CN117425650A - 一种raf激酶抑制剂的晶型及其制备方法 - Google Patents

一种raf激酶抑制剂的晶型及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN117425650A
CN117425650A CN202280039919.4A CN202280039919A CN117425650A CN 117425650 A CN117425650 A CN 117425650A CN 202280039919 A CN202280039919 A CN 202280039919A CN 117425650 A CN117425650 A CN 117425650A
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
formula
added
ray powder
powder diffraction
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202280039919.4A
Other languages
English (en)
Inventor
刘希乐
丁照中
陈曙辉
胡利红
周成亮
孙德恒
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Qilu Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Qilu Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Qilu Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Qilu Pharmaceutical Co Ltd
Publication of CN117425650A publication Critical patent/CN117425650A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/444—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring heteroatom, e.g. amrinone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

提供了一种RAF激酶抑制剂的晶型及其制备方法，具体公开了式(I)化合物N‑(3‑(2‑((1R，5S)‑3‑氧杂双环[3.1.0]己‑1‑基)‑6‑(2‑羟基乙氧基)吡啶‑4‑基)‑4‑甲基苯基)‑2‑(三氟甲基)异烟酰胺的晶型及其制备方法。

Description

一种RAF激酶抑制剂的晶型及其制备方法
本申请主张如下优先权：
CN202110625608.3，申请日2021年06月04日；
CN202110625603.0，申请日2021年06月04日；
CN202210583709.3，申请日2022年05月25日。
技术领域
本发明公开了一种RAF激酶抑制剂的晶型及其制备方法，以及它们在治疗与相关疾病中的应用。
背景技术
丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路是细胞内一条重要的信号转导通路，该通路通过RAS/RAF/MEK/ERK的特异性级联磷酸化将信号由细胞外传入细胞核内，最终导致特定基因的激活，引起细胞增殖、凋亡或分化。RAF是RAS/RAF/MEK/ERK信号通路中一个非常重要的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，位于RAS的下游，可以被RAS激活，RAF活化可以磷酸化MEK蛋白，完成下游信号传导。RAF家族包括ARAF、BRAF、CRAF(RAF-1)三种亚型，具有高度的同源性和相似的结构域。ARAF和CRAF突变较少发生，BRAF突变率较高。RAF抑制剂可以有效抑制ERK磷酸化，进而阻断下游信号MEK/ERK传导，从而有效阻断RAS-ERK通路，对MAPK通路的肿瘤疾病具有治疗效果。因此，RAF激酶已成为临床治疗肿瘤的重要靶标。
第一代BRAF激酶抑制剂Vemurafenib，Dabrafenib和Encorafenib已经被FDA批准用于发生B-Raf V600E突变癌症的治疗。尽管Vemurafenib，Dabrafenib和Encorafenib在B-Raf V600E突变黑色素瘤的治疗上表现出可喜的疗效，但在一年内因产生获得性耐药性而复发。新一代pan-Raf抑制剂可以克服耐药性，正在开发扩展临床应用范围，pan-RAF抑制剂可以抑制二聚体活性，阻断通路的反常激活(paradoxcal activation)，从而可以减耐药性。处于临床研究的pan-Raf二聚体抑制剂主要有HM95573、TAK-580、BGB-283、LXH254，以及LY3009120等，这些新型RAF抑制剂的研发，有望克服第一代抑制剂的耐药性，进一步扩大临床应用。
本发明人在专利PCT/CN/2020/133933中公开了一种小分子pan-RAF激酶抑制剂，其结构如式(I)所示，化学名称为N-(3-(2-((1R，5S)-3-氧杂双环[3.1.0]己-1-基)-6-(2-羟基乙氧基)吡啶-4-基)-4-甲基苯基)-2-(三氟甲基)异烟酰胺。该小分子抑制剂具有良好的RAF激酶抑制活性和多种细胞抗增殖活性，同时该分子具有较好的药动学性质，有望开发成临床药物。
发明内容
本发明提供式(I)化合物N-(3-(2-((1R，5S)-3-氧杂双环[3.1.0]己-1-基)-6-(2-羟基乙氧基)吡啶-4-基)-4-甲基苯基)-2-(三氟甲基)异烟酰胺的晶型A，
其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征峰：6.03±0.20°、12.00±0.20°、14.36±0.20°、19.72±0.20°。
在本发明的一些方案中，上述晶型A，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征峰：6.03±0.20°、9.63±0.20°、12.00±0.20°、14.36±0.20°、19.02±0.20°、19.72±0.20°、20.73±0.20°、22.10±0.20°、24.08±0.20°。
在本发明的一些方案中，上述晶型A，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征峰：6.03±0.20°、7.65±0.20°、9.63±0.20°、12.00±0.20°、14.09±0.20°、14.36±0.20°、14.82±0.20°、15.28±0.20°、15.95±0.20°、16.31±0.20°、17.50±0.20°、19.02±0.20°、19.72±0.20°、20.73±0.20°、22.10±0.20°、23.29±0.20°、24.08±0.20°、25.53±0.20°、26.73±0.20°、27.34±0.20°、28.51±0.20°、29.04±0.20°、31.04±0.20°、33.17±0.20°、33.72±0.20°、34.28±0.20°、39.63±0.20°。
在本发明的一些方案中，上述晶型A，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征峰：12.00±0.20°、和/或6.03±0.20°、和/或7.65±0.20°、和/或9.63±0.20°、和/或14.09±0.20°、和/或14.36±0.20°、和/或14.82±0.20°、和/或15.28±0.20°、和/或15.95±0.20°、和/或16.31±0.20°、和/或17.50±0.20°、和/或19.02±0.20°、和/或19.72±0.20°、和/或20.73±0.20°、和/或22.10±0.20°、和/或23.29±0.20°、和/或24.08±0.20°、和/或25.53±0.20°、和/或26.73±0.20°、和/或27.34±0.20°、和/或28.51±0.20°、和/或29.04±0.20°、和/或31.04±0.20°、和/或33.17±0.20°、和/或33.72±0.20°、和/或34.28±0.20°、和/或39.63±0.20°。
在本发明的一些方案中，上述晶型A，其X射线粉末衍射图谱如图1所示。
在本发明的一些方案中，上述式(I)化合物晶型A的XRPD图谱衍射峰解析数据如表1所示。
表1式(I)化合物晶型A的XRPD衍射峰解析数据
在本发明的一些方案中，上述晶型A中含有水分子，式(I)化合物与水分子的摩尔比为1∶1。
在本发明的一些方案中，上述晶型A为式(I)化合物的一水合物。
在本发明的一些方案中，上述晶型A的TGA谱图如图5所示。
在本发明的一些方案中，上述晶型A的DSC谱图如图7所示。
在本发明还提供式(I)化合物N-(3-(2-((1R，5S)-3-氧杂双环[3.1.0]己-1-基)-6-(2-羟基乙氧基)吡啶-4-基)-4-甲基苯基)-2-(三氟甲基)异烟酰胺的晶型B，
其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征峰：6.06±0.20°、12.06±0.20°、20.10±0.20°、21.24±0.20°。
在本发明的一些方案中，上述晶型B，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征峰：6.06±0.20°、12.06±0.20°、15.94±0.20°、18.95±0.20°、20.10±0.20°、20.74±0.20°、21.24±0.20°、22.20±0.20°、24.20±0.20°。
在本发明的一些方案中，上述晶型B，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征峰：6.06±0.20°、7.77±0.20°、9.61±0.20°、12.06±0.20°、14.15±0.20°、14.93±0.20°、15.48±0.20°、15.94±0.20°、16.94±0.20°、17.62±0.20°、18.95±0.20°、20.10±0.20°、20.74±0.20°、21.24±0.20°、22.20±0.20°、23.27±0.20°、24.20±0.20°、25.65±0.20°、26.83±0.20°、27.42±0.20°、28.17±0.20°、28.90±0.20°、30.96±0.20°、31.54±0.20°、37.07±0.20°、37.91±0.20°。
在本发明的一些方案中，上述晶型B，其X射线粉末衍射图谱如图2所示。
在本发明的一些方案中，上述式(I)化合物晶型B的XRPD图谱衍射峰解析数据如表2所示。
表2式(I)化合物晶型B的XRPD衍射峰解析数据
在本发明的一些方案中，上述晶型B的TGA谱图如图6所示。
在本发明的一些方案中，上述晶型B的DSC谱图如图8所示。
在本发明还提供式(I)化合物的结晶，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征峰：6.03±0.20°、7.65±0.20°、9.63±0.20°、12.00±0.20°、19.72±0.20°。
在本发明的一些方案中，上述式(I)化合物的结晶，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征峰：6.03±0.20°、7.65±0.20°、9.63±0.20°、12.00±0.20°、19.72±0.20°、22.10±0.20°。
在本发明的一些方案中，上述式(I)化合物的结晶，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征峰：6.03±0.20°、7.65±0.20°、9.63±0.20°、12.00±0.20°、19.72±0.20°、22.10±0.20°、24.08±0.20°。
在本发明的一些方案中，上述式(I)化合物的结晶，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征峰：6.03±0.20°、7.65±0.20°、9.63±0.20°、12.00±0.20°、19.72±0.20°、22.10±0.20°、24.08±0.20°、31.04±0.20°。
本发明还提供式(I)化合物N-(3-(2-((1R，5S)-3-氧杂双环[3.1.0]己-1-基)-6-(2-羟基乙氧基)吡啶-4-基)-4-甲基苯基)-2-(三氟甲基)异烟酰胺的无定型物，
在本发明的一些方案中，上述无定型物，其X射线粉末衍射图谱如图9所示。
在本发明还提供一种药物组合物，其包含上述晶型A和/或晶型B和/或结晶、和/或无定型物及可药用的载体。
在本发明还提供上述晶型A和/或晶型B和/或结晶和/或无定形物或其药物组合物在制备用于治疗RAF激酶突变介导疾病的药物中的应用。
在本发明的一些方案中，上述疾病为肺癌。
在本发明还提供上述晶型A和/或晶型B和/或结晶和/或无定型在制备治疗肺癌药物中的应用。
技术效果
本申请的晶型稳定、受热、湿度、和光照影响较小，便于储存及制剂。本申请的晶型具有良好的药代动力学性质，满足药物在体内的要求，适合作为药用制剂使用，其中所述药代动力学性质可以在临床前的例如SD大鼠、比格犬的动物试验中测得。
定义和说明
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在含有下列含义。一个特定的短语或术语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文出现商品名时，旨在指代其对应的商品或其活性成分。
本文所用的术语″可药用″是指在合理医疗判断的范围内适合与人类和动物的组织接触，而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或其它问题并发症的，与合理的受益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
术语“可药用的载体”是指能够递送本发明有效量活性物质、不干扰活性物质的生物活性并且对宿主或者患者无毒副作用的任何制剂或载体介质代表性的载体包括水、油、蔬菜和矿物质、膏基、洗剂基质、软膏基质等。这些基质包括悬浮剂、增粘剂、透皮促进剂等。它们的制剂为化妆品领域或局部药物领域的技术人员所周知。
本发明公开或要求保护的结晶、晶体或晶型的结构可能根据试验条件、纯度、设备和本领域技术人员已知的其它常几变量在合理误差范围内表现出类似但不完全相同的分析特性。相应地，本领域技术人员显而易见的是，可以在不背离本发明的范围和精神的情况下在本发明内作出各种修改和变动。例如， 粉末X射线衍射中的衍射角(2θ)通常产生±0.20°的范围内的误差，所以，需要将上述衍射角的值理解为也包含±0.20°左右范围内的值。所以，本发明不仅包括粉末X射线衍射中的衍射角完全一致的结晶，还包括在±0.20°的误差范围内衍射角一致的结晶。
本文所用的“多晶型”或“多晶型物”是指具有相同化学组成，但构成该晶体的分子、原子和/或离子的不同空间排列的晶型。尽管多晶型物具有相同的化学组成，但它们的堆积和几何排列不同，并可能表现出不同的物理性质，如熔点、形状、颜色、密度、硬度、可形变性、稳定性、溶解度、溶出速率和类似性质。根据他们的温度-稳定性关系，两种多晶型物可以是单变性或互变性的。对于单变性体系，在温度变化时，两种固相之间的相对稳定性保持不变。相反，在互变性体系中，存在一个过渡温度，在此两种相的稳定性调换。这种化合物以不同晶体结构存在的现象被称作药物多晶型现象。
本发明的结晶结构可以通过各种方法制备，包括从合适的溶剂中结晶或重结晶、升华、从熔融体中生长、从另一相固态转化、从超临界流体中结晶和射流喷雾等。结晶结构从溶剂混合物中结晶或重结晶的技术，包括溶剂蒸发、降低溶剂混合物的温度、该分子和/或盐的过饱和溶剂混合物的引晶、冻干溶剂混合物、向溶剂混合物中加入反溶剂等。
本发明的中间体化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明具体实施方式的化学反应是在合适的溶剂中完成的，所述的溶剂须适合于本发明的化学变化及其所需的试剂和物料。为了获得本发明的化合物，有时需要本领域技术人员在已有实施方式的基础上对合成步骤或者反应流程进行修改或选择。
术语“保护基”包括但不限于“氨基保护基”、“羟基保护基”或“巯基保护基”。术语“氨基保护基”是指适合用于阻止氨基氮位上副反应的保护基团。代表性的氨基保护基包括但不限于：甲酰基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基、三氯乙酰基或三氟乙酰基)；烷氧基羰基，如叔丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，如苄氧羰基(Cbz)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)；芳基甲基，如苄基(Bn)、三苯甲基(Tr)、1，1-二-(4′-甲氧基苯基)甲基；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。术语“羟基保护基”是指适合用于阻止羟基副反应的保护基。代表性羟基保护基包括但不限于：烷基，如甲基、乙基和叔丁基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基)；芳基甲基，如苄基(Bn)，对甲氧基苄基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)和二苯基甲基(二苯甲基，DPM)；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的常规方法来确认结构，如果本发明涉及化合物的绝对构型，则该绝对构型可以通过本领域常规技术手段予以确证。例如单晶X射线衍射法(SXRD)，把培养出的单晶用Bruker D8 venture衍射仪收集衍射强度数据，光源为CuKα辐射，扫描方式： 扫描，收集相关数据后，进一步采用直接法(Shelxs97)解析晶体结构，便可以确证绝对构型。
下面会通过实施例具体描述本发明，这些实施例并不意味着对本发明的任何限制。
本发明所使用的溶剂可经市售获得。
本发明采用下述缩略词：
Pd(dppf)Cl 2·DCM代表[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯-二氯甲烷复合物，[Ir(COD)OMe] 2代表环辛二烯甲氧基铱二聚物，tmphen代表3，4，7，8-四甲基-1，10菲萝啉，Pd 2dba 3代表三-二苯丙酮-二钯，Brettphos代表(2-二环己基膦-3，6-二甲氧基-2′，4′，6′-三异丙基-1，1′-联苯，PE代表石油醚，EA代表乙酸乙酯，DMSO代表二甲亚砜。
本发明化合物依据本领域常规命名原则或者使用 软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。
1.仪器及分析方法
1.1本发明晶型A和晶型B的X-射线粉末衍射(X-ray powder diffractometer，XRPD)方法
仪器型号：PANalytical(帕纳科)-X’pert 3
测试条件：详细的XRPD参数如下：
X-ray发生器：Cu，kα，
管电压：45kV，管电流：40mA.
散射狭缝：1mm
探测器狭缝：0.3mm
防散射狭缝：1mm
扫描范围：3-40度
步长：0.0263度
扫描时间：46.665秒
本发明无定型物的X-射线粉末衍射(X-ray powder diffractometer，XRPD)方法
仪器型号：DX-2700BH
测试条件：详细的XRPD参数如下：
X-ray发生器：Cu，kα，
管电压：40kV，管电流：30mA.
散射狭缝：1mm
探测器狭缝：0.3mm
防散射狭缝：1mm
扫描范围：3-40度
步长：0.02度
扫描时间：0.5秒
附图说明
图1为式(I)化合物晶型A的XRPD谱图。
图2为式(I)化合物晶型B的XRPD谱图。
图3为式(I)化合物单晶的晶胞图。
图4为式(I)化合物单晶的XRPD谱图。
图5为式(I)化合物晶型A的TGA谱图。
图6为式(I)化合物晶型B的TGA谱图。
图7为式(I)化合物晶型A的DSC谱图。
图8为式(I)化合物晶型B的DSC谱图。
图9为式(I)化合物无定型物的XRPD谱图。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。
实施例1：式(I)化合物的制备
化合物2
-78℃下，向化合物1(10克，51.96毫摩尔)的二氯甲烷(100mL)溶液中加入正丁基锂(23mL，2.5M)，搅拌30分钟。-78℃下，向该混合液中加入1a(4.92克，57.16毫摩尔)，升温至25℃搅拌0.5小时。向反应混合物中加入饱和氯化铵溶液(40mL)，用二氯甲烷(40mL×2)萃取，合并后的萃取液用无水硫酸钠干燥后浓缩，经柱层析(PE/EA＝10/1至5/1，V/V)分离得化合物2。 1HNMR(400MHz，CDCl 3)δ7.72(t，J＝7.8Hz，1H)，7.47(d，J＝7.2Hz，1H)，7.28(d，J＝7.2Hz，1H)，4.35(s，1H)，4.24-4.14(m，2H)，4.05-4.00(m，1H)，3.96-3.92(m，1H)，2.45(td，J＝8.8，13.0Hz，1H)，2.32-2.22(m，1H)。
化合物3
向2(6克，30.06毫摩尔)的甲苯(80mL)溶液中加入对甲苯磺酸(11.5克，60.46毫摩尔)，升温至110℃搅拌16小时。向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠溶液(40mL)和乙酸乙酯(100mL)，分 液，有相机用饱和碳酸氢钠溶液(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱层析(PE/EA＝50/1至20/1，V/V)分离得化合物3。 1HNMR(400MHz，CDCl 3)δ7.64(t，J＝7.8Hz，1H)，7.23(dd，J＝5.2，7.8Hz，2H)，6.68(quin，J＝2.0Hz，1H)，5.08(dt，J＝2.0，5.0Hz，2H)，4.91(dt，J＝2.0，5.0Hz，2H)。
化合物4
向叔丁醇钾(3.71克，33.04毫摩尔)，2a(7.3克，33.17毫摩尔)的混合物中加入DMSO(50mL)。在氮气保护下，将反应混合物在25℃并搅拌1小时。向反应液中加入3(1克，5.51毫摩尔)的DMSO(5mL)溶液，将反应混合物加热至70℃并搅拌6小时。向反应混合物中加入水(180mL)，用乙酸乙酯(30×3mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱层析(PE/EA＝20/1，V/V)分离，得化合物4。 1HNMR(400MHz，CDCl 3)δ7.46(t，J＝7.8Hz，1H)，7.05(d，J＝7.8Hz，1H)，6.88(d，J＝7.6Hz，1H)，4.11-4.04(m，2H)，3.89-3.78(m，2H)，2.08(ddd，J＝2.8，5.2，8.0Hz，1H)，1.32(dd，J＝4.4，8.0Hz，1H)，1.07(t，J＝4.6Hz，1H)。
化合物5
将3a(1.08克，4.25毫摩尔)，[Ir(COD)OMe] 2(70毫克，105.60微摩尔)和tmphen(50毫克，211.59微摩尔)置于甲基叔丁醚(20mL)中。反应混合物在氮气保护下，加入4(770毫克，3.94毫摩尔)，加热至80℃搅拌3小时。反应液过滤，滤液浓缩，得化合物5粗品。MS(ESI)：m/z 240.3[M-84+2H]+。
化合物6
将化合物5(1.2克，3.73毫摩尔)，4a(1.4克，3.90毫摩尔)和Pd(dppf)Cl 2·DCM(300毫克，367.36微摩尔)和碳酸钠(800毫克，7.55毫摩尔)置于二氧六环(50mL)和水(10mL)中。反应混合物在氮气保护下，加热至100℃并搅拌3小时。将反应混合物过滤，滤液浓缩后加入乙酸乙酯(20mL)和水(10mL)，分液，水相用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并后的有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱层析(PE/EA＝10/1至5/1)分离得6。 1HNMR(400MHz，CDCl 3)δ8.92(d，J＝5.0Hz，1H)，8.20(s，1H)，8.11(s，1H)，7.94(d，J＝5.0Hz，1H)，7.60-7.51(m，2H)，7.32(d，J＝7.8Hz，1H)，7.10(d，J＝1.2Hz，1H)，6.90(d，J＝1.2Hz，1H)，4.19-4.14(m，2H)，3.95-3.87(m，2H)，2.27(s，3H)，2.24-2.17(m，1H)，1.48-1.41(m，1H)，1.20-1.15(m，1H)。
化合物7
向6(900毫克，1.90毫摩尔)和5a(400毫克，2.27毫摩尔)的甲苯(30mL)溶液中，加入Pd2dba3(180毫克，196.57微摩尔)，Brettphos(200毫克，372.60微摩尔)和碳酸铯(1.26克，3.87毫摩尔)。在氮气保护下，将反应混合物加热至110℃并搅拌4小时。将反应液过滤，滤液浓缩后经硅胶柱层析(PE/EA＝20/1至6/1)分离，得化合物7。 1HNMR(400MHz，DMSO-d 6)δ10.65(s，1H)，8.95(d，J＝5.0Hz，1H)，8.31(s，1H)，8.14(d，J＝4.6Hz，1H)，7.70(dd，J＝2.0，8.2Hz，1H)，7.59(d，J＝2.2Hz，1H)，7.29(d，J＝8.4Hz，1H)，6.68(s，1H)，6.49(s，1H)，4.31(br d，J＝2.8Hz，1H)，4.07-3.97(m，2H)，3.90-3.86(m，2H)，3.79-3.69(m，2H)，2.17(s，3H)，2.15-2.09(m，1H)，1.33(dd，J＝3.8，7.8Hz，1H)，1.13(t，J＝7.2Hz，1H)，0.96-0.91(m，1H)，0.80(s，9H)，0.00(s，6H)。
化合物8
向7(300毫克，488.81微摩尔)的四氢呋喃(10mL)中加入盐酸(1mL，4M)，反应液在25℃ 下搅拌1小时。将反应液用乙酸乙酯(20mL)稀释后，用碳酸氢钠饱和溶液调pH＝8，用乙酸乙酯(10×3mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，薄层硅胶板(PE/EA＝1/1，V/V)分离，得化合物8。 1HNMR(400MHz，DMSO-d 6)δ10.70(s，1H)，9.06-8.95(d，J＝5.0Hz，1H)，8.37(s，1H)，8.23-8.18(d，J＝4.2Hz，1H)，7.77-7.71(dd，J＝2.2，8.4Hz，1H)，7.68-7.64(d，J＝2.2Hz，1H)，7.39-7.31(d，J＝8.4Hz，1H)，6.73(s，1H)，6.59-6.54(d，J＝1.0Hz，1H)，4.86-4.81(t，J＝5.2Hz，1H)，4.35-4.30(t，J＝5.2Hz，2H)，4.13-4.03(m，2H)，3.83-3.70(m，4H)，2.24(s，3H)，2.22-2.08(ddd，J＝2.4，5.0，7.8Hz，1H)，1.40-1.32(dd，J＝3.6，7.8Hz，1H)，1.02-0.96(t，J＝4.4Hz，1H)。MS(ESI)m/z：500.4[M+H]+。
式(I)化合物
化合物8经SFC手性分离(手性柱DAICEL CHIRALCEL OJ-H(250mm*30mm，5μm)，流动相A：乙醇(含0.05％二异丙基乙胺)；流动相B：二氧化碳)得到8A(保留时间1.487min)和式(I)化合物(保留时间1.590min)。8A是式(I)化合物的对映异构体。
化合物8A： 1HNMR(400MHz，DMSO-d 6)δ10.70(s，1H)，9.06-8.95(d，J＝5.0Hz，1H)，8.37(s，1H)，8.23-8.18(d，J＝4.2Hz，1H)，7.77-7.71(dd，J＝2.2，8.4Hz，1H)，7.68-7.64(d，J＝2.2Hz，1H)，7.39-7.31(d，J＝8.4Hz，1H)，6.73(s，1H)，6.59-6.54(d，J＝1.0Hz，1H)，4.86-4.81(t，J＝5.2Hz，1H)，4.35-4.30(t，J＝5.2Hz，2H)，4.13-4.03(m，2H)，3.83-3.70(m，4H)，2.24(s，3H)，2.22-2.08(ddd，J＝2.4，5.0，7.8Hz，1H)，1.40-1.32(dd，J＝3.6，7.8Hz，1H)，1.02-0.96(t，J＝4.4Hz，1H)。MS(ESI)m/z：500.4[M+H]+，100％(ee％)。
式(I)化合物： 1HNMR(400MHz，DMSO-d 6)δ10.70(s，1H)，9.06-8.95(d，J＝5.0Hz，1H)，8.37(s，1H)，8.23-8.18(d，J＝4.2Hz，1H)，7.77-7.71(dd，J＝2.2，8.4Hz，1H)，7.68-7.64(d，J＝2.2Hz，1H)，7.39-7.31(d，J＝8.4Hz，1H)，6.73(s，1H)，6.59-6.54(d，J＝1.0Hz，1H)，4.86-4.81(t，J＝5.2Hz，1H)，4.35-4.30(t，J＝5.2Hz，2H)，4.13-4.03(m，2H)，3.83-3.70(m，4H)，2.24(s，3H)，2.22-2.08(ddd，J＝2.4，5.0，7.8Hz，1H)，1.40-1.32(dd，J＝3.6，7.8Hz，1H)，1.02-0.96(t，J＝4.4Hz，1H)。MS(ESI)m/z：500.4[M+H] +，99.7％(ee％)。
实施例2：式(I)化合物晶型B的制备
步骤1：化合物I-2
室温下，将N，N-二甲基甲酰胺(12.5升)加入到50升反应釜中，加入化合物I-1(2.75千克，20.91摩尔)和化合物I-1-1(3.55千克，31.36摩尔)，搅拌至溶解澄清。再加入碳酸钾(7.22千克，52.27摩尔)，加热至75～80度下搅拌16小时。反应完成后，将反应液冷却至25度；向反应釜中加入水(27升)，将约27升的反应液转入30升白桶中暂存；向釜中剩余的27升反应液中缓慢加入盐酸溶液(6摩尔/升，8.5升)，每次0.3升，调节pH至3～4。有黄色固体析出，伴有大量气体产生，少量放热。减压抽滤固液混合物，滤饼用水洗涤三次，每次2升。剩余27升反应液，同样方法处理。滤饼合并后，在45度真空干燥24小时，得到化合物I-2。 1HNMR(400MHz，CDCl 3)δ14.32(br s，1H)，7.42(dd，J＝7.4，9.0Hz，1H)，7.12(d，J＝9.0Hz，1H)，6.53(dd，J＝1.4，7.4Hz，1H)，4.26-4.18(m，2H)，1.28(t，J＝7.2Hz，3H)。
步骤2：化合物I-3
室温下，将二甲亚砜(12升)加入50升反应釜中，加入化合物I-2(3.6千克，16.03摩尔)，内温升至70度。反应液澄清后，加入氯化钠(1.87千克，32.05摩尔)的水(6升)溶液，将内温升至80-85度，搅拌16小时。反应完成后，温度降至25度，向釜中加入水(20.5升)，搅拌5分钟，反应液用乙酸乙酯萃取2次，每次10升。合并有机相，用饱和食盐水洗涤两次，每次10升。有机相用无水硫酸钠干燥后，45度下减压浓缩得到产物化合物I-3。 1HNMR(400MHz，CDCl 3)δ7.74(t，J＝7.8Hz，1H)，7.43(d，J＝7.6Hz，1H)，7.34(d，J＝8.0Hz，1H)，3.94(s，2H)。
步骤3：化合物I-4
室温下，将四氢呋喃(7.5升)加入50升反应釜中，加入化合物I-3(1.5千克，9.83摩尔)和化合物I-3-1(0.926千克，10摩尔)，内温降至-25度。氮气氛围下，向釜中泵入六甲基硅胺基锂(10升，10摩尔，四氢呋喃溶液)，控制内温不超过-15度，约3小时加完。将内温升在-8～-5度之间，保温反应3小时。将温度降至-25度，用蠕动泵将六甲基硅胺基钠(10升，10摩尔，四氢呋喃溶液)加到反应釜(2小时加完)中，控制内温不超过-15度。将内温升至20～25度，搅拌反应16小时。反应完成后，向反应液中缓慢加入水(0.883升，49.1摩尔)，控制内温低于30度搅拌0.5小时。反应液在釜中，40度减压蒸馏，浓缩得到化合物I-4粗产物溶液(约10升)，直接用于下一步反应。
步骤4：化合物I-5
室温下，向粗品化合物I-4(10升溶液)的50升反应釜中加入氢氧化钾(9.6升，19.2摩尔)的水溶液和乙醇(10升)，内温升至75～80度，搅拌5小时。反应完成后降温至25～30度，向反应液中缓慢加入盐酸水溶液(8升，48摩尔)，控制温度不超过40度，加热内温至60度，搅拌1小时。反应完成后，浓缩得到粗产物溶液(剩余液约2升)，用乙酸乙酯萃取两次，每次7.5升。将萃取液加入反应釜中，加入硅胶(100-200目，750克)，加入正庚烷(15升)，搅拌16小时。过滤，滤饼用正庚烷/乙酸乙酯(1∶1)洗涤三次，每次1升，合并有机相，减压浓缩得到黑色固体粗品。将粗品用乙醇(3升)加热至内温70度，搅拌至溶清，降温至20度，有大量固体析出后，向混悬液中加入水(9升)，搅拌0.5小时。过滤，滤饼用水洗涤两次，每次1升；将滤饼加入到混合溶液(正庚烷/乙醇，4∶1，4.5升)中，搅拌0.5小时，过滤，滤饼用正庚烷/乙醇(4∶1)洗涤2次，每次0.3升，将滤饼45度真空干燥16小时，得到化合物I-5。 1HNMR(400MHz，CDCl 3)δ8.09(dd，J＝0.8，7.8Hz，1H)，7.64(t，J＝7.8Hz，1H)，7.18(dd，J＝0.8，7.8Hz，1H)，4.43(dd，J＝4.6，9.2Hz，1H)，4.31(d，J＝9.2Hz，1H)，3.04-2.89(m，1H)，2.14(dd，J＝4.4，7.8Hz，1H)，1.56-1.44(m，1H)。
步骤：5：化合物I-6
室温下，将四氢呋喃(16升)加入50升反应釜中，加入化合物I-5(3.2千克，15.27摩尔)，搅拌至溶解澄清。内温升至30度，在氮气氛围下，用蠕动泵将硼氢化锂(4.58升，9.16摩尔)的四氢呋喃溶液缓慢加入到釜中(1.5小时加完)，控制温度不超过35度，夹套温度控制在10度，投料完毕后，控制内温在25度～35度之间，保温反应2小时，搅拌过夜16小时。向反应液中缓慢加入饱和氯化铵(2.3升)溶液，控制内温低于20度，搅拌0.5小时。向反应液中加入正庚烷(8升)，搅拌0.5小时，减压抽滤固液混合物，滤饼用正庚烷/四氢呋喃(1∶2)洗涤2次，每次1.5升，滤液减压浓缩至约8升，加入乙酸乙酯16升。有机相用水洗涤3次，每次3升，水相用乙酸乙酯萃取3次，每次2升。合并有机相，用无水硫酸钠(2千克)干燥后，减压浓缩。粗品用正庚烷/乙酸乙酯(10∶1，6.4升)打浆，搅拌0.5小时，过滤，滤饼用正庚烷/乙酸乙酯(10∶1，3.2升)洗涤1次，将滤饼真空干燥16小时，得化合物I-6。 1HNMR(400MHz，DMSO-d 6)δ7.76(t，J＝7.8Hz，1H)，7.59(d，J＝7.8Hz，1H)，7.25(d，J＝7.8Hz，1H)，4.84-4.62(m，2H)，4.09(dd，J＝6.2，12.4Hz，1H)，3.88-3.71(m，2H)，3.50(ddd，J＝4.8，8.8，11.8Hz，1H)，1.82-1.62(m，1H)，1.29(dd，J＝4.0，8.8Hz，1H)，0.92(dd，J＝4.0，6.2Hz，1H)。
步骤6：化合物I-7
室温下，将四氢呋喃(22.5升)加入50升反应釜中，加入化合物I-6(1.5千克，7.02摩尔)，搅 拌至溶解澄清。加入偶氮二甲酰二哌啶(2.04千克，8.07摩尔)，搅拌至溶解澄清，在氮气氛围下，用蠕动泵将正丁基膦的四氢呋喃溶液(1.63千克，8.07摩尔)缓慢加入到釜中(1.5小时加完)，控制温度不超过40度。投料完毕后，控制内温在15～25度之间，反应2小时，室温搅拌过夜16小时。将反应液过滤，滤饼用甲基叔丁醚洗涤2次，每次3升，滤液浓缩得粗品。粗品用甲基叔丁醚(15升)溶解，用盐酸(4摩尔/升)洗涤3次，每次3升，水相用甲基叔丁醚萃取3次，每次3升，合并有机相用饱和食盐水洗涤3次，每次5升，用无水硫酸钠(2千克)干燥后，减压浓缩得粗品。粗品转移至釜中，加入正庚烷(7升)，升温至内温70度，搅拌0.5小时至溶清。降温至内温15度，搅拌16小时。过滤，滤饼用正庚烷(1.4升)洗涤1次，滤饼真空干燥16小时，得化合物I-7。 1HNMR(400MHz，CDCl 3)δ7.46(t，J＝7.8Hz，1H)，7.04(dd，J＝0.8，7.8Hz，1H)，6.87(dd，J＝0.8，7.7Hz，1H)，4.10-4.04(m，2H)，3.86-3.78(m，2H)，2.07(ddd，J＝2.8，5.2，8.0Hz，1H)，1.32(dd，J＝4.4，8.2Hz，1H)，1.07(t，J＝4.8Hz，1H)。
步骤7：化合物I-8
室温下，将二氧六环(12升)加入50升反应釜中，加入化合物I-7-1(2.11千克，17.89摩尔)和叔丁醇钾(2.51千克，22.36摩尔)。反应液加热至95度，将化合物I-7(1.75千克，8.94摩尔)的二氧六环(5.5升)溶液用恒压滴液漏斗加入此反应液中，并控制内温90-100度。30分钟加完，保温反应30分钟。反应完成后，降温至50度，垫硅藻土过滤，滤饼用正庚烷洗涤2次，每次2升，滤液合并后旋干。将得到的黄色油状物溶于正庚烷(20升)中，用水洗3次，每次15升，点板显示无化合物I-7-1剩余。有机相用无水硫酸钠(2.5千克)干燥后浓缩，得粗产品化合物I-8。 1HNMR(400MHz，CDCl 3)δ7.45(t，J＝7.8Hz，1H)，6.66-6.48(m，2H)，4.45-4.29(m，2H)，4.21-4.07(m，2H)，3.95-3.81(m，2H)，3.75-3.64(m，2H)，2.13-2.02(m，1H)，1.42-1.34(m，1H)，1.25-1.17(m，9H)，1.10-1.02(m，1H)。
步骤8：化合物4a
室温下，将二氯甲烷(13升)加入50升反应釜中，加入三氟甲基异烟酸(2.6千克，13.6摩尔)和N，N-二甲基甲酰胺(105毫升，1.36摩尔)，搅拌至澄清。用恒压滴液漏斗缓慢加入草酰氯(1.67升，19.05摩尔)，尾气用碱液吸收。20度下，氮气氛围下搅拌16小时。反应完成后，将反应液中溶剂旋蒸除去，得到的三氟甲基异烟酰氯用N，N-二甲基甲酰胺(12升)溶解，将此溶液用恒压滴液漏斗缓慢加入到3-溴-4-甲基苯胺(3.0千克，13.97摩尔)和二异丙基乙胺(4.11升，20.44摩尔)的N，N-二甲基甲酰胺(6升)溶液中，控制内温在15～25度之间。加料完成后，继续反应0.5小时。反应完成后，将反应液加入到水(54升)中，析出固体，控制温度在20～30度，加完后继续搅拌10分钟，悬浊液用抽滤漏斗减压过滤，滤饼用水洗涤(2升)一次，收集滤饼。将滤饼转移至装有正庚烷(15升)的反应釜中，内温在15～25度，搅拌16小时。反应液过滤，滤饼用正庚烷(1升)洗涤2次，将滤饼真空干燥16小时，得化合物4a。 1HNMR(400MHz，CDCl 3)δ8.93(d，J＝4.8Hz，1H)，8.11(s，1H)，8.01(br s，1H)，7.96-7.86(m，2H)，7.49(br d，J＝8.2Hz，1H)，7.26(d，J＝8.2Hz，1H)，2.41(s，3H)。
步骤9：化合物I-9
室温下，将叔丁基甲醚(18升)加入50升反应釜中，加入化合物I-8(1.8千克，6.49摩尔)和嚬哪醇硼酸酯(1.73千克，6.81摩尔)，搅拌澄清，体系抽真空置换三次氮气。将tmphen(30.67克，0.13摩尔)和[Ir(COD)(OMe)]2(40.02克，65毫摩尔)分别依次加入反应釜中，体系氮气流保护升温至55-60度，保温搅拌2小时。反应完成后，自然冷却反应液，搅拌16小时。反应液减压浓缩，得粗产品化 合物I-9。
步骤10：化合物I-10
室温下，将二氧六环(16升)加入50升反应釜中，加入化合物4a(2.2千克，6.12摩尔)，搅拌至澄清，将Pd(dppf)Cl 2·CH 2Cl 2(263.22克，0.32摩尔)加入到反应釜中，通氮气置换3次。将碳酸钠(1.37千克，12.89摩尔)溶于水(5.2升)至澄清后加入到反应釜中，升温至70-75度。N 2保护下将溶液化合物I-9(2.6千克，6.45摩尔)用蠕动泵加入反应釜中(100毫升/分钟)，控制内温70-75度，搅拌约2小时。反应完成后，反应液冷却至室温，将反应液垫硅藻土减压抽滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤2次，每次2.5升。滤液减压浓缩后，向其中加入乙酸乙酯(25升)和饱和食盐水(20升)，并垫硅藻土减压抽滤，滤液分液后，有机相用无水硫酸钠(2.5千克)干燥。将有机相中转移至反应釜中，向其中加入改性硅胶(3.6千克)，加热至60度搅拌16小时。反应液冷却到室温，过滤，滤液减压浓缩。得到黄色粘稠物中加入叔丁基甲醚(4.5升)，50度溶清后，趁热转移到50升反应釜中，并加入正庚烷(13.5升)，升温至60度。关闭加热，打浆液自然降温至20度，搅拌16小时。减压抽滤，滤饼用(叔丁基甲醚/正庚烷＝1/3，2.5升)洗涤，滤饼真空干燥16小时，得到粗产品。在50升反应釜中加入乙醇/正庚烷(1/10，12.5升)，将粗产品加入其中，升温至65度，保温搅拌1小时。关闭加热，打浆自然降温至20度，搅拌16小时。减压抽滤，滤饼用乙醇/正庚烷(1∶10，2升)洗涤，滤饼真空干燥16小时，得化合物I-10。 1HNMR(400MHz，CDCl 3)δ8.90(d，J＝4.8Hz，1H)，8.24(br s，1H)，8.15(s，1H)，7.95(br d，J＝3.8Hz，1H)，7.63(br d，J＝8.2Hz，1H)，7.44(s，1H)，7.32-7.27(m，1H)，6.53(s，1H)，6.47(s，1H)，4.41(t，J＝5.2Hz，2H)，4.20-4.07(m，2H)，3.94-3.84(m，2H)，3.74(t，J＝5.2Hz，2H)，2.25(s，3H)，2.12(ddd，J＝2.6，5.0，7.8Hz，1H)，1.41(dd，J＝4.2，8.0Hz，1H)，1.24(s，9H)，1.08(t，J＝4.4Hz，1H)。
步骤11：化合物I-11
室温下，将甲酸(12升)加入50升反应釜中，加入化合物I-10(2.4千克，4.32摩尔)，内温升至60～70度，搅拌4～5小时。反应完成后，停止加热，反应液冷却至室温，将反应液减压浓缩(45度)。向粗品中加入乙酸乙酯(20升)和水(15升)，加入碳酸氢钠固体调节溶液pH至4～5，分液，有机相用饱和食盐水(10升)洗涤一次，用无水硫酸钠干燥后旋干。转移至烘箱中真空干燥16小时，得化合物I-11。 1HNMR(400MHz，CDCl 3)δ8.87(d，J＝4.8Hz，1H)，8.41(s，1H)，8.17-8.06(m，2H)，7.93(br d，J＝4.4Hz，1H)，7.62-7.52(m，1H)，7.46(s，1H)，7.32-7.21(m，1H)，6.56(s，1H)，6.50(s，1H)，4.64-4.45(m，4H)，4.22-4.03(m，2H)，3.94-3.83(m，2H)，2.25(s，3H)，2.12(ddd，J＝2.6，5.0，7.8Hz，1H)，1.40(dd，J＝4.2，7.8Hz，1H)，1.09(t，J＝4.4Hz，1H)。
步骤12：化合物(I)晶型B
室温下，将乙二醇二甲醚(10.5升)加入50升的反应釜中。加入化合物I-11(2.1千克，3.98摩尔)，搅拌至溶液澄清。降温至5～10度，缓慢加入氢氧化钠(238.85克，5.97摩尔)的纯水(2.1升)溶液，搅拌0.5小时。反应完成后，向反应液中加入乙酸乙酯(20升)和纯水(10升)，分液，有机相用水(10升)洗涤一次，无水硫酸钠干燥。旋蒸有机相，得到的固体转移到烘箱，真空干燥16小时，得式(I)化合物粗品。 1HNMR(400MHz，CDCl 3)δ8.93(d，J＝4.8Hz，1H)，8.18(s，1H)，8.14(s，1H)，7.96(br d，J＝4.8Hz，1H)，7.60(br d，J＝8.2Hz，1H)，7.52(s，1H)，7.32(d，J＝8.2Hz，1H)，6.63(s，1H)，6.57(s，1H)，4.54-4.46(m，2H)，4.20-4.11(m，2H)，4.02-3.96(m，2H)，3.96-3.86(m，2H)，2.29(s，3H)，2.16(ddd， J＝2.6，5.0，7.8Hz，1H)，1.41(dd，J＝4.2，7.9Hz，1H)，1.14(t，J＝4.4Hz，1H)。
室温下，将乙醇(9升)和纯水(9升)加入50升的反应釜中，加入上述(I)化合物粗品(1.880千克，3.76摩尔)，内温升至70-75度，搅拌2h，溶液澄清。关闭加热，溶液自然降温至20度，搅拌16小时。减压抽滤，滤饼用乙醇/水(1∶1，2升)洗涤一次，滤饼真空干燥，32小时，得化合物(I)的B晶型。 1HNMR(400MHz，DMSO-d 6)δ10.70(s，1H)，9.00(d，J＝4.8Hz，1H)，8.37(s，1H)，8.20(d，J＝4.8Hz，1H)，7.75(dd，J＝2.2，8.3Hz，1H)，7.70-7.59(m，1H)，7.35(d，J＝8.4Hz，1H)，6.73(s，1H)，6.57(s，1H)，4.83(t，J＝5.6Hz，1H)，4.30(t，J＝5.2Hz，2H)，4.16-4.00(m，2H)，3.87-3.67(m，4H)，2.24(s，3H)，2.18(ddd，J＝2.6，5.0，7.8Hz，1H)，1.39(dd，J＝3.8，7.8Hz，1H)，0.98(t，J＝4.2Hz，1H)。其XRPD谱图基本如图2所示。
实施例3：式(I)化合物晶型A的制备
室温下，将式(I)化合物晶型B置于铝箔纸中，敞口于湿度大于30％的空气中。放置24小时，至恒重，得式(I)化合物的晶型A，其XRPD谱图基本如图1所示。
实验例4：KF水份测定
反应杯中加入可浸没铂电极的甲醇，在搅拌下用卡尔费休试剂滴定至终点，加入约10毫克的纯水，精确至0.1毫克，搅拌60秒；用卡尔费休试剂滴定至终点，得到卡尔费休试剂的滴定度；水分标定一共3次，并计算相对标准偏差。迅速加入称量好的式(I)化合物晶型A样品约0.1克，加入到上述甲醇溶液中，提取时间为60秒，搅拌时间为60秒；加入卡尔费休试剂滴定至终点，得到样品的水份结果，重复测量两次。
结论：测得晶型A的含水量平均值为3.45％，约合每1分子式(I)化合物中含1分子水。
实施例5：式(I)化合物单晶的制备
实验方法：
将式(I)化合物30毫克，溶解于2mL丙酮中，将溶解好的溶液放入离心管(容量：10mL)中。向此溶液慢慢加入2mL石油醚，两种溶剂上下分层显著，用封口膜封闭管口，开少许蒸发小孔。室温静置10天，待溶剂挥发大部分有晶体析出，收集晶体进行单晶X射线衍射(SC-XRD)检测。
实验结果：
表3式(I)化合物的晶体结构数据和测定参数
表4式(I)化合物晶体的原子坐标(×10 4)和等价各向同性移位参数
表5式(I)化合物化合物晶体的键长 和键角[deg]
表6式(I)化合物晶体的扭转角度[deg]
结论：该单晶的晶胞图见图3，结果表明，该单晶为式(I)化合物的一水合物，结构为N-(3-(2-((1R，5S)-3-氧杂双环[3.1.0]己-1-基)-6-(2-羟基乙氧基)吡啶-4-基)-4-甲基苯基)-2-(三氟甲基)异烟酰胺。
实施例6：式(I)化合物单晶的XRPD
实验目的：采用实施例5中单晶的制备方法制备较大量的晶体，测定其XRPD。
实验方法：
将式(I)化合物100毫克，溶解于2mL丙酮中，将溶解好的溶液放入离心管(容量：10mL)中。向此溶液慢慢加入2mL石油醚，两种溶剂上下分层显著，用封口膜封闭管口，开少许蒸发小孔。室温 静置7天，待溶剂挥发有晶体析出，收集晶体并将晶体粉碎测试XRPD。
本实验X-射线粉末衍射(X-ray powder diffractometer，XRPD)方法：
仪器型号：DX-2700BH
测试条件：详细的XRPD参数如下：
X-ray发生器：Cu，kα，
管电压：40kV，管电流：30mA.
散射狭缝：1mm
探测器狭缝：0.3mm
防散射狭缝：1mm
扫描范围：3-40度
步长：0.02度
扫描时间：0.5秒
实验结果：式(I)化合物单晶的XRPD谱图见图4，解析数据见表7。
表7式(I)化合物单晶的XRPD图解析数据
结论：式(I)化合物的单晶晶型与式(I)化合物的晶型A一致。
实施例7：体外酶活性测试
实验目的：
检测化合物对cRAF酶活性的抑制效应。
实验材料：
表8
实验材料 品牌货号
cRAF蛋白 Creative BioMart-RAF1-416H
MEK1蛋白 Invitrogen-PR3984A
ADP-Glo激酶检测试剂盒 Promega-V9102
Tris-HCl，pH 7.4 Sigma-T2663-1L
MgCl 2 Sigma-63020-1L
NaCl Sigma-S5150
DTT Invitrogen-P2325
Triton X-100 Sigma-X100
H 2O Gibco-15230-162
384中间板 Greiner-781280
384实验板 PerkinElmer-6007299
实验步骤：
(1)化合物准备：
用DMSO将待测化合物及参考化合物稀释到100μM，并用Echo对化合物进行3倍梯度稀释，得到11个浓度梯度的目标板。
(2)实验流程：
1)缓冲液配制：50mM Tris-HCl(pH7.4)，3.5mM MgCl 2，150mM NaCl，1mM DTT，0.02％Triton X-100，H 2O；
2)用缓冲液配置MEK1和ATP的混合液，向384中间板中加入5μL底物混合液；
3)用缓冲液将cRAF酶稀释，向384中间板中加入5μL；
4)用Bravo转移5μL反应混合液到384实验板中，离心15秒后放入23度恒温箱中孵育。
5)1小时后，向384实验板中加入5μL ADP-Glo，震荡，离心15秒后放入23度恒温箱中孵育。
6)40分钟后，向384实验板中加入10μL激酶检测试剂，震荡，离心15秒后放入23度恒温箱中孵育。
7)1小时后，在Envision上读板。
实验结果：表9提供了本发明的化合物对cRAF酶的抑制活性。
表9化合物的体外活性
说明：上述化合物的体外活性测试中(实施例7至实施例11)，使用的均为实施例1制备得到的化合物(I)。
实施例8：Calu-6(Kras Q61K)抗增殖活性实验
实验材料：
表10实验试剂耗材
名称 品牌货号
EMEM培养基 维森特-320-005-CL
胎牛血清 Biosera-FB-1058/500
0.25％胰蛋白酶 源培-S310KJ
双抗(青霉素、链霉素) Procell-PB180120
CellTiter Glo Promega-G7573
细胞板 Coming-3610
表11实验仪器
名称 品牌货号
细胞计数板 求精
Victor Nivo PerkinElmer
实验步骤：
细胞接种：
(1)细胞培养基：89％EMEM，10％胎牛血清和1％青霉素-链霉素；
(2)除去细胞培养瓶中原有培养基，用胰酶消化细胞后计数，用培养基将细胞悬液稀释到铺板所需的细胞密度3.75×10 4个细胞每毫升；
(3)在细胞板四周每孔中加入100μL培养基，向其它孔中加入80μL细胞悬液，放入含5％CO 2的37度培养箱中培养过夜。
加药：
用Echo对化合物进行梯度稀释和加药，然后将细胞板放回到培养箱中培养三天；
读板、分析数据：
加CTG并读板：向细胞板的每个孔中加入20μL CellTierGlo，避光震荡10min，在Victor Nivo上读板。
实验结果：表9提供了本发明化合物对Calu-6细胞的抗增殖活性。
实施例9：HCT-116(Kras G13D)抗增殖活性实验
实验材料：
表12实验试剂耗材
名称 品牌货号
Mc’Coy 5A培养基 BI-01-075-1ACS
胎牛血清 Biosera-FB-1058/500
0.25％胰蛋白酶 源培-S310KJ
双抗(青霉素、链霉素) Procell-PB180120
CellTiter Glo Promega-G7573
细胞板 Corning-3610
表13实验仪器
名称 品牌货号
细胞计数板 求精
Victor Nivo PerkinElmer
实验步骤：
细胞接种：
(1)细胞培养基：89％Mc’Coy 5A，10％胎牛血清和1％青霉素-链霉素；
(2)除去细胞培养瓶中原有培养基，用胰酶消化细胞后计数，用培养基将细胞悬液稀释到铺板所需的细胞密度2.5×10 4个细胞每毫升；
(3)在细胞板四周每孔中加入100μL培养基，向其它孔中加入80μL细胞悬液，放入含5％CO 2的37度培养箱中培养过夜。
加药：
对化合物进行梯度稀释和加药，然后将细胞板放回到培养箱中培养三天；
读板、分析数据：
加CTG并读板：向细胞板的每个孔中加入20μL CellTiterGlo，避光震荡10min，在Victor Nivo上读板。
实验结果：表8提供了本发明化合物对HCT-116细胞的抗增殖活性。
实施例10：HCT116(Kras G13D)ERK磷酸化抑制试验
实验材料：
表14试剂耗材
试剂 品牌货号
人ERK磷酸化蛋白高灵敏检测试剂盒 Cisbio-64AERPEH
RPMI1640培养基 Gibco-22400089
胎牛血清 Hyclone-SV30087.03
96 HTRF微孔板 Cisbio-66PL96025
96微孔板 COSTAR-3599
DMSO Sigma-D2650-100mL
0.05％Trypsin-EDTA Gibco-25300-062
表15主要仪器
仪器 生产厂家 型号
生物安全柜 AIRTECH BSC-1304IIA2
二氧化碳培养箱 Thermo 311
细胞计数仪 BECKMAN Vi-cellXR
酶标仪 PerkinElmer Envision
离心机 Eppendorf Centrifuge 5810R
表16细胞信息
细胞名称 来源 货号
HCT116 ATCC ATCC-HTB-132
实验步骤和方法：
1)复苏细胞并培养至对数生长期，用胰酶消化，种96孔板，放入培养箱中孵育过夜。
2)将DMSO溶解的系列梯度化合物加入96孔板中，放回至培养箱中孵育1小时。
3)取出细胞板，去上清，加入细胞裂解液(含1％的封闭肽)室温孵育裂解30分钟。
4)每孔转移16μL细胞裂解液至HTRF板中，随后加入配置好的抗体混合液4μL。
5)孵育过夜后用Envision读板，根据ratio(Ex665/Ex615荧光强度的比值)得到拟合的曲线并根
据Graphpad的四参数拟合公式Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogEC50-X)*HillSlope))计算得出EC 50。
实验结果：表8提供了本发明化合物对HCT-116 ERK磷酸化抑制活性。
实施例11：Calu-6(Kras Q61K)ERK磷酸化抑制试验
实验材料：
表17试剂耗材
试剂 品牌货号
人ERK磷酸化蛋白高灵敏检测试剂盒 Cisbio-64AERPEH
RPMI1640培养基 Gibco-22400089
胎牛血清 Hyclone-SV30087.03
96HTRF微孔板 Cisbio-66PL96025
96微孔板 COSTAR-3599
DMSO Sigma-D2650-100mL
0.05％Trypsin-EDTA Gibco-25300-062
表18主要仪器
仪器 生产厂家 型号
生物安全柜 AIRTECH BSC-1304IIA2
二氧化碳培养箱 Thermo 311
细胞计数仪 BECKMAN Vi-cellXR
酶标仪 PerkinElmer Envision
离心机 Eppendorf Centrifuge 5810R
表19细胞信息
细胞名称 来源 货号
Calu6 ATCC ATCC-HTB-56
实验步骤和方法：
1)复苏细胞并培养至对数生长期，用胰酶消化，种96孔板，放入培养箱中孵育过夜。
2)将DMSO溶解的系列梯度化合物加入96孔板中，放回至培养箱中孵育1小时。
3)取出细胞板，加入细胞裂解液(含1％的封闭肽)室温孵育裂解30分钟。
4)每孔转移16μL细胞裂解液至HTRF板中，随后加入配置好的抗体混合液4μL。
5)孵育过夜后用Envision读板，根据ratio(Ex665/Ex615荧光强度的比值)得到拟合的曲线并根据Graphpad的四参数拟合公式Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogEC50-X)*HillSlope))计算得出EC 50。
实验结果：表9提供了本发明化合物对Calu-6 ERK磷酸化抑制活性。
结论：式(I)化合物对cRAF酶具有较强的抑制活性，同时对Calu-6细胞和HCT-116细胞具有较好的抗增殖活性和ERK磷酸化抑制活性。
实施例12：小鼠单次静脉与口服给药的药代动力学研究
本实验旨在研究供试化合物(实施例1制备得到)单次静脉及单次口服给药后，化合物在小鼠体内的药代动力学(PK)情况。
样品收集与制备：
静脉注射或口服给药后，采集动物血液样本，记录实际采血时间。血样采集以后，立即转移至贴有标签的含K2-EDTA的离心管中，随后离心处理后取血浆。将血浆转移至预冷的离心管，在干冰中速冻，并储存在-70±10℃超低温冰箱中，直到进行LC-MS/MS分析。
药代动力学数据分析：
使用药动学软件，以非房室模型对化合物的血浆药物浓度数据进行处理。达峰浓度(C max)和达峰时间(T max)以及可定量末时间，从血药浓度-时间图中直接获得。使用对数线性梯形法计算下列药代动力学参数：半衰期(T 1/2)，表观分布容积(V dss)以及清除率(Cl)，0点到末端时间点时间-血浆浓度曲线下面积(AUC 0-last)，初始浓度(C 0)。
实验结果：
表20小鼠单次静脉和口服给药本发明化合物的药代动力学参数
实验结论：式(I)化合物在小鼠中口服吸收较好，具有较低的清除率，半衰期较长，生物利用度较好。
实施例13：式(I)化合物A晶型6个月加速条件下稳定性试验
实验目的：
考察式(I)化合物A晶型在带包装加速条件下的稳定性。
实验仪器：恒温恒湿箱，型号：BSC-400，条件：40℃/75％RH。
实验方法：
取适量式(I)化合物A晶型装入双层低密度聚乙烯袋，每层低密度聚乙烯袋分别扎扣密封，再放入铝箔袋中并热封，放置于加速(40℃/75％RH)条件下，1月、2月、3月、6月后取出检测有关物质、对映异构体、水分和晶型。
表21式(I)化合物A晶型加速试验(40℃/75％RH)研究结果
实验结论：式(I)化合物A晶型在加速试验条件(40℃/75％RH)下放置6个月，各检项均无明显变化，各项检测均符合规定。因此，拟定的包装和贮藏条件下可以保证样品在拟定的有效期内保持稳定。
实施例14：式(I)化合物A晶型长期试验(25℃/60％RH)稳定性
实验目的：
考察式(I)化合物A晶型在带包装加速条件下的稳定性。
实验仪器：恒温恒湿箱，型号：BSC-400，条件：25℃/60％RH。
实验方法：
取适量式(I)化合物A晶型装入双层低密度聚乙烯袋，每层低密度聚乙烯袋分别扎扣密封，再放入铝箔袋中并热封，放置于长期(25℃/60％RH)条件下，3个月和6个月后取出检测有关物质、对映异构体、水分和晶型。
表22式(I)化合物A晶型长期试验(25℃/60％RH)研究结果
实验结论：式(I)化合物A晶型在长期试验条件(25℃/60％RH)下放置6个月，各检项均无明显变化，各项检测均符合规定。因此，拟定的包装和贮藏条件下可以保证样品在拟定的有效期内保持稳定。
实施例15：式(I)化合物无定型的制备
室温下，将式(I)化合物(46克)置于1L圆底烧瓶中，加入二氯甲烷(300mL)，充分溶清后，真空旋蒸干燥，得(I)化合物无定型，其XRPD谱图如图9所示。

Claims (18)

  1. 式(I)化合物N-(3-(2-((1R，5S)-3-氧杂双环[3.1.0]己-1-基)-6-(2-羟基乙氧基)吡啶-4-基)-4-甲基苯基)-2-(三氟甲基)异烟酰胺的晶型A，
    其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征峰：6.03±0.20°、12.00±0.20°、14.36±0.20°、19.72±0.20°。
  2. 根据权利要求1所述的晶型A，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征峰：6.03±0.20°、9.63±0.20°、12.00±0.20°、14.36±0.20°、19.02±0.20°、19.72±0.20°、20.73±0.20°、22.10±0.20°、24.08±0.20°。
  3. 根据权利要求2所述的晶型A，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征峰：6.03±0.20°、7.65±0.20°、9.63±0.20°、12.00±0.20°、14.09±0.20°、14.36±0.20°、14.82±0.20°、15.28±0.20°、15.95±0.20°、16.31±0.20°、17.50±0.20°、19.02±0.20°、19.72±0.20°、20.73±0.20°、22.10±0.20°、23.29±0.20°、24.08±0.20°、25.53±0.20°、26.73±0.20°、27.34±0.20°、28.51±0.20°、29.04±0.20°、31.04±0.20°、33.17±0.20°、33.72±0.20°、34.28±0.20°、39.63±0.20°。
  4. 根据权利要求1～3任意一项所述的晶型A，其X射线粉末衍射图谱如图1所示。
  5. 根据权利要求1～4任意一项所述的晶型A，其为式(I)化合物的一水合物。
  6. 根据权利要求1～5任意一项所述的晶型A，其TGA谱图如图5所示。
  7. 根据权利要求1～6任意一项所述的晶型A，其DSC谱图如图7所示。
  8. 式(I)化合物N-(3-(2-((1R，5S)-3-氧杂双环[3.1.0]己-1-基)-6-(2-羟基乙氧基)吡啶-4-基)-4-甲基苯基)-2-(三氟甲基)异烟酰胺的晶型B，
    其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征峰：6.06±0.20°、12.06±0.20°、20.10±0.20°、21.24±0.20°。
  9. 根据权利要求8所述的晶型B，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征峰：6.06±0.20°、12.06±0.20°、15.94±0.20°、18.95±0.20°、20.10±0.20°、20.74±0.20°、21.24±0.20°、22.20±0.20°、24.20±0.20°。
  10. 根据权利要求9所述的晶型B，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征峰：6.06±0.20°、7.77±0.20°、9.61±0.20°、12.06±0.20°、14.15±0.20°、14.93±0.20°、15.48±0.20°、15.94±0.20°、16.94±0.20°、 17.62±0.20°、18.95±0.20°、20.10±0.20°、20.74±0.20°、21.24±0.20°、22.20±0.20°、23.27±0.20°、24.20±0.20°、25.65±0.20°、26.83±0.20°、27.42±0.20°、28.17±0.20°、28.90±0.20°、30.96±0.20°、31.54±0.20°、37.07±0.20°、37.91±0.20°。
  11. 根据权利要求8～10任意一项所述的晶型B，其X射线粉末衍射图谱如图2所示。
  12. 根据权利要求8～11任意一项所述的晶型B，其TGA谱图如图6所示。
  13. 根据权利要求8～12任意一项所述的晶型B，其DSC谱图如图8所示。
  14. 式(I)化合物N-(3-(2-((1R，5S)-3-氧杂双环[3.1.0]己-1-基)-6-(2-羟基乙氧基)吡啶-4-基)-4-甲基苯基)-2-(三氟甲基)异烟酰胺的无定型物，
  15. 根据权利要求14所述的无定型物，其特征在于，其X射线粉末衍射图谱如图9所示。
  16. 一种药物组合物，其包含权利要求1～15任意一项所述晶型/无定型物及可药用的载体。
  17. 权利要求1～15任意一项所述的晶型/无定型物或权利要求16所述的药物组合物在制备用于治疗RAF激酶突变介导疾病的药物中的应用。
  18. 根据权利要求17所述的应用，其中所述的疾病为肺癌。
CN202280039919.4A 2021-06-04 2022-06-02 一种raf激酶抑制剂的晶型及其制备方法 Pending CN117425650A (zh)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2021106256083 2021-06-04
CN202110625608 2021-06-04
CN2021106256030 2021-06-04
CN202110625603 2021-06-04
CN2022105837093 2022-05-25
CN202210583709 2022-05-25
PCT/CN2022/096983 WO2022253334A1 (zh) 2021-06-04 2022-06-02 一种raf激酶抑制剂的晶型及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN117425650A true CN117425650A (zh) 2024-01-19

Family

ID=84322780

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202280039919.4A Pending CN117425650A (zh) 2021-06-04 2022-06-02 一种raf激酶抑制剂的晶型及其制备方法

Country Status (3)

Country Link
CN (1) CN117425650A (zh)
TW (1) TWI812259B (zh)
WO (1) WO2022253334A1 (zh)

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9242969B2 (en) * 2013-03-14 2016-01-26 Novartis Ag Biaryl amide compounds as kinase inhibitors
CN107074828B (zh) * 2014-09-12 2020-05-19 诺华股份有限公司 用作raf激酶抑制剂的化合物和组合物
US20190175609A1 (en) * 2016-06-10 2019-06-13 Novartis Ag Therapeutic uses of a c-raf inhibitor
WO2019185026A1 (zh) * 2018-03-30 2019-10-03 南京明德新药研发有限公司 作为SGLTs抑制剂的葡糖苷类衍生物及其应用
BR112021022335A2 (pt) * 2019-05-13 2021-12-28 Novartis Ag Formas cristalinas de n-(3-(2-(2-hidroxietoxi)-6-morfolinopiridin-4-il)-4-metilfenil)-2 (trifluorome-til)isonicotinamida como inibidores raf para o tratamento de câncer
EP4071146A4 (en) * 2019-12-06 2023-01-04 Medshine Discovery Inc. BIARYL COMPOUND AS PAN-RAF KINASE INHIBITOR
CN113912591B (zh) * 2020-07-08 2023-10-20 齐鲁制药有限公司 联芳基化合物

Also Published As

Publication number Publication date
TWI812259B (zh) 2023-08-11
WO2022253334A1 (zh) 2022-12-08
TW202304892A (zh) 2023-02-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BR112015002709B1 (pt) Compostos, composição farmacêutica, uso dos mesmos e uso de uma combinação de composto ou composição farmacêutica e um segundo agente profilático ou agente terapêutico
EA038195B1 (ru) Малатная соль n-(4-{[6,7-бис-(метилокси)хинолин-4-ил]окси}фенил)-n'-(4-фторфенил)циклопропан-1,1-дикарбоксамида и ее применение для лечения рака почек и печени
EP2504331B1 (en) Compound, certain novel forms thereof, pharmaceutical compositions thereof and methods for preparation and use
US20180179189A1 (en) Adipate forms and compositions of biaryl inhibitors of bruton's tyrosine kinase
CN112300153A (zh) 一种杂环化合物、药物组合物和用途
WO2016090257A1 (en) Salts and crystalline forms of 6-acetyl-8-cyclopentyl-5-methyl-2((5-(piperazin-1-yl)pyridin-2-yl)amino)pyrido[2,3-d] pyrimidin-7(8h)-one (palbociclib)
CN113912591B (zh) 联芳基化合物
CN114031559A (zh) 基于芳基含氮杂环修饰的5-氟-嘧啶二胺苯甲酸酯及其制备方法与应用
US9884856B2 (en) Crystal form of Dabrafenib mesylate and preparation method thereof
US11352368B2 (en) Salt of fused ring pyrimidine compound, crystal form thereof and preparation method therefor and use thereof
CN113880772B (zh) 一类cdk激酶抑制剂及其应用
KR20160087902A (ko) N-(4-((3-(2-아미노-4-피리미디닐)-2-피리디닐)옥시)페닐)-4-(4-메틸-2-티에닐)-1-프탈라진아민 염의 약제학적으로 허용가능한 결정형 및 이의 용도
CN117425650A (zh) 一种raf激酶抑制剂的晶型及其制备方法
CN113966332A (zh) Cdk9抑制剂的多晶型物及其制法和用途
CN110357905B (zh) 作为蛋白激酶抑制剂的大环类衍生物及其制备方法和用途
CN110066272A (zh) 取代的苯并[d]咪唑类化合物及其药物组合物
CA3130247C (en) Fgfr inhibitor compound in solid form and preparation method therefor
CN114478403A (zh) 一种含芳香胍基类化合物及其制备方法与应用
CN106029664A (zh) 一种酪氨酸激酶抑制剂的苹果酸盐的结晶形式及其制备方法
CN107108602A (zh) 噻唑衍生物的制备方法
RU2810067C2 (ru) Соединение ингибитора FGFR в твердой форме и способ его получения
US11820760B2 (en) Crystalline polymorphs of Bruton's tyrosine kinase inhibitors
CN103819461B (zh) N-[3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯基]-6-[5-[[2-(甲亚磺酰基)乙基]氨基]甲基]-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺多晶型物及其制备方法
WO2022247772A1 (zh) 一种含氧杂环化合物的晶型、其制备方法及应用
WO2021037156A1 (zh) 一种致癌性融合激酶抑制剂的晶型及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination