方案78-86中任一项的化合物，其中R9是氟。
91.根据实施方案1的化合物，其中该化合物具有下式:
或其药学上可接受的盐。
92.根据实施方案91的化合物，其中A6是-CH-
93.根据实施方案91的化合物，其中A6是-N-。
94.根据实施方案91-93中任一项的化合物，其中R17是氢。
95.根据实施方案91-93中任一项的化合物，其中R17是烷基。
96.根据实施方案91-93中任一项的化合物，其中R17是卤素。
97.根据实施方案91-93中任一项的化合物，其中R17是氟。
98.根据实施方案91-97中任一项的化合物，其中R18是氢。
99.根据实施方案91-97中任一项的化合物，其中R18是烷基。
100.根据实施方案91-97中任一项的化合物，其中R18是卤素。
101.根据实施方案91-97中任一项的化合物，其中R18是氟。
102.根据实施方案91-101中任一项的化合物，其中R19是氢。
103.根据实施方案91-101中任一项的化合物，其中R19是烷基。
104.根据实施方案91-101中任一项的化合物，其中R19是卤素。
105.根据实施方案91-101中任一项的化合物，其中R19是氟。
106.根据实施方案78-105中任一项的化合物，其中A2是-O-。
107.根据实施方案78-105中任一项的化合物，其中A2是-NH-。
108.根据实施方案78-105中任一项的化合物，其中A2是-(C＝O)-。
109.根据实施方案78-108中任一项的化合物，其中n为0。
110.根据实施方案78-108中任一项的化合物，其中n为1。
111.根据实施方案78-110中任一项的化合物，其中R6是氢。
112.根据实施方案78-110中任一项的化合物，其中R6是卤素。
113.根据实施方案78-110中任一项的化合物，其中R6是氨基或二烷基氨基。
114.根据实施方案78-110中任一项的化合物，其中R6是羟基或烷氧基。
115.根据实施方案1的化合物，其中该化合物具有下式:
或其药学上可接受的盐。
116.根据实施方案115的化合物，其中D为
117.根据实施方案115的化合物，其中D为
118.根据实施方案115-117中任一项的化合物，其中W1为-N-。
119.根据实施方案115-117中任一项的化合物，其中W1为-CH-。
120.根据实施方案115-119中任一项的化合物，其中W2为-N-。
121.根据实施方案115-119中任一项的化合物，其中W2为-CR26-。
122.根据实施方案115-121中任一项的化合物，其中R26是氢。
123.根据实施方案115-121中任一项的化合物，其中R26是卤素。
124.根据实施方案115-123中任一项的化合物，其中A22为-O-。
125.根据实施方案115-123中任一项的化合物，其中A22为-NH-。
126.根据实施方案78-125中任一项的化合物，其中接头选自
其中:
X1和X2在每次出现时独立地选自键、杂环、NR2、C(R2)2、O、C(O)和S；
R20、R21、R22、R23和R24在每次出现时独立地选自二价部分，其选自键、烷基、-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-SO2-、-S(O)-、-C(S)-、-C(O)NR2-、-NR2C(O)-、-O-、-S-、-NR2-、-C(R40R40)-、-P(O)(OR36)O-、-P(O)(OR36)-、双环、烯烃、炔烃、卤代烷基、烷氧基、芳基、杂环、脂族基、杂脂族基、杂芳基、乳酸、乙醇酸和碳环；其各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R40的取代基取代；
R36在每次出现时独立地选自氢、烷基、芳烷基、杂芳烷基、烯烃、炔烃、芳基、杂芳基、杂环、脂族基和杂脂族基；和
R40在每次出现时独立地选自氢、烷基、烯烃、炔烃、氟、溴、氯、羟基、烷氧基、叠氮化物、氨基、氰基、-NH(脂族基，包括烷基)、-N(脂族基，包括烷基)2、-NHSO2(脂族基，包括烷基)、-N(脂族基，包括烷基)SO2烷基、-NHSO2(芳基、杂芳基或杂环)、-N(烷基)SO2(芳基、杂芳基或杂环)、-NHSO2烯基、-N(烷基)SO2烯基、-NHSO2炔基、-N(烷基)SO2炔基、卤代烷基、脂族基、杂脂族基、芳基、杂芳基、杂环和环烷基。
127.根据实施方案126的化合物，其中接头具有下式:
128.根据实施方案126和127中任一项的化合物，其中X1是键。
129.根据实施方案126和127中任一项的化合物，其中X1是杂环。
130.根据实施方案126和127中任一项的化合物，其中X1是NR2。
131.根据实施方案126和127中任一项的化合物，其中X1是C(O)。
132.根据实施方案126-131中任一项的化合物，其中X2是键。
133.根据实施方案126-131中任一项的化合物，其中X2是杂环。
134.根据实施方案126-131中任一项的化合物，其中X2是NR2。
135.根据实施方案126-131中任一项的化合物，其中X2是C(O)。
136.根据实施方案126-135中任一项的化合物，其中R20是键。
137.根据实施方案126-135中任一项的化合物，其中R20为CH2。
138.根据实施方案126-135中任一项的化合物，其中R20为杂环。
139.根据实施方案126-135中任一项的化合物，其中R20是芳基。
140.根据实施方案126-135中任一项的化合物，其中R20是苯基。
141.根据实施方案126-135中任一项的化合物，其中R20是双环。
142.根据实施方案126-141中任一项的化合物，其中R21是键。
143.根据实施方案126-141中任一项的化合物，其中R21为CH2。
144.根据实施方案126-141中任一项的化合物，其中R21为杂环。
145.根据实施方案126-141中任一项的化合物，其中R21是芳基。
146.根据实施方案126-141中任一项的化合物，其中R21为。
147.根据实施方案126-141中任一项的化合物，其中R21是双环。
148.根据实施方案126的化合物，其中接头具有下式:
149.根据实施方案126-148中任一项的化合物，其中R22是键。
150.根据实施方案126-148中任一项的化合物，其中R22为CH2。
151.根据实施方案126-148中任一项的化合物，其中R22为杂环。
152.根据实施方案126-148中任一项的化合物，其中R22是芳基。
153.根据实施方案126-148中任一项的化合物，其中R22是苯基。
154.根据实施方案126-148中任一项的化合物，其中R22是双环。
155.根据实施方案126-154中任一项的化合物，其中R23是键。
156.根据实施方案126-154中任一项的化合物，其中R23为CH2。
157.根据实施方案126-154中任一项的化合物，其中R23为杂环。
158.根据实施方案126-154中任一项的化合物，其中R23是芳基。
159.根据实施方案126-154中任一项的化合物，其中R23是苯基。
160.根据实施方案126-154中任一项的化合物，其中R23是双环。
161.根据实施方案126-160中任一项的化合物，其中R24是键。
162.根据实施方案126-160中任一项的化合物，其中R24为CH2。
163.根据实施方案126-160中任一项的化合物，其中R24为杂环。
164.根据实施方案126-160中任一项的化合物，其中R24是芳基。
165.根据实施方案126-160中任一项的化合物，其中R24是苯基。
166.根据实施方案126-160中任一项的化合物，其中R24是双环。
167.根据实施方案126-160中任一项的化合物，其中R24为C(O)。
168.根据实施方案1-167中任一项的化合物，其中A1为-NR2-。
169.根据实施方案1-167中任一项的化合物，其中A1为-CHR2’-。
170.根据实施方案1-167中任一项的化合物，其中A1是-NH-。
171.根据实施方案1-167中任一项的化合物，其中A1为-NCH3-。
172.根据实施方案1-167中任一项的化合物，其中A1是-CH2-。
173.根据实施方案1-172中任一项的化合物，其中R1是氢。
174.根据实施方案1-172中任一项的化合物，其中R1是烷基。
175.根据实施方案1-172中任一项的化合物，其中R1是甲基。
176.根据实施方案1-172中任一项的化合物，其中R1是乙基。
177.根据实施方案1-176中任一项的化合物，其中R4是氢。
178.根据实施方案1-176中任一项的化合物，其中R4是氰基。
179.根据实施方案1-176中任一项的化合物，其中R4是卤素。
180.根据实施方案1-179中任一项的化合物，其中R5是氢。
181.根据实施方案1-179中任一项的化合物，其中R5是卤素。
182.根据实施方案1-179中任一项的化合物，其中R5是氟。
183.根据实施方案1-182中任一项的化合物，其中C为
184.根据实施方案1-182中任一项的化合物，其中C是氮杂环庚烷基。
185.根据实施方案1-182中任一项的化合物，其中C是氮杂环丁烷基。
186.根据实施方案1-182中任一项的化合物，其中C是哌嗪基。
187.根据实施方案1-182中任一项的化合物，其中C是任选被一个或两个独立选自羟基、烷基和烷氧基的取代基取代的环烷基。
188.根据实施方案1-182中任一项的化合物，其中C是任选被一个或两个独立选自羟基、烷基和烷氧基的取代基取代的哌啶基。
189.一种化合物，选自:
/>
或其药学上可接受的盐。
190.根据实施方案189的化合物，其中该化合物具有如下结构
或其药学上可接受的盐。
191.根据实施方案189的化合物，其中该化合物具有如下结构
或其药学上可接受的盐。
192.根据实施方案189的化合物，其中该化合物具有如下结构
或其药学上可接受的盐。
193.根据实施方案189的化合物，其中该化合物具有如下结构
或其药学上可接受的盐。
194.根据实施方案189的化合物，其中该化合物具有如下结构
或其药学上可接受的盐。
195.根据实施方案189的化合物，其中该化合物具有如下结构
或其药学上可接受的盐。
196.根据实施方案189的化合物，其中该化合物具有如下结构
或其药学上可接受的盐。
197.根据实施方案189的化合物，其中该化合物具有如下结构
或其药学上可接受的盐。
198.根据实施方案189的化合物，其中该化合物具有如下结构
或其药学上可接受的盐。
199.根据实施方案189的化合物，其中该化合物具有如下结构
或其药学上可接受的盐。
200.一种药物组合物，其包含根据实施方案1-199中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
201.一种治疗突变BRAF介导的病症的方法，包括向有需要的患者施用有效量的根据实施方案1-199中任一项的化合物或其药学上可接受的盐或根据实施方案200的药物组合物。
202.根据实施方案201的方法，其中患者是人。
203.根据实施方案201或202的方法，其中所述突变BRAF介导的病症为癌症。
204.根据实施方案203的方法，其中所述突变BRAF介导的癌症为黑素瘤。
205.根据实施方案203的方法，其中所述突变BRAF介导的癌症为肺癌。
206.根据实施方案203的方法，其中所述突变BRAF介导的癌症是非小细胞肺癌。
207.根据实施方案203的方法，其中所述突变BRAF介导的癌症为结肠直肠癌。
208.根据实施方案203所述的方法，其中所述突变BRAF介导的癌症是微卫星稳定的结肠直肠癌。
209.根据实施方案203所述的方法，其中所述突变BRAF介导的癌症为甲状腺癌。
210.根据实施方案203的方法，其中所述突变BRAF介导的癌症为卵巢癌。
211.根据实施方案201的方法，其中所述突变BRAF介导的病症为胆管癌、埃尔德海姆-切斯特病、朗格汉斯组织细胞增多症、神经节神经胶质瘤、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、毛细胞黏液样星形细胞瘤、间变性多形性黄色星形细胞瘤、星形细胞瘤、乳头状甲状腺癌、间变性甲状腺癌、胰腺癌、胸透明细胞肉瘤、唾液腺癌或微卫星稳定结肠直肠癌。
212.根据实施方案201-211中任一项所述的方法，其中所述患者还接受另外的活性剂。
213.根据实施方案212所述的方法，其中所述另外的活性剂是MEK抑制剂。
214.根据实施方案213的方法，其中MEK抑制剂为曲美替尼。
215.根据实施方案212所述的方法，其中所述另外的活性剂是免疫检查点抑制剂。
216.根据实施方案215所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂选自纳武单抗、派姆单抗、西米普利单抗、伊匹单抗、relatlimab、阿特珠单抗、阿维鲁单抗和德瓦鲁单抗。
217.根据实施方案212所述的方法，其中所述另外的活性剂为西妥昔单抗或派姆单抗。
218.根据实施方案1-199中任一项的化合物或其药学上可接受的盐或根据实施方案200的药物组合物，用于治疗突变BRAF介导的病症。
219.根据实施方案218的化合物，其中突变BRAF介导的病症为癌症。
220.根据实施方案219的化合物，其中突变的BRAF介导的癌症为黑素瘤。
221.根据实施方案219的化合物，其中突变BRAF介导的癌症为肺癌。
222.根据实施方案219的化合物，其中所述突变BRAF介导的癌症是非小细胞肺癌。
223.根据实施方案219的化合物，其中突变的BRAF介导的癌症为结肠直肠癌。
224.根据实施方案219的化合物，其中所述突变的BRAF介导的癌症是微卫星稳定的结肠直肠癌。
225.根据实施方案219的化合物，其中突变BRAF介导的癌症为甲状腺癌。
226.根据实施方案219的化合物，其中突变BRAF介导的癌症为卵巢癌。
227.根据实施方案218的化合物，其中所述突变BRAF介导的病症为胆管癌、埃尔德海姆-切斯特病、朗格汉斯组织细胞增多症、神经节神经胶质瘤、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、毛细胞黏液样星形细胞瘤、间变性多形性黄色星形细胞瘤、星形细胞瘤、乳头状甲状腺癌、间变性甲状腺癌、胰腺癌、胸透明细胞肉瘤、唾液腺癌或微卫星稳定结肠直肠癌。
228.根据实施方案1-199中任一项的化合物或其药学上可接受的盐或实施方案200的药物组合物，用于治疗突变BRAF介导的病症。
229.根据实施方案228的化合物，其中突变BRAF介导的病症为癌症。
230.根据实施方案229的化合物，其中突变的BRAF介导的癌症为黑素瘤。
231.根据实施方案229的化合物，其中突变BRAF介导的癌症为肺癌。
232.根据实施方案229的化合物，其中所述突变BRAF介导的癌症是非小细胞肺癌。
233.根据实施方案229的化合物，其中突变的BRAF介导的癌症为结肠直肠癌。
234.根据实施方案229的化合物，其中所述突变BRAF介导的癌症是微卫星稳定的结肠直肠癌。
235.根据实施方案229的化合物，其中突变BRAF介导的癌症为甲状腺癌。
236.根据实施方案229的化合物，其中突变BRAF介导的癌症为卵巢癌。
237.根据实施方案228的化合物，其中所述突变BRAF介导的病症为胆管癌、埃尔德海姆-切斯特病、朗格汉斯组织细胞增多症、神经节神经胶质瘤、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、毛细胞黏液样星形细胞瘤、间变性多形性黄色星形细胞瘤、星形细胞瘤、乳头状甲状腺癌、间变性甲状腺癌、胰腺癌、胸透明细胞肉瘤、唾液腺癌或微卫星稳定结肠直肠癌。
238.根据实施方案1-199中任一项的化合物或其药学上可接受的盐或实施方案200的药物组合物在制备用于治疗突变BRAF介导的病症的药物中的用途。
239.根据实施方案238的用途，其中突变BRAF介导的病症为癌症。
240.根据实施方案239的用途，其中突变BRAF介导的癌症为黑素瘤。
241.根据实施方案239的用途，其中突变BRAF介导的癌症为肺癌。
242.根据实施方案239的用途，其中突变BRAF介导的癌症是非小细胞肺癌。
243.根据实施方案239的用途，其中突变BRAF介导的癌症为结肠直肠癌。
244.根据实施方案239的用途，其中突变的BRAF介导的癌症是微卫星稳定的结肠直肠癌。
245.根据实施方案239的用途，其中突变BRAF介导的癌症为甲状腺癌。
246.根据实施方案239的用途，其中突变BRAF介导的癌症为卵巢癌。
247.根据实施方案238的用途，其中所述突变BRAF介导的病症为胆管癌、埃尔德海姆-切斯特病、朗格汉斯组织细胞增多症、神经节神经胶质瘤、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、毛细胞黏液样星形细胞瘤、间变性多形性黄色星形细胞瘤、星形细胞瘤、乳头状甲状腺癌、间变性甲状腺癌、胰腺癌、胸透明细胞肉瘤、唾液腺癌或微卫星稳定结肠直肠癌。
248.根据实施方案1至199中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，用作治疗活性物质。
治疗方法
本发明的化合物或其药学上可接受的盐或药物组合物可以有效量使用以治疗患有由突变BRAF介导的任何病症的患者。
BRAF是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，其是信号转导蛋白激酶的成员。BRAF V600X突变，特别是BRAF V600E/K突变，经常在多种人类肿瘤中观察到，包括黑素瘤、甲状腺癌、结肠直肠癌、肺癌等。V600X突变的非限制性例子包括V600E、V600K、V600R、V600D和V600N。尽管临床上可获得的BRAF抑制剂在许多这类适应症中具有治疗益处，但对这类药物的抗肿瘤反应的持续时间受限于耐药性的产生。
BRAF蛋白提供了一种信号传播机制，其要求蛋白同二聚化(BRAF-BRAF)或与其他RAF蛋白的异二聚化(BRAF-RAF1或BRAF-ARAF)。当BRAF突变时，如在肿瘤学适应症中观察到的BRAF V600X置换，BRAF信号传导独立于同二聚体和/或异二聚体的产生。在这种情况下，激酶作为单体蛋白被过度激活，并驱动细胞增殖信号。
由于目前可获得的抑制剂仅阻断单体形式的BRAF活性，而对BRAF同二聚体或异二聚体无效，因此许多BRAF抗性诱导机制通过恢复RAF同二聚化和异二聚化介导的信号传导发挥作用并不令人惊讶。
靶向的蛋白降解通过募集E3连接酶诱导靶标泛素化，从而促进蛋白酶体介导的对结合靶标的破坏。通过靶向降解对BRAF的降解提供了优于常规抑制的优势，因为其消除了BRAF V600E/K的支架活性，且特别是诱导BRAF蛋白的消除。这种活性阻止了二聚化介导的抗性机制。
与这一理论相一致，文献报道表明，BRAF蛋白消除可能代表一种延迟获得耐药性起始的策略，以及潜在地靶向获得对可得抑制剂的耐药性的肿瘤的策略。该观察为治疗BRAF V600X突变的肿瘤(如黑素瘤、结肠直肠癌和肺癌)提供了新的治疗机会。
本发明的另一方面提供了一种如本文所述的化合物，或其对映异构体、非对映异构体或立体异构体，或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，或药物组合物，用于制备治疗或预防有此需要的患者的癌症的药物；其中需要BRAF抑制来治疗或预防癌症。
在某些方面，本发明的化合物被用于治疗BRAF介导的癌症，其中BRAF已从野生型突变。BRAF突变存在多种可能性。在某些非限制性实施方案中，突变为I类突变、II类突变或III类突变，或其任何组合。I类突变的非限制性例子包括V600突变，例如V600E、V600K、V600R、V600D和V600N。II类突变的非限制性例子包括G469A、G469V、G469L、G469R、L597Q和K601E。III类突变的非限制性例子包括G466A、G466E、G466R、G466V、S467L、G469E、N581I、D594E、D594G和D594N。
在某些实施方案中，本发明的化合物治疗BRAF突变介导的病症，其中该突变不是I类、II类或III类突变。突变的非限制性例子包括G464I、G464R、N581T、L584F、E586K、G593D、G596C、L597R、L597S、S605I、S607F、N684T、E26A、V130M、L745L和D284E。
在某些实施方案中，BRAF突变是外显子11突变。
在某些实施方案中，BRAF突变是外显子15突变。
在某些实施方案中，BRAF突变是G464突变。
在某些实施方案中，BRAF突变是G466突变。
在某些实施方案中，BRAF突变是G466R突变。
在某些实施方案中，BRAF突变是G466E突变。
在某些实施方案中，BRAF突变是G469突变。
在某些实施方案中，BRAF突变是G469E突变。
在某些实施方案中，BRAF突变是D594突变。
在某些实施方案中，BRAF突变是D594A突变。
在某些实施方案中，BRAF突变是L597突变。
在某些实施方案中，BRAF突变是L597R突变。
在某些实施方案中，BRAF突变是L597S突变。
在某些实施方案中，BRAF突变是L597Q突变。
在某些实施方案中，BRAF突变是V600突变。
在某些实施方案中，BRAF突变是V600E突变。
在某些实施方案中，BRAF突变是V600K突变。
在某些实施方案中，BRAF突变是V600R突变。
在某些实施方案中，BRAF突变是V600D突变。
在某些实施方案中，BRAF突变是K601突变。
在某些实施方案中，BRAF突变是K601E突变。
在某些实施方案中，BRAF突变是K601N突变。
在某些实施方案中，本发明的化合物治疗BRAF突变介导的病症，其中该突变为剪接变体，例如p61-BRAFV600E。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗由两种或更多种突变蛋白介导的病症，例如由BRAFV600E/NRASQ61K双突变体介导的癌症。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗对至少一种BRAF抑制剂具有抗性的癌症，例如对选自达拉菲尼、曲美替尼、维莫非尼和康奈非尼的BRAF抑制剂具有抗性或已经获得抵抗性的癌症。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗已发生逃逸突变的癌症，例如BRAFV600E NRASQ61K双突变体癌症。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗黑素瘤。
黑素瘤的非限制性例子包括非肢端皮肤黑素瘤、肢端黑素瘤、粘膜黑素瘤、葡萄膜黑素瘤和柔脑膜黑素瘤，其每一种都可以是原发的或转移的。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗三阴性乳腺癌，例如具有G464VBRAF突变的三阴性乳腺癌。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗肺癌，例如具有G466V BRAF突变的肺腺癌。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗具有V600 BRAF突变的黑素瘤。
在某些方面，化合物157用于治疗BRAF介导的癌症，其中BRAF从野生型突变。BRAF突变存在多种可能性。在某些非限制性实施方案中，突变为I类突变、II类突变或III类突变或其任何组合。I类突变的非限制性例子包括V600突变，例如V600E、V600K、V600R、V600D和V600N。II类突变的非限制性例子包括G469A、G469V、G469L、G469R、L597Q和K601E。III类突变的非限制性例子包括G466A、G466E、G466R、G466V、S467L、G469E、N581I、D594E、D594G和D594N。
在某些实施方案中，化合物157治疗BRAF突变介导的病症，其中该突变不是I类、II类或III类突变。突变的非限制性例子包括G464I、G464R、N581T、L584F、E586K、G593D、G596C、L597R、L597S、S605I、S607F、N684T、E26A、V130M、L745L和D284E。
在某些实施方案中，化合物157治疗BRAF突变介导的病症，其中该突变为剪接变体，例如p61-BRAFV600E。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗由两种或更多种突变蛋白介导的病症，例如由BRAFV600E/NRASQ61K双突变体介导的癌症。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗对至少一种BRAF抑制剂具有抗性的癌症，例如对选自达拉菲尼、曲美替尼、维莫非尼和康奈非尼的BRAF抑制剂具有抗性或已经获得抗性的癌症。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗已发生逃逸突变的癌症，例如BRAF V600ENRASQ61K双突变癌症。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗黑素瘤。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗三阴性乳腺癌，例如具有G464V BRAF突变的三阴性乳腺癌。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗肺癌，例如具有G466VBRAF突变的肺腺癌。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗具有V600 BRAF突变的黑素瘤。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗胆管癌。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗埃尔德海姆-切斯特疾病。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗朗格汉斯组织细胞增多症。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗神经节神经胶质瘤。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗神经胶质瘤。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗GIST。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗成胶质细胞瘤。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗毛细胞白血病。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗多发性骨髓瘤。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗非小细胞肺癌。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗卵巢癌。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗毛细胞黏液样星形细胞瘤。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗间变性多形性黄色星形细胞瘤。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗星形细胞瘤。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗甲状腺癌。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗甲状腺乳头状癌。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗间变性甲状腺癌。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗胰腺癌。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗胸透明细胞肉瘤。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗唾液腺癌。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗结肠直肠癌。
在某些实施方案中，化合物157用于治疗微卫星稳定的结肠直肠癌。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗选自以下的病症：胆管癌、埃尔德海姆-切斯特病、朗格汉斯组织细胞增多症、神经节细胞瘤、神经胶质瘤、GIST、成胶质细胞瘤、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤、肺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、毛细胞黏液样星形细胞瘤、间变性多形性黄色星形细胞瘤、星形细胞瘤、甲状腺癌、乳头状甲状腺癌、间变性甲状腺癌、胰腺癌、胸透明细胞肉瘤、唾液腺癌、结肠直肠癌和微卫星稳定结肠直肠癌。
本发明的另一方面提供了一种治疗或预防增殖性疾病的方法。该方法包括向有需要的患者施用有效量的包含本文所述的化合物或其对映异构体、非对映异构体或立体异构体或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，以及任选的药学上可接受的载体的药物组合物。
在某些实施方案中，疾病或病症是癌症或增殖性疾病。
在某些实施方案中，BRAF介导的病症是异常细胞增殖，包括但不限于实体或血液癌症。
在某些实施方案中，血液癌症为急性髓细胞性白血病(AML)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成淋巴细胞性T细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病(CML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、毛细胞性白血病、慢性中性粒细胞性白血病(CNL)、急性成淋巴细胞性T细胞性白血病、急性单核细胞性白血病、浆细胞瘤、免疫母细胞性大细胞性白血病、套细胞性白血病、多发性骨髓瘤、巨核细胞性白血病、急性巨核细胞性白血病、早幼粒细胞性白血病、混合谱系白血病(MLL)、红白血病、恶性淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、B细胞急性成淋巴细胞性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、Myc和B细胞白血病(BCL)2和/或BCL6重排/过表达[双重和三重打击淋巴瘤]、骨髓增生异常/骨髓增生性肿瘤、套细胞淋巴瘤，包括硼替佐米抗性套细胞淋巴瘤。
可用本文所述化合物治疗的实体肿瘤包括但不限于肺癌，包括小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)，乳腺癌，包括炎性乳腺癌、ER阳性乳腺癌(包括他莫昔芬抗性ER阳性乳腺癌)和三阴性乳腺癌，结肠癌，中线癌，肝癌，肾癌，前列腺癌，包括去势抗性前列腺癌(CRPC)，脑癌，包括神经胶质瘤、成胶质细胞瘤，神经母细胞瘤和成神经管细胞瘤，包括MYC扩增的成神经管细胞瘤，结肠直肠癌，肾母细胞瘤，尤因肉瘤，横纹肌肉瘤，室管膜瘤，头颈癌，黑色素瘤，鳞状细胞癌，卵巢癌，胰腺癌(包括胰腺导管腺癌(PDAC)和胰腺神经内分泌肿瘤(PanNET))，骨肉瘤，骨巨细胞瘤，甲状腺癌，膀胱癌，尿路上皮癌，外阴癌，子宫颈癌，子宫内膜癌，间皮瘤，食道癌，唾液腺癌，胃癌，鼻咽癌，口部瘤，口腔癌，GIST(胃肠间质瘤)，NUT-中线癌，睾丸癌，鳞状细胞癌，肝细胞癌(HCC)，MYCN驱动的实体瘤和NUT中线癌(NMC)。
在进一步的实施方案中，疾病或病症是骨、肌肉、腱、软骨、神经、脂肪或血管的肉瘤。
在进一步的实施方案中，疾病或病症为软组织肉瘤、骨肉瘤或骨肉瘤。
在进一步的实施方案中，疾病或病症为血管肉瘤、纤维肉瘤、脂肪肉瘤、平滑肌肉瘤、卡波济氏肉瘤、骨肉瘤、胃肠间质瘤、滑液肉瘤、多形性肉瘤、软骨肉瘤、尤因氏肉瘤、网状细胞肉瘤、血管肉瘤、葡萄状肉瘤、横纹肌肉瘤或胚胎性横纹肌肉瘤。
在某些实施方案中，疾病为骨、肌肉、腱、软骨、神经、脂肪或血管肉瘤。
在其他实施方案中，同时或顺序施用包含本文所述化合物和另外的治疗剂的药物组合物。
在其他实施方案中，疾病或病症是癌症。在进一步的实施方案中，所述癌症为肺癌、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、脑癌、肾癌、卵巢癌、胃癌、皮肤癌、骨癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、肝细胞癌、乳头状肾癌、头颈鳞状细胞癌、白血病、淋巴瘤、髓细胞瘤、实体瘤、血液学癌症或实体癌。
本申请的一个方面提供了可用于治疗以细胞过度或异常增殖为特征的疾病、障碍和病症的化合物。该等疾病包括但不限于增殖性或过度增殖性疾病。增殖性和过度增殖性疾病的例子包括但不限于癌症。术语“癌症”包括但不限于以下癌症：乳腺癌；卵巢；子宫颈；前列腺；精巢、泌尿生殖道；食道；喉、成胶质细胞瘤；神经母细胞瘤；胃；皮肤、角化棘皮瘤；肺、表皮样癌、大细胞癌、小细胞癌、肺腺癌；骨头；结肠；结直肠；腺瘤；胰腺、腺癌；甲状腺、滤泡状癌、未分化癌、乳头状癌；精原细胞瘤；黑素瘤；肉瘤；膀胱癌；肝癌和胆道；肾癌；骨髓障碍；淋巴障碍、何杰金氏、毛细胞；口腔和咽(口)、唇、舌、口、咽；小肠；结肠、大肠、直肠、脑和中枢神经系统；慢性髓细胞性白血病和白血病。术语“癌症”包括但不限于以下癌症：骨髓瘤、淋巴瘤或选自胃癌、肾癌或以下的癌症：头颈癌、口咽癌、非小细胞肺癌、子宫内膜癌、肝癌、非何杰金氏淋巴瘤和肺癌。
术语“癌症”指由恶性肿瘤细胞的增殖引起的任何癌症，例如肿瘤、赘生物、癌、肉瘤、白血病、淋巴瘤等。例如，癌症包括但不限于间皮瘤、白血病和淋巴瘤，例如皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)、非皮肤外周T细胞淋巴瘤、与人T细胞淋巴营养病毒相关的淋巴瘤(HTLV)，例如成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)、B细胞淋巴瘤、急性非淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、急性髓细胞性白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤、非何杰金氏淋巴瘤、急性淋巴性白血病(ALL)、慢性淋巴性白血病(CLL)、何杰金氏淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、成人T细胞白血病淋巴瘤、急性髓性白血病(AML)、慢性髓性白血病(CML)或肝细胞癌。进一步的例子包括骨髓发育不良综合征、儿童实体瘤如脑瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、肾母细胞瘤、骨肿瘤和软组织肉瘤，成人常见实体瘤如头颈癌，如口腔癌、喉癌、鼻咽癌食道癌；泌尿生殖系统癌症，如前列腺癌、膀胱癌、肾癌、子宫癌、卵巢癌、睾丸癌；肺癌，如小细胞肺癌和非小细胞肺癌；乳腺癌、胰腺癌、黑色素瘤和其他皮肤癌、胃癌、脑肿瘤，与戈林综合征相关的肿瘤，如成神经管细胞瘤或脑膜瘤，以及肝癌。
癌症的其他示例性形式包括但不限于骨骼肌或平滑肌的癌症、胃癌、小肠癌、直肠癌、唾液腺癌、子宫内膜癌、肾上腺癌、肛门癌、直肠癌、甲状旁腺癌和垂体癌。
本文所述化合物可用于预防、治疗和研究的其他癌症为，例如，结肠癌、家族性腺瘤性息肉病癌症和遗传性非息肉病性结肠直肠癌或黑色素瘤。此外，癌症包括但不限于唇癌、喉癌、下咽癌、舌癌、唾液腺癌、胃癌、腺癌、甲状腺癌(髓样癌和乳头状甲状腺癌)、肾癌、肾实质癌、子宫颈癌、子宫体癌、子宫内膜癌、绒毛膜癌、睾丸癌、尿路癌、黑色素瘤、脑肿瘤(例如胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、脑膜瘤、成神经管细胞瘤和周围神经外胚层肿瘤)、胆囊癌、支气管癌、多发性骨髓瘤、基底细胞瘤、畸胎瘤、视网膜母细胞瘤、脉络膜黑色素瘤、精原细胞瘤、横纹肌肉瘤、颅咽管瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤、尤文肉瘤和浆细胞瘤。在本申请的一个方面，本申请提供了一种或多种本文所述化合物在制备用于治疗癌症(包括但不限于本文所公开的各种类型的癌症)的药物中的用途。
在一些实施方案中，本申请的化合物可用于治疗癌症，例如结肠直肠癌、甲状腺癌、乳腺癌和肺癌；以及骨髓增生性障碍，例如真性红细胞增多症、血小板增多症、伴有骨髓纤维变性的骨髓化生、慢性髓细胞性白血病、慢性粒单细胞性白血病、嗜酸细胞增多综合征、幼粒单细胞性白血病和系统性肥大细胞疾病。在一些实施方案中，本文所述的化合物可用于治疗造血系统疾病，特别是急性髓细胞性白血病(AML)、慢性髓细胞性白血病(CML)、急性早幼粒细胞性白血病和急性淋巴细胞性白血病(ALL)。
在某些实施方案中，本文所述的化合物或其相应的药学上可接受的盐或同位素衍生物可以有效量用于治疗患有淋巴瘤或淋巴细胞或髓细胞增殖障碍或异常的宿主，例如人。例如，本文所述的化合物可施用于患有何杰金氏淋巴瘤或非何杰金氏淋巴瘤的宿主。例如，宿主可能患有非何杰金氏淋巴瘤，例如但不限于：AIDS相关淋巴瘤；间变性大细胞淋巴瘤；血管免疫母细胞性淋巴瘤；母细胞NK细胞淋巴瘤；伯基特淋巴瘤；伯基特样淋巴瘤(小非裂细胞淋巴瘤)；弥漫性小裂细胞淋巴瘤(DSCCL)；慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞性淋巴瘤；皮肤T细胞淋巴瘤；弥漫性大B细胞淋巴瘤；肠病型T细胞淋巴瘤；滤泡性淋巴瘤；肝脾型γ-δT细胞淋巴瘤；淋巴母细胞性淋巴瘤；套细胞淋巴瘤；边缘区淋巴瘤；鼻T细胞淋巴瘤；小儿淋巴瘤；外周T细胞淋巴瘤；原发性中枢神经系统淋巴瘤；T细胞白血病；转化的淋巴瘤；治疗相关的T细胞淋巴瘤；朗格汉斯细胞组织细胞增多症；或华氏巨球蛋白血症。
在另一个实施方案中，本文所述的化合物或其相应的药学上可接受的盐或同位素衍生物可以有效量用于治疗患有何杰金氏淋巴瘤的患者，例如人，例如但不限于：结节性硬化经典何杰金淋巴瘤(CHL)；混合细胞性CHL；淋巴细胞耗竭型CHL；富含淋巴细胞的CHL；淋巴细胞为主的何杰金淋巴瘤；或结节性淋巴细胞为主的HL。
本申请进一步包括治疗或预防细胞增殖性障碍，例如增生、发育异常和癌前损害。发育异常是病理学家在活组织检查中发现的最早的癌前病变。该化合物的施用目的可以是防止所述增生、发育异常或癌前损害继续扩大或变成癌症。癌前损害的例子可能发生在皮肤、食管组织、乳房和宫颈上皮内组织。
根据前述内容，本申请进一步提供了用于预防或治疗需要该等治疗的患者的任何上述疾病或病症的方法，该方法包括向所述患者施用治疗有效量的本文所述化合物或其对映异构体、非对映异构体或立体异构体或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。对于上述任何一种用途，所需剂量将根据给药方式、待治疗的具体情况和所需效果而有所不同。
联合疗法
本文所述的公开化合物或其药学上可接受的盐或药物组合物可以有效量单独使用或与本发明的另一种化合物或另一种生物活性剂或第二种治疗剂组合使用，以治疗患者，例如具有突变BRAF介导的病症的人，包括但不限于本文所述的那些。
术语“生物活性剂”或“另外的活性试剂”用于描述除了根据本发明选择的化合物之外的药剂，其可与本发明的化合物组合或交替使用以获得所需的治疗结果。在某些实施方案中，本发明的化合物和生物活性剂以其在重叠的时间段(例如，具有重叠的Cmax、Tmax、AUC或其他药物动力学参数的时间段)内在体内具有活性的方式施用。在另一个实施方案中，将本发明的化合物和生物活性剂施用于需要的患者，该患者不具有重叠的药代动力学参数，但是，一种药物对另一种药物的治疗效果具有治疗影响。
在一些实施方案中，本文提供的选定化合物或其药学上可接受的盐与另一种BRAF抑制剂如索拉非尼、维莫非尼达拉菲尼/>或康奈非尼/>组合使用。/>
在某些实施方案中，生物活性剂是MEK抑制剂。MEK抑制剂是众所周知的，包括，例如，曲美替尼/GSKl120212(N-(3-{3-环丙基-5-[(2-氟-4-碘代苯基)氨基]-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H基)苯基)乙酰胺)、司美替尼(6-(4-溴-2-氯苯胺基)-7-氟-N-(2-羟基乙氧基)-3-甲基苯并咪唑-5-甲酰胺、pimasertib/AS703026/MSC 1935369((S)-N-(2,3-二羟基丙基)-3-((2-氟-4-碘代苯基)氨基)异烟酰胺)、XL-518/GDC-0973(l-({3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘代苯基)氨基)苯基}羰基)-3-[(2S)-哌啶-2-基]氮杂环丁烷-3-醇)、refametinib/BAY869766/RDEAl 19(N-(3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘代苯基氨基)-6-甲氧基苯基)-1-(2,3-二羟基丙基)环丙烷-1-磺酰胺)、PD-0325901(N-[(2R)-2,3-二羟基丙氧基]-3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘代苯基)氨基]-苯甲酰胺)、TAK733((R)-3-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-5-(2-氟-4-碘代苯基氨基)-8-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-三酮)、MEK162/ARRY438162(5-[(4-溴-2-氟苯基)氨基]-4-氟-N-(2-羟基乙氧基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-6-甲酰胺)、R05126766(3-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰氨基)-4-吡啶]甲基]-4-甲基-7-嘧啶-2-基氧基色烯-2-酮)、WX-554、R04987655/CH4987655(3,4-二氟-2-((2-氟-4-碘代苯基)氨基)-N-(2-羟基乙氧基)-5-((3-氧代-1,2-氧氮杂环己烷-2-基)甲基)苯并咪唑)或AZD8330(2-((2-氟-4-碘代苯基)氨基)-N-(2-羟基乙氧基)-1,5-二甲基-6-氧代-l,6-二氢吡啶-3-甲酰胺)、U0126-EtOH、PD184352(CI-1040)、GDC-0623、BI-847325、考比替尼、PD98059、BIX 02189、BIX 02188、贝美替尼、SL-327、TAK-733、PD318088。
在某些实施方案中，MEK抑制剂为曲美替尼。
在某些实施方案中，本发明的化合物与西妥昔单抗或曲美替尼联合用于治疗结肠直肠癌。在某些实施方案中，本发明的化合物与西妥昔单抗和BYL719联合用于治疗结肠直肠癌。在某些实施方案中，本发明的化合物与西妥昔单抗和伊立替康联合用于治疗结肠直肠癌。
在某些实施方案中，化合物157与西妥昔单抗或曲美替尼联合用于治疗结肠直肠癌。在某些实施方案中，化合物157与西妥昔单抗和BYL719联合用于治疗结肠直肠癌。在某些实施方案中，化合物157与西妥昔单抗和伊立替康联合用于治疗结肠直肠癌。
在某些实施方案中，生物活性剂是SHP2抑制剂。在某些实施方案中，SHP2抑制剂为SHP099。
在某些实施方案中，生物活性剂是RAF抑制剂。Raf抑制剂的非限制性例子包括，例如，维莫非尼(N-[3-[[5-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基]羰基]-2,4-二氟苯基]-1-丙磺酰胺)、索拉非尼甲苯磺酸酯(4-[4-[[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]氨甲酰氨基]苯氧基]-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；4-甲基苯磺酸酯)、AZ628(3-(2-氰基丙-2-基)-N-(4-甲基-3-(3-甲基-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-6-基氨基)苯基)苯甲酰胺)、NVP-BHG712(4-甲基-3-(1-甲基-6-(吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基氨基)-N-(3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺)、RAF-265(1-甲基-5-[2-[5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基]吡啶-4-基]氧基-N-[4-(三氟甲基)苯基]苯并咪唑-2-胺)、2-bromoaldisine(2-溴-6,7-二氢-1H,5H-吡咯并[2,3-c]氮杂环庚三烯-4,8-二酮)、Raf激酶抑制剂IV(2-氯-5-(2-苯基-5-(吡啶-4-基)-1H-咪唑-4-基)苯酚)、索拉非尼N-氧化物(4-[4-[[[[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]氨基]羰基]氨基]苯氧基]-N-甲基-2-吡啶甲酰胺1-氧化物)、PLX-4720、达拉非尼(GSK2118436)、GDC-0879、RAF265、AZ 628、SB590885、ZM336372、GW5074、TAK-632、CEP-32496、LY3009120和GX818(康奈非尼)。
在某些实施方案中，RAF抑制剂为康奈非尼。
在某些实施方案中，RAF抑制剂为维莫非尼。
在某些实施方案中，RAF抑制剂为达拉菲尼。
在某些实施方案中，生物活性试剂为EGFR抑制剂，包括例如吉非替尼埃罗替尼/>拉帕替尼/>奥西替尼来那替尼/>凡德他尼/>达可替尼/>罗西替尼(XEGAFRITM)、阿法替尼(/>GIOTRIFFTM、AFANIXTM)、拉泽替尼或nazartib。
EGFR抑制剂的其他实例包括罗西替尼(CO-1686)、奥莫替尼(Olita)、纳科替尼(ASP8273)、纳扎替尼(EGF816)、PF-06747775、伊科替尼(BPI-2009)、来那替尼(HKI-272；PB272)；阿维替尼(AC0010)、EAI045、他索替尼(TH-4000；PR-610)、PF-06459988(Pfizer)、特斯伐替尼(XL647；EXEL-7647；KD-019)、transtinib、WZ-3146、WZ8040、CNX-2006、达可替尼(PF-00299804；Pfizer)、布格替尼(Alunbrig)、洛拉替尼和PF-06747775(PF7775)。
在某些实施方案中，生物活性剂是第一代EGFR抑制剂，例如埃罗替尼、吉非替尼或拉帕替尼。在某些实施方案中，生物活性剂是第二代EGFR抑制剂，例如阿法替尼和/或达科替尼。在某些实施方案中，生物活性剂是第三代EGFR抑制剂，例如奥希替尼。
在某些实施方案中，将本发明的化合物与奥希替尼联合施用于有此需要的患者。
在某些实施方案中，将本发明的化合物与罗西替尼联合施用于有此需要的患者。
在某些实施方案中，将本发明的化合物与阿维替尼联合施用于有需要的患者。
在某些实施方案中，将本发明的化合物与拉泽替尼联合施用于有此需要的患者。
在某些实施方案中，将本发明的化合物与纳扎替尼联合施用于有需要的患者。
在某些实施方案中，将本发明的化合物与EGFR抗体(例如西妥昔单抗、派姆单抗或necitumab)联合施用于有此需要的患者。
在某些实施方案中，将本发明的化合物与西妥昔单抗联合施用于有此需要的患者。
在某些实施方案中，将本发明的化合物与帕尼单抗联合施用于有此需要的患者。
在某些实施方案中，将本发明的化合物与necitumumab联合施用于有此需要的患者。
在本实施方案的一个方面，生物活性剂是免疫调节剂，包括但不限于检查点抑制剂，作为非限制性实例包括但不限于PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、PD-L2抑制剂、CTLA-4抑制剂、LAG-3抑制剂、TIM-3抑制剂、T细胞激活V域Ig抑制剂(VISTA)、小分子、肽、核苷酸或其他抑制剂。在某些方面，免疫调节剂是抗体，例如单克隆抗体。
通过与PD-1受体结合来阻断PD-1和PD-L1相互作用并进而抑制免疫阻抑的PD-1抑制剂包括例如，纳武单抗派姆单抗/>匹地利珠单抗、AMP-224(AstraZeneca和MedImmune)、PF-06801591(Pfizer)、MEDI0680(AstraZeneca)、PDR001(Novartis)、REGN2810(Regeneron)、SHR-12-1(Jiangsu Hengrui MedicineCompany和Incyte Corporation)、TSR-042(GlaxoSmithKline plc)和PD-L1/VISTA抑制剂CA-170(Curis Inc.)。通过与PD-L1受体结合来阻断PD-1和PD-L1相互作用并进而抑制免疫阻抑的PD-L1抑制剂包括例如，阿特珠单抗/>度伐鲁单抗(AstraZeneca和MedImmune)、KN035(Alphamab Co.Ltd.)和BMS-936559(Bristol-MyersSquibb)。与CTLA-4结合并抑制免疫阻抑的CTLA-4检查点抑制剂包括但不限于伊匹单抗、曲美利木单抗(AstraZeneca和MedImmune)、AGEN1884和AGEN2041(Agenus)。LAG-3检查点抑制剂包括，但不限于，BMS-986016(Bristol-Myers Squibb)、GSK2831781(GlaxoSmithKlineplc)、IMP321(Prima BioMed)、LAG525(Novartis)以及双重PD-1和LAG-3抑制剂MGD013(MacroGenics)。TIM-3抑制剂的实例是TSR-022(GlaxoSmithKline plc)。
在某些实施方案中，检查点抑制剂选自纳武单抗派姆单抗和匹地丽珠单抗/CT-011、MPDL3280A/RG7446；MEDI4736；MSB0010718C；BMS 936559，PDL2/lg融合蛋白如AMP224或B7-H3抑制剂(例如，MGA271)、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG 3，VISTA、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049、CHK 1、CHK2、A2aR、B-7家族配体或其组合。
在再另一个实施方案中，本文所述的一种或多种活性化合物可以以治疗女性生殖系统异常组织(例如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌或子宫癌)的有效量与有效量的雌激素抑制剂(包括但不限于SERM(选择性雌激素受体调节剂)、SERD(选择性雌激素受体降解剂)、完全雌激素受体降解剂或另一种形式的部分或完全雌激素拮抗剂或激动剂)组合或交替施用。部分抗雌激素药物如雷洛昔芬和他莫昔芬保留了一些雌激素样作用，包括对子宫生长的雌激素样刺激，以及在某些情况下，在实际刺激肿瘤生长的乳腺癌进展过程中的雌激素样作用。相比之下，完全抗雌激素的氟维司群对子宫无类似雌激素的作用，对三苯氧胺抵抗性肿瘤有效。
授予Astra Zeneca的WO 2014/19176、WO2013/090921、WO 2014/203129、WO 2014/203132和授予Olema Pharmaceuticals的US2013/0178445以及美国专利号9,078,871、8,853,423和8,703,813中以及US2015/0005286、WO2014/205136和WO2014/1205128中提供了抗雌激素化合物的非限制性例子。
抗雌激素化合物的其他非限制性例子包括：SERMS，例如双炔失碳酯、巴多昔芬、溴帕雌三醇、氯三茴香烯、柠檬酸克罗米芬、环芬尼、拉索昔芬、奥美洛昔芬、雷洛昔芬、他莫昔芬、托瑞米芬和氟维司汀；芳香化酶抑制剂，例如氨鲁米特、睾内酯、阿那曲唑、依西美坦、法屈唑、福美坦和来曲唑；和抗促性腺激素如亮丙瑞林、西曲瑞克、烯丙雌醇、乙酸氯地孕酮、乙酸环丙孕酮、乙酸代马孕酮、地屈孕酮、乙酸甲羟孕酮、乙酸甲地孕酮、乙酸诺美地孕酮、乙酸炔诺酮、黄体酮和螺内酯。
可以根据本发明使用的其他雌激素配体描述于美国专利号4,418,068；5,478,847；5,393,763；和5,457,117、WO2011/156518、美国专利号8,455,534和8,299,112、美国专利号9,078,871；8,853,423；8,703,810；US2015/0005286；以及WO 2014/205138、US2016/0175289、US2015/0258080、WO 2014/191726、WO 2012/084711；WO 2002/013802；WO 2002/004418；WO 2002/003992；WO 2002/003991；WO 2002/003990；WO 2002/003989；WO 2002/003988；WO 2002/003986；WO 2002/003977；WO 2002/003976；WO 2002/003975；WO 2006/078834；US 6821989；US2002/0128276；US 6777424；US 2002/0016340；US 6326392；US6756401；US2002/0013327；US 6512002；US 6632834；US2001/0056099；US 6583170；US6479535；WO 1999/024027；US 6005102；EP 0802184；US 5998402；US 5780497、US5880137、WO 2012/048058和WO 2007/087684。
在另一个实施方案中，本文所述的活性化合物可以有效量与有效量的雄激素(例如睾酮)抑制剂(包括但不限于选择性雄激素受体调节剂、选择性雄激素受体降解剂、完全雄激素受体降解剂或另一种形式的部分或完全雄激素拮抗剂)组合或交替给药，用于治疗男性生殖系统的异常组织，例如前列腺癌或睾丸癌。在某些实施方案中，前列腺癌或睾丸癌具有雄激素抗性。
WO 2011/156518和美国专利号8,455,534和8,299,112中提供了抗雄激素化合物的非限制性实例。抗雄激素化合物的其他非限制性实例包括：恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸环丙孕酮、醋酸氯地孕酮、螺内酯、坎利酮、屈螺酮、酮康唑、托匹鲁胺、醋酸阿比特龙和西咪替丁。
在某些实施方案中，生物活性剂是ALK抑制剂。ALK抑制剂的例子包括但不限于克唑替尼阿莱替尼/>色瑞替尼、TAE684(NVP-TAE684)、GSK1838705A、AZD3463、ASP3026、PF-06463922、entretinib(RXDX-101)和AP26113。
在某些实施方案中，生物活性剂是HER-2抑制剂。HER-2抑制剂的例子包括曲妥珠单抗、拉帕替尼、ado-曲妥珠单抗美坦新偶联物和帕妥珠单抗。
在某些实施方案中，生物活性剂是CD20抑制剂。CD20抑制剂的例子包括奥滨尤妥珠单抗利妥昔单抗、法木单抗、替伊莫单抗/>托司妥莫单抗和奥瑞珠单抗(ocrelizumab)。
在某些实施方案中，生物活性剂是JAK3抑制剂。JAK3抑制剂的例子包括他索西替尼(tasocitinib)。
在某些实施方案中，生物活性剂是BCL-2抑制剂。BCL-2抑制剂的例子包括维尼妥拉、ABT-199(4-[4-[[2-(4-氯苯基)-4,4-二甲基环己-1-烯-1-基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[[3-硝基-4-[[(四氢-2H-吡喃-4-基)甲基]氨基]苯基]磺酰基]-2-[(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基]苯甲酰胺)、ABT-737(4-[4-[[2-(4-氯苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[4-[[(2R)-4-(二甲基氨基)-1-苯基硫烷基丁-2-基]氨基]-3-硝基苯基]磺酰基苯甲酰胺)(那维妥拉)、ABT-263((R)-4-(4-((4'-氯-4,4-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯基]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((4-((4-吗啉代-1-(苯硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺)、GX15-070(奥布妥拉甲磺酸盐，(2Z)-2-[(5Z)-5-[(3,5-二甲基-1H-吡咯-2-基)亚甲基]-4-甲氧基吡咯-2-亚基]吲哚；甲磺酸)))、2-甲氧基-抗霉素A3、YC137(4-(4,9-二氧代-4,9-二氢萘并[2,3-d]噻唑-2-基氨基)-苯基酯)、波戈辛(pogosin)、2-氨基-6-溴-4-(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代乙基)-4H-色烯-3-甲酸乙基酯、尼罗替尼-d3、TW-37(N-[4-[[2-(1,1-二甲基乙基)苯基]磺酰基]苯基]-2,3,4-三羟基-5-[[2-(1-甲基乙基)苯基]甲基]苯甲酰胺)、Apogossypolone(ApoG2)、HA14-1、AT101、沙步妥拉(sabutoclax)、藤黄酸或G3139(Oblimersen)。
在某些实施方案中，生物活性剂是激酶抑制剂。在某些实施方案中，激酶抑制剂选自磷酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂或脾酪氨酸激酶(Syk)抑制剂或其组合。
PI3激酶抑制剂的例子包括但不限于渥曼青、脱甲氧韦林、哌立福新、idelalisib、匹替利司、Palomid 529、ZSTK474、PWT33597、CUDC-907和AEZS-136、duvelisib、GS-9820、BKM120、GDC-0032(Taselisib)(2-[4-[2-(2-异丙基-5-甲基-1,2,4-三唑-3-基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-d][1,4]苯并氧氮杂-9-基]吡唑-1-基]-2-甲基丙酰胺)、MLN-1117((2R)-1-苯氧基-2-丁烷基氢(S)-甲基磷酸酯；或甲基(氧代){[(2R)-1-苯氧基-2-丁基]氧基}鏻))、BYL-719((2S)-N1-[4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基乙基)-4-吡啶基]-2-噻唑基]-1,2-吡咯烷二甲酰胺)、GSK2126458(2,4-二氟-N-{2-(甲氧基)-5-[4-(4-哒嗪基)-6-喹啉基]-3-吡啶基}苯磺酰胺)(omipalisib)、TGX-221((±)-7-甲基-2-(吗啉-4-基)-9-(l-苯基氨基乙基)-吡啶并[1,2-a]-嘧啶-4-酮)、GSK2636771(2-甲基-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苄基)-6-吗啉代-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸二盐酸盐)、KIN-193((R)-2-((l-(7-甲基-2-吗啉代-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-9-基)乙基)氨基)苯甲酸)、TGR-1202/RP5264、GS-9820((S)-l-(4-((2-(2-氨基嘧啶-5-基)-7-甲基-4-羟基丙-1-酮)、GS-1101(5-氟-3-苯基-2-([S)]-1-[9H-嘌呤-6-基氨基]-丙基)-3H-喹唑啉-4-酮)、AMG-319、GSK-2269557、SAR245409(N-(4-(N-(3-((3,5-二甲氧基苯基)氨基)喹喔啉-2-基)氨磺酰基)苯基)-3-甲氧基-4甲基苯甲酰胺)、BAY80-6946(2-氨基-N-(7-甲氧基-8-(3-吗啉代丙氧基)-2,3-二氢咪唑并[1,2-c]quinaz)、AS252424(5-[l-[5-(4-氟-2-羟基-苯基)-呋喃-2-基]-甲-(Z)-亚基]-噻唑啉-2,4-二酮)、CZ 24832(5-(2-氨基-8-氟-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-N-叔丁基吡啶-3-磺酰胺)、Buparlisib(5-[2,6-二(4-吗啉基)-4-嘧啶基]-4-(三氟甲基)-2-吡啶胺)、GDC-0941(2-(1H-吲唑-4-基)-6-[[4-(甲基磺酰基)-1-哌嗪基]甲基]-4-(4-吗啉基)噻吩并[3,2-d]嘧啶)、GDC-0980((S)-1-(4-((2-(2-氨基嘧啶-5-基)-7-甲基-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)甲基)哌嗪-l-基)-2-羟基丙-l-酮(也称为RG7422))、SF1126((8S,14S,17S)-14-(羧甲基)-8-(3-胍基丙基)-17-(羟甲基)-3,6,9,12,15-五氧代-1-(4-(4-氧代-8-苯基-4H-色烯-2-基)吗啉代-4-鎓)-2-氧杂-7,10,13,16-四氮杂十八碳-18-酸盐)、PF-05212384(N-[4-[[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]羰基]苯基]-N'-[4-(4,6-二-4-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲)(gedatolisib)、LY3023414、BEZ235(2-甲基-2-{4-[3-甲基-2-氧代-8-(喹啉-3-基)-2,3-二氢-lH-咪唑并[4,5-c]喹啉-l-基]苯基}丙腈)(dactolisib)、XL-765(N-(3-(N-(3-(3,5-二甲氧基苯基氨基)喹喔啉-2-基)氨磺酰基)苯基)-3-甲氧基-4-甲基苯甲酰胺)和GSK1059615(5-[[4-(4-吡啶基)-6-喹啉基]亚甲基]-2,4-噻唑烷二酮)、PX886([(3aR,6E,9S,9aR,10R,11aS)-6-[[双(丙-2-烯基)氨基]亚甲基]-5-羟基-9-(甲氧基甲基)-9a,11a-二甲基-1,4,7-三氧代-2,3,3a,9,10,11-六氢茚并[4,5h]异色烯-10-基]乙酸酯(也称为sonolisib))、LY294002、AZD8186、PF-4989216、pilaralisib、GNE-317、PI-3065、PI-103、NU7441(KU-57788)、HS173、VS-5584(SB2343)、CZC24832、TG100-115、A66、YM201636、CAY10505、PIK-75、PIK-93、AS-605240、BGT226(NVP-BGT226)、AZD6482、维他利塞(voxtalisib)、阿培利司、IC-87114、TGI100713、CH5132799、PKI-402、考泮利司(BAY80-6946)、XL 147、PIK-90、PIK-293、PIK-294、3-MA(3-甲基腺嘌呤)、AS-252424、AS-604850、阿托利司(GDC-0980，RG7422)。/>
BTK抑制剂的例子包括依鲁替尼(也称为PCI-32765)(1-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基-苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]哌啶-1-基]丙-2-烯-1-酮)、基于二苯胺基嘧啶的抑制剂例如AVL-101和AVL-291/292(N-(3-((5-氟-2-((4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺)(Avila Therapeutics)(参见美国专利公开号2011/0117073，全部并入本文)、达沙替尼([N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基氨基)噻唑-5-甲酰胺]、LFM-A13(α-氰基-β-羟基-β-甲基-N-(2,5-二溴苯基)丙烯酰胺)、GDC-0834([R-N-(3-(6-(4-(1,4-二甲基-3-氧代哌嗪-2-基)苯基氨基)-4-甲基-5-氧代-4,5-二氢吡嗪-2-基)-2-甲基苯基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-2-甲酰胺]、CGI-560 4-(叔丁基)-N-(3-(8-(苯基氨基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-6-基)苯基)苯甲酰胺、CGI-1746(4-(叔丁基)-N-(2-甲基-3-(4-甲基-6-((4-(吗啉-4-羰基)苯基)氨基)-5-氧代-4,5-二氢吡嗪-2-基)苯基)苯甲酰胺)、CNX-774(4-(4-((4-((3-酰基酰胺基苯基)氨基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-甲基吡啶甲酰胺)、CTA056(7-苄基-1-(3-(哌啶-1-基)丙基)-2-(4-(吡啶-4-基)苯基)-1H-咪唑并[4,5-g]喹喔啉-6(5H)-酮)、GDC-0834((R)-N-(3-(6-((4-(1,4-二甲基-3-氧代哌嗪-2-基)苯基)氨基)-4-甲基-5-氧代-4,5-二氢吡嗪-2-基)-2-甲基苯基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-2-甲酰胺)、GDC-0837((R)-N-(3-(6-((4-(1,4-二甲基-3-氧代哌嗪-2-基)苯基)氨基)-4-甲基-5-氧代-4,5-二氢吡嗪-2-基)-2-甲基苯基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-2-甲酰胺)、HM-71224、ACP-196、ONO-4059(Ono Pharmaceuticals)、PRT062607(4-((3-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯基)氨基)-2-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺盐酸盐)、QL-47(1-(1-丙烯酰基吲哚啉-6-基)-9-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯并[h][1,6]萘啶-2(1H)-酮)和RN486(6-环丙基-8-氟-2-(2-羟基甲基-3-{1-甲基-5-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-2-基氨基]-6-氧代-1,6-二氢-吡啶-3-基}-苯基)-2H-异喹啉-1-酮)和其他能够抑制BTK活性的分子，例如在Akinleye等人,Journal of Hematology&Oncology,2013,6:59中公开的那些BTK抑制剂，其全部内容通过引用并入本文。
Syk抑制剂包括但不限于cerdulatinib(4-(环丙基氨基)-2-((4-(4-(乙基磺酰基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺)、entospletinib(6-(1H-吲唑-6-基)-N-(4-吗啉代苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺)、福他替尼([6-({5-氟-2-[(3,4,5-三甲氧基苯基)氨基]-4-嘧啶基}氨基)-2,2-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-4H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-4-基]甲基磷酸二氢酯)、福他替尼二钠盐((6-((5-氟-2-((3,4,5-三甲氧基苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,2-二甲基-3-氧代-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-4(3H)-基)甲基磷酸钠)、BAY61-3606(2-(7-(3,4-二甲氧基苯基)-咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基氨基)-烟酰胺HCl)、RO9021(6-[(1R,2S)-2-氨基-环己基氨基]-4-(5,6-二甲基-吡啶-2-基氨基)-哒嗪-3-羧酸酰胺)、伊马替尼(格列卫，4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]-N-(4-甲基-3-{[4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)苯甲酰胺)、星形孢菌素、GSK143(2-(((3R、4R)-3-氨基四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-4-(对甲苯基氨基)嘧啶-5-甲酰胺)、PP2(1-(叔丁基)-3-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺)、PRT-060318(2-(((1R、2S)-2-氨基环己基)氨基)-4-(间甲苯基氨基)嘧啶-5-甲酰胺)、PRT-062607(4-((3-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯基)氨基)-2-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺盐酸盐)、R112(3,3'-((5-氟嘧啶-2,4-二基)双(氮烷二基))二酚)、R348(3-乙基-4-甲基吡啶)、R406(6-((5-氟-2-((3,4,5-三甲氧基苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,2-二甲基-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-3(4H)-酮)、白皮杉醇(3-羟基白藜芦醇)、YM193306(见Singh等人，Discovery and Development of SpleenTyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643)、7-氮杂吲哚、白皮杉醇、ER-27319(参见Singh等人.Discovery and Development of Spleen TyrosineKinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643，其全部内容在此引入)、化合物D(参见Singh等人.Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643，其全部内容在此引入)、PRT060318(参见Singh等人.Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643，其全部内容在此引入)、毛地黄黄酮(参见Singh等人.Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643，其全部内容在此引入)、芹菜甙元(参见Singh等人.Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643，其全部内容在此引入)、槲皮苷(参见Singh等人.Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643，其全部内容在此引入)、非瑟酮(参见Singh等人.Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643，其全部内容在此引入)、杨梅酮(参见Singh等人.Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643，其全部内容在此引入)、桑色素(参见Singh等人.Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643，其全部内容在此引入)。
在某些实施方案中，生物活性剂为c-MET抑制剂，例如，克唑替尼(CRIZONIXTM)、替泊替尼(XL880，EXEL-2880，GSK1363089，GSK089)或tivantinib(ARQ197)。
在某些实施方案中，生物活性剂是AKT抑制剂，包括但不限于MK-2206、GSK690693、哌立福新(KRX-0401)、GDC-0068、曲西瑞滨、AZD5363、和厚朴酚、PF-04691502和米替福新，FLT-3抑制剂，包括但不限于P406、多韦替尼、奎扎替尼(AC220)、amuvatinib(MP-470)、坦度替尼(MLN518)、ENMD-2076和KW-2449，或其组合。
在某些实施方案中，生物活性剂是mTOR抑制剂。mTOR抑制剂的例子包括但不限于雷帕霉素及其类似物、依维莫司替西罗莫司、地磷莫司、西罗莫司和地福莫司。
在某些实施方案中，生物活性剂是RAS抑制剂。RAS抑制剂的例子包括但不限于Reolysin和siG12D LODER。
在某些实施方案中，生物活性剂是HSP抑制剂。HSP抑制剂包括但不限于格尔德霉素或17-N-烯丙基氨基-17-去甲氧基格尔德霉素(17AAG)和根赤壳菌素。
其他生物活性化合物包括，例如依维莫司、曲贝替定、abraxane、TLK 286，AV-299、DN-101、帕唑帕尼、GSK690693、RTA 744，ON 0910.Na、AZD 6244(ARRY-142886)、AMN-107、TKI-258、GSK461364、AZD 1152，恩扎妥林(enzastaurin)、凡德他尼、ARQ-197、MK-0457、MLN8054、PHA-739358、R-763、AT-9263、FLT-3抑制剂、VEGFR抑制剂，极光激酶抑制剂、PIK-1调节剂、HDAC抑制剂、c-MET抑制剂、PARP抑制剂，Cdk抑制剂、IGFR-TK抑制剂、抗HGF抗体、粘着斑激酶抑制剂、Map激酶(mek)抑制剂、VEGF陷阱抗体、培美曲塞、帕尼单抗、氨柔比星、奥瑞戈沃单抗、Lep-etu、诺拉曲塞(nolatrexed)、azd2171、巴他布林(batabulin)、阿妥木单抗、扎诺利木单抗、依托卡林(edotecarin)、粉防己碱、鲁比替康、替米利芬(tesmilifene)、奥利默森、替昔单抗(ticilimumab)、伊匹单抗、棉酚、Bio 111、131-I-TM-601、ALT-110、BIO140，CC 8490、西仑吉肽、吉马替康(gimatecan)、IL13-PE38QQR、INO 1001、IPdR1 KRX-0402、硫蒽酮、LY317615、纽拉迪布(neuradiab)、维特斯潘(vitespan)、Rta 744、Sdx 102、他仑帕奈、阿曲生坦、Xr 311、洛米迪星、ADS-100380、舒尼替尼、5-氟尿嘧啶、伏立诺他、依托泊苷、吉西他滨、阿霉素、脂质体阿霉素、5'-脱氧-5-氟尿苷、长春新碱、替莫唑胺、ZK-304709、seliciclib、PD0325901、AZD-6244、卡培他滨、L-谷氨酸、N-[4-[2-(2-氨基-4,7-二氢-4-氧代-1H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基]苯甲酰基]-，二钠盐，七水合物、喜树碱、PEG标记的伊立替康、它莫西芬、托瑞米芬柠檬酸盐、阿那曲唑、依西美坦、来曲唑、DES(己烯雌酚)、雌二醇、雌激素、结合雌激素、贝伐单抗、IMC-1C11、CHIR-258)、3-[5-(甲基磺酰基哌啶甲基)-吲哚基-喹诺酮、瓦他拉尼、AG-013736、AVE-0005、醋酸戈舍瑞林、醋酸亮丙瑞林、曲普瑞林双羟萘酸酯、醋酸甲羟孕酮、己酸羟孕酮、醋酸甲地孕酮、雷洛昔芬、比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特、醋酸甲地孕酮、CP-724714、TAK-165、HKI-272、拉帕替尼、卡奈替尼、ABX-EGF抗体、爱必妥、EKB-569、PKI-166、GW-572016、爱那法尼(Ionafarnib)、BMS-214662、替吡法尼(ipifarnib)、氨磷汀、NVP-LAQ824、辛二酰基异羟肟酸、丙戊酸、曲古抑菌素A、FK-228、SU11248、索拉非尼、KRN951、氨鲁米特、安吖啶、阿那格雷、L-左旋天冬酰胺酶、卡介苗(BCG)疫苗、阿德里亚霉素、博来霉素、布舍瑞林、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、氯膦酸盐、环丙孕酮、阿糖胞苷、达卡巴嗪、更生霉素、柔红霉素、己烯雌酚、表柔比星、氟达拉滨、氟氢可地松、氟甲睾酮、氟他胺、格列卫、吉西他滨、羟基脲、伊达比星、异环磷酰胺、伊马替尼、亮丙瑞林、左旋咪唑、罗氮芥、二氯甲基二乙胺、美法仑、6-巯基嘌呤、美司钠、甲氨蝶呤、丝裂霉素、米托坦、米托蒽醌、尼鲁米特、奥曲肽、奥沙利铂、帕米膦酸盐、喷司他丁、普卡霉素、卟菲尔钠、丙卡巴肼、雷替曲塞、利妥昔单抗、链脲佐菌素、替尼泊苷、睾酮、沙利度胺、硫鸟嘌呤、噻替派、维甲酸、长春地辛、13-顺式视黄酸、苯丙氨酸氮芥、乌拉莫司汀、雌莫司汀、六甲蜜胺、氟尿苷、5-脱氧尿苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷、6-巯基嘌呤、脱氧助间型霉素、骨化三醇、戊柔比星、光神霉素、长春碱、长春瑞滨、拓扑替康、雷佐辛、马立马司他、COL-3、neovastat、BMS-275291、角鲨胺、内皮抑素、SU5416、SU6668、EMD121974、白介素-12、IM862、血管抑素、vitaxin、屈洛昔芬、艾多昔芬、螺内酯、非那雄胺(finasteride)、西米替丁、曲妥珠单抗、地尼白介素、吉非替尼、硼替佐米、紫杉醇、不含克列莫佛的紫杉醇、多西他赛、epithilone B、BMS-247550、BMS-310705、屈洛昔芬、4-羟基它莫西芬、哌喷昔芬、ERA-923、阿佐昔芬(arzoxifene)、氟维司群、阿考比芬(acolbifene)、拉索昔芬、艾多昔芬、TSE-424、HMR-3339、ZK186619、拓扑替康、PTK787/ZK 222584、VX-745、PD 184352、雷帕霉素、40-O-(2-羟乙基)-雷帕霉素、替西罗莫司、AP-23573、RAD001、ABT-578、BC-210、LY294002、LY292223、LY292696、LY293684、LY293646、渥曼青霉素(wortmannin)、ZM336372、L-779,450、PEG-非格司亭、达比泊汀、促红细胞生成素、粒细胞集落刺激因子、唑仑膦酸盐、泼尼松、西妥昔单抗、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、组氨瑞林、聚乙二醇化干扰素α-2a、干扰素α-2a、聚乙二醇干扰素α-2b、干扰素α-2b、阿扎胞苷、PEG-L-天冬酰胺酶、来那度胺、吉妥珠单抗氢化可的松、白介素-11、右丙亚胺、阿仑单抗、全反式维甲酸、酮康唑、白介素-2、甲地孕酮、免疫球蛋白、氮芥、甲基泼尼松龙、替坦-艾瑞妥莫单抗(ibritgumomab tiuxetan)、雄激素、地西他滨、六甲嘧胺、贝沙罗汀、托司妥莫单抗、三氧化二砷、可的松、editronate、米托坦、环孢菌素、脂质体柔红霉素、Edwina-天冬酰胺酶、锶89、casopitant、奈妥吡坦、NK-1受体拮抗剂、帕洛诺司琼、阿瑞匹坦、苯海拉明、羟嗪、甲氧氯普胺、劳拉西泮、阿普唑仑、氟哌啶醇、氟哌利多、屈大麻酚、地塞米松、甲基泼尼松龙(methylprednisolone)、丙氯拉嗪、格拉司琼、昂丹司琼、多拉司琼、托烷司琼、聚乙二醇非格司亭、促红细胞生成素、阿法依伯汀、达贝泊汀α及其混合物。
在某些实施方案中，该化合物与异环磷酰胺联合给药。
在某些实施方案中，生物活性剂选自但不限于甲磺酸伊马替尼达沙替尼/>尼洛替尼/>博舒替尼/>曲妥珠单抗/>曲妥珠单抗-DM1、帕妥珠单抗(PERJETATM)、拉帕替尼/>吉非替尼/>厄洛替尼西妥昔单抗/>帕尼单抗/>凡德他尼/>维罗非尼/>伏立诺他罗米地辛/>贝沙罗汀/>阿利维A酸/>维甲酸/>卡非佐米(KYPROLISTM)、普拉曲沙/>贝伐珠单抗/>ZIV-阿柏西普索拉非尼/>舒尼替尼/>帕唑帕尼瑞戈非尼/>和卡博替尼/>
在某些方面，生物活性剂是抗炎剂、化学治疗剂、放射治疗剂、另外的治疗剂或免疫抑制剂。
合适的化学治疗生物活性剂包括但不限于放射性分子、毒素，也称为细胞毒素或细胞毒性剂，其包括对细胞活力有害的任何药剂，以及脂质体或含有化疗化合物的其他囊泡。一般的抗癌药物包括：长春新碱或脂质体长春新碱柔红霉素(道诺霉素或/>或多柔比星阿糖胞苷(胞嘧啶阿拉伯糖苷、ARA-C或/>L-天冬酰胺酶/>或PEG-L-天冬酰胺酶(培门冬酰胺酶或依托泊苷(VP-16)、替尼泊苷/>6-巯基嘌呤(6-MP或/>甲氨蝶呤、环磷酰胺/>泼尼松、地塞米松(DECADRON)、伊马替尼/>达沙替尼/>尼洛替尼伯舒替尼/>和帕纳替尼/>
其他合适的化学治疗剂的例子包括但不限于1-脱氢睾酮、5-氟尿嘧啶达卡巴嗪、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、放线菌素D、阿霉素、阿地白介素、烷基化剂、别嘌醇钠、六甲蜜胺、氨磷汀、阿那曲唑、安曲霉素(AMC)、抗有丝分裂剂、顺式二氯二胺铂(II)((DDP)顺铂)、二氨基二氯铂、蒽环霉素、抗生素、抗代谢物、天冬酰胺酶、活BCG(膀胱内)、倍他米松磷酸钠和倍他米松醋酸盐、比卡鲁胺、硫酸博莱霉素、白消安、甲酰四氢叶酸钙(calcium leucouorin)、加利车霉素、卡培他滨、卡铂、洛莫司汀(CCNU)、卡莫司汀(BSNU)、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、秋水仙素、缀合雌激素、环磷酰胺、环磷酰胺、阿糖胞苷、阿糖胞苷、细胞松弛素B、癌得星、达卡巴嗪、更生霉素、放线菌素D(原名放射菌素)、柔红霉素盐酸盐、柔红霉素柠檬酸盐、地尼白介素、右雷佐生、二溴甘露醇、二羟基炭疽菌素二酮、多西他赛、甲磺酸多拉司琼、阿霉素盐酸盐、屈大麻酚、大肠杆菌L-天冬酰胺酶、吐根碱、促红细胞生成素-α、Erwinia L-天冬酰胺酶、酯化雌激素、雌二醇、雌莫司汀磷酸钠、溴化乙锭、乙炔雌二醇、依替膦酸盐、依托泊苷citrororum因子、磷酸依托泊苷、非格司亭、氟尿苷、氟康唑、氟达拉滨磷酸盐、氟尿嘧啶、氟他胺、亚叶酸、吉西他滨HCL、糖皮质激素、醋酸戈舍瑞林、短杆菌肽D、格拉司琼HCL、羟基脲、伊达比星HCL、异环磷酰胺、干扰素α-2b、伊立替康HCL、来曲唑、亚叶酸钙、醋酸亮丙瑞林、左旋咪唑HCL、利多卡因、罗氮芥、美登木素生物碱、二氯甲基二乙胺HCL、醋酸甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、美法仑HCL、巯基嘌呤、美司钠、甲氨蝶呤、甲基睾酮、光神霉素、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、尼鲁米特、醋酸奥曲肽、昂丹司琼HCL、紫杉醇、帕米膦酸二钠、喷司他丁、毛果芸香碱HCL、普利霉素、带有卡莫司汀植入物的聚苯丙生20、卟吩姆钠、普鲁卡因、丙卡巴肼HCL、普萘洛尔、利妥昔单抗、沙格司亭、链脲佐菌素、它莫西芬、紫杉醇、替尼泊苷、替诺泊苷(tenoposide)；睾内酯、丁卡因、噻替派苯丁酸氮芥、硫鸟嘌呤、噻替派、拓扑替康HCL、托瑞米芬柠檬酸盐、曲妥珠单抗、维甲酸、戊柔比星、硫酸长春碱、长春新碱硫酸盐和酒石酸长春瑞滨。
在一些实施方案中，本发明的化合物与化学治疗剂(例如细胞毒性剂或用于治疗癌症的其他化合物)联合给药。化学治疗剂的例子包括烷化剂、抗代谢物、叶酸类似物、嘧啶类似物、嘌呤类似物和相关抑制剂、长春花生物碱、表鬼臼毒素、抗生素、L-天冬酰胺酶、拓扑异构酶抑制剂、干扰素、铂配位络合物、蒽二酮取代的脲、甲基肼衍生物、肾上腺皮质抑制剂、肾上腺皮质激素、孕激素、雌激素、抗雌激素、雄激素、抗雄激素和促性腺激素释放激素类似物。还包括5-氟尿嘧啶(5-FU)、亚叶酸(LV)、艾立替康、奥沙利铂、卡培他滨、紫杉醇和多西他赛。化学治疗剂的非限制性实例包括烷化剂，例如噻替哌和环磷酰胺；烷基磺酸盐，如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶类，如苯并多巴、卡巴醌(carboquone)、美妥替哌(meturedopa)和脲多巴(uredopa)；乙烯亚胺和甲基蜜胺类(methylamelamines)，包括六甲蜜胺、曲他胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺(triethiylenethiophosphoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylolomelamine)；多聚乙酰类(acetogenins)(尤其是布拉它辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone)；喜树碱(包括合成类似物拓扑替康)、苔藓虫素、卡利他汀(callystatin)；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；念珠藻素类(cryptophycins)(具体是念珠藻素1和念珠藻素8)；尾海兔素(dolastatin)；倍癌霉素(duocarmycin)(包括合成类似物，KW-2189和CB1-TM1)；五加素(eleutherobin)；水鬼蕉碱(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海绵抑制素(spongistatin)；氮芥类，如苯丁酸氮芥、萘氮芥、胆怜酸胺(cholophosphamide)、雌莫司汀、异环磷酰胺、氮芥、二氯甲基二乙胺、盐酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法仑、新恩比兴(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼氮芥(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、乌拉莫司汀；亚硝基脲类(nitrosureas)，如卡莫司汀、氯脲霉素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，如烯二炔抗生素(例如，卡奇霉素(calicheamicin)，尤其卡利奇霉素gammall和卡利奇霉素omegall(参见，例如，Agnew,Chem.Inti.Ed Engl.33:183-186(1994))；达内霉素(dynemicin)，包含达内霉素A；双膦酸盐类，例如氯膦酸盐(clodronate)；埃斯培拉霉素(esperamicin)；以及新制癌菌素发色团(neocarzinostatin chromophore)及相关色蛋白烯二炔抗生素发色团)、阿克拉霉素(aclacinomysin)、放线菌素(actinomycin)、安曲霉素(authramycin)、氮杂丝氨酸、博来霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、卡拉霉素(carabicin)、洋红霉素(caminomycin)、嗜癌素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基5-氧代-L-正亮氨酸、(多柔比星(doxorubicin，包括吗啉基-多柔比星、氰吗啉基-多柔比星、2-吡咯啉基-多柔比星及脱氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素(mitomycin如丝裂霉素C)、霉酚酸(mycophenolic acid)、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素(streptonigrin)、链脲菌素(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物，例如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，例如二甲叶酸(denopterin)、甲氨蝶呤、蝶罗呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，例如氟达拉滨，6-巯嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，如环胞苷(ancitabine)、阿扎胞苷、6-氮尿苷(azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖孢苷、二脱氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨、氟尿苷；雄激素，例如卡普睾酮(calusterone)、屈他雄酮丙酸酯、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺类，如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂，例如亚叶酸；醋葡醛内酯(aceglatone)；醒磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶；阿莫司汀(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；地佛法明(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elfomithine；依利醋铵(elliptinium acetate)；埃博霉素；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；洛尼代宁(lonidainine)；美登木素生物碱，如美登素和安丝菌素(ansamitocins)；米托胍腙；米托蒽醌；莫匹丹莫(mopidanmol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；喷司他丁；苯来美特(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基酰肼(ethylhydrazide)；丙卡巴肼；/>多糖复合物(JHS Natural Products,Eugene,OR)；丙亚胺(razoxane)；根霉素；裂裥菌素(sizofuran)；锗螺胺(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2',2"-三氯三乙胺；单端孢霉烯(trichothecenes)(尤其是T-2毒素、维拉库林(verracurin)A、杆孢菌素(roridin)A和蛇形菌素(anguidine))；乌拉坦(urethan)；长春地辛；达卡巴嗪；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；加西托新(gacytosine)；阿拉伯糖苷("Ara-C")；环磷酰胺、噻替派；紫杉烷类，例如/>紫杉醇(Bristol-MyersSquibb Oncology,Princeton,N.J.)、不含cremophor的ABRAXANETM、紫杉醇的白蛋白工程化纳米颗粒制剂(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,IL)和多西他赛(Rhone-Poulenc Rorer,Antony,法国)；苯丁酸氮芥(chloranbucil)；/>吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂配位络合物，例如顺铂、奥沙利铂和卡铂；长春碱(vinblastine)、铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；/>长春瑞滨；能灭瘤(novantrone)；替尼泊苷；依达曲沙(edatrexate)；道诺霉素(daunomycin)；氨基蝶呤；希罗达(xeloda)；伊班膦酸钠(ibandronate)；伊立替康(例如，CPT-11)；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄醇，如视黄酸；卡培他滨；以及任何上述的药学上可接受的盐、酸或衍生物。两种或更多种化学治疗剂可以以混合物的形式与本文所述的化合物组合施用。联合化疗的合适给药方案是本领域已知的。例如联合给药方案描述于Saltz等人,Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.18:233a(1999)和Douillard等人,Lancet355(9209):1041 -1047(2000)。
可与本文公开的化合物联合给药的其他治疗剂可包括贝伐单抗、舒尼替尼、索拉非尼、2-甲氧基雌二醇或2ME2、氟磺胺(finasunate)、瓦他拉尼、凡德他尼、阿柏西普(aflibercept)、沃洛赛昔单抗、伊瑞西珠(MEDI-522)、西仑吉肽、西妥昔单抗、帕尼单抗、吉非替尼、曲妥珠单抗、多韦替尼、菲吉妥木单抗、阿塞西普、利妥昔单抗、阿仑单抗、阿地白介素、阿特利珠单抗(atlizumab)、托西利珠单抗、替西罗莫司、依维莫司、鲁卡妥木单抗、达塞妥珠单抗、HLL1、huN901-DM1、阿替莫德、那他利珠单抗(natalizumab)、硼替佐米、卡非佐米、马佐米(marizomib)、坦螺旋霉素(tanespimycin)、沙奎那韦甲磺酸盐、利托那韦、奈非那韦甲磺酸盐、茚地那韦硫酸盐、贝诺司他、帕比司他(panobinostat)、玛帕妥木单抗、乐萨妥木单抗、杜拉乐明、ABT-737、奥利默森、plitidepsin、他匹莫德、P276-00、恩扎妥林(enzastaurin)、替吡法尼(ipifarnib)、哌立福新、伊马替尼、达沙替尼、来那度胺(lenalidomide)、沙利度胺(thalidomide)、辛伐他汀、塞来昔布、巴多昔芬、AZD4547、瑞洛妥木单抗、奥沙利铂(Eloxatin)、PD0332991、瑞博西利(LEE011)、amebaciclib(LY2835219)、HDM201、氟维司群(Faslodex)、依西美坦(Aromasin)、PIM447、鲁索替尼(INC424)、BGJ398、奈西妥木单抗、培美曲塞(Alimta)和雷莫芦单抗(IMC-1121B)。
在某些实施方案中，另外的治疗是单克隆抗体(MAb)。一些MAb刺激免疫反应，从而破坏癌细胞。与B细胞自然产生的抗体类似，这些MAb可以“覆盖”癌细胞表面，引发免疫系统对其进行破坏。例如，贝伐单抗靶向血管内皮生长因子(VEGF)，这是一种由肿瘤细胞和肿瘤微环境中的其他细胞分泌的蛋白质，可促进肿瘤血管的发育。当与贝伐单抗结合时，VEGF不能与其细胞受体相互作用，从而阻止导致新血管生长的信号传导。与细胞表面生长因子受体结合的MAb会阻止靶向的受体发送其正常的生长促进信号。它们还可能触发细胞凋亡并激活免疫系统以破坏肿瘤细胞。。
在本发明的一个方面，生物活性剂是免疫抑制剂。免疫抑制剂可以是钙调磷酸酶抑制剂，例如例如环孢菌素或子囊霉素，例如环孢菌素AFK506(他克莫司)、吡美莫司(pimecrolimus)、mTOR抑制剂例如雷帕霉素或其衍生物、例如西罗莫司/>依维莫司/>替西罗莫司、佐他莫司、biolimus-7、biolimus-9、雷帕霉素类似物(rapalog)例如地磷莫司、硫唑嘌呤(azathioprine)、campath1H、S1P受体调节剂例如芬戈莫德或其类似物、抗IL-8抗体、霉酚酸或其盐、例如钠盐、或其前药、例如霉酚酸酯/>OKT3/>泼尼松、/>布喹那钠、OKT4、T10B9.A-3A、33B3.1、15-脱氧精胍菌素(15-deoxyspergualin)、曲培莫司、来氟米特/>CTLAI-Ig、抗CD25、抗IL2R、巴利昔单抗/>达利珠单抗/>咪唑立宾、甲氨蝶呤、地塞米松、ISAtx-247、SDZASM981(吡美莫司、/>)、CTLA4lg(阿巴西普)、贝拉西普、LFA3lg、依那西普(Immunex以/>出售)、阿达木单抗英利昔单抗/>抗LFA-1抗体、那他珠单抗恩莫单抗、加威利莫单抗、抗胸腺细胞免疫球蛋白、西普利珠单抗、阿法西普依法珠单抗、颇得斯安(pentasa)、美沙拉嗪(mesalazine)、美沙拉嗪片(asacol)、磷酸可待因、贝诺酯、芬布芬、萘普生、双氯芬酸(diclofenac)、依托度酸和吲哚美辛、阿司匹林和布洛芬。
在一些实施方案中，生物活性剂是治疗剂，其是用于癌症治疗的生物性细胞因子(例如，干扰素或白细胞介素(例如，IL-2))。在一些实施方案中，生物制剂是抗血管生成剂，例如抗VEGF剂，如贝伐单抗在一些实施方案中，生物制品是基于免疫球蛋白的生物制品，例如，单克隆抗体(例如，人源化抗体、完全人抗体、Fc融合蛋白或其功能片段)，其激动靶标以刺激抗癌反应，或拮抗对癌症很重要的抗原。此类药物包括(利妥昔单抗)；/>(达珠单抗)；/>(巴利昔单抗)；/>(帕利珠单抗)；/>(英夫利昔单抗)；(曲妥珠单抗)；/>(吉妥珠单抗奥佐米星)；(阿仑单抗)；/>(替坦-艾瑞妥莫单抗)；/>(阿达木单抗)；/>(奥马珠单抗)；/>(托西莫单抗-l-131)；(依法珠单抗)；/>(西妥昔单抗)；/>(贝伐珠单抗)；/>(那他珠单抗)；/>(托珠单抗)；/>(帕尼单抗)；/>(雷珠单抗)；/>(依库丽单抗)；/>(聚乙二醇赛妥珠单抗)；/>(戈利木单抗)；/>(卡那单抗)；/>(优特克单抗)；/>(奥法木单抗)；/>(狄诺塞麦)；/>(莫维珠单抗)；/>(瑞西巴库单抗(raxibacumab))；/>(贝利尤单抗)；/>(伊匹单抗)；/>(布仑妥昔单抗-维多汀(brentuximabvedotin))；/>(帕妥珠单抗)；/>(曲妥珠单抗-美坦新偶联物(ado-trastuzumab emtansine))；和/>(奥滨尤妥珠单抗(obinutuzumab))。还包括抗体-药物缀合物。
联合治疗可包括非药物治疗的治疗剂。例如，该化合物可以在放射治疗、冷冻治疗、高温治疗和/或肿瘤组织的外科手术之外被施用。
接头
接头是键或化学稳定的二价基团，其将Cereblon配体共价连接至BRAF靶向配体。
在某些实施方案中，接头可以是将Cereblon配体连接至BRAF靶向配体的任何化学稳定的基团。在一些实施方案中，接头具有2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个或更多个碳原子的链，其中一个或多个碳原子可被杂原子如O、N、S或P取代，只要所得分子作为药学上可接受的剂型的一部分具有至少两个月、三个月、六个月或一年的稳定保存期，并且其本身是药学上可接受的剂。在某些实施方案中，该链可在链中具有2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个连续的原子。例如，链可以包括1个或多个乙二醇单元，并且在一些实施方案中，接头可以具有至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个或更多个连续的、部分连续的或不连续的乙二醇。在某些实施方案中，链具有至少1、2、3、4、5、6、7或8个分支，其可以独立地为烷基、杂烷基、芳基、杂芳基、烯基或炔基取代基，其中在一个实施方案中，每个分支具有10、8、6、4、3、2或1个碳。
在其他实施方案中，接头可包括乙二醇、丙二醇、乳酸和/或乙醇酸中的一种或多种或由其组成。一般而言，丙二醇增加了疏水性，而丙二醇增加了亲水性。乳酸节段往往比乙醇酸节段具有更长的半衰期。嵌段和无规的乳酸-共-乙醇酸部分，以及乙二醇和丙二醇，在本领域中已知是药学上可接受的，并且可以被修饰或排列以获得所需的半衰期和亲水性。在某些方面，这些单元可以与其他部分(例如脂族部分，包括烷基、杂脂族基、芳基、杂芳基、杂环基、环烷基等)侧接或散布，以获得适当的药物性质。
在某些方面，接头选自
/>
其中所有变量定义如上。
在某些实施方案中，接头包括
在某些实施方案中，接头包括
在某些实施方案中，接头包括
在某些实施方案中，接头包括
在某些实施方案中，接头包括/>
在某些实施方案中，接头包括
在某些实施方案中，接头包括
在某些实施方案中，接头包括
在某些实施方案中，接头包括
在某些实施方案中，接头包括
在某些实施方案中，接头包括
在某些实施方案中，接头包括
在某些实施方案中，接头包括
以下是可用于本发明的接头的非限制性例子。基于这一阐述，本领域技术人员将理解如何充分利用接头来实现本发明的目标。
作为某些非限制性示例，接头包括:
/>
/>
在另外的实施方案中，接头选自:
/>
在一个实施方案中，X1连接于BRAF靶向配体。在另一个实施方案中，X2连接于BRAF靶向配体。
R20、R21、R22、R23和R24的部分的非限制性例子包括：
R20、R21、R22、R23和R24的部分的其他非限制性例子包括：
R20、R21、R22、R23和R24的部分的其他非限制性例子包括:
在另外的实施方案中，接头是任选取代的(聚)乙二醇，其具有至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个乙二醇单元，或散布有任选取代的O、N、S、P或Si原子的任选取代的烷基。在某些实施方案中，接头侧接、取代或散布有芳基、苯基、苄基、烷基、亚烷基或杂环基。在某些实施方案中，接头可以是不对称的或对称的。在一些实施方案中，接头是取代或未取代的聚乙二醇基团，其尺寸范围为约1至约12个乙二醇单元、约1至约10个乙二醇单元、约2至约6个乙二醇单元、约2至5个乙二醇单元、约2至4个乙二醇单元。在本文所述化合物的任何实施方案中，接头可以是本文所述的任何合适的部分。
在其他实施方案中，接头选自:
-NR61(CH2)n1-(低级烷基)-、-NR61(CH2)n1-(低级烷氧基)-、-NR61(CH2)n1-(低级烷氧基)-OCH2-、-NR61(CH2)n1-(低级烷氧基)-(低级烷基)-OCH2-、-NR61(CH2)n1-(环烷基)-(低级烷基)-OCH2-、-NR61(CH2)n1-(杂环烷基)-、-NR61(CH2CH2O)n1-(低级烷基)-O-CH2-、-NR61(CH2CH2O)n1-(杂环烷基)-O-CH2-、-NR61(CH2CH2O)n1-芳基-O-CH2-、-NR61(CH2CH2O)n1-(杂芳基)-O-CH2-、-NR61(CH2CH2O)n1-(环烷基)-O-(杂芳基)-O-CH2-、-NR61(CH2CH2O)n1-(环烷基)-O-芳基-O-CH2-、-NR61(CH2CH2O)n1-(低级烷基)-NH-芳基-O-CH2-、-NR61(CH2CH2O)n1-(低级烷基)-O-芳基-CH2、-NR61(CH2CH2O)n1-环烷基-O-芳基-、-NR61(CH2CH2O)n1-环烷基-O-杂芳基-、-NR61(CH2CH2)n1-(环烷基)-O-(杂环)-CH2、-NR61(CH2CH2)n1-(杂环)-(杂环)-CH2和-NR61-(杂环)-CH2；
其中n1是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；和
R61是氢、甲基或乙基。
在其他实施方案中，接头选自:
-N(R61)-(CH2)m1-O(CH2)n2-O(CH2)o1-O(CH2)p1-O(CH2)q1-O(CH2)r1-OCH2-、
-O-(CH2)m1-O(CH2)n2-O(CH2)o1-O(CH2)p1-O(CH2)q1-O(CH2)r1-OCH2-、
-O-(CH2)m1-O(CH2)n2-O(CH2)o1-O(CH2)p1-O(CH2)q1-O(CH2)r1-O-；
-N(R61)-(CH2)m1-O(CH2)n2-O(CH2)o1-O(CH2)p1-O(CH2)q1-O(CH2)r1-O-；
-(CH2)m1-O(CH2)n2-O(CH2)o1-O(CH2)p1-O(CH2)q1-O(CH2)r1-O-；
-(CH2)m1-O(CH2)n2-O(CH2)o1-O(CH2)p1-O(CH2)q1-O(CH2)r1-OCH2-；
-O(CH2)m1O(CH2)n2O(CH2)p1O(CH2)q1OCH2-；
-O(CH2)m1O(CH2)n2O(CH2)p1O(CH2)q1OCH2-；其中
m1、n2、o1、p1、q1和r1独立地为1、2、3、4或5；和
R61是氢、甲基或乙基。
在其他实施方案中，接头选自:
m1、n2、o1、p1、q2和r1独立地为1、2、3、4或5。在其他实施方案中，接头选自:
在其他实施方案中，接头选自:
在其他实施方案中，接头选自:
/>
/>
/>
/>
其中R71为-O-、-NH、N烷基、杂脂族基、脂族或-NMe。在其他实施方案中，接头选自:
/>
在其他实施方案中，接头选自:
/>
/>
/>
在其他实施方案中，接头选自:
在其他实施方案中，接头选自:
/>
在其他实施方案中，接头选自:
/>
在其他实施方案中，接头选自:
在其他实施方案中，接头选自:
在某些实施方案中，接头选自:
在某些实施方案中，接头选自:
/>
在上述结构中，代表/>
在某些实施方案中，接头可以是4-24个碳原子的直链，其中直链中的一个或多个碳原子可以被氧、氮、酰胺、氟化碳等取代替换或取代。例如以下:
/>
/>
在某些实施方案中，接头可以是非线性链，并且可以是或包括脂族或芳族或杂芳族环状部分。
在某些实施方案中，接头可包括尺寸范围为约1至约12个乙二醇单元、约1至约10个乙二醇单元、约2至约6个乙二醇单元、约2至5个乙二醇单元、约2至4个乙二醇单元(例如1、2、3、4、6、6、7、8、9、10、11或12个乙二醇单元)的连续、部分连续或非连续的乙二醇单元组。
在某些实施方案中，接头可具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氟取代基。在另一个实施方案中，接头是全氟化的。在再另一个实施方案中，接头是部分或完全氟化的聚醚。氟化接头部分的非限制性例子包括:
R20、R21、R22、R23和R24的部分的非限制性例子包括：/>
R20、R21、R22、R23和R24的部分的其他非限制性例子包括:
R20、R21、R22、R23和R24的部分的其他非限制性例子包括：
在某些实施方案中，长度可根据需要或如对于所需应用发现必要的进行调整。
本发明的另外的实施方案
所有单独的实施方案可以组合。
R1的实施方案
在某些实施方案中，R1是氢。
在某些实施方案中，R1是烷基。
在某些实施方案中，R1是环烷基。
在某些实施方案中，R1是甲基。
在某些实施方案中，R1是乙基。
在某些实施方案中，R1是环丙基。
R2的实施方案
在某些实施方案中，R2是氢。
在某些实施方案中，R2是烷基。
在某些实施方案中，R2是环烷基。
在某些实施方案中，R2是甲基。
在某些实施方案中，R2是乙基。
在某些实施方案中，R2是环丙基。
在某些实施方案中，R2是卤代烷基。
在某些实施方案中，R2为CF3。
在某些实施方案中，R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被一个或两个R3取代的杂环烷基。
R2’的实施方案
在某些实施方案中，R2’是氢。
在某些实施方案中，R2’是烷基。
在某些实施方案中，R2’是环烷基。
在某些实施方案中，R2’是甲基。
在某些实施方案中，R2’是乙基。
在某些实施方案中，R2’是环丙基。
在某些实施方案中，R2’是卤代烷基。
在某些实施方案中，R2’为CF3。
在某些实施方案中，R1和R2’与它们所连接的碳原子一起形成任选被一个或两个R3取代的环烷基。
R3的实施方案
在某些实施方案中，R3是氢。
在某些实施方案中，R3是烷基。
在某些实施方案中，R3是环烷基。
在某些实施方案中，R3是甲基。
在某些实施方案中，R3是乙基。
在某些实施方案中，R3是环丙基。
在某些实施方案中，R3是烷氧基。
在某些实施方案中，R3是甲氧基。
在某些实施方案中，R3是乙氧基。
在某些实施方案中，R3是卤素。
在某些实施方案中，R3为F。
R4的实施方案
在某些实施方案中，R4是氢。
在某些实施方案中，R4是烷基。
在某些实施方案中，R4是环烷基。
在某些实施方案中，R4是甲基。
在某些实施方案中，R4是乙基。
在某些实施方案中，R4是环丙基。
在某些实施方案中，R4是卤素。
在某些实施方案中，R4是F。
在某些实施方案中，R4是氰基。
R5的实施方案
在某些实施方案中，R5是氢。
在某些实施方案中，R5是烷基。
在某些实施方案中，R5是环烷基。
在某些实施方案中，R5是甲基。
在某些实施方案中，R5是乙基。
在某些实施方案中，R5是环丙基。
在某些实施方案中，R5是卤素。
在某些实施方案中，R5为F。
在某些实施方案中，R5是氰基。
W1和W2的实施方案
在某些实施方案中，W1为-N-。
在某些实施方案中，W1为-CH-。
在某些实施方案中，W2为-N-。
在某些实施方案中，W2为-CH-。
在某些实施方案中，W2为-CR26-。
在某些实施方案中，W2为-CCH3-。
在某些实施方案中，W2是-CF-。
R6和R26的实施方案
在某些实施方案中，R6是氢。
在某些实施方案中，R6是烷基。
在某些实施方案中，R6是环烷基。
在某些实施方案中，R6是甲基。
在某些实施方案中，R6是乙基。
在某些实施方案中，R6是环丙基。
在某些实施方案中，R6是卤素。
在某些实施方案中，R6是F。
在某些实施方案中，R6是羟基。
在某些实施方案中，R6是氨基。
在某些实施方案中，R6是二烷基氨基。
在某些实施方案中，R6是烷氧基。
在某些实施方案中，R6是烷氧基烷基。
在某些实施方案中，R26是氢。
在某些实施方案中，R26是烷基。
在某些实施方案中，R26是环烷基。
在某些实施方案中，R26是甲基。
在某些实施方案中，R26是乙基。
在某些实施方案中，R26是环丙基。
在某些实施方案中，R26是卤素。
在某些实施方案中，R26为F。
在某些实施方案中，R26是羟基。
在某些实施方案中，R26是烷氧基。
在某些实施方案中，R26是烷氧基烷基。
R7的实施方案
在某些实施方案中，R7是氢。
在某些实施方案中，R7是烷基。
在某些实施方案中，R7是氰基。
在某些实施方案中，R7是卤素。
在某些实施方案中，R7是烷氧基。
在某些实施方案中，R7是氟。
在某些实施方案中，R7是甲氧基。
在某些实施方案中，R7是乙氧基。
在某些实施方案中，R7是甲基
在某些实施方案中，R7是乙基。
R8的实施方案
在某些实施方案中，R8是氢。
在某些实施方案中，R8是烷基。
在某些实施方案中，R8是氰基。
在某些实施方案中，R8是卤素。
在某些实施方案中，R8是烷氧基。
在某些实施方案中，R8是氟。
在某些实施方案中，R8是甲氧基。
在某些实施方案中，R8是乙氧基。
在某些实施方案中，R8是甲基
在某些实施方案中，R8是乙基。
R9的实施方案
在某些实施方案中，R9是氢。
在某些实施方案中，R9是烷基。
在某些实施方案中，R9是氰基。
在某些实施方案中，R9是卤素。
在某些实施方案中，R9是烷氧基。
在某些实施方案中，R9是氟。
在某些实施方案中，R9是甲氧基。
在某些实施方案中，R9是乙氧基。
在某些实施方案中，R9是甲基
在某些实施方案中，R9是乙基。
R17的实施方案
在某些实施方案中，R17是氢。
在某些实施方案中，R17是烷基。
在某些实施方案中，R17是氰基。
在某些实施方案中，R17是卤素。
在某些实施方案中，R17是烷氧基。
在某些实施方案中，R17是氟。
在某些实施方案中，R17是甲氧基。
在某些实施方案中，R17是乙氧基。
在某些实施方案中，R17是甲基
在某些实施方案中，R17是乙基。
在某些实施方案中，R17是羟基。
在某些实施方案中，R17是环烷基。
在某些实施方案中，R17是环丙基。
R18的实施方案
在某些实施方案中，R18是氢。
在某些实施方案中，R18是烷基。
在某些实施方案中，R18是氰基。
在某些实施方案中，R18是卤素。
在某些实施方案中，R18是烷氧基。
在某些实施方案中，R18是氟。
在某些实施方案中，R18是甲氧基。
在某些实施方案中，R18是乙氧基。
在某些实施方案中，R18是甲基
在某些实施方案中，R18是乙基。
在某些实施方案中，R18是羟基。
在某些实施方案中，R18是环烷基。
在某些实施方案中，R18是环丙基。
R19的实施方案
在某些实施方案中，R19是氢。
在某些实施方案中，R19是烷基。
在某些实施方案中，R19是氰基。
在某些实施方案中，R19是卤素。
在某些实施方案中，R19是烷氧基。
在某些实施方案中，R19是氟。
在某些实施方案中，R19是甲氧基。
在某些实施方案中，R19是乙氧基。
在某些实施方案中，R19是甲基
在某些实施方案中，R19是乙基。
在某些实施方案中，R19是羟基。
在某些实施方案中，R19是环烷基。
在某些实施方案中，R19是环丙基。
A1的实施方案
在某些实施方案中，A1是NR2。
在某些实施方案中，A1为-CHR2’-。
在某些实施方案中，A1是NH。
在某些实施方案中，A1是NCH3。
在某些实施方案中，A1是-CH2-。
A2和A22的实施方案
在某些实施方案中，A2为-O-。
在某些实施方案中，A2是-NH-。
在某些实施方案中，A2是-(C＝O)-。
在某些实施方案中，A22为-O-。
在某些实施方案中，A22是-NH-。
A3和A23的实施方案
在某些实施方案中，A3是键。
在某些实施方案中，A3是-CH2-。
在某些实施方案中，A3是-CH2-CH2-。
在某些实施方案中，A3是-CH2-CH2-CH2-。
在某些实施方案中，A3是-CH(CH3)-CH2-CH2-。
在某些实施方案中，A3为-CH2-CH(CH3)-CH2-。
在某些实施方案中，A3是-CH2-CH2-CH(CH3)-。
在某些实施方案中，A3是-CH2-CH2-CH2-CH2-。
在某些实施方案中，A3为-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-。
在某些实施方案中，A23是键。
在某些实施方案中，A23为-O-。
在某些实施方案中，A23为-CH2-。
A4和A14的实施方案
在某些实施方案中，A4是键。
在某些实施方案中，A4是-CH2-。
在某些实施方案中，A4是-(SO2)-CH2-。
在某些实施方案中，A4是-CH(CH2OH)-。
在某些实施方案中，A4是-NH-。
在某些实施方案中，A4为-O-。
在某些实施方案中，A14是键。
在某些实施方案中，A14是-CH2-。
在某些实施方案中，A14是-CH2-CH2-。
在某些实施方案中，A14为-CH(CH2OH)-。
在某些实施方案中，A14是-NH-。
在某些实施方案中，A14为-O-。
在某些实施方案中，A14是环烷基。
在某些实施方案中，A14是烷基氨基。
A5、A6和A15的实施方案
在某些实施方案中，A5是-CH-。
在某些实施方案中，A5为-N-。
在某些实施方案中，A6是-CH-。
在某些实施方案中，A6为-N-。
在某些实施方案中，A15为-O-。
在某些实施方案中，A15为-N-。
在某些实施方案中，A15是键。
A和A30的实施方案
在某些实施方案中，A是键。
在某些实施方案中，A是嘧啶基。
在某些实施方案中，A是吡啶基。
在某些实施方案中，A是吡唑基。
在某些实施方案中，A是3-氮杂双环[3.1.0]己基。
在某些实施方案中，A30是键。
在某些实施方案中，A30是嘧啶基。
在某些实施方案中，A30为吡啶基。
在某些实施方案中，A30为吡唑基。
在某些实施方案中，A30是-CH2-。
B的实施方案
1.在某些实施方案中，B是苯基，其中B任选被一个或两个独立地选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
2.在某些实施方案中，B是哌啶基，其中B任选被一个或两个独立地选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
3.在某些实施方案中，B是哌嗪基，其中B任选被一个或两个独立地选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
4.在某些实施方案中，B是1,4-二氮杂环庚基，其中B任选被一个或两个独立地选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
5.在某些实施方案中，B是1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基，其中B任选被一个或两个独立地选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
6.在某些实施方案中，B是1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基，其中B任选被一个或两个独立地选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
7.在某些实施方案中，B是2,8-二氮杂螺[4.5]癸基，其中B任选被一个或两个独立地选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
8.在某些实施方案中，B是2-氮杂螺[4.5]癸基，其中B任选被一个或两个独立地选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
9.在某些实施方案中，B是3-氮杂双环[3.1.0]己基，其中B任选被一个或两个独立地选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
10.在某些实施方案中，B是3-氮杂螺[5.5]十一烷基，其中B任选被一个或两个独立地选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
11.在某些实施方案中，B是7-氮杂螺[3.5]壬基，其中B任选被一个或两个独立地选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
12.在某些实施方案中，B是1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸基，其中B任选被一个或两个独立地选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
13.在某些实施方案中，B是1-氧杂螺[4.5]癸基，其中B任选被一个或两个独立地选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
14.在某些实施方案中，B是1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸基，其中B任选被一个或两个独立地选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
15.在某些实施方案中，B是1,8-二氮杂螺[4.5]癸基，其中B任选被一个或两个独立地选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
16.在某些实施方案中，B是8-氮杂螺[4.5]癸基，其中B任选被一个或两个独立地选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
17.实施方案1-16中任一项，其中B被独立地选自卤素、烷基和烷氧基的一个取代基取代。
18.实施方案1-16中任一项，其中B被独立选自卤素、烷基和烷氧基的两个取代基取代。
19.实施方案1-16中任一项，其中B被卤素取代。
20.实施方案1-16中任一项，其中B被氟取代。
21.实施方案1-16中任一项，其中B被烷基取代。
22.实施方案1-16中任一项，其中B被烷氧基取代。
23.实施方案1-16中任一项，其中B未被取代。
B2的实施方案
1.在某些实施方案中，B2是苯基，其中B2任选被一个或两个独立选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
2.在某些实施方案中，B2为哌啶基，其中B2任选被一个或两个独立选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
3.在某些实施方案中，B2是哌嗪基，其中B2任选被一个或两个独立地选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
4.在某些实施方案中，B2为1,4-二氮杂环庚基，其中B2任选被一个或两个独立选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
5.在某些实施方案中，B2是1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基，其中B2任选被一个或两个独立选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
6.在某些实施方案中，B2是1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基，其中B2任选被一个或两个独立选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
7.在某些实施方案中，B2是2,8-二氮杂螺[4.5]癸基，其中B2任选被一个或两个独立选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
8.在某些实施方案中，B2是2-氮杂螺[4.5]癸基，其中B2任选被一个或两个独立选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
9.在某些实施方案中，B2为3-氮杂双环[3.1.0]己酯，其中B2任选被一个或两个独立选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
10.在某些实施方案中，B2是3-氮杂螺[5.5]十一烷基，其中B2任选被一个或两个独立选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
11.在某些实施方案中，B2是7-氮杂螺[3.5]壬基，其中B2任选被一个或两个独立选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
12.在某些实施方案中，B2是8-氮杂螺[4.5]癸基，其中B2任选被一个或两个独立选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代。
13.实施方案1-12中任一项，其中B2被独立选自卤素、烷基和烷氧基的一个取代基取代。
14.实施方案1-12中任一项，其中B2被独立选自卤素、烷基和烷氧基的两个取代基取代。
15.实施方案1-12中任一项，其中B2被卤素取代。
16.实施方案1-12中任一项，其中B2被氟取代。
17.实施方案1-12中任一项，其中B2被烷基取代。
18.实施方案1-12中任一项，其中B2被烷氧基取代。
19.实施方案1-12中任一项，其中B2未被取代。
B3的实施方案
在某些实施方案中，B3是苯基。
在某些实施方案中，B3是哌啶基。
在某些实施方案中，B3是哌嗪基。
在某些实施方案中，B3是1,4-二氮杂环庚基。
在某些实施方案中，B3是1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基。
在某些实施方案中，B3是1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基。
在某些实施方案中，B3是2,8-二氮杂螺[4.5]癸基。
在某些实施方案中，B3是2-氮杂螺[4.5]癸基。
在某些实施方案中，B3是3-氮杂双环[3.1.0]己基。
在某些实施方案中，B3是3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基。
在某些实施方案中，B3是1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸基。
在某些实施方案中，B3是1-氧杂螺[4.5]癸基。
在某些实施方案中，B3是1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸基。
在某些实施方案中，B3是1,8-二氮杂螺[4.5]癸基。
在某些实施方案中，B3是8-氮杂螺[4.5]癸基。
n的实施方案
在某些实施方案中，n为0。
在某些实施方案中，n为1。
C的实施方案
1.在某些实施方案中，C是任选被一个或两个独立选自卤素(例如F)、羟基、烷基和烷氧基的取代基取代的氮杂环庚烷基。
2.在某些实施方案中，C是任选被一个或两个独立选自卤素(例如F)、羟基、烷基和烷氧基的取代基取代的环烷基。
3.在某些实施方案中，C是任选被一个或两个独立地选自卤素(例如F)、羟基、烷基和烷氧基的取代基取代的哌嗪基。
4.在某些实施方案中，C是任选被一个或两个独立地选自卤素(例如F)、羟基、烷基和烷氧基的取代基取代的氮杂环丁烷基。
5.在某些实施方案中，C是任选被一个或两个独立地选自卤素(例如F)、羟基、烷基和烷氧基的取代基取代的哌啶基。
6.实施方案1-5中任一项，其中C被独立选自卤素(例如F)、羟基、烷基和烷氧基的一个取代基取代。
7.实施方案1-5中任一项，其中C被独立选自卤素(例如F)、羟基、烷基和烷氧基的两个取代基取代。
8.实施方案1-7中任一项，其中C被卤素取代。
9.实施方案1-7中任一项，其中C被羟基取代。
10.实施方案1-7中任一项，其中C被烷基取代。
11.实施方案1-7中任一项，其中C被烷氧基取代。
12.实施方案1-7中任一项，其中C被氟取代。
13.实施方案-15中任一项，其中C未被取代。
D的实施方案
在某些实施方案中，D为/>
在某些实施方案中，D为
烷基的实施方案
在一个实施方案中，“烷基”是C1-C10烷基、C1-C9烷基、C1-C8烷基、C1-C7烷基、C1-C6烷基、C1-C5烷基、C1-C4烷基、C1-C3烷基或C1-C2烷基。
在一个实施方案中，“烷基”具有一个碳。
在一个实施方案中，“烷基”具有两个碳。
在一个实施方案中，“烷基”具有三个碳。
在一个实施方案中，“烷基”具有四个碳。
在一个实施方案中，“烷基”具有五个碳。
在一个实施方案中，“烷基”具有六个碳。
“烷基”的非限制性例子包括：甲基、乙基、丙基、丁基、戊基和己基。
“烷基”的其他非限制性例子包括：异丙基、异丁基、异戊基和异己基。
“烷基”的其他非限制性例子包括：仲丁基、仲戊基和仲己基。
“烷基”的其他非限制性例子包括：叔丁基、叔戊基和叔己基。
“烷基”的其他非限制性例子包括：新戊基、3-戊基和活性戊基。
环烷基的实施方案
在一个实施方案中，“环烷基”是C3-C8环烷基、C3-C7环烷基、C3-C6环烷基、C3-C5环烷基、C3-C4环烷基、C4-C8环烷基、C5-C8环烷基或C6-C8环烷基。
在一个实施方案中，“环烷基”具有三个碳。
在一个实施方案中，“环烷基”具有四个碳。
在一个实施方案中，“环烷基”具有五个碳。
在一个实施方案中，“环烷基”具有六个碳。
在一个实施方案中，“环烷基”具有七个碳。
在一个实施方案中，“环烷基”具有八个碳。
在一个实施方案中，“环烷基”具有九个碳。
在一个实施方案中，“环烷基”具有十个碳。
“环烷基”的非限制性例子包括：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基和环癸基。
卤代烷基的实施方案
在一个实施方案中，“卤代烷基”是C1-C10卤代烷基、C1-C9卤代烷基、C1-C8卤代烷基、C1-C7卤代烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C5卤代烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C3卤代烷基和C1-C2卤代烷基。
在一个实施方案中，“卤代烷基”具有一个碳。
在一个实施方案中，“卤代烷基”具有一个碳和一个卤素。
在一个实施方案中，“卤代烷基”具有一个碳和两个卤素。
在一个实施方案中，“卤代烷基”具有一个碳和三个卤素。
在一个实施方案中，“卤代烷基”具有两个碳。
在一个实施方案中，“卤代烷基”具有三个碳。
在一个实施方案中，“卤代烷基”具有四个碳。
在一个实施方案中，“卤代烷基”具有五个碳。
在一个实施方案中，“卤代烷基”具有六个碳。
“卤代烷基”的非限制性例子包括:
“卤代烷基”的其他非限制性例子包括:
“卤代烷基”的其他非限制性例子包括:
“卤代烷基”的其他非限制性例子包括:
芳基的实施方案
在一个实施方案中，“芳基”是6-碳芳族基团(苯基)。
在一个实施方案中，“芳基”是10碳芳族基团(萘基)。
在一个实施方案中，“芳基”是与杂环稠合的6-碳芳族基团，其中连接点是芳基环。“芳基”的非限制性例子包括二氢吲哚、四氢喹啉、四氢异喹啉和二氢苯并呋喃，其中每个基团的连接点在芳环上。
在一个实施方案中，“芳基”是与环烷基稠合的6-碳芳族基团，其中连接点是芳基环。“芳基”的非限制性例子包括二氢茚和四氢萘，其中每个基团的连接点在芳环上。
在一个实施方案中，“杂环”指具有一个氮和3、4、5、6、7或8个碳原子的环状环。
杂环的实施方案
在一个实施方案中，“杂环”指具有一个氮和一个氧以及3、4、5、6、7或8个碳原子的环。
在一个实施方案中，“杂环”指具有两个氮和3、4、5、6、7或8个碳原子的环。
在一个实施方案中，“杂环”指具有一个氧和3、4、5、6、7或8个碳原子的环。
在一个实施方案中，“杂环”指具有一个硫和3、4、5、6、7或8个碳原子的环。
“杂环”的非限制性例子包括氮丙啶、环氧乙烷、硫杂环丙烷、氮杂环丁烷、1,3-二氮杂环丁烷、氧杂环丁烷和硫杂环丁烷。
“杂环”的其他非限制性例子包括吡咯烷、3-吡咯啉、2-吡咯啉、吡唑烷和咪唑烷。
“杂环”的其他非限制性例子包括四氢呋喃、1,3-二氧戊环、四氢噻吩、1,2-氧硫杂环戊烷和1,3-氧硫杂环戊烷。
“杂环”的其他非限制性例子包括哌啶、哌嗪、四氢吡喃、1,4-二噁烷、硫杂环己烷、1,3-二噻烷、1,4-二噻烷、吗啉和硫代吗啉。
“杂环”的其他非限制性例子包括二氢吲哚、四氢喹啉、四氢异喹啉和二氢苯并呋喃，其中每个基团的连接点在杂环上。
“杂环”的非限制性例子还包括:
“杂环”的其他非限制性例子包括:
“杂环”的其他非限制性例子包括:
“杂环”的非限制性例子还包括:
“杂环”的非限制性例子还包括:
“杂环”的其他非限制性例子包括:
“杂环”的其他非限制性例子包括:
杂芳基的实施方案
在一个实施方案中，“杂芳基”是包含1、2、3或4个氮原子的5元芳族基团。
5元“杂芳基”的非限制性例子包括吡咯、呋喃、噻吩、吡唑、咪唑、三唑、四唑、异噁唑、噁唑、噁二唑、噁三唑、异噻唑、噻唑、噻二唑和噻三唑。
5元“杂芳基”的其他非限制性例子包括:
在一个实施方案中，“杂芳基”是包含1、2或3个氮原子的6元芳族基团(即，吡啶基、哒嗪基、三嗪基、嘧啶基和吡嗪基)。
具有1或2个氮原子的6元“杂芳基”的非限制性例子包括:
在一个实施方案中，“杂芳基”是包含1或2个选自氮、氧和硫的原子的9元双环芳族基团。
作为双环的“杂芳基”的非限制性例子包括吲哚、苯并呋喃、异吲哚、吲唑、苯并咪唑、氮杂吲哚、氮杂吲唑、嘌呤、异苯并呋喃、苯并噻吩、苯并异噁唑、苯并异噻唑、苯并噁唑和苯并噻唑。
双环的“杂芳基”的其他非限制性例子包括:
双环的“杂芳基”的其他非限制性例子包括:
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双环的“杂芳基”的其他非限制性例子包括:
在一个实施方案中，“杂芳基”是包含1或2个选自氮、氧和硫的原子的10元双环芳族基团。
双环的“杂芳基”的非限制性例子包括喹啉、异喹啉、喹喔啉、酞嗪、喹唑啉、噌啉和萘啶。
双环的“杂芳基”的其他非限制性例子包括:
在替代实施方案中，“杂芳基”被1、2、3或4个取代基“任选取代”。
双环的实施方案
在某些实施方案中，术语“双环”指其中两个环融合在一起且每个环独立地选自碳环、杂环、芳基和杂芳基的环体系。双环基团的非限制性实例包括:
当术语“双环”用于二价残基(例如接头)的情况中时，连接点可以位于单独的环上或相同的环上。在某些实施方案中，两个连接点位于同一环上。在某些实施方案中，两个连接点位于不同的环上。二价双环基团的非限制性例子包括:
在替代实施方案中，“双环”被1、2、3或4个取代基“任选地取代”。
分子的BRAF靶向配体部分的实施方案
在某些实施方案中，R1为CH3。
在某些实施方案中，A1是-N(CH2CH3)-。
在某些实施方案中，R4是氰基。
在某些实施方案中，R5为F。
在某些实施方案中，A2为O。
在某些实施方案中，R6是氢。
在某些实施方案中，BRAF靶向配体选自:
在某些实施方案中，BRAF靶向配体选自:
在某些实施方案中，BRAF靶向配体选自:
在某些实施方案中，BRAF靶向配体选自:
在某些实施方案中，BRAF靶向配体选自:
分子的Cereblon配体部分的实施方案在某些实施方案中，Cereblon配体选自
在某些实施方案中，Cereblon配体选自
本发明的目的还在于制造本发明所述化合物的方法。
本发明的化合物可根据以下方法制备。如以下一般方案1至3所述，并使用本领域技术人员已知的方法。
本发明的化合物可根据以下方法制备。这些方法将通过以下通用方案进行更详细的描述。一般而言，用于合成本发明化合物的步骤顺序在某些情况下也可以被修改。
方案1
在上述方案中，A2为-O-，n为1，R4为氰基，R5为氟。其余取代基和变量如本文所述。
步骤A-环化：通过在合适的溶剂如甲苯、四氢呋喃或其混合物中，在约110℃至约140℃的温度下将无水原甲酸三乙酯和胺(2)加入到2-氨基-5-羟基-苯甲酸或其衍生物(1)中12-18小时来实现以得到喹唑啉酮中间体(3)。对于用胺盐(HCl、TFA等)的环化，可以使用催化乙酸(0.1当量)。
步骤B-O-芳化：O-芳化以获得中间体(5)可通过在合适的碱(例如碳酸铯或叔丁醇钾)存在下，在合适的溶剂(例如N,N-二甲基甲酰胺、THF或其混合物)中，在室温下向喹唑啉酮中间体(3)中加入2,3,6-三氟苯甲腈(4)来实现。
步骤C-氨磺酰化：在合适的溶剂(例如N,N-二甲基甲酰胺)中向中间体(5)中加入氨磺酰中间体(可商购或如本文中方法I和方法II中所述)(6)和合适的碱(例如碳酸铯等)，可以通过氨磺酰化提供磺酰胺中间体(7)。适宜地，条件是在约60℃至约70℃之间持续约12小时至约18小时。
步骤D-N-Boc脱保护：在适当的溶剂(例如二氯甲烷或二噁烷)中，在室温下向磺酰胺中间体(7)中加入适当的酸(例如TFA或HCl)，可以得到脱保护的胺(8)。
步骤E-酸-胺偶联：
在合适的偶联剂如HATU或COMU的存在下，在合适的溶剂如N,N-二甲基甲酰胺中，将N,N-二异丙基乙基胺和酸(9)加入胺(8)中，可以提供本发明的喹唑啉酮衍生物(Ia)。反应的适宜条件为约0℃至约50℃持续约2小时至约16小时，特别是约10℃至约40℃持续约4小时至约14小时。
方案2
上述方案提供了根据本发明的化合物，其中A2是-NH-，n是1，R4是氰基，并且R5是氟。其余取代基和变量如本文所述。
步骤F-溴化的一般程序：在合适的溶剂(例如DMF)中向苯甲酸衍生物(11)中加入溴化剂(例如NBS等)可以提供溴代苄基衍生物(12)。反应适宜地在室温下进行。
步骤G-环化的一般程序：在合适的溶剂如甲苯、四氢呋喃或其混合物中，将无水原甲酸三乙酯和胺(13)加入到溴苄基衍生物(12)中，可以通过环化提供喹唑啉酮中间体(14)。反应的适宜条件是在约110℃至约140℃持续约12小时至约18小时。对于用胺盐(HCl、TFA等)的环化反应，可以使用催化乙酸(0.1当量)。
步骤H&I-胺-喹唑啉酮偶联和Boc保护的一般程序：步骤H：Pd-PEPPSI-IHept催化剂可在合适的碱(例如碳酸铯等)存在下，在合适的溶剂(例如1,4-二噁烷)中加入到胺(15)和喹唑啉酮中间体(14)，以获得(15)和(14)的偶联。步骤I：偶联后，在合适的碱(例如三甲胺或DIPEA)存在下，在合适的溶剂(例如乙腈)中，通过加入二碳酸二叔丁酯和DMAP，喹唑啉酮中间体可被Boc保护，以得到中间体(5’)。根据本发明，中间体(5’)可通过如上述方案1所示的类似步骤C、D和E进一步转化为式(Ib)化合物。
方案3
上述方案提供了根据本发明的化合物，其中A2是-O-，A3是键，A是键，n是0，A4是键，R4是氰基，并且R5是氟。其余取代基和变量如本文所述。
步骤J：在合适的溶剂中将2-氨基-5-羟基-苯甲酸或其衍生物(15)和原甲酸三乙酯加入胺(16)中可提供中间体(17)。适宜地，溶剂为甲苯、四氢呋喃或其混合物。适宜地，反应在约100℃至约140℃之间进行12小时至16小时。
步骤K：通过在合适的溶剂(例如甲醇)中于环境温度下加入氢和Pd/C约12小时至约18小时，可以从中间体(17)中去除Bn基团以提供中间体(18)。
步骤L：在合适的溶剂(例如THF)中，在环境温度和氮气氛下，向中间体(18)中加入2,3,6-三氟苯甲腈(19)和碳酸铯可以提供中间体(20)。
步骤M：在适当的溶剂(例如二氯甲烷)中，在室温和氮气氛下，向中间体(20)中加入氯铬酸吡啶(PCC)约12小时至18小时，可以得到酮中间体(21)。
步骤N：在合适的碱(例如碳酸铯)存在下，在合适的溶剂(例如DMF)中，在约60℃至70℃之间向中间体(21)中加入氨磺酰基(22)可提供酮中间体(23)。
步骤O：在合适的碱(例如DIPEA)存在下，在合适的溶剂(例如DMAc)中，在约60℃至约80℃之间向胺(24)中加入酮中间体(23)和Na(CN)BH3，可以提供本发明的喹唑啉酮衍生物(Ic)。
化合物的分离和纯化
如果需要，本文所述化合物和中间体的分离和纯化可通过任何合适的分离或纯化程序进行，例如过滤、提取、结晶、柱色谱、薄层色谱、厚层色谱、制备低压或高压液相色谱或这些程序的组合。适当的分离和分离程序的具体说明可参考下文的制备和实施例。但是，也可以使用其他同等的分离或隔离程序。本发明的手性化合物的外消旋混合物可以使用手性高效液相色谱和/或手性SFC分离。手性合成中间体的外消旋混合物也可以使用手性高效液相色谱和/或手性SFC分离。
本发明化合物的盐
在本发明的化合物为碱性的情况下，它们可以转化为相应的酸加成盐。转化通过用至少化学计量量的适当酸(例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等)和有机酸(例如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、顺丁烯二酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等)处理来完成。一种特定的盐是富马酸盐。通常，将游离碱溶解在惰性有机溶剂中，例如乙醚、乙酸乙酯、氯仿、乙醇或甲醇等，并将酸加入类似的溶剂中。温度保持在0℃至50℃之间。所得的盐自发沉淀，或者可能用低极性溶剂从溶液中析出。
在实施例中未描述其制备的情况下，本发明的化合物以及所有中间产品可根据类似方法或根据本文所述方法制备。起始材料可商购、本领域已知或可通过本领域已知的方法或类似方法制备。
应当理解，本发明中的本发明化合物可以在官能团上衍生，以提供能够在体内转化回母体化合物的衍生物。
药理学试验
本发明的化合物及其药学上可接受的盐具有有价值的药理学性质。根据下文给出的测试对化合物进行了研究。
材料
补充L-谷氨酰胺的DMEM无酚红培养基购自(Corning)。胎牛血清(FBS)购自Gibco(Grand Island,NY,USA)。HiBiT裂解分析缓冲液和试剂购自Promega(Madison,WI,USA)。A375(携带BRAF纯合V600E突变)购自ATCC。通过CRISPR技术在BRAFV600E蛋白的N端敲入HiBiT标签，从来自ATCC的A375细胞系产生A375.10细胞系。从康宁(Corning,NY,USA)获得细胞培养瓶和384孔黑色平底聚苯乙烯TC处理的微孔板。
HiBiT细胞BRAFV600E降解试验
在测定前，将A375.10细胞系保持在补充10％胎牛血清(FBS)的DMEM无酚红培养基中。在化合物处理后，BRAFV600E的降解是基于通过裂解细胞并随后加入HiBiT裂解分析试剂对HiBiT发光信号进行定量来确定的。检测到的发光信号与细胞中的总BRAFV600E蛋白水平相关。简而言之，向384孔板以11个半对数稀释加入最高浓度10μM的测试化合物，一式两份。然后，将30uL的A375.10细胞系悬液以每孔7500个细胞的细胞密度分配至384孔板的第1-24列。在分析持续时间(6或24小时)内，将平板保持在37℃和5％二氧化碳下。在与化合物孵育所需时间后，将30uL的含LgBiT蛋白(稀释1:100)和发光底物(稀释1:50)的/>HiBiT裂解缓冲液加入到分析板的第1-23列的细胞中。平板在室温下在工作台上孵育30分钟。最后，在EnVisionTM Multilabel Reader(PerkinElmer,SantaClara,CA,USA)上采集HiBiT发光信号。
在化合物存在下测量的发光响应的量化相对高信号/无降解对照(未处理的细胞+裂解检测试剂)和低信号/完全降解对照(未处理的细胞，无裂解检测试剂)标准化。数据通过4参数逻辑拟合进行分析以生成S形剂量反应曲线。DC50是总细胞BRAFV600E的恰好50％被降解的化合物浓度。Emax，或每种化合物的最大效应，代表化合物处理后细胞中残留蛋白质的量，提供于表1A、表1B、表1C和表1D。
表1A:DC50值和Emax值
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表2B:DC50值和Emax值
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表3C:DC50值和Emax值
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表4D:DC50值和Emax值
Ex. HiBit 24h DC50[nM] HiBit 24h Emax[％]
228 18.65 7.82
药物组合物
本发明的选定化合物或其药学上可接受的盐可作为净化学品施用，但通常作为药物组合物施用，该药物组合物包括对需要治疗本发明所述任何疾病的宿主(通常为人类)的有效量。因此，本公开提供了用于本文所述任何用途的药物组合物，其包含有效量的化合物或药学上可接受的盐以及至少一种药学上可接受的载体。药物组合物可包含化合物或盐作为唯一的活性药物，或在替代实施方案中，包含化合物和至少一种另外的活性剂。
在某些实施方案中，药物组合物为单位剂型中包含约0.001mg至约1000mg、约0.01mg至约800mg、约1mg至约800mg、或约200mg至约600mg的活性化合物，并且任选地包含约0.1mg至约2000mg、约10mg至约1000mg、约100mg至约800mg或约200mg至约600mg的另外活性剂的剂型。实例为含有至少约，或不超过，0.001、0.005、0.010、0.10、1、5、10、25、50、100、200、250、300、400、500、600、700或750mg活性化合物或其盐的剂型。
在某些实施方案中，药物组合物为包含约70mg活性化合物或其盐的剂型。在某些实施方案中，药物组合物为包含约400mg活性化合物或其盐的剂型。在某些实施方案中，药物组合物为包含约800mg活性化合物或其盐的剂型。
在某些实施方案中，该化合物每天两次施用于有需要的患者。
本文公开的化合物可以以包含常规药学上可接受载体的剂量单位制剂的形式，经口服、局部、系统、非肠道、通过吸入或喷雾、舌下、经植入(包括眼植入)、经皮、经口腔施用、经直肠、作为眼用溶液、注射(包括静脉内)、主动脉内、颅内、真皮下、腹膜内、皮下、经鼻、舌下或直肠，或通过其他方式施用。
药物组合物可以配制成任何药学上有用的形式，例如作为固体剂型、液体、气雾剂、霜剂、凝胶、丸剂、注射液或输注液、胶囊、片剂、糖浆剂、透皮贴剂、皮下贴剂、干粉、吸入制剂、在医疗装置中、栓剂、含服或舌下制剂、肠胃外制剂或眼用溶液。一些剂型，例如片剂和胶囊，被细分为适当大小的单位剂量，其包含适当量的活性组分，例如达到所需目的的有效量。
载体包括赋形剂和稀释剂，并且应当具有足够高的纯度和足够低的毒性，以使其适合于以有效量施用于被治疗的患者。载体可以是惰性的，或可以具有自身的药物益处。与化合物结合使用的载体的量足以提供每单位剂量化合物的实际施用材料量。
载体的种类包括但不限于粘合剂、缓冲剂、着色剂、稀释剂、崩解剂、乳化剂、调味剂、助流剂、润滑剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂、制片剂和湿润剂。一些载体可能被列于一个以上的类别中，例如，植物油可能在某些制剂中用作润滑剂，在其他制剂中用作稀释剂。示例性的药学上可接受的载体包括糖、淀粉、纤维素、粉末黄蓍胶、麦芽、明胶；滑石和植物油。药物组合物中可包含任选的活性剂，其基本上不干扰本发明化合物的活性。
药物组合物/组合可被配制用于口服给药。这些组合物可包含达到所需结果的任何量的活性化合物，例如0.1至99重量％(重量)的化合物，通常至少约5重量％的化合物。一些实施方案包含约25重量％至约50重量％或约5重量％至约75重量％的化合物。
在某些实施方案中，LNP包含阳离子或可电离的极限。例子包括但不限于：美国专利公开号20060083780和20060240554；美国专利号5,208,036号；5,264,618；5,279,833；5,283,185；5,753,613；和5,785,992；和PCT公开号WO 96/10390，其公开内容为所有目的通过引用整体纳入本文。
适合于直肠给药的制剂有时以单位剂量栓剂的形式出现。这些可以通过将活性化合物与一种或多种常规固体载体(例如可可脂)混合，然后将所得混合物成型来制备。
适用于皮肤局部应用的制剂优选采用软膏剂、霜剂、洗剂、糊剂、凝胶、喷雾剂、气雾剂或油的形式。可使用的载体包括凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、醇类、透皮增强剂及其两种或更多种的组合。
适合经皮给药的制剂可以以适合与接受者的表皮长时间保持紧密接触的离散贴片的形式存在。适用于经皮给药的制剂也可通过电离子电渗法递送(例如，参见Pharmaceutical Research 3(6):318(1986))并且有时采取活性化合物的任选缓冲水溶液的形式。在一个实施方案中，提供微针贴片或装置用于将药物输送穿过或进入生物组织，特别是皮肤。微针贴片或装置允许药物以临床相关的速率跨过或进入皮肤或其他组织屏障，对组织的损伤、疼痛或刺激最小或无。
适合施用于肺部的制剂可通过多种被动呼吸驱动和主动功率驱动的单/多剂量干粉吸入器(DPI)递送。最常用于呼吸递送的装置包括喷雾器、计量吸入器和干粉吸入器。有多种类型的喷雾器可用，包括喷射喷雾器、超声喷雾器和振动网式喷雾器。选择合适的肺递送装置取决于参数，例如药物的性质及其制剂、作用部位和肺的病理生理。
另外的药物组合物
式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物和/或其药学上可接受的盐可用作治疗活性物质，例如以药物制剂的形式。药物制剂可以口服给药，例如以片剂、包衣片剂、糖衣丸、硬明胶胶囊和软明胶胶囊、溶液、乳剂或混悬剂的形式。然而，给药也可通过直肠(例如以栓剂的形式)或非肠道(例如以注射液的形式)进行。
式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物和/或其药学上可接受的盐可与药学上惰性的、无机的或有机的载体一起加工用于制备药物制剂。乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其盐等可用作例如片剂、包衣片剂、糖衣丸和硬明胶胶囊的载体。用于软明胶胶囊的合适载体是例如植物油、蜡、脂肪、半固体和液体多元醇等。根据活性物质的性质，软明胶胶囊的情况中通常不需要载体。用于产生溶液和糖浆剂的合适载体为例如水、多元醇、甘油、植物油等。栓剂的合适载体为，例如，天然或硬化油、蜡、脂肪、半液体或液体多元醇等。
此外，药物制剂可包含药学上可接受的辅助物质，例如防腐剂、增溶剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、调味剂、用于改变渗透压力的盐、缓冲剂、掩蔽剂或抗氧化剂。它们还可以包含其他有治疗价值的物质。
本发明还提供了包含式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物和/或其药学上可接受的盐和治疗惰性载体的药物以及其制备方法，该方法包括将一种或多种式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物和/或其药学上可接受的盐和(如果需要的话)一种或多种其他治疗有价值的物质与一种或多种治疗惰性载体一起制成盖仑施用形式。
剂量可以在很宽的限度内变化，并且当然，在每一特定情况下，必须根据个体需求进行调整。在口服给药的情况下，成人的剂量可为每天约0.01mg至约1000mg的式I、式II、式III、式IV、式V或式VI化合物或其相应量的药学上可接受的盐。每日剂量可以作为单一剂量或分次剂量给药，并且另外，当发现有指示时，也可以超过上限。
以下实施例说明了本发明，但不限制本发明，而仅作为本发明的代表。药物制剂适宜地包含约1-500mg，特别是1-100mg的式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物及其相应量的药学上可接受的盐。根据本发明的组合物的例子是:
实施例A
以下组成的片剂以通常方式制造:
表5：可能的片剂组成
制造程序
1.将成分1、2、3和4混合，并用纯水制粒。
2.颗粒在50℃下干燥。
3.将颗粒通过合适的研磨设备。
4.加入成分5并混合三分钟；在合适的压机上压缩。
实施例B-1
制造以下组成的胶囊:
表6：可能的胶囊成分组成
制造程序
1.将成分1、2和3在合适的混合器中混合30分钟。
2.加入成分4和5，混合3分钟。
3.填充入合适的胶囊中。
式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物、乳糖和玉米淀粉首先在混合器中混合，然后在粉碎机中混合。将混合物返回至混合器；向其中加入滑石并充分混合。通过机器将混合物填入合适的胶囊中，例如硬明胶胶囊。
实施例B-2
制备以下组成的软明胶胶囊:
成分 mg/胶囊
式(I、II、III、IV、V或VI)化合物 5
黄蜡 8
氢化大豆油 8
部分氢化植物油 34
大豆油 110
总计 165
表47：可能的软明胶胶囊成分组成
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表8：可能的软明胶胶囊组成
制造程序
将式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物溶解于其他成分的温热熔体中，并将混合物填入适当大小的软明胶胶囊中。填充的软明胶胶囊按照通常的程序进行处理。
实施例C
制备以下组成的栓剂:
成分 mg/栓剂
式(I、II、III、IV、V或VI)化合物 15
栓剂物料 1285
总计 1300
表9：可能的栓剂组成
制造程序
将栓剂物料在玻璃或钢制容器中熔化，充分混合并冷却至45℃。然后，向其中加入式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的细粉末化合物，并搅拌直至其完全分散。将混合物倒入合适大小的栓剂模具中，冷却；然后将栓剂从模具中取出，单独包装在蜡纸或金属箔中。
实施例D
制造以下组成的注射液:
表10：可能的注射液组成
制造程序
将式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物溶解在聚乙二醇400和注射用水(部分)的混合物中。用乙酸将pH值调节至5.0。通过加入剩余量的水将体积调节至1.0ml。将溶液过滤，用适当的超量装入小瓶中并灭菌。
实施例E
制造以下组成的扁囊剂:
成分 mg/扁囊
式(I、II、III、IV、V或VI)化合物 50
乳糖，细粉 1015
微晶纤维素(AVICEL PH 102) 1400
羧甲基纤维素钠 14
聚乙烯吡咯烷酮K 30 10
硬脂酸镁 10
调味添加剂 1
总计 2500
表11：可能的扁囊组成
制造程序
将式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物与乳糖、微晶纤维素和羧甲基纤维素钠混合，并与聚乙烯吡咯烷酮在水中的混合物一起制粒。将颗粒与硬脂酸镁和调味添加剂混合，并填充入扁囊中。
一般合成
本文所述的化合物可通过本领域技术人员已知的方法制备。在一个非限制性实例中，所公开的化合物可使用以下方案制备。
为方便起见，本发明的具有立体中心的化合物可以在没有立体化学的情况下绘制。本领域技术人员将认识到，纯对映异构体和非对映异构体可以通过本领域已知的方法制备。获得光学活性材料的方法的实例至少包括以下：
i)晶体物理分离——人工分离单个对映异构体的宏观晶体的技术。如果存在分离的对映异构体的晶体，即材料为团聚体，并且晶体在视觉上是不同的，则可以使用该技术；
ii)同时结晶-一种将单个对映异构体从外消旋物溶液中单独结晶的技术，仅在对映异构体为固态团聚体时才有可能；
iii)酶促拆分——通过对映异构体与酶的不同反应速率部分或完全分离外消旋物的技术；
iv)酶促不对称合成——其中合成中的至少一个步骤使用酶促反应以获得所需对映异构体的对映异构体纯的或富集的合成前体的合成技术；
v)化学不对称合成——其中所需的对映异构体由非手性前体在产品中产生不对称性(即，手性)的条件下合成的合成技术，这可通过手性催化剂或手性助剂来实现；
vi)非对映异构体分离——外消旋化合物与对映异构体纯的试剂(手性助剂)反应，将单个对映异构体转化为非对映异构体的技术。所得非对映异构体随后由于其现在更明显的结构差异通过色谱或结晶分离，手性助剂随后被去除以获得所需的对映异构体；
vii)一级和二级不对称转化——来自外消旋物的非对映异构体快速平衡而在来自所需对映异构体的非对映异构体的溶液中产生数量上的优势，其中来自所需对映异构体的非对映异构体的优先结晶扰动该平衡使得最终原则上所有材料均从所需的对映异构体转化为结晶的非对映异构体。然后从非对映异构体释放所需的对映异构体；
viii)动力学拆分——该技术指通过对映异构体与手性、非外消旋试剂或催化剂在动力学条件下的不同反应速率实现外消旋物的部分或完全拆分(或部分拆分化合物的进一步拆分)；
ix)由非外消旋前体进行的对映异构体特异性合成——一种从非手性起始材料中获得所需对映异构体的合成技术，其中立体化学完整性在合成的过程中未受到或仅受到最低程度的损害；
x)手性液相色谱——一种通过外消旋物的对映异构体与固定相的不同相互作用，在液体流动相中分离外消旋物对映异构体的技术(包括小瓶手性HPLC)。固定相可以由手性材料制成，或者流动相可以包含额外的手性材料以引起不同的相互作用；
xi)手性气相色谱——通过气相流动相与含有固定非外消旋手性吸附相的柱的不同相互作用使外消旋物挥发并分离对映异构体的技术；
xii)用手性溶剂提取——一种通过将一种对映异构体优先溶解于特定手性溶剂中来分离对映异构体的技术；
xiii)跨手性膜的转运——外消旋物与薄膜屏障接触的技术。屏障分离两种可混溶的流体，一种包含外消旋物，且驱动力(例如浓度或压力差)导致优先传输通过膜屏障。由于膜的非外消旋手性性质仅允许外消旋物的一种对映异构体通过，因此发生分离；
xiv)在一个实施方案中使用模拟移动床色谱。市场上有各种各样的手性固定相。
本发明代表性化合物的合成
缩写
ACN＝乙腈；Boc＝叔丁氧基羰基；dba＝二亚苄基丙酮；COMU＝(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-碳鎓六氟磷酸盐，1-[(1-(氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)-二甲基氨基-吗啉代)]脲鎓-六氟磷酸盐；DBU＝1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯；DCM＝二氯甲烷；DMAc＝二甲基乙酰胺；DMAP＝4-二甲基氨基吡啶；DMF＝二甲基甲酰胺；DMSO＝二甲基亚砜；dppf＝1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁；ESI＝电喷雾电离；EtOAc＝乙酸乙酯；Ex＝实施例；HATU＝六氟磷酸氮杂苯并三唑四甲基脲；HPLC＝高效液相色谱；IPA＝异丙醇；LC-MS＝液相色谱联用质谱；MS＝质谱；MTBE＝甲基叔丁基醚；NBS＝N-溴代丁二酰亚胺；NIS＝N-碘代丁二酰亚胺；NMR＝核磁共振；PEPPSI＝吡啶增强的预催化剂制备、稳定和引发；PG＝保护基团；pin＝频哪醇合；rt＝室温；SFC＝超临界流体色谱；TEA＝三乙胺；Tf＝三氟甲磺酸盐；TFA＝三氟乙酸；THF＝四氢呋喃；TLC＝薄层色谱；Ts＝甲苯磺酸盐；UPLC＝超高效液相色谱。
中间体的合成
方案I:
方案I的一般程序:向1-1(1毫摩尔)和1-2(2毫摩尔)在二噁烷(3毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(2毫摩尔)。将所得溶液在70-110℃的密封管中加热24小时以产生1-3。然后将反应混合物冷却至室温，用水稀释，用乙酸乙酯萃取。合并的乙酸乙酯萃取物用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物通过柱色谱(二氧化硅，梯度：0-3％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到1-3。
中间体4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯由4-(4-氨基苯基)-1-哌啶羧酸叔丁酯(CAS#170011-57-1)按照一般程序(N,N-二异丙基乙胺/二噁烷)合成。产率-45％；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.75(s,1H),6.94(d,J＝8.16Hz,2H),6.60(d,J＝7.88Hz,2H),5.64(d,J＝6.96Hz,1H),4.28-4.24(m,1H),4.07-4.00(m,2H),2.79-2.64(m,4H),2.53-2.48(m,2H),2.11-2.05(m,1H),1.89-1.81(m,1H),1.71-1.64(m,2H0,1.40-1.34(m,10H)；LC-MS(ES-):m/z 386.3[M-H]-。
中间体4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯
4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成遵循一般程序(DIPEA/DMF)。产率-50％；LC-MS(ES+):m/z 389.2[M+H]+。
方案II:
方案II的一般程序：在室温下，向溶于甲醇(0.1M)的2-1中加入氯化氢(4M于1,4-二噁烷中，5当量)。)并将反应混合物在40℃下加热2小时。挥发性物质在减压下蒸发，得到2-2。
中间体3-((4-(哌啶-4-基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐
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3-((4-(哌啶-4-基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐由4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯按照一般程序合成。产率-88％；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),8.84(brs,1H),8.77(brs,1H),6.95(d,J＝8.44Hz,2H),6.66(d,J＝8.48Hz,2H),4.29(dd,J＝11.4,4.72Hz,1H),3.35-3.29(m,2H),2.99-2.91(m,2H),2.71-2.53(m,3H),2.10-2.05(m,1H),1.89-1.71(m,5H)；LC-MS(ES+):m/z288.2[M+H]+。
中间体3-((4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐
3-((4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐按照一般程序(Boc-脱保护)合成。产率-92％；1H NMR(400MHz,MeOD):δ＝7.38(d,8.52Hz,2H),7.21(d,J＝8.6Hz,2H),4.71-4.65(m,1H),3.53(brs,4H),3.40(brs,4H),2.74-2.66(m,2H),2.04(brs,2H)；LC-MS(ES+):m/z 289.1[M+H]+。
中间体3-(3-氟-4-哌啶-4-基-苯基氨基)-哌啶-2,6-二酮盐酸盐的合成:
步骤1：将碳酸钠(6.14克，57.89毫摩尔)加入4-溴-3-氟苯胺(5.00克，26.3毫摩尔)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(8.95克，29.0毫摩尔)在水(12毫升)、THF(60毫升)和甲醇(24毫升)中的搅拌溶液中，且烧瓶用氩气充分清洗。加入PdCl2(dppf).二氯甲烷(430毫克，526微摩尔)，反应混合物用氮气脱气，然后在80℃下加热12小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，通过短硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯洗涤。合并的有机提取物用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过柱色谱(15％乙酸乙酯-己烷)纯化，得到4-(4-氨基-2-氟-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(6.1克，20.9毫摩尔，79％收率)，为淡黄色固体。LCMS(ES+):m/z 293[M+H]+。
步骤2:将碳酸铯(19.73克，60.54毫摩尔)加入到4-(4-氨基-2-氟-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(5.9克，20.2毫摩尔)和2,6-二苄氧基-3-碘-吡啶(9.26克，22.2毫摩尔)在t-BuOH(60毫升)中的搅拌溶液中，所得混合物用氩气脱气，和在惰性气氛下加入Pd2(dba)3(924mg,1.01mmol),RuPhos(942mg,2.02mmol)。将所得混合物在100℃下加热18小时。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，通过短硅藻土垫过滤，并用乙酸乙酯洗涤。合并的有机提取物用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过柱色谱(15％乙酸乙酯-己烷)纯化，得到淡黄色固体的4-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2-氟-苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(5.9g，10.1毫摩尔，50％收率)。LCMS(ES+):m/z 582[M+H]+。
步骤3:将10％ Pd-C(50％湿，4.6克)加入到乙酸乙酯(40毫升)中的4-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2-氟-苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(4.6克，7.91毫摩尔)的搅拌氮气脱气溶液中。将所得混合物在环境温度和氢气囊压力下搅拌20小时。将反应混合物通过小硅藻土垫过滤，并用乙酸乙酯洗涤。减压蒸发合并的滤液，并通过柱色谱(40％乙酸乙酯在己烷中)纯化，得到蓝色固体的4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.6克，6.41毫摩尔，81％收率)。LCMS(ES+):m/z 406[M+H]+。
步骤4：在10℃下，将二噁烷-HCl(4M，30mL，130mmol)加入到4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.3g，3.21mmol)中。将所得混合物加热至环境温度并搅拌16小时。将反应混合物减压浓缩，用醚研磨并冻干，得到绿色固体的3-[3-氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮(840mg,2.73mmol,85.25％产率)。LCMS(ES+):m/z 306[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.79(s,1H),9.00(br s,1H),8.85-8.83(m,1H),6.96-6.91(m,1H),6.50-6.45(m,2H),4.34-4.30(m,1H),3.32-3.29(m,2H),2.98-2.93(m,3H),2.77-2.69(m,1H),2.60-2.56(m,1H),2.08-2.05(m,1H),1.92-1.81(m,5H)。
2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸和2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸的合成:
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步骤1：外消旋化合物4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(10克，23.67毫摩尔)用手性SFC分离(流动相：40％ IPA-CO2；流速：120mL/min；循环时间:7.6分钟；回压:100巴；紫外:210nm)处理，得到灰白色固体的峰1(第一洗脱的)4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.9g，7.13毫摩尔，29％收率，99.252％ee)，和白色固体的峰2(第二洗脱的)叔丁基4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.1g,7.44mmol,30％产率,94.588％ee)。
步骤2:在氮气氛下，在0℃下，向4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(400mg，986.53μmol)的无水二氯甲烷(10mL)的搅拌溶液中滴加4.0M HCl于1,4-二噁烷(4mL)中的溶液。将所得反应混合物在环境温度下搅拌2小时。反应完成后，在减压下从反应混合物中除去过量的溶剂以得到粗产物，将其与二氯甲烷共蒸馏，得到(3S)-3-[3-氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮(300mg，871.54μmol，88％产率)，为灰白色固体。LCMS(ES+):m/z 306.2[M+H]+。
步骤3:在0℃下，向4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(300mg，739.90μmol)在二氯甲烷(15mL)中的充分搅拌的溶液中加入HCl在二噁烷(3mL)中的4.0M溶液。所得反应混合物在室温下搅拌1小时。反应完成后，将反应混合物真空浓缩，并用乙醚洗涤，得到(3R)-3-[3-氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮(250mg，699.96μmol，95％产率)，为灰白色固体。LCMS(ES+):m/z306.2[M+H]+。
3-(2-氟-4-哌啶-4-基-苯基氨基)-哌啶-2,6-二酮盐酸盐的合成:
步骤1:将碳酸钠(6.14克，57.89毫摩尔)加入4-溴-2-氟苯胺(5.00克，26.3毫摩尔)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(8.95克，29.0毫摩尔)在水(12毫升)、THF(60毫升)和甲醇(24毫升)中的搅拌溶液中。所得混合物用氩气脱气，且在惰性气氛下加入PdCl2(dppf).二氯甲烷(430mg，526μmol)。将所得混合物在80℃加热12小时。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，通过短硅藻土垫过滤，并用乙酸乙酯洗涤。合并的有机提取物用水、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过柱色谱(15％乙酸乙酯-己烷)纯化，得到4-(4-氨基-3-氟-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(6.1克，20.9毫摩尔，79％产率)，为淡黄色固体。LCMS(ES+):m/z 293[M+H]+。
步骤2:将碳酸铯(19.73克，60.54毫摩尔)加入到4-(4-氨基-3-氟-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(5.9克，20.2毫摩尔)和2,6-二苄氧基-3-碘-吡啶(9.26克，22.2毫摩尔)在t-BuOH(60毫升)中的搅拌溶液中。所得混合物用氩气脱气，在惰性气氛下加入Pd2(dba)3(924mg，1.01mmol)和RuPhos(942mg，2.02mmol)。将所得混合物在100℃下加热18小时。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，通过短硅藻土垫过滤，并用乙酸乙酯洗涤。合并的有机提取物用水、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过柱色谱(10％乙酸乙酯-己烷)纯化，得到淡黄色固体的4-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-3-氟-苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(5.9克，10.1毫摩尔，50％产率)。LCMS(ES+):m/z582[M+H]+。
步骤3:将10％ Pd-C(50％湿，4.6克)加入到乙酸乙酯(40毫升)中4-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-3-氟-苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(4.6克，7.91毫摩尔)的搅拌脱气溶液中。将所得混合物在环境温度和氢气囊压力下搅拌20小时。将反应混合物通过短硅藻土垫过滤，并用乙酸乙酯洗涤。减压蒸发合并的滤液，并通过柱色谱(40％乙酸乙酯-己烷)纯化，得到4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.6克，6.41毫摩尔，81％产率)，为蓝色固体。LCMS(ES+):m/z 406[M+H]+。
步骤4:在10℃下，将二噁烷HCl(4M，10mL，40mmol)加入到4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.3g，3.21mmol)中。将所得混合物加热至环境温度并搅拌16小时。将反应混合物减压浓缩，醚研磨并冻干，得到3-[2-氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(840mg,2.73mmol,85％产率)，为绿色固体。LCMS(ES+):m/z 306[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.82(s,1H),8.85(br s,1H),8.69-8.68(m,1H),6.92-6.89(m,1H),6.83-6.77(m,2H),4.40-4.36(m,2H),3.37-3.31(m,2H),2.98-2.90(m,2H),2.76-2.71(m,2H),2.58-2.56(m,1H),2.05-1.73(m,6H)。
中间体用2-溴乙酸叔丁酯烷基化的一般程序:2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯的合成
将3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(1克，3.09毫摩尔)溶于N,N-二甲基乙酰胺(15毫升)中，并加入N,N-二异丙基乙胺(1.60克，12.4毫摩尔，2.15毫升)。将混合物冷却至0℃，加入2-溴乙酸叔丁酯(663毫克，3.40毫摩尔，498微升)。混合物在0℃下搅拌4小时。反应用乙酸乙酯稀释，用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。将有机层浓缩并通过硅胶色谱(0-10％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到白色固体的2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(0.84g，2.09毫摩尔，68％产率)。LCMS(ES+):m/z 402.2[M+H]+。
以下化合物系使用一般程序合成，如用于从3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐合成2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯。
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中间体的叔丁酯裂解的一般程序:2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸，三氟乙酸盐
将2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯溶解于二氯甲烷(5mL)中，并加入TFA(1.61mL，20.9mmol)。将反应混合物在40℃加热4小时，且反应完成。挥发性物质在减压下蒸发。将材料冷冻至-78℃，经历高真空，并解冻以提供致密固体。将固体重新溶解在甲醇:二氯甲烷(1:4)中，滴加MTBE，直至形成沉淀。将悬浮液进行超声处理，并在抽吸下过滤固体。通过过滤收集绿色固体，得到2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸，三氟乙酸盐(0.95g，2.07mmol，97％产率)。LCMS(ES+):m/z 346.4[M+H]+。
以下中间体由合适的原料使用用于2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸，三氟乙酸盐合成的一般程序合成。
2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸和2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸的合成:
步骤1.在0℃下向充分搅拌的2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(330毫克，786.67微摩尔)在二氯甲烷(25毫升)中的溶液加入在二噁烷(3毫升)中的4.0M氯化氢溶液，所得反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物在真空下浓缩，用乙醚洗涤，得到2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(300mg，750.29μmol，95％产率)，为灰白色固体。LCMS(ES+):m/z 364.5[M+H]+。
步骤2.在0℃下向充分搅拌的2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁基酯(350毫克，834.35微摩尔)在二氯甲烷(30毫升)中的溶液加入二噁烷(3毫升)中的氯化氢溶液4.0M，将所得反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物真空浓缩，用乙醚洗涤，得到2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(320mg，800.31μmol，96％产率)，为灰白色固体。LCMS(ES+):m/z 364.5[M+H]+。
2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]哌嗪-1-基]乙酸的合成:
步骤1:在室温下，向1,2-二氟-4-硝基苯(2克，12.57毫摩尔，1.39毫升)、哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.34克，12.57毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(8.12克，62.86毫摩尔，10.95毫升)。将反应混合物加热至110℃持续12小时。用水(10mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2x 30mL)萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，得到粗化合物。粗化合物通过硅胶柱色谱纯化，用石油醚中20-25％乙酸乙酯洗脱，得到黄色固体的4-(2-氟-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4g，12.30毫摩尔，98％产率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝8.01-8.07(m,2H),7.19(t,J＝12.80Hz,1H),3.49(t,J＝7.20Hz,4H),3.27(t,J＝6.80Hz,4H),1.43(s,9H)。
步骤2:向4-(2-氟-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4.1克，12.60毫摩尔)在乙醇(30毫升)、水(8毫升)溶液中加入铁(3.52克，63.01毫摩尔，447.70微升)、氯化铵(2.02克，37.81毫摩尔，1.32毫升)，并在70℃下搅拌4小时。完成后，反应混合物通过硅藻土垫过滤，并用乙酸乙酯(200mL)洗涤。滤液用水(80mL)、碳酸氢钠溶液(60mL)和盐水(60mL)洗涤。有机层用硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗化合物。粗化合物通过硅胶柱色谱纯化，用60％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到4-(4-氨基-2-氟-苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.7克，12.31毫摩尔，98％产率)。LCMS(ESI):m/z 296.1[M+H]+。
步骤3:向4-(4-氨基-2-氟-苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2克，6.77毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液中加入碳酸氢钠(1.99克，23.70毫摩尔，921.76微升)，然后加入3-溴哌啶-2,6-二酮(3.25克，16.93毫摩尔)。将反应混合物在70℃下搅拌14小时。完成后，用水(60mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3x200 mL)萃取。有机层用盐水溶液(10mL)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗产物，该粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用70％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.73g，4.96mmol，73％产率)。LCMS(ESI):m/z 407.1[M+H]+。
步骤4:在0℃下向4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.7g，6.64mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的搅拌溶液中加入1,4-二噁烷(4M,10mL)中的4M氯化氢溶液。反应混合物在室温下搅拌2小时。完成后，将反应混合物真空浓缩，用乙醚研磨，得到3-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟-苯甲酰基]-5-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1.6克，2.38毫摩尔，97％产率)。LCMS(ESI):m/z 307.0[M+H]+。
步骤5:在密封管中加入N,N-二甲基甲酰胺(15毫升)中的3-(3-氟-4-哌嗪-1-基-苯胺基)哌啶-2,6-二酮(2克，6.53毫摩尔)，加入三乙胺(2.64克，26.12毫摩尔，3.64毫升)，然后在室温下加入2-溴乙酸叔丁酯(1.40克，7.18毫摩尔，1.05毫升)。反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完成后，向反应混合物中加入水(50mL)，用乙酸乙酯(2x100mL)萃取。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到粗产物，其用乙醚洗涤，得到2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]哌嗪-1-基乙酸叔丁酯(1.7克，3.37毫摩尔，产率52％)。LCMS(ESI):m/z 421.2[M+H]+。
步骤6:向2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯(1.7克，4.04毫摩尔)在1,4-二噁烷(10毫升)中的搅拌溶液中加入二噁烷(4M，20毫升)中的4M氯化氢溶液。反应混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物真空浓缩，得到粗产物，其用乙醚研磨，得到2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]哌嗪-1-基]乙酸(1.5g，3.28mmol，81％产率)。LCMS(ESI):m/z 365.2[M+H]+。
2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸的合成:
步骤1:向4-溴-3,5-二氟-苯胺(2.49克，11.96毫摩尔)在THF(20毫升)、甲醇(5毫升)和水(5毫升)的搅拌溶液中加入4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(5.55g,17.94mmol)，并用氮气脱气20分钟。向反应混合物中加入Pd(dppf)Cl2.二氯甲烷(0.98克，1.20毫摩尔)、碳酸钠(3.80克，35.89毫摩尔，1.50毫升)并在100℃加热12小时。完成后，过滤反应混合物并减压浓缩以得到粗产物，其经硅胶柱色谱纯化，用20％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到4-(4-氨基-2,6-二氟-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(3g,7.06mmol,59％产率)，为灰白色固体。LCMS(ESI):m/z 255.1[M-56+H]+。
步骤2:将4-(4-氨基-2,6-二氟-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(2.1克，6.77毫摩尔)在1,4二噁烷(25毫升)中的溶液用N2脱气15分钟。向反应混合物中加入Pd(OH)2(2.1克，14.95毫摩尔)，并在H2气囊压力下搅拌24小时。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土过滤并在减压下浓缩，得到4-(4-氨基-2,6-二氟-苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2克，5.51毫摩尔，81％产率)，为灰白色固体。LCMS(ESI):m/z257.1[M-56+H]+。
步骤3:向4-(4-氨基-2,6-二氟-苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(500毫克，1.60毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)中的搅拌溶液中加入碳酸氢钠(807毫克，9.61毫摩尔，373.61微升)和3-溴哌啶-2,6-二酮(923毫克，4.81毫摩尔)。反应混合物在60℃下搅拌16小时。完成后，反应混合物用冰水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(2x 50mL)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，其经硅胶柱色谱纯化，用石油醚中50％乙酸乙酯洗脱，得到4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(460mg，380.21μmol，24％产率)，为粘性液体。LCMS(ESI):m/z 368.1[M-56+H]+。
步骤4:在0℃下向4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(460mg，1.09毫摩尔)在二氯甲烷(10毫升)中的搅拌溶液中加入氯化氢溶液(二噁烷中4M，4.00g，109.71毫摩尔，5毫升)，并将反应混合物在室温下搅拌12小时。反应混合物在减压下浓缩得到粗产物，其用乙醚研磨以得到3-[3,5-二氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮(100mg,255.53μmol,24％产率)，为灰白色固体。LCMS(ESI):m/z 324.1[M+H]+。
步骤5:在0℃向3-[3,5-二氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮(6，300毫克，927.82微摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)中的搅拌溶液中加入TEA(470毫克，4.64毫摩尔，647.38微升)和2-溴乙酸叔丁酯(200毫克，1.03毫摩尔，150.38微升)，并在室温下搅拌反应混合物12小时。反应混合物用冰水稀释(30mL)，并用乙酸乙酯(2x 50mL)萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发，得到2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(310mg，666.09μmol，72％产率)，为灰白色固体。LCMS(ESI):m/z 438.1[M+H]+。
步骤6:向2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(250mg，571.46μmol)在二氯甲烷(10mL)中的搅拌溶液中加入HCl氯化氢溶液(二噁烷中4M，4.00g，109.71mmol，5mL)，反应混合物在室温下搅拌12小时。反应混合物减压浓缩以得到粗产物，其用乙醚研磨以得到2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(200mg,459.51μmol,80％产率)，为灰白色固体。LCMS(ESI):m/z382.1[M+H]+。
2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]乙酸的合成:
步骤1:向1,2-二氟-4-硝基-苯(1.5克，9.43毫摩尔，1.04毫升)和2-(4-哌啶基)乙酸叔丁酯(1.88克，9.43毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(15毫升)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(6.09克，47.14毫摩尔，8.21毫升)，反应混合物在100℃加热12小时。完成后，将反应混合物加入冰水中，然后获得固体。过滤固体，用冷水洗涤并在减压下干燥，得到2-[1-(2-氟-4-硝基-苯基)-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(2.7克，5.67毫摩尔，60％产率)，为灰白色固体。LCMS(ESI):m/z 339.1[M+H]+。
步骤2:在室温和氮气氛下，向2-[1-(2-氟-4-硝基-苯基)-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(2.7克，7.98毫摩尔)在水(10毫升)和乙醇(25毫升)中的搅拌溶液中加入铁粉(2.23克，39.90毫摩尔，283.47微升)和氯化铵(2.13克，39.90毫摩尔，1.39毫升)。然后在70℃下搅拌反应5小时。反应完成后，将反应混合物冷却至室温，用水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(3×70mL)萃取，合并的有机层用盐水溶液(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗制化合物通过硅胶柱色谱纯化，用石油醚中40-50％乙酸乙酯作为洗脱剂，得到黄色固体2-[1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(2.5g,5.27mmol,66％产率)。LCMS(ESI):m/z309.1[M+H]+。
步骤3:向2-[1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.5g，4.86mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的搅拌溶液中加入碳酸氢钠(1.23g，14.59mmol，567.51μL)和3-溴哌啶-2,6-二酮(2.1g，10.94mmol)。反应混合物在70℃下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(2x 50mL)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，该粗产物经硅胶柱色谱纯化，用石油醚中50％乙酸乙酯洗脱，得到2-[1-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(900mg，2.10mmol，43％产率)，为灰白色固体。LCMS(ESI):m/z 420.2[M+H]+。
步骤4:在0℃向2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(950毫克，2.26毫摩尔)在二氯甲烷(10毫升)中的搅拌溶液中加入HCl氯化氢溶液(在二噁烷中4M，2毫升)，并将反应混合物在室温下搅拌12小时。将反应混合物减压浓缩，得到粗产物，用二乙醚研磨，得到2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]乙酸(800毫克，1.56毫摩尔，69％产率)，为灰白色固体。LCMS(ESI):m/z 364.2[M+H]+。
2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸的合成:
步骤1:在-78℃和氮气氛下，向乙酸甲酯(4.46克，60.23毫摩尔，4.78毫升)在无水THF(200毫升)中的搅拌溶液中滴加二异丙基酰胺锂(10.75克，100.38毫摩尔，50.19毫升)。反应混合物在-78℃下搅拌30分钟，然后在-78℃下滴加THF(50毫升)溶液中的4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(10克，50.19毫摩尔)，并在室温下搅拌反应混合物2小时。完成后，反应混合物在0℃下用饱和氯化铵溶液(250mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3x200 mL)萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗化合物使用40-50％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂通过柱色谱(60-120硅胶)纯化，得到黄色液体的4-羟基-4-(2-甲氧基-2-氧代-乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(5.6克，16.75毫摩尔，33％产率)。LCMS(ESI):m/z 174.1[M-100+H]+。
步骤2:在5℃下向4-羟基-4-(2-甲氧基-2-氧代-乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(5.5g，20.12mmol)在二氯甲烷(70mL)中的搅拌溶液中加入氯化氢溶液(二噁烷中4M，50mL)。反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，在减压下浓缩反应混合物，得到淡黄色胶状液体的粗制2-(4-羟基-4-哌啶基)乙酸甲酯(5.5g，26.23mmol)。LCMS(ESI):m/z 174.1[M+H]+。
步骤3:2-(4-羟基-4-哌啶基)乙酸甲酯(5.5克，31.75毫摩尔)在DMSO(70毫升)中加入密封的管中，并在室温下加入N,N-二异丙基乙胺(14.36克，111.14毫摩尔，19.36毫升)和1,2-二氟-4-硝基苯(6.06克，38.10毫摩尔，4.21毫升)。反应混合物在100℃下搅拌12小时。完成后，用水(70mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(3x100 mL)萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。通过柱色谱(60-120硅胶)，使用40-50％乙酸乙酯(在石油醚中)作为洗脱剂从粗产物纯化所需产物，得到黄色粘性液体的2-[1-(2-氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸甲酯(2.7g，7.95mmol，25％产率)。LCMS(ESI):m/z 313.1[M+H]+。
步骤4:在室温下，向2-[1-(2-氟-4-硝基苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸甲酯(6.1克，19.53毫摩尔)在乙醇(200毫升)和水(36毫升)中的搅拌溶液中加入铁粉(5.45克，97.66毫摩尔，693.97微升)和氯化铵(3.13克，58.60毫摩尔，2.05毫升)。反应混合物在75℃下搅拌5小时。完成后，反应混合物通过硅藻土垫过滤，滤液减压浓缩，用水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(3x70 mL)萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到浅棕色液体的粗制2-[1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸甲酯(5.5g，19.48mmol，100％产率)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝6.75-6.80(m,1H),6.27-6.34(m,2H),4.93(s,2H),4.53(s,1H),3.59(s,3H),2.77-2.89(m,4H),2.50(s,2H),1.75-1.78(m,4H)。
步骤5:在密封管中加入2-[1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸甲酯(5.5g，19.48mmol)，并在室温下溶解于N,N-二甲基甲酰胺(70mL)中，加入碳酸氢钠(4.91g，58.45mmol，2.27mL)和3-溴哌啶-2,6-二酮(6.24g，48.71mmol)。反应混合物在75℃下搅拌16小时。完成后，反应混合物通过硅藻土垫过滤，滤液减压浓缩，用水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(3x150 mL)萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。通过柱色谱(60-120硅胶)使用石油醚中的80-90％乙酸乙酯作为洗脱剂从粗产物纯化所需产物以得到产物，其用乙醚洗涤，然后用乙酸乙酯洗涤，得到淡绿色固体的2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸甲酯(3.8克，8.82毫摩尔，45％产率)。LCMS(ESI):m/z 394.0[M+H]+。
步骤6:在5℃下，向2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸甲酯(3.8克，9.66毫摩尔)在THF(20毫升)中的搅拌溶液中加入6N HCl溶液(1.14毫摩尔，80毫升)。反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，反应混合物在减压下浓缩，得到粗产物。粗产物用乙醚和然后用乙腈洗涤，得到黄色固体的2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(4克，8.42毫摩尔，产率87％)。LCMS(ESI):m/z 380.1[M+H]+。
(1r,3r)-3-(3-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)氮杂环丁烷-1-基)环丁烷-1-羧酸和(1s,3s)-3-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)氮杂环丁烷-1-基)环丁烷-1-羧酸的合成:
步骤1:在氮气氛下，将1,2-二溴乙烷(5.60克，29.8毫摩尔，2.25毫升，1.88e-1eq)加入到在THF(49.0毫升)中的搅拌锌粉(19.7克，301毫摩尔，1.90eq)中，所得混合物在80℃下搅拌10分钟，随后在25℃下加入TMSCl(2.57克，23.6毫摩尔，3.00毫升，1.49e-1当量)在THF(18.0毫升)中的溶液并在该温度下搅拌4分钟。然后加入化合物3-碘代氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(45.0克，158毫摩尔，1.00当量)在THF(102毫升)中的溶液并搅拌15分钟。将反应混合物在25℃下搅拌2小时，然后加入三(2-呋喃基)磷烷(2.17克，9.37毫摩尔，5.89e-2当量)和Pd2(dba)3(2.33克，2.54毫摩尔，1.60e-2eq)，随后加入2-氟-1-碘-4-硝基苯(43.9克，164毫摩尔，1.03eq)在THF(216mL)中的溶液，所得混合物在50℃下搅拌8小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)指示3-碘代氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(Rf＝0.5)被消耗掉，并形成一个新斑点(Rf＝0.1)。用乙酸乙酯(300mL)稀释反应混合物，加入H2O(500mL)。分离的有机相用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残留物，残留物通过快速硅胶色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1，Rf＝0.1)，得到黄色油状的3-(2-氟-4-硝基苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(22.0g，74.2mmol，46.7％产率)。
步骤2:将3-(2-氟-4-硝基苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(10.0克，33.7毫摩尔，1.00当量)和TFA(19.2克，168毫摩尔，12.4毫升，5.00当量)在DCM(50.0毫升)中的混合物在25℃下搅拌2小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝0/1)指示原料(Rf＝0.5)被完全消耗，并形成一个新斑点(Rf＝0.1)。将反应混合物浓缩，得到黄色油状的3-(2-氟-4-硝基苯基)氮杂环丁烷(10.0g，粗产物TFA盐)。
步骤3:向3-(2-氟-4-硝基苯基)氮杂环丁烷(10.0克，32.2毫摩尔，1.00当量，TFA盐)在DCM(120毫升)中的溶液中加入乙酸(3.48克，57.9毫摩尔，3.31毫升，1.80当量)和3-氧代环丁烷-1-羧酸叔丁酯(8克，47.00毫摩尔，1.46当量)。所得混合物在25℃下搅拌15分钟。加入NaBH(OAc)3(24.6克，116毫摩尔，3.60当量)。将反应混合物在30℃下搅拌6小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝0/1)指示原料(Rf～0.1)被完全消耗并形成两个新斑点(Rf＝0.4，Rf＝0.5)。LCMS显示原料消耗掉，并检测到一个具有所需质量的主峰(RT＝0.777分钟)。将反应混合物用DCM(200mL)和H2O(300mL)稀释，用饱和NaHCO3水溶液碱化至pH 6。分离的有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩以得到残留物，残留物通过快速硅胶色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝0/1，Rf＝0.4，Rf＝0.5)，得到(1r,3r)-3-(3-(2-氟-4-硝基苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔基酯(5.00g，14.2毫摩尔，98.3％产率)，经HNMR和NOE确认，为黄色油。经HNMR和NOE确认的(1s,3s)-3-(3-(2-氟-4-硝基苯基)氮杂环丁烷-1-基)环丁烷-1-羧酸叔丁基酯(6.00g，17.1mmol，96.5％产率)以黄色油获得。LCMS(ES+):m/z 351.1[M+H]+。
顺式非对映异构体1HNMR:δ8.03(dd,J＝2.1,8.4Hz,1H),7.88(dd,J＝2.3,9.7Hz,1H),7.56(t,J＝7.9Hz,1H),3.93(t,J＝7.6Hz,1H),3.66-3.65(m,1H),3.73(t,J＝7.6Hz,2H),3.26(t,J＝7.3Hz,2H),3.17-3.08(m,1H),2.74-2.59(m,1H),2.26-2.18(m,2H),2.16-2.07(m,2H),1.44(s,9H)。
步骤4:(1s,3s)-3-(3-(2-氟-4-硝基苯基)氮杂环丁烷-1-基)环丁烷-1-羧酸叔丁酯(8.00克，24.8毫摩尔，1.00当量)和10％ Pd/C(600毫克，14.2毫摩尔，1.00当量)在THF(20.0毫升)中的混合物，然后该混合物在25℃和H2(15psi)气氛下搅拌2小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝0/1)指示原料(Rf＝0.5)被消耗掉并形成一个新斑点(Rf＝0.3)。LCMS显示原料消耗掉，检测到一个具有所需质量的新主峰(RT＝0.685分钟)。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并将滤液减压浓缩，得到黄色油状物的(1s,3s)-3-(3-(4-氨基-2-氟苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(7.80g，24.3mmol，98.0％产率)。
步骤5:(1s,3s)-3-(3-(4-氨基-2-氟苯基)氮杂环丁烷-1-基)环丁烷-1-羧酸叔丁酯(20.5毫摩尔，1.00当量)、2,6-双(苄氧基)-3-溴吡啶(22.6毫摩尔，1.10当量)、Pd2(dba)3(600毫克，655微摩尔，5.25e-2当量)、XPhos(600毫克，1.26毫摩尔，1.01e-1eq)和t-BuONa(28.6mmol,1.40eq)在二噁烷(70.0mL)中的混合物在氮气氛下100℃下搅拌8小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝0/1)指示原料(Rf＝0.4)被消耗掉，并形成一个新斑点(Rf＝0.3)。LCMS显示原料被消耗，并检测到一个具有所需质量的新主峰(RT＝1.02分钟)。反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，用H2O(200mL)洗涤。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残留物，残留物通过柱色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝50/1至5/1，Rf＝0.3)纯化，得到(1s,3s)-3-(3-(4-((2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)氮杂环丁烷-1-基)环丁烷-1-羧酸叔丁酯(6.30g，10.3mmol，50.9％产率)，为黄色油。LCMS(ES+):m/z 610.3[M+H]+。
步骤6:将(1s,3s)-3-(3-(4-((2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)氮杂环丁烷-1-基)环丁烷-1-羧酸叔丁酯(10.1毫摩尔，1.00当量)和10％ Pd/C(600毫克，656微摩尔，0.100当量)在THF(40.0毫升)中的混合物在25℃下于H2(50psi)氢氧下搅拌24小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝0/1)显示原料(Rf＝0.3)被消耗掉并形成一个新斑点(Rf＝0.2)。过滤反应混合物，浓缩滤液以得到残留物，其通过柱色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝10/1至二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化，得到(1s,3s)-3-(3-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)氮杂环丁烷-1-基)环丁烷-1-羧酸叔丁酯(2.20g，5.10mmol，51.8产率)，为蓝色油。LCMS(ES+):m/z 493.4[M+H]+。
步骤7:将(1s,3s)-3-(3-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)氮杂环丁烷-1-基)环丁烷-1-羧酸叔丁酯(5.1毫摩尔，1.00当量)和TFA(15.4克，135毫摩尔，10.0毫升，29.1当量)在DCM(10.0毫升)中的混合物在25℃下搅拌2小时。TLC(二氯甲烷/甲醇＝10/1)指示原料(Rf＝0.6)被消耗掉并形成一个新斑点(Rf＝0.3)。反应混合物用H2O(50mL)稀释，用二氯甲烷(100mL)洗涤。弃去分离的有机层，将水相冻干，并通过反相高效液相色谱(HPLC:EW20037-26-p1c1，0.1％ TFA条件)进一步纯化，得到(1s,3s)-3-(3-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)氮杂环丁烷-1-基)环丁烷-1-羧酸(1.35g，3.60mmol，70.54％产率)，为蓝灰色固体。1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δ12.83-12.11(m,1H),10.80(s,1H),10.73-10.55(m,1H),10.44-10.23(m,1H),7.17(br t,J＝8.4Hz,1H),6.58-6.46(m,2H),6.41-6.14(m,1H),4.37(br dd,J＝4.7,11.6Hz,2H),4.28-3.86(m,5H),2.87(quin,J＝8.7Hz,1H),2.80-2.68(m,1H),2.58(td,J＝3.8,17.6Hz,1H),2.46(br s,2H),2.22(brd,J＝9.2Hz,2H),2.12-2.01(m,1H),1.88(dq,J＝4.5,12.3Hz,1H)。
注:反式非对映异构体用与上述相同方式制备。
3-((4-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮的合成:
步骤1:向N-[1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯(150毫克，484.84微摩尔)和2,6-二苄氧基-3-碘-吡啶(222.53毫克，533.33微摩尔)在t-BuOH(4.85毫升)中的搅拌溶液中加入碳酸铯(473.92毫克，1.45毫摩尔)，溶液通过Ar吹扫充分脱气。然后加入RuPhos Pd G3(44.80毫克，48.48微摩尔)，且反应再次脱气。将反应混合物在100℃下加热18小时。然后将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用小硅藻土垫过滤，并用乙酸乙酯充分洗涤。将合并的有机物用水和盐水洗涤，过滤，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到油状的粗物质，该粗物质通过使用二氧化硅的柱色谱纯化，以己烷中40％乙酸乙酯洗脱，得到淡黄色固体的N-[1-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯(100mg，158.68μmol，33％产率)。LCMS(ES+):m/z 600[M+H]+。
步骤2:向N-[1-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯(75毫克，125.27微摩尔)在乙醇(5毫升)中的溶液中加入钯，5％活性炭上(4.00毫克，37.58微摩尔)，然后用H2气球清洗烧瓶。反应在氢气氛(球囊压力)下于室温下搅拌16小时。反应经硅藻土过滤，用3×乙醇和3×乙酸乙酯洗涤硅藻土垫，然后浓缩，得到油状的粗品N-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯(50mg，112.97μmol，90％产率)，其无需进一步纯化而使用。LCMS(ES+):m/z 421[M+H]+。
步骤3:向N-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯(50毫克，118.91微摩尔)在DCM(2毫升)中的溶液中加入TFA(740.00毫克，6.49毫摩尔，500微升)。将该溶液搅拌3小时，并从甲苯3x浓缩，得到粗制油的3-[4-(4-氨基-1-哌啶基)-3-氟苯胺基]哌啶-2,6-二酮(45mg，98.42μmol，83％产率，TFA盐)，其无需纯化用于下一步。LCMS(ES+):m/z 321[M+H]+。
2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸的合成
步骤1:向3,3-二氟-4-氧代-哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.5g，10.63mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中加入三乙胺(3.23g，31.8mmol，4.44mL)，并将反应混合物冷却至-20℃。在-20℃氮气气氛下逐滴加入二氯甲烷(10mL)中的三氟甲基磺酰基三氟甲烷磺酸盐(4.50g,15.94mmol,2.68mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，在0℃下用冷水(70mL)逐滴淬灭反应，并用二氯甲烷(3×100mL)萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗产物。通过柱色谱(硅胶)从粗产物中纯化所需产物，使用pet醚中的5-15％乙酸乙酯作为洗脱剂，得到浅黄色液体的3,3-二氟-4-(三氟甲基磺酰氧基)-2,6-二氢吡啶-1-羧酸叔丁酯(1.3g，2.16mmol，20％产率)。LCMS(ES+):m/z 268.0[M-CO2 tBu+H]+。
步骤2:向3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯胺(1.70克，7.19毫摩尔)和3,3-二氟-4-(三氟甲基磺酰氧基)-2,6-二氢吡啶-1-羧酸叔丁酯(2.4克，6.53毫摩尔)在1,4-二噁烷(30毫升)和水(3毫升)的密封管中的溶液中加入无水磷酸三钾(4.16g,19.60mmol)。反应混合物用氮气脱气10分钟，然后加入与二氯甲烷复合的[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(533.62毫克，653.44微摩尔)。反应混合物再次用氮气吹扫5分钟，并在80℃的微波下辐射1.5小时。完成后，反应混合物用水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(3X70 mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗产物。通过使用15-25％乙酸乙酯(在石油醚中)作为洗脱剂，通过硅胶柱色谱从粗产物中纯化所需产物，得到4-(4-氨基-2-氟-苯基)-3,3-二氟-2,6-二氢吡啶-1-羧酸叔丁酯(1.6克，4.84毫摩尔，74％产率)，为淡绿色粘性液体。LCMS(ES+):m/z 229.2[M-CO2 tBu+H]+。
步骤3:向4-溴-3-氟-苯胺(5g，26.31毫摩尔)在1,4-二噁烷(200mL)中的溶液中加入乙酸钾(7.75g，78.94毫摩尔，4.93mL)和4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(7.35g，28.95mmol)。反应混合物用氮气脱气10分钟，然后加入与二氯甲烷复合的[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(2.15克，2.63毫摩尔)。将反应混合物在100℃下搅拌12小时。完成后，用水(100mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(3x150 mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗产物。通过使用10-20％乙酸乙酯(在石油醚中)作为洗脱剂的硅胶柱色谱从粗产物纯化所需产物，得到3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯胺(5.5g，15.96mmol，61％产率)，为淡黄色粘性固体。LCMS(ES+):m/z 238.2[M+H]+。
步骤4:向4-(4-氨基-2-氟-苯基)-3,3-二氟-2,6-二氢吡啶-1-羧酸叔丁酯(1.6克，4.87毫摩尔)在甲醇(20毫升)和乙酸乙酯(20毫升)中的搅拌溶液中加入20％ Pd(OH)2(2克，14.24毫摩尔)，并通过将氢气鼓泡10分钟用氢饱和，然后在室温下进行氢化(1个大气压)16小时。完成后，用氮气吹扫反应混合物，通过硅藻土垫过滤除去催化剂。硅藻土床用甲醇(200mL)洗涤。将滤液减压浓缩，得到4-(4-氨基-2-氟-苯基)-3,3-二氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.45克，4.32毫摩尔，89％产率)，为灰白色固体。LCMS(ES+):m/z 231.2[M+H-CO2 tBu]+。
步骤5:在0-5℃下，向4-(4-氨基-2-氟-苯基)-3,3-二氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯(800毫克，2.42毫摩尔)的乙腈(6毫升)搅拌溶液中加入4-甲基苯磺酸.水合物(1.40克，7.34毫摩尔，1.13毫升)，随后在相同温度下加入水(2毫升)中的亚硝酸钠(342.53毫克，4.96毫摩尔，157.85微升)。将反应混合物在0-5℃下搅拌1小时，并在相同温度下加入在水(2mL)中的碘化钾(848.24mg，5.11mmol，271.87μL)。反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，向反应混合物中加入水(8mL)，用乙酸乙酯(3×8mL)提取。合并的有机层经硫酸钠干燥、过滤并减压浓缩。粗化合物通过硅胶柱色谱纯化，用石油醚中25％乙酸乙酯作为洗脱剂，得到橙色粘性液体的3,3-二氟-4-(2-氟-4-碘-苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(896mg，1.94mmol，80％产率)。LCMS(ES+):m/z 342.0[M+H-CO2 tBu]+。
步骤6:向微波小瓶中3,3-二氟-4-(2-氟-4-碘-苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(800毫克，1.81毫摩尔)和2,6-二苄氧基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶(1.71克，2.18毫摩尔)在1,4-二噁烷(8毫升)和水(2毫升)中的搅拌溶液加入无水K3PO4(962.18mg,4.53mmol)。反应混合物用氮气吹扫10分钟，然后加入XPhos-Pd-G2(142.66mg，181.31μmol)。反应混合物再次用氮气吹扫5分钟，并在100℃的微波下辐射2小时。完成后，用水(15mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(3x20 mL)提取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗产物。通过使用石油醚中30-45％乙酸乙酯作为洗脱剂的硅胶柱色谱从粗产物中纯化所需产物，得到4-[4-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-2-氟-苯基]-3,3-二氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯(810mg，835.91μmol，46％产率)。LCMS(ES+):m/z 605.2[M+H]+。
步骤7:向4-[4-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-2-氟-苯基]-3,3-二氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯(810毫克，1.34毫摩尔)在乙酸乙酯(3毫升)和1,4-二噁烷(3毫升)中的溶液中加入Pd(OH)2(564.38毫克，4.02毫摩尔)。反应混合物在氢气氛下于室温下搅拌16小时。反应完成后，通过硅藻土过滤反应混合物，并用乙酸乙酯(80mL)洗涤。通过使用石油醚中30-45％乙酸乙酯作为洗脱剂的硅胶柱色谱从粗产物中纯化所需产物，得到4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-3,3-二氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯(420mg，927.80μmol，69％产率)。LCMS(ES+):m/z 327.0[M+H-100]+。
步骤8:在氮气氛下，于5℃向4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-3,3-二氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯(420mg，984.93μmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的搅拌溶液中加入二噁烷(4mL)中4M HCl溶液。将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应完成后，将反应混合物减压浓缩，用石油醚洗涤，得到粗产物3-[4-(3,3-二氟-4-哌啶基)-3-氟-苯基]哌啶-2,6-二酮(340mg，937.22μmol，95％产率)，为灰白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.90(s,1H),7.35(t,J＝8.00Hz,1H),7.18(d,J＝11.20Hz,1H),7.14(d,J＝8.00Hz,1H),3.80-3.95(m,3H),3.55-3.74(m,1H),3.12-3.45(m,2H),2.41-2.51(m,1H),2.20-2.31(m,2H),1.98-2.15(m,3H)。
步骤9:在氮气氛下室温下向3-[4-(3,3-二氟-4-哌啶基)-3-氟-苯基]哌啶-2,6-二酮(340毫克，1.04毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(2毫升)中的搅拌溶液中加入三乙胺(421.74毫克，4.17毫摩尔，580.91微升)，然后加入2-溴乙酸叔丁酯(203.24毫克，1.04毫摩尔，152.81微升)。反应混合物在室温下搅拌14小时。用水(10mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(3×10mL)提取。有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥。溶液然后在减压下浓缩，得到粗产物2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(460mg，1.03mmol，99％产率)，为灰白色固体。LCMS(ES+):m/z 441.2[M+H]+。
步骤10:在氮气氛下，于0℃向2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(460毫克，1.04毫摩尔)在二氯甲烷(2毫升)中的搅拌溶液中加入二噁烷(4M，5毫升)中的4M HCl溶液。反应混合物在室温下搅拌6小时。将反应混合物真空浓缩，得到粗产物，其用石油醚洗涤，得到2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸(355mg，811.22μmol，78％产率)，为灰白色固体。LCMS(ES+):m/z 385.2[M+H]+。
1-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮的合成:
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步骤1:在0℃下将氢化钠(60％，在油中，2.38克，59.4毫摩尔)逐份加入到6-溴-1H-吲唑-3-胺(7克，33.0毫摩尔，439微升)在DMF(150毫升)中的搅拌溶液中，并将混合物搅拌40分钟。在冷却下逐滴加入碘甲烷(5.15克，36.3毫摩尔，2.26毫升)，所得混合物升温至环境温度并搅拌16小时。反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用水、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过硅胶色谱纯化(50％乙酸乙酯-己烷)，得到6-溴-1-甲基-吲唑-3-胺(4.2克，18.6毫摩尔，56％产率)。LCMS(ES+):m/z 227[M+H]+。
步骤2:在80℃下丙烯酸乙酯(14.0克，139毫摩尔)在5天内分5份(每份2.8克)加入到6-溴-1-甲基-吲唑-3-胺(4.2克，18.6毫摩尔)，[DBU][Lac](通过在环境温度下将DBU和乳酸的等摩尔混合物搅拌16小时制备，2.09克，14.9毫摩尔)的混合物中。完成后(LCMS)，用次氯酸钠(30％aq,5mL)淬灭反应混合物并用乙酸乙酯稀释。合并的有机物用水、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过硅胶色谱(50％乙酸乙酯-己烷)纯化，得到3-[(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)氨基]丙酸乙酯(2.9g，8.89mmol，48％产率)。LCMS(ES+):m/z 327[M+H]+。
步骤3:在环境温度下，将无水乙酸钠(1.46克，17.8毫摩尔)和随后溴化氰(1.41克，13.3毫摩尔)加入到3-[(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)氨基]丙酸乙酯(2.9克，8.89毫摩尔)在乙醇(40毫升)中的搅拌溶液中。将所得混合物加热至回流48小时。将反应混合物减压浓缩并用乙酸乙酯稀释。合并的有机物用水、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过柱色谱纯化(45％乙酸乙酯-己烷)，得到3-[(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)-氰基-氨基]丙酸乙酯(1.65g，4.70mmol，53％产率)。LCMS(ES+):m/z 352[M+H]+。
步骤4:(1E)-乙醛肟(1.01克，17.1毫摩尔)，随后氯化铟(III)(126毫克，569微摩尔)在环境温度下加入到3-[(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)-氰基-氨基]丙酸乙酯(2克，5.69毫摩尔)在甲苯(60毫升)中的搅拌溶液中。将所得混合物加热至回流1小时。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤。有机物经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过柱色谱(60％乙酸乙酯-己烷)纯化，得到3-[(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)-氨基甲酰基-氨基]丙酸乙酯(1.4g，3.79mmol，67％产率)。LCMS(ES+):m/z 370[M+H]+。
步骤5:在环境温度下，将Triton-B(40％甲醇中，2.4mL、5.69mmol)滴加到3-[(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)-氨基甲酰基-氨基]丙酸乙酯(1.40g、3.79mmol)在MeCN(70mL)中的搅拌溶液中。将所得混合物在环境温度下搅拌45分钟。反应混合物在真空下浓缩，用乙酸乙酯稀释。用水、盐水洗涤有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过柱色谱(30％乙酸乙酯-己烷)纯化，得到白色固体的1-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮(910mg，2.81mmol，74％产率)。LCMS(ES+):m/z 324[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.60(s,1H),7.97(s,1H),7.61(d,J＝8.6Hz,1H),7.26-7.23(m,1H),3.98(s,3H),3.93(t,J＝6.6Hz,2H),2.76(t,J＝6.6Hz,2H)。
1-(1-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮盐酸盐的合成:
步骤1:将1-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮(1.25克，3.87毫摩尔)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(2.39克，7.74毫摩尔)的溶液用N2鼓泡10分钟。然后，加入氟化铯(1.18克，7.74毫摩尔)和Pd(dppf)Cl2(566毫克，774微摩尔)，并将混合物在85℃下搅拌2小时。将混合物冷却至环境温度，用乙酸乙酯稀释，并通过硅藻土/硅胶过滤。用乙酸乙酯洗涤后，将滤液用水稀释并分层，有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残留物通过正相色谱纯化(己烷中5-100％乙酸乙酯)，得到4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(1.04克，2.44毫摩尔，63％产率)。LCMS(ES+):m/z426.3[M+H]+。
步骤2:将钯(10％碳上，487型，干燥，1.08克，1.02毫摩尔)加入到4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(1.44克，3.38毫摩尔)的甲醇(30毫升)溶液中，并在氢球囊气氛下于环境温度搅拌该混合物。24小时后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤，用二氯甲烷/甲醇(1:1)的混合物洗涤，并真空浓缩，得到4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.42g，3.32mmol，98％产率)。LCMS(ES+):m/z 372.3[M-叔丁基+H]+。
步骤3:使用HCl(4M于1,4-二噁烷中，5当量)用于叔丁氧基羰基保护基脱保护，从4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯以定量产率获得1-(1-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮盐酸盐。LCMS(ES+):m/z 328.1[M+H]+。
步骤4:在室温下，向1-[1-甲基-6-(4-哌啶基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(2.8克，7.70毫摩尔)在DMF(30毫升)和三乙胺(3.89克，38.48毫摩尔，5.36毫升)中的搅拌溶液中加入2-溴乙酸叔丁酯(2.25克，11.54毫摩尔，1.69毫升)。反应混合物在氮气氛下于室温下搅拌16小时。完成后，将反应混合物倒入冰水(100mL)中，立即用乙酸乙酯(3X150 mL)提取。合并的有机层用冷水(3X50 mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(2.3g,4.57mmol,59％产率)，为浅棕色固体。LCMS(ES+):m/z 442.2[M+H]+。
步骤5:在氮气氛下，在5℃下，向2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(2.2克，4.98毫摩尔)在DCM(20毫升)中的搅拌溶液中加入在二噁烷(4M，1.25毫升)中的4.0M HCl溶液。反应混合物在室温下搅拌6小时。完成后，将反应混合物在减压下浓缩，得到2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸(2.5g，5.12mmol，100％产率)，为灰白色固体。LCMS(ES+):m/z 386.2[M+H]+。
2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸的合成:
步骤1:化合物6-溴-1H-吲唑(57.0克，289毫摩尔)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(134克，433毫摩尔)、Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(12.0克，14.6毫摩尔)和Na2CO3(100克，943毫摩尔)在二噁烷(480mL)和水(120mL)中的混合物在105℃下搅拌12小时。混合物通过硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯(500ml)洗涤。滤液用盐水(150mL×3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过硅胶色谱(0～30％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到黄色油状的4-(1H-吲唑-6-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(80.0g，239mmol，83％)。LCMS(ES+):m/z 300.1[M+H]+。
步骤2:向4-(1H-吲唑-6-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(75.0克，224毫摩尔)的DMF(700毫升)溶液中加入氢氧化钾(37.7克，672毫摩尔)和I2(85.3克，336毫摩尔，67.7毫升)。将混合物在25℃下搅拌12小时，并冷却至0℃，然后加入MeI(44.6克，314毫摩尔，19.6毫升)。所得混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物倒入水(1500mL)中，用乙酸乙酯(500mL×3)提取。合并的有机相用盐水(500mL×3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩得到残留物，残留物通过硅胶色谱(0～8％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到黄色油状的4-(3-碘-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(23.0g，52.3mmol，产率23％)。LCMS(ES+):m/z 440.1[M+H]+。
步骤3:0℃下向t-BuOK(190克，1.69摩尔)在THF(1.00升)的溶液中加入苯基甲醇(73.4克，679毫摩尔，70.6毫升)。在25℃向混合物中加入2,6-二氯吡啶(50.0克，338毫摩尔)，并在75℃下搅拌12小时。在0℃下反应用饱合氯化铵水溶液(200mL)淬灭，用乙酸乙酯(200mL)稀释，用乙酸乙酯(200mL×3)提取。合并的有机层用盐水(500mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到残留物。残留物用石油醚(150mL)研磨，得到黄色固体的2,6-双(苄氧基)吡啶(84.0g，产率85％)。LCMS(ES+):m/z 292.2[M+H]+。
步骤4:40℃下向2,6-双(苄氧基)吡啶(34.0克，116毫摩尔)在乙腈(100毫升)中的溶液中加入NBS(21.0克，118毫摩尔，1.01当量)在乙腈(200毫升)中的溶液，并将反应混合物在85℃下搅拌12小时。将反应混合物减压浓缩，用水(500毫升)稀释，并用乙酸乙酯(300毫升×3)提取。合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，残留物用石油醚(60ml)研磨，得到2,6-双(苄氧基)-3-溴吡啶(27.7g，64％产率)。LCMS(ES+):m/z371.9[M+H]+。
步骤5:向2,6-双(苄氧基)-3-溴吡啶(52.4克，139毫摩尔)在二噁烷(500毫升)中的溶液中加入4,4,4’,4’5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-二(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(37.1克，146毫摩尔)、KOAc(41.0克，418毫摩尔)和Pd(dppf)Cl2 CH2Cl2(5.69克6.97mmol)。将反应混合物在105℃下搅拌12小时。通过硅藻土垫过滤反应混合物。滤液用水(500mL)稀释，用乙酸乙酯(500mL×2)提取。提取液用盐水(400mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残留物经硅胶色谱(0～100％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到黄色油状2,6-双(苄氧基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶(35.0g，产率60％)。LCMS(ES+):m/z 418.3[M+H]+。
步骤6:向2,6-双(苄氧基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶(20.0克，45.53毫摩尔)、4-(1H-吲唑-6-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(26.6克，63.7毫摩尔)和Cs2CO3(44.5克，136毫摩尔)在二噁烷(200mL)和水(40mL)中的溶液加入Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(3.72g,4.55mmol,0.10eq)。反应混合物在100℃下搅拌2小时。反应混合物通过硅藻土垫过滤，滤液用盐水(60mL×3mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残留物经硅胶色谱(0～100％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到黄色油状的4-(3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(20.0g，产率73％)。LCMS(ES+):m/z 603.3[M+H]+。
步骤7:在氮气氛下，向4-(3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(18.0克，29.8毫摩尔，1.00当量)在乙醇(270毫升)和乙酸乙酯(270毫升)中的溶液中加入10％Pd/C(4.00克)。将悬浮液脱气并用H2清洗3次。将混合物在30℃下于H2(15psi)下搅拌24小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并将滤液浓缩。残留物通过硅胶色谱(乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到白色固体的4-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(5.3g，41％产率)。LCMS(ES+):m/z427.2[M+H]+。
步骤8:0℃下向包含充分搅拌的4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(500mg，1.17mmol)的无水DCM(5mL)溶液的25mL单颈圆底烧瓶中加入TFA(668.35mg,5.86mmol,451.59μL)。在室温下搅拌3小时后，将反应混合物减压浓缩。残留物与甲苯(2x 15mL)共沸，并用二乙醚(20mL)研磨，得到3-[1-甲基-6-(4-哌啶基)吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮(500mg，1.12mmol，95％产率，TFA盐)，为灰白色固体。LCMS(ES+):m/z326.9[M+H]+。
步骤9:在室温下，向3-[1-甲基-6-(4-哌啶基)吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮(230毫克，704.67微摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(4毫升)中的搅拌溶液中加入三乙胺(213.92毫克，2.11毫摩尔，294.65微升)，然后加入溴乙酸叔丁酯(151.19毫克，775.14微摩尔，113.68微升)，且所得反应混合物在室温下搅拌12小时。使用5％甲醇-二氯甲烷作为洗脱剂，通过TLC监测反应进程。完成后，加入水，用5％甲醇-二氯甲烷(2x30 mL)提取。合并的有机层用冰冷水(2x30 mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸发，得到所需的灰白色固体粗化合物2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(260mg，576.44μmol，82％产率)。LCMS(ES+):m/z 441.4[M+H]+。
步骤10:在0℃向2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(260mg，590.19μmol)在二氯甲烷(5mL)中的搅拌溶液中加入HCl溶液(4.0M在二噁烷中，590.19μmol，4mL)，所得反应混合物在室温下搅拌12小时。使用5％甲醇-二氯甲烷作为洗脱剂，通过TLC监测反应进展。反应混合物在减压下浓缩。所得残留物与甲苯(2x20 mL)共蒸馏，用二乙醚(2x5 mL)研磨，减压干燥，得到2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸(230mg，545.86μmol，92％产率，HCl盐)，为灰白色固体。LCMS(ES+):m/z 385.3[M+H]+。
2-[1-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸的合成:
步骤1:在氮气氛下，将N,N-二甲基甲酰胺(15毫升)中的6-溴-3-碘-1H-吲唑(5.0克，15.48毫摩尔)于0℃下加入到氢化钠(矿物油中60％分散体,557.35mg,23.22mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(15毫升)中的悬浮液中。在25℃下搅拌反应混合物10分钟。之后，将反应混合物再次冷却至0℃，并加入碘甲烷(4.40克，30.97毫摩尔，1.93毫升)。将反应混合物在25℃下搅拌2小时。之后，反应混合物用氯化铵(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(2x50 mL)提取。合并的有机层用冰冷的盐水溶液(2x 50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，然后蒸发，得到粗物质，其通过快速硅胶柱色谱(20％乙酸乙酯在石油醚中)纯化，得到6-溴-3-碘-1-甲基-吲唑(4.0g，11.79mmol，76％产率)，为灰白色固体。LCMS(ES+):m/z339.8[M+H]+。
步骤2:在室温下，在氮气下，将2,6-二苄氧基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶(1.5g，3.09mmol)加入到包含6-溴-3-碘-1-甲基-吲唑(1.56g，4.64mmol)在水(1.8mL)和二噁烷(4.2mL)中的充分搅拌溶液的10mL密封管中。通过吹扫氮气5分钟使反应混合物脱气。随后，加入Pd(dppf)Cl2.二氯甲烷(252.36毫克，309.02微摩尔)和碳酸铯(2.01克，6.18毫摩尔)，并将反应混合物在95℃下加热16小时。反应混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(2x 50mL)洗涤。将滤液减压浓缩，得到粗物质，其通过硅胶快速柱色谱(20％乙酸乙酯在石油醚中)纯化，得到白色固体的6-溴-3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑(1.1克，1.77毫摩尔，57％产率)。LCMS(ES+):m/z 502.0[M+H]+。
步骤3:将6-溴-3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑(1.4克，2.80毫摩尔)在1,4-二噁烷(10.0毫升)中的溶液置于密封管中，并在室温和氮气氛下加入2-(4-羟基-4-哌啶基)乙酸叔丁酯(602.34毫克，2.80毫摩尔)和碳酸铯(2.73克，8.39毫摩尔)。反应混合物用氮气脱气15分钟，然后向反应混合物中加入RuPhos(130.56毫克，279.78微摩尔)、RuPhosPdG3(234.00毫克，279.78微摩尔)，再用氮气脱气5分钟。将所得反应混合物加热至100℃2.5小时。完成后，将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，用水(20.0ml)和盐水溶液(30.0mL)洗涤。有机层经硫酸钠干燥并减压浓缩得到粗产物，该粗产物经硅胶柱色谱纯化，用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到2-[1-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.1克，1.64毫摩尔，59％产率)，为灰白色固体。LCMS(ES+):m/z 635.2[M+H]+。
步骤4:向用氮气吹扫的2-[1-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(2.0克，3.15毫摩尔)在1,4-二噁烷(30毫升)中的搅拌溶液加入在碳上的氢氧化钯，20重量％基于干重(442.48毫克，3.15毫摩尔)并在氢气氛下于室温下搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(200mL)洗涤并在减压下浓缩，得到粗产物，该粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用石油醚中75％乙酸乙酯洗脱，得到2-[1-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.2g，2.59mmol，产率82％)，为灰白色固体。LCMS(ES+):m/z 457.2[M+H]+。
步骤5:在0℃下向2-[1-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.2克，2.59毫摩尔)在1,4-二噁烷(15毫升)中的搅拌溶液中逐滴加入二噁烷(30毫升)中的4M HCl溶液，并在室温下搅拌50小时。反应完成后，将反应混合物浓缩，用己烷(100mL)研磨，并干燥，得到2-[1-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(1.15g，2.16mmol，83％产率)，为灰白色固体。LCMS(ES+):m/z 401.2[M+H]+。
2-[1-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-哌啶基]乙酸的合成:
步骤1:将2-(4-哌啶基)乙酸叔丁酯(50毫克，250.89微摩尔)和6-溴-3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑(125.54毫克，250.89微摩尔)在1,4二噁烷(3毫升)中的搅拌溶液。将反应混合物脱气5分钟，随后加入Cs2CO3(97.6mg,250.89μmol)。然后，加入XPhos(9.1毫克，250.89微摩尔)，随后加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(9.5毫克，250.89微摩尔)。反应混合物在100℃下搅拌16小时。反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释，用冷水(5mL)洗涤。有机层用盐水溶液(5mL)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩以得到粗产物，该粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用pet醚中30％乙酸乙酯洗脱，得到黄色固体的2-[1-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(40mg,46.54μmol,18.55％产率)。LCMS(ES+):m/z 619.3[M+H]+。
步骤2:25℃下向2-[1-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(500毫克，808.06微摩尔)在1,4二噁烷(20毫升)中的搅拌溶液中加入碳上氢氧化钯，20重量％和50％的水(226.97毫克，1.62毫摩尔)。在氢气球压力下，将总反应混合物搅拌16小时。反应完成后，反应混合物通过硅藻土床过滤，并用1,4二噁烷(150mL)洗涤。滤液在减压下浓缩以得到粗产物。粗产物用二乙醚(20mL)洗涤，得到棕色固体的2-[1-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(400mg，573.85μmol，71.02％产率)。LCMS(ES+):m/z 441.2[M+H]+。
步骤3:0℃下向2-[1-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(300毫克，680.99微摩尔)在二氯甲烷(5毫升)中的搅拌溶液中加入三氟乙酸(388.24毫克，3.40毫摩尔，262.33微升)。总反应混合物在25℃下搅拌2小时。反应通过LC-MS监测。反应完成后，将反应混合物减压浓缩以得到粗产物。粗产物用二乙醚(20mL)洗涤，得到2-[1-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-哌啶基]乙酸(220mg，353.09μmol，51.85％产率)，为浅粉色固体。
4-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成:
步骤1:在包含6-溴-3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑(2克，4.00毫摩尔)在1,4-二噁烷(20mL)中的充分搅拌溶液的100mL密封管中加入双(频哪醇合)乙硼烷(1.12克，4.40毫摩尔)和乙酸钾(1.18克，11.99毫摩尔，749.55微升)。反应混合物用氮气脱气10分钟。向反应混合物中加入Pd(dppf)Cl2.二氯甲烷(326.40毫克，399.69微摩尔)并再次脱气5分钟。然后将反应混合物在90℃下搅拌2小时。完成后，将反应混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯洗涤，减压浓缩有机层，得到粗产物，该粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用石油醚中20％乙酸乙酯洗脱，得到3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吲唑(1.9g，3.43mmol，86％产率)，为粘性黄色液体。LCMS(ES+):m/z 548.2[M+H]+。
步骤2a:在-20℃下，向3,3-二氟-4-氧代-哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.5g，10.63mmol)在二氯甲烷(25mL)中的搅拌溶液中添加三乙基胺(3.23g，31.88mmol，4.44mL)，然后滴加三氟甲磺酸酐(4.50g，15.94mmol，2.68mL)。反应物料在室温下搅拌16小时。然后，用碳酸氢钠(aq)淬灭反应，用二氯甲烷提取，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，真空浓缩。粗混合物通过硅胶柱色谱纯化(石油醚中0-20％乙酸乙酯)，得到3,3-二氟-4-(三氟甲基磺酰氧基)-2,6-二氢吡啶-1-羧酸叔丁酯(1.2克，2.29毫摩尔，22％产率)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ6.59(s,1H),4.29(q,J＝4.3Hz,2H),4.04(t,J＝11.0Hz,2H),1.51(s,9H)。
步骤2:向包含3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吲唑(500mg，913.32μmol)、3,3-二氟-4-(三氟甲基磺酰氧基)-2,6-二氢吡啶-1-羧酸叔丁酯(436.09mg，1.19mmol)在1,4-二噁烷(5mL)和水(1mL)中的充分搅拌的溶液的50ml密封管中加入碳酸钠(290.41mg,2.74mmol,114.79μL)。反应混合物用氮气吹扫15分钟，然后加入Pd(dppf)2.二氯甲烷(111.79mg，137.00μmol)，并在80℃下持续搅拌2小时。反应混合物通过硅藻土床，用乙酸乙酯(50mL)洗涤，滤液减压浓缩以得到粗产物，粗产物通过快速硅胶柱色谱纯化，用石油醚中25％乙酸乙酯洗脱，得到4-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-2,6-二氢吡啶-1-羧酸叔丁酯(487mg，722.00μmol，79％产率)，为黄色粘性固体。LCMS(ES+):m/z 639.2[M+H]+。
步骤3:室温下向包含4-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-2,6-二氢吡啶-1-羧酸叔丁酯(480mg，706.43μmol)在无水1,4-二噁烷(5mL)中的充分搅拌溶液的100mL单颈圆底烧瓶中加入碳上氢氧化钯，20重量％，50％水(545.66毫克，777.08微摩尔)。将反应混合物在氢球囊下搅拌16小时。原料完成后，反应混合物通过硅藻土床过滤，用1,4二噁烷(100mL)和N,N-二甲基甲酰胺(20mL)洗涤，减压蒸发溶剂。粗化合物用二乙醚(20mL)研磨并在减压下干燥，得到4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯(300mg，636.15μmol，90％产率)，为灰白色固体。LCMS(ES+):m/z 463.2[M+H]+。
2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸的合成:
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步骤1:在室温和氮气氛下向4-溴-2,5-二氟-苯甲腈(25g，114.68mmol)在乙醇(250mL)中的搅拌溶液中加入甲基肼(85％水溶液，21.13克，458.72毫摩尔)。将所得反应混合物加热至80℃12小时。完成后，所得溶液用水(80毫升)淬灭，过滤所得沉淀并干燥，得到6-溴-5-氟-1-甲基-吲唑-3-胺(17.5克，70.71毫摩尔，62％产率)，为灰白色固体，其无需进一步纯化继续进行。LCMS(ES+):m/z 246.0[M+H]+。
步骤-2a:将烧瓶(2.00升)中的DBU(200克，1.31摩尔，1.00当量)和乳酸(118克，1.31摩尔，97.5毫升，1.00当量)的混合物脱气，并用N2清洗3次。所得混合物在氮气氛下于25℃搅拌12小时以得到[DBU].[Lac]离子液体(316g，粗品)，为浓稠溶液，其无需进一步纯化继续进行。
步骤2:在氮气氛下，在室温下向6-溴-5-氟-1-甲基-吲唑-3-胺(17.5克，71.70毫摩尔)在[DBU].[Lac]离子液体(18克)中的溶液中加入丙-2-烯酸乙酯(50.25克，501.92毫摩尔，54.38毫升)。将所得溶液加热至90℃48小时。完成后，用水(100ml)淬灭所得溶液，并用乙酸乙酯(2x 100mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。使用乙酸乙酯-石油醚(0-60％)通过硅胶快速柱色谱纯化所得粗产物，得到红色半固体的3-[(6-溴-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基)氨基]丙酸乙酯(11.0g，30.97mmol，43％产率)。LCMS(ES+):m/z344.4[M+H]+。
步骤3:在氮气氛下，在室温下向3-[(6-溴-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基)氨基]丙酸乙酯(11克，31.96毫摩尔)在乙醇(110毫升)中的溶液加入乙酸钠(15.73克，191.76毫摩尔，10.28毫升)和溴化氰(16.93克，159.80毫摩尔，8.38毫升)。将反应混合物加热至85℃16小时。用水(50mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(2x 100mL)提取。有机层用盐水(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到黄色固体的3-[(6-溴-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基)-氰基-氨基]丙酸乙酯(12g，25.98mmol，81％产率)，其无需进一步纯化继续进行。LCMS(ES+):m/z371.0[M+H]+。
步骤4:在室温和氮气氛下，向3-[(6-溴-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基)-氰基-氨基]丙酸乙酯(12克，32.50毫摩尔)在甲苯(120毫升)中的搅拌溶液中加入氯化铟(III)(718.91毫克，3.25毫摩尔)和乙醛肟(5.76克，97.51毫摩尔)。将反应混合物加热至110℃1小时。完成后，过滤反应混合物并在减压下浓缩。使用乙酸乙酯-石油醚(0-80％)通过硅胶快速柱色谱纯化所得粗产物，得到3-[(6-溴-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基)-氨基甲酰基-氨基]丙酸乙酯(8.0克，20.33毫摩尔，63％产率)，为灰白色固体。LCMS(ES+):m/z 387.0[M+H]+。
步骤5:在氮气氛下，在室温下，向3-[(6-溴-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基)-氨基甲酰基-氨基]丙酸乙酯(8.0克，20.66毫摩尔)在乙腈(80毫升)中的搅拌溶液中加入苄基三甲基氢氧化铵(25％甲醇溶液，4.15克，6.20毫摩尔)。反应混合物在室温下搅拌1小时。反应混合物用水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(3×80mL)提取。合并的有机层经硫酸钠干燥并减压浓缩，得到1-(6-溴-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮(5.2克，15.01毫摩尔，73％产率)，为灰白色固体。LCMS(ES+):m/z 343.0[M+H]+。
步骤-6a:在-78℃下向乙酸叔丁酯(18.67克，160.76毫摩尔，160.76毫升)在THF(200毫升)中的充分搅拌的溶液中加入二异丙基酰胺锂(THF中2M，64.30毫升)，并将反应混合物在相同温度下搅拌1小时。然后，在-78℃下向反应混合物中缓慢加入4-氧代哌啶-1-羧酸苄酯(15克，64.31毫摩尔，12.82毫升)的溶液反应混合物，然后搅拌1小时。反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭。反应混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释，用水(40mL)和盐水(40mL)洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到4-(2-叔丁氧基-2-氧代-乙基)-4-羟基-哌啶-1-羧酸苄酯(22.5克，64.02毫摩尔，100％产率)，为无色油。LCMS(ES+):m/z 294.2[M+H-56]+。
步骤-6b:向4-(2-叔丁氧基-2-氧代-乙基)-4-羟基-哌啶-1-羧酸苄酯(23克，65.82毫摩尔)在1,4-二噁烷(200毫升)中的搅拌溶液中加入钯(7.00克，65.82毫摩尔)，其通过将氢气鼓泡10分钟饱和，然后在室温下进行氢化(1个大气压)20小时。完成后，用氮气吹扫反应混合物，通过硅藻土垫过滤反应混合物。在减压下浓缩滤液，得到2-(4-羟基-4-哌啶基)乙酸叔丁酯(14g，64.94mmol，99％产率)，为灰白色固体，其无需进一步纯化继续进行。LCMS(ES+):m/z 216.3[M+H]+。
步骤6:将1-(6-溴-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮(4.4克，12.90毫摩尔)在1,4-二噁烷(80毫升)中的溶液置于密封管中，并在室温、氮气氛下加入碳酸铯(10.51克，32.25毫摩尔)和2-(4-羟基-4-哌啶基)乙酸叔丁基酯(5.55克，25.80毫摩尔)。反应混合物用氮气脱气10分钟，然后在室温下加入Pd-PEPPSI-IHept催化剂(626.85mg，644.39μmol)。将所得反应混合物加热至105℃16小时。用水(20mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(2x 50mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。所得产物通过使用乙酸乙酯-石油醚(0-80％)的硅胶快速柱色谱纯化，得到2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(4.0克，7.67毫摩尔，59％产率)，为灰白色固体。LCMS(ES+):m/z 476.2[M+H]+。
步骤7:在氮气氛下，于0℃向2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(0.5g，1.05mmol)在二氯甲烷(5mL)中的搅拌溶液中加入1,4-二噁烷中的HCl溶液(4.0M，10.51mL)。将所得溶液在室温下搅拌24小时。将所得溶液在减压下浓缩，得到2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(0.48克，884.68微摩尔，84％产率)，为淡棕色半固体，其无需进一步纯化继续进行。LCMS(ES+):m/z 420.2[M+H]+。
2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-5-氟-1-甲基-1H-吲唑-6-基)哌嗪-1-基)乙酸的合成:
/>
步骤1:将4-氨基-2,5-二氟苯甲腈(52.0克，0.33摩尔)、4-甲基苯磺酸(208克，1.21摩尔)在乙腈(1.06升)中的混合物在15℃下搅拌4小时。然后在0℃下向反应器中加入NaNO2(39.6克，0.57摩尔)和KI(95.2克，0.57摩尔)。然后混合物在15℃下搅拌12小时。完成后，混合物用亚硫酸氢钠水溶液(200mL)淬灭。水相用乙酸乙酯(500mL)提取。合并的有机相用盐水(200mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到白色固体的2,5-二氟-4-碘代苯甲腈(120g，产率48％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝7.39(s,1H),7.12-7.00(m,1H)。
步骤2:将2,5-二氟-4-碘代苯甲腈(60.0克，0.22摩尔)和甲基肼(59.6毫升，0.45摩尔)在乙醇(600毫升)中的混合物脱气和在15℃下用N2进行3次吹扫，然后将混合物在80℃下在氮气氛下搅拌16小时。反应在减压下真空浓缩。残余黄色固体在15℃下用乙醇(120mL)研磨5小时，并过滤得到白色固体的5-氟-6-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-胺(109g，83％产率)。
步骤3:将5-氟-6-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-胺(54.5克，220毫摩尔)、丙烯酸乙酯(142毫升，1.31摩尔)和[DBU].[Lac](26.4克，180毫摩尔)的混合物脱气并用N2吹扫3次，所得混合物在80℃下在氮气氛下搅拌120小时。残留物用DCM(500mL)和H2O(500mL)稀释，有机层用盐水(300mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到残留物。残留物通过硅胶柱色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝50/1至1/1)，得到黄色固体的3-((5-氟-6-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-基)氨基)丙酸乙酯(70.0g，产率48％)。
步骤4:将3-((5-氟-6-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-基)氨基)丙酸乙酯(50.0克，0.39摩尔)、NaOCN(24.9克，0.38摩尔)在HOAc(225毫升)和水(75.0毫升)中的混合物在15℃下搅拌3小时。水相用乙酸乙酯(150毫升)提取。合并的有机相用碳酸氢钠(150毫升，3.00倍体积)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到3-(1-(5-氟-6-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-基)脲基)丙酸乙酯(32.0克，57％产率)，为白色固体。
步骤5:将3-(1-(5-氟-6-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-基)脲基)丙酸乙酯(32.0克，73.0毫摩尔)和Triton B(22.0毫摩尔，4.02毫升)在乙腈(320毫升)中的混合物在15℃下搅拌3小时。过滤反应混合物以得到饼，减压浓缩饼，得到1-(5-氟-6-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(24.0g,84％产率)，为灰白色固体。LCMS(ES+):m/z 389.0[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.56(s,1H),8.27-8.01(m,1H),7.51-7.45(m,1H),3.97(s,3H),3.95-3.90(m,2H),2.79-2.73(m,2H)。
步骤6:向1-(5-氟-6-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(2.5g，6.44mmol)在t-BuOH(50mL)中的溶液加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.40g，12.8mmol)、t-BuONa(1.86g,19.3mmol)、t-BuXphos(2.74g,6.44mmol)和t-BuBrettphos Pd G3(2.56g,3.22mmol)。将反应混合物在100℃下搅拌12小时。用水(50mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(50mL×3)提取。合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩以得到残留物，残留物通过快速硅胶柱色谱(石油醚中0-100％乙酸乙酯)纯化，得到黄色固体的4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-5-氟-1-甲基-1H-吲唑-6-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(944mg，产率30％)。LCMS(ES+):m/z 447.1[M+H]+.1HNMR(400MHz,CDCl3):δ＝7.63(s,1H),7.35(d,J＝12.3Hz,1H),6.69(d,J＝6.6Hz,1H),4.08(t,J＝6.7Hz,2H),3.99-3.87(m,3H),3.70-3.60(m,4H),3.14-3.01(m,4H),2.87(t,J＝6.7Hz,2H),1.49(s,9H)。
步骤7:在氮气氛下，于5℃向4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.15克，335.97微摩尔)在二噁烷(3毫升)中的搅拌溶液中加入二噁烷中的4.0M HCl溶液(4M，83.99微升)。反应混合物在室温下搅拌6小时。完成后，反应混合物在减压下浓缩，得到1-(5-氟-1-甲基-6-哌嗪-1-基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(0.125g，309.24μmol，92％产率)，为灰白色固体。LCMS(ES+):m/z 347.1[M+H]+。
步骤8:向1-(5-氟-1-甲基-6-哌嗪-1-基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮(146毫克，421.53微摩尔)、TEA(127.96毫克，1.26毫摩尔，176.26微升)在DMF(2毫升)中的溶液中加入叔丁基溴乙酸(83.07毫克，421.53微摩尔)，并在室温下搅拌14小时。反应混合物用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL)萃取。有机层用盐水溶液(10mL)洗涤，用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯(130mg，271.01μmol，64％产率)，为浅棕色固体。LCMS(ES+):m/z 461.2[M+H]+。
步骤9:在0℃下向2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯(120mg，260.59μmol)在DCM(2mL)中的溶液中加入在1,4-二噁烷(4M，3mL)中的HCl，4M，于室温下搅拌6小时。反应混合物在减压下浓缩，得到粗产物。其用石油醚研磨以得到2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酸盐酸盐。LCMS(ES+):m/z 405.2[M+H]+。
2-(1-(3-(2,4-二氧杂四氢嘧啶-1(2H)-基)-7-氟-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸的合成:
/>
步骤1:向4-溴-2,3-二氟-苯甲腈(45g，206.42mmol)的乙醇(450mL)溶液中加入40％甲基肼(45.48g，412.85mmol)。将混合物在80℃下搅拌12小时。将混合物冷却至30℃并在真空(40℃)下浓缩以除去溶剂并过滤。滤饼用乙醇(5mL×2)洗涤，并在40℃真空下浓缩，得到黄色固体的6-溴-7-氟-1-甲基-吲唑-3-胺(44g，180.28mmol，产率87％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝7.46(d,J＝8.5Hz,1H),7.07(dd,J＝8.5,5.5Hz,1H),5.68(s,2H),3.84(s,3H)。
步骤2:向6-溴-7-氟-1-甲基-吲唑-3-胺(23.5克，96.29毫摩尔)的2N HCl(230毫升)溶液中加入丙烯酸(10.41克，144.43毫摩尔，9.91毫升)和四丁基溴化铵(3.10克，9.63毫摩尔)。将混合物在100℃下搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温并搅拌过夜，过滤，用水(250mL)洗涤。真空干燥饼，得到白色固体的3-[(6-溴-7-氟-1-甲基-吲唑-3-基)氨基]丙酸(28.5g，89.25mmol，93％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝7.50(d,J＝8.5Hz,1H),7.09(dd,J＝8.5,5.6Hz,1H),3.88(s,3H),3.45(t,J＝6.9Hz,2H),2.65–2.51(m,2H)。
步骤3:将3-[(6-溴-7-氟-1-甲基-吲唑-3-基)氨基]丙酸(28.5克，90.15毫摩尔)和氰酸钠(11.72克，180.31毫摩尔)在乙酸(280毫升)中的混合物在60℃下搅拌16小时。向该混合物中加入2N HCl(280毫升)，并在60℃下再搅拌6小时。将反应混合物冷却至室温并搅拌过夜、过滤和用水(250mL)洗涤。真空干燥饼，得到白色固体的1-(6-溴-7-氟-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮(16克，46.43毫摩尔，产率52％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.64(s,1H),7.44(d,J＝8.7Hz,1H),7.30(dd,J＝8.7,5.7Hz,1H),4.12(d,J＝1.3Hz,3H),3.94(t,J＝6.7Hz,2H),2.77(t,J＝6.7Hz,2H)。
步骤4:向1-(6-溴-7-氟-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮(1克，2.93毫摩尔)和2-(4-羟基-4-哌啶基)乙酸叔丁酯(1.58克，7.33毫摩尔)在二噁烷(10毫升)中的溶液中加入Pd-PEPPSI-IHeptCl(80mg,146.57μmol)和碳酸铯(3.34克，10.00毫摩尔)。混合物在105℃下在N2下搅拌14小时。用水(30mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(10mL×3)提取。合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过硅胶柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝1/1至0/1)纯化，得到黄色固体的2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-7-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(0.8克，1.67毫摩尔，产率57％)。LCMS(ES+):m/z 420.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.57(s,1H),7.33(d,J＝8.9Hz,1H),6.95(dd,J＝8.9,7.1Hz,1H),4.57(s,1H),4.06(d,J＝1.3Hz,3H),3.90(t,J＝6.7Hz,2H),3.18–3.10(m,4H),2.75(t,J＝6.7Hz,2H),2.38(s,2H),1.90–1.76(m,2H),1.71(d,J＝12.9Hz,2H),1.43(s,9H)。
步骤5:向2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-7-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(800毫克，1.68毫摩尔)的DCM(8毫升)溶液中加入二噁烷(4毫升,8mL)中的HCl。将混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩，得到黄色油状的2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-7-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(750mg，1.58mmol，94％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.58(s,1H),7.37(d,J＝8.9Hz,1H),7.02(t,J＝7.9Hz,1H),4.07(s,3H),3.90(t,J＝6.7Hz,2H),3.29–3.09(m,4H),2.75(t,J＝6.7Hz,2H),2.43(s,2H),1.97–1.85(m,2H),1.75(d,J＝13.1Hz,2H)。
实施例
以下实施例用于说明本发明。它们不应被视为限制本发明的范围，而仅仅是本发明的代表。
支架A的一般方案:
步骤A-环化的一般程序(程序A-A):在室温下向甲苯:四氢呋喃(5:1)中的2-氨基-5-羟基-苯甲酸(1，1当量)的搅拌溶液中加入无水原甲酸三乙酯(2当量)，随后加入胺(2，1当量)并在110℃至140℃下加热所得反应混合物12至18小时。对于用胺盐(HCl、TFA等)的环化，添加催化乙酸(0.1当量)给出了更好的转化。完成后，将反应混合物冷却至室温。向反应混合物中加入碳酸氢钠水溶液，水层用乙酸乙酯提取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸发，得到所需的粗产物。使用5％甲醇-二氯甲烷作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化粗物质，得到喹唑啉酮中间体(3)。
步骤B-O-芳化的一般程序(程序A-B):在室温下在碱如碳酸铯或叔丁醇钾(1.1当量)和(4，1.1eq.)存在下向喹唑啉酮中间体(3，1当量)在N,N-二甲基甲酰胺/THF(10mL)中的搅拌溶液中加入2,3,6-三氟苯甲腈。将所得反应混合物在室温下搅拌约16小时。完成后，用水淬灭反应混合物，用乙酸乙酯提取。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并在真空下浓缩得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，使用石油醚中50％乙酸乙酯作为洗脱剂，得到中间体(5)。
步骤C-磺酰化的一般程序(程序A-C):在室温下向中间体5(1当量)在N,N-二甲基甲酰胺中的溶液加入碳酸铯(2.5当量)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(2当量)。将所得反应混合物在约60℃至70℃之间搅拌12小时至16小时。反应完成后，将反应混合物冷却至室温，用水稀释，用乙酸乙酯提取。合并的有机层用盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩以得到粗产物。用石油醚中20-50％乙酸乙酯作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化粗化合物，得到磺酰胺中间体(7)。
注:对于大多数反应，加入水后，观察到固体沉淀。这些固体通过滤纸过滤。滤液用乙酸乙酯提取。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并在真空下浓缩，得到具有适当纯度的磺酰胺中间体(7)。
步骤D-N-Boc脱保护的一般程序(程序A-D):在0℃下磺酰胺中间体溶液(7，1当量)溶于二氯甲烷中并加入TFA(5当量)或二噁烷中的4N HCl(10当量)。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。完成后，减压除去反应溶剂，得到粗产物。用甲基叔丁基醚(MTBE)研磨粗化合物，以提供靶向配体(8)。
酸-胺偶联的一般程序(程序A-E):
在氮气下于室温下向中间体酸(9)(1当量)和胺(8)(1当量)在N,N-二甲基甲酰胺(4毫升/毫摩尔)的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙基胺(4当量)，随后在相同温度下加入HATU(1.1当量)。反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，用水稀释反应混合物，用二氯甲烷中10％异丙醇提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到粗化合物。通过反相纯化来纯化粗化合物，并将级分冻干，得到目标化合物(10)。
酸-胺偶联的一般程序(程序A-F):在氮气氛下于室温下向酸(9)(1当量)和胺(8)(1当量)的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙基胺(4当量)和COMU(1.1当量)进行。反应混合物在室温下搅拌6小时。完成后，将反应混合物用水(10mL)稀释，用二氯甲烷中的10％异丙醇(3x20mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗产物。通过反相纯化从粗产物中纯化所需产物，并将级分冻干以得到目标化合物(10)。
实施例1-3
步骤1:通过使用6-羟基-3H-喹唑啉-4-酮(5克，30.84毫摩尔)、叔丁醇钾(3.81克，33.92毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(5.33克，33.92毫摩尔，3.92毫升)按照O-芳基化的一般程序(程序A-B)合成O-芳基化的喹唑啉酮中间体，以得到化合物3,6-二氟-2-[(4-氧代-3H-喹唑啉-6基)氧基]苯甲腈(6.8g,22.21mmol,72％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):300.20[M+H]+。
步骤2a:在0℃向4-(2-羟乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2克，8.72毫摩尔，1.92毫升)在二氯甲烷(20毫升)中的搅拌溶液中加入三乙胺(882.54毫克，8.72毫摩尔，1.22毫升)，随后在相同温度下加入对甲苯磺酰氯(1.83克，9.59毫摩尔)，并将所得反应混合物加热至室温12小时。完成后，用水(40mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(2x50 mL)提取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到4-[2-(对甲苯基磺酰氧基)乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.8克，粗品)，为无色液体。LCMS m/z(ESI):284.30[M+H-CO2 tBu]+。
步骤2:在室温下，向3,6-二氟-2-[(4-氧代-3H-喹唑啉-6-基)氧基]苯甲腈(1.5g，5.01毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中的搅拌溶液中加入叔丁醇钾(618.75mg，5.51毫摩尔)，随后加入4-[2-(对甲苯基磺酰氧基)乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.92g，5.01毫摩尔)，所得反应混合物室温下加热12小时。反应完成后，用水(40mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2x50 mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用5％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂，得到4-[2-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.4g，3.93mmol，78％产率)，为浅棕色液体。LCMS m/z(ESI):509.30[M-H]-。
步骤3:使用4-[2-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]乙基]哌啶-1-羧酸叔丁基酯(0.5g，979.37微摩尔)、碳酸铯(797.75mg，2.45毫摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(270.68mg，1.96毫摩尔)，按照程序A-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用5％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂，得到4-[2-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(180mg，242.32μmol，25％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):529.30[M+H-CO2 tBu]+。
步骤4:按照程序A-D，使用4-[2-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(180毫克，286.30微摩尔)和TFA(592.00毫克，5.19毫摩尔，0.4毫升)合成所需的胺。用甲基叔丁基醚研磨所得的粗化合物，得到浅棕色半固体的6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-[2-(4-哌啶基)乙基]喹唑啉(200mg，粗产物)。LCMS m/z(ESI):529.20[M+H]+。
实施例1
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]乙基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应(程序A-E)制备目标化合物。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-[2-(4-哌啶基)乙基]喹唑啉(20毫克，37.84微摩尔)、HATU(17.26毫克，45.40微摩尔)和N,N-二异丙基乙胺(24.45毫克，189.18微摩尔，32.95微升)和2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(13.75mg,37.84μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗产物通过制备型高效液相色谱纯化进行纯化(方法：10mm乙酸铵:乙腈，和柱：BRIDGE C8(19x 150)MM,5MIC)，并将纯级分冻干，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-氧代-喹唑啉(9.77mg,10.93μmol,29％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):874.50[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.75(bs,1H),8.38(s,1H),7.76(d,J＝9.20Hz,1H),7.63(dd,J＝2.40,8.80Hz,1H),7.48-7.46(m,1H),7.35-7.29(m,2H),6.99(t,J＝8.40Hz,1H),6.49-6.44(m,2H),6.07(d,J＝7.60Hz,1H),4.33-4.31(m,1H),4.10-4.95(m,2H),3.90-3.75(m,2H),3.25-3.15(m,2H),3.03(q,J＝7.20Hz,2H),2.78-2.67(m,7H),2.62(s,3H),2.10-2.08(m,2H),1.95-1.70(m,8H),1.70-1.50(m,4H),1.25-1.10(m,1H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例2
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]乙基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应(程序A-E)制备目标化合物。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-[2-(4-哌啶基)乙基]喹唑啉(20毫克，37.84微摩尔)、HATU(17.26毫克，45.40微摩尔)和N,N-二异丙基乙胺(24.45毫克，189.18微摩尔，32.95微升)和2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(13.18mg,37.84μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗产物通过制备型高效液相色谱纯化(方法：10mm乙酸铵:乙腈，柱：BRIDGE C8(19X150)MM,5MIC)再次纯化粗产物，并将纯级分冻干，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]乙基-4-氧代-喹唑啉(10.57mg,11.76μmol,31％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):859.40[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.86(s,1H),9.79(bs,1H),8.39(s,1H),7.76(d,J＝8.80Hz,1H),7.65(d,J＝2.80Hz,1H),7.63-7.62(m,1H),7.35-7.27(m,3H),7.07(t,J＝3.20Hz,2H),4.34-4.31(m,1H),4.03-3.99(m,2H),3.95-3.80(m,3H),3.25-3.15(m,2H),3.04(q,J＝7.20Hz,2H),2.97-2.92(m,3H),2.75-2.60(m,7H),2.25-2.21(m,1H),2.10-1.98(m,1H),1.95-1.70(m,7H),1.65-1.50(m,4H),1.25-1.10(m,1H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例3
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-3-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]乙基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应(程序A-E)制备目标化合物。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-[2-(4-哌啶基)乙基]喹唑啉(20毫克，37.84微摩尔)、HATU(17.26毫克，45.40微摩尔)和N,N-二异丙基乙胺(24.45毫克，189.18微摩尔，32.95微升)和2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(13.75mg,37.84μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗产物通过制备型高效液相色谱纯化(方法：10mm乙酸铵:乙腈和柱：BRIDGE C8(19×150)MM，5MIC)再次纯化粗产物，并将纯级分冻干，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]乙基]-4-氧代-喹唑啉(5.15mg,5.81μmol,15％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):874.30[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),8.40(s,1H),7.76(d,J＝8.80Hz,1H),7.63(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.46-7.44(m,1H),7.35-7.29(m,2H),6.95(d,J＝12.80Hz,1H),6.86-6.84(m,1H),6.80-6.76(m,1H),5.45(d,J＝6.40Hz,1H),4.39-4.31(m,2H),4.31-4.01(m,3H),3.90-3.75(m,2H),3.25-3.15(m,3H),3.02(q,J＝6.80Hz,2H),2.82-2.70(m,2H),2.70-2.55(m,6H),2.08-1.97(m,3H),1.90-1.70(m,5H),1.70-1.50(m,4H),1.24-1.15(m,2H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例4-6
步骤1:按照程序A-B，使用6-羟基-3H-喹唑啉-4-酮(5克，30.84毫摩尔)、叔丁醇钾(3.81克，33.92毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(5.33克，33.92毫摩尔，3.92毫升)合成O-芳基化喹唑啉酮中间体，得到化合物3,6-二氟-2-[(4-氧代-3H-喹唑啉-6-基)氧基]苯甲腈(6.8g,22.21mmol,72％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):300.20[M+H]+。
步骤2a:在0℃向4-(3-羟丙基)哌啶-1-羧酸酯(2.5g，10.27mmol)在二氯甲烷(15mL)中的搅拌溶液中加入三乙胺(2.60g，25.68mmol，3.58mL)，随后在相同温度下加入对甲苯磺酰氯(2.15g，11.30mmol)，并将所得反应混合物加热至室温12小时。反应完成后，用水(50mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2x70 mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用石油醚中15％乙酸乙酯作为洗脱剂，得到4-[3-(对甲苯基磺酰氧基)丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.2克，5.42毫摩尔，53％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):298.30[M+H-CO2 tBu]+。
步骤2:在室温下，向3,6-二氟-2-[(4-氧代-3H-喹唑啉-6-基)氧基]苯甲腈(1.5g，5.01毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的搅拌溶液中加入叔丁醇钾(618.75mg，5.51毫摩尔)，随后加入4-[3-(对甲苯基磺酰氧基)丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.19g，5.51毫摩尔)，且所得反应混合物在室温下搅拌3小时。反应完成后，用水(50mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2x100 mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用5％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂，得到4-[3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.4g，3.66mmol，73％产率)，为浅棕色液体。LCMS m/z(ESI):523.30[M-H]-。
步骤3:使用叔丁基4-[3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]丙基]哌啶-1-羧酸酯(700mg，1.33毫摩尔)、碳酸铯(1.09g，3.34毫摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(368.81mg，2.67毫摩尔)，按照程序A-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用5％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂，得到4-[3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(260mg，355.98μmol，27％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):641.30[M-H]-。
步骤4:按照程序A-D，使用4-[3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(260毫克，404.52微摩尔)和TFA(740.00毫克，6.49毫摩尔，0.5毫升)合成所需的胺。用甲基叔丁基醚研磨所得的粗化合物，得到浅棕色半固体的6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-[3-(4-哌啶基)丙基]喹唑啉(280mg，粗品)。LCMS m/z(ESI):543.30[M+H]+。
实施例4
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]丙基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应(程序A-E)制备目标化合物。使用作为其TFA盐的6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-[3-(4-哌啶基)丙基]喹唑啉(20毫克，30.46微摩尔)、作为其TFA盐的2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸(14毫克，30.47微摩尔)、N,N-二异丙基乙胺(371.00mg,2.87mmol,0.50mL)和HATU(14mg,36.82μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗产物通过制备型高效液相色谱纯化进行纯化，方法：10mm乙酸铵:乙腈，和纯级分经冻干以得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]丙基]-4-氧代-喹唑啉(9.98mg，11.08μmol，36％产率)，为淡黄色固体。LCMS m/z(ESI):870.40[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.79(s,1H),9.62(bs,1H),8.38(s,1H),7.78(d,J＝7.20Hz,1H),7.66(dd,J＝4.40,6.00Hz,1H),7.46(t,J＝10.00Hz,1H),7.37-7.28(m,2H),6.97(d,J＝8.40Hz,2H),6.67(d,J＝10.80Hz,2H),5.73(d,J＝7.60Hz,1H),4.35-4.28(m,2H),4.00-3.75(m,5H),3.35-3.27(m,2H),3.02(q,J＝6.80Hz,2H),2.82-2.65(m,3H),2.65-2.55(m,6H),2.09-2.08(m,1H),1.89-1.72(m,9H),1.60-1.45(m,2H),1.26-1.22(m,2H),1.15-1.05(m,1H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H),0.98-0.85(m,1H)。
实施例5
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]丙基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-[3-(4-哌啶基)丙基]喹唑啉作为其TFA盐(20毫克，30.46微摩尔)、2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸作为其HCl盐(12毫克，31.18微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(371.00mg,2.87mmol,0.50mL)和HATU(14mg,36.82μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗产物通过制备型高效液相色谱纯化，方法：10mm乙酸铵:乙腈，和纯级分经冻干以得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]丙基]-4-氧代-喹唑啉(11.02mg，12.46μmol，41％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):873.40[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.86(s,1H),9.80(bs,1H),8.37(s,1H),7.77(d,J＝8.92Hz,1H),7.65(dd,J＝3.04,8.90Hz,1H),7.62-7.52(m,1H),7.37-7.34(m,2H),7.29(t,J＝8.16Hz,1H),7.09-7.06(m,2H),4.40-4.30(m,1H),3.95(t,J＝7.16Hz,2H),3.88(dd,J＝4.80,11.98Hz,1H),3.85-3.75(m,1H),3.30-3.25(m,2H),3.06(q,J＝7.12Hz,2H),3.00-2.85(m,2H),2.80-2.65(m,4H),2.67(s,3H),2.60-2.55(m,2H),2.24-2.21(m,1H),2.08-1.82(m,5H),1.80-1.65(m,5H),1.65-1.50(m,1H),1.27-1.23(m,2H),1.15-1.10(m,2H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例6
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]丙基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应(程序A-E)制备目标化合物。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-[3-(4-哌啶基)丙基]喹唑啉作为其TFA盐(20毫克，30.46微摩尔)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸作为其HCl盐(13毫克，32.51微摩尔)、N,N-二异丙基乙胺(371.00mg,2.87mmol,0.50mL)和HATU(14mg,36.82μmol)以得到粗产物。粗产物通过制备型高效液相色谱纯化进行纯化，方法：10mm乙酸铵:乙腈，和纯级分冻干，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]丙基]-4-氧代-喹唑啉(6.90mg，7.20mol，24％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):887.80[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.69(bs,1H),8.38(s,1H),7.77(d,J＝8.80Hz,1H),7.65(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.60-7.50(m,1H),7.36-7.33(m,2H),7.01-6.97(m,1H),6.50-6.44(m,2H),6.08(d,J＝7.60Hz,1H),4.34-4.31(m,2H),4.00-3.75(m,5H),3.40-3.30(m,2H),3.05(q,J＝7.20Hz,2H),3.00-2.90(m,2H),2.77-2.71(m,3H),2.68(s,3H),2.67-2.59(m,2H),2.08-2.07(m,1H),1.91-1.80(m,3H),1.76-1.72(m,6H),1.60-1.50(m,1H),1.26-1.23(m,2H),1.20-1.05(m,1H),1.10(t,J＝6.80Hz,3H),0.95-0.85(m,1H)。
实施例7
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]苯基]哌啶-1-基]-2-氧代乙基]哌啶-4-基]丙基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:在室温下，向作为其TFA盐的6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-[3-(4-哌啶基)丙基]喹唑啉(30毫克，45.69微摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(2毫升)中的搅拌溶液中加入三乙胺(23.12毫克，228.43微摩尔，31.84微升)，随后加入2-溴乙酸叔丁酯(10毫克，51.27μmol,7.52μL)，且反应混合物在室温下搅拌12小时。反应完成后，用水(5mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2x5mL)提取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到2-[4-[3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]丙基]-1-哌啶基]乙酸酯(25mg，31.94μmol，70％产率)，为淡棕色粘性液体。该粗化合物无需任何纯化即可进行下一步。LCMS m/z(ESI):657.40[M+H]+。
步骤2:按照程序A-D，使用2-[4-[3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]丙基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(25毫克，38.07微摩尔)和TFA(43.40毫克，380.65微摩尔，29.33微升)合成所需的胺。将得到的粗化合物用甲基叔丁基醚研磨，得到2-[4-[3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]丙基]-1-哌啶基]乙酸作为其TFA盐(22mg，24.40μmol，64％产率)，为淡棕色粘性液体。该粗化合物无需任何纯化即进入下一步，LCMS m/z(ESI):601.40[M+H]+。
步骤3:通过HATU介导的酸-胺偶联反应(程序A-E)制备目标化合物。使用2-[4-[3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]丙基]-1-哌啶基]乙酸作为其TFA盐(22毫克，30.78微摩尔)、3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮(13毫克，32.39微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(371.00mg,2.87mmol,0.50mL)和HATU(15mg,39.45μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗产物通过制备型高效液相色谱纯化进行纯化，方法：10mm乙酸铵:乙腈，和纯级分经冻干以得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]丙基]-4-氧代-喹唑啉(10.56mg，11.45μmol,37％产率)，为绿色固体。LCMS m/z(ESI):870.60[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.78(s,1H),9.60(bs,1H),8.36(s,1H),7.76(d,J＝8.96Hz,1H),7.63(dd,J＝3.00,8.92Hz,1H),7.46(t,J＝9.76Hz,1H),7.34-7.28(m,2H),6.95(d,J＝8.56Hz,2H),6.62(d,J＝8.60Hz,2H),5.70(d,J＝7.52Hz,1H),5.70(d,J＝7.52Hz,1H),4.55-4.45(m,1H),4.32-4.22(m,1H),4.00-3.80(m,5H),3.34-3.08(m,3H),3.02(q,J＝7.16Hz,2H),2.74-2.67(m,5H),2.64(s,3H),2.09-2.08(m,1H),1.95-1.65(m,8H),1.60-1.45(m,1H),1.39-1.24(m,5H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例8和9
步骤1:使用2-氨基-5-羟基-苯甲酸(1克，6.53毫摩尔)、原甲酸三乙酯(1.45克，9.80毫摩尔，1.63毫升)和4-(2-氨基乙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.65克，7.18毫摩尔)按照程序A-A合成喹唑啉酮中间体。通过使用5％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂的硅胶快速柱色谱从粗产物中纯化所需化合物，得到棕色固体的4-[2-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)乙基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(750mg，2.00毫摩尔，31％产率)。LCMS m/z(ESI):375.20[M+H]+。
步骤2:按照程序A-B使用叔丁基4-[2-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)乙基]哌嗪-1-羧酸酯(750毫克，2.00毫摩尔)、叔丁醇钾(247.24毫克，2.20毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(346.13毫克，2.20毫摩尔，254.51微升)合成O-芳基化喹唑啉酮中间体，以获得化合物叔丁基4-[2-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]乙基]哌嗪-1-羧酸酯(1g,1.80mmol,90％产率)，为棕色固体。LCMS m/z(ESI):512.20[M+H]+。
步骤3:使用叔丁基4-[2-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]乙基]哌嗪-1-羧酸酯(1克，1.95毫摩尔)、碳酸铯(1.59克，4.89毫摩尔)和加入[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(540.31毫克，3.91毫摩尔)，按照程序A-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，使用5％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂，得到浅棕色固体的4-[2-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]乙基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(770mg，1.10mmol，56.02％产率)。LCMS m/z(ESI):630.10[M+H]+。
步骤4:按照程序A-D，使用叔丁基4-[2-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]乙基]哌嗪-1-羧酸酯(770毫克，1.22毫摩尔)和4N HCl在二噁烷(2.0毫升)中合成所需的胺。所得的粗化合物用甲基叔丁基醚研磨，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基乙基)喹唑啉作为其HCl盐(630mg，974.42μmol，80％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):530.20[M+H]+。
实施例8
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]乙基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应(程序A-E)制备目标化合物。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基乙基)喹唑啉(20毫克，37.77微摩尔)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(13.72毫克，37.77微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(24.40mg,188.83μmol,32.89μL)和HATU(17.23mg,45.32μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗产物通过制备型高效液相色谱纯化方法进行纯化：10mm乙酸铵:乙腈，和纯级分经冻干以得到产物6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]乙基]-4-氧代-喹唑啉(7.34mg，8.34μmol，22％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):875.30[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),9.78(bs,1H),8.32(s,1H),7.76(d,J＝9.20Hz,1H),7.65(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.53(t,J＝10.00Hz,1H),7.35-7.32(m,2H),6.98(t,J＝8.40Hz,1H),6.49-6.44(m,2H),6.07(d,J＝7.60Hz,1H),4.35-4.31(m,1H),4.29-4.09(m,2H),3.85-3.70(m,2H),3.50-3.40(m,5H),3.41-3.22(m,3H),3.04(q,J＝6.80Hz,2H),2.78-2.70(m,3H),2.64(s,3H),2.60-2.55(m,4H),2.48-2.38(m,2H),2.10-2.07(m,1H),1.91-1.76(m,5H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例9
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]乙基]-4-氧代喹唑啉
/>
通过HATU介导的酸-胺偶联反应(程序A-E)制备目标化合物。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基乙基)喹唑啉(20mg，37.77μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸(13.04mg，37.77μmol)、N,N-二异丙基乙基胺(24.40mg,188.83μmol,32.89μL)和HATU(17.23mg,45.32μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗产物通过制备型高效液相色谱纯化方法进行纯化：10mm 10mm乙酸铵:乙腈，和纯级分冻干以得到产物6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]乙基]-4-氧代-喹唑啉(7.97mg，9.28μmol，25％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):857.20[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.78(s,1H),9.70(bs,1H),8.31(s,1H),7.76(d,J＝8.92Hz,1H),7.64(dd,J＝2.96,8.92Hz,1H),7.50(t,J＝9.76Hz,1H),7.35-7.30(m,2H),6.96(d,J＝8.32Hz,2H),6.63(d,J＝8.44Hz,2H),5.72(d,J＝7.48Hz,1H),4.30-4.25(m,1H),4.10-4.07(m,2H),3.90-3.78(m,2H),3.45-3.35(m,5H),3.25-3.15(m,3H),3.03(q,J＝7.12Hz,2H),2.80-2.65(m,3H),2.64(s,3H),2.62-2.56(m,4H),2.48-2.38(m,2H),2.12-2.08(m,1H),1.88-1.76(m,5H),1.03(t,J＝7.16Hz,3H)。
实施例10
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[4-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]丁-2-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:在0℃向4-(3-羟丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(100毫克，410.94微摩尔)在二氯甲烷(1.6毫升)中的搅拌溶液中加入氯铬酸吡啶(132.87毫克，616.41微摩尔)，并在室温下继续反应2小时。完成后，用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)淬灭反应混合物，并用二氯甲烷(2×10mL)提取。合并的有机层用盐水溶液(15mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到4-(3-氧代丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.07g，174μmol，42.3％产率)，为粘性液体。LCMSm/z(ESI):186.1[M+H-tBu]+。
步骤2:在-78℃下向4-(3-氧代丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(3克，12.43毫摩尔)在THF(12毫升)的搅拌溶液中滴加甲基溴化镁(2.17克，18.17毫摩尔，2.10毫升)，并在-78℃下继续反应2小时。完成后，将反应混合物用NH4Cl饱和溶液(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(2x50mL)提取，浓缩有机相，得到粗物质，其用柱色谱纯化，用石油醚中0-40％乙酸乙酯洗脱，得到4-(3-羟基丁基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.3g，8.49mmol，68％产率)，为无色液体。LCMSm/z(ESI):158.2[M+H-CO2 tBu]+。
步骤3:在0℃向4-(3-羟基丁基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.2克，8.55毫摩尔)在二氯甲烷(30毫升)中的搅拌溶液中加入氯铬酸吡啶(2.76克，12.82毫摩尔)，并在室温下继续反应4小时。完成后，用饱和碳酸氢钠(50mL)溶液淬灭反应混合物，并用二氯甲烷(2x 50mL)提取。浓缩合并的有机层，得到粗物质，其用柱色谱纯化，用石油醚中0-40％乙酸乙酯洗脱，得到4-(3-氧代丁基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2克，7.60毫摩尔，89％产率)。LCMS m/z(ESI):156.1[M+H-CO2 tBu]+。
步骤4:在室温下，向4-(3-氧代丁基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2克，7.83毫摩尔)在甲醇(30毫升)中的搅拌溶液中加入乙酸铵(6.04克，78.32毫摩尔)，并在室温下搅拌反应混合物1.5小时，然后在室温下将氰基硼氢化钠(738.30毫克，11.75毫摩尔)逐份加入上述反应混合物中，并回流16小时。完成后，将反应混合物真空浓缩，得到粗产物，其用水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2x 50mL)提取。合并的有机层用饱和NH4Cl溶液洗涤，用硫酸钠干燥，真空浓缩，得到4-(3-氨基丁基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.4g，4.70mmol，60％产率)。LCMS m/z(ESI):257.5[M+H]+。
步骤5:按照用于环化的一般程序(程序A-A)使用4-(3-氨基丁基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.3克，5.07毫摩尔)、2-氨基-5-羟基苯甲酸(776.48毫克，5.07毫摩尔)、原甲酸三乙酯(1.88克，12.68毫摩尔，2.11毫升)合成喹唑啉酮中间体，得到4-(3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)丁基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.6g,1.87mmol,37％产率)。LCMS m/z(ESI):402.3[M+H]+。
步骤6:使用4-[3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)丁基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.5克，3.74毫摩尔)、叔丁醇钾(628.84毫克，5.60毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(704.28毫克，4.48毫摩尔，517.85微升)按照O-芳化的一般程序(程序A-B)合成O-芳基化的喹唑啉酮中间体。粗反应混合物用柱色谱纯化，用0-80％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到黄色固体的纯4-[3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]丁基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(800mg，1.37mmol，37％产率)。LCMS m/z(ESI):483.2[M+H-tBu]+。
步骤7:使用叔丁基4-[3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]丁基]哌啶-1-羧酸酯(0.7克，1.30毫摩尔)、[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(359.21毫克，2.60毫摩尔)和碳酸铯(1.27克，3.90毫摩尔)按照程序A-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体。使用硅胶快速柱色谱纯化所得粗化合物，用二氯甲烷中0-10％甲醇洗脱，得到纯4-[3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]丁基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(560mg，596.86μmol，46％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):655.1[M-H]-。
步骤8:需要的胺通过TFA介导的N-Boc脱保护(程序A-D)合成。使用三氟乙酸(4.44g，38.94mmol，3mL)对叔丁基4-[3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]丁基]哌啶-1-羧酸酯(560mg，852.66μmol)进行N-Boc脱保护，得到作为其TFA盐的粗6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[1-甲基-3-(4-哌啶基)丙基]-4-氧代-喹唑啉(430mg,702.95μmol,82％产率)，为粘性液体。LCMS m/z(ESI):557.3[M+H]+。
步骤9:通过HATU介导的酸-胺偶联反应(程序A-E)制备目标化合物。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[1-甲基-3-(4-哌啶基)丙基]-4-氧代-喹唑啉(430mg，772.48μmol)、2-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(308.87mg，772.48μmol)、HATU(440.58mg,1.16mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.50g,11.59mmol,2.02mL)进行酰胺偶联。所得粗化合物通过反相柱色谱纯化[流动相A:0.1％乙酸铵水溶液，流动相B:乙腈；柱:100gRf C18]以得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]-1-甲基-丙基]-4-氧代-喹唑啉(75mg，80.66μmol，10％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):902.3[M+H]+1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),9.66(s,1H),8.41(s,1H),7.76(d,J＝8.80Hz,1H),7.64(dd,J＝2.80,9.20Hz,1H),7.48-7.57(m,1H),7.33(d,J＝2.80Hz,1H),7.30-7.34(m,1H),6.97-7.02(m,1H),6.48(d,J＝7.60Hz,1H),6.46(d,J＝12.80Hz,1H),6.08(d,J＝7.20Hz,1H),4.85-4.72(m,1H),4.28-4.37(m,1H),3.71-3.82(m,1H),3.20-3.40(m,2H),2.92-3.11(m,3H),2.52-2.81(m,6H),2.62(s,3H),2.05-2.11(m,2H),1.60-1.98(m,10H),1.40-1.52(m,2H),1.42(d,J＝6.80Hz,3H),1.15-1.26(m,1H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H),0.82-1.10(m,3H)。
实施例11
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]丁基]-4-氧代喹唑啉
/>
步骤1:将氢化纳(60％分散体，矿物油中，1.21克，52.79毫摩尔)在四氢呋喃(40毫升)和2-二乙氧基磷酰基乙酸乙酯(8.88克，39.60毫摩尔，7.86毫升)中的搅拌溶液溶解在四氢呋喃(10毫升)中，并在0℃下加入到反应混合物中，反应混合物在室温下搅拌2小时。然后在室温下向反应混合物中加入4-乙酰哌啶-1-羧酸叔丁酯(6克，26.40毫摩尔)。反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完成后，反应混合物用冷水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(2x100mL)提取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用石油醚中15-25％乙酸乙酯作为洗脱剂，得到4-[(E)-3-乙氧基-1-甲基-3-氧代-丙-1-烯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(4克，10.76毫摩尔，41％产率)，为无色液体。LCMS m/z(ESI):198.20[M+H-CO2 tBu]+。
步骤2:在室温下，向4-[(E)-3-乙氧基-1-甲基-3-氧代-丙-1-烯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(4克，13.45毫摩尔)在脱气的无水甲醇(40毫升)中的搅拌溶液中加入10％钯/碳(基于干重)(400毫克，1.35毫摩尔)。所得悬浮液在氢气球囊下于室温下搅拌16小时。反应完成后，反应混合物通过硅藻土垫过滤，用甲醇洗涤。将滤液减压浓缩，得到4-(3-乙氧基-1-甲基-3-氧代丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的粗混合物(3.9g，12.24mmol，91％产率)，为无色液体。LCMS m/z(ESI):200.1[M+H-CO2 tBu]+。
步骤3:在氮气氛下，在0℃向4-(3-乙氧基-1-甲基-3-氧代-丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(3克，10.02毫摩尔)的无水乙醇(30毫升)的搅拌溶液中加入氯化钙(1.11克，10.02毫摩尔)和硼氢化钠(568.58毫克，15.03毫摩尔)。将所得悬浮液在室温下搅拌24小时。反应完成后，用冷水(50mL)处理反应混合物，用乙酸乙酯(2X 100mL)提取。合并的有机物用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到黄色液体的粗产物4-(3-羟基-1-甲基-丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.8克，9.79毫摩尔，98％产率)。LCMS m/z(ESI):158.1[M+H-CO2 tBu]+。
步骤4:在氮气氛下，于0℃向4-(3-羟基-1-甲基丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.7克，10.49毫摩尔)在无水二氯甲烷(30毫升)中的搅拌溶液中加入三乙胺(2.65克，26.23毫摩尔，3.66毫升)，随后加入甲烷磺酰氯(1.80克，15.74毫摩尔，1.22毫升)。所得悬浮液在室温下搅拌16小时。反应完成后，用冰水处理反应混合物，并用二氯甲烷(2x 100mL)提取。合并的有机物用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到黄色液体的粗产物4-(1-甲基-3-甲磺酰氧基-丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.8克，8.26毫摩尔，产率79％)。LCMSm/z(ESI):236.0[M+H-CO2 tBu]+。
步骤5:在氮气氛下，在室温下向4-(1-甲基-3-甲磺酰氧基-丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.8克，8.35毫摩尔)的无水N,N-二甲基甲酰胺(30毫升)的搅拌溶液中加入叠氮化钠(813.94毫克，12.52毫摩尔)。完全加入后，将反应混合物在氮气氛下于70℃搅拌16小时。然后将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(100mL)稀释，并依次用水(2x 50mL)和盐水(20mL)洗涤。分离的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸发至干，得到4-(3-叠氮基-1-甲基丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的粗残留物(2.35克，8.32毫摩尔，100％产率)，为棕色液体。通过LCMS未显示电离。这在没有任何纯化的情况下进行下一步。
步骤6:在室温和氮气氛下，向4-(3-叠氮基-1-甲基-丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(3g，10.62毫摩尔)在甲醇(30毫升)中的搅拌溶液中加入10％钯碳(600毫克，10.62毫摩尔)。将所得悬浮液在氢气氛球囊下于室温下搅拌3小时。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土床过滤，用甲醇(100mL)洗涤。减压浓缩合并的滤液，得到浅棕色油状的粗产物4-(3-氨基-1-甲基-丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2克，6.47毫摩尔，61％产率)。LCMS m/z(ESI):157.2[M+H-CO2 tBu]+。
步骤7:在室温和氮气氛下，向4-(3-氨基-1-甲基丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(920.83mg，3.59mmol)和2-氨基-5-羟基苯甲酸(500mg，3.27mmol)在无水甲苯(10mL)中的搅拌溶液中加入原甲酸三乙酯(629.05mg，4.24mmol，706.00μL)。将所得混合物在110℃下搅拌16小时。在TLC显示反应完成后，将反应混合物冷却至室温，用水(70mL)稀释，用乙酸乙酯(2x150 mL)提取。合并的有机物用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到浅棕色油状的叔丁基4-[3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-甲基-丙基]哌啶-1-羧酸酯(900毫克，1.68毫摩尔，产率51％)。LCMS m/z(ESI):402.20[M+H]+。
步骤8:O-芳基化的喹唑啉酮中间体按照程序A-B使用叔丁基4-[3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-甲基-丙基]哌啶-1-羧酸酯(900毫克，2.24毫摩尔)、碳酸铯(1.10克，3.36毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(422.57毫克，2.69毫摩尔，310.71微升)合成。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用石油醚中70-75％乙酸乙酯作为洗脱剂，得到4-[3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-甲基-丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(800mg，1.31mmol，58％产率)，为黄色粘性液体。LCMS m/z(ESI):439.1[M+H-CO2 tBu]+。
步骤9:使用4-[3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-甲基-丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(800毫克，1.49毫摩尔)、碳酸铯(1.21克，3.71毫摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(307.89毫克，2.23毫摩尔)按照程序A-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体，得到粗产物叔丁基4-[3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-甲基-丙基]哌啶-1-羧酸酯(800mg,682.13μmol,46％产率)，为黄色粘性固体。LCMS m/z(ESI):557.10[M+H-CO2 tBu]+。
步骤10:使用叔丁基4-[3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-甲基-丙基]哌啶-1-羧酸酯(800毫克，1.22毫摩尔)和在二噁烷(6毫升)中的HCl溶液4.0M，按照程序A-D合成所需的胺。所得的粗化合物用甲基叔丁基醚研磨，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-[3-(4-哌啶基)丁基]喹唑啉，作为其HCl盐(600mg，778.94μmol，64％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):557.20[M+H]+。
步骤11:通过HATU介导的酸-胺偶联反应(程序A-E)制备目标化合物。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(137.53mg，343.95μmol)、6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-[3-(4-哌啶基)丁基]喹唑啉(170mg，286.62μmol)、N,N-二异丙基乙胺(222.26mg,1.72mmol,299.54μL)和HATU(119.88mg,315.29μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗产物使用Isolera(100gRf C18(Teledyne ISCO Corp.,Thousand Oaks,CA)，方法:10mM水中乙酸铵:乙腈)通过C18反相柱色谱纯化，并将纯级分冻干，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]乙酰基]-4-哌啶基]-4-氧代-喹唑啉(95mg,105.10μmol,37％产率)，为淡棕色固体。LCMS m/z(ESI):902.30[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),9.64(bs,1H),8.40(s,1H),7.76(d,J＝9.20Hz,1H),7.64(dd,J＝2.80,9.00Hz,1H),7.51(s,1H),7.34-7.32(m,2H),7.05-6.90(m,1H),6.47(t,J＝12.00Hz,2H),6.08(d,J＝7.60Hz,1H),4.50-4.40(m,1H),4.45-4.38(m,1H),4.10-3.75(m,5H),3.40-3.20(m,2H),3.03(q,J＝7.20Hz,2H),3.00-2.90(m,2H),2.85-2.70(m,3H),2.63(s,3H),2.60-2.55(m,2H),2.15-2.05(m,1H),1.95-1.70(m,7H),1.70-1.55(m,2H),1.55-1.30(m,3H),1.25-1.10(m,1H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H),0.92(d,J＝2.00Hz,3H)。
实施例12
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-4-甲基哌啶-4-基]丙基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:在室温下，向4-甲酰基-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.9克，8.36毫摩尔)在THF(30毫升)的搅拌溶液中加入2-二乙氧基磷酰基乙腈(85.72毫克，483.94微摩尔，77.93微升)。然后在0℃向反应中加入叔丁醇钾(1.13克，10.03毫摩尔)，并在室温下继续反应搅拌16小时。完成后，用水(100mL)稀释反应混合物，并在乙酸乙酯(2x 100mL)中提取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用0-5％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂洗脱，得到4-[(E)-2-氰基乙烯基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(1克，3.79毫摩尔，45％产率)，为无色液体。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ＝6.71(d,J＝16.80Hz,1H),6.38(d,J＝12.40Hz,1H),5.44(d,J＝12.40Hz,1H),5.32(d,J＝-16.80Hz,1H),3.64-3.70(m,2H),3.42-3.47(m,4H),3.17-3.23(m,2H),1.94-1.98(m,2H),1.53-1.62(m,4H),1.49(s,18H),1.28(s,3H),1.10(s,3H)。
步骤2:向3-[1-(2-羟基乙酰)-4-甲基-4-哌啶基]丙腈(1克，4.76毫摩尔)在乙醇(10毫升)和氢氧化铵(10毫升)中的搅拌溶液中加入氧化铝上铑(489.39毫克，4.76毫摩尔)，并将反应加热至40℃达16小时。完成后，用乙醇将反应混合物通过硅藻土床过滤并浓缩，得到粗1-[4-(3-氨基丙基)-4-甲基-1-哌啶基]-2-羟基乙酮(1克，4.67毫摩尔，98％产率)，其无需进一步纯化即可进行下一步。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝3.41-3.45(m,2H),3.10-3.22(m,2H),2.65-2.80(m,2H),1.49-1.54(m,2H),1.39(s,9H),1.21-1.31(m,6H),0.88(s,3H)。
步骤3:按照环化的一般程序(程序A-A)使用4-(3-氨基丙基)-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(1克，3.90毫摩尔)、原甲酸三乙酯(578.04毫克，3.90毫摩尔，648.76微升)和2-氨基-5-羟基-苯甲酸(597.29毫克，3.90毫摩尔)合成喹唑啉酮中间体，得到4-(3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)丙基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(650毫克，1.30毫摩尔，33％产率)，为淡棕黄色固体。LCMS m/z(ESI):402.0[M+H]+。
步骤4:通过使用叔丁基4-[3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)丙基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸酯(600毫克，1.49毫摩尔)、碳酸铯(1.46克，4.48毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(234.76毫克，1.49毫摩尔，172.62微升)按照O-芳化的一般程序(程序A-B)合成O-芳化的喹唑啉酮中间体，以提供叔丁基4-[3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]丙基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸酯(260mg,459μmol,31％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):537.2[M-H]-。
步骤5:使用叔丁基4-[3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]丙基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸酯(260毫克，482.75微摩尔)、[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(100.06毫克，724.12微摩尔)和碳酸铯(314.58毫克，965.49微摩尔)按照程序A-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体以得到粗残留物4-[3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]丙基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(200mg,267.98μmol,56％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):557.2[M+H]+。
步骤6:通过TFA介导的N-Boc脱保护(程序A-D)合成所需的胺。使用TFA(694.45毫克，6.09毫摩尔，469.22微升)对4-[3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]丙基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(200毫克，304.52微摩尔)进行N-Boc脱保护，得到作为其TFA盐的6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[3-(4-甲基-4-哌啶基)丙基]-4-氧代-喹唑啉(200mg,271.37μmol,89％产率)，为淡棕黄色粘性液体。LCMS m/z(ESI):556.9[M+H]+。
步骤7:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[3-(4-甲基-4-哌啶基)丙基]-4-氧代-喹唑啉(200mg，359.29μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(130.56mg，359.29μmol)、HATU(163.94mg,431.15μmol)和N,N-二异丙基乙胺(278.62mg,2.16mmol,375.49μL)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用在0.1％甲酸水溶液中的45％乙腈洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-甲基-4-哌啶基]丙基]-4-氧代喹唑啉(95mg，99.08μmol,28％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):902.3[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),9.79(s,1H),8.38(s,1H),7.78(dd,J＝3.20,8.80Hz,1H),7.52-7.69(m,2H),7.34-7.41(m,2H),6.94-7.04(m,1H),6.49(d,J＝7.60Hz,1H),6.46(d,J＝12.40Hz,1H),6.10(d,J＝7.60Hz,1H),4.30-4.36(m,1H),3.91-4.15(m,4H),3.65-3.75(m,1H),3.15-3.41(m,3H),3.02-3.11(m,2H),2.61-2.95(m,4H),2.68(s,3H),2.52-2.61(m,2H),2.02-2.12(m,1H),1.71-2.01(m,5H),1.62-1.71(m,2H),1.21-1.40(m,7H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H),0.92(s,3H)。
实施例13
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-4-氟哌啶-4-基]乙基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:使用4-(2-氨基乙基)-4-羟基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(1克，4.09毫摩尔)、2-氨基-5-羟基-苯甲酸(752.10毫克，4.91毫摩尔)和原甲酸三乙酯(788.52毫克，5.32毫摩尔，884.98微升)按照环化的一般程序(程序A-A)合成喹唑啉酮中间体。粗产物用乙醚研磨，得到所需的4-羟基-4-[2-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(600毫克，1.53毫摩尔，37％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):388[M-H]-。
步骤2:-30℃下向叔丁基4-羟基-4-[2-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)乙基]哌啶-1-羧酸酯(600毫克，1.54毫摩尔)在二氯甲烷(5毫升)中的溶液中加入deoxofur(510.73毫克，2.31毫摩尔，425.61微升)。反应混合物在0℃下搅拌1小时。完成后，用水淬灭反应混合物，用二氯甲烷(2x 25mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，并蒸发至干，得到所需的粗产物。粗混合物通过使用硅胶快速柱色谱纯化，用2％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到4-氟-4-[2-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(400mg，1.01毫摩尔，66％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):390.2[M-H]-。
步骤3:通过使用叔丁基4-氟-4-[2-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)乙基]哌啶-1-羧酸酯(400毫克，1.02毫摩尔)、碳酸铯(998.84毫克，3.07毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(192.64毫克，1.23毫摩尔，141.64微升)按照O-芳化的一般程序(程序A-B)合成O-芳化的喹唑啉酮中间体。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用1％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到4-[2-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]乙基]-4-氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯(430mg，724.10μmol，71％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):473.1[M+H-tBu]+。
步骤4:使用叔丁基4-[2-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]乙基]-4-氟-哌啶-1-羧酸酯(400mg，756.83μmol)、碳酸铯(739.77mg，2.27mmol)和[甲基(氨磺酰)氨基]乙烷(209.17mg，1.51mmol)按照程序A-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体，以提供叔丁基4-[2-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]乙基]-4-氟-哌啶-1-羧酸酯(160mg,239.99μmol,32％产率)，为粘性液体。LCMS m/z(ESI):645.2[M+H]+。
步骤5:通过HCl介导的N-Boc脱保护反应合成所需的胺(程序A-D)。在叔丁基4-[2-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]乙基]-4-氟-哌啶-1-羧酸酯(160mg，247.41μmol)上，使用二噁烷(5mL)中4.0M HCl进行N-Boc脱保护，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[2-(4-氟-4-哌啶基)乙基]-4-氧代-喹唑啉盐酸盐(140mg,239.88μmol,97％产率)，为灰白色固体。LCMSm/z(ESI):545.1[M-H]-。
步骤6:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[2-(4-氟-4-哌啶基)乙基]-4-氧代-喹唑啉(180mg，308.72μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(123.44mg，308.72μmol)、N,N-二异丙基乙胺(159.60mg,1.23mmol,215.09μL)和HATU(129.1mg,339.59μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中40％乙腈洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-氟-4-哌啶基]乙基]-4-氧代-喹唑啉(20mg，22.27μmol,7％产率)，为灰白色固体。LCMSm/z(ESI):890.3[M-H]-；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.80(s,1H),9.81(s,1H),8.40(s,1H),7.76(d,J＝9.20Hz,1H),7.63(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.40-7.51(m,1H),7.34(d,J＝2.80Hz,1H),7.29-7.34(m,1H),6.99(t,J＝8.00Hz,1H),6.47(d,J＝6.80Hz,1H),6.45(d,J＝12.00Hz,1H),6.06(d,J＝8.00Hz,1H),4.28-4.38(m,1H),4.10-4.17(m,3H),3.75-3.85(m,1H),3.32-3.42(m,2H),3.10-3.21(m,1H),2.92-3.10(m,2H),3.02(q,J＝6.80Hz,2H),2.65-2.81(m,2H),2.61(s,3H),2.51-2.60(m,3H),2.03-2.17(m,4H),1.61-1.98(m,9H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例14
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]-2-甲基丙基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:在氮气氛下，于0℃向4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.58克，16.79毫摩尔)在THF(40毫升)的搅拌溶液中加入2-二乙氧基丙酸乙酯(5克，20.9毫摩尔)，在相同温度下搅拌1小时。向反应中加入KOtBu(2.36克，20.99毫摩尔)，在室温下继续搅拌4小时。完成后，反应混合物用饱和氯化铵溶液(200mL)淬灭，用乙酸乙酯(3×150mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。使用30％乙酸乙酯-石油醚作为洗脱剂，通过柱色谱纯化粗物质，得到4-[(E)-3-乙氧基-2-甲基-3-氧代-丙-1-烯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.5g，11.65mmol，56％产率)，为无色液体。LCMS m/z(ESI):198.1[M+H-CO2 tBu]+。
步骤2:向4-[(E)-3-乙氧基-2-甲基-3-氧代-丙-1-烯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.5g，11.77mmol)在甲醇(50mL)中的搅拌溶液中逐份加入10％钯/活性炭(1.88g，17.65mmol)，并在H2(1个大气压)下在室温下继续搅拌16小时。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，硅藻土用甲醇(100mL)洗涤。将滤液减压浓缩，得到4-(3-乙氧基-2-甲基-3-氧代丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.3g，11.01毫摩尔，94％产率)，其为无色液体，用于下一步而无需进一步纯化。LCMS m/z(ESI):200.0[M+H]+。
步骤3:在0℃向4-(3-乙氧基-2-甲基-3-氧代-丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.3克，11.02毫摩尔)在THF(30毫升)中的搅拌溶液中缓慢滴加硼氢化锂(360.15毫克，16.53毫摩尔)。反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，反应混合物用氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯(3×25mL)提取。合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩，得到4-(3-羟基-2-甲基-丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.9g，10.68mmol，97％产率)，为无色液体，其无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS m/z(ESI):158.1[M+H-CO2 tBu]+。
步骤4:向4-(3-羟基-2-甲基丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.1克，12.05毫摩尔)在二氯甲烷(30毫升)中的搅拌溶液中加入4-甲基苯磺酰氯(3.44克，18.07毫摩尔)、三乙胺(3.05克，30.11毫摩尔，4.20毫升)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(735毫克，6.02毫摩尔)。在室温下继续搅拌5小时。完成后，反应混合物用水(200mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×150mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到4-[2-甲基-3-(对甲苯基磺酰氧基)丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.5g，5.83mmol，48％产率，68.51％纯)，为无色粘性液体。LCMS m/z(ESI):312.0[M+H-CO2 tBu]+。
步骤5:在室温下，向4-[2-甲基-3-(对甲苯基磺酰氧基)丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.2克，7.78毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(40毫升)中的搅拌溶液中加入叠氮化钠(1.26克，19.44毫摩尔)。所得反应混合物在55℃持续搅拌5小时。完成后，反应混合物用水(500mL)淬灭，用乙酸乙酯(3×150mL)提取。合并的有机层经硫酸钠干燥并减压浓缩，得到浅黄色固体的4-(3-叠氮基-2-甲基-丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.5g，7.57mmol，97％产率)。LCMS m/z(ESI):255.1[M+H-N2]+
步骤6:向4-(3-叠氮基-2-甲基丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.8克，6.37毫摩尔)在乙醇(40毫升)中的搅拌溶液中加入10％碳载钯(1.02克，9.56毫摩尔)，并在H2(1个大气压)下于室温下搅拌反应3小时。反应混合物然后通过硅藻土垫过滤，硅藻土用甲醇洗涤。将滤液减压浓缩，得到4-(3-氨基-2-甲基-丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.5g，2.16mmol，产率34％)，为无色液体。LCMS m/z(ESI):257.1[M+H]+。
步骤7:使用4-(3-氨基-2-甲基-丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.5g，5.85mmol)、2-氨基-5-羟基-苯甲酸(895.93mg，5.85mmol)、原甲酸三乙酯(2.17g，14.63mmol，2.43mL)和乙酸(35.13mg，585.06μmol，330mL)按照环化的一般程序(程序A-A)合成喹唑啉酮中间体。粗物质使用石油醚中0-80％乙酸乙酯通过硅胶快速柱色谱纯化，得到4-[3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-2-甲基-丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(400mg，895.85μmol，15％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):402.2[M+H]+。
步骤8:按照O-芳化的一般程序(程序A-B)使用4-[3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-2-甲基-丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(400毫克，996.27微摩尔)、碳酸铯(649.21毫克，1.99毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(187.81毫克，1.20毫摩尔，138.09微升)合成O-芳化的喹唑啉酮中间体。通过使用0-80％乙酸乙酯(在石油醚中)的硅胶快速柱色谱纯化粗物质，得到4-[3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-2-甲基-丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(560mg，1.35毫摩尔，31％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):439.1[M+H]+。
步骤9:使用4-[3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-2-甲基-丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(370毫克，686.99微摩尔)、碳酸铯(671.50毫克，2.06毫摩尔)和[甲基(氨磺酰)氨基]乙烷(189.87毫克，1.37毫摩尔)，按照程序A-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体。使用石油醚中0-80％乙酸乙酯通过硅胶快速柱色谱纯化粗化合物，得到4-[3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-2-甲基-丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(230mg，299.14μmol，44％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):557.0[M+H-CO2 tBu]+。
步骤10:通过HCl介导的N-Boc脱保护反应合成所需的胺(程序A-D)。在叔丁基4-[3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-2-甲基-丙基]哌啶-1-羧酸酯(230mg，350.20μmol)上，使用二噁烷(4M，2mL)的4M HCl溶液进行N-Boc脱保护。粗化合物用二乙醚研磨，得到(6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[2-甲基-3-(4-哌啶基)丙基]-4-氧代-喹唑啉(210mg，334.8μmol，96％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):557.2[M+H]+。
步骤11:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(121.35毫克，303.48微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(196.11毫克，1.52毫摩尔，264.30微升)和HATU(174.01毫克，455.23微摩尔)和6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[2-甲基-3-(4-哌啶基)丙基]-4-氧代-喹唑啉(180mg,303.5μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化[流动相A:水中0.1％乙酸铵，流动相B:乙腈；柱:100gRf C18]以得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]-2-甲基-丙基]-4-氧代-喹唑啉(155mg，168.13μmol，55％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):902.3[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),9.67(s,1H),8.33(s,1H),7.77(d,J＝8.80Hz,1H),7.64(dd,J＝2.80,9.00Hz,1H),7.60-7.42(m,1H),7.33(s,1H),7.30-7.34(m,1H),6.91-7.00(m,1H),6.49(d,J＝7.60Hz,1H),6.46(d,J＝12.40Hz,1H),6.08(d,J＝7.60Hz,1H),4.29-4.40(m,2H),3.61-4.05(m,5H),3.21-3.35(m,2H),3.03(q,J＝7.20Hz,2H),2.92-3.11(m,2H),2.61-2.82(m,5H),2.67(s,3H),2.02-2.16(m,2H),1.55-1.95(m,8H),1.09-1.20(m,2H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H),0.81-1.01(m,2H),0.85(t,J＝6.00Hz,3H)。
实施例15
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-4-氟哌啶-4-基]丙基]-4-氧代喹唑啉
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步骤1:按照环化的一般程序(程序A-A)使用2-氨基-5-羟基苯甲酸(1.30克，8.52毫摩尔)、4-(3-氨基丙基)-4-羟基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(2克，7.74毫摩尔)和原甲酸三乙酯(1.72克，11.61毫摩尔，1.93毫升)合成喹唑啉酮中间体，得到4-羟基-4-[3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(770mg,1.76mmol,23％产率)，为淡黄色固体。LCMS m/z(ESI):404.2[M+H]+。
步骤2:在-30℃向4-羟基-4-[3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(770毫克，1.91毫摩尔)在二氯甲烷(15毫升)中的搅拌溶液中加入Deoxo-Fluor(633毫克，2.86毫摩尔)。在0℃下继续搅拌反应2小时。完成后，用水(20毫升)稀释反应混合物并在二氯甲烷(2×15毫升)中提取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用0-100％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂体系进行洗脱，得到黄色固体的4-氟-4-[3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(440mg，965.81μmol，51％产率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.11(s,1H),8.21(s,1H),7.54(d,J＝11.60Hz,1H),7.44(s,1H),7.27(dd,J＝2.00,11.80Hz,1H),3.90-3.95(m,2H),3.70-3.77(m,2H),2.80-3.10(m,2H),1.91-2.10(m,2H),1.30-1.85(m,6H),1.39(s,9H)。
步骤3:按照O-芳化的一般程序(程序A-B)使用叔丁基4-氟-4-[3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)丙基]哌啶-1-羧酸酯(500毫克，1.23毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(232.47毫克，1.48毫摩尔，170.93微升)和碳酸铯(803.57毫克，2.47毫摩尔)合成O-芳化的喹唑啉酮中间体。粗物质通过硅胶快速柱色谱纯化，用0-100％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂体系进行洗脱，得到4-[3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]丙基]-4-氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯(600mg，1.02mmol，83％产率)，为淡黄色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝8.39(s,1H),7.96-8.01(m,1H),7.72-7.80(m,2H),7.56-7.62(m,2H),3.97-4.06(m,2H),3.65-3.80(m,2H),2.91-2.98(m,2H),1.91-2.10(m,2H),1.30-1.85(m,6H),1.35(s,9H)。
步骤4:使用叔丁基4-[3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]丙基]-4-氟代-哌啶-1-羧酸酯(600mg，1.11毫摩尔)、[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(152.82mg，1.11毫摩尔)和碳酸铯(720.64mg，2.21毫摩尔)按照程序A-C合成氨磺酰基化的喹唑啉酮中间体。通过制备型高效液相色谱纯化粗化合物，得到白色固体的4-[3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]丙基]-4-氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯(200mg，206.52μmol，19％产率)。LCMS m/z(ESI):561[M+H-CO2 tBu]+。
步骤5:通过TFA介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。用三氟乙酸(34.51毫克，302.70微摩尔，23.32微升)对4-[3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]丙基]-4-氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯(200毫克，302.70微摩尔)进行N-Boc脱保护，得到白色固体的6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[3-(4-氟-4-哌啶基)丙基]-4-氧代-喹唑啉(200mg,278.67μmol,92％产率)。LCMS m/z(ESI):561.0[M+H]+。
步骤6:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(129.64毫克，356.75微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(138.32毫克，1.07毫摩尔，186.41微升)、HATU(203.47毫克，535.13微摩尔)和6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[3-(4-氟-4-哌啶基)丙基]-4-氧代-喹唑啉(200毫克，356.75微摩尔)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相高效液相色谱[流动相A:水中0.1％甲酸，流动相B:乙腈；柱:100gRfC18]进行纯化以产生6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-氟-4-哌啶基]丙基]-4-氧代-喹唑啉(70mg，72.23μmol，20％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):904.2[M-H]-；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),10.16(bs,1H),9.51(bs,1H),8.40(s,1H),7.86(t,J＝9.20Hz,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.70(dd,J＝2.80,9.00Hz,1H),7.50(dd,J＝4.00,9.20Hz,1H),7.37(d,J＝3.20Hz,1H),6.92-6.98(m,1H),6.50(d,J＝7.60Hz,1H),6.47(d,J＝12.40Hz,1H),6.12(d,J＝8.00Hz,1H),4.18-4.40(m,4H),3.91-4.05(m,2H),3.45-3.60(m,2H),3.15-3.30(m,1H),3.17(q,J＝7.20Hz,2H),3.00-3.15(m,2H),2.85-2.96(m,2H),2.80(s,3H),2.65-2.79(m,1H),2.51-2.62(m,2H),1.95-2.12(m,4H),1.41-1.94(m,10H),1.06(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例16-20
步骤1:使用2-氨基-5-羟基苯甲酸(1.5克，9.80毫摩尔)、原甲酸三乙酯(2.18克，14.69毫摩尔，2.44毫升)和4-(4-氨基吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.61克，9.80毫摩尔)，按照环化的一般程序(程序A-A)合成喹唑啉酮中间体。通过硅胶快速柱色谱纯化所需化合物，使用3％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂，得到棕色固体的4-[4-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)吡唑-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.2克，2.53毫摩尔，26％产率)。LCMS m/z(ESI):409.90[M+H]+。
步骤2:按照程序A-B使用叔丁基4-[4-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)吡唑-1-基]哌啶-1-羧酸酯(700毫克，1.70毫摩尔)、叔丁醇钾(210.00毫克，1.87毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(293.99毫克，1.87毫摩尔，216.17微升)合成O-芳基化喹唑啉酮中间体，以获得4-[4-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]吡唑-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.8g,粗)，为棕色固体。LCMS m/z(ESI):547.20[M+H]+。
步骤3:使用4-[4-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]吡唑-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(300mg，546.91μmol)、碳酸铯(445.48mg，1.37mmol)和[甲基(氨磺酰)氨基]乙烷(151.15mg，1.09mmol)，按照程序A-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体。粗产物经硅胶快速柱色谱纯化，使用5％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂，得到浅棕色固体的4-[4-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]吡唑-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(120mg，173.70μmol，32％产率)。LCMS m/z(ESI):665.10[M-H]+。
步骤4:按照程序A-D，使用4-[4-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]吡唑-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(120毫克，179.99微摩尔)和TFA(20.52毫克，179.99微摩尔，13.87微升)合成所需的胺。用甲基叔丁基醚研磨所得的粗化合物，得到浅棕色半固体的6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-[1-(4-哌啶基)吡唑-4-基]喹唑啉(150mg，粗)的TFA盐。LCMS m/z(ESI):[M-H]+565.20。
实施例16
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]吡唑-4-基]-4-氧代喹唑啉
目标化合物通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备(程序A-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-[1-(4-哌啶基)吡唑-4-基]喹唑啉(20mg，35.30μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(12.83mg，35.30μmol)、N,N-二异丙基乙胺(22.81mg,176.49μmol,30.74μL)和HATU(16.11mg,42.36μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗物质通过制备型高效液相色谱纯化方法进行纯化：10mm乙酸铵:乙腈，和纯级分经冻干得到产物6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡唑-4-氧代-喹唑啉(10.11mg，10.80μmol,31％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):912.20[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.90(bs,1H),8.45(s,1H),8.33(s,1H),7.90(s,1H),7.82(d,J＝8.80Hz,1H),7.68(d,J＝2.40Hz,1H),7.60-7.50(m,1H),7.42(s,1H),7.38-7.30(m,1H),7.05-6.95(m,1H),6.52-6.40(m,2H),6.07-6.05(m,1H),4.62-4.42(m,2H),4.35-4.25(m,1H),4.05-3.95(m,1H),3.27-3.15(m,3H),3.04(q,J＝7.20Hz,2H),2.92-2.80(m,2H),2.64(s,3H),2.60-2.51(m,5H),2.20-2.00(m,4H),1.95-1.72(m,6H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例17
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]吡唑-4-基]-4-氧代喹唑啉
目标化合物通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备(程序A-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-[1-(4-哌啶基)吡唑-4-基]喹唑啉(20毫克，35.30微摩尔)、2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(12.30毫克，35.30微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(22.81mg,176.49μmol,30.74μL)和HATU(16.11mg,42.36μmol)进行酰胺偶联。粗物质通过制备型高效液相色谱纯化方法进行纯化：10mm乙酸铵:乙腈，和纯级分经冻干以得到产物6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡唑-4-基]-4-氧代-喹唑啉(9.34mg，9.87μmol，28％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):895.60[M-H]-；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.86(s,1H),9.90(bs,1H),8.45(s,1H),8.33(s,1H),7.90(s,1H),7.81(d,J＝8.80Hz,1H),7.67(d,J＝2.40Hz,1H),7.53(t,J＝9.60Hz,1H),7.43(d,J＝2.40Hz,1H),7.35-7.27(m,2H),7.05-7.04(m,2H),4.60-4.52(m,1H),4.47(d,J＝12.80Hz,1H),4.08-4.05(m,1H),3.87(dd,J＝4.80,11.80Hz,1H),3.80-3.60(m,2H),3.34-3.21(m,4H),3.04(q,J＝6.80Hz,2H),2.88-2.72(m,2H),2.71-2.67(m,1H),2.64(s,3H),2.24-2.01(m,6H),1.99-1.84(m,6H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例18
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]吡唑-4-基]-4-氧代喹唑啉
目标化合物通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备(程序A-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-[1-(4-哌啶基)吡唑-4-基]喹唑啉(20毫克，35.30微摩尔)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸(14毫克，30.47微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(22.81mg,176.49μmol,30.74μL)和HATU(16.11mg,42.36μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗物质通过制备型高效液相色谱纯化方法进行纯化:10mm乙酸铵:乙腈，和纯级分经冻干得到产物6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡唑-4-基]-4-氧代-喹唑啉(7.84mg，8.14μmol，28％产率)，为淡黄色固体。LCMS m/z(ESI):894.20[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.79(s,1H),9.71(bs,1H),8.45(s,1H),8.34(s,1H),7.90(s,1H),7.82(d,J＝9.20Hz,1H),7.67(dd,J＝2.80,9.00Hz,1H),7.60-7.50(m,1H),7.42(d,J＝3.20Hz,1H),7.42-7.30(m,1H),6.98(d,J＝7.60Hz,2H),6.63(d,J＝8.40Hz,2H),5.72(d,J＝7.20Hz,1H),4.45-4.25(m,4H),4.15-3.95(m,2H),3.03(q,J＝7.20Hz,2H),2.95-2.82(m,2H),2.80-2.65(m,6H),2.63(s,3H),2.12-2.08(m,5H),1.91-1.76(m,6H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例19
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-3-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]吡唑-4-基]-4-氧代喹唑啉
目标化合物通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备(程序A-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-[1-(4-哌啶基)吡唑-4-基]喹唑啉(20mg，35.30μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(12.83mg，35.30μmol)、N,N-二异丙基乙基胺(371.00mg,2.87mol,0.50mL)和HATU(16.11mg,42.36μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗物质通过制备型高效液相色谱纯化方法纯化:10mm A:0.1％甲酸水溶液，流动相B:乙腈，和纯级分经冻干以得到产物6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡唑-4-基]-4-氧代喹唑啉(4.42mg,4.51μmol,13％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):912.20[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.83(s,1H),8.49(s,1H),8.45(s,1H),7.90(s,1H),7.82(d,J＝8.80Hz,1H),7.67(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.65-7.50(m,1H),7.43(d,J＝3.20Hz,1H),7.36-7.33(m,1H),6.97(d,J＝13.20Hz,1H),6.86(d,J＝8.00Hz,1H),6.78(t,J＝8.80Hz,1H),6.55(s,1H),5.47(d,J＝6.80Hz,1H),4.56-4.36(m,4H),4.10-3.90(m,2H),3.20-3.20(m,3H),3.05(q,J＝7.20Hz,2H),2.95-2.80(m,1H),2.80-2.70(m,2H),2.65(s,3H),2.60-2.52(m,2H),2.20-2.00(m,6H),19.00-1.75(m,4H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例20
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2,6-二氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]吡唑-4-基]-4-氧代喹唑啉
目标化合物通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备(程序A-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-[1-(4-哌啶基)吡唑-4-基]喹唑啉(20毫克，35.30微摩尔)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(13.46毫克，35.30微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(371.00mg,2.87mol,0.50mL)和HATU(16.11mg,42.36μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗物质通过制备型高效液相色谱纯化方法进行纯化:10mm乙酸铵:乙腈，和纯级分经冻干得到产物6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡唑-4-基]-4-氧代-喹唑啉(5.90mg,6.29μmol,18％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):930.00[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.83(s,1H),9.91(bs,1H),8.45(s,1H),8.33(s,1H),7.90(s,1H),7.82(d,J＝8.80Hz,1H),7.67(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.60-7.50(m,1H),7.43(d,J＝3.20Hz,1H),7.37-7.33(m,1H),6.40-6.32(m,3H),4.55-4.45(m,2H),4.35-4.40(m,1H),4.15-3.95(m,1H),3.29-3.24(m,4H),3.06(q,J＝7.20Hz,2H),2.95-2.80(m,2H),2.80-2.68(m,2H),2.65(s,3H),2.25-2.05(m,7H),1.88-1.82(m,3H),1.73-1.71(m,3H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例21
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]苯基]哌啶-1-基]-2-氧代乙基]哌啶-4-基]吡唑-4-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:在室温下，向作为其TFA盐的6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-[1-(4-哌啶基)吡唑-4-基]喹唑啉(30毫克，44.08微摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(2毫升)中的搅拌溶液中加入三乙胺(22.30毫克，220.38微摩尔，30.72微升)，随后加入2-溴乙酸叔丁酯(10mg,51.27μmol,7.52μL)，所得反应混合物在室温下搅拌12小时。反应完成后，用水(5mL)稀释混合物，用乙酸乙酯(2x5mL)提取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到2-[4-[4-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]吡唑-1-基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(31mg，42.23μmol，96％产率)，为淡棕色粘性液体。该粗化合物无需任何纯化即可进行下一步。LCMS m/z(ESI):681.40[M+H]+。
步骤2:按照程序A-D，使用2-[4-[4-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]吡唑-1-基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(31毫克，45.54微摩尔)和TFA(51.92毫克，455.38微摩尔，35.08微升)合成所需的胺。将得到的粗化合物与甲基叔丁基醚研磨，得到2-[4-[4-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]吡唑-1-基]-1-哌啶基]乙酸的TFA盐(30mg，34.59μmol，76％产率)，为淡棕色粘性液体。LCMS m/z(ESI):[M+H]+625.40。
步骤3:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[4-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]吡唑-1-基]-1-哌啶基]乙酸作为其TFA盐(30毫克，40.61微摩尔)、3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮(17毫克，42.35微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(371.00mg,2.87mmol,0.50mL)和HATU(19mg,49.97μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗物质通过制备型高效液相色谱纯化方法进行纯化:10mm乙酸铵:乙腈，和纯级分经冻干得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]吡唑-4-基]-4-氧代-喹唑啉(8.56mg，9.28μmol,23％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):893.80[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.78(s,1H),9.95(bs,1H),8.46(s,1H),8.33(s,1H),7.89(s,1H),7.83(d,J＝8.92Hz,1H),7.70-7.64(m,2H),7.43(d,J＝2.96Hz,1H),7.40-7.37(m,1H),6.96(d,J＝8.52Hz,2H),6.62(d,J＝8.60Hz,2H),5.69(d,J＝7.52Hz,1H),4.52-4.49(m,1H),4.35-4.20(m,2H),4.15-4.05(m,1H),3.75-3.62(m,2H),3.25-3.10(m,4H),3.08(q,J＝7.12Hz,2H),2.74-2.69(m,3H),2.67(s,3H),2.64-2.51(m,2H),2.13-2.08(m,5H),1.88-1.84(m,1H),1.81-1.74(m,2H),1.65-1.50(m,1H),1.45-1.35(m,1H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例22和23
步骤1:使用2-氨基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(2.0克，8.32毫摩尔)、2-氨基-5-羟基-苯甲酸(1.53克，9.99毫摩尔)、原甲酸三乙酯(1.60克，10.82毫摩尔，1.80毫升)按照环化的一般程序(程序A-A)合成喹唑啉酮中间体。粗物质通过230-400硅胶快速柱色谱纯化，使用0-100％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到浅棕色固体的2-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(1.2克，2.46毫摩尔，30％产率)。LCMS m/z(ESI):386.1[M+H]+。
步骤2:通过使用2-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(0.75克，1.95毫摩尔)、KOtBu(436.67毫克，3.89毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(305.66毫克，1.95毫摩尔，224.75微升)按照O-芳基化的一般程序(程序A-B)合成O-芳基化的喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，使用石油醚中50％乙酸乙酯作为洗脱剂，得到2-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(0.6克，654.49微摩尔，34％产率)，为浅棕色半固体。LCMS m/z(ESI):523.1[M+H]+。
步骤3:按照程序A-C，使用2-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(0.6克，1.15毫摩尔)、碳酸铯(1.12克，3.44毫摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(158.67毫克，1.15毫摩尔)合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体。通过使用石油醚中0-100乙酸乙酯作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化粗物质，得到橙色半固体的2-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(0.45g，526.75μmol，46％产率)。LCMSm/z(ESI):641.3[M+H]+。
步骤4:通过TFA介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。使用三氟乙酸(3.70g，32.45mmol，2.5mL)对2-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(450mg，702.33μmol)进行N-Boc脱保护，得到3-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉的TFA盐(0.4g,482.71μmol,69％产率)，为棕色固体。LCMS m/z(ESI):541.2[M+H]+。
实施例22
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[7-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]-4-氧代喹唑啉
目标化合物通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备(程序A-E)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(138.77mg，347.07μmol)、3-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(0.25g，381.88μmol)、HATU(217.81mg,572.84μmol)和N,N-二异丙基乙胺(246.79mg,1.91mmol,332.60μL)进行酰胺偶联。通过反相柱色谱[流动相A:0.1％乙酸铵，流动相B:乙腈]纯化粗化合物，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[7-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]-4-氧代-喹唑啉(125mg,140.23μmol,37％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):886.3[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),9.77(bs,1H),8.40(s,1H),7.77(d,J＝8.80Hz,1H),7.64(dd,J＝3.20,8.80Hz,1H),7.51-7.60(m,1H),7.34(d,J＝2.80Hz,2H),6.95-7.05(m,1H),6.49(d,J＝7.60Hz,1H),6.46(d,J＝12.40Hz,1H),6.08(d,J＝7.60Hz,1H),4.95-5.05(m,1H),4.24-4.35(m,1H),3.60-4.10(m,2H),3.46-3.55(m,1H),3.20-3.45(m,6H),3.05(q,J＝6.80Hz,2H),2.60-2.81(m,2H),2.65(s,3H),2.55-2.45(m,2H),2.30-2.45(m,5H),2.05-2.12(m,1H),1.55-1.92(m,8H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例23
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[7-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]-4-氧代喹唑啉
目标化合物通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备(程序A-E)。使用3-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(400mg，611.03μmol)、2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(231.81mg，557.46μmol)、HATU(302.03mg,794.34μmol)和N,N-二异丙基乙胺(394.86mg,3.06mmol,532.15μL)进行酰胺偶联。通过反相柱色谱[流动相A:0.1％甲酸水，流动相B:乙腈；柱:100g Rf C18]柱色谱，用在0.1％甲酸水溶液中37％乙腈洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[7-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]-4-氧代-喹唑啉(142mg,149.40μmol,24％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):902.0[M+H]+1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.79(s,1H),10.20(s,1H),8.42(d,J＝4.00Hz,1H),7.78-7.83(m,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.68(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.48(dd,J＝3.60,8.80Hz,1H),7.35(d,J＝2.80Hz,1H),6.85(t,J＝9.20Hz,1H),6.50(d,J＝14.80Hz,1H),6.41(d,J＝8.40Hz,1H),5.78(d,J＝7.60Hz,1H),4.97(d,J＝2.40Hz,1H),4.93-4.96(m,1H),4.23-4.28(m,1H),3.51-3.60(m,2H),3.35-3.42(m,2H),3.15(q,J＝6.80Hz,2H),2.80-2.92(m,4H),2.78(s,3H),2.67-2.77(m,1H),2.46-2.60(m,2H),2.28-2.41(m,5H),2.05-2.12(m,1H),1.80-1.91(m,1H),1.52-1.80(m,8H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例24
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:使用2-氨基-5-羟基苯甲酸(250毫克，1.63毫摩尔)、原甲酸三乙酯(483.88毫克，3.27毫摩尔，543.08微升)和3-氨基-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(418.49毫克，1.63毫摩尔)，按照环化的一般程序(程序A-A)合成喹唑啉酮中间体。通过使用5％甲醇-二氯甲烷作为洗脱剂的硅胶快速柱色谱从粗反应混合物中纯化所需化合物，得到棕色固体的3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(405mg，746.94μmol，46％产率)。LCMS m/z(ESI):400.2[M-H]-。
步骤2:通过使用叔丁基3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(999毫克，2.49毫摩尔)、叔丁醇钾(279.23毫克，2.49毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(430.01毫克，2.74mmol,316.18μL)按照O-芳基化的一般程序(程序A-B)合成O-芳基化的喹唑啉酮中间体以产生粗3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(665mg,975.51μmol,39％产率)，为淡棕色半固体。LCMS m/z(ESI):483.1[M+H-tBu]+。
步骤3:使用叔丁基3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(250毫克，464.22微摩尔)、碳酸铯(378.13毫克，1.16毫摩尔)和[甲基(氨磺酰)氨基]乙烷(96.22毫克，696.33微摩尔)按照程序A-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体，得到3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(210mg,283.64μmol,61％产率)，为浅棕色油。LCMS m/z(ESI):655.2[M-H]-。
步骤4:通过TFA介导的N-Boc脱保护反应合成所需的胺(程序A-D)。使用TFA(36.46毫克，319.77微摩尔，24.64微升)对3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(210毫克，319.77微摩尔)进行N-Boc脱保护，得到3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷的TFA盐(210mg,259.90μmol,82％产率)，为浅黄色固体。LCMS m/z(ESI):557.2[M+H]+。
步骤5:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(310毫克，462.25微摩尔)、HATU(210.91毫克，554.70微摩尔)和N,N-二异丙基乙基胺(298.71毫克，2.31毫摩尔，402.58微升)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中20-30％乙腈洗脱，得到3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(106.4mg,115.66μmol,25％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):902.2[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.81(s,1H),8.34(d,J＝1.20Hz,1H),7.77(d,J＝8.80Hz,1H),7.65(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.49(s,1H),7.35(d,J＝2.80Hz,1H),7.29-7.34(m,1H),6.99(s,1H),6.48(d,J＝7.20Hz,1H),6.46(d,J＝13.60Hz,1H),6.06(d,J＝7.20Hz,1H),5.31(s,1H),4.32-4.35(m,1H),4.11-4.19(m,2H),3.66-3.75(m,1H),3.41-3.60(m,2H),3.4-3.21(m,3H),3.01-3.10(m,2H),2.62-2.81(m,2H),2.62(s,3H),2.58-2.41(m,5H),2.06-2.10(m,2H),1.60-1.91(m,10H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例25
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:按照环化的一般程序(程序A-A)使用2-氨基-5-羟基-苯甲酸(250mg，1.63mmol)、6-氨基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯(485.51mg，2.45mmol)、原甲酸三乙酯(241.94mg，1.63mmol，271.54μL)和乙酸(4.90mg，81.63μmol,4.67μL)合成喹唑啉酮中间体以得到叔丁基6-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸酯(450mg,1.17mmol,71％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):344.1[M+H]+。
步骤2:通过使用叔丁基6-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸酯(450毫克，1.31毫摩尔)、叔丁醇钾(161.76毫克，1.44毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(226.46毫克，1.44毫摩尔，166.51μL)按照O-芳化的一般程序(程序A-B)合成O-芳化的喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，以石油醚中80-90％乙酸乙酯作为洗脱剂，得到6-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯(500mg，978.22μmol，75％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):481.1[M+H]+。
步骤3:使用叔丁基6-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸酯(500mg，1.04mmol)、碳酸铯(847.67mg，2.60mmol)和[甲基(氨磺酰)氨基]乙烷(316.38mg，2.29mmol)，按照程序A-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，以石油醚中90-100％乙酸乙酯作为洗脱剂，得到6-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯(370mg，414.10μmol，40％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):579.2[M-H]-。
步骤4:通过HCl介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。在叔丁基6-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸酯(370mg，618.06μmol)上使用二噁烷(0.5mL)中的4M HCl溶液进行N-Boc脱保护，得到3-(3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉HCl盐(320mg,466.55μmol,75％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):499.1[M+H]+。
步骤5:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用3-(3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(310毫克，579.45微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(374.45毫克，2.90毫摩尔，504.65微升)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(231.69mg,579.45μmol)和HATU(264.39mg,695.34μmol)进行酰胺偶联。通过制备型高效液相色谱(水中0.1％甲酸:乙腈)纯化粗化合物，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[3-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基]-4-氧代-喹唑啉(20.1mg，22.13μmol,4％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):844.0[M+H]+1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.77(s,1H),8.33(s,1H),8.31(s,1H),7.73(d,J＝8.80Hz,1H),7.58(ddd,J＝0.80,3.00,8.80Hz,1H),7.35(d,J＝3.20Hz,1H),7.29(t,J＝10.00Hz,1H),7.21-7.24(m,1H),7.00(t,J＝8.40Hz,1H),6.44-6.46(m,2H),5.95-6.05(m,1H),4.25-4.35(m,1H),4.01-4.06(m,1H),3.84(d,J＝11.60Hz,2H),3.70-3.75(m,2H),3.41-3.55(m,1H),3.10(s,2H),2.96(q,J＝7.20Hz,2H),2.85-2.90(m,3H),2.70-2.81(m,1H),2.55(s,3H),2.05-2.25(m,5H),1.80-1.91(m,1H),1.58-1.71(m,4H),1.02(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例26
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]苯氧基]-3-[7-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:使用2-氨基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(2.0克，8.32毫摩尔)、2-氨基-5-羟基-苯甲酸(1.53克，9.99毫摩尔)、原甲酸三乙酯(1.60克，10.82毫摩尔，1.80毫升)按照环化的一般程序(程序A-A)合成喹唑啉酮中间体。粗物质通过230-400硅胶快速柱色谱纯化，使用0-100％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到2-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(1.2克，2.46毫摩尔，30％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):386.1[M+H]+。
步骤2:通过使用2-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(0.6克，1.56毫摩尔)、碳酸铯(1.52克，4.67毫摩尔)和2,6-二氟苯甲腈(259.83毫克，1.87毫摩尔，207.87微升)按照O-芳化的一般程序(程序A-B)合成O-芳化的喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，使用石油醚中50％乙酸乙酯作为洗脱剂，得到2-[6-(2-氰基-3-氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(500mg，828.46μmol，53％产率)，为浅棕色半固体。LCMS m/z(ESI):505.0[M+H]+。
步骤3:按照程序A-C，使用2-[6-(2-氰基-3-氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(300毫克，594.59微摩尔)、碳酸铯(581.18毫克，1.78毫摩尔)和[甲基(氨磺酰)氨基]乙烷(98.60毫克，713.50微摩尔)合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体。使用石油醚中0-100乙酸乙酯作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化粗物质，得到橙色固体的叔丁基2-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯(150mg，180.66μmol，31％产率)。LCMS m/z(ESI):623.2[M+H]+。
步骤4:通过TFA介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。用三氟乙酸(1.48克，12.98毫摩尔，1毫升)对2-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(0.15克，240.87微摩尔)进行N-Boc脱保护，得到3-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]苯氧基]-4-氧代-喹唑啉的TFA盐(125mg,129.59μmol,54％产率)，为棕色半固体。LCMS m/z(ESI):523.2[M+H]+。
步骤5:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用3-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(125mg，196.34μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(78.48mg，196.28μmol)、HATU(111.98mg,294.51μmol)和N,N-二异丙基乙胺(126.88mg,981.71μmol,171.00μL)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中的37％乙腈洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]苯氧基]-3-[7-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]-4-氧代-喹唑啉(116mg，124.43μmol,63％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):868.0[M+H]+1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.82(s,1H),10.19(s,1H),9.51(s,1H),8.47(d,J＝4.40Hz,1H),7.82(d,J＝8.80Hz,1H),7.62-7.70(m,3H),7.33(d,J＝8.40Hz,1H),6.93-7.01(m,1H),6.90(d,J＝8.00Hz,1H),6.50(d,J＝7.60Hz,1H),6.48(d,J＝12.80Hz,1H),6.13(d,J＝7.60Hz,1H),4.95-5.08(m,1H),4.23-4.41(m,3H),3.42-3.61(m,3H),3.25-3.35(m,3H),3.19(q,J＝6.80Hz,2H),3.01-3.12(m,2H),2.81-2.92(m,1H),2.80(s,3H),2.67-2.75(m,1H),2.41-2.60(m,4H),1.92-2.10(m,4H),1.58-1.92(m,7H),1.07(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例27
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
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目标化合物通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备(程序A-E)。使用3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(350mg，521.90μmol)、2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(260.43mg,626.28μmol)、N,N-二异丙基乙胺(337.25mg,2.61mmol,454.51μL)和HATU(238.13mg,626.28μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过制备型高效液相色谱(流动相:在H2O/乙腈中10mM甲酸)纯化，得到目标化合物3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(120mg,124.41μmol,24％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):918.4[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.79(s,1H),10.20(s,1H),8.36(s,1H),7.87(t,J＝10.00Hz,1H),7.80(d,J＝9.20Hz,1H),7.71(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.50(dd,J＝4.00,9.00Hz,1H),7.37(d,J＝3.20Hz,1H),6.85(t,J＝9.20Hz,1H),6.50(dd,J＝2.00,15.00Hz,1H),6.40-6.45(m,1H),5.78(d,J＝7.20Hz,1H),5.30-5.35(m,1H),4.93(s,1H),4.21-4.31(m,1H),4.05-4.20(m,2H),3.70-3.81(m,1H),3.58-3.67(m,1H),3.44-3.55(m,1H),3.40-3.29(m,1H),3.17(q,J＝7.20Hz,2H),2.65-2.91(m,5H),2.80(s,3H),2.51-2.60(m,2H),2.32-2.41(m,1H),2.02-2.12(m,2H),1.49-1.90(m,10H),1.06(t,J＝6.80Hz,3H)。
实施例28
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
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步骤1:按照环化的一般程序(程序A-A)使用叔丁基3-氨基-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(4g，15.73mmol)、原甲酸三乙酯(5.83g，39.3mmol)、2-氨基-5-羟基苯甲酸(2.41g，15.73mmol)合成喹唑啉酮中间体，得到叔丁基3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(5.8g,11.56mmol,74％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):400.3[M+H]+。
步骤2:通过使用叔丁基3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(5.8克，14.52毫摩尔)、叔丁醇钾(3.26克，29.04毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(2.74克，17.42毫摩尔，2.01毫升)按照O-芳基化的一般程序(程序A-B)合成O-芳基化的喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，使用石油醚中50％乙酸乙酯作为洗脱剂，得到浅黄色液体的3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(7.3g，6.80毫摩尔，47％产率)。LCMS m/z(ESI):481.1[M+H-tBu]+。
步骤3:使用叔丁基3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(7.0克，13.05毫摩尔)、[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(3.61克，26.09毫摩尔)和碳酸铯(12.75克，39.14毫摩尔)，按照程序A-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体。粗物质通过硅胶快速柱色谱纯化，使用60％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(4.6克，4.71毫摩尔，36％产率)。LCMS m/z(ESI):653.2[M-H]-。
步骤4:通过HCl介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。使用1,4-二噁烷(41mL)中4M HCl对3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(4.1g，6.26mmol)进行N-Boc脱保护。将粗化合物用pet醚(2x20 mL)研磨并浓缩，得到3-(8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基)-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉的HCl盐(3.5g，5.00mmol，80％产率)。LCMS m/z(ESI):555.1[M+H]+。
步骤5:通过HATU介导的酸-胺偶联制备目标化合物(程序A-E)。使用3-(8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基)-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(1克，1.80毫摩尔)、HATU(1.03克，2.70毫摩尔)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(655.17mg,1.80mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.17g,9.01mmol,1.57mL)进行酰胺偶联。通过反相柱纯化进行粗化合物纯化，使用乙腈中0.1％乙酸铵作为洗脱剂，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉(505mg,553.48μmol,31％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):900.3[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),9.75(bs,1H),8.43(d,J＝3.60Hz,1H),7.76(d,J＝9.20Hz,1H),7.64(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.41-7.60(m,1H),7.34(s,1H),7.30-7.34(m,1H),6.95-7.08(m,1H),6.48(d,J＝7.20Hz,1H),6.46(d,J＝12.40Hz,1H),6.08(d,J＝7.60Hz,1H),5.01-5.11(m,1H),4.29-4.38(m,1H),3.56-3.66(m,1H),3.18-3.50(m,3H),3.04(q,J＝6.80Hz,2H),2.61-2.85(m,5H),2.67(s,3H),2.46-2.55(m,2H),2.05-2.20(m,5H),1.70-1.95(m,8H),1.40-1.65(m,5H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例29
4-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-9-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷
步骤1:使用叔丁基4-氨基-1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯(950.0毫克，3.51毫摩尔)、2-氨基-5-羟基-苯甲酸(645.69毫克，4.22毫摩尔)、原甲酸三乙酯(54.81毫克，369.87微摩尔，61.52微升)和催化量的乙酸，按照环化的一般程序(程序A-A)合成喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用90％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到黄色固体的4-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸叔丁酯(700mg，1.52mmol，43％产率)。LCMS m/z(ESI):416.2[M+H]+。
步骤2:按照O-芳化的一般程序(程序A-B)使用4-(6-羟基-4-氧代-8,8a-二氢喹唑啉-3-基)-1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸叔丁酯(650.0毫克，1.56毫摩尔)、叔丁醇钾(192.17毫克，1.71毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(269.03mg,1.71mmol,197.82μL)合成O-芳化喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，以80％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到黄色液体的4-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸叔丁酯(750.0mg，997.61μmol，64％产率)。LCMS m/z(ESI):497.0[M+H]+。
步骤3:氨磺酰化的喹唑啉酮中间体按照程序A-C使用叔丁基4-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯(700.0毫克，1.27毫摩尔)、碳酸铯(1.03克，3.17毫摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(350.12毫克，2.53毫摩尔)合成，得到所需的叔丁基4-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯(570.0mg,674.74μmol,53％产率)作为粗产物。LCMS m/z(ESI):669.1[M-H]-
步骤4:通过TFA介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。对叔丁基4-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯(600.0毫克，894.52微摩尔)和三氟乙酸(203.99毫克，1.79毫摩尔，137.83微升)进行N-Boc脱保护。所得产物用二乙醚(2x 15mL)研磨，减压干燥，得到黄色液体的4-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷的TFA盐(650.0mg，652.22μmol，73％产率)。LCMSm/z(ESI):571.0[M+H]+。
步骤5:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用4-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷(600.0毫克，1.05毫摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(679.47毫克，5.26毫摩尔，915.73微升)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(382.08mg,1.05mmol)和HATU(1.26mmol,479.6mg)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中37％乙腈洗脱，得到4-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-9-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷(78.63mg,80.29μmol,8％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):916.3[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),8.47(d,J＝6.00Hz,1H),7.79(d,J＝8.80Hz,1H),7.70-7.81(m,1H),7.68(dt,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.40-7.49(m,1H),7.37(t,J＝3.20Hz,1H),6.93-7.01(m,1H),6.50(d,J＝8.00Hz,1H),6.47(d,J＝14.00Hz,1H),6.11(d,J＝7.60Hz,1H),4.96-5.01(m,1H),3.95-4.35(m,4H),3.78-3.90(m,2H),3.30-3.55(m,4H),3.08(q,J＝6.80Hz,2H),2.85-3.20(m,3H),2.65-2.80(m,1H),2.71(s,3H),2.48-2.60(m,2H),2.20-2.35(m,1H),1.70-2.12(m,10H),1.30-1.65(m,3H),1.00(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例30
9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-3-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷
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步骤1:使用2-氨基-5-羟基-苯甲酸(520毫克，3.40毫摩尔)、9-氨基-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(911.38毫克，3.40毫摩尔)和原甲酸三乙酯(1.26克，8.49毫摩尔，1.41毫升)按照环化的一般程序(程序A-A)合成喹唑啉酮中间体。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化(50g二氧化硅；0-100％乙酸乙酯/石油醚)，得到灰白色固体的9-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(1.05g，2.23mmol，66％产率)。LCMS m/z(ESI):414.3[M+H]+。
步骤2:按照O-芳化的一般程序(程序A-B)使用9-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(1.05克，2.54毫摩尔)、叔丁醇钾(341.91毫克，3.05毫摩尔)、2,3,6-三氟苯甲腈(438.79毫克，2.79毫摩尔，322.64μL)合成O-芳化的喹唑啉酮中间体。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化(50g二氧化硅；0-100％乙酸乙酯/石油醚)，得到淡棕色固体的9-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(1.08g，1.54mmol，61％产率)。LCMS m/z(ESI):550.9[M+H]+。
步骤3:按照程序A-C，使用9-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(1.08克，1.96毫摩尔)、碳酸铯(1.92克，5.88毫摩尔)、[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(542.12毫克，3.92毫摩尔)合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用0-100％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(580mg，793.42μmol，40％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):669.0[M+H]+。
步骤4:通过TFA介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。用三氟乙酸(1.20克，10.53毫摩尔，811.55微升)对9-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(580毫克，1.05毫摩尔)进行N-Boc脱保护。粗化合物用二乙醚(2x 30mL)研磨并干燥，得到9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷的TFA盐(570mg，655.88μmol，62％产率)，为浅棕色半固体。LCMS m/z(ESI):569.2[M+H]+。
步骤5:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷(570mg，834.94μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(333.84mg，834.94μmol)进行酰胺偶联。所得粗化合物通过反相柱色谱纯化[流动相A:水中0.1％乙酸铵，流动相B:乙腈；柱:100gRf C18]以得到9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷(287mg，312.32μmol，37％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):914.4[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),9.77(s,1H),8.51(d,J＝6.40Hz,1H),7.76(d,J＝8.80Hz,1H),7.64(dd,J＝2.80,9.00Hz,1H),7.50-7.58(m,1H),7.35(s,1H),7.31-7.35(m,1H),6.99(t,J＝8.40Hz,1H),6.49(d,J＝7.20Hz,1H),6.46(d,J＝12.00Hz,1H),6.08(d,J＝7.60Hz,1H),4.52-4.60(m,1H),4.30-4.38(m,1H),3.60-3.95(m,2H),3.40-3.51(m,4H),3.21-3.31(m,2H),3.04(q,J＝6.80Hz,2H),2.57-2.79(m,3H),2.64(s,3H),2.48-2.57(m,2H),1.98-2.15(m,3H),1.60-1.95(m,11H),1.22-1.45(m,4H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例31
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[[7-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]甲基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:按照环化的一般程序(程序A-A)，使用甲苯(30毫升)中2-氨基-5-羟基-苯甲酸(63毫克，411.40微摩尔)、原甲酸三乙酯(61毫克，411.61微摩尔，68.46微升)、乙酸(2.51毫克，41.75微摩尔，2.39微升)和2-(氨基甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(104.11mg,409.28μmol)合成喹唑啉酮中间体。通过使用50％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂的硅胶快速柱色谱从粗反应中纯化所需化合物，得到棕色固体的2-[(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)甲基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(120mg，222.29μmol，54％产率)。LCMSm/z(ESI):398.1[M-H]-。
步骤2:使用2-[(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)甲基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(650毫克，1.63毫摩尔)、碳酸铯(1.33克，4.07毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(300毫克，1.91毫摩尔，220.59微升)按照O-芳化的一般程序(程序A-B)合成O-芳化的喹唑啉酮中间体。通过硅胶快速柱色谱从粗反应中纯化所需化合物，使用50％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到2-[[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]甲基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(600mg，1.03mmol，63％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):481.0[M-tBu+H]+。
步骤3:使用叔丁基2-[[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]甲基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯(600毫克，1.12毫摩尔)、碳酸铯(364.34毫克，1.12毫摩尔)和[甲基(氨磺酰)氨基]乙烷(154.52毫克，1.12毫摩尔)按照程序A-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体。通过硅胶快速柱色谱从粗混合物中纯化所需化合物，使用在二氯甲烷中的4％甲醇作为洗脱剂，得到2-[[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]甲基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(320mg，420.31μmol，38％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):653.1[M-H]-。
步骤4:在二噁烷介导的N-Boc脱保护中通过4M HCl合成所需的胺(程序A-D)。在叔丁基2-[[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]甲基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯(320mg，488.74μmol)上使用1,4-二噁烷中HCl，4M，99％(4M，4mL)进行N-Boc脱保护，得到3-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基甲基)-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉的盐酸盐(300mg,385.72μmol,79％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):555.3[M+H]+。
步骤5:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用3-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基甲基)-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(300mg，507.53μmol)和2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(184.43mg，461.25μmol)、N,N-二异丙基乙胺(262.38mg,2.03mmol,353.61μL)和HATU(192.98mg,507.53μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中45％乙腈洗脱，得到产物6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[[7-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]甲基]-4-氧代-喹唑啉(85mg,94.26μmol,19％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):900.3[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.58(s,1H),8.38(s,1H),7.75(d,J＝9.20Hz,1H),7.63(dd,J＝9.00,3.20Hz,1H),7.40(bs,1H),7.32(d,J＝2.80Hz,1H),7.28(bs,1H),6.97(s,1H),6.45(d,J＝14.80Hz,2H),6.05(d,J＝5.60Hz,1H),4.33-4.30(m,1H),4.02(d,J＝4.40Hz,2H),3.41-3.39(m,4H),3.00(d,J＝7.20Hz,3H),2.74-2.70(m,2H),2.68-2.67(m,7H),2.08-2.07(m,1H),1.87-1.85(m,5H),1.72(bs,4H),1.62-1.54(m,4H),1.52-1.46(m,2H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例32
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-2-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:按照环化的一般程序(程序A-A)使用2-氨基-5-羟基苯甲酸(628.51毫克，4.10毫摩尔)、原甲酸三乙酯(658.95毫克，4.45毫摩尔，739.56微升)、乙酸(20.54毫克，342.02微摩尔，19.56微升)合成喹唑啉酮中间体。通过使用40-55％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂的硅胶快速柱色谱从粗反应中纯化所需产物，得到8-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-2-氮杂螺[4.5]癸烷-2-羧酸叔丁酯(720mg，1.50mmol，44％产率)。LCMS m/z(ESI):400.2[M+H]+。
步骤2:通过使用8-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-2-氮杂螺[4.5]癸烷-2-羧酸叔丁酯(720.00毫克，1.80毫摩尔)、2,3,6-三氟苯甲腈(311.45毫克，1.98毫摩尔，229.01微升)和碳酸铯(1.76克，5.44mmol)按照O-芳基化的一般程序(程序A-B)合成O-芳基化的喹唑啉酮中间体。通过使用30-45％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂的硅胶快速柱色谱从粗反应中纯化所需产物，得到8-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-2-氮杂螺[4.5]癸烷-2-羧酸叔丁酯(317mg，554.75μmol，31％产率)。LCMS m/z(ESI):537.2[M+H]+。
步骤3:氨磺酰化喹唑啉酮中间体按照程序A-C使用叔丁基8-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-2-氮杂螺[4.5]癸烷-2-羧酸酯(300毫克，559.11微摩尔)、碳酸铯(546.50毫克，1.68毫摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(154.52毫克，1.12毫摩尔)合成，得到叔丁基8-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-2-氮杂螺[4.5]癸烷-2-羧酸酯(285mg,385.48μmol,69％产率)。LCMSm/z(ESI):655.4[M+H]+。
步骤4:通过HCl介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。在叔丁基8-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-2-氮杂螺[4.5]癸烷-2-羧酸酯(285mg，435.28μmol)上使用二噁烷中4.0M(99.19μL)进行N-Boc脱保护，得到3-(2-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉HCl盐(300mg,407.56μmol,94％产率)。LCMS m/z(ESI):555.0[M+H]+。
步骤5:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用3-(2-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(300mg，540.90μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(196.55mg，540.90μmol)、N,N-二异丙基乙胺(349.53mg,2.70mmol,471.06μL)和HATU(226.23mg,594.99μmol)进行酰胺偶联。所得粗反应通过反相柱色谱纯化，使用100gsnap柱，用0.1％乙酸铵水溶液中37％乙腈洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[2-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-2-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-4-氧代-喹唑啉(59.64mg,65.27μmol,12％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):900.3[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.76(s,1H),8.50(d,J＝2.00Hz,1H),7.77(d,J＝8.80Hz,1H),7.64(dd,J＝2.80,9.00Hz,1H),7.48-7.60(m,1H),7.35(s,1H),7.31-7.35(m,1H),7.00(t,J＝8.00Hz,1H),6.46(d,J＝12.40Hz,1H),6.43(d,J＝11.60Hz,1H),6.07(d,J＝7.60Hz,1H),4.55-4.65(m,1H),4.25-4.34(m,1H),3.60-3.95(m,1H),3.42-3.61(m,4H),3.12-3.20(m,1H),3.04(q,J＝6.80Hz,1H),2.60-2.81(m,6H),2.63(s,3H),2.51-2.58(m,2H),1.61-2.11(m,14H),1.57(t,J＝12.80Hz,2H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例33
(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:按照环化的一般程序(程序A-A)使用叔丁基3-氨基-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(2克，7.80毫摩尔)、2-氨基-5-羟基苯甲酸(1.19克，7.80毫摩尔)和原甲酸三乙酯(1.39克，9.36毫摩尔，1.56毫升)合成喹唑啉酮中间体，得到叔丁基3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1.5g,3.09mmol,40％产率)，为浅棕色稠油。LCMS m/z(ESI):402.3[M+H]+。
步骤2:按照O-芳化的一般程序(程序A-B)使用叔丁基3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1.8克，4.48毫摩尔)、叔丁醇钾(603.75毫克，5.38毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(774.79毫克，4.93mmol,569.70μL)合成O-芳化的喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用80-90％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到外消旋叔丁基3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯。对该外消旋化合物进行手性SFC方法开发，随后使用Lux A1手性柱(溶剂体系-30％的(0.5％异丙基胺在异丙醇中，温度-35℃)进行纯化，得到叔丁基(S)-3-(6-(2-氰基-3,6-二氟苯氧基)-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(第一洗脱异构体，400mg，678.87μmol，15％产率)和叔丁基(R)-3-(6-(2-氰基-3,6-二氟苯氧基)-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(第二洗脱异构体，410mg)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):483.1[M+H-tBu]+。
注:手性SFC纯化后手性中心处的立体化学是任意指定的。第一洗脱异构体立体化学被任意指定为S-对映异构体，第二洗脱的异构体立体化学被任意指定为R-对映异构体。
步骤3:使用叔丁基(3S)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(410毫克，761.32微摩尔)、[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(157.81毫克，1.14毫摩尔)和碳酸铯(620.1毫克，1.9mmol)按照程序A-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体，得到叔丁基(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(471mg,670.36μmol,88％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):655.21[M-H]-。
步骤4:通过TFA介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。使用TFA(408.02毫克，3.58毫摩尔，275.69微升)对叔丁基(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(470毫克，715.67微摩尔)进行N-Boc脱保护，得到(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷的TFA盐(436mg,494.10μmol,69％产率)。LCMS m/z(ESI):557.1[M+H]+。
步骤5:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(436mg，650.13μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(285.95mg,715.15μmol)、N,N-二异丙基乙胺(420.12mg,3.25mmol,566.19μL)和HATU(271.92mg,715.15μmol)进行酰胺偶联。通过制备型高效液相色谱(流动相:水中10mM甲酸\乙腈)纯化粗化合物，并将级分冻干，得到(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(220mg,231.12μmol,36％产率)。为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):902.3[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.82(s,1H),9.52(bs,1H),8.36(d,J＝2.00Hz,1H),7.78-7.81(m,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.70(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.48(dd,J＝4.00,9.20Hz,1H),7.37(d,J＝3.20Hz,1H),6.95-7.05(m,1H),6.50(d,J＝7.60Hz,1H),6.47(d,J＝12.80Hz,1H),6.12(d,J＝7.60Hz,1H),5.28-5.38(m,1H),4.10-4.40(m,5H),3.76-3.85(m,1H),3.32-3.61(m,5H),3.15(q,J＝7.20Hz,2H),3.02-3.11(m,1H),2.85-2.95(m,1H),2.65-2.81(m,1H),2.78(s,3H),2.50-2.62(m,2H),2.38-2.48(m,1H),1.96-2.15(m,4H),1.52-1.95(m,7H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例34
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
/>
步骤1:喹唑啉酮中间体的合成采用3-氨基-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯.HCl(15克，51.23毫摩尔)、2-氨基-5-羟基苯甲酸(7.85克，51.23毫摩尔)、原甲酸三乙酯(10.63克，71.72毫摩尔，11.93毫升)，按照环化的一般程序(程序A-A)进行。将粗化合物用20％乙酸乙酯/石油醚研磨，得到棕色固体的3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(12.0g，25.29mmol，49％产率)。LCMS m/z(ESI):402.20[M+H]+。
步骤2:按照O-芳化的一般程序(程序A-B)使用叔丁基3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(12.0克，25.11毫摩尔)、碳酸铯(24.54克，75.33毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(5.13克，32.64毫摩尔，3.77毫升)合成O-芳化的喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶柱色谱纯化，用60％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(9.0克，16.54毫摩尔，66％产率)，为灰白色固体，以及1.8克。LCMS m/z(ESI):539.2[M+H]+。
步骤3:对叔丁基3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(9.0克，16.54毫摩尔)进行手性SFC纯化以拆分对映异构体。外消旋中间体使用Lux A1柱(250mm×30mm；5微米)用40％异丙醇/二氧化碳与甲醇中0.5％异丙胺作为共溶剂进行洗脱(流速:4ml/min；出口压力:100巴)以提供3.5g第一洗脱异构体和3.7g第二洗脱异构体。
两种异构体的构型任意指定如下。
对映异构体1:第一洗脱异构体被任意指定为叔丁基(S)-3-(6-(2-氰基-3,6-二氟苯氧基)-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯
对映异构体2:第二洗脱异构体被任意指定为叔丁基(R)-3-(6-(2-氰基-3,6-二氟苯氧基)-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯。
步骤4a:在0℃下，向N-乙基-N-甲基-氨磺酰氯(10克，63.44毫摩尔，7.81毫升)的甲醇(20毫升)溶液中加入甲醇中7M氨(7M，30毫升)，并在室温下搅拌反应混合物14小时。反应混合物减压浓缩以得到粗产物。将粗化合物用水(150mL)稀释，用乙酸乙酯(2x150 mL)提取。合并的有机层用碳酸氢钠溶液(100ml)、盐水(100ml)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗产物，其通过硅胶柱色谱纯化，用40％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(7.0g，48.12mmol，76％产率)，为无色液体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝6.65(s,2H),2.98(q,J＝7.20Hz,2H),2.61(s,3H),1.09(t,J＝7.20Hz,3H)。
步骤4:使用叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(3.7克，6.87毫摩尔)、碳酸铯(5.60克，17.18毫摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(1.42克，18毫摩尔)按照程序A-C合成氨磺酰基化的喹唑啉酮中间体。将粗化合物用石油醚中10％二氯甲烷研磨，得到叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(2.8克，3.58毫摩尔，52％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):601.0[M+H-tBu]+。
步骤5:通过HCl介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。对叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(2.7克，4.11毫摩尔)和1,4-二噁烷(4M，36.68毫升)中的4M HCl溶液进行N-Boc脱保护。将反应混合物减压浓缩以得到粗产物，其用二乙醚研磨，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷的HCl盐(2.7克，3.90毫摩尔，95％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):557.0[M+H]+。
步骤6:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(800mg，1.35mmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(490.17mg,1.23mmol)、HATU(512.90mg,1.35mmol)和N,N-二异丙基乙胺(697.35mg,5.40mmol,939.83μL)进行酰胺偶联。粗反应混合物通过反相柱色谱纯化，使用在0.1％甲酸水溶液中50％乙腈快速洗脱的30g，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(400mg,0.46mmol,33％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):902.2[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.82(s,1H),10.20(bs,1H),9.60(bs,1H),8.36(d,J＝2.00Hz,1H),7.79-7.85(m,2H),7.71(dd,J＝3.20,8.80Hz,1H),7.49(dd,J＝4.00,9.40Hz,1H),7.37(d,J＝2.80Hz,1H),6.96(d,J＝8.80Hz,1H),6.47-6.51(m,1H),6.48(d,J＝12.40Hz,1H),6.12(d,J＝7.60Hz,1H),5.30-5.40(m,1H),4.10-4.40(m,5H),3.75-3.81(m,1H),3.41-3.51(m,2H),3.35-3.45(m,2H),3.16(q,J＝6.80Hz,2H),3.00-3.10(m,1H),2.85-2.95(m,1H),2.79(s,3H),2.65-2.75(m,1H),2.51-2.61(m,2H),2.50-2.40(m,1H),2.01-2.21(m,5H),1.51-1.95(m,7H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例35
4-[6-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]-N-[1-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-4-基]苯甲酰胺
/>
步骤1:按照环化的一般程序(程序A-A)使用叔丁基(1R,5S)-6-氨基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸酯(1.10g，5.55mmol)、2-氨基-5-羟基-苯甲酸(1.02g，6.66mmol)和原甲酸三乙酯(1.07g，7.21mmol，1.20mL)合成喹唑啉酮中间体。粗产物用乙醚研磨，得到所需的叔丁基(1R,5S)-6-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸酯(1.1克，3.12毫摩尔，56％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):344.2[M+H]+。
步骤2:按照O-芳化的一般程序(程序A-B)使用叔丁基(1R,5S)-6-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸酯(1克，2.91毫摩尔)、碳酸铯(2.85克，8.74毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(548.99毫克，3.49毫摩尔，403.67微升)合成O-芳化的喹唑啉酮中间体。粗产物通过柱色谱纯化，1％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到叔丁基(1R,5S)-6-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸酯(1.2克，2.46毫摩尔，84％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):481.2[M+H]+。
步骤3:向6-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯(1.1克，2.29毫摩尔)在二噁烷(15毫升)中的搅拌溶液中，加入4.0M HCl二噁烷(1.04毫升)溶液，并在室温下继续反应3小时。完成后，反应混合物在减压下浓缩，得到粗化合物。用乙酸乙酯研磨该粗化合物，得到2-[3-(3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-3,6-二氟-苯甲腈(950毫克，2.26毫摩尔，99％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):381.0[M+H]+。
步骤4:在密封管中加入2-[3-[(1R,5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-3,6-二氟-苯甲腈(1.0克，2.40毫摩尔)和4-溴苯甲酸叔丁酯(616.89毫克，2.40毫摩尔)在二噁烷(10毫升)中的溶液，并加入碳酸铯(2.35克，7.20毫摩尔)。在室温下将X-phos-Pd-G2(188.74毫克，239.92微摩尔)和X-Phos(114.37毫克，239.92微摩尔)加入混合物之前，将所得反应混合物用氮气脱气10分钟。反应混合物随后在100℃加热16小时。完成后，向反应混合物中加入水(300mL)，并用乙酸乙酯(3x200 mL)提取。合并的有机层用盐水溶液(200mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗化合物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用50-60％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂进行洗脱，得到4-[(1R,5S)-6-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]苯甲酸叔丁酯(750mg，1.11mmol，46.06％产率)，为淡黄色固体。LCMS m/z(ESI):557.2[M+H]+。
步骤5:使用4-[(1R,5S)-6-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]苯甲酸叔丁酯(750毫克，1.35毫摩尔)、[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(409.68毫克，2.96毫摩尔)和碳酸铯(1.10g,3.37mmol)按照程序A-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体。将粗化合物用二氯甲烷和石油醚研磨，得到4-[(1R,5S)-6-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]苯甲酸叔丁酯(400mg，397.19μmol，29％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):675.3[M+H]+。
步骤6:通过HCl介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。使用1,4-二噁烷(204.72L)中4M HCl对二噁烷(5mL)中的叔丁基4-[(1R,5S)-6-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]苯甲酸酯(250mg，449.19μmol)进行N-Boc脱保护。将粗化合物用乙酸乙酯研磨，得到4-[(1R,5S)-6-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]苯甲酸的HCl盐(180mg，217.35μmol，48％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):619.2[M+H]+。
步骤7:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用4-[6-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]苯甲酸(150mg，242.47μmol)、3-[4-(4-氨基-1-哌啶基)-3-氟-苯胺基]哌啶-2,6-二酮(103.82mg，290.96μmol)、N,N-(156.68mg,1.21mmol,211.16μL)和HATU(110.63mg,290.96μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中40％乙腈洗脱，并将级分冻干，得到4-[6-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]-N-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]苯甲酰胺(33.93mg,35.00μmol,14％产率)，为淡绿色固体。LCMS m/z(ESI):921.4[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.79(s,1H),10.20(s,1H),8.37(s,1H),7.94(d,J＝8.00Hz,1H),7.74-7.80(m,4H),7.68(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.44-7.52(m,1H),7.37(d,J＝2.80Hz,1H),6.87(t,J＝9.60Hz,1H),6.63(d,J＝8.80Hz,2H),6.52(dd,J＝2.40,15.20Hz,1H),6.43(d,J＝8.80Hz,1H),5.81(d,J＝7.60Hz,1H),4.21-4.31(m,1H),3.80-3.90(m,1H),3.78(d,J＝10.00Hz,1H),3.31-3.48(m,4H),3.11-3.20(m,4H),2.77(s,3H),2.58-2.76(m,4H),2.42(s,2H),2.05-2.15(m,1H),1.81-1.91(m,3H),1.68-1.78(m,2H),1.06(t,J＝6.80Hz,3H)ppm。
实施例36
3-[[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]甲基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
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步骤1:0℃下向3-氧代-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(0.5g，1.96毫摩尔)在甲醇(20mL)中的搅拌溶液中逐份加入硼氢化钠(148.18mg，3.92毫摩尔)，反应在室温下搅拌1小时。完成后，浓缩反应混合物以得到粗物质，其在乙酸乙酯和水之间分配。有机层经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到灰白色固体的3-羟基-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(0.4g，1.55mmol，产率79％)。LCMS m/z(ESI):158.1[M+H]+。
步骤2:向叔丁基3-羟基-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.4克，1.55毫摩尔)在二氯甲烷(6毫升)中的溶液中加入N,N-二乙基乙胺(393.24毫克，3.89毫摩尔，541.65微升)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(18.99毫克，155.44微摩尔)，并将反应混合物冷却至0℃。在相同温度下将甲磺酰氯(213.68mg，1.87mmol，144.38μL)逐滴添加至反应混合物中并在RT下继续搅拌45分钟。完成后，将反应混合物用二氯甲烷(30mL)稀释并用水(100ml)、随后盐水溶液(50mL)洗涤。分离有机相，用硫酸钠干燥，真空浓缩，得到粗物质，其用硅胶快速柱色谱(0-60％乙酸乙酯/Pet醚)纯化，得到叔丁基3-甲磺酰氧基-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.3g，885.47μmol，57％产率)，为胶状物。LCMS m/z(ESI):236.0[M+H]+。
步骤3:将叔丁基3-甲磺酰氧基-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.3克，894.41微摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(3毫升)中的溶液置于密封管中，并在室温下一次加入氰化钠(65.75毫克，1.34毫摩尔)。将管密封，并将所得反应混合物加热至110℃达16小时。16小时后，将反应混合物冷却至室温，用水稀释，用5％甲醇/二氯甲烷(100mL)提取。分离有机层，用硫酸钠干燥，真空浓缩，得到粗物质，其用硅胶快速柱色谱(50％乙酸乙酯于二氯甲烷中)纯化，得到白色固体的3-氰基-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(0.15g，444.93μmol，50％产率)。LCMS m/z(ESI):166.9[M+H]+。
步骤4:在0℃下，向3-氰基-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1.40g，5.26mmol)的四氢呋喃(25mL)搅拌溶液中滴加硼烷四氢呋喃复合溶液(1.13g，13.14mmol，1M)，并在相同温度下继续搅拌10分钟。将反应混合物加热至室温，然后在氮气氛下于80℃回流4小时。然后将反应混合物用甲醇(15mL)淬灭并真空浓缩，得到作为粗物质的3-(氨甲基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1.40g，4.82mmol，92％产率)，其用于下一步无需进一步纯化。LCMS m/z(ESI):171.1[M+H]+。
步骤5:使用叔丁基3-(氨基甲基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1.4克，5.18毫摩尔)、2-氨基-5-羟基-苯甲酸(792.96毫克，5.18毫摩尔)和原甲酸三乙酯(1.92克，12.95毫摩尔，2.15毫升)按照环化的一般程序(程序A-A)合成喹唑啉酮中间体。通过使用0-80％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂的硅胶快速柱色谱从粗物质中纯化所需化合物，得到3-[(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)甲基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1.4g，2.92mmol，56％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):360.2[M+H]+。
步骤6:通过使用叔丁基3-[(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)甲基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1.4克，3.37毫摩尔)、碳酸铯(3.29克，10.11毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(1.06克，6.74毫摩尔，788.44微升)按照O-芳基化的一般程序(程序A-B)合成O-芳基化的喹唑啉酮中间体。使用0-10％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱从粗混合物中纯化所需化合物，得到固体的3-[[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]甲基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1.3g，2.12mmol，63％产率)。LCMSm/z(ESI):453.2[M+H]+。
步骤7:使用叔丁基3-[[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]甲基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1.2克，2.17毫摩尔)、碳酸铯(2.12克，6.52毫摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(600.20毫克，4.34毫摩尔)按照程序A-C合成氨磺酰基化的喹唑啉酮中间体完成后，用水(20ml)稀释反应混合物，过滤出固体。滤液用乙酸乙酯(2x 60ml)提取，分离的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到液体的3-[[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]甲基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(0.7g，726.46μmol，产率33％)。LCMS m/z(ESI):571.2[M+H]+。
步骤8:通过三氟乙酸介导的N-Boc脱保护反应所需的胺(程序A-D)。使用三氟乙酸(1.19克，10.44毫摩尔，804.02微升)在0℃和氮气氛下对3-[[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]甲基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(0.7克，1.04毫摩尔)进行N-Boc脱保护，以提供胶状的3-[[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]甲基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(0.65g,818.46μmol,78％产率)。LCMS m/z(ESI):571.2[M+H]+。
步骤9:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(146.00mg，365.15μmol)、3-[[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]甲基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(0.25g,365.15μmol)、N,N-二异丙基乙胺(235.96mg,1.83mmol,318.00μL)和HATU(208.26mg,547.72μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中43％乙腈洗脱，得到产物3-[[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]甲基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(98mg,101.70μmol,28％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):916.3[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.82(s,1H),9.83(s,1H),8.41(s,1H),7.81(s,1H),7.78(s,1H),7.69(dd,J＝8.80,2.80Hz,1H),7.48-7.45(m,1H),7.37(d,J＝3.20Hz,1H),6.97(s,1H),6.48(t,J＝13.60Hz,2H),6.12(d,J＝7.60Hz,1H),4.43-4.31(m,2H),4.28-4.19(m,2H),4.02(d,J＝6.80Hz,2H),3.85-3.84(m,2H),3.58-3.51(m,2H),3.38-3.30(m,2H),3.14(q,J＝6.80Hz,2H),3.09-3.01(m,2H),2.76-2.68(m,2H),2.68(s,3H),2.67-2.60(m,1H),2.59-2.53(m,1H),2.11-2.08(m,2H),1.91-0.00(m,6H),1.83-1.71(m,1H),1.52-1.54(m,4H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例37
2-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-N-[1-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-4-基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺
步骤1:在0℃下向3-[4-(4-氨基-1-哌啶基)-3-氟-苯胺基]哌啶-2,6-二酮(50毫克，140.13微摩尔)在THF(1毫升)中的溶液中加入三乙基胺(70.90毫克，700.63微摩尔，97.65微升)和(4-硝基苯基)氯甲酸酯(33.89毫克，168.15微摩尔)，将所得溶液在室温下搅拌3小时。完成后，将溶液减压浓缩，得到(4-硝基苯基)N-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]氨基甲酸酯(70mg，95.11μmol，产率68％)，为棕色固体。LCMSm/z(ESI):486.0[M+H]+。
步骤2:在氮气下于30℃向3-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(200.45毫克，306.20微摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(4毫升)溶液中加入三乙胺(416.88毫克，4.12毫摩尔，574.21微升)和(4-硝基苯基)N-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]氨基甲酸酯。将反应溶液缓慢升温至rt并搅拌5小时。完成后，将反应混合物减压浓缩，粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵中45％乙腈洗脱，得到2-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-N-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺(144mg,160.27μmol,19％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):887.4[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.79(s,1H),10.15(s,1H),8.42(s,1H),7.89-7.84(m,1H),7.80(d,J＝9.20Hz,1H),7.69(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.50(dd,J＝4.00,9.20Hz,1H),7.35(d,J＝2.80Hz,1H),6.85(t,J＝9.60Hz,1H),6.50(dd,J＝15.20,2.40Hz,1H),6.41(dd,J＝8.80,2.00Hz,1H),6.23(d,J＝7.20Hz,1H),5.80(d,J＝7.20Hz,1H),4.94(t,J＝8.80Hz,1H),4.40-4.20(m,1H),3.51-3.48(m,1H),3.21-3.16(m,4H),3.11(t,J＝11.20Hz,2H),2.76(s,3H),2.72-2.2.65,(m,2H),2.64-2.56(m,3H),2.36(t,J＝8.80Hz,3H),2.27(t,J＝11.60Hz,3H),2.08-1.92(m,1H),1.84-1.77(m,3H),1.61-1.54(m,5H),1.06(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例38
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-N-[1-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-4-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酰胺
步骤1:在氮气下于0℃向3-[4-(4-氨基-1-哌啶基)-3-氟-苯胺基]哌啶-2,6-二酮(0.7g，1.96mmol)在THF(7mL)中的溶液中加入三乙胺(992.55mg，9.81mmol，1.37mL)和(4-硝基苯基)氯甲酸酯(474.50mg，2.35mmol)。将所得溶液在0℃至室温下搅拌3小时。完成后，在减压下浓缩反应，得到(4-硝基苯基)N-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]氨基甲酸酯(1.27g，1.95毫摩尔，99％产率)，为棕色固体，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):486.2[M+H]+。
步骤2:在室温和氮气氛下，向3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(137.44毫克，231.74微摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)溶液中加入三乙胺(416.88毫克，4.12毫摩尔，574.21微升)。将反应混合物冷却至-30℃并搅拌10分钟。(4-硝基苯基)N-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]氨基甲酸酯(0.25克，514.97微摩尔)在-30℃下加入，反应混合物在室温下搅拌3小时。完成后，反应混合物在真空下浓缩。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中40％乙腈洗脱，得到3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-N-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酰胺(38.15mg,38.83μmol,8％产率)，为灰白色色固体。LCMS m/z(ESI):901.3[M-H]-；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.57(s,1H),9.81(s,1H),8.35(s,1H),7.78(d,J＝8.80Hz,1H),7.67(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.60(d,J＝8.00Hz,2H),7.44(s,1H),7.35(d,J＝3.20Hz,2H),7.06(d,J＝8.00Hz,1H),5.32(s,1H),4.20-4.13(m,2H),3.99(s,3H),3.91(t,J＝6.80Hz,2H),3.68-3.59(m,1H),3.50(m,2H),3.06(d,J＝7.20Hz,2H),2.86-2.80(m,3H),2.76(t,J＝6.80Hz,3H),2.67(d,J＝5.60Hz,4H),2.49-2.40(m,3H),2.14-2.07(m,1H),1.96(s,4H),1.83-1.56(m,5H),1.04(t,J＝6.80Hz,3H)。
实施例39
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[7-[3-[3-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]氮杂环丁烷-1-基]环丁烷羰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用3-[3-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]氮杂环丁烷-1-基]环丁烷羧酸(173.60mg，462.44μmol)、3-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(0.25g,462.44μmol)、N,N-二异丙基乙胺(298.84mg,2.31mmol,402.75μL)和HATU(263.75mg,693.66μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用43％的乙腈与水中0.1％的甲酸洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[7-[3-[3-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]氮杂环丁烷-1-基]环丁烷羰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]-4-氧代-喹唑啉(215mg,222.10μmol,48％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):898.3[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.82(s,1H),10.54(bs,1H),8.40(d,J＝3.20Hz,1H),7.78(d,J＝9.20Hz,1H),7.65(dd,J＝9.00,3.20Hz,2H),7.40-7.37(m,1H),7.34(d,J＝3.20Hz,1H),7.18(t,J＝8.00Hz,1H),6.51(t,J＝14.00Hz,2H),6.24(d,J＝8.00Hz,1H),6.24(q,J＝8.00Hz,1H),4.37(q,J＝44.00Hz,1H),4.09-0.00(m,2H),3.96-3.71(m,4H),3.51-3.48(m,2H),3.20-3.10(m,2H),3.08(q,J＝7.20Hz,3H),2.78-2.61(m,5H),3.17-3.07(m,8H),2.07-1.91(m,1H),1.91-1.90(m,1H),1.66-1.56(m,4H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例40
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:使用叔丁基3-氨基-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(5.0克，19.66毫摩尔)、2-氨基-5-羟基-苯甲酸(3.01克，19.66毫摩尔)、原甲酸三乙酯(7.28克，49.14毫摩尔，8.17毫摩尔)和乙酸(118.04毫克，1.97毫摩尔，112.42微升)按照环化的一般程序(程序A-A)合成喹唑啉酮中间体。粗化合物经用乙酸乙酯/石油醚的硅胶快速柱色谱纯化，得到棕色固体的3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(5.6克，13.72毫摩尔，70％产率)。外消旋环化化合物使用手性SFC纯化进行手性拆分。使用Chiralcel OX-H柱(流速:3毫升/分钟，共溶剂:30％甲醇，出口压力:100巴，温度:35℃)将3.0克外消旋环化化合物进行SFC纯化。SFC纯化后，获得1.3g第一洗脱异构体(对映异构体1)和1.3g第二洗脱异构体(对映异构体2)。第一洗脱异构体的立体化学被任意指定为S-对映异构体，第二洗脱异构体被任意指定为R-对映异构体。LCMS m/z(ESI):400.2[M+H]+。
请注意，为了区分两种对映异构体和产生不同的登记号，构型被任意指定如下。
对映异构体1:第一洗脱异构体被任意指定为叔丁基3-[(3S)-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯
对映异构体2:第二洗脱异构体被任意指定为3-[(3R)-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯
步骤2:按照O-芳化的一般程序(程序A-B)使用叔丁基3-[(3S)-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1.30克，3.25毫摩尔)、叔丁醇钾(730.32毫克，6.51毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(511.21毫克，3.25毫摩尔，375.89微升)合成O-芳化喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用60％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂进行洗脱，得到叔丁基(3S)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1.2克，1.71毫摩尔，53％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):481.1[M+H-tBu]+。
步骤3:使用叔丁基(3S)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1.20克，2.24毫摩尔)、碳酸铯(1.82克，5.59毫摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(618.10毫克，4.47毫摩尔)按照程序A-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体，得到叔丁基(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(960.0mg,1.01mmol,45％产率)，为无色液体。LCMS m/z(ESI):653.2[M-H]-。
步骤4:通过HCl介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。N-Boc脱保护是在叔丁基(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(400.00mg，610.92mol)上使用二噁烷(4M，3.0mL)中HCl溶液进行的。所得残留物用二乙醚(2x 10mL)研磨并在减压下干燥，得到黄色固体的3-[(3S)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(360.0mg，542.20μmol，89％产率)。LCMS m/z(ESI):555.2[M+H]+。
步骤5:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用3-[(3S)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(400.00毫克，721.20微摩尔)、HATU(411.33毫克，1.08毫摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(466.05毫克，3.61毫摩尔，628.10微升)和2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(262.07mg,721.20μmol)进行酰胺偶联。通过使用100gsnap的反相柱色谱纯化所得粗产物，用0.1％乙酸铵水溶液中42％乙腈洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉(230.0mg,254.57μmol,35％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):900.4[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.74(s,1H),8.43(d,J＝3.60Hz,1H),7.76(d,J＝6.00Hz,1H),7.64(dd,J＝3.20,8.80Hz,1H),7.45-7.61(m,1H),7.35(s,1H),7.31-7.35(m,1H),6.99(t,J＝8.00Hz,1H),6.49(d,J＝7.60Hz,1H),6.46(d,J＝12.00Hz,1H),6.07(d,J＝8.00Hz,1H),5.01-5.11(m,1H),4.28-4.38(m,1H),3.72-4.01(m,1H),3.53-3.62(m,1H),3.21-3.51(m,4H),3.02-3.07(m,2H),2.60-2.81(m,4H),2.64(s,3H),2.51-2.59(m,2H),2.01-2.18(m,4H),1.70-1.92(m,8H),1.42-1.69(m,5H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例41
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:按照O-芳化的一般程序(程序A-B)使用叔丁基(3R)-3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1.30克，3.25毫摩尔)、叔丁醇钾(730.32毫克，6.51毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(511.21毫克，3.25毫摩尔，375.89微升)合成O-芳化喹唑啉酮中间体。粗产物通过230-400硅胶快速柱色谱纯化，使用60％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1.3克，1.94毫摩尔，60％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):481.3[M+H-tBu]+。
步骤2:使用叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1.10克，2.05毫摩尔)、碳酸铯(667.95毫克，2.05毫摩尔)和[甲基(氨磺酰)氨基]乙烷(283.29毫克，2.05毫摩尔)，按照程序A-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体。将反应混合物冷却至室温，用水(40mL)淬灭，过滤并干燥。滤液用乙酸乙酯(2x30 mL)提取，用盐水(25mL)洗涤。有机层经硫酸钠干燥并浓缩，得到棕色液体的叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.9g，934.71μmol，46％产率)。LCMS m/z(ESI):599.1[M+H-tBu]+。
步骤3:通过HCl介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。使用二噁烷(4.0M，4mL)中的HCl对叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(400.00mg，610.92μmol)进行N-Boc脱保护。将所得粗产物用二乙醚(2x 10mL)研磨并干燥，得到3-[(3R)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(0.4g，531.89μmol，87％产率)，为淡黄色固体。LCMS m/z(ESI):555.2[M+H]+。
步骤4:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用3-[(3R)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代喹唑啉(400.00mg，721.20μmol)、HATU(411.33mg，1.08mmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(262.07mg,721.20μmol)和N,N-二异丙基乙胺(466.05mg,3.61mmol,628.10μL)进行酰胺偶联。粗化合物通过100g C18反相柱纯化，使用乙腈中0.1％乙酸铵作为洗脱剂，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉(130mg,140.40μmol,19％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):898.3[M-H]-；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),9.68(s,1H),8.43(d,J＝3.60Hz,1H),7.76(d,J＝8.80Hz,1H),7.64(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.42-7.61(m,1H),7.34(s,1H),7.28-7.34(m,1H),6.91-7.05(m,1H),6.48(d,J＝7.20Hz,1H),6.46(d,J＝12.40Hz,1H),6.08(d,J＝7.20Hz,1H),4.96-5.11(m,1H),4.28-4.35(m,1H),3.55-3.61(m,1H),3.34-3.51(m,4H),3.01-3.08(m,2H),2.72-2.81(m,3H),2.51-2.71(m,7H),2.05-2.16(m,4H),1.71-1.95(m,8H),1.40-1.69(m,5H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例42
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(800mg，1.44mmol)、2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(548.40mg,1.51mmol)、N,N-二异丙基乙胺(928.77mg,7.19mmol,1.25mL)和HATU(601.15mg,1.58mmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中40-45％的乙腈洗脱，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(270mg,295.42μmol,21％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):902.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.87(s,1H),8.34(s,1H),7.77(d,J＝8.80Hz,1H),7.66(dd,J＝9.00,2.80Hz,1H),7.55(s,1H),7.35(d,J＝2.80Hz,2H),6.99(s,1H),6.47(t,J＝12.80Hz,2H),6.07(d,J＝7.60Hz,1H),5.31(s,1H),4.35-4.29(m,1H),4.20-4.11(m,2H),3.70(d,J＝17.20Hz,2H),3.58-3.48(m,3H),3.05(d,J＝7.20Hz,2H),2.74-2.65(m,7H),2.47-2.36(m,3H),2.11-2.06(m,3H),1.92-1.62(m,9H),1.58-1.51(m,1H),1.04(t,J＝6.80Hz,3H)。
实施例43
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(0.8克，1.35毫摩尔)、2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(593.29mg,1.48mmol)、N,N-二异丙基乙胺(1.74g,13.49mmol,2.35mL)和HATU(564.19mg,1.48mmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中50％乙腈洗脱，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(307mg,336.76μmol,25％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):902.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),9.86(s,1H),8.35(s,1H),7.78(d,J＝9.20Hz,1H),7.66(d,J＝8.80Hz,1H),7.55(s,1H),7.35(s,2H),6.99(s,1H),6.47(t,J＝13.60Hz,2H),6.08(d,J＝6.40Hz,1H),5.31(s,1H),4.32(s,1H),4.15(d,J＝12.40Hz,3H),3.72(s,1H),3.47-3.34(m,4H),3.06(d,J＝6.40Hz,1H),2.79-2.66(m,5H),2.42-2.34(m,4H),2.10-2.07(m,3H),1.92-1.55(m,11H),1.04(t,J＝6.80Hz,3H)。
实施例44
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用3-[(3R)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-6-[2-氰基-3-(二甲基磺酰胺基)-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(0.15克，259.93微摩尔)、HATU(148.25毫克，389.90微摩尔)、2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(94.46mg,236.23μmol)和N,N-二异丙基乙胺(167.97mg,1.30mmol,226.38μL)进行酰胺偶联。粗产物通过30g C18反相柱色谱纯化，使用乙腈中0.1％乙酸铵作为洗脱剂，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸-3-基]-4-氧代-喹唑啉(75mg,81.07μmol,31％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):900.3[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),9.70(s,1H),8.43(d,J＝4.00Hz,1H),7.76(d,J＝9.20Hz,1H),7.64(dd,J＝2.80,9.00Hz,1H),7.45-7.55(m,1H),7.34(s,1H),7.28-7.35(m,1H),6.95-7.02(m,1H),6.48(d,J＝7.20Hz,1H),6.46(d,J＝12.00Hz,1H),6.08(d,J＝7.60Hz,1H),5.01-5.11(m,1H),4.29-4.37(m,1H),3.51-3.61(m,1H),3.35-3.50(m,2H),3.35-3.14(m,3H),3.01-3.07(m,2H),2.70-2.81(m,2H),2.61-2.68(m,2H),2.67(s,3H),2.51-2.58(m,2H),2.02-2.15(m,4H),1.65-1.91(m,7H),1.42-1.68(m,5H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例45
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(101.47毫克，253.77微摩尔)、HATU(144.73毫克，380.65微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(163.99毫克，1.27毫摩尔，221.01微升)和3-[(3R)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(150.0mg，253.77μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过使用100g snap的反相柱色谱纯化，用在0.1％乙酸铵水溶液中46％乙腈洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉(35.0mg,37.96μmol,15％产率)。为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):900.4[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.69(s,1H),8.43(d,J＝3.60Hz,1H),7.76(d,J＝8.80Hz,1H),7.64(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.42-7.56(m,1H),7.34(s,1H),7.28-7.34(m,1H),6.95-7.02(m,1H),6.48(d,J＝7.20Hz,1H),6.46(d,J＝12.40Hz,1H),6.07(d,J＝7.60Hz,1H),5.01-5.11(m,1H),4.28-4.38(m,1H),3.55-3.62(m,1H),3.11-3.51(m,5H),3.01-3.08(m,2H),2.71-2.81(m,3H),2.51-2.68(m,4H),2.63(s,3H),2.01-2.15(m,4H),1.65-1.95(m,7H),1.40-1.65(m,5H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例46
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:在氮气氛下，在0-5℃下，将4-(4-氨基-2-氟-苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(3克，10.19毫摩尔)加入到亚硝酸盐叔丁酯(1.58克，15.29毫摩尔，1.82毫升)和CuBr2(4.55克，20.38毫摩尔，966.58微升)在乙腈(30毫升)中的搅拌溶液中。反应混合物在室温下搅拌4小时。反应完成后，用水(30mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3×30mL)提取。合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩以得到粗产物，该粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用70％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到4-(4-溴-2-氟-苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(4.1g，4.89mmol，48％产率)。LCMS m/z(ESI):304.0[M-tBu+3H]+。
步骤2:在氮气氛下，将4-(4-溴-2-氟-苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.9g，10.89mmol)在1,4-二噁烷(40mL)中的溶液置于密封管中。向反应混合物中加入乙酸钾(2.14克，21.77毫摩尔，1.36毫升)和4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(4.15克，16.33毫摩尔)。反应混合物用氮气吹扫10分钟，加入Pd(dppf)Cl2.二氯甲烷(889.02毫克，1.09毫摩尔)，然后用氮气吹扫5分钟。将反应混合物在100℃下搅拌16小时。完成后，用水(60mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(3×60mL)提取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。所得粗产物经硅胶柱色谱纯化，用60％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到4-[2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(4.6克，5.33毫摩尔，产率49％)。LCMS m/z(ESI):306.2[M+H]+。
步骤3:向密封管中4-[2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(5g，12.34mmol)在1,4-二噁烷(60mL)和水(10mL)中的溶液中加入K3PO4(7.86g，37.01mmol)和2,6-二苄氧基-3-溴-吡啶(5.02g,13.57mmol)。反应混合物用氮气吹扫10分钟，加入Pd(dppf)Cl2.二氯甲烷(1.01g，1.23mmol)，然后用氮气吹扫5分钟。将反应混合物在110℃下搅拌12小时。完成后，用水(60mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(3×60mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过使用30-45％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化所得粗产物，得到4-[4-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-2-氟-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.3g，3.79毫摩尔，31％产率)。LCMS m/z(ESI):569.3[M+H]+。
步骤4:向4-[4-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-2-氟-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1克，1.76毫摩尔)在乙酸乙酯(3毫升)和1,4-二噁烷(3毫升)的搅拌溶液中加入Pd(OH)2(493.90毫克，3.52毫摩尔)。将反应混合物在氢气氛下于室温下搅拌6小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并将滤液真空浓缩，得到白色固体的4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(650mg，1.54mmol，88％产率)，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMSm/z(ESI):389.2[M-H]-。
步骤5:在0℃下，向4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(500毫克，1.28毫摩尔)在1,4-二噁烷(2毫升)中的搅拌溶液中加入HCl在二噁烷(4毫升)中的溶液。反应混合物在室温下搅拌2小时。完成后，反应混合物在真空下浓缩。粗化合物用乙醚洗涤，得到3-[3-氟-4-(4-哌啶基)苯基]哌啶-2,6-二酮(490毫克，1.01毫摩尔，79％产率)，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):291.2[M+H]+。
步骤6:在室温下，向3-[3-氟-4-(4-哌啶基)苯基]哌啶-2,6-二酮(490毫克，1.69毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(4毫升)溶液中加入三乙胺(683.12毫克，6.75毫摩尔，940.94微升)，然后加入2-溴乙酸叔丁酯(362.12毫克，1.86毫摩尔，272.27微升)。反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，向反应混合物中加入水(10mL)，并用乙酸乙酯(2x 50mL)提取。合并的有机层经硫酸钠干燥、过滤并减压浓缩。粗产物用二乙醚洗涤，得到乙酸叔丁酯2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(547mg，1.22毫摩尔，72％产率)，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):405.2[M+H]+。
步骤7:在0℃下，向2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(547mg，1.35mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的搅拌溶液中加入二噁烷(4M，5mL)中的HCl溶液。反应混合物在室温下搅拌2小时。反应混合物在真空下浓缩。粗化合物用乙醚洗涤，得到2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(800mg，1.21毫摩尔，89％产率)，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):349.2[M+H]+。
步骤8:通过COMU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-F)。使用3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(300mg，538.98μmol)、2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(206.54mg，592.88μmol)、N,N-二异丙基乙胺(348.29mg,2.69mmol,469.39μL)，然后COMU(253.91mg,592.88μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用乙腈中40-45％的甲酸缓冲液洗脱，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(10.38mg,10.81μmol,2％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):887.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.88(s,1H),10.17(s,1H),9.53(s,1H),8.36(d,J＝2.00Hz,1H),7.79-7.89(m,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.70(dd,J＝2.40,8.80Hz,1H),7.47(d,J＝6.80Hz,1H),7.37(d,J＝2.80Hz,1H),7.21-7.31(m,1H),7.10(d,J＝11.20Hz,2H),5.29-5.36(m,1H),4.12-4.45(m,1H),4.11-4.18(m,2H),3.89(dd,J＝4.80,11.80Hz,1H),3.72-3.81(m,1H),3.24-3.65(m,4H),3.02-3.21(m,5H),2.77(s,3H),2.53-2.71(m,4H),2.15-2.27(m,1H),1.60-2.14(m,10H),1.50-1.61(m,1H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例47
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(230mg，352.91μmol)、2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]乙酸(141.11mg,352.91μmol)、N,N-二异丙基乙胺(182.44mg,1.41mmol,245.88μL)和HATU(134.19mg,352.91μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中50％乙腈洗脱，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(100mg,100.94μmol,29％产率)，为灰固体。LCMS m/z(ESI):902.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.78(s,1H),10.18(s,1H),8.36(s,1H),7.86(t,J＝10.00Hz,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.70(dd,J＝9.00,3.20Hz,1H),7.50(dd,J＝9.20,4.00Hz,1H),7.37(d,J＝3.20Hz,1H),6.83(t,J＝8.80Hz,1H),6.52(s,1H),6.48(d,J＝2.00Hz,1H),6.41(d,J＝8.80Hz,1H),5.79(d,J＝2.80Hz,1H),4.29-4.21(m,1H),4.15-4.12(m,2H),3.74-3.66(m,1H),3.53-3.42(m,3H),3.18-3.14(m,2H),3.10-3.08(m,2H),2.80(s,3H),2.73-2.68(m,2H),2.60-2.51(m,2H),2.35-2.29(m,4H),2.09-2.07(m,2H),1.79-1.61(m,8H),1.41-1.25(m,2H),1.06(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例48
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌嗪-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
通过COMU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-F)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]哌嗪-1-基]乙酸(33.91mg，70.87μmol)、3-[(3S)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(50mg，84.59μmol)、N,N-二异丙基乙胺(54.66mg,422.94μmol,73.67μL)和(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代碳鎓六氟磷酸盐(54.34mg,126.88μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中35％乙腈洗脱，得到产物6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]哌嗪-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉(40mg,40.81μmol,48％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):900.8[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.78(s,1H),9.98(bs,1H),8.46(s,1H),7.82(s,1H),7.69(d,J＝2.80Hz,1H),7.67(d,J＝2.80Hz,1H),7.48-7.44(m,1H),7.36(d,J＝2.80Hz,1H),6.86(t,J＝9.60Hz,1H),6.53(dd,J＝2.40,14.80Hz,1H),6.43(dd,J＝2.00,Hz,1H),5.87(d,J＝7.60Hz,1H),5.11-4.92(m,1H),4.37-4.22(m,1H),3.553.62(m,2H),3.36(q,J＝20.00Hz,2H),3.11-2.74(m,9H),2.60-2.51(m,5H),2.34-2.07(m,5H),1.87-1.82(m,3H),1.65-1.45(m,6H),1.05(s,3H)。
实施例49
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用(3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-[3-[(3R)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-苯基]-3-氟-吡咯烷-1-磺酰胺(70mg，98.87μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(35.93mg,89.85μmol)、N,N-二异丙基乙胺(51.11mg,395.46μmol,68.88μL)和HATU(37.59mg,98.87μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中50％乙腈洗脱，得到产物(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]-3-氟-吡咯烷-1-磺酰胺(12mg,12.01μmol,12％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):932.2[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),9.47(s,1H),8.35(s,1H),7.79(d,J＝8.80Hz,2H),7.68(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.47(s,1H),7.38(s,1H),6.96(t,J＝8.00Hz,1H),6.49(t,J＝12.40Hz,2H),6.12(d,J＝8.00Hz,1H),5.39-5.25(m,2H),4.36-4.27(m,3H),4.20-4.13(m,2H),3.81-3.78(m,1H),3.51-3.49(m,5H),3.06-2.90(m,2H),2.53-2.51(m,7H),2.14-2.00(m,6H),1.92-1.70(m,7H),1.32-1.20(m,1H)。
实施例50
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌嗪-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(70mg，125.76μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]哌嗪-1-基]乙酸(45.82mg,125.76μmol)、N,N-二异丙基乙胺(65.02mg,503.05μmol,87.62μL)和HATU(47.82mg,125.76μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中50％乙腈洗脱，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]哌嗪-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(20mg,20.81μmol,17％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):903.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),10.08(s,1H),8.36(s,1H),8.04(t,J＝10.00Hz,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.71(dd,J＝8.80,2.80Hz,1H),7.50(dd,J＝9.20,4.00Hz,1H),7.37(d,J＝2.80Hz,1H),6.88(t,J＝9.20Hz,1H),6.49(dd,J＝35.40,8.40Hz,2H),5.93(d,J＝7.60Hz,1H),5.31(s,1H),4.27(t,J＝8.40Hz,1H),4.19-4.11(m,3H),3.76(s,1H),3.42-3.34(m,3H),3.19-3.11(m,8H),2.80(s,3H),2.68-2.59(m,4H),2.14-2.06(m,3H),1.95-1.51(m,6H),1.06(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例51
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-氟-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:在惰性条件下，于0℃向2,3-二氟苯甲酸(10克，63.25毫摩尔)在硫酸(80.52克，820.99毫摩尔，44.00毫升)中的搅拌溶液中滴加硝酸(4.78克，75.90毫摩尔，3.17毫升)。将反应混合物在0-5℃下搅拌2小时。完成后，用水(200mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3×100mL)提取。合并的有机层经硫酸钠洗涤干燥，过滤并减压浓缩，得到黄色固体的2,3-二氟-6-硝基-苯甲酸(9.2克，44.39毫摩尔，产率70％)，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):202.2[M-H]-。
步骤2:向2,3-二氟-6-硝基-苯甲酸(2.7克，13.29毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(40毫升)中的搅拌溶液中加入氢化钠(60％分散体在矿物油中，2.55克，63.68毫摩尔)。反应混合物在0℃下搅拌并搅拌1小时。完成后，反应混合物在0℃下用饱和氯化铵溶液(50毫升)逐滴淬灭，并用乙酸乙酯(3×200毫升)提取。合并的有机层用冷水(3×100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，使用10-20％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到黄色固体的2-氟-3-羟基-6-硝基-苯甲酸(2.7克，10.91毫摩尔，82％产率)。LCMS m/z(ESI):200.2[M-H]-。
步骤3:室温，氮气氛下向2-氟-3-羟基-6-硝基-苯甲酸(2.7克，13.43毫摩尔)在1,4-二噁烷(30毫升)中的搅拌溶液中加入碳上氢氧化钯，20重量％(1.89克，13.43毫摩尔)水。将所得悬浮液在氢气氛球囊下于室温搅拌16小时。完成后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤，用甲醇(100mL)洗涤。将合并的滤液减压浓缩，得到棕色粘性固体的6-氨基-2-氟-3-羟基-苯甲酸(2.7g，7.99mmol，产率60％)，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):170.10[M-H]-。
步骤4:在室温和氮气氛下，向6-氨基-2-氟-3-羟基-苯甲酸(1.2克，7.01毫摩尔)在甲苯(18毫升)和四氢呋喃(3毫升)中的搅拌溶液中加入3-氨基-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1.80克，7.01毫摩尔)和二乙氧基甲氧基乙烷(1.25克，8.41毫摩尔，1.40毫升)。将反应混合物在110℃下搅拌12小时。完成后，用水(150mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3×200mL)提取。合并的有机层用10％碳酸氢钠溶液(3×100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩。使用70-90％乙酸乙酯(在石油醚中)作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化产物，得到3-(5-氟-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(0.460g，931.09μmol，13％产率)。LCMS m/z(ESI):420.2[M+H]+。
步骤5:O-芳基化的喹唑啉酮中间体按照程序A-B使用叔丁基3-(5-氟-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.440g，1.05mmol)、碳酸铯(1.03g，3.15mmol)和2,3,6-三氟苯甲腈(197.75mg，1.26mmol，145.40μL)合成。用80-90％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化粗化合物，得到浅棕色液体的3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(0.450g，749.43μmol，71％产率)。LCMS m/z(ESI):501.20[M+H-tBu]+。
步骤6:使用叔丁基3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.430g，772.64μmol)、碳酸铯(629.36mg，1.93mmol)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(160.16mg,1.16mmol)按照程序A-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体，以得到叔丁基3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.22g,292.80μmol,38％产率)，为棕色固体，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):673.2[M-H]-。
步骤7:使用叔丁基3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.22g，326.06μmol)和在1,4-二噁烷(4.0M，3mL)中的氯化氢溶液按照程序A-D合成所需的胺。将所得粗化合物用甲基叔丁基醚研磨，得到3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(0.22g，346.01μmol，93％产率)，为灰白色固体，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):573.0[M-H]-。
步骤8:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(步骤A-E)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(53.12mg，146.19μmol)、3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(0.07g,121.82μmol)、N,N-二异丙基乙胺(61.64mg,609.12μmol,84.90μL)和HATU(50.95mg,134.01μmol)进行酰胺偶联。粗产物通过C18反相柱色谱使用Isolera(100gRf C18,方法:水中0.1％甲酸:乙腈)纯化，并将纯级分冻干，得到3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(20.96mg,20.43μmol,17％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):920.20[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.75(s,1H),10.20(bs,1H),9.60(bs,1H),8.35(s,1H),7.74(m,1H),7.61(d,J＝7.20Hz,1H),7.52(d,J＝9.20Hz,1H),7.40(d,J＝6.00Hz,1H),6.98(m,1H),6.55-6.46(m,2H),6.12(d,J＝7.20Hz,1H),5.38-5.27(m,1H),4.40-4.10(m,5H),2.85-2.75(m,1H),3.60-3.40(m,2H),3.30-2.85(m,5H),2.76(s,3H),2.70-2.60(m,2H),2.45-2.35(m,2H),2.20-1.50(m,12H),1.06(t,J＝6.80Hz,3H)。
实施例52
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-5-氟-4-氧代喹唑啉
步骤1:室温，氮气氛下向2-氟-3-羟基-6-硝基苯甲酸(2.7克，13.43毫摩尔)在1,4-二噁烷(30毫升)中的搅拌溶液中加入碳上氢氧化钯，20重量％(1.89克，13.43毫摩尔)水。将所得悬浮液在氢气氛球囊下于室温搅拌16小时。完成后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并用甲醇(100mL)洗涤。减压浓缩合并的滤液，得到棕色粘性固体的粗产物6-氨基-2-氟-3-羟基-苯甲酸(2.7g，7.99mmol，60％产率)。LCMS m/z(ESI):170.10[M-H]-。
步骤2:在室温和氮气氛下，向6-氨基-2-氟-3-羟基-苯甲酸(897.00mg，2.83mmol)在甲苯(18mL)和四氢呋喃(3mL)中的搅拌溶液中加入3-氨基-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(600mg，2.36mmol)和二乙氧基甲烷(524.36mg，3.54mmol，588.51μL)。将反应混合物在110℃下搅拌12小时。完成后，用水(75mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3×100mL)提取。合并的有机层用10％碳酸氢钠溶液(3×50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，使用90-100％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到3-(5-氟-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(0.3g，626.57μmol，27％产率)。LCMS m/z(ESI):362.20[M+H-tBu]+。
步骤3:按照程序A-B使用叔丁基3-(5-氟-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.3克，718.61微摩尔)、碳酸铯(702.41毫克，2.16毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(135.47毫克，862.33微摩尔，99.61微升)合成O-芳基化喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，以80-90％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到棕色粘性固体的3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(0.190g，293.47μmol，41％产率)。LCMS m/z(ESI):554.56[M+H]+。
步骤4:使用叔丁基3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.190g，342.61μmol)、碳酸铯(279.08mg，856.54μmol)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(71.02mg，513.92μmol)，按照程序A-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体，以得到叔丁基3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.12g,126.80μmol,37％产率)，为棕色固体。LCMS m/z(ESI):671.20[M-H]-。
步骤5:按照程序A-D，使用叔丁基3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.12克，178.37微摩尔)和在1,4-二噁烷(4.0M，3mL)中的氯化氢溶液合成所需的胺。用甲基叔丁基醚研磨所得的粗化合物，得到3-(8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基)-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉(0.11克，139.23微摩尔，78％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):571.0[M-H]-。
步骤6:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(83.77mg，230.52μmol)、3-(8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基)-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉(0.110g，192.10μmol)、N,N-二异丙基乙胺(97.19mg,960.49μmol,133.87μL)和HATU(80.35mg,211.31μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗产物使用Isolera(100gRf C18,方法:0.1％甲酸水溶液:乙腈)通过C18反相柱色谱纯化，并将纯级分冻干，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉(20mg,20.11μmol,10％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):918.20[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.70(s,1H),9.50(bs,1H),8.35(s,1H),7.57(s,1H),7.47-7.38(m,2H),7.26(d,J＝5.60Hz,1H),6.90-6.80(m,1H),6.43-6.34(m,2H),6.00(d,J＝7.60Hz,1H),4.95-4.93(m,1H),4.30-4.10(m,3H),3.55-3.45(m,2H),3.45-3.30(m,3H),2.96(q,J＝12.40Hz,2H),2.85-2.70(m,3H),2.67(s,3H),2.60-2.45(m,3H),2.05-1.60(m,12H),1.60-1.32(m,4H),0.93(t,J＝6.80Hz,3H)。
实施例53
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-3-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:向密封管中4-溴-2-氟-1-硝基苯(5.00克，22.73毫摩尔)在二噁烷(50毫升)中的搅拌溶液中加入K3PO4(14.47克，68.18毫摩尔)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(7.73克，25.00mmol)。反应混合物用氮气吹扫10分钟，然后加入Pd(dppf)Cl2.二氯甲烷(1.86克，2.27毫摩尔)，再次用氮气吹扫5分钟，然后在100℃下搅拌12小时。完成后，用水(100毫升)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(3x150毫升)提取。合并的有机层用冷水(3×70mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。使用70-80％乙酸乙酯(在石油醚中)作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化所需产物，得到4-(3-氟-4-硝基苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(5.0克，14.80毫摩尔，65％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):223.2[M+H-CO2 tBu]+。
步骤2:向4-(3-氟-4-硝基-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(5.00克，15.51毫摩尔)在乙酸乙酯(25毫升)和1,4-二噁烷(25毫升)中的搅拌溶液中加入碳上氢氧化钯，20重量％(2.18克，15.51毫摩尔)。通过将氢气鼓泡10分钟使反应用氢饱和，然后在室温下氢化(1个大气压)16小时。完成后，用氮气吹扫反应混合物，并通过硅藻土垫过滤除去催化剂。将滤液减压浓缩，得到浅棕色液体的4-(4-氨基-3-氟-苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(4.2克，14.05毫摩尔，产率91％)，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):195.20[M+H-CO2 tBu]+。
步骤3:在室温和氮气氛下，向4-(4-氨基-3-氟-苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1克，3.40毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(10毫升)中的搅拌溶液中加入碳酸氢钠(998.84毫克，11.89毫摩尔，462.43微升)，然后加入3-溴哌啶-2,6-二酮(1.63克，8.49毫摩尔)。将反应混合物在60℃下搅拌。反应完成后，用水(20mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3×30mL)提取。有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗物质通过硅胶柱色谱纯化，用60％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到黄色固体的4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.6克，1.30毫摩尔，38％产率)。LCMS m/z(ESI):350.20[M+H-tBu]+。
步骤4:在氮气氛下，在5℃向4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.6克，1.48毫摩尔)在1,4-二噁烷(4毫升)中的搅拌溶液中加入在1,4-二噁烷(4.0M，3mL)中的氯化氢溶液。反应混合物在室温下搅拌6小时。完成后，反应混合物在减压下浓缩，得到3-[2-氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮(0.5g，1.45毫摩尔，98％产率)，为灰白色固体，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):306.2[M+H]+。
步骤5:在室温氮气氛下，向3-[2-氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮(0.5g，1.64mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二乙基乙胺(662.79mg，6.55mmol，912.93μL)，随后加入2-溴乙酸叔丁酯(319.40mg，1.64mmol，240.15μL)。反应混合物在室温下搅拌12小时。反应完成后，用水(10mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3×10mL)提取。有机层用盐水溶液(30毫升)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(0.120克，281.45微摩尔，17％产率)，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):420.2[M+H]+。
步骤6:使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(0.12g，286.06μmol)和在1,4-二噁烷(4.0M，2mL)中的氯化氢溶液，按照程序A-D合成所需的胺。所得粗化合物与甲基叔丁基醚研磨，得到2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(0.14g，350.14μmol)，为灰白色固体，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):364.20[M+H]+。
步骤7:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用3-[(3S)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(0.08g，144.24μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(52.41mg，144.24μmol)、N,N-二异丙基乙胺(93.21mg,721.20μmol,125.62μL)和HATU(60.33mg,158.66μmol)进行酰胺偶联。粗产物通过C18反相柱色谱使用Isolera(100gRf C18，方法:0.1％甲酸水溶液:乙腈)纯化，并将纯级分冻干，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉(10mg,10.48μmol,7％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):900.20[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.83(s,1H),8.45(s,1H),7.80-7.75(m,2H),7.68(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.46(s,1H),7.37(s,1H),6.95(d,J＝12.80Hz,1H),6.87-6.78(m,2H),5.55-5.45(m,1H),5.15-4.95(m,1H),4.45-4.30(m,2H),4.28-4.15(m,1H),3.65-3.50(m,2H),3.20-3.05(m,3H),2.76(s,3H),2.70-2.60(m,2H),2.20-2.20(m,6H),2.00-1.80(m,7H),1.70-1.40(m,6H),1.27-1.24(m,2H),1.05(t,J＝6.80Hz,3H)。
实施例54
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-3-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(70.00mg，125.76μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(45.70mg,125.76μmol)、N,N-二异丙基乙胺(81.27mg,628.81μmol,109.53μL)和HATU(52.60mg,138.34μmol)进行酰胺偶联。粗产物通过C18反相柱色谱使用Isolera(100gRf C18，方法:0.1％甲酸水溶液:乙腈)纯化，并将纯级分冻干，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟代-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(10mg,10.31μmol,8％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):902.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.82(s,1H),8.34(s,1H),7.77(d,J＝9.20Hz,1H),7.66(d,J＝8.80Hz,1H),7.52(bs,1H),7.35(s,2H),6.96(d,J＝15.20Hz,1H),6.86-6.76(m,2H),5.55-5.40(m,1H),5.35-5.25(m,1H),4.45-4.35(m,1H),4.25-4.10(m,2H),3.75-3.65(m,3H),3.50-3.40(m,4H),3.15-3.00(m,3H),2.85-2.70(m,3H),2.68(s,3H),2.50-2.40(m,4H),2.20-2.00(m,3H),1.90-1.65(m,7H),1.60-1.50(m,1H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例55
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]哌嗪-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:将1,2-二氟-4-硝基苯(5克，31.43毫摩尔，3.47毫升)在N,N-二甲基甲酰胺(40毫升)中的溶液置于密封管中，并在室温和氮气氛下加入N,N-二异丙基乙基胺(16.25克，125.71毫摩尔，21.90毫升)，随后加入叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(5.85克，31.43毫摩尔)。将反应混合物加热至110℃12小时。用水(60mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3×100mL)提取。合并的有机层经硫酸钠干燥、过滤并真空浓缩。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用30-45％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到4-(2-氟-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(9.0克，27.66毫摩尔，产率88％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝8.01-8.07(m,2H),7.19(t,J＝9.60Hz,1H),3.40-3.51(m,4H),3.27(t,J＝4.80Hz,4H),1.43(s,9H)。
步骤2:向4-(2-氟-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(9.0克，27.66毫摩尔)在乙醇(70毫升)、水(20毫升)中的溶液中加入铁粉(7.72克，138.32毫摩尔，982.75微升)，随后在室温下加入盐酸铵(4.44克，82.99毫摩尔)，并将反应混合物在70℃下搅拌4小时。完成后，通过硅藻土过滤反应混合物和用乙醇乙酯(250mL)洗涤。滤液用水(150mL)、饱和碳酸氢钠溶液(50mL)和盐水(50mL)洗涤。有机层用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。粗产物经硅胶柱色谱纯化，用70％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到[1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-哌啶基]甲醇(5.8克，17.84毫摩尔，60％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):296.2[M+H]+。
步骤3:在0-5℃下向4-(4-氨基-2-氟-苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2克，6.77毫摩尔)在乙腈(20毫升)中的搅拌溶液中加入p-TSA.H2O(3.90克，20.52毫摩尔，3.15毫升)，然后在相同温度下加入在水(5mL)中的亚硝酸钠(957.77毫克，13.88毫摩尔，441.37微升)。将反应混合物在0-5℃下搅拌1小时，并在相同温度下加入水(5mL)中的碘化钾(2.37g，14.29mmol，760.21μL)。反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，向反应混合物中加入水(80mL)，并用乙酸乙酯(3×80mL)提取。合并的有机层经硫酸钠干燥、过滤并减压浓缩。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用25％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂进行洗脱，得到黄色固体的4-(2-氟-4-碘-苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.1克，4.84毫摩尔，产率71％)。LCMS m/z(ESI):351.0[M+H]+。
步骤4:向微波小瓶内的4-(2-氟-4-碘-苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1克，2.46毫摩尔)和2,6-二苄氧基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶(2.05克，2.95毫摩尔)在1,4-二噁烷(8毫升)和水(2毫升)中的搅拌溶液中加入无水磷酸钾(1.31克，6.15毫摩尔)。反应混合物用氮气吹扫10分钟，然后加入XPhos-Pd-G2(193.68mg，246.16μmol)。反应混合物再次用氮气吹扫5分钟，并在微波中于100℃辐射2小时。完成后，用水(40mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(3×60mL)提取。合并的有机层经硫酸钠干燥、过滤并减压浓缩。使用30-45％乙酸乙酯(在石油醚中)作为洗脱剂，通过柱色谱从粗产物中纯化所需产物，得到4-[4-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-2-氟-苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.12g，1.67mmol，68％产率)。LCMS m/z(ESI):570.2[M+H]+。
步骤5:向叔丁基4-[4-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-2-氟-苯基]哌嗪-1-羧酸酯(1.12克，1.97毫摩尔)在1,4-二噁烷(12毫升)中的溶液中加入Pd(OH)2(700毫克，4.98毫摩尔)。然后将反应混合物在氢气氛下于室温下搅拌16小时。完成后，将反应混合物通过硅藻土过滤并用乙酸乙酯(80mL)洗涤。减压浓缩有机层，得到4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟代-苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(500毫克，1.25毫摩尔，63％产率)。LCMS m/z(ESI):336.2[M-tBu+H]+。
步骤6:在氮气氛下，在5℃下，向4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(500mg，1.28mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的搅拌溶液中加入在1,4-二噁烷(4M，4mL)中的氯化氢溶液。反应混合物在室温下搅拌2小时。完成后，反应混合物在减压下浓缩，用石油醚洗涤，得到3-(3-氟-4-哌嗪-1-基-苯基)哌啶-2,6-二酮(417毫克，1.27毫摩尔，99％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):292.2[M+H]+。
步骤7:在室温和氮气气氛下，向3-(3-氟-4-哌嗪-1-基-苯基)哌啶-2,6-二酮(520毫克，1.78毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(3毫升)中的搅拌溶液中加入三乙胺(722.49毫克，7.14毫摩尔，995.16微升)，然后加入2-溴乙酸叔丁酯(348.17毫克，1.78毫摩尔，261.78微升)。将反应混合物在室温下搅拌14小时。用水(10mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3×10mL)提取。有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯(450mg，1.09mmol，61％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):406.2[M+H]+。
步骤8:在氮气氛下，于0℃向2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯(435毫克，1.07毫摩尔)在二氯甲烷(3毫升)中的搅拌溶液中加入在1,4-二噁烷(4M，5mL)中的氯化氢溶液。反应混合物在室温下搅拌6小时。反应混合物在真空下浓缩，粗产物用石油醚洗涤，得到22-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]哌嗪-1-基]乙酸(372mg，1.06毫摩尔，99％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):350.2[M+H]+。
步骤9:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用3-[(3S)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(80mg，144.24μmol)、2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]哌嗪-1-基]乙酸(60.47mg，173.09μmol)、N,N-二异丙基乙胺(93.21mg,721.20μmol,125.62μL)和HATU(60.33mg,158.66μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％的甲酸水溶液中40-45％乙腈洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]哌嗪-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉(27.35mg,28.69μmol,20％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):886.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),10.13(s,1H),8.46(s,1H),7.87(t,J＝10.00Hz,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.69(dd,J＝2.80,9.20Hz,1H),7.50(dd,J＝3.60,9.20Hz,1H),7.37(s,1H),6.99-7.11(m,3H),5.01-5.11(m,1H),4.20-4.55(m,2H),3.83(dd,J＝4.40,12.00Hz,1H),3.55-3.65(m,2H),3.25-3.52(m,3H),3.12-3.35(m,2H),3.17(q,J＝6.80Hz,2H),2.80(s,3H),2.45-2.65(m,7H),1.95-2.25(m,5H),1.78-1.90(m,2H),1.40-1.75(m,5H),1.06(t,J＝6.80Hz,3H)。
实施例56
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环戊烷磺酰胺
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(46.33mg，115.88μmol)、N-[2-氰基-4-氟代-3-[3-[(3R)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧代-苯基]环戊烷磺酰胺(0.07g,115.88μmol)、N,N-二异丙基乙胺(149.76mg,1.16mmol,201.83μL)和HATU(48.47mg,127.46μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％的甲酸水溶液中50％乙腈洗脱，得到N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]环戊烷磺酰胺(34.94mg,35.66μmol,31％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):913.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),10.31(s,1H),8.36(s,1H),7.79(d,J＝8.80Hz,1H),7.69(dd,J＝2.80,8.80Hz,2H),7.47(d,J＝2.80Hz,1H),7.41(d,J＝2.80Hz,1H),6.97(s,1H),6.51-6.46(m,2H),6.11(d,J＝8.00Hz,1H),5.32(s,1H),4.33(t,J＝4.00Hz,2H),4.20-4.13(m,3H),3.82-3.60(m,3H),3.52-3.40(m,4H),2.91-2.72(m,3H),2.49-2.40(m,1H),2.13-2.06(m,3H),1.95-1.83(m,11H),1.75-1.24(m,7H)。
实施例57
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-5-甲基-4-氧代喹唑啉
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步骤1:在0℃下向3-氟-2-甲基苯甲酸溶液(194.99毫克，1.27毫摩尔)在浓硫酸(2毫升)中的溶液加入发烟硝酸(159.42毫克，2.53毫摩尔，0.15毫升)。所得反应物料在0℃下搅拌2小时。完成后，反应混合物用冷水(15毫升)稀释，用乙酸乙酯(3×30毫升)提取。合并的有机层用盐水溶液(20毫升)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到3-氟-2-甲基-6-硝基-苯甲酸(0.24克，1.03毫摩尔，81％产率)，为灰白色固体，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):198.2[M-H]-。
步骤2:向3-氟-2-甲基-6-硝基-苯甲酸(5g，25.11毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(120mL)中的溶液中加入2-甲磺酰基乙醇(3.74g，30.13毫摩尔)。将反应混合物冷却至0℃，然后在氮气氛下于0℃逐份加入氢化钠(60％分散在矿物油中，8.71克，200.87毫摩尔)。反应混合物在0℃下搅拌1小时。反应升温至室温并搅拌1小时。完成后，反应混合物在0℃下用1.5N氯化氢溶液(pH约1)逐滴淬灭，并用乙酸乙酯(3×150mL)提取。合并的有机层用冷水(3×100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到橙色固体的3-羟基-2-甲基-6-硝基苯甲酸(5g，21.54mmol，产率86％)，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):196.2[M-H]-。
步骤3:向3-氟-2-甲基-6-硝基-苯甲酸(5g，25.11mmol)在1,4-二噁烷(70mL)中的溶液中加入湿10％钯碳(2.67g，25.11mmol)，通过将氢气鼓泡10分钟使其氢饱和，然后在室温下氢化(1个大气压)16小时。完成后，用氮气吹扫反应混合物，并通过硅藻土垫过滤除去催化剂，用甲醇(500mL)洗涤。将滤液减压浓缩，得到深棕色固体的6-氨基-3-羟基-2-甲基-苯甲酸(4.3g，16.95mmol，产率68％)，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):168.2[M+H]+。
步骤4:按照环化的一般程序(程序A-A)使用6-氨基-3-羟基-2-甲基-苯甲酸(0.6克，3.59毫摩尔)、原甲酸三乙酯(797.91毫克，5.38毫摩尔，895.52微升)、乙酸(21.55毫克，358.93微摩尔，20.53微升)和叔丁基3-氨基-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(821.71mg,3.23mmol)合成喹唑啉酮中间体。通过使用60-70％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂的硅胶快速柱色谱纯化所需化合物，得到3-(6-羟基-5-甲基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(0.4g，821.17μmol，23％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):414.2[M+H]+。
步骤5:通过使用叔丁基3-(6-羟基-5-甲基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.4克，967.33微摩尔)、碳酸铯(945.52毫克，2.90毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(303.92毫克，1.93毫摩尔，223.47微升)按照O-芳基化的一般程序(程序A-B)合成O-芳基化的喹唑啉酮中间体。使用60-70％乙酸乙酯(在石油醚中)作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化所需化合物，得到3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-甲基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(0.37g，566.83μmol，59％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):551.2[M+H]+。
步骤6:使用叔丁基3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-甲基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(280mg，508.54μmol)、碳酸铯(497.08mg，1.53mmol)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(105.41mg，762.81μmol)按照程序A-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体。完成后，用水(5mL)稀释反应混合物，所得固体通过滤纸过滤。水层用乙酸乙酯(3×8mL)提取。有机层用冷水(3×10mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到浅黄色固体的粗叔丁基3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-5-甲基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(200mg，242.23μmol，48％产率)。LCMS m/z(ESI):667.2[M-H]-。
步骤7:在二噁烷介导的N-Boc脱保护中通过4M HCl合成所需的胺(程序A-D)。在叔丁基(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-5-甲基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(200mg，299.05μmol)上使用氯化氢，4M/1,4-二噁烷，99％(4M，3mL)进行N-Boc脱保护，得到3-[(3S)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基)-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-5-甲基-4-氧代-喹唑啉(206mg,294.81μmol,98.58％产率,87％纯度)，为黄色粘性固体。LCMS m/z(ESI):569.2[M+H]+.。
步骤8:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(58.15mg，145.43μmol)、3-(8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基)-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-5-甲基-4-氧代-喹唑啉(0.08g，32.20μmol)、N,N-二异丙基乙胺(170.87mg,1.32mmol,230.28μL)和HATU(55.29mg,145.43μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中45％乙腈洗脱，得到产物6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-5-甲基-4-氧代-喹唑啉(11.11mg,10.91μmol,8％产率,94.31％纯度)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):914.2[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.86(s,1H),8.41(s,1H),7.52-7.51(m,1H),7.49(d,J＝9.20Hz,1H),7.30(d,J＝4.40Hz,1H),7.16(d,J＝9.20Hz,1H),6.99(s,1H),6.50-6.45(m,2H),6.08(d,J＝7.60Hz,1H),5.21-5.05(m,1H),4.48-4.29(m,1H),3.62-3.38(m,4H),3.07(d,J＝6.80Hz,2H),2.88(s,3H),2.80-2.65(m,3H),2.50-2.60(m,9H),2.13-2.08(m,4H),1.90-1.78(m,7H),1.67-1.50(m,5H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例58
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]-3,3-二氟哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
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步骤1:向3,3-二氟-4-氧代-哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.5g，10.63mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中加入三乙胺(3.23g，31.8mmol，4.44mL)，并将反应混合物冷却至-20℃。在氮气氛，-20℃下加入三氟甲基磺酰基三氟甲磺酸盐(4.50g，15.94mmol，2.68mL)在二氯甲烷(10mL)中的溶液。反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，反应在0℃下用冷水(70mL)逐滴淬灭，并用二氯甲烷(3×100mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩以得到粗产物。通过柱色谱(硅胶)从粗产物纯化所需产物，使用pet醚中的5-15％乙酸乙酯作为洗脱剂，得到浅黄色液体的3,3-二氟-4-(三氟甲基磺酰氧基)-2,6-二氢吡啶-1-羧酸叔丁酯(1.3g，2.16mmol，20％产率)。LCMS m/z(ESI):268.0[M-CO2 tBu+H]+。
步骤1A:向4-溴-3-氟苯胺(5g，26.31毫摩尔)在1,4-二噁烷(200mL)中的溶液中加入乙酸钾(7.75g，78.94毫摩尔，4.93mL)和4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(7.35g，28.95mmol)。反应混合物用氮气脱气10分钟，然后加入与二氯甲烷复合的[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(2.15克，2.63毫摩尔)。将反应混合物在100℃下搅拌12小时。完成后，用水(100mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3×150mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。使用pet醚中10-20％乙酸乙酯作为洗脱剂，通过柱色谱(硅胶)纯化所需产物，得到3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯胺(5.5g，15.96mmol，61％产率)，为淡黄色粘性固体。LCMS m/z(ESI):238.2[M+H]+。
步骤2:向3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯胺(1.70克，7.19毫摩尔)和3,3-二氟-4-(三氟甲基磺酰氧基)-2,6-二氢吡啶-1-羧酸叔丁酯(2.4克，6.53毫摩尔)在1,4-二噁烷(30毫升)和水(3毫升)的密封管中的溶液中加入无水磷酸三钾(4.16g,19.60mmol)。反应混合物用氮气脱气10分钟，然后加入与二氯甲烷复合的[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(533.62毫克，653.44微摩尔)。反应混合物再次用氮气吹扫5分钟，并在微波下80℃辐射1.5小时。完成后，用水(50mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3×70mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过使用pet醚中的15-25％乙酸乙酯作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化所需产物，得到4-(4-氨基-2-氟-苯基)-3,3-二氟-2,6-二氢吡啶-1-羧酸叔丁酯(1.6克，4.84毫摩尔，74％产率)，为浅绿色液体。LCMS m/z(ESI):229.2[M-CO2 tBu+H]+。
步骤3:向叔丁基4-(4-氨基-2-氟-苯基)-3,3-二氟-2,6-二氢吡啶-1-羧酸酯(1.6克，4.87毫摩尔)在甲醇(20毫升)和乙酸乙酯(20毫升)中的溶液中加入20％的二羟基钯(2克，14.24毫摩尔)，并通过将氢气鼓入10分钟使混合物氢饱和。然后将内容物在室温下氢化(1个大气压)16小时。完成后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤，用甲醇(200mL)洗涤。将滤液减压浓缩，得到4-(4-氨基-2-氟-苯基)-3,3-二氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.45克，4.32毫摩尔，产率89％)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):231.2[M-CO2 tBu+H]+。
步骤4:向4-(4-氨基-2-氟-苯基)-3,3-二氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.6克，1.82毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(8毫升)溶液中加入碳酸氢钠(762.90毫克，9.08毫摩尔，353.19微升)和3-溴哌啶-2,6-二酮(2.09克，10.90毫摩尔)。每12小时逐份(4x 0.52g)加入3-溴哌啶-2,6-二酮(2.09g)。将反应混合物在85℃下搅拌72小时。完成后，用水(70mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3x 150mL)提取。合并的有机层用冷水(3×70mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。使用pet醚中40-50％乙酸乙酯作为洗脱剂，通过柱色谱(硅胶)纯化所需产物，得到淡蓝色固体的4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-3,3-二氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.3g，679.59μmol，37％产率)。LCMS m/z(ESI):386.2[M+H]+。
步骤5:在氮气氛下，于5℃向4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-3,3-二氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.3g，679.59μmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入1,4-二噁烷(4M，5mL)中的氯化氢溶液。反应混合物在室温下搅拌4小时。完成后，反应混合物在减压下浓缩，得到3-[4-(3,3-二氟-4-哌啶基)-3-氟-苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(0.33克，873.50微摩尔)，为淡蓝色粘性固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.83(s,1H),10.28(s,1H),7.02(t,J＝8.40Hz,1H),6.52(t,J＝14.00Hz,2H),4.38(d,J＝4.80Hz,1H),3.87-3.56(m,4H),3.33(d,J＝11.60Hz,1H),3.22-3.12(m,1H),2.75-2.62(m,1H),2.60-2.56(m,2H),2.43-1.88(m,3H)。
步骤6:向3-[4-(3,3-二氟-4-哌啶基)-3-氟-苯胺基]哌啶-2,6-二酮(0.3克，794.10微摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)和三乙胺(401.77毫克，3.97毫摩尔，553.41微升)中的溶液中加入2-溴乙酸叔丁酯(232.34毫克，1.19毫摩尔，174.69微升)。反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，用水(30mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3×50mL)提取。合并的有机层用冷水(3×30mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(0.23g，387.37μmol，49％产率)，为浅棕色液体，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):456.2[M+H]+。
步骤7:在氮气氛下，于5℃向2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(0.23克，504.97微摩尔)在二氯甲烷(10毫升)中的溶液中加入在1,4-二噁烷(5毫升)中的氯化氢溶液4.0M。反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，反应混合物在减压下浓缩，得到2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸(0.23g，448.63μmol，89％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):400.2[M+H]+。
步骤8:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸(51.68mg，118.58μmol)、(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(0.06g,101.17μmol)、N,N-二异丙基乙胺(139.32mg,1.08mmol,187.76μL)和HATU(45.09mg,118.58μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用4 0.1％甲酸水溶液中5％乙腈洗脱，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(16mg,15.62μmol,14％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):938.2[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),10.20(s,1H),8.36(s,1H),7.80(t,J＝4.40Hz,2H),7.70(t,J＝5.60Hz,1H),7.48(s,1H),7.37(s,1H),7.06(s,1H),6.47(d,J＝14.80Hz,2H),6.18(d,J＝4.40Hz,1H),5.31(s,1H),4.34(s,1H),4.14(s,2H),3.68-3.35(m,3H),3.15(d,J＝6.80Hz,4H),2.92(s,1H),2.77(s,3H),2.59-2.34(m,6H),2.15-2.00(m,3H),1.90-1.49(m,8H),1.05(t,J＝6.80Hz,3H)。
实施例59
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-甲基-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:按照环化的一般程序(程序A-A)使用6-氨基-3-羟基-2-甲基-苯甲酸(0.8克，4.79毫摩尔)、原甲酸三乙酯(1.06克，7.18毫摩尔，1.19毫升)、乙酸(28.74毫克，478.58微摩尔，27.37微升)和3-氨基-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1.10g,4.31mmol)合成喹唑啉酮中间体。通过柱色谱纯化所需产物，用60-80％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂进行洗脱，得到3-(6-羟基-5-甲基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(0.73g，1.36mmol，29％产率)，为淡黄色固体。LCMS m/z(ESI):416.2[M+H]+。
步骤2:按照O-芳化的一般程序(程序A-B)，使用叔丁基3-(6-羟基-5-甲基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(373毫克，897.75微摩尔)、碳酸铯(877.52毫克，2.69毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(211.55毫克，1.35毫摩尔，155.55微升)合成O-芳化喹唑啉酮中间体。通过柱色谱纯化所需产物，用60-80％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂进行洗脱，得到3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-甲基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(250mg，399.95μmol，45％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):553.2[M+H]+。
步骤3:使用叔丁基3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-甲基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(250毫克，452.43微摩尔)、碳酸铯(442.23毫克，1.36毫摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(93.78毫克，678.65微摩尔)按照程序A-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体，得到叔丁基3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-5-甲基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(220mg,282.40μmol,62％产率)，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):671.2[M+H]+。
步骤4:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。在叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-5-甲基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(220mg，327.99μmol)上使用1,4-二噁烷(4mL)中的4M氯化氢溶液进行N-Boc脱保护，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-5-甲基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(215mg,325.53μmol,99％产率)，为淡黄色固体，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):571.2[M+H]+。
步骤5:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-5-甲基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(80.00mg，140.19μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(61.13mg,168.23μmol)、N,N-二异丙基乙胺(90.60mg,700.97μmol,122.10μL)和HATU(58.64mg,154.21μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％的甲酸水溶液中40-45％的乙腈洗脱，得到3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-5-甲基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(10.74mg,10.96μmol,8％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):916.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.90(s,1H),8.32(s,1H),7.59-7.71(m,1H),7.50(d,J＝8.80Hz,1H),7.31-7.39(m,1H),7.19(d,J＝8.80Hz,1H),6.92-7.05(m,1H),6.50(d,J＝7.60Hz,1H),6.47(d,J＝13.60Hz,1H),6.10(d,J＝7.20Hz,1H),5.37(t,J＝6.80Hz,1H),4.31-4.38(m,1H),4.17(d,J＝3.20Hz,2H),3.72-3.81(m,1H),3.25-3.52(m,5H),3.05-3.15(m,2H),2.88(s,3H),2.74(s,3H),2.65-2.74(m,1H),2.41-2.58(m,6H),2.01-2.12(m,2H),1.52-2.01(m,10H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例60
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]哌嗪-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(70mg，118.03μmol)、2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]哌嗪-1-基]乙酸(41.23mg，106.88μmol)、N,N-二异丙基乙胺(61.02mg,472.12μmol,82.23μL)和HATU(44.88mg,118.03μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中50％乙腈洗脱，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]哌嗪-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(28mg,29.51μmol,25％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):888.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.83(s,1H),10.13(s,1H),8.36(s,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,2H),7.70(dd,J＝3.20,8.80Hz,1H),7.47(dd,J＝3.60,9.40Hz,1H),7.37(d,J＝2.80Hz,1H),7.08-6.97(m,3H),5.30(s,1H),4.16-4.13(m,2H),3.84-3.80(m,1H),3.79-3.70(m,1H),3.52-3.49(m,3H),3.17-3.12(m,6H),2.89-2.79(m,2H),2.77(s,3H),2.69-2.62(m,4H),2.50-2.47(m,2H),2.27-2.20(m,1H),2.15-1.90(m,2H),1.83-1.51(m,5H),1.05(t,J＝6.80Hz,3H)。
实施例61
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]丙烷-2-磺酰胺
步骤1:使用叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(220mg，408.51μmol)、碳酸铯(332.75mg，1.02mmol)和丙烷-2-磺酰胺(75.48mg，612.77μmol)按照程序A-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用70-75％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到淡黄色固体的叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-6-氟-3-(异丙基磺酰氨基)苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(230mg，320.78μmol，79％产率)。LCMS m/z(ESI):640.20[M-H]-。
步骤2:按照程序A-D，使用叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-6-氟-3-(异丙基磺酰氨基)苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(260毫克，405.17微摩尔)和在1,4-二噁烷(2毫升)中的4M氯化氢溶液合成所需的胺。将所得粗化合物与甲基叔丁基醚一起研磨，得到N-[2-氰基-4-氟-3-[3-[(3R)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-苯基]丙烷-2-磺酰胺(220mg，327.34μmol，80.79％产率，86％纯度)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):542.20[M+H]+。
步骤3:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(65mg，162.56μmol)、N-[2-氰基-4-氟-3-[3-[(3R)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-苯基]丙烷-2-磺酰胺(112.76mg,195.08μmol)、N,N-二异丙基乙胺(126.06mg,975.38μmol,169.89μL)和HATU(67.99mg,178.82μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗产物通过C18反相柱色谱使用Isolera(100gRf C18，方法:0.1％甲酸水溶液:乙腈)纯化，并将纯级分冻干，得到N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]丙烷-2-磺酰胺(39mg,41.22μmol,25.35％产率,99％纯度)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):887.20[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),8.35(s,1H),7.77(d,J＝8.80Hz,1H),7.67-7.65(m,2H),7.38(s,2H),6.98(s,1H),6.47(t,J＝12.80Hz,2H),6.09(d,J＝6.80Hz,1H),5.40-5.25(m,1H),4.35-4.29(m,1H),4.20-4.13(m,2H),3.76-3.74(m,1H),3.50-3.40(m,2H),3.15-3.00(m,2H),2.77-2.71(m,2H),2.70-2.68(m,2H),2.42-2.34(m,4H),2.10-2.07(m,3H),1.91-1.69(m,9H),1.58-1.55(m,1H),1.26(d,J＝6.00Hz,6H)。
实施例62
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2,5-二氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
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步骤1:将4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(8.92克，28.85毫摩尔)在1,4-二噁烷(80毫升)、水(20毫升)中的溶液置于密封管中，并在室温和氮气氛下加入碳酸铯(23.50克，72.11毫摩尔)。反应混合物用氮气脱气10分钟，向反应混合物中加入Pd(dppf)Cl2.二氯甲烷(1.96g，2.40mmol)。在100℃下搅拌反应混合物。完成后，用水(60mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(2x 100mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用40％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到4-(4-氨基-2,5-二氟-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(6克，18.61毫摩尔，77％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):211.2[M+H-CO2 tBu]+。
步骤2:将4-(4-氨基-2,5-二氟-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(3.5g，11.28mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的溶液脱气10分钟，然后在氮气氛下向反应混合物中加入Pd(OH)2(3.96g，28.20mmol)。反应混合物然后在室温下在H2气球压力下搅拌14小时。反应混合物通过硅藻土过滤并在减压下浓缩，得到棕色固体的4-(4-氨基-2,5-二氟-苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(3克，9.41毫摩尔，83％产率)，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):213.2[M+H-CO2 tBu]+。
步骤3:将4-(4-氨基-2,5-二氟-苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(500毫克，1.60毫摩尔)、2,6-二苄氧基-3-溴-吡啶(711.19毫克，1.92毫摩尔)和碳酸铯(1.56克，4.80毫摩尔)在1,4-二噁烷(5毫升)中的混合物置于密封管中，所得反应混合物用N2脱气10分钟。将Pd2(dba)3(14.66毫克，16.01微摩尔)和X-Phos(7.63毫克，16.01微摩尔)加入到在110℃加热14小时的反应混合物中。用水(30毫升)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(50毫升)提取。有机层用水(50mL)、饱和盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用70％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到棕色固体的4-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2,5-二氟-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(450mg，693.91μmol，43％产率)。LCMSm/z(ESI):546[M+H-tBu]+。
步骤4:在N2气氛下，向4-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2,5-二氟-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(450毫克，747.90微摩尔)在1,4-二噁烷(12毫升)中的脱气溶液中加入Pd(OH)2(420.13毫克，2.99毫摩尔)。将所得混合物在室温下在H2球囊压力下搅拌14小时。将反应混合物通过硅藻土过滤并在减压下浓缩，得到浅棕色固体的4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,5-二氟-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(300mg，658.87μmol，88％产率)。LCMS m/z(ESI):324[M+H-CO2tBu]+。
步骤5:向4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2,5-二氟苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(460毫克，1.09毫摩尔)在1,4-二噁烷(1.5毫升)中的搅拌溶液中加入二噁烷(49.51μL)中的4.0M氯化氢溶液。将所得溶液在室温下搅拌16小时。将反应混合物减压浓缩，得到(3-((2,5-二氟-4-(哌啶-4-基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(390mg，1.06毫摩尔，98％产率)，为浅棕色固体，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):324.2[M+H]+。
步骤6:在室温，氮气氛下向3-[2,5-二氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮(520毫克，1.61毫摩尔)、N,N-二乙基乙胺(162.74毫克，1.61毫摩尔，224.16微升)在N,N-二甲基甲酰胺(3毫升)中的搅拌溶液中加入2-溴乙酸叔丁酯(439.17毫克，2.25毫摩尔，330.20微升)。反应在室温下搅拌14小时。反应混合物用水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL)提取。有机层用饱和盐水溶液(10mL)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到浅棕色固体的2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,5-二氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(390mg，797.60μmol，50％产率)。LCMS m/z(ESI):438.2[M+H]+。
步骤7:0℃下向2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,5-二氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(390毫克，891.47微摩尔)在二氯甲烷(5毫升)中的溶液中加入1,4-二噁烷(40.63升)中的4M氯化氢溶液，并在室温下搅拌12小时。反应混合物在减压下浓缩，得到粗产物，其用石油醚研磨，得到2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,5-二氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(385mg,838.49μmol,94％产率)，为棕色固体。LCMS m/z(ESI):382.2[M+H]+。
步骤8:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,5-二氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(50mg，131.11μmol)、(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(72.97mg,131.11μmol)、HATU(59.82mg,157.33μmol)、N,N-二异丙基乙胺(67.78mg,524.42μmol,91.34μL)进行酰胺偶联。粗产物通过使用30g snap的反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中50％乙腈洗脱，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,5-二氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(5mg,5.37μmol,4％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):920.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.82(s,1H),8.36(s,1H),7.75-7.85(m,1H),7.80(d,J＝9.20Hz,1H),7.70(dd,J＝2.80,9.00Hz,1H),7.41-7.51(m,1H),7.37(d,J＝2.40Hz,1H),6.92-7.01(m,1H),6.71(dd,J＝7.60,12.40Hz,1H),5.86(d,J＝8.40Hz,1H),5.38-5.48(m,1H),4.42(dd,J＝8.80,16.80Hz,1H),4.01-4.38(m,4H),3.75-3.85(m,1H),3.55-3.32(m,3H),3.10-3.18(m,2H),2.85-3.10(m,2H),2.77(s,3H),2.65-2.81(m,1H),2.34-2.65(m,4H),1.92-2.15(m,5H),1.51-1.91(m,7H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例63
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2,3-二氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
通过COMU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-F)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,3-二氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(70.69mg，169.18μmol)、3-[(3S)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(0.1g，169.18μmol)、COMU(108.68mg,253.77μmol)、N,N-二异丙基乙胺(109.32mg,845.89μmol,147.34μL)进行酰胺偶联。粗化合物通过使用30g snap的反相柱色谱纯化，用在0.1％乙酸铵水溶液中的45％乙腈洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,3-二氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉(52mg,55.57μmol,33％产率)，为淡粉红色固体。LCMS m/z(ESI):918.2[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.82(s,1H),9.81(s,1H),8.43(d,J＝3.60Hz,1H),7.76(d,J＝8.80Hz,1H),7.64(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.41-7.61(m,1H),7.34(d,J＝6.80Hz,1H),7.29-7.34(m,1H),6.81-6.90(m,1H),6.64(t,J＝8.40Hz,1H),5.75-5.85(m,1H),5.01-5.12(m,1H),4.49-4.40(m,1H),3.32-3.61(m,4H),3.21-3.31(m,2H),3.01-3.09(m,2H),2.60-2.92(m,8H),2.49-2.58(m,2H),2.01-2.20(m,5H),1.68-1.95(m,6H),1.40-1.68(m,5H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例64
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2,3-二氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:在氮气氛下，室温下向4-溴-2,3-二氟苯胺(2.0克，9.62毫摩尔)在1,4-二噁烷(30毫升)和水(10毫升)中的溶液中加入碳酸铯(9.40克，28.85毫摩尔)。将反应混合物用氮气脱气10分钟，然后在相同温度下加入与二氯甲烷复合的[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(785.21mg，961.52μmol)。将所得溶液在100℃下加热12小时。完成后，将所得溶液冷却至室温，通过硅藻土床过滤，并用乙酸乙酯(50ml)洗涤。收集的滤液在减压下浓缩。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用pet醚中40％乙酸乙酯作为洗脱剂，得到4-(4-氨基-2,3-二氟-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(2.8克，8.73毫摩尔，91％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):211.0[M+H]+。
步骤2:向叔丁基4-(4-氨基-2,3-二氟-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸酯(2.8克，9.02毫摩尔)在1,4-二噁烷(30毫升)中的溶液中加入碳上氢氧化钯(1.27克，9.02毫摩尔)，并将反应置于氢气球囊压力下12小时。完成后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并用甲醇(50毫升)洗涤。在减压下浓缩滤液，得到液体的4-(4-氨基-2,3-二氟-苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.8克，8.83毫摩尔，98％产率)，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):213.2[M+H]+。
步骤3:在氮气氛下，室温下向4-(4-氨基-2,3-二氟-苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.4克，4.48毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(14毫升)溶液中加入碳酸氢钠(1.51克，17.93毫摩尔，697.27微升)和3-溴哌啶-2,6-二酮(1.72克，8.96毫摩尔)。将反应混合物加热至80℃20小时。完成后，用水(20mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(2x 50mL)提取。有机层用盐水(10mL)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩。通过使用乙酸乙酯-石油醚(0-70％)的硅胶(50gSNAP)柱色谱纯化所得粗产物，得到4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,3-二氟-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.23g，481.51μmol，11％产率)，为蓝色固体。LCMS m/z(ESI):324.2[M+H]+。
步骤4:0℃，氮气下向叔丁基4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,3-二氟-苯基]哌啶-1-羧酸酯(0.23g，543.15μmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入在1,4-二噁烷(4.0M，2.00mL)中的氯化氢溶液。将所得溶液在室温下搅拌2小时。完成后，将所得溶液在减压下浓缩，得到3-[2,3-二氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮(0.2克，507.12微摩尔，93％产率)，为淡黄色固体。LCMS m/z(ESI):324.2[M+H]+。
步骤5:在氮气下，在室温下向3-[2,3-二氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮(0.20克，555.87微摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(2毫升)溶液中加入三乙胺(140.62毫克，1.39毫摩尔，193.69微升)和2-溴乙酸叔丁酯(162.64毫克，833.80微摩尔，122.28微升)。反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，用水(10mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(2x20mL)提取。分离的有机层用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。得到的粗产物通过使用乙酸乙酯-石油醚(0-80％)的硅胶(25gSNAP)柱色谱纯化，得到2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,3-二氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(0.12g，246.76μmol，44％产率)，为绿色液体。LCMS m/z(ESI):438.2[M+H]+。
步骤6:在氮气下，于0℃向2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,3-二氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(0.12克，274.30微摩尔)的二氯甲烷(2毫升)溶液中加入1,4-二噁烷(4.0M，1.37mL)中的氯化氢溶液。将所得溶液在室温下搅拌12小时。完成后，将所得溶液在减压下浓缩，得到2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,3-二氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(0.11g，244.99μmol，89％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):382.2[M+H]+。
步骤7:通过COMU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-F)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,3-二氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(68.52mg，179.66μmol)、(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(0.1g,179.66μmol)、N,N-二异丙基乙胺(116.10mg,898.30μmol,156.47μL)和(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-碳鎓六氟磷酸盐(115.41mg,269.49μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中45％乙腈洗脱，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,3-二氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(23mg,24.01μmol,13％产率)，为淡粉红色固体。LCMS m/z(ESI):920.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.82(s,1H),9.86(bs,1H),8.38(s,1H),7.76(s,1H),7.66(dd,J＝9.00,2.80Hz,1H),7.58(s,1H),7.35(dd,J＝9.00,2.80Hz,2H),6.89-6.80(m,1H),6.64(t,J＝8.80Hz,1H),6.81(d,J＝8.00Hz,1H),5.32-5.21(m,1H),4.15(q,J＝3.20Hz,1H),4.12-4.09(m,2H),3.51-3.50(m,1H),3.49-3.42(m,2H),3.38-3.33(m,3H),3.06(q,J＝7.20Hz,2H),2.76-2.67(m,4H),2.66(s,3H),2.34-2.33(m,2H),2.08-2.04(m,4H),1.92-1.68(m,9H),1.06(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例65
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]-3,3-二氟哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(80mg，143.73μmol)、2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸(66.29mg,172.47μmol)、N,N-二异丙基乙胺(92.88mg,718.64μmol,125.17μL)和HATU(60.11mg,158.10μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用在0.1％的甲酸水溶液中40-45％乙腈洗脱，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(17.25mg,17.64μmol,12％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):923.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.87(s,1H),10.19(s,1H),8.37(s,1H),7.87(t,J＝9.60Hz,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.70(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.50(dd,J＝4.00,9.20Hz,1H),7.35-7.41(m,1H),7.37(d,J＝2.80Hz,1H),7.09-7.13(m,2H),5.28-5.38(m,1H),4.11-4.19(m,2H),3.90(d,J＝8.40Hz,1H),3.45-3.75(m,4H),3.25-3.45(m,2H),3.17(q,J＝7.20Hz,2H),2.91-2.99(m,1H),2.80(s,3H),2.59-2.72(m,3H),2.35-2.60(m,3H),2.01-2.31(m,5H),1.45-1.81(m,5H),1.06(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例66
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基]-3,3-二氟哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用3-[(3S)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(80mg，144.24μmol)、2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸(66.53mg，173.09μmol)、N,N-二异丙基乙胺(93.21mg,721.20μmol,125.62μL)和HATU(60.33mg,158.66μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％的甲酸水溶液中40-45％的乙腈洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉(16.73mg,17.06μmol,12％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):921.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.87(s,1H),10.19(s,1H),8.45(s,1H),7.81-7.90(m,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.69(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.49(dd,J＝4.00,9.20Hz,1H),7.37-7.40(m,1H),7.37(d,J＝2.80Hz,1H),7.12(d,J＝11.20Hz,1H),7.09(d,J＝8.40Hz,1H),5.01-5.10(m,1H),3.88-3.95(m,1H),3.48-3.60(m,3H),3.25-3.41(m,3H),3.16(q,J＝6.40Hz,2H),2.91-2.98(m,1H),2.79(s,3H),2.60-2.72(m,3H),2.41-2.60(m,3H),2.18-2.31(m,1H),2.01-2.20(m,5H),1.72-1.91(m,3H),1.41-1.71(m,5H),1.06(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例67
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2,5-二氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,5-二氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(50mg，119.66μmol)、3-[(3S)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(70.73mg，119.66μmol)、HATU(68.25mg,179.50μmol)和N,N-二异丙基乙胺(77.33mg,598.32μmol,104.21μL)进行酰胺偶联。粗化合物通过使用30g snap的反相柱色谱纯化，用在0.1％甲酸水溶液中50％乙腈洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,5-二氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉(4.21mg,4.17μmol,3％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):917.8[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.84(s,1H),10.20(s,1H),9.45(s,1H),8.46(s,1H),7.78-7.86(m,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.69(dd,J＝2.40,9.00Hz,1H),7.48(d,J＝5.20Hz,1H),7.37(s,1H),6.95(dd,J＝6.80,12.40Hz,1H),6.71(dd,J＝7.60,13.00Hz,1H),5.87(d,J＝8.00Hz,1H),5.01-5.11(m,1H),4.39-4.48(m,1H),4.21-4.38(m,2H),3.45-3.68(m,3H),3.25-3.43(m,2H),3.15(q,J＝6.40Hz,2H),2.84-3.12(m,3H),2.78(s,3H),2.61-2.77(m,1H),2.53-2.65(m,2H),1.95-2.21(m,7H),1.78-1.92(m,3H),1.45-1.78(m,6H),1.06(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例68
3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:在室温和氮气氛下，向2-溴-3-羟基-6-硝基-苯甲酸(4.00克，15.27毫摩尔)在甲醇(50毫升)中的搅拌溶液中加入六水合氯化镍(II)，98％(434.01毫克，1.53毫摩尔，226.04微升)。将所得混合物冷却至0℃，逐份加入硼氢化钠(866.35毫克，22.90毫摩尔，809.67微升)。将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，然后升温至室温并搅拌5小时。在0℃下滴加二叔丁基二碳酸酯(10.00克，45.80毫摩尔，10.51毫升)，并在室温下搅拌16小时。反应混合物在0℃下用逐滴氯化铵溶液(40mL)淬灭。反应混合物用乙酸乙酯(3×150mL)萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥、过滤并减压浓缩。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，以80-100％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到棕色固体的2-溴-6-(叔丁氧基羰基氨基)-3-羟基苯甲酸(1.5g，2.89mmol，19％产率)。LCMS m/z(ESI):432.0[M-H]-。
步骤2:在氮气氛下，于0℃向2-溴-6-(叔丁氧基羰基氨基)-3-羟基-苯甲酸(1.5g，4.52mmol)在二氯甲烷(15mL)中的搅拌溶液中滴加在1,4-二噁烷(4M，10.16mL)中的氯化氢。在搅拌16小时前，将反应混合物加热至室温。将反应混合物直接减压浓缩，得到棕色固体的6-氨基-2-溴-3-羟基-苯甲酸(1.1克，1.89毫摩尔，42％产率)，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):232.0[M+H]+。
步骤3:使用6-氨基-2-溴-3-羟基-苯甲酸(1g，4.31毫摩尔)、原甲酸三乙酯(1.60g，10.77毫摩尔，1.79毫升)、乙酸(25.88毫克，430.98微摩尔，24.65微升)和3-氨基-7-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1.10g，4.31毫摩尔)按照环化的一般程序(程序A-A)合成喹唑啉酮中间体。粗产物通过柱色谱纯化，用70-80％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂进行洗脱，得到棕色固体的3-(5-溴-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(480mg，770.44μmol，18％产率)。LCMS m/z(ESI):480.0[M+H]+。
步骤4:通过使用叔丁基3-(5-溴-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(480毫克，999.27微摩尔)、2,3,6-三氟苯甲腈(156.98毫克，999.27微摩尔，115.42微升)和碳酸铯(976.75mg,3.00mmol)按照O-芳化的一般程序(程序A-B)合成O-芳化喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用70-80％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到棕色固体的叔丁基3-[5-溴-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(400mg，469.04μmol，47％产率)。LCMS m/z(ESI):619.3[M+H]+。
步骤5:使用叔丁基3-[5-溴-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(200.00mg，323.92mol)、[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(89.52mg，647.84μmol)和碳酸铯(316.62mg,971.76μmol)按照程序A-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体，得到叔丁基3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(170mg,171.24μmol,53％产率)，为棕色固体。LCMS m/z(ESI):735.0[M-H]-。
步骤6:通过HCl介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。用叔丁基3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(80.00mg，108.75μmol)和在1,4-二噁烷(4M，1mL)中的氯化氢进行N-Boc脱保护，得到3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(75mg,68.68μmol,63％产率)，为无色液体。LCMS m/z(ESI):635.0[M+H]+。
步骤7:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(75.00mg，118.02μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(42.89mg,118.02μmol)、N,N-二异丙基乙胺(76.26mg,590.08μmol,102.78μL)和HATU(67.31mg,177.02μmol)进行酰胺偶联。粗反应混合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中40％乙腈洗脱，得到3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(13mg,12.25μmol,10％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):980.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.84(s,1H),8.39(s,1H),7.67(d,J＝8.80Hz,1H),7.60-7.68(m,1H),7.36(d,J＝8.80Hz,1H),6.91-7.11(m,1H),6.45-6.53(m,2H),6.09(d,J＝7.60Hz,1H),7.32-7.41(m,1H),5.32-5.41(m,1H),4.28-4.38(m,1H),4.10-4.21(m,2H),3.92-4.10(m,2H),3.61-3.71(m,1H),3.31-3.52(m,3H),3.04-3.12(m,3H),2.65-2.91(m,4H),2.69(s,3H),2.40-2.58(m,2H),2.02-2.15(m,2H),1.52-2.01(m,10H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例69
5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:在氮气条件下，于0℃向2-溴-3-氟-苯甲酸(20.0克，91.32毫摩尔)在硫酸(90毫升)中的搅拌溶液中滴加硝酸(5.75克，91.32毫摩尔，0.35毫升)。将所得混合物在0℃下搅拌2小时。完成后，将反应混合物冷却至0℃，倒入含有冰和固体沉淀的烧杯中。过滤所得固体，用水(200mL)洗涤并减压干燥，得到白色固体的2-溴-3-氟-6-硝基-苯甲酸(20g，58.41mmol，64％产率)。LCMS m/z(ESI):261.0[M-2H]-。
步骤2:在室温和氮气氛下，向2-溴-3-氟-6-硝基-苯甲酸(10.00克，37.88毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(400毫升)中的搅拌溶液中加入2-甲磺酰基乙醇(5.64克，45.45毫摩尔)。在0℃下搅拌反应混合物，在0℃下分批加入氢化钠(60％分散在矿物油中，5.8克，151.51毫摩尔，2.53毫升)，并使反应混合物达到室温并搅拌2小时。完成后，在0℃下滴加1.5N盐酸溶液(pH约1)使反应混合物淬灭，并用乙酸乙酯(3x150 mL)提取。合并的有机层用冷水(3x50 mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到棕色固体的2-溴-3-羟基-6-硝基-苯甲酸(7g，18.97mmol，50％产率)。LCMS m/z(ESI):260.0[M-2H]-。
步骤3:在室温和氮气氛下向2-溴-3-羟基-6-硝基-苯甲酸(2.50克，9.54毫摩尔)在四氢呋喃(20毫升)中的溶液中加入溶于水(6毫升)中的连二亚硫酸钠(4.98克，28.62毫摩尔)。将所得混合物在65℃下搅拌16小时。完成后，将反应混合物用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(3x50mL)提取。有机层用盐水(20毫升)洗涤，用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到棕色固体的6-氨基-2-溴-3-羟基-苯甲酸(850毫克，2.27毫摩尔，24％产率)。LCMS m/z(ESI):230.0[M-2H]-。
步骤4:使用6-氨基-2-溴-3-羟基-苯甲酸(1.2克，5.17毫摩尔)、原甲酸三乙酯(1.92克，12.93毫摩尔，2.15毫升)、乙酸(31.05毫克，517微摩尔，29.57微升)和3-氨基-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1.32克，1.32克)按照环化的一般程序(程序A-A)合成喹唑啉酮中间体。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用70-80％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂进行洗脱，得到棕色固体的3-(5-溴-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(350mg，515.07μmol，10％产率)。LCMS m/z(ESI):422.0[M-tBu+H]+。
步骤5:使用叔丁基3-(5-溴-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(350毫克，731.64微摩尔)、2,3,6-三氟苯甲腈(114.94毫克，731.64微摩尔，84.51微升)和碳酸铯(715.15mg,2.19mmol)按照O-芳化的一般程序(程序A-B)合成O-芳化喹唑啉酮中间体。粗产物经硅胶快速柱色谱纯化，用70-80％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到棕色固体的3-[5-溴-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(180mg，205.89μmol，28产率)。LCMS m/z(ESI):599.0[M-tBu+H]+。
步骤6:使用叔丁基(3S)-3-[5-溴-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(180mg，292.46μmol)、[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(80.83mg，584.92μmol)和碳酸铯(285.87mg，877.39μmol)按照程序A-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体，得到叔丁基(3S)-3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(115mg,82.14μmol,28％产率)，为棕色固体。LCMS m/z(ESI):677.0[M-tBu+H]+。
步骤7:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。在叔丁基3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(75.00mg，102.23μmol)上，使用1,4-二噁烷(4M，937.50μL)中4M氯化氢进行N-Boc脱保护，得到3-(8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基)-5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(75mg,52.27μmol,51％产率)，为无色液体。LCMS m/z(ESI):635.0[M+2H]+。
步骤8:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用3-(8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基)-5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(75.00mg，118.38μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(43.02mg，118.38μmol)、N,N-二异丙基乙胺(76.50mg,591.92μmol,103.10μL)和HATU(67.52mg,177.58μmol)进行酰胺偶联。粗反应混合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中40％乙腈洗脱，得到5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉(8mg,7.54μmol,6％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):978.2[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),9.61(s,1H),8.51(d,J＝2.40Hz,1H),7.60-7.71(m,1H),7.67(d,J＝8.80Hz,1H),7.39(d,J＝8.00Hz,2H),6.95-7.02(m,1H),6.50(d,J＝8.00Hz,1H),6.48(d,J＝12.40Hz,1H),6.11(d,J＝8.00Hz,1H),5.05-5.15(m,1H),4.02-4.45(m,3H),3.58-3.68(m,1H),3.25-3.35(m,3H),3.09-3.18(m,2H),2.81-3.10(m,3H),2.65-2.82(m,2H),2.74(s,3H),2.45-2.60(m,2H),2.05-2.18(m,4H),1.70-2.05(m,7H),1.48-1.70(m,5H),1.06(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例70
5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:在室温和氮气气氛下，向3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(2.2克，5.51毫摩尔)的乙腈(30毫升)搅拌溶液中加入N-氯代琥珀酰亚胺(1.47克，11.01毫摩尔，891.37微升)。反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，用水(30mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3×50mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩得到粗产物。用20-30％乙酸乙酯(在石油醚中)作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱从粗产物中纯化所需产物，得到3-(5-氯-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1.5g，2.06mmol，37％产率)，为棕色粘性液体。LCMS m/z(ESI):378.2[M-tBu+H]+。
步骤2:按照O-芳化的一般程序(程序A-B)使用叔丁基3-(5-氯-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(190.00mg，437.86μmol)、碳酸铯(427.99mg，1.31mmol)和2,3,6-三氟苯甲腈(82.54mg，525.43μmol,60.69μL)合成O-芳化喹唑啉酮中间体。通过使用80-90％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂的硅胶快速柱色谱从粗产物中纯化所需化合物，得到浅棕色液体的叔丁基3-[5-氯-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.13g，189.10μmol，43％产率)。LCMS m/z(ESI):515.0[M-tBu+H]+。
步骤3:使用叔丁基3-[5-氯-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(160毫克，280.20微摩尔)、碳酸铯(228.24毫克，700.51微摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(58.08毫克，420.31微摩尔)按照程序A-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体。将粗化合物与在pet醚中10％二氯甲烷研磨，得到3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(150mg，154.53μmol，55％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):633.4[M-tBu+H]+。
步骤4:在二噁烷介导的N-Boc脱保护作用中通过4M氯化氢合成所需的胺(程序A-D)。在0℃下，用1,4-二噁烷(4M，2.20mL)中的氯化氢，4M对叔丁基3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(155mg，159.68μmol)进行N-Boc脱保护，得到3-(8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基)-5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(130mg,155.87μmol,98％产率)，为棕色固体。LCMS m/z(ESI):589.2[M+H]+。
步骤5:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用3-(8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基)-5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(80mg，135.80μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(49.35mg，135.80μmol)、N,N-二异丙基乙胺(70.21mg,543.22μmol,94.62μL)和HATU(51.64mg,135.80μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中50％乙腈洗脱，得到产物5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉(14mg,13.76μmol,10％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):934.2[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.80(s,1H),8.49(s,1H),7.70-7.69(m,1H),7.64(d,J＝9.20Hz,1H),7.45(d,J＝8.80Hz,1H),7.39(dd,J＝9.00,4.00Hz,1H),6.99(s,1H),6.51-6.46(m,2H),6.10(d,J＝8.00Hz,1H),5.18-5.06(m,1H),5.46-4.35(m,1H),4.30-4.21(m,1H),3.64-3.38(m,6H),3.14-3.12(m,3H),3.10-2.81(m,2H),2.75(s,3H),2.70-2.65(m,2H),2.16-2.08(m,6H),2.05-1.80(m,6H),1.68-1.51(m,5H),1.06(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例71
3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:使用叔丁基3-[5-氯-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(50毫克，87.26微摩尔)、碳酸铯(113.73毫克，349.05微摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(36.18mg,261.79μmol)按照程序A-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体，得到叔丁基3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(51mg,54.80μmol,63％产率)，为淡黄色固体。LCMS m/z(ESI):635.0[M+H-tBu]+。
步骤2:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。在叔丁基3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(51mg，73.79μmol)上使用二噁烷(4M，2mL)中4M氯化氢溶液进行N-Boc脱保护，得到粗产物3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(53mg,73.48μmol,100％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):591.3[M+H]+。
步骤3:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(60mg，101.51μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(40.58mg,111.67μmol)、N,N-二异丙基乙胺(65.60mg,507.57μmol,88.41μL)和HATU(42.46mg,111.67μmol)进行酰胺偶联，得到3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(4mg,3.97μmol,4％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):936.2[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),10.15(s,1H),9.56(s,1H),8.38(s,1H),7.71(s,1H),7.68(d,J＝4.00Hz,1H),7.45(d,J＝9.20Hz,1H),7.38(s,1H),6.98(s,1H),6.51-6.46(m,2H),6.11(d,J＝7.60Hz,1H),5.34(m,1H),5.34(m,1H),4.32-4.30(m,2H),4.18-4.16(m,3H),3.78(m,1H),3.44-3.41(m,3H),3.13-3.11(m,3H),2.73(s,3H),2.11-2.08(m,3H),2.45-2.38(m,4H),1.96-1.74(m,9H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例72
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-氟-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷盐酸盐(17毫克，27.82微摩尔)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(10.11mg,25.28μmol)、N,N-二异丙基乙胺(14.38mg,111.28μmol,19.38μL)和HATU(10.58mg,27.82μmol)，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(3mg,3.16μmol,11％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):920.2[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.73(s,1H),8.33(s,1H),7.51-7.40(m,3H),7.29-7.22(m,1H),6.98(s,1H),6.54-6.44(m,2H),6.05(d,J＝12.00Hz,1H),5.35-5.33(m,1H),4.32(t,J＝7.20Hz,1H),4.20-4.14(m,2H),3.72-3.71(m,1H),3.15-2.85(m,4H),2.74(q,J＝16.00Hz,2H),2.46-2.32(m,4H),2.16-2.04(m,5H),1.97-1.72(m,9H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例73
(3R)-3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:在氮气氛下，在室温下向3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1.1克，2.74毫摩尔)在乙腈(15毫升)中的搅拌溶液中加入N-溴代琥珀酰亚胺(487.68毫克，2.74毫摩尔，232.23微升)，所得混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(3x25 mL)提取。合并有机层，盐水(15mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩以得到粗产物。粗产物通过使用230-400硅胶的柱色谱纯化，用60-70％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到3-(5-溴-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(600mg，1.19mmol，43％产率)，为浅棕色固体。LCMSm/z(ESI):482.0[M+H]+。
步骤2:按照O-芳化的一般程序(程序A-B)使用叔丁基3-(5-溴-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(600mg，1.20mmol)、2,3,6-三氟苯甲腈(188.18mg，1.20mmol，138.37μL)和碳酸铯(1.17g,3.59mmol)合成O-芳化喹唑啉酮中间体。粗化合物通过使用230-400硅胶的柱色谱纯化，用70-80％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到棕色固体的叔丁基3-[5-溴-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(400mg，638.12μmol，53％产率)。LCMS m/z(ESI):618.0[M-H]-。
步骤3:使用(R,R)Whelk-01柱对400mg外消旋混合物进行手性SFC纯化，得到叔丁基(S)-3-(5-溴-6-(2-氰基-3,6-二氟苯氧基)-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(160mg，99.8％纯度)和叔丁基(R)-3-(5-溴-6-(2-氰基-3,6-二氟苯氧基)-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(160mg，99.8％纯度)。
注：第一洗脱异构体被任意指定为S-异构体，第二洗脱异构体被任意指定为R-异构体。
步骤4:使用叔丁基3-[(3R)-5-溴-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(160mg，259.14μmol)、[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(35.81mg，259.14μmol)和碳酸铯(211.08mg,647.84μmol)按照程序A-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体，得到叔丁基(3R)-3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(120mg,125.89μmol,49％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):735.0,[M-H]-。
步骤5:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。N-Boc脱保护在叔丁基(3R)-3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(120mg，163.13mol)上，使用二噁烷(4M，1.63mL)中的4M氯化氢进行，得到(3R)-3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(105mg,132.35μmol,81％产率)，为淡棕色固体。LCMS m/z(ESI):637.0[M+H]+。
步骤6:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用(3R)-3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(105mg，165.22μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(66.06mg,165.22μmol)、N,N-二异丙基乙胺(106.77mg,826.12μmol,143.89μL)和HATU(94.23mg,247.83μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过使用C18-30 g snap的反相柱色谱纯化，用0.1％的甲酸水溶液中50％乙腈洗脱，得到(3R)-3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(27mg,25.74μmol,16％产率)，为米色固体。LCMS m/z(ESI):980.0[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),10.15(bs,1H),9.45(bs,1H),8.40(s,1H),7.78(t,J＝10.00Hz,1H),7.68(d,J＝9.20Hz,1H),7.41-7.45(m,2H),6.91-7.02(m,1H),6.50(d,J＝7.60Hz,1H),6.48(d,J＝12.80Hz,1H),6.12(d,J＝7.60Hz,1H),5.31-5.41(m,1H),4.12-4.41(m,5H),3.75-3.85(m,1H),3.31-3.61(m,4H),3.02-3.21(m,4H),2.85-2.95(m,1H),2.78(s,3H),2.68-2.78(m,1H),2.41-2.62(m,2H),1.60-2.15(m,12H),1.07(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例74
(3S)-3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:使用叔丁基(3S)-3-[5-溴-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(160mg，259.14μmol)、[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(35.81mg，259.13μmol)和碳酸铯(211.08mg,647.84μmol)按照程序A-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体，得到(3R)-3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(120mg,130.34μmol,50％产率)，为淡棕色固体。LCMS m/z(ESI):735.0,[M+H]+。
步骤2:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。N-Boc脱保护在叔丁基(3S)-3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(120mg，163.13μmol)上使用二噁烷(4M，1.63mL)中的4M氯化氢进行，得到(3S)-3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(110mg,142.01μmol,87％产率)，为淡棕色固体。LCMS m/z(ESI):635.0,[M+H]+。
步骤3:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用(3S)-3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(110mg，163.70μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(65.45mg,163.70μmol)、N,N-二异丙基乙胺(105.78mg,818.50μmol,142.57μL)和HATU(93.36mg,245.55μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过使用C18-30 g snap的反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中50％乙腈洗脱，得到(3S)-3-[5-溴-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(21mg,20.24μmol,12％产率)，为米色固体。LCMS m/z(ESI):980.0[M+H]+ 1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),10.15(bs,1H),9.45(bs,1H),8.40(s,1H),7.71-7.80(m,1H),7.68(d,J＝8.80Hz,1H),7.39-7.43(m,2H),6.91-7.02(m,1H),6.50(d,J＝7.60Hz,1H),6.48(d,J＝13.20Hz,1H),6.12(d,J＝7.60Hz,1H),5.31-5.41(m,1H),4.12-4.41(m,5H),3.75-3.85(m,1H),3.31-3.57(m,4H),3.11-3.21(m,2H),2.98-3.11(m,1H),2.81-2.90(m,1H),2.76(s,3H),2.65-2.76(m,1H),2.40-2.65(m,2H),1.56-2.18(m,12H),1.06(t,J＝6.80Hz,3H)。
实施例75
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟-5-甲氧基苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:将4-溴-5-氟-2-甲氧基苯胺(2克，9.09毫摩尔)、叔丁基4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸酯(3.37克，10.91毫摩尔)在二噁烷(20毫升)中的溶液置于密封管中，并在室温，氮气氛下加入碳酸铯(8.88克，27.27毫摩尔)。反应混合物用氮气脱气5分钟，并在相同温度下加入Pd(dppf)Cl2.二氯甲烷(742.27mg，908.93μmol)。所得反应混合物在110℃下搅拌16小时。用水(50mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(2x 30mL)提取。合并的有机层用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到粗产物。粗产物通过使用硅胶和0-50％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂的柱色谱纯化，得到黄色固体的4-(4-氨基-2-氟-5-甲氧基-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(2.1克，6.32毫摩尔，70％产率)。LCMS m/z(ESI):223.2[M+H-100]+。
步骤2:向4-(4-氨基-2-氟-5-甲氧基-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(2.1克，6.51毫摩尔)在二噁烷(25毫升)中的搅拌溶液中加入碳上氢氧化钯(20重量％50％水，914.82毫克，6.51毫摩尔)并通过将氢气鼓泡10分钟使其氢饱和，然后在室温下进行氢化(1个大气压)16小时。完成后，用氮气吹扫反应混合物，通过硅藻土垫过滤除去催化剂。将滤液减压浓缩，得到4-(4-氨基-2-氟-5-甲氧基-苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2g，6.13mmol，94％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):225.2[M+H-100]+。
步骤3:向4-(4-氨基-2-氟-5-甲氧基-苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(337.89毫克，1.04毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(10毫升)中的搅拌溶液中加入碳酸氢钠(262.51毫克，3.12毫摩尔，121.53微升)，随后加入3-溴哌啶-2,6-二酮(0.5克，2.60毫摩尔)，并将反应加热至60℃14小时。用水(20mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(3x30 mL)提取。有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥，减压浓缩以得到粗产物。通过硅胶快速柱色谱从粗产物中纯化所需产物，用50-70％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂进行洗脱，得到4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.4g，889.02μmol，85％产率)，为淡绿色粘性化合物。LCMS m/z(ESI):380.2[M+H-56]+。
步骤4:在氮气氛下于5℃向4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-3-甲氧基-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.225g，516.66μmol)的二噁烷(2mL)的搅拌溶液中加入1,4-二噁烷(4M，2mL)中的4M氯化氢溶液。将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应完成后，在减压下浓缩反应混合物，得到3-[3-氟-2-甲氧基-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮粗产物(0.17g，413.94μmol，产率80％)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):336.2[M-H]-。
步骤5:向3-[5-氟-2-甲氧基-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮(0.30克，894.53微摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(3毫升)中的搅拌溶液中加入三乙胺(362.07毫克，3.58毫摩尔，498.72微升)，然后在室温，氮气氛下加入2-溴乙酸叔丁酯(174.48毫克，894.53微摩尔，131.19微升)。反应混合物在室温下搅拌12小时。用水(10mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(3x20 mL)提取。有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥。然后将溶液减压浓缩，得到2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(0.20g，442.96μmol，50％产率)。LCMS m/z(ESI):450.2[M+H]+。
步骤6:在氮气氛下，于5℃向2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(0.14g，311.45μmol)在二氯甲烷(2mL)中的搅拌溶液中加入二噁烷(4M，1.5mL)中的4M氯化氢溶液。反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，在减压下浓缩反应混合物以得到粗产物，其用甲基叔丁基醚(50mL)洗涤，得到2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-1-哌啶基]乙酸(0.130g，296.02μmol，95％产率)，为棕色固体。LCMS m/z(ESI):394.0[M+H]+。
步骤7:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-1-哌啶基]乙酸(70.68毫克，179.66微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(92.88毫克，718.64微摩尔，125.17微升)、HATU(68.31毫克，179.66微摩尔)进行酰胺偶联和加入(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(0.1g,179.66μmol)3]。通过反相柱色谱(水中0.1％甲酸:乙腈)从粗产物中纯化所需产物，并将级分冻干，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(21.34mg,21.21μmol,12％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):932.0[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.85(s,1H),10.20(s,1H),9.50(s,1H),8.36(d,J＝1.60Hz,1H),7.78-7.85(m,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.70(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.42-7.51(m,1H),7.38(d,J＝2.80Hz,1H),6.66(d,J＝6.80Hz,1H),6.52(d,J＝13.20Hz,1H),5.29-5.40(m,2H),4.10-4.40(m,4H),3.82(s,3H),3.75-3.81(m,1H),3.25-3.60(m,5H),3.11-3.21(m,2H),2.91-3.10(m,2H),2.70-2.81(m,1H),2.77(s,3H),2.45-2.61(m,4H),1.92-2.21(m,4H),1.51-1.90(m,6H),1.06(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例76
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]氮杂环庚烷-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
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步骤1:向4-氧代氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(3克，14.07毫摩尔)的四氢呋喃(30毫升)溶液中加入1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(6.42克，42.20毫摩尔，6.30毫升)，然后在-10℃下加入九氟丁烷磺酰氟(10.62克，35.17毫摩尔，6.07毫升)。室温下搅拌反应混合物5小时。反应完成后，用水(50mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2×100mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩以得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用15-20％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到4-(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁基磺酰氧基)-2,3,6,7-四氢氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(3.8克，7.66毫摩尔，54％产率)，为浅色油。LCMS m/z(ESI):396.0[M-CO2 tBu+H]+。
步骤2:在室温，氮气氛下向4-(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁基磺酰氧基)-2,3,6,7-四氢氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(1.5g，3.03mmol)和3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯胺(789.69mg，3.33mmol)在1,4-二噁烷(10mL)和水(2mL)中的搅拌溶液中加入无水磷酸氢二钾(1.93g,9.08mmol)。反应混合物用氮气吹扫15分钟，然后加入Pd(dppf)Cl2.二氯甲烷(247.29毫克，302.81微摩尔)。将反应混合物在微波中于80℃搅拌2小时。反应完成后，将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤，并用乙酸乙酯(2x50 mL)洗涤硅藻土床。合并的滤液在减压下浓缩以得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用65-70％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到4-(4-氨基-2-氟-苯基)-2,3,6,7-四氢氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(610mg，1.92mmol，63％产率)，为无色液体。LCMS m/z(ESI):207.20[M-CO2 tBu+H]+。
步骤3:在室温氮气氛下，向4-(4-氨基-2-氟-苯基)-2,3,6,7-四氢氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(610毫克，1.99毫摩尔)在1,4-二噁烷(7毫升)中的搅拌溶液中加入碳上氢氧化钯(419.41毫克，2.99毫摩尔)。反应混合物在H2压力下搅拌12小时。反应完成后，通过硅藻土床过滤除去催化剂。硅藻土床用乙酸乙酯(3x30mL)洗涤，滤液减压浓缩，得到4-(4-氨基-2-氟-苯基)氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(560mg，1.78mmol，产率89％)，为无色液体。LCMS m/z(ESI):209.20[M-CO2 tBu+H]+。
步骤4:在室温下，向4-(4-氨基-2-氟-苯基)氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(560毫克，1.82毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(6毫升)中的搅拌溶液中加入碳酸氢钠(610.18毫克，7.26毫摩尔，282.49微升)和3-溴哌啶-2,6-二酮(1.05克，5.45毫摩尔)。所得反应混合物在70℃下搅拌12小时。完成后，用水(20ml)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2x25ml)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩以得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用60-65％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(380mg，878.69μmol，48％产率)，为灰白色固体。LCMSm/z(ESI):418.30[M-H]-。
步骤5:在氮气氛下，于5℃向4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(380mg，905.86μmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的搅拌溶液中加入在二噁烷(3mL)中的氯化氢溶液。反应混合物在室温下搅拌6小时。反应完成后，反应混合物在减压下浓缩，得到黄色固体的粗制3-[4-(氮杂环庚烷-4-基)-3-氟-苯胺基]哌啶-2,6-二酮(310mg，848.54微摩尔，94％产率)。LCMS m/z(ESI):320.20[M+H]+。
步骤6:在室温，氮气氛下向3-[4-(氮杂环庚烷-4-基)-3-氟-苯胺基]哌啶-2,6-二酮(310毫克，871.19微摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(3毫升)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙基胺(440.78毫克，4.36毫摩尔，607.13微升)和溴乙酸叔丁酯(169.93毫克，871.19微摩尔，127.77微升)。反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，用水(10mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3x10 mL)提取。有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩以得到粗产物。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中50％乙腈洗脱，得到产物2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]氮杂环庚烷-1-基]乙酸叔丁酯(216mg，496.71μmol，57％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):434.20[M+H]+。
步骤7:向2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]氮杂环庚烷-1-基]乙酸叔丁酯(210mg，484.41μmol)在二氯甲烷(5mL)中的搅拌溶液中加入在1,4-二噁烷(2mL)中的氯化氢4.0M溶液。内容物在室温下搅拌6小时。完成后，将得到的粗化合物减压干燥，用甲基叔丁基醚研磨，得到黄色固体的2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]氮杂环庚烷-1-基]乙酸(170mg，406.65μmol，84％产率)。LCMS m/z(ESI):378.20[M+H]+。
步骤8:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(90mg，151.75μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]氮杂环庚烷-1-基]乙酸(69.09mg,166.93μmol)、N,N-二异丙基乙胺(98.07mg,758.77μmol,132.16μL)和HATU(69.24mg,182.10μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中55％乙腈洗脱，得到产物(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]氮杂环庚烷-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(9.5mg,10.14μmol,7％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):916.30[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),8.33(s,1H),7.76(d,J＝8.80Hz,1H),7.64(dd,J＝2.80,9.00Hz,1H),7.39-7.29(m,3H),6.99(t,J＝8.40Hz,1H),6.54-6.42(m,2H),6.02(d,J＝7.60Hz,1H),5.32-5.31(m,1H),4.35-4.25(m,1H),4.22-4.10(m,2H),3.80-3.68(m,1H),3.60-3.40(m,2H),3.05-2.85(m,6H),2.80-2.70(m,2H),2.59(s,3H),2.55-2.53(m,1H),2.45-2.35(m,2H),2.15-2.05(m,3H),1.95-1.50(m,12H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例77
(3R)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:在室温和氮气氛下，向3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1克，2.49毫摩尔)的乙腈(10毫升)搅拌溶液中加入1-氯代吡咯烷-2,5-二酮(399.15毫克，2.99毫摩尔，241.91微升)。反应混合物在室温下搅拌14小时。用水(10mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(40mL)提取。有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到棕色固体的粗产物3-(5-氯-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1.2克，2.16毫摩尔，87％产率)。LCMS m/z(ESI):380.2[M+H-tBu]+。
步骤2:按照O-芳化的一般程序(程序A-B)使用叔丁基3-(5-氯-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1.2克，2.15毫摩尔)、碳酸铯(2.10克，6.44毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(505.98毫克，3.22毫摩尔,372.05μL)合成O-芳化喹唑啉酮中间体，得到3-[5-氯-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(140mg,239.45μmol,11％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):517.0[M+H-tBu]+。
步骤3:使用YMC纤维素-SC柱通过SFC手性分离来分离3-[5-氯-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(250mg，239.45μmol，11.15％产率)。在手性纯化后，两种异构体在真空压力下缩减，得到叔丁基(3R)-3-[5-氯-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(100.00mg，174.52μmol,71.82％产率)和叔丁基(3S)-3-[5-氯-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(80.00mg,139.62μmol 28％产率)。
注:手性纯化合物通过参考柱(Lux A1)检查。Lux A1柱的第一洗脱峰被任意指定为S-异构体，第二洗脱峰被任意指定为R-异构体。
步骤4:使用叔丁基(3R)-3-[5-氯-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(100.00mg，174.52μmol)、碳酸铯(227.45mg，698.10μmol)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(72.35mg,523.57μmol)按照程序A-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体，得到叔丁基(3R)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(135mg,173.84μmol,100％产率)，为浅黄色固体。LCMS m/z(ESI):635.7[M+H-tBu]+。
步骤5:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。在叔丁基(3R)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(135mg，195.32μmol)上使用二噁烷(4M，5mL)中的4M氯化氢溶液进行N-Boc脱保护，得到粗3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(140mg,178.48μmol,91％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):591.7[M+H]+。
步骤6:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用(3R)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(140mg，236.87μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(86.07mg,236.87μmol)、N,N-二异丙基乙胺(153.07mg,1.18mmol,206.29μL)和HATU(99.07mg,260.55μmol)进行酰胺偶联，得到(3R)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(27.35mg,27.69μmol,12％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):936.2[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.81(s,1H),10.15(s,1H),9.56(s,1H),8.38(s,1H),7.69(s,1H),7.64(d,J＝9.20Hz,1H),7.46(d,J＝8.80Hz,1H),7.39(d,J＝5.60Hz,1H),6.98(s,1H),6.50(d,J＝6.80Hz,1H),6.46(s,1H),6.11(d,J＝8.00Hz,1H),5.34(m,1H),4.36-4.29(m,1H),4.18-4.16(m,2H),3.51-3.45(m,4H),3.18-3.01(m,4H),2.94-2.82(m,1H),2.75(s,3H),2.71(m,1H),2.45-2.38(m,4H),2.14-1.72(m,12H),1.61-1.53(m,1H),1.07(t,J＝3.60Hz,3H)。
实施例78
(3S)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:使用叔丁基(3S)-3-[5-氯-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(80.00毫克，139.62微摩尔)、碳酸铯(181.96毫克，558.48微摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(57.88mg,418.86μmol)按照程序A-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体，得到叔丁基(3S)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(109mg,138.78μmol,99％产率)，为淡黄色固体。LCMS m/z(ESI):635.7[M+H-tBu]+。
步骤2:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。在叔丁基(3S)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(120mg，173.62mol)上使用二噁烷(4M，43.40L)中4M氯化氢溶液进行N-Boc脱保护，得到(3S)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(120mg,150.59μmol,87％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):591.7[M+H]+。
步骤3:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用(3S)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(120mg，203.03μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(73.78mg,203.03μmol)、N,N-二异丙基乙胺(26.24mg,203.03μmol,35.36μL)和HATU(77.20mg,203.03μmol)进行酰胺偶联，得到(3S)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(19.28mg,19.37μmol,10％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):936.0[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.82(s,1H),10.15(s,1H),9.56(s,1H),8.38(s,1H),7.77(s,1H),7.64(d,J＝8.80Hz,1H),7.49(d,J＝9.20Hz,1H),7.42(dd,J＝3.60,9.00Hz,1H),6.98(s,1H),6.51-6.46(m,2H),6.12(d,J＝8.00Hz,1H),5.35-5.34(m,1H),4.38-4.26(m,2H),4.33-4.30(m,3H),4.18-4.16(m,2H),3.84-3.78(m,1H),3.58-3.49(m,1H),3.47-3.38(m,3H),3.16(q,J＝6.80Hz,3H),3.12-3.03(m,2H),2.93-2.85(m,1H),2.78(s,3H),2.08-2.01(m,4H),1.89-1.76(m,7H),1.64-1.53(m,1H),1.06(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例79
5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:在室温，氮气氛下向密封管中的2-氨基-5-羟基苯甲酸(3.2克，20.90毫摩尔)在甲苯(40毫升)和THF(10毫升)中的搅拌溶液中加入二乙氧基-甲氧基乙烷(4.65克，31.34毫摩尔，5.21毫升)、乙酸(525.00毫克，8.74毫摩尔，0.5毫升)和3-氨基-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(5.32g,20.90mmol)。将反应混合物在110℃下搅拌12小时。完成后，用水(70mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3x100mL)提取。合并的有机层用10％碳酸氢钠溶液(3x30mL)洗涤，然后用水(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到浅棕色固体的粗制叔丁基3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(4g，8.59mmol，产率41％)。LCMS m/z(ESI):400.2[M+H]+。
步骤2:在室温和氮气气氛下，向3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(2.2克，5.51毫摩尔)的乙腈(30毫升)搅拌溶液中加入N-氯代琥珀酰亚胺(1.47克，11.01毫摩尔，891.37微升)。反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，用水(30mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3x50mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩以得到粗产物。使用20-30％乙酸乙酯(在石油醚中)作为洗脱剂，通过柱色谱法从粗产物中纯化所需产物，得到棕色粘性液体的3-(5-氯-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1.5g，2.06mmol，37％产率)。LCMS m/z(ESI):378.2[M+H]+。
步骤3:使用叔丁基3-(5-氯-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1.5g，3.46毫摩尔)、碳酸铯(3.38g，10.37毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(1.09g，6.91毫摩尔，798.59微升)按照O-芳化的一般程序(程序A-B)合成O-芳化的喹唑啉酮中间体。通过使用pet醚中80-90％乙酸乙酯作为洗脱剂的硅胶快速柱色谱从粗产物中纯化所需产物，得到外消旋产物3-[5-氯-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(0.7g 80.39％纯)。外消旋产物(0.5g，80.39％纯)通过反相柱色谱(10mM乙酸铵水溶液:乙腈)纯化，浓缩级分以得到纯产物(0.28g)。LCMS m/z(ESI):515.0[M+H-56]+。
步骤4:外消旋产物(0.28g)通过手性SFC纯化以得到叔丁基(3S)-3-[5-氯-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.13g，226.66μmol，6.56％产率)，为灰白色固体，和叔丁基(3R)-3-[5-氯-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.09g,157.61μmol,5％产率)，为淡棕色固体。LCMS m/z(ESI):515.0[M+H-56]+。
注:异构体的绝对立体化学被任意指定如下：第一洗脱峰为S-异构体，第二洗脱峰为R-异构体。
步骤5:使用叔丁基(3S)-3-[5-氯-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.13克，227.67微摩尔)、碳酸铯(222.53毫克，683.00微摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(62.92mg,455.33μmol)按照程序A-C合成氨磺酰基化的喹唑啉酮中间体，得到叔丁基(3S)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.12g,165.22μmol,73％产率)，为无色粘性液体。LCMS m/z(ESI):687.0[M-H]-。
步骤6:通过TFA介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。在叔丁基(3S)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(120.00mg，174.12μmol)上使用二噁烷(4M，1.2mL)中的4M氯化氢溶液进行N-Boc脱保护，得到粗产物33-[(3S)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(0.1g,145.28μmol,83％产率)，为淡棕色固体。LCMS m/z(ESI):589.2[M+H]+LCMS m/z(ESI):589.2[M+H]+。
步骤7:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(70.31毫克，175.85微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(206.61毫克，1.60毫摩尔，278.45微升)、HATU(66.86毫克，175.85微摩尔)和3-[(3S)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(0.1g,159.86μmol)进行酰胺偶联。通过反相柱色谱(10mM乙酸铵水溶液:乙腈)从粗产物中纯化所需产物，并将级分冻干，得到5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉(59mg,62.92μmol,39％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):934.0[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.80(s,1H),8.47(d,J＝-2.40Hz,1H),7.62(d,J＝9.20Hz,1H),7.35(d,J＝9.60Hz,1H),7.28(d,J＝5.60Hz,1H),6.47(t,J＝12.80Hz,2H),6.07(d,J＝7.20Hz,1H),5.09(q,J＝52.00Hz,1H),4.36-4.28(m,1H),3.65-3.55(m,1H),3.05(q,J＝36.00Hz,2H),2.78-2.69(m,1H),2.62(s,3H),2.20-2.03(m,5H),1.95-1.70(m,8H),1.70-1.55(m,4H),1.55-1.45(m,1H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例80
5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:使用叔丁基(3R)-3-[5-氯-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.09克，157.61微摩尔)、碳酸铯(154.06毫克，472.84微摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(43.56mg,315.23μmol)按照程序A-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体，以得到叔丁基(3R)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.08g,105.94μmol,67％产率)。LCMS m/z(ESI):687.0[M-H]-。
步骤2:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。在叔丁基(3R)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.09g，130.59μmol)上使用二噁烷(4M，1.2mL)中的4M氯化氢溶液进行N-Boc脱保护，得到粗制3-[(3R)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(0.08g,119.45μmol,91％产率)，为淡棕色固体。LCMS m/z(ESI):589.0[M+H]+。
步骤3:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(56.25毫克，140.68微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(165.28毫克，1.28毫摩尔，222.75微升)、HATU(53.49毫克，140.68微摩尔)和3-[(3R)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(0.08g,127.89μmol)进行酰胺偶联。通过反相柱色谱(10mM乙酸铵水溶液:乙腈)从粗产物中纯化所需产物，并将级分冻干，得到5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉(36mg,37.99μmol,30％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):934.0[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.81(s,1H),8.47(d,J＝2.40Hz,1H),7.61(d,J＝9.20Hz,1H),7.34(dd,J＝20.00,32.80Hz,2H),7.02-6.92(m,1H),6.47(t,J＝13.20Hz,2H),6.07(d,J＝7.20Hz,1H),5.11(q,J＝48.00Hz,1H),4.38-4.28(m,1H),3.65-3.40(m,8H),3.02(d,J＝7.20Hz,2H),2.78-2.69(m,1H),2.61(s,3H),2.19-2.07(m,5H),1.95-1.72(m,8H),1.69-1.43(m,5H),1.55-1.45(m,1H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例81
3-[5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:在0℃向3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(400mg，996.38μmol)在二氯甲烷(10mL)中的搅拌溶液中加入亚硝酸叔丁酯(308.24mg，2.99mmol，355.52μL)，并将反应混合物在氮气氛下于室温下搅拌12小时。反应完成后，用水(20mL)稀释反应混合物，用二氯甲烷(3×30mL)提取。合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用80-85％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到棕色固体的3-(6-羟基-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(210mg，437.45μmol，44％产率)。LCMS m/z(ESI):445.6[M-H]-。
步骤2:在0℃下，将3-(6-羟基-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(130mg，291.18μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液加入氢化纳(60％分散于矿物油中，33.47mg，1.46mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的搅拌溶液中，反应混合物在室温下搅拌2小时。然后将2,3,6-三氟苯甲腈(137.23mg，873.55μmol，100.90μL)添加到反应混合物中并在80℃搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物用冷水(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(2×10mL)萃取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩以得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用60-70％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到棕色固体的3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(60mg，90.48μmol，31％产率)。LCMS M/z(ESI):484.00[M+H-CO2tBu]+。
步骤3:使用叔丁基3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(40毫克，68.55微摩尔)、碳酸铯(67.00毫克，205.64微摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(28.42毫克，205.64微摩尔)按照程序A-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用70-80％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到棕色粘性的3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(25mg，27.79μmol，41％产率)。LCMS m/z(ESI):700.00[M-H]-。
步骤4:在室温下向3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(25毫克，35.63微摩尔)在水(1毫升)/乙醇(3毫升)中的搅拌溶液中加入铁粉(9.95毫克，178.13微摩尔)和氯化铵(9.53毫克，178.13微摩尔)。反应混合物在80℃下搅拌3小时。反应完成后，过滤反应混合物并在真空下浓缩以得到粗产物。将该粗产物溶于水(5mL)，用乙酸乙酯(2x10mL)提取。合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸发，得到粗产物，其用80-90％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂通过硅胶快速柱色谱纯化，得到棕色粘性的3-[5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(20mg，21.44μmol,60％产率)。LCMS m/z(ESI):672.20[M+H]+。
步骤5:按照程序A-D，使用叔丁基3-[5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(20mg，29.77μmol)和二噁烷(1mL)中的氯化氢溶液4.0M合成所需的胺。用甲基叔丁基醚研磨所得的粗化合物，得到3-[5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(18mg，29.60μmol，99％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):572.40[M+H]+。
步骤6:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用3-[5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(20mg，32.89μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(19.73mg，49.34μmol)、N,N-二异丙基乙胺(42.51mg,328.90μmol,57.29μL)和HATU(18.76mg,49.34μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中45％乙腈洗脱，得到产物3-[5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(8.5mg,8.59μmol,26％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):917.00[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝12.30(s,1H),10.79(s,1H),8.16(d,J＝9.20Hz,2H),7.36(s,1H),7.21(d,J＝5.20Hz,2H),7.01-6.97(m,1H),6.90(d,J＝8.80Hz,1H),6.66(d,J＝8.80Hz,1H),6.49-6.43(m,2H),6.04(d,J＝4.40Hz,1H),5.33(s,1H),4.31(t,J＝3.60Hz,1H),4.14(d,J＝4.80Hz,2H),3.66-3.48(m,4H),3.20-2.92(m,5H),2.72-2.51(m,5H),2.50-2.41(m,2H),2.09-2.05(m,3H),1.81-1.34(m,10H),1.28-1.24(m,1H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例82
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯胺基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
/>
步骤1:使用叔丁基3-氨基-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(2克，7.80毫摩尔)、2-氨基-5-硝基苯甲酸(1.42克，7.80毫摩尔)、原甲酸三乙酯(3.47克，23.41毫摩尔，3.89毫升)按照环化的一般程序(程序A-A)合成喹唑啉酮中间体。反应完成后，将反应混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(3×50mL)提取。有机层用碳酸氢钠溶液(2x 50mL)和盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗残留物，其用10％乙酸乙酯/石油醚研磨，得到棕色固体的3-(6-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(3克，5.44毫摩尔，产率70％)。LCMS m/z(ESI):375.20[M-CO2 tBu+H]+。
步骤2:在室温下，向叔丁基3-(6-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(3克，6.97毫摩尔)在水(5毫升)/乙醇(25毫升)中的搅拌溶液中加入铁粉(1.95克，34.85毫摩尔，247.59微升)和氯化铵(1.86克，34.85毫摩尔，1.22毫升)。反应混合物在85℃下搅拌3小时。完成后，过滤反应混合物并在减压下浓缩以提供粗物质。将粗产物溶解于水(50mL)中，用乙酸乙酯(3×50mL)提取。合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸发以得到粗产物。使用70-80％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，通过硅胶色谱纯化粗物质，得到棕色固体的3-(6-氨基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1.8克，4.45毫摩尔，63.85％产率)。外消旋化合物通过手性SFC(Lux-A1柱[250*30毫米，5微米]；流动相:50％ IPA-CO2+甲醇中0.5％异丙胺；流速:120mL/min；循环时间:7.6min；反压:100马；UV:210nm))进行手性拆分)，得到峰1(第一洗脱，任意指定为S-异构体)叔丁基(S)-3-(6-氨基-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(610mg)，为灰白色固体，和所需峰2(第二洗脱，任意指定为R-异构体)叔丁基(R)-3-(6-氨基-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(600mg,2.93mmol,10％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):401.20[M+H]+。
步骤3:向氢化纳(60％分散在矿物油中，172.22毫克，4.49毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(10毫升)中的搅拌溶液中加入在0℃下溶解在N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)中的叔丁基(3R)-3-(6-氨基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(600毫克，1.50毫摩尔)。反应混合物在室温下搅拌2小时。接下来，在室温下将2,3,6-三氟苯甲腈(470.73mg，3.00mmol，346.12μL)添加到反应混合物中并搅拌16小时。完成后，将反应混合物用冷水(50mL)淬灭并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩以得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用70-80％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到棕色固体的叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯胺基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(720mg，688.05μmol，46％产率)。LCMSm/z(ESI):538.80[M+H]+。
步骤4:室温下向叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯胺基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(700毫克，1.30毫摩尔)在无水乙腈(8毫升)中的溶液中加入DMAP(79.54毫克，651.09微摩尔)和三乙胺(395.31毫克，3.91毫摩尔，544摩升)。在0℃下滴加焦碳酸二叔丁酯(568.40毫克，2.60毫摩尔，597.68微升)，内容物在室温下搅拌16小时。完成后，用水(50毫升)淬灭反应混合物，用乙酸乙酯(60毫升)提取，用硫酸钠干燥，过滤。溶剂被蒸发。用70-80％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化粗物质，得到叔丁基(3R)-3-[6-(N-叔丁氧基羰基-2-氰基-3,6-二氟-苯胺基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(600mg，412.59μmol，32％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):638.40[M+H]+。
步骤5:使用叔丁基(3R)-3-[6-(N-叔丁氧基羰基-2-氰基-3,6-二氟-苯胺基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(600mg，940.92μmol)、碳酸铯(919.71mg，2.82mmol)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(370.77mg,2.35mmol)按照程序A-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体。使用反相制备型高效液相色谱(柱:X-select C18(150*19)mm 5微米制备方法:0.1％乙酸铵水溶液/乙腈)纯化粗化合物，得到叔丁基(3R)-3-[6-[N-叔丁氧基羰基-2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯胺基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(160mg,185.75μmol,20％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):754.10[M-H]-。
步骤6:使用叔丁基(3R)-3-[6-[N-叔丁氧基羰基-2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯胺基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(160mg，211.68μmol)和氯化氢溶液(4.0M二噁烷中，3mL)按照程序A-D合成所需的胺。用甲基叔丁基醚研磨所得的粗化合物，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯胺基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(140mg，204.18μmol，96％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):556.70[M+H]+。
步骤7:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯胺基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(70mg，102.09μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(48.98mg，122.51μmol)、N,N-二异丙基乙胺(65.97mg,510.44μmol,88.91μL)和HATU(58.23mg,153.13μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中45％乙腈洗脱，得到产物(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯胺基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(21mg,23.09μmol,23％产率)。为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):901.20[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.89(bs,1H),8.88(bs,1H),8.22(s,1H),7.84(d,J＝8.80Hz,2H),7.35-7.23(m,3H),6.98(t,J＝8.40Hz,1H),6.44(s,2H),6.04(s,1H),5.34(s,1H),4.32-4.30(m,1H),4.19(d,J＝5.20Hz,2H),3.49-3.68(m,4H),3.10(s,5H),2.85-2.75(m,1H),2.74(s,3H),2.52-2.50(m,2H),2.06(s,4H),1.91-1.53(m,11H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例83
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]环己基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
/>
步骤1:在氮气氛，环境温度下向含有1-溴-2-氟-4-硝基苯(4.0克，18.18毫摩尔)和2-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(5.80克，21.79毫摩尔)在1,4-二噁烷(50毫升)中的充分搅拌的溶液的250毫升密封管中加入碳酸钠(1.0M,55.0mL)。通过向反应混合物中鼓入氮气10分钟使所得混合物脱气。随后，加入Pd(dppf)Cl2.二氯甲烷(750毫克，918.40微摩尔)，并将反应混合物加热至80℃达16小时。将反应混合物冷却至室温，倒入水(100mL)中，用乙酸乙酯(3×100mL)提取。合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用30-40％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到8-(2-氟-4-硝基-苯基)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯(4.40克，14.97毫摩尔，82％产率)，为黄色粘性液体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝8.03-8.09(m,2H),7.63(t,J＝8.40Hz,1H),6.05(s,1H),3.94(s,4H),2.52(t,J＝1.60Hz,2H),2.42(s,2H),1.82(t,J＝6.40Hz,2H)。
步骤2:向含有8-(2-氟-4-硝基苯基)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯(4.40克，15.76毫摩尔)在无水1,4-二噁烷(50毫升)中的充分搅拌溶液的250毫升单颈圆底烧瓶中加入碳上氢氧化钯(20重量％50％水，1.50克，2.14毫摩尔，20％纯度)。通过将氢气鼓入10分钟使所得混合物氢饱和，然后在环境温度下氢化(1个大气压)32小时。用氮气吹扫反应混合物，并通过硅藻土垫过滤除去催化剂。在减压下浓缩滤液，得到4-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-3-氟代苯胺(3.70g，14.28mmol，91％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):252.2[M+H]+。
步骤3:在氮气氛下，于0-5℃向4-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-3-氟代苯胺(3.70克，14.72毫摩尔)的无水二氯甲烷(50毫升)的搅拌溶液中加入三乙胺(4.50克，44.48毫摩尔，6.20毫升)，随后在相同温度下加入(2,2,2-三氟乙酰基)2,2,2-三氟乙酸酯(4.77克，22.70毫摩尔，3.20毫升)。将所得混合物在环境温度下搅拌16小时。加入水(100mL)，水性混合物用二氯甲烷(3×100mL)提取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥、过滤并减压浓缩。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用50-60％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到呈灰白色固体的N-[4-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-3-氟-苯基]-2,2,2-三氟-乙酰胺(4.40g，7.60毫摩尔，52％产率)。LCMS m/z(ESI):346.2[M-H]-。
步骤4:在氮气氛下，在环境温度下向N-[4-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-3-氟-苯基]-2,2,2-三氟-乙酰胺(4.40克，12.67毫摩尔)在无水二氯甲烷(30毫升)中的搅拌溶液中加入三氟乙酸(14.80克，129.80毫摩尔，10毫升)。将所得混合物在环境温度下搅拌16小时。反应混合物在减压下浓缩。向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠溶液，水性混合物用二氯甲烷(3×100mL)提取。合并的有机层经硫酸钠干燥、过滤并减压浓缩。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到2,2,2-三氟-N-[3-氟-4-(4-氧代环己基)苯基]乙酰胺(2.50克，8.16毫摩尔，64％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):302.09[M-H]-。
步骤5/步骤6:在氮气氛下，在环境温度下向含有(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(200mg，359.32μmol)和2,2,2-三氟-N-[3-氟-4-(4-氧代环己基)苯基]乙酰胺(220mg,725.47μmol)在无水甲醇(5.0mL)中的充分搅拌的溶液的25mL单颈圆底烧瓶中加入无水乙酸钠(60mg,731.41μmol,39.22μL)、乙酸(21.58mg,359.32μmol,20.55μL)和MP-CNBH3(500mg,359.32μmol)。将所得混合物在环境温度下搅拌32小时。反应混合物经硅藻土过滤，滤液减压浓缩。粗物质经制备型高效液相色谱纯化，使用方法:流动相:A:在MQ-水中0.1％甲酸；B:乙腈；以提供260mg外消旋化合物。该外消旋化合物通过SFC-手性纯化(使用该方法:流速:5ml/min；柱:YMC纤维素-SC；共溶剂:异丙醇中的0.5％异丙基胺；注射量:15μl；出口压力:100巴；温度:35℃)进行纯化，得到N-[4-(1s,4s)-(4-[(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]环己基]-3-氟-苯基]-2,2,2-三氟-乙酰胺(120mg，137.94μmol，38％产率,F1)，为淡棕色粘性液体，和N-[4-(1r,4r)-(4-[(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]环己基]-3-氟-苯基]-2,2,2-三氟-乙酰胺(110mg，126.18μmol，35％产率,F2)，为淡棕色固体。LCMSm/z(ESI):844.0[M+H]+。
注:第一洗脱异构体(F1)被任意指定为顺式异构体，第二洗脱异构体(F2)被任意指定为反式异构体
步骤7:室温下向25mL单颈圆底烧瓶中N-[4-(1r,4r)[4-[(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]环己基]-3-氟-苯基]-2,2,2-三氟-乙酰胺(100mg，118.50μmol)在甲醇(5.0ml)和水(1.0ml)的混合物中的充分搅拌的溶液加入无水碳酸钾(85mg,615.02μmol,37.12μL)。将所得混合物加热至50℃16小时。加入水(30ml)，用5％甲醇/二氯甲烷(3×50mL)提取混合物。合并的有机层经硫酸钠干燥、过滤并减压浓缩。粗残留物通过硅胶快速柱色谱纯化，用在二氯甲烷中10-15％甲醇洗脱，得到(3R)-8-[4-(1r,4r)-(4-氨基-2-氟代苯基)环己基]-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(70mg，85.18mol，72％产率)，为浅黄色固体。LCMSm/z(ESI):748.6[M+H]+。
步骤8:在环境温度，氮气氛下向含有(3R)-8-[4-(1r,4r)-(4-氨基-2-氟-苯基)环己基]-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(60mg，80.23μmol)在无水N,N-二甲基甲酰胺(2.0mL)中的充分搅拌的溶液的10mL密封管反应器中加入碳酸氢钠(42mg,499.96μmol,19.44μL)和3-溴哌啶-2,6-二酮(80mg,416.64μmol)。将所得混合物加热至70℃48小时。将反应混合物冷却至室温，并加入水(20mL)。混合物用10％异丙醇/二氯甲烷(3×50mL)提取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，且滤液减压浓缩。通过制备型高效液相色谱(X-SELECT C18(250*19)MM 5微米，10MM ABC:ACN)纯化粗物质，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[4-(1r,4r)-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]环己基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(4.0mg,4.40μmol,5％产率)。为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):859.2[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),8.31(s,1H),7.76(d,J＝8.80Hz,1H),7.64(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.43-7.33(m,1H),7.33(d,J＝2.80Hz,1H),7.28-7.26(m,1H),6.97(t,J＝8.40Hz,1H),6.46-6.42(m,2H),6.03(d,J＝7.60Hz,1H),5.30-5.27(m,1H),4.33-4.29(m,1H),4.21-4.17(m,1H),4.14-4.09(m,1H),3.20-3.05(m,2H),3.01(q,J＝6.80Hz,2H),2.80-2.60(m,10H),2.20-2.18(m,1H),2.14-2.05(m,3H),2.08-1.91(m,2H),1.91-1.72(m,4H),1.73-1.42(m,5H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
磺酰胺合成的一般程序(方法I):
使用(3R)-3-氟代吡咯烷-1-磺酰胺合成磺酰胺的代表性例子描述如下:
步骤1:在室温下，在氮气氛下向(R)-3-氟代吡咯烷盐酸盐(2.0克，15.93毫摩尔)在二氯甲烷(3毫升)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙基胺(3.09克，23.89摩尔，4.16毫升)。在-30℃下加入磺酰氯(5.37克，39.82毫摩尔，3.24毫升)，并在该温度下搅拌混合物2小时。完成后，通过逐滴加入水(5毫升)淬灭反应混合物，用乙酸乙酯(2×50毫升)提取。合并的有机层用1.5N氯化氢溶液(2x 5mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗磺酰氯中间体(2.1g，11.19mmol，70％产率)，其无需进一步纯化即可用于下一步。
步骤2:在0℃下向(3R)-3-氟代吡咯烷-1-磺酰氯(1.8克，9.59毫摩尔)的甲醇(5毫升)溶液中加入氨(7M，甲醇中)(163.38毫克，9.59毫摩尔，10毫升)，于室温下搅拌14小时。反应完成后，混合物减压浓缩，残留物用水(25毫升)稀释，用乙酸乙酯(2×50毫升)提取。有机层用碳酸氢钠溶液(20mL)、盐水(25mL)洗涤，用硫酸钠干燥，减压浓缩，并通过硅胶柱色谱纯化；用pet醚中40％乙酸乙酯洗脱，得到淡黄色液体的(3R)-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺(850mg，5.00mmol，产率52％)。LCMS m/z:169.2[M+H]+。
使用方法I的步骤1/2或步骤2的一般程序合成下列磺酰胺。
磺酰胺合成的一般程序(方法II):
使用3,3-二氟吡咯烷-1-磺酰胺合成磺酰胺的代表性例子描述如下:
步骤1:在0℃向叔丁醇(3.14克，42.39毫摩尔，4.00毫升)和DMAP(7.77克，63.59毫摩尔)在二氯甲烷(20毫升)中的搅拌溶液中滴加N-(氧代亚甲基)氨磺酰氯(3克，21.20毫摩尔，1.84毫升)。将所得混合物在室温下搅拌2小时。完成后，将混合物用水(3×20mL)稀释，用二氯甲烷(3×50mL)提取，用无水硫酸钠干燥，并在减压下蒸发，得到白色固体的粗产物叔丁基N-氯磺酰基氨基甲酸酯(3.5g，16.09mmol，76％产率)。
步骤2:在氮气氛下，在0℃下向3,3-二氟吡咯烷(1.0克，9.34毫摩尔)在二氯甲烷(15毫升)中的搅拌溶液中加入三乙基胺(944.80毫克，9.34毫摩尔，1.30毫升)和叔丁基N-氯磺酰基氨基甲酸酯(2.01克，9.34毫摩尔)。所得反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，反应混合物为水(25毫升)，用乙酸乙酯(2)提取。合并有机相，用盐水洗涤，干燥(无水硫酸钠)，过滤，减压浓缩，得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，使用1-10％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂，得到白色固体的叔丁基N-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)磺酰基氨基甲酸酯(1.5g，5.19mmol，56％产率)。LCMS(ELSD)m/z:285.20[M-H]-。
步骤3:在环境温度和氮气氛下，向叔丁基N-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)磺酰基氨基甲酸酯(1.5g，5.24mmol)在无水1,4-二噁烷(5mL)中的搅拌溶液中加入二噁烷(4.0M，1.31mL)中的4.0M氯化氢。将所得悬浮液在环境温度下搅拌16小时。完成后，将反应混合物在减压下浓缩，得到粗产物，其用pet醚研磨，得到3,3-二氟吡咯烷-1-磺酰胺(0.9g，4.03毫摩尔，77％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z:185.2[M-H]-。
按照方法II的一般程序合成了下列磺酰胺
实施例84
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉
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步骤1:在室温和氮气氛下，向密封管中的2-氯-5-硝基-嘧啶(5g，31.34mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液中加入叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(5.84g，31.34mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(16.20g，125.37mmol，21.84mL)。将反应混合物在110℃下搅拌12小时。反应完成后，将反应混合物倒入冰冷的水中。将所得固体通过Büchner漏斗过滤并在减压下干燥，得到浅棕色固体粗产物4-(5-硝基嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.78g，12.15mmol，39％产率)。LCMS m/z(ESI):254[M+H-tBu]+。
步骤2:在惰性气氛下，在室温下向4-(5-硝基嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.78克，12.22毫摩尔)的乙醇(32毫升)和水(4毫升)溶液中加入铁粉(3.41克，61.10毫摩尔，434.13微升)和氯化铵(1.96克，36.66毫摩尔，1.28毫升)。将所得反应混合物在70℃下搅拌6小时。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土过滤，并用乙酸乙酯(200mL)洗涤。滤液用水(80mL)、饱和碳酸氢钠溶液(60mL)和盐水(60mL)洗涤。有机层经硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗产物，粗产物经硅胶柱色谱纯化，用70％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到棕色固体的4-(5-氨基嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.67g，4.18mmol，34％产率)。LCMS m/z(ESI):280.2[M+H]+。
步骤3:按照环化的一般程序(程序A-A)使用4-(5-氨基嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.4克，5.01毫摩尔)、2-氨基-5-羟基-苯甲酸(767.49毫克，5.01毫摩尔)、原甲酸三乙酯(1.49克，10.02毫摩尔，1.67毫升)和乙酸(3.01毫克，50.12微摩尔，2.67毫升)合成喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，70％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到4-[5-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(260mg，569.68μmol，11％产率)，为淡黄色固体LCMS m/z(ESI):425.2[M+H]+。
步骤4:按照O-芳化的一般程序(程序A-B)使用4-[5-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(280毫克，659.67微摩尔)、碳酸铯(537.34毫克，1.65毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(155.45毫克，989.51微摩尔，114.30微升)合成O-芳化喹唑啉酮中间体。所得粗产物经硅胶快速柱色谱纯化，用60％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到4-[5-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(250mg，431.85μmol，65％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):562.2[M+H]+。
步骤5:使用叔丁基4-[5-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(220mg，391.78μmol)、[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(108.28mg，783.56μmol)和碳酸铯(319.12mg，979.4μmol)，按照程序A-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体。粗化合物用石油醚中75％乙酸乙酯纯化，得到4-[5-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(120mg，155.36μmol，40％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):624.2[M+H-tBu]+。
步骤6:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。对叔丁基4-(5-(6-(2-氰基-3-((N-乙基-N-甲基氨磺酰基)氨基)-6-氟苯氧基)-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸酯(60mg，88.27μmol)、氯化氢溶液(4.0M二噁烷中，20μL)进行N-Boc脱保护，得到(6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(53mg,75.71μmol,86％产率)，为淡棕色固体。LCMS m/z(ESI):580.2[M+H]+。
步骤7:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(43毫克，74.19微摩尔)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(26.96毫克，74.19微摩尔)、HATU(42.31mg,111.28μmol)和N,N-二异丙基乙胺(47.94mg,370.94μmol,64.61μL)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用在0.1％的甲酸水溶液中的64％乙腈洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉(3mg，2.99μmol,4％产率)。为灰白色固体。LCMSm/z(ESI):925.2[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.95(s,1H),8.58(s,2H),8.32(s,1H),7.85(d,J＝8.80Hz,1H),7.73(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.36-7.45(m,1H),7.39(d,J＝2.80Hz,1H),6.95-7.05(m,1H),6.49(d,J＝6.80Hz,1H),6.47(d,J＝12.80Hz,1H),6.08(d,J＝6.00Hz,1H),7.61-7.81(m,1H),4.29-4.38(m,1H),3.84-3.95(m,4H),3.57-3.68(m,4H),3.06-3.17(m,3H),2.64-2.75(m,3H),2.51-2.62(m,3H),2.52(s,3H),2.05-2.15(m,2H),1.72-2.01(m,6H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例85
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:在惰性气氛下，在室温下，向密封管中2-氯-5-硝基-吡啶(5g，31.54毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液中加入叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(5.87g，31.54毫摩尔)和N,N-二异丙基乙基胺(16.30g，126.15毫摩尔，21.97mL)。将反应在110℃下搅拌12小时。完成后，将反应混合物倒入冰冷的水中。将所得固体在Büchner漏斗中过滤并在减压下干燥，得到浅棕色固体粗产物4-(5-硝基-2-吡啶基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.95g，12.63mmol，40％产率)。LCMS m/z(ESI):253.2[M+H-tBu]+。
步骤2:在室温下，向4-(5-硝基-2-吡啶基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.9g，12.65毫摩尔)在乙醇(32毫升)和水(4毫升)的溶液中加入铁粉(3.53g，63.24毫摩尔，449.38微升)和氯化铵(2.03g，37.95毫摩尔，1.33毫升)，所得混合物在70℃下搅拌6小时。完成后，将反应混合物通过硅藻土过滤并用乙酸乙酯(200mL)洗涤。滤液用水(80mL)、碳酸氢钠溶液(60mL)和盐水(60mL)洗涤。所得有机层经硫酸钠干燥并减压浓缩以得到粗产物，粗产物经硅胶柱色谱纯化，用70％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到棕色固体的4-(5-氨基-2-吡啶基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.4g，11.85mmol，94％产率)。LCMS m/z(ESI):279[M+H]+。
步骤3:按照环化的一般程序(程序A-A)使用4-(5-氨基-2-吡啶基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2克，7.19毫摩尔)、原甲酸三乙酯(2.13克，14.37毫摩尔，2.39毫升)、乙酸(4.31毫克，71.85微摩尔，4.11微升)合成喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用40％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到4-[5-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-2-吡啶基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(460mg，1.05毫摩尔，15％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):424.2[M+H]+。
步骤4:使用4-[5-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-2-吡啶基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(514毫克，1.21毫摩尔)、碳酸铯(988.70毫克，3.03毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(286.01毫克，1.82毫摩尔，210.30微升)按照O-芳化的一般程序(程序A-B)合成O-芳化的喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用60％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到4-[5-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-2-吡啶基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(460mg，796.00μmol，66％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):505.2[M+H-tBu]+。
步骤5:使用叔丁基4-[5-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-2-吡啶基]哌嗪-1-羧酸酯(460mg，820.62μmol)、[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(226.80mg，1.64mmol)、碳酸铯(668.44mg，2.05mmol)按照程序A-C合成氨磺酰基化的喹唑啉酮中间体。粗化合物用石油醚中75％乙酸乙酯纯化，得到4-[5-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-2-吡啶基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(110mg，115.07μmol，14％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):677.2[M-H]-。
步骤6:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。在叔丁基4-[5-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-2-吡啶基]哌嗪-1-羧酸酯(110mg，162.07μmol)和氯化氢溶液(4.0M二噁烷中，40μL)上进行N-Boc脱保护，得到粗(6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)喹唑啉(105mg,124.62μmol,77％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):579.0[M+H]+。
步骤7:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)喹唑啉(42.93mg，74.19μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟代-苯基]-1-哌啶基]乙酸(26.96mg，74.19μmol)、HATU(42.31mg,111.28μmol)和N,N-二异丙基乙胺(47.94mg,370.94μmol,64.61μL)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％的甲酸水溶液中70％乙腈洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]-4-氧代-喹唑啉甲酸盐(12mg,11.65μmol,16％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):924.2[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),8.28(s,1H),8.25(s,1H),7.83(d,J＝9.20Hz,1H),7.71(d,J＝8.00Hz,1H),7.75(d,J＝9.20Hz,1H),7.53-7.68(m,1H),7.39(s,1H),7.32-7.39(m,1H),7.03(d,J＝8.80Hz,1H),6.96-7.04(m,1H),6.48(d,J＝6.40Hz,1H),6.46(d,J＝12.80Hz,1H),6.07(d,J＝6.00Hz,1H),4.28-4.36(m,1H),4.11(q,J＝4.40Hz,1H),3.61-3.75(m,8H),3.17(d,J＝5.20Hz,2H),3.02-3.12(m,2H),2.61-2.80(m,4H),2.51(s,3H),2.04-2.12(m,2H),1.71-1.95(m,6H),1.02(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例86
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-氟-4-氧代喹唑啉
步骤1:在室温和氮气氛下，将哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5.84克，31.34毫摩尔)和N,N-二异丙基乙基胺(16.20克，125.37毫摩尔，21.84毫升)加入2-氯-5-硝基-嘧啶(5克，31.34毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)中充分搅拌的溶液中。将反应在110℃下搅拌12小时。反应完成后，将反应混合物倒入冰冷的水中。过滤出沉淀并在减压下干燥，得到浅棕色固体的4-(5-硝基嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.78g，12.15毫摩尔，产率39％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝9.14(s,2H),3.92(t,J＝7.20Hz,4H),3.46(t,J＝6.80Hz,4H),1.43(s,9H)。
步骤2:在惰性气氛下，在室温下向4-(5-硝基嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.78克，12.22毫摩尔)的乙醇(32毫升)、水(4毫升)中的溶液中加入铁粉(3.41克，61.10毫摩尔，434.13微升)、氯化铵(1.96克，36.66毫摩尔，1.28毫升)。将反应混合物在70℃下搅拌6小时。完成后，反应混合物通过硅藻土过滤，并用乙酸乙酯(200mL)洗涤。滤液用水(80mL)、碳酸氢钠溶液(60mL)和盐水(60mL)洗涤。有机层经硫酸钠干燥并减压浓缩得到粗产物，粗产物经硅胶柱色谱纯化，用70％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到棕色固体的4-(5-氨基嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.67g，4.18mmol，34％产率)。LCMS m/z(ESI):280.2[M+H]+。
步骤3:按照环化的一般程序(程序A-A)使用4-(5-氨基嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.04克，3.73毫摩尔)、6-氨基-2-氟-3-羟基苯甲酸(0.58克，3.39毫摩尔)和原甲酸三乙酯(753.44毫克，5.08毫摩尔，845.62微升)合成喹唑啉酮中间体，得到4-[5-(5-氟-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(0.950g,1.30mmol,38％产率)，为棕色固体。LCMS m/z(ESI-):441.2[M-H]-。
步骤4:按照O-芳化的一般程序(程序A-B)使用4-[5-(5-氟-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(0.9克，2.03毫摩尔)、碳酸铯(1.99克，6.10毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(319.55毫克，2.03毫摩尔)合成O-芳化的喹唑啉酮中间体。使用80-90％乙酸乙酯(在石油醚中)作为洗脱剂，通过柱色谱从粗产物中纯化所需产物，得到浅棕色液体的4-[5-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.210g，362.36mol，18％产率)。LCMS m/z(ESI):524.3[M+H-56]+。
步骤5:使用叔丁基4-[5-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(0.21克，362.36微摩尔)、碳酸铯(295.16毫克，905.91微摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(75.11毫克，543.54微摩尔)，按照程序A-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体，得到4-[5-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.14g,162.59μmol,45％产率)，为棕色固体。LCMS m/z(ESI):696.0[M-H]-。
步骤6:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。使用氯化氢溶液(4M在1,4-二噁烷中，40μL)对4-[5-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.12g，171.99μmol)进行N-叔丁氧基氨基甲酸酯脱保护，得到粗6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-氟-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基]喹唑啉盐酸盐(0.12g,169.57μmol,99％产率)，为黄色固体。LCMS m/z(ESI):598.0[M+H]+。
步骤7:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(87.56毫克，240.97微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(129.76毫克，1.00毫摩尔，174.88微升)、HATU(83.99毫克，220.89微摩尔)和6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-氟-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基]喹唑啉(0.12g,200.80μmol)进行酰胺偶联。通过反相柱色谱(0.1％甲酸在水中:乙腈)从粗产物中纯化所需产物，并将级分冻干，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉(18.26mg,18.95μmol,9％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):943.0[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.79(s,1H),9.86(s,1H),8.58(d,J＝5.60Hz,2H),8.31(s,1H),7.57(s,2H),7.45-7.56(m,1H),7.31(d,J＝4.80Hz,1H),7.01(t,J＝7.60Hz,1H),6.49(d,J＝7.20Hz,1H),6.46(d,J＝12.00Hz,1H),6.06(d,J＝7.60Hz,1H),4.28-4.38(m,1H),3.82-3.98(m,4H),3.58-3.70(m,4H),3.15-3.40(m,4H),3.02-3.11(m,2H),2.60-2.82(m,3H),2.66(s,3H),2.48-2.60(m,2H),2.02-2.15(m,1H),1.69-1.91(m,5H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例87
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟-6-甲氧基苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)喹唑啉(85mg，146.90μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-6-甲氧基-苯基]-1-哌啶基]乙酸(57.79mg，146.90μmol)、N,N-二异丙基乙胺(75.94mg,587.61μmol,102.35μL)和HATU(55.86mg,146.90μmol)进行酰胺偶联，以得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟-6-甲氧基苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-基]-4-氧代喹唑啉(33mg,34.56μmol,24％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):954.0[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.83(s,1H),8.28(s,1H),8.25(d,J＝2.80Hz,3H),7.83(d,J＝8.80Hz,1H),7.75(dd,J＝2.40,9.00Hz,1H),7.70(dd,J＝2.80,9.00Hz,1H),7.57(s,1H),7.39(d,J＝2.80Hz,1H),7.35(s,1H),7.03(d,J＝9.20Hz,1H),6.18-6.05(m,2H),4.45(t,J＝20.00Hz,1H),3.72(s,3H),3.71-3.68(m,3H),3.64-3.61(m,6H),3.07-3.02(m,3H),2.74-2.70(m,1H),2.68(q,J＝2.00Hz,2H),2.60-2.59(m,1H),2.34-2.33(m,2H),2.09-2.06(m,2H),1.60-1.58(m,2H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例88
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟-5-甲氧基苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(100mg，172.53μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-1-哌啶基]乙酸(67.88mg，172.53μmol)、N,N-二异丙基乙胺(89.19mg,690.13μmol,120.21μL)和HATU(65.60mg,172.53μmol)进行酰胺偶联，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉(35mg,36.31μmol,21％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):955.0[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.87(s,1H),9.84(s,1H),8.57(s,2H),8.30(s,1H),7.82(d,J＝8.80Hz,1H),7.68(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.40(s,1H),7.37(d,J＝2.80Hz,1H),7.27(s,1H),6.70(d,J＝6.80Hz,1H),6.49(d,J＝12.80Hz,1H),5.33-5.32(m,1H),4.31(q,J＝6.40Hz,1H),3.93-3.86(m,2H),3.85-3.79(m,2H),3.81(s,3H),3.68-3.59(m,5H),3.08-3.01(m,2H),2.82-2.76(m,2H),2.68-2.61(m,5H),2.13-2.11(m,2H),1.96-1.92(m,4H),1.77-1.76(m,2H),1.02(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例89
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟代-6-甲氧基苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:在-10℃和氮气氛下，向3-氟-5-甲氧基苯胺(2克，14.17毫摩尔)的乙腈(20毫升)溶液中加入1-溴吡咯烷-2,5-二酮(2.52克，14.17毫摩尔，1.20毫升)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。用水(70mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2x75 mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩得到粗化合物。所得粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用70％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到4-溴-3-氟-5-甲氧基苯胺(2.2克，9.88毫摩尔，70％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):220.0[M+H]+。
步骤2:向4-溴-3-氟-5-甲氧基苯胺(2.2克，10.00毫摩尔)在1,4-二噁烷(20毫升)中的搅拌溶液中加入4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(3.71克，12.00毫摩尔)、碳酸铯(9.77克，29.99毫摩尔)和Pd(dppf)Cl2.二氯甲烷(816.49mg,999.82μmol)。将反应混合物在120℃下搅拌16小时。用水(30mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2x 40mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。所得粗产物经硅胶快速柱色谱纯化，用30-45％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到4-(4-氨基-2-氟-6-甲氧基-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(3.0克，8.79毫摩尔，88％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):223.2[M+H-CO2 tBu]+。
步骤3:在N2气氛下，向4-(4-氨基-2-氟-6-甲氧基-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(3克，9.31毫摩尔)在1,4-二噁烷(30毫升)中的脱气溶液中加入氢氧化钯(II)(20％木炭上，湿，1.31克，9.31毫摩尔)。将所得混合物在室温下于H2球囊压力下搅拌14小时。将反应混合物通过硅藻土过滤，并将滤液减压浓缩，得到4-(4-氨基-2-氟-6-甲氧基-苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.8克，8.29毫摩尔，89％产率)，为淡黄色固体。LCMS m/z(ESI):225.2[M+H-CO2 tBu]+。
步骤4:将4-(4-氨基-2-氟-6-甲氧基-苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(500毫克，1.54毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(10毫升)中的溶液置于密封管中，并在室温下加入碳酸氢钠(453.19毫克，5.39毫摩尔，209.81微升)、3-溴哌啶-2,6-二酮(739.89毫克，3.85毫摩尔)。将反应混合物在70℃下搅拌14小时。用水(20mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(60mL)提取。有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用60％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-6-甲氧基-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(520mg，1.15mmol，74％产率)，为淡绿色固体。LCMS m/z(ESI):380.5[M+H-tBu]+。
步骤5:向叔丁基4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-6-甲氧基-苯基]哌啶-1-羧酸酯(520毫克，1.19毫摩尔)在1,4-二噁烷(5毫升)中的溶液中，在0℃加入氯化氢溶液(4M在二噁烷中，6毫升)，并在室温下搅拌2小时。反应完成后，反应混合物在减压下浓缩，得到3-[3-氟-5-甲氧基-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(410mg,1.03mmol,86％产率)。为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):336.2[M+H]+。
步骤6:于0℃向3-[3-氟-5-甲氧基-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮(470毫克，1.40毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(3毫升)中的溶液中加入三乙胺(567.24毫克，5.61毫摩尔，781.33微升)、2-溴乙酸叔丁酯(273.35毫克，1.40毫摩尔，205.53微升)，并在室温下搅拌14小时。反应完成后，将反应混合物用水(15mL)稀释并用乙酸乙酯(40mL)萃取。有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩得到粗化合物，其用30-45％乙酸乙酯/石油醚洗脱，通过硅胶快速柱色谱纯化，得到2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-6-甲氧基-苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(250mg，546.03μmol，39％产率)，为淡绿色固体。LCMS m/z(ESI):450.2[M+H]+。
步骤7:在氮气氛下，于5℃向2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-6-甲氧基-苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(250mg，556.16μmol)在二氯甲烷(5mL)中的搅拌溶液中加入二噁烷中的氯化氢溶液(4M在1,4-二噁烷中，4mL)。反应混合物在室温下搅拌12小时。反应完成后，反应混合物在减压下浓缩，得到粗2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-6-甲氧基-苯基]-1-哌啶基]乙酸(140mg，299.63μmol，54％产率)。LCMS m/z(ESI):394.7[M+H]+。
步骤8:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(90mg，155.28μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-6-甲氧基-苯基]-1-哌啶基]乙酸(61.09mg，155.28μmol)、N,N-二异丙基乙胺(100.34mg,776.39μmol,135.23μL)和HATU(64.95mg,170.81μmol)进行酰胺偶联，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟代-6-甲氧基苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉(17.99mg,18.72μmol,12％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):955.0[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),9.86(s,1H),8.58(s,2H),8.31(s,1H),7.83(d,J＝8.80Hz,1H),7.70(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.52-7.31(m,2H),7.38(d,J＝2.80Hz,1H),6.17(s,1H),6.06(d,J＝13.60Hz,2H),4.37-4.29(m,1H),3.91-3.83(m,4H),3.73(s,3H),3.69-3.58(m,4H),3.14-2.93(m,4H),2.76-2.67(m,1H),2.63-2.56(m,6H),2.10-2.07(m,4H),1.89-1.84(m,2H),1.82-1.56(m,2H),1.02(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例90
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟-5-甲氧基苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-1-哌啶基]乙酸(82.27毫克，209.12微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(245.70毫克，1.90毫摩尔，331.13微升)、HATU(79.51毫克，209.12微摩尔)和6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)喹唑啉(0.11g,190.11μmol)进行酰胺偶联。通过反相柱色谱(水中0.1％乙酸铵:乙腈)从粗产物中纯化所需产物，并将级分冻干，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]-4-氧代-喹唑啉(25.78mg,26.53μmol,14％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):954.2[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.86(s,1H),8.26(s,1H),8.24(d,J＝2.80Hz,1H),7.81(d,J＝8.80Hz,1H),7.74(dd,J＝2.40,9.00Hz,1H),7.66(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.38(d,J＝2.80Hz,1H),7.30-7.41(m,1H),7.22-7.28(m,1H),7.02(d,J＝8.80Hz,1H),6.70(d,J＝7.20Hz,1H),6.49(d,J＝12.80Hz,1H),5.29(d,J＝6.40Hz,1H),4.25-4.35(m,1H),3.80(s,3H),3.65-3.75(m,4H),3.58-3.65(m,4H),3.22-3.41(m,2H),2.93-3.10(m,4H),2.70-2.85(m,1H),2.67(s,3H),2.41-2.65(m,2H),2.05-2.31(m,2H),1.85-2.01(m,2H),1.60-1.85(m,4H),1.02(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例91
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]-3-羟基丙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:在氮气气氛下，于-4℃向2-氨基-3-苄氧基丙酸(3克，15.37毫摩尔)和溴化钾(6.40克，53.79毫摩尔，2.33毫升)在冰冷水(15毫升)中的搅拌溶液中逐滴加入亚硝酸钠(1.59克，23.05毫摩尔，732.93微升)在水(15毫升)中的溶液。将反应混合物在0℃下搅拌约45分钟，然后在室温下搅拌1小时。完成后，用水(50mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3x50 mL)提取。有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗产物。通过硅胶快速柱色谱纯化粗化合物，同时用pet醚中30-45％乙酸乙酯洗脱所需化合物，得到棕色粘性的3-苄氧基-2-溴丙酸(2.3g，8.43毫摩尔，55％产率)。LCMS m/z(ESI):259.20[M-H]-。
步骤2:在0℃向3-苄氧基-2-溴代丙酸(1.8克，6.95毫摩尔)在甲醇(10毫升)中的搅拌溶液中加入亚硫酰氯(826.51毫克，6.95毫摩尔，516.57微升)。将反应混合物在室温、氮气氛下搅拌14小时。反应完成后，将反应混合物用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，化合物用pet醚中30-45％乙酸乙酯洗脱，得到棕色固体的3-苄氧基-2-溴代丙酸甲酯(1.8克，6.46毫摩尔，93％产率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝7.37-7.30(m,5H),4.76(t,J＝8.00Hz,1H),4.56(s,2H),3.89(dd,J＝9.60,14.20Hz,1H),3.77(dd,J＝8.00,14.00Hz,1H),3.72(s,3H)。
步骤3:在氮气氛下，于0℃向3-苄氧基-2-溴代丙酸甲酯(1.6克，5.86毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(10毫升)中的搅拌溶液中加入三乙胺(1.78克，17.57毫摩尔，2.45毫升)。加入4-(2-氟-4-硝基苯基)-1,2,3,6-四氢吡啶(1.30克，5.86毫摩尔)，在室温下搅拌14小时。反应完成后，用水(15毫升)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(3x15毫升)提取。有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，化合物用pet醚中30-45％乙酸乙酯洗脱，得到黄色固体的3-苄氧基-2-[4-(2-氟-4-硝基苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-基]丙酸甲酯(2.0g，4.78mmol，82％产率)。LCMS m/z(ESI):415.6[M+H]+。
步骤4:在室温和氮气氛下向3-苄氧基-2-[4-(2-氟-4-硝基苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-基]丙酸甲酯(1.00克，2.41毫摩尔)在甲醇(15毫升)中的搅拌溶液中加入氢氧化钯(20重量％碳上，湿，677.73毫克，4.83毫摩尔)。将所得悬浮液在氢气氛球囊下于室温下搅拌16小时。完成后，将反应混合物通过硅藻土床过滤，并用甲醇(50mL)洗涤硅藻土床。合并的滤液在减压下浓缩，得到粗产物2-[4-(4-氨基-2-氟-苯基)-1-哌啶基]-3-羟基丙酸甲酯(300mg，347.24μmol，14％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):297.2[M+H]+。
步骤5:在室温和氮气氛下，向2-[4-(4-氨基-2-氟-苯基)-1-哌啶基]-3-羟基-丙酸甲酯(500毫克，1.69毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)中的搅拌溶液中加入碳酸氢钠(566.99毫克，6.75毫摩尔)和3-溴哌啶-2,6-二酮(971.92毫克，5.06毫摩尔)。反应完成后，用水(20mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(3x30 mL)提取。有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，该粗产物通过C18反相柱色谱纯化(30gRf C18，方法:10mM乙酸铵水溶液:乙腈)，并将纯级分冻干，得到2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-3-羟基丙酸甲酯(450mg，1.05mmol，62％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):406.00[M-H]-。
步骤6:在氮气氛下，于0℃向2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-3-羟基-丙酸甲酯(400mg，981.75μmol)在二氯乙烷(4mL)中的搅拌溶液中加入三甲基氢氧化锡(177.52mg，981.75μmol)。将反应混合物在80℃下搅拌12小时。反应完成后，将反应混合物减压浓缩得到粗产物，并通过C18反相柱色谱(30gRf C18，方法:10mM乙酸铵水溶液:乙腈)进行纯化。将纯级分冻干，得到2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-3-羟基丙酸(150mg，205.89μmol，21％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):392.20[M-H]-。
步骤7:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-3-羟基-丙酸(50mg，127.09μmol)、6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(71.18mg，115.54μmol)、N,N-二异丙基乙胺(74.66mg,577.70μmol,100.62μL)和HATU(52.72mg,138.65μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中43％乙腈洗脱，得到产物6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-3-羟基丙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉(6.13mg,6.07μmol,5％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):955.20[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝12.75(s,1H),10.79(s,1H),10.20(s,1H),8.57(s,2H),8.31(s,1H),7.83(d,J＝8.80Hz,1H),7.70(d,J＝10.00Hz,1H),7.39(d,J＝2.80Hz,1H),7.32-7.30(m,1H),6.97(t,J＝8.80Hz,1H),6.53(s,1H),6.46-6.42(m,2H),6.00(d,J＝6.80Hz,1H),4.49(s,1H),4.31-4.29(m,1H),4.07-3.99(m,2H),3.81-3.76(m,6H),3.65-3.62(m,2H),3.50(m,1H),3.10(s,3H),2.98(m,1H),2.68-2.61(m,1H),2.67-2.59(m,4H),2.50-2.35(m,2H),2.10-2.06(m,1H),1.88-1.84(m,1H),1.50-1.70(m,5H)1.02(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例92
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(300mg，486.96μmol)、2-[4-[4-[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(292.06mg，730.44μmol)、N,N-二异丙基乙胺(1.11g,8.61mmol,1.5mL)和HATU(222.19mg,584.35μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中45％的乙腈洗脱，得到产物6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉(132mg,137.14μmol,28％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):925.25[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),9.93(bs,1H),8.62(s,2H),8.35(s,1H),7.84(dd,J＝5.20,9.20Hz,1H),7.71(dd,J＝3.20,8.80Hz,1H),7.59(s,1H),7.53-7.38(m,2H),7.00-6.98(m,1H),6.49-6.44(m,2H),6.06(d,J＝7.60Hz,1H),4.35-4.25(m,1H),3.95-3.75(m,4H),3.65-3.55(m,4H),3.25-3.15(m,2H),3.10-3.00(m,2H),2.80-2.70(m,2H),2.68(s,3H),2.62-2.55(m,2H),2.45-2.35(m,1H),2.10-2.06(m,2H),1.91-1.89(m,1H),1.88-1.76(m,5H),1.02(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例93
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[6-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)喹唑啉(280mg，483.91μmol)、2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟代-苯基]-1-哌啶基]乙酸(175.85mg，483.91μmol)、N,N-二异丙基乙胺(250.17mg,1.94mmol,337.16μL)和HATU(184.00mg,483.91μmol)进行酰胺偶联以得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[6-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-基]-4-氧代喹唑啉(95mg,100.79μmol,21％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):924.0[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),8.26(s,1H),8.24(d,J＝2.80Hz,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.73(dd,J＝2.40,9.00Hz,1H),7.65(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.37(d,J＝2.80Hz,1H),7.29(t,J＝10.00Hz,1H),7.21(dd,J＝4.40,9.60Hz,1H),7.03-6.98(m,2H),6.46-6.45(m,2H),6.01(dd,J＝16.00,Hz,1H),4.34-4.28(m,1H),3.72-3.66(m,4H),3.59(s,4H),3.22(s,2H),2.98-2.92(m,4H),2.76-2.70(m,1H),2.69-2.67(m,1H),2.62-2.53(m,2H),2.34-2.33(m,4H),2.10-2.06(m,6H),1.88-1.65(m,4H),1.01(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例94
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[6-[4-[2-[4-[4-[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:在氮气氛下，于5℃向4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.2克，2.96毫摩尔)在二氯甲烷(20毫升)中的搅拌溶液中加入氯化氢溶液(4M在1,4-二噁烷中，15毫升)。反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，将反应混合物减压浓缩，得到灰白色固体的粗产物(3S)-3-[3-氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(1.2克，3.48毫摩尔)。LCMS m/z(ESI):306.2[M+H]+。
步骤2:在室温和氮气氛下，向(3S)-3-[3-氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮(1.2克，3.93毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(15毫升)和三乙胺(1.99克，19.65毫摩尔，2.74毫升)中的搅拌溶液中加入2-溴乙酸叔丁酯(1.15克，5.89毫摩尔，864.53微升)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，将反应混合物倒入冰水(50mL)中，立即用乙酸乙酯(3x70 mL)提取。合并的有机层用冷水(3x30 mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.4g，3.34mmol，85％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):420.2[M+H]+。
步骤3:在氮气氛下，于5℃向2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.4g，3.34mmol)在二氯甲烷(30mL)中的搅拌溶液中加入氯化氢溶液(4M在1,4-二噁烷中，15mL)。反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，在减压下浓缩反应混合物，得到棕色固体的粗2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(1.3g，3.20毫摩尔，96％产率)。LCMS m/z(ESI):364.2[M+H]+。
步骤4:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(259.95毫克，650.12微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(840.50毫克，6.50毫摩尔，1.13毫升)、HATU(272.00毫克，715.36微摩尔)进行酰胺偶联和加入6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶)喹唑啉(0.4g,650.32μmol)。通过反相柱色谱(水中10mM乙酸铵:乙腈)从粗产物中纯化所需产物，并将级分冻干，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[6-[4-[2-[4-[4-[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]-4-氧代-喹唑啉(122mg,127.07μmol,20％产率)，为淡绿色固体。LCMS m/z(ESI):924.2[M+H]+和1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),8.26(d,J＝10.00Hz,2H),8.04(d,J＝161.60Hz,1H),7.82-7.69(m,2H),7.39(s,1H),7.02(d,J＝7.20Hz,2H),6.47(t,J＝12.00Hz,2H),6.06(d,J＝8.00Hz,1H),4.35-4.29(m,1H),3.68-3.63(m,10H),3.05(d,J＝6.80Hz,2H),2.85-2.70(m,1H),2.68-2.65(m,4H),2.11-2.06(m,1H),1.95-1.68(m,5H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例95
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(300mg，517.59μmol)、6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(300mg,517.59μmol)、2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(188.08mg,517.59μmol)、N,N-二异丙基乙胺(334.47mg,2.59mmol,450.77μL)和HATU(216.49mg,569.35μmol)进行酰胺偶联以得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉(80mg,81.44μmol,16％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):925.2[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),9.85(s,1H),8.57(s,2H),8.31(s,1H),7.83(d,J＝8.80Hz,1H),7.69(dd,J＝6.00,8.80Hz,1H),7.50(s,1H),7.38(d,J＝2.80Hz,1H),7.31(s,1H),7.02-6.98(m,1H),6.48-6.44(m,2H),6.06(d,J＝7.20Hz,1H),4.33-4.30(m,1H),3.90-3.83(m,4H),3.68-3.59(m,4H),3.17(m,1H),3.03-2.91(m,3H),2.77-2.71(m,2H),2.61-2.59(m,6H),2.09-2.06(m,1H),1.89-1.75(m,4H),1.02(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例96
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺
步骤1:使用4-[5-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(450mg，801.37μmol)、碳酸铯(261.10mg，801.37μmol)和(3R)-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺(144.43mg，801.37μmol)使用程序A-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体，得到4-[5-[6-[2-氰基-6-氟-3-[[(3R)-3-甲氧基吡咯烷-1-基]磺酰氨基]苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(400mg,509.87μmol,64％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):666.7[M+H-tBu]+。
步骤2:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。使用氯化氢溶液(4M在1,4-二噁烷中，4mL)对4-[5-[6-[2-氰基-6-氟-3-[[(3R)-3-甲氧基吡咯烷-1-基]磺酰氨基]苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(420mg，581.91μmol)进行N-Boc脱保护，得到(3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-[4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉-6-基]氧基-苯基]-3-甲氧基-吡咯烷-1-磺酰胺(380mg,551.03μmol,95％产率)，为淡棕色固体。LCMS m/z(ESI):622.3[M+H]+。
步骤3:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用(3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-[4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉-6-基]氧基-苯基]-3-甲氧基-吡咯烷-1-磺酰胺盐酸盐(120mg，182.34μmol)、2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(66.26mg,165.71μmol)、N,N-二异丙基乙胺(94.27mg,729.37μmol,127.04μL)和HATU(69.33mg,182.34μmol)进行酰胺偶联以得到(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺(35mg,34.54μmol,19％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):967.0[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),10.23(bs,1H),8.59(s,2H),8.33(s,1H),7.84(dd,J＝8.80,14.40Hz,1H),7.82-7.80(m,1H),7.75(dd,J＝3.20,8.80Hz,1H),7.52(dd,J＝4.00,8.80Hz,1H),7.43(d,J＝2.80Hz,1H),6.97(d,J＝6.40Hz,1H),6.52-6.46(m,3H),6.12(d,J＝8.00Hz,1H),4.34-4.32(m,1H),3.97-3.93(m,6H),3.67-3.63(m,2H),3.59-3.51(m,4H),3.29-3.25(m,2H),3.18(s,3H),3.15-3.05(m,1H),2.97-2.85(m,1H),2.75-2.67(m,1H),2.11-1.82(m,8H)。
实施例97
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用(3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-[4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉-6-基]氧基-苯基]-3-甲氧基-吡咯烷-1-磺酰胺盐酸盐(130毫克，197.54微摩尔)、2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]乙酸(71.78mg,179.52μmol)、N,N-二异丙基乙胺(102.12mg,790.15μmol,137.63μL)和HATU(75.11mg,197.54μmol)进行酰胺偶联，得到(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺(43mg,42.32μmol,21％产率)，为原灰白色固体。LCMS m/z(ESI):967.0[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),10.19(bs,1H),9.59(bs,1H),8.59(s,2H),8.33(s,1H),7.84-7.76(m,2H),7.74(dd,J＝2.80,9.00Hz,1H),7.51-7.43(m,1H),7.42(d,J＝2.80Hz,1H),6.97(d,J＝8.40Hz,1H),6.51-6.46(m,2H),6.11(d,J＝8.00Hz,1H),4.34-4.30(m,2H),3.95-3.85(m,5H),3.71-3.65(m,2H),3.59-3.48(m,3H),3.28-3.26(m,2H),3.18(s,3H),2.92-2.83(m,1H),2.79-2.71(m,1H),2.61-2.60(m,1H),2.12-1.82(m,9H)。
实施例98
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[(2S)-2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]-3-羟基丙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:向(2R)-2-氨基-3-苄氧基-丙酸(7克，35.86毫摩尔)在三氟乙酸水溶液(0.7M，51.23毫升)中的搅拌溶液中加入在0℃下溶于水(50毫升)的亚硝酸钠(3.71克，53.79毫摩尔，1.71毫升)。将所得反应混合物在室温下搅拌5小时。反应完成后，向反应混合物中加入氯化钠，用乙酸乙酯提取，合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到(2R)-3-苄氧基-2-羟基丙酸(6克，28.13毫摩尔，78％产率)，为无色液体，其原样用于下一步。LCMS m/z(ESI):195.2[M-H]-。
步骤2:在氮气氛下，于0℃向(2R)-3-苄氧基-2-羟基丙酸(6克，30.58毫摩尔)在甲苯(70毫升)中的搅拌溶液中加入苯甲醇(16.53克，152.91毫摩尔，15.75毫升)和p-TSA(526.61毫克，3.06毫摩尔)。将所得反应混合物在110℃下搅拌16小时。完成后，用水稀释反应混合物，并用二氯甲烷提取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩得到粗产物。通过反相C-18色谱(水中0.1％乙酸铵和乙腈)纯化粗产物，减压浓缩纯级分，得到无色液体的(2R)-3-苄氧基-2-羟基丙酸苄酯(5.8克，16.21毫摩尔，53％产率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝7.27-7.39(m,10H),5.69(d,J＝6.40Hz,1H),5.16(d,J＝5.20Hz,2H),4.52(t,J＝5.60Hz,2H),4.31-4.35(m,1H),3.63-3.70(m,2H)。
步骤3和步骤4:在惰性气氛下于0℃向(2R)-3-苄氧基-2-羟基丙酸苄酯(562.62毫克，1.96毫摩尔)在甲苯(3毫升)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙基胺(253.96毫克，1.96毫摩尔，342.26微升)，随后滴加三氟甲磺酸酐(554.40毫克，1.96毫摩尔，330.00微升)。将反应混合物缓慢升温至室温1小时。在单独的反应容器中，(3S)-3-[3-氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮(0.3克，982.49微摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(3毫升)中的搅拌溶液加入N,N-二异丙基乙胺(253.96毫克，1.96毫摩尔，342.26微升)和在氮气气氛下于0℃滴加上述制备的甲苯中的溶液。将反应混合物缓慢升温至室温，并继续反应12小时。用水(10ml)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2x50 mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用80％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到棕黄色半固体的(2S)-3-苄氧基-2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]丙酸苄酯(0.22g，366.13mol，37％产率)。LCMS m/z(ESI):574.2[M+H]+。
步骤5:将碳上氢氧化钯(0.22g，383.51μmol)加入到含有充分搅拌的二噁烷(4mL)中(2S)-3-苄氧基-2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]丙酸苄酯(220.00mg，383.51μmol)溶液的50mL RB烧瓶中，将反应物在氢气囊压力下氢化16小时。反应混合物通过硅藻土垫过滤，用5％甲醇/二氯甲烷(50mL)洗涤。将滤液减压浓缩，得到半固体的(2S)-2-[4-[4-[[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-3-羟基丙酸(75mg，160.58μmol，42％产率)。LCMS m/z(ESI):394.5[M+H]+。
步骤6:向(2S)-2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟代-苯基]-1-哌啶基]-3-羟基丙酸(31.93毫克，81.16微摩尔)、6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(50mg,81.16μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的搅拌溶液中加入1-丙烷膦酸酐溶液(619.76ug，97.39μmol，50％纯度)和N,N-二异丙基乙胺(52.45mg，405.80μmol，70.68μL)并在室温下搅拌3小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩至其体积的一半，其通过使用30g C18柱的反相柱色谱进行纯化，用0.1％的甲酸水溶液中35％的乙腈洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[(2S)-2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-3-羟基丙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉(26mg,25.21μmol,31％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):955.0[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.78(s,1H),10.00(s,1H),8.57(s,2H),8.32(s,1H),7.85(d,J＝8.80Hz,1H),7.74(dd,J＝3.20,8.80Hz,2H),7.55-7.30(m,2H),7.05-6.85(m,1H),6.55-6.35(m,2H),6.03(s,1H),4.32-4.30(m,1H),4.10-3.95(m,2H),3.88-3.78(m,4H),3.75-3.58(m,4H),3.13-3.11(m,4H),2.74-2.67(m,4H),2.62-2.58(m,1H),2.57-2.55(m,3H),2.15-2.05(m,1H),1.89-1.85(m,2H),1.80-1.65(m,3H),1.58-1.45(m,2H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例99
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-甲氧基-4-氧代喹唑啉
步骤1:在氮气氛下，向4-[5-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(950毫克，2.24毫摩尔)在二氯甲烷(30毫升)中的搅拌溶液中加入N-溴代琥珀酰亚胺，99％(398.36毫克，2.24毫摩尔，189.70微升)。反应混合物在0℃搅拌30分钟。完成后，用水(50ml)淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯(2x100 ml)提取。合并有机相，用盐水洗涤，干燥(无水硫酸钠)，过滤，减压浓缩得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，使用70-80％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到黄色固体的4-[5-(5-溴-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.0克，1.89毫摩尔，84％产率)。LCMS(ES+):m/z447.0，449.0[M+H-tBu]，溴同位素模式。
步骤2:在室温，氮气氛下向4-[5-(5-溴-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(400毫克，794.68微摩尔)和溴化铜(I)(57.00毫克，397.34微摩尔，12.10微升)在无水甲醇(5毫升)和N,N-二甲基甲酰胺(7毫升)中的搅拌溶液中加入甲醇钠(257.59毫克，4.77毫升，265.83微升)。反应混合物在微波条件下于130℃搅拌2小时。反应完成后，反应混合物用饱和氯化铵溶液(10mL)淬灭，用乙酸乙酯(3×30mL)提取。合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸发得到粗产物，该粗产物使用硅胶快速柱色谱纯化，使用pet醚中80-90％乙酸乙酯作为洗脱剂，得到棕色固体的4-[5-(6-羟基-5-甲氧基-4-氧代-喹唑啉-3-基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(300mg，547.88μmol，69％产率)。LCMS(ES+):m/z计算值455.20[M+H]+(Br-同位素模式)。
步骤3:通过使用叔丁基4-[5-(6-羟基-5-甲氧基-4-氧代-喹唑啉-3-基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(50毫克，110.02微摩尔)、碳酸铯(107.54毫克，330.05微摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(22.47毫克，143.02微摩尔，16.52微升)按照O-芳化的一般程序(程序A-B)合成O-芳化的喹唑啉酮中间体。通过使用60％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂的硅胶快速柱色谱从粗产物中纯化所需化合物，得到淡黄色固体的4-[5-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-甲氧基-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(40mg，64.91μmol，59％产率)。LCMS m/z(ESI):592.2[M+H]+。
步骤4:使用叔丁基4-[5-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-甲氧基-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(0.9克，1.52毫摩尔)、碳酸铯(1.49克，4.56毫摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(525.60毫克，3.80毫摩尔)按照程序A-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体。通过使用55％乙酸乙酯(在石油醚中)作为洗脱剂的硅胶快速柱色谱从粗产物中纯化所需化合物，得到4-[5-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-甲氧基-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(370mg，469.18μmol，31％产率)，为棕色粘性液体。LCMS m/z(ESI):708.0[M-H]-
步骤5:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。使用氯化氢溶液(4M在1,4-二噁烷中，1mL)对4-[5-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-甲氧基-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(250mg，352.24μmol)进行N-Boc脱保护，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-甲氧基-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(215mg,272.21μmol,77％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):610.2[M+H]+。
步骤6:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-甲氧基-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(100mg，154.78μmol)、2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(56.24mg，154.78μmol)、N,N-二异丙基乙胺(60.01mg,464.33μmol,80.88μL)和HATU(88.28mg,232.17μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中40％乙腈洗脱，得到产物6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-甲氧基-4-氧代-喹唑啉(29mg,29.37μmol,19％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):955.0[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.79(s,1H),9.89(s,1H),8.58(s,2H),8.26(s,1H),7.53(s,1H),7.50(s,2H),7.29(dd,J＝4.00,8.80Hz,1H),7.01(t,J＝8.40Hz,1H),6.49-6.45(m,2H),6.05(d,J＝7.60Hz,1H),4.40-4.30(m,1H),3.88(d,J＝25.60Hz,4H),3.82(s,3H),3.64(s,5H),3.27(s,2H),3.11(q,J＝7.20Hz,2H),2.80-2.60(m,6H),2.49-2.53(m,3H),2.10-2.07(m,1H),1.92-1.77(m,5H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例100
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-甲氧基-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-甲氧基-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(80mg，123.82μmol)和2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(49.51mg，123.82μmol)、N,N-二异丙基乙胺(80.01mg,619.11μmol,107.83μL)和HATU(94.16mg,247.64μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中40％乙腈洗脱，得到产物6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-甲氧基-4-氧代-喹唑啉(10mg,10.37μmol,8％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):955.0[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.79(s,1H),9.89(s,1H),8.58(s,2H),8.26(s,1H),7.51-7.46(m,3H),7.50(s,2H),7.27(d,J＝3.20Hz,1H),7.01(t,J＝8.40Hz,1H),6.49-6.45(m,2H),6.05(d,J＝7.60Hz,1H),4.40-4.30(m,1H),3.88(d,J＝25.60Hz,4H),3.83(s,3H),3.64(d,J＝14.40Hz,5H),3.27(s,2H),3.11(q,J＝7.20Hz,2H),2.80-2.50(m,6H),2.10-2.07(m,1H),1.92-1.77(m,6H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例101
5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:按照环化的一般程序(程序A-A)，使用甲苯(35毫升)中的2-氨基-5-羟基-苯甲酸(2.19克，14.32毫摩尔)、原甲酸三乙酯(4.24克，28.64毫摩尔，4.76毫升)、乙酸(8.60毫克，143.20摩尔，8.19微升)和4-(5-氨基嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4.0g,14.32mmol)合成喹唑啉酮中间体。通过使用70％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂的硅胶快速柱色谱从粗产物中纯化所需化合物，得到黄色固体的4-[5-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.5g，3.53mmol，25％产率)。LCMS m/z(ESI):425.2[M+H]+。
步骤2:在氮气氛下，于0℃向4-[5-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.5g，3.53mmol)在二氯甲烷(100mL)中的搅拌溶液中加入亚硝酸叔丁酯(1.09g，10.60mmol，1.26mL)。反应混合物在室温下搅拌3小时。完成后，用水稀释反应混合物，用二氯甲烷(2x 50mL)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥并减压浓缩得到粗产物，该粗产物通过硅胶(230-400目)柱色谱纯化，所需产物在Pet醚中0-80％乙酸乙酯洗脱，得到棕色固体的4-[5-(6-羟基-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(1克，2.02毫摩尔，产率57％)。LCMS(ESI):468.2[M-H]-。
步骤3:按照O-芳化的一般程序(程序A-B)使用叔丁基4-[5-(6-羟基-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(800毫克，1.70毫摩尔)、氢化纳(60％分散在矿物油中，156.71毫克，6.82毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(535.41毫克，3.82毫摩尔)合成O-芳化的喹唑啉酮中间体。通过使用60％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂的硅胶快速柱色谱从粗产物中纯化所需化合物，得到淡黄色固体的4-[5-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(480mg，783.47μmol，46％产率)。LCMS m/z(ESI):551.5[M-tBu+H]+。
步骤4:使用叔丁基4-[5-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(480毫克，791.38微摩尔)、碳酸铯(773.54毫克，2.37毫摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(273.40毫克，1.98摩尔)按照程序A-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体。通过使用80％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂的硅胶快速柱色谱从粗产物中纯化所需化合物，得到4-[5-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(240mg，271.55μmol，34％产率)，为棕色粘性固体。LCMS m/z(ESI):723.2[M-H]。
步骤5:室温下向4-[5-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(210mg，289.77μmol)在乙醇(3mL)和水(0.5mL)中的搅拌溶液中加入氯化铵(93.00mg，1.74mmol，60.78μL)、铁粉(80.92mg,1.45mmol,10.29μL)。将反应混合物加热至70℃16小时。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，通过硅藻土床过滤，并用乙酸乙酯洗涤。滤液在减压下浓缩得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱使用石油醚中0-100％乙酸乙酯纯化，得到黄色固体的4-[5-[5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(160mg，218.79μmol，76％产率)。LCMS(ES+):m/z639.7[M+H-tBu]+。
步骤6:在二噁烷介导的N-Boc脱保护中通过4M HCl合成所需的胺(程序A-D)。在叔丁基4-[5-[5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(160mg，230.30μmol)上使用1,4-二噁烷中氯化氢，4M，99％(167.94mg，4.61mmol，209.93μL)进行N-Boc脱保护，以提供5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(160mg,223.11μmol,97％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):593.7[M-H]-。
步骤7:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(50.42mg，138.74μmol)和5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(75mg,126.13μmol)、N,N-二异丙基乙胺(48.90mg,378.39μmol,65.91μL)和HATU(71.94mg,189.20μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中40％乙腈洗脱，得到产物5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟代苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉(18mg,17.85μmol,14％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):940.2[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.90(s,1H),8.59(s,2H),8.11(s,1H),7.54(s,1H),7.30(dd,J＝4.00,9.20Hz,1H),7.18(s,1H),7.01(dd,J＝8.40,12.20Hz,2H),6.74(d,J＝5.60Hz,1H),6.49-6.44(m,2H),6.05(d,J＝7.60Hz,1H),4.33-4.31(m,1H),3.92-3.85(m,5H),3.64(s,5H),3.33-3.11(m,2H),3.10-3.06(m,2H),2.80-2.50(m,7H),2.10-2.07(m,1H),1.89-1.77(m,5H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例102
5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(70mg，110.92μmol)和2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(44.34mg,110.89μmol)、N,N-二异丙基乙胺(43.01mg,332.76μmol,57.96μL)和HATU(63.26mg,166.38μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中40％乙腈洗脱，得到产物5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉(14.5mg,14.98μmol,14％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):940.0[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.89(s,1H),8.61(s,1H),8.11(s,1H),7.55(s,1H),7.55(s,1H),7.31(t,J＝4.80Hz,1H),7.19(s,1H),6.99(d,J＝8.80Hz,2H),6.72(d,J＝8.40Hz,1H),6.49-6.45(m,2H),6.05(d,J＝8.00Hz,1H),4.35-4.30(m,1H),3.88(d,J＝27.20Hz,5H),3.64(s,5H),3.40-3.20(m,3H),2.78-2.59(m,11H),2.11-2.08(m,1H),1.91-1.77(m,5H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例103
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[(3R,4R)-4-[4-[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]-3-甲氧基哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉
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步骤1:在环境温度，氮气氛下，向含有4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(10克，32.34毫摩尔)和4-溴-2-氟-1-碘代苯(9.73克，32.34毫摩尔，1.80毫升)在无水1,4-二噁烷(100毫升)中的充分搅拌溶液的250毫升密封管中加入水(20mL)中的Pd(dppf)Cl2.二氯甲烷(2.64g,3.23mmol)和碳酸钠(8.57g,80.85mmol,3.39mL)，所得的混合物通过鼓泡氮气进入反应混合物中脱气10分钟。将反应混合物加热至110℃2小时。反应完成后，用水将反应混合物淬灭并用乙酸乙酯(2x 100ml)提取。合并有机相，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩得到粗产物，粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化(90％乙酸乙酯/石油醚)，得到4-(4-溴-2-氟-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(8.4克，22.52毫摩尔，70％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):256.2[M+H]+。
步骤2:在氮气氛下，于0℃向含有4-(4-溴-2-氟-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(8.6克，21.49毫摩尔)在四氢呋喃(100毫升)中的充分搅拌的溶液的250毫升双颈圆底烧瓶中加入硼烷四氢呋喃复合溶液(1M，THF中)(1M，35.11毫升)。将反应混合物在40℃下加热12小时。反应混合物冷却至0℃，然后加入25％的氢氧化钠溶液(859.45mg,21.49mmol,403.50μL)和35％的过氧化氢(730.74mg,21.49mmol,664.31μL)。反应完成后，用水淬灭反应混合物，用乙酸乙酯(2x100 ml)提取。合并有机相，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗产物。粗产物通过反相制备型高效液相色谱纯化(柱:Xbridge C-18 20x 150m；流动相:A:水中0.1％的甲酸，B:乙腈]，得到纯化的级分，其冻干以得到白色固体的4-(4-溴-2-氟-苯基)-3-羟基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(4.3克，11.26毫摩尔，52％产率)。LCMS m/z(ESI):274.0[M+H-CO2 tBu]+。
步骤3:4-(4-溴-2-氟-苯基)-3-羟基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(4.6克，12.17毫摩尔)通过手性SFC纯化(柱:Chiralcel OD-H[250*30毫米mm，5μm]；流动相:[二氧化碳:甲醇(80:20)]；流速:70g/min；循环时间:3.3分钟；回压:100巴；UV:220纳米)，以提供白色固体的纯对映体叔丁基(3R,4R)-4-(4-溴-2-氟-苯基)-3-羟基-哌啶-1-羧酸酯(2.2克，5.82毫摩尔，48％产率)和叔丁基(3S,4S)-4-(4-溴-2-氟-苯基)-3-羟基-哌啶-1-羧酸酯(2.3克，6.08毫摩尔，50％产率)。LCMS m/z(ESI):276.2[M-CO2 tBu+2H]+。
注:第一洗脱异构体被任意指定为叔丁基(3R,4R)-4-(4-溴-2-氟-苯基)-3-羟基-哌啶-1-羧酸酯，第二洗脱异构体被任意指定为叔丁基(3S,4S)-4-(4-溴-2-氟-苯基)-3-羟基-哌啶-1-羧酸酯。
步骤4:于0℃向氮气氛下包含叔丁基(3R,4R)-4-(4-溴-2-氟-苯基)-3-羟基-哌啶-1-羧酸酯(920毫克，2.43毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(10毫升)中的充分搅拌溶液的100mL单颈圆底烧瓶中加入氢化纳(60％分散在矿物油中，139.88毫克，3.65毫摩尔)。反应混合物在0℃下搅拌30分钟，然后加入甲基碘(690.88mg,4.87mmol,303.02μL)。反应混合物在室温下搅拌2小时。反应完成后，反应混合物用氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯(2x50 ml)提取。合并有机相，用盐水洗涤，干燥(无水硫酸钠)，过滤，减压浓缩，得到粗产物叔丁基(3R,4R)-4-(4-溴-2-氟-苯基)-3-甲氧基-哌啶-1-羧酸酯(900mg，2.29mmol，94％产率)，为粘性液体。LCMS m/z(ESI):332.0[M-tBu+H]+。
步骤5:在环境温度下向包含叔丁基(3R,4R)-4-(4-溴-2-氟-苯基)-3-甲氧基-哌啶-1-羧酸酯(850mg，2.17mmol)在无水1,4-二噁烷(10mL)中的充分搅拌的溶液的50ml密封管中加入2,6-二苄氧基吡啶-3-胺(838.70mg，2.60mmol)、BrettPhos(232.67mg,433.46μmol)和Pd(dba)3(396.93mg,433.46μmol)及碳酸铯(2.12g,6.50mmol)，且所得混合物中通过鼓泡氮气到反应混合物中脱气5分钟，反应混合物加热至100℃12h。反应完成后，用水淬灭反应混合物，用乙酸乙酯(2x100 ml)提取。。合并有机层，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用90％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到产物叔丁基(3R,4R)-4-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-哌啶-1-羧酸酯(900mg，1.10mmol，51％产率)，为粘性液体。LCMS m/z(ESI):614.8[M+H]+。
步骤6:在环境温度和氮气氛下向包含叔丁基(3R,4R)-4-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-哌啶-1-羧酸酯(960mg，1.17mmol)在无水1,4-二噁烷(20mL)中的充分搅拌的溶液的100mL单颈圆底烧瓶中加入碳上氢氧化钯(20重量％50％水，640.00毫克，911.42微摩尔，20％纯度)。所得悬浮液在环境温度和氢气氛(1个大气压)下搅拌16小时。原料完全消耗后，将反应混合物通过过滤垫过滤，过滤垫用四氢呋喃(50ml)洗涤，并在减压下浓缩得到粗产物，该粗产物通过反相制备型高效液相色谱(柱:XbridgeC-18 20×150mm流动相:A:0.1％甲酸水溶液，B:乙腈)纯化，得到纯化级分，其冻干以得到固体的叔丁基(3R,4R)-4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-哌啶-1-羧酸酯(515mg,1.17mmol,100％产率)。LCMS m/z(ESI):336.2[M+H-CO2 tBu]+。
步骤7:叔丁基(3R,4R)-4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-哌啶-1-羧酸酯(520mg，1.18mmol)通过手性SFC纯化(柱:YMC Cellulose-SC[250*30mm,5μm]；流动相:[二氧化碳:异丙醇(60:40)]；流速:110g/min；循环时间:8分钟；回压:100巴；UV:210nm)，得到纯对映异构体叔丁基(3R,4R)-4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-哌啶-1-羧酸酯(230毫克，512.30微摩尔，43％产率)和叔丁基(3R,4R)-4-[4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-哌啶-1-羧酸酯(250mg,551.11μmol,47％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):336.2[M+H-CO2 tBu]+。
注:第一洗脱异构体被任意指定为叔丁基(3R,4R)-4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-哌啶-1-羧酸酯，第二洗脱异构体被任意指定为叔丁基(3R,4R)-4-[4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-哌啶-1-羧酸酯。
步骤8:在环境温度和氮气氛下，向包含叔丁基(3R,4R)-4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-哌啶-1-羧酸酯(250mg，568.33mol)在无水二氯甲烷(2mL)中的充分搅拌的溶液的50mL单颈圆底烧瓶中加入4M氯化氢二噁烷溶液(5.38mL)。将所得悬浮液在环境温度下搅拌2小时。原料完全消耗后，反应混合物在减压下浓缩得到粗产物，其用石油醚研磨，得到(3R)-3-[3-氟-4-[(3R,4R)-3-甲氧基-4-哌啶基]苯胺基]哌啶-2,6-二酮(200mg，505.60μmol，89％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):336.2[M+H]+。
步骤9:在氮气氛下，于0℃向含有(3R)-3-[3-氟-4-[(3R,4R)-3-甲氧基-4-哌啶基]苯胺基]哌啶-2,6-二酮(180毫克，515.25微摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)中的充分搅拌溶液的50毫升双颈圆底烧瓶中加入溴乙酸叔丁酯(100.50毫克，515.25微摩尔，75.56微升)。将反应混合物在室温下搅拌2h。反应完成后，用水淬灭反应混合物，用乙酸乙酯(2x100 ml)提取。合并有机层，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到2-[(3R,4R)-4-[4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(200mg，440.48μmol，85％产率)，为粘性液体。LCMS m/z(ESI):450.2[M+H]+。
步骤10:在氮气氛下，于0℃向2-[(3R,4R)-4-[4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(300mg，667.39μmol)在二氯甲烷(3mL)中的搅拌溶液中加入在二噁烷(2.0ml)中的4N氯化氢溶液。反应混合物在室温下搅拌3小时。反应混合物在减压下浓缩，得到浅棕色固体的粗2-[(3R,4R)-4-[4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-1-哌啶基]乙酸(220mg，509.28μmol，76％产率)。LCMS m/z(ESI):394.2[M+H]+。
步骤11:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(169.60mg，251.65μmol)、2-[(3R,4R)-4-[4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-1-哌啶]乙酸(100mg,251.65μmol)、N,N-二异丙基乙胺(162.62mg,1.26mmol,219.16μL)和HATU(143.53mg,377.47μmol)进行酰胺偶联以提供粗产物。使用预填充的二氧化硅柱(100g C18填料，方法:水中0.1％的甲酸:乙腈)通过反相柱色谱纯化粗产物，并将纯级分冻干，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[(3R,4R)-4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟苯基]-3-甲氧基-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉(70mg,69.23μmol,28％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):955.0[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),10.08(s,1H),8.60(s,2H),8.35(s,1H),7.90-7.85(m,2H),7.76(dd,J＝2.80,9.00Hz,1H),7.52-7.50(m,1H),7.41(d,J＝2.80Hz,1H),7.09-6.62(m,1H),7.42-7.41(m,2H),6.10(d,J＝12.00Hz,1H),4.34-4.32(m,2H),3.93-3.87(m,5H),3.67-3.57(m,6H),3.19-3.13(m,6H),2.76(s,3H),2.71-2.67(m,3H),2.61-2.60(m,2H),2.12-2.08(m,1H),1.91-1.85(m,3H),1.05(t,J＝6.80Hz,3H)。
实施例104
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[(3S,4S)-4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]-3-甲氧基哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:在氮气氛下，于0℃向叔丁基(3S,4S)-4-(4-溴-2-氟-苯基)-3-羟基-哌啶-1-羧酸酯(900mg，2.40mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的搅拌溶液中加入氢化纳(60％分散于矿物油中，138.22mg，3.61mmol)，并搅拌30分钟。向反应混合物中加入碘甲烷(682.68毫克，4.81毫摩尔，299.42微升)，并在室温下搅拌2小时。完成后，用饱和氯化铵溶液(40mL)淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯(2x 50mL)提取。合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到(3S,4S)-4-(4-溴-2-氟-苯基)-3-甲氧基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(880mg，2.27mmol，94％产率)，为粘性液体。LCMS m/z(ESI):332.0[M+H-tBu]+。
步骤2:在环境温度下向包含叔丁基(3S,4S)-4-(4-溴-2-氟-苯基)-3-甲氧基-哌啶-1-羧酸酯(880毫克，2.27毫摩尔)在无水1,4-二噁烷(10mL)中充分搅拌的溶液的50mL密封管中加入2,6-二苄氧基吡啶-3-胺(1.04克，3.40毫摩尔)、碳酸铯(2.22克，6.80毫摩尔)，随后加入Brett-Phos(243.33mg,453.29μmol)和Pd2(dba)3(415.09mg,453.29μmol)，所得混合物通过在反应混合物中鼓泡氮气脱气5分钟，反应混合物加热至100℃12h。反应完成后，用水淬灭反应混合物，用乙酸乙酯(2x100ml)提取。合并有机相，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用90％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到产物叔丁基(3S,4S)-4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-哌啶-1-羧酸酯(730mg，689.89μmol，30％产率)，为粘性液体。LCMS m/z(ESI):612.83[M-H]-。
步骤3:在室温下，向叔丁基(3S,4S)-4-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-哌啶-1-羧酸酯(1克，1.63毫摩尔)在1,4-二噁烷(10毫升)中的溶液中加入碳上氢氧化钯(457.65毫克，3.26毫摩尔)。然后将反应混合物在氢气氛下于室温下搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯(80mL)洗涤，真空干燥，得到叔丁基(3S,4S)-4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-哌啶-1-羧酸酯(665mg，1.53mmol，94％产率)。LCMS M/z(ESI):336.2[M+H-CO2tBu]+。
步骤4:叔丁基(3S,4S)-4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-哌啶-1-羧酸酯(665mg，1.53mmol)通过手性SFC纯化(柱:YMC Cellulose-SC[250*30mm,5μm]；流动相:[二氧化碳:异丙醇(60:40)]；流速:100g/min；回压:100巴；波长:210纳米；循环时间:9.0分钟)以提供叔丁基(3S,4S)-4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-哌啶-1-羧酸酯(260mg，593.39μmol，36％产率)和叔丁基(3S,4S)-4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-哌啶-1-羧酸酯(260mg,593.39μmol,36％产率)。
注:手性SFC纯化的第一洗脱异构体被任意指定为叔丁基(3S,4S)-4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-哌啶-1-羧酸酯，第二洗脱异构体被任意指定为叔丁基(3S,4S)-4-[4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-哌啶-1-羧酸酯。
步骤5:在氮气氛下，于0℃向叔丁基(3S,4S)-4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-哌啶-1-羧酸酯(260mg，597.03μmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的搅拌溶液中加入4M氯化氢二噁烷(4M，3.00mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌2小时。完成后，反应混合物在减压下浓缩，得到灰色固体的粗(3S)-3-[3-氟-4-[(3S,4S)-3-甲氧基-4-哌啶基]苯胺基]哌啶-2,6-二酮(220mg，580.89μmol，97％产率)。LCMS m/z(ESI):336.2[M+H]+。
步骤6:在室温，氮气氛下向(3S)-3-[3-氟-4-[(3S,4S)-3-甲氧基-4-哌啶基]苯胺基]哌啶-2,6-二酮(220毫克，655.99微摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(3毫升)中的搅拌溶液中加入三乙胺(66.38毫克，655.99微摩尔，91.43微升)，然后加入2-溴乙酸叔丁酯(127.95毫克，655.99微摩尔，96.21μL)。反应混合物在室温下搅拌12小时。用水(10mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(3×10mL)提取。有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗2-[(3S,4S)-4-[4-[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(230mg，510.64μmol，78％产率)。LCMS m/z(ESI):450.2[M+H]+。
步骤7:在氮气氛下，于0℃向2-[(3S,4S)-4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(230mg，511.66μmol)在二氯甲烷(4mL)中的搅拌溶液中加入4M氯化氢二噁烷(4M，127.92μL)溶液。反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，在减压下浓缩反应混合物，得到粗2-[(3S,4S)-4-[4-[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-1-哌啶基]乙酸(200mg，459.53μmol，90％产率)。LCMSm/z(ESI):394.5[M+H]+。
步骤8:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(120mg，207.04μmol)、2-[(3S,4S)-4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-1-哌啶基]乙酸(81.45mg,207.04μmol)、N,N-二异丙基乙胺(133.79mg,1.04mmol,180.31μL)和然后HATU(86.59mg,227.74μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用乙腈中40-45％的甲酸缓冲液洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[(3S,4S)-4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-3-甲氧基-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-5-基]-4-氧代-喹唑啉(37.16mg,37.08μmol,18％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):955.0[M+H]+.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.82(s,1H),9.93(s,2H),8.60(s,2H),8.39(s,1H),7.88(d,J＝8.80Hz,2H),7.76(dd,J＝3.20,8.80Hz,1H),7.50(dd,J＝4.00,9.00Hz,1H),7.41(d,J＝2.80Hz,1H),7.02(s,1H),0.00-6.53(m,2H),5.92(d,J＝6.40Hz,1H),4.37-4.29(m,1H),4.19-4.05(m,6H),3.93-3.87(m,3H),3.75-3.73(m,3H),3.17-3.12(m,6H),2.79(s,3H),2.75-2.61(m,3H),2.09-2.08(m,2H),1.90-1.84(m,3H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例105
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环己磺酰胺
/>
步骤1:在5℃下向搅拌的环己烷磺酰氯(1克，5.47毫摩尔)的丙酮(5毫升)溶液中缓慢加入氨水(30％水溶液，10毫升，5.47毫摩尔)。反应混合物在氮气氛下室温搅拌16h。完成后，将反应混合物减压浓缩，用水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(3x50 mL)提取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗产物。使用30-50％乙酸乙酯(在石油醚中)作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化所需的粗产物，得到灰白色固体的环己烷磺酰胺(0.58g，3.55mmol，65％产率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝6.61(s,2H),2.74(t,J＝9.60Hz,1H),2.02-2.12(m,2H),1.79(d,J＝10.40Hz,2H),1.64(d,J＝11.60Hz,1H),1.21-1.38(m,4H),1.05-1.17(m,1H)。
步骤2:将4-[5-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.5g，890.41μmol)在密封管中溶解于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，并在室温下将碳酸铯(870.34mg，2.67mmol)和环己烷磺酰胺(363.37mg，2.23mmol)溶解。反应混合物在65℃下搅拌16小时。完成后，用水(30mL)稀释反应混合物。反应混合物通过滤纸过滤。滤液用乙酸乙酯(3x50 mL)提取。合并的有机层用冷水(3x50 mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到棕色粘性液体的粗叔丁基4-[5-[6-[2-氰基-3-(环己基磺酰氨基)-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(0.45g，557.22μmol，63％产率)。LCMS M/z(ESI):703.4[M-H]-。
步骤3:在氮气氛下于5℃向4-[5-[6-[2-氰基-3-(环己基磺酰氨基)-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.44克，624.32微摩尔)在二氯甲烷(10毫升)中的搅拌溶液中加入氯化氢(1,4-二噁烷中4M溶液，4毫升)。反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，反应混合物在减压下浓缩，得到浅棕色固体的粗N-[2-氰基-4-氟-3-[4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉-6-基]氧基-苯基]环己磺酰胺(0.44克，585.07微摩尔，94％产率)。LCMS m/z(ESI):605.2[M+H]+。
步骤4:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(143.44毫克，358.75微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(463.66毫克，3.59毫摩尔，624.88微升)、HATU(150.05毫克，394.62微摩尔)和N-[2-氰基-4-氟-3-[-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉-6-基]氧基-苯基]环己磺酰胺(0.23g,358.75μmol)进行酰胺偶联。通过反相柱色谱(水中10mM乙酸铵:乙腈)从粗产物中纯化所需产物，并将级分冻干，得到N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]环己磺酰胺(108mg,112.53μmol,31％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):950.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.79(s,1H),10.02(s,1H),8.58(s,2H),8.31(s,1H),7.83(d,J＝8.80Hz,1H),7.71(d,J＝2.80Hz,1H),7.41(t,J＝8.80Hz,3H),7.00(s,1H),6.47(t,J＝12.00Hz,2H),6.06(d,J＝8.00Hz,1H),4.32(s,1H),3.88(d,J＝26.00Hz,4H),3.63(s,4H),2.72(d,J＝42.80Hz,3H),2.12-2.07(m,4H),1.89-1.76(m,8H),1.56(d,J＝43.60Hz,2H),1.42-1.39(m,2H),1.24-1.12(m,4H)。
实施例106
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]哌啶-1-磺酰胺
步骤1:在0℃下，向哌啶-1-磺酰氯(2克，10.89毫摩尔，1.53毫升)在甲醇(20毫升)中的搅拌溶液中加入氨溶液(7N甲醇氨)(10.89毫摩尔，10毫升)。反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完成后，反应混合物用冰水(50毫升)淬灭，用乙酸乙酯(2×50毫升)提取。合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸发，得到灰白色固体的粗产物哌啶-1-磺酰胺(1.2克，7.23毫摩尔，产率66％)。LCMS m/z(ESI):165.20[M+H]+。
步骤2:使用叔丁基4-[5-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(500mg，890.41μmol)、碳酸铯(1.02g，3.12mmol)和哌啶-1-磺酰胺(365.57mg，2.23mmol)按照程序A-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体，得到粗产物叔丁基4-[5-[6-[2-氰基-6-氟-3-(1-哌啶基磺酰胺基)苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(400mg,498.75μmol,56％产率)，为棕色固体。LCMS m/z(ESI):704.0[M-H]-。
步骤3:按照程序A-D，使用叔丁基4-[5-[6-[2-氰基-6-氟-3-(1-哌啶基磺酰胺基)苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(400mg，566.77μmol)和二噁烷(3mL)中氯化氢溶液4.0M合成所需的胺。用甲基叔丁基醚研磨所得的粗化合物，得到灰白色固体的N-[2-氰基-4-氟-3-[4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉-6-基]氧基-苯基]哌啶-1-磺酰胺(400mg，517.05μmol，91％产率)。LCMS m/z(ESI):606.2[M+H]+。
步骤4:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用N-[2-氰基-4-氟-3-[4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉-6-基]氧基-苯基]哌啶-1-磺酰胺(200mg，330.23μmol)、2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(132.00mg,363.25μmol)、N,N-二异丙基乙胺(213.40mg,1.65mmol,287.60μL)和HATU(150.68mg,396.27μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中45％乙腈洗脱，得到产物N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]哌啶-1-磺酰胺(72.14mg,71.44μmol,22％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):951.0[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.79(s,1H),9.85(bs,1H),8.57(s,2H),8.30(s,1H),7.82(d,J＝8.80Hz,1H),7.69(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.38(d,J＝24.80Hz,3H),7.00(s,1H),6.48(d,J＝6.80Hz,1H),6.44(s,1H),6.04(d,J＝7.20Hz,1H),4.33-4.30(m,1H),3.87(d,J＝27.20Hz,4H),3.66-3.61(m,4H),3.20-3.18(m,1H),3.05-2.95(m,4H),2.85-2.70(m,2H),2.65-2.60(m,1H),2.59-2.55(m,1H),2.50-2.45(m,1H),2.25-2.15(m,2H),1.95-1.85(m,3H),1.82-1.60(m,4H),1.35-1.59(m,6H)。
实施例107
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]吡咯烷-1-磺酰胺
/>
步骤1/步骤2:在-30℃下，将N,N-二异丙基乙基胺(13.63克，105.45毫摩尔，18.37毫升)、磺酰氯(18.98克，140.61毫摩尔，11.43毫升)加入到吡咯烷(5克，70.30毫摩尔，5.84毫升)在二氯甲烷(5毫升)中的搅拌溶液中，并将反应混合物在相同温度下搅拌2小时。完成后，用(60mL)水逐滴将反应混合物淬灭，用乙酸乙酯(2X100毫升)提取。合并的有机层用1.5N盐酸(2x50 mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到浅棕色固体的粗吡咯烷-1-磺酰氯(10g，44.21mmol，63％产率)。在0℃下向吡咯烷-1-磺酰氯(10克，58.95毫摩尔)的甲醇(30毫升)溶液中加入7N氨甲醇溶液(1.00克，58.95毫摩尔)，并在室温下搅拌14小时。将反应混合物减压浓缩得到粗产物，其用水(30毫升)稀释，用乙酸乙酯(50毫升)提取。有机层用碳酸氢钠溶液(20ml)、盐水(20ml)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩得到粗产物，该粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用40％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到灰白色固体的吡咯烷-1-磺酰胺(4.5g，29.82mmol，51％产率)。LCMS m/z(ESI):151.2[M+H]+。
步骤3:按照程序A-C，使用4-[5-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(500毫克，890.41微摩尔)、碳酸铯(870.34毫克，2.67毫摩尔)和吡咯烷-1-磺酰胺(267.48毫克，1.78毫摩尔)合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体，得到粗产物叔丁基4-[5-[6-[2-氰基-6-氟-3-(吡咯烷-1-基磺酰氨基)苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(440mg,535.62μmol,60％产率)，为棕色粘性化合物。LCMS m/z(ESI):690.0[M-H]-。
步骤4:通过三氟乙酸介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。使用三氟乙酸(72.53mg,636.09μmol,49.00μL)对叔丁基4-[5-[6-[2-氰基-6-氟-3-(吡咯烷-1-基磺酰氨基)苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(440mg,636.09μmol)进行N-Boc脱保护以得到N-[2-氰基-4-氟-3-[4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉-6-基]氧基-苯基]吡咯烷-1-磺酰胺(370mg,442.35μmol,70％产率)，为棕色粘性化合物。LCMS m/z(ESI):592.2[M+H]+。
步骤5:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用N-[2-氰基-4-氟-3-[4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉-6-基]氧基苯基]吡咯烷-1-磺酰胺(185毫克，312.70微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(202.07毫克，1.56毫摩尔，272.33微升)和2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(113.63mg,312.70μmol)和HATU(130.79mg,343.97μmol)进行酰胺偶联。通过反相柱色谱(水中0.1％甲酸:乙腈)从粗产物中纯化所需产物，并将级分冻干，得到N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]吡咯烷-1-磺酰胺(74.82mg,74.34μmol,24％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):937.0[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),10.20(s,1H),9.61(s,1H),8.59(s,2H),8.33(s,1H),7.89-7.84(m,2H),7.76(dd,J＝3.20,8.80Hz,1H),7.53(dd,J＝4.00,9.20Hz,1H),7.41(d,J＝2.80Hz,1H),6.98(t,J＝8.00Hz,1H),6.51(d,J＝7.60Hz,1H),6.48(d,J＝12.80Hz,H),6.12(d,J＝7.60Hz,1H),4.38-4.50(m,3H),3.82-3.95(m,4H),3.65-3.71(m,2H),3.49-3.62(m,4H),3.21-3.31(m,4H),3.05-3.18(m,1H),2.82-2.92(m,1H),2.71-2.81(m,1H),2.50-2.65(m,2H),1.95-2.15(m,3H),1.75-1.92(m,7H)。
实施例108和109
步骤1:使用4-[5-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.5g，890.41微摩尔)、碳酸铯(725.28mg，2.23毫摩尔)和环戊烷磺酰胺(199.29mg，1.34毫摩尔)按照程序A-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体，得到粗产物叔丁基4-[5-[6-[2-氰基-3-(环戊基磺酰氨基)-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(0.47g,574.55μmol,65％产率)，为无色液体，其无需进一步纯化而继续进行。LCMS m/z(ESI):689.4[M-H]-。
步骤2:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序A-D)。使用在1,4-二噁烷中的氯化氢溶液(4M，5mL)对叔丁基4-[5-[6-[2-氰基-3-(环戊基磺酰氨基)-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(0.47g，680.43μmol)进行N-Boc脱保护，得到N-[2-氰基-4-氟-3-[4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基]喹唑啉-6-基]氧基-苯基]环戊烷磺酰胺(0.42g,669.76μmol,98％产率)，为棕色固体，其无需进一步纯化而继续进行。LCMS m/z(ESI):591.6[M+H]+。
实施例108
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环戊烷磺酰胺
步骤3:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(110.74mg，304.76μmol)、N-[2-氰基-4-氟-3-[4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉-6-基]氧基-苯基]环戊烷磺酰胺(0.18g,304.76μmol)、HATU(115.88mg,304.76μmol)和N,N-二异丙基乙胺(196.94mg,1.52mmol,265.42μL)进行酰胺偶联。粗化合物通过使用30g snap的反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中35％乙腈洗脱，得到N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]环戊烷磺酰胺(90mg,88.45μmol,29％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):936.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.79(s,1H),9.98(s,1H),8.58(s,2H),8.32(s,1H),7.86-7.84(m,1H),7.74(dd,J＝3.20,9.00Hz,2H),7.48-7.45(m,2H),7.10-6.90(m,1H),6.51-6.46(m,2H),6.08(d,J＝7.60Hz,1H),4.32-4.31(m,1H),4.22-4.15(m,1H),3.96-3.82(m,5H),3.70-3.55(m,6H),3.50-3.35(m,2H),2.96-2.82(m,2H),2.78-2.71(m,1H),2.59-2.55(m,1H),2.14-2.05(m,1H),2.02-1.89(m,7H),1.88-1.80(m,2H),1.70-1.67(m,2H),1.58-1.55(m,2H)。
实施例109
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环戊烷磺酰胺
步骤4:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用N-[2-氰基-4-氟-3-[4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉-6-基]氧基-苯基]环戊烷磺酰胺(180mg，287.04μmol)、2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(104.31mg,260.87μmol)、HATU(109.14mg,287.04μmol)和N,N-二异丙基乙胺(37.10mg,287.04μmol,50.00μL)进行酰胺偶。联粗化合物通过使用30g snap的反相柱色谱纯化，用0.1％的甲酸水溶液中35％的乙腈洗脱，得到N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]环戊烷磺酰胺(73mg,73.43μmol,26％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):937[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.79(s,1H),10.10(s,1H),8.58(s,2H),8.32(s,1H),7.85-7.83(m,1H),7.72(dd,J＝2.80,9.00Hz,1H),7.64(s,1H),7.43(d,J＝2.80Hz,2H),7.07-6.98(m,1H),6.52-6.45(m,2H),6.06(d,J＝7.60Hz,1H),4.38-4.30(m,1H),3.98-3.90(m,2H),3.90-3.82(m,2H),3.68-3.58(m,4H),3.58-3.47(m,1H),3.29-3.10(m,2H),2.95-2.70(m,3H),2.62-2.58(m,1H),2.57-2.55(m,1H),2.54(m,2H),2.15-2.05(m,1H),1.85-1.98(m,7H),1.83-1.75(m,2H),1.72-1.63(m,2H),1.60-1.49(m,2H)。
实施例110-130
实施例110-130以与实施例105-109相同的方式，使用上述方法I和II以及C到E的一般程序，使用相应的磺酰胺合成。
实施例110
(3S)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中45％乙腈洗脱，得到(3S)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]-3-甲氧基-吡咯烷-1-磺酰胺(33mg,30.71μmol,17％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):967.20[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),10.18(bs,1H),8.60(s,2H),8.33(s,1H),7.76(dd,J＝2.80,8.80Hz,3H),7.50(dd,J＝5.20,Hz,1H),7.42(d,J＝3.20Hz,1H),6.99(s,1H),6.50(d,J＝7.60Hz,1H),6.46(s,1H),6.11(s,1H),4.35-4.30(m,4H),3.96-3.87(m,5H),3.67(s,3H),3.55-3.43(m,4H),3.28-3.23(m,3H),3.22-3.20(m,3H),3.18-3.02(m,1H),2.98-2.92(m,2H),2.80-2.70(m,1H),2.65-2.60(m,1H),2.58-2.55(m,1H),2.15-2.05(m,2H),2.10-1.95(m,1H),1.80-0.30(m,5H)。
实施例111
(3S)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中45％乙腈洗脱，得到(3S)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]-3-甲氧基-吡咯烷-1-磺酰胺(20mg,20.21μmol,11％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):967.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.79(s,1H),9.90(s,1H),8.57(s,2H),8.30(s,1H),7.82(d,J＝8.80Hz,1H),7.69(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.39(d,J＝2.80Hz,2H),7.33(s,1H),7.00(d,J＝8.40Hz,1H),6.51(d,J＝18.40Hz,1H),6.44(s,1H),6.04(d,J＝7.60Hz,1H),4.31(m,1H),3.93-3.91(m,3H),3.91-3.83(m,2H),3.61(m,4H),3.30-3.20(m,2H),3.20-3.15(m,4H),3.15-3.00(m,4H),2.74-2.71(m,2H),2.53-2.50(m,2H),2.08-2.07(m,2H),1.93-1.85(m,3H),1.76-1.74(m,4H)。
实施例112
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]丙烷-2-磺酰胺
粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％碳酸氢铵水溶液中50％乙腈洗脱，得到产物N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]丙烷-2-磺酰胺(57mg,62.45μmol,21％产率)，为浅绿色固体。LCMS m/z(ESI):910.0[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.75(s,1H),8.51(s,2H),8.24(s,1H),7.76(d,J＝8.80Hz,1H),7.64(dd,J＝3.20,8.80Hz,1H),7.34(d,J＝2.80Hz,2H),7.32-7.29(m,1H),7.95-6.89(m,1H),6.46-6.37(m,2H),5.99(d,J＝7.60Hz,1H),4.29-4.20(m,1H),3.80(d,J＝25.60Hz,4H),3.60(d,J＝36.80Hz,4H),2.75(t,J＝5.20Hz,4H),2.36-2.08(m,4H),2.72-2.61(m,5H),2.02(d,J＝40.00Hz,6H)。
实施例113
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]哌啶-1-磺酰胺
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中45％乙腈洗脱，得到产物N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]哌啶-1-磺酰胺(60.25mg,60.10μmol,18％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):951.0[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.88(bs,1H),8.58(s,2H),8.31(s,1H),7.84(d,J＝8.80Hz,1H),7.71(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.55(s,1H),7.39(d,J＝2.80Hz,2H),7.00(s,1H),6.47(t,J＝12.00Hz,2H),6.07(d,J＝7.60Hz,1H),4.33-4.30(m,1H),3.91-3.84(m,4H),3.70-3.55(m,4H),3.29-3.15(m,2H),3.09-3.03(m,4H),2.79-2.71(m,2H),2.70-2.59(m,3H),2.34(t,J＝2.00Hz,1H),2.11-2.06(m,2H),1.92-1.79(m,5H),1.50-1.41(m,6H)。
实施例114
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丙烷磺酰胺
粗产物通过反相制备型高效液相色谱(柱:Xbridge C-18 20x150m流动相:A:0.1％碳酸氢铵水溶液，B:乙腈)纯化，得到产物N-[2-氰基-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丙烷磺酰胺(80mg,82.56μmol,19％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):908.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.79(s,1H),9.99(bs,1H),8.58(s,2H),8.31(s,1H),7.84(d,J＝9.20Hz,1H),7.72(dd,J＝2.80,9.00Hz,1H),7.59-7.50(m,1H),7.42-7.38(m,2H),7.01(t,J＝8.00Hz,1H),6.49-6.45(m,2H),6.05(d,J＝7.60Hz,1H),4.33-4.30(m,1H),4.30-3.84(m,5H),3.71-3.63(m,5H),3.22-3.17(m,2H),3.22-3.17(m,3H),2.60-2.59(m,2H),2.09-2.07(m,1H),1.90-1.86(m,3H),1.85-1.77(m,3H),0.87-0.85(m,4H)。
实施例115
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丙烷磺酰胺
标题化合物通过反相制备型高效液相色谱(柱:Xbridge C-1820x150m流动相:A:0.1％碳酸氢铵水溶液，B:乙腈)纯化，得到产物N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丙烷磺酰胺(50mg,53.00μmol,15％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):908.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.90(s,1H),8.58(s,2H),8.32(s,1H),7.84(d,J＝8.80Hz,1H),7.74(d,J＝1.60Hz,1H),7.58(s,1H),7.41(s,2H),7.01(s,1H),6.49(d,J＝6.40Hz,1H),6.45(s,1H),6.06(d,J＝6.80Hz,1H),4.32-4.31(m,1H),3.91-3.85(m,5H),3.63(m,5H),3.24-3.23(m,2H),2.79-2.70(m,3H),2.51(m,3H),2.10-2.08(m,1H),1.89-1.84(m,4H),1.78(m,1H),0.87-0.85(m,4H)。
实施例116
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％的甲酸水溶液中45％乙腈洗脱，得到(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]-3-氟-吡咯烷-1-磺酰胺(59.79mg,57.83μmol,22％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):955.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.82(s,1H),10.34(s,1H),8.59(s,2H),8.32(s,1H),7.86(d,J＝9.20Hz,1H),7.83(s,1H),7.75(dd,J＝3.20,8.80Hz,1H),7.52(dd,J＝3.60,9.00Hz,1H),7.43(d,J＝2.80Hz,1H),6.98(t,J＝8.40Hz,1H),6.52-6.46(m,2H),6.13(d,J＝7.60Hz,1H),5.39-5.26(m,1H),4.44-4.32(m,3H),3.97-3.85(m,4H),3.68(s,2H),3.70-3.39(m,8H),3.19-3.09(m,1H),23.01-2.89(m,1H),2.78-2.69(m,1H),2.61-2.50(m,2H),2.15-2.03(m,5H),1.91-1.87(m,3H)。
实施例117
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基氮杂环丁烷-1-磺酰胺
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％碳酸氢铵水溶液中45％乙腈洗脱，得到N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]-3-甲氧基-氮杂环丁烷-1-磺酰胺(89.43mg,92.81μmol,23％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):953.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),9.62(s,1H),8.58(s,2H),8.30(s,1H),7.83(d,J＝8.80Hz,1H),7.70(dd,J＝3.20,8.80Hz,1H),7.50-7.30(m,3H),6.99(s,1H),6.48(t,J＝12.40Hz,2H),6.09(d,J＝7.20Hz,1H),4.35-4.31(m,1H),4.03(t,J＝5.60Hz,1H),3.89(d,J＝25.20Hz,4H),3.80-3.50(m,9H),3.15(s,4H),3.00-2.65(m,3H),2.56(t,J＝11.20Hz,2H),2.11-1.83(m,6H)。
实施例118
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]丙烷-2-磺酰胺
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中35％乙腈洗脱，得到N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]丙烷-2-磺酰胺(97mg,104.46μmol,35％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):910.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),10.00(s,1H),8.58(s,2H),8.31(s,1H),7.84-7.82(m,1H),7.71-7.68(m,1H),7.47-7.34(m,3H),7.36(t,J＝5.60Hz,1H),6.49-6.44(m,2H),6.05(d,J＝7.60Hz,1H),4.31-4.30(m,1H),3.95-3.80(m,4H),3.76-3.58(m,5H),3.24-3.15(m,1H),3.14-3.00(m,2H),2.80-2.68(m,2H),2.64-2.56(m,2H),2.15-2.06(m,1H),1.91-1.76(m,7H),1.24(d,J＝6.80Hz,6H)。
实施例119
6-[2-氰基-3-[[2,2-二氟乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％碳酸氢铵水溶液中40％乙腈洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[2,2-二氟乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟代苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉(41.5mg,42.89μmol,47％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):961.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),9.62(s,1H),8.58(s,2H),8.30(s,1H),7.82(d,J＝8.80Hz,1H),7.69(dd,J＝3.20,8.80Hz,1H),7.38(d,J＝2.80Hz,2H),7.26(d,J＝4.40Hz,1H),6.99(s,1H),6.48(d,J＝12.40Hz,2H),6.15(t,J＝4.40Hz,2H),4.36-4.30(m,1H),3.93-3.86(m,4H),3.66-3.58(m,5H),3.30(t,J＝Hz,2H),3.28(t,J＝Hz,2H),3.10(s,1H),2.90(s,1H),2.79-2.73(m,1H),2.68(s,3H),2.60(d,J＝4.00Hz,2H),2.56-2.53(m,2H),2.10-2.07(m,1H),1.92-1.83(m,4H)。
实施例120
6-[2-氰基-6-氟-3-[[2-氟乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％碳酸氢铵水溶液中40％乙腈洗脱，得到6-[2-氰基-6-氟-3-[[2-氟乙基(甲基)氨磺酰基]苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉(45.42mg,47.57μmol,18％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):943.0[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.76(s,1H),8.58(s,2H),8.30(s,1H),7.83(d,J＝8.80Hz,1H),7.69(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.38(d,J＝2.80Hz,2H),7.30(s,1H),7.00(s,1H),6.49(d,J＝7.20Hz,2H),6.45(s,2H),6.07(t,J＝7.20Hz,1H),4.59(t,J＝4.80Hz,1H),4.49-4.31(m,1H),3.89(d,J＝17.60Hz,4H),3.70-3.63(m,5H),3.93-3.86(m,2H),3.30-3.28(m,2H),3.15(s,1H),3.31-3.28(m,1H),2.98-2.85(m,1H),2.78-2.70(m,3H),2.62-2.58(m,2H),2.50-2.42(m,2H),2.15-2.05(m,1H),1.90-1.83(m,2H)。
实施例121
6-[2-氰基-6-氟-3-[[2-氟乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％的甲酸水溶液中40％的乙腈洗脱，得到6-[2-氰基-6-氟-3-[[2-氟乙基(甲基)氨磺酰基]苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉(51.25mg,49.89μmol,19％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):943.0[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),10.11(bs,1H),8.59(s,2H),8.32(s,1H),7.85(d,J＝9.20Hz,1H),7.73(dd,J＝2.80,8.80Hz,2H),7.40(d,J＝2.80Hz,2H),6.99(bs,1H),6.54-6.46(m,2H),6.11(d,J＝7.60Hz,1H),4.58(t,J＝4.80Hz,1H),4.46(t,J＝5.20Hz,1H),4.35-4.30(m,2H),3.92-3.85(m,4H),3.69-3.52(m,6H),3.37-3.35(m,1H),3.30-3.28(m,1H),2.95-2.85(m,3H),2.78-2.70(m,4H),2.69-2.57(m,2H),2.11-2.07(m,2H),1.90-1.89(m,1H),1.87-1.83(m,3H)。
实施例122
6-[2-氰基-3-[[2,2-二氟乙基(甲基)氨磺酰]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％碳酸氢铵水溶液中40％乙腈洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[2,2-二氟乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉(42.24mg,42.93μmol,47％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):961.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.64(bs,1H),8.58(s,2H),8.30(s,1H),7.82(d,J＝8.80Hz,1H),7.69(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.38(d,J＝2.80Hz,2H),7.27-7.23(m,1H),7.00(bs,1H),6.50-6.45(m,2H),6.16(t,J＝4.40Hz,2H),4.36-4.30(m,1H),3.89(d,J＝25.20Hz,4H),3.65-3.60(m,4H),3.43-3.38(m,1H),3.28-3.27(m,3H),2.78-2.73(m,2H),2.71-2.68(m,1H),2.67(s,3H),2.60-2.56(m,3H),2.51-2.50(m,2H),2.11-2.07(m,1H),1.90-1.83(m,4H)。
实施例123
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3,3-二氟吡咯烷-1-磺酰胺
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中40％乙腈洗脱，得到N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]-3,3-二氟-吡咯烷-1-磺酰胺(30mg,30.74μmol,19％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):973.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.55(s,1H),8.59(s,2H),8.30(s,1H),7.82(d,J＝8.80Hz,1H),7.69(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.41(s,1H),7.39(d,J＝3.20Hz,1H),7.32-7.29(m,1H),6.99(s,1H),6.51(s,1H),6.48(d,J＝12.80Hz,1H),6.10(d,J＝8.00Hz,1H),4.35-4.31(m,2H),3.93(s,2H),3.87(s,2H),3.67(s,2H),3.57(s,2H),3.39(t,J＝24.00Hz,3H),3.26(t,J＝7.20Hz,3H),3.12(m,1H),2.87(m,1H),2.76-2.72(m,1H),2.68-2.61(m,2H),2.38-2.32(m,3H),2.11-2.10(m,1H),2.09-2.07(m,1H),1.87-1.83(m,3H)。
实施例124
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％的甲酸水溶液中40％的乙腈洗脱，得到(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]-3-氟-吡咯烷-1-磺酰胺(48.54mg,47.81μmol,16％产率)as off-white solid.LCMS m/z(ESI):955.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.56(s,1H),8.59(s,2H),8.33(s,1H),7.86(d,J＝9.20Hz,1H),7.74(dd,J＝2.80,9.00Hz,2H),7.51-7.50(m,1H),7.43(d,J＝3.20Hz,1H),6.99(s,1H),6.51(d,J＝8.00Hz,1H),6.47(s,1H),6.11(d,J＝8.00Hz,1H),5.39(s,1H),5.26(s,1H),4.36-4.30(m,3H),3.94(s,2H),3.94(s,2H),3.68(s,2H),3.52(m,4H),3.41(s,2H),3.27-3.26(m,2H),2.93-2.90(m,1H),2.78-2.72(m,1H),2.15-2.07(m,6H),1.91-1.87(m,4H)。
实施例125
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]氮杂环丁烷-1-磺酰胺
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中35％乙腈洗脱，得到N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]氮杂环丁烷-1-磺酰胺(19mg,19.14μmol,15％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):923.2[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),10.40(s,1H),8.59(s,2H),8.33(s,1H),7.86(d,J＝8.80Hz,1H),7.75(dd,J＝3.20,9.00Hz,2H),7.52-7.50(m,1H),7.43(d,J＝2.80Hz,1H),7.03-6.99(m,1H),6.50(t,J＝12.80Hz,2H),6.11(d,J＝7.60Hz,1H),4.34-4.30(m,2H),3.98-3.90(m,2H),3.93-3.83(m,2H),3.81(t,J＝7.20Hz,3H),3.70-3.60(m,2H),3.60-3.45(m,4H),3.08(s,1H),2.89-2.82(m,1H),2.80-2.72(m,1H),2.62-2.58(m,1H),2.57-2.53(m,3H),2.15-2.06(m,5H),1.91-1.87(m,3H)。
实施例126
6-[2-氰基-3-[[环丙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中40％乙腈洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[环丙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉(73mg,72.72μmol,38％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):937.0[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.82(s,1H),9.90(s,1H),8.58(s,2H),8.34(s,1H),7.86-7.84(m,1H),7.74(d,J＝2.80Hz,2H),7.47-7.41(m,1H),7.39(d,J＝2.80Hz,1H),7.04-6.95(m,1H),6.51-6.46(m,2H),6.11(d,J＝7.60Hz,1H),4.39-4.32(m,2H),3.87-3.93(m,4H)3.70-3.55(m,6H),3.08-2.70(m,7H),2.63-2.58(m,2H),2.37-2.27(m,1H),2.18-1.80(m,6H),0.60(d,J＝18.00Hz,4H)。
实施例127
6-[2-氰基-3-[[环丙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中40％乙腈洗脱，得到产物6-[2-氰基-3-[[环丙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉(15mg,14.52μmol,7％产率)，为淡黄色固体。LCMS m/z(ESI):937.2[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.99(s,1H),9.99(s,1H),8.58(s,2H),8.32(s,1H),7.86(d,J＝9.20Hz,1H),7.76-7.73(m,2H),7.47-7.46(m,1H),7.39(t,J＝2.80Hz,1H),6.99(m,1H),6.52-6.50(m,1H),6.47-6.46(m,1H),6.11(d,J＝7.60Hz,1H),4.33-4.31(m,2H),3.95-3.92(m,2H),3.90-3.86(m,2H),3.69-3.65(m,2H),3.59-3.55(m,2H),3.52-3.49(m,2H),3.15-2.98(m,2H),2.95-2.85(m,2H),2.78(s,3H),2.75-2.73(m,1H),2.68-2.67(m,1H),2.61-2.60(m,1H),2.09-2.01(m,3H),2.09-2.01(m,3H)。
实施例128
(1S,5R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-磺酰胺
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％碳酸氢铵水溶液中45％乙腈洗脱，得到(1S,5R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-磺酰胺(67.69mg,69.16μmol,25％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):949.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.79(s,1H),9.58(s,1H),8.58(d,J＝5.20Hz,2H),8.30(s,1H),7.83(d,J＝8.80Hz,1H),7.70(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.48(s,1H),7.39(d,J＝2.80Hz,1H),7.28(s,1H),7.01(t,J＝8.00Hz,1H),6.49-6.44(m,2H),6.05(d,J＝7.60Hz,1H),4.33-4.32(m,1H),3.87(d,J＝26.40Hz,5H),3.64(s,4H),3.17(s,5H),2.77-2.71(m,2H),2.10-2.08(m,1H),1.90-1.74(m,5H),1.47-1.46(m,2H),0.48-0.47(m,1H),0.33-0.32(m,1H)。
实施例129
(3R,4R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3,4-二氟吡咯烷-1-磺酰胺
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％碳酸氢铵水溶液中40％乙腈洗脱，得到(3R,4R)-N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]-3,4-二氟吡咯烷-1-磺酰胺(52mg,53.21μmol,21％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):973.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),9.59(s,2H),8.59(s,1H),7.82(d,J＝9.20Hz,1H),7.69(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.38(d,J＝2.40Hz,1H),7.48-7.38(m,1H),7.00(t,J＝15.20Hz,1H),6.51-6.46(m,2H),6.20(d,J＝40.00Hz,1H),5.34-5.32(m,1H),5.22-5.20(m,1H),4.33-4.29(m,2H),3.89(d,J＝26.00Hz,4H),3.66(s,3H),3.59-3.50(m,4H),3.35-3.21(m,4H),2.70-2.60(m,2H),2.60(d,J＝16.00Hz,2H),2.10-2.07(m,3H),1.90-1.86(m,4H)。
实施例130
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]氮杂环丁烷-1-磺酰胺
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中35％乙腈洗脱，得到N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]氮杂环丁烷-1-磺酰胺(35mg,35.56μmol,21％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):923.2[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.75(s,1H),8.58(s,2H),8.30(s,1H),7.83(d,J＝8.80Hz,1H),7.70(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.50-7.40(m,1H),7.39(d,J＝2.80Hz,1H),7.38-7.30(m,1H),7.30-6.92(m,1H),6.48(t,J＝12.40Hz,2H),6.08(d,J＝7.20Hz,1H),4.33-4.31(m,1H),3.91-3.85(m,5H),3.70-3.50(m,9H),2.79-2.70(m,3H),2.60-2.52(m,2H),2.10-1.99(m,4H),1.93-1.80(m,6H)。
实施例131
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]环己基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:在环境温度和氮气氛下向包含1-溴-2-氟-4-硝基苯(4.0g，18.18mmol)和2-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(5.80g，21.79mmol)在1,4-二氧杂环(50mL)中的充分搅拌的溶液的250mL密封管中加入碳酸钠(1.0M,55.0mL)。通过向反应混合物中鼓入氮气10分钟使所得混合物脱气。随后，向反应混合物中加入Pd(dppf)Cl2.二氯甲烷(750mg，918.40μmol)，并加热至80℃达16小时。反应完成后，将反应混合物冷却至室温，倒入水(100mL)中，用乙酸乙酯(3×100mL)提取。合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗残留物。粗产物经快速硅胶柱色谱纯化，用30-40％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到8-(2-氟-4-硝基苯基)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯(4.40g，14.97mmol，82％产率)，为淡黄色粘性液体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝8.03-8.09(m,2H),7.63(t,J＝8.40Hz,1H),6.05(s,1H),3.94(s,4H),2.51-2.55(m,2H),2.42(s,2H),1.82(t,J＝6.40Hz,2H)。
步骤2:向包含8-(2-氟-4-硝基苯基)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯(4.40g，15.76mmol)在无水1,4-二噁烷(50mL)中的充分搅拌的溶液的250mL单颈圆底烧瓶中加入碳上氢氧化钯(20重量％50％水，1.50克，2.14毫摩尔)，通过将氢气鼓入10分钟使其氢饱和，并在环境温度下氢化(1个大气压)32小时。完成后，用氮气吹扫反应混合物，通过硅藻土垫过滤除去催化剂。在减压下浓缩滤液，得到4-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-3-氟-苯胺(3.70g，14.28mmol，91％产率)，为灰白色固体。该粗产物未经纯化即进入下一步。LCMS m/z(ESI):252.2[M+H]+。
步骤3:在氮气氛下，在0-5℃向4-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-3-氟-苯胺(3.70克，14.72毫摩尔)的无水二氯甲烷(50毫升)的搅拌溶液中加入三乙胺(4.50克，44.48毫摩尔，6.20毫升)，随后在相同温度下加入(2,2,2-三氟乙酰基)2,2,2-三氟乙酸酯(4.77克，22.70毫摩尔，3.20毫升)。将所得混合物在环境温度下搅拌16小时。反应完成后，向反应混合物中加入水(100mL)，并用二氯甲烷(3×100mL)提取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗残留物。粗化合物通过快速硅胶柱色谱纯化，用50-60％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到灰白色固体的N-[4-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-3-氟-苯基]-2,2,2-三氟-乙酰胺(4.40克，7.60毫摩尔，产率52％)。LCMS m/z(ESI):346.2[M-H]-。
步骤4:在环境温度和氮气氛下，向包含N-[4-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-3-氟-苯基]-2,2,2-三氟-乙酰胺(4.40g，12.67mmol，000)在无水二氯甲烷(30mL)中的充分搅拌溶液的250mL单颈圆底烧瓶中加入三氟乙酸(14.80g，129.80mmol，10mL)。所得混合物在环境温度下搅拌16小时。完成后，反应混合物在减压下浓缩。向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠溶液，并用二氯甲烷(3×100mL)提取。合并的有机层经硫酸钠干燥、过滤并减压浓缩。粗产物通过快速硅胶柱色谱纯化，用40-50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到2,2,2-三氟-N-[3-氟-4-(4-氧代环己基)苯基]乙酰胺(2.50克，8.16毫摩尔，64％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):302.3[M-H]-。
步骤5/步骤6:在环境温度和氮气氛下，向含有(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(200mg，359.32μmol)和2,2,2-三氟-N-[3-氟-4-(4-氧代环己基)苯基]乙酰胺在无水甲醇(5.0mL)中的充分搅拌溶液的25mL单颈圆底烧瓶中加入无水乙酸钠(60mg,731.41μmol,39.22μL)、乙酸(21.58mg,359.32μmol,20.55μL)和MP-CNBH3(500mg,359.32μmol)。将所得混合物在环境温度下搅拌32小时。完成后，将反应混合物通过硅藻土过滤，并将滤液减压浓缩。反应粗产物通过使用0.1％甲酸水溶液中的乙腈的制备型高效液相色谱纯化，得到260mg外消旋化合物。该外消旋化合物通过SFC-手性性纯化(柱:YMC纤维素SC[(250*30)mm，5μ]；流动相:二氧化碳:IPA中0.5％的异丙胺(50:50)；总流速:110g/min；回压:100巴；波长:254纳米；循环时间:11.0分钟)以提供N-(4-((1S,4s)-4-((R)-3-(6-(2-氰基-3-((N-乙基-N-甲基氨磺酰基)氨基)-6-氟苯氧基)-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)环己基)-3-氟苯基)-2,2,2-三氟乙酰胺(第一洗脱异构体，120mg，137.94μmol,38％产率)，为淡棕色粘性液体，和N-(4-((1R,4r)-4-((R)-3-(6-(2-氰基-3-((N-乙基-N-甲基氨磺酰基)氨基)-6-氟苯氧基)-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)环己基)-3-氟苯基)-2,2,2-三氟乙酰胺(第二洗脱异构体，110mg,126.18μmol,35％产率)，为淡棕色固体。LCMS(ESI):m/z 844.29[M+H]+。
注:第一洗脱异构体被任意指定为-顺式异构体，第二洗脱异构体被任意指定为-反式异构体。
步骤7:在环境温度下向含有充分搅拌的N-(4-((1S,4s)-4-((R)-3-(6-(2-氰基-3-((N-乙基-N-甲基氨磺酰基)氨基)-6-氟苯氧基)-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)环己基)-3-氟苯基)-2,2,2-三氟乙酰胺(120mg，142.20μmol)在甲醇(5.0mL)和水(2.0mL)的混合物中的溶液的25mL单颈圆底烧瓶中加入无水碳酸钾(100mg,723.56μmol,43.67μL)。所得混合物加热至50℃16小时。反应完成后，向反应混合物中加入水(30ml)，并用5％甲醇/二氯甲烷(3×50mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗残留物。粗残留物通过快速硅胶柱色谱纯化，用二氯甲烷中10-15％甲醇洗脱，得到(3R)-8-[4-(4-氨基-2-氟-苯基)环己基]-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(70mg，84.24μmol，产率59％)，为淡黄色固体。LCMS m/z(ESI):748.7[M+H]+。
步骤8:在环境温度和氮气气氛下向含有(3R)-8-[4-(4-氨基-2-氟-苯基)环己基]-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(70mg，93.60μmol)在无水N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL)中的充分搅拌溶液的10mL密封管反应器中加入碳酸氢钠(50mg,595.19μmol,23.15μL)和3-溴代哌啶-2,6-二酮(90mg,468.72μmol)。将所得混合物加热至70℃48小时。完成后，将反应混合物冷却至室温，加入水(20mL)，用二氯甲烷中10％异丙醇(3×50mL)中提取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗残留物。通过制备型高效液相色谱(X-BRIDGE C8(150*19)MM 5微米，0.1％甲酸水溶液:乙腈)纯化粗化合物，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]环己基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(840.00μg,0.895μmol,1％产率)，为黄色固体。LCMS m/z(ESI):859.2[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),8.32(s,1H),7.76(d,J＝8.80Hz,1H),7.64(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.47-7.36(m,1H),7.33(d,J＝9.20Hz,1H),7.29-7.23(m,1H),7.12-7.08(m,1H),6.46(t,J＝14.40Hz,2H),6.03(d,J＝8.00Hz,1H),5.32-5.22(m,1H),4.35-4.25(m,1H),4.17-4.11(m,1H),4.13-4.07(m,1H),2.98(q,J＝32.00Hz,3H),2.92-2.81(m,2H),2.67-2.51(m,5H),2.50-2.35(m,2H),2.14-2.07(m,3H),1.95-1.73(m,11H),1.59(s,3H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例132
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丁烷磺酰胺
以与实施例105-130相同的方式，使用环丁磺酰胺作为起始原料合成标题化合物。标题化合物通过反相制备型高效液相色谱纯化(柱:X-bridge C18 20x150m流动相:A:水中0.1％甲酸，B:乙腈]以得到N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]环丁烷磺酰胺(60mg，60.99μmol，18％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):922.2[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),10.01(s,1H),8.59(s,2H),8.33(s,1H),7.86(d,J＝9.20Hz,1H),7.73-7.87(m,1H),7.75(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.42-7.46(m,2H),6.95-7.05(m,1H),6.51(d,J＝8.00Hz,1H),6.48(d,J＝12.80Hz,1H),6.11(d,J＝7.60Hz,1H),4.01-4.39(m,3H),4.02(t,J＝7.60Hz,1H),3.87-3.93(m,4H),3.67(m,2H),3.42-3.61(m,2H),3.57(m,2H),2.81-3.20(m,3H),2.64-2.80(m,2H),2.20-2.41(m,4H),1.75-2.12(m,8H)。
实施例133
N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丁烷磺酰胺
以与实施例105-130相同的方式，使用环丁磺酰胺作为起始原料合成标题化合物。标题化合物通过反相制备型高效液相色谱纯化(柱:X-bridge C18 20x150m流动相:A:水中0.1％碳酸氢铵，B:乙腈]以得到N-[2-氰基-3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]环丁烷磺酰胺(55mg，58.77μmol,34％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):922.2[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.79(s,1H),10.05(bs,1H),8.57(s,2H),8.30(s,1H),7.82(d,J＝8.80Hz,1H),7.69(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.46(bs,1H),7.41(d,J＝2.80Hz,1H),7.32(dd,J＝4.00,9.20Hz,1H),7.03-6.98(m,1H),6.48(d,J＝6.40Hz,1H),6.45(d,J＝12.00Hz,1H),6.04(d,J＝7.60Hz,1H),4.34-4.30(m,1H),3.90-3.83(m,3H),3.82-3.74(m,2H),3.72-3.63(m,4H),3.63-3.35(m,4H),3.33-3.14(m,2H),2.77-2.71(m,2H),2.34-2.25(m,3H),2.16-2.07(m,3H),1.91-1.71(m,7H)。
实施例134和135
步骤1:在0℃下向包含在氮气氛下充分搅拌的叔丁基4-[5-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(3.0g，5.51mmol)在二氯甲烷(50.12mL)中的溶液的100mL单颈圆底烧瓶中加入N-溴代琥珀酰亚胺(883.10mg，4.96mmol，420.93μL)。将反应混合物在0℃下搅拌30分钟。完成后，用水将反应混合物淬灭，用二氯甲烷(2x 100mL)提取。合并有机相，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗产物。将粗产物与10％乙酸乙酯/石油醚研磨，得到黄色固体的4-[5-(5-溴-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.5g，3.97mmol，72％产率)。LCMS m/z(ESI):503.0[M+H]+。
步骤2:在室温和氮气气氛下向4-[5-(5-溴-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2克，3.97毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(40毫升)中的搅拌溶液中加入叔丁醇钾(3.88克，34.61毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(1.25克，7.95毫摩尔，917.93微升)。反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，用水(50mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(3x170mL)提取。合并的有机层用冷水(3x50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗产物。使用70-90％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，通过硅胶柱色谱从粗产物中纯化所需产物，得到浅棕色固体的4-[5-[5-溴-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.7g，2.17mmol，55％产率)。LCMS m/z(ESI):584.4[M+H-tBu]+。
步骤3:向密封管中4-[5-[5-溴-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.8克，1.25毫摩尔)在1,4-二噁烷(10毫升)和水(1毫升)的搅拌溶液中加入碳酸钾(517.92毫克，3.75毫摩尔，226.17微升)和(甲氧基甲基)三氟硼酸钾(474.57mg,3.12mmol)。反应混合物用氮气吹扫10分钟，然后加入Pd(dppf)Cl2.二氯甲烷(102.01mg，124.92μmol)，再次用氮气吹扫5分钟，然后在90℃下搅拌12小时。完成后，反应混合物用水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(3x20 mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。通过反相柱色谱(10mM碳酸氢铵水溶液:乙腈)从粗产物中纯化所需产物，得到4-[5-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-(甲氧基甲基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.22g，340.58μmol，27％产率)，为灰白色固体。LCMSm/z(ESI):506.5[M+H-CO2 tBu]+。
步骤4:在室温下向密封管中4-[5-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-(甲氧基甲基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.22g，363.28μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的搅拌溶液中加入碳酸铯(355.09mg，1.09mmol)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(125.50mg,908.20μmol)。将反应混合物在65℃下搅拌12小时。完成后，用水(20mL)稀释反应混合物。通过滤纸过滤反应混合物以去除荧光杂质。滤液用乙酸乙酯(3x30mL)提取。合并的有机层用冷水(3x20 mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到4-[5-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-(甲氧基甲基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.2g，255.47μmol，70％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):624.6[M+H-CO2 tBu]+。
步骤5:在氮气氛下，于5℃向4-[5-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-(甲氧基甲基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.2克，276.33微摩尔)在二氯甲烷(4毫升)中的搅拌溶液中加入4M氯化氢二噁烷(2毫升)溶液。反应混合物在室温下搅拌3小时。完成后，反应混合物在减压下浓缩，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-(甲氧基甲基)-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(0.19g，112.54μmol，41％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):624.7[M+H]+。
实施例134
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-(甲氧基甲基)-4-氧代喹唑啉
步骤6:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(54.50mg，136.30μmol)、N-乙基-N-异丙基-丙-2-胺(176.21mg，1.36mmol，237.48μL)、HATU(57.02mg，149.97μmol)和6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-(甲氧基甲基)-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(0.09g,136.34μmol)进行酰胺偶联。通过反相柱色谱(0.1％甲酸在水中:乙腈)纯化所需产物，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-(甲氧基甲基)-4-氧代-喹唑啉(7mg,6.55μmol,5％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):969.0[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.79(s,1H),8.60(s,2H),8.30(s,1H),7.72(d,J＝8.80Hz,1H),7.30(t,J＝8.80Hz,1H),7.01(d,J＝16.00Hz,1H),6.05(d,J＝7.60Hz,1H),5.20(s,2H),4.33-4.28(m,1H),3.89(d,J＝26.80Hz,5H),3.71-3.66(m,5H),3.06(d,J＝6.40Hz,3H),2.66(d,J＝20.00Hz,4H),2.10-2.05(m,2H),1.87-1.82(m,2H),1.82-1.68(m,3H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例135
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-(甲氧基甲基)-4-氧代喹唑啉
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步骤7:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[2-氟-4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸(54.50mg，136.30μmol)、N-乙基-N-异丙基-丙-2-胺(176.21mg，1.36mmol，237.48μL)、HATU(57.02mg，149.97μmol)和6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-(甲氧基甲基)-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(0.09g,136.34μmol)进行酰胺偶联。通过反相柱色谱(水中0.1％甲酸:乙腈)纯化所需产物，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟代苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-(甲氧基甲基)-4-氧代-喹唑啉(11mg,10.16μmol,7％产率)，为浅绿色固体。LCMS m/z(ESI):969.2[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.90(bs,1H),8.60(s,2H),8.30(s,1H),7.73(d,J＝8.80Hz,1H),7.59(bs,1H),7.33(d,J＝8.00Hz,2H),7.01(s,1H),6.49(d,J＝6.40Hz,1H),6.45(s,1H),6.07(d,J＝8.00Hz,1H),5.20(s,2H),4.32(s,1H),3.93-3.87(m,5H),3.64-3.51(m,4H),2.99(d,J＝13.20Hz,3H),2.77-2.68(m,7H),2.09(d,J＝8.80Hz,1H),1.89-1.80(m,6H),1.05(t,J＝6.80Hz,3H)。
实施例136
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-羟基-4-氧代喹唑啉
步骤1:在-78℃下，向叔丁基4-[5-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-甲氧基-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(250毫克，352.24微摩尔)在无水二氯甲烷(4毫升)中的搅拌溶液中滴加三氯化硼溶液1.0毫二氯甲烷(3.52毫摩尔，15毫升)。将所得内容物在室温下搅拌36小时。完成后，将反应混合物减压浓缩得到粗产物，并通过反相柱色谱纯化，用0.1％的甲酸水溶液中40％的乙腈洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-羟基-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(200mg，246.25μmol，70％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):596.3[M+H]+。
步骤2:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-羟基-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(100mg，167.90μmol)、2-[4-[2-氟-4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸(61.01mg,167.90μmol)/N,N-二异丙基乙胺(108.49mg,839.48μmol,146.22μL)和HATU(82.99mg,218.27μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过制备型高效液相色谱纯化(方法:0.1％甲酸水溶液:乙腈；柱:XSELECT C18(19×150)mm，5微米)，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[2-氟-4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-羟基-4-氧代-喹唑啉(7mg,6.76μmol,4％产率)，为棕色固体。LCMS m/z(ESI):941.2[M+H]+.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝11.73(s,1H),10.81(s,1H),8.63(s,2H),8.31(s,1H),7.51-7.46(m,2H),7.27-7.24(m,1H),7.20(d,J＝6.80Hz,1H),7.00(s,1H),6.47(t,J＝12.00Hz,2H),6.05(s,1H),4.32-4.31(m,1H),3.92-3.85(m,5H),3.64-3.63(m,5H),3.30-3.41(m,2H),3.08(s,4H),2.81-2.50(m,4H),2.08-2.06(m,3H),1.89-1.74(m,6H),1.06-1.02(m,3H)。
实施例137
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-羟基-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-羟基-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(70mg，117.53μmol)、2-[4-[2-氟-4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸(42.71mg,117.53μmol)、N,N-二异丙基乙胺75.95mg,587.64μmol,102.35μL)和HATU(58.09mg,152.79μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过制备型高效液相色谱纯化(方法:0.1％甲酸水溶液:乙腈；柱:X SELECT C18(19×150)mm，5微米)，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[2-氟-4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-5-羟基-4-氧代-喹唑啉(6mg,5.91μmol,5％产率)，为棕色固体。LCMS m/z(ESI):941.2[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝11.73(s,1H),10.81(s,1H),9.92(s,1H),8.63(s,2H),8.31(s,1H),7.48(t,J＝16.80Hz,2H),7.27-7.20(m,2H),7.01(s,1H),6.46(d,J＝12.00Hz,1H),6.06(d,J＝7.60Hz,1H),4.35-4.29(m,1H),3.91-3.85(m,5H),3.64(s,5H),3.30-3.41(m,1H),3.08(d,J＝7.20Hz,3H),2.69-2.52(m,9H),2.08(t,J＝3.60Hz,1H),1.91-1.76(m,5H),1.02(t,J＝5.20Hz,3H)。
实施例138
N-[3-[3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-2,4-二氟苯基]环戊烷磺酰胺
步骤1:向2,4-二氟苯胺(5.0克，38.73毫摩尔，3.94毫升)在二氯甲烷(40毫升)中的0℃冷却溶液中加入三氟乙酸酐(9.76克，46.47毫摩尔，6.56毫升)，随后加入三乙基胺(11.76克，116.18毫摩尔，16.19毫升)，并在室温下搅拌14小时。将反应混合物用水(40毫升)稀释，用二氯甲烷(100毫升)提取。有机层用碳酸氢钠溶液(30mL)、盐水(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩得到粗产物，该粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用10％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到棕色固体的N-(2,4-二氟苯基)-2,2,2-三氟乙酰胺(7.0g，30.97mmol，80％产率)。LCMS m/z(ESI):224.1[M-H]-。
步骤2:将N-(2,4-二氟苯基)-2,2,2-三氟乙酰胺(7.0克，31.10毫摩尔)在无水四氢呋喃(60毫升)中的溶液在-78℃下加入正丁基锂(1.6M，48.59毫升)，并将反应混合物搅拌15分钟。在相同温度下向反应混合物中加入硼酸三甲酯(4.85克，46.64毫摩尔，5.30毫升)，并搅拌3小时。将反应混合物在1.5N氯化氢(5毫升)中淬灭，用乙酸乙酯(60毫升)提取。有机层用碳酸氢钠溶液(20mL)、盐水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩得到粗产物。粗化合物通过硅胶柱色谱纯化，用20％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到[2,6-二氟-3-[(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]苯基]硼酸(5.1克，18.36毫摩尔，59％产率)，为棕色固体。LCMS m/z(ESI):268.1[M-H]-。
步骤3:在0℃下向[2,6-二氟-3-[(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]苯基]硼酸(5.1克，18.96毫摩尔)在四氢呋喃(40毫升)、乙酸(4毫升)中的搅拌溶液中加入加入过氧化氢(1.84克，18.96毫摩尔，1.68毫升，35％)，并在室温下搅拌反应混合物14小时。反应混合物用乙酸乙酯(30毫升)稀释，用水(10毫升)、盐水(10毫升)洗涤，经硫酸钠干燥并减压浓缩得到粗产物。所得粗产物经硅胶柱色谱纯化，用25％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到棕色固体的N-(2,4-二氟-3-羟基-苯基)-2,2,2-三氟-乙酰胺(3.5g，14.18mmol，75％产率)。LCMS m/z(ESI):240.0，[M-H]-。
步骤4:向N-(2,4-二氟-3-羟基-苯基)-2,2,2-三氟乙酰胺(3.4克，14.10毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)中的溶液中加入碳酸铯(4.59克，14.10毫摩尔)，随后在室温下加入5-羟基-2-硝基苯甲酸甲酯(2.78克，14.10毫摩尔)，并将反应混合物在50℃加热5小时。将反应混合物用乙酸乙酯(120mL)稀释，用水(40mL)、盐水(40mL)洗涤，经硫酸钠干燥并减压浓缩得到粗产物。所得粗产物经硅胶柱色谱纯化，用30％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到浅棕色固体的5-[2,6-二氟-3-[(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]苯氧基]-2-硝基苯甲酸甲酯(4.1克，9.09毫摩尔，64％产率)。LCMS m/z(ESI):419.0[M-H]-。
步骤5:在0-5℃下，向5-[2,6-二氟-3-[(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]苯氧基]-2-硝基苯甲酸甲酯(4.1克，9.76毫摩尔)的水溶液中加入氢氧化锂一水合物(695.99毫克，16.59毫摩尔，460.92微升)。将所得反应混合物在室温下搅拌3小时。完成后，减压除去反应溶剂得到粗化合物。粗化合物用水稀释，用1.5N盐酸酸化，用乙酸乙酯(20mL)提取。有机层经硫酸钠干燥并减压浓缩，得到浅棕色固体的5-[2,6-二氟-3-[(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]苯氧基]-2-硝基苯甲酸(3.8克，8.53毫摩尔，产率87％)。LCMS m/z(ESI):405.1[M-H]-。
步骤6:将5-[2,6-二氟-3-[(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]苯氧基]-2-硝基苯甲酸(680毫克，1.67毫摩尔)在乙酸乙酯(20毫升)中的溶液用氮气脱气5分钟，向反应混合物中加入10％碳钯(150毫克，1.41毫摩尔)，并在H2气球压力下搅拌4小时。反应混合物通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到2-氨基-5-[2,6-二氟-3-[(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]苯氧基]苯甲酸(510mg,1.24mmol,74％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):377.1[M+H]+。
步骤7:在室温下向4-(5-氨基嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(890.95毫克，3.19毫摩尔)、2-氨基-5-[2,6-二氟-3-[(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]苯氧基]苯甲酸(1.2克，3.19毫摩尔)在甲苯(7.98毫升)和四氢呋喃(3.99毫升)中的溶液中加入原甲酸三乙酯(945.37mg,6.38mmol,1.06mL)和乙酸(19.15mg,318.95μmol,18.26μL)。将所得反应混合物加热至110℃16小时。用水(10mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2x50mL)提取。合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用0-30％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂洗脱，得到4-[5-[6-[2,6-二氟-3-[(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.0g，1.50毫摩尔，产率47％)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):648.6[M+H]+。
步骤8:在室温下，向4-[5-[6-[2,6-二氟-3-[(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(950毫克，1.47毫摩尔)的乙醇(15毫升)溶液中加入三乙胺(2.23克，22.01毫摩尔，3.07毫升)。将所得反应混合物加热至80℃16小时。将反应混合物减压浓缩得到粗产物，粗产物用石油醚洗涤，得到4-[5-[6-(3-氨基-2,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.8克，1.45毫摩尔，99％产率)，为棕黄色粘稠液体。LCMS m/z(ESI):552.2[M+H]+。
步骤9:将1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(110.41mg,725.24μmol,108.24μL)加入4-[5-[6-(3-氨基-2,6-二氟苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(400mg，725.24μmol)在二氯甲烷(7.89mL)中的0℃冷却溶液中并搅拌10分钟。向反应混合物中加入环戊烷磺酰氯(122.31mg，725.24μmol，92.28μL)，并在室温下搅拌4小时。反应混合物用二氯甲烷(80mL)稀释，用水(30mL)、盐水(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥并在减压下浓缩得到粗产物。所得粗产物经硅胶柱色谱纯化，用60％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到浅棕色固体的4-[5-[6-[3-(环戊基磺酰氨基)-2,6-二氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(230mg，303.70μmol，42％产率)。LCMS m/z(ESI):684.2[M+H]+。
步骤10:在0℃下，向叔丁基4-[5-[6-[3-(环戊基磺酰氨基)-2,6-二氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(230mg，336.39μmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的搅拌溶液中加入在1,4-二噁烷(4M，3mL)中4M氯化氢，并将所得反应混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物减压浓缩得到粗品，将其用乙醚研磨得到N-[2,4-二氟-3-[4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉-6-基]氧基-苯基]环戊烷磺酰胺(210mg,327.16μmol,97％产率)，为淡棕色固体。LCMS m/z(ESI):584.6,[M+H]+。
步骤11:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用N-[2,4-二氟-3-[4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉-6-基]氧基-苯基]环戊烷磺酰胺(100mg，161.27μmol)、2-[4-[2-氟-4-[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸(58.60mg,146.57μmol)、HATU(61.32mg,161.27μmol)和N,N-二异丙基乙胺(83.37mg,645.09μmol,112.36μL)进行酰胺偶联。所得粗产物通过使用30g snap的反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中50％乙腈洗脱，得到N-[2,4-二氟-3-[3-[2-[4-[2-[4-[2-氟-4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-苯基]环戊烷磺酰胺(15mg,14.68μmol,9％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):929.0[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.83(s,1H),8.56(s,2H),8.32(s,1H),7.84(d,J＝8.80Hz,1H),7.73(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.49-7.34(m,3H),7.00(s,1H),6.49-6.44(m,2H),6.06(d,J＝5.60Hz,1H),4.36-4.27(m,1H),3.96-3.81(m,4H),3.68-3.54(m,5H),2.74-2.69(m,1H),2.61-2.57(m,2H),2.57-2.51(m,4H),2.15-2.04(m,1H),1.94-1.51(m,13H)。
实施例139
3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:在室温下向N-乙基-N-甲基-氨磺酰氯(342.93毫克，2.18毫摩尔，268.27微升)、4-[5-(3-氨基-2,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.2克，362.62微摩尔)在二噁烷(2毫升)中的搅拌溶液中加入吡啶(286.83mg,3.63mmol,293.28μL)。将所得混合物加热至90℃16小时。完成后，用水(10mL)稀释反应混合物，过滤出所得固体，得到棕色固体的叔丁基4-[5-[6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(0.15g，180.17μmol，产率50％)。LCMS，m/z:617.2[M-tBu+H]+。
步骤2:在二噁烷介导的N-Boc脱保护作用中通过4M氯化氢合成所需胺(程序A-D)。在叔丁基4-[5-[6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(0.15g，222.98μmol)上使用二噁烷(2mL)中氯化氢溶液4.0M进行N-Boc脱保护，得到粗6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟-苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(0.13g,169.09μmol,76％产率)，为棕色固体。LCMS m/z:573.6[M+H]+。
步骤3:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟-苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(65mg，113.52μmol)、2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(41.25mg,113.52μmol)、N,N-二异丙基乙胺(73.36mg,567.60μmol,98.87μL)和HATU(43.16mg,113.52μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％碳酸氢铵水溶液中40％乙腈洗脱，得到6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟-苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[2-氟-4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉(17mg,18.20μmol,16％产率)，为灰白色固体。LCMSm/z(ESI+):918.0[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.78(s,1H),9.80(s,1H),8.55(s,2H),8.32(s,1H),7.84(d,J＝8.80Hz,1H),7.73(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.45-7.35(m,3H),7.00(t,J＝8.40Hz,1H),6.46-6.42(m,2H),6.00(d,J＝7.60Hz,1H),4.33-4.27(m,1H),3.95-3.78(m,4H),3.75-3.65(m,2H),3.62-3.53(m,2H),3.28-3.18(m,3H),3.09(q,J＝36.00Hz,2H),3.02-2.93(m,2H),2.82-2.67(m,5H),2.04-2.22(m,3H),1.92-1.80(m,1H),1.73-1.58(m,4H),0.99(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例140
3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用2-[4-[2-氟-4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸(42.67mg，106.72μmol)、6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟-苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(65mg,106.72μmol)、N,N-二异丙基乙胺(68.97mg,533.62μmol,92.95μL)和HATU(40.58mg,106.72μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％碳酸氢铵水溶液中40％乙腈洗脱，得到6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟-苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[2-氟-4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉(9mg,9.21μmol,9％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI+):918.0[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.78(s,1H),8.56(s,2H),8.31(s,1H),7.83(d,J＝9.20Hz,1H),7.72(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.40-7.36(m,2H),7.30(t,J＝40.00Hz,1H),7.00(t,J＝8.40Hz,1H),6.47-6.42(m,2H),6.01(d,J＝7.60Hz,1H),-19.20-4.34(m,1H),3.95-3.86(m,2H),3.84-3.77(m,2H),3.75-3.68(m,2H),3.63-3.54(m,2H),3.28-3.20(m,2H),3.06(q,J＝24.00Hz,2H),2.98(d,J＝36.00Hz,2H),2.84-2.73(m,1H),2.67(s,3H),2.64-2.58(m,2H),2.18-2.05(m,3H),1.94-1.82(m,1H),1.72-1.60(m,4H),0.99(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例141
3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟苯甲酰基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:于-78℃向N-(2,4-二氟苯基)-2,2,2-三氟乙酰胺(3.01克，13.39毫摩尔)在THF(30毫升)的搅拌溶液中加入在可重新密封的化学密封瓶中在氩气下包装的正丁基锂，2.2M己烷溶液(1.6M，17.57毫升)中，并在相同温度下搅拌1小时。在-78℃下将5-[甲氧基(甲基)氨基甲酰基]-2-硝基苯甲酸甲酯(3.77克，14.06毫摩尔)在THF(10毫升)中的溶液滴加到反应混合物中，并在相同温度下进一步搅拌2小时。反应完成后，将反应混合物用冰冷水淬灭，用乙酸乙酯(2x100 mL)提取。将有机层干燥并浓缩得到粗产物。粗产物通过快速硅胶柱色谱纯化，用乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到淡黄色油状的5-[2,6-二氟-3-[(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]苯甲酰基]-2-硝基-苯甲酸甲酯(2.6克，5.47毫摩尔，41％产率)。LCMS m/z(ES+):430.8[M-H]-。
步骤2:在室温下，向5-[2,6-二氟-3-[(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]苯甲酰基]-2-硝基苯甲酸甲酯(2.6克，6.01毫摩尔)在THF(20毫升)的搅拌溶液中加入氢氧化锂一水合物，98％(1.0毫升，6.01毫升)。将内容物在室温下搅拌3.5小时。完成后，混合物用1.5N氯化氢酸化，用乙酸乙酯提取，用硫酸钠干燥，真空浓缩，得到5-[2,6-二氟-3-[(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]苯甲酰基]-2-硝基-苯甲酸(2.2克，4.26毫摩尔，71％产率)，为灰白色粘性固体。LCMS m/z(ES):417.3[M-H]-。
步骤3:在环境温度、氮气下，向5-[2,6-二氟-3-[(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]苯甲酰基]-2-硝基苯甲酸(750毫克，1.79毫摩尔)在无水乙醇(20毫升)中的搅拌溶液中加入钯碳，10％(375.00毫克，3.52毫摩尔)。将内容物在25℃和氢气球压力下搅拌16小时。反应完成后，用10％甲醇/二氯甲烷在氮气下通过硅藻土垫过滤混合物。将滤液减压浓缩，得到2-氨基-5-[2,6-二氟-3-[(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]苯甲酰基]苯甲酸(400mg，813.92μmol，45％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ES+):389.4[M+H]+。
步骤4:使用2-氨基-5-[2,6-二氟-3-[(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]苯甲酰基]苯甲酸(404.13毫克，1.04毫摩尔)、4-(5-氨基嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(290.76毫克，1.04毫摩尔)、原甲酸三乙酯(308.52mg,2.08mmol,346.27μL)和乙酸(12.50mg,208.18μmol,11.92μL)按照环化的一般程序(程序A-A)合成喹唑啉酮中间体。通过使用80％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂的硅胶色谱从粗产物中纯化所需化合物，得到4-[5-[6-[2,6-二氟-3-[(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]苯甲酰基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(90mg，88.23μmol，8％产率)，为淡黄色固体。LCMS m/z(ESI+):658.0[M-H]-。
步骤5:向4-[5-[6-[2,6-二氟-3-[(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]苯甲酰基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(80mg，121.29μmol)的乙醇(1mL)溶液中加入三乙胺(61.37mg，606.46μmol，84.53μL)，并将反应混合物在80℃下搅拌16小时。反应完成后，将混合物浓缩并用乙酸乙酯稀释和用水洗涤。将有机层干燥并浓缩，得到产物4-[5-[6-(3-氨基-2,6-二氟-苯甲酰基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(60mg，58.52μmol，48％产率)。LCMS m/z(ES+):508.2[M-tBu+H]+。
步骤6:在室温和氮气气氛下向叔丁基4-[5-[6-(3-氨基-2,6-二氟-苯甲酰基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(55mg，97.59μmol)在1,4-二噁烷(1.01mL)中的溶液中加入吡啶(38.60mg，487.97μmol，39.47μL)和N-乙基-N-甲基-氨磺酰氯(15.38mg,97.59μmol,12.03μL)。将反应混合物在60℃加热16小时。完成后，将反应混合物用冷水(10mL)稀释并提取至乙酸乙酯(20mL)。有机层经硫酸钠干燥并减压浓缩得到粗产物，其用石油醚研磨，得到棕色固体的4-[5-[6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟-苯甲酰基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(60mg，76.85μmol，79％产率)。LCMS m/z(ES):683.0[M-H]-。
步骤7:在二噁烷介导的N-Boc脱保护作用中用4M氯化氢合成所需胺(程序A-D)。在叔丁基4-[5-[6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟-苯甲酰基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(60mg，87.63μmol)上使用氯化氢、4M在1,4-二噁烷(4M，328.61μL)中进行N-Boc脱保护，得到6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟-苯甲酰基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(45mg,61.61μmol,70％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ES):585.2[M+H]+。
步骤8:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序A-E)。使用6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟-苯甲酰基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(20mg，32.20μmol)、2-[4-[2-氟-4-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸(11.70mg，29.27μmol)、N,N-二异丙基乙胺(12.49mg,96.61μmol,16.83μL)和HATU(18.37mg,48.30μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用50％乙腈在0.1％甲酸水溶液中洗脱，得到产物6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟-苯甲酰基]-3-[2-[4-[2-[4-[2-氟-4-[[3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉(3mg,3.00μmol,9％产率)，为灰白色固体。LCMSm/z(ESI):930.3[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.80(s,1H),8.57(d,J＝14.40Hz,1H),8.44(d,J＝20.00Hz,1H),8.36(dd,J＝2.40,8.60Hz,1H),7.95(d,J＝8.40Hz,1H),7.73-7.67(m,1H),7.36(t,J＝1.60Hz,1H),7.00(t,J＝8.40Hz,1H),6.45(d,J＝12.00Hz,2H),6.05(s,1H),4.30-4.40(m,1H),3.87(d,J＝28.40Hz,4H),3.66-3.62(m,3H),3.39-3.34(m,2H),2.74-2.73(m,3H),2.60-2.53(m,8H),2.08-2.07(m,2H),1.71(s,2H),1.24(s,4H),1.01(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例142和143
步骤1:按照实施例84中的步骤合成起始化合物。在室温下向4-[5-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1当量)在N,N-二甲基甲酰胺中的溶液中加入叔丁醇钾(2.5当量)和2-甲基-2-[甲基(氨磺酰基)氨基]丙烷(2当量。将所得反应混合物在60℃下搅拌16小时。经LC-MS确认反应完成后，进行后处理，粗化合物经柱色谱纯化，得到4-[5-[6-[3-[[叔丁基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2-氰基-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯。
步骤2:叔丁基4-[5-[6-[3-[[叔丁基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2-氰基-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(1当量)在二氯甲烷中的溶液加入二噁烷中4N氯化氢(10当量)。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。完成后，在减压下除去反应溶剂，并将粗化合物与甲基叔丁基醚(MTBE)一起研磨，得到产物6-[3-[[叔丁基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2-氰基-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉。
实施例142
6-[3-[[叔丁基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2-氰基-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉
在氮气氛下于室温下向2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(1当量)和6-[3-[[叔丁基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2-氰基-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(1当量)在N,N-二甲基甲酰胺中的溶液(4毫升/毫摩尔)中加入N,N-二异丙基乙基胺(4当量)。随后在相同温度下加入HATU(1.1当量)。反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，进行后处理，粗产物通过反相高效液相色谱纯化，得到目标化合物6-[3-[[叔丁基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2-氰基-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉。
实施例143
6-[3-[[叔丁基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2-氰基-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉
在氮气氛下于室温下向2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(1当量)和6-[3-[[叔丁基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2-氰基-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(1当量)在N,N-二甲基甲酰胺中的溶液(4毫升/毫摩尔)中加入N,N-二异丙基乙基胺(4当量)。随后在相同温度下加入HATU(1.1当量)。反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，进行后处理，粗产物通过反相高效液相色谱纯化，得到目标化合物6-[3-[[叔丁基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2-氰基-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基]氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉。
实施例A1-A3
中间体1
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-[2-(4-哌啶基)乙基]喹唑啉盐酸盐
将4-[2-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(386mg，614μmol)溶解于1,4-二噁烷(2.4ml)中。加入在1,4-二噁烷中的4M氯化氢(3.07mL，12.3mmol，Eq:20)，反应在室温下搅拌3小时。反应混合物真空浓缩并在高真空下干燥，得到标题化合物，为无色固体(386mg，90％纯度，100％产率)。m/z 529.4[M+H]+，ESI pos。
中间体2
2-[4-[2-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]乙基]-1-哌啶基]乙酸，2,2,2-三氟乙酸盐
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将中间体1(100毫克，142微摩尔，Eq:1)、2-溴乙酸叔丁酯(55.2毫克，283微摩尔，Eq:2)和DIPEA(110毫克，148微升，849微摩尔，Eq:6)在DMF(1ml)中的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物倾入水中，用乙酸乙酯(2x)提取。合并有机层，用水洗涤3次，用硫酸钠干燥，真空浓缩，得到90mg淡黄色蜡状固体。将残留物溶解于DCM(1ml)中，并加入TFA(444mg，300μl，3.89mmol，Eq:27.8)。反应混合物在室温下搅拌过夜，然后真空浓缩并在高真空下干燥，得到标题化合物，为黄色固体(125mg，80％纯度，100％产率)。
中间体3
n-[2-氰基-4-氟-3-[4-氧代-3-[2-(4-哌啶基)乙基]喹唑啉-6-基]氧基-苯基]环戊烷磺酰胺盐酸盐
将4-(2-(6-(2-氰基-3-(环戊烷磺酰胺基)-6-氟苯氧基)-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(380mg，595μmol，Eq:1)溶解于1,4-二噁烷(2.3ml)中。加入在1,4-二噁烷中的4M氯化氢(2.97毫升，11.9毫摩尔，Eq:20)。反应混合物在室温下搅拌3小时，然后真空浓缩并在高真空下干燥，得到标题化合物，为黄色固体(370mg，90％纯度，97％产率)。m/z 538.5[M-H]-，ESI neg。
实施例A1-A3的一般程序:
在室温下搅拌胺中间体(或其盐)(1当量)、羧酸中间体(1.2当量)、HATU(1.5当量)和DIPEA(3-5当量)在DMF(0.1M)中的溶液。反应由LCMS监测，如有必要，加入其他反应物，HATU和/或DIPEA。粗反应混合物通过制备反相高效液相色谱纯化。
实施例A1
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]乙基]-4-氧代-喹唑啉
根据实施例A1-A3的一般程序，2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酸盐酸盐(30毫克，53微摩尔)和中间体1(30毫克，69微摩尔)得到标题化合物，为浅灰色固体(33毫克，73％)。LCMS(ES+):m/z 856.7[M+H]+。
实施例A2
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]乙基]-4-氧代-喹唑啉，2,2,2-三氟乙酸盐
根据实施例A1-A3的一般程序，3-((4-(哌啶-4-基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐(14毫克，43微摩尔)和中间体2(30毫克，43微摩尔)得到标题化合物，为浅灰色固体(14毫克，33％)。LCMS(ES+):m/z856.4[M+H]+。
实施例A3
N-[2-氰基-3-[3-[2-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]乙基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]环戊烷磺酰胺2,2,2-三氟乙酸盐
根据实施例A1-A3的一般程序，2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酸盐酸盐(38毫克，62微摩尔，随后15毫克，33微摩尔)和中间体1(33毫克，52微摩尔)得到标题化合物，为淡绿色固体(18毫克，34％产率)。LCMS(ES+):m/z 867.6[M+H]+。
支架B的总体方案:
步骤A-环化的一般程序(程序B-A):在室温下向2-氨基-5-羟基-苯甲酸(1，1当量)在甲苯中:四氢呋喃(5:1)的搅拌溶液中加入无水原甲酸三乙酯(2当量)，随后加入胺(可商购或如本文所述)(2，1当量)并在密封管中将所得反应混合物在110℃加热18小时。用于使用胺盐(氯化氢、TFA等)的环化，添加催化乙酸(0.1当量)给出了更好的转化。完成后，将反应混合物冷却至室温。向反应混合物中加入碳酸氢钠水溶液，水层用乙酸乙酯提取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸发得到所需的粗产物。使用5％甲醇-二氯甲烷作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化粗物质，得到喹唑啉酮中间体(3)。
步骤B-O-芳化的一般程序(程序B-B):在室温下向喹唑啉酮中间体(3，1当量)在N,N-二甲基甲酰胺/THF(10mL)的搅拌溶液中加入碳酸铯/叔丁醇钾(1.1当量)和可商购的2,3,6-三氟苯甲腈(4，1.1当量)。将所得反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，用水淬灭反应混合物，用乙酸乙酯提取。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并在真空下浓缩得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，使用50％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到中间体(5)。
步骤C-磺酰化的一般程序(程序B-C):在室温下向中间体5(1当量)在N,N-二甲基甲酰胺中的溶液加入碳酸铯(2.5当量)和氨磺酰衍生物(可商购或如方法I和方法II中所述；2eq.)。将所得反应混合物在60℃下搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物冷却至室温，用水稀释并用乙酸乙酯提取。合并的有机层用盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗产物。用20-50％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化粗化合物，得到磺酰胺中间体(7)。
注:在大多数反应中，加入水后，观察到固体沉淀。这些固体通过滤纸过滤。滤液用乙酸乙酯提取。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并在真空下浓缩，得到具有适当纯度的磺酰胺中间体(7)。
步骤D-N-Boc脱保护的一般程序(程序B-D):在0℃下磺酰胺中间体(7，1当量)溶液溶于二氯甲烷中并加入TFA(5当量)或二噁烷中的4N氯化氢(10当量)。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。完成后，减压除去反应溶剂得到粗产物。用甲基叔丁基醚(MTBE)研磨粗化合物，以提供靶向配体(8)。
步骤E-酸-胺偶联的一般程序(程序B-E):
在氮气下于室温下向中间体酸(9，1当量)和胺(8，1当量)在N,N-二甲基甲酰胺中的搅拌溶液(4毫升/毫摩尔)中加入N,N-二异丙基乙基胺(4当量)，随后在相同温度下加入HATU(1.1当量)。反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，用水稀释反应混合物，用二氯甲烷中10％异丙醇提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩得到粗化合物。粗化合物通过反相纯化进行纯化，并将级分冻干，得到目标化合物(10)。
步骤E-酸-胺偶联的可选一般程序(程序B-F):在氮气氛下于室温下向酸(9，1当量)和胺(8，1当量)在N,N-二甲基甲酰胺中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙基胺(4当量)和COMU(1.1当量)。反应混合物在室温下搅拌6小时。完成后，将反应混合物用水(10mL)稀释，用二氯甲烷中10％异丙醇(3x20 mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗产物。通过反相纯化从粗产物中纯化所需产物，并将级分冻干，得到目标化合物(10)。
实施例144
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]乙基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:使用6-羟基-3H-喹唑啉-4-酮(5g，30.84毫摩尔)、叔丁醇钾(3.81g，33.92毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(5.33g，33.92毫摩尔，3.92毫升)按照O-芳化的一般程序(程序B-B)合成O-芳化的喹唑啉酮中间体，以获得化合物3,6-二氟-2-[(4-氧代-3H-喹唑啉-6-基)氧基]苯甲腈(1.5g，5.01毫摩尔)(6.8g,22.21mmol,72％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):300.20[M+H]+。
步骤2a:在0℃向4-(2-羟乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2克，8.72毫摩尔，1.92毫升)在二氯甲烷(20毫升)中的搅拌溶液中加入三乙胺(882.54毫克，8.72毫摩尔，1.22毫升)，随后在相同温度下加入对甲苯磺酰氯(1.83克，9.59毫摩尔)，并将所得反应混合物加热至室温12小时。完成后，用水(40mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(2x50 mL)提取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到4-[2-(对甲苯基磺酰氧基)乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.8克，粗)，无色液体。LCMS m/z(ESI):284.30[M+H-CO2 tBu]+。
步骤2:在室温下，向3,6-二氟-2-[(4-氧代-3H-喹唑啉-6-基)氧基]苯甲腈(1.5g，5.01毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中的搅拌溶液中加入叔丁醇钾(618.75mg，5.51毫摩尔)，随后加入4-[2-(对甲苯基磺酰氧基)乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.92g，5.01毫摩尔)，且将所得反应混合物在室温下搅拌12小时。反应完成后，用水(40mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2x50 mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用5％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂，得到4-[2-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.4g，3.93mmol，78％产率)，为浅棕色液体。LCMS m/z(ESI):509.3[M-H]-。
步骤3:使用叔丁基4-[2-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]乙基]哌啶-1-羧酸酯(0.5g，979.37微摩尔)、碳酸铯(797.75mg，2.45毫摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(270.68mg，1.96毫摩尔)，按照程序B-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用5％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂，得到4-[2-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(180mg，242.32μmol，25％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):529.3[M+H-CO2 tBu]+。
步骤4:按照程序B-D，使用4-[2-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(180毫克，286.30微摩尔)和TFA(592.00毫克，5.19毫摩尔，0.4毫升)合成所需的胺。用甲基叔丁基醚研磨所得的粗化合物，得到浅棕色半固体的6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-[2-(4-哌啶基)乙基]喹唑啉(200mg，粗)。LCMS m/z(ESI):529.2[M+H]+。
步骤5:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备标题化合物(程序B-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-[2-(4-哌啶基)乙基]喹唑啉(20毫克，37.84微摩尔)、HATU(17.26毫克，45.40微摩尔)和N,N-二异丙基乙基胺(24.45毫克，189.18微摩尔，32.95微升)和2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸(14.55mg,37.84μmol)以提供作为粗产物的标题化合物。为粗产物通过制备型高效液相色谱纯化(方法:10mM乙酸铵:乙腈；柱:BRIDGE C8(19×150)MM，5MIC)再次纯化和纯级分冻干，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[1-[2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]乙基]-4-氧代-喹唑啉(6.93毫克，7.65TMG摩尔，20％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):895.30[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.90(s,1H),8.39(s,1H),7.76(d,J＝8.80Hz,1H),7.65-7.64(m,2H),7.43(s,1H),7.34(s,2H),7.05(d,J＝8.00Hz,1H),4.36-4.32(m,2H),4.32-3.98(m,6H),3.10-2.90(m,6H),2.67(s,3H),2.67-2.60(m,6H),2.25-2.10(m,2H),2.05-1.85(m,4H),1.84-1.70(m,3H),1.70-1.45(m,5H),1.25-1.10(m,1H),1.03(t,J＝6.80Hz,3H)。
实施例145
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]丙基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:按照程序B-B，使用6-羟基-3H-喹唑啉-4-酮(5g，30.84毫摩尔)、叔丁醇钾(3.81g，33.92毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(5.33g，33.92毫摩尔，3.92毫升)合成O-芳基化喹唑啉酮中间体，得到化合物3,6-二氟-2-[(4-氧代-3H-喹唑啉-6-基)氧基]苯甲腈(6.8g,22.21mmol,72％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):300.2[M+H]+。
步骤2a:在0℃向4-(3-羟丙基)哌啶-1-羧酸酯(2.5g，10.27mmol)在二氯甲烷(15mL)中的搅拌溶液中加入三乙胺(2.60g，25.68mmol，3.58mL)，随后在相同温度下加入对甲苯磺酰氯(2.15g，11.30mmol)，并将所得反应混合物加热至室温12小时。反应完成后，用水(50mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2x70 mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用15％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到4-[3-(对甲苯基磺酰氧基)丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.2克，5.42毫摩尔，53％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):298.30[M+H-CO2 tBu]+。
步骤2:在室温下，向3,6-二氟-2-[(4-氧代-3H-喹唑啉-6-基)氧基]苯甲腈(1.5g，5.01毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的搅拌溶液中加入叔丁醇钾(618.75mg，5.51毫摩尔)，随后加入4-[3-(对甲苯基磺酰氧基)丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.19g，5.51毫摩尔)，将所得反应混合物在室温下搅拌3小时。反应完成后，用水(50mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2x100 mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用5％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂，得到4-[3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.4g，3.66mmol，73％产率)，为浅棕色液体。LCMS m/z(ESI):523.3[M-H]-。
步骤3:使用叔丁基4-[3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]丙基]哌啶-1-羧酸酯(700mg，1.33毫摩尔)、碳酸铯(1.09g，3.34毫摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(368.81mg，2.67毫摩尔)，按照程序B-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用5％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂，得到4-[3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(260mg，355.98μmol，27％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):641.3[M-H]-。
步骤4:按照程序B-D，使用4-[3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(260毫克，404.52微摩尔)和TFA(740.00毫克，6.49毫摩尔，0.5毫升)合成所需的胺。用甲基叔丁基醚研磨所得的粗化合物，得到浅棕色半固体的6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-[3-(4-哌啶基)丙基]喹唑啉(280mg，粗)。LCMS m/z(ESI):543.3[M+H]+。
步骤5:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-[3-(4-哌啶基)丙基]喹唑啉(20毫克，30.46微摩尔)、2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸(13毫克，30.89微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(371.00mg,2.87mmol,0.50mL)和HATU(14mg,36.82μmol)进行酰胺偶联。粗产物通过制备型高效液相色谱纯化方法进行纯化:10mM乙酸铵:乙腈。将纯级分冻干，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[3-[1-[2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]丙基]-4-氧代-喹唑啉(13.90mg，15.22μmol，50％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):909.20[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.90(s,1H),9.73(bs,1H),8.37(s,1H),7.76(d,J＝8.92Hz,1H),7.66-7.63(m,2H),7.53(t,J＝9.76Hz,1H),7.43(s,1H),7.34(dd,J＝6.92,8.00Hz,2H),7.05(d,J＝8.44Hz,1H),4.36-4.32(m,2H),3.98-3.93(m,5H),3.82-3.79(m,3H),3.04(q,J＝7.20Hz,2H),2.98-2.81(m,1H),2.75-2.70(m,3H),2.68-2.67(m,2H),2.57(s,3H),2.56-2.50(m,2H),2.37-2.33(m,1H),2.19-2.14(m,1H),2.10-1.90(m,5H),1.75-1.65(m,4H),1.55-1.45(m,1H),1.26-1.23(m,2H),1.10-1.07(m,1H),1.03(t,J＝7.16Hz,3H)。
实施例146
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]吡唑-4-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:使用2-氨基-5-羟基苯甲酸(1.5克，9.80毫摩尔)、原甲酸三乙酯(2.18克，14.69毫摩尔，2.44毫升)和4-(4-氨基吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.61克，9.80毫摩尔)，按照环化的一般程序(程序B-A)合成喹唑啉酮中间体。所需化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，使用3％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂，得到棕色固体的4-[4-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)吡唑-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.2克，2.53毫摩尔，26％产率)。LCMS m/z(ESI):409.9[M+H]+。
步骤2:按照一般程序(程序B-B)使用4-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)吡唑-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(700毫克，1.70毫摩尔)、叔丁醇钾(210.00毫克，1.87毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(293.99毫克，1.87毫摩尔，216.17微升)合成O-芳基化喹唑啉酮中间体以得到棕色固体的4-[4-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]吡唑-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.8g,粗)。LCMS m/z(ESI):547.2[M+H]+。
步骤3:按照一般程序(程序B-C)使用4-[4-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]吡唑-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(300毫克，546.91微摩尔)、碳酸铯(445.48毫克，1.37毫摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(151.15毫克，1.09毫摩尔)合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体。粗产物经硅胶快速柱色谱纯化，使用5％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂，得到浅棕色固体的4-[4-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]吡唑-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(120mg，173.70μmol，32％产率)。LCMS m/z(ESI):665.1[M-H]+。
步骤4:使用叔丁基4-[4-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]吡唑-1-基]哌啶-1-羧酸酯(120毫克，179.99微摩尔)和TFA(20.52毫克，179.99微摩尔，13.87微升)按照一般程序(程序B-D)合成所需的胺。用甲基叔丁基醚研磨所得的粗化合物，得到浅棕色半固体的6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-[1-(4-哌啶基)吡唑-4-基]喹唑啉(的TFA盐150mg，粗)。LCMS m/z(ESI):[M-H]+565.20。
步骤5:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-[1-(4-哌啶基)吡唑-4-基]喹唑啉(20mg，35.30μmol)、2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸(13mg，30.89μmol)、N,N-二异丙基乙胺(371.00mg,2.87mmol,0.50mL)和HATU(14mg,36.82μmol)进行酰胺偶联。粗物质通过制备型高效液相色谱纯化方法进行纯化:10mM乙酸铵:乙腈。将纯级分冻干，得到产物6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[1-[1-[2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡唑-4-基]-4-氧代-喹唑啉(9.60mg，10.24μmol，35％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):933.20[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.90(s,1H),9.89(bs,1H),8.46(s,1H),8.34(s,1H),7.90(s,1H),7.82(d,J＝8.80Hz,1H),7.67(dd,J＝8.40,13.00Hz,1H),7.59(t,J＝10.00Hz,1H),7.43(d,J＝3.20Hz,2H),7.38-7.34(m,1H),7.06(d,J＝8.80Hz,2H),4.57-4.50(m,1H),4.41(d,J＝43.60Hz,1H),4.35-4.32(m,1H),4.15-4.00(m,2H),3.98(s,3H),3.06(q,J＝7.20Hz,2H),2.88-2.85(m,3H),2.76-2.68(m,3H),2.65(s,3H),2.64-2.61(m,2H),2.37-2.33(m,1H),2.19-2.11(m,4H),2.08-2.00(m,5H),1.96-1.76(m,2H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例147
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[7-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:使用2-氨基-5-羟基苯甲酸(3.50克，22.88毫摩尔)、原甲酸三乙酯(3.70克，24.96毫摩尔，4.15毫升)和2-氨基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(5克，20.80毫摩尔)，按照环化的一般程序(程序B-A)合成喹唑啉酮中间体。使用80％乙酸乙酯(在石油醚中)作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化所需化合物，得到2-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(4.5g，11.39mmol，55％产率)，为灰白色固体。LCMSm/z(ESI):386.0[M+H]+。
步骤2:O-芳基化的喹唑啉酮中间体通过使用2-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(4.5克，11.67毫摩尔)、叔丁醇钾(1.57克，14.01毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(2.02克，12.84毫摩尔，1.44毫摩尔)按照O-芳基化的一般程序(程序B-B)合成。通过使用80％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂的硅胶快速柱色谱从粗产物中纯化所需化合物，得到半固体的2-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(6.0g,11.01mmol,94％产率)。LCMS m/z(ESI):523.2[M+H]+。
步骤3:使用叔丁基2-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯(3.0克，5.74毫摩尔)、碳酸铯(5.61克，17.22毫摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(1.59克，11.48毫摩尔)，按照程序B-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体。完成后，用水(20ml)稀释反应混合物，过滤出所得固体。滤液用乙酸乙酯(2x 60ml)提取，分离的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到2-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(2.2g，3.23mmol，产率56％)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):641.2[M+H]+。
步骤4:通过三氟乙酸介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序B-D)。在叔丁基2-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯(2.2克，3.43毫摩尔)上，使用三氟乙酸，99％(3.92克，34.34毫摩尔，2.65毫升)进行N-Boc脱保护，得到液体胶状物的3-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(2.1g,3.13mmol,91％产率)。LCMS m/z(ESI):539.0[M+H]+。
步骤5:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸(161.11mg，381.89μmol)、3-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(0.25g,381.89μmol)、N,N-二异丙基乙胺(246.79mg,1.91mmol,332.60μL)和HATU(217.81mg,572.84μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％的甲酸中45％的乙腈洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[7-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]-4-氧代喹唑啉(194mg,213.29μmol,56％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):908.3[M+H]+.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.56(s,1H),9.81(bs,1H),8.41(s,1H),7.78(d,J＝8.80Hz,1H),7.66-7.63(m,3H),7.45(d,J＝8.00Hz,1H),7.35(d,J＝2.80Hz,2H),7.06(d,J＝8.40Hz,1H),4.98(d,J＝8.40Hz,1H),3.99(s,3H),3.92(t,J＝6.40Hz,3H),3.53-3.43(m,5H),3.05(q,J＝7.20Hz,2H),2.76(t,J＝6.80Hz,5H),2.67(s,3H),2.35-2.33(m,5H),1.96-1.77(m,5H),1.77-1.61(m,4H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例148
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟甲氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:在密封管中向1-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮(1.5g，4.64mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液中加入4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(2.87g，9.28mmol)和氟化铯(1.41g,9.28mmol,342.28μL)。反应混合物用氮气脱气10分钟，然后加入与二氯甲烷复合的[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(758.11毫克，928.38微摩尔)。将反应混合物在100℃下搅拌16小时。完成后，用水(70mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3×100mL)提取。合并的有机层用冷水(3×70mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗混合物通过柱色谱(硅胶)纯化，使用pet醚中70-80％乙酸乙酯作为洗脱剂，得到4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(1.85g，3.24mmol，70％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):426.3[M+H]+。
步骤2:向叔丁基4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸酯(1.85克，4.35毫摩尔)在甲醇(20毫升)和乙酸乙酯(20毫升)中的溶液中加入二羟基钯(3.5克，24.92毫摩尔)，通过氢气鼓泡10分钟使其氢饱和。内容物在室温下氢化(1个大气压)16小时。完成后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并用甲醇(200mL)洗涤。将滤液减压浓缩，得到4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.5g，2.47毫摩尔，产率57％)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):321.8[M-Boc+H]+。
步骤3:在0℃下向叔丁基4-[3-(2,4-二噁烷氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]哌啶-1-羧酸酯(1.5g，3.51mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入氯化氢溶液(4.0M在二噁烷中，15mL)。反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，反应混合物在减压下浓缩，得到1-[1-甲基-6-(4-哌啶基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(1.45g,3.99mmol)，为灰白色固体，其无需进一步纯化而继续进行。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.57(s,1H),8.77(s,1H),7.61(d,J＝11.20Hz,1H),7.40(s,1H),7.03(d,J＝11.20Hz,1H),3.98(s,3H),3.91(t,J＝8.80Hz,2H),3.03(d,J＝14.40Hz,3H),2.76(t,J＝9.20Hz,2H),2.44-2.32(m,3H),1.98-1.87(m,3H)。
步骤4:在室温下，向1-[1-甲基-6-(4-哌啶基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(1.45克，3.99毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)和三乙胺(2.02克，19.93毫摩尔，2.78毫升)中的溶液中加入2-溴乙酸叔丁酯(1.17克，5.98毫摩尔，876.70微升)。反应混合物在氮气氛下于室温下搅拌16小时。完成后，将反应混合物倒入冰冷水(50mL)中，用乙酸乙酯(3×70mL)提取。有机层用冷水(3×30mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.35g,2.99mmol,75％产率)，为浅棕色固体，无需进一步纯化即可使用。LCMS m/z(ESI):442.3[M+H]+。
步骤5:在氮气氛下，于5℃向2-[4-[3-(2,4-二噁烷氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.35克，3.06毫摩尔)的二氯甲烷(15毫升)溶液中加入氯化氢溶液(4.0毫摩尔，二噁烷中，14毫升)。反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，反应混合物在减压下浓缩，得到2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸(1.45克，3.44毫摩尔)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):386.2[M+H]+。
步骤6:通过COMU介导的酸-胺偶联反应制备标题化合物(程序B-F)。使用2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸(195.62mg，463.69μmol)、3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(0.25g,421.54μmol)、N,N-二异丙基乙胺(272.40mg,2.11mmol,367.12μL)和[[(Z)-(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代-亚乙基)氨基]氧基-吗啉代-亚甲基]-二甲基铵；六氟磷酸盐(198.58mg,463.69μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中50％的乙腈洗脱，得到3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(182mg,195.61μmol,46％产率)，为粉红色固体。LCMS m/z(ESI):922.3[M-H]-；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.57(s,1H),9.76(s,1H),8.35(s,1H),7.78(d,J＝8.80Hz,1H),7.67(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.60(d,J＝8.00Hz,2H),7.44(s,1H),7.35(d,J＝3.20Hz,2H),7.06(d,J＝8.00Hz,1H),5.32(s,1H),4.20-4.13(m,2H),3.98(s,1H),3.91(t,J＝6.80Hz,3H),3.80-3.74(m,1H),3.50(s,2H),3.06(d,J＝7.20Hz,2H),2.78-2.70(m,6H),2.66(s,4H),2.49-2.38(m,4H),2.14-2.07(m,1H),2.05-1.89(m,4H),1.83-1.50(m,5H),1.04(t,J＝6.80Hz,3H)。
实施例149
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[7-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用3-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(0.25g，433.22μmol)、2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸(182.34mg,433.22μmol)、HATU(215.28mg,563.19μmol)和N,N-二异丙基乙胺(296.80mg,2.30mmol,0.4mL)进行酰胺偶联。所得粗化合物通过反相柱色谱纯化[流动相A:0.1％乙酸铵水溶液，流动相B:乙腈；柱:100gRf C18]以得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[7-[2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]-4-氧代-喹唑啉(130mg,139.43μmol,32％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):907.4[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.90(s,1H),9.83(bs,1H),8.41(s,1H),7.77(d,J＝9.20Hz,1H),7.65(dd,J＝6.00,7.20Hz,2H),7.51-7.60(m,1H),7.44(s,1H),7.34(d,J＝2.80Hz,2H),7.06(d,J＝8.00Hz,1H),4.91-5.01(m,1H),4.34(dd,J＝5.20,9.80Hz,1H),3.99(s,3H),3.41-3.55(m,4H),3.3-3.21(m,1H),3.01-3.06(m,2H),2.75-2.91(m,1H),2.61-2.71(m,6H),2.52-2.58(m,2H),2.25-2.45(m,5H),2.13-2.21(m,2H),1.90-2.05(m,4H),1.55-1.79(m,5H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例150
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
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步骤1:喹唑啉酮中间体的合成采用3-氨基-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯.HCl(15克，51.23毫摩尔)、2-氨基-5-羟基苯甲酸(7.85克，51.23毫摩尔)、原甲酸三乙酯(10.63克，71.72毫摩尔，11.93毫升)，按照环化的一般程序(程序B-A)进行。将粗化合物与20％乙酸乙酯/石油醚研磨，得到棕色固体的3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(12.0g，25.29mmol，49％产率)。LCMS m/z(ESI):402.20[M+H]+。
步骤2:按照O-芳化的一般程序(程序B-B)使用叔丁基3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(12.0克，25.11毫摩尔)、碳酸铯(24.54克，75.33毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(5.13克，32.66毫摩尔，3.77毫升)合成O-芳化的喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶柱色谱纯化，用60％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(9.0克，16.54毫摩尔，66％产率)，为灰白色固体，以及1.8g。LCMS m/z(ESI):539.2[M+H]+。
步骤3:对叔丁基3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(9.0克，16.54毫摩尔)进行手性SFC纯化以拆分对映体。外消旋中间体使用Lux A1柱(250mm×30mm；5微米)用40％异丙醇/二氧化碳和甲醇中0.5％异丙胺作为共溶剂进行洗脱(流速:4ml/min；出口压力:100巴)以提供3.5g第一洗脱异构体和3.7g第二洗脱异构体。
两种异构体的构型可任意指定如下。
对映体1:第一洗脱异构体被任意指定为叔丁基(S)-3-(6-(2-氰基-3,6-二氟苯氧基)-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯
对映体2:第二洗脱异构体被任意指定为叔丁基(R)-3-(6-(2-氰基-3,6-二氟苯氧基)-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯。
步骤4a:在0℃下，向N-乙基-N-甲基-氨磺酰氯(10克，63.44毫摩尔，7.81毫升)的甲醇(20毫升)溶液中加入7M氨(7M，30毫升)，并在室温下搅拌反应混合物14小时。将反应混合物减压浓缩得到粗产物。将粗化合物用水(150mL)稀释，用乙酸乙酯(2x150 mL)提取。合并的有机层用碳酸氢钠溶液(100ml)、盐水(100ml)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩得到粗产物，该粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用40％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(7.0g，48.12mmol，76％产率)，为无色液体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝6.65(s,2H),2.98(q,J＝7.20Hz,2H),2.61(s,3H),1.09(t,J＝7.20Hz,3H)。
步骤4:按照一般程序(程序B-C)使用叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(3.7克，6.87毫摩尔)、碳酸铯(5.60克，17.18毫摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(1.42g,10.31mmol)合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体。将粗化合物与石油醚中10％二氯甲烷研磨，得到叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(2.8克，3.58毫摩尔，52％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):601.0[M+H-tBu]+。
步骤5:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序B-D)。对叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(2.7克，4.11毫摩尔)和在1,4-二噁烷(4M，36.68毫升)中的4M氯化氢溶液进行N-Boc脱保护。将反应混合物减压浓缩得到粗产物，其用二乙醚研磨，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷的盐酸盐(2.7克，3.90毫摩尔，95％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):557.0[M+H]+。
步骤6:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(300mg，404.67μmol)、2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸(155.57mg,404.67μmol)、N,N-二异丙基乙胺(209.21mg,1.62mmol,281.95μL)和HATU(153.87mg,404.67μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中50％的乙腈洗脱，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(102mg,107.04μmol,26％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):923.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.89(s,1H),9.86(bs,1H),8.35(s,1H),7.78(d,J＝8.80Hz,1H),7.66(dd,J＝8.80,3.20Hz,2H),7.55(s,1H),7.44(bs,1H),7.35(d,J＝3.20Hz,1H),7.06(d,J＝8.40Hz,1H),5.34(s,1H),4.35-4.32(m,1H),4.18-4.13(m,2H),3.98(d,J＝2.00Hz,3H),3.81-3.72(m,2H),3.51(bs,2H),3.47-3.36(m,3H),3.05(d,J＝7.60Hz,3H),2.83-2.79(m,1H),2.68-2.61(m,6H),2.51-2.46(m,2H),2.30-2.14(m,3H),2.10-1.90(m,4H),1.86-1.62(m,4H),1.60-1.52(m,1H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例151
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(170mg，286.64μmol)、2-[1-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-哌啶基]乙酸(120.65mg,286.64μmol)、N,N-二异丙基乙胺(148.18mg,1.15mmol,199.71μL)和HATU(108.99mg,286.64μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中50％乙腈洗脱，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(68mg,68.42μmol,24％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):923.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.86(s,1H),10.20(s,1H),8.36(s,1H),7.92-7.81(m,1H),7.80(d,J＝9.20Hz,1H),7.70(dd,J＝9.00,3.20Hz,1H),7.47(d,J＝9.20Hz,2H),7.36(d,J＝2.80Hz,1H),6.90(d,J＝8.40Hz,1H),6.83(s,1H),5.35-5.29(m,1H),4.25(dd,J＝9.40,5.20Hz,1H),4.17-4.10(m,2H),3.88(m,3H),3.79-3.70(m,3H),3.51-3.49(m,1H),3.35-3.40(m,2H),3.18-3.13(m,2H),2.78(s,3H),2.73(s,1H),2.70-2.51(m,2H),2.60-2.54(m,1H),2.34-2.28(m,3H),2.18-2.15(m,1H),2.08-2.05(m,1H),1.89(s,1H),1.80-1.64(m,7H),1.35-1.24(m,2H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例152
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(180mg，292.88μmol)、2-[1-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(127.96mg,292.88μmol)、N,N-二异丙基乙胺(151.41mg,1.17mmol,204.06μL)和HATU(122.50mg,322.17μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％的甲酸水溶液中43％的乙腈洗脱，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(101mg,100.59μmol,34％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):939.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.85(s,1H),10.19(s,1H),8.36(s,1H),7.87(bs,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.70(dd,J＝9.00,2.80Hz,1H),7.51(d,J＝3.60Hz,1H),7.47(d,J＝9.20Hz,1H),7.37(d,J＝3.20Hz,1H),6.91(d,J＝9.20Hz,1H),6.85(s,1H),5.47-5.29(m,1H),5.02(s,1H),4.32-4.25(m,1H),4.30-4.20(m,2H),3.89(s,2H),3.85-3.74(m,1H),3.72-3.61(m,1H),3.50(d,J＝11.60Hz,3H),3.28-3.16(m,4H),2.79(s,3H),2.63-2.56(m,4H),2.40-2.28(m,4H),2.19-2.10(m,2H),2.09-2.01(m,1H),1.76-1.68(m,7H),1.06(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例153
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:使用叔丁基3-氨基-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(5.0克，19.66毫摩尔)、2-氨基-5-羟基-苯甲酸(3.01克，19.66毫摩尔)、原甲酸三乙酯(7.28克，49.14毫摩尔，8.17毫摩尔)和乙酸(118.04毫克，1.97毫摩尔，112.42微升)按照环化的一般程序(程序B-A)合成喹唑啉酮中间体。粗化合物经用乙酸乙酯/石油醚的硅胶快速柱色谱纯化，得到棕色固体的3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(5.6克，13.72毫摩尔，70％产率)。外消旋环化化合物使用手性SFC纯化进行手性拆分。使用Chiralcel OX-H柱(流速:3毫升/分钟，共溶剂:30％甲醇，出口压力:100巴，温度:35℃)将3.0克外消旋环化化合物进行SFC纯化。SFC纯化后，获得1.3g第一洗脱异构体(对映体1)和1.3g第二洗脱异构体(对映体2)。第一洗脱异构体的立体化学被任意指定为S-对映体，第二洗脱异构体被任意指定为R-对映体。LCMS m/z(ESI):400.2[M+H]+。
两种异构体的构型可任意指定如下。
对映体1:第一洗脱异构体被任意指定为3-[(3S)-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯
对映体2:第二洗脱异构体被任意指定为3-[(3R)-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯
步骤2:通过使用叔丁基3-[(3S)-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1.30克，3.25毫摩尔)、叔丁醇钾(730.32毫克，6.51毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(511.21毫克，3.25毫摩尔，375.89微升)按照O-芳基化的一般程序(程序B-B)合成O-芳基化的喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用60％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂进行洗脱，得到叔丁基(3S)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1.2克，1.71毫摩尔，53％产率)，为灰白色固体。LCMSm/z(ESI):481.1[M+H-tBu]+。
步骤3:使用叔丁基(3S)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1.20克，2.24毫摩尔)、碳酸铯(1.82克，5.59毫摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(618.10毫克，4.47毫摩尔)按照程序B-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体以得到叔丁基(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(960.0mg,1.01mmol,45％产率)。为无色液体。LCMS m/z(ESI):653.2[M-H]-。
步骤4:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序B-D)。N-Boc脱保护是在叔丁基(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(400.00mg，610.92μmol)上使用氯化氢二噁烷(4M，3.0mL)溶液进行的。所得残留物用二乙醚(2x 10mL)研磨并在减压下干燥，得到黄色固体的3-[(3S)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(360.0mg，542.20μmol，89％产率)。LCMS m/z(ESI):555.2[M+H]+。
步骤5:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备标题化合物(程序B-E)。使用3-[(3S)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(100mg，156.86μmol)、2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸(60.30mg,156.86μmol)、N,N-二异丙基乙胺(81.09mg,627.44μmol,109.29μL)和HATU(59.64mg,156.86μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中50％乙腈洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉(40mg,40.08μmol,26％产率)，为灰状固体。LCMS m/z(ESI):921.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.89(s,1H),9.89(s,1H),8.44(d,J＝3.20Hz,1H),7.78(d,J＝8.80Hz,1H),7.66(dd,J＝9.00,3.20Hz,1H),7.44(s,1H),7.40-7.38(m,1H),7.36(d,J＝2.80Hz,1H),7.07(d,J＝8.00Hz,1H),5.12-5.01(m,1H),4.35(dd,J＝5.20,10.00Hz,1H),3.99(s,4H),3.69-3.55(m,1H),3.44-3.32(m,5H),3.10-3.08(m,3H),2.93-2.80(m,2H),2.71-2.52(m,6H),2.43-2.31(m,2H),2.16-1.99(m,9H),1.86-1.83(m,3H),1.66-1.57(m,3H),1.51-1.43(m,1H),1.07-1.03(m,3H)。
实施例154
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸(192.70mg，456.78mol)、3-[(3S)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(0.27g,456.78μmol)、N,N-二异丙基乙胺(295.18mg,2.28mmol,397.81μL)和HATU(260.52mg,685.17μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用在0.1％乙酸铵水溶液中50％的乙腈洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸-3-基]-4-氧代-喹唑啉(18mg,18.52μmol,4％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):922.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.56(s,1H),9.65(bs,1H),8.44(d,J＝4.00Hz,1H),7.77(d,J＝8.80Hz,1H),7.66(d,J＝2.80Hz,1H),7.64(d,J＝2.80Hz,1H),7.60(d,J＝8.40Hz,1H),7.44(s,1H),7.35(s,2H),7.06(d,J＝8.40Hz,1H),5.04(t,J＝11.60Hz,1H),3.98(s,3H),3.92(t,J＝6.80Hz,2H),3.59-3.51(m,1H),3.49-3.34(m,3H),3.15(q,J＝6.80Hz,2H),2.96-2.81(m,2H),2.76(t,J＝6.80Hz,2H),2.68-2.67(m,2H),2.65(s,3H),2.12-2.09(m,4H),1.98-1.96(m,4H),1.85-1.65(m,3H),1.64-1.47(m,6H),1.03(t,J＝10.80Hz,3H)。
实施例155
9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-3-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷
步骤1:使用2-氨基-5-羟基苯甲酸(3.14克，20.49毫摩尔)、原甲酸三乙酯(4.14克，27.94毫摩尔，4.65毫升)和9-氨基-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(5克，18.63毫摩尔)，按照环化的一般程序(程序B-A)合成喹唑啉酮中间体。使用50％乙酸乙酯(在石油醚中)作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化所需化合物，得到棕色固体的9-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(5.6克，10.78毫摩尔，58％产率)。LCMS m/z(ESI):414.2[M+H]+。
步骤2:使用9-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(5.5克，13.30毫摩尔)、碳酸铯(13.00克，39.90毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(4.18克，26.60毫摩尔，3.07毫升)按照O-芳化的一般程序(程序B-B)合成O-芳化的喹唑啉酮中间体。使用70-80％乙酸乙酯(在石油醚中)作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化所需化合物，得到淡黄色固体的9-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(3.6克，6.05毫摩尔，46％产率)。LCMS m/z(ESI):551.2[M+H]+。
步骤3:使用叔丁基9-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸酯(3.6克，6.54毫摩尔)、碳酸铯(2.13克，6.54毫摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(903.53毫克，6.54毫摩尔)，按照程序B-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体。将反应混合物在60℃下搅拌12小时。完成后，用水(100mL)稀释反应混合物。通过滤纸过滤反应混合物以去除荧光杂质。滤液用乙酸乙酯(3×150mL)提取。合并的有机层用冷水(3×50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到淡黄色固体的叔丁基9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸酯(1.8g，2.27mmol，产率35％)。LCMS m/z(ESI):669.2[M+H]+。
步骤4:在二噁烷介导的N-Boc脱保护中，由4M氯化氢合成所需的胺(程序B-D)。在氮气氛下，在5℃下，使用在1,4-二噁烷中氯化氢，99％(4M，20mL)对9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯进行N-Boc脱保护。反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，反应混合物在减压下浓缩，得到粗产物9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷(1.8克，2.41毫摩尔，90％产率)，为乳白色固体。LCMS m/z(ESI):569.2[M+H]+。
步骤5:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸(76.69mg，181.78μmol)、9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷0.1g,165.26μmol)、N,N-二异丙基乙胺(213.58mg,1.65mmol,287.85μL)和HATU(69.12mg,181.78μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用在0.1％的甲酸水溶液中50％的乙腈洗脱，得到9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷(36.54mg,37.20μmol,23％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):935.9[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.56(s,1H),9.86(s,1H),8.53(d,J＝8.00Hz,1H),7.83-7.81(m,1H),7.79(d,J＝9.20Hz,1H),7.69(dd,J＝3.20,8.80Hz,1H),7.63(d,J＝8.80Hz,1H),7.50-7.46(m,1H),7.44(s,1H),7.38(t,J＝2.40Hz,1H),7.19(s,1H),4.51(s,1H),4.29(s,2H),4.00(s,3H),3.92(t,J＝6.80Hz,3H),3.55(s,4H),3.19-3.13(m,6H),2.78-2.75(m,5H),2.21-2.01(m,6H),1.93-1.65(m,6H),1.50-1.29(m,4H),1.08-1.04(m,3H)。
实施例156
9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-3-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷(100mg，175.85μmol)、2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸(81.12mg,211.02μmol)、N,N-二异丙基乙胺(113.64mg,879.26μmol,153.15μL)和HATU(73.55mg,193.44μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用40-45％甲酸缓冲液在乙腈中洗脱，得到9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-[2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷(25mg,25.37μmol,14％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):935.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.91(s,1H),10.20(bs,1H),9.51(bs,1H),8.54(d,J＝8.80Hz,1H),7.81-7.90(m,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.69(dd,J＝2.80,8.80Hz,2H),7.48(dd,J＝4.40,9.00Hz,1H),7.44(s,1H),7.37(t,J＝2.40Hz,1H),7.07(d,J＝9.20Hz,1H),4.56(t,J＝12.40Hz,1H),4.35(dd,J＝5.20,10.00Hz,2H),4.21-4.51(m,1H),3.99(s,3H),3.51-3.62(m,3H),3.24-3.45(m,2H),2.92-3.21(m,4H),2.79(s,3H),2.31-2.71(m,4H),1.98-2.21(m,8H),1.80-1.91(m,2H),1.65-1.80(m,4H),1.25-1.45(m,4H),1.06(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例157
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:在室温和氮气氛下向4-溴-2,5-二氟-苯甲腈(25g，114.68mmol)在乙醇(250mL)中的搅拌溶液中加入甲基肼(85％水溶液，21.13克，458.72毫摩尔)。将所得反应混合物加热至80℃12小时。完成后，将所得溶液用水(80毫升)淬灭，过滤所得沉淀并干燥，得到6-溴-5-氟-1-甲基-吲唑-3-胺(17.5克，70.71毫摩尔，62％产率)，呈灰白色固体，无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):246.0[M+H]+。
步骤2a:将烧瓶(2.00升)中的DBU(200克，1.31摩尔，1.00当量)和乳酸(118克，1.31摩尔，97.5毫升，1.00当量)的混合物脱气并用N2清洗3次。所得混合物在氮气氛下于25℃搅拌12小时，得到[DBU].[Lac]离子液体(316g，粗)，为浓溶液，无需进一步纯化即可继续进行。
步骤2:在氮气氛下室温下向6-溴-5-氟-1-甲基-吲唑-3-胺(17.5克，71.70毫摩尔)在[DBU].[Lac]离子液体(18克)中的溶液中加入丙-2-烯酸乙酯(50.25克，501.92毫摩尔，54.38毫升)。将所得溶液加热至90℃48小时。完成后，用水(100ml)淬灭所得溶液，并用乙酸乙酯(2x 100mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。使用乙酸乙酯-石油醚(0-60％)通过硅胶快速柱色谱纯化所得粗产物，得到红色半固体的3-[(6-溴-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基)氨基]丙酸乙酯(11.0g，30.97mmol，43％产率)。LCMS m/z(ESI):344.4[M+H]+。
步骤3:在氮气氛下，在室温下乙酸钠(15.73克，191.76毫摩尔，10.28毫升)和溴化氰(16.93克，159.80毫摩尔，8.38毫升)加入3-[(6-溴-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基)氨基]丙酸乙酯(11克，31.96毫摩尔)的乙醇(110毫升)溶液。将反应混合物加热至85℃16小时。用水(50mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(2x 100mL)提取。有机层用盐水(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到黄色固体的3-[(6-溴-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基)-氰基-氨基]丙酸乙酯(12g，25.98mmol，81％产率)，无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):371.0[M+H]+。
步骤4:在氮气氛下，在室温下向3-[(6-溴-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基)-氰基-氨基]丙酸乙酯(12克，32.50毫摩尔)在甲苯(120毫升)中的搅拌溶液中加入氯化铟(III)(718.91毫克，3.25毫摩尔)和乙醛肟(5.76克，97.51毫摩尔)。将反应混合物加热至110℃1小时。完成后，过滤反应混合物并在减压下浓缩。使用乙酸乙酯-石油醚(0-80％)通过硅胶快速柱色谱纯化所得粗产物，得到3-[(6-溴-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基)-氨基甲酰基-氨基]丙酸乙酯(8.0克，20.33毫摩尔，63％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):387.0[M+H]+。
步骤5:在氮气氛下，在室温下，向3-[(6-溴-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基)-氨基甲酰基-氨基]丙酸乙酯(8.0克，20.66毫摩尔)在乙腈(80毫升)中的搅拌溶液中加入苄基三甲基氢氧化铵(25％甲醇溶液，4.15克，6.20毫摩尔，25％纯度)。反应混合物在室温下搅拌1小时。反应混合物用水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(3×80mL)提取。合并的有机层经硫酸钠干燥并减压浓缩，得到1-(6-溴-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮(5.2克，15.01毫摩尔，73％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):343.0[M+H]+。
步骤6a:在-78℃下，向乙酸叔丁酯(18.67g，160.76mmol，160.76mL)在THF(200mL)的充分搅拌的溶液中加入二异丙酰胺锂(THF中2M，64.30mL)，并将反应混合物在相同温度下搅拌1小时。然后，向反应混合物中缓慢加入4-氧代哌啶-1-羧酸苄酯(15g，64.31mmol，12.82mL)的溶液，之后搅拌1小时。将反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭。反应混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释，用水(40mL)和盐水(40mL)洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到4-(2-叔丁氧基-2-氧代-乙基)-4-羟基-哌啶-1-羧酸苄酯(22.5克，64.02毫摩尔，100％产率)，为无色油。LCMS m/z(ESI)＝294.2[M+H-56]+。
步骤6b:向4-(2-叔丁氧基-2-氧代-乙基)-4-羟基-哌啶-1-羧酸苄酯(23克，65.82毫摩尔)在1,4-二噁烷(200毫升)中的搅拌溶液中加入钯(7.00克，65.82毫摩尔)，通过将氢气鼓入10分钟氢饱和，然后在室温下氢化(1个大气压)20小时。完成后，用氮气吹扫反应混合物，通过硅藻土垫过滤反应混合物。在减压下浓缩滤液，得到2-(4-羟基-4-哌啶基)乙酸叔丁酯(14g，64.94mmol，99％产率)，为灰白色固体，无需进一步纯化即可继续进行。LCMSm/z(ESI):216.3[M+H]+。
步骤6:将1-(6-溴-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮(4.4克，12.90毫摩尔)在1,4-二噁烷(80毫升)中的溶液置于密封管中，并在室温下氮气氛下加入碳酸铯(10.51克，32.25毫摩尔)和2-(4-羟基-4-哌啶基)乙酸叔丁酯(5.55克，25.80毫摩尔)。反应混合物用氮气脱气10分钟，然后在室温下加入Pd-PEPPSI-IHept催化剂(626.85mg，644.39μmol)。将所得反应混合物加热至105℃16小时。用水(20mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(2x 50mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。所得产物通过使用乙酸乙酯-石油醚(0-80％)的硅胶快速柱色谱纯化，得到2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(4.0克，7.67毫摩尔，59％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):476.2[M+H]+。
步骤7:在氮气氛下，于0℃向2-[1-[3-(2,4-二噁烷氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(0.5g，1.05mmol)的二氯甲烷(5mL)搅拌溶液中加入氯化氢1,4-二噁烷(4.0M，10.51mL)溶液。将所得溶液在室温下搅拌24小时。将所得溶液在减压下浓缩，得到2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(0.48克，884.68微摩尔，84％产率)，为浅褐色半固体，无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):420.2[M+H]+。
步骤8:将(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(650毫克，1.17毫摩尔)、2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸在N,N-二甲基甲酰胺(8mL)的搅拌溶液加入HATU(444.03mg,1.17mmol)和N,N-二异丙基乙胺(603.71mg,4.67mmol,813.63μL)，并在室温下搅拌4小时。完成后，将反应混合物减压浓缩至其体积的一半，并直接通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中50％乙腈洗脱，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(310mg,320.23μmol,27％产率)，为灰白色固体。LCMSm/z(ESI):958.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.50(s,1H),10.20(s,1H),8.37(s,1H),7.88(t,J＝10.00Hz,1H),7.79-7.80(m,1H),7.69-7.72(m,1H),7.49-7.52(m,1H),7.37(d,J＝2.40Hz,1H),7.33(d,J＝13.20Hz,1H),7.13(d,J＝6.40Hz,1H),5.31(s,1H),5.03(s,1H),4.10-4.21(m,2H),3.94(s,3H),3.88-3.92(m,2H),3.75-3.85(m,1H),3.51-3.71(m,3H),3.15-3.25(m,3H),3.05-3.15(m,2H),2.80(s,3H),2.65-2.75(m,3H),2.32-2.56(m,3H),2.00-2.12(m,1H),1.50-1.90(m,8H),1.06(t,J＝-6.80Hz,3H)。
实施例158
9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟甲氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-3-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(0.05g，109.68μmol)、9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷(73.01mg,120.65μmol)、N,N-二异丙基乙胺(141.76mg,1.10mmol,191.04μL)和HATU(45.87mg,120.65μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用50％的乙腈在0.1％的甲酸水溶液中洗脱，得到产物9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷(28.24mg,28.83μmol,26％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):970.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.46(s,1H),10.13(s,1H),8.44(s,1H),7.70(d,J＝8.80Hz,1H),7.59(d,J＝7.20Hz,1H),7.33(s,1H),7.26(d,J＝12.80Hz,2H),7.06(d,J＝7.20Hz,1H),5.04(d,J＝7.20Hz,1H),4.48(s,1H),3.87(s,3H),3.82(t,J＝6.40Hz,2H),3.45(s,4H),3.09-3.00(m,6H),2.69-2.61(m,6H),2.51-2.49(m,2H),1.79(d,J＝13.60Hz,2H),1.66-1.50(m,10H),1.30-1.17(m,4H),0.97(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例159
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(42.57mg，93.39μmol)、3-[(3S)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(60mg,101.51μmol)、N,N-二异丙基乙胺(65.59mg,507.53μmol,88.40μL)和HATU(57.89mg,152.26μmol)进行酰胺偶联。通过反相柱色谱法纯化粗化合物，用0.1％甲酸水溶液中的35％乙腈洗脱，得到产物6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸-3-基]-4-氧代-喹唑啉(38mg,38.36μmol,38％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):956.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.53(s,1H),10.19(s,1H),8.45(s,1H),7.74(d,J＝2.40Hz,1H),7.70(s,1H),7.67(d,J＝8.80Hz,1H),7.42(s,1H),7.35(d,J＝Hz,1H),7.31(s,1H),7.13(d,J＝7.20Hz,1H),5.08-5.04(m,2H),3.94(s,3H),3.89(t,J＝6.40Hz,2H),3.60-3.58(m,2H),3.45-3.41(m,2H),3.18-3.10(m,6H),2.75-2.67(m,4H),2.56-2.51(m,2H),2.10-2.05(m,3H),1.73-1.52(m,12H),1.05(t,J＝6.80Hz,3H)
实施例160-161
步骤1:在氮气氛下，于5℃向4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯(215mg，464.88μmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的搅拌溶液中加入氯化氢在1,4-二噁烷(4M，4mL)中的溶液。反应混合物在室温下搅拌2小时。完成后，反应混合物在减压下浓缩，并用石油醚洗涤，得到3-[6-(3,3-二氟-4-哌啶基)-1-甲基-吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮(198mg，463.09μmol，100％产率)，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):363.2[M+H]+。
步骤2:向3-[6-(3,3-二氟-4-哌啶基)-1-甲基-吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮(200毫克，551.92微摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(3毫升)中的搅拌溶液中加入三乙胺(223.39毫克，2.21毫摩尔，307.71微升)，然后在室温和氮气氛下加入2-溴乙酸叔丁酯(107.65mg,551.92μmol,80.94μL)。将反应混合物在室温下搅拌14小时。用水(10mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3×10mL)提取。合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(230mg，413.84μmol，75％产率)，为棕色固体。LCMS m/z(ESI):477.2[M+H]+。
步骤3:在氮气氛下，于0℃向2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(230毫克，482.67微摩尔)在二氯甲烷(2毫升)中的搅拌溶液中加入氯化氢在1,4-二噁烷(4米，4毫升)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物在真空下浓缩，并将粗物质与石油醚一起研磨，得到浅棕色固体的2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸(262mg，480.57μmol，100％产率)。LCMS m/z(ESI):421.2[M+H]+。
实施例160
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]-3,3-二氟哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
步骤4:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用3-[(3S)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(100mg，180.30μmol)、2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸(90.96mg,216.36μmol)、N,N-二异丙基乙胺(116.51mg,901.49μmol,157.02μL)和HATU(75.41mg,198.33μmol)进行酰胺偶联。通过反相柱色谱纯化粗化合物，用40-50％乙腈在0.1％甲酸水溶液中洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉(16.44mg,15.76μmol,9％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):957.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.91(s,1H),10.20(s,1H),8.45(s,1H),7.71-7.80(m,1H),7.79(d,J＝8.80Hz,1H),7.67(t,J＝8.40Hz,2H),7.53(s,1H),7.46(s,1H),7.37(s,1H),7.09(d,J＝8.00Hz,1H),5.01-5.10(m,1H),4.31-4.39(m,1H),4.00(s,3H),3.51-3.61(m,2H),3.25-3.45(m,4H),3.10-3.25(m,4H),2.99(d,J＝9.60Hz,1H),2.75(s,3H),2.60-2.71(m,3H),2.38-2.58(m,2H),2.02-2.31(m,5H),1.78-1.91(m,3H),1.40-1.77(m,5H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例161
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]-3,3-二氟哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤5:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(70mg，125.76μmol)、2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸(63.45mg,150.91μmol)、N,N-二异丙基乙胺(81.27mg,628.81μmol,109.53μL)和HATU(52.60mg,138.34μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用40-50％乙腈在0.1％甲酸水溶液中洗脱，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(13.03mg,12.40μmol,10％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):959.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.90(s,1H),10.21(s,1H),8.37(s,1H),7.81-7.91(m,1H),7.83(d,J＝11.60Hz,1H),7.70(dd,J＝2.80,9.00Hz,1H),7.66(dd,J＝2.80,8.60Hz,1H),7.53(s,1H),7.45-7.53(m,1H),7.37(d,J＝2.40Hz,1H),7.09(d,J＝8.00Hz,1H),5.28-5.38(m,1H),4.31-4.38(m,1H),4.09-4.20(m,2H),4.00(d,J＝4.00Hz,3H),3.50-3.74(m,3H),3.30-3.45(m,3H),3.11-3.31(m,4H),2.95-3.05(m,1H),2.79(s,3H),2.35-2.71(m,4H),2.05-2.31(m,5H),1.51-1.91(m,5H),1.06(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例162
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酸(35.04mg，79.48μmol)、3-[(3S)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-6-[2-氰基-3-(二甲基磺酰胺基)-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(50mg,86.64μmol)、N,N-二异丙基乙胺(55.99mg,433.22μmol,75.46μL)和HATU(49.42mg,129.97μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用35％的乙腈在0.1％乙酸铵水溶液中洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉(16mg,16.65μmol,19％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):940.8[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.54(s,1H),10.16(bs,1H),8.44(s,1H),7.78(d,J＝8.80Hz,1H),7.73(s,1H),7.68(d,J＝2.80Hz,1H),7.43(d,J＝5.60Hz,1H),7.39(s,1H),7.35(s,1H),7.15(d,J＝6.80Hz,1H),5.05(t,J＝9.20Hz,1H),3.95(s,3H),3.90(t,J＝6.80Hz,2H),3.54-3.44(m,3H),3.14-3.09(m,6H),2.76-2.73(m,6H),2.68(s,3H),2.10-2.05(m,3H),1.86-1.81(m,3H),1.62-1.44(m,7H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例163
9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟甲氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-3-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酰基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酸(0.035g，79.39mol)、9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷(49.66mg,82.07μmol)、N,N-二异丙基乙胺(102.61mg,793.91μmol,138.28μL)和HATU(33.21mg,87.33μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用46％的乙腈在0.1％的甲酸水溶液中洗脱，得到9-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-3-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酰基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷(4.83mg,4.95μmol,6％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):956.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.55(s,1H),10.17(s,1H),8.52(s,1H),7.78(dd,J＝2.00,8.80Hz,2H),7.68(d,J＝9.60Hz,1H),7.44(d,J＝3.60Hz,1H),7.37(d,J＝14.40Hz,1H),7.15(d,J＝7.20Hz,1H),4.55(s,1H),3.96(s,3H),3.90(t,J＝6.80Hz,2H),3.49(s,5H),3.15-3.11(m,6H),2.87(s,7H),2.50-2.49(m,3H),2.06(d,J＝11.20Hz,2H),1.86(d,J＝12.00Hz,2H),1.74-1.64(m,4H),1.40-1.24(m,5H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例164
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
标题化合物通过HATU介导的酸-胺偶联反应(程序B-E)制备。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(55mg，74.19μmol)、2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酸(34.89mg,68.05μmol)、N,N-二异丙基乙胺(38.35mg,296.76μmol,51.69μL)和HATU(28.21mg,74.19μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％的甲酸水溶液中40％的乙腈洗脱，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(6mg,5.71μmol,8％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):943.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.55(s,1H),10.14(s,1H),8.36(s,1H),7.86(t,J＝10.00Hz,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.70(d,J＝8.80Hz,1H),7.51-7.49(m,1H),7.39(d,J＝17.60Hz,2H),7.19(s,1H),5.30(s,1H),4.15(d,J＝15.20Hz,2H),3.97(s,3H),3.90(t,J＝6.40Hz,2H),3.81-3.72(m,2H),3.48-3.34(m,3H),3.17-3.15(m,5H),2.79(s,3H),2.75(t,J＝6.40Hz,2H),2.50-2.3.47(m,4H),2.12-2.11(m,1H),1.83-1.56(m,5H),1.06(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例165
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺
/>
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用(3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-[3-[(3R)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-苯基]-3-氟-吡咯烷-1-磺酰胺(70mg，99.99μmol)、2-[4-[3-(2,6-二氧杂-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸(38.44mg,91.33μmol)、N,N-二异丙基乙胺(12.92mg,99.99μmol,17.42μL)和HATU(38.02mg,99.99μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用50％乙腈在0.1％甲酸水溶液中洗脱，得到(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氟-吡咯烷-1-磺酰胺(16mg,15.62μmol,16％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):953.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.91(s,1H),9.59(s,1H),8.36(s,1H),7.79(d,J＝8.80Hz,2H),7.68(d,J＝8.80Hz,2H),7.46(d,J＝24.40Hz,1H),7.39(d,J＝2.40Hz,2H),7.06(d,J＝7.20Hz,1H),5.39-5.26(m,2H),4.37-4.33(m,2H),4.18-4.14(m,2H),4.00(s,3H),3.82-3.79(m,1H),3.58-3.34(m,7H),3.11-2.97(m,4H),2.68-2.38(m,4H),2.15-1.85(m,9H),1.77-1.58(m,5H)。
实施例166
6-[2-氯-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
/>
步骤1:使用2-氨基-5-羟基-苯甲酸(3.31克，21.62毫摩尔)、3-氨基-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(5克，19.66毫摩尔)、原甲酸三乙酯(7.28克，49.14毫摩尔，8.17毫摩尔)和乙酸(118.04毫克，1.97毫摩尔，112.42微升)按照环化的一般程序(程序B-A)合成喹唑啉酮中间体。通过使用0-80％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂的硅胶快速柱色谱从粗产物中纯化所需化合物，得到外消旋的2-(6-羟基-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(4.4g)，为灰白色固体。将3.7克外消旋混合物进行手性SFC纯化，及灰白色固体的第二洗脱产物叔丁基(3S)-3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1.2克，3.00毫摩尔，15％产率)为所需的异构体。LCMS m/z(ESI):400.3[M+H]+。
步骤2:在室温，氮气氛下向叔丁基(3S)-3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.8克，2.00毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(10毫升)中的溶液中加入碳酸铯(1.63克，5.01毫摩尔)和1-溴-2-氯-3,4-二氟-苯(683.19毫克，3.00毫摩尔)。将所得溶液加热至60℃12小时。完成后，用水(15ml)稀释所得溶液，并用乙酸乙酯(2x30ml)提取。分离的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。得到的粗产物通过硅胶(50g SNAP)柱色谱纯化，使用乙酸乙酯-石油醚(0-70％)，得到棕色液体的叔丁基(3S)-3-[6-(3-溴-2-氯-6-氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.5g，720.78μmol，36％产率)。LCMS m/z(ESI):607.8[[M+H]+。
步骤3:向二苯基甲亚胺(223.96毫克，1.24毫摩尔，207.37微升)和叔丁基(3S)-3-[6-(3-溴-2-氯-6-氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.5g，823.85微摩尔)在二噁烷(5毫升)中的搅拌溶液中加入碳酸铯(805.27毫克，2.47摩尔)，并将混合物用氮气脱气5分钟。加入Xantphos(95.34毫克，164.77微摩尔)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(75.44毫克，82.38微摩尔)，所得混合物在100℃下搅拌16小时。完成后，反应用水(15毫升)稀释，用乙酸乙酯(2×35毫升)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩得到粗产物。得到的粗产物通过硅胶(25g SNAP)柱色谱纯化，使用乙酸乙酯-石油醚(0-60％)，得到半固体的叔丁基(3S)-3-[6-[3-(二苯甲基氨基)-2-氯-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.36g，331.22μmol，40％产率)。LCMSm/z(ESI):707.0[M+H]+。
步骤4:向叔丁基(3S)-3-[6-[3-(二苯甲基氨基)-2-氯-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.5g，706.98μmol)在THF(5mL)的搅拌溶液中加入柠檬酸水溶液(1.0M，5mL)，并将所得混合物在室温下搅拌16小时。完成后，反应用水(10mL)和乙酸乙酯(20mL)稀释。分离后，水层用乙酸乙酯(20mL)反萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。得到的粗产物通过硅胶(25g)柱色谱纯化，使用乙酸乙酯-石油醚(0-60％)，得到棕色粘性固体的叔丁基(3S)-3-[6-(3-氨基-2-氯-6-氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.23g，331.47μmol，47％产率)。LCMS m/z(ESI):543.2[M+H]+。
步骤5:在室温氮气氛下向叔丁基(3S)-3-[6-(3-氨基-2-氯-6-氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.23克，423.55微摩尔)在1,4-二噁烷(3毫升)中的溶液中加入吡啶(335.03毫克，4.24毫摩尔，342.56微升)和N-乙基-N-甲基-氨磺酰氯(400.56mg,2.54mmol,312.94μL)。将所得溶液在90℃加热12小时。完成后，用乙酸乙酯(20ml)稀释反应混合物，用水(5ml)洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤，减压蒸发。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，pet醚中70％乙酸乙酯作为洗脱剂，得到棕色液体的叔丁基(3S)-3-[6-[2-氯-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.11g，113.93μmol，27％产率)。LCMS m/z(ESI):607.8[M+H]+。
步骤6:在0℃，氮气下向叔丁基(3S)-3-[6-[2-氯-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.11克，165.62微摩尔)在二氯甲烷(1毫升)中的溶液中加入在1,4-二噁烷(4.0米，1毫升)中的氯化氢溶液。将所得溶液在室温下搅拌4小时。完成后，将所得溶液在减压下浓缩，得到3-[(3S)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-6-[2-氯-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(0.1克，117.23微摩尔，71％产率)，为粘性固体。LCMS m/z(ESI):564.0[M+H]+。
步骤7:通过COMU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-F)。使用3-[(3S)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-6-[2-氯-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉(50mg，83.26μmol)、2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸(32.01mg,76.05μmol)、N,N-二异丙基乙胺(53.80mg,416.30μmol,72.51μL)和(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代碳鎓六氟磷酸盐(53.49mg,124.89μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％甲酸水溶液中35％乙腈洗脱，得到6-[2-氯-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉(15mg,14.00μmol,17％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):930.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.89(s,1H),8.42(bs,1H),8.16(s,1H),7.77(d,J＝9.20Hz,1H),7.63(t,J＝8.00Hz,2H),7.53(d,J＝7.60Hz,2H),7.43(s,1H),7.21(s,1H),7.04(d,J＝9.20Hz,1H),5.03-5.02(m,1H),4.33(q,J＝4.80Hz,1H),3.97(s,3H),3.55(d,J＝12.80Hz,3H),3.11(q,J＝7.20Hz,2H),3.02-3.00(m,2H),2.75(s,3H),2.68-2.56(m,4H),2.30-2.06(m,7H),1.83-1.68(m,7H),1.61-1.57(m,4H),1.43-1.25(m,2H),1.02(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例167
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环戊烷磺酰胺
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步骤1a:在5℃下，向环戊烷磺酰氯(2.00克，11.86毫摩尔，1.50毫升)在丙酮(10毫升)中的溶液中缓慢加入氨溶液25％(18.00克，513.55毫摩尔，20毫升)。反应混合物在氮气氛下于室温下搅拌12小时。完成后，反应混合物在减压下浓缩。粗化合物通过柱色谱(硅胶)纯化，使用pet醚中40-50％乙酸乙酯作为洗脱剂，得到棕色固体的环戊烷磺酰胺(0.74g，4.96毫摩尔，42％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝6.69(s,2H),1.89-1.99(m,4H),1.66-1.57(m,4H)。
步骤1:使用叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.22克，408.51微摩尔)、碳酸铯(399.30毫克，1.23毫摩尔)和环戊烷磺酰胺(182.86毫克，182.86毫克)按照一般程序(程序B-C)合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体。将反应混合物在55℃下搅拌12小时。完成后，用水(20mL)稀释反应混合物，过滤掉沉淀的固体。水层用乙酸乙酯(3×50mL)提取。合并的有机层用冷水(3×30mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-(环戊基磺酰氨基)-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.25g，319.06μmol，78％产率)，为浅棕色粘性固体。LCMS m/z(ESI):666.0[M-H]-。
步骤2:在二噁烷介导的N-Boc脱保护中，由4M氯化氢合成所需的胺(程序B-D)。在叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-(环戊基磺酰氨基)-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.25g，374.39μmol)上，使用1,4-二噁烷中氯化氢，4M，99％(3mL)进行N-Boc脱保护，得到N-[2-氰基-4-氟-3-[3-[(3R)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-苯基]环戊烷磺酰胺(0.25g,374.16μmol,100％产率)，为淡桔红色粘性固体。LCMS m/z(ESI):568.2[M+H]+。
步骤3:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸(48.77mg，115.88μmol)、N-[2-氰基-4-氟-3-[3-[(3R)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-苯基]环戊烷磺酰胺(0.07g,115.88μmol)、N,N-二异丙基乙胺(149.76mg,1.16mmol,201.84μL)和HATU(48.47mg,127.46μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用43％乙腈在0.1％甲酸水溶液中洗脱，得到N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]环戊烷磺酰胺(17.26mg,17.48μmol,15％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):935.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.90(s,1H),9.86(s,1H),8.35(s,1H),7.77(d,J＝9.20Hz,1H),7.66(dd,J＝9.00,3.20,Hz,2H),7.53(s,1H),7.44(s,1H),7.38(d,J＝2.80Hz,1H),7.06(d,J＝7.60Hz,2H),5.31(s,1H),4.36-4.32(m,1H),4.19-4.13(m,3H),3.99(s,3H),3.79-3.71(m,1H),3.52-3.34(m,5H),2.87-2.71(m,1H),2.63-2.58(m,3H),2.50-2.34(m,3H),2.19-2.10(m,3H),1.93-1.78(m,10H),1.69-1.66(m,4H),1.55-1.51(m,3H)。
实施例168
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]丙烷-2-磺酰胺
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸(65mg，154.44μmol)、N-[2-氰基-4-氟-3-[3-[(3R)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-苯基]丙烷-2-磺酰胺(107.13mg,185.32μmol)、N,N-二异丙基乙胺(119.76mg,926.61μmol,161.40μL)和HATU(70.46mg,185.32μmol)进行酰胺偶联。粗产物通过C18反相柱色谱使用Isolera(100gRf C18，方法:0.1％甲酸水溶液:乙腈)纯化，并将纯级分冻干，得到N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]丙烷-2-磺酰胺(23mg,23.81μmol,15％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):908.20[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.90(s,1H),8.35(s,1H),7.77(d,J＝8.80Hz,1H),7.66(d,J＝8.40Hz,2H),7.44-7.38(m,4H),7.06(s,1H),5.40-5.25(m,1H),4.40-4.30(m,2H),4.25-4.10(m,2H),3.99(s,3H),3.82-3.70(m,2H),3.55-3.40(m,3H),3.20-2.70(m,4H),2.70-2.60(m,2H),2.45-2.32(m,2H),2.20-1.50(m,12H),1.26(d,J＝6.00Hz,6H)。
实施例169
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]环己基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
/>
步骤1:将3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-6-碘代-1-甲基-吲唑(1.9克，3.47毫摩尔)在1,4-二噁烷(30毫升)中的溶液置于密封管中，加入乙酸钾(1.02克，10.41毫摩尔，650.92微升)和4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(1.32g,5.21mmol)。反应混合物用氮气吹扫10分钟，然后加入Pd(dppf)Cl2.二氯甲烷(283.46毫克，347.10微摩尔)，再次用氮气吹扫5分钟，然后在100℃下搅拌8小时。完成后，用水(70mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(3x150 mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗产物。通过使用20-30％乙酸乙酯(在石油醚中)作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱从粗产物中纯化所需产物，得到3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吲唑(1.3g，1.87mmol，54％产率)，为淡黄色粘性液体。LCMS m/z(ESI):548.2[M+H]+。
步骤1a:向2-(4-氧代环己基)乙酸甲酯(2克，11.75毫摩尔)在二氯甲烷(40毫升)中的搅拌溶液中加入2,6-二叔丁基-4-甲基吡啶(2.90克，14.10毫摩尔)。将反应混合物在氮气氛下于室温下搅拌30分钟，然后将反应混合物冷却至0℃。在氮气氛下于0℃向反应混合物中滴加三氟甲磺酸酐(3.48克，12.34毫摩尔，2.07毫升)。反应混合物在室温下搅拌5小时。完成后，在0℃下滴加饱和碳酸氢钠溶液(70mL)使反应混合物淬灭，并用二氯甲烷(3x100 mL)提取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩得到粗产物。通过使用5-20％乙酸乙酯(在石油醚中)作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱从粗产物中纯化所需产物，得到2-[4-(三氟甲基磺酰氧基)环己-3-烯-1-基]乙酸甲酯(2.6克，8.60毫摩尔，73％产率)，为无色液体。1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ＝5.75(d,J＝2.00Hz,1H),3.71(s,3H),2.41-2.52(m,1H),2.31-2.40(m,3H),2.10-2.21(m,1H),1.90-2.01(m,2H),1.48-1.70(m,2H)。
步骤2:向密封管中3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吲唑(1.2克，2.19毫摩尔)在1,4-二噁烷(20毫升)和水(2毫升)的搅拌溶液中加入碳酸钠(696.98毫克，6.58毫摩尔，275.49微升)和2-[4-(三氟甲基磺酰氧基)环己-3-烯-1-基]乙酸甲酯(993.84mg,3.29mmol)。反应混合物用氮气吹扫10分钟，然后加入Pd(dppf)Cl2.二氯甲烷(179.01毫克，219.20微摩尔)，再次用氮气吹扫5分钟，然后在85℃下搅拌5小时。完成后，用水(70mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(3x150 mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗产物。使用20-30％乙酸乙酯(在石油醚中)作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱从粗产物中纯化所需产物，得到2-[4-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]环己-3-烯-1-基]乙酸甲酯(0.8克，1.24毫摩尔，56％产率)，为淡绿色粘性液体。LCMS m/z(ESI):574.2[M+H]+。
步骤3:向2-[4-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]环己-3-烯-1-基]乙酸甲酯(0.2克，348.63微摩尔)在甲苯(4毫升)中的搅拌溶液中加入冰乙酸(125.61毫克，2.09毫摩尔)和5％钯碳(0.1克，939.67微摩尔)。将反应混合物在氮气氛下于室温下搅拌5分钟，然后加入硼氢化钠(80mg)并搅拌反应混合物5分钟。再次加入硼氢化钠(80mg)，并在氮气氛下于室温下搅拌反应混合物2小时。再次将反应混合物冷却至5℃，加入硼氢化钠(80mg)。反应混合物在氮气氛下于室温下搅拌2小时。完成后，反应混合物通过硅藻土床过滤，并用THF:甲苯混合物(200mL:50mL)和乙酸乙酯(100mL)洗涤床。滤液在减压下浓缩得到粗产物。通过使用20-30％乙酸乙酯(在石油醚中)作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱从粗产物中纯化所需产物，得到2-[4-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]环己基]乙酸甲酯(0.12g，203.69μmol，58％产率)，为淡绿色粘性液体。LCMS m/z(ESI):576.2[M+H]+。
步骤4/步骤5:在室温和氮气氛下，向2-[4-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]环己基]乙酸甲酯(0.35克，607.96微摩尔)的四氢呋喃(20毫升)和水(5毫升)的搅拌溶液中加入氢氧化锂水合物(510.24毫克，12.16毫摩尔，337.91微升)。将反应混合物在50℃下搅拌12小时。完成后，将反应混合物减压浓缩，在0℃下用1.5N氯化氢溶液酸化(pH约2)，过滤固体，用水(50mL)洗涤，真空干燥4小时得到混合物(350mg，95％纯)。混合物通过使用Chiralpak OX-H柱的手性SFC纯化得到2-((1R,4R)-4-(3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)环己基)乙酸(0.12g，208.93μmol，34％产率)和2-((1S,4S)-4-(3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)环己基)乙酸(0.15g,267.06μmol,43.93％产率)。LCMS m/z(ESI):562.2[M+H]+。
注:分离的异构体的绝对立体化学被任意指定如下:第一洗脱峰(F1-3.99RT)任意指定为反式化合物(1r,4r)和第二洗脱峰(F2-4.92RT)指定为顺式化合物(1s,4s)。
步骤6:向2-((1r,4r)-4-(3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)环己基)乙酸(0.12克，213.65微摩尔)在1,4-二噁烷(5毫升)中的搅拌溶液中加入20％Pd(OH)2(0.1克，712.08微摩尔)，通过将氢气鼓入10分钟使其氢饱和，然后在室温下氢化(1个大气压)16小时。完成后，用氮气吹扫反应混合物，通过硅藻土垫过滤除去催化剂，并用1,4-二噁烷(200mL)洗涤。将滤液减压浓缩，得到2-((1r,4r)-4-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)环己基)乙酸(0.08g，205.78μmol，96％产率)，为灰白色固体。LCMSm/z(ESI):384.2[M+H]+。
步骤7:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用2-((1r,4r)-4-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)环己基)乙酸(54.52毫克，129.83微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(152.55毫克，1.18毫摩尔，205.59微升)、HATU(49.37毫克，129.83微摩尔)和(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(0.07g,118.03μmol)进行酰胺偶联。通过反相柱色谱(0.1％甲酸在水中:乙腈)从粗产物中纯化所需产物，并将级分冻干，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-(1r,4r)-(4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]环己基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(27mg,27.30μmol,23％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):922.2[M+H]+.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.88(s,1H),10.19(s,1H),8.36(s,1H),7.80(s,1H),7.78(s,1H),7.69(dd,J＝2.80,9.00Hz,1H),7.60(d,J＝8.40Hz,1H),7.45(s,1H),7.36(d,J＝3.20Hz,1H),7.09(d,J＝8.40Hz,1H),5.35-5.25(m,1H),4.39-4.30(m,1H),4.20-4.09(m,2H),3.97(s,3H),3.78-3.65(m,1H),3.65-3.45(m,2H),3.17(q,J＝7.20Hz,2H),2.80(s,3H),2.72-2.60(m,4H),2.40-2.30(m,3H),2.28-2.12(m,2H),2.12-2.02(m,2H),1.88-1.58(m,13H),1.06(t,J＝6.80Hz,3H)。
实施例170
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]环己基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:向2-((1s,4s)-4-(3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)环己基)乙酸(0.15克，267.06微摩尔)在1,4-二噁烷(5毫升)中的搅拌溶液中加入20％Pd(OH)2/C(0.12克，854.49微摩尔)，通过氢气鼓泡10分钟使其氢饱和，然后在室温下进行氢化(1atm)16小时。完成后，用氮气吹扫反应混合物，通过硅藻土垫过滤除去催化剂，并用1,4-二噁烷(200mL)洗涤。将滤液减压浓缩，得到2-((1s,4s)-4-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)环己基)乙酸(0.11g，246.71μmol，92％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):384.2[M+H]+。
步骤2:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用2-((1s,4s)-4-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)环己基)乙酸(45.26mg，118.03μmol)、N,N-二异丙基乙基胺(91.53mg，708.18μmol，123.35μL)和HATU(44.88mg，118.03μmol)和(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(0.07g,118.03μmol)进行酰胺偶联。通过反相柱色谱(10mM乙酸铵水溶液:乙腈)从粗产物中纯化所需产物，并将级分冻干，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-(1S,4S)-4-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]环己基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(34mg,35.53μmol,30％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):922.2[M+H]+and 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.87(s,1H),10.18(s,1H),8.37(d,J＝5.20Hz,1H),7.82-7.84(m,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.70(dd,J＝2.40,8.80Hz,1H),7.59(d,J＝8.40Hz,1H),7.47(dd,J＝26.40,20.60Hz,1H),7.36(d,J＝10.80Hz,1H),7.38(s,1H),7.03(d,J＝8.40Hz,1H),5.31(s,1H),4.32(q,J＝4.80Hz,1H),4.16-4.12(m,2H),3.97(s,2H),3.76-3.64(m,1H),3.55-3.42(m,2H),3.23(q,J＝7.20Hz,2H),2.79(s,3H),2.68-2.56(m,4H),2.37-2.33(m,5H),2.28-2.27(m,2H),1.87-1.56(m,12H),1.22-1.10(m,2H),1.06(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例171
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基吲唑-6-基]氮杂环丁烷-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
/>
步骤1:在室温和氮气氛下，向微波小瓶中(1-甲基吲唑-6-基)硼酸(621.60毫克，3.53毫摩尔)在异丙醇(2.5毫升)中的搅拌溶液中加入反式-2-氨基环己醇盐酸盐(16.07毫克，105.97微摩尔)、二碘代镍(33.11毫克，105.97微摩尔)和叔丁醇钠(1M，3.53毫升)。搅拌5分钟后，在相同温度下加入3-碘代氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(500毫克，1.77毫摩尔)在异丙醇(2.5毫升)中的溶液。将所得反应混合物在80℃微波下辐射30分钟。反应完成后，将反应混合物用水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(2x 30mL)提取。合并的有机层用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩得到粗产物，该粗产物通过使用硅胶和60-70％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂的柱色谱纯化，得到浅黄色油状的3-(1-甲基吲唑-6-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(350mg，1.13mmol，64％产率)。LCMS m/z(ESI):288.20[M+H]+。
步骤2:在室温下，向密封管中3-(1-甲基吲唑-6-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(200mg，696.00μmol)在乙腈(5mL)中的搅拌溶液中加入N-碘代丁二酰亚胺(469.77mg，2.09mmol，29.49μL)。将所得反应混合物在密闭的密封管中于90℃搅拌16小时。反应完成后，用水(50mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(2X 30mL)提取。合并的有机层用10％硫代硫酸钠溶液洗涤，随后用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到浅棕色油状的3-(3-碘代-1-甲基-吲唑-6-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(260mg，548.62μmol，79％产率)。LCMS m/z(ESI):414.0[M+H]+。
步骤3:在室温和氮气氛下向3-(3-碘代-1-甲基-吲唑-6-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(300mg，725.95μmol)和(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)硼酸(218.98mg，653.35μmol)在1,4-二噁烷(10mL)和水(2mL)中的搅拌溶液中加入磷酸三钾(385.24mg，1.81mmol)。反应混合物用氮气吹扫15分钟，然后加入XPhos Pd G2(57.12毫克，72.59微摩尔)。将反应混合物在微波中于100℃搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤，并用乙酸乙酯(2x50 mL)洗涤硅藻土床。合并的滤液在减压下浓缩得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用80-90％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到3-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(320mg，439.76μmol，61％产率)，为淡黄色油。LCMS m/z(ESI):577.50[M+H]+。
步骤4:在室温和氮气氛下，向叔丁基3-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氮杂环丁烷-1-羧酸酯(320毫克，554.90微摩尔)在1,4-二噁烷(10毫升)中的搅拌溶液中加入氢氧化钯(100毫克，142.41微摩尔)。反应混合物在H2压力下搅拌16小时。反应完成后，通过硅藻土床过滤除去催化剂。硅藻土床用乙酸乙酯(2x30 mL)洗涤，滤液减压浓缩得到粗产物，其用90-100％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂通过硅胶快速柱色谱纯化，得到浅棕色固体的3-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(150mg，358.95μmol，65％产率)。LCMS m/z(ESI):399.0[M+H]+。
步骤5:在0℃下，向叔丁基3-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氮杂环丁烷-1-羧酸酯(150mg，376.45μmol)在二氯甲烷(1mL)中的搅拌溶液中加入三氟乙酸(740.00mg，6.49mmol，0.5mL)。所得反应混合物在室温下搅拌2小时。反应完成后，将反应混合物减压浓缩并与甲基叔丁基醚研磨，得到粗3-[6-(氮杂环丁烷-3-基)-1-甲基-吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮(150mg,358.48μmol,95％产率)，为棕色固体。LCMS m/z(ESI):299.10[M+H]+。
步骤6:在室温和氮气氛下，向33-[6-(氮杂环丁烷-3-基)-1-甲基-吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮(150毫克，363.76微摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(3毫升)中的搅拌溶液中加入三乙胺(92.02毫克，909.40微摩尔，126.75微升)，然后加入溴乙酸叔丁酯(85.14毫克，436.51微摩尔，64.02微升)。反应混合物在室温下搅拌12小时。反应完成后，用水(10mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(3×10mL)提取。有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用5-10％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂，得到2-[3-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氮杂环丁烷-1-基]乙酸叔丁酯(60mg，125.56μmol，35％产率)，为浅黄色油。LCMS m/z(ESI):431.20[M+H]+。
步骤7:使用2-[3-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氮杂环丁烷-1-基]乙酸叔丁酯(60毫克，145.46微摩尔)和加入的三氟乙酸(444.00毫克，3.89毫摩尔，0.3毫升)，按照程序B-D合成所需的胺。将所得的粗化合物与甲基叔丁基醚一起研磨，得到浅棕色油状的粗2-[3-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氮杂环丁烷-1-基]乙酸TFA盐(65mg，129.06μmol，89％产率)。LCMS m/z(ESI):357.20[M+H]+。
步骤8:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用2-[3-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氮杂环丁烷-1-基]乙酸(65mg，138.18μmol)、(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(73.76mg,124.36μmol)、N,N-二异丙基乙胺(107.15mg,829.09μmol,144.41μL)和HATU(57.79mg,152.00μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用46％乙腈在0.1％甲酸水溶液中洗脱，得到产物(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[3-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氮杂环丁烷-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(13.5mg,14.29μmol,10％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):894.8[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.90(s,1H),10.38(s,1H),8.34(s,1H),7.77(d,J＝8.80Hz,1H),7.72(d,J＝8.40Hz,1H),7.66(d,J＝2.80Hz,1H),7.64(s,1H),7.47(s,1H),7.35-7.32(m,2H),7.18(d,J＝8.40Hz,1H),5.31(s,1H),4.39-4.33(m,5H),4.21-4.10(m,5H),4.01(s,3H),3.73(t,J＝4.40Hz,1H),3.50-3.42(m,3H),3.03(q,J＝7.20Hz,2H),2.53(s,3H),2.51-2.50(m,1H),2.36-2.33(m,2H),2.20-2.09(m,2H),2.08-1.69(m,4H),1.61-1.50(m,1H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例172
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-7-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-7-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(75mg，164.52μmol)、3-[(3S)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉盐酸盐(97.25mg,164.52μmol)、N,N-二异丙基乙胺(127.58mg,987.13μmol,171.94μL)和HATU(75.07mg,197.43μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用50％的乙腈在0.1％的甲酸水溶液中洗脱，得到产物6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3S)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-7-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉(24.1mg,25.13μmol,15％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):955.8[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.57(s,1H),10.18(s,1H),8.45(s,1H),7.87(t,J＝9.60Hz,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.69(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.50(dd,J＝4.00,9.20Hz,1H),7.37(d,J＝2.80Hz,1H),7.34(d,J＝8.80Hz,1H),6.95(t,J＝8.80Hz,1H),5.06-5.04(m,2H),4.06(s,3H),3.90(t,J＝6.40Hz,2H),3.62-3.53(m,2H),3.49-3.38(m,2H),3.20-3.15(m,6H),2.80(s,3H),2.74(t,J＝12.00Hz,2H),2.59-2.52(m,2H),2.12-2.06(m,3H),1.83-1.71(m,4H),1.68-1.45(m,7H),1.06(t,J＝6.80Hz,3H)。
实施例173
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-7-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-7-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(40mg，87.74μmol)、(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷盐酸盐(52.04mg,87.74μmol)、N,N-二异丙基乙胺(68.04mg,526.47μmol,91.70μL)和HATU(40.04mg,105.29μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用50％乙腈在0.1％乙酸铵水溶液中洗脱，得到产物(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-7-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(25mg,25.10μmol,29％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):958.00[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.58(s,1H),10.19(s,1H),8.36(s,1H),7.86(s,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.70(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.50(dd,J＝4.00,9.20Hz,1H),7.37(d,J＝2.80Hz,1H),7.33(d,J＝8.80Hz,1H),6.95(t,J＝8.00Hz,1H),5.32-5.29(m,1H),5.01(s,1H),4.15-4.11(m,2H),4.05(s,3H),3.90(t,J＝6.40Hz,2H),3.82-3.71(m,1H),3.70-3.60(m,1H),3.51-3.48(m,1H),3.16-3.14(m,6H),2.79(s,3H),2.76(t,J＝6.80Hz,2H),2.52-2.51(m,2H),2.37-2.33(m,1H),2.10-2.06(m,1H),1.90-1.51(m,9H),1.06(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例174
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-氟-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:在惰性条件下，于0℃向2,3-二氟苯甲酸(10克，63.25毫摩尔)在硫酸(80.52克，820.99毫摩尔，44.00毫升)中的搅拌溶液中滴加硝酸(4.78克，75.90毫摩尔，3.17毫升)。将反应混合物在0-5℃下搅拌2小时。完成后，用水(200mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3×100mL)提取。合并的有机层洗涤、经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到黄色固体的2,3-二氟-6-硝基苯甲酸(9.2克，44.39毫摩尔，产率70％)，无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):202.2[M-H]-。
步骤2:向2,3-二氟-6-硝基苯甲酸(2.7克，13.29毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(40毫升)中的搅拌溶液中加入氢化钠(60％分散在矿物油中，2.55克，63.68毫摩尔)。反应混合物在0℃下搅拌1小时。完成后，反应混合物在0℃下用饱和氯化铵溶液(50毫升)逐滴淬灭，并用乙酸乙酯(3×200毫升)提取。合并的有机层用冷水(3×100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，使用10-20％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到黄色固体的2-氟-3-羟基-6-硝基苯甲酸(2.7克，10.91毫摩尔，82％产率)。LCMS m/z(ESI):200.2[M-H]-。
步骤3:室温，氮气氛下向2-氟-3-羟基-6-硝基苯甲酸(2.7克，13.43毫摩尔)在1,4-二噁烷(30毫升)中的搅拌溶液中加入碳上氢氧化钯，20重量％水(1.89克，13.43毫摩尔)。将所得悬浮液在氢气氛下于室温搅拌16小时。完成后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤，用甲醇(100mL)洗涤。将合并的滤液减压浓缩，得到棕色粘性固体的6-氨基-2-氟-3-羟基-苯甲酸(2.7g，7.99mmol，产率60％)，其无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):170.10[M-H]-。
步骤4:在室温和氮气氛下，向6-氨基-2-氟-3-羟基苯甲酸(1.2克，7.01毫摩尔)在甲苯(18毫升)和四氢呋喃(3毫升)中的搅拌溶液中加入3-氨基-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1.80克，7.01毫摩尔)和二乙氧基甲氧基乙烷(1.25克，8.41毫摩尔，1.40毫升)。将反应混合物在110℃下搅拌12小时。完成后，用水(150mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3×200mL)提取。合并的有机层用10％碳酸氢钠溶液(3×100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩。使用70-90％乙酸乙酯(在石油醚中)作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化产物，得到3-(5-氟-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(0.460g，931.09μmol，13％产率)。LCMS m/z(ESI):420.2[M+H]+。
步骤5:按照程序B-B，使用叔丁基3-(5-氟-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.440g，1.05毫摩尔)、碳酸铯(1.03g，3.15毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(197.75mg，1.26毫摩尔，145.40μL)合成O-芳基化喹唑啉酮中间体。用80-90％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化粗化合物，得到浅棕色液体的3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(0.450g，749.43μmol，71％产率)。LCMS m/z(ESI):501.20[M+H-tBu]+。
步骤6/步骤7:室温下向叔丁基3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(700毫克，1.26毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)中的搅拌溶液中加入碳酸铯(1.02克，3.14毫摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(260.72mg,1.89mmol)。反应混合物在55℃下搅拌16小时。完成后，用水(3mL)稀释反应混合物，所得固体通过滤纸过滤。水层用乙酸乙酯(3x30 mL)提取。用冷水(3x15 mL)洗涤合并的有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到棕色固体的粗产物叔丁基3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.25g，364.65μmol，29％产率)。使用Lux A1柱对该外消旋产物进行手性SFC纯化，得到叔丁基(S)-3-(6-(2-氰基-3-((N-乙基-N-甲基氨磺酰基)氨基)-6-氟苯氧基)-5-氟-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(100mg，100％纯，第一洗脱异构体，任意指定为S-异构体)和叔丁基(R)-3-(6-(2-氰基-3-((N-乙基-N-甲基氨磺酰基)氨基)-6-氟苯氧基)-5-氟-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(90mg，100％纯，第二洗脱异构体，任意指定为R-异构体)，为淡棕色固体。LCMS m/z(ESI):619.2[M+H-56]+。
注:第一洗脱峰被任意指定为S-异构体，第二洗脱峰被任意指定为R-异构体。
步骤8:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序B-D)。在叔丁基3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(100mg，148.21μmol)上，使用4M氯化氢二噁烷(4M，37.05μL)溶液进行N-Boc脱保护，得到粗3-(6-(2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基)-5-氟-4-氧代喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(100mg,129.35μmol,87％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):575.0[M+H]+。
步骤9:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(72.99毫克，174.03微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(112.46毫克，870.17微摩尔，151.57微升)、HATU(72.79毫克，191.44微摩尔)和(3R)-3-(6-(2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基)-5-氟-4-氧代喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(0.100g,174.03μmol)进行酰胺偶联。通过反相柱色谱(乙酸铵水溶液:乙腈)纯化所需产物，并将级分冻干，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(47.81mg,48.81μmol,28％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):976.2[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.53(s,1H),10.18(s,1H),8.35(s,1H),7.50-7.75(m,2H),7.51(d,J＝8.80Hz,1H),7.29-7.40(m,1H),7.33(d,J＝12.80Hz,1H),7.13(d,J＝7.20Hz,1H),5.28-5.38(m,1H),5.03(d,J＝1.60Hz,1H),4.11-4.19(m,2H),3.95(s,3H),3.89(t,J＝6.40Hz,2H),3.71-3.81(m,1H),3.61-3.70(m,1H),3.48-3.60(m,1H),3.25-3.45(m,1H),3.02-3.21(m,6H),2.60-2.77(m,3H),2.58(s,3H),2.35-2.60(m,2H),2.05-2.15(m,1H),1.55-1.88(m,8H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例175
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺
步骤1/步骤2:向3-甲氧基吡咯烷(0.500克，4.94毫摩尔)在二氯甲烷(5毫升)中的-30℃搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙基胺(958.31毫克，7.41毫摩尔，1.29毫升)和磺酰氯(1.67克，12.36毫摩尔)。将所得反应混合物在-30℃下搅拌2小时。通过逐滴加入水(60mL)使反应混合物淬灭，然后用乙酸乙酯(2x100 mL)提取。合并的有机层用1.5N氯化氢溶液(2x50 mL)洗涤。有机相经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰氯。在0℃下，向粗3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰氯(0.6克，3.01毫摩尔)的甲醇(8毫升)溶液中加入7M氨甲醇溶液(7M，429.31微升)，并在室温下搅拌14小时。减压浓缩反应混合物得到粗物质，其用水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL)提取。有机层用碳酸氢钠溶液(20ml)、盐水(20ml)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩。所得粗残留物通过硅胶快速柱色谱纯化，用40％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到浅棕色固体的3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺(0.230g，738.72μmol，25％产率)。LCMS m/z(ESI):181.2[M+H]+。
步骤3:使用3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺(50.20毫克，278.53微摩尔)、碳酸铯(226.88毫克，696.33微摩尔)和叔丁基3-[(3R)-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.15g,278.53μmol)合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体，得到粗叔丁基3-[(3R)-6-[2-氰基-6-氟-3-[(3-甲氧基吡咯烷-1-基)磺酰氨基]苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(135mg,168.77μmol,61％产率)，为棕色粘性液体。LCMS m/z(ESI):697.0[M+H]+。
步骤4:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序B-D)。使用4M氯化氢溶液(4M，48.30L)对叔丁基3-[(3R)-6-[2-氰基-6-氟-3-[(3-甲氧基吡咯烷-1-基)磺酰氨基]苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.135g，193.20μmol)进行N-Boc脱保护，得到N-[2-氰基-4-氟-3-[(3R)-3-(1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-苯基]-3-甲氧基-吡咯烷-1-磺酰胺盐酸盐(125mg,189.54μmol,98％产率)，为淡棕色固体。LCMS m/z(ESI):599.2[M+H]+。
步骤5:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(77.07毫克，183.75微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(118.74毫克，918.74微摩尔，160.03微升)、HATU(76.85毫克，202.12微摩尔)和N-[2-氰基-4-氟-3-[(3R)-3-(1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-苯基]-3-甲氧基-吡咯烷-1-磺酰胺(0.11g,183.75μmol)进行酰胺偶联。通过反相柱色谱(乙酸铵水溶液:乙腈)从粗残留物中纯化所需产物，并将级分冻干，得到N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺(51.52mg,49.44μmol,27％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):1000.2[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.51(s,1H),10.21(s,1H),8.36(s,1H),7.75-7.90(m,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.69(dd,J＝3.20,8.80Hz,1H),7.52(d,J＝5.20Hz,1H),7.39(d,J＝2.80Hz,1H),7.33(d,J＝12.80Hz,1H),7.12(d,J＝7.20Hz,1H),5.25-5.35(m,1H),5.02(d,J＝1.60Hz,1H),4.10-4.20(m,2H),3.92-4.01(m,1H),3.95(s,3H),3.90(t,J＝6.80Hz,2H),3.73-3.84(m,1H),3.58-3.68(m,1H),3.48-3.59(m,1H),3.23-3.41(m,4H),3.37(s,3H),3.14-3.21(m,2H),3.02-3.12(m,2H),2.74(t,J＝6.80Hz,2H),2.35-2.61(m,4H),2.03-2.12(m,1H)。
实施例176
(3S)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺
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步骤1:向溶解于四氢呋喃(50mL)中的叔丁基(3S)-3-羟基吡咯烷-1-羧酸酯(5g，26.70mmol)的0℃搅拌溶液中加入氢化钠(2.32g，53.41mmol，60％分散于矿物油中)。在0℃下继续搅拌1小时。随后加入碘甲烷(5.69克，40.06毫摩尔，2.49毫升)，所得反应混合物在室温下搅拌4小时。通过在0℃滴加氯化铵溶液使反应混合物淬灭。相分离，水层进一步用乙酸乙酯(3×100mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥并浓缩得到粗物质。通过硅胶快速柱色谱从粗产物中纯化所需产物，用40-50％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂进行洗脱，得到浅棕色粘性液体的叔丁基(3S)-3-甲氧基吡咯烷-1-羧酸酯(5.5g，24.20mmol，91％)。LCMS m/z(ESI):102.0[M+H-100]+。
步骤2:在氮气氛下，于5℃向叔丁基(3S)-3-甲氧基吡咯烷-1-羧酸酯(5.5g，27.33mmol)在二氯甲烷(15mL)中的搅拌溶液中加入4M氯化氢二噁烷(20mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌3小时。减压浓缩反应混合物，得到浅棕色固体的粗(3S)-3-甲氧基吡咯烷(4.5g，32.70mmol)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝9.51(s,1H),9.21(s,1H),4.07(q,J＝2.40Hz,1H),3.76(s,1H),3.24(s,3H),3.09-3.23(m,3H),2.00-2.07(m,1H),1.82-1.92(m,1H)。
步骤3/步骤4:将N,N-二异丙基乙基胺(6.34克，49.05毫摩尔，8.54毫升)和磺酰氯(11.03克，81.75毫摩尔)加入(3S)-3-甲氧基吡咯烷(4.5克，32.70毫摩尔)在二氯甲烷(20毫升)中的-30℃搅拌溶液中。在-30℃下继续搅拌2小时。通过滴加水(60mL)使反应混合物淬灭，用二氯甲烷(2x100 mL)提取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗(3S)-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰氯(3.1克，15.53毫摩尔，47％产率)，其无需进一步纯化即可用于下一步。向(3S)-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰氯(3.1克，15.53毫摩尔)在甲醇(10毫升)中的0℃搅拌溶液中加入在甲醇(7M，10毫升)中的7M氨。将反应混合物加热至室温并搅拌16小时。完成后，将反应混合物减压浓缩，用水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(3×100mL)提取。有机层用碳酸氢钠溶液(70ml)洗涤，用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩得到粗物质。通过硅胶快速柱色谱从粗产物中纯化所需产物，用30-40％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂进行洗脱，得到(3S)-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺(0.470，2.55毫摩尔，16％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):181.2[M+H]+。
步骤5:使用叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(100.00mg，185.69μmol)、碳酸铯(181.50mg，557.06μmol)和(3S)-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺(83.66mg,464.22μmol)，按照程序B-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体，得到叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-6-氟-3-[[(3S)-3-甲氧基吡咯烷-1-基]磺酰氨基]苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(130mg,142.21μmol,77％产率)，为棕色粘性液体。LCMS m/z(ESI):697.0[M-H]-LCMS m/z(ESI):697.0[M-H]-。
步骤6:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序B-D)。在叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-6-氟-3-[[(3S)-3-甲氧基吡咯烷-1-基]磺酰氨基]苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(130.00mg，186.04μmol)上，使用4M氯化氢二噁烷(4M，46.51L)溶液进行N-Boc脱保护，得到(3S)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺(130mg,168.28μmol,90％产率)，为淡棕色固体。LCMS m/z(ESI):599.2[M+H]+(3S)-NLCMS m/z(ESI):599.2[M+H]+。
步骤7:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(91.08毫克，217.16微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(140.33毫克，1.09毫摩尔，189.12微升)、HATU(82.57毫克，217.16微摩尔)和(3S)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺(130.00mg,217.16μmol)进行酰胺偶联。粗残留物通过反相柱色谱纯化(0.1％甲酸水溶液:乙腈)，得到(3S)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺(32.06mg,31.24μmol,14％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):1000.0[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.54(s,1H),10.24(s,1H),8.36(s,1H),7.75-7.90(m,1H),7.79(d,J＝8.80Hz,1H),7.68(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.41-7.51(m,1H),7.37(d,J＝2.80Hz,1H),7.33(d,J＝12.80Hz,1H),7.13(d,J＝7.20Hz,1H),5.25-5.35(m,1H),5.03(d,J＝2.40Hz,1H),4.10-4.20(m,2H),3.92-4.01(m,1H),3.94(s,3H),3.89(t,J＝6.40Hz,2H),3.73-3.84(m,1H),3.58-3.68(m,1H),3.48-3.59(m,1H),3.23-3.41(m,4H),3.34(s,3H),3.14-3.21(m,2H),3.06(t,J＝10.80Hz,2H),2.74(t,J＝6.40Hz,2H),2.35-2.61(m,4H),2.03-2.12(m,1H)。
实施例177
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺
步骤1:向(3R)-3-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(4g，21.36毫摩尔)在四氢呋喃中的0℃搅拌溶液中加入氢化钠(60％分散在矿物油中，1.64g，42.73毫摩尔)。在0℃下继续搅拌1小时，并在相同温度下加入甲基碘(4.55克，32.05毫摩尔，1.99毫升)。反应混合物升温至室温并搅拌2小时。通过在0℃滴加饱和氯化铵溶液(30mL)使反应混合物淬灭，并用乙酸乙酯(3x70 mL)提取。合并的有机层用冷水(3x50 mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗物质。通过使用10-20％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂的硅胶快速柱色谱从粗残留物中纯化所需产物，得到无色液体的叔丁基(3R)-3-甲氧基吡咯烷-1-羧酸酯(4g，19.81mmol，93％产率)。GCMS m/z(ESI):201.1[M+H]+。
步骤2:在氮气氛下，于5℃向叔丁基(3R)-3-甲氧基吡咯烷-1-羧酸酯(4g，19.87mmol)在二噁烷(3mL)中的搅拌溶液中加入4M氯化氢二噁烷(4M，4.97mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌2小时。完成后，将反应混合物减压浓缩，得到浅棕色固体的粗(3R)-3-甲氧基吡咯烷(3.3g，17.99毫摩尔，91％产率)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝9.60(s,1H),9.29(s,1H),4.07(q,J＝2.40Hz,1H),3.65(s,1H),3.25(s,3H),3.09-3.25m,3H),2.00-2.07(m,1H),1.82-1.92(m,1H)。
步骤3/步骤4:向(3R)-3-甲氧基吡咯烷(3.5g，34.60mmol)在二氯甲烷(5mL)中的-30℃搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙基胺(6.71g，51.90mmol，9.04mL)、磺酰氯(11.68g，86.51mmol)。在-30℃下继续搅拌2小时。通过滴加水(60mL)使反应混合物淬灭。层分离，用水进一步用乙酸乙酯(2x100 mL)提取。合并的有机层用1.5N氯化氢溶液(2x50 mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗(3R)-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰氯(3.3g，12.40mmol，产率35.82％)。0℃下向(3R)-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰氯(3.3克，16.53毫摩尔)在甲醇(8毫升)中的溶液中加入在甲醇(7M，2.36毫升)中7M氨，于室温下搅拌14小时。反应混合物在减压下浓缩得到粗残留物，其在水(30毫升)和乙酸乙酯(50毫升)之间分配。有机层用碳酸氢钠溶液(20ml)、盐水(20ml)洗涤，用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用40％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到(3R)-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺(1.2克，6.66毫摩尔，40％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):181.2[M+H]+。
步骤5:使用(3R)-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺(150毫克，832.29微摩尔)、碳酸铯(325.41毫克，998.75微摩尔)和叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(179.29mg,332.92μmol)按照程序B-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体，以得到粗叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-6-氟-3-[[(3R)-3-甲氧基吡咯烷-1-基]磺酰氨基]苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(190mg,239.42μmol,72％产率)，为棕色粘性液体。LCMS m/z(ESI):700.0[M+H]+。
步骤6:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序B-D)。在叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-6-氟-3-[[(3R)-3-甲氧基吡咯烷-1-基]磺酰氨基]苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(190.00mg，271.91μmol)上使用4M氯化氢二噁烷(4M，67.98L)溶液进行N-Boc脱保护，得到粗(3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-[3-[(3R)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-苯基]-3-甲氧基-吡咯烷-1-磺酰胺(170mg,243.74μmol,90％产率)，为淡棕色固体。LCMS m/z(ESI):599.2[M+H]+。
步骤7:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(84.07毫克，200.45微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(129.54毫克，1.00毫摩尔，174.58微升)和HATU(83.84毫克，220.50微摩尔)和(3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-[3-[(3R)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-苯基]-3-甲氧基-吡咯烷-1-磺酰胺(120.00mg,200.45μmol)进行酰胺偶联。通过反相柱色谱(0.1％甲酸水溶液:乙腈)从粗物质中纯化所需产物，并将级分冻干，得到(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基吡咯烷-1-磺酰胺(40.51mg,39.70μmol,20％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):1000[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.52(s,1H),10.22(s,1H),8.36(s,1H),7.75-7.90(m,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.69(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.45-7.55(m,1H),7.38(d,J＝2.80Hz,1H),7.33(d,J＝12.80Hz,1H),7.12(d,J＝7.20Hz,1H),5.25-5.35(m,1H),5.02(s,1H),4.10-4.20(m,2H),3.92-4.01(m,1H),3.95(s,3H),3.89(t,J＝6.80Hz,2H),3.73-3.84(m,1H),3.58-3.68(m,1H),3.48-3.59(m,1H),3.23-3.41(m,4H),3.19(s,3H),3.14-3.21(m,2H),3.02-3.11(m,2H),2.74(t,J＝6.80Hz,2H),2.35-2.61(m,4H),2.03-2.12(m,1H)。
实施例178
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯胺基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:使用叔丁基3-氨基-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(2克，7.80毫摩尔)、2-氨基-5-硝基苯甲酸(1.42克，7.80毫摩尔)、原甲酸三乙酯(3.47克，23.41毫摩尔，3.89毫升)按照环化的一般程序(程序B-A)合成喹唑啉酮中间体。反应完成后，将反应混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(3×50mL)提取。有机层用碳酸氢钠溶液(2x 50mL)和盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩得到粗残留物，其用10％乙酸乙酯/石油醚研磨，得到棕色固体的3-(6-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(3克，5.44毫摩尔，产率70％)。LCMS m/z(ESI):375.2[M-CO2 tBu+H]+。
步骤2:在室温下，向叔丁基3-(6-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(3克，6.97毫摩尔)在水(5毫升)/乙醇(25毫升)中的搅拌溶液中加入铁粉(1.95克，34.85毫摩尔，247.59和微升)和氯化铵(1.86克，34.85毫摩尔，1.22毫升)。反应混合物在85℃下搅拌3小时。完成后，过滤反应混合物并在减压下浓缩以提供粗物质。将粗产物溶解于水(50mL)中，用乙酸乙酯(3×50mL)提取。合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸发得到粗产物。使用70-80％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，通过硅胶色谱纯化粗物质，得到棕色固体的3-(6-氨基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1.8克，4.45毫摩尔，63.85％产率)。外消旋化合物通过手性SFC(Lux-A1柱[250*30mm，5微米]；流动相:甲醇中50％异丙醇-二氧化碳+0.5％异丙胺；流速:120mL/min；循环时间:7.6分钟；回压:100巴；UV:210纳米)进行手性拆分，得到峰1(第一洗脱，任意指定为S-异构体)叔丁基(S)-3-(6-氨基-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(610mg)，为灰白色固体，和所需峰2(第二洗脱，任意指定为R-异构体)叔丁基(R)-3-(6-氨基-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(600mg,2.93mmol,10％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):401.2[M+H]+。
步骤3:向氢化纳(60％分散在矿物油中，172.22毫克，4.49毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(10毫升)中的搅拌溶液中加入0℃下溶解在N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)中的叔丁基(3R)-3-(6-氨基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(600毫克，1.50毫摩尔)。将反应混合物室温下搅拌2h，然后在室温下向反应混合物加入2,3,6-三氟苯甲腈(470.73mg,3.00mmol,346.12μL)并搅拌16h。完成后，反应混合物用冷水(50mL)淬灭，乙酸乙酯(2x50 mL)提取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，在pet醚中70-80％乙酸乙酯作为洗脱剂，得到棕色固体的叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯胺基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(720mg，688.1mol，46％产率)。LCMS m/z(ESI):538.8[M+H]+。
步骤4:向叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯胺基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(700毫克，1.30毫摩尔)在无水乙腈(8毫升)中的溶液中加入DMAP(79.54毫克，651.09微摩尔)和三乙胺(395.31毫克，3.91毫摩尔，544.50微摩尔)。在0℃下滴加焦碳酸二叔丁酯(568.40毫克，2.60毫摩尔，597.68微升)，内容物在室温下搅拌16小时。完成后，用水(50毫升)淬灭反应混合物，用乙酸乙酯(60毫升)提取，用硫酸钠干燥，过滤。溶剂被蒸发。用70-80％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化粗物质，得到叔丁基(3R)-3-[6-(N-叔丁氧基羰基-2-氰基-3,6-二氟-苯胺基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(600mg，412.59μmol，32％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):638.4[M+H]+。
步骤5:使用叔丁基(3R)-3-[6-(N-叔丁氧基羰基-2-氰基-3,6-二氟-苯胺基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(600mg，940.92μmol)、碳酸铯(919.71mg，2.82mmol)和[甲基(氨磺酰基)]乙烷(370.77mg,2.35mmol)按照程序B-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体。使用反相制备型高效液相色谱法(柱:X-select C18(150*19)mm 5微米制备方法:0.1％乙酸铵水溶液/乙腈)纯化粗化合物，得到叔丁基(3R)-3-[6-[N-叔丁氧基羰基-2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯胺基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(160mg,185.75μmol,20％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):754.1[M-H]-。
步骤6:使用叔丁基(3R)-3-[6-[N-叔丁氧基羰基-2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯胺基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(160mg，211.68mol)和氯化氢溶液(4.0M二噁烷溶液，3mL)按照程序B-D合成所需的胺。用甲基叔丁基醚研磨所得的粗化合物，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯胺基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(140mg，204.18μmol，96％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):556.7[M+H]+。
步骤7:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯胺基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(70mg，102.09μmol)、2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶]乙酸(51.38mg,112.71μmol)、N,N-二异丙基乙胺(131.94mg,1.02mmol,177.82μL)和HATU(58.23mg,153.13μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用45％的乙腈在0.1％乙酸铵水溶液中洗脱，得到产物(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯胺基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(21mg,20.74μmol,20％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):957.0[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.53(s,1H),9.98(s,1H),9.01(bs,1H),8.24(s,1H),7.66-7.59(m,2H),7.35-7.27(m,4H),7.13(d,J＝7.20Hz,1H),5.36-5.33(m,1H),5.04-5.03(m,1H),4.14-4.13(m,2H),3.95(s,3H),3.91-3.89(m,2H),3.88-3.79(m,1H),3.79-3.64(m,1H),3.64-3.51(m,1H),3.19-3.17(m,4H),3.16-3.06(m,2H),2.79-2.72(m,5H),2.52(s,3H),2.42-2.39(m,1H),2.08-2.03(m,1H),1.82-1.68(m,8H),1.06(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例179
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-(二甲胺基)-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:在0℃向3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(400mg，996.38μmol)在二氯甲烷(10mL)中的搅拌溶液中加入亚硝酸叔丁酯(308.24mg，2.99mmol，355.52μL)，并将反应混合物在氮气氛下于室温下搅拌12小时。反应完成后，用水(20mL)稀释反应混合物，用二氯甲烷(3×30mL)提取。合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用80-85％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到棕色固体的3-(6-羟基-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(210mg，437.45μmol，44％产率)。LCMS m/z(ESI):445.6[M-H]-。
步骤2:在0℃下，将3-(6-羟基-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(130mg，291.18μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液加入氢化纳(60％分散于矿物油中，1.46mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的搅拌溶液中，反应混合物室温下搅拌2h。然后2,3,6-三氟苯甲腈(137.23mg,873.55μmol,100.90μL)加入反应混合物中，80℃搅拌16h。反应完成后，反应混合物用冷水(10mL)淬灭，乙酸乙酯(2×10mL)提取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用60-70％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到棕色固体的3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(60mg，90.48μmol，31％产率)。LCMS M/z(ESI):484.0[M+H-CO2tBu]+。
步骤3:使用叔丁基3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(40毫克，68.55微摩尔)、碳酸铯(67.00毫克，205.64微摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(28.42毫克，205.64μmol)按照程序B-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用70-80％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到棕色粘性的3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(25mg，27.79μmol，41％产率)。LCMS m/z(ESI):700.0[M-H]-。
步骤4:在室温下向3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(25毫克，35.63微摩尔)在水(1毫升)/乙醇(3毫升)中的搅拌溶液中加入铁粉(9.95毫克，178.13微摩尔)和氯化铵(9.53mg,178.13μmol)。反应混合物在80℃下搅拌3小时。反应完成后，过滤反应混合物并在真空下浓缩得到粗产物。将该粗产物溶于水(5mL)，用乙酸乙酯(2x10 mL)提取。合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸发得到粗产物，其用80-90％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂通过硅胶快速柱色谱纯化，得到3-[5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(20mg,21.44μmol,60％产率)as a brown viscous.LCMS m/z(ESI):672.20[M+H]+。
步骤5:在室温下向3-[5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(150毫克，223.30微摩尔)和多聚甲醛(67.05毫克，2.23毫摩尔，62.08微升)在甲醇(4毫升)中的搅拌溶液中加入乙酸(134.10mg,2.23mmol,127.71μL)。将反应混合物在60℃下搅拌2小时。加入MP-氰基硼氢化物(2.04摩尔/克)(264.20毫克，538.98微摩尔)，并将反应混合物在60℃下进一步搅拌16小时。完成后，过滤反应混合物并在真空下浓缩得到粗产物。通过C18反相柱色谱(15g Rf C18，方法:10mM乙酸铵水溶液:乙腈)纯化粗产物，并将纯级分冻干，得到3-[[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-(二甲胺基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(50mg，44.30μmol，20％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):700.20[M+H]+。
步骤6:按照程序B-D，使用叔丁基3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-(二甲胺基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(25mg，35.72μmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液和在二噁烷(1mL)中的氯化氢4.0M溶液合成所需的胺。用甲基叔丁基醚研磨所得的粗化合物，得到3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-(二甲胺基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(25mg，24.76μmol，69％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):600.20[M+H]+。
步骤7:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)sulfamoyl]氨基]-6-氟苯氧基]-5-(二甲胺基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(25mg，39.30μmol)、2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(26.87mg,58.95μmol)、N,N-二异丙基乙胺(74.20mg,574.11μmol,0.1mL)和HATU(17.93mg,47.16μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用43％的乙腈在0.1％的甲酸水溶液中洗脱，得到产物3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)s Lfamoyl]氨基]-6-氟苯氧基]-5-(二甲胺基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(5.5mg,5.05μmol,13％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):1001.20[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.53(s,1H),8.23(s,2H),7.45-7.05(m,6H),6.65-6.50(m,1H),5.40-5.30(m,1H),5.05-5.04(m,1H),4.18-4.10(m,2H),3.95(s,3H),3.93(t,J＝7.20Hz,2H),3.85-3.75(m,1H),3.70-3.60(m,1H),3.60-3.50(m,2H),3.25-3.15(m,3H),3.10-3.00(m,2H),2.95(q,J＝7.20Hz,2H),2.83(s,6H),2.80-2.70(m,2H),2.68(s,3H),2.45-2.35(m,1H),2.05-1.95(m,1H),1.85-1.60(m,7H),1.01(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例180
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:将1-(6-溴-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮(300毫克，879.42微摩尔)、2-(4-哌啶基)乙酸叔丁酯(175.26毫克，879.42微摩尔)和碳酸铯(573.06毫克，1.76毫摩尔)在1,4-二噁烷(4毫升)中的混合物在密封管中混合，并用N2脱气10分钟。向反应混合物中加入Pd-PEPPSI-iHeptCl(42.82mg,43.97μmol)，并将所得反应混合物密封并在100℃加热14小时。用水(60mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(120mL)提取。有机层用水(50mL)、盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。如此获得的粗物质通过硅胶快速柱色谱纯化，用70％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(160mg，311.95μmol，35％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):460.2[M+H]+。
步骤2:向2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(130毫克，282.91微摩尔)在二氯甲烷(2毫升)中的0℃溶液中加入4M氯化氢在1,4-二噁烷(4M，3毫升)中的溶液。将所得反应混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物减压浓缩得到粗产物，其用二乙醚研磨，得到2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-哌啶基]乙酸(115mg，242.36μmol，86％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):404.5[M+H]+。
步骤3:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷盐酸盐(110mg，185.48μmol)、2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-哌啶基]乙酸(74.82mg,185.48μmol)、N,N-二异丙基乙胺(95.89mg,741.90μmol,129.23μL)和HATU(70.52mg,185.48μmol)进行酰胺偶联以得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(32mg,33.87μmol,18％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):942.0[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.54(s,1H),10.20(s,1H),8.36(s,1H),7.86(bs,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.70(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.49(dd,J＝3.60,9.00Hz,1H),7.36(dd,J＝2.80,6.80Hz,1H),7.32(s,1H),7.09(d,J＝6.80Hz,1H),5.33-5.26(m,1H),4.12(t,J＝3.60Hz,1H),4.31-4.30(m,2H),3.94(s,3H),3.89(t,J＝6.80Hz,2H),3.76-3.68(m,1H),3.53-3.38(m,4H),3.16(q,J＝7.20Hz,2H),2.79(s,3H),2.74(t,J＝6.80Hz,2H),2.68-2.67(m,2H),2.39-2.34(m,3H),2.08-2.07(m,1H),1.83-1.64(m,7H),1.42-1.39(m,2H),1.05(t,J＝6.80Hz,3H)。
实施例181
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-甲氧基-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:在室温和氮气氛下向叔丁基3-(5-溴-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1.1克，2.29毫摩尔)和甲醇钠(742.28毫克，13.74毫摩尔，766.03微升)在无水N,N-二甲基甲酰胺(6毫升)和甲醇(3毫升)中的搅拌溶液中加入溴化铜(I)(164.25mg,1.14mmol,34.87μL)。反应混合物在微波反应器中于130℃搅拌2小时。反应混合物用饱和氯化铵水溶液(30mL)淬灭，用乙酸乙酯(2x 50mL)提取。合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸发得到粗产物，该粗产物用80-90％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂通过硅胶快速柱色谱纯化，得到棕色固体的3-(6-羟基-5-甲氧基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(400mg，880.69μmol，38％产率)。LCMS m/z(ESI):432.20[M+H]+。
步骤2:按照程序B-B，使用叔丁基3-(6-羟基-5-甲氧基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(400毫克，927.04微摩尔)、叔丁醇钾(312.07毫克，2.78毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(436.89毫克，2.78毫摩尔,321.24μL)合成O-芳基化喹唑啉酮中间体。用60-70％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化粗化合物得到纯产物。通过SFC(柱名:Lux A1)对该产物进行手性拆分，得到叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-甲氧基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(110mg，192.69μmol，21％产率)(SOR:[α]D:-79.27，指定为R-异构体，第二洗脱)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):513.20[M+H-CO2 tBu]+，和叔丁基(3S)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-甲氧基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(100mg，170.41μmol，18％产率，第一洗脱)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):513.20[M+H-CO2tBu]+。
步骤3:按照一般程序B-C，使用叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-甲氧基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(110mg，193.47μmol)、碳酸铯(189.11mg，580.41μmol)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(133.68mg,967.34μmol)合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体。通过C18反相柱色谱使用Isolera(15g RfC18，方法:10mM乙酸铵水溶液:乙腈)纯化粗产物，并将纯级分冻干，得到叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-甲氧基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(60mg,85.93μmol,44％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):685.00[M-H]-。
步骤4:按照一般程序B-D，使用叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-甲氧基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(60.00毫克，87.37微摩尔)和氯化氢二噁烷(2毫升)溶液4.0M合成所需胺。用甲基叔丁基醚研磨所得的粗化合物，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-甲氧基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(50mg，74.39μmol，85％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):587.20[M+H]+。
步骤5:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-甲氧基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(50mg，85.23μmol)，2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(58.28mg,127.85μmol)和N,N-二异丙基乙胺(236.43mg,1.83mmol,318.64μL)和HATU(38.89mg,102.28μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用50％的乙腈在0.1％的甲酸水溶液中洗脱，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-甲氧基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(22mg,21.60μmol,25％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):988.00[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.54(s,1H),10.10(s,1H),8.32(s,1H),7.68-7.65(m,1H),7.52(s,1H),7.46(d,J＝9.20Hz,1H),7.33(d,J＝12.00Hz,2H),7.13(s,1H),5.42-5.30(m,1H),5.04(s,1H),4.15(d,J＝5.20Hz,2H),3.94(s,3H),3.89(t,J＝6.40Hz,2H),3.80(s,3H),3.69-3.51(m,2H),3.19-3.02(m,5H),2.76-2.69(m,4H),2.58-2.51(m,4H),2.42-2.40(m,3H),2.12-2.01(m,1H),1.82-1.43(m,8H),1.06(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例182
(3R)-3-[5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:在0℃向3-[(3R)-6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1.50克，3.74毫摩尔)在二氯甲烷(20毫升)中的搅拌溶液中加入亚硝酸叔丁酯(1.54克，14.95毫摩尔，1.78毫升)，并将反应混合物在室温下搅拌12小时。用水(20mL)稀释反应混合物，用二氯甲烷(3×30mL)提取。合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩。用85-90％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化粗物质，得到棕色固体的叔丁基(3R)-3-(6-羟基-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1克，1.93毫摩尔，产率52％)。LCMS m/z(ESI):445.2[M-H]-。
步骤2:向氢化纳(60％分散在矿物油中，343.30毫克，8.96毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)中的0℃搅拌溶液中加入叔丁基(3R)-3-(6-羟基-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1.00克，2.24毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)中的溶液。反应混合物在室温下搅拌2小时。加入2,3,6-三氟苯甲腈(703.74毫克，4.48毫摩尔，517.45微升)，所得反应混合物在80℃下搅拌16小时。反应混合物用冷水(50毫升)淬灭，用乙酸乙酯(2x50毫升)提取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。粗物质通过硅胶快速柱色谱纯化，用70-80％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟苯氧基)-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(800mg，1.17mmol，52％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):484.00[M-CO2 tBu+H]+。
步骤3:按照一般程序B-C，使用叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(800mg，1.37mmol)、碳酸铯(1.34g，4.11mmol)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(947.24mg,6.85mmol)合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体。用80-85％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化粗化合物，得到棕色粘性液体的叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(600mg，589.98μmol，43％产率)。LCMS m/z(ESI):700.80[M-H]-。
步骤4:在室温下向叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-硝基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(600毫克，855.04微摩尔)在水(5毫升)和乙醇(7毫升)中的搅拌溶液中加入铁粉(477.50毫克，8.55毫摩尔,60.75μL)和氯化铵(457.37mg,8.55mmol,298.94μL)。将反应混合物在85℃下搅拌6小时。过滤反应混合物并在减压下浓缩。将该粗残留物溶于水(50mL)，用乙酸乙酯(2x50 mL)提取。合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。使用80-90％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化粗物质，得到棕色固体的叔丁基(3R)-3-[5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(400mg，434.69μmol，51％产率)。LCMS m/z(ESI):670.20[M-H]-。
步骤5:按照一般程序B-D，使用叔丁基(3R)-3-[5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(100mg，148.87μmol)和4.0M氯化氢二噁烷(4mL)溶液合成所需的胺。用甲基叔丁基醚研磨粗化合物，得到(3R)-3-[5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(100mg，110.18μmol，74％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):570.20[M-H]-。
步骤6:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用(3R)-3-[5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(100mg，164.45μmol)、2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(112.45mg,246.68μmol)、N,N-二异丙基乙胺(371.00mg,2.87mmol,0.5mL)和HATU(75.04mg,197.34μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用43％的乙腈在0.1％的甲酸水溶液中洗脱，得到产物(3R)-3-[5-氨基-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(34mg,33.83μmol,21％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):973.20[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.54(s,1H),10.12(bs,1H),8.18(s,1H),7.62(bs,1H),7.33(dd,J＝1.20,12.80Hz,2H),7.23(s,1H),7.13(d,J＝7.20Hz,2H),6.97(d,J＝8.80Hz,1H),6.66(d,J＝8.40Hz,1H),5.35-5.31(m,1H),5.04-5.04(m,1H),4.15-4.14(m,1H),3.95(s,3H),3.89(t,J＝6.80Hz,2H),3.85-3.75(m,1H),3.70-3.60(m,1H),3.60-3.45(m,1H),3.20-3.00(m,5H),2.78-2.70(m,5H),2.59(s,3H),2.45-2.35(m,2H),2.08-2.00(m,1H),1.90-1.55(m,9H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例183
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:室温下，将4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(906.41毫克，2.93毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)中的溶液在密封管中组合。加入1-(6-溴-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮(0.5g，1.47mmol)和氟化铯(667.93mg，4.40mmol，162.12μL)。将所得混合物用氮气脱气20分钟，加入1,1-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物(179.54毫克，219.85微摩尔)。将所得反应混合物密封并在80℃下搅拌16小时。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，通过硅藻土床过滤，并用乙酸乙酯(50mL)洗涤。用水(20mL)洗涤有机层，并在减压下蒸发分离的有机层。粗产物通过柱色谱(230-400硅胶)纯化，使用90％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(0.42g，843.37μmol，58％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):388.2[M+H-56]+。
步骤2:在环境温度下，在氮气氛下，将碳上氢氧化钯(0.2克，924.53微摩尔)加入到包含4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(0.41克，924.53微摩尔)在二噁烷(4毫升)中的充分搅拌的溶液的50毫升单颈圆底烧瓶中。反应混合物在室温下用氢气囊(1个大气压)氢化16小时。反应混合物通过硅藻土床过滤，用二氯甲烷(40ml)中的10％甲醇冲洗。减压除去溶剂，得到棕色固体的叔丁基4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]哌啶-1-羧酸酯(0.4g，884.25μmol，96％产率)。LCMS m/z＝390.5[M+H-56]+。
步骤3:在氮气氛下，于0℃向叔丁基4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]哌啶-1-羧酸酯(0.41克，920.34微摩尔)的二氯甲烷(2毫升)溶液中加入4M氯化氢二噁烷(4毫升)溶液。所得溶液在室温下搅拌3小时。将所得溶液减压浓缩，得到棕色固体的粗1-[5-氟-1-甲基-6-(4-哌啶基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(0.35克，916.63微摩尔，100％产率)。LCMS m/z＝346.5[M+H]+。
步骤4:在室温下向1-[5-氟-1-甲基-6-(4-哌啶基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(0.35克，1.01毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙基胺(327.44毫克，2.53毫摩尔，441.29微升)和溴乙酸叔丁酯(197.67毫克，1.01毫摩尔，148.62μL)。将所得混合物在室温下搅拌12小时。完成后，将反应混合物水(10ml)稀释并用乙酸乙酯(2x30 mL)提取。减压蒸发合并的有机层。如此获得的粗产物通过柱色谱(230-400硅胶)纯化，使用90％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(0.31g，649.3μmol，64％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):460.2[M+H]+。
步骤5:在氮气氛下，于0℃向2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(0.31克，674.63微摩尔)的二氯甲烷(3毫升)溶液中加入4M氯化氢二噁烷(4.0M，2.53毫升)溶液。将所得溶液在石油醚中搅拌16小时。将所得溶液减压浓缩，得到淡棕色固体的粗2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸(0.27g，568.03μmol，84％产率)。LCMS m/z(ESI):404.2[M+H]+。
步骤6:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(0.1克，168.61微摩尔)、2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸(74.17mg,168.61μmol)、HATU(64.11mg,168.61μmol)和N,N-二异丙基乙胺(108.96mg,843.07μmol,146.85μL)进行酰胺偶联。粗物质通过使用30g snap的反相柱色谱纯化，用35％的乙腈在0.1％的甲酸水溶液中洗脱，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(45mg,43.46μmol,26％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):942.2[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.57(s,1H),9.91(s,1H),8.36(d,J＝1.20Hz,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.69(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.68-7.81(m,1H),7.53(d,J＝5.20Hz,1H),7.42-7.51(m,1H),7.42(d,J＝10.80Hz,1H),7.37(d,J＝2.80Hz,1H),5.31-5.39(m,1H),4.10-4.22(m,2H),4.02(s,3H),3.91(t,J＝6.80Hz,2H),3.71-3.80(m,1H),3.25-3.60(m,5H),3.19-3.20(m,3H),2.81-3.11(m,2H),2.71-2.78(m,2H),2.75(s,3H),2.35-2.56(m,3H),1.91-2.21(m,5H),1.51-1.91(m,5H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例184
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯胺基]-5-氟-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
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步骤1:在80℃下，向微小加压釜(tiny clave)中2,3,6-三氟苯甲腈(3克，19.10毫摩尔，2.21毫升)在异丙醇(8毫升)中的搅拌溶液中加入氢氧化铵(8.03克，229.16毫摩尔，8.92毫升)16小时。用水(50mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(100mL)提取。有机层用碳酸氢钠溶液(20mL)、盐水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。如此获得的粗物质通过硅胶快速柱色谱纯化，用50-70％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到白色固体的2-氨基-3,6-二氟-苯甲腈(0.9g，5.84毫摩尔，31％产率)。GCMS m/z(ESI):154[M-H]-。
步骤2a:在-10℃和氮气氛下，向2-氨基-6-氟-苯甲酸(5g，32.23毫摩尔)在二氯甲烷(50mL)中的溶液加入N-溴代琥珀酰亚胺(5.74g，32.23毫摩尔，2.73mL)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。用水(70mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2x100 mL)提取。有机层用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。使用0-70％乙酸乙酯/石油醚通过硅胶快速柱色谱纯化所得粗产物，得到6-氨基-3-溴-2-氟-苯甲酸(4g，16.61mmol，52％产率)，为淡黄色固体。LCMS m/z(ESI):232.0[M-H]-。
步骤2b:使用6-氨基-3-溴-2-氟-苯甲酸(608.62毫克，2.60毫摩尔)、3-氨基-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1克，3.90毫摩尔)和原甲酸三乙酯(1.16克，7.80毫摩尔，1.30毫升)按照环化的一般程序(程序B-A)合成喹唑啉酮中间体。粗残留物通过硅胶快速柱色谱纯化，用60-80％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂进行洗脱，得到黄色固体的3-(6-溴-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1.2克，2.30毫摩尔，89％产率)。LCMS m/z(ESI):426.0[M+H-56]+。
步骤2:将密封管中3-(6-溴-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(600毫克，1.24毫摩尔，21.78微升)和2-氨基-3,6-二氟-苯甲腈(191.71毫克，1.24毫摩尔)在1,4-二噁烷(6毫升)中的混合物用氮气脱气10分钟。加入碳酸铯(1.01克，3.11毫摩尔)和Pd-PEPPSI-iHeptCl(60.50毫克，62.20微摩尔)，反应混合物进一步用氮气脱气5分钟，然后在110℃加热12小时。用水(20mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(30mL)提取。有机层用水(10mL)、盐水(10mL)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩。粗混合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用0-70％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂进行洗脱，得到浅棕色固体叔丁基3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯胺基)-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.3g，516.09μmol，41％产率)。LCMS m/z(ESI):556.7[M+H]+。
步骤3/步骤4:在室温下向叔丁基3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯胺基)-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(300毫克，540.01微摩尔)在乙腈(5毫升)中的搅拌溶液中加入二碳酸二叔丁酯(235.71毫克，1.08毫摩尔，247.86微升)、DMAP(32.99mg,270.00μmol)和三乙胺(163.93mg,1.62mmol,225.80μL)。反应混合物在室温下搅拌16小时。用水(10mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(3x30 mL)提取。合并的有机层用冷水(3x15 mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。如此获得的粗物质用丙酮和石油醚研磨，得到浅棕色固体的产物叔丁基(3R)-3-[6-(N-叔丁氧基羰基-2-氰基-3,6-二氟-苯胺基)-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(200mg)。该外消旋产物通过使用Lux-A1柱的手性SFC纯化进行手性拆分，得到叔丁基(3R)-3-[6-(N-叔丁氧基羰基-2-氰基-3,6-二氟-苯胺基)-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯，级分-1(75mg，95.7％纯度，任意指定为R-异构体)和叔丁基(3S)-3-[6-(N-叔丁氧基羰基-2-氰基-3,6-二氟-苯胺基)-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(55mg，91％纯度，任意指定为S-异构体)。LCMS m/z(ESI):671.2[M+H]+。
注:第一洗脱峰被任意指定为R-异构体，第二洗脱峰被任意指定为S-异构体。该分配基于SOR数据。负SOR值被视为R-异构体，正SOR值被视为S-异构体。
步骤5:使用叔丁基(3R)-3-[6-(N-叔丁氧基羰基-2-氰基-3,6-二氟-苯胺基)-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(75.00mg，114.39μmol)、碳酸铯(111.81mg，343.16μmol)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(39.52mg,285.97μmol)按照程序B-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体，得到叔丁基(3R)-3-[6-[N-叔丁氧基羰基-2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯胺基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(65mg,72.93μmol,64％产率)，为棕色粘性液体。LCMS m/z(ESI):772.2[M-H]-。
步骤6:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序B-D)。使用4M氯化氢二噁烷(35毫升)溶液的叔丁基(3R)-3-[6-[N-叔丁氧基羰基-2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯胺基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(100.00mg，129.22μmol)的N-Boc脱，得到粗(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯胺基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(80mg,117.31μmol,91％产率)，为淡棕色固体。LCMS m/z(ESI):574.7[M+H]+。
步骤7:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯胺基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(70毫克，122.03微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(78.86毫克，610.17微摩尔，106.28微升)、2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(51.18mg,122.03μmol)和HATU(51.04mg,134.24μmol)进行酰胺偶联。粗残留物通过反相柱色谱纯化(0.1％碳酸氢铵水溶液:乙腈)，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯胺基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(14mg,14.13μmol,12％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):975.0[M+H]+.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.53(s,1H),9.89(s,1H),8.77(s,1H),8.25(s,1H),7.42-7.61(m,1H),7.41(d,J＝7.60Hz,2H),7.33(d,J＝12.00Hz,1H),7.18(dd,J＝4.00,9.00Hz,1H),7.13(d,J＝6.80Hz,1H),5.34(t,J＝7.20Hz,1H),5.03(d,J＝2.40Hz,1H),4.14(d,J＝5.20Hz,2H),3.95(s,3H),3.89(t,J＝6.80Hz,2H),3.72-3.82(m,1H),3.60-3.70(m,1H),3.45-3.60(m,1H),3.22-3.40(m,1H),3.02-3.20(m,6H),2.65-2.81(m,3H),2.58(s,3H),2.38-2.61(m,2H),2.01-2.10(m,1H),1.51-1.88(m,8H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例185
(3R)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯胺基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:在10℃下，向2-氨基-6-氯-苯甲酸(5g，29.14毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中的搅拌溶液中逐份加入N-溴代丁二酰亚胺(6.22g，34.97毫摩尔，2.96mL)。将反应在0℃下搅拌16小时。将反应混合物倒入冰水(400毫升)中，过滤收集产物并干燥，得到浅棕色固体的6-氨基-3-溴-2-氯-苯甲酸(5.7克，18.21毫摩尔，62％产率)。LCMS(ESI+):548.0[M+H；溴同位素模式]。
步骤2:使用6-氨基-3-溴-2-氯-苯甲酸(2.35克，9.36毫摩尔)、3-氨基-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(2克，7.80毫摩尔)、二乙氧基甲氧基乙烷(3.47克，23.41毫摩尔，3.89毫摩尔)和乙酸(93.71mg,1.56mmol,89.24μL)按照环化的一般程序(程序B-A)合成喹唑啉酮中间体。通过使用50％乙酸乙酯(在石油醚中)作为洗脱剂的硅胶快速柱色谱从粗物质中纯化所需化合物，得到外消旋化合物。使用Lux C2柱通过SFC进行手性分离，得到S-异构体的级分-1叔丁基(3S)-3-(6-溴-5-氯-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(380mg，758.18μmol，9.72％产率)和R-异构体的级分-2叔丁基(3R)-3-(6-溴-5-氯-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(320mg,640.71μmol,8％产率)。
步骤3:在密封管中向叔丁基(3R)-3-(6-溴-5-氯-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(300mg，601.45μmol)和2-氨基-3,6-二氟-苯甲腈(111.23mg，721.74μμmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的搅拌溶液中加入碳酸铯(391.93mg,1.20mmol)，混合物用氮气脱气5分钟。加入Pd-PEPPSI-iHept-Cl(29.25毫克，30.07微摩尔)，所得反应混合物在封闭的密封管中于100℃搅拌16小时。反应完成后，将混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)稀释。分离有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗残留物通过硅胶快速柱色谱纯化，用0-50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，获得黄色固体的叔丁基(3R)-3-[5-氯-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯胺基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(160mg，268.53μmol，45％产率)。LCMS(ESI+):516.5[M+H-tBu]+。
步骤4:在室温和氮气氛下向叔丁基(3R)-3-[5-氯-6-(2-氰基-3,6-二氟-苯胺基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(160毫克，279.72微摩尔)在乙腈(3毫升)中的搅拌溶液中加入三乙胺(84.91毫克，839.16微摩尔，116.96微升)和DMAP(17.09mg,139.86μmol)。向所得反应混合物中加入二碳酸二叔丁酯(122.10毫克，559.44摩尔，128.39升)。向所得反应混合物中加入二碳酸二叔丁酯(122.10mg,559.44μmol,128.39μL)。将所得反应混合物升温至室温并搅拌16小时。向反应混合物中加入冰冷的水(10mL)，并使用乙酸乙酯(2x10mL)提取水性混合物。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。如此获得的粗化合物通过柱色谱纯化，石油醚中40-100％乙酸乙酯中洗脱，得到叔丁基(3R)-3-[6-(N-叔丁氧基羰基-2-氰基-3,6-二氟-苯胺基)-5-氯-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(130mg，164.41μmol，59％产率)，为灰白色固体。LCMS(ESI+):672.3[M+H]+。
步骤5:使用叔丁基(3R)-3-[6-(N-叔丁氧基羰基-2-氰基-3,6-二氟-苯胺基)-5-氯-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(130毫克，193.42微摩尔)、碳酸铯(189.06毫克，580.26微摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(66.82mg,483.55μmol)按照程序B-C合成氨磺酰化的喹唑啉酮中间体。粗化合物通过柱色谱纯化，使用230-400硅胶和0-80％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到叔丁基(3R)-3-[6-[N-叔丁氧基羰基-2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟代苯胺基]-5-氯-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(75mg,51.25μmol,27％产率)，为棕色粘性液体。LCMS(ESI+):788.3[M+H]+。
步骤6:根据程序B-D合成所需的胺。在0℃下使用1,4-二噁烷(400μL)中4M氯化氢溶液对叔丁基(3R)-3-[6-[N-叔丁氧基羰基-2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯胺基]-5-氯-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(70mg，88.57μmol)进行N-Boc脱保护。将反应混合物在真空下浓缩，用乙醚洗涤以得到(3R)-3-[5-氯-6-[2-氰-3-[[乙基(甲基)磺胺基]氨基]-6-氟苯胺基]-4-氧基喹唑啉-3-基]-1-氧-8-氮杂螺[4.5]癸烷(58mg,38.88μmol,44％产率)，为灰白色固体。LCMS:m/z 590.3[M-H]-。
步骤7:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用(3R)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯胺基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(50mg，79.80μmol)和2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]4-哌啶基]乙酸(36.82mg,80.76μmol)、N,N-二异丙基乙胺(30.94mg,239.41μmol,41.70μL)和HATU(45.52mg,119.71μmol)进行酰胺偶联。通过制备型高效液相色谱(X select C18(10X 150mm)5.0μ，溶剂A:水中0.1％的碳酸氢铵；溶剂B；乙腈)纯化粗化合物，收集纯级分并冻干，得到(3R)-3-[5-氯-6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯胺基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(2.2mg,2.20μmol,3％产率)，为灰白色固体。LCMS(ESI+):m/z 991.2[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.53(s,1H),9.96(s,1H),8.35(s,1H),8.27(s,1H),7.61(s,1H),7.51(d,J＝9.20Hz,1H),7.35-7.30(m,2H),7.13(d,J＝7.20Hz,2H),5.33(s,1H),5.04(s,1H),4.15(d,J＝5.20Hz,2H),3.95(s,3H),3.91(q,J＝6.80Hz,2H),3.90-3.40(m,3H),3.19-3.04(m,6H),2.79-2.70(m,5H),2.58-2.38(m,4H),2.08-2.06(m,1H),1.82-1.24(m,8H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例186
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-羟基-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:-50℃下向叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-甲氧基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(40mg，58.25μmol)在二氯甲烷(3mL)中的搅拌溶液中加入三氯化硼在二氯甲烷中的1.0M溶液(407.72μmol，0.4mL)。将反应混合物在室温下搅拌2h。减压浓缩反应混合物，用甲基叔丁基醚(3×10mL)对粗残留物进行研磨，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)磺胺基]氨基]-6-氟-苯氧基]-5-羟基-4-氧代喹唑啉-3-基]-1-氧-8-氮杂螺[4.5]癸烷(35mg,37.35μmol,64％产率)，为灰白色固体。LCMS(ESI+):m/z 573.20[M+H]+。
步骤2:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(35.00mg，37.35μmol)、2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(20.43mg,44.82μmol)、N,N-二异丙基乙胺(148.40mg,1.15mmol,0.2mL)和HATU(17.04mg,44.82μmol)进行酰胺偶联。将粗化合物进行制备型高效液相色谱纯化(方法:0.1％甲酸水溶液:乙腈，柱:BRIDGE C8(19X150)MM，5MIC)，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-5-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(3.5mg,3.57μmol,10％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):974.20[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝12.02(s,1H),10.53(s,1H),10.09(s,1H),8.33(s,1H),7.45-7.35(m,2H),7.33(d,J＝12.80Hz,1H),7.24(s,1H),7.16-7.12(m,2H),5.40-5.30(m,1H),5.03(s,1H),4.23-4.15(m,2H),3.95-3.88(m,4H),3.80-3.78(m,1H),3.70-3.60(m,1H),3.51-3.49(m,2H),3.43-3.42(m,1H),3.20-3.10(m,3H),3.09-3.06(m,3H),2.73(q,J＝6.40Hz,2H),2.68(s,3H),2.60-2.55(m,2H),2.45-2.35(m,1H),2.15-2.12(m,1H),1.91-1.56(m,8H),1.03(t,J＝6.80Hz,3H)。
下述实施例187-191是深口袋(deep pocket)修改的代表性实施例实施例187
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]哌啶-1-磺酰胺/>
步骤1:使用叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(250毫克，464.22微摩尔)、碳酸铯(529.38毫克，1.62毫摩尔)和哌啶-1-磺酰胺(190.59毫克，1.62毫摩尔)按照程序B-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体以得到粗产物。用80-85％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化粗化合物，得到棕色固体的叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-6-氟-3-(1-哌啶基磺酰胺基)苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(180mg，238.91μmol，51％产率)。LCMS m/z(ESI):681.4[M-H]-。
步骤2:按照程序B-D，使用叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-6-氟-3-(1-哌啶基磺酰胺基)苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(180mg，263.64μmol)和氯化氢(4.0M，1,4-二噁烷中)(4M，65.91μL)合成所需的胺。用甲基叔丁基醚研磨所得粗化合物，得到灰白色固体的N-[2-氰基-4-氟-3-[3-[(3R)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-苯基]哌啶-1-磺酰胺(160mg，205.77μmol，78％产率)。LCMS m/z(ESI):581.2[M-H]-。
步骤3:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(83.77mg，230.52μmol)、N-[2-氰基-4-氟-3-[3-[(3R)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-苯基]哌啶-1-磺酰胺(250mg,403.81μmol)、N,N-二异丙基乙胺(371.00mg,2.87mmol,0.5mL)和HATU(191.92mg,504.76μmol)进行酰胺偶联以得到粗产物。粗化合物通过反相柱色谱纯化，(乙腈:水中0.1％的甲酸)洗脱，得到产物N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-苯基]哌啶-1-磺酰胺(80mg,79.25μmol,24％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):984.2[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.53(s,1H),10.27(s,1H),8.36(s,1H),7.86(s,1H),7.81(s,1H),7.71(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.53(dd,J＝4.00,9.00Hz,1H),7.33(d,J＝12.80Hz,1H),7.36(s,1H),7.12(d,J＝7.20Hz,1H),5.40-5.30(m,1H),5.02(s,1H),4.16-4.11(m,2H),4.12(s,3H),3.89(t,J＝6.40Hz,2H),3.80-3.70(m,1H),3.70-3.60(m,1H),3.60-3.50(m,1H),3.16(m,6H),3.09-3.04(m,2H),2.71(t,J＝1.60Hz,2H),2.67(s,2H),2.50-2.33(m,2H),2.10-2.07(m,1H),1.82-1.67(m,8H),1.53-1.47(m,6H)。
实施例188
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环己磺酰胺
步骤1:使用叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.25克，464.22微摩尔)、碳酸铯(453.75毫克，1.39毫摩尔)和环己烷磺酰胺(189.44毫克，1.16毫摩尔)按照程序B-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体，得到粗叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-(环己基磺酰氨基)-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.22g,290.16μmol,63％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):682.4[M+H]+。
步骤2:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序B-D)。在叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-(环己基磺酰氨基)-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.22g，322.69μmol)上使用氯化氢(4M，二噁烷中)(4M，2mL)进行N-Boc脱保护，得到粗N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-苯基]环己烷磺酰氨(0.22g,290.00μmol,90％产率)，为淡棕色固体。LCMSm/z(ESI):582.2[M+H]+。
步骤3:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(156.06毫克，342.34微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(480.91毫克，3.72毫摩尔，648.13微升)、HATU(155.63毫克，409.31微摩尔)和N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-苯基]环己烷磺酰氨(0.23g,372.10μmol)进行酰胺偶联。通过反相柱色谱(0.1％甲酸水溶液:乙腈)从粗产物中纯化所需产物，并将级分冻干，得到N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]环己烷磺酰氨(116mg,110.21μmol,30％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):983.0[M+H]+和1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.52(s,1H),10.30(s,1H),8.36(s,1H),8.31(s,1H),7.80(d,J＝9.20Hz,2H),7.70(d,J＝3.20Hz,1H),7.15-7.48(m,1H),7.40(d,J＝2.80Hz,1H),7.33(d,J＝12.80Hz,1H),7.12(d,J＝7.20Hz,1H),5.31(s,1H),5.03(d,J＝1.60Hz,1H),4.16-4.13(m,2H),3.94(s,3H),3.89(t,J＝6.80Hz,2H),3.86-3.75(m,1H),3.70-3.62(m,1H),3.55-3.45(m,1H),3.19-3.06(m,5H),2.74(t,J＝6.80Hz,2H),2.68(t,J＝1.60Hz,3H),2.50-2.33(m,1H),2.16-2.08(m,3H),1.82-1.61(m,10H),1.42-1.31(m,5H),1.30-1.27(m,1H)。
实施例189
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]丙烷-2-磺酰胺
步骤1:使用叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.25克，464.22微摩尔)、碳酸铯(453.75毫克，1.39毫摩尔)和丙烷-2-磺酰胺(142.95mg,1.16mmol)按照程序B-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体以得到粗叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-6-氟-3-(异丙基磺酰胺基)苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.21g,286.08μmol,62％产率)，为棕色粘性液体。LCMS m/z(ESI):586.0[M+H-56]+。
步骤2:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护合成所需的胺(程序B-D)。在叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-6-氟-3-(异丙基磺酰胺基)苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.21g，327.25μmol)上，使用氯化氢(二噁烷中4M)(4M，2mL)进行N-Boc脱保护，得到粗N-[2-氰基-4-氟-3[(3R)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-苯基]丙烷-2-磺酰胺(0.21g,326.52μmol,100％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):542.2[M+H]+。
步骤3:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(159.62毫克，350.15微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(491.88毫克，3.81毫摩尔，662.91微升)、HATU(159.18毫克，418.65微摩尔)和N-[2-氰基-4-氟-3[(3R)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-苯基]丙烷-2-磺酰胺(0.22g,380.59μmol)进行酰胺偶联。通过反相柱色谱(0.1％甲酸水溶液:乙腈)从粗产物中纯化所需产物，并将级分冻干，得到N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]丙烷-2-磺酰胺(109mg,108.25μmol,28％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):943.0[M+H]+and 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.54(s,1H),10.33(s,1H),8.37(s,1H),7.80(d,J＝9.20Hz,2H),7.71-7.68(m,1H),7.51-7.50(m,1H),7.41(d,J＝3.20Hz,1H),5.34(d,J＝1612.80Hz,1H),7.13(d,J＝7.60Hz,1H),5.31(m,1H),5.03(s,1H),4.15-4.13(m,2H),3.95(s,3H),3.90(t,J＝6.80Hz,2H),3.79(m,1H),3.64(m,1H),3.55-3.51(m,1H),3.17(d,J＝9.60Hz,2H),3.08(d,J＝11.20Hz,2H),2.74(t,J＝6.80Hz,2H),2.68(t,J＝1.60Hz,3H),2.11-2.07(m,1H),1.82-1.71(m,8H),1.33(d,J＝6.40Hz,6H)。
实施例190
(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺
步骤1:使用叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(250.00mg，464.22μmol)、碳酸铯(605.00mg，1.86mmol)和(3R)-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺(234.23mg,1.39mmol)按照程序B-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体以得到粗叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-6-氟-3-[[(3R)-3-氟吡咯烷-1-基]氨磺酰氨基]苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(210mg,260.35μmol,56％产率)，为黄色固体。LCMS m/z(ESI):685.2[M-H]-。
步骤2:通过TFA介导的N-Boc脱保护反应合成所需的胺(程序B-D)。在叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-6-氟-3-[[(3R)-3-氟吡咯烷-1-基]氨磺酰氨基]苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(210mg，299.26μmol)上使用氯化氢(二噁烷中4M)(4M，1.96mL)进行N-Boc脱保护，得到粗3-氟-2-[4-氧代-3-[(3R)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-3-基]喹唑啉-6-基]氧基-6-[(3R)-3-氟吡咯烷-1-基]氨磺酰氨基]苄腈(200mg,285.23μmol,95％产率)，为淡棕色固体。LCMS m/z(ESI):587.3[M+H]+。
步骤3:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用(3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-[3-[(3R)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-苯基]-3-氟-吡咯烷-1-磺酰胺(185mg，315.37μmol)、2-[1-[3-(2,4-二氧杂环己烷氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(132.27mg,315.37μmol)、N,N-二异丙基乙胺(203.80mg,1.58mmol,274.66μL)和HATU(131.91mg,346.91μmol)进行酰胺偶联。通过反相柱色谱(0.1％甲酸水溶液:乙腈)纯化粗化合物，得到(3R)-N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺(55.98mg,56.48μmol,18％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):988.0[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.52(s,1H),10.34(s,1H),8.36(s,1H),7.87(s,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,2H),7.69(dd,J＝2.80,9.00Hz,1H),7.53(d,J＝6.00Hz,1H),7.39(d,J＝2.80Hz,1H),7.33(d,J＝12.80Hz,1H),7.12(d,J＝7.20Hz,1H),5.41-5.25(m,2H),5.02(s,1H),4.21-4.09(m,2H),3.94(s,3H),3.89(t,J＝6.80Hz,2H),3.82-3.73(m,1H),3.67-3.59(m,1H),3.54-3.46(m,4H),3.21-3.12(m,2H),3.12-3.01(m,2H),2.74(t,J＝6.80Hz,2H),2.62-2.56(m,2H),2.37-2.33(m,2H),2.16-2.07(m,4H),1.82-1.68(m,8H)。
实施例191
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环戊烷磺酰胺
步骤1:使用叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1.5g，2.79mmol)、碳酸铯(2.27g，6.96mmol)和环戊烷磺酰胺(706.52mg，4.74mmol)按照程序B-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体以得到叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-(环戊基磺酰氨基)-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1.35g,1.82mmol,65％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):612.4[M+H-tBu]+。
步骤2:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护反应合成所需的胺(程序B-D)。在叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-(环戊基磺酰氨基)-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1.35克，2.02毫摩尔)上使用氯化氢(1,4-二噁烷中4M，20mL)进行N-Boc脱保护，得到N-[2-氰基-4-氟-3-[3-[(3R)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-苯基]环戊烷磺酰胺(1.21g,1.82mmol,90％产率)，为淡棕色固体。LCMS m/z(ESI):568.5[M+H]+。
步骤3:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用N-[2-氰基-4-氟-3-[3-[(3R)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-苯基]环戊烷磺酰胺(1.2克，2.11毫摩尔)、2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶其]乙酸(886.65mg,2.11mmol)、N,N-二异丙基乙胺(1.09g,8.46mmol,1.47mL)和HATU(803.83mg,2.11mmol)进行酰胺偶联以得到N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环戊烷磺酰胺(600mg,615.28μmol,29％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):967.2[M-H]-；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.53(s,1H),10.30(s,1H),8.36(bs,1H),7.80(s,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.70(dd,J＝2.80,9.00Hz,1H),7.49(dd,J＝4.40,8.80Hz,1H),7.41(d,J＝2.80Hz,1H),7.33(d,J＝12.40Hz,1H),7.12(d,J＝7.20Hz,1H),5.25-5.35(m,1H),5.03(s,1H),4.10-4.23(m,2H),3.95(s,3H),3.89(t,J＝6.80Hz,2H),3.75-3.85(m,1H),3.60-3.72(m,2H),3.44-3.57(m,1H),3.17(d,J＝11.20Hz,2H),3.06(t,J＝10.40Hz,2H),2.74(t,J＝6.80Hz,2H),2.58(s,2H),2.32-2.45(m,2H),2.05-2.15(m,1H),1.85-2.04(m,4H),1.50-1.90(m,12H)。
实施例192-197采用与实施例187-191相同的方式，使用上述方法I和II以及一般程序B-C至B-E合成。
实施例192
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丙烷磺酰胺
标题化合物通过反相制备型高效液相色谱纯化(柱:Xbridge C-1820x150m流动相:A:水中0.1％碳酸氢铵，B:乙腈)，得到产物N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]环丙磺酰胺(160mg,162.39μmol,59％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):941.2[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.53(s,1H),10.27(bs,1H),8.36(s,1H),7.81(s,1H),7.78(s,1H),7.70(dd,J＝2.80,9.00Hz,1H),7.50-7.48(m,1H),7.40(d,J＝2.80Hz,1H),7.33(d,J＝12.80,Hz,1H),7.13(d,J＝7.20Hz,1H),5.37-5.32(m,1H),5.03(d,J＝2.40Hz,1H),4.16-3.94(m,2H),3.94(s,3H),3.89(t,J＝6.40Hz,2H),3.84-3.76(m,1H),3.68-3.56(m,1H),3.52-3.49(m,1H),3.34-3.30(m,2H),3.16-3.06(m,2H),2.76-2.67(m,2H),2.58-2.51(m,3H),2.39-2.33(m,2H),2.11-2.08(m,1H),1.79-1.67(m,8H),0.99-0.90(m,4H)。
实施例193
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-甲氧基氮杂环丁-1-磺酰胺
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用50％的乙腈和0.1％的甲酸水溶液洗脱，得到产物N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]-3-甲氧基-氮杂环丁烷-1-磺酰胺(53.8mg,54.54μmol,15％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):986.2[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.56(s,1H),8.37(s,2H),7.88(t,J＝9.60Hz,1H),7.80(d,J＝9.20Hz,1H),7.71(dd,J＝2.80,9.00Hz,1H),7.55(dd,J＝4.40,9.20Hz,1H),7.41(d,J＝2.80Hz,1H),7.35(s,1H),7.32(s,1H),7.13(d,J＝7.20Hz,1H),5.30(m,1H),5.00(s,1H),4.15(q,J＝7.20Hz,3H),4.03(t,J＝6.80Hz,2H),3.95(s,3H),3.89(t,J＝6.80Hz,2H),3.76(q,J＝4.80Hz,3H),3.65(m,1H),3.50(m,1H),3.17(d,J＝14.80Hz,5H),3.07(d,J＝10.80Hz,2H),2.74(t,J＝6.80Hz,2H),2.58-2.53(m,2H),2.50-2.33(m,1H),2.09-2.07(m,1H),1.82-1.67(m,8H)。
实施例194
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-磺酰胺
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％碳酸氢铵水溶液中40％乙腈洗脱，得到产物N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-磺酰胺(63.3mg,62.29μmol,19％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):982.0[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.53(s,1H),10.36(s,1H),8.36(s,1H),7.84(s,1H),7.80(d,J＝8.80Hz,1H),7.70(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.49(s,1H),7.38(d,J＝3.20Hz,1H),7.33(d,J＝12.80Hz,1H),7.13(d,J＝7.20Hz,1H),5.26-5.25(m,1H),5.03(s,1H),4.26-4.06(m,2H),3.94(s,3H),3.89(t,J＝6.40Hz,2H),3.79-3.71(m,1H),3.68-3.59(m,1H),3.56-3.48(m,1H),3.17(t,J＝4.40Hz,3H),3.10-3.01(m,2H),2.74(t,J＝6.40Hz,2H),2.58-2.53(m,4H),2.45-2.36(m,2H),2.10-2.01(m,1H),1.90-1.50(m,11H),0.64-0.55(m,1H),0.31(s,1H)。
实施例195
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]吡咯烷-1-磺酰胺
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％碳酸氢铵水溶液中45％乙腈洗脱，得到产物N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]吡咯烷-1-磺酰胺(62.17mg,63.46μmol,14％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):970.02[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.52(s,1H),10.20(s,1H),8.36(s,1H),7.79(d,J＝9.20Hz,2H),7.69(dd,J＝2.80,9.00Hz,1H),7.50(d,J＝4.80Hz,1H),7.35(dd,J＝12.80,14.00Hz,2H),7.12(d,J＝7.20Hz,1H),5.31(s,1H),5.02(d,J＝2.00Hz,1H),4.16-4.12(m,2H),3.95(s,3H),3.89(t,J＝6.80Hz,2H),3.78-3.77(m,1H),3.63(s,1H),3.63(m,1H),3.27(d,J＝43.60Hz,6H),3.07(t,J＝10.40Hz,2H),2.74(t,J＝6.80Hz,2H),2.58(s,3H),2.40-2.39(m,1H),2.10-2.07(m,1H),1.84-1.79(m,7H),1.73-1.68(m,5H)。
实施例196
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]氮杂环丁烷-1-磺酰胺
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用43％的乙腈在0.1％的甲酸水溶液中洗脱，得到产物N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]氮杂环丁烷-1-磺酰胺(51.25mg,49.79μmol,28％产率)，为灰白色固体化合物。LCMS m/z(ESI):956.2[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.53(s,1H),8.43(s,1H),8.33(s,1H),7.75(d,J＝8.80Hz,1H),7.61(q,J＝2.80Hz,1H),7.35-7.27(m,4H),7.12(d,J＝7.20Hz,1H),5.39-5.25(m,1H),5.03(d,J＝3.60Hz,1H),4.20-4.11(m,2H),3.94(s,3H),3.89(t,J＝6.40Hz,2H),3.79-3.63(m,1H),3.63-3.57(m,1H),3.53(t,J＝9.20Hz,4H),3.19-3.16(m,2H),3.15-3.06(m,2H),2.74(t,J＝6.80Hz,2H),2.57-2.33(m,4H),2.15-2.05(m,1H),2.05-1.91(m,2H),1.85-1.50(m,9H)。
实施例197
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[环丙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％的甲酸水溶液中40％的乙腈洗脱，得到产物(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[环丙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(85mg,86.39μmol,27％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):970.2[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.99(s,1H),9.99(s,1H),8.58(s,2H),8.32(s,1H),7.86(d,J＝9.20Hz,1H),7.76-7.73(m,2H),7.47-7.46(m,1H),7.39(t,J＝2.80Hz,1H),6.99(m,1H),6.52-6.50(m,1H),6.47-6.46(m,1H),6.11(d,J＝7.60Hz,1H),4.33-4.31(m,2H),3.95-3.92(m,2H),3.90-3.86(m,2H),3.69-3.65(m,2H),3.59-3.55(m,2H),3.52-3.49(m,2H),3.15-2.98(m,2H),2.95-2.85(m,2H),2.78(s,3H),2.75-2.73(m,1H),2.68-2.67(m,1H),2.61-2.60(m,1H),2.09-2.01(m,3H),2.09-2.01(m,3H)。
实施例198
N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉-6-基]氧基-4-氟苯基]环丁磺酰胺
标题化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％碳酸氢铵水溶液中45％乙腈洗脱，得到产物N-[2-氰基-3-[3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基-4-氟-苯基]环丁磺酰胺(65mg,67.55μmol,19％产率)，为灰白色固体。LCMSm/z(ESI):956.2[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.52(s,1H),10.27(s,1H),8.36(s,1H),7.79(d,J＝9.20Hz,2H),7.70(dd,J＝2.80,Hz,1H),7.44(dd,J＝4.00,9.20Hz,1H),7.41(d,J＝3.20Hz,1H),7.33(d,J＝12.80Hz,1H),7.12(d,J＝7.20Hz,1H),5.31(s,1H),5.03(s,1H),4.16-4.14(m,2H),4.13-3.94(m,1H),3.91(s,3H),3.88(d,J＝6.80Hz,2H),3.85-3.72(m,1H),3.61-3.60(m,1H),3.68-3.48(m,1H),3.33-3.18(m,2H),3.16(m,1H),3.05(d,J＝10.00Hz,1H),2.74(t,J＝6.80Hz,2H),2.51(s,2H),2.37-2.30(m,3H),2.27(d,J＝8.40Hz,2H),2.10(d,J＝6.40Hz,1H),1.95-1.91(m,2H),1.89-1.78(m,4H),1.73-1.67(m,4H)。
实施例199
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代喹唑啉/>
步骤1:在室温和氮气氛下，向2-氯-5-硝基-嘧啶(5g，31.34mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的密封管溶液中加入叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(5.84g，31.34mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(16.20g，125.37mmol，21.84mL)。将反应混合物在110℃下搅拌12小时。反应完成后，将反应混合物倒入冰冷的水中。将所得固体通过Büchner漏斗过滤并在减压下干燥，得到浅棕色固体粗产物4-(5-硝基嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.78g，12.15mmol，39％产率)。LCMS m/z(ESI):254[M+H-tBu]+。
步骤2:在惰性气氛下，在室温下向4-(5-硝基嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.78克，12.22毫摩尔)的乙醇(32毫升)和水(4毫升)溶液中加入铁粉(3.41克，61.10毫摩尔，434.13升)和氯化铵(1.96克，36.66毫摩尔，1.28毫升)。将所得反应混合物在70℃下搅拌6小时。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土过滤，并用乙酸乙酯(200mL)洗涤。滤液用水(80mL)、饱和碳酸氢钠溶液(60mL)和盐水(60mL)洗涤。有机层经硫酸钠干燥并减压浓缩得到粗产物，粗产物经硅胶柱色谱纯化，用70％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到棕色固体的4-(5-氨基嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.67g，4.18mmol，34％产率)。LCMS m/z(ESI):280.2[M+H]+。
步骤3:按照环化的一般程序(程序B-A)使用4-(5-氨基嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.4克，5.01毫摩尔)、2-氨基-5-羟基-苯甲酸(767.49毫克，5.01毫摩尔)、原甲酸三乙酯(1.49克，10.02毫摩尔，1.67毫升)和乙酸(3.01毫克，50.12摩尔，2.67毫升)合成喹唑啉酮中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，70％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到4-[5-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(260mg，569.68μmol，11％产率)，为淡黄色固体。LCMS m/z(ESI):425.2[M+H]+
步骤4:按照O-芳化的一般程序(程序B-B)使用4-(5-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(280毫克，659.67微摩尔)、碳酸铯(537.34毫克，1.65毫摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(155.45毫克，989.51微摩尔，114.30微升)合成O-芳化的喹唑啉酮中间体。所得粗产物经硅胶快速柱色谱纯化，用60％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到4-[5-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(250mg，431.85μmol，65％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):562.2[M+H]+。
步骤5:使用叔丁基4-[5-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(220mg，391.78μmol)、[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(108.28mg，783.56μmol)和碳酸铯(319.12mg，979.4μmol)按照程序B-C合成氨磺酰化喹唑啉酮中间体。粗化合物在石油醚中用75％乙酸乙酯纯化，得到4-[5-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]嘧啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(120mg，155.36μmol，40％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):624.2[M+H-tBu]+。
步骤6:通过氯化氢介导的N-Boc脱保护反应合成所需的胺(程序B-D)。对叔丁基4-(5-(6-(2-氰基-3-((N-乙基-N-甲基氨磺酰基)氨基)-6-氟苯氧基)-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸酯(60mg，88.27μmol)，氯化氢溶液(4.0M二噁烷，20μL)进行N-Boc脱保护，得到(6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(53mg,75.71μmol,86％产率)。为淡棕色固体。LCMS m/z(ESI):580.2[M+H]+。
步骤7:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-(2-哌嗪-1-基嘧啶-5-基)喹唑啉(80mg，129.86μmol)、2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(59.91mg,142.84μmol)、N,N-二异丙基乙胺(83.91mg,649.28μmol,113.09μL)和HATU(59.25mg,155.83μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中45％乙腈洗脱，得到产物6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[2-[4-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-基]-4-氧代-喹唑啉(36.25mg,36.69μmol,28％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):981.00[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.53(s,1H),10.19(s,1H),8.57(s,2H),8.34(s,1H),7.84(d,J＝14.80Hz,2H),7.75(dd,J＝3.20,8.80Hz,1H),7.48(s,1H),7.40(d,J＝2.80Hz,1H),7.34(d,J＝12.80Hz,1H),7.13(d,J＝7.20Hz,1H),4.95(s,1H),3.95(s,3H),3.91-3.83(m,6H),3.66-3.65(m,4H),3.20-3.06(m,6H),2.77-2.73(m,4H),2.67(s,3H),1.89-1.84(m,2H),1.78-1.75(m,2H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例200
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-1-基]-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:在氮气氛下，在0-5℃下，将烯丙基溴化镁(1M，122.39mL)加入500mL双颈圆底烧瓶中，该圆底烧瓶包含4-苄氧基环己酮(10g，48.96mmol)在无水四氢呋喃(150mL)中的充分搅拌的溶液。将所得混合物在环境温度下搅拌6小时。在TLC显示的反应完成后，向反应混合物中加入饱和氯化铵(100mL)，并用乙酸乙酯(3×100mL)提取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗残留物。粗化合物通过快速硅胶柱色谱纯化，在40-50％乙酸乙酯的石油醚溶液中洗脱，得到1-烯丙基-4-苄氧基环己醇(3.7g，12.85毫摩尔，26％产率)，为无色粘稠液体。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝7.26-7.31(m,5H),5.82-5.91(m,1H),4.96-5.02(m,1H),4.48(s,1H),4.43(d,J＝8.80Hz,1H),4.11(s,1H),3.20-3.35(m,1H),2.55-2.30(m,2H),2.10(d,J＝9.60Hz,1H),1.45-1.81(m,6H),1.15-1.41(m,2H)。
步骤2:在包含1-烯丙基-4-苄氧基环己醇(3.70g，15.02mmol，000)在叔丁醇(40mL)和水(20mL)的混合物中充分搅拌的溶液的250mL单颈圆底烧瓶中，加入偏高碘酸钠(3.60g，16.83mmol)，温度为0-5℃。将所得混合物加热至50℃并保持16小时。反应完成后，将反应混合物冷却至室温并倒入水(100mL)中，用乙酸乙酯(3×100mL)提取。合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗残留物。粗产物经快速硅胶柱色谱纯化，用70-80％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到8-苄氧基-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-醇(1.10g，4.15mmol，产率28％)，为棕黄色粘稠液体。LCMS m/z(ESI):263.4[M+H]+。
步骤3:在0-5℃下在包含8-苄氧基-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-醇(1.10g，4.19mmol)在无水二氯甲烷(15mL)中的充分搅拌溶液的50mL单颈圆底烧瓶中加入三乙胺(1.45g，14.35mmol，2.0mL)，然后在相同温度下加入甲磺酰氯(740.00mg，6.46mmol，0.500mL)。将所得混合物在环境温度下搅拌16小时。反应完成后，向反应混合物中加入水(50mL)，并用二氯甲烷(2x 100mL)提取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗残留物。粗化合物通过快速硅胶柱色谱纯化，用40-50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到(8-苄氧基-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基)甲烷磺酸酯(1.0克，2.35毫摩尔，56％产率)，为黄色粘稠液体。LCMS m/z(ESI):341.4[M+H]+。
步骤4:在环境温度和氮气氛下，向含有(8-苄氧基-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基)甲烷磺酸酯(1.0克，2.94毫摩尔)在无水N,N-二甲基甲酰胺(10毫升)中充分搅拌的溶液的50毫升单颈圆底烧瓶中加入叠氮化钠(300毫克，4.61毫摩尔，162.16升)。将所得混合物加热至80℃达16小时。反应完成后，向反应混合物中加入水(50ml)，并用乙酸乙酯(2x 100mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗残留物。粗残留物通过快速硅胶柱色谱纯化，用70-80％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到3-叠氮基-8-苄氧基-1-氧杂螺[4.5]癸烷(780mg，2.23mmol，75.77％产率，82％纯度)，为棕黄色粘稠液体。LCMS m/z(ESI):288.4[M+H]+。
步骤5:在环境温度下，将三苯基膦(1.10克，4.19毫摩尔)加入到50毫升单颈圆底烧瓶中，该圆底烧瓶含有充分搅拌的3-叠氮基-8-苄氧基-1-氧杂螺[4.5]癸烷(780毫克，2.71毫摩尔)在四氢呋喃(10毫升)和水(1.0毫升)的混合物中的溶液。将所得混合物加热至80℃达3小时。反应完成后，向反应混合物中加入水(50ml)，并用乙酸乙酯(3×100mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗残留物。粗残留物通过快速硅胶柱色谱纯化，用0-20％甲醇在二氯甲烷中洗脱，得到8-苄氧基-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-胺(510mg，1.85mmol，68％产率)，为棕黄色粘稠液体。LCMS m/z(ESI):262.4[M+H]+。
步骤6:在含有8-苄氧基-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-胺(510毫克，1.95毫摩尔)在甲苯(10.0毫升)和四氢呋喃(3.0毫升)的混合物中充分搅拌的溶液的50毫升密封管中，加入2-氨基-5-羟基-苯甲酸(370毫克，2.42毫摩尔)和原甲酸三乙酯(801.90毫克，5.41毫摩尔，0.900毫升)。将所得混合物加热至110℃并保持16小时。完成后，将反应混合物冷却至室温并倒入水(50mL)中，用乙酸乙酯(2x 100mL)提取。合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗残留物通过快速硅胶柱色谱纯化，用5-10％甲醇在二氯甲烷中洗脱，得到3-(8-苄氧基-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基)-6-羟基-喹唑啉-4-酮(560mg，1.30mmol，66％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):407.7[M+H]+。
步骤7:向含有3-(8-苄氧基-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基)-6-羟基-喹唑啉-4-酮(560毫克，1.38毫摩尔)在无水1,4-二噁烷(10毫升)中的充分搅拌溶液的50毫升单颈圆底烧瓶中加入乙酸(104.90毫克，1.75毫摩尔，0.100毫升)，并加入10％钯碳(150mg，140.95μmol，10％纯度)，通过鼓泡氢气10分钟而用氢气饱和，并在环境温度下氢化(1atm)16小时。完成后，用氮气吹扫反应混合物，通过硅藻土垫过滤除去催化剂。滤液在减压下浓缩。粗产物通过快速硅胶柱色谱纯化，用10-15％甲醇在二氯甲烷中洗脱，得到浅黄色固体的6-羟基-3-(8-羟基-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基)喹唑啉-4-酮(340mg，913.54μmol，66％产率)。LCMS m/z(ESI):317.2[M+H]+。
步骤8:在环境温度下，在氮气氛下，向含有6-羟基-3-(8-羟基-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基)喹唑啉-4-酮(340毫克，1.07毫摩尔)在无水四氢呋喃(10毫升)中充分搅拌的溶液的25毫升密封管中加入2,3,6-三氟苯甲腈(260毫克，1.66毫摩尔，191.18毫摩尔)和碳酸铯(1.10克，3.38毫摩尔)。将所得混合物在环境温度下搅拌16小时。反应完成后，向反应混合物中加入水(50ml)，并用乙酸乙酯(2×100mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗残留物。粗残留物通过快速硅胶柱色谱纯化，用80-90％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到黄色粘稠液体3,6-二氟-2-[3-(8-羟基-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基)-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基苯甲腈(380mg，687.20μmol，64％产率)。LCMS m/z(ESI):454.1[M+H]+。
步骤9/步骤10:在环境温度和氮气氛下，向50mL单颈圆底烧瓶中加入氯铬酸吡啶盐(460mg，2.13mmol)，该圆底烧瓶包含3,6-二氟-2-[3-(8-羟基-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基)-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基苯甲腈(380mg，838.04μmol)在无水二氯甲烷(10mL)中的充分搅拌的溶液。将所得混合物在环境温度下搅拌16小时。完成后，反应混合物通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到粗残留物。粗残留物通过快速硅胶柱色谱纯化，用90-95％乙酸乙酯在二氯甲烷中洗脱，得到320mg外消旋化合物(95％纯)。该化合物通过手性SFC纯化(柱:Chiralpak ASH[(250*30)mm，5μ]；流动相:二氧化碳:异丙醇(70:30)；总流速:70g/min；波长:220纳米；循环时间:8.2分钟；反压:100巴)以提供棕色粘性液体的3,6-二氟-2-[4-氧代-3-[(3S)-8-氧代-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基]喹唑啉-6-基]氧基苯甲腈(第一洗脱峰，130mg，259.18μmol，31％产率)和3,6-二氟-2-[4-氧代-3-[(3R)-8-氧代-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基]喹唑啉-6-基]氧基苯甲腈(第二洗脱峰，110mg，233.93μmol，28％产率，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):452.2[M+H]+.SOR analysis:F1[α]d:64.4(CHCl3,0.5M)；F2[α]d:-73.04(CHCl3,0.5M)。
步骤11:将[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(60mg，434.19μmol)加入10mL密封管中，该密封管包含3,6-二氟-2-[4-氧代-3-[(3R)-8-氧代-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基]喹唑啉-6-基]氧基苯甲腈(110mg，243.67μmol)在无水N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL)中的充分搅拌的溶液。将所得混合物加热至65℃16小时。反应完成后，向反应混合物中加入水(30ml)，并用乙酸乙酯(3×50mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗残留物。粗残留物通过快速硅胶柱色谱纯化，用5-10％甲醇在二氯甲烷中洗脱，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-[(3R)-8-氧代-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基]喹唑啉(85mg，110.43μmol，45％产率)，为棕黄色粘稠液体。LCMS m/z(ESI):570.2[M+H]+。
步骤12:在环境温度下，在氮气氛下，向包含6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-3-[(3R)-8-氧代-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基]喹唑啉(85mg，149.23μmol)和1-[5-氟-1-甲基-6-(4-哌啶基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(115mg，301.18μmol)在无水N,N-二甲基乙酰胺(5.0mL)中的充分搅拌的溶液的10mL密封管中加入N,N-二异丙基乙胺(742.00mg,5.74mmol,1.0mL)和氰基硼氢化钠(100毫克，1.59毫摩尔)。所得混合物加热至70℃达16小时。完成后，反应混合物通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩。粗化合物通过使用50g snap(高效RediSep Rf C18)与0.1％碳酸氢铵水溶液中的乙腈的反相柱色谱纯化，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-1-氧杂螺[4.5]癸-3-基]-4-氧代-喹唑啉(6.0mg,6.30μmol,4％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):899.0[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.57(s,1H),9.40(s,1H),8.32(s,1H),7.76(d,J＝8.80Hz,1H),7.63(dd,J＝2.80,9.20Hz,1H),7.58-7.45(m,1H),7.43-7.34(m,3H),7.27-7.26(m,1H),5.32-5.22(m,1H),4.16-4.05(m,2H),4.01(s,3H),3.91(t,J＝6.80Hz,2H),3.20-2.99(m,5H),2.76(t,J＝6.40Hz,3H),2.60-2.50(m,4H),1.95-1.44(m,15H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例201
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-氟哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
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步骤1:在-30℃下，向叔丁基乙酸酯(200mg，420.60μmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入双-(2-甲氧基乙基)氨基三氟化硫(139.58mg，630.90μmol)。用水淬灭反应混合物，用二氯甲烷(60mL)提取。有机层用水(20mL)、盐水(20mL)洗涤，在硫酸钠下干燥并减压浓缩，得到粗产物，该粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用60％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到浅棕色2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-氟-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(140mg，210.22μmol，50％产率)LCMS m/z(ESI):478.2[M+H]+。
步骤2:向2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-氟-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(140mg，293.19μmol)在二氯甲烷(2mL)中的0℃冷却溶液中加入4M氯化氢在1,4-二噁烷(4M，3mL)中，并将所得反应混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物减压浓缩，得到粗产物，其用二乙醚研磨，得到2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-氟-4-哌啶基]乙酸(130mg，214.37μmol，73％产率)，为浅棕色固体。LCMS m/z(ESI):422.2，[M+H]+。
步骤3:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(80mg，143.73μmol)、2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-氟-4-哌啶基]乙酸(60.57mg,143.73μmol)、HATU(54.65mg,143.73μmol)和N,N-二异丙基乙胺(74.30mg,574.91μmol,100.14μL)进行酰胺偶联。粗化合物通过使用30g snapr反相柱色谱纯化，用50％乙腈在0.1％盐酸水溶液中洗脱，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-氟-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(14mg,14.45μmol,10.05％产率,99.06％purity)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):960.2[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.54(s,1H),10.21(s,1H),8.35(s,1H),7.79(d,J＝8.80Hz,1H),7.64-7.75(m,1H),7.68(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.38-7.46(m,1H),7.35-7.38(m,2H),7.17(d,J＝6.80Hz,1H),5.23-5.33(m,1H),4.11-4.21(m,2H),3.95(s,3H),3.90(t,J＝6.80Hz,2H),3.71-3.81(m,1H),3.55-3.65(m,1H),3.44-3.55(m,1H),3.25-3.35(m,4H),3.08-3.18(m,2H),2.88-2.98(m,2H),2.78-2.88(m,2H),2.62-2.70(m,5H),2.54-2.60(m,2H),2.31-2.41(m,1H),1.98-2.18(m,5H),1.50-1.81(m,4H)。
实施例202
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯胺基]-5-氟-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:在-10℃和氮气氛下，向2-氨基-6-氟-苯甲酸(2.0克，12.89毫摩尔)在二氯甲烷(20毫升)中的搅拌溶液中加入N-溴代丁二酰亚胺(2.29克，12.89毫摩尔)。反应混合物在室温下搅拌2小时。用水(30mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2x50 mL)提取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。得到的粗产物通过硅胶柱色谱纯化，使用0-80％乙酸乙酯/石油醚，得到6-氨基-3-溴-2-氟-苯甲酸(1.6克，6.23毫摩尔，48％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):234.0[M+H]+。
步骤2:在室温下原甲酸三乙酯(3.23克，21.79毫摩尔，3.62毫升)加入6-氨基-3-溴-2-氟-苯甲酸(1.7克，7.26毫摩尔)、3-氨基-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1.86克，7.26毫摩尔)在甲苯(24.55毫升)和四氢呋喃(4.09毫升)中的溶液。将所得反应混合物加热至110℃16小时。将反应混合物用乙酸乙酯(50ml)稀释，用水(10mL)洗涤。有机层用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。得到的粗产物通过硅胶柱色谱纯化，使用0-90％乙酸乙酯/石油醚，得到3-(6-溴-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1.58g，2.87mmol，39％产率)，为棕黄色固体。LCMS m/z(ESI):484.4[M+H]+
步骤3a:将2,3,6-三氟苯甲腈(3克，19.10毫摩尔，2.21毫升)在异丙醇(15毫升)中的溶液置于小加压釜中，并在室温下加入氢氧化铵(8.03克，229.16毫摩尔，8.92毫升)。将所得反应混合物在80℃加热16小时。完成后，用水(50mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(100mL)提取。有机层用碳酸氢钠溶液(20mL)、盐水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗产物，该粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用50-70％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到白色固体的2-氨基-3,6-二氟-苯甲腈(750mg，4.28mmol，22％产率)。GC-MS m/z:154[M-H]-。
步骤3:向叔丁基3-(6-溴-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1.56克，3.24毫摩尔)、2-氨基-3,6-二氟-苯甲腈(0.5克，3.24毫摩尔)在1,4-二噁烷(5毫升)中的溶液中加入碳酸铯(477.55毫克，1.47毫摩尔)。反应混合物在氮气氛下脱气10分钟，并在室温下加入Pd-PEPPSI-IHept-Cl 3-氯吡啶(28.49mg，29.29mol)，并加热至110℃16小时。用水(5mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2x30mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，使用60％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯胺基)-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(0.6g，904.62μmol，28％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):556.4[M+H]+。
步骤4/步骤5:在室温下向叔丁基3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯胺基)-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.8克，1.44毫摩尔)在乙腈(8毫升)中的搅拌溶液中加入二碳酸二叔丁基酯(628.56毫克，2.88毫摩尔，660.95微升)，DMAP(87.96mg，720.01μmol)和三乙胺(437.15mg，4.32mmol，602.13μL)。反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，用水(10mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3x30 mL)提取。合并的有机层用冷水(3x15 mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，该粗产物通过反相柱色谱纯化，使用30g C18柱，用40％乙腈和0.1％碳酸氢铵在水中洗脱，得到外消旋化合物。所得产物通过手性SFC纯化(柱:Lux纤维素-2[(250*30)mm，5μ]；流动相:二氧化碳:甲醇(60:40)；总流速:100g/min；回压:100巴；波长:220纳米；循环时间:22.5分钟)以提供叔丁基(3R)-3-[6-(N-叔丁氧基羰基-2-氰基-3,6-二氟-苯胺基)-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(级分-1，任意指定为R-异构体(0.16g，100％)和叔丁基(3R)-3-[6-(N-叔丁氧基羰基-2-氰基-3,6-二氟-苯胺基)-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(级分-2，任意指定为S-异构体,0.19g，99.7％),为淡棕色固体。LCMS m/z(ESI):600.2[M+H-56]+。
步骤6:室温下向[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(84.30毫克，610.07微摩尔)、叔丁基(3R)-3-[6-(n-叔丁氧基羰基-2-氰基-3,6-二氟-苯胺基)-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.16克，244.03微摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液加入碳酸铯(238.53mg，732.08μmol)。将所得反应混合物加热至60℃16小时。用水(10mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2x30 mL)提取。合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩。粗化合物通过反相柱色谱纯化，使用30g C18柱，用40％乙腈在0.1％碳酸氢铵水溶液中洗脱，得到叔丁基(3R)-3-[6-[N-叔丁氧基羰基-2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯胺基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(80mg,103.38μmol,42％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):774.9[M+H]+。
步骤7:在0℃和氮气氛下，向叔丁基(3R)-3-[6-[N-叔丁氧基羰基-2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯胺基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(80mg，103.38μmol)的二氯甲烷(1mL)溶液中加入4M氯化氢二噁烷(4.0M，258.8)。溶液在室温下搅拌2小时。将反应混合物减压浓缩，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯胺基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷盐酸盐(63mg，100.04μmol，97％产率)，为棕黄色固体。LCMS m/z(ESI):574.7[M+H]+。
步骤8a:在室温和氮气氛下，向乙酸叔丁酯(154.04mg，772.93μmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的溶液中加入碳酸铯(419.72mg，1.29mmol)和1-(5-氟-6-碘-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮(0.2g，515.28μmol)。反应混合物用氮气脱气10分钟，然后在室温下加入Pd-PEPPSI-IHeptCl 3-氯吡啶(25.04mg，25.74μmol)，并加热至80℃16小时。用水(5mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2x20 mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，使用60％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(80mg，163.74μmol，32％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):460.3[M+H]+。
步骤8b:在氮气氛下，于0℃向2-[1-[3-(2,4-二噁烷氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(80mg，174.10μmol)的二氯甲烷(1mL)溶液中加入4M氯化氢二噁烷(4.0M，435.24μL)溶液。所得溶液在室温下搅拌12小时。在减压下浓缩反应混合物，得到棕色固体的粗2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-哌啶基]乙酸(76mg，157.83μmol，91％产率)。LCMS m/z(ESI):404.5[M+H]+。
步骤8:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备标题化合物(程序B-E)。使用2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-哌啶基]乙酸(41.66mg，94.71μmol)、(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯胺基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(63mg,103.27μmol)、HATU(39.26mg,103.27μmol)和N,N-二异丙基乙胺(66.73mg,516.33μmol,89.94μL)进行酰胺偶联。粗化合物通过使用30g snap的反相柱色谱纯化，用40％乙腈在0.1％碳酸氢铵水溶液中洗脱，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯胺基]-5-氟-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(43mg,43.00μmol,42％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):959.2[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.53(s,1H),9.88(s,1H),8.74(s,1H),8.25(s,1H),7.50-7.60(m,1H),7.42(d,J＝8.80Hz,1H),7.32-7.43(m,1H),7.34(d,J＝12.40Hz,1H),7.18(dd,J＝4.00,9.00Hz,1H),7.09(d,J＝6.80Hz,1H),5.30-5.36(m,1H),4.14(d,J＝4.40Hz,2H),3.94(s,3H),3.89(t,J＝6.40Hz,2H),3.69-3.78(m,1H),3.32-3.61(m,4H),3.11-3.18(m,2H),2.65-2.81(m,6H),2.35-2.58(m,4H),2.01-2.10(m,1H),1.60-1.91(m,8H),1.35-1.51(m,2H),1.04(t,J＝6.80Hz,3H)。
实施例203
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-3,3-二氟哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
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步骤1:在-10℃下，向叔丁基3,3-二氟-4-氧代-哌啶-1-羧酸酯(3克，12.75毫摩尔)在THF(50毫升)的搅拌溶液中加入1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(5.82克，38.26毫摩尔，5.71毫升)，随后缓慢加入1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁烷-1-磺酰氯(7.71g,25.51mmol,4.40mL)在THF(40mL)中的溶液。反应混合物在室温下搅拌1小时。完成后，将反应混合物加入水(50ml)并用乙酸乙酯(2X100 mL)提取。合并的有机层用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩得到粗产物。粗混合物通过硅胶柱色谱纯化，使用0-40％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱液，得到3,3-二氟-4-(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁基磺酰氧基)-2,6-二氢吡啶-1-羧酸叔丁酯(1.5g，2.87mmol，23％产率)，为无色油。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝6.60(s,1H),4.29(d,J＝4.00Hz,2H),4.05(t,J＝11.20Hz,2H),1.51(s,9H)。
步骤2:向1-[5-氟-1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(500毫克，1.29毫摩尔)和3,3-二氟-4-(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁基磺酰氧基)-2,6-二氢吡啶-1-羧酸叔丁酯(732.92mg,1.42mmol)在二噁烷(8ml)中的搅拌溶液中加入水(2ml)中的碳酸钠(409.54mg,3.86mmol,161.75μL)。将所得反应混合物用氮气脱气10分钟，并加入与二氯甲烷复合的[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(105.10mg，128.80μmol)。将反应混合物加热至60℃达2小时。完成后，将反应混合物冷却至室温，用水(30mL)稀释，然后用乙酸乙酯(2X50 mL)提取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗产物。粗混合物通过硅胶柱色谱纯化，在石油醚中从0-100％乙酸乙酯中洗脱，得到黄色固体的叔丁基4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-2,6-二氢吡啶-1-羧酸酯(180mg，302.97μmol，24％产率)。LCMSm/z(ESI+):480.6[M+H]+。
步骤3:在氮气下向100mL微型clave玻璃容器中叔丁基4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-2,6-二氢吡啶-1-羧酸酯(180mg，375.43μmol)在乙醇/乙酸乙酯(1:2)混合物中的溶液中加入碳上氢氧化钯，20重量％(60mg，427.24μmol)。将混合物在5kg/cm 3压力下于室温搅拌16小时。反应完成后，反应混合物通过硅藻土床过滤，用10％甲醇在二氯甲烷(100mL)中洗涤，滤液减压浓缩，得到4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯(170mg,340.62μmol,91％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):426.2[M-tBu+H]+。
步骤4:于0℃下向4-[3-(2,4-二噁烷氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯(70mg，145.39μmol)在DCM(10mL)中的搅拌溶液中加入氯化氢，4M在1,4-二噁烷(1mL)中，将所得反应混合物在室温下搅拌4小时。反应完成后，将反应混合物真空浓缩，用乙醚洗涤，得到产物1-[6-(3,3-二氟-4-哌啶基)-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(60mg，119.77μmol，82％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI+):382.2[M+H]+。
步骤5:向1-[6-(3,3-二氟-4-哌啶基)-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(60mg，157.34μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙基胺(61.00mg，472.01μmol，82.21μL)，随后0℃氮气氛下加入溴乙酸叔丁酯(33.76mg,173.07μmol,25.38μL)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，加入冰冷却的水(5mL)并使用乙酸乙酯(2X 20mL)提取反应混合物。合并的有机层在减压下浓缩。所得粗产物用反相高效液相色谱纯化，同时用0-50％的乙腈在0.1％的甲酸水溶液中进行洗脱，得到2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(40mg，80.49μmol，产率51％)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI+):496.2[M+H]+。
步骤6:外消旋化合物2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(40mg，80.73μmol)通过手性SFC手性拆分(柱:YMC纤维素SC；流动相:二氧化碳:IPA(40:60)；流速:5ml/min；回压:100巴；波长:210nm)得到峰1(第一洗脱)2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(14mg，27.49μmol，34％产率，100％ee，任意指定为R-对映体)，峰2(第二洗脱)2-[(4S)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(13mg,25.83μmol,32％产率,100％ee,任意指定为S-对映体)，为灰白色固体。
步骤7:在0℃下向2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(14mg，28.25μmol)在二氯甲烷(2mL)中的搅拌溶液中逐滴加入氯化氢在二噁烷(4M，105.95μL)中的溶液，并将反应混合物在室温下进一步搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物浓缩，并在减压下与10ml二氯甲烷共蒸馏，得到2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5[-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸(12mg,26.63μmol,94％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI+):438.1[M-H]-。
步骤8:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(15.21mg，27.32μmol)和2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸(13.00mg,27.32μmol)、N,N-二异丙基乙胺(10.59mg,81.96μmol,14.28μL)和HATU(15.58mg,40.98μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用50％的乙腈在0.1％的甲酸水溶液中洗脱，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(7mg,7.05μmol,26％产率)，为灰白色固体。LCMSm/z(ESI):978.2[M+H]+.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.59(s,1H),10.10(s,1H),8.36(d,J＝4.80Hz,1H),7.79(d,J＝8.80Hz,1H),7.68(t,J＝2.40Hz,2H),7.43(d,J＝10.40Hz,2H),7.36(s,1H),5.31(s,1H),4.20-4.10(m,2H),4.03(d,J＝7.20Hz,3H),3.92(t,J＝6.80Hz,2H),3.69-3.34(m,6H),3.40-3.20(m,4H),3.10(d,J＝6.80Hz,2H),3.01(d,J＝9.60Hz,1H),2.80-2.60(m,4H),2.40(m,4H),2.40-2.00(m,1H),1.90-1.80(m,2H),1.68(d,J＝9.20Hz,3H),1.06(t,J＝Hz,3H)。
实施例204
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[(4S)-4-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-3,3-二氟哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:在0℃下向乙酸叔丁酯2-[(4S)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]酯(12mg，24.22μmol，000)在二氯甲烷(2mL)中的搅拌溶液中逐滴加入氯化氢在二噁烷(4M，90.82μL)中的溶液，并在室温下进一步搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物浓缩，并在减压下与10ml二氯甲烷共蒸馏，得到2-[(4S)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸(11mg,21.82μmol,90％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI+):438.2[M-H]-。
步骤2:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(12.87mg，23.12μmol)和2-[(4S)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸(11mg,23.12μmol)、N,N-二异丙基乙胺(8.96mg,69.35μmol,12.08μL)和HATU(13.18mg,34.67μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用50％的乙腈在0.1％的甲酸水溶液中洗脱，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[(4S)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(7mg,6.86μmol,30％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):978.2[M+H]+.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.59(s,1H),10.21(s,1H),8.36(d,J＝6.40Hz,1H),7.79(d,J＝9.20Hz,1H),7.68(t,J＝-7.60Hz,2H),7.43(d,J＝10.40Hz,2H),7.36(s,1H),5.32(s,1H),4.20-4.10(m,2H),4.03(d,J＝6.40Hz,3H),3.92(t,J＝6.40Hz,2H),3.69-3.34(m,6H),3.40-3.20(m,4H),3.45(d,J＝361.20Hz,1H),3.01(d,J＝9.60Hz,1H),2.80-2.60(m,6H),2.40(m,4H),2.10-2.06(m,1H),1.80-1.60(m,4H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例205
(3R)-8-[2-[1-[5-氯-3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:在室温下，向搅拌乙酸叔丁酯2-(4-羟基-4-哌啶基)酯(1.24克，5.76毫摩尔)在二甲基亚砜(10毫升)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙基胺(2.23克，17.29毫摩尔，3.01毫升)和5-氯-2,4-二氟-苯甲腈(1克，5.76毫摩尔)。将反应混合物在100℃下搅拌2小时。完成后，用水稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2×50mL)提取。有机相经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗产物，用0-20％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱液通过硅胶柱色谱纯化，得到白色固体的2-[1-(2-氯-4-氰基-5-氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.1克，2.93毫摩尔，产率51％)。LCMS:m/z 369.2[M+H]+。
步骤2:在室温下，向2-[1-(2-氯-4-氰基-5-氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1克，2.71毫摩尔)在乙醇(10毫升)中的搅拌溶液中加入甲基肼(374.73毫克，8.13毫摩尔)。将所得反应混合物在90℃下搅拌24小时。反应完成后，减压浓缩除去反应溶剂，得到粗产物，该粗产物通过使用0-80％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂的硅胶快速柱色谱纯化，得到淡黄色固体2-[1-(3-氨基-5-氯-1-甲基-吲唑-6-基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯。LCMS(ES+):m/z 395.2[M+H]+。
步骤3:在室温下，向2-[1-(3-氨基-5-氯-1-甲基-吲唑-6-基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(520毫克，1.32毫摩尔)在1,4-二噁烷(6毫升)中的溶液中加入丙烯酸(189.78毫克，2.63毫摩尔，180.57微升)。将所得混合物在100℃下搅拌36小时。36小时后，反应混合物用碳酸氢钠水溶液碱化，用乙酸乙酯提取。水层用1.5N氯化氢水溶液进一步酸化，使用乙酸乙酯提取和化合物。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到3-[[6-[4-(2-叔丁氧基-2-氧代-乙基)-4-羟基-1-哌啶基]-5-氯-1-甲基-吲唑-3-基]氨基]丙酸(300mg，501.12μmol，38％产率)，为灰白色固体。LCMS:m/z 467.3[M+H]+。
步骤4:在室温和氮气氛下，向3-[[6-[4-(2-叔丁氧基-2-氧代-乙基)-4-羟基-1-哌啶基]-5-氯-1-甲基-吲唑-3-基]氨基]丙酸(300mg，424.02μmol)在乙酸(4.05mL)中的搅拌溶液中加入氰酸钠(137.82mg，2.12mmol，72.92μL)。将所得混合物在密封管中于50℃搅拌5小时。完成后，将粗混合物浓缩，加入氯化氢(4M)水溶液，并在50℃下继续加热12小时。然后将粗反应混合物用反相柱色谱进行浓缩和纯化，使用48％的乙腈和0.1％的甲酸水溶液，得到2-[1-[5-氯-3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(170mg,331.13μmol,78％产率)，为灰白色固体。LCMS(ESI):m/z 436.10[M+H]+。
步骤5:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序B-E)。使用2-[1-[5-氯-3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(80mg，166.01μmol)和(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(98.46mg,166.01μmol)、N,N-二异丙基乙胺(107.28mg,830.07μmol,144.58μL)和HATU(82.06mg,215.82μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用50％乙腈在0.1％甲酸水溶液中洗脱，得到(3R)-8-[2-[1-[5-氯-3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(11mg,10.73μmol,6％产率)，为灰白色固体。LCMS(ESI+):m/z 974.0.[M+H]+.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.54(s,1H),8.35(s,1H),7.77(d,J＝8.80Hz,1H),7.72(s,1H),7.65(dd,J＝3.20,8.60Hz,2H),7.36(d,J＝2.80Hz,2H),5.41-5.31(m,1H),5.06(d,J＝2.40Hz,1H),4.21-4.11(m,2H),3.96(s,3H),3.92-3.89(m,2H),3.81-3.72(m,1H),3.68-3.50(m,2H),3.12-3.01(m,7H),3.79-3.70(m,2H),2.65-2.50(m,4H),2.49-2.34(m,2H),2.11-2.01(m,1H),1.90-1.50(m,9H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例206
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:在氮气氛下于室温下向4-氧代哌啶-1-羧酸苄酯(1当量)在甲苯中的溶液加入碳酸铯(2当量)和乙2-(三苯基-亚磷烷基)酸甲酯(1当量)。将反应混合物在60℃下搅拌10小时。经LC-MS确认反应完成后，进行后处理，粗产物经柱色谱纯化，得到4-(2-甲氧基-2-氧代-亚乙基)哌啶-1-羧酸苄酯。
步骤2:在室温下向4-(2-甲氧基-2-氧代-亚乙基)哌啶-1-羧酸苄酯(500毫克，1.73毫摩尔)在DME(21.58毫升)中的溶液中加入氢化钠(60％分散在矿物油中)(1当量)。随后在-10℃的氮气氛下加入2-氨基乙酸甲酯(1.5当量)。反应混合物在60℃下搅拌12小时，同时用LC-MS监测。反应完成后，进行后处理，粗产物通过柱色谱纯化，得到O8-苄基O4-甲基3-氧代-1-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4,8-二羧酸酯。
步骤3:O8-苄基O4-甲基3-氧代-1-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4,8-二羧酸酯(1当量)中加入水中氯化锂(3当量)。反应混合物在150℃下加热3小时，同时用LC-MS监测。反应完成后，进行后处理，粗产物通过柱色谱纯化，得到3-氧代-1-硫代-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸苄酯。
步骤4:在0℃和氮气氛下3-氧代-1-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸苄酯(1当量)在DCM中的溶液加入3-氯代苯碳过氧酸(carboperxoic acid)(3当量)。反应混合物在室温下搅拌12小时。经LC-MS确认反应完成后，反应混合物用氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取。有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，真空浓缩。粗产物通过柱色谱纯化，得到1,1,3-三氧代-1-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸苄酯。
步骤5:将1,1,3-三氧代-1-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸苄酯(1当量)在二噁烷中的溶液加入去碳酸二叔丁酯(1当量)。在加入10％钯碳(2.5当量)之前，用氩气清洗溶液。反应混合物然后在氢气氛下于室温下搅拌过夜。经LC-MS确认反应完成后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯洗涤并真空浓缩。残留物通过硅胶柱色谱纯化，得到1,1,3-三氧代-1-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯。
步骤6:向叔丁基1,1,3-三氧代-1-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1当量)在乙醇中的溶液中加入羟胺；盐酸(1.5当量)和乙酸钠(3当量)。将反应混合物在65℃加热6小时。经LC-MS确认反应完成后，将反应混合物冷却至室温并真空浓缩。然后向残留物中加入水，过滤所得固体并真空干燥，得到叔丁基(3Z)-3-羟基亚氨基-1,1-二氧代-1-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯。
步骤7:叔丁基(3Z)-3-羟基亚氨基-1,1-二氧代-1-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1当量)和Raney镍(6当量)在乙醇的溶液在氢气氛下于室温下搅拌16小时。经LC-MS确认反应完成后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤，用乙醇洗涤。然后将合并的有机层真空浓缩，得到3-氨基-1,1-二氧代-1-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯。
步骤8:于室温下2-氨基-5-羟基-苯甲酸(1当量)在甲苯四氢呋喃(5:1)中的溶液加入无水原甲酸三乙酯(2当量)，附后加入3-氨基-1,1-二氧代-1-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1当量)。所得反应混合物在密封管中于110℃加热18小时。经LC-MS确认反应完成后，将反应混合物冷却至室温并进行后处理。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1,1-二氧代-1-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯。
步骤9:在室温下向3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1,1-二氧代-1-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1当量)在THF的搅拌溶液中加入碳酸铯(1.1当量)和2,3,6-三氟苯甲腈(1.1当量)。所得反应混合物在室温下搅拌16小时。经LC-MS确认反应完成后，进行后处理，粗产物经硅胶柱色谱纯化，得到3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1,1-二氧代-1-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯。
步骤10:外消旋化合物3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1,1-二氧代-1-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯通过手性SFC纯化得到叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1,1-二氧代-1-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯。
步骤11:在室温下叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1,1-二氧代-1-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1当量)在N,N-二甲基甲酰胺中的溶液加入碳酸铯(2.5当量)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(2当量)。将所得反应混合物在65℃下搅拌16小时。经LC-MS确认反应完成后，进行后处理，粗产物经硅胶柱色谱纯化，得到叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1,1-二氧代-1-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯。
步骤12:0℃下叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1,1-二氧代-1-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1当量)在二氯甲烷中的溶液加入在二噁烷中的4N氯化氢(10当量)。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。经LC-MS确认反应完成后，将反应真空浓缩并通过硅胶柱色谱纯化，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1,1-二氧代-1-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷。
步骤13:在氮气氛下于室温下向2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(1当量)和(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1,1-二氧代-1-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(1当量)在N,N-二甲基甲酰胺中的溶液(4毫升/毫摩尔)中加入N,N-二异丙基乙基胺(4当量)。随后在相同温度下加入HATU(1.1当量)。反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，将粗混合物通过反相高效液相色谱纯化，得到目标化合物(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1,1-二氧代-1λ6-1-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷。
实施例207
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]甲磺酰基]-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉/>
步骤1:在室温下8-苄氧基-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-胺(1当量)在THF的溶液加入中的碳酸氢钠(3当量)和碳酸叔丁酯(1.5当量)。反应混合物在室温下搅拌4小时。经LC-MS确认反应完成后，进行后处理，产物叔丁基N-(8-苄氧基-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基)氨基甲酸酯不经纯化直接用于下一步。
步骤2:叔丁基N-(8-苄氧基-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基)氨基甲酸酯(1当量)的溶液加入10％钯碳(0.12当量)。反应混合物然后用N2脱气，并在氢气氛下于室温下搅拌16小时。经LC-MS确认反应完成后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤，其用乙酸乙酯洗涤。然后将滤液真空浓缩，得到N-(8-羟基-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯。
步骤3:在0℃和氮气氛下叔丁基N-(8-羟基-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基)氨基甲酸酯(1当量)在无水DCM中的溶液加入三乙胺(2.5当量)，然后甲磺酰氯(1.5当量)。将所得悬液在环境温度下搅拌16小时。经LC-MS确认反应完成后，进行后处理，粗产物通过柱色谱纯化，得到[3-(叔丁氧基羰基氨基)-1-氧杂螺[4.5]癸烷-8-基]甲磺酸酯。
步骤4:在环境温度和氮气氛下[3-(叔丁氧基羰基氨基)-1-氧杂螺[4.5]癸烷-8-基]甲磺酸酯在无水DMF中的溶液(1当量)加入硫代乙酸钾(2.5当量。然后将反应混合物在70℃下搅拌16小时，并通过LC-MS监测。反应完成后，进行后处理，粗产物通过柱色谱纯化，得到N-(8-硫烷基-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯。
步骤5:NaH(1.2当量)在THF中的悬浮液冷却至0℃，随后逐滴加入N-(8-硫烷基-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(1当量)。在1-氧杂-6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-羧酸苄酯(1.2当量)之前，将反应搅拌30分钟，并使反应升温并在该温度下搅拌4小时。经LC-MS确认反应完成后，反应混合物在0℃用甲醇小心淬灭并进行后处理。粗产物通过柱色谱纯化，得到4-[[3-(叔丁氧基羰基氨基)-1-氧杂螺[4.5]癸烷-8-基]硫烷基甲基]-4-羟基-哌啶-1-羧酸苄酯。
步骤6:在0℃和氮气氛下向4-[[3-(叔丁氧基羰基氨基)-1-氧杂螺[4.5]癸烷-8-基]硫代甲基]-4-羟基-哌啶-1-羧酸苄酯(1当量)在DCM中的溶液中加入3-氯代苯碳过氧酸(3当量)。反应混合物在室温下搅拌12小时。经LC-MS确认反应完成后，反应混合物用氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取。有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，真空浓缩。粗产物通过柱色谱纯化，得到4-[[3-(叔丁氧基羰基氨基)-1-氧杂螺[4.5]癸烷-8-基]磺酰甲基]-4-羟基-哌啶-1-羧酸苄酯。
步骤7:4-[[3-(叔丁氧基羰基氨基)-1-氧杂螺[4.5]癸烷-8-基]磺酰甲基]-4-羟基-哌啶-1-羧酸苄酯(1当量)在二氯甲烷中的溶液0℃下加入在二噁烷中4N氯化氢(10当量)。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。经LC-MS确认反应完成后，将反应真空浓缩并通过柱色谱纯化，得到4-[(3-氨基-1-氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)磺酰甲基]-4-羟基-哌啶-1-羧酸苄酯。
步骤8:在室温下向2-氨基-5-羟基-苯甲酸(1当量)在甲苯:四氢呋喃(5:1)中的搅拌溶液中加入无水原甲酸三乙酯(2当量)，随后是4-[(3-氨基-1-氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)磺酰甲基]-4-羟基-哌啶-1-羧酸苄酯(1当量)。所得反应混合物在密封管中于110℃加热18小时。经LC-MS确认反应完成后，将反应混合物冷却至室温并进行后处理。粗产物通过柱色谱纯化，得到4-羟基-4-[[3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂螺[4.5]癸烷-8-基]磺酰甲基]哌啶-1-羧酸苄酯。
步骤9:在室温下向4-羟基-4-[[3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-1-氧杂螺[4.5]癸烷-8-基]磺酰甲基]哌啶-1-羧酸苄酯(1当量)在THF的搅拌溶液中加入碳酸铯(1.1当量)和2,3,6-三氟苯甲腈(1.1当量)。所得反应混合物在室温下搅拌16小时。经LC-MS确认反应完成后，进行后处理，粗产物经柱色谱纯化，得到4-[[3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂螺[4.5]癸烷-8-基]磺酰甲基]-4-羟基-哌啶-1-羧酸苄酯。
步骤10:外消旋化合物4-[[3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂螺[4.5]癸-8-基]磺酰甲基]-4-羟基-哌啶-1-羧酸苄酯通过手性SFC纯化进行拆分，得到4-[[(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂螺[4.5]癸-8-基]磺酰甲基]-4-羟基-哌啶-1-羧酸苄酯。
步骤11:在室温下苄基4-[[(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂螺[4.5]癸烷-8-基]磺酰基甲基]-4-羟基-哌啶-1-羧酸酯(1当量)在N,N-二甲基甲酰胺中的溶液加入碳酸铯(2.5当量)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(2当量)。将所得反应混合物在65℃下搅拌16小时。在经LC-MS确认的反应完成后，进行后处理，粗产物通过柱色谱纯化，得到4-[[(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂螺[4.5]癸烷-8-基]磺酰甲基]-4-羟基-哌啶-1-羧酸苄酯。
步骤12:在室温下苄基4-[[(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂螺[4.5]癸烷-8-基]磺酰基甲基]-4-羟基-哌啶-1-羧酸酯(1当量)在甲醇中的溶液加入10％钯碳(0.1当量)。将溶液脱气并在氢气氛下搅拌16小时，或直至反应完成(经液相色谱-质谱确认)。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并进行后处理。粗产物然后通过柱色谱纯化，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[(4-羟基-4-哌啶基)甲磺酰基]-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉。
步骤13:在室温下1-(5-氟-6-碘-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮(1当量)在二噁烷中的溶液加入碳酸铯(2.5当量)和6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[(4-羟基-4-哌啶基)甲磺酰基]-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉(1当量)。反应混合物在添加Pd-PEPPSI-IHeptCl(0.05当量)之前用N2脱气10分钟被。反应在110℃下加热12小时，同时通过液相色谱-质谱进行监测。反应完成后，进行后处理并通过柱色谱进行纯化。通过制备-高效液相色谱进一步纯化产物，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]甲磺酰基]-1-氧杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉。
实施例208
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉/>
/>
步骤1:向4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(20克，100.38毫摩尔)在DCM(142.00毫升)中的搅拌溶液中加入氨基甲酸苄酯(18.21克，120.45毫摩尔)和烯丙三甲基硅烷(17.20克，150.57毫摩尔，23.99毫升)，然后在0℃滴加三氟化硼乙醚合物(17.10g，120.45mmol)。将反应混合物减压浓缩至粗产物，溶于1M氢氧化钠/丙酮混合物中，在室温下加入二碳酸二叔丁酯(21.91克，100.38毫摩尔，23.04毫升)，反应时间为5小时。反应完成后，用水稀释反应混合物，用DCM提取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩得到粗产物。粗产物经硅胶(100-200目)Biotage Isolera柱色谱纯化(产物在29％-32％乙酸乙酯/Pet醚中洗脱)，得到4-烯丙基-4-(苄氧基羰基氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(24.6克，61.09毫摩尔，60.86％产率)，为无色液体。LC-MS(ES+):M/z 275.2[M+H-CO2tBu]+。
步骤2:向含有4-烯丙基-4-(苄氧基羰基氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(24克，64.09毫摩尔)在DCM(200毫升)中的溶液的1L单颈圆底烧瓶中，在0℃下加入盐酸4M在1,4-二噁烷(4M，96.14毫升)中，所得反应混合物在室温下搅拌2小时。通过TLC和UPLC监测反应进程。反应完成后，反应混合物在真空下浓缩，用乙醚洗涤并干燥，得到所需产物N-(4-烯丙基-4-哌啶基)氨基甲酸苄酯(16.9克，61.52毫摩尔，96.00％产率)，为淡白色固体。LCMS(ES-):m/z275.2[M+H]+。
步骤3:在氮气氛下，于0℃向N-(4-烯丙基-4-哌啶基)氨基甲酸苄酯(16.5克，60.14毫摩尔)在DCM(20毫升)中的搅拌溶液中滴加三乙胺(24.34克，240.56毫摩尔，33.53毫升)和三氟乙酸酐(25.26克，120.28毫摩尔，16.99毫升)。反应混合物在室温下搅拌12小时。通过TLC监测反应进程。反应完成后，用水稀释反应混合物，用DCM提取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，有机层减压浓缩，得到粗产物。粗产物经硅胶(100-200目)Biotage Isolera柱色谱(产物在55％-58％乙酸乙酯/Pet醚中洗脱)纯化，得到棕色液体的N-[4-烯丙基-1-(2,2,2-三氟乙酰)-4-哌啶基]氨基甲酸苄酯(8克，20.95毫摩尔，34.84％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝7.43(s,5H),5.79-5.72(m,1H),5.28(s,2H),5.05(ddd,J＝10.6,2.0Hz,2H),3.77-3.62(m,2H),3.45-3.39(m,2H),2.70(d,J＝7.2Hz,2H),2.53(s,1H),2.25-2.20(m,2H),2.10-2.05(m,2H)ppm。
步骤4:在100mL单颈圆底烧瓶中，在0℃下向N-[4-烯丙基-1-(2,2,2-三氟乙酰)-4-哌啶基]氨基甲酸苄酯(4g，10.80mmol)中加入三氟乙酸(12.31g，108.00mmol，8.32mL)，于室温下所得反应混合物在60℃下搅拌12小时。通过TLC和UPLC监测反应进程。反应完成后，将反应混合物在真空下浓缩，并使用Biotage Isolera柱色谱(100％乙酸乙酯在pet醚中)进行纯化，得到产物1-(4-烯丙基-4-氨基-1-哌啶基)-2,2,2-三氟乙酮(2克，8.30毫摩尔，76.82％产率)，为灰白色固体。LC-MS(ESI+):m/z[M+H]+。
步骤5:向100mL密封管中加入高碘酸钠(793.87mg，3.71mmol)和偏亚硫酸氢钠(705.59mg，3.20mL)，该密封管包含1-(4-烯丙基-4-氨基-1-哌啶基)-2,2,2-三氟乙酮(1.3g，3.71mmol，061)在水(401.20μL)和叔丁醇(1.20mL)中的充分搅拌的溶液。将反应混合物在50℃下搅拌16小时。在经UPLC确认的反应完成后，粗产物2,2,2-三氟-1-(3-羟基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)乙酮(2.6克，2.37毫摩尔，63.88％产率)未经纯化进入下一步。LCMS(ES+):m/z 253.2[M+H]+。
步骤6:向100毫升密封管中加入碳酸氢钠(3.40克，40.44毫摩尔)和二碳酸二叔丁酯(2.21克，10.11毫摩尔，2.32毫升)，该密封管包含在THF的2，2,2,2-三氟-1-(3-羟基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)乙酮(1.7克，6.74毫摩尔)的充分搅拌的溶液，将反应混合物在室温下搅拌16小时。经UPLC确认反应完成后，将反应混合物浓缩并溶解于乙酸乙酯中，用水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩，得到粗叔丁基3-羟基-8-(2,2,2-三氟乙酰)-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1-羧酸酯(1.9g，4.31mmol，64.01％产率)。LC-MS(ES+):m/z297.2[M-tBu+H]+。
步骤7:向100mL单颈圆底烧瓶中加入三乙基胺(1.64g，16.18mmol，2.25mL)和甲磺酰氯(926.55mg，8.09mmol，627)，该圆底烧瓶中含有充分搅拌的叔丁基3-羟基-8-(2,2,2-三氟乙酰)-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1-羧酸酯(1.9g，5.39mmol)在DCM(20mL)中的溶液。所得溶液在室温下搅拌3小时。在TLC显示反应完成后，用水(100mL)稀释反应混合物，用DCM(2×100mL)提取产物。有机层用无水硫酸钠干燥并浓缩，得到粗化合物叔丁基3-甲磺酰氧基-8-(2,2,2-三氟乙酰)-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1-羧酸酯(1.6克，3.23毫摩尔，产率59.96％)。仅粗产物用于下一步。LC-MS(ESI):m/z 331.0[M+H-Boc]+。
步骤8:在室温下，向100毫升单颈圆底烧瓶中加入叠氮化钠(634.33毫克，9.76毫摩尔)，该圆底烧瓶包含充分搅拌的叔丁基3-甲磺酰氧基-8-(2,2,2-三氟乙酰)-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1-羧酸酯(2.8克，6.50毫摩尔)在DMF(30毫升)中的溶液。将所得溶液在80℃下搅拌16小时。如TLC所示反应完成后，用水(50mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2×50mL)提取，有机层用无水硫酸钠干燥并浓缩，得到粗化合物3-叠氮基-8-(2，2-三氟乙酰)-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1-羧酸叔丁酯(1.6g，4.07mmol，62.57％产率)，直接用于下一步。LC-MS(ESI):m/z 278.2[M+H-Boc]+。
步骤9:向25mL单颈圆底烧瓶中加入三苯基膦(156.39mg，596.25μmol)，该圆底烧瓶中含有叔丁基3-叠氮基-8-(2,2,2-三氟乙酰)-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1-羧酸酯(150mg，397.50μmol)在水(0.5mL)和THF(2mL)中的充分搅拌的溶液。将所得溶液在80℃下搅拌16小时。如TLC所示反应完成后，用水(10mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2×10mL)提取产物。有机层经无水硫酸钠干燥、浓缩和纯化，得到叔丁基3-氨基-8-(2,2,2-三氟乙酰)-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1-羧酸酯(60mg，111.00μmol，27.92％产率)。LC-MS(ES+):m/z296.1[M+H-tBu]+。
步骤10:室温下加入2-氨基-5-羟基苯甲酸(1当量)在甲苯:四氢呋喃(5:1)的搅拌溶液加入无水原甲酸三乙酯(2当量)，随后3-氨基-8-(2,2,2-三氟乙酰)-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1-羧酸叔丁酯(1当量)。所得反应混合物在密封管中于110℃加热18小时。经LC-MS确认反应完成后，将反应混合物冷却至室温并进行后处理。粗产物通过柱色谱纯化，得到3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-8-(2,2,2-三氟乙酰)-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1-羧酸叔丁酯。
步骤11:在室温下3-(6-羟基-4-氧代-喹唑啉-3-基)-8-(2,2,2-三氟乙酰)-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1-羧酸叔丁酯(1当量)在THF的搅拌溶液中加入碳酸铯(1.1当量)和2,3,6-三氟苯甲腈(1.1当量)。所得反应混合物在室温下搅拌16小时。经LC-MS确认反应完成后，进行后处理，粗产物经硅胶柱色谱纯化，得到3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-(2,2,2-三氟乙酰)-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1-羧酸叔丁酯。
步骤12:外消旋化合物3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-(2,2,2-三氟乙酰)-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1-羧酸叔丁酯通过手性SFC纯化得到叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-(2,2,2-三氟乙酰)-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1-羧酸叔丁酯。
步骤13:在室温下叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-(2,2,2-三氟乙酰)-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1-羧酸酯(1当量)在N,N-二甲基甲酰胺中的溶液加入碳酸铯(2.5当量)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(2当量)。将所得反应混合物在65℃下搅拌16小时。经LC-MS确认反应完成后，进行后处理，粗产物经硅胶柱色谱纯化，得到叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-(2,2,2-三氟乙酰)-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1-羧酸酯。
步骤14:在室温下叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-(2,2,2-三氟乙酰)-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1-羧酸酯(1当量)在甲醇和水中的溶液加入无水碳酸钾(5当量)。将所得混合物加热至50℃16小时，并通过LC-MS监测。完成后，进行后处理，粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1-羧酸酯。
步骤15:在氮气氛下于室温下向2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(1当量)和叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1-羧酸酯(1当量)在N,N-二甲基甲酰胺(4毫升/毫摩尔)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙基胺(4当量)。随后在相同温度下加入HATU(1.1当量)。反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，粗混合物通过柱色谱纯化，得到目标化合物叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1,8-二氮杂螺螺[4.5]癸烷-1-羧酸酯。
步骤16:叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1-羧酸酯(1当量)在二氯甲烷中的溶液加入二噁烷中4N氯化氢(10当量)。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。经LC-MS确认反应完成后，将反应真空浓缩并通过反相制备-高效液相色谱纯化，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉。
实施例209
6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉
步骤1:叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-(2,2,2-三氟乙酰)-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1-羧酸酯(1当量)在二氯甲烷中的溶液中加入二噁烷中的4N氯化氢(10当量)。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。经LC-MS确认反应完成后，将反应真空浓缩，得到3,6-二氟-2-[4-氧代-3-[(3R)-8-(2,2,2-三氟乙酰)-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]喹唑啉-6-基]氧基苯甲腈。
步骤2:3,6-二氟-2-[4-氧代-3-[(3R)-8-(2,2,2-三氟乙酰)-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]喹唑啉-6-基]氧基苯甲腈(1当量)，甲基碘(2当量)在DMF中的溶液加入DIPEA(3当量)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。经LC-MS确认反应完成后，进行后处理，粗产物经硅胶柱色谱纯化，得到3,6-二氟-2-[3-[(3R)-1-甲基-8-(2,2,2-三氟乙酰)-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基苯甲腈。
步骤3:在室温下3,6-二氟-2-[3-[(3R)-1-甲基-8-(2,2,2-三氟乙酰)-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉-6-基]氧基苯甲腈(1当量)在N,N-二甲基甲酰胺中的溶液加入碳酸铯(2.5当量)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(2当量)。将所得反应混合物在65℃下搅拌16小时。经LC-MS确认反应完成后，进行后处理，粗产物经硅胶柱色谱纯化，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-1-甲基-8-(2,2,2-三氟乙酰)-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉。
步骤4:在室温下6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-1-甲基-8-(2,2,2-三氟乙酰)-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉(1当量)在甲醇和水中的溶液加入无水碳酸钾(5当量)。将所得混合物回流16小时并通过LC-MS监测。完成后，进行后处理，粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代-喹唑啉。
步骤5:在氮气氛下于室温下2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(1当量)和6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉(1当量)在N,N-二甲基甲酰胺(4毫升/毫摩尔)中的溶液加入N,N-二异丙基乙基胺(4当量)。随后在相同温度下加入了HATU(1.1当量)。反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，通过反相制备-高效液相色谱纯化粗混合物，得到目标化合物6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-[(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]-4-氧代喹唑啉。
实施例210
(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-3-[6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟-苯甲酰基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:在环境温度下向2-氨基-5-[2,6-二氟-3-[(2,2,2-三氟乙酰)氨基]苯甲酰基]苯甲酸(1.09克，2.81毫摩尔)和叔丁基3-氨基-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(600毫克，2.34毫摩尔)在甲苯(10毫升)和THF(3毫升)中的搅拌溶液中加入二乙氧基甲氧基乙烷(693.76mg,4.68mmol,778.63μL)，然后加入乙酸(28.11mg,468.13μmol,26.77μL)。所得混合物在封闭的密封管中于110℃搅拌16小时。完成后，用水(10mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2x 10mL)提取。合并的有机层用10％碳酸氢钠溶液(10mL)洗涤，随后用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，该粗产物用0-50％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱液通过硅胶柱色谱纯化，得到叔丁基3-[6-[2,6-二氟-3-[(2,2,2-三氟乙酰)氨基]苯甲酰基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(531mg,734.06μmol,31％产率)，为棕色固体。LCMS(ESI+):m/z 637.7[M+H]+and 581.1[M-tBu+H]+。
步骤2:0℃下向3-[6-[2,6-二氟-3-[(2,2,2-三氟乙酰)氨基]苯甲酰基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(360mg，565.54μmol)的甲醇(6mL)的搅拌溶液中加入正丁胺(206.82mg，2.83mmol，280.24μL)，将所得反应混合物温热至60℃，保持16小时。完成后，将反应混合物浓缩，得到粗品，将其通过快速硅胶柱色谱法纯化，使用二氯甲烷中的10％甲醇，得到叔丁基3-[6-(3-氨基-2，6-二氟-苯甲酰基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(170mg,279.90μmol,49％产率)，黄色固体。LCMS(ESI+):m/z485.0[M-tBu+H]+。
步骤3:外消旋化合物叔丁基3-[6-(3-氨基-2,6-二氟-苯甲酰基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(240mg，443.99μmol)通过手性SFC手性拆分(柱:YMC AMYLOSE-SA[250*30mm，5微米]；流动相:40％(甲醇中0.5％的异丙基胺)和60％的二氧化碳]；流速:70g/min；循环时间:8分钟；回压:100巴；UV:220纳米)，得到峰1(第一洗脱)叔丁基(3S)-3-[6-(3-氨基-2,6-二氟-苯甲酰基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(110毫克，203.49微摩尔，46％产率，100％ee，SOR:+81.20)，峰2(第二洗脱)叔丁基(3R)-3-[6-(3-氨基-2,6-二氟-苯甲酰基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(98mg,177.96μmol,40％产率,96.2％ee,SOR:-79.12)，灰白色固体。
步骤4:室温下向含有叔丁基(3R)-3-[6-(3-氨基-2,6-二氟-苯甲酰基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(80mg，148.00μmol)在二噁烷(2mL)中充分搅拌的溶液的10mL密封管中加入吡啶(117.06mg，1.48mmol，119.70μL)和N-乙基-N-甲基-氨磺酰氯(139.96mg，887.97μmol，109.49μL)。将反应混合物在90℃下搅拌12小时。用水稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2x 25mL)提取。合并的有机层用冷水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，该粗产物用0-10％甲醇在二氯甲烷中的硅胶柱色谱纯化，得到叔丁基(3R)-3-[6-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟苯甲酰基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(13mg,19.06μmol,13％产率)，为棕色固体。LCMS(ESI+):660.3[M-H]-.。
步骤5:在0℃下，向叔丁基(3R)-3-[6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟苯甲酰基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(13mg，19.65μmol)在二氯甲烷(0.2mL)中的搅拌溶液中加入氯化氢在二噁烷(17.91μL)中的4.0M溶液，得到的反应混合物室温下搅拌2小时。反应完成后，将反应混合物真空浓缩，用乙醚洗涤，得到(3R)-3-[6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟-苯甲酰基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(12mg，17.66μmol，90％产率)，为灰白色固体。LCMS(ESI+):562.3[M+H]+。
步骤6:在氮气氛下(3R)-3-[6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟-苯甲酰基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(1当量)和2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(1当量)在DMF中的溶液加入N,N-二异丙基乙基胺(3当量)和HATU(1.5当量)。反应混合物在室温下搅拌并通过LC-MS监测。完成后，粗混合物通过反相制备-高效液相色谱纯化，得到目标化合物(3R)-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-3-[6-[3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2,6-二氟-苯甲酰基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷。
实施例211
(3R)-3-[6-[3-[[叔丁基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2-氰基-6-氟苯氧基]-4-氧代喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:在0℃下N-(氧代亚甲基)氨磺酰氯(5g，35.33mmol，3.08mL)在二氯甲烷(50mL)中的搅拌溶液加入苯甲醇(3.82g，35.33mmol，3.66mL)在二氯甲烷(50mL)中的溶液。将所得反应混合物在室温下搅拌1小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，得到黄色固体的N-氯磺酰基氨基甲酸苄酯(8克，30.44毫摩尔，86％产率)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝12.43(s,1H),7.42-7.33(m,5H),5.23(s,1H),4.97(s,1H)。
步骤2:向N-氯磺酰氨基甲酸苄酯(3克，12.02毫摩尔)和N,2-二甲基丙-2-胺(1.05克，12.02毫摩尔，1.44毫升)在二氯甲烷(30毫升)中的搅拌溶液中加入三乙胺(3.65克，36.05毫摩尔，5.02毫升)。所得反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物减压浓缩，用快速硅胶柱色谱纯化，用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到N-[叔丁基(甲基)氨磺酰基]氨基甲酸苄酯(1.5g，4.04mmol，34％产率)。LCMS(ESI+):m/z 299.2[M+H]+。
步骤3:在氮气氛下，向N-[叔丁基(甲基)氨磺酰基]氨基甲酸苄酯(1.5g，4.99mmol)在乙醇(20mL)中的搅拌溶液中加入钯，10％碳(797.16mg，7.49mmol)。悬浮液在真空下用氮气脱气。混合物在氢气球囊下于室温下搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土床过滤，用10％甲醇在二氯甲烷(300mL)中洗涤，滤液减压浓缩，得到2-甲基-2-[甲基(氨磺酰基)氨基]丙烷(900mg，4.60mmol，92％产率)，为灰白色固体。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝6.63(s,2H),2.67(s,3H),1.30(s,9H)。
步骤4:向叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(50mg，92.84μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的搅拌溶液中加入叔丁醇钾(31.25mg，278.53μmol)和2-甲基-2-[甲基(氨磺酰基)氨基]丙烷(26.24mg,157.83μmol)。将反应混合物在50℃加热16小时。将反应混合物用冷水(10mL)稀释并过滤。滤液用乙酸乙酯(20mL)提取。有机层经硫酸钠干燥并减压浓缩得到粗产物，用10％二氯甲烷在石油醚中研磨，得到呈灰白色固体的叔丁基(3R)-3-[6-[[叔丁基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2-氰基-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯。LCMS(ESI):m/z:683.2[M-H]-。
步骤5:叔丁基(3R)-3-[6-[3-[[叔丁基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2-氰基-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1当量)在二氯甲烷中的溶液中加入二噁烷(10当量)中4N氯化氢。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。经LC-MS确认反应完成后，将反应真空浓缩并通过柱色谱纯化，得到(3R)-3-[6-[3-[[叔丁基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2-氰基-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷。
步骤6:在氮气氛下于室温下2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(1当量)和(3R)-3-[6-[3-[[叔丁基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2-氰基-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(1当量)在N,N-二甲基甲酰胺(4毫升/毫摩尔)中的溶液加入N,N-二异丙基乙基胺(4当量)。随后在相同温度下加入了HATU(1.1当量)。反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，通过反相高效液相色谱纯化粗混合物，得到目标化合物(3R)-3-[6-[3-[[叔丁基(甲基)氨磺酰基]氨基]-2-氰基-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺螺[4.5]癸烷。
实施例212-213
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]环己基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷顺式异构体和(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)]氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]环己基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷反式异构体
步骤1:在室温下向1-(5-氟-6-碘代-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮(2克，5.15毫摩尔)在二噁烷(10毫升)中在密封管中的搅拌溶液中加入2-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(2.06克，7.73毫摩尔)和氟化铯(2.35g，15.46mmol)。将反应混合物用氮气吹扫10分钟，然后添加Pd(dppf)Cl2.二氯甲烷(420.80mg，515.28μmol)。反应混合物再次用氮气吹扫5分钟，然后在100℃加热12小时。完成后，用水(100mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(3×150mL)提取。合并的有机层用冷水(3×70mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗产物。粗产物用甲基叔丁基醚洗涤，得到浅棕色固体的1-[6-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(1.5g，3.09mmol，60％产率)。LCMS(ESI)＝m/z401.4[M+H]+。
步骤2:在氮气氛下，于5℃向1-[6-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(700mg，1.75mmol)的二氯甲烷(4.90mL)的搅拌溶液中加入三氟乙酸(199.33mg，1.75mmol，134.69μL)。反应混合物在室温下搅拌2小时。完成后，反应混合物在真空下浓缩，得到粗产物。通过反相柱色谱(水中0.1％甲酸:乙腈)纯化所需产物，得到1-[5-氟-1-甲基-6-(4-氧代环己烯-1-基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(270mg，633.57μmol，36％产率)，为灰白色固体。LCMS(ESI)＝m/z 357.2[M+H]+。
步骤3:向1-[5-氟-1-甲基-6-(4-氧代环己烯-1-基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(700毫克，1.96毫摩尔)在1,4-二噁烷(10毫升)中的搅拌溶液中加入20重量％的碳上氢氧化钯50％水(551.75毫克，3.93毫摩尔)。反应混合物用氢气鼓泡10分钟，然后在室温下氢化(1个大气压)16小时。完成后，用氮气吹扫反应混合物，通过硅藻土垫过滤除去催化剂。将滤液减压浓缩，得到粗产物，用100％乙酸乙酯作为洗脱剂通过硅胶柱色谱纯化，得到1-[5-氟-1-甲基-6-(4-氧代环己基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(300mg，734.25μmol，37％产率)，为灰白色固体。LCMS(ESI)＝m/z 359.4[M+H]+。
步骤4:向amberlsyt碱化胺(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(174.03mg，259.51μmol)在甲醇(2mL)中和1-[5-氟-1-甲基-6-(4-氧代环己基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮的搅拌溶液中加入乙酸(15.58mg,259.51μmol,14.86μL)。将反应混合物在75℃加热4小时。然后添加MP-氰基硼氢化物(100mg，259.51μmol)并将反应混合物在75℃下再搅拌2小时。反应完成后，反应混合物经硅藻土过滤，减压浓缩，得到粗产物，该粗产物通过反相柱色谱纯化(水中0.1％碳酸氢铵:ACN)。
通过制备型高效液相色谱进一步纯化产物，并将分离的非对映体(级分1和2)冻干，得到反式异构体(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]环己基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷和顺式异构体(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)]氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]环己基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷，灰白色固体。
实施例212:LCMS(ESI):m/z 899.2[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.56(s,1H),8.70(s,1H),8.33(s,1H),7.76(d,J＝8.80Hz,1H),7.65(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.25-7.55(m,2H),7.49(d,J＝5.60Hz,1H),7.39(d,J＝11.20Hz,1H),7.34(d,J＝2.80Hz,1H),5.26-5.32(m,1H),3.96-4.22(m,2H),4.03(s,3H),3.91(t,J＝6.40Hz,2H),2.95-3.21(m,4H),3.40-3.61(m,1H),2.75(t,J＝10.80Hz,2H),2.38-2.65(m,6H),1.52-2.21(m,14H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)ppm。
实施例213:LCMS(ESI):m/z 899.3[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.56(s,1H),9.05(s,1H),8.32(s,1H),7.77(d,J＝8.80Hz,1H),7.65(dd,J＝2.80,8.80Hz,1H),7.54(d,J＝6.00Hz,1H),7.21-7.42(m,2H),7.39(d,J＝10.80Hz,1H),7.34(d,J＝2.80Hz,1H),5.24-5.35(m,1H),4.11-4.28(m,2H),4.00(s,3H),3.91(t,J＝6.80Hz,2H),2.82-3.21(m,6H),2.71-2.81(m,2H),2.38-2.68(m,5H),1.60-2.25(m,14H),1.03(t,J＝7.20Hz,3H)ppm)。
实施例214
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-异丙基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:在室温下，向4-溴-2,5-二氟-苯甲腈(10克，45.87毫摩尔)在DMF(100毫升)中的溶液中加入盐酸异丙肼(5.07克，45.87毫摩尔)和无水碳酸钾(99％(15.85克，114.68毫摩尔)。将所得溶液加热至80℃达12小时，并通过LC-MS和TLC进行监测。完成后，反应混合物用水(30ml)淬灭，用乙酸乙酯(2×60mL)提取。有机层用盐水(15mL)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩。粗产物通过柱色谱纯化，使用60-120目硅胶和0-40％乙酸乙酯在pet醚中作为洗脱剂，得到6-溴-5-氟-1-异丙基-吲唑-3-胺(3.0g，10.65毫摩尔，23.23％产率)，为棕色固体。LCMS(ESI)＝m/z 272.1[M+H]+
步骤2:制备[DBU][LAC]离子液体；在氮气氛下于室温下10ml单颈圆底烧瓶中1当量的乳酸加入1当量DBU。所得溶液在该温度下搅拌12小时。获得的浓溶液直接用于以下迈克尔加成。
在氮气氛下，在室温下向6-溴-5-氟-1-异丙基-吲唑-3-胺(1.0克，3.67毫摩尔)在[DBU][LAC]离子液体(1.0克，3.67毫摩尔)中的溶液中加入丙烯酸乙酯(2.58克，25.72毫摩尔，2.79毫升)。将所得溶液加热至97℃达72小时，并通过LC-MS/TLC进行监测。完成后，所得溶液用水(10ml)淬灭，用乙酸乙酯(2×20mL)提取。有机层用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。粗产物通过硅胶(25g SNAP)柱色谱纯化，乙酸乙酯-石油醚(0-60％)作为洗脱剂，得到棕黄色固体的3-[(6-溴-5-氟-1-异丙基-吲唑-3-基)氨基]丙酸乙酯(0.5g，1.21mmol，32.95％产率)。LCMS(ESI)＝m/z 372.4[M+H]+
步骤3:在28℃下，向3-[(6-溴-5-氟-1-异丙基-吲唑-3-基)氨基]丙酸乙酯(0.2克，537.30微摩尔)在THF(2毫升)、甲醇(0.5毫升)和水(0.5毫升)中的溶液中加入氢氧化锂一水合物,98％(33.82毫克，805.95微摩尔，22.40微摩尔)。将所得混合物在室温下搅拌3小时，并通过TLC/LC监测。所得残留物用水稀释，用乙酸酸化至pH5，得到固体，过滤并干燥，得到3-[(6-溴-5-氟-1-异丙基-吲唑-3-基)氨基]丙酸(0.14g，376.71μmol，70.11％产率)，为浅棕色固体。LCMS(ESI)＝m/z 344.1[M+H]+
步骤4:在室温下，向3-[(6-溴-5-氟-1-异丙基-吲唑-3-基)氨基]丙酸(50mg，145.27μmol)乙酸(1mL)的搅拌溶液中加入氰酸钠(18.89mg，290.55μmol)。将反应混合物在140℃下搅拌16小时。通过TLC监测反应进程。反应完成后，将反应混合物真空浓缩，得到棕色液体的1-(6-溴-5-氟-1-异丙基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮(70mg，42.87μmol，29.51％)。LCMS(ESI):m/z 371.2[M+H]+
步骤5:在室温和氮气氛下，向1-(6-溴-5-氟-1-异丙基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮(90mg，243.78μmol)的二噁烷(2mL)溶液中加入碳酸铯(198.57mg，609.44μmol)和乙酸叔丁酯2-(4-羟基-4-哌啶基)(62.98mg，292.53μmol)。在室温下加入Pd-PEPPSI-IHeptCl3-氯吡啶(11.86mg，12.19μmol)之前，将反应混合物用N2脱气10分钟。然后将反应在110℃加热16小时。反应完成后，用水(5mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(2×30mL)提取。有机层经硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗产物，该粗产物通过柱色谱(230-400目硅胶)纯化，使用60％乙酸乙酯在pet醚中作为洗脱剂，得到乙酸叔丁酯2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-异丙基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]酯(40mg，78.54μmol，32.22％产率)UPLC-MS(ESI):m/z 504.7[M+H]+。
步骤6:在氮气氛下，在0℃下，向乙酸叔丁酯2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-异丙基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸酯(40mg，79.43μmol)在DCM(1mL)中的溶液中加入4.0M氯化氢二噁烷(57.92mg，1.59mmol，72.41μL)溶液。将所得混合物在室温下搅拌12小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，得到棕色半固体的2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-异丙基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(38mg，72.29μmol，91.01％产率，盐酸盐)。LC-MS(ESI):m/z 448.2[M+H]+。
步骤7:室温下向(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(50mg，84.31μmol，盐酸盐)、2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-异丙基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(37.72mg,77.96μmol,HCl盐)在DMF(1mL)中的搅拌溶液中加入HATU(32.06mg,84.31μmol)，随后DIPEA(54.48mg,421.54μmol,73.42μL)。在该温度下搅拌反应混合物4小时。反应完成后，用水(4mL)稀释反应混合物，并用10％异丙醇/二氯甲烷(2×4mL)提取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到粗产物，该粗产物通过反相柱色谱纯化(在罐中的碳酸氢铵缓冲液)，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-异丙基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(25mg,24.67μmol,29.26％产率)，为灰白色固体。LCMS(ESI):m/z 986.2[M+H]+.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.69(s,1H),10.20(s,1H),8.36(s,1H),7.78-7.80(m,2H),7.69(dd,J＝2.40,9.00Hz,1H),7.44(d,J＝12.40Hz,2H),7.36(d,J＝2.80Hz,1H),7.08(d,J＝7.20Hz,1H),5.38-5.22(m,1H),5.01(s,1H),4.70-4.72(m,1H),4.12-4.15(m,3H),3.90(m,1H),3.76-3.72(m,1H),3.64-3.69(m,2H),3.12-3.18(m,5H),2.99(t,J＝10.40Hz,2H),2.86(t,J＝6.80Hz,3H),2.75(s,3H),2.38-2.40(m,1H)2.08(m,1H),1.68-1.79(m,9H),1.42-1.46(m,6H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)ppm。
支架C的总体方案:
步骤A-SNAr取代的一般程序(程序C-A):在0℃惰性气氛下向胺(2)(1当量)在THF的搅拌溶液中逐份加入氢化钠(60％分散在矿物油中，1.5当量。或者，也可以使用Cs2CO3TDMF代替氢化钠和THF。30分钟后，7-溴-2-氯-喹喔啉或其合适的衍生物(1)(1当量)在0℃下加入反应混合物中，反应在室温下搅拌4小时。反应完成后，用水逐滴淬灭，用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到中间体(3)。
步骤B-羟基化的一般程序(程序C-B):中间体(3)(1当量)在1,4-二噁烷中的搅拌溶液加入氢氧化钾(1当量)和配体二叔丁基Xphos或Me4 tButylXphos(0.01-0.05当量。所得反应混合物用氮气脱气10分钟。然后添加Pd2(dba)3(0.01-0.05eq)。完成后，将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤。合并的滤液在真空下浓缩，得到喹喔啉中间体(6)。
步骤A’——羟基化的一般程序(程序C-A’):
步骤A’-1:氢氧化钾(2.5当量)和7-溴-2-氯-喹喔啉或其合适的衍生物(1)(1当量)在水和1,4-二噁烷的混合物中的搅拌溶液，在密封管中用氮气脱气5分钟。Pd2dba3(0.1eq.)和tBuXPhos(0.1当量)加入到反应混合物中，所得混合物在封闭的密封管中于100℃搅拌16小时。完成后，用1M氢氧化钾溶液和乙酸乙酯稀释反应混合物。分层，水层用1.5N盐酸溶液酸化至pH3。过滤并干燥所得固体，得到中间体喹喔啉-2,7-二醇或其衍生物。
步骤A’-2:在室温下加入三苯基膦(2.5当量)在1,4-二噁烷中的搅拌溶液加入N-氯代琥珀酰亚胺(NCS)(2.5当量)。将所得反应混合物在室温下搅拌0.5小时。向其中添加喹喔啉-2,7-二醇中间体(1当量)，并在110℃下搅拌4小时。完成后，用水稀释反应混合物，并用乙酸乙酯提取。合并的有机层用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，同时用0-30％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂进行洗脱，得到中间体3-氯喹喔啉-6-醇或其衍生物(4)。
步骤B’——交叉偶联的一般程序(程序C-B’):在氮气氛下于室温下硼酸酯(5)(2当量)和3-氯喹喔啉-6-醇中间体(4)(1当量)在1,4-二噁烷和水中的搅拌溶液中加入碳酸钾(2.5当量)。反应混合物用氮气脱气15分钟。添加Pd(dppf)Cl2.二氯甲烷(0.1当量)并在100℃下搅拌反应混合物16小时。完成后，将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤并用乙酸乙酯洗涤。将合并的滤液减压浓缩，得到粗产物，用45-50％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化，得到喹喔啉中间体(6)。
步骤C-O-芳化的一般程序(程序C-C):在室温下向喹喔啉中间体(6，1当量)在N,N-二甲基甲酰胺/THF中的搅拌溶液中加入碳酸铯/叔丁醇钾(1.1当量)和可商购的2,3,6-三氟苯甲腈(7，1.1当量)。将所得反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，用水淬灭反应混合物，用乙酸乙酯提取。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并在真空下浓缩得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，使用50％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到中间体(8)。
步骤D-磺酰化的一般程序(程序C-D):在室温下中间体(8)(1当量)在N,N-二甲基甲酰胺中的溶液加入碳酸铯(2.5当量)和氨磺酰衍生物(9)(可商购或如方法I和方法II中所述；2eq.)。将所得反应混合物在60℃下搅拌16小时。完成后，将反应混合物冷却至室温，用水稀释并用乙酸乙酯提取。合并的有机层用盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗产物。用20-50％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化粗化合物，得到磺酰胺中间体(10)。
注:在大多数反应中，加入水后，观察到固体沉淀。这些固体通过滤纸过滤。滤液用乙酸乙酯提取。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并在真空下浓缩，得到具有适当纯度的磺酰胺中间体10。
步骤E-N-Boc脱保护的一般程序(程序C-E):磺酰胺中间体溶液(10，1当量)溶于二氯甲烷中并加入TFA(5当量)或二噁烷中的4N氯化氢(10当量)。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。完成后，减压除去反应溶剂，得到粗产物。用甲基叔丁基醚(MTBE)研磨粗化合物，以提供靶向配体(11)。
步骤F-酸胺耦合的一般程序(程序C-F):
在氮气下于室温下酸(12，1当量)和胺(11，1当量)在N,N-二甲基甲酰胺(4毫升/毫摩尔)中的搅拌溶液加入N,N-二异丙基乙基胺(4当量)，随后在相同温度下加入HATU(1.1当量)。反应混合物在室温下搅拌12小时。反应完成后，用水稀释反应混合物，用10％异丙醇在二氯甲烷中提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗化合物。通过反相纯化纯化粗化合物，并将级分冻干，得到目标化合物(13)。
实施例215
7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-2-[4-[4-[2-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1,4-二氮杂-1-基]吡唑-1-基]喹喔啉
/>
步骤1:在室温下，将1-苄基-4-碘代-吡唑(2g，7.04毫摩尔)在二甲基亚砜(20mL)中的溶液加入密封管中，随后加入无水碳酸钾(2.92g，21.12毫摩尔)。反应混合物用氮气脱气10分钟，然后在室温下加入碘化铜(I)(134.07毫克，703.99摩尔，23.86升)、铜粉(44.70毫克，703.99摩尔)和L-脯氨酸(162.10毫克，1.41毫摩尔，119.19升)。封管后，将所得反应混合物在110℃下搅拌16小时。完成后，将反应混合物冷却至室温，用水(500mL)稀释，用乙酸乙酯(3×300mL)提取。合并的有机层用盐水溶液(200mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗物质。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用40-50％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到棕色粘性化合物4-(1-苄基吡唑-4-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(800毫克，1.99毫摩尔，29％产率)。LCMS m/z(ESI):357.0[M+H]+。
步骤2:向4-(1-苄基吡唑-4-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(800毫克，2.24毫摩尔)甲醇(20毫升)的搅拌溶液中加入10％碳载钯(300毫克，2.82毫摩尔)。通过将氢气鼓泡通过10分钟使溶液饱和，然后在氢气(1个大气压)下于60℃下搅拌10小时。完成后，用氮气吹扫反应混合物，通过硅藻土垫过滤除去催化剂。滤液在减压下浓缩。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用30-40％乙酸乙酯(在石油醚中)作为洗脱剂，得到棕色固体的4-(1H-吡唑-4-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(350mg，1.25毫摩尔，56％产率)。LCMS m/z(ESI):267.2[M+H]+。
步骤3:在密封管中加入4-(1H-吡唑-4-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(300毫克，1.13毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(6毫升)中的溶液，并加入碳酸铯(440.40毫克，1.35毫摩尔)，随后在室温和氮气氛下加入7-溴-2-氯-喹喔啉(274.26毫克，1.13毫摩尔)。将所得反应混合物在100℃下搅拌16小时。完成后，将反应混合物冷却至室温，用水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(3×70mL)提取。合并的有机层用盐水溶液(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用20-30％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到黄色固体的4-[1-(7-溴喹喔啉-2-基)吡唑-4-基]-1,4-二氮杂环-1-羧酸叔丁酯(250毫克，332.72微摩尔，30％产率)。LCMS m/z(ESI):416.8[M+H-tBu]+
步骤4:将4-[1-(7-溴喹喔啉-2-基)吡唑-4-基]-1,4-二氮杂环-1-羧酸叔丁酯(200mg，422.51μmol)在二噁烷(4mL)和水(1mL)中的溶液加入到密封管中，随后在室温和氮气氛下加入氢氧化钾(59.26mg，1.06mmol，29.05L)。反应混合物用氮气脱气10分钟，然后加入二亚苄基丙酮钯(0)(7.74毫克，8.45摩尔)，随后在相同温度下加入二叔丁基-[2,3,4,5-四甲基-6-[2,4,6-三(丙-2-基)苯基]苯基]膦(10.16毫克，21.13微摩尔)。将所得反应混合物加热至100℃达16小时。完成后，将反应混合物冷却至室温，用水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(3×70mL)提取。合并的有机层用盐水溶液(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗物质。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，以20-30％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到黄色固体的4-[1-(7-羟基喹喔啉-2-基)吡唑-4-基]-1,4-二氮杂环-1-羧酸叔丁酯(100mg，236.32μmol，56％产率)。LCMS m/z(ESI):411.1[M+H]+。
步骤5:0℃氮气氛下向4-[1-(7-羟基喹喔啉-2-基)吡唑-4-基]-1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(100毫克，243.62微摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)中的搅拌溶液中加入叔丁醇钾(30.07毫克，267.99微摩尔)，随后加入2,3,6-三氟苯甲腈(42.10毫克，267.99微摩尔，30.95微升)。反应在室温下搅拌3小时。完成后，用冷水(50mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(3×60ml)提取。合并的有机层用冷水(2×100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到黄色固体的4-[1-[7-(2-氰基-3,6-二氟苯氧基)喹喔啉-2-基]吡唑-4-基]-1,4-二氮杂环-1-羧酸叔丁酯(130mg，170.94μmol，70％产率)。LCMS m/z(ESI):492.1[M+H]+。
步骤6:室温下向化合物叔丁基4-[1-[7-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)喹喔啉-2-基]吡唑-4-基]-1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸酯(130mg，237.42μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(7mL)中的搅拌溶液中加入碳酸铯(193.39mg，593.55μmol)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(72.18mg,522.32μmol)。然后将反应在65℃下搅拌16小时。完成后，将反应混合物冷却至室温，用水(50mL)和乙酸乙酯(3×50mL)提取。合并的有机层在无水硫酸钠上干燥并减压浓缩，得到黄色固体的叔丁基4-[1-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]吡唑-4-基]-1,4-二氮杂环-1-羧酸酯(130mg，161.29μmol，68％产率)。LCMS m/z(ESI):664.2[M-H]-。
步骤7:在0-5℃下，向4-[1-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]吡唑-4-基]-1,4-二氮杂环-1-羧酸叔丁酯(130毫克，195.27微摩尔)在二氯甲烷(10毫升)中的搅拌溶液中加入4M氯化氢二噁烷(71.20毫克，1.95毫摩尔，89.00微升)溶液。反应完成后，在减压下浓缩反应混合物，得到黄色固体的7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-2-[4-(1,4-二氮杂-1-基)吡唑-1-基]喹喔啉的盐酸盐(100mg，157.79μmol，81％产率)。LCMS m/z(ESI):566.1[M+H]+。
步骤8:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序C-E)。使用7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-2-[4-(1,4-二氮杂-1-基)吡唑-1-基]喹喔啉(100毫克，166.09微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(107.33毫克，830.45微摩尔，144.65升)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟代苯基]-1-哌啶基]乙酸(100mg,166.09μmol)、N,N-二异丙基乙胺(107.33mg,830.45μmol,144.65μL)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(73.05mg,182.70μmol)和HATU(63.15mg,166.09μmol)进行酰胺偶联。粗化合物经反相纯化，用25-30％的乙腈在0.1％的甲酸水溶液中洗脱，得到7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-2-[4-[2-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟代苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1,4-二氮杂-1-基]吡唑-1-基]喹喔啉(32.29mg,33.07μmol,20％产率)，黄色固体。LCMS m/z(ESI):911.3[M+H]+1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.42(s,1H),8.13-8.17(m,2H),7.88(d,J＝17.20Hz,1H),7.70-7.80(m,1H),7.67(ddd,J＝1.20,2.80,9.00Hz,1H),7.49-7.42(m,1H),7.09(s,1H),6.75-6.85(m,1H),6.41-6.46(m,2H),6.09(d,J＝7.60Hz,1H),4.30-4.34(m,1H),4.16-4.30(m,1H),3.74(s,1H),3.60(s,2H),3.42-3.55(m,6H),3.35-3.24(m,1H),3.14(q,J＝6.80Hz,2H),2.95-3.05(m,2H),2.60-2.81(m,2H),2.75(s,3H),2.47-2.62(m,2H),2.06-2.09(m,1H),1.80-2.01(m,5H),1.63-1.78(m,2H),1.08(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例216
7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-2-[[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]甲氧基]喹喔啉
步骤1:在惰性气氛下，于0℃向4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(200毫克，928.98微摩尔)在THF(5毫升)的搅拌溶液中加入氢化钠(60％分散于矿物油中，32.04毫克，1.39毫摩尔)。30分钟后，在0℃向反应混合物中加入7-溴-2-氯-喹喔啉(226.20mg，928.98μmol)，反应在室温下搅拌4小时。反应完成后，用水逐滴淬灭，用乙酸乙酯(2x 10mL)提取。合并的有机层用盐水溶液(15毫升)洗涤，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到4-[(7-溴喹喔啉-2-基)氧甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(250毫克，562.38摩尔，61％产率)。LCMS m/z(ESI):366.0[M+H-tBu]+。
步骤2:向4-[(7-溴喹喔啉-2-基)氧甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.1克，236.79摩尔)在1,4-二噁烷(1毫升)中的搅拌溶液中加入溶于水(1毫升)的氢氧化钾(13.29毫克，236.79微摩尔，6.51微升)和二叔丁基Xphos(5.03毫克，11.84微摩尔)。所得反应混合物用氮气脱气10分钟。然后加入Pd2(dba)3(2.17毫克，2.37微摩尔)，将反应加热至100℃达16小时。完成后，将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯(5毫升)洗涤。合并的滤液在真空下浓缩，得到白色固体的4-[(7-羟基喹喔啉-2-基)氧甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.1克，250.40微摩尔，100％产率)。LCMS m/z(ESI):358.2[M-H]-。
步骤3:在室温和惰性气氛下，向4-[(7-羟基喹喔啉-2-基)氧甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.1克，278.23微摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(2毫升)中的搅拌溶液中加入叔丁醇钾(62.44毫克，556.45微摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(43.71毫克，278.23微摩尔，32.14微升)。将所得反应混合物在室温下搅拌3小时。完成后，用水(5ml)淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯(2×10ml)提取。合并的有机层用盐水(10ml)洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩。粗化合物通过柱纯化进行纯化，使用50％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到4-[[7-(2-氰基-3,6-二氟苯氧基)喹喔啉-2-基]氧甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.09g，181.03μmol，65％产率)，为无色液体。LCMS m/z(ESI):441.0[M+H-tBu]+
步骤4:氮气氛下将4-[[7-(2-氰基-3,6-二氟苯氧基)喹喔啉-2-基]氧甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.09克，181.27微摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(2毫升)中的搅拌溶液置于密封管中，并加入[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(50.10毫克，362.53微摩尔)和碳酸铯(147.65毫克，453.17微摩尔)。然后将反应混合物在65℃下搅拌16小时。完成后，用水(10mL)淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯(2×10mL)提取。合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩。通过使用50-100％乙酸乙酯/石油醚的硅胶快速柱色谱纯化粗化合物，得到棕色液体的4-[[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]氧甲基]哌啶-1-羧酸甲酯(70mg，101.81μmol，56％产率)。LCMS m/z(ESI):613.2[M-H]-。
步骤5:在0℃下，向叔丁基4-[[7-(2-氰基-3,6-二氟苯氧基)喹喔啉-2-基]氧甲基]哌啶-1-羧酸酯(0.07g，140.99mol)在二氯甲烷(2mL)中的搅拌溶液中加入氯化氢在1,4-二噁烷(4.0M，0.7mL)中的溶液，然后在室温下搅拌反应混合物3小时。将反应混合物真空浓缩并用石油醚(5mL)洗涤，产生3,6-二氟-2-[3-(4-哌啶基甲氧基)喹喔啉-6-基]氧基-苯甲腈盐酸盐(0.07g,154.09μmol,100％产率)，黄色固体。LCMS m/z(ESI):515.2[M+H]+。
步骤6:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序C-E)。使用7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-2-(4-哌啶甲氧基)喹喔啉(70mg，127.03μmol)、2-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟代苯基]-1-哌啶基]乙酸(46.16mg，127.03μmol)、HATU HATU(241.51mg,635.17μmol)和N,N-二异丙基乙胺(16.42mg,127.03μmol,22.13μL)进行酰胺偶联。粗化合物通过制备型高效液相色谱纯化，使用0.1％甲酸水溶液:乙腈作为洗脱剂，得到7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-2-[[1-[2-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]甲氧基]喹喔啉(10mg，10.57mol，8％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):860.3[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),8.51(s,1H),8.06(d,J＝9.20Hz,1H),7.51-7.60(m,1H),7.49(dd,J＝2.80,9.20Hz,1H),7.31-7.39(m,1H),6.95-7.02(m,1H),6.97(s,1H),6.48(d,J＝5.60Hz,1H),6.46(d,J＝11.60Hz,1H),6.07(d,J＝6.80Hz,1H),4.42-4.39(m,1H),4.33-4.35(m,4H),3.80-3.97(m,2H),3.01-3.12(m,3H),2.60-2.82(m,3H),2.65(s,3H),2.46-2.51(m,2H),2.05-2.20(m,3H),1.70-1.96(m,8H),1.15-1.40(m,3H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例217
7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰]氨基]-6-氟苯氧基]-2-[(1R，5S)-3-[2-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基]甲氧基]喹喔啉
步骤1:在氮气氛下，在0-5℃下，向氢化纳(60％分散在矿物油中，330毫克，8.25毫摩尔)在THF(20毫升)的搅拌悬浮液中加入叔丁基(1R,5S)-6-(羟甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸酯(900毫克，4.22毫摩尔)在THF(20毫升)的溶液。将反应混合物在室温下搅拌30分钟。将反应混合物再次冷却至0-5℃，然后在相同温度下加入7-溴-2-氯-喹喔啉(1.0克，4.11毫摩尔)在THF(20毫升)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌3小时。完成后，将反应混合物冷却至0-5℃，然后加入饱和氯化铵溶液(100mL)并用乙酸乙酯(2x200mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。该粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用30％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到叔丁基(1R,5S)-6-[(7-溴喹喔啉-2-基)氧甲基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸酯(1.50g，3.35mmol，82％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):364.0[M+H-tBu]+。
步骤2:将叔丁基(1R,5S)-6-[(7-溴喹喔啉-2-基)氧甲基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸酯(1.40g，3.33mmol)在1,4-二噁烷(20mL)和水(10mL)混合物中的溶液置于密封管中，并在室温下加入氢氧化钾(290mg，5.17mmol，142.16μL)。反应混合物用氮气脱气15分钟，然后加入叔丁基过氧化氢(71毫克，167.20微摩尔)。反应混合物再次用氮气脱气10分钟，并在相同温度下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(61毫克，66.61微摩尔)。将反应混合物加热至100℃达16小时。完成后，向反应混合物中加入饱和氯化铵溶液(100mL)，并用乙酸乙酯(3×100mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。该粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用90％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到叔丁基(1R,5S)-6-[(7-羟基喹喔啉-2-基)氧甲基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸酯(1.10g，2.95mmol，89％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):356.1[M-H]-。
步骤3:在氮气氛下，在室温下，向叔丁基(1S,5R)-6-[(7-羟基喹喔啉-2-基)氧甲基]二环[3.1.0]己烷-3-羧酸酯(1.0g，2.81毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的搅拌溶液中加入叔丁醇钾(350mg，3.12毫摩尔)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后在相同温度下加入2,3,6-三氟苯甲腈(490毫克，3.12毫摩尔，360.29微升)的N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液。反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，向反应混合物中加入水(50mL)，用乙酸乙酯(2x 100mL)提取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用30％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到叔丁基(1S,5R)-6-[[7-(2-氰基-3,6-二氟苯氧基)喹喔啉-2-基]氧甲基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸酯(1.0g，1.96mmol，70％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):439.0[M+H-tBu]+。
步骤4:将叔丁基(1S,5R)-6-[[7-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)喹喔啉-2-基]氧甲基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸酯(900mg，1.82mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液置于密封管中，并在室温和氮气氛下加入碳酸铯(1.50g，4.60mmol)。将反应混合物加热至60℃达16小时。完成后，加入水(50mL)，用乙酸乙酯(2x 100mL)提取反应混合物。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，其中60％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到叔丁基(1S,5R)-6-[[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]氧甲基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸酯(480mg，548.42μmol，30％产率)，为淡黄色固体。LCMS m/z(ESI):611.2[M-H]-。
步骤5:在0-5℃下氮气氛下向叔丁基(1S,5R)-6-[[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]氧甲基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸酯(480mg，783.45μmol)在二氯甲烷(5.0mL)中的搅拌溶液中加入氯化氢在1,4-二噁烷(4.0M，4.0mL)中的溶液。反应混合物在室温下搅拌4小时。完成后，反应混合物在减压下浓缩，用二乙醚(2x 50mL)研磨，得到棕色固体的2-[[(1S,5R)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基]甲氧基]-7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉(420mg，512.55μmol，65％产率)。LCMS m/z(ESI):513.2[M+H]+。
步骤6:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序C-E)。使用2-[[(1S,5R)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基]甲氧基]-7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉(400mg，728.58μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟代苯基]-1-哌啶基]乙酸(300mg,750.29μmol)、N,N-二异丙基乙胺(2.23g,17.22mmol,3.0mL)和HATU(310mg,815.30μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，使用150g snap，用50％乙腈在0.1％乙酸铵水溶液中洗脱，得到7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-2-[(1S,5R)-3-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟代苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基]甲氧基]喹喔啉(110mg,126.79μmol,17％产率)，黄色固体。LCMS m/z(ESI):856.2[M-H]-；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),9.79(bs,1H),8.52(s,1H),8.05(d,J＝8.80Hz,1H),7.46-7.52(m,1H),7.33(dd,J＝4.40,9.40Hz,1H),6.94-6.99(m,2H),6.48(d,J＝6.80Hz,1H),6.46(d,J＝12.00Hz,1H),6.07(d,J＝7.60Hz,1H),7.33(dd,J＝4.40,9.40Hz,1H),4.35-4.45(m,1H),4.25-4.36(m,2H),3.61-3.91(m,4H),3.52-3.59(m,1H),3.22-3.41(m,3H),3.05(q,J＝7.20Hz,2H),2.55-2.81(m,4H),2.64(s,3H),2.03-2.12(m,1H),1.81-1.92(m,4H),1.71-1.81(m,4H),1.05-1.15(m,1H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例218
3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹啉-3-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
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步骤1:在氮气下，在0℃向叔丁基3-氧代-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(2.0克，7.83毫摩尔)在THF(20毫升)的溶液中加入DBU(5.92克，23.50毫摩尔)。将反应混合物在0℃下搅拌0.5小时。在0℃下向反应溶液中滴加1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁烷-1-磺酰氟(7.10克，23.50毫摩尔，4.06毫升)10分钟。将所得溶液缓慢升温至室温1小时。完成后，用水(20毫升)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(2×50毫升)提取。分离的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。用乙酸乙酯-石油醚(0-40％)通过硅胶(50g SNAP)柱色谱纯化所得粗产物，得到液体的3-(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁基磺酰氧基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸叔丁酯(3.0g，5.57mmol，71％产率)。LCMS m/z(ESI):438.0[M+H]+。
步骤2:室温下向叔丁基3-(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁基磺酰氧基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯(1.5g，2.79mmol)在1,4-二噁烷(25mL)中的溶液中加入乙酸钾(821.82mg，8.37mmol，523.45μL)、双(频哪醇)乙硼烷(1.06g,4.19mmol)。将所得溶液用氮气脱气并在100℃下加热12小时。完成后，将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土床过滤并用乙酸乙酯(60ml)洗涤。将收集的滤液减压浓缩，得到3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸叔丁酯(1.65g，2.75毫摩尔，99％产率)，其为深棕色液体，无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):266.2[M+H]+。
步骤3:室温氮气下向叔丁基3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]十二-2-烯-8-羧酸酯(1.22克，3.35毫摩尔)在1,4-二噁烷(10毫升)和水(2毫升)中的溶液中加入无水碳酸钾(925.26毫克，6.69毫摩尔，404.05微升)。将反应混合物用氮气脱气10分钟，然后在相同温度下加入与二氯甲烷复合的[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(182.24mg，223.16mol)。将所得溶液在100℃下加热12小时。完成后，将所得溶液冷却至室温，通过硅藻土床过滤，并用乙酸乙酯(50ml)洗涤。收集的滤液在减压下浓缩。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，70％乙酸乙酯在pet醚中作为洗脱剂，得到红色固体的3-(6-羟基-3-喹啉基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]十二碳-2-烯-8-羧酸叔丁酯(0.6克，1.43毫摩尔，64％产率)。LCMS m/z(ESI):383.2[M+H]+。
步骤4:向叔丁基3-(6-羟基-3-喹啉基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯(0.1克，261.47摩尔)在1,4-二噁烷(1毫升)中的溶液中加入氢氧化钯于活性炭上(18.63毫克，130.74摩尔)，并在氢气球囊压力下搅拌反应12小时。完成后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并用10％甲醇二氯甲烷(20mL)洗涤。将滤液减压浓缩，得到棕色固体的3-(6-羟基-3-喹啉基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(90mg，223.18mol，85％产率)。LCMS m/z(ESI):385.6[M+H]+。
步骤5:在氮气氛下，向2,3,6-三氟苯甲腈(245.16毫克，1.56毫摩尔，180.26升)在THF(5毫升)的溶液中加入叔丁基3-(6-羟基-3-喹啉基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(500毫克，1.30毫摩尔)。反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，用水(5mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(2x 20mL)提取。有机层用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。得到的粗产物通过使用乙酸乙酯-石油醚(0-70％)的硅胶(25gSNAP)柱色谱纯化，得到3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-3-喹啉基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(0.57g，1.07mmol，83％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):522.2[M+H]+。
步骤6:在室温氮气氛下向叔丁基3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-3-喹啉基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.57克，1.09毫摩尔)在N,N-二甲基甲酰胺(6毫升)中的溶液中加入碳酸铯(890.21毫克，2.73毫摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(302.05毫克，2.19毫摩尔)。将反应混合物加热至70℃12小时。完成后，用水(10mL)稀释反应混合物，过滤出所得固体。滤液用乙酸乙酯(2x 25mL)提取。有机层用盐水(10mL)洗涤，用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到液体的叔丁基3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-喹啉基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.43g，576.84μmol，53％产率)，无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):640.2[M+H]+。
步骤7:0℃，氮气下向叔丁基3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-喹啉基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.43克，672.15微摩尔)在二氯甲烷(5毫升)中的溶液中加入氯化氢在1,4-二噁烷(4.0M，3.36毫升)中的溶液。将所得溶液在室温下搅拌3小时。完成后，将溶液在减压下浓缩，得到半固体33-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-喹啉基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(0.42g，515.96μmol，77％产率)，其继续进行无需进一步纯化。LCMS m/z(ESI):540.2[M+H]+。
步骤8:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序C-E)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(80.81mg，222.38微摩尔)、3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-3-喹啉基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(0.12g，222.38微摩尔)、N,N-二异丙基乙胺(143.70mg,1.11mmol,193.67μL)和HATU(127.50mg,333.57μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用38％乙腈在0.1％甲酸水溶液中洗脱，得到3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-3-喹啉基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(24mg,24.64μmol,11％产率)，灰白色固体。LCMS m/z(ESI):885.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.82(s,1H),9.86(bs,1H),8.82(s,1H),8.24(s,1H),8.06(d,J＝9.20Hz,1H),7.76-7.70(m,1H),7.61(dd,J＝2.80,9.20Hz,1H),7.44-7.41(m,1H),7.26(s,1H),6.97-6.91(m,1H),6.48(t,J＝13.20Hz,2H),6.12(d,J＝8.00Hz,1H),4.30-4.23(m,4H),3.82-3.78(m,3H),3.44-3.34(m,4H),3.15-3.05(m,3H),2.71(s,3H),2.51-2.40(m,2H),2.33-2.31(m,2H),1.89-1.59(m,13H),1.06(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例219
7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-2-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-2,8-氮杂螺[4.5]癸烷-2-基]喹喔啉
步骤1:在室温和氮气氛下，向2,8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1克，4.16毫摩尔)的四氢呋喃(15毫升)搅拌溶液中加入7-溴-2-氯喹喔啉(1.01克，4.16毫摩尔)和碳酸铯(3.39克，10.40毫摩尔)。将反应混合物在100℃下搅拌12小时。将反应混合物冷却至室温，用水(15mL)稀释。溶液用乙酸乙酯(3x20 mL)提取，用盐水(15mL)洗涤，用硫酸钠干燥，减压浓缩，得到2-(7-溴喹喔啉-2-基)-2,8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(1.15g，2.52mmol，61％产率)。LCMS m/z(ESI):447.0[M+H]+。
步骤2:在室温和氮气氛下，向2-(7-溴喹喔啉-2-基)-2,8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(900毫克，2.01毫摩尔)的四氢呋喃(12毫升)搅拌溶液中加入氢氧化钾(282.18毫克，5.03毫摩尔，138.32微升)和水(1毫升)。将该混合物用氮气脱气10分钟，加入Pd2(dba)3(184.22mg，201.18μmol)和Me4 tButylXphos(96.71mg,201.18μmol)。将所得混合物在100℃下搅拌16小时。用水(5mL)稀释反应混合物并提取乙酸乙酯(3×15mL)。合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，并在减压下蒸发。粗产物通过使用230-400硅胶的柱色谱纯化，用50-60％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到2-(7-羟基喹喔啉-2-基)-2,8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(450mg，1.12mmol，56％产率)，为浅棕色固体。LCMS:m/z(ESI):385.2[M+H]+。
步骤3:在室温和氮气氛下，向2-(7-羟基喹喔啉-2-基)-2,8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(450毫克，1.17毫摩尔)的四氢呋喃(6毫升)搅拌溶液中加入2,3,6-三氟苯甲腈(183.87毫克，1.17毫摩尔，135.20微升)和碳酸铯(1.14克，3.51毫摩尔)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。用水(3mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3×20mL)提取。合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩。通过使用230-400硅胶的柱色谱纯化粗产物，用70-80％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到浅棕色固体的2-[7-(2-氰基-3,6-二氟苯氧基)喹喔啉-2-基]-2,8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(550mg，1.05mmol，90％产率)。LCMS m/z(ESI):522.2[M+H]+。
步骤4:在室温下，向2-[7-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)喹喔啉-2-基]-2,8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(550毫克，1.05毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)的搅拌溶液中加入[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(291.45毫克，2.11毫摩尔)和碳酸铯(1.03克，3.16毫摩尔)滤液用乙酸乙酯(3×50mL)提取，用盐水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥。减压蒸发有机层，得到棕色固体的2-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-2,8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(150mg，178.15μmol，17％产率)。LCMS m/z(ESI):640.2[M+H]+。
步骤5:在氮气氛下于0℃向2-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-2,8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(150毫克，234.47摩尔)二氯甲烷(2毫升)的搅拌溶液中滴加氯化氢于1,4-二噁烷(4M，1.47毫升)中，所得混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物直接减压浓缩，得到7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-2-(2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-2-基)喹喔啉(135mg,163.21μmol,70％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):540.2[M+H]+。
步骤6:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序C-E)。使用7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-2-(2,8-氮杂螺[4.5]癸烷-2-基)喹喔啉(130mg，240.91μmol)、2-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟代苯基]-1-哌啶基]乙酸(87.54mg，240.91μmol)、N,N-二异丙基乙胺(155.68mg,1.20mmol,209.81μL)和HATU(137.40mg,361.36μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，使用150g snap，用50％的乙腈在0.1％的甲酸水溶液中洗脱，得到7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-2-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-2,8-氮杂螺[4.5]癸烷-2-基]喹喔啉(8mg,7.54μmol,6％产率)，黄色固体。LCMSm/z(ESI):885.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.81(s,1H),10.15(bs,1H),9.51(bs,1H),8.44(s,1H),7.88(d,J＝9.20Hz,1H),7.85-7.89(m,1H),7.48(dd,J＝4.00,9.20Hz,1H),7.19(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),6.95-7.01(m,1H),6.74(d,J＝2.80Hz,1H),6.51(d,J＝7.60Hz,1H),6.48(d,J＝12.40Hz,1H),6.12(d,J＝8.00Hz,1H),4.22-4.41(m,4H),3.61-3.80(m,3H),3.31-3.61(m,5H),3.17(q,J＝6.80Hz,2H),3.01-3.12(m,1H),2.85-2.95(m,1H),2.80(s,3H),2.68-2.81(m,1H),2.51-2.61(m,2H),2.55(s,2H),1.82-2.12(m,6H),1.52-1.71(m,4H),1.07(t,J＝6.80Hz,3H)。
实施例220
7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-2-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]喹喔啉
步骤1:将氢氧化钾(4.61克，82.14毫摩尔，2.26毫升)和7-溴-2-氯-喹喔啉(8克，32.86毫摩尔)在水(12毫升)和1,4-二噁烷(48毫升)的混合物中在密封管中的搅拌溶液用氮气脱气5分钟。向反应混合物中加入Pd2dba3(3.01克，3.29毫摩尔)和tBuXPhos(1.40克，3.29毫摩尔)，并将所得混合物在100℃下在封闭的密封管中搅拌16小时。完成后，将反应混合物用1M氢氧化钾溶液(100mL)和乙酸乙酯(200mL)稀释。分层，水层用1.5N盐酸溶液酸化至PH3。过滤并干燥所得固体，得到棕色固体的喹喔啉-2,7-二醇(3.8克，20.43毫摩尔，62％产率)。LCMS m/z(ESI):163.20[M+H]+。
步骤2:在室温下，向三苯基膦(7.28克，27.75毫摩尔)在1,4-二噁烷(100毫升)中的搅拌溶液中加入N-氯代琥珀酰亚胺(3.71克，27.75毫摩尔，2.25毫升)。将所得反应混合物在室温下搅拌0.5小时。向其中加入喹喔啉-2,7-二醇(1.8克，11.10毫摩尔)，并在110℃下搅拌4小时。完成后，用水(100毫升)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(2x 100毫升)提取。合并的有机层用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，同时用0-30％乙酸乙酯在Pet醚中作为洗脱剂进行洗脱，得到浅黄色固体的3-氯喹喔啉-6-醇(350mg，1.64mmol，产率15％)。LCMS m/z(ESI):179.20[M-H]-。
步骤3:在室温、氮气氛下向叔丁基3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯(402.34毫克，1.11毫摩尔)和3-氯喹喔啉-6-醇(100毫克，553.74摩尔)在1,4-二噁烷(5毫升)和水(1毫升)中的搅拌溶液中加入碳酸钾(191.33mg，1.38mmol)。反应混合物用氮气脱气15分钟。加入Pd(dppf)Cl2.二氯甲烷(45.22毫克，55.37微摩尔)，将反应混合物在100℃下搅拌16小时。完成后，将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯(2x 50毫升)洗涤。将合并的滤液减压浓缩，得到粗产物，该粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用45-50％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到棕色半固体的3-(7-羟基喹喔啉-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸叔丁酯(150mg，374.70μmol，68％产率)。LCMS m/z(ESI):382.20[M+H]+。
步骤4:在室温下，向3-(7-羟基喹喔啉-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸叔丁酯(270毫克，707.79微摩尔)在1,4-二噁烷(10毫升)中的搅拌溶液中加入氢氧化钯(100毫克，142.41微摩尔)。反应混合物在H2压力下(球囊)搅拌12小时。反应完成后，通过硅藻土床过滤除去催化剂。硅藻土床用乙酸乙酯(3×30mL)洗涤，滤液减压浓缩。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用50-60％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到棕色粘性固体的3-(7-羟基喹喔啉-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(120mg，294.93μmol，42％产率)。LCMSm/z(ESI):384.20[M+H]+。
步骤5:通过以下程序C-C使用叔丁基3-(7-羟基喹喔啉-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(120毫克，312.92微摩尔)、碳酸铯(254.89毫克，782.30微摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(54.07毫克，344.21微摩尔，39.76微升)合成O-芳基化喹喔啉中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用50-60％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到3-[7-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)喹喔啉-2-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(80mg，136.47μmol，44％产率)，为淡黄色油。LCMS m/z(ESI):465.20[M+H-tBu]+。
步骤6:使用叔丁基3-[7-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)喹喔啉-2-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(80毫克，153.68微摩尔)、碳酸铯(125.18毫克，384.19微摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(31.85毫克，230.52微摩尔)，按照程序C-D合成氨磺酰化的喹喔啉中间体。用90-100％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，通过硅胶快速柱色谱纯化粗化合物，得到浅黄色油状叔丁基3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(50mg，58.90μmol，38％产率)。LCMS m/z(ESI):637.20[M-H]-。
步骤7:使用叔丁基3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(50mg，78.28μmol)和氯化氢1,4-二噁烷(1mL)溶液4.0M，按照程序C-E合成所需的胺。用甲基叔丁基醚研磨所得的粗化合物，得到黄色固体的2-(8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基)-7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉(40mg，39.99μmol，51％产率)。LCMS m/z(ESI):537.0[M-H]-。
步骤8:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序C-F)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(25毫克，62.52微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(48.49毫克，375.15微摩尔，65.34微升)、2-(8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基)-7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉(39.55mg,68.78μmol)和HATU(26.15mg,68.78μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用50％乙腈在0.1％乙酸铵水溶液中洗脱，得到7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-2-[8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟代苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基]喹喔啉(18mg,20.27μmol,32％产率)，淡黄色固体。LCMS m/z(ESI):884.20[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.71(s,1H),8.85(d,J＝2.00Hz,1H),8.12(d,J＝9.20Hz,1H),7.68(dd,J＝9.20,2.80,Hz,1H),7.52(s,1H),7.36-7.34(m,1H),7.10(s,1H),6.99(s,1H),6.50-6.45(m,2H),6.08(d,J＝7.60Hz,1H),4.40-4.25(m,1H),4.00-3.75(m,2H),3.70-3.35(m,4H),3.04(q,J＝6.80Hz,2H),2.90-2.55(m,7H),2.12-2.07(m,5H),1.92-1.51(m,15H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例221
3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:室温氮气下向3-氯喹喔啉-6-醇(0.2克，1.11毫摩尔)和叔丁基3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯(809.06毫克，2.21毫摩尔)在1,4-二噁烷(8毫升)和水(2毫升)中的搅拌溶液中加入碳酸钾(309.06毫克，2.21毫摩尔)。反应混合物用氮气吹扫15分钟，然后加入Pd(dppf)Cl2.二氯甲烷(90.44毫克，110.75微摩尔)。将反应混合物在100℃下搅拌16小时。完成后，将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯(2x 50mL)洗涤。合并的滤液减压浓缩，粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，乙酸乙酯/石油醚的含量为70-80％，作为洗脱剂，得到棕色半固体的3-(7-羟基喹喔啉-2-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]十二碳-2-烯-8-羧酸叔丁酯(0.2克，323.39摩尔，产率29％)。LCMS m/z(ESI):328.0[M+H-tBu]+。
步骤2:在室温下，向叔丁基3-(7-羟基喹喔啉-2-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]十二-2-烯-8-羧酸酯(0.2克，521.59摩尔)在1,4-二噁烷(5毫升)中的搅拌溶液中加入氢氧化钯(109.87毫克，782.39摩尔)。反应混合物在H2压力下搅拌12小时。完成后，通过硅藻土床过滤除去催化剂，用乙酸乙酯(3×10mL)洗涤。将滤液减压浓缩，粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用80-90％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到棕色固体的3-(7-羟基喹喔啉-2-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(0.1克，210.95微摩尔，40％产率)。LCMSm/z(ESI):330.20[M+H-tBu]+。
步骤3:通过以下程序C-C使用叔丁基3-(7-羟基喹喔啉-2-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(0.1克，259.43微摩尔)、碳酸铯(211.32毫克，648.58微摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(48.91毫克，311.32微摩尔，35.96微升)合成O-芳基化喹喔啉中间体。粗化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，用60-70％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到3-[7-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(0.1克，186.30微摩尔，72％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):467.20[M+H-tBu]+。
步骤4:使用叔丁基3-[7-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(100毫克，191.37微摩尔)、碳酸铯(155.88毫克，478.43微摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(39.67毫克，287.06微摩尔)，按照程序C-D合成氨磺酰化的喹喔啉中间体粗。化合物通过硅胶快速柱色谱纯化，其中60-70％的丙酮在石油醚中作为洗脱剂，得到浅黄色油状叔丁基3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(20mg，21.21μmol，11％产率)。LCMS m/z(ESI):639.0[M-H]-。
步骤5:按照程序C-E，使用叔丁基3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(20mg，31.21μmol)和氯化氢在1,4-二噁烷(4.0M，0.2mL)中的溶液合成所需的胺。用甲基叔丁基醚研磨所得的粗化合物，得到黄色固体的3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(17mg，20.08μmol，64％产率)。LCMS m/z(ESI):541.4[M+H]+。
步骤6:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序C-F)。使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(15毫克，37.51微摩尔)、N,N-二异丙基乙基胺(4.85毫克，37.51微摩尔，6.53微升)、3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(17.32mg,30.01μmol)和HATU(14.26mg,37.51μmol)进行酰胺偶联。通过反相柱色谱纯化粗化合物，用46％的乙腈在0.1％乙酸铵水溶液中洗脱，得到3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(10.7mg,11.52μmol,31％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):886.20[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.79(s,1H),9.66(s,1H),8.88(s,1H),8.15(d,J＝8.80Hz,1H),7.71(dd,J＝2.80,9.20Hz,1H),7.64-7.56(m,1H),7.35(m,1H),7.13(s,1H),6.98(s,1H),6.50-6.45(m,2H),6.07(d,J＝7.20Hz,1H),4.33-4.28(m,2H),4.03-3.98(m,2H),3.90-3.70(m,1H),3.48-3.46(m,2H),3.06-3.05(m,2H),2.80-2.60(m,6H),2.40-2.13(m,2H),2.11-2.07(m,2H),2.00-1.60(m,13H),1.24(s,2H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例222
(3S)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:3-[7-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(0.4g，745.20μmol)被手性拆分，得到相应的纯对映体叔丁基(3R)-3-[7-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(第一洗脱，90mg，172.23μmol)和叔丁基(3S)-3-[7-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(第二洗脱，90mg，172.23μmol)。
注:经SFC手性纯化后。任意指定为R-异构体的第一洗脱异构体(RT-3.0，(在LuxA1柱中分离))和任意指定为S-异构体的第二洗脱异构体(RT-3.78)。第二洗脱异构体(s-异构体[α]D＝+42.4浓度:0.5M)。LCMS(ES+):m/z 467.0[M+H-56]+。
步骤2:室温下向叔丁基(3S)-3-[7-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(90mg，172.23μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中加入碳酸铯(140.29mg，430.59μmol)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(47.60mg,344.47μmol)。将反应混合物加热至65℃16小时。用水(20mL)稀释反应混合物，过滤出所得固体。滤液用乙酸乙酯(2x 25mL)提取，有机层用盐水(10mL)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到棕色液体的叔丁基(3S)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(80mg，103.30μmol，60％产率)。LCMSm/z(ESI):641.4[M+H]+。
步骤3:在氮气氛下，向叔丁基(3S)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(80mg，124.86μmol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液中加入4M氯化氢在1,4-二噁烷(1mL)中的溶液。将所得溶液在室温下搅拌2小时。将所得溶液在减压下浓缩，得到棕色固体的(3S)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(70mg，86.82μmol，70％产率)，无需进一步纯化即可继续进行。LCMS m/z(ESI):541.6[M+H]+
步骤4:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序C-E)。使用2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(54.31mg，129.48μmol)、(3S)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(70mg,129.48μmol)、HATU(49.23mg,129.48μmol)和N,N-二异丙基乙胺(83.67mg,647.42μmol,112.77μL)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，使用30g snap，用35％的乙腈在0.1％的甲酸水溶液中洗脱，得到(3S)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(43mg,43.38μmol,34％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):942.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.54(s,1H),10.19(s,1H),8.91(s,1H),8.18(d,J＝9.20Hz,1H),7.89(t,J＝9.60Hz,1H),7.74(d,J＝9.20Hz,1H),7.52(dd,J＝4.00,9.20Hz,1H),7.33(d,J＝12.80Hz,1H),7.23(s,1H),7.13(d,J＝7.20Hz,1H),5.04(s,1H),4.28(s,1H),4.07-3.99(m,2H),3.96(s,3H),3.91(t,J＝28.00Hz,3H),3.72-3.62(m,1H),3.57-3.45(m,1H),3.23-3.12(m,4H),3.12-3.03(m,2H),2.81(s,3H),2.75(t,J＝28.00Hz,2H),2.68(s,1H),2.58(d,J＝Hz,2H),2.42-2.33(m,2H),2.17-2.12(m,1H),1.82-1.80(m,3H),1.74-1.67(m,5H),1.62-1.53(m,1H),1.07(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例223
(3R)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:使用叔丁基(3R)-3-[7-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(100mg，191.37μmol)、碳酸铯(155.88mg，478.43μmol)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(39.67mg,287.06μmol)按照程序C-D合成氨磺酰化喹喔啉中间体，得到叔丁基(3R)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(60mg,33.71μmol,18％产率)，淡黄色固体。其无需进一步纯化而继续进行。LCMS m/z(ESI):639.20[M-H]-。
步骤2:通过以下程序C-E，使用叔丁基(3R)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(60毫克，93.64微摩尔)和氯化氢在二噁烷(2毫升)中的溶液合成所需的胺。用甲基叔丁基醚研磨所得的粗化合物，得到(3R)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(55毫克，37.28微摩尔，40％产率)，为浅棕色油。LCMS m/z(ESI):541.40[M+H]+。
步骤3:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序C-F)。使用(3R)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(51.96mg，90.04μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟代苯基]-1-哌啶基]乙酸(40mg,100.04μmol)、N,N-二异丙基乙胺(77.58mg,600.23μmol,104.55μL)和HATU(41.84mg,110.04μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用50％乙腈在0.1％乙酸铵水溶液中洗脱，得到(3R)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(14.8mg,15.93μmol,16％产率)，为淡黄色固体。LCMS m/z(ESI):886.20[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.78(s,1H),9.65(s,1H),8.87(s,1H),8.14(d,J＝9.20Hz,1H),7.70(dd,J＝2.40,8.80Hz,1H),7.34(s,1H),7.12(s,1H),6.99(s,1H),6.47(t,J＝12.40Hz,2H),6.04(d,J＝7.20Hz,1H),4.37-4.23(m,2H),4.23-3.92(m,2H),3.84-3.42(m,3H),3.11-2.90(m,3H),2.79-2.71(m,2H),2.63-2.50(m,5H),2.42-2.33(m,4H),2.20-2.10(m,3H),1.90-1.50(m,11H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例224
(3S)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]-2-氟苯基]哌啶-1-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
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步骤1:使用叔丁基(3S)-3-[7-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(100.00mg，191.37μmol)、碳酸铯(155.88mg，478.43μmol)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(39.67mg,287.06μmol)按照程序C-D合成氨磺酰化喹喔啉中间体，得到叔丁基(3S)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(60mg,33.99μmol,18％产率)，为淡黄色油。其无需进一步纯化而继续进行。LCMS m/z(ESI):639.20[M-H]-。
步骤2:通过以下程序C-E，使用叔丁基(3S)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(60mg，93.64μmol)和氯化氢溶液(4.0M，1,4-二噁烷，2mL)合成所需的胺。用甲基叔丁基醚研磨所得的粗化合物，得到(3S)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(55毫克，38.79微摩尔，41％产率)，为浅棕色油。LCMS m/z(ESI):541.40[M+H]+。
步骤3:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序C-F)。使用(3S)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(51.96mg，90.04μmol)、2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟代苯基]-1-哌啶基]乙酸(40mg,100.04μmol)、N,N-二异丙基乙胺(77.58mg,600.23μmol,104.55μL)和HATU(45.65mg,120.05μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用46％的乙腈在0.1％乙酸铵水溶液中洗脱，得到(3S)-3-[7-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]喹喔啉-2-基]-8-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(17mg,18.36μmol,18％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):886.20[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.80(s,1H),9.65(s,1H),8.87(s,1H),8.14(d,J＝9.20Hz,1H),7.71(dd,J＝2.40,8.80Hz,1H),7.50(s,1H),7.35(s,1H),7.12(s,1H),6.98(s,1H),6.49-6.45(m,2H),6.07(d,J＝8.00Hz,1H),4.32-4.28(m,2H),4.03-3.98(m,2H),3.84-3.72(m,1H),3.53-3.42(m,2H),3.29-3.16(m,2H),3.04(d,J＝6.80Hz,2H),2.79-2.70(m,2H),2.68-2.60(m,5H),2.34-2.33(m,1H),2.23-2.15(m,2H),2.11-2.06(m,2H),1.92-1.58(m,11H),1.04(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例225
(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-甲氧基喹啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:在氮气氛下，向6-甲氧基喹啉-4-醇(4.0克，22.83毫摩尔)在乙酸(60毫升)中的搅拌溶液中加入0℃的N-溴代琥珀酰亚胺(4.10克，23.06毫摩尔，1.95毫升)。完成后，将反应混合物用水(60ml)淬灭，用乙酸乙酯(2x50ml)提取。合并有机相，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到产物3-溴-6-甲氧基-喹啉-4-醇(5.30克，20.44毫摩尔，90％产率)。LCMS m/z(ESI+):254.2[M+H]+，255.2(Br-同位素模式)。
步骤2:在氮气氛下于0℃向3-溴-6-甲氧基-喹啉-4-醇(5g，19.68mmol)中加入三氯氧磷(6.03g，39.36mmol，15mL)。将反应混合物加热至室温，并在90℃下搅拌2小时。完成后，向反应混合物中加入冰冷的水，并用乙酸乙酯(50mL)提取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，有机层在减压下浓缩，得到浅黄色油状的3-溴-4-氯-6-甲氧基-喹啉(5.2克，18.51毫摩尔，产率94％)。LCMS m/z(ESI):272.0[M+H]+。
步骤3:在氮气氛下，于0℃向3-溴-4-氯-6-甲氧基-喹啉(5.20克，19.08毫摩尔)在二氯甲烷(20毫升)中的搅拌溶液中加入三溴化硼(1N，19.08毫摩尔)。将反应在室温下搅拌16小时。将反应混合物倒入200mL冰冷的水中，分离有机相。水层用1N盐酸酸化至pH 4，用乙酸乙酯(250mL×2)提取所需化合物。有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到3-溴-4-氯-喹啉-6-醇(3.7克，13.17毫摩尔，69％产率)，为灰色固体。LCMS m/z(ESI):260.0[M+H]+。
步骤4:向叔丁基3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯(890.22毫克，2.44毫摩尔)和3-溴-4-氯-喹啉-6-醇(0.7克，2.71毫摩尔)在1,4-二噁烷(165.51微升)和水(165.51毫摩尔)中的溶液中将反应混合物用氮气脱气10分钟，然后在相同温度下加入与二氯甲烷复合的[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(221毫克，0.271毫摩尔)。将所得溶液加热至100℃达12小时。完成后，将所得溶液通过硅藻土床过滤，并用乙酸乙酯(10ml)洗涤。收集的滤液在减压下浓缩。粗化合物通过硅胶柱色谱纯化，用70％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂，得到3-(4-氯-6-羟基-3-喹啉基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸叔丁酯(600毫克，1.30毫摩尔，48％产率)，为棕色固体。LCMS m/z(ESI):417.2[M+H]+。
步骤5:在室温和氮气氛下，向3-(4-氯-6-羟基-3-喹啉基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸叔丁酯(350mg，839.54μmol)在无水THF(5mL)中的搅拌溶液中加入25％的甲醇钠(90.71mg，1.68mmol，93.61μL)。反应混合物在微波条件下于100℃搅拌6小时。反应完成后，用水稀释反应物料，并用乙酸乙酯(2x10 mL)提取。分离的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗化合物。粗产物通过反相柱色谱纯化，使用120g用0.1％甲酸水溶液中40％乙腈快速洗脱，得到棕色固体的3-(6-羟基-4-甲氧基-3-喹啉基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸叔丁酯(270mg，353.47μmol，42％产率)。LCMS m/z(ESI):413.5[M+H]+。
步骤6:在惰性气氛下，室温下向叔丁基3-(6-羟基-4-甲氧基-3-喹啉基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯(270mg，654.58μmol)在1,4-二噁烷(3.5mL)中的搅拌溶液中加入碳上氢氧化钯，20重量％。％50％水(91.93mg，654.58μmol)。反应混合物在氢气球囊压力下于室温氢化32小时。完成后，用10％甲醇/二氯甲烷(200mL)通过硅藻土垫过滤反应混合物。减压浓缩滤液，用70％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂通过硅胶柱色谱纯化，得到棕色固体3-(6-羟基-4-甲氧基-3-喹啉基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(270mg，547.17μmol，84％产率)。LCMS m/z(ESI):415.6[M+H]+。
步骤7/8:向叔丁基3-(6-羟基-4-甲氧基-3-喹啉基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(271.32毫克，654.58微摩尔)和2,3,6-三氟苯甲腈(133.68毫克，850.96微摩尔，98.29微摩尔)在THF(4毫升)的溶液中加入碳酸铯(639.82毫克，1.96毫摩尔)。反应在室温下搅拌16小时。反应完成后，用水(30mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(2x50mL)提取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗化合物。所得粗产物通过快速硅胶柱色谱纯化，用0-100％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到外消旋化合物，为灰白色固体。外消旋化合物通过手性SFC手性拆分(柱:Lux直链淀粉-1(250*30)mm，5μ)；流动相:二氧化碳:甲醇中0.5％的异丙基胺(60:40)；流速:70g/min；回压:100巴；波长:220；循环时间:8分钟)得到峰1(第一洗脱)叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-甲氧基-3-喹啉基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(71mg，127.43μmol，19％产率，99.36％ee，任意指定为R对映体，SOR＝+28.80)，峰2(第二洗脱)叔丁基(3S)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-甲氧基-3-喹啉基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(65mg，116.66μmol，18％产率，97.2％ee，任意指定为S对映体，SOR＝-18.80)，灰白色固体。
步骤9:使用叔丁基(3S)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-甲氧基-3-喹啉基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(60.00毫克，108.78微摩尔)、碳酸铯(106.33毫克，326.34微摩尔)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(25.55毫克，25.55微摩尔)按照程序C-D合成氨磺酰化中间体。完成后，用水(10mL)稀释反应物料，并使用10％甲醇在二氯甲烷(2x30mL)中提取。将分离的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到白色固体的粗化合物叔丁基(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-甲氧基-3-喹啉基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(48mg，52.32μmol，48％产率)，其进行进一步的步骤而无需纯化。LCMS m/z(ESI):670.5。[M+H]+。
步骤10:在二噁烷介导的N-Boc脱保护程序C-E中，用4M氯化氢在叔丁基(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-甲氧基-3-喹啉基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(48.00mg，71.67μm)上进行N-Boc脱保护，得到(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-甲氧基-3-喹啉基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(40mg,46.86μmol,65％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ES+):570.3[M+H]+。
步骤11:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序C-F)。使用(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-甲氧基-3-喹啉基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(48mg，79.19μmol)、2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(33.21mg,72.86μmol)、N,N-二异丙基乙胺(51.18mg,395.97μmol,68.97μL)和HATU(39.15mg,102.95μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中40％乙腈洗脱，得到产物(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-甲氧基-3-喹啉基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(15mg,14.41μmol,18％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):972.2[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.54(s,1H),10.20(s,1H),8.91(d,J＝3.20Hz,1H),8.11(d,J＝9.20Hz,1H),7.88(s,1H),7.60(dd,J＝2.80,9.00Hz,1H),7.50(d,J＝6.40Hz,1H),7.33(d,J＝12.80Hz,1H),7.28(d,J＝2.40Hz,1H),7.13(d,J＝7.20Hz,1H),5.06(s,1H),4.20(d,J＝7.20Hz,1H),3.95(s,3H),3.89(t,J＝6.80Hz,4H),3.86(s,3H),3.74-3.62(m,1H),3.61-3.50(m,1H),3.21-3.10(m,4H),2.80(s,3H),2.75(t,J＝8.00Hz,2H),2.59-2.52(m,4H),2.50-2.34(m,2H),1.97-1.71(m,10H),1.06(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例226
(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-甲氧基喹啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂环己烷-1-基)-5-氟-1-甲基吲唑-6-基]-4-羟基哌啶-4-基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
步骤1:使用叔丁基(3R)-3-[6-(2-氰基-3,6-二氟-苯氧基)-4-甲氧基-3-喹啉基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(71.00mg，128.72μmol)、碳酸铯(125.82mg，386.16μmol)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(30.24mg，218.83μmol)，通过程序C-D合成氨磺酰化中间体。完成后，用水(10mL)稀释反应物料，并使用10％甲醇在二氯甲烷(2x30 mL)中提取。将分离的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-甲氧基-3-喹啉基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(42mg，47.66μmol，37％产率)，为灰白色固体，其无需纯化即可进行进一步。LCMS m/z(ESI):670.5[M+H]+。
步骤2:在二噁烷介导的N-Boc脱保护程序C-E中，用4M氯化氢在叔丁基(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-甲氧基-3-喹啉基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(40.00mg，59.72μmol)上进行N-Boc脱保护，得到(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟-苯氧基]-4-甲氧基-3-喹啉基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(32mg,31.68μmol,53％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ES+):570.4[M+H]+。
步骤3:通过HATU介导的酸-胺偶联反应制备目标化合物(程序C-F)。使用(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-甲氧基-3-喹啉基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(32mg，52.80μmol)、2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(24.36mg,53.43μmol)、N,N-二异丙基乙胺(34.12mg,263.98μmol,45.98μL)和HATU(26.10mg,68.63μmol)进行酰胺偶联。粗化合物通过反相柱色谱纯化，用0.1％乙酸铵水溶液中40％乙腈洗脱，得到产物(3R)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-甲氧基-3-喹啉基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(6mg,5.94μmol,11％产率)，为灰白色固体。LCMS m/z(ESI):972.2[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.54(s,1H),10.19(s,1H),8.90(d,J＝2.80Hz,1H),8.10(d,J＝9.20Hz,1H),7.83(s,1H),7.59(dd,J＝2.80,9.20Hz,1H),7.47(s,1H),7.33(s,1H),7.27(d,J＝2.40Hz,1H),7.13(d,J＝7.20Hz,1H),5.06(s,1H),4.22(t,J＝6.80Hz,1H),3.95(s,1H),3.89(t,J＝6.80Hz,4H),3.86(s,3H),3.73-3.62(m,1H),3.60-3.49(m,1H),3.29-3.04(m,7H),2.76-2.72(m,4H),2.59-2.51(m,4H),2.40-2.37(m,1H),2.01-1.98(m,2H),1.82-1.71(m,9H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例227
(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]噌啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷/>
步骤1:向250mL圆底烧瓶中加入1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(8.94g，58.75mmol，8.77mL)，该圆底烧瓶中含有在0℃下充分搅拌的3-氧代-1-氧代-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(3.0g，11.75mmol)在THF的溶液(30mL)，将所得反应混合物缓慢升至环境温度并搅拌1小时。随后在0℃加入1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁烷-1-磺酰氟(10.65克，35.25毫摩尔，6.09毫升)。然后将反应混合物在室温下搅拌6小时。如TLC所示，反应完成后，用水(50mL)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(3×60mL)提取。合并的有机层用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗产物通过柱色谱纯化，使用60-120硅胶和0-15％乙酸乙酯在pet醚中作为洗脱剂，得到3-(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁基磺酰氧基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸叔丁酯(4.5g，8.37mmol，71.23％产率)，为白色胶状固体。LC-MS(ES+):m/z 438.0[M+H-100]+。
步骤2:室温下向叔丁基3-(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁基磺酰氧基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]十二-2-烯-8-羧酸酯(1.4克，2.61毫摩尔)在1,4-二噁烷(39.75毫升)中的溶液中加入乙酸钾(767.03毫克，7.82毫摩尔)和双(频哪醇)乙硼烷((1.32g,5.21mmol)。将所得溶液用氮气脱气5分钟，并在该温度下加入(1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁)二氯化钯(II)(2.13g，2.61mmol)。将所得溶液加热至100℃达12小时。通过LCMS/TLC监测反应的进展。将所得溶液冷却至室温，通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(60ml)洗涤。将收集的滤液减压浓缩，得到粗产物，该粗产物通过柱色谱(230-400目硅胶)纯化，使用40％乙酸乙酯在pet醚中作为洗脱剂，得到液体的叔丁基3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯(750mg，1.50毫摩尔，57.54％产率)。LC-MS(ES+):m/z266.0[M-Boc+H]+。
步骤3:于0℃在50毫升单颈圆底烧瓶中加入水(2毫升)中的亚硝酸钠(218.16毫克，3.16毫摩尔)，该烧瓶中含有充分搅拌的4-苄氧基苯胺(700.00毫克，3.51毫摩尔)氯化氢(6毫升)溶液。反应混合物在0℃下搅拌30分钟，然后在该温度下加入氯化氢(6毫升)中氯化锡(II)(1.73克，9.13毫摩尔)。然后将反应混合物在环境温度下搅拌2小时。经UPLC确认反应完成后，过滤反应混合物，用冷水洗涤，并在高真空下干燥，得到浅棕色固体的产物(4-苄氧基苯基)肼(700mg，3.27mmol，92.99％)。LC-MS(ES+):m/z 215.0[M+H]+。
步骤4:在环境温度和氮气氛下，向100mL单颈圆底烧瓶中加入甲醇钠(756.41mg，14.00毫摩尔)和2,2-二乙氧基乙酸乙酯(1.23g，7.00毫摩尔)，该圆底烧瓶包含(4-苄氧基苯基)联氨(1.0g，4.67毫摩尔)在乙醇(15mL)中的充分搅拌的溶液。将反应混合物在60℃下搅拌16小时。如TLC所示反应完成后，用水淬灭反应混合物，用乙酸乙酯(2×20mL)提取。合并有机相，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗产物通过硅胶(230-400目)柱色谱(40％乙酸乙酯在Pet-乙醚中)纯化，得到黄色固体的N’-(4-苯甲氧基苯基)-2,2-二乙氧基乙酰肼(570mg，1.56mmol，33.46％产率)。LC-MS(ES+):m/z 345.2[M+H]+
步骤5:在室温下，向N’-(4-苄氧基苯基)-2,2-二乙氧基乙酰肼(0.2克，580.71微摩尔)乙酸(2毫升)溶液中加入三氟乙酸(1.48克，12.98毫摩尔，1毫升)。将所得溶液加热至100℃达2小时。通过LCMS/TLC监测反应。完成后，所得溶液在减压下浓缩，得到残留物。将残留物溶于乙酸乙酯(20ml)中，用10％碳酸氢钠溶液(10ml)洗涤。将有机相干燥(无水硫酸钠)，过滤并减压浓缩，得到棕色固体的6-苄氧基innolin-3-ol(80mg，317.12μmol，产率54.61％)。LC-MS(ES+):m/z253.3[M+H]+
步骤6:将6-苄氧基噌啉-3-醇(15毫克，59.46微摩尔)在三氯化磷(45.59毫克，297.30微摩尔)中的溶液加热至110℃4小时。通过LCMS/TLC监测反应完成后，将所得溶液在减压下浓缩，得到棕色固体的6-苄氧基-3-氯-噌啉(10mg，23.26μmol，产率39.13％)。LC-MS(ES+):m/z 271.1[M+H]+。
步骤7:在氮气氛下于室温中6-(苄氧基)-3-氯噌啉(1当量)和叔丁基3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯(1.2当量)在1,4-二噁烷中的溶液加入碳酸铯(3当量)。在1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁二氯钯(II)与二氯甲烷复合物(0.1当量)之前，将反应混合物用N2脱气10分钟。在经LC-MS确认反应完成后，进行后处理，粗产物通过柱色谱纯化，得到3-(6-(苄氧基)噌啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸叔丁酯。
步骤8:在室温下叔丁基3-(6-(苄氧基)噌啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯(1当量)在甲醇中加入10％钯碳(0.1当量)。将溶液脱气并在氢气氛下搅拌16小时，或直至反应完成(经液相色谱-质谱确认)。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并进行后处理。粗产物然后通过柱色谱纯化，得到3-(6-羟基噌啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯。
步骤9:在室温下叔丁基3-(6-羟基噌啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1当量)在THF中的溶液加入碳酸铯(1.1当量)和2,3,6-三氟苯甲腈(1.1当量)。所得反应混合物在室温下搅拌16小时。经LC-MS确认反应完成后，进行后处理，粗产物经柱色谱纯化，得到3-(6-(2-氰基-3,6-二氟苯氧基)噌啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯。
步骤10:外消旋化合物3-(6-(2-氰基-3,6-二氟苯氧基)噌啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯通过手性SFC纯化进行拆分，得到(S)-3-(6-(2-氰基-3,6-二氟苯氧基)噌啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯。
步骤11:在室温下叔丁基(S)-3-(6-(2-氰基-3,6-二氟苯氧基)噌啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1当量)在N,N-二甲基甲酰胺中的溶液加入碳酸铯(2.5当量)和[甲基(氨磺酰基)氨基]乙烷(2当量)。将所得反应混合物在60℃下搅拌16小时。经LC-MS确认反应完成后，进行后处理，粗产物经柱色谱纯化，得到叔丁基(S)-3-(6-(2-氰基-3-((N-乙基-N-甲基氨磺酰基)氨基)-6-氟苯氧基)噌啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯。
步骤12:叔丁基(S)-3-(6-(2-氰基-3-((N-乙基-N-甲基硫代甲氧基)氨基)-6-氟苯氧基)噌啉-3-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(1当量)在二氯甲烷中的溶液加入二噁烷中4N氯化氢(10当量)。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。完成后，在减压下除去反应溶剂，并将粗化合物与甲基叔丁基醚(MTBE)一起研磨，得到最终产物(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]噌啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷。
步骤13:在氮气氛下于室温下向2-(1-(3-(2,4-二氧杂四氢嘧啶-1(2H)-基)-5-氟-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸(1当量)和(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]噌啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(1当量)在N,N-二甲基甲酰胺(4毫升/毫摩尔)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙基胺(4当量)。随后在相同温度下加入了HATU(1.1当量)。反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，进行后处理，粗产物通过反相高效液相色谱纯化，得到目标化合物(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]噌啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷。
实施例228
(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(实施例228)
步骤1和步骤2:
程序与实施例150中的步骤4和步骤5相同。获得的化合物(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷为浅棕色固体。LCMS(ESI):m/z557.3[M+H]+。
步骤3:
程序与实施例157中的步骤8相同。通过反相柱色谱(40-45％碳酸氢铵缓冲液在乙腈中)纯化粗化合物，得到(3S)-3-[6-[2-氰基-3-[[乙基(甲基)氨磺酰基]氨基]-6-氟苯氧基]-4-氧代-喹唑啉-3-基]-8-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(69.16mg,70.93μmol,16.80％产率)，灰白色固体。
LCMS(ESI):m/z 958.2[M+H]+。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.36(s,1H),7.78(s,1H),7.81(s,1H),7.69(dd,J＝3.20,9.00Hz,1H),7.52-7.45(m,1H),7.37(d,J＝2.80Hz,1H),7.33(d,J＝12.80Hz,1H),7.12(d,J＝6.80Hz,1H),5.31(m,1H),5.02(d,J＝2.00Hz,1H),4.16-4.13(m,2H),3.94-3.88(m,6H),3.89-3.72(m,1H),3.71-3.61(m,1H),3.60-3.48(m,1H),3.42-3.32(m,1H),3.19-3.06(m,6H),2.76-2.67(m,5H),2.58-2.38(m,3H),2.34-2.33(m,1H),2.12-2.01(m,1H),1.82-1.67(m,8H),1.05(t,J＝7.20Hz,3H)。
实施例229细胞HiBiT试验
材料
A375(携带BRAF纯合V600E突变)细胞系购自ATCC(Manassas,VA,USA)。RPMI 1640培养基(不含酚红)、胎牛血清(FBS)和丙酮酸钠(100mM)购自Gibco(美国纽约州大岛市)。从Corning(Corning,NY,USA)购买DMEM培养基(不含酚红，并添加了L-谷氨酰胺)。Nano-GloHiBiT裂解分析系统购自Promega(美国威斯康星州麦迪逊市)。A375.10(HiBiT-BRAFV600E)细胞系，通过CRISPR自制内源表达具有HiBiT融合标签的BRAFV600E。HEK293T.114(HiBiT-GSPT1)细胞系通过CRISPR内源表达带有HiBiT融合标签的GSPT1。由从德国DSMZ莱布尼茨研究所购买的KELLY细胞系(ACC-355)通过CRISPR自制内源表达具有HiBiT融合标签的SALL4的KELLY.2(SALL4-HiBiT)细胞系。细胞培养瓶和384孔微孔板从VWR(美国PA Radnor)或康宁(美国纽约州康宁)获得。
BRAFV600E降解分析
BRAFV600E的降解是基于使用Nano-Glo HiBiT裂解分析试剂盒对发光信号进行量化而确定的。在384孔板中加入测试化合物，11点，半对数滴定，最高浓度为10μM，一式两份。A375.10细胞以每孔7500个细胞的细胞密度加入384孔板中。板在37℃和5％二氧化碳下保持24小时。在没有测试化合物的情况下处理的细胞为阴性对照，而没有HiBiT裂解分析试剂的细胞为阳性对照。培养24小时后，向细胞中加入/>HiBiT裂解分析试剂。发光是在EnVision multilbel Reader(美国加利福尼亚州圣克拉拉市PerkinElmer)上获得的。化合物157的最终数据见图1。
GSPT1降解分析
GSPT1的降解是基于使用Nano-Glo HiBiT裂解分析试剂盒对发光信号进行量化而确定的。在384孔板中加入测试化合物，11点，半对数滴定，最高浓度为10μM，一式两份。HEK293T.114细胞以每孔6000个细胞的细胞密度加入384孔平板。板在37℃和5％二氧化碳下保持6小时。在没有测试化合物的情况下处理的细胞为阴性对照，而没有HiBiT裂解试剂的细胞为阳性对照。培养6小时后，向细胞中加入/>HiBiT裂解试剂。发光是在EnVision multilbel Reader(美国加利福尼亚州圣克拉拉市PerkinElmer)上获得的。化合物157的最终数据见图2。
SALL4降解分析
SALL4的降解是基于使用Nano-Glo HiBiT裂解分析试剂盒对发光信号进行量化而确定的。在384孔板中加入测试化合物，11点，半对数滴定，最高浓度为10μM，一式两份。KELLY.2细胞以每孔6000个细胞的细胞密度加入384孔平板。板在37℃和5％二氧化碳下保持6小时。在没有测试化合物的情况下处理的细胞为阴性对照，而没有HiBiT裂解试剂的细胞为阳性对照。培养6小时后，向细胞中加入/>HiBiT裂解试剂。发光是在EnVision multilbel Reader(美国加利福尼亚州圣克拉拉市PerkinElmer)上获得的。化合物157的最终数据见图3。
实施例230HTRF ERK抑制试验
材料
A375(携带BRAF纯合V600E突变)细胞系购自ATCC(CRL-1619)。从康宁(美国纽约州康宁市)购买了不含酚红且添加了L-谷氨酰胺的DMEM培养基。高级磷酸ERK(Thr202/Tyr204)HTRF检测试剂盒购自Cisbio(美国马萨诸塞州贝德福德)。细胞培养瓶和384孔微孔板从VWR(美国PA Radnor)或康宁(美国纽约州康宁)获得。
磷酸ERK(T202/Y204)抑制分析
基于使用高级磷酸ERK(T202/Y204)HTRF检测试剂盒对FRET信号的量化，确定对激活的磷酸ERK(T202/Y204)蛋白的抑制。在384孔板中加入测试化合物，11点，半对数滴定，最高浓度为10μM，一式两份。A375细胞以每孔8000个细胞的细胞密度加入384孔平板。板在37℃下用5％的二氧化碳保持24小时。在没有测试化合物的情况下处理的细胞为阴性对照。阳性对照由包含所有试剂但不含细胞的孔设定。FRET信号通过EnVision Multilabel Reader(美国加利福尼亚州圣克拉拉市PerkinElmer)获得。化合物157的最终数据见图1。
实施例231蛋白质印迹分析
方法:采用蛋白质印迹法测定化合物157的BRAF V600E降解特性及作用机制。A375(ATCC，CRL-1619)细胞用添加10％热灭活FBS的DMEM培养基培养，在6孔板中以500，000个细胞/孔铺板，并允许其附着16小时。将细胞用10μM靶向无功能性CRBN侧的BRAF V600E的化合物、IMiD靶向CRBN、MLN4924或1μM硼替佐米预处理1小时。预培养后，细胞在用或不用100nM化合物157的情况下处理24小时，此时用PBS冲洗细胞并快速冷冻。将细胞沉淀在裂解缓冲液[RIPA(Thermo，Ref 89901)、1x Halt蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合液(Thermo，Pro#1361281)、benzonase酶(Sigma，E1014-5JU)]中于冰上裂解10分钟。通过离心(21.2×g，10分钟)从裂解物中清除不溶性蛋白质。
使用BCA蛋白质检测试剂盒(Thermo，23228)测量蛋白质浓度。使用EnvisionMultilabel Reader(Perkin elemer)读取用牛血清白蛋白制备的蛋白质标准曲线和样品的蛋白质浓度。裂解液浓度用裂解缓冲液和Laemmli 6X、SDS-样品缓冲液，Reducing(Boston BioProducts，Inc.Part#BP-111R-50ml)进行标准化。将标准化样品和Duo Pre-stained Protein Ladder(LI-COR,928-60000)装载到4-15％Criterion Tris-氯化氢蛋白凝胶(Bio-Rad，3450028)上。凝胶在120V下运行1.5小时。根据制造商的建议，使用Trans-Blot Turbo Transfer System(Bio-Rad，1704150EDU)在25V下使用Trans-Blot Turbo RTA Midi 0.2μmNitrocellulose Transfer Kit(Bio-Rad,目录#1704271)完成7分钟的蛋白质转移。
在摇动的同时膜在Blocking Buffer(TBS)(LI-COR，目录号927-50000)中封闭1小时。一级抗体BRAF(1:1000；Cell Signaling,D9T6S)和粘着斑蛋白(1:10，000；EMD，05-386)在Intercept T20(TBS)无蛋白抗体稀释液(LI-COR，目录号927-85001)中稀释，并在4℃摇床培养过夜。膜在TBS-T中摇动洗涤3次，每次5分钟。二级抗体IR Dye800CW山羊抗兔(1:5000；LiCor，926-32211/C91030-13)和IR Dye680RD羊抗小鼠(1:5000；LiCor，926-68072/C90910-21)在Intercept T20(TBS)无蛋白抗体稀释液(LI-COR，目录号927-85001)中稀释，并在膜上培养1小时，同时在室温下摇动。按照前述方法洗涤膜，并在Odyssey CLx上成像。化合物157的该分析结果见图4。
该程序还用于确定化合物157和化合物157NMe的BRAF V600E降解特性。A375(ATCC，CRL-1619)细胞用添加10％热灭活FBS的DMEM培养基培养，在6孔板中以500，000个细胞/孔铺板，并允许其附着16小时。用在二甲基亚砜中连续稀释的化合物157或化合物157NMe化合物处理细胞24小时。用以下一级抗体对样品进行检测:BRAF(1:1000；Cell Signaling,D9T6S)，粘着斑蛋白(1:10，000；EMD，05-386)，ERK(1:1000；Cell Signaling，4696S)和pERKT202/Y204(1:1000；Cell Signaling,9101S)。结果数据见图9。
化合物157NMe
该程序还用于确定化合物157的WT BRAF降解特性。将经补充10％热灭活FBS的McCoy’s 5a培养基改良(ATCC，30-2007)培养的HCT-116(ATCC，CCL-247)细胞以500，000个细胞/孔接种于6孔板中，并允许其附着16小时。将细胞用在二甲基亚砜中连续稀释的化合物157处理24小时。用以下一级抗体对样品进行检测:BRAF(1:1000；Cell Signaling,D9T6S)，粘着斑蛋白(1:10，000；EMD，05-386)，ERK(1:1000；Cell Signaling，4696S)和pERKT202/Y204(1:1000；Cell Signaling,9101S)。结果数据见图12。
该程序还用于研究BRAF V600E和NRASQ61K双突变抗性模型，响应于与曲美替尼联合使用的BRAF降解物或抑制剂。用添加10％热灭活FBS的DMEM培养液培养的A375(ATCC，CRL-1619)细胞用CRISPR工程化以稳定表达NRASQ61K作为患者观察到的耐药模型。将细胞以500，000个细胞/孔接种于6孔板中，并允许其附着16小时。用连续稀释于二甲基亚砜中的化合物157或康奈非尼化合物处理细胞24小时。他们还与1nM曲美替尼联合治疗。用以下一级抗体对样品进行检测:BRAF(1:1000；Cell Signaling,D9T6S)，粘着斑蛋白(1:10，000；EMD，05-386)，ERK(1:1000；Cell Signaling，4696S)和pERK T202/Y204(1:1000；CellSignaling,9101S)。结果数据见图20。
该程序还用于确定化合物157的BRAF降解特性。HEK-293T(ATCC，CRL-3216)细胞用添加10％热灭活FBS的DMEM培养基培养后，被工程改造以表达HA标记形式的BRAF V600E、WT、p61剪接变体、II类突变G469A和III类突变G466V。将细胞以500，000个细胞/孔接种于6孔板中，并允许其附着16小时。将细胞用二甲基亚砜中连续稀释的化合物157处理24小时。用以下一级抗体对样品进行检测:HA(1:1000；Cell Signaling,3924)和粘着斑蛋白(1:10，000；EMD，05-386)。结果数据见图23。
该程序还用于确定化合物157的BRAF降解特性。将内源性表达III类突变G466V的H1666(ATCC，CRL-5885)细胞用添加5％热灭活FBS的RPMI-1640培养基培养。将细胞以500，000个细胞/孔接种于6孔板中，并使其附着16小时。将细胞用在二甲基亚砜中连续稀释的化合物157处理24小时。样品按照上文图2B所述的相同方法进行蛋白质印迹分析。用以下一级抗体对样品进行检测:BRAF(1:1000；Cell Signaling,D9T6S)，粘着斑蛋白(1:10，000；EMD，05-386)，ERK(1:1000；Cell Signaling，4696S)和pERK T202/Y204(1:1000；CellSignaling,9101S)。结果数据见图24。
实施例232三元复合物形成分析
使用AlphaLISA分析对BRAF V600E、测试化合物和CRBN之间三元复合物的形成进行定量。GST标记的BRAF V600E和His标记的CRBN被标记为供体/受体对，并通过α信号的变化监测复合物的形成。来自对照孔的信号被用作标准化对照。化合物157的三元复合物形成的浓度相关性具有典型的钟形曲线，并且未观察到该化合物的非活性形式(化合物157NMe)的复合物形成。
方法
GST-BRAF V600E、化合物157和his-CRBN之间三元复合物形成的表征是使用AlphaLISA分析进行的。使用声学技术将化合物从低死体积板中的连续稀释的DMSO原液分配到灰色384孔AlphaPlastes中，达到总反应体积的1％。化合物垂直排列在A行至p行。浓度系列水平排列:第1-11列，然后在第12-22列重复。第23和第24列分别为0％(无测试化合物，因此只有背景信号)和100％对照(1nM双标记MBP蛋白，产生的信号对应于10nM的复合物)。
供体珠的激发导致单线态氧分子的产生。如果在BRAF V600E和CRBN之间形成三元复合物，它将供体/受体珠紧密靠近，供体释放的单态氧将刺激受体珠的光发射。在没有三元复合物的情况下，供体-受体的平均距离太大，无法刺激受体发射。
向含有测试化合物的孔(第1-22列)和阴性对照孔(第23列)中加入10微升混合物，该混合物含有50mM HEPES(pH 7.4)中的16nM的BRAF V600E和64nM的CRBN、200mM氯化钠、1mM TCEP、0.05％ Pluronic Acid、0.1％ BSA。阳性对照孔(第24列)含有10uL的20nM双标签MBP。将板离心30秒，以2000转/分钟的速度振摇30秒，并在室温下培养1小时。培养完成后，向所有孔中加入10uL含供体和受体珠的混合物，各40ug/ml。将板再次离心30秒，以2000转/分的速度搅拌30秒，并在室温下培养1小时。然后，在配有适当的AlphaLISA过滤设置的Envision平板阅读器上读板。化合物157的所得数据见图5。
实施例233激酶组学谱分析
化合物157针对多种蛋白激酶进行了测试，以确定其对BRAF的选择性。图6和图7中的圆圈显示了与化合物157一起培养后剩余的蛋白质活性多大。
方法
在Eurofins DiscoverX Corporation进行了激酶组学扫描分析。激酶标记的T7噬菌体株系在来源于BL21株系的大肠杆菌宿主中在24孔区平行生长。将大肠杆菌生长至对数期，用T7噬菌体从冷冻储备中感染(感染复数＝0.4)，并在32℃下振荡培养直至裂解(90-150分钟)。将裂解物离心(6，000x g)并过滤(0.2μm)以去除细胞碎片。剩余的激酶在HEK-293细胞中产生，随后用DNA标记用于qPCR检测。链霉亲和素包被的磁珠在室温下用生物素化小分子配体处理30分钟，以产生用于激酶分析的亲和树脂。用过量的生物素封闭连接的珠，并用封闭缓冲液(SeaBlock(Pierce)，1％牛血清白蛋白，0.05％Tween 20，1mM DTT)洗涤以去除未结合的配体并减少非特异性噬菌体结合。结合反应通过在1倍结合缓冲液(20％SeaBlock、0.17倍PBS、0.05％Tween 20、6mM DTT)中结合激酶、配体连接的亲和珠和测试化合物来组装。测试化合物在100％的二甲基亚砜中制备成40倍的储备，并直接稀释到检测中。所有反应均在最终体积为0.02ml的聚丙烯384孔板中进行。将分析板在室温下振荡培养1小时，并用洗涤缓冲液(1倍PBS，0.05％Tween 20)洗涤亲和珠。然后将珠粒重新悬浮在洗脱缓冲液(1倍PBS、0.05％Tween 20、0.5μM非生物素化亲和配体)中，并在室温下振荡培养30分钟。洗脱液中的激酶浓度通过qPCR测定。结果数据见图6和图7。
实施例234全蛋白质组学谱分析A375和JURKAT细胞系
对于A375细胞，共鉴定出8，760种蛋白质，蛋白质错误发现率为2.65％。本实验结果表明，与300nM达拉菲尼处理相比，BRAFV600E选择性降解至剩余27％蛋白质，而ARAF和RAF1(又名CRAF)基本保持不变。发现减少的唯一其他蛋白质是LOXL4(sp|Q96JB6|LOXL4_HUMAN；Lysyl氧化酶同源物4)，然而，在达拉菲尼处理的样品中也观察到了较低程度的降低，因此不被认为是化合物157的真正脱靶，而是BRAFV600E活性损失的结果。在含有野生型BRAF的JURKAT细胞(ATCC，TIB-152)中进行的实验中，共鉴定出8，415种蛋白质，蛋白质错误发现率为2.8％。数据分析显示，在用300nM化合物157处理24小时后，BRAF、ARAF和RAF1(又名CRAF)未发生变化，这表明化合物157与野生型BRAF以及密切相关的蛋白质ARAF和RAF1(又名CRAF)相比，对BRAFV600E具有高度的特异性。
化合物157在A375和JURKAT细胞系中的全蛋白质组学实验方法。
在37℃和5％二氧化碳的培养箱中，用二氧化硫或化合物157(最终浓度为300nM)处理每一个细胞系24小时。培养24小时后，收获细胞，用PBS洗涤两次，并在液氮中快速冷冻。将样品重新悬浮在裂解缓冲液[8M尿素、50mM HEPES(pH 8.5)、50mM氯化钠、1倍蛋白酶抑制剂混合物]中，并通过在4℃下以85％的幅度在30秒开启和30秒关闭的脉冲设置下进行超声裂解，总时间为5分钟。裂解物在4℃下以最大速度离心10分钟，收集上清液，在室温下用5毫摩尔TCEP还原1小时，然后用15毫摩尔碘代乙酰胺(室温下，在黑暗中，30分钟)将半胱氨酸残基烷基化。通过甲醇-氯仿沉淀和随后的冰冷丙酮洗涤提取蛋白质含量。将蛋白颗粒重悬于8M尿素、50mM HEPES(pH 8.5)缓冲液中，并通过BCA分析测量蛋白浓度。然后用50mMHEPES(pH 8.5)将样品稀释至4M尿素，并在37℃下用内蛋白酶Lys-C以1/250酶/蛋白比消化1小时。然后用50mM HEPES(pH 8.5)将混合物稀释至1M尿素，并以1/150的酶/蛋白比加入胰蛋白酶。反应在37℃孵育过夜，用甲酸酸化至最终浓度5％(v/v)停止。使用C18 SepPak固相萃取柱纯化肽，并使用SpeedVac系统干燥至完全。
对于肽串联质量标签(TMT)标记，在200mM HEPES(pH 8.5)、30％乙腈(ACN)和每种的特定TMT试剂中，以1μg/μl浓度制备每样品100μg的肽。在室温下温育1小时后，用0.3％的羟胺将反应淬灭15分钟，并基于蛋白质的量均匀混合。混合样品用C18 SepPak固相萃取柱脱盐，在快速真空中干燥至完全，然后重悬浮于5％丙烯酸正丁酯、10mM碳酸氢铵pH 8中，用于使用配备3.5m x桥肽BEH C18柱的高效液相色谱的碱性反相色谱进行分级。收集96个级分，合并成12个样品，使用SepPAK C18柱脱盐，然后通过真空离心干燥。然后将样品在16微升5％的甲酸溶液中进行重构用于液相色谱-串联质谱/串联质谱分析。通过反相色谱分离6微升的每个样品，使用安装在EASY-nLC 1200LC泵中的EASY-Spray C18柱(2μm颗粒尺寸，500mm长度x 75μm ID)，该泵与Orbitrap Fusion Lumos Tribid质谱仪连接。使用分成3个部分(5-25％ ACN 300分钟，25-40％ ACN 120分钟，95％ ACN 30分钟)的450分钟梯度以300nL/min的流速将肽分离。通过数据依赖采集方法收集肽，使用CID进行MS2片段化，使用HCD进行同步前体选择，基于MS3(SPS-MS3)片段化进行TMT报告离子释放。从质谱仪中获得的所有数据文件均使用哈佛医学院史蒂夫·吉教授实验室开发的基于SEQUEST的软件进行处理。简而言之，在人类非冗余Uniprot蛋白数据库中检索质谱，该数据库与由所有按相反顺序排列的蛋白序列以及已知污染物组成的数据库相连接。在所有SEQUEST检索中，前体离子耐受度设定为25ppm，包括甲硫氨酸氧化(+15.9949Da)和半胱氨酸脲甲基化(carbamidomethylation)(+57.0215Da)作为可变修饰。赖氨酸残基和N端肽上的TMT标签(+229.1629Da)被设置为静态修饰。使用线性鉴别分析进行肽谱匹配(PSM)，并调整至2％的错误发现率(FDR)。TMT报告离子强度通过减去每种离子的信噪比进行量化。接下来，使用4％的蛋白质FDR标靶将肽折叠成蛋白质组。结果数据见图8。
实施例235A375细胞生长速率
A375(ATCC，CRL-1619)细胞用添加10％热灭活FBS的DMEM培养基培养，在96孔培养皿中以3，000个细胞/孔培养。化合物在二甲基亚砜中连续稀释，并在接种后加入到培养基中。板用透气膜透气密封膜(Sigma，Z380059)密封，细胞在初始成像前放置8小时。通过7天内每隔6小时在温度和湿度受控的培养箱(37℃，5％二氧化碳)中成像测量汇合。使用Incucyte软件进行分析。含化合物157的A375细胞的生长速率见图10和图11。该实验还对用CRISPR改造的具有NRASQ61K突变的A375细胞(ATCC，CRL-1619IG-2)进行。该数据如图21所示。
实施例236HCT-116细胞汇合
将McCoy 5a培养基改良(ATCC，30-2007)培养基(补充10％热灭活FBS)培养的HCT-116(ATCC，CCL-247)细胞以3，000个细胞/孔接种于96孔板中。化合物在二甲基亚砜中连续稀释，并在接种后加入到培养基中。板用透气膜透气密封膜(Sigma，Z380059)密封，细胞在初始成像前放置8小时。通过7天，每隔6小时在温度和湿度受控的培养箱(37℃，5％二氧化碳)中成像测量汇合。使用Incucyte软件进行分析。该数据如图13所示。
实施例237HTRF ERK抑制试验
材料
A375(携带BRAF纯合V600E突变)购自ATCC。从康宁(美国纽约州康宁市)购买了不含酚红且添加了L-谷氨酰胺的DMEM培养基。高级磷酸ERK(Thr202/Tyr204)HTRF检测试剂盒购自Cisbio(美国马萨诸塞州贝德福德)。细胞培养瓶和384孔微孔板从VWR(美国PARadnor)或康宁(美国纽约州康宁)获得。
磷酸ERK(T202/Y204)抑制分析
基于使用高级磷酸ERK(T202/Y204)HTRF检测试剂盒对FRET信号的量化，确定激活的磷酸ERK(T202/Y204)蛋白的降解。在384孔板中加入测试化合物，11点，半对数滴定，最高浓度为10μM，一式两份。A375细胞分别以每孔8000个细胞的细胞密度加入384孔板。板在37℃下用5％的二氧化碳保持24小时。在没有测试化合物的情况下处理的细胞为阴性对照。阳性对照由包含所有试剂但不含细胞的孔设定。FRET信号通过EnVision Multilabel Reader(美国加利福尼亚州圣克拉拉市PerkinElmer)获得。
细胞生长抑制分析
A375细胞的生存力是基于使用2.0发光检测试剂盒对三磷酸腺苷的定量来确定的，其指示存在具有代谢活性的细胞。简而言之，在384孔板中加入测试化合物，最高浓度为10μM，14个点，半对数滴定，一式两份。将A375细胞以每孔250个细胞的细胞密度接种到含10％ FBS的DMEM培养基中的384孔板中。在不存在测试化合物的情况下处理的细胞为阴性对照，对100％活力标准化，在不存在/>2.0的情况下处理的细胞为阳性对照，对0％活力标准化。将A375细胞在37℃和5％二氧化碳下培养72小时，然后向细胞中加入/>2.0试剂，并在EnVision multilbel Reader(美国加利福尼亚州圣克拉拉市PerkinElmer)上获得发光。结果数据如表10所示。
表10
表中的所有数据代表至少n＝3个测定结果的平均响应
表中所有pERK数据均在24小时收集
实施例238化合物157在A375异种移植物肿瘤中的体内效力和体重变化。
对荷A375肿瘤的雌性BALB/c裸鼠进行了疗效研究。雌性BALB/c裸鼠在右侧腹皮下接种于0.2mL的补充有Matrigel的PBS(比例为1:1)中的A375肿瘤细胞(5x106)用于肿瘤生长。使用卡尺每周测量两次二维肿瘤体积，并使用以下公式计算体积(mm3):V＝0.5a xb2，其中a和b分别为肿瘤的长径和短径，单位为mm。一旦肿瘤达到246mm3的平均肿瘤体积(植入后16天)，将动物随机分为6个的组，分层以使每个治疗组的平均肿瘤大小大致相等，并在第0天开始治疗。
所有药物均口服(PO),每日(QD；康奈非尼)，对于化合物157一天两次(BID)或一天三次(TID)，共21或35天。康奈非尼以35毫克/千克的剂量给药，化合物157以0.1、0.3、1、3或10毫克/千克的剂量每日两次，或2毫克/千克每日三次给药。化合物157在20％聚乙二醇400+80％(25％ SBECD)中配制。按每周2次的时间表测量体重和MTV，并作为平均值±SEM报告。
化合物157在A375异种移植物肿瘤中的效力在六种不同浓度下进行评估:0.1-10毫克/千克。化合物157经口服给予BID(一天两次)或TID(一天三次)。将化合物157的效力与康奈非尼(口服，一天一次(QD)，35毫克/千克)进行比较。结果见图4。与媒剂治疗的肿瘤相比，化合物157以1毫克/千克PO BID、2毫克/千克PO TID或3毫克/千克PO BID进行治疗可产生有效的肿瘤生长抑制作用，且以10毫克/千克PO BID进行治疗可产生稳健的肿瘤生长衰退。所有剂量均具有良好的耐受性，因为在整个研究过程中，没有任何一组的体重减轻超过平均3.5％。结果数据见图14和15。
实施例239化合物157在血浆和A375异种移植物肿瘤中的体内药代动力学活性
将A375肿瘤细胞(5x106)在0.2mL补充有Matrigel的PBS(比例为1:1)中在右侧腹皮下接种用于肿瘤生长。使用卡尺每周测量两次二维肿瘤体积，并使用以下公式计算体积(mm3):V＝0.5a x b2，其中a和b分别为肿瘤的长径和短径，单位为mm。一旦肿瘤达到313mm3的平均肿瘤体积，将动物随机分为3个的组，并以0.3、1、3或10mg/kg的单次口服剂量给予化合物157。化合物157在20％聚乙二醇400+80％(25％ SBECD)中配制。在单次给药后1小时、4小时、10小时、24小时和36小时处死小鼠，收集血浆和肿瘤。每个取样时间点收集3个肿瘤和血浆样品。将血浆和肿瘤样品注入LC/MS/MS系统进行定量分析。数据以平均值SEM表示。结果数据见图16和17。
对其他样品进行了处理，结果见图18和图19。在单次给药后1小时、4小时、10小时、24小时和36小时处死小鼠，收集血浆和肿瘤。然后对肿瘤进行机械均质化处理，并使用RIPA缓冲液(Sigma Aldrich)提取蛋白质。使用PierceTM BCA蛋白质检测试剂盒对蛋白质浓度进行定量，缩减样品，然后将等量的蛋白质装载到蛋白质印迹凝胶上进行分析。对肿瘤进行B-RAF(CST，14814)或磷酸ERK(CST，4370)表达分析。使用Image Studio软件对单个条带的强度进行了测量用于数据分析。相对于参考蛋白GAPDH对蛋白表达进行定量，以控制总蛋白浓度。然后与媒剂对照样品进行比较，将数据对化合物157处理样品中的目标量标准化。数据以媒剂对照中存在的目标的百分比表示，并对于总蛋白质进行标准化。误差线代表SEM值。
实施例240HTRF ERK抑制试验
材料
A375-NRASQ61K细胞(含有BRAF纯合V600E突变和NRAS纯合Q61K突变)购自ATCC。从康宁(美国纽约州康宁市)购买了不含酚红且添加了L-谷氨酰胺的DMEM培养基。高级磷酸ERK(Thr202/Tyr204)HTRF检测试剂盒购自Cisbio(美国马萨诸塞州贝德福德)。细胞培养瓶和384孔微孔板从VWR(美国PA Radnor)或康宁(美国纽约州康宁)获得。
磷酸ERK(T202/Y204)降解分析
基于使用高级磷酸ERK(T202/Y204)HTRF检测试剂盒对FRET信号的量化，确定激活的磷酸ERK(T202/Y204)蛋白的降解。在384孔板中加入测试化合物，最高浓度为10μM，11点，半对数滴定，一式两份。将A375-NRASQ61K细胞以每孔2000个细胞的细胞密度加入384孔板中。板在37℃下用5％的二氧化碳保持24小时。在没有测试化合物的情况下处理的细胞为阴性对照。阳性对照由包含所有试剂但不含细胞的孔设定。FRET信号通过EnVisionMultilabel Reader(美国加利福尼亚州圣克拉拉市PerkinElmer)获得。
CellTiter-Glo生长抑制试验方法
材料
A375-NRASQ61K细胞(含有BRAF纯合V600E突变和NRAS纯合Q61K突变)购自ATCC。从康宁(美国纽约州康宁市)购买了DMEM培养基(不含酚红，并添加了L-谷氨酰胺)。2.0检测购自Promega(美国威斯康星州麦迪逊市)。细胞培养瓶和384孔微孔板从VWR(美国PA Radnor)或康宁(美国纽约州康宁)获得。
细胞生长抑制分析
A375-NRASQ61K细胞活力通过使用2.0发光检测试剂盒对三磷酸腺苷进行定量来确定，其指示存在代谢活性细胞。简而言之，在384孔板中加入测试化合物，最高浓度为10μM，14个点，半对数滴定，一式两份。将A375-NRASQ61K细胞以每孔250个细胞的细胞密度接种到含10％ FBS的DMEM培养基中的384孔板中。在不存在测试化合物的情况下处理的细胞为阴性对照，对100％活力标准化，在不存在/>2.0的情况下处理的细胞为阳性对照，对0％活力标准化。将A375细胞在37℃和5％二氧化碳下培养96小时。然后向细胞中加入CellTiter-Glo Glo试剂，并在EnVision multilbel Reader(美国加利福尼亚州圣克拉拉市PerkinElmer)上获得发光。
表9
表中的所有数据代表至少n＝3个测定结果的平均响应
表中所有pERK数据均在24小时收集
实施例241NRASQ61K肿瘤体积测定
将实施例240中所述的A375 NRASQ61K肿瘤V600E双突变细胞在37℃下，5％二氧化碳的气氛中，在补充有10％胎牛血清和1％青霉素-链霉素的DMEM培养基中进行体外培养。肿瘤细胞每周常规传代培养两次。收获以指数生长阶段生长的细胞并计数用于肿瘤接种。
在携带A375 NRASQ61K肿瘤的雌性BALB/c裸鼠中进行疗效研究。将A375 NRASQ61K肿瘤细胞(10x106)在0.2mL的补充有Matrigel的PBS中(比例为1:1)在右侧腹皮下接种用于肿瘤生长。使用卡尺每周测量两次二维肿瘤体积，并使用以下公式计算体积(mm3):V＝0.5axb2，其中a和b分别为肿瘤的长径和短径，单位为mm。一旦肿瘤达到139mm3的平均肿瘤体积(植入后40天)，将动物随机分为8个的组，分层以使每个治疗组的平均肿瘤大小大致相等，并在第1天开始治疗。
所有药剂均以口服方式(PO)给药于荷A375 NRASQ61K肿瘤的小鼠，康奈非尼每日(QD)以35mg/kg给药，或曲美替尼每日两次(BID)以0.1mg/kg给药，和化合物157作为单一药物以3、10或30mg/kg给药，或与曲美替尼联合以1、3、10、30mg/kg给药。给药21天。化合物157在20％聚乙二醇400+80％(25％ SBECD)中配制。按每周2次的时间表测量体重和MTV，并作为平均值±SEM报告。结果数据见图22。
实施例242H1666细胞汇合
用添加5％热灭活FBS的RPMI-1640培养基培养的H1666(ATCC，CRL-5885)细胞在96孔培养皿中以3，000个细胞/孔接种。化合物在二甲基亚砜中连续稀释，并在接种后加入到培养基中。板用透气膜透气密封膜(Sigma，Z380059)密封，细胞在初始成像前放置8小时。通过7天内，每隔6小时在温度和湿度受控的培养箱(37℃，5％二氧化碳)中成像测量汇合。使用Incucyte软件进行分析。结果数据见图25。
本说明书中引用的所有出版物和专利申请均通过引用纳入本说明书，如同每个单独的出版物或专利申请均被明确且单独地指明通过引用纳入本说明书。
尽管为了清楚理解的目的，已经通过举例和举例的方式对前述发明进行了一些详细描述，但是对于本领域普通技术人员而言，根据本发明的教导，在不脱离所附权利要求书中定义的本发明的精神或范围的情况下，可以对其进行某些改变和修改是显而易见的。此外，本领域技术人员将认识到或能够仅通过常规实验确定与本文所述具体实施方式和方法的许多等同物。该等等同物旨在包含在本申请的范围内。

Claims (248)

1.式I、式II、式III、式IV、式V或式VI的化合物：
或其药学上可接受的盐；
其中
A1选自-NR2-和-CHR2’-；
R1选自氢、烷基和环烷基；
R2选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选地被一个或两个R3取代的杂环烷基；
R2'选自氢、烷基、环烷基和卤代烷基；
或R1和R2'与它们所连接的碳原子一起形成任选被一个或两个R3取代的环烷基；
每个R3独立地选自氢、卤素、烷基、环烷基和烷氧基；
R4选自氢、烷基、氰基和卤素；
R5选自氢、烷基、氰基和卤素；
A2选自-O-、-NH-和-(C＝O)-；
A22选自-O-和-NH-；
A24选自键、-CH2-、-NH-和-O-；
W1选自-N-和-CH-；
W2选自-N-和-CR26-；
R6选自氢、卤素、羟基、氨基、二烷基氨基、烷氧基、烷基和烷氧基烷基；
R26选自氢、卤素、羟基、氨基、烷氧基和烷基；
A3选自键、-CH2-、-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-、-CH(CH3)-CH2-CH2-、-CH2-CH(CH3)-CH2-、-CH2-CH2-CH(CH3)-、-CH2-CH2-CH2-CH2-和-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-；
A23选自键、-O-和-CH2-；
A选自键、嘧啶基、吡啶基、吡唑基和3-氮杂双环[3.1.0]己基；
A30选自键、-CH2-、嘧啶基、吡啶基、吡唑基和3-氮杂双环[3.1.0]己基；
B选自苯基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚烷基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基、1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂螺[4.5]癸基、1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸基、1,8-二氮杂螺[4.5]癸基和8-氮杂螺[4.5]癸基；其中B任选被独立地选自卤素、烷基和烷氧基的一个或两个取代基取代；
B2选自苯基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚烷基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基和8-氮杂螺[4.5]癸基；其中B2任选被独立地选自卤素、烷基和烷氧基的一个或两个取代基取代；
B3选自苯基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚烷基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基、1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂螺[4.5]癸基、1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸基、1,8-二氮杂螺[4.5]癸基和8-氮杂螺[4.5]癸基；
n是0或1；
A4选自键、-CH2-、-(SO2)-CH2-、-CH(CH2OH)-、-NH-和-O-；
A14选自键、-CH2-、-CH2-CH2-、-CH(CH2OH)-、-NH-、-O-、环烷基和烷基氨基；
C选自氮杂环庚烷基、氮杂环丁烷基、环烷基、哌嗪基和哌啶基；其中C任选被一个或两个独立地选自羟基、烷基和烷氧基的取代基取代；
D选自
R7选自氢、烷基、氰基、卤素和烷氧基；
R8选自氢、烷基、氰基、卤素和烷氧基；
R9选自氢、烷基、氰基、卤素和烷氧基；
R17选自氢、烷基、氰基、羟基、环烷基、卤素和烷氧基；
R18选自氢、烷基、氰基、羟基、环烷基、卤素和烷氧基；
R19选自氢、烷基、氰基、羟基、环烷基、卤素和烷氧基；
A5是-CH-或-N-；
A15选自键、-O-和-NH-；
A6是-CH-或-N-；以及
接头是二价化学基团。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有下式：
或其药学上可接受的盐。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中A4是键。
4.根据权利要求1或2所述的化合物，其中A4是-NH-。
5.根据权利要求1或2所述的化合物，其中A4是-O-。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物，其中A5为-CH-。
7.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物，其中A5是-N-。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中R7为氢。
9.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中R7为烷基。
10.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中R7为甲基。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的化合物，其中R8为氢。
12.根据权利要求1-10中任一项所述的化合物，其中R8为烷基。
13.根据权利要求1-10中任一项所述的化合物，其中R8为卤素。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的化合物，其中R9为氢。
15.根据权利要求1-13中任一项所述的化合物，其中R9为烷基。
16.根据权利要求1-13中任一项所述的化合物，其中R9为卤素。
17.根据权利要求1-13中任一项所述的化合物，其中R9为氟。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的化合物，其中B是
19.根据权利要求1-17中任一项所述的化合物，其中B是
20.根据权利要求1-17中任一项所述的化合物，其中B为任选被一个或两个独立选自卤素、烷基和烷氧基的取代基取代的苯基、哌啶基或哌嗪基。
21.根据权利要求1-17中任一项所述的化合物，其中B为苯基、哌啶基或哌嗪基。
22.根据权利要求1-17中任一项所述的化合物，其中B为1,4-二氮杂环庚烷基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基、1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂螺[4.5]癸基、1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸基、1,8-二氮杂螺[4.5]癸基或8-氮杂螺[4.5]癸基。
23.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有下式：
或其药学上可接受的盐。
24.根据权利要求1或权利要求23所述的化合物，其中A6是-CH-。
25.根据权利要求1或权利要求23所述的化合物，其中A6是-N-。
26.根据权利要求23-25中任一项所述的化合物，其中A14为键。
27.根据权利要求23-25中任一项所述的化合物，其中A14为-CH2-、-CH2-CH2-或-CH(CH2OH)-。
28.根据权利要求23-25中任一项所述的化合物，其中A14是-NH-。
29.根据权利要求23-25中任一项所述的化合物，其中A14为-O-。
30.根据权利要求23-25中任一项所述的化合物，其中A14是环烷基。
31.根据权利要求23-25中任一项所述的化合物，其中A14为烷基氨基。
32.根据权利要求23-31中任一项所述的化合物，其中R17为氢。
33.根据权利要求23-31中任一项所述的化合物，其中R17是烷基。
34.根据权利要求23-31中任一项所述的化合物，其中R17为卤素。
35.根据权利要求23-31中任一项所述的化合物，其中R17是氟。
36.根据权利要求23-35中任一项所述的化合物，其中R18为氢。
37.根据权利要求23-35中任一项所述的化合物，其中R18是烷基。
38.根据权利要求23-35中任一项所述的化合物，其中R18为卤素。
39.根据权利要求23-35中任一项所述的化合物，其中R18为氟。
40.根据权利要求23-39中任一项所述的化合物，其中R19为氢。
41.根据权利要求23-39中任一项所述的化合物，其中R19为烷基。
42.根据权利要求23-39中任一项所述的化合物，其中R19为卤素。
43.根据权利要求23-39中任一项所述的化合物，其中R19为氟。
44.根据权利要求1-43中任一项所述的化合物，其中A2是-O-。
45.根据权利要求1-43中任一项所述的化合物，其中A2是-NH-。
46.根据权利要求1-43中任一项所述的化合物，其中A2是-(C＝O)-。
47.根据权利要求1-46中任一项所述的化合物，其中A3为键。
48.根据权利要求1-46中任一项所述的化合物，其中A3是-CH2-。
49.根据权利要求1-46中任一项所述的化合物，其中A3为-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-、-CH(CH3)-CH2-CH2-、CH2-CH(CH3)-CH2-、-CH2-CH2-CH(CH3)-、-CH2-CH2-CH2-CH2-或-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-。
50.根据权利要求1-49中任一项所述的化合物，其中n为0。
51.根据权利要求1-49中任一项所述的化合物，其中n为1。
52.根据权利要求1-51中任一项所述的化合物，其中R6为氢。
53.根据权利要求1-51中任一项所述的化合物，其中R6为卤素。
54.根据权利要求1-51中任一项所述的化合物，其中R6为氨基或二烷基氨基。
55.根据权利要求1-51中任一项所述的化合物，其中R6为羟基或烷氧基。
56.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有下式：
或其药学上可接受的盐。
57.根据权利要求56所述的化合物，其中D是
58.根据权利要求56所述的化合物，其中D是
59.根据权利要求56-58中任一项所述的化合物，其中W1为-N-。
60.根据权利要求56-58中任一项所述的化合物，其中W1为-CH-。
61.根据权利要求56-60中任一项所述的化合物，其中W2为-N-。
62.根据权利要求56-60中任一项所述的化合物，其中W2为-CR26-。
63.根据权利要求56-62中任一项所述的化合物，其中R26为氢。
64.根据权利要求56-62中任一项所述的化合物，其中R26为卤素。
65.根据权利要求56-64中任一项所述的化合物，其中A23为键。
66.根据权利要求56-64中任一项所述的化合物，其中A23为-O-。
67.根据权利要求56-64中任一项所述的化合物，其中A23为-CH2-。
68.根据权利要求56-67中任一项所述的化合物，其中A30是键。
69.根据权利要求56-67中任一项所述的化合物，其中A30是-CH2-。
70.根据权利要求56-67中任一项所述的化合物，其中A30是嘧啶基或吡啶基。
71.根据权利要求56-67中任一项所述的化合物，其中A30是吡唑基。
72.根据权利要求56-67中任一项所述的化合物，其中A30是3-氮杂双环[3.1.0]己基。
73.根据权利要求56-72中任一项所述的化合物，其中B3为苯基。
74.根据权利要求56-72中任一项所述的化合物，其中B3为哌啶基或哌嗪基。
75.根据权利要求56-72中任一项所述的化合物，其中B3为1,4-二氮杂环庚烷基、1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷基、2,8-二氮杂螺[4.5]癸基、2-氮杂螺[4.5]癸基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、7-氮杂螺[3.5]壬基、1,1-二氧代-1λ6-硫杂-8-氮杂螺[4.5]癸基、1-氧杂螺[4.5]癸基、1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸基、1,8-二氮杂螺[4.5]癸基或8-氮杂螺[4.5]癸基。
76.根据权利要求56-75中任一项所述的化合物，其中A22是-O-。
77.根据权利要求56-75中任一项所述的化合物，其中A22是-NH-。
78.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有下式：
或其药学上可接受的盐。
79.根据权利要求78所述的化合物，其中A5是-CH-。
80.根据权利要求78所述的化合物，其中A5是-N-。
81.根据权利要求78-80中任一项所述的化合物，其中R7为氢。
82.根据权利要求78-80中任一项所述的化合物，其中R7为烷基。
83.根据权利要求78-80中任一项所述的化合物，其中R7为甲基。
84.根据权利要求78-83中任一项所述的化合物，其中R8为氢。
85.根据权利要求78-83中任一项所述的化合物，其中R8为烷基。
86.根据权利要求78-83中任一项所述的化合物，其中R8为卤素。
87.根据权利要求78-86中任一项所述的化合物，其中R9为氢。
88.根据权利要求78-86中任一项所述的化合物，其中R9为烷基。
89.根据权利要求78-86中任一项所述的化合物，其中R9为卤素。
90.根据权利要求78-86中任一项所述的化合物，其中R9为氟。
91.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有下式：
或其药学上可接受的盐。
92.根据权利要求91所述的化合物，其中A6是-CH-。
93.根据权利要求91所述的化合物，其中A6是-N-。
94.根据权利要求91-93中任一项所述的化合物，其中R17为氢。
95.根据权利要求91-93中任一项所述的化合物，其中R17是烷基。
96.根据权利要求91-93中任一项所述的化合物，其中R17为卤素。
97.根据权利要求91-93中任一项所述的化合物，其中R17为氟。
98.根据权利要求91-97中任一项所述的化合物，其中R18为氢。
99.根据权利要求91-97中任一项所述的化合物，其中R18为烷基。
100.根据权利要求91-97中任一项所述的化合物，其中R18为卤素。
101.根据权利要求91-97中任一项所述的化合物，其中R18为氟。
102.根据权利要求91-101中任一项所述的化合物，其中R19为氢。
103.根据权利要求91-101中任一项所述的化合物，其中R19是烷基。
104.根据权利要求91-101中任一项所述的化合物，其中R19为卤素。
105.根据权利要求91-101中任一项所述的化合物，其中R19为氟。
106.根据权利要求78-105中任一项所述的化合物，其中A2为-O-。
107.根据权利要求78-105中任一项所述的化合物，其中A2为-NH-。
108.根据权利要求78-105中任一项所述的化合物，其中A2为-(C＝O)-。
109.根据权利要求78-108中任一项所述的化合物，其中n为0。
110.根据权利要求78-108中任一项所述的化合物，其中n为1。
111.根据权利要求78-110中任一项所述的化合物，其中R6为氢。
112.根据权利要求78-110中任一项所述的化合物，其中R6为卤素。
113.根据权利要求78-110中任一项所述的化合物，其中R6为氨基或二烷基氨基。
114.根据权利要求78-110中任一项所述的化合物，其中R6为羟基或烷氧基。
115.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有下式：
或其药学上可接受的盐。
116.根据权利要求115所述的化合物，其中D是
117.根据权利要求115所述的化合物，其中D是
118.根据权利要求115-117中任一项所述的化合物，其中W1为-N-。
119.根据权利要求115-117中任一项所述的化合物，其中W1为-CH-。
120.根据权利要求115-119中任一项所述的化合物，其中W2为-N-。
121.根据权利要求115-119中任一项所述的化合物，其中W2为-CR26-。
122.根据权利要求115-121中任一项所述的化合物，其中R26是氢。
123.根据权利要求115-121中任一项所述的化合物，其中R26是卤素。
124.根据权利要求115-123中任一项所述的化合物，其中A22是-O-。
125.根据权利要求115-123中任一项所述的化合物，其中A22是-NH-。
126.根据权利要求78-125中任一项所述的化合物，其中接头选自
其中：
X1和X2在每次出现时独立地选自键、杂环、NR2、C(R2)2、O、C(O)和S；
R20、R21、R22、R23和R24在每次出现时独立地选自二价部分，其选自键、烷基、-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-SO2-、-S(O)-、-C(S)-、-C(O)NR2-、-NR2C(O)-、-O-、-S-、-NR2-、-C(R40R40)-、-P(O)(OR36)O-、-P(O)(OR36)-、双环、烯烃、炔烃、卤代烷基、烷氧基、芳基、杂环、脂族基、杂脂族基、杂芳基、乳酸、乙醇酸和碳环；其各自任选被1、2、3或4个独立地选自R40的取代基取代；
R36在每次出现时独立地选自氢、烷基、芳基烷基、杂芳基烷基、烯烃、炔烃、芳基、杂芳基、杂环、脂族基和杂脂族基；以及
R40在每次出现时独立地选自氢、烷基、烯烃、炔烃、氟、溴、氯、羟基、烷氧基、叠氮化物、氨基、氰基、-NH(脂族基，包括烷基)、-N(脂族基，包括烷基)2、-NHSO2(脂族基，包括烷基)、-N(脂族基，包括烷基)SO2烷基、-NHSO2(芳基、杂芳基或杂环)、-N(烷基)SO2(芳基、杂芳基或杂环)、-NHSO2烯基、-N(烷基)SO2烯基、-NHSO2炔基、-N(烷基)SO2炔基、卤代烷基、脂族基、杂脂族基、芳基、杂芳基、杂环和环烷基。
127.根据权利要求126所述的化合物，其中接头具有下式：
128.根据权利要求126和127中任一项所述的化合物，其中X1为键。
129.根据权利要求126和127中任一项所述的化合物，其中X1为杂环。
130.根据权利要求126和127中任一项所述的化合物，其中X1为NR2。
131.根据权利要求126和127中任一项所述的化合物，其中X1为C(O)。
132.根据权利要求126-131中任一项所述的化合物，其中X2为键。
133.根据权利要求126-131中任一项所述的化合物，其中X2为杂环。
134.根据权利要求126-131中任一项所述的化合物，其中X2为NR2。
135.根据权利要求126-131中任一项所述的化合物，其中X2为C(O)。
136.根据权利要求126-135中任一项所述的化合物，其中R20为键。
137.根据权利要求126-135中任一项所述的化合物，其中R20为CH2。
138.根据权利要求126-135中任一项所述的化合物，其中R20为杂环。
139.根据权利要求126-135中任一项所述的化合物，其中R20为芳基。
140.根据权利要求126-135中任一项所述的化合物，其中R20为苯基。
141.根据权利要求126-135中任一项所述的化合物，其中R20是双环。
142.根据权利要求126-141中任一项所述的化合物，其中R21为键。
143.根据权利要求126-141中任一项所述的化合物，其中R21为CH2。
144.根据权利要求126-141中任一项所述的化合物，其中R21为杂环。
145.根据权利要求126-141中任一项所述的化合物，其中R21为芳基。
146.根据权利要求126-141中任一项所述的化合物，其中R21为。
147.根据权利要求126-141中任一项所述的化合物，其中R21为双环。
148.根据权利要求126所述的化合物，其中接头具有下式：
149.根据权利要求126-148中任一项所述的化合物，其中R22是键。
150.根据权利要求126-148中任一项所述的化合物，其中R22是CH2。
151.根据权利要求126-148中任一项所述的化合物，其中R22是杂环。
152.根据权利要求126-148中任一项所述的化合物，其中R22为芳基。
153.根据权利要求126-148中任一项所述的化合物，其中R22为苯基。
154.根据权利要求126-148中任一项所述的化合物，其中R22是双环。
155.根据权利要求126-154中任一项所述的化合物，其中R23为键。
156.根据权利要求126-154中任一项所述的化合物，其中R23为CH2。
157.根据权利要求126-154中任一项所述的化合物，其中R23为杂环。
158.根据权利要求126-154中任一项所述的化合物，其中R23为芳基。
159.根据权利要求126-154中任一项所述的化合物，其中R23为苯基。
160.根据权利要求126-154中任一项所述的化合物，其中R23为双环。
161.根据权利要求126-160中任一项所述的化合物，其中R24为键。
162.根据权利要求126-160中任一项所述的化合物，其中R24为CH2。
163.根据权利要求126-160中任一项所述的化合物，其中R24为杂环。
164.根据权利要求126-160中任一项所述的化合物，其中R24为芳基。
165.根据权利要求126-160中任一项所述的化合物，其中R24为苯基。
166.根据权利要求126-160中任一项所述的化合物，其中R24是双环。
167.根据权利要求126-160中任一项所述的化合物，其中R24为C(O)。
168.根据权利要求1-167中任一项所述的化合物，其中A1为-NR2-。
169.根据权利要求1-167中任一项所述的化合物，其中A1为-CHR2’-。
170.根据权利要求1-167中任一项所述的化合物，其中A1为-NH-。
171.根据权利要求1-167中任一项所述的化合物，其中A1为-NCH3-。
172.根据权利要求1-167中任一项所述的化合物，其中A1为-CH2-。
173.根据权利要求1-172中任一项所述的化合物，其中R1为氢。
174.根据权利要求1-172中任一项所述的化合物，其中R1为烷基。
175.根据权利要求1-172中任一项所述的化合物，其中R1为甲基。
176.根据权利要求1-172中任一项所述的化合物，其中R1为乙基。
177.根据权利要求1-176中任一项所述的化合物，其中R4为氢。
178.根据权利要求1-176中任一项所述的化合物，其中R4为氰基。
179.根据权利要求1-176中任一项所述的化合物，其中R4为卤素。
180.根据权利要求1-179中任一项所述的化合物，其中R5为氢。
181.根据权利要求1-179中任一项所述的化合物，其中R5为卤素。
182.根据权利要求1-179中任一项所述的化合物，其中R5为氟。
183.根据权利要求1-182中任一项所述的化合物，其中C是
184.根据权利要求1-182中任一项所述的化合物，其中C为氮杂环庚烷基。
185.根据权利要求1-182中任一项所述的化合物，其中C为氮杂环丁烷基。
186.根据权利要求1-182中任一项所述的化合物，其中C为哌嗪基。
187.根据权利要求1-182中任一项所述的化合物，其中C为任选被一个或两个独立选自羟基、烷基和烷氧基的取代基取代的环烷基。
188.根据权利要求1-182中任一项所述的化合物，其中C为任选被一个或两个独立选自羟基、烷基和烷氧基的取代基取代的哌啶基。
189.一种化合物，其选自：
/>
或其药学上可接受的盐。
190.根据权利要求189所述的化合物，其中所述化合物具有以下结构：
或其药学上可接受的盐。
191.根据权利要求189所述的化合物，其中所述化合物具有以下结构：
或其药学上可接受的盐。
192.根据权利要求189所述的化合物，其中所述化合物具有以下结构：
或其药学上可接受的盐。
193.根据权利要求189所述的化合物，其中所述化合物具有以下结构：
或其药学上可接受的盐。
194.根据权利要求189所述的化合物，其中所述化合物具有以下结构：
或其药学上可接受的盐。
195.根据权利要求189所述的化合物，其中所述化合物具有以下结构：
或其药学上可接受的盐。
196.根据权利要求189所述的化合物，其中所述化合物具有以下结构：
或其药学上可接受的盐。
197.根据权利要求189所述的化合物，其中所述化合物具有以下结构：
或其药学上可接受的盐。
198.根据权利要求189所述的化合物，其中所述化合物具有以下结构：
或其药学上可接受的盐。
199.根据权利要求189所述的化合物，其中所述化合物具有以下结构：
或其药学上可接受的盐。
200.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-199中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
201.一种治疗突变BRAF介导的病症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的根据权利要求1-199中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或者根据权利要求200所述的药物组合物。
202.根据权利要求201所述的方法，其中所述患者是人。
203.根据权利要求201或202所述的方法，其中所述突变BRAF介导的病症是癌症。
204.根据权利要求203所述的方法，其中所述突变BRAF介导的癌症是黑素瘤。
205.根据权利要求203所述的方法，其中所述突变BRAF介导的癌症是肺癌。
206.根据权利要求203所述的方法，其中所述突变BRAF介导的癌症是非小细胞肺癌。
207.根据权利要求203所述的方法，其中所述突变BRAF介导的癌症是结肠直肠癌。
208.根据权利要求203所述的方法，其中所述突变BRAF介导的癌症是微卫星稳定的结肠直肠癌。
209.根据权利要求203所述的方法，其中所述突变BRAF介导的癌症是甲状腺癌。
210.根据权利要求203所述的方法，其中所述突变BRAF介导的癌症是卵巢癌。
211.根据权利要求201所述的方法，其中所述突变BRAF介导的病症是胆管癌、埃尔德海姆-切斯特病、朗格汉斯组织细胞增多症、神经节神经胶质瘤、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、毛细胞黏液样星形细胞瘤、间变性多形性黄色星形细胞瘤、星形细胞瘤、乳头状甲状腺癌、间变性甲状腺癌、胰腺癌、胸透明细胞肉瘤、唾液腺癌或微卫星稳定的结肠直肠癌。
212.根据权利要求201-211中任一项所述的方法，其中所述患者还接受另外的活性剂。
213.根据权利要求212所述的方法，其中所述另外的活性剂是MEK抑制剂。
214.根据权利要求213所述的方法，其中所述MEK抑制剂是曲美替尼。
215.根据权利要求212所述的方法，其中所述另外的活性剂是免疫检查点抑制剂。
216.根据权利要求215所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂选自纳武单抗、派姆单抗、西米普利单抗、伊匹单抗、relatlimab、阿特珠单抗、阿维鲁单抗和德瓦鲁单抗。
217.根据权利要求212所述的方法，其中所述另外的活性剂是西妥昔单抗或帕尼单抗。
218.根据权利要求1-199中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或者根据权利要求200所述的药物组合物，其用于治疗性治疗突变BRAF介导的病症。
219.根据权利要求218所述的化合物，其中所述突变BRAF介导的病症是癌症。
220.根据权利要求219所述的化合物，其中所述突变BRAF介导的癌症是黑素瘤。
221.根据权利要求219所述的化合物，其中所述突变BRAF介导的癌症是肺癌。
222.根据权利要求219所述的化合物，其中所述突变BRAF介导的癌症是非小细胞肺癌。
223.根据权利要求219所述的化合物，其中所述突变BRAF介导的癌症是结肠直肠癌。
224.根据权利要求219所述的化合物，其中所述突变BRAF介导的癌症是微卫星稳定的结肠直肠癌。
225.根据权利要求219所述的化合物，其中所述突变BRAF介导的癌症是甲状腺癌。
226.根据权利要求219所述的化合物，其中所述突变BRAF介导的癌症是卵巢癌。
227.根据权利要求218所述的化合物，其中所述突变BRAF介导的病症是胆管癌、埃尔德海姆-切斯特病、朗格汉斯组织细胞增多症、神经节神经胶质瘤、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、毛细胞黏液样星形细胞瘤、间变性多形性黄色星形细胞瘤、星形细胞瘤、乳头状甲状腺癌、间变性甲状腺癌、胰腺癌、胸透明细胞肉瘤、唾液腺癌或微卫星稳定的结肠直肠癌。
228.根据权利要求1-199中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或者根据权利要求200所述的药物组合物，其用于治疗突变BRAF介导的病症。
229.根据权利要求228所述的化合物，其中所述突变BRAF介导的病症是癌症。
230.根据权利要求229所述的化合物，其中所述突变BRAF介导的癌症是黑素瘤。
231.根据权利要求229所述的化合物，其中所述突变BRAF介导的癌症是肺癌。
232.根据权利要求229所述的化合物，其中所述突变BRAF介导的癌症是非小细胞肺癌。
233.根据权利要求229所述的化合物，其中所述突变BRAF介导的癌症是结肠直肠癌。
234.根据权利要求229的化合物，其中所述突变BRAF介导的癌症是微卫星稳定的结肠直肠癌。
235.根据权利要求229所述的化合物，其中所述突变BRAF介导的癌症是甲状腺癌。
236.根据权利要求229所述的化合物，其中所述突变BRAF介导的癌症是卵巢癌。
237.根据权利要求228所述的化合物，其中所述突变BRAF介导的病症是胆管癌、埃尔德海姆-切斯特病、朗格汉斯组织细胞增多症、神经节神经胶质瘤、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、毛细胞黏液样星形细胞瘤、间变性多形性黄色星形细胞瘤、星形细胞瘤、乳头状甲状腺癌、间变性甲状腺癌、胰腺癌、胸透明细胞肉瘤、唾液腺癌或微卫星稳定的结肠直肠癌。
238.根据权利要求1-199中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或者根据权利要求200所述的药物组合物在制备用于治疗突变BRAF介导的病症的药物中的用途。
239.根据权利要求238所述的用途，其中所述突变BRAF介导的病症是癌症。
240.根据权利要求239所述的用途，其中所述突变BRAF介导的癌症是黑素瘤。
241.根据权利要求239所述的用途，其中所述突变BRAF介导的癌症是肺癌。
242.根据权利要求239所述的用途，其中所述突变BRAF介导的癌症是非小细胞肺癌。
243.根据权利要求239所述的用途，其中所述突变BRAF介导的癌症是结肠直肠癌。
244.根据权利要求239所述的用途，其中所述突变BRAF介导的癌症是微卫星稳定的结肠直肠癌。
245.根据权利要求239所述的用途，其中所述突变BRAF介导的癌症是甲状腺癌。
246.根据权利要求239所述的用途，其中所述突变BRAF介导的癌症是卵巢癌。
247.根据权利要求238所述的用途，其中所述突变BRAF介导的病症是胆管癌、埃尔德海姆-切斯特病、朗格汉斯组织细胞增多症、神经节神经胶质瘤、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、毛细胞黏液样星形细胞瘤、间变性多形性黄色星形细胞瘤、星形细胞瘤、乳头状甲状腺癌、间变性甲状腺癌、胰腺癌、胸透明细胞肉瘤、唾液腺癌或微卫星稳定的结肠直肠癌。
248.根据权利要求1-199中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用作治疗活性物质。
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