CN117898320A - 2,4-二氯苯氧乙酸促进猕猴桃采后成熟软化的应用 - Google Patents
2,4-二氯苯氧乙酸促进猕猴桃采后成熟软化的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了2,4‑二氯苯氧乙酸促进猕猴桃采后成熟软化的应用，发现采用植物激素2,4‑二氯苯氧乙酸(2,4‑D)处理猕猴桃果实，可以有效促进猕猴桃果实采后成熟软化，并深入研究了2,4‑D促进猕猴桃成熟软化的机理，发现2,4‑D能促进猕猴桃淀粉降解相关基因和细胞壁降解相关基因的表达，从而促进猕猴桃果实的淀粉降解为可溶性糖类，并促进细胞壁物质的降解，加快猕猴桃果实的成熟软化。本发明提供的促进猕猴桃采后成熟软化的方法剂量明确，催熟效果极佳，并且保证了处理过的猕猴桃果实品质，帮助了消费者能够在购买猕猴桃后立即食用，这会提高消费者的购买愿望和食用需求，并且2,4‑D价格低廉，用来处理猕猴桃不会明显提高成本，为促进猕猴桃的采后成熟提供了一种全新的方法。
Description
技术领域
本发明属于水果催熟技术领域，具体涉及2,4-二氯苯氧乙酸促进猕猴桃采后成熟软化的应用。
背景技术
猕猴桃是典型的呼吸跃变型水果，通常在猕猴桃生理成熟期前采收，与其他后熟型水果如番茄、香蕉和芒果相比，猕猴桃采后需要更长的后熟过程才可食用。目前销售、消费过程中需要解决的问题是市面上销售的大多是硬果猕猴桃，无法立即食用，需通过自然存放使其成熟变软，但成熟时间难以掌握，且成熟度不一致，严重影响了消费者的购买愿望和食用需求。
目前促进猕猴桃果实采后成熟的方法主要是乙烯利催熟。但是不少生产者、商家盲目追求经济效益，超剂量使用乙烯利催熟果实，导致乙烯利残留量超标，果实的营养品质受损，危害人民的身体健康。并且过量的乙烯利处理可能会造成果实生理絮乱，无法完成后熟。因此寻找一种更为有效，剂量明确的方法来促进猕猴桃果实成熟软化势在必行。
2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)，是一种有机化合物，化学式为C8H6Cl2O3，主要用作除草剂和植物生长剂，如CN107347887A公开了2,4-二氯苯氧乙酸可用于制备猕猴桃种植中的除草剂，CN114711083B公开了2,4-二氯苯氧乙酸可用于猕猴桃的生长调节剂。目前还没有将2,4-D用于农产品采后贮藏领域的相关报道。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了2,4-二氯苯氧乙酸促进猕猴桃采后成熟软化的应用，发现采用植物激素2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)处理猕猴桃果实，可以有效促进猕猴桃果实采后成熟软化，并深入研究了2,4-D促进猕猴桃成熟软化的机理，发现2,4-D能促进猕猴桃淀粉降解相关基因和细胞壁降解相关基因的表达，从而促进猕猴桃果实的淀粉降解为可溶性糖类，并促进细胞壁物质的降解，加快猕猴桃果实的成熟软化。本发明提供的促进猕猴桃采后成熟软化的方法剂量明确，催熟效果极佳，并且保证了处理过的猕猴桃果实品质，帮助了消费者能够在购买猕猴桃后立即食用，这会提高消费者的购买愿望和食用需求，并且2,4-D价格低廉，用来处理猕猴桃不会明显提高成本，为促进你猕猴桃的采后成熟提供了一种全新的方法。
一方面，本发明提供了一种促进猕猴桃果实采后成熟软化的方法，所述方法使猕猴桃果实接触含有2,4-二氯苯氧乙酸的溶液。
2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)是一种生长素(IAA)类似物，常用于果实栽培阶段，但从未报道将其用于采后果实的催熟。而且2,4-D非常容易降解，暴露在环境下的2,4-D极易被光氧化，很快被降解，其半衰期不足一天。经2,4-D处理的水果，放置一天后其中的2,4-D就能完全降解，因此非常安全。
进一步地，所述含有2,4-二氯苯氧乙酸的溶液中的2,4-二氯苯氧乙酸的浓度为0.1～10mmol/L，所述猕猴桃果实浸泡在含有2,4-二氯苯氧乙酸的溶液中。
可以理解的是，任何浓度的2,4-二氯苯氧乙酸溶液都具有促进猕猴桃果实采后成熟软化的效果。从成本和安全环保角度考虑，优选采用0.1～10mmol/L浓度的2,4-二氯苯氧乙酸溶液处理猕猴桃果实。
另一方面，本发明提供了2,4-二氯苯氧乙酸用于制备促进猕猴桃果实成熟软化的试剂的用途。
再一方面，本发明提供了2,4-二氯苯氧乙酸用于制备促进猕猴桃果实中的果胶转变为水溶性果胶的试剂的用途。
再一方面，本发明提供了2,4-二氯苯氧乙酸用于制备促进猕猴桃果实中的淀粉降解的试剂的用途。
再一方面，本发明提供了2,4-二氯苯氧乙酸用于制备促进猕猴桃果实的细胞壁降解的试剂的用途。
促进产后水果成熟软化的途径有很多种，比如促进果胶果酯酶表达从而促进果胶降解或转化成水溶性果胶；促进果胶裂解酶表达从而促进果胶裂解；促进纤维素酶表达从而促进纤维素降解；促进半乳糖酶表达从而促进半乳糖降解等等。
本发明经大量研究证明，2,4-二氯苯氧乙酸能同时通过三条途径促使猕猴桃果实采后的成熟软化：1、能促进猕猴桃果实中的果胶转变为水溶性果胶；2、能促进猕猴桃果实中的淀粉降解；3、能促进猕猴桃果实的细胞壁降解。
不过研究证明，2,4-二氯苯氧乙酸并不能促进猕猴桃果实中的纤维素酶表达。
在目前对水果催熟的研究中发现，使用脱落酸(ABA)、油菜素内酯(BR)、乙烯处理都会促进水果的软化成熟，但它们无一例外都是通过促进细胞壁代谢来进行催熟，而2,4-二氯苯氧乙酸则可以在促进细胞壁代谢的同时，还能促进猕猴桃果实中的淀粉降解，相对于目前的催熟方式更加高效。
再一方面，本发明提供了2,4-二氯苯氧乙酸用于制备促进猕猴桃果实中AcBAM4、AcBAM5、AcLDA2、AcSEX1中的任意一种或多种基因表达制剂的用途。
进一步地，所述AcBAM4、AcBAM5、AcLDA2、AcSEX1的序列分别如Seq ID NO.1～SeqID NO.4所示。
本发明先经大量转录测序工作，从猕猴桃果实的基因中筛选到与促进或抑制猕猴桃果实采后成熟的相关基因，明确相关基因的具体序列，并考察了猕猴桃果实采后贮藏期间各基因表达情况的变化趋势。
AcBAM4、AcBAM5、AcLDA2、AcSEX1都是猕猴桃果实中淀粉降解相关基因，研究证明2,4-二氯苯氧乙酸能促进猕猴桃果实中AcBAM4、AcBAM5、AcLDA2、AcSEX1的表达。但是淀粉降解的相关基因还有AcGWD、AcPWD、AcISA、AcDEP2、AcPHS、AcAMY3，研究证明，2,4-二氯苯氧乙酸对促进AcGWD、AcPWD、AcISA、AcDEP2基因表达无效，甚至对AcPHS、AcAMY3还有抑制的影响。
所述AcBAM4、AcBAM5、AcLDA2、AcSEX1、AcGWD、AcPWD、AcISA、AcDEP2、AcPHS、AcAMY3在NCBI上的序列号分别为XM_057621441.1、XM_057657924.1、XM_057608558.1、XM_057626664.1、XM_057640605.1、XM_057633519.1、XM_057614090.1、XM_057635045.1、XM_057627804.1、XM_057638036.1。
再一方面，本发明提供了2,4-二氯苯氧乙酸用于制备促进猕猴桃果实中AcXLT2、AcEXPA1、AcPG、AcEXPA8、AcBGaL1、AcXTH15、AcXYL、AcEG、AcPMU1中的任意一种或多种基因表达制剂的用途。
进一步地，所述AcXLT2、AcEXPA1、AcPG、AcEXPA8、AcBGaL1、AcXTH15、AcXYL、AcEG、AcPMU1的序列分别如Seq ID NO.5～13所示。
AcXLT2、AcEXPA1、AcPG、AcEXPA8、AcBGaL1、AcXTH15、AcXYL、AcEG、AcPMU1都是猕猴桃果实中细胞壁降解相关基因，研究证明2,4-二氯苯氧乙酸能促进猕猴桃果实中AcXLT2、AcEXPA1、AcPG、AcEXPA8、AcBGaL1、AcXTH15、AcXYL、AcEG、AcPMU1的表达。不过细胞壁降解相关基因还有AcAGaL3，研究证明，2,4-二氯苯氧乙酸对促进AcAGaL3基因表达无效。
所述AcXLT2、AcEXPA1、AcPG、AcEXPA8、AcBGaL1、AcXTH15、AcXYL、AcEG、AcPMU1、AcAGaL3在NCBI上的序列号分别为XM_057625801.1、XM_057630544.1、XM_057650182.1、XM_057618356.1、XM_057649182.1、XM_057650368.1、XM_057640703.1、XM_057640590.1、XM_057603519.1、XM_057619150.1。
本发明提供的2,4-二氯苯氧乙酸促进猕猴桃采后成熟软化的应用具有以下有益效果：
1、一种全新的促进猕猴桃果实采后成熟软化的方法；
2、发现了2,4-二氯苯氧乙酸促进猕猴桃采后成熟软化的用途，能实现猕猴桃果实可控式成熟软化；
3、发现了2,4-二氯苯氧乙酸能促进猕猴桃采后果实中的果胶转变为水溶性果胶、淀粉降解、细胞壁降解；
4、发现了2,4-二氯苯氧乙酸能促进猕猴桃采后果实中淀粉降解相关基因AcBAM4、AcBAM5、AcLDA2、AcSEX1的表达，可用于制备促进猕猴桃采后果实中淀粉降解相关基因AcBAM4、AcBAM5、AcLDA2、AcSEX1表达的制剂；
5、发现了2,4-二氯苯氧乙酸能促进猕猴桃采后果实中细胞壁降解相关基因AcXLT2、AcEXPA1、AcPG、AcEXPA8、AcBGaL1、AcXTH15、AcXYL、AcEG、AcPMU1的表达，可用于制备促进猕猴桃采后果实中细胞壁降解相关基因AcXLT2、AcEXPA1、AcPG、AcEXPA8、AcBGaL1、AcXTH15、AcXYL、AcEG、AcPMU1表达的制剂。
附图说明
图1为实施例1中2,4-D对猕猴桃采后果实贮藏期间硬度的变化曲线图；
图2为实施例1中2,4-D对猕猴桃采后果实贮藏期间的乙烯释放量的变化曲线图；
图3为实施例2中2,4-D对猕猴桃采后果实贮藏期间水溶性果胶含量的变化曲线图；
图4为实施例2中2,4-D对猕猴桃采后果实贮藏期间的原果胶含量的变化曲线图；
图5为实施例2中2,4-D对猕猴桃采后果实贮藏期间淀粉含量的变化曲线图；
图6为实施例3中两组猕猴桃的AcBAM4、AcBAM5、AcLDA2、AcSEX1基因表达情况变化曲线图；
图7为实施例3中两组猕猴桃的AcGWD、AcPWD、AcISA、AcDEP2、AcPHS、AcAMY3基因表达情况变化曲线图；
图8为实施例4中两组猕猴桃的AcXLT2、AcEXPA1、AcPG、AcEXPA8、AcBGaL1、AcXTH15、AcXYL、AcEG、AcPMU1基因表达情况变化曲线图；
图9为实施例4中两组猕猴桃的AcAGaL3基因表达情况变化曲线图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的优选实施例作进一步详细描述，需要指出的是，以下实施例旨在便于对本发明的理解，而对其不起任何限定作用，本发明的实施例中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均能够以任何方式组合。
实施例1、2,4-二氯苯氧乙酸处理对猕猴桃采后成熟软化的影响
以‘红阳’猕猴桃为实验材料，于授粉后120d(可溶性固形物含量7.2％±0.3％，硬度42N左右)采自浙江省宁波市东钱湖何芬家庭农场，采摘后常温运输到实验室，室温下散田间热3h。选取无任何机械、人为损伤、大小均一的果实，分两组。第一组置于0.5mmol/L的2,4-D溶液中(含0.1％of Tween20)浸泡10min，第二组在其他条件相同情况下用蒸馏水浸泡10min作为对照。处理结束后自然风干，于20℃，相对湿度85-90％的环境中贮藏8d，每隔2d取1次样，测量果实硬度、乙烯释放量等指标。果实硬度和乙烯释放量是衡量猕猴桃果实成熟度的重要指标，在猕猴桃果实贮藏中需要将硬度维持在较高水平，而乙烯释放量代表了猕猴桃果实的成熟程度。
随机取出9个果实，削去果实纵向两侧的果皮，置于探头直径7.5mm，检测速度60mm/min，果肉形变量10％条件下用美国FTC公司的TMS-Touch质构仪进行硬度测定，重复3次，单位为N。
随机选取5个猕猴桃果实置于密闭的容器中，分别置于相应贮藏温度下3h后抽取气体5mL，用岛津2014C型气相色谱仪(岛津，日本)测定乙烯含量，同时以标准乙烯气体作标准曲线，计算果实的乙烯释放速率。
检测结果见图1和图2，其中图1为2,4-D对猕猴桃采后果实贮藏期间硬度的变化曲线图，图2为2,4-D对猕猴桃采后果实贮藏期间的乙烯释放量的变化曲线图。
根据图1可以看出，在贮藏的第6天和第8天，2,4-D处理的硬度显著低于对照组。
根据图2可以看出，在贮藏的第6天开始，2,4-D处理的乙烯释放量显著高于对照组。这证明经过2,4-D处理的猕猴桃，会比对照组软化成熟更快，说明2,4-D处理会促进猕猴桃果实的成熟软化。
本实施例还采用了0.001mmol/L、0.01mmol/L、0.1mmol/L、0.3mmol/L、0.6mmol/L、0.9mmol/L、2mmol/L、5mmol/L、10mmol/L的2,4-D溶液分别进行试验，都能起到一定的促进猕猴桃采后果实软化和提高乙烯释放量的效果，因篇幅的限制，这里就不一一举例说明。
实施例2、2,4-二氯苯氧乙酸处理对猕猴桃采后果实中的果胶、淀粉含量的影响
以‘红阳’猕猴桃为实验材料，于授粉后120d(可溶性固形物含量7.2％±0.3％，硬度42N左右)采自浙江省宁波市东钱湖何芬家庭农场，采摘后常温运输到实验室，室温下散田间热3h。选取无任何机械、人为损伤、大小均一的果实，分两组。第一组置于0.5mmol/L的2,4-D溶液中(含0.1％of Tween20)浸泡10min，第二组在其他条件相同情况下用蒸馏水浸泡10min作为对照。处理结束后自然风干，于20℃，相对湿度85-90％的环境中贮藏8d，每隔2d取1次样，测量果实的水溶性果胶、原果胶(采摘初期的果胶含量，非水溶性果胶)、淀粉含量等指标。
果胶提取的方法为：
1)称取1g左右经液氮研磨成粉末状的猕猴桃果肉；
2)加入25ml 95％乙醇；
3)沸水浴30min，煮沸过程中，及时补充95％(v/v)乙醇；
4)冰浴冷却，离心8000g，4℃，15分钟；
5)重复步骤2-4三次；
6)用蒸馏水(20mL)溶解沉淀物，然后在50℃下孵育30分钟；
7)冷却后，将悬浮液离心(8000g，4℃,15分钟)。将上清液命名为WSP转移并用蒸馏水溶解至100mL。这种制备溶液用于分析水溶性果胶含量；
8)在上述离心后，弃去上清液，而沉淀物保留在离心管中，并溶解在25mL 0.5mmol/L H2SO4溶液中；
9)在沸水浴中加热1h；10)在混合物冷却后，然后离心(8000×g，4℃,15分钟)。将上清液转移并用蒸馏水溶解至100mL。该溶液用于分析原果胶含量。
其中水溶性果胶和原果胶含量的检测方法为：
1)1ml 200ul测定液中加入0.25ml咔唑-乙醇溶液，手动摇匀至出现白色混浊，
2)将试管于冰中冷却5min左右后
3)于通风橱沿着管壁缓缓加入5ml浓硫酸，
4)混匀后于85℃水浴20min，
5)待流水冷却或冰浴冷却至室温后测定525nm下的吸光值。
淀粉含量的检出方法为：
1)液氮冻结样品研磨成粉末，称取0.05g左右；
2)2.5mL 80％乙醇匀浆，10000rpm,4℃离心15min，弃上清液；
3)用5mL dH2O匀浆，洗涤沉淀，10000rpm,4℃离心15min，弃上清液；
4)用2.5mL 80％ Ca(NO3)2溶解，沸水浴10min，4000rpm4℃离心4min；
5)重复步骤4三次；
6)定容至10mL。测定：取2mL提取液加100μL0.01 mol·L-1I2-KI于600nm处波长测定吸光值。
检测结果见图3～5，其中图3为2,4-D对猕猴桃采后果实贮藏期间水溶性果胶含量的变化曲线图，图4为2,4-D对猕猴桃采后果实贮藏期间的原果胶含量的变化曲线图，图5为2,4-D对猕猴桃采后果实贮藏期间淀粉含量的变化曲线图。
根据图3可以看出，在贮藏的第2天开始，2,4-D处理后猕猴桃果实中的水溶液果胶明显高于对照组。
根据图4可以看出，在贮藏的第2～8天，2,4-D处理后猕猴桃果实中的原果胶含量都明显低于对照组。这证明经过2,4-D处理的猕猴桃，原果胶含量随着硬度的下降，逐渐转变为水溶性果胶，说明2,4-D处理会促进猕猴桃果实的成熟软化。
在猕猴桃的成熟软化过程中，淀粉逐渐降解为可溶性糖类物质。根据图5可以看出，在贮藏的第2～8天，2,4-D处理后猕猴桃果实中的淀粉含量都明显低于对照组，说明经过2,4-D处理的猕猴桃，淀粉更快降解为可溶性糖类物质，说明2,4-D处理会促进猕猴桃果实的成熟软化。
本实施例还采用了0.001mmol/L、0.01mmol/L、0.1mmol/L、0.3mmol/L、0.6mmol/L、0.9mmol/L、2mmol/L、5mmol/L、10mmol/L的2,4-D溶液分别进行试验，都能起到一定的促进猕猴桃采后水溶性果胶含量升高，原果胶含量降低和淀粉含量降低的效果，因篇幅的限制，这里就不一一举例说明。
实施例3、2,4-二氯苯氧乙酸处理对猕猴桃采后果实中的淀粉降解相关基因的影响
本实施例以‘红阳’猕猴桃为实验材料，于授粉后120d(可溶性固形物含量7.2％±0.3％，硬度42N左右)采自浙江省宁波市东钱湖何芬家庭农场，采摘后常温运输到实验室，室温下散田间热3h。选取无任何机械、人为损伤、大小均一的果实，分两组。第一组置于0.5mmol/L的2,4-D溶液中(含0.1％of Tween 20)浸泡10min，第二组在其他条件相同情况下用蒸馏水浸泡10min作为对照。处理结束后自然风干，于20℃，相对湿度85-90％的环境中贮藏8d，每隔2d取1次样，测量果实的淀粉降解相关基因表达的变化情况。
总RNA提取和cDNA合成方法为：称取约0.2g果实冻样，用柱式植物RNA提取试剂盒2.0(北京天恩泽基因科技有限公司)提取猕猴桃的总RNA。利用核酸蛋白仪与琼脂糖电泳仪来检测提取RNA的质量。cDNA采用HiFiScript cDNA Synthesis Kit试剂盒(北京康为生物有限公司)反转录而成。
本实施例通过实时定量PCR分析猕猴桃采后果实中AcBAM4、AcBAM5、AcLDA2、AcSEX1、AcGWD、AcPWD、AcISA、AcDEP2、AcPHS、AcAMY3表达的变化情况，以AeACT为内参基因，采用美国赛默飞旗下的Real-Time PCR仪，按照美国赛默飞世尔公司的DyNAmo Flash SYBRGreen qPCR试剂盒说明书，进行三步法扩增，进行如下程序设置：95℃预变性7min；95℃，15S，45℃退火30s，75℃延伸15s，此步骤进行39个循环。每个样品进行4次生物学重复，相对表达量采用2-ΔCT方法进行计算分析。
两组猕猴桃的AcBAM4、AcBAM5、AcLDA2、AcSEX1基因表达情况如图6所示，AcGWD、AcPWD、AcISA、AcDEP2、AcPHS、AcAMY3基因表达情况如图7所示，其中*，**，***分别表示在0.05、0.01、0.001水平上差异显著。
由图6可以看出，其中，AcBAM4在处理组和对照组中均呈不断上升的趋势，处理组在整个贮藏期间AcBAM4基因的表达水平显著高于对照组(P﹤0.05)，尤其是在第6、8天，AcBAM4基因的表达水平显著提高。
AcBAM5基因在处理组和对照组中均呈先上升后下降的趋势，在处理组和对照组中均在6d达到最大表达量后下调，整个贮藏期间处理组显著上调了AcBAM5的表达(P﹤0.05)。
AcLDA2基因在第0、2天时，对照组中的表达量高于处理组，而在第4～8天，处理组的表达量显著升高，而对照组表达量出现下降趋势(P﹤0.05)。
AcSEX1在处理组中上升至6d时达到最大表达量，翻了三倍，但在对照组中一直处于较低水平，整个贮藏期间处理组AcSEX1的表达显著高于对照组(P﹤0.05)。
因此，在整个贮藏期间，处理组对AcBAM4、AcBAM5、AcLDA2、AcSEX1基因的表达水平都显著高于对照组(P﹤0.05)，可见2,4-D处理对猕猴桃在贮藏期间的AcBAM4、AcBAM5、AcLDA2、AcSEX1基因有促进表达作用，从而促进果实成熟软化。
由图7可以看出，2,4-D处理对猕猴桃在贮藏期间的AcGWD、AcPWD、AcISA、AcDEP2、AcPHS、AcAMY3基因并无促进表达作用，甚至对AcPHS、AcAMY3还有抑制的影响。可见2,4-D处理并不能促进猕猴桃的所有淀粉降解相关基因的表达，但对其中的AcBAM4、AcBAM5、AcLDA2、AcSEX1基因有明显促进表达作用，从而能促进果实成熟软化。
本实施例还采用了0.001mmol/L、0.01mmol/L、0.1mmol/L、0.3mmol/L、0.6mmol/L、0.9mmol/L、2mmol/L、5mmol/L、10mmol/L的2,4-D溶液分别进行试验，都能起到一定的促进猕猴桃采后AcBAM4、AcBAM5、AcLDA2、AcSEX1基因表达的效果，因篇幅的限制，这里就不一一举例说明。
实施例4、2,4-二氯苯氧乙酸处理对猕猴桃采后果实中的细胞壁降解相关基因的影响
本实施例以‘红阳’猕猴桃为实验材料，于授粉后120d(可溶性固形物含量7.2％±0.3％，硬度42N左右)采自浙江省宁波市东钱湖何芬家庭农场，采摘后常温运输到实验室，室温下散田间热3h。选取无任何机械、人为损伤、大小均一的果实，分两组。第一组置于0.5mmol/L的2,4-D溶液中(含0.1％of Tween 20)浸泡10min，第二组在其他条件相同情况下用蒸馏水浸泡10min作为对照。处理结束后自然风干，于20℃，相对湿度85-90％的环境中贮藏8d，每隔2d取1次样，测量果实的细胞壁降解相关基因表达的变化情况。
总RNA提取和cDNA合成方法为：称取约0.2g果实冻样，用柱式植物RNA提取试剂盒2.0(北京天恩泽基因科技有限公司)提取猕猴桃的总RNA。利用核酸蛋白仪与琼脂糖电泳仪来检测提取RNA的质量。cDNA采用HiFiScript cDNA Synthesis Kit试剂盒(北京康为生物有限公司)反转录而成。
本实施例通过实时定量PCR分析猕猴桃采后果实中AcXLT2、AcEXPA1、AcPG、AcEXPA8、AcBGaL1、AcXTH15、AcXYL、AcEG、AcPMU1、AcAGaL3表达的变化情况，以AeACT为内参基因，采用美国赛默飞旗下的Real-Time PCR仪，按照美国赛默飞世尔公司的DyNAmo FlashSYBR Green qPCR试剂盒说明书，进行三步法扩增，进行如下程序设置：95℃预变性7min；95℃，15S，45℃退火30s，75℃延伸15s，此步骤进行39个循环。每个样品进行4次生物学重复，相对表达量采用2-ΔCT方法进行计算分析。
两组猕猴桃的AcXLT2、AcEXPA1、AcPG、AcEXPA8、AcBGaL1、AcXTH15、AcXYL、AcEG、AcPMU1基因表达情况如图8所示，AcAGaL3基因表达情况如图9所示，其中*，**，***分别表示在0.05、0.01、0.001水平上差异显著。
由图8可以看出，其中，AcXLT2在对照组中均呈下降趋势，而在处理组中却呈现先上升后下降并趋于稳定的趋势，处理组在4～8天期间AcXLT2基因的表达水平显著高于对照组(P﹤0.05)，尤其是在第4天，AcBAM4基因的表达水平达到最高值。
AcEXPA1、AcPG、AcEXPA8、AcBGaL1基因在处理组和对照组中均呈不断上升趋势，整个贮藏期间处理组显著上调了AcEXPA1、AcPG、AcEXPA8、AcBGaL1的表达(P﹤0.05)。
AcXTH15基因在处理组和对照组中在贮藏后期呈现上升趋势，尤其是在第6天以后，表达量迅速上升，整个贮藏期间处理组显著上调了AcXTH15的表达(P﹤0.05)。
AcXYL、AcEG基因在处理组和对照组中均呈不断上升趋势，整个贮藏期间处理组显著上调了AcEXPA1、AcPG、AcEXPA8、AcBGaL1的表达(P﹤0.05)。
AcPMU1在对照组中表达量一直趋于较低水平，而在处理组中，从第2天开始，表达量不断上升，整个贮藏期间处理组AcSEX1的表达显著高于对照组(P﹤0.05)。
因此，在整个贮藏期间，处理组对AcXLT2、AcEXPA1、AcPG、AcEXPA8、AcBGaL1、AcXTH15、AcXYL、AcEG、AcPMU1基因的表达水平都显著高于对照组(P﹤0.05)，可见2,4-D处理对猕猴桃在贮藏期间的AcXLT2、AcEXPA1、AcPG、AcEXPA8、AcBGaL1、AcXTH15、AcXYL、AcEG、AcPMU1基因有促进表达作用，从而促进果实成熟软化。
由图9可以看出，2,4-D处理对猕猴桃在贮藏期间的AcAGaL3基因并无促进表达作用。可见2,4-D处理并不能促进猕猴桃的所有细胞壁降解相关基因的表达，但对其中的AcXLT2、AcEXPA1、AcPG、AcEXPA8、AcBGaL1、AcXTH15、AcXYL、AcEG、AcPMU1基因有明显促进表达作用，从而能促进果实成熟软化。
本实施例还采用了0.001mmol/L、0.01mmol/L、0.1mmol/L、0.3mmol/L、0.6mmol/L、0.9mmol/L、2mmol/L、5mmol/L、10mmol/L的2,4-D溶液分别进行试验，都能起到一定的促进猕猴桃采后AcXLT2、AcEXPA1、AcPG、AcEXPA8、AcBGaL1、AcXTH15、AcXYL、AcEG、AcPMU1基因表达的效果，因篇幅的限制，这里就不一一举例说明。
本发明的应用并不局限于此。如根据其在环境保护方面的应用范围均可做扩展。任何本领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，均可作各种更动与修改，因此本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。
Claims (10)
1.一种促进猕猴桃果实采后成熟软化的方法，其特征在于，使猕猴桃果实接触含有2,4-二氯苯氧乙酸的溶液。
2.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述含有2,4-二氯苯氧乙酸的溶液中的2,4-二氯苯氧乙酸的浓度为0.1～10mmol/L，所述猕猴桃果实浸泡在含有2,4-二氯苯氧乙酸的溶液中。
3.2,4-二氯苯氧乙酸用于制备促进猕猴桃果实成熟软化的试剂的用途。
4.2,4-二氯苯氧乙酸用于制备促进猕猴桃果实中的果胶转变为水溶性果胶的试剂的用途。
5.2,4-二氯苯氧乙酸用于制备提高猕猴桃果实中的乙烯释放量的试剂的用途。
6.2,4-二氯苯氧乙酸用于制备促进猕猴桃果实中的淀粉降解和/或细胞壁降解的试剂的用途。
7.2,4-二氯苯氧乙酸用于制备促进猕猴桃果实中AcBAM4、AcBAM5、AcLDA2、AcSEX1中的任意一种或多种基因表达制剂的用途。
8.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述AcBAM4、AcBAM5、AcLDA2、AcSEX1的序列分别如Seq ID NO.1～Seq ID NO.4所示。
9.2,4-二氯苯氧乙酸用于制备促进猕猴桃果实中AcXLT2、AcEXPA1、AcPG、AcEXPA8、AcBGaL1、AcXTH15、AcXYL、AcEG、AcPMU1中的任意一种或多种基因表达制剂的用途。
10.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述AcXLT2、AcEXPA1、AcPG、AcEXPA8、AcBGaL1、AcXTH15、AcXYL、AcEG、AcPMU1的序列分别如Seq ID NO.5～13所示。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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