CN117412748A

CN117412748A - 用于治疗jak介导的病症的洛普昔替尼

Info

Publication number: CN117412748A
Application number: CN202280034425.7A
Authority: CN
Inventors: E·F·阿蒂耶; K·E·巴赫曼; G·C·朱; T·库德里亚科娃; D·C·波利多里; G·V·博尔齐洛
Original assignee: Janssen Pharmaceutica NV
Current assignee: Janssen Pharmaceutica NV
Priority date: 2021-03-11
Filing date: 2022-03-09
Publication date: 2024-01-16

Abstract

本文公开了具有低全身毒性的JAK抑制剂。在一些方面，本公开包括用于治疗由JAK介导的疾病状态、病症和病况的方法，所述疾病状态、病症和病况为诸如胃肠系统癌，包括结直肠癌和家族性腺瘤性息肉病。

Description

用于治疗JAK介导的病症的洛普昔替尼

优先权要求

本申请要求2021年3月11日提交的美国专利申请号63/159,726、2021年3月29日提交的美国临时申请号63/167,287以及2021年8月12日提交的美国临时申请号63/232,356的优先权，这些临时申请中的每个临时申请全文以引用方式并入。

技术领域

本发明涉及JAK抑制剂和包含此类抑制剂的药物组合物的使用方法。设想该化合物和药物组合物可用于预防或治疗由JAK介导的疾病状态、病症和病况。

背景技术

据报道，约三分之一的女性和约二分之一的男性被诊断出癌症，并且约四分之一的男性将死于癌症。参见A.Albini等人，Clin.CancerRes.22(17),4322-27(2016)“Cancerprevention and interception:A new era for chemopreventive approaches”。大量癌症在胃肠道的以下器官中发展：胃、小肠、结肠、直肠和肛门。据报道，胃癌或胃部癌症在最常见癌症的排名中是第四位，并且在世界癌症死亡率的排名中是第二位。G.Bjelakovic等人，The Cochrane Database of Systematic Reviews(3):CD004183(2008)“Antioxidantsupplements for preventing gastrointestinal cancers”。据报道，在美国每年有9,000人患有小肠癌。

据报道，在美国每年诊断出超过22,000例胃癌。据报道，在美国每年诊断出约145,000例结肠癌病例。据报道，在美国每年诊断出超过40,000例直肠癌。在这些癌症中，那些影响结肠或直肠的癌症，称为结直肠癌(“CRC”)，在美国每年占超过180,000例。根据美国癌症协会，预计2018年在美国诊断出140,250例新的结直肠癌病例，并且预计2018年在美国发生50,600例由于结直肠癌病例引起的死亡。胃、小肠和大肠(后者包括结肠、直肠和肛门)在这里统称为胃肠系统(“SIS”)，并且任何此类器官中的癌症都称为胃肠系统癌(“SISC”)。预防SISC的发作，特别是CRC的发作，无论是关于其首次出现还是在复发阶段，都是未满足的医疗需要。这种预防作用在本文中称为SISC拦截，或当指结直肠癌拦截时称为CRC拦截。

FAP是最常见的腺瘤息肉综合征。它是常染色体显性遗传病症，其特征在于遍及结肠的数百至数千腺瘤性息肉的早期发作。如果不进行治疗，则几乎所有患有该综合征的患者到35岁至40岁都发展出结肠癌。预防性结肠切除术是护理标准，但是患者仍然处于十二指肠息肉和直肠息肉恶性转换的风险中。非选择性和选择性环加氧酶抑制剂(诸如舒林酸(sulindac)或塞来昔布(celecoxib))的多项研究显示，抗炎剂可以抑制结直肠腺瘤息肉的形成。(R.K.S.Phillips等人Gut 50,857-860(2002)“A randomized,double blind,placebo controlled study ofcelecoxib,a selective cyclooxygenase 2inhibitor,onduodenal polyposis in familial adenomatouspolyposis”；P.Rice等人Cancer Res.63,616-620(2003)“Sulindac sulfide inhibits epidermal growth factor-inducedphosphorylation of extracellular-regulated kinase 1/2 and Bad in human coloncancer cells”)与这些试剂相关的毒性妨碍了它们的进一步开发。对于减少息肉负荷、延迟或消除结肠切除术的需要、以及在患有FAP的个体中拦截腺癌发展的新治疗选择存在高度未满足的需要。来自FAP患者的息肉以及导致散发性CRC的息肉显示出与白细胞介素(IL)-23/IL-17/Janus激酶(JAK)/STAT3通路的信号转导与转录活化因子相关的炎症。与正常出现的邻近非腺瘤上皮及其免疫周围相比，腺瘤的上皮伴有明显增加的免疫浸润物。这种浸润物的特征在于由IL-17和p-STAT3表达显示的STAT3通路活化。此外，腺瘤性上皮本身可以被聚焦激活。具有高度发育异常的腺瘤可显示更强的活化IL-17和p-STAT3免疫浸润物和更广泛分布的上皮p-STAT3表达。这些发现表明这种炎症途径导致进一步的诱变和肿瘤发展。还有报道称在鼠类模型中，免疫和上皮STAT3活化都促成肿瘤发生。E.C.Wick等人，Inflamm.Bowel Dis.20(5),821-34(2014)“Stat3 activation in murinecolitis inducedbyenterotoxigenicBacteroidesfragilis”。具体地，IL-23与CRC中的肿瘤生长和进展有联系，并且具有高度发育异常的腺瘤显示升高水平的IL-17A和磷酸化STAT3。(J.L.Langowski等人Nature 442(7101),461-465(2006)“IL-23promotes tumourincidence and growth”)。胃肠道中的过度炎症反应是由炎症细胞因子介导的，诸如肿瘤坏死因子(TNF)、干扰素-γ(IFNγ)、IL-1、IL-6、IL-12、IL-21和IL-23，这些炎症细胞因子对先天和适应性免疫系统的细胞发挥作用，这些细胞包括T淋巴细胞和B淋巴细胞、上皮细胞、巨噬细胞和树突细胞(DC)(M.Coskun等人，以上引用的Pharmacological Research 76,1-8(2013)；S.Danese等人，Am JPhysiol GastrointestLiverPhysiol.310,G155-162(2016)“JAKinhibitionusing tofacitinib for inflammatory bowel diseasetreatment:a hub for multiple inflammatory cytokines”；NeurathM.Nat.Rev.Immunol.14,329-342(2014)“Cytokines in inflammatory bowel disease”；S.Vermeire等人，Gastroenterology 150,S1267(2016)“Filgotinib(GLPG0634),an OralJAK1Selective Inhibitor,Induces Clinical Remission in Patients With Moderate-to-Severe Crohn's Disease:Results From the Phase 2FITZROY Study InterimAnalysis[DDW文摘812c]”)JAK家族即JAK1、JAK2、JAK3和Tyk2是在对许多此类细胞因子的反应中起关键作用的非受体酪氨酸激酶(J.O'Shea,N.Engl.J.Med.368,161-170(2013)“JAKs and STATs in immunity,immunodeficiency,and cancer”)。受体连接后，相关的JAK同型二聚体或异二聚体被磷酸化和活化，使得STAT转录因子家族的后续募集、磷酸化和活化成为可能。磷酸化STAT易位至细胞核并诱导参与FAP发病机制的几种趋化因子、细胞因子和蛋白酶的基因转录(M.Coskun等人，以上引用的Pharmacological Research 76,1-8(2013))。这种JAK-STAT通路是在GI癌症的发病机制中起作用的许多细胞因子的信号传导机制。(M.Li等人PLoS One 10(5),e0127356(2015)“Prognosticroleofphospho-STAT3inpatientswith cancers of the digestive system:a systematic review and meta-analysis”)。JAK-STAT通路对于多种炎症细胞因子反应是常见的，因此它提供了有吸引力的治疗靶标，以预防与FAP相关的过度炎症反应和与散发性CRC相关的腺瘤，并恢复粘膜稳态以便试图拦截GI道中腺癌的发展。研究和销售的口服的全身可生物利用的pan-JAK抑制剂具有各种明显限制高(更高)剂量的脱靶效应，诸如升高的脂质(低密度脂蛋白和高密度脂蛋白)和血细胞减少症(包括中性白细胞减少症、淋巴细胞减少症和贫血)，以及升高的肝酶。因此，受限暴露于肠道的JAK的治疗性抑制作用将提供在JAK驱动的肠道疾病(包括FAP、SISC和CRC)中实现功效的机会。

参考图1，口服药物原则上可遵循胃肠道从口腔到食道(1)，到胃(2)穿过十二指肠(3)到空肠(4)，然后到回肠(5)，并且然后到结肠(6)。此类不同部分的相对吸收面积对于空肠(4)而言为大约60％，对于回肠(5)而言为大约26％，对于结肠(6)而言为大约13％。通过这些不同胃肠区域吸收可导致全身分布发生，这继而可导致不可取的副作用。胃肠道具有非常大的表面积。参见，例如，H.F.Helander等人，Surface area ofthe digestive tract-revisited,Scandinavian Journal ofGastroenterology 49(6),681-89(2014)；以及K.J.Filipski等人，Intestinal Targeting ofDrugs:Rational Design Approaches andChallenges Current Topics in Medicinal Chemistry 13,776-802(2013)。此类广泛的吸收表面积有利于物质的全身分布，所述物质可穿过肠道各个部分的壁并进入血流，并且继而有可能导致全身分布的物质的不希望的副作用。出于简化的说明性目的，全身分布由图1中的虚线箭头表示为透过结肠壁，但是此类分布不限于结肠壁，因为其还可通过如图1所示的胃肠道其他部分的壁发生，诸如小肠的那些壁。还应当理解，图1中的虚线箭头表示胃肠道之外的全身分布，因为已知这种全身分布参照胃肠道生理学而发生，并且此类虚线箭头仅以示意性说明方式指代此类全身分布。对于肠组织、穿过肠组织的运输、以及代谢的说明，参见，例如，Current Topics inMedicinal Chemistry 13，777-80(2013)，如上文所引用的。

因为一些已知的JAK抑制剂具有与其全身效应相关的不利影响，所以希望找到新的JAK抑制剂作为用于治疗和预防肠道疾病(包括FAP、SISC和CRC)的活性物质。

发明内容

本文公开了具有低全身毒性的JAK抑制剂。在一些方面，本发明包括由式I化合物表示的JAK抑制剂：

2-(1-((1r,4r)-4-(氰甲基)环己基)-1,6-二氢咪唑并[4,5-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-N-(2-羟基-2-甲基丙基)乙酰胺，

或其药学上可接受的盐、溶剂化物和多晶型物，以及使用式I化合物治疗由JAK介导的疾病状态、病症和病况的方法。术语“式I化合物”意在涵盖式I化合物或其药学上可接受的盐，或式I化合物或其药学上可接受的盐的溶剂化物，或任何前述化合物的多晶型物或共晶体，无论是无溶剂形式还是如本文所述的任何一种水合形式和/或溶剂化形式，下文称为“式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和多晶型物”。式I化合物也称为“活性剂”。

本发明的方面涉及式I化合物，含有式I化合物的药物组合物，使用它们作为JAK抑制剂的方法以及使用它们治疗由JAK介导的疾病状态、病症和病况的方法。

在一些方面中，治疗或预防胃肠系统癌(SISC)的发作，特别是结直肠癌(CRC)的发作的方法包括向受试者施用包含治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和多晶型物的组合物。

在一些方面，治疗或预防患有家族性腺瘤息肉病(“FAP”)的受试者的方法包括向受试者施用包含治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和多晶型物的组合物。

本发明的方面表现出具有局部GI效应以及较低或可忽略不计的全身效应的pan-JAK抑制效应。此外，具有此类特征的本发明的方面可口服。

由以下具体实施方式和通过实施本发明，本发明的附加方面、特征和优点将显而易见。

附图说明

图1.人胃肠道的一部分的示意图，其以不按比例拉伸渲染的形式示出。十二指肠(3)、空肠(4)和回肠(5)(全部均示意性地示出)在胃(2)和食道(1)之后形成小肠。大肠包括结肠(6)，其继而包括盲肠(7)和阑尾(未示出)、升结肠、横结肠、降结肠、乙状结肠(环同样未示出)和直肠(11)。横结肠是包含在右(8)结肠弯曲和左(9)结肠弯曲之间的部分，从盲肠(7)延伸到右结肠弯曲(8)的升结肠，从左结肠弯曲(9)延伸到直肠(11)的降结肠。为了方便起见，参考结肠示出了各种分布图案，但它们也可指胃肠道的其他部分。出于简化的说明性目的，全身分布由图1中的虚线箭头表示为透过结肠壁，但是此类分布不限于结肠壁，因为其还可通过如图1所示的胃肠道其他部分的壁发生，诸如小肠的那些壁。出于简化的示例性目的，具有一些组织渗透的分布由图1中的实线箭头表示为穿透结肠组织，但此类穿透并不限于结肠组织，因为其也可在图1所示胃肠道的其他部分，诸如小肠的组织中发生。根据本发明的JAK抑制剂的实施方案的效果示例性地示为破坏JAK/STAT信号传导通路，否则其将导致JAK介导的病症，诸如与炎性肠病(“IBD”)或结直肠癌相关的炎症。

图2.示出了式I化合物的实施方案的制备/互相转化的示意图。

图3.式I化合物的以下实施方案的高通量X射线粉末衍射(HT-XRPD)图案的叠加，从底部至顶部：1s，2(通过在室温下在1,4-二氧六环中平衡获得)，3b(通过在环己酮中热循环获得)，1b+4(通过在甲醇/水(50/50，体积/体积)中以μL规模进行冷却结晶获得)，5(通过在氯仿中热循环获得)，6(通过在乙腈中以mL规模进行冷却结晶获得)，7(由1s+7获得，继而通过在庚烷中进行溶剂平衡获得)，7(通过1s+7的去溶剂化获得，继而在庚烷中进行溶剂平衡获得)，8(通过循环差示扫描量热法由实施方案5的去溶剂化获得)，以及9(通过循环差示扫描量热法由实施方案2的去溶剂化获得)。

图4.式I化合物的以下实施方案的高通量X射线粉末衍射(HT-XRPD)图案的叠加，从底部到顶部：1s(原料)，1a(在暴露于加速老化条件(AAC)(40℃和70％相对湿度)之后获得，实施方案1s的多种样品形式)，1b(通过在甲苯中在室温下进行溶剂平衡获得)，1c(通过在乙酸乙酯/1,4-二氧戊环(50/50，体积/体积)中以μL规模进行冷却结晶获得)，1d(通过在乙腈/氯仿(50/50，体积/体积)中以μL规模冷却结晶获得)，1e(通过在乙酸乙酯/1,4-二氧戊环(50/50，体积/体积)中以μL规模进行冷却结晶获得)，1f(通过在对二甲苯中在室温下进行溶剂平衡获得)，1g(通过在苯甲醚中在50℃处进行溶剂平衡获得)，1h(通过在对二甲苯中以μL规模进行冷却结晶获得)。

图5.式I化合物的以下实施方案的高通量X射线粉末衍射(HT-XRPD)图案的叠加，从底部至顶部：1s,3b(通过在环己酮中热循环获得)，3c(通过在1,4-二氧六环中以μL规模进行冷却结晶获得)，3d(通过在四氢呋喃中以μL规模进行冷却结晶获得)和3e(通过在异丁醇中热循环获得)。

图6.在暴露于40℃和70％相对湿度(“1s 70RH”)四天后以及在暴露于25℃和100％相对湿度(“10”)四天之后，呈其初始形式(“1s”)的实施方案1s的HR-XRPD衍射图。

图7A-图7E.实施方案11(A)；实施方案12(B)；实施方案13(C)；实施方案14(D)；和实施方案11b(E)的X-射线粉末衍射(XRPD)图案。

图8.式I化合物的以下实施方案的X-射线粉末衍射(XRPD)图案的叠加，从底部至顶部：实施方案17、实施方案18、实施方案15和实施方案16。

图9.实施方案19的调制DSC(“mDSC”)曲线，示出了在115.3℃的玻璃化转变点(Tg)(纵坐标轴中上“Rev”是指“可逆”)。

图10A-图10B.(A)实施方案18的TGA(热重量分析)，示出了在30℃和170℃之间的6.5％重量/重量的损耗；(B)实施方案18的DSC(差示扫描量热法)，示出了在45℃和90℃之间的52.8J/g的吸热、140.6℃处的31.0J/g的吸热、168.8℃处的24.3J/g的放热以及200.0℃处的31.3J/g的吸热。

图11.式I化合物的以下实施方案的X-射线粉末衍射(XRPD)图案的叠加，从底部至顶部：实施方案20和实施方案21。

图12A-图12B.(A)实施方案17的TGA，示出了在30℃和100℃之间的4.2％重量/重量的损耗；(B)实施方案17的DSC，示出了在45℃和100℃之间的90.3J/g的吸热、143.8℃处的35.5J/g的吸热、168.3℃处的1.6J/g的吸热、178℃处的3.8J/g的放热以及200.0℃处的9.2J/g的吸热。

图13.式I化合物的以下实施方案的X-射线粉末衍射(XRPD)图案的叠加，从底部至顶部：实施方案31、实施方案30、实施方案17、实施方案29、实施方案16、实施方案26、实施方案25、实施方案18、实施方案24、实施方案23、实施方案27和实施方案22。

图14.式I化合物的以下实施方案的X-射线粉末衍射(XRPD)图案的叠加，从底部至顶部：实施方案32、实施方案33、实施方案23、实施方案34、实施方案35、实施方案36、实施方案25、实施方案38、实施方案17、实施方案39和实施方案28。

图15.式I化合物的以下实施方案的X-射线粉末衍射(XRPD)图案的叠加，从底部至顶部：实施方案46、实施方案45、实施方案44、实施方案43、实施方案42、实施方案41、实施方案40和实施方案37。

图16.式I化合物的以下实施方案的X-射线粉末衍射(XRPD)图案的叠加，从底部至顶部：实施方案53、实施方案52、实施方案51、实施方案50、实施方案49、实施方案48和实施方案47。

图17A-图17B.(A)实施方案11的TGA，示出了在155℃和185℃之间的4.7％重量/重量的损耗；(B)实施方案11的DSC，示出了由于溶剂损耗而在167.8℃处的57.8J/g的第一吸热以及由于样品熔融而在194.5℃处的90.8J/g的第二吸热。

图18.实施方案11的重量法蒸气吸附(GVS)等温曲线图，示出了0％至90％RH之间的0.66％的质量变化。纵轴上的质量变化是参考起始样品的质量而言的。

图19A-图19B.(A)实施方案6的TGA，示出了在高于260℃的温度下的重量损耗，重量损耗被解释为与样品劣化相关；(B)实施方案6的DSC，示出了由于样品熔融而在194.4℃处的95.8J/g的吸热。

图20A-图20B.(A)实施方案8的TGA，示出了在40℃和240℃之间的1.4％重量/重量的损耗，这对应于0.07mol的1,4-二氧六环的损耗；(B)实施方案8的DSC，示出了由于样品熔融而在199.7℃处的58.6J/g的吸热。

图21A-图21B.(A)实施方案2的TGA，示出了在75℃和110℃之间的7.4％重量/重量的损耗、在110℃和130℃之间的11.9％重量/重量的损耗、在130℃和165℃之间的2.0％重量/重量的损耗以及在165℃和210℃之间的2.5％重量/重量的损耗；(B)实施方案2的DSC，示出了92.8℃处的86.2J/g的吸热、111.5℃处的11.1J/g的吸热、149.0℃处的45.5J/g的吸热、165.2℃处的20.6J/g的放热、177.1℃处的3.7J/g的吸热、200.2℃处的43.0J/g的吸热以及220.6℃处的29.3J/g的吸热。

图22A-图22B.(A)实施例9的TGA；(B)实施例9的DSC，示出了221.8℃处的104.4J/g的吸热。

图23A-图23B.(A)实施方案16的TGA，示出了在30℃和105℃之间的5.2％重量/重量的损耗；(B)实施方案16的DSC，示出了在35℃和90℃之间的48.4J/g的吸热、147.0℃处的41.8J/g的吸热、166.6℃处的1.0J/g的吸热、180.7℃处的4.4J/g的放热以及201.1℃处的7.7J/g的吸热。

图24.实施方案11的X-射线粉末衍射(XRPD)(标记为“11”)和实施方案11在可变温度(VT)-XRPD实验之后的X-射线粉末衍射(XRPD)(标记为“VT后11”)以及实施方案6的X-射线粉末衍射(XRPD)。

图25.1s形式的式I化合物的X射线粉末衍射(XRPD)图案。

具体实施方式

如本文所用，术语“包括”、“含有”和“包含”是以其开放的、非限制性的意思使用。

本文给出的任何式旨在表示具有该结构式所示的结构的化合物以及某些变型或形式。某些结构可作为互变异构体存在。另外，还设想本发明的此类化合物的无定形形式、水合物、溶剂化物、多晶型物和假多晶型物、以及它们的混合物作为本发明的一部分。本发明的方面呈无溶剂形式或如本文所示的水合形式和/或溶剂化形式中的任一种。

如本文所用，术语“约”在紧邻数值之前时意指该值的正或负10％的范围，例如，“约50”意指45至55，“约25,000”意指22,500至27,500等，除非本公开的上下文另有说明，或与此类解释不一致。

术语“施用(administer)”或“施用的(administered)”或“施用(administering)”是指通过根据本公开的本领域技术人员已知的任何方法向受试者施用式I化合物或药物组合物，诸如通过肌内、皮下、口服、静脉、皮肤、粘膜(例如，肠)、鼻内或腹膜内施用途径。在具体的方面中，本发明的药物组合物向受试者口服施用。

术语“受试者”意指任何动物，具体意指哺乳动物，最具体意指人，将通过或者已经通过根据本发明的实施方案的方法对其进行治疗。如本文所用，术语“哺乳动物”涵盖任何哺乳动物。哺乳动物的示例包括但不限于奶牛、马、绵羊、猪、猫、狗、小鼠、大鼠、兔子、豚鼠、非人灵长类(NHP)(诸如，猴子或猿)、人等，更具体地包括人。

术语“抑制剂”是指减少、预防、灭活、脱敏或下调JAK表达或活性的化合物。

术语“治疗有效量”是指包括本发明结晶形式在内的活性化合物或药剂的量，该量可引起研究者、兽医、医生或其他临床医生所追求的组织系统、动物或人的生物学或医学响应，这包括降低或抑制酶或蛋白质活性，或改善症状，减轻病况，减缓或延迟疾病进展，或预防疾病。

如本文所用，在一个实施方案中，术语任何疾病、病况、综合征或病症的“治疗”是指改善疾病、病况、综合征或病症(即，减缓或阻止或减少疾病或其临床症状中的至少一种的发展)。在另一个实施方案中，“治疗”是指减轻或改善至少一种身体参数，包括患者可能无法察觉的那些。在另一个实施方案中，“治疗”是指在身体上(例如，可察觉的症状的稳定)、生理上(例如，身体参数的稳定)或者两者兼有地调节疾病、病况、综合征或病症。在又一个实施方案中，“治疗”是指预防或延缓疾病、病况、综合征或病症的发作或发展或进展。

“药学上可接受的盐”是化合物的盐，该盐是无毒的、生物学上可耐受的或其他方面在生物学上适于施用于受试者。一般参见以下文献：S.M.Berge等人，“PharmaceuticalSalts”,J.Pharm.Sci.66，1-19(1977)，和Handbook of Pharmaceutical Salts,Properties,Selection,and Use，Stahl和Wermuth编辑，Wiley-VCHandVHCA，Zurich，2002。式I化合物可具有足够酸性的基团、足够碱性的基团或这两种类型的官能团，并因此与多种无机碱或有机碱以及无机酸和有机酸反应以形成药学上可接受的盐。药学上可接受的盐的示例包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1,4-二酸盐、己炔-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯代苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐和扁桃酸盐。

本文公开了式I化合物的组合物和使用它们治疗由JAK家族的酪氨酸激酶中的一种或多种介导的疾病状态、病症和病况的方法。在一些方面，该方法包括向受试者施用组合物，该组合物包含有效量的具有式I的结构的化合物2-(1-((1r,4r)-4-(氰甲基)环己基)-1,6-二氢咪唑并[4,5-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-N-(2-羟基-2-甲基丙基)乙酰胺：

或其药学上可接受的盐、溶剂化物和多晶型物。

本文还公开了治疗或预防患有胃肠系统癌或结直肠癌的受试者的方法。该方法包括向受试者施用包含治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和多晶型物的组合物。胃、小肠和大肠(后者包括结肠、直肠和肛门)在这里统称为胃肠系统(“SIS”)，并且任何此类器官中的癌症都称为胃肠系统癌(“SISC”)。结肠和直肠中任一者中的癌症都称为结直肠癌(“CRC”)。

本文还公开了治疗或预防受试者的恶变前病况的方法，这些方法包括向受试者施用包含治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和多晶型物的组合物。SISC之前的恶变前病况可存在于胃肠道，特别是结肠和/或直肠的多个区域的任何一个区域中。有时此类病况以息肉的形式表现，息肉可以少量存在(如在其散发性发作时)、大量存在(如在家族性腺瘤息肉病(“FAP”)中)或根本不存在(如在某些形式的遗传性非息肉性结直肠癌(也称为Lynch综合征)中)。

本文还公开了治疗、延迟或预防患有任何SISC相关的癌症易感综合征诸如家族性腺瘤息肉病(“FAP”)的受试者的任何疾病表现的方法。该方法包括延迟对外科手术诸如结肠切除术的需要，外科手术预防性地去除结肠以便降低未来结直肠癌发展的风险。该方法包括向受试者施用包含治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、其溶剂化物和其多晶型物的组合物。本文使用术语FAP涵盖有时称为其亚型的疾病，诸如衰减型家族性腺瘤息肉病(“AFAP”)。除非另有说明或明确称为任何特定亚型，否则术语FAP包括诸如AFAP的亚型。

在一些方面，一种减少受试者中的息肉数目或息肉负荷(后者通过考虑息肉的数目和个体大小两方面来定义)的方法包括向该受试者施用包含治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和多晶型物的组合物。在一些方面，减少息肉的数目包括在施用式I化合物后减少结肠、直肠、术后J袋和/或十二指肠中的息肉的数目。在一些方面，减少结肠、直肠、术后J袋和十二指肠中直径≥2mm的息肉的数目。在一些方面，减少结肠、直肠、术后J袋和/或十二指肠中直径≥5mm的息肉的数目。在某些方面，施用后息肉的数目减少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更多、或其间的任何范围。

本文还公开了治疗或预防处于疾病演化的任何阶段的SISC发作，特别是CRC发作的方法，这些方法包括向受试者施用包含治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和多晶型物的组合物。

本文还公开了治疗或预防受试者的胃肠系统中的任何慢性或急性炎症病症的方法，这些方法包括向受试者施用包含治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和多晶型物的组合物。

本发明的其他方面涉及式I化合物用于向患有或已经患有散发性胃肠息肉形成、FAP(或其他遗传性息肉病综合征)和Lynch综合征(或其他遗传性非息肉病综合征)中的至少一种的受试者施用的用途。

本发明的其他方面是通过施用包含治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和多晶型物的组合物来治疗患有或诊断有至少一种形式的局部或转移性SISC的受试者的方法，该至少一种形式的局部或转移性SISC包括胃癌、小肠癌、结直肠癌和肛门癌中的至少一种。

本发明的其他方面包括一种在受试者中进行SISC拦截的方法，该方法包括施用包含治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和多晶型物的组合物。进一步的方面由前述中的任何一者给出，其中SISC拦截是FAP SISC拦截。进一步的方面由前述方面中的任何一者给出，其中SISC拦截是Lynch综合征SISC拦截。进一步的方面由前述方面中的任何一者给出，其中SISC拦截是散发性息肉拦截。进一步的方面由前述方面中的任何一者给出，其中SISC拦截是胃部癌症拦截。进一步的方面由前述方面中的任何一者给出，其中SISC拦截是小肠癌拦截。进一步的方面由前述方面中的任何一者给出，其中SISC拦截是肛门癌拦截。

在一些SISC拦截场景中，可期望沿整个或大部分肠道进行药物递送。在其他场景中，可期望增加胃肠道的任何给定部分处的局部浓度。在其他场景中，在肠道中的不同位点处的这两种递送形式的组合可能是期望的。

式I化合物的治疗有效剂量包括约1mg至约1000mg、10mg至约1000mg的剂量范围，或其中任何特定的量或范围，尤其是约1mg至约100mg、10mg至约100mg、或其中任何特定的量或范围。在本发明的一些方面，剂量范围为约1mg至约5mg。在本发明的一些方面，剂量范围为约5mg至约10mg。在本发明的一些方面，剂量范围为约10mg至约15mg。在本发明的一些方面，剂量范围为约15mg至约20mg。在本发明的一些方面，剂量范围为约20mg至约25mg。在本发明的一些方面，剂量范围为约25mg至约30mg。在本发明的一些方面，剂量范围为约35mg至约40mg。在本发明的一些方面，剂量范围为约45mg至约50mg。在本发明的一些方面，剂量范围为约55mg至约60mg。在本发明的一些方面，剂量范围为约65mg至约70mg。在本发明的一些方面，剂量范围为约75mg至约80mg。在本发明的一些方面，剂量范围为约85mg至约90mg。在本发明的一些方面，剂量范围为约95mg至约100mg。在本发明的一些方面，剂量范围为约30mg至约1620mg。在本发明的一些方面，剂量范围为约50mg至约90mg。在本发明的一些方面，剂量范围为约50mg至约80mg。在本发明的一些方面，剂量为约50mg。在本发明的一些方面，剂量为约55mg。在本发明的一些方面，剂量为约60mg。在本发明的一些方面，剂量为约65mg。在本发明的一些方面，剂量为约70mg。在本发明的一些方面，剂量为约75mg。在本发明的一些方面，剂量为约80mg。在本发明的一些方面，剂量为约85mg。在本发明的一些方面，剂量为约90mg。在本发明的一些方面，剂量为约95mg。在本发明的一些方面，剂量为约100mg。在本发明的一些方面，每个剂量是日剂量。在本发明的一些方面，剂量需要每天多次施用，例如每天两次或每天三次。例如，通过每天两次施用50mg的剂量来实现100mg的施用；通过每天两次施用65mg的剂量来实现130mg的施用；通过每天两次施用75mg的剂量来实现150mg的施用；通过每天两次施用100mg的剂量来实现200mg的施用；通过每天两次施用150mg的剂量来实现300mg的施用；通过每天两次施用200mg的剂量来实现400mg的施用；并且通过每天两次施用300mg的剂量来实现600mg的施用。

在一些方面，式I化合物为选自形式1s、1a、1b、1c、1d、1e、1f、1g、1h、2、3b、3c、3d、3e、5、6、7、8、9、10、11、11b、12、15、16、17、18、19、20、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52和53的结晶形式。

在一些方面，治疗或预防患有家族性腺瘤息肉病(“FAP”)的受试者的方法包括向受试者施用约1mg至约100mg治疗有效剂量的式I化合物。在一些方面，施用是每天一次或每天两次。在一些方面，治疗FAP包括减少所述受试者中的息肉负荷。在一些方面，减少息肉负荷包括减小息肉的数目和/或减小息肉的大小。

在一些方面，治疗或预防先前已接受疗法或当前正在接受FAP疗法的受试者的FAP的方法包括向受试者施用约1mg至约100mg的治疗有效剂量的式I化合物。在一些方面，该疗法可以是手术、放射疗法、Cox-2抑制剂、非甾体抗炎药(NSAID)或化学疗法。

在一些方面，治疗或预防患有SISC的受试者的方法包括向受试者施用约1mg至约100mg治疗有效剂量的式I化合物。在一些方面，施用是每天一次或每天两次。在一些方面，治疗或预防SISC包括减少所述受试者中的息肉负荷。在一些方面，减少息肉负荷包括减小息肉的数目和/或减小息肉的大小。

在一些方面，治疗或预防先前已接受疗法或当前正在接受疗法的受试者的SISC的方法包括向受试者施用约1mg至约100mg的治疗有效剂量的式I化合物。在一些方面，该疗法可以是手术、放射疗法、化学疗法、EGFR抑制剂、VEGF抑制剂和检查点抑制剂。

在一些方面，治疗或预防先前已接受疗法或当前正在接受疗法的受试者的CRC的方法包括向受试者施用约1mg至约100mg的治疗有效剂量的式I化合物。在一些方面，该疗法可以是手术、放射疗法、化学疗法、EGFR抑制剂、VEGF抑制剂和检查点抑制剂。

在一些方面，治疗或预防患有CRC的受试者的方法包括向受试者施用约1mg至约100mg治疗有效剂量的式I化合物。在一些方面，施用是每天一次或每天两次。在一些方面，治疗或预防CRC包括减少所述受试者中的CRC恶性肿瘤和/或相关的息肉负荷。在一些方面，减少息肉负荷包括减小息肉的数目和减小息肉的大小。在一些方面，降低息肉参数括减小息肉的数目或减小息肉的大小。

在一些方面，预防受试者中CRC复发的方法包括向受试者施用约1mg至约100mg的治疗有效剂量的式I化合物。

在一些方面，预防受试者中FAP相关息肉病复发的方法包括向受试者施用约1mg至约100mg的治疗有效剂量的式I化合物。

在一些方面，预防受试者中FAP的症状进展的方法包括向受试者施用约1mg至约100mg的治疗有效剂量的式I化合物。

在一些方面，延迟受试者中FAP的症状进展的方法包括向受试者施用约1mg至约100mg的治疗有效剂量的式I化合物。

在一些方面，在已经诊断患有肠易激疾病(IBD)的受试者中预防SISC的方法包括向受试者施用约1mg至约100mg的治疗有效剂量的式I化合物。在一些方面，IBD可以是溃疡性结肠炎或克罗恩病(Crohn’sdisease)。

在一些方面，在先前已经针对癌症进行诊断的受试者中预防SISC的方法包括向受试者施用约1mg至约100mg的治疗有效剂量的式I化合物。在一些方面，该癌症可以是乳腺癌、卵巢癌、子宫癌或腹部癌。

在一些方面，式I化合物作为预防措施或作为拦截施用以治疗处于发展CRC、SISC或FAP的高风险的受试者。高风险可能是由于诸如肠易激综合征、特定肠道微生物成分的存在、结直肠癌家族史、结直肠癌既往史、在结肠镜检查期间发现息肉或癌前病变等因素，或诸如KRAS、TP53、EGFR、STK11(LKB1)、PTEN、BMPR1A、SMAD4(MADH/DPC4)、MLH1、MSH2、MSH6、PMS2、EPCAM、MUTYH(MYH)、POLD1、POLE和/或APC基因中的突变等其他遗传因素。

在一些方面，在处于高风险组中的受试者中预防FAP或CRC的方法包括向受试者施用约1mg至约100mg的治疗有效剂量的式I化合物。

在一些方面，预防恶变前病况变成恶性病况的方法包括向受试者施用约1mg至约100mg的治疗有效剂量的式I化合物。在一些方面，恶变前病况可以是腺瘤性息肉的存在。在一些方面，恶变前病况可以是Lynch综合征。在一些方面，恶变前病况可以是早期CRC和腺瘤。

在一些方面，治疗肠道中的过度炎症反应的方法包括向受试者施用约1mg至约100mg的治疗有效剂量的式I化合物。

在一些方面，治疗或预防受试者患结直肠癌的方法包括向受试者施用约50mg至约100mg的治疗有效剂量的式I化合物(结晶形式1s)。在一些方面，施用是每天一次或每天两次。

在一些方面，治疗或预防受试者患结直肠癌的方法包括向受试者施用约10mg至约50mg的治疗有效剂量的式I化合物(结晶形式1s)。在一些方面，施用是每天一次或每天两次。

在一些方面，治疗或预防受试者患结直肠癌的方法包括向受试者施用约30mg至约50mg的治疗有效剂量的式I化合物(结晶形式1s)。在一些方面，施用是每天一次或每天两次。

在一些方面，治疗或预防受试者患结直肠癌的方法包括向受试者施用约50mg至约100mg的治疗有效剂量的式I化合物(结晶形式11)。在一些方面，施用是每天一次或每天两次。

在一些方面，在需要治疗的受试者中治疗受JAK酪氨酸激酶活性的抑制影响的病症或病况的方法，包括以足以在结肠组织中实现约20ng/g至约20,000ng/g的浓度的量施用式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物。在一些方面，施用实现约20ng/g至约15,000ng/g、约20ng/g至约10,000ng/g、约20ng/g至约8,000ng/g、约20ng/g至约6,000ng/g、约20ng/g至约4,000ng/g或约20ng/g至约1,000ng/g的组织浓度。在一些方面，该病症或病况是结直肠癌或FAP。

在一些方面，在需要治疗的受试者中治疗受JAK的抑制影响的病症或病况的方法，包括以足以在直肠组织中实现约20ng/g至约20,000ng/g的浓度的量施用式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物。在一些方面，施用实现约20ng/g至约15,000ng/g、约20ng/g至约10,000ng/g、约20ng/g至约8,000ng/g、约20ng/g至约6,000ng/g、约20ng/g至约4,000ng/g或约20ng/g至约1,000ng/g的组织浓度。在一些方面，该病症或病况是结直肠癌或FAP。

本文还公开了测定或预测需要治疗的受试者对JAK抑制剂的反应的方法。在一个方面，一种预测对其有需要的受试者对式I化合物的反应的方法包括：

(a)测量尚未暴露于式I化合物的受试者对照样品中的pSTAT-3水平；

(b)测量已暴露于式I化合物的受试者测试样品中的pSTAT-3水平；和

(c)将(a)和(b)中的所述pSTAT-3水平进行比较，其中(b)中的所述pSTAT-3水平的降低预测所述受试者对所述式I化合物的反应。

在另一个方面，一种监测对其有需要的受试者中正在进行的JAK抑制剂疗法的功效的方法包括：

(c)将(a)和(b)中的所述pSTAT-3水平进行比较，其中(b)中的所述pSTAT-3水平的降低指示式I化合物在所述受试者中的功效。

在另一个方面，一种设计用于治疗对其有需要的受试者的家族性腺瘤息肉病、癌症或JAK介导的疾病的药物方案的方法包括：

(c)将(a)和(b)中的pSTAT-3水平进行比较，以及

(d)如果与对照样品相比，测试样品中的pSTAT-3水平更高，则施用更高剂量的式I化合物。

一种在患有FAP、癌症或JAK介导的疾病的受试者中改变JAK抑制剂的剂量和/或给药频率的方法包括：

(c)将(a)和(b)中的pSTAT-3水平进行比较，以及

(d)如果与对照样品相比时测试样品中的pSTAT-3水平更高、相等或少量降低，则增加式I化合物的剂量，并且如果与对照样品相比时测试样品中的pSTAT-3水平更低，则降低式I化合物的剂量。

在一些方面中，测试样品和对照样品来自同一受试者。在一些方面，对照样品可以来自施用式I化合物之前的受试者。在一些方面，对照样品可以来自向受试者施用式I化合物之前的受试者样品库。

在一些方面中，受试者的样品(对照样品或测试样品)可以是任何细胞或组织，包括血液。在一些方面中，受试者的样品可以是正常细胞、正常组织、肿瘤细胞、肿瘤组织或任何恶性细胞。在一些方面，受试者的样品可以是来自肠道的不同部位的组织，诸如结肠、直肠、术后J袋和十二指肠。

一旦获得受试者的对照样品或测试样品，就可以使用诸如流式细胞术(优选成像流式细胞术(IFC))、发光分析、化学发光分析、免疫组织化学法、荧光显微术等测定法来测量受试者样品中的pSTAT-3水平。

在一些方面中，比较对照样品和测试样品中的pSTAT-3水平可提供关于受试者中JAK抑制剂功效的信息。例如，当与对照样品相比时测试样品中pSTAT-3水平的降低可指示式I化合物在受试者中是有效的。在某些方面中，当与对照样品相比时，测试样品中的pSTAT-3水平降低约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更多，或者它们之间的任何范围。

在一些方面，治疗受试者的CRC或FAP的方法包括：(a)确定选自KRAS、TP53、EGFR、STK11(LKB1)、PTEN、BMPR1A、SMAD4(MADH/DPC4)、MLH1、MSH2、MSH6、PMS2、EPCAM、MUTYH(MYH)、POLD1、POLE和APC的一个或多个基因中的突变；和(b)施用治疗有效剂量的式I化合物。

在一些方面，诊断受试者是否具有在受试者中发展CRC或FAP的高风险的方法包括：(a)确定选自KRAS、TP53、EGFR、STK11(LKB1)、PTEN、BMPR1A、SMAD4(MADH/DPC4)、MLH1、MSH2、MSH6、PMS2、EPCAM、MUTYH(MYH)、POLD1、POLE和APC的一个或多个基因中的突变；和(b)施用治疗有效剂量的式I化合物。

在一些方面中，式I化合物的施用表现出具有局部GI效应以及较低或可忽略不计的全身效应的pan-JAK激酶抑制效应，如循环中pSTAT-3水平的变化所定义的。此外，具有此类特征的本发明的方面可口服。在一些方面中，式I化合物可用于预防和/或控制过度炎症反应，并且其全身效应被消除或减少。在一些方面中，式I化合物对胃肠组织表现出局部效应，用于治疗诸如但不限于IBD的病况，但不引起全身效应或可接受地降低此类全身效应。

一旦患者的疾病、病症或病况发生改善，就可将剂量调整为预防性或维持性的治疗。例如，施用的剂量或频次或者这两方面可根据症状而降低到能维持期望的治疗或预防作用的水平。当然，如果症状已减轻到适当的水平，可停止治疗。然而，患者可能因病征的任何复发而需要长期的间歇性治疗。

此外，还设想式I化合物单独地，与其他活性剂中的一种或多种活性剂组合，或与附加活性成分组合用于治疗下文讨论的病况。可与式I化合物组合的活性剂的非限制性示例包括NSAID、Cox-2抑制剂、抗EGFR剂(诸如西妥昔单抗(cetuximab)和帕尼单抗(panitumumab))、抗VEGF/VEGFR剂(诸如贝伐单抗(bevacizumab)、Ziv-阿柏西普(Ziv-aflibercept)、瑞戈非尼(regorafenib)、雷莫芦单抗(ramucirumab))和免疫检查点抑制剂(诸如伊匹单抗(ipilimumab)、纳武单抗(nivolumab)和帕博利珠单抗(pembrolizumab))。附加活性成分可单独与式I化合物共同施用，或者包含在根据本发明的单一药物组合物中。在一个示例性的实施方案中，附加活性成分是已知或被发现有效治疗由JAK活性介导的病况、病症或疾病的那些活性成分，诸如另一种JAK抑制剂或者对另一个与该特定病况、病症或疾病相关的靶有活性的化合物。该组合可有助于增加功效(例如，通过在该组合物中包含增强活性剂的效力或有效性的化合物)，减少一种或多种副作用或者降低活性剂的所需剂量。

在一些方面，式I化合物的组合物包含药学上可接受的赋形剂。药物组合物中常用的药学上可接受的赋形剂是无毒的、生物学上可耐受的并且换句话讲在生物学上适于施用于受试者的物质，诸如惰性物质，其被添加到药物组合物中或换句话讲用作媒介物、载体或稀释剂以促进试剂的施用并与其相容。此类赋形剂的示例包括碳酸钙、磷酸钙、多种糖和多类淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油和聚乙二醇。

含有一个或多个剂量单位的式I化合物的药物组合物的递送形式可使用本领域技术人员已知的或可利用的药学上可接受的赋形剂和配混技术进行制备。这些组合物在本发明方法中可通过合适的递送途径施用，例如通过口服途径、肠胃外途径、直肠途径、局部途径或眼部途径施用，或者通过吸入施用。

制剂可为片剂、胶囊、囊剂、糖衣丸剂、散剂、颗粒剂、锭剂、重构用散剂、液体制剂或栓剂的形式。所述组合物可配制用于多种给药途径中的任一种，诸如静脉输注、皮下注射、局部给药或口服。优选地，这些组合物可被配制用于口服施用。

对于口服施用，活性剂可以片剂、胶囊剂、或小珠的形式提供，或者作为溶液、乳液或混悬剂提供。为了制备口服组合物，可配制活性剂以例如对于70kg人而言，产生以单剂量单位或多剂量单位计约1mg/天至1000mg/天的剂量作为示例性范围。

口服片剂可包括与相容的药学上可接受的赋形剂诸如稀释剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂混合在一起的一种或多种活性成分。合适的惰性填充剂包括碳酸钠和碳酸钙、磷酸钠和磷酸钙、乳糖、淀粉、糖、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、甘露糖醇、山梨醇等。示例性液态口服赋形剂包括乙醇、甘油、水等。淀粉、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羟乙酸淀粉钠、微晶纤维素和藻酸是示例性的崩解剂。粘结剂可包括淀粉和明胶。润滑剂(当存在时)可为硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。如果需要，片剂可用材料诸如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯进行包衣，以延迟在胃肠道中的吸收，或者可用肠溶衣进行包衣。可使用的附加涂层包括被设计成根据时间、pH或细菌含量释放化合物或活性剂的涂层。

用于口服的胶囊剂包括硬明胶胶囊和软明胶胶囊或(羟丙基)甲基纤维素胶囊。为制备硬明胶胶囊剂，可将一种或多种活性成分与固体、半固体或液体稀释剂混合。软明胶胶囊剂可以通过将活性成分与下述物质混合而制备：油诸如花生油或橄榄油、液体石蜡、短链脂肪酸的单甘油酯和二甘油酯的混合物、聚乙二醇400或丙二醇。口服施用的液体可为悬浮液、溶液、乳液或糖浆的形式，或者可冻干或作为干燥品呈现，供临用前用水或其他合适的媒介物进行重构。此类液体组合物可任选地包含：药学上可接受的赋形剂，诸如悬浮剂(例如，山梨醇、甲基纤维素、海藻酸钠、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶等)；非水性媒介物，例如油类(例如杏仁油或分级椰子油)、丙二醇、乙醇或水；防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)；润湿剂，诸如卵磷脂；以及(如果需要)矫味剂或染色剂。

也可通过非口服途径施用式I化合物的组合物。例如，组合物可配制成栓剂供直肠施用。对于肠胃外使用，包括静脉内途径、肌肉内途径、腹膜内途径或皮下途径，本公开的化合物可以无菌水溶液剂或混悬剂的形式提供，这些形式被缓冲至适当的pH和等渗性或者在胃肠外可接受的油中。合适的含水媒介物包括林格氏溶液和等渗氯化钠。此类形式将以单位剂量形式呈现，诸如安瓿或一次性注射装置，以多剂量形式呈现，诸如可从其中抽取适当剂量的小瓶，或者以可用来制备可注射制剂的固体形式或预浓缩物形式呈现。示例性的输注剂量可为约1μg/kg/分钟至1000μg/kg/分钟的化合物的范围，与药物载体混合在数分钟至数天的时间里输注。

本文针对治疗方法描述的所有方面也适用于在治疗中的用途。

本文针对用于治疗病症或病况的方法描述的所有方面也适用于在治疗所述病症或病况中的用途。

本文针对在治疗病症或病况中的用途描述的所有方面也适用于治疗所述病症或病况的方法。

本文针对用于治疗病症或病况的方法描述的所有方面也适用于在治疗所述病症或病况的方法中的用途。

本文针对在用于治疗病症或病况的方法中的用途描述的所有方面也适用于治疗所述病症或病况的方法。

提供如下具体实施例来进一步说明本发明和各个方面。

在获得下文实施例中描述的化合物和相应的分析数据时，除非另外指明，否则遵循以下实验和分析方案。

除非另外指明，否则在室温(rt)下磁力搅拌反应混合物。当溶液被“干燥”时，它们通常经干燥剂诸如Na2SO4或MgSO4干燥。当混合物、溶液和提取物被“浓缩”时，它们通常在旋转蒸发器上减压浓缩。

薄层色谱法使用Merck硅胶60F2542.5cm×7.5cm、250μm或5.0cm×10.0cm、250μm预涂布硅胶板进行。

除非另外指明，否则正相快速柱色谱法(FCC)是在硅胶(SiO2)上用2MNH3的MeOH/DCM的溶液洗脱来进行。

除非另外指明，否则质谱(MS)是在Agilent系列1100MSD上使用电喷雾电离(ESI)，以正离子模式获得。计算的质量(calcd.)对应于精确质量。

核磁共振(NMR)谱是在BrukerDRX型光谱仪上获得。以下¹HNMR数据的格式是：在四甲基硅烷参照物的低场的化学位移(单位为ppm)(多重度，耦合常数J(单位为Hz)，积分)。

化学名称通过ChemDraw(CambridgeSoft,Cambridge,MA)或ACD/Name第9版(Advanced Chemistry Development,Toronto,Ontario,Canada)产生。以举例的方式，名称(1r,4r)是指使用Chemdraw Ultra Pro14.0的命名功能产生的环己基环周围的反式取向。

当收率以百分数的形式给出时，这种收率是指被给出该收率的实体的质量与同一实体在特定化学计量条件下可获得的最大量之比。除非另外指明，否则以百分比形式给出的试剂浓度是指质量比。

本文所用的缩写和首字母缩略词包括如下所示的以下内容：定义的缩写和首字母缩略词

首字母缩略词	术语
		AAC	加速老化条件(40℃和70％RH)
ACN	乙腈
		aq	水溶液
br	宽
		cLogP	经计算的logP
DCM	二氯甲烷

首字母缩略词	术语
		RH	相对湿度
Rt	保留时间
		Rt或RT	室温
TFA	三氟乙酸
		THF	四氢呋喃
TLC	薄层色谱法
		tPSA	拓扑极性表面积

实施例1

2-(1-((1r,4r)-4-(氰甲基)环己基)-1,6-二氢咪唑并[4,5-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-N-(2-羟基-2-甲基丙基)乙酰胺

步骤A：2-(1-((1r,4r)-4-(氰甲基)环己基)-6-(苯磺酰基)-1,6-二氢咪唑并[4,5-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-N-(2-羟基-2-甲基丙基)乙酰胺。为了确保干燥的原料，在反应之前，将2-(1-((1r,4r)-4-(氰甲基)环己基)-6-(苯磺酰基)-1,6-二氢咪唑并[4,5-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)乙酸乙酯(中间体3)在真空下于50℃处加热18小时。在1L烧瓶中，将2-(1-((1r,4r)-4-(氰甲基)环己基)-6-(苯磺酰基)-1,6-二氢咪唑并[4,5-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)乙酸乙酯(中间体3，52.585g，104.01mmol)悬浮于DMA(50mL)中。添加1-氨基-2-甲基丙-2-醇(50mL)，并且将反应加热至110℃并持续45分钟，然后加热至125℃并持续5小时。将该反应冷却至室温并用EtOAc(800mL)稀释。有机层用水/盐水溶液萃取三次，其中该溶液由1L水加上50mL盐水组成。将水层用EtOAc(2×600mL)反萃取。将合并的有机层经无水MgSO4干燥，浓缩至干，并且然后在真空下干燥3天，以提供呈黄色泡沫的标题化合物(65.9g，98％收率)。将产物用于下一步骤而无需进一步纯化。MS(ESI)：C28H32N6O4S的质量计算值为548.22；m/z实测值为549.2[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.76(s,1H),8.26-8.19(m,2H),7.84(d,J＝4.1Hz,1H),7.60-7.53(m,1H),7.50-7.44(m,2H),6.84(d,J＝4.2Hz,1H),4.76-4.61(m,1H),3.97(s,2H),3.45(s,1H),3.27(d,J＝5.9Hz,2H),2.41(d,J＝6.5Hz,2H),2.38-2.25(m,2H),2.23-2.12(m,2H),2.09-1.94(m,4H),1.48(qd,J＝13.6,4.0Hz,2H),1.21(s,6H)。

步骤B：2-(1-((1r,4r)-4-(氰甲基)环己基)-1,6-二氢咪唑并[4,5-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-N-(2-羟基-2-甲基丙基)乙酰胺。向包含搅拌棒的1L烧瓶中，添加2-(1-((1r,4r)-4-(氰甲基)环己基)-6-(苯磺酰基)-1,6-二氢咪唑并[4,5-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-N-(2-羟基-2-甲基丙基)乙酰胺(65.90g，102.1mmol)。添加1,4-二氧六环(300mL)，之后添加KOH水溶液(3M，150mL)。将反应在80℃处加热2小时。将反应冷却至室温，并且在旋转蒸发器上将溶剂体积减少至约200mL。残余物用水/盐水(100mL/100mL)的溶液处理，然后用10％MeOH的CH2Cl2溶液(2×1L)萃取。将有机层合并，经无水MgSO4，并浓缩至干以提供黄色固体。将固体悬浮于CH2Cl2(200mL)中，剧烈搅拌30分钟，并且然后通过过滤收集。固体用CH2Cl2(100mL)冲洗，通过使空气通过过滤器来干燥，并且然后在真空下于室温下进一步干燥16小时，以提供呈白色固体的标题化合物(41.59g，89％收率)。MS(ESI)：C22H28N6O2的质量计算值为408.23；m/z实测值为409.2[M+H]+。1HNMR(600MHz,DMSO-d6):δ11.85(s,1H),8.50(s,1H),8.21–8.10(m,1H),7.49–7.43(m,1H),6.74–6.65(m,1H),4.53–4.42(m,2H),4.07(s,2H),3.08(d,J＝6.0Hz,2H),2.58(d,J＝6.1Hz,2H),2.41–2.28(m,2H),2.09–1.92(m,5H),1.42–1.31(m,2H),1.09(s,6H)。本文以实施例的形式提供了本发明方面中的每一个方面的合成和活性化合物表征。由于本发明的一些方面的晶体结构，可进行多晶型物筛选以进一步表征任何此类化合物的特定形式。这通过标题多晶型物筛选下的实施例以非限制性方式对式I化合物进行说明。

参考前述合成制备以下化合物：

中间体1

2-((1r,4r)-4-((5-硝基-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氨基)环己基)乙腈

步骤A：N-[(1r,4r)-4-(羟甲基)环己基]氨基甲酸叔丁酯。向用氮气惰性气氛吹扫并维持氮气惰性气氛的20-L 4-颈圆底烧瓶中放置(1r,4r)-4-[[(叔丁氧基)羰基]氨基]环己烷-1-羧酸(1066g，4.38mol，1.00当量)和THF(10L)。这之后在-10℃在1小时内滴加BH3-Me2S(10M，660mL)。将所得溶液在15℃处搅拌3小时。将该反应平行进行三次，并且合并反应混合物。然后通过添加甲醇(2L)淬灭该反应。真空浓缩所得混合物。这产生呈白色固体的N-[(1r,4r)-4-(羟甲基)环己基]氨基甲酸叔丁酯(3000g，99.6％)。MS(ESI)：C12H23NO3的质量计算值为229.32；m/z实测值为215.2[M-tBu+MeCN+H]+。1H NMR:(300MHz,CDCl3):δ4.40(s,1H),3.45(d,J＝6.3Hz,2H),3.38(s,1H),2.05-2.02(m,2H),1.84-1.81(m,2H),1.44(s,11H),1.17-1.01(m,4H)。

步骤B：N-[(1r,4r)-4-[(甲磺酰基氧基)甲基]环己基]氨基甲酸叔丁酯向用氮气惰性气氛吹扫并维持氮气惰性气氛的20-L 4-颈圆底烧瓶中放置N-[(1r,4r)-4-(羟甲基)环己基]氨基甲酸叔丁酯(1000g，4.36mol，1.00当量)、二氯甲烷(10L)、吡啶(1380g，17.5mol，4.00当量)。这之后在-15℃处滴加MsCl(1000g，8.73mol，2.00当量)。将所得溶液在25℃处搅拌过夜。将该反应平行进行3次，并且合并反应混合物。然后该反应通过添加2L水淬灭。用乙酸乙酯(1×9L)萃取水层。将有机层分离并且用1M HCl(3×10L)、NaHCO3(饱和水溶液)(2×10L)、水(1×10L)和盐水(1×10L)洗涤。混合物用无水硫酸钠干燥、过滤并真空浓缩。这产生呈白色固体的N-[(1r,4r)-4-[(甲磺酰基氧基)甲基]环己基]氨基甲酸叔丁酯(3300g，82％)。LC-MS：MS(ESI)：C13H25NO5S的质量计算值为307.15；m/z实测值为292.1，[M-tBu+MeCN+H]+；1HNMR:(300MHz,CDCl3):δ4.03(d,J＝6.6Hz,2H),3.38(s,1H),3.00(s,3H),2.07-2.05(m,2H),1.87-1.84(m,2H),1.72-1.69(m,1H),1.44(s,9H),1.19-1.04(m,4H)。

步骤C：N-[(1r,4r)-4-(氰甲基)环己基]氨基甲酸叔丁酯。向10L 4-颈圆底烧瓶中，放置N-[(1r,4r)-4-[(甲磺酰基氧基)甲基]环己基]氨基甲酸叔丁酯(1100g，3.58mol，1.00当量)、DMSO(5500mL)和NaCN(406g，8.29mol，2.30当量)。将所得混合物在90℃搅拌5小时。将该反应平行3次，并且合并反应混合物。然后通过添加15L水/冰来淬灭反应。通过过滤收集固体。用水(3×10L)洗涤固体。这产生呈白色固体的N-[(1r,4r)-4-(氰甲基)环己基]氨基甲酸叔丁酯(2480g，97％)。MS(ESI)：C13H22N2O2的质量计算值为238.17；m/z实测值为224[M-tBu+MeCN+H]+；1H NMR:(300MHz,CDCl3):δ4.39(s,1H),3.38(s,1H),2.26(d,J＝6.9Hz,2H),2.08-2.04(m,2H),1.92-1.88(m,2H),1.67-1.61(m,1H),1.44(s,9H),1.26-1.06(m,4H)。

步骤D：2-[(1r,4r)-4-氨基环己基]乙腈盐酸盐。向10-L圆底烧瓶中放置N-[(1r,4r)-4-(氰甲基)环己基]氨基甲酸叔丁酯(620g，2.60mol，1.00当量)和1,4-二氧六环(2L)。这之后在10℃处，边搅拌边滴加HCl的1,4-二氧六环溶液(5L，4M)。将所得溶液在25℃处搅拌过夜。将该反应进行4次，并且合并反应混合物。通过过滤收集固体。固体用1,4-二氧六环(3×3L)、乙酸乙酯(3×3L)、和己烷洗涤(3×3L)洗涤。这产生呈白色固体的2-[(1r,4r)-4-氨基环己基]乙腈盐酸盐(1753g，96％)。MS(ESI)：C8H14N2的质量计算值为138.12；m/z实测值为139.25，[M+H]+；1HNMR:(300MHz,DMSO-d6):δ8.14(s,3H),2.96-2.84(m,1H),2.46(d,J＝6.3Hz,2H),1.98(d,J＝11.1Hz,2H),1.79(d,J＝12.0Hz,2H),1.64-1.49(m,1H),1.42-1.29(m,2H),1.18-1.04(m,2H)。

步骤E：2-((1r,4r)-4-((5-硝基-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氨基)环己基)乙腈。向包含2-[(1r,4r)-4-氨基环己基]乙腈盐酸盐(29.10g，166.6mmol)的1000mL圆底烧瓶中添加DMA(400mL)。所得的悬浮液用4-氯-5-硝基-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(51.53g，152.6mmol)处理，之后用DIPEA(63.0mL，366mmol)处理。将反应混合物置于N2下并且在80℃处加热4小时。将该粗反应混合物冷却至室温并缓慢倒入包含1.6L水的剧烈搅拌的2L烧瓶中。将所得悬浮液在室温下搅拌15分钟，然后过滤并在真空烘箱中在70℃处加热干燥16小时，以提供呈黄色固体的标题化合物(63.37g，95％)。MS(ESI)：C21H21N5O4S的质量计算值为439.1；m/z实测值为440.1[M+H]+。1HNMR(500MHz,CDCl3):δ9.10(s,1H),8.99(d,J＝7.8Hz,1H),8.23-8.15(m,2H),7.66-7.59(m,2H),7.56-7.49(m,2H),6.67(d,J＝4.2Hz,1H),3.95-3.79(m,1H),2.38(d,J＝6.2Hz,2H),2.32-2.21(m,2H),2.08-1.98(m,2H),1.88-1.76(m,1H),1.60-1.32(m,4H)。

中间体2

2-((1r,4r)-4-((5-氨基-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氨基)环己基)乙腈

将2-((1r,4r)-4-((5-硝基-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氨基)环己基)乙腈(中间体1，58.60g，133.3mmol)溶于THF/MeOH(1:1，4800mL)中。使混合物以10mL/min与100％氢气(大气压，80℃)一起通过连续流动的氢化反应器(10％Pd/C)，诸如Thales Nano然后使溶液浓缩以提供呈紫色固体的产物。将固体用EtOAc(400mL)研磨，然后再次用MeOH(200mL)研磨，并且然后过滤并真空干燥，以提供标题化合物(50.2g，91.9％收率)。

MS(ESI)：C21H23N5O2S的质量计算值为409.2；m/z实测值为410.2[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.10-8.03(m,2H),7.76(s,1H),7.51-7.43(m,1H),7.43-7.34(m,3H),6.44(d,J＝4.2Hz,1H),4.61(d,J＝8.5Hz,1H),3.65-3.51(m,1H),2.74(s,2H),2.26(d,J＝6.4Hz,2H),2.19-2.05(m,2H),1.97-1.86(m,2H),1.76-1.59(m,1H),1.33-1.12(m,4H)。

中间体3

2-(1-((1r,4r)-4-(氰甲基)环己基-6-(苯磺酰基)-1,6-二氢咪唑并[4,5-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)乙酸乙酯

向包含搅拌棒和2-((1r,4r)-4-((5-氨基-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氨基)环己基)乙腈(中间体2，58.31g，142.4mmol)的1L圆底烧瓶中3-乙氧基-3-亚氨基丙酸乙酯(60.51g，309.3mmol)，之后添加EtOH(600mL，在分子筛上干燥48小时)。将回流冷凝器附接到反应烧瓶，用N2吹扫反应，并且在90℃处加热9小时。将反应混合物冷却至室温并使其静置30小时，其中产物作为棕色针状物结晶。用刮刀将固体破碎，并且将反应混合物转移到2L烧瓶中。在剧烈搅拌的情况下，经由分液漏斗缓慢添加水(1.4L)。在完成水的添加之后，将悬浮液搅拌30分钟。通过过滤分离棕色针，并且然后通过使空气通过过滤器来干燥1小时。将产物转移至500mL烧瓶中并用EtOAc(200mL)处理。添加少量晶种，所述晶种引发白色固体沉淀的形成。将悬浮液在室温下搅拌30分钟，过滤，用EtOAc(25mL)冲洗，并且真空干燥以提供为白色固体的产物(48.65g，68％收率)。MS(ESI)：C26H27N5O4S的质量计算值为505.2；m/z实测值为506.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.85(s,1H),8.28-8.19(m,2H),7.84(d,J＝4.0Hz,1H),7.61-7.53(m,1H),7.52-7.43(m,2H),6.84(d,J＝4.1Hz,1H),4.32(s,1H),4.20(q,J＝7.1Hz,2H),4.09(s,2H),2.44(d,J＝6.2Hz,2H),2.40-2.27(m,2H),2.16(d,J＝13.3Hz,2H),2.12-1.96(m,3H),1.54-1.38(m,2H),1.27(t,J＝7.1Hz,3H)。

多晶型物筛选实施例

作为游离碱的式I化合物的一些实施方案呈现出具有复杂固态行为的多种结晶构型，其中一些由于不同量的掺入溶剂，继而可在它们中间呈现出区别特征。式I化合物的一些实施方案呈假多晶型物的形式，其为由于晶格本身中不同量的溶剂而呈现出晶格组成差异的相同化合物的实施方案。此外，在式I化合物的一些结晶实施方案中，还可存在通道溶剂化，其中溶剂掺入存在于晶格中的通道或空隙内。例如，对于式I化合物发现了表2中给出的各种结晶构型。由于这些特征，经常观察到非化学计量的溶剂化物，如表2所示。此外，根据本发明的一些实施方案的晶体结构中存在此类通道或空隙使得水和/或溶剂分子能够以不同程度的粘结强度保持在晶体结构内。因此，在根据本发明的一些实施方案中，具体环境条件的改变可容易地导致水分子和/或溶剂分子的一些损失或增益。应当理解表2中所列实施方案中的每一个实施方案的“溶剂化”(表2中第三列)是公式溶剂化，并且作为化学计量数的实际测定(表2中第四列)在对其进行实验测定时，可根据实际环境条件与公式溶剂化略有所不同。例如，如果一个实施方案中约一半的水分子可与晶格中活性化合物氢键键合的形式存在，同时约另一半水分子可处于在晶格中的通道或空隙中，则环境条件的变化可改变空隙或通道中此类松散包含的水分子的量，并因此导致根据例如单晶衍射分配的公式溶剂化与例如通过热重量分析偶联质谱进行测定的化学计量之间的轻微差异。

表2.式I化合物的结晶形式的实施方案

如实施例1中所述获得的化合物通过如下方法进一步结晶：制备DCM中的浆液(1:3，例如30ml DCM中的10g化合物)，将其在40℃处搅拌4小时，并且在25℃处进一步搅拌14小时，然后在25℃处缓慢添加庚烷(1:2，例如，将20ml庚烷添加到化合物/DCM浆液/溶液)中，在40℃处搅拌4小时，冷却至25℃，并且在25℃处再搅拌14小时。后续过滤产生呈灰白色固体形式的式I化合物，其被鉴定为一水合物，1s实施方案。

表2和图2中的实施方案1至10是结晶的。实施方案1s和1a至1h是同构的。实施方案1s以中心对称的三斜晶系空间群P-1形式结晶。术语“实施方案1”统称为同构实施方案1s和1a至1h。此类1s和1a至1h实施方案中的任一个有时被称为实施方案1的同构成员或仅被称为实施方案1的成员。实施方案3b、3c、3d和3e是同构的，并且以单斜体系，空间群C2/c形式结晶。术语“实施方案3”统称为同构的实施方案3b、3c、3d和3e。此类3b、3c、3d和3e实施方案中的任一个有时被称为实施方案3的同构成员或仅被称为实施方案3的成员。同构实施方案是使得其具有类似的晶体结构特性(相同的对称性和相似的晶胞参数和晶体堆积)，同时具有不同的化学组成(即，掺入晶格中的不同溶剂和/或水分子)的那些。同构实施方案中的晶胞参数可由于不同的组成(掺入晶体结构中的溶剂或水)而略有不同。表2中提及的实施方案如表2中示意性地示出并且如以下筛选技术中更详细描述的制备和/或互相转化。

筛选包括结晶方案，诸如纯溶剂中的溶剂平衡、蒸发结晶、用热过滤冷却结晶、用反溶剂崩解结晶、以及通过热循环结晶。固体通过HT XRPD分析。适用时，将母液完全蒸发，并剩余固体也通过HT-XRPD分析。所鉴定的主要固体形式为一水合物形式的原料实施方案1s。

在25℃和50℃处的溶剂平衡

通过将化合物实施方案1s悬浮于二十种纯溶剂中并在室温下搅拌两周和在50℃处搅拌一周来进行长期浆液实验。在平衡时间结束后，将残余固体与母液分离。固体在环境条件下干燥，并且在真空(5mBar)下干燥，然后通过HT-XRPD分析。随后，将固体暴露于加速老化条件(40℃/70％相对湿度)两天，并且再次通过HT-XRPD分析。

从大部分结晶溶剂中，获得作为实施方案1s的原料。从多种结晶溶剂中，发现HT-XRPD图案类似于初始实施方案1s的那些。在大多数这些衍射图案中，鉴定出峰位移和/或附加峰。这些图案中的每一个图案对应于标记为1a至1h中的一者的实施方案，并且基于此类实施方案的HT-XRPD衍射图案中的相似性，它们作为实施方案1的同构成员的实施方案被呈现。在暴露于40℃和75％RH两天之后，实施方案1的全部同构成员均转化成实施方案1a。

当其暴露于25℃处100％RH时，实施方案1s转化成水合实施方案10。然而，实施方案10在环境条件下在物理上不稳定。虽然实施方案1s以三斜晶系，空间群P-1形式结晶，但发现实施方案10以单斜晶体系，空间群C2/c形式结晶。实施方案10在环境条件下具有有限的物理稳定性，并且其转化成另一个实施方案，诸如1s或1a。这种行为可归因于所有水合/溶剂化分子的不均匀强结合。在这种情况下，实施方案10将具有较不强键合的第二水分子，其将在环境条件下损失。更精确地，通过将此类实施方案的20mg样品暴露于40℃和70％相对湿度并持续四天，并且将相同实施方案的另一20mg样品暴露于25℃和100％相对湿度也持续四天，在气候室中研究实施方案1s的物理稳定性。四天后，通过HR-XRPD分析各种固体样品，测定晶胞参数，并对衍射图建立索引。衍射图如图6所示。从下到上，图6中的第一衍射图对应于作为原料的实施方案1s，并且第二衍射图对应于在暴露于40℃和70％相对湿度4天后的相同实施方案，在同一图中标记为“1s 70RH”。该分析显示初始实施方案1s已回收，但具有少量的结晶形式，所述第二结晶形式可能是具有较高含水量的另一水合实施方案。由于其存在的量很小，因此不可能对此类形式建立索引。第三衍射图对应于暴露于25℃和100％相对湿度4天后的实施方案1s，其在同一图中标记为“10”。这些条件导致实施方案1s转化为实施方案10，其具有少量初始实施方案1s杂质和溶剂化物，如表2中所表征的。脱水后，实施方案1s和10两者均重结晶成无水形式，其中熔点为148℃。

室温下的溶剂平衡由作为结晶溶剂的甲苯产生实施方案1b，并且由对二甲苯作为结晶溶剂产生实施方案1f。

鉴定了三个附加固体实施方案并且命名为实施方案2、3和7。由在室温下在1,4-二氧六环中进行溶剂平衡实验鉴定出实施方案2(其TGA和DSC分别示于图21A和图21B中)，然而在50℃处由庚烷的单一溶剂平衡实验中以与实施方案1s的混合物形式发现实施方案7。鉴定出若干相似但不相同的衍射图，将所述衍射图分组为实施方案3b、3c、3d和3e，其为实施方案3的等构成员。发现实施方案3的等构成员与实施方案1的成员混合。在一些情况下，包含实施方案3的成员的混合物转化为实施方案1a或者实施方案1a和3e的混合物。实施方案7看起来是物理稳定的，但实施方案2在暴露于AAC两天后转化为实施方案3e。

蒸发结晶

将从室温下进行的溶剂平衡实验保留的母液用于缓慢蒸发结晶实验。过滤母液以除去任何颗粒物质并使其在环境条件下缓慢蒸发。通过HT-XRPD分析获得的固体，并且在暴露于AAC两天后再次分析。

由于式I化合物在一些溶剂中的溶解性差，当使用此类溶剂时没有回收固体。在固体沉淀的实验中，回收实施方案1或3的无定形残余物或同构成员。在稳定性研究期间，实施方案1的不同成员转化为实施方案1a，然而实施方案3的样品似乎在物理上是稳定的。在一些情况下，无定形固体在稳定性研究后保持无定形的，变得潮解或示出一些结晶度的迹象。

冷却结晶

将在50℃处进行的溶剂平衡实验的母液在50℃处过滤以除去任何颗粒物质。使用0.2μm PTFE过滤器过滤50℃处的悬浮液，并且将溶液置于5℃并老化72小时。当固体在老化期间中沉淀时，将这些固体与液体分离，在环境条件下和真空下干燥，并且通过HT-XRPD分析。使剩余的母液缓慢蒸发，并通过HT-XRPD分析剩余的固体。将不发生沉淀的样品置于真空下，并且通过HT-XRPD分析干燥的固体。然后将所有固体暴露于AAC(40℃/70％RH下2天)并通过HT-XRPD重新分析。

固体在一些溶液中冷却时不沉淀，在这种情况下，将溶液在环境条件下蒸发。由于式I化合物在一些溶剂中的低溶解性，从一些溶液中没有获得固体。

从四种溶剂(2-丙醇、2-丁酮、乙腈和甲醇)中发生沉淀。在800μL乙腈中，25mg/mL的浓度下以mL规模进行单一冷却结晶实验的蒸发之后，鉴定出实施方案6。实施方案6在2天AAC后似乎是稳定的固体形式，并且其呈现为非溶剂化实施方案。

以μL规模进行冷却/蒸发结晶

μL规模的冷却/蒸发结晶实验在96孔板中进行，其使用12种纯溶剂和12种溶剂混合物并应用四种温度分布。在每个孔中，固体定量投放大约4mg的实施方案1s。随后，添加结晶溶剂(80μL)和溶剂混合物以达到50mg/mL的浓度，其中将每个孔单独密封，以随后经历四种温度分布中的一种。在完成温度分布后，使溶剂在低环境压力下蒸发(24小时)，并且在暴露于AAC 2天(40℃/70％RH)之前和之后通过HT-XRPD分析剩余固体。

从大多数溶剂体系和温度分布中发现实施方案1和3的成员。然而，观察到固体形式相对于温度分布的某种趋势。实施方案1b主要从短温度分布(3小时老化)识别。然而，具有长老化时间的相同溶剂体系导致实施方案1f、实施方案3的成员或实施方案1和3的成员的混合物的识别。实施方案3c由1,4-二氧戊环作为结晶溶剂和50℃作为初始温度，保持60分钟，之后以1℃/h的速率冷却至20℃的最终温度，保持48小时的温度分布来获得；实施方案3d由四氢呋喃作为结晶溶剂和与实施方案3c相同的温度分布来获得。

当应用短老化条件时，在甲醇/水(50/50，体积/体积)、THF和DCM/IPA(50/50，体积/体积)中进行的实验中鉴定出实施方案4。实施方案4通过如下方法获得：用水和甲醇的混合物(50/50)和50℃作为初始温度，保持60分钟，之后以20℃/h的速率冷却至5℃的最终温度，保持3小时的温度分布处理实施方案1s，这连同实施方案1b一起产生实施方案4。实施方案4连同实施方案1b还通过如下方法获得：用水和甲醇的混合物(50/50)和50℃作为初始温度，保持60分钟，之后以20℃/h的速率冷却至20℃的最终温度，保持3小时的温度分布处理1s。实施方案4在环境条件下看起来不是物理稳定的。冷却结晶实验以乙酸乙酯/1,4-二氧戊环(50/50，体积/体积)作为结晶溶剂，和50℃作为初始温度，保持60分钟，之后以1℃/h的速率冷却至5℃的最终温度，保持48小时的温度分布，产生实施方案1c；以乙腈/氯仿(50/50，体积/体积)作为结晶溶剂，和50℃作为初始温度，保持60分钟，之后以1℃/h的速率冷却至5℃的最终温度，保持48小时的温度分布，产生实施方案1d；以及以乙酸乙酯/1,4-二氧六环(50/50，体积/体积)作为结晶溶剂和50℃作为初始温度，保持60分钟，之后以1℃/h的速率冷却至20℃的最终温度，保持48小时的温度分布，产生实施方案1e。

实施方案5在氯仿作为结晶溶剂和50℃作为初始温度，保持60分钟，之后以1℃/h的速率冷却至20℃的最终温度，保持48小时的温度分布来进行的实验中鉴定出来。

如先前在其他结晶方法中观察到的，在稳定性研究期间观察到类似的转化。在大多数情况下，所有固体形式均转化为实施方案1a或包含实施方案1a的混合物。

从固体混合物蒸发结晶

在使用溶剂/反溶剂混合物的蒸发结晶中，制备化合物的澄清溶液，其中首先蒸发溶剂(高蒸气压)，从而导致化合物在一定程度上以晶体形式沉淀。然后，这些晶体在蒸发反溶剂(较低的蒸气压)时充当种子。

式I化合物不完全溶于溶剂体系中的每一个溶剂体系中。出于该原因，所用实验均包括蒸发之前的过滤。

HT-XRPD分析的结果证明，当蒸发溶剂混合物时，式I化合物主要作为实施方案1结晶。对于以下溶剂/反溶剂体系观察到这种情况：四氢呋喃/水、乙腈/水、氯仿/乙醇、甲醇/乙酸乙酯、2-丁酮/异丙醇和庚烷/丙酮。从两种体系，丙酮/异丙基苯和1,4-二氧六环/甲酸乙酯中，鉴定出同构实施方案3b和3e，其在AAC之后分别转化成实施方案1a和3d，以及实施方案1s和3e的不同混合物。

反溶剂重结晶

在纯溶剂中制备式I化合物的饱和溶液。反溶剂添加在正向和反向添加中进行。在正向添加中，将反溶剂以三份等分试样添加到化合物溶液中。通过将一定体积的化合物溶液加入大量过量的反溶剂(20mL)中来进行反向添加。

沉淀后，将固体与液体分离，在环境条件下干燥，并在真空(5毫巴)下干燥，然后通过HT-XRPD分析。将在添加反溶剂时不发生沉淀的实验在5℃处储存48小时以诱导沉淀。随后分离沉淀的固体并通过HT-XRPD分析。当未获得固体时，将溶液在温和条件下蒸发，并且通过HT-XRPD分析残余固体。将所有固体暴露于AAC(40℃/70％RH下2天)并通过HT-XRPD进行重新分析。

在所有情况下，正向反溶剂结晶均示出沉淀。所有固体均可被归类为实施方案1的同构成员(1s、1b、1j、1f)或实施方案3的同构成员(3b、3d、3f)。在暴露于AAC后，除了转化为实施方案1a和3e的混合物的固体样品之外，所有固体样品均转化为实施方案1a。

在作为溶剂的DMSO中进行的反向反溶剂结晶实验根据所用的反溶剂给出不同的固体形式。在二氯甲烷或对二甲苯的情况下，鉴定出实施方案1的同构成员(1s和1b)，然而在MTBE的情况下得到无定形残余物。用庚烷和水作为反溶剂，在反溶剂添加时不沉淀的两种溶液的蒸发导致油状物。在AAC之后观察到转化成实施方案1a，并且无定形残余物变得潮解。

热过滤实验

利用热过滤的冷却结晶实验由在50℃处在不同溶剂混合物中制备的式I化合物的过饱和溶液进行。热过滤溶液经历48小时的冷却分布。将其中固体在温度分布之后已经沉淀的小瓶进行离心，并且将固体与液体分离并通过HT-XRPD分析(在真空下干燥后)。如果没有固体沉淀，则在真空下蒸发溶液，并且通过HT-XRPD分析固体。将所有固体暴露于AAC(40℃/70％RH下2天)并通过HT-XRPD重新分析。在一半的热过滤实验中，不发生沉淀，并且在溶剂蒸发时，由于式I化合物在那些溶剂体系中的溶解性差，未回收足够的固体。在三个实验中，回收无定形残余物，其在AAC后结晶成实施方案1(1s或1a)和实施方案3(3e)的成员的混合物，或变得潮解。实施方案5从丙酮/氯仿(50/50，体积/体积)中的实验鉴定。该实施方案看起来在物理上不稳定，因为在AAC后观察到实施方案1a的转化。

热循环实验

在室温下，在10种溶剂中制备约6mg实施方案1s的悬浮液。使悬浮液在5℃和50℃之间循环。在热循环完成后，固体通过离心分离并在环境条件和真空(5毫巴)下干燥，然后通过HT-XRPD分析。随后，将所有固体暴露于AAC两天，并再次通过HT-XRPD分析。热循环实验通常促进更稳定的多晶型形式的形成。除了在环己酮中进行的实验之外，所有小瓶均在热分布后包含固体。将环己酮溶液在适度真空下缓慢蒸发。实施方案1、实施方案3的成员或其混合物主要鉴定为呈湿固体形式。在干燥这些固体后，观察到转化为实施方案1s。实施方案3b和3e得自在300μL环己酮中在51mg/mL浓度下的热循环(3b)和在400μL异丁醇中在37.3mg/mL浓度下的热循环(3e)。实施方案5得自在800μL氯仿中在18.6mg/mL浓度下的热循环。

图3、图4和图5示出了表2中所列的实施方案的HT-XRPD图案的重叠，并且在上述筛选中也被提及。

从大部分结晶实验中回收实施方案1s。其是取决于环境条件，具有可变数量的掺入的水分子和/或其他溶剂的通道水合物。观察到转化成实施方案1a。这种形式包含略多的水(1.3个水分子)。在暴露于40℃和75％相对湿度两天之后，实施方案1的全部同构成员均转化成实施方案1a。对于实施方案1的成员，XRPD图案中的一些衍射峰的偏移可归因于掺入晶格中的不同溶剂或水分子。图4示出了实施方案1的成员的HT-XRPD图案的叠加。衍射图1s对应于实施方案1s形式的作为原料的式I化合物。衍射图1a对应于实施方案1a，其在若干实施方案1s的样品暴露于AAC之后获得。衍射图1b对应于实施方案1b，其从甲苯中室温下进行的溶剂平衡实验获得。衍射图1c对应于实施方案1c，其从在乙酸乙酯/1,4-二氧六环(50/50，体积/体积)中以μL规模进行的冷却结晶实验中获得。衍射图1c对应于实施方案1d，其从在乙腈/氯仿(50/50，体积/体积)中以μL规模进行的冷却结晶实验中获得。衍射图1e对应于实施方案1e，其从在乙酸乙酯/1,4-二氧六环(50/50，体积/体积)中以μL规模进行的冷却结晶实验中获得。衍射图1f对应于实施方案1f，其从在对二甲苯中室温下进行的溶剂平衡实验中获得。衍射图1g对应于实施方案1g，其从在苯甲醚中在50℃下进行的溶剂平衡实验中获得。衍射图1h对应于实施方案1h，其从在对二甲苯中以μL规模进行的冷却结晶实验中获得。

实施方案3的成员的衍射图如图5所示。不同HT-XRPD图案中观察到的偏移最可能归因于掺入晶格中的不同溶剂分子。实施方案3通过在70％RH下将实施方案2加热至40℃并持续4天来获得。实施方案3b至3e是包含非化学计量量的溶剂的溶剂化形式，所述非化学计量的量根据掺入晶体结构中的溶剂而有所不同(0.3-0.7个分子)。包含实施方案3的成员的混合物在暴露于AAC时是不稳定的，并且其在一些情况下转化为实施方案1a或者实施方案1a和3e的混合物。对实施方案1a转化归因于在暴露于高相对湿度时由水分子交换溶剂分子，并且重结晶成水合实施方案1a。

实施方案9通过如下方式获得：将实施方案2加热至约200℃的温度，之后冷却至25℃，并且还进行循环DSC 25℃-200℃-25℃-300℃。

实施方案9也通过附加的程序获得。此类程序中的一种是两步程序：在室温下用1,4-二氧六环(10体积)处理实施方案1s(1.5g)。加入实施方案2的种子(5mg)并将样品在室温下搅拌24小时。将所得的悬浮液过滤并将样品风干1.5小时。通过XRPD确定该样品为实施方案2。在该两步程序的第二步中，将实施方案2以10℃/分钟加热至210℃并在210℃处保持30分钟。然后使样品冷却至室温。通过XRPD分析确定所得的固体为实施方案9。此类程序中的另一种也是用于获得实施方案9的两步程序。在该程序中，用1,4-二氧六环(10体积)处理实施方案1s(1.5g)。加入实施方案2的种子(5mg)并将样品在室温下搅拌24小时。将所得的悬浮液过滤并将样品风干1.5小时。通过XRPD确定该样品为实施方案2。在该程序的第二步中，将实施方案2以10℃/分钟加热至150℃，然后以2℃/分钟进一步加热至170℃。然后使样品冷却至室温。通过XRPD分析确定所得的固体为实施方案9。实施方案9的TGA和DSC分别示于图22A和图22B中。

实施方案1s通过使实施方案9在50℃处在以下溶剂中浆化6天来获得：2-丁酮、丙酮/水(90/10，体积/体积)和乙腈/水(90/10，体积/体积)。当在室温下进行相同的实验时，也获得实施方案1s。

实施方案8通过将实施方案5加热至约175℃的温度来获得。实施方案8也通过附加的程序获得。此类程序中的一种是两步程序：用1,4-二氧六环(10体积)处理实施方例1s(1.5g)并在室温下搅拌72小时。过滤所得的悬浮液，并且将获得的固体在室温下于真空烘箱中干燥16小时。通过XRPD确定从该第一步获得的固体为实施方案3c。在第二步中，将实施方案3c(100mg)以10℃/分钟加热至150℃，然后以2℃/分钟的较慢速率加热至180℃。然后使样品冷却回室温。通过XRPD确定所得的固体为实施方案8。此类程序中的另一种也是用于获得实施方案8的两步程序。在该程序中，用1,4-二氧六环(3体积)处理实施方案19(300mg)并在60℃处摇动24小时。过滤所得的悬浮液，并且通过XRPD确定从该第一步获得的固体为实施方案3c。在第二步中，将实施方案3c(300mg)以10℃/分钟加热至180℃。然后使样品冷却回室温。通过XRPD确定所得的固体为实施方案8。实施方案8的TGA和DSC分别示于图20A和图20B中。

除了如上所述的实施方案6的制备之外，该实施方案通过加热实施方案11(80mg至100mg，其制备方式将在下文描述)，通过热重量分析以10℃/分钟从环境温度加热至185℃，并且保持等温3分钟来获得。然后使样品冷却至室温。实施方案6也通过使实施方案11经受浆液实验而从实施方案11获得。浆液实验按如下方式运行：将溶剂添加到实施方案11(50mg)中，并且将混合物在指定温度下搅拌0.5小时。加入形式9的晶种(5mg)，并且将混合物在指定温度下搅拌过夜。通过离心分离固体并通过XRPD使用乙酸异丙酯(0.5mL)在30℃和50℃两者下分析。实施方案6的生成通过XRPD确认。实施方案6的TGA和DSC分别示于图19A和图19B中。

式I化合物的附加实施方案如下所述获得。

通过使实施方案5经受浆液实验将其转化成实施方案9。使用各种溶剂在所鉴定的温度下如下进行浆液实验：将溶剂添加到实施方案5(50mg)中，并且将混合物在指定温度下搅拌0.5小时。加入形式9的晶种(5mg)，并且将混合物在指定温度下搅拌过夜。通过离心分离固体并通过XRPD分析。使用以下溶剂进行50℃处的浆液实验运行：TBME(0.75mL)以及乙酸异丙酯:庚烷的33:67混合物(0.5mL)。使用以下溶剂进行75℃处的浆液实验运行：乙酸异丙酯(0.5mL)和甲基乙基酮(0.5mL)。

实施方案11按如下方式获得：将实施方案1s(45g)在乙醇(无水，水含量<0.1％，300mL)中的悬浮液在50℃处搅拌16.5小时。然后以0.25℃/分钟将悬浮液冷却至5℃。随后，在5℃处将悬浮液搅拌3小时。然后滤出固体并用冷(5℃)乙醇(无水，水含量<0.1％，90mL)洗涤，并且在40℃处真空干燥17小时，获得大约39g的实施方案11。实施方案11的TGA和DSC分别示于图17A和图17B中。

实施方案11还按如下方式获得：将无水乙醇(170mL)添加到实施方案1s(19g)中并加热至溶剂的约沸点。少量固体(5％)不溶解并且通过热过滤去除。确定滤出的固体为实施方案1s。因此将固体添加回滤液中，并且将该混合物加热直至所有固体溶解。经由分液漏斗向该热溶液中逐滴加入庚烷(535mL)。在庚烷的该逐滴加入期间，剧烈搅拌该热溶液。在庚烷加入完成后，将含有热溶液/庚烷混合物的烧瓶浸入冰水浴中并剧烈搅拌一小时。然后通过过滤收集固体，并且通过使空气通过白色固体滤饼来干燥15分钟。通过在高真空下在70℃处加热16小时，并且然后在80℃处加热18小时，将其进一步干燥，获得16.3g的实施方案11。实施方案11的衍射图示于图7中。

在实施方案11的吸湿性研究中，发现它仅是轻微吸湿性的，其中在如图18所示的GVS分析中，0％至90％RH之间的质量变化为0.66％。GVS分析后的XRPD分析示出材料是物理稳定的。执行变温(VT)-XRPD以评估实施方案11在加热时的稳定性。如XRPD分析所示，材料在经受高达约175℃的温度时保持不变，然而在经受高于180℃的温度时，样品转化成实施方案6。在图24中示出了实施方案11在VT-XRPD实验之前和之后的衍射图以及实施方例6的衍射图。实施方案11还在40℃/75％RH下经受静态储存分析长达48天。在2天、5天和48天后，通过XRPD和Karl Fisher(KF)分析样品。实施方案11如XRPD分析所示保持不变，其中48天后总水摄取量为1.2％。材料在静态储存48天后的¹H-NMR示出材料保留0.36摩尔当量的乙醇。¹H-NMR表明，在环境条件下储存该研究期间的实施方案11含有0.46摩尔当量的乙醇。

实施方案11b按如下方式从实施方案1s获得：将10mL干燥甲醇添加到3.3g实施方案1s中。使该混合物经受以下温度循环：将混合物在40℃处加热1小时，并且然后在2小时周期内将温度升至60℃。然后将混合物在60℃处加热1小时。然后在2小时周期内将温度降至40℃。将该温度循环方案重复总共约20小时。此时，在2小时周期内将混合物冷却至5℃。在5℃处通过真空过滤分离固体，并且然后在环境温度下真空干燥约66小时。另选地，实施方案11b使用以下程序从实施方案1s获得：将1mL干燥甲醇添加到330mg实施方案1s中。使该混合物经受以下温度循环：将混合物在40℃处加热1小时，并且然后在2小时周期内将温度升至60℃。然后将混合物在60℃处加热1小时。然后在2小时周期内将温度降至40℃。将该温度循环方案重复总共约18小时。此时，通过离心分离固体，并且然后在环境温度下真空干燥约33小时。使用分子筛(在真空下于100℃处活化至少24小时)干燥上述实验的甲醇。实施方案11b的衍射图示于图7E中。

实施方案12得自实施方案1s，其在25℃处暴露于低于10％RH的湿度条件以提供实施方案12。实施方案12的衍射图示于图7B中。

实施方案13按如下方式获得：向25±5℃处的250mL 4-颈烧瓶中添加实施方案1s的样品。然后向烧瓶中加入MeOH(4.0V，40mL)和纯化水(10mL，1.0V)，并且搅拌直至所有固体溶解。向混合物中鼓入N2 1小时，并且然后将混合物冷却至0至5℃。在N2下于0℃处，将纯化水(40mL)装入到100mL 4颈烧瓶中，接着添加NaBH4(1.0g)，制备0.225mL体积的NaBH4/水(0.006当量，2.5％重量/重量)的冷溶液(0至5℃)；将混合物在0℃处搅拌，直至所有NaBH4溶解。将此类NaBH4溶液添加到冷却(0至5℃)的250mL烧瓶中并在0至5℃处搅拌。反应混合物的颜色变为黄色。在0至5℃处，在1小时内滴加纯化水(40mL，4.0V，使用前用N2脱气)。将反应在N2下在0至5℃处搅拌4小时。在0至5℃处，在1小时内滴加附加的纯化水(30mL，3.0V，脱气)，并且在N2下在0至5℃处将反应混合物再搅拌16小时。然后过滤反应，并且在手套箱环境中在N2(O2含量为200ppm)下，用纯化水(20mL，2V，使用前用N2脱气)洗涤所得的固体。将固体在35±5℃处用润湿的氮气真空干燥，以提供呈灰白色固体的实施方案13。实施方案13的衍射图示于图7C中。

实施方案14按如下方式制备：将2-(1-((1r,4r)-4-(氰甲基)环己基)-6-(苯磺酰基)-1,6-二氢咪唑并[4,5-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-N-(2-羟基-2-甲基丙基)乙酰胺(48.15kg，在实施例2的步骤B中制备)、EtOH(技术等级，481L)和KOH(6.613kg)在10℃至20℃处搅拌9小时。然后用乙酸(6.74L)淬灭反应，将温度保持在10℃至20℃。加入乙腈(240L)，并且将溶剂减压蒸发至约240L的体积。将乙腈的该加入和蒸发再重复两次。将所得的混合物加热至60℃至70℃并保持5小时，之后将其冷却至10℃至15℃并搅拌2小时。然后将该混合物中的固体过滤掉并用乙腈(48L)洗涤两次。然后将固体添加到水(240L)中，并将反应混合物在45℃至50℃处加热3小时至5小时，然后在15℃至20℃处冷却4小时。滤出剩余的固体并用水(96L，两次)洗涤滤饼。将该滤饼在45℃处干燥以提供实施方案14(26.28kg)。实施方案14的衍射图示于图7D中。

式I化合物的附加实施方案如下所述获得。

溶解度评估

用渐增体积的溶剂处理实施方案1s(15mg)，直至材料完全溶解或直至已加入最多100mL溶剂。按如下增量加入溶剂：5mL、10mL、20mL、30mL、40mL、50mL、70mL和100mL。在每次加入溶剂之后，在轻轻搅拌下将体系在50℃处保持5分钟，并且目视评估固体的存在。该过程持续进行，直至总共加入100mL溶剂。如果无固体残留，则不加入附加的溶剂。在评估完成之后，将溶液在50℃处保持1小时，并且然后在搅拌下以0.1℃/分钟从50℃冷却至5℃。如果存在固体，则使用96孔板在真空下过滤混合物并通过XRPD进行分析。如果获得澄清溶液，则使溶液在室温下蒸发。以下溶剂(其中添加的总溶剂量紧接在溶剂之后的括号中注明)在5℃和50℃的温度下根据该程序使用，其中在得到所注明的实施方案的每个温度之后的括号内给出溶解程度：5℃(悬浮液)和50℃(悬浮液)下的水(100mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；5℃(悬浮液)和50℃(溶液)下的甲醇(10mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；5℃(悬浮液)和50℃(溶液)下的乙醇(30mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；5℃(悬浮液)和50℃(溶液)下的2-丙醇(30mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；5℃(悬浮液)和50℃(溶液)下的1-丙醇(30mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；5℃(悬浮液)和50℃(溶液)下的丙酮(100mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；5℃(悬浮液)和50℃(混浊)下的乙酸乙酯(100mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；5℃(悬浮液)和50℃(溶液)下的乙腈(100mL)，得到其衍射图如图3所示的实施方案6；5℃(部分溶解)和50℃(混浊)下的甲苯(100mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；5℃(悬浮液)和50℃(混浊)下的乙酸异丙酯(100mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；5℃(悬浮液)和50℃(悬浮液)下的甲基叔丁基醚(100mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；5℃(悬浮液)和50℃(溶液)下的2-丁酮(100mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；5℃(部分溶解)和50℃(溶液)下的THF(70mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；5℃(溶液，将样品冷冻并使其在室温下蒸发)和50℃(溶液)下的DMSO(5mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；5℃(溶液，使其在室温下蒸发)和50℃(溶液)下的N-甲基吡咯烷酮(5mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；5℃(悬浮液)和50℃(悬浮液)下的乙醚(5mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；5℃(悬浮液)和50℃(悬浮液)下的甲基异丁酮(100mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；5℃(悬浮液)和50℃(悬浮液)下的DCM(100mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；5℃(悬浮液)和50℃(悬浮液)下的庚烷(100mL)，得到其衍射图如图8所示的实施方案18；5℃(部分溶解，将样品冷冻并使其在室温下蒸发)和50℃(悬浮液)下的1-4-二氧六环(100mL)，得到其衍射图如图5所示的干燥形式的实施方案3c；5℃(悬浮液)和50℃(悬浮液)下的硝基甲烷(100mL)，得到不良结晶的实施方案(衍射图未示出)；5℃(溶液)和50℃(溶液)下的1-甲氧基-2-丙醇(20mL)，得到其衍射图如图11所示的干燥形式的实施方案20；5℃(悬浮液)和50℃(悬浮液)下的2-甲基-THF(100mL)，得到其衍射图如图8所示并且其TGA和DSC分别如图10A和图10B所示的实施方案18；5℃(悬浮液)和50℃(混浊)的四氢化萘(100mL)，得到其衍射图如图3所示的实施方案4和实施方案1b的混合物；5℃(悬浮液)和50℃(溶液)下的3-甲基-1-丁醇(100mL)，得到其衍射图如图8所示并且其TGA和DSC分别如图12A和图12B所示的实施方案17；5℃(悬浮液)和50℃(混浊)下的苯甲醚(100mL)，得到其衍射图如图3所示的实施方案4和实施方案1b的混合物；5℃(溶液)和50℃(溶液)下的叔丁醇/水(1:1，10mL)，得到其调制DSC如图9所示的干燥形式的实施方案19；5℃(悬浮液)和50℃(混浊)下的1,2-二甲氧基乙烷(100mL)，得到其衍射图如图3所示的实施方案4和实施方案1b的混合物；5℃(悬浮液)和50℃(混浊)下的异丙基苯(100mL)，得到其衍射图如图3所示的实施方案4和实施方案1b的混合物；5℃(悬浮液)和50℃(悬浮液)下的二异丙醚(100mL)，得到其衍射图如图8所示的实施方案18；5℃(悬浮液)和50℃(溶液)下的吗啉(5mL)，得到其衍射图如图11所示的干燥形式的实施方案21；5℃(悬浮液)和50℃(溶液)下的乙醇:水(95:5，10mL)，得到不良结晶的实施方案(衍射图未示出)；5℃(溶液)和50℃(溶液)下的乙醇:水(9:1，5mL)，得到其衍射图如图5所示的干燥形式的实施方案1s；以及5℃(悬浮液)和50℃(溶液)下的乙腈:水(95:5，30mL)，得到不良结晶的实施方案(衍射图未示出)。

在5℃处温育

通过用每种溶剂处理实施方案1s(30mg)来进行在5℃处温育的若干实验，并且将混合物在5℃处浆化48小时。取出等分试样并立即通过XRPD进行分析。将每个等分试样干燥16小时，并且通过XRPD重新分析。然后将风干的样品置于真空烘箱(室温)中24小时，之后通过XRPD进一步分析。以下溶剂(其中添加的总溶剂量在溶剂之后的括号中注明，后面是溶解程度)根据得到所注明的实施方案的该程序使用：水(30mL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；甲醇(5mL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；乙醇(30mL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；2-丙醇(30mL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；1-丙醇(30mL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；丙酮(30mL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；乙酸乙酯(30mL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；乙腈(30mL，悬浮液)，得到不良结晶的实施方案(衍射图未示出)；甲苯(30mL，悬浮液)，得到其衍射图如图8所示的实施方案15；乙酸异丙酯(30mL，悬浮液)，得到其衍射图如图8所示的实施方案17；甲基叔丁基醚(30mL，悬浮液)，得到其衍射图如图8所示的实施方案18；2-丁酮(30mL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；THF(30mL，悬浮液)，得到其衍射图如图8所示的实施方案17；乙醚(30mL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；甲基异丁酮(30mL，悬浮液)，得到其衍射图如图8所示的实施方案17；DCM(30mL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；庚烷(30mL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；1,4-二氧六环(30mL，悬浮液)，得到其来自该实验的衍射图如图5所示的实施方案3c；硝基甲烷(30mL，悬浮液)，得到其衍射图未示出的不良结晶形式的实施方案1s；丙二醇(30mL，悬浮液)，得到不良结晶的实施方案(衍射图未示出)；2-甲基四氢呋喃(30mL，悬浮液)，得到其衍射图如图8所示的实施方案18；四氢化萘(30mL，悬浮液)，得到其衍射图未示出的不良结晶的实施方案1s；3-甲基-1-丁醇(30mL，悬浮液)，得到其衍射图如图8所示的实施方案18；苯甲醚(30mL，悬浮液)，得到实施方案1s，其中其衍射图类似于实施方案1s的衍射图(如图5所示)，不同的是它显示一些附加的峰；1,2-二甲氧基乙烷(30mL，悬浮液)，得到实施方案1s，其中其衍射图类似于实施方案1s的衍射图(如图5所示)，不同的是它显示一些附加的峰；异丙基苯(30mL，悬浮液)，得到实施方案1s，其中其衍射图类似于实施方案1s的衍射图(如图5所示)，不同的是它显示一些附加的峰；二异丙醚(30mL，悬浮液)，得到其衍射图如图8所示的实施方案17；乙醇:水(95:5，30mL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；乙腈:水(95:5，30mL，悬浮液)，得到不良结晶的的实施方案(衍射图未示出)；以及聚乙二醇(30mL，悬浮液)，得到不良结晶的实施方案(衍射图未示出)。

热/冷熟化

将实施方案1s(30mg)在每种溶剂中的悬浮液置于平台振荡温育箱中并经受从环境温度至大约50℃的一系列热冷却循环24小时。这通过每4小时打开和关闭加热来实现。自始至终保持摇动。从每个样品取出等分试样并使其风干2小时。通过XRPD分析风干的固体，然后使用真空烘箱(室温，24小时)真空干燥并通过XRPD重新分析。将该实验中获得的每个样品真空干燥，并且在真空干燥后，通过在高温下进行XRPD温育来分析每个样品。以下溶剂(其中添加的总溶剂量在溶剂之后的括号中注明)根据得到所注明的实施方案的该程序使用：水(20mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；甲醇(5mL)，得到其衍射图如图13所示的实施方案22；乙醇(5mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；2-丙醇(10mL)，得到对于该实验其衍射图如图13所示的实施方案27；1-丙醇(10mL)，得到其衍射图如图13所示的实施方案23；丙酮(20mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；乙酸乙酯(20mL)，得到其衍射图未示出的不良结晶形式的实施方案1s；乙腈(20mL)，得到其衍射图如图13所示的不良结晶的的实施方案24；甲苯(20mL)，得到其衍射图未示出的不良结晶的实施方案1s；乙酸异丙酯(20mL)，得到其衍射图如图13所示的实施方案18；甲基叔丁基醚(20mL)，得到其衍射图未示出的不良结晶的实施方案1s；2-丁酮(20mL)，得到其衍射图如图13所示的实施方案26；THF(20mL)，得到其衍射图如图13所示的实施方案18；乙醚(20mL)，得到其衍射图未示出的不良结晶的实施方案1s；甲基异丁酮(20mL)，得到其衍射图如图13所示的实施方案25；DCM(20mL)，得到其衍射图未示出的不良结晶的实施方案1s；庚烷(20mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；1,4-二氧六环(20mL)，得到对于该实验其衍射图如图13所示的实施方案27；硝基甲烷(20mL)，得到其衍射图未示出的不良结晶的实施方案1s；丙二醇(5mL)，得到不良结晶的实施方案(衍射图未示出)；2-甲基四氢呋喃(20mL)，得到其衍射图如图13所示的实施方案18；四氢化萘(20mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；3-甲基丁醇(20mL)得到其衍射图如图13所示的实施方案18；苯甲醚(20mL)得到其衍射图如图13所示并且其TGA和DSC分别如图23A和图23B所示的实施方案16；1,2-二甲氧基乙烷(20mL)，得到其衍射图如图13所示的实施方案29；异丙基苯(20mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；二异丙基醚(20mL)，得到其衍射图如图13所示的实施方案17；乙醇:水(95:5，20mL)，得到其衍射图如图13所示的实施方案30；乙腈:水(95:5，20mL)得到其衍射图未示出的不良结晶形式的实施方案1s；以及聚乙二醇(5mL)，得到实施方案31，其衍射图示于图13中。

实施方案1s在60℃处温育

用溶剂处理实施方案1s(30mg)并在60℃处摇动24小时。取出等分试样并使其风干16小时。然后通过XRPD分析干燥的样品。

以下溶剂(其中添加的总溶剂量在溶剂之后的括号中注明)根据得到所注明的实施方案的该程序使用：水(10mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；乙醇(10mL)，得到其衍射图如图14所示的实施方案32；2-丙醇(10mL)，得到其衍射图如图14所示的实施方案33；1-丙醇(10mL)，得到其衍射图如图14所示的实施方案23；丙酮(10mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；乙酸乙酯(10mL)，得到其衍射图如图14所示的实施方案34；乙腈(10mL)，得到其衍射图如图14所示的实施方案35；甲苯(10mL)，得到其衍射图如图14所示的实施方案36；乙酸异丙酯(10mL)，得到对于该实验其衍射图如图14所示的实施方案25；甲基叔丁基醚(10mL)，得到其衍射图如图14所示的实施方案35；2-丁酮(10mL)，得到其衍射图如图14所示的实施方案38；THF(10mL)，得到对于该实验其衍射图如图14所示的实施方案33；乙醚(10mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；甲基异丁酮(10mL)，得到对于该实验其衍射图如图14所示的实施方案25；DCM(10mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；庚烷(10mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；1-4-二氧六环(10mL)，得到其衍射图如图14所示的实施方案33；硝基甲烷(10mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；

丙二醇(10mL)，得到对于该实验其衍射图如图14所示的实施方案28；2-甲基四氢呋喃(10mL)，得到其衍射图如图14所示的实施方案33；四氢化萘(10mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s和其调制DSC曲线如图9所示的实施方案19的混合物(混合物的衍射图未示出)；3-甲基-1-丁醇(10mL)，得到其衍射图如图14所示的实施方案33；苯甲醚(10mL)，得到其衍射图如图14所示的实施方案36；1,2-二甲氧基乙烷(10mL)，得到其衍射图如图14所示的实施方案34；异丙基苯(10mL)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；二异丙基醚(10mL)，得到其衍射图如图8所示的实施方案17；乙醇:水(95:5，10mL)，得到其衍射图如图14所示的实施方案28；和丙二醇(5mL)，得到对于该实验其衍射图如图14所示的实施方案39

高温熟化

用如下所示量的溶剂处理多个实施方案19(25mg)样品中的每个样品，继而产生多个样品，每个样品在60℃处搅拌24小时。分离来自每个样品的固体，风干16小时并通过XRPD进行分析。以下溶剂(其中添加的总溶剂量紧接在溶剂之后的括号中注明，后面是溶解程度)根据得到所注明的实施方案的该程序使用：水(125μL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；甲醇(125μL，悬浮液)，得到其衍射图类似于图5所示的实施方案1s的衍射图的实施方案1s，不同的是它显示一些附加的峰；乙醇(125μL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；2-丙醇(75μL，悬浮液)，得到其衍射图如图15所示的实施例37；1-丙醇(75μL，悬浮液)，得到其衍射图如图15所示的实施方案40；丙酮(75μL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；乙酸乙酯(75μL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；乙腈(75μL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；甲苯(75μL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；乙酸异丙酯(75μL，悬浮液)，得到其衍射图示于如图15所示的实施方案37；甲基叔丁基醚(75μL，悬浮液)，得到其衍射图如图14所示的实施方案33；2-丁酮(75μL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；THF(75μ，悬浮液)，得到其衍射图如图15所示的实施方案37；乙醚(150μL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；甲基异丁酮(150μL，悬浮液)，得到其衍射图如图14所示的实施方案33；DCM(75μL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；庚烷(150μL，悬浮液)，得到其衍射图如图15所示的实施方案41；1，4-二氧六环(75μL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案3c；硝基甲烷(75μL，悬浮液)，得到其衍射图如图15所示的实施方案42；丙二醇(75μL，悬浮液)，得到其衍射图如图15所示的实施方案43；2-甲基-四氢呋喃(150μL，悬浮液)，得到其衍射图如图14所示的实施方案33；四氢化萘(150μL，悬浮液)，得到其衍射图如图14所示的实施方案33；3-甲基-1-丁醇(75μL，悬浮液)，得到其衍射图如图14所示的实施方案33；苯甲醚(150μL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；1，2-二甲氧基乙烷(75μL，悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；异丙基苯(150μL，悬浮液)，得到其衍射图如图15所示的实施方案44；二异丙醚(150μL，悬浮液)，得到其衍射图如图14所示的实施方案33；乙醇：水(95：5，75μL，悬浮液)，得到其衍射图如图15所示的实施方案45；乙腈：水(95：5，75μL，悬浮液)，得到实施方案1s，当与图5中所示的衍射图比较时，其衍射图显示出细胞扩增；和聚乙二醇(75μL，悬浮液)，得到其衍射图如图15所示的实施方案46。

热循环

用如下所示量的溶剂处理多个实施方案19(25mg)样品中的每个样品，继而产生多个样品，通过热循环(40℃至60℃，4小时循环)使每个样品熟化24小时。分离固体，风干16小时并通过XRPD进行分析。以下溶剂(其中添加的总溶剂量紧接在溶剂之后的括号中注明，后面是在24小时观察到的外观)根据得到所注明的实施方案的该程序使用：水(125μL，淡绿色固体)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；甲醇(75μL，透明固体)，得到实施方案11，当与图7中的衍射图相比时，其衍射图显示出以高角度偏移的峰；乙醇(100μL，淡绿色固体)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；2-丙醇(75μL，淡黄色固体)，得到其衍射图如图14所示的实施方案33；1-丙醇(75μL，白色悬浮液)，得到其衍射图如图14所示的实施方案33；丙酮(75μL，淡绿色固体)，得到其衍射图如图16所示的实施方案47；乙酸乙酯(75μL，白色悬浮液)，得到其衍射图如图14所示的实施方案33；乙腈(75μL，白色悬浮液)，得到其衍射图如图3所示的实施方案6的不良结晶；甲苯(75μL，透明固体)，得到其衍射图如图14所示的实施方案36；乙酸异丙酯(75μL，白色固体)，得到其衍射图如图14所示的实施方案33；甲基叔丁基醚(75μL，白色悬浮液)，得到其衍射图如图3所示的实施方案6；2-丁酮(75μL，灰白色固体)，得到其衍射图如图14所示的实施方案33；THF(75μL，灰白色固体)，得到其衍射图如图16所示的实施方案48；乙醚(150μL，灰白色固体)，得到其衍射图如图16所示的实施方案49；甲基异丁酮(150μL，灰白色固体)，得到其衍射图非常类似于图13中所示的实施方案25的衍射图的实施方案25；DCM(125μL，白色悬浮液)，得到其衍射图如图5所示的实施方案1s；庚烷(150μL，白色固体)，得到其改进的DSC曲线如图9所示的实施方案19；1，4-二氧六环(75μL，白色固体)，得到其衍射图如图5所示的实施方案3c；硝基甲烷(75μL，白色悬浮液)，得到其衍射图如图16所示的实施方案50；丙二醇(75μL，乳膏悬浮液)，得到其衍射图非常类似于实施方案10的衍射图(如图16中所示)的实施方案10，不同的是它显示出无定形晕；2-甲基-四氢呋喃(150μL，白色固体)，得到其衍射图如图16所示的实施方案48；四氢化萘(150μL，白色固体)，得到其衍射图未示出的不良结晶的的实施方案；3-甲基-1-丁醇(75μL，白色悬浮液)，得到其衍射图如图13所示的实施方案25；苯甲醚(150μL，白色悬浮液)，得到其衍射图如图16所示的实施方案51；1，2-二甲氧基乙烷(75μL，白色悬浮液)，得到其衍射图如图16所示的实施方案52；异丙基苯(150μL，白色固体)得到其衍射图未示出的不良结晶的实施方案；二异丙醚(150μL，白色固体)，得到其衍射图如图3所示的实施方案6；乙醇∶水(95∶5，75μL，透明固体)，得到其衍射图如图7所示的实施方案11；乙腈∶水(95∶5，75μL，透明固体)，得到其衍射图如图16所示的实施方案53；和丙二醇(75μ，淡粉色悬浮液)，得到其衍射图非常类似于实施方案31的衍射图(如图13所示)的实施方案31，不同的是它显示出无定形晕。

式I化合物的实施方案11、11b、12、13、14、15、16、17、18、19、20、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52和53中的任一个实施方案及其任何组合是根据本发明的化合物的实施方案。根据本发明的化合物的其他实施方案包括非吸湿性溶剂化物形式的式I化合物，诸如式I化合物的实施方案11。根据本发明的化合物的其他实施方案包括无定形形式的式I化合物，诸如式I化合物的实施方案19。式I化合物的实施方案11、16、17和18中的任一个实施方案及其任何组合是根据本发明的化合物的实施方案。本发明的另外实施方案包括呈药学上可接受的共晶体形式的根据本发明的化合物。本发明的附加实施方案包括呈药学上可接受的盐形式的根据本发明的化合物。

本发明的实施方案包括呈下列形式中的至少一种形式的式I化合物：1s、1a、1b、1c、1d、1e、1f、1g、1h、2、3b、3c、3d、3e、5、6、7、8、9和10。本发明的实施方案包括呈药学上可接受的共晶体形式的式I化合物。

本发明的实施方案包括呈下列形式中的至少一种形式的式I化合物：1s、1a、1b、1c、1d、1e、1f、1g、1h、2、3b、3c、3d、3e、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52和53。本发明的实施方案包括呈药学上可接受的共晶体形式的式I化合物。

形式1s的式I化合物的XRPD示于图25中。主峰的列表包括2θ值为6.13±0.2、9.88±0.2、10.26±0.2、13.39±0.2、14.52±0.2、16.64±0.2、18.24±0.2、19.98±0.2、20.58±0.2和22.01±0.2的那些。

在酶促测定和细胞测定中测试式I化合物。酶促测定的结果及其描述呈现于2019年5月21日发布的美国专利10,294,226中的标题为“酶促抑制测定结果”的表4和第51-54列中，该专利通过引用整体并入本文。该化合物还在三种细胞测定中进行了测试：IL-2pSTAT5(JAK1/JAK3)、IFNαpSTAT-4(JAK1/TYK2)和GM-CSF pSTAT5(JAK2/JAK2)，其结果和测定法描述呈现于美国专利10,294,226中标题为“基于细胞的测定数据”的表5和第53-55列中，该专利通过引用整体并入本文。

在溶解度测定和渗透性测定中测试式I化合物。溶解度测定的结果呈现于标题为“溶解度测定数据”的表6中，并且渗透性测定的结果呈现于标题为“MDCK-MDR1渗透性数据”的表7及美国专利10,294,226第55-58列中，该专利通过引用整体并入本文。

根据美国专利10,294,226的表1a中第21-22列和第58-59列所述的方案对式I化合物进行测试，该专利通过引用整体并入本文。

式I化合物的进一步特征在于如美国专利10,294,226的表8中第59列所描述和给出的物理化学性质，该专利通过引用整体并入本文。

式I化合物的进一步特征在于实施方案11、11b、12、15、16、17、18、19、20、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52和53的描述，如2020年5月28日公开的美国专利申请US2020/0165250的图7A、图7B、图7C、图7D、图7E和图8-图23以及段落[0328]-[0348]中描述和给出的，该专利申请通过引用整体并入本文。

以下实施例中以mg计的量是指式I化合物形式的活性剂的量。如果所施用的是另一种形式的活性剂，诸如药学上可接受的盐，则应当进行适当的校正。

实施例2：体内研究

在结肠组织中的IL-12/IL-18诱导的STAT3磷酸化测定中和在离体细胞因子刺激的结肠外植体研究中，式I化合物在小鼠中展示出高的结肠暴露和组织靶标接合，在口服给药后具有低的全身暴露。如通过用干扰素-α(IFNα)或IL-21离体全血刺激所测定的，式I化合物在小鼠中口服给药导致最小程度的全身暴露并且在血液中缺乏一致的剂量依赖性药效学反应。

式I化合物在口服施用后呈现出低水平的全身暴露。为了了解在人体研究中全身暴露和靶标接合之间的关系，用此类化合物测量人全血中细胞因子诱导的pSTAT-3的抑制。在人全血中，式I化合物以浓度依赖性方式抑制IFNα(JAK1/Tyk2)、血小板生成素(TPO)(JAK2/JAK2)和IL-21(JAK1/JAK3)信号传导下游的JAK1、JAK2、JAK3和Tyk2同型二聚体和异二聚体。使用式I化合物的IFNα、TPO和IL-21介导的STAT3磷酸化的平均IC50值分别为105.3nM、490.4nM和579.2nM，如表3所示，其中报道了式I化合物的结果。

表3.人和鼠全血中细胞因子诱导的pSTAT的式I化合物的IC50

式I化合物	IC50/nM	95％CI(a)	n(c)
				人IFNα^(b)(pSTAT-3)	105.3	84.0-131.9	4
人TPO^(e)(pSTAT-3)	490.4	282.1-852.7	2
				人IL-21(pSTAT-3)	579.2	536.2-625.7	2
鼠IFNα^(b)(pSTAT-3)	298.6	121.7-733.1	2
				鼠IL-21(pSTAT-3)	415.1	308.1-559.4	3
鼠IL-12(pSTAT-4)	ND(d)

^(a)CI，置信区间；^(b)IFNα，干扰素α；^(c)n，试验次数；^(d)ND，未测定，不收敛；^(e)TPO，血小板生成素。

还生成了小鼠全血IC50值以建立对鼠类模型中全身暴露和靶标接合之间关系的理解。在鼠全血中，测量了式I化合物在鼠全血中抑制IFNα-(JAK1/Tyk2)、IL-21-(JAK1/3)和IL-12-(JAK2/Tyk2)诱导的pSTAT反应的体外活性。表3所示的结果证明式I化合物抑制IFNα和IL21反应，IC50值分别为298.6nM和415.1nM。没有报告抑制鼠全血中IL-12诱导的pSTAT-4的可靠IC50。

为了理解局部、肠选择性JAK抑制剂抑制结肠组织中的STAT信号传导的潜力，开发了两项药代动力学/药效学(PK/PD)研究。第一种涉及在小鼠中联合腹膜内施用IL-12和IL-18，诱导全身性炎症反应，导致结肠组织中JAK/STAT通路的活化，这可以在攻击后三小时通过STAT3的稳健磷酸化来监测。第二种PK/PD模型涉及用细胞因子混合物(IL-22、IL-6和IFNα)离体刺激小鼠结肠组织，测量式I化合物口服给药后对STAT3磷酸化的抑制。

IL-12和IL-18的联合腹膜内施用诱导小鼠的结肠炎(Chikano S等人Gut 47(6),779–786(2000)“IL-18and IL-12induce intestinal inflammation and fatty liver inmice in an IFN-gamma dependent manner”；Nold-Petry C等人Front Immunol.8,1531(2017)“Gp96 Antagonist Protects in Murine-Intestinal-Inflammation”)。用IL 12/IL-18攻击后三小时通过STAT3的稳健磷酸化来监测结肠组织中的炎症反应。在该非GLP研究中，评价口服施用的式I化合物对通过IL-12和IL 18两者全身给药诱导的小鼠结肠组织中的STAT3反应的影响。

将C57BL/6小鼠(6至8周龄)按重量随机化并分配至用于两项研究中每一项研究的不同处理组。用IL-12(250ng)和IL-18(1μg)的组合腹膜内攻击小鼠。为了检查式I化合物对IL-12/IL-18诱导的pSTAT-3反应的影响，在IL-12/IL-18攻击前1小时，给多组小鼠口服给药式I化合物。IL-12/IL-18攻击后三小时，以CO2窒息对小鼠实施安乐死，经由心脏穿刺收集血液用于PK分析，并且收集结肠组织用于测量pSTAT-3反应和药物水平。口服给药20％2-羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)的小鼠用作媒介物对照。进行两项独立的研究(S-1和S-2)以检查式I化合物对小鼠中IL-12/IL-18诱导的结肠pSTAT-3反应的影响。在两项研究中均看到IL-12/IL-18攻击后结肠pSTAT-3的显著增加。在两项实验中，式I化合物均显示出对pSTAT-3反应的明显剂量相关性抑制趋势：在10mg/kg下3.9％和33.1％抑制；在25mg/kg为25.8％和61.2％；以及在50mg/kg下为49.7％和66.1％(表4)。统计分析指示在S-1中缺乏抑制显著性，但在25mg/kg和50mg/kg剂量下在S-2中实现显著抑制。在给药后30分钟和4小时(终点)测量血清水平。如下表5和表6所示，式I化合物在所有测试剂量下在30分钟表现出低全身暴露(nM，平均值±SEM；在10mg/kg下为7.4±1.4和7.0±0.7；在25mg/kg下为21.8±5.5mg/kg和70.5±60.4mg/kg；在50mg/kg剂量下为121.7±87.2mg/kg和38.8±7.4)。如表3所示，对于IL-21诱导的pSTAT-3和IFNα诱导的pSTAT-3和pSTAT-4，观察到的式I化合物的血清暴露显著低于鼠全血IC50。给药后4小时测量结肠药物水平。相对于血清，在用式I化合物处理的小鼠的结肠样品中观察到高药物水平(表5和表6)。式1化合物的结肠暴露以剂量依赖性方式增加。在25mg/kg剂量下，式I化合物的结肠暴露为30814.5±5552.5ng/g组织和18256.5±4118.8ng/g组织。总的来说，血清和结肠暴露数据表明，式I化合物的药理学反应似乎主要由药物的组织暴露驱动。式I化合物通过抑制结肠中IL-12/IL-18诱导的pSTAT-3而展示出体内靶标接合，具有高结肠暴露和低全身暴露。如其他研究中所示，式I化合物在小鼠中口服给药导致最小程度的全身暴露并且在血液中缺乏一致的剂量依赖性药效学反应。

表4.式I化合物对结肠pSTAT-3的抑制

结肠pSTAT-3的抑制百分比在离群值去除后使用对数转化数据来确定。

表5.式I化合物的IL-12/IL-18S-1血清和结肠浓度

数据呈现为平均值±SEM；N＝3-7只/组。BLOQ，低于定量限；min，分钟；h，小时。

表6.式I化合物的IL-12/IL-18S-2血清和结肠浓度

数据呈现为平均值±SEM；N＝3至7只/组。BLOQ，低于定量限；min，分钟；h，小时。

除了上述IL-12/IL-18模型外，在小鼠细胞因子混合物(IL-22/IL-6/IFNα)结肠外植体模型中进一步确定式I化合物的局部功效。IL-22、IL-6和IFNα的组合在攻击后1小时在小鼠结肠外植体中离体诱导快速且稳健的pSTAT-3反应。该研究旨在检查在离体小鼠结肠外植体模型中式I化合物对IL 22/IL 6/IFNα诱导的pSTAT-3反应的剂量反应和作用持续时间。

将C57BL/6小鼠(6至8周龄)按重量随机化并分配至用于每项研究的不同处理组。给小鼠口服给药指定剂量的式I化合物。在研究结束时，经由心脏穿刺收集血液，制备血清和经过洗涤的近端结肠用于PK分析。

远端结肠外植体(大约3mm²)未经处理或经细胞因子(IL 6、IL-22、IFNα各100ng/mL)处理。刺激1小时后，将组织快速冷冻以匀化并测定pSTAT-3。在2项独立实验SS-1和SS-2中，式I化合物剂量依赖性地抑制结肠pSTAT-3。在SS-1中，式I化合物在0.5mg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg和25mg/kg下分别抑制基础pSTAT-3反应54.3％、74.4％、78.6％和89.5％。类似地，在0.5mg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg和25mg/kg下IL 22/IL-6/IFNα刺激的pSTAT-3反应分别受式I化合物抑制42.7％、74.9％、83.8％和93.8％。在SS-2中，基础pSTAT-3在式I化合物的0.5mg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg和25mg/kg剂量下分别受抑制36.7％、66.2％、71.3％和83.8％。IL-22/IL-6/IFNα刺激的pSTAT-3在0.5mg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg和25mg/kg下分别受式I化合物抑制5.5％、62.0％、68.1％和89.8％。因此，通过抑制IL 22/IL 6/IFNα诱导的pSTAT-3反应，式I化合物在离体结肠组织中表现出稳健的靶标接合。

如表7和表8所示，式I化合物的作用伴有式I化合物的低全身暴露(血清)(≤10.3±6.9nM)和高结肠暴露(在SS-1和SS-2中在25mg/kg下分别为27488.1±6128.6ng/g和22929.6±4146.6ng/g)。观察到的式I化合物的高结肠暴露和低全身暴露暗示结肠药物水平作为观察到的药理学的关键驱动因素的作用。式I化合物在口服给药后4小时展示出结肠组织靶标接合。

表7.研究SS-1-式I化合物的血清和结肠浓度(口服剂量后4小时)

治疗组	血清(nM)	结肠(ng/g)
			式I化合物(0.25mg/kg)	BLOQ	446.2±51.5
式I化合物(2.5mg/kg)	BLOQ	2842.3±715.9
			式I化合物(5mg/kg)	BLOQ	4628.5±705.1
式I化合物(25mg/kg)	4.9±2.1	27488.1±6128.6

数据呈现为平均值±SEM；N＝5只/组。BLOQ，低于定量限。

表8.研究SS-2-式I化合物的血清和结肠浓度(口服给药后4小时)

治疗组	血清(nM)	结肠(ng/g)
			式I化合物(0.25mg/kg)	BLOQ	261.5±30.5
式I化合物(2.5mg/kg)	BLOQ	1323.6±270.2
			式I化合物(5mg/kg)	10.3±6.9	4672.4±952.6
式I化合物(25mg/kg)	6.3±2.9	22929.6±4146.6

数据呈现为平均值±SEM；N＝5只/组。BLOQ，低于定量限。

在以10mg/kg的剂量口服施用配制为在20％HP-β-CD中的溶液的式1化合物后0.5小时、1小时、2小时、3小时、5小时、7小时和24小时，在雌性C57B1/6小鼠(N＝3/时间点)中进行有限组织(肝、肠)分布研究。收集血浆和以下组织用于化合物浓度分析：肝、整个回肠和整个结肠。匀化前，用盐水冲洗回肠和结肠。在24小时内收集粪便。将所有组织(除血浆以外)在无菌水中匀化，并使用LC-MS/MS测定式I化合物的浓度。该研究的结果证明，在回肠结肠肝脏血浆中观察到最高组织浓度(参见表9)。给药后24小时，粪便中式I化合物的浓度为125.6μg。

表9.以10mg/kg化合物口服施用式I化合物后小鼠的血浆(ng/mL)和组织(ng/g)中式I化合物的浓度(平均值±SD)

a值为平均值±SD(N＝3只动物)。

b BLOQ(1ng/mL)

c N＝2(未计算SD)

BLOQ＝低于定量限；N＝动物数量；po＝口服施用；SD＝标准偏差

在以25mg/kg的剂量口服施用式I化合物后0.5小时、1小时、2小时、3小时、5小时、7小时和24小时，在雄性Sprague-Dawley大鼠(N＝3/时间点)中进行初步组织分布研究。收获以下组织用于化合物浓度分析：肝脏、肾脏、脑、肌肉、附睾脂肪、十二指肠、空肠、回肠、结肠(管腔内容物和组织两者)和血浆。各种组织中的化合物浓度示于表10和表11中。该研究的结果指示低的全身暴露和高的局部浓度(肠道)。

表10.在以25mg/kg(N＝3)向大鼠口服施后血浆(ng/mL)和组织(ngg/g)中式I化合物的平均(±SD)浓度

时间(小时)

血浆

脑

肝脏

肾

脂肪

肌肉

0.5

6.3±1.1

3.5±3.1

158.3±104.5

57.9±26.2

NC(b)

16.7±15.0

1

5.8±NA

BLOQ^(a)

70.4±NA^(c)

42.2±NA

BLOQ(a)

NC(b)

2

3.7±0.9

BLOQ^(a)

49.9±17.5

24.3±6.6

BLOQ(a)

3

3.1±1.1

BLOQ(a)

29.6±14.5

30.0±9.4

NC(b)

BLOQ(a)

5

1.5±0.7

BLOQ(a)

18.7±3.0

12.9±3.6

BLOQ(a)

7

2.1±0.5

BLOQ(a)

20.7±3.0

19.9±7.8

NC(b)

24

BLOQ(a)

NC(b)

BLOQ(a)

(a)BLOQ低于定量限(0.5ng/mL组织匀浆)。

(b)如果3个样品中的2个样品为BLOQ，则NC＝未计算平均值。浓度<BLOQ设定为0以计算平均值。

(c)NA＝不适用/不可用

表11.在以25mg/kg(N＝3)向大鼠口服施后肠组织(ngg/g)和管腔内容物(ng/mL) 中式I化合物的平均(±SD)浓度

(a)NC，如果3个样品中的2个样品为BLOQ(0.5ng/mL组织匀浆)，则未计算平均值。BLOQ＝低于定量限；Duod＝十二指肠；N＝动物数量；NC＝未计算；po＝口服施用；SD＝标准偏差

实施例3：评价式I化合物即Janus激酶(JAK)抑制剂在患有家族性腺瘤息肉病的参与者中的功效和安全性的1b期研究

式I化合物是口服、小分子、有效的pan-Janus激酶(JAK)抑制剂，基于渗透性和溶解度具有有利的肠选择性。

这组细胞质酪氨酸激酶的抑制干扰信号转导和转录激活(STAT)蛋白的磷酸化。磷酸化的STAT(pSTAT)易位至细胞核并诱导牵涉类风湿关节炎、炎症性肠病、家族性腺瘤息肉病(FAP)和其他炎性疾病的发病机制的几种趋化因子、细胞因子和蛋白酶的基因转录。

目标和终点

本研究的主要目标是确定式I化合物对患有FAP的参与者中的结直肠息肉负荷(息肉负荷的总和)的影响。关键的次要目标是评估在息肉中的安全性、功效的其他量度、局部和全身药代动力学(PK)和药效学(PD)。

总体设计

这是评价式I化合物在患有FAP的成年参与者中的功效和安全性的1b期多中心研究。设计该研究以确定式I化合物是否在结直肠和十二指肠中具有临床活性，如通过在24周的时间内息肉数目的减少和息肉中JAK信号传导的降低所评估的。参与者可以是结肠切除术前或结肠切除术后的，然而，所有参与者都需要有结肠息肉或直肠息肉。所有参与者都需要具有经典FAP的遗传诊断，即，结肠腺瘤性息肉病(APC)种系突变或肯定携带者，有结直肠的疾病累及。患有衰减型FAP的参与者不合格。

参与者数量

该研究将招募大约40名参与者(结肠切除后和结肠切除术前各大约20名)。

治疗组和持续时间

所有参与者将每天两次接受75mg式I化合物。每个参与者参与研究的总持续时间大约32周，由筛选(30天)、治疗(24周)和随访(最后一剂研究药物后大约30天)组成。

式I化合物将由申办方负责以75mg片剂形式制备和提供。

功效评价

所有参与者将在第24周进行功效评价。评价将包括较低的GI息肉负荷、十二指肠息肉负荷和将由研究者进行的疾病反应。

药代动力学评价

收集来自下GI道(肠粘膜和息肉切除术)的静脉血样品和组织样品，用于在活动计划中指定的时间点测量式I化合物的血浆浓度和组织浓度。

药效学和生物标记物评价

生物标记物将用于评估式I化合物对从FAP患者收集的血液、组织活检和粪便样品中的JAK/STAT通路的分子效应物和细胞效应物的影响。然后将评价剂量方案、PK、生物标记物变化和功效之间的关系，并且如果评价另外的剂量则将指导剂量优化。

安全性评价

评价将包括不良事件(AE)、严重不良事件(SAE)、包括肺结核(TB)在内的感染事件、临床实验室血液检查(全血细胞计数和血清化学)、生命体征、内窥镜检查和伴随用药审查的评估。除了局部测试外，还将进行中枢胆固醇测试。

统计方法

在本研究中将不进行正式的统计假设检验。统计方法的具体细节将在统计分析计划中提供。

通过假设到第24周息肉负荷将从基线平均降低至少25％来计算结肠切除术后参与者群组的样本大小为大约20。假设脱落率(dropout rate)为20％。对于到第24周时息肉负荷从基线的变化百分比，假设30个百分点的标准偏差。在这些假设下，到第24周时息肉负荷从基线的百分比变化的95％置信区间具有大约90％或更大的概率以使其上限小于0％，从而提供了用式I化合物治疗平均降低息肉负荷的证据。对于结肠切除术前患者群组，类似地确定样本大小为大约20。

方面：

方面1：一种在治疗或预防受试者的家族性腺瘤息肉病中使用的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物，所述治疗或预防包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物。

方面2：一种在治疗或预防受试者的胃肠系统癌中使用的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和多晶型物，所述治疗或预防包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物。

方面3：一种在治疗或预防受试者的结直肠癌中使用的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和多晶型物，所述治疗或预防包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物。

方面4：一种在治疗或预防处于高风险组中的受试者的家族性腺瘤息肉病或结直肠癌中使用的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和多晶型物，所述治疗或预防包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物。

方面5：一种在治疗或预防受试者的家族性腺瘤息肉病或结直肠癌中使用的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和多晶型物，所述治疗或预防包括：(a)确定选自KRAS、TP53、EGFR、STK11(LKB1)、PTEN、BMPR1A、SMAD4(MADH/DPC4)、MLH1、MSH2、MSH6、PMS2、EPCAM、MUTYH(MYH)、POLD1、POLE和APC的一个或多个基因中的突变；和(b)施用治疗有效剂量的式I化合物。

方面6：一种在诊断所述受试者是否具有发展结直肠癌或家族性腺瘤息肉病的高风险中使用的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和多晶型物，所述治疗或预防包括：(a)确定选自KRAS、TP53、EGFR、STK11(LKB1)、PTEN、BMPR1A、SMAD4(MADH/DPC4)、MLH1、MSH2、MSH6、PMS2、EPCAM、MUTYH(MYH)、POLD1、POLE和APC的一个或多个基因中的突变；和(b)施用治疗有效剂量的式I化合物。

方面7：一种在治疗或预防受试者中受JAK的抑制作用影响的病症或病况中使用的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和多晶型物，所述治疗或预防包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物。

方面8：一种在治疗或预防受试者的CRC复发中使用的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和多晶型物，所述治疗或预防包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物。

方面9：一种在治疗或预防受试者的FAP复发中使用的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和多晶型物，所述治疗或预防包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物。

方面10：一种在治疗或预防已经诊断患有肠易激疾病(IBD)的受试者的SISC中使用的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和多晶型物，所述治疗或预防包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物。

方面11：一种在预防受试者中的恶变前病况变成恶性病况中使用的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和多晶型物，所述治疗或预防包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物。

方面12：根据方面1-11中任一方面所述的用途，其中式I化合物的所述治疗有效量为约10mg至约1000mg。

方面13：根据方面1-12中任一方面所述的用途，其中式I化合物的所述治疗有效量为约1mg至约100mg。

方面14：根据方面1-13中任一方面所述的用途，其中所述式I化合物每天施用一次。

方面15：根据方面1-14中任一方面所述的用途，其中所述式I化合物每天施用两次。

方面16：根据方面1-15中任一方面所述的用途，其中所述受试者先前已接受疗法或目前正在接受疗法。

方面17：根据方面1-16中任一方面所述的用途，其中所述疗法可以是手术、放射疗法、化学疗法、NSAID、Cox-2抑制剂、EGFR抑制剂、VEGF抑制剂和检查点抑制剂。

方面18：根据方面1-17中任一方面所述的用途，其中在治疗FAP中包括降低所述受试者的息肉负荷。

方面19：根据方面1-18中任一方面所述的用途，其中减少息肉负荷包括减小息肉的数目和减小息肉的大小。

方面20：根据方面1-19中任一方面所述的用途，其中处于高风险组的所述受试者包括具有肠易激综合征、存在肠道微生物、结直肠癌家族史、结直肠癌既往史、在结肠镜检查期间发现息肉或癌前病变，或诸如KRAS、TP53、EGFR、STK11(LKB1)、PTEN、BMPR1A、SMAD4(MADH/DPC4)、MLH1、MSH2、MSH6、PMS2、EPCAM、MUTYH(MYH)、POLD1、POLE和APC基因中的突变等其他遗传因素的受试者。

方面21：根据方面1-20中任一方面所述的用途，所述用途还包括与所述式I化合物组合施用第二活性剂，其中所述第二活性剂选自NSAID、Cox-2抑制剂、西妥昔单抗、帕尼单抗、贝伐单抗、Ziv-阿柏西普、瑞戈非尼、雷莫芦单抗、伊匹单抗、纳武单抗和帕博利珠单抗。

方面22：一种预测对其有需要的受试者对式I化合物的反应的方法，所述方法包括：

方面23.一种监测对其有需要的受试者中正在进行的JAK抑制剂疗法的功效的方法，所述方法包括：

Claims

1.一种治疗或预防患有家族性腺瘤息肉病的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物的组合物。

2.一种治疗或预防患有胃肠系统癌的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物的组合物。

3.一种治疗或预防患有结直肠癌的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物的组合物。

4.一种预防处于高风险组中的受试者的家族性腺瘤息肉病或结直肠癌的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物的组合物。

5.一种治疗受试者的结直肠癌或家族性腺瘤息肉病的方法，所述方法包括：

(a)确定选自KRAS、TP53、EGFR、STK11(LKB1)、PTEN、BMPR1A、SMAD4(MADH/DPC4)、MLH1、MSH2、MSH6、PMS2、EPCAM、MUTYH(MYH)、POLD1、POLE和APC的一个或多个基因中的突变；和(b)施用治疗有效剂量的式I化合物。

6.一种诊断受试者是否具有在受试者中发展结直肠癌或家族性腺瘤息肉病的高风险的方法包括：(a)确定选自KRAS、EGFR、STK11(LKB1)、PTEN、BMPR1A、SMAD4(MADH/DPC4)、MLH1、MSH2、MSH6、PMS2、EPCAM、MUTYH(MYH)、POLD1、POLE TP53和APC的一个或多个基因中的突变；和(b)施用治疗有效剂量的式I化合物。

7.一种在需要治疗的受试者中预防受JAK的抑制作用影响的病症或病况的方法，所述方法包括施用式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物。

8.根据权利要求1-7所述的方法，其中式I化合物的所述治疗有效量为约10mg至约1000mg。

9.根据权利要求1-8所述的方法，其中式I化合物的所述治疗有效量为约1mg至约100mg。

10.根据权利要求1-9所述的方法，其中所述式I化合物每天施用一次。

11.根据权利要求1-9所述的方法，其中所述式I化合物每天施用两次。

12.根据权利要求1-11所述的方法，其中所述受试者先前已接受疗法或目前正在接受疗法。

13.根据权利要求1-12所述的方法，其中所述疗法可以是手术、放射疗法、化学疗法、NSAID、Cox-2抑制剂、EGFR抑制剂、VEGF抑制剂和检查点抑制剂。

14.根据权利要求1-13所述的方法，所述方法还包括与所述式I化合物组合施用第二活性剂，其中所述第二活性剂选自NSAID、Cox-2抑制剂、西妥昔单抗、帕尼单抗、贝伐单抗、Ziv-阿柏西普、瑞戈非尼、雷莫芦单抗、伊匹单抗、纳武单抗和帕博利珠单抗。

15.一种预测对其有需要的受试者对式I化合物的反应的方法，所述方法包括：

16.一种监测对其有需要的受试者中正在进行的JAK抑制剂疗法的功效的方法，所述方法包括：

17.一种式I化合物，所述式I化合物在根据权利要求1-16中任一项所述的方法中使用。

18.一种式I化合物在制备用于根据权利要求1-16中任一项所述的方法的药物中的用途。