CN117645608A - 抗体药物偶联物及其应用 - Google Patents

抗体药物偶联物及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN117645608A
CN117645608A CN202311630453.8A CN202311630453A CN117645608A CN 117645608 A CN117645608 A CN 117645608A CN 202311630453 A CN202311630453 A CN 202311630453A CN 117645608 A CN117645608 A CN 117645608A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
antibodies
alkyl
hydrogen
seq
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202311630453.8A
Other languages
English (en)
Inventor
丁会
许云雷
欧阳芳幸
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kunshan Xinyunda Biotech Co ltd
Original Assignee
Kunshan Xinyunda Biotech Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kunshan Xinyunda Biotech Co ltd filed Critical Kunshan Xinyunda Biotech Co ltd
Priority to CN202311630453.8A priority Critical patent/CN117645608A/zh
Publication of CN117645608A publication Critical patent/CN117645608A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4375—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having nitrogen as a ring heteroatom, e.g. quinolizines, naphthyridines, berberine, vincamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/22—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/02—Linear peptides containing at least one abnormal peptide link

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本公开涉及抗体药物偶联物及其应用，具体提供了式I所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，以及由其制备的具有特定结构的linker‑payload分子和抗体药物偶联物，该化合物和/或抗体药物偶联物在多种肿瘤(如结肠癌、胰腺癌、乳腺癌等)上体现出优异的抗肿瘤活性。

Description

抗体药物偶联物及其应用
技术领域
本公开涉及生物医药领域，具体地，本公开涉及抗体药物偶联物及其应用。
背景技术
抗体-药物偶联物(antibody-drug conjugate，下文简称“ADC”或“偶联物”)相对于单纯的抗体药物而言已经显示出独特的优势，其通过将具有肿瘤细胞表面抗原结合特异性的单克隆抗体与生物活性分子(如细胞毒素)相连，从而将抗体的肿瘤识别靶向性和细胞毒素的高效杀伤作用相结合，巧妙的同时解决了抗体疗效偏低和毒素缺乏靶向性导致毒性过大的缺陷。这使得ADC与传统的抗肿瘤药物相比，在准确的靶向肿瘤细胞的同时，降低对正常细胞的影响，大幅提高了抗肿瘤药物的有效性和安全性。
ADC一般包括三个部分：抗体、接头(Linker)和生物活性分子。ADC的生物活性分子部分为发挥杀伤作用的毒素小分子，一般通过抑制DNA或蛋白合成、抑制细胞有丝分裂等方式来杀伤肿瘤细胞。目前用于ADC开发的毒素主要包括微管抑制剂美登素类(参见EP0425235、US5208020、US5416064、US7276497)和奥瑞他汀(MMAE/MMAF，参见US2016304621A)。其他种类的细胞毒素还包括卡奇霉素类(Calicheamicin，参见US5606040)，苯并二吡咯类衍生物(duocarmycin，参见US7129261)，咯并苯二氮卓类(PBDs，参见WO2005/040170)和喜树碱类衍生物。其中喜树碱类衍生物包括SN-38、DXD、CPT-11、依沙替康、9-硝基喜树碱、10-羟基喜树碱等。毒素通过接头偶联到抗体上；抗体则能够特异性识别肿瘤细胞表面的靶点，将ADC富集到肿瘤细胞表面，使得ADC通过细胞内吞效应进入肿瘤细胞，释放毒素，达到特异性杀灭肿瘤的作用。
可见，毒素是ADC的关键元素之一。因此，新的毒素、新的linker-payload分子以及由其制备的新的ADC需要持续开发和研究。
发明内容
本公开涉及一类结构新颖的毒素分子，以及由该毒素分子制备的具有特定结构的linker-payload分子和抗体药物偶联物，本公开的毒素分子和/或抗体药物偶联物在多种肿瘤(如结肠癌、胰腺癌、乳腺癌等)上体现出优异的抗肿瘤活性。
为此，本公开的第一方面，提供了式I所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，
其中：
R选自
R1选自氢、C1-C6烷基；
R2选自氢、C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷基；
R3选自氢、C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6亚烷基、羟基-C1-C6亚烷基-C(＝O)-；
R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、羧基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-、RaRbN-C(＝O)-、咪唑基(如)、苯基、羟基取代的苯基(如)、吲哚基(如)；
R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、羧基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-、RaRbN-C(＝O)-、咪唑基(如)、苯基、羟基取代的苯基(如)、吲哚基(如)；
Ra、Rb各自独立地选自氢、C1-C6烷基。
在一些实施方案中，R1为氢。
在一些实施方案中，R2选自氢、
在一些实施方案中，R2选自氢、C1-C6烷基。
在一些实施方案中，R2为氢。
在一些实施方案中，R3选自氢、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6亚烷基、羟基-C1-C6亚烷基-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R3选自氢、
在一些实施方案中，R3选自羟基取代的C1-C6烷基。
在一些实施方案中，R3为
在一些实施方案中，Ra、Rb均为氢。
在一些实施方案中，R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R4选自氢、C1-C6烷基。
在一些实施方案中，R4选自氢、甲基。
在一些实施方案中，R5选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R5选自氢、甲基、
在一些实施方案中，R4、R5均为氢。
在一些实施方案中，R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R6选自氢、C1-C6烷基。
在一些实施方案中，R6选自氢、甲基。
在一些实施方案中，R7选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R7选自氢、甲基、
在一些实施方案中，R6、R7均为氢。
在一些优选的实施方案中，所述化合物具有式I-1所示的结构式，
其中：
R1选自氢、C1-C6烷基；
R2选自氢、C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷基；
R3选自氢、C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6亚烷基、羟基-C1-C6亚烷基-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R1为氢。
在一些实施方案中，R2选自氢、
在一些实施方案中，R2选自氢、C1-C6烷基。
在一些实施方案中，R2为氢。
在一些实施方案中，R3选自氢、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6亚烷基、羟基-C1-C6亚烷基-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R3选自氢、
在一些实施方案中，R3选自羟基取代的C1-C6烷基。
在一些实施方案中，R3为
在一些优选的实施方案中，所述化合物具有式I-2所示的结构式，
其中：
R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、羧基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-、RaRbN-C(＝O)-、咪唑基(如)、苯基、羟基取代的苯基(如)、吲哚基(如)；
Ra、Rb各自独立地选自氢、C1-C6烷基。
在一些实施方案中，Ra、Rb均为氢。
在一些实施方案中，R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R4选自氢、C1-C6烷基。
在一些实施方案中，R4选自氢、甲基。
在一些实施方案中，R5选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R5选自氢、甲基、
在一些实施方案中，R4、R5均为氢。
在一些优选的实施方案中，所述化合物具有式I-3所示的结构式，
其中：
R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、羧基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-、RaRbN-C(＝O)-、咪唑基(如)、苯基、羟基取代的苯基(如)、吲哚基(如)；
Ra、Rb各自独立地选自氢、C1-C6烷基。
在一些实施方案中，Ra、Rb均为氢。
在一些实施方案中，R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R6选自氢、C1-C6烷基。
在一些实施方案中，R6选自氢、甲基。
在一些实施方案中，R7选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R7选自氢、甲基、
在一些实施方案中，R6、R7均为氢。
在一些实施方案中，所述化合物选自：
本公开的第二方面，提供了式II所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，
M-L1-L2-L3-D
II
其中：
M为
L1选自-(CH2)p1C(＝O)-、-(CH2CH2O)q1-、-(CH2)p2C(＝O)-NH-(CH2CH2O)q2(CH2)p3C(＝O)-；
p1、p2、p3各自独立地选自1-10之间的任意整数；
q1、q2各自独立地选自1-20之间的任意整数；
L2为氨基酸残基或由2-10个氨基酸残基形成的肽残基；
L3不存在或为-NH-CH2-；
D为
R’选自优选地，R’中，左侧的连接位点与L3相连接；
R1选自氢、C1-C6烷基；
R2选自氢、C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷基；
R3选自氢、C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6亚烷基、羟基-C1-C6亚烷基-C(＝O)-；
R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、羧基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-、RaRbN-C(＝O)-、咪唑基(如)、苯基、羟基取代的苯基(如)、吲哚基(如)；
R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、羧基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-、RaRbN-C(＝O)-、咪唑基(如)、苯基、羟基取代的苯基(如)、吲哚基(如)；
Ra、Rb各自独立地选自氢、C1-C6烷基。
在一些实施方案中，L1为-(CH2)p1C(＝O)-。
在一些实施方案中，p1选自1、2、3、4、5。在一些实施方案中，p1选自3、4、5。在一些实施方案中，p1为5。
在一些实施方案中，p2选自1、2、3、4、5。在一些实施方案中，p2选自2、3、4、5。在一些实施方案中，p2选自2、3、4。在一些实施方案中，p2为2。
在一些实施方案中，p3选自1、2、3、4、5。在一些实施方案中，p3选自2、3、4、5。在一些实施方案中，p3选自2、3、4。在一些实施方案中，p3为2。
在一些实施方案中，q1选自1-12之间的任意整数。在一些实施方案中，q1选自2-12之间的任意整数。在一些实施方案中，q1选自6-10之间的任意整数。在一些实施方案中，q1为8。
在一些实施方案中，q2选自1-12之间的任意整数。在一些实施方案中，q2选自2-12之间的任意整数。在一些实施方案中，q2选自6-10之间的任意整数。在一些实施方案中，q2为8。
在一些实施方案中，L2为由2-4个(优选2个)氨基酸残基形成的肽残基。在一些实施方案中，所述氨基酸残基选自甘氨酸残基、苯丙氨酸残基、缬氨酸残基、瓜氨酸残基、丙氨酸残基。
在一些实施方案中，L2选自甘氨酸残基-甘氨酸残基-苯丙氨酸残基-甘氨酸残基(GGFG)、缬氨酸残基-瓜氨酸残基(VC)、缬氨酸残基-丙氨酸残基(VA)、丙氨酸残基-丙氨酸残基-丙氨酸残基(AAA)。
在一些实施方案中，L2为甘氨酸残基-甘氨酸残基-苯丙氨酸残基-甘氨酸残基(GGFG)，如为
在一些实施方案中，L3为-NH-CH2-。
在一些实施方案中，R1为氢。
在一些实施方案中，R2选自氢、
在一些实施方案中，R2选自氢、C1-C6烷基。
在一些实施方案中，R2为氢。
在一些实施方案中，R3选自氢、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6亚烷基、羟基-C1-C6亚烷基-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R3选自氢、
在一些实施方案中，R3选自羟基取代的C1-C6烷基。
在一些实施方案中，R3为
在一些实施方案中，Ra、Rb均为氢。
在一些实施方案中，R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R4选自氢、C1-C6烷基。
在一些实施方案中，R4选自氢、甲基。
在一些实施方案中，R5选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R5选自氢、甲基、
在一些实施方案中，R4、R5均为氢。
在一些实施方案中，R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R6选自氢、C1-C6烷基。
在一些实施方案中，R6选自氢、甲基。
在一些实施方案中，R7选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R7选自氢、甲基、
在一些实施方案中，R6、R7均为氢。
在一些优选的实施方案中，D具有以下式I-1’所示的结构式，
其中：
R1选自氢、C1-C6烷基；
R2选自氢、C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷基；
R3选自氢、C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6亚烷基、羟基-C1-C6亚烷基-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R1为氢。
在一些实施方案中，R2选自氢、
在一些实施方案中，R2选自氢、C1-C6烷基。
在一些实施方案中，R2为氢。
在一些实施方案中，R3选自氢、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6亚烷基、羟基-C1-C6亚烷基-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R3选自氢、
在一些实施方案中，R3选自羟基取代的C1-C6烷基。
在一些实施方案中，R3为
在一些优选的实施方案中，D具有以下式I-2’所示的结构式，
其中：
R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、羧基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-、RaRbN-C(＝O)-、咪唑基(如)、苯基、羟基取代的苯基(如)、吲哚基(如)；
Ra、Rb各自独立地选自氢、C1-C6烷基。
在一些实施方案中，Ra、Rb均为氢。
在一些实施方案中，R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R4选自氢、C1-C6烷基。
在一些实施方案中，R4选自氢、甲基。
在一些实施方案中，R5选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R5选自氢、甲基、
在一些实施方案中，R4、R5均为氢。
在一些优选的实施方案中，D具有以下式I-3’所示的结构式，
其中：
R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、羧基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-、RaRbN-C(＝O)-、咪唑基(如)、苯基、羟基取代的苯基(如)、吲哚基(如)；
Ra、Rb各自独立地选自氢、C1-C6烷基。
在一些实施方案中，Ra、Rb均为氢。
在一些实施方案中，R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R6选自氢、C1-C6烷基。
在一些实施方案中，R6选自氢、甲基。
在一些实施方案中，R7选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-。
在一些实施方案中，R7选自氢、甲基、
在一些实施方案中，R6、R7均为氢。
在一些实施方案中，D选自：
在一些实施方案中，所述化合物选自：
本公开的第三方面，提供了式III所示的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，
Ab-(M’-L1-L2-L3-D)n
III
Ab为抗体或其抗原结合片段；
M’为
L1、L2、L3、D的定义各自独立地如第二方面的任一技术方案所描述；
n为1-20之间的任意数值(如1、1.5、2、2.5、2.7、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5或20，或者如1-1.5、1.5-2、2-2.5、2.5-3、3-3.5、3.5-4、4-4.5、4.5-5、5-5.5、5.5-6、6-6.5、6.5-7、7-7.5、7.5-8、8-8.5、8.5-9、9-9.5、9.5-10、10-10.5、10.5-11、11-11.5、11.5-12、12-12.5、12.5-13、13-13.5、13.5-14、14-14.5、14.5-15、15-15.5、15.5-16、16-16.5、16.5-17、17-17.5、17.5-18、18-18.5、18.5-19、19-19.5或19.5-20)。
本公开中，DAR(drug antibody ratio)是指偶联到抗体的药物分子的个数(例如，式III中的n)。本文所述的抗体药物偶联物中包含的药物分子的个数可以是整数，也可以是小数。无论是整数还是小数，其指的均是每个抗体偶联的药物分子的平均数量。“n为1-20之间的任意数值”，其表示，n可以是选自1-20之间的任意整数(包括端点1和20)，也可以是选自1-20之间的任意小数。同时，本领域技术人员可以理解，即使采用相同的制备方法，不同的批次制备得到的抗体药物偶联物的DAR值也不一定完全相同，例如，可以在上下不超过0.5的范围内浮动。
DAR可以通过常规手段来测定，诸如质谱、ELISA测定法、HIC和HPLC。还可以测定ADC在n方面的定量分布。在有些情况中，将n为某数值的同质ADC从具有其它药物载荷的ADC中分离、纯化和验证可以通过诸如HIC、反相HPLC或电泳的手段来实现。
在一些实施方案中，所述抗体药物偶联物选自：
本公开形成的ADC中，抗体Ab通过-S-与linker-payload末端的丁二酰亚胺的碳原子相连接，该-S-并非另外引入Ab的巯基，而是抗体Ab被还原而打开二硫键后的抗体自身所含有的巯基。
在一些实施方案中，所述抗体选自抗ADAM9抗体、抗Trop-2抗体、抗CD37抗体、抗HER2抗体、抗B7H4抗体、抗CD70抗体、抗EGFRvIII抗体、抗Mesothelin抗体、抗Folateeceoptor1抗体、抗Mucin 1抗体、抗CD138抗体、抗CD20抗体、抗CD19抗体、抗CD30抗体、抗SLTRK6抗体、抗Nectin 4抗体、抗Tissue factor抗体、抗Mucin16抗体、抗Endothelinreceoptor抗体、抗STEAP1抗体、抗SLC39A6抗体、抗Guanylylcyclase C抗体、抗PSMA抗体、抗CCD79b抗体、抗CD22抗体、抗Sodium phosphate cotransporter2B抗体、抗GPNMB抗体、抗Trophoblast glycoprotein抗体、抗AGS-16抗体、抗EGFR抗体、抗CD33抗体、抗CD66e抗体、抗CD74抗体、抗CD56抗体、抗PD-L1抗体、抗TACSTD2抗体、抗DR5抗体、抗E16抗体、抗STEAP1抗体、抗0772P抗体、抗MPF抗体、抗Napi3b抗体、抗Sema 5b、抗PSCA hlg抗体、抗ETBR抗体、抗MSG783抗体、抗STEAP2抗体、抗TrpM4抗体、抗CRIPTO抗体、抗CD21抗体、抗CD79b抗体、抗FcRH2抗体、抗NCA抗体、抗MDP抗体、抗IL20Rα抗体、抗Brevican抗体、抗EphB2R抗体、抗ASLG659抗体、抗PSCA抗体、抗GEDA抗体、抗BAFF-R抗体、抗CD22抗体、抗CD79a抗体、抗CXCR5抗体、抗HLA-DOB抗体、抗P2X5抗体、抗CD72抗体、抗LY64抗体、抗FcRH1抗体、抗IRTA2抗体、抗TENB2抗体、抗整合素α5β6抗体、抗α4β7抗体、抗FGF2抗体、抗FGFR2抗体、抗HER3抗体、抗CD70抗体、抗CA6抗体、抗DLL3抗体、抗DLL4抗体、抗P-cadherin抗体、抗EpCAM抗体、抗pCAD抗体、抗CD223抗体、抗LYPD3抗体、抗LY6E抗体、抗EFNA4抗体、抗ROR1抗体、抗SLITRK6抗体、抗5T4抗体、抗ENPP3抗体、抗SLC39A6抗体、抗CLAUDIN18.2抗体、抗BMPR1B抗体、抗E16抗体、抗STEAP1抗体、抗Tyro7抗体、抗0772P抗体、抗MPF抗体、抗Napi3b抗体、抗Sema 5b抗体、抗PSCA hlg抗体、抗ETBR抗体、抗MSG783抗体、抗STEAP2抗体、抗TrpM4抗体、抗CRIPTO抗体、抗CD21抗体、抗CD79b抗体、抗FcRH2抗体、抗NCA抗体、抗MDP抗体、抗IL20Rα抗体、抗Brevican抗体、抗EphB2R抗体、抗ASLG659抗体、抗PSCA抗体、抗GEDA抗体、抗CD22抗体、抗CD79a抗体、抗CXCR5抗体、抗HLA-DOB抗体、抗P2X5抗体、抗CD72抗体、抗LY64抗体、抗FcRH1抗体、抗IRTA2抗体、抗c-Met抗体、抗ApoE抗体、抗CD1 lc抗体、抗CD40抗体、抗CD45(PTPRC)抗体、抗CD49D(ITGA4)抗体、抗CD80抗体、抗CSF1R抗体、抗CTSD抗体、抗GZMB抗体、抗Ly86抗体、抗MS4A7抗体、抗PIK3AP1抗体、抗PIK3CD抗体、抗CCR5抗体、抗IFNG抗体、抗IL10RA1抗体、抗IL-6抗体、抗ACTA2抗体、抗COL7A1抗体、抗LOX抗体、抗LRRC15抗体、抗MCPT8抗体、抗MMP10抗体、抗NOG抗体、抗SERPINEl抗体、抗STAT1抗体、抗TGFBR1抗体、抗CTSS抗体、抗PGF抗体、抗VEGFA抗体、抗C1QA抗体、抗C1QB抗体、抗ANGPTL4抗体、抗EGLN抗体、抗ANGPTL4抗体、抗EGLN3抗体、抗BNIP3抗体、抗AIF1抗体、抗CCL5抗体、抗CXCL10抗体、抗CXCL11抗体、抗IFI6抗体、抗PLOD2抗体、抗KISS1R抗体、抗STC2抗体、抗DDIT4抗体、抗PFKFB3抗体、抗PGK1抗体、抗PDK1抗体、抗AKR1C1抗体、抗AKR1C2抗体、抗CADM1抗体、抗CDH11抗体、抗COL6A3抗体、抗CTGF抗体、抗HMOX1抗体、抗KRT33A抗体、抗LUM抗体、抗WNT5A抗体、抗IGFBP3抗体、抗MMP14抗体、抗CDCP1抗体、抗PDGFRA抗体、抗TCF4抗体、抗TGF抗体、抗TGFB1抗体、抗TGFB2抗体、抗CDl lb抗体、抗ADGRE1抗体、抗EMR2抗体、抗TNFRSF21抗体、抗UPK1B抗体、抗TNFSF9抗体、抗MMP16抗体、抗MFI2抗体、抗IGF-1R抗体、抗RNF43抗体、抗NaPi2b抗体、抗BCMA抗体、抗TENB2抗体。
在一些实施方案中，所述抗体选自抗ADAM9抗体、抗HER3抗体、抗HER2抗体、抗TROP-2抗体、抗B7H4抗体、抗CLAUDIN18.2抗体。
在一些实施方案中，所述抗体为抗ADAM9抗体、抗TROP-2抗体。
在一些实施方案中，所述抗体为抗ADAM9抗体。
在一些实施方案中，所述抗体为抗TROP-2抗体。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，其中：
所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1所示的LCDR1、SEQ ID NO:3所示的LCDR2和SEQID NO:4所示的LCDR3；所述重链可变区包含SEQ ID NO:6所示的HCDR1、SEQ ID NO:8所示的HCDR2和SEQ ID NO:10所示的HCDR3；或者，
所述轻链可变区包含SEQ ID NO:2所示的LCDR1、SEQ ID NO:3所示的LCDR2和SEQID NO:5所示的LCDR3；所述重链可变区包含SEQ ID NO:7所示的HCDR1、SEQ ID NO:9所示的HCDR2和SEQ ID NO:11所示的HCDR3；或者，
所述轻链可变区包含SEQ ID NO:22所示的LCDR1、SEQ ID NO:23所示的LCDR2和SEQ ID NO:24所示的LCDR3；所述重链可变区包含SEQ ID NO:25所示的HCDR1、SEQ ID NO:26所示的HCDR2和SEQ ID NO:27所示的HCDR3。
在一些实施方案中，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:2所示的LCDR1、SEQ ID NO:3所示的LCDR2和SEQ ID NO:5所示的LCDR3；所述重链可变区包含SEQ ID NO:7所示的HCDR1、SEQ ID NO:9所示的HCDR2和SEQ ID NO:11所示的HCDR3。
在一些实施方案中，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:22所示的LCDR1、SEQ ID NO:23所示的LCDR2和SEQ ID NO:24所示的LCDR3；所述重链可变区包含SEQ ID NO:25所示的HCDR1、SEQ ID NO:26所示的HCDR2和SEQ ID NO:27所示的HCDR3。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，其中：
所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:12所示的序列，所述重链可变区包含如SEQ IDNO:13所示的序列；或者，
所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:14所示的序列，所述重链可变区包含如SEQ IDNO:15所示的序列；或者，
所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:14所示的序列，所述重链可变区包含如SEQ IDNO:16所示的序列；或者，
所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:28所示的序列，所述重链可变区包含如SEQ IDNO:29所示的序列。
在一些实施方案中，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:14所示的序列，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:16所示的序列。
在一些实施方案中，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:28所示的序列，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:29所示的序列。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段还包含轻链恒定区和重链恒定区，其中：
所述轻链恒定区选自人源性lambda恒定区、kappa恒定区或上述恒定区的突变体；
所述重链恒定区选自人源性IgG、IgM、IgA、IgD、IgE恒定区或上述恒定区的突变体。
在一些实施方案中，所述IgG选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
如SEQ ID NO:17所示的轻链和如SEQ ID NO:18所示的重链；或者，
如SEQ ID NO:19所示的轻链和如SEQ ID NO:20所示的重链；或者，
如SEQ ID NO:19所示的轻链和如SEQ ID NO:21所示的重链；或者，
如SEQ ID NO:30所示的轻链和如SEQ ID NO:31所示的重链。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:19所示的轻链和如SEQ ID NO:21所示的重链。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:30所示的轻链和如SEQ ID NO:31所示的重链。
在一些实施方案中，n为1-10之间的任意数值。
在一些实施方案中，n为4-8之间的任意数值，例如7.6、7.7、7.8或7.9。
本公开的第四方面，提供了制备前述的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物的方法，其包括：
将权利要求前述的式II所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物与前述任一方案所描述的Ab反应，获得所述的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物。
下面，对于本公开的抗体-药物偶联物或其制造中间体的代表性的制造方法进行说明。
具体而言，本公开中，经由硫醚而将抗体和接头结构连接的抗体-药物偶联物例如可通过下述的方法来制造。
M-L1-L2-L3-D+AB-SH→AB-S-M’-L1-L2-L3-D
如上接头-药物中间体化合物与AB-SH反应，以通过由抗体的铰链部的二硫键部分形成的硫醚键将接头-药物中间体化合物与抗体连接；制备得到式表示的抗体-药物偶联物。其中，L1-L2-L3-D的定义如本公开说明书所述。
式中，AB-SH表示携带巯基的抗体，AB表示抗体，M-L1-L2-L3-D所示的化合物即为本公开上述的接头-药物中间体化合物，作为产物的AB-S-M’-L1-L2-L3-D所示的化合物即为本公开的抗体-药物偶联物。
为了便于说明，AB-S-M’-L1-L2-L3-D所示的化合物中，以1个从药物至接头末端的结构部分与1个抗体连接而成的结构的形式进行了记载，但实际上，相对于1个抗体分子而言连接有多个该结构部分的情况较多。例如，如上所述，在一个抗体分子上连接2～8个、优选为4～8个、更优选为6～8个接头-药物中间体化合物。该情况在以下的制造方法的说明中也同样。实际上，如上所述，本公开中，以平均药物连接数表示连接于每一个分子抗体的接头-药物的平均数目。
即，如上所示，通过使本公开上述的接头-药物中间体化合物与具有巯基的抗体AB-SH反应，可制造式AB-S-M’-L1-L2-L3-D所示的抗体-药物偶联物。
具有巯基的抗体可利用本领域技术人员公知的方法获得(Hermanson，G.T、Bioconjugate Techniques、pp.56-136、pp.456-493、Academic Press(1996))。例如，可举出以下方法：使Traut举出试剂与抗体的氨基作用；使N-琥珀酰亚胺基S-乙酰硫代链烷酸酯(N-succinimidyl S-acetylthioalkanoate)类与抗体的氨基作用后，与羟基胺作用；在使N-琥珀酰亚胺基3-(吡啶基二硫代)丙酸酯作用后，使还原剂作用；使二硫苏糖醇、2-巯基乙醇、三(2-羧基乙基)膦盐酸盐(TCEP)等还原剂与抗体作用而将抗体内铰链部的二硫键还原从而产生巯基；等等，但不限于这些方法。
具体而言，作为还原剂，相对于每一个抗体内铰链部二硫键，使用2～8摩尔当量TCEP，在含有螯合剂的缓冲液中，使其与抗体反应，由此，可得到部分或完全地将抗体内铰链部二硫醚还原而得到的携带巯基的抗体(AB-SH)。作为螯合剂，可举出例如乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)等。可以以1mM～20mM的浓度使用它们。作为缓冲液，可使用磷酸钠、硼酸钠、乙酸钠溶液等。在具体的例子中，于4℃～37℃使抗体与TCEP反应1～4小时，由此，可得到部分或完全还原而具有巯基的抗体AB-SH。
相对于每一个具有巯基的抗体AB-SH，可使用2～20摩尔当量的AB-S-M’-L1-L2-L3-D所示的化合物，制造1个抗体连接2个-8个药物而成的抗体-药物偶联物AB-S-M’-L1-L2-L3-D。具体而言，在含有具有巯基的抗体AB-SH的缓冲液中，添加溶解有式M-L1-L2-L3-D所示的化合物的溶液并使其进行反应。此处，作为缓冲液，可使用乙酸钠溶液、磷酸钠、硼酸钠，EPPS等。反应时的pH为5～9，更优选在pH7附近反应。作为溶解化合物M-L1-L2-L3-D的溶剂，可使用二甲基亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺(DMA)、N-甲基-2-吡啶酮(NMP)等有机溶剂。可以以1～20％v/v将溶解有式M-L1-L2-L3-D所示的化合物的有机溶剂溶液添加到含有具有巯基的抗体AB-SH的缓冲液中并进行反应。反应温度为0～37℃、更优选为10～25℃，反应时间为0.5～2小时。可通过利用含硫醇试剂使未反应的式M-L1-L2-L3-D所示的化合物的反应性失活而结束反应。含硫醇试剂例如为半胱氨酸或N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)。更具体而言，添加相对于使用的式M-L1-L2-L3-D所示的化合物而言1～2摩尔当量的NAC，于室温孵育10～30分钟，由此使反应结束。
对于制造的抗体-药物偶联物AB-S-M’-L1-L2-L3-D，可利用以下的共通操作，进行浓缩、缓冲液交换、纯化等的操作。
共通操作A：抗体或抗体-药物偶联物水溶液的浓缩
在超滤管内，放入抗体或抗体-药物偶联物溶液，使用离心机进行离心操作(例如，以2000G～3800G离心5～20分钟)，将抗体或抗体-药物偶联物溶液浓缩。
共通操作B：抗体的浓度测定
使用UV测定器，按照制造商规定的方法，进行抗体浓度的测定。
此时，使用随着抗体不同而显示不同的280nm吸光系数(1.3mLmg-1cm-1～1.8mLmg- 1cm-1)。
共通操作C-1：抗体的缓冲液交换
按照制造商说明书的方法，用含有氯化钠(例如，137mM)及乙二胺四乙酸(EDTA，例如，5mM)的磷酸缓冲液或者(例如，10mM，pH6.5)(本说明书中也称为PBS6.5/EDTA)或者EPPS缓冲液/EDTA。将使用了Sephadex G-25载体的PD-10柱平衡化。针对一根该PD-10柱，装填2mL抗体水溶液，然后分离用PBS6.5/EDTA 3.5mL洗脱的级分(3.5mL)。利用共通操作A将该级分浓缩，使用共通操作B，进行抗体浓度的测定，然后使用PBS6.5/EDTA，将抗体浓度调整为10mg/mL。
共通操作C-2：抗体的缓冲液交换
按照制造商规定的方法，用含有氯化钠(例如，50mM)及EDTA(例如，2mM)的磷酸缓冲液(例如，50mM，pH7.2)(本说明书中也称为PBS7.2/EDTA)。将使用了Sephadex G-25载体的PD-0柱平衡化。针对一根该PD-10柱，装填2mL抗体水溶液，然后分离获取用PBS7.2/EDTA3.5mL洗脱的级分(3.5mL)。利用共通操作A将该级分浓缩，使用共通操作B进行抗体浓度的测定，然后使用PBS6.5/EDTA，将抗体浓度调整为5mg/mL。
共通操作D-1：抗体-药物偶联物的纯化
使用市售的磷酸缓冲液(例如，PBS7.4)、含有氯化钠(例如，137mM)的磷酸钠缓冲液(例如，10mM，pH6.0；本说明书中也称为PBS6.0。)或含有山梨糖醇(例如，5％)的乙酸缓冲液(例如，10mM，pH5.5；本说明书中也称为PBS)中的任一种缓冲液将PD-10柱平衡化。在该PD-10柱中装填抗体-药物偶联物反应水溶液(例如，约1.5mL)，用制造商规定的量的缓冲液洗脱，由此分离获取抗体级分。将该分离获取的级分再次装填至PD-10柱，用缓冲液洗脱，进行凝胶过滤纯化操作，反复操作计2～3次，由此，得到了除去了未连接的药物接头、低分子化合物(三(2-羧基乙基)膦盐酸盐(TCE P)，N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)，二甲基亚砜)的抗体-药物偶联物。
共通操作D-2：抗体-药物偶联物的纯化
使用市售的磷酸缓冲液(例如，PBS7.4)、含有氯化钠(例如，137mM)的磷酸钠缓冲液(例如，10mM，pH6.0；本说明书中也称为PBS6.0。)或含有山梨糖醇(例如，5％)的组氨酸缓冲液(例如，10mM，pH5.5)中的任一种缓冲液将AKTA柱(填料：sephadex G 25)平衡化。进样器装载抗体-药物偶联物反应水溶液(例如，约2mL)，用制造商规定的量的缓冲液洗脱，由此分离获取抗体级分。由此，得到了除去了未连接的药物接头、低分子化合物(三(2-羧基乙基)膦盐酸盐(TCEP)，N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)，二甲基亚砜)的抗体-药物偶联物。
本公开的第五方面，提供了药物组合物，其包含前述的式I所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者包含前述的式II所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者包含前述的式III所示的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物；任选地，还包含一种或多种药用辅料，例如载体和/或赋形剂。
本公开的第六方面，提供了前述的式I所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者前述的式II所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者前述的式III所示的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者前述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗疾病的药物中的用途。
本公开的第七方面，提供了前述的式I所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者前述的式II所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者前述的式III所示的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者前述的药物组合物，其用于预防和/或治疗疾病。
本公开的第八方面，提供了预防和/或治疗疾病的方法，其包括给予有需要的受试者有效量的前述的式I所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者前述的式II所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者前述的式III所示的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者前述的药物组合物。
在一些实施方案中，所述疾病为癌症。
在一些实施方案中，所述疾病选自膀胱癌、乳腺癌(尤其是三阴性乳腺癌)、宫颈癌、结直肠癌(尤其是腺癌、胃肠类癌瘤、胃肠道间质瘤、原发性结直肠淋巴瘤、平滑肌肉瘤、黑素瘤或鳞状细胞癌)、脑癌、食管癌、胃癌、头颈癌、肝癌、非小细胞肺癌(尤其是鳞状细胞癌、腺癌或大细胞未分化癌)、骨髓癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾细胞癌、甲状腺癌、睾丸癌、子宫内膜癌、胆囊癌。
在一些实施方案中，所述疾病选自胃癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、脑癌、胰腺癌、肝癌、结直肠癌、乳腺癌。
有益效果：
1.本公开的ADC(如靶向ADAM-9的各个ADC或靶向TROP-2的各个ADC)对胰腺癌细胞系如Bxpc-3的抑瘤效果优异。
2.本公开的ADC(如靶向ADAM-9的各个ADC或靶向TROP-2的各个ADC)对结肠癌细胞系如Colo-205的抑瘤效果优异。
3.细胞毒试验中，本公开的毒素分子和ADC(如靶向ADAM-9的各个ADC或靶向TROP-2的各个ADC)对多种肿瘤细胞系(如BXPC-3)的抑瘤效果优异。
附图说明
图1：ADC(I-1A)的SEC-HPLC图谱；
图2：ADC(I-2A)的SEC-HPLC图谱；
图3：ADC(I-3A)的SEC-HPLC图谱；
图4：ADC2(I-1A)、ADC2(I-2A)、ADC2(I-3A)的SEC-HPLC图谱；
图5：靶向ADAM-9的各个ADC对BXPC-3肿瘤的抑制效果；
图6：BXPC-3模型靶向ADAM-9的各个ADC给药后的小鼠体重变化；
图7：BXPC-3模型靶向ADAM-9的各个ADC治疗后实体瘤展示图；
图8：靶向TROP-2的各个ADC对BXPC-3肿瘤的抑制效果；
图9：BXPC-3模型靶向TROP-2的各个ADC治疗后实体瘤展示图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本公开的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本公开，而不应视为限定本公开的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
在本公开中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的蛋白质和核酸化学、分子生物学、细胞和组织培养、微生物学、免疫学相关术语和实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的术语和常规步骤。同时，为了更好地理解本公开，下面提供相关术语的定义和解释。
在本公开中，除非另有说明，否则任何数值范围应理解为包括范围内的任何值或任何子范围。
在本公开中，术语“抗体”是指通常由两对相同的多肽链(每对具有一条“轻”(L)链和一条“重”(H)链)组成的免疫球蛋白分子。抗体的轻链可分为κ和λ两类。重链可分为μ、δ、γ、α或ε五种，依据重链的不同可将抗体分为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE五类。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过大约12或更多个氨基酸的“J”区连接，重链还包含大约3个或更多个氨基酸的“D”区。各重链由重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)组成。重链恒定区由3个结构域(CH1、CH2和CH3)组成。各轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子，包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和补体系统的组分C1q的结合。VH和VL区还可被细分为具有高变性的区域(称为互补决定区(CDR))，其间散布有较保守的称为骨架区(FR)的区域。各VH和VL由按下列顺序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4从氨基末端至羧基末端排列的3个CDR和4个FR组成。各重链/轻链对的可变区(VH和VL)分别形成抗体结合部位。氨基酸至各区域或结构域的分配遵循Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest(NationalInstitutes of Health,Bethesda,Md.(1987and1991))，或Chothia&Lesk(1987)J.Mol.Biol.196:901-917；Chothia等人(1989)Nature 342:878-883的定义。
在本公开中，“人源化”抗体是指非人(例如小鼠)抗体形式，其是嵌合的免疫球蛋白、免疫球蛋白链或者其片段(如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或者抗体的其它抗原结合亚序列)，含有源自非人免疫球蛋白的最小序列。优选地，人源化抗体是人免疫球蛋白(接受者抗体)，其中接受者抗体的互补决定区(CDR)的残基由来自具有期望的特异性、亲和性和能力的非人物种(供体抗体)如小鼠、大鼠或者兔的CDR残基置换。
此外，在人源化中，还可能对VH和/或VL的CDR1、CDR2和/或CDR3区内的氨基酸残基进行突变，由此改善抗体的一或多种结合特性(例如亲和性)。可进行例如PCR介导的突变引入突变，其对抗体结合或其它功能特性的影响可利用本文所述的体外或体内测试评估。通常，引入保守性突变。此类突变可为氨基酸取代、添加或缺失。另外，CDR内的突变通常不超过一个或两个。
在本公开中，术语抗体的“抗原结合片段”是指包含全长抗体的片段的多肽，其保持特异性结合全长抗体所结合的相同抗原的能力，和/或与全长抗体竞争对抗原的特异性结合，其也被称为“抗原结合部分”。通常参见，Fundamental Immunology,Ch.7(Paul,W.,ed.,第2版，Raven Press,N.Y.(1989)，其以其全文通过引用合并入本文，用于所有目的。可通过重组DNA技术或通过完整抗体的酶促或化学断裂产生抗体的抗原结合片段。抗原结合片段的非限制性实例包括Fab、Fab’、F(ab’)2、Fd、Fv、互补决定区(CDR)片段、scFv、双抗体(diabody)、单域抗体(singledomain antibody)、嵌合抗体、线性抗体(linear antibody)、纳米抗体(技术来自Domantis)、probody和这样的多肽，其包含足以赋予多肽特异性抗原结合能力的抗体的至少一部分。工程改造的抗体变体综述于Holliger等,2005；NatBiotechnol,23:1126-1136中。
在本公开中，术语“Fd”意指由VH和CH1结构域组成的抗体片段；术语“Fab片段”意指由VL、VH、CL和CH1结构域组成的抗体片段；术语“F(ab’)2片段”意指包含通过铰链区上的二硫桥连接的两个Fab片段的抗体片段；术语“Fab’片段”意指还原连接F(ab’)2片段中两个重链片段的二硫键后所获片段，由一条完整的轻链和重链的Fd片段(由VH和CH1结构域组成)组成。
在本公开中，术语“Fv”意指由抗体的单臂的VL和VH结构域组成的抗体片段。Fv片段通常被认为是，能形成完整的抗原结合位点的最小抗体片段。一般认为，六个CDR赋予抗体的抗原结合特异性。然而，即便是一个可变区(例如Fd片段，其仅仅含有三个对抗原特异的CDR)也能够识别并结合抗原，尽管其亲和力可能低于完整的结合位点。
在本公开中，术语“scFv”是指，包含VL和VH结构域的单个多肽链，其中所述VL和VH通过接头(linker)相连(参见，例如，Bird等人，Science 242:423-426(1988)；Huston等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883(1988)；Pluckthun，The Pharmacology ofMonoclonal Antibodies，第113卷，Roseburg和Moore编，Springer-Verlag，纽约，第269-315页(1994))。此类scFv分子可具有一般结构：NH2-VL-接头-VH-COOH或NH2-VH-接头-VL-COOH。合适的现有技术接头由重复的GGGGS氨基酸序列或其变体组成。例如，可使用具有氨基酸序列(GGGGS)4的接头，但也可使用其变体(Holliger等人(1993)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448)。可用于本公开的其他接头由Alfthan等人(1995)，Protein Eng.8:725-731，Choi等人(2001)，Eur.J.Immunol.31:94-106，Hu等人(1996)，Cancer Res.56:3055-3061，Kipriyanov等人(1999)，J.Mol.Biol.293:41-56和Roovers等人(2001)，Cancer Immunol.描述。在一些情况下，scFv的VH与VL之间还可以存在二硫键。在本公开的某些实施方案中，scFv可形成di-scFv，其指的是两个或两个以上单个scFv串联而形成抗体。在本公开的某些实施方案中，scFv可形成(scFv)2，其指的是两个或两个以上单个scFv并联而形成抗体。
在本公开中，术语“双抗体”意指，其VH和VL结构域在单个多肽链上表达，但使用太短的连接体以致不允许在相同链的两个结构域之间配对，从而迫使结构域与另一条链的互补结构域配对并且产生两个抗原结合部位(参见，例如，Holliger P.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993)；Poljak R.J.等人，Structure 2:1121-1123(1994))。
在本公开中，术语“单域抗体(single-domain antibody,sdAb)”具有本领域技术人员通常理解的含义，其是指由单个单体可变抗体结构域(例如单个重链可变区)所组成的抗体片段，其保持特异性结合全长抗体所结合的相同抗原的能力。单域抗体也称为纳米抗体(nanobody)。
在本公开中，术语“嵌合抗体”是指这样的抗体，其中可变区序列源自一个物种，恒定区序列源自另一物种，如其中可变区序列源自小鼠抗体及恒定区序列源自人抗体的抗体。
上述各个抗体片段均保持了特异性结合全长抗体所结合的相同抗原的能力，和/或与全长抗体竞争对抗原的特异性结合。
可使用本领域技术人员已知的常规技术(例如，重组DNA技术或酶促或化学断裂法)从给定的抗体(例如本公开提供的抗体)获得抗体的抗原结合片段(例如，上述抗体片段)，并且以与用于完整抗体的方式相同的方式就特异性筛选抗体的抗原结合片段。
本公开的抗原结合片段可以通过水解完整的抗体分子获得(参见Morimoto etal.,J.Biochem.Biophys.Methods 24:107-117(1992)；Brennan et al.,Science229:81(1985))。另外，这些抗原结合片段也可以直接由重组宿主细胞产生(参见Hudson,Curr.Opin.Immunol.11:548-557(1999)；Little et al.,Immunol.Today,21:364-370(2000))。比如，Fab’片段可以直接从宿主细胞中获得；可以将Fab’片段化学偶联形成F(ab’)2片段(Carter et al.,Bio/Technology,10:163-167(1992))。另外，Fv、Fab或F(ab’)2片段也可以直接从重组宿主细胞培养液中直接分离得到。本领域的普通技术人员完全知晓制备这些抗原结合片段的其它技术。
在本公开中，用于确定序列同源性和序列相似性百分数的算法是例如BLAST和BLAST 2.0算法，它们分别描述在Altschul等(1977)Nucl.Acid.Res.25：3389-3402和Altschul等(1990)J.Mol.Biol.215：403-410。采用例如文献中所述或者默认参数，BLAST和BLAST 2.0可以用于确定本公开的氨基酸序列同源性百分数。执行BLAST分析的软件可以通过美国国立生物技术信息中心(NCBI)为公众所获得。
在本公开中，所述氨基酸序列的突变体指的是与所述氨基酸序列的同源性大于70％，例如大于75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的序列，例如具有3个、2个或1个取代、缺失或添加氨基酸的序列。优选的是，取代、添加或缺失的氨基酸不超过3个氨基酸。更优选的是，取代、添加或缺失的氨基酸不超过2个氨基酸。最优选的是，取代、添加或缺失的氨基酸不超过1个氨基酸。
“取代型”变体是天然序列中至少一个氨基酸残基被除去并被不同的氨基酸插入其相同位置的变体。所述取代可为单个的，其中该分子中仅有一个氨基酸被取代；或可为多个的，其中该相同分子有两个或更多的氨基酸被取代。多个取代可位于连续的位点。同样，一个氨基酸可被多个残基取代，其中这样的变体包括取代和插入二者。“插入型”(或“添加型”)变体是一个或多个氨基酸被插入到紧邻一段天然序列某个特定位置处的氨基酸的变体。紧邻氨基酸意指与该氨基酸的α-羧基或α-氨基官能团连接。“缺失型”变体是天然氨基酸序列中一个或多个氨基酸被除去的变体。通常情况下，缺失型变体在其分子的特定区域内有一个或两个氨基酸被缺失。
在某些实施方案中，在偶联反应中少于理论最大值的药物模块偶联至抗体。一般而言，抗体不包含许多游离的和反应性的半胱氨酸硫醇基，其可连接药物模块；事实上，抗体中的大多数半胱氨酸硫醇基以二硫桥形式存在。在某些实施方案中，可以在部分或完全还原性条件下用还原剂诸如二硫苏糖醇(DTT)或三羰基乙基膦(TCEP)还原抗体以产生反应性半胱氨酸硫醇基。
本公开中，术语“药学上可接受的盐”是指，(i)本公开所提供的偶联物中存在的酸性官能团与适当的无机或者有机阳离子(碱)形成的盐，并且包括但不限于，碱金属盐，如钠盐、钾盐、锂盐等；碱土金属盐，如钙盐、镁盐等；其他金属盐，如铝盐、铁盐、锌盐、铜盐、镍盐、钴盐等；无机碱盐，如铵盐；有机碱盐，如叔辛基胺盐、二苄基胺盐、吗啉盐、葡糖胺盐、苯基甘氨酸烷基酯盐、乙二胺盐、N-甲基葡糖胺盐、胍盐、二乙胺盐、三乙胺盐、二环己基胺盐、N,N’-二苄基乙二胺盐、氯普鲁卡因盐、普鲁卡因盐、二乙醇胺盐、N-苄基-苯乙基胺盐、哌嗪盐、四甲基胺盐、三(羟甲基)氨基甲烷盐。以及，(ii)本公开所提供的偶联物中存在的碱性官能团与适当的无机或者有机阴离子(酸)形成的盐，并且包括但不限于，氢卤酸盐，如氢氟酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐等；无机酸盐，如硝酸盐、高氯酸盐、硫酸盐、磷酸盐等；低级烷磺酸盐，如甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、乙磺酸盐等；芳基磺酸盐，如苯磺酸盐、对苯磺酸盐等；有机酸盐，如醋酸盐、苹果酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、草酸盐、马来酸盐等；氨基酸盐，如甘氨酸盐、三甲基甘氨酸盐、精氨酸盐、鸟氨酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐等。
药学上可接受的盐可使用本领域熟知的标准程序获得，例如，通过将足量的碱性物质和提供药学上可以接受的阴离子的合适的酸反应，或者，通过将足量的酸性物质和提供药学上可以接受的阳离子的合适的碱反应。
在本公开中，溶剂合物表示这些形式的本公开的抗体药物偶联物：所述抗体药物偶联物通过与溶剂分子配位而形成的固态或液态形式的复合物。水合物是溶剂合物的一种具体形式，其具有配位的水分子。在本公开中，水合物是优选的溶剂合物。
本公开的化合物或偶联物可以存在特定的几何或立体异构体形式，本公开的化合物或偶联物中，手性中心可以存在于药物中，可以存在于接头结构中，还可以存在于抗体及其衍生物中。本公开中，所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，均包括在本公开的范围之内。
可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。如果想得到本公开的化合物或偶联物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。
制备各种含有一定量的活性成分的药物组合物的方法是已知的，或根据本公开的公开内容对于本领域技术人员是显而易见的。如REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES,Martin,E.W.,ed.,Mack Publishing Company,19th ed.(1995)所述，制备所述药物组合物的方法包括掺入适当的药学赋形剂、载体、稀释剂等，它们在所采用的剂量和浓度对暴露于其的细胞或哺乳动物是无毒的。
本公开中，所述药用辅料是指生产药品和调配处方时，使用的赋形剂和附加剂，是指除活性成分外，在安全性方面已进行了合理的评估，并且包含在药物制剂中的物质。药用辅料除了赋型、充当载体、提高稳定性外，还具有增溶、助溶、缓控释等重要功能，是可能会影响到药品的质量、安全性和有效性的重要成分。根据其来源可分为天然物、半合成物和全合成物。根据其作用与用途可分为：溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、湿润剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏着剂、抗氧剂、螯合剂、渗透促进剂、pH调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂等；根据其给药途径可分为口服、注射、黏膜、经皮或局部给药、经鼻或口腔吸入给药和眼部给药等。同一药用辅料可用于不同给药途径的药物制剂，且有不同的作用和用途。
本公开中，所述药物组合物可根据给药途径制成各种适宜的剂型。例如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服溶液剂、口服混悬剂、口服乳剂、散剂、酊剂、糖浆剂、注射剂、栓剂、软膏剂、乳膏剂、糊剂、眼用制剂、丸剂、植入剂、气雾剂、粉雾剂、喷雾剂等。其中，所述的药物组合物或适宜的剂型可以含有0.01mg至1000mg的本公开的抗体药物偶联物、或其药学上可接受的盐、溶剂合物或所述盐的溶剂合物。
本文使用的术语“治疗”一般是指获得需要的药理和/或生理效应。该效应根据完全或部分地预防疾病或其症状，可以是预防性的；和/或根据部分或完全稳定或治愈疾病和/或由于疾病产生的副作用，可以是治疗性的。本文使用的“治疗”涵盖了对患者疾病的任何治疗，包括：(a)预防易感染疾病或症状但还没诊断出患病的患者所发生的疾病或症状；(b)抑制疾病的症状，即阻止其发展；或(c)缓解疾病的症状，即，导致疾病或症状退化。
在本公开中，“受试者”指脊椎动物。在某些实施方案中，脊椎动物指哺乳动物。哺乳动物包括，但不限于，牲畜(诸如牛)、宠物(诸如猫、犬、和马)、灵长类动物、小鼠和大鼠。在某些实施方案中，哺乳动物指人。
在本公开中，“有效量”指在必需的剂量和时间上有效实现期望的治疗或预防效果的量。本公开的物质/分子的“治疗有效量”可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重及该物质/分子在个体中引发期望应答的能力等因素而变化。治疗有效量还涵盖该物质/分子的治疗有益效果胜过任何有毒或有害后果的量。“预防有效量”指在必需的剂量和时间上有效实现期望的预防效果的量。通常而非必然，由于预防剂量是在疾病发作之前或在疾病的早期用于受试者的，因此预防有效量会低于治疗有效量。在癌症的情况中，药物的治疗有效量可减少癌细胞数；缩小肿瘤体积；抑制(即一定程度的减缓，优选停止)癌细胞浸润到周围器官中；抑制(即一定程度的减缓，优选停止)肿瘤转移；一定程度的抑制肿瘤生长；和/或一定程度的减轻与癌症有关的一种或多种症状。
在本公开中，20种常规氨基酸和其缩写遵从常规用法。参见Immunology-ASynthesis(第2版,E.S.Golub和D.R.Gren,Eds.,Sinauer Associates,Sunderland,Mass.(1991))，其通过引用合并入本文。
术语“氨基酸残基”指的是氨基酸的氨基失去一个氢、羧基失去一个羟基后，剩余的不完整的氨基酸结构，具有氨基端和羰基端。本公开中，L2为氨基酸残基或由2-10个(优选2-4个)氨基酸残基形成的肽残基，其中，2-10个(优选2-4个)氨基酸的种类相互之间可以相同，也可以不同。例如，若L2为由4个氨基酸残基组成的肽残基，且氨基酸选自甘氨酸、苯丙氨酸，则L2可以为以下肽残基：甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸(Gly-Gly-Phe-Gly)，具体可以为
本公开中，除非以其他方式明确指出，在本文中通篇采用的描述方式“…各自独立地选自”既可以是指在不同基团中，相同或不同的符号之间所表达的具体选项之间互相不影响，也可以表示在相同的基团中，相同或不同的符号之间所表达的具体选项之间互相不影响。
本公开化合物的取代基按照基团种类或范围公开。特别指出，本公开包括这些基团种类和范围的各个成员的每一个独立的次级组合。例如，术语“C1-C6烷基”特别指独立公开的甲基、乙基、C3烷基、C4烷基、C5烷基和C6烷基。
术语“C1-C6烷基”是指具有1至6个碳原子的烷基，优选“C1-C4烷基”，更优选“C1-C3烷基”，最优选“C1-C2烷基”。“C1-C6烷基”的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基(例如正丙基、异丙基)、丁基(例如正丁基、异丁基、叔丁基)、戊基(例如正戊基、异戊基、新戊基)等。“C1-C4烷基”的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基(例如正丙基、异丙基)、丁基(例如正丁基、异丁基、叔丁基)等。“C1-C3烷基”的实例包括甲基、乙基、丙基(例如正丙基、异丙基)等。“C1-C2烷基”的实例包括甲基、乙基。
术语“C1-C6烷氧基”指的是任意上述C1-C6烷基通过氧原子(-O-)连接到分子的其余部分，实例包括甲氧基、乙氧基、异丙氧基等。
术语“C1-C6烷硫基”指的是任意上述C1-C6烷基通过硫原子(-S-)连接到分子的其余部分，实例包括甲硫基、乙硫基、异丙硫基等。
术语“C1-C6亚烷基”是指从任意上述C1-C6烷基(例如C1-C4烷基、C1-C3烷基等)中去掉一个氢原子所得到的二价基团，例如 等。
从所有上述描述中，对本领域技术人员显而易见的是，其名称是复合名称的任意基团，例如“C1-C6烷氧基C1-C6亚烷基”，应该指的是常规地从左向右从其衍生的部分例如从被“C1-C6烷氧基”取代的“C1-C6亚烷基”来构建，其中“C1-C6烷氧基”、“C1-C6亚烷基”如上文所定义。其余类似的复合基团可以参照前述内容进行理解。
本公开中，“羟基取代的C1-C6烷基”指的是任意上述C1-C6烷基中的一个氢原子被羟基所替代后形成的基团，例如羟甲基。
本公开中，例如，“R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、羧基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-、RaRbN-C(＝O)-、咪唑基(如)、苯基、羟基取代的苯基(如)、吲哚基(如)”，其中，“所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代”的含义是，所述C1-C6烷基可以是未取代的，也可以是被取代的，且被取代时，取代基选自羟基、巯基、羧基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-、RaRbN-C(＝O)-、咪唑基(如)、苯基、羟基取代的苯基(如)、吲哚基(如)。其余类似的定义请参照前述内容进行理解。
下面结合具体实施例对本发明进行进一步的解释说明。
实施例1：抗体的制备
I.抗ADAM9抗体的制备
一、抗原、免疫方案及抗体制备
1.抗原
用于免疫的蛋白抗原是人ADAM9重组蛋白(NCBI Reference Sequence:NP_003807.1)的第206-297位氨基酸，即ADAM9胞外结构域(ADAM9-ECD)，C端带6个His标签，即人ADAM9-ECD-His蛋白，由三优生物医药(上海)有限公司制备提供。
2.免疫方案
用前述人ADAM9-ECD-His蛋白进行动物免疫，共选用10只Balb/C小鼠，雌性，10周龄，小鼠均购自北京维通利华实验动物技术有限公司。首次免疫抗原用弗氏完全佐剂乳化，抗原量为100μg/鼠，后续免疫佐剂为弗氏不完全佐剂，抗原量为50μg/鼠。注射方式为腹腔加皮下多点注射。细胞免疫首次免疫细胞量为1×107个/鼠，后续免疫细胞量为5×106个/鼠。注射方式为腹腔注射。免疫次数4次，免疫时间设置为隔周免疫，即免疫过后间隔一周再次免疫，最后一次免疫后，21天后进行加强免疫。
3.血清效价检测
3.1.样品准备
取免疫后的小鼠血清，按照1500、4500、13500、40500倍的梯度，用5％ PBST进行梯度稀释。
3.2.ELISA方法检测血清效价
1)包被：2μg/mL抗原，每孔30μL，4℃过夜，PBST洗板3次。
2)封闭：5％ PBST室温封闭2h，PBST洗板3次。
3)一抗：加入上述梯度稀释的血清，未免疫小鼠血清作为阴性对照，30μL/孔，室温孵育1h，PBST洗板6次。
4)二抗：血清样品加入1:5000稀释的二抗羊抗鼠-lgG-HRP(Rockland，cat#609-103-123)，5％ PBST稀释；阳性对照组加入1：5000稀释的二抗山羊抗人IgG-HRP(上海酶联生物科技有限公司，ml087062)，5％ PBST稀释。30μL/孔，室温孵育50min，PBST洗板6次。
5)终止：加入30μL/孔的TMB(苏州亚科化学试剂股份有限公司，cat#S0025)室温显色5min～10min，之后加入30μL/孔的2M终止液(苏州亚科化学试剂股份有限公司)终止反应，酶标仪OD450读取数据。
二、杂交瘤细胞的制备和鼠源抗体的获得
如上所述，用人ADAM9-ECD-His蛋白对上述免疫后的Balb/C小鼠进行效价检测，评估血清效价及结合细胞表面抗原的能力，对照效价检测情况(大于10万倍稀释度)决定启动细胞融合。选择血清效价强的免疫小鼠进行一次终免疫后处死小鼠，取脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合后铺板获得杂交瘤，通过间接ELISA筛选到目标杂交瘤，并通过有限稀释法建株为单克隆细胞株。得到的阳性抗体株进一步使用间接ELISA进行筛选，从而选定结合重组蛋白的杂交瘤。收集对数生长期杂交瘤细胞，用Trizol(Invitrogen,15596-018)提取RNA并反转录(PrimeScriptTM Reverse Transcriptase，Takara#2680A)。将反转录得到的cDNA采用mouse Ig-Primer Set(Novagen，TB326 Rev.B 0503)进行PCR扩增后测序，最终得到鼠源抗体。
三、小鼠抗体人源化实验
鼠源抗人ADAM9单克隆抗体人源化如本领域许多文献公示的方法进行。简言之，使用人恒定结构域替代亲本(鼠源抗体)恒定结构域，根据鼠源抗体和人抗体的同源性选择人种抗体序列，本实施例将鼠源抗体进行人源化。
具体的，将人种系序列用作受体框，用于使鼠源抗体人源化。为了找到最接近的种系序列，通过NCBI IgBLAST(ncbi.nlm.nih.gov/igblast/)在种系序列数据库中鉴定最类似表达的轻链和最类似的重链。在该搜索中，将鼠源抗体的CDR序列掩蔽。最合适表达的序列的选择标准，包括核对经典残基和界面残基的序列同一性，以及核对CDR环长度的类似性。
在所获得的鼠源抗体VH/VL CDR典型结构的基础上，将重、轻链可变区序列与人源抗体种系数据库比较，获得同源性高的人种系模板。
将鼠源抗体的CDR区移植到选择好的相应人源化模板上。然后，以鼠源抗体的三维结构为基础，对包埋残基、与CDR区有直接相互作用的残基，以及对VL和VH的构象有重要影响的残基进行回复突变，并对CDR区化学不稳定氨基酸残基优化，经表达测试和回复突变数量对比，选择出人源化重链可变区HCVR和轻链可变区LCVR序列组合而成的抗体，其中轻重链可变区的CDR序列如下表1所示，具体人源化抗体的CDR组合及序列信息见下表2，人源化抗体的轻重链可变区的序列信息见下表3。
表1.人源化抗体重链和轻链可变区CDR序列
表2.人源化抗体CDR区序列
表3.人源化抗体的重链和轻链可变区序列
注：下划线表示单抗CDR序列。
将设计的重链和轻链可变区序列与IgG1重链恒定区和轻链恒定区序列连接，示例性的，抗体轻链恒定区为人κ链的恒定区，重链恒定区为人IgG1天然恒定区，得到重链和轻链序列如表4所示：
表4.人源化抗体的重链和轻链序列，及重链和轻链恒定区序列
注：单下划线表示单抗CDR序列，双下划线表示单抗恒定区序列。
II.抗TROP-2抗体的制备
1.基因合成、转染和抗体制备
hRS7抗体在CHO细胞产生。含hRS7抗体基因的表达载体分别用常规的分子生物学方法构建，hRS7抗体轻链和重链的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。将上述两序列对应的核苷酸序列插入到同一表达载体中，大量提取制备转染质粒，并转染到CHO-K1细胞(ATCC CCL-61)中，具体转染和抗体制备的过程如下：
(1)细胞培养：CHO-K1细胞悬浮生长于ActiPro(GE HyClone)培养基，于37℃，7％CO2，140rpm，90％相对湿度进行培养；
(2)转染：在进入对数生长期后，取细胞离心，重悬于新鲜的ActiPro培养基，计数并调节细胞密度到1.2×107个/毫升，转500μl细胞悬液到电击杯中，然后加入40μg构建好的质粒，将细胞与质粒混匀，然后用电转方式导入质粒(Bio-rad电转仪)；
(3)亚克隆：电转后的细胞用37℃的ActiPro培养基重悬，每孔100μl分装于96孔板。测定细胞上清以测定抗体的表达水平。将表达水平较高的克隆从96孔板转移到24孔板培养，而后再转入6孔板培养，测定细胞的抗体产量和产率，选择表达量最高的4个克隆进行亚克隆，而后转入摇瓶，放在培养箱中继续培养。
2抗体的纯化
收集摇瓶培养的高表达的细胞液，用蛋白A亲和纯化(GE，Mab Select SuRe)和离子交换纯化(GE，Capto S)。采用SDS-PAGE和SEC-HPLC对纯化后的抗体进行分子量和纯度分析。SDS-PAGE测定结果表明制备的hRS7分子量符合预期，用SEC-HPLC法测得抗体纯度为99.1％。
制备的抗TROP-2抗体(即hRS7抗体)的序列汇总详见下表5。
表5：hRS7抗体的序列汇总
实施例2：毒素D的合成
1.依喜替康衍生物I-1A的合成
1.1中间体化合物A2的制备
在依喜替康A1(200mg,0.38mmol)的DCM/MeOH(5/5mL)溶液中分批加入化合物叔丁基二甲基硅氧烷基乙醛(98.38mg,0.564mmol)和AcOH(83.60mg,1.39mmol)。将反应液在室温条件下反应1小时后加入NaBH3CN(400mg,1.88mmol)，并加热到40℃反应4小时。将反应液旋干后用NMP溶解经Pre-HPLC制备纯化后冻干得目标产物A2大约28mg。
1.2毒素衍生物I-1A的制备
在A2(28mg,0.037mmol)的MeOH(2mL)溶液中加入TFA(0.5mL)。将反应液在室温条件下反应2小时。TLC表明原料消失，将反应液直接送Pre-HPLC纯化后得目标产物I-1A大约19mg左右。LCMS：[M+1]+＝524.4。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.72(d,J＝11.0Hz,1H),7.30(s,1H),6.51(s,1H),5.83(d,J＝19.9Hz,1H),5.42(s,2H),5.26(d,J＝19.8Hz,1H),4.56(t,J＝5.2Hz,3H),3.60-3.52(m,4H),3.33-3.25(m,1H),3.00-2.85(m,1H),2.75-2.69(m,2H),2.62-2.52(m,2H),2.36-2.28(m,4H),2.14-2.05(m,1H),1.94-1.77(m,2H),0.89(t,J＝7.3Hz,3H)。
2.依喜替康衍生物I-1B的合成
2.1中间体化合物B1的制备
在依喜替康A1(200mg,0.38mmol)的DCM/MeOH(5/5mL)溶液中分批加入化合物甲氧基乙醛(41.81mg,0.56mmol)和AcOH(83.60mg,1.39mmol)。将反应液在室温条件下反应0.5小时后加入NaBH3CN(47.29mg,0.75mmol)，并加热到40℃反应3小时。将反应液旋干后过硅胶柱纯化得黄色固体大约134mg。取上述黄色固体(50mg,0.1mmol)溶于DCM/MeOH(2/2mL)溶液中分批加入化合物叔丁基二甲基硅氧烷基乙醛(52.98mg,0.3mmol)，AcOH(22.51mg,0.37mmol)和NaBH3CN(12.73mg,0.2mmol)，并于室温条件下反应过夜。将反应液旋干后过硅胶柱纯化得目标产物B1大约44mg左右。
2.2毒素衍生物I-1B的制备
在B1(44mg,0.067mmol)的MeOH(1mL)溶液中加入TFA(0.5mL)。将反应液在室温条件下反应3小时。TLC表明原料消失，将反应液经Pre-HPLC纯化后得目标产物I-1B大约24mg左右。LCMS：[M+1]+＝538.2。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.72(d,J＝11.0Hz,1H),7.30(s,1H),6.51(s,1H),5.83(d,J＝19.8Hz,1H),5.42(s,1H),5.26(d,J＝19.8Hz,1H),4.74-4.58(m,2H),3.50-3.37(m,3H),3.36(s,3H),2.90(t,J＝7.1Hz,2H),2.86-2.66(m,2H),2.30(s,3H),2.15-1.89(m,3H),1.81-1.72(m,1H),0.89(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.毒素衍生物I-2A的合成
3.1中间体化合物F1的合成
在依喜替康A1(250mg,0.57mmol)的THF(10mL)溶液中加入化合物Fmoc-Gly-Osu(226.42mg,0.57mmol)和化合物DIEA(222.61mg,1.72mmol)并于室温条件下反应3小时。TLC检测反应完全，将反应液旋干后经硅胶柱纯化得目标产物F1大约305mg。LCMS确认:[M+H]+＝715.4
3.2中间体化合物F2的合成
在化合物F1(300mg,0.42mmol)的THF(5mL)溶液中加入化合物二乙胺(614mg,8.39mmol)，并于室温条件下反应3小时。TLC监测表明原料反应完全，将反应液旋干后过硅胶柱得目标分子F2约163mg。LCMS确认：
[M+H]+＝492.9
3.3化合物I-2A的合成
在化合物F2(50mg,0.1mmol)的DMA(2mL)溶液中加入乙醇酸(8.5mg,0.11mmol)，DIEA(39mg,0.3mmol)和HATU(46.3mg,0.12mmol)并于室温条件下反应5分钟。将反应液经制备柱纯化后冻干得目标分子I-2A约10mg。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.52(d,J＝8.9Hz,1H),7.92(t,J＝5.7Hz,1H),7.80(d,J＝11.1Hz,1H),7.30(s,1H),6.54(s,1H),5.57(t,J＝5.7Hz,2H),5.43(s,2H),5.24(d,J＝5.5Hz,2H),3.81(t,J＝12.3Hz,4H),3.16(s,2H),2.40(s,3H),2.22-2.03(m,2H),1.92-1.80(m,2H),0.87(t,J＝7.2Hz,3H)。
4.毒素衍生物I-3A的合成
4.1化合物C1的合成
在化合物Fmoc-GG-OH(200mg,0.56mmol)的DMF/H2O(5mL/1mL)溶液中加入依喜替康A1(245.8mg,0.56mmol)，DMTMM(249.5mg,0.85mmol)和TEA(171.3mg,1.69mmol)并于室温条件下反应1小时。TLC监测表明原料反应完全，将反应液经反向柱得目标分子C1约388mg。
4.2.化合物I-3A的合成
在化合物C1(383mg,0.50mmol)的THF(10mL)溶液中加入化合物二乙胺(725.9mg,9.92mmol)，并于室温条件下反应3小时。TLC监测表明原料反应完全，将反应液经反向柱得目标分子I-3A约167mg。LCMS确认：[M+H]+＝549.6。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.72(d,J＝11.0Hz,1H),7.30(s,1H),6.51(s,1H),5.83(d,J＝19.9Hz,1H),5.42(s,2H),5.26(d,J＝19.8Hz,1H),4.56(t,J＝5.2Hz,3H),3.60-3.52(m,4H),3.33-3.25(m,1H),3.00-2.85(m,1H),2.75-2.69(m,2H),2.62-2.52(m,2H),2.36-2.28(m,4H),2.14-2.05(m,1H),1.94-1.77(m,2H),0.89(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例3：LD的合成
1.LD(I-1A)的合成
1.1中间体化合物D2的制备
将I-1A(80mg，0.152mmol)和D1(112mg，0.3mmol)用6mL甲苯和0.6mL DMF溶解后，加入乙酸锌(55mg，0.305mmol)，100摄氏度下反应4小时，外送质谱检测，大量原料反应。按照上述步骤投三个平行反应，将反应液合并旋干后经Prep-HPLC纯化(乙腈/水)后冻干得目标产物D2大约32mg。LCMS：[M+1]+＝831.8
1.2中间体化合物D3的制备
将D2(30mg，0.036mmol，1eq)用1mL DMF溶解后，加入吗啉(6mg，0.072mmol，2eq)，室温下反应4小时，质谱检测，原料反应完全，将反应液旋干后经Prep-HPLC纯化(乙腈/水)后冻干得目标产物D3大约16mg。LCMS：[M+1]+＝610.1
1.3LD终产物LD(I-1A)的制备
在化合物D3(12.6mg，0.021mmol，1eq)的DMF/H2O(2.5mL/0.5mL)溶液中加入MC-GGF-OH(14.65mg，0.031mmol，1.5eq),DMTMM(9.14mg，0.03mmol，1.5eq)和三乙胺(6.27mg，0.062mmol，3.0eq)。将反应液在室温条件下反应1小时后经Prep-HPLC纯化(乙腈/水)后冻干得目标产物LD(I-1A)大约8.5mg。LCMS：[M+1]+＝1064.7
2.LD(I-2A)的合成
2.1.化合物E1的合成
在化合物A1(250mg,0.57mmol)的THF(10mL)溶液中加入化合物Fmoc-G-Osu(226.42mg,0.57mmol)和化合物DIEA(222.61mg,1.72mmol)并于室温条件下反应3小时。TLC检测反应完全，将反应液旋干后经硅胶柱纯化得目标产物E1大约305mg。LCMS确认:[M+H]+＝715.4
2.2.化合物E2的合成
在化合物E1(300mg,0.42mmol)的THF(5mL)溶液中加入化合物二乙胺(614mg,8.39mmol)，并于室温条件下反应3小时。TLC监测表明原料反应完全，将反应液旋干后过硅胶柱得目标分子E2约163mg。LCMS确认：[M+H]+＝492.9
2.3.终产物LD(I-2A)的合成
在化合物E3(购自上海禧耀医药科技有限公司)(100mg,0.16mmol)的DMF/H2O(2.5mL/0.5mL)溶液中加入化合物E2(79.87mg,0.16mmol)，DMTMM(71.70mg,0.24mmol)和TEA(49.23mg,0.49mmol)并于室温条件下反应1小时。将反应液经制备柱纯化后冻干得目标分子LD(I-2A)约20.1mg。LCMS确认：[M+H]+＝1091.9
3.LD(I-3A)的合成
3.1终产物LD(I-3A)的合成
在化合物MC-GGFG-OH(67.5mg,0.13mmol)的NMP(5mL)溶液中加入化合物DCC(39.4mg,0.019mmol)，NHS(44.0mg,0.38mmol)和吡啶(30.2mg,0.38mmol)并于室温条件下反应1小时。向反应液中加入化合物I-3A(70mg,0.13mmol)并于室温条件下继续反应6小时。TLC监测表明原料反应完全，将反应液经反向柱纯化冻干得终产物LD(I-3A)约52.6mg。LCMS确认：[M+H]+＝1061.1.
实施例4：ADC的制备
1.制备ADAM9抗体偶联物ADC(I-1A)
1.1偶联粗产物ADC(I-1A)的合成
将抗体H03-2换液至50mM EPPS+10mM EDTA，pH 7.0的缓冲液中，蛋白溶液置于37℃水浴锅水浴，搅拌混合的同时加入6.5倍的物质的量的TCEP溶液，并置于37℃水浴反应120分钟。样品使用22℃水浴锅水浴，往抗体混合液中加入14倍的物质的量的化合物LD(I-1A)的DMSO溶液，(DMSO终浓度为12％)。60分钟后，加入14倍的物质的量的乙酰半胱氨酸，置于22℃摇床30rpm反应10分钟，得到偶联粗产物ADC(I-1A)。
1.2偶联粗产物ADC(I-1A)的检测
1.2.1RP-HPLC分析方法
仪器：沃特世AcQuity H class Plus
色谱柱：YMC Triat Bio C4 3um 3.0×150mm
色谱条件：流动相0.1％ TFA in Water、0.1％ TFA in ACN；流速0.5mL/min；柱温85℃；进样量10μL；运行时间16min；检测波长280nm、376nm
1.2.2SEC-HPLC分析方法
仪器：安捷伦1260InfinityⅡ
色谱柱：东曹株式会社TSKgel G3000SWXL 7.8mmI.D.30cm，5μm东曹株式会社TSKgel guardcolumnSWXL 6.0mmI.D.4cm
色谱条件：流动相0.1M PB、0.2M NaCl、5％异丙醇pH 7.0；流速0.5mL/min；柱温30℃；进样量100μL；运行时间30min检测波长215、
280nm
1.3偶联反应产品纯化：
通过PD-10脱盐柱(填料：sephadex G 25)脱盐纯化后，得偶联物ADC(I-1A)，偶联物再换液到His pH5.5溶液中，SEC检测，小分子已经完全除掉。纯化后的ADC(I-1A)的SEC结果见图1。
1.4DAR的测定
ADC(I-1A)和单抗溶液中加入等体积50mM DTT溶液，涡旋混匀，37℃水浴30min。还原后的ADC和抗体用RP-HPLC分析偶联和未偶联的抗体轻链和重链。通过分析其组成确定DAR值为7.8,聚体为1.2％。
2.制备ADAM9抗体偶联物ADC(I-2A)
2.1偶联粗产物ADC(I-2A)的合成
将抗体H03-2换液至50mM EPPS+10mM EDTA，pH 7.0的缓冲液中，蛋白溶液置于37℃水浴锅水浴，搅拌混合的同时加入6.5倍的物质的量的TCEP溶液，并置于37℃水浴反应120分钟。样品使用22℃水浴锅水浴，往抗体混合液中加入10倍的物质的量的化合物LD(I-2A)的DMSO溶液，(DMSO终浓度为12％)。60分钟后，加入10倍的物质的量的乙酰半胱氨酸，置于22℃摇床30rpm反应10分钟，得到偶联粗产物ADC(I-2A)。
2.2偶联粗产物ADC(I-2A)的检测
2.2.1RP-HPLC分析方法
仪器：沃特世AcQuity H class Plus
色谱柱：YMC Triat Bio C4 3um 3.0×150mm
色谱条件：流动相0.1％ TFA in Water、0.1％ TFA in ACN；流速0.5mL/min；柱温85℃；进样量10μL；运行时间16min；检测波长280nm、376nm
2.2.2SEC-HPLC分析方法
仪器：安捷伦1260InfinityⅡ
色谱柱：东曹株式会社TSKgel G3000SWXL 7.8mmI.D.30cm，5μm东曹株式会社TSKgel guardcolumnSWXL 6.0mmI.D.4cm
色谱条件：流动相0.1M PB、0.2M NaCl、5％异丙醇pH 7.0；流速0.5mL/min；柱温30℃；进样量100μL；运行时间30min检测波长215、
280nm
2.3偶联反应产品纯化：
通过PD-10脱盐柱(填料：sephadex G 25)脱盐纯化后，得偶联物ADC(I-2A)，偶联物再换液到His pH5.5溶液中，SEC检测，小分子已经完全除掉。纯化后的ADC(I-2A)的SEC结果见图2。
2.4DAR的测定
ADC(I-2A)和单抗溶液中加入等体积50mM DTT溶液，涡旋混匀，37℃水浴30min。还原后的ADC和抗体用RP-HPLC分析偶联和未偶联的抗体轻链和重链。通过分析其组成确定DAR值为7.7,聚体为1.4％。
3.制备ADAM9抗体偶联物ADC(I-3A)
3.1偶联粗产物ADC(I-3A)的合成
将抗体H03-2换液至50mM EPPS+10mM EDTA，pH 7.0的缓冲液中，蛋白溶液置于37℃水浴锅水浴，搅拌混合的同时加入6.5倍的物质的量的TCEP溶液，并置于37℃水浴反应120分钟。样品使用22℃水浴锅水浴，往抗体混合液中加入10倍的物质的量的化合物LD(I-3A)的DMSO溶液，(DMSO终浓度为12％)。60分钟后，加入10倍的物质的量的乙酰半胱氨酸，置于22℃摇床30rpm反应10分钟，得到偶联粗产物ADC(I-3A)。
3.2偶联粗产物ADC(I-3A)的检测
3.2.1RP-HPLC分析方法
仪器：沃特世AcQuity H class Plus
色谱柱：YMC Triat Bio C4 3um 3.0×150mm
色谱条件：流动相0.1％ TFA in Water、0.1％ TFA in ACN；流速0.5mL/min；柱温85℃；进样量10μL；运行时间16min；检测波长280nm、376nm
3.2.2SEC-HPLC分析方法
仪器：安捷伦1260InfinityⅡ
色谱柱：东曹株式会社TSKgel G3000SWXL 7.8mmI.D.30cm，5μm东曹株式会社TSKgel guardcolumnSWXL 6.0mmI.D.4cm
色谱条件：流动相0.1M PB、0.2M NaCl、5％异丙醇pH 7.0；流速0.5mL/min；柱温30℃；进样量100μL；运行时间30min检测波长215、
280nm
3.3偶联反应产品纯化：
通过PD-10脱盐柱(填料：sephadex G 25)脱盐纯化后，得偶联物ADC(I-3A)，偶联物再换液到His pH5.5溶液中，SEC检测，小分子已经完全除掉。纯化后的ADC(I-3A)的SEC结果见图3。
3.4DAR的测定
ADC(I-3A)和单抗溶液中加入等体积50mM DTT溶液，涡旋混匀，37℃水浴30min。还原后的ADC和抗体用RP-HPLC分析偶联和未偶联的抗体轻链和重链。通过分析其组成确定DAR值为7.9,聚体为2.2％。
4.制备TROP-2抗体偶联物ADC2(I-1A)，ADC2(I-2A)，ADC2(I-3A)
4.1ADC2(I-1A)，ADC2(I-2A)，ADC2(I-3A)的结构
4.2ADC2(I-1A)，ADC2(I-2A)，ADC2(I-3A)的制备
ADC2(I-1A)、ADC2(I-2A)、ADC2(I-3A)使用了hRS7抗体(TROP-2抗体)，分别和不同的连接子-毒素LD(I-1A)、LD(I-2A)、LD(I-3A)通过偶联反应制备而得到。其偶联的方法和投料比可以分别参考前述ADC(I-1A)、ADC(I-2A)、ADC(I-3A)的制备。其RP-HPLC、SEC-HPLC的分析方法、纯化方法、和DAR值的测定可以分别参考前述的ADC(I-1A)、ADC(I-2A)、ADC(I-3A)的方法。各个ADC的SEC-HPLC图谱见图4。分析结果显示ADC2(I-1A)、ADC2(I-2A)、ADC2(I-3A)的DAR值分别为7.8、7.6、和7.9；ADC2(I-1A)、ADC2(I-2A)、ADC2(I-3A)的聚体分别为0％，2.3％，和2.8％。
实施例5：依喜替康衍生物毒素及ADC的细胞毒试验
5.1细胞铺板
根据细胞计数结果，使用培养基将细胞密度调整为4×104cells/ml，根据所需铺板的数量，配制一定体积的细胞悬液，按100μl/well于96孔板进行铺板。细胞铺板后，将96孔板置于二氧化碳培养箱(37℃，5％CO2)中培养24h，使细胞充分贴壁。
5.2给药与培养
将稀释后的样品，按100μl/well加入96孔板相应板孔中，每个浓度双复孔，加样完成后轻轻振荡混匀，置于二氧化碳培养箱(37℃，5％CO2)中，培养96h。
5.3细胞活力检测
将CCK-8检测试剂盒于室温平衡至少30min，恢复至室温后再使用。从二氧化碳培养箱中取出培养结束的细胞，每孔中加入20μl CCK-8检测试剂(注意不要在孔中生成气泡，以免影响OD值的读数)，将细胞培养板置于二氧化碳培养箱(37℃，5％CO2)中，继续培养2h。将96孔板置于多功能酶标仪上，根据实验设计进行编板，读取450nm处的吸光度，应用四参数曲线拟合出样品的IC50值。依喜替康衍生物和ADC的细胞毒(BXPC-3)IC50值见表6和表7。
表6：依喜替康衍生物的IC50值
表7：ADC的IC50值(按小分子毒素计算)
样品名称 IC50(BXPC-3)(ng/mL)
ADC(I-1A) 1.156
ADC(I-2A) 0.279
ADC(I-3A) 0.219
实施例6：靶向ADAM-9的ADC对胰腺癌细胞系Bxpc-3的抑瘤效果
6.1细胞培养
BxPC-3(ATCC CRL-1687)细胞体外单层培养，培养条件为1640培养基中加10％热灭活胎牛血清并加琼脂，于37℃、含5％ CO2空气的培养箱中培养。一周两次用0.25％胰酶进行消化处理传代。当细胞呈指数生长期时，收取细胞，计数，接种。
6.2肿瘤细胞接种及瘤块传代
将5.0×106个BxPC-3肿瘤细胞悬浮于0.1ml PBS与Matrigel混合物(1:1)，接种于5只裸鼠右侧肩胛处(P1代)。待肿瘤长至500-800mm3时，将荷瘤小鼠用CO2麻醉处死，取出瘤块，去除周围坏死的组织，将状态较好的将瘤块切成20-30mm3的小瘤块，接种到新的一批裸鼠(P2代)。
6.3瘤块接种及分组给药
本试验使用P11代肿瘤组织进行受试品的抗肿瘤活性评价。待P10代肿瘤长至500-800mm3时，将荷瘤小鼠用CO2麻醉处死，取出瘤块，去除周围坏死的组织，将状态较好的将瘤块切成20-30mm3的小瘤块，接种到正式实验用鼠的右侧肩胛处。瘤块接种7天后肿瘤平均体积达到约128mm3时，剔除瘤体积过小或过大的小鼠，将剩余的小鼠(n＝5)根据瘤体积随机分组并开始给药。给药方案见下表。
表8：ADC给药方案
6.4实验观察和数据收集
肿瘤细胞接种后，除了观察肿瘤生长情况，还对药物治疗对动物行为的影响进行监测：实验动物的活动性，摄食和饮水，体重变化(体重每周测量2次)，眼睛、被毛及其它异常情况。实验过程中观察到的临床症状均记录在原始数据中。肿瘤体积计算方法为：肿瘤体积(mm3)＝1/2×(a×b2)(其中a表示长径，b表示短径)。当单只动物的体重下降超过15％时(BWL>15％)，给予相应单只动物停药处理，体重下降恢复到10％以内，恢复给药。当单只小鼠体重下降>20％，按照动物福利对其实施安乐死。
6.5疗效评价标准
相对肿瘤增殖率，T/C％，即在某一时间点，治疗组和对照组的相对肿瘤体积或瘤重的百分比值。计算公式如下：T/C％＝TRTV/CRTV×100％(TRTV：治疗组平均RTV；CRTV：溶媒对照组平均RTV；RTV＝Vt/V0，V0为分组时该动物的瘤体积，Vt为治疗后该动物的瘤体积)；或T/C％＝TTW/CTW×100％(TTW：治疗组实验终结时平均瘤重；CTW：溶媒对照组实验终结时平均瘤重)。
6.6实验终点
瘤块接种后第36天，所有小鼠取肿瘤，并称重、拍照。
6.7统计分析
本实验用one-way ANOVA进行各组间肿瘤均值的比较。方差齐性分析得出F值有显著性差异，在ANOVA分析之后用Dunnet’s T3(方差不齐)法再进行多重比较。用SPSS17.0进行所有数据分析。p<0.05认为有显著性差异。
6.8实验结果
实验结果如图5-7所示，图5为抑瘤活性统计曲线，图6为体重变化曲线，图7为实体瘤展示图。
6.9实验结论
由以上结果可知，本公开的靶向ADAM-9的ADC对胰腺癌细胞系Bxpc-3的抑瘤效果优异。
实施例7：靶向TROP-2的ADC对胰腺癌细胞系Bxpc-3的抑瘤效果
7.1细胞培养、肿瘤细胞接种及瘤块传代、瘤块接种都和实施例6相同。
7.2给药方案如表格9。
表9：ADC给药方案
7.3实验观察和数据收集、疗效评价标准、实验终点和统计分析都和实施例6相同。
7.4实验结果
实验结果如图8-9所示，图8为抑瘤活性统计曲线，图9为实体瘤展示图。
7.5实验结论
由以上结果可知，本公开的靶向TROP-2的ADC对胰腺癌细胞系Bxpc-3的抑瘤效果优异。

Claims (22)

1.式I所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，
其中：
R选自
R1选自氢、C1-C6烷基；
优选地，R1为氢；
R2选自氢、C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷基；
优选地，R2选自氢、
或者优选地，R2选自氢、C1-C6烷基；
最优选地，R2为氢；
R3选自氢、C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6亚烷基、羟基-C1-C6亚烷基-C(＝O)-；
优选地，R3选自氢、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6亚烷基、羟基-C1-C6亚烷基-C(＝O)-；
更优选地，R3选自氢、
或者更优选地，R3选自羟基取代的C1-C6烷基；
最优选地，R3为
R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、羧基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-、RaRbN-C(＝O)-、咪唑基(如)、苯基、羟基取代的苯基(如)、吲哚基(如)；
优选地，R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-C(＝O)-；
更优选地，R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、RaRbN-C(＝O)-；
进一步优选地，R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-；
进一步优选地，R4选自氢、C1-C6烷基；
更进一步优选地，R4选自氢、甲基；
进一步优选地，R5选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-；
更进一步优选地，R5选自氢、甲基、
最优选地，R4、R5均为氢；
R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、羧基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-、RaRbN-C(＝O)-、咪唑基(如)、苯基、羟基取代的苯基(如)、吲哚基(如)；
优选地，R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-C(＝O)-；
更优选地，R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、RaRbN-C(＝O)-；
进一步优选地，R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-；
进一步优选地，R6选自氢、C1-C6烷基；
更进一步优选地，R6选自氢、甲基；
进一步优选地，R7选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-；
更进一步优选地，R7选自氢、甲基、
最优选地，R6、R7均为氢；
Ra、Rb各自独立地选自氢、C1-C6烷基；
优选地，Ra、Rb均为氢。
2.根据权利要求1所述的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，其中，所述化合物具有式I-1所示的结构式，
其中：
R1选自氢、C1-C6烷基；
优选地，R1为氢；
R2选自氢、C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷基；
优选地，R2选自氢、
或者优选地，R2选自氢、C1-C6烷基；
最优选地，R2为氢；
R3选自氢、C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6亚烷基、羟基-C1-C6亚烷基-C(＝O)-；
优选地，R3选自氢、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6亚烷基、羟基-C1-C6亚烷基-C(＝O)-；
更优选地，R3选自氢、
或者更优选地，R3选自羟基取代的C1-C6烷基；
最优选地，R3为
3.根据权利要求1所述的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，其中，所述化合物具有式I-2所示的结构式，
其中：
R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、羧基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-、RaRbN-C(＝O)-、咪唑基(如)、苯基、羟基取代的苯基(如)、吲哚基(如)；
优选地，R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-C(＝O)-；
更优选地，R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、RaRbN-C(＝O)-；
进一步优选地，R4、R5各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-；
进一步优选地，R4选自氢、C1-C6烷基；
更进一步优选地，R4选自氢、甲基；
进一步优选地，R5选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-；
更进一步优选地，R5选自氢、甲基、
最优选地，R4、R5均为氢；
Ra、Rb各自独立地选自氢、C1-C6烷基；
优选地，Ra、Rb均为氢。
4.根据权利要求1所述的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，其中，所述化合物具有式I-3所示的结构式，
其中：
R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、羧基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-、RaRbN-C(＝O)-、咪唑基(如)、苯基、羟基取代的苯基(如)、吲哚基(如)；
优选地，R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、RaRbN-C(＝O)-；
更优选地，R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、RaRbN-C(＝O)-；
进一步优选地，R6、R7各自独立地选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-；
进一步优选地，R6选自氢、C1-C6烷基；
更进一步优选地，R6选自氢、甲基；
进一步优选地，R7选自氢、C1-C6烷基，且所述C1-C6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、RaRbN-C(＝O)-；
更进一步优选地，R7选自氢、甲基、
最优选地，R6、R7均为氢；
Ra、Rb各自独立地选自氢、C1-C6烷基；
优选地，Ra、Rb均为氢。
5.根据权利要求1-4任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，其中，所述化合物选自：
6.式II所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，
M-L1-L2-L3-D
II
其中：
M为
L1选自-(CH2)p1C(＝O)-、-(CH2CH2O)q1-、-(CH2)p2C(＝O)-NH-(CH2CH2O)q2(CH2)p3C(＝O)-；
优选地，L1为-(CH2)p1C(＝O)-；
p1、p2、p3各自独立地选自1-10之间的任意整数；
优选地，p1选自1、2、3、4、5；更优选地，p1选自3、4、5；最优选地，p1为5；
优选地，p2选自1、2、3、4、5；更优选地，p2选自2、3、4、5；进一步优选地，p2选自2、3、4；最优选地，p2为2；
优选地，p3选自1、2、3、4、5；更优选地，p3选自2、3、4、5；进一步优选地，p3选自2、3、4；最优选地，p3为2；
q1、q2各自独立地选自1-20之间的任意整数；
优选地，q1选自1-12之间的任意整数；更优选地，q1选自2-12之间的任意整数；进一步优选地，q1选自6-10之间的任意整数；最优选地，q1为8；
优选地，q2选自1-12之间的任意整数；更优选地，q2选自2-12之间的任意整数；进一步优选地，q2选自6-10之间的任意整数；最优选地，q2为8；
L2为氨基酸残基或由2-10个氨基酸残基形成的肽残基；
优选地，L2为由2-4个(优选2个)氨基酸残基形成的肽残基；优选地，所述氨基酸残基选自甘氨酸残基、苯丙氨酸残基、缬氨酸残基、瓜氨酸残基、丙氨酸残基；
更优选地，L2选自甘氨酸残基-甘氨酸残基-苯丙氨酸残基-甘氨酸残基(GGFG)、缬氨酸残基-瓜氨酸残基(VC)、缬氨酸残基-丙氨酸残基(VA)、丙氨酸残基-丙氨酸残基-丙氨酸残基(AAA)；
最优选地，L2为甘氨酸残基-甘氨酸残基-苯丙氨酸残基-甘氨酸残基(GGFG)，如为
L3不存在或为-NH-CH2-；
优选地，L3为-NH-CH2-；
D为
R’选自优选地，R’中，左侧的连接位点与L3相连接；
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7各自独立地如权利要求1所限定。
7.根据权利要求6所述的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，其中，D具有以下式I-1’所示的结构式，
其中：
R1、R2、R3各自独立地如权利要求2所限定。
8.根据权利要求6所述的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，其中，D具有以下式I-2’所示的结构式，
其中：
R4、R5各自独立地如权利要求3所限定。
9.根据权利要求6所述的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，其中，D具有以下式I-3’所示的结构式，
其中：
R6、R7各自独立地如权利要求4所限定。
10.根据权利要求6-9任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，其中，D选自：
11.根据权利要求6-10任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，其中，所述化合物选自：
12.式III所示的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，
Ab-(M’-L1-L2-L3-D)n
III
Ab为抗体或其抗原结合片段；
M’为
L1、L2、L3、D如权利要求6-10任一项所限定；
n为1-20之间的任意数值。
13.根据权利要求12所述的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，其中，所述抗体药物偶联物选自：
14.权利要求12-13任一项所述的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，其中，所述抗体选自抗ADAM9抗体、抗Trop-2抗体、抗CD37抗体、抗HER2抗体、抗B7H4抗体、抗CD70抗体、抗EGFRvIII抗体、抗Mesothelin抗体、抗Folate eceoptor1抗体、抗Mucin 1抗体、抗CD138抗体、抗CD20抗体、抗CD19抗体、抗CD30抗体、抗SLTRK6抗体、抗Nectin 4抗体、抗Tissue factor抗体、抗Mucin16抗体、抗Endothelinreceoptor抗体、抗STEAP1抗体、抗SLC39A6抗体、抗Guanylylcyclase C抗体、抗PSMA抗体、抗CCD79b抗体、抗CD22抗体、抗Sodium phosphate cotransporter2B抗体、抗GPNMB抗体、抗Trophoblastglycoprotein抗体、抗AGS-16抗体、抗EGFR抗体、抗CD33抗体、抗CD66e抗体、抗CD74抗体、抗CD56抗体、抗PD-L1抗体、抗TACSTD2抗体、抗DR5抗体、抗E16抗体、抗STEAP1抗体、抗0772P抗体、抗MPF抗体、抗Napi3b抗体、抗Sema 5b、抗PSCA hlg抗体、抗ETBR抗体、抗MSG783抗体、抗STEAP2抗体、抗TrpM4抗体、抗CRIPTO抗体、抗CD21抗体、抗CD79b抗体、抗FcRH2抗体、抗NCA抗体、抗MDP抗体、抗IL20Rα抗体、抗Brevican抗体、抗EphB2R抗体、抗ASLG659抗体、抗PSCA抗体、抗GEDA抗体、抗BAFF-R抗体、抗CD22抗体、抗CD79a抗体、抗CXCR5抗体、抗HLA-DOB抗体、抗P2X5抗体、抗CD72抗体、抗LY64抗体、抗FcRH1抗体、抗IRTA2抗体、抗TENB2抗体、抗整合素α5β6抗体、抗α4β7抗体、抗FGF2抗体、抗FGFR2抗体、抗HER3抗体、抗CD70抗体、抗CA6抗体、抗DLL3抗体、抗DLL4抗体、抗P-cadherin抗体、抗EpCAM抗体、抗pCAD抗体、抗CD223抗体、抗LYPD3抗体、抗LY6E抗体、抗EFNA4抗体、抗ROR1抗体、抗SLITRK6抗体、抗5T4抗体、抗ENPP3抗体、抗SLC39A6抗体、抗CLAUDIN18.2抗体、抗BMPR1B抗体、抗E16抗体、抗STEAP1抗体、抗Tyro7抗体、抗0772P抗体、抗MPF抗体、抗Napi3b抗体、抗Sema 5b抗体、抗PSCA hlg抗体、抗ETBR抗体、抗MSG783抗体、抗STEAP2抗体、抗TrpM4抗体、抗CRIPTO抗体、抗CD21抗体、抗CD79b抗体、抗FcRH2抗体、抗NCA抗体、抗MDP抗体、抗IL20Rα抗体、抗Brevican抗体、抗EphB2R抗体、抗ASLG659抗体、抗PSCA抗体、抗GEDA抗体、抗CD22抗体、抗CD79a抗体、抗CXCR5抗体、抗HLA-DOB抗体、抗P2X5抗体、抗CD72抗体、抗LY64抗体、抗FcRH1抗体、抗IRTA2抗体、抗c-Met抗体、抗ApoE抗体、抗CD1 lc抗体、抗CD40抗体、抗CD45(PTPRC)抗体、抗CD49D(ITGA4)抗体、抗CD80抗体、抗CSF1R抗体、抗CTSD抗体、抗GZMB抗体、抗Ly86抗体、抗MS4A7抗体、抗PIK3AP1抗体、抗PIK3CD抗体、抗CCR5抗体、抗IFNG抗体、抗IL10RA1抗体、抗IL-6抗体、抗ACTA2抗体、抗COL7A1抗体、抗LOX抗体、抗LRRC15抗体、抗MCPT8抗体、抗MMP10抗体、抗NOG抗体、抗SERPINEl抗体、抗STAT1抗体、抗TGFBR1抗体、抗CTSS抗体、抗PGF抗体、抗VEGFA抗体、抗C1QA抗体、抗C1QB抗体、抗ANGPTL4抗体、抗EGLN抗体、抗ANGPTL4抗体、抗EGLN3抗体、抗BNIP3抗体、抗AIF1抗体、抗CCL5抗体、抗CXCL10抗体、抗CXCL11抗体、抗IFI6抗体、抗PLOD2抗体、抗KISS1R抗体、抗STC2抗体、抗DDIT4抗体、抗PFKFB3抗体、抗PGK1抗体、抗PDK1抗体、抗AKR1C1抗体、抗AKR1C2抗体、抗CADM1抗体、抗CDH11抗体、抗COL6A3抗体、抗CTGF抗体、抗HMOX1抗体、抗KRT33A抗体、抗LUM抗体、抗WNT5A抗体、抗IGFBP3抗体、抗MMP14抗体、抗CDCP1抗体、抗PDGFRA抗体、抗TCF4抗体、抗TGF抗体、抗TGFB1抗体、抗TGFB2抗体、抗CDl lb抗体、抗ADGRE1抗体、抗EMR2抗体、抗TNFRSF21抗体、抗UPK1B抗体、抗TNFSF9抗体、抗MMP16抗体、抗MFI2抗体、抗IGF-1R抗体、抗RNF43抗体、抗NaPi2b抗体、抗BCMA抗体、抗TENB2抗体；
优选地，所述抗体选自抗ADAM9抗体、抗HER3抗体、抗HER2抗体、抗TROP-2抗体、抗B7H4抗体、抗CLAUDIN18.2抗体；
更优选地，所述抗体选自抗ADAM9抗体、抗TROP-2抗体；
最优选地，所述抗体为抗ADAM9抗体；
最优选地，所述抗体为抗TROP-2抗体。
15.权利要求12-14任一项的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，其中：
所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1所示的LCDR1、SEQ ID NO:3所示的LCDR2和SEQ IDNO:4所示的LCDR3；所述重链可变区包含SEQ ID NO:6所示的HCDR1、SEQ ID NO:8所示的HCDR2和SEQ ID NO:10所示的HCDR3；或者，
所述轻链可变区包含SEQ ID NO:2所示的LCDR1、SEQ ID NO:3所示的LCDR2和SEQ IDNO:5所示的LCDR3；所述重链可变区包含SEQ ID NO:7所示的HCDR1、SEQ ID NO:9所示的HCDR2和SEQ ID NO:11所示的HCDR3；或者，
所述轻链可变区包含SEQ ID NO:22所示的LCDR1、SEQ ID NO:23所示的LCDR2和SEQ IDNO:24所示的LCDR3；所述重链可变区包含SEQ ID NO:25所示的HCDR1、SEQ ID NO:26所示的HCDR2和SEQ ID NO:27所示的HCDR3；
优选地，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:2所示的LCDR1、SEQ ID NO:3所示的LCDR2和SEQ ID NO:5所示的LCDR3；所述重链可变区包含SEQ ID NO:7所示的HCDR1、SEQ ID NO:9所示的HCDR2和SEQ ID NO:11所示的HCDR3；
优选地，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:22所示的LCDR1、SEQ ID NO:23所示的LCDR2和SEQ ID NO:24所示的LCDR3；所述重链可变区包含SEQ ID NO:25所示的HCDR1、SEQ IDNO:26所示的HCDR2和SEQ ID NO:27所示的HCDR3。
16.权利要求12-15任一项的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，其中：
所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:12所示的序列，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:13所示的序列；或者，
所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:14所示的序列，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:15所示的序列；或者，
所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:14所示的序列，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:16所示的序列；或者，
所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:28所示的序列，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:29所示的序列；
优选地，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:14所示的序列，所述重链可变区包含如SEQID NO:16所示的序列；
优选地，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:28所示的序列，所述重链可变区包含如SEQID NO:29所示的序列。
17.权利要求15-16任一项的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，其中，所述抗体或其抗原结合片段还包含轻链恒定区和重链恒定区，其中：
所述轻链恒定区选自人源性lambda恒定区、kappa恒定区或上述恒定区的突变体；
所述重链恒定区选自人源性IgG、IgM、IgA、IgD、IgE恒定区或上述恒定区的突变体；
优选地，所述IgG选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
18.权利要求12-17任一项的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
如SEQ ID NO:17所示的轻链和如SEQ ID NO:18所示的重链；或者，
如SEQ ID NO:19所示的轻链和如SEQ ID NO:20所示的重链；或者，
如SEQ ID NO:19所示的轻链和如SEQ ID NO:21所示的重链；或者，
如SEQ ID NO:30所示的轻链和如SEQ ID NO:31所示的重链；
优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:19所示的轻链和如SEQ ID NO:21所示的重链；
优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:30所示的轻链和如SEQ ID NO:31所示的重链。
19.权利要求12-18任一项的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，其中，n为1-10之间的任意数值；
优选地，n为4-8之间的任意数值。
20.制备权利要求12-19任一项所述的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物的方法，其包括：
将权利要求6-11任一项所述的式II所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物与权利要求12-19任一项所限定的Ab反应，获得所述的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物。
21.药物组合物，其包含权利要求1-5任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者包含权利要求6-11任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者包含权利要求12-19任一项所述的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物；任选地，还包含一种或多种药用辅料，例如载体和/或赋形剂。
22.权利要求1-5任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者权利要求6-11任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者权利要求12-19任一项所述的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者权利要求21所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗疾病的药物中的用途；
优选地，所述疾病为癌症；
更优选地，所述疾病选自膀胱癌、乳腺癌(尤其是三阴性乳腺癌)、宫颈癌、结直肠癌(尤其是腺癌、胃肠类癌瘤、胃肠道间质瘤、原发性结直肠淋巴瘤、平滑肌肉瘤、黑素瘤或鳞状细胞癌)、脑癌、食管癌、胃癌、头颈癌、肝癌、非小细胞肺癌(尤其是鳞状细胞癌、腺癌或大细胞未分化癌)、骨髓癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾细胞癌、甲状腺癌、睾丸癌、子宫内膜癌、胆囊癌；
最优选地，所述疾病选自胃癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、脑癌、胰腺癌、肝癌、结直肠癌、乳腺癌。
CN202311630453.8A 2023-11-30 2023-11-30 抗体药物偶联物及其应用 Pending CN117645608A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202311630453.8A CN117645608A (zh) 2023-11-30 2023-11-30 抗体药物偶联物及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202311630453.8A CN117645608A (zh) 2023-11-30 2023-11-30 抗体药物偶联物及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN117645608A true CN117645608A (zh) 2024-03-05

Family

ID=90042848

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202311630453.8A Pending CN117645608A (zh) 2023-11-30 2023-11-30 抗体药物偶联物及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN117645608A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN114845739B (zh) 艾日布林衍生物的药物偶联物、其制备方法及其在医药上的应用
AU2019272250B2 (en) Anti-mesothelin antibody and antibody-drug conjugate thereof
JP2018516539A (ja) 抗ｃ−Ｍｅｔ抗体および抗ｃ−Ｍｅｔ抗体−細胞毒性薬物複合体ならびにそれらの医薬用途
JP7407973B2 (ja) 抗体薬物複合体、その調製方法、およびその使用
US20240189438A1 (en) Drug conjugate of glucocorticoid receptor agonist, and application thereof in medicine
WO2016165580A1 (zh) 抗c-Met抗体和抗c-Met抗体-细胞毒性药物偶联物及其医药用途
WO2022001864A1 (zh) 一种抗体-药物偶联物，其制备方法及应用
JP2024520674A (ja) 薬物コンジュゲート及びその使用
EP4043495A1 (en) Anti-human trop-2 antibody and application thereof
WO2022078279A1 (zh) 抗体-药物偶联物及其应用
US20200054764A1 (en) Medical use of anti-c met antibody-cytotoxic drug conjugate
WO2023143365A1 (zh) Her3抗体药物偶联物及其用途
WO2022262789A1 (zh) 一种抗肿瘤化合物及其应用
CN113121639A (zh) 澳瑞他汀类似物及其偶联物、其制备方法及其应用
EP4374879A1 (en) Drug conjugate of eribulin derivative
WO2023046202A1 (zh) 一种抗体及其药物偶联物和用途
CN117645608A (zh) 抗体药物偶联物及其应用
WO2024131949A1 (zh) Anti-cMet抗体、抗体药物偶联物及其制备方法和用途
US20240228658A1 (en) Anti-5t4 antibodies and uses thereof
WO2024012524A1 (zh) 抗体药物偶联物及其制备方法和用途
CN115845080A (zh) 艾日布林衍生物-抗叶酸受体抗体偶联物
TW202430557A (zh) Ａｎｔｉ－Ｍｅｔ抗體、抗體藥物偶聯物及其製備方法和用途
TW202408590A (zh) 抗體藥物偶聯物及其製備方法和用途
WO2024082055A1 (en) Antibody-drug conjugates targeting napi2b and methods of use
CN118079013A (zh) 稠环类化合物及其偶联物和用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination