CN117899084A - 药物组合物、制剂、美托拉宗冻干粉制剂及其制备方法与用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种药物组合物、制剂、美托拉宗冻干粉制剂及其制备方法与用途，所述药物组合物为美托拉宗包合物，含有美托拉宗或其盐和β环糊精衍生物，所述美托拉宗或其盐和所述β环糊精衍生物的分子摩尔比为1：2～1：8。本发明通过试验意外发现美托拉宗可以与β‑环糊精衍生物发生包合作用，从而极大地提高了美托拉宗的水溶性；用美托拉宗包合物制备的美托拉宗冻干注射剂，相比相同剂量原研片剂利尿速度更快，利尿作用更强，且药效持久，可在给药后迅速发挥强大利尿效果，尤其适用于急性心衰伴随袢利尿剂抵抗患者的急救治疗，具有显著的临床应用价值。

Description

药物组合物、制剂、美托拉宗冻干粉制剂及其制备方法与用途

技术领域

本发明涉及药物组合物、制剂、美托拉宗冻干粉制剂及其制备方法与用途。

背景技术

美托拉宗(CAS：17560-51-9)是一种喹唑啉类利尿剂，用于治疗充血性心力衰竭引起的水肿，也用于治疗高血压。美托拉宗利尿作用强、效果稳定持久。

美托拉宗主要作用于远曲小管抑制钠离子的再吸收而增加尿液量，与袢利尿剂作用于髓袢升支粗段不同，因此二者利尿作用可互补叠加；且袢利尿剂治疗会导致远曲小管钠离子再摄取增强，提高美托拉宗的药物作用敏感性，因此美托拉宗与袢利尿剂(如，呋塞米)在药效机制上具有协同作用。临床应用表现为，美托拉宗与呋塞米联合应用利尿效果优于单独使用两种药物，并可明显改善呋塞米利尿抵抗患者的利尿效果。例如美国心衰指南《2022AHA/ACC/HFSA Guideline for the Management of Heart Failure》中，推荐发生袢利尿剂抵抗后，首选美托拉宗进行添加治疗。

美托拉宗是急性失代偿性心力衰竭(ADHF)使用袢利尿剂抵抗后的重要治疗用药。美托拉宗利尿作用强、持续时间长，且与袢利尿剂机制互补，能够很好地解决呋塞米等利尿剂抵抗的问题，并且美托拉宗不同于同类机制药物氢氯噻嗪，不会使肾血流量和肾小球滤过率降低，肾功能严重损害者尚可应用；但美托拉宗现有制剂形式限制了其临床应用，作为口服制剂给药后1小时左右才能达到满意的利尿效果，对于情况危急的心衰患者治疗时效性不足；对于部分心衰伴随水肿严重的患者，由于水肿累及肠道导致口服药物吸收障碍，会进一步影响药物发挥利尿去水肿的作用。

可供静脉注射的美托拉宗制剂可以解决临床应用中存在的上述问题，但美托拉宗在水中溶解度极低(0.02mg/ml)限制了其静脉注射制剂的开发。

为了解决该问题，美国专利US 5124152A在制剂处方中添加了大量的有机溶剂如乙醇、丙二醇、聚乙二醇等，大量有机溶剂不仅导致给药部位的刺激，还带来了溶血和过敏等临床用药风险；美国专利US 9427398 B2公开了一种含有N，N-二甲基乙酰胺(DMAC)助溶剂的溶液体系，制备获得美托拉宗注射剂，然而该专利使用的DMAC并未通过药监局药用辅料审批，临床使用存在未知安全风险；美国专利US2020/0179386 A1采用均质分散技术将美托拉宗同植物油、磷脂类乳化剂、吐温-80和泊洛沙姆等助乳化剂等制备成脂肪乳制剂，可用于静脉注射给药，但该专利组方中添加了较高含量的吐温-80及泊洛沙姆，静脉给药具有较高的溶血和致过敏风险。

综上，美托拉宗作为水难溶性药物，仅有部分对比文件记载其可制备成注射剂的组合物和方法，但仍存在用药安全的风险，且这些现有技术没有解决美托拉宗的静脉注射制剂存在稳定性差的问题，因此，一直没有符合药品质量要求的美托拉宗静脉注射制剂上市。

发明内容

为了解决上述克服现有技术的美托拉宗注射剂中的助溶剂或助乳化剂存在用药安全问题、且稳定性不佳的问题，提供一种药物组合物、制剂、美托拉宗冻干粉制剂及其制备方法与用途；本发明通过制备得到美托拉宗包合物水溶性好，成分安全，进一步制备得到的冻干粉针剂，在作为注射剂剂型时有较好的稳定性，直接为将美托拉宗制备成注入体内的针剂等剂型提供了可能性，对于临床治疗而言，价值巨大。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的。

第一方面，本发明提供了一种药物组合物，其为美托拉宗包合物，含有美托拉宗或其盐和β环糊精衍生物，所述美托拉宗或其盐和所述β环糊精衍生物的分子摩尔比为1：2～1：8。

本发明中，所述美托拉宗包合物中的美托拉宗或其盐被包裹于所述β环糊精衍生物的腔体内。

本发明中，所述美托拉宗的盐可为其药物上可接受的盐。

本发明中，所述美托拉宗盐一般为美托拉宗与无机碱或有机碱生成的盐。

其中，所述无机碱可选自含钠、钾、镁、钙和铝的无机碱中的一种或几种。

其中，所述有机碱可选自甲基胺、乙基胺、乙醇胺、赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸中的一种或几种。

本发明中，所述β环糊精衍生物为本领域常规选择，优选地为，磺丁基醚β-环糊精钠、羟丙基β-环糊精和甲基β-环糊精中的一种或几种。

本发明中，所述美托拉宗或其盐和所述β环糊精衍生物的分子摩尔比为较佳地为1：3～1：6，更佳地为1：4。

本发明中，所述美托拉宗包合物中β糊精衍生物是一类毒性较小的药用辅料，在国内外均被批准用于口服或注射给药，尤其是磺丁基醚β-环糊精钠相比其他β环糊精衍生物的毒性更小，临床使用更加安全。

本发明中，β环糊精衍生物的用量过低或过高都不利于形成包合物，尤其是，当β环糊精衍生物的量过低时，导致无法完成包合药物，复溶会出现沉淀；而当β环糊精衍生物的量过高时，超出必要用量，制造成本大大提高，此时效果也已达到饱和。

在本发明一些实施方案中，所述美托拉宗包合物，还可包含至少一种药学上可接受的载体，辅料或稀释剂，并且如果需要，还可联合其他活性成分。

第二方面，本发明提供了一种药物组合物的制备方法，所述药物组合物为如前所述，包括如下任一方式：

方式一：将所述美托拉宗或其盐和所述β环糊精衍生物溶于第一溶媒中，搅拌至澄清透明。

方式二：将所述美托拉宗或其盐溶于第二溶媒中得美托拉宗溶液，将所述β环糊精衍生物溶于第三溶媒中得β环糊精衍生物溶液，再将两者混合，搅拌至澄清透明。

方式三：将所述β环糊精衍生物与水混合，再与所述美托拉宗或其盐混合，同时加入碱性pH调节剂，搅拌至澄清透明，再加入酸性pH调节剂中和。

其中，所述第一溶媒可选自水、乙醇、甲醇、丙醇、异丙醇、丙酮、乙二醇、丙二醇、丙三醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃和叔丁醇中的一种或几种，其中，所述第一溶媒为水时，所述第一溶媒还含有碱性pH调节剂，并且在所述“搅拌至澄清透明”步骤之后，还加入酸性pH调节剂中和；较佳地，所述第一溶媒选自：乙醇，乙醇和水的混合溶媒，叔丁醇，以及，叔丁醇和水的混合溶媒；更佳地，所述乙醇和水的混合溶媒中乙醇和水的体积比例为1：3～3：1，所述叔丁醇和水的混合溶媒中叔丁醇和水的体积比为例1：3～2：1。

其中，所述第二溶媒可选自水、乙醇、无水乙醇、甲醇、丙醇、异丙醇、丙酮、乙二醇、丙二醇、丙三醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃和叔丁醇中的一种或几种，较佳地，所述第二溶媒选自：无水乙醇和/或叔丁醇；其中，所述第二溶媒与所述第三溶媒同时为水时，所述第二溶媒还含有pH碱性调节剂，并且在所述“搅拌至澄清透明”步骤之后，还加入pH酸性调节剂中和。

其中，所述第三溶媒可选自水、乙醇、甲醇、丙醇、异丙醇、丙酮、乙二醇、丙二醇、丙三醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃和叔丁醇中的一种或几种；较佳地，所述第三溶媒选自：水，乙醇，乙醇和水的混合溶媒，叔丁醇，以及，叔丁醇和水的混合溶媒；更佳地，所述乙醇和水的混合溶媒中乙醇和水的体积比例为1：3～3：1，所述叔丁醇和水的混合溶媒中叔丁醇和水的体积比为例1：3～2：1。

其中，所述搅拌的温度可为4℃～60℃，例如4℃、10℃、25℃、40℃或60℃。

其中，所述搅拌的时间可为30-120min，例如30min、60min或120min。

其中，所述美托拉宗的用量可控制为溶液中的美托拉宗质量体积百分比为0.05～0.3％；所述质量体积百分比，指美托拉宗在溶液中的质量(g)与溶液总体积(ml)之比。

本发明中，本领域技术人员知晓，在所述“搅拌至澄清透明”之后得到的是美托拉宗包合物溶液，一般来讲，后续还可包括干燥步骤，经过干燥之后得到的是美托拉宗包合物粉末。

其中，所述干燥的方式可为减压旋蒸、喷雾干燥或冷冻干燥。

本发明中，所述碱性pH调节剂可为本领域常规药用碱性pH调节剂，可选自氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、三乙醇胺、氨水、氢氧化钾、然酸钾、氨丁三醇、葡甲胺和碱性氨基酸中的一种或几种，优选地为氢氧化钠。

本发明中，所述碱性pH调节剂的用量可为实现搅拌至澄清透明的量，一般可为调节至溶液pH为11～12。

本发明中，所述酸性pH调节剂可为本领域常规药用酸性pH调节剂，可选自枸橼酸、盐酸、硫酸、醋酸、酒石酸、乳酸、苹果酸、磷酸、富马酸、马来酸、琥珀酸和酸性氨基酸中的一种或几种，优选地为枸橼酸。

本发明中，所述酸性pH调节剂的用量可为实现溶液中和的量，一般可为调节至溶液pH为6～8。

第三方面，本发明提供了一种药物制剂，包括前述美托拉宗包合物或前述制备方法制得的药物组合物，和至少一种药学上可接受的载体、辅料或稀释剂，或其他活性成分。

较佳地，所述药物组合物的药剂形式为输液、水针、粉针、片剂、胶囊、颗粒剂、分散片、口服液或糖浆剂。

本发明的美托拉宗包合物可以以无菌可注射水性溶液的形式进行肠胃外给药。所述肠胃外给药包括皮下给药，皮内给药，静脉内给药，肌内给药，或本领域已知的其他施用方法。所述的用于肠胃外给药的美托拉宗包合物，还可以包含药学可接受的载体和溶剂，包括水、林格氏液、等渗氯化钠溶液或葡萄糖溶液。肠胃外给药形式的制剂可包括：输液、水针、粉针等。

本发明的美托拉宗包合物可以以口服制剂形式进行给药，可以包含药学上可接受的固体载体或液体载体。所述固体载体一般包括药学上常用的稀释剂、调味剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等，所述液体载体为水、乙醇、丙二醇、甘油、玉米糖浆等，所述液体制剂还可以包含药学上可接受的甜味剂、矫味剂、防腐剂等。固体形式的制剂可包括：片剂、胶囊、颗粒剂、分散片等；液体形式的制剂可包括：口服液、糖浆剂等。

第四方面，本发明还提供了一种美托拉宗冻干粉制剂，包括前述美托拉宗包合物或前述制备方法制得的药物组合物。

本发明中，所述冻干粉制剂还可包括冻干保护剂，例如甘露醇、肌醇、山梨醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖、右旋糖苷、甘氨酸、PVP和聚乙二醇中的一种或几种。

本发明中，所述冻干粉制剂还可包括pH调节剂，例如氢氧化钠、盐酸、枸橼酸、酒石酸、磷酸、碳酸氢钠和氨基酸中的一种或几种。

第五方面，本发明提供一种美托拉宗冻干粉制剂的制备方法，所述美托拉宗冻干粉制剂采用前述的美托拉宗冻干粉制剂，包括如下步骤：所述药物组合物为粉末状时，复溶后过滤，或者将所述“搅拌至澄清透明”得到的所述美托拉宗包合物溶液过滤；之后干燥，即可。

其中，所述复溶的溶剂可为水，优选地为注射用水，优选地所述水的用量为所述美托拉宗包合溶液体积的0.4-2倍，所述美托拉宗包合物溶液体积为如前述第一溶媒的体积或所述第二溶媒和第三溶媒的总体积。

其中，所述过滤的方式为本领域常规，优选为滤膜过滤。

其中，所述干燥的方式可为冷冻干燥、喷雾干燥或减压干燥，优选为冷冻干燥。

本发明中，优选地，在所述过滤前，还可加入冻干保护剂溶解。

使用包含本发明所述美托拉宗包合物制备的注射用冻干粉针剂，可明显提高美托拉宗制剂的稳定性。

第六方面，本发明提供一种美托拉宗包合物或美托拉宗冻干粉制剂在制备利尿药物中的用途，所述利尿药物可用于治疗水肿和高血压。

其中，所述美托拉宗包合物为如前述美托拉宗包合物，或前述制备方法制得的美托拉宗包合物，

其中，所述美托拉宗冻干粉制剂为采用前述美托拉宗冻干粉制剂，或前述制备方法得到的美托拉宗冻干粉制剂。

在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

本发明的积极进步效果在于：

(1)通过试验意外发现美托拉宗或其盐可以与β-环糊精衍生物发生包合作用，从而极大地提高了美托拉宗的水溶性，克服了美托拉宗难以制备成水溶性制剂的缺点，尤其是制备成可供静脉注射的液体制剂；该包合物使美托拉宗的水溶性提高了100倍以上，用其制备的口服制剂也具有溶出好，生物利用度高的特点，更有利于临床应用。

(2)用本发明的美托拉宗包合物制备的美托拉宗冻干注射剂，相比相同剂量原研片剂利尿速度更快，利尿作用更强，且药效持久，可在给药后迅速发挥强大利尿效果，尤其适用于急性心衰伴随袢利尿剂抵抗患者的急救治疗，具有显著的临床应用价值。

附图说明

图1为X射线衍射图谱，其中，图1的a部分为实施例4所用原料美托拉宗粉末的X射线衍射图谱；图1的b部分为实施例4所用原料磺丁基醚β环糊精粉末的X射线衍射图谱；图1的c部分为美托拉宗粉末与磺丁基醚β环糊精物理混合物的X射线衍射图谱；图1的d部分为实施例4制得的美托拉宗磺丁基醚β-环糊精钠包合物的X射线衍射图谱。

图2为试验例3的尿生成实时速率(mean±SD,μL/min)。

图3a为试验例3的利尿作用起效时间(mean±SD,min)。

图3b为试验例3的利尿作用达峰时间(mean±SD,min)。

图3c为试验例3的尿生成速率峰值增量(mean±SD,min)。

图4为试验例3的给药后累积尿量(mean±SD,mL)。

图5为试验例3的累积尿量较阴性对照组增幅(mean±SD,％)。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

实施例1

分别称取2.53g羟丙基β-环糊精和100mg美托拉宗(美托拉宗与羟丙基β-环糊精分子摩尔比1：6)，加入50ml乙醇中，25℃搅拌30分钟至澄清透明，经减压旋蒸得干燥固体，即得美托拉宗羟丙基β-环糊精包合物。

实施例2

称取1.78g磺丁基醚β-环糊精钠溶于40ml水中得溶液A，另称取100mg美托拉宗溶于60ml无水乙醇中得溶液B(美托拉宗与磺丁基醚β-环糊精钠分子摩尔比1：3)，再将溶液B缓慢加入溶液A混匀，40℃搅拌60分钟至澄清透明，减压旋蒸得干燥固体，即得美托拉宗磺丁基醚β-环糊精钠包合物。

实施例3

分别称取1.69g羟丙基β-环糊精和100mg美托拉宗(美托拉宗与羟丙基β-环糊精分子摩尔比1：4)，加入100ml叔丁醇中，10℃下搅拌120分钟至澄清透明，减压旋蒸为干燥固体，即得美托拉宗羟丙基β-环糊精包合物。

实施例4

称取5.92g磺丁基醚β-环糊精钠溶于40ml水中得溶液A，另称取250mg美托拉宗溶于60ml无水乙醇中得溶液B(美托拉宗与磺丁基醚β-环糊精钠分子摩尔比1：4)，再将溶液B缓慢加入溶液A混匀，25℃搅拌60分钟至澄清透明，减压旋蒸为干燥固体，即得美托拉宗磺丁基醚β-环糊精钠包合物。

实施例5

称取0.59g磺丁基醚β-环糊精钠溶于25ml水中得溶液A，另称取50mg美托拉宗溶于75ml无水乙醇中得溶液B(美托拉宗与磺丁基醚β-环糊精钠分子摩尔比1：2)，再将溶液B缓慢加入溶液A混匀，4℃搅拌60分钟至澄清透明，减压旋蒸为干燥固体，即得美托拉宗磺丁基醚β-环糊精钠包合物。

实施例6

称取4.74g磺丁基醚β-环糊精钠溶于75ml水中得溶液A，另称取100mg美托拉宗溶于25ml无水乙醇中得溶液B(美托拉宗与磺丁基醚β-环糊精钠分子摩尔比1：8)，再将溶液B缓慢加入溶液A混匀，60℃搅拌60分钟至澄清透明，减压旋蒸为干燥固体，即得美托拉宗磺丁基醚β-环糊精钠包合物。

实施例7

称取8.88g磺丁基醚β-环糊精钠溶于50ml水中得溶液A，另称取300mg美托拉宗溶于50ml无水乙醇中得溶液B(美托拉宗与磺丁基醚β-环糊精钠分子摩尔比1：5)，再将溶液B缓慢加入溶液A混匀，25℃搅拌60分钟至澄清透明，减压旋蒸为干燥固体，即得美托拉宗磺丁基醚β-环糊精钠包合物。

实施例8

称取2.37g磺丁基醚β-环糊精钠，加入98ml注射用水中搅拌溶解，再加入100mg美托拉宗充分搅拌分散(美托拉宗与磺丁基醚β-环糊精钠分子摩尔比1：4)，同时加入0.7ml4M氢氧化钠溶液将溶液pH调至为11，继续搅拌至获得澄清透明的美托拉宗水溶液，然后加入0.9ml 1M枸橼酸溶液将溶液pH调至为7，获得澄清透明且稳定不析出的pH中性美托拉宗磺丁基醚β-环糊精钠包合物溶液。

实施例9

称取3.56g磺丁基醚β-环糊精钠溶于33.3ml水中得溶液A，另称取200mg美托拉宗溶于66.7ml叔丁醇中得溶液B(美托拉宗与磺丁基醚β-环糊精钠分子摩尔比1：3)，再将溶液B缓慢加入溶液A混匀，25℃搅拌60分钟至澄清透明，减压旋蒸为干燥固体，即得美托拉宗磺丁基醚β-环糊精钠包合物。

实施例10

称取4.44g磺丁基醚β-环糊精钠溶于40ml水中得溶液A，另称取250mg美托拉宗溶于60ml无水乙醇中得溶液B(美托拉宗与磺丁基醚β-环糊精钠分子摩尔比1：3)，再将溶液B缓慢加入溶液A混匀，25℃搅拌60分钟至澄清透明，减压旋蒸为干燥固体，即得美托拉宗磺丁基醚β-环糊精钠包合物。

实施例11

称取1.43g甲基β-环糊精溶于40ml水中得溶液A，另称取100mg美托拉宗溶于60ml无水乙醇中得溶液B(美托拉宗与甲基β-环糊精分子摩尔比1：4)，再将溶液B缓慢加入溶液A混匀，25℃搅拌60分钟至澄清透明，减压旋蒸为干燥固体，即得美托拉宗甲基β-环糊精钠包合物。

实施例12

美托拉宗注射用冻干粉剂

将实施例1制备的美托拉宗羟丙基β-环糊精包合物加入100ml注射用水复溶至澄清透明，滤膜过滤，分装于西林瓶中，置于冻干机中冷冻干燥压盖即得。

实施例13

美托拉宗注射用冻干粉剂

将实施例2制备的美托拉宗磺丁基醚β-环糊精钠包合物加入100ml注射用水复溶至澄清透明，滤膜过滤，分装于西林瓶中，置于冻干机中冷冻干燥压盖即得。

实施例14

美托拉宗注射用冻干粉剂

将实施例3制备的美托拉宗羟丙基β-环糊精包合物加入100ml注射用水复溶至澄清透明，滤膜过滤，分装于西林瓶中，置于冻干机中冷冻干燥压盖即得。

实施例15

美托拉宗注射用冻干粉剂

将实施例4制备的美托拉宗磺丁基醚β-环糊精钠包合物加入100ml注射用水复溶至澄清透明，滤膜过滤，分装于西林瓶中，置于冻干机中冷冻干燥压盖即得。

实施例16

美托拉宗注射用冻干粉剂

将实施例5制备的美托拉宗磺丁基醚β-环糊精钠包合物溶液滤膜过滤，分装于西林瓶中，置于冻干机中冷冻干燥压盖即得。

实施例17

美托拉宗注射用冻干粉剂

将实施例6制备的美托拉宗磺丁基醚β-环糊精钠包合物溶液滤膜过滤，分装于西林瓶中，置于冻干机中冷冻干燥压盖即得。

实施例18

美托拉宗注射用冻干粉剂

将实施例7制备的美托拉宗磺丁基醚β-环糊精钠包合物加入100ml注射用水复溶至澄清透明，滤膜过滤，分装于西林瓶中，置于冻干机中冷冻干燥压盖即得。

实施例19

美托拉宗注射用冻干粉剂

将实施例8制备的美托拉宗磺丁基醚β-环糊精钠包合物溶液滤膜过滤，分装于西林瓶中，置于冻干机中冷冻干燥压盖即得。

实施例20

美托拉宗注射用冻干粉剂

将实施例9制备的美托拉宗磺丁基醚β-环糊精钠包合物加入100ml注射用水复溶至澄清透明，滤膜过滤，分装于西林瓶中，置于冻干机中冷冻干燥压盖即得。

实施例21

美托拉宗注射用冻干粉剂

将实施例10制备的美托拉宗磺丁基醚β-环糊精钠包合物加入100ml注射用水复溶至澄清透明，滤膜过滤，分装于西林瓶中，置于冻干机中冷冻干燥压盖即得。

实施例22

美托拉宗注射用冻干粉剂

将实施例11制备的美托拉宗甲基β-环糊精包合物加入100ml注射用水复溶至澄清透明，滤膜过滤，分装于西林瓶中，置于冻干机中冷冻干燥压盖即得。

对比例1

根据美国专利US 5124152A文件中的实施例2制备得美托拉宗注射液，含美托拉宗1.17mg/ml，10％体积比的乙醇溶液(95％)，40％体积比的丙二醇。

对比例2

根据美国专利US 9427398 B2文件中的实施例3制备得美托拉宗注射液，含美托拉宗150mg，0.1mL的二甲基乙酰胺(DMAC)，以及9.9mL的聚乙二醇400。

对比例3

美国专利US2020/0179386 A1文件中的实施例26制备得美托拉宗脂肪乳注射液，含1mg/ml美托拉宗，20％大豆油，12mg/ml大豆磷脂，2.25％甘油，3％泊洛沙姆。

对比例4

称取0.6g磺丁基醚β-环糊精钠溶于40ml水中得溶液A，另称取100mg美托拉宗溶于60ml无水乙醇中得溶液B(美托拉宗与磺丁基醚β-环糊精钠分子摩尔比1：1)，再将溶液B缓慢加入溶液A混匀，在40℃下搅拌60分钟至澄清透明，减压旋蒸得干燥固体。

对比例5

称取1.29g 2-羟丙基α-环糊精溶于40ml水中得溶液A，另称取100mg美托拉宗溶于60ml无水乙醇中得溶液B(美托拉宗与2-羟丙基α-环糊精分子摩尔比1：4)，再将溶液B缓慢加入溶液A混匀，在40℃下搅拌60分钟至澄清透明，减压旋蒸得干燥固体。

对比例6

称取1.89g羟丙基γ-环糊精溶于40ml水中得溶液A，另称取100mg美托拉宗溶于60ml无水乙醇中得溶液B(美托拉宗与羟丙基γ-环糊精分子摩尔比1：4)，再将溶液B缓慢加入溶液A混匀，在40℃下搅拌60分钟至澄清透明，减压旋蒸得干燥固体。

效果实施例

实施例4制得的包合物的X射线衍射图谱，显示样品中美托拉宗的晶体特征峰消失，表明其已与β-环糊精衍生物成功包合(图1)。具体地，图1的a部分为实施例4所用原料美托拉宗粉末的X射线衍射图谱；图1的b部分为实施例4所用原料磺丁基醚β环糊精粉末的X射线衍射图谱；图1的c部分为美托拉宗粉末与磺丁基醚β环糊精物理混合物的X射线衍射图谱；图1的d部分为实施例4制得的美托拉宗磺丁基醚β-环糊精钠包合物的X射线衍射图谱。

其中，图1的a部分美托拉宗粉末X射线衍射图谱在7.36，19.6和25.89有特征峰；

图1的b部分磺丁基醚β环糊精粉末X射线衍射图谱在20左右也有峰；

图1的c部分美托拉宗粉末与磺丁基醚β环糊精物理混合物可以看出是美托拉宗与磺丁基醚β环糊精的简单叠加；

而图1的d部分实施例4制得的包合物显示美托拉宗的晶体特征峰消失，说明了包合结果，美托拉宗被包裹于所述β环糊精衍生物的腔体内。

试验例1

包合物溶解性实验

实施例1-11制备所得包合物分别加入100ml生理盐水搅拌，均可快速溶解至澄清透明，且经室温放置可稳定不析出，详见下表1。表明包合物制备成功。

对比例4-6制备所得固体加入100ml生理盐水搅拌，无法得到澄清透明溶液，室温放置后出现颗粒物沉淀，表明未形成稳定包合物。

表1

试验例2制剂稳定性试验

取实施例12 -22制得的美托拉宗注射用冻干粉剂，与对比例1、对比例2和对比例3制得的美托拉宗注射液(分装于西林瓶中压盖封装)，分别按照中国药典中药物制剂稳定性试验指导原则进行高温试验和强光照射试验。

高温试验条件：将供试品置于60℃温度下放置10天，于第5天和第10天取样，检测制剂性状、主药含量和有关物质的变化。

其中有关物质是药品中与主成分通过同一来源和过程产生的结构与性质相近或相关的一些杂质。可来自于药品生产过程中的副产物，或贮存过程中的降解产物，区别于普通杂质。

强光照射试验条件：将供试品置于光照装置内，于4500lx±500x的条件下放置10天，于第5天和第10天取样，检测制剂性状、主药含量和有关物质的变化。

将经过稳定性试验的实施例制备所得的供试品分别用注射用生理盐水按照制剂标识量复溶至1mg/ml，其中主药含量和有关物质通过高效液相色谱技术(HPLC)检测，具体检测方法如下：

使用美国安捷伦公司的Agilent 1260型液相色谱仪，配套G7115A型紫外检测器，检测波长230nm；色谱柱为安捷伦公司的ZORBAX Eclipse XDB型号的C18分析柱(4.6×150mm，5μm)；流动相A：95％含0.1％甲酸的水溶液+5％甲醇，流动相B：90％含0.05％甲酸的乙腈溶液+10％甲醇。流速1.0mL/min；柱温30℃；进样量为15μL。梯度洗脱见下表2；

表2

高温试验和强光照射试验结果如下表所示：

表3

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结果数据显示，本试验高温和光照条件下，本发明实施例12-22制备的注射用冻干粉针制剂稳定，性状无明显改变，含量和有关物质变化很小；对比例所制备的制剂在高温试验中主药有不同程度地小幅降低，有关物质上升明显，其中对比例3所制备的脂肪乳液出现漂油和分层现象；而在强光照射条件下，对比例的主药含量均出现大幅度地下降，有关物质大幅上升，制剂稳定性破坏严重。

试验例3利尿作用试验

实验采用雄性大鼠24只，体重280-320g，随机分为3组(n＝8)。饲养期间标准饮食可自由饮水，实验前禁食过夜。具体试验步骤如下：

1).腹腔注射戊巴比妥钠50mg/kg麻醉。右后肢体皮肤切开，OD 0.9mm PE导管股静脉置管，深度15mm，用于维持麻醉；腹中线切开腹壁，OD 1.2mm硅胶管膀胱插管，深度5mm，生物胶固定用于收集尿液，经切口腹腔内放置OD 1.2mm硅胶管用于腹腔补液，切口由生理盐水浸润的纱布覆盖。

2)维持麻醉及补液：采用微量注射泵(保定兰格)，经连接PE导管的硅胶管持续输注8mg/mL戊巴比妥钠维持动物麻醉,输注速率0.5mL/h；通过另一硅胶管持续腹腔内输注生理盐水补液，输注速率0.5mL/h。输液自基线期起，至实验结束。

3)给药：基线期过后，静脉组经尾静脉注射实施例15制得样品，给药剂量2mg/kg(0.1mL/100g体重)；口服组直接经胃壁穿刺胃内注射美托拉宗片剂研磨混悬液2mg/kg(0.1mL/100g体重)；对照组尾静脉注射等体积生理盐水。

4)尿液收集：采用2ml离心管收集膀胱内流出尿液，基线期共收集70min，前三个点每个点20min，最后一个点10分钟；给药后第一个小时，每10分钟收集一次，从第2小时起每20分钟收集一次，共收集420分钟。

5)收集到的尿液称重计算排尿量、排尿速率、累积排尿量和累积排尿增幅百分比，排尿速率为区间段内收集尿量与区间段时长的比值， (ΣVm：给药组，每只给药后累积尿量(mL)；对照组给药后累积尿量平均值(mL))。

给药组：静脉组(实施例15制得的冻干粉剂，记为iv)和口服组(片剂，ig)。

对照组：生理盐水(saline)对照组。

结果显示，静脉组(iv)和口服组(ig)给药后，动物排尿速率相较于生理盐水(saline)对照组均明显提高，具体参见图2尿生成实时速率(mean±SD,μL/min)，静脉组(iv)10min排尿速率即升至基线2倍以上，且均可维持较长时间，给药后7小时仍有一定利尿作用，其中的排尿速率基线值为给药前收集总尿量/70分钟。

进一步分析可知，口服组(ig)起效相对较慢，平均起效时间53.33±12.11min。静脉组(iv)给药后起效迅速，生效速度约为口服组5.33倍，具体参见图3a利尿作用起效时间(mean±SD,min)。口服组(ig)药效达峰缓慢，平均达峰时间为151.67±67.06min，静脉组(iv)给药后药效可迅速达到峰值，平均达峰时间为31.25±16.15min，约为口服组(ig)的4.85倍，具体参见图3b利尿作用达峰时间(mean±SD,min)。静脉组(iv)给药后平均峰值排尿速率较基线期升高19.69±5.51μL/min，口服组(ig)给药平均峰值排尿速率为12.87±2.98μL/min，静脉组(iv)约为口服组(ig)的1.53倍，具体参见图3c尿生成速率峰值增量(mean±SD,min)。

另一方面，静脉组和口服组给药后的累计排尿量明显高于对照组，且静脉组高于口服组，具体参见图4给药后累积尿量(mean±SD,mL)。静脉组在给药后30min累计排尿量相比对照组增幅最大，口服组在给药后140min累计排尿量相比对照组增幅最大；至给药后5小时，两给药组累计尿量增幅趋于稳定；7小时后静脉组和口服组累计排尿量较对照组增加129.31±55.35％和74.59％±44.82％，静脉组增幅百分比是口服组的1.73倍，具体参见图5累积尿量较阴性对照组增幅(mean±SD,％)。

Claims (10)

1.一种药物组合物，其特征在于：所述药物组合物为美托拉宗包合物，含有美托拉宗或其盐和β环糊精衍生物，所述美托拉宗或其盐和所述β环糊精衍生物的分子摩尔比为1：2～1：8。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述美托拉宗包合物满足下述条件中的一种或多种：

所述美托拉宗盐为美托拉宗与无机碱或有机碱生成的盐；较佳地，所述无机碱选自含钠、钾、镁、钙和铝的无机碱中的一种或几种；较佳地，所述有机碱选自甲基胺、乙基胺、乙醇胺、赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸中的一种或几种；

所述β-环糊精衍生物选自磺丁基醚β-环糊精钠、羟丙基β-环糊精和甲基β-环糊精中的一种或几种；

所述美托拉宗或其盐和所述β环糊精衍生物的分子摩尔比为1：3～1：6，较佳地为1：4。

3.一种如权利要求1或2所述药物组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法为下述任一方式：

方式一：将所述美托拉宗或其盐和所述β环糊精衍生物溶于第一溶媒中，搅拌至澄清透明；

方式二：将所述美托拉宗或其盐溶于第二溶媒中得美托拉宗溶液，将所述β环糊精衍生物溶于第三溶媒中得β环糊精衍生物溶液，再将两者混合，搅拌至澄清透明；

方式三：将所述β环糊精衍生物与水混合，再与所述美托拉宗或其盐混合，同时加入碱性pH调节剂，搅拌至澄清透明，再加入酸性pH调节剂中和。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法满足下述条件的一种或多种：

所述第一溶媒选自水、乙醇、甲醇、丙醇、异丙醇、丙酮、乙二醇、丙二醇、丙三醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃和叔丁醇中的一种或几种，其中，所述第一溶媒为水时，所述第一溶媒还含有碱性pH调节剂，并且在所述“搅拌至澄清透明”步骤之后，还加入酸性pH调节剂中和；较佳地，所述第一溶媒选自：乙醇，乙醇和水的混合溶媒，叔丁醇，以及，叔丁醇和水的混合溶媒；更佳地，所述乙醇和水的混合溶媒中乙醇和水的体积比例为1：3～3：1，所述叔丁醇和水的混合溶媒中叔丁醇和水的体积比为例1：3～2：1；

所述第二溶媒选自水、乙醇、无水乙醇、甲醇、丙醇、异丙醇、丙酮、乙二醇、丙二醇、丙三醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃和叔丁醇中的一种或几种，较佳地，所述第二溶媒选自：无水乙醇和/或叔丁醇；其中，所述第二溶媒与所述第三溶媒同时为水时，所述第二溶媒还含有pH碱性调节剂，并且在所述“搅拌至澄清透明”步骤之后，还加入pH酸性调节剂中和；

所述第三溶媒选自水、乙醇、甲醇、丙醇、异丙醇、丙酮、乙二醇、丙二醇、丙三醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃和叔丁醇中的一种或几种；较佳地，所述第三溶媒选自：水，乙醇，乙醇和水的混合溶媒，叔丁醇，以及，叔丁醇和水的混合溶媒；更佳地，所述乙醇和水的混合溶媒中乙醇和水的体积比例为1：3～3：1，所述叔丁醇和水的混合溶媒中叔丁醇和水的体积比为例1：3～2：1。

5.如权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法满足下述条件的一种或多种：所述搅拌的温度为4℃～60℃，例如4℃、10℃、25℃、40℃或60℃；

所述搅拌的时间为30-120min，例如30min、60min或120min；

所述美托拉宗的用量控制为溶液中的美托拉宗质量体积百分比为0.05～0.3％；

所述“搅拌至澄清透明”之后还包括干燥步骤，得到美托拉宗包合物粉末；较佳地，所述干燥的方式为减压旋蒸、喷雾干燥或冷冻干燥。

6.如权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于，

所述碱性pH调节剂选自氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、三乙醇胺、氨水、氢氧化钾、然酸钾、氨丁三醇、葡甲胺和碱性氨基酸的一种或几种，优选地为氢氧化钠；

所述酸性pH调节剂选自枸橼酸、盐酸、硫酸、醋酸、酒石酸、乳酸、苹果酸、磷酸、富马酸、马来酸、琥珀酸和酸性氨基酸中一种或几种，优选地为枸橼酸；

所述碱性pH调节剂的用量为调节至溶液pH为11～12；

所述酸性pH调节剂的用量为调节至溶液pH为6～8。

7.一种药物制剂，其特征在于，包括权利要求1或2所述美托拉宗包合物、或权利要求3-5任一项所述制备方法制得的药物组合物，和至少一种药学上可接受的载体、辅料或稀释剂，或其他活性成分；较佳地，所述药物制剂的药剂形式为输液、水针、粉针、片剂、胶囊、颗粒剂、分散片、口服液或糖浆剂。

8.一种美托拉宗冻干粉制剂，其特征在于：其包括权利要求1或2中所述美托拉宗包合物、或者如权利要求3-6任一项所述制备方法制得的药物组合物；

较佳地，所述冻干粉制剂还包括冻干保护剂，例如甘露醇、肌醇、山梨醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖、右旋糖苷、甘氨酸、PVP和聚乙二醇中的一种或几种；

较佳地，所述冻干粉制剂还包括pH调节剂，例如氢氧化钠、盐酸、枸橼酸、酒石酸、磷酸、碳酸氢钠和氨基酸中的一种或几种。

9.如权利要求8所述美托拉宗冻干粉制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)所述药物组合物为粉末状时，复溶后过滤，或者将所述“搅拌至澄清透明”得到的所述美托拉宗包合物溶液过滤；

(2)之后干燥，即可；

较佳地，所述复溶的溶剂为水，更佳地为注射用水，所述注射用水的用量为所述美托拉宗包合溶液体积的0.4-2倍，所述美托拉宗包合物溶液体积为如权利要求4中所述第一溶媒的体积或所述第二溶媒和第三溶媒的总体积；

较佳地，所述过滤采用滤膜过滤；

较佳地，所述干燥的方式为冷冻干燥、喷雾干燥或减压干燥，更佳地为冷冻干燥；

较佳地，所述过滤前，还包括加入冻干保护剂溶解。

10.一种美托拉宗包合物或美托拉宗冻干粉制剂在制备利尿药物中的用途，其特征在于：所述美托拉宗包合物为如权利要求1或2所述美托拉宗包合物，或如权利要求3-6任一项所述制备方法制得的美托拉宗包合物，所述美托拉宗冻干粉制剂为采用如权利要求8所述美托拉宗冻干粉制剂，或如权利要求9所述的制备方法得到的美托拉宗冻干粉制剂。