CN117858724A - 使用激活素受体ii型信号传导抑制剂的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了治疗患有与骨髓发育异常综合征相关的血细胞减少症、与慢性骨髓单核细胞性白血病相关的血细胞减少症或与骨髓纤维化相关的血细胞减少症,诸如贫血、血小板减少症或嗜中性粒细胞减少症的受试者的方法,所述方法通过向所述受试者施用ActRII信号传导抑制剂,诸如包括细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱来进行。所述细胞外ActRIIA变体可融合至Fc结构域或部分。
Description
发明背景
骨髓发育异常综合征或MDS为以无效造血为特征的骨髓病症的集合,常常具有不能成熟为功能血细胞的祖细胞的突发性扩增。在美国,有60,000至170,000个MDS患者并且每年报道15,000至20,000个新的MDS案例。MDS主要影响年长的成人,在诊断时约75%的患者年龄为60岁或更年长。中值存活在极低风险患者约九年至高风险患者不到一年范围内。贫血为MDS患者中归因于低红血细胞产生的无效造血的最常见结果,影响90%的MDS患者。另一结果为血小板减少症,这影响40-65%的患者。患有MDS相关贫血的患者通常使用红血细胞输注和红细胞生成刺激剂(ESA)来治疗,这些未被批准用于此类治疗。MDS相关血小板减少症通常用血小板输注和血小板刺激剂来治疗。
骨髓纤维化为一种慢性骨髓增生性恶性肿瘤,其特征为以髓样细胞的克隆增殖以及巨核细胞增生/发育异常从而导致骨髓纤维化和骨质硬化。它可呈现为一种新发病症(原发性骨髓纤维化,PMF)或从真性红细胞增多症(PV后MF)、特发性血小板增多症(ET后MF)、骨髓发育异常综合征(MDS)、狼疮或其他血液和实体肿瘤演变而来。骨髓增生性赘瘤由克隆扩增并且产生实际上所有髓样细胞和B细胞以及自然杀伤细胞的单一体细胞突变的造血干细胞祖细胞产生。它以骨髓纤维化、无效造血、脾肿大、骨髓外造血、全身症状以及存活缩短为特征。患有骨髓纤维化的受试者中的骨髓中的广泛瘢痕化可引起重度贫血和低血小板数目。骨髓纤维化的症状包括疲劳、骨骼疼痛、容易瘀伤、容易出血以及发热。不存在针对患有骨髓纤维化的患者的根治性医学疗法,但已显示JAK抑制剂(诸如鲁索替尼(ruxolitinib)非德替尼(fedratinib)/>以及帕克替尼(pacritinib)(VONJOTM))减小脾脏体积并且改善与骨髓纤维化相关的症状。然而,JAK抑制剂妨碍正常造血并且用鲁索替尼和非德替尼治疗因发展贫血和血小板减少症而变得复杂,这可引起剂量降低和附着减少,从而限制能够保持使用JAK抑制剂的患者的数目。患有侵袭性或高风险骨髓纤维化的患者可能需要输血或骨髓移植。其他治疗选择包括具有已知风险的疗法,诸如雄激素疗法以及用沙利度胺(thalidomide)或相关药物治疗。对于患有中风险骨髓纤维化的患者,治疗通常是针对症状管理。
慢性骨髓单核细胞性白血病(CMML)为一种罕见血液癌症,通常影响年长的成人。它以未成熟单核细胞的累积为特征,未成熟单核细胞的累积可破坏红血细胞和血小板的产生并且引起贫血和血小板减少症的发展。患有CMML的受试者还可能具有嗜中性粒细胞缺乏以及肿大的脾脏。约15%至30%的患有CMML的人发展急性骨髓性白血病(AML)。目前,针对CMML相关血细胞减少症的治疗选择有限,特别是在具有高输注负担的环形铁粒幼红细胞阳性的受试者中。
因此,需要新颖并且有效的针对MDS相关、CMML相关以及骨髓纤维化相关的血细胞减少症的治疗。
发明内容
本发明提供了ActRII信号传导抑制剂,包括激活素A抗体、激活素B抗体、肌生成抑制素抗体、GDF-11抗体、ActRII抗体以及ActRII配体阱,包括包含细胞外激活素受体IIA型(ActRIIA)变体的ActRIIA配体阱。在一些实施方案中,ActRIIA配体阱包括融合至Fc结构域、Fc结构域单体或其他部分的N端或C端的细胞外ActRIIA变体。此类部分可通过氨基酸或其他共价键连接并且可增加多肽的稳定性。包括融合至Fc结构域单体的细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱还可通过两个Fc结构域单体之间的相互作用形成二聚体(例如均二聚体或异二聚体)。可使用本发明的ActRII信号传导抑制剂的来治疗患有与骨髓发育异常综合征(MDS相关血细胞减少症)、慢性骨髓单核细胞性白血病或骨髓纤维化相关的血细胞减少症(例如贫血、血小板减少症或嗜中性粒细胞减少症)或处于发展所述疾病的风险中的受试者,例如通过在患有骨髓发育异常综合征、慢性骨髓单核细胞性白血病或骨髓纤维化的受试者中增加血红蛋白水平,增加红细胞压积,增加红血细胞计数,促进或增加红系祖细胞的成熟和/或分化,增加晚期红系前体成熟,将早期祖细胞招募至红系谱系中,增加原成红细胞数目,增加网织红细胞,增加早期红系前体和/或祖细胞数目,促进红系前体和/或祖细胞通过红细胞生成发生进展,增加血小板水平(例如增加血小板计数),增加嗜中性粒细胞水平(例如增加嗜中性粒细胞计数),降低输注负荷和/或促成输注非依赖性。
以下所列举段落中描述了本发明的示例性实施方案。
E1.一种治疗患有与骨髓发育异常综合征相关的血细胞减少症或处于发展所述血细胞减少症的风险中的受试者的方法,所述受试者尚未接受使用阿扎胞苷(azacitidine)、地西他滨(decitabine)、来那度胺(lenalidomide)、罗特西普(luspatercept)或索特西普(sotatercept)的现有治疗,所述方法通过向所述受试者施用治疗有效量的ActRII信号传导抑制剂来进行。
E2.一种治疗患有骨髓发育异常综合征的受试者的血细胞减少症的方法,所述受试者尚未接受使用阿扎胞苷、地西他滨、来那度胺、罗特西普或索特西普的现有治疗,所述方法通过向所述受试者施用治疗有效量的ActRII信号传导抑制剂来进行。
E3.一种治疗患有与骨髓发育异常综合征相关的血细胞减少症或处于发展所述血细胞减少症的风险中的受试者的方法,所述受试者具有或被鉴定为具有大于100mIU/mL的红细胞生成素水平,所述方法通过向所述受试者施用治疗有效量的ActRII信号传导抑制剂来进行。
E4.一种治疗患有骨髓发育异常综合征的受试者的血细胞减少症的方法,所述受试者具有或被鉴定为具有大于100mIU/mL的红细胞生成素水平,所述方法通过向所述受试者施用治疗有效量的ActRII信号传导抑制剂来进行。
E5.一种在有需要的受试者中促成输注非依赖性的方法,所述方法通过向所述受试者施用治疗有效量的ActRII信号传导抑制剂来进行。
E6.如E5所述的方法,其中所述受试者患有与骨髓发育异常综合征相关的血细胞减少症或处于发展所述血细胞减少症的风险中。
E7.如E5所述的方法,其中所述受试者患有与慢性骨髓单核细胞性白血病(CMML)相关的血细胞减少症或处于发展所述血细胞减少症的风险中。
E8.如E5所述的方法,其中所述受试者患有与骨髓纤维化相关的血细胞减少症或处于发展所述血细胞减少症的风险中。
E9.如E1-E4和E6中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征为骨髓发育异常综合征伴单系发育异常(MDS-SLD)、骨髓发育异常综合征伴多系发育异常(MDS-MLD)、骨髓发育异常综合征伴环形铁粒幼红细胞(MDS-RS,其包括单谱系发育异常(MDS-RS-SLD)和多系发育异常(MDS-RS-MLD))、与分离的del染色体异常相关的骨髓发育异常综合征(骨髓发育异常综合征伴分离的del(5q))、骨髓发育异常综合征伴过量原始细胞(例如骨髓发育异常综合征伴过量原始细胞-1型(MDS-EB-1)或骨髓发育异常综合征伴过量原始细胞-2型(MDS-EB-2))、不能分型的骨髓发育异常综合征(MDS-U)或骨髓发育异常综合征/骨髓增生性赘瘤伴环形铁粒幼红细胞和血小板增多症(MDS/MPN-RS-T)。
E10.如E1-E4、E6以及E9中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征为MDS-SLD。
E11.如E1-E4、E6以及E9中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征为MDS-MLD。
E12.如E1-E4、E6以及E9中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征为MDS-RS-SLD。
E13.如E1-E4、E6以及E9中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征为MDS-RS-MLD。
E14.如E1-E4、E6以及E9中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征为骨髓发育异常综合征伴分离的del(5q)。
E15.如E1-E4、E6以及E9中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征为MDS-EB-1。
E16.如E1-E4、E6以及E9中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征为MDS-EB-2。
E17.如E1-E4、E6以及E9中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征为MDS-U。
E18.如E1-E4、E6以及E9中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征为MDS/MPN-RS-T。
E19.如E1-E4、E6以及E9-E18中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征为环形铁粒幼红细胞阳性骨髓发育异常综合征(RS阳性MDS,例如所述受试者具有环形铁粒幼红细胞)。
E20.如E19所述的方法,其中所述RS阳性骨髓发育异常综合征与剪接因子突变相关。
E21.如E20所述的方法,其中所述剪接因子突变为剪接因子3b亚单位1(SF3B1)中的突变。
E22.如E1-E4、E6、E9-E11以及E14-E17中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征为非环形铁粒幼红细胞骨髓发育异常综合征(非RS,例如所述受试者缺乏环形铁粒幼红细胞)。
E23.如E1-E4、E6以及E9-E22中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征为极低风险、低风险或中风险骨髓发育异常综合征(例如如通过修正的国际预后评分系统所确定)。
E24.如E23所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征为极低风险骨髓发育异常综合征(例如如通过修正的国际预后评分系统所确定)。
E25.如E23所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征为低风险骨髓发育异常综合征(例如如通过修正的国际预后评分系统所确定)。
E26.如E23所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征为中风险骨髓发育异常综合征(例如如通过修正的国际预后评分系统所确定)。
E27.如E1-E4、E6以及E9-E26中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征与终末成熟缺陷相关。
E28.如E1-E4、E6以及E9-E26中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征与早期造血作用(例如祖细胞的定向或分化)缺陷相关。
E29.如E1-E4、E6以及E9-E28中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征与内源性红细胞生成素水平升高相关。
E30.如E1-E4、E6以及E9-E29中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征与低细胞性骨髓相关(例如所述受试者具有低细胞性骨髓)。
E31.一种治疗患有与CMML相关的血细胞减少症的受试者的方法,所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的ActRII信号传导抑制剂。
E32.一种治疗患有CMML的受试者的血细胞减少症的方法,所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的ActRII信号传导抑制剂。
E33.如E31或E32所述的方法,其中所述受试者尚未接受使用阿扎胞苷、地西他滨、来那度胺、罗特西普或索特西普的现有治疗。
E34.如E31-E33中任一项所述的方法,其中所述受试者具有无效造血。
E35.如E7和E31-E34中任一项所述的方法,其中所述CMML为CMML-0。
E36.一种治疗患有与原发性骨髓纤维化(PMF)、特发性血小板增多症后骨髓纤维化(ET后MF)或真性红细胞增多症后骨髓纤维化(PV后MF)相关的血细胞减少症的受试者的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂。
E37.一种治疗患有PMF、ET后MF或PV后MF的受试者的血细胞减少症的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂。
E38.一种治疗患有PMF、ET后MF或PV后MF的受试者的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂。
E39.一种减轻患有骨髓纤维化的受试者的骨质硬化的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂。
E40.如E39所述的方法,其中所述方法还包括在施用所述ActRII信号传导抑制剂之后评估骨质硬化。
E41.如E39所述的方法,其中在施用所述ActRII信号传导抑制剂之前所述受试者被鉴定为具有骨质硬化。
E42.如E39所述的方法,其中所述方法还包括在施用所述ActRII信号传导抑制剂之前将所述受试者鉴定为具有骨质硬化。
E43.一种减轻患有骨髓纤维化的受试者的脾肿大的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂。
E44.一种减轻有需要的受试者中与骨髓外造血相关的脾肿大的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂。
E45.如E43或E44所述的方法,其中所述方法还包括在施用所述ActRII信号传导抑制剂之后评估脾脏体积。
E46.如E43或E44所述的方法,其中在施用所述ActRII信号传导抑制剂之前所述受试者被鉴定为具有脾肿大。
E47.如E43或E44所述的方法,其中所述方法还包括在施用所述ActRII信号传导抑制剂之前将所述受试者鉴定为具有脾肿大。
E48.一种减轻患有骨髓纤维化的受试者的骨髓纤维化的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂。
E49.如E48所述的方法,其中所述方法还包括在施用所述ActRII信号传导抑制剂之后评估骨髓纤维化。
E50.如E48所述的方法,其中在施用所述ActRII信号传导抑制剂之前所述受试者被鉴定为患有骨髓纤维化。
E51.如E48所述的方法,其中所述方法还包括在施用所述ActRII信号传导抑制剂之前将所述受试者鉴定为患有骨髓纤维化。
E52.一种降低患有骨髓纤维化、血小板增多症或真性红细胞增多症的受试者中或因过量红血细胞而需要放血术的受试者中的血小板数目或血小板体积的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂。
E53.如E52所述的方法,其中所述方法还包括在施用所述ActRII信号传导抑制剂之后评估血小板数目或血小板体积。
E54.如E52所述的方法,其中在施用所述ActRII信号传导抑制剂之前所述受试者被鉴定为具有高血小板水平。
E55.如E52所述的方法,其中所述方法还包括在施用所述ActRII信号传导抑制剂之前将所述受试者鉴定为具有高血小板水平。
E56.一种治疗患有骨髓纤维化的受试者的血细胞减少症的方法,所述受试者已停止用JAK抑制剂治疗,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂。
E57.一种治疗患有骨髓纤维化的受试者的方法,所述受试者已停止用JAK抑制剂治疗,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂。
E58.如E56或E57所述的方法,其中在用所述JAK抑制剂治疗之后所述受试者的疾病复发。
E59.如E56或E57所述的方法,其中所述受试者难以用所述JAK抑制剂治疗。
E60.如E56或E57所述的方法,其中所述受试者对用JAK抑制剂治疗不耐受或不再满足继续用所述JAK抑制剂治疗的风险/效益比。
E61.一种治疗患有骨髓纤维化的受试者的血细胞减少症的方法,所述受试者不适合用JAK抑制剂治疗,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂。
E62.一种治疗患有骨髓纤维化的受试者的方法,所述受试者不适合用JAK抑制剂治疗,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂。
E63.如E56-E62中任一项所述的方法,其中所述JAK抑制剂为鲁索替尼、非德替尼或帕克替尼。
E64.如E8、E39-E43以及E45-E63中任一项所述的方法,其中所述骨髓纤维化为PMF、ET后MF或PV后MF。
E65.如E38-E55、E57-E60以及E62-E64中任一项所述的方法,其中所述受试者患有血细胞减少症。
E66.如E8和E36-E65中任一项所述的方法,其中所述骨髓纤维化为中风险或高风险骨髓纤维化。
E67.一种治疗患有与用抗真菌剂治疗相关的血细胞减少症的受试者的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂。
E68.如E67所述的方法,其中所述抗真菌剂为酮康唑(ketoconazole)、特比萘芬(terbinafine)、氟康唑(fluconazole)、米卡芬净(micafungin)或卡泊芬净(caspofungin)。
E69.一种治疗患有与免疫抑制剂治疗相关的血细胞减少症的受试者的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂。
E70.如E69所述的方法,其中所述免疫抑制剂为氮杂硫嘌呤、甲氨蝶呤(methotrexate)或吗替麦考酚酯(mycophenolate mofetil)。
E71.一种治疗患有与抗生素治疗相关的贫血的受试者的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂。
E72.如E71所述的方法,其中所述抗生素为头孢菌素或青霉素。
E73.如E1-E72中任一项所述的方法,其中所述受试者对用红细胞生成素(EPO)治疗没有良好反应,易于发生EPO的有害作用,或对用红系成熟剂治疗没有良好反应。
E74.如E1-E73中任一项所述的方法,其中所述受试者先前已用红细胞生成刺激剂(ESA)治疗。
E75.如E1-E73中任一项所述的方法,其中所述受试者先前尚未用红细胞生成刺激剂(ESA)治疗。
E76.如E3-E75中任一项所述的方法,其中受试者先前尚未用阿扎胞苷、地西他滨、来那度胺、罗特西普或索特西普治疗。
E77.如E1-E76中任一项所述的方法,其中所述受试者具有低输注负荷。
E78.如E77所述的方法,其中在开始用ActRII信号传导抑制剂治疗之前八周内,所述受试者已接受1-3个单位的RBC(1-3次RBC输注)。
E79.如E77所述的方法,其中在开始用ActRII信号传导抑制剂治疗之前八周内,所述受试者已接受0个单位的RBC(0次RBC输注)(即,所述受试者为非输注受试者)。
E80.如E1-E76中任一项所述的方法,其中所述受试者具有高输注负荷。
E81.如E1、E2以及E5-E80中任一项所述的方法,其中所述受试者具有大于100mIU/mL的红细胞生成素水平。
E82.如E1、E2以及E5-E80中任一项所述的方法,其中所述受试者具有小于或等于100mIU/mL的红细胞生成素水平。
E83.如E1-E78和E80-E82中任一项所述的方法,其中所述方法降低所述受试者的输注负荷。
E84.如E1-E78和E80-E83中任一项所述的方法,其中所述方法促成输注非依赖性(例如与紧接在治疗前8周的治疗前输注数据相比,在用ActRII信号传导抑制剂治疗期间持续至少8周、10周、12周、14周、16周、20周、24周、26周、1年、2年或更久的输注非依赖性)。
E85.如E1-E79和E81-E84中任一项所述的方法,其中所述方法使得血红蛋白增加≥1.5g/dL(例如与基线或治疗前测量相比,在用ActRII信号传导抑制剂治疗期间血红蛋白增加≥1.5g/dL,持续至少2周、4周、6周、8周、10周、12周、14周、16周、20周、24周、26周、1年、2年或更久)。
E86.如E1-E77和E81-E85中任一项所述的方法,其中所述方法使得在治疗期内输注的单位减少≥4U或≥50%(例如与紧接在治疗前8周内的基线相比,在使用ActRII信号传导抑制剂的2周、4周、6周、8周、10周、12周、14周、16周、20周、24周、26周、1年、2年或更久的治疗期内输注的单位减少≥4U或≥50%)。
E87.如E1-E78和E80-E86中任一项所述的方法,其中在治疗期间所述受试者实现持续至少八周或十二周的输注非依赖性(例如与紧接在治疗前8周或12周的治疗前输注数据相比)。
E88.如E1-E87中任一项所述的方法,其中所述血细胞减少症为贫血。
E89.如E1-E88中任一项所述的方法,其中在施用所述ActRII信号传导抑制剂之前所述受试者被鉴定为患有贫血。
E90.如E1-E88中任一项所述的方法,其中所述方法还包括在施用所述ActRII信号传导抑制剂之前将所述受试者鉴定为患有贫血。
E91.如E1-E90中任一项所述的方法,其中所述方法还包括在施用所述ActRII信号传导抑制剂之后评估红血细胞计数、血红蛋白水平、网织红细胞计数或红细胞压积水平。
E92.如E1-E91中任一项所述的方法,其中所述血细胞减少症为血小板减少症。
E93.如E1-E92中任一项所述的方法,其中在施用所述ActRII信号传导抑制剂之前所述受试者被鉴定为患有血小板减少症。
E94.如E1-E92中任一项所述的方法,其中所述方法还包括在施用所述ActRII信号传导抑制剂之前将所述受试者鉴定为患有血小板减少症。
E95.如E1-E94中任一项所述的方法,其中所述方法还包括在施用所述ActRII信号传导抑制剂之后评估血小板水平。
E96.如E1-E95中任一项所述的方法,其中所述血细胞减少症为嗜中性粒细胞减少症。
E97.如E1-E96中任一项所述的方法,其中在施用所述ActRII信号传导抑制剂之前所述受试者被鉴定为患有嗜中性粒细胞减少症。
E98.如E1-E96中任一项所述的方法,其中所述方法还包括在施用所述ActRII信号传导抑制剂之前将所述受试者鉴定为患有嗜中性粒细胞减少症。
E99.如E1-E98中任一项所述的方法,其中所述方法还包括在施用所述ActRII信号传导抑制剂之后评估嗜中性粒细胞水平。
E100.如E1-E99中任一项所述的方法,其中所述方法还包括在施用所述ActRII信号传导抑制剂之后(例如治疗开始之后12小时、24小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周或12周或1个月、2个月、3个月、4个月、5个月或6个月或更久)进行全血记数(CBC)。
E101.如E1-E100中任一项所述的方法,其中所述方法还包括在施用所述ActRII信号传导抑制剂之前进行CBC。
E102.一种在有需要的受试者中改善造血干细胞植入的方法,所述方法包括在造血干细胞移植之前(例如在植入之前)向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂。
E103.一种治疗患有血小板增多症的受试者的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂。
E104.一种治疗患有真性红细胞增多症的受试者的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂。
E105.一种减少有需要的受试者中的血小板的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂。
E106.如E105所述的方法,其中所述受试者患有血小板增多症或真性红细胞增多症,或因过量红血细胞而需要放血术。
E107.如E103-E106中任一项所述的方法,其中在施用所述ActRII信号传导抑制剂之前所述受试者被鉴定为具有升高的血小板水平。
E108.如E1-E107中任一项所述的方法,其中所述方法减少或抑制激活素A、激活素B和/或肌生成抑制素与其受体(例如其内源性受体)的结合。
E109.如E1-E108中任一项所述的方法,其中所述ActRII信号传导抑制剂以足以增加红血细胞水平、增加血红蛋白水平、增加红血细胞产生、增加红血细胞计数、增加红细胞压积、降低输注负荷、促成输注非依赖性、增加平均红细胞体积、增加平均红细胞血红蛋白、增加网织红细胞血红蛋白、增加红细胞生成素水平、增加促血小板生成素水平、增加红系祖细胞(例如早期和/或晚期红系祖细胞)的成熟和/或分化、增加晚期红系前体成熟、将早期祖细胞招募至红系谱系中、增加网织红细胞、增加原成红细胞数目、减少红血细胞祖细胞的累积、增加早期红系前体和/或祖细胞的数目、促进红系前体和/或祖细胞通过红细胞生成发生进展、治疗贫血、增加血小板水平、增加血小板体积、增加未成熟血小板级分、增加前血小板、增加血小板产生、增加血小板计数、增加或诱导巨核细胞分化和/或成熟、增加巨核细胞祖细胞更新、减少血小板祖细胞的累积、改善血液凝固、减少出血事件、减少皮肤出血、治疗血小板减少症、增加嗜中性粒细胞水平、增加嗜中性粒细胞产生、增加嗜中性粒细胞计数、增加或诱导祖细胞分化和/或成熟为嗜中性粒细胞、治疗嗜中性粒细胞减少症、降低对感染的敏感度、影响所述受试者中的肌生成抑制素、激活素A、激活素B和/或BMP9信号传导或减少或抑制激活素A、激活素B和/或肌生成抑制素与其受体(例如其内源性受体)的结合的量施用。
E110.如E7、E8以及E31-E101中任一项所述的方法,其中所述ActRII信号传导抑制剂以足以减小脾脏体积的量施用。
E111.如E8和E36-E101中任一项所述的方法,其中所述ActRII信号传导抑制剂以足以减轻骨髓纤维化、减轻骨质硬化、改善骨髓纤维化等级或降低高血小板水平的量施用。
E112.如E1-E111中任一项所述的方法,其中所述方法不在所述受试者中引起血管并发症。
E113.如E112所述的方法,其中所述方法不增加血管通透性或渗漏。
E114.如E1-E113中任一项所述的方法,其中所述受试者为人。
E115.如E1-E114中任一项所述的方法,其中所述ActRII信号传导抑制剂为激活素A抗体或其抗原结合片段。
E116.如E115所述的方法,其中所述激活素A抗体为加托索单抗(garetosmab)。
E117.如E115所述的方法,其中所述激活素A抗体或其抗原结合片段具有与表1中的HCVR序列具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的重链可变区(HCVR)序列以及与表1中的LCVR序列具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的轻链可变区(LCVR)序列(例如表1中的HCVR序列和表1中的LCVR序列,诸如来自表1的同一行的HCVR序列和LCVR序列)。
E118.如E115或E117所述的方法,其中所述激活素A抗体或其抗原结合片段具有表2中所列的轻链CDR1、CDR2以及CDR3以及重链CDR1、CDR2以及CDR3(例如来自表2的同一行的轻链CDR1、CDR2以及CDR3序列以及重链CDR1、CDR2以及CDR3序列)。
E119.如E1-E114中任一项所述的方法,其中所述ActRII信号传导抑制剂为肌生成抑制素抗体或其抗原结合片段。
E120.如E119所述的方法,其中所述肌生成抑制素抗体为多马珠单抗(domagrozumab)、兰洛珠单抗(landogrozumab)、曲戈卢单抗(trevogrumab)或SRK-015。
E121.如E119所述的方法,其中所述肌生成抑制素抗体或其抗原结合片段具有与表3中的HCVR序列具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的HCVR序列以及与表3中的LCVR序列具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的LCVR序列(例如表3中的HCVR序列和表3中的LCVR序列,诸如来自表3的同一行的HCVR序列和LCVR序列或SEQID NO:448-476中的任一者的HCVR序列以及SEQ ID NO:477-486中的任一者的LCVR序列)。
E122.如E119或E121所述的方法,其中所述肌生成抑制素抗体或其抗原结合片段具有表4、表5或表6中所列的轻链CDR1、CDR2以及CDR3以及重链CDR1、CDR2以及CDR3(例如来自表4的同一行的轻链CDR1、CDR2以及CDR3序列以及重链CDR1、CDR2以及CDR3序列)。
E123.如E119、E121以及E122中任一项所述的方法,其中所述肌生成抑制素抗体或其抗原结合片段具有与表7中提供的重链和轻链序列具有至少90%序列同一性(例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、95%、97%、98%、99%或100%序列同一性)的重链和轻链序列(例如来自表7的同一行的重链和轻链序列)。
E124.如E1-E114中任一项所述的方法,其中所述ActRII信号传导抑制剂为ActRII抗体或其抗原结合片段。
E125.如E124所述的方法,其中所述ActRII抗体为比马鲁单抗(bimagrumab)、CSJ089、CQI876或CDD861。
E126.如E124所述的方法,其中所述ActRII抗体或其抗原结合片段具有与表8中的HCVR序列具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的HCVR序列以及与表8中的LCVR序列具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的LCVR序列(例如表8中的HCVR序列和表8中的LCVR序列,诸如来自表8的同一行的HCVR序列和LCVR序列)。
E127.如E124或E126所述的方法,其中所述ActRII抗体或其抗原结合片段具有表9中所列的轻链CDR1、CDR2以及CDR3以及重链CDR1、CDR2以及CDR3(例如来自表9的同一行的轻链CDR1、CDR2以及CDR3序列以及重链CDR1、CDR2以及CDR3序列)。
E128.如E124、E126以及E127中任一项所述的方法,其中所述ActRII抗体或其抗原结合片段具有与表10中提供的重链和轻链序列具有至少90%序列同一性(例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、95%、97%、98%、99%或100%序列同一性)的重链和轻链序列(例如来自表10的同一行的重链和轻链序列)。
E129.如E1-E114中任一项所述的方法,其中所述ActRII信号传导抑制剂为ActRII配体阱。
E130.如E129所述的方法,其中所述ActRII配体阱为ActRIIA配体阱。
E131.如E130所述的方法,其中所述ActRIIA配体阱为表18的组合物(例如表18的多肽、核酸分子、载体或药物组合物)。
E132.如E130所述的方法,其中所述ActRIIA配体阱包含野生型ActRIIA的细胞外部分(例如SEQ ID NO:73或SEQ ID NO:729)。
E133.如E130所述的方法,其中所述ActRIIA配体阱为索特西普。
E134.如E129所述的方法,其中所述ActRII配体阱为ActRIIB配体阱。
E135.如E134所述的方法,其中所述ActRIIB配体阱为BIIB110、ALG-802罗特西普、拉马西普(ramatercept)或ACE-2494。
E136.如E134所述的方法,其中所述ActRIIB配体阱包含野生型ActRIIB的细胞外部分(例如SEQ ID NO:74或其部分)。
E137.如E134所述的方法,其中所述ActRIIB配体阱为表19的组合物(例如表19的多肽、核酸分子、载体或药物组合物)。
E138.如E134所述的方法,其中所述ActRIIB配体阱包含SEQ ID NO:745-750中的任一者的序列(例如借助于接头融合至诸如Fc结构域或Fc结构域单体等部分的SEQ ID NO:745-750中的任一者的序列)。
E139.如E129所述的方法,其中所述ActRII配体阱为ActRII嵌合体配体阱。
E140.如E139所述的方法,其中所述ActRII嵌合体配体阱为表20或表21的组合物(例如表20或表21的多肽、核酸分子、载体或药物组合物)。
E141.如E1-E114中任一项所述的方法,其中所述ActRII信号传导抑制剂为激活素B抗体或其抗原结合片段。
E142.如E141所述的方法,其中所述激活素B抗体或其抗原结合片段具有与SEQ IDNO:494具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的HCVR以及与SEQ ID NO:495具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的LCVR。
E143.如E1-E114中任一项所述的方法,其中所述ActRII信号传导抑制剂为GDF-11抗体或其抗原结合片段。
定义
为便于理解本发明,许多术语定义如下。本文中定义的术语具有如与本发明相关领域的普通技术人员通常所理解的含义。诸如“一种”、“一个”以及“所述”等术语不意在仅指单数实体,而是包括可使用特定实例进行说明的一般类别。除非在权利要求中概述,否则本文中的术语用于描述本发明的特定实施方案,但其使用不限制本发明。
如本文所用,术语“约”是指一个值高于或低于所描述的值10%以内。
如本文所用,以值的范围提供的任何值包括上界和下界以及上界和下界内所含的任何值。
如本文所用,“施用”是指通过任何有效途径为受试者提供或给予治疗剂(例如本文所描述的ActRII信号传导抑制剂)。示例性施用途径如本文以下所描述。
术语“抗体”以广义使用并且具体来说涵盖完整单克隆抗体、多克隆抗体、由至少两个完整抗体形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)以及抗体片段,只要它们展现所需生物活性即可。
“抗体片段”包括完整抗体的一部分,优选为完整抗体的抗原结合或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab')2以及Fv片段;双抗体;线性抗体(Zapata等ProteinEng.8(10):1057-1062(1995));单链抗体分子;以及由抗体片段形成的多特异性抗体。
如本文所用,术语“细胞外激活素受体IIA型(ActRIIA)变体”是指包括单一跨膜受体ActRIIA的可溶性细胞外部分的肽,所述可溶性细胞外部分相对于野生型细胞外ActRIIA(例如下文所示SEQ ID NO:75的序列的粗体部分)具有至少一个氨基酸取代。以下显示野生型人ActRIIA前驱蛋白的序列(SEQ ID NO:75),其中信号肽为斜体并且细胞外部分为粗体。
野生型人ActRIIA前驱蛋白(SEQ ID NO:75):
细胞外ActRIIA变体可具有SEQ ID NO:1-72中的任一者的序列。在特定实施方案中,细胞外ActRIIA变体具有SEQ ID NO:6-72中的任一者的序列(表12)。在一些实施方案中,细胞外ActRIIA变体可与野生型细胞外ActRIIA的序列(SEQ ID NO:73)具有至少85%(例如至少85%、87%、90%、92%、95%、97%或更大)的氨基酸序列同一性。
如本文所用,术语“接头”是指两个元件(例如肽或蛋白质结构域)之间的连接部分。本文所描述的ActRII配体阱可包括融合至一个部分的ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)。所述部分可增加多肽的稳定性或改善其药代动力学特性。所述部分(例如Fc结构域单体、Fc结构域、白蛋白结合肽、纤连蛋白结构域或人血清白蛋白)可通过接头融合至多肽。接头可为共价键或间隔子。术语“键”是指化学键,例如酰胺键或二硫键,或由化学反应(例如化学缀合)形成的任何类型的键。术语“间隔子”是指存在于两个元件(例如肽或蛋白质结构域)之间以在两个元件之间提供间隔和/或可挠性的部分(例如聚乙二醇(PEG)聚合物)或氨基酸序列(例如1-200氨基酸序列)。氨基酸间隔子为多肽的一级序列的一部分(例如经由多肽骨架融合至间隔肽)。例如形成Fc结构域的两个铰链区之间形成二硫键不被认为是接头。
如本文所用,术语“Fc结构域”是指两个Fc结构域单体的二聚体。Fc结构域与至少包括CH2结构域和CH3结构域的人Fc结构域具有至少80%序列同一性(例如至少85%、90%、95%、97%或100%序列同一性)。Fc结构域单体包括第二和第三抗体恒定结构域(CH2和CH3)。在一些实施方案中,Fc结构域单体还包括铰链结构域。Fc结构域不包括免疫球蛋白中能够充当抗原识别区的任何部分,例如可变结构域或互补决定区(CDR)。在野生型Fc结构域中,两个Fc结构域单体通过两个CH3抗体恒定结构域之间的相互作用以及两个二聚化Fc结构域单体的铰链结构域之间形成的一个或多个二硫键发生二聚化。在一些实施方案中,Fc结构域可发生突变以缺少效应功能,这是“死亡Fc结构域”特有的。在某些实施方案中,Fc结构域中的Fc结构域单体中的每一者在CH2抗体恒定结构域中包括氨基酸取代以降低Fc结构域与Fcγ受体之间的相互作用或结合。在一些实施方案中,Fc结构域含有减少或抑制Fc结构域二聚化的一个或多个氨基酸取代。Fc结构域可为任何免疫球蛋白抗体同型,包括IgG、IgE、IgM、IgA或IgD。另外,Fc结构域可为IgG亚型(例如IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3或IgG4)。Fc结构域还可为非天然存在的Fc结构域,例如重组Fc结构域。
如本文所用,术语“白蛋白结合肽”是指对血清白蛋白具有亲和力并且用以结合血清白蛋白的12至16个氨基酸的氨基酸序列。白蛋白结合肽可具有不同来源,例如人、小鼠或大鼠。在一些实施方案中,白蛋白结合肽具有序列DICLPRWGCLW(SEQ ID NO:83)。
如本文所用,术语“纤连蛋白结构域”是指结合至例如跨膜受体蛋白(诸如整合素)和细胞外基质组分(诸如胶原蛋白和纤维蛋白)的细胞外基质的高分子量糖蛋白或其片段。在一些实施方案中,纤连蛋白结构域为具有UniProt ID号:P02751的序列的氨基酸610-702的纤连蛋白III型结构域(SEQ ID NO:82)。在其他实施方案中,纤连蛋白结构域为adnectin蛋白。
如本文所用,术语“人血清白蛋白”是指存在于人血浆中的白蛋白。人血清白蛋白为血液中最丰富的蛋白质。它构成血清蛋白的约一半。在一些实施方案中,人血清白蛋白具有UniProt ID号:P02768(SEQ ID NO:81)的序列。
如本文所用,术语“内源性”描述分子(例如多肽、核酸或辅因子)天然存在于特定有机体(例如人)中或有机体内的特定位置(例如器官、组织或细胞,诸如人细胞,例如人红血细胞、血小板、嗜中性粒细胞或肌细胞)。
如本文所用,术语“融合”用于描述两个或更多个元件、组分或蛋白质结构域(例如肽或多肽)通过包括化学缀合、重组手段以及化学键(例如酰胺键)的手段组合或连接。举例来说,串联的两个单一肽可通过化学缀合、化学键、肽接头或任何其他共价键联手段融合,以形成一个连续蛋白质结构(例如多肽)。在本文所描述的ActRII配体阱的一些实施方案中,ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体))可通过接头串联融合至一个部分(例如Fc结构域单体(例如SEQ ID NO:97的序列)、Fc结构域(例如SEQ ID NO:84或SEQ IDNO:79的序列)、白蛋白结合肽(例如SEQ ID NO:83的序列)、纤连蛋白结构域(例如SEQ IDNO:82的序列)或人血清白蛋白(例如SEQ ID NO:81的序列))的N端或C端。举例来说,细胞外ActRIIA变体通过肽接头融合至一个部分(例如Fc结构域单体、Fc结构域、白蛋白结合肽、纤连蛋白结构域或人血清白蛋白),其中肽接头的N端通过化学键(例如肽键)融合至细胞外ActRIIA变体的C端,并且肽接头的C端通过化学键(例如肽键)融合至所述部分(例如Fc结构域单体、Fc结构域、白蛋白结合肽、纤连蛋白结构域或人血清白蛋白)的N端。
如本文所用,术语“C端延伸”是指向包括细胞外ActRIIA变体(例如具有SEQ IDNO:1-70(例如SEQ ID NO:6-70)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)的多肽的C端添加一个或多个氨基酸。C端延伸可为一个或多个氨基酸,诸如1-6个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6个或更多个氨基酸)。C端延伸可包括来自野生型ActRIIA的对应位置的氨基酸。示例性C端延伸为氨基酸序列NP(二氨基酸C端延伸)和氨基酸序列NPVTPK(SEQ ID NO:78)(六氨基酸C端延伸)。可使用不破坏多肽活性的任何氨基酸序列。SEQ ID NO:71为具有NP的C端延伸的SEQ ID NO:69的序列,并且SEQ ID NO:72为具有NPVTPK(SEQ ID NO:78)的C端延伸的SEQID NO:69的序列,这两者代表本发明的多肽可经过修饰以包括C端延伸的两种可能的方式。
如本文所用,术语“同一性百分比(%)”是指在比对序列并且必要时引入空隙以实现最大同一性百分比(即,可在候选序列和参考序列中的一者或两者中引入空隙以获得最佳比对并且出于比较目的可将非同源序列忽略)之后候选序列(例如细胞外ActRIIA变体)中与参考序列(例如野生型细胞外ActRIIA(例如SEQ ID NO:73))的氨基酸(或核酸)残基相同的氨基酸(或核酸)残基的百分比。出于确定同一性百分比的目的进行比对可以本领域技术范围内的各种方式来实现,例如使用公共可获得的计算机软件,诸如BLAST、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可确定用于测量比对的适当参数,包括在所比较的序列的整个长度上实现最大比对所需的任何算法。在一些实施方案中,给定候选序列对、与或针对给定参考序列的氨基酸(或核酸)序列同一性百分比(或者可表述为给定候选序列对、与或针对给定参考序列具有或包括某一氨基酸(或核酸)序列同一性百分比)计算如下:
100x(A/B的分数)
其中A为在候选序列与参考序列的比对中被评为相同的氨基酸(或核酸)残基的数目,并且其中B为参考序列中的氨基酸(或核酸)残基的总数目。在候选序列的长度不等于参考序列的长度的一些实施方案中,候选序列与参考序列的氨基酸(或核酸)序列同一性百分比将不等于参考序列与候选序列的氨基酸(或核酸)序列同一性百分比。
在特定实施方案中,为与候选序列比较而进行比对的参考序列可表明在候选序列的整个长度或候选序列的所选部分的连续氨基酸(或核酸)残基上候选序列展现50%至100%同一性。出于比较目的而进行比对的候选序列的长度为参考序列的长度的至少30%,例如至少40%,例如至少50%、60%、70%、80%、90%或100%。当候选序列中的位置被与参考序列中对应位置相同的氨基酸(或核酸)残基占据时,那么分子在所述位置处为相同的。
如本文所用,在向受试者施用治疗性蛋白质的情形中,术语“血清半衰期”是指受试者中蛋白质的血浆浓度减少一半所需的时间。蛋白质可再分布或从血流清除,或例如通过蛋白水解发生降解。血清半衰期比较可通过比较Fc融合蛋白的血清半衰期来进行。
如本文所用,术语“亲和力”或“结合亲和力”是指两个分子之间的结合相互作用的强度。通常,结合亲和力是指分子与其结合配偶体(诸如细胞外ActRIIA变体与BMP9或激活素A)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另有指示,否则结合亲和力是指反映结合对的成员之间的1:1相互作用的固有结合亲和力。两个分子之间的结合亲和力通常由解离常数(KD)或亲和力常数(KA)描述。对彼此具有弱结合亲和力的两个分子通常缓慢结合,倾向于容易解离,并且展现大KD。对彼此具有高亲和力的两个分子通常容易结合,倾向于更长时间保持结合,并且展现小KD。两个相互作用分子的KD可使用本领域熟知的方法和技术(例如表面等离子共振)来确定。以k解离/k缔合的比率的形式来计算KD。
如本文所用,短语“影响肌生成抑制素、激活素A、激活素B和/或BMP9信号传导”意指改变肌生成抑制素、激活素A、激活素B和/或BMP9与其受体(例如ActRIIA、ActRIIB和/或BMPRII(例如ActRIIA,例如内源性ActRIIA))的结合。在一些实施方案中,包括本文所描述的细胞外ActRIIA变体的多肽减少或抑制肌生成抑制素、激活素A、激活素B和/或BMP9与其受体(例如ActRIIA、ActRIIB和/或BMPRII(例如ActRIIA,例如内源性ActRIIA))的结合。
如本文所用,术语“增加”和“降低”是指进行调节从而相对于参考分别产生更大或更低量的度量的功能、表达或活性。举例来说,在本文所描述的方法中施用本发明的包括细胞外ActRIIA变体的多肽之后,受试者中如本文所描述的度量(例如血红蛋白水平、红血细胞计数、红细胞压积、网织红细胞计数、血小板计数或输注负荷)的标记物的量相对于施用之前标记物的量可有所增加或降低。通常,在施用之后在所述施用已具有所列效果时(例如治疗方案开始后至少一周、一个月、3个月或6个月)对所述度量进行测量。
如本文所用,术语“增加红血细胞水平”和“促进红血细胞形成”是指临床上可观测的度量,诸如红细胞压积、红血细胞计数以及血红蛋白测量,并且意在关于使此类变化发生的机制为中性的。术语“红血细胞形成”和“红血细胞产生”是指红血细胞的产生,诸如其中在骨髓中产生红血细胞的红细胞生成过程。
如本文所用,术语“贫血”是指导致血液中的氧含量降低的血红蛋白或红血细胞的任何异常。贫血可与红细胞和/或血红蛋白的异常产生、加工或表现相关。术语贫血是指血液中红血细胞数目和/或血红蛋白水平相对于正常血液水平的任何降低。举例来说,具有≤10g/dL的血红蛋白水平或接受红血细胞(RBC)输注的受试者可被鉴定为患有贫血。
如本文所用,术语“增加血小板水平”和“促进血小板形成”是指临床上可观测的度量,诸如血小板计数,并且意在关于使此类变化发生的机制为中性的。术语“血小板形成”和“血小板产生”是指血小板的产生,诸如其中从巨核细胞产生血小板的过程。
如本文所用,术语“增加嗜中性粒细胞水平”和“促进嗜中性粒细胞形成”是指临床上可观测的度量,诸如嗜中性粒细胞计数,并且意在关于使此类变化发生的机制为中性的。术语“嗜中性粒细胞形成”和“嗜中性粒细胞产生”是指嗜中性粒细胞的产生,诸如其中骨髓中产生嗜中性粒细胞的过程。
如本文所用,术语“血小板减少症”是指其中血液含有低于正常数目的血小板的疾患,所述疾患可归因于血小板产生缺陷、肿大的脾脏内血小板的累积或血小板的破坏。人中正常血小板水平在每微升血液约150,000至450,000个范围内。小于150,000个血小板/微升的血小板计数低于正常值。如果血小板计数降到每微升血液50,000个血小板以下,那么在相对微小的损伤之后就会发生出血,并且如果血小板计数降到每微升血液10,000至20,000个血小板以下,那么可能在没有识别到任何损伤的情况下就发生严重出血。
如本文所用,术语“嗜中性粒细胞减少症”是指其中血液含有异常低数目的嗜中性粒细胞的疾患。嗜中性粒细胞计数的典型下限为每微升血液约1500个细胞。低于此水平,感染的风险增加。嗜中性粒细胞减少症严重程度归类为:轻度(每微升血液1000至1500个嗜中性粒细胞)、中度(每微升血液500至1000个嗜中性粒细胞)以及重度(每微升血液低于500个嗜中性粒细胞)。嗜中性粒细胞减少症具有许多原因,但它们通常在两种主要类别范围内:与骨髓可产生新的嗜中性粒细胞相比嗜中性粒细胞的破坏或消耗更快,或骨髓中嗜中性粒细胞的产生减少。
如本文所用,术语“低输注负荷”是指受试者在用本文所描述的ActRIIA变体治疗之前八周内已接受小于四个单位的红血细胞(RBC)(例如八周内3、2、1或0个单位的RBC)的情况。可基于平均血红蛋白浓度的测量将具有低输注负荷的受试者鉴定为患有贫血。将具有低输注负荷并且在用本文所描述的ActRIIA变体治疗之前相隔至少一周进行的两次测量(例如一次测量在治疗之前一天内进行并且另一次在治疗前7-28天进行,不受测量七天内的RBC输注的影响)的平均血红蛋白浓度小于10.0g/dL的受试者定义为患有贫血。在一些实施方案中,在用本文所描述的ActRIIA变体治疗之前八周内,具有低输注负荷的受试者接受1-3个单位的RBC(1-3次RBC输注)。在一些实施方案中,在用本文所描述的ActRIIA变体治疗之前八周内,具有低输注负荷的受试者不接受任何单位的RBC(0次RBC输注)。在用本文所描述的ActRIIA变体治疗之前八周内不接受任何单位的RBC(0次RBC输注)的具有低输注负荷的受试者也可称为“非输注”受试者。
如本文所用,术语“高输注负荷”是指受试者在用本文所描述的ActRIIA变体治疗之前八周内需要大于或等于四个单位的RBC(例如4、5、6、7、8或更多个单位)的情况。可基于平均血红蛋白浓度的测量将具有高输注负荷的受试者鉴定为患有贫血。将具有高输注负荷并且平均血红蛋白浓度小于或等于9.0g/dL的受试者定义为患有贫血。
如本文所用,术语“无效造血”是指不能产生完全成熟的造血细胞(例如不能产生红血细胞、血小板以及嗜中性粒细胞)。无效造血可归因于可导致祖细胞的过度增殖或缺乏的单个或多个缺陷,诸如祖细胞的异常增殖和/或分化(例如不能完成分化的祖细胞的过量产生)。
如本文所用,术语“红细胞生成刺激剂”和“ESA”是指通过扩增早期祖细胞汇集物作用于红血细胞发育的增殖阶段的一类药物。红细胞生成刺激剂的实例为阿法依泊汀(epoetin alfa)和阿法达贝泊汀(darbepoetin alfa)。
如本文所用,术语“血管并发症”是指血管病症或对血管的任何损害,诸如损害血管壁。损害血管壁可引起血管通透性或渗漏增加。术语“血管通透性或渗漏”是指血管壁允许小分子、蛋白质以及细胞流入和流出血管的能力。血管通透性或渗漏增加可能由衬于血管壁内的内皮细胞之间的空隙增加(例如空隙的尺寸和/或数目增加)和/或血管壁变薄引起。
如本文所用,术语“多肽”描述单个聚合物,在所述单个聚合物中单体为通过酰胺键共价缀合在一起的氨基酸残基。多肽旨在涵盖天然存在的、重组的或合成制备的任何氨基酸序列。
如本文所用,术语“均二聚体”是指由两个相同的大分子(诸如蛋白质或核酸)形成的分子构建体。所述两个相同的单体可通过共价键或非共价键形成均二聚体。举例来说,如果两个Fc结构域单体含有相同序列,那么Fc结构域可为两个Fc结构域单体的均二聚体。在另一个实例中,本文所描述的包括融合至Fc结构域单体的细胞外ActRIIA变体的多肽可通过两个Fc结构域单体的相互作用形成均二聚体,所述两个Fc结构域单体形成均二聚体中的Fc结构域。
如本文所用,术语“异二聚体”是指由两个不同的大分子(诸如蛋白质或核酸)形成的分子构建体。所述两个单体可通过共价键或非共价键形成异二聚体。举例来说,本文所描述的包括融合至Fc结构域单体的细胞外ActRIIA变体的多肽可通过各自融合至不同的ActRIIA变体的两个Fc结构域单体的相互作用形成异二聚体,所述两个Fc结构域单体形成异二聚体中的Fc结构域。
如本文所用,术语“宿主细胞”是指包括从对应核酸表达蛋白质所需的必需细胞组分(例如细胞器)的媒介物。核酸典型地包括在核酸载体中,核酸载体可通过本领域已知的常规技术(转化、转染、电穿孔、磷酸钙沉淀、直接微量注射等)引入宿主细胞中。宿主细胞可为原核细胞,例如细菌细胞;或真核细胞,例如哺乳动物细胞(例如CHO细胞或HEK293细胞)。
如本文所用,术语“治疗有效量”是指在治疗患有与骨髓发育异常综合征或骨髓纤维化相关的疾病或疾患(诸如血细胞减少症,例如贫血、血小板减少症或嗜中性粒细胞减少症)的患者时,本发明的多肽、核酸或载体或含有本发明的多肽、核酸或载体的药物组合物有效实现所需治疗作用的量。特别地,治疗有效量的多肽、核酸或载体避免有害副作用。
如本文所用,术语“药物组合物”是指包括活性成分以及使活性成分能够适合于施用方法的赋形剂和稀释剂的医学或药物制剂。本发明的药物组合物包括与多肽、核酸或载体相容的药学上可接受的组分。药物组合物可呈片剂或胶囊形式用于经口施用,或呈水性形式用于静脉内或皮下施用。
如本文所用,术语“药学上可接受的载体或赋形剂”是指药物组合物中的赋形剂或稀释剂。药学上可接受的载体必须与制剂的其他成分相容并且不对接受者有害。在本发明中,药学上可接受的载体或赋形剂必须为本文所描述的多肽(例如ActRII信号传导抑制剂,诸如包括细胞外ActRIIA变体的ActRII配体阱)、编码所述多肽的一个或多个核酸分子或含有此类一个或多个核酸分子的载体提供充足的药物稳定性。载体或赋形剂的性质随施用模式不同而不同。举例来说,对于静脉内施用,通常使用水溶液载体;对于经口施用,固体载体为优选的。
如本文所用,术语“治疗和/或预防”是指使用本发明的方法和组合物治疗和/或预防与骨髓发育异常综合征或骨髓纤维化相关的疾病或疾患,例如血细胞减少症(例如贫血、血小板减少症或嗜中性粒细胞减少症)。通常,治疗与骨髓发育异常综合征或骨髓纤维化相关的疾病或疾患(例如血细胞减少症,例如贫血、血小板减少症或嗜中性粒细胞减少症)在受试者发展所述疾病或疾患之后进行。预防与骨髓发育异常综合征或骨髓纤维化相关的疾病或疾患(例如血细胞减少症,例如贫血、血小板减少症或嗜中性粒细胞减少症)是指当受试者处于发展所述疾病或疾患的风险中时所采取的步骤或程序。受试者可显示医师判断为发展所述疾病或疾患的指征或危险因素的迹象或轻度症状,具有与发展所述疾病或疾患相关的另一疾病或疾患,正在经历可能引起所述疾病或疾患的治疗,或具有发展所述疾病或疾患的家族史或遗传易感性,但尚未发展所述疾病或疾患。
如本文所用,术语“受试者”是指哺乳动物,例如优选为人。哺乳动物包括但不限于人以及家养和农场动物,诸如猴(例如食蟹猴)、小鼠、狗、猫、马以及牛等。
附图说明
图1为显示细胞外ActRIIA和ActRIIB的野生型序列以及示例性ActRIIA变体的序列的序列比对。
图2为示出ActRIIA/B-hFc(SEQ ID NO:80)对输注负荷的影响的图。针对输注减少对完成8周的用ActRIIA/B-hFc处理的在基线处需要输注(≥2个RBC单位/8周)的患者进行评估。六个患者在基线处需要输注(8周内2-10个RBC单位)。如图2中所示,在处理8周之后在使用每4周一次给药时程的情况下观测到临床上有意义的输注负荷降低以及输注非依赖性。*8周内的基线输注负荷,**与基线输注负荷相比在处理时8周内的输注减少百分比。
图3为示出ActRIIA/B-mFc(借助于接头融合至小鼠Fc结构域的SEQ ID NO:69)对血小板生成的影响的一系列图。如图3中所示,在给药后12小时内,ActRIIA/B-mFc使循环血小板数目以及骨髓巨核细胞祖细胞增加。数据表示为平均值±SEM。使用史都登氏t检验(Student T-Test)进行统计分析;*p<0.05;****p<0.0001。
图4为表明用ActRIIA/B-mFc处理对巨核细胞成熟有直接影响的一系列图。用ActRIIA/B-mFc(10mg/kg,经由皮下施用)对十一周龄C57/Bl6小鼠进行处理使得在给药后12小时CD41+巨核细胞祖细胞的数目增加(左)并且到给药后24小时多倍体巨核细胞的数目增加(右)。数据表示为平均值±SEM。
图5A至图5C为表明,与媒介物处理相比,用ActRIIA/B-mFc处理使血小板消耗之后血小板数目的恢复加快的一系列图。用抗GP1bα(0.08mg/kg,Efferet)或IgG对照对十一周龄小鼠进行处理。在处理之后第4天,将抗GP1bα处理组进一步划分成接受媒介物或ActRIIA/B-mFc(7.5mg/kg)处理。在抗GP1bα给药后在所指示的时间点测量血小板。在处理后第10天,将小鼠安乐死并且收获骨髓细胞。如图5A中所示,在此小鼠免疫血小板减少症模型中,与媒介物处理的小鼠相比,用ActRIIA/B-mFc处理的小鼠在血小板消耗之后展现加快的血小板数目恢复。另外,如图5B至图5C中所示,与媒介物处理组相比,ActRIIA/B-mFc处理组的骨髓中的CD41+巨核细胞祖细胞的数目增加25%,并且在血小板消耗之后第10天的4N倍数性水平更高。对于血小板数据,使用重复测量混合效应模型化进行统计分析。所示出的个别比较来自图基事后检验(Tukey post-test)。对于CD41数据,使用单因素ANOVA进行统计分析并且使用图基事后检验计算个别比较。*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001;****p<0.0001。
图6为表明用单一剂量的ActRIIA/B-mFc处理使得循环血小板增加至少85天的一系列图。用单一剂量的媒介物或ActRIIA/B-mFc(10mg/kg)通过皮下施用对十一周龄C57BL/6小鼠进行处理。在研究第37天、第51天以及第85天,对两个给药组的单独小鼠队列进行全血取样,并且使用兽医学血液学分析仪(Heska Element HT5)确定血小板计数。数据显示为平均值±SEM。使用史都登氏t检验进行统计分析;*p≤0.05;**p≤0.01;***p≤0.001;****p≤0.0001。
图7为表明用ActRIIA/B-mFc离体处理逆转激活素介导的巨核细胞前体变化的图。从11周龄C57Bl/6小鼠分离骨髓细胞并且用激活素A(5mg/kg)、ActRIIA/B-mFc(10mg/kg)或两者的组合处理六天。六天之后收获细胞并且使用流式细胞术分析(N=2)。误差线=SEM。
图8为表明用抗激活素A抗体处理使野生型小鼠中的血小板增加的图。经由腹膜内施用给予十周龄C57Bl/6雄性小鼠TBS(媒介物)、抗激活素A(5mg/kg)或ActRIIA/B-mFc(10mg/kg)。给药后二十四小时对全血进行取样,并且使用兽医学血液学分析仪(Hematrue)确定血小板计数。数据表示为平均值±SEM。使用单因素ANOVA进行统计分析,**p<0.01,***p<0.001。
图9为表明在骨髓纤维化的TPO高模型中血小板数目和血小板体积增加并且用ActRIIA/B-mFc处理使血小板的扩增减少的一系列图。为七周龄C57Bl/6白化小鼠(B6(Cg)-Tyr,Jackson Laboratory)尾部静脉注射克隆至pLEV113质粒(Lake Pharma)中的0.75mg/kg促血小板生成素(TPO)表达质粒。以流体动力学方法进行注射,其中在短时间段(6-10秒)内注射100ml/kg的体积。在TPO注射之后第3天,将小鼠分成2组,每周两次经由腹膜内注射接受媒介物(TBS)或ActRIIA/B-mFc(7.5mg/kg)。在TPO注射之后第14天将小鼠处死。通过使用Heska Element HT5兽医学血液学分析仪测量对血液学参数进行分析。N=10-12个小鼠/组。结果表示为平均值±SEM。通过单因素ANOVA进行统计分析。****=p<0.0001。
图10为表明ActRIIA/B-mFc改善TPO诱导的贫血的一系列图。骨髓纤维化的TPO高模型在TPO表达14天之后为贫血的并且展现减少的红血细胞、血红蛋白、红细胞压积以及平均红细胞血红蛋白浓度。用ActRIIA/B-mFc处理与RBC度量显著改善相关并且在此模型中似乎减少贫血的发展。N=10-12个小鼠/组。结果表示为平均值±SEM。通过单因素ANOVA进行统计分析。**=p<0.01;***=p<0.001;****=p<0.0001。
图11为表明ActRIIA/B-mFc减少TPO诱导的脾骨髓外造血作用的图。在骨髓纤维化的TPO高模型中,巨核细胞生长和增殖的扩大使骨髓造血的能力降低,从而诱导肝脏和脾脏中的补偿性骨髓外造血作用。这些数据表明,在用ActRIIA/B-mFc处理的小鼠中脾肿大显著减轻,指示减少的脾骨髓外造血作用,这可能是归因于对此补偿过程的需要减少。N=10-12个小鼠/组。结果表示为平均值±SEM。通过单因素ANOVA进行统计分析。*=p<0.05;****=p<0.0001。
图12为表明ActRIIA/B-mFc使TPO介导的白血细胞和淋巴细胞的增加减少的一系列图。骨髓纤维化的TPO高模型展现白血细胞、嗜中性粒细胞以及淋巴细胞的增加。用ActRIIA/B-mFc处理使TPO高小鼠中白血细胞和淋巴细胞的增加减少。N=10-12个小鼠/组。结果表示为平均值±SEM。通过单因素ANOVA进行统计分析。***=p<0.001;****=p<0.0001。
图13A至图13C为表明用ActRIIA/B-hFc处理使得人受试者中的输注负荷降低、红细胞生成增加并且血小板计数增加(n=5,输血反应者,TR)的一系列图。图13A示出了8周内观测到的最大输注负荷降低。图13B至图13C示出了观测到的网织红细胞变化(图13B)以及观测到的血小板变化(图13C)。
图14为示出在用ActRIIA/B-hFc对队列1、2、3以及4进行处理期间所发生的频率≥10%的处理紧急有害事件的图。
图15为示出在队列1、2以及3中基线输注需求为≥2个RBC单位的受试者中用ActRIIA/B-hFc处理对八周内的最大输注减少的影响的图。
图16A至图16D为表明在RS+与非RS MDS患者中ActRIIA/B-hFc处理展现红细胞生成和血小板生成改善的一系列图。在实现HI-E或TI终点的患者中观测到网织红细胞增加、血清可溶性转铁蛋白受体(sTfR)增加以及血清铁蛋白减少(图16A至图16C)。在实现HI-E或TI终点的患者中还观测到血小板持续增加(图16D)。箭头指示ActRIIA/B-hFc剂量。
图17为示出在队列1、2、3以及4中基线输注需求为≥2个RBC单位的受试者中用ActRIIA/B-hFc处理对八周内的最大输注减少的影响的图。
图18A至图18D为表明在队列1、2、3以及4中的患者中ActRIIA/B-hFc处理展现红细胞生成和血小板生成改善的一系列图。在实现HI-E或TI终点的患者中观测到网织红细胞增加、血清可溶性转铁蛋白受体(sTfR)增加以及血清铁蛋白减少(图18A至图18C)。在实现HI-E或TI终点的患者中还观测到血小板持续增加(图18D)。箭头指示ActRIIA/B-hFc剂量。
图19为示出在用ActRIIA/B-hFc对队列1-5进行处理期间发生的频率≥10%的处理紧急有害事件的图。
图20为示出在队列1-5中基线输注需要为≥2个RBC单位的受试者中用ActRIIA/B-hFc处理对八周内的最大输注负荷降低的影响的图。在输注依赖性非RS和RS+MDS患者中,用ActRIIA/B-hFc处理引起HI-E和TI。
图21为表明在用ActRIIA/B-hFc处理的实现HI-E或TI的HTB患者中观测到血小板持续增加的图。箭头指示ActRIIA/B-hFc剂量。
图22为示出用ActRIIA/B-hFc处理对HTB患者中的网织红细胞的影响的图。箭头指示ActRIIA/B-hFc剂量。
图23为示出用ActRIIA/B-hFc处理对HTB患者中的可溶性转铁蛋白受体(sTfR)和铁蛋白的影响的图。
图24为示出在头八周的处理期间用ActRIIA/B-hFc处理对红细胞生成的标记物的影响的一系列图。在网织红细胞(顶部)和血红蛋白(底部)中观测到剂量依赖性增加。各图上从左至右示出剂量:0.75mg/kg、1.5mg/kg、2.5mg/kg、3.75mg/kg以及5.0mg/kg。
图25A至图25B为示出来自未处理的小鼠的巨核细胞前体细胞中的TGF-β受体和配体的表达的一系列图。鼠骨髓巨核细胞前体表达激活素、GDF、BMP以及TGF-β配体(图25B)以及其同源受体(图25A)。与ActRIIA/B-mFc直接相关的受体和配体为粗体。ND,未检出。
具体实施方式
本发明提供了用于治疗与骨髓发育异常综合征、CMML或骨髓纤维化相关的血细胞减少症(例如贫血、血小板减少症或嗜中性粒细胞减少症)的方法中并且用于治疗患有骨髓纤维化的受试者的骨髓纤维化和减轻其骨质硬化、肝脾肿大或脾肿大以及骨髓纤维化的ActRII信号传导抑制剂。ActRII信号传导抑制剂可为结合至ActRII配体的抗体、抗ActRII抗体或ActRII配体阱,诸如包括细胞外激活素受体IIA型(ActRIIA)变体的ActRII配体阱。在一些实施方案中,ActRIIA配体阱包括融合至一个部分(例如Fc结构域单体、Fc结构域、白蛋白结合肽、纤连蛋白结构域或人血清白蛋白)的细胞外ActRIIA包括融合至Fc结构域单体的细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱还可通过两个Fc结构域单体之间的相互作用形成二聚体(例如均二聚体或异二聚体)。与激活素和肌生成抑制素相比,本文所描述的细胞外ActRIIA变体与骨形态发生蛋白9(BMP9)具有弱结合亲和力或没有结合亲和力。本文所描述的ActRII信号传导抑制剂(诸如包括本文所描述的细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体)可通过增加红血细胞计数、血红蛋白水平、红细胞压积、网织红细胞、红血细胞产生、原成红细胞数目、红系祖细胞成熟和/或分化(例如早期或晚期(例如终末期)红系祖细胞成熟和/或分化为原成红细胞、网织红细胞或红血细胞)、晚期前体(红系前体)成熟(例如终末成熟,诸如网织红细胞成熟为红血细胞或成红细胞成熟为网织红细胞和/或红血细胞),通过将早期祖细胞招募至红系谱系中,通过减少红血细胞祖细胞的累积(例如通过刺激祖细胞进展至成熟),通过增加早期红系前体和/或祖细胞的数目(例如通过扩增早期前体和/或祖细胞群体来提供前体的连续供应以补充多色成红细胞并且允许连续供应成熟网织红细胞),通过促进红系前体和/或祖细胞通过红细胞生成发生进展,通过增加血小板水平(例如血小板计数、巨核细胞分化和/或成熟、巨核细胞祖细胞更新和/或血小板产生),减少血小板祖细胞的累积(例如通过刺激祖细胞进展至成熟),增加嗜中性粒细胞水平(例如嗜中性粒细胞计数,例如嗜中性粒细胞产生)或祖细胞(例如骨髓样祖细胞、成髓细胞或髓细胞)分化和/或成熟为嗜中性粒细胞和/或通过降低输注负荷或促成输注非依赖性来治疗MDS相关或骨髓纤维化相关血细胞减少症。
ActRII信号传导
激活素II型受体为调节转化生长因子β(TGF-β)超家族中配体的信号的单跨膜结构域受体。TGF-β超家族中的配体参与许多生理学过程,诸如肌肉生长、血管生长、细胞分化、稳态以及骨生成。TGF-β超家族中的配体的实例包括例如激活素A、激活素B、抑制素、生长分化因子(GDF)(例如GDF8,也称为肌生成抑制素,以及GDF11)以及骨形态发生蛋白(BMP)(例如BMP9)。
TGF-β信号传导路径调控造血作用,涉及激活素的信号传导路径阻止红血细胞、血小板以及嗜中性粒细胞祖细胞分化以维持祖细胞呈静止状态,并且涉及BMP的信号传导路径促使祖细胞分化。此过程的稳态对确保血液中适当补充所有细胞类型(包括红细胞、白细胞以及血小板)必不可少。相关地,激活素受体配体GDF11被认为在溶血性贫血的小鼠模型中过表达并且与红血细胞产生不足相关。这些数据表明,通过内源性激活素受体的信号传导因激活素受体配体(例如激活素A、激活素B、肌生成抑制素)的表达增加或激活素受体本身的表达增加而增加可破坏造血作用。因此,可使用减少或抑制激活素A、激活素B和/或肌生成抑制素信号传导的方法来促进造血作用并且治疗涉及无效造血的疾病和疾患,诸如与骨髓发育异常综合征或骨髓纤维化相关的血细胞减少症(例如贫血、血小板减少症或嗜中性粒细胞减少症)。
ActRII信号传导抑制剂
ActRII信号传导抑制剂为通过结合至配体或受体来减少或阻止ActRII配体与ActRIIA和/或ActRIIB的相互作用的剂。本文以下提供了用于本文所描述的方法中的ActRII信号传导抑制剂。
在一些实施方案中,ActRII信号传导抑制剂为激活素A抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中,激活素A抗体为加托索单抗(也称为REGN-2477)。可用于本文所描述的方法中的其他激活素A抗体包括国际专利申请公布号WO2015017576、WO2013074557以及WO2008031061;美国专利申请号US2015/0359850;以及美国专利号9,718,881、10,526,403、8,309,082、8,753,627以及10,100,109中所描述的那些激活素A抗体,这些专利中的每一者以引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中,激活素A抗体或其抗原结合片段具有表1中所列的重链可变区(HCVR)和轻链可变区(LCVR)(例如来自表1的同一行的HCVR和LCVR)。在一些实施方案中,激活素A抗体或其抗原结合片段包括与表1中的HCVR序列(诸如SEQ ID NO:138、140、142、143、144、146、148、150、151、172以及174中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的HCVR序列以及与表1中的LCVR序列(诸如SEQ ID NO:139、141、145、147、149、173以及175中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的LCVR序列。在一些实施方案中,激活素A抗体或其抗原结合片段除轻链CDR1、CDR2以及CDR3以及重链CDR1、CDR2以及CDR3外还具有与表1中所列的HCVR和LCVR序列具有至少90%序列同一性(例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、95%、95%、97%、98%、99%或更大的序列同一性)的HCVR和LCVR序列。在一些实施方案中,激活素A抗体或其抗原结合片段具有表1中的HCVR序列和LCVR序列的轻链CDR1、CDR2以及CDR3以及重链CDR1、CDR2以及CDR3序列。在一些实施方案中,激活素A抗体或其抗原结合片段包括来自表1的同一行的HCVR序列和LCVR序列。
表1.激活素A抗体的示例性HCVR和LCVR序列
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在一些实施方案中,激活素A抗体或其抗原结合片段具有表2中所描述的CDR序列(即,轻链CDR1、CDR2以及CDR3以及重链CDR1、CDR2以及CDR3)。在一些实施方案中,激活素A抗体或其抗原结合片段包括与表2中的轻链可变CDR1序列(诸如SEQ ID NO:155、161、179以及185中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的轻链可变CDR1序列;与表2中的轻链可变CDR2序列(诸如SEQ IDNO:156、162、180以及186中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的轻链可变CDR2序列;与表2中的轻链可变CDR3序列(诸如SEQ ID NO:157、163、181以及187中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的轻链可变CDR3序列;与表2中的重链可变CDR1序列(诸如SEQ ID NO:152、158、176以及182中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的重链可变CDR1序列;与表2中的重链可变CDR2序列(诸如SEQ ID NO:153、159、177以及183中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大)序列同一性的重链可变CDR2序列;以及与表2中的重链可变CDR3序列(诸如SEQID NO:154、160、178以及184中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大)序列同一性的重链可变CDR3序列。在一些实施方案中,激活素A抗体或其抗原结合片段包括来自表2的同一行的轻链CDR1、CDR2以及CDR3序列以及重链CDR1、CDR2以及CDR3序列。
表2.激活素A抗体的示例性CDR序列
在一些实施方案中,ActRII信号传导抑制剂为肌生成抑制素抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中,肌生成抑制素抗体为多马珠单抗(也称为PF-06252616)、兰洛珠单抗(也称为LY2495655)、曲戈卢单抗(也称为REGN-1033),或SRK-015。可用于本文所描述的方法中的其他肌生成抑制素抗体包括国际专利申请公布号WO2007047112、WO2007044411、WO2006116269、WO2012024242、WO2016073853、WO2013186719、WO2009058346、WO2011150008、WO2016168613、WO2007024535、以及WO2016098357、美国专利申请号US20070178095和US20210246198;以及美国专利号10,000,560、10,738,111、7,632,499、8,066,995、7,635,760、7,745,583、7,745,583、7,807,159、8,999,343、10,307,480、8,992,913、9,751,937、9,409,981、9,850,301、8,840,894、9,890,212、9,260,515、10,934,349、8,871,209、10,400,036、7,888,486以及8,372,625中所描述的那些肌生成抑制素抗体,这些专利中的每一者以引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中,肌生成抑制素抗体或其抗原结合片段具有表3中所列的HCVR和LCVR(例如来自表3的同一行的HCVR和LCVR)。在一些实施方案中,肌生成抑制素抗体或其抗原结合片段包括与表3中的HCVR序列(诸如SEQ ID NO:164、188、201、204-210、222-228、234、250、252、254、256、258、260、262、264、266、268、270、272、298、306、308、310、312、314、316、318、320、356、371、373、387、389、391、405、407、409、411、413、415、417、419、421-423、425、427、429、431、433、435、437、439、441、444、446以及448-476中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的HCVR序列,以及与表3中的LCVR序列(诸如SEQ ID NO:165、189、202、203、221、229-233、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、299、307、309、311、313、315、317、319、321、358、372、374、388、390、392、406、408、410、412、414、416、418、420、424、426、428、430、432、434、436、438、440、442、443、445、447以及477-486中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的LCVR序列。在一些实施方案中,肌生成抑制素抗体或其抗原结合片段除轻链CDR1、CDR2以及CDR3以及重链CDR1、CDR2以及CDR3外还具有与表3中所列的HCVR和LCVR序列具有至少90%序列同一性(例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、95%、97%、98%、99%或更大的序列同一性)的HCVR和LCVR序列。在一些实施方案中,肌生成抑制素抗体或其抗原结合片段具有表3中的HCVR序列和LCVR序列的轻链CDR1、CDR2以及CDR3以及重链CDR1、CDR2以及CDR3序列。在一些实施方案中,肌生成抑制素抗体或其抗原结合片段包括来自表3的同一行的HCVR序列和LCVR序列。在一些实施方案中,肌生成抑制素抗体或其抗原结合片段包括SEQ ID NO:448-476中的任一者的HCVR序列以及SEQ ID NO:477-486中的任一者的LCVR序列。
表3.肌生成抑制素抗体的示例性HCVR和LCVR序列
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在一些实施方案中,肌生成抑制素抗体或其抗原结合片段具有表4、表5或表6中所描述的CDR序列(即,轻链CDR1、CDR2以及CDR3以及重链CDR1、CDR2以及CDR3)。在一些实施方案中,肌生成抑制素抗体或其抗原结合片段包括与表4或表6中的轻链可变CDR1序列(诸如SEQ ID NO:169、193、198、238、241、303、325、330、362、378、384、396、402、826、490、493以及343-346中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的轻链可变CDR1序列;与表4或表6中的轻链可变CDR2序列(诸如SEQ ID NO:170、194、199、239、304、326、331、363、379、385、397、403、827、491以及347-349中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的轻链可变CDR2序列;与表4或表6中的轻链可变CDR3序列(诸如SEQ ID NO:171、195、200、240、245、249、305、327、364、380、386、398、404、829、492以及350-355中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的轻链可变CDR3序列;与表4或表5中的重链可变CDR1序列(诸如SEQ ID NO:166、190 196、235、242、246、300、322、328、359、366、375、381、393、399、823、487以及332-334中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的重链可变CDR1序列;与表4或表5中的重链可变CDR2序列(诸如SEQ ID NO:167、191、197、236、243、247、301、323、329、360、365、376、382、394、400、824、488、335以及336中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大)序列同一性的重链可变CDR2序列;以及与表4或表5中的重链可变CDR3序列(诸如SEQ ID NO:168、192、237、244、248、302、324、361、377、383、395、401、825、489以及337-342中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大)序列同一性的重链可变CDR3序列。在一些实施方案中,肌生成抑制素抗体或其抗原结合片段包括来自表4的同一行的轻链CDR1、CDR2以及CDR3序列以及重链CDR1、CDR2以及CDR3序列。
表4.肌生成抑制素抗体的示例性CDR序列
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表5.肌生成抑制素抗体的示例性重链CDR序列
表6.肌生成抑制素抗体的示例性轻链CDR序列
在一些实施方案中,肌生成抑制素抗体或其抗原结合片段具有与表7中提供的重链和轻链序列具有至少90%序列同一性(例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、95%、97%、98%、99%或100%序列同一性)的重链和轻链序列。在一些实施方案中,肌生成抑制素抗体或其抗原结合片段具有来自表7的同一行的重链和轻链序列。在一些实施方案中,重链和轻链具有SEQ ID NO:274和275;276和277;278和279;280和281;282和283;284和285;286和287;288和289;290和291;292和293;294和295;296和297;367和368;或369和370的序列(例如重链与各配对中的第一序列编号的序列具有至少90%序列同一性(例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、95%、97%、98%、99%或100%序列同一性)并且轻链与各配对中的第二序列编号的序列具有至少90%序列同一性(例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、95%、97%、98%、99%或100%序列同一性))。
表7.肌生成抑制素抗体的示例性重链和轻链序列
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在一些实施方案中,肌生成抑制素抗体为还结合至激活素A的双特异性抗体。可用于本文所描述的方法中的示例性双特异性肌生成抑制素抗体包括美国专利号9,718,881、10,526,403、10,400,036以及8,871,209中所描述的那些双特异性肌生成抑制素抗体,这些专利的公开内容以引用的方式并入本文中。在一些实施方案中,双特异性抗体包括来自表1的激活素A HCVR和LCVR(例如与表1中的HCVR序列(诸如SEQ ID NO:138、140、142、143、144、146、148、150、151、172以及174中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的HCVR序列,以及与表1中的LCVR序列(诸如SEQ ID NO:139、141、145、147、149、173以及175中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的LCVR序列)以及来自表3的肌生成抑制素HCVR和LCVR(例如与表3中的HCVR序列(诸如SEQ ID NO:164、188、201、204-210、222-228、234、250、252、254、256、258、260、262、264、266、268、270、272、298、306、308、310、312、314、316、318、320、356、371、373、387、389、391、405、407、409、411、413、415、417、419、421-423、425、427、429、431、433、435、437、439、441、444、446以及448-476中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的HCVR序列以及与表3中的LCVR序列(诸如SEQ ID NO:165、189、202、203、221、229-233、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、299、307、309、311、313、315、317、319、321、358、372、374、388、390、392、406、408、410、412、414、416、418、420、424、426、428、430、432、434、436、438、440、442、443、445、447以及477-486中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的LCVR序列)。在一些实施方案中,双特异性抗体包括来自表2的激活素A重链CDR1、CDR2以及CDR3以及轻链CDR1、CDR2以及CDR3(例如来自表2的同一行的激活素A重链CDR1、CDR2以及CDR3以及轻链CDR1、CDR2以及CDR3)以及来自表4的肌生成抑制素重链CDR1、CDR2以及CDR3以及轻链CDR1、CDR2以及CDR3(例如来自表4的同一行的肌生成抑制素重链CDR1、CDR2以及CDR3以及轻链CDR1、CDR2以及CDR3)。在一些实施方案中,双特异性抗体包括SEQ ID NO:138的激活素AHCVR和SEQ ID NO:139的LCVR以及SEQ ID NO:164的肌生成抑制素HCVR和SEQ ID NO:165的LCVR。在一些实施方案中,双特异性抗体包括SEQ ID NO:138的激活素A HCVR和SEQ ID NO:139的LCVR以及SEQ ID NO:387的肌生成抑制素HCVR和SEQ ID NO:388的LCVR。在一些实施方案中,双特异性抗体包括SEQ ID NO:138的激活素AHCVR和SEQ ID NO:139的LCVR以及SEQ ID NO:391的肌生成抑制素HCVR和SEQ ID NO:392的LCVR。在一些实施方案中,双特异性抗体包括SEQ ID NO:144的激活素A HCVR和SEQ ID NO:145的LCVR以及SEQ ID NO:164的肌生成抑制素HCVR和SEQ ID NO:165的LCVR。在一些实施方案中,双特异性抗体包括SEQ ID NO:144的激活素A HCVR和SEQ ID NO:145的LCVR以及SEQ ID NO:387的肌生成抑制素HCVR和SEQ ID NO:388的LCVR。在一些实施方案中,双特异性抗体包括SEQ ID NO:144的激活素AHCVR和SEQ ID NO:145的LCVR以及SEQ ID NO:391的肌生成抑制素HCVR和SEQ ID NO:392的LCVR。在一些实施方案中,双特异性抗体包括SEQ IDNO:152-157的激活素A重链CDR1、CDR2以及CDR3以及轻链CDR1、CDR2以及CDR3以及SEQ IDNO:166-171的肌生成抑制素重链CDR1、CDR2以及CDR3以及轻链CDR1、CDR2以及CDR3。在一些实施方案中,双特异性抗体包括SEQ ID NO:158-163的激活素A重链CDR1、CDR2以及CDR3以及轻链CDR1、CDR2以及CDR3以及SEQ ID NO:166-171的肌生成抑制素重链CDR1、CDR2以及CDR3以及轻链CDR1、CDR2以及CDR3。
在一些实施方案中,ActRII信号传导抑制剂为激活素B抗体或其抗原结合片段。可用于本文所描述的方法中的激活素B抗体包括美国专利号8,383,351中所描述的那些激活素B抗体,所述专利以引用的方式并入本文中。在一些实施方案中,激活素B抗体或其抗原结合片段具有包括来自SEQ ID NO:494的HCVR序列的三个CDR的HCVR以及包括来自SEQ IDNO:495的LCVR序列的三个CDR的LCVR。在一些实施方案中,激活素B抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:494具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的HCVR。在一些实施方案中,激活素B抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:495具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的LCVR。
在一些实施方案中,ActRII信号传导抑制剂为GDF-11抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中,ActRII信号传导抑制剂为ActRII抗体或其抗原结合片段。现有两种类型的激活素II型受体:ActRIIA和ActRIIB。在一些实施方案中,ActRII抗体为ActRIIA抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中,ActRII抗体为ActRIIB抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中,ActRII抗体或其抗原结合片段结合至ActRIIA与ActRIIB两者。在一些实施方案中,ActRII抗体为比马鲁单抗(也称为BYM338)、CSJ089、CQI876或CDD861(Morvan等,PNAS114:12448-12453(2017)中所描述)。可用于本文所描述的方法中的其他ActRII抗体包括国际专利申请公布号WO2010125003、WO2012064771、WO2017156488、WO2013063536、WO2018175460、WO2021044287、WO2013188448以及WO2020243448;美国专利申请号US20180066061、US20180230221、US20180111991、US20200181271、US 20210309749以及US20160200818;以及美国专利号9,453,080、10,266,598、10,981,999、10,266,598、10,981,999、10,307,455、11,000,565、10,982,000、9,969,806、9,365,651、8,388,968、8,551,482、9,493,556、8,765,385以及9,624,301中所描述的那些ActRII抗体,这些专利中的每一者以引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中,ActRII抗体或其抗原结合片段具有表8中所列的HCVR和LCVR(例如来自表8的同一行的HCVR和LCVR)。在一些实施方案中,ActRII抗体或其抗原结合片段包括与表8中的HCVR序列(诸如SEQ ID NO:512、514、516、518、520、522、524、526、528、530、532、534、536、538、583、591、593、595-598、600、602、603、605、606、608、610-614、687、689、692、695以及697中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的HCVR序列以及与表8中的LCVR序列(诸如SEQ IDNO:513、515、517、519、521、523、525、527、529、531、533、535、537、539、584、592、594、601、604、607、609、615、688、690、691、693、694、696以及698中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的LCVR序列。在一些实施方案中,ActRII抗体或其抗原结合片段除轻链CDR1、CDR2以及CDR3以及重链CDR1、CDR2以及CDR3外还具有与表8中所列的HCVR和LCVR序列具有至少90%序列同一性(例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、95%、95%、97%、98%、99%或更大的序列同一性)的HCVR和LCVR序列。在一些实施方案中,ActRII抗体或其抗原结合片段具有表8中的HCVR序列和LCVR序列的轻链CDR1、CDR2以及CDR3以及重链CDR1、CDR2以及CDR3序列。在一些实施方案中,ActRII抗体或其抗原结合片段包括来自表8的同一行的HCVR序列和LCVR序列。
表8.ActRII抗体的示例性HCVR和LCVR序列
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在一些实施方案中,ActRII抗体或其抗原结合片段具有表9中所描述的CDR序列(即,轻链CDR1、CDR2以及CDR3以及重链CDR1、CDR2以及CDR3)。在一些实施方案中,ActRII抗体或其抗原结合片段包括与表9中的轻链可变CDR1序列(诸如SEQ ID NO:499、505、543、580、588、619、625、633、640、648、654、663、684、702、705、711、714、720以及726中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的轻链可变CDR1序列;与表9中的轻链可变CDR2序列(诸如SEQ ID NO:500、506、544、581、589、620、626、634、641、649、655、664、685、703、706、712、715、721以及727中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的轻链可变CDR2序列;与表9中的轻链可变CDR3序列(诸如SEQ ID NO:501、507、545、547、548、549、582、590、621、627、635、635、642、650、656、665、686、704、707、713、716、722以及728中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的轻链可变CDR3序列;与表9中的重链可变CDR1序列(诸如SEQ IDNO:496、502、540、577、585、616、622、629、630、638、644、651、659、660、669-672、679-681、699、708、717以及723中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)序列同一性的重链可变CDR1序列;与表9中的重链可变CDR2序列(诸如SEQ ID NO:497、503、541、546、550-556、578、586、617、623、628、631、637、643、646、652、658、661、666、667、668、676、677、678、682、700、709、718以及724中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大)序列同一性的重链可变CDR2序列;以及与表9中的重链可变CDR3序列(诸如SEQ ID NO:498、504、542、579、587、618、624、632、636、639、647、653、657、662、673、674、675、683、701、710、719以及725中的任一者)具有至少90%(例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大)序列同一性的重链可变CDR3序列。在一些实施方案中,ActRII抗体或其抗原结合片段包括来自表9的同一行的轻链CDR1、CDR2以及CDR3序列以及重链CDR1、CDR2以及CDR3序列。
表9.ActRII抗体的示例性CDR序列
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在一些实施方案中,ActRII抗体或其抗原结合片段具有与表10中提供的重链和轻链序列具有至少90%序列同一性(例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、95%、97%、98%、99%或100%序列同一性)的重链和轻链序列。在一些实施方案中,ActRII抗体或其抗原结合片段具有来自表10的同一行的重链和轻链序列。在一些实施方案中,重链和轻链具有SEQ ID NO:508和509;510和511;557和558;559和560;561和562;563和564;565和566;567和568;569和570;571和572;573和574;或575和576的序列(例如重链与各配对中的第一序列编号的序列具有至少90%序列同一性(例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、95%、97%、98%、99%或100%序列同一性)并且轻链与各配对中的第二序列编号的序列具有至少90%序列同一性(例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、95%、97%、98%、99%或100%序列同一性))。
表10.ActRII抗体的示例性重链和轻链序列
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在一些实施方案中,ActRII信号传导抑制剂为ActRII配体阱。ActRII配体阱为含有能够结合至一个或多个ActRII配体(例如激活素A、激活素B、肌生成抑制素或GDF11)的ActRIIA和/或ActRIIB的细胞外部分的多肽。ActRIIA和/或ActRIIB的细胞外部分可借助于接头融合至一个部分(例如Fc结构域、Fc结构域单体、白蛋白结合肽、纤连蛋白结构域或人血清白蛋白)。ActRII配体阱可减少或抑制ActRII配体与内源性激活素II型受体的结合,从而减少ActRII信号传导。因为ActRII配体阱含有受体的细胞外部分,故它们将为可溶性的并且能够结合至并且螯合配体(例如激活素A和B、肌生成抑制素、GDF11)而不活化细胞内信号传导路径。
在一些实施方案中,ActRII配体阱为ActRIIA配体阱。ActRIIA配体阱可含有野生型ActRIIA(例如人或鼠ActRIIA)的细胞外部分或可含有相对于野生型人细胞外ActRIIA含有一个或多个氨基酸取代的野生型ActRIIA的细胞外部分。人ActRIIA的细胞外部分的野生型氨基酸序列显示如下。
人ActRIIA细胞外部分(SEQ ID NO:73):
ActRIIA配体阱可含有SEQ ID NO:73的序列或其含有一个或多个氨基酸取代的变体。在一些实施方案中,ActRIIA配体阱含有SEQ ID NO:73的一部分(例如通过从N端、C端或两端去除氨基酸而缩短的连续部分)或其含有一个或多个氨基酸取代的变体。在一些实施方案中,ActRIIA配体阱含有SEQ ID NO:73的序列或其在C端具有来自ActRIIA的野生型序列(SEQ ID NO:75)的其他氨基酸的部分。可包括在ActRIIA配体阱中的在N端缩短并且在C端包括来自SEQ ID NO:75的其他氨基酸的野生型ActRIIA蛋白的一部分的示例性序列提供如下:
研究已表明BMP9以比ActRIIA高约300倍的结合亲和力结合ActRIIB(参见例如Townson等,J.Biol.Chem.287:27313,2012)。与ActRIIB-Fc相比,已知ActRIIA-Fc具有更长的半衰期。本文以下描述了含有细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱,所述细胞外ActRIIA变体通过将ActRIIB的氨基酸残基引入ActRIIA中来构建,目标为赋予ActRIIB所赋予的生理特性,同时还维持ActRIIA的有益生理和药代动力学特性。最佳肽促进造血(例如增加红血细胞计数、血红蛋白水平、红细胞压积、网织红细胞、血小板水平(例如血小板计数)和/或嗜中性粒细胞水平(例如嗜中性粒细胞计数)),同时保留对BMP9的弱结合亲和力以及例如作为Fc融合蛋白的较长血清半衰期。与野生型ActRIIA相比,优选ActRIIA变体还展现类似或改善的与激活素和/或肌生成抑制素的结合,这允许它们与内源性激活素受体竞争配体结合并且减少或抑制内源性激活素受体信号传导。可使用这些变体通过增加血红蛋白水平、红细胞压积、红血细胞计数(例如增加红血细胞产生和/或红细胞质量或体积)或红系祖细胞成熟和/或分化(例如早期或晚期(例如终末期)红系祖细胞成熟和/或分化为原成红细胞、网织红细胞或红血细胞),减少红血细胞祖细胞的累积(例如通过刺激祖细胞进展至成熟),增加晚期前体(红系前体)成熟(例如终末成熟,诸如网织红细胞成熟为红血细胞,或成红细胞成熟为网织红细胞和/或红血细胞),将早期祖细胞招募至红系谱系中,增加早期红系前体和/或祖细胞的数目,促进红系前体和/或祖细胞通过红细胞生成发生进展(例如通过红细胞生成路径发生进展),增加原成红细胞,增加网织红细胞,增加血小板水平(例如增加血小板计数、巨核细胞分化和/或成熟、巨核细胞祖细胞更新和/或血小板产生),减少血小板祖细胞的累积(例如通过刺激祖细胞进展至成熟),增加嗜中性粒细胞水平(例如增加嗜中性粒细胞计数,例如增加嗜中性粒细胞产生)和/或增加祖细胞(例如骨髓样祖细胞、成髓细胞或髓细胞)分化和/或成熟为嗜中性粒细胞来治疗与骨髓发育异常综合征或骨髓纤维化相关的血细胞减少症(例如贫血、血小板减少症和/或嗜中性粒细胞减少症)。在一些实施方案中,可将氨基酸取代引入细胞外ActRIIA变体以降低或去除变体与BMP9的结合亲和力。
本文所描述的ActRIIA配体阱可包括细胞外ActRIIA变体,所述细胞外ActRIIA变体相对于具有SEQ ID NO:73的序列的野生型细胞外ActRIIA具有至少一个氨基酸取代。可在27个不同位置向细胞外ActRIIA变体引入可能的氨基酸取代(表11)。在一些实施方案中,细胞外ActRIIA变体可与野生型细胞外ActRIIA的序列(SEQ ID NO:73)具有至少85%(例如至少85%、87%、90%、92%、95%、97%或更大)的氨基酸序列同一性。细胞外ActRIIA变体可相对野生型细胞外ActRIIA的序列(SEQ ID NO:73)具有一个或多个(例如1-27、1-25、1-23、1-21、1-19、1-17、1-15、1-13、1-11、1-9、1-7、1-5、1-3或1-2;例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26或27个)氨基酸取代。在一些实施方案中,细胞外ActRIIA变体(例如具有SEQ ID NO:1的序列的细胞外ActRIIA变体)可包括如表11中所列的所有27个位置的氨基酸取代。在一些实施方案中,细胞外ActRIIA变体可包括在许多位置的氨基酸取代,例如在如表11中所列的27个位置中的2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26个位置的氨基酸取代。
氨基酸取代可使本发明的ActRIIA变体的活性和/或结合亲和力变糟或改善。为了维持多肽功能,保留表11和表12中所示的序列中(SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72))位置X17的赖氨酸(K)是重要的。所述位置的取代可引起活性损失。举例来说,具有序列GAILGRSETQECLFYNANWELERTNQTGVERCEGEKDKRLHCYATWRNISGSIEIVAKGCWLDDFNCYDRTDCVETEENPQVYFCCCEGNMCNEKFSYFPEMEVTQPTS(SEQ ID NO:85)的ActRIIA变体具有降低的体内活性,表明在丙氨酸(A)取代X17处的赖氨酸(K)为不容许的。因此,本发明的ActRIIA变体,包括表11和表12中的变体(例如SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72),保留在位置X17的氨基酸K。
本发明的ActRIIA变体优选具有减少的、弱的与BMP9的结合或大体上没有与BMP9的结合。在X23、X24、X25以及X26位置含有氨基酸序列TEEN(SEQ ID NO:76)的ActRIIA变体中以及在位置X24维持氨基酸K并且在位置X23、X24、X25以及X26具有氨基酸序列TKEN(SEQ ID NO:77)的变体中BMP9结合减少(例如与野生型ActRIIA相比减少)。在本发明的ActRIIA变体(例如表11和表12中的变体,例如SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72))中,序列TEEN(SEQID NO:76)和TKEN(SEQ ID NO:77)可互换使用以提供减少的BMP9结合。
本发明的ActRIIA变体可还包括C端延伸(例如在C端的其他氨基酸)。C端延伸可在C端向表11和表12中所示的变体中的任一者(例如SEQ ID NO:1-70(例如SEQ ID NO:6-70))中添加一个或多个其他氨基酸(例如1、2、3、4、5、6或更多个其他氨基酸)。C端延伸可对应于来自野生型ActRIIA中相同位置的序列。可包括在本发明的ActRIIA变体中的一种潜在C端延伸为氨基酸序列NP。举例来说,包括C端延伸NP的序列为SEQ ID NO:71(例如具有NP的C端延伸的SEQ ID NO:69)。可包括在本发明的ActRIIA变体中的另一示例性C端延伸为氨基酸序列NPVTPK(SEQ ID NO:78)。举例来说,包括C端延伸NPVTPK(SEQ ID NO:78)的序列为SEQID NO:72(例如具有NPVTPK(SEQ ID NO:78)的C端延伸的SEQ ID NO:69)。
表11.具有SEQ ID NO:1-5中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体中的氨基酸取代
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在具有SEQ ID NO:1或2的序列的细胞外ActRIIA变体的一些实施方案中,X3为E,X6为R,X11为D,X12为K,X13为R,X16为K或R,X17为K,X19为W,X20为L,X21为D,并且X22为I或F。在具有SEQ ID NO:1的序列的细胞外ActRIIA变体的一些实施方案中,X2为Y;X4为L;X8为E;X9为E;X14为L;X18为K;X23为T;X25为E;X26为N;并且X27为Q。也可在SEQ ID NO:2-5中形成SEQ ID NO:1中的这些取代。在具有SEQ ID NO:1的序列的细胞外ActRIIA变体的一些实施方案中,X1为F或Y;X2为Y;X4为L;X5为D或E;X7为P或R;X8为E;X9为E;X10为K或Q;X14为L;X15为F或Y;X16为K或R;X18为K;X22为I或F;X23为T;X24为K或E;X25为E;X26为N;并且X27为Q。在具有SEQ ID NO:1的序列的细胞外ActRIIA变体的一些实施方案中,X1为F或Y;X2为Y;X3为E;X4为L;X5为D或E;X6为R;X7为P或R;X8为E;X9为E;X10为K或Q;X11为D;X12为K;X13为R;X14为L;X15为F或Y;X16为K或R;X17为K;X18为K;X19为W;X20为L;X21为D;X22为I或F;X23为T;X24为K或E;X25为E;X26为N;并且X27为Q。在具有SEQ ID NO:1或2的序列的细胞外ActRIIA变体的一些实施方案中,X17为K。在具有SEQ ID NO:1-3的序列的细胞外ActRIIA变体的一些实施方案中,X17为K,X23为T,X24为E,X25为E并且X26为N。在具有SEQ ID NO:1-5中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体的一些实施方案中,X17为K,X23为T,X24为K,X25为E并且X26为N。
在一些实施方案中,本文所描述的ActRIIA配体阱包括具有SEQ ID NO:6-72中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体(表12)。
表12.具有SEQ ID NO:6-72的序列的细胞外ActRIIA变体
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在一些实施方案中,包括细胞外ActRIIA变体(例如SEQ ID NO:1-72(例如SEQ IDNO:6-72)中的任一者)的ActRIIA配体阱在X17位置具有氨基酸K。改变在位置X17的氨基酸可使得活性降低。举例来说,具有序列GAILGRSETQECLFYNANWELERTNQTGVERCEGEKDKRLHCYATWRNISGSIEIVAKGCWLDDFNCYDRTDCVETEENPQVYFCCCEGNMCNEKFSYFPEMEVTQPTS(SEQ ID NO:85)的ActRIIA变体具有降低的体内活性,表明A取代在X17处的K为不容许的。
在一些实施方案中,在位置X23、X24、X25以及X26具有序列TEEN(SEQ ID NO:76)的包括细胞外ActRIIA变体(例如SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者)的ActRIIA配体阱可具有氨基酸K对位置X24的氨基酸E的取代。在一些实施方案中,在位置X23、X24、X25以及X26具有序列TKEN(SEQ ID NO:77)的包括细胞外ActRIIA变体(例如SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者)的ActRIIA配体阱可具有氨基酸E对位置X24的氨基酸K的取代。在位置X23、X24、X25以及X26具有序列TEEN(SEQ ID NO:76)或TKEN(SEQ ID NO:77)的ActRIIA变体具有减少的或弱的与BMP9的结合(例如与野生型ActRIIA的BMP9结合相比减少的与BMP9的结合)。
在一些实施方案中,包括细胞外ActRIIA变体(例如SEQ ID NO:1-70(例如SEQ IDNO:6-70)中的任一者)的ActRIIA配体阱可还包括C端延伸(例如在C端的一个或多个其他氨基酸)。C端延伸可对应于来自野生型ActRIIA中相同位置的序列。在一些实施方案中,C端延伸为氨基酸序列NP。举例来说,包括C端延伸NP的序列为SEQ ID NO:71(例如具有NP的C端延伸的SEQ ID NO:69)。在一些实施方案中,C端延伸为氨基酸序列NPVTPK(SEQ ID NO:78)。举例来说,包括C端延伸NPVTPK(SEQ ID NO:78)的序列为SEQ ID NO:72(例如具有NPVTPK(SEQID NO:78)的C端延伸的SEQ ID NO:69)。C端延伸可在C端添加一个或多个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6或更多个其他氨基酸)。
在一些实施方案中,包括细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱还可包括一个部分(例如Fc结构域单体、Fc结构域、白蛋白结合肽、纤连蛋白结构域或人血清白蛋白),所述部分可借助于接头或其他共价键融合至细胞外ActRIIA变体的N端或C端(例如C端)。包括融合至Fc结构域单体的细胞外ActRIIA变体的多肽可通过两个Fc结构域单体之间的相互作用形成二聚体(例如均二聚体或异二聚体),所述两个Fc结构域单体组合形成二聚体中的Fc结构域。
此外,在一些实施方案中,本文所描述的ActRIIA配体阱(例如ActRIIA变体-Fc融合蛋白)在人中具有至少7天的血清半衰期。ActRIIA配体阱可以10pM或更高的KD结合至激活素A。在一些实施方案中,ActRIIA配体阱不结合至BMP9或激活素A。在一些实施方案中,ActRIIA配体阱结合至激活素A、激活素B和/或肌生成抑制素并且展现减少的(例如弱的)与BMP9的结合(例如与野生型ActRIIA的BMP9结合相比减少的BMP9结合)。在一些实施方案中,具有减少的或弱的与BMP9的结合的ActRIIA配体阱在位置X23、X24、X25以及X26具有序列TEEN(SEQ ID NO:76)或TKEN(SEQ ID NO:77)。在一些实施方案中,ActRIIA配体阱大体上不结合至人BMP9。
在一些实施方案中,ActRIIA配体阱可以约800pM或或更小的KD(例如约800、700、600、500、400、300、200、100、90、80、70、60、50、40、30、20、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1pM或或更小的KD,例如约800pM与约200pM之间的KD)结合至人激活素A。在一些实施方案中,ActRIIA配体阱可以800pM或更小的KD(例如约800、700、600、500、400、300、200、100、90、80、70、60、50、40、30、20、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1pM或更小的KD,例如约800pM与约200pM之间的KD)结合至人激活素B。ActRIIA配体阱还可以约5pM或更高的KD(例如约5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195或200pM或更高的KD)结合至生长和分化因子11(GDF-11)。
在一些实施方案中,ActRIIA配体阱为索特西普(也称为ACE-011)。可用于本文所描述的方法中的其他ActRIIA配体阱描述于国际专利申请公布号WO2007062188以及美国专利号7,709,605、9,138,459、7,612,041、8,067,360、8,629,109、9,572,865、9,163,075、10,071,135以及7,951,771中了,这些专利中的每一者以引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中,ActRII配体阱为ActRIIB配体阱。ActRIIB配体阱可含有野生型ActRIIB(例如人或鼠ActRIIB)的细胞外部分或可含有相对于野生型人细胞外ActRIIB含有一个或多个氨基酸取代的野生型ActRIIB的细胞外部分。人ActRIIB的细胞外部分的野生型氨基酸序列显示如下。
人ActRIIB细胞外部分(SEQ ID NO:74):
ActRIIB配体阱可含有SEQ ID NO:74的序列或其含有一个或多个氨基酸取代的变体。在一些实施方案中,ActRIIB配体阱含有SEQ ID NO:74的一部分(例如通过从N端、C端或两端去除氨基酸而缩短的连续部分)或其含有一个或多个氨基酸取代的变体。举例来说,ActRIIB配体阱可包括具有L60D取代的SEQ ID NO:74的序列。在另一实例中,ActRIIB配体阱可包括具有在位置E9的取代(例如E9W、E9A、E9F、E9Q、E9V、E9I、E9L、E9M、E9K、E9H或E9Y取代)、S25T取代和/或R45A取代的SEQ ID NO:74的序列。在一些实施方案中,ActRIIB配体阱为BIIB110(先前称为ALG-801)、ALG-802、罗特西普(也称为ACE-536)、拉马西普(也称为ACE-031)或ACE-2494。可用于本文所描述的方法中的其他ActRIIB配体阱包括国际专利申请公布号WO2010/062383、WO2015/192127、WO2019140283以及WO2021189010;美国专利申请公布号US20110250198和US20200407415;以及美国专利号10,913,782、8,058,229、8,216,997、8,703,927、9,439,945、9,932,379、10,131,700、10,689,427、10,889,626、10,829,532、10,829,533、8,361,957、9,505,813、10,377,996、9,617,319、8,710,016、7,709,605、8,252,900、7,842,663、8,343,933、9,399,669、10,259,861、8,138,142、8,178,488、8,293,881、9,181,533、9,745,559、10,358,633、11,066,654、9,610,327、9,284,364、8,067,562、8,614,292、7,947,646、8,716,459、8,501,678、8,999,917、9,447,165、9,809,638、10,407,487、8,410,043、9,273,114以及10,308,704中所描述的那些ActRIIB配体阱,这些专利中的每一者以引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中,ActRIIB配体阱含有具有表13中所示的SEQ ID NO:730的序列的ActRIIB变体。
表13.具有SEQ ID NO:730的序列的细胞外ActRIIB变体中的氨基酸取代
在一些实施方案中,ActRIIB变体具有SEQ ID NO:731-744中的任一者的序列(表14)。
表14.具有SEQ ID NO:731-744的序列细胞外ActRIIB变体
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在一些实施方案中,细胞外ActRIIB变体具有1-7个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6或7个氨基酸)的N端截短。N端截短可通过从表13和表14中所示的ActRIIB变体中的任一者的N端去除1-7个氨基酸来产生。N端截短可去除直到第一个半胱氨酸之前两个氨基酸的氨基酸(例如截短的ActRIIB变体的N端保留第一个半胱氨酸之前的两个氨基酸(RE))。具有N端截短的其他ActRIIB变体提供如下:
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在一些实施方案中,包括ActRIIB变体的ActRIIB配体阱还可包括一个部分(例如Fc结构域单体、Fc结构域、白蛋白结合肽、纤连蛋白结构域或人血清白蛋白),所述部分可借助于接头或其他共价键融合至细胞外ActRIIB变体的N端或C端(例如C端)。包括融合至Fc结构域单体的细胞外ActRIIB变体的ActRIIB配体阱可通过两个Fc结构域单体之间的相互作用形成二聚体(例如均二聚体或异二聚体),所述两个Fc结构域单体组合形成二聚体中的Fc结构域。
在一些实施方案中,ActRII配体阱为ActRII嵌合体配体阱。ActRII嵌合体配体阱含有细胞外ActRIIA(例如人ActRIIA)和细胞外ActRIIB(例如人ActRIIB)的部分。在一些实施方案中,ActRII嵌合体配体阱含有与细胞外ActRIIA(以上示出的SEQ ID NO:73)的C端部分连接的细胞外ActRIIB(以上示出的SEQ ID NO:74)的N端部分,使得序列连续(例如在ActRIIB序列停止处ActRIIA序列延续,以定位于ActRIIA的对应位置的下一氨基酸开始)。在一些实施方案中,在ActRII嵌合体配体阱中所包括的ActRII嵌合体的N端包括连接至细胞外ActRIIB的第五个氨基酸的存在于细胞外ActRIIA的N端的六个氨基酸。在一些实施方案中,在ActRII嵌合体配体阱中所包括的ActRII嵌合体的N端以位于细胞外ActRIIB的N端的第一个氨基酸开始。在一些实施方案中,ActRII嵌合体配体阱中所包括的ActRII嵌合体的N端包括连接至细胞外ActRIIB的第九个氨基酸的存在于细胞外ActRIIA的N端的头十个氨基酸。ActRII嵌合体配体阱中所包括的细胞外ActRII嵌合体还可包括与野生型细胞外ActRIIB相比在嵌合体中对应于ActRIIB的序列的部分(例如上文所示的SEQ ID NO:74)中的一个或多个氨基酸取代,以及与野生型细胞外ActRIIA相比在嵌合体中对应于ActRIIA的序列的部分(例如上文所示的SEQ ID NO:73)中的一个或多个氨基酸取代。可将9个不同位置的氨基酸取代引入细胞外ActRII嵌合体中(表15)。相对于野生型序列的序列(例如如果嵌合体的部分对应于野生型细胞外ActRIIB的区域,那么相对于野生型细胞外ActRIIB(SEQID NO:74)的序列,或如果嵌合体的部分对应于野生型细胞外ActRIIA的区域,那么相对于野生型细胞外ActRIIA(SEQ ID NO:73)的序列),细胞外ActRII嵌合体可具有一个或多个(例如1、2、3、4、5、6、7、8或9个)氨基酸取代。可形成氨基酸取代的位置以及在这些位置可发生取代的氨基酸列于表15中。可用于本文所描述的方法中的ActRII嵌合体配体阱包括国际专利申请公布号WO2021189019A1中所描述的那些ActRII嵌合体配体阱,所述专利申请公布的公开内容以引用的方式并入本文中。
表15.具有SEQ ID NO:751-771中的任一者的序列的细胞外ActRII嵌合体中的氨基酸取代
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在一些实施方案中,在SEQ ID NO:751-771(表15中所示)的ActRII嵌合体中,X1为D,X2为I、F或E,X3为N或T,X4为A或E,X5为T或K,X6为E或K,X7为E或D,X8为N或S,并且X9为E或Q。在一些实施方案中,在SEQ ID NO:174-216的细胞外ActRII嵌合体中,X1为D,X2为I或F,X3为N,X4为A或E,X5为T或K,X6为E或K,X7为E或D,X8为N或S,并且X9为E或Q。
在一些实施方案中,ActRII嵌合体配体阱含有SEQ ID NO:772-793中的任一者的序列(表16)。
表16.具有SEQ ID NO:772-793的序列的细胞外ActRII嵌合体
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在一些实施方案中,在ActRII嵌合体配体阱中所包括的ActRII嵌合体由来自一种ActRII蛋白(例如ActRIIB)的对应于β-折叠的一个或多个氨基酸序列以及任选地一个或多个间插序列(例如β-折叠之间的序列)取代至其他ActRII蛋白(例如ActRIIA)的对应位置中而产生。举例来说,可通过将ActRIIB中的对应于β-折叠的一个或多个氨基酸序列以及任选地一个或多个间插序列用来自ActRIIA的对应于β-折叠的氨基酸序列以及任选地间插序列置换来产生ActRII嵌合体。还可通过将ActRIIA中的对应于β-折叠的一个或多个氨基酸序列以及任选地一个或多个间插序列用来自ActRIIB的对应于β-折叠的氨基酸序列以及任选地间插序列置换来产生ActRII嵌合体。在ActRII嵌合体中,来自一种蛋白质的β-折叠和任选地间插序列用来自另一种蛋白质的对应β-折叠和任选地对应间插序列置换(例如来自ActRIIA的第5β-折叠(β5A)可用来自ActRIIB的第5β-折叠(β5B)置换)。各ActRII蛋白具有七个β-折叠(β1-β7)和八个间插序列(X1-X8)。ActRII嵌合体包括β1a、β2a、β3a、β4a、β5a或β7a中的至少一者以及β1b、β2b、β3b、β4b、β5b或β7b中的至少一者。因此,在ActRII嵌合体配体阱中所包括的ActRII嵌合体可具有一个至五个β-折叠取代(例如来自一种ActRII蛋白的β1、β2、β3、β4、β5以及β7中的1者、2者、3者、4者或5者可用来自另一种ActRII蛋白的对应β-折叠序列取代)。ActRII嵌合体还可具有一个至七个间插序列取代(例如来自一种ActRII蛋白的X1、X2、X3、X5、X6、X7以及X8中的1者、2者、3者、4者、5者、6者或7者可用来自另一种ActRII蛋白的对应间插序列取代)。在一些实施方案中,发生取代的β-折叠序列为最小β-折叠序列((例如至少HCFATWK(SEQ ID NO:805),其为RHCFATWKNI(β3a)(SEQ ID NO:804)的一部分;至少HCYASWR(SEQ ID NO:807),其为LHCYASWRNS(β3b)(SEQ ID NO:806)的一部分;至少EIVKQGCW(SEQ IDNO:809),其为SIEIVKQGCW(β4a)(SEQ ID NO:808)的一部分;至少ELVKKGCW(SEQ ID NO:811),其为TIELVKKGCW(β4b)(SEQ ID NO:810)的一部分;至少VE,其为VEK(β5a)的一部分;至少V,其为VAT(β5b)的一部分;至少SYF,其为KFSYF(β7a)(SEQ ID NO:819)的一部分;或至少T,其为RFTHL(β7b)(SEQ ID NO:820)的一部分)。细胞外ActRII嵌合体与野生型细胞外ActRIIA和ActRIIB的长度相同(例如具有相同的氨基酸数目),因此,在其中最小β-折叠序列发生取代的实施方案中,使用来自ActRIIA或ActRIIB的连续氨基酸将最小β-折叠连接至邻近的间插序列以维持ActRII嵌合体的长度(例如氨基酸数目)(例如以防止细胞外ActRII嵌合体与细胞外ActRIIA和ActRIIB的对应区域相比具有更少的氨基酸)。表17中提供了可包括在ActRII嵌合体配体阱中的示例性ActRII嵌合体序列。可用于本文所描述的方法中的ActRII嵌合体配体阱包括国际专利申请号PCT/US2022/027399中所描述的那些ActRII嵌合体配体阱,所述专利申请的公开内容以引用的方式并入本文中。
表17.细胞外ActRII嵌合体序列
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在一些实施方案中,细胞外ActRII嵌合体具有1-9个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8或9个氨基酸)的N端截短。N端截短可涉及从表15至表17中所示的嵌合体中的任一者的N端去除1-9个氨基酸。N端截短可去除直到第一个半胱氨酸之前两个氨基酸的氨基酸(例如N端截短的ActRII嵌合体配体阱中保留第一个半胱氨酸之前的两个氨基酸(RE或QE))。
细胞外ActRII嵌合体配体阱还可包括C端延伸(例如C端的其他氨基酸)。C端延伸可在C端向表15至表17中所示的嵌合体中的任一者添加一个或多个其他氨基酸(例如1、2、3、4、5、6个或更多个其他氨基酸)。C端延伸可对应于来自野生型ActRIIA或ActRIIB中相同位置的序列。举例来说,可包括在本发明的细胞外ActRII嵌合体配体阱中的C端延伸为氨基酸序列NP和氨基酸序列NPVTPK(SEQ ID NO:78),所述氨基酸序列对应于存在于野生型ActRIIA中相同位置的序列。
在一些实施方案中,细胞外ActRII嵌合体配体阱还可包括一个部分(例如Fc结构域单体、Fc结构域、白蛋白结合肽、纤连蛋白结构域或人血清白蛋白),所述部分可通过接头或其他共价键融合至细胞外ActRII嵌合体的N端或C端(例如C端)。包括融合至Fc结构域单体的细胞外ActRII嵌合体的ActRII嵌合体配体阱可通过两个Fc结构域单体之间的相互作用形成二聚体(例如均二聚体或异二聚体),所述两个Fc结构域单体组合以形成二聚体中的Fc结构域。
Fc结构域
在一些实施方案中,本文所描述的ActRII配体阱可包括融合至免疫球蛋白的Fc结构域单体或Fc结构域的片段以增加多肽的血清半衰期的ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分。包括融合至Fc结构域单体的ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分的ActRII配体阱可通过两个Fc结构域单体之间的相互作用形成二聚体(例如均二聚体或异二聚体),所述两个Fc结构域单体形成二聚体中的Fc结构域。如本领域中通常已知的,Fc结构域为存在于免疫球蛋白C端的蛋白质结构。Fc结构域包括通过CH3抗体恒定结构域之间的相互作用二聚化的两个Fc结构域单体。Fc结构域形成结合至Fc受体的最小结构,例如FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIa、FcγRIIIb、FcγRIV。在一些实施方案中,Fc结构域可发生突变从而缺乏效应功能,这是“死亡”Fc结构域特有的。举例来说,Fc结构域可包括已知使Fc结构域与Fcγ受体之间的相互作用最小化的特定氨基酸取代。在一些实施方案中,Fc结构域来自IgG1抗体并且包括氨基酸取代L234A、L235A以及G237A。在一些实施方案中,Fc结构域来自IgG1抗体并且包括氨基酸取代D265A、K322A以及N434A。上述氨基酸位置是根据Kabat来确定的(Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD.(1991))。可通过在具有“标准”Kabat编号序列的抗体序列的同源性区域进行比对来确定给定抗体的氨基酸残基的Kabat编号。此外,在一些实施方案中,Fc结构域不诱导任何免疫系统相关反应。举例来说,可对包括融合至Fc结构域单体的ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分的ActRII配体阱的二聚体中的Fc结构域进行修饰以降低Fc结构域与Fcγ受体之间的相互作用或结合。可融合至ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体变体的细胞外部分的的Fc结构域单体的序列显示如下(SEQ ID NO:97):
在一些实施方案中,Fc结构域来自IgG1抗体并且相对于SEQ ID NO:97的序列包括氨基酸取代L12A、L13A以及G15A。在一些实施方案中,Fc结构域来自IgG1抗体并且相对于SEQ ID NO:97的序列包括氨基酸取代D43A、K100A以及N212A。在一些实施方案中,具有SEQID NO:97的序列的Fc结构域单体缺少末端赖氨酸。在一些实施方案中,本文所描述的ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)可通过常规基因或化学手段(例如化学缀合)融合至Fc结构域单体(例如SEQ ID NO:97)的N端或C端。如果需要,那么可在ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分与Fc结构域单体之间插入接头(例如间隔子)。Fc结构域单体可融合至ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分的N端或C端(例如C端)。
在一些实施方案中,本文所描述的ActRII配体阱可包括融合至Fc结构域的ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分。在一些实施方案中,Fc结构域含有减少或抑制Fc结构域二聚化的一个或多个氨基酸取代。在一些实施方案中,Fc结构域含有铰链结构域。Fc结构域可属于免疫球蛋白抗体同型IgG、IgE、IgM、IgA或IgD。另外,Fc结构域可为IgG亚型(例如IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3或IgG4)。Fc结构域还可为非天然存在的Fc结构域,例如重组Fc结构域。
工程化具有减少的二聚化的Fc结构域的方法为本领域已知的。在一些实施方案中,可向CH3-CH3二聚体界面引入一个或多个具有大侧链的氨基酸(例如酪氨酸或色氨酸)以阻碍因空间碰撞形成二聚体。在其他实施方案中,可向CH3-CH3二聚体界面引入一个或多个具有小侧链的氨基酸(例如丙氨酸、缬氨酸或苏氨酸)以消除有利的相互作用。例如Ying等(J Biol Chem.287:19399-19408,2012)、美国专利公布号2006/0074225、美国专利号8,216,805和5,731,168、Ridgway等(Protein Eng.9:617-612,1996)、Atwell等(J MolBiol.270:26-35,1997)以及Merchant等(Nat Biotechnol.16:677-681,1998)中描述了在CH3结构域中引入具有大侧链或小侧链的氨基酸的方法,所有这些参考文献以全文引用的方式并入本文中。
在其他实施方案中,CH3结构域中构成两个Fc结构域之间的CH3-CH3界面的一个或多个氨基酸残基用带正电荷的氨基酸残基(例如赖氨酸、精氨酸或组氨酸)或带负电荷的氨基酸残基(例如天冬氨酸或谷氨酸)置换,使得根据所引入的特定带电荷的氨基酸,相互作用变得在静电上为不利的。例如Ying等(J Biol Chem.287:19399-19408,2012)、美国专利公布号2006/0074225、2012/0244578以及2014/0024111中描述了在CH3结构域中引入带电荷的氨基酸以不利于或阻止二聚体形成的方法,所有这些参考文献以全文引用的方式并入本文中。
在本发明的一些实施方案中,Fc结构域相对于人IgG1的序列包括以下氨基酸取代中的一者或多者:T366W、T366Y、T394W、F405W、Y349T、Y349E、Y349V、L351T、L351H、L351N、L352K、P353S、S354D、D356K、D356R、D356S、E357K、E357R、E357Q、S364A、T366E、L368T、L368Y、L368E、K370E、K370D、K370Q、K392E、K392D、T394N、P395N、P396T、V397T、V397Q、L398T、D399K、D399R、D399N、F405T、F405H、F405R、Y407T、Y407H、Y407I、K409E、K409D、K409T以及K409I。在一些实施方案中,Fc结构域氨基酸序列中缺少末端赖氨酸。在一个特定实施方案中,Fc结构域相对于人IgG1的序列包括氨基酸取代T366W。Fc结构域(野生型Fc结构域)的序列如下示于SEQ ID NO:84中:
缺少末端赖氨酸的野生型Fc结构域的示例性序列提供如下(SEQ ID NO:79):
白蛋白结合肽
在一些实施方案中,本文所描述的ActRII配体阱可包括融合至血清蛋白结合肽的ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分。结合至血清蛋白肽可改善蛋白质药物的药代动力学。
作为一个实例,可用于本文所描述的方法和组合物中的白蛋白结合肽通常为本领域已知的。在一个实施方案中,白蛋白结合肽包括序列DICLPRWGCLW(SEQ ID NO:83)。
在本发明中,白蛋白结合肽可连接至本文所描述的ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)的N端或C端(例如C端)以增加细胞外ActRIIA变体的血清半衰期。在一些实施方案中,白蛋白结合肽为直接或通过接头连接至ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分的N端或C端。
在一些实施方案中,本文所描述的ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)可通过常规基因或化学手段(例如化学缀合)融合至白蛋白结合肽(例如SEQID NO:83)的N端或C端。如果需要,那么可在ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分与白蛋白结合肽之间插入接头(例如间隔子)。在不受理论限制的情况下,本文所描述的ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分中包括白蛋白结合肽预期可通过使治疗性蛋白质结合至血清白蛋白而使得治疗性蛋白质的保留延长。
纤连蛋白结构域
在一些实施方案中,本文所描述的ActRII配体阱可包括融合至纤连蛋白结构域的ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分。结合至纤连蛋白结构域可改善蛋白质药物的药代动力学。
纤连蛋白结构域为细胞外基质的高分子量糖蛋白或其片段,所述高分子量糖蛋白或其片段结合至例如跨膜受体蛋白(诸如整合素)和细胞外基质组分(诸如胶原蛋白和纤维蛋白)。在本发明的一些实施方案中,纤连蛋白结构域连接至本文所描述的ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)的N端或C端(例如C端)以增加ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分的血清半衰期。纤连蛋白结构域可直接或通过接头连接至ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分的N端或C端。
作为一个实例,可用于本文所描述的方法和组合物中的纤连蛋白结构域通常为本领域已知的。在一个实施方案中,纤连蛋白结构域为具有UniProt ID编号:P02751的序列的氨基酸610-702的纤连蛋白III型结构域(以下SEQ ID NO:82)。
在另一实施方案中,纤连蛋白结构域为adnectin蛋白。
在一些实施方案中,本文所描述的ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)可通过常规基因或化学手段(例如化学缀合)融合至纤连蛋白结构域(例如SEQ ID NO:82)的N端或C端。如果需要,那么可在ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分与纤连蛋白结构域之间插入接头(例如间隔子)。在不受理论限制的情况下,本文所描述的ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分中包括纤连蛋白结构域预期可通过使治疗性蛋白质结合至整合素和细胞外基质组分(诸如胶原蛋白和纤维蛋白)而使得治疗性蛋白质的保留延长。
血清白蛋白
在一些实施方案中,本文所描述的ActRII配体阱可包括融合至血清白蛋白的ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分。结合至血清白蛋白可改善蛋白质药物的药代动力学。
血清白蛋白为一种球状蛋白质,所述球状蛋白质为哺乳动物中最丰富的血液蛋白质。血清白蛋白在肝脏中产生并且构成血清蛋白的约一半。它是单聚的并且可溶于血液。血清白蛋白的最重要的功能中的一些包括运送激素、脂肪酸以及体内的其他蛋白质、缓冲pH值以及维持血管与身体组织之间人体流体的适当分布所需的渗透压。在优选实施方案中,血清白蛋白为人血清白蛋白。在本发明的一些实施方案中,人血清白蛋白连接至本文所描述的ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)的N端或C端(例如C端)以增加ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分的血清半衰期。人血清白蛋白可直接或通过接头连接至ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分的N端或C端。
作为一个实例,可用于本文所描述的方法和组合物中的血清白蛋白通常为本领域已知的。在一个实施方案中,血清白蛋白包括UniProt ID编号:P02768的序列(以下SEQ IDNO:81)。
在一些实施方案中,本文所描述的ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)可通过常规基因或化学手段(例如化学缀合)融合至人血清白蛋白(例如SEQID NO:81)的N端或C端。如果需要,那么可在ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分与人血清白蛋白之间插入接头(例如间隔子)。在不受理论限制的情况下,本文所描述的ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分中包括人血清白蛋白预期可使得治疗性蛋白质的保留延长。
接头
本文所描述的ActRII配体阱可包括通过接头融合至一个部分的ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)。在一些实施方案中,所述部分使多肽的稳定性增加。示例性部分包括Fc结构域单体、Fc结构域、白蛋白结合肽、纤连蛋白结构域或人血清白蛋白。在本发明中,位于一个部分(例如Fc结构域单体(例如SEQ ID NO:97的序列)、Fc结构域(例如SEQ ID NO:84或SEQ ID NO:79)、白蛋白结合肽(例如SEQ ID NO:83)、纤连蛋白结构域(例如SEQ ID NO:82)或人血清白蛋白(例如SEQ ID NO:81))与ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)之间的接头可为包括1-200个氨基酸的氨基酸间隔子。合适的肽间隔子为本领域已知的,并且包括例如含有可挠性氨基酸残基(诸如甘氨酸、丙氨酸以及丝氨酸)的肽接头。在一些实施方案中,间隔子可含有基序,例如GA、GS、GG、GGA、GGS、GGG、GGGA(SEQ ID NO:98)、GGGS(SEQ ID NO:99)、GGGG(SEQ ID NO:100)、GGGGA(SEQ IDNO:101)、GGGGS(SEQ ID NO:102)、GGGGG(SEQ ID NO:103)、GGAG(SEQ ID NO:104)、GGSG(SEQ ID NO:105)、AGGG(SEQ ID NO:106)或SGGG(SEQ ID NO:107)的多个或重复基序。在一些实施方案中,间隔子可含有包括GA或GS的基序的2至12个氨基酸,例如GA、GS、GAGA(SEQID NO:108)、GSGS(SEQ ID NO:109)、GAGAGA(SEQ ID NO:110)、GSGSGS(SEQ ID NO:111)、GAGAGAGA(SEQ ID NO:112)、GSGSGSGS(SEQ ID NO:113)、GAGAGAGAGA(SEQ ID NO:114)、GSGSGSGSGS(SEQ ID NO:115)、GAGAGAGAGAGA(SEQ ID NO:116)以及GSGSGSGSGSGS(SEQ IDNO:117)。在一些实施方案中,间隔子可含有包括GGA或GGS的基序的3至12个氨基酸,例如GGA、GGS、GGAGGA(SEQ ID NO:118)、GGSGGS(SEQ ID NO:119)、GGAGGAGGA(SEQ ID NO:120)、GGSGGSGGS(SEQ ID NO:121)、GGAGGAGGAGGA(SEQ ID NO:122)以及GGSGGSGGSGGS(SEQ IDNO:123)。在另一些实施方案中,间隔子可含有包括GGAG(SEQ ID NO:104)、GGSG(SEQ IDNO:105)的基序的4至12个氨基酸,例如GGAG(SEQ ID NO:104)、GGSG(SEQ ID NO:105)、GGAGGGAG(SEQ ID NO:124)、GGSGGGSG(SEQ ID NO:125)、GGAGGGAGGGAG(SEQ ID NO:126)以及GGSGGGSGGGSG(SEQ ID NO:127)。在一些实施方案中,间隔子可含有GGGGA(SEQ ID NO:101)或GGGGS(SEQ ID NO:102)的基序,例如GGGGAGGGGA GGGGA(SEQ ID NO:128)和GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:129)。在本发明的一些实施方案中,位于一个部分(例如Fc结构域单体、Fc结构域、白蛋白结合肽、纤连蛋白结构域或人血清白蛋白)与ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)之间的氨基酸间隔子可为GGG、GGGA(SEQ IDNO:98)、GGGG(SEQ ID NO:100)、GGGAG(SEQ ID NO:130)、GGGAGG(SEQ ID NO:131)或GGGAGGG(SEQ ID NO:132)。
在一些实施方案中,间隔子还可含有除甘氨酸、丙氨酸以及丝氨酸外的氨基酸,例如AAAL(SEQ ID NO:133)、AAAK(SEQ ID NO:134)、AAAR(SEQ ID NO:135)、EGKSSGSGSESKST(SEQ ID NO:136)、GSAGSAAGSGEF(SEQ ID NO:137)、AEAAAKEAAAKA(SEQ ID NO:96)、KESGSVSSEQLAQFRSLD(SEQ ID NO:95)、GENLYFQSGG(SEQ ID NO:94)、SACYCELS(SEQ ID NO:93)、RSIAT(SEQ ID NO:92)、RPACKIPNDLKQKVMNH(SEQ ID NO:91)、GGSAGGSGSGSSGGSSGASGTGTAGGTGSGSGTGSG(SEQ ID NO:90)、AAANSSIDLISVPVDSR(SEQ ID NO:189)或GGSGGGSEGGGSEGGGSEGGGSEGGGSEGGGSGGGS(SEQ ID NO:88)。在一些实施方案中,间隔子可含有基序,例如EAAAK(SEQ ID NO:87)的多个或重复基序。在一些实施方案中,间隔子可含有基序,例如富脯氨酸序列的多个或重复基序,诸如(XP)n,其中X可为任何氨基酸(例如A、K或E)并且n为1-5;以及PAPAP(SEQ ID NO:86)。
所用的肽间隔子和氨基酸的长度可根据所涉及的两种蛋白质以及最终蛋白质融合多肽中所需的可挠性程度进行调节。可对间隔子的长度进行调节以确保适当的蛋白质折叠并且避免形成聚集物。
在一些实施方案中,一个部分(例如Fc结构域单体(例如SEQ ID NO:97的序列)、Fc结构域(例如SEQ ID NO:84或SEQ ID NO:79)、白蛋白结合肽(例如SEQ ID NO:83)、纤连蛋白结构域(例如SEQ ID NO:82)或人血清白蛋白(例如SEQ ID NO:81))与本文所描述的ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)之间的接头为具有序列GGG的氨基酸间隔子。举例来说,本发明的ActRII配体阱可含有通过GGG接头融合至Fc结构域(例如SEQID NO:79)的细胞外ActRIIA变体(例如SEQ ID NO:6-72中的任一者)。含有SEQ ID NO:69的ActRIIA变体、GGG接头以及缺乏末端赖氨酸的Fc结构域(SEQ ID NO:79)的示例性多肽提供如下(SEQ ID NO:80):
载体、宿主细胞以及蛋白质产生
本发明的ActRII信号传导抑制剂可由宿主细胞产生。宿主细胞是指一种媒介物,所述媒介物包括从对应核酸表达本文所描述的多肽和融合多肽所需的必需细胞组分(例如细胞器)。可通过本领域已知的常规技术(例如转化、转染、电穿孔、磷酸钙沉淀、直接微量注射、感染等)将核酸包括在可引入宿主细胞中的核酸载体中。核酸载体的选择部分依赖于要使用的宿主细胞。通常,优选的宿主细胞为真核(例如哺乳动物)或原核(例如细菌)来源的宿主细胞。
核酸载体构建和宿主细胞
可通过本领域已知的多种方法来制备编码本发明的多肽(即ActRII信号传导抑制剂)的氨基酸序列的核酸序列。这些方法包括但不限于寡核苷酸介导(或定点)诱变和PCR诱变。可使用标准技术(例如基因合成)来获得编码本发明的多肽的核酸分子。或者,为了产生ActRII配体阱,可使用本领域中的标准技术(例如QuikChangeTM诱变)使编码细胞外ActRIIA或ActRIIB的野生型部分的核酸分子突变以包括特定氨基酸取代。可使用核苷酸合成仪或PCR技术合成核酸分子。
可将编码本发明的多肽的核酸序列插入能够在原核或真核宿主细胞中复制和表达核酸分子的载体中。许多载体为本领域中可获得的并且可用于本发明的目的。各个载体可包括可针对与特定宿主细胞的相容性进行调节和优化的各种组件。举例来说,载体组件可包括但不限于复制起点、选择标记基因、启动子、核糖体结合位点、信号序列、编码所关注的蛋白质的核酸序列以及转录终止序列。
在一些实施方案中,可使用哺乳动物细胞作为本发明的宿主细胞。哺乳动物细胞类型的实例包括但不限于人胚胎肾(HEK)(例如HEK293、HEK 293F)、中国仓鼠卵巢(CHO)、HeLa、COS、PC3、Vero、MC3T3、NS0、Sp2/0、VERY、BHK、MDCK、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT20、T47D、NS0(不内源性地产生任何免疫球蛋白链的鼠骨髓瘤细胞系)、CRL7O3O以及HsS78Bst细胞。在一些实施方案中,还可使用大肠杆菌细胞作为本发明的宿主细胞。大肠杆菌(E.coli)菌株的实例包括但不限于大肠杆菌294(31,446)、大肠杆菌λ1776(31,537、大肠杆菌BL21(DE3)(/>BAA-1025)以及大肠杆菌RV308(/>31,608)。不同宿主细胞具有用于蛋白质产物的翻译后加工和修饰(例如糖基化)的特征和特定机制。可选择适当的细胞系或宿主系统以确保所表达的多肽的恰当修饰和加工。可使用本领域的常规技术(例如转化、转染、电穿孔、磷酸钙沉淀以及直接微量注射)将上文所描述的表达载体引入适当的宿主细胞中。在将载体引入宿主细胞中以便产生蛋白质后,将宿主细胞在针对诱导启动子、选择转化体或扩增编码所需序列的基因适当进行改良的常规培养基中培养。用于表达治疗性蛋白质的方法为本领域已知的,参见例如Paulina Balbas,Argelia Lorence(编)Recombinant Gene Expression:Reviews and Protocols(Methodsin Molecular Biology),Humana Press;第2版2004以及Vladimir Voynov和JustinA.Caravella(编)Therapeutic Proteins:Methods and Protocols(Methods inMolecular Biology)Humana Press;第2版2012。
蛋白质产生、回收以及纯化
可使用于产生本发明的多肽的宿主细胞在本领域已知并且适合于培养所选宿主细胞的培养基中生长。适合于哺乳动物宿主细胞的培养基的实例包括最低必需培养基(MEM)、杜尔贝科氏改良伊格尔培养基(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium,DMEM)、Expi293TM表达培养基、补充有胎牛血清(FBS)的DMEM以及RPMI-1640。适合于细菌宿主细胞的培养基的实例包括路里亚培养液(Luria broth,LB)加上必要的补充物,诸如选择剂,例如安比西林(ampicillin)。将宿主细胞在适合的温度(诸如约20℃至约39℃,例如25℃至约37℃,优选37℃)和CO2水平(诸如5至10%)下培养。培养基的pH值通常为约6.8至7.4,例如7.0,这主要取决于宿主有机体。如果本发明的表达载体中使用诱导型启动子,那么在适合于活化启动子的条件下诱导蛋白质表达。
在一些实施方案中,根据所用的表达载体和宿主细胞,表达的蛋白质可从宿主细胞(例如哺乳动物宿主细胞)分泌至细胞培养基中。蛋白质回收可涉及过滤细胞培养基以去除细胞碎片。可将蛋白质进一步纯化。可通过本领域已知的蛋白质纯化的任何方法(例如通过色谱(例如离子交换、亲和力以及尺寸排阻柱色谱)、离心、差异溶解度)或通过用于蛋白质纯化的任何其他标准技术对本发明的多肽进行纯化。举例来说,可通过适当选择亲和柱(诸如蛋白质A柱,例如POROS蛋白质A色谱)和将亲和柱与色谱柱(例如POROS HS-50阳离子交换色谱)、过滤、超滤、盐析以及渗析程序组合对蛋白质进行分离和纯化。
在其他实施方案中,可例如通过渗透压冲击、超声处理或溶解来破坏宿主细胞,以回收所表达的蛋白质。在细胞被破坏后,可通过离心或过滤去除细胞碎片。在一些情况下,可使多肽缀合至标记序列(诸如肽)以有助于纯化。标记氨基酸序列的实例为六组氨酸肽(His-标签),所述六组氨酸肽以微摩尔亲和力结合至镍官能化琼脂糖亲和柱。可用于纯化的其他肽标签包括但不限于血球凝集素“HA”标签,所述标签对应于来源于流感血球凝集素蛋白的表位(Wilson等,Cell37:767,1984)。
或者,本发明的多肽可由受试者(例如人)的细胞产生,例如在基因疗法的情形下,通过施用含有编码本发明的多肽的核酸分子的载体(诸如病毒载体(例如逆转录病毒载体、腺病毒载体、痘病毒载体(例如痘苗病毒载体,诸如改良型安卡拉痘苗(Modified VacciniaAnkara,MVA)、腺相关病毒载体以及α病毒载体))。载体在进入受试者的细胞内部(例如通过转化、转染、电穿孔、磷酸钙沉淀、直接微量注射、感染等)后将促进多肽的表达,所述多肽然后从细胞分泌。如果治疗疾病或病症是所需的结果,那么可能不再需要进一步的动作。如果需要收集蛋白质,那么可从受试者收集血液并且通过本领域已知的方法从血液纯化蛋白质。
药物组合物和制剂
本发明提供了药物组合物,所述药物组合物包括本文所描述的多肽(例如ActRII信号传导抑制剂,诸如包括ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)的ActRII配体阱。在一些实施方案中,本发明的药物组合物包括具有C端延伸(例如1、2、3、4、5、6或更多个其他氨基酸)作为治疗性蛋白质的ActRII配体阱,所述ActRII配体阱包括细胞外ActRIIA变体(例如具有SEQ ID NO:1-70(例如SEQ ID NO:6-70)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)。在一些实施方案中,本发明的药物组合物包括作为治疗性蛋白质的ActRII配体阱,所述ActRII配体阱包括融合至一个部分(例如Fc结构域单体或其二聚体、Fc结构域、白蛋白结合肽、纤连蛋白结构域或人血清白蛋白)的ActRIIA、ActRIIB、其变体或其嵌合体的细胞外部分(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)。在一些实施方案中,包括本发明的多肽的本发明的药物组合物可与其他剂(例如治疗性生物剂和/或小分子)或组合物组合用于疗法中。除治疗有效量的多肽外,药物组合物还可包括一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂,所述物质可通过本领域技术人员已知的方法调配。在一些实施方案中,本发明的药物组合物包括编码本发明的多肽的核酸分子(DNA或RNA,例如mRNA),或含有此类核酸分子的载体。
药物组合物中可接受的载体和赋形剂在所采用的剂量和浓度下对接受者无毒。可接受的载体和赋形剂可包括缓冲剂,诸如磷酸盐、柠檬酸盐、HEPES以及TAE;抗氧化剂,诸如抗坏血酸和甲硫氨酸;防腐剂,诸如六甲氯铵、十八基二甲基苯甲基氯化铵、间苯二酚以及苯扎氯铵;蛋白质,诸如人血清白蛋白、明胶、右旋糖酐以及免疫球蛋白;亲水性聚合物,诸如聚乙烯吡咯烷酮;氨基酸,诸如甘氨酸、谷氨酰胺、组氨酸、精氨酸以及赖氨酸;以及碳水化合物,诸如葡萄糖、甘露糖、蔗糖以及山梨糖醇。本发明的药物组合物可以可注射制剂形式肠胃外施用。注射用药物组合物可使用无菌溶液或任何药学上可接受的液体作为媒介物进行调配。药学上可接受的媒介物包括但不限于无菌水、生理盐水以及细胞培养基(例如杜尔贝科氏改良伊格尔培养基(DMEM)、α-改良伊格尔培养基(α-MEM)、F-12培养基)。配制方法为本领域已知的,参见例如Banga(编)Therapeutic Peptides and Proteins:Formulation,Processing and Delivery Systems(第3版)Taylor&Francis Group,CRCPress(2015)。
可将本发明的药物组合物制备成微胶囊,诸如羟甲基纤维素或明胶-微胶囊以及聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊。本发明的药物组合物还可在其他药物递送系统(诸如脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米粒子以及纳米胶囊)中制备。Remington:The Science andPractice of Pharmacy第22版(2012)中描述了此类技术。要用于体内施用的药物组合物必须为无菌的。这容易通过经无菌过滤膜过滤来实现。
还可将本发明的药物组合物制备成持续释放制剂。持续释放制剂的适合的实例包括含有本发明的多肽的固体疏水性聚合物的半透性基质。持续释放基质的实例包括聚酯、水凝胶、聚丙交酯、L-谷氨酸与γ乙基-L-谷氨酸盐的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物(诸如LUPRON DEPOTTM)以及聚D-(-)-3-羟丁酸。一些持续释放制剂使分子能够历时几个月(例如一个月至六个月)释放,而其他制剂在较短的时间段(例如数天至数周)内释放本发明的药物组合物。
药物组合物可按需要以单位剂型形式形成。药物制剂中所包括的活性组分(例如本发明的多肽)的量使得提供指定范围内的适合的剂量(例如在每千克体重0.01-100mg范围内的剂量)。
用于基因疗法的药物组合物可含于可接受的稀释剂中,或可包括其中包埋基因递送媒介物的缓慢释放基质。如果使用流体动力学注射作为递送方法,那么以静脉内方式以大流体体积快速递送含有编码本文所描述的多肽的核酸分子或含有所述核酸分子的载体(例如病毒载体)的药物组合物。可用作体内基因递送媒介物的载体包括但不限于逆转录病毒载体、腺病毒载体、痘病毒载体(例如痘苗病毒载体,诸如改良型安卡拉痘苗)、腺相关病毒载体以及α病毒载体。
途径、剂量以及施用
包括本发明的多肽作为治疗性蛋白质的药物组合物可被调配用于例如静脉内施用、肠胃外施用、皮下施用、肌肉内施用、动脉内施用、鞘内施用或腹膜内施用。药物组合物还可被调配成用于经口、经鼻、喷雾、气溶胶、经直肠或经阴道施用或经由所述途径进行施用。对于可注射制剂,各种有效药物载体为本领域已知的。参见例如ASHP Handbook onInjectable Drugs,Toissel,第18版(2014)。
在一些实施方案中,可通过基因递送施用包括编码本发明的多肽的核酸分子或含有此类核酸分子的载体的药物组合物。基因递送的方法为本领域技术人员熟知的。可用于体内基因递送和表达的载体包括但不限于逆转录病毒载体、腺病毒载体、痘病毒载体(例如痘苗病毒载体,诸如改良的安卡拉痘苗(MVA))、腺相关病毒载体以及α病毒载体。在一些实施方案中,可直接向受试者施用编码本发明的多肽的mRNA分子。
在本发明的一些实施方案中,可使用流体动力学注射平台施用编码本文所描述的多肽的核酸分子或含有此类核酸分子的载体。在流体动力学注射方法中,将编码本文所描述的多肽的核酸分子置于工程化质粒(例如病毒质粒)中的强启动子的控制下。质粒常常以静脉内方式以大流体体积快速递送。流体动力学注射使用静脉中受控的流体动压力来增强细胞渗透性,使得因快速大流体体积注射而升高的压力使流体和质粒从静脉中溢出。核酸分子的表达主要由肝脏驱动。在小鼠中,常常通过将质粒注射至尾部静脉中来进行流体动力学注射。在某些实施方案中,可使用流体动力学注射来施用编码本文所描述的多肽的mRNA分子。
本发明的药物组合物的剂量取决于多种因素,包括施用途径、要治疗的疾病以及物理特征,例如受试者的年龄、体重、总体健康。本发明的药物组合物可包括的本发明的ActRII信号传导抑制剂的剂量在0.01至500mg/kg范围内(例如0.01、0.1、0.2、0.3、0.325、0.35、0.375、0.4、0.5、0.75、1、1.25、1.5、1.75、2、2.25、2.5、2.75、3、3.25、3.5、3.75、4、4.25、4.5、4.75、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、100、150、200、250、300、350、400、450或500mg/kg),并且在一个更特定的实施方案中,在约0.1至约30mg/kg范围内,并且在一个更特定的实施方案中,在约0.3至约30mg/kg范围内。剂量可由医师根据常规因素(诸如疾病的程度)和受试者的不同参数进行修改。
以与剂量制剂相容的方式并且以治疗有效的量施用药物组合物以使得症状得到改善或修复。以多种剂型施用药物组合物,例如静脉内剂型、皮下剂型以及口服剂型(例如可摄取溶液、药物释放胶囊)。通常,以0.1-100mg/kg(例如0.5-50mg/kg)给予治疗性蛋白质。可每天、每周、每两周、每四周、每月、每两月、每季、每半年、每年或按医学需要例如一次或多次(例如1-10次或更多次)向有需要的受试者施用包括本发明的多肽的药物组合物。在一些实施方案中,可每周、每两周、每四周、每月、每两月、或每季向有需要的受试者施用包括本发明的多肽的药物组合物。可以单个或多个给药方案提供剂量。施用之间的时间可随医学疾患的改善而减少或随患者健康状况下降而增加。
治疗方法
可使用本文所描述的ActRII信号传导抑制剂(诸如含有本文所描述的细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱)来破坏内源性激活素信号传导,所述细胞外ActRIIA变体保留ActRIIA的有益特性(诸如与BMP9的弱结合亲和力和作为Fc融合蛋白的较长血清半衰期)并且获得了ActRIIB的一些有益特性(诸如增加的与激活素A和B的结合)。因此,可使用ActRII信号传导抑制剂(诸如含有细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱)来治疗其中涉及激活素信号传导的疾病或疾患。举例来说,激活素受体配体GDF11被发现在溶血性贫血的小鼠模型中过表达并且与红血细胞产生不足相关。涉及激活素的信号传导路径还通过阻止红血细胞、血小板以及嗜中性粒细胞祖细胞分化来调控造血作用以维持祖细胞呈静止状态。不希望受理论束缚,对于治疗涉及无效造血的疾病或疾患(诸如与骨髓发育异常综合征相关的血细胞减少症,例如贫血、血小板减少症和/或嗜中性粒细胞减少症)来说,结合至激活素受体配体(例如肌生成抑制素、激活素和/或GDF11)并且减少它们与内源性激活素受体的结合或相互作用(例如通过螯合内源性配体)或结合至内源性受体并且破坏它们与这些配体的相互作用的治疗剂可具有治疗功效。
可使用本文所描述的ActRII信号传导抑制剂(例如激活素A抗体、肌生成抑制素抗体、激活素B抗体、GDF-11抗体、ActRII抗体或ActRII配体阱,诸如包括细胞外ActRIIA变体(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)的ActRIIA配体阱,例如有效量的包括细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱)来治疗患有与骨髓发育异常综合征相关的血细胞减少症(例如贫血、血小板减少症或嗜中性粒细胞减少症)或处于发展所述血细胞减少症的风险中的受试者。可根据世界卫生组织(WorldHealth Organization,WHO)分类法或法、美、英(FAB)分类法将受试者诊断为患有骨髓发育异常综合征。骨髓发育异常综合征可为骨髓发育异常综合征伴单系发育异常(MDS-SLD)、骨髓发育异常综合征伴多系发育异常(MDS-MLD)、骨髓发育异常综合征伴环形铁粒幼红细胞(MDS-RS,其包括单谱系发育异常(MDS-RS-SLD)和多系发育异常(MDS-RS-MLD))、与分离的del染色体异常相关的骨髓发育异常综合征(MDS伴分离的del(5q))、骨髓发育异常综合征伴过量原始细胞(MDS-EB;其包括骨髓发育异常综合征伴过量原始细胞-1型(MDS-EB-1)和骨髓发育异常综合征伴过量原始细胞-2型(MDS-EB-2))、不能分型的骨髓发育异常综合征(MDS-U)或骨髓发育异常综合征/骨髓增生性赘瘤伴环形铁粒幼红细胞和血小板增多症(MDS/MPN-RS-T)。如通过修正的国际预后评分系统(IPSS-R)所确定,骨髓发育异常综合征可为极低风险、低风险或中风险骨髓发育异常综合征。骨髓发育异常综合征可为RS阳性骨髓发育异常综合征(例如患有骨髓发育异常综合征的受试者可具有环形铁粒幼红细胞)或非RS骨髓发育异常综合征(例如患有骨髓发育异常综合征的受试者可缺少环形铁粒幼红细胞)。在一些实施方案中,RS阳性骨髓发育异常综合征与剪接因子突变(诸如SF3B1中的突变)相关。在一些实施方案中,MDS与终末成熟缺陷相关(常常在RS阳性MDS中和具有剪接因子突变的受试者中观测到,此类受试者可相对于健康受试者在骨髓中具有增加的红系祖细胞)。在一些实施方案中,MDS与早期造血作用缺陷相关(例如早期红系细胞发展,诸如定向或早期分化,此类受试者可与健康受试者或与具有终末成熟缺陷的受试者相比在骨髓中具有较少的红系祖细胞)。在一些实施方案中,MDS与内源性红细胞生成素水平升高相关。在一些实施方案中,骨髓发育异常综合征与低细胞性骨髓相关(例如患有MDS的受试者具有低细胞性骨髓)。受试者可具有低输血负荷或高输注负荷。在一些实施方案中,受试者具有低输注负荷并且在用ActRII信号传导抑制剂(诸如包括本文所描述的ActRIIA变体的ActRII配体阱)治疗之前八周内接受1-3个RBC单位。在一些实施方案中,受试者具有低输注负荷并且在用ActRII信号传导抑制剂(诸如包括本文所描述的ActRIIA变体的ActRII配体阱)治疗之前八周内未接受输注(接受0个RBC单位)。在一些实施方案中,受试者对红细胞生成素(EPO)没有良好反应或易于发生EPO的有害作用(例如高血压、头痛、血管血栓形成、流感样综合征、旁路阻塞以及心肌梗塞)。本文所描述的组合物和方法还可用于治疗对红系成熟剂没有反应的受试者。在一些实施方案中,受试者先前已用ESA治疗。在一些实施方案中,受试者先前尚未用ESA治疗。在一些实施方案中,受试者先前尚未用阿扎胞苷、地西他滨、来那度胺、罗特西普或索特西普治疗。在一些实施方案中,受试者具有大于100mIU/mL的红细胞生成素水平。在一些实施方案中,受试者具有小于或等于二的东部肿瘤协作组(EasternCooperative Oncology Group,ECOG)表现评分。在一些实施方案中,在用本文所描述的ActRII信号传导抑制剂治疗之前,受试者在骨髓中具有<5%原始细胞。在一些实施方案中,在用本文所描述的ActRII信号传导抑制剂治疗之前,受试者具有小于13,000/μL的外周血白血细胞计数。在一些实施方案中,受试者患有贫血。在一些实施方案中,受试者患有血小板减少症。在一些实施方案中,受试者患有贫血与血小板减少症两者。在一些实施方案中,受试者患有嗜中性粒细胞减少症。在一些实施方案中,受试者患有贫血和嗜中性粒细胞减少症。在一些实施方案中,受试者患有血小板减少症和嗜中性粒细胞减少症。在一些实施方案中,受试者患有贫血、血小板减少症以及嗜中性粒细胞减少症。
还可使用本文所描述的ActRII信号传导抑制剂(例如激活素A抗体、肌生成抑制素抗体、激活素B抗体、GDF-11抗体、ActRII抗体或ActRII配体阱,诸如包括细胞外ActRIIA变体(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱),例如有效量的包括细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱)来治疗患有与慢性骨髓单核细胞性白血病(CMML)相关的血细胞减少症(例如贫血、血小板减少症或嗜中性粒细胞减少症)或处于发展所述血细胞减少症的风险中的受试者。CMML可为例如CMML-0,其定义为在外周血中具有小于2%原始细胞并且在骨髓中具有小于5%原始细胞并且没有奥氏小体棒(Auer rod)的CMML。在一些实施方案中,血细胞减少症为贫血。在一些实施方案中,血细胞减少症为血小板减少症。在一些实施方案中,血细胞减少症为贫血与血小板减少症两者。在一些实施方案中,血细胞减少症为嗜中性粒细胞减少症。在一些实施方案中,血细胞减少症为贫血和嗜中性粒细胞减少症。在一些实施方案中,血细胞减少症为血小板减少症和嗜中性粒细胞减少症。在一些实施方案中,血细胞减少症为贫血、血小板减少症以及嗜中性粒细胞减少症。在一些实施方案中,受试者具有脾肿大。受试者可具有高输注负荷或低输注负荷并且可为环形铁粒幼红细胞阳性或环形铁粒幼红细胞阴性。
还可使用本文所描述的ActRII信号传导抑制剂(例如激活素A抗体、肌生成抑制素抗体、激活素B抗体、GDF-11抗体、ActRII抗体或ActRII配体阱,诸如包括细胞外ActRIIA变体(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)的ActRIIA配体阱,例如有效量的包括细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱)来治疗患有与骨髓纤维化相关的血细胞减少症(例如贫血、血小板减少症或嗜中性粒细胞减少症)或处于发展所述血细胞减少症的风险中的受试者或治疗骨髓纤维化(例如治疗骨髓纤维化的多个方面的病变)。在一些实施方案中,骨髓纤维化为PMF、ET后MF或PV后MF(例如根据2017世界卫生组织准则来诊断)。在一些实施方案中,受试者具有小于或等于二的东部肿瘤协作组(ECOG)表现评分。在一些实施方案中,受试者患有贫血。贫血定义为在筛选或接受RBC输注期间血红蛋白≤10g/dL。在一些实施方案中,受试者患有血小板减少症。在一些实施方案中,受试者患有贫血与血小板减少症两者。在一些实施方案中,受试者患有嗜中性粒细胞减少症。在一些实施方案中,受试者患有贫血和嗜中性粒细胞减少症。在一些实施方案中,受试者患有血小板减少症和嗜中性粒细胞减少症。在一些实施方案中,受试者患有贫血、血小板减少症以及嗜中性粒细胞减少症。在一些实施方案中,所述受试者不适合用JAK抑制剂(例如鲁索替尼、非德替尼或帕克替尼,例如归因于已患有血细胞减少症或归因于骨髓纤维化风险状态)治疗。在一些实施方案中,归因于在用JAK抑制剂治疗之后疾病复发、难以用JAK抑制剂治疗或对用JAK抑制剂治疗不耐受或不再满足继续用JAK抑制剂治疗的风险/效益比,受试者已停止用JAK抑制剂治疗。在一些实施方案中,受试者具有JAK/STAT信号传导缺陷(例如JAK/STAT信号传导减少、缺陷或失败)。在一些实施方案中,骨髓纤维化为中风险或高风险骨髓纤维化。在一些实施方案中,在施用本文所描述的ActRII信号传导抑制剂之前,受试者被鉴定为患有血细胞减少症(例如贫血、血小板减少症或嗜中性粒细胞减少症)。在一些实施方案中,所述方法包括在施用本文所描述的ActRII信号传导抑制剂之前将受试者鉴定为患有血细胞减少症(例如贫血、血小板减少症或嗜中性粒细胞减少症)的步骤(例如通过评估红血细胞、血红蛋白、红细胞压积、血小板和/或嗜中性粒细胞水平)。所述方法还可包括在施用本文所描述的ActRII信号传导抑制剂之后(例如在诸如通过摄入CBC开始用本文所描述的ActRII信号传导抑制剂治疗之后12小时、24小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周或12周或1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、8个月、10个月、12个月、18个月或24个月或更久)评估红血细胞、血红蛋白、红细胞压积、网织红细胞、血小板和/或嗜中性粒细胞水平。在一些实施方案中,受试者未接受使用红细胞生成刺激剂(ESA)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、促血小板生成素激动剂(TPO)、免疫调节剂酰亚胺药物(IMiD;例如沙利度胺、泊马度胺(pomalidomide)、来那度胺)、干扰素或羟基脲、达那唑(danazol)、类固醇(除了小于或等于10mg/天的泼尼松(prednisone)或皮质类固醇等效物)、细胞毒性剂或化学治疗剂、低甲基化剂、RBC造血生长因子(例如白介素-3)、雄激素、口服类视黄醇或三氧化砷的并行治疗。
还可使用本文所描述的ActRII信号传导抑制剂(例如激活素A抗体、肌生成抑制素抗体、激活素B抗体、GDF-11抗体、ActRII抗体或ActRII配体阱,诸如包括细胞外ActRIIA变体(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)的ActRIIA配体阱,例如有效量的包括细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱)来治疗与骨髓外造血相关的脾肿大。
还可使用本文所描述的ActRII信号传导抑制剂(例如激活素A抗体、肌生成抑制素抗体、激活素B抗体、GDF-11抗体、ActRII抗体或ActRII配体阱,诸如包括细胞外ActRIIA变体(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)的ActRIIA配体阱,例如有效量的包括细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱)来降低具有高血小板水平的受试者(诸如患有骨髓纤维化、血小板增多症或真性红细胞增多症的受试者或因过量红血细胞而需要放血术的受试者)中的血小板数目或血小板体积。因此,还可使用本文所描述的方法来治疗患有血小板增多症或真性红细胞增多症的受试者,或因过量红血细胞而需要放血术的受试者。
还可使用本文所描述的ActRII信号传导抑制剂(例如激活素A抗体、肌生成抑制素抗体、激活素B抗体、GDF-11抗体、ActRII抗体或ActRII配体阱,诸如包括细胞外ActRIIA变体(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)的ActRIIA配体阱,例如有效量的包括细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱)来治疗具有其他原因的血细胞减少症。举例来说,可使用ActRII信号传导抑制剂来治疗由用抗真菌剂(例如酮康唑、特比萘芬、氟康唑、米卡芬净或卡泊芬净)或免疫抑制剂(例如氮杂硫嘌呤、甲氨蝶呤或吗替麦考酚酯)治疗引起的血细胞减少症(例如贫血、血小板减少症和/或嗜中性粒细胞减少症)。还可使用ActRII信号传导抑制剂来治疗由用抗生素(例如头孢菌素或青霉素)治疗引起的贫血。此外,可使用本文所描述的ActRII信号传导抑制剂(例如激活素A抗体、肌生成抑制素抗体、激活素B抗体、GDF-11抗体、ActRII抗体或ActRII配体阱,诸如包括细胞外ActRIIA变体(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)的ActRIIA配体阱,例如有效量的包括细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱)来改善造血干细胞植入(例如当在造血干细胞移植之前或与造血干细胞移植同时向受试者施用时)。
在一些实施方案中,本文所描述的方法影响受试者中的肌生成抑制素、激活素A、激活素B和/或BMP9信号传导(例如减少或抑制激活素A、激活素B、肌生成抑制素和/或BMP9与其内源性受体(例如ActRIIA、ActRIIB和/或BMPRII)的结合)。在一些实施方案中,本文所描述的方法增加血红蛋白水平,增加红细胞压积,增加红血细胞计数,增加红细胞体积,增加红细胞质量,增加网织红细胞,增加原成红细胞,增加或诱导红血细胞形成或产生,增加红系祖细胞的成熟和/或分化(早期或晚期(例如终末期)祖细胞,例如早期红系祖细胞,诸如爆裂形成单位红系细胞(BFU-E)和/或集落形成单位红系细胞(CFU-E),例如增加BFU-E和/或CFU-E成熟和/或分化为原成红细胞、网织红细胞或红血细胞,例如增加原成红细胞和/或网织红细胞数目),增加晚期红系前体成熟(例如终末成熟,诸如网织红细胞成熟为红血细胞,或成红细胞成熟为网织红细胞和/或红血细胞),将早期祖细胞招募至红系谱系中,增加早期红系前体和/或祖细胞的数目(例如扩增早期前体群体以提供前体的连续供应以补充多色成红细胞并且允许连续供应成熟网织红细胞),促进红系前体和/或祖细胞通过红细胞生成发生进展,减少红血细胞祖细胞的累积(例如通过刺激祖细胞进展至成熟),增加血小板水平(例如增加血小板计数),增加或诱导巨核细胞分化和/或成熟(例如以产生血小板,例如促血小板终末成熟至血小板),减少血小板祖细胞的累积(例如通过刺激祖细胞进展至成熟),增加巨核细胞祖细胞(例如增加巨核细胞祖细胞更新),增加血小板前体,促进或增加血小板形成或产生,增加嗜中性粒细胞水平(例如增加嗜中性粒细胞计数),增加或诱导祖细胞(例如骨髓样祖细胞、成髓细胞或髓细胞)分化和/或成熟为嗜中性粒细胞,和/或诱导或增加受试者中的嗜中性粒细胞形成或产生。在一些实施方案中,本文所描述的方法增加从血小板减少症恢复的速率。与在治疗之前获得的测量相比或与从未治疗的患有相同疾病或疾患(例如MDS相关血细胞减少症、CMML相关血细胞减少症或骨髓纤维化相关血细胞减少症)的受试者获得的测量相比,在用本文所描述的ActRII信号传导抑制剂(例如激活素A抗体、肌生成抑制素抗体、激活素B抗体、GDF-11抗体、ActRII抗体或ActRII配体阱,诸如包括细胞外ActRIIA变体(例如具有中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)的ActRIIA配体阱),例如有效量的包括细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱)治疗的受试者中可观测到这些改变。在一些实施方案中,本文所描述的方法减小脾脏尺寸(例如在具有脾肿大(诸如与CMML或骨髓纤维化相关的脾肿大)的受试者中)。在一些实施方案中,本文所描述的方法改善或恢复骨髓中的造血作用,减少或逆转网硬蛋白和/或胶原蛋白沉淀,或逆转与骨髓纤维化相关的骨改变。在一些实施方案中,本文所描述的方法减轻或改善巨核细胞功能障碍(例如患有骨髓纤维化的受试者中的骨髓中的巨核细胞功能障碍),从而可预防或减轻炎症/纤维化,恢复骨髓中的造血作用,并且治疗归因于骨髓纤维化的血细胞减少症以及由JAK抑制剂治疗引起的血细胞减少症。在一些实施方案中,本文所描述的方法减轻或消除患有骨髓纤维化的受试者中的肝脾肿大或脾肿大(例如减小脾脏体积和/或降低脾骨髓外造血作用)以及其症状。在一些实施方案中,本文所描述的方法减轻骨髓纤维化并且缓解由患有骨髓纤维化的受试者中的骨髓功能损失引起的症状。在一些实施方案中,本文所描述的方法减慢或减少骨髓纤维化的进展。在一些实施方案中,本文所描述的方法改进或改善患有骨髓纤维化的患者中减弱的骨吸收和骨质硬化。在一些实施方案中,本文所描述的方法改善患有骨髓纤维化的受试者中的纤维化、骨骼组织形态学、脾脏尺寸(例如减小脾脏尺寸)、骨髓纤维化症状、骨髓纤维化和/或骨硬化发育异常。在一些实施方案中,本文所描述的方法减少出血事件。在一些实施方案中,本文所描述的方法减轻感染。
在一些实施方案中,本文所描述的组合物和方法降低患有MDS或CMML的受试者对输血的需要(例如降低输注负荷,例如受试者不再需要输血,或与用本文所描述的组合物和方法治疗之前相比受试者需要不太频繁的输血)。在一些实施方案中,本文所描述的组合物和方法在患有MDS或CMML的受试者中促成输注非依赖性(例如在紧接在治疗开始前8周内需要1个或更多个(例如2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多个)RBC单位的受试者在用ActRII信号传导抑制剂(诸如包括本文所描述的ActRIIA变体的ActRIIA配体阱)治疗期间至少8周、10周、12周、14周、16周、18周、20周、22周、24周、26周、1年、2年或更久不需要输注)。对于MDS和CMML,当血红蛋白<9.0g/dL时建议进行RBC输注,并且如果Hgb≥9.0g/dL并且与贫血的一种或多种症状(例如需要治疗的血液动力学或肺损害)或证明阈值≥9.0g/dL Hgb的共病相关,那么可建议进行。可进行全血记数(CBC)以评估受试者对用本文所描述的组合物治疗的反应,并且可考察血红蛋白水平以确定受试者是否具有超过输注阈值的稳定血红蛋白水平。在实现输注非依赖性的受试者中,血红蛋白水平与绝对网织红细胞计数均可增加。在一些实施方案中,本文所描述的组合物和方法减慢或抑制较低风险MDS进展至较高风险MDS和/或较低风险MDS或CMML进展至急性骨髓性白血病(AML)。举例来说,具有极低风险、低风险或中风险MDS以及低输注负荷的受试者的贫血的治疗可使得相较于基线或治疗前测量血红蛋白增加大于或等于1.5g/dL(例如在用ActRII信号传导抑制剂,诸如包括本文所描述的细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱治疗期间持续至少一天、两天、三天、四天、五天、六天、一周、两周、三周、四周、六周、八周、十周、十二周、十四周、十六周、十八周、二十周、二十二周、二十四周、二十六周、一年、两年或更久)。在另一实例中,具有极低风险、低风险或中风险MDS以及高输注负荷的受试者的贫血的治疗可使得与治疗前相比输注的RBC单位减少≥50%或≥4个(例如将治疗期间八周的时间与治疗之前八周的时间相比较)。在另一实例中,具有极低风险、低风险或中风险MDS以及低输注负荷(例如在用ActRII信号传导抑制剂(诸如包括本文所描述的细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱)治疗之前八周内接受1-3个RBC单位的受试者)或高输注负荷(例如在用ActRII信号传导抑制剂(诸如包括本文所描述的ActRIIA变体的ActRIIA配体阱)治疗之前八周内接受4个或更多个RBC单位的受试者)的受试者的贫血的治疗可引起输注非依赖性(例如在用ActRII信号传导抑制剂(诸如包括本文所描述的细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱)治疗期间持续至少八周、十周、十二周、十四周、十六周、十八周、二十周、二十二周、二十四周、二十六个周、一年、两年或更久的输注非依赖性,例如将治疗期间八周的时间与即将治疗之前八周的时间进行比较)。在一些实施方案中,在不存在血小板输注的情况下,根据本文所描述的方法治疗使得相较于基线的平均血小板增加大于30x 109/L(对于基线值大于20x 109/L的受试者来说)。在一些实施方案中,根据本文所描述的方法治疗使得相较于治疗前嗜中性粒细胞计数的增加大于或等于100%并且大于500/μL。在一些实施方案中,根据本文所描述的方法治疗使得癌症疗法功能评估-贫血(FACT-An)、骨髓发育不良量表生活质量(QUALMS)或慢性病疗法功能评估-疲劳(FACIT-F)问卷中的基线发生变化。在一些实施方案中,在用本文所描述的ActRIIA变体治疗之前,受试者被鉴定为患有MDS相关血细胞减少症(例如贫血、血小板减少症或嗜中性粒细胞减少症)。在一些实施方案中,所述方法包括的步骤在用ActRII信号传导抑制剂(诸如包括本文所描述的ActRIIA变体的ActRIIA配体阱)治疗之前,将受试者鉴定为患有MDS相关血细胞减少症(例如贫血、血小板减少症或嗜中性粒细胞减少症)(例如通过评估红血细胞、血红蛋白、红细胞压积、血小板和/或嗜中性粒细胞水平)。所述方法还可包括在施用ActRII信号传导抑制剂(诸如包括本文所描述的ActRIIA变体的ActRIIA配体阱)之后(例如诸如通过摄入CBC开始治疗之后12小时、24小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周或12周或1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、8个月、10个月、12个月、18个月或24个月或更久),评估红血细胞、血红蛋白、红细胞压积、网织红细胞、血小板和/或嗜中性粒细胞水平。
在一些实施方案中,在用本文所描述的ActRII信号传导抑制剂治疗期间,例如在根据本文针对骨髓纤维化所描述的方法对输注非依赖性受试者的治疗的头24周或52周内,根据本文所描述的方法治疗使得在连续12周或更久的时间(诸如12周、14周、16周、18周、20周、22周、24周、26周、1年2年或更久)内,相较于基线或治疗前测量平均血红蛋白增加大于或等于1.5g/dL或2.0g/dL。在一些实施方案中,在根据本文针对骨髓纤维化所描述的方法对输注非依赖性受试者的治疗的头24周或52周内,根据本文所描述的方法治疗使得简洁疲劳目录评分中的一者或多者相较于基线有所降低。在一些实施方案中,本文所描述的方法降低受试者(诸如需要RBC输注的患有贫血和骨髓纤维化的受试者)对输血的需要(例如降低输注负荷,例如受试者不再需要输血,或与用本文所描述的组合物和方法治疗之前相比受试者需要不太频繁的输血)。在一些实施方案中,在用本文所描述的ActRII信号传导抑制剂治疗期间,例如在根据本文针对骨髓纤维化所描述的方法治疗的头24周或52周内,根据本文所描述的方法治疗使得在连续12周或更久(诸如12周、14周、16周、18周、20周、22周、24周、26周、1年、2年或更久)的时间内,相较于基线治疗前测量(例如紧接在开始用本文所描述的ActRII信号传导抑制剂治疗前12周内进行的测量)RBC输注的次数有所减少。在一些实施方案中,本文所描述的组合物和方法促成输注非依赖性(例如在紧接在开始用本文所描述的ActRII信号传导抑制剂治疗前12周内需要1个或更多个(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个)RBC单位的受试者在用本文所描述的ActRII信号传导抑制剂治疗期间(例如在根据本文针对骨髓纤维化所描述的方法治疗的头24周或52周内)在连续12周或更长时间内(诸如12周、14周、16周、18周、20周、22周、24周、26周、1年、2年或更久)不需要输注。对于患有骨髓纤维化的受试者,当血红蛋白<8.0g/dL时建议使用RBC输注对贫血进行并行治疗,并且如果Hgb≥8.0g/dL并且与贫血的一种或多种症状(例如需要治疗的血液动力学或肺损害)或证明阈值≥8.0g/dL Hgb的共病相关,那么可建议使用。可进行全血记数(CBC)以评估受试者对用本文所描述的组合物治疗的反应,并且可考察血红蛋白水平以确定受试者是否具有超过输注阈值的稳定血红蛋白水平。在实现输注非依赖性的受试者中,血红蛋白水平与绝对网织红细胞计数均可增加。在一些实施方案中,诸如通过24周或52周的根据本文所描述的方法的治疗,根据本文所描述的方法治疗使得骨髓纤维化症状评估表总症状评分(MF-SAF-TSS)相较于基线改善大于或等于50%(例如相较于基线至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或更多)。在一些实施方案中,诸如通过24周或52周的根据本文针对骨髓纤维化所描述的方法的治疗,根据本文所描述的方法治疗使得如通过计算机断层扫描所测量脾脏体积相较于基线减小大于或等于35%(例如相较于基线至少35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%或更多)。在一些实施方案中,诸如通过24周或52周的根据本文所描述的方法的治疗,本文所描述的组合物和方法减慢或抑制进展至急性骨髓性白血病(AML)(骨髓原始细胞>20%)和/或加快骨髓纤维化(骨髓原始细胞≥10%)。在一些实施方案中,例如通过24周或52周的根据本文针对骨髓纤维化所描述的方法的治疗,在用本文所描述的ActRII信号传导抑制剂治疗期间(在不存在血小板输注的情况下),根据本文所描述的方法治疗使得在12周或更长时间内(诸如12周、14周、16周、18周、20周、22周、24周、26周、1年、2年或更久)平均血小板相较于基线增加大于30x 109/L。在一些实施方案中,根据本文所描述的方法治疗使≥1级的贫血、嗜中性粒细胞减少症以及血小板减少症的事件减少。在一些实施方案中,诸如通过24周或52周的如本文针对骨髓纤维化所描述的治疗,根据本文所描述的方法治疗如使用CT所评估使骨质硬化相较于基线有所减轻。在一些实施方案中,诸如通过24周或52周的如本文针对骨髓纤维化所描述的治疗,根据本文所描述的方法治疗使得患者报告的结果测量信息系统(PROMIS)评分或BFI评分相较于基线有所降低。在一些实施方案中,根据本文所描述的方法治疗减慢或减少骨髓纤维化的进展或改善(例如逆转)骨髓纤维化。举例来说,诸如通过24周或52周的如本文所描述的治疗,根据本文所描述的方法治疗可使得骨髓纤维化等级相较于基线有所改善或可防止骨髓纤维化等级变差。根据本文所描述的方法治疗还可增加红细胞参数,诸如网织红细胞计数、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白(MCH)以及网织红细胞血红蛋白和/或血细胞产生的生物标记物,诸如红细胞生成素(EPO)和促血小板生成素(TPO)水平。在一些实施方案中,根据本文所描述的方法治疗增加平均血小板体积和未成熟血小板分数。在一些实施方案中,根据本文所描述的方法治疗使FSH与基线相比有所增加。在一些实施方案中,根据本文所描述的方法治疗使骨骼代谢的生物标记物(诸如骨骼特异性碱性磷酸酶(BSAP)和I型胶原蛋白的血清C端肽(CTX))与基线相比有所增加。在一些实施方案中,根据本文所描述的方法治疗在治疗持续时间内减少骨髓纤维化相关分子和细胞形成异常的发展。
诸如通过8周、12周、20周、24周、26周、52周或2年的如本文所描述的治疗,根据本文所描述的方法治疗还可使得铁代谢生物标记物(例如血清铁、铁蛋白、转铁蛋白、转铁蛋白饱和、总铁结合能力、可溶性转铁蛋白受体水平以及铁调素)、铁螯合剂的剂量以及细胞因子水平与相比基线有所改变。举例来说,根据本文所描述的方法治疗(例如用本文所描述的ActRII信号传导抑制剂,诸如包括细胞外ActRIIA变体(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)的ActRIIA配体阱治疗)可使得血清铁蛋白减少并且可溶性转铁蛋白受体(sTfR)增加。随着患者变为输注非依赖性的,预期铁蛋白减少,并且随着铁储存物合并至新红血细胞中,无效红细胞生成得到改善。sTfR增加为诱导红细胞生成的替代标记物,并且sTfR的测量可用作药效动力学标记物以监测响应于疗法的红细胞生成变化,甚至可能在血红蛋白的变化明显之前。
在一些实施方案中,本文所描述的方法(例如治疗本文所描述的MDS相关血细胞减少症、CMML相关血细胞减少症或骨髓纤维化相关血细胞减少症的方法)在受试者中不引起任何血管并发症,诸如增加的血管通透性或渗漏。
在一些实施方案中,本文所描述的方法中所用的ActRII信号传导抑制剂为包括细胞外ActRIIA变体(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)的ActRIIA配体阱。在一些实施方案中,包括细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱以在0.01至500mg/kg范围内(例如0.01、0.1、0.2、0.3、0.325、0.35、0.375、0.4、0.5、0.75、1、1.25、1.5、1.75、2、2.25、2.5、2.75、3、3.25、3.5、3.75、4、4.25、4.5、4.75、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、100、150、200、250、300、350、400、450或500mg/kg)并且在更具体的实施方案中约0.1至约30mg/kg并且在更具体的实施方案中约0.3至约30mg/kg的剂量施用。在本文所描述的方法中的任一者中,可使用还包括一个或多个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6个或更多个氨基酸)的C端延伸的包括细胞外ActRIIA变体(例如具有SEQ ID NO:1-71(例如SEQ ID NO:6-71)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)的ActRIIA配体阱作为治疗性蛋白质。在本文所描述的方法中的任一者中,可使用通过各自融合至多肽的两个Fc结构域单体的相互作用形成的二聚体(例如均二聚体或异二聚体)作为治疗性蛋白质,所述多肽包括细胞外ActRIIA变体(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)。在本文所描述的方法中的任一者中,可使用包括融合至一个部分(例如Fc结构域单体、Fc结构域、白蛋白结合肽、纤连蛋白结构域或人血清白蛋白)的细胞外ActRIIA变体(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)的ActRIIA配体阱作为治疗性蛋白质。还可根据本文所描述的方法中的任一者施用编码本文所描述的多肽的核酸或含有所述核酸的载体。在本文所描述的方法中的任一者中,多肽、核酸或载体可作为药物组合物的一部分而施用。
以下表10、表11以及表18至表21中提供了可根据本文所描述的方法向受试者施用的组合物。
表18
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表19
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表20
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表21
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实施例
提供以下实施例以进一步说明本发明的一些实施方案,但不旨在限制本发明的范围;由其示例性将了解,可替代地使用本领域技术人员已知的其他程序、方法或技术。
实施例1-ActRIIA/B-hFc对患有极低风险、低风险或中风险骨髓发育异常综合征的患者的贫血的影响
在多中心、开放标签、两部分、阶段2研究中登记患有IPSS-R极低风险、低风险或中风险MDS和贫血的患者。参与者接受0.75mg/kg(队列1)、1.5mg/kg(队列2)、2.5mg/kg(队列3)、3.75mg/kg(队列4)或5.0mg/kg(队列5)ActRIIA/B-hFc(SEQ ID NO:80)的剂量,每4周皮下施用一次,持续12周。在第1部分剂量递增中,在由患有贫血(定义为血红蛋白<10g/dL或需要红血细胞输注)的6个参与者组成的队列中在各剂量水平下对ActRIIA/B-hFc进行评估,所述各剂量水平1:1分层至具有环形铁粒幼红细胞(RS+)的参与者和非RS参与者中。安全性终点包括有害事件(AE)的发生率以及进展至更高风险的MDS/AML。功效终点包括在具有低输注负荷的患者中血红蛋白增加>1.5g/dL持续至少8周;在具有高输注负荷的患者中与基线相比在至少8周内输注的单位减少≥4U或≥50%;以及在具有低输注负荷(在用ActRIIA/B-hFc处理之前8周内1-3个RBC单位)或高输注负荷的参与者中持续至少8周的输注非依赖性。在研究中登记的头12个参与者中,50%为RS+和非RS,50%具有>100mIU/mL的红细胞生成素,50%具有高输注负荷(≥4U/8周),并且85%具有多系发育异常,并且参与者具有192.4x 109/L的平均血小板计数。患者未接受使用阿扎胞苷、地西他滨、来那度胺、罗特西普或索特西普的现有治疗。未用过ESA的患者与经历过ESA的患者均为合格的。
在用ActRIIA/B-hFc完成八周的处理之后,未观测到药物相关严重有害事件,并且在基线处需要输注(在8周内≥2个红血细胞单位)的RS阳性与非RS患者中观测到网织红细胞、血红蛋白以及血小板增加。完成八周的处理的五个患者满足以下终点中的至少一者:血红蛋白增加≥1.5g/dL持续8周、8周内输注需求降低50%或持续至少8周的输注非依赖性,其中三个患者实现持续时间≥8周的输注非依赖性,其中两个为RS阳性并且其中一者为非RS。如图2中所示,在每4周一次给药时程情况下观测到临床上有意义的输注负荷降低以及输注非依赖性。在RS阳性与非RS患者中均观测到输注减少。
实施例2-ActRIIA/B-hFc对患有极低风险、低风险或中风险骨髓发育异常综合征的患者的贫血的影响
在已登记其他参与者并且研究持续时间已增加后,对来自实施例1中所描述的研究的受试者进行第二次评估。在具有140天(范围为1至169天)的中值随访的第二次评估时,17个参与者已接受三个剂量水平的≥1个剂量的ActRIIA/B-hFc:0.75mg/kg、1.5mg/kg以及2.5mg/kg。下表22中描述了17个参与者的基线特征。针对第1部分剂量递增的队列1和2中的功效可评估参与者报告此评估的结果,所述功效可评估参与者定义为具有≥8周的血红蛋白和输注数据(10个患者)。这十个患者已完成至少8周的使用ActRIIA/B-hFc的处理。在十个可评估患者中,三个为非输注的(NT,在用ActRIIA/B-hFc处理之前8周内接受0个RBC单位并且具有<10g/dL的血红蛋白水平的受试者),两个为具有低输注负荷的输注受试者(LTB,在用ActRIIA/B-hFc处理之前8周内接受1-3个RBC单位并且具有<10g/dL的血红蛋白水平的受试者),并且五个为具有高输注负荷的输注受试者(HTB,在用ActRIIA/B-hFc处理之前8周内接受4个或更多个RBC单位的受试者)。在具有LTB或HTB的七个输注受试者中,三个不具有环形铁粒幼红细胞(非RS)并且四个具有环形铁粒幼红细胞(RS+)。
在队列1和2中,ActRIIA/B-hFc为良好耐受的。未报告药物相关严重有害事件(SAE)、剂量限制性毒性或剂量修改。另外,没有患者发展高风险MDS或AML。三个患者中报告了四个处理紧急SAE,所述处理紧急SAE全部被认为与研究药物不相关,包括贫血、发热性疾病、肺炎以及死亡。在完成8周的使用ActRIIA/B-hFc的处理之前,两个患者停止研究药物,一个是归因于被认为与研究药物不相关的死亡,并且一个患者撤回同意。观测到一个严重程度为中度(2级)的斑丘疹的处理相关有害事件。在患者的第一剂量之后报告皮疹并且在后续剂量之后消退,没有复发。
在10个功效可评估参与者中,总体红系反应率为60%(n=6/10),因为10个患者中有六个满足以下终点中的至少一者:血红蛋白增加≥1.5g/dL持续8周、在8周内输注需求降低50%或持续至少8周的输注非依赖性。百分之三十三(n=1/3)的在用ActRIIA/B-hFc处理之前8周内不需要RBC输注的参与者(非输血参与者)具有维持≥8周的≥1.5g/dL的血红蛋白增加。七个输注可评估参与者中有五个(71%)(n=1/2以低输注负荷(LTB)输注并且n=4/5以高输注负荷(HTB)输注;n=2/3非RS并且n=3/4RS+)具有维持≥8周(范围为8-20周,持续)的红系反应并且在8周内输注需求降低至少50%。这些患者称为输注反应者(TR)。此外,57%(n=4/7)的输注可评估患者实现持续至少8周的输注非依赖性(图13A)。
在输注反应者(TR)(n=5)中所观测的网织红细胞相较于基线的最大增加观测值为24.6x109/L(平均值),范围为从第1天到第29天10.5-41.6x109/L,并且在各剂量之后观测到网织红细胞增加(图13B)。在TR中所观测的血清铁蛋白的最大降低为40.4%(平均值),范围为10-66%,并且在TR中所观测的可溶性转铁蛋白受体(sTfR)的最大增加为52.8%(平均值),范围为29.8-116.4%。
表22.人口分布和基线特征
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在TR中观测到血小板增加(图13C)。TR的平均基线血小板计数为234x109/L(范围104-401x109/L),并且相较于基线的最大增加为130x109/L(平均值),范围32-235x109/L。没有参与者因血小板增多症而需要降低剂量。
概括地说,在RS+和非RS MDS患者中观测到红系反应,包括在初始剂量水平下输注负荷降低。观测到的网织红细胞和sTfR增加以及观测到的血清铁蛋白减少表明ActRIIA/B-hFc的施用可能与红细胞生成增加相关。在TR中观测到了血小板增加。这些数据支持ActRIIA/B-hFc通过潜在地靶向造血作用的多个阶段作为针对MDS中的多系血细胞减少症的治疗的潜能。
实施例3-ActRIIA/B-hFc对患有极低风险、低风险或中风险骨髓发育异常综合征的患者的贫血的影响
在已登记其他参与者并且研究持续时间已增加后,对来自实施例1中所描述的研究的受试者进行第三次评估。下表23中提供了研究中所登记的24个参与者的基线特征。表24中提供了RS+和非RS患者的基线特征的综述。在基线处,与RS+患者相比,非RS患者具有更低的网织红细胞和血小板计数、更高的内源性EPO水平以及更低的sTfR,表明无效造血的程度更高。大部分所登记的患者(19/24,79%)在基线处需要输注并且(20/24,83%)具有多系发育异常。如果截至第三次评估日期患者已完成至少八周的处理,那么他们为功效可评估的。
表23.基线特征
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*队列2(1.5mg/kg)中两个参与者因撤回同意(n=1)和死亡(n=1)而不是功效可评估的,并且队列4(3.75mg/kg)中六个参与者因为他们到第三次评估时未完成8周研究而不是功效可评估的。
表24.根据RS状态的基线特征
截至第三次评估日期,队列1、2、3以及4中24个患者已接受至少一个剂量的ActRIIA/B-hFc。ActRIIA/B-hFc总体上为良好耐受的,截至第三次评估日期没有剂量依赖性发现。未报告药物相关严重有害事件或剂量限制性毒性。最常报告的处理紧急有害事件为恶心、疲劳、腹泻以及呼吸困难,这些全部都不被认为与研究药物有关。四个患者中报告处理相关有害事件,所述处理相关有害事件的严重程度为轻度或中度,并且不引起剂量修改或处理停止。在患者的第一剂量之后,在一个患者中报告斑丘疹的处理相关AE,并且在后续剂量之后消退,没有复发。没有患者发展高风险MDS或急性骨髓性白血病。队列2中两个患者在完成八周的使用ActRIIA/B-hFc的处理之前退出试验,一个是归因于被认为与研究药物不相关的死亡并且一个是归因于撤回患者同意。以下在表25中列出了少数相关AE,并且不存在严重处理相关AE和/或3级或更高级别的处理相关AE。所有严重TEAE均不被认为与研究药物有关。图14中列出了频率>10%的处理紧急AE。队列2中存在一例研究时死亡,所述死亡被认为不与研究药物有关。
表25.截至第三次评估日期相对于安全性群体具有处理紧急有害事件的患者的数目和百分比
*具有以下最高等级的处理相关AE:1级(头痛、四肢疼痛、腹痛),2级(皮疹、腹泻、恶心、外周水肿)。
**具有以下最高等级的严重TEAE:2级(发热、充血性心力衰竭),3级(贫血、肺炎、气胸),5级(死亡-肥胖症相关心脏病),全部被认为与研究药物不相关。
队列1、2以及3中十六个患者截至数据截止日期已完成至少八周的处理和评估(“可评估患者”)。在16个可评估患者中,四个为非输注的(NT,在用ActRIIA/B-hFc处理之前8周内接受0个RBC单位并且具有<10g/dL的血红蛋白水平的受试者),三个为具有低输注负荷的输注受试者(LTB,在用ActRIIA/B-hFc处理之前8周内接受1-3个RBC单位并且具有<10g/dL的血红蛋白水平的受试者),并且九个为具有高输注负荷的输注受试者(HTB,在用ActRIIA/B-hFc处理之前8周内接受4个或更多个RBC单位的受试者)。在12个具有LTB或HTB的输注受试者中,六个不具有环形铁粒幼红细胞(非RS)并且六个具有环形铁粒幼红细胞(RS+)。在16个可评估患者中,8个为非RS并且8个为RS+。队列2中两个患者因撤回同意(n=1)和死亡(n=1)而不是功效可评估的。队列4中六个患者因为他们截至第三次评估日期未完成8周的评估和处理而不是功效可评估的。截至第三次评估日期,50%(n=8/16)的可评估患者实现总体红系反应,其中三个为非RS并且其中五个为RS+,总体红系反应定义为满足以下两个终点中的一者:
·IWG 2006血液学改善-红系(HI-E),其定义为:
ο在LTB和NT患者中血红蛋白增加≥1.5g/dL持续八周;或
ο与HTB患者中周期1第1天之前的八周时间相比,在试验期间的任何八周时间内输注的红血细胞(RBC)单位减少≥4个。
·在基线处需要输注≥2个RBC单位的患者中持续至少八周的输注非依赖性(TI)。
在可评估患者中,43.8%(n=7/16)在八周时间内实现HI-E,并且45.5%(n=5/11)在基线处接受≥2个RBC单位的输注患者实现持续至少八周的TI。RS+患者的TI反应率为3/6(50%)并且非RS患者为2/5(50%)。大部分输注受试者(9/11,82%)为HTB并且在图15中可观察到超过8周的输注负荷降低。
在RS+与非RS MDS患者中,ActRIIA/B-hFc处理均展现红细胞生成和血小板生成的改善。在实现HI-E或TI终点的患者中观测到网织红细胞增加、血清可溶性转铁蛋白受体(sTfR)增加以及血清铁蛋白减少(图16A至图16C)。sTfR的诱导和铁蛋白的减少是随着处理而进行的。在尚未实现HI-E或TI的患者中也在较低程度上观测到网织红细胞增加和sTfR诱导。在实现HI-E或TI终点的患者中观测到血小板持续增加(图16D),这支持ActRIIA/B-hFc在诱导血小板生成中的作用。未观测到血小板增多症或血栓事件。
概括地说,在此正在进行的研究中,在高达3.75mg/kg每4周一次方案中ActRIIA/B-hFc总体上为良好耐受的。在非RS与RS+参与者两者中均实现HI-E(43.8%)和输注非依赖性(45.5%),并且在非RS与RS+患者中均观测到临床上有意义的输注负荷降低和输注非依赖性。这些数据表明,ActRIIA/B-hFc可潜在地在具有无效造血的患者中促进红细胞生成和血小板生成。所观测的网织红细胞和可溶性转铁蛋白受体增加以及所观测的血清铁蛋白减少表明,ActRIIA/B-hFc的施用可能与增加的红细胞生成相关,血小板增加表明对造血作用的更广泛影响。
实施例4-ActRIIA/B-hFc对患有极低风险、低风险或中风险骨髓发育异常综合征的患者的贫血的影响
在已登记其他参与者并且研究持续时间已增加后,对来自实施例1中所描述的研究的受试者进行第四次评估。截至第四次评估日期,研究的队列1-5中31个患者已接受至少一个剂量的ActRIIA/B-hFc。在这31个患者中观测到截至第四次评估日期ActRIIA/B-hFc总体上为良好耐受的。未报告药物相关严重有害事件或剂量限制性毒性。最常报告的处理紧急有害事件为呼吸困难、疲劳、贫血、腹泻以及恶心。在四个患者中报告了处理相关有害事件,所述处理相关有害事件的严重程度为轻度或中度,并且不引起剂量修改或处理停止(1级:头痛、四肢疼痛、腹痛;2级:皮疹、腹泻、恶心、外周水肿)。在一个患者中在患者的第一剂量之后报告斑丘疹的处理相关AE,并且在后续剂量之后消退,没有复发。没有患者发展高风险MDS或急性骨髓性白血病。两个患者在完成八周的使用ActRIIA/B-hFc的处理之前退出试验,一个是归因于被认为不与研究药物相关的死亡并且一个是归因于撤回同意。
队列1-4中二十二个患者截至第四次评估日期已完成八周的处理和评估(“可评估患者”)。22个可评估患者由以下组成:五个非输注患者(NT,在用ActRIIA/B-hFc处理之前8周内接受0个RBC单位并且具有<10g/dL的血红蛋白水平的受试者),具有低输注负荷的五个输注患者(LTB,在用ActRIIA/B-hFc处理之前8周内接受1-3个RBC单位并且具有<10g/dL的血红蛋白水平的受试者),以及12个具有高输注负荷的输注患者(HTB,在用ActRIIA/B-hFc处理之前8周内接受4个或更多个RBC单位的受试者)。输注LTB患者中有两个在基线处需要<2个红血细胞单位。在17个输注LTB和HTB患者中,八个不具有环形铁粒幼红细胞(非RS)并且九个具有环形铁粒幼红细胞(RS阳性)。截至第四次评估日期,50%(n=11/22)的可评估患者实现总体红系反应,总体红系反应定义为满足以下两个终点中的一者:
·IWG 2006血液学改善-红系(HI-E),其定义为:
ο在LTB和NT患者中血红蛋白增加≥1.5g/dL持续八周;或
ο与HTB患者中周期1第1天之前的八周时间相比,在试验期间的任何八周时间内输注的红血细胞(RBC)单位减少≥4个。
·在基线处需要输注≥2个RBC单位的输注依赖性患者中持续至少八周的输注非依赖性(TI)。
截至第四次评估日期,研究的队列1-4中的可评估患者的其他数据包括:
·40.9%(n=9/22)的可评估群体在八周时间内实现HI-E。
·46.7%(n=7/15)的在基线处接受≥2个红血细胞单位的输注患者实现持续至少八周的TI。在这些患者中,55.6%(n=5/9)为RS阳性并且33.3%(n=2/6)为非RS。图17中示出了这些数据。
在队列1-4中的患者中,ActRIIA/B-hFc处理展现红细胞生成和血小板生成改善。在实现HI-E或TI终点的患者中观测到网织红细胞增加、血清可溶性转铁蛋白受体(sTfR)增加以及血清铁蛋白减少(图18A至图18C),这支持ActRIIA/B-hFc在上调红细胞生成中的作用。在实现HI-E或TI终点患者中观测到血小板持续增加(图18D),这支持ActRIIA/B-hFc在上调血小板生成中的作用。没有患者因血小板增多症而需要降低剂量。
概括地说,截至第四次评估日期,在RS+与非RS患者中均观测到临床上有意义的输注负荷降低和输注非依赖性。截至第四次评估日期剂量水平总体上为良好耐受的。在RS+与非RS患者中还观测到血液学参数增加,包括网织红细胞、血红蛋白以及血小板增加。所观测的网织红细胞和可溶性转铁蛋白受体增加以及所观测的血清铁蛋白减少表明,ActRIIA/B-hFc的施用可能与增加的红细胞生成相关,血小板增加表明对造血作用的更广泛影响。
实施例5-ActRIIA/B-hFc对患有极低风险、低风险或中风险骨髓发育异常综合征的患者的贫血的影响
在研究持续时间已增加后,对来自实施例1中所描述的研究的受试者进行第五次评估。下表26中提供了研究中所登记的31个参与者的基线特征。这些患者中约87%在诊断时呈现患有MLD并且大多数为输注依赖性的(约84%)。这些参与者包括在基线处在八周筛选窗中得到的在不同输注负荷(NT、LTB以及HTB)情况下各剂量水平下约1:1比率的RS+和非RS患者,大部分参与者为HTB。此外,58%的患者为HTB并且血清铁蛋白升高。
表26.基线特征
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*具有至少8周的处理后HGB和输注评估的患者定义为功效可评估的。
**基于所有HTB患者的百分比。
截至第三次评估日期,队列1-5中31个患者已接受至少一个剂量的ActRIIA/B-hFc。在已接受至少一个剂量的ActRIIA/B-hFc的队列1-5中的31个患者中观测到在所施用的所有剂量水平下ActRIIA/B-hFc总体上为良好耐受的。未报告药物相关严重有害事件或剂量限制性毒性,并且没有患者进展至高风险MDS或AML。最常报告的处理紧急有害事件(≥10%)为呼吸困难、疲劳、贫血、腹泻、头痛以及恶心。在五个患者中报告处理相关有害事件,所述处理相关有害事件的严重程度为轻度或中度。十个患者经历SAE,但都不为药物相关的。在完成用ActRIIA/B-hFc处理之前,四个患者退出研究,一个是归因于被认为与研究药物不相关的死亡(根据尸体解剖报告是归因于肥胖症相关心脏病),一个是归因于撤回同意,并且两个是归因于不相关的处理紧急有害事件;都不需要剂量修改。下表27中提供了队列1-5中接受至少一个剂量的ActRIIA/B-hFc的患者的安全性数据。图19中示出了频率≥10%的处理紧急AE。
表27.截至第五次评估日期具有处理紧急有害事件的患者的数目和百分比
队列1-5中二十七个患者截至第五次评估日期已完成至少八周的处理和评估(“可评估患者”)。在27个可评估患者中,五个为非输注(NT,在用ActRIIA/B-hFc处理之前8周内接受0个RBC单位并且具有≤10g/dL的血红蛋白水平的受试者),六个为具有低输注负荷的输注受试者(LTB,在用ActRIIA/B-hFc处理之前8周内接受1-3个RBC单位并且具有≤9g/dL的血红蛋白水平的受试者),并且16个为具有高输注负荷的输注受试者(HTB,在用ActRIIA/B-hFc处理之前8周内接受4个或更多个RBC单位并且具有≤9g/dL的血红蛋白水平的受试者)。输注LTB患者中有两个在基线处需要<2个红血细胞(“RBC”)单位。在在基线处需要≥2个RBC单位的20个具有LTB或HTB的输注受试者中,八个为非RS并且12个为RS+。截至第五次评估日期,51.9%(n=14/27)的可评估患者实现总体红系反应,总体红系反应定义为满足以下两个终点中的一者:
·IWG 2006血液学改善-红系(HI-E),其定义为:
ο在LTB和NT患者中血红蛋白增加≥1.5g/dL持续八周;或
ο与HTB患者中周期1第1天之前的八周时间相比,在试验期间的任何八周时间内输注的红血细胞(RBC)单位减少≥4个。
·在基线处需要输注≥2个RBC单位的输注依赖性患者中持续至少八周的输注非依赖性(TI)。
另外,当集中于单独HTB患者时,11/16或68.75%实现总体红系反应。下表28中概括了这些数据。
表28.MDS患者中实现的八周终点的功效概述
*基线输注需求≥2个RBC单位
n=各类别中的反应者;m=截至第五次评估日期的8周可评估群体
在可评估患者中,46.2%(n=12/26)在八周时间内实现HI-E,并且45.0%(n=9/20)的在基线处接受≥2个RBC单位的输注患者实现持续至少八周的TI。在这20个患者中,12个为RS+并且八个为非RS,其中50.0%(n=6/12)的RS+患者实现持续至少八周的TI并且37.5%(n=3/8)的非RS患者实现持续至少八周的TI。此外,43.8%(n=7/16)的HTB患者实现持续至少8周的TI。图20示出了在具有在基线处输注≥2个RBC单位的输注负荷的输注依赖性患者中在ActRIIA/B-hFc处理情况下在8周时间内的最大输注减少观测值(n=20)。在RS+与非RS输注依赖性患者中均实现HI-E和TI,包括在7/16的HTB患者中。需要在基线处输注≥2个RBC单位的四个LTB患者中有两个(2/4)也实现TI。此外,在实现HI-E或TI的HTB患者中观测到血小板持续增加(图21)。在实现HI-E或TI的HTB患者中相较于基线的最大血小板增加为96.6x109/L(平均值),范围为13.8-234.8x109/L。没有患者因血小板增多症而需要降低剂量。在所有所登记的HTB参与者中观测到与反应无关的网织红细胞增加(图22)以及血清铁蛋白减少和血清可溶性转铁蛋白受体水平增加(图23),表明红细胞生成得到改善。在HTB患者中相较于基线的平均最大网织红细胞增加为62.9x109/L,范围为15.7-145.8x109/L。在HTB患者中,血清铁蛋白升高(平均基线血清铁蛋白为1359.2ng/mL,范围为230.5至5829.1ng/mL),指示输注相关铁过载。在三个月的处理之后,用ActRIIA/B-hFc处理的患者具有29%的血清铁蛋白减少(平均最大铁蛋白减少为29.1%,范围为0至92%)。平均最大sTfR增加为52.9%,范围为9.9-116.4%。图24示出了在头八周的给药中所有患者的剂量相关血液学参数变化(平均网织红细胞和血红蛋白变化)。网织红细胞与血红蛋白均随ActRIIA/B-hFc的剂量增加而增加。
概括地说,在用ActRIIA/B-hFc处理的参与者中观测到红系参数与血小板的变化。在不同的输注负荷下在用ActRIIA/B-hFc处理的RS+与非RS MDS患者中均已观测到红系反应,其中44%的HTB患者在此3个月处理研究期间实现TI。在HTB参与者中还观测到血清铁蛋白减少。所观测的ActRIIA/B-hFc对网织红细胞、可溶性转铁蛋白受体以及血小板的影响支持所提出的ActRIIA/B-hFc增加造血作用的机制。
实施例6-ActRIIA/B-mFc对血小板的影响
经由腹膜内(IP)施用给予十一周龄C57BL/6小鼠TBS(媒介物)或ActRIIA/B-mFc(10mg/kg)。给药后十二小时对全血进行取样,并且使用兽医学血液学分析仪(HeskaElement HT5)确定血小板计数。然后将小鼠安乐死,并且从股骨提取骨髓。将骨髓细胞用针对谱系(Perc-Cy5)、sca1(BV525)、cKit(Alexa750)、CD41(APC)以及CD150(Pcy7)的抗体染色并且在流式细胞仪(Cytoflex,Beckman coulter)上分析。基于Lin-;sca1-;ckit+;CD150+;CD41+细胞对巨核细胞祖细胞进行门控。
图3示出了ActRIIA/B-mFc对血小板生成的影响。在给药后12小时内,单一剂量的ActRIIA/B-mFc使循环血小板数目和骨髓巨核细胞祖细胞增加。对血小板的影响的时间暗示ActRIIA/B-mFc对前血小板终末成熟为血小板的直接影响并且巨核细胞祖细胞数据证实ActRIIA/B-mFc影响血小板形成过程的早期阶段。数据表示为平均值±SEM。用史都登氏t检验进行统计分析;*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001;****p<0.0001。
实施例7-ActRIIA/B-mFc对巨核细胞分化和成熟的影响
经由腹膜内施用给予十一周龄C57BL/6小鼠TBS(媒介物)或ActRIIA/B-mFc(10mg/kg)。十二和二十四小时后将小鼠安乐死,并且从股骨提取骨髓。将骨髓细胞固定在乙醇中随后与RNA酶处理并行,用碘化丙锭(PI)和抗CD41(FITC,Efferet)抗体染色。通过流式细胞仪(Cytoflex,Beckman coulter)对样品进行分析。对CD41+有核细胞(PI+细胞)的倍数性进行分析。图式表示各倍数性阶段的细胞百分比。12小时N=3并且24小时N=2。对12小时时间点的CD41+细胞进行t检验以便进行统计分析。数据呈现为平均值±SEM。
图4表明,如通过在处理之后12小时时CD41+巨核细胞祖细胞的数目增加并且到24小时时多倍体巨核细胞的数目增加所示,ActRIIA/B-mFc处理展现对巨核细胞分化和成熟的直接影响。这些数据指示对血小板生成路径的祖细胞的早期效应,表明ActRIIA/B-mFc使巨核细胞前体向后续成熟阶段的分化增加,并且证实ActRIIA/B-mFc处理使得可能被引发产生更多前血小板的巨核细胞的数目更大。
实施例8-ActRIIA/B-mFc对血小板在消耗之后恢复的影响
将十二周龄小鼠用抗GP1bα(0.08mg/kg,Efferet)或IgG对照处理。在处理之后第4天,将抗GP1bα处理组进一步划分成接受媒介物或ActRIIA/B-mFc(7.5mg/kg)处理。在抗GP1bα给药后在所指示的时间点测量血小板。在处理后第10天,将小鼠安乐死,并且收获骨髓细胞。将骨髓细胞固定在冰冷的100%乙醇中并且与RNA酶处理(2mg/ml,Invitrogen)并行用碘化丙锭(PI)(200μg/mL,Sigma-Aldrich)和抗CD41(FITC缀合的,Emfret Analytics)抗体染色。通过流式细胞仪(Cytoflex,Beckman coulter)对样品进行分析并且测量CD41+有核细胞(PI+细胞)百分比。
如图5A中所示,在免疫血小板减少症的小鼠模型中,与媒介物处理的小鼠相比,用ActRIIA/B-mFc处理的小鼠展现在血小板消耗后血小板数目的加速恢复。这些数据表明,ActRIIA/B-mFc可潜在地促进更快地从血小板减少症恢复。另外,如图5B至图5C中所示,在血小板消耗之后第10天,与媒介物处理组相比,ActRIIA/B-mFc处理组的骨髓中CD41+巨核细胞祖细胞的数目增加25%并且4N倍数性水平更高,表明在急性血小板减少症情况下,ActRIIA/B-mFc处理潜在地通过加快巨核细胞前体的成熟促进巨核细胞的分化,并且促使小鼠加速恢复。对于血小板数据,使用重复测量混合效应模型化进行统计分析。所示出的个别比较来自图基事后检验。对于CD41数据,使用单因素ANOVA进行统计分析并且使用图基事后检验计算个别比较。*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001;****p<0.0001。N=9/组。
实施例9-单一剂量的ActRIIA/B-mFc对血小板数目的影响
经由皮下施用给予十一周龄C57BL/6小鼠单一剂量的TBS(媒介物)或ActRIIA/B-mFc(10mg/kg)。在研究第37天、第51天以及第85天,对两个给药组的单独小鼠队列进行全血取样,并且使用兽医学血液学分析仪(Heska Element HT5)确定血小板计数。
如图6中所示,在第37天、第51天以及第85天,单一剂量的ActRIIA/B-mFc产生增加的循环血小板。数据显示为平均值±SEM。使用史都登氏t检验进行统计分析;*p≤0.05;**p≤0.01;***p≤0.001;****p≤0.0001。
实施例10-ActRIIA/B-mFc对离体巨核细胞前体的影响
从11周龄C57BL/6小鼠分离骨髓细胞并且用激活素A(5mg/kg)、ActRIIA/B-mFc(10mg/kg)或两者的组合处理六天。六天之后收获细胞并且使用流式细胞术进行分析(N=2)。
如图7中所示,离体激活素A处理使2N倍数性水平增加并且使多倍性的程度降低(降低更高的倍数性水平),这表明激活素A起到阻止这些细胞成熟的作用。用ActRIIA/B-mFc离体处理逆转激活素介导的巨核细胞前体变化,表明ActRIIA/B-mFc抑制激活素A对倍数性的影响。与激活素A组相比,在激活素A+ActRIIA/B-mFc处理组中出现更高的多倍体水平。数据表示为平均值±SEM。
实施例11-抗激活素A抗体对血小板数目的影响
经由腹膜内施用给予十周龄C57BL/6雄性小鼠TBS(媒介物)、抗激活素A抗体(WO2008031061A2中所描述的,5mg/kg)或ActRIIA/B-mFc(10mg/kg)。给药后二十四小时对全血进行取样,并且使用兽医学血液学分析仪(Hematrue)确定血小板计数。
如图8中所示,用抗激活素A抗体以及用ActRIIA/B-mFc处理使野生型小鼠中的血小板增加。抗激活素A抗体情况下观测到的血小板增加表明抑制激活素A可至少部分使得在ActRIIA/B-mFc情况下观测到血小板水平增加。数据表示为平均值±SEM。使用Prism 9(GraphPad Software,San Diego,CA,USA)使用单因素ANOVA加Fisher的LSD分析数据。*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001,****p<0.0001。
实施例12-在骨髓纤维化的TPO高模型中ActRIIA/B-mFc对血小板、红血细胞参数、脾脏重量以及免疫细胞的影响
骨髓纤维化的TPO高模型通过升高的对促血小板生成素的暴露诱导骨髓纤维化样病变,促血小板生成素是巨核细胞祖细胞增殖和发展的天然内分泌诱导剂。为七周龄C57BL/6白化小鼠(B6(Cg)-Tyr,Jackson Laboratory)尾部静脉注射克隆至pLEV113质粒(Lake Pharma)中的0.75mg/kg促血小板生成素(TPO)表达质粒。以流体动力学方法进行注射,其中在短时间(6-10秒)内注射100ml/kg的体积。在TPO注射之后第3天,将小鼠分成2组,每周两次接受媒介物(TBS)或ActRIIA/B-mFc(7.5mg/kg)。在TPO注射之后第14天将小鼠处死。使用Heska Element HT5兽医学血液学分析仪测量血液学参数。
如图9中所示,TPO HDI使血小板数目和体积增加。用ActRIIA/B-mFc处理与血小板的扩增显著减弱相关。高血小板水平与血小板增多症相关,血小板增多症可引起继发性骨髓纤维化。这些数据可表明,ActRIIA/B-mFc正在重新平衡定向至巨核细胞谱系的细胞的数目。N=10-12个小鼠/组。结果表示为平均值±SEM。通过单因素ANOVA进行统计分析。****=p<0.0001。
数据证实,在TPO过表达14天之后TPO高骨髓纤维化模型为贫血的(图10)。用ActRIIA/B-mFc处理与RBC度量显著改善相关并且在此模型中似乎减少贫血的发展。N=10-12个小鼠/组。结果表示为平均值±SEM。通过单因素ANOVA进行统计分析。**=p<0.01;***=p<0.001;****=p<0.0001。
此模型中巨核细胞生长和增殖的扩大使骨髓进行造血作用的能力减小,从而诱导肝脏和脾脏中的补偿性骨髓外造血作用(图11)。这些数据表明,在用ActRIIA/B-mFc处理的小鼠中脾肿大显著减轻,指示减少的脾骨髓外造血作用,这可能是归因于对此补偿过程的需要减少。N=10-12个小鼠/组。结果表示为平均值±SEM。通过单因素ANOVA进行统计分析。*=p<0.05;****=p<0.0001。
最后,如图12中所示,TPO HDI使得白血细胞、嗜中性粒细胞以及淋巴细胞快速增加,并且用ActRIIA/B-mFc处理使TPO介导的白血细胞和淋巴细胞增加减少。TPO通过JAK2路径进行信号传导。JAK2路径为增殖性的并且活化性突变与赘生性综合征和发展骨髓性白血病的倾向相关。N=10-12个小鼠/组。结果表示为平均值±SEM。通过单因素ANOVA进行统计分析。***=p<0.001;****=p<0.0001。
实施例13-巨核细胞前体细胞表达激活素、GDF、BMP以及TGF-β配体以及其同源受体
将来自三个未处理的小鼠的骨髓为汇集并且针对巨核细胞标记物CD41进行选择。在细胞经历使用大鼠抗小鼠CD41(克隆-MWReg30)的正性选择后,经由Zymo ResearchDirect-zol RNA MicroPrep试剂盒提取RNA。然后将总RNA转化为cDNA(QuantiTect逆转录试剂盒)并且将每孔至少20ng添加至小鼠特异性TGF-β家族路径TaqMan基因表达阵列(ThermoFisher定制基因阵列)中。进行定量实时PCR,并且使用2^δCt值绘制结果。使用包括18s、Gusb、Gapdh、Actb以及Ubc的看家基因来规范化TGF-β基因表达。结果示于图25A至图25B中并且代表3次独立的实验重复。如图25A至图25B中所示,鼠骨髓巨核细胞前体表达激活素、GDF、BMP以及TGF-β配体以及其同源受体,包括激活素受体IIA和IIB。这些数据证实TGF-β路径参与巨核细胞的分化以及正常巨核细胞功能的能力。编码激活素A蛋白的基因INHBA与其他家族成员配体相比适度地表达。与ActRIIA/B-mFc直接相关的受体和配体为粗体。ND,未检出。
实施例14-通过施用包括细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱来治疗MDS相关血细胞减少症
根据本文所公开的方法,本领域的医师可对患有归因于低风险、极低风险或中风险骨髓发育异常综合征的血细胞减少症(例如贫血和/或血小板减少症)的受试者(诸如人患者)进行治疗,以便增加红血细胞计数,增加血红蛋白水平,增加红细胞压积,增加网织红细胞,增加红系祖细胞的成熟和/或分化,增加晚期红系前体成熟,增加早期红系前体和/或祖细胞的数目,促进红系前体和/或祖细胞通过红细胞生成发生进展,将早期祖细胞招募至红系谱系中,增加血小板水平,增加或诱导巨核细胞分化和/或成熟,减少血小板祖细胞的累积,增加巨核细胞祖细胞(例如增加巨核细胞祖细胞更新)和/或促进或增加血小板形成或产生。治疗方法可包括将受试者诊断或鉴定为使用IPSS-R治疗和/或测量血红蛋白水平和血小板水平的候选者。为了治疗受试者,本领域的医师可向受试者施用含有包括细胞外ActRIIA变体(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)的ActRIIA配体阱的组合物。可例如通过肠胃外注射(例如静脉内或皮下注射)向受试者施用含有包括细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱的组合物以治疗MDS相关血细胞减少症(例如贫血和/或血小板减少症)。包括细胞外ActRIIA变体(例如具有SEQ IDNO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)的ActRIIA配体阱以治疗有效量施用,诸如0.01至500mg/kg(例如0.01、0.1、0.2、0.3、0.325、0.35、0.375、0.4、0.5、0.75、1、1.25、1.5、1.75、2、2.25、2.5、2.75、3、3.25、3.5、3.75、4、4.25、4.5、4.75、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、100、150、200、250、300、350、400、450或500mg/kg)。在一些实施方案中,每两月、每月一次、每四周一次、每两周一次或至少每周一次或更频繁地(例如一周1次、2次、3次、4次、5次、6次或7次或更多次地)施用包括细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱。包括细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱以足以增加红血细胞计数、增加血红蛋白水平、增加红细胞压积、增加网织红细胞、增加红系祖细胞的成熟和/或分化、增加晚期红系前体成熟、增加早期红系前体和/或祖细胞的数目、促进红系前体和/或祖细胞通过红细胞生成发生进展、将早期祖细胞招募至红系谱系中、增加血小板水平、增加或诱导巨核细胞分化和/或成熟、减少血小板祖细胞的累积、增加巨核细胞祖细胞和/或促进或增加血小板形成或产生的量施用。
在向患者施用组合物之后,本领域的开业医师可通过多种方法监测患者响应于疗法的改善。举例来说,医师可使用血液测试监测患者的红血细胞计数、血红蛋白水平、红细胞压积或血小板计数。与施用组合物之前的测试结果相比,在施用组合物之后患者的红血细胞计数、血红蛋白水平、红细胞压积、网织红细胞和/或血小板计数增加的发现表明患者对治疗正有利地作出反应。可按需要确定和施用后续剂量。
实施例15-通过施用包括细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱来治疗CMML-0相关血细胞减少症
根据本文所公开的方法,本领域的医师可治疗患有归因于CMML-0的血细胞减少症(例如贫血和/或血小板减少症)的受试者(诸如人患者),以便增加红血细胞计数,增加血红蛋白水平,增加红细胞压积,增加网织红细胞,增加红系祖细胞的成熟和/或分化,增加晚期红系前体成熟,增加早期红系前体和/或祖细胞的数目,促进红系前体和/或祖细胞通过红细胞生成发生进展,将早期祖细胞招募至红系谱系中,增加血小板水平,增加或诱导巨核细胞分化和/或成熟,减少血小板祖细胞的累积,增加巨核细胞祖细胞(例如增加巨核细胞祖细胞更新)和/或促进或增加血小板形成或产生。治疗方法可包括血红蛋白水平和血小板水平。为了治疗受试者,本领域的医师可向受试者施用含有包括细胞外ActRIIA变体(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)的ActRIIA配体阱的组合物。可例如通过肠胃外注射(例如静脉内或皮下注射)向受试者施用含有包括细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱的组合物以治疗CMML-0相关血细胞减少症(例如贫血和/或血小板减少症)。包括细胞外ActRIIA变体(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)的ActRIIA配体阱以治疗有效量施用,诸如0.01至500mg/kg(例如0.01、0.1、0.2、0.3、0.325、0.35、0.375、0.4、0.5、0.75、1、1.25、1.5、1.75、2、2.25、2.5、2.75、3、3.25、3.5、3.75、4、4.25、4.5、4.75、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、100、150、200、250、300、350、400、450或500mg/kg)。在一些实施方案中,每两月、每月一次、每四周一次、每两周一次或至少每周一次或更频繁地(例如一周1次、2次、3次、4次、5次、6次或7次或更多次地)施用包括细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱。包括细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱以足以增加红血细胞计数、增加血红蛋白水平、增加红细胞压积、增加网织红细胞、增加红系祖细胞的成熟和/或分化、增加晚期红系前体成熟、增加早期红系前体和/或祖细胞的数目、促进红系前体和/或祖细胞通过红细胞生成发生进展、将早期祖细胞招募至红系谱系中、增加血小板水平、增加或诱导巨核细胞分化和/或成熟、减少血小板祖细胞的累积、增加巨核细胞祖细胞和/或促进或增加血小板形成或产生的量施用。
在向患者施用组合物之后,本领域的开业医师可通过多种方法监测患者响应于疗法的改善。举例来说,医师可使用血液测试监测患者的红血细胞计数、血红蛋白水平、红细胞压积或血小板计数。与施用组合物之前的测试结果相比,在施用组合物之后患者的红血细胞计数、血红蛋白水平、红细胞压积、网织红细胞和/或血小板计数增加的发现表明患者对治疗正有利地作出反应。可按需要确定和施用后续剂量。
实施例16-通过施用含有细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱来治疗骨髓纤维化
根据本文所公开的方法,本领域的医师可治疗患有骨髓纤维化(例如PMF、ET后MF以及PV后MF)并且患有贫血的受试者(诸如人患者),以便增加红血细胞计数,增加血红蛋白水平,增加红细胞压积,减少RBC输注,促成输注非依赖性,减小脾脏体积,减轻骨质硬化,减轻骨髓纤维化和/或治疗贫血。治疗方法可包括通过测量血红蛋白水平将受试者诊断或鉴定为进行治疗的候选者。为了治疗受试者,本领域的医师可向受试者施用含有包含细胞外ActRIIA变体(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)的ActRIIA配体阱的组合物。可例如通过肠胃外注射(例如静脉内或皮下注射)向受试者施用含有包含细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱的组合物。含有细胞外ActRIIA变体(例如具有SEQ ID NO:1-72(例如SEQ ID NO:6-72)中的任一者的序列的细胞外ActRIIA变体)的ActRIIA配体阱以治疗有效量施用,诸如0.01至500mg/kg(例如0.01、0.1、0.2、0.3、0.325、0.35、0.375、0.4、0.5、0.75、1、1.25、1.5、1.75、2、2.25、2.5、2.75、3、3.25、3.5、3.75、4、4.25、4.5、4.75、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、100、150、200、250、300、350、400、450或500mg/kg)。在一些实施方案中,每两月、每月一次、每四周一次、每两周一次或至少每周一次或更频繁地(例如一周1次、2次、3次、4次、5次、6次或7次或更多次地)施用包括细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱。含有细胞外ActRIIA变体的ActRIIA配体阱以足以增加红血细胞计数、增加血红蛋白水平、增加红细胞压积、减少RBC输注、促成输注非依赖性、减小脾脏体积、减轻骨质硬化、减轻骨髓纤维化和/或治疗贫血的量施用。
在向患者施用组合物之后,本领域的开业医师可通过多种方法监测患者响应于疗法的改善。举例来说,医师可使用血液测试监测患者的红血细胞计数、血红蛋白水平或红细胞压积。与施用组合物之前测试结果相比,在施用组合物之后患者的红血细胞计数、血红蛋白水平或红细胞压积增加的发现表明患者对治疗正有利地作出反应。可按需要确定和施用后续剂量。
其他实施方案
虽然已结合特定实施方案描述本发明,但应了解,本发明能够进一步修改,并且本申请旨在涵盖对本发明的任何变化、使用或变更,这些变化、使用或变更总体上遵循本发明的原理并且包括在本发明所属领域内的已知或惯常实践范围内对本公开的此类偏离,并且本申请可应用于上文阐述的基本特征。
所有公布、专利以及专利申请以全文引用的方式并入本文中,所达到的程度如同各个别公布、专利或专利申请特定地并且个别地被指示以全文引用的方式并入本文中一样。
其他实施方案在以下权利要求书内。
Claims (84)
1.一种治疗患有骨髓发育异常综合征的受试者的血细胞减少症的方法,所述受试者尚未接受使用阿扎胞苷、地西他滨、来那度胺、罗特西普或索特西普的现有治疗,所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的ActRII信号传导抑制剂的步骤。
2.一种治疗患有骨髓发育异常综合征的受试者的血细胞减少症的方法,所述受试者被鉴定为具有大于100mIU/mL的红细胞生成素水平,所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的ActRII信号传导抑制剂的步骤。
3.一种在有需要的受试者中促成输注非依赖性的方法,所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的ActRII信号传导抑制剂的步骤。
4.如权利要求3所述的方法,其中所述受试者患有与骨髓发育异常综合征相关的血细胞减少症。
5.如权利要求3所述的方法,其中所述受试者患有与慢性骨髓单核细胞性白血病(CMML)相关的血细胞减少症。
6.如权利要求3所述的方法,其中所述受试者患有与骨髓纤维化相关的血细胞减少症。
7.如权利要求1、2以及4中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征为骨髓发育异常综合征伴单系发育异常、骨髓发育异常综合征伴多系发育异常、骨髓发育异常综合征伴环形铁粒幼红细胞、骨髓发育异常综合征伴分离的del(5q)、骨髓发育异常综合征伴过量原始细胞、不能分型的骨髓发育异常综合征或骨髓发育异常综合征/骨髓增生性赘瘤伴环形铁粒幼红细胞和血小板增多症。
8.如权利要求7所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征为骨髓发育异常综合征伴多系发育异常。
9.如权利要求1、2、4、7以及8中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征为极低风险、低风险或中风险骨髓发育异常综合征。
10.如权利要求1、2、4以及7-9中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征为环形铁粒幼红细胞阳性骨髓发育异常综合征。
11.如权利要求1、2、4以及7-9中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征为非环形铁粒幼红细胞骨髓发育异常综合征。
12.如权利要求1、2、4以及7-11中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征与造血细胞终末成熟缺陷相关。
13.如权利要求1、2、4以及7-12中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征与早期造血作用缺陷相关。
14.如权利要求1、2、4以及7-13中任一项所述的方法,其中所述骨髓发育异常综合征与低细胞性骨髓相关。
15.一种治疗患有CMML的受试者的血细胞减少症的方法,所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的ActRII信号传导抑制剂的步骤。
16.如权利要求15所述的方法,其中所述受试者尚未接受使用阿扎胞苷、地西他滨、来那度胺、罗特西普或索特西普的现有治疗。
17.如权利要求15或16所述的方法,其中所述受试者具有无效造血。
18.如权利要求5和15-17中任一项所述的方法,其中所述CMML为CMML-0。
19.一种治疗患有原发性骨髓纤维化(PMF)、特发性血小板增多症后骨髓纤维化(ET后MF)或真性红细胞增多症后骨髓纤维化(PV后MF)的受试者的血细胞减少症的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂的步骤。
20.一种治疗患有PMF、ET后MF或PV后MF的受试者的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂的步骤。
21.一种减轻患有骨髓纤维化的受试者的骨质硬化的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂的步骤。
22.如权利要求21所述的方法,其中所述方法还包括在所述ActRII信号传导抑制剂的所述施用之后评估骨质硬化。
23.如权利要求21所述的方法,其中在所述ActRII信号传导抑制剂的所述施用之前所述受试者被鉴定为具有骨质硬化。
24.如权利要求21所述的方法,其中所述方法还包括在所述ActRII信号传导抑制剂的所述施用之前将所述受试者鉴定为具有骨质硬化。
25.一种减轻患有骨髓纤维化的受试者的脾肿大的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂的步骤。
26.如权利要求25所述的方法,其中所述方法还包括在所述ActRII信号传导抑制剂的所述施用之后评估脾脏体积。
27.如权利要求25所述的方法,其中在所述ActRII信号传导抑制剂的所述施用之前所述受试者被鉴定为具有脾肿大。
28.如权利要求25所述的方法,其中所述方法还包括在所述ActRII信号传导抑制剂的所述施用之前将所述受试者鉴定为具有脾肿大。
29.一种减轻患有骨髓纤维化的受试者的骨髓纤维化的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂的步骤。
30.如权利要求29所述的方法,其中所述方法还包括在所述ActRII信号传导抑制剂的所述施用之后评估骨髓纤维化。
31.如权利要求29所述的方法,其中在所述ActRII信号传导抑制剂的所述施用之前所述受试者被鉴定为患有骨髓纤维化。
32.如权利要求29所述的方法,其中所述方法还包括在所述ActRII信号传导抑制剂的所述施用之前将所述受试者鉴定为患有骨髓纤维化。
33.一种降低患有骨髓纤维化的受试者中的血小板数目或血小板体积的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂的步骤。
34.如权利要求33所述的方法,其中所述方法还包括在所述ActRII信号传导抑制剂的所述施用之后评估血小板数目或血小板体积。
35.如权利要求33所述的方法,其中在所述ActRII信号传导抑制剂的所述施用之前所述受试者被鉴定为具有高血小板水平。
36.如权利要求33所述的方法,其中所述方法还包括在所述ActRII信号传导抑制剂的所述施用之前将所述受试者鉴定为具有高血小板水平。
37.一种治疗患有骨髓纤维化的受试者的血细胞减少症的方法,所述受试者已停止用JAK抑制剂治疗,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂的步骤。
38.如权利要求37所述的方法,其中在用所述JAK抑制剂治疗之后所述受试者的疾病复发。
39.如权利要求37所述的方法,其中所述受试者难以用所述JAK抑制剂治疗。
40.如权利要求37所述的方法,其中所述受试者对用JAK抑制剂治疗不耐受或不再满足继续用所述JAK抑制剂治疗的风险/效益比。
41.一种治疗患有骨髓纤维化的受试者的血细胞减少症的方法,所述受试者不适合用JAK抑制剂治疗,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂的步骤。
42.如权利要求6和21-41中任一项所述的方法,其中所述骨髓纤维化为PMF、ET后MF或PV后MF。
43.如权利要求20-36和42中任一项所述的方法,其中所述受试者患有血细胞减少症。
44.如权利要求6和19-43中任一项所述的方法,其中所述骨髓纤维化为中风险或高风险骨髓纤维化。
45.一种治疗患有与用抗真菌剂治疗相关的血细胞减少症的受试者的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂的步骤。
46.一种治疗患有与免疫抑制剂治疗相关的血细胞减少症的受试者的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂的步骤。
47.一种治疗患有与抗生素治疗相关的贫血的受试者的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂的步骤。
48.如权利要求1-47中任一项所述的方法,其中所述受试者先前已用红细胞生成刺激剂(ESA)治疗。
49.如权利要求1-47中任一项所述的方法,其中所述受试者先前尚未用ESA治疗。
50.如权利要求1-49中任一项所述的方法,其中所述受试者对用红细胞生成素(EPO)治疗没有良好反应或易于发生EPO的有害作用。
51.如权利要求1-50中任一项所述的方法,其中所述受试者具有低输注负荷。
52.如权利要求1-50中任一项所述的方法,其中所述受试者具有高输注负荷。
53.如权利要求1-52中任一项所述的方法,其中所述方法降低所述受试者的输注负荷。
54.如权利要求1、2、4-19以及43-53中任一项所述的方法,其中所述血细胞减少症为贫血。
55.如权利要求1、2、4-19以及43-54中任一项所述的方法,其中所述血细胞减少症为血小板减少症。
56.如权利要求1、2、4-19以及43-55中任一项所述的方法,其中所述血细胞减少症为嗜中性粒细胞减少症。
57.如权利要求1-56中任一项所述的方法,其中所述受试者在治疗期间实现持续至少八周的输注非依赖性。
58.如权利要求1-57中任一项所述的方法,其中所述方法还包括在所述ActRII信号传导抑制剂的所述施用之后进行全血记数的步骤。
59.如权利要求1-58中任一项所述的方法,其中所述方法还包括在所述ActRII信号传导抑制剂的所述施用之后测量血红蛋白水平的步骤。
60.如权利要求1-59中任一项所述的方法,其中所述方法使平均血红蛋白增加大于或等于1.5g/dL。
61.一种改善有需要的受试者中的造血干细胞植入的方法,所述方法包括在植入之前向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂的步骤。
62.一种治疗患有血小板增多症的受试者的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂的步骤。
63.一种治疗患有真性红细胞增多症的受试者的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂的步骤。
64.一种减少有需要的受试者中的血小板的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的ActRII信号传导抑制剂的步骤。
65.如权利要求64所述的方法,其中所述受试者患有血小板增多症或真性红细胞增多症,或因过量红血细胞而需要放血术。
66.如权利要求62-65中任一项所述的方法,其中在施用所述ActRII信号传导抑制剂之前所述受试者被鉴定为具有升高的血小板水平。
67.如权利要求1-60中任一项所述的方法,其中所述ActRII信号传导抑制剂以足以增加血红蛋白水平、增加红血细胞计数、增加红细胞压积、增加网织红细胞计数、增加平均红细胞体积、增加平均红细胞血红蛋白、增加网织红细胞血红蛋白、增加红细胞生成素水平、增加促血小板生成素水平、降低输注负荷、治疗贫血、增加血小板计数、增加血小板体积、增加未成熟血小板分数、治疗血小板减少症、增加嗜中性粒细胞计数或治疗嗜中性粒细胞减少症的量施用。
68.如权利要求5、6以及15-44中任一项所述的方法,其中所述ActRII信号传导抑制剂以足以减小脾脏体积的量施用。
69.如权利要求6和19-44中任一项所述的方法,其中所述ActRII信号传导抑制剂以足以减轻骨髓纤维化、减轻骨质硬化、改善骨髓纤维化等级或降低高血小板水平的量施用。
70.如权利要求1-69中任一项所述的方法,其中所述ActRII信号传导抑制剂为激活素A抗体或其抗原结合片段。
71.如权利要求70所述的方法,其中所述激活素A抗体为加托索单抗。
72.如权利要求1-69中任一项所述的方法,其中所述ActRII信号传导抑制剂为肌生成抑制素抗体或其抗原结合片段。
73.如权利要求71所述的方法,其中所述肌生成抑制素抗体为多马珠单抗、兰洛珠单抗、曲戈卢单抗或SRK-015。
74.如权利要求1-69中任一项所述的方法,其中所述ActRII信号传导抑制剂为ActRII抗体或其抗原结合片段。
75.如权利要求74所述的方法,其中所述ActRII抗体为比马鲁单抗、CSJ089、CQI876或CDD861。
76.如权利要求1-69中任一项所述的方法,其中所述ActRII信号传导抑制剂为ActRII配体阱。
77.如权利要求76所述的方法,其中所述ActRII配体阱为ActRIIA配体阱。
78.如权利要求77所述的方法,其中所述ActRIIA配体阱为表18的组合物。
79.如权利要求77所述的方法,其中所述ActRIIA配体阱为索特西普。
80.如权利要求76所述的方法,其中所述ActRII配体阱为ActRIIB配体阱。
81.如权利要求80所述的方法,其中所述ActRIIB配体阱为BIIB110、ALG-802、罗特西普、拉马西普或ACE-2494。
82.如权利要求76所述的方法,其中所述ActRII配体阱为ActRII嵌合体配体阱。
83.如权利要求1-69中任一项所述的方法,其中所述ActRII信号传导抑制剂为激活素B抗体或其抗原结合片段。
84.如权利要求1-69中任一项所述的方法,其中所述ActRII信号传导抑制剂为GDF-11抗体或其抗原结合片段。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
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PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication |