CN117295504A - 用于治疗异常中空空间的方法和套件 - Google Patents

Abstract

本公开提供了用于治疗受试者的异常中空空间诸如瘘管，例如肛瘘或造口空间的方法和套件。例如，异常中空空间可以是肛瘘、造口开口或藏毛窦。该方法利用来源于受试者的自体血液，将其引入至异常中空空间中并使其在异常中空空间内凝结，从而在其中形成凝固的血块，即血凝块，从而增强异常中空空间的愈合过程。愈合可以是所述空间的完全或部分闭合或尺寸或体积的减小；或在先前的异常中空空间内形成健康组织。

Description

用于治疗异常中空空间的方法和套件

技术领域

本公开属于受试者异常中空空间(特别是瘘管或肛瘘)的医学治疗领域。

背景技术

下面列出了被认为与当前公开的主题的背景相关的参考文献：

-WO 2019/058373

-WO 2019/058375

-US 9,180,142

本文对上述参考文献的确认不应被推断为意味着这些参考文献以任何方式与当前公开的主题的可专利性相关。

发明内容

本公开提供了用于治疗受试者的异常中空空间诸如瘘管，例如肛瘘或造口空间的方法和套件(试剂盒)。在本公开的上下文中，术语“异常中空空间”应当被解释为由于某种医学状况或作为某种医学状况的结果而在人或非人动物中形成的异常空腔。例如，它可以是肛瘘、造口开口或藏毛窦。该方法利用来源于受试者的自体血液，将其引入至异常中空空间中并使其在异常中空空间内凝结，从而在其中形成凝固的血块，即血凝块，从而增强异常中空空间的愈合过程。愈合可以是所述空间的完全或部分闭合或尺寸或体积的减小；或在先前的异常中空空间内形成健康组织。

根据本公开的一些实施方式，所治疗的异常中空空间包括在身体的外表面处的至少一个开口。即，可以通过在受试者皮肤的一部分处形成的开口进入中空空间。通过其他实施方式，异常中空空间可能通向内部体腔，例如可以是两个管状器官之间(例如，结肠和尿道之间)的瘘管。

因此，本公开的第一方面提供了一种用于治疗受试者的异常中空空间的方法。该方法包括：(i)从受试者获得或抽取全血。这可以通过本领域任何已知的方式来进行。该方法还包括(ii)将受试者的血液与一种或多种凝固剂或抗抗凝剂混合，从而引发血液的凝固过程。然后，(iii)在血液完全凝固之前，将具有凝固剂的血液引入(例如注射)至所述中空空间中，并且(iv)允许血液在所述异常中空空间中凝固，直至获得完全凝固并且在异常中空空间内形成凝块。应当注意的是，当提及术语“在血液完全凝固之前”时，其意味着凝固过程已开始但血液仍处于可流动状态并且可以流入(例如，通过注射)至异常中空空间中并在其中完成凝固，即在异常中空空间中凝固形成血凝块。凝块可以在其被注射的空间中维持限定的时间段，例如数小时或数天，或者在整个愈合过程中维持。异常中空空间内的凝固血块可以被吸收或自然降解，可以自然地被推出愈合中空空间或者可以在一定时间段后被去除。

在该方法的一些实施方式中，包括从受试者抽取全血并在将血液引入待治疗的中空空间之前将血液与抗凝剂混合。这允许控制凝固过程，例如，通过抗凝剂的性质或其浓度来微调凝固时间和所得凝固血液的物理性质。

在该方法的一些实施方式中，抗凝剂选自由以下组成的组：ACD-A(抗凝剂柠檬酸右旋糖，溶液A)、EDTA(乙二胺四乙酸)、EGTA(乙二醇四乙酸)、柠檬酸盐、肝素和草酸盐。

在一些实施方式中，在所述中空空间具有两个或更多个开口(例如瘘管)的情况下，该方法进一步包括：密封中空空间的一个或多个开口，例如瘘管的远端开口，从而形成窦，即仅保持一个开口打开。该步骤在上述(iii)之前的任何时间进行。在一些实施方式中，该方法还包括(iv)将医用敷料或密封件施加到中空空间的开口上，以防止血液从异常中空空间或窦漏出，从而确保血液在其中凝固。

在一些实施方式中，该方法还包括通过使可膨胀元件膨胀以封闭异常中空空间的开口之一来密封该开口之一。例如，在肛瘘的情况下，可膨胀元件的这种膨胀可以在直肠中；从而可膨胀元件的壁将瘘管通向直肠腔的开口密封。当开口被膨胀元件密封后，将凝固中的血液通过非封闭开口引入至异常中空空间中。在一些情况下，可膨胀元件可以在原位维持一段有限的时间，例如在允许血液在异常中空空间内凝固到足够程度之后，可以将膨胀元件收缩并收回。这适用于，例如，在肛瘘的情况下，其中肛瘘的开口之一在直肠腔的壁中，而血液从在靠近肛门的外皮肤上形成的开口引入。因此，可膨胀元件在非膨胀状态下经由直肠引入，并且一旦就位就膨胀至膨胀状态以将通向直肠内腔中的开口密封，并且仅在这种密封之后才经由外部开口引入凝固中的血液。然后允许血液在肛瘘的中空空间内凝固例如数分钟，以及然后可以将膨胀元件收缩并移除。一旦血液充分凝固，在可能不需要可膨胀元件以将凝固剂保留在肛瘘内时，可膨胀元件被收缩至非膨胀状态并经由直肠取回，并且凝固的血液保留在肛瘘的中空空间内。

通过该方法的一些实施方式，将医用敷料或密封件施加到所治疗的中空空间的开口上，这可以是在将凝固中的血液引入至其中之后立即或在一段时间之后，例如在所述引入后3-15分钟的时间段之后，或在1、2、3、4、5、6、7、8和10、11、12、13、14、15、16分钟之间的时间段之后，或约9分钟之后。应当注意的是，该时间段通常是允许血液在异常中空空间内凝固的时间范围。在一些实施方式中，该时间范围可以小于10、9、8、7、6、5、4、3、2分钟或有时小于1分钟。

术语“约”应理解为与标称值的偏差最多为20％。例如，约10分钟的时间段是指在8-12分钟之间的任何时间段。

在该方法的一些实施方式中，一种或多种凝固剂是液体或粉末形式。

在该方法的一些实施方式中，一种或多种凝固剂或抗抗凝剂选自：高岭土、Ca²⁺(例如以钙盐诸如葡萄糖酸钙的形式)、Mg²⁺、带负电的磷脂(PL)和硫酸鱼精蛋白。

在该方法的一些实施方式中，(ii)包括首先将血液与葡萄糖酸钙混合，然后将血液和葡萄糖酸钙的混合物与高岭土混合。

在该方法的一些实施方式中，中空空间是瘘管。在该方法的一些实施方式中，瘘管是肛瘘。

在该方法的一些实施方式中，中空空间是窦。

在该方法的一些实施方式中，中空空间是藏毛窦。

在该方法的一些实施方式中，血液以限定的注入方案(injection profile)被引入或注射到异常中空空间中。注入方案包括首先将血液注射到中空空间的远侧端部直至填充整个空间，即直至血液填充所述空间至其近侧端部。该方案可以防止异常中空空间(例如，瘘管)的膨胀(如果其是柔性的话)，并确保注射的血液充满异常中空空间的整个容积。

在该方法的一些实施方式中，该方法的要素(ii)和(iii)(如上定义)同时进行。即，当将血液引入或注射至异常中空空间中的同时，将血液与一种或多种凝固剂或抗抗凝剂混合。

在该方法的一些实施方式中，在(iii)之前，该方法还包括用具有注射端口的密封件密封异常中空空间的开口，以及然后进行(iii)，其中经由注射端口进行引入。

在该方法的一些实施方式中，异常中空空间的开口中的至少一个开口形成在受试者身体的外表面部分处。因此，所述至少一个开口可用于将凝固中的血液引入其中，而不需要穿透身体。根据待治疗的异常中空空间的部位，开口可以形成在例如受试者身体上的直肠部分、腹部或任何其他暴露的部分上。

在该方法的一些实施方式中，所述中空空间是腹部空间。腹部空间可能是造口手术或造口逆转手术的结果，并且血液可以通过构成异常中空空间的开口的造口开口引入。在造口逆转手术中，引入腹部空间的凝固中的血液接触造口开口以及重新连接的在造口手术期间分离的肠端。然后将血液在待愈合的组织上凝固，即造口开口和两个重新连接的肠端之间的附着界面，并增强愈合过程。

本公开的又一个方面提供了用于治疗受试者的异常中空空间或空腔的部件套件(kit)或系统。套件或系统包括：用于从受试者抽取血液的一个或多个血液抽取装置；用于接收从受试者抽取的血液的一个或多个血液收集容器；凝固组件，其被配置为将抽取的血液与一种或多种凝固剂混合以启动抽取的血液的凝固过程；以及用于将凝固中的血液引入中空空间的施用器。

在套件或系统的一些实施方式中，一个或多个收集容器是真空管。

在套件或系统的一些实施方式中，凝固组件包括用于接收抽取的血液并将其与一种或多种凝固剂或抗抗凝剂混合的外壳。

在一些实施方式中，套件还包括一种或多种抗凝剂，用于与抽取的血液混合以防止其自然凝固过程并允许在期望的时间可控地诱导其凝固。

在套件的一些实施方式中，一种或多种抗凝剂包含在所述一个或多个血液收集容器内。

在套件的一些实施方式中，抗凝剂选自由下列组成的列表：ACD-A(抗凝剂柠檬酸右旋糖，溶液A)、EDTA(乙二胺四乙酸)、EGTA(乙二醇四乙酸)、柠檬酸盐、肝素和草酸盐。

在套件的一些实施方式中，一种或多种凝固剂或抗抗凝剂选自：高岭土、Ca²⁺(例如以钙盐诸如葡萄糖酸钙的形式)、Mg²⁺、带负电的磷脂(PL)和硫酸鱼精蛋白。

在一些实施方式中，套件还包括用于密封异常中空空间的开口的密封件。密封件包括注射端口，用于允许将凝固中的血液经由密封件注入到异常中空空间中。

在套件的一些实施方式中，异常中空空间是瘘管。在套件的一些实施方式中，瘘管是肛瘘。

在套件的一些实施方式中，异常中空空间是窦。

需要注意的是，术语“窦”是指任何器官或组织中的囊或腔，或者由组织破坏引起的异常腔或通道。

在一些实施方式中套件旨在用于治疗受试者的异常中空空间或空腔的方法中的用途；该方法包括：

(i)从受试者抽取或获得全血；

(ii)将所述受试者的血液与一种或多种凝固剂或抗抗凝剂混合；

(iii)在所述血液完全凝固之前，将具有凝固剂的所述血液引入至所述中空空间中；以及

(iv)使所述空间内的血液凝固直至完全凝固，并在异常中空空间内形成凝块。

在一些实施方式中，套件旨在用于该方法的任何上述实施方式中。

附图说明

为了更好地理解本文公开的主题并举例说明如何在实践中实现，现在将参考附图仅通过非限制性示例来描述实施方式，其中：

图1A-1D是呈现根据本公开的一个方面的方法的非限制性示例的不同阶段的示意图。

图2A-2B是根据本公开的一个方面的方法的不同实施方式的非限制性示例的流程图。

图3A-3E是呈现治疗肛瘘的手术的不同阶段的示意图。

具体实施方式

本公开的方法涉及用于治疗受试者体内存在的异常中空空间，例如，肛瘘。该方法首先需要从患有待治疗的异常中空空间的受试者获取全血。这是通过以任何已知的方法从受试者抽取血液来进行的。获得血液后，通常将其与抗凝剂混合，以允许将血液保存为非凝固液体形式，直到需要凝固血液形成凝块为止。现在参考图1A-1C，其是呈现在从患者抽取血液之后根据本公开的方面的方法的实施方式的不同阶段的示意图。图1A示出了凝固组件102，其包括密封泡罩104，该密封泡罩限定用于接收从受试者抽取的血液的无菌容积106。密封泡罩104由血液注射部分108和含凝固剂的表面110形成，血液注射部分108可以是透明或半透明的以允许过程可视化，含凝固剂的表面110容纳液体或粉末形式的一种或多种凝固剂或抗抗凝剂。通过使用刺穿元件111，例如具有适配针头的注射器，在两个不同位置处刺穿血液注射部分108以形成两个开口，如图1A中可见，从而允许将血液从第一开口引入到无菌容积106中，同时空气从第二开口逸出。然后将抽取的血液注射到无菌容积106中，如图1B中示例的，并且将凝固剂或抗抗凝剂与受试者的血液混合以启动凝血过程。可以通过在将血液注射部分108中的开口密封以防止血液在摇动时泄漏之后摇动凝固组件102来增强混合。然后将泡罩104开封，例如通过移除泡罩104底部的密封基部112，如图1C示例的，或者通过刺穿血液注射部分108以允许将凝固中的血液抽回注射器中。然后，该过程包括从泡罩中抽出凝固中的血液，以及然后将其注射到异常中空空间(例如瘘管)中，或者在异常中空空间的一个或多个开口被密封(例如通过缝合程序)的情况下,注射到窦腔中。这在图1D中进行示例，其示出了储存在注射器114中的具有凝固剂或抗抗凝剂的血液，该血液被注射到瘘管FIS中以允许血液在其中凝固。

现在参考图2A-2B，其是示例根据本公开的方面的方法的不同实施方式的流程图。图2A中示例的方法包括从具有待治疗的异常中空空间(例如，瘘管或肛瘘)的受试者抽取全血250。该方法还包括将抽取的血液与一种或多种凝固剂或抗抗凝剂混合252。然后，该方法包括将血液和凝固剂的混合物引入到异常中空空间中254。这是在血液仍处于可流动形式时，即在其完全凝固之前进行的。当血液在中空空间中时，该方法包括允许血液在异常中空空间中凝固256，从而在异常中空空间内形成血凝块。

现在参考图2B，其与图2A的不同之处在于包括在从受试者抽取全血250之后将血液与一种或多种抗凝剂混合，从而抑制血液的自然凝固过程并允许在期望的时间可控地诱导其凝固过程。

要注意的是，在需要密封异常中空空间的一个或多个开口的情况下，该方法还包括密封一个或多个开口以形成将凝血血液引入其中的窦。

现在参考图3A-3E，其为示例根据本公开的治疗肛瘘的手术的示意图。图3A显示了受试者的初始病理，其由肛瘘FIS形成的异常中空空间组成。首先，如图3B中所示，通过将消毒液SL从肛瘘FIS的一个开口引入到肛瘘FIS中来对其进行清洁。通常，液体经由肛瘘的第一开口引入并经由肛瘘的第二开口排出。然后，如图3C中可见，当可膨胀/可收缩元件316处于其收缩状态时，经由直肠RM引入。一旦定位在仅可经由直肠进入的开口OP附近，可膨胀/可收缩元件316就膨胀至其膨胀状态，如图3D中所示，并且经由瘘管FIS的非密封开口NSO引入从受试者抽取的凝固中全血318。在可膨胀/可收缩元件316收缩至其收缩状态并经由直肠RM取回之前，允许全血在瘘管FIS内充分凝固。

实施例

以下是基于本发明各个方面的临床试验的实施例。

实施例1-肛瘘患者的自体全血血凝块治疗

目的：肛瘘是一种慢性炎症过程，其通常不会自然愈合并且手术仍然是最终的治疗方法。瘘管复发和大便失禁的潜在风险二者的高比率仍然是外科手术后的主要问题。

ActiGraft是一种由患者自身的外周血产生的自体血凝块，其形成纤维蛋白凝块，通过物理和生物机制促进细胞再生。ActiGraft被发现促进慢性伤口愈合，从停滞的炎症阶段进入增殖阶段，导致细胞增殖、伤口床肉芽组织形成和伤口闭合。

方法：对29例慢性肛瘘患者进行了包括以下的手术程序：瘘管清理和清创、将肛内、直肠侧、开口缝合。进行了漏水测试。手术后，从患者抽取18mL的血液，与高岭土和葡萄糖酸钙混合并且立即注射到瘘管道的伤口处，通过堵塞窦允许血液在内部凝固。应用后3个月时通过视觉评估和MRI进行瘘管愈合验证。

结果：截至本报告，8名受试者完成了6个月的随访，而所有其他19名受试者正在进行中。对符合方案的人群进行的中期分析显示，经过MRI证实，ActiGraft治疗使已完成6个月的随访的8名患者中的7名完全康复。有趣的是，7名确诊治愈的患者中有一名克罗恩病患者，这显示出ActiGraft对这一亚群患者的显著效果。

结论：ActiGraft对于治疗肛瘘患者(包括克罗恩病患者)是安全有效的，术后3个月即可完全愈合。

实施例2-微创手术后藏毛窦中自体全血血凝块治疗的安全性和有效性

目的：藏毛病是一种影响全世界年轻患者的常见疾病。它最常见于骶尾部的臀间裂(natal cleft)处的毛囊，引起异物反应，导致中线凹陷形成，这种情况可能导致健康年轻人感染、明显不适、疼痛、行动不便和工作效率下降。藏毛病的常见治疗方法包括手术切除窦道，但手术风险较高。

ActiGraft是一种自体血凝块，被发现可安全有效地治愈皮肤术后伤口和慢性伤口。血凝块是人体天然的、最佳的临时伤口基质，作为细胞可以迁移到的临时基质，促进局部组织的再生。利用微创手术程序的藏毛窦中血凝块治疗不仅可以作为临时基质，还可以作为再生组织，其可以密封窦腔并导致新肉芽组织的形成和上皮的重新形成，从而缩短愈合时间并防止窦复发和并发症。

方法：43例藏毛窦患者进行了微创环锯手术。手术后立即抽取18mL的血液，并且与高岭土和葡萄糖酸钙混合后立即注入至窦腔中，使血液在内部凝固形成血凝块。术后12周目视验证藏毛窦愈合情况。

结果：对符合方案的人群进行了中期分析。25名患者完成12周随访，13名患者仍处于随访阶段，在5名患者中发生失访。完成研究的21/25名患者确认完全治愈，没有报告不良事件。

结论：ActiGraft被发现在微创环锯藏毛窦手术后实现窦腔的完全闭合是安全和有效的。

ActiGraft包含纤维蛋白支架，其将受损组织固定在一起，并提供自然愈合过程所需的临时基质和因子。ActiGraft的特性使其成为藏毛窦的一种有前景的治疗方法。

实施例3-自体血凝块加速了造口逆转后伤口闭合

目的：造口逆转手术可能会导致各种并发症，其可能增加住院时间、巨额医疗保健相关费用以及不良的长期结果。SSI仍然是最常见的并发症，从2％到41％，因此将SR后SSI的发生率降低是尚未得到满足的重大需求。

自体全血血凝块在护理点从患者自身的外周血中产生，形成促进伤口愈合过程并增加细胞颗粒形成的保护性支架，并被提出延迟细菌渗入至伤口中。

目的：回顾性分析四例接受SR手术和自体全血血凝块的患者。在手术结束时，使伤口保持部分打开，并且在术后18-24小时，从患者抽取血液，与高岭土和钙凝固剂混合，并且立即注射到开放的伤口中，使血液在伤口内凝固，以形成血凝块。针对感染体征和闭合率对患者进行随访。

结果：SR后对4名患者进行了自体血凝块治疗。所有患者在自体血凝块治疗后3周，伤口完全闭合，没有感染迹象。自体血凝块治疗促进伤口愈合过程，并且可以加速SR伤口的闭合和感染风险。

Claims (32)

1.一种用于治疗受试者的身体部分中形成的异常中空空间的方法，所述方法包括：

(i)从所述受试者抽取全血；

(ii)将所述受试者的血液与一种或多种凝固剂或抗抗凝剂混合；

(iii)在所述血液完全凝固之前，将具有凝固剂的所述血液引入至所述中空空间中；以及

(iv)允许所述血液在所述异常中空空间中凝固。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，(i)包括从所述受试者抽取全血并将其与抗凝剂混合。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述抗凝剂选自由以下组成的组：ACD-A(抗凝剂柠檬酸右旋糖，溶液A)、EDTA(乙二胺四乙酸)、EGTA(乙二醇四乙酸)、柠檬酸盐、肝素和草酸盐。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，包括，当所述中空空间具有两个或更多个开口时，密封所述中空空间的一个或多个开口以产生窦。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，(iv)包括将医用敷料或密封件施加到所述中空空间的开口上。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述施加在自所述引入起小于10分钟的时间段之后进行。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中，所述一种或多种凝固剂是液体或粉末形式。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中，所述一种或多种凝固剂或抗抗凝剂选自：高岭土、Ca²⁺(例如以钙盐诸如葡萄糖酸钙的形式)、Mg²⁺、带负电的磷脂(PL)和硫酸鱼精蛋白。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中，(ii)包括首先将所述血液与葡萄糖酸钙混合，然后将所述血液和葡萄糖酸钙的混合物与高岭土混合。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，包括：在(iii)之前，用具有注射端口的密封件密封所述异常中空空间，随后进行(iii)，其中所述引入经由所述注射端口进行。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中，所述中空空间包括形成在身体的外表面上的至少一个开口。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中，所述中空空间是肛瘘。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中，所述中空空间是窦或藏毛窦。

14.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中，所述中空空间是腹部空间。

15.根据权利要求14所述的方法，其中，所述中空空间是由造口手术形成的造口空间。

16.根据权利要求14或15所述的方法，其中，所述中空空间的至少一个开口是造口开口。

17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中，所述异常中空空间包括两个或更多个开口，并且所述方法还包括在(iii)之前使处于收缩状态的可膨胀/可收缩元件邻近所述开口之一并使其膨胀以密封所述开口，从而当所述血液经由未密封的开口引入至所述中空空间时允许将所述血液保持在所述中空空间中。

18.根据权利要求17所述的方法，还包括在所述中空空间内的所述血液充分凝固之后使所述可膨胀/可收缩元件收缩并且收回所述可膨胀/可收缩元件。

19.一种用于治疗受试者的身体部分中形成的异常中空空间的套件，所述套件包括：

用于允许从所述受试者抽取血液的一个或多个血液抽取装置；

用于接收从所述受试者抽取的血液的一个或多个血液收集容器；

凝固组件，其被配置为允许所抽取的血液与一种或多种凝固剂混合以启动所抽取的血液的凝固过程；以及

用于将未完全凝固的血液引入所述中空空间的施用器。

20.根据权利要求19所述的套件，其中，所述一个或多个收集容器是真空管。

21.根据权利要求19或20所述的套件，其中，所述凝固组件包括用于引入所抽取的血液的容积，所述容积能够与一种或多种凝固剂或抗抗凝剂接触。

22.根据权利要求19-21中任一项所述的套件，包括用于与所抽取的血液混合的一种或多种抗凝剂。

23.根据权利要求22所述的套件，其中，所述一种或多种抗凝剂包含在所述一个或多个血液收集容器内。

24.根据权利要求22或23所述的套件，其中，所述抗凝剂选自由以下组成的组：ACD-A(抗凝剂柠檬酸右旋糖，溶液A)、EDTA(乙二胺四乙酸)、EGTA(乙二醇四乙酸)、柠檬酸盐、肝素和草酸盐。

25.根据权利要求19-24中任一项所述的套件，所述一种或多种凝固剂或抗抗凝剂选自：高岭土、Ca²⁺、Mg²⁺、带负电的磷脂(PL)和硫酸鱼精蛋白。

26.根据权利要求19-25中任一项所述的套件，包括用于密封所述异常中空空间的开口的密封件，所述密封件包括用于允许经由所述密封件将血液注射至所述异常中空空间的注射端口。

27.根据权利要求19-26中任一项所述的套件，其中，所述异常中空空间是肛瘘。

28.根据权利要求19-27中任一项所述的套件，其中，所述异常中空空间是窦。

29.根据权利要求19-27中任一项所述的套件，其中，所述异常中空空间是腹部空间。

30.根据权利要求29所述的套件，其中，所述腹部空间是造口空间。

31.根据权利要求19-30中任一项所述的套件，用于治疗受试者的异常中空空间的方法中的用途，所述方法包括：

(i)从所述受试者抽取全血；

(ii)将所述受试者的血液与一种或多种凝固剂或抗抗凝剂混合；

(iii)在所述血液完全凝固之前，将具有凝固剂的所述血液引入至所述中空空间中；以及

(iv)允许所述血液在所述空间中凝固。

32.根据权利要求19-30中任一项所述的套件，用于根据权利要求1-18中任一项所述的方法中的用途。