CN117897178A - 用于治疗癌症的组合物和方法 - Google Patents

用于治疗癌症的组合物和方法 Download PDF

Info

Publication number
CN117897178A
CN117897178A CN202280057827.9A CN202280057827A CN117897178A CN 117897178 A CN117897178 A CN 117897178A CN 202280057827 A CN202280057827 A CN 202280057827A CN 117897178 A CN117897178 A CN 117897178A
Authority
CN
China
Prior art keywords
polynucleotide
antibody
cancer
tumor
variant
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202280057827.9A
Other languages
English (en)
Inventor
E·奎加诺
P·格莱泽
B·C.·特纳
D·路德维希
V·博米雷迪文卡塔
L·埃斯科巴-霍尤斯
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kinao Biological Co
Yale University
Original Assignee
Kinao Biological Co
Yale University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kinao Biological Co, Yale University filed Critical Kinao Biological Co
Priority claimed from PCT/US2022/036143 external-priority patent/WO2023278897A1/en
Publication of CN117897178A publication Critical patent/CN117897178A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

提供了用于通过施用在治疗性多核苷酸与3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物来治疗癌症的组合物和方法。在一些情况下，所述复合物通过摩尔比为至少约2:1的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸来稳定。

Description

用于治疗癌症的组合物和方法
关于联邦政府资助的研究的声明
本发明是根据国立卫生研究院授予的R35CA197574在政府支持下完成的。政府享有本发明中的某些权利。
技术领域
本公开总体上涉及用于治疗癌症的组合物和方法。
背景技术
癌症是一组具有广泛的病因和临床表现的不同的过度增殖性疾病。由于癌症生物学的显著差异，没有单一的治疗策略——更不用说特定的疗法——足以治疗每种癌症类型。相反，已经开发了不同的治疗方法来治疗不同类型的癌症。在这些不同的治疗策略中，已经开发了若干类基于多核苷酸的癌症疗法。
在基于多核苷酸的癌症疗法中，已经发展出许多不同的策略。例如，在各种癌症免疫疗法中，免疫刺激剂多核苷酸已被用于激动促炎性细胞因子的介体，如模式识别受体。基因调节多核苷酸，例如siRNA、miRNA、ASO等，已被用于沉默靶基因，调节癌症进展中涉及的信号传导通路。编码治疗性蛋白的多核苷酸，例如编码抗原或癌症免疫治疗性蛋白的mRNA或质粒，也已经在治疗上使用。功能性核酸如适体也已经以类似于基于抗体的癌症疗法的方式使用，例如通过结合和阻断关键的肿瘤靶标，如PD-1。基因编辑多核苷酸也以类似于基因调节多核苷酸的方式被用于沉默癌症介体的表达。关于各种基于多核苷酸的癌症疗法的综述，参见例如《药物发现中的医学(Medicine in Drug Discovery)》6(2020)100023和Hager等人,《细胞(Cells)》,9(9):2061(2020)，所述文献的内容通过引用并入本文。
尽管这些基于多核苷酸的癌症疗法在临床前研究中取得了一些成功，但是当在临床试验中评估治疗功效时，它们没有达到预期(Lopes等人,癌症DNA疫苗：当前临床前和临床发展及未来展望(Cancer DNAvaccines:Current preclinical and clinicaldevelopments and future perspectives).《实验与临床癌症研究杂志(J.Exp.Clin.Cancer Res.)》,2019,38,146；等人,用离体RNA转染的树突状细胞进行的治疗性肿瘤疫苗接种——最新的发展(Therapeutic Cancer Vaccination with exvivo RNA-Transfected Dendritic Cells-An Update).《药剂学(Pharmaceutics)》,2020,12,92)。一个主要障碍是缺乏防止pDNA/mRNA降解和实现细胞类型特异性递送所需的适当递送系统(Angell等人,用于精确控制药物递送和基因疗法的DNA纳米技术(DNANanotechnology for Precise Control over Drug Delivery and Gene Therapy).Small(德国魏因海姆安德贝格街(Weinheim an der Bergstrasse,Germany)),2016,12,1117–1132；Das等人,癌症的基因疗法：策略、挑战和成功(Gene Therapies for Cancer:Strategies,Challenges and Successes).《细胞生理学杂志(J.Cell.Physiol.)》,2015,230,259–271)。
核酸不容易穿过细胞膜。克服此障碍的常规方法包含将核酸包装在基于脂质体的递送媒剂中，这呈现如基于DNA的疗法中所示的免疫学挑战。进一步，核酸容易被皮肤、组织和血液中存在的细胞外核酸酶降解。Kowalski PS等人,《分子疗法(Mol Ther.)》,27(4):710-28(2019)，所述文献的内容通过引用并入本文。
发明内容
鉴于上述背景，本领域需要用治疗性多核苷酸治疗癌症的改进方法。基于多核苷酸的癌症疗法为癌症疗法提供了有前景的途径，因为它们编码任何多肽的多功能性、可获得高度可重复的制造方法、对多核苷酸序列进行简单和精确调整的能力、它们价廉的性质、它们特异性靶向和/或编辑任何基因序列的能力等。然而，将多核苷酸治疗剂递送到体内特定组织带来了许多挑战，包含外源核酸在体内的快速降解和由普通递送媒剂如脂质体和病毒载体引起的免疫原性。参见例如，Zhou等人,《药物发现中的医学(Medicine in DrugDiscovery)》,6(2020)100023和Dahlman等人,《自然纳米技术(Nature Nanotechnol)》.9(8):648-655(2014)，所述文献的内容通过引用并入本文。有利地，本公开提供了用于基于多核苷酸的癌症疗法的不依赖于基于脂质体或病毒载体的核酸递送的组合物和方法。
在一些方面，这些组合物和方法至少部分地基于以下发现：3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段可以用于将治疗性多核苷酸高效地体内递送到癌组织。例如，如实例中所描述，在鼠模型中全身施用后，3E10介导多核苷酸体内递送到各种癌症，包含乳腺癌(实例1和2)、脑癌(实例7)、皮肤癌(实例16、18和21)、胰腺癌(实例17)和结肠癌(实例22)。
因此，一方面，本公开提供了一种通过向有需要的受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的方法，所述组合物包括在(i)治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。
另一方面，本公开提供了具有在(i)治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物的药物组合物。
在本文所描述的方法和组合物的一些实施例中，所述治疗性多核苷酸是或编码多核苷酸免疫刺激剂，例如，能够刺激模式识别受体(PRR)、环状-GMP-AMP-合酶(cGAS)或干扰素基因刺激因子(STING)的多核苷酸配体。在本文所描述的方法和组合物的一些实施例中，所述治疗性多核苷酸编码用于癌症疗法的蛋白质或肽，例如肿瘤抗原或促炎性细胞因子。在本文所描述的方法和组合物的一些实施例中，所述治疗性多核苷酸是或编码基因调节多核苷酸，例如siRNA、miRNA、saRNA、安塔够妙(antagomir)、反义寡核苷酸或诱骗寡核苷酸。在本文所描述的方法和组合物的一些实施例中，所述治疗性多核苷酸编码基因组编辑效应物，例如锌指核酸酶、转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)或包括Cas蛋白和向导RNA的CRISPR系统。在本文所描述的方法和组合物的一些实施例中，所述治疗性多核苷酸是或编码效应多核苷酸，例如适体或核酶。
有利地，3E10-PRR激动剂复合物介导细胞死亡的这种能力在本文所描述的用于治疗各种癌症的组合物和方法中得到利用。
因此，本公开的一方面提供了用于治疗有需要的受试者的癌症的方法。在一些实施例中，所述方法包含向所述受试者施用治疗有效量的组合物，所述组合物包括在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，所述癌症是所述受试者的中枢神经系统的癌症。在一些实施例中，所述施用是肠胃外施用，例如向所述受试者的外周施用。在一些实施例中，肠胃外施用是肌肉内施用、静脉内施用或皮下施用。在一些实施例中，所述施用是直接注射到所述CNS中。在一些实施例中，直接注射到所述CNS是通过鞘内施用(例如，腰椎鞘内施用或脑池鞘内施用)、脑室内施用或脑实质内施用进行的。在一些实施例中，能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体是多核苷酸RIG-I激动剂。
在一些实施例中，本文所描述的组合物和方法的有利性质至少部分地基于如下文所描述的发现：3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段容易穿过血脑屏障。例如，如实例6所描述和图13所展示，3E10-D31N在携带人髓母细胞瘤肿瘤的小鼠的CNS中累积并保留至少8天，在脑和脊髓两者中均如此。有利地，在本文所描述的组合物和方法中利用了3E10穿过血脑屏障的能力，以将多核苷酸PRR激动剂递送穿过BBB并进入CNS，用于治疗各种癌症。
因此，本公开的一方面提供了用于治疗有需要的受试者的中枢神经系统的癌症的方法。在一些实施例中，所述施用是肠胃外施用，例如向所述受试者的外周施用。在一些实施例中，肠胃外施用是肌肉内施用、静脉内施用或皮下施用。在一些实施例中，所述施用是直接注射到所述CNS中。在一些实施例中，直接注射到所述CNS是通过鞘内施用(例如，腰椎鞘内施用或脑池鞘内施用)、脑室内施用或脑实质内施用进行的。在一些实施例中，所述治疗性多核苷酸是能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体。在一些实施例中，能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体是多核苷酸RIG-I激动剂。
在一些实施例中，本文所描述的组合物和方法的有利性质至少部分地基于如下文所描述的发现：多核苷酸PRR激动剂和3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段的复合物在系统施用后显著降低了CNS癌症的肿瘤负荷。例如，如实例7所描述和图14所展示，并且特别是在图14D中，单剂量的GMABD31N/3pRNA，而不是PBS对照，在静脉内施用后显著降低了小鼠脑中人髓母细胞瘤的肿瘤负荷。有利地，在本文所描述的组合物和方法中利用了这些复合物在全身施用后降低CNS肿瘤负荷的能力，以提供对CNS癌症的相对简单和有效疗法。
因此，本公开的一方面提供了用于治疗有需要的受试者的中枢神经系统的癌症的方法。在一些实施例中，所述方法包含例如向所述受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物，所述组合物包括在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。外周意指向中枢神经系统以外的部位施用。因此，在一些实施例中，肠胃外施用是向中枢神经系统以外的部位的全身施用，例如肌内施用、静脉内施用或皮下施用。在一些实施例中，能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体是多核苷酸RIG-I激动剂。
在一些实施例中，本公开提供了一种用于如本文所描述通过将药物组合物直接注射到有需要的受试者的中枢神经系统中来治疗所述受试者的CNS的癌症的方法。因此，在一些实施例中，所述方法包含向所述受试者的所述CNS中注射治疗有效量的组合物，所述组合物包括在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体是多核苷酸RIG-I激动剂。在一些实施例中，直接注射到所述CNS是通过鞘内施用(例如，腰椎鞘内施用或脑池鞘内施用)、脑室内施用或脑实质内施用进行的。在一些实施例中，所述施用是直接注射到脑，包含其相关组织和腔中。在一些实施例中，所述施用是直接注射到脊柱，包含其相关组织和腔中。
在一些实施例中，本文所描述的组合物和方法的有利性质至少部分地基于如下文所描述的发现：多核苷酸PRR激动剂和3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段的复合物在系统施用后显著防止脑肿瘤向脊髓转移。例如，如实例7所描述和图14所展示，并且特别是在图14E中，单剂量的GMABD31N/3pRNA，而不是PBS对照，在静脉内施用后显著防止了人髓母细胞瘤在小鼠脑中的转移。有利地，在本文所描述的组合物和方法中利用了这些复合物在全身施用后防止或减少脑肿瘤的转移的能力，以提供对CNS癌症的相对简单和有效疗法。
因此，本公开的一方面提供了防止或减少有需要的受试者的中枢神经系统的癌症转移的方法。在一些实施例中，所述方法包含向所述受试者施用治疗有效量的组合物，所述组合物包括在(i)用于治疗癌症的治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，所述施用是肠胃外施用，例如向所述受试者的外周施用。在一些实施例中，肠胃外施用是肌肉内施用、静脉内施用或皮下施用。在一些实施例中，所述施用是直接注射到所述CNS中。在一些实施例中，直接注射到所述CNS是通过鞘内施用(例如，腰椎鞘内施用或脑池鞘内施用)、脑室内施用或脑实质内施用进行的。在一些实施例中，所述治疗性多核苷酸是能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体。在一些实施例中，能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体是多核苷酸RIG-I激动剂。
在一些实施例中，本文所描述的组合物和方法的有利性质至少部分地基于以下发现：使用3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与多核苷酸的更高的摩尔比导致多核苷酸免于RNA降解的更大保护。例如，如在实例6中所描述的和在图13A和13B中所展示的，尽管亲本3E10和3E10(D31N)变体抗体两者以2:1和20:1的摩尔比保护mRNA免于RNA酶A介导的RNA降解，但通过20:1的摩尔比提供的保护超过以2:1提供的保护。有利地，在本文所描述的组合物和方法中利用了以更高的3E10抗体或其变体或其抗原结合片段浓度提供的多核苷酸的增强的保护，以改善在体内递送多核苷酸的治疗性组合物的药代动力学特性。
因此，本公开的一方面提供了具有在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物的药物组合物，用于治疗CNS癌症。在一些实施例中，所述药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与多核苷酸配体的摩尔比为至少2:1。
在本文所描述的方法和组合物的一些实施例中，所述3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含(a)轻链可变区(VL)互补决定区(CDR)1，所述VL CDR1包括3E10-VL-CDR1(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；(b)VL CDR2，所述VL CDR2包括3E10-VL-CDR2(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；(c)VL CDR3，所述VL CDR3包括3E10-VL-CDR3(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；(d)重链可变区(VH)CDR1，所述VH CDR1包括3E10-VH-CDR1a(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；(e)VH CDR2，所述VH CDR2包括3E10-VH-CDR2(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；以及(f)VH CDR3，所述VH CDR3包括3E10-VH-CDR3(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列。
在本文所描述的方法和组合物的一些实施例中，所述3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含(a)轻链可变区(VL)互补决定区(CDR)1，所述VL CDR1包括相对于3E10-VL-CDR1(SEQ ID NO:XX)具有不超过两个氨基酸取代的氨基酸序列；(b)VL CDR2，所述VL CDR2包括相对于3E10-VL-CDR2(SEQ ID NO:XX)具有不超过两个氨基酸取代的氨基酸序列；(c)VL CDR3，所述VL CDR3包括相对于3E10-VL-CDR3(SEQ ID NO:XX)具有不超过两个氨基酸取代的氨基酸序列；(d)重链可变区(VH)CDR1，所述VH CDR1包括相对于3E10-VH-CDR1a(SEQID NO:XX)具有不超过两个氨基酸取代的氨基酸序列；(e)VH CDR2，所述VH CDR2包括相对于3E10-VH-CDR2(SEQ ID NO:XX)具有不超过两个氨基酸取代的氨基酸序列；以及(f)VHCDR3，所述VH CDR3包括相对于3E10-VH-CDR3(SEQ ID NO:XX)具有不超过两个氨基酸取代的氨基酸序列。
在本文所描述的方法和组合物的一些实施例中，所述3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含(a)轻链可变区(VL)互补决定区(CDR)1，所述VL CDR1包括3E10-VL-CDR1m(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；(b)VL CDR2，所述VL CDR2包括3E10-VL-CDR2m(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；(c)VL CDR3，所述VL CDR3包括3E10-VL-CDR3m(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；(d)重链可变区(VH)CDR1，所述VH CDR1包括3E10-VH-CDR1m(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；(e)VH CDR2，所述VH CDR2包括3E10-VH-CDR2m(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；以及(f)VH CDR3，所述VH CDR3包括3E10-VH-CDR3m(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列。
在本文所描述的方法和组合物的一些实施例中，所述3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段是双特异性抗体，所述双特异性抗体包含靶向所关注细胞类型、组织或器官(例如，癌组织或细胞)的结合序列。
附图说明
图1展示了亲本3E10单克隆抗体的氨基酸序列。
图2A、2B和2C展示了根据本公开的一些实施例的3E10单克隆抗体的D31N变体(图2A)、其它CDR变体(图2B)和另外设想的CDR变体(图2C)的氨基酸序列。
图3展示了根据本公开的各个实施例的3E10单克隆抗体的示例性电荷保守的CDR变体。
图4展示了根据本公开的各个实施例的3E10单克隆抗体的含有氨基酸取代、带电的保守的氨基酸取代和合理设计的氨基酸取代的组合的示例性CDR变体。
图5展示了人源化3E10重链可变区的实例的序列比对，其中CDR如所指示的加下划线。
图6展示了人源化3E10轻链可变区的实例的序列比对，其中CDR和推定核定位信号(NLS)如所指示的加下划线。
图7A、7B、7C、7D和7E共同展示了3E10单克隆抗体的人源化二scFv构建体的实例的序列比对。
图8A是示出在小鼠全身注射之前在室温下与增加剂量的3E10(0.25，0.5和1mg)混合持续15分钟的经荧光标记的siRNA在肿瘤中累积的柱状图。
图8B是示出在小鼠全身注射之前在室温下与1mg 3E10或0.1mg D31N变体3E10混合持续15分钟的荧光标记的siRNA在肿瘤中累积的柱状图。在注射后24小时分析所有肿瘤。
图9A、9B和9C共同示出了静脉内施用后3E10-D31N的体内肿瘤定位。图9A和9B是示出在注射后24小时由IVIS(珀金埃尔默公司)成像的对照(图9A)以及将3E10-D31N IV注射到同基因结肠肿瘤(CT26)(图9B)的分布的图像。图9C是定量IVIS图像中的荧光的柱状图。
图10A、10B、10C和10D共同示出了在与或不与3E10-D31N一起静脉内施用后ssDNA的体内肿瘤定位。图10A、10B和10C是示出在注射后24小时由IVIS(珀金埃尔默公司)成像的对照(图10A)以及IV注射裸单链DNA(ssDNA)(图10B)和3E10-D31N+ssDNA(图10C)给同基因结肠肿瘤(CT26)的分布的图像。图10D是定量IVIS图像中的荧光的柱状图。
图11是示出3E10介导的RIG-I的递送和刺激的柱状图。
图12A和12B是示出野生型(12A)或D31N 3E10(12B)+Poly(I:C)在黑色素瘤细胞活力中的影响的柱状图。
图13A和13B共同示出了在人髓母细胞瘤(DAYO)的小鼠模型中荧光标记的3E10-D31N的静脉内注射导致抗体在小鼠的CNS(包括脑和脊髓)中累积和滞留。图13A示出了施用后8天内的体内3E10-D31N荧光的IVIS成像。图13B示出了经处理的(空心圆)和未经处理的对照(实心圆)小鼠的荧光定量。
图13C和13D共同展示了cD31N/3p-hpRNA靶向直视髓母细胞瘤肿瘤并且抑制肿瘤生长。图13C示出了用媒剂对照(PBS)、3p-hpRNA、cD31N、cD31N/3p-hpRNA或替莫唑胺处理的携带表达萤光素酶的原位髓母细胞瘤肿瘤(DAOY)的小鼠中肿瘤生长的IVIS可视化，并且图13D示出了肿瘤生长的定量。每组n＝4的数据，其中通过斯图登氏t检验进行统计分析，以进行个体比较，同时标明p值。
图14A、14B、14C、14D和14E共同示出了在人髓母细胞瘤肿瘤的小鼠模型中，全身施用单剂量的RIG-I多核苷酸激动剂和3E10-D31N复合物降低了肿瘤负荷并防止了转移。图14A示出了静脉内施用PBS对照(顶行)、单独的3E10-D31N(中间行)或3E10-D31N和3pRNARIG-I激动剂的复合物(底行)后1天、3天、4天、8天和9天的DAYO细胞中荧光素酶表达的图像。图14B示出了静脉内施用PBS对照(顶行)或3E10-D31N和3pRNA RIG-I激动剂的复合物(底行)后14天的DAYO细胞中荧光素酶表达的图像。图14C示出了静脉内施用PBS对照(黑色)、单独的3E10-D31N(灰色)或3E10-D31N和3pRNA RIG-I激动剂的复合物(蓝色)后两周内髓母细胞瘤生长的定量。图14D示出了静脉内施用PBS对照(左图)或3E10-D31N和3pRNARIG-I激动剂的复合物(右图)后14天，小鼠脑中DAYO细胞中荧光素酶表达的图像。图14E示出了静脉内施用PBS对照(左图)或3E10-D31N和3pRNA RIG-I激动剂的复合物(右图)后14天，小鼠脊髓处DAYO细胞中荧光素酶表达的图像。
图15A和15B展示了3E10-scFv构建体的分子模型的静电表面电位渲染，从而揭示了推定核酸结合袋(NAB1)。图15A另外示出了由残基HC CDR1残基31处的氨基酸取代诱导的预测的结构和静电电位变化。图15B是3E10-scFv(Pymol)的分子建模的图解，其中NAB1氨基酸残基由点状圆点突出显示。
图15C展示了如通过在图15A和15B中所示出的分子建模所鉴定的推定核酸结合袋到3E10-scFv构建体的氨基酸序列上的映射。
图16A和16B示出了如实例9所描述的使用以20:1(图16A)和2:1(图16B)(3E10:mRNA)摩尔比制备的3E10与720核苷酸mRNA分子之间形成的复合物进行的mRNA保护测定的凝胶电泳。
图17示出了如实例10所描述的使用以1:1、2:1、5:1、10:1和100:1(3E10:mRNA)摩尔比制备的3E10与14kb mRNA分子之间形成的复合物进行的mRNA保护测定的凝胶电泳分析。
图18A、18B和18C展示了共同示出如在实例11中所描述的在暴露于PBS(对照)、单独的3p-hpRNA、单独的增加量的3E10-D31N(GMAB)和以增加的摩尔比(3E10:3p-hpRNA)制备的3E10-D31N/3p-hpRNA复合物之后THP-1单核细胞中1型IFN应答的3天时间过程的直方图。
图19A和19B展示了示出如在实例12中所描述的在暴露于PBS(对照)、单独的3p-hpRNA、单独的3E10-D31N(GMAB)和3E10-D31N/3p-hpRNA复合物之后，人脑肿瘤细胞的活力的直方图。
图20A和20B展示了示出如在实例13中所描述的在暴露于PBS(对照)、单独的3p-hpRNA、单独的3E10-D31N(GMAB)和3E10-D31N/3p-hpRNA复合物之后，人脑肿瘤细胞的细胞坏死的直方图。
图21A、21B、21C和21D展示了示出如在实例14中所描述的在暴露于PBS(对照)、单独的3p-hpRNA、单独的3E10-D31N(GMAB)和3E10-D31N/3p-hpRNA复合物之后，人(21A和21B)和鼠类(21C和21D)结直肠癌细胞的细胞坏死的直方图。
图22展示了示出如在实例15中所描述的在暴露于PBS(对照)、单独的3p-hpRNA、单独的3E10-D31N(GMAB)和3E10-D31N/3p-hpRNA复合物之后，人乳腺癌细胞的细胞坏死的直方图。
图23展示了示出如在实例16中所描述的在将B16黑色素瘤细胞暴露于PBS(对照)、单独的3E10-D31N(GMAB)、单独的3p-hpRNA、3E10-D31N/3p-hpRNA复合物或抗CTLA-4抗体之后，IL-10浓度的直方图。
图24展示了示出如在实例16中所描述的在将B16黑色素瘤细胞暴露于PBS(对照)、单独的3E10-D31N(GMAB)、单独的3p-hpRNA、3E10-D31N/3p-hpRNA复合物或抗CTLA-4之后，IL-6浓度的直方图。
图25A和25B示出了如在实例17中所描述的在静脉内施用PBS(左图)或3E10-D31N/3p-hpRNA复合物之后，在具有原位胰腺肿瘤的小鼠中，在癌组织中的荧光素酶报告基因的生物发光(图25A)和经标记的3E10-D31N的荧光(图25B)的体内图像。
图26A和26B示出了如在实例17中所描述的在静脉内施用PBS(左图)、单独的3E10-D31N(中图)或3E10-D31N/3p-hpRNA复合物(右图)之后，在切除的原位胰腺肿瘤中，在癌组织中的荧光素酶报告基因的生物发光(图26A)和经标记的3E10-D31N的荧光(图26B)。
图26C展示了如在实例17中所描述的在静脉内施用PBS(左图)或3E10-D31N/3p-hpRNA复合物之后，来自具有原位胰腺肿瘤的代表性小鼠的切除器官中的经标记的3E10-D31N的荧光。
图26D示出了如在实例17中所描述的在用PBS(对照；每组中的左图)、单独的3E10-D31N(GMAB)(每组中的中图)和3E10-D31N/3p-hpRNA复合物(每组中的右图)处理的队列中的来自小鼠的切除器官中的经标记的3E10-D31N的平均辐射效率(荧光)的直方图。
图26E示出了如在实例17中所描述的在用3E10-D31N/3p-hpRNA复合物处理的队列中的所有小鼠的切除器官中，癌组织中的荧光素酶报告基因的生物发光(左列)和经标记的3E10-D31N的荧光(右列)。
图27A、27B、27C、27D、27E、27F、27G、27H、27I、27J、27K、27L、27M和27N共同示出了如在实例18中所描述的在将鼠类黑色素瘤模型暴露于PBS(对照)、单独的3E10-D31N(GMAB)、单独的3p-hpRNA、3E10-D31N/3p-hpRNA复合物或抗CTLA-4抗体之后的细胞因子浓度和TIL肿瘤浸润。
图28展示了如在实例19中所描述的由3E10-D31N介导的3p-hpRNA的递送引发的I型IFN应答。
图29展示了如在实例20中所描述的由3E10-D31N介导的3p-hpRNA的递送引起的细胞死亡。
图30A、30B、30C、30D、30E、30F、30G、30H、30I、30J和30K共同示出了3E10-D31N/3p-hpRNA复合物的静脉内施用抑制黑色素瘤的小鼠模型中的肿瘤生长。图30A展示了如在实例21中所描述的在肿瘤移植后的第9天、第11天、第13天和第15天全身施用PBS(对照；●)、单独的3E10-D31N(GMAB；■)、单独的3p-hpRNA(▲)、3E10-D31N/3p-hpRNA复合物(▼)或抗CTLA-4抗体(◆)之后的鼠类模型中的平均黑色素瘤肿瘤体积。还示出了在肿瘤移植后的第9天、第11天、第13天和第15天全身施用PBS(对照；30B和30C)、单独的3E10-D31N(GMAB；30D和30E)、单独的3p-hpRNA(30F和30G)、3E10-D31N/3p-hpRNA复合物(30H和30I)或抗CTLA-4抗体(30J和30K)之后，在移植后的第23天，每个队列五只小鼠中的每只小鼠的肿瘤体积(mm3)和队列中的代表性肿瘤的图像。
图31A、31B、31C、31D、31E、31F、31G、31H、31I、31J、31K、31L和31M共同示出了3E10-D31N/3p-hpRNA复合物的静脉内施用与抗PD-1抗体疗法协同抑制结肠癌的小鼠模型中的肿瘤生长。图31A展示了如在实例22中所描述的在癌细胞注射后的第8天、第11天和第14天全身施用PBS(对照；●)、3E10-D31N/3p-hpRNA复合物(▼)、3E10-D31N/3p-hpRNA复合物+抗PD-1(◆)或单独的抗PD-1(○)之后的鼠类模型中的平均结肠肿瘤体积。还示出了在癌细胞注射后的第8天、第11天和第14天全身施用PBS(对照；31B和31C)、单独的3E10-D31N(GMAB；31D和31E)、单独的3p-hpRNA(31F和31G)、3E10-D31N/3p-hpRNA复合物(31H和31I)、抗PD-1抗体(31J和31K)或3E10-D31N/3p-hpRNA复合物+抗PD-1抗体(31L和31M)之后，在注射后的第21天，每个队列五只小鼠中的每只小鼠的肿瘤体积(mm3)和队列中的代表性肿瘤的图像。
图32A、32B、32C、32D、32E、32F、32G和32H共同示出了3E10(D31N)/3p-hpRNA复合物的静脉内施用与抗PD-1抗体疗法协同抑制乳腺癌的小鼠模型中的肿瘤生长。图32A展示了如在实例32中所描述的在癌细胞注射后的第8天、第11天和第14天全身施用PBS(对照；●)、3E10(D31N)/3p-hpRNA复合物(▼)、3E10(D31N)/3p-hpRNA复合物+抗PD-1(◆)或单独的抗PD-1(○)之后的鼠类模型中的平均乳腺肿瘤体积。还示出了在癌细胞注射后的第8天、第11天和第14天全身施用PBS(对照；32B)、单独的3E10(D31N)(GMAB；32C)、单独的3p-hpRNA(32D)、3E10(D31N)/3p-hpRNA复合物(32E)、抗PD-1抗体(32F)或3E10(D31N)/3p-hpRNA复合物+抗PD-1抗体(32G)之后，每个队列五只小鼠中的每只小鼠的肿瘤体积(mm3)。图32H展示了3E10(D31N)/3p-hpRNA复合物的静脉内施用与抗PD-1抗体疗法协同产生免疫记忆。
图33A、33B、33C、33D、33E和33F共同示出了3E10(D31N)/3p-hpRNA复合物的静脉内施用减少了髓母细胞瘤小鼠模型中的肿瘤体积。图33A-33E示出了静脉内施用PBS对照(33A)、替莫唑胺(33B)、单独的3E10-D31N(GMAB；33C)、单独的3p-hpRNA(33D)和3E10-D31N/3p-hpRNA复合物(33E)后10天，DAYO细胞中荧光素酶表达的代表性图像。图33F示出了如实例7中所描述的每个队列中小鼠的平均归一化肿瘤体积。
图34示出了在施用89Zr标记的同种型对照、3E10-WT和3E10-D31N抗体之后的细胞质、膜、核蛋白和gDNA级分的直方图，如在实例24中所描述的。
图35A、35B、35C、35D、35E共同展示了嵌合3E10-D31N抗体(cD31N)与RNA非共价结合并且分布到体内肿瘤中。图35A示出了通过ELISA对cD31N抗体和相关嵌合3E10抗体(cWT；不具有D31N取代)与单链DNA的结合的定量。图35B示出了通过ELISA对cD31N与单链RNA的结合的定量，以cWT作为比较。图35C展示了cD31N对89个核苷酸的3p-hpRNA的亲和力作为增加的RNA浓度的函数的生物层干涉测量法(BLI)测量。解离常数(KD)和相关参数的导出值在附表中指明。图35D示出了与单独的cD31N相比，使用动态光散射测量cD31N/3p-hpRNA抗体RNA复合物(3p-ARC)的流体动力学半径。数据是n＝16的平均值±s.e.m。P值由双尾不成对t检验确定。图35E示出了(左)与同种型对照相比，荧光标记的cD31N渗透到U2OS人骨肉瘤细胞中，以及(右)当细胞用与cD31N复合的3p-hpRNA处理时，与和同种型对照一起温育的经标记的3p-hpRNA相比，荧光标记的3p-hpRNA递送到U2OS细胞中。图35F示出了在施用之后24小时在携带EMT6胁腹肿瘤的小鼠(n＝1)中IV施用的荧光标记的cD31N的肿瘤和正常组织分布的IVIS可视化。图35G示出了在施用之后24小时，相对于单独作为对照的siRNA，在携带EMT6胁腹肿瘤的小鼠(n＝1)中，IV施用的与cD31N复合的siGLO(荧光标记的siRNA)的肿瘤和正常组织分布的IVIS可视化。
图36A、36B、36C、36D和36E共同展示了嵌合3E10-D31N抗体(cD31N)/3p-hpRNA抗体/RNA复合物在细胞中诱导RIG-I依赖性干扰素应答，并且在黑色素瘤小鼠模型中介导肿瘤生长抑制。图36A示出了对两者均含有IFN-应答荧光素酶报告基因构建体的THP-1单核细胞或THP-1RIG-I KO单核细胞中1型IFN诱导的定量。将细胞用媒剂对照(PBS)、3p-hpRNA、cD31N或cD31N/3p-hpRNA处理。数据是n＝4的平均值±s.e.m，其中通过ANOVA进行统计分析，同时标明p值。图36B展示了用于肿瘤生长研究的在携带B16.F10.OVA胁腹肿瘤的具有免疫能力的C57Bl/6小鼠中通过眼眶后IV注射进行的体内给药方案的示意性图示。图36C示出了用媒剂对照(PBS)、cD31N、3p-hpRNA、cD31N/3p-hpRNA或抗CTLA-4处理的携带B16.F10.OVA胁腹肿瘤的小鼠中的肿瘤生长曲线。每组n＝5-6的数据，其中通过斯图登氏t检验进行统计分析，以进行个体比较，同时标明p值。图36D示出了在实验过程中经处理的携带B16.F10.OVA胁腹肿瘤的小鼠的体重。图36E展示了携带B16.F10.OVA胁腹肿瘤的小鼠的处理后的终末骨髓细胞计数。每组n＝5-6的数据，其中通过ANOVA进行统计分析，同时标明p值。
图37A和37B共同展示了cD31N/3p-hpRNA抗体/RNA复合物诱导黑色素瘤胁腹肿瘤中的肿瘤浸润性白细胞。在施用两个剂量的指定的处理之后24小时(在植入后第10天和第13天)，从携带B16.F10.OVA肿瘤的经处理的C57Bl/6小鼠采集的肿瘤(图37A)和脾对照(图37B)中CD45+、CD8+、NK、NKT和CD19+细胞的百分比。数据是n＝5只经处理的小鼠的平均值±s.e.m，其中通过ANOVA进行统计分析，同时标明p值。
图38A、38B、38C、38D、38E、38F和38G共同示出了cD31N/3p-hpRNA复合物穿透原位胰腺肿瘤，提高存活率，诱导肿瘤坏死，并且促进免疫原性。图38A展示了在携带原位KPC肿瘤的小鼠中通过眼眶后IV注射进行的体内给药方案的示意性图示。图38B示出了在三个剂量的3p-hpRNA/cD31N的最后一个剂量后一天，通过流式分选，与从KPC原位肿瘤中分离的CD45+细胞相比，对将3p-hpRNA递送到肿瘤细胞的RT-PCR定量。每组n＝5的数据，其中通过斯图登氏t检验进行统计分析，以进行个体比较，同时标明p值。图38C示出了对照或cD31N/3p-hpRNA处理的小鼠的存活率曲线。来自n＝6-7的数据，其中通过对数秩(Mantel–Cox)检验进行统计分析，同时表明p值。图38D展示了对肿瘤细胞坏死的组织学分析的定量。n＝4的数据，其中通过斯图登氏t检验进行统计分析，以进行个体比较，同时标明p值。图38E示出了对照和cD31N/3p-hpRNA处理的小鼠的肿瘤切片的H&E染色图像，以两种放大倍率展示了cD31N/3p-hpRNA处理的小鼠相对于对照的肿瘤细胞坏死。图38F示出了从肿瘤中分离并且通过流式细胞术定量的CD4+细胞的百分比。图38G示出了从肿瘤中分离并且通过流式细胞术定量的CD8+细胞的百分比。
图39A和39B共同展示了cD31N结合多个种类的RNA。生物层干涉测量法(BLI)测量cD31N对(图39A)GFP-mRNA和(图39B)靶向KRAS的siRNA的亲和力。解离常数(KD)和相关参数的导出值在对应表格中指明。
图40展示了cD31N细胞穿透是ENT2依赖性的。在与cD31N一起温育之前，用双嘧达莫或NBMPR(6-S-[(4-硝基苯基)甲基]-6-硫代肌苷)预处理U2OS人骨肉瘤细胞，持续30分钟。用cD31N处理30分钟后，通过相对于细胞核的DAPI(4',6-双脒基-2-苯基吲哚)染色归一化的免疫荧光来对摄取进行定量。通过斯图登氏t检验进行统计分析，以进行个体比较，同时标明p值。
图41A和41B共同展示了ENT2在多种肿瘤模型中高度表达。对由鼠组织(C57Bl/6)和所示肿瘤细胞系制备的细胞裂解物中的ENT2蛋白表达的蛋白质印迹分析(图41A)和定量(图41B)。
具体实施方式
有利地，开发了用于将治疗性多核苷酸靶向体内各种癌症组织并且促进将这些治疗性多核苷酸递送到病变细胞中的方法和组合物，所述病变细胞例如在其细胞表面展示高水平ENT2的癌细胞。进一步，这些方法保护治疗性多核苷酸免于细胞外和细胞内核酸酶的降解，而不阻断一旦在细胞中内化后对多核苷酸的接近。因此，本公开提供了用于将治疗性多核苷酸递送穿过血脑屏障并到达癌组织的组合物和方法。在一些实施例中，所述方法和组合物特别适用于癌症和中枢神经系统的癌症的治疗。例如，描述了包括在(i)治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物的组合物，以及用于使用此类组合物治疗癌症的方法。
在一些实施例中，本文所描述的组合物和方法的有利性质至少部分地基于如下文所描述的发现：在全身施用后，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段在体内定位到癌组织。例如，如实例1和2所描述以及图8和9所展示，静脉内施用后，3E10和3E10-D31N变体抗体定位到小鼠EMT6胁腹肿瘤。有利地，在本文所描述的组合物和方法中利用了对癌组织的这种嗜性，以靶向此类组织来递送治疗性多核苷酸，从而治疗各种癌症，例如显示ENT2的癌症。
在一些实施例中，本文所描述的组合物和方法的有利性质至少部分地基于如下文所描述的发现：3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段在全身施用后将多核苷酸体内递送到癌组织，并且通过非共价相互作用促进多核苷酸转运到癌细胞中。在一些其它实施例中，本文所描述的组合物和方法至少部分地基于如下文所描述的发现：3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段将多核苷酸递送穿过血脑屏障并且促进递送到CNS中的肿瘤细胞。例如，如实例3所描述和图10所展示，静脉内施用后，3E10和3E10-D31N变体抗体定位到小鼠的胁腹同基因结肠肿瘤(CT26)。有利地，在本文所描述的组合物和方法中利用了这种在体内将多核苷酸递送和转运到癌组织中的能力，以将治疗性多核苷酸递送到各种癌症，例如显示ENT2的癌症中。
在一些实施例中，本文所描述的组合物和方法的有利性质至少部分地基于如下文所描述的发现：由3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段递送到肿瘤细胞中的治疗性多核苷酸保留了它们在癌细胞中介导细胞死亡的能力。例如，如实例5所描述和图12所展示，3E10和3E10-D31N变体抗体介导的poly(I:C)向黑色素瘤细胞的递送在24小时内使得细胞活力降低。类似地，如实例11所描述和图18所展示，3E10-D31N介导的RIG-I刺激配体向源自急性单核细胞白血病的单核细胞的递送在至少三天内有效地诱导了免疫疗法的I型IFN应答特性，表明治疗性多核苷酸在整合到细胞中之后随时间推移从3E10载剂中释放。有利地，在本文所描述的用于治疗各种癌症的组合物和方法中利用了这种将治疗性多核苷酸递送和整合到癌细胞中，同时仍使多核苷酸可用于在细胞内发挥功能的能力。
在一些实施例中，本文所描述的组合物和方法的有利特性至少部分地基于如下文所描述的发现：3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段促进将治疗性多核苷酸递送到肿瘤细胞中，并且所递送的治疗性多核苷酸保留其在癌细胞中介导细胞死亡的能力。例如，如实例12-15所描述和图19-22所展示，将源自脑肿瘤、结直肠癌和乳腺癌的细胞系暴露于在3E10-D31N抗体与RIG-I刺激配体之间形成的复合物，导致所有肿瘤类型中显著的细胞死亡。有利地，在本文所描述的用于治疗各种癌症的组合物和方法中利用了通过用此类复合物进行治疗而引起癌细胞死亡的能力。
在一些实施例中，本文所描述的组合物和方法的有利性质至少部分地基于如下文所描述的发现：3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段和治疗性多核苷酸的复合物在系统施用后显著降低了肿瘤负荷。例如，如实例7所描述和图14所展示，并且特别是在图14D中，单剂量的GMABD31N/3pRNA，而不是PBS对照，在静脉内施用后显著降低了小鼠脑中人髓母细胞瘤的肿瘤负荷。有利地，在本文所描述的用于治疗各种癌症的组合物和方法中利用了这些复合物在全身施用后降低肿瘤负荷的能力。
因此，本公开的一方面提供了用于治疗有需要的受试者的癌症，例如显示ENT2的癌症的方法。在一些实施例中，所述方法包含向所述受试者施用治疗有效量的组合物，所述组合物包括在(i)用于治疗癌症的治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。
在一些实施例中，本文所描述的组合物和方法的有利性质至少部分地基于如下文所描述的发现：3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段容易穿过血脑屏障。例如，如实例6所描述和图13所展示，3E10-D31N在携带人髓母细胞瘤肿瘤的小鼠的中枢神经系统(CNS)中累积并保留至少8天，在脑和脊髓两者中均如此。有利地，在本文所描述的组合物和方法中利用了3E10穿过血脑屏障的能力，以将治疗性多核苷酸递送穿过血脑屏障(BBB)并进入CNS，用于治疗各种癌症。
因此，本公开的一方面提供了用于治疗有需要的受试者的中枢神经系统的癌症，例如显示ENT2的癌症的方法。
定义。
在本公开中使用的术语仅用于描述特定实施例的目的，并不旨在限制本发明。如在本发明的说明书和所附权利要求中所使用的，单数形式“一个/一种(a/an)”和“所述(the)”旨在同样包含复数形式，除非上下文明确指示。还应理解，如本文所使用的，术语“和/或”指代并且涵盖相关列举项中的一个或多个项的任何和所有可能的组合。除非上下文另有要求，否则应进一步理解，术语“包含”和/或“包括”或其任何变体当在本说明书中使用时指定所陈述的特征、整数、步骤、操作、元素和/或组分的存在，但不排除存在或添加一种或多种其它特征、整数、步骤、操作、元素、组分和/或其组。此外，在具体实施方式和/或权利要求书中使用了术语“包含(including/include)”、“具有(having/has/with)”或其变体的情况下，此类术语旨在以类似于术语“包括”的方式是包含性的。
除非本文另有说明，否则本文对数值范围的引用仅旨在用作分别指代落入所述范围内的每个单独值的简写方法，并且每个单独值如同在本文被单独引用一样被并入本说明书中。
术语“约”的使用旨在描述在大约+/-10％的范围内高于或低于所陈述值的值。
抗体和其变体
本文中的“抗原结合结构域”或“ABD”意指一组六个互补决定区(CDR)在作为多肽序列的一部分或序列存在时如本文所讨论的特异性地结合靶抗原。因此，“核酸结合结构域”结合如本文所概述的核酸抗原。如本领域已知的，这些CDR通常作为第一组可变重CDR(vhCDR或VHCDR)和第二组可变轻CDR(vlCDR或VLCDR)存在，其各自包括三个CDR：重链的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3和轻的vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。CDR分别存在于可变重结构域和可变轻结构域中并且一起形成Fv区。因此，在一些情况下，抗原结合结构域的六个CDR源自可变重结构域和可变轻结构域。在“Fab”格式中，一组6个CDR源自两个不同的多肽序列、可变重结构域(vh或VH；含有vhCDR1、vhCDR2和vhCDR3)和可变轻结构域(vl或VL；含有vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3)，其中vh结构域的C末端与重链的CH1结构域的N末端连接并且vl结构域的C末端与恒定轻结构域的N末端连接(并且因此形成轻链)。在scFv形式中，vh结构域和vl结构域通常通过使用如本文概述的接头(例如，“scFv接头”)二价连接到单个多肽序列中，这可以是(从N末端开始)vh-接头-vl或vl-接头-vh，通常优选的是前者(包含各侧上的任选结构域接头，这取决于所使用的形式)。通常，scFv结构域的C末端与第二单体中的铰链的N末端连接。
对于本公开所讨论的涉及抗体的所有位置，除非另外指出，否则氨基酸位置编号是根据EU索引。EU索引或如Kabat或EU编号方案中的EU索引是指EU抗体的编号。Kabat等人收集了重链和轻链的可变区的多个一级序列。基于序列的保守度，其将各个一级序列分类成CDR和框架并且做出其列表。参见《免疫学上关注的序列(SEQUENCES OF IMMUNOLOGICAL INTEREST)》,第5版,NIH出版号91-3242,E.A.Kabat等人；Edelman等人,1969,《美国国家科学院院刊(Proc Natl Acad Sci USA)》63:78-85，所述文献的内容通过引用并入。修饰可以是添加、缺失或取代。
如本文所使用的，“靶抗原”意指通过包括给定抗体的可变区的抗原结合结构域来特异性地结合的分子。如下文所讨论的，在此情况下，靶抗原是核酸。
如下文所描述的，在一些实施例中，亲本多肽例如Fc亲本多肽是人野生型序列，如来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重恒定结构域或Fc区，但是具有变体的人序列还可以用作“亲本多肽”，例如可以包含US公开2006/0134105的IgG1/2杂交体。本文的蛋白变体序列将优选地与亲本蛋白序列具有至少约75％同一性，或与亲本蛋白序列具有至少约80％同一性，并且最优选地至少约90％同一性，更优选地至少约95％、或至少约98％或至少约99％序列同一性。在一些实施例中，本文的蛋白变体序列与亲本蛋白序列具有至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少99.5％序列同一性。因此，如本文所使用的，“抗体变体”或“变体抗体”意指由于至少一个氨基酸修饰而与亲本抗体不同的抗体，如本文所使用的，“IgG变体”或“变体IgG”意指由于至少一个氨基酸修饰而与亲本IgG(再次，在许多情况下，来自人IgG序列)不同的抗体，并且如本文所使用的，“免疫球蛋白变体”或“变体免疫球蛋白”意指由于至少一个氨基酸修饰而与亲本免疫球蛋白序列不同的免疫球蛋白序列。如本文所使用的，“Fc变体”或“变体Fc”意指包括如与人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的Fc结构域相比，在Fc结构域中的氨基酸修饰的蛋白质。
如本文所使用的，“同种型”意指免疫球蛋白的由其恒定区的化学和抗原特性定义的任何亚类。应理解，治疗性抗体还可以包括同种型和/或亚类的杂交体。
如本文所使用的，“Fab”或“Fab区”意指包括通常在两个不同的多肽链上的VH、CH1、VL和CL免疫球蛋白结构域的多肽(例如，VH-CH1在一条链上并且VL-CL在另一条链上)。Fab可以指分离情况下的这个区或本公开的抗体的上下文中的这个区。在Fab的上下文中，除了CH1和CL结构域之外，Fab还包括Fv区。
如本文所使用的，“Fv”或“Fv片段”意指包括ABD的VL和VH结构域的多肽。Fv区可以格式化为Fab(如上文所讨论的，通常是还包含如上文所概述的恒定区的两种不同的多肽)和scFv两者，其中vl和vh结构域组合(通常是与如本文所讨论的连接头组合)以形成scFv。
本文中的“单链Fv”或“scFv”意指通常使用如本文所讨论的scFv接头来与可变轻结构域共价连接以形成scFv或scFv结构域的可变重结构域。scFv结构域可以从N末端至C末端处于任一朝向(vh-接头-vl或vl-接头-vh)。在序列表和附图中所描绘的序列中，vh和vl结构域的顺序以名称指示，例如，H.X_L.Y意指N末端至C末端为vh-接头-vl，并且L.Y_H.X为vl-接头-vh。
如本文所使用的，“Fc”或“Fc区”或“Fc结构域”意指包括IgG分子的CH2-CH3结构域并且在一些情况下包含铰链的多肽。在对人IgG1进行EU编号时，CH2-CH3结构域包括氨基酸231至447，并且铰链为216至230。因此，“Fc结构域”的定义包含氨基酸231-447(CH2-CH3)或216-447(铰链-CH2-CH3)或其片段。在此上下文中，“Fc片段”可以从N末端和C末端中的任一者或两者含有较少氨基酸但仍保持能够与另一个Fc结构域或Fc片段形成二聚体，如可以使用通常基于大小的标准方法(例如，非变性色谱法、大小排阻色谱法等)检测到的。人IgG Fc结构域特别用于本公开，并且可以是来自人IgG1、IgG2或IgG4的Fc结构域。
如与亲本Fc结构域相比，“变体Fc结构域”包含氨基酸修饰。因此，“变体人IgG1 Fc结构域”是如与人IgG1 Fc结构域相比含有氨基酸修饰(通常是氨基酸取代，但是在消融变体的情况下，包含氨基酸缺失)的变体Fc结构域。通常，变体Fc结构域与对应的亲本人IgGFc结构域具有至少约80％、约85％、约90％、约95％、约97％、约98％或约99％同一性(使用下文所讨论的同一性算法，其中一个实施例利用如本领域已知的BLAST算法，使用默认参数)。可替代地，与亲本Fc结构域相比，变体Fc结构域可以具有1至约20个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个或20个)氨基酸修饰。另外，如本文所讨论的，本文中的变体Fc结构域仍然保持与另一个Fc结构域形成二聚体的能力，如使用本文所描述已知技术如非变性凝胶电泳所测量的。
本文中的“重链恒定区”意指抗体(或其片段)的CH1-铰链-CH2-CH3部分，不包括可变重结构域；在人IgG1的EU编号中，这是氨基酸118-447。本文中的“重链恒定区片段”意指从N末端和C末端中的任一者或两者含有较少氨基酸但仍保持能够与另一个重链恒定区形成二聚体的重链恒定区。
如本文所使用的，“可变区”或“可变结构域”意指包括基本上由分别构成κ、λ和重链免疫球蛋白基因基因座的任何Vκ、Vλ和/或VH基因编码的一个或多个Ig结构域并且含有赋予抗原特异性的CDR的免疫球蛋白的区。因此，“可变重结构域”与“可变轻结构域”配对以形成抗原结合结构域(“ABD”)。另外，每个可变结构域包括从氨基末端至羧基末端按以下顺序布置的三个高变区(“互补决定区”、“CDR”)(可变重结构域的vhCDR1、vhCDR2和vhCDR3以及可变轻结构域的vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3)和四个框架区(FR)：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。
如本文所使用的，“IgG亚类修饰”或“同种型修饰”意指将一个IgG同种型的一个氨基酸转换为不同的比对的IgG同种型中的对应氨基酸的氨基酸修饰。例如，因为IgG1包括酪氨酸并且IgG2包括EU位置296处的苯基丙氨酸，因此IgG2的F296Y取代被认为是IgG亚类修饰。
如本文所使用的，“非天然发生修饰”意指不是同种型的氨基酸修饰。例如，因为人IgG均不包括位置434处的丝氨酸，因此IgG1、IgG2、IgG3或IgG4(或其杂交体)的取代434S被视为非天然发生修饰。
本公开的抗体通常是分离的或重组的。在用于描述本文所公开的各种多肽时，“分离的”意指已经从表达所述多肽的细胞或细胞培养物中鉴定并且分离和/或回收的多肽。通常，分离的多肽将通过至少一个纯化步骤来制备。“分离的抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其它抗体的抗体。“重组”意指在外源性宿主细胞中使用重组核酸技术产生抗体，并且也可以分离抗体。
如本文所使用的，术语“细胞穿透抗体”是指被转运到活的哺乳动物细胞的细胞质和/或细胞核中的免疫球蛋白、其片段、变体或基于其的融合蛋白。“细胞穿透抗DNA抗体”特异性地结合DNA(例如，单链和/或双链DNA)。在一些实施例中，抗体在不借助于载剂或缀合物的情况下被转运到细胞的细胞质中。在其它实施例中，抗体与细胞穿透部分，如细胞穿透肽缀合。在一些实施例中，细胞穿透抗体在使用或不使用载剂或缀合物的情况下转运在细胞核中。
在一些实施例中，本公开提供了依赖于使用将自组装形成异源二聚体Fc结构域和异源二聚体抗体的两个不同的重链变体Fc序列的双特异性(异源二聚体)抗体。因此，在一些实施例中，本公开提供了与超过一种抗原或配体结合的异源二聚体抗体，例如，以允许与治疗性多核苷酸和存在于所关注的细胞或组织表面上的抗原如癌症抗原的双特异性结合。
源二聚体抗体构建体是基于抗体的重链的两个Fc结构域的自组装性，例如组装成“二聚体”的两个“单体”。通过更改每个单体的氨基酸序列来形成异源二聚体抗体，如下文中更加充分地讨论的。因此，在一些实施例中，本公开包含用于治疗癌症的异源二聚体3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段。在一些实施例中，这些异源二聚体抗体依赖于恒定区中的在每条链上不同的氨基酸变体促进异源二聚体的形成和/或允许相比于同源二聚体更容易地纯化异源二聚体。
因此，在一些实施例中，本公开提供了双特异性抗体。抗体技术中正存在的一个问题是期望“双特异性”抗体同时与两种不同抗原结合，通常由此允许不同抗原接近且从而产生新功能和新疗法。通常，这些抗体是通过将每条重链和轻链的基因纳入宿主细胞中来产生。这通常导致期望的异源二聚体(A-B)以及两个同源二聚体(A-A和B-B(不包含轻链异源二聚体问题))形成。然而，形成双特异性抗体的主要阻碍是难以纯化异源二聚体抗体远离同源二聚体抗体和/或相比于同源二聚体的形成偏置异源二聚体的形成。
存在可以用于生成本发明的异源二聚体的多种机制。另外，如本领域的技术人员将了解的，这些机制可以组合以确保高异源二聚体化。因此，导致异源二聚体产生的氨基酸变体被称为“异源二聚体化变体”。如下文所讨论的，异源二聚化变体可以包含空间变体(例如，下文所描述“旋钮与孔(knobs and holes)”或“偏斜”变体和下文所描述“电荷对”)以及“pI变体”，这允许纯化同源二聚体远离异源二聚体。如在，通过引用以其整体在此并入的WO2014/145806中通常描述的，并且具体如下文所讨论的“异源二聚体化变体”，异源二聚体化的有用机制包含“隆凸与孔”(“KIH”；有时在本文中被称为“偏斜”变体(参见WO2014/145806中的讨论)、如WO2014/145806中所描述的“静电转向”或“电荷对”、如WO2014/145806中所描述的pI变体以及如WO2014/145806以及下文中所概述的一般另外的Fc变体)。
若干基本机制可能使得异源二聚体抗体的纯化变得容易，例如，一种策略使用pI变体，使得每个单体具有不同pI，从而允许等电纯化A-A、A-B和B-B二聚体蛋白。可替代地，一些支架格式如“三重F”格式”也允许基于大小进行分离。还可能相比于同源二聚体“偏斜”异源二聚体的形成。因此，空间异源二聚体化变体与pI变体或电荷对变体的组合特别用于本发明。
本文所描述的双特异性抗体具有两个不同的抗原结合结构域(ABD)，所述两个不同的ABD与呈二价双特异性格式或三价双特异性格式的两个不同的靶抗原(“靶对”)结合。在本公开中，双特异性异源二聚体抗体在一侧上具有含有来自3E10抗体或其变体或其抗原结合片段的CDR的与如本文所描述的治疗性多核苷酸结合的第一结合结构域，并且在另一侧上具有与第二抗原结合的第二结合结构域，所述第二抗原如细胞表面抗原(例如，肿瘤抗原)或细胞内部的效应抗原，如检查点蛋白/复合物。
在一些实施例中，本文所提供的双特异性抗体具有两个不同的抗原结合结构域(ABD)，所述两个不同的ABD与例如呈二价双特异性格式或三价双特异性格式的两个不同的靶抗原(“靶对”)结合。在本公开中，双特异性异源二聚体抗体在一侧上通过来自3E10抗体或其变体的CDR序列结合多核苷酸PRR激动剂，并且在另一侧上结合选自EGF、Ras、Myc、HER2/Neu、p53、CD19、CD20和PSMA的第二抗原。因此，在一些实施例中，本公开提供了一种双特异性抗体，其通过来自3E10抗体或其变体的CDR序列结合多核苷酸PRR激动剂以及EGF。
在一些实施例中，本公开提供了一种双特异性抗体，其通过来自3E10抗体或其变体的CDR序列结合多核苷酸PRR激动剂以及Ras。
在一些实施例中，本公开提供了一种双特异性抗体，其通过来自3E10抗体或其变体的CDR序列结合多核苷酸PRR激动剂以及Myc。
在一些实施例中，本公开提供了一种双特异性抗体，其通过来自3E10抗体或其变体的CDR序列结合多核苷酸PRR激动剂以及HER2/Neu。
在一些实施例中，本公开提供了一种双特异性抗体，其通过来自3E10抗体或其变体的CDR序列结合多核苷酸PRR激动剂以及p53。
在一些实施例中，本公开提供了一种双特异性抗体，其通过来自3E10抗体或其变体的CDR序列结合多核苷酸PRR激动剂以及CD19。
在一些实施例中，本公开提供了一种双特异性抗体，其通过来自3E10抗体或其变体的CDR序列结合多核苷酸PRR激动剂以及CD20。
在一些实施例中，本公开提供了一种双特异性抗体，其通过来自3E10抗体或其变体的CDR序列结合多核苷酸PRR激动剂以及PSMA。
双特异性抗体和其它结合蛋白具有来自3E10的第一重链和第一轻链以及来自特异性地结合第二靶标的单克隆抗体的第二重链和第二轻链，其在Weisbart等人,《分子癌症治疗(Mol.Cancer Ther)》,11(10):2169-73(2012)，和Weisbart等人,《国际肿瘤学杂志》,25:1113-8(2004)，以及美国专利申请第2013/0266570号中有所讨论，所述文献其以全文引用的方式具体并入。在一些实施例中，第二靶标对靶细胞类型、组织、器官等具有特异性。因此，第二重链和第二轻链可以充当靶向复合物至靶细胞类型、组织、器官，例如癌组织的靶向部分。在一些实施例中，第二重链和第二轻链靶向细胞类型、组织、器官等内部的效应抗原，例如癌症免疫疗法靶向的细胞周期检查点蛋白。
蛋白质、多肽和变体
本文中的“多核苷酸PRR激动剂”意指被模式识别受体识别并且能够刺激模式识别受体的多核苷酸。模式识别受体的非限制性实例包含Toll样受体(TLR)、C型凝集素受体(CLR)、RIG-Ⅰ样受体(RLR)、核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)样受体(NLR)和胞质DNA传感器(CDS)。关于模式识别受体以及其针对各种癌症的免疫疗法的综述，参见例如Bai L.等人,“用于癌症免疫疗法的基于模式识别受体的新靶点(Promising targets based onpattern recognition receptors for cancer immunotherapy)”,《药理学研究(Pharmacological Research)》,159(2020)105017，所述文献的内容出于所有目的通过引用并入本文。
本文中的“修饰”意指多肽序列中的氨基酸取代、插入和/或缺失。
如本文所使用的，“变体蛋白”或“蛋白变体”或“变体”意指由于至少一个氨基酸修饰而与亲本蛋白质不同的蛋白质。与亲本蛋白相比，蛋白变体具有至少一个氨基酸修饰，但并没有多得使得变体蛋白使用如下文所描述的比对程序将不与亲本蛋白质比对。通常，使用下文所描述的比对程序，如BLAST，变体蛋白(本文所概述的变体Fc结构域等)与亲本蛋白至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少99.5％相同。
两个类似序列之间的序列同一性(例如，抗体可变结构域)可以通过如以下的算法等算法测量：如Smith,T.F.和Waterman,M.S.(1981)“生物序列的比较(Comparison OfBiosequences)”,《应用数学进展(Adv.Appl.Math.)》2:482[局部同源算法]；Needleman,S.B.和Wunsch,CD.(1970)“可适用于搜索两种蛋白质的氨基酸序列中的类似性的一般方法(A General Method Applicable To The Search For Similarities In The Amino AcidSequence Of Two Proteins)”,《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》,48:443[同源比对算法]，Pearson,W.R.和Lipman,D.J.(1988)“用于生物序列比较的改进的工具(ImprovedTools For Biological Sequence Comparison)”,《国家科学院院刊》(美国)85:2444[相似性搜索方法]；或Altschul,S.F.等人,(1990)“基本局部比对搜索工具(Basic LocalAlignment Search Tool)”，Biochem.J《分子生物学杂志》215:403-10,“BLAST”算法，请参见URL为blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi的网页。在使用任何上述算法时，使用默认参数(针对窗口长度、空位罚分等)。除非另有说明，否则使用BLAST算法，使用默认参数来确定序列同一性
受试者和癌症治疗
如本文所使用的，术语“受试者”意指作为施用靶标的任何个体。受试者可以是脊椎动物，例如哺乳动物。因此，受试者可以是人。所述术语不指示特定的年龄或性别。
如本文所使用的，术语“药物有效量”意指所使用的组合物的量是足以改善疾病或病症的一种或多种原因或症状的量。此类改善仅需要减少或改变，并不一定需要消除。精确剂量将根据多种因素而变化，所述因素如受试者依赖性变量(例如，年龄、免疫系统健康状况等)、所治疗的疾病或病症以及施用途径和所施用药剂的药代动力学。
如本文所使用的，术语“载剂”或“赋形剂”是指调配物中的有机或无机成分、天然或合成的非活性成分，其中一种或多种活性成分与其组合。如本领域技术人员众所周知的，载剂或赋形剂将被自然地选择来最小化活性成分的降解或最小化受试者中的不良副作用。
如本文所使用的，术语“治疗”是指患者的医疗管理，其中有意治愈、改善、稳定或预防疾病、病理学病状或病症。此术语包含积极治疗，即具体针对疾病、病理学病状或病症的改善的治疗，并且还包含病因治疗，即针对相关疾病、病理学病状或病症的病因的去除的治疗。另外，此术语包含姑息性治疗，即设计用于缓解症状而非治愈疾病、病理学病状或病症的治疗；预防性治疗，即旨在最小化或部分或完全抑制相关疾病、病理学病状或病症的发展的治疗；以及支持性治疗，即用于补充针对相关疾病、病理学病状或病症的改善的另一种特异性疗法的治疗。
如本文所使用的，术语“癌症”是指来自任何组织的细胞的异常生长。癌症包含未血管化或尚未充分血管化的肿瘤以及血管化肿瘤。癌症可以包括非实体瘤(如血液肿瘤，例如，白血病和淋巴瘤)或可以包括实体瘤。要用当前要求保护的3E10抗体和治疗性多核苷酸复合物治疗的癌症的类型包含但不限于癌、母细胞瘤和肉瘤，以及某些白血病或淋巴恶性肿瘤、良恶性肿瘤以及恶性肿瘤，例如肉瘤、癌和黑色素瘤。成人肿瘤/癌症和儿童肿瘤/癌症也包含在内。血液癌是血液或骨髓的癌症。血液(或血源性)癌的实例包含白血病，包含急性白血病(如急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞性白血病、急性骨髓性白血病和成髓细胞白血病、早幼粒细胞白血病、髓单核细胞白血病、单核细胞白血病和红白血病)、慢性白血病(如慢性髓细胞(粒细胞)白血病、慢性骨髓性白血病和慢性淋巴细胞白血病)、真性红细胞增多症、淋巴瘤、霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤(惰性和高级别形式)、多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulinemia)、重链病、骨髓增生异常综合征、毛细胞白血病和脊髓发育不良。实体瘤是通常不含有囊肿或液体区的异常组织肿块。实体瘤可以是良性的或恶性的。不同类型的实体瘤因形成其的细胞的类型(如肉瘤、癌和淋巴瘤)而命名。如肉瘤和癌等实体瘤的实例包含纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤和其它肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤文氏肿瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、淋巴类肿瘤、胰腺癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、肝细胞癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、甲状腺髓样癌、甲状腺乳头状癌、嗜铬细胞瘤皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、维尔姆斯瘤(Wilms'tumor)、宫颈癌、睾丸瘤、精原细胞瘤、膀胱癌、黑色素瘤和CNS肿瘤(如神经胶质瘤(如脑干神经胶质瘤和混合神经胶质瘤)、胶质母细胞瘤(也称为多形性胶质母细胞瘤)、星形细胞瘤、CNS淋巴瘤、生殖细胞瘤、髓母细胞瘤、神经鞘瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突胶质细胞瘤、脑膜瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤和脑转移瘤)。
如本文所使用的，术语“CNS癌症”或“中枢神经系统的癌症”是指来自中枢神经系统的任何组织的细胞的异常生长，包含受试者的原发性CNS的脑、脊髓、脑膜或造血组织。CNS癌症的非限制性实例包含神经上皮癌(如胶质瘤、成熟神经元癌、原始神经外胚层肿瘤和原始脑癌)、脑膜癌和原发性中枢神经系统造血系统癌症。提供了CNS癌症的另外的实例。
范围：在整个本公开中，本发明的各个方面可以以范围格式呈现。应当理解，采用范围格式的描述仅仅是为了方便和简洁，而不应被理解为对本发明范围的僵化限制。因此，对范围的描述应当被认为是具有确切公开的所有可能的子范围以及所述范围内的单独数值。例如，对如1至6的范围的描述应被视为具有具体公开的子范围，如1至3、1至4、1至5、2至4、2至6、3至6等，以及所述范围内的单独数量，例如1、2、2.7、3、4、5、5.3和6。无论范围的宽度为多少，这都适用。
3E10抗体、其变体和片段
在一些方面，本公开涉及3E10抗体和其衍生物用于递送治疗性多核苷酸以治疗癌症的用途。如下文所讨论的，通常使用术语抗体。在各个实施例中，用于本公开的抗体采取如本文所描述的多种形式，包含本文所描述的传统抗体以及抗体衍生物、片段和模拟物。
传统抗体结构单位通常包括四聚体。每种四聚体通常由相同的两对多肽链构成，每对具有一条“轻”链(通常，分子量为约25kDa)和一条“重”链(通常，分子量为约50-70kDa)。人轻链被分类为κ和λ轻链。本公开涉及通常基于IgG类的抗体，所述IgG类具有若干个亚类，包含但不限于IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。通常，IgG1、IgG2和IgG4比IgG3使用得更频繁。应注意，IgG1具有在356(D或E)和358(L或M)处具有多态性的不同同种异型。
轻链通常包括两个结构域：可变轻结构域(含有轻链CDR并且与可变重结构域一起形成Fv区)，以及恒定轻链区(通常称为CL或Cκ)。重链包括可变重结构域和恒定结构域，所述恒定结构域包含包括CH2-CH3的CH1-任选的铰链-Fc结构域。
抗体的高变区通常涵盖来自轻链可变区中的约氨基酸残基24-34(LCDR1；“L”表示轻链)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)以及重链可变区中的约31-35B(HCDR1；“H”表示重链)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)周围的氨基酸残基；Kabat等人,《免疫学上关注的蛋白质的序列(SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST)》,第5版马里兰州贝塞斯达的美国国立卫生研究院公共卫生服务部(Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda,Md.)(1991)和/或形成高变环的那些残基(例如，在轻链可变区中的残基26-32(LCDR1)、50-52(LCDR2)和91-96(LCDR3)以及在重链可变区中的26-32(HCDR1)、53-55(HCDR2)和96-101(HCDR3)；Chothia和Lesk(1987)《分子生物学杂志》.196:901-917。下文描述了可用于本文所描述的组合物和方法的具体CDR。
如本领域的技术人员将理解的，在不同的编号系统中，CDR的精确编号和放置可以有所不同。然而，应理解，可变重和/或可变轻序列的公开内容包含相关(固有)CDR的公开内容。因此，每个可变重区的公开内容是vhCDR的公开内容(例如，vhCDR1、vhCDR2和vhCDR3)，并且每个可变轻区的公开内容是vlCDR的公开内容(例如，vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3)。CDR编号的有用比较如下，Lafranc等人,《发展与比较免疫学》27(1):55-77(2003)。
贯穿本说明书，在提及可变结构域中的残基(大致上，轻链可变区的残基1-107和重链可变区的残基1-113)时通常使用Kabat编号系统，并且EU编号系统用于Fc区(例如Kabat等人，同上(1991))。
本公开提供了大量不同的CDR组。在这种情况下，“完整的CDR组”包括三个可变轻和三个可变重CDR，例如vlCDR1、vlCDR2、vlCDR3、vhCDR1、vhCDR2和vhCDR3。这些分别可以是较大的可变轻结构域或可变重结构域的一部分。另外，如本文中更全面地概述的，在使用重链和轻链时(例如，在使用Fab时)，可变重结构域和可变轻结构域可以在单独的多肽链上，或在scFv序列的情况下在单个多肽链上。
CDR有助于抗原结合或更具体地抗体的表位结合位点的形成。“表位”是指与被称为互补位的抗体分子的可变区中的特异性抗原结合位点相互作用的决定簇。表位是如核酸、氨基酸或糖侧链等分子的基团(grouping)并且通常具有具体的结构特性以及具体的电荷特性。单个抗原可以具有超过一个表位。本文所描述的抗体以部分序列非依赖性方式与核酸表位结合。也就是说，虽然本文所描述的抗体以比其它核酸结构和序列更大的亲和力与一些多核苷酸结构和序列结合，但其对多核苷酸具有一些一般亲和力。
重链的“Fc结构域”包含-CH2-CH3结构域以及任选地铰链结构域(-H-CH2-CH3)。对于IgG，Fc结构域包括免疫球蛋白结构域CH2和CH3(Cγ2和Cγ3)以及CH1(Cγ1)与CH2(Cγ2)之间的下铰链区。虽然Fc区的边界可以变化，但人IgG重链Fc区通常被定义成在其羧基末端包含残基C226或P230，其中根据如Kabat中的EU索引进行编号。因此，在IgG的上下文中，“CH”结构域如下：“CH1”是指根据如Kabat中的EU索引的位置118-215。“铰链”是指根据如Kabat中的EU索引的位置216-230。“CH2”是指根据如Kabat中的EU索引的位置231-340，并且“CH3”是指根据如Kabat中的EU索引的位置341-447。因此，“Fc结构域”包含-CH2-CH3结构域以及任选地铰链结构域(铰链-CH2-CH3)。在本文的实施例中，当scFv与Fc结构域连接时，通常scFv构建体的C末端与Fc结构域的铰链的全部或部分连接；例如，其通常与作为铰链的开始的序列EPKS连接。在一些实施例中，如下文更全面地描述的，对Fc区进行氨基酸修饰，例如以改变与一种或多种FcγR受体或FcRn受体的结合，并且如本文所概述的，实现异源二聚体形成和纯化。
重链的另一部分是铰链区。本文的“铰链”或“铰链区”或“抗体铰链区”或“铰链结构域”意指包括抗体的第一恒定结构域与第二恒定结构域之间的氨基酸的柔性多肽。在结构上，IgG CH1结构域在EU位置215处结束，并且IgG CH2结构域在残基EU位置231处开始。因此，对于IgG，抗体铰链在本文中被定义为包含位置216(IgG1中的E216)至230(IgG1中的p230)，其中根据如Kabat中的EU索引进行编号。在一些情况下，使用“铰链片段”，所述铰链片段在铰链结构域的N端和C端中的任一者或两者处含有较少氨基酸。
scFv包括可变重链、scFv接头和可变轻结构域。在本文所概述的大多数构建体和序列中，可变重链的C末端与scFv接头的N末端连接，所述scFv接头的C末端与可变轻链的N末端连接(N-vh-接头-vl-C)，但是可以切换(N-vl-接头-vh-C)。
因此，本公开涉及不同的抗体结构域。如本文所描述和本领域已知的，在本公开的某些实施例中所描述的异源二聚体抗体在重链和轻链内包括不同的结构域，所述结构域也可以重叠。这些结构域包含但不限于Fc结构域、CH1结构域、CH2结构域、CH3结构域、铰链结构域、重恒定结构域(CH1-铰链-Fc结构域或CH1-铰链-CH2-CH3)、可变重结构域、可变轻结构域、轻恒定结构域、Fab结构域和scFv结构域。
在某些实施例中，本公开的抗体包括来自特定种系重链免疫球蛋白基因的重链可变区和/或来自特定种系轻链免疫球蛋白基因的轻链可变区。例如，此类抗体可以包括人抗体或由其组成，所述人抗体包括作为特定种系序列的“产物”或“源自”特定种系序列，例如3E10抗体的重链可变区或轻链可变区”。作为人种系免疫球蛋白序列“的产物”或“源自”人种系免疫球蛋白序列的人抗体可以如此鉴定：通过将人抗体的氨基酸序列与人种系免疫球蛋白的氨基酸序列进行比较，并且选择与人抗体的序列在序列方面最接近(即，最大同一性％)的人种系免疫球蛋白序列(使用本文概述的方法)。作为特定人种系免疫球蛋白序列的“产物”或“源自”特定人种系免疫球蛋白序列的人抗体与种系序列相比，可能由于例如天然发生的体细胞突变或故意引入的定点突变而含有氨基酸差异。然而，人源化抗体通常与由人种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列在氨基酸序列上至少90％相同，并且在与其它物种的种系免疫球蛋白氨基酸序列(例如，鼠种系序列)进行比较时，含有将抗体鉴定为源自人序列的氨基酸残基。在某些情况下，人源化抗体可以与由种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列在氨基酸序列上至少95％、96％、97％、98％或99％，或甚至至少96％、97％、98％或99％相同。通常，源自特定人种系序列的人源化抗体将显示与由人种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列不超过10-20个氨基酸差异。在某些情况下，人源化抗体可以显示出与由种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列不超过5个，或甚至不超过4个、3个、2个或1个氨基酸差异。
在一个实施例中，亲本抗体已经是亲和力成熟的，如本领域已知的。可以利用基于结构的方法进行人源化和亲和力成熟，例如如美国申请第11/004,590号中描述，所述美国申请通过引用并入本文。基于选择的方法可以用于人源化和/或亲和力成熟抗体可变区，包含但不限于以下文献中所描述的方法：Wu等人,1999,《分子生物学杂志》.294:151-162；Baca等人,1997,《生物化学杂志(J.Biol.Chem)》.272(16):10678-10684；Rosok等人,1996,《生物化学杂志》.271(37):22611-22618；Rader等人,1998,《美国国家科学院院刊》95:8910-8915；Krauss等人,2003,《蛋白质工程化(Protein Engineering)》16(10):753-759，所述文献中的所有文献均通过引用并入本文。其它人源化方法可以涉及CDR的仅一部分的移植，包含但不限于以下所描述的方法：美国申请第09/810,510号；Tan等人,2002,《免疫学杂志(J.Immunol)》.169:1119-1125；De Pascalis等人,2002,《免疫学杂志》.169:3076-3084，所述文献中的所有文献均通过引用并入本文。
在一些方面，本公开涉及与核酸结合，并且具体地与源自3E10抗体的用于治疗癌症的治疗性多核苷酸结合的抗原结合结构域(ABD)的用途。亲本3E10抗体的重链和轻链的氨基酸序列在图1中示出。因此，在一些实施例中，本文所描述的组合物包含3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段。
在一些实施例中，本文所描述的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含对应于亲本3E10抗体的CDR序列，在图1中示出。因此，在一些实施例中，所述3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含轻链可变区(VL)互补决定区(CDR)1，所述VL CDR1包括3E10-VL-CDR1(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；VL CDR2，所述VL CDR2包括3E10-VL-CDR2(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；VL CDR3，所述VL CDR3包括3E10-VL-CDR3(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；重链可变区(VH)CDR1，所述VH CDR1包括3E10-VH-CDR1(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；VH CDR2，所述VH CDR2包括3E10-VH-CDR2(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；以及VH CDR3，所述VH CDR3包括3E10-VH-CDR3(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列。
在一些实施例中，本文所描述的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含来自在VH CDR1中包含D31N氨基酸取代的变体3E10抗体的CDR序列，如在图2中所示出的。因此，在一些实施例中，所述3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含轻链可变区(VL)互补决定区(CDR)1，所述VL CDR1包括3E10-VL-CDR1_D31N(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；VLCDR2，所述VL CDR2包括3E10-VL-CDR2_D31N(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；VL CDR3，所述VL CDR3包括3E10-VL-CDR3_D31N(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；重链可变区(VH)CDR1，所述VH CDR1包括3E10-VH-CDR1_D31N(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；VH CDR2，所述VH CDR2包括3E10-VH-CDR2_D31N(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；以及VH CDR3，所述VH CDR3包括3E10-VH-CDR3_D31N(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列。
在一些实施例中，本文所描述的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段是指对应于图1中所示出的亲本3E10抗体的CDR序列，任选地在VH CDR1中包含D31N氨基酸取代。因此，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含轻链可变区(VL)互补决定区(CDR)1，所述VL CDR1包括3E10-VL-CDR1(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；VL CDR2，所述VLCDR2包括3E10-VL-CDR2(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；VL CDR3，所述VL CDR3包括3E10-VL-CDR3(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；重链可变区(VH)CDR1，所述VH CDR1包括3E10-VH-CDR1a(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；VH CDR2，所述VH CDR2包括3E10-VH-CDR2(SEQ IDNO:XX)的氨基酸序列；以及VH CDR3，所述VH CDR3包括3E10-VH-CDR3(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列。
在一些实施例中，本文所描述的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含对应于图1中所示出的亲本3E10抗体的CDR序列，其中在一个或多个CDR中具有已知氨基酸取代。例如，图2B示出了若干个已知的VH CDR2、VL CDR1和VL CDR2氨基酸序列的氨基酸序列。因此，在一些实施例中，本文所描述的3E10抗体或其变体，或其抗原结合片段包含相对于亲本3E10(图1中所示出的)或3E10-D31N变体(图2中所示出)的CDR序列的一个或多个氨基酸取代，其选自VH CDR2的位置5处的G至S取代、VH CDR2的位置14处的T至S取代、VL CDR1的位置5处的S至T取代、VL CDR1的位置14处的M至L取代、VL CDR1的位置15处的H至A取代，以及VLCDR2的位置6处的E至Q取代。
因此，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含包括3E10-VH-CDR2.1(SEQ ID NO:XX)或3E10-VH-CDR2.2(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列的VH CDR2。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据亲本3E10抗体的VLCDR 1-3以及VH CRD 1和3(如在图1中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据3E10-D31N变体的VL CDR 1-3以及VH CRD 1和3(如在图2A中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含相对于亲本3E10抗体的CDR(如在图1中所示出的)或相对于3E10-D31N变体(如在图2A中所示出的)具有一个或多个氨基酸取代的VL CDR 1-3以及VH CRD 1和3。
类似地，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含包括3E10-VL-CDR1.1(SEQ ID NO:XX)或3E10-VL-CDR1.2(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列的VL CDR1。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据亲本3E10抗体的VLCDR 2和3以及VH CRD 1-3(如在图1中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据3E10-D31N变体的VL CDR 2和3以及VH CRD 1-3(如在图2A中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含相对于亲本3E10抗体的CDR(如在图1中所示出的)或相对于3E10-D31N变体(如在图2A中所示出的)具有一个或多个氨基酸取代的VL CDR 2和3以及VH CRD 1-3。
类似地，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含包括3E10-VL-CDR2.1(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列的VL CDR2。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据亲本3E10抗体的VL CDR 1和3以及VH CRD 1-3(如在图1中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据3E10-D31N变体的VL CDR 1和3以及VH CRD 1-3(如在图2A中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含相对于亲本3E10抗体的CDR(如在图1中所示出的)或相对于3E10-D31N变体(如在图2A中所示出的)具有一个或多个氨基酸取代的VL CDR 1和3以及VH CRD 1-3。
虽然上文所描述的一些氨基酸取代是相当保守的取代，例如，在VL CDR1的位置5处的S至T取代—但其它取代是具有极大不同特性的氨基酸，例如，VL CDR1的位置14处的M至L取代、VL CDR1的位置15处的H至A取代，以及VL CDR2的位置6处的E至Q取代。这表明在不受理论束缚的情况下，3E10 CDR框架内的至少这些位置对其它氨基酸取代是耐受的。
因此，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含包括3E10-VH-CDR2.3(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列的VH CDR2。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据亲本3E10抗体的VL CDR 1-3以及VH CRD 1和3(如在图1中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据3E10-D31N变体的VL CDR 1-3以及VH CRD 1和3(如在图2A中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含相对于亲本3E10抗体的CDR(如在图1中所示出的)或相对于3E10-D31N变体(如在图2A中所示出的)具有一个或多个氨基酸取代的VL CDR1-3以及VH CRD 1和3，例如，如本文所描述的。
类似地，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含包括3E10-VL-CDR1.3(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列的VL CDR1。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据亲本3E10抗体的VL CDR 2和3以及VH CRD 1-3(如在图1中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据3E10-D31N变体的VL CDR 2和3以及VH CRD 1-3(如在图2A中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含相对于亲本3E10抗体的CDR(如在图1中所示出的)或相对于3E10-D31N变体(如在图2A中所示出的)具有一个或多个氨基酸取代的VL CDR 2和3以及VH CRD 1-3，例如，如本文所描述的。
类似地，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含包括3E10-VL-CDR2.2(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列的VL CDR2。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据亲本3E10抗体的VL CDR 1和3以及VH CRD 1-3(如在图1中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据3E10-D31N变体的VL CDR 1和3以及VH CRD 1-3(如在图2A中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含相对于亲本3E10抗体的CDR(如在图1中所示出的)或相对于3E10-D31N变体(如在图2A中所示出的)具有一个或多个氨基酸取代的VL CDR 1和3以及VH CRD 1-3，例如，如本文所描述的。
进一步地，因为3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段以部分序列非依赖性方式与核酸结合，并且因此不受理论束缚，设想了相互作用可以通过与核苷酸主链的静电相互作用来介导。为了研究此理论，产生了3E10-scFv构建体的分子模型的静电表面电位渲染，所述构建体的氨基酸序列在图15C中示出，如在图15A和15B中所示出的。这些模型揭示了对应于分子的表面上的大碱性区的推定核酸结合袋(NAB1)，如在图15A中所展示的。促进模型中推定核酸结合袋的氨基酸的非氢原子的位置叠加在图15B中，并且氨基酸残基映射到图15C中的构建体的序列上。
因此，设想到，如本文所描述的，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段的CDR内的保持此推定核酸结合袋的静电特征的氨基酸取代也将保持构建体的核酸结合特性。因此，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含第一碱性氨基酸与第二碱性氨基酸(例如，K、R或H)的一个或多个氨基酸取代。类似地，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含第一酸性氨基酸与第二酸性氨基酸(例如，D或E)的一个或多个氨基酸取代。此类电荷保守的变体3E10 CDR的实例在图3中示出。
因此，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含包括3E10-VH-CDR1.c1(SEQ ID NO:XX)、3E10-VH-CDR1.c2(SEQ ID NO:XX)、3E10-VH-CDR1.c3(SEQ IDNO:XX)、3E10-VH-CDR1.c4(SEQ ID NO:XX)或3E10-VH-CDR1.c5(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列的VH CDR1。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据亲本3E10抗体的VL CDR 1-3以及VH CRD 2和3(如在图1中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含相对于亲本3E10抗体的CDR(如在图1中所示出的)具有一个或多个氨基酸取代的VL CDR 1-3以及VH CRD 1和3，例如，如本文所描述的。
类似地，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含包括3E10-VH-CDR2.c1(SEQ ID NO:XX)、3E10-VH-CDR2.c2(SEQ ID NO:XX)或3E10-VH-CDR2.c3(SEQID NO:XX)的氨基酸序列的VH CDR2。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据亲本3E10抗体的VL CDR 1-3以及VH CRD 1和3(如在图1中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据3E10-D31N变体的VLCDR 1-3以及VH CRD 1和3(如在图2A中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含相对于亲本3E10抗体的CDR(如在图1中所示出的)具有一个或多个氨基酸取代的VL CDR 1-3以及VH CRD 1和3，例如，如本文所描述的。
类似地，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含包括3E10-VH-CDR3.c1(SEQ ID NO:XX)、3E10-VH-CDR3.c2(SEQ ID NO:XX)或3E10-VH-CDR3.c3(SEQID NO:XX)的氨基酸序列的VH CDR3。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据亲本3E10抗体的VL CDR 1-3以及VH CRD 1和2(如在图1中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据3E10-D31N变体的VLCDR 1-3以及VH CRD 1和2(如在图2A中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含相对于亲本3E10抗体的CDR(如在图1中所示出的)具有一个或多个氨基酸取代的VL CDR 1-3以及VH CRD 1和2，例如，如本文所描述的。
类似地，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含包括3E10-VL-CDR1.c1(SEQ ID NO:XX)、3E10-VL-CDR1.c2(SEQ ID NO:XX)、3E10-VL-CDR1.c3(SEQ IDNO:XX)、3E10-VL-CDR1.c4(SEQ ID NO:XX)、3E10-VL-CDR1.c5(SEQ ID NO:XX)或3E10-VL-CDR1.c6(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列的VL CDR1。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据亲本3E10抗体的VL CDR 2和3以及VH CRD 1-3(如在图1中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据3E10-D31N变体的VL CDR 2和3以及VH CRD 1-3(如在图2A中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含相对于亲本3E10抗体的CDR(如在图1中所示出的)具有一个或多个氨基酸取代的VL CDR 2和3以及VH CRD 1-3，例如，如本文所描述的。
类似地，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含包括3E10-VL-CDR2.c1(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列的VL CDR2。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据亲本3E10抗体的VL CDR 1和3以及VH CRD 1-3(如在图1中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据3E10-D31N变体的VL CDR 1和3以及VH CRD 1-3(如在图2A中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含相对于亲本3E10抗体的CDR(如在图1中所示出的)具有一个或多个氨基酸取代的VL CDR 1和3以及VH CRD 1-3，例如，如本文所描述的。
类似地，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含包括3E10-VL-CDR3.c1(SEQ ID NO:XX)、3E10-VL-CDR3.c2(SEQ ID NO:XX)、3E10-VL-CDR3.c3(SEQ IDNO:XX)、3E10-VL-CDR3.c4(SEQ ID NO:XX)、3E10-VL-CDR3.c5(SEQ ID NO:XX)或3E10-VL-CDR3.c6(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列的VL CDR3。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据亲本3E10抗体的VL CDR 1和2以及VH CRD 1-3(如在图1中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据3E10-D31N变体的VL CDR 1和2以及VH CRD 1-3(如在图2A中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含相对于亲本3E10抗体的CDR(如在图1中所示出的)具有一个或多个氨基酸取代的VL CDR 1和2以及VH CRD 1-3，例如，如本文所描述的。
还设想了如本文所描述的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含上文所描述的3E10 CDR氨基酸取代的任何组合。并入本文所描述的氨基酸取代中的一个或多个氨基酸取代的3E10变体CDR序列的实例在图4中示出。
因此，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含包括3E10-VH-CDR1m(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列的VH CDR1。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据亲本3E10抗体的VL CDR 1-3以及VH CRD 2和3(如在图1中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含相对于亲本3E10抗体的CDR(如在图1中所示出的)具有一个或多个氨基酸取代的VL CDR 1-3以及VHCRD 1和3，例如，如本文所描述的。
类似地，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含包括3E10-VH-CDR2m(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列的VH CDR2。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据亲本3E10抗体的VL CDR 1-3以及VH CRD 1和3(如在图1中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据3E10-D31N变体的VL CDR 1-3以及VH CRD 1和3(如在图2A中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含相对于亲本3E10抗体的CDR(如在图1中所示出的)具有一个或多个氨基酸取代的VL CDR 1-3以及VH CRD 1和3，例如，如本文所描述的。
类似地，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含包括3E10-VH-CDR3m(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列的VH CDR3。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据亲本3E10抗体的VL CDR 1-3以及VH CRD 1和2(如在图1中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据3E10-D31N变体的VL CDR 1-3以及VH CRD 1和2(如在图2A中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含相对于亲本3E10抗体的CDR(如在图1中所示出的)具有一个或多个氨基酸取代的VL CDR 1-3以及VH CRD 1和2，例如，如本文所描述的。
类似地，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含包括3E10-VL-CDR1m(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列的VL CDR1。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据亲本3E10抗体的VL CDR 2和3以及VH CRD 1-3(如在图1中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据3E10-D31N变体的VL CDR 2和3以及VH CRD 1-3(如在图2A中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含相对于亲本3E10抗体的CDR(如在图1中所示出的)具有一个或多个氨基酸取代的VL CDR 2和3以及VH CRD 1-3，例如，如本文所描述的。
类似地，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含包括3E10-VL-CDR2m(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列的VL CDR2。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据亲本3E10抗体的VL CDR 1和3以及VH CRD 1-3(如在图1中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据3E10-D31N变体的VL CDR 1和3以及VH CRD 1-3(如在图2A中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含相对于亲本3E10抗体的CDR(如在图1中所示出的)具有一个或多个氨基酸取代的VL CDR 1和3以及VH CRD 1-3，例如，如本文所描述的。
类似地，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含包括3E10-VL-CDR3m(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列的VL CDR3。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据亲本3E10抗体的VL CDR 1和2以及VH CRD 1-3(如在图1中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含根据3E10-D31N变体的VL CDR 1和2以及VH CRD 1-3(如在图2A中所示出的)。在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段进一步包含相对于亲本3E10抗体的CDR(如在图1中所示出的)具有一个或多个氨基酸取代的VL CDR 1和2以及VH CRD 1-3，例如，如本文所描述的。
在一些实施例中，本文所描述的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含轻链可变区(VL)互补决定区(CDR)1，所述VL CDR1包括3E10-VL-CDR1m(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；VL CDR2，所述VL CDR2包括3E10-VL-CDR2m(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；VL CDR3，所述VL CDR3包括3E10-VL-CDR3m(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；重链可变区(VH)CDR1，所述VH CDR1包括3E10-VH-CDR1m(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；VH CDR2，所述VH CDR2包括3E10-VH-CDR2m(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；以及VH CDR3，所述VH CDR3包括3E10-VH-CDR3m(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列。
在一些实施例中，本文所描述的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段是指相对于图1中所示出的亲本3E10抗体具有不超过一个氨基酸取代的CDR序列，任选地包含在VHCDR1中的D31N氨基酸取代。因此，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含轻链可变区(VL)互补决定区(CDR)1，所述VL CDR1包括相对于3E10-VL-CDR1(SEQ IDNO:XX)具有不超过一个氨基酸取代的氨基酸序列；VL CDR2，所述VL CDR2包括相对于3E10-VL-CDR2(SEQ ID NO:XX)具有不超过一个氨基酸取代的氨基酸序列；VL CDR3，所述VL CDR3包括相对于3E10-VL-CDR3(SEQ ID NO:XX)具有不超过一个氨基酸取代的氨基酸序列；重链可变区(VH)CDR1，所述VH CDR1包括相对于3E10-VH-CDR1a(SEQ ID NO:XX)具有不超过一个氨基酸取代的氨基酸序列；VH CDR2，所述VH CDR2包括相对于3E10-VH-CDR2(SEQ ID NO:XX)具有不超过一个氨基酸取代的氨基酸序列；以及VH CDR3，所述VH CDR3包括相对于3E10-VH-CDR3(SEQ ID NO:XX)具有不超过一个氨基酸取代的氨基酸序列。
在一些实施例中，本文所描述的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段是指相对于图1中所示出的亲本3E10抗体具有不超过两个氨基酸取代的CDR序列，任选地包含在VHCDR1中的D31N氨基酸取代。因此，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含轻链可变区(VL)互补决定区(CDR)1，所述VL CDR1包括相对于3E10-VL-CDR1(SEQ IDNO:XX)具有不超过两个氨基酸取代的氨基酸序列；VL CDR2，所述VL CDR2包括相对于3E10-VL-CDR2(SEQ ID NO:XX)具有不超过两个氨基酸取代的氨基酸序列；VL CDR3，所述VL CDR3包括相对于3E10-VL-CDR3(SEQ ID NO:XX)具有不超过两个氨基酸取代的氨基酸序列；重链可变区(VH)CDR1，所述VH CDR1包括相对于3E10-VH-CDR1a(SEQ ID NO:XX)具有不超过两个氨基酸取代的氨基酸序列；VH CDR2，所述VH CDR2包括相对于3E10-VH-CDR2(SEQ ID NO:XX)具有不超过两个氨基酸取代的氨基酸序列；以及VH CDR3，所述VH CDR3包括相对于3E10-VH-CDR3(SEQ ID NO:XX)具有不超过两个氨基酸取代的氨基酸序列。
3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段的其它变体也是本领域已知的，如例如在Zack等人,《免疫学杂志(J.Immunol.)》,157(5):2082-8(1996)中所公开的。例如，已确定3E10的重链可变区的氨基酸位置31对抗体和其片段穿透核并与DNA结合的能力有影响(在SEQ ID NO:1、2和13中以粗体表示)。CDR1中的D31N突变(在SEQ ID NO:2和13中以粗体表示)穿透细胞核并结合DNA，其效率比原始抗体高得多(Zack等人,《免疫学和细胞生物学(Immunology and Cell Biology)》,72:513-520(1994)，Weisbart等人,《自体免疫力杂志(J.Autoimmun.)》,11,539-546(1998)；Weisbart,《国际肿瘤学杂志(Int.J.Oncol.)》,25,1867-1873(2004))。在一些实施例中，抗体具有D31N取代。
尽管在本文中通常被称为“3E10”或“3E10抗体”，但是应理解，片段和结合蛋白(包含抗原结合片段、变体和融合蛋白，如scFv、二-scFv、三-scFv和其它单链可变片段)以及本文所公开的其它细胞穿透、核酸转运分子也被明确地提供用于本文所公开的组合物和方法的短语所涵盖。因此，抗体和其它结合蛋白在本文中也被称为细胞穿透。
在优选的实施例中，3E10抗体在不借助于载剂或缀合物的情况下被转运到细胞的细胞质和/或细胞核中。例如，授予Richard Weisbart的美国专利第4,812,397号和第7,189,396号公开了在体内转运到哺乳动物细胞的细胞核而没有细胞毒性作用的单克隆抗体3E10和其活性片段。
可用于本文所描述的组合物和方法中的抗体包含任何类别的整个免疫球蛋白(即完整抗体)、其片段以及至少含有抗体的抗原结合可变结构域的合成蛋白质。可变结构域在抗体之间在序列方面有所不同并且用于每个特定抗体针对其特定抗原的结合和特异性。然而，可变性通常不会均匀地分布在抗体的可变结构域。其通常集中在轻链可变结构域和重链可变结构域两者中的被称为互补决定区(CDR)或高变区的三个区段中。可变结构域的更高保守性部分称为框架(FR)。天然重链和轻链的可变结构域各自包括：主要采用通过三个CDR连接的β-片层构型的四个FR区，所述三个CDR形成连接β-片层结构的环并且在一些情况下形成β-片层结构的一部分。每条链中的CDR通过FR区紧密保持在一起并与来自另一条链的CDR一起促进抗体的抗原结合位点的形成。因此，抗体通常至少含有维持DNA结合和/或干扰DNA修复所必需的CDR。
3E10抗体通常是单克隆3E10，或其结合与3E10相同或不同的表位的变体、衍生物、片段、融合物或人源化形式。
根据布达佩斯条约的条款，于2000年9月6日接收了产生单克隆抗体3E10的杂交瘤细胞系的寄存，并且被美国维吉尼亚州马纳萨斯市20110-2209大学大道10801号的美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection,ATCC,10801University Blvd.,Manassas,VA20110-2209,USA)接受，并且给出的专利保藏号为PTA-2439。
因此，抗体可以具有与由ATCC号PTA 2439杂交瘤产生的单克隆抗体3E10相同或不同的表位特异性。抗体可以具有单克隆抗体3E10的互补位。抗体可以是3E10的单链可变片段或变体，例如其保守性变体。例如，抗体可以是3E10的单链可变片段(3E10 Fv)或其变体。
另外地或可替代地，可以根据IMGT系统定义重链互补决定区(CDR)。由IMGT系统鉴定的互补决定区(CDR)包含CDR H1.3(原始序列)：GFTFSDYG(SEQ ID NO:XX)；CDR H1.4(具有D31N突变)：GFTFSNYG(SEQ ID NO:XX)；CDR H2.2:ISSGSSTI(SEQ ID NO:XX)和变体ISSSSSTI(SEQ ID NO:XX)；CDR H3.2:ARRGLLLDY(SEQ ID NO:XX)。
另外地或可替代地，可以根据IMGT系统定义轻链互补决定区(CDR)。如由IMGT系统鉴定的互补决定区(CDR)包含CDR L1.2 KSVSTSSYSY(SEQ ID NO:XX)和变体KTVSTSSYSY(SEQ ID NO:XX)；CDR L2.2:YAS(SEQ ID NO:XX)；CDR L3.2:QHSREFPWT(SEQ ID NO:XX)。
在一些实施例中，所述抗体是人源化抗体。用于人源化非人抗体的方法是本领域众所周知的。通常，人源化抗体具有从非人的来源引入到其的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基通常被称为“输入(import)”残基，所述输入残基通常取自“输入”可变结构域。抗体人源化技术通常涉及使用重组DNA技术来操纵编码抗体分子的一条或多条多肽链的DNA序列。
WO 2015/106290、WO 2016/033324、WO 2019/018426和WO/2019/018428中讨论了3E10人源化序列的实例，所述文献的公开内容通过引用整体并入本文用于所有目的，并且具体地用于其人源化3E10序列以及其产生方法的公开内容。人源化3E10重链可变区(SEQID NO:XX-YY)和人源化3E10轻链可变区(SEQ ID NO:XX-YY)的其它实例分别在图5和6中示出。
所公开的组合物和方法通常利用维持穿透细胞的能力的3E10抗体，并且任选地利用核。
通过自身抗体的细胞内化机制是多样化的。一些通过静电相互作用或FcR介导的内吞作用进入到细胞中，而另一些则利用基于与细胞表面肌球蛋白或钙网蛋白缔合的机制，随后为内吞作用(Ying-Chyi等人,《欧洲免疫学杂志(Eur J Immunol)》38,3178-3190(2008)，Yanase等人,《临床研究杂志(J Clin Invest)》100,25-31(1997))。
3E10在Fc非依赖性机制中穿透细胞(如通过缺乏Fc的3E10片段穿透细胞的能力所证明的)，其涉及核苷转运蛋白ENT2的存在(Weisbart等人,《科技报告(Sci Rep)》5:12022.doi:10.1038/srep12022.(2015)，Zack等人,《免疫学杂志》157,2082-2088(1996)，Hansen等人,《生物化学杂志(J.Biol.Chem.)》282,20790-20793(2007))。因此，在一些实施例中，在所公开的组合物和方法中利用的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段以Fc非依赖性机制穿透细胞。类似地，在一些实施例中，在所公开的组合物和方法中利用的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段以ENT2依赖性方式穿透细胞。
所公开的组合物和方法使用3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段，所述抗体或其变体、或其抗原结合片段维持结合多核苷酸，例如用于治疗癌症的治疗性多核苷酸的能力。
实例8描述了3E10和另外的3E10变体的分子建模。3E10(Pymol)的分子建模揭示了推定核酸结合袋(NAB1)(参见例如，图15A和15B)，并在图15C中用下划线展示。从分子建模预测的NAB1氨基酸已在图15C中的重链和轻链序列中加了下划线。图15B是示出具有用点状圆点展示的NAB1氨基酸残基的3E10-scFv(Pymol)的分子建模的图解。
在一些实施例中，所公开的3E10抗体或其变体或其抗原结合片段包含一些或全部带下划线的NAB1序列。在一些实施例中，3E10抗体或其变体或其抗原结合片段包含具有结合核酸的改变的能力的变体序列。在一些实施例中，NAB1中的突变(例如，取代、插入和/或缺失)改善抗体与核酸如RNA的结合。在一些实施例中，突变是保守性取代。在一些实施例中，突变增加了NAB1袋的阳离子电荷。
如本文所讨论和例示的，在CDR1的残基31处的天冬氨酸向天冬酰胺的突变增加了此残基的阳离子电荷并增强了核酸在体内的结合和递送(3E10-D31N)。在CDR1的残基31处的天冬氨酸向天冬酰胺的突变增加了此残基的阳离子电荷并增强了核酸在体内的结合和递送(3E10-D31N)。在CDR1的残基31处的天冬氨酸向精氨酸(3E10-D31R)的突变进一步扩增了阳离子电荷，而向赖氨酸(3E10-D31K)的突变改变了电荷朝向(图15A)。
因此，在一些实施例中，3E10抗体或其变体或其抗原结合片段包含在CDR1的残基31处的天冬氨酸向精氨酸(3E10-D31R)的取代，所述建模指示扩增阳离子电荷，或赖氨酸(3E10-D31K)，所述建模指示改变电荷朝向。因此，在一些实施例中，3E10结合蛋白包含D31R或D31K取代。因此，设想本文公开的具有对应于3E10 D31或N31的残基的所有序列可以在其中包含D31R或D31K取代。
3E10中干扰其结合DNA的能力的突变可能使抗体不能进行核穿透。因此，通常所公开的抗体的变体和人源化形式维持结合核酸，特别是结合DNA的能力。另外，先前已经示出了3E10 scFv能够以ENT2依赖性方式穿透到活细胞和核酸中，其中ENT2缺陷细胞中的摄取效率受损(Hansen等人,《生物化学杂志》282,20790-20793(2007))。因此，在一些实施例中，所公开的抗体的变体和人源化形式维持以ENT依赖性，优选地ENT2依赖性方式穿透到细胞中的能力。
免疫刺激寡核苷酸
先天免疫系统的大分子刺激因子，特别是模式识别受体(PRR)的多核苷酸激动剂，为癌症的治疗带来了巨大的希望。模式识别受体(PRR)识别病原体相关以及内源性损伤相关分子模式。一旦配体结合发生，信号传导级联在细胞内发展以激活效应分子，导致抗肿瘤免疫细胞的募集和激活以及炎性细胞因子的释放。因此，PRR激动剂已经成功地用作用于治疗多种癌症的免疫疗法。关于PRR以及PRR激动剂在癌症免疫疗法中的使用的综述，参见例如Bai L.等人,“用于癌症免疫疗法的基于模式识别受体的新靶点(Promising targetsbased on pattern recognition receptors for cancer immunotherapy)”,《药理学研究》,159(2020)105017，所述文献的内容出于所有目的通过引用并入本文。
因此，在一些实施例中，3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与多核苷酸免疫刺激剂，例如能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸复合。
模式识别受体(PRR)激动剂
一方面，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。如本领域所认识到的，例如通过激活模式识别受体来刺激先天免疫系统，表示用于治疗癌症的有前景的治疗途径。通常，PRR在识别病原体相关模式(PAMP)和/或损伤相关模式(DAMP)后刺激先天免疫系统。通常，PRR分组成五个类别：Toll样受体(TLR)、C型凝集素受体(CLR)、RIG-I样受体(RLR)、核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)样受体(NLR)和胞质DNA传感器(CDS)。本文所描述的方法和组合物通过识别多核苷酸抗原并且被多核苷酸抗原激活的这些类别中的任何类别的PRR发挥作用。
因此，一方面，提供了用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)能够刺激Toll样受体(TLR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。至少有13种Toll样受体已被鉴定，包含TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、TLR11、TLR12和TLR13。这些Toll样受体中的每一种对不同的抗原具有亲和力。根据本公开的各个实施例，本文所描述的方法和组合物包含使用TLR的多核苷酸激动剂。例如，TLR3、TLR7、TLR8和TLR9中的每一个都对各种多核苷酸具有亲和力，并且被各种多核苷酸激活。因此，在一些实施例中，本文所描述的方法和组合物中使用的激动剂能够刺激TLR3、TLR7、TLR8或TLR9。
例如，可以通过人的浆细胞样树突状细胞和B细胞上的TLR9检测未甲基化的CpG位点(Zaida等人,《感染与免疫(Infection and Immunity)》,76(5):2123-2129,(2008))。因此，寡核苷酸的序列可以包含一个或多个未甲基化的胞嘧啶-鸟嘌呤(CG或CpG，可互换使用)二核苷酸基序。“p”是指DNA的磷酸二酯主链，然而，在一些实施例中，包含CG的寡核苷酸可以具有经修饰的主链，例如硫代磷酸酯(PS)主链。
在一些实施例中，寡核苷酸可以含有连续布置或由中间核苷酸分离的多于一个CG二核苷酸。CpG基序可以处于寡核苷酸序列的内部。许多核苷酸序列刺激TLR9，其中CG二核苷酸的数量和位置以及侧接CG二聚体的精确碱基序列变化。
通常，基于其序列、二级结构和对人外周血单核细胞(PBMC)的作用对CG ODN进行分类。五个类别是类别A(D型)、类别B(K型)、类别C、类别P和类别S(Vollmer,J&Krieg,AM,《先进药物递送综述(Advanced Drug Delivery Reviews)》61(3):195–204(2009)，所述文献通过引用并入本文)。CG ODN可以刺激I型干扰素(例如IFNα)的产生，并且诱导树突状细胞(DC)的成熟。一些类别的ODN还是通过间接细胞因子信号传导的自然杀伤(NK)细胞的强激活剂。一些类别是人B细胞和单核细胞成熟的强刺激物(Weiner,GL,《美国国家科学院院刊(PNAS USA)》94(20):10833-7(1997)；Dalpke,AH,《免疫学(Immunology)》106(1):102-12(2002)；Hartmann,G,《免疫学杂志》164(3):1617-2(2000)，所述文献中的每个文献通过引用并入本文)。
RIG-I样受体(RLR)是用作病毒RNA内的病原体相关分子模式(PAMP)的胞质传感器的RNA解旋酶家族。因此，另一方面，提供了用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)能够刺激RIG-I样受体(RLR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。经鉴定的RLR包含RIG-I(视黄酸诱导基因I)、MDA5(黑色素瘤分化相关因子5)和LGP2(遗传学和生理学实验室2)。
示例性RIG-I配体包含但不限于5'ppp-dsRNA，即RIG-I的特异性激动剂；3p-hpRNA，即RIG-I的特异性激动剂；取决于poly(I:C)的大小被RIG-I和/或MDA-5识别的Poly(I:C)/LyoVec复合物；被RIG-I间接识别的Poly(dA:dT)/LyoVec复合物。在一些实施例中，3p-hpRNA是通过体外转录甲型流感(H1N1)的序列而产生的5'三磷酸发夹RNA。在一些实施例中，3p-hpRNA是含有未加帽的5'三磷酸末端和双链片段的RNA寡核苷酸。在一些实施例中，3p-hpRNA为约50bp、约55bp、约60bp、约65bp、约70bp、约75bp、约80bp、约85bp、约90bp、约100bp或更大。在一些实施例中，3p-hpRNA的长度为89bp。
在一个实施例中，提供了用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)能够刺激RIG-I的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。RIG-I是一种螺旋ATP依赖性DExD/H盒RNA解旋酶，优先选择具有5'三磷酸部分的短(例如，少于300个碱基对)dsRNA。若干项研究还表明，RIG-I对含有例如具有至少5个，优选地至少8个连续尿嘧啶残基的聚尿嘧啶(polyU)区的RNA具有偏好性。
因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)至少部分地双链的并且能刺激RIG-I的RNA分子与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，至少部分地双链的RNA分子包括两条单独的RNA链，所述链退火以形成分子的双链部分。在其它实施例中，至少部分地双链的RNA分子是具有自身互补性的单RNA链，使得在生理条件下，它自身退火以形成分子的双链部分，例如，由此形成一个或多个发夹结构。
类似地，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)至少部分地双链的、含有至少一个5'三磷酸部分并且能够刺激RIG-I的多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，至少部分地双链的RNA分子包括两条单独的RNA链，所述链退火以形成分子的双链部分。在其它实施例中，至少部分地双链的RNA分子是具有自身互补性的单RNA链，使得在生理条件下，它自身退火以形成分子的双链部分，例如，由此形成一个或多个发夹结构。文献中提供了多核苷酸RIG-I激动剂的实例。通常，这些多核苷酸RIG-I激动剂中的任何一种都可用于本文所描述的方法和组合物中。
例如，PCT申请公开第WO 2008/017473号描述了具有5'三磷酸基团的多核苷酸RIG-I激动剂的实例，所述申请公开的内容出于所有目的通过引用整体并入本文。如WO2008/017473中所描述的，在一些实施例中，具有5'三磷酸基团的RIG-I激动剂不含任何5'帽或其它修饰。因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)至少部分地双链的、含有至少一个5'三磷酸部分、不含任何5'帽或其它修饰并且能够刺激RIG-Ⅰ的多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，RIG-I激动剂在多核苷酸的5'端处含有至少1个核糖核苷酸。在一些实施例中，RIG-I激动剂在多核苷酸的5'端处含有至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多个核糖核苷酸。在一些实施例中，RIG-I激动剂是多核糖核苷酸分子或其经修饰形式。在一些实施例中，RIG-I激动剂是WO 2008/017473中公开或描述的多核苷酸。
如WO 2008/017473中所描述，在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂包含2'-甲基-dNTP和/或2'-氟-dNTP修饰。因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)至少部分地双链的、含有至少一个5'三磷酸部分、含有2'-甲基-dNTP和/或2'-氟-dNTP修饰并且能够刺激RIG-Ⅰ的多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，RNA分子不含任何5'帽或其它修饰。在一些实施例中，RIG-I激动剂在多核苷酸的5'端处含有至少1个核糖核苷酸。在一些实施例中，RIG-I激动剂在多核苷酸的5'端处含有至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多个核糖核苷酸。在一些实施例中，RIG-I激动剂是多核糖核苷酸分子或其经修饰形式。
如WO 2008/017473中所描述，在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂在一条链的3'端处没有突出端。因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)至少部分地双链的、含有至少一个5'三磷酸部分、在一条链的3'端处没有突出端并且能够刺激RIG-Ⅰ的多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，RNA分子不含任何5'帽或其它修饰。在一些实施例中，RIG-I激动剂在多核苷酸的5'端处含有至少1个核糖核苷酸。在一些实施例中，RIG-I激动剂在多核苷酸的5'端处含有至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多个核糖核苷酸。在一些实施例中，RIG-I激动剂是多核糖核苷酸分子或其经修饰形式。在一些实施例中，RIG-I激动剂含有2'-甲基-dNTP和/或2'-氟-dNTP修饰。
如WO 2008/017473中所描述，在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂在一条链的3'端处具有单个核苷酸突出端。因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)至少部分地双链的、含有至少一个5'三磷酸部分、在一条链的3'端处具有单个核苷酸突出端并且能够刺激RIG-Ⅰ的多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，RNA分子不含任何5'帽或其它修饰。在一些实施例中，RIG-I激动剂在多核苷酸的5'端处含有至少1个核糖核苷酸。在一些实施例中，RIG-I激动剂在多核苷酸的5'端处含有至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多个核糖核苷酸。在一些实施例中，RIG-I激动剂是多核糖核苷酸分子或其经修饰形式。在一些实施例中，RIG-I激动剂含有2'-甲基-dNTP和/或2'-氟-dNTP修饰。
如WO 2008/017473中所描述，在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂在一条链的3'端处具有两个核苷酸突出端。因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)至少部分地双链的、含有至少一个5'三磷酸部分、在一条链的3'端处具有两个核苷酸突出端并且能够刺激RIG-Ⅰ的多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，RNA分子不含任何5'帽或其它修饰。在一些实施例中，RIG-I激动剂在多核苷酸的5'端处含有至少1个核糖核苷酸。在一些实施例中，RIG-I激动剂在多核苷酸的5'端处含有至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多个核糖核苷酸。在一些实施例中，RIG-I激动剂是多核糖核苷酸分子或其经修饰形式。在一些实施例中，RIG-I激动剂含有2'-甲基-dNTP和/或2'-氟-dNTP修饰。
类似地，PCT申请公开第WO 2009/141146号和第WO 2010/002851号描述了具有5'三磷酸基团的多核苷酸RIG-I激动剂的实例，所述申请公开的内容出于所有目的通过引用整体并入本文。如WO 2008/017473中所描述的，在一些实施例中，具有5'三磷酸基团的RIG-I激动剂具有平端。因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)至少部分地双链的、含有至少一个5'三磷酸部分、具有一个平端并且能够刺激RIG-Ⅰ的多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，RIG-I激动剂在多核苷酸的5'端处含有至少1个核糖核苷酸。在一些实施例中，RIG-I激动剂在多核苷酸的5'端处含有至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多个核糖核苷酸。在一些实施例中，RIG-I激动剂不含任何5'帽或其它修饰。在一些实施例中，RIG-I激动剂具有单个多核苷酸链。在一些实施例中，RIG-I激动剂具有两个多核苷酸链。在一些实施例中，RIG-I激动剂是多核糖核苷酸分子或其经修饰形式。在一些实施例中，RIG-I激动剂是WO 2009/141146或WO 2010/002851中公开或描述的多核苷酸。
如WO 2009/141146和WO 2010/002851中所描述的，在一些实施例中，具有5'三磷酸基团的RIG-I激动剂具有两个平端。因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)至少部分地双链的、含有至少一个5'三磷酸部分、具有两个平端并且能够刺激RIG-Ⅰ的多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，RIG-I激动剂在多核苷酸的5'端处含有至少1个核糖核苷酸。在一些实施例中，RIG-I激动剂在多核苷酸的5'端处含有至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多个核糖核苷酸。在一些实施例中，RIG-I激动剂不含任何5'帽或其它修饰。在一些实施例中，RIG-I激动剂是多核糖核苷酸分子或其经修饰形式。
PCT申请公开第WO 2014/049079号描述了具有5'三磷酸基团的多核苷酸RIG-I激动剂的实例，所述基团被化学修饰以提高其稳定性，所述申请公开的内容出于所有目的通过引用整体并入本文。如WO 2014/049079中所描述的，在一些实施例中，具有5'三磷酸基团的RIG-I激动剂包含至少一个2'-O-甲基化的核苷酸。因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)至少部分地双链的、含有至少一个5'三磷酸部分、含有至少一个2'-O-甲基化的核苷酸并且能够刺激RIG-Ⅰ的多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，RIG-I激动剂在多核苷酸的5'端处含有至少1个核糖核苷酸。在一些实施例中，RIG-I激动剂在多核苷酸的5'端处含有至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多个核糖核苷酸。在一些实施例中，RIG-I激动剂不含任何5'帽或其它修饰。在一些实施例中，RIG-I激动剂是多核糖核苷酸分子或其经修饰形式。在一些实施例中，RIG-I激动剂是WO 2014/049079中公开或描述的多核苷酸。
如WO 2014/049079中所描述的，在一些实施例中，具有5'三磷酸基团的RIG-I激动剂包含至少一个2'-氟核苷酸。因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)至少部分地双链的、含有至少一个5'三磷酸部分、含有至少一个2'-氟核苷酸并且能够刺激RIG-Ⅰ的多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，RIG-I激动剂在多核苷酸的5'端处含有至少1个核糖核苷酸。在一些实施例中，RIG-I激动剂在多核苷酸的5'端处含有至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多个核糖核苷酸。在一些实施例中，RIG-I激动剂不含任何5'帽或其它修饰。在一些实施例中，RIG-I激动剂是多核糖核苷酸分子或其经修饰形式。在一些实施例中，RIG-I激动剂是WO2014/049079中公开或描述的多核苷酸。
如WO 2014/049079中所描述的，在一些实施例中，具有5'三磷酸基团的RIG-I激动剂包含至少一个通过硫代磷酸酯键连接的二核苷酸。因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)至少部分地双链的、含有至少一个5'三磷酸部分、含有至少一个通过硫代磷酸酯键连接的二核苷酸并且能够刺激RIG-Ⅰ的多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，RIG-I激动剂在多核苷酸的5'端处含有至少1个核糖核苷酸。在一些实施例中，RIG-I激动剂在多核苷酸的5'端处含有至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多个核糖核苷酸。在一些实施例中，RIG-I激动剂不含任何5'帽或其它修饰。在一些实施例中，RIG-I激动剂是多核糖核苷酸分子或其经修饰形式。在一些实施例中，RIG-I激动剂是WO 2014/049079中公开或描述的多核苷酸。
在一些实施例中，如WO 2014/049079中所描述，RIG-I激动剂包含有义链和反义链，其中所述有义链包含核苷酸序列5'GACGCUGfACCCUGA AmGUUCAUCPTOUfPTOU 3'(SEQ IDNO:XX)，并且所述反义链包含核苷酸序列3'CUGmCGACUGGGACfUUCAAGUAGPTOAPTOA5'(SEQID NO:XX)，其中核苷酸索引m是2'-O-甲基化的，核苷酸索引f是2'-氟；并且两个核苷酸之间的索引PTO指示所述两个核苷酸通过硫代磷酸酯键连接。
在一些实施例中，如WO 2014/049079中所描述，RIG-I激动剂包含有义链和反义链，其中所述有义链包含核苷酸序列5'GPTOAPTOCGCUGfA CCCUGAAmGUUCAUCPTOUfPTOU 3'(SEQ ID NO:XX)，并且所述反义链包含核苷酸序列3'CUGpmCGACUGGGACfUUCAAGUAGPTOAPTOA 5'(SEQ ID NO:XX)，其中核苷酸索引m是2'-O-甲基化的，核苷酸索引f是2'-氟；并且两个核苷酸之间的索引PTO指示所述两个核苷酸通过硫代磷酸酯键连接。
PCT申请公开第WO 2017/001702号描述了不连续寡核苷酸RIG-I激动剂的实例，所述申请公开的内容出于所有目的通过引用整体并入本文。如WO 2017/001702中所描述的，在一些实施例中，RIG-I激动剂具有以下结构：
RNA1-B-RNA2
RNA3 RNA4
其中RNA1表示长度为至少六个核苷酸的核糖核酸或其类似物或衍生物的第一链，RNA2表示长度为至少六个核苷酸的核糖核酸或其类似物或衍生物的第二链，RNA3表示长度为至少六个核苷酸的核糖核酸或其类似物或衍生物的第三链，其与RNA1形成至少五个互补碱基对，RNA4表示长度为至少六个核苷酸的核糖核酸或其类似物或衍生物的第四链，其与RNA2形成至少五个互补碱基对，B表示将RNA1的5'末端与RNA2的5'末端共价键合或将RNA1的3'末端与RNA2的3'末端共价键合的二价接头，并且RNA3和RNA4彼此不共价键合。
因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)具有以下结构的不连续寡核苷酸：
RNA1-B-RNA2
RNA3 RNA4
其中RNA1表示长度为至少六个核苷酸的核糖核酸或其类似物或衍生物的第一链，RNA2表示长度为至少六个核苷酸的核糖核酸或其类似物或衍生物的第二链，RNA3表示长度为至少六个核苷酸的核糖核酸或其类似物或衍生物的第三链，其与RNA1形成至少五个互补碱基对，RNA4表示长度为至少六个核苷酸的核糖核酸或其类似物或衍生物的第四链，其与RNA2形成至少五个互补碱基对，B表示将RNA1的5'末端与RNA2的5'末端共价键合或将RNA1的3'末端与RNA2的3'末端共价键合的二价接头，并且RNA3和RNA4彼此不共价键合；与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，RIG-I激动剂是多核糖核苷酸分子或其经修饰形式。在一些实施例中，RIG-I激动剂是WO 2017/001702中公开或描述的多核苷酸。
PCT申请公开第WO 2018/172546号描述了含有优选结合基序的多核苷酸RIG-I激动剂的实例，所述申请公开的内容出于所有目的通过引用整体并入本文。如WO 2017/001702中所描述，在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂在核苷酸链的5'端上具有选自以下的序列基序：
5'-gbucndnwnnnnnnnnwnsnn-3'(SEQ ID NO:XX)、
5'-gucuadnwnnnnnnnnwnsnn-3'(SEQ ID NO:XX)、
5'-guagudnwnnnnnnnnwnsnn-3'(SEQ ID NO:XX)、
5'-gguaadnwnnnnnnnnwnsnn-3'(SEQ ID NO:XX)、
5'-ggcagdnwnnnnnnnnwnsnn-3'(SEQ ID NO:XX)、
5'-gcuucdnwnnnnnnnnwnsnn-3'(SEQ ID NO:XX)、
5'-gcccadnwnnnnnnnnwnsnn-3'(SEQ ID NO:XX)以及
5'-gcgcudnwnnnnnnnnwnsnn-3'(SEQ ID NO:XX)。
因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)在核苷酸链的5'端上具有选自以下的序列基序的多核苷酸RIG-I激动剂：
5'-gbucndnwnnnnnnnnwnsnn-3'(SEQ ID NO:XX)、
5'-gucuadnwnnnnnnnnwnsnn-3'(SEQ ID NO:XX)、
5'-guagudnwnnnnnnnnwnsnn-3'(SEQ ID NO:XX)、
5'-gguaadnwnnnnnnnnwnsnn-3'(SEQ ID NO:XX)、
5'-ggcagdnwnnnnnnnnwnsnn-3'(SEQ ID NO:XX)、
5'-gcuucdnwnnnnnnnnwnsnn-3'(SEQ ID NO:XX)、
5'-gcccadnwnnnnnnnnwnsnn-3'(SEQ ID NO:XX)以及
5'-gcgcudnwnnnnnnnnwnsnn-3'(SEQ ID NO:XX)；
与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，RIG-I激动剂是多核糖核苷酸分子或其经修饰形式。在一些实施例中，RIG-I激动剂是WO2018/172546中公开或描述的多核苷酸。
PCT申请公开第WO 2019/204179号描述了改善RIG-I选择性和/或增强或消除RIG-I驱动的免疫的经修饰的多核苷酸RIG-I激动剂的实例，所述申请公开的内容出于所有目的通过引用整体并入本文。因此，在一些实施例中，本文所描述的方法和组合物中使用的RIG-I激动剂是WO 2019/204179中公开或描述的激动剂。
PCT申请公开第WO 2020/260547号描述了改善RIG-I选择性和/或增强或消除RIG-I驱动的免疫的经修饰的多核苷酸RIG-I激动剂的实例，所述申请公开的内容出于所有目的通过引用整体并入本文。具体地，WO 2019/204179公开了具有特定2'-O-甲基化和/或2'-氟化修饰模式的多核苷酸RIG-I激动剂。因此，在一些实施例中，本文所描述的方法和组合物中使用的RIG-I激动剂是WO 2020/260547中公开或描述的激动剂。
PCT申请公开第WO 2019/246450号描述了短发夹多核苷酸RIG-I激动剂的实例，所述申请公开的内容出于所有目的通过引用整体并入本文。如WO 2019/246450中所描述，在一些实施例中，RIG-I激动剂是含有环或发夹结构的双链的双链体或单链多核苷酸和含有少于25个碱基对的双链部分。在一些实施例中，双链部分含有少于30个、少于25个、少于20个、少于19个、少于18个、少于17个、少于16个、少于15个、少于14个、少于13个、少于12个、少于11个、少于10个、少于9个、少于8个或更少个碱基对。因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)能够刺激RIG-Ⅰ的短发夹多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，本文所描述的方法和组合物中使用的RIG-I激动剂是WO 2019/246450中公开或描述的激动剂。
PCT申请公开第WO 2009/095226号描述了具有一个或多个poly-U序列元件的多核苷酸RIG-I激动剂的实例，所述申请公开的内容出于所有目的通过引用整体并入本文。在一些实施例中，poly-U元件是至少5个连续尿嘧啶残基。在一些实施例中，poly-U元件是至少6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个或更多个连续尿嘧啶残基。如WO 2009/095226中所描述的，在一些实施例中，RIG-I激动剂含有序列基序(NuGlXmGnNv)a，其中：
G是鸟苷(鸟嘌呤)、尿苷(尿嘧啶)或鸟苷(鸟嘌呤)或尿苷(尿嘧啶)的类似物，优选地鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物；
X是鸟苷(鸟嘌呤)、尿苷(尿嘧啶)、腺苷(腺嘌呤)、胸苷(胸腺嘧啶)、胞苷(胞嘧啶)或这些核苷酸(核苷)的类似物，优选地尿苷(尿嘧啶)或其类似物；
N是长度为约4个至50个、优选地约4个至40个、更优选地约4个至30个或4个至20个核酸的核酸序列，每个N独立地选自鸟苷(鸟嘌呤)、尿嘧啶(尿嘧啶)、腺苷(腺嘌呤)、胸腺嘧啶(胸腺嘧啶)、胞苷(胞嘧啶)或这些核苷酸(核苷)的类似物；
a是1至20、优选地1至15、最优选地1至10的整数；
I是1至40的整数，其中当I＝1时，G是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物，当I>1时，这些核苷酸(核苷)的至少50％是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物；
m是整数并且为至少3；
其中当m＝3时，X是尿苷(尿嘧啶)或其类似物，当m>3时，出现至少3个连续尿苷(尿嘧啶)或尿苷(尿嘧啶)类似物；
n是1至40的整数，其中当n＝1时，G是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物，当n>1时，这些核苷酸(核苷)的至少50％是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物；
u、v可以彼此独立地是0至50的整数，优选地其中当u＝0时，v>1或者当v＝0时，u>1；
其中核酸分子的长度为至少50个核苷酸，优选地至少100个核苷酸，更优选地至少150个核苷酸，甚至更优选地至少200个核苷酸，并且最优选地至少250个核苷酸。
因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)能够刺激RIG-Ⅰ的含有包含序列基序(NuGlXmGnNv)a的序列基序的多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，多核苷酸激动剂进一步包含poly-U元件。在一些实施例中，本文所描述的方法和组合物中使用的RIG-I激动剂是WO 2009/095226中公开或描述的激动剂。
PCT申请公开第WO 2013/064584号描述了短双链多核苷酸RIG-I激动剂的实例，所述申请公开的内容出于所有目的通过引用整体并入本文。如WO 2013/064584中所描述的，在一些实施例中，RIG-I激动剂具有以下结构：
5'-(G/C)x(N)y(G/C)z-3'
3'-(G/C)x(N)y(G/C)z-5'
其中G/C是G或C核糖核苷酸，条件是当G核糖核苷酸位于一条链中的某个位置时，另一条链在相对位置中具有C核糖核苷酸，并且反之亦然；N是任何核糖核苷酸，条件是两条链的序列基本上互补；每个x是3至10的整数，具体地3、4、5、6、7、8、9或10，每个y通常是30至200或更大的整数，如500或600，优选地30至150，更优选地30至100，甚至更优选地30至50，并且每个z是3至10的整数，条件是一条链中的x等于另一条链中的x，一条链中的y等于另一条链中的y，并且一条链中的z等于另一条链中的z；并且进一步条件是所述双链结构的长度为至少45bp，典型地为45至520bp或更长，如620bp，优选地45至220bp，更优选地45至150bp，特别优选地45至90bp，甚至更优选地45至70bp。因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)具有以下结构的能够刺激RIG-Ⅰ的双链多核苷酸：
5'-(G/C)x(N)y(G/C)z-3'
3'-(G/C)x(N)y(G/C)z-5'
与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，本文所描述的方法和组合物中使用的RIG-I激动剂是WO 2013/064584中公开或描述的激动剂。
PCT申请公开第WO 2014/169049号描述了具有5'三磷酸基团的RIG-I激动剂的实例，所述申请公开的内容出于所有目的通过引用整体并入本文。如WO 2014/169049中所描述，在一些实施例中，RIG-I激动剂是至少17个核苷酸长的包含2'氟修饰的嘧啶的非线性单链RNA。在一些实施例中，非线性单链RNA是至少18个、至少19个、至少20个、至少25个、至少30个、至少35个、至少40个、至少45个、至少50个、至少55个、至少60个、至少65个、至少70个、至少75个、至少80个、至少85个、至少90个、至少95个、至少100个、至少125个、至少150个、至少200个、至少250个、至少300个、至少400个、至少500个或更多个核苷酸长。因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)至少17个核苷酸长的具有5'三磷酸基团和2'氟修饰的嘧啶的能够刺激RIG-Ⅰ的非线性单链RNA与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，本文所描述的方法和组合物中使用的RIG-I激动剂是WO2014/169049中公开或描述的激动剂。
美国专利第9,775,894号和PCT申请公开第WO 2019/152884号描述了具有一个或多个poly-U序列元件的多核苷酸RIG-I激动剂的实例，所述申请公开的内容出于所有目的通过引用整体并入本文。在一些实施例中，poly-U元件是至少5个连续尿嘧啶残基。在一些实施例中，poly-U元件是至少6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个或更多个连续尿嘧啶残基。因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)含有poly-U元件的能够刺激RIG-Ⅰ的多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，本文所描述的方法和组合物中使用的RIG-I激动剂是美国专利第9,775,894号或PCT申请公开第WO 2019/152884号中公开或描述的激动剂。
PCT申请公开第WO 2017/173427号描述了具有中央发夹和内环的不产生干扰素应答的RIG-I激动剂的实例，所述申请公开的内容出于所有目的通过引用整体并入本文。因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)具有中央发夹和内环的不产生干扰素应答的能够刺激RIG-Ⅰ的多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，本文所描述的方法和组合物中使用的RIG-I激动剂是WO 2017/173427中公开或描述的激动剂。
PCT申请公开第WO 2019/143297号描述了在茎结构中具有扭结的短发夹RNARIG-I激动剂的实例，所述申请公开的内容出于所有目的通过引用整体并入本文。在一些实施例中，短发夹RNA具有不超过100个核苷酸。在一些实施例中，短发夹RNA具有不超过75个、不超过50个、不超过40个、不超过35个、不超过30个、不超过25个、不超过20个、不超过19个、不超过18个、不超过17个、不超过16个、不超过15个或更少个核苷酸。因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)在茎结构中具有扭结的能够刺激RIG-Ⅰ的短发夹RNA与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，本文所描述的方法和组合物中使用的RIG-I激动剂是WO 2019/143297中公开或描述的激动剂。
PCT申请公开第WO 2019/204743号描述了具有5'二磷酸或三磷酸的短平端发夹RNA的实例，所述5'二磷酸或三磷酸具有提高RLR介导的活性的序列基序，所述申请公开的内容出于所有目的通过引用整体并入本文。在一些实施例中，短发夹RNA具有不超过100个核苷酸。在一些实施例中，短发夹RNA具有不超过75个、不超过50个、不超过40个、不超过35个、不超过30个、不超过25个、不超过20个、不超过19个、不超过18个、不超过17个、不超过16个、不超过15个或更少个核苷酸。因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)具有5'二磷酸或三磷酸的能够刺激RIG-Ⅰ的短平端发夹RNA与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，本文所描述的方法和组合物中使用的RIG-I激动剂是WO 2019/204743中公开或描述的激动剂。
PCT申请公开第WO 2021/076713号描述了含有经修饰的核苷酸的多核苷酸RIG-I激动剂的实例，所述申请公开的内容出于所有目的通过引用整体并入本文。如WO 2021/076713中所描述，在一些实施例中，RIG-I激动剂包含序列基序5'-PEPSZV-3'(SEQ ID NO:XX)，其中每个P独立地并且在每次出现时是C-5修饰的嘧啶；E是C-5修饰的嘧啶、A或G；S是G或C；Z是C-5修饰的嘧啶或A；并且V是C、A或G。因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)含有包含序列基序5'-PEPSZV-3'(SEQ ID NO:XX)的序列基序的能够刺激RIG-Ⅰ的多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。如WO 2021/076713中所描述，在一些实施例中，RIG-I激动剂包含序列基序5'-PEPSFP-3'(SEQ ID NO:XX)，其中每个P独立地并且在每次出现时是C-5修饰的嘧啶；E是C-5修饰的嘧啶、A或G；S是G或C；并且F是C-5修饰的嘧啶、未经修饰的C、G或A。因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)含有包含序列基序5'-PEPSFP-3'(SEQ ID NO:XX)的序列基序的能够刺激RIG-Ⅰ的多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，本文所描述的方法和组合物中使用的RIG-I激动剂是WO 2021/076713中公开或描述的激动剂。
在一些实施例中，RIG-I激动剂是通过体外转录来自甲型流感(H1N1)病毒、具有序列5'-pppGGAGCAAAAGCAGGGUGACAAAGACAUAAUGGAUCCAAACACUGUGUCAAGCUUUCAGGUAGAUUGCUUUCUUUGGCAUGUCCGCAAAC-3'(SEQ ID NO:XX)的单链反义RNA病毒(3p-hpRNA)或其高度保守的核苷酸序列的序列而产生的5'三磷酸发夹RNA。参见例如，Rehwinkel J.等人,《细胞(Cell)》,140:397-408(2010)和Liu G.等人,《病毒学杂志(J Virol.)》89(11):6067-79(2015)，所述文献的内容出于所有目的通过引用整体并入本文。因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)能够刺激RIG-Ⅰ的具有3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的序列的多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。
在一些实施例中，RIG-I激动剂具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的序列至少80％相同的序列。在一些实施例中，RIG-I激动剂具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的序列至少85％相同的序列。在一些实施例中，RIG-I激动剂具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的序列至少90％相同的序列。在一些实施例中，RIG-I激动剂具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的序列至少95％相同的序列。在一些实施例中，RIG-I激动剂具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的序列至少96％相同的序列。在一些实施例中，RIG-I激动剂具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的序列至少97％相同的序列。在一些实施例中，RIG-I激动剂具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的序列至少98％相同的序列。在一些实施例中，RIG-I激动剂具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的序列至少99％相同的序列。因此，在一些实施例中，提供了用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列的能够刺激RIG-Ⅰ的多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。
在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为至少20个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为至少21个、至少22个、至少23个、至少24个、至少25个、至少30个、至少35个、至少40个、至少45个、至少50个、至少55个、至少60个、至少65个、至少70个、至少75个、至少80个、至少85个、至少90个、至少95个、至少100个或更多个核苷酸的单链多核苷酸。
在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是poly(dA:dT)。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是poly(I:C)。
在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度不超过500个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度不超过400个、不超过350个、不超过300个、不超过250个、不超过200个、不超过150个、不超过125个、不超过100个、不超过75个、不超过50个或更少个核苷酸的单链多核苷酸。
在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为20个至500个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为20个至400个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为20个至300个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为20个至250个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为20个至200个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为20个至150个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为20个至125个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为20个至100个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为20个至75个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为20个至50个核苷酸的单链多核苷酸。
在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为35个至500个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为35个至400个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为35个至300个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为35个至250个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为35个至200个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为35个至150个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为35个至125个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为35个至100个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为35个至75个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为35个至50个核苷酸的单链多核苷酸。
在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为50个至500个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为50个至400个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为50个至300个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为50个至250个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为50个至200个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为50个至150个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为50个至125个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为50个至100个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为50个至75个核苷酸的单链多核苷酸。
在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为75个至500个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为75个至400个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为75个至300个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为75个至250个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为75个至200个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为75个至150个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为75个至125个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为75个至100个核苷酸的单链多核苷酸。
在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为100个至500个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为100个至400个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为100个至300个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为100个至250个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为100个至200个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为100个至150个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为100个至125个核苷酸的单链多核苷酸。
在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为125个至500个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为125个至400个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为125个至300个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为125个至250个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为125个至200个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为125个至150个核苷酸的单链多核苷酸。
在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为150个至500个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为150个至400个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为150个至300个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为150个至250个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为150个至200个核苷酸的单链多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸RIG-I激动剂是长度为150个至150个核苷酸的单链多核苷酸。
编码效应多肽的多核苷酸
在一些实施例中，本文所描述的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段用于将编码效应多肽的多核苷酸递送到癌组织。效应多肽是直接或间接影响癌症治疗的任何多肽，例如通过减缓癌症进展、诱导癌细胞的细胞死亡、诱导癌细胞衰老等。例如，在一些实施例中，效应多肽刺激免疫细胞上调细胞因子的产生，使得靶向癌细胞，从而导致细胞死亡。在其它实施例中，效应多肽表达或刺激肿瘤细胞上调肿瘤抗原的表达，所述肿瘤抗原是免疫细胞鉴定肿瘤细胞的标志物。关于效应多肽的综述，参见例如Esensten等人,“CD28共刺激：从机制到疗法(CD28 costimulation:from mechanism to therapy)”,《免疫审查(Immunity Review)》,44,(2016)973；《免疫(Immunity)》,2016,44,973-988；Smolle等人,非编码RNA和免疫检查点(Noncoding RNAs and immune checkpoints),《欧洲生物化学联合会杂志(FEBS Journal)》,2017,284,1952-1966；Chen等人,抗PD-1-PD-L1治疗人类癌症的过去、现在和未来(Anti-PD-1-PD-L1 therapy of human cancer past,present,andfuture),《临床研究杂志(Journal of Clinical Investigation)》,2015,第125卷,9,3384-3391；Rowshanravan等人,CTLA-4——免疫疗法中的移动靶标(CTLA-4a movingtarget in immunotherapy),《血液(Blood)》,2018,第131卷,1,58-67；以及Dougall等人,用于癌症免疫疗法的TIGIT和CD96新检查点受体靶标(TIGIT and CD96 New checkpointreceptor targets for cancer immunotherapy),《免疫学评论(ImmunologicalReviews)》,2017,276,112-120，所述文献中的每个文献的内容出于所有目的通过引用整体并入本文。
因此，一方面，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)编码效应多肽的治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。
肿瘤抗原
在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)编码肿瘤相关抗原的治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。
肿瘤抗原是几乎专门呈递于癌细胞的细胞表面上的肽，由此将癌细胞与不展示肿瘤抗原的非癌细胞区分开。当癌细胞死亡时，这些肿瘤抗原被释放到肿瘤微环境中，并且可以被免疫系统识别为外来肽、改变的自身肽或自身肽。当释放足够量的肿瘤抗原时，免疫系统可以通过产生针对肿瘤抗原的免疫应答来产生抗肿瘤免疫。具体地，免疫系统靶向并破坏展示用于产生免疫应答的肿瘤抗原的癌细胞。
已经实验性地开发了若干类别的抗原来产生抗肿瘤免疫。具体地，将肿瘤抗原作为肽或编码抗原的核酸外源性施用于患有在其细胞表面展示肿瘤抗原的癌症的患者。进而，免疫系统被呈递足够量的抗原以产生针对肿瘤抗原的免疫应答，从而产生抗肿瘤免疫。肿瘤抗原类别的实例包含肿瘤病毒蛋白抗原、新抗原和源自癌胚系基因的抗原。通常，肿瘤抗原或编码肿瘤抗原的多核苷酸与激活树突状细胞的佐剂或树突状细胞本身共同施用，以促进抗肿瘤免疫的产生。关于综述，参见例如Haen等人,“迈向新高度：肿瘤抗原库的表征、分类和意义(Towards new horizons Characterization,classification andimplications of the tumor antigenic repertoire)”,《自然评论临床肿瘤学(NatureReviews-Clinical Oncology)》,2020,第17卷,595-610；Saxena M.等人,《自然综述：癌症(Nat.Rev.Cancer)》21,360–378(2021)，所述文献的内容出于所有目的通过引用整体并入本文。
在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)编码肿瘤病毒蛋白抗原的治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。肿瘤病毒蛋白抗原是呈递于癌症的细胞表面的源自与癌症相关的致癌病毒的抗原。例如，绝大多数宫颈癌即使不是由HPV感染引起的，也与所述感染相关。因此，呈递在宫颈癌细胞的细胞表面上的源自HPV的抗原表示肿瘤病毒蛋白抗原。肿瘤病毒蛋白抗原的非限制性实例，以及与这些抗原相关的癌症的实例在下表1中呈现。
表1.肿瘤病毒蛋白和相关癌症类型的实例。
因此，在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)编码源自表1中列出的病毒蛋白的肿瘤病毒蛋白抗原的治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，治疗有效量的组合物与佐剂共同施用。在一些实施例中，治疗有效量的组合物与树突状细胞共同施用。
在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)编码源自表1中列出的病毒蛋白的相应肿瘤病毒蛋白抗原的治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物，其中所述癌症是与表1中的相应肿瘤病毒蛋白抗原相关的癌症。在一些实施例中，治疗有效量的组合物与佐剂共同施用。在一些实施例中，治疗有效量的组合物与树突状细胞共同施用。
在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)编码新抗原的治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。新抗原是呈递于癌细胞的表面的肽，具有对癌组织来说新颖的氨基酸序列。也就是说，新抗原具有种系(野生型)人类基因组中不存在的氨基酸序列。新抗原是在癌症发展期间或之后通过基因组突变产生的，以此方式，对个体患者是特异性的。
深度测序技术可以用于鉴定个体肿瘤的外显子组中存在的突变，以预测新抗原。这是通过鉴定可以被T细胞识别的新抗原来实现的。例如，在一些实施例中，分析肿瘤材料的非同义体细胞突变。RNA测序数据用于关注所表达基因的突变。含有任何经鉴定的非同义突变的肽段在计算机上产生，并且不过滤，使用预测算法过滤，或者用于在由患者的癌组织产生的质谱数据中鉴定MHC相关新抗原。对突变对所得肽-MHC复合物的影响的建模可以用作另外的过滤器，以鉴定特别有前景的新抗原。通过基于MHC多聚体的筛选，所得表位组也可以用于鉴定生理上发生的新抗原特异性T细胞应答。(参见例如，《科学(Science)》,2015年4月03日:第348卷,第6230期,第69-74页)。然而，包含外显子组分析和蛋白质组分析在内的其它技术也可以用于分别鉴定对应于新抗原的新型基因组或新型肽序列。使用转录组、外显子组和蛋白质组分析从个体癌症中鉴定的新抗原的非限制性实例描述于例如Haen等人,迈向新高度：肿瘤抗原库的表征、分类和意义,《自然评论临床肿瘤学》,2020,第17卷,595-610中。
因此，在一些实施例中，如本文所描述的，本公开提供了一种用于通过首先鉴定受试者的癌症的新抗原并且然后向所述受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的所述癌症的方法，所述组合物包含在(i)编码经鉴定的新抗原的治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。
在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)编码癌症种系抗原的治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。癌症种系抗原是一类由在睾丸和/或卵巢的配子发生细胞和人类癌症中表达的基因编码的免疫原性肿瘤抗原。癌症种系抗原的实例包含但不限于，源自滑膜肉瘤X-2(SSX-2)、纽约食管鳞状细胞癌-1(NY-ESO-1)、黑色素瘤相关抗原1(MAGA1)和黑色素瘤相关抗原3(MAGA3)的抗原，所述抗原中的每种抗原在不同的人类癌症如黑色素瘤和肺癌中过表达。
因此，在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)编码源自SSX-2、NY-ESO-1、MAGA1或MAGA3蛋白的癌症种系抗原的治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，癌症是黑色素瘤。在一些实施例中，癌症是肺癌。
在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)编码肿瘤相关抗原(TAA)的治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，治疗有效量的组合物与佐剂共同施用。在一些实施例中，治疗有效量的组合物与树突状细胞共同施用。
肿瘤相关抗原是源自主要在癌组织中表达的野生型蛋白质序列的肽。TAA主要由基因扩增或翻译后修饰产生，这导致相对于非癌细胞，潜在的蛋白质在癌细胞内差异表达。已经鉴定的肿瘤相关抗原的非限制性实例在表2中呈现。
表2.肿瘤相关抗原和相关癌症的实例。
因此，在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)编码源自表2中列出的蛋白质的肿瘤相关抗原的治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，治疗有效量的组合物与佐剂共同施用。在一些实施例中，治疗有效量的组合物与树突状细胞共同施用。
在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)编码源自表2中列出的蛋白质的相应肿瘤相关抗原的治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物，其中所述癌症是与表2中的肿瘤相关抗原相关的癌症。在一些实施例中，治疗有效量的组合物与佐剂共同施用。在一些实施例中，治疗有效量的组合物与树突状细胞共同施用。
CD28是以细胞外可变免疫球蛋白样结构域为特征的共刺激分子亚家族的成员。人CD28由编码具有220个氨基酸的蛋白质的四个外显子构成，所述蛋白质在细胞表面上表达为44kDa的糖基化的二硫键连接的同源二聚体。CD28家族的成员具有许多共同的特征，如例如与单一跨膜结构域和含有关键信号传导基序的胞质结构域连接的成对V集免疫球蛋白超家族(IgSF)结构域。(Esensten等人,《免疫审查》(2016))。据报告，CD28通过与信号传导基序的相互作用来调节T细胞激活。例如，CD28的酪氨酸磷酸化在表征CD28共刺激和随后调节T细胞激活的早期信号传导事件中起作用。因此，在一些实施例中，本文提供的用于治疗癌症的组合物包含在(i)编码共刺激分子的信号传导基序的多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物，所述共刺激分子具有与单一跨膜结构域和胞质结构域连接的成对V集免疫球蛋白超家族(IgSF)结构域。
促炎性细胞因子
促炎性细胞因子通过直接的抗增殖或促凋亡活性，或通过刺激免疫细胞对肿瘤细胞的细胞毒性活性来间接限制肿瘤细胞生长。因此，促炎性细胞因子可以改善抗原引发，增加肿瘤微环境中效应免疫细胞的数量和/或增强它们的溶细胞活性。促炎性细胞因子的实例包含但不限于IL-2、IL-15、IL-21、IL-12、IFN-α、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF、CSF-2)和TGF-β。
IL-2被批准用于治疗晚期肾细胞癌(RCC)和转移性黑色素瘤，并且IFN-α被批准用于治疗毛细胞白血病、滤泡性非霍奇金淋巴瘤、黑色素瘤和AIDS相关卡波西氏肉瘤(Berraondo等人,临床癌症免疫疗法中的细胞因子(Cytokines in clinical cancerimmunotherapy).《英国癌症杂志(British Journal of Cancer)》,2019,120,6-15；Fyfe等人,255例患有转移性肾细胞癌患者接受高剂量重组白介素-2疗法的结果(Results oftreatment of 255patients with metastatic renal cell carcinoma who receivedhigh-dose recombinant interleukin-2therapy).《临床肿瘤学杂志(J.Clin.Oncol.)》,1995,13,688-696；Atkins等人,用于患有转移性黑色素瘤的患者的高剂量重组白介素2疗法：对1985年至1993年间治疗的270例患者的分析(High-dose recombinant interleukin2therapy for patients with metastatic melanoma:analysis of 270patientstreated between 1985and 1993).《临床肿瘤学杂志》,1999,17,2105-2116；Golomb等人,毛细胞白血病的α-2干扰素疗法：对64例患者的多中心研究(Alpha-2interferon therapyof hairy-cell leukemia:a multicenter study of 64patients).《临床肿瘤学杂志》,1986,4,900-905；Solal-Celigny等人,重组干扰素α-2b与含多柔比星的方案组合治疗患有晚期滤泡性淋巴瘤的患者(Recombinant interferon alfa-2b combined with a regimencontaining doxorubicin in patients with advanced follicular lymphoma).成人淋巴瘤研究组的研究(Groupe d'Etude des Lymphomes de l'Adulte).《新英格兰医学杂志(New Engl.J.Med.)》,1993,329,1608-1614；Kirkwood等人,高危切除皮肤黑色素瘤的干扰素α-2b辅助疗法：东部肿瘤协作组试验EST 1684(Interferon alfa-2b adjuvant therapyof high-risk resected cutaneous melanoma:the Eastern Cooperative OncologyGroup Trial EST 1684).《临床肿瘤学杂志》,1996,14,7-17；Groopman等人,用于与获得性免疫缺陷综合征相关的卡波西氏肉瘤的重组α-2干扰素疗法(Recombinant alpha-2interferon therapy for Kaposi's sarcoma associated with the acquiredimmunodeficiency syndrome).《内科医学年鉴(Ann.Intern.Med.)》,1984,100,671-676)。
因此，在一些实施例中，本文所描述的用于治疗癌症的组合物包含3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段和编码促炎性细胞因子的多核苷酸。
在一些实施例中，如本文所描述的，本文所描述的用于治疗癌症的组合物包含在(i)编码用于促炎性细胞因子的激动剂的多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。
基因调节多核苷酸
在一些实施例中，本文所描述的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段用于递送基因调节多核苷酸，所述基因调节多核苷酸例如通过靶向基因或其转录物来减少或沉默促进癌症生长和/或进展的基因产物的表达。基因调节多核苷酸的非限制性实例包含siRNA、miRNA、saRNA、antagomirs、反义寡核苷酸和诱骗寡核苷酸。关于已经研究过的各种类型的基因调节多核苷酸的治疗能力的综述，参见例如Roberts TC,Langer R,Wood MJA,“寡核苷酸药物传递的研究进展(Advances in oligonucleotide drug delivery)”,《自然综述：药物发现(Nat.Rev.Drug Discov.)》,19(10):673-94(2020)，所述文献的内容出于所有目的通过引用整体并入本文。
因此，一方面，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)基因调节多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。
siRNA
在一些实施例中，如本文所描述的，本文所描述的用于治疗癌症的组合物包含在(i)siRNA与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。小干扰RNA(siRNA)，也被称为短干扰RNA或沉默RNA，是一类长度通常为20个至27个碱基对的并且在RNA干扰(RNAi)通路内进行操作的双链RNA非编码RNA分子。基因调节核酸药物如siRNA可以调节转录后基因表达并且沉默靶向基因，进一步调节参与癌症进展的细胞内信号传导通路(Zhou等人,用于癌症免疫疗法的核酸治疗剂的递送(Delivery of nucleic acidtherapeutics for cancer immunotherapy),《药物发现中的医学》,2020年3月24日；Dahlman等人,使用低分子量的聚合物纳米颗粒进行的体内内皮siRNA递送(In vivoendothelial siRNAdelivery using polymeric nanoparticles with low molecularweight),《自然纳米技术(Nature Nanotechnol.)》2014；9(8):648-655)。
因此，siRNA可以用于通过调节翻译后基因表达和/或沉默对应基因来调节免疫检查点分子如本文所描述的免疫检查点分子的表达。类似地，siRNA可以用于通过调节免疫检查点分子的激动剂或抑制剂的表达来间接调节免疫检查点分子的活性。因此，在一些实施例中，如本文所描述的，本文所描述的用于治疗癌症的组合物包含在(i)靶向编码免疫检查点分子的基因的mRNA转录物的siRNA与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。
PD-1和其某些同源物，如例如PD-L1，抑制T细胞应答，特别是在肿瘤微环境中。因此，PD-1和/或PD-L1的抑制剂可以提高T细胞攻击和杀死肿瘤细胞的功效。对PD-1和/或PD-L1活性的抑制可以通过例如抑制细胞内PD-1和/或PD-L1的产生来实现。因此，在一些实施例中，本文提供的用于癌症的组合物包含在(i)靶向PD-1或PD-L1的mRNA转录物的siRNA与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。
已知抑制细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)活性会导致T细胞的快速浸润。因此，CTLA-4的抑制剂可能导致促进T细胞应答。因此，在一些实施例中，本文提供的用于治疗癌症的组合物包含在(i)靶向CTLA-4的mRNA转录物的siRNA与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。
siRNA类似地可以用于沉默调节肿瘤生长或血管生成的基因。例如，siRNA已经用于靶向血管内皮生长因子(VEGF)和驱动蛋白纺锤体蛋白(KSP)(用于实体瘤，例如结肠癌的肝转移)。可以使用siRNA沉默的其它基因靶标包含但不限于编码蛋白激酶N3(PKN3)(例如，用于转移性胰腺癌)、核糖核苷酸还原酶的M2亚单位(RRM2)(例如，用于实体瘤)、Myc癌蛋白(例如，用于肝细胞癌)、肝配蛋白A型受体2(EphA2)(例如，用于晚期癌症)和KRAS G12D突变(例如，用于晚期胰腺癌)的基因。参见例如，《国际纳米医学杂志(International Journalof Nanomedicine)》2019:143111–3128。因此，在一些实施例中，本文提供的用于治疗癌症的组合物包含在(i)靶向VEGF、KSP、PKN3、RRM2、EphA2或KRAS的mRNA转录物的siRNA与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。
在本文所描述的方法和组合物中发现用途的siRNA的其它实例包含但不限于靶向来自编码CD25(IL-2受体)的基因的mRNA转录物的siRNA，以下调CD8+T细胞中的IL-2信号传导。
下表2提供了正在研究的siRNA和相关癌症类型的其它非限制性实例(参见例如，《国际分子科学杂志(Int.J.Mol.Sci.)》22(2021)3295)。
表2：示例siRNA和相关癌症类型。
因此，在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)表2中列出的siRNA与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。
在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)表2中列出的相应siRNA与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物，其中所述癌症是与表2中的相应siRNA相关的癌症。
在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)表2中列出的靶向基因的转录物的siRNA与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。
在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)表2中列出的靶向相应基因的转录物的siRNA与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物，其中所述癌症是与表2中的相应基因相关的癌症。
miRNA
在一些实施例中，如本文所描述的，本文所描述的用于治疗癌症的组合物包含在(i)miRNA与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。微小RNA(miRNA)是一类在调节基因表达中起重要作用的非编码RNA。miRNA是长度为约18-24nt的内源性非编码小RNA，可以通过类似于siRNA的机制调节靶基因表达(Zhou等人,用于癌症免疫疗法的核酸治疗剂的递送(Delivery of nucleic acid therapeutics for cancerimmunotherapy),《药物发现中的医学》,2020年3月24日；Xiao等人,免疫系统中的微小RNA控制(MicroRNA control in the immune system)；基本原则(basic principles),《细胞》,2009；136(1):26-36)。miRNA递送的一个主要挑战是将它们高效地递送到具有深层组织穿透的肿瘤组织中。此外，肿瘤微环境的复杂性也阻止了miRNA向靶肿瘤细胞的高效胞内递送(Rupaimoole等人,癌细胞和肿瘤微环境中的MiRNA失调(MiRNA deregulation incancercells and the tumor microenvironment).《癌症发现(Cancer Discov.)》2016；6(3):235–46)。
然而，有利地，miRNA的表达对不同的肿瘤具有特异性，并且miRNA涉及免疫应答的早期调节。一种用于治疗癌症的方法是通过调节miRNA的水平来调节免疫检查点分子如本文所描述的免疫检查点分子的表达。调节免疫检查点相关过程的miRNA的实例包含但不限于miR-15a、-15b、-16、-195、-424、497、-503，其调节PD-L1和CD80的表达。具有肿瘤抑制功能的miRNA的另一个实例是miR-28，其通过与T细胞中TIM3、BTLA和PD-1的相应3'UTR结合来抑制它们的表达。miRNA的另一个实例是miR-138，其抑制效应T细胞和调节性T细胞两者的表面上的PD-1和CTLA-4的表达。miR-34家族，包含miR-34a、-34b和-34c，抑制PD-L1的表达。
已知miR-138-5p的表达阻碍CRC细胞的增殖，阻断它们从细胞周期的G1到S期的转变，并且直接抑制PD-L1的表达。
在某些类型的癌细胞中过表达的其它miRNA如例如miR-20b、-21和130b，可以通过PTEN的表达有效地间接减轻肿瘤微环境中的T细胞激活。
因此，如本文所描述的，本文所描述的用于治疗癌症的组合物包含在(i)直接或间接调节免疫检查点分子的表达的miRNA与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。
在一些实施例中，如本文所描述的，本文所描述的用于治疗癌症的组合物包含在(i)直接或间接调节免疫检查点分子的表达的miRNA模拟分子与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。由于相同的序列，miRNA可以是模拟内源性miRNA的双链合成RNA。
在一些实施例中，如本文所描述的，本文所描述的用于治疗癌症的组合物包含在(i)编码直接或间接调节免疫检查点分子的表达的miRNA的miRNA表达载体与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。
在一些实施例中，如本文所描述的，本文所描述的用于治疗癌症的组合物包含在(i)靶向直接或间接调节免疫检查点分子的表达的miRNA的LNA修饰的反义寡脱氧核糖核苷酸(ASO)与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。LNA是双环RNA类似物，其中通过引入2'-O、4'-C亚甲基桥将核糖锁定在C3'-内构象中。
在一些实施例中，如本文所描述的，本文所描述的用于治疗癌症的组合物包含在(i)靶向直接或间接调节免疫检查点分子的表达的miRNA的安塔够妙与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。安塔够妙可以是与靶向miRNA互补的除了2'-O-甲氧基乙基之外还用部分硫代磷酸酯骨架修饰的单链23个核苷酸的RNA分子。已知这通过保护miRNA免于降解来增加其稳定性。
在一些实施例中，如本文所描述的，本文所描述的用于治疗癌症的组合物包含在(i)靶向直接或间接调节免疫检查点分子的表达的miRNA的反义寡脱氧核糖核苷酸(ASO)与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。
在一些实施例中，如本文所描述的，本文所描述的用于治疗癌症的组合物包含在(i)直接或间接调节免疫检查点分子的表达的miRNA海绵与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。miRNA海绵可以是含有从表达载体转录的所关注miRNA的多个串联结合位点的RNA。
类似地，如本文所描述的，调节与肿瘤生长或血管生成相关的蛋白质表达的miRNA也可以通过与3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段复合来递送。表3给出了miRNA和与其相关的癌症的非限制性实例。
表3.正在研究用于治疗癌症的miRNA的示例(参见例如，《国际临床化学与实验室医学联合会杂志(Journal of the International Federation of Clinical Chemistryand Laboratory Medicine)》(2019)第30卷,第2号,第114-127页)。
miRNA 癌症
miR-122 HCV
miR-155 淋巴瘤和白血病
miR-16 间皮瘤
miR-34 肾细胞癌、肢端黑色素瘤、肝细胞癌
MRX34 肝癌、肺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、多发性骨髓瘤、肾细胞癌
INT-1B3 实体瘤
TargomiR 恶性胸膜间皮瘤、非小细胞肺癌
Cobomarsen(MRG-106) 皮肤T细胞淋巴瘤、结直肠癌
因此，在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)表3中列出的miRNA与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。
在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)表3中列出的相应miRNA与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物，其中所述癌症是与表3中的相应miRNA相关的癌症。
saRNA
在一些实施例中，如本文所描述的，本文所描述的用于治疗癌症的组合物包含在(i)saRNA与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。小激活RNA(saRNA)是一类长度约21nt在两端有2nt突出端的非编码dsRNA(Zhou等人,用于癌症免疫疗法的核酸治疗剂的递送(Delivery of nucleic acid therapeutics for cancerimmunotherapy),《药物发现中的医学》,2020年3月24日；Kwok等人,开发小激活RNA作为治疗剂：当前的挑战和希望(Developing small activating RNAas a therapeutic:currentchallenges and promises).《治疗剂递送(Ther.Deliv.)》2019；10(3):151–64)。虽然它与siRNA有相似的结构，但它具有相反的基因调节机制。细胞质中的saRNA被特异性装载到AGO2蛋白，并且此RNA-AGO2复合物被转运到细胞核中，以诱导靶向基因启动子进行基因激活(Li等人,小DsRNA在人细胞中诱导转录激活(Small DsRNAsinducetranscriptional activation in human cells).《美国国家科学院院刊》2006；103(46):17337–42)。据报告，核中的saRNA-AGO2复合物募集用于转录起始的必需蛋白，如RNA解旋酶A、RNA聚合酶相关蛋白CTR9同源物(CTR9)和RNA聚合酶II相关因子1同源物(PAF1)(Portnoy等人,saRNA引导的Ago2将RITA复合物靶向启动子以刺激转录(SaRNA-guidedAgo2 targets the RITA complex to promoters to stimulate transcription).《细胞研究(Cell Res.)》2016；26(3):320–35)。由于其基因上调的能力，saRNA显示出如癌症免疫疗法的应用潜力。因此，在一些实施例中，如本文所描述的，本文所描述的用于治疗癌症的组合物包含在(i)诱导编码免疫检查点分子的基因激活的saRNA与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。
在一个实例中，saRNA可以上调转录因子CCATT/增强子结合蛋白α(CEBPA)，这导致功能性C/EBP蛋白和白蛋白的增加，并且抑制大鼠模型中肝癌的生长。表4列出了正在研究的用于治疗癌症的saRNA的其它非限制性实例。
表4.正在研究的用于治疗癌症的saRNA
saRNA 癌症
C/EBPα-saRNA 肝细胞癌、胰腺导管腺癌
dsP21-322 膀胱癌
安塔够妙
在一些实施例中，如本文所描述的，本文所描述的用于治疗癌症的组合物包含在(i)安塔够妙与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。安塔够妙是一种小的合成RNA，与特定的miRNA靶标互补，在Ago2的切割位点有错配或某种碱基修饰以抑制Ago2切割。安塔够妙是与细胞靶mRNA竞争的隔离的特异性内源性微小RNA，诱导miRNA阻遏并且通过RISC阻止mRNA靶标降解。因此，安塔够妙可以用于miRNA功能丧失有利的治疗。
安塔够妙的实例是抗miR21。研究表明，通过使用抗miR21沉默miR21影响结肠癌细胞的活力、凋亡和细胞周期(Song等人,“抗miR21安塔够妙，一种用于结直肠癌的治疗工具，通过干扰血管生成相关miR30具有潜在的协同效应(The anti-miR21 antagomir,atherapeutic tool for colorectal cancer,has a potential synergistic effect byperturbing an angiogenesis-associated miR30)”,《遗传学前沿(Front.Genet.)》,2014年1月)。
安塔够妙的另一个实例是安塔够妙-221。研究表明，安塔够妙-221能够通过抑制miR-221的功能来减少细胞增殖，miR-221在HCC中起着重要作用，因为它抑制肿瘤抑制性靶蛋白，如P27KIP1、P57KIP2以及磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)。同样，若干项研究表明，安塔够妙-21通过靶向PTEN使AKT丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT)和ERK1/2通路失活，从而逆转上皮间质转化(EMT)。安塔够妙-21的这种作用可以潜在地用于靶向乳腺癌恶性倾向的病因机制。参见例如，Atri等人,AGO驱动的非编码RNA(AGO-Driven Non-Coding RNAs)(2019)。
靶向miR-155的安塔够妙正处于1期(NCT02580552)和2期临床试验(NCT03713320)。miR-155调节血液和淋巴细胞的分化和增殖，并且是用于治疗某些种类的淋巴瘤和白血病的合适靶标。参见例如，“基于RNA的治疗剂：从反义寡核苷酸到miRNA(RNA-Based Therapeutics:From Antisense Oligonucleotides to miRNAs)”,2020年1月7日；9(1):137。
因此，在一些实施例中，如本文所描述的，本文所描述的用于治疗癌症的组合物包含在(i)调节肿瘤相关mRNA的翻译的靶向微小RNA的安塔够妙与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。安塔够妙的非限制性实例包含安塔够妙-221、安塔够妙-21和安塔够妙-155。
反义寡核苷酸(ASO)
在一些实施例中，如本文所描述的，本文所描述的用于治疗癌症的组合物包含在(i)反义寡核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。反义寡核苷酸(ASO)是具有靶向任何所关注基因产物的潜力的短的合成的化学修饰的核苷酸链。通常，ASO是与细胞内的靶基因转录的信使RNA(mRNA)序列互补的单链序列(Rinaldi等人,“反义寡核苷酸：用于神经病症治疗的下一个前沿(Antisense oligonucleotides:thenext frontier for treatment of neurological disorders)”,《神经病学自然综述(Nat.Rev.Neurol.)》2018；14(1):9-21；Bennett,治疗性反义寡核苷酸正在成熟(Therapeutic Antisense Oligonucleotides Are Coming of Age).《医学年鉴(Ann.Rev.Med.)》2019；70:307-321)。ASO靶向对应的mRNA，通过如内源性细胞RNA酶H的机制降解靶向复合物。
用于癌症疗法的ASO的一个实例是靶向CD39 mRNA以改善CD8+T细胞增殖，由此改善抗肿瘤免疫应答的ASO。Zhou等人,用于癌症免疫疗法的核酸治疗剂的递送(Delivery ofnucleic acid therapeutics for cancer immunotherapy).《药物发现中的医学》,6(2020)100023。
表5给出了ASO和与其相关的癌症的其它非限制性实例。
表5.正在研究的用于治疗癌症的示例ASO(参见例如，《国际分子科学杂志》22(2021)3295)。
因此，在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)表5中列出的反义寡核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。
在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)表5中列出的相应反义寡核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物，其中所述癌症是与表5中的相应反义寡核苷酸相关的癌症。
在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)表5中列出的靶向基因的转录物的反义寡核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。
在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)表5中列出的靶向相应基因的转录物的反义寡核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物，其中所述癌症是与表5中的相应基因相关的癌症。
诱骗寡核苷酸
在一些实施例中，本文所描述的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含编码诱骗寡核苷酸的多核苷酸。据报告，顺式元件双链寡核苷酸(被称为诱骗寡脱氧核苷酸)的转染是一种强有力的工具，为基因疗法提供了一类新的抗原策略(Crinelli等人,含有锁定核酸的诱骗寡核苷酸的设计和表征(Design and characterization of decoyoligonucleotides containing locked nucleic acids).《核酸研究(Nucleic AcidRes.)》2002；30(11):2435-2443)。一个此类实例是STAT3诱骗寡核苷酸，它是一种双链15聚体寡核苷酸，非常对应于c-fos启动子内的信号转导物和转录激活因子3(STAT3)应答元件，具有潜在的抗肿瘤活性。STAT3诱骗寡核苷酸与激活的STAT3特异性结合，并且阻断STAT3与多种STAT3应答性启动子上的DNA序列的结合，从而使得抑制STAT3介导的转录，并且潜在地抑制肿瘤细胞增殖。STAT3在包含头颈部鳞状细胞癌在内的多种癌症中被组成性地激活，导致细胞生长失控和肿瘤转化。
基因组编辑多核苷酸
编码可以进行基因组编辑的复合物的多核苷酸的实例在以下部分描述。
锌指核酸酶
在一些实施例中，本文所描述的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含编码锌指核酸酶的多核苷酸。锌指核酸酶是基因组编辑核酸酶。锌指核酸酶是通过将锌指DNA结合结构域与DNA切割结构域融合而产生的人工限制性酶。设计的锌指结构域的结合特异性将锌指核酸酶引导到特定的基因组位点。与其它可编程核酸酶相比，锌指核酸酶的使用通常受限于较差的靶向密度和相对高水平的脱靶效应，从而导致细胞毒性(Song等人,CRISPR/Cas9、ZFN和TALEN在产生位点特异性基因组改变中的用途(The Use of CRISPR/Cas9,ZFNs,and TALENs in Generating Site-Specific Genome Alterations),2014,《酶学方法(Methods in Enzymology)》)。然而，锌指核酸酶也是最小类型的可编程核酸酶，使得可以使用递送载体如腺相关病毒(AAV)载体来表达它们。
转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)
在一些实施例中，本文所描述的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含编码转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)的多核苷酸。TALEN是基因组编辑核酸酶(Zhou等人,用于癌症免疫疗法的核酸治疗剂的递送(Delivery of nucleic acid therapeutics forcancer immunotherapy),《药物发现中的医学》,2020年3月24日)。TALEN是限制性酶，其可以被工程化以切割特定的DNA序列。它们是通过将TAL效应子DNA结合结构域与DNA切割结构域融合而工程化的。
CRISPR/Cas
在一些实施例中，本文所描述的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含编码CRISPER/Cas的多核苷酸。成簇的规则间隔的短回文重复序列/CRISPR相关蛋白(CRISPR/Cas)系统。CRISPR/Cas是基因组编辑核酸酶(Zhou等人,用于癌症免疫疗法的核酸治疗剂的递送,《药物发现中的医学》,2020年3月24日)。CRISPR/Cas9系统是目前研究最全面的工具之一，因为它具有简单的实用程序、可编程性、成本效益，以及最重要的高效多重基因组工程化能力(Yin等人,CRISPR–Cas：用于癌症研究和治疗的工具(CRISPR–Cas:a tool forcancer research and therapeutics).《《自然综述：临床肿瘤学(Nat Rev.Clin.Oncol.)》2019；16(5):281–95)。例如，CRISPR/Cas9系统含有两个关键组分，Cas9核酸酶和gRNA，后者是crRNA和恒定tracrRNA的融合体(Li等人,用于基于CRISPR/Cas9的基因组编辑的非病毒递送系统：挑战与机遇(Non-viral delivery systems for CRISPR/Cas9 based genomeediting:challenges and opportunities).《生物材料(Biomaterials.)》2018；171:207-18)。
适体
在一些实施例中，本文所描述的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含编码适体的多核苷酸。核酸适体是折叠成不同的二级或三级结构的单链(ss)寡核苷酸(DNA或RNA)分子，赋予它们对其对应靶标的高亲和力和特异性结合能力(Zhu等人,用于靶向癌症疗法的核酸适体介导的药物递送(Nucleic Acid Aptamer-Mediated Drug Delivery forTargeted Cancer Therapy),《化学生物化学(ChemMedChem)》2015,10,39-45)。适体通过被称为SELEX(通过指数富集的配体系统进化)的体外技术从1013–1016个ssDNA或ssRNA分子的随机文库中选择(Ellington等人,《自然》1990,346,818–822；Tuerk等人,《科学》1990,249,505–510)。
通过SELEX鉴定适体序列后，可以将经修饰的核苷酸掺入序列中，例如，以提高稳定性和/或对核酸酶降解的抗性和/或增加适体的效率。例如，适体APTA-12包含吉西他滨残基，它是2'脱氧胞苷的2',2'-二氟类似物。参见例如，Park JY等人,《分子疗法-核酸(Mol.Ther.Nucleic Acids)》2018,12,543–553。
通常，适体可以用于癌症疗法，以直接抑制靶分子的活性(其中适体充当功能性治疗分子)，或将治疗分子，例如化学治疗剂或其它抗癌剂靶向癌组织。在一些实施例中，本文所描述的方法和组合物中使用的适体直接抑制靶分子的活性，而不是靶向癌组织。这是因为与适体复合的3E10分子已经靶向各种癌组织，如本文所描述。通常，用于癌症疗法的治疗性适体通过与癌蛋白或其配体之一结合而充当癌蛋白或其配体的拮抗剂，由此阻断促进癌症发展和/或进展的蛋白质-蛋白质或受体-配体相互作用。关于使用适体治疗癌症的综述，参见例如Han等人,适体在癌症中的应用与发展——从临床诊断到癌症疗法(Applicationand development of aptamer in cancer-from clinical diagnosis to cancertherapy),《癌症杂志(Journal of Cancer)》,2020,11,6902-6915；Zhu等人,用于靶向癌症疗法的核酸适体介导的药物递送(Nucleic Acid Aptamer-Mediated Drug Delivery forTargeted Cancer Therapy),《化学生物化学》2015,10,39-45；以及Subjakova等人,癌症靶向疗法中的DNA RNA适体和抗体修饰的聚合物纳米颗粒和纳米马达(PolymerNanoparticles and Nanomotors Modified by DNA RNA Aptamers and Antibodies inTargeted Therapy of Cancer),《聚合物(Polymers)》,2021,13,341；Morita Y等人,《癌症》(巴塞尔),2018；10(3):80，所述文献的公开内容通过引用并入本文。
在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)适体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。下表6中呈现了已被研究用于癌症的治疗的适体的非限制性实例。
表6.被研究用于癌症的治疗的示例适体。
因此，在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)选自表6中列出的那些适体的适体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。
在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)与选自表6中列出的那些分子靶标的分子靶标特异性结合的适体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。
在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)与选自表6中列出的那些分子靶标的相应分子靶标特异性结合的适体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物，其中所述癌症是与表6中的分子靶标相关的癌症。
在一些实施例中，如本文所描述的，本公开涉及用于通过向受试者施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)选自表6中列出的那些适体的相应适体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物，其中所述癌症是与表6中的相应适体相关的癌症。
核酶
在一些实施例中，本文所描述的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包含编码核酶的多核苷酸。核酶是具有催化活性的RNA分子。核酶以各种大小和形状天然存在。所述核酶催化特定磷酸二酯键的切割和连接。在核糖体上的蛋白质合成期间的肽键形成是由核糖体RNA催化的。核酶的生物学功能是多种多样的，并且它们在转移RNA成熟、内含子剪接、RNA病毒或类病毒复制、信使RNA稳定性调节和蛋白质合成中起着重要作用(Westhof等人《病毒学百科全书(Encyclopedia of Virology)》(第3版),2008)。
癌症的治疗
一方面，如本文所描述的，本公开提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，治疗性多核苷酸是能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸免疫刺激剂，所述模式识别受体可以刺激本文所描述的任何PRR和/或包含本文所描述的任何多核苷酸配体。
在一些实施例中，所述癌症是癌、肉瘤、母细胞瘤、乳头状瘤或腺瘤。在其它实施例中，所述癌症是转移性癌症。
在一些实施例中，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的癌、肉瘤、母细胞瘤、乳头状瘤或腺瘤的方法，所述组合物包含在(i)治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，治疗性多核苷酸是能够刺激RIG-I的多核苷酸配体。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
在一些实施例中，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的转移性癌症的方法，所述组合物包含在(i)治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，治疗性多核苷酸是能够刺激RIG-I的多核苷酸配体。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
在一些实施例中，所述癌症选自由以下组成的组：膀胱癌、血癌、脑癌、乳腺癌、骨癌、宫颈癌、结直肠癌、内分泌癌、食道癌、胃癌、头颈癌、肝胆癌、白血病、肺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、骨髓瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、甲状腺癌和子宫癌。
在一些实施例中，如本文所描述的，提供了用于通过向患有膀胱癌、血癌、脑癌、乳腺癌、骨癌、宫颈癌、结直肠癌、内分泌癌、食道癌、胃癌、头颈癌、肝胆癌、白血病、肺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、骨髓瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、甲状腺癌和子宫癌的受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的方法，所述组合物包含在(i)治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，治疗性多核苷酸是能够刺激RIG-I的多核苷酸配体。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
在一些实施例中，所述癌症是选自由以下组成的组的皮肤癌：基底细胞癌、鳞状细胞癌和黑色素瘤。在一个实施例中，所述癌症是黑色素瘤。
在一些实施例中，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的基底细胞癌、鳞状细胞癌或黑色素瘤的方法，所述组合物包含在(i)治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，治疗性多核苷酸是能够刺激RIG-I的多核苷酸配体。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
在一些实施例中，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的黑色素瘤的方法，所述组合物包含在(i)治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，治疗性多核苷酸是能够刺激RIG-I的多核苷酸配体。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
CNS癌症的治疗
一方面，如本文所描述的，本公开提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的中枢神经系统的癌症的组合物和方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。通常，能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体可以刺激本文所描述的任何PRR和/或包含本文所描述的任何多核苷酸配体。在一些实施例中，神经系统的癌症选自下表7中列出的癌症，所述表示出了中枢神经系统的癌症的非限制性实例。
表7–中枢神经系统的各种组织的示例癌症。
在一个实施例中，中枢神经系统的癌症是神经上皮性脑或脊髓肿瘤。因此，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的神经上皮性脑或脊髓肿瘤的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。在一些实施例中，所述神经上皮性脑或脊髓肿瘤是星形细胞肿瘤、少突胶质细胞肿瘤、少突星形细胞肿瘤、室管膜肿瘤、脉络丛肿瘤、神经元或混合性神经元-胶质肿瘤、松果体区肿瘤、胚胎性肿瘤或在其它方面未分类的神经上皮肿瘤。
因此，在一些实施例中，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的星形细胞肿瘤的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，星形细胞肿瘤是毛细胞性星形细胞瘤(ICD-O9421/1)、毛细胞黏液型星形细胞瘤(ICD-O 9425/3)、室管膜下巨细胞星形细胞瘤(ICD-O9384/1)、多形性黄色星形细胞瘤(ICD-O 9424/3)、弥漫性星形细胞瘤(ICD-O9400/3)、间变性星形细胞瘤(ICD-O 9401/3)、胶质母细胞瘤(ICD-O 9440/3)、巨细胞胶质母细胞瘤(ICD-O 9441/3)、胶质肉瘤(ICD-O 9442/3)或脑胶质瘤病(ICD-O 9381/3)。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ IDNO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
类似地，在一些实施例中，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的少突胶质细胞肿瘤的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，少突胶质细胞肿瘤是少突胶质细胞瘤(ICD-O 9450/3)或间变性少突胶质细胞瘤(ICD-O 9451/3)。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
类似地，在一些实施例中，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的少突星形细胞肿瘤的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，少突星形细胞肿瘤是少突星形细胞瘤(ICD-O 9382/3)或间变性少突星形细胞瘤(ICD-O 9382/3)。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
类似地，在一些实施例中，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的室管膜肿瘤的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，室管膜肿瘤是室管膜下瘤(ICD-O 9383/1)、粘液乳头状室管膜瘤(ICD-O 9394/1)和室管膜瘤(ICD-O 9391/3)或间变性室管膜瘤(ICD-O9392/3)。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
类似地，在一些实施例中，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的脉络丛肿瘤的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，脉络丛肿瘤是脉络丛乳头状瘤(ICD-O 9390/0)、非典型脉络丛乳头状瘤(ICD-O 9390/1)或脉络丛癌(ICD-O 9390/3)。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
类似地，在一些实施例中，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的神经元或混合性神经元-胶质肿瘤的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，神经元或混合性神经元-胶质肿瘤是小脑发育不良性神经节细胞瘤(莱尔米特-杜克罗斯病(Lhermitte-Duclos))(ICD-O9493/0)、促结缔组织增生性婴儿星形细胞瘤/神经节胶质细胞瘤(ICD-O9412/1)、胚胎发育不良性神经上皮肿瘤(ICD-O 9413/0)、神经节细胞瘤(ICD-O 9492/0)、神经节胶质细胞瘤(ICD-O 9505/1)、间变性神经节胶质细胞瘤(ICD-O 9505/3)、中枢神经细胞瘤(ICD-O 9506/1)、脑室外神经细胞瘤(ICD-O 9506/1)、小脑脂肪神经细胞瘤(ICD-O 9506/1)、乳头状胶质神经元肿瘤(ICD-O 9509/1)、第四脑室玫瑰花结形成性胶质神经元肿瘤(ICD-O9509/1)或副神经节瘤(ICD-O 8680/1)。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
类似地，在一些实施例中，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的松果体区肿瘤的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，松果体区肿瘤是松果体细胞瘤(ICD-O 9361/1)、松果体实质中度分化型肿瘤(ICD-O 9362/3)、松果体母细胞瘤(ICD-O 9362/3)或松果体区乳头状肿瘤(ICD-O 9395/3)。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
类似地，在一些实施例中，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的胚胎性肿瘤的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，胚胎性肿瘤是髓母细胞瘤(ICD-O 9470/3)、具有广泛结节的髓母细胞瘤(ICD-O 9471/3)、间变性髓母细胞瘤(ICD-O 9474/3)、CNS原始神经外胚层肿瘤(ICD-O 9473/3)、CNS神经母细胞瘤(ICD-O 9500/3)或非典型畸胎样/横纹肌样肿瘤(ICD-O 9508/3)。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
在一些实施例中，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的髓母细胞瘤的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
类似地，在一些实施例中，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的未分类的神经上皮肿瘤的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，未分类的神经上皮肿瘤是星形母细胞瘤(ICD-O9430/3)、第三脑室的脊索样胶质瘤(ICD-O 9444/1)或血管中心性胶质瘤(ICD-O9431/1)。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
在一些实施例中，对神经上皮性脑或脊髓肿瘤的治疗降低了受试者的肿瘤负荷。在一些实施例中，治疗将受试者的肿瘤负荷降低了至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或更多。
在一些实施例中，所述癌症是尚未转移到所述受试者的脊髓的神经上皮性脑肿瘤。在一些实施例中，例如如实例7所展示，治疗降低了癌症转移到脊髓的可能性。因此，在一些实施例中，如本文所描述的，提供了一种用于通过向患有神经上皮性脑肿瘤的受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来降低所述受试者的转移风险的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
在一个实施例中，所述中枢神经系统的所述癌症是颅神经或椎旁神经的癌症。因此，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的颅神经或椎旁神经的癌症的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，所述颅神经或椎旁神经的癌症是神经鞘瘤、神经纤维瘤、神经束膜瘤或恶性外周神经鞘膜瘤。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
在一些实施例中，对颅神经或椎旁神经的癌症的治疗降低了受试者的肿瘤负荷。在一些实施例中，治疗将受试者的肿瘤负荷降低了至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或更多。
在一些实施例中，所述癌症是尚未转移到所述受试者的脊髓的颅神经或椎旁神经的癌症。在一些实施例中，例如如实例7所展示，治疗降低了癌症转移到脊髓的可能性。因此，在一些实施例中，如本文所描述的，提供了一种用于通过向患有颅神经或椎旁神经的癌症的受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来降低所述受试者的转移风险的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
在一个实施例中，中枢神经系统的癌症是脑膜组织的癌症。因此，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的脑膜组织的癌症的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。在一些实施例中，所述脑膜组织的所述癌症是脑膜上皮细胞瘤、间叶性肿瘤、原发性黑素细胞病变或其它与脑膜相关的赘生物。
因此，在一些实施例中，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的脑膜上皮细胞瘤的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，脑膜上皮细胞瘤是脑膜瘤、非典型脑膜瘤或间变性脑膜瘤。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
因此，在一些实施例中，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的间叶性肿瘤的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，间叶性肿瘤是脂肪瘤、血管脂肪瘤、冬眠瘤、脂肪肉瘤、孤立性纤维瘤、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌瘤、横纹肌肉瘤、软骨瘤、软骨肉瘤、骨瘤、骨肉瘤、骨软骨瘤、血管瘤、上皮样血管内皮瘤、血管外皮细胞瘤、间变性血管外皮细胞瘤、血管肉瘤、卡波西肉瘤(Kaposi sarcoma)或尤文肉瘤(Ewing sarcoma)。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
因此，在一些实施例中，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的原发性黑素细胞病变的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，原发性黑素细胞病变是弥漫性黑素细胞增多症、黑素细胞瘤、恶性黑色素瘤或脑膜黑色素瘤病。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
因此，在一些实施例中，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的血管母细胞瘤的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
在一些实施例中，对脑膜组织的癌症的治疗降低了受试者的肿瘤负荷。在一些实施例中，治疗将受试者的肿瘤负荷降低了至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或更多。
在一些实施例中，所述癌症是尚未转移到受试者的脊髓的脑膜组织的癌症。在一些实施例中，例如如实例7所展示，治疗降低了癌症转移到脊髓的可能性。因此，在一些实施例中，如本文所描述的，提供了一种用于通过向患有脑膜组织的癌症的受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来降低所述受试者的转移风险的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
造血系统的癌症
在一个实施例中，所述中枢神经系统的所述癌症是造血系统的癌症。因此，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的造血系统的癌症的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，所述造血系统的所述癌症是恶性淋巴瘤、浆细胞瘤或粒细胞肉瘤。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
在一些实施例中，对造血系统的癌症的治疗降低了受试者的肿瘤负荷。在一些实施例中，治疗将受试者的肿瘤负荷降低了至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或更多。
在一些实施例中，所述癌症是尚未转移到受试者的脊髓的造血系统的癌症。在一些实施例中，例如如实例7所展示，治疗降低了癌症转移到脊髓的可能性。因此，在一些实施例中，如本文所描述的，提供了一种用于通过向患有造血系统的癌症的受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来降低所述受试者的转移风险的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
生殖细胞肿瘤
在一个实施例中，所述中枢神经系统的所述癌症是生殖细胞肿瘤。因此，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的生殖细胞肿瘤的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，所述生殖细胞肿瘤是生殖细胞瘤、胚胎性癌、卵黄囊瘤、绒毛膜癌、畸胎瘤或混合性生殖细胞肿瘤。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
在一些实施例中，对生殖细胞肿瘤的治疗降低了受试者的肿瘤负荷。在一些实施例中，治疗将受试者的肿瘤负荷降低了至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或更多。
在一些实施例中，所述癌症是尚未转移到所述受试者的脊髓的生殖细胞肿瘤。在一些实施例中，例如如实例7所展示，治疗降低了癌症转移到脊髓的可能性。因此，在一些实施例中，如本文所描述的，提供了一种用于通过向患有生殖细胞肿瘤的受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来降低所述受试者的转移风险的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
鞍区的肿瘤
在一个实施例中，所述中枢神经系统的所述癌症是鞍区的肿瘤。因此，如本文所描述的，提供了用于通过向受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来治疗所述受试者的鞍区的肿瘤的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，所述鞍区的所述肿瘤是颅咽管瘤、颗粒细胞肿瘤、垂体细胞瘤或腺垂体的纺锤细胞嗜酸细胞瘤。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
在一些实施例中，对鞍区的肿瘤的治疗降低了受试者的肿瘤负荷。在一些实施例中，治疗将受试者的肿瘤负荷降低了至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或更多。
在一些实施例中，所述癌症是尚未转移到受试者的脊髓的鞍区的肿瘤。在一些实施例中，例如如实例7所展示，治疗降低了癌症转移到脊髓的可能性。因此，在一些实施例中，如本文所描述的，提供了一种用于通过向患有鞍区的肿瘤的受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物来降低所述受试者的转移风险的方法，所述组合物包含在(i)能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体与(ii)3E10抗体或其变体或其抗原结合片段之间形成的复合物。在一些实施例中，多核苷酸配体能够刺激RIG-I。在一些实施例中，多核苷酸配体具有与3p-hpRNA(SEQ ID NO:XX)的核苷酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
用于治疗癌症的组合物
一方面，本公开提供了药物组合物，其包含在如本文所描述的治疗性多核苷酸与如本文所描述的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。
在一些实施例中，治疗性多核苷酸编码用于癌症疗法的蛋白质或肽。在一些实施例中，所述用于癌症疗法的蛋白质或肽是肿瘤抗原。
在其它实施例中，所述肿瘤抗原选自由以下组成的组：肿瘤病毒蛋白抗原、新抗原和源自癌胚系基因的抗原。在一些实施例中，肿瘤病毒蛋白抗原是选自由以下组成的组的至少一项：叶酸受体、HER2、乳头瘤病毒癌蛋白E6和乳头瘤病毒癌蛋白E7癌胚抗原(CEA)、粘蛋白1、EGFR、cMyc、突变TP53、T细胞识别的鳞状细胞癌抗原3(SART3)、β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)、维尔姆氏肿瘤抗原(Wilms'Tumor antigen)1(WT1)、存活蛋白、MAGE3、p53、环指蛋白43和线粒体外膜转位酶34(TOMM34)、前列腺特异性抗原(PSA)-TRICOM和KRAS。
在一些实施例中，新抗原是选自由以下组成的组的至少一项：BRCA1、BRCA2、BRAF、KRAS、EGFR、IDH1、PIK3CA、ROS1、HLA、JAK1、JAK2、PARK2、ATM、p53、TP53、erbb2相互作用蛋白(ERBB2IP)、β-2-微球蛋白(β2m)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A(CDKN2A)、Claudin-18.2、交替阅读框(ARF)和细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)。
在一些实施例中，其中所述癌胚系基因是选自由MAGEA1、MAGEA2、MAGEA3、MAGEA4、MAGEA5、MAGEA6、MAGEA8、MAGEA9、MAGEA10、MAGEA11、MAGEA12、BAGE、BAGE2、BAGE3、BAGE4、BAGE5、MAGEB1、MAGEB2、MAGEB5、MAGEB6、MAGEB3、MAGEB4、GAGE1、GAGE2A、GAGE3、GAGE4、GAGE5、GAGE6、GAGE7、GAGE8、SSX1、SSX2、SSX2b、SSX3、SSX4、CTAG1B、LAGE-1b、CTAG2、MAGEC1、MAGEC3、SYCP1、BRDT、MAGEC2、SPANXA1、SPANXB1、SPANXC、SPANXD、SPANXN1、SPANXN2、SPANXN3、SPANXN4、SPANXN5、XAGE1D、XAGE1C、XAGE1B、XAGE1、XAGE2、XAGE3、XAGE-3b、XAGE-4/RP11-167P23.2、XAGE5、DDX43、SAGE1、ADAM2、PAGE5、CT16.2、PAGE1、PAGE2、PAGE2B、PAGE3、PAGE4、LIPI、VENTXP1、IL13RA2、TSP50、CTAGE1、CTAGE-2、CTAGE5、SPA17、ACRBP、CSAG1、CSAG2、DSCR8、MMA1b、DDX53、CTCFL、LUZP4、CASC5、TFDP3、JARID1B、LDHC、MORC1、DKKL1、SPO11、CRISP2、FMR1NB、FTHL17、NXF2、TAF7L、TDRD1、TDRD6、TDRD4、TEX15、FATE1、TPTE、CT45A1、CT45A2、CT45A3、CT45A4、CT45A5、CT45A6、HORMAD1、HORMAD2、CT47A1、CT47A2、CT47A3、CT47A4、CT47A5、CT47A6、CT47A7、CT47A8、CT47A9、CT47A10、CT47A11、CT47B1、SLCO6A1、TAG、LEMD1、HSPB9、CCDC110、ZNF165、SPACA3、CXorf48、THEG、ACTL8、NLRP4、COX6B2、LOC348120、CCDC33、LOC196993、PASD1、LOC647107、TULP2、CT66/AA884595、PRSS54、RBM46、CT69/BC040308、CT70/BI818097、SPINLW1、TSSK6、ADAM29、CCDC36、LOC440934、SYCE1、CPXCR1、TSPY3、TSGA10、HIWI、MIWI、PIWI、PIWIL2、ARMC3、AKAP3、Cxorf61、PBK、C21orf99、OIP5、CEP290、CABYR、SPAG9、MPHOSPH1、ROPN1、PLAC1、CALR3、PRM1、PRM2、CAGE1、TTK、LY6K、IMP-3、AKAP4、DPPA2、KIAA0100、DCAF12、SEMG1、POTED、POTEE、POTEA、POTEG、POTEB、POTEC、POTEH、GOLGAGL2 FA、CDCA1、PEPP2、OTOA、CCDC62、GPATCH2、CEP55、FAM46D、TEX14、CTNNA2、FAM133A、LOC130576、ANKRD45、ELOVL4、IGSF11、TMEFF1、TMEFF2、ARX、SPEF2、GPAT2、TMEM108、NOL4、PTPN20A、SPAG4、MAEL、RQCD1、PRAME、TEX101、SPATA19、ODF1、ODF2、ODF3、ODF4、ATAD2、ZNF645、MCAK、SPAG1、SPAG6、SPAG8、SPAG17、FBXO39、RGS22、细胞周期蛋白A1、C15orf60、CCDC83、TEKT5、NR6A1、TMPRSS12、TPPP2、PRSS55、DMRT1、EDAG、NDR、DNAJB8、CSAG3B、CTAG1A、GAGE12B、GAGE12C、GAGE12D、GAGE12E、GAGE12F、GAGE12G、GAGE12H、GAGE12I、GAGE12J、GAGE13、LOC728137、MAGEA2B、MAGEA9B/LOC728269、NXF2B、SPANXA2、SPANXB2、SPANXE、SSX4B、SSX5、SSX6、SSX7、SSX9、TSPY1D、TSPY1E、TSPY1F、TSPY1G、TSPY1H、TSPY1I、TSPY2和XAGE1E组成的组的至少一项。
在又其它实施例中，所述用于癌症疗法的肽是促炎性细胞因子。
在一些实施例中，所述促炎性细胞因子是选自由以下组成的组的至少一项：IL-1、IL-6、IL-8、IL-12、IFN-γ、IL-18、IL-15、IL-2、TNF-α、IL-10、TGF-β、CSF-1、CCL2、CCL3、CCL5和VEGF。
在另外的实施例中，所述治疗性多核苷酸是非复制的未经修饰的mRNA。在一些实施例中，所述治疗性多核苷酸是非复制的经修饰的mRNA。在一些实施例中，所述治疗性多核苷酸是自扩增mRNA。在一些实施例中，所述治疗性多核苷酸是编码所述蛋白质或肽的质粒。在一些实施例中，所述治疗性多核苷酸是编码反义序列的质粒。在一些实施例中，其中所述治疗性多核苷酸是基因调节多核苷酸。
在一些实施例中，所述基因调节多核苷酸是siRNA。在一些实施例中，siRNA包括基于脂质的纳米颗粒(LNP)siRNA、KRAS siRNA、Her2 siRNA、VEGF siRNA、EGFR siRNA、SOSC1siRNA,、ADAR1 siRNA、PLK1 siRNA、cMyc siRNA、TP53 siRNA、HIF2a siRNA或Bcl2 siRNA。
在一些实施例中，所述基因调节多核苷酸是miRNA。在一些实施例中，miRNA包括miR-15a、miR-15b、miR-16、miR-20b、miR-21、miR-28、miR-34a、miR-34b、miR-34c、miR-125b、miR-130b、miR-138、miR-138-5p、miR-155、miR-195、miR-197、miR-200、miR-210、miR-221、miR-222、miR-424、miR-497、miR-503或miR-513。
在一些实施例中，所述基因调节多核苷酸是小激活RNA(saRNA)。在一些实施例中，saRNA包括转录因子CCATT/增强子结合蛋白α(CEBPA)的saRNA。
在一些实施例中，所述基因调节多核苷酸是安塔够妙。
在一些实施例中，所述基因调节多核苷酸是反义寡核苷酸。
在一些实施例中，所述基因调节多核苷酸是诱骗寡核苷酸。
在一些实施例中，所述基因组编辑多核苷酸编码锌指核酸酶。在一些实施例中，所述基因组编辑多核苷酸编码转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)。在一些实施例中，所述基因组编辑多核苷酸编码包括Cas蛋白和向导RNA的CRISPR系统。
在一些实施例中，其中所述治疗性多核苷酸是效应多核苷酸。在一些实施例中，所述效应多核苷酸是适体。在一些实施例中，所述适体包括PSMA适体、HER2适体、MUC1适体、CD117适体、PTK7适体、CTLA-4适体、TLS11a适体、PD-1适体、PD-1适体、马库根适体、AS1411、Sgc8、TD05、ARC1779、A-凝血酶(TBA)、马库根、E10030、AS1411、ARC1779、NU172、NOX-A12、NOX-E36、NOX-H94、ARC1905、REG1、ARC19499、AS1411、AS1411、EpCAM、A10-3-J1、Sgc8c、TSA14、5TR1、Endo28、EGFR、A10、Sgc8c、AS1411、NOX-A12、KH1C12、K19、TD05、AS1411、HB5、HeA2_3、H2、S6、SYL3C、APTA-12、M17、S-1、SL2B、CAA01、CA50 A02、CA72-4A01、APT-43、TA6、CA125.1、Apt928、R13、HF3-58或HA5-68。
在一些实施例中，所述适体是选自以下的免疫检查点抑制剂：B7-H3、B7-H4、BTLA、CD160、CTLA4、KIR、LAG3、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3和TIGIT或其组合。
在一些实施例中，所述效应多核苷酸是核酶。在一些实施例中，所述核酶靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)RNA。
在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为至少2:1。在本文所描述的组合物中使用3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比保护治疗性多核苷酸免于降解。例如，如在图13A和13B中所展示的，尽管亲本3E10和3E10(D31N)变体抗体两者以2:1和20:1的摩尔比保护mRNA免于RNA酶A介导的RNA降解，但通过20:1的摩尔比提供的保护超过以2:1提供的保护。
因此，在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比大于约2:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为至少约5:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为至少约7.5:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为至少约10:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为至少约15:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为至少约20:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为至少约25:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为至少约30:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为至少约40:1。
在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为至少约1:1、至少约2:1、至少约3:1、至少约4:1、至少约5:1、至少约6:1、至少约7:1、至少约8:1、至少约9:1、至少约10:1、至少约15:1、至少约20:1、至少约25:1、至少约30:1、至少约35:1、至少约40:1、至少约45:1、至少约50:1、至少约55:1、至少约60:1、至少约65:1、至少约70:1、至少约75:1、至少约80:1、至少约85:1、至少约90:1、至少约95:1、至少约100:1、至少约105:1、至少约110:1、至少约115:1、至少约120:1、至少约125:1、至少约130:1、至少约135:1、至少约140:1、至少约145:1、至少约150:1、至少约155:1、至少约160:1、至少约165:1、至少约170:1、至少约175:1、至少约180:1、至少约185:1、至少约190:1、至少约195:1、至少约200:1、至少约205:1、至少约210:1、至少约215:1、至少约220:1、至少约225:1、至少约230:1、至少约235:1、至少约240:1、至少约245:1、至少约250:1或更大以及其间的任何范围。
在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、15:1、20:1、25:1、30:1、35:1、40:1、45:1、50:1、55:1、60:1、65:1、70:1、75:1、80:1、85:1、90:1、95:1、100:1、105:1、110:1、115:1、120:1、125:1、130:1、135:1、140:1、145:1、150:1、155:1、160:1、165:1、170:1、175:1、180:1、185:1、190:1、195:1、200:1、205:1、210:1、215:1、220:1、225:1、230:1、235:1、240:1、245:1、250:1或更大以及其间的任何范围。
在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比小于或不超过1:1、不超过2:1、不超过3:1、不超过4:1、不超过5:1、不超过6:1、不超过7:1、不超过8:1、不超过9:1、不超过10:1、不超过15:1、不超过20:1、不超过25:1、不超过30:1、不超过35:1、不超过40:1、不超过45:1、不超过50:1、不超过55:1、不超过60:1、不超过65:1、不超过70:1、不超过75:1、不超过80:1、不超过85:1、不超过90:1、不超过95:1、不超过100:1、不超过105:1、不超过110:1、不超过115:1、不超过120:1、不超过125:1、不超过130:1、不超过135:1、不超过140:1、不超过145:1、不超过150:1、不超过155:1、不超过160:1、不超过165:1、不超过170:1、不超过175:1、不超过180:1、不超过185:1、不超过190:1、不超过195:1、不超过200:1、不超过205:1、不超过210:1、不超过215:1、不超过220:1、不超过225:1、不超过230:1、不超过235:1、不超过240:1、不超过245:1、不超过250:1以及其间的任何范围。
在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为至少10:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为至少5:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为至少7.5:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为至少10:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为至少15:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为至少20:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为至少25:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为至少30:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为至少40:1。
在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为至少3:1、至少4:1、至少5:1、至少6:1、至少7:1、至少8:1、至少9:1、至少10:1、至少11:1、至少12:1、至少13:1、至少14:1、至少15:1、至少16:1、至少17:1、至少18:1、至少19:1、至少20:1、至少21:1、至少22:1、至少23:1、至少24:1、至少25:1、至少26:1、至少27:1、至少28:1、至少29:1、至少30:1、至少31:1、至少32:1、至少33:1、至少34:1、至少35:1、至少36:1、至少37:1、至少38:1、至少39:1、至少40:1、至少41:1、至少42:1、至少43:1、至少44:1、至少45:1或更大。
在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、21:1、22:1、23:1、24:1、25:1、26:1、27:1、28:1、29:1、30:1、31:1、32:1、33:1、34:1、35:1、36:1、37:1、38:1、39:1、40:1、41:1、42:1、43:1、44:1、45:1或更大。
在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比不超过约50:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比不超过约40:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比不超过约30:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比不超过约25:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比不超过约20:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比不超过约15:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比不超过约10:1。
在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比不超过约50:1、不超过约49:1、不超过约48:1、不超过约47:1、不超过约46:1、不超过约45:1、不超过约44:1、不超过约43:1、不超过约42:1、不超过约41:1、不超过约40:1、不超过约39:1、不超过约38:1、不超过约37:1、不超过约36:1、不超过约35:1、不超过约34:1、不超过约33:1、不超过约32:1、不超过约31:1、不超过约30:1、不超过约29:1、不超过约28:1、不超过约27:1、不超过约26:1、不超过约25:1、不超过约24:1、不超过约23:1、不超过约22:1、不超过约21:1、不超过约20:1、不超过约19:1、不超过约18:1、不超过约17:1、不超过约16:1、不超过约15:1、不超过约14:1、不超过约13:1、不超过约12:1、不超过约11:1、不超过约10:1、不超过约9:1、不超过约8:1、不超过约7:1、不超过约6:1、不超过约5:1或更小。
在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比不超过50:1、不超过49:1、不超过48:1、不超过47:1、不超过46:1、不超过45:1、不超过44:1、不超过43:1、不超过42:1、不超过41:1、不超过40:1、不超过39:1、不超过38:1、不超过37:1、不超过36:1、不超过35:1、不超过34:1、不超过33:1、不超过32:1、不超过31:1、不超过30:1、不超过29:1、不超过28:1、不超过27:1、不超过26:1、不超过25:1、不超过24:1、不超过23:1、不超过22:1、不超过21:1、不超过20:1、不超过19:1、不超过18:1、不超过17:1、不超过16:1、不超过15:1、不超过14:1、不超过13:1、不超过12:1、不超过11:1、不超过10:1、不超过9:1、不超过8:1、不超过7:1、不超过6:1、不超过5:1或更小。
在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约2:1至约50:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约2:1至约40:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约2:1至约30:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约2:1至约25:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约2:1至约20:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约2:1至约15:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约2:1至约10:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约2:1至约7.5:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约2:1至约5:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约2:1至约5:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约2:1至约3:1。
在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约5:1至约50:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约5:1至约40:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约5:1至约30:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约5:1至约25:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约5:1至约20:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约5:1至约15:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约5:1至约10:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约5:1至约7.5:1。
在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约10:1至约50:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约10:1至约40:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约10:1至约30:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约10:1至约25:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约10:1至约20:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约10:1至约15:1。
在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约15:1至约50:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约15:1至约40:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约15:1至约30:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约15:1至约25:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约15:1至约20:1。
在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约20:1至约50:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约20:1至约40:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约20:1至约30:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约20:1至约25:1。
在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约25:1至约50:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约25:1至约40:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约25:1至约30:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约30:1至约50:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约30:1至约40:1。在又其它实施例中，设想了落在约2:1至约50:1的范围内的其它范围。
在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为2:1至50:1、2:1至40:1、2:1至30:1、2:1至25:1、2:1至20:1、2:1至15:1、2:1至10:1、2:1至7.5:1、2:1至5:1、5:1至50:1、5:1至40:1、5:1至30:1、5:1至25:1、5:1至20:1、5:1至15:1、5:1至10:1、5:1至7.5:1、10:1至50:1、10:1至40:1、10:1至30:1、10:1至25:1、10:1至20:1、10:1至15:1、15:1至50:1、15:1至40:1、15:1至30:1、15:1至25:1、15:1至20:1、20:1至50:1、20:1至40:1、20:1至30:1、20:1至25:1、25:1至50:1、25:1至40:1、25:1至30:1、30:至50:1、30:1至40:1或40:1至50:1。在又其它实施例中，设想了落在2:1至50:1的范围内的其它范围。
在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约1:1至约50:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约1:1至约30:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约1:1至约20:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约1:1至约10:1。在一些实施例中，本文所描述的药物组合物的3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与治疗性多核苷酸的摩尔比为约1:1至约5:1。
在一些实施例中，摩尔比与核酸(即，治疗性多核苷酸)的大小相关。例如，较长的多核苷酸以较高的摩尔比复合，并且较短的多核苷酸以较低的摩尔比复合。
在一些实施例中，治疗性多核苷酸的大小为约10bp、15bp、20bp、25bp、30bp、35bp、40bp、45bp、50bp、55bp、60bp、65bp、70bp、75bp、80bp、85bp、90bp、95bp、100bp、105bp、110bp、115bp、120bp、125bp、130bp、135bp、140bp、145bp、150bp、155bp、160bp、165bp、170bp、175bp、180bp、185bp、190bp、195bp、200bp、205bp、210bp、215bp、220bp、225bp、230bp、235bp、240bp、245bp、250bp、255bp、260bp、265bp、270bp、275bp、280bp、285bp、290bp、295bp、300bp、305bp、310bp、315bp、320bp、325bp、330bp、335bp、340bp、345bp、350bp、355bp、360bp、365bp、370bp、375bp、380bp、385bp、390bp、395bp、400bp、405bp、410bp、415bp、420bp、425bp、430bp、435bp、440bp、445bp、450bp、455bp、460bp、465bp、470bp、475bp、480bp、485bp、490bp、495bp、500bp、505bp、510bp、515bp、520bp、525bp、530bp、535bp、540bp、545bp、550bp或更大以及其间的任何范围。
在一些实施例中，本文公开的摩尔比与如本文公开的治疗性多核苷酸的大小相关。例如，较长的多核苷酸以较高的摩尔比复合，并且较短的多核苷酸以较低的摩尔比复合。
在一些实施例中，本文公开的任何摩尔比可以与治疗性多核苷酸的任何大小组合。非限制性实例包含药物组合物，所述药物组合物的3E10抗体与治疗性多核苷酸的摩尔比为1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、15:1、20:1、25:1、30:1、35:1、40:1、45:1、50:1、55:1、60:1、65:1、70:1、75:1、80:1、85:1、90:1、95:1、100:1、105:1、110:1、115:1、120:1、125:1、130:1、135:1、140:1、145:1、150:1、155:1、160:1、165:1、170:1、175:1、180:1、185:1、190:1、195:1、200:1、205:1、210:1、215:1、220:1、225:1、230:1、235:1、240:1、245:1、250:1或更大以及其间的任何范围，其中大小治疗性多核苷酸为约10bp、15bp、20bp、25bp、30bp、35bp、40bp、45bp、50bp、55bp、60bp、65bp、70bp、75bp、80bp、85bp、90bp、95bp、100bp、105bp、110bp、115bp、120bp、125bp、130bp、135bp、140bp、145bp、150bp、155bp、160bp、165bp、170bp、175bp、180bp、185bp、190bp、195bp、200bp、205bp、210bp、215bp、220bp、225bp、230bp、235bp、240bp、245bp、250bp、255bp、260bp、265bp、270bp、275bp、280bp、285bp、290bp、295bp、300bp、305bp、310bp、315bp、320bp、325bp、330bp、335bp、340bp、345bp、350bp、355bp、360bp、365bp、370bp、375bp、380bp、385bp、390bp、395bp、400bp、405bp、410bp、415bp、420bp、425bp、430bp、435bp、440bp、445bp、450bp、455bp、460bp、465bp、470bp、475bp、480bp、485bp、490bp、495bp、500bp、505bp、510bp、515bp、520bp、525bp、530bp、535bp、540bp、545bp、550bp或更大以及其间的任何范围。
本公开的组合物可以被调配用于许多普通施用途径中的一种，并且随后通过施用途径来施用。在一些实施例中，药物组合物被配制用于肠胃外施用。在一些实施例中，肠胃外施用是肌肉内施用、静脉内施用或皮下施用。
然而，在其它实施例中，本文所描述的含有在(i)治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物的组合物通过直接注射到肿瘤中来施用。因此，在一些实施例中，所述药物组合物被调配用于直接注射到肿瘤中。在一些实施例中，所述药物组合物被调配用于鞘内施用(例如，腰椎鞘内施用或脑池鞘内施用)、脑室内施用或脑实质内施用进行的。
在一些实施例中，本文所描述的组合物的治疗性多核苷酸包含一个或多个非典型核苷酸，例如以改善mRNA在体内的稳定性和/或半衰期。适合于包含在本文所描述的分子中的非典型核苷酸的实例描述于美国专利第9,181,319号中，所述美国专利的内容通过引用并入本文。
共同疗法
在一些实施例中，以下疗法中的一种或多种疗法可以与前述抗体/多核苷酸治疗一起使用。
化学疗法
化学疗法是指使用任何药物来治疗任何疾病。化学疗法被认为是一种全身性治疗，因为药物通常在身体各处流动，并且可以杀死例如已经扩散(转移)到远离原始(原发)肿瘤或其它疾病源的身体部位的癌细胞。
激素疗法
激素疗法是一种减缓或阻止使用激素生长的癌症的生长的癌症治疗方法。某些癌症依赖激素生长。在这些情况下，激素疗法可以通过阻断身体产生这些特定激素的能力或改变激素受体在体内的行为方式来减缓或停止它们的扩散。激素疗法可以通过药丸、注射或外科手术去除产生激素的器官，例如女性的卵巢和男性的睾丸来实现。它通常与其它癌症治疗方法一起被推荐。
免疫疗法
免疫疗法通过激活或抑制免疫系统来治疗疾病。旨在引发或放大免疫应答的免疫疗法被归类为激活免疫疗法，而减少或抑制免疫反应的免疫疗法被归类为抑制免疫疗法。免疫疗法是一种使用人体自身免疫系统对抗例如癌症的治疗方法。
在一些实施例中，所施用的免疫疗法可以抑制PD-1蛋白。已经表明，PD-1和PD-L1的表达在癌细胞中得到增强，并且与免疫应答缺陷有关。此外，已经表明两个关键的免疫检查点分子是癌症和感染性疾病治疗的重要治疗靶标。
在一些实施例中，针对PD-1的拮抗剂单克隆抗体是(纳武单抗)和(派姆单抗)，并且描述于美国专利第7,595,048号和第8,952,136号，所述美国专利中的每一个特此通过引用整体并入。
在一些实施例中，针对PD-L1的拮抗剂单克隆抗体是(阿维单抗)、(阿特珠单抗)或(德瓦鲁单抗)，并且描述于美国专利第11,058,769号、第8,952,136号和第8,779,108号，所述美国专利中的每一个特此通过引用整体并入。
过继性细胞疗法
过继性细胞疗法，也被称为细胞免疫疗法，是一种使用人的免疫系统细胞来消除癌症的治疗形式。这些方法中的一些方法涉及直接分离人自己的免疫细胞并仅扩增它们的数量，而其它方法涉及对人的免疫细胞进行基因工程化(通过基因疗法)以增强其抗癌能力。过继性细胞疗法的实例包含肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)疗法、工程化T细胞受体(TCR)疗法、嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法和自然杀伤(NK)细胞疗法。
放射疗法
放射疗法是一种使用高能光束杀死癌细胞的癌症治疗类型。放射疗法经常使用X射线，但也可以使用质子或其它类型的能量。虽然健康细胞和癌细胞都被放射疗法破坏，但是放射疗法的目标是尽可能少地破坏正常细胞。
外科手术
当用于治疗癌症时，外科手术是一种将癌症从身体中物理去除的过程。通常，肿瘤和一些附近的淋巴结被切除。
除非另外定义，否则本文所使用的所有技术术语和科学术语都具有与所公开的本发明所属领域的技术人员通常所理解的含义相同的含义。本文所引用的出版物和其所引用的材料通过引用具体并入。
实例
现在将参考以下实例描述本发明。提供这些实例仅是出于说明的目的，并且本发明绝不应被理解为限于那些实例，而是应被解释为涵盖由于在此提供的教导而变得明显的任何和所有变化。
在不作进一步描述的情况下，相信本领域的普通技术人员可以使用前面的描述和以下说明性实例来制造和利用本发明的化合物并实践所要求保护的方法。因此，以下工作实例具体指出了本发明的优选实施例，并且不应被解释为以任何方式限制本公开的其余部分。
关于下面的实验，使用标准的3E10序列，除了其中注明为D31N变体之外。标准的3E10和D31N变体两者都被用作全长抗体。
实例1：3E10介导体内mRNA递送到肿瘤
将编码GFP的10ug的mRNA与0.1mg的3E10在室温下混合持续15分钟。将与3E10复合的mRNA全身注射到携带测量为100mm3的EMT6胁腹肿瘤的BALB/c小鼠。处理后20小时，收获肿瘤并使用IVIS成像分析mRNA表达(GFP)。
与不产生肿瘤中的任何GFP表达的自由注射的mRNA相比，3E10介导的mRNA的递送导致肿瘤中的显著更高水平的GFP表达。在用任一种处理检查的包含肝、脾、心脏和肾的正常组织中的任何正常组织中，均不存在GFP的可检测表达。结果表明mRNA被稳健地递送到肿瘤中，具有功能性翻译和表达。
实例2：3E10介导体内siRNA递送
将40ug的经荧光标记的siRNA与增加剂量的3E10(0.25，0.5和1mg)在室温下混合持续15分钟。将与3E10复合的siRNA全身注射到携带测量为100mm3的EMT6胁腹肿瘤的BALB/c小鼠。处理后20小时，收获肿瘤并使用IVIS成像分析siRNA递送。
将40ug的经荧光标记的siRNA与1mg 3E10或0.1mg的3E10的D31N变体在室温下混合持续15分钟。将与3E10复合的siRNA全身注射到携带测量为100mm3的EMT6胁腹肿瘤的BALB/c小鼠。处理后20小时，收获肿瘤并使用IVIS成像分析siRNA递送。
如在图8A中所示出的，增加3E10的剂量会导致siRNA在肿瘤中的更高的累积。如在图8B中所示出的，降低十倍剂量的D31N 3E10会导致与3E10相似的siRNA递送水平。
实例3：静脉内施用后，3E10在体内定位于肿瘤
向携带胁腹同基因结肠肿瘤(CT26)的小鼠静脉内注射200μg的标记为VivoTag680(珀金埃尔默公司)的3E10、WT或D31N。在注射后24小时，收获肿瘤并通过IVIS(珀金埃尔默公司)成像(图9A-9B)。肿瘤分布的定量证明了当与3E10-WT相比时，3E10-D31N在肿瘤中具有更高的累积(图9C)。
研究了与3E10非共价相关的ssDNA的分布。向携带胁腹同基因结肠肿瘤(CT26)的小鼠静脉内注射200ug的3E10、WT或D31N，并与40ug的经标记的ssDNA(IR680)混合。在注射后24小时，收获肿瘤并通过IVIS(珀金埃尔默公司)成像(图10A-10C)。组织分布的定量证明了当与3E10-WT相比时，通过3E10-D31N递送ssDNA导致更高的肿瘤累积(图10D)。
实例4：3E10介导RIG-I配体的递送和RIG-I活性的刺激。
RIG-I报告细胞(HEK-Lucia RIG-I，英杰公司(Invivogen))以50,000个细胞/孔接种，并用RIG-I配体(1ug)或与3E10-D31N复合的配体(20ug)处理。此项测定使用了具有荧光素酶报告基因的细胞系，当干扰素诱导时，所述细胞系被激活。
在所有情况下，单独的RIG-I配体不刺激IFN分泌。然而，用3E10-D31N递送RIG配体刺激了高于对照的IFN分泌，其中在低分子量和高分子量(LMW和HMW)两者中，观察到poly(I:C)的最高分泌量，如图11中所展示。
实例5：3E10-D31N+Poly(I:C)介导黑色素瘤细胞死亡
用缓冲液对照、poly(I:C)、3E10(WT或D31N)或与3E10(WT或D31N)复合的poly(I:C)处理小鼠黑色素瘤细胞(B16)。处理后24小时，通过CellTiter-Glo测量细胞活力。在所有情况下，相对于对照，poly(I:C)与3E10(WT或D31N)的复合降低了细胞活力(图12A-12B)。
实例6：3E10-D31N体内定位到髓母细胞瘤模型
为了测试3E10-D31N(GMABD31N)是否可以穿过血脑屏障并定位到中枢神经系统中的肿瘤，对携带人髓母细胞瘤肿瘤模型的小鼠静脉内施用荧光标记的3E10-D31N。简言之，通过脑池内注射将人髓母细胞瘤模型(DAYO)植入裸鼠。在开始处理之前，通过荧光素酶表达测量肿瘤生长。随后向小鼠静脉内注射荧光标记的3E10-D31N(200ug)。通过IVIS成像监测标记的3E10-D31N的肿瘤累积(图13A)并进行定量(图13B)。
如图13A所示，3E10-D31N在小鼠的CNS中累积并保留至少8天，在脑和脊髓两者中均如此。在没有施用标记的3E10-D31N的对照小鼠中没有观察到荧光。这在图13B中进一步定量示出。这些结果证明，在全身施用后，3E10-D31N能够穿过血脑屏障(BBB)并定位到CNS肿瘤和可能转移的部位。
实例7：用RIG-I多核苷酸激动剂和3E10-D31N复合物治疗髓母细胞瘤肿瘤
为了测试3E10-D31N是否可以将治疗有效量的RIG-I多核苷酸激动剂递送到中枢神经系统的癌症，向携带髓母细胞瘤肿瘤的人类模型的小鼠静脉内施用衍生自甲型流感(H1N1)病毒的5'三磷酸发夹RNARIG-I激动剂(3p-hpRNA；英杰公司(Invitrogen))的复合物，所述激动剂具有以下序列：5'-pppGGAGCAAAAGCAGGGUGACAAAGACAUAAUGGAUCCAAACACUGUGUCAAGCUUUCAGGUAGAUUGCUUUCUUUGGCAUGUCCGCAAAC-3'(SEQ ID NO:XX)。
简言之，通过脑池内注射将人髓母细胞瘤模型(DAYO)植入裸鼠。在开始处理之前，通过荧光素酶表达测量肿瘤生长。随后将小鼠用PBS对照(200ul)、3E10-D31N(GMABD31N)(550ug)或与3p-hpRNA RIG-I激动剂(25ug)(GMABD31N/3pRNA)复合的3E10-D31N(550ug)处理。在第1天、第3天、第4天、第8天、第9天和第14天，通过DAYO细胞的荧光素酶表达监测肿瘤生长，如图14A和14B所展示，并且如在图14C中定量。如图14所示，与施用单独的PBS或GMABD31N的对照小鼠相比，在GMABD31N/3pRNA处理的小鼠中测量的所有时间点处，肿瘤负荷都显著降低。
在施用单剂量的PBS对照、替莫唑胺、3p-hpRNA、单独的3E10-D31N和3E10-D31N/3p-hpRNA复合物后，在第10天对肿瘤成像并确定肿瘤体积。代表性图像在图33A-33E中示出，而每个队列的平均肿瘤负荷在图33F中展示。
在施用后第14天终止小鼠后，对对照小鼠和经处理小鼠的脑和脊髓进行成像，观察DAYO细胞中荧光素酶的表达。如图14D所示，单剂量的GMABD31N/3pRNA，而非PBS对照，显著降低了小鼠的脑中的肿瘤负荷。进一步，如图14E所展示，单剂量的GMABD31N/3pRNA，而非PBS对照，显著防止了癌症向脊髓的转移。
实例8：3E10和其工程化变体的分子建模
WT重链scFv序列
E VQLVESGGGL VKPGGSRKLS CAASGFTFSD YGMHWVRQAP EKGLEWVAYI SSGSSTIYYADTVKGRFTIS RDNAKNTLFL QMTSLRSEDT AMYYCARRGL LLDYWGQGTT LTVS(SEQ ID NO:XX)
轻链scFv序列
D IVLTQSPASL AVSLGQRATI SCRASKSVST SSYSYMHWYQ QKPGQPPKLL IKYASYLESGVPARFSGSGS GTDFTLNIHP VEEEDAATYY CQHSREFPWT FGGGTKLEIK RADAAPGGGG SGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:XX)
3E10(Pymol)的分子建模揭示了推定核酸结合袋(NAB1)(图15A-15B)。在CDR1的残基31处的天冬氨酸向天冬酰胺的突变增加了此残基的阳离子电荷并增强了核酸在体内的结合和递送(3E10-D31N)。在CDR1的残基31处的天冬氨酸向精氨酸(3E10-D31R)的突变进一步扩增了阳离子电荷，而向赖氨酸(3E10-D31K)的突变改变了电荷朝向(图15A)。
从分子建模预测的NAB1氨基酸已在上文重链和轻链序列中加了下划线。图15B是示出具有用点状圆点展示的NAB1氨基酸残基的3E10-scFv(Pymol)的分子建模的图解。
实例9：3E10(D31N)保护mRNA免于RNA降解
接下来研究使mRNA与3E10(D31N)复合是否能保护mRNA免于降解。简而言之，通过将3E10(D31N)与mRNA以20:1的摩尔比混合形成3E10(D31N)与编码绿色荧光蛋白，即荧光素酶的mRNA的复合物，所述荧光素酶具有如下所示的序列GFP_mRNA(SEQ ID NO:XX)。然后将游离mRNA和3E10-mRNA复合物与1％血清、10％血清或16μg/mL RNA酶A在37℃下一起温育持续10分钟。对反应进行凝胶电泳分析(图16A)。如图16A所示，通过与1％血清、10％血清和RNA酶A中的每一种一起温育来降解游离mRNA。然而，当复合的mRNA与1％血清、10％血清或RNA酶A中的任一者一起温育时，未观察到明显的RNA降解，这表明3E10(D31N)保护mRNA免于降解。
GFP_mRNA-AUGGUGAGCAAGGGCGAGGAGCUGUUCACCGGGGUGGUGCCCAUCCUGGUCGAGCUGGACGGCGACGUAAACGGCCACAAGUUCAGCGUGUCCGGCGAGGGCGAGGGCGAUGCCACCUACGGCAAGCUGACCCUGAAGUUCAUCUGCACCACCGGCAAGCUGCCCGUGCCCUGGCCCACCCUCGUGACCACCCUGACCUACGGCGUGCAGUGCUUCAGCCGCUACCCCGACCACAUGAAGCAGCACGACUUCUUCAAGUCCGCCAUGCCCGAAGGCUACGUCCAGGAGCGCACCAUCUUCUUCAAGGACGACGGCAACUACAAGACCCGCGCCGAGGUGAAGUUCGAGGGCGACACCCUGGUGAACCGCAUCGAGCUGAAGGGCAUCGACUUCAAGGAGGACGGCAACAUCCUGGGGCACAAGCUGGAGUACAACUACAACAGCCACAACGUCUAUAUCAUGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCAUCAAGGUGAACUUCAAGAUCCGCCACAACAUCGAGGACGGCAGCGUGCAGCUCGCCGACCACUACCAGCAGAACACCCCCAUCGGCGACGGCCCCGUGCUGCUGCCCGACAACCACUACCUGAGCACCCAGUCCGCCCUGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGAUCACAUGGUCCUGCUGGAGUUCGUGACCGCCGCCGGGAUCACUCUCGGCAUGGACGAGCUGUACAAGUAA(SEQ ID NO:XX)。
接下来，研究了以较低摩尔比复合的mRNA是否也得到保护免于RNA降解。简而言之，通过将3E10(D31N)与mRNA以2:1的摩尔比混合形成3E10(D31N)与编码绿色荧光蛋白(GFP_mRNA；SEQ ID NO:XX)的mRNA的复合物。然后在上述条件下，将游离mRNA和3E10-mRNA复合物与RNA酶A一起温育。进行对反应的凝胶电泳分析(图16B)。如图16B所示，通过与RNA酶A一起温育，使游离mRNA完全降解。然而，将mRNA与3E10(D31N)以2:1的摩尔比复合引起mRNA对降解的一些保护，如孔中存在RNA信号所指示，这指示存在完整的3E10(D31N)-mRNA复合物。当以20:1摩尔比复合时，以2:1摩尔比提供的保护看起来小于对mRNA提供的保护。
实例10：3E10(D31N)以大小依赖性方式保护mRNA免于RNA降解
研究了3E10-D31N在复合时是否还将保护较大的mRNA分子免于酶降解，以及是否需要较大化学计量量的3E10-D31N。简而言之，通过以1:1、2:1、5:1、10:1、20:1和100:1摩尔比将3E10-D31N与mRNA混合，形成编码大蛋白的3E10-D31N与14kb mRNA(HMW mRNA)的复合物。然后将游离mRNA与3E10-mRNA复合物在37℃下与另外的蛋白酶K一起用6μg/mL RNA酶A温育10分钟，以促进蛋白质降解。图17示出了保护测定的琼脂糖凝胶电泳分析。如图17所示，游离HMW mRNA以及以1:1、2:1、5:1和10:1摩尔比(3E10:mRNA)复合的HMW mRNA通过与RNA酶A一起温育而完全降解。然而，如图17所示，以20:1和100:1的摩尔比将HMW mRNA与3E10复合，增加对mRNA免于被RNA酶A降解的保护，如凝胶上未降解的mRNA以类似距离迁移的条带所指示。这些结果与实例9的结果结合，表明3E10以大小依赖性方式保护多核苷酸。
实例11：3E10-D31N介导的RIG-I配体的递送在THP-1单核细胞中诱导I型IFN应答
研究了3E10-D31N介导的RIG-I刺激配体到源自急性单核细胞白血病的单核细胞中的递送是否有效地诱导免疫疗法的I型IFN应答特征。简言之，将THP-1单核细胞接种到孔中，并以20,000个细胞/孔在补充有20％ FBS和1％P/S的DMEM中温育。然后用PBS(对照)、单独的3p-hpRNARIG-I激动剂(1ug/孔)、单独的增加量的3E10-D31N(GMAB)和以增加的摩尔比(3E10:3p-hpRNA)制备的3E10-D31N/3p-hpRNA(1ug 3p-hpRNA/孔)复合物处理细胞持续10分钟，如在图18中所指示的。在指定的时间点对样品培养基进行采样，并测量荧光素酶活性(I型IFN的报告基因)。连续三天监测IFN应答，如在图18A(第1天)、图18B(第2天)和图18C(第3天)中所示出的。
如在图18中所示出的，用单独的3p-hpRNA RIG-I激动剂暴露THP-1单核细胞会导致在三天内1型IFN应答的少量(约2倍)增加，这与裸多核苷酸激动剂的不良细胞内化一致。用单独的3E10-D31N暴露THP-1单核细胞会导致1型IFN应答以剂量非依赖性方式增加了大约5倍。相比之下，用3E10-D31N/3p-hpRNA复合物暴露THP-1单核细胞使1型IFN应答在第2天时增加了15倍至25倍，并且在第三天时增加了10倍至20倍。这些结果与3E10-D31N将多核苷酸转运到细胞中的能力一致。所述应答保持到第3天表明3p-hpRNARIG-I激动剂随着时间的推移从3E10-D31N释放。如在图18中所示出的，使用以较高摩尔比，例如3:1、4:1和5:1与3E10-D31N形成的3p-hpRNA复合物会导致对1型IFN应答的更大刺激。
实例12：如通过细胞活力的丧失所测定的，暴露于在3E10-D31N与RIG-I激动剂之间形成的复合物会引起人脑肿瘤细胞中的细胞死亡
研究了3E10-D31N介导的RIG-I刺激配体到人脑肿瘤细胞中的递送是否诱导细胞死亡。简言之，源自人脑肿瘤的两种细胞系——U87(原发性胶质母细胞瘤)和U251(多形性胶质母细胞瘤)被接种到孔中，并且然后用PBS(对照)、单独的3p-hpRNA RIG-I激动剂(25ug/孔)、单独的3E10-D31N(GMAB)以及在4:1的摩尔比(3E10:3p-hpRNA)下制备的3E10-D31N/3p-hpRNA复合物进行处理。
根据制造说明(参见，可在URL promega.com/resources/protocols/technical-bulletins/0/celltiter-glo-luminescent-cell-viability-assay-protocol/在线获得的技术通报)使用发光细胞活力测定(普洛麦格公司(Promega))处理后测量细胞坏死。如在图19种所示出的，用单独的3p-hpRNA RIG-I激动剂处理会略微降低细胞活力，而用单独的PBS或3E10-D31N处理会导致细胞活力没有可检测的降低。相比之下，用3E10-D31N3p-hpRNA复合物处理会导致两种脑肿瘤细胞系中的细胞活力显著减少(分别为大约15％和20％)，从而表明3E10-D31N介导的RIG-I激动剂的递送可以用于治疗脑肿瘤。
实例13：如通过细胞膜完整性的丧失所测定的，暴露于在3E10-D31N与RIG-I激动剂之间形成的复合物会引起人脑肿瘤细胞中的细胞死亡
进一步研究了3E10-D31N介导的RIG-I刺激配体到人脑肿瘤细胞中的递送是否诱导细胞死亡。简言之，源自人脑肿瘤的两种细胞系——U87(原发性胶质母细胞瘤)和U251(多形性胶质母细胞瘤)被接种到孔中，并且然后用PBS(对照)、单独的3p-hpRNA RIG-I激动剂(1ug/孔)、单独的3E10-D31N(GMAB)以及在5:1的摩尔比(3E10:3p-hpRNA)下制备的3E10-D31N/3p-hpRNA复合物进行处理。
根据制造说明(参见，可在URL promega.com/-/media/files/resources/protocols/technical-manuals/101/celltox-green-cytotoxicity-assay-protocol.pdf在线获得的技术通报)使用CellToxTM绿色细胞毒性测定(普洛麦格公司)处理后测量细胞坏死。如在图20中所示出的，用单独的3p-hpRNA RIG-I激动剂处理会诱导U251细胞中的一小部分(大约7％)的细胞死亡，但在U87细胞中不诱导细胞死亡。类似地，用单独的PBS或3E10-D31N处理不会导致细胞死亡。相比之下，用3E10-D31N/3p-hpRNA复合物处理会导致两种脑肿瘤细胞系中的显著的细胞死亡(分别为大约10％和17％)，从而进一步表明3E10-D31N介导的RIG-I激动剂的递送可以用于治疗脑肿瘤。
实例14：如通过细胞膜完整性的丧失所测定的，暴露于在3E10-D31N与RIG-I激动剂之间形成的复合物会引起结直肠肿瘤细胞中的细胞死亡
进一步研究了3E10-D31N介导的RIG-I刺激配体到结直肠癌细胞中的递送是否诱导细胞死亡。简言之，源自人结直肠癌的两种细胞系——DLD1(杜克氏C型结直肠腺癌(Dukes'type C colorectal adenocarcinoma))和DLD1BRCA KO(具有双等位基因BRCA1敲除的杜克氏C型结直肠腺癌)—以及源自鼠类结直肠癌的两种细胞系——MC38(结肠腺癌)和CT26(结肠腺癌)—被接种到孔中，并且然后用PBS(对照)、单独的3p-hpRNA RIG-I激动剂(1ug/孔)、单独的3E10-D31N(GMAB)以及在5:1的摩尔比(3E10:3p-hpRNA)下制备的3E10-D31N/3p-hpRNA复合物进行处理。
根据制造说明(参见，可在URL promega.com/-/media/files/resources/protocols/technical-manuals/101/celltox-green-cytotoxicity-assay-protocol.pdf在线获得的技术通报)使用CellToxTM绿色细胞毒性测定(普洛麦格公司)处理后测量细胞坏死。如在图21中所示出的，用单独的3p-hpRNA RIG-I激动剂处理会诱导人细胞系中的一小部分(大约3％)的细胞死亡，但在鼠类细胞系中不诱导细胞死亡。类似地，用单独的PBS处理不会导致细胞死亡。用单独的3E10-D31N处理会诱导中等百分比(分别为大约7％和10％)的鼠类细胞系的细胞死亡，但不诱导人细胞系的细胞死亡。相比之下，用3E10-D31N/3p-hpRNA复合物处理会导致在人(在图21A和21B中为大约15％)和鼠类(在图21C和21D中分别为大约15％和25％)结直肠癌细胞系两者中的显著的细胞死亡，从而表明3E10-D31N介导的RIG-I激动剂的递送可以用于治疗结直肠癌。
实例15：如通过细胞膜完整性的丧失所测定的，暴露于在3E10-D31N与RIG-I激动剂之间形成的复合物会引起人乳腺癌细胞中的细胞死亡
进一步研究了3E10-D31N介导的RIG-I刺激配体到人乳腺癌细胞中的递送是否诱导细胞死亡。简言之，将源自人乳腺三阴性乳腺癌(TNBC)腺癌(MDA-MB-231)的细胞系接种到孔中，并且然后用PBS(对照)、单独的3p-hpRNA RIG-I激动剂、单独的3E10-D31N(GMAB)或3E10-D31N/3p-hpRNA复合物(3E10:3p-hpRNA)处理。
根据制造说明(参见，可在URL promega.com/-/media/files/resources/protocols/technical-manuals/101/celltox-green-cytotoxicity-assay-protocol.pdf在线获得的技术通报)使用CellToxTM绿色细胞毒性测定(普洛麦格公司)处理后测量细胞坏死。如在图22中所示出的，用单独的3p-hpRNA RIG-I激动剂处理会诱导乳腺癌细胞中的一小部分(大约2％)的细胞死亡。用单独的3E10-D31N处理会诱导中等百分比(大约10％)的乳腺癌细胞的细胞死亡。相比之下，用3E10-D31N/3p-hpRNA复合物处理会导致乳腺癌细胞中的显著的细胞死亡(大约25％)，从而表明3E10-D31N介导的RIG-I激动剂的递送可以用于治疗乳腺癌。
实例16：3E10-D31N介导的RIG-I配体的递送诱导了黑色素瘤细胞中促炎性IL-10产生的增加和促肿瘤IL-6的减少
通过测定在此类细胞中产生的炎性细胞因子的变化，进一步研究了3E10-D31N/3p-hpRNA RIG-I激动剂诱导的黑色素瘤细胞的细胞死亡的机制。简言之，将B16细胞——黑色素瘤的鼠类模型注射到小鼠中，所述小鼠用PBS(对照)、单独的3p-hpRNARIG-I激动剂、单独的3E10-D31N(GMAB)、3E10-D31N/3p-hpRNA复合物或抗CTLA-4抗体处理。
然后测定促炎性IL-10和促肿瘤IL-6的水平。鉴于关于RIG-I诱导的细胞死亡的已知作用机制，设想如果细胞死亡是由于将RIG-I激动剂递送到细胞而发生，使得激动剂在递送后被释放，则IL-10产生将增加，并且IL-6产生将减少。简言之，在处理后，通过ELISA测定肿瘤中的IL-10和IL-6水平。如在图23中所示出的，相对于PBS处理，用单独的3E10-D31N处理(*p<0.05)，而不是用单独的3p-hpRNA处理(ns＝不显著)诱导了IL-10产生的小的增加。然而，相对于所有其它队列，用3E10-D31N/3p-hpRNA复合物处理会导致IL-10产生的显著增加(****p<0.00005)。这些结果与RIG-I诱导的细胞死亡机制一致。在用抗CLTA-4抗体处理之后，未观察到IL-10产生的增加，这与抗体介导的细胞死亡的不同作用机制一致。
类似地，如在图24中所展示的，相对于用PBS处理(*p<0.05)对照和单独的3p-hpRNA处理(**p<0.005)，用3E10-D31N/3p-hpRNA复合物处理会导致IL-6产生的显著降低，而用单独的3E10-D31N或3p-hpRNA处理不会导致IL-6产生的显著降低(ns＝不显著)。这些结果再次与RIG-I诱导的细胞死亡机制一致。在用抗CTLA-4抗体处理之后，还观察到IL-6产生的减少，这与细胞死亡的诱导一致。
实例17：静脉内施用后，3E10-D31N在体内定位于原位胰腺肿瘤
胰腺肿瘤在体内难以靶向疗法。为了研究3E10-D31N是否能够在体内将治疗性多核苷酸靶向并递送到胰腺癌，向携带原位胰腺肿瘤的小鼠静脉内施用PBS(对照)、单独的经荧光标记的3E10-D31N(GMAB)或与3p-hpRNA(GMAB/3p-hpRNA；每个队列5只小鼠)复合的经荧光标记的3E10-D31N。原位胰腺肿瘤在体内通过荧光素酶表达可视化(图25A；代表性小鼠)。如在图25B中所示出的，与3p-hpRNA复合的经荧光标记的3E10-D31N在体内定位于肿瘤，如通过图25A中在与报告荧光素酶表达相同的位置处的高密度荧光所指示的。
为了进一步研究3E10-D31N是否能够介导将3p-hpRNA递送到癌组织中，从每只小鼠切除原位胰腺肿瘤，并对荧光素酶表达(确认肿瘤组织)和荧光(可视化3E10)进行成像。图26A示出了从每只小鼠切除肿瘤组织。如在图26B中所示出的，来自施用单独的经荧光标记的3E10-D31N(中柱)和与3p-hpRNA复合的3E10-D31N(右柱)的小鼠的切除的肿瘤被内化到癌症组织中。正如所预期的，来自施用PBS的小鼠的肿瘤未示出荧光。
为了进一步研究静脉内施用后3E10-D31N的生物分布，在处死后解剖每只小鼠的肝、肺、脾、肾和心脏，并对荧光素酶表达(指示癌组织)和荧光(可视化3E10)进行成像。来自施用单独的3E10-D31N(左柱)和与3p-hpRNA复合的3E10-D31N的代表性小鼠的每个器官的荧光图像的实例在图26C中(从上到下：肿瘤、肝、肺、脾、肾和心脏)示出。图26D中展示了跨每个小鼠队列中的每个组织测量的平均辐射效率(荧光)。如可以看到的，3E10在体内特异性地靶向肿瘤。肝中的荧光是药物代谢的结果(p<0.05；**p<0.005；***p<0.0005；****p<0.00005)。图26E中示出了来自施用与3p-hpRNA复合的3E10-D31N的每只小鼠的器官的荧光素酶(上行)和荧光(底行)图像。这些结果证明了3E10-D31N能够在体内以组织特异性方式将治疗性多核苷酸定位并递送到胰腺癌。
实例18：3E10-D31N介导的RIG-I配体的递送诱导与黑色素瘤细胞中RIG-I介导的细胞死亡一致的细胞因子表达
通过测定在此类细胞中产生的炎性细胞因子的变化，进一步研究了3E10-D31N/3p-hpRNARIG-I激动剂诱导的黑色素瘤细胞的细胞死亡的机制。简言之，B16细胞——黑色素瘤的鼠类模型—被注射到小鼠中以产生黑色素瘤肿瘤。在注射后第7天和第11天，用PBS(对照)、单独的3p-hpRNA RIG-I激动剂、单独的3E10-D31N(GMAB)、3E10-D31N/3p-hpRNA复合物(3E10:3p-hpRNA)或抗CTLA-4抗体处理小鼠。如在图27中所指示的，在第12天，将肿瘤从小鼠切除，并通过流式细胞术分析自然杀伤(NK)细胞和肿瘤浸润性白细胞(TIL)的浸润，以及各种细胞因子的水平。
如在图27L中所示出的，来自用3E10-D31N/3p-hpRNA复合物和抗CTLA-4抗体处理的小鼠的肿瘤中的活细胞百分比显著高于来自用PBS处理的阴性对照小鼠的肿瘤中的活细胞百分比，从而指示存在更多数量的TIL。与此结果一致的是，在来自用3E10-D31N/3p-hpRNA复合物和抗CTLA-4抗体处理的小鼠的肿瘤中，作为CD45+或NK细胞的活细胞的比例显著高于来自用PBS处理的阴性对照小鼠的肿瘤。进一步地，还确定了肿瘤中的IL-12p70(图27A)、TNFα(图27B)、IL-10(图27C)、IFNγ(图27D)、IL-2(图27E)、IL-4(图27F)、IL-5(图27G)、IFNα(图27H)、IFNβ(图27I)、IL-6(图27J)和KC/GRO(图27K)的水平。如在图27中共同示出的，仅用3E10-D31N/3p-hpRNA复合物处理的小鼠促进通过CD45+TIL的肿瘤浸润并诱导IL-12、IL-10和TNFα产生。
实例19：3E10-D31N介导的RIG-I配体的递送在THP-1单核细胞中诱导I型IFN应答
研究了3E10-D31N介导的RIG-I刺激配体到源自急性单核细胞白血病的单核细胞中的递送是否有效地诱导免疫疗法的I型IFN应答特征。简言之，将THP-1单核细胞接种到孔中，并以20,000个细胞/孔在补充有20％ FBS和1％P/S的DMEM中温育。然后用PBS(对照)、单独的3p-hpRNARIG-I激动剂(1ug/孔)、单独的增加量的3E10-D31N(GMAB)和3E10-D31N/3p-hpRNA(1ug 3p-hpRNA/孔)复合物处理细胞持续10分钟。在指定的时间点对样品培养基进行采样，并测量荧光素酶活性(I型IFN的报告基因)。细胞系包含当诱导IFN途径时表达的荧光素酶报告基因。如在图28中所示出的，用3E10-D31N/3p-hpRNA复合物处理细胞引发的I型IFN应答显著大于用单独E10-D31N处理细胞引发的I型IFN应答。用PBS和单独的3p-hpRNARIG-I激动剂处理不会导致I型IFN应答。
实例20：暴露于在3E10-D31N与RIG-I激动剂之间形成的复合物会引起结直肠肿瘤细胞中的细胞死亡
进一步研究了3E10-D31N介导的RIG-I刺激配体到结直肠癌细胞中的递送是否诱导细胞死亡。简言之，将来自与C57Bl/6小鼠同基因的MC38小鼠结肠癌细胞系的细胞接种到孔中，并且然后用PBS(对照)、单独的3p-hpRNA RIG-I激动剂、单独的3E10-D31N(GMAB)和3E10-D31N/3p-hpRNA复合物(3E10:3p-hpRNA)进行处理。然后测量细胞死亡。如在图29中所示出的，用3E10-D31N/3p-hpRNA复合物处理会导致显著的细胞死亡，而所有其它处理不会诱导细胞死亡。
实例21：3E10-D31N介导的RIG-I配体的递送抑制了黑色素瘤鼠类模型中的肿瘤生长
研究了3E10-D31N/3p-hpRNA RIG-I激动剂的复合物是否在体内抑制黑色素瘤肿瘤生长。简言之，B16细胞——黑色素瘤的鼠类模型—被注射到小鼠中以产生黑色素瘤肿瘤。在注射后第9天、第11天、第13天和第15天，用PBS(对照；●)、单独的3E10-D31N(GMAB；■)、单独的3p-hpRNA(▲)、3E10-D31N/3p-hpRNA复合物(▼)或抗CTLA-4抗体(◆)处理小鼠。随着时间的推移测量小鼠中的每只小鼠的肿瘤体积。如在图30A中所示出的，相对于用PBS、单独的3E10-D31N和单独的3p-hpRNA处理，用3E10-D31N/3p-hpRNA复合物和抗CTLA-4抗体处理显著抑制了肿瘤生长(*p<0.05；**p<0.005)。在用3E10-D31N/3p-hpRNA复合物和抗CTLA-4抗体处理(ns＝不显著)与阴性对照之间，或用单独的3E10-D31N或单独的3p-hpRNA处理与阴性对照之间未看到显著的差异(ns＝不显著)。
图30B-30G展示了在肿瘤移植后的第9天、第11天、第13天和第15天全身施用PBS(对照；30B和30C)、单独的3E10-D31N(GMAB；30D和30E)、单独的3p-hpRNA(30F和30G)、3E10-D31N/3p-hpRNA复合物(30H和30I)或抗CTLA-4抗体(30J和30K)之后，在移植后的第23天，每个队列中的每只单独的小鼠的肿瘤体积(mm3)以及肿瘤的代表性图像。
实例22：用3E10-D31N/RIG-I配体复合物和抗PD-1抗体进行的共同疗法协同抑制小鼠结肠癌模型中的肿瘤生长
研究了3E10-D31N/3p-hpRNA RIG-I激动剂的复合物是否在体内抑制结肠癌肿瘤生长。简言之，MC38细胞——小鼠结肠癌细胞系—被注射到小鼠中以产生结肠肿瘤。在注射后第8天、第11天和第14天，将小鼠用PBS(对照；●)、3E10-D31N/3p-hpRNA复合物(▼)、3E10-D31N/3p-hpRNA复合物+抗PD-1(◆)或单独的抗PD-1(○)处理。随时间推移测量肿瘤体积。如图31A所示，相对于阴性对照(PBS)，用单独的3E10-D31N/3p-hpRNA复合物进行的治疗无法抑制肿瘤生长。相对于阴性对照(PBS)，用单独的抗PD-1抗体进行的治疗适度抑制了肿瘤生长。然而，相对于所有其它治疗，用3E10-D31N/3p-hpRNA复合物和抗PD-1抗体进行的共同治疗显著抑制了肿瘤生长(*p<0.05；**p<0.005；***p<0.0005)。
图31B-31M展示了在全身施用PBS(对照；31B和31C)、单独的3E10-D31N(GMAB；31D和31E)、单独的3p-hpRNA(31F和31G)、3E10-D31N/3p-hpRNA复合物(31H和31I)、抗PD-1抗体(31J和31K)或3E10-D31N/3p-hpRNA复合物+抗PD-1抗体(31L和31M)之后，在注射后的第21天，每个队列中的每只单独的小鼠的肿瘤体积(mm3)以及肿瘤的代表性图像。
实例23：用3E10-D31N/RIG-I配体复合物和抗PD-1抗体进行的共同疗法协同抑制小鼠乳腺癌模型中的肿瘤生长
研究了3E10-D31N/3p-hpRNA RIG-I激动剂的复合物是否在体内抑制乳腺癌肿瘤生长。EMT6是源自BALB/c小鼠的移植的增生性肺泡结节的鼠乳腺癌细胞系。在同基因小鼠中，EMT6细胞形成肿瘤和自发转移，主要转移到肺部。因此，将EMT6细胞注射到小鼠体内以产生肺癌肿瘤。在注射后第8天、第11天和第14天，将小鼠用PBS(对照；●)、3E10-D31N/3p-hpRNA复合物(▼)、3E10-D31N/3p-hpRNA复合物+抗PD-1(◆)或单独的抗PD-1(○)处理。随时间推移测量肿瘤体积。如图32A所示，相对于阴性对照(PBS)，用单独的3E10-D31N/3p-hpRNA复合物或单独的抗PD-1抗体进行的治疗无法抑制肿瘤生长。然而，相对于所有其它治疗，用3E10-D31N/3p-hpRNA复合物和抗PD-1抗体进行的共同治疗显著抑制了肿瘤生长(***p<0.0005)。
图32B-32G展示了在全身施用PBS(对照；32B)、单独的3E10(D31N)(GMAB；32C)、单独的3p-hpRNA(32D)、3E10(D31N)/3p-hpRNA复合物(32E)、抗PD-1抗体(32F)或3E10(D31N)/3p-hpRNA复合物+抗PD-1抗体(32G)后，每个队列中的每只个体小鼠的肿瘤体积(mm3)。图32H展示了用3E10-D31N/3p-hpRNA复合物和抗PD-1抗体进行的共同处理产生了免疫记忆。具体地图32H展示了，一旦在处理后形成了免疫记忆，用肿瘤细胞再次攻击的小鼠就不再生长肿瘤。
实例24：3E10-D31N在体内内化并与gDNA缔合
研究3E10-D31N的内化和细胞定位实验。用89Zr标记同种型对照、3E10-WT(GMABWT)和3E10-D31N(GMABD31N)抗体并在体内向细胞施用。在一定时间量之后，将细胞组分(细胞质、膜、核蛋白和gDNA)分级并测定89Zr信号(每分钟计数，CPM)。如在图34中所示出的，定位于核的大部分内化GMABWT和GMABD31N抗体被发现与核的核蛋白级分和gDNA部分两者缔合。然而，与gDNA级分缔合的GMABD31N的部分比GMABWT更大，从而表明GMABD31N比GMABWT更容易定位到染色质。
实例25：嵌合3E10-D31N(cD31N)与RNA非共价结合并且在体内分布到肿瘤中
研究了嵌合3E10-D31N(cD31N)的核酸结合。在选定的抗体浓度下，通过ELISA测定cD31N和相关的不具有D31N取代的嵌合3E10(cWT)以确定与核酸的结合动力学。如图35A和图35B所示，在通过相对光单位(RLU)测量，在所有测试抗体浓度(12.5、25、50和100μg/μl)下，cD31N显示出与RNA的优先结合比与DNA的优先结合增加了2倍以上。在另一个实验中，cD31N对89个核苷酸的3p-hpRNAcD31N的亲和力通过生物层干涉测量法(BLI)测量，作为增加RNA浓度的函数。如图35C所示，与6.25nM、12.5nM、25nM和50nM的寡聚物浓度相比，最高寡聚物浓度(100nM)的结合率(nm)随时间(秒)推移急剧增加并保持最大值。图35C进一步示出了3p-hpRNA的解离常数(KD)的导出值以及相关参数。在另一个实验中，使用动态光散射将cD31N/3p-hpRNA抗体RNA复合物(3p-ARC)的流体动力学半径与单独的cD31N进行比较和测量。如图35D所示，当与单独cD31N相比时，3p-ARC的动态光散射在统计学上更大。数据是n＝16的平均值±s.e.m，并且p值通过双尾不成对t检验确定。
研究cD31N在U2OS人骨肉瘤细胞中的渗透和分布。同种型对照和cD31N与荧光标记的3p-hpRNA一起温育，并且施用于U2OS人骨肉瘤细胞。如图35E所示，与和同种型对照一起温育的标记的3p-hpRNA相比，当细胞用与cD31N复合的3p-hpRNA处理时，荧光标记的3p-hpRNA向U2OS细胞中的递送更多。在对携带EMT6胁腹肿瘤的小鼠(n＝1)施用荧光标记的cD31N之后24小时，研究肿瘤和正常组织分布的IVIS可视化。图35F示出了相对于若干其它组织(例如，脾、心脏和脑)，荧光标记的cD31N在肿瘤和肝脏中的组织分布的增加。在对携带EMT6胁腹肿瘤的小鼠(n＝1)施用与cD31N复合的siGLO(荧光标记的siRNA)之后24小时，研究肿瘤和正常组织分布的IVIS可视化。图35G示出了相对于若干其它组织(例如，脾、心脏和脑)，siGLO在肿瘤和肝脏中的组织分布的增加。
实例26：嵌合3E10-D31N抗体(cD31N)/3p-hpRNA抗体/RNA复合物诱导RIG-I依赖性干扰素应答
研究了嵌合3E10-D31N抗体(cD31N)/3p-hpRNA抗体/RNA复合物在小鼠黑色素瘤模型中诱导RIG-I依赖性干扰素应答和介导肿瘤生长抑制的能力。使用构建的含有IFN-应答荧光素酶报告基因的THP-1单核细胞或THP-1RIG-I KO单核细胞来测试I型IFN诱导应答，并且将这些细胞用媒剂对照(PBS)、3p-hpRNA、cD31N或cD31N/3p-hpRNA处理。如图36A所示，3E10-D31N抗体(cD31N)/3p-hpRNA抗体/RNA复合物显示出诱导RIG-I依赖性干扰素应答的最大能力(约60倍增加)。对于肿瘤生长研究，如图36B所示，概述了在携带B16.F10.OVA胁腹肿瘤的具有免疫能力的C57Bl/6小鼠中通过眼眶后IV注射进行cD31N/3p-hpRNA复合物IV施用的体内给药方案。测量了用媒剂对照(PBS)、cD31N、3p-hpRNA、cD31N/3p-hpRNA或抗CTLA-4处理的携带B16.F10.OVA胁腹肿瘤的小鼠中的肿瘤生长曲线。从每组中n＝5-6的肿瘤体积数据(mm3)得到恢复，并且与单独的cD31N或单独的3p-hpRNA相比，在用cD31N/3p-hpRNA处理的小鼠中肿瘤体积显著更小。图36D示出了在实验过程中经处理的携带B16.F10.OVA胁腹肿瘤的小鼠的体重。图36E展示了携带B16.F10.OVA胁腹肿瘤的小鼠的处理后的终末骨髓细胞计数。
实例27：cD31N/3p-hpRNA抗体/RNA复合物诱导黑色素瘤胁腹肿瘤中的肿瘤浸润性白细胞
研究了cD31N/3p-hpRNA抗体/RNA复合物，以确定它们是否可以诱导黑色素瘤胁腹肿瘤中的肿瘤浸润性白细胞。如图37A和图37B所示，在施用两个剂量的指定的处理之后24小时(在植入后第10天和第13天)，测量从携带B16.F10.OVA肿瘤的经处理的C57Bl/6小鼠采集的肿瘤和脾对照(图37B)中的CD45+、CD8+、NK、NKT和CD19+细胞的百分比。
实例28：cD31N/3p-hpRNA复合物穿透原位胰腺肿瘤，提高存活率，诱导肿瘤坏死，并且促进免疫原性
研究了3E10-D31N/3p-hpRNA RIG-I激动剂的复合物是否可以在体内治疗胰腺癌模型。胰腺导管腺癌的鼠KPC模型发展了在人PDA中观察到的许多关键特征，包含胰腺上皮内瘤形成以及包含排斥效应T细胞的强烈炎症反应。Hingorani S.R.等人,《癌细胞(CancerCell)》,7:469(2005)和Olive K.P.等人,《科学》,324:1457(2009)。因此，如图38A所示，分别在肿瘤植入后10天、13天和16天，通过眼眶后IV注射向KPC小鼠施用三个剂量的3E10-D31N/3p-hpRNA。
为了研究复合物是否将3p-hpRNA RIG-I激动剂递送到肿瘤组织，在三个剂量的3p-hpRNA/cD31N的最后一个剂量后一天，通过流式分选，对肿瘤和从KPC原位肿瘤分离的CD45+细胞进行3p-hpRNA的RT-PCR定量。如图38B所示，3p-hpRNA存在于施用有复合物的小鼠的肿瘤细胞中，但不存在于施用有PBS对照的小鼠中。在CD45+细胞中没有观察到3p-hpRNA。每组n＝5的数据，其中通过斯图登氏t检验进行统计分析，以进行个体比较，同时标明p值。
如图38C所示，施用有3p-hpRNA(3804)的小鼠比施用有PBS对照(3802)的小鼠具有显著更长的存活期，p＝0.006。来自n＝6-7的数据，其中通过对数秩(Mantel–Cox)检验进行统计分析，同时表明p值。
进一步，施用有3p-hpRNA的小鼠中大约一半的KPC肿瘤细胞显示出坏死组织学，而施用有PBS对照的小鼠中的KPC肿瘤细胞则没有显示出。图38D展示了对肿瘤细胞坏死的组织学分析的定量。n＝4的数据，其中通过斯图登氏t检验进行统计分析，以进行个体比较，同时标明p值。与此发现一致，对照和cD31N/3p-hpRNA处理的小鼠的肿瘤切片的H&E染色图像，以两种放大倍率展示了cD31N/3p-hpRNA处理的小鼠相对于对照的肿瘤细胞坏死，如图38E所示。此外，在用3p-hpRNA处理的小鼠中，更高百分比的CD45+细胞也是CD4+(图38F)和/或CD8+(图38G)。
综上所述，这些数据表明3E10-D31N/3p-hpRNA RIG-I激动剂的复合物在体内治疗胰腺癌是有效的。
实例29：cD31N结合多个种类的RNA
图39A和39B共同展示了cD31N结合多个种类的RNA。生物层干涉测量法(BLI)测量cD31N对(图39A)GFP-mRNA和(图39B)靶向KRAS的siRNA的亲和力。在图39A中，3902示出了2.5秒的收集和拟合曲线，3904示出了1.25秒的收集和拟合曲线，3906示出了0.625秒的收集和拟合曲线，并且3908示出了0.3125秒的收集和拟合曲线。在图39B中，3912示出了31.3秒的收集和拟合曲线，3914示出了15.6秒的收集和拟合曲线，并且3916示出了7.81秒的收集和拟合曲线。解离常数(KD)和相关参数的导出值在对应表格中指明。
实例30：cD31N细胞穿透是ENT2依赖性的
图40展示了cD31N细胞穿透是ENT2依赖性的。在与cD31N一起温育之前，用双嘧达莫或NBMPR(6-S-[(4-硝基苯基)甲基]-6-硫代肌苷)预处理U2OS人骨肉瘤细胞，持续30分钟。用cD31N处理30分钟后，通过相对于细胞核的DAPI(4',6-双脒基-2-苯基吲哚)染色归一化的免疫荧光来对摄取进行定量。通过斯图登氏t检验进行统计分析，以进行个体比较，同时标明p值。
实例31：ENT2在多种肿瘤模型中高度表达
图41A和41B共同展示了ENT2在多种肿瘤模型中高度表达。对由鼠组织(C57Bl/6)和所示肿瘤细胞系制备的细胞裂解物中的ENT2蛋白表达的蛋白质印迹分析(图41A)和定量(图41B)。
引用的文献和替代性实施例
本文中所引用的全部参考文献以全文引用的方式并入本文并且出于所有目的，其程度如同每个单独的公开或专利或专利申请具体地且单独地被指示为出于所有目的以全文引用的方式并入本文。
可以在不脱离本发明的精神和范围的情况下做出本发明的许多修改和变化，如所属领域的技术人员将显而易见的。本文所描述的具体实施例仅以实例的方式给出。为了最佳地解释本发明的原理很热其实际应用，选择和描述了所述实施例，以便由此使本领域的其它技术人员能够最好地利用本发明以及具有适合于所设想的特定用途的各种修改的各个实施例。本发明仅由所附权利要求书的术语以及权利要求书所授权的等效物的完整范围来限制。

Claims (326)

1.一种用于治疗有需要的受试者的中枢神经系统的癌症的方法，所述方法包括：
向所述受试者的外周肠胃外施用治疗有效量的组合物，所述组合物包括在(i)治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。
2.一种用于治疗有需要的受试者的中枢神经系统的癌症的方法，所述方法包括：
向所述受试者的所述中枢神经系统中注射治疗有效量的组合物，所述组合物包括在(i)治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述中枢神经系统的所述癌症是神经上皮性脑或脊髓肿瘤。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述神经上皮性脑或脊髓肿瘤是星形细胞肿瘤、少突胶质细胞肿瘤、少突星形细胞肿瘤、室管膜肿瘤、脉络丛肿瘤、神经元或混合性神经元-胶质肿瘤、松果体区肿瘤、胚胎性肿瘤或在其它方面未分类的神经上皮肿瘤。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述神经上皮性脑或脊髓肿瘤是选自由以下组成的组的星形细胞肿瘤：毛细胞性星形细胞瘤(ICD-O 9421/1)、毛细胞黏液型星形细胞瘤(ICD-O 9425/3)、室管膜下巨细胞星形细胞瘤(ICD-O 9384/1)、多形性黄色星形细胞瘤(ICD-O 9424/3)、弥漫性星形细胞瘤(ICD-O 9400/3)、间变性星形细胞瘤(ICD-O 9401/3)、胶质母细胞瘤(ICD-O 9440/3)、巨细胞胶质母细胞瘤(ICD-O 9441/3)、胶质肉瘤(ICD-O9442/3)和脑胶质瘤病(ICD-O 9381/3)。
6.根据权利要求4所述的方法，其中所述神经上皮性脑或脊髓肿瘤是选自由以下组成的组的少突胶质细胞肿瘤：少突胶质细胞瘤(ICD-O 9450/3)和间变性少突胶质细胞瘤(ICD-O 9451/3)。
7.根据权利要求4所述的方法，其中所述神经上皮性脑或脊髓肿瘤是选自由以下组成的组的少突星形细胞肿瘤：少突星形细胞瘤(ICD-O 9382/3)和间变性少突星形细胞瘤(ICD-O 9382/3)。
8.根据权利要求4所述的方法，其中所述神经上皮性脑或脊髓肿瘤是选自由以下组成的组的室管膜肿瘤：室管膜下瘤(ICD-O 9383/1)、粘液乳头状室管膜瘤(ICD-O 9394/1)和室管膜瘤(ICD-O 9391/3)以及间变性室管膜瘤(ICD-O 9392/3)。
9.根据权利要求4所述的方法，其中所述神经上皮性脑或脊髓肿瘤是选自由以下组成的组的脉络丛肿瘤：脉络丛乳头状瘤(ICD-O 9390/0)、非典型脉络丛乳头状瘤(ICD-O9390/1)和脉络丛癌(ICD-O 9390/3)。
10.根据权利要求4所述的方法，其中所述神经上皮性脑或脊髓肿瘤是选自由以下组成的组的神经元或混合性神经元-胶质肿瘤：小脑发育不良性神经节细胞瘤(莱尔米特-杜克罗斯病(Lhermitte-Duclos))(ICD-O 9493/0)、促结缔组织增生性婴儿星形细胞瘤/神经节胶质细胞瘤(ICD-O 9412/1)、胚胎发育不良性神经上皮肿瘤(ICD-O 9413/0)、神经节细胞瘤(ICD-O 9492/0)、神经节胶质细胞瘤(ICD-O 9505/1)、间变性神经节胶质细胞瘤(ICD-O9505/3)、中枢神经细胞瘤(ICD-O 9506/1)、脑室外神经细胞瘤(ICD-O 9506/1)、小脑脂肪神经细胞瘤(ICD-O 9506/1)、乳头状胶质神经元肿瘤(ICD-O 9509/1)、第四脑室玫瑰花结形成性胶质神经元肿瘤(ICD-O 9509/1)和副神经节瘤(ICD-O 8680/1)。
11.根据权利要求4所述的方法，其中所述神经上皮性脑或脊髓肿瘤是选自由以下组成的组的松果体区肿瘤：松果体细胞瘤(ICD-O 9361/1)、松果体实质中度分化型肿瘤(ICD-O9362/3)、松果体母细胞瘤(ICD-O 9362/3)和松果体区乳头状肿瘤(ICD-O 9395/3)。
12.根据权利要求4所述的方法，其中所述神经上皮性脑或脊髓肿瘤是选自由以下组成的组的胚胎性肿瘤：髓母细胞瘤(ICD-O 9470/3)、具有广泛结节的髓母细胞瘤(ICD-O9471/3)、间变性髓母细胞瘤(ICD-O 9474/3)、CNS原始神经外胚层肿瘤(ICD-O 9473/3)、CNS神经母细胞瘤(ICD-O 9500/3)和非典型畸胎样/横纹肌样肿瘤(ICD-O 9508/3)。
13.根据权利要求4所述的方法，其中所述神经上皮性脑或脊髓肿瘤是选自由以下组成的组的在其它方面未分类的神经上皮肿瘤：星形母细胞瘤(ICD-O 9430/3)、第三脑室的脊索样胶质瘤(ICD-O 9444/1)和血管中心性胶质瘤(ICD-O 9431/1)。
14.根据权利要求4所述的方法，其中所述神经上皮性脑或脊髓肿瘤是髓母细胞瘤。
15.根据权利要求3至14中任一项所述的方法，其中所述癌症是尚未转移到所述受试者的脊髓的神经上皮性脑肿瘤。
16.根据权利要求14所述的方法，其中所述治疗降低了所述癌症转移到所述脊髓的可能性。
17.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述中枢神经系统的所述癌症是颅神经或椎旁神经的癌症。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述颅神经或椎旁神经的癌症选自由以下组成的组：神经鞘瘤、神经纤维瘤、神经束膜瘤和恶性外周神经鞘膜瘤。
19.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述中枢神经系统的所述癌症是脑膜组织的癌症。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述脑膜组织的所述癌症是脑膜上皮细胞瘤、间叶性肿瘤、原发性黑素细胞病变或其它与脑膜相关的赘生物。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述脑膜组织的所述癌症是选自由以下组成的组的脑膜上皮细胞瘤：脑膜瘤、非典型脑膜瘤和间变性脑膜瘤。
22.根据权利要求20所述的方法，其中所述脑膜组织的所述癌症是选自由以下组成的组的间叶性肿瘤：脂肪瘤、血管脂肪瘤、冬眠瘤、脂肪肉瘤、孤立性纤维瘤、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌瘤、横纹肌肉瘤、软骨瘤、软骨肉瘤、骨瘤、骨肉瘤、骨软骨瘤、血管瘤、上皮样血管内皮瘤、血管外皮细胞瘤、间变性血管外皮细胞瘤、血管肉瘤、卡波西肉瘤(Kaposi sarcoma)和尤文肉瘤(Ewing sarcoma)。
23.根据权利要求20所述的方法，其中所述脑膜组织的所述癌症是选自由以下组成的组的原发性黑素细胞病变：弥漫性黑素细胞增多症、黑素细胞瘤、恶性黑色素瘤和脑膜黑色素瘤病。
24.根据权利要求20所述的方法，其中所述脑膜组织的所述癌症是血管母细胞瘤。
25.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述中枢神经系统的所述癌症是造血系统的癌症。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述造血系统的所述癌症选自由以下组成的组：恶性淋巴瘤、浆细胞瘤和粒细胞肉瘤。
27.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述中枢神经系统的所述癌症是生殖细胞肿瘤。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述生殖细胞肿瘤选自由以下组成的组：生殖细胞瘤、胚胎性癌、卵黄囊瘤、绒毛膜癌、畸胎瘤和混合性生殖细胞肿瘤。
29.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述中枢神经系统的所述癌症是鞍区的肿瘤。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述鞍区的所述肿瘤选自由以下组成的组：颅咽管瘤、颗粒细胞肿瘤、垂体细胞瘤和腺垂体的纺锤细胞嗜酸细胞瘤。
31.根据权利要求1和3至30中任一项所述的方法，其中所述肠胃外施用是静脉内施用。
32.根据权利要求2至30中任一项所述的方法，其中所述组合物通过鞘内施用、脑室内施用或脑实质内施用来施用。
33.根据权利要求1至32中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是多核苷酸免疫刺激剂。
34.根据权利要求33所述的方法，其中所述多核苷酸免疫刺激剂是能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体。
35.根据权利要求34所述的方法，其中所述PRR是维甲酸诱导型基因I(RIG-I)。
36.根据权利要求35所述的方法，其中所述多核苷酸配体包括5'三磷酸和双链RNA。
37.根据权利要求35所述的方法，其中所述多核苷酸配体包括核酸序列5'-pppGGAGCAAAAG CAGGGUGACA AAGACAUAAU GGAUCCAAAC ACUGUGUCAA GCUUUCAGGUAGAUUGCUUU CUUUGGCAUG UCCGCAAAC-3'(SEQ ID NO:XX)。
38.根据权利要求35所述的方法，其中所述多核苷酸配体包括5'三磷酸和发夹RNA。
39.根据权利要求35所述的方法，其中所述多核苷酸配体包括poly(dA:dT)。
40.根据权利要求35所述的方法，其中所述多核苷酸配体包括poly(I:C)。
41.根据权利要求34所述的方法，其中所述PRR是Toll样受体(TLR)。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述TLR是TLR3、TLR7、TLR8或TLR9。
43.根据权利要求1至32中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸编码蛋白质或肽。
44.根据权利要求1至32中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是非复制的未经修饰的mRNA。
45.根据权利要求1至32中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是自扩增mRNA。
46.根据权利要求1至32中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是编码肽的蛋白质的质粒。
47.根据权利要求1至32中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是编码反义序列的质粒。
48.根据权利要求1至32中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是基因调节多核苷酸。
49.根据权利要求48所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是siRNA。
50.根据权利要求48所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是miRNA。
51.根据权利要求48所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是小激活RNA(saRNA)。
52.根据权利要求48所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是安塔够妙(antagomir)。
53.根据权利要求48所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是反义寡核苷酸。
54.根据权利要求48所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是诱骗寡核苷酸。
55.根据权利要求1至32中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是效应多肽。
56.根据权利要求55所述的方法，其中所述效应多肽是适体。
57.根据权利要求55所述的方法，其中所述效应多肽是核酶。
58.根据权利要求1至57中任一项所述的方法，其中所述3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包括：
(a)轻链可变区(VL)互补决定区(CDR)1，所述VL CDR1包括3E10-VL-CDR1(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；
(b)VL CDR2，所述VL CDR2包括3E10-VL-CDR2(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；
(c)VL CDR3，所述VL CDR3包括3E10-VL-CDR3(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；
(d)重链可变区(VH)CDR1，所述VH CDR1包括3E10-VH-CDR1a(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；
(e)VH CDR2，所述VH CDR2包括3E10-VH-CDR2(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；以及
(f)VH CDR3，所述VH CDR3包括3E10-VH-CDR3(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列。
59.根据权利要求278所述的方法，其中所述VH CDR1包括3E10-VH-CDR1_D31N(SEQ IDNO:XX)的序列。
60.根据权利要求1至59中任一项所述的方法，其中所述抗体或其片段包括包含与3E10-VL(SEQ ID NO:XX)至少85％相同的氨基酸序列的VL链。
61.根据权利要求60所述的方法，其中所述抗体或其片段包括包含与3E10-VL(SEQ IDNO:XX)相同的氨基酸序列的VL。
62.根据权利要求1至61中任一项所述的方法，其中所述抗体或其片段包括包含与3E10-VH_D31N(SEQ ID NO:XX)至少85％相同的氨基酸序列的VH。
63.根据权利要求62所述的方法，其中所述抗体或其片段包括包含与3E10-VH_D31N(SEQ ID NO:XX)相同的氨基酸序列的VH。
64.根据权利要求1至63中任一项所述的方法，其中所述抗体或其片段包括：
重链，所述重链从N末端至C末端包括VH-CH1-铰链-CH2-CH3，以及轻链，所述轻链从N末端至C末端包括VL-CL。
65.根据权利要求64所述的方法，其中所述铰链-CH2-CH3是选自由来自人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的Fc结构域组成的组的Fc结构域。
66.根据权利要求1至65中任一项所述的方法，其中所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)多核苷酸配体的摩尔比是至少约2:1。
67.根据权利要求66所述的方法，其中所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)多核苷酸配体的摩尔比是至少约5:1。
68.根据权利要求66所述的方法，其中所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)多核苷酸配体的摩尔比是至少约20:1。
69.根据权利要求1至68中任一项所述的方法，其中所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)多核苷酸配体的摩尔比不超过约50:1。
70.根据权利要求69所述的方法，其中所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)多核苷酸配体的摩尔比不超过约30:1。
71.根据权利要求69所述的方法，其中所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)多核苷酸配体的摩尔比是约2:1至约50:1。
72.根据权利要求69所述的方法，其中所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)多核苷酸配体的摩尔比是约2:1至约30:1。
73.根据权利要求1至73中任一项所述的方法，其中所述3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段是双特异性抗体或其变体、或其抗原结合片段。
74.根据权利要求73所述的方法，其中所述双特异性抗体或其变体、或其抗原结合片段包括：
来自3E10抗体的第一抗原结合结构域；以及
来自靶向癌细胞上存在的细胞表面抗原的抗体的第二抗原结合结构域。
75.根据权利要求73所述的方法，其中所述双特异性抗体或其变体、或其抗原结合片段包括：
来自3E10抗体的第一抗原结合结构域；以及
来自靶向细胞周期检查点蛋白或复合物的抗体的第二抗原结合结构域。
76.根据权利要求73所述的方法，其中所述双特异性抗体或其变体、或其抗原结合片段包括：
来自3E10抗体的第一抗原结合结构域；以及
来自抗体的第二抗原结合结构域，所述抗体靶向选自由以下组成的组的抗原：EGF、Ras、Myc、HER2/Neu、p53、CD19、CD20和PSMA。
77.一种用于治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括：
向所述受试者施用治疗有效量的组合物，所述组合物包括在(i)治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。
78.根据权利要求77所述的方法，其中所述癌症是癌、肉瘤、母细胞瘤、乳头状瘤或腺瘤。
79.根据权利要求77所述的方法，其中所述癌症是转移性癌症。
80.根据权利要求77至79中任一项所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的组：膀胱癌、血癌、脑癌、乳腺癌、骨癌、宫颈癌、结直肠癌、内分泌癌、食道癌、胃癌、头颈癌、肝胆癌、白血病、肺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、骨髓瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、甲状腺癌和子宫癌。
81.根据权利要求80所述的方法，其中所述癌症是选自由以下组成的组的皮肤癌：基底细胞癌、鳞状细胞癌和黑色素瘤。
82.根据权利要求80所述的方法，其中所述癌症是黑色素瘤。
83.根据权利要求77至79中任一项所述的方法，其中所述癌症是中枢神经系统的癌症。
84.根据权利要求77所述的方法，其中所述癌症是选自由以下组成的组的神经上皮性脑或脊髓肿瘤：髓母细胞瘤、星形细胞肿瘤、少突胶质细胞肿瘤、少突星形细胞肿瘤、室管膜肿瘤、脉络丛肿瘤、神经元或混合性神经元-胶质肿瘤、松果体区肿瘤、胚胎性肿瘤或在其它方面未分类的神经上皮肿瘤。
85.根据权利要求77至84中任一项所述的方法，其中所述施用是通过肠胃外施用进行的。
86.根据权利要求85所述的方法，其中所述肠胃外施用是肌肉内施用、静脉内施用或皮下施用。
87.根据权利要求77所述的方法，其中所述癌症是黑色素瘤，并且所述施用是通过肠胃外施用进行的。
88.根据权利要求77至87中任一项所述的方法，其中所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)治疗性多核苷酸的摩尔比是至少约2:1。
89.根据权利要求77至87中任一项所述的方法，其中所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)治疗性多核苷酸的摩尔比是至少约5:1。
90.根据权利要求77至87中任一项所述的方法，其中所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)治疗性多核苷酸的摩尔比是至少约20:1。
91.根据权利要求77至90中任一项所述的方法，其中所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)治疗性多核苷酸的摩尔比不超过约200:1。
92.根据权利要求77至90中任一项所述的方法，其中所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)治疗性多核苷酸的摩尔比不超过约100:1。
93.根据权利要求77至92中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸的长度不超过500个核苷酸，并且所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)治疗性多核苷酸的摩尔比是约2:1至约50:1。
94.根据权利要求77至92中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸的长度不超过500个核苷酸，并且所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)治疗性多核苷酸的摩尔比是约2:1至约30:1。
95.根据权利要求77至92中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸的长度大于500个核苷酸，并且所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)治疗性多核苷酸的摩尔比是约10:1至约200:1。
96.根据权利要求77至92中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸的长度大于500个核苷酸，并且所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)治疗性多核苷酸的摩尔比是约10:1至约100:1。
97.根据权利要求77至96中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是多核苷酸免疫刺激剂。
98.根据权利要求97所述的方法，其中所述多核苷酸免疫刺激剂是能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体。
99.根据权利要求98所述的方法，其中所述PRR是维甲酸诱导型基因I(RIG-I)。
100.根据权利要求99所述的方法，其中所述多核苷酸配体包括5'三磷酸和双链RNA。
101.根据权利要求99所述的方法，其中所述多核苷酸配体包括核酸序列5'-pppGGAGCAAAAG CAGGGUGACA AAGACAUAAU GGAUCCAAAC ACUGUGUCAA GCUUUCAGGUAGAUUGCUUU CUUUGGCAUG UCCGCAAAC-3'(SEQ ID NO:XX)。
102.根据权利要求99所述的方法，其中所述多核苷酸配体包括5'三磷酸和发夹RNA。
103.根据权利要求99所述的方法，其中所述多核苷酸配体包括poly(dA:dT)。
104.根据权利要求99所述的方法，其中所述多核苷酸配体包括poly(I:C)。
105.根据权利要求98所述的方法，其中所述PRR是Toll样受体(TLR)。
106.根据权利要求105所述的方法，其中所述TLR是TLR3、TLR7、TLR8或TLR9。
107.根据权利要求98所述的方法，其中所述PRR是黑色素瘤分化相关蛋白5(MDA5)。
108.根据权利要求97所述的方法，其中所述多核苷酸免疫刺激剂是能够刺激环状-GMP-AMP-合酶(cGAS)的多核苷酸配体。
109.根据权利要求97所述的方法，其中所述多核苷酸免疫刺激剂是能够刺激干扰素基因刺激因子(STING)的多核苷酸配体。
110.根据权利要求77至94中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸编码用于癌症疗法的蛋白质或肽。
111.根据权利要求110所述的方法，其中所述用于癌症疗法的蛋白质或肽是肿瘤抗原。
112.根据权利要求111所述的方法，其中所述肿瘤抗原选自由以下组成的组：肿瘤病毒蛋白抗原、新抗原和源自癌胚系基因的抗原。
113.根据权利要求112所述的方法，其中所述肿瘤抗原是源自蛋白质的肿瘤病毒蛋白抗原，所述蛋白质选自由以下组成的组：叶酸受体、HER2、乳头瘤病毒癌蛋白E6和乳头瘤病毒癌蛋白E7癌胚抗原(CEA)、粘蛋白1、EGFR、T细胞识别的鳞状细胞癌抗原3(SART3)、β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)、维尔姆氏肿瘤抗原(Wilms'Tumor antigen)1(WT1)、存活蛋白、MAGE3、p53、环指蛋白43和线粒体外膜转位酶34(TOMM34)、前列腺特异性抗原(PSA)-TRICOM和KRAS。
114.根据权利要求112所述的方法，其中所述肿瘤抗原是源自突变蛋白的新抗原，所述突变蛋白选自由以下组成的组：BRCA1、BRCA2、BRAF、KRAS、EGFR、IDH1、PIK3CA、ROS1、HLA、JAK1、JAK2、PARK2、ATM、p53、TP53、erbb2相互作用蛋白(ERBB2IP)、β-2-微球蛋白(β2m)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A(CDKN2A)、Claudin-18.2、交替阅读框(ARF)和细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)。
115.根据权利要求112所述的方法，其中所述肿瘤抗原是源自选自由MAGEA1、MAGEA2、MAGEA3、MAGEA4、MAGEA5、MAGEA6、MAGEA8、MAGEA9、MAGEA10、MAGEA11、MAGEA12、BAGE、BAGE2、BAGE3、BAGE4、BAGE5、MAGEB1、MAGEB2、MAGEB5、MAGEB6、MAGEB3、MAGEB4、GAGE1、GAGE2A、GAGE3、GAGE4、GAGE5、GAGE6、GAGE7、GAGE8、SSX1、SSX2、SSX2b、SSX3、SSX4、CTAG1B、LAGE-1b、CTAG2、MAGEC1、MAGEC3、SYCP1、BRDT、MAGEC2、SPANXA1、SPANXB1、SPANXC、SPANXD、SPANXN1、SPANXN2、SPANXN3、SPANXN4、SPANXN5、XAGE1D、XAGE1C、XAGE1B、XAGE1、XAGE2、XAGE3、XAGE-3b、XAGE-4/RP11-167P23.2、XAGE5、DDX43、SAGE1、ADAM2、PAGE5、CT16.2、PAGE1、PAGE2、PAGE2B、PAGE3、PAGE4、LIPI、VENTXP1、IL13RA2、TSP50、CTAGE1、CTAGE-2、CTAGE5、SPA17、ACRBP、CSAG1、CSAG2、DSCR8、MMA1b、DDX53、CTCFL、LUZP4、CASC5、TFDP3、JARID1B、LDHC、MORC1、DKKL1、SPO11、CRISP2、FMR1NB、FTHL17、NXF2、TAF7L、TDRD1、TDRD6、TDRD4、TEX15、FATE1、TPTE、CT45A1、CT45A2、CT45A3、CT45A4、CT45A5、CT45A6、HORMAD1、HORMAD2、CT47A1、CT47A2、CT47A3、CT47A4、CT47A5、CT47A6、CT47A7、CT47A8、CT47A9、CT47A10、CT47A11、CT47B1、SLCO6A1、TAG、LEMD1、HSPB9、CCDC110、ZNF165、SPACA3、CXorf48、THEG、ACTL8、NLRP4、COX6B2、LOC348120、CCDC33、LOC196993、PASD1、LOC647107、TULP2、CT66/AA884595、PRSS54、RBM46、CT69/BC040308、CT70/BI818097、SPINLW1、TSSK6、ADAM29、CCDC36、LOC440934、SYCE1、CPXCR1、TSPY3、TSGA10、HIWI、MIWI、PIWI、PIWIL2、ARMC3、AKAP3、Cxorf61、PBK、C21orf99、OIP5、CEP290、CABYR、SPAG9、MPHOSPH1、ROPN1、PLAC1、CALR3、PRM1、PRM2、CAGE1、TTK、LY6K、IMP-3、AKAP4、DPPA2、KIAA0100、DCAF12、SEMG1、POTED、POTEE、POTEA、POTEG、POTEB、POTEC、POTEH、GOLGAGL2 FA、CDCA1、PEPP2、OTOA、CCDC62、GPATCH2、CEP55、FAM46D、TEX14、CTNNA2、FAM133A、LOC130576、ANKRD45、ELOVL4、IGSF11、TMEFF1、TMEFF2、ARX、SPEF2、GPAT2、TMEM108、NOL4、PTPN20A、SPAG4、MAEL、RQCD1、PRAME、TEX101、SPATA19、ODF1、ODF2、ODF3、ODF4、ATAD2、ZNF645、MCAK、SPAG1、SPAG6、SPAG8、SPAG17、FBXO39、RGS22、细胞周期蛋白A1、C15orf60、CCDC83、TEKT5、NR6A1、TMPRSS12、TPPP2、PRSS55、DMRT1、EDAG、NDR、DNAJB8、CSAG3B、CTAG1A、GAGE12B、GAGE12C、GAGE12D、GAGE12E、GAGE12F、GAGE12G、GAGE12H、GAGE12I、GAGE12J、GAGE13、LOC728137、MAGEA2B、MAGEA9B/LOC728269、NXF2B、SPANXA2、SPANXB2、SPANXE、SSX4B、SSX5、SSX6、SSX7、SSX9、TSPY1D、TSPY1E、TSPY1F、TSPY1G、TSPY1H、TSPY1I、TSPY2和XAGE1E组成的组的癌胚系基因的抗原。
116.根据权利要求110所述的方法，其中所述用于癌症疗法的蛋白质或肽是促炎性细胞因子。
117.根据权利要求116所述的方法，其中所述促炎性细胞因子选自由以下组成的组：IL-1、IL-6、IL-8、IL-12、IFN-γ、IL-18、IL-15、IL-2、TNF-α、IL-10、TGF-β、CSF-1、CCL2、CCL3、CCL5和VEGF。
118.根据权利要求107至117中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是非复制的未经修饰的mRNA。
119.根据权利要求107至117中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是非复制的经修饰的mRNA。
120.根据权利要求107至117中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是自扩增mRNA。
121.根据权利要求107至117中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是编码所述蛋白质或肽的质粒。
122.根据权利要求107至117中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是编码反义序列的质粒。
123.根据权利要求77至96中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是基因调节多核苷酸。
124.根据权利要求107所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是siRNA。
125.根据权利要求125所述的方法，其中所述siRNA靶向来自选自由以下组成的组的基因的mRNA转录物：KRAS、ERBB2/HER2、VEGF、SOSC1、ADAR1、PLK1、cMyc、突变TP53、HIF2α和BCL2。
126.根据权利要求123所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是miRNA。
127.根据权利要求126所述的方法，其中所述miRNA选自由以下组成的组：miR-15a、miR-15b、miR-16、miR-20b、miR-21、miR-28、miR-34a、miR-34b、miR-34c、miR-125b、miR-130b、miR-138、miR-138-5p、miR-155、miR-195、miR-197、miR-200、miR-210、miR-221、miR-222、miR-424、miR-497、miR-503和miR-513。
128.根据权利要求123所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是小激活RNA(saRNA)。
129.根据权利要求128所述的方法，其中所述saRNA靶向CEBPA基因的启动子区。
130.根据权利要求123所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是安塔够妙。
131.根据权利要求123所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是反义寡核苷酸。
132.根据权利要求123所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是诱骗寡核苷酸。
133.根据权利要求77至96中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸编码基因组编辑效应物。
134.根据权利要求133所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸编码锌指核酸酶。
135.根据权利要求133所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸编码转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)。
136.根据权利要求133所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸编码包括Cas蛋白和向导RNA的CRISPR系统。
137.根据权利要求77至96中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是效应多核苷酸。
138.根据权利要求137所述的方法，其中所述效应多核苷酸是适体。
139.根据权利要求138所述的方法，其中所述适体选自由以下组成的组：PSMA适体、HER2适体、MUC1适体、CD117适体、PTK7适体、CTLA-4适体、TLS11a适体、PD-1适体、PD-1适体、马库根适体(Macugen aptamer)、AS1411、Sgc8、TD05、ARC1779、a-凝血酶(TBA)、马库根、E10030、AS1411、ARC1779、NU172、NOX-A12、NOX-E36、NOX-H94、ARC1905、REG1、ARC19499、AS1411、AS1411、EpCAM、A10-3-J1、Sgc8c、TSA14、5TR1、Endo28、EGFR、A10、Sgc8c、AS1411、NOX-A12、KH1C12、K19、TD05、AS1411、HB5、HeA2_3、H2、S6、SYL3C、APTA-12、M17、S-1、SL2B、CAA01、CA50 A02、CA72-4 A01、APT-43、TA6、CA125.1、Apt928、R13、HF3-58或HA5-68。
140.根据权利要求137所述的方法，其中所述效应多核苷酸是核酶。
141.根据权利要求140所述的方法，其中所述核酶靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)RNA。
142.一种用于将治疗性多核苷酸递送到有需要的受试者体内的细胞核的方法，所述方法包括：向所述受试者施用治疗有效量的组合物，所述组合物包括在(i)治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。
143.根据权利要求142所述的方法，其中所述细胞是肿瘤细胞。
144.根据权利要求142或143所述的方法，其中所述细胞不是CD45+细胞。
145.根据权利要求142所述的方法，其中所述细胞是胰腺肿瘤细胞。
146.根据权利要求143至145中任一项所述的方法，其中所述复合物在所述肿瘤细胞内累积。
147.根据权利要求143至146所述的方法，其中所述复合物定位到所述肿瘤细胞。
148.根据权利要求142至147中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是多核苷酸免疫刺激剂。
149.根据权利要求148所述的方法，其中所述多核苷酸免疫刺激剂是能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体。
150.根据权利要求149所述的方法，其中所述PRR是维甲酸诱导型基因I(RIG-I)。
151.根据权利要求149所述的方法，其中所述多核苷酸配体包括5'三磷酸和双链RNA。
152.根据权利要求149所述的方法，其中所述多核苷酸配体包括核酸序列5'-pppGGAGCAAAAG CAGGGUGACA AAGACAUAAU GGAUCCAAAC ACUGUGUCAA GCUUUCAGGUAGAUUGCUUU CUUUGGCAUG UCCGCAAAC-3'(SEQ ID NO:XX)。
153.根据权利要求149所述的方法，其中所述多核苷酸配体包括5'三磷酸和发夹RNA。
154.根据权利要求149所述的方法，其中所述多核苷酸配体包括poly(dA:dT)。
155.根据权利要求149所述的方法，其中所述多核苷酸配体包括poly(I:C)。
156.根据权利要求149所述的方法，其中所述PRR是Toll样受体(TLR)。
157.根据权利要求156所述的方法，其中所述TLR是TLR3、TLR7、TLR8或TLR9。
158.根据权利要求149所述的方法，其中所述PRR是黑色素瘤分化相关蛋白5(MDA5)。
159.根据权利要求148所述的方法，其中所述多核苷酸免疫刺激剂是能够刺激环状-GMP-AMP-合酶(cGAS)的多核苷酸配体。
160.根据权利要求148所述的方法，其中所述多核苷酸免疫刺激剂是能够刺激干扰素基因刺激因子(STING)的多核苷酸配体。
161.一种将治疗性多核苷酸递送到有需要的受试者体内的胰腺肿瘤细胞核的方法，所述方法包括：向所述受试者施用治疗有效量的组合物，所述组合物包括在(i)治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。
162.根据权利要求161所述的方法，其中所述胰腺肿瘤细胞不是CD45+细胞。
163.根据权利要求161或162所述的方法，其中所述复合物在肿瘤胰腺肿瘤细胞内累积。
164.根据权利要求161至163中任一项所述的方法，其中所述复合物定位到所述胰腺肿瘤细胞。
165.根据权利要求142至164中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸编码用于癌症疗法的蛋白质或肽。
166.根据权利要求165所述的方法，其中所述用于癌症疗法的蛋白质或肽是肿瘤抗原。
167.根据权利要求166所述的方法，其中所述肿瘤抗原选自由以下组成的组：肿瘤病毒蛋白抗原、新抗原和源自癌胚系基因的抗原。
168.根据权利要求165所述的方法，其中所述用于癌症疗法的蛋白质或肽是促炎性细胞因子。
169.根据权利要求165至168中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是非复制的未经修饰的mRNA。
170.根据权利要求165至168中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是非复制的经修饰的mRNA。
171.根据权利要求165至168中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是自扩增mRNA。
172.根据权利要求165至168中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是编码所述蛋白质或肽的质粒。
173.根据权利要求165至168中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是编码反义序列的质粒。
174.根据权利要求142至164中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是基因调节多核苷酸。
175.根据权利要求174所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是siRNA。
176.根据权利要求175所述的方法，其中所述siRNA靶向来自选自由以下组成的组的基因的mRNA转录物：KRAS、ERBB2/HER2、VEGF、SOSC1、ADAR1、PLK1、cMyc、突变TP53、HIF2α和BCL2。
177.根据权利要求174所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是miRNA。
178.根据权利要求174所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是小激活RNA(saRNA)。
179.根据权利要求178所述的方法，其中所述saRNA靶向CEBPA基因的启动子区。
180.根据权利要求174所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是安塔够妙。
181.根据权利要求174所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是反义寡核苷酸。
182.根据权利要求174所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是诱骗寡核苷酸。
183.根据权利要求142至164中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸编码基因组编辑效应物。
184.根据权利要求142所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸编码锌指核酸酶。
185.根据权利要求142所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸编码转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)。
186.根据权利要求142所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸编码包括Cas蛋白和向导RNA的CRISPR系统。
187.根据权利要求142至164中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是效应多核苷酸。
188.根据权利要求187所述的方法，其中所述效应多核苷酸是适体。
189.根据权利要求187所述的方法，其中所述效应多核苷酸是核酶。
190.一种用于将治疗性多核苷酸递送到有需要的受试者体内的染色质的方法，所述方法包括：向所述受试者施用治疗有效量的组合物，所述组合物包括在(i)治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。
191.根据权利要求190所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是多核苷酸免疫刺激剂。
192.根据权利要求191所述的方法，其中所述多核苷酸免疫刺激剂是能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体。
193.根据权利要求192所述的方法，其中所述PRR是维甲酸诱导型基因I(RIG-I)。
194.根据权利要求192所述的方法，其中所述多核苷酸配体包括5'三磷酸和双链RNA。
195.根据权利要求192所述的方法，其中所述多核苷酸配体包括核酸序列5'-pppGGAGCAAAAG CAGGGUGACA AAGACAUAAU GGAUCCAAAC ACUGUGUCAA GCUUUCAGGUAGAUUGCUUU CUUUGGCAUG UCCGCAAAC-3'(SEQ ID NO:XX)。
196.根据权利要求192所述的方法，其中所述多核苷酸配体包括5'三磷酸和发夹RNA。
197.根据权利要求192所述的方法，其中所述多核苷酸配体包括poly(dA:dT)。
198.根据权利要求192所述的方法，其中所述多核苷酸配体包括poly(I:C)。
199.根据权利要求192所述的方法，其中所述PRR是Toll样受体(TLR)。
200.根据权利要求199所述的方法，其中所述TLR是TLR3、TLR7、TLR8或TLR9。
201.根据权利要求192所述的方法，其中所述PRR是黑色素瘤分化相关蛋白5(MDA5)。
202.根据权利要求191所述的方法，其中所述多核苷酸免疫刺激剂是能够刺激环状-GMP-AMP-合酶(cGAS)的多核苷酸配体。
203.根据权利要求104所述的方法，其中所述多核苷酸免疫刺激剂是能够刺激干扰素基因刺激因子(STING)的多核苷酸配体。
204.根据权利要求190至203中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸编码用于癌症疗法的蛋白质或肽。
205.根据权利要求204所述的方法，其中所述用于癌症疗法的蛋白质或肽是肿瘤抗原。
206.根据权利要求205所述的方法，其中所述肿瘤抗原选自由以下组成的组：肿瘤病毒蛋白抗原、新抗原和源自癌胚系基因的抗原。
207.根据权利要求205所述的方法，其中所述用于癌症疗法的蛋白质或肽是促炎性细胞因子。
208.根据权利要求190至203中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是非复制的未经修饰的mRNA。
209.根据权利要求190至203中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是非复制的经修饰的mRNA。
210.根据权利要求190至203中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是自扩增mRNA。
211.根据权利要求190至203中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是编码所述蛋白质或肽的质粒。
212.根据权利要求190至203中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是基因调节多核苷酸。
213.根据权利要求212所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是siRNA。
214.根据权利要求213所述的方法，其中所述siRNA靶向来自选自由以下组成的组的基因的mRNA转录物：KRAS、ERBB2/HER2、VEGF、SOSC1、ADAR1、PLK1、cMyc、突变TP53、HIF2α和BCL2。
215.根据权利要求212所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是miRNA。
216.根据权利要求212所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是小激活RNA(saRNA)。
217.根据权利要求216所述的方法，其中所述saRNA靶向CEBPA基因的启动子区。
218.根据权利要求212所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是安塔够妙。
219.根据权利要求212所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是反义寡核苷酸。
220.根据权利要求212所述的方法，其中所述基因调节多核苷酸是诱骗寡核苷酸。
221.根据权利要求190至203中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸编码基因组编辑效应物。
222.根据权利要求190所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸编码锌指核酸酶。
223.根据权利要求190所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸编码转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)。
224.根据权利要求190所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸编码包括Cas蛋白和向导RNA的CRISPR系统。
225.根据权利要求190至203中任一项所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸是效应多核苷酸。
226.根据权利要求225所述的方法，其中所述效应多核苷酸是适体。
227.根据权利要求225所述的方法，其中所述效应多核苷酸是核酶。
228.根据权利要求77至227中任一项所述的方法，其中所述3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包括：
(a)轻链可变区(VL)互补决定区(CDR)1，所述VL CDR1包括3E10-VL-CDR1(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；
(b)VL CDR2，所述VL CDR2包括3E10-VL-CDR2(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；
(c)VL CDR3，所述VL CDR3包括3E10-VL-CDR3(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；
(d)重链可变区(VH)CDR1，所述VH CDR1包括3E10-VH-CDR1a(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；
(e)VH CDR2，所述VH CDR2包括3E10-VH-CDR2(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；以及
(f)VH CDR3，所述VH CDR3包括3E10-VH-CDR3(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列。
229.根据权利要求228所述的方法，其中所述VH CDR1包括3E10-VH-CDR1_D31N(SEQ IDNO:XX)的序列。
230.根据权利要求77至229中任一项所述的方法，其中所述3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包括包含与3E10-VL(SEQ ID NO:XX)至少85％相同的氨基酸序列的VL链。
231.根据权利要求230所述的方法，其中所述抗体或其片段包括包含与3E10-VL(SEQID NO:XX)相同的氨基酸序列的VL。
232.根据权利要求77至231中任一项所述的方法，其中所述3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包括包含与3E10-VH_D31N(SEQ ID NO:XX)至少85％相同的氨基酸序列的VH。
233.根据权利要求232所述的方法，其中所述抗体或其片段包括包含与3E10-VH_D31N(SEQ ID NO:XX)相同的氨基酸序列的VH。
234.根据权利要求77至233中任一项所述的方法，其中所述抗体或其片段包括：
重链，所述重链从N末端至C末端包括VH-CH1-铰链-CH2-CH3，以及轻链，所述轻链从N末端至C末端包括VL-CL。
235.根据权利要求234所述的方法，其中所述铰链-CH2-CH3是选自由来自人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的Fc结构域组成的组的Fc结构域。
236.根据权利要求77至235中任一项所述的方法，其中所述3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段是双特异性抗体或其变体、或其抗原结合片段。
237.根据权利要求236所述的方法，其中所述双特异性抗体或其变体、或其抗原结合片段包括：
来自3E10抗体的第一抗原结合结构域；以及
来自靶向癌细胞上存在的细胞表面抗原的抗体的第二抗原结合结构域。
238.根据权利要求237所述的方法，其中所述双特异性抗体或其变体、或其抗原结合片段包括：
来自3E10抗体的第一抗原结合结构域；以及
来自靶向细胞周期检查点蛋白或复合物的抗体的第二抗原结合结构域。
239.根据权利要求237所述的方法，其中所述双特异性抗体或其变体、或其抗原结合片段包括：
来自3E10抗体的第一抗原结合结构域；以及
来自抗体的第二抗原结合结构域，所述抗体靶向选自由以下组成的组的抗原：EGF、Ras、Myc、HER2/Neu、p53、CD19、CD20和PSMA。
240.根据权利要求77至239中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括向所述受试者施用第二癌症疗法。
241.根据权利要求240所述的方法，其中所述第二癌症疗法是化学疗法。
242.根据权利要求240所述的方法，其中所述第二癌症疗法是激素疗法。
243.根据权利要求240所述的方法，其中所述第二癌症疗法是免疫疗法。
244.根据权利要求243所述的方法，其中所述免疫疗法是免疫检查点抑制剂。
245.根据权利要求244所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂是选自以下的检查点分子的抑制剂：B7-H3、B7-H4、BTLA、CD160、CTLA4、KIR、LAG3、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3和TIGIT或其组合。
246.根据权利要求245所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂选自由以下组成的组：纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、阿维单抗(avelumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)和德瓦鲁单抗(durvalumab)。
247.根据权利要求243所述的方法，其中所述免疫疗法是免疫共刺激分子激动剂。
248.根据权利要求247所述的方法，其中所述免疫共刺激分子激动剂是选自以下的免疫共刺激分子的激动剂：4-1BB、CD27、CD28、CD40L、CD137、GITR、ICOS、OX40、TMIGD2和TNFRSF25或其组合。
249.根据权利要求243所述的方法，其中所述免疫疗法是过继性细胞疗法。
250.根据权利要求85所述的方法，其中所述过继性细胞疗法是表达识别肿瘤相关抗原并与其结合的CAR-T的重组T细胞。
251.根据权利要求240所述的方法，其中所述第二癌症疗法是放射疗法。
252.根据权利要求240所述的方法，其中所述第二癌症疗法是干细胞移植。
253.根据权利要求240所述的方法，其中所述第二癌症疗法是所述癌症的外科手术切除。
254.根据权利要求240所述的方法，其中所述第二癌症疗法是信号转导抑制剂。
255.根据权利要求240所述的方法，其中所述第二癌症疗法是血管生成抑制剂。
256.一种药物组合物，其包括在(i)治疗性多核苷酸与(ii)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段之间形成的复合物。
257.根据权利要求256所述的药物组合物，其中所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)治疗性多核苷酸的摩尔比是至少约2:1。
258.根据权利要求256所述的药物组合物，其中所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)治疗性多核苷酸的摩尔比是至少约5:1。
259.根据权利要求256所述的药物组合物，其中所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)治疗性多核苷酸的摩尔比是至少约20:1。
260.根据权利要求256至259中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)治疗性多核苷酸的摩尔比不超过约200:1。
261.根据权利要求256至259中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)治疗性多核苷酸的摩尔比不超过约100:1。
262.根据权利要求256至261中任一项所述的药物组合物，其中所述治疗性多核苷酸的长度不超过500个核苷酸，并且所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)治疗性多核苷酸的摩尔比是约2:1至约50:1。
263.根据权利要求256至261中任一项所述的药物组合物，其中所述治疗性多核苷酸的长度不超过500个核苷酸，并且所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)治疗性多核苷酸的摩尔比是约2:1至约30:1。
264.根据权利要求256至261中任一项所述的药物组合物，其中所述治疗性多核苷酸的长度不超过500个核苷酸，并且所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)治疗性多核苷酸的摩尔比是约2:1至约30:1。
265.根据权利要求256至261中任一项所述的药物组合物，其中所述治疗性多核苷酸的长度大于500个核苷酸，并且所述组合物包括的(i)3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段与(ii)治疗性多核苷酸的摩尔比是约10:1至约200:1。
266.根据权利要求256至265中任一项所述的药物组合物，其中所述治疗性多核苷酸是多核苷酸免疫刺激剂。
267.根据权利要求266所述的药物组合物，其中所述多核苷酸免疫刺激剂是能够刺激模式识别受体(PRR)的多核苷酸配体。
268.根据权利要求267所述的药物组合物，其中所述PRR是维甲酸诱导型基因I(RIG-I)。
269.根据权利要求268所述的药物组合物，其中所述多核苷酸配体包括5'三磷酸和双链RNA。
270.根据权利要求268所述的药物组合物，其中所述多核苷酸配体包括核酸序列5'-pppGGAGCAAAAG CAGGGUGACA AAGACAUAAU GGAUCCAAAC ACUGUGUCAA GCUUUCAGGUAGAUUGCUUU CUUUGGCAUG UCCGCAAAC-3'(SEQ ID NO:XX)。
271.根据权利要求268所述的药物组合物，其中所述多核苷酸配体包括5'三磷酸和发夹RNA。
272.根据权利要求268所述的药物组合物，其中所述多核苷酸配体包括poly(dA:dT)。
273.根据权利要求268所述的药物组合物，其中所述多核苷酸配体包括poly(I:C)。
274.根据权利要求267所述的药物组合物，其中所述PRR是Toll样受体(TLR)。
275.根据权利要求274所述的药物组合物，其中所述TLR是TLR3、TLR7、TLR8或TLR9。
276.根据权利要求267所述的药物组合物，其中所述PRR是黑色素瘤分化相关蛋白5(MDA5)。
277.根据权利要求266所述的药物组合物，其中所述多核苷酸免疫刺激剂是能够刺激环状-GMP-AMP-合酶(cGAS)的多核苷酸配体。
278.根据权利要求266所述的药物组合物，其中所述多核苷酸免疫刺激剂是能够刺激干扰素基因刺激因子(STING)的多核苷酸配体。
279.根据权利要求256至265中任一项所述的药物组合物，其中所述治疗性多核苷酸编码用于癌症疗法的蛋白质或肽。
280.根据权利要求279所述的药物组合物，其中所述用于癌症疗法的肽是肿瘤抗原。
281.根据权利要求280所述的药物组合物，其中所述肿瘤抗原选自由以下组成的组：肿瘤病毒蛋白抗原、新抗原和源自癌胚系基因的抗原。
282.根据权利要求281所述的药物组合物，其中所述肿瘤抗原是源自蛋白质的肿瘤病毒蛋白抗原，所述蛋白质选自由以下组成的组：叶酸受体、HER2、乳头瘤病毒癌蛋白E6和乳头瘤病毒癌蛋白E7癌胚抗原(CEA)、粘蛋白1、EGFR、T细胞识别的鳞状细胞癌抗原3(SART3)、β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)、维尔姆氏肿瘤抗原1(WT1)、存活蛋白、MAGE3、p53、环指蛋白43和线粒体外膜转位酶34(TOMM34)、前列腺特异性抗原(PSA)-TRICOM和KRAS。
283.根据权利要求281所述的药物组合物，其中所述肿瘤抗原是源自突变蛋白的新抗原，所述突变蛋白选自由以下组成的组：BRCA1、BRCA2、BRAF、KRAS、EGFR、IDH1、PIK3CA、ROS1、HLA、JAK1、JAK2、PARK2、ATM、p53、TP53、erbb2相互作用蛋白(ERBB2IP)、β-2-微球蛋白(β2m)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A(CDKN2A)、Claudin-18.2、交替阅读框(ARF)和细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)。
284.根据权利要求281所述的药物组合物，其中所述肿瘤抗原是源自选自由MAGEA1、MAGEA2、MAGEA3、MAGEA4、MAGEA5、MAGEA6、MAGEA8、MAGEA9、MAGEA10、MAGEA11、MAGEA12、BAGE、BAGE2、BAGE3、BAGE4、BAGE5、MAGEB1、MAGEB2、MAGEB5、MAGEB6、MAGEB3、MAGEB4、GAGE1、GAGE2A、GAGE3、GAGE4、GAGE5、GAGE6、GAGE7、GAGE8、SSX1、SSX2、SSX2b、SSX3、SSX4、CTAG1B、LAGE-1b、CTAG2、MAGEC1、MAGEC3、SYCP1、BRDT、MAGEC2、SPANXA1、SPANXB1、SPANXC、SPANXD、SPANXN1、SPANXN2、SPANXN3、SPANXN4、SPANXN5、XAGE1D、XAGE1C、XAGE1B、XAGE1、XAGE2、XAGE3、XAGE-3b、XAGE-4/RP11-167P23.2、XAGE5、DDX43、SAGE1、ADAM2、PAGE5、CT16.2、PAGE1、PAGE2、PAGE2B、PAGE3、PAGE4、LIPI、VENTXP1、IL13RA2、TSP50、CTAGE1、CTAGE-2、CTAGE5、SPA17、ACRBP、CSAG1、CSAG2、DSCR8、MMA1b、DDX53、CTCFL、LUZP4、CASC5、TFDP3、JARID1B、LDHC、MORC1、DKKL1、SPO11、CRISP2、FMR1NB、FTHL17、NXF2、TAF7L、TDRD1、TDRD6、TDRD4、TEX15、FATE1、TPTE、CT45A1、CT45A2、CT45A3、CT45A4、CT45A5、CT45A6、HORMAD1、HORMAD2、CT47A1、CT47A2、CT47A3、CT47A4、CT47A5、CT47A6、CT47A7、CT47A8、CT47A9、CT47A10、CT47A11、CT47B1、SLCO6A1、TAG、LEMD1、HSPB9、CCDC110、ZNF165、SPACA3、CXorf48、THEG、ACTL8、NLRP4、COX6B2、LOC348120、CCDC33、LOC196993、PASD1、LOC647107、TULP2、CT66/AA884595、PRSS54、RBM46、CT69/BC040308、CT70/BI818097、SPINLW1、TSSK6、ADAM29、CCDC36、LOC440934、SYCE1、CPXCR1、TSPY3、TSGA10、HIWI、MIWI、PIWI、PIWIL2、ARMC3、AKAP3、Cxorf61、PBK、C21orf99、OIP5、CEP290、CABYR、SPAG9、MPHOSPH1、ROPN1、PLAC1、CALR3、PRM1、PRM2、CAGE1、TTK、LY6K、IMP-3、AKAP4、DPPA2、KIAA0100、DCAF12、SEMG1、POTED、POTEE、POTEA、POTEG、POTEB、POTEC、POTEH、GOLGAGL2 FA、CDCA1、PEPP2、OTOA、CCDC62、GPATCH2、CEP55、FAM46D、TEX14、CTNNA2、FAM133A、LOC130576、ANKRD45、ELOVL4、IGSF11、TMEFF1、TMEFF2、ARX、SPEF2、GPAT2、TMEM108、NOL4、PTPN20A、SPAG4、MAEL、RQCD1、PRAME、TEX101、SPATA19、ODF1、ODF2、ODF3、ODF4、ATAD2、ZNF645、MCAK、SPAG1、SPAG6、SPAG8、SPAG17、FBXO39、RGS22、细胞周期蛋白A1、C15orf60、CCDC83、TEKT5、NR6A1、TMPRSS12、TPPP2、PRSS55、DMRT1、EDAG、NDR、DNAJB8、CSAG3B、CTAG1A、GAGE12B、GAGE12C、GAGE12D、GAGE12E、GAGE12F、GAGE12G、GAGE12H、GAGE12I、GAGE12J、GAGE13、LOC728137、MAGEA2B、MAGEA9B/LOC728269、NXF2B、SPANXA2、SPANXB2、SPANXE、SSX4B、SSX5、SSX6、SSX7、SSX9、TSPY1D、TSPY1E、TSPY1F、TSPY1G、TSPY1H、TSPY1I、TSPY2和XAGE1E组成的组的癌胚系基因的抗原。
285.根据权利要求279所述的药物组合物，其中所述用于癌症疗法的蛋白质或肽是促炎性细胞因子。
286.根据权利要求285所述的药物组合物，其中所述促炎性细胞因子选自由以下组成的组：IL-1、IL-6、IL-8、IL-12、IFN-γ、IL-18、IL-15、IL-2、TNF-α、IL-10、TGF-β、CSF-1、CCL2、CCL3、CCL5和VEGF。
287.根据权利要求279至286中任一项所述的药物组合物，其中所述治疗性多核苷酸是非复制的未经修饰的mRNA。
288.根据权利要求279至286中任一项所述的药物组合物，其中所述治疗性多核苷酸是自扩增mRNA。
289.根据权利要求279至286中任一项所述的药物组合物，其中所述治疗性多核苷酸是编码所述蛋白质或肽的质粒。
290.根据权利要求219至226中任一项所述的药物组合物，其中所述治疗性多核苷酸是编码反义序列的质粒。
291.根据权利要求256至265中任一项所述的药物组合物，其中所述治疗性多核苷酸是基因调节多核苷酸。
292.根据权利要求291所述的药物组合物，其中所述基因调节多核苷酸是siRNA。
293.根据权利要求292所述的药物组合物，其中所述siRNA靶向来自选自由以下组成的组的基因的mRNA转录物：KRAS、ERBB2/HER2、VEGF、EGFR、SOSC1、ADAR1、PLK1、cMyc、TP53、HIF2α、突变TP53、HIF2α和BCL2。
294.根据权利要求291所述的药物组合物，其中所述基因调节多核苷酸是miRNA。
295.根据权利要求294所述的药物组合物，其中所述miRNA选自由以下组成的组：miR-15a、miR-15b、miR-16、miR-20b、miR-21、miR-28、miR-34a、miR-34b、miR-34c、miR-125b、miR-130b、miR-138、miR-138-5p、miR-155、miR-195、miR-197、miR-200、miR-210、miR-221、miR-222、miR-424、miR-497、miR-503或miR-513。
296.根据权利要求291所述的药物组合物，其中所述基因调节多核苷酸是小激活RNA(saRNA)。
297.根据权利要求296所述的药物组合物，其中所述saRNA靶向CEBPA基因的启动子区。
298.根据权利要求291所述的药物组合物，其中所述基因调节多核苷酸是安塔够妙。
299.根据权利要求291所述的药物组合物，其中所述基因调节多核苷酸是反义寡核苷酸。
300.根据权利要求291所述的药物组合物，其中所述基因调节多核苷酸是诱骗寡核苷酸。
301.根据权利要求256至265中任一项所述的药物组合物，其中所述治疗性多核苷酸是基因组编辑多核苷酸。
302.根据权利要求301所述的药物组合物，其中所述基因组编辑多核苷酸编码锌指核酸酶。
303.根据权利要求301所述的药物组合物，其中所述基因组编辑多核苷酸编码转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)。
304.根据权利要求301所述的药物组合物，其中所述基因组编辑多核苷酸编码包括Cas蛋白和向导RNA的CRISPR系统。
305.根据权利要求256至265中任一项所述的药物组合物，其中所述治疗性多核苷酸是效应多核苷酸。
306.根据权利要求305所述的药物组合物，其中所述效应多核苷酸是适体。
307.根据权利要求306所述的药物组合物，其中所述适体选自由以下组成的组：PSMA适体、HER2适体、MUC1适体、CD117适体、PTK7适体、CTLA-4适体、TLS11a适体、PD-1适体、PD-1适体、马库根适体、AS1411、Sgc8、TD05、ARC1779、a-凝血酶(TBA)、马库根、E10030、AS1411、ARC1779、NU172、NOX-A12、NOX-E36、NOX-H94、ARC1905、REG1、ARC19499、AS1411、AS1411、EpCAM、A10-3-J1、Sgc8c、TSA14、5TR1、Endo28、EGFR、A10、Sgc8c、AS1411、NOX-A12、KH1C12、K19、TD05、AS1411、HB5、HeA2_3、H2、S6、SYL3C、APTA-12、M17、S-1、SL2B、CAA01、CA50 A02、CA72-4 A01、APT-43、TA6、CA125.1、Apt928、R13、HF3-58或HA5-68。
308.根据权利要求305所述的药物组合物，其中所述效应多核苷酸是核酶。
309.根据权利要求308所述的药物组合物，其中所述核酶靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)RNA。
310.根据权利要求256至308中任一项所述的药物组合物，其中所述3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包括：
(a)轻链可变区(VL)互补决定区(CDR)1，所述VL CDR1包括3E10-VL-CDR1(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；
(b)VL CDR2，所述VL CDR2包括3E10-VL-CDR2(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；
(c)VL CDR3，所述VL CDR3包括3E10-VL-CDR3(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；
(d)重链可变区(VH)CDR1，所述VH CDR1包括3E10-VH-CDR1a(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；
(e)VH CDR2，所述VH CDR2包括3E10-VH-CDR2(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列；以及
(f)VH CDR3，所述VH CDR3包括3E10-VH-CDR3(SEQ ID NO:XX)的氨基酸序列。
311.根据权利要求310所述的药物组合物，其中所述VH CDR1包括3E10-VH-CDR1_D31N(SEQ ID NO:XX)的序列。
312.根据权利要求256至311中任一项所述的药物组合物，其中所述3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包括包含与3E10-VL(SEQ ID NO:XX)至少85％相同的氨基酸序列的VL链。
313.根据权利要求312所述的药物组合物，其中所述抗体或其片段包括包含与3E10-VL(SEQ ID NO:XX)相同的氨基酸序列的VL。
314.根据权利要求256至313中任一项所述的药物组合物，其中所述3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段包括包含与3E10-VH_D31N(SEQ ID NO:XX)至少85％相同的氨基酸序列的VH。
315.根据权利要求314所述的药物组合物，其中所述抗体或其片段包括包含与3E10-VH_D31N(SEQ ID NO:XX)相同的氨基酸序列的VH。
316.根据权利要求256至315中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体或其片段包括：
重链，所述重链从N末端至C末端包括VH-CH1-铰链-CH2-CH3，以及
轻链，所述轻链从N末端至C末端包括VL-CL。
317.根据权利要求316所述的药物组合物，其中所述铰链-CH2-CH3是选自由来自人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的Fc结构域组成的组的Fc结构域。
318.根据权利要求256至317中任一项所述的药物组合物，其中所述3E10抗体或其变体、或其抗原结合片段是双特异性抗体或其变体、或其抗原结合片段。
319.根据权利要求318所述的药物组合物，其中所述双特异性抗体或其变体、或其抗原结合片段包括：
来自3E10抗体的第一抗原结合结构域；以及
来自靶向癌细胞上存在的细胞表面抗原的抗体的第二抗原结合结构域。
320.根据权利要求318所述的药物组合物，其中所述双特异性抗体或其变体、或其抗原结合片段包括：
来自3E10抗体的第一抗原结合结构域；以及
来自靶向细胞周期检查点蛋白或复合物的抗体的第二抗原结合结构域。
321.根据权利要求318所述的药物组合物，其中所述双特异性抗体或其变体、或其抗原结合片段包括：
来自3E10抗体的第一抗原结合结构域；以及
来自抗体的第二抗原结合结构域，所述抗体靶向选自由以下组成的组的抗原：EGF、Ras、Myc、HER2/Neu、p53、CD19、CD20和PSMA。
322.根据权利要求256至321中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物被调配用于肠胃外施用。
323.根据权利要求322所述的药物组合物，其中所述肠胃外施用是肌肉内施用、静脉内施用或皮下施用。
324.根据权利要求256至321中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物用于治疗中枢神经系统的癌症，并且所述组合物被调配用于肠胃外施用于所述受试者的外周。
325.根据权利要求256至321中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物用于治疗中枢神经系统的癌症，并且所述组合物被调配用于注射到所述中枢神经系统中。
326.根据权利要求256至321中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物用于治疗黑色素瘤，并且所述组合物被调配用于肠胃外施用。
CN202280057827.9A 2021-07-02 2022-07-05 用于治疗癌症的组合物和方法 Pending CN117897178A (zh)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US63/217,926 2021-07-02
US63/218,970 2021-07-07
US63/239,372 2021-08-31
US202263297542P 2022-01-07 2022-01-07
US63/297,542 2022-01-07
US63/297,538 2022-01-07
PCT/US2022/036143 WO2023278897A1 (en) 2021-07-02 2022-07-05 Compositions and methods for treating cancers

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN117897178A true CN117897178A (zh) 2024-04-16

Family

ID=90646101

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202280057827.9A Pending CN117897178A (zh) 2021-07-02 2022-07-05 用于治疗癌症的组合物和方法
CN202280071569.XA Pending CN118159299A (zh) 2021-08-31 2022-08-31 用于治疗癌症的组合物和方法

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202280071569.XA Pending CN118159299A (zh) 2021-08-31 2022-08-31 用于治疗癌症的组合物和方法

Country Status (1)

Country Link
CN (2) CN117897178A (zh)

Also Published As

Publication number Publication date
CN118159299A (zh) 2024-06-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7542441B2 (ja) 癌を治療するための方法及び組成物
CN107709548B (zh) 用于增强治疗性免疫细胞的功效的方法
CA2907100C (en) Treatment of cancer using humanized anti-cd19 chimeric antigen receptor
CN112638947B (zh) 用于治疗实体瘤的嵌合抗原受体细胞
CN114258430A (zh) 使用融合蛋白进行tcr重编程的组合物和方法
CA3009709A1 (en) Immune effector cell therapies with enhanced efficacy
US20230303719A1 (en) Humanized 3e10 antibodies, variants, and antigen binding fragments thereof
CA2955386A1 (en) Treatment of cancer using humanized anti-bcma chimeric antigen receptor
US20210069241A1 (en) Compositions and methods of immunotherapy targeting tigit and/or cd112r or comprising cd226 overexpression
CA2961636A1 (en) Targeting cytotoxic cells with chimeric receptors for adoptive immunotherapy
BR112021001338A2 (pt) composições e métodos para reprogramação de tcr usando proteínas de fusão específicas para o alvo
WO2022006451A2 (en) Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins and pd-1 antibodies
US20220273720A1 (en) Lymphodepletion dosing regimens for cellular immunotherapies
JP2024500303A (ja) 細胞への核酸の送達のための組成物及び方法
JP2023544970A (ja) 細胞への核酸の送達のための組成物及び方法
KR20240043747A (ko) 암을 치료하기 위한 조성물 및 방법
KR20200118010A (ko) 암의 만성 car 치료
WO2024030970A2 (en) Genetic editing of target genes to enhance natural killer cell function
CN117897178A (zh) 用于治疗癌症的组合物和方法
JP2024510898A (ja) Ｒｏｒ１を標的とするキメラ抗原受容体
JP2024532621A (ja) がんを治療するための組成物および方法
CA3226130A1 (en) Compositions and methods for treating cancers
WO2023081767A1 (en) Methods for immunotherapy

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination