CN117481147A - 处理植物中细菌和病毒病原体的组合物和方法 - Google Patents

处理植物中细菌和病毒病原体的组合物和方法 Download PDF

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Abstract

本申请涉及处理植物中细菌和病毒病原体的组合物和方法。包含脂松香、松油和盐水的抗微生物组合物减轻或消除有害的植物微生物，并减轻或逆转植物疾病，例如革兰氏阴性细菌疾病。所述组合物有效对抗革兰氏阴性细菌疾病；真菌疾病，例如由耳念珠菌引起的那些，以及病毒性疾病，例如由柑橘衰退病毒引起的那些。所述抗微生物组合物可用作根处理、叶面处理或两者。可以将所述组合物稀释成浓缩的混合物并喷洒在患病植物或易患疾病植物的叶子上。所述组合物可以用作根浸液或用在灌溉系统中用于治疗患病植物。所述组合物可以任选地包括表面活性剂和生长刺激剂。

Description

处理植物中细菌和病毒病原体的组合物和方法
本申请是申请日为2020年7月16日、申请号为202080050688.8、发明名称为“处理植物中细菌和病毒病原体的组合物和方法”的发明专利申请的分案申请。
技术领域
本申请要求2019年7月16日提交的美国临时专利申请第62/874,555号的权益，该美国临时专利申请据此通过引用以其整体并入本文。
本发明的领域是对遭受细菌疾病的植物的处理，所述细菌疾病包括由革兰氏阴性菌引起的疾病(包括由韧皮部杆菌(Candidatus Liberibacter)引起的柑橘绿化病或HLB，以及由苛养木杆菌(Xylella fastidiosa)或假单胞菌(Pseudomonas spp.)引起的疾病)、真菌疾病诸如由耳念珠菌(Candida auris)或疫霉菌属(Phytophthora spp.)引起的那些，以及病毒性疾病诸如由病原体诸如柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus)引起的那些。本文所述的包括松油、脂松香(gum rosin)和盐水的组合物可用于处理例如植物叶、植物根或叶和根两者。
背景技术
柑橘黄龙病(HLB)(俗称柑橘绿化病)于2005年在美国佛罗里达州迈阿密郊区的柑橘树上首次被发现。所述疾病由韧皮部杆菌引起，也被称为柑橘绿化病(CitrusGreening)，其是一种革兰氏阴性菌，通过充当天然载体的木虱Trioza erytrea和柑橘木虱(Diaphorina citri)传播。病原体穿透植物的韧皮部，攻击维管系统，堵塞叶脉，并大幅减少水和营养物的运输。在亚洲、非洲、美国、墨西哥以及南美洲和中美洲已经检测到多种韧皮部杆菌细菌。
苛养木杆菌是另一种革兰氏阴性菌疾病，其也通过载体传播给植物。1996年，在加利福尼亚的商业葡萄藤中首次检测到苛养木杆菌。玻璃翼叶蝉病媒(glassy-wingedleafhopper vector)是葡萄皮尔斯病、桃矮缩病、橄榄、杏仁、樱桃、夹竹桃以及其它植物中的快速衰退综合征以及柑橘中的柑桔斑枯病(Citrus Variegated Chlorosis)的原因。这些疾病目前在加利福尼亚、意大利、西班牙和法国已经达到流行水平。
目前，对于韧皮部杆菌或苛养木杆菌细菌病没有已知的治愈方法。若干种实验性处理尚未被证明有效对抗这些疾病。在美国，土霉素、硫酸链霉素和铜已经成为可用于处理细菌性植物疾病的主要化学品。它们尚未证明能成功缓解这些革兰氏阴性细菌疾病。热疗法热处理设备已经被尝试过并且发现是无效的。在2012年至2017年期间，还尝试了由USDA资助的900万美元的“作为生物控制剂的后方释放木虱项目”。在这五年的试验中也没有记录到阳性结果。参见https://portal.nifa.usda.gov/web/crisprojectpages/0230893-rear-and-release-psyllids-as-biological-control-agents--an-economical-and-feasible-mid-term-solution-for-huanglongbing-hlb-disease.html。
WO 2019/147466描述了一种组合物和利用所述组合物的方法，所述组合物包括柑橘油、松油和盐水。然而，已经发现可供使用的柑橘皮的质量可能存在可变性。这种可变性可能会造成产品有效性的模糊性。此外，柑橘类病原菌诸如韧皮部杆菌和苛养木杆菌也已经降低了柑橘皮中的精油的质量，使优质柑橘皮潜在稀缺。此外，柑橘皮需要过度加工，以便获得足够小的、不会堵塞如微喷射器的灌溉设备的粒径。
破坏性植物作物疾病的现象使水果生产和供应以及水果种植业面临严重风险。到2017年，经济损失估计数以十亿美元计。参见https://www.usda.gov/media/press-releases/2017/01/19/usda-invests-136-million-citrus-greening-research。在用目前可用的抗微生物药剂处理后，已经报告了由革兰氏阴性菌和其它微生物病原体引起的植物作物的破坏性和持续性感染和疾病。因此，在本领域中需要能够预防和减轻由这种病原体在水果作物中引起的疾病。进一步需要使用不含已知会对环境和人类造成有害影响的合成化学品、抗生素或其它药物的组合物来解决这一问题。
附图说明
图1描绘了从感染柑橘绿化病的处理的和未处理的树上采摘的哈姆林柑橘的果汁重量分析的结果(磅/果)，以及哈姆林柑橘的弗罗里达州平均果汁重量。
图2描绘了从感染柑橘绿化病的处理的和未处理的树上采摘的哈姆林柑橘的每英亩果汁固体的净值(在处理成本后)，以及哈姆林柑橘的弗罗里达州平均值。
图3描绘了从感染柑橘绿化病的处理的和未处理的树上采摘的哈姆林柑橘的果实产量分析的结果(每英亩箱数)，以及哈姆林柑橘的弗罗里达州平均产量。
图4描绘了从感染柑橘绿化病的处理的和未处理的树上采摘的哈姆林柑橘的糖度/酸比率(Brix/acid ratio)分析的结果，以及哈姆林柑橘的弗罗里达州平均糖度/酸比率。
图5描绘了从感染柑橘绿化病的处理的和未处理的树上采摘的哈姆林柑橘的水果产量分析的结果(按磅计)，以及哈姆林柑橘的佛罗里达平均产量(按磅计)。
图6描绘了在两个不同取样日期感染了苛养木杆菌的处理的和未处理(对照)的橄榄树的叶片细菌分析的结果。这些结果以对使用指定组合物的处理提供的苛养木杆菌每毫升菌落形成单位(CFU/mL)的测量值提供。
图7描绘了在2020年3月6日至2020年5月25日取样日期之间，对于由在感染了苛养木杆菌的处理的和未处理(对照)的橄榄树上进行的叶细菌分析所得到的指定组合物，苛养木杆菌CFU/mL的变化的测量。
图8和9描绘了在2020年3月6日至2020年5月25日取样日期之间，对于由在感染了苛养木杆菌的处理的和未处理(对照)的橄榄树上进行的叶细菌分析所得到的指定组合物，苛养木杆菌CFU/mL的变化百分比。
图10(a)描绘了显示感染了苛养木杆菌的橄榄树的照片，所述橄榄树正在经历处理应用。
图10(b)描绘了显示用组合物γ处理的感染了苛养木杆菌的橄榄树的照片。
图10(c)描绘了显示用组合物γ处理后的橄榄树上的新条(flush)的照片。
图11描绘了2020年5月25日相对于3月6日(首次施用日期)，30个标记的树枝/处理的/未处理的类别的总的新条长度。
图12描绘了与2020年3月6日(第一次施用日期)相比，5月25日由30个标记的树枝/处理的树相对于未处理的树的木杆菌导致的平均树枝生长和树枝损失。
图13描绘了与2020年3月6日(第一次施用日期)相比，5月25日处理的树相对于未处理的树中木杆菌细菌菌落形成单位/mL的平均减少。
图14(a)和14(b)描绘了未处理的和处理的(分别)CTV感染的塔罗科血橙树的照片。
图15(a)和15(b)描绘了未处理的和处理的(分别)CTV感染的塔罗科血橙树的照片。
图16描绘了处理的CTV感染的塔罗科血橙树的照片。
发明内容
本发明解决了本领域中对处理被微生物病原体感染或易患微生物疾病的植物作物的需要。在这种情况下，强力有效的抗微生物活性和疾病症状处理尤为必要。因此，本发明的一个目的是提供一种用于处理暴露于有害微生物或易受有害微生物影响的植物的组合物和方法，所述有害微生物包括但不限于革兰氏阴性细菌疾病。使用本文所述的抗微生物组合物，疾病得以减轻或逆转。
本文所述的抗微生物组合物出乎意料地能够显著地降低植物中的病原体负荷并恢复营养物通过韧皮部或木质部的流动。令人惊讶地是，组合物中脂松香衍生物与松油的组合使得植物微生物疾病得到显著缓解和消除。本文所述的抗微生物组合物包含抗微生物和营养活性成分，所述抗微生物和营养活性成分表现出多种属性的组合——包括抗致病微生物病原体如柑橘绿化病和苛养木杆菌的杀生物活性、逆转或消除疾病症状、恢复维管组织中的营养物流动、促进植物中的系统获得性抗性，以及排斥传播微生物病原体的载体，所述属性将这些组合物定位为本领域中处理患病作物和增加果实产量的需要的最佳解决方案。
在一些实施例中，抗微生物组合物包含对易患微生物疾病的植物的处理，其中所述组合物包括松油、脂松香和盐水。三种组分相互比较的相对量(按体积测量)为：
a)0.5-75％的松油；
b)0.01-70％的脂松香衍生物；以及
c)15-95％的盐水。
在一些实施例中，抗微生物组合物可以用作叶面施用、根部施用或两者。在某些实施例中，抗微生物组合物可以进一步包括任何表面活性剂，并且表面活性剂的相对量(按积测量)为0.05-30％。所述抗微生物组合物可以进一步包括生长刺激剂，并且所述生长刺激剂的相对量(按积测量)为0.1-20％。生长刺激剂可以包括腐殖酸和/或黄腐酸或其混合物。
在某些实施例中，抗微生物组合物包含对易患革兰氏阴性细菌疾病的植物的处理，其中所述组合物包括脂松香、松油、盐水、表面活性剂和生长刺激剂。五种组分相互比较的相对量(按积测量)为：
a)0.01-70％的脂松香；
b)0.5-75％的松油；
c)15-95％的盐水；
d)0.05-30％的表面活性剂；以及
e)0.1-20％的生长刺激剂。
在某些实施例中，处理易患革兰氏阴性细菌疾病的植物的方法包含提供包括脂松香、松油和盐水的组合物，其中三种组分相互比较的相对量(按体积测量)为：
a)0.01-70％的脂松香；
b)0.5-75％的松油；
c)15-95％的盐水；以及
以有效减轻所述革兰氏阴性细菌疾病的量将所述组合物施用于所述植物。
在某些实施例中，处理易患革兰氏阴性细菌疾病的植物的叶的方法包含提供包括脂松香、松油、盐水和表面活性剂的组合物，其中所述四种组分相互比较的相对量(按体积测量)为：
a)0.01-70％的脂松香；
b)0.5-75％的松油；
c)15-95％的盐水；
d)0.05-30％的表面活性剂；以及
以有效减轻所述革兰氏阴性细菌疾病的量将所述组合物施用于所述植物的叶。
在某些实施例中，处理易患革兰氏阴性细菌疾病的植物的根的方法包含提供包括脂松香、松油、盐水和生长刺激剂的组合物，其中所述四种组分相互比较的相对量(按体积测量)为：
a)0.01-70％的脂松香；
b)0.5-75％的松油；
c)15-95％的盐水；
d)0.01-20％的生长刺激剂；以及
以有效减轻所述革兰氏阴性细菌疾病的量向所述植物的根供应所述组合物。
在某些实施例中，抗微生物组合物包含海藻。在某些实施例中，抗微生物组合物包含松油、脂松香和海藻。在其它实施例中，所述抗微生物组合物包含松油和海藻而不含脂松香。
具体实施方式
在本发明中已经发现，包含脂松香、松油和盐水的组合物在减轻和逆转植物病原体的症状方面是有效的。已经确定细菌和真菌菌落形成生物体存在于受感染植物的韧皮部和木质部通路中。这些病原体菌落形成生物体限制水和营养物循环通过这些维管通路，直到通路完全堵塞，并且植物会因水和营养物不足而死亡。本文的抗微生物组合物和方法降低了感染植物的病原体菌落形成生物体的水平，从而改善了植物中水和营养物循环增加所必需的维管通路活性。这种混合物是一种有效、安全、和自然的处理，以逆转由柑橘绿化病(HLB)、苛养木杆菌、柑橘衰退病毒和其它革兰氏阴性菌和病毒病原体引起的阴性病原体症状。通过稀释组合物的浓缩混合物并将其喷洒在患病植物或易患病植物的叶子上，可以将包含脂松香、松油和盐水的混合物用作叶面处理。类似地，所述抗微生物组合物可以用作根浸液或用于任何灌溉系统中以处理患病植物。此外，如本文公开的组合物中的活性组分可以任选地包括表面活性剂(特别是在叶面施用中)和生长刺激剂(特别是在根浸液或灌溉施用中)。
在某些实施例中，本文的抗微生物组合物和方法涉及所述组合物预防、减轻或逆转革兰氏阴性细菌疾病的用途，所述革兰氏阴性细菌疾病包括但不限于由韧皮部杆菌、苛养木杆菌、假单胞菌属和黄单胞菌(Xanthomona spp.)属引起的疾病。在其它实施例中，所述抗微生物组合物用于预防、减轻或逆转由微生物引起的疾病，所述疾病包括但不限于真菌疾病诸如由耳念珠菌引起的那些、病毒性疾病诸如由柑橘衰退病毒引起的那些，以及由疫霉菌属引起的其它疾病诸如根腐病。在某些实施例中，所述抗微生物组合物用于预防、减轻或逆转由两种或更多种微生物(诸如苛养木杆菌和耳念珠菌)引起或加重的感染。在其它实施例中，所述抗微生物组合物用于预防、减轻或逆转由野油菜黄单胞菌(Xanthomonascampestris)、草莓黄单胞菌(X.fragariae)、X.amepelina、白纹黄单胞菌(Xalbilineans)或地毯草黄单胞菌(X.axonopodis)引起的疾病。
在一个示例中，可能存在治愈革兰氏阴性菌疾病，如HLB柑橘绿化病以及其它类似的植物疾病的两步方法。首先，对整个柑橘树(从根系到树冠)进行处理。测试表明，如果使用者用叶面喷雾和彻底的根浸液来处理树冠和根系，树木将能够逆转这种疾病。继续使用所述产品将进一步增强树木的免疫系统，使其不太可能再次感染病原体。鼓励种植者继续应用的激励因素包括更大的水果、更好质量的水果、更少的落果、更高的磅固体。本发明的组合物是一种天然溶液，其不会在水果中引起任何有害的残留物，不会向土壤和地下水中添加毒素，不会引起细菌抗性，并且这种混合物进入水道的任何潜在的“径流”不会喂养有害的引起中毒的细菌，如影响美国至少几个地区(特别是佛罗里达和得克萨斯州)的“赤潮”。
本发明的应用包括但不限于处理柑橘树(诸如瓦伦西亚橙、血橙、葡萄柚和默科特柑橘(murcott)(杂交柑橘品种)树)、橄榄树、杏树和葡萄藤的能力。可以受益于本发明的植物包括但不限于易受微生物感染的水果作物、表现出微生物疾病的水果作物和微生物病原体感染的水果作物。
通过本发明预防、减轻或逆转的疾病包括但不限于柑橘绿化病、柑橘溃疡病、根腐病、细菌性叶斑病和叶鳞病(leaf scaled disease)。通过本发明预防、减轻或逆转的疾病症状包括但不限于萎黄病、韧皮部堵塞、嫩枝或肢体枯死、绿色、畸形或苦味的果实以及落果。
橄榄树的快速衰退开始于树枝和嫩枝的快速枯死，也被称为“萎蔫”。带有木杆菌的橄榄树的症状通常从上部树枝开始，并在一或两个月内蔓延至整个树冠。结果，这棵树呈现出焦黑的外观。在某些实施例中，所述抗微生物组合物逆转橄榄树的萎蔫。
在某些实施例中，所述抗微生物组合物向受感染的树提供自然的系统性处理以战胜疾病。在树干周围三英尺的半径区域中根浸液期间，该处理增加了树木所需的营养和抗微生物组分。在某些实施例中，天然腐植酸和黄腐酸存在于制剂中并且提供植物和根刺激元素。这些刺激剂强化根部，并且促进根部生长。更强的根系反过来增加对在腐殖酸/黄腐酸、盐水以及脂松香混合物成分中发现的营养矿物质的吸收。此外，更强的根系也有助于吸收松油和脂松香混合物成分中的抗微生物元素。在不受理论限制的情况下，就抗细菌病原体的有效性而言，据信这一处理的抗微生物组分逐渐减少堵塞树木的韧皮部管的韧皮部限制细菌，所述韧皮部限制细菌“疏通”管。最终，这些抗微生物元素清除了树木的堵塞的韧皮部管。透明的韧皮部管允许水和处理营养物流过整棵树，包括其树干、树枝、树叶和果实。由于这种对复复苏根系的额外强调，处理将大大改善树自身的免疫系统。因此，在一些实施例中，所述处理为所述树提供了从底部/顶部内部恢复、减轻或破坏这一疾病的机会。此外，处理为树提供了保护自身免受这些病原体未来攻击的机会。
在某些实施例中，将抗微生物组合物叶面喷雾施用到树的叶冠上在帮助树杀死疾病方面可能是重要的。在某些实施例中，松油(用脂松香共混物增强)还起到如杀虫剂的作用，以杀死载体木虱(和木虱卵)。在进一步的实施例中，表面活性剂存在于组合物中并用作“粘着剂”，因此处理粘附到树的叶子和树枝上。这种粘附允许处理有更多的时间被叶子吸收。松油的抗微生物特性(通过脂松香共混物增强)也用作木虱(载体)驱避剂。通过驱除这些载体，树木免遭进一步侵扰。然后，抗微生物和营养处理从叶子行进到树的韧皮部。这使得处理能够攻击树的韧皮部系统中的细菌，同时从上到下为树木提供急需的营养。
在某些实施例中用于处理困难的植物疾病(如HLB柑橘绿化病)的双管(上/下和下/上)方法被认为是独特的。这种方法使用“天然药物”的适当混合物来提供许多重要的矿物质、离子、营养元素和抗微生物补充剂，将使树木获得系统获得性耐药性药剂(SAR)。这是处理HLB/柑橘绿化病和许多其它由对农业有害的微生物引起的疾病的有效方法，所述疾病包括但不限于由革兰氏阴性菌(诸如苛养木杆菌、假单胞菌属和黄单胞菌属)引起的疾病，由真菌诸如耳念珠菌引起的疾病，由病毒诸如柑桔衰退病毒引起的疾病，以及由疫霉菌属引起的其它疾病诸如根腐病。
下面将分别更详细地讨论每种活性组合物组分及其使用方法。
天然松油源自松节油，松节油是从脂松香、妥尔油或木松香中蒸馏出来的。脂松香是通过敲击活松树收获的。妥尔油是造纸/纸浆工艺的副产品。木松香是从松树的树桩中化学提取的。松油也可以从沸腾的松针中提取。还存在附加的从上述来源中提取松油的方法。合成松油源自松节油在反应器中的水合，然后分馏以分离醇、萜烃和其它馏分的不同馏分。应当注意，本制剂中所有提及的松油均指天然或合成松油。EPA注册的松油产品也可以用在发明的组合物中。目前，存在12家活性松油注册公司(1家注册松油制造商)，其根据《联邦杀虫剂、杀菌剂和杀鼠剂法(Federal Insecticide,Fungicide,and Rodenticide Act)(FIFRA)》第3款注册。松油通常有效并用作消毒剂、消毒杀菌剂、杀微生物剂/抑菌剂(microbiostat)、杀病毒剂和杀虫剂。在使用松油时的一些目标害虫包括产氨短杆菌、白色念珠菌、产气肠杆菌、大肠杆菌、革兰氏阴性肠道细菌、家庭细菌、革兰氏阴性家庭细菌，诸如引起沙门氏菌病的细菌、1型和2型单纯疱疹、A型流感、A型/巴西型流感病毒、A2型/日本型流感病毒、肠道细菌、肺炎克雷伯菌、致臭细菌、霉菌、霉、铜绿色假单胞菌、猪霍乱沙门菌、伤寒沙门氏菌、伤寒沙门菌、伤寒沙门氏菌、宋内志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、粪链球菌、化脓性链球菌、须发癣菌。应当注意，引起柑橘绿化病的韧皮部杆菌和苛养木杆菌均为革兰氏阴性菌。
松油是一种相对可靠的成分。可靠的供应、一致的质量和价格稳定性是松油的附加益处。用于本发明组合物的一种可接受的松油是El Pinol 85松油(包括El Pinol 85)，它是一种经批准的EPA注册的用于室内抗微生物消毒剂应用的活性成分。El Pinol 85EPA注册编号为11668-3，并且注册于1974年5月14日。2017年6月，El Pinol 85被澳大利亚国家可持续农业协会(National Association for Sustainable Agriculture,Australia)(NASAA)批准为户外有机农业除草剂应用的活性成分。El Pinol 85在柑橘绿化病的示例中作为本发明组合物中的活性成分的目的是帮助根除韧皮部杆菌和苛养木杆菌细菌，从患病的柑橘树的叶子中根除传染性载体，并驱除这些载体使其不再感染柑橘树或其它易感植物。它是从脂松节油中分离出来的天然物质，脂松节油是从松脂中提取的。其附加的安全优势是，过去40多年的记录的毒理学研究证明松油对人类或动物无害。
El Pinol 85的化学组成包括以下化合物，这些化合物被认为有助于这一组合物的有效性：
1)α-松油醇
2)萜品油烯
3)柠檬烯
4)α-蒎烯
5)月桂烯
6)葑醇(α与β)
7)萜烯醇
El Pinol 85(85％萜烯醇)是在抗微生物组合物的某些实施例中使用的一种松油成分。可以用作这一松油成分的替代品并包括在本文松油的定义中的其它液体萜烯包括：
1)萜烯醇范围为5％至100％的松油
2)二戊烯
3)脂松节油
4)天然松油
5)α-蒎烯(衍生自松节油、粗妥尔油和粗硫酸盐松节油)
6)妥尔油和妥尔油脂肪酸
7)蓖麻油
8)油性树脂
脂松香或木松香是包括在抗微生物组合物的实施例中的成分之一。松香是在提取挥发性松节油后，从来自针叶树的树脂中提取的固体物质。经鉴定，松香的主要成分为山达海松酸、异海松酸、长叶松酸、脱氢枞酸、枞酸、新枞酸和merkusic acid。它在组合物中充当天然乳化剂。此外，它还作为天然表面活性剂，帮助组合物更好地结合到处理过的植物的根部和叶面。术语“脂松香”应相对于本发明进行广义定义和解释。术语“脂松香”也用于指木材松香以及从中衍生松香的针叶树树脂。除了一般的脂松香和木松香之外，被认为包括在“脂松香”的定义中的附加的组成包括以下：
1)油性树脂
2)树脂
3)酯胶
4)氢化的脂松香/木松香
5)脂松香的甘油酯
6)木松香的甘油酯
7)富马酸树脂
已经发现，脂松香降低了本文所述的总组合物的挥发性，使得当产品被施用于土壤时，它能够更好地渗透到植物的根系。
还已经确定，脂松香在被添加到组合物中并施用于土壤时从植物的根部去除草甘膦残留物。草甘膦残留物广泛存在于土壤和地下水位中，通常在这些土壤和地下水位中施用草甘膦材料用于杂草控制。通过向组合物中添加脂松香从根部去除草甘膦残留物允许植物的根部更好地从土壤中吸收营养物。根系的提高的效率使得植物更健康。更健康的植物具有更健康的免疫系统，这有利于成功抵抗植物病原体，如韧皮部杆菌和苛养木杆菌。
在进一步的实施例中，本文所述的松油成分中的任一种可以被选择并与本文所述的脂松香成分中的任一种的选择组合。
盐水也是本发明组合物中的成分。在一个示例中，这种盐水只是来源于任何海洋或大洋或微咸水源的海水。这种海水含有许多天然离子成分，这些离子成分有助于根除不健康的细菌并且为植物提供营养物。如本文所定义的盐水成分还包括任何人造海水或水的其它混合物，其包括海水的一或多种主要离子，包括氯化物、钠、硫酸盐和镁以及海水中的其它任选的常见离子。
在某些实施例中，抗微生物组合物包含表面活性剂。例如，在叶面施用中，表面活性剂通过改善组合物在植物的叶子和枝上的分散以及改善组合物在叶子和树皮中的吸收而具有益处。一类这样的表面活性剂被称为苄基季铵化合物。一种特定的表面活性剂是BTC8358，它是一种季铵化合物，用于配制成各种机构和工业清洁应用、水处理、气/油钻井泥浆/封隔液、气/油回收注射水系统、气/油压裂液系统和木材防腐。应用包括其作为杀藻剂、抗微生物剂、除臭剂、消毒剂、杀真菌剂、防腐剂、消毒杀菌剂、游泳池维护和水处理的用途。所述化合物的化学描述为烷基二甲基苄基氯化铵。其它种类的可接受的表面活性剂包括但不限于聚山梨醇酯(例如TweenTM)、十二烷基硫酸钠(月桂基硫酸钠)、月桂基二甲基氧化胺、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、聚乙氧基化醇、聚氧乙烯脱水山梨醇、辛苯昔醇(Octoxynol)(例如Triton X100TM)、N,N-二甲基十二胺-N-氧化物、十六烷基三甲基溴化铵(HTAB)、聚氧乙烯10十二烷基醚、Brij 721TM、胆汁盐(脱氧胆酸钠、胆酸钠)、聚氧蓖麻油(例如CremophorTM)、壬基酚乙氧基化物(例如TergitolTM)、环糊精、卵磷脂和甲基苄索氯铵(例如HyamineTM)。在大多数制剂中使用表面活性剂，以尽可能长时间地将产品保持在施用的表面上，从而实现产品的最大益处。通过延长与植物的叶子的接触，制剂中的化合物中的营养物和矿物质的吸收延长了它们对患病的树木和植物的作用。
在某些实施例中，抗微生物组合物包含生长刺激剂。在一些实施例中，当本发明的组合物用于根浸液或灌溉应用时，生长刺激剂是有帮助的。例如，腐植酸和黄腐酸及其混合物可以帮助植物变得更加健康。黄腐酸和腐殖酸是由有机物的分解产生的复杂分子。健康的土壤自然包含这些酸。相比之下，不健康的和严重扰动的土壤(其中这种自然循环已被扰动)会耗尽这些物质，而这些物质对导致植物健康和活力的有机过程至关重要。因为大多数土壤都不处于理想状态，所以直接向土壤中添加腐植酸和黄腐酸通常能得到显著的改善，并且有助于将它恢复到其原始的自然状态。黄腐酸和腐殖酸也可能在土壤中起作用，以结合污染物并使其失去活性。
替代的生长促进剂包括以下物质：腐殖酸(微量)矿物质(有机的、浓缩的液体、粉末)、黄腐酸(微量)矿物质(有机的、浓缩的液体、粉末)、硅藻土矿物质、离子矿物质、微量稀土矿物质和稀土矿物质。
在进一步的实施例中，本文所述的任何一种生长刺激剂可以与本文所述的松油成分中的任何一种的选择以及本文所述的脂松香成分中的任何一种的选择组合。
在某些实施例中，抗微生物组合物包含松油、生长刺激剂诸如腐殖酸或黄腐酸(或两者的混合物)和盐水。在进一步的实施例中，抗微生物组合物包含松油和生长刺激剂而不含脂松香。
在某些实施例中，抗微生物组合物包含海藻(其是生物刺激剂和矿物质的来源)，并且特别地包含海藻而不含脂松香。在其它实施例中，抗微生物组合物包含松油、脂松香和海藻。海藻的类型不受限制，并且在一些实施例中为棕色海藻。在一些实施例中，棕色海藻与原产于佛罗里达海湾海岸的棕色海藻相同或相似。组合物中的海藻成分不受限制，并且例如可以是凝胶形式或具有凝胶的稠度。在一些实施例中，混合海藻直到其达到凝胶稠度。然后将其添加到松油混合物中。
上述组分可以以浓缩的或各种稀释的混合物的形式混合在一起，这取决于如何将组合物施用于树林或农场的植物。因此，列出了组合物组分的相对量并且在本文中如仅参考那些组分的相对量被要求保护。
以下是组合物的制剂的示例的列表：
通常，各组分的相应范围如下。如上所述，百分比以体积计，并且仅相对于浓缩混合物中的其它组分，而不相对于可以携带组合物的任何附加的稀释剂。
制剂范围：
在组合物稀释于水的某些应用实施例中，处理范围包括浓缩的制剂/组合物相对于水的以下体积。
1.叶面应用范围：每加仑水10-90毫升，或者可替代地5-200毫升浓缩的组合物。
2.根浸液应用范围：每加仑水30-140毫升，或者可替代地10-200毫升浓缩的组合物。
3.灌溉应用范围：每加仑水10-90毫升，或者可替代地5-200毫升浓缩的组合物。
以下讨论了这些类型的植物应用中的每一种。根据本发明，可以使用这些应用中的任何一或多种(一起)。这些组合物应用的示例针对特定植物的处理，但对于其它植物应用也是类似的，其中每种应用都针对特定类型的植物进行了调整。
叶面喷雾施用—基本上弗罗里达州的所有柑橘都接受由杀真菌剂、杀虫剂和/或营养剂组成的叶面喷雾施用。大多数叶面喷雾都是通过喷气式喷雾器施用的。这些喷雾器通常由拖拉机以每小时1-3英里牵引。喷雾器上的罐的大小通常为500-1000加仑。一些喷雾器安装在卡车上。喷雾器由用于容纳喷雾混合物的500-1000加仑的罐、安装在喷雾器的后部的多个喷嘴组成。喷嘴安装在大风扇的附近和侧面，所述风扇将喷雾推进到树冠上/推入树冠内。在成排的树之间驱动喷雾器。使用了一些较小的低容量喷雾剂，并且一些叶面喷雾剂是通过空气施加的。较小的浓缩液喷雾器每英亩施用50-150加仑，并且喷雾飞机每英亩施用5-20加仑。飞机通常用于较大面积的树林。
根浸液施用—根浸液(也被称为土壤浸液)在植物基部周围的土壤稍微潮湿时施用。暂时耙回覆盖土壤的覆盖物(mulch)、树叶或其它材料和植物基部1英尺范围内最上面一英寸土壤，会限制蒸发对施用于土壤的化学品的影响，并且会使化学品更快地进入树中。在土壤浸液中使用的肥料和水量通常根据肥料的浓度和使用其的土壤面积来计算。树上使用的农药和其它化学品是根据树干的直径和制造商对所用化学品的建议进行计算的。
灌溉系统—可以用于施用微生物组合物的灌溉系统的示例是在弗罗里达州通常已知和使用的那些，以及本领域技术人员已知的其它系统，诸如以下四种类型的系统，其任何一种均可以被包括在本发明的实施例中：
1.微喷射器—低容量系统，在每棵树附近都具有喷洒器，并且有时在两棵树之间具有喷洒器。喷洒器覆盖直径为10-20英尺的区域。存在其它已知的配置。施用的加仑数和灌溉时间表取决于树林所有者的希望。通常在每次灌溉时施加0.5-1.0英亩英寸的水。随着HLB(绿化病)的发病，一些种植者施用多次灌溉，其中每次施用较少的水。水从树林中的井供应，并由大型电动泵或柴油泵操作。杀真菌剂、杀虫剂和/或营养剂和肥料经常被注入到系统中。注入系统位于泵附近。注入是用于将材料作为土壤施用或浸液施用到土壤中的非常经济的方法。在灌溉事件早期注入材料之后，继续灌溉事件以冲洗灌溉管线并将所需的水施加到树林中。
2.洪水灌溉—在佛罗里达州南部存在一些被漫灌的树林。树木种植在凸起的床上，在床的任一侧具有沟渠。将大量的水泵入沟渠中或由运河和重力供应。行之间的沟渠略微倾斜，以便水沿着沟渠流下。
3.喷灌—在微喷射器出现之前，这一系统曾被广泛使用。
4.渗水灌溉—在柑橘栽培的平地林区(靠近海岸和佛罗里达州南部)，靠近树林的运河被淹没，并且水通过土壤剖面渗透到柑橘树。
实例
以下实例仅用于说明本发明及其实践。这些实例不应被解释为对本发明的范围或精神的限制。
实例1
弗罗里达州巴伦西亚树林田间试验
2018年8月25日
位置
佛罗里达乌玛提拉
作物品种
瓦伦西亚橙树(8'-10'英尺高)
2004年2月15日种植
时间范围
果实于2019年4月22日收获
田间试验于2018年8月25日在弗罗里达州乌玛提拉的瓦伦西亚树林(ValenciaGrove)开始。本次试验选择了20棵随机选择的树木。将使用10棵树来评估处理1制剂W104。来自这组选定的树木中其余的10棵树将保持未处理。
应当注意，树林所有者继续对他在这片树林中的所有瓦伦西亚橙树(包括在这个田间试验中的20棵树)进行肥料、农药、杀虫剂、杀真菌剂等的标准处理应用。
处理应用信息
第1次全叶面喷雾——2018年8月25日
第1次根浸液(每棵树3'周长)-2018年8月25日
第2次全叶面喷雾-2018年9月12日
第2次根浸液(每棵树3'周长)-2018年9月12日
第3次根浸液(每棵树3'周长)-2018年10月7日
喷雾设备–在40PSI下带有D8-45锥形喷嘴的CO2背包
1加仑稀释的处理液(45毫升浓缩制剂/加仑水)作为叶面喷雾施加，并且1加仑稀释的处理液(65毫升浓缩制剂/加仑水)作为土壤浸液施加在树干的三英尺半径内。
此外，使用手动喷雾器将材料从树干到滴水管线喷洒到土壤上。种植者可以可替代地通过微喷灌溉进行土壤施用。取决于种植者，每个微喷射器覆盖不同的表面区域。处理的大致表面积为14-16英尺直径。种植者可以使用他们的除草剂施药器施用产品，该施药器将从树干施药到刚好在树木的滴水线外侧；大约距树干6-8英尺的半径。
表1
处理1-W104
瓦伦西亚#2乌马蒂拉，FL FT 08/30/2018
海水 56.20％
水 0.00％
El Pinol 85 40.03％
Resimal F-24(富马酸树脂) 3.77％
总百分比 100.00％
方案
田间试验使用柑橘研究发展基金会2016年3月11日颁布的田间试验树评价方法进行。
在进行任何施用之前，于2018年6月27日进行了初步评估和并且拍摄了照片，目的是为未来的评估建立基线。
HLB-在任何施用之前采集成熟的叶子和展开的芽叶。老叶子的CT值表明在所有树上都有大量的柑橘HLB绿化。
在2019年4月25日收集果实收获。对从每棵树收获的每个采摘袋果实进行称重，并计算每棵树果实的总磅数。每次处理收获十棵单独的树木。结果在表2中示出。
田间试验结果
1)在2018年10月11日和2018年11月9日，处理1的树木比未处理的树木具有明显更多的新条。通常，一个评估日期的大量新条会导致下一个评估日期的新条减少。
2)从每棵树上选择十个随机选择的新条，并分别测量其长度。与未处理的树木相比，来自两组处理的树木具有稍长的新条。在本试验过程中收集的评估数据表明，与未处理的树木相比，处理的树木的树木活力有所提高。2018年秋季期间叶子活力和新条生长的增加是2019年收获期间作物大小的特别重要的指标。
3)平均而言，在这一田间试验期间，与未处理的树木相比，处理的树木掉落的果实明显更少。比较落果结果表明，与未处理的树木相比，处理的树木具有更高的收获产量。
表2
与未处理的相比，处理1的平均％较低的落果 31.20％
处理 每棵树的平均果实磅数
WE 104 227.7 a 109％
未处理的 208.1 a 100％
瓦伦西亚田间试验。在10个成熟的瓦伦西亚树上首次施用8个月后，产量增加9.4％。每棵处理的树2.53盒相对于每棵未处理的树2.31盒。
表3描述了落果和新条测量的结果。
表3
表4示出了在2019年3月18日进行的果实品质分析的结果。
表4
*FM“失败的成熟度”：比率必须超过9才能被视为成熟果实。未处理的样品具有8.83的比率，因此果实未达到成熟度要求。处理的样品001和002的比率高于9，因此它们通过了成熟度最小值。
实例2
2019年11月至2020年1月，对佛罗里达州沃楚拉的商业树林中的哈姆林橙树进行了40英亩的田间试验。橙树感染了HLB柑橘绿化病(韧皮部杆菌)。每英亩包含150棵树。通过微喷射灌溉用组合物1处理树木。
表5
组合物1
腐植酸/黄腐酸 0.0018％
海水 30.0000％
水 52.2182％
El Pinol 85 17.6400％
Resimal F-24(富马酸树脂) 0.1400％
Megara(GR)油性树脂脂松香/脂松节油混合物)
Mexican 360纳米颗粒
总百分比 100.0000％
在所有实例中，Mexican 360纳米颗粒是指的360°Agrorocker杀菌剂。
2020年1月10日，从处理和未处理的水果中随机抽取八十个水果。2020年1月17日，通过评估以下来分析了水果质量：果汁重量(图1)、水果产量(图3)、糖度/酸比率(图4)和以磅固体计的产量(图5)。果汁固体的净值在图2中示出。2020年1月17日进行的附加评估在表6中呈现。
表6
沃楚拉树林40英亩田间试验2019年11月6日-2020年1月25日
第1年哈姆林2020年1月10日采摘的80个水果(处理的/未处理)的结果
/>
*USDA国家农业统计服务中心-2020
年1月柑橘作物测试结果
https://www.nass.usda.gov/Statistics_by_State/Florida/Publications/Citrus/Citrus_Forecast/2019-20/cit0120b.pdf
**2018/2019年磅固体的价格为2.86美
元
据报道，2020年，10英亩的瓦伦西亚树林收获了1200箱，而去年2019年为800箱。
表7显示了来自沃楚拉试验的水果质量分析结果。
表7
水果质量分析
处理的水果相对于未处理的水果的改善百分比
在感染HLB柑橘绿化病的商业树林中的弗罗里达肥料田间试验
2020年，对弗罗里达州沃楚拉的处理的和未处理的哈姆林树地块进行的水果质量分析表明，与来自未处理的树木的水果相比，处理的水果重量增加，质量得到改善，并且磅固体增加。这些结果是通过这种混合物处理约2个月后获得的。
实例3
在2019年，通过将组合物1施用于如下所述的幼年tangos(柑橘)树，在佛罗里达州格罗夫兰开始了灌溉规模的田间试验。
比率：
1.每次施用将一盎司的组合物1浓缩物与每棵树一加仑水混合。
2.每次施用使用一加仑(128盎司)的组合物1与40-128加仑水混合来处理128棵树(取决于种植者灌溉水率偏好、储水容器的大小等)。
3.在混合后5小时内使用混合物，如果在此期间未使用，则重新搅拌混合物，以确保完全混合。
4.在适用的情况下，组合物1能够使用微喷灌系统进行施用——使用相同的速率。
处理方案：105地块为13英亩，每英亩有303棵树。注入了50％的面积，即6.5英亩或1970棵树木。这需要16加仑的组合物1。用大约50加仑水稀释组合物1。102地块为10英亩，每英亩有165棵树。注入了50％的面积，即5英亩或825棵树，需要6.5加仑的组合物1。用大约25加仑的水稀释组合物1。其在30到40分钟的灌溉周期期间在两个地块上注入。
5. 2019年6月13日的处理1适用于所选的系统。
6.处理2/3于2-3周后开始，并且采用叶面施用和根浸液的方式施用。
7. 2019年6月28日-在干燥天气期间使用相同比率的组合物1进行叶面喷施。
8. 2019年7月5日-在干燥天气期间也使用相同比率的组合物1进行根浸液施用。
9.处理4-2019年7月15日-根据天气，第4次处理在第3次处理后3周至1个月施用，并且在新条开始时特别有效，并且使用相同比率的组合物1进行施用。
获得以下结果。
表8
实例4
在意大利普利亚对感染了苛养木杆菌的橄榄树(商业有机橄榄树树林-奥格利亚罗拉品种50-80年树木)进行了田间试验(图10(a)和10(b))。如下所述，应用了抗微生物组合物的三种不同制剂(α、β和γ)。
表9
表10
表11
本试验于2020年1月开始，其中在2020年3月6日施用首次处理。在斯昆扎诺(LE)生物(有机)橄榄树林内选择了两个试验田进行活动，地点1为细菌苛养木杆菌的低度感染地点，地点2为中度感染地点。每块田由30株处理过的植物和10株对照植物构成。在地点2中，所考虑的树木行与未处理的树木行交替。植物用数字标记，行用字母标记：组合物α、β、γ和C(对照)。
在试验期开始和结束时，分析了来自处理的和未处理的橄榄树的木质部流体样品。
结果：与未处理的对照相比，对处理的橄榄树(在试验开始时感染了苛养木杆菌)进行了新条(嫩枝)的长度测量(图11)。图10(c)示出了橄榄树上的新条(组合物γ处理)。还测量了由木杆菌引起的分枝生长和分枝损失(图12)。图13示出了在2020年3月6日与2020年5月25日取样日期之间，对由感染了苛养木杆菌的处理的和未处理(对照)的橄榄树上的叶细菌分析所得到的组合物γ的苛养木杆菌CFU/mL的减少。
表12示出了2020年3月6日至5月8日的叶片的生长(对来自四个类别中的每一类别的相同30个分枝进行了标记并定期测量)。
表12
处理于2020年3月6日开始，其中在处理前同一天从树木中的韧皮部流体中提取样品。在2020年5月26日，从同一棵树上采集样品。对这些一级和二级样品进行了叶片细菌水平的分析。结果在表13-17和图6-9中示出。
表13
表14
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表15
处理
总的低Xf感染组合物α 200％
总的低Xf感染组合物β 38％
总的低Xf感染组合物γ -68％
总的中度Xf感染组合物γ -89％
总的中度Xf感染组合物β -72％
总的中度Xf感染组合物α -53％
总的对照-低Xf感染 -30％
总的对照-中度Xf感染 -58％
表16
总的低Xf感染组合物γ -68％
总的对照-低Xf感染 -30％
总的中度Xf感染组合物γ -89％
总的对照-中度Xf感染 -58％
表17
/>
表17中的阿拉伯数字表示树的编号。
令发明人惊讶的是，组合物γ获得了针对橄榄树的苛养木杆菌的最佳田间试验结果。此外，组合物γ在针对抗苛养木杆菌疾病方面的表现也出乎意料地优于组合物β。
这些结果显示，在对成熟的低和中度(Xf)感染的橄榄树进行处理的3个月内，结果呈阳性。处理的Xf感染的橄榄树产生了明显更多的叶新条(嫩枝)(比未处理的Xf“对照”橄榄树多高达47％的嫩枝)。一项田间试验导致与未处理的Xf橄榄树相比，处理的Xf橄榄树的树枝干燥降低(经处理的树木为15％，而未处理的树木为28％)。在三个月的田间研究期间，对“低感染”Xf橄榄树进行的一项处理没有因干燥而失去任何枝条。从处理的Xf感染的橄榄树采集的叶片的实验室分析也证实了对这些自然处理的阳性反应。在三个月内，对三月和五月从相同的Xf橄榄树上采集的叶片进行的实验室分析表明，这些处理使Xf细菌菌落形成单位降低了高达89％。
此外，还对对照和处理的橄榄树进行了代谢组学分析。本研究的目的是测量初级代谢物，诸如多元醇和单糖、氨基酸、有机酸、植物激素和次级代谢物，它们在植物生长和抗应激性中起关键作用(雷伦-阿尔瓦雷斯(Rellán-)等人，2011；劳式鲍尔(Lowe-Power)等人，2018；索弗(Sofo)等人，2019b)。2019年二月和五月，从每个地块的三株对照植物和三株处理的植物的橄榄树嫩枝中采集了木质部汁液。
与未处理的木质部流体样品相比，处理的木质部流体结果为阳性。在一次采样中，所考虑的每个地点均发现了75种代谢物。确定的主要组为：抗氧化剂、克氏循环中间体、糖、氨基酸。表18列出了在低田间和中度田间的各样品中分离的代谢物。
表18
实例5
在弗罗里达州格罗夫兰对25年生葡萄柚树进行了田间试验。在本试验中测试了组合物1。
首次灌溉应用于2019年6月13日进行。最终灌溉应用于2019年7月15日进行。
获得以下结果。
表19
实例6
在意大利西西里岛(卡塔尼亚和锡拉丘兹)对感染柑橘衰退病毒(CTV)的塔罗科血橙树(严重分离株SY-568)进行了田间试验。
测试了以下三种组合物。
表20
表21
表22
方案：
-品种：塔罗科-血橙-酸砧木-一种原产于西西里岛的品种
-树龄：常规(非有机)商业树林中的4年柑橘树
-CTV-起源于加利福尼亚的“严重分离株”-SY 568，一种来自加利福尼亚大学河滨分校的高毒株，通过在柑橘宿主范围内进行转位(嫁接传播)。
-根部施用方法-使用微喷射灌溉系统施用
-树木数量-30棵用组合物S-α、S-β和S-γ处理的树木；10棵树未处理的对照
-水果将于2020年11月收获-还将分析水果重量和质量数据
-首次施用2020年5月4日
-第二次施用2020年5月20日
-2020年6月8日首次田间试验叶面活力照片文档
2020年6月8日的视觉评估发现：
1)与未处理的树木相比，处理的树木具有更多的新条
2)与未处理的树相比，处理的树木叶片更具活力
3)经处理的CTV感染的树没有表现出干枯树枝和矮化的症状(图14(b)和15(b))。
4)未处理的CTV感染的树木都展现出典型的CTV症状，即干枯/枯萎的树枝和矮化(图14(a)和15(a))。
5)所有处理的树都具有新的果芽(到这个日期为止，未处理的树都没有结果)。
与未处理的柑橘树相比，经处理的CTV感染的柑橘树出现更多的新条，叶面更具活力，并且没有树枝顶梢枯死症状(图16)。此外，仅在处理的柑橘树上观察到新的果芽。(图16)。
实例7
耳念珠菌是一种真菌组分，它通过利用应激的树木并将其杀死加剧了由苛养木杆菌引起的疾病。进行测定来确定85％松油(El Pinol 85(T&R化学公司))作为测试物质中的一种成分是否能够减少固体、无孔表面上的耳念珠菌。测试物质由19.9％的El Pinol 85成分构成。为了通过测定，该产品必须在十分钟内将表面上的耳念珠菌计数减少五个对数。
方案：将耳念珠菌的悬浮液与土壤模拟溶液(BSA、粘蛋白和酵母提取物)混合，然后在金属盘的表面上干燥，以模拟受污染的表面。然后将50μl的测试物质点在耳念珠菌的顶部并孵育10分钟。然后将样品转移至足够体积的肉汤中，以便稀释测试物质，从而阻止耳念珠菌计数期间的进一步的活性。通过中和测定来验证进一步的活性的阻止。剧烈地摇晃装有盘(含耳念珠菌和测试/对照物质)和肉汤的小瓶，以将耳念珠菌从盘中分散到液体肉汤中。通过将来自每个处理小瓶的肉汤倒在过滤器上以捕获所有耳念珠菌细胞，对处理组中的耳念珠菌进行计数。然后将过滤器放在生长板上，并且在30℃下孵育120小时。此时，将对耳念珠菌菌落进行计数。假设来自盘的所有耳念珠菌已被分散到肉汤中并在过滤器上捕获。因此，过滤器上的菌落的数目是在用测试物质处理后存活的耳念珠菌细胞的数目。仅对于处理组需要此过滤方法，因为耳念珠菌计数太低以至于无法通过肉汤的直接稀释平板法进行检测。通过肉汤的直接稀释平板法计数对照组中的耳念珠菌。将10μl的肉汤和10μl的10倍稀释的肉汤铺板，然后在30℃下孵育72小时。使用稀释液中的菌落的数目来反算整个肉汤体积中的菌落的数目。将此假定为每个盘上的耳念珠菌细胞的数量。为了使测定有效，这一数目必须在105-106个细胞之间。为了通过活性测定，来自处理组的耳念珠菌细胞的平均数目必须比来自对照组的耳念珠菌细胞的平均数目低至少五个对数。
初步结果显示，测试物质未出现菌落。这些实验室结果显示，令人惊讶的是，抗微生物组合物的松油对耳念珠菌有效。
实例8
开始对幼年默科特柑橘(杂交柑橘品种)进行试验。处理的默科特柑橘具有HLB症状，包括块状泛黄的叶子。
在使用以下抗微生物组合物进行处理之前，使用Round-Up产品(草甘膦)对默科特柑橘树进行处理。
通过根浸液法在施用组合物1前后采集根部的样品。在施用组合物1后，发现并意外地观察到树根上的草甘膦残留物消失。
幼年默科特柑橘树也用组合物2处理。这种组合物中的海藻是棕色海藻(佛罗里达海湾沿岸)。将其混合，直至其达到凝胶稠度。然后将其加入到松油混合物中。令人惊讶的是，在用不含脂松香的含海藻的抗微生物组合物处理仅四至五天后，观察到扁平、平整和有光泽的绿叶，没有HLB症状的迹象。
表23
以下两种抗菌组合物也作为处理应用于幼年默科特柑橘树。
表24
表25
实例9
在希腊正在进行的试验中(开始于2019年)，使用组合物5处理了具有可见植物应激症状的各种树木和作物，这些症状包括叶片变黄/枯萎、树枝干燥、树干真菌、果实和树枝形成透明液滴(细菌感染的症状)。处理的树木和作物为橄榄树、杏树、核桃树、梨树、李树、樱桃树、葡萄藤和无花果树。
观察到疾病症状的逆转。特别是，通过处理获得了更大和更健康的叶片。
表26
使用组合物5进行的这些初步田间试验揭示了非常令人惊讶的发现。用这种组合物处理的杏树在2019年生产出了唯一的可食用杏仁。一种未经证实的细菌/真菌病原体(疑似假单胞菌属)已感染了位于希腊伯罗奔尼撒斯的这个村庄的所有杏树。这个村庄里的大部分杏树已经成功抵抗了这种病原体，包括一些超过250年的杏树。此外，在用这种组合物处理的“应激”梨树上观察到显著改善。处理的梨树在处理15天内表现出改善的叶面颜色和活力。当从处理的和未处理的树上收获梨时，发现，处理的梨比未处理的梨更大、更多汁，并且没有瑕疵的迹象。还令人惊讶地观察到，来自处理的葡萄藤的一些葡萄在典型收获前超过30天成熟。葡萄在那个地区生长了至少三代。据报道，只要葡萄在葡萄藤的照料下超过50年，由处理引起的这种现象就没有出现过。还观察到，橄榄树对这种混合物的处理反应非常好。叶面活力在处理30天内有所改善，并且与这一处理前的先前收获相比，收获的橄榄更大、更健康，没有瑕疵的迹象。
除了上述实例之外，出乎意料的是，在103英亩受HLB感染的瓦伦西亚田间试验(弗罗里达州伊姆卡莱)中，用这种混合物处理的树木在施用后30天内比树林中未处理的树木产生明显更多的新条且叶面更具活力。据观察，迄今为止，他们所测试的任何其它HLB处理均未观察到这种水平的应答。在弗罗里达州的帕里什，连续两个季节用所述组合物处理了10英亩瓦伦西亚树林，与2019年相比，2020年的产量增加了50％。此外，令人惊讶的是，这种混合物是2020年收获前该树林中使用的唯一“肥料”产品。应当注意，佛罗里达州农业部门报告说，2020年瓦伦西亚树林因落果而损失了多达50％的收成。一些佛罗里达州种植者报告说，他们的瓦伦西亚树林落果太多，以至于采摘没有掉落的果实甚至是不经济的。
上述实例和田间报告证明了在用本发明的抗微生物组合物处理的各种病原体感染的树的反应中的高度令人惊讶的发现。此外，实例1-6、8和9显示本发明的抗微生物组合物逆转了测试中的相应微生物疾病的症状。鉴于在本领域中使用现有组合物来减轻和处理水果作物中的细菌性疾病的实质性挑战和失败，该发现是令人惊讶的。
除了本文的实例和附图之外，或者除非另外明确说明，所有的数值范围、量、值、比率和百分比可以被理解为好像是以单词“约”开头，即使术语“约”可能没有明确地与值、量、范围、比率等一起出现。此外，当本文阐述数值范围时(甚至当以单词“在……内”开头时)，这些范围包括所列举的范围终点(即，可以使用终点)。此外，本文所述的任何数值范围旨在包括其中包含的所有子范围。例如，“1至10”的范围旨在包括所述最小值1和所述最大值10之间(并包括1和10)的所有子范围，即，具有等于或大于1的最小值和等于或小于10的最大值。如本文使用的术语“一个”、“一(a)”或“一(an)”旨在包括“至少一个”或“一或多个”，除非另有说明。
虽然已经参考本发明的优选实施例在说明书和附图中具体示出和描述了本发明，但是根据本公开内容，本领域技术人员将理解，在不脱离所附权利要求所包含的本发明的范围的情况下，可以在形式和细节上进行各种改变。

Claims (33)

1.一种治疗植物中的柑橘绿化病HLB的方法，所述方法包含向所述植物施用通过由水稀释浓缩物得到的组合物的步骤，其中所述浓缩物包含：
a)0.1体积％至40体积％的量的脂松香，
b)1体积％至50体积％的量的松油，以及
c)20体积％至40体积％的量的盐水；
其中所述组合物的施用减轻、逆转或消除所述柑橘绿化病的至少一种症状。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述植物是柑橘树。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述浓缩物进一步包含0.05体积％至30体积％的量的表面活性剂。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述浓缩物进一步包含0.1体积％至20体积％的量的生长刺激剂。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述浓缩物进一步包含海藻。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述海藻是棕色海藻。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述海藻以0.01体积％至70体积％的量存在。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物向所述植物的叶、植物的根，或植物的叶和根两者施用。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述施用的方法是叶面施用，其中所述浓缩物稀释到每加仑水5-200毫升浓缩物的浓度。
10.根据权利要求8所述的方法，其中所述施用的方法是根浸液施用，其中所述浓缩物稀释到每加仑水10-200毫升浓缩物的浓度。
11.根据权利要求8所述的方法，其中所述施用的方法是灌溉施用，其中所述浓缩物稀释到每加仑水5-200毫升浓缩物的浓度。
12.根据权利要求1所述的方法，其中所述疾病的至少一种症状是韧皮部堵塞。
13.根据权利要求1所述的方法，其中所述疾病的所述至少一种症状是落果。
14.根据权利要求1所述的方法，其中所述疾病的所述至少一种症状是根腐病、萎蔫、萎黄病、嫩枝或肢体枯死、绿色果实、畸形果实或苦味果实。
15.根据权利要求1所述的方法，其中，与未处理的植物相比，所述组合物的施用改善水果质量。
16.根据权利要求15所述的方法，其中水果质量通过新条数量、新条长度、磅固体、每个水果的毛重量、果汁固体的净值/英亩、每个水果的净果汁重量、每90磅盒的水果数量，或糖度/酸比率(Brix/acid ratio)来测量。
17.一种治疗感染苛养木杆菌(Xylella fastidiosa)的植物中的疾病的方法，所述方法包含向所述植物施用通过由水稀释浓缩物得到的组合物的步骤，其中所述浓缩物包含：
a)0.1体积％至40体积％的量的脂松香，
b)1体积％至50体积％的量的松油，以及
c)20体积％至40体积％的量的盐水；
其中所述组合物的施用减轻、逆转或消除所述疾病中的至少一种症状。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述植物是柑橘树、橄榄树、杏树或葡萄藤。
19.根据权利要求17所述的方法，其中所述疾病是皮尔斯病、快速衰退综合征或柑桔斑枯病。
20.根据权利要求17所述的方法，其中所述浓缩物进一步包含0.05体积％至30体积％的量的表面活性剂。
21.根据权利要求17所述的方法，其中所述浓缩物进一步包含0.1体积％至20体积％的量的生长刺激剂。
22.根据权利要求17所述的方法，其中所述浓缩物进一步包含海藻。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述海藻是棕色海藻。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述海藻以0.01体积％至70体积％的量存在。
25.根据权利要求17所述的方法，其中所述组合物向所述植物的叶、植物的根，或植物的叶和根两者施用。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述施用的方法是叶面施用，其中所述浓缩物稀释到每加仑水5-200毫升浓缩物的浓度。
27.根据权利要求25所述的方法，其中所述施用的方法是根浸液施用，其中所述浓缩物稀释到每加仑水10-200毫升浓缩物的浓度。
28.根据权利要求25所述的方法，其中所述施用的方法是灌溉施用，其中所述浓缩物稀释到每加仑水5-200毫升浓缩物的浓度。
29.根据权利要求17所述的方法，其中所述疾病的所述至少一种症状是韧皮部堵塞。
30.根据权利要求17所述的方法，其中所述疾病的所述至少一种症状是落果。
31.根据权利要求17所述的方法，其中所述疾病的所述至少一种症状是根腐病、萎蔫、萎黄病、嫩枝或肢体枯死、绿色果实、畸形果实或苦味果实。
32.根据权利要求17所述的方法，其中，与未处理的植物相比，所述组合物的施用改善水果质量。
33.根据权利要求32所述的方法，其中水果质量通过新条数量、新条长度、磅固体、每个水果的毛重量、果汁固体的净值/英亩、每个水果的净果汁重量、每90磅盒的水果数量，或糖度/酸比率(Brix/acid ratio)来测量。
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