CN117230201A - Anxa6+肿瘤相关成纤维细胞在egfr突变介导的疾病治疗中的应用 - Google Patents
Anxa6+肿瘤相关成纤维细胞在egfr突变介导的疾病治疗中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117230201A CN117230201A CN202311407428.3A CN202311407428A CN117230201A CN 117230201 A CN117230201 A CN 117230201A CN 202311407428 A CN202311407428 A CN 202311407428A CN 117230201 A CN117230201 A CN 117230201A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- egfr
- anxa6
- cells
- cancer
- caf
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 title claims abstract description 62
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 62
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 62
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims abstract description 18
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims abstract description 18
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 title claims abstract description 18
- 230000035772 mutation Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims description 42
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 title abstract description 8
- 101000780137 Homo sapiens Annexin A6 Proteins 0.000 title description 72
- 102100034278 Annexin A6 Human genes 0.000 title description 68
- 101150082808 ANXA6 gene Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 229940121647 egfr inhibitor Drugs 0.000 claims abstract description 20
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims abstract description 20
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 10
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 4
- 208000010507 Adenocarcinoma of Lung Diseases 0.000 claims description 20
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 18
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 13
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 12
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 11
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 9
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 8
- 239000005551 L01XE03 - Erlotinib Substances 0.000 claims description 7
- 229960001686 afatinib Drugs 0.000 claims description 7
- ULXXDDBFHOBEHA-CWDCEQMOSA-N afatinib Chemical compound N1=CN=C2C=C(O[C@@H]3COCC3)C(NC(=O)/C=C/CN(C)C)=CC2=C1NC1=CC=C(F)C(Cl)=C1 ULXXDDBFHOBEHA-CWDCEQMOSA-N 0.000 claims description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 229960001433 erlotinib Drugs 0.000 claims description 7
- AAKJLRGGTJKAMG-UHFFFAOYSA-N erlotinib Chemical compound C=12C=C(OCCOC)C(OCCOC)=CC2=NC=NC=1NC1=CC=CC(C#C)=C1 AAKJLRGGTJKAMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 7
- 239000005411 L01XE02 - Gefitinib Substances 0.000 claims description 6
- 229960002584 gefitinib Drugs 0.000 claims description 6
- XGALLCVXEZPNRQ-UHFFFAOYSA-N gefitinib Chemical compound C=12C=C(OCCCN3CCOCC3)C(OC)=CC2=NC=NC=1NC1=CC=C(F)C(Cl)=C1 XGALLCVXEZPNRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229950007440 icotinib Drugs 0.000 claims description 5
- QQLKULDARVNMAL-UHFFFAOYSA-N icotinib Chemical compound C#CC1=CC=CC(NC=2C3=CC=4OCCOCCOCCOC=4C=C3N=CN=2)=C1 QQLKULDARVNMAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 229960003278 osimertinib Drugs 0.000 claims description 5
- DUYJMQONPNNFPI-UHFFFAOYSA-N osimertinib Chemical compound COC1=CC(N(C)CCN(C)C)=C(NC(=O)C=C)C=C1NC1=NC=CC(C=2C3=CC=CC=C3N(C)C=2)=N1 DUYJMQONPNNFPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 4
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000016624 Retinal neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 239000013022 formulation composition Substances 0.000 claims description 3
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 claims description 3
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 claims description 3
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 201000008933 retinal cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 3
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 3
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000008385 Urogenital Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 2
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 172
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 32
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 17
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 14
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 13
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 12
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 12
- 230000004044 response Effects 0.000 description 12
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 10
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 9
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 9
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 9
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 6
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 6
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 6
- 229940028444 muse Drugs 0.000 description 6
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 5
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 5
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 5
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 4
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 238000011729 BALB/c nude mouse Methods 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 3
- 239000002136 L01XE07 - Lapatinib Substances 0.000 description 3
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 229960004891 lapatinib Drugs 0.000 description 3
- BCFGMOOMADDAQU-UHFFFAOYSA-N lapatinib Chemical compound O1C(CNCCS(=O)(=O)C)=CC=C1C1=CC=C(N=CN=C2NC=3C=C(Cl)C(OCC=4C=C(F)C=CC=4)=CC=3)C2=C1 BCFGMOOMADDAQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- GMVPRGQOIOIIMI-DWKJAMRDSA-N prostaglandin E1 Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1CCCCCCC(O)=O GMVPRGQOIOIIMI-DWKJAMRDSA-N 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 229940121358 tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 description 3
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 2
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 2
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 2
- 206010057175 Mass conditions Diseases 0.000 description 2
- 102000038030 PI3Ks Human genes 0.000 description 2
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 101710100969 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Proteins 0.000 description 2
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 2
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 2
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 201000005243 lung squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 208000010979 non-small cell squamous lung carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 210000004882 non-tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 2
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HBZBAMXERPYTFS-SECBINFHSA-N (4S)-2-(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,2-f][1,3]benzothiazol-2-yl)-4,5-dihydro-1,3-thiazole-4-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(=N1)c1nc2cc3CCNc3cc2s1 HBZBAMXERPYTFS-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- HWIIAAVGRHKSOJ-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-6,7-dimethoxyquinazolin-4-amine Chemical compound ClC1=NC(N)=C2C=C(OC)C(OC)=CC2=N1 HWIIAAVGRHKSOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 6-oxabicyclo[3.2.1]oct-3-en-7-one Chemical group C1C2C(=O)OC1C=CC2 TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 101100067974 Arabidopsis thaliana POP2 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102000007350 Bone Morphogenetic Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010007726 Bone Morphogenetic Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000010356 CRISPR-Cas9 genome editing Methods 0.000 description 1
- 101100123850 Caenorhabditis elegans her-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 101150039808 Egfr gene Proteins 0.000 description 1
- 102000056372 ErbB-3 Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 101100118549 Homo sapiens EGFR gene Proteins 0.000 description 1
- 101000851181 Homo sapiens Epidermal growth factor receptor Proteins 0.000 description 1
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010027458 Metastases to lung Diseases 0.000 description 1
- 208000003445 Mouth Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100029986 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Human genes 0.000 description 1
- 102100029981 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Human genes 0.000 description 1
- 101710100963 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Proteins 0.000 description 1
- 101100123851 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) HER1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010066901 Treatment failure Diseases 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000035578 autophosphorylation Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000002457 bidirectional effect Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 101150067309 bmp4 gene Proteins 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 229940112869 bone morphogenetic protein Drugs 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 230000004712 cancer cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000004709 cell invasion Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000009087 cell motility Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- LVXJQMNHJWSHET-AATRIKPKSA-N dacomitinib Chemical compound C=12C=C(NC(=O)\C=C\CN3CCCCC3)C(OC)=CC2=NC=NC=1NC1=CC=C(F)C(Cl)=C1 LVXJQMNHJWSHET-AATRIKPKSA-N 0.000 description 1
- 229950002205 dacomitinib Drugs 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 108700021358 erbB-1 Genes Proteins 0.000 description 1
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004024 hepatic stellate cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011503 in vivo imaging Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 208000012987 lip and oral cavity carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000921 morphogenic effect Effects 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000026267 regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000007781 signaling event Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000004981 tumor-associated macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明属于生物医学，具体涉及成纤维细胞在疾病治疗中的应用；具体公开了一种ANXA6基因在制备治疗EGFR突变介导的疾病的诊断制剂中的应用，所述应用为当检测到有ANXA6基因在CAF细胞中过表达时，则EGFR突变介导的疾病不能采用EGFR靶向药物进行治疗；进一步的，所述EGFR靶向药物为表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR‑TKIs)。
Description
技术领域
本发明属于生物医学，具体涉及成纤维细胞在疾病治疗中的应用
背景技术
人表皮生长因子受体(EGFR，epidermal growth factor receptor，简称为EGFR、ErbB-1或HER1)是表皮生长因子受体(HER)家族成员之一。该家族包括HER1(erbB1，EGFR)、HER2(erbB2，NEU)、HER3(erbB3)及HER4(erbB4)。EGFR表达于正常上皮细胞表面，在许多实体肿瘤细胞中存在EGFR的高表达或异常表达，包括头颈癌、乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌、肾癌、结肠癌以及非小细胞肺癌等，尤其是肺癌，亚裔肺癌人群中EGFR突变率可达到50％(Seshacharyulu P等，Expert Opin Ther Targets,2012；16:15–31)。
EGFR是肿瘤靶向治疗的热门靶点。目前发现的EGFR酪氨酸激酶(EGFR TK)可以催化ATP的高能磷酸键转移到EGFR的数个酪氨酸位点，使其磷酸化，从而激活下游的PI3K/Akt、Ras/MAPK等信号通路，促进细胞进生长增殖、代谢，抑制细胞凋亡。细胞中EGFR过度表达和突变时，会阻碍细胞程序死亡，使细胞的生长调节失控，而获得无限增殖和侵袭能力，即发展成为恶性肿瘤细胞。EGFR TKI通过与ATP竞争胞内酪氨酸激酶的结合位点，阻止受体内酪氨酸的自身磷酸化，抑制EGFR酪氨酸激酶激活，从而抑制肿瘤细胞生长、加速肿瘤细胞凋亡，抑制血管生成和肿瘤细胞浸润、转移。小分子EGFR TKI的基本结构为喹唑啉胺。EGFRTKI可分为：1)可逆性TKI主要有：吉非替尼(gefitinib)，厄洛替尼(erlotinib)，拉帕替尼(Lapatinib)，2)不可逆性TKI主要有：阿法替尼(Afatinib)，达可替尼(Dacomitinib)。目前，可逆性和不可逆性EGFR TKI对突变EGFR非小细胞肺癌短时间内具有显著的疗效，但最终均因产生获得性耐药而导致治疗失败，并没有明显延长患者的生存期。目前有多种针对性的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)获批用于EGFR基因敏感突变患者的治疗，可取得较好的疗效，显著延长生存期，改善生活质量，以奥西替尼为代表的三代EGFR-TKI给患者带来超3年的长期生存，但最终都不可避免地出现耐药。目前已经有部分四代EGFR-TKIs进入临床研究，能否让患者获益还需进一步探索。
人膜联蛋白A6(annexin A6，ANXA6)基因由26个外显子组成，约6000bp，位于染色体5q32-q34上，是高度保守的Ca2+依赖性膜结合蛋白，主要存在于质膜和内体腔室，其在细胞发育和分化中具有多种功能，除参与细胞增殖、分化、炎症、膜修复和病毒感染等过程外，研究显示，ANXA6与多种肿瘤密切相关，并且在不同类型的肿瘤中ANXA6发挥的功能也不相同，这些功能经常与Ras、Ras/MAPK和FAK/PI3K等信号转导活性的改变有关，并且具有“双向调控”的特点；在黑色素瘤、上皮癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌和慢性粒细胞白血病中，具有肿瘤抑制作用，它的下调可能促进了这些癌症的发展并增强了此类癌症的侵袭和转移；另外，ANXA6可以促进乳腺癌细胞粘附、运动、侵袭，也可以促进急性淋巴细胞白血病进展、淋巴瘤粘连以及骨髓瘤细胞中的分泌过程，同时在宫颈癌中表达上调，这种“双向调控”机制目前并不清楚。在专利CN111388683B中报道一种ANXA6表达抑制剂在制备治疗肺癌的药物中的应用，研究发现：ANXA6表达受抑制后，肺癌细胞的增殖受到显著抑制，肺癌细胞的集落形成能力受到抑制，肺癌细胞的皮下成瘤能力显著下降，且肿瘤的生长速度受到显著抑制。
肿瘤是由恶性肿瘤细胞及大量非肿瘤细胞组成的复杂结构，它们之间相互作用共同构成肿瘤微环境(Tumor microenvironment，TME)。TME主要由肿瘤周围的血管、细胞外基质(extracellular matrix，ECM)和其他非肿瘤细胞(包括成纤维细胞、脂肪细胞、血管内皮细胞，以及T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞、肿瘤相关巨噬细胞等免疫细胞)以及细胞分泌的细胞因子和外泌体等组成。其中，肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblats，CAFs)是TME中一类重要细胞组分，来源广泛，可由固有成纤维细胞、骨髓间充质干细胞和造血干细胞、脂肪干细胞、内皮细胞及肝细胞星状细胞等转化而来。CAF是TME中最为丰富的一类细胞，它的异质性很强，分别表现在其起源、功能、表型和生物标志物等方面，大多数文献报道均为CAF可以促进肿瘤的发生发展，但是仍然有小部分研究者发现CAF也发挥着抑制肿瘤的作用，如Brechbuhl HM等人发现在乳腺癌中CD146阳性的CAFS增强乳腺癌细胞的他莫昔芬敏感性，Patel等发现口腔癌中a-SMA表达低的CAFs可通过骨形态发生蛋白4(bonemorphogenetic protein 4，BMP4)抑制干细胞样肿瘤细胞的自我更新等。
发明内容
基于本申请对人膜联蛋白A6基因和肿瘤相关成纤维细胞(CAF)的研究发现，CAF细胞中的人膜联蛋白A6基因的过表达可以促进EGFR突变肺腺癌细胞对靶向药物的抵抗作用，而CAF细胞中ANXA6表达降低时明显逆转EGFR突变肺腺癌细胞对靶向药物的抵抗。基于此，完成了本发明。
第一方面，本发明提供一种ANXA6基因在制备治疗EGFR突变介导的疾病的诊断制剂中的应用，所述应用为当检测到有ANXA6基因在CAF细胞中过表达时，则EGFR突变介导的疾病不能采用EGFR靶向药物进行治疗。
进一步的，所述EGFR靶向药物为表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)。
进一步的，所述EGFR-TKIs包括但不限于吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、阿法替尼、达克替尼、奥希替尼(AZD9291)或伏美替尼。
进一步的，所述EGFR突变介导的疾病包括癌症。
进一步的，所述癌症包括但不限于成胶质细胞瘤、头颈癌、胰腺癌、肺癌、神经系统的癌症、胃肠癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、肾癌、视网膜癌、皮肤癌、肝癌、生殖-泌尿癌和膀胱癌。
进一步的，EGFR介导的癌症优选肺腺癌、肺鳞状细胞癌或非小细胞肺癌。
第二方面，本发明提供一种不适用EGFR靶向治疗的肺腺癌人群的筛选方法，所述方法包括如下步骤：
S1.采集受试者的肿瘤组织；
S2.从肿瘤组织中分离CAF细胞；
S3.检测CAF细胞中的ANXA6基因表达量的检测。
S4.人群判断：依据CAF细胞中是否有ANXA6基因的过表达确定为不适用人群。
进一步的，所述不适用EGFR靶向治疗的人群为CAF细胞中ANXA6基因的过表达的人群。
进一步的，所述EGFR靶向治疗包括但不限于吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、阿法替尼、达克替尼、奥希替尼(AZD9291)或伏美替尼的药物治疗。
第三方面，本发明提供一种制剂组合物，所述制剂组合物含有抑制CAF细胞中ANXA6基因表达的抑制剂和EGFR靶向制剂以及药学上可接受的药物辅料。
进一步的，所述抑制剂还含有其他活性成分，所述活性成分为增强CAF细胞中ANXA6基因表达的抑制剂的活性成分且不影响EGFR靶向制剂功效的活性成分。
进一步的，所述活性成分可以是增强CAF细胞中ANXA6基因表达的抑制剂的活性成分且还提高EGFR靶向制剂功效的活性成分。
第四方面，本发明提供一种制剂组合物在制备EGFR靶向治疗EGFR突变介导的疾病的药物中的应用。
进一步的，所述制剂组合物为含有抑制CAF细胞中ANXA6基因表达的抑制剂和EGFR靶向制剂以及药学上可接受的药物辅料。
进一步的，所述抑制剂还含有其他活性成分，所述活性成分为增强CAF细胞中ANXA6基因表达的抑制剂的活性成分且不影响EGFR靶向制剂功效的活性成分。
进一步的，所述活性成分可以是增强CAF细胞中ANXA6基因表达的抑制剂的活性成分且还提高EGFR靶向制剂功效的活性成分。
进一步的，所述EGFR突变介导的疾病包括但不限于成胶质细胞瘤、头颈癌、胰腺癌、肺癌、神经系统的癌症、胃肠癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、肾癌、视网膜癌、皮肤癌、肝癌、生殖-泌尿癌和膀胱癌。
进一步的，EGFR介导的癌症优选肺腺癌、肺鳞状细胞癌或非小细胞肺癌。
进一步的，所述EGFR靶向制剂为表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)。
进一步的，所述EGFR-TKIs包括但不限于吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、阿法替尼、达克替尼、奥希替尼(AZD9291)或伏美替尼。
附图说明
图1为ANXA6+CAF上清处理EGFR突变肺腺癌细胞后，肺癌细胞对奥西替尼的敏感性；A：ANXA6+CAF上清处理HCC827细胞48小时，HCC827细胞对奥西替尼的应答情况；B：ANXA6+CAF上清处理HCC827细胞72小时，HCC827细胞对奥西替尼的应答情况；C：ANXA6+CAF上清处理HCC827细胞96小时，HCC827细胞对奥西替尼的应答情况；D：ANXA6+CAF上清处理PC-9细胞48小时，PC-9细胞对奥西替尼的应答情况；
E：ANXA6+CAF上清处理PC-9细胞72小时，PC-9细胞对奥西替尼的应答情况；
F：ANXA6+CAF上清处理PC-9细胞96小时，PC-9细胞对奥西替尼的应答情况；
G：ANXA6+CAF上清处理H1975细胞48小时，H1975细胞对奥西替尼的应答情况；
H：ANXA6+CAF上清处理H1975细胞72小时，H1975细胞对奥西替尼的应答情况；
I：ANXA6+CAF上清处理H1975细胞96小时，H1975细胞对奥西替尼的应答情况；
图2敲降ANXA6的CAF上清处理EGFR突变肺腺癌细胞后，肺癌细胞对奥西替尼的敏感性分析；
A：敲降ANXA6的CAF上清处理HCC827细胞96小时，HCC827细胞对奥西替尼的应答情况；
B：敲降ANXA6的CAF上清处理PC-9细胞96小时，PC-9细胞对奥西替尼的应答情况；C：敲降ANXA6的CAF上清处理H1975细胞96小时，H1975细胞对奥西替尼的应答情况。
图3为ANXA6+CAF影响EGFR突变肺腺癌细胞对伏美替尼的应答。
图4为ANXA6-CAF影响EGFR突变肺腺癌细胞对伏美替尼的应答。
图5为ANXA6+CAF长期作用于EGFR突变肺腺癌细胞形成的转移灶对伏美替尼的应答情况。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为可通过常规的商业途径购买得到。
实施例
实施例中细胞培养条件均为：37℃、5％CO2静置培养。
实施例中所用的基础培养基为：10％RPMI-1640(取无血清RPMI-1640培养基，加入胎牛血清至浓度为10％、加入青霉素至浓度为1％、加入链霉素至浓度为1％)和10％DMEM(取无血清DMEM培养基，加入胎牛血清至浓度为10％、加入青霉素至浓度为1％、加入链霉素至浓度为1％)。
实施例1 ANXA6+CAF的EGFR突变肺腺癌细胞抗药性
1.ANXA6+CAF细胞于DMEM培养基中，置入37℃、5％CO2培养箱中，收集细胞培养上清。
2.将HCC827、PC-9、H1975三种细胞接种于10％RPMI-1640培养基中，将生长90％汇合的细胞进行传代，加入胰酶消化液，37℃消化约5min，直到细胞完全消化为单个细胞，加入完全培养基吹打混匀，混匀后用Muse细胞计数仪进行计数。
3.在96孔板中接种HCC827、PC-9、H1975三种细胞，每孔细胞数为5000个，待24小时细胞贴壁生长。
4.将ANXA6+CAF细胞培养上清与10％RPMI-1640培养基按照1：1体积比进行混合，用其配置6nM、12nM、120nM、250nM、500nM、1200nM、6000nM、12000nM、24000nM不同浓度的奥西替尼，吸出96孔板中的上清弃去，将不同浓度的奥西替尼按100μl每孔加入，分别接种至HCC827细胞96孔板中。
5.将ANXA6+CAF细胞培养上清与10％RPMI-1640培养基按照1：1体积比进行混合，用其配置1nM、2nM、4nM、40nM、400nM、4000nM、6000nM、8000nM、16000nM不同浓度的奥西替尼，吸出96孔板中的上清弃去，将不同浓度的奥西替尼按100μl每孔加入接种有PC-9细胞和H1975细胞的96孔板中。
6.将96孔板置入细胞培养箱中，分别在奥西替尼作用细胞48小时、72小时和96小时后测定细胞的OD值，得到数据。
7.依据数据绘制细胞对奥西替尼的药物敏感性曲线。
8.实验结果：
如图1，奥西替尼作用48小时HCC827细胞IC50为5.20nM，ANXA6+CAF+HCC827细胞IC50为3469.2nM，是HCC827细胞IC50的667.15倍；奥西替尼作用72小时HCC827细胞IC50为5.20nM，ANXA6+CAF+HCC827细胞IC50为2640.2nM，是HCC827细胞IC50的507.73倍；奥西替尼作用96小时HCC827细胞IC50为3.42nM，ANXA6+CAF+HCC827细胞IC50为260.2nM,是HCC827细胞IC50的50.05倍，这些结果提示了ANXA6+CAF会导致HCC827细胞对奥西替尼的抵抗。
综上所述，与3种细胞自身比较，ANXA6+CAF细胞上清处理HCC827、PC-9和H1975细胞后，ANXA6+CAF细胞上清处理过的HCC827、PC-9和H1975的3种细胞对奥西替尼产生明显的抵抗。
实施例2敲降ANXA6的CAF细胞上清处理EGFR突变肺腺癌细胞的抗药性影响
1.使用CRISPR-Cas9技术在ANXA6+CAF细胞中敲降ANXA6蛋白基因后，将其置于细胞培养箱中培养，收集细胞培养上清。
2.将HCC827、PC-9、H1975三种细胞接种于10％RPMI-1640培养基中，将生长90％汇合的细胞进行传代，加入胰酶消化液，37℃消化约5min，直到细胞完全消化为单个细胞，加入完全培养基吹打混匀，混匀后用Muse细胞计数仪进行计数。
3.在96孔板中接种HCC827、PC-9、H1975三种细胞，每孔细胞数为5000个，待24小时细胞贴壁生长。
4将ANXA6+CAF/ANXA6-CAF(CAFANXA6sgRNA1，CAFANXA6sgRNA2，CAFANXA6sgRNA3)细胞培养上清与10％RPMI-1640培养基按照1：1体积比进行混合，用其配置1.5nM、3nM、30nM、150nM、300nM、600nM、1200nM、2500nM、6000nM不同浓度的奥西替尼，吸出96孔板中的上清弃去，将不同浓度的奥西替尼按100μl每孔加入接种HCC827细胞96孔板中。
5.将ANXA6+CAF/ANXA6-CAF细胞培养上清与10％RPMI-1640培养基按照1：1体积比进行混合，用其配置1nM、2nM、4nM、40nM、400nM、4000nM、6000nM、8000nM、16000nM不同浓度的奥西替尼，吸出96孔板中的上清弃去，将不同浓度的奥西替尼按100μl每孔加入接种有PC-9细胞和H1975细胞的96孔板中。
6.将96孔板置入细胞培养箱中，在奥西替尼作用细胞96小时后测定细胞的OD值，得到数据。
7.依据数据绘制细胞对奥西替尼的药物敏感性曲线。
如图2所示，用ANXA6+CAF和敲降ANXA6的CAF上清处理EGFR突变肺腺癌细胞，奥西替尼作用96小时，ANXA6+CAF+HCC827细胞IC50为2610.2nM，CAFANXA6sgRNA1+HCC827细胞IC50为1.4nM，CAFANXA6sgRNA2+HCC827细胞IC50为1.3nM，CAFANXA6sgRNA3+HCC827细胞IC50为3.1nM，ANXA6+CAF上清处理HCC827细胞的IC50是敲降ANXA6的CAF上清处理HCC827细胞IC50的842-2007.85倍；
ANXA6+CAF+PC-9细胞IC50为405.2nM，CAFANXA6sgRNA1+PC-9细胞IC50为16.1nM，CAFANXA6sgRNA2+PC-9细胞IC50为310.2nM，CAFANXA6sgRNA3+PC-9细胞IC50为380.2nM，ANXA6+CAF上清处理PC-9细胞的IC50是敲降ANXA6的CAF上清处理PC-9细胞IC50的1.07-25.17倍；
ANXA6+CAF+H1975细胞IC50为11021.1nM，CAFANXA6sgRNA1+H1975细胞IC50为5968.2nM，CAFANXA6sgRNA2+H1975细胞IC50为6498.2nM，CAFANXA6sgRNA3+H1975细胞IC50为7998.3nM，ANXA6+CAF上清处理H1975细胞的IC50是敲降ANXA6的CAF上清处理H1975细胞IC50的1.38-1.85倍。
结果提示用ANXA6表达降低的CAF细胞上清处理HCC827、PC-9和H1975细胞后，明显逆转这3种细胞对奥西替尼的抵抗。
实施例3 ANXA6+CAF与EGFR突变肺腺癌细胞对伏美替尼的应答的关系
1.将HCC827细胞和ANXA6+CAF培养至80％汇合度后，加入胰酶消化液，37℃消化约5min，加入10％RPMI-1640培养基，混匀，离心后弃上清。用10％RPMI-1640培养基重悬，重悬后用Muse细胞计数仪进行计数。
2.根据计数结果，将细胞悬液稀释为1×107/ml，一组细胞悬液为HCC827细胞，另一组细胞悬液为HCC827+CAF细胞。
3.准备相应数量的周龄为4周的BALB/c裸鼠，混匀细胞悬液后，分别用注射器将两组细胞接种于裸鼠腋下，每个部位注射细胞悬液200万细胞，每种细胞接种6只裸鼠。
5.等待裸鼠腋下成瘤后，按照150mg/kg剂量腹腔注射荧光素酶，15分钟后，用小动物活体成像系统观察裸鼠腋下瘤块情况。
6.待肿瘤大小为400±32.97mm3，伏美替尼按照5mg/kg的剂量给与小鼠灌胃治疗，0.1ml/天/只，给药23天。
7.于给药后第5天、第9天、第12天、第17天、第23天时按照150mg/kg剂量腹腔注射荧光素酶，15分钟后，用小动物活体成像系统观察裸鼠腋下瘤块变化的情况。
8.实验结果
如图3所示，将ANXA6+CAF与HCC827细胞一起接种到裸鼠腋下，待肿瘤大小为400±32.97mm3，伏美替尼灌胃治疗23天，HCC827细胞移植瘤病灶缩小了94±4％，HCC827+ANXA6+CAF细胞移植瘤病灶缩小了56±17.16％，提示ANXA6+CAF明显增加了HCC827细胞对伏美替尼的抵抗。
实施例4敲降ANXA6的CAF(ANXA6-CAF)作用于EGFR突变肺腺癌细胞对伏美替尼的应答
1.将PC-9细胞、ANXA6+CAF细胞和ANXA6-CAF细胞培养至80％汇合度后，加入胰酶消化液，37℃消化约5min，加入10％RPMI-1640培养基，混匀，离心后弃上清。用10％RPMI-1640培养基重悬，重悬后用Muse细胞计数仪进行计数。
2.根据计数结果，将细胞悬液稀释成1×107/ml，一组细胞悬液为PC-9+ANXA6+CAF细胞，另一组细胞悬液为PC-9+ANXA6-CAF细胞。
3.准备相应数量的周龄为4周的BALB/c裸鼠，混匀细胞悬液后，用注射器接种于裸鼠腋下，每个部位注射细胞悬液200万细胞，每种细胞接种6只裸鼠。
5.等待裸鼠腋下成瘤后，按照150mg/kg剂量腹腔注射荧光素酶，15分钟后，用小动物活体成像系统观察裸鼠腋下瘤块情况。
6.待肿瘤大小为390±28.61mm3，伏美替尼按照5mg/kg的剂量给与小鼠灌胃治疗，0.1ml/天/只，给药29天。
如图4所示，将ANXA6+CAF/敲降ANXA6的CAF与PC-9细胞一起接种与裸鼠腋下，待肿瘤大小为390±28.61mm3，伏美替尼治疗29天，ANXA6+CAF+PC-9细胞移植瘤病灶缩小了23.6±13.3％，敲降ANXA6的CAF+PC-9细胞移植瘤病灶缩小了65±9.16％，提示与ANXA6+CAF比较，敲降ANXA6的CAF明显逆转了PC-9细胞对伏美替尼的抵抗。
实施例5 ANXA6+CAF长期作用于EGFR突变肺腺癌细胞形成的转移灶对伏美替尼的应答情况
将培养的HCC827细胞和ANXA6+CAF细胞用胰酶消化液消化成单个细胞后，用Muse计数仪计数，以1：1的比例混合在一起。准备相应数量的周龄为4周的BALB/c裸鼠，混匀细胞悬液后，用注射器接种于裸鼠腋下，每个部位注射细胞悬液200万细胞；等待小鼠皮下成瘤后，以脱颈致死处死法处死小鼠，解剖出瘤块。将瘤块用剪刀剪碎，用生理盐水洗涤三次后，加入10％DMEM培养基并移至培养瓶中，置入暖箱中培养，待肿瘤细胞生长至一定数量后，将其消化下来进行扩大培养并命名为HCC827-3细胞。
转移灶缩小判断依据：按照150mg/kg剂量给小鼠腹腔注射荧光素酶底物，10分钟后，使用小动物成像系统进行成像，对比治疗前后病灶荧光信号强弱，计算病灶改变情况。
1.将HCC827细胞和HCC827-3接种在10％RPMI-1640培养基中，培养至70％到80％汇合度。
2.加入胰酶消化液，37℃消化约5min，直到细胞完全消化为单个细胞。加入基础培养基，混匀，离心后弃上清。用培养基重悬，重悬后用Muse细胞计数仪进行计数。
3.用生理盐水洗涤细胞3次，用生理盐水重悬细胞至1×107/ml。
4.准备相应数量的NOD/SCID雌小鼠，周龄4周。
5.细胞悬液混匀后，以200万/只数量将HCC827/HCC827-3细胞经尾静脉进行注射，每种细胞接种5只小鼠。
6.等待1.5个月时，按照150mg/kg剂量腹腔注射荧光素酶，15分钟后，用小动物活体成像系统观察到小鼠均有肺转移情况。
7.伏美替尼按照5mg/kg的剂量给与小鼠灌胃治疗，0.1ml/天/只。
8.分别在给药10天、20天、30天、40天、51天、60天、80天、90天时按照150mg/kg剂量腹腔注射荧光素酶，15分钟后，用小动物活体成像系统观察小鼠肺转移灶大小情况。
为了观察ANXA6+CAF长期作用于EGFR突变肺腺癌细胞形成转移灶对伏美替尼的应答情况，用HCC827细胞和HCC827-3细胞建立肺转移模型，进行伏美替尼治疗，治疗90天后，HCC827细胞形成转移灶缩小了70％-100％，HCC827-3细胞形成的转移灶缩小了44.44％-70.83％；表明ANXA6+CAF长期作用于EGFR突变肺腺癌细胞形成的转移灶对伏美替尼有抵抗作用(见图5)。
Claims (10)
1.一种ANXA6基因在制备治疗EGFR突变介导的疾病的诊断制剂中的应用，所述应用为当检测到有ANXA6基因在CAF细胞中过表达时，则EGFR突变介导的疾病不能采用EGFR靶向药物进行治疗。
2.如权利要求1所述ANXA6基因在制备治疗EGFR突变介导的疾病的诊断制剂中的应用，其特征在于，所述EGFR靶向药物为表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)。
3.如权利要求2所述EGFR-TKIs，其特征在于，所述EGFR-TKIs包括但不限于吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、阿法替尼、达克替尼、奥希替尼(AZD9291)或伏美替尼。
4.如权利要求1所述ANXA6基因在制备治疗EGFR突变介导的疾病的诊断制剂中的应用，其特征在于，所述EGFR突变介导的疾病为癌症。
5.如权利要求4所述EGFR突变介导的疾病，其特征在于所述癌症包括但不限于成胶质细胞瘤、头颈癌、胰腺癌、肺癌、神经系统的癌症、胃肠癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、肾癌、视网膜癌、皮肤癌、肝癌、生殖-泌尿癌和膀胱癌。
6.一种不适用EGFR靶向治疗的肺腺癌人群的筛选方法，所述方法包括如下步骤：
S1.采集受试者的肿瘤组织；
S2.从肿瘤组织中分离CAF细胞；
S3.检测CAF细胞中的ANXA6基因表达量的检测；
S4.人群判断：依据CAF细胞中是否有ANXA6基因的过表达确定为不适用人群；
其中，所述不适用EGFR靶向治疗的人群为ANXA6基因在CAF细胞中的过表达的人群。
7.如权利要求6所述不适用EGFR靶向治疗的肺腺癌人群的筛选方法，其特征在于，所述EGFR靶向治疗包括但不限于吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、阿法替尼、达克替尼、奥希替尼(AZD9291)或伏美替尼的药物治疗。
8.一种制剂组合物，所述制剂组合物含有抑制CAF细胞中ANXA6基因表达的抑制剂和EGFR靶向制剂以及药学上可接受的药物辅料。
9.如权利要求7所述一种之及组合物，其特征在于，所述抑制剂还含有其他活性成分，所述活性成分为增强CAF细胞中ANXA6基因表达的抑制剂的活性成分且不影响EGFR靶向制剂功效的活性成分。
10.一种制剂组合物在制备EGFR靶向治疗EGFR突变介导的疾病的药物中的应用，所述制剂组合物为含有抑制CAF细胞中ANXA6基因表达的抑制剂和EGFR靶向制剂以及药学上可接受的药物辅料。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311407428.3A CN117230201A (zh) | 2023-10-27 | 2023-10-27 | Anxa6+肿瘤相关成纤维细胞在egfr突变介导的疾病治疗中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311407428.3A CN117230201A (zh) | 2023-10-27 | 2023-10-27 | Anxa6+肿瘤相关成纤维细胞在egfr突变介导的疾病治疗中的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117230201A true CN117230201A (zh) | 2023-12-15 |
Family
ID=89086165
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311407428.3A Pending CN117230201A (zh) | 2023-10-27 | 2023-10-27 | Anxa6+肿瘤相关成纤维细胞在egfr突变介导的疾病治疗中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117230201A (zh) |
-
2023
- 2023-10-27 CN CN202311407428.3A patent/CN117230201A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101360495B (zh) | 对癌症病人给药mTOR抑制剂 | |
| KR101475167B1 (ko) | 복합 항암 요법 | |
| US20180071339A1 (en) | Combination of pharmaceutical preparations for tumor chemotherapy | |
| CN112386593B (zh) | 一种含西达本胺的抗肿瘤药物组合物及其应用 | |
| CN111358952B (zh) | 一种抗肿瘤药物组合物及其制剂和应用 | |
| CN101612400A (zh) | 血管紧张素ⅱ的1型受体拮抗剂在抗肿瘤中的应用 | |
| Wang et al. | The combinatorial effect of cisplatin and moxibustion on tumor growth inhibition with special reference to modulation of the immune microenvironment in Lewis lung cancer mice | |
| CN117230201A (zh) | Anxa6+肿瘤相关成纤维细胞在egfr突变介导的疾病治疗中的应用 | |
| CN101861159A (zh) | 改进的抗肿瘤治疗 | |
| Felis-Giemza et al. | Is intra-articular infliximab therapy a good alternative to radionuclide synovectomy for a patient with refractory pigmented villonodular synovitis? | |
| Mao et al. | Xl019, a novel JAK inhibitor, suppressed osteoclasts differentiation induced by RANKL through MAPK signaling pathway | |
| TW201206457A (en) | Reishi polysaccharide-based compositions and methods for treatment of cancer | |
| CN111821458A (zh) | 一种用于非小细胞肺癌治疗的药物组合物 | |
| Bedard et al. | Long-term safety of inavolisib (GDC-0077) in an ongoing phase 1/1b study evaluating monotherapy and in combination (combo) with palbociclib and/or endocrine therapy in patients (pts) with PIK3CA-mutated, hormone receptor-positive/HER2-negative (HR+/HER2−) metastatic breast cancer (BC) | |
| CN106075454A (zh) | 一种抗肿瘤药物制剂组合 | |
| US20220378879A1 (en) | Application of peg interferon and protooncogene product targeting inhibitor in synergistic treatment of renal carcinoma | |
| CN111821303A (zh) | 沃替西汀及其盐在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN105517558A (zh) | 土庄绣线菊提取物及其用途 | |
| CN108653293A (zh) | Jak2抑制剂在预防和治疗印戒细胞癌中的应用 | |
| CN114222753B (zh) | 一种预防和/或治疗神经母细胞瘤的多肽药物及其用途 | |
| CN115252613B (zh) | 药物组合物及其在逆转仑伐替尼耐药性中的用途 | |
| CN107510843B (zh) | Dem1的功能与用途 | |
| CN114949000B (zh) | 麝香提取物及其增强car-t细胞疗效的应用 | |
| EP4349339A1 (en) | Pharmaceutical composition for treatment of cancer and use thereof | |
| CN110974829A (zh) | 羟氯喹亚麻酸酯提高5-Fu敏感性的应用及评价方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |