CN117305164B - 一种罗伊氏乳杆菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种罗伊氏乳杆菌及其应用。所述罗伊氏乳杆菌为罗伊氏乳杆菌Lactobacillus reuteri SINE003菌株，保藏编号为CGMCC NO.25664。本发明分离筛选得到罗伊氏乳杆菌Lactobacillus reuteri SINE003菌株，对其进行生理生化检测，并利用其对孤独症小鼠进行干预，进行行为学检测以及肠道菌群16s rRNA测试，发现罗伊氏乳杆菌Lactobacillus reuteri SINE003菌株能够调控肠道菌群，提高益生菌丰度，改善肠道菌群紊乱，且对于孤独症有一定的行为学改善作用。

Description

一种罗伊氏乳杆菌及其应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及一种罗伊氏乳杆菌及其应用。
背景技术
孤独症即孤独症谱系障碍，孤独症谱系障碍的发病率逐年上升。对大量同卵双胞胎的调查研究显示，遗传和环境因素是孤独症发病的主要原因，其中一个重要的环境因素是肠道微生物失调。新近的研究表明，肠道微生物通过调控宿主肠道神经内分泌系统、表观遗传学等途径影响孤独症的发病。
近年来，肠道菌群在神经精神疾病方面的作用逐渐被大家所认识，大量的研究发现肠道与大脑之间存在着一个肠道菌群-肠-脑轴，肠道细菌通过此轴调控宿主的脑功能、行为等，肠道菌群的改变也会经此轻影响中枢神经系统的发育与功能。通过口服抗生素、益生菌或者进行粪菌移植等方式改变宿主的肠道菌群后，宿主的行为等方面会发生改变，例如正常小鼠口服新霉素、杆菌肤和纳他霉素使得肠道菌群发生改变，可以发现小鼠的试探性行为增多，大脑边缘区脑源性神经营养因子水平升高，而通过腹腔给药则无上述变化。大量的实验均证实了肠道菌群在神经精裤疾病中发挥着重要作用，因此改善肠道菌群有可能会成为预防和治疗神经精神疾病的一项重要的辅助措施。如CN110051700A公开一种治疗孤独症的益生菌组合物，各成分的质量份数为：双歧杆菌的组分为5~15份，乳杆菌的组份为7~20份，嗜热链球菌的组份为15~45份，将前述原料混合均匀即获得治疗孤独症的益生菌组合物，益生菌组合物还包括按质量份数为40份的低聚果糖。
罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)是存在于肠道内的乳酸菌，作为益生菌使用，对肠黏膜具有很强的黏附能力，并且还具有优异的耐酸、耐胆盐和广谱抑菌特性，能广泛抑制革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、酵母、真菌和病原虫等的生长。
综上所述，挖掘能够用于预防或治疗孤独症的的肠道微生物，为预防或治疗孤独症提供新手段、新思路，具有重要意义。
发明内容
针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种罗伊氏乳杆菌及其应用，分离筛选得到罗伊氏乳杆菌Lactobacillus reuteriSINE003菌株，并进一步发现其能够调控肠道菌群，提高益生菌丰度，改善肠道菌群紊乱，且对于孤独症有一定的行为学改善作用。
为达上述目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种罗伊氏乳杆菌，所述罗伊氏乳杆菌为罗伊氏乳杆菌Lactobacillus reuteriSINE003菌株，于2022年9月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO. 25664。
本发明中，分离筛选得到罗伊氏乳杆菌Lactobacillus reuteriSINE003菌株，对其进行生理生化检测，并利用其对孤独症小鼠进行干预，进行行为学检测、肠道菌群16srRNA测试，发现罗伊氏乳杆菌Lactobacillus reuteriSINE003菌株能够调控肠道菌群，提高益生菌丰度，改善肠道菌群紊乱，对孤独症小鼠有行为学改善作用，在社会接近能力和新事物识别实验测评中，表现出显著的统计学差异，即可改善社会接近能力和新事物识别能力。
第二方面，本发明提供如第一方面所述的罗伊氏乳杆菌在制备预防或治疗神经精神疾病的药物中的应用。
优选地，所述药物是用于预防或治疗包括神经系统发育障碍。
优选地，所述神经系统发育障碍包括孤独症谱系障碍。
第三方面，本发明提供一种组合物，所述组合物包括第一方面所述的罗伊氏乳杆菌和/或所述罗伊氏乳杆菌的发酵产物。
优选地，所述组合物还包括其他益生菌。
优选地，所述其他益生菌选自长双歧杆菌长亚种、植物乳植杆菌、长双歧杆菌婴儿亚种、戊糖片球菌或鼠李糖乳酪杆菌中的至少一种。
优选地，所述罗伊氏乳杆菌为活菌和/或灭活菌体。
所述组合物中罗伊氏乳杆菌的浓度为50亿CFU/g。
优选地，所述组合物还包括益生元，所述益生元选自低聚果糖、低聚木糖、异麦芽酮糖醇或低聚异麦芽糖中的至少一种。
第四方面，本发明提供一种药物，所述药物的制备原料包括第一方面所述的罗伊氏乳杆菌或第三方面所述的组合物，和药学上可接受的辅料。
优选地，所述辅料包括载体、润湿剂、增溶剂、渗透压调节剂、包衣材料、着色剂、pH调节剂、抗氧剂或缓冲剂中的任意一种或至少两种的组合。
第五方面，本发明提供第三方面所述的组合物或第四方面所述的药物在制备预防或治疗神经精神疾病的药物中的应用。
优选地，所述药物是用于预防或治疗包括神经系统发育障碍。
优选地，所述神经系统发育障碍包括孤独症谱系障碍。
与现有技术相比，本发明采用以下技术方案：
本发明分离筛选得到新菌株罗伊氏乳杆菌
Lactobacillus reuteri
SINE003菌株，对其进行生理生化检测，并利用其对孤独症小鼠进行干预，进行行为学检测、肠道菌群16s rRNA测试，发现罗伊氏乳杆菌
Lactobacillus reuteri
SINE003菌株能够调控肠道菌群，提高益生菌丰度，改善肠道菌群紊乱，且对于孤独症的行为学（包括社会接近能力和新事物识别能力）有改善作用。
附图说明
图1为SINE003菌株基因组圈图；
图2为SINE003菌株API-ZYM酶反应结果图；
图3为SINE003菌株培养液上清SDS-PAGE图谱 M1、M2：蛋白Marker；1：加了粘蛋白的培养基；2和3：未加粘蛋白的培养基；4、5菌株1培养液；6、7：菌株SINE003培养液；8、9：菌株3培养液；
图4为SINE003菌株培养上清作用后细胞存活率结果图；
图5为SINE003菌体毒性试验所得相对活性结果图；
图6为SINE003菌株干预对肠道菌群α多样性的影响结果图；
图7为SINE003菌株干预对肠道菌群多样性的影响结果图。
具体实施方式
为进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合实施例和附图对本发明作进一步地说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施方式仅仅用于解释本发明，而非对本发明的限定。
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道购买获得的常规产品。
下述实施例所涉及的罗伊氏乳杆菌命名为罗伊氏乳杆菌
Lactobacillus reuteri
SINE003菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2022年9月7日，保藏编号为CGMCC NO. 25664，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
实施例1
本实施例进行罗伊氏乳杆菌Lactobacillus reuteriSINE003菌株（以下简称SINE003菌株）的鉴定以及生理生化检测。
1、菌株鉴定：
平均核苷酸序列一致性（average nucleotide identity，ANI）能够基于两个基因组的所有直系同源蛋白编码基因计算核酸序列的相似性，从而从基因组水平判定两个基因组序列之间的相似性。已发表的研究显示，ANI值95-96%与DNA-DNA杂交值70%相对应，可作为原核生物物种界定的域值标准。
使用fastANI进行平均核苷酸一致性分析。使用Lactobacillus reuteri DSM20016（type strain of Lactobacillus reuteri）的全基因组序列作为对比序列。Lactobacillus reuteri DSM 20016全基因组的收录号：CP000705.1。
Strain SINE003基因组与DSM 20016基因组序列之间的ANI值为：99.98%。
根据ANI分析结果说明，SINE003属于Lactobacillus reuteri。
基因组圈图如图1所示，基因组圈图全面展示基因组（含有1个质粒）的特征，如基因在正、反义链上的分布情况、基因的COG功能分类情况、GC含量、GC偏差、tRNA/rRNA、基因组岛、同源基因等。下图为基因组圈图，该菌株不含质粒。
2、生理生化检测内容：
（1）检测SINE003菌株生理生化特征：β-溶血性、过氧化氢酶活性、明胶水解、胆盐水解能力、精氨酸水解能力、常见酶活性、粘蛋白降解试验；
（2）检测SINE003菌株的代谢产物：生物胺；
（3）检测SINE003菌株的抗生素敏感性；
（4）检测SINE003菌株的细胞粘附性、细胞毒性；
（5）检测SINE003菌株的对酸、人工胃液、人工肠液、胆盐耐受性。
3、生理生化检测方法
参考文献、欧洲食品安全局EFSA、美国食品药品管理局FDA等有关益生菌生理生化检测内容，制定如表1所示的检测方案。
表1
4、检测结果
4.1 溶血性试验
在哥伦比亚血平板上生长的SINE003菌落周围无溶血环，溶血阴性。
4.2 过氧化氢酶活性
无气泡产生，SINE003菌株过氧化氢酶阴性。
4.3 明胶水解
接种了SINE003菌株的明胶培养基未出现液化现象，明胶水解为阴性。
4.4 胆盐水解能力
胆盐沉淀浑浊带无透明圈，SINE003菌株无胆盐水解能力。
4.5 精氨酸水解能力
试验管与对照管均变黄色，SINE003菌株精氨酸水解能力为阴性。
4.6 酶活性
SINE003菌株API-ZYM酶反应结果如图2所示，结果表明，19种常见结构酶中α-甘露糖甙酶和β-岩藻糖甙酶，未检测到活性；检测到的17种酶中，亮氨酸芳胺酶、α-半乳糖甙酶、β-半乳糖甙酶表达量较高。SINE003菌株19种结构酶反应结果及对应表达量值（nM）如表2所示。
表2
4.7 粘蛋白降解
接种SINE003菌株的含粘蛋白（Mucin）的50 CHL培养液浑浊指示剂由紫变黄，50CHL培养基不变色。SDS-PAGE图谱（图3）显示：与未接种SINE003的培养液相比，SINE003培养液，粘蛋白条带减少，说明粘蛋白被降解。
4.8 生物胺
SINE003发酵液中，生物胺（色胺、腐胺、尸胺、组胺、亚精胺、精胺）未出峰，浓度均低于方法检出限（5 mg/L）。
4.9 抗生素敏感性
表3为SINE003抗生素最小抑菌浓度（µg/mL）结果，SINE003-氨苄青霉素最小抑菌浓度为2 µg/mL，SINE003-庆大霉素最小抑菌浓度为4 µg/mL，SINE003对卡那霉素最小抑菌浓度为8 µg/mL，SINE003-链霉素最小抑菌浓度为8 µg/mL，SINE003-红霉素最小抑菌浓度为0.5 µg/mL，SINE003-克林霉素最小抑菌浓度为0.5 µg/mL，SINE003-四环素最小抑菌浓度为16 µg/mL，SINE003-氯霉素最小抑菌浓度为64 µg/mL。
表3
4.11 细胞试验
4.11.1 发酵液细胞毒性试验结果
不同浓度SINE003菌株培养液与HT-29作用后CCK-8活性见表4，SINE003菌株培养上清作用后细胞存活率如图4所示。
表4
4.11.2菌体细胞毒性试验结果
不同浓度SINE003菌体与HT29作用后乳酸氧化酶活性见表5，SINE003菌体毒性试验所得相对活性结果如图5所示。
表5
4.11.3细胞黏附性试验结果
菌体细胞黏附性试验得到，总细胞量为Nc=2280000 CFU；黏附SINE003菌量Nb=(555000±4082) CFU。每100个细胞黏附SINE003菌量Nb/Nc×100 CFU=(24±0) CFU。
4.12人工胃液和肠液耐受性试验
4.12.1酸性耐受检测结果
SINE003酸性耐受检测结果如表6所示。
表6
4.12.2人工胃液耐受检测结果
SINE003人工胃液耐受检测结果如表7所示。
表7
4.12.3人工肠液耐受检测结果
SINE003人工肠液耐受检测结果如表8所示。
表8
4.12.4胆盐耐受性检测结果
SINE003胆盐耐受检测结果如表9所示。
表9
综上所述，生理生化检测结果为：1. SINE003菌株无溶血性、过氧化氢酶阴性、明胶水解阴性、精氨酸水解酶阴性、胆盐水解能力阴性、具有粘蛋白降解能力；2. 19种常见结构酶中α-甘露糖甙酶和β-岩藻糖甙酶，未检测到活性；检测到的17种酶中，亮氨酸芳胺酶、α-半乳糖甙酶、β-半乳糖甙酶表达量较高；3. SINE003发酵液中，生物胺（色胺、腐胺、尸胺、组胺、亚精胺、精胺）低于方法检出限（5 mg/L）；4. SINE003对氨苄青霉素、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、红霉素、克林霉素、四环素、氯霉素敏感；5. SINE003菌体及发酵液对HT-29细胞无毒性，对HT-29细胞粘附性较强；6. 菌株SINE003分别在MRS（pH 2.5、3.0、3.5）、人工胃液（pH 2.5）、人工肠液和MRS（含牛胆盐0.1%）的6种条件下孵育2h后，菌株存活率均大于90%。菌株对pH 2.5、pH 3.0、pH 3.5、胃蛋白酶、胰蛋白酶、牛胆盐的体外耐受性较强。
实施例2
本实施例利用罗伊氏乳杆菌Lactobacillus reuteriSINE003菌株（以下简称SINE003菌株）干预孤独症小鼠。
1、试验用小鼠
该实验用BTBR Tþ tf/J (BTBR) 小鼠，购于The Jackson Laboratory (BarHarbor, ME)，饲养于上海成喜生物科技有限公司，随机分组，1，2笼为模型对照组（CTL组，1笼为雄，2笼为雌），同样地，3，4笼为SINE003干预组（SINE003组，3笼为雄，4笼为雌），伦理号：20230402001。
2、行为学检测项目
三项行为学测试，新事物识别能力、社会接近能力、自我梳理行为测试。
3、行为学测试方法
3.1 新物体识别Novel Object Recognition
通过比较小鼠在学习记忆阶段对新颖物体和旧物体的互动行为，可以评估其对新颖物体的识别和记忆能力。具体步骤如下：
（1）小鼠准备：提供适当饲料、水和适宜环境条件，恒温和适当光照周期。
（2）实验装置：准备一个空旷的实验箱，实验场所无异味、干净无杂物。
（3）适应阶段：每天2小时（上、下午各1小时），让小鼠在实验场所中进行探索性活动，使其熟悉环境，连续3天。
（4）测试和记录：将两个相同的物体放置在实验场所中的不同位置，让小鼠自由探索这两个物体。时间间隔2小时后，将一个新颖的物体放置在原来物体的位置上（替换掉一个物体），保持另一个物体位置不变。再次让小鼠自由探索，记录20分钟内其与物体互动行为的次数（包括嗅闻、触摸等）。
3.2 社会接近 Social approach testing
社交接近测试是一种用于评估小鼠对社交互动的兴趣和偏好的实验方法，具体步骤如下：
（1）小鼠准备：提供适当饲料、水和适宜环境条件，恒温和适当光照周期；
（2）实验动物社交化：连续3天，每天20分钟，将待测试的小鼠与同性的社交伴侣放在一起，让它们进行社交接触和互动，以确保小鼠在社交环境中适应并建立社交联系。
（3）实验装置：准备一个社交三室箱，通常由三个相连的房间组成，中间的房间是中性房间，两侧房间是社交刺激物（C57BL/6J小鼠通常用作比较品系，而其他品系在社交室中花费的时间明显多于非社交室）的房间。该装置（60 × 40 cm）有两个门道，将其分成三个腔室装置（每个20 × 40 cm）。
（4）测试阶段：将一个社交刺激物放置在一个侧房间中，另一个侧房间则为空置。然后将待测试小鼠放入中性房间，允许它自由探索社交和非社交刺激物10 min。
（5）观察记录：记录10分钟内小鼠在社交三室箱中的行为，检测了进入每个房间花费的时间以及与社交刺激物接触的次数。
3.3 自我梳理行为 Spontaneous self-grooming behavior
（1）实验动物准备：适宜饲料、水和适宜环境条件，恒温和适当光照周期；
（2）观察环境准备：准备一个箱子（28cm×17cm×12cm），具有适当的大小和配置，以确保小鼠在其中有足够的空间进行自发的行为，允许动物自由探索；
（3）小鼠适应：将小鼠放入箱子中，让它们适应新环境。上午30分钟，下午10分钟，以确保小鼠对观察环境的适应；
（4）观察记录：10分钟的适应后，由训练有素的观察员记录小鼠的自发行为，记录10分钟内小鼠的梳理行为，包括洗头、梳理身体、梳理生殖器/尾巴以及舔爪子和腿。
3.4 统计分析方法
使用t检验分析服从正态分布的连续变量。当数据不满足正态分布假设的情况，并且不依赖于具体的分布形态时，使用非参数检验方法Wilcoxon秩和检验分析两组独立样本之间的差异是否存在显著性。
4. 行为学测试结果
4.1 新物体识别能力测评
在该目标物体辨识实验中，我们评估其新事物识别能力，结果如表10所示，两组小鼠表现出了对新物体的显著兴趣和探索行为，相较于旧物体，它们花费了更多的时间与新物体互动。与CTL组对比，SINE03小鼠对新物体的互动次数增加，在新物体周围的停留时间显著增加（p = 0.002），即益生菌SINE003的干预显著提高了自闭小鼠对待新物体时表现出的兴趣、敏感性和辨识能力，具有统计学差异。
表10
(注：New objects interaction和Old objects interaction分别表示小鼠对新旧事物在20分钟内的互动次数)
4.2 社会接近能力测评
在该行为学测评中，我们观察了小鼠在有社交刺激鼠的房间和无社交鼠房间的停留时间长度以及与社交刺激鼠的接触次数。社会接近能力测评结果如表11所示，与对照组相比，SINE003干预组小鼠在社交鼠房间停留的时间具有统计学差异（p = 0.023），并且与社交鼠接触的频率提高，有上升趋势。另外，两组小鼠在非社交房间里的停留时间无显著性差异。
表11
（注：Social_room表示小鼠在有社交刺激鼠的房间停留时间，Frequency表示接触频率；Non-social_room表示小鼠在无社交房间停留时间）
4.3 自我梳理行为测试
通过10分钟小鼠自我梳理行为观察，自我梳理行为测试结果如表12所示，各组小鼠均有挠头、梳理身体和舔爪子等行为。与对照组相比，SINE003组小鼠舔爪子/腿的行为显著（p = 0.027），挠头、梳理身体/尾巴行为无统计学差异。
表12
5. 行为学测试结论
总的来看，SINE003干预对孤独症小鼠有行为学改善作用，在社会接近能力和新事物识别实验测评中，表现出显著的统计学差异。
实施例
本实施例对实施例2的实验小鼠进行分析检测，检测项目包括肠道菌群16s rRNA测试。
1、样本信息
该实验用BTBR Tþ tf/J (BTBR)小鼠粪便样本作为研究对象。
2、检测项目
肠道菌群16s rRNA测试。
3. 实验方法
3.1 肠道菌群16s rRNA测序方法
总DNA的提取和检测：用PowerSoil® DNA提取试剂盒(MoBio, Carlsbad, CA,USA)提取小鼠盲肠内容物中细菌基因组DNA。使用NanoDrop 2000微量分光光度计(ThermoScientific, Wilmington, DE, USA)检测所提取基因组DNA的纯度(A260/A280 = 1.8 ~2.1)和浓度，并使用1%琼脂糖凝胶电泳验证其完整性（条带清晰明亮、无拖尾、无杂带）。DNA质量检测合格后，利用通用引物：上引物338_F (5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3')和下引物806_R (5'- GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3')对细菌16S rRNA基因的V3 - V4区进行2轮PCR扩增。第一轮扩增体系为50μL，其中包含10 μL Bμffer、0.2μL Q5 High- Fidelity DNAPolymerase、10 μL High GC Enhancer、1 μL dNTP、10μM上引物、10μM下引物和60 ng基因组DNA。第一轮热循环条件：95°C预变性5min，95°C变性1 min，50°C退火1min，72°C延伸1min，循环10次，最后72°C延伸7 min。将第一轮PCR产物通过VAHTSTM DNA Clean Beads纯化后进行第二轮PCR扩增。第二轮扩增体系为40μL，其中包含20μL 2 × Phμsion HF MM、8μL ddH2O、10μM上引物、10μM下引物和10μL第一轮PCR扩增产物。第二轮热循环条件：98°C预变性10min，98°C变性10s，65°C退火30s，72°C延伸30s，循环10次，最后72°C延伸5min。利用Quant-iTTM dsDNA HS试剂对第二轮PCR扩增产物进行荧光定量，并根据样本的测序量要求进行相应比例混合，最后使用Illumina Hiseq 2500平台（2 × 250bp配对端）对纯化的样本进行16S rRNA测序分析。
生物信息学分析：在数据预处理阶段，我们使用usearch11进行质量控制和去噪处理，确保数据质量。随后，我们运用usearch11对预处理后的数据进行ASVs聚类，以计算样本中不同微生物ASVs的相对含量。在ASVs水平上，利用usearch11分析肠道微生物群的多样性；利用QIIME (Quantitative Insights Into Microbial Ecology) 软件 (https://qiime2.org/)采用Bray-Curtis距离进行主坐标分析 (principal coordinate analyses，PCoA) 分析。利用LEfSe (linear discriminant analysis effect size) 软件(https://huttenhower.sph.harvard.edu/ga laxy/) 对各样本中的生物标记物种进行分析。利用R语言 (version 4.2.2) 进行Pearson相关系数分析。
3.2 统计分析方法
使用t检验分析服从正态分布的连续变量。当数据不满足正态分布假设的情况，并且不依赖于具体的分布形态时，使用非参数检验方法Wilcoxon秩和检验分析两组独立样本之间的差异是否存在显著性。
4. 测试结果
4.1 肠道菌群16s rRNA测序结果
通过对自闭小鼠的粪便样本进行16S rRNA测序，评估了肠道菌群的alpha多样性，使用Chao1、ACE、Shannon和Simpson指数来衡量alpha多样性。结果如图6所示，在基线和实验结束时，CTL组和SINE003组的Chao1、ACE、Shannon和Simpson指数无显著性差异。相同的字母表示组间无显著差异（p>0.05）。
除了评估样本内的多样性，还对肠道菌群进行了多样性分析，以探究样本之间的差异和相似性。在本测试中，我们采用Bray-Curtis距离来衡量多样性。通过Bray-Curtis距离，发现两组之间的肠道菌群结构存在显著差异（p<0.05）。Unweighted UniFrac距离的PCoA图显示样本聚类在不同的区域，样本间存在显著差异（图7）。
小鼠肠道微生物属水平前111物种丰度显示（表13），与CTL组对比，SINE003干预组的
Bacteroides,Akkermansia,Lactobacillus等有益菌的丰度显著增加（p<0.05）,Enterococcus丰度显著降低（p<0.001）。
表13
综合上述，通过对自闭小鼠粪便样本进行16S rRNA测序，在实验结束时，SINE003组相比对照组在肠道菌群的多样性没有发生显著变化，单多样性上SINE003组高于对照组存在显著差异（p<0.05）；小鼠肠道微生物属水平物种丰度显示，SINE003干预组的Bacteroides, Akkermansia, Lactobacillus等有益菌的丰度显著增加（p<0.05）。
综上所述，本发明分离筛选得到罗伊氏乳杆菌Lactobacillus reuteriSINE003菌株，对其进行生理生化检测，并利用其对孤独症小鼠进行干预，进行行为学检测以及肠道菌群16s rRNA测试，发现罗伊氏乳杆菌Lactobacillus reuteriSINE003菌株能够调控肠道菌群，提高益生菌丰度，改善肠道菌群紊乱，且对于孤独症有一定的行为学改善作用。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (8)

1.一种罗伊氏乳杆菌，其特征在于，所述罗伊氏乳杆菌为罗伊氏乳杆菌Lactobacillus reuteri SINE003菌株，于2022年9月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO. 25664。
2.如权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌在制备预防或治疗孤独症的药物中的应用。
3.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌和/或所述罗伊氏乳杆菌的发酵产物。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括其他益生菌。
5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述其他益生菌选自长双歧杆菌长亚种、植物乳植杆菌、长双歧杆菌婴儿亚种、戊糖片球菌或鼠李糖乳酪杆菌中的至少一种。
6.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述罗伊氏乳杆菌为活菌和/或灭活菌体。
7.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括益生元，所述益生元选自低聚果糖、低聚木糖、异麦芽酮糖醇或低聚异麦芽糖中的至少一种。
8.一种药物，其特征在于，所述药物的制备原料包括权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌或权利要求3~7任一项所述的组合物，和药学上可接受的辅料。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN110564638A (zh) * 2019-07-29 2019-12-13 江南大学 一株具有益生特性的罗伊氏乳杆菌及其用途
CN113180109A (zh) * 2021-04-16 2021-07-30 北京华元生物技术研究院 罗伊氏乳杆菌在制备预防或治疗发育障碍类疾病产品中的应用

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