CN117321045A - 经取代的杂环化合物 - Google Patents

Abstract

公开了可用于通过作用于Tyk‑2以引起信号转导抑制来调节IL‑12、IL‑23和/或IFNα的下式I的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中所有取代基都是如本文所定义的。本发明的化合物可用于治疗神经系统变性疾病或障碍。

Description

经取代的杂环化合物

相关申请的交叉引用

本申请要求2021年5月14日提交的美国临时申请号63/188,498和2022年4月26日提交的美国临时申请号63/334,717的权益，将这些申请的公开内容通过引用以其整体并入本文。

技术领域

本发明涉及可用于通过作用于Tyk-2以引起信号转导抑制来调节IL-12、IL-23和/或IFNα的化合物。本文提供了经取代的杂环化合物、包含此类化合物的组合物以及它们的使用方法。本发明进一步涉及含有至少一种根据本发明的化合物的药物组合物，所述药物组合物可用于治疗哺乳动物中与IL-12、IL-23和/或IFNα的调节相关的病症。特别地，本发明涉及对神经系统变性疾病有效用的化合物。

背景技术

共有共同的p40亚基的异二聚体细胞因子白细胞介素(IL)-12和IL-23由活化的抗原呈递细胞产生，并且在Th1和Th17细胞(在自身免疫中起着关键作用的两个效应T细胞谱系)的分化和增殖中至关重要。IL-23由p40亚基和独特的p19亚基构成。IL-23通过由IL-23R和IL-12Rβ1组成的异二聚体受体起作用，对于产生促炎细胞因子如IL-17A、IL-17F、IL-6和TNF-α的Th17细胞的存活和扩增至关重要(McGeachy,M.J.等人,"The link between IL-23and Th17 cell-mediated immune pathologies",Semin.Immunol.,19:372-376(2007))。这些细胞因子在介导许多自身免疫性疾病的病理生物学中至关重要，所述自身免疫性疾病包括类风湿性关节炎、多发性硬化、炎性肠病和狼疮。IL-12除了含有与IL-23共有的p40亚基外，还含有p35亚基并且通过由IL-12Rβ1和IL-12Rβ2构成的异二聚体受体起作用。IL-12是Th1细胞发育和IFNγ分泌必需的，IFNγ是通过刺激MHC的表达、将B细胞类别转换为IgG亚类以及活化巨噬细胞而在免疫中发挥决定性作用的一种细胞因子(Gracie,J.A.等人,"Interleukin-12induces interferon-gamma-dependent switching ofIgGalloantibody subclass",Eur.J.Immunol.,26:1217-1221(1996)；Schroder,K.等人,"Interferon-gamma:an overview of signals,mechanisms and functions",J.Leukoc.Biol.,75(2):163-189(2004))。

含有p40的细胞因子在自身免疫中的重要性通过如下发现证明：缺乏p40、p19或IL-23R的小鼠被保护免受尤其多发性硬化、类风湿性关节炎、炎性肠病、狼疮和银屑病等模式的疾病的影响(Kyttaris,V.C.等人,"Cutting edge:IL-23receptor deficiencyprevents the development of lupus nephritis in C57BL/6-lpr/lpr mice",J.Immunol.,184:4605-4609(2010)；Hong,K.等人,"IL-12,independently ofIFN-gamma,plays a crucial role in the pathogenesis of a murine psoriasis like skindisorder",J.Immunol.,162:7480-7491(1999)；Hue,S.等人,"Interleukin-23drivesinnate and T cell-mediated intestinal inflammation",J.Exp.Med.,203:2473-2483(2006)；Cua,D.J.等人,"Interleukin-23rather than interleukin-12is the criticalcytokine for autoimmune inflammation of the brain",Nature,421:744-748(2003)；Murphy,C.A.等人,"Divergent pro-and anti-inflammatory roles for IL-23and IL-12in joint autoimmune inflammation",J.Exp.Med.,198:1951-1957(2003))。

在人类疾病中，已经在银屑病病变中测量到p40和p19的高表达，并且已经在MS患者大脑中的活动性病变中和在活动性克罗恩病患者的肠粘膜中鉴定出Th17细胞(Lee,E.等人,"Increased expression of interleukin 23p19 and p40 in lesional skin ofpatients with psoriasis vulgaris",J.Exp.Med.,199:125-130(2004)；Tzartos,J.S.等人,"Interleukin-17production in central nervous systeminfiltrating T cellsand glial cells is associated with active disease in multiple sclerosis",Am.J.Pathol.,172:146-155(2008))。活动性SLE患者中p19、p40和p35的mRNA水平也显示与非活动性SLE患者中的那些相比显著更高(Huang,X.等人,"Dysregulated expression ofinterleukin-23 and interleukin-12 subunits in systemic lupus erythematosuspatients",Mod.Rheumatol.,17:220-223(2007))，并且来自狼疮患者的T细胞具有占主导地位的Th1表型(Tucci,M.等人,"Overexpression of interleukin-12 and T helper 1predominance in lupus nephritis",Clin.Exp.Immunol.,154:247-254(2008))。

此外，全基因组关联研究已经鉴定出了许多与慢性炎性和自身免疫性疾病相关的基因座，这些基因座编码在IL-23和IL-12途径中起作用的因子。这些基因包括IL23A、IL12A、IL12B、IL12RB1、IL12RB2、IL23R、JAK2、TYK2、STAT3和STAT4(Lees,C.W.等人,"NewIBD genetics:common pathways with other diseases",Gut,60:1739-1753(2011)；Tao,J.H.等人,"Meta-analysis of TYK2 gene polymorphisms association withsusceptibility to autoimmune and inflammatory diseases",Mol.Biol.Rep.,38:4663-4672(2011)；Cho,J.H.等人,"Recent insights into the genetics ofinflammatory bowel disease",Gastroenterology,140:1704-1712(2011))。

事实上，抗p40治疗(抑制IL-12和IL-23二者)和IL-23特异性抗p19疗法已显示在包括银屑病、克罗恩病和银屑病性关节炎在内的疾病中的自身免疫的治疗中是有效的(Leonardi,C.L.等人,"PHOENIX 1 study investigators.Efficacy and safety ofustekinumab,a human interleukin-12/23 monoclonal antibody,in patients withpsoriasis:76-week results from a randomized,double-blind,placebo-controlledtrial(PHOENIX 1)",Lancet,371:1665-1674(2008)；Sandborn,W.J.等人,"UstekinumabCrohn's Disease Study Group.A randomized trial of Ustekinumab,a humaninterleukin-12/23monoclonal antibody,in patients with moderate-to-severeCrohn's disease",Gastroenterology,135:1130-1141(2008)；Gottlieb,A.等人,"Ustekinumab,a human interleukin 12/23 monoclonal antibody,for psoriaticarthritis:randomized,double-blind,placebo-controlled,crossover trial",Lancet,373:633-640(2009))。因此，可以预期抑制IL-12和IL-23作用的药剂在人自身免疫性障碍中具有治疗益处。

干扰素(IFN)的I型分组，包括IFNα成员以及IFNβ、IFNε、IFNκ和IFNω，通过异二聚体IFNα/β受体(IFNAR)起作用。I型IFN在先天免疫系统和适应性免疫系统中均具有多种效应，包括活化细胞和体液免疫应答以及增强自身抗原的表达和释放(Hall,J.C.等人,"TypeI interferons:crucial participants in disease amplification in autoimmunity",Nat.Rev.Rheumatol.,6:40-49(2010))。

在患有系统性红斑狼疮(SLE，一种具有潜在致命性的自身免疫性疾病)的患者中，干扰素(IFN)α(I型干扰素)血清水平增加或I型IFN调节的基因(所谓的IFNα签名)在外周血单核细胞和受影响器官中的表达增加已经在大多数患者中得到证明(Bennett,L.等人,"Interferon and granulopoiesis signatures in systemic lupus erythematosusblood",J.Exp.Med.,197:711-723(2003)；Peterson,K.S等人,"Characterization ofheterogeneity in the molecular pathogenesis of lupus nephritis fromtranscriptional profiles of laser-captured glomeruli",J.Clin.Invest.,113:1722-1733(2004))，并且一些研究显示，血清IFNα水平与疾病活动度和严重程度相关(Bengtsson,A.A.等人,"Activation of type I interferon system in systemic lupuserythematosus correlates with disease activity but not with antiretroviralantibodies",Lupus,9:664-671(2000))。IFNα在狼疮病理生物学中的直接作用通过以下观察而得到证明：向患有恶性或病毒性疾病的患者施用IFNα可以诱导狼疮样综合征。此外，狼疮易感小鼠中IFNAR的缺失提供了对自身免疫、疾病严重程度和死亡率的高度保护(Santiago-Raber,M.L.等人,"Type-I interferon receptor deficiency reduceslupus-like disease in NZB mice",J.Exp.Med.,197:777-788(2003))，并且全基因组关联研究已经鉴定出与狼疮相关的基因座，这些基因座编码在I型干扰素途径中起作用的因子，包括IRF5、IKBKE、TYK2和STAT4(Deng,Y.等人,"Genetic susceptibility to systemiclupus erythematosus in the genomic era",Nat.Rev.Rheumatol.,6:683-692(2010)；Sandling,J.K.等人,"A candidate gene study of the type I interferon pathwayimplicates IKBKE and IL8 as risk loci for SLE",Eur.J.Hum.Genet.,19:479-484(2011))。除了狼疮之外，还有证据表明I型干扰素介导的途径的异常激活在其他自身免疫性疾病(如舍格伦综合征和硬皮病)的病理生物学中是十分重要的(U.等人,"Activation of the type I interferon systemin primary/>syndrome:apossible etiopathogenic mechanism",Arthritis Rheum.,52:1185-1195(2005)；Kim,D.等人,"Induction of interferon-alpha by scleroderma sera containingautoantibodies to topoisomerase I:association of higher interferon-alphaactivity with lung fibrosis",Arthritis Rheum.,58:2163-2173(2008))。因此，可以预期抑制I型干扰素反应的作用的药剂在人自身免疫性障碍中具有治疗益处。

酪氨酸激酶2(Tyk2)是非受体酪氨酸激酶的Janus激酶(JAK)家族的成员，并且已显示在小鼠(Ishizaki,M.等人.,"Involvement of Tyrosine Kinase-2 in Both the IL-12/Th1 and IL-23/Th17 Axes In vivo",J.Immunol.,187:181-189(2011)；Prchal-Murphy,M.等人,"TYK2 kinase activity is required for functional type Iinterferon responses in vivo",PLoS One,7:e39141(2012))和人(Minegishi,Y.等人,"Human tyrosine kinase 2deficiency reveals its requisite roles in multiplecytokine signals involved in innate and acquired immunity",Immunity,25:745-755(2006))二者中调节IL-12、IL-23和I型干扰素的受体下游的信号转导级联中是至关重要的。Tyk2介导转录因子STAT家族成员的受体诱导磷酸化，这是导致STAT蛋白二聚化和STAT依赖性促炎基因转录的重要信号。Tyk2缺陷小鼠对结肠炎、银屑病和多发性硬化的实验模型具有抗性，这证明了Tyk2介导的信号传导在自身免疫和相关障碍中的重要性(Ishizaki,M.等人,"Involvement of Tyrosine Kinase-2 in Both the IL-12/Th1 andIL-23/Th17 Axes In vivo",J.Immunol.,187:181-189(2011)；Oyamada,A.等人,"Tyrosine kinase 2 plays critical roles in the pathogenic CD4 T cell responsesfor the development of experimental autoimmune encephalomyelitis",J.Immunol.,183:7539-7546(2009))。

在人中，表达Tyk2的非活性变体的个体受到保护免于多发性硬化和可能的其他自身免疫障碍(Couturier,N.等人,"Tyrosine kinase 2 variant influences Tlymphocyte polarization and multiple sclerosis susceptibility",Brain,134:693-703(2011))。全基因组关联研究显示，Tyk2的其他变体与自身免疫性障碍诸如克罗恩病、银屑病、系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎相关，进一步证明了Tyk2在自身免疫中的重要性(Ellinghaus,D.等人,"Combined Analysis of Genome-wide Association Studies forCrohn Disease and Psoriasis Identifies Seven Shared Susceptibility Loci"Am.J.Hum.Genet.,90:636-647(2012)；Graham,D.等人,"Association of polymorphismsacross the tyrosine kinase gene,TYK2 in UK SLE families",Rheumatology(Oxford),46:927-930(2007)；Eyre,S.等人,"High-density genetic mappingidentifies new susceptibility loci for rheumatoid arthritis",Nat.Genet.,44:1336-1340(2012))。

TYK2抑制还可以作为单一疗法或与包括免疫疗法在内的现有护理标准相组合用于实体瘤和血液恶性肿瘤。

T细胞急性成淋巴细胞性白血病(T-ALL)的离体研究表明，TYK2是T-ALL存活所必需的，这表明TYK2抑制剂在这种适应证中具有潜在的直接癌症杀伤机制，Sanda,T.等人TYK2-STAT1-BCL2 Pathway Dependence in T-cell Acute LymphoblasticLeukemia.Cancer Discov.3,564-577(2013)。已经检测并表征了T-ALL细胞系中的多个TYK2激活突变。NPM1-TYK2基因融合物也已在皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)的子集中鉴定出，并且TYK2被证明是转化的致癌驱动因素，Kuravi,S.等人Functional characterization ofNPM1-TYK2fusion oncogene.Npj Precis.Oncol.6,3(2022)。TYK2信号传导的缺失可以抑制这种转化潜力。

已经描述了有效的TYK2抑制剂；然而，在标准流出模型中，这些化合物往往是具有高外排比的高极性化合物，Wrobleski,S.T.等人Highly selective inhibition ofTyrosine Kinase 2(TYK2)for the treatment of autoimmune diseases:Discovery ofthe allosteric inhibitor BMS-986165.J.Med.Chem.62,8973-8995(2019)。众所周知，多药耐药性的一种途径是外排转运蛋白的表达增加，Gottesman,M.M.等人MultidrugResistance in Cancer:Role of ATP-Dependent Transporters.Nature Rev.Cancer 2,48-58(2002)，Fletcher,J.I.等人ABC transporters in cancer:more than just drugefflux pumps.Nature Rev.Cancer 10,147-156(2010)。

因此，在体外模型中具有更低外排比的化合物可能潜在地具有更大的有效治疗一些致癌适应证的机会。

鉴于可能通过涉及细胞因子和/或干扰素调节的治疗而受益的病症，能够调节细胞因子和/或干扰素(如IL-12、IL-23和/或IFNα)的新化合物以及使用这些化合物的方法可能为有此需要的各种各样的患者提供实质性的治疗益处。

发明内容

本发明涉及下式I的化合物，所述化合物可通过抑制Tyk2介导的信号转导而用作IL-12、IL-23和/或IFNα的调节剂。

本发明还提供了用于制备本发明的化合物的方法和中间体。

本发明还提供了药物组合物，其包含药学上可接受的载体和至少一种本发明的化合物。

本发明还提供了一种用于通过抑制Tyk-2介导的信号转导来调节IL-12、IL-23和/或IFNα的方法，其包括向需要这种治疗的宿主施用治疗有效量的至少一种本发明的化合物。

本发明还提供了一种用于治疗神经系统变性疾病的方法，其包括向需要这种治疗的宿主施用治疗有效量的至少一种本发明的化合物。

本发明还提供了用于疗法的本发明的化合物。

随着本公开文本的继续，本发明的这些和其他特征将以扩展的形式阐述。

在另一个实施方案中，提供了包含一种或多种式I的化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的药物组合物。

本发明还涉及可用于通过作用于Tyk-2引起信号转导抑制来治疗与IL-12、IL-23和/或IFNα的调节相关的疾病的药物组合物，其包含式I的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体或稀释剂。

本发明进一步涉及治疗与IL-12、IL-23和/或IFNα的调节相关的疾病的方法，其包括向需要这种治疗的患者施用治疗有效量的根据式I的化合物。

本发明还提供了用于制备本发明的化合物的方法和中间体。

本发明还提供了一种用于治疗增殖性、代谢性、过敏性、自身免疫性和炎性疾病的方法(或本发明的化合物用于制造用于治疗这些疾病的药剂的用途)，包括向需要这种治疗的宿主施用治疗有效量的至少一种本发明的化合物。

本发明还提供了一种治疗炎性或自身免疫性疾病的方法(或本发明的化合物用于制造治疗这些疾病的药剂的用途)，其包括向需要这种治疗的患者施用治疗有效量的式I的化合物。

本发明还提供了一种用于治疗疾病的方法(或本发明的化合物用于制造用于治疗这些疾病的药剂的用途)，所述方法(或用途)包括向需要这种治疗的患者施用治疗有效量的式I的化合物，其中所述疾病是类风湿性关节炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮(SLE)、狼疮性肾炎、皮肤狼疮、炎性肠病、银屑病、克罗恩病、银屑病关节炎、舍格伦综合征、系统性硬皮病、溃疡性结肠炎、格雷夫斯病、盘状红斑狼疮、成人斯蒂尔病、全身型幼年特发性关节炎、痛风、痛风性关节炎、1型糖尿病、胰岛素依赖型糖尿病、败血症、感染性休克、志贺氏菌病、胰腺炎(急性或慢性)、肾小球肾炎、自身免疫性胃炎、糖尿病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性中性粒细胞减少症、血小板减少症、特应性皮炎、重症肌无力、胰腺炎(急性或慢性)、强直性脊柱炎、寻常型天疱疮、古德帕斯丘病、抗磷脂综合征、特发性血小板减少症、ANCA相关性血管炎、天疱疮、川崎病、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病(CIDP)、皮肌炎、多肌炎、葡萄膜炎、吉兰-巴雷综合征、自身免疫性肺部炎症、自身免疫性甲状腺炎、自身免疫性炎性眼病和慢性脱髓鞘性多发性神经病。

本发明还提供了一种治疗神经系统变性疾病的方法(或本发明的化合物用于制造用于治疗所述疾病的药剂的用途)，其包括向需要这种治疗的患者施用治疗有效量的式I的化合物，其中所述疾病选自阿尔茨海默病、帕金森病、ALS、多发性硬化(RMS和/或进展型MS，包括CIS、视神经炎、视神经脊髓炎)。

本发明还提供了一种用于治疗类风湿性关节炎的方法(或本发明的化合物用于制造用于治疗类风湿性关节炎的药剂的用途)，其包括向需要这种治疗的患者施用治疗有效量的式I的化合物。

此外，本发明还提供了一种治疗病症的方法(或本发明的化合物用于制造用于治疗这些病症的药剂的用途)，其包括向需要这种治疗的患者施用治疗有效量的式I的化合物，其中所述病症选自急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、转移性黑色素瘤、卡波西肉瘤、多发性骨髓瘤、实体瘤、眼部新生血管、和婴儿血管瘤、B细胞淋巴瘤、系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、多发性血管炎、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、重症肌无力、过敏性鼻炎、多发性硬化(MS)、移植排斥、I型糖尿病、膜性肾炎、炎性肠病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性甲状腺炎、冷和热凝集素疾病、伊文思综合征、溶血性尿毒症综合征/血栓性血小板减少性紫癜(HUS/TTP)、结节病、舍格伦综合征、周围神经病、寻常型天疱疮和哮喘。

本发明还提供了一种治疗IL-12、IL-23和/或IFNα介导的疾病的方法(或本发明的化合物用于制造用于治疗这些疾病的药剂的用途)，包括向需要这种治疗的患者施用治疗有效量的式I的化合物。

本发明还提供了一种治疗IL-12、IL-23和/或IFNα介导的疾病的方法(或本发明的化合物用于制造用于治疗这些疾病的药剂的用途)，包括向需要这种治疗的患者施用治疗有效量的式I的化合物，其中所述IL-12、IL-23和/或IFNα介导的疾病是通过IL-12、IL-23和/或IFNα调节的疾病。

本发明还提供了一种治疗疾病的方法，其包括向需要这种治疗的患者施用与其他治疗剂组合的治疗有效量的式I的化合物。

本发明还提供了用于疗法的本发明的化合物。

在另一个实施方案中，式I的化合物选自例示的化合物或例示的化合物的组合或者本文其他实施方案。

在另一个实施方案中，提供了在至少一种下述测定中IC₅₀<1000nM的化合物。

本发明可以在不背离其精神或本质属性的情况下体现为其他具体形式。本发明涵盖本文所述的本发明的优选方面和/或实施方案的所有组合。应理解，可以将本发明的任何和所有实施方案与任何其他一个或多个实施方案结合来描述另外的更优选的实施方案。还应理解，优选实施方案的每个单独要素是其自己独立的优选实施方案。此外，实施方案的任何要素意在与来自任何实施方案的任何和所有其他要素组合来描述另外的实施方案。

本发明的实施方案的详细描述

在本发明的第一方面，提供了一种式I的化合物

或其立体异构体或药学上可接受的盐，

其中

X、X¹和X²是-N-或-CH-，条件是如果X是-CH-，则X¹和X²中的一个必须是-N-，并且如果X是-N-，则X¹和X²中的一个必须是-N-；

Y是-CH-或-N-；

R¹是OR^1a、NR^1aR^1b或R²；

R^1a和R^1b独立地是氢或C_1-3烷基；

R²是被0-2个R^2a取代的C_3-6环烷基；

R^2a是F或C_1-3烷基；

R³是C_1-3烷基或C_3-6环烷基；并且

R⁴是氢、卤素、或C_1-3烷基。

在本发明的第二方面，提供了式II的化合物

或其立体异构体或药学上可接受的盐，

其中

X、X¹和X²是-N-或-CH-，条件是如果X是-CH-，则X¹和X²中的一个必须是-N-，并且如果X是-N-，则X¹和X²中的一个必须是-N-；

Y是-CH-或-N-；

R³是C_1-3烷基或C_3-6环烷基。

在本发明的第三方面，提供了式III的化合物

或其立体异构体或药学上可接受的盐，

X、X¹和X²是-N-或-CH-，条件是如果X是-CH-，则X¹和X²中的一个必须是-N-，并且如果X是-N-，则X¹和X²中的一个必须是-N-；

R³是C_1-3烷基或C_3-6环烷基。

在另一个方面，提供了一种选自第一方面的范围内的所例示的例子的化合物或其药学上可接受的盐。

在另一个方面，本发明提供了一种选自任何上述方面的范围内的化合物的任何子集列表的化合物。

在另一个方面，提供了一种选自以下的化合物(IUPAC命名惯例)或其药学上可接受的盐：

6-环丙烷酰胺基-4-{[5-甲氧基-6-(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-4-基]氨基}-N-(2H3)甲基哒嗪-3-甲酰胺，

6-环丙烷酰胺基-4-{[3-甲氧基-2-(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-4-基]氨基}-N-(2H3)甲基哒嗪-3-甲酰胺，

4-{[3-甲氧基-2-(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-4-基]氨基}-N-(2H3)甲基-6-[(1R)-螺[2.2]戊烷-1-酰胺基]哒嗪-3-甲酰胺，

6-环丙烷酰胺基-4-{[2-(1-环丙基-1H-吡唑-4-基)-3-甲氧基吡啶-4-基]氨基}-N-(2H3)甲基哒嗪-3-甲酰胺，和

6-环丙烷酰胺基-4-{[2-(2-环丙基-2H-1,2,3-三唑-4-基)-3-甲氧基吡啶-4-基]氨基}-N-(2H3)甲基哒嗪-3-甲酰胺。

在另一个实施方案中，提供了包含一种或多种式I的化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的药物组合物。

本发明还涉及可用于通过作用于Tyk-2引起信号转导抑制来治疗与IL-12、IL-23和/或IFNα的调节相关的疾病的药物组合物，其包含式I的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体或稀释剂。

本发明进一步涉及治疗与IL-12、IL-23和/或IFNα的调节相关的疾病的方法，其包括向需要这种治疗的患者施用治疗有效量的根据式I的化合物。

本发明还提供了用于制备本发明的化合物的方法和中间体。

本发明还提供了一种用于治疗增殖性、代谢性、过敏性、自身免疫性和炎性疾病的方法(或本发明的化合物用于制造用于治疗这些疾病的药剂的用途)，包括向需要这种治疗的宿主施用治疗有效量的至少一种本发明的化合物。

本发明还提供了一种治疗炎性或自身免疫性疾病的方法(或本发明的化合物用于制造治疗这些疾病的药剂的用途)，其包括向需要这种治疗的患者施用治疗有效量的式I的化合物。

本发明还提供了一种用于治疗疾病的方法(或本发明的化合物用于制造用于治疗这些疾病的药剂的用途)，所述方法(或用途)包括向需要这种治疗的患者施用治疗有效量的式I的化合物，其中所述疾病是类风湿性关节炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮(SLE)、狼疮性肾炎、皮肤狼疮、炎性肠病、银屑病、克罗恩病、银屑病关节炎、舍格伦综合征、系统性硬皮病、溃疡性结肠炎、格雷夫斯病、盘状红斑狼疮、成人斯蒂尔病、全身型幼年特发性关节炎、痛风、痛风性关节炎、1型糖尿病、胰岛素依赖型糖尿病、败血症、感染性休克、志贺氏菌病、胰腺炎(急性或慢性)、肾小球肾炎、自身免疫性胃炎、糖尿病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性中性粒细胞减少症、血小板减少症、特应性皮炎、重症肌无力、胰腺炎(急性或慢性)、强直性脊柱炎、寻常型天疱疮、古德帕斯丘病、抗磷脂综合征、特发性血小板减少症、ANCA相关性血管炎、天疱疮、川崎病、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病(CIDP)、皮肌炎、多肌炎、葡萄膜炎、吉兰-巴雷综合征、自身免疫性肺部炎症、自身免疫性甲状腺炎、自身免疫性炎性眼病和慢性脱髓鞘性多发性神经病。

本发明还提供了一种治疗神经系统变性疾病的方法(或本发明的化合物用于制造用于治疗所述疾病的药剂的用途)，其包括向需要这种治疗的患者施用治疗有效量的式I的化合物，其中所述疾病选自阿尔茨海默病、帕金森病、ALS、多发性硬化(RMS和/或进展型MS，包括CIS、视神经炎、视神经脊髓炎)。

本发明还提供了一种用于治疗类风湿性关节炎的方法(或本发明的化合物用于制造用于治疗类风湿性关节炎的药剂的用途)，其包括向需要这种治疗的患者施用治疗有效量的式I的化合物。

此外，本发明还提供了一种治疗病症的方法(或本发明的化合物用于制造用于治疗这些病症的药剂的用途)，其包括向需要这种治疗的患者施用治疗有效量的式I的化合物，其中所述病症选自急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、转移性黑色素瘤、卡波西肉瘤、多发性骨髓瘤、实体瘤、眼部新生血管、和婴儿血管瘤、B细胞淋巴瘤、系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、多发性血管炎、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、重症肌无力、过敏性鼻炎、多发性硬化(MS)、移植排斥、I型糖尿病、膜性肾炎、炎性肠病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性甲状腺炎、冷和热凝集素疾病、伊文思综合征、溶血性尿毒症综合征/血栓性血小板减少性紫癜(HUS/TTP)、结节病、舍格伦综合征、周围神经病、寻常型天疱疮和哮喘。

本发明还提供了一种治疗IL-12、IL-23和/或IFNα介导的疾病的方法(或本发明的化合物用于制造用于治疗这些疾病的药剂的用途)，包括向需要这种治疗的患者施用治疗有效量的式I的化合物。

本发明还提供了一种治疗IL-12、IL-23和/或IFNα介导的疾病的方法(或本发明的化合物用于制造用于治疗这些疾病的药剂的用途)，包括向需要这种治疗的患者施用治疗有效量的式I的化合物，其中所述IL-12、IL-23和/或IFNα介导的疾病是通过IL-12、IL-23和/或IFNα调节的疾病。

本发明还提供了一种治疗疾病的方法，其包括向需要这种治疗的患者施用与其他治疗剂组合的治疗有效量的式I的化合物。

本发明还提供了用于疗法的本发明的化合物。

在另一个实施方案中，式I的化合物选自例示的化合物或例示的化合物的组合或者本文其他实施方案。

本发明可以在不背离其精神或本质属性的情况下体现为其他具体形式。本发明涵盖本文所述的本发明的优选方面和/或实施方案的所有组合。应理解，可以将本发明的任何和所有实施方案与任何其他一个或多个实施方案结合来描述另外的更优选的实施方案。还应理解，优选实施方案的每个单独要素是其自己独立的优选实施方案。此外，实施方案的任何要素意在与来自任何实施方案的任何和所有其他要素组合来描述另外的实施方案。

具体实施方式

以下是本说明书和所附权利要求中使用的术语的定义。除非另有说明，否则本文提供的对于基团或术语的初始定义适用于整个说明书和权利要求中的该基团或术语(单独地或作为另一基团的一部分)。

本发明的化合物可以具有一个或多个不对称中心。除非另有说明，否则本发明的化合物的所有手性(对映异构和非对映异构)和外消旋形式都包括在本发明中。化合物中也可以存在烯烃、C＝N双键等的许多几何异构体，并且所有此类稳定的异构体都考虑在本发明中。描述了本发明的化合物的顺式和反式几何异构体，并且其可以作为异构体的混合物或作为分开的异构形式分离。本发明的化合物可以以光学活性或外消旋形式分离。本领域熟知如何制备光学活性形式，如通过拆分外消旋形式或通过从光学活性起始材料合成。除非特别指出具体的立体化学或异构体形式，否则意指结构的所有手性(对映异构和非对映异构)和外消旋形式以及所有几何异构形式。

当任何变量(例如，R³)在化合物的任何成分或式中出现多于一次时，其在每次出现时的定义独立于其在其他每次出现时的定义。因此，例如，如果显示基团被0-2个R³取代，则所述基团可以任选地被最多两个R³基团取代，并且R³在每次出现时独立地选自R³的定义。另外，只有当取代基和/或变量的组合产生稳定的化合物时，此类组合才可被允许。

当显示与取代基的键与连接环中两个原子的键交叉时，则这个取代基可键合至所述环上的任何原子。当列出取代基而没有指示这个取代基是经由哪个原子键合至给定式的化合物的其余部分时，则这个取代基可以经由这个取代基中的任何原子键合。只有当取代基和/或变量的组合产生稳定的化合物时，此类组合才可被允许。

在本发明的化合物上存在氮原子(例如，胺)的情况下，可以通过用氧化剂(例如，MCPBA和/或过氧化氢)处理将这些氮原子转化为N-氧化物，以得到本发明的其他化合物。因此，所有显示和要求保护的氮原子被认为包括所示的氮及其N-氧化物(N→O)衍生物二者。

根据本领域使用的惯例，用于本文的结构式中以描绘作为部分或取代基与核心或骨架结构的附接点的键。/>

不在两个字母或符号之间的短划线“-”用于指示取代基的附接点。例如，-CONH₂通过碳原子附接。

关于式I的化合物的特定部分的术语“任选被取代的”(例如，任选被取代的杂芳基)是指具有0、1、2或更多个取代基的部分。例如，“任选被取代的烷基”包括如下定义的“烷基”和“被取代的烷基”二者。本领域技术人员将理解，对于含有一个或多个取代基的任何基团，此类基团不旨在引入在空间方面不实用、在合成方面不可行和/或在内在方面不稳定的任何取代或取代模式。

如本文所用，术语“至少一种化学实体”可与术语“化合物”互换。

如本文所用，术语“烷基”或“亚烷基”旨在包括具有指定碳原子数的支链和直链饱和脂族烃基团二者。例如，“C_1-10烷基”(或亚烷基)旨在包括C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉和C₁₀烷基。另外，例如，“C₁-C₆烷基”表示具有1至6个碳原子的烷基。烷基可以是未被取代的或被取代的，使得其一个或多个氢被另一个化学基团取代。烷基的例子包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(例如，正丙基和异丙基)、丁基(例如，正丁基、异丁基、叔丁基)、戊基(例如，正戊基、异戊基、新戊基)等。

本领域技术人员将理解，当在本文中使用名称“CO₂”时，这旨在指基团

当术语“烷基”与另一个基团一起使用时，如在“芳基烷基”中，这种结合以更高的专一性定义了被取代的烷基将含有的取代基中的至少一个。例如，“芳基烷基”是指如上定义的被取代的烷基，其中至少一个取代基是芳基，如苄基。因此，术语芳基(C_0-4)烷基包括具有至少一个芳基取代基的经取代的低级烷基，并且还包括与另一个基团直接键合的芳基，即芳基(C₀)烷基。术语“杂芳基烷基”是指如上定义的被取代的烷基，其中至少一个取代基是杂芳基。

术语“烷氧基”是指被如上定义的烷基或被取代的烷基取代的氧原子。例如，术语“烷氧基”包括基团-O-C_1-6烷基，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、2-戊氧基、异戊氧基、新戊氧基、己氧基、2-己氧基、3-己氧基、3-甲基戊氧基等。“低级烷氧基”是指具有1至4个碳的烷氧基。

应理解，本领域技术人员将对所有基团(包括例如烷氧基、硫代烷基和氨基烷基)进行选择，以提供稳定的化合物。

如本文所用，术语“被取代的”意指指定原子或基团上的任何一个或多个氢被来自所指示组的选择取代，条件是不超过指定原子的正常化合价。当取代基是氧代基或酮基(即，＝O)时，则所述原子上的2个氢被替代。芳族部分上不存在酮基取代基。除非另外指定，否则取代基被命名至核心结构中。例如，应理解，当(环烷基)烷基被列为可能的取代基时，此取代基与核心结构的附接点在烷基部分中。如本文所用，环双键是在两个相邻环原子之间形成的双键(例如，C＝C、C＝N或N＝N)。

只有当取代基和/或变量的组合产生稳定的化合物或有用的合成中间体时，此类组合才可被允许。稳定的化合物或稳定的结构意在暗示化合物足够稳健以在从反应混合物中分离至有用的纯度以及随后配制成有效的治疗剂中幸存。优选的是，本发明列举的化合物不含N-卤代基、S(O)₂H、或S(O)H基团。

术语“环烷基”是指环化的烷基，其包括单环、二环或多环环系。C_3-7环烷基旨在包括C₃、C₄、C₅、C₆和C₇环烷基。环烷基的例子包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、降冰片基等。如本文所用，“碳环”或“碳环残基”旨在意指任何稳定的3、4、5、6或7元单环或双环或7、8、9、10、11、12或13元双环或三环的环，其中任何一个可以是饱和的、部分不饱和的、不饱和的或芳香族的。此类碳环的例子包括但不限于环丙基、环丁基、环丁烯基、环戊基、环戊烯基、环己基、环庚烯基、环庚基、环庚烯基、金刚烷基、环辛基、环辛烯基、环辛二烯基、[3.3.0]二环辛烷、[4.3.0]二环壬烷、[4.4.0]二环癸烷、[2.2.2]二环辛烷、芴基、苯基、萘基、茚满基、金刚烷基、蒽基和四氢萘基(四氢化萘)。如上所示，桥环也包括在碳环的定义中(例如，[2.2.2]二环辛烷)。除非另有指定，否则优选的碳环是环丙基、环丁基、环戊基、环己基和苯基。当使用术语“碳环”时，其旨在包括“芳基”。桥环在一个或多个碳原子连接两个不相邻的碳原子时存在。优选的桥是一个或两个碳原子。应注意，桥总是将单环的环转化为二环的环。当环被桥接时，针对所述环列举的取代基也可以存在于所述桥上。

术语“芳基”是指在环部分中具有6至12个碳原子的单环或二环芳香族烃基团，如苯基和萘基，它们中的每一个均可以被取代。

因此，在式I的化合物中，术语“环烷基”包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、双环辛基等，以及以下环系：

等，其可任选地在一个或多个环的任何可用原子处被取代。

优选的环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。

术语“卤代基”或“卤素”是指氯、溴、氟和碘。

术语“卤代烷基”意指具有一个或多个卤代基取代基的被取代的烷基。例如，“卤代烷基”包括单氟甲基、二氟甲基和三氟甲基。

术语“卤代烷氧基”意指具有一个或多个卤代基取代基的烷氧基。例如，“卤代烷氧基”包括OCF₃。

术语“杂环(heterocycle)”、“杂环烷基”、“杂环(heterocyclo)”、“杂环的”或“杂环基”可互换使用，并且是指被取代和未被取代的3至7元单环基团、7至11元二环基团、以及10至15元三环基团，其在至少一个环中具有至少一个杂原子(O、S或N)，所述含有杂原子的环优选具有1、2或3个选自O、S和N的杂原子。这种含有杂原子的基团的每个环可以含有一个或两个氧或硫原子和/或一至四个氮原子，条件是每个环中的杂原子总数是四个或更少，并且进一步的条件是所述环含有至少一个碳原子。氮和硫原子可任选地被氧化，并且氮原子可任选被季铵化。完成二环和三环基团的稠环可以仅含有碳原子，并且可以是饱和的、部分饱和的或完全不饱和的。杂环基团可以被附接在任何可用的氮或碳原子上。如本文所用，术语“杂环(heterocycle)”、“杂环烷基”、“杂环(heterocyclo)”、“杂环的”和“杂环基”包括“杂芳基”基团，如以下所定义。

除了下面描述的杂芳基之外，示例性单环杂环基包括氮杂环丁烷基、吡咯烷基、氧杂环丁烷基、咪唑啉基、噁唑烷基、异噁唑啉基、噻唑烷基、异噻唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧代氮杂卓基、氮杂卓基、1-吡啶酮基、4-哌啶酮基、四氢吡喃基、吗啉基、硫吗啉基、硫吗啉基亚砜、硫吗啉基砜、1,3-二氧戊环和四氢-1,1-二氧噻吩基等。示例性二环杂环基团包括奎宁环基。

另外的单环杂环基包括

术语“杂芳基”是指被取代和未被取代的芳香族5元或6元单环基团、9元或10元二环基团、以及11元至14元三环基团，其在至少一个环中具有至少一个杂原子(O、S或N)，所述含有杂原子的环优选具有1、2或3个选自O、S和N的杂原子。含有杂原子的杂芳基的每个环可以含有一个或两个氧或硫原子和/或一至四个氮原子，条件是每个环中的杂原子总数是四个或更少，并且每个环具有至少一个碳原子。完成二环和三环基团的稠环可以仅含有碳原子，并且可以是饱和的、部分饱和的或不饱和的。氮和硫原子可任选地被氧化，并且氮原子可任选被季铵化。作为二环或三环的杂芳基必须包括至少一个完全芳香族环，但是其他一个或多个稠环可以是芳香族的或非芳香族的。杂芳基可以被附接在任何环的任何可用氮或碳原子上。在化合价允许的情况下，如果所述另一环是环烷基或杂环，则其另外任选地被＝O(氧代)取代。

示例性单环杂芳基包括吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、异噻唑基、呋喃基、噻吩基、噁二唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基等。

除非另有说明，否则当提及具体命名的芳基(例如，苯基)、环烷基(例如，环己基)、杂环基(例如，吡咯烷基、哌啶基和吗啉基)、或杂芳基(例如，四唑基、咪唑基、吡唑基、三唑基、噻唑基和呋喃基)时，所述提及旨在包括视情况具有0至3个、优选0至2个取代基的环，所述取代基选自上文针对芳基、环烷基、杂环基和/或杂芳基列举的取代基。

术语“碳环基”或“碳环”是指饱和或不饱和的单环或二环的环，其中所有环的所有原子都是碳。因此，所述术语包括环烷基和芳基环。单环碳环具有3至6个环原子、仍更通常5或6个环原子。二环碳环具有7至12个环原子，例如排列为二环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]体系；或者9或10个环原子，排列为二环[5,6]或[6,6]体系。单环和二环碳环的例子包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基、苯基和萘基。碳环的环可以是被取代的，在这种情况下，取代基选自上文针对环烷基和芳基列举的那些取代基。

术语“杂原子”应包括氧、硫和氮。

当术语“不饱和的”在本文中用于指环或基团时，所述环或基团可以是完全不饱和的或部分不饱和的。

在整个说明书中，基团及其取代基可由本领域技术人员选择，以提供稳定的部分和化合物，以及可用作药学上可接受的化合物和/或可用于制备药学上可接受的化合物的中间体化合物的化合物。

式I的化合物可以游离形式(没有电离)存在或可以形成盐，所述盐也在本发明的范围内。除非另有说明，否则提及本发明的化合物应理解为包括提及游离形式及其盐。术语“一种或多种盐”表示与无机和/或有机酸和碱形成的酸式和/或碱式盐。此外，术语“盐”可以包括两性离子(内盐)，例如当式I的化合物含有碱性部分(如胺或吡啶或咪唑环)和酸性部分(如羧酸)时。药学上可接受的(即，无毒的生理学上可接受的)盐是优选的，例如像其中的阳离子对盐的毒性或生物活性没有显著贡献的可接受的金属盐和胺盐。然而，其他盐可以例如用于可在制备期间采用的分离或纯化步骤中，并且因此考虑在本发明的范围内。式I的化合物的盐可以例如通过使式I的化合物与一定量的酸或碱(如当量)在介质(如盐在其中沉淀的介质)中或在水性介质中反应，随后冻干而形成。

示例性酸加成盐包括乙酸盐(如与乙酸或三卤乙酸(例如三氟乙酸)形成的那些)、己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐(与盐酸形成)、氢溴酸盐(与溴化氢形成)、氢碘化物、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐(与马来酸形成)、甲磺酸盐(与甲磺酸形成)、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐(如与硫酸形成的那些)、磺酸盐(如本文中提到的那些)、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐(toluenesulfonate)(如甲苯磺酸盐(tosylate))、十一烷酸盐等。

示例性的碱式盐包括铵盐；碱金属盐，如钠盐、锂盐和钾盐；碱土金属盐，如钙盐和镁盐；钡盐、锌盐和铝盐；与有机碱(例如有机胺)的盐，所述有机碱是如三烷基胺(如三乙胺)、普鲁卡因、二苄胺、N-苄基-β-苯乙胺、1-二苯羟甲胺(ephenamine)、N,N′-二苄乙烯-二胺、脱氢枞胺、N-乙基哌啶、苄胺、二环己胺或类似的药学上可接受的胺；以及与氨基酸的盐，所述氨基酸是如精氨酸、赖氨酸等。碱性含氮基团可以用诸如低级烷基卤化物(例如，甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物)、二烷基硫酸酯(例如，二甲基、二乙基、二丁基和二戊基的硫酸酯)、长链卤化物(例如，癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂酰基的氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基卤化物(例如，苄基和苯乙基的溴化物)的试剂季铵化。优选的盐包括单盐酸盐、硫酸氢盐、甲磺酸盐、磷酸盐或硝酸盐。

短语“药学上可接受的”在本文中用于指在合理的医学判断的范围内，适用于与人和动物的组织接触而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，与合理的效益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。

如本文所用，“药学上可接受的盐”是指所公开化合物的衍生物，其中母体化合物通过制造其酸盐或碱盐而被修饰。药学上可接受的盐的例子包括但不限于碱性基团(如胺)的矿物酸或有机酸盐；以及酸性基团(如羧酸)的碱盐或有机盐等。药学上可接受的盐包括例如由无毒的无机酸或有机酸形成的母体化合物的常规无毒盐或季铵盐。例如，此类常规无毒盐包括从如下无机酸衍生的那些：例如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸；以及由如下有机酸制备的盐：例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、双羟萘酸(pamoic)、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、磺胺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、和羟乙磺酸等。

本发明的药学上可接受的盐可以通过常规化学方法由含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。通常，此类盐可以通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计算量的适当的碱或酸在水中或在有机溶剂中或者在这两者的混合物中反应来制备；通常，非水性介质如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是优选的。合适的盐的列表发现于Remington'sPharmaceutical Sciences,第18版,Mack Publishing Company,Easton,PA(1990)，将其公开内容通过引用特此并入。

考虑了本发明的化合物的所有立体异构体，呈混合物或呈纯的或基本上纯的形式。立体异构体可以包括通过具有一个或多个手性原子而为光学异构体的化合物，以及借助于围绕一个或多个键有限旋转而为光学异构体(阻转异构体)的化合物。根据本发明的化合物的定义涵盖所有可能的立体异构体及其混合物。其非常特定地涵盖外消旋形式和具有指定活性的经分离光学异构体。外消旋形式可以通过物理方法拆分，所述物理方法例如像非对映异构体衍生物的分级结晶、分离或结晶或者通过手性柱色谱分离。单独的光学异构体可以通过常规方法(例如像，用光学活性酸形成盐，随后结晶)从外消旋体获得。

本发明旨在包括本发明的化合物中存在的原子的所有同位素。同位素包括那些原子数相同但质量数不同的原子。作为一般例子而非限制，氢的同位素包括氘和氚。碳的同位素包括¹³C和¹⁴C。本发明的同位素标记的化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与本文所述的那些类似的方法，使用适当的同位素标记的试剂代替以其他方式使用的未标记的试剂来制备。

还考虑了本发明的化合物的前药和溶剂化物。术语“前药”表示这样一种化合物，所述化合物在被施用受试者后通过代谢或化学过程进行化学转化以产生式I的化合物和/或其盐和/或溶剂化物。将在体内转化以提供生物活性剂(即，式I的化合物)的任何化合物是在本发明的范围和精神内的前药。例如，含有羧基的化合物可以形成生理学上可水解的酯，其通过在体内水解产生式I化合物本身而充当前药。此类前药优选口服施用，因为在许多情况下水解主要在消化酶的影响下发生。在酯本身具有活性的情况下或在水解发生在血液中的那些情况下，可以使用肠胃外施用。式I的化合物的生理学上可水解的酯的例子包括C_1-6烷基苄基、4-甲氧基苄基、茚满基、邻苯二甲酰基、甲氧基甲基、C_1-6烷酰基氧基-C_1-6烷基(例如，乙酰氧基甲基、新戊酰氧基甲基或丙酰氧基甲基)、C_1-6烷氧基羰基氧基-C_1-6烷基(例如甲氧基羰基-氧基甲基或乙氧基羰基氧基甲基)、甘氨酰氧基甲基、苯基甘氨酰氧基甲基、(5-甲基-2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯-4-基)-甲基以及例如在青霉素和头孢菌素领域中使用的其他熟知的生理学上可水解的酯。此类酯可通过本领域已知的常规技术制备。

各种形式的前药是本领域熟知的，并且描述于Rautio,J.等人,Nature ReviewDrug Discovery,17,559-587(2018)。

式I的化合物及其盐可以其互变异构形式存在，其中氢原子转置到分子的其他部分，并且因此分子的原子之间的化学键得以重排。应当理解，所有互变异构形式，只要它们可能存在，都包括在本发明内。另外，本发明化合物可具有反式和顺式异构体。

还应当理解，式I的化合物的溶剂化物(例如，水合物)也在本发明的范围内。溶剂化的方法是本领域中众所周知的。

效用

本发明的化合物调节IL-23刺激的细胞功能和IFNα刺激的细胞功能，包括基因转录。可以由本发明的化合物调节的其他类型的细胞功能包括但不限于IL-12刺激的反应。

因此，式I的化合物通过作用于Tyk2以介导信号转导而在治疗与IL-23和/或IFNα的功能的调节相关，并且特别是与IL-23、IL-12和/或IFNα的功能的选择性抑制相关的病症中具有效用。此类病症包括IL-23、IL-12或IFNα相关的疾病，其中致病机制由这些细胞因子介导，并且随后激活Tyk2途径，随后可能在外周和/或中央区室中发生促炎反应。

如本文所用，术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”涵盖对哺乳动物、特别是人的疾病状态的治疗，并且包括：(a)防止或延迟疾病状态在哺乳动物中发生，特别是当这个哺乳动物易患疾病状态，但尚未被诊断为患有所述疾病状态时；(b)抑制疾病状态，即阻止或减缓其发展；和/或(c)实现症状或疾病状态的完全或部分减少，和/或缓解、改善、减轻或治愈疾病或障碍和/或其症状。

鉴于它们作为IL-23、IL-12和/或IFNα刺激的细胞反应的调节剂的活性，式I的化合物可用于治疗IL-23、IL-12和/或IFNα相关的疾病，包括但不限于炎性疾病，如克罗恩病、溃疡性结肠炎、哮喘、移植物抗宿主病、同种异体移植物排斥、慢性阻塞性肺病；自身免疫性疾病，如格雷夫斯病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、皮肤狼疮、狼疮性肾炎、盘状红斑狼疮、银屑病；自身炎性疾病，包括CAPS、TRAPS、FMF、成人斯蒂尔病、全身型幼年特发性关节炎、痛风、痛风性关节炎；代谢性疾病，包括2型糖尿病、动脉粥样硬化、心肌梗死；破坏性骨障碍，如骨吸收疾病、骨关节炎、骨质疏松症、多发性骨髓瘤相关骨障碍；增生性障碍，如急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病；血管生成障碍，如包括实体瘤、眼部新生血管和婴儿血管瘤的血管生成障碍；感染性疾病，如败血症、感染性休克和志贺氏菌病；神经系统变性疾病，如阿尔茨海默病、帕金森病、ALS、多发性硬化(RMS和/或进展型MS，包括CIS、视神经炎、视神经脊髓炎)、脑缺血或由创伤性损伤引起的神经系统变性疾病；肿瘤以及病毒性疾病，分别如转移性黑色素瘤、卡波西肉瘤、多发性骨髓瘤，以及HIV感染和CMV视网膜炎、AIDS。

更特别地，可用本发明的化合物治疗的特定病症或疾病包括而不限于胰腺炎(急性或慢性)、哮喘、过敏、成人呼吸窘迫综合征、慢性阻塞性肺病、肾小球肾炎、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、皮肤狼疮、狼疮性肾炎、盘状红斑狼疮、硬皮病、慢性甲状腺炎、格雷夫斯病、自身免疫性胃炎、糖尿病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性中性粒细胞减少症、血小板减少症、特应性皮炎、慢性活动性肝炎、重症肌无力、多发性硬化、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、银屑病、移植物抗宿主病、内毒素引起的炎性反应、结核病、动脉粥样硬化、肌肉退化、恶病质、银屑病性关节炎、莱特尔综合征、痛风、创伤性关节炎、风疹关节炎、急性滑膜炎、胰腺β细胞病；以大量嗜中性粒细胞浸润为特征的疾病；类风湿性脊椎炎、痛风性关节炎和其他关节炎病症、脑型疟疾、慢性肺炎性疾病、矽肺病、肺结节病、骨吸收疾病、同种异体移植物排斥、感染引起的发热和肌痛、继发于感染的恶病质、瘢痕疙瘩形成、瘢痕组织形成、溃疡性结肠炎、热病、流感、骨质疏松症、骨关节炎、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、转移性黑色素瘤、卡波西肉瘤、多发性骨髓瘤、败血症、感染性休克、和志贺氏菌病；阿尔茨海默病、帕金森病、多发性硬化(RMS和/或进展型MS，包括CIS、视神经炎、视神经脊髓炎)、脑缺血或由创伤性损伤引起的神经系统变性疾病；血管生成障碍，包括实体瘤、眼部新生血管和婴儿血管瘤；病毒性疾病，包括急性肝炎感染(包括甲型肝炎、乙型肝炎和丙型肝炎)、HIV感染和CMV视网膜炎、AIDS、ARC或恶性肿瘤和疱疹；中风、心肌缺血、中风心脏病发作中的缺血、器官缺氧、血管增生、心脏和肾脏再灌注损伤、血栓形成、心脏肥大、凝血酶诱导的血小板聚集、内毒素血症和/或中毒性休克综合征、与前列腺素内过氧化酶合酶-2相关的病症、和寻常型天疱疮。优选的治疗方法是其中所述病症选自阿尔茨海默病、帕金森病、ALS、多发性硬化(RMS和/或进展型MS，包括CIS、视神经炎、视神经脊髓炎)的那些方法。

当在本文使用术语“IL-23、IL-12和/或IFNα相关的病症”或“IL-23、IL-12和/或IFNα相关的疾病或障碍”时，每一个旨在涵盖以上鉴定的所有病症，如同在长度上重复，以及由IL-23、IL-12和/或IFNα影响的任何其他病症。

因此，本发明提供了用于治疗此类病症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的至少一种式I的化合物或其盐。“治疗有效量”旨在包括本发明的化合物在单独或组合施用时有效抑制IL-23、IL-12和/或IFNα功能和/或治疗疾病的量。

治疗IL-23、IL-12和/或IFNα相关的病症的方法可以包括将式I的化合物单独或与彼此组合和/或与用于治疗此类病症的其他合适治疗剂组合地施用。因此，“治疗有效量”还旨在包括所要求保护的化合物的组合有效抑制IL-23、IL-12和/或IFNα功能和/或治疗与IL-23、IL-12和/或IFNα相关的疾病的量。

此类其他治疗剂的例子包括皮质类固醇、咯利普兰、卡弗他丁、细胞因子抑制性抗炎药(CSAID)、白细胞介素-10、糖皮质激素、水杨酸盐、一氧化氮和其他免疫抑制剂；核转位抑制剂，如脱氧精胍菌素(DSG)；非甾体抗炎药(NSAID)，如布洛芬、塞来昔布和罗非昔布；类固醇，如泼尼松或地塞米松；抗病毒剂，如阿巴卡韦；抗增殖剂，如甲氨蝶呤、来氟米特、FK506(他克莫司，)；抗疟药，如羟基氯喹；细胞毒性药物，如硫唑嘌呤和环磷酰胺；TNF-α抑制剂，如替尼达普、抗TNF抗体或可溶性TNF受体，以及雷帕霉素(西罗莫司或)或其衍生物。

当与本发明的化合物组合采用时，上文其他治疗剂可以例如以Physicians'DeskReference(PDR)中指示的或者如本领域普通技术人员以其他方式确定的那些量来使用。在本发明的方法中，此类一种或多种其他治疗剂可以在施用本发明的化合物之前、同时或之后施用。本发明还提供了能够通过抑制Tyk2介导的信号转导来治疗IL-23、IL-12或IFNα相关病症的药物组合物，所述病症包括IL-23、IL-12和/或IFNα介导的疾病，如上所述。

本发明的组合物可以含有如上文所描述的其他治疗剂，并且可以例如通过采用常规的固体或液体媒介物或稀释剂以及适合于所需的施用方式的类型的药物添加剂(例如，赋形剂、粘合剂、防腐剂、稳定剂、调味剂等)根据诸如药物配制领域熟知的那些等技术来配制。

因此，本发明进一步包括包含一种或多种式I的化合物和药学上可接受的载体的组合物。

“药学上可接受的载体”是指本领域通常接受的用于将生物活性剂递送至动物、特别是哺乳动物的介质。根据完全在本领域普通技术人员的范围内的许多因素来配制药学上可接受的载体。这些因素包括而不限于所配制的活性剂的类型和性质；待被施用含有药剂的组合物的受试者；组合物的预期施用途径；以及所靶向的治疗适应证。药学上可接受的载体包括水性和非水性液体介质两者、以及多种固体和半固体剂型。此类载体还可以包括除活性剂之外的许多不同的成分和添加剂，此类另外的成分出于本领域普通技术人员熟知的多种原因(例如，活性剂、粘合剂等的稳定化)被包括在配制品中。合适的药学上可接受的载体及其选择中涉及的因素的描述在多种可容易获得的来源(例如像Remington'sPharmaceutical Sciences,第17版(1985)，将其通过引用以其整体并入本文)中找到。

式I的化合物可以通过适合于待治疗病症的任何手段施用，这可取决于对位点特异性治疗的需要或待递送的药物的量。局部施用对于皮肤相关疾病通常是优选的，并且全身性治疗对于癌性或癌变前病症是优选的，但是也考虑其他递送方式。例如，化合物可以口服递送，如以片剂、胶囊、颗粒剂、散剂、或包括糖浆在内的液体配制品的形式；局部递送，如以溶液、混悬剂、凝胶或软膏的形式；舌下递送；口腔递送；肠胃外递送，如通过皮下、静脉内、肌肉内或胸骨内注射或输注技术(例如，作为无菌可注射水溶液或非水溶液或混悬剂)；鼻腔递送，如通过吸入喷雾；局部递送，如以乳膏或软膏的形式；直肠递送，如以栓剂的形式；或脂质体递送。可以施用含有无毒的药学上可接受的媒介物或稀释剂的剂量单位配制品。化合物可以适合于立即释放或延长释放的形式施用。立即释放或延长释放可以用合适的药物组合物实现，或者特别是在延长释放的情况下，用设备如皮下植入物或渗透泵实现。

用于局部施用的示例性组合物包括局部载体，如(用聚乙烯胶凝化的矿物油)。

用于口服施用的示例性组合物包括混悬剂，所述混悬剂可含有例如用于赋予体积的微晶纤维素、作为助悬剂的海藻酸或海藻酸钠、作为粘度增强剂的甲基纤维素、以及甜味剂或调味剂，如本领域已知的那些；以及立即释放片剂，所述立即释放片剂可含有例如微晶纤维素、磷酸二钙、淀粉、硬脂酸镁和/或乳糖和/或其他赋形剂、粘合剂、增量剂、崩解剂、稀释剂和润滑剂，如本领域已知的那些。本发明化合物还可以通过舌下和/或颊腔施用来口服递送，例如采用模制、压缩或冷冻干燥的片剂。示例性组合物可以包含快速溶解的稀释剂，如甘露糖醇、乳糖、蔗糖和/或环糊精。此类配制品中还可以包含高分子量赋形剂，如纤维素或聚乙二醇(PEG)；帮助粘膜粘附的赋形剂，如羟丙基纤维素(HPC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素钠(SCMC)和/或马来酸酐共聚物(例如，/>)；和控制释放的试剂，如聚丙烯酸共聚物(例如，CARBOPOL/>)。还可以添加润滑剂、助流剂、调味剂、着色剂和稳定剂以便于制造和使用。

用于鼻用气雾剂或吸入施用的示例性组合物包括溶液，所述溶液可含有例如苯甲醇或其他合适的防腐剂、用于增强吸收和/或生物利用度的吸收促进剂，和/或其他增溶剂或分散剂，如本领域已知的那些。

用于肠胃外施用的示例性组合物包括可注射溶液或混悬剂，所述可注射溶液或混悬剂可含有例如合适的无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂，如甘露糖醇、1,3-丁二醇、水、林格氏溶液、等渗氯化钠溶液或其他合适的分散剂或润湿剂和助悬剂，包括合成的甘油单酯或甘油二酯和脂肪酸(包括油酸)。

用于直肠施用的示例性组合物包括栓剂，所述栓剂可含有例如合适的无刺激性赋形剂，如可可脂、合成甘油酯或聚乙二醇，它们在常温下为固体但在直肠腔中液化和/或溶解以释放药物。

本发明的化合物的治疗有效量可以由本领域普通技术人员确定，并且包括对于哺乳动物的每天约0.05至1000mg/kg、1-1000mg/kg、1-50mg/kg、5-250mg/kg、250-1000mg/kg体重的活性化合物的示例性剂量，其可以单剂量或以单独的分剂量的形式(如每天1至4次)施用。应理解，任何特定受试者的特定剂量水平和剂量频率可以变化，并且将取决于多种因素，包括所用的特定化合物的活性，该化合物的代谢稳定性和作用时间长度，受试者的物种、年龄、体重、总体健康、性别和饮食，施用的模式和时间，排泄速率，药物组合，以及特定病症的严重性。用于治疗的优选受试者包括动物，最优选哺乳动物物种，如人，以及家畜，如狗、猫、马等。因此，当本文使用术语“患者”时，所述术语旨在包括通过调节IL-23、IL-12和/或IFNα介导的功能而受影响的所有受试者，最优选哺乳动物物种。

制备方法

本发明的化合物可以通过有机合成领域的技术人员熟知的多种方式制备。本发明的化合物可以使用下面所描述的方法，连同合成有机化学领域中已知的合成方法、或如本领域技术人员所理解的其变化来合成。优选的方法包括但不限于以下所描述的那些。将本文引用的所有参考文献都通过引用以其整体特此并入。

可以使用本部分中描述的反应和技术制备本发明的化合物。这些反应在适合于所用试剂和材料的溶剂中进行，并且适用于所实现的转化。此外，在以下描述的合成方法的描述中，应当理解，所有提出的反应条件，包括溶剂的选择、反应气氛、反应温度、实验的持续时间和后处理程序，被选择为对于所述反应为标准的条件，本领域技术人员应该容易认识到这一点。有机合成领域的技术人员应理解，分子各部分上存在的官能团必须与所提出的试剂和反应相容。对于与这些反应条件相容的取代基的此类限制将对于本领域技术人员而言是易于清楚的，并且于是必须使用替代方法。有时，这将需要判断以修改合成步骤的顺序或选择一种而不是另一种特定的工艺方案，以便获得所需的本发明的化合物。还将认识到，在此领域的任何合成途径的规划中的另一个主要考虑因素是明智地选择用于保护本发明中描述的化合物中存在的反应性官能团的保护基团。为受过培训的从业者描述许多替代方案的权威解释是Greene和Wuts(Protective Groups In OrganicSynthesis,第三版,Wileyand Sons,1999)。

图1中所示的关键中间体可以通过合成有机化学领域的技术人员已知的多种方式组装以得到化合物1。

图1

方案1显示本领域技术人员如何将中间体Ia与中间体Ib组合以提供通式II的中间体。(通式Ic的中间体是可商购的或可以使用有机合成领域技术人员熟知的方法制备。)转化可以由本领域技术人员使用过渡金属催化的适当的硼酸酯与适当的卤化物的偶联来实现。更具体地，该转化可以使用铃木型偶联，采用PdCl₂(dppf)[DCM]或类似系统作为催化剂和磷酸三钾水溶液作为碱，在溶剂如1,4-二噁烷中在升高的温度下实现。

方案1

方案2显示了有机合成领域的技术人员如何将通式Ic的中间体(参见Moslin等人,J.Med.Chem 2019,62,8953-8972或US 9,505,748)与通式II的中间体偶联，以提供通式III的中间体。该反应涉及将两种试剂在0℃和50℃之间(取决于具体的II)在适当的非质子溶剂(特别是THF或2-甲基-THF)中混合，以及添加适当的碱，特别是六甲基二硅基氨基锂(lithiumhexamethyldisilazide)、六甲基二硅基氨基钠、六甲基二硅基氨基钾或氢化钠。

方案2

方案3显示了有机合成领域的技术人员如何在一个或一个步骤中将化合物III偶联至适当的底物，以产生通式1的化合物。一步法涉及将通式III的化合物与通式I的伯酰胺在过渡金属催化的条件下偶联。特别地，该反应的有利条件涉及采用布赫瓦尔德(Buchwald)型偶联，其使用Pd₂(dba)₃作为催化剂，xantphos作为配体和Cs₂CO₃作为碱，在作为溶剂的1,4-二噁烷中，在升高的温度下进行。该催化剂/配体//碱体系可以以本领域技术人员已知的方式改变。

方案3

制备

除非另有说明，否则所有从商业来源购买的试剂都不经进一步纯化即使用。所有涉及空气或水分敏感试剂的反应都在惰性气氛下进行。在Bruker Avance 400或JEOLEclipse 500光谱仪上记录质子和碳磁共振(¹H和¹³C NMR)光谱，并且相对于它们在其中运行的样品的参考溶剂报告(以ppm计)。使用Shimadzu LC-10AS液相色谱仪和SPDUV-vis检测器在220或254nm处进行HPLC和LCMS分析，用Micromass Platform LC光谱仪进行MS检测。使用来自Agilent technologies的GC(7890B)-MS(5977B)进行GCMS分析。

方法A：

线性梯度为2分钟(“min”)内0％至100％溶剂B，在100％ B下保持0.5分钟(“min”)

254纳米(“nm”)处的紫外(“UV”)可视化

柱：AcquityBEH C18 1.7μM

流速：1毫升(“mL”)/分钟

溶剂A：0.05％三氟乙酸，95％水，5％乙腈

溶剂B：0.05％三氟乙酸，5％水，95％乙腈

方法B：

线性梯度为3分钟(“min”)内0％至100％溶剂B，在100％ B下保持0.5分钟(“min”)220纳米(“nm”)处的紫外(“UV”)可视化

柱：Waters XBridge C18(2.1mm x 50mm)1.7μM

流速：1毫升(“mL”)/分钟

溶剂A：0.1％三氟乙酸，95％水，5％乙腈

溶剂B：0.1％三氟乙酸，5％水，95％乙腈

/>

实施例1

步骤1 5-甲氧基-6-(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-4-胺：

将(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)硼酸(95mg，0.752mmol)、6-氯-5-甲氧基嘧啶-4-胺(60mg，0.376mmol)和PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂加合物(15.35mg，0.019mmol)在二噁烷(2mL)中的搅拌混合物通过将氮气鼓泡通过混合物5分钟来脱气。快速添加2M K₃PO₄(水溶液)(0.564mL，1.128mmol)，并且将反应混合物在100℃下加热30分钟。反应几乎立即变暗。LC-MS显示起始材料完全消耗。将反应混合物冷却至室温，然后用EtOAc(75mL)稀释。然后将此溶液经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并且通过快速色谱法纯化，用在己烷中的0-100％ EtOAc洗脱然后用在DCM中的0-10％ MeOH洗脱。提供呈黄色油状物的5-甲氧基-6-(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-4-胺(35mg，0.170mmol，45.1％产率)。MS(M+1)m/z:207.2(M+H)⁺。LC保留时间0.38[A]。

步骤2 6-氯-4-((5-甲氧基-6-(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺：

使用注射器以逐滴方式(<5分钟)向4,6-二氯-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺(参见Moslin等人,J.Med.Chem 2019,62,8953-8972)(36mg，0.172mmol)和5-甲氧基-6-(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-4-胺(35.5mg，0.172mmol)在四氢呋喃(1.5mL)中的溶液中添加双(三甲基甲硅烷基)酰胺钾(0.431mL，0.431mmol)，并将反应在室温下搅拌。添加饱和氯化铵水溶液以淬灭残余的碱。然后将反应在EtOAc与水之间分配。将水层用1x乙酸乙酯洗涤，然后将合并的有机层用1x氯化铵(饱和的)、1x盐水洗涤。然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过使用12g ISCO柱纯化，用0-100％ EtOAc洗脱，提供呈灰白色固体的6-氯-4-((5-甲氧基-6-(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺(13mg，0.034mmol，19.93％产率)。MS(M+1)m/z:379.1(M+H)⁺。LC保留时间1.18[A]。

实施例1 6-(环丙烷甲酰胺基)-4-((5-甲氧基-6-(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺：

将6-氯-4-((5-甲氧基-6-(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺(13mg，0.034mmol)、xantphos(3.97mg，6.86μmol)和环丙烷甲酰胺(14.60mg，0.172mmol)在二噁烷(1.5mL)中的混合物通过将N2鼓泡通过混合物5分钟来脱气。然后添加Cs₂CO₃(44.7mg，0.137mmol)和Pd₂(dba)₃(3.14mg，3.43μmol)，将器皿密封，并且将反应在130℃下搅拌2h。将反应用DMF稀释至2mL，然后过滤并通过制备型HPLC纯化。将纯的级分浓缩以提供6-(环丙烷甲酰胺基)-4-((5-甲氧基-6-(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺，2.3mg；15.7％产率。MS(M+1)m/z:428.3(M+H)⁺。LC保留时间1.32[B]。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ12.81(s,1H),11.49(s,1H),9.93(s,1H),9.35(s,1H),8.68(s,1H),8.35(s,1H),4.31(s,3H),3.91(s,3H),2.25-2.11(m,1H),1.05-0.85(m,4H)。

实施例2

步骤1 3-甲氧基-2-(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-4-胺：

将(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)硼酸(132mg，1.042mmol)、2-氯-3-甲氧基吡啶-4-胺,HCl,H₂O(111mg，0.521mmol)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(21.27mg，0.026mmol)在二噁烷(4mL)中的搅拌混合物通过将氮气鼓泡通过混合物5分钟来脱气。快速添加2 MK₃PO₄(水溶液)(0.781mL，1.563mmol)并且将反应混合物在100℃下加热30分钟。反应几乎立即变暗。LC-MS显示起始材料完全消耗。将反应混合物冷却至室温，然后用EtOAc(75mL)稀释。然后将此溶液经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并且通过快速色谱法纯化，用在己烷中的0-100％EtOAc洗脱。将纯的级分浓缩以提供呈黄色油状物的3-甲氧基-2-(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-4-胺(42mg，0.205mmol，39.3％产率)。MS(M+1)m/z:206.2(M+H)⁺。LC保留时间0.69[A]。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.14(s,2H),6.61(d,J＝5.3Hz,1H),4.42-4.35(br s,2H),4.29(s,3H),3.74(s,3H)。

步骤2 6-氯-4-((3-甲氧基-2-(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-4-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺：

使用注射器以逐滴方式(<5min)向4,6-二氯-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺(42.8mg，0.205mmol)和3-甲氧基-2-(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-4-胺(40mg，0.195mmol)(经再纯化)在四氢呋喃(2mL)中的溶液中添加双(三甲基甲硅烷基)酰胺钾(0.487mL，0.487mmol)，并搅拌反应混合物直至通过LCMS确定反应完成(约15min)。添加饱和氯化铵(水溶液)以淬灭残余的碱，接着固体从溶液中沉淀出并将该固体滤出，该固体是所需产物。进行干燥以提供呈灰白色固体的6-氯-4-((3-甲氧基-2-(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-4-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺(59mg，0.156mmol，80％产率)。MS(M+1)m/z:378.0(M+H)⁺。LC保留时间0.95[A]。

实施例2 6-(环丙烷甲酰胺基)-4-((3-甲氧基-2-(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-4-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺：

将6-氯-4-((3-甲氧基-2-(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-4-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺(37mg，0.098mmol)、xantphos(11.33mg，0.020mmol)和环丙烷甲酰胺(41.7mg，0.490mmol)在二噁烷(1.5mL)中的混合物通过将N₂鼓泡通过混合物5分钟来脱气。然后添加Cs₂CO₃(128mg，0.392mmol)和Pd₂(dba)₃(8.97mg，9.79μmol)，将器皿密封，并且将反应在130℃下搅拌2h。通过LC-MS确定反应完成，然后用DMF稀释至2mL，过滤并通过制备型HPLC纯化。将纯的级分浓缩以提供6-(环丙烷甲酰胺基)-4-((3-甲氧基-2-(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-4-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺(2.7mg，6.39％产率)。MS(M+1)m/z:427.1(M+H)⁺。LC保留时间1.18[B]。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ11.63(s,1H),11.52(s,1H),9.24(s,1H),8.51(s,1H),8.22(br s,1H),4.45-4.17(m,3H),3.79(s,3H),2.12(br t,J＝5.6Hz,1H),0.94-0.87(m,4H)(埋在芳族基线中的可交换质子)。

实施例3

步骤1 4,5-二溴-2-环丙基-2-H-1,2,3-三唑：

将4,5-二溴-1H-1,2,3-三唑(3.0g，13mmol)、乙酸铜(II)(2.88g，15.9mmol)、2,2’-联吡啶(2.48g，15.9mmol)和碳酸钠(2.80g，26.4mmol)在二氯乙烷(40mL)中的搅拌溶液通过将氮气鼓泡通过反应混合物5分钟来脱气。向脱气的混合物中添加环丙基硼酸(3.41g，39.7mmol)。将反应加热至85℃过夜。将反应冷却至室温，然后在200mL EtOAc与饱和氯化铵(水溶液)和浓氢氧化铵(1:1)的100mL混合物之间分配。将各层分离，并将水层用2x75mLEtOAc萃取。然后用饱和氯化铵(水溶液)和盐水洗涤合并的EtOAc层。然后将EtOAc层经硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩。使用自动色谱法(0-70％EtOAc/己烷)纯化粗产物。将纯级分合并并在减压下浓缩，以提供4,5-二溴-2-环丙基-2-H-1,2,3-三唑(979mg，28％产率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ4.03-3.95(m,1H),1.38-1.32(m,2H),1.16-1.09(m,2H)。

步骤2

向冷却(-20℃)的4,5-二溴-2-环丙基-2H-1,2,3-三唑(0.950g，3.56mmol)在THF(5mL)中的溶液中缓慢添加异丙基氯化镁(2M在THF中，5.3mL，10.7mmol)。将反应搅拌30分钟，保持-20℃的冷浴，然后使其在2小时内温热至0℃。通过添加饱和氯化铵(水溶液)将反应淬灭。使用EtOAc(2x50mL)萃取产物。将合并的EtOAc层用盐水溶液洗涤，然后经无水硫酸钠干燥。通过过滤除去干燥剂，并在减压下浓缩滤液，得到呈黄色油状物的4-溴-2-环丙基-2H-1,2,3-三唑(605mg，81％产率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.51(s,1H),3.99(tt,J＝7.5,3.8Hz,1H),1.39-1.32(m,2H),1.15-1.07(m,2H)。

向4-溴-2-环丙基-2H-1,2,3-三唑(712mg，3.79mmol)在THF(10mL)中的变冷(10℃)的搅拌溶液中缓慢添加异丙基氯化镁氯化锂络合物(1.3M在THF中，3.5mL，4.5mmol)。将反应在10℃下搅拌2小时，然后进一步冷却至-20℃。然后向该溶液中添加硼酸三甲酯(0.64mL，5.7mmol)。将反应在-20℃下搅拌1小时，然后通过添加1NHCl(水溶液)淬灭。将产物用EtOAc(x2)萃取，并将合并的有机层用盐水溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥。通过过滤除去干燥剂，并在减压下浓缩滤液，得到固体(2-环丙基-2H-1,2,3-三唑-4-基)硼酸(499mg，73％产率)。

步骤4 3-甲氧基-2-(2-环丙基-2H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-4-胺：

将(2-环丙基-2H-11,2,3-三唑-4-基)硼酸(104mg，0.677mmol)、2-氯-3-甲氧基吡啶-4-胺,HCl,H₂O(111mg，0.521mmol)和[1,1'-双(二-叔丁基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(16.98mg，0.026mmol)在二噁烷(2mL)中的搅拌混合物通过将氮气鼓泡通过混合物5分钟来脱气。快速添加2M K₃PO₄(水溶液)(1.042mL，2.084mmol)，并且将反应混合物在100℃下加热30分钟。反应几乎立即变暗。LC-MS显示起始材料完全消耗。将反应混合物冷却至室温，然后用EtOAc(75mL)稀释。然后将该溶液经硫酸钠干燥、过滤、浓缩，并通过快速色谱法纯化，用在己烷中的0-100％ EtOAc洗脱，得到呈白色固体的2-(2-环丙基-2H-1,2,3-三唑-4-基)-3-甲氧基吡啶-4-胺(49mg，40.7％产率)。MS(M+1)m/z:232.2(M+H)⁺。LC保留时间0.88[A]。

步骤5 6-氯-4-((3-甲氧基-2-(2-环丙基-2H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-4-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺：

使用注射器以逐滴方式(<5min)向4,6-二氯-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺(66.4mg，0.318mmol)和2-(2-环丙基-2H-1,2,3-三唑-4-基)-3-甲氧基吡啶-4-胺(49mg，0.212mmol)在四氢呋喃(2mL)中的溶液中添加双(三甲基甲硅烷基)酰胺钾(0.848mL，0.848mmol)，并将反应混合物搅拌直至通过LCMS确定反应完成(约15min)。添加饱和氯化铵(水溶液)以淬灭残余的碱。然后将反应在DCM/氯仿与水之间分配。将水层用2x DCM洗涤，然后将合并的有机层用1x盐水洗涤。然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物使用12gISCO硅胶柱进行色谱分离，用己烷中的0-100％ EtOAc洗脱。将纯的级分浓缩以提供呈浅黄色固体的6-氯-4-((2-(2-环丙基-2H-1,2,3-三唑-4-基)-3-甲氧基吡啶-4-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺(81mg，85％产率)。MS(M+1)m/z:404.2(M+H)⁺。LC保留时间1.02[A]。

实施例3 6-(环丙烷甲酰胺基)-4-((3-甲氧基-2-(2-环丙基-2H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-4-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺：

将6-氯-4-((2-(2-环丙基-2H-1,2,3-三唑-4-基)-3-甲氧基吡啶-4-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺(40mg，0.099mmol)、xantphos(11.46mg，0.020mmol)和环丙烷甲酰胺(42.1mg，0.495mmol)在二噁烷(1.3mL)中的混合物通过将N₂鼓泡通过混合物5分钟来脱气。然后添加Cs₂CO₃(129mg，0.396mmol)和Pd₂(dba)₃(9.07mg，9.90μmol)，将器皿密封，并且将反应在130℃下搅拌2h。将反应物用DMF稀释至2mL，然后过滤并通过制备型HPLC纯化，得到6-(环丙烷甲酰胺基)-4-((2-(2-环丙基-2H-1,2,3-三唑-4-基)-3-甲氧基吡啶-4-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺(8.3mg，0.018mmol，17.69％产率)。MS(M+1)m/z:453.2(M+H)⁺。LC保留时间1.22[B]。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ11.65(s,1H),11.52(s,1H),9.24(s,1H),8.51(s,1H),8.38(d,J＝5.2Hz,1H),8.20(s,1H),7.50(d,J＝5.5Hz,1H),4.30-4.19(m,1H),3.78(s,3H),2.18-2.08(m,1H),1.29(br d,J＝2.7Hz,2H),1.16(br d,J＝5.5Hz,2H),0.90(br d,J＝5.2Hz,4H)。

实施例4

步骤1 2-(1-环丙基-1H-吡唑-4-基)-3-甲氧基吡啶-4-胺：

将1-环丙基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(114mg，0.488mmol)、2-氯-3-甲氧基吡啶-4-胺,HCl,H₂O(80mg，0.375mmol)和[1,1'-双(二叔丁基膦基)二茂铁]-二氯钯(II)(12.24mg，0.019mmol)在二噁烷(3mL)中的搅拌混合物通过将氮气鼓泡通过混合物5分钟来脱气。快速添加2M K₃PO₄(水溶液)(0.751mL，1.502mmol)并且将反应混合物在100℃下加热30分钟。反应几乎立即变暗。LC-MS显示起始材料完全消耗。将反应混合物冷却至室温，然后用EtOAc(75mL)稀释。然后将此溶液经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并且通过快速色谱法纯化，用在己烷中的0-100％ EtOAc洗脱。将纯的级分浓缩以提供呈黄色油状物的2-(1-环丙基-1H-吡唑-4-基)-3-甲氧基吡啶-4-胺(51mg，59.0％产率)。MS(M+1)m/z:231.2(M+H)⁺。LC保留时间0.77[A]。

步骤2 6-氯-4-((2-(1-环丙基-1H-吡唑-4-基)-3-甲氧基吡啶-4-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺：

使用注射器以逐滴方式(<5min)向4,6-二氯-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺(74.1mg，0.354mmol)和2-(1-环丙基-1H-吡唑-4-基)-3-甲氧基吡啶-4-胺(51mg，0.221mmol)在四氢呋喃(2mL)中的溶液中添加双(三甲基甲硅烷基)酰胺钾(0.997mL，0.997mmol)，并将反应搅拌直至通过LCMS确定完成(约15min)。添加饱和氯化铵(水溶液)以淬灭残余的碱。然后将反应在EtOAc与水之间分配。将水层用1x乙酸乙酯洗涤，然后将合并的有机层用1x氯化铵(饱和)和1x盐水洗涤。然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速色谱法使用12g ISCO柱纯化，用在己烷中的0-100％ EtOAc洗脱。将纯的级分浓缩以提供呈浅黄色固体的6-氯-4-((2-(1-环丙基-1H-吡唑-4-基)-3-甲氧基吡啶-4-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺(27mg，30.3％产率)。MS(M+1)m/z:403.2(M+H)⁺。LC保留时间0.98[A]。

实施例4 6-(环丙烷甲酰胺基)-4-((2-(1-环丙基-1H-吡唑-4-基)-3-甲氧基吡啶-4-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺：

将6-氯-4-((2-(1-环丙基-1H-吡唑-4-基)-3-甲氧基吡啶-4-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺(25mg，0.062mmol)、xantphos(7.18mg，0.012mmol)和环丙烷甲酰胺(26.4mg，0.310mmol)在二噁烷(1.3mL)中的混合物通过将N2鼓泡通过混合物5分钟来脱气。然后添加Cs₂CO₃(81mg，0.248mmol)和Pd₂(dba)₃(5.68mg，6.21μmol)，将器皿密封，并且将反应在130℃下搅拌2h。通过LC-MS确定反应完成。用DMF稀释至2mL并过滤后，通过制备型HPLC纯化溶液。将纯的级分浓缩以提供6-(环丙烷甲酰胺基)-4-((2-(1-环丙基-1H-吡唑-4-基)-3-甲氧基吡啶-4-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺(3.6mg，12.76％产率)。MS(M+1)m/z:452.2(M+H)⁺。LC保留时间1.16[B]。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ11.65-11.48(m,1H),9.24(br s,1H),8.48(s,1H),8.34(s,1H),8.28(br d,J＝5.2Hz,1H),8.04(s,1H),7.32(brd,J＝4.9Hz,1H),3.91-3.81(m,1H),3.75(s,3H),3.42-3.20(m,1H),2.19-2.04(m,1H),1.20-1.09(m,2H),1.08-0.98(m,2H),0.96-0.79(m,4H)。

实施例5

步骤1 5-(2-环丙基-2H-1,2,3-三唑-4-基)-4-甲氧基吡啶-3-胺：

将(2-环丙基-2H-1,2,3-三唑-4-基)硼酸(85mg，0.553mmol)、5-溴-4-甲氧基吡啶-3-胺(102mg，0.502mmol)和PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂加合物(20.51mg，0.025mmol)在二噁烷(2.5mL)中的搅拌混合物通过将氮气鼓泡通过混合物5分钟来脱气。快速添加2M K₃PO₄(水溶液)(0.754mL，1.507mmol)并且将反应混合物在50℃下加热30分钟。反应几乎立即变暗。LC-MS显示起始材料完全消耗。将反应混合物冷却至室温，然后用EtOAc(75mL)稀释。然后将此溶液经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并且通过快速色谱法纯化，用在己烷中的0-100％ EtOAc洗脱然后用在DCM中的0-15％ MeOH洗脱。将纯的级分浓缩以提供呈灰白色固体的5-(2-环丙基-2H-1,2,3-三唑-4-基)-4-甲氧基吡啶-3-胺(95mg，82％产率)。MS(M+1)m/z:232.2(M+H)⁺。LC保留时间0.78[A]。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.49(s,1H),8.11(s,1H),7.97(s,1H),4.09(tt,J＝7.5,3.8Hz,1H),3.86(br s,2H),3.74(s,3H),1.48-1.39(m,2H),1.20-1.11(m,2H)。

步骤2 6-氯-4-((5-(2-环丙基-2H-1,2,3-三唑-4-基)-4-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺：

使用注射器以逐滴方式(<5min)向4,6-二氯-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺(93mg，0.447mmol)和5-(2-环丙基-2H-1,2,3-三唑-4-基)-4-甲氧基吡啶-3-胺(94mg，0.406mmol)在四氢呋喃(3mL)中的溶液中添加双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂(1.423mL，1.423mmol)，并将反应搅拌直至通过LCMS确定完成(约15min)。添加饱和氯化铵(水溶液)以淬灭残余的碱。然后将反应在EtOAc与水之间分配。将水层用1x乙酸乙酯洗涤，然后将合并的有机层用1x氯化铵(饱和)和1x盐水洗涤。然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。使用12gISCO硅胶柱以通过快速色谱法纯化，用在己烷中的0-100％ EtOAc洗脱。将纯的级分浓缩以提供浅黄色固体的6-氯-4-((5-(2-环丙基-2H-1,2,3-三唑-4-基)-4-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺(104mg，63.4％产率)。MS(M+1)m/z:404.1(M+H)⁺。LC保留时间1.12[A]。

实施例5 6-(环丙烷甲酰胺基)-4-((5-(2-环丙基-2H-1,2,3-三唑-4-基)-4-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺

将6-氯-4-((5-(2-环丙基-2H-1,2,3-三唑-4-基)-4-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺(40mg，0.099mmol)、xantphos(11.46mg，0.020mmol)和环丙烷甲酰胺(42.1mg，0.495mmol)在二噁烷(1.3mL)中的混合物通过将N2鼓泡通过混合物5分钟来脱气。然后添加Cs₂CO₃(129mg，0.396mmol)和Pd₂(dba)₃(9.07mg，9.90μmol)，将器皿密封，并且将反应在130℃下搅拌2h。通过LC-MS确定反应完成，并用DMF稀释至2mL，过滤并通过制备型HPLC纯化。将纯的级分浓缩以提供6-(环丙烷甲酰胺基)-4-((5-(2-环丙基-2H-1,2,3-三唑-4-基)-4-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-N-(甲基-d₃)哒嗪-3-甲酰胺(2.7mg，6.02％产率)。MS(M+1)m/z:453.2(M+H)⁺。LC保留时间1.24[B]。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ11.33(s,1H),10.80(s,1H),9.14(s,1H),8.85(br s,1H),8.67-8.51(m,1H),8.15(s,1H),7.88(s,1H),4.23(dt,J＝7.5,3.6Hz,1H),3.80(s,3H),2.12-2.00(m,1H),1.29(br d,J＝3.1Hz,2H),1.16(br d,J＝5.5Hz,2H),0.88-0.73(m,4H)。

生物测定

使用以下分析来显示本发明化合物的活性。

在人全血中IFNα诱导的STAT磷酸化

与化合物一起孵育一小时后，将人全血(用ACD-A作为抗凝剂抽取)用1000U/mL重组人IFNαA/D(R&D Systems 11200-2)刺激15min。通过添加固定/裂解缓冲液(BD 558049)停止刺激。将细胞用CD3 FITC抗体(BD 555916)染色，洗涤，并且使用Perm III缓冲液(BD558050)在冰上透化。然后将细胞用Alexa-Fluor 647pSTAT5(pY694)抗体(BD612599)染色60min，然后在iQue Plus上分析。在对CD3阳性群体门控后，通过中值荧光强度定量pSTAT5表达的量。

Caco-2细胞中的双向渗透性测定

概述

对所描述的化合物在Caco-2双向渗透性测定中进行测试，以评估其渗透性和外排底物潜力。在37℃下，将化合物(3μM，一式三份)与Caco-2细胞在pH 7.4的测定缓冲液(含有0.5％牛血清白蛋白[BSA])中孵育2小时，然后提取用于LC-MS分析，以确定化合物在反应混合物中的浓度并计算渗透系数、外排比和回收率。

材料和方法

Caco-2(高加索结肠腺癌)细胞获自美国典型培养物保藏中心(弗吉尼亚州马纳萨斯)。杜尔贝科改良伊格尔培养基(DMEM)、N-2羟乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸(HEPES)缓冲液、非必需氨基酸、L-谷氨酰胺、青霉素-G-链霉素和热灭活胎牛血清(FBS)购自GIBCO/Invitrogen(加利福尼亚州卡尔斯巴德)。具有96个孔(表面积：0.11cm²)的Transwell板(具有0.4-μm孔径的聚碳酸酯膜和低结合Transwell簇板)购自Sigma Aldrich(密苏里州圣路易斯)。低结合96孔板购自Corning(纽约州康宁)。通过用HEPES将Hank's平衡盐溶液(HBSS)调节至pH 7.4来制备改性的Hank's平衡盐溶液(MHBSS)。HBSS、地高辛和牛血清白蛋白(BSA)购自Sigma(密苏里州圣路易斯)。过滤块(2mL，96孔)购自Whatman(弗莱堡，德国)。所有溶剂均为分析级。

细胞制备

在测定前十四(14)至28天，将Caco-2细胞以1.8x10⁵个细胞/cm²(大约2.0x10⁴个细胞/孔)的密度接种到96孔transwell板中的聚碳酸酯滤膜上。使细胞在培养基中生长，该培养基由补充有10％胎牛血清、10mM HEPES、1％非必需氨基酸、2mM L-谷氨酰胺、100U/mL青霉素-G和100μg/mL链霉素的DMEM组成。每3天更换培养基，并且将细胞在37℃下在95％相对湿度和5％ CO₂气氛中维持。在即将测定之前评价细胞的紧密连接形成(参见下文的质量控制部分)。

化合物制备

将化合物在100％ DMSO中溶解至10mM。在目视确认完全溶解后，将10mM的化合物储备液铺板到96孔板中，并在100％ DMSO中进一步连续稀释以产生0.3mM的100x储备液浓度。将四(4)个对照化合物与所描述的化合物一起测试，将它们以0.3mM的100x浓度一式四份铺板。

渗透性评估

将所描述的化合物在单个实验中以3μM的最终浓度一式三份进行测试。测定中使用的细胞传代已通过QC标准(参见下文的质量控制部分)。用培养14至28天的Caco-2细胞单层进行研究，细胞传代次数在20与80之间。

测定(转运)缓冲液由调节至pH 7.4的MHBSS和0.5％ BSA组成。从100x化合物板中，将化合物的8μL的100％ DMSO储备溶液添加到800μL测定缓冲液中，充分混合，并过滤以除去任何沉淀物，作为测定孵育前的最后制备步骤。所描述的化合物和对照化合物的目标最终测试浓度为3μM。滤液表示用作测定的供者溶液(在两个方向上)的初始储备化合物溶液。受者溶液仅为测定缓冲液。

就在执行测定之前，将每个细胞单层用测定缓冲液洗涤3次以除去所有痕量的培养基。通过将100μL测定缓冲液加/减化合物添加到96孔transwell低结合簇板的顶端transwell隔室并且将200μL测定缓冲液加/减化合物添加到基底外侧隔室来启动渗透性研究。对于顶端至基底外侧(A→B)渗透性(吸收方向)，将含有化合物或对照化合物的缓冲液(1x供者溶液)置于顶端隔室(供者孔)中，而仅将缓冲液置于相应的基底外侧隔室(受者孔)中。对于基底外侧至顶端(B→A)渗透性(分泌方向)，将含有化合物或对照化合物的缓冲液(1x供者溶液)置于基底外侧隔室(供者孔)中，而仅将缓冲液置于相应的顶端隔室(受者孔)中。然后将Transwell在37℃下在95％相对湿度和5％ CO₂气氛中孵育2小时。孵育后，从每个顶端和基底外侧隔室中取出75μL并且转移至96孔低结合板，这些板已预先加载75μL/孔的含有250nM普萘洛尔、250nM双氯芬酸和500nM甲苯磺丁脲(作为内标)的乙腈。随后将样品通过LC-MS/MS分析以测定所描述的化合物和对照化合物的浓度。

测定样品的分析

通过LC-MS/MS确定测定样品中所描述的化合物和对照化合物的浓度。AB Sciex4500/5500/6500多路复用系统由2套二元Shimadzu 20ADvp泵及SCL-20Avp控制器(用于梯度洗脱)和LS1自动进样器、以及在电喷雾电离(ESI)模式下运行的AB Sciex 4500/5500/6500三重四极杆质谱仪组成。为了获得用于样品分析的最佳SRM条件，使用DiscoveryQuant^TM(AB Sciex)对每种化合物进行MS/MS优化，其特征在于用从化合物储备溶液制备的在甲醇和水(1:1，v/v)的混合物中的5μM标准溶液进行饱和控制。在75％流动相B(在乙腈中的0.2％甲酸)和25％流动相A(在水中的0.2％甲酸)的等度洗脱下，使用流动注射分析以40μL的注射体积进行优化。

注射5-μL等分试样的样品，然后在Kinetex XB-C18(2.6μm，2.1x30mm柱)上分离，使用由A(在水中的0.2％甲酸)和B(在乙腈中的0.2％甲酸)组成的流动相进行梯度洗脱。

A＝在水中的0.2％甲酸；B＝在乙腈中的0.2％甲酸

DiscoveryQuant^TM自动确定所描述的化合物和参考化合物的最佳电离极性(正或负)、前体和产物离子、去簇电压、和碰撞能量。优化的SRM MS/MS条件用于样品分析。使用所描述的化合物或对照化合物与内标的峰面积比定量。使用给药溶液中化合物的峰面积比确定样品中的化合物浓度。

数据分析

报告了所描述的化合物的以下结果：渗透系数(Pc[纳米每秒])、外排比和回收百分比。

使用以下公式计算Pc值：

其中：

C_At＝时间t后受者孔中测试化合物的浓度，

V_A＝受者孔中的体积，

S＝膜的表面积(0.11cm²),

C_D0＝供者孔中测试化合物的初始浓度，

t＝孵育时间。

外排比计算如下：

通过将在孵育时间结束时存在于供者和受者测定隔室中的测试化合物的总量(nmol)(组合)表示为在测定孵育之前添加到供者隔室中的测试化合物的总量(nmol)的分数(百分比)来计算回收率(％)。它是使用以下公式计算的：

其中：

C_D0＝供者孔中测试化合物的初始浓度，

V_D＝供者孔中的体积，

C_Dt＝时间t后供者孔中的浓度，

C_At＝时间t后受者孔中的浓度，

V_A＝受者孔中的体积。

质量控制

使用跨上皮电阻(TEER)测量评价在测定当天使用的一个transwell板中的Caco-2细胞的紧密连接形成。使用EVOM电阻计(World Precision Instruments，佛罗里达州萨拉索塔)进行TEER评价。transwell板的每个孔显示TEER值>600Ω·cm²，并且该铺板批次的细胞传代和所有板均被接收用于测定。

将Pc值覆盖了一定渗透性范围的四(4)种对照化合物与每个实验中描述的化合物一起进行了测试。该测定的验收标准要求3μM的对照化合物的结果在可接受的历史范围内。表B中显示了历史上观察到的这4种对照的Pc值和外排比的可接受范围。

在这些研究中，所有对照化合物的结果均在其各自的历史范围内。因此，测定数据被接受用于数据分析和评价所描述的化合物在Caco-2细胞中的双向渗透性。

值是平均值±标准差。

Pc＝渗透系数。A→B＝顶端到基底外侧。B→A＝基底外侧到顶端。

表1：例示的化合物在人全血测定和CACO2渗透性测定中的效力和渗透性数据。

实施例编号	人全血IFNa pSTAT5 IC50(μM)	CACO2(A-B)nm/s	外排比
				1	0.32	261	1.80
2	0.05	122	4.90
				3	0.19	98	3.30
4	0.35	138	2.80
				5	1.09	342	1.10

Claims (8)

1.一种式I的化合物

或其立体异构体或药学上可接受的盐，

其中

X、X¹和X²是-N-或-CH-，条件是如果X是-CH-，则X¹和X²中的一个必须是-N-，并且如果X是-N-，则X¹和X²中的一个必须是-N-；

Y是-CH-或-N-；

R¹是OR^1a、NR^1aR^1b或R²；

R^1a和R^1b独立地是氢或C_1-3烷基；

R²是被0-2个R^2a取代的C_3-6环烷基；

R^2a是F或C_1-3烷基；

R³是C_1-3烷基或C_3-6环烷基；并且

R⁴是氢、卤素、或C_1-3烷基。

2.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物具有式II

或其立体异构体或药学上可接受的盐，

其中

X、X¹和X²是-N-或-CH-，条件是如果X是-CH-，则X¹和X²中的一个必须是-N-，并且如果X是-N-，则X¹和X²中的一个必须是-N-；

Y是-CH-或-N-；

R³是C_1-3烷基或C_3-6环烷基。

3.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物具有式III

或其立体异构体或药学上可接受的盐，

X、X¹和X²是-N-或-CH-，条件是如果X是-CH-，则X¹和X²中的一个必须是-N-，并且如果X是-N-，则X¹和X²中的一个必须是-N-；

R³是C_1-3烷基或C_3-6环烷基。

4.一种化合物或其药学上可接受的盐，选自

6-环丙烷酰胺基-4-{[5-甲氧基-6-(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-4-基]氨基}-N-(2H3)甲基哒嗪-3-甲酰胺，

6-环丙烷酰胺基-4-{[3-甲氧基-2-(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-4-基]氨基}-N-(2H3)甲基哒嗪-3-甲酰胺，

4-{[3-甲氧基-2-(2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-4-基]氨基}-N-(2H3)甲基-6-[(1R)-螺[2.2]戊烷-1-酰胺基]哒嗪-3-甲酰胺，

6-环丙烷酰胺基-4-{[2-(1-环丙基-1H-吡唑-4-基)-3-甲氧基吡啶-4-基]氨基}-N-(2H3)甲基哒嗪-3-甲酰胺，和

6-环丙烷酰胺基-4-{[2-(2-环丙基-2H-1,2,3-三唑-4-基)-3-甲氧基吡啶-4-基]氨基}-N-(2H3)甲基哒嗪-3-甲酰胺。

5.一种药物组合物，所述药物组合物包含一种或多种根据权利要求1所述的化合物以及药学上可接受的载体或稀释剂。

6.一种药物组合物，所述药物组合物包含一种或多种根据权利要求4所述的化合物以及药学上可接受的载体或稀释剂。

7.一种治疗疾病的方法，所述方法包括向需要这种治疗的患者施用治疗有效量的根据权利要求1所述的化合物，其中所述疾病是神经系统变性疾病。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述神经系统变性疾病是阿尔茨海默病、帕金森病、ALS、多发性硬化(RMS和/或进展型MS，包括CIS、视神经炎、视神经脊髓炎)。