CN117915947A

CN117915947A - 用于治疗癌症的组合疗法

Info

Publication number: CN117915947A
Application number: CN202280041424.5A
Authority: CN
Inventors: 罗培志; 刘桂中
Original assignee: Tianyan Pharmaceutical Co ltd
Current assignee: Tianyan Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2021-04-11
Filing date: 2022-04-11
Publication date: 2024-04-19

Abstract

本申请提供使用抗细胞毒性T淋巴细胞蛋白4(CTLA4)抗体(例如可活化抗CTLA4抗体)治疗癌症的组合物和方法。在一些实施方案中，提供包括抗CTLA4抗体和免疫检查点抑制剂、抗CD137抗体、血管内皮生长因子(VEGF)抑制剂、化学治疗剂或多聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂的组合疗法。

Description

用于治疗癌症的组合疗法

相关申请的交叉引用

本申请案主张2021年4月11日提交的美国临时专利申请第63/173,479号和2022年1月18日提交的第63/300,567号的优先权权益，所述美国临时专利申请案各自的内容以全文引用的方式并入本文中。

技术领域

本申请属于癌症治疗领域，且涉及包含与人细胞毒性T淋巴细胞蛋白4(CTLA4)结合的抗体的组合疗法。

背景技术

细胞毒性T淋巴细胞蛋白4(CTLA4)是免疫球蛋白(Ig)蛋白质超家族的起下调T细胞活化以及维持免疫原性体内平衡的作用的成员。已显示在同种同基因鼠前列腺癌模型中，体内抗体介导的CTLA4阻断使抗癌免疫应答增强(Kwon等(1997)Proc Natl Acad SciUSA,94(15):8099-103)。此外，显示阻断CTLA4功能会在携带肿瘤的小鼠中，在各种肿瘤生长阶段下，使抗肿瘤T细胞应答增强(Yang等(1997)Cancer Res 57(18):4036-41；Hurwitz等(1998)Proc Natl Acad Sci USA 95(17):10067-7)。然而，对适于人类使用的基于抗体的治疗剂的开发仍然是困难的，因为从临床前动物模型向人类安全性的转化经常是不良的。因此，存在对在不同物种诸如人和实验动物(例如小鼠、猴、大鼠等)之间具有交叉反应性的抗CTLA4抗体的需要，以并行地能够进行动物模型研究以及提供适合人治疗性候选物。此外，存在对开发仅在某些情形下诸如在富含蛋白酶的肿瘤微环境中具有活性的更安全抗CTLA4抗体的需要。

发明内容

本申请提供使用抗CTLA4抗体和可活化抗CTLA4抗体治疗癌症的方法。本申请还提供使用抗CTLA4抗体和第二治疗剂治疗癌症的方法。本申请还提供使用可活化抗CTLA4抗体和第二治疗剂治疗癌症的方法。

在一个方面，本文提供治疗受试者癌症的方法，包含向受试者施用：(a)有效量的可活化抗体，其中所述可活化抗体包含：多肽，所述多肽从N末端至C末端包含遮蔽性部分(MM)、可裂解部分(CM)和靶标结合部分(TBM)，其中所述MM包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：X_mCPDHPYPCXX(SEQ ID NO:181)、X_mCDAFYPYCXX(SEQ ID NO:182)、X_mCDSHYPYCXX(SEQ ID NO:183)和X_mCVPYYYACXX(SEQ ID NO:184)，并且其中m是2-10，及其中每个X独立地选自由A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y组成的组的氨基酸；其中当所述CM未被裂解时，所述MM抑制所述可活化抗体与人CTLA4的结合；其中所述CM包含至少第一裂解位点；其中：a)所述TBM包含抗体轻链可变区(VL)，并且所述可活化抗体还包含第二多肽，所述第二多肽包含抗体重链可变区(VH)；b)所述TBM包含抗体重链可变区(VH)，并且所述可活化抗体还包含第二多肽，所述第二多肽包含抗体轻链可变区(VL)；c)所述TBM从N末端至C末端包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)；或d)所述TBM从N末端至C末端包含抗体重链可变区(VH)和抗体轻链可变区(VL)；其中当所述CM被裂解时，所述可活化抗体通过所述VH和VL结合人CTLA4。在一些实施方案中，所述受试者是人。在一些实施方案中，所述受试者是非人动物或非人哺乳动物。

在一些实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体可作为单一疗法向有需要患者施用。在其他实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体可与本文所述一种或多种额外药剂组合施用。在一些实施方案中，所述癌症为卵巢癌、胰腺癌、胆管癌、肺癌、乳腺癌、黑色素瘤、肝细胞癌、胶质母细胞瘤、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌或结肠直肠癌。在一些实施方案中，所述肺癌为非小细胞肺癌(NSCLC)。在一些实施方案中，所述结肠直肠癌为微卫星高度不稳定(MSI-H)或错误配对修复缺陷(dMMR+)结肠直肠癌。在一些实施方案中，所述黑色素瘤为葡萄膜(UV)黑色素瘤。

在一些实施方案中，可活化抗CTLA4抗体的MM还在它的N末端包含额外氨基酸序列。在一些实施方案中，额外氨基酸序列包含SEQ ID NO:148的氨基酸序列。

在一些实施方案中，可活化抗CTLA4抗体的第一裂解位点是选自由以下组成的组的蛋白酶的蛋白酶裂解位点：尿激酶型纤维蛋白溶酶原活化因子(urokinase-typeplasminogen activator，uPA)、基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1，MMP-1)、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-14、烟草蚀刻病毒(Tobacco Etch Virus，TEV)蛋白酶、纤维蛋白溶酶(plasmin)、凝血酶(Thrombin)、因子X、PSA、PSMA、组织蛋白酶D(Cathepsin D)、组织蛋白酶K、组织蛋白酶S、ADAM10、ADAM12、ADAMTS、卡斯帕酶-1(Caspase-1)、卡斯帕酶-2、卡斯帕酶-3、卡斯帕酶-4、卡斯帕酶-5、卡斯帕酶-6、卡斯帕酶-7、卡斯帕酶-8、卡斯帕酶-9、卡斯帕酶-10、卡斯帕酶-11、卡斯帕酶-12、卡斯帕酶-13、卡斯帕酶-14和TACE。

在一些实施方案中，CM还在第一裂解位点的C末端包含第一接头(L₁)。在一些实施方案中，L₁包含选自由SEQ ID NOS:156-163组成的组的氨基酸序列。

在一些实施方案中，CM还包含第二裂解位点。在一些实施方案中，第二裂解位点在L₁的C末端。在一些实施方案中，第二裂解位点是选自由以下组成的组的蛋白酶的蛋白酶裂解位点：尿激酶型纤维蛋白溶酶原活化因子(uPA)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-14、烟草蚀刻病毒(TEV)蛋白酶、纤维蛋白溶酶、凝血酶、因子X、PSA、PSMA、组织蛋白酶D、组织蛋白酶K、组织蛋白酶S、ADAM10、ADAM12、ADAMTS、卡斯帕酶-1、卡斯帕酶-2、卡斯帕酶-3、卡斯帕酶-4、卡斯帕酶-5、卡斯帕酶-6、卡斯帕酶-7、卡斯帕酶-8、卡斯帕酶-9、卡斯帕酶-10、卡斯帕酶-11、卡斯帕酶-12、卡斯帕酶-13、卡斯帕酶-14和TACE。在一些实施方案中，第一和第二裂解位点是不同的。

在一些实施方案中，CM还在第二裂解位点的C末端包含第二接头(L₂)。在一些实施方案中，L₂包含选自由SEQ ID NOS:156-163组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，CM还在第一裂解位点的N末端包含第三接头(L₃)。

在一些实施方案中，CM包含至少第一蛋白酶裂解位点，并且以一种或多种选自由以下组成的组的蛋白酶加以裂解：尿激酶型纤维蛋白溶酶原活化因子(uPA)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-14、烟草蚀刻病毒(TEV)蛋白酶、纤维蛋白溶酶、凝血酶、因子X、PSA、PSMA、组织蛋白酶D、组织蛋白酶K、组织蛋白酶S、ADAM10、ADAM12、ADAMTS、卡斯帕酶-1、卡斯帕酶-2、卡斯帕酶-3、卡斯帕酶-4、卡斯帕酶-5、卡斯帕酶-6、卡斯帕酶-7、卡斯帕酶-8、卡斯帕酶-9、卡斯帕酶-10、卡斯帕酶-11、卡斯帕酶-12、卡斯帕酶-13、卡斯帕酶-14和TACE。

在一些实施方案中，可活化抗CTLA4抗体包含选自由SEQ ID NOS:165-179组成的组的氨基酸序列。

在一些实施方案中，可活化抗CTLA4抗体具有选自由SEQ ID NOS:189-196组成的组的MM氨基酸序列。在其他实施方案中，可活化抗CTLA4抗体包含选自由SEQ ID NOS:213-216组成的组的MM氨基酸序列。在其他实施方案中，可活化抗CTLA4抗体包含选自由SEQ IDNOS:141-147组成的组的MM氨基酸序列。在特定实施方案中，可活化抗CTLA4抗体包含SEQID NO:200的MM氨基酸序列。

在一些实施方案中，可活化抗CTLA4抗体具有选自由SEQ ID NOS:197-209组成的组的MM/CM组合氨基酸序列。在特定实施方案中，可活化抗CTLA4抗体具有SEQ ID NO:192的MM/CM组合氨基酸序列。

在一些实施方案中，MM裂解后，可活化抗CTLA4抗体特异性结合包含人CTLA4的氨基酸残基Y105和L106但不包含残基I108的表位，其中氨基酸残基的编号根据SEQ ID NO:207。

在一些实施方案中，MM裂解后，a)所述经裂解抗CTLA4抗体以约350nM或更小的解离常数(K_D)结合人CTLA4、食蟹猴CTLA4、小鼠CTLA4、大鼠CTLA4和狗CTLA4；b)所述抗CTLA4抗体的结合诱导针对表达CTLA4的人细胞或人Treg细胞的抗体依赖性细胞细胞毒性(ADCC)，其中所述抗CTLA4抗体的ADCC活性比伊匹木单抗的ADCC活性更高；和/或c)在其中当CD80和/或CD86包被在板上时或当人CTLA4存在于细胞表面上时的测定中，对于阻断CD80和/或CD86与人CTLA4的结合，所述抗CTLA4抗体具有的IC50比伊匹木单抗的IC50更高。

在一些实施方案中，可活化抗CTLA4抗体包含重链可变区和轻链可变区，a)其中所述重链可变区包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3，其中所述HVR-H1包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：

式(I)：X1TFSX2YX3IHWV(SEQ ID NO:1)，其中X1是F或Y，X2是D或G，并且X3是A、G或W；

式(II)：YSIX1SGX2X3WX4WI(SEQ ID NO:2)，其中X1是S或T，X2是H或Y，X3是H或Y，并且X4是A、D或S；和

式(III)：FSLSTGGVAVX1WI(SEQ ID NO:3)，其中X1是G或S；

其中所述HVR-H2包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：

式(IV)：IGX1IX2HSGSTYYSX3SLKSRV(SEQ ID NO:4)，其中X1是D或E，X2是S或Y，并且X3是P或Q；

式(V)：IGX1ISPSX2GX3TX4YAQKFQGRV(SEQ ID NO:5)，其中X1是I或W，X2是G或S，X3是G或S，并且X4是K或N；和

式(VI)：VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(SEQ ID NO:6)，其中X1是A、G或S，X2是S或Y，X3是G或S，并且X4是S或T；并且

其中所述HVR-H3包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：

式(VII)：ARX1X2X3X4FDX5(SEQ ID NO:7)，其中X1是G、R或S，X2是A、I或Y，X3是D、V或Y，X4是A、E或Y，并且X5是I或Y；

式(VIII)：ARX1GX2GYFDX3(SEQ ID NO:8)，其中X1是D或L，X2是F或Y，并且X3是V或Y；

式(IX)：ARX1X2X3X4AX5X6FDY(SEQ ID NO:9)，其中X1是L或R，X2是I或P，X3是A或Y，X4是S或T，X5是T或Y，并且X6是A或Y；

式(X)：ARDX1X2X3GSSGYYX4GFDX5(SEQ ID NO:10)，其中X1是I或V，X2是A或H，X3是P或S，X4是D或Y，并且X5是F或V；并且

b)其中所述轻链可变区包含HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3，

其中所述HVR-L1包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：

式(XI)：RASQX1X2X3SX4LX5(SEQ ID NO:11)，其中X1是G或S，X2是I或V，X3是G或S，X4是S或Y，并且X5是A或N；

式(XII)：RASQX1VX2X3RX4LA(SEQ ID NO:12)，其中X1是S或T，X2是F、R或S，X3是G或S，并且X4是F或Y；和

式(XIII)：RASX1SVDFX2GX3SFLX4(SEQ ID NO:13)，其中X1是E或Q，X2是D、F、H或Y，X3是F、I或K，并且X4是A、D或H；

其中所述HVR-L2包含根据式(XIV)：X1ASX2X3X4X5GX6(SEQ ID NO:14)的氨基酸序列，其中X1是A或D，X2是N、S或T，X3是L或R，X4是A、E或Q，X5是S或T，并且X6是I或V；并且

其中所述HVR-L3包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：

式(XV)：YCX1X2X3X4X5X6PX7T(SEQ ID NO:15)，其中X1是E、Q或V，X2是H或Q，X3是A、G、H、R或S，X4是D、L、S或Y，X5是E、G、P、Q或S，X6是L、T、V或W，并且X7是F、L、P、W或Y；

式(XVI)：YCQQX1X2X3WPPWT(SEQ ID NO:16)，其中X1是S或Y，X2是D或Y，并且X3是Q或Y；和

式(XVII)：YCQX1YX2SSPPX3YT(SEQ ID NO:17)，其中X1是H或Q，X2是T或V，并且X3是E或V。

在一些实施方案中，可活化抗CTLA4抗体包含：a)含有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-L3；b)含有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-L3；c)含有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:55的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-L3；d)含有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:43的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:56的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的HVR-L3；e)含有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:44的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:57的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的HVR-L3；f)含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的HVR-L3；g)含有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:46的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的HVR-L3；h)含有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:36的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的HVR-L3；i)含有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的HVR-L3；j)含有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的HVR-L3；k)含有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的HVR-L3；l)含有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的HVR-L3；或m)含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的HVR-L3。

在一些实施方案中，可活化抗CTLA4抗体，裂解后，包含：a)含有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的轻链可变区；b)含有SEQ IDNO:83的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的轻链可变区；c)含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的轻链可变区；d)含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的轻链可变区；e)含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的轻链可变区；f)含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQID NO:100的氨基酸序列的轻链可变区；g)含有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的轻链可变区；h)含有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的轻链可变区；i)含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的轻链可变区；j)含有SEQ IDNO:91的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区；k)含有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:105的氨基酸序列的轻链可变区；l)含有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:106的氨基酸序列的轻链可变区；或m)含有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ IDNO:107的氨基酸序列的轻链可变区。

在一些实施方案中，可活化抗CTLA4抗体，裂解后，包含：a)重链可变区，所述重链可变区包含含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H2，和含有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的HVR-H3，和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L2，和含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的HVR-L3；或b)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列或与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少90％序列一致性的氨基酸序列，和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列或与SEQID NO:100的氨基酸序列具有至少90％序列一致性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，可活化抗CTLA4抗体包含含有SEQ ID NO:320的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:322的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，可活化抗体包含含有SEQ ID NO:321的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:322的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，可活化抗体包含含有SEQ ID NO:320或321的氨基酸序列的重链和含有SEQ IDNO:322的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，可活化抗体包含含有SEQ ID NO:323的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:325的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，可活化抗体包含含有SEQ ID NO:324的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:325的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，可活化抗体包含含有SEQ ID NO:323或324的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:325的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，可活化抗体包含含有SEQ IDNO:326的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:328的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，可活化抗体包含含有SEQ ID NO:327的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:328的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，可活化抗体包含含有SEQ ID NO:326或327的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:328的氨基酸序列的轻链。

在一些实施方案中，可活化抗CTLA4抗体以约0.1mg/kg和约20mg/kg之间的剂量，例如约0.1mg/kg、约0.3mg/kg、约1mg/kg、约3mg/kg、约6mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg或约20mg/kg向受试者施用。在一些此类实施方案中，可活化抗CTLA4抗体每三周施用一次。

在另一方面，本文提供治疗受试者黑色素瘤的方法，包含向受试者施用有效量的可活化抗CTLA4抗体。在一些实施方案中，可活化抗CTLA4抗体以单一疗法施用。在一些实施方案中，可活化抗CTLA4抗体以约0.1mg/kg和约10mg/kg之间的剂量向受试者施用。在一些实施方案中，可活化抗体以约0.1mg/kg、约0.3mg/kg、约1mg/kg、约3mg/kg或约10mg/kg的剂量向受试者施用。在一些实施方案中，可活化抗体以约0.1mg/kg和约20mg/kg之间的剂量向受试者施用。在一些实施方案中，可活化抗体以约0.1mg/kg、约0.3mg/kg、约1mg/kg、约3mg/kg、约6mg/kg、约10mg/kg或约20mg/kg的剂量向受试者施用。在一些实施方案中，可活化抗体每三周施用一次。在前述的一些实施方案中，可活化抗体包含含有SEQ ID NO:320或321的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:322的氨基酸序列的轻链。在其它前述实施方案中，可活化抗体包含含有SEQ ID NO:323或324的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:325的氨基酸序列的轻链。在其它前述实施方案中，可活化抗体包含含有SEQ ID NO:326或327的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:328的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，受试者为人。在一些实施方案中，受试者为非人动物或非人哺乳动物。

在一些实施方案中，本公开的抗CTLA4抗体和可活化抗CTLA4抗体与PD-1抑制剂(例如，抗PD-1抗体)组合向受试者施用。在一些此类实施方案中，抗PD1抗体为2E5。在其它此类实施方案中，抗PD1抗体为特瑞普利单抗。其它此类实施方案中，抗PD-1抗体为帕母单抗。在一些实施方案中，受试者为人。在一些实施方案中，受试者为非人动物或非人哺乳动物。在一些实施方案中，当组合施用时，可活化抗CTLA4抗体和PD-1抑制剂(例如，抗PD-1抗体)组合显示协同作用。在前述的一些实施方案中，抗CTLA4抗体包含含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链可变区或与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列，和/或含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的轻链可变区或与SEQ ID NO:100的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列。在前述的一些实施方案中，抗CTLA4抗体为裂解后的可活化抗CTLA4抗体，包含含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链可变区或与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列，和/或含有SEQID NO:100的氨基酸序列的轻链可变区或与SEQ ID NO:100的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本公开的抗CTLA4抗体和可活化抗CTLA4抗体与抗CD137抗体组合向受试者施用，其中抗CD137抗体特异性结合人CD137细胞外结构域，其中所述抗体结合至一个或多个选自由以下氨基酸残基组成的组：SEQ ID NO:231的氨基酸残基51、53、62-73、83、89、92、95-104和112-116。在一些实施方案中，受试者为人。在一些实施方案中，受试者为非人动物或非人哺乳动物。在一些实施方案中，当组合施用时，可活化抗CTLA4抗体和抗CD137抗体组合显示协同作用。在一些实施方案中，抗CD137抗体结合至SEQ ID NO:231的氨基酸残基51、63-67、69-73、83、89、92、98-104和112-114。在一些实施方案中，抗CD137抗体包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH包含含有SEQ ID NO:232的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:233的氨基酸序列的HVR-H2和含有SEQ ID NO:234的氨基酸序列的HVR-H3；且其中VL包含含有SEQ ID NO:235的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:236的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:237的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD137抗体包含含有SEQ ID NO:238的氨基酸序列的VH，和/或含有SEQ ID NO:239的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，抗CD137抗体包含重链和轻链，且其中重链包含氨基酸序列SEQ ID NO:240，和/或轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO:241。在一些实施方案中，抗CD137抗体包含VH和VL，其中VH包含含有SEQ ID NO:242的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:243的氨基酸序列的HVR-H2和含有SEQ ID NO:244的氨基酸序列的HVR-H3；且其中VL包含含有SEQ ID NO:245的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:246的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:247的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD137抗体包含含有SEQID NO:248的氨基酸序列的VH，和/或含有SEQ ID NO:249的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，抗CD137抗体包含重链和轻链，其中重链包含氨基酸序列SEQ ID NO:250，和/或轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO:251。在一些实施方案中，抗CD137抗体包含VH和VL，其中VH包含含有SEQ ID NO:252的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:253的氨基酸序列的HVR-H2和含有SEQ ID NO:254的氨基酸序列的HVR-H3；且其中VL包含含有SEQ ID NO:255的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:256的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:257的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD137抗体包含含有SEQ ID NO:258的氨基酸序列的VH，和/或含有SEQ ID NO:259的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，抗CD137抗体包含重链和轻链，其中重链包含氨基酸序列SEQ ID NO:260，和/或轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO:261。在一些实施方案中，抗CD137抗体包含人IgG4 Fc区，任选地其中人IgG4 Fc区包含S241P突变，其中编号是根据Kabat进行的。在前述的一些实施方案中，抗CTLA4抗体包含含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链可变区或与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列，和/或含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的轻链可变区或与SEQ ID NO:100的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列。在前述的一些实施方案中，抗CTLA4抗体为裂解后的可活化抗CTLA4抗体，包含含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链可变区或与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列，和/或含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的轻链可变区或与SEQ ID NO:100的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供治疗受试者癌症的方法，包含向受试者施用：(a)有效量的抗CTLA4抗体(例如，可活化抗CTLA4抗体)，其中所述抗体特异性结合包含人CTLA4的氨基酸残基Y105和L106，但不包含残基I108的表位，其中氨基酸残基的编号根据SEQ ID NO:207，和(b)有效量的VEGF抑制剂。在一些实施方案中，所述VEGF抑制剂为呋喹替尼。在一些实施方案中，所述癌症为结肠癌。在一些实施方案中，所述VEGF抑制剂为安罗替尼。在一些实施方案中，所述癌症为肾癌，任选地为肾腺癌。在前述的一些实施方案中，抗CTLA4抗体包含含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链可变区或与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列，和/或含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的轻链可变区或与SEQ ID NO:100的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列。在前述的一些实施方案中，抗CTLA4抗体为裂解后的可活化抗CTLA4抗体，包含含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链可变区或与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列，和/或含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的轻链可变区或与SEQ ID NO:100的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列。

在一个方面，本文提供治疗受试者癌症的方法，包含向受试者施用：(a)有效量的抗CTLA4抗体(例如，可活化抗CTLA4抗体)，其中所述抗体特异性结合包含人CTLA4的氨基酸残基Y105和L106，但不包含残基I108的表位，其中氨基酸残基的编号根据SEQ ID NO:207，和(b)有效量的化学治疗剂。在一些实施方案中，所述化学治疗剂为多西他赛。在一些实施方案中，所述癌症为乳腺癌。在一些实施方案中，所述化学治疗剂为阿可拉定。在一些实施方案中，所述癌症为黑色素瘤。

在另一方面，本文提供治疗受试者癌症的方法，包含向受试者施用：(a)有效量的抗CTLA4抗体(例如，可活化抗CTLA4抗体)，其中所述抗体特异性结合包含人CTLA4的氨基酸残基Y105和L106，但不包含残基I108的表位，其中氨基酸残基的编号根据SEQ ID NO:207，和(b)有效量的PARP抑制剂。在一些实施方案中，所述PARP抑制剂为奥拉帕尼。在一些实施方案中，所述癌症为乳腺癌。

在根据上文所述方法中的任一者的一些实施方案中，癌症对先前疗法具有耐药性或难治性，其中先前疗法为CTLA4、PD-1或PD-1配体抑制剂。在一些实施方案中，受试者对先前疗法具有耐药性或已经从先前疗法中复发，其中先前疗法是CTLA4、PD-1或PD-1配体抑制剂。在一些实施方案中，先前疗法为CTLA4抑制剂，例如抗CTLA4抗体，如伊匹木单抗。在一些实施方案中，先前疗法为PD-1抑制剂，例如抗PD-1抗体，如派姆单抗或特瑞普利单抗。在一些实施方案中，先前疗法为PD-1配体(例如PD-L1)抑制剂，如抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，先前疗法包括CTLA4抑制剂和PD-1抑制剂。在一些实施方案中，先前疗法包括CTLA4抑制剂和PD-L1抑制剂。在前述的一些实施方案中，可活化抗CTLA4抗体，在MM裂解后，包含含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链可变区或与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列，和/或含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的轻链可变区或与SEQ ID NO:100的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列。在前述的一些实施方案中，可活化抗CTLA4抗体包含人IgG1 Fc区，例如野生型IgG1 Fc区或具有增强ADCC活性的变体。在前述的一些实施方案中，可活化抗CTLA4抗体包含人IgG1 Fc区，例如野生型IgG1 Fc区或具有增强ADCC活性的变体。在前述的一些实施方案中，可活化抗体包含含有SEQ ID NO:320或321的氨基酸序列的重链，或与SEQ ID NO:320或321的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列，和含有SEQ ID NO:322的氨基酸序列的轻链，或与SEQID NO:322的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列。

应了解，以上以及本文中所述的各种实施方案的性质中的一者、一些或全部可加以组合以形成本公开的其他实施方案。本公开的这些和其他方面将变得为本领域技术人员显而易知。本公开的这些和其他实施方案通过随后具体实施方式来进一步描述。

附图说明

本专利或申请文件包含至少一张彩色绘图。专利局将根据申请人的要求，在支付必要的费用后，提供该专利或专利申请公开的副本和彩色附图。

图1示出被共价连接的N端肽遮蔽的SAFEbody示意图，随后连接蛋白酶裂解位点。在正常组织中，SAFEbody保持遮蔽且不能结合至其靶。然而，在肿瘤微环境中，遮蔽被各种肿瘤组织中过表达的蛋白酶裂解，导致SAFEbody活化并能结合至其靶，如下文所述的可活化抗CTLA4抗体TY22404。TY22404的完整重链和轻链(包括遮蔽/连接子)分别参见SEQ IDNos:320和322。

图2示出活化TY22404阻断CTLA4/B7配体相互作用并增强T细胞活化的作用机制(参见，例如，Rowshanravan等人，CTLA4:amoving target in immunotherapy.Blood 2018,131:58)，及在肿瘤微环境(TME)中通过ADCC/ADCP消减免疫抑制性Treg细胞，从而总体增强抗肿瘤免疫应答的示意图。

图3示出TY22404 SAFEbody的靶标结合位点被高度遮蔽且在低浓度(约nM)下与CTLA4蛋白微弱结合，但在更高浓度(约uM或亚uM，高于nM)下可与靶标结合。然而，一旦蛋白酶裂解遮蔽性肽，TY22404就被活化且可以高亲和力结合人、猴和啮齿动物来源的跨物种CTLA4蛋白。

图4示出基于细胞的CTLA4阻断生物测定(Promega)结果，该测定用于评估抗CTLA4介导的CD28信号传导活化。经蛋白酶活化的TY22404是一种比伊匹木单抗更柔和的CTLA4检查点抑制剂。

图5示出体外ADCC报告子测定结果，其中CTLA4表达靶细胞和Jurkat NFAT-Luc/CD16报告子细胞用于评估TY22404介导的ADCC信号传导活化。经蛋白酶活化，但非遮蔽性肽完整的TY22404，展现出比伊匹木单抗更强的ADCC信号传导活性。

图6示出作为T细胞活化功能测量的IL-2水平。经蛋白酶活化的TY22404，但非遮蔽性肽完整的TY22404，可以增强SEA(葡萄球菌肠毒素A)诱导的人T细胞活化。

图7示出在小鼠肝癌和结肠癌模型中测试的TY22404(5mg/kg)，作为单一药剂在同种同基因小鼠肿瘤模型中显示出有效的体内抗肿瘤活性。

图8示出TY22404(2mg/kg)与抗PD-1组合在小鼠路易斯肺癌模型中显示出有效的体内抗肿瘤活性。

图9示出在CT26结肠肿瘤模型中，Treg细胞在肿瘤组织中展现出比外周组织中更高的CTLA4表达并在TY22404(5mg/kg)治疗后有效消减。

图10示出TY22404与抗PD-1抗体在路易斯癌症模型中组合施用的功效。

图11示出TY22404与抗CD137抗体ADG106在4T1癌症模型中组合施用的功效。

图12A-12B示出ADG106与TY21580在小鼠CT26结肠癌模型中组合施用的功效。

图13A-13B示出ADG106与TY21580在小鼠MC38结肠癌模型中组合施用的功效。

图14A-14B示出ADG106与TY21580在小鼠MC38结肠癌模型中组合施用的功效。

图15示出ADG106与TY21580在小鼠4T1乳腺癌模型中组合施用的功效。

图16示出ADG106与TY21580在小鼠4T1乳腺癌模型中组合施用的功效。

图17示出ADG106与TY21580在同种同基因小鼠B16F10黑色素瘤模型中组合施用的功效。

图18A-18B示出ADG106与TY21580在A20癌症模型中组合施用的功效。

图19A-19B示出ADG106与TY21580在EMT6癌症模型中组合施用的功效。

图20A-20B示出TY21580与ADG106在CT26结肠癌模型中组合施用的功效。

图21A-21B示出TY21580与呋喹替尼在CT26癌症模型中组合施用的功效。

图22A-22B示出TY21580与安罗替尼在Renca癌症模型中组合施用的功效。

图23A-23B示出TY21580与多西他赛在4T1癌症模型中组合施用的功效。

图24A-24B示出TY21580与奥拉帕尼在EMT6癌症模型中组合施用的功效。

图25示出TY22404与ADG106抗体在MC38癌症模型中组合施用的功效。

图26示出TY21580与阿可拉定(“SNG162”)和/或ADG106在同种同基因小鼠B16F10黑色素瘤模型中组合施用的功效。

图27示出TY22404和TY21580在携带CTLA4阴性和阳性H22肿瘤的小鼠中的体内成像。

图28示出小鼠(左)和食蟹猴(右)中TY21580与TY22404的药代动力学。

图29和30示出1期剂量递增研究设计，该研究检查抗CTLA4SAFEbody在人患者中的施用。每3周一次施用0.1mg/kg、0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg或10mg/kg的抗CTLA4 SAFEbody，直到疾病进展或不可接受的毒性，由SRC推荐的10mpk扩展群组在选定适应症中，抗CTLA4SAFEbody以6mg/kg与抗PD-1组合使用，抗CTLA4SAFEbody以3mg/kg与ADG106组合使用。

图31示出抗CTLA4 SAFEbody的治疗相关安全性概况。截至2021年11月30日，16名患者已接受5个剂量递增群组(0.1、0.3、1、3和10mg/kg)治疗。抗CTLA4 SAFEbody耐受性良好，仅有1例≥3级AE(3级疲劳)和10例1级AE。

图32A和32B示出两个案例研究：一名既往接受过5线疗法的卵巢癌患者，该患者在每两个周期抗CTLA4 SAFEbody治疗后，每次肿瘤评估均显示出持续的肿瘤缩小(图32A)，和一名既往接受伊匹木单抗加纳武单抗疗法失败的葡萄膜(UV)黑色素瘤患者，该患者在抗CTLA4 SAFEbody治疗后显示出T细胞活化和-24％的肿瘤缩小(图32B)。

图33示出在治疗过程中，促炎症反应细胞因子IFN-γ在癌症患者血清中的动态变化。

图34示出在治疗过程中，促炎症反应细胞因子TNF-α在癌症患者血清中的变化。

图35A-35C示出经抗CTLA4 SAFEbody治疗的患者的外周血样本中免疫细胞亚群(包括CD4+辅助性T细胞(图35A)、CD8+细胞毒性T细胞(图35B)和NK细胞(图35C))绝对计数相对于基础水平(第1个周期第1天给药前)的变化。

图36示出推注TY224041后，在2/3小鼠肿瘤中检测到裂解形式的TY22404，约占总活化抗CTLA4抗体TY22404一半，而给药24小时后未在肝脏和血浆中检测到。然而，给药96小时后，TY22404裂解形式在所有样品中观察到，包括来自所有3只小鼠(4-6标记)的肿瘤、肝脏和血浆。

图37示出相较于肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)中的同型对照，可活化抗CTLA4抗体TY22404使CD4⁺T细胞中Tregs的百分比以剂量依赖性方式显著降低。然而，TY22404未降低脾脏中CD4⁺T细胞中Tregs的百分比。

图38示出TIL中Treg细胞的CTLA4表达水平在TY22404治疗后以剂量依赖性方式显著降低。然而，脾脏Treg细胞的CTLA4表达水平在TY22404治疗后未改变。

具体实施方式

I.定义

除非本文另外定义，否则与本申请关联使用的科学和技术术语将具有由本领域普通技术人员通常所理解的含义。另外，除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数，并且复数术语应包括单数。一般来说，本文所述的抗体工程改造、免疫疗法、细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学和蛋白质及核酸化学使用的命名法和技术是本领域中所熟知且常用的。

术语“抗体”在本文中在最广泛意义上使用，并且明确涵盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体、三特异性抗体)和抗体片段(例如Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)₂、Fv和/或单链可变片段或scFv)，只要它们展现所需生物活性即可。

在一些实施方案中，术语“抗体”是指具有由两条相同的重(H)链和两条相同的轻(L)链组成的基本四多肽链结构的抗原结合蛋白(即，免疫球蛋白)。各L链通过一个共价二硫键连接至H链，同时两条H链取决于H链同种型通过一个或多个二硫键彼此连接。每条重链在N末端具有可变区(在本文缩写为V_H)，接着是恒定区。重链恒定区包含三个结构域：C_H1、C_H2和C_H3。每条轻链在N末端具有可变区(在本文缩写为V_I)，接着是在其另一端的恒定区。轻链恒定区包含一个结构域，C_L。将V_L与V_H比对并且将C_L与重链的第一恒定结构域(CH1)比对。V_H和V_L的配对一起形成单一抗原结合位点。IgM抗体由5个基本的异四聚体单元以及被称为J链的另一多肽组成，因此含有10个抗原结合位点；而分泌型IgA抗体可聚合形成包含2-5个基本的4链单元以及J链的多价装配物。

V_H和V_L区还可以基于结构和序列分析细分成具有高变性的区域，称为高变区(HVR)。HVR散布有更加保守的区域，称为框架区(FW)(参见例如，Chen等人(1999)J.Mol.Biol.(1999)293,865-881)。各V_H和V_L由三个HVR和四个FW组成，以下列顺序从氨基末端到羧基末端排列：FW-1_HVR-1_FW-2_HVR-2_FW-3_HVR-3_FW4。在本公开通篇，重链的三个HVR被称为HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3。类似地，轻链的三个HVR被称为HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3。

本文所用，术语“CDR”或“互补决定区”旨在表示在重链和轻链多肽的可变区内发现的非连续抗原结合位点。这些特定区域已被描述于Kabat等人，J.Biol.Chem.252:6609-6616(1977)；Kabat等人，U.S.Dept.of Health and Human Services,“Sequences ofproteins of immunological interest”(1991)；Chothia等人，J.Mol.Biol.196:901-917(1987)；Al-Lazikani B等人，J.Mol.Biol.,273:927-948(1997)；MacCallum等人，J.Mol.Biol.262:732-745(1996)；Abhinandan和Martin,Mol.Immunol.,45:3832-3839(2008)；Lefranc M.P.等人，Dev.Comp.Immunol.,27:55-77(2003)；以及Honegger和Plückthun,J.Mol.Biol.,309:657-670(2001)，其中所述定义包括彼此比较时氨基酸残基的重叠或子集。然而，任一定义的抗体或移植抗体或其变体的CDR的应用旨在处于本文定义和使用的术语的范围内。下表I中列出了氨基酸残基，其包含由上述引用各个文献中定义的CDRs，作为比较。CDR预测算法和界面在本领域中是已知的，包括例如Abhinandan和Martin,Mol.Immunol.,45:3832-3839(2008)；Ehrenmann F.等人，Nucleic Acids Res.,38:D301-D307(2010)；和Adolf-Bryfogle J.等人，Nucleic Acids Res.,43:D432-D438(2015)。本段中引用的参考文献的内容通过引用方式整体并入本文，以用于本发明并且可能包括在本文的一个或多个权利要求中。

表I：CDR定义

	Kabat¹	Chothia²	MacCallum³	IMGT⁴	AHo⁵
						VH CDR1	31-35	26-32	30-35	27-38	25-40
VH CDR2	50-65	53-55	47-58	56-65	58-77
						VH CDR3	95-102	96-101	93-101	105-117	109-137
VL CDR1	24-34	26-32	30-36	27-38	25-40
						VL CDR2	50-56	50-52	46-55	56-65	58-77
VL CDR3	89-97	91-96	89-96	105-117	109-137

¹残基编号遵循Kabat等人的命名法，同上

²残基编号遵循Chothia等人的命名法，同上

³残基编号遵循MacCallum等人的命名法，同上

⁴残基编号遵循Lefranc等人的命名法，同上

⁵残基编号遵循Honegger及Plückthun的命名法，同上

重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq)。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过具有约12个或更多个氨基酸的“J”区连接，其中重链还包括具有约10个或更多个氨基酸的“D”区(参见例如，Fundamental Immunology第7章(Paul,W.编辑第2版，Raven Press,N.Y).(1989))。

来自任何脊椎动物物种的L链可基于其恒定结构域的氨基酸序列指定为两种明显不同类型(称为κ和λ)中的一者。取决于其重链的恒定结构域(CH)的氨基酸序列，抗体可分为不同的种类或同种型。存在五类抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其分别具有被命名为α(alpha)、δ(delta)、ε(epsilon)、γ(gamma)和μ(mu)的重链。IgG类抗体可以分别通过γ重链Y1-Y4进一步分类为四个亚类IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。

术语“抗体衍生物”或抗体的“衍生物”是指能够与所述抗体结合的相同抗原(例如，CTLA4)且包含与另一分子实体连接的所述抗体的氨基酸序列的分子。抗体衍生物中包含的抗体氨基酸序列可以是全长重链、全长轻链、全长重链的任何一个或多个部分、全长轻链的任何一个或多个部分、抗体的其他片段，或互补抗体。另一分子实体可以是化学或生物分子。另一分子实体的实例包括化学基团、氨基酸、肽、蛋白质(例如酶、抗体)以及化学化合物。另一分子实体可具有任何实用性，诸如用作检测剂、标记、标志物、药剂或治疗剂。抗体的氨基酸序列可通过化学偶联、基因融合、非共价缔合或其他方式与另一分子实体附接或连接。术语“抗体衍生物”还涵盖嵌合抗体、人源化抗体，以及由CTLA4抗体的氨基酸序列修饰，诸如保守氨基酸取代、添加和插入衍生的分子。

术语抗体的“抗原结合片段”或“抗原结合部分”是指抗体的保留与所述抗体所结合的抗原(例如，CTLA4)相结合的能力的一个或多个部分。抗体的“抗原结合片段”的实例包括(i)Fab片段，其为由V_L、V_H、C_L和C_H1结构域组成的一价片段；(ii)F(ab’)₂片段，其为包含由在铰链区的二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由V_H和C_H1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体的单臂的V_L和V_H结构域组成的Fv片段；(v)由V_H结构域组成的dAb片段(Ward等人，Nature 341:544-546(1989))；以及(vi)分离的互补决定区(CDR)。

术语“CTLA4”在本申请中使用，并且包括人CTLA4(例如，UniProt登录号P16410)以及其变体、亚型和物种同源物(例如小鼠CTLA4(UniProt登录号P09793)、大鼠CTLA4(UniProt登录号Q9Z1A7)、狗CTLA4(UniProt登录号Q9XSI1)、食蟹猴CTLA4(UniProt登录号G7PL88)等)。因此，如本文定义和公开的抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)还可结合来自除人以外的物种的CTLA4。在其他情况下，抗CTLA4抗体可对人CTLA4具有完全特异性，并且可不展现物种交叉反应性或其他类型的交叉反应性。

术语“CTLA4抗体”是指能够结合人CTLA4(例如，可活化抗CTLA4抗体)的如本文定义的抗体。

术语“嵌合抗体”是指包含源于不同动物物种的氨基酸序列的抗体，诸如具有源于人抗体的可变区和鼠免疫球蛋白恒定区的那些。

术语“竞争结合”是指两个抗体在它们与结合靶标结合时的相互作用。如果相较于在不存在第二抗体下第一抗体的结合，在第二抗体存在下，第一抗体与它的同源表位的结合被可检测地降低，那么第一抗体与第二抗体竞争结合。其中在第一抗体存在下，第二抗体与它的表位的结合也被可检测地降低的替代方案可为但无需为事实。也就是说，第一抗体可抑制第二抗体与它的表位的结合，而不伴有第二抗体抑制第一抗体与它的相应表位的结合的情况。然而，当每个抗体可检测地抑制另一抗体与它的同源表位的结合时，无论程度相同、更大还是更小，抗体都被称为彼此“交叉竞争”结合它们的一个或多个相应表位。

术语“表位”是指抗原上与抗体(或其抗原结合片段)相结合的部分。可由通过蛋白质的三级折叠来并置的连续氨基酸或不连续氨基酸形成表位。由连续氨基酸形成的表位通常在暴露于变性溶剂时保留，而通过三级折叠形成的表位通常在用变性溶剂处理时丢失。表位可包括处于独特空间构象的不同数量的氨基酸。确定表位的空间构象的方法包括，例如，x射线晶体学、2维核磁共振、与质谱组合的氘氢交换，或定点诱变，或与抗原以及具有其结合抗体及其变体的其复合物结构的计算机建模组合使用的所有方法。参见，例如，Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology中，第66卷，G.E.Morris编辑(1996)。一旦确定了抗原的期望表位，就可以例如使用本文所述的技术生成针对所述表位的抗体。抗体的生成和表征也可阐明关于期望表位的信息。由此信息，接着可以竞争性地筛选结合相同表位的抗体。实现这一点的方法是进行交叉竞争研究，以寻找彼此竞争结合的抗体，即竞争结合抗原的抗体。基于其交叉竞争“分拣(binning)”抗体的高通量方法描述于PCT公布号WO 03/48731中。

术语“糖基化位点”是指由真核细胞识别为用于附接糖残基的位置的氨基酸残基。在其中附接碳水化合物(诸如低聚糖)的氨基酸通常为天冬酰胺(N-键)、丝氨酸(O-键)和苏氨酸(O-键)残基。附接的特异性位点通常以在本文称为“糖基化位点序列”的氨基酸序列为标志。用于N-连接糖基化的糖基化位点序列为：-Asn-X-Ser-或-Asn-X-Thr-，其中X可以是除脯氨酸之外的任何常规氨基酸。术语“N-连接的”和“O-连接的”是指在糖分子与氨基酸残基之间用作附接位点的化学基团。N-连接的糖通过氨基附接；O-连接的糖通过羟基附接。术语“聚糖占据(glycan occupancy)”是指存在连接至糖基化位点的碳水化合物部分(即，聚糖位点被占据)。在多肽上存在至少两个潜在糖基化位点的情况下，没有一个(0-聚糖位点占据)、一个(1-聚糖位点占据)或两个(2-聚糖位点占据)位点可以被碳水化合物部分占据。

术语“宿主细胞”是指可被工程改造来产生目标蛋白质、蛋白质片段或肽的细胞系统。宿主细胞包括不限于培养细胞，例如源于啮齿动物(大鼠、小鼠、豚鼠或仓鼠)的哺乳动物培养细胞诸如CHO、BHK、NSO、SP2/0、YB2/0；人细胞，例如HEK293F细胞、HEK293T细胞；或人组织或杂交瘤细胞、酵母细胞、昆虫细胞(例如S2细胞)、细菌细胞(例如大肠杆菌(E.coli)细胞)以及包含在转基因动物或培养组织内的细胞。所述术语不仅涵盖特定主题细胞，而且还涵盖这种细胞的子代。因为某些修饰可由于突变或环境影响而发生在继代中，所以所述子代可能不与亲本细胞相同，但仍然被包括在术语“宿主细胞”的范围内。

“人抗体”是具有对应于由人或人细胞产生或源于非人来源的抗体的氨基酸序列的氨基酸序列的抗体，所述非人来源利用人抗体谱系或其他人抗体编码序列。人抗体的这个定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。

术语“人源化抗体”是指包含来源于人抗体序列的氨基酸残基的嵌合抗体。人源化抗体可包含来自非人动物或合成抗体的一些或所有CDR或HVR，而抗体的框架和恒定区包含来源于人抗体序列的氨基酸残基。

术语“说明性抗体”是指本公开中描述以及指定为表A和表B中所列的那些的抗体中的任一者，以及包含表A和表B中所列的抗体的6个HVR和/或VH和VL的任何抗体。这些抗体可处于任何类别(例如IgA、IgD、IgE、IgG和IgM)。因此，以上鉴定的每种抗体涵盖处于所有五个类别的具有相同V_L区和V_H区氨基酸序列的抗体。此外，处于IgG类别的抗体可处于任何子类(例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)。因此，处于IgG子类的以上鉴定的每种抗体涵盖处于所有四个子类的具有相同V_L区和V_H区氨基酸序列的抗体。处于五个类别以及处于四个IgG子类的人抗体的重链恒定区的氨基酸序列在本领域中是已知的。

“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”是指其中结合到某些细胞毒性细胞(例如，NK细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)上存在的Fc受体(FcR)上的分泌免疫球蛋白使得这些细胞毒性效应细胞能够与携带抗原的靶细胞特异性结合并且随后用细胞毒素杀死靶细胞的细胞毒性形式。用于介导ADCC的原代细胞，NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。FcR在造血细胞上的表达在Ravetch和Kinet，Annu.Rev.Immunol.9:457-92(1991)第464页的表3中进行概述。为了评定感兴趣的分子的ADCC活性，可以进行体外ADCC测定，诸如美国专利号5,500,362或5,821,337或美国专利号6,737,056(Presta)所描述的。用于此类测定的有用效应细胞包括PBMC和NK细胞。可替代地或另外地，可以在体内(例如在动物模型中，诸如Clynes等人，PNAS(USA)95:652-656(1998)中公开的动物模型中)评定感兴趣的分子的ADCC活性。本文的实施例中提供用于评估ADCC活性的示例性测定。

“补体依赖性细胞毒性”或“CDC”是指在补体存在下靶细胞的裂解。经典补体途径的激活通过补体系统的第一组分(C1q)与结合其同源抗原的(适当亚类的)抗体的结合来启动。为了评估补体激活，可以进行CDC测定，例如，如Gazzano-Santoro等人，J.Immunol.Methods 202:163(1996)中所描述。具有改变的Fc区氨基酸序列(具有Fc区变体的多肽)并且C1q结合能力升高或降低的多肽变体描述于，例如，美国专利号6,194,551B1和WO 1999/51642。还参见Idusogie等人J.Immunol.164:4178-4184(2000)。

“经分离”抗体(例如，可活化抗体)是已与它的天然环境的组分分离的抗体或结合分子。在一些实施方案中，抗体被纯化至大于95％或99％纯度，如通过例如电泳(例如SDS-PAGE、等电聚焦(IEF)、毛细管电泳)或色谱(例如离子交换或反相HPLC)所测定。对于用于评估抗体纯度的方法的综述，参见例如Flatman等，J.Chromatogr.B848:79-87(2007)。

术语“k_a”是指特定抗体-抗原相互作用的缔合速率常数，而术语“k_d”是指特定抗体-抗原相互作用的解离速率常数。

术语“K_D”是指特定抗体-抗原相互作用的平衡解离常数。它由k_d与k_a的比率(即，k_d/k_a)获得，并且表示为摩尔浓度(M)。K_D用作抗体与它的结合配偶体的结合的亲和力的量度。K_D越小，抗体越紧密结合，或抗体与抗原之间的亲和力越高。举例来说，相比于具有微体积摩尔浓度(μM)解离常数的抗体，具有纳体积摩尔浓度(nM)解离常数的抗体更紧密结合特定抗原。抗体的K_D值可使用本领域中完善建立的方法确定。一种用于确定抗体的K_D的方法是通过使用表面等离子体共振(SPR)，通常利用生物传感器系统，诸如系统。举例来说，使用BIACORE^TM系统的测定程序(BIAcore测定)描述于本公开的至少实施例3中。

术语“哺乳动物”是指哺乳纲的任何动物物种。哺乳动物的实例包括：人；实验室动物诸如大鼠、小鼠、仓鼠、兔、非人灵长类动物和豚鼠；家养动物诸如猫、狗、牛、绵羊、山羊、马和猪；以及圈养野生动物诸如狮子、老虎、大象等。

如本文所用，两个多肽序列之间的“序列一致性”指示在所述序列之间相同的氨基酸的百分比。多肽的氨基酸序列一致性可以使用已知计算机程序诸如Bestfit、FASTA或BLAST常规地确定(参见，例如Pearson,Methods Enzymol.183:63-98(1990)；Pearson,Methods Mol.Biol.132:185-219(2000)；Altschul等人,J.Mol.Biol.215:403-410(1990)；Altschul等人,Nucelic Acids Res.25:3389-3402(1997))。当使用Bestfit或任何其他序列比对程序确定特定序列是否与参考氨基酸序列具有例如95％一致性时，设定参数，使得在参考氨基酸序列的全长上计算一致性的百分比并且允许参考序列中的氨基酸残基的总数的同源性的间隔最高至5％。确定多肽之间的一致性百分比的这一上述方法适用于本文公开的所有蛋白质、其片段或变体。

如本文所用，术语“结合”、“特异性结合”或“对……具有特异性”是指靶标与抗体之间的可测量和可重现相互作用诸如结合，此在包括生物分子的分子的异质群体存在下，确定所述靶标的存在。举例来说，结合或特异性结合靶标(其可为表位)的抗体是相比于它结合其他靶标，以更大亲和力、亲合力，更易于和/或以更久持续时间结合这个靶标的抗体。在一个实施方案中，抗体与无关靶标结合的程度小于所述抗体与靶标结合的约10％，如例如通过放射免疫测定(RIA)所测量。在某些实施方案中，特异性结合靶标的抗体具有≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM或≤0.1nM的解离常数(Kd)。在某些实施方案中，抗体特异性结合蛋白质上在来自不同物种的蛋白质之间保守的表位。在另一实施方案中，特异性结合可包括但不要求排他性结合。

关于哺乳动物中的某一疾病病状的术语“治疗(treat、treating或treatment)”是指在患有该疾病病状的哺乳动物中导致期望或有益的效应。期望或有益的效应可包括疾病的一种或多种症状(即，肿瘤生长和/或转移，或由免疫细胞的数量和/或活性介导的其他作用等)的频率或严重程度降低，或疾病、病状或病症的进一步发展的停止或抑制。在治疗哺乳动物的癌症的上下文中，期望或有益的效应可包括癌细胞的进一步生长或扩散的抑制、癌细胞的死亡、癌症复发的抑制、癌症相关疼痛的减少，或哺乳动物存活率的提高。所述作用可以是主观或客观的。例如，如果哺乳动物是人，那么人可将精力或活力改善或疼痛减少记录为改善的自觉症状或对疗法的响应。可替代地，临床医生可基于体检、实验室参数、肿瘤标志物或影像学发现注意到肿瘤大小或肿瘤负荷的减小。对于对治疗的响应，临床医生可观察的一些实验室征象包括测试的标准化，诸如白血细胞计数、红血细胞计数、血小板计数、红细胞沉降率以及各种酶水平。另外，临床医生可观察到可检测肿瘤标志物的减少。可替代地，可使用其他测试评估客观改善，诸如声像图、核磁共振测试以及正电子发射测试。

关于哺乳动物中的某一疾病病状的术语“预防(prevent或preventing)”是指预防或延迟疾病的发作，或预防其临床或亚临床症状的出现。

术语“分离核酸”是指与在核酸的天然来源中存在的其他核酸分子分开的基因组、cDNA或合成来源或其组合的核酸分子。例如，关于基因组DNA，术语“分离的”包括与基因组DNA天然相关联的染色体分开的核酸分子。优选地，“分离的”核酸不含天然侧接于所述核酸的序列(即，位于目标核酸的5'端和3'端的序列)。

术语“载体”是指能够运送外来核酸分子的核酸分子。外来核酸分子通过重组技术诸如连接或重组来连接于载体核酸分子。这允许在宿主细胞或生物体中繁殖、选择、进一步操作或表达外来核酸分子。载体可为质粒、噬菌体、转座子、粘粒、染色体、病毒或病毒粒子。一种类型的载体可在引入宿主细胞中后整合至宿主细胞的基因组中，并且由此连同宿主基因组一起复制(例如非游离型哺乳动物载体)。另一类的载体能够在它所引入的宿主细胞中自主复制(例如具有细菌复制起点的细菌载体和游离型哺乳动物载体)。能够引导它们所操作性地连接的可表达外来核酸的表达的另一特定类型的载体通常被称为“表达载体”。表达载体通常具有驱动可表达外来核酸的表达的控制序列。被称为“转录载体”的较简单载体仅能够被转录而非翻译：它们可在靶标细胞中复制而非表达。术语“载体”涵盖所有类型的载体，无论它们的功能如何。能够引导它们所操作性地连接的可表达核酸的表达的载体通常被称为“表达载体”。“载体”的其他实例可包括展示载体(例如引导所编码多肽在病毒或细胞(诸如细菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞和/或哺乳动物细胞)的表面上表达和展示的载体)。

如本文所用，“受试者”、“患者”或“个体”可指人或非人动物。“非人动物”可指不分类为人的任何动物，诸如家养动物、农场动物或动物园动物、运动动物、玩赏动物(诸如狗、马、猫、母牛等)以及研究中使用的动物。研究动物可不加限制地指代线虫、节肢动物、脊椎动物、哺乳动物、蛙、啮齿动物(例如小鼠或大鼠)、鱼(例如斑马鱼或河豚鱼)、鸟(例如鸡)、狗、猫以及非人灵长类动物(例如恒河猴、食蟹猴、黑猩猩等)。在一些实施方案中，受试者、患者或个体是人。

“有效量”是指至少以下数量：在必要剂量下以及持续必要时期，所述数量有效实现一种或多种包括治疗或防治结果的所需或所指示作用。有效量可以一次或多次施用来提供。出于本申请的目的，抗体、药物、化合物或药物组合物的有效量是足以直接或间接实现防治性或治疗性治疗的量。如在临床情形下所了解，药物、化合物或药物组合物的有效量可或可不与另一药物、化合物或药物组合物联合实现(例如如以单一疗法或组合疗法形式施用的有效量)。因此，可在施用一种或多种治疗剂的情形下考虑“有效量”，并且如果与一种或多种其他药剂联合，可实现或实现了合乎需要结果，那么单一药剂可被视为以有效量给予。

术语“复发”、“复发性复发”或“复发的”是指在临床评估疾病或癌症消失后再发生。远距离转移或局部复发的诊断可被认为是复发。

术语“难治性”或“耐药性”是指对治疗没有响应的癌症或疾病。

如本文所用，“完全缓解”或“CR”是指所有靶病变的消失；“部分缓解”或“PR”是指靶病变的最长直径之和(SLD)至少降低30％，以基线SLD作为参考；且“疾病稳定”或“SD”是指自开始治疗以来以最低点SLD作为参考，未使靶病变充分缩小以符合PR，又未充分增加以符合PD。

如本文所用，“疾病进展”或“PD”是指靶病变的SLD至少增加20％，自开始治疗以来以最低点SLD作为参考或存在一个或多个新病变。

如本文所用，“无进展生存期”(PFS)是指治疗期间及之后疾病(如癌症)未恶化的时间长度。无进展生存期可包括患者经历完全缓解或部分缓解的时间，以及患者经历疾病稳定的时间。

如本文所用，“总体响应率”(ORR)是指完全缓解(CR)率和部分缓解(PR)率的和。

如本文所用，“总体存活”是指在特定持续时间后，群组中可能存活的个体的百分比。

如本文所用，术语“生物标志物”或“标志物”通常是指分子(例如，前体mRNA、mRNA、蛋白质等)或细胞群体(例如，效应记忆T细胞或T_em细胞、或调节性T细胞或T_reg细胞)，其在受试者的组织(例如，肿瘤)中或上的水平，或在分子的情况下，由受试者的组织或细胞的分泌可以通过已知方法(或本文公开的方法)检测并且是预测的或可以用于预测(或辅助预测)受试者对其的敏感性，并且在一些实施方案中，预测(或辅助预测)受试者对治疗方案(例如，利用抗CTLA4抗体治疗)的应答性。

如本文所用，术语“样品”是指获得自或来源于目的受试者的组合物，其包含待表征和/或鉴定的细胞和/或其他分子实体，例如基于物理、生化、化学和/或生理特征。

如本文所用，术语“组织或细胞样品”是指获得自受试者或患者的组织的类似细胞的集合。组织或细胞样品的来源可以是来自新鲜、冷冻和/或保存的器官或组织样品或活检或抽吸物的实体组织；血液或任何血液成分；体液，例如脑脊液、羊水、腹膜液或间质液；来自受试者的妊娠或发育过程中任何时间的细胞。组织样品也可以是原代细胞或培养细胞。任选地，组织或细胞样品获得自疾病组织或器官。组织样品可以包括在自然界中不与组织自然混合的化合物，例如防腐剂、抗凝剂、缓冲剂、固定剂、营养物、抗生素等。如本文所用，“参考值”或“参考水平”可以是绝对值；相对值；具有上限和/或下限的值；一系列值；平均值；中值；平均值；或与特定水平或基准水平相比的值。

如本文所用，“基线水平”或“基线值”是指受试者在开始治疗(例如抗CTLA4抗体治疗)前的水平或值。

如本文所用“参考样品”、“参考细胞”、“参考组织”、“对照样品”、“对照细胞”或“对照组织”是指用于比较目的的样品、细胞、组织、标准品或水平。在一个实施方案中，参考样品、参考细胞、参考组织、对照样品、对照细胞或对照组织是从同一受试者或个体的身体(例如，组织或细胞)的健康和/或非患病部位获得。例如，与患病细胞或组织相邻的健康和/或非患病细胞或组织(例如，与肿瘤相邻的细胞或组织)。在另一实施方案中，参考样品是从同一受试者或个体的身体未治疗的组织和/或细胞获得。在又一实施方案中，参考样品、参考细胞、参考组织、对照样品、对照细胞或对照组织是从个体(非受试者或非个体)的身体(例如，组织或细胞)健康和/或非患病部位获得。甚至在另一实施方案中，参考样品、参考细胞、参考组织、对照样品、对照细胞或对照组织是从个体(非受试者或非个体)的身体未经治疗的组织和/或细胞中获得的。

“相关(correlate)”或“相关(correlating)”是指以任何方式将第一次分析或方案的性能和/或结果与第二次分析或方案的性能和/或结果进行比较。例如，可以使用第一分析或方案的结果来开展第二方案，和/或可使用第一分析或方案的结果来确定是否应开展第二分析或方案。关于生物标志物分析或方案的实施方案中，可以使用生物标志物水平分析或方案的结果来确定是否开展特定治疗方案。关于生物标志物水平分析或方案的实施方案中，可以使用生物标志物水平分析或方案的结果来确定是否应开展特定治疗方案。

患者的“有效响应”或患者对药物治疗的“应答性”以及类似措辞是指赋予有疾病或病症(如癌症)风险或患有疾病或病症的患者的临床或治疗益处。在一个实施方案中，这种益处包括以下任何一种或多种：生存期延长(包括总生存期和无进展生存期)；导致客观缓解(包括完全缓解或部分缓解)；或改善癌症的体征或症状。

对治疗“不具有有效响应”的患者是指没有任何一项延长生存期(包括总生存期和无进展生存期)；导致客观缓解(包括完全缓解或部分缓解)；或改善癌症的体征或症状的患者。

除非另外指示，否则本申请的方法和技术通常根据本领域熟知且如本说明书通篇引用和论述的各种一般性和更特定参考文献中所描述的方法来执行。此类参考文献包括，例如，Sambrook和Russell,Molecular Cloning,A Laboratory Approach,Cold SpringHarbor Press,Cold Spring Harbor,N.Y.(2001)，Ausubel等人,Current Protocols inMolecular Biology,John Wiley&Sons,NY(2002)，以及Harlow和Lane Antibodies:ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.(1990)。酶促反应和纯化技术是根据制造商说明书，如本领域中通常所达成或如本文所述来执行。与本文所述的分析化学、合成有机化学以及医学和药物化学结合使用的命名法，以及所述分析化学、合成有机化学以及医学和药物化学的实验室程序和技术是本领域熟知和常用的那些。标准技术用于化学合成、化学分析、药物制备、配制和递送以及患者的治疗。

如本文所用，20种常规氨基酸及其缩写遵循常规用法。参见Immunology—ASynthesis(第2版,E.S.Golub和D.R.Gren编辑,Sinauer Associates,Sunderland,Mass.(1991))。

如本文所用，除非内容另外明确规定，否则单数形式“一个(种)(a/an)”和“这个(种)(the)”包括复数个(种)指示物。因此，举例来说，提及“一个(种)分子”任选地包括两个(种)或更多个(种)所述分子的组合，以此类推。

如本文所用的术语“约”是指相应值的易于为本技术领域中的熟练人士所知的通常误差范围。在本文中提及“约”某一值或参数包括(并且描述)有关那个值或参数本身的实施方案。

应了解，本文所述的本公开的方面和实施方案包括“包含”、“由……组成”以及“基本上由……组成”方面和实施方案。

如本文所用，对“并非”某个值或参数的引用通常指描述“除某个值或参数以外”。例如，该方法不用于治疗X型癌症，表示该方法用于治疗X型以外的癌症。

本文使用的术语“约X-Y”具有与“约X至约Y”相同的含义。

如本文所用，术语“和/或”，短语例如“A和/或B”旨在包括A和B二者；A或B；A(单独)；和B(单独)。类似地，如本文所用，术语“和/或”，短语例如“A、B和/或C”旨在涵盖以下实施方案的每一种：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。

II.治疗方法

本申请提供使用特异性结合人CTLA4的抗CTLA4抗体来治疗受试者癌症的方法。部分III“抗CTLA4抗体”中的任一抗CTLA4抗体(包括全长抗体及其抗原结合片段，和可活化抗体)可用于本文所述的方法。抗CTLA4抗体(例如可活化抗体)可作为单一疗法单独施用，或与一种或多种另外的治疗剂或疗法组合施用。

本文所述的方法可用于治疗多种癌症。在一些实施方案中，癌症为实体癌症。在一些实施方案中，癌症为液体癌症。涉及CTLA4的多种癌症，无论恶性或良性且无论原发性或继发性，都可使用本公开所提供的方法治疗或预防。示范性癌症包含但不限于肝癌、消化系统癌症(例如结肠癌、结肠直肠癌)、肺癌、骨癌、心脏癌、脑癌、肾癌、膀胱癌、血液癌症(例如白血病)、皮肤癌、乳腺癌、甲状腺癌、胰腺癌、头部和/或颈部癌症、眼相关癌症、男性生殖系统癌症(例如前列腺癌、睾丸癌)或女性生殖系统癌症(例如子宫癌、子宫颈癌)。在一些实施方案中，所述癌症为肾癌，例如肾细胞癌或尿路上皮癌。在一些实施方案中，所述癌症为卵巢癌、胰腺癌、胆管癌、肺癌(例如，NSCLC)、乳腺癌、黑色素瘤、肝细胞癌、胶质母细胞瘤、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌或结肠直肠癌(例如，MSI-H或dMMR+结肠直肠癌)。在一些实施方案中，所述癌症为黑色素瘤、NSCLC、肝细胞癌、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌或结肠直肠癌(例如，MSI-H或dMMR+结肠直肠癌)。

在一些实施方案中，所述抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)作为单一疗法向癌症患者施用。在一些实施方案中，所述癌症为黑色素瘤。在其它实施方案中，所述癌症为卵巢癌、胰腺癌、胆管癌、肺癌、乳腺癌、肝细胞癌、胶质母细胞瘤、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、结肠直肠癌。在一些实施方案中，所述肺癌为非小细胞肺癌(NSCLC)。

在一些实施方案中，所述抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)与一种或多种另外的治疗剂组合向癌症患者施用，以用于分开、顺序或同时施用。术语“另外的治疗剂”是指除本公开提供的抗CTLA4抗体之外的任何治疗剂。在一些实施方案中，提供一种用于治疗受试者癌症的组合疗法，其包含向受试者施用治疗有效量的本文所述的抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)与一种或多种另外的治疗剂组合。在一些实施方案中，抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)与一种或多种另外的治疗剂组合施用，另外的治疗剂包含化学治疗剂、免疫治疗剂和/或激素治疗剂。在一些实施方案中，一种或多种另外的治疗剂选自由以下组成的组：病毒基因疗法、免疫检查点抑制剂、靶向疗法、放射疗法和化疗。

在一些实施方案中，所述抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)与抗PD-1抗体组合施用。在一些实施方案中，所述抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)与抗PD-L1抗体组合施用。在一些实施方案中，所述抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)与抗CD137抗体组合施用。在一些实施方案中，所述抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)与VEGF抑制剂组合施用。在一些实施方案中，所述抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)与化学治疗剂组合施用。在一些实施方案中，所述抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)与PARP抑制剂组合施用。

在一些实施方案中，本文提供治疗受试者癌症的方法，包含向受试者施用：(a)有效量的可活化抗CTLA4抗体，和(b)有效量的抗PD-1抗体；其中所述可活化抗体包含：多肽，所述多肽从N末端至C末端包含遮蔽性部分(MM)、可裂解部分(CM)和靶标结合部分(TBM)，其中所述MM包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：X_mCPDHPYPCXX(SEQ ID NO:181)、X_mCDAFYPYCXX(SEQ ID NO:182)、X_mCDSHYPYCXX(SEQ ID NO:183)和X_mCVPYYYACXX(SEQ IDNO:184)，并且其中m是2-10，及其中每个X独立地选自由A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y组成的组的氨基酸；其中当所述CM未被裂解时，所述MM抑制所述可活化抗CTLA4抗体与人CTLA4的结合；其中所述CM包含至少第一裂解位点；其中：a)所述TBM包含抗体轻链可变区(VL)，并且所述可活化抗体还包含第二多肽，所述第二多肽包含抗体重链可变区(VH)；b)所述TBM包含抗体重链可变区(VH)，并且所述可活化抗体还包含第二多肽，所述第二多肽包含抗体轻链可变区(VL)；c)所述TBM从N末端至C末端包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)；或d)所述TBM从N末端至C末端包含抗体重链可变区(VH)和抗体轻链可变区(VL)；其中当所述CM被裂解时，所述可活化抗体通过所述VH和VL结合人CTLA4。在一些实施方案中，所述抗PD-1抗体为2E5。在一些实施方案中，所述抗PD-1抗体包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述VH包含含有SEQ ID NO:294的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:295的氨基酸序列的HVR-H2和含有SEQ ID NO:296的氨基酸序列的HVR-H3；及其中所述VL包含含有SEQ ID NO:297的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:298的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:299的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，所述抗PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:300的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述抗PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:301的氨基酸序列的VL。在前述的一些实施方案中，所述癌症诶肺癌。在一些实施方案中，所述肺癌为非小细胞肺癌(NSCLC)。在前述的其它实施方案中，所述癌症为卵巢癌、胰腺癌、胆管癌、乳腺癌、肝细胞癌、胶质母细胞瘤、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌或结肠直肠癌。

在一些实施方案中，本文提供治疗受试者癌症的方法，包含向受试者施用：(a)有效量的可活化抗CTLA4抗体，和(b)有效量的抗CD137抗体；其中所述可活化抗CTLA4抗体包含：多肽，所述多肽从N末端至C末端包含遮蔽性部分(MM)、可裂解部分(CM)和靶标结合部分(TBM)，其中所述MM包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：X_mCPDHPYPCXX(SEQ ID NO:181)、X_mCDAFYPYCXX(SEQ ID NO:182)、X_mCDSHYPYCXX(SEQ ID NO:183)和X_mCVPYYYACXX(SEQID NO:184)，并且其中m是2-10，及其中每个X独立地选自由A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y组成的组的氨基酸；其中当所述CM未被裂解时，所述MM抑制所述可活化抗CTLA4抗体与人CTLA4的结合；其中所述CM包含至少第一裂解位点；其中：a)所述TBM包含抗体轻链可变区(VL)，并且所述可活化抗体还包含第二多肽，所述第二多肽包含抗体重链可变区(VH)；b)所述TBM包含抗体重链可变区(VH)，并且所述可活化抗体还包含第二多肽，所述第二多肽包含抗体轻链可变区(VL)；c)所述TBM从N末端至C末端包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)；或d)所述TBM从N末端至C末端包含抗体重链可变区(VH)和抗体轻链可变区(VL)；其中当所述CM被裂解时，所述可活化抗体通过所述VH和VL结合人CTLA4；及其中所述抗CD137抗体与人CD137细胞外结构域特异性结合，其中所述抗体结合至一个或多个选自由以下氨基酸残基组成的组：SEQ ID NO:231的氨基酸残基51、53、62-73、83、89、92、95-104及112-116。在一些实施方案中，所述癌症为乳腺癌。在前述的其它实施方案中，所述癌症为肺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰腺癌、胆管癌、肝细胞癌、胶质母细胞瘤、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌或结肠直肠癌。

在一些实施方案中，本文提供治疗受试者癌症的方法，包含向受试者施用：(a)有效量的抗CTLA4抗体，其中抗体特异性结合包含人CTLA4的氨基酸残基Y105和L106，但不包含残基I108的表位，其中氨基酸残基的编号根据SEQ ID NO:207，和(b)有效量的VEGF抑制剂。在一些实施方案中，所述VEGF抑制剂为呋喹替尼。在一些实施方案中，所述癌症为结肠癌。在一些实施方案中，所述VEGF抑制剂为安罗替尼。在一些实施方案中，所述癌症为肾癌。在一些实施方案中，所述癌症为肾腺癌。在一些实施方案中，本文提供治疗受试者癌症的方法，包含向受试者施用：(a)有效量的抗CTLA4抗体，其中抗体特异性结合包含人CTLA4的氨基酸残基Y105和L106，但不包含残基I108的表位，其中氨基酸残基的编号根据SEQ ID NO:207，和(b)有效量的化学治疗剂。在一些实施方案中，所述化学治疗剂为多西他赛。在一些实施方案中，所述癌症为乳腺癌。在一些实施方案中，本文提供治疗受试者癌症的方法，包含向受试者施用：(a)有效量的抗CTLA4抗体，其中抗体特异性结合包含人CTLA4的氨基酸残基Y105和L106，但不包含残基I108的表位，其中氨基酸残基的编号根据SEQ ID NO:207，和(b)有效量的PARP抑制剂。在一些实施方案中，所述PARP抑制剂为奥拉帕尼。在前述的一些实施方案中，所述癌症为乳腺癌。在前述的其它实施方案中，所述癌症为肺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰腺癌、胆管癌、肝细胞癌、胶质母细胞瘤、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌或结肠直肠癌。

癌症治疗可通过例如肿瘤消退、肿瘤重量或大小缩小、进展时间、存活持续时间、无进展生存期、总体缓解率、缓解持续时间、生活质量、蛋白质表达和/或活性来评估。可以采用确定治疗功效的方法，包括例如通过放射成像来测量响应。

可以通过任何合适的施用的肠途径或肠胃外途径施用本公开提供的抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)、一种或多种额外治疗剂和组合物。术语施用的“肠途径”是指经由胃肠道的任何部分的施用。肠途径的实例包括口腔、粘膜、颊面和直肠途径，或胃内途径。施用的“肠胃外途径”是指除了肠途径以外的施用途径。施用的肠胃外途径的实例包括静脉内、肌内、真皮内、腹膜内、瘤内、膀胱内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心脏内、经气管、关节内、被膜下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内、皮下或局部施用。可使用任何合适的方法施用本公开的抗体和组合物，诸如通过口服摄取、鼻胃管、胃造口管(gastrostomy tube)、注射、输注、可植入输注泵，以及渗透泵。合适的施用途径和方法可取决于多种因素而变化，诸如所用的具体抗体、期望的吸收速率、所用的具体制剂或剂型、所治疗病症的类型或严重程度、具体的作用部位，以及患者的状况，并且可以由本领域技术人员容易地选择。在一些实施方案中，抗CTLA4抗体是静脉内施用。

在一些实施方案中，抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)是以不超过以下中的任一者的剂量施用：20mg/kg、15mg/kg、10mg/kg、9mg/kg、8mg/kg、7mg/kg、6mg/kg、5mg/kg、4mg/kg、3mg/kg、2mg/kg、1mg/kg、0.8mg/kg、0.6mg/kg、0.5mg/kg、0.4mg/kg、0.3mg/kg、0.2mg/kg、0.1mg/kg、0.08mg/kg、0.05mg/kg、0.04mg/kg、0.03mg/kg、0.01mg/kg、0.003mg/kg或0.001mg/kg。在一些实施方案中，抗CTLA4抗体的剂量在以下范围中的任一内，其中范围具有以下中的任一者的上限：20mg/kg、19mg/kg、18mg/kg、17mg/kg、16mg/kg、15mg/kg、14mg/kg、13mg/kg、12mg/kg、11mg/kg、10mg/kg、9mg/kg、8mg/kg、7mg/kg、6mg/kg、5mg/kg、4mg/kg、3mg/kg、2mg/kg、1mg/kg、0.8mg/kg、0.6mg/kg、0.5mg/kg、0.4mg/kg、0.3mg/kg、0.2mg/kg、0.1mg/kg、0.08mg/kg、0.05mg/kg、0.04mg/kg、0.03mg/kg或0.003mg/kg，及以下中的任一者的独立选择的下限：19mg/kg、18mg/kg、17mg/kg、16mg/kg、15mg/kg、14mg/kg、13mg/kg、12mg/kg、11mg/kg、10mg/kg、9mg/kg、8mg/kg、7mg/kg、6mg/kg、5mg/kg、4mg/kg、3mg/kg、2mg/kg、1mg/kg、0.8mg/kg、0.6mg/kg、0.5mg/kg、0.4mg/kg、0.3mg/kg、0.2mg/kg、0.1mg/kg、0.08mg/kg、0.05mg/kg、0.04mg/kg、0.03mg/kg、0.01mg/kg、0.003mg/kg或0.001mg/kg，且其中下限小于上限。在一些实施方案中，抗CTLA4抗体是以下列中的任一者的剂量施用：约0.03mg/kg至约20mg/kg、约0.1mg/kg至约20mg/kg、约0.3mg/kg至约20mg/kg、约1mg/kg至约20mg/kg、约3mg/kg至约20mg/kg、约5mg/kg至约20mg/kg、约0.03mg/kg至约10mg/kg、约0.1mg/kg至约10mg/kg、约0.3mg/kg至约10mg/kg、约1mg/kg至约10mg/kg、约3mg/kg至约10mg/kg、约5mg/kg至约10mg/kg、约0.03mg/kg至约0.1mg/kg、约0.1mg/kg至约0.3mg/kg、约0.3mg/kg至约1mg/kg、约1mg/kg至约3mg/kg、约3mg/kg至约5mg/kg、约0.1mg/kg至约3mg/kg、或约1mg/kg至约5mg/kg。本文所述的剂量是指用于人的合适剂量，或用于特定物种的受试者的等效剂量。在一些实施方案中，对于人受试者，抗CTLA4抗体是以等效于约0.03mg/kg至约20mg/kg的剂量施用：如约0.03mg/kg、约0.1mg/kg、约0.3mg/kg、约1.0mg/kg、约3.0mg/kg、约6.0mg/kg、约10mg/kg或约20mg/kg。在一些实施方案中，抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)以约0.1mg/kg和约20mg/kg之间的剂量施用，例如约0.1mg/kg、约0.3mg/kg、约1mg/kg、约3mg/kg、约6mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg或约20mg/kg。在一些实施方案中，抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)以0.1mg/kg和20mg/kg之间的剂量施用，例如0.1mg/kg、0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg、6mg/kg、10mg/kg、15mg/kg或20mg/kg。

抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)和/或一种或多种额外治疗剂的有效量可以单剂量或多剂量施用。对于包含以多剂量施用抗CTLA4抗体的方法，示范性给药频率包含但不限于，每周一次、每周不间断、三周中的两周每周一次、四周中的三周每周一次、每三周一次、每两周一次、每月一次、每六个月一次、每年一次等。在一些实施方案中，抗CTLA4抗体约每周一次、每2周一次、每3周一次、每6周一次或每12周一次施用。在一些实施方案中，每次施用之间的间隔小于约3年、2年、12个月、11个月、10个月、9个月、8个月、7个月、6个月、5个月、4个月、3个月、2个月、1个月、4周、3周、2周或1周中的任一个。在一些实施方案中，每次施用之间的间隔大于约1周、2周、3周、4周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、2年或3年中的任一个。在一些实施方案中，给药方案不存在中断。

在一些实施方案中，抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)和/或一种或多种额外治疗剂以低频率施用，例如，不超过每周一次、每隔一周一次、每三周一次、每月一次、每2个月一次、每3个月一次、每4个月一次、每5个月一次、每6个月一次、每7个月一次、每8个月一次、每9个月一次、每10个月一次、每11个月一次、每年一次或更少中的任一个。在一些实施方案中，抗CTLA4抗体和/或一种或多种额外治疗剂以单一剂量施用。在一些实施方案中，抗CTLA4抗体和/或一种或多种额外治疗剂约每三周施用一次。

在一些实施方案中，抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)和/或一种或多种额外治疗剂被施用2个或更多个周期，例如约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或更多个周期中的任一个。在一些实施方案中，抗CTLA4抗体被施用至少4个周期。

在一些实施方案中，治疗包括初始阶段和后续维持阶段。在一些实施方案中，抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)和/或一种或多种额外治疗剂在维持阶段的施用频率低于初始阶段。在一些实施方案中，抗CTLA4抗体和/或一种或多种额外治疗剂在维持阶段的施用频率与初始阶段相同。在一些实施方案中，治疗包含初始阶段：其中抗CTLA4抗体和/或一种或多种额外治疗剂约每三周施用一次持续至少4个周期，和维持期：其中抗CTLA4抗体和/或一种或多种额外治疗剂约每4周施用一次至每12周施用一次，例如每4周一次、每6周一次、每8周一次、每10周一次或每12周一次。在一些实施方案中，维持阶段的给药频率根据一种或多种生物标志物进行调整，例如T_reg细胞、CD8+T_em细胞、CD4+T_em细胞、CD8+T_em细胞与T_reg细胞的比率、CD4+T_em细胞与T_reg细胞的比率、CD25+T细胞和/或NK细胞。例如，如果受试者接受抗CTLA4抗体后显示CD8+T_em细胞与T_reg细胞的比率增加，则受试者可约每4周进一步施用抗CTLA4抗体。

抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)和/或一种或多种额外治疗剂的施用可以延长一段时间，例如从约一周至约一个月、从约一个月至约一年、从约一年至约几年。在一些实施方案中，抗CTLA4抗体和/或一种或多种额外治疗剂以至少约1周、2周、3周、4周、5周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、1年、2年、3年、4年或更长的任一时间施用。

在一些实施方案中，其中所述可活化抗CTLA4抗体，在MM裂解后，包含含有SEQ IDNO:87的氨基酸序列的重链可变区或与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列，和/或含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的轻链可变区或与SEQ ID NO:100的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列，所述可活化抗CTLA4抗体以约3mg/kg至约20mg/kg之间的剂量每三周施用一次、约3mg/kg至约15mg/kg之间的剂量每三周施用一次、约6mg/kg至约15mg/kg之间的剂量每三周施用一次或约6mg/kg至约10mg/kg之间的剂量每三周施用一次。在一些此类实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体以约3mg/kg的剂量每三周施用一次。在其它此类实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体以约6mg/kg的剂量每三周施用一次。在其它此类实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体以约10mg/kg的剂量每三周施用一次。在前述的一些实施方案中，所述可活化抗体包含含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的HVR-L3。在前述的一些实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体包含人IgG1 Fc区，例如野生型IgG1 Fc区或具有增强ADCC活性的变体。在前述的一些实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体包含选自由SEQ ID NOS:189-196组成的组的MM氨基酸序列。在前述的一些实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体包含选自由SEQ ID NOS:213-216组成的组的MM氨基酸序列。在前述的一些实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体包含选自由SEQ ID NOS:141-147组成的组的MM氨基酸序列。在前述的一些实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体包含SEQ ID NO:200的MM氨基酸序列。在前述的一些实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体包含含有SEQ ID NO:320或321的氨基酸序列的重链或与SEQ ID NO:320或321的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列，和含有SEQID NO:322的氨基酸序列的轻链或与SEQ ID NO:322的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列。在前述的一些实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体被施用于患有黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾细胞癌或肝细胞癌的患者。在前述的其他实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体被施用于患有MSI-H或dMMR癌症的患者。在前述的其他实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体被施用于癌症已转移的患者。在前述的一些实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体被施用于对先前癌症疗法(包括其他抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体或其组合)具有耐药性或难治性的患者。

在一些实施方案中，其中所述可活化抗CTLA4抗体，在MM裂解后，包含含有SEQ IDNO:87的氨基酸序列的重链可变区或与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列，和/或含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的轻链可变区或与SEQ ID NO:100的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列，所述可活化抗CTLA4抗体以第一较高剂量(例如，在约10mg/kg和约20mg之间)施用至少一个治疗周期(如本文所定义)，并在后续周期中，以较低的剂量施用(例如，约3mg/kg至约10mg/kg之间)。在一些此类实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体以约10mg/kg的剂量施用至少一个治疗周期(例如，一至三个治疗周期)，并在后续治疗周期中以约6mg/kg的剂量施用。在其他此类实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体以约10mg/kg的剂量施用至少一个治疗周期(例如，一至三个治疗周期)，并在后续治疗周期中以约3mg/kg的剂量施用。在其他此类实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体以约15mg/kg的剂量施用至少一个治疗周期(例如，一至三个治疗周期)，并在后续治疗周期中以约10mg/kg的剂量施用。在其他此类实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体以约20mg/kg的剂量施用至少一个治疗周期(例如，一至三个治疗周期)，并在后续治疗周期中以约10mg/kg的剂量施用。在前述的一些实施方案中，所述可活化抗体包含含有SEQ IDNO:23的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列HVR-L2和含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的HVR-L3。在前述的一些实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体包含含有SEQ ID NO:320或321的氨基酸序列的重链或与SEQID NO:320或321的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列，和含有SEQ IDNO:322的氨基酸序列的轻链或与SEQ ID NO:322的氨基酸序列具有至少90％(例如，至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列一致性的氨基酸序列。在前述的一些实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体被施用于患有黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾细胞癌或肝细胞癌的患者。在前述的其他实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体被施用于患有MSI-H或dMMR癌症的患者。在前述的其他实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体被施用于癌症已转移的患者。在前述的一些实施方案中，所述可活化抗CTLA4抗体被施用于对先前癌症疗法(包括其他抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体或其组合)具有耐药性或难治性的患者。

在前述两段的任何实施方案中，所述抗CTLA4抗体可作为单一疗法或与本文公开的一种或多种抗癌症药剂组合施用。例如，所述抗CTLA4抗体可与抗PD-1抗体或抗CD137抗体组合施用。在一些实施方案中，抗CTLA4抗体与抗PD-1抗体或抗CD137抗体组合展现出协同作用。

在一些实施方案中，抗CTLA4抗体和/或一种或多种额外治疗剂治疗消减肿瘤中Treg细胞。在一些实施方案中，抗CTLA4抗体和/或一种或多种额外治疗剂治疗不消减外周组织中Treg细胞。

在一些实施方案中，受试者先前已用先前疗法治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经接受1、2、3、4或更多种先前疗法中的任何一种。在一些实施方案中，受试者已经用尽所有其他可用的疗法。在一些实施方案中，受试者对先前疗法不响应或有耐药性。在一些实施方案中，受试者在先前治疗之后疾病复发。在一些实施方案中，受试者对先前疗法具有难治性。在一些实施方案中，受试者在约1年、6个月、3个月或更短时间内对先前疗法失效。在一些实施方案中，受试者先前未接受先前疗法。

在一些实施方案中，受试者先前已用针对癌症的标准疗法治疗。在一些实施方案中，受试者对标准疗法不响应或有耐药性。在一些实施方案中，受试者在标准疗法之后疾病复发。在一些实施方案中，受试者对标准疗法具有难治性。在一些实施方案中，受试者在大约1年、6个月、3个月或更短时间对标准治疗失效。在一些实施方案中，受试者先前未接受标准疗法。在一些实施方案中，受试者拒绝或不适合标准疗法。

在一些实施方案中，先前疗法(例如，标准疗法)选自病毒基因疗法、免疫疗法、靶疗法、放射疗法以及化学疗法组成的组。在一些实施方案中，先前疗法是免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，先前疗法是CTLA4、PD-1或PD-1配体(例如PD-L1或PD-L2)抑制剂。在一些实施方案中，先前疗法是CTLA4抑制剂，例如不同于本文所述的抗CTLA4抗体的抗CTLA4抗体。在一些实施方案中，先前疗法是伊匹木单抗。在一些实施方案中，先前疗法是伊匹木单抗和/或纳武单抗。

在一些实施方案中，先前疗法是PD-1或PD-1配体抑制剂，包括PD-1结合拮抗剂、PDL1结合拮抗剂和PDL2结合拮抗剂。“PD-1”的别名包括CD279和SLEB2。“PDL1”的别名包括B7-H1、B7-4、CD274和B7-H。“PDL2”的别名包括B7-DC、Btdc和CD273。在一些实施方案中，PD-1、PDL1和PDL2是人PD-1、PDL1和PDL2。

在一些实施方案中，PD-1抑制剂是抑制PD-1与其配体结合配偶体结合的分子。在一些实施方案中，PD-1配体抑制剂是PD-L1和/或PD-L2抑制剂。在一些实施方案中，PD-L1抑制剂是抑制PDL1与其结合配偶体结合的分子。在一些实施方案中，PD-L2结合配偶体是PD-1和/或B7-1。在一些实施方案中，PD-1配体抑制剂是抑制PD-L2与其结合配偶体结合的分子。在一些实施方案中，PD-L2结合配偶体是PD-1。所述抑制剂可以是抗体、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白或寡肽。

在一些实施方案中，PD-1抑制剂是抗PD-1抗体(例如，人抗体、人源化抗体或嵌合抗体)。在一些实施方案中，抗PD-1抗体选自纳武单抗、帕母单抗和CT-011组成的组。在一些实施方案中，PD-1抑制剂是免疫粘附素(例如，包含与恒定区(例如免疫球蛋白序列的Fc区)融合的胞外域或PDL1或PDL2的PD-1结合部分的免疫粘附素)。在一些实施方案中，PD-1抑制剂是AMP-224。纳武单抗，也称为MDX-1106-04、MDX-1106、ONO-4538、BMS-936558和是WO2006/121168中描述的抗PD-1抗体。Pembrolizumab，也称为MK-3475、Merck 3475、lambrolizumab、/>和SCH-900475，是WO2009/114335中描述的抗PD-1抗体。CT-011，也称为hBAT或hBAT-1，是WO2009/101611中描述的抗PD-1抗体。AMP-224，也称为B7-DCIg，是WO2010/027827和WO2011/066342中描述的PDL2-Fc融合可溶性受体。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是纳武单抗(CAS登记号：946414-94-4)。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是帕母单抗(CAS登记号：1374853-91-4)。

在一些实施方案中，PD-L1抑制剂是抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，PD-L1抑制剂选自YW243.55.S70、MPDL3280A、MDX-1105和MEDI4736组成的组。MDX-1105，也称为BMS-936559，是WO2007/005874中描述的抗PD-L1抗体。抗体YW243.55.S70是WO 2010/077634A1中描述的抗PD-L1。MEDI4736是WO2011/066389和US2013/034559中描述的抗PD-L1抗体。可用于本申请方法的抗PD-L1抗体的实例，及其制造方法描述于PCT专利申请WO 2010/077634A1和美国专利号8,217,149中，其以引用的方式并入本文。

先前疗法(例如，标准疗法)还涵盖除去肿瘤的手术和放射疗法。示范性放射疗法包括但不限于电离(电磁)放射治疗(例如，X射线或γ射线)和粒子束放射疗法(例如，高线性能放射(high linear energy radiation))的组合。放射源对于受试者可以是外部的或内部的。

本文所述的方法可用于癌症治疗的各个方面。在一些实施方案中，提供一种抑制个体的细胞增殖(例如肿瘤生长)的方法，包含向个体施用有效量的本文所述抗CTLA4抗体中的任一者。在一些实施方案中，抑制至少约10％(包括例如至少约20％、约30％、约40％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％或更大中的任一者)的细胞增殖。

在一些实施方案中，提供一种抑制个体的肿瘤转移的方法，包含向个体施用有效量的本文所述抗CTLA4抗体中的任一者。在一些实施方案中，抑制至少约10％(包括例如至少约20％、约30％、约40％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％或更大中的任一者)的转移。

在一些实施方案中，提供减少(例如消除)个体的预先存在的肿瘤转移(例如转移至淋巴结)的方法，包含向个体施用有效量的本文所述抗CTLA4抗体中的任一者。在一些实施方案中，减少至少约10％(包括例如至少约20％、约30％、约40％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％或更大中的任一者)的转移。

在一些实施方案中，提供减小个体的预先存在的肿瘤转移(例如转移至淋巴结)的发生率或负荷的方法，包含向个体施用有效量的本文所述抗CTLA4抗体中的任一者。

在一些实施方案中，提供减小个体的肿瘤大小的方法，包含向个体施用有效量的本文所述抗CTLA4抗体中的任一者。在一些实施方案中，该方法使肿瘤大小减小至少约10％(包括例如至少约20％、约30％、约40％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％或更大中的任一者)。

在一些实施方案中，提供一种延长个体癌症疾病进展时间的方法，包含向个体施用有效量的本文所述抗CTLA4抗体中的任一者。在一些实施方案中，该方法使疾病进展时间延长至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、16、20、24、28、32、36或更多周中的任一者。

在一些实施方案中，提供一种延长患有癌症的个体的生存期(例如总生存期或无进展生存期)的方法，包含向个体施用有效量的本文所述抗CTLA4抗体中的任一者。在一些实施方案中，该方法使个体的生存期延长至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18或24个月中的任一者。

在一些实施方案中，提供一种减轻患有癌症的个体一种或多种症状的方法，包含向个体施用有效量的本文所述抗CTLA4抗体中的任一者。在一些实施方案中，所述抗CTLA4抗体与一种或多种额外治疗剂组合施用。

在一些实施方案中，提供一种改善患有癌症的个体生活品质的方法，包含向个体施用有效量的本文所述抗CTLA4抗体中的任一者。

组合疗法

本文提供治疗受试者癌症的方法，包含向受试者施用抗CTLA4抗体与一种或多种额外治疗剂的组合。

在一些实施方案中，所述抗CTLA4抗体与免疫治疗剂组合施用。术语“免疫治疗剂”是指可使哺乳动物的免疫应答增强的化学或生物物质。免疫治疗剂的实例包括：卡介苗(BCG)；细胞因子，诸如干扰素；疫苗，诸如MyVax个性化免疫疗法、Onyvax-P、安可菲(Oncophage)、GRNVAC1、法维得(Favld)、普罗温基(Provenge)、吉瓦克斯(GVAX)、洛瓦新C(Lovaxin C)、拜瓦希得(BiovaxID)、吉姆克斯(GMXX)和纽瓦克斯(NeuVax)；以及抗体，诸如阿来珠单抗(alemtuzumab)(坎帕斯)、贝伐单抗/>西妥昔单抗/>奥佐米星吉妥单抗(gemtuzunab ozogamicin)(米洛他/>)、替坦异贝莫单抗(ibritumomab tiuxetan)(泽瓦林/>)、帕尼单抗(panitumumab)(维克替比/>)、利妥昔单抗/>曲妥珠单抗/>托西莫单抗(tositumomab)(百克沙/>)、伊匹木单抗(叶沃)、曲美木单抗(tremelimumab)、CAT-3888、针对OX40受体的激动抗体(诸如WO2009/079335中公开的那些)、针对CD40受体的激动抗体(诸如WO2003/040170中公开的那些)和TLR-9激动剂(诸如WO2003/015711、WO2004/016805和WO2009/022215中公开的那些)。

在一些实施方案中，所述抗CTLA4抗体与激素治疗剂组合施用。术语“激素治疗剂”是指抑制或消除激素的产生，或抑制或抵抗激素对癌性细胞的生长和/或存活的影响的化学或生物物质。适于本文方法的所述药剂的实例包括US20070117809中公开的那些。特定激素治疗剂的实例包括他莫昔芬(tamoxifen)(洛尔瓦德)、托瑞米芬(toremifene)(法乐通/>)、氟维司群(fulvestrant)(法斯洛德)、阿那曲唑(anastrozole)(安美达/>)、依西美坦(exemestane)(阿诺新/>)、来曲唑(letrozole)(弗隆/>)、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)(美格思/>)、戈舍瑞林(goserelin)(诺雷德)和亮脯利特(leuprolide)(利普安/>)。本公开的抗CTLA4抗体还可与非药物激素疗法组合使用，所述非药物激素疗法诸如(1)移除参与产生激素的器官或腺体诸如卵巢、睾丸、肾上腺和垂体腺的全部或一部分的手术方法，和(2)放射治疗，其中使患者的器官或腺体经受数量足以抑制或消除所靶向激素的产生的放射。

在一些实施方案中，额外治疗剂是以下中的一者或多者：泊马莱斯特、雷利米德、来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、DNA烷基化含铂衍生物顺铂、5-氟尿嘧啶、环磷酰胺、抗CD137抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CD20抗体、抗CD40抗体、抗DR5抗体、抗CDld抗体、抗TIM3抗体、抗SLAMF7抗体、抗KIR受体抗体、抗OX40抗体、抗HER2抗体、抗ErbB-2抗体、抗EGFR抗体、西妥昔单抗、利妥昔单抗、曲妥珠单抗、帕母单抗、放射疗法、单次剂量放射、分次放射、局灶性放射、全器官放射、IL-12、IFNα、GM-CSF、嵌合抗原受体、继承性转移的T细胞、抗癌疫苗和溶瘤性病毒。在一些实施方案中，另外的治疗剂是抗PD-1抗体。在一些实施方案中，另外的治疗剂是抗PD-1抗体。

用于治疗癌症的组合疗法还涵盖抗CTLA4抗体与用以移除肿瘤的手术的组合。抗CTLA4抗体可在手术之前、期间或之后向哺乳动物施用。

用于治疗癌症的组合疗法还涵盖抗CTLA4抗体与放射疗法诸如离子化(电磁)放射疗法(例如X射线或γ射线)和粒子束放射疗法(例如高线性能量放射)的组合。放射源可在哺乳动物的外部或内部。抗CTLA4抗体可在放射疗法之前、期间或之后向哺乳动物施用。

还提供了用于此部分描述方法的本文所述任一抗CTLA4抗体的组合物，和抗CTLA4抗体在制备用于治疗癌症(例如实体癌症，如尿路上皮癌)的药物中的用途。

免疫检查点抑制剂

在一些实施方案中，抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)与免疫检查点抑制剂(例如，抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体)组合施用。免疫检查点抑制剂是抑制免疫系统的控制机制的活性的化合物。免疫系统检查点或免疫检查点是免疫系统中的抑制途径，其通常起到维持自我耐受性或调节生理免疫应答的持续时间和幅度，以减少附带组织损伤。检查点抑制剂可以通过刺激刺激性检查点分子的活性，或抑制通路中的抑制检查点分子的活性来抑制免疫系统检查点。免疫系统检查点分子包括但不限于：细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)、程序性细胞死亡受体1(PD-1)、程序性细胞死亡配体1(PD-L1)、程序性细胞死亡配体2(PD-L2)、淋巴细胞活化基因(LAG3)、B7-1、B7-H3、B7-H4、T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白3(TIM3)、B/T淋巴细胞衰减因子(BTLA)、T细胞活化V结构域Ig抑制因子(VISTA)、杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)和腺苷A2A受体(A2aR)。因此，检查点抑制剂包括CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、LAG3、B7-1、B7-H3、B7-H4、BTLA、VISTA、KIR、A2aR或TIM3的拮抗剂。例如，CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、LAG3、B7-1、B7-H3、B7-H4、BTLA、VISTA、KIR、A2aR或TIM3结合并拮抗其抗体功能的抗体为检查点抑制剂。此外，任何抑制免疫系统检查点抑制功能的分子(例如肽，核酸，小分子等)为检查点抑制剂。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂为特异性结合免疫检查点分子的抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂选自由抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体及抗CTLA-4抗体组成的组。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体。示范性抗PD-1抗体包括但不限于2E5(基石药业)、替雷利珠单抗(tislelizumab)(BGB-A317)、BGB-108、STI-A1110、AM0001、BI754091、信迪利单抗(sintilimab)(IBI308)、西利单抗(cetrelimab)(JNJ-63723283)、特瑞普利单抗(JS-001)、卡瑞利珠单抗(camrelizumab)(SHR-1210、INCSHR-1210、HR-301210)、MEDI-0680(AMP-514)、MGA-012(INCMGA 0012)、纳武单抗(nivolumab)(BMS-936558、MDX1106、ONO-4538)、斯巴达珠单抗(PDR00l)、派姆单抗(pembrolizumab)(MK-3475、SCH 900475)、PF-06801591、西米普利单抗(cemiplimab)(REGN-2810、REGEN2810)、多塔利单抗(TSR-042、ANB011)、匹地利珠单抗(pidilizumab)(CT-011)、FITC-YT-16(PD-1结合肽)、APL-501或CBT-501或杰诺单抗(genolimzumab)(GB-226)、AB-122、AK105、AMG 404、BCD-100、F520、HLX10、HX008、JTX-4014、LZM009、Sym021、PSB205、AMP-224(靶向PD-1融合蛋白)、CX-188(PD-1前体)、AGEN-2034、GLS-010、布格利单抗(budigalimab)(ABBV-181)、AK-103、BAT-1306、CS-1003、AM-0001、TILT-123、BH-2922、BH-2941、BH-2950、ENUM-244C8、ENUM-388D4、HAB-21、H EISCOI 11-003、IKT-202、MCLA-134、MT-17000、PEGMP-7、PRS-332、RXI-762、STI-1110、VXM-10、XmAb-23104、AK-112、HLX-20、SSI-361、AT-16201、SNA-01、AB122、PD1-PIK、PF-06936308、RG-7769、CAB PD-1Abs、AK-123、MEDI-3387、MEDI-5771、4H1128Z-E27、REMD-288、SG-001、BY-24.3、CB-201、IBI-319、ONCR-177、Max-1、CS-4100、JBI-426、CCC-0701、CCX-4503、其生物类似物及其衍生物。在一些实施方案中，也可使用与这些领域公认抗体中的任一种竞争结合PD-1的抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是2E5。2E5及相关抗PD-1抗体已在，例如，在CN107840887A中描述，其全文以引用的方式并入本文。在一些实施方案中，所述免疫检查点抑制剂是特瑞普利单抗。特瑞普利单抗及相关抗PD-1抗体已在，例如，US10066013B2描述中，其全文以引用的方式并入本文。

在一些实施方案中，所述抗PD-1抗体包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述VH包含含有SEQ ID NO:294的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:295的氨基酸序列的HVR-H2、和含有SEQ ID NO:296的氨基酸序列的HVR-H3；及其中VL包含含有SEQ ID NO:297的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:298的氨基酸序列的HVR-L2、和含有SEQ IDNO:299的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，所述抗PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:300的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述抗PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:301的氨基酸序列的VL。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗PD-L1抗体。示范性抗PD-L1抗体包括但不限于阿替利珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、德瓦鲁单抗(durvalumab)(imfinzi)、BGB-A333、SHR-1316(HTI-1088)、CK-301、BMS-936559、恩沃利单抗(envafolimab)(KN035、ASC22)、CS1001、MDX-1105(BMS-936559)、LY3300054、STI-A1014、FAZ053、CX-072、INCB086550、GNS-1480、CA-170、CK-301、M-7824、HTI-1088(HTI-131、SHR-1316)、MSB-2311、AK-106、AVA-004、BBI-801、CA-327、CBA-0710、CBT-502、FPT-155、IKT-201、IKT-703、10-103、JS-003、KD-033、KY-1003、MCLA-145、MT-5050、SNA-02、BCD-135、APL-502(CBT-402或TQB2450)、IMC-001、KD-045、INBRX-105、KN-046、IMC-2102、IMC-2101、KD-005、IMM-2502、89Zr-CX-072、89Zr-DFO-6E11、KY-1055、MEDI-1109、MT-5594、SL-279252、DSP-106、Gensci-047、REMD-290、N-809、PRS-344、FS-222、GEN-1046、BH-29xx、FS-118、其生物类似物及其衍生物。在一些实施方案中，也可使用与这些领域公认抗体中的任一种竞争结合PD-L1的抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是阿替利珠单抗。

抗CD137抗体

在一些实施方案中，抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)与抗CD137抗体组合施用。在一些实施方案中，所述抗CD137抗体为本文所述(参见部分IV.抗CD137抗体)的任一抗CD137抗体(包括全长抗体及其抗原结合片段)。

CD137(也称为CD137受体、4-1BB、TNFRSF9等)是肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRS)的跨膜蛋白。目前对CD137的了解表明，其表达通常是活化依赖性的并且存在于免疫细胞的广泛子集中，所述细胞包括活化的NK和NKT细胞、调节T细胞、树突细胞(DC)、被刺激的肥大细胞、分化中的骨髓细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞以及嗜酸性粒细胞(Wang,2009,Immunological Reviews 229:192-215)。CD137表达还已证实处于肿瘤血管上(Broll,2001,Amer.J.Clin.Pathol.115(4):543-549；Seaman,2007,Cancer Cell 11:539-554)和发炎或动脉粥样硬化的内皮部位上(Drenkard,2007 FASEB J.21:456-463；Olofsson,2008,Circulation 117:1292-1301)。刺激CD137的配体，即CD137配体(CD137L)，在活化的抗原呈递细胞(APC)、骨髓祖细胞和造血干细胞上表达。

VEGF抑制剂

在一些实施方案中，抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)与VEGF抑制剂组合施用。血管内皮生长因子(VEGF)抑制剂为一种血管生成抑制剂。血管内皮生长因子(VEGF)介导血管生成被认为在肿瘤生长和转移中起关键作用。在一些实施方案中，抗CTLA4抗体与VEGF抑制剂组合施用。在一些实施方案中，所述VEGF抑制剂选自由呋喹替尼(fruquintinib)、安罗替尼(anlotinib)、舒尼替尼(Sunitinib)、索拉非尼(Sorafenib)、帕唑帕尼(Pazopanib)、丙氨酸布立尼布(Brivanib alaninate)、西地尼布(Cediranib)、凡德他尼(Vandetanib)、利尼伐尼(Linifinib)、利尼伐尼(Linifinib)、阿柏西普(Aflibercept)和抗VEGF双特异性抗体组成的组。

化学治疗剂

在一些实施方案中，抗CTLA4抗体与化学治疗剂组合施用。术语“化学治疗剂”是指可导致癌细胞死亡，或干扰癌细胞的生长、分裂、修复和/或功能的化学或生物物质。化学治疗剂的实例包括WO 2006/129163和US 20060153808中公开的那些，所述专利的公开内容以引用的方式并入本文。特定化学治疗剂的实例包括：(1)烷基化剂，诸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)(瘤克宁)、环磷酰胺(癌得星/>)、异环磷酰胺(ifosfamide)(伊弗克斯/>)、盐酸二氯甲基二乙胺(mechlorethaminehydrochloride)(盐酸氮芥/>)、噻替派(thiotepa)(噻普勒斯)、链脲佐菌素(streptozotocin)(链佐星/>)、卡莫司汀(carmustine)(比克纽/>格立得糯米纸囊剂(GLIADEL/>))、洛莫司汀(lomustine)(斯思尤/>)和达卡巴嗪(dacarbazine)(甲氮咪胺/>)；(2)生物碱或植物长春花生物碱，包括细胞毒性抗生素，诸如多柔比星(doxorubicin)(阿霉素/>)、表柔比星(epirubicin)(艾棱斯/>泛艾霉素)、柔红霉素(daunorubicin)(司比定/>柔红霉素脂质体/>)、奈莫柔比星(nemombicin)、伊达比星(idarubicin)(伊达霉素无防腐剂溶液(IDAMYCIN/>)、善唯达/>)、米托蒽醌(mitoxantrone)(/>诺凡特龙/>)、更生霉素(dactinomycin)(放线菌素D(actinomycin D)、可美净/>)、光神霉素(plicamycin)(光辉霉素/>)、丝裂霉素(mitomycin)(突变霉素/>)和博莱霉素(bleomycin)(布兰诺克塞/>)、酒石酸长春瑞滨(vinorelbinetartrate)(诺维本/>)、长春花碱(vinblastine)(维尔班/>)、长春新碱(vincristine)(昂可文/>)和长春地辛(vindesine)(癌的散/>)；(3)抗代谢剂，诸如卡培他滨(capecitabine)(希罗达/>)、阿糖胞苷(cytarabine)(塞特沙-U/>)、氟达拉滨(fludarabine)(福达华)、吉西他滨(gemcitabine)(健择/>)、羟基脲(hydroxyurea)(海卓/>)、甲氨蝶呤(methotrexate)(福勒克斯/>麦沙特(MEXATE)、曲夏尔/>)、奈拉滨(nelarabine)(阿仑恩/>)、三甲曲沙(trimetrexate)(宁赐新/>)和培美曲塞(pemetrexed)(爱宁达)；(4)嘧啶拮抗剂，诸如5-氟尿嘧啶(5-FU)；卡培他滨/>雷替曲塞(raltitrexed)(图姆戴克斯/>)、替加氟-尿嘧啶(tegafur-uracil)(优服托拉/>)和吉西他滨/> (5)紫杉烷，诸如多西他赛(docetaxel)(泰索帝)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)(泰素/>)；(6)铂药物，诸如顺铂(cisplatin)(帕拉汀洛/>)和卡铂(carboplatin)(伯尔定)以及奥沙利铂(oxaliplatin)(乐沙定/>)；(7)拓扑异构酶抑制剂，诸如伊立替康(irinotecan)(开普拓沙/>)、拓扑替康(topotecan)(癌康定/>)、依托泊苷(etoposide)(凡毕复灭必治/>托普萨/>)和替尼泊苷(teniposide)(威猛/>)；(8)表鬼臼毒素(epipodophyllotoxin)(鬼臼毒素(podophyllotoxin)衍生物)，诸如依托泊苷/>(9)叶酸衍生物，诸如甲酰四氢叶酸(leucovorin)(维尔卡伏/>)；(10)亚硝基脲(nitrosourea)，诸如卡莫司汀/>洛莫司汀/>(11)包括表皮生长因子受体(EGFR)、血管内皮生长因子(VEGF)、胰岛素受体、胰岛素样生长因子受体(IGFR)、肝细胞生长因子受体(HGFR)和血小板源性生长因子受体(PDGFR)的受体酪氨酸激酶的抑制剂，诸如吉非替尼(gefitinib)(易瑞沙/>)、埃罗替尼(erlotinib)(塔西瓦)、硼替佐米(bortezomib)(维尔科德/>)、甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)(格列卫/>)、吉非替尼(genefitinib)、拉帕替尼(lapatinib)、索拉非尼(sorafenib)、沙利度胺(thalidomide)、舒尼替尼(sunitinib)(舒腾特/>)、阿西替尼(axitinib)、利妥昔单抗(rituximab)(利妥星(RITUXAN)、美罗华/>)、曲妥珠单抗(trasmzumab)(赫赛汀/>)、西妥昔单抗(cetuximab)(爱必妥/>)、贝伐单抗(bevacizumab)(阿伐斯汀)和雷珠单抗(ranibizumab)(诺适得/>)、lym-1(安可临)、WO2002/053596中公开的针对胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)的抗体；(12)血管生成抑制剂，诸如贝伐单抗/>苏拉明(suramin)(各莫素/>)、血管抑素(angiostatin)、SU5416、沙利度胺和基质金属蛋白酶抑制剂(诸如巴马司他(batimastat)和马立马司他(marimastat))以及WO2002055106中公开的那些；和(13)蛋白酶体抑制剂，诸如硼替佐米/>

在一些实施方案中，抗CTLA4抗体与阿可拉定(3,5,7-三羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基-2-烯基)铬-4-1；PubChem CID No.5318980)组合施用。阿可拉定是一种从中草药淫羊霍中提取的化合物，被证实在多种肿瘤(包括血液肿瘤，例如白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤)中具有抗肿瘤功效。阿可拉定也可被称为“SNG 162”。阿可拉定的结构如下。

阿可拉定(3,5,7-三羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基-2-烯基)铬-4-1)

PARP抑制剂

在一些实施方案中，抗CTLA4抗体与PARP抑制剂组合施用。PARP抑制剂是一组多聚ADP核糖聚合酶(PARP)的药理学抑制剂。在一些实施方案中，抗CTLA4抗体与PARP抑制剂组合施用。在一些实施方案中，所述PARP抑制剂为奥拉帕尼。

III.抗CTLA4抗体

本文所述方法包含施用特异性结合人CTLA4的抗CTLA4抗体，包括CTLA4抗体、CTLA4抗体的抗原结合片段、以及CTLA4抗体的衍生物。示例性抗CTLA4抗体已在例如国际公开号WO2019149281A1中描述，其以引用方式整体并入本文。

在一些实施方案中，抗CTLA4抗体是本文所述的任何抗体，包括关于HVR、可变区(VL、VH)以及轻链和重链(例如IgG1、IgG2、IgG4)的特定氨基酸序列所述的抗体。在一些实施方案中，抗体是人抗体。在一些实施方案中，抗体是人源化抗体和/或嵌合抗体。在一些实施方案中，抗CTLA4抗体结合人CTLA4，并且具有以下功能性质中的至少一者(例如至少一者、至少两者、至少三者、至少四者、至少五者、至少六者、至少七者、至少八者或全部九者)：(a)以500nM或更小的K_D结合人、食蟹猴、小鼠、大鼠和/或狗CTLA4；(b)对人CTLA4具有拮抗活性；(c)在多达100nM的浓度下不结合人PD-1、PD-L1、PD-L2、LAG3、TIM3、B7-H3、CD95、CD120a、OX40、CD40、BTLA、VISTA、ICOS和/或B7-H4；(d)与猴、小鼠、大鼠和/或狗CTLA4具有交叉反应性；(e)诱导ADCC效应(例如对Treg)；(f)使人PBMC活化(例如刺激IL-2和/或IFNγ的分泌)；(g)能够抑制肿瘤细胞生长；(h)对癌症具有治疗作用；和(i)阻断人CTLA4与人CD80和/或CD86的结合。在一些实施方案中，在其中当人CD80和/或CD86被固定(或包被在板上)时或当人CTLA4蛋白存在于细胞表面上时的测定中，相较于伊匹木单抗，本文所述的抗CTLA4抗体在阻断CD80和/或CD86与人CTLA4的结合方面具有较低活性。在一些实施方案中，相较于PBMC或脾中的Treg消减，本文所述的抗CTLA4抗体选择性地使肿瘤环境中的Treg细胞消减。在一些实施方案中，相较于伊匹木单抗，本文所述的抗CTLA4抗体在肿瘤微环境中具有更高Treg消减活性。本文还提供了一种或多种与本文所述的抗体或抗原结合片段中的一者或多者交叉竞争结合人CTLA4的抗CTLA4抗体或抗原结合片段。

在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段以约500nM或更小(例如约500nM或更小，约450nM或更小，约400nM或更小，约350nM或更小，约300nM或更小，约250nM或更小，约200nM或更小，约150nM或更小，约100nM或更小，约90nM或更小，约80nM或更小，约70nM或更小，约60nM或更小，约50nM或更小，约40nM或更小，约30nM或更小，约25nM或更小，约20nM或更小，约10nM或更小，约1nM或更小，约0.1nM或更小等)的K_D结合人、食蟹猴、小鼠、大鼠和/或狗CTLA4。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段以约350nM或更小的K_D结合人、食蟹猴、小鼠、大鼠和/或狗CTLA4。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段以约100nM或更小的K_D结合人CTLA4。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段以约50nM或更小的K_D结合人CTLA4。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段以约10nM或更小的K_D结合人CTLA4。测量抗体或抗原结合片段的K_D的方法可使用本领域中已知的任何方法进行，包括例如通过表面等离子体共振、ELISA、等温滴定量热法、滤膜结合测定、EMSA等。在一些实施方案中，K_D通过表面等离子体共振或ELISA测量(参见例如以下实施例3)。

在一些实施方案中，本文所述的抗体或抗原结合片段对人CTLA4具有拮抗活性。在一些实施方案中，当表达人CTLA4的细胞(例如人细胞)由抗体或抗原结合片段接触时，抗体或抗原结合片段阻遏人CTLA4的一种或多种活性(例如CTLA4阻断，如使用CLA4阻断报告基因测定，通过报告基因信号增加所度量)。

在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段与猴(例如食蟹猴)、小鼠、大鼠和/或狗CTLA4具有交叉反应性。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段与猴CTLA4具有交叉反应性。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段与小鼠CTLA4具有交叉反应性。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段与大鼠CTLA4具有交叉反应性。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段与狗CTLA4具有交叉反应性。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段与猴和小鼠CTLA4；猴和大鼠CTLA4；猴和狗CTLA4；小鼠和大鼠CTLA4；小鼠和狗CTLA4；大鼠和狗CTLA4；猴、小鼠和大鼠CTLA4；猴、小鼠和狗CTLA4；猴、大鼠和狗CTLA4；小鼠、大鼠和狗CTLA4；或猴、小鼠、大鼠和狗CTLA4具有交叉反应性。在一些实施方案中，如果抗体或抗原结合片段以小于约500nM(例如小于约1nM、小于约10nM、小于约25nM、小于约50nM、小于约75nM、小于约100nM、小于约150nM、小于约200nM、小于约250nM、小于约300nM、小于约350nM等)的K_D结合至非人CTLA4分子，那么抗体或抗原结合片段具有交叉反应性。测量抗体交叉反应性的方法在本领域中是已知的，包括不限于表面等离子体共振、ELISA、等温滴定量热法、滤膜结合测定、EMSA等。在一些实施方案中，交叉反应性通过ELISA测量。

在一些实施方案中，在抗体结合细胞表达的CTLA4之后，抗体诱导针对表达CTLA4的细胞(例如针对表达CTLA4的人细胞诸如Treg)的ADCC效应。测量ADCC效应的方法(例如体外方法)在本领域中是已知的。在一些实施方案中，相对于对照(例如同种型对照或伊匹木单抗)，抗体诱导ADCC效应超过约10％(例如诱导ADCC超过约10％、超过约15％、超过约20％、超过约25％、超过约30％、超过约35％、超过约40％等)。

在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段能够抑制肿瘤细胞生长和/或增殖。在一些实施方案中，相对于未与抗体或抗原结合片段接触的相应肿瘤细胞(或相对于与同种型对照抗体接触的相应肿瘤细胞)，当与抗体或抗原结合片段接触时，肿瘤细胞生长和/或增殖被抑制至少约5％(例如至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或至少约99％)。在一些实施方案中，当向受试者施用抗体或抗原结合片段时，抗体或抗原结合片段能够使所述受试者中的肿瘤体积降低。在一些实施方案中，相对于受试者中的初始肿瘤体积(例如在施用抗体或抗原结合片段之前；相较于被施用同种型对照抗体的受试者中的相应肿瘤)，抗体或抗原结合片段能够使所述受试者中的肿瘤体积降低至少约5％(例如至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或至少约99％)。监测肿瘤细胞生长/增殖、肿瘤体积和/或肿瘤抑制的方法在本领域中是已知的。

在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段对癌症具有治疗作用。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段使癌症的一种或多种征象或症状减轻。在一些实施方案中，当被施用抗体或抗原结合片段时，罹患癌症的受试者得到部分或完全缓解。

在另一方面，本公开提供与本公开的任何说明性抗体诸如TY21585、TY21586、TY21587、TY21588、TY21589、TY21580、TY21591、TY21686、TY21687、TY21689、TY21680、TY21691和/或TY21692竞争或交叉竞争结合人CTLA4的经分离抗体。在一特定实施方案中，本申请提供与本公开的任何说明性抗体竞争或交叉竞争结合人CTLA4上的相同表位的经分离抗体。抗体与另一抗体竞争或交叉竞争结合的能力可使用本领域中已知的标准结合测定诸如BIAcore分析、ELISA测定或流式细胞计量术来测定。举例来说，可使本公开的说明性抗体在饱和条件下结合人CTLA4，接着测量测试抗体结合CTLA4的能力。如果测试抗体能够与说明性抗体同时结合CTLA4，那么测试抗体与说明性抗体结合不同表位。然而，如果测试抗体不能同时结合CTLA4，那么测试抗体结合相同表位、重叠表位、或紧密邻近于由说明性抗体结合的表位的表位。这个实验可使用各种方法诸如ELISA、RIA、FACS或表面等离子体共振来进行。

在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段阻断CTLA4与它的结合配偶体中的一者或多者(例如人CTLA4与人CD80、人CTLA4与人CD86)之间的结合。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段在体外阻断CTLA4与它的配体之间的结合。在一些实施方案中，对于阻断CTLA4与CD80和/或CD86的结合，抗体或抗原结合片段具有约500nM或更小(例如约500nM或更小、约400nM或更小、约300nM或更小、约200nM或更小、约100nM或更小、约50nM或更小、约25nM或更小、约10nM或更小、约1nM或更小等)的半数最大抑制浓度(IC₅₀)。在一些实施方案中，对于阻断CTLA4与CD80和/或CD86的结合，抗体或抗原结合片段具有约100nM或更小的半数最大抑制浓度(IC₅₀)。在一些实施方案中，当在约100nM或更大(例如约100nM或更大、约500nM或更大、约1μM或更大、约10μM或更大等)的浓度下提供时，抗体或抗原结合片段完全阻断人CTLA4与CD80和/或CD86的结合。如本文所用，术语“完全阻断(complete blocking/completely blocks)”是指抗体或抗原结合片段能够使第一蛋白与第二蛋白之间的结合降低至少约80％(例如至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％等)。测量抗体或抗原结合片段阻断第一蛋白(例如人CTLA4)和第二蛋白(例如人CD80或人CD86)的结合的能力的方法在本领域中是已知的，包括不限于通过BIAcore分析、ELISA测定和流式细胞计量术。在一些实施方案中，相比于伊匹木单抗，本文所述的抗CTLA4抗体在阻断配体结合方面具有较低活性。

在一些实施方案中，抗CTLA4抗体以1000nM或更小(例如50nM或更小、10nM或更小)的K_D结合人CTLA4，如通过表面等离子体共振所测量。在一些实施方案中，抗体与至少一个选自食蟹猴、小鼠、大鼠和狗的非人物种具有交叉反应性。

在一些实施方案中，抗CTLA4抗体特异性结合与人CTLA4的配体结合位点类似的表位。在一些实施方案中，抗体特异性结合与人CTLA4的CD80结合位点类似的表位。在一些实施方案中，抗体特异性结合与人CTLA4的CD86结合位点类似的表位。在一些实施方案中，抗体特异性结合包含人CTLA4的配体结合位点(例如CD80和/或CD86结合位点)中的一个或多个氨基酸残基的表位。在一些实施方案中，抗体特异性结合人CTLA4上与伊匹木单抗的表位不同的表位。在一些实施方案中，表位不包含人CTLA4的CC’环基序中的氨基酸残基。在一些实施方案中，表位不包含人CTLA4的氨基酸残基L106或I108。在一些实施方案中，抗体特异性结合包含人CTLA4的氨基酸残基Y105和L106而非I108的表位，其中氨基酸残基的编号根据：KAMHVAQPAVVLASSRGIASFVCEYASPGKATEVRVTVLRQADSQVTEVCAATYMMGNELTFLDDSICTGTSSGNQVNLTIQGLRAMDTGLYICKVELMYPPPYYLGIGNGTQIYVIDPE(SEQ ID NO:207)

在一些实施方案中，抗CTLA4抗体包含重链可变区和轻链可变区，a)其中所述重链可变区包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3，其中所述HVR-H1包含根据选自以下的式的氨基酸序列：式(I)：X1TFSX2YX3IHWV(SEQ ID NO:1)，其中X1是F或Y，X2是D或G，并且X3是A、G或W；式(II)：YSIX1SGX2X3WX4WI(SEQ ID NO:2)，其中X1是S或T，X2是H或Y，X3是H或Y，并且X4是A、D或S；和式(III)：FSLSTGGVAVX1WI(SEQ ID NO:3)，其中X1是G或S；所述HVR-H2包含根据选自以下的式的氨基酸序列：式(IV)：IGX1IX2HSGSTYYSX3SLKSRV(SEQ ID NO:4)，其中X1是D或E，X2是S或Y，并且X3是P或Q；式(V)：IGX1ISPSX2GX3TX4YAQKFQGRV(SEQ ID NO:5)，其中X1是I或W，X2是G或S，X3是G或S，并且X4是K或N；和式(VI)：VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(SEQ IDNO:6)，其中X1是A、G或S，X2是S或Y，X3是G或S，并且X4是S或T；并且所述HVR-H3包含根据选自以下的式的氨基酸序列：式(VII)：ARX1X2X3X4FDX5(SEQ ID NO:7)，其中X1是G、R或S，X2是A、I或Y，X3是D、V或Y，X4是A、E或Y，并且X5是I或Y；式(VIII)：ARX1GX2GYFDX3(SEQ ID NO:8)，其中X1是D或L，X2是F或Y，并且X3是V或Y；式(IX)：ARX1X2X3X4AX5X6FDY(SEQ ID NO:9)，其中X1是L或R，X2是I或P，X3是A或Y，X4是S或T，X5是T或Y，并且X6是A或Y；和式(X)：ARDX1X2X3GSSGYYX4GFDX5(SEQ ID NO:10)，其中X1是I或V，X2是A或H，X3是P或S，X4是D或Y，并且X5是F或V；和/或b)其中所述轻链可变区包含HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3，其中所述HVR-L1包含根据选自以下的式的氨基酸序列：式(XI)：RASQX1X2X3SX4LX5(SEQ ID NO:11)，其中X1是G或S，X2是I或V，X3是G或S，X4是S或Y，并且X5是A或N；式(XII)：RASQX1VX2X3RX4LA(SEQID NO:12)，其中X1是S或T，X2是F、R或S，X3是G或S，并且X4是F或Y；和式(XIII)：RASX1SVDFX2GX3SFLX4(SEQ ID NO:13)，其中X1是E或Q，X2是D、F、H或Y，X3是F、I或K，并且X4是A、D或H；所述HVR-L2包含根据式(XIV)：X1ASX2X3X4X5GX6(SEQ ID NO:14)的氨基酸序列，其中X1是A或D，X2是N、S或T，X3是L或R，X4是A、E或Q，X5是S或T，并且X6是I或V；并且所述HVR-L3包含根据选自以下的式的氨基酸序列：式(XV)：YCX1X2X3X4X5X6PX7T(SEQ ID NO:15)，其中X1是E、Q或V，X2是H或Q，X3是A、G、H、R或S，X4是D、L、S或Y，X5是E、G、P、Q或S，X6是L、T、V或W，并且X7是F、L、P、W或Y；式(XVI)：YCQQX1X2X3WPPWT(SEQ ID NO:16)，其中X1是S或Y，X2是D或Y，并且X3是Q或Y；和式(XVII)：YCQX1YX2SSPPX3YT(SEQ ID NO:17)，其中X1是H或Q，X2是T或V，并且X3是E或V。

在一些实施方案中，抗体包含：a)含有选自SEQ ID NO:18-29的氨基酸序列的HVR-H1；含有选自SEQ ID NO:30-39的氨基酸序列的HVR-H2；和含有选自SEQ ID NO:40-52的氨基酸序列的HVR-H3；和/或b)含有选自SEQ ID NO:53-65的氨基酸序列的HVR-L1；含有选自SEQ ID NO:66-69的氨基酸序列的HVR-L2；和含有选自SEQ ID NO:70-81的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗体包含对于下表A中所述的任何示例性抗体显示的HVR中的一者、两者、三者、四者、五者或全部六者。

表A：抗CTLA4 HVR序列

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在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQID NO:30的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ IDNO:53的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ IDNO:70的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQID NO:20的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ IDNO:42的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:55的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:43的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:56的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQID NO:34的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:44的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ IDNO:57的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ IDNO:74的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQID NO:24的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ IDNO:46的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:36的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQID NO:37的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ IDNO:61的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ IDNO:78的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQID NO:28的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ IDNO:50的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQID NO:39的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ IDNO:65的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ IDNO:77的氨基酸序列的HVR-L3。

在一些实施方案中，抗体包含：a)含有选自SEQ ID NO:82-94的氨基酸序列的重链可变区；和/或b)含有选自SEQ ID NO:95-107的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与选自SEQ ID NO:82-94的序列具有至少90％(例如至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列一致性的氨基酸序列，和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含与选自SEQ ID NO:95-107的序列具有至少90％(例如至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列一致性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含下表B中所述的任何示例性抗体的重链可变区和轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含对于下表B中所述的任何示例性抗体显示的重链可变区的一个、两个或全部三个HVR和/或轻链可变区的一个、两个或全部三个HVR。

表B：抗CTLA4可变区氨基酸序列

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在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ IDNO:83的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQID NO:102的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:105的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:106的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:107的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗体包含含有SEQ ID NO:320的氨基酸序列的重链，和含有SEQ ID NO:322的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，所述抗体包含含有SEQ ID NO:321的氨基酸序列的重链，和含有SEQ ID NO:322的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，所述抗体是指抗体种类的混合物，其中每种抗体种类具有包含SEQ ID NO:322的氨基酸序列的轻链和包含SEQ ID NO:320或321的氨基酸序列中任一者的重链。在一些实施方案中，所述抗体包含含有SEQ ID NO:323的氨基酸序列的重链，和含有SEQ ID NO:325的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，所述抗体包含含有SEQ ID NO:324的氨基酸序列的重链，和含有SEQ ID NO:325的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，所述抗体是指抗体种类的混合物，其中每种抗体种类具有包含SEQ IDNO:325的氨基酸序列的轻链和包含SEQ ID NO:323或324的氨基酸序列中任一者的重链。在一些实施方案中，所述抗体包含含有SEQ ID NO:326的氨基酸序列的重链，和含有SEQ IDNO:328的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，所述抗体包含含有SEQ ID NO:327的氨基酸序列的重链，和含有SEQ ID NO:328的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，所述抗体是指抗体种类的混合物，其中每种抗体种类具有包含SEQ ID NO:328的氨基酸序列的轻链和包含SEQ ID NO:326或321的氨基酸序列中任一者的重链。

在一些实施方案中，本申请的抗体与包含以下的抗体交叉竞争结合人CTLA4：a)含有选自SEQ ID NOS:18-29的氨基酸序列的HVR-H1；含有选自SEQ ID NOS:30-39的氨基酸序列的HVR-H2；和含有选自SEQ ID NOS:40-52的氨基酸序列的HVR-H3；和/或b)含有选自SEQID NOS:53-65的氨基酸序列的HVR-L1；含有选自SEQ ID NOS:66-69的氨基酸序列的HVR-L2；和含有选自SEQ ID NOS:70-81的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，本申请的抗体与包含对于表A中所述的任何示例性抗体显示的HVR中的一者、两者、三者、四者、五者或全部六者的抗体交叉竞争结合人CTLA4。在一些实施方案中，本申请的抗体与包含以下的抗体交叉竞争结合人CTLA4：a)含有选自SEQ ID NOS:82-94的氨基酸序列的重链可变区；和/或b)含有选自SEQ ID NOS:95-107的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，本申请的抗体与包含对于表B中所述的任何示例性抗体显示的VH和/或VL的抗体交叉竞争结合人CTLA4。

本文所述的CTLA4抗体可处于任何类别，诸如IgG、IgM、IgE、IgA或IgD。在一些实施方案中，CTLA4抗体处于IgG类别，诸如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4子类。使用本领域中已知的方法，可使CTLA4抗体从一个类别或子类转变成另一类别或子类。用于产生处于所需类别或子类的抗体的一示例性方法包括以下步骤：分离编码CTLA4抗体的重链的核酸和编码CTLA4抗体的轻链的核酸，分离编码V_H区的序列，使V_H序列连接于编码所述所需类别或子类的重链恒定区的序列，在细胞中表达轻链基因和重链构建体，以及收集CTLA4抗体。本申请的抗体可为单克隆抗体或多克隆抗体。本申请的抗体可为单特异性抗体或多特异性(例如双特异性、三特异性等)抗体。在一些实施方案中，本文所述的CTLA4抗体可包括一个或多个Fc突变(例如调节(增加或降低)ADCC或CDC活性)。本领域中已知的任何适合Fc突变都可用于本申请的CTLA4抗体中。

在一些实施方案中，抗CTLA4抗体是抗CTLA4抗体的抗原结合片段。CTLA4抗体的抗原结合片段包括：(i)Fab片段，其为由V_L、V_H、C_L和C_H1结构域组成的一价片段；(ii)F(ab’)₂片段，其为包含由在铰链区的二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由V_H和C_H1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体的单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；(v)由VH结构域组成的dAb片段(Ward等人,(1989)Nature341:544-546)；(vi)分离的CDR，以及(vii)单链抗体(scFv)，其为包含与抗体的V_H区连接的抗体的V_L区的多肽。(参见，Bird等人,(1988)Science242:423-426；Huston等人,(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883)。

在一些实施方案中，抗CTLA4抗体是本文所述的任何一种抗CTLA4抗体的衍生物。在一些实施方案中，抗体衍生物衍生自本申请的示例性抗体(例如“亲本抗体”)的氨基酸序列的修饰，同时保留亲本抗体氨基酸序列的总体分子结构。亲本抗体链的任何区域的氨基酸序列可被修饰，诸如框架区、HVR区或恒定区。修饰的类型包括亲本抗体的一个或多个氨基酸的取代、插入、缺失或其组合。

在一些实施方案中，抗体衍生物包含VL或VH区，其与如SEQ ID NOS:82-107中的任一个中所示的氨基酸序列具有至少65％、至少75％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致性。在一些实施方案中，抗体衍生物包含HVR_H1氨基酸序列区域，其与如SEQ ID NOS:18-29中的任一个中所示的氨基酸序列具有至少65％、至少75％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致性。在一些实施方案中，抗体衍生物包含HVR_H2氨基酸序列区域，其与如SEQ ID NOS:30-39中的任一个中所示的氨基酸序列具有至少65％、至少75％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致性。在一些实施方案中，抗体衍生物包含HVR_H3氨基酸序列区域，其与如SEQ ID NOS:40-52中的任一个中所示的氨基酸序列具有至少65％、至少75％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致性。在一些实施方案中，抗体衍生物包含HVR_L1氨基酸序列区域，其与如SEQ ID NOS:53-65中的任一个中所示的氨基酸序列具有至少65％、至少75％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致性。在一些实施方案中，抗体衍生物包含HVR_L2氨基酸序列区域，其与如SEQ ID NOS:66-69中的任一个中所示的氨基酸序列具有至少65％、至少75％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致性。在一些实施方案中，抗体衍生物包含HVR_L3氨基酸序列区域，其与如SEQ ID NOS:70-81中的任一个中所示的氨基酸序列具有至少65％、至少75％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致性。

在一些特定实施方案中，所述衍生物包含对SEQ ID NOS:18-107中的任一个中所示的氨基酸序列的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个保守或非保守取代，和/或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个添加和/或缺失。

氨基酸取代涵盖保守取代和非保守取代。术语“保守氨基酸取代”是指一个氨基酸替换为另一个氨基酸，其中两个氨基酸在某些物理-化学特性上具有相似性，诸如所涉及残基的极性、电荷、溶解度、疏水性、亲水性、和/或两亲性质。例如，取代通常可以在以下组中的每一个内进行：(a)非极性(疏水性)氨基酸，诸如丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸以及甲硫氨酸；(b)极性中性氨基酸，诸如甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺以及谷氨酰胺；(c)带正电的(碱性)氨基酸，诸如精氨酸、赖氨酸以及组氨酸；以及(d)带负电的(酸性)氨基酸，诸如天冬氨酸和谷氨酸。

修饰可在抗体的氨基酸序列的任何位置进行，包括HVR、框架区或恒定区。在一个实施方案中，本申请提供一种抗体衍生物，其包含本公开的例示性抗体的V_H和V_L HVR序列，还包含与例示性抗体的那些不同的框架序列。此类框架序列可以从包括生殖系抗体基因序列的公共DNA数据库或公布的参考文献获得。例如，人重链和轻链可变区基因的生殖系DNA序列可以在Genbank数据库或“VBase”人生殖系序列数据库中找到(Kabat等人,Sequencesof Proteins of Immunological Interest,第5版,美国卫生与公共服务部(U.S.Department of Health and Human Services),NIH出版号91-3242(1991)；Tomlinson等人,J.Mol.Biol.227:776-798(1992)；以及Cox等人,Eur.J.Immunol.24:827-836(1994))。可用于构建抗体衍生物的框架序列包括在结构上类似于本公开的例示性抗体所用的框架序列。例如，可以将例示性抗体的HVR_H1、HVR_H2和HVR_H3序列，以及HVR_L1、HVR_L2和HVR_L3序列移植到具有与框架序列所来源的生殖系免疫球蛋白基因中所发现的相同序列的框架区上，或可以将HVR序列移植到与生殖系序列相比包含一个或多个突变的框架区上。

在一些实施方案中，抗体衍生物是嵌合抗体，其包含本公开的例示性抗体的氨基酸序列的。在一个实例中，来自一种或多种例示性抗体的一个或多个HVR与来自非人动物(诸如小鼠或大鼠)的抗体的HVR组合。在另一个实例中，嵌合抗体的所有HVR来源于一种或多种例示性抗体。在一些特定实施方案中，嵌合抗体包含来自例示性抗体的重链可变区的一个、两个或三个HVR和/或轻链可变区的一个、两个或三个HVR。可以使用本领域已知的常规方法生成嵌合抗体。

另一类修饰是使V_H和/或V_L链的HRV区内的氨基酸残基突变。可以执行定点诱变或PCR介导的诱变以引入一个或多个突变，并且可以在本领域已知的体外或体内测定中评估对抗体结合或其他感兴趣的功能特性的影响。通常，引入保守取代。突变可以是氨基酸添加和/或缺失。此外，通常改变HVR区内的不超过一个、两个、三个、四个或五个残基。在一些实施方案中，抗体衍生物在重链HVR和/或轻链HVR中包含1、2、3或4个氨基酸取代。在另一个实施方案中，氨基酸取代是将抗体中的一个或多个半胱氨酸变为另一残基，诸如但不限于丙氨酸或丝氨酸。半胱氨酸可以是经典或非经典半胱氨酸。在一个实施方案中，相对于例示性抗体的氨基酸序列，抗体衍生物在重链HVR区中具有1、2、3或4个保守氨基酸取代。

还可对V_H和/或V_L区内的框架残基进行修饰。通常，制备此类框架变体以降低抗体的免疫原性。一种方法是将一个或多个框架残基“回复突变”为对应的生殖系序列。已经进行了体细胞突变的抗体可包含不同于抗体所来源的生殖系序列的框架残基。可以通过将抗体框架序列与抗体所来源的生殖系序列相比较来鉴定此类残基。为了将框架区序列恢复至其生殖系构造，可以通过例如定点诱变或PCR介导的诱变将体细胞突变“回复突变”为生殖系序列。

此外，还可在例示性抗体的Fc区内进行修饰，通常以改变抗体的一种或多种功能特性，诸如血清半衰期、补体固定、Fc受体结合，和/或抗原依赖性细胞毒性。在一个实例中，CH1的铰链区经过修饰，使得铰链区中的半胱氨酸残基数量改变，例如增加或减少。此方法在美国专利号5,677,425中进一步描述。改变CH1的铰链区中的半胱氨酸残基数量，例如，以有利于轻链和重链的装配，或增加或降低抗体的稳定性。在另一情况下，使抗体的Fc铰链区突变，以减少抗体的生物学半衰期。

此外，可根据本领域已知的常规实验对本申请的抗体进行修饰，以改变其潜在的糖基化位点或模式。在另一方面，本申请提供CTLA4抗体的衍生物，其在轻链或重链的可变区中包含至少一个突变，所述突变改变可变区中的糖基化模式。对于抗原的结合，这种抗体衍生物可具有增大的亲和力和/或改变的特异性。突变可在V区中增添新的糖基化位点，改变一个或多个V区糖基化位点的位置，或除去先前存在的V区糖基化位点。在一个实施方案中，本申请提供CTLA4抗体的衍生物，其在重链可变区中的天冬酰胺处具有潜在的N-连接糖基化位点，其中一个重链可变区中的潜在的N-连接糖基化位点被除去。在另一个实施方案中，本申请提供CTLA4抗体的衍生物，其在重链可变区中的天冬酰胺处具有潜在的N-连接糖基化位点，其中两个重链可变区中的潜在的N-连接糖基化位点均被除去。改变抗体的糖基化模式的方法是本领域已知的，诸如美国专利号6,933,368中描述的那些，所述专利的公开内容以引用方式并入本文。

靶向CTLA4的可活化结合多肽

本公开还部分地涉及结合人CTLA4的精准/情形依赖性可活化结合多肽(即可活化抗体)，包括包含本文所述的任何抗CTLA4抗体(例如抗CTLA4抗体、抗CTLA4抗体结合片段和/或抗CTLA4抗体衍生物)的可活化抗体；可活化抗CTLA4抗体的抗原结合片段和/或可活化抗CTLA4抗体的衍生物。在一些实施方案中，本文所述的可活化抗CTLA4抗体可具有改进的安全性概况。举例来说，本文所述的抗CTLA4抗体可具有更好的安全界限，如通过脾重量变化所评估。脾尺寸随着所施用药物剂量的增加而发生的变化被用作用以评估所用药物候选物的安全界限的基准。相对于亲本抗体(不具有遮蔽性部分的抗体)，本文所述的可活化抗CTLA4抗体具有更好安全界限。在一些实施方案中，可活化抗体被称为“SAFEbody”。在一些实施方案中，可活化抗体为TY22404。在一些实施方案中，可活化抗体为双特异性抗体(例如，抗CTLA4和PD1抗体、抗CTLA4和PD-L1抗体、或抗CTLA4和CD137抗体)。

在一些实施方案中，本公开的可活化抗体包含：(a)遮蔽性部分(MM)；(b)可裂解部分(CM)；和(c)靶标结合部分(TBM)。在一些实施方案中，MM是本文所述的任何遮蔽性部分。在一些实施方案中，CM是本文所述的任何可裂解部分。在一些实施方案中，TBM是本文所述的任何靶标结合部分(例如包含抗体轻链可变区和/或抗体重链可变区诸如本文所述的任何抗CTLA4抗体的VH和/或VL的靶标结合部分(TBM))。在一些实施方案中，当CM未被裂解时，MM干扰和/或抑制可活化抗体与它的靶标(例如人CTLA4或人CD137)的结合。在一些实施方案中，当CM被裂解时，可活化抗体能够结合它的靶标(例如人CTLA4或人CD137)。

在一些实施方案中，可活化抗体包含：(a)多肽，所述多肽从N末端至C末端包含遮蔽性部分(MM)、可裂解部分(CM)和靶标结合部分(TBM)，其中所述MM是本文所述的任何遮蔽性部分，所述CM是本文所述的任何可裂解部分，并且其中所述TBM包含抗体轻链可变区(VL)；和(b)抗体重链可变区(VH)。

在一些实施方案中，可活化抗体包含：(a)多肽，所述多肽从N末端至C末端包含遮蔽性部分(MM)、可裂解部分(CM)和靶标结合部分(TBM)，其中所述MM是本文所述的任何遮蔽性部分，所述CM是本文所述的任何可裂解部分，并且其中所述TBM包含抗体重链可变区(VH)；和(b)抗体轻链可变区(VL)。

在一些实施方案中，可活化抗体包含：多肽，所述多肽从N末端至C末端包含遮蔽性部分(MM)、可裂解部分(CM)和靶标结合部分(TBM)，其中所述MM是本文所述的任何遮蔽性部分，所述CM是本文所述的任何可裂解部分，并且其中所述TBM包含抗体重链可变区(VH)和抗体轻链可变区(VL)。

术语“可活化结合多肽”、“ABP”或“可活化抗体”包括包含靶标结合部分(TBM)、可裂解部分(CM)和遮蔽性部分(MM)的多肽。在一些实施方案中，TBM包含结合靶标的氨基酸序列。在一些实施方案中，TBM包含抗体或其抗体片段(例如本文所述的任何抗体或抗原结合片段)的抗原结合结构域(ABD)。在一些实施方案中，抗原结合结构域包含含有本文所述的重链可变区HVR中的一者、两者或三者的重链可变区，以及含有本文所述的轻链可变区HVR中的一者、两者或三者的轻链可变区(例如如表A中所示的重链可变区HVR序列中的一者、两者或三者，和/或轻链可变区HVR序列中的一者、两者或三者，包括如表A中所示的任何示例性抗体的全部六个HVR)。在一些实施方案中，抗原结合结构域包含含有本文所述的任何重链可变区序列的重链可变区，以及含有本文所述的任何轻链可变区序列的轻链可变区(例如如表B中所示的重链可变区序列和/或轻链可变区序列)。在一些实施方案中，TBM(例如包含ABD)包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)，其中所述VH和所述VL形成在不存在MM下结合靶标的结合结构域。在一些实施方案中，VH和VL共价连接，例如在scFv中。在一些实施方案中，VH和VL不共价连接。在一些实施方案中，VH和VL形成Fab片段。在一些实施方案中，VH连接于抗体重链恒定区，并且VL连接于抗体轻链恒定区。

在一些实施方案中，可活化抗体包含从N末端至C末端包含以下结构的多肽：遮蔽性部分(MM)-可裂解部分(CM)-VL，并且可活化抗体还包含第二多肽，所述第二多肽包含VH(例如Fab片段)。在一些实施方案中，可活化抗体包含从N末端至C末端包含以下结构的多肽：遮蔽性部分(MM)-可裂解部分(CM)-VL-VH(例如scFv)。在一些实施方案中，可活化抗体包含从N末端至C末端包含以下结构的多肽：遮蔽性部分(MM)-可裂解部分(CM)-VH，并且可活化抗体还包含第二多肽，所述第二多肽包含VL(例如Fab片段)。在一些实施方案中，可活化抗体包含从N末端至C末端包含以下结构的多肽：遮蔽性部分(MM)-可裂解部分(CM)-VH-VL(例如scFv)。

CM通常包括可裂解的，例如充当酶的底物的氨基酸序列，和/或能够形成可还原二硫键的半胱氨酸-半胱氨酸配对。因此，当术语“裂解”、“可裂解”、“经裂解”等与CM关联使用时，所述术语涵盖例如由蛋白酶达成的酶促裂解，以及通过可由暴露于还原剂所致的二硫键还原来破坏半胱氨酸-半胱氨酸配对之间的二硫键。

MM是指当可活化抗体的CM是完整的(例如未由相应酶裂解，和/或含有未还原半胱氨酸-半胱氨酸二硫键)时，MM干扰或抑制TBM与它的靶标的结合的氨基酸序列。在一些实施方案中，MM如此高效地干扰或抑制TBM与它的靶标的结合，以致TBM与它的靶标的结合是极低的和/或在检测限以下(例如结合不能在ELISA或流式细胞计量术测定中检测到)。CM的氨基酸序列可与MM重叠，或包括在MM内。应注意，为方便起见，“ABP”或“可活化抗体”在本文中用于指代处于它们的未裂解(或“天然”)状态以及处于它们的经裂解状态的ABP或可活化抗体。将为普通技术人员显而易知的是，在一些实施方案中，经裂解ABP可由于例如由蛋白酶对CM的裂解而缺乏MM，所述裂解导致释放至少所述MM(例如当所述MM不通过共价键(例如半胱氨酸残基之间的二硫键)接合于ABP时)。示例性ABP在以下更详细描述。

在一些实施方案中，遮蔽性部分(MM)干扰、阻碍靶标结合部分结合它的靶标，降低靶标结合部分结合它的靶标的能力，阻止、抑制靶标结合部分结合它的靶标，或与靶标结合部分竞争结合它的靶标(例如“非活性”可活化抗体)。在一些实施方案中，遮蔽性部分(MM)仅当多肽尚未被活化(例如通过pH变化(增加或降低)而活化，通过温度变动(增加或降低)而活化，在与第二分子(诸如小分子或蛋白质配体)接触之后而活化等)时干扰、阻碍、降低、阻止、抑制靶标结合部分结合它的靶标，或与靶标结合部分竞争结合它的靶标。在一些实施方案中，活化诱导在裂解部分内对多肽的裂解。在一些实施方案中，活化诱导多肽的构象变化(例如遮蔽性部分(MM)的移位)，从而导致遮蔽性部分不再阻止可活化抗体结合它的靶标。在一些实施方案中，遮蔽性部分(MM)仅当可裂解部分(CM)尚未由一种或多种在可裂解部分(CM)内进行裂解的蛋白酶裂解时干扰、阻碍靶标结合部分结合它的靶标，降低靶标结合部分结合它的靶标的能力，阻止、抑制靶标结合部分结合它的靶标，或与靶标结合部分竞争结合它的靶标。在一些实施方案中，在活化之前，遮蔽性部分(MM)具有至少约2.0(例如至少约2.0、至少约3.0、至少约4.0、至少约5.0、至少约6.0、至少约7.0、至少约8.0、至少约9.0、至少约10、至少约25、至少约50、至少约75、至少约100、至少约150、至少约200、至少约300、至少约400、至少约500等)的遮蔽性部分。在一些实施方案中，遮蔽性部分测量为包含遮蔽性部分(MM)的可活化抗体结合它的靶标的亲和力(在活化之前)相对于缺乏遮蔽性部分的多肽结合它的靶标的亲和力的差异(例如包含遮蔽性部分(MM)的可活化抗体(在活化之前)相对于缺乏遮蔽性部分(MM)的亲本抗体，在对靶标抗原(诸如CTLA4)的亲和力方面的差异，或包含遮蔽性部分(MM)的可活化抗体对靶标抗原(诸如CTLA4)的亲和力(在活化之前)相对于所述可活化抗体在活化之后对所述靶标抗原的亲和力的差异)。在一些实施方案中，遮蔽性部分通过用包含遮蔽性部分(MM)的可活化抗体的结合的EC₅₀(在活化之前)除以亲本抗体的EC₅₀来测量(例如通过用ELISA测量EC₅₀；参见例如实施例8的方法)。在一些实施方案中，遮蔽性部分测量为包含遮蔽性部分(MM)的可活化抗体在活化之前结合它的靶标的亲和力相对于包含遮蔽性部分(MM)的可活化抗体在活化之后结合它的靶标的亲和力的差异(例如可活化抗体在活化之前相对于所述可活化抗体在活化之后，在对靶标抗原(诸如CTLA4)的亲和力方面的差异)。在一些实施方案中，遮蔽性部分(MM)结合靶标结合部分(TBM)，并且阻止可活化抗体结合它的靶标(例如“非活性”可活化抗体)。在一些实施方案中，遮蔽性部分(MM)具有的关于结合靶标结合部分(TBM)的解离常数大于靶标结合部分(TBM)关于它的靶标的解离常数。

在一些实施方案中，在可活化抗体已被活化(例如通过用一种或多种在可裂解部分(CM)内进行裂解的蛋白酶处理而活化，通过pH变化(增加或降低)而活化，通过温度变动(增加或降低)而活化，在与第二分子(诸如酶或蛋白质配体)接触之后而活化等)之后，遮蔽性部分(MM)不干扰、阻碍靶标结合部分(TBM)结合它的靶标，降低靶标结合部分(TBM)结合它的靶标的能力，阻止、抑制靶标结合部分(TBM)结合它的靶标，或与靶标结合部分(TBM)竞争结合它的靶标。在一些实施方案中，在可裂解部分(CM)已由一种或多种在可裂解部分(CM)内进行裂解的蛋白酶裂解之后，遮蔽性部分(MM)不干扰、阻碍靶标结合部分(TBM)结合它的靶标，降低靶标结合部分(TBM)结合它的靶标的能力，阻止、抑制靶标结合部分(TBM)结合它的靶标，或与靶标结合部分(TBM)竞争结合它的靶标。在一些实施方案中，在活化之后，遮蔽性部分(MM)具有至多约1.75(例如至多约1.75、至多约1.5、至多约1.4、至多约1.3、至多约1.2、至多约1.1、至多约1.0、至多约0.9、至多约0.8、至多约0.7、至多约0.6或至多约0.5等)的遮蔽性部分(例如相较于亲本抗体的亲和力，可活化抗体在活化之后的相对亲和力)。

在一些实施方案中，本公开的可活化抗体含有在固定位置处包含一对半胱氨酸残基以确保可活化抗体具有受约束构象，和/或具有少许或不具有化学不稳定残基(诸如甲硫氨酸或色氨酸)的遮蔽性部分(MM)。有利的是，在固定位置处包括一对半胱氨酸残基确保了可活化抗体具有受约束构象，从而倾向于展现增加的结合亲和力和/或特异性。此外，本公开的可活化抗体包括具有少许乃至不具有不利于制造过程的残基诸如甲硫氨酸或色氨酸的遮蔽性部分。

在一些实施方案中，本公开的可活化抗体具有情形依赖性(例如在某些情形下(诸如在富含蛋白酶的肿瘤微环境中)是活化的(仅能够结合它们的靶标))。在一些实施方案中，本公开的可活化抗体提供优于更加传统的非可活化抗体的改进的安全性(例如显示毒性降低，不诱导对许多器官的重量的显著改变，不改变肝组织病理学、血液学和/或血液生物化学等)。在一些实施方案中，相较于更加传统的非可活化抗体，本公开的可活化抗体具有改进的药物代谢动力学性质(例如具有更久体内半衰期)。

抗CTLA4可活化抗体活性

在一些实施方案中，本公开涉及当呈活性形式时结合人CTLA4的可活化抗体(例如可活化抗体在可裂解部分中裂解(例如被一种或多种蛋白酶)之后具有活性，但在可裂解部分中裂解(例如被一种或多种蛋白酶)之前是非活性的)。在一些实施方案中，当呈活性形式时，可活化抗体具有以下功能性质中的至少一者(例如至少一者、至少两者、至少三者、至少四者、至少五者、至少六者、至少七者、至少八者或全部九者)：(a)以500nM或更小例如约10nM或更小的KD结合人、食蟹猴、小鼠、大鼠和/或狗CTLA4；(b)对人CTLA4具有拮抗活性；(c)在多达100nM的浓度下不结合人PD-1、PD-L1、PD-L2、LAG3、TIM3、B7-H3、CD95、CD120a、OX40、CD40、BTLA、VISTA、ICOS和/或B7-H4；(d)与猴、小鼠、大鼠和/或狗CTLA4具有交叉反应性；(e)诱导ADCC效应(例如对Treg)；(f)使人PBMC活化(例如刺激IL-2和/或IFNγ的分泌)；(g)能够抑制肿瘤细胞生长；(h)对癌症具有治疗作用；和(i)抑制人CTLA4与人CD80和/或人CD86的结合。本文还提供了一种或多种与本文所述的靶向CTLA4的可活化抗体和/或抗CTLA4抗体中的一者或多者竞争或交叉竞争结合人CTLA4的可活化抗体。

在一些实施方案中，当呈非活性形式时，可活化抗体以约500nM或更大的K_D结合人、食蟹猴、小鼠、大鼠和/或狗CTLA4。在一些实施方案中，当呈活性形式时，可活化抗体以约500nM或更小(例如约500nM或更小、约450nM或更小、约400nM或更小、约350nM或更小、约300nM或更小、约250nM或更小、约200nM或更小、约150nM或更小、约100nM或更小、约90nM或更小、约80nM或更小、约70nM或更小、约60nM或更小、约50nM或更小、约40nM或更小、约30nM或更小、约25nM或更小、约20nM或更小、约10nM或更小、约1nM或更小、约0.1nM或更小等)的K_D结合人、食蟹猴、小鼠、大鼠和/或狗CTLA4。在一些实施方案中，当呈活性形式时，可活化抗体以约350nM或更小的K_D结合人、食蟹猴、小鼠、大鼠和/或狗CTLA4。在一些实施方案中，当呈活性形式时，可活化抗体以约100nM或更小的K_D结合人CTLA4。在一些实施方案中，当呈活性形式时，可活化抗体以约50nM或更小的K_D结合人CTLA4。在一些实施方案中，当呈活性形式时，可活化抗体以约10nM或更小的K_D结合人CTLA4。测量可活化抗体的K_D的方法可使用本领域中已知的任何方法进行，包括例如通过表面等离子体共振、ELISA、等温滴定量热法、滤膜结合测定、EMSA等。在一些实施方案中，K_D通过ELISA测量(参见例如以下实施例)。

在一些实施方案中，当呈非活性形式时，可活化抗体不对人CTLA4具有拮抗活性。在一些实施方案中，当呈活性形式时，可活化抗体对人CTLA4具有拮抗活性(例如诱导ADCC效应(诸如针对Treg)，使PBMC活化(诸如通过对IL-2和/或IFNγ分泌进行活化、诱导和/或刺激)，阻断人CTLA4与人CD80和/或人CD86的结合等)。在一些实施方案中，当呈活性形式时，可活化抗体阻遏人CTLA4的一种或多种活性(例如当表达人CTLA4的细胞(诸如人细胞)由可活化抗体接触时，阻遏人CTLA4的一种或多种活性)。

在一些实施方案中，当呈非活性形式时，可活化抗体不与猴(例如食蟹猴)、小鼠、大鼠和/或狗CTLA4具有交叉反应性。在一些实施方案中，当呈活性形式时，可活化抗体与猴(例如食蟹猴)、小鼠、大鼠和/或狗CTLA4具有交叉反应性。在一些实施方案中，当呈活性形式时，可活化抗体与猴CTLA4具有交叉反应性。在一些实施方案中，当呈活性形式时，可活化抗体与小鼠CTLA4具有交叉反应性。在一些实施方案中，当呈活性形式时，可活化抗体与大鼠CTLA4具有交叉反应性。在一些实施方案中，当呈活性形式时，可活化抗体与狗CTLA4具有交叉反应性。在一些实施方案中，当呈活性形式时，可活化抗体与猴和小鼠CTLA4；猴和大鼠CTLA4；猴和狗CTLA4；小鼠和大鼠CTLA4；小鼠和狗CTLA4；大鼠和狗CTLA4；猴、小鼠和大鼠CTLA4；猴、小鼠和狗CTLA4；猴、大鼠和狗CTLA4；小鼠、大鼠和狗CTLA4；或猴、小鼠、大鼠和狗CTLA4具有交叉反应性。在一些实施方案中，当呈活性形式时，可活化结合多肽在约350nM下(例如在约1nM下，在约10nM下，在约25nM下，在约50nM下，在约75nM下，在约100nM下，在约150nM下，在约200nM下，在约250nM下，在约300nM下，在约350nM下)具有交叉反应性。测量交叉反应性的方法在本领域中是已知的，包括不限于表面等离子体共振、ELISA、等温滴定量热法、滤膜结合测定、EMSA等。

在一些实施方案中，当呈非活性形式时，可活化抗体不诱导ADCC效应(例如针对表达CTLA4的人细胞诸如Treg)。在一些实施方案中，相较于对照结合多肽(例如亲本抗体)，当呈非活性形式时，可活化抗体具有降低的ADCC效应(例如针对表达CTLA4的人细胞诸如Treg)。在一些实施方案中，当呈活性形式时，可活化抗体诱导ADCC效应(例如针对表达CTLA4的细胞诸如Treg)。测量ADCC效应的方法(例如体外方法)在本领域中是已知的，包括但不限于通过以下实施例中所述的方法。在一些实施方案中，相对于对照(例如亲本抗体)，当呈非活性形式时，可活化抗体诱导ADCC效应小于约10％(例如诱导ADCC小于约10％、小于约5％、小于约1％等)。在一些实施方案中，相对于对照(例如同种型对照)，当呈活性形式时，可活化抗体诱导ADCC效应超过约10％(例如诱导ADCC超过约10％、超过约15％、超过约20％、超过约25％、超过约30％、超过约35％、超过约40％等)。

在一些实施方案中，可活化抗体能够抑制肿瘤细胞生长和/或增殖。在一些实施方案中，相对于未与可活化抗体接触的相应肿瘤细胞(或相对于与同种型对照抗体接触的相应肿瘤细胞)，当与可活化抗体接触时，肿瘤细胞生长和/或增殖被抑制至少约5％(例如至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或至少约99％)。在一些实施方案中，当向受试者施用可活化抗体时，可活化抗体能够使所述受试者中的肿瘤体积降低。在一些实施方案中，相对于受试者中的初始肿瘤体积(例如在施用可活化抗体之前；相较于被施用同种型对照抗体的受试者中的相应肿瘤)，可活化抗体能够使所述受试者中的肿瘤体积降低至少约5％(例如至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或至少约99％)。监测肿瘤细胞生长/增殖、肿瘤体积和/或肿瘤抑制的方法在本领域中是已知的，包括例如通过以下实施例中所述的方法。

在一些实施方案中，可活化抗体对癌症具有治疗作用。在一些实施方案中，可活化抗体使癌症的一种或多种征象或症状减轻。在一些实施方案中，当被施用可活化抗体时，罹患癌症的受试者得到部分或完全缓解。

在一些实施方案中，本公开提供了当呈活性形式时，与包含以下的抗体竞争或交叉竞争结合人CTLA4的经分离可活化抗体：a)含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H1；含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H2；和含有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的HVR-H3；和/或b)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L1；含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L2；和含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，本公开提供了当呈活性形式时，与包含以下的抗体竞争或交叉竞争结合人CTLA4的经分离可活化抗体：a)含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链可变区；和/或b)含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的轻链可变区。可活化抗体与抗体竞争或交叉竞争结合的能力可使用本领域中已知的标准结合测定诸如BIAcore分析、ELISA测定或流式细胞计量术来测定。举例来说，可使抗体(例如如上所述)在饱和条件下结合人CTLA4，接着测量测试可活化抗体(当呈活性形式时)结合CTLA4的能力。如果测试可活化抗体能够与抗体同时结合CTLA4，那么测试可活化抗体与抗体结合不同表位。然而，如果测试可活化抗体不能同时结合CTLA4，那么测试可活化抗体结合相同表位、重叠表位、或紧密邻近于由抗体结合的表位的表位。这个实验可使用各种方法诸如ELISA、RIA、FACS或表面等离子体共振来进行。

在一些实施方案中，可活化抗体(当呈非活性形式时)不抑制CTLA4与它的结合配偶体中的一者或多者(例如人CTLA4与人CD80、人CTLA4与人CD86)之间的结合。在一些实施方案中，可活化抗体(当呈活性形式时)抑制CTLA4与它的结合配偶体中的一者或多者(例如人CTLA4与人CD80、人CTLA4与人CD86)之间的结合。在一些实施方案中，可活化抗体在体外抑制CTLA4与它的配体之间的结合。在一些实施方案中，对于抑制CTLA4与CD80和/或CD86的结合，可活化抗体具有约500nM或更小(例如约500nM或更小、约400nM或更小、约300nM或更小、约200nM或更小、约100nM或更小、约50nM或更小、约25nM或更小、约10nM或更小、约1nM或更小等)的半数最大抑制浓度(IC₅₀)。在一些实施方案中，对于抑制CTLA4与CD80和/或CD86的结合，可活化抗体具有约100nM或更小的半数最大抑制浓度(IC₅₀)。在一些实施方案中，当在约100nM或更大(例如约100nM或更大、约500nM或更大、约1μM或更大、约10μM或更大等)的浓度下提供时，可活化抗体完全抑制人CTLA4与CD80和/或CD86的结合。如本文所用，术语“完全抑制(complete inhibiting/completely inhibits)”是指可活化抗体能够使第一蛋白与第二蛋白之间的结合降低至少约80％(例如至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％等)。测量多肽抑制第一蛋白(例如人CTLA4)和第二蛋白(例如人CD80或人CD86)的结合的能力的方法在本领域中是已知的，包括但不限于通过BIAcore分析、ELISA测定和流式细胞计量术。

遮蔽性部分(MM)

在一些实施方案中，本公开涉及包含遮蔽性部分(MM)的可活化抗体。在一些实施方案中，遮蔽性部分(MM)包含根据式(XVIII)：X_mCX_nCZ_o(SEQ ID NO:134)的氨基酸序列，其中m是2-10，n是3-10，并且o是1-10，其中每个X独立地是选自由A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y组成的组的氨基酸，并且其中每个Z独立地是选自由D、A、Y、S、T、N、I、L、F、V、H和P组成的组的氨基酸。在一些实施方案中，X不是W、M和/或C。在一些实施方案中，式(XVIII)的X_m中的每个X独立地是选自由D、A、Y、S、T、N、I、L、F、V、H和P组成的组的氨基酸，和/或式(XVIII)的X_n中的每个X独立地是选自由D、A、Y、S、T、N、I、L、F、V、H和P组成的组的氨基酸。在一些实施方案中，MM包含由根据式(XX)：(NNK)_mTGY(NNK)_nTGY(NHC)_o(SEQ ID NO:136)的多核苷酸序列编码的多肽，其中每个N独立地是A、G、T或C，其中每个K独立地是T或G，其中每个Y独立地是T或C，并且其中每个H独立地是A、T或C。

在一些实施方案中，遮蔽性部分(MM)包含根据式(XIX)：Z_mCZ_nCZ_o(SEQ ID NO:135)的氨基酸序列，其中m是2-10，n是3-10，并且o是1-10，并且每个Z独立地是选自由D、A、Y、S、T、N、I、L、F、V、H和P组成的组的氨基酸。

在一些实施方案中，m是2-10、2-9、2-8、2-7、2-6、2-5、2-4、2-3、3-10、3-9、3-8、3-7、3-6、3-5、3-4、4-10、4-9、4-8、4-7、4-6、4-5、5-10、5-9、5-8、5-7、5-6、6-10、6-9、6-8、6-7、7-10、7-9、7-8、8-10、8-9、或9-10。在一些实施方案中，m是6-8。在一些实施方案中，m是3、4、5、6、7、8、9或10。在一些实施方案中，m是6。

在一些实施方案中，n是3-10、3-9、3-8、3-7、3-6、3-5、3-4、4-10、4-9、4-8、4-7、4-6、4-5、5-10、5-9、5-8、5-7、5-6、6-10、6-9、6-8、6-7、7-10、7-9、7-8、8-10、8-9、或9-10。在一些实施方案中，n是6-8。在一些实施方案中，n是3、4、5、6、7、8、9或10。在一些实施方案中，n是6。在一些实施方案中，n是8。

在一些实施方案中，o是1-10、1-9、1-8、1-7、1-6、1-5、1-4、1-3、1-2、2-10、2-9、2-8、2-7、2-6、2-5、2-4、2-3、3-10、3-9、3-8、3-7、3-6、3-5、3-4、4-10、4-9、4-8、4-7、4-6、4-5、5-10、5-9、5-8、5-7、5-6、6-10、6-9、6-8、6-7、7-10、7-9、7-8、8-10、8-9、或9-10。在一些实施方案中，o是1-2。在一些实施方案中，o是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些实施方案中，o是2。

在一些实施方案中，遮蔽性部分(MM)包含根据式(XXI)：Z₆CX₆CZ₂(SEQ ID NO:137)的氨基酸序列，其中每个X独立地是选自由A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y组成的组的氨基酸，并且其中每个Z独立地是选自由D、A、Y、S、T、N、I、L、F、V、H和P组成的组的氨基酸。

在一些实施方案中，遮蔽性部分(MM)包含根据式(XXII)：Z₆CX₈CZ₂(SEQ ID NO:138)的氨基酸序列，其中每个X独立地是选自由A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y组成的组的氨基酸，并且其中每个Z独立地是选自由D、A、Y、S、T、N、I、L、F、V、H和P组成的组的氨基酸。

在一些实施方案中，第一肽(FP)包含根据式(XXIII)：(Z₆)C(Z₆)C(Z₂)(SEQ ID NO:139)的氨基酸序列，其中每个Z独立地是选自由D、A、Y、S、T、N、I、L、F、V、H和P组成的组的氨基酸。

在一些实施方案中，遮蔽性部分(MM)包含根据式(XXIV)：(Z₆)C(Z₈)C(Z₂)(SEQ IDNO:140)的氨基酸序列，其中每个Z独立地是选自由D、A、Y、S、T、N、I、L、F、V、H和P组成的组的氨基酸。在一些实施方案中，可活化抗体包含含有选自由X_mCPDHPYPCXX(SEQ ID NO:181)、X_mCDAFYPYCXX(SEQ ID NO:182)、X_mCDSHYPYCXX(SEQ ID NO:183)和X_mCVPYYYACXX(SEQ IDNO:184)组成的组的序列的遮蔽性部分(MM)，其中m是2-10，并且其中每个X独立地是选自由A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y组成的组的氨基酸。在一些实施方案中，可活化抗体包含含有序列EVGSYNFVADSCPDHPYPCSA(SEQ ID NO:189)、EVGSYIVHHSDCDAFYPYCDS(SEQ ID NO:190)、EVGSYYSAYPACDSHYPYCNS(SEQ ID NO:191)、EVGSYPNPSSDCVPYYYACAY(SEQ ID NO:192)、EVGSYYSAYPACDSHYPYCQS(SEQ ID NO:193)、EVGSYPQPSSDCVPYYYACAY(SEQ ID NO:195)或EVGSYPNPASDCVPYYYACAY(SEQ ID NO:196)的遮蔽性部分(MM)。在一些实施方案中，MM包含序列EDCVPYYYACAY(SEQ ID NO:213)、EVGSSDCVPYYYACAY(SEQ ID NO:214)、EDCDAFYPYCDS(SEQ ID NO:215)或EVGHSDCDAFYPYCDS(SEQ ID NO:216)。

在一些实施方案中，遮蔽性部分(MM)包含选自NFVADSCPDHPYPCSA(SEQ ID NO:141)、IVHHSDCDAFYPYCDS(SEQ ID NO:142)、YSAYPACDSHYPYCNS(SEQ ID NO:143)、PNPSSDCVPYYYACAY(SEQ ID NO:144)、YSAYPACDSHYPYCQS(SEQ ID NO:145)、PQPSSDCVPYYYACAY(SEQ ID NO:146)和PNPASDCVPYYYACAY(SEQ ID NO:147)的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的任何遮蔽性部分(MM)都可还包含一个或多个额外氨基酸序列(例如一个或多个多肽标签)。适合额外氨基酸序列的实例可包括不限于纯化标签(诸如his标签、flag标签、麦芽糖结合蛋白和谷胱甘肽-S-转移酶标签)、检测标签(诸如可以光度测量方式检测的标签(例如红色或绿色荧光蛋白等))、具有可检测酶活性的标签(例如碱性磷酸酶等)、含有分泌序列、前导序列和/或稳定化序列的标签、蛋白酶裂解位点(例如弗林蛋白酶(furin)裂解位点、TEV裂解位点、凝血酶裂解位点)等。在一些实施方案中，一个或多个额外氨基酸序列在遮蔽性部分(MM)的N末端。在一些实施方案中，额外氨基酸序列包含序列EVGSY(SEQ ID NO:148)或由序列EVGSY(SEQ ID NO:148)组成。

在一些实施方案中，在活化之前(例如在用一种或多种在可裂解部分(CM)内进行裂解的蛋白酶处理之前，在经受(局部)pH变化(增加或降低)之前，在温度变动(增加或降低)之前，在与第二分子(诸如小分子或蛋白质配体)接触之前，等)，遮蔽性部分结合靶标结合部分(TBM)，并且抑制可活化抗体结合它的靶标，但在活化之后(例如在用一种或多种在可裂解部分(CM)内进行裂解的蛋白酶处理之后，在经受(局部)pH变化(增加或降低)之后，在温度变动(增加或降低)之后，在与第二分子(诸如小分子或蛋白质配体)接触之后，等)，不结合TBM和/或抑制可活化抗体结合它的靶标。在一些实施方案中，当CM未被裂解时，遮蔽性部分(MM)抑制可活化抗体与它的靶标的结合，但当CM被裂解时，不抑制可活化抗体与它的靶标的结合。在一些实施方案中，遮蔽性部分(MM)具有的关于结合TBM的解离常数大于可活化抗体关于它的靶标的解离常数(当呈活性形式时)(例如是至少约1.5倍大、至少约2倍大、至少约2.5倍大、至少约3倍大、至少约3.5倍大、至少约4倍大、至少约4.5倍大、至少约5倍大、至少约10倍大、至少约100倍大、至少约500倍大等)。

可裂解部分(CM)

在一些实施方案中，本公开涉及包含可裂解部分(CM)的可活化抗体。在一些实施方案中，通过用一种或多种在可裂解部分(CM)内进行裂解的蛋白酶处理，通过pH变化(增加或降低)，通过温度变动(增加或降低)，和/或通过与第二分子(诸如小分子或蛋白质配体)接触等来裂解和/或破坏可裂解部分(CM)。

在一些实施方案中，可裂解部分(CM)包含至少第一裂解位点(CS₁)(例如第一蛋白酶裂解位点)。在一些实施方案中，第一裂解位点是第一蛋白酶裂解位点。可使用由本领域中已知的任何蛋白酶(例如已知与包含CM的可活化抗体的靶标共定位的蛋白酶)识别和/或裂解的任何适合蛋白酶裂解位点，包括例如由以下识别和/或裂解的蛋白酶裂解位点：尿激酶型纤维蛋白溶酶原活化因子(uPA)；基质金属蛋白酶(例如MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-19、MMP-20、MMP-23、MMP-24、MMP-26和/或MMP-27)；烟草蚀刻病毒(TEV)蛋白酶；纤维蛋白溶酶；凝血酶；PSA；PSMA；ADAMS/ADAMTS(例如ADAM8、ADAM9、ADAM10、ADAM12、ADAM15、ADAM17/TACE、ADAMDEC1、ADAMTS1、ADAMTS4和/或ADAMTS5)；卡斯帕酶(例如卡斯帕酶-1、卡斯帕酶-2、卡斯帕酶-3、卡斯帕酶-4、卡斯帕酶-5、卡斯帕酶-6、卡斯帕酶-7、卡斯帕酶-8、卡斯帕酶-9、卡斯帕酶-10、卡斯帕酶-11、卡斯帕酶-12、卡斯帕酶-13和/或卡斯帕酶-14)；天冬氨酸蛋白酶(例如RACE和/或肾素(Renin))；天冬氨酸组织蛋白酶(例如组织蛋白酶D和/或组织蛋白酶E)；半胱氨酸组织蛋白酶(例如组织蛋白酶B、组织蛋白酶C、组织蛋白酶K、组织蛋白酶L、组织蛋白酶S、组织蛋白酶V/L2和/或组织蛋白酶X/Z/P)；半胱氨酸蛋白酶(例如Cruzipain、豆荚蛋白(Legumain)和/或Otubain-2)；KLK(例如KLK4、KLK5、KLK6、KLK7、KLK8、KLK10、KLK11、KLK13和/或KLK14)；金属蛋白酶(例如穿膜肽酶(Meprin)、中性溶酶(Neprilysin)、PSMA和/或BMP-1)；丝氨酸蛋白酶(例如经活化蛋白C、组织蛋白酶A、组织蛋白酶G、胃促胰酶(Chymase)和/或凝血因子蛋白酶(诸如FVIIa、FIXa、FXa、FXIa、FXIIa))；弹性蛋白酶(elastase)；粒酶B；胍基苯甲酸酶；HtrA1；人嗜中性白细胞弹性蛋白酶；乳铁传递蛋白(lactoferrin)；marapsin；NS3/4A；PACE4；tPA；类胰蛋白酶(tryptase)；II型跨膜丝氨酸蛋白酶(TTSP)(例如DESCl、DPP-4、FAP、肝丝酶(Hepsin)、基质蛋白酶-2(Matriptase-2)、MT-SP1/基质蛋白酶、TMPRSS2、TMPRSS3和/或TMPRSS4)；等。在一些实施方案中，第一蛋白酶裂解位点是选自以下的蛋白酶的裂解位点：uPA、MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-14、TEV蛋白酶、纤维蛋白溶酶、凝血酶、因子X、PSA、PSMA、组织蛋白酶D、组织蛋白酶K、组织蛋白酶S、ADAM10、ADAM12、ADAMTS、卡斯帕酶-1、卡斯帕酶-2、卡斯帕酶-3、卡斯帕酶-4、卡斯帕酶-5、卡斯帕酶-6、卡斯帕酶-7、卡斯帕酶-8、卡斯帕酶-9、卡斯帕酶-10、卡斯帕酶-11、卡斯帕酶-12、卡斯帕酶-13、卡斯帕酶-14和TACE。在一些实施方案中，第一蛋白酶裂解位点是选自以下的蛋白酶的裂解位点：uPA、MMP-2、MMP-9和/或TEV蛋白酶。在一些实施方案中，蛋白酶裂解位点包含选自SGRSA(SEQ ID NO:149)、PLGLAG(SEQ ID NO:150)和ENLYFQG(SEQID NO:151)的氨基酸序列。

在一些实施方案中，可活化抗体包含含有根据式(XXV)：EVGSY(Z₆)C(Z₆)C(Z₂)SGRSA(SEQ ID NO:152)的氨基酸序列的遮蔽性部分(MM)和可裂解部分(CM)，其中每个Z独立地是选自D、A、Y、S、T、N、I、L、F、V、H和P的氨基酸。

在一些实施方案中，可活化抗体包含含有根据式(XXVI)：EVGSY(Z₆)C(X₆)C(Z₂)SGRSA(SEQ ID NO:153)的氨基酸序列的遮蔽性部分(MM)和可裂解部分(CM)，其中每个X独立地是选自A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y的氨基酸，并且其中每个Z独立地是选自由D、A、Y、S、T、N、I、L、F、V、H和P组成的组的氨基酸。

在一些实施方案中，可活化抗体包含含有根据式(XXVII)：EVGSY(Z₆)C(Z₈)C(Z₂)SGRSA(SEQ ID NO:154)的氨基酸序列的遮蔽性部分(MM)和可裂解部分(CM)，其中每个Z独立地是选自D、A、Y、S、T、N、I、L、F、V、H和P的氨基酸。

在一些实施方案中，可活化抗体包含含有根据式(XXVIII)：EVGSY(Z₆)C(X₈)C(Z₂)SGRSA(SEQ ID NO:155)的氨基酸序列的遮蔽性部分(MM)和可裂解部分(CM)，其中每个X独立地是选自由A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y组成的组的氨基酸，并且其中每个Z独立地是选自由D、A、Y、S、T、N、I、L、F、V、H和P组成的组的氨基酸。

在一些实施方案中，可裂解部分(CM)还包含第一接头(L₁)。在一些实施方案中，第一接头(L₁)在第一裂解位点(CS₁)(例如第一蛋白酶裂解位点)的C末端。在一些实施方案中，可裂解部分(CM)从N末端至C末端包含以下结构：(CS₁)-L₁。

可使用本领域中已知的任何适合接头(例如柔性接头)，包括例如：甘氨酸聚合物(G)n，其中n是至少1(例如至少一、至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10等)的整数；甘氨酸-丝氨酸聚合物(GS)n，其中n是至少1(例如至少一、至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10等)的整数，诸如GGGGS(SEQ ID NO:156)、SGGS(SEQ ID NO:157)、GGSG(SEQ ID NO:158)、GGSGG(SEQ ID NO:159)、GSGSG(SEQ ID NO:160)、GSGGG(SEQ ID NO:161)、GGGSG(SEQ ID NO:162)和/或GSSSG(SEQ ID NO:163)；甘氨酸-丙氨酸聚合物；丙氨酸-丝氨酸聚合物；等。接头序列可具有任何长度，诸如约1个氨基酸(例如甘氨酸或丝氨酸)至约20个氨基酸(例如20氨基酸甘氨酸聚合物或甘氨酸-丝氨酸聚合物)、约1个氨基酸至约15个氨基酸、约3个氨基酸至约12个氨基酸、约4个氨基酸至约10个氨基酸、约5个氨基酸至约9个氨基酸、约6个氨基酸至约8个氨基酸等。在一些实施方案中，接头的长度是约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸中的任一者。在一些实施方案中，接头包含选自SEQ ID NO:159-163的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头包含SEQ ID NO:156或157的氨基酸序列。

在一些实施方案中，可裂解部分(CM)还包含至少第二裂解位点(例如至少第二、至少第三、至少第四、至少第五，等)。在一些实施方案中，可裂解部分(CM)还包含第二裂解位点(CS₂)。在一些实施方案中，第二裂解位点是第二蛋白酶裂解位点。第二蛋白酶裂解位点可为由以上所述的任何蛋白酶识别和/或裂解的任何适合蛋白酶裂解位点。在一些实施方案中，第一(CS₁)和第二(CS₂)裂解位点是由相同蛋白酶识别和/或裂解的蛋白酶裂解位点。在一些实施方案中，第一(CS₁)和第二(CS₂)裂解位点是由不同蛋白酶识别和/或裂解的蛋白酶裂解位点(例如第一蛋白酶裂解位点由uPA识别和/或裂解，而第二蛋白酶裂解位点由MMP-2识别和/或裂解；第一蛋白酶裂解位点由uPA识别和/或裂解，而第二蛋白酶裂解位点由MMP-9识别和/或裂解；第一蛋白酶裂解位点由uPA识别和/或裂解，而第二蛋白酶裂解位点由TEV蛋白酶识别和/或裂解；等)。在一些实施方案中，至少第二裂解位点(CS₂)在第一接头(L₁)的C末端。在一些实施方案中，可裂解部分(CM)从N末端至C末端包含以下结构：(CS₁)-L₁-(CS₂)。

在一些实施方案中，可裂解部分(CM)还包含至少第二接头(例如至少第二、至少第三、至少第四、至少第五，等)。在一些实施方案中，可裂解部分(CM)还包含第二接头(L₂)。第二接头(L₂)可为以上所述的任何适合接头。在一些实施方案中，第二接头包含选自SEQ IDNO:156-163的氨基酸序列。在一些实施方案中，第一(L₁)和第二(L₂)接头是相同的(例如两个接头均包含SEQ ID NO:156或157的序列)。在一些实施方案中，第一(L₁)和第二(L₂)接头是不同的(例如第一接头(L₁)包含SEQ ID NO:156的氨基酸序列，而第二接头(L₂)包含SEQID NO:157的氨基酸序列，等)。在一些实施方案中，至少第二接头(L₂)在第二裂解位点(CS₂)的C末端。在一些实施方案中，可裂解部分(CM)从N末端至C末端包含以下结构：(CS₁)-L₁-(CS₂)-L₂。

示例性MM-CM序列

在一些实施方案中，本公开的可活化抗体从N末端至C末端包含以下结构：(FP)-(PCS₁)-L₁-(PCS₂)-L₂。在一些实施方案中，可活化抗体包含根据式(XXIX),EVGSYX₁X₂X₃X₄X₅X₆CX₇X₈X₉X₁₀X₁₁X₁₂CX₁₃X₁₄SGRSAGGGGTENL YFQGSGGS(SEQ ID NO:164)的氨基酸序列，其中X1是A、D、I、N、P或Y，X2是A、F、N、S或V，X3是A、H、L、P、S、V或Y，X4是A、H、S或Y，X5是A、D、P、S、V或Y，X6是A、D、L、S或Y，X7是D、P或V，X8是A、D、H、P、S或T，X9是A、D、F、H、P或Y，X10是L、P或Y，X11是F、P或Y，X12是A、P、S或Y，X13是A、D、N、S、T或Y，并且X14是A、S或Y。在一些实施方案中，本公开的可活化抗体包含以下氨基酸序列：EVGSYDALHYACPPDYYACYYSGRSAGGGGTENLYFQGSGGS(SEQ ID NO:165)；EVGSYNSYHAYCPHPLYPCTASGRSAGGGGTENLYFQGSGGS(SEQ ID NO:166)；EVGSYASSAVLCVTAYFSCNSSGRSAGGGGTENLYFQGSGGS(SEQ ID NO:167)；EVGSYNFVADSCPDHPYPCSASGRSAGGGGSPLGLAGSGGS(SEQ ID NO:168)；EVGSYNFVADSCPDHPYPCSASGRSAGGGGTENLYFQGSGGS(SEQ ID NO:169)；EVGSYIVHHSDCDAFYPYCDSSGRSAGGGGSPLGLAGSGGS(SEQ ID NO:170)；EVGSYIVHHSDCDAFYPYCDSSGRSAGGGGTENLYFQGSGGS(SEQ ID NO:171)；EVGSYYSAYPACDSHYPYCNSSGRSAGGGGSPLGLAGSGGS(SEQ ID NO:172)；EVGSYYSAYPACDSHYPYCNSSGRSAGGGGTENLYFQGSGGS(SEQ ID NO:173)；EVGSYPNPSSDCVPYYYACAYSGRSAGGGGSPLGLAGSGGS(SEQ ID NO:174)；EVGSYPNPSSDCVPYYYACAYSGRSAGGGGTENLYFQGSGGS(SEQ ID NO:175)；EVGSYYSAYPACDSHYPYCQSSGRSAGGGGSPLGLAGSGGS(SEQ ID NO:176)；EVGSYYSAYPACDSHYPYCNSAGRSAGGGGSPLGLAGSGGS(SEQ ID NO:177)；

EVGSYPQPSSDCVPYYYACAYSGRSAGGGGSPLGLAGSGGS(SEQ ID NO:178)；和/或EVGSYPNPASDCVPYYYACAYSGRSAGGGGSPLGLAGSGGS(SEQ ID NO:179)。在一些实施方案中，本公开的多肽从N末端至C末端包含以下结构：(FP)-(PCS₁)-L₁-(PCS₂)-L₂-(TBM)。

在一些实施方案中，可活化抗体包含氨基酸序列SGRSAGGGGTENLYFQGSGGS(SEQ IDNO:220)、SGRSAGGGGTPLGLAGSGGS(SEQ ID NO:221)或SGRSAPLGLA(SEQ ID NO:222)。在一些实施方案中，可活化抗体包含序列EV(Z_n)C(X₈)C(Z₂)SGRSA(SEQ ID NO:217)、EDC(Z₆)C(Z₂)SGRSA(SEQ ID NO:218)或EDC(Z₆)C(Z₂)PLGLA(SEQ ID NO:219)，其中每个X独立地是选自由A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y组成的组的氨基酸，其中n是1-11，并且其中每个Z独立地是选自由D、A、Y、S、T、N、I、L、F、V、H和P组成的组的氨基酸。

靶标结合部分(TBM)

在一些实施方案中，本公开涉及包含靶标结合部分(TBM)的可活化抗体。在一些实施方案中，靶标结合部分(TBM)包含抗体轻链可变区和/或抗体重链可变区。在一些实施方案中，靶标结合部分(TBM)包含抗体轻链可变区。在一些实施方案中，靶标结合部分(TBM)包含抗体重链可变区。在一些实施方案中，靶标结合部分(TBM)包含抗体轻链可变区和抗体重链可变区。

在一些实施方案中，靶标结合部分(TBM)包含全长抗体轻链和/或全长抗体重链。抗体轻链可为κ或λ轻链。抗体重链可处于任何类别，诸如IgG、IgM、IgE、IgA或IgD。在一些实施方案中，抗体重链处于IgG类别，诸如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4子类。使用本领域中已知的方法，可使本文所述的抗体重链从一个类别或子类转变成另一类别或子类。

本文所述的靶标结合部分(TBM)中的任何一者或多者可并有：本文所述的任何HVR序列(例如如上表A中所示的重链可变区HVR序列中的一者、两者或三者，和/或轻链可变区HVR序列中的一者、两者或三者)；本文所述的任何重链可变区序列和/或轻链可变区序列(例如如上表B中所示的重链可变区序列和/或轻链可变区序列)；和/或本文所述的任何抗体。

在一些实施方案中，靶标结合部分(TBM)包含本文所述的抗CTLA4抗体中的一者或多者的序列，所述抗CTLA4抗体包括关于HVR、可变区(VL、VH)和/或轻链和重链(例如IgG1、IgG2、IgG4)的特定氨基酸序列所述的抗体。在一些实施方案中，靶标结合部分(TBM)包含抗体轻链可变区，所述抗体轻链可变区包含含有氨基酸序列RASQSVRGRFLA(SEQ ID NO:58)的HVR-L1、含有氨基酸序列DASNRATGI(SEQ ID NO:66)的HVR-L2和/或含有氨基酸序列YCQQSSSWPPT(SEQ ID NO:75)的HVR-L3。在一些实施方案中，靶标结合部分(TBM)包含抗体轻链可变区，所述抗体轻链可变区包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列或与SEQ ID NO:100的序列具有至少90％(例如95％、96％、97％、98％或99％)序列一致性的序列。在一些实施方案中，靶标结合部分(TBM)包含抗体重链可变区，所述抗体重链可变区包含含有氨基酸序列YSISSGYHWSWI(SEQ ID NO:23)的HVR-H1、含有氨基酸序列LARIDWDDDKYYSTSLKSRL(SEQ IDNO:35)的HVR-H2和/或含有氨基酸序列ARSYVYFDY(SEQ ID NO:45)的HVR-H3。在一些实施方案中，靶标结合部分(TBM)包含抗体重链可变区，所述抗体重链可变区包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列或与SEQ ID NO:87的序列具有至少90％(例如95％、96％、97％、98％或99％)序列一致性的序列。在一些实施方案中，靶标结合部分(TBM)包含：a)抗体轻链可变区，所述抗体轻链可变区包含含有氨基酸序列RASQSVRGRFLA(SEQ ID NO:58)的HVR-L1、含有氨基酸序列DASNRATGI(SEQ ID NO:66)的HVR-L2和/或含有氨基酸序列YCQQSSSWPPT(SEQ ID NO:75)的HVR-L3；和b)抗体重链可变区，所述抗体重链可变区包含含有氨基酸序列YSISSGYHWSWI(SEQ ID NO:23)的HVR-H1、含有氨基酸序列LARIDWDDDKYYSTSLKSRL(SEQ ID NO:35)的HVR-H2和/或含有氨基酸序列ARSYVYFDY(SEQ ID NO:45)的HVR-H3。在一些实施方案中，靶标结合部分(TBM)包含含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的抗体轻链可变区，以及含有SEQ IDNO:87的氨基酸序列的抗体重链可变区。

可活化结合多肽性质

在一些实施方案中，本公开的可活化结合多肽(即可活化抗体)包含：(a)遮蔽性部分(MM)，(b)可裂解部分，和(c)靶标结合部分。在一些实施方案中，遮蔽性部分(MM)结合可活化抗体的靶标结合部分(TBM)，并且相较于缺乏遮蔽性部分的相应结合多肽与CTLA4(例如人CTLA4)的结合，和/或相较于亲本抗体与CTLA4(例如人CTLA4)的结合，降低或抑制可活化结合部分与CTLA4(例如人CTLA4)的结合。

在一些实施方案中，“可活化”结合多肽是指以下结合多肽：当处于抑制、遮蔽和/或未裂解状态时展现与CTLA4的第一结合水平，并且在处于未抑制、未遮蔽和/或裂解状态时展现与CTLA4的第二结合水平，其中所述第二CTLA4结合水平大于所述第一CTLA4结合水平。在一些实施方案中，在可裂解部分内裂解(例如由一种或多种蛋白酶)之后，可活化结合多肽接近CTLA4的机会增大。

在一些实施方案中，当相较于在可活化抗体的活化之前，在可活化抗体的活化之后(例如在通过用一种或多种在可裂解部分(CM)内进行裂解的蛋白酶处理来活化之后，在通过pH变化(增加或降低)来活化之后，在通过温度变动(增加或降低)来活化之后，在通过与第二分子(诸如小分子)接触来活化之后，等)，多肽对CTLA4(例如人CTLA4)的结合亲和力增加至至少约2倍(例如至少约2倍、至少约2.5倍、至少约3、至少约3.5倍、至少约4倍、至少约4.5倍、至少约5倍、至少约5.5倍、至少约6倍、至少约6.5倍、至少约7倍、至少约7.5倍、至少约8倍、至少约8.5倍、至少约9倍、至少约9.5倍、至少约10倍、至少约25倍、至少约50倍、至少约75倍、至少约100倍、至少约250倍、至少约500倍、至少约750倍或至少约1000倍或更多倍)时，本公开的可活化抗体通常被视为是“可活化”结合多肽。在一些实施方案中，如果在“活化”之后，可活化抗体的EC₅₀降低至至少约1/2(例如至少约1/2、至少约1/2.5、至少约1/3、至少约1/3.5、至少约1/4、至少约1/4.5、至少约1/5、至少约1/5.5、至少约1/6、至少约1/6.5、至少约1/7、至少约1/7.5、至少约1/8、至少约1/8.5、至少约1/9、至少约1/9.5、至少约1/10、至少约1/25、至少约1/50、至少约1/75、至少约1/100、至少约1/250、至少约1/500、至少约1/750或至少约1/1000、或降低至更小)(例如如通过ELISA或FACS测定所测量；参见以下实施例)，那么本公开的可活化抗体通常被视为“可活化”。在一些实施方案中，如果在用在可裂解部分(CM)内进行裂解的蛋白酶处理之后，多肽的EC₅₀降低至至少约1/2(例如如通过ELISA或FACS测定所测量；参见以下实施例)，那么本公开的可活化抗体通常被视为“可活化”。

在一些实施方案中，当遮蔽性部分(MM)结合于可活化抗体的靶标结合部分(TBM)时，可活化抗体关于CTLA4的K_D是遮蔽性部分(MM)未结合于靶标结合部分(TBM)时(例如在可活化抗体的“活化”之后(诸如在进行蛋白酶处理以在可裂解部分(CM)内进行裂解之后))和/或是亲本抗体关于CTLA4的K_D的约2(例如约2、约2.5、约3、约3.5约4、约4.5、约5、约5.5、约6、约6.5、约7、约7.5、约8、约8.5、约9、约9.5、约10、约25、约50、约75、约100、约250、约500、约750或约1000或更多)倍大。测量亲和力的方法在本领域中是已知的，包括例如通过以下实施例中所述的方法。

在一些实施方案中，相对于当遮蔽性部分未结合于靶标结合部分时(例如在可活化抗体的“活化”之后(诸如在进行蛋白酶处理以在可裂解部分(CM)内进行裂解之后))，和/或相对于亲本抗体关于CTLA4的K_D，当遮蔽性部分结合于可活化抗体的靶标结合部分时，可活化抗体关于CTLA4的K_D降低至少约25％(例如至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约99％)。测量亲和力的方法在本领域中是已知的，包括例如通过以下实施例中所述的方法。

在一些实施方案中，遮蔽性部分在空间上阻碍可活化抗体与CTLA4的结合，和/或变构阻碍可活化抗体与CTLA4的结合。在一些实施方案中，遮蔽性部分不包含可活化抗体和/或亲本抗体的天然结合配偶体的氨基酸序列。

在一些实施方案中，遮蔽性部分关于靶标结合部分的解离常数大于可活化抗体关于CTLA4的解离常数(当活化时)。在一些实施方案中，遮蔽性部分关于靶标结合部分的解离常数是可活化抗体关于CTLA4的解离常数(当活化时)的约2(例如约2、约2.5、约3、约3.5约4、约4.5、约5、约5.5、约6、约6.5、约7、约7.5、约8、约8.5、约9、约9.5、约10、约25、约50、约75、约100、约250、约500、约750或约1000或更多)倍大。在一些实施方案中，遮蔽性部分关于靶标结合部分的解离常数约等于可活化抗体关于CTLA4的解离常数(当活化时)。

可进一步修饰本文所述的可活化抗体。在一些实施方案中，可活化抗体连接于额外分子实体。额外分子实体的实例包括药物制剂、肽或蛋白质、检测剂或标记、以及抗体。

在一些实施方案中，本公开的可活化抗体连接于药物制剂。药物制剂的实例包括细胞毒性剂或其他癌症治疗剂以及放射性同位素。细胞毒性剂的特定实例包括紫杉醇、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、吐根碱、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、长春新碱、长春花碱、秋水仙碱、多柔比星、柔红霉素、二羟基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、米拉霉素、放线菌素D、1-脱氢睾酮、糖皮质素、普鲁卡因、四卡因、利多卡因、普萘洛尔和嘌呤霉素以及它们的类似物或同源物。治疗剂还包括例如抗代谢剂(例如甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、达卡巴嗪)、烷基化剂(例如二氯甲基二乙胺、塞替派、苯丁酸氮芥、美法仑、卡莫司汀(BSNU)和洛莫司汀(CCNU)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲佐菌素、丝裂霉素C和顺式二氯二胺铂(II)(DDP)顺铂)、蒽环霉素(例如柔红霉素(先前称为道诺霉素)和多柔比星)、抗生素(例如更生霉素(先前称为放线菌素)、博莱霉素、米拉霉素和安曲霉素(AMC))、以及抗有丝分裂剂(例如长春新碱和长春花碱)。可缀合于抗体以进行诊断或治疗使用的放射性同位素的实例包括但不限于碘¹³¹、铟¹¹¹、钇⁹⁰和镥¹⁷⁷。用于使多肽连接于药物制剂的方法在本领域中是已知的，诸如使用各种接头技术。接头类型的实例包括腙、硫醚、酯、二硫醚和含肽接头。对于用于使治疗剂连接于抗体的接头和方法的进一步讨论，参见例如Saito等，Adv.Drug Deliv.Rev.55:199-215(2003)；Trail等，CancerImmunol.Immunother.52:328-337(2003)；Payne，Cancer Cell3:207-212(2003)；Allen，Nat.Rev.Cancer 2:750-763(2002)；Pastan和Kreitman，Curr.Opin.Investig.Drugs 3:1089-1091(2002)；Senter和Springer(2001)Adv.Drug Deliv.Rev.53:247-264。

IV.抗CD137抗体

在一些实施方案中，本文所述方法包含施用与人CD137细胞外区域特异性结合的抗CD137抗体。本文所述抗CD137抗体包括全长抗CD137抗体、CD137抗体的抗原结合片段，以及CD137抗体的衍生物。在一些实施方案中，抗CD137抗体是本文所述的任何抗体，包括关于表位结合所描述的抗体和关于CDR、可变区(VL、VH)和IgG(例如，IgG4)轻链和重链的具体氨基酸序列所描述的抗体。在一些实施方案中，抗CD137抗体具有以下功能特性中的至少一个(例如，至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、八个或全部九个)：(a)以500nM或更小的KD与人CD137结合；(b)对人CD137具有激动剂活性；(c)在最高至1000nM的浓度下不与人OX40、CD40、GITR和/或CD27受体结合；(d)与猴、小鼠、大鼠或狗CD137交叉反应；(e)不引起ADCC效应；(f)能够抑制肿瘤细胞生长；(g)对癌症具有治疗作用；(h)阻断CD137与CD137L之间的结合；以及(i)在表达CD137的细胞中阻断由CD137L刺激的CD137信号传导(例如，CD137L刺激的NF-κB依赖性转录)。在一些实施方案中，本文公开的抗体还可以阻断(例如，完全阻断)CD137与其配体CD137L之间的结合。在一些实施方案中，抗CD137抗体为与如本文所述抗CD137抗体或抗原结合片段中的一种或多种交叉竞争结合人CD137的一种或多种抗CD137抗体(或其抗原结合片段)。适用于本文所述方法的示范性抗CD137抗体已在，例如，在US20190055314A1、WO2019036855A1及WO2019037711A1中描述，其全文以引用的方式并入本文。

人CD137是255个氨基酸的蛋白质(GenBank登录号NM_001561；NP_001552；SEQ IDNO:231)。所述蛋白质包含信号序列(氨基酸残基1-17)，接着是细胞外结构域(169个氨基酸)、跨膜区(27个氨基酸)，以及细胞内结构域(42个氨基酸)(Cheuk ATC等人2004CancerGene Therapy 11:215-226)。受体以单体和二聚体形式在细胞表面表达并且可能与CD137配体三聚化以进行信号传导。

在一些实施方案中，抗CD137抗体与SEQ ID NO:231的氨基酸残基34-108内的一个或多个氨基酸残基特异性结合。在一些实施方案中，抗CD137抗体与SEQ ID NO:231的氨基酸残基34-93内的一个或多个氨基酸残基特异性结合。在一些实施方案中，抗CD137抗体与选自由SEQ ID NO:231的氨基酸残基34-36、53-55和92-93组成的组的一个或多个氨基酸残基特异性结合。在一些实施方案中，抗CD137抗体与SEQ ID NO:231的氨基酸残基34-36中的一个或多个、氨基酸残基53-55中的一个或多个，以及氨基酸残基92-93中的一个或多个特异性结合。在一些实施方案中，抗CD137抗体不与选自由SEQ ID NO:231的氨基酸残基109-112、125、126、135-138、150和151组成的组的氨基酸残基中的一个或多个结合。在一些实施方案中，抗CD137抗体不与SEQ ID NO:231的氨基酸残基109-112、125、126、135-138、150和151特异性结合。测量抗体或抗原结合片段结合靶抗原的能力的方法可使用本领域已知的任何方法进行，包括例如，通过表面等离子体共振、ELISA、等温滴定量热法、过滤结合测定、EMSA等及基于抗CD137抗体与CD137的晶体结构。

在一些实施方案中，抗CD137抗体与选自由SEQ ID NO:231的氨基酸残基51、53、62-73、83、89、92、95-104及112-116组成的组的一个或多个氨基酸残基特异性结合。在一些实施方案中，抗CD137抗体与选自由SEQ ID NO:231的氨基酸残基51、53、63-67、69-73、83、89、92、98-104及112-116组成的组的一个或多个氨基酸残基特异性结合。在一些实施方案中，抗CD137抗体与选自由SEQ ID NO:231的氨基酸残基51、63-67、69-73、83、89、92、98-104及112-114组成的组的一个或多个氨基酸残基特异性结合。

在一些实施方案中，抗CD137抗体与SEQ ID NO:231的氨基酸残基51、53、62-73、83、89、92、95-104及112-116内的一个或多个氨基酸残基特异性结合。抗CD137抗体与SEQID NO:231的氨基酸残基51、53、63-67、69-73、83、89、92、98-104及112-116内的一个或多个氨基酸残基特异性结合。抗CD137抗体与SEQ ID NO:231的氨基酸残基51、63-67、69-73、83、89、92、98-104及112-114内的一个或多个氨基酸残基特异性结合。

在一些实施方案中，抗CD137抗体以约500nM或更小(例如，约500nM或更小、约400nM或更小、约300nM或更小、约200nM或更小、约150nM或更小、约100nM或更小、约90nM或更小、约80nM或更小、约75nM或更小、约70nM或更小、约60nM或更小、约50nM或更小、约40nM或更小、约30nM或更小、约25nM或更小、约20nM或更小、约10nM或更小、约1nM或更小、约0.1nM或更小等)的KD与人CD137特异性结合。在一些实施方案中，抗CD137抗体以约100nM或更小的KD与人CD137特异性结合。在一些实施方案中，抗CD137抗体以约50nM或更小的KD与人CD137特异性结合。测量抗体或抗原结合片段的KD的方法可使用本领域已知的任何方法进行，包括例如，通过表面等离子体共振、ELISA、等温滴定量热法、过滤结合测定、EMSA等。

抗CD137抗体必须交联，以变得具有激动性。例如，交联通过Fcγ受体在体内实现，而通常多克隆抗Fc抗体在体外用于基于细胞的实验中。在一些实施方案中，本文所述的抗CD137抗体对人CD137具有激动剂活性。在一些实施方案中，当表达人CD137的细胞(例如，人细胞)接触抗CD137抗体时，抗CD137抗体诱导人CD137的一种或多种(例如，一种或多种、两种或更多种、三种或更多种等)活性。各种CD137活性是本领域已知的并且可包括但不限于NF-κB依赖性转录的诱导、T细胞增殖的诱导、T细胞存活的延长、活化T细胞的共刺激、细胞因子分泌(诸如IL-2)的诱导，以及单核细胞活化的诱导。在一些实施方案中，一种或多种CD137活性不是CD137与其配体的结合。测量CD137活性(例如，NF-κB依赖性转录和/或T细胞增殖的诱导等)的方法是本领域已知的，包括，例如，经由以下实施方案8和9中所述的方法。在一些实施方案中，抗CD137抗体增加表达人CD137的细胞(例如，人细胞)中的NF-κB依赖性转录。在一些实施方案中，相对于不与抗CD137抗体接触的对应细胞(例如，不与抗体接触，或与同种型对照抗体接触的对应细胞)，在与抗CD137抗体接触的表达CD137的细胞(例如，人细胞)中，NF-κB依赖性转录增加约10％或更多、约20％或更多、约30％或更多、约40％或更多、约50％或更多、约60％或更多、约70％或更多、约80％或更多、约90％或更多，或约99％或更多。在一些实施方案中，相对于不与抗CD137抗体接触的对应细胞(例如，不与抗体接触，或与同种型对照抗体接触的对应细胞)，在与抗CD137抗体接触的表达CD137的细胞(例如，人细胞)中，NF-κB依赖性转录增加约2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、100倍、1000倍或更多。

在一些实施方案中，抗CD137抗体与猴(例如，食蟹猴)、小鼠、大鼠和/或狗CD137交叉反应。在一些实施方案中，抗CD137抗体与猴CD137交叉反应。在一些实施方案中，抗CD137抗体与小鼠CD137交叉反应。在一些实施方案中，抗CD137抗体与大鼠CD137交叉反应。在一些实施方案中，抗CD137抗体与狗CD137交叉反应。在一些实施方案中，抗CD137抗体与猴和小鼠CD137；猴和大鼠CD137；猴和狗CD137；小鼠和大鼠CD137；小鼠和狗CD137；大鼠和狗CD137；猴、小鼠和大鼠CD137；猴、小鼠和狗CD137；猴、大鼠和狗CD137；小鼠、大鼠和狗CD137；或猴、小鼠、大鼠和狗CD137交叉反应。在一些实施方案中，抗CD137抗体在约100nM下(例如，在约1nM下、在约10nM下、在约25nM下、在约50nM下、在约75nM下、在约100nM下)交叉反应。测量抗体交叉反应性的方法是本领域已知的，包括但不限于表面等离子体共振、ELISA、等温滴定量热法、过滤结合测定、EMSA等。

在一些实施方案中，抗CD137抗体不引起ADCC效应。测量ADCC效应的方法(例如，体内方法)是本领域已知的。在一些实施方案中，相对于对照，抗CD137抗体不引起超过约10％的ADCC效应(不引起超过约10％、超过约5％、超过约1％、超过约0.1％、超过约0.01％的ADCC效应)。

在一些实施方案中，抗CD137抗体能够抑制肿瘤细胞生长/增殖。在一些实施方案中，相对于不与抗CD137抗体接触的对应肿瘤细胞，当与抗CD137抗体接触时，肿瘤细胞生长/增殖被抑制至少约5％(例如，至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％，或至少约99％)。在一些实施方案中，在将抗CD137抗体施用给受试者时，抗CD137抗体能够减小受试者的肿瘤体积。在一些实施方案中，相对于受试者的初始肿瘤体积(例如，在施用抗CD137抗体之前)，抗CD137抗体能够将受试者的肿瘤体积减少至少约5％(例如，至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％，或至少约99％)。监测肿瘤细胞生长/增殖、肿瘤体积和/或肿瘤抑制的方法是本领域已知的。

在一些实施方案中，抗CD137抗体对癌症具有治疗作用。在一些实施方案中，抗CD137抗体减少癌症的一种或多种体征或症状。在一些实施方案中，当施用抗CD137抗体时，罹患癌症的受试者进入部分或完全缓解。

在一些实施方案中，抗CD137抗体选自由AG10058、AG10059和ADG106组成的组。在一些实施方案中，抗CD137抗体与本公开的例示性抗体中的任何一种，诸如AG10058、AG10059和ADG106竞争或交叉竞争结合人CD137。在一些实施方案中，抗CD137抗体与AG10058、AG10059或ADG106竞争或交叉竞争结合人CD137上的相同表位。抗体与另一抗体竞争或交叉竞争结合的能力可以使用本领域已知的标准结合测定确定，诸如BIAcore分析、ELISA测定或流式细胞术。例如，可以允许本公开的例示性抗体在饱和条件下与人CD137结合，然后测量测试抗体结合CD137的能力。如果测试抗体能够与例示性抗体同时结合至CD137，那么测试抗体结合至与例示性抗体不同的表位。然而，如果测试抗体不能同时结合至CD137，那么测试抗体结合至例示性抗体所结合表位的相同表位、重叠表位，或与其紧密相邻的表位。此实验可以使用各种方法执行，诸如ELISA、RIA、FACS或表面等离子体共振。

在一些实施方案中，抗CD137抗体阻断CD137与其配体(例如，人CD137与人CD137L)之间的结合。在一些实施方案中，抗CD137抗体在体外阻断CD137与其配体之间的结合。在一些实施方案中，对于阻断CD137与其配体的结合，抗CD137抗体具有约500nM或更小(例如，约500nM或更小、约400nM或更小、约300nM或更小、约200nM或更小、约100nM或更小、约50nM或更小、约25nM或更小、约10nM或更小、约1nM或更小等)的半最大抑制浓度(IC50)。在一些实施方案中，对于阻断CD137与其配体的结合，抗CD137抗体具有约100nM或更小的半最大抑制浓度(IC50)。在一些实施方案中，当以约100nM或更大(例如，约100nM或更大、约500nM或更大、约1μM或更大、约10μM或更大等)的浓度提供时，抗CD137抗体完全阻断人CD137与其配体的结合。如本文所用，术语“完全阻断(complete blocking或completely blocks)”是指抗体或抗原结合片段将第一蛋白质与第二蛋白质之间的结合减少至少约80％(例如，至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％等)的能力。测量抗体或抗原结合片段阻断第一蛋白质(例如，CD137)与第二蛋白质(例如，CD137L)的结合的能力的方法是本领域已知的，包括但不限于经由BIAcore分析、ELISA测定和流式细胞术。

在一些实施方案中，抗CD137抗体包含重链可变区(VH)和轻链(VL)可变区，a)其中VH包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3，其中HVR-H1包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：式(I)：X1TFX2X3YX4IHWV(SEQ ID NO:262)，其中X1为F或Y，X2为S或T，X3为G、N或S，且X4为A、G或W；式(II)：YSIX1SGX2X3WX4WI(SEQ ID NO:263)，其中X1为S或T，X2为H或Y，X3为H或Y，并且X4为A、D、G、N、S或T；及式(III)：FSLSTX1GVX2VX3WI(SEQ ID NO:264)，其中X1为G或S，X2为A或G，且X3为A、G、S或T；其中HVR-H2包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：式(IV)：LALIDWX1X2DKX3YSX4SLKSRL(SEQ ID NO:265)，其中X1为A、D或Y，X2为D或G，X3为R、S或Y，且X4为P或T；式(V)：IGX1IYHSGX2TYYX3PSLKSRV(SEQ ID NO:266)，其中X1为D或E，X2为N或S，并且X3为N或S；及式(VI)：VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(SEQ ID NO:267)，其中X1为A、G、S、V或Y，X2为A、D、S或Y，X3为D、G或S，且X4为S或T；并且其中HVR-H3包含根据下式的氨基酸序列：式(VII)：ARX1GX2X3X4VX5GDWFX6Y(SEQ ID NO:268)，其中X1为E或G，X2为E或S，X3为D或T，X4为A、T或V，X5为A、I、L、T或V，且X6为A、D或G；并且/或者b)其中轻链可变区包含HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3，其中HVR-L1包含根据下式的氨基酸序列：式(VIII)：X1ASQX2X3X4X5X6X7X8(SEQ ID NO:269)，其中X1为Q或R，X2为D、G或S，X3为I或V，X4为G、R、S或T，X5为P、R、S或T，X6为A、D、F、S、V或Y，X7为L或V，并且X8为A、G或N；其中HVR-L2包含根据下式的氨基酸序列：式(IX)：X1ASX2X3X4X5GX6(SEQ ID NO:270)，其中X1为A或D，X2为N、S或T，X3为L或R，X4为A、E或Q，X5为S或T，并且X6为I或V；并且其中HVR-L3包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：式(X)：YCQQX1YX2X3X4T(SEQ ID NO:271)，其中X1为A、G、S或Y，X2为Q、S或Y，X3为I、L、T或Y，并且X4为I、S、V或W；以及式(XI)：YCX1QX2X3X4X5PX6T(SEQID NO:272)，其中X1为E或Q，X2为P、S或Y，X3为D、L、S、T或Y，X4为D、E、H、S或T，X5为D、LT或W，且X6为L、P、R或V。

在一些实施方案中，抗CD137抗体包含VH及VL，其中VH包含：包含氨基酸序列SEQID NO:264的HVR-H1、包含氨基酸序列SEQ ID NO:265的HVR-H2，以及包含氨基酸序列SEQID NO:268的HVR-H3；和/或其中VL包含：包含氨基酸序列SEQ ID NO:269的HVR-L1、包含氨基酸序列SEQ ID NO:270的HVR-L2，以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:271的HVR-L3。

示范性抗CD137抗体的序列如下表C所示。

表C.示范性抗CD137抗体

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在一些实施方案中，抗CD137抗体包含VH及VL，其中VH包含：包含氨基酸序列SEQID NO:232的HVR-H1、包含氨基酸序列SEQ ID NO:233的HVR-H2，以及包含氨基酸序列SEQID NO:234的HVR-H3；和/或其中VL包含：包含氨基酸序列SEQ ID NO:235的HVR-L1、包含氨基酸序列SEQ ID NO:236的HVR-L2，以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:237的HVR-L3。

在一些实施方案中，抗CD137抗体包含VH包含氨基酸序列SEQ ID NO:238的重链互补决定区(HC-CDR)1、HC-CDR2及HC-CDR3；及/或VL包含氨基酸序列SEQ ID NO:239的轻链互补决定区(LC-CDR)1、LC-CDR2及LC-CDR3。在某些实施方案中，抗CD137抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:238的重链可变区，及/或VL包含氨基酸序列SEQ ID NO:239的轻链可变区。在某些实施方案中，抗CD137抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:240的重链，及/或VL包含氨基酸序列SEQ ID NO:241的轻链。

在一些实施方案中，抗CD137抗体包含VH及VL，其中VH包含：包含氨基酸序列SEQID NO:242的HVR-H1、包含氨基酸序列SEQ ID NO:243的HVR-H2，以及包含氨基酸序列SEQID NO:244的HVR-H3；和/或其中VL包含：包含氨基酸序列SEQ ID NO:245的HVR-L1、包含氨基酸序列SEQ ID NO:246的HVR-L2，以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:247的HVR-L3。

在一些实施方案中，抗CD137抗体包含VH包含氨基酸序列SEQ ID NO:248的重链互补决定区(HC-CDR)1、HC-CDR2及HC-CDR3；及/或VL包含氨基酸序列SEQ ID NO:249的轻链互补决定区(LC-CDR)1、LC-CDR2及LC-CDR3。在某些实施方案中，抗CD137抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:248的重链可变区，及/或VL包含氨基酸序列SEQ ID NO:249的轻链可变区。在某些实施方案中，抗CD137抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:250的重链，及/或VL包含氨基酸序列SEQ ID NO:251的轻链。

在一些实施方案中，抗CD137抗体包含VH及VL，其中VH包含：包含氨基酸序列SEQID NO:252的HVR-H1、包含氨基酸序列SEQ ID NO:253的HVR-H2，以及包含氨基酸序列SEQID NO:254的HVR-H3；和/或其中VL包含：包含氨基酸序列SEQ ID NO:255的HVR-L1、包含氨基酸序列SEQ ID NO:256的HVR-L2，以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:257的HVR-L3。

在一些实施方案中，抗CD137抗体包含VH包含氨基酸序列SEQ ID NO:258的重链互补决定区(HC-CDR)1、HC-CDR2及HC-CDR3；及/或VL包含氨基酸序列SEQ ID NO:259的轻链互补决定区(LC-CDR)1、LC-CDR2及LC-CDR3。在某些实施方案中，抗CD137抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:258的重链可变区，及/或VL包含氨基酸序列SEQ ID NO:259的轻链可变区。在某些实施方案中，抗CD137抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:260的重链，及/或VL包含氨基酸序列SEQ ID NO:261的轻链。

本文所述的CD137抗体可以属于任何种类，诸如IgG、IgM、IgE、IgA或IgD。优选的是，CD137抗体属于IgG类，诸如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚类。可以使用本领域已知的方法将CD137抗体从一个种类或亚类转换为另一种类或亚类。用于产生属于期望种类或亚类的抗体的示例性方法包括以下步骤：分离编码CD137抗体的重链的核酸和编码CD137抗体的轻链的核酸；分离编码VH区的序列；将VH序列与编码期望种类或亚类的重链恒定区的序列连接；在细胞中表达轻链基因和重链构建体；以及收集CD137抗体。在一些实施方案中，抗体包含人IgG4 Fc区。在一些实施方案中，人IgG4 Fc区包含S241P突变，其中编号是根据Kabat进行的。

V.药物组合物、试剂盒和制品

在其他方面，本申请提供了一种组合物，其包含本文所述任何抗CTLA4抗体(例如，可活化抗体)。在一些实施方案中，组合物是包含抗CTLA4抗体(例如可活化抗体)和药学上可接受的载体的药物组合物。在一些实施方案中，本文提供了一种组合物，其包含一种或多种额外治疗剂(例如，抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CD137抗体、VEGF抑制剂、化学治疗剂或PARP抑制剂)。组合物可通过本领域中已知的常规方法制备。

术语“医药学上可接受的载剂”是指适用于递送活性剂(例如抗CTLA4抗体)的制剂中的任何非活性物质。载剂可以是抗粘剂、粘结剂、包衣、崩解剂、填料或稀释剂、防腐剂(诸如抗氧化剂、抗细菌剂或抗真菌剂)、甜味剂、吸收延迟剂、湿润剂、乳化剂、缓冲剂等。合适的药学上可接受的载剂的实例包括水、乙醇、多元醇(诸如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、右旋糖、植物油(诸如橄榄油)、盐水、缓冲液、缓冲盐水，以及等渗剂(诸如糖、聚醇、山梨醇和氯化钠)。组合物可处于任何合适的形式，诸如液体、半固体和固体剂型。液体剂型的实例包括溶液(例如，可注射和可输注溶液)、微乳液、脂质体、分散体或混悬液。固体剂型的实例包括片剂、丸剂、胶囊、微胶囊和粉剂。适用于递送抗CTLA4抗体的组合物的特定形式是可注射或可输注无菌液体，诸如溶液、悬浮液或分散液。无菌溶液可以通过将所需量的抗体掺入适当的载剂中，然后进行灭菌微过滤来制备。一般来说，通过将抗体掺入无菌媒介物中来制备分散液，所述无菌媒介物包含基本分散介质和其他载剂。对于用于制备无菌液体的无菌粉末来说，制备方法包括真空干燥和冷冻干燥(冻干)，以产生活性成分加上来自其先前经过无菌过滤的溶液的任何另外的期望成分的粉末。组合物的各种剂量可以通过本领域已知的常规技术制备。

组合物中包含的抗CTLA4抗体的相对量将取决于多种因素，诸如所用的具体抗CTLA4抗体和载剂、剂型以及期望的释放和药效学特征。单一剂型中抗CTLA4抗体的量通常为产生治疗效果的量，但也可以是较少的量。一般来说，相对于剂型的总重量，此量将在约0.01％至约99％、约0.1％至约70％，或约1％至约30％的范围内。

除抗CTLA4抗体之外，还可在组合物中包括一种或多种额外治疗剂。本文在“治疗方法”部分描述额外治疗剂的实例。包括在组合物中的额外治疗剂的适合量可易于由本领域技术人员选择，并且将视许多因素而变化，诸如所用特定药剂和载体、剂型、以及所需释放和药效学特征。包括在单一剂型中的额外治疗剂的量将通常是药剂的产生治疗作用的那个量，但也可为更小量。

在一些实施方案中，提供一种制品，其包含可用于治疗癌症的材料。制品可包含容器和在容器上或与容器相关联的标签或包装插页。合适的容器包含例如瓶子、小瓶、注射器等。容器可以由多种材料形成，例如玻璃或塑料。通常，容器容纳本文所述的用于有效治疗癌症的组合物，并且可以具有无菌进入口(例如，容器可以是静脉内溶液袋或具有可被皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。包装插页是指治疗产品的商业包装中通常包含的说明书，其包含关于适应症、用法、剂量、给药、禁忌和/或有关此类治疗产品的用途警告的信息。在一些实施方案中，包装插页指示组合物用于治疗癌症。标签或包装页可进一步包含用于向患者施用所述组合物的说明书。

另外，制品还可进一步包含第二容器，所述第二容器包含药学上可接受的缓冲剂，例如抑菌注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液(Ringer’s solution)和右旋糖溶液。其还可以包括自商业和用户的立场中期望的其他材料，包含其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针和注射器。

还提供了可用于各种目的的试剂盒，例如用于本文所述的癌症的治疗，视情况与制品组合使用。本申请的试剂盒包括一个或多个容器，其包括本文所述的任何一种组合物(或单位剂型和/或制品)。在一些实施方案中，所述试剂盒还包括根据本文所述的方法中的任一者使用的其它药剂(例如，一个或多个额外治疗剂)和/或说明书。所述试剂盒还可包括选择适于治疗的个体的描述。在本申请的试剂盒中提供的说明书通常是在标签或包装插页(例如，包括在试剂盒中的纸张)上的书面说明书，但是机器可读的说明书(例如，存储在磁碟存储器或光碟存储器上的说明书)也是可接受的。

例如，在一些实施方案中，提供试剂盒，其包含含有本文所述的任何一种抗CTLA4抗体及医药学上可接受的载剂的药物组合物，和将药物组合物施用患有癌症的个体的说明书。在一些实施方案中，试剂盒进一步包含含有额外治疗剂的药物组合物，例如化学治疗剂。在一些实施方案中，试剂盒进一步包含含有抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CD137抗体和VEGF抑制剂、化学治疗剂或PARP抑制剂的药物组合物。在一些实施方案中，试剂盒包含用于确定本文所述的一种或多种生物标志物的水平(例如，CD8+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T_em细胞、CD4+T_em细胞、T_reg细胞、CD8+T_em细胞与T_reg细胞的比率、CD4+T_em细胞与T_reg细胞的比率、NK细胞、B细胞)的一种或多种测定方法或其试剂。

本申请的试剂盒是在合适包装中。合适包装包括但不限于小瓶、瓶子、广口瓶、软包装(例如，密封的聚酯薄膜或塑料袋)等。试剂盒可视情况地提供其他组分，例如缓冲页和解释性信息。因此，本申请还提供了包括小瓶(例如密封小瓶)、瓶子、广口瓶、软包装等制品。

容器可以是单位剂量，散装包装(例如，多剂量包装)或亚单位剂量。试剂盒还可以包括多个单位剂量的药物组合物和使用说明书，且足以在药房例如医院药房和配制药房中储存和使用的量包装。

先前书面描述被视为足以使得本领域技术人员能够实施本公开。以下实施例仅出于说明性目的而提供，并且不意图以任何方式限制本公开的范围。实际上，除本文显示和描述的那些修改之外，根据先前描述，本公开的各种修改将变得为本领域技术人员显而易知，并且落在随附权利要求的范围内。

实施例

通过参考以下实施例可以进一步理解本发明，所述实施例通过说明的方式提供并且不意味是限制性的。

实施例1.一种新型抗CTLA4检查点抑制剂前药，用于解决癌症免疫疗法的靶向非肿瘤毒性

作为FDA批准的首个靶向CTLA4的免疫检查点抑制剂，伊匹木单抗已证明检查点阻断在癌症免疫疗法中的临床益处，特别是与抗PD-1疗法组合。然而，由于伊匹木单抗在正常组织中的自身免疫应答可能涉及多个器官系统，可引起严重甚至致命免疫介导不良反应，从而限制了其临床应用。因此，迫切需要开发具有增强抗肿瘤功效和改进安全性概况的下一代抗CTLA4抗体。

TY22404是一种使用SAFEbody技术设计的新型抗CTLA4全人源IgG1抗体前药。TY22404被设计为一种在肿瘤微环境中优先激活的抗体，限制其在正常组织中的靶向非肿瘤毒性。如图1所示，SAFEbody被共价连接的N端肽遮蔽，随后连接蛋白酶裂解位点。在正常组织中，SAFEbody遮蔽性部分具有阻断TY22404与CTLA4结合的功能，然而，在肿瘤组织中被已知的高度表达和活跃的蛋白酶裂解后，遮蔽性部分被释放，使活化后的TY22404抗体原位结合并抑制CTLA4的功能。

非临床药理学研究表明，未经遮蔽或活化的TY22404与物种交叉反应性CTLA4独特且保守的表位结合，并部分阻断CTLA4/B7配体相互作用。经活化TY22404在主要刺激信号存在下通过诱导IL-2细胞因子产生来增强T细胞活化、通过增强的ADCC消减免疫抑制性Treg、并在肿瘤微环境中特异性降低免疫抑制性Treg活性来介导抗肿瘤应答。TY22404(作为单一药剂及与其他免疫调节剂组合)在多种同种同基因鼠肿瘤模型中显示出有效的抗肿瘤活性。非临床毒理学研究表明，TY22404在食蟹猴中耐受性良好。这些结果表明，与其他传统抗CTLA4抗体相比，在局部肿瘤微环境中优先活化经遮蔽TY22404前药可允许为肿瘤提供更高有效剂量水平的治疗，同时具有更高的全身安全性。因此，TY22404有望在广泛的人类癌症免疫疗法中获得更好的疗效和安全性。

临床前毒理学结果

在非肥胖糖尿病(NOD)小鼠模型中，TY22404以50mg/kg剂量给药6次后，所有小鼠均存活，未观察到TY22404引起的异常发现。

在一项为期4周的GLP重复剂量毒理学研究中，食蟹猴以5、30和200mg/kg/剂静脉内输注TY22404，每周一次、共5次，随后是28天恢复期，耐受性良好。在200mg/kg剂量下，在两性多器官和组织中观察到轻微至中度混合性血管周围浸润的不良但可逆的微观发现。

大鼠和食蟹猴中确定的未观察到不良反应水平(NOAEL)为30mg/kg/剂，且食蟹猴中确定的最高非严重毒性剂量(HNSTD)为200mg/kg/剂。

TY22404对人、猴、小鼠和大鼠CTLA4的结合亲和力

评估了经遮蔽TY22404与其活化形式(通过条件1和2活化的TY22404)对人、食蟹猴、小鼠或大鼠来源的重组CTLA4蛋白的结合亲和力。简言之，用人、食蟹猴、小鼠或大鼠来源的重组CTLA4蛋白(细胞外结构域)包被ELISA微孔板，以在连续稀释液中捕获TY22404、经活化TY22404形式(通过条件1和2活化的TY22404)、或人IgG1同型对照抗体，随后使用HRP标记的抗人IgG(Fab特异性)二抗检测捕获抗体。半最大效应浓度(EC50)根据拟合结合曲线计算。

如图3所示，经遮蔽TY22404可与人、食蟹猴、小鼠和大鼠重组CTLA4蛋白结合，但亲和力非常低。而其活化形式与所有四个物种的重组CTLA4蛋白结合，具有相当高的亲和力(均约为0.3nM)。与经遮蔽TY22404抗体相比，裂解后的TY22404结合至其靶CTLA4蛋白的亲和力显著增加，分别为：对人CTLA4的亲和力增加超过250倍、对猴CTLA4的亲和力增加约40倍、对小鼠CTLA4的亲和力增加超过300倍和对大鼠CTLA4的亲和力增加超过100倍。

TY22404对CD28信号活化的影响通过体外细胞CTLA4阻断生物测定

通过阻断CD80和CD86配体的CTLA4螯合作用，评估了经遮蔽TY22404及其活化形式与伊匹木单抗相比刺激CD28介导的下游细胞信号传导的功能活性。

本研究采用Promega CTLA4阻断生物测定系统(一种基于生物发光细胞的测定)来评估抗CTLA4单克隆抗体的CTLA4阻断功能。该测定系统涉及两种经遗传工程改造的细胞系：CTLA4效应细胞-表达人CTLA4(1.0×10⁵/孔)和由对TCR/CD28活化起响应的IL-2天然启动子驱动的荧光素酶报告体的Jurkat T细胞；和aAPC/Raji细胞(2.0×10⁵)-表达被设计来以抗原非依赖性方式使TCR活化的细胞表面蛋白，并且内源性表达CTLA4配体CD80和CD86的Raji细胞。当共培养这两种细胞类型时，CTLA4与CD28竞争其共享配体(CD80和CD86)，并因此抑制CD28路径活化和启动子介导的发光。最终添加连续稀释TY22404、其活化形式、伊匹木单抗或同型抗体来阻断CTLA4与它的配体CD80和CD86的相互作用，这导致启动子介导的发光。所述生物发光信号可随后使用Bio-Glo^TM荧光素酶测定系统检测。

如图4所示，经遮蔽TY22404不能诱导下游发光细胞信号传导。在体外被条件1或2裂解活化后，条件1和2活化的抗体都可以剂量依赖性方式刺激CTLA4阻断介导的报告子信号传导。然而，TY22404活化形式的活性远低于伊匹木单抗。

TY22404在293F上过表达人CTLA4的ADCC报告基因活性评估

评估了TY22404及其活化形式与伊匹木单抗相比在其靶细胞(293F-CTLA4)上的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)报告基因活性。简言之，效应细胞、Jurkat-NFAT-CD16由人T淋巴细胞Jurkat细胞系工程改造而成。Jurkat细胞自然表达功能性NFAT转录因子，该转录因子参与ADCC早期信号事件。这里使用的靶细胞(2.0×10⁴)是过表达CTLA4靶分子的293F。在存在和不存在不同浓度抗CTLA4单克隆抗体下，通过293F-CTLA4靶细胞与效应细胞(1.2×10⁵)共孵育来评估抗CTLA4单克隆抗体的ADCC报告基因活性，随后分析荧光素酶。所述IgG1同型对照单克隆抗体用作ADCC报告子活性的阴性对照。

如图5所示，这些结果表明具有遮蔽性肽的TY22404没有显示出ADCC报告子活性，且其通过蛋白酶裂解去除遮蔽性肽的活化形式(通过条件1和通过条件2活化的TY22404)对过表达CTLA4分子的293F细胞具有显著剂量依赖性ADCC报告子活性。值得注意地，通过条件1和通过条件2活化的TY22404都比伊匹木单抗对293F-CTLA4细胞具有更强的ADCC报告子活性，表现为更低的EC50。

在PBMC中SEA存在下通过TY22404体外活化人T细胞

评估了TY22404及其活化形式(通过条件1和2活化的TY22404)在PBMC背景下增强葡萄球菌肠毒素A(SEA)肽刺激的人T细胞活化的体外生物活性。SEA作为一种超级抗原，已知其通过与来自APC的MHCII和来自T细胞的T细胞受体(TCR)结合来活化大部分人T细胞，并因此在本研究中被选作启动T细胞活化。将人PBMC(外周血单核细胞，2.0×10⁵/孔)从一个健康供体(D#69)中分离，并用次优浓度的SEA肽(50ng/mL)和连续稀释浓度的TY22404、其活化形式或同型对照抗体刺激。4天后收集重复细胞上清液，以ELISA作为增强T细胞活化的终点测量IL-2。

如图6所示，这些体外T细胞活化测定结果表明，TY22404的活化形式(通过条件1和2活化的TY22404)可增强来自健康供体PBMC中的SEA肽刺激的IL-2细胞因子释放，而经遮蔽TY22404没有此种活性。此外，在人PBMC背景下增强抗原刺激的T细胞活化方面，通过条件2活化的TY22404比通过条件1活化的TY22404表现出更有效的活性。H22鼠肝癌模型中TY22404的抗肿瘤功效

将BALB/c小鼠(每组n＝8，雌性，6-7周龄)皮下接种H22(CCTCC)鼠肝癌细胞。当平均肿瘤体积达到约97mm³时开始治疗。通过腹膜内注射向小鼠施用5mg/kg的同型对照和TY22404。每周两次向小鼠施用这些抗体，总计六剂。每周监测两次肿瘤生长，并报告为随时间的平均肿瘤体积±s.e.m。如图7(左图)所示，TY22404作为单一疗法在H22模型中显示出非常强的抗肿瘤功效。

CT26鼠结肠癌模型中TY22404的抗肿瘤功效

将BALB/c小鼠(每组n＝8，雌性，7-8周龄)皮下接种CT26(SIBS)鼠结肠癌细胞。当平均肿瘤体积达到约98mm³时开始治疗。通过腹膜内注射向小鼠施用5mg/kg的同型对照和TY22404。每周两次向小鼠施用这些抗体，总计六剂。每周监测两次肿瘤生长，并报告为随时间的平均肿瘤体积±s.e.m。如图7(右图)所示，TY22404作为单一疗法在CT26模型中显示出非常强的抗肿瘤功效。

图8为图10的个体曲线。(TY22404与抗PD-1抗体在路易斯癌症模型中组合施用)。

TY22404在CT26鼠结肠癌模型中的Treg消减

将BALB/c小鼠(每组n＝10，雌性，7-8周龄)皮下接种CT26(SIBS)鼠结肠癌细胞。在肿瘤接种后第9天开始治疗，此时平均肿瘤体积达到约121mm³。通过腹膜内注射向小鼠施用5mg/kg的同型对照和TY22404。在第9天和第12天向小鼠施用这些抗体，并在第14天终止进行外周和肿瘤浸润性淋巴细胞分析。

如图9所示，相较于TIL中的同型对照，TY22404使CD4⁺T细胞中Tregs的百分比显著降低。然而，TY22404不影响血液和脾脏外周淋巴细胞中CD4⁺T细胞中Tregs的百分比(右图)。如图9(左图)所示，TIL中Treg细胞的CTLA4表达水平在TY22404治疗后显著降低。然而，外周Treg细胞的CTLA4表达水平在TY22404治疗后略有上调(PBMC)或未改变(脾脏)。

总结

TY22404是一种可活化前药，其在蛋白酶裂解去除遮蔽性肽后，与多个物种的CTLA4特异性结合(图3)。

活化的TY22404是一种比伊匹木单抗更柔和的配体阻断剂，但对高密度CTLA4表达细胞具有更强效的ADCC活性靶向(图4-5)。

活化的TY22404，但非遮蔽性肽完整的TY22404 SAFEbody，可强效地增强T细胞活化(图6)。

TY22404作为单一药剂在不同小鼠肿瘤模型中展现出强效的抗肿瘤活性(图7)。

TY22404与其他IO药物(如抗PD-1抗体)协同组合，以抑制体内肿瘤生长(图8)。组合疗法显著减缓肿瘤生长，并在八种肿瘤中的四种出现完全消退(CR)。

TY22404可有效消减肿瘤中的T_reg细胞，这些细胞表达更高水平的CTLA4，但不能消耗外周组织中的T_reg细胞(图9)。

TY22404在动物(包括NOD小鼠和食蟹猴)中耐受性良好，表明TY22404具有高治疗指数的潜力。

实施例2.抗CTLA4抗体的组合疗法

在各种癌症模型中对抗CTLA4抗体组合疗法的功效进行了测试。

图10提供TY22404与抗PD-1抗体在路易斯癌症模型中组合施用的结果。评估了TY22404与抗PD-1组合治疗的体内抗肿瘤功效。小鼠皮下接种路易斯鼠肺肿瘤细胞。当平均肿瘤体积达到118mm³时，将荷瘤小鼠随机分为不同治疗组，每组8只。每两周一次(总计四剂)腹膜内施用测试抗体。在开始给药后14天评估相对于同型对照组的肿瘤生长抑制(TGI)。如图10所示，2mg/kg TY21580和TY22404单一疗法显示出抗肿瘤活性，TGI分别为51％和18％。10mg/kg FC1225抗PD-1单一疗法显示出抗肿瘤功效(TGI＝69％)。TY21580或TY22404与抗PD-1FC1225组合展现出显著增强的抗肿瘤功效，TGI分别为92％和91％。组合疗法的应答优于所有测试的单一疗法方案，这表明TY21580和TY22404都可协同抗PD1肿瘤抑制。

图11提供TY22404与抗CD137抗体ADG106在4T1癌症模型中组合施用的结果，以评估TY22404和ADG106组合治疗的体内抗肿瘤功效。小鼠皮下接种4T1鼠乳腺癌细胞。当平均肿瘤体积达到90mm³时，将荷瘤小鼠随机分为不同治疗组，每组8只。每两周一次(总计四剂)腹膜内施用媒介物、5mg/kg TY22404或ADG106、或这两种药剂的组合。如图11所示，与媒介物对照组相比，TY22404在第33天显示出部分抗肿瘤功效、TGI为49％，而ADG106不具有显著的抗肿瘤活性(TGI为10％)。TY22404与ADG106组合在该模型中显示出略微增强的抗肿瘤功效(TGI为63％)。

图12A-12B提供ADG106与TY21580在小鼠CT26结肠癌模型中组合施用的结果，以评估ADG106和TY21580组合治疗的体内抗肿瘤功效。小鼠皮下接种CT26鼠结肠肿瘤细胞。当平均肿瘤体积达到67mm³时，将荷瘤小鼠随机分为不同治疗组，每组8只。这些治疗组通过腹膜内注射接受1mg/kg同型对照、0.2mg/kg ADG106、0.2或1mg/kg TY21580、或相同剂量ADG106与TY21580的组合。所有抗体每周给药两次。如图12A-12B所示，与第19天的同型对照组相比，ADG106单独治疗显示出部分肿瘤生长抑制、TGI为47％，TY21580单独展现出更强的肿瘤生长剂量依赖性抑制，TGI在0.2mg/kg剂量下为79％且在1mg/kg剂量下为92％。ADG106与0.2或1mg/kg的TY21580组合未显示出增强的抗肿瘤活性，TGI分别为83％和91％。这些结果表明ADG106和TY21580强效的单药剂抗肿瘤活性，尽管在该模型中无协同作用。

图13A-13B提供ADG106与TY21580在小鼠MC38结肠癌模型中组合施用的结果，以评估TY21580和ADG106组合治疗的体内抗肿瘤功效。小鼠皮下接种MC38鼠结肠肿瘤细胞。当平均肿瘤体积达到69mm³时，将荷瘤小鼠随机分为不同治疗组，每组8只。这些治疗组通过腹膜内注射接受10mg/kg同型对照、10mg/kg ADG106、0.2或2mg/kg TY21580、或相同剂量ADG106与TY21580的组合。所有抗体每周给药两次，总计4周。如图13A-13B所示，与第33天的同型对照组相比，ADG106单独治疗不抑制肿瘤生长，而TY21580展现出肿瘤生长剂量依赖性抑制，第33天TGI在0.2mg/kg剂量下为30％且在2mg/kg剂量下为67％。ADG106与0.2或2mg/kg的TY21580组合显示出增强的抗肿瘤活性，TGI分别为65％和84％。未观察到这些治疗对体重的不良影响。这些结果表明ADG106与TY21580组合在鼠MC38结肠癌模型中引起增强的抗肿瘤应答。

图14A-14B提供ADG106与TY21580在小鼠MC38结肠癌模型中组合施用的结果。当平均肿瘤体积达到约53mm³(n＝8)时开始给药。TY21580单一治疗组中完全缓解(CR)为1/10，ADG106+TY21580组合治疗组中完全缓解(CR)为1/10且疾病稳定(SD)为2/10。TY21580和ADG106在本研究中具有协同作用。

图15-16提供ADG106与TY21580在小鼠4T1乳腺癌模型中组合施用的结果。将BALB/c小鼠(每组n＝8，雌性，6-8周龄)皮下移植3×10⁵个4T1乳腺癌细胞，这是一种三阴性小鼠乳腺癌细胞系。肿瘤形成后(即体积达到96mm³)，小鼠用同型对照抗体、抗CD137抗体ADG106(5mg/kg)、抗CTLA-4抗体TY21580(2mg/kg)、或ADG106(5mg/kg)与TY21580(2mg/kg)组合通过腹膜内注射每周治疗两次，总计2周。每周监测两次肿瘤生长，并报告为随时间的平均肿瘤体积±SEM。TY21580组中4/8死亡且ADG106+TY21580组中1/8死亡。如图15-16所示，与同型对照抗体相比，TY21580和ADG106单一疗法均显示出抗肿瘤活性，且TY21580与ADG106组合在4T1乳腺癌模型中展现出协同抗肿瘤功效。

图17提供ADG106与TY21580在同种同基因小鼠B16F10黑色素瘤模型中组合施用的结果，以评估TY21580与ADG106组合治疗的体内抗肿瘤功效。小鼠皮下接种B16F10鼠黑色素瘤肿瘤细胞。肿瘤接种后将小鼠随机分为不同治疗组，每组8只，并通过腹膜内注射接受同型对照、ADG106、或5mg/kg TY21580、或相同剂量ADG106与TY21580的组合。所有抗体每周给药两次。如图17所示，与同型对照组相比，ADG106单独治疗不抑制肿瘤生长，而TY21580展现出单药剂抗肿瘤活性。ADG106与TY21580组合进一步增强了肿瘤生长抑制作用，这表明ADG106和TY21580可协同抗肿瘤功效。

图18A-18B提供ADG106与TY21580在A20癌症模型中组合施用的结果，以评估ADG106与TY21580组合治疗的体内抗肿瘤功效。小鼠皮下接种A20鼠B淋巴瘤细胞。当平均肿瘤体积达到101mm³时，将荷瘤小鼠随机分为不同治疗组，每组8只。每两周一次(总计四剂)腹膜内施用5mg/kg ADG106或0.5mg/kg TY21580、或这两种药剂的组合。如图18A-18B所示，与媒介物对照组相比，5mg/kg ADG106或0.5mg/kg TY21580单独治疗均显示出部分抗肿瘤活性。ADG106与TY21580组合展现出进一步增强的抗肿瘤功效(4个完全缓解)，这表明ADG106和TY21580可协同肿瘤抑制。

图19A-19B提供ADG106与TY21580在EMT6癌症模型中组合施用的结果，以评估ADG106与TY21580组合治疗的体内抗肿瘤功效。小鼠皮下接种EMT6鼠乳腺癌细胞。当平均肿瘤体积达到95mm³时，将荷瘤小鼠随机分为不同治疗组，每组8只。每两周一次腹膜内施用0.5mg/kg ADG106或0.1mg/kg TY21580、或这两种药剂的组合。如图19A-19B所示，与媒介物对照组相比，0.5mg/kg ADG106或0.1mg/kg TY21580单独治疗均显示出显著的抗肿瘤活性。ADG106与TY21580组合展现出进一步增强的抗肿瘤功效(7个完全缓解)，这表明ADG106和TY21580可协同肿瘤抑制。

图20A-20B提供TY21580与ADG106在CT26结肠癌模型中组合施用的结果。将BALB/c小鼠(每组n＝8，雌性，7-8周龄)皮下接种CT26(SIBS)鼠结肠癌细胞。当平均肿瘤体积达到约62mm³时开始治疗。通过腹膜内注射向小鼠施用同型对照(5mg/kg)、TY21580(5mg/kg)、ADG106(2剂0.1mg/kg，另外4剂0.2mg/kg)和TY21580与ADG106的组合。每周两次向小鼠施用这些抗体，总计六剂。每周监测两次肿瘤生长，并报告为随时间的平均肿瘤体积±s.e.m。如图20所示，TY21580单一疗法均显示出抗肿瘤活性，且TY21580与ADG106组合在CT26模型中展现出增强的抗肿瘤功效。

图21A-21B提供TY21580与呋喹替尼在CT26癌症模型中组合施用的结果，以评估TY21580与VEGFR抑制剂呋喹替尼组合治疗的体内抗肿瘤功效。当平均肿瘤体积达到约120mm³时开始给药(每组n＝8)。将荷瘤小鼠随机分为不同治疗组，每组8只。每两周一次(总计四剂)腹膜内施用0.1mg/kg TY21580。每天口服5mg/kg呋喹替尼，总计3周。如图21A-21B所示，与同型对照组相比，0.1mg/kg TY21580或5mg/kg呋喹替尼单独治疗均显示出部分抗肿瘤活性。TY21580与呋喹替尼组合展现出进一步增强的抗肿瘤功效，这表明TY21580可在肿瘤抑制中协同呋喹替尼。联合组中完全缓解(CR)为1/8且TY21580或呋喹替尼单一疗法组中无完全缓解(CR)。

图22A-22B提供TY21580与安罗替尼在Renc癌症模型中组合施用的结果，以评估TY21580与VEGFR抑制剂安罗替尼组合治疗的体内抗肿瘤功效。小鼠皮下接种Renca鼠肾癌细胞。当平均肿瘤体积达到86mm³时，将荷瘤小鼠随机分为不同治疗组，每组8只。每两周一次(总计四剂)腹膜内施用5mg/kg TY21580。每天口服3mg/kg安罗替尼，总计17剂。如图22A-22B所示，与媒介物对照组相比，5mg/kg TY21580单独治疗不具有抗肿瘤功效，而安罗替尼单独使用显示出强抗肿瘤活性，第29天TGI为93％。TY21580与安罗替尼组合展现出与安罗替尼单药剂相同的抗肿瘤功效，这表明这两种药剂在肿瘤模型中无协同作用。

图23A-23B提供TY21580与多西他赛在4T1癌症模型中组合施用的结果，以评估TY21580与多西他赛组合治疗的体内抗肿瘤功效。当平均肿瘤体积达到约90mm³时开始给药(每组n＝8)。当平均肿瘤体积达到90mm³时，将荷瘤小鼠随机分为不同治疗组，每组8只。每两周一次(总计四剂)腹膜内施用2mg/kg TY21580。10mg/kg多西他赛每周一次(总计三剂)静脉内给药。4/8小鼠在TY21580单一疗法组开始给药后2周死亡，而仅1/8小鼠在联合疗法组开始给药后6周死亡。如图23A-23B所示，与媒介物对照组相比，2mg/kg TY21580或10mg/kg多西他赛单独治疗均显示出部分抗肿瘤活性(第35天TGI分别为44.9％和38.3％)。TY21580与多西他赛组合展现出进一步增强的抗肿瘤功效(TGI为74％)，这表明TY21580可在肿瘤抑制中协同多西他赛。

图24A-24B提供TY21580与奥拉帕尼在EMT6癌症模型中组合施用的结果，以评估TY21580与PARP抑制剂奥拉帕尼组合治疗的体内抗肿瘤功效。小鼠皮下接种EMT6鼠乳腺癌细胞。当平均肿瘤体积达到95mm³时，将荷瘤小鼠随机分为不同治疗组，每组8只。每两周一次腹膜内施用0.1mg/kg TY21580。每天口服50mg/kg奥拉帕尼，总计21剂。如图24A-24B所示，与媒介物对照组相比，奥拉帕尼单独治疗不具有显著的抗肿瘤功效，而0.1mg/kgTY21580单独治疗显示出显著的抗肿瘤活性，第27天TGI为56％。TY21580与奥拉帕尼组合展现出降低的抗肿瘤功效，TGI为15.4％，这表明奥拉帕尼可在肿瘤抑制中拮抗TY21580活性。

图25提供TY22404与ADG106在MC38癌症模型中组合施用的结果，以评估组合治疗的体内抗肿瘤功效。小鼠皮下接种MC38鼠结肠肿瘤细胞。当平均肿瘤体积达到97mm³时，将荷瘤小鼠随机分为不同治疗组，每组8只。每两周一次(总计四剂)腹膜内施用测试抗体。在肿瘤细胞接种后第27天评估相对于同型对照组的肿瘤生长抑制(TGI)。如图25所示，5mg/kgTY22404单一疗法显示出显著的抗肿瘤活性，TGI为77％，而5mg/kg ADG106单独治疗不具有显著的抗肿瘤活性(TGI＝21％)。这两种药剂组合展现出显著增强的抗肿瘤功效，平均TGI为94％，且8只小鼠中4只肿瘤完全消退。组合疗法的应答优于两个药剂单独治疗，这表明TY22404可在肿瘤抑制中协同ADG106。

图26提供TY21580与阿可拉定(“SNG162”)和/或ADG106在同种同基因小鼠B16F10黑色素瘤模型中组合施用的结果。将BALB/c小鼠(每组n＝8)皮下接种B16F10鼠黑色素瘤细胞。在肿瘤接种后第6天开始治疗。通过腹膜内注射向小鼠施用对照(玉米油+mIgG+hIgG4)、TY21580(5mg/kg)、ADG106(5mg/kg)和TY21580与ADG106的组合。每三天一次(Q3D)向小鼠施用，总计6剂。TY21580与阿可拉定(“SNG162”)和/或ADG106组合施用在同种同基因小鼠B16F10黑色素瘤模型中也进行了测试。如图26所示，ADG106在该模型中显示出与TY21580协同的抗肿瘤功效。实验结束时，在SNG162+TY21580、ADG106+TY21580、和SNG162+ADG106+TY21580三组中的每一组中都有肿瘤完全消退的小鼠。

实施例3.TY22404活化和TY21580与TY22404药代动力学

如图27所示，将BALB/c雌性小鼠皮下接种表达或不表达人CTLA4的鼠H22肝癌肿瘤细胞。如示意图27所示，外源过表达CTLA4的H22肿瘤细胞和不表达CTLA4的亲本H22肿瘤细胞分别接种至小鼠左侧和右侧。亲本TY21580和TY22404单克隆抗体均用89Zr放射标记，并静脉内注射到荷瘤小鼠尾静脉。在不同时间点进行PET/CT扫描，以对信号分布成像。成像结果表明，120小时单克隆抗体给药后，TY22404主要累积在靶CTLA4表达的肿瘤上，与亲本TY21580的情况相似。这些结果表明，TY22404在肿瘤微环境中被活化，从而实现靶结合。

如图28所示，小鼠和食蟹猴分别施用10mg/kg单一剂量的TY21580或TY22404。在抗体给药后不同时间点采集血液样本，并测量测试抗体的浓度。将不同时间点TY21580或TY22404平均浓度与时间作图。该结果表明，TY22404在小鼠和食蟹猴中均展现出比TY21580更长的半衰期和更高的全身暴露，这与SAFEbody在正常生理条件下保护抗体不与其靶标结合并导致靶点介导药物处置(TMDD)降低的概念一致。

实施例4.抗CTLA4 SAFEbody在1期剂量递增研究中的临床分析

抗CTLA4 SAFEbody的1期剂量递增和扩展群组研究已在澳大利亚和美国多地进行。这是一项针对既往多线疗法失败的晚期实体瘤患者的开放标签、多位点、1期研究。每3周一次施用0.1mg/kg、0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg或10mg/kg的抗CTLA4 SAFEbody，直到疾病进展或不可接受的毒性。

SAFEbody包含TY21580的VH和VL序列，且在轻链N端分别具有包含SEQ ID Nos:192和221序列的遮蔽性和连接部分(组合EVGSYPNPSSDCVPYYYACAYSGRSAGGGGTPLGLAGSGGS；SEQID NO:200的MM/LM序列)。完整重链和轻链(包括遮蔽/连接子)分别参见SEQ ID Nos:320和322。

约18名患者已入组自0.1至10mg的剂量递增。高达10mg/kg Q3W持续中没有观察到DLT，由SRC推荐的10mpk扩展群组在选定适应症中，抗CTLA4 SAFEbody以6mg/kg与抗PD-1组合使用，抗CTLA4 SAFEbody以3mg/kg与ADG106组合使用(图29&30)。

患者人口统计学特征及治疗史和适应症见表G。

表G.研究患者特征

/>

治疗相关安全性概况如图31所示。这些数据显示抗CTLA4SAFEbody在高至10mpk时具有非常强的安全性，与临床前观察一致。

为两种冷肿瘤选择了两个案例研究。首先，一名卵巢癌患者既往接受过5线疗法(图32A)。在1mpk入组本研究后，该患者在每两个周期抗CTLA4 SAFEbody治疗后，每次肿瘤评估均显示出持续的肿瘤缩小。靶向肿瘤病变从-13％、-19％缩小到-22％，而CA125从-18％、-67％稳步下降到-77％，与患者临床获益一致。其次，既往接受伊匹木单抗加纳武单抗疗法失败的UV黑色素瘤患者显示出-24％的肿瘤缩小(图32B)，这得到两个周期抗CTLA4SAFEbody疗法后T细胞活化的支持。对于无有效疗法的冷肿瘤亚型来说，这些观察结果令人惊讶。

实施例5.抗CTLA4 SAFEbody在1期剂量递增研究中的初步生物标志物分析

对于初步生物标志物评估，从入组实施例4中描述的I期临床试验患者中采集外周血和血清样本，并评估探索性生物标志物研究。这些研究包括通过流式细胞术分析外周淋巴细胞特征、分析血清细胞因子、可溶性受体/配体和MMPs的水平。

对于细胞因子分析，按照标准方案在不同时间点(第1个周期第1天给药前、第1个周期第8天、第1个周期第15天、第2个周期第1天给药前、第3个周期第1天给药前和第4个周期第1天给药前)从每位患者采集的新鲜血液制备血清。促炎症反应细胞因子组(IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6和IL-10)-免疫活化早期反应者的浓度，在血清中通过灵敏定量的MSD V-Plex测定法(Cat.No.K151A9H)根据制造商的说明测量。

IFN-γ和TNF-α在治疗过程中相对于基础水平(第1个周期第1天给药前)的变化如图33(IFN-γ)和图34(TNF-α)所示。IFN-γ丰度在3mg/kg TY22404给药的6105-005患者中从C1D8到C2D1显著增加。对于1mg/kg给药的6105-004患者，TNF-α丰度在治疗期间显示出显著增加。总之，在TY22404治疗后的一些患者中观察到IFN-γ和/或TNF-α水平短暂升高，表明免疫活化。

对于免疫细胞分析，按照标准方案在不同时间点(第1个周期第1天给药前、第1个周期第8天、第1个周期第15天、第2个周期第1天给药前、第3个周期第1天给药前和第4个周期第1天给药前)从每位患者中采集新鲜外周血样本。通过TBNK FACS板确定包括CD4+辅助性T细胞、CD8+细胞毒性T细胞、B细胞和NK细胞的免疫细胞亚群特征。如图35A-35C所示，描绘了每个亚群绝对计数在治疗过程中相对于基础水平(第1个周期第1天给药前)的变化。总之，在TY22404治疗后的一些患者观察到CD4⁺、CD8⁺T和NK细胞短暂升高。治疗后的NK细胞绝对计数和百分比增加可能为剂量依赖性。

实施例6.TY22404在小鼠H22肿瘤、肝脏和血浆中的体内裂解

采用传统蛋白质印迹(WB)评估尿激酶型纤维蛋白溶酶原活化因子(uPA)或基质金属蛋白酶-9(MMP9)在小鼠H22肿瘤、肝脏和血浆中对TY22404的体内裂解功效。简言之，将H22肿瘤细胞在体外在补充有10％胎牛血清的RPMI-1640培养基中，在含5％ CO₂的空气气氛、37℃下维持为单层培养物。收获生长处于指数生长期的细胞，并计数以用于肿瘤接种。在每个小鼠(BALB/c)的右侧腹区域皮下接种在0.1ml的PBS中的H22肿瘤细胞(2x 10⁶)以进行肿瘤发展。根据初始肿瘤体积(约300mm³)，将BALB/c小鼠随机分为2组(N＝3)。然后给本研究小鼠静脉注射5mg/kg TY22404。给药24小时和96小时后，分别从两组(每组3只小鼠)采集肿瘤、肝脏和血浆样品，用于后续WB分析。将组织样品在冰冻的RIPA溶解缓冲液中溶解，并通过二喹啉甲酸(BCA)试剂盒定量蛋白酶抑制剂混合物和总组织蛋白。随后，将目标抗体下拉并用预处理的蛋白A富集。将制备好的样品加载到12％梯度凝胶上用于SDS-PAGE。将抗人kappa轻链抗体(Abcam，ab134930；1:5000稀释)用作一抗，HRP标记的小鼠抗兔IgG(H+L)用作二抗，增强型化学发光(ECL)法用作最终信号检测。完整和裂解TY22404的1：1混合物用作测定中的标准对照(STD标记)。

如图36所示，给药24小时后，在2/3小鼠(1-3标记)肿瘤中检测到裂解形式的TY22404，约占总TY22404一半，而未在肝脏和血浆中检测到。然而，给药96小时后，TY22404裂解形式在所有样品中观察到，包括来自所有3只小鼠(4-6标记)的肿瘤、肝脏和血浆。

实施例7.CT26鼠结肠癌模型中TY22404的剂量依赖性Treg消减

将BALB/c小鼠(每组n＝10，雌性，8-9周龄)皮下接种CT26(SIBS)鼠结肠癌细胞。在肿瘤接种后第9天开始治疗，此时平均肿瘤体积达到约150mm³。通过腹膜内注射向小鼠施用5mg/kg同型对照以及5、1和0.2mg/kg的TY22404。在第9天和第12天向小鼠施用这些抗体，并在第14天终止进行脾脏和肿瘤浸润性淋巴细胞分析。如图37所示，相较于TIL中的同型对照，TY22404以剂量依赖性方式显著降低CD4⁺T细胞中Tregs的百分比。然而，TY22404并未降低脾脏中CD4⁺T细胞中Tregs的百分比。如图38所示，TIL中Treg细胞的CTLA4表达水平在TY22404治疗后以剂量依赖性方式显著降低。然而，外周Treg细胞的CTLA4表达水平在TY22404治疗后未改变。

示例性序列

表D.抗CTLA4可变区多核苷酸序列

/>

表E.抗体组分序列

/>

表F.进一步的抗体组分序列

/>

SEQ ID NO:231人CD137氨基酸序列

MGNSCYNIVATLLLVLNFERTRSLQDPCSNCPAGTFCDNNRNQICSPCPPNSFSSAGGQRTCDICRQCKGVFRTRKECSSTSNAECDCTPGFHCLGAGCSMCEQDCKQGQELTKKGCKDCCFGTFNDQKRGICRPWTNCSLDGKSVLVNGTKERDVVCGPSPADLSPGASSVTPPAPAREPGHSPQIISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSVVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL

SEQ ID NO:232 ADG106 HVR-H1

FSLSTGGVGVGWI

SEQ ID NO:233 ADG106 HVR-H2

LALIDWADDKYYSPSLKSRL

SEQ ID NO:234 ADG106 HVR-H3

ARGGSDTVIGDWFAY

SEQ ID NO:235 ADG106 HVR-L1

RASQSIGSYLA

SEQ ID NO:236 ADG106 HVR-L2

DASNLETGV

SEQ ID NO:237 ADG106 HVR-L3

YCQQGYYLWT

SEQ ID NO:238 ADG106 VH

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSTGGVGVGWIRQAPGKGLEWLALIDWADDKYYSPSLKSRLTISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYYCARGGSDTVIGDWFAYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:239 ADG106 VL

DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIGSYLAWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGYYLWTFGQGTKVEIKR

SEQ ID NO:240 ADG106重链

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSTGGVGVGWIRQAPGKGLEWLALIDWADDKYYSPSLKSRLTISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYYCARGGSDTVIGDWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK

SEQ ID NO:241 ADG106轻链

DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIGSYLAWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGYYLWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO:242 AG10059 HVR-H1

YSITSGHYWAWI

SEQ ID NO:243 AG10059 HVR-H2

VSSISGYGSTTYYADSVKGRF

SEQ ID NO:244 AG10059 HVR-H3

ARGGSDAVLGDWFAY

SEQ ID NO:245 AG10059 HVR-L1

RASQGIGSFLA

SEQ ID NO:246 AG10059 HVR-L2

DASNLETGV

SEQ ID NO:247 AG10059 HVR-L3

YCQQGYYLWT

SEQ ID NO:248 AG10059 VH

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSITSGHYWAWIRQAPGKGLEWVSSISGYGSTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYYCARGGSDAVLGDWFAYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:249 AG10059 VL

DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIGSFLAWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGYYLWTFGQGTKVEIKR

SEQ ID NO:250 AG10059重链

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSITSGHYWAWIRQAPGKGLEWVSSISGYGSTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYYCARGGSDAVLGDWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK

SEQ ID NO:251 AG10059轻链

DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIGSFLAWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGYYLWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO:252 AG10058 HVR-H1

FSLSTSGVGVGWI

SEQ ID NO:253 AG10058 HVR-H2

LALIDWDDDKYYSPSLKSRL

SEQ ID NO:254 AG10058 HVR-H3

ARGGSDTVLGDWFAY

SEQ ID NO:255 AG10058 HVR-L1

RASQSVSPYLA

SEQ ID NO:256 AG10058 HVR-L2

DASSLESGV

SEQ ID NO:257 AG10058 HVR-L3

YCQQGYSLWT

SEQ ID NO:258 AG10058 VH

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSTSGVGVGWIRQAPGKGLEWLALIDWDDDKYYSPSLKSRLTISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYYCARGGSDTVLGDWFAYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:259 AG10058 VL

DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSPYLAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGYSLWTFGQGTKVEIKR

SEQ ID NO:260 AG10058重链

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSTSGVGVGWIRQAPGKGLEWLALIDWDDDKYYSPSLKSRLTISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYYCARGGSDTVLGDWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK

SEQ ID NO:261 AG10058轻链

DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSPYLAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGYSLWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO:262 HVR-H1式(I)

X1TFX2X3YX4IHWV，其中X1为F或Y，X2为S或T，X3为G、N或S，且X4为A、G或W

SEQ ID NO:263 HVR-H1式(II)

YSIX1SGX2X3WX4WI，其中X1为S或T，X2为H或Y，X3为H或Y，且X4为A、D、G、N、S或T

SEQ ID NO:264 HVR-H1式(III)

FSLSTX1GVX2VX3WI，其中X1为G或S，X2为A或G，且X3为A、G、S或T

SEQ ID NO:265 HVR-H2式(IV)

LALIDWX1X2DKX3YSX4SLKSRL，其中X1为A、D或Y，X2为D或G，X3为R、S或Y，且X4为P或T

SEQ ID NO:266 HVR-H2式(V)

IGX1IYHSGX2TYYX3PSLKSRV，其中X1为D或E，X2为N或S，且X3为N或S

SEQ ID NO:267 HVR-H2式(VI)

VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF，其中X1为A、G、S、V或Y，X2为A、D、S或Y，X3为D、G或S，且X4为S或T

SEQ ID NO:268 HVR-H3式(VII)

ARX1GX2X3X4VX5GDWFX6Y，其中X1为E或G，X2为E或S，X3为D或T，X4为A、T或V，X5为A、I、L、T或V，且X6为A、D或G

SEQ ID NO:269 HVR-L1式(VIII)

X1ASQX2X3X4X5X6X7X8，其中X1为Q或R，X2为D、G或S，X3为I或V，X4为G、R、S或T，X5为P、R、S或T，X6为A、D、F、S、V或Y，X7为L或V，且X8为A、G或N

SEQ ID NO:270 HVR-L2式(IX)

X1ASX2X3X4X5GX6，其中X1为A或D，X2为N、S或T，X3为L或R，X4为A、E或Q，X5为S或T，且X6为I或V

SEQ ID NO:271 HVR-L3式(X)

YCQQX1YX2X3X4T，其中X1为A、G、S或Y，X2为Q、S或Y，X3为I、L、T或Y，且X4为I、S、V或W

SEQ ID NO:272 HVR-L3式(XI)

YCX1QX2X3X4X5PX6T，其中X1为E或Q，X2为P、S或Y，X3为D、L、S、T或Y，X4为D、E、H、S或T，X5为D、L、T或W，且X6为L、P、R或V

SEQ ID NO:273sCD137氨基酸序列

LQDPCSNCPAGTFCDNNRNQICSPCPPNSFSSAGGQRTCDICRQCKGVFRTRKECSSTSNAECDCTPGFHCLGAGCSMCEQDCKQGQELTKKGCKDCCFGTFNDQKRGICRPWTNCSLDGKSVLVNGTKERDVVCGPSPADLSPGASSVTPPAPAREPGHSPQ

SEQ ID NO:274 CD137L核酸序列

Atggaatacgcctctgacgcttcactggaccccgaagccccgtggcctcccgcgccccgcgctcgcgcctgccgcgtactgccttgggccctggtcgcggggctgctgctgctgctgctgctcgctgccgcctgcgccgtcttcctcgcctgcccctgggccgtgtccggggctcgcgcctcgcccggctccgcggccagcccgagactccgcgagggtcccgagctttcgcccgacgatcccgccggcctcttggacctgcggcagggcatgtttgcgcagctggtggcccaaaatgttctgctgatcgatgggcccctgagctggtacagtgacccaggcctggcaggcgtgtccctgacggggggcctgagctacaaagaggacacgaaggagctggtggtggccaaggctggagtctactatgtcttctttcaactagagctgcggcgcgtggtggccggcgagggctcaggctccgtttcacttgcgctgcacctgcagccactgcgctctgctgctggggccgccgccctggctttgaccgtggacctgccacccgcctcctccgaggctcggaactcggccttcggtttccagggccgcttgctgcacctgagtgccggccagcgcctgggcgtccatcttcacactgaggccagggcacgccatgcctggcagcttacccagggcgccacagtcttgggactcttccgggtgacccccgaaatcccagccggactcccttcaccgaggt cggaa

SEQ ID NO:275 CD137L氨基酸序列

MEYASDASLD PEAPWPPAPR ARACRVLPWA LVAGLLLLLL LAAACAVFLA CPWAVSGARASPGSAASPRL REGPELSPDD PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIDGPLSWY SDPGLAGVSL TGGLSYKEDTKELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQGRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE

SEQ ID NO:276 PD-L1氨基酸序列

MRIFAVFIFMTYWHLLNAFTVTVPKDLYVVEYGSNMTIECKFPVEKQLDLAALIVYWEMEDKNIIQFVHGEDLKVQHSSYRQRARLLKDQLSLGNAALQITDVKLQDAGVYRCMISYGGADYKRITVKVNAPYNKINQRILVVDPVTSEHELTCQAEGYPKAEVIWTSSDHQVLSGKTTTTNSKREEKLFNVTSTLRINTTTNEIFYCTFRRLDPEENHTAELVIPELPLAHPPNERTHLVILGAILLCLGVALTFIFRLRKGRMMDVKKCGIQDTNSKKQSDTH LEET

SEQ ID NO:277 Ki67氨基酸序列

MWPTRRLVTIKRSGVDGPHFPLSLSTCLFGRGIECDIRIQLPVVSKQHCKIEIHEQEAILHNFSSTNPTQVNGSVIEPVRLKHGDVITIIDRSFRYENESLQNGRKSTEFPRKIREQEPARRVSRSSFSSDPDEKAQDSKAYSKITEGKVSGNPQVHIKNVKEDSTADDSKDSVAQGTTNVHSSEHAGRNGRNAADPISGDFKEISSVKLVSRYGELKSVPTTQCLDNSKKNESPFWKLYESVKKELDVKSQKENVLQYCRKSGLQTDYATEKESADGLQGETQLLVSRKSRPKSGGSGHAVAEPASPEQELDQNKGKGRDVESVQTPSKAVGASFPLYEPAKMKTPVQYSQQQNSPQKHKNKDLYTTGRRESVNLGKSEGFKAGDKTLTPRKLSTRNRTPAKVEDAADSATKPENLSSKTRGSIPTDVEVLPTETEIHNEPFLTLWLTQVERKIQKDSLSKPEKLGTTAGQMCSGLPGLSSVDINNFGDSINESEGIPLKRRRVSFGGHLRPELFDENLPPNTPLKRGEAPTKRKSVMHTPPVLKKIIKEQPQPSGKQESGSEIHVEVKAQSLVISPPAPSPRKTPVASDQRRRSCKTAPASSSKSQTEVPKRGGRKSGNLPSKRVSISRSQHDILQMICSKRRSGASEANLIVAKSWADVVKLGAKQTQTKVIKHGPQRSMNKRQRRPATPKKPVGEVHSQFSTGHANSPCTIIIGKAHTEKVHVPARPYRVLNNFISNQKMDFKEDLSGIAEMFKTPVKEQPQLTSTCHIAISNSENLLGKQFQGTDSGEEPLLPTSESFGGNVFFSAQNAAKQPSDKCSASPPLRRQCIRENGNVAKTPRNTYKMTSLETKTSDTETEPSKTVSTANRSGRSTEFRNIQKLPVESKSEETNTEIVECILKRGQKATLLQQRREGEMKEIERPFETYKENIELKENDEKMKAMKRSRTWGQKCAPMSDLTDLKSLPDTELMKDTARGQNLLQTQDHAKAPKSEKGKITKMPCQSLQPEPINTPTHTKQQLKASLGKVGVKEELLAVGKFTRTSGETTHTHREPAGDGKSIRTFKESPKQILDPAARVTGMKKWPRTPKEEAQSLEDLAGFKELFQTPGPSEESMTDEKTTKIACKSPPPESVDTPTSTKQWPKRSLRKADVEEEFLALRKLTPSAGKAMLTPKPAGGDEKDIKAFMGTPVQKLDLAGTLPGSKRQLQTPKEKAQALEDLAGFKELFQTPGHTEELVAAGKTTKIPCDSPQSDPVDTPTSTKQRPKRSIRKADVEGELLACRNLMPSAGKAMHTPKPSVGEEKDIIIFVGTPVQKLDLTENLTGSKRRPQTPKEEAQALEDLTGFKELFQTPGHTEEAVAAGKTTKMPCESSPPESADTPTSTRRQPKTPLEKRDVQKELSALKKLTQTSGETTHTDKVPGGEDKSINAFRETAKQKLDPAASVTGSKRHPKTKEKAQPLEDLAGLKELFQTPVCTDKPTTHEKTTKIACRSQPDPVDTPTSSKPQSKRSLRKVDVEEEFFALRKRTPSAGKAMHTPKPAVSGEKNIYAFMGTPVQKLDLTENLTGSKRRLQTPKEKAQALEDLAGFKELFQTRGHTEESMTNDKTAKVACKSSQPDPDKNPASSKRRLKTSLGKVGVKEELLAVGKLTQTSGETTHTHTEPTGDGKSMKAFMESPKQILDSAASLTGSKRQLRTPKGKSEVPEDLAGFIELFQTPSHTKESMTNEKTTKVSYRASQPDLVDTPTSSKPQPKRSLRKADTEEEFLAFRKQTPSAGKAMHTPKPAVGEEKDINTFLGTPVQKLDQPGNLPGSNRRLQTRKEKAQALEELTGFRELFQTPCTDNPTTDEKTTKKILCKSPQSDPADTPTNTKQRPKRSLKKADVEEEFLAFRKLTPSAGKAMHTPKAAVGEEKDINTFVGTPVEKLDLLGNLPGSKRRPQTPKEKAKALEDLAGFKELFQTPGHTEESMTDDKITEVSCKSPQPDPVKTPTSSKQRLKISLGKVGVKEEVLPVGKLTQTSGKTTQTHRETAGDGKSIKAFKESAKQMLDPANYGTGMERWPRTPKEEAQSLEDLAGFKELFQTPDHTEESTTDDKTTKIACKSPPPESMDTPTSTRRRPKTPLGKRDIVEELSALKQLTQTTHTDKVPGDEDKGINVFRETAKQKLDPAASVTGSKRQPRTPKGKAQPLEDLAGLKELFQTPICTDKPTTHEKTTKIACRSPQPDPVGTPTIFKPQSKRSLRKADVEEESLALRKRTPSVGKAMDTPKPAGGDEKDMKAFMGTPVQKLDLPGNLPGSKRWPQTPKEKAQALEDLAGFKELFQTPGTDKPTTDEKTTKIACKSPQPDPVDTPASTKQRPKRNLRKADVEEEFLALRKRTPSAGKAMDTPKPAVSDEKNINTFVETPVQKLDLLGNLPGSKRQPQTPKEKAEALEDLVGFKELFQTPGHTEESMTDDKITEVSCKSPQPESFKTSRSSKQRLKIPLVKVDMKEEPLAVSKLTRTSGETTQTHTEPTGDSKSIKAFKESPKQILDPAASVTGSRRQLRTRKEKARALEDLVDFKELFSAPGHTEESMTIDKNTKIPCKSPPPELTDTATSTKRCPKTRPRKEVKEELSAVERLTQTSGQSTHTHKEPASGDEGIKVLKQRAKKKPNPVEEEPSRRRPRAPKEKAQPLEDLAGFTELSETSGHTQESLTAGKATKIPCESPPLEVVDTTASTKRHLRTRVQKVQVKEEPSAVKFTQTSGETTDADKEPAGEDKGIKALKESAKQTPAPAASVTGSRRRPRAPRESAQAIEDLAGFKDPAAGHTEESMTDDKTTKIPCKSSPELEDTATSSKRRPRTRAQKVEVKEELLAVGKLTQTSGETTHTDKEPVGEGKGTKAFKQPAKRKLDAEDVIGSRRQPRAPKEKAQPLEDLASFQELSQTPGHTEELANGAADSFTSAPKQTPDSGKPLKISRRVLRAPKVEPVGDVVSTRDPVKSQSKSNTSLPPLPFKRGGGKDGSVTGTKRLRCMPAPEEIVEELPASKKQRVAPRARGKSSEPVVIMKRSLRTSAKRIEPAEELNSNDMKTNKEEHKLQDSVPENKGISLRSRRQNKTEAEQQITEVFVLAERIEINRNEKKPMKTSPEMDIQNPDDGARKPIPRDKVTENKRCLRSARQNESSQPKVAEESGGQKSAKVLMQNQKGKGEAGNSDSMCLRSRKTKSQPAASTLESKSVQRVTRSVKRCAENPK KAEDNVCVKKIRTRSHRDSEDI

SEQ ID NO:286阿替利珠单抗(抗PD-L1)HVR-H1

GFTFSDSWIH

SEQ ID NO:287阿替利珠单抗HVR-H2

WISPYGGSTYYADSVKG

SEQ ID NO:288阿替利珠单抗HVR-H3

RHWPGGFDY

SEQ ID NO:289阿替利珠单抗HVR-L1

RASQDVSTAVA

SEQ ID NO:290阿替利珠单抗HVR-L2

SASFLYS

SEQ ID NO:291阿替利珠单抗HVR-L3

QQYLYHPAT

SEQ ID NO:292阿替利珠单抗VH

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:293阿替利珠单抗VL

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTV

SEQ ID NO:294 2E5 HVR-H1

TYYIS

SEQ ID NO:295 2E5 HVR-H2

YINMGSGGTNYNEKFK

SEQ ID NO:296 2E5 HVR-H3

IGYFDY

SEQ ID NO:297 2E5 HVR-L1

RSSQSLLDSDGGTYLY

SEQ ID NO:298 2E5 HVR-L2

LVSTLGS

SEQ ID NO:299 2E5 HVR-L3

MQLTHWPYT

SEQ ID NO:300 2E5 VH

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFTFTTYYISWVRQAPGQGLEYLGYINMGSGGTNYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAIIGYFDYWGQGTMVTVSS

SEQ ID NO:301 2E5 VL

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLLDSDGGTYLYWFQQRPGQSPRRLIYLVSTLGSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQLTHWPYTFGQGTKLEIK

SEQ ID NO:302抗CD137L第一表位

MEYASDASLDPEAPWPPAPRARACRVLP

SEQ ID NO:303抗CD137L第二表位

MEYASDASLDPEAPWPPAPRARA

SEQ ID NO:304 TY23561 HVR-H1

FSLSTSGVGVSWI

SEQ ID NO:305 TY23561 HVR-H2

LALIDWAGDKYYSPSLKSRL

SEQ ID NO:306 TY23561 HVR-H3

ARYGYSSYALDY

SEQ ID NO:307 TY23561 HVR-L1

RASQSVRGSYLA

SEQ ID NO:308 TY23561 HVR-L2

AASTLQSGV

SEQ ID NO:309 TY23561 HVR-L3

YCQQYSSLWT

SEQ ID NO:310 TY23561 VH

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSTSGVGVSWIRQAPGKGLEWLALIDWAGDKYYSPSLKSRLTISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYYCARYGYSSYALDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:311 TY23561 VL

DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVRGSYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSSLWTFGQGTKVEIKR

SEQ ID NO:312特瑞普利单抗(抗PD1)HVR-H1

DYEMH

SEQ ID NO:313特瑞普利单抗HVR-H2

VIESETGGTAYNQKFKG

SEQ ID NO:314特瑞普利单抗HVR-H3

EGITTVATTYYWYFDV

SEQ ID NO:315特瑞普利单抗HVR-L1

RSSQSIVHSNGNTYLE

SEQ ID NO:316特瑞普利单抗HVR-L2

KVSNRFS

SEQ ID NO:317特瑞普利单抗HVR-L3

FQGSHVPLT

SEQ ID NO:318特瑞普利单抗VH

QGQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYEMHWVRQAPIHGLEWIGVIESETGGTAYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREGITTVATTYYWYFDVWGQGTTVTVSS

SEQ ID NO:319特瑞普利单抗VL

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPLTFGQGTKLEIK

SEQ ID NO:320抗CTLA4 SAFEbody 2全长重链(去除C端赖氨酸)EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSISSGYHWSWIRQAPGKGLEWLARIDWDDDKYYSTSLKSRLTISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYYCARSYVYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO:321抗CTLA4 SAFEbody 2全长重链(具有C端赖氨酸)

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSISSGYHWSWIRQAPGKGLEWLARIDWDDDKYYSTSLKSRLTISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYYCARSYVYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO:322抗CTLA4 SAFEbody 2具有N端遮蔽性部分和连接子的全长轻链

EVGSYPNPSSDCVPYYYACAYSGRSAGGGGTPLGLAGSGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVRGRFLAWYQQKPGKAPKLLIYDASNRATGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSSSWPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKH KVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO:323抗CTLA4 SAFEbody 1全长重链(去除C端赖氨酸)

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSISSGYHWSWIRQAPGKGLEWLARIDWDDDKYYSTSLKSRLTISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYYCARSYVYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO:324抗CTLA4 SAFEbody 1全长重链(具有C端赖氨酸)

SEQ ID NO:325抗CTLA4 SAFEbody 1具有N端遮蔽性部分和连接子的全长轻链

EVGSYNFVADSCPDHPYPCSASGRSAGGGGSPLGLAGSGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVRGRFLAWYQQKPGKAPKLLIYDASNRATGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSSSWPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKH KVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO:326抗CTLA4 SAFEbody 3全长重链(去除C端赖氨酸)

SEQ ID NO:327抗CTLA4 SAFEbody 3全长重链(具有C端赖氨酸)

SEQ ID NO:328抗CTLA4 SAFEbody 3具有N端遮蔽性部分和连接子的全长轻链

EVGSYIVHHSDCDAFYPYCDSSGRSAGGGGSPLGLAGSGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVRGRFLAWYQQKPGKAPKLLIYDASNRATGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSSSWPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

Claims

1.一种治疗受试者癌症的方法，包含向受试者施用：(a)有效量的可活化抗体，和(b)有效量的抗PD-1抗体；其中所述可活化抗体包含：

多肽，所述多肽从N末端至C末端包含遮蔽性部分(MM)、可裂解部分(CM)和靶标结合部分(TBM)，

其中所述MM包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：

X_mCPDHPYPCXX(SEQ ID NO:181)、X_mCDAFYPYCXX(SEQ ID NO:182)、X_mCDSHYPYCXX(SEQID NO:183)和X_mCVPYYYACXX(SEQ ID NO:184)，并且其中m是2-10，及其中每个X独立地选自由A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y组成的组的氨基酸；其中当所述CM未被裂解时，所述MM抑制所述可活化抗体与人CTLA4的结合；

其中所述CM包含至少第一裂解位点；

其中：

a)所述TBM包含抗体轻链可变区(VL)，并且所述可活化抗体还包含第二多肽，所述第二多肽包含抗体重链可变区(VH)；

b)所述TBM包含抗体重链可变区(VH)，并且所述可活化抗体还包含第二多肽，所述第二多肽包含抗体轻链可变区(VL)；

c)所述TBM从N末端至C末端包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)；或

d)所述TBM从N末端至C末端包含抗体重链可变区(VH)和抗体轻链可变区(VL)；

其中当所述CM被裂解时，所述可活化抗体通过所述VH和VL结合人CTLA4。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述抗PD-1抗体为2E5或特瑞普利单抗。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述癌症为卵巢癌、胰腺癌、胆管癌、肺癌、乳腺癌、黑色素瘤、肝细胞癌、胶质母细胞瘤、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌或结肠直肠癌。

4.一种治疗受试者癌症的方法，包含向受试者施用：(a)有效量的可活化抗体，和(b)有效量的抗CD137抗体；其中所述可活化抗体包含：

其中所述MM包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：

其中所述CM包含至少第一裂解位点；

其中：

其中当所述CM被裂解时，所述可活化抗体通过所述VH和VL结合人CTLA4；及

其中所述抗CD137抗体与人CD137细胞外结构域特异性结合，其中所述抗体结合至一个或多个选自由以下氨基酸残基组成的组：SEQ ID NO:231的氨基酸残基51、53、62-73、83、89、92、95-104及112-116。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述抗CD137抗体与SEQ ID NO:231的氨基酸残基51、63-67、69-73、83、89、92、98-104及112-114结合。

6.如权利要求4或5所述的方法，其中所述抗CD137抗体包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述VH包含含有SEQ ID NO:232的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:233的氨基酸序列的HVR-H2和含有SEQ ID NO:234的氨基酸序列的HVR-H3；且其中所述VL包含含有SEQ ID NO:235的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:236的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:237的氨基酸序列的HVR-L3。

7.如权利要求6所述的方法，其中所述抗CD137抗体包含含有SEQ ID NO:238的氨基酸序列的VH，和/或含有SEQ ID NO:239的氨基酸序列的VL。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述抗CD137抗体包含重链和轻链，且其中所述重链包含SEQ ID NO:240的氨基酸序列，和/或所述轻链包含SEQ ID NO:241的氨基酸序列。

9.如权利要求4或5所述的方法，其中所述抗CD137抗体包含VH和VL，其中所述VH包含含有SEQ ID NO:242的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:243的氨基酸序列的HVR-H2和含有SEQ ID NO:244的氨基酸序列的HVR-H3；且其中所述VL包含含有SEQ ID NO:245的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:246的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:247的氨基酸序列的HVR-L3。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述抗CD137抗体包含含有SEQ ID NO:248的氨基酸序列的VH，和/或含有SEQ ID NO:249的氨基酸序列的VL。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述抗CD137抗体包含重链和轻链，其中所述重链包含SEQ ID NO:250的氨基酸序列，和/或所述轻链包含SEQ ID NO:251的氨基酸序列。

12.如权利要求4或5所述的方法，其中所述抗CD137抗体包含VH和VL，其中所述VH包含含有SEQ ID NO:252的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:253的氨基酸序列的HVR-H2和含有SEQ ID NO:254的氨基酸序列的HVR-H3；且其中所述VL包含含有SEQ ID NO:255的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:256的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:257的氨基酸序列的HVR-L3。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述抗CD137抗体包含含有SEQ ID NO:258的氨基酸序列的VH，和/或含有SEQ ID NO:259的氨基酸序列的VL。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述抗CD137抗体包含重链和轻链，其中所述重链包含SEQ ID NO:260的氨基酸序列，和/或所述轻链包含SEQ ID NO:261的氨基酸序列。

15.如权利要求4-14中任一项所述的方法，其中所述抗CD137抗体包含人IgG4 Fc区，任选地其中所述人IgG4 Fc区包含S241P突变，其中编号是根据Kabat进行的。

16.如权利要求4-15中任一项所述的方法，其中所述癌症为卵巢癌、胰腺癌、胆管癌、肺癌、乳腺癌、黑色素瘤、肝细胞癌、胶质母细胞瘤、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌或结肠直肠癌。

17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述MM在它的N末端还包含额外氨基酸序列。

18.如权利要求17所述的方法，其中所述额外氨基酸序列包含SEQ ID NO:148的氨基酸序列。

19.如权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述第一裂解位点是选自由以下组成的组的蛋白酶的蛋白酶裂解位点：尿激酶型纤维蛋白溶酶原活化因子(uPA)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-14、烟草蚀刻病毒(TEV)蛋白酶、纤维蛋白溶酶、凝血酶、因子X、PSA、PSMA、组织蛋白酶D、组织蛋白酶K、组织蛋白酶S、ADAM10、ADAM12、ADAMTS、卡斯帕酶-1、卡斯帕酶-2、卡斯帕酶-3、卡斯帕酶-4、卡斯帕酶-5、卡斯帕酶-6、卡斯帕酶-7、卡斯帕酶-8、卡斯帕酶-9、卡斯帕酶-10、卡斯帕酶-11、卡斯帕酶-12、卡斯帕酶-13、卡斯帕酶-14和TACE。

20.如权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述CM还在第一裂解位点的C末端包含第一接头(L₁)。

21.如权利要求20所述的方法，其中所述L₁包含选自由SEQ ID NOS:156-163组成的组的氨基酸序列。

22.如权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述CM还包含第二裂解位点。

23.如权利要求22所述的方法，其中所述第二裂解位点在L₁的C末端。

24.如权利要求22或23所述的方法，其中所述第二裂解位点是选自由以下组成的组的蛋白酶的蛋白酶裂解位点：尿激酶型纤维蛋白溶酶原活化因子(uPA)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-14、烟草蚀刻病毒(TEV)蛋白酶、纤维蛋白溶酶、凝血酶、因子X、PSA、PSMA、组织蛋白酶D、组织蛋白酶K、组织蛋白酶S、ADAM10、ADAM12、ADAMTS、卡斯帕酶-1、卡斯帕酶-2、卡斯帕酶-3、卡斯帕酶-4、卡斯帕酶-5、卡斯帕酶-6、卡斯帕酶-7、卡斯帕酶-8、卡斯帕酶-9、卡斯帕酶-10、卡斯帕酶-11、卡斯帕酶-12、卡斯帕酶-13、卡斯帕酶-14和TACE。

25.如权利要求22-24中任一项所述的方法，其中所述第一和第二裂解位点是不同的。

26.如权利要求22-25中任一项所述的方法，其中所述CM还在第二裂解位点的C末端包含第二接头(L₂)。

27.如权利要求26所述的方法，其中所述L₂包含选自由SEQ ID NOS:156-163组成的组的氨基酸序列。

28.如权利要求1-28中任一项所述的方法，其中所述CM还在第一裂解位点的N末端包含第三接头(L₃)。

29.如权利要求1-28中任一项所述的方法，其中所述CM包含至少第一蛋白酶裂解位点，并且以一种或多种选自由以下组成的组的蛋白酶加以裂解：尿激酶型纤维蛋白溶酶原活化因子(uPA)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-14、烟草蚀刻病毒(TEV)蛋白酶、纤维蛋白溶酶、凝血酶、因子X、PSA、PSMA、组织蛋白酶D、组织蛋白酶K、组织蛋白酶S、ADAM10、ADAM12、ADAMTS、卡斯帕酶-1、卡斯帕酶-2、卡斯帕酶-3、卡斯帕酶-4、卡斯帕酶-5、卡斯帕酶-6、卡斯帕酶-7、卡斯帕酶-8、卡斯帕酶-9、卡斯帕酶-10、卡斯帕酶-11、卡斯帕酶-12、卡斯帕酶-13、卡斯帕酶-14和TACE。

30.如权利要求1-29中任一项所述的方法，其中所述可活化抗体包含选自由SEQ IDNOS:165-179组成的组的氨基酸序列。

31.如权利要求1-30中任一项所述的方法，其中MM裂解后，所述可活化抗体特异性结合包含人CTLA4的氨基酸残基Y105和L106但不包含残基I108的表位，其中氨基酸残基的编号根据SEQ ID NO:207。

32.一种治疗受试者癌症的方法，包含向受试者施用：(a)有效量的抗CTLA4抗体，其中所述抗体特异性结合包含人CTLA4的氨基酸残基Y105和L106但不包含残基I108的表位，其中氨基酸残基的编号根据SEQ ID NO:207，和(b)有效量的VEGF抑制剂。

33.如权利要求32所述的方法，其中所述VEGF抑制剂为呋喹替尼。

34.如权利要求33所述的方法，其中所述癌症为结肠癌。

35.如权利要求32所述的方法，其中所述VEGF抑制剂为安罗替尼。

36.如权利要求35所述的方法，其中所述癌症为肾癌，任选地为肾腺癌。

37.如权利要求1-36中任一项所述的方法，其中所述可活化抗体以约0.1mg/kg和约20mg/kg之间的剂量向受试者施用。

38.如权利要求37所述的方法，其中所述可活化抗体以约0.1mg/kg、约0.3mg/kg、约1mg/kg、约3mg/kg、约6mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg或约20mg/kg的剂量向受试者施用。

39.一种治疗受试者癌症的方法，包含向受试者施用：(a)有效量的抗CTLA4抗体，其中所述抗体特异性结合包含人CTLA4的氨基酸残基Y105和L106，但不包含残基I108的表位，其中氨基酸残基的编号根据SEQ ID NO:207，和(b)有效量的化学治疗剂。

40.如权利要求39所述的方法，其中所述化学治疗剂为多西他赛。

41.如权利要求40所述的方法，其中所述癌症为乳腺癌。

42.如权利要求39所述的方法，其中所述化学治疗剂为阿可拉定。

43.如权利要求42所述的方法，其中所述癌症为黑色素瘤。

44.一种治疗受试者癌症的方法，包含向受试者施用：(a)有效量的抗CTLA4抗体，其中所述抗体特异性结合包含人CTLA4的氨基酸残基Y105和L106但不包含残基I108的表位，其中氨基酸残基的编号根据SEQ ID NO:207，和(b)有效量的PARP抑制剂。

45.如权利要求44所述的方法，其中所述PARP抑制剂为奥拉帕尼。

46.如权利要求45所述的方法，其中所述癌症为乳腺癌。

47.如权利要求32-46中任一项所述的方法，其中：

a)所述抗体以约350nM或更小的解离常数(K_D)结合人CTLA4、食蟹猴CTLA4、小鼠CTLA4、大鼠CTLA4和狗CTLA4；

b)所述抗CTLA4抗体的结合诱导针对表达CTLA4的人细胞或人Treg细胞的抗体依赖性细胞细胞毒性(ADCC)，其中所述抗CTLA4抗体的ADCC活性比伊匹木单抗的ADCC活性更高；和/或

c)在其中当CD80和/或CD86包被在板上时或当人CTLA4存在于细胞表面上时的测定中，对于阻断CD80和/或CD86与人CTLA4的结合，所述抗CTLA4抗体具有的IC50比伊匹木单抗的IC50更高。

48.如权利要求32-47中任一项所述的方法，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，

a)其中所述重链可变区包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3，

其中所述HVR-H1包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：

式(III)：FSLSTGGVAVX1WI(SEQ ID NO:3)，其中X1是G或S；

式(IV)：IGX1IX2HSGSTYYSX3SLKSRV(SEQ ID NO:4)，

其中X1是D或E，X2是S或Y，并且X3是P或Q；

b)其中所述轻链可变区包含HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3，

49.如权利要求48所述的方法，其中所述抗体包含：

a)含有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-L3；

b)含有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-L3；

c)含有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:55的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-L3；

d)含有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:43的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:56的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的HVR-L3；

e)含有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:44的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:57的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的HVR-L3；

f)含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的HVR-L3；

g)含有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:46的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的HVR-L3；

h)含有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:36的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的HVR-L3；

i)含有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的HVR-L3；

j)含有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的HVR-L3；

k)含有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的HVR-L3；

l)含有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的HVR-L3；或

m)含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的HVR-L3。

50.如权利要求48或49所述的方法，其中所述抗体包含：

a)含有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的轻链可变区；

b)含有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的轻链可变区；

c)含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的轻链可变区；

d)含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的轻链可变区；

e)含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的轻链可变区；

f)含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的轻链可变区；

g)含有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的轻链可变区；

h)含有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的轻链可变区；

i)含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的轻链可变区；

j)含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区；

k)含有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:105的氨基酸序列的轻链可变区；

l)含有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:106的氨基酸序列的轻链可变区；或

m)含有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:107的氨基酸序列的轻链可变区。

51.如权利要求1-50中任一项所述的方法，其中所述抗体包含：a)重链可变区，所述重链可变区包含含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H2，和含有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的HVR-H3，和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L2，和含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的HVR-L3；或b)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列或与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少90％序列一致性的氨基酸序列，和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列或与SEQID NO:100的氨基酸序列具有至少90％序列一致性的氨基酸序列。

52.如权利要求1-50中任一项所述的方法，其中所述可活化抗体包含含有SEQ ID NO:320或321的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:322的氨基酸序列的轻链。

53.如权利要求1-50中任一项所述的方法，其中所述可活化抗体包含含有SEQ ID NO:323或324的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:325的氨基酸序列的轻链。

54.如权利要求1-50中任一项所述的方法，其中所述可活化抗体包含含有SEQ ID NO:326或327的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:328的氨基酸序列的轻链。

55.一种治疗受试者黑色素瘤的方法，包含向受试者施用有效量的可活化抗体，其中所述可活化抗体包含：

其中所述MM包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：

其中所述CM包含至少第一裂解位点；

其中：

56.如权利要求55所述的方法，其中所述可活化抗体包含含有SEQ ID NO:320或321的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:322的氨基酸序列的轻链。

57.如权利要求55所述的方法，其中所述可活化抗体包含含有SEQ ID NO:323或324的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:325的氨基酸序列的轻链。

58.如权利要求55所述的方法，其中所述可活化抗体包含含有SEQ ID NO:326或327的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:328的氨基酸序列的轻链。

59.如权利要求1-58中任一项所述的方法，其中所述受试者为人。

60.如权利要求1-59中任一项所述的方法，还包含向受试者施用治疗有效量的至少一种额外治疗剂。

61.如权利要求39-60中任一项所述的方法，其中所述可活化抗体以约0.1mg/kg至约20mg/kg之间的剂量向受试者施用。

62.如权利要求61所述的方法，其中所述可活化抗体以约0.1mg/kg、约0.3mg/kg、约1mg/kg、约3mg/kg、约6mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg或约20mg/kg的剂量向受试者施用。