CN117777042A - 一种三嗪类的异羟肟酸衍生物及其制备方法与应用 - Google Patents

一种三嗪类的异羟肟酸衍生物及其制备方法与应用 Download PDF

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CN117777042A CN202311789999.8A CN202311789999A CN117777042A CN 117777042 A CN117777042 A CN 117777042A CN 202311789999 A CN202311789999 A CN 202311789999A CN 117777042 A CN117777042 A CN 117777042A
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戴求资
何彬生
欧阳晓蓉
刘槿旸
金莉烨
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Abstract

本发明公开了一种三嗪类的异羟肟酸衍生物及其制备方法与应用，衍生物的结构通式为：

Description

一种三嗪类的异羟肟酸衍生物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及医药领域，尤其涉及一种三嗪类的异羟肟酸衍生物及其制备方法与应用。
背景技术
磷酯酰肌醇3激酶(PI3K)是一类可以将肌醇(PI)3位羟基磷酸化产生肌醇-3-磷酸(PIP)、肌醇-3，4-二磷酸(PIP2)和肌醇-3，4，5-三磷酸(PIP3)的脂质激酶。根据结构、底物、分布和功能的不同，PI3K主要分为I、II和III三类，其中I类又可根据其调节亚基不同，分成IA(由p110α，p110β、p110δ催化单元和p85α、p85β或p55γ调节亚基形成的二聚体组成，分为PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kδ三个亚型)和IB(催化亚基p110γ和调节亚基p101或p87组成的PI3Kγ亚型)两个亚家族。II类PI3K只含有一个p110样的催化域，有三种构象。III类PI3K只含有一个Vps34单元。PI3Kα和PI3Kβ在组织中广泛表达，PI3Kδ和PI3Kγ则主要在免疫细胞和造血细胞中表达。以上各种PI3K的亚型中，PI3Kα能够介导EGFR的信号传导，在各种癌症中发挥着尤为重要的作用；在多种癌症中都发现其发生突变或者信号放大，因此它也是研究较多、对应抑制剂较多的一个亚型。另外，PI3Kδ因其在白血病和淋巴瘤中的重要生理学意义，也吸引了众多科研工作的目光，它也是第一个有批准药物的PI3K靶点。当前，PI3K抑制剂在临床上的发展主要包括联合用药和单独用药两种。
组蛋白去乙酰化酶(HDAC)可催化乙酰化的赖氨酸脱去乙酰基，使带正电荷的赖氨酸残基与带负电荷的DNA磷酸骨架紧密缠绕，因而抑制抑癌基因表达。在哺乳动物体内已发现HDAC共18种，根据其与酵母的同源性分为四个亚型，其中I型(HDAC1，HDAC2，HDAC3，HDAC8)、II A型(HD AC4，HDAC5，HDAC7，HDAC9)、II B型(HDAC6，HDAC10)和IV型(HDAC11)属于Zn2+离子依赖型HDAC；III型HDAC包含去乙酰化酶SIRT1-SIRT7，属NAD+依赖的酶。作为抗肿瘤药物研发成熟的靶点，已有许多HDAC抑制剂进入临床研究，且五个HDAC抑制剂(Vorinostat,Romidep sin,Belinostat,Panobinostat,Chidamide)已经上市。
由于肿瘤细胞中PI3K激活常常伴随Ras-MEK通路激活和PI3K下游致癌基因突变，而单一的PI3K抑制又会进一步引起肿瘤细胞多种补偿通路激活，导致PI3K抑制剂治疗效果受限，因此，联合用药是使PI3K抑制剂适用于更多肿瘤类型的有效方法。但是联合用药存在药代动力学复杂、可能发生药物相互作用、可引发更多毒副作用等缺点，而具有多靶点抑制活性的单个小分子能有效避免这些问题，研发多靶点抑制剂已成为一个常用的药物研发策略。
已有文献报道PI3K抑制剂和组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂联合使用具有协同抗肿瘤作用，并且其中CUDC-101和CUDC-907已经作为潜在的PI3K和HDAC的双靶点药物进入临床试验，这表明了基于HDAC的双靶点药物设计策略是可行的，开发更多结构新颖、活性优良的PI3K和HDAC多靶点抑制剂具有巨大的潜力。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种对磷酯酰肌醇3激酶和组蛋白去乙酰化酶具有较好的抑制活性三嗪类的异羟肟酸衍生物及其制备方法与应用。
为实现上述目的，本发明提供一种三嗪类的异羟肟酸衍生物，所述衍生物的结构通式如式I所示：
其中：
R1选自氢原子、卤素、-CH3、-CF3、-CHF2、-CH2F中的任意一种；
X选自碳原子、-N-、-O-、-S-中的任意一种；
Y选自-O-、-S-、-CH2-、-C＝O-、-CH2CH2-、-CHF-、-CHCl-、-CHBr-、-CHI-、-CF2-、-CCl2-、-CBr2-、-CI2-、-CH2CF2-、-CH2CCl2-、-CH2CBr2-、-CH2CI2-、-CF2CH2-、-CCl2CH2-、-CBr2CH2-、-CI2CH2-中的任意一种；
G选自直接键、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-、-CHF-、-CHCl-、-CHBr-、-CHI-、-CF2-、-CCl2-、-CBr2-、-CI2-、-CH2CF2-、-CH2CCl2-、-CH2CBr2-、-CH2CI2-、-CF2CH2-、-CCl2CH2-、-CBr2CH2-、-CI2CH2-、-CH＝CH-、-CH＝CH-CH＝CH-中的任意一种。
优选地，所述卤素选自氟、氯、溴或碘中的任意一种。
式I所示衍生物可以以不同的多晶型物形式存在。
本发明还提供上述式I所示衍生物的药学上可接受的盐或其互变异构体，也属于本发明的保护范围。
优选地，所述衍生物的结构式如下列任意一个编号所示：
优选地，所述药学上可接受的盐为无机酸盐或有机酸盐；
所述无机酸盐选自下述任意一种无机酸形成的盐：盐酸、硫酸和磷酸；
所述有机酸盐选自下述任意一种有机酸形成的盐：乙酸、三氟乙酸、丙二酸、柠檬酸和对甲苯磺酸。
本发明还提供三种式I所示衍生物的制备方法。
第一种制备方法包括下述步骤：
以式IA所示化合物与羟胺或盐酸羟胺反应获得式I所示衍生物；
优选地，反应在缩合剂条件下或在不含缩合剂条件下进行。
优选地，缩合剂为苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸(HBTU)，反应在溶剂N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中、碱性(三乙胺)、室温条件下进行。
第二种制备方法包括下述步骤：
以式IA所示化合物与羟基带保护基团的羟胺在缩合剂作用下先反应生成式IB所示化合物，再由式IB所示化合物脱除保护基团后获得式I所示衍生物；
其中，P为羟胺中羟基的保护基团。
优选地，缩合剂为苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸(HBTU)，羟基带保护基团的羟胺为O-(四氢-2H-吡喃-2-基)羟基胺，反应在溶剂N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中、在室温条件下进行。
优选地，脱除保护基团在溶剂如四氢呋喃中、酸性(盐酸或三氟乙酸)或在碱性(氢氧化钠)、在0至80℃温度下进行。
第三种制备方法包括下述步骤：
以式IC所示化合物与羟胺或盐酸羟胺在碱性溶液中反应获得式I所示衍生物；
其中，E为烷基。
优选地，烷基为C1-C6的烷基，包括但不限于是甲基、乙基或异丙基。
优选地，反应在水溶液或有机溶剂中进行，所述有机溶剂选自下述至少一种：二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、氯仿、二氯甲烷、丙酮、四氢呋喃、乙腈和甲醇。
优选地，v所述碱选自下述至少一种：氨水、三乙胺、二异丙基乙基胺、氢氧化钠、氢氧化钾、甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钠和叔丁醇。
优选地，反应温度为20至80℃，反应时间为0.5至10小时。
上述各制备方法，在不描述中间体和起始原料合成的情况下，这些化合物是可商业购买的，或可以利用标准方法或利用本文实施例的扩展方法、由可商业化购买的化合物来制备。
本发明制备的衍生物经过核磁共振等测试，证明所制备的衍生物正确无误，为通式Ⅰ所示。
本发明还提供式I所示衍生物或其药学上可接受的盐或其互变异构体在制备下列任意一种产品中的应用：
1)磷酯酰肌醇3激酶和/或组蛋白去乙酰化酶抑制剂；
2)真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂；
3)预防和/或治疗肿瘤药物。
本发明还提供一种产品，其活性成分为式I所示衍生物或其药学上可接受的盐或其互变异构体；所述产品为下列任意一种：
1)磷酯酰肌醇3激酶和/或组蛋白去乙酰化酶抑制剂；
2)真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂；
3)预防和/或治疗肿瘤药物。
优选地，所述磷酯酰肌醇3激酶包括在哺乳动物细胞中已知的亚型PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kδ和PI3Kγ；
所述组蛋白去乙酰化酶包括在哺乳动物细胞中已知的亚型HDAC1、HDA C2、HDAC3、HDAC8、HDAC4、HDAC5、HDAC7、HDAC9、HDAC6、HDAC10、HDAC11；
所述真核生物为哺乳动物；所述肿瘤细胞为癌细胞；所述癌细胞为白血病癌细胞、淋巴瘤细胞、肺癌细胞、乳腺癌细胞、卵巢癌细胞、宫颈癌细胞、人脑胶质瘤细胞、黑色素癌细胞、胶质母细胞瘤细胞、鼻咽癌细胞、肝癌细胞、脑癌细胞、胰腺癌细胞、子宫癌细胞、睾丸癌细胞、皮肤癌细胞、胃癌细胞、结肠癌细胞、膀胱癌细胞或直肠癌细胞。
优选地，所述肿瘤为癌；所述癌为白血病、淋巴瘤、肺癌、黑色素癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、鼻咽癌、肝癌、乳腺癌、脑癌、胰腺癌、卵巢癌、子宫癌、睾丸癌、皮肤癌、胃癌、结肠癌、膀胱癌或直肠癌。
优选地，所述白血病癌细胞具体为人慢性粒细胞白血病(CML)细胞系K562；所述淋巴瘤细胞具体为人组织细胞淋巴瘤细胞U937；所述肺癌细胞具体为人肺癌细胞株HCC827；所述乳腺癌细胞具体为人乳腺癌细胞MCF-7、T47D和MDA-MB-231；所述卵巢癌细胞具体为A2780；所述宫颈癌细胞具体为人宫颈癌细胞系Hela；所述人脑胶质瘤细胞具体为U251；所述黑色素癌细胞具体为A375；所述胶质母细胞瘤细胞具体为人胶质母细胞瘤细胞A172和人脑星形胶质母细胞瘤细胞U-118MG；所述鼻咽癌细胞具体为鼻咽癌细胞株CNE-2；所述肝癌细胞具体为人肝癌细胞HepG2。
用式Ⅰ所示衍生物或其药学上可接受的盐或其互变异构体制备的磷酯酰肌醇3激酶和/或组蛋白去乙酰化酶抑制剂、真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂以及预防和/或治疗肿瘤的药物可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其他物质混合或包裹后导入机体。
需要的时候，在上述产品中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。
用式Ⅰ所示衍生物或其药学上可接受的盐或其互变异构体制备的磷酯酰肌醇3激酶和/或组蛋白去乙酰化酶抑制剂、真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂以及预防和/或治疗肿瘤的药物可以制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
本发明的有益效果体现在：
本发明构建了一类具有PI3K和HDAC双靶点抑制活性的化学小分子，并研究了其对多种肿瘤细胞的抑制活性，经过多种肿瘤细胞系测试(包括结肠癌细胞、乳腺癌细胞)以及磷酯酰肌醇3激酶(PI3K)、组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制活性测试，证明式Ⅰ所示衍生物是一种潜在的对磷酯酰肌醇3激酶(PI3K)和组蛋白去乙酰化酶(HDAC)有抑制活性的化学小分子。另外，本发明提供的化合物原料易得，制备方法简单，实验证明其有良好的抗癌效果，在抗肿瘤药物设计研发领域有着良好的应用前景。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明的范围并不限定于此。
下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为有机合成的常规方法；所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均从商业途径获得。
实施例1
编号CY-1三嗪类的异羟肟酸衍生物的制备
A：制备4-(4,6-二氯-1,3,5-三嗪-2-基)吗啉，结构式如下：
在冰浴下往化合物三聚氯氰(25mmol，5.2077g)、二氯甲烷(150ml)的混合物中逐滴加入吗啉(50mmol，4.3ml)，待反应恢复至室温并继续反应过夜，期间采用薄层色谱(TLC)监测至原料反应完全，使用二氯甲烷(DCM)萃取，用饱和氯化钠溶液洗涤反应液，有机相经无水硫酸钠干燥后旋干得粗品。之后再用柱层析(V石油醚(PE):V乙酸乙酯(EA)＝10:1)分离，得到标题化合物(白色固体，2.7976g，产率47.60％)。
B：制备4-(4-氯-6-吗啉-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯，结构式如下：
将步骤A制得的化合物(5mmol，1.1701g)、1-叔丁氧羰基哌嗪(5mmol，0.9856g)及DIEA(8mmol，1.3ml)放于100ml的圆底烧瓶中，再向其内加入四氢呋喃(THF，25ml)于室温条件下反应过夜，期间采用TLC监测反应完成后，加入水并以二氯甲烷(DCM)萃取。有机相经无水硫酸钠干燥后旋干，得到标题化合物(白色固体，1.8518g，产率96.23％)，没有经过纯化直接进行下一步。
C：制备4-(4-(4-氨基苯基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯，结构式如下：
将步骤B得到的化合物(3mmol，1.1452g)、碳酸钠(6mmol，0.6492g)和4-氨基苯硼酸频哪醇酯(6mmol，1.3196g)于100ml圆底烧瓶中，再加入1，4-二氧六环/水(25ml:5ml)以及适量的四(三苯基膦)钯在105℃油浴加热的反应条件下，经过一夜的反应后，使用TLC技术进行监测，并在反应停止后使用旋蒸仪进行旋干，以获得所需溶剂，用DCM和饱和食盐水萃取洗涤，收集下层有机层后用无水硫酸钠干燥，之后再干法上样，使用柱层析分离，先用VPE:VEA＝7:1过除杂质，然后用VPE:VEA＝1:1得到标题化合物(黄棕色固体，0.9420g，产率为71.11％)。
D：制备4-(4-吗啉基-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)苯胺，结构式如下：
将步骤C制得的化合物(1.1678g)与浓盐酸(5ml)在室温条件下反应7h，期间采用TLC监测，停止反应后，加碳酸钠中和至pH为7左右，即无气泡冒出，后处理用DCM萃取，期间使用饱和食盐水洗涤后收集有机层，再用无水硫酸钠干燥，旋干，得到标题化合物(白棕色粉末，0.7749g，产率为85.81％)。
E：制备4-(4-(4-氨基苯基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酸甲酯，结构式如下：
将戊二酸单甲酯(0.3mmol，0.0553g)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)(0.6mmol，0.2372g)于25ml圆底烧瓶中，加入5ml DMF，再精密称取DIEA(1.2mmol，0.1468g)和步骤D制得的化合物(0.3mmol，0.1008g)于上述圆底烧瓶中，室温条件下反应30min，期间采用TLC监测反应完成后，加水淬灭后，用DCM萃取，期间使用饱和食盐水洗涤后收集有机层，再用无水硫酸钠干燥，旋干，再用柱层析(VPE:VEA＝1:1)分离，得到标题化合物(白色固体，产率为32％)。
F：制备4-(4-(4-氨基苯基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-N-羟基-4-氧代丁酰胺(化合物CY-1)，结构式如下：
将步骤E制得的化合物(1eq)溶于甲醇中，依次加入羟胺水溶液(15.17M，10eq)和甲醇钠甲醇溶液(5M，5eq)，室温下反应1小时。之后以旋转蒸发仪除去反应溶剂后加入适量水并以3N盐酸调节pH至7～8。稍静置后过滤并以少量水、乙醚洗涤滤饼，干燥后得标题化合物。白色粉末，产率39％，熔点241-242℃。化合物结构表征为：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.05(d,J＝8.6Hz,2H),6.57(d,J＝8.6Hz,2H),5.71(s,2H),3.78(s,8H),3.64(t,J＝4.7Hz,4H),3.59(s,3H),3.51(p,J＝4.8Hz,4H),2.38(q,J＝7.7Hz,4H),1.77(p,J＝7.4Hz,2H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ169.04,164.86,164.70,162.33,150.06,137.12,120.70,107.39,66.49,44.99,43.69,43.02.
实施例2
编号CY-2三嗪类的异羟肟酸衍生物的制备
E：制备5-(4-(4-(氨基苯基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)戊酸甲酯，结构式如下：
以实施例1D制得的化合物和溴戊酸甲酯为原料，合成方法同实施例1E。得到白色固体，产率87％。
F：制备5-(4-(4-(-4-氨基苯基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-N-羟基戊酰胺，结构式如下：
以实施例2E制得的化合物、羟胺水溶液(15.17M，10eq)和甲醇钠甲醇溶液(5M，5eq)为原料，合成方法同实施例1F。得到白色粉末，产率28％，熔点228-229℃。化合物结构表征为：1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.05(d,J＝8.5Hz,2H),6.59(d,J＝8.4Hz,2H),5.70(s,2H),3.76(s,8H),3.63(t,J＝4.8Hz,4H),2.36(t,J＝4.9Hz,4H),2.27(t,J＝7.2Hz,2H),1.99(t,J＝7.2Hz,2H),1.47(dq,J＝40.7,7.4Hz,4H).13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ169.91,169.64,165.10,164.86,152.65,130.15,124.08,113.23,66.53,57.96,53.11,49.04,43.69,43.18,32.58,26.20,23.55.
实施例3
编号CY-3三嗪类的异羟肟酸衍生物的制备
C：制备4-(4-(6-氨基吡啶-3-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯，结构式如下：
以实施例1B和2-氨基吡啶-5-硼酸频哪醇酯为原料，合成方法同实施例1C。得到白色固体，产率61％。
D：制备5-(4-吗啉基-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺，结构式如下：
以实施例3C为原料，合成方法同实施例1D。得到白色固体，产率91％。
E：制备5-(4-(4-(6-氨基吡啶-3-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酸甲酯，结构式如下：
以实施例3D和戊二酸单甲酯为原料，合成方法同实施例1E。白色固体，产率96％。
F：制备5-(4-(4-(6-氨基吡啶-3-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-N-羟基-5-氧代戊酰胺，结构式如下：
以实施例3E、羟胺水溶液(15.17M，10eq)和甲醇钠甲醇溶液(5M，5eq)为原料，合成方法同实施例1F。白色粉末，产率48％，熔点178-179℃。化合物结构表征为：1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.49(s,1H),8.89(d,J＝2.3Hz,1H),8.21(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),6.57(s,2H),6.49(d,J＝8.8Hz,1H),3.77(s,8H),3.63(t,J＝4.8Hz,4H),3.50(dt,J＝11.5,5.1Hz,4H),2.34(t,J＝7.5Hz,2H),2.02(t,J＝7.3Hz,2H),1.74(t,J＝7.3Hz,2H).13CNMR(126MHz,DMSO)δ170.92,169.45,169.08,164.84,164.79,162.34,150.06,137.14,120.70,107.44,66.49,45.10,43.71,43.36,42.97,41.28,32.16,32.06,21.36.
实施例4
编号CY-4三嗪类的异羟肟酸衍生物的制备
E：制备6-(4-(4-(6-氨基吡啶-3-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-6-氧代己酸乙酯，结构式如下：
以实施例3D和己二酸单乙酯为原料，合成方法同实施例1E。得到白色固体，产率89％。
F：制备6-(4-(4-(6-氨基吡啶-3-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-N-羟基-6-氧代己酰胺(化合物)，结构式如下：
以实施例4E、羟胺水溶液(15.17M，10eq)和甲醇钠甲醇溶液(5M，5eq)为原料，合成方法同实施例1F。得到白色粉末，产率38％，熔点230-231℃。化合物结构表征为：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.29(s,1H),8.90(d,J＝2.2Hz,1H),8.22(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),6.55(s,2H),6.48(d,J＝8.8Hz,1H),3.78(s,8H),3.64(t,J＝4.7Hz,4H),3.53(d,J＝5.0Hz,4H),2.35(t,J＝6.8Hz,2H),1.98(t,J＝6.6Hz,2H),1.52(dq,J＝8.4,4.4Hz,4H).13CNMR(101MHz,DMSO-d6)δ171.19,169.44,169.08,164.84,164.78,162.36,150.10,137.13,120.65,107.40,66.50,43.70,40.60,40.39,40.19,39.98,39.77,39.56,39.35,32.58,32.51,25.34,24.79.
实施例5
编号CY-5三嗪类的异羟肟酸衍生物的制备
E：制备4-(4-(6-氨基吡啶-3-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)丁酸甲酯，结构式如下：
以实施例3D和溴丁酸甲酯为原料，合成方法同实施例1E。得到白色固体，产率89％。
F：制备4-(4-(6-氨基吡啶-3-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-N-羟基丁酰胺(化合物)，结构式如下：
以实施例5E、羟胺水溶液(15.17M，10eq)和甲醇钠甲醇溶液(5M，5eq)为原料，合成方法同实施例1F。得到白色粉末，产率59％，熔点202-204℃。化合物结构表征为：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.45(s,1H),8.87(s,1H),8.20(d,J＝8.1Hz,1H),6.52(s,2H),6.48(d,J＝8.7Hz,1H),3.76(s,8H),3.64(d,J＝4.8Hz,4H),2.38(d,J＝5.0Hz,4H),2.27(t,J＝7.3Hz,2H),2.00(t,J＝7.3Hz,2H),1.72–1.59(m,2H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ169.64,168.98,164.86,164.62,162.26,149.95,137.14,120.79,107.44,66.49,57.66,53.01,43.67,43.16,40.52,40.31,40.10,39.89,39.68,39.47,39.26,30.70,22.81.
实施例6
编号CY-6三嗪类的异羟肟酸衍生物的制备
E：制备5-(4-(4-(6-氨基吡啶-3-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)戊酸甲酯，结构式如下：
以实施例3D和溴戊酸甲酯为原料，合成方法同实施例1E。得到白色固体，产率81％。
F：制备5-(4-(4-(6-氨基吡啶-3-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-N-羟基戊酰胺，结构式如下：
/>
以实施例6E、羟胺水溶液(15.17M，10eq)和甲醇钠甲醇溶液(5M，5eq)为原料，合成方法同实施例1F。得到白色粉末，产率43％，熔点160-161℃。化合物结构表征为：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.38(s,1H),8.90(d,J＝10.4Hz,1H),8.21(d,J＝8.7Hz,1H),6.57(d,J＝13.3Hz,2H),6.46(d,J＝8.8Hz,1H),3.80(d,J＝23.2Hz,8H),3.64(s,4H),2.37(s,4H),2.29(d,J＝7.2Hz,2H),1.97(t,J＝7.4Hz,2H),1.47(dt,J＝37.8,7.8Hz,4H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ169.50,168.96,164.84,164.60,162.32,150.04,137.11,120.70,107.37,88.94,66.50,57.92,53.10,43.66,43.12,40.57,40.36,40.15,39.94,39.73,39.52,39.31,32.57,26.21,23.53.
实施例7
编号CY-7三嗪类的异羟肟酸衍生物的制备
E：制备6-(4-(4-(6-氨基吡啶-3-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)己酸甲酯，结构式如下：
以实施例3D和溴己酸甲酯为原料，合成方法同实施例1E。得到白色固体，产率78％。
F：制备6-(4-(4-(6-氨基吡啶-3-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-N-羟基己酰胺，结构式如下：
以实施例7E、羟胺水溶液(15.17M，10eq)和甲醇钠甲醇溶液(5M，5eq)为原料，合成方法同实施例1F。得到白色粉末，产率56％，熔点173-174℃。化合物结构表征为：1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.42(s,1H),8.87(d,J＝2.3Hz,1H),8.20(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),6.53(s,2H),6.47(d,J＝8.7Hz,1H),3.79(d,J＝31.0Hz,8H),3.63(t,J＝4.7Hz,4H),2.37(t,J＝5.0Hz,4H),2.26(t,J＝7.3Hz,2H),1.95(t,J＝7.4Hz,2H),1.55–1.47(m,2H),1.43(t,J＝7.5Hz,2H),1.23(dd,J＝15.0,7.2Hz,2H).13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ169.59,169.01,164.90,164.64,162.30,149.99,137.10,120.82,107.41,66.50,58.27,53.12,43.69,43.18,32.71,26.99,26.40,25.53.
实施例8
编号CY-8三嗪类的异羟肟酸衍生物的制备
C：制备4-(4-(2-氨基嘧啶-5-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯，结构式如下：
以实施例1B和2-氨基嘧啶-5-硼酸为原料，合成方法同实施例1C。得到白色固体，产率87％。
D：制备5-(4-吗啉基-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺，结构式如下：
以实施例8C为原料，合成方法同实施例1D。得到白色固体，产率97％。
E：制备5-(4-(4-(2-氨基嘧啶-5-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酸甲酯，结构式如下：
以实施例8D和戊二酸单甲酯为原料，合成方法同实施例1E。得到白色固体，产率85％。
F：制备5-(4-(4-(2-氨基嘧啶-5-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-N-羟基-5-氧代戊酰胺，结构式如下：
以实施例8E、羟胺水溶液(15.17M，10eq)和甲醇钠甲醇溶液(5M，5eq)为原料，合成方法同实施例1F。得到白色粉末，产率63％，熔点220-221℃。化合物结构表征为：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.38(s,1H),9.06(s,2H),8.68(s,1H),7.27(s,2H),3.79(s,8H),3.65(t,J＝4.7Hz,4H),3.52(q,J＝6.6,6.2Hz,4H),2.35(t,J＝7.3Hz,2H),2.01(t,J＝7.3Hz,2H),1.74(t,J＝7.3Hz,2H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ170.87,169.34,167.71,165.26,164.59,159.05,118.93,66.49,32.13,32.05,21.33.
实施例9
编号CY-9三嗪类的异羟肟酸衍生物的制备
E：制备6-(4-(4-(2-氨基嘧啶-5-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-6-氧代己酸乙酯，结构式如下：
以实施例8D和己二酸单乙酯为原料，合成方法同实施例1E。得到白色固体，产率83％。
F：制备6-(4-(4-(2-氨基嘧啶-5-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-N-羟基-6-氧代己酰胺，结构式如下：
以实施例9E、羟胺水溶液(15.17M，10eq)和甲醇钠甲醇溶液(5M，5eq)为原料，合成方法同实施例1F。得到白色粉末，产率55％，熔点198-199℃。化合物结构表征为：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.48(s,1H),9.05(s,2H),7.29(s,2H),3.79(d,J＝24.7Hz,8H),3.64(d,J＝4.7Hz,4H),3.53–3.50(m,4H),2.35(t,J＝6.8Hz,2H),1.98(t,J＝6.7Hz,2H),1.50(q,J＝5.9Hz,4H).13CNMR(101MHz,DMSO-d6)δ171.21,169.50,167.66,165.21,164.57,164.52,159.06,118.88,66.49,40.51,40.30,40.09,39.88,39.67,39.46,39.26,32.53,32.49,25.32,24.74.
实施例10
编号CY-10三嗪类的异羟肟酸衍生物的制备
E：制备4-(4-(2-氨基嘧啶-5-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)丁酸甲酯，结构式如下：
以实施例8D和4-溴丁酸甲酯为原料，合成方法同实施例1E。得到白色固体，产率80％。
F：制备4-(4-(2-氨基嘧啶-5-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-N-羟基丁酰胺，结构式如下：
以实施例10E、羟胺水溶液(15.17M，10eq)和甲醇钠甲醇溶液(5M，5eq)为原料，合成方法同实施例1F。得到白色粉末，产率62％，熔点223-224℃。化合物结构表征为：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.37(s,1H),9.04(d,J＝1.2Hz,2H),8.66(s,1H),7.25(s,2H),3.77(s,8H),3.64(t,J＝4.5Hz,4H),2.39(t,J＝4.8Hz,4H),2.29(t,J＝7.3Hz,2H),2.00(t,J＝7.4Hz,2H),1.68(t,J＝7.3Hz,2H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ169.52,167.63,165.23,164.66,164.40,158.98,119.03,66.50,57.64,52.99,40.41,30.68.
实施例11
编号CY-11三嗪类的异羟肟酸衍生物的制备
E：制备5-(4-(4-(2-氨基嘧啶-5-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)戊酸甲酯，结构式如下：
以实施例8D和5-溴戊酸甲酯为原料，合成方法同实施例1E。得到白色固体，产率79％。
F：制备5-(4-(4-(2-氨基嘧啶-5-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-N-羟基戊酰胺，结构式如下：
以实施例11E、羟胺水溶液(15.17M，10eq)和甲醇钠甲醇溶液(5M，5eq)为原料，合成方法同实施例1F。得到白色粉末，产率48％，熔点177-178℃。化合物结构表征为：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),9.04(s,2H),8.67(s,1H),7.25(s,2H),3.78(s,8H),3.64(t,J＝4.6Hz,4H),2.37(d,J＝37.0Hz,6H),1.98(t,J＝7.0Hz,2H),1.55–1.42(m,4H).13CNMR(101MHz,DMSO-d6)δ169.50,167.65,165.23,164.67,164.43,159.00,71.92,66.48,52.90,40.62,32.54,23.49.
实施例12
编号CY-12三嗪类的异羟肟酸衍生物的制备
E：制备6-(4-(4-(2-氨基嘧啶-5-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)己酸甲酯，结构式如下：
以实施例8D和溴己酸甲酯为原料，合成方法同实施例1E。得到白色固体，产率82％。
F：制备6-(4-(4-(2-氨基嘧啶-5-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-N-羟基己酰胺，结构式如下：
以实施例12E、羟胺水溶液(15.17M，10eq)和甲醇钠甲醇溶液(5M，5eq)为原料，合成方法同实施例1F。得到白色粉末，产率49％，熔点198-199℃。化合物结构表征为：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.35(s,1H),9.04(s,2H),8.66(s,1H),7.25(s,2H),3.80(d,J＝24.0Hz,8H),3.64(t,J＝4.6Hz,4H),2.36(d,J＝43.9Hz,6H),1.95(t,J＝7.3Hz,2H),1.48(dt,J＝22.1,7.5Hz,4H),1.27(d,J＝18.3Hz,2H).
实施例13
编号CY-13三嗪类的异羟肟酸衍生物的制备
C：制备4-(4-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯，结构式如下：
以实施例1B和2-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-5-硼酸频哪醇酯为原料，合成方法同实施例1C。得到白色固体，产率91％。
D：制备5-(4-吗啉基-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺，结构式如下：
以实施例13C为原料，合成方法同实施例1D。得到白色固体，产率96％。
E：制备5-(4-(4-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)戊酸甲酯，结构式如下：
以实施例13D和5-溴戊酸单甲酯为原料，合成方法同实施例1E。得到白色固体，产率88％。
F：制备5-(4-(4-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-N-羟基戊酰胺，结构式如下：
以实施例13E、羟胺水溶液(15.17M，10eq)和甲醇钠甲醇溶液(5M，5eq)为原料，合成方法同实施例1F。得到白色粉末，产率72％，熔点182-183℃。化合物结构表征为：1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),8.58(s,1H),6.95(s,2H),6.81(s,1H),3.75(d,J＝11.1Hz,8H),3.62(t,J＝4.8Hz,4H),2.36(t,J＝5.3Hz,4H),2.28(t,J＝7.2Hz,2H),1.96(t,J＝7.2Hz,2H),1.51(p,J＝7.1Hz,2H),1.42(q,J＝7.7Hz,2H).13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ169.86,169.45,164.64,164.36,161.60,152.90,124.64,119.30,105.13,66.42,60.22,57.88,53.00,43.65,32.57,26.18,23.52,21.23,14.55.
实施例14
编号CY-14三嗪类的异羟肟酸衍生物的制备
E：制备5-(4-(4-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酸甲酯，结构式如下：
/>
以实施例13D和戊二酸单甲酯为原料，合成方法同实施例1E。得到白色固体，产率86％。
F：制备5-(4-(4-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-N-羟基-5-氧代戊酰胺，结构式如下：
以实施例14E、羟胺水溶液(15.17M，10eq)和甲醇钠甲醇溶液(5M，5eq)为原料，合成方法同实施例1F。得到白色粉末，产率65％，熔点143-144℃。化合物结构表征为：1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.39(d,J＝2.8Hz,1H),8.60(s,1H),6.97(s,2H),6.83(s,1H),3.82–3.71(m,8H),3.66–3.61(m,4H),3.51(s,4H),2.34(t,J＝7.3Hz,2H),2.01(dd,J＝8.7,5.7Hz,2H),1.74(q,J＝7.3Hz,2H).13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ170.90,170.88,169.92,169.33,164.59,164.54,162.76,161.66,152.99,119.13,105.18,66.42,53.78,43.67,38.71,36.25,32.12,32.04,31.23,21.31.
实施例15
编号CY-15三嗪类的异羟肟酸衍生物的制备
C：制备4-(4-(6-氨基-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯，结构式如下：
以实施例1B和2-氨基-3-(三氟甲基)吡啶-5-硼酸频哪醇酯为原料，合成方法同实施例1C。得到白色固体，产率94％。
D：制备5-(4-吗啉基-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺，结构式如下：
/>
以实施例15C为原料，合成方法同实施例1D。得到白色固体，产率92％。
E：制备5-(4-(4-(6-氨基-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)戊酸甲酯，结构式如下：
以实施例15D和4-溴戊酸甲酯为原料，合成方法同实施例1E。得到白色固体，产率78％。
F：制备5-(4-(4-(6-氨基-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-N-羟基戊酰胺，结构式如下：
以实施例15E、羟胺水溶液(15.17M，10eq)和甲醇钠甲醇溶液(5M，5eq)为原料，合成方法同实施例1F。得到白色粉末，产率43％，熔点203-204℃。化合物结构表征为：1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),9.10(d,J＝2.1Hz,1H),8.71(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),7.11(s,2H),3.90–3.69(m,8H),3.65(t,J＝4.7Hz,4H),2.46–2.33(m,4H),2.29(t,J＝7.2Hz,2H),1.98(t,J＝7.2Hz,2H),1.47(dq,J＝39.3,7.5Hz,4H).13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ169.51,167.75,164.72,164.47,157.75,153.52,134.89,133.57,132.75,132.51,132.49,131.98,131.90,129.27,129.17,125.64,123.48,120.42,66.47,57.89,53.05,43.69,32.56,26.20,23.52.
实施例16
编号CY-16三嗪类的异羟肟酸衍生物的制备
E：制备5-(4-(4-(6-氨基-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酸甲酯，结构式如下：
以实施例15D和戊二酸单甲酯为原料，合成方法同实施例1E。得到白色固体，产率76％。
F：制备5-(4-(4-(6-氨基-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-N-羟基-5-氧代戊酰胺，结构式如下：
以实施例16E、羟胺水溶液(15.17M，10eq)和甲醇钠甲醇溶液(5M，5eq)为原料，合成方法同实施例1F。得到白色粉末，产率55％，熔点213-214℃。化合物结构表征为：1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.37(d,J＝1.8Hz,1H),9.11(d,J＝2.2Hz,1H),8.69(d,J＝1.7Hz,1H),8.48(d,J＝2.1Hz,1H),7.12(s,2H),3.81(d,J＝23.3Hz,8H),3.65(t,J＝4.9Hz,5H),3.53(s,4H),3.17(d,J＝5.2Hz,2H),2.35(t,J＝7.4Hz,2H),2.01(t,J＝7.4Hz,2H),1.74(p,J＝7.4Hz,2H).13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ170.85,169.33,167.84,164.69,164.64,157.80,153.60,134.94,125.63,120.30,66.48,49.06,40.47,32.13,32.04,21.32.
实施例17
编号CY-17三嗪类的异羟肟酸衍生物的制备
C：制备4-(4-(2-氨基-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯，结构式如下：
以实施例1B和2-氨基-4-三氟甲基嘧啶-5-硼酸频哪醇酯为原料，合成方法同实施例1C。得到白色固体，产率95％。
D：制备4-(4-吗啉基-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)4-(三氟甲基)嘧啶-2-胺，结构式如下：
以实施例17C为原料，合成方法同实施例1D。得到白色固体，产率96％。
E：制备5-(4-(4-(2-氨基-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酸甲酯，结构式如下：
以实施例17D和戊二酸单甲酯为原料，合成方法同实施例1E。得到白色固体，产率75％。
F：制备5-(4-(4-(2-氨基-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-N-羟基-5-氧代戊酰胺，结构式如下：
以实施例17E、羟胺水溶液(15.17M，10eq)和甲醇钠甲醇溶液(5M，5eq)为原料，合成方法同实施例1F。得到白色粉末，产率48％，熔点190-191℃。化合物结构表征为：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.90(s,1H),7.68(s,2H),5.17(s,1H),3.85–3.73(m,8H),3.63(t,J＝4.7Hz,4H),3.51(s,4H),2.33(t,J＝7.5Hz,2H),1.97(t,J＝7.3Hz,2H),1.72(t,J＝7.4Hz,2H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ171.10,168.88,168.57,164.49,163.57,163.11,118.63,66.39,32.29,21.58.
实施例18
编号CY-18三嗪类的异羟肟酸衍生物的制备
E：制备5-(4-(4-(2-氨基-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)戊酸甲酯，结构式如下：
以实施例1B和溴戊酸甲酯为原料，合成方法同实施例1E。得到白色固体，产率67％。
F：制备5-(4-(4-(2-氨基-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)-N-羟基戊酰胺，结构式如下：
以实施例18E、羟胺水溶液(15.17M，10eq)和甲醇钠甲醇溶液(5M，5eq)为原料，合成方法同实施例1F。得到白色粉末，产率56％，熔点125-126℃。化合物结构表征为：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.48(s,1H),8.87(s,1H),7.66(s,2H),3.90–3.71(m,8H),3.61(t,J＝4.7Hz,4H),2.42(d,J＝5.9Hz,4H),2.32(t,J＝7.1Hz,2H),1.98(t,J＝7.0Hz,2H),1.48(dt,J＝23.5,7.5Hz,4H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ169.55,168.52,164.53,164.27,163.54,163.06,118.72,66.39,57.69,52.80,43.66,42.92,32.51,25.93,23.46.
MTT法细胞增殖抑制活性测试
体外细胞增殖抑制实验采用MTT法，采用以下4种细胞系：人结直肠癌细胞系HT-29、HCT116，人乳腺癌细胞HCC1937、MDA-MB-231。
HT-29、HCT116、HCC1937、MDA-MB-231为贴壁细胞，用含体积分数为10％胎牛血清的RPIM-1640培养液，在37℃、体积分数为5％的CO2条件下常规培养。
具体操作如下：
首先，将实施例CY1-CY18制备获得的化合物(即样品)分别配制成化合物浓度为5mmol/L的DMSO(二甲基亚砜)溶液，然后将获得的溶液经梯度稀释，得到一系列浓度梯度的样品溶液。
接着，取对数期细胞，通过血球计数板计数，将肿瘤细胞以每孔6-8×103个的密度接种于96孔板中，每孔培养基体积为99μL，与铺板后12-16h加药(待细胞贴壁后加药)。每孔加入1μL待测化合物溶液，使化合物终浓度为设定的浓度值，每个浓度设置4个复孔，IC50测试时设置8个浓度梯度。同时设置两个阳性药组(分别加入HDAC抑制剂SAHA或PI3K抑制剂BKM120、PQR309)、对照组(加入1μL DMSO)和空白组(加入1μL DMSO)；化合物与细胞共培养72h后往实验组和对照组中加入MTT的PBS溶液(5mg/mL，10μL/孔)，继续于培养箱中无菌培养4h；将96孔板离心并吸除培养基(贴壁细胞无须离心)，加入DMSO(100μL/孔)并将96孔板在微量振荡器上振荡5分钟后使用酶标仪测试490nm处OD值，最后根据OD值计算出不同浓度下化合物对肿瘤细胞增殖的抑制率(Inh％)，进而通过绘制浓度—抑制率曲线求得IC50值。
抑制率计算公式如下：Inh％＝(对照组OD490-实验组OD490)/(对照组OD490-空白组OD490)×100％。
经过计算，得到本发明所制备的化合物的体外细胞增殖抑制活性，结果见表1。可见化合物CY1、化合物CY2与SAHA对所测试的肿瘤细胞具有良好的增值抑制活性。特别是在乳腺癌细胞MDA-MB-231中，化合物CY1、化合物CY2比上市药物SAHA活性更好。其他大部分化合物与上市药物BKM120对肿瘤细胞增殖活性虽然不如化合物CY1、化合物CY2、SAHA理想，但是对部分细胞系的IC50小于50μM。总之，所测试化合物能抑制肿瘤细胞增殖，具有开发为抗肿瘤药物的潜力。
表1各实施例制备的化合物的体外肿瘤细胞增殖抑制活性
注：IC50表示半数抑制浓度。
PI3K酶抑制活性试验
使用PI3Kα比色分析试剂盒(购于Invitrogen，PV4788)检测化合物CY1-CY18对PI3Kα的抑制活性，并使用PI3Kα抑制剂PI103做对照。实验步骤参考试剂盒说明书，主要包括：1)配制系列稀释剂，制备源板：将化合物以100％DMSO的浓度稀释至反应所需的最高抑制剂浓度的100倍，以达到最终的反应效果。使用该溶液对样品进行萃取和浓缩处理以获得浓缩物。将100μL的稀释液转移至96孔板中；将100μL100％DMSO分别注入96孔板中，未添加任何复方或酶对照，并将该板标记为源板。将含有40μL的化合物从源板转移至全新的384孔板，以其作为中间板；用Echo在100％DMSO中将50nL化合物转移到测定板上。2)准备2×激酶溶液：在1×激酶缓冲液中制备激酶溶液，浓度为试验中每种试剂最终浓度的2倍。除无酶的对照孔外，在检测板的每孔中加入2.5μL 1×激酶缓冲液，振动。3)准备2×基板溶液：制备PIP2底物和ATP底物溶液，需要在1×激酶反应缓冲液中使用每种试剂的最终浓度的2倍来制备。在检测板中注入2.5uL底物的溶液/孔，为使反应充分，进行振动处理。4)进行激酶反应：需将检测板覆盖于其上,室温孵育1小时。5)激酶检测：将ADP-Glo试剂平衡至室温。在每孔中加入5μLADP-Glo试剂，停止反应。与离心机简单混合，在振动筛上慢摇，平衡120分钟。每孔加入10uL激酶检测试剂，摇动1分钟，平衡30分钟后在平板阅读器上读取发光。6)曲线拟合：从Envision中复制RLU的值。将RLU值转换为百分比抑制值，拟合XLFit excel插件5.4.0.8版本中的数据，得到IC50值。公式为：Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+(IC50/X)^HillSlope)。活性测试结果如表2所示。可见化合物除了CY2和CY18在1μM下对PI3Kα的抑制率小于0％，特别是化合物CY9、化合物CY10、化合物CY12、化合物CY13和CY20具有和PI103相当的PI3Kα抑制活性。因此，大部分化合物是良好的PI3Kα抑制剂。
表2各实施例制备的化合物的PI3Kα酶抑制活性
HDAC酶抑制活性试验
以组蛋白去乙酰化酶家族的一个亚型HDAC1为研究对象，测试化合物对组蛋白去乙酰化酶的抑制活性，每个化合物设7个浓度梯度，单孔，并以已上市的HDAC抑制剂SAHA做对照。首先将化合物溶解到反应缓冲液中，之后加入一定体积的含组蛋白去乙酰化酶的缓冲溶液，室温孵育15分钟后加入胰蛋白酶和乙酰化的肽缓冲溶液作为反应底物以启动脱乙酰化反应，同时使化合物浓度和酶含量达到设定值，轻轻混合60秒后室温孵育，记录1个小时内一定激发光和发射光波长下反应的动力参数。通过和阴性对照组(无抑制剂组)比较得到化合物对酶的抑制活性，并计算得到化合物对组蛋白去乙酰化酶的半数抑制浓度(IC50)。结果如表3所示。可见除了化合物CY5、化合物CY12对HDAC1的IC50大于1000nM，其他化合物对HDAC1的IC50小于1000nM。以上结果表明本发明制得的化合物具有良好的HDAC1、HDAC6抑制活性。综合实施例2、实施例3的实验结果可知，大部分化合物是良好的PI3K和HDAC双靶点抑制剂，且能有效抑制肿瘤细胞增殖，具有开发为抗肿瘤药物的潜能。
表3各实施例制备的化合物的HDAC1酶抑制活性
注：IC50表示半数抑制浓度。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种三嗪类的异羟肟酸衍生物或其药学上可接受的盐或其互变异构体，其特征在于，所述衍生物的结构通式如式I所示：
其中：
R1选自氢原子、卤素、-CH3、-CF3、-CHF2、-CH2F中的任意一种；
X选自碳原子、-N-、-O-、-S-中的任意一种；
Y选自-O-、-S-、-CH2-、-C＝O-、-CH2CH2-、-CHF-、-CHCl-、-CHBr-、
-CHI-、-CF2-、-CCl2-、-CBr2-、-CI2-、-CH2CF2-、-CH2CCl2-、-CH2CBr2-、-CH2CI2-、-CF2CH2-、-CCl2CH2-、-CBr2CH2-、-CI2CH2-中的任意一种；
G选自直接键、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-、-C HF-、-CHCl-、-CHBr-、-CHI-、-CF2-、-CCl2-、-CBr2-、-CI2-、-CH2CF2-、-C H2CCl2-、-CH2CBr2-、-CH2CI2-、-CF2CH2-、-CCl2CH2-、-CBr2CH2-、-CI2CH2-、-CH＝CH-、-CH＝CH-CH＝CH-中的任意一种。
2.如权利要求1所述的三嗪类的异羟肟酸衍生物或其药学上可接受的盐或其互变异构体，其特征在于，所述衍生物的结构式如下列任意一个编号所示：
3.如权利要求1或2所述的三嗪类的异羟肟酸衍生物或其药学上可接受的盐或其互变异构体，其特征在于，所述药学上可接受的盐为无机酸盐或有机酸盐；
所述无机酸盐选自下述任意一种无机酸形成的盐：盐酸、硫酸和磷酸；
所述有机酸盐选自下述任意一种有机酸形成的盐：乙酸、三氟乙酸、丙二酸、柠檬酸和对甲苯磺酸。
4.如权利要求1至3中任一项所述的三嗪类的异羟肟酸衍生物或其药学上可接受的盐或其互变异构体的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：
以式IA所示化合物与羟胺或盐酸羟胺反应获得式I所示衍生物；
或者：
以式IA所示化合物与羟基带保护基团的羟胺在缩合剂作用下先反应生成式IB所示化合物，再由式IB所示化合物脱除保护基团后获得式I所示衍生物；
其中，P为羟胺中羟基的保护基团。
5.如权利要求1至3中任一项所述的三嗪类的异羟肟酸衍生物或其药学上可接受的盐或其互变异构体的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：
以式IC所示化合物与羟胺或盐酸羟胺在碱性溶液中反应获得式I所示衍生物；
其中，E为烷基。
6.如权利要求1至3中任一项所述的衍生物或其药学上可接受的盐或其互变异构体在制备下列任意一种产品中的应用：
1)磷酯酰肌醇3激酶和/或组蛋白去乙酰化酶抑制剂；
2)真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂；
3)预防和/或治疗肿瘤药物。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于：所述磷酯酰肌醇3激酶包括在哺乳动物细胞中已知的亚型PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kδ和PI3Kγ；
所述组蛋白去乙酰化酶包括在哺乳动物细胞中已知的亚型HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC8、HDAC4、HDAC5、HDAC7、HDAC9、HDAC6、HDAC10、HDAC11；
所述真核生物为哺乳动物；所述肿瘤细胞为癌细胞；所述癌细胞为白血病癌细胞、淋巴瘤细胞、肺癌细胞、乳腺癌细胞、卵巢癌细胞、宫颈癌细胞、人脑胶质瘤细胞、黑色素癌细胞、胶质母细胞瘤细胞、鼻咽癌细胞、肝癌细胞、脑癌细胞、胰腺癌细胞、子宫癌细胞、睾丸癌细胞、皮肤癌细胞、胃癌细胞、结肠癌细胞、膀胱癌细胞或直肠癌细胞。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于：所述白血病癌细胞具体为人慢性粒细胞白血病(CML)细胞系K562；所述淋巴瘤细胞具体为人组织细胞淋巴瘤细胞U937；所述肺癌细胞具体为人肺癌细胞株HCC827；所述乳腺癌细胞具体为人乳腺癌细胞MCF-7、T47D和MDA-MB-231；所述卵巢癌细胞具体为A2780；所述宫颈癌细胞具体为人宫颈癌细胞系Hela；所述人脑胶质瘤细胞具体为U251；所述黑色素癌细胞具体为A375；所述胶质母细胞瘤细胞具体为人胶质母细胞瘤细胞A172和人脑星形胶质母细胞瘤细胞U-118MG；所述鼻咽癌细胞具体为鼻咽癌细胞株CNE-2；所述肝癌细胞具体为人肝癌细胞HepG2。
9.一种产品，其特征在于，其活性成分为如权利要求1至3中任一项所述的衍生物或其药学上可接受的盐或其互变异构体；所述产品为下列任意一种：
1)磷酯酰肌醇3激酶和/或组蛋白去乙酰化酶抑制剂；
2)真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂；
3)预防和/或治疗肿瘤药物。
10.如权利要求9所述的产品，其特征在于，所述磷酯酰肌醇3激酶包括在哺乳动物细胞中已知的亚型PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kδ和PI3Kγ；
所述组蛋白去乙酰化酶包括在哺乳动物细胞中已知的亚型HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC8、HDAC4、HDAC5、HDAC7、HDAC9、HDAC6、HDAC10、HDAC11；
所述真核生物为哺乳动物；所述肿瘤细胞为癌细胞；所述癌细胞为白血病癌细胞、淋巴瘤细胞、肺癌细胞、乳腺癌细胞、卵巢癌细胞、宫颈癌细胞、人脑胶质瘤细胞、黑色素癌细胞、胶质母细胞瘤细胞、鼻咽癌细胞、肝癌细胞、脑癌细胞、胰腺癌细胞、子宫癌细胞、睾丸癌细胞、皮肤癌细胞、胃癌细胞、结肠癌细胞、膀胱癌细胞或直肠癌细胞。
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