CN117203337A - 肌营养不良的治疗方法 - Google Patents

Abstract

描述了用引起人肌营养不良蛋白基因外显子跳跃的反义寡核苷酸缀合物治疗患有杜氏肌营养不良(DMD)的患者的肌营养不良的新给药方案。还描述了用反义寡聚物CPP缀合物和镁补充剂治疗患者的方法。

Description

肌营养不良的治疗方法

相关申请

本申请要求2021年4月30日提交的美国临时申请号63/182,327和2021年9月29日提交的美国临时申请号63/249,721的权益。上述申请的全部教导以全文引用的方式并入。

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ASCII文本文件中的电子提交的序列表的内容(名称：4140_0510002_Seqlisting_ST25；大小：223,634字节；和创建日期：2022年4月12日)以全文引用的方式并入本文中。

技术领域

本公开涉及用引起人肌营养不良蛋白基因中外显子跳跃的反义寡核苷酸缀合物治疗患有杜氏肌营养不良(DMD)的患者的肌营养不良的新给药方案。其还提供了降低与涉及反义寡核苷酸CPP缀合物的治疗相关的毒性的方法。

背景技术

肌营养不良蛋白是一种关键的结构蛋白，其保护肌肉免受反复应变诱导的损伤，影响骨骼肌、膈肌和心肌。杜氏肌营养不良是一种由肌营养不良蛋白基因突变引起的罕见、严重、危及生命的X连锁隐性变性神经肌肉疾病。这些突变破坏了肌营养不良蛋白信使核糖核酸(mRNA)的阅读框，阻止了功能性肌营养不良蛋白的翻译。任何改变外显子阅读框、或引入终止密码子、或特征在于去除整个框外一个或多个外显子或一个或多个外显子重复的外显子突变都可能破坏功能性肌营养不良蛋白的产生，从而导致DMD。肌营养不良蛋白的缺乏是所述疾病的直接原因，并且患者遵循可预测的疾病进程，从儿童早期开始骨骼肌功能无情地进行性恶化，导致过早死亡，通常在30岁之前。

杜氏肌营养不良(DMD)是由蛋白质肌营养不良蛋白的表达的缺陷引起的。编码所述蛋白的基因含有79个分布在超过200万个DNA核苷酸上的外显子。任何改变外显子阅读框、或引入终止密码子、或特征在于去除整个框外一个或多个外显子或一个或多个外显子重复的外显子突变都可能破坏功能性肌营养不良蛋白的产生，从而导致DMD。

已发现一种不太严重的肌营养不良形式，即贝克尔肌营养不良(BMD)，其中突变(通常是一个或多个外显子的缺失)导致沿整个肌营养不良蛋白转录物的正确阅读框，从而使mRNA翻译成蛋白质的过程不会过早终止。如果在处理突变的肌营养不良蛋白前体mRNA时，上游和下游外显子的接合保持了基因的正确阅读框，其结果是编码蛋白质的mRNA具有短的内部缺失，但保留了一些活性，从而产生了BMD表型。

多年来，已知不改变肌营养不良蛋白阅读框的一个或多个外显子的缺失会引起BMD表型，而引起移码的外显子缺失会引起DMD(Monaco,Bertelson等人1988)。一般来说，肌营养不良蛋白突变包括点突变和外显子缺失，这些突变改变了阅读框，从而中断了正确的蛋白质翻译，导致DMD。还应注意的是，一些BMD和DMD患者的外显子缺失覆盖多个外显子。

反义寡核苷酸(例如剪接转换寡核苷酸(SSO))已经成功地用于治疗DMD以通过空间阻断剪接体来诱导前体mRNA的选择性剪接。SSO已被特别设计为靶向前体mRNA的特定区域，通常是外显子，以诱导DMD基因突变的跳跃，从而恢复这些框外突变的框内突变，从而能够产生内部缩短的功能性肌营养不良蛋白。已知此类反义寡聚物完全靶向外显子内(所谓的外显子内部序列)或剪接供体或剪接受体连接处，所述连接处从外显子进入内含子的一部分。

例如，依特立生(eteplirsen)是一种磷酰二胺吗啉代寡聚物(PMO)，其被设计用于跳跃患有适合于外显子51跳跃的DMD的患者中的人肌营养不良蛋白基因的外显子51，以恢复阅读框并产生功能性较短形式的肌营养不良蛋白。美国美国食品药品监督管理局(FDA)于2016年批准Exondys(依特立生)用于治疗具有确认的适合于外显子51跳跃的DMD基因突变的患者的DMD。再举一个例子，戈洛迪森(golodirsen)(Vyondys)(也是PMO亚类的反义寡核苷酸)最近已被批准用于治疗具有确认的适合于外显子53跳跃的DMD基因突变的患者的DMD。

与用于DMD的细胞穿透肽(例如PPMO)缀合的反义寡聚物的发现和开发也是一个研究领域(参见，例如，美国专利号10,888,578；美国申请号16/469,104；美国申请号16/001,310)。，细胞穿透肽(CPP)(例如，富含精氨酸的肽转运部分)在动物模型中已显示出能有效增强反义寡聚物穿透细胞并引起不同肌肉群中的外显子跳跃。然而，迄今为止，人体全身暴露于反义寡聚物缀合物(例如，PPMO)的剂量水平之间的关系尚未确定。

镁缺乏症(或低镁血症)是一种电解质紊乱，其中体内镁水平较低。低镁血症的原因包括暴露于某些药物。低镁血症可导致多种症状。症状包括震颤、协调性差、肌肉痉挛、食欲不振、性格改变和眼球震颤。并发症可能包括癫痫发作或心脏骤停，例如尖端扭转型室性心动过速。那些镁含量低的人通常钾含量也低。

低镁血症的诊断通常基于发现低血镁水平。正常的镁水平可在约0.6mmol/L至约1.1mmol/L(约1.5mg/dL至约2.7mg/dL)之间波动，其中低于约0.6mmol/L(约1.5mg/dL)的水平通常定义为低镁血症。反义寡聚物缀合物(诸如PPMO)对接受PPMO疗法的患者(包括DMD患者)的镁水平的影响尚不清楚。

因此，尽管在临床前模型中使用与细胞穿透肽缀合的反义寡聚物取得了成功，但是仍然需要一种用于用此类缀合物治疗人类患者的DMD和BMD的安全和有效的剂量范例。

发明内容

在一些方面，本公开涉及一种治疗有需要的患有杜氏肌营养不良(DMD)的患者的方法，所述患者具有适合于外显子跳跃的突变，所述方法包括向患者施用式(I)的反义寡聚物缀合物：

或其药学上可接受的盐，

其中：

n是1-40；

每个Nu是核碱基，其合在一起形成与肌营养不良蛋白前体mRNA中的外显子退火位点互补的靶向序列；

T是选自以下的部分：

其中

R¹⁰⁰是细胞穿透肽，R²⁰⁰是氢，并且R¹是C₁-C₆烷基，

并且其中所述缀合物以有效提供约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约240ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的缀合物或其药学上可接受的盐的平均曲线下面积(AUC)的剂量施用。

在一些方面，R¹⁰⁰是CPP，其中CPP通过CPP羧基末端处的酰胺键连接至寡聚物的3’端。在其他方面，R¹⁰⁰是取代基“Z”，其定义为CPP和接头的组合，所述接头在其羧基末端将CPP桥接至寡核苷酸的3’端。

在一些方面，本公开涉及一种治疗有需要的患有杜氏肌营养不良(DMD)的患者的方法，所述患者具有适合于外显子51跳跃的突变，所述方法包括向患者施用式(I)的反义寡聚物缀合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

n是1-40；

每个Nu是核碱基，其合在一起形成与肌营养不良蛋白前体mRNA中的外显子退火位点互补的靶向序列；

T是选自以下的部分：

其中

R¹⁰⁰是细胞穿透肽，R²⁰⁰是氢，并且R¹是C₁-C₆烷基，

其中所述缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg至约1500mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次施用，以实现约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约240ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的平均AUC。

在一些方面，所述缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg至约1200mg、约300mg至约1000mg、约300mg至约750mg、约300mg至约500mg、约400mg至约1400mg、约400mg至约1100mg、约400mg至约900mg、约400mg至约600mg、约500mg至约1500mg、约500mg至约1300mg、约500mg至约1000mg、约500mg至约950mg、约500mg至约850mg、约500mg至约750mg、约500mg至约650mg、约600mg至约1400mg、约600mg至约1300mg、约600mg至约1200mg、约600mg至约1000或约600mg至约900mg的缀合物的.6HCl盐的剂量施用。在一些方面，所述缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。在一些方面，所述缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约120ug·h/mL与约240ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在某些方面，所述缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在某些方面，所述缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg或约900mg的缀合物的.6HCl盐的剂量施用。

在一些方面，所述缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约950mg、约1000mg、约1050mg、约1100mg、约1150mg、约1200mg、约1250mg、约1300mg、约1350mg、约1400mg、约1450mg或约1500mg的缀合物的.6HCl盐的剂量施用。

在一些方面，所述细胞穿透肽选自RXRRXRRXRRXR(SEQ ID NO:18)、RFFRFFRFFR(SEQ ID NO:19)、RXRRXRRXRRXRXB(SEQ ID NO:20)、RFFRFFRFFRG(SEQ ID NO:21)、RRRRRRG(SEQ ID NO:22)、RRRRRR(SEQ ID NO:23)、RRRRRG(SEQ ID NO:24)或RRRRR(SEQ ID NO:25)，其中R是精氨酸，X是6-氨基己酸，B是β-丙氨酸，F是苯丙氨酸，并且G是甘氨酸。

在其他方面，所述细胞穿透肽RRRRRRG(SEQ ID NO:22)、RRRRRR(SEQ ID NO:23)、RRRRRG(SEQ ID NO:24)或RRRRR(SEQ ID NO:25)，其中R是精氨酸并且G是甘氨酸。在一个方面，所述细胞穿透肽是RRRRRRG(SEQ ID NO:22)，其中R是精氨酸并且G是甘氨酸。

在一些方面，所述反义寡聚物缀合物的反义寡聚物具有n+2个碱基对，其中式(I)中的n是1至40，任选地13-38，任选地13-28，任选地13-23或任选地13-18。换句话说，所述寡聚物的长度为15-40个、15-35个、15-30个、15-25个或15-20个核苷酸。

在一些方面，所述反义寡聚物缀合物引起人肌营养不良蛋白基因中外显子的跳跃。在一些方面，所述外显子选自外显子44、45、50、51、52或53。在某些方面，所述外显子选自外显子45、51或53。

在某些方面，本公开提供一种治疗有需要的患有DMD的患者的方法，所述患者具有适合于外显子跳跃的突变，所述方法包括向患者施用式(III)的反义寡聚物缀合物：

或其药学上可接受的盐，

其中每个Nu是核碱基，其合在一起形成与肌营养不良蛋白前体mRNA中的外显子退火位点互补的靶向序列。

在一些实施方案中，本公开提供一种治疗有需要的患有DMD的患者的方法，所述患者具有适合于外显子51跳跃的突变，所述方法包括向患者施用具有式(IV)的反义寡聚物缀合物：

或其药学上可接受的盐。

在其他方面，反义寡聚物缀合物具有式(IVA)：

在一些方面，反义寡聚物缀合物具有式(IVB)：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，式(IVB)的反义寡聚物缀合物是其HCl(盐酸)盐。在某些实施方案中，HCl盐是.6HCl盐。

又在其他实施方案中，本公开提供一种治疗有需要的患有DMD的患者的方法，所述患者具有适合于外显子45跳跃的突变，所述方法包括向患者施用具有式(VI)的反义寡聚物缀合物：

或其药学上可接受的盐。

在一些方面，反义寡聚物缀合物具有式(VIA)：

在一些方面，反义寡聚物缀合物是根据式(VIB)：

或其药学上可接受的盐。

在一些方面，式(VIB)的反义寡聚物缀合物是其HCl(盐酸)盐。在某些实施方案中，HCl盐是.6HCl盐。

在一些方面，本公开提供一种治疗有需要的患有DMD的患者的方法，所述患者具有适合于外显子53跳跃的突变，所述方法包括向患者施用具有式(VIII)的反义寡聚物缀合物：

或其药学上可接受的盐。

在其他方面，反义寡聚物缀合物具有式(VIIIA)：

在其他方面，反义寡聚物缀合物具有式(VIIIB)：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，式(VIIIB)的反义寡聚物缀合物是其HCl(盐酸)盐。在某些实施方案中，HCl盐是.6HCl盐。

在一些方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg至约700mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约10kg至约25kg的患者施用。

在一些方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约600mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约10kg至约25kg的患者施用。

在其他方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约900mg至约1200mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约10kg至约25kg的患者施用。

在一个方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1100mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约10kg至约25kg的患者施用。

在其他方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约750mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重大于或等于约18kg至小于约50kg的患者施用。

在其他方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1250mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重大于或等于约18kg至小于约50kg的患者施用。

在一些方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约600mg至约800mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约25kg至约50kg的患者施用。

在一个方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约650mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约25kg至约50kg的患者施用。

在其他方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1000mg的缀合物的.6HCl盐至约1300mg的剂量每四周一次向体重介于约25kg至约50kg的患者施用。

在一个方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1200mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约25kg至约50kg的患者施用。

在其他方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约600mg至约900mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约50kg至约100kg的患者施用。

在另一方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约700mg至约900mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约50kg至约100kg的患者施用。

在一个方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约750mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约50kg至约100kg的患者施用。

在其他方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1200mg至约1600mg缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约50kg至约100kg的患者施用。

在一个方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1400mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约50kg至约100kg的患者施用。

在其他方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约850mg的缀合物的·6HCl盐的剂量每四周一次向体重大于或等于约50kg的患者施用。

在其他方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1350mg的缀合物的·6HCl盐的剂量每四周一次向体重大于或等于约50kg的患者施用。

在其他方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约600mg至约900mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约65kg至约150kg的患者施用。

在另一方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约700mg至约900mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约65kg至约150kg的患者施用。

在一个方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约750mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约65kg至约150kg的患者施用。

在其他方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1200mg至约1600mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约65kg至约150kg的患者施用。

在一个方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1400mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约65kg至约150kg的患者施用。

本公开还提供一种治疗有需要的患有杜氏肌营养不良(DMD)的患者的方法，所述患者具有适合于外显子51跳跃的突变，所述方法包括向患者施用式(I)的反义寡聚物缀合物：

或其药学上可接受的盐，

其中：

n是1-40；

每个Nu是核碱基，其合在一起形成与肌营养不良蛋白前体mRNA中的外显子退火位点互补的靶向序列；

T是选自以下的部分：

其中

R¹⁰⁰是细胞穿透肽，R²⁰⁰是氢，并且R¹是C₁-C₆烷基，

剂量相当于根据下列方案的所述缀合物的.6HCl盐的剂量：

i)对于体重介于约10kg至约25kg的患者，约300mg至约700mg，或约900mg至约1200mg，每四周一次；

ii)对于体重介于约25kg至约50kg的患者，约600mg至约800mg，或约1000mg至约1300mg，每四周一次；或

iii)对于体重介于约50kg至约100kg的患者，约700mg至约900mg，或约1200mg至约1500mg，每四周一次；

以分别实现约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的平均AUC。

在一些实施方案中，所述缀合物根据以下方案以相当于缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用：

iv)对于体重介于约10kg至约25kg的患者，约300mg至约700mg，或约900mg至约1200mg，每四周一次；

v)对于体重介于约25kg至约50kg的患者，约500mg至约800mg，或约1000mg至约1300mg，每四周一次；或

vi)对于体重介于约50kg至约100kg的患者，约700mg至约900mg，或约1200mg至约1500mg，每四周一次；

以分别实现约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的平均AUC。

在一些方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约600mg或约1100mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约10kg至约25kg的患者施用。

在一些方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约750mg或约1250mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约18kg至约50kg的患者施用。

在一些方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约650mg或约1200mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约25kg至约50kg的患者施用。

在一些方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约750mg或约1400mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约50kg至约100kg的患者施用。

在一些方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约850mg或约1350mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向体重大于或等于50kg的患者施用。

在一个方面，本公开提供一种治疗有此需要的患者的方法，其包括向患者施用反义寡聚物缀合物，并且还包括向患者施用镁补充剂。

在一个特定方面，本公开还提供一种治疗有需要的患有杜氏肌营养不良(DMD)的患者的方法，所述患者具有适合于外显子跳跃的突变，所述方法包括向患者施用如本文所述的式(I)的反义寡聚物缀合物，并且还包括向患者施用镁补充剂。

本公开还提供一种用反义寡聚物缀合物治疗患有杜氏肌营养不良(DMD)的患者的方法，其包括向患者施用：

i)式(I)的反义寡聚物缀合物：

或其药学上可接受的盐，

其中：

n是1-40；

每个Nu是核碱基，其合在一起形成与肌营养不良蛋白前体mRNA中的外显子退火位点互补的靶向序列；

T是选自以下的部分：

其中

R¹⁰⁰是细胞穿透肽，R²⁰⁰是氢，并且R¹是C₁-C₆烷基；和

ii)镁补充剂。

在一些方面，所述缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg至约1200mg、约300mg至约1000mg、约300mg至约750mg、约300mg至约500mg、约400mg至约1400mg、约400mg至约1100mg、约400mg至约900mg、约400mg至约600mg、约500mg至约1500mg、约500mg至约1300mg、约500mg至约1000mg、约500mg至约950mg、约500mg至约850mg、约500mg至约750mg、约500mg至约650mg、约600mg至约1400mg、约600mg至约1200mg、约600mg至约1200mg、约600mg至约1000或约600mg至约900mg的缀合物的.6HCl盐的剂量施用。

在一些方面，所述缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg或约900mg的缀合物的.6HCl盐的剂量施用。

在一些方面，所述缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约950mg、约1000mg、约1050mg、约1100mg、约1150mg、约1200mg、约1250mg、约1300mg、约1350mg、约1400mg、约1450mg或约1500mg的缀合物的.6HCl盐的剂量施用。

在某些方面，所述细胞穿透肽选自RXRRXRRXRRXR(SEQ ID NO:18)、RFFRFFRFFR(SEQ ID NO:19)、RXRRXRRXRRXRXB(SEQ ID NO:20)、RFFRFFRFFRG(SEQ ID NO:21)、RRRRRRG(SEQ ID NO:22)、RRRRRR(SEQ ID NO:23)、RRRRRG(SEQ ID NO:24)或RRRRR(SEQ ID NO:25)，其中R是精氨酸，X是6-氨基己酸，B是β-丙氨酸，F是苯丙氨酸，并且G是甘氨酸。在某些其他方面，所述细胞穿透肽RRRRRRG(SEQ ID NO:22)、RRRRRR(SEQ ID NO:23)、RRRRRG(SEQID NO:24)或RRRRR(SEQ ID NO:25)，其中R是精氨酸并且G是甘氨酸。在一个特定方面，所述细胞穿透肽是RRRRRRG(SEQ ID NO:22)，其中R是精氨酸并且G是甘氨酸。

在一些方面，所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐引起人肌营养不良蛋白基因中外显子的跳跃。在一些方面，所述外显子选自外显子44、45、50、51、52或53。在某些方面，所述外显子选自外显子45、51或53。

在一些方面，所述镁补充剂以有效提供正常血清镁水平的量施用。在某些方面，所述镁补充剂以相当于每天约100mg至约2400mg氧化镁的剂量施用。在其他方面，所述镁补充剂以相当于每天约400mg至约2400mg氧化镁的剂量施用。

在一些方面，本公开的方法还包括在所述施用后两周或更多周测量所述患者的血清镁水平。在一些另外的方面，本公开的方法包括以基于所测量的血清镁水平的剂量施用第二剂量的镁补充剂。

在一些方面，所述镁补充剂选自氧化镁、柠檬酸镁、碳酸镁、磷酸氢镁、甘油磷酸镁、三硅酸镁、氢氧化镁、碳酸氢氧化镁、乙酸镁、柠檬酸镁、乳酸镁、葡萄糖酸镁、氯化镁、天冬氨酸镁、辛酸镁、抗坏血酸镁、牛磺酸镁、苹果酸镁和二甘氨酸镁、吡酮酸镁或硫酸镁。在一个方面，所述镁补充剂来自氧化镁。

附图说明

图1显示在两项为期12周的非人类灵长类动物(NHP)研究中动物初始体重的差异。

图2描绘施用PPMO-1后NHP的血浆暴露与体重的关系。

图3描绘施用PPMO-1后NHP的曲线下面积(AUC)和血浆峰值浓度(C_max)与体重的关系。较高的体重与较高的AUC和C_max相关。

图4是描绘人DMD患者中20mg/kg和30mg/kg的PPMO-1的血浆峰值浓度(C_max)的图。

图5描绘施用20mg/kg PPMO-1(下图)或30mg/kg PPMO-1(上图)的DMD患者的血浆峰值浓度(C_max)与体重之间的相关性。

具体实施方式

本公开涉及通过施用反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐来治疗肌营养不良(例如DMD和BMD)的新型给药方法，其被特别设计用于诱导人肌营养不良蛋白基因中的外显子跳跃。

本公开还提供治疗有效的给药方案，其将与施用反义寡聚物缀合物相关的不希望的副作用降至最低。具体而言，本公开提供用于降低正在用施用反义寡聚物缀合物治疗的患者的低镁血症的频率和严重程度的方法。

定义

“约”是指与参考数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度相差多达30、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1％的数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度。

除非另有说明，否则本文所用的术语“烷基”是指饱和的直链或支链烃。在某些实施方案中，烷基是伯烃、仲烃或叔烃。在某些实施方案中，烷基包括一个至十个碳原子，即C₁至C₁₀烷基。在某些实施方案中，烷基包括一个至六个碳原子，即C₁至C₆烷基。在某些实施方案中，烷基选自由以下组成的组：甲基、CF₃、CCl₃、CFCl₂、CF₂Cl、乙基、CH₂CF₃、CF₂CF₃、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、己基、异己基、3-甲基戊基、2,2-二甲基丁基和2,3-二甲基丁基。所述术语包括取代和未取代的烷基，包括卤代烷基。在某些实施方案中，烷基是氟化烷基。可以对烷基进行取代的部分的非限制性实例选自由以下组成的组：卤素(氟、氯、溴或碘)、羟基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫酸酯基、膦酸、磷酸酯或膦酸酯，这些部分未受保护或必要时受保护，如所属领域技术人员所熟知，例如，如Greene等人,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley and Sons,第二版,1991中所教示，特此以引用的方式并入。

如本文关于受试者或患者所用的“适合于外显子跳跃”旨在包括在肌营养不良蛋白基因中具有一个或多个突变的受试者和患者，所述突变不存在肌营养不良蛋白前体mRNA的特定外显子的跳跃，引起阅读框移码，从而破坏了前体mRNA的翻译，导致受试者或患者无法产生功能性或半功能性肌营养不良蛋白。确定患者是否在肌营养不良蛋白基因中具有适合于外显子跳跃的突变完全在所属领域技术人员的能力范围内(Aartsma-Rus等人(2009)Hum Mutat.30:293-299；Gurvich等人,Hum Mutat.2009；30(4)633-640和Fletcher等人(2010)Molecular Therapy 18(6)1218-1223.)。

术语“寡聚物”和“寡核苷酸”可互换使用，并且指通过亚基间键连接的亚基序列。在某些情况下，术语“寡聚物”用于指“反义寡聚物”。对于“反义寡聚物”，每个亚基由以下组成：(i)核糖或其衍生物；和(ii)与其结合的核碱基，使得碱基配对部分的顺序通过Watson-Crick碱基配对形成与核酸(通常是RNA)中的靶序列互补的碱基序列，以在靶序列内形成核酸:寡聚物异源双链体，条件是亚基、亚基间键或两者都不是天然存在的。在某些实施方案中，反义寡聚物是PMO。

术语“互补”和“互补性”是指通过Watson-Crick碱基配对规则彼此相关的两个或更多个寡聚物(即，每个包含核碱基序列)。举例来说，核碱基序列“T-G-A(5’→3’)”与核碱基序列“A-C-T(3’→5’)”互补。互补性可以是“部分的”，其中根据碱基配对规则，给定核碱基序列的不到全部核碱基与另一核碱基序列匹配。举例来说，在一些实施方案中，给定核碱基序列与其他核碱基序列之间的互补性可以是约70％、约75％、约80％、约85％、约90％或约95％。或者，给定核碱基序列和其他核碱基序列之间可能存在“完全”或“完美”(100％)互补性，以继续实例。核碱基序列之间的互补程度对序列之间杂交的效率和强度有显著影响。

术语“有效量”和“治疗有效量”在本文中可互换使用，并指作为单剂量或作为一系列剂量的一部分施用于哺乳动物受试者的治疗性化合物(诸如反义寡聚物缀合物)的量，其可有效地产生期望的治疗效果。对于反义寡聚物缀合物，这种效果通常是通过抑制所选靶序列的翻译或天然剪接加工，或产生临床上有意义量的肌营养不良蛋白(统计显著性)而带来的。

“增强(enhance/enhancing)”或“增加(increase/increasing)”或“刺激(stimulate/stimulating)”一般是指与由没有反义寡聚物缀合物或对照化合物引起的反应相比，一种或多种反义寡聚物缀合物或医药组合物在细胞或受试者中产生或引起更大的生理反应(即下游效应)的能力。更大的生理反应可包括增加肌营养不良蛋白的功能形式的表达，或增加肌肉组织中肌营养不良蛋白相关的生物活性，以及根据所属领域的理解和本文的描述显而易见的其他反应。还可以测量肌肉功能的增加，包括肌肉功能增加或改善约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。还可以测量表达功能性肌营养不良蛋白的肌纤维的百分比，包括约1％、2％、5％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％的肌纤维中增加的肌营养不良蛋白表达。例如，已经表明，如果25-30％的纤维表达肌营养不良蛋白，则大约40％的肌肉功能改善可以发生(参见例如DelloRusso等人,Proc Natl Acad Sci USA 99:12979-12984,2002)。“增加”或“增强”的量通常是“统计学上显著”的量，并且可以包括增加1.1、1.2、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50或更多倍(例如，500、1000倍，包括介于1与大于1的所有整数和小数点，例如，1.5、1.6、1.7、1.8等)，由没有无反义寡聚物缀合物(不存在药剂)或对照化合物产生的量。

如本文所用，术语“功能”和“功能性”等是指生物、酶或治疗功能。

“功能性”肌营养不良蛋白一般是指具有足够生物活性的肌营养不良蛋白，以减少肌肉组织的进行性降解，这原本是肌营养不良的特征，通常与存在于某些患有DMD或BMD的受试者中的改变的或“缺陷”形式的肌营养不良蛋白相比。在某些实施方案中，功能性肌营养不良蛋白可以具有野生型肌营养不良蛋白的体内生物活性的约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％(包括介于两者之间的所有整数)，根据本领域中的常规技术测量。包括肌营养不良蛋白的截短形式，例如在施用本公开的某些外显子跳跃反义寡聚物缀合物之后产生的那些形式。

术语“错配”或“不匹配”是指寡聚物核碱基序列中的一个或多个核碱基(无论是连续的还是分开的)根据碱基配对规则与靶前体mRNA不匹配。虽然通常需要完美的互补性，但一些实施方案可以包括一个或多个但优选为6、5、4、3、2或1个相对于靶前体mRNA的错配。在寡聚物内任何位置的变异都包括在内。在某些实施方案中，本公开的反义寡聚物缀合物包括内部末端变化附近的核碱基序列的变化，并且如果存在，通常在5'和/或3'末端的约6、5、4、3、2或1个亚基内。

术语“吗啉代”、“吗啉代寡聚物”和“PMO”是指具有以下通用结构的磷酰二胺吗啉代寡聚物：

并且如Summerton,J.等人,Antisense&Nucleic Acid Drug Development,7:187-195(1997)的图2中所描述。本文所描述的吗啉代包括前述通用结构的所有立体异构体和互变异构体。吗啉代寡聚物的合成、结构和结合特征详述于美国专利号：5,698,685、5,217,866、5,142,047、5,034,506、5,166,315、5,521,063、5,506,337、8,076,476和8,299,206；所有这些专利都以引用的方式并入本文中。

在一些方面，吗啉代寡聚物(PMO)在寡聚物的5'或3'端与“尾部”部分缀合以增加其稳定性和/或溶解性。示例性尾部包括：

在上文示例性尾部部分中，“TEG”或“EG3”是指以下尾部部分：

在上文示例性尾部部分中，“GT”是指以下尾部部分：

有用的吗啉代寡聚物更详细描述于下文。

术语“反义寡聚物CPP缀合物”、“反义寡聚物缀合物”和“PPMO”是指其中PMO已经与细胞穿透肽缀合的缀合物。下文将更全面地描述CPP。

如下表所示，本文使用的CPP的非限制性实例包括-(RXR)₄-R^a、-R-(FFR)₃-R^a、-B-X-(RXR)₄-R^a、-B-X-R-(FFR)₃-R^a、-GLY-R-(FFR)₃-R^a、-GLY-R₅-R^a和–R₅-R^a、-GLY-R₆-R^a和–R₆-R^a，其中R^a选自H、酰基、乙酰基、苯甲酰基和硬脂酰基，并且其中R是精氨酸，X是6-氨基己酸，B是β-丙氨酸，F是苯丙氨酸，并且GLY(或G)是甘氨酸。CPP“R₆”是指通过酰胺键连接在一起的六(6)个精氨酸残基的肽(而不是单个取代基，例如R⁶)。在一些实施方案中，R^a是H或酰基。在一些实施方案中，R^a是乙酰基。下表1中提供了示例性的CPP。

在一个方面，CPP选自下列序列中的一个：

CPP、它们的合成和与寡聚物缀合的方法进一步描述于美国专利号9,161,948和10,888,578、美国申请公开号2012/0289457和国际专利申请公开号WO 2004/097017、WO2009/005793和WO 2012/150960中，其公开内容以全文引用的方式并入本文。下文提供了更全面的CPP列表。

术语“核碱基”(Nu)、“碱基配对部分”或“碱基”可互换使用，指天然存在的或“天然”DNA或RNA(例如，尿嘧啶、胸腺嘧啶、腺嘌呤、胞嘧啶和鸟嘌呤)中发现的嘌呤或嘧啶碱基，以及这些天然存在的嘌呤和嘧啶的类似物。这些类似物可赋予寡聚物改进的特性，例如结合亲和力。示例性的类似物包括次黄嘌呤(肌苷的基础成分)；2,6-二氨基嘌呤；5-甲基胞嘧啶；C5-丙炔基修饰的嘧啶；10-(9-(氨基乙氧基)苯噁嗪基)(G-钳)等。

碱基配对部分的其他实例包括但不限于尿嘧啶、胸腺嘧啶、腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤和次黄嘌呤(肌苷)(其各自的氨基由酰基保护基团保护)、2-氟尿嘧啶、2-氟胞嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、2,6-二氨基嘌呤、氮杂胞嘧啶、嘧啶类似物，例如假异胞嘧啶和假尿嘧啶以及其他修饰的核碱基，例如8-取代的嘌呤、黄嘌呤或次黄嘌呤(后两者为天然降解产物)。还考虑了以下所公开的修饰的核碱基：Chiu和Rana,RNA,2003,9,1034-1048；Limbach等人Nucleic Acids Research,1994,22,2183-2196和Revankar和Rao,ComprehensiveNatural Products Chemistry,第7卷,313；其内容以引用的方式并入本文中。

碱基配对部分的其他实例包括但不限于其中已添加一个或多个苯环的大小扩大的核碱基。核酸碱基替代物描述于：the Glen Research catalog(www.glenresearch.com)；Krueger AT等人,Acc.Chem.Res.,2007,40,141-150；Kool,ET,Acc.Chem.Res.,2002,35,936-943；Benner S.A.等人,Nat.Rev.Genet.,2005,6,553-543；Romesberg,F.E.等人,Curr.Opin.Chem.Biol.,2003,7,723-733和Hirao,I.,Curr.Opin.Chem.Biol.,2006,10,622-627；其内容以引用的方式并入本文中，考虑可用于本文所描述的反义寡聚物缀合物中。大小扩大的核碱基的实例包括以下所示的核碱基和其互变异构形式。

术语“暴露”是指剂量(PPMO输入体内)和血浆和其他生物液体中急性或综合PPMO浓度的各种量度(例如，Cmax、Cmin、Css、AUC)。术语“反应”是指对药物的药理作用的直接测量。反应包括广泛的终点或生物标志物，从潜在或公认的替代物(例如，对血压、镁水平或心输出量的影响)到与疗效和安全性相关的全部短期或长期临床影响。

本文所用的短语“肠胃外施用(parenteral administration/administeredparenterally)”是指除肠内和局部施用以外的施用方式，通常通过注射，并且包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内和胸骨内注射和输注。

为了清楚起见，本公开的结构从5’到3’是连续的，并且为了方便以紧凑的形式描述整个结构，已经包括标记为“断点A”、“断点B”和“断点C”的各种说明断点。如熟练的技术人员所理解的那样，例如，“断点A”的每个指示显示了在这些点处的结构的图示的接续。本领域技术人员理解，对于上述结构中的“断点B”和“断点C”的每个实例也是如此。然而，这些图示断点均无意于表明，熟练的技术人员也不会将其理解为意味着上述结构的实际中断。

如本文所用，在结构式中使用的一组括号表示括号之间的结构特征是重复的。在一些实施方案中，使用的括号可以是“[”和“]”，在某些实施方案中，用于表示重复的结构特征的括号可以是“(”和“)”。在一些实施方案中，括号之间的结构特征的重复迭代次数为括号外指示的次数，如2、3、4、5、6、7等。在各种实施方案中，括号之间的结构特征的重复迭代次数由括号外指示的变量(例如“n”)指示。

如本文所用，在结构式内绘制到手性碳或磷原子的直键或波状键表示手性碳或磷的立体化学是未定义的，旨在包括手性中心的所有形式。下面描绘了这类图示的实例。

低镁血症的治疗

本说明书提供降低DMD患者的低镁血症的严重程度和频率的方法。DMD患者的低镁血症的发生率一般不高于健康人。出乎意料地，本发明人已经观察到用反义寡聚物CPP缀合物(例如，PPMO)治疗的患者，较高的暴露(AUC值)与低镁血症(镁缺乏症)的严重程度和频率相关。因此，本文所述的方法可以降低与在人类患者中施用反义寡聚物CPP缀合物(例如，PPMO)相关的异常镁水平相关的毒性。

在一些方面，本公开提供通过向正在用反义寡聚物CPP缀合物治疗的患者施用镁补充剂来治疗与向患者施用反义寡聚物CPP缀合物(例如，PPMO)以实现外显子跳跃相关的低镁血症的方法。在一些方面，患者是DMD患者。在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物是式(I)的反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐。在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物是式(IVB)的反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐。在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物是式(VIB)的反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐。在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物是式(VIIIB)的反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐。

在一些方面，本公开提供通过向正在用反义寡聚物CPP缀合物治疗的患者施用镁补充剂来预防与向患者施用反义寡聚物CPP缀合物(例如，PPMO)以实现外显子跳跃相关的低镁血症的方法。在一些方面，患者是DMD患者。在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物是式(I)的反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐。在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物是式(IVB)的反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐。在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物是式(VIB)的反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐。在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物是式(VIIIB)的反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐。

在一些方面，本公开提供通过向正在用反义寡聚物CPP缀合物治疗的患者施用镁补充剂来维持施用反义寡聚物缀合物(例如，PPMO)的患者的正常血清镁水平的方法。在一些方面，患者是DMD患者。在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物是式(I)的反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐。在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物是式(IVB)的反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐。在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物是式(VIB)的反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐。在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物是式(VIIIB)的反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐。

患者(例如，DMD患者)的低镁血症可通过体检、症状、病史和测试镁体内含量的实验室测试来诊断。一般来说，用于检测镁体内含量的方法包括检测患者血浆或血清中的血镁水平(其异常通常指示镁代谢紊乱，并且通常是一组进一步特定测试的起点)；检测尿液中的镁水平(这给出了通过尿液消除镁的量度，并且通常与蛋白质摄入相关，因为尿液中的镁/尿素比率相当恒定)；检测脊髓液中的镁水平；检测红细胞镁(其显示当红细胞生成发生时骨髓中含有的镁的量，并且因此允许关于镁的间接髓质探查)；检测淋巴细胞镁；用²⁵Mg进行核磁共振(这证明了镁的亚细胞分布和不同化学-物理结构的任何改变)；以及检测患者骨骼、肌肉或任何其他感兴趣的组织或器官中的镁含量。

根据CTCAE(不良事件通用术语标准)或镁减少水平定义低镁血症：

严重的低镁血症通常导致浓度<0.9mg/dL(<0.4mmol/L)。

本公开的一个方面包括通过向患者施用镁补充剂来治疗诊断为低镁血症的患者。在本文中，在含镁产品、镁补充剂、镁配制品和/或镁疗法的情形中，术语“镁”是指Mg⁺²离子，呈盐中的游离离子形式或呈络合物形式。

在某些方面，预防性地施用镁补充剂，而不首先检测低镁血症。本公开的一个方面包括用反义寡聚物CPP缀合物治疗患有杜氏肌营养不良(DMD)的患者，其包括向患者施用：(i)反义寡核苷酸CPP缀合物，其包括吗啉代磷酰二胺反义寡聚物，所述反义寡聚物(a)与人肌营养不良蛋白前体mRNA的外显子的一部分100％互补，和(b)长度为15个至50个核苷酸，其中所述反义寡核苷酸静脉内施用；和镁补充剂。在另一方面，寡聚物的长度为15-40个、15-35个、15-30个、15-25个或15-20个核苷酸。在一些方面，寡核苷酸的长度为30个、29个、28个、27个、26个、25个、24个、23个、22个、21个、20个、19个、18个、17个、16个或15个核苷酸。在一个方面，寡核苷酸的长度为30个核苷酸。在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物是式(I)的反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐。在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物是式(IVB)的反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐。在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物是式(VIB)的反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐。在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物是式(VIIIB)的反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐。

在一些方面，向患者口服施用镁补充剂。用于口服施用的含镁产品包括例如氧化镁、柠檬酸镁、碳酸镁、磷酸氢镁、甘油磷酸镁、三硅酸镁、氢氧化镁、碳酸氢氧化镁、乙酸镁、柠檬酸镁、乳酸镁、葡萄糖酸镁、氯化镁、天冬氨酸镁、辛酸镁、抗坏血酸镁、牛磺酸镁、苹果酸镁和二甘氨酸镁、吡酮酸镁或硫酸镁。在一些方面，镁补充剂是氧化镁。

在一些方面，向患者静脉施用镁补充剂。静脉内施用的镁包括例如硫酸镁。

像许多含金属的络合物一样，不同的镁化合物在体内具有不同的摄取机制。此外，在施用(包括摄入)时，过渡金属络合物可能会在体内经历影响生物利用度和最终的治疗效果的许多反应。举例来说，柠檬酸镁可溶于胃液中，并且因此易于在上部胃肠道被动吸收。乙酸镁、抗坏血酸镁和乳酸镁可溶于胃液中，并且共享柠檬酸镁的上部胃肠道被动吸收潜力。抗坏血酸根作为维生素C的来源，当暴露于胃液中的盐酸时转化为抗坏血酸，而镁离子转化为可溶性氯化镁。乙酸镁、抗坏血酸镁、柠檬酸镁和乳酸镁的令人满意的水溶性提供镁在发生一些镁的被动吸收的上部小肠中的扩散梯度。氧化镁在胃中转化为氯化镁，并且提供高离子镁含量的优势，因为60重量％的氧化镁分子是元素镁。二甘氨酸镁代表镁的一种形式，其通过二肽转运途径在近端小肠中作为完整的二肽被部分吸收，并且因此提供镁的第三种吸收机制。

本公开考虑了镁量的各种剂量。除非另有明确规定，否则本文所指的剂量是指相当于氧化镁量的量。剂量可以范围介于约5mg至约1000mg或更多。在一些方面，剂量可以范围介于约5mg至约900mg、约850mg、约800mg、约750mg、约700mg、约650mg、约600mg、约550mg、约500mg、约450mg、约400mg、约350mg、约300mg、约250mg、约200mg、约150mg、约100mg或至约50mg。在一些方面，剂量可以范围介于约15mg至约900mg、约850mg、约800mg、约750mg、约700mg、约650mg、约600mg、约550mg、约500mg、约450mg、约400mg、约350mg、约300mg、约250mg、约200mg、约150mg、约100mg或至约50mg。在一些方面，剂量可以范围介于约30mg至约900mg、约850mg、约800mg、约750mg、约700mg、约650mg、约600mg、约550mg、约500mg、约450mg、约400mg、约350mg、约300mg、约250mg、约200mg、约150mg、约100mg或至约50mg。在一些方面，剂量可以范围介于约60mg至约900mg、约850mg、约800mg、约750mg、约700mg、约650mg、约600mg、约550mg、约500mg、约450mg、约400mg、约350mg、约300mg、约250mg、约200mg、约150mg、约100mg或至约50mg。在一些方面，剂量可以范围介于约100mg至约900mg、约850mg、约800mg、约750mg、约700mg、约650mg、约600mg、约550mg、约500mg、约450mg、约400mg、约350mg、约300mg、约250mg或约200mg。在一些方面，剂量可以范围介于约200mg至约900mg、约850mg、约800mg、约750mg、约700mg、约650mg、约600mg克、约550mg、约500mg、约450mg、约400mg、约350mg、约300mg至约250mg。在一些方面，剂量可以范围介于约300mg至约900mg、约850mg、约800mg、约750mg、约700mg、约650mg、约600mg、约550mg、约500mg、约450mg、约400mg或至约350mg。在一些方面，剂量可以范围介于约400mg至约900mg、约850mg、约800mg、约750mg、约700mg、约650mg、约600mg、约550mg、约500mg或至约450mg。

镁补充剂的具体剂量包括约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、约100mg、约105mg、约110mg、约115mg、约120mg、约125mg、约130mg、约135mg、约140mg、约145mg、约150mg、约155mg、约160mg、约165mg、约170mg、约175mg、约180mg、约185mg、约190mg、约200mg、约205mg、约210mg、约215mg、约220mg、约225mg、约230mg、约235mg 240mg、约245mg、约250mg、约255mg、约260mg、约265mg、约270mg、约275mg、约280mg、约285mg、约290mg、约295mg、约300mg、约305mg、约310mg、约315mg、约320mg、约325mg、约330mg、约335mg、约340mg、约345mg、约350mg、约355mg、约360mg、约365mg、约370mg、约375mg、约380mg、约385mg、约390mg、约395mg、约400mg、约405mg、约410mg、约415mg、约420mg、约425mg、约430mg、约435mg、约440mg、约445mg、约450mg、约455mg、约460mg、约465mg、约470mg、约475mg、约480mg、约485mg、约490mg、约495mg、约500mg、约505mg、约510mg、约515mg、约520mg、约525mg、约530mg、约535mg、约540mg、约545mg、约550mg、约555mg、约560mg、约565mg、约570mg、约575mg、约580mg、约585mg、约590mg、约595mg、约600mg、约605mg、约610mg、约615mg、约620mg、约625mg、约630mg、约635mg、约640mg、约645mg、约650mg、约655mg、660mg、约665mg、约670mg、约675mg、约680mg、约685mg、约690mg、约695mg、约700mg、约705mg、约710mg、约715mg、约720mg、约725mg、约730mg、约735mg、约740mg、约745mg、约750mg、约755mg、约760mg、约765mg、770mg、约780mg、约785mg、约790mg、约795mg、约800mg、约805mg、约810mg、约815mg、约820mg、约825mg、约830mg、约835mg、约840mg、约845mg、850mg、约855mg、约860mg、约865mg、880mg、约885mg、约890mg、约895mg、约900、约905mg、约910mg、约915mg、约920mg、约925mg、约930mg、约935mg、约940mg、约945mg、950mg、约955mg、960mg、约965mg、约970mg、约975mg、约980mg、约985mg、约990mg、约995mg或约1000mg。

在一些方面，本公开提供通过向正在用反义寡聚物CPP缀合物治疗的患者施用镁补充剂来治疗或预防与向患者施用式(IVB)的反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以实现外显子跳跃有关的低镁血症的方法，其中镁补充剂的剂量为约400mg至900mg。

在一些方面，本公开提供通过向正在用反义寡聚物CPP缀合物治疗的患者施用镁补充剂来治疗或预防与向患者施用式(VIB)的反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以实现外显子跳跃有关的低镁血症的方法，其中镁补充剂的剂量为约400mg至900mg。

在一些方面，本公开提供通过向正在用反义寡聚物CPP缀合物治疗的患者施用镁补充剂来治疗或预防与向患者施用式(VIIIB)的反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以实现外显子跳跃有关的低镁血症的方法，其中镁补充剂的剂量为约400mg至900mg。

在一方面，镁补充剂的剂量相当于约400mg氧化镁。在另一方面，镁补充剂的剂量相当于约800mg氧化镁。

也考虑了更高剂量的镁。例如，剂量可以范围介于约1000mg至约2400mg、约1000mg至约2000mg、约1000mg至约1500mg、约1050mg至约2400mg、约1050mg至约2000mg、约1050mg至约1500mg、1100mg至约2400mg、约1100mg至约2000mg、约1100mg至约1500mg\1200mg至约2400mg、约120mg至约2000mg、约12mg至约1500mg、1500mg至约2400mg或约1500mg至约2000mg。镁的具体剂量可以包括约1000mg、约1050mg、约1100mg、约1150mg、约1200mg、约1250mg、约1300mg、约1350mg、约1400mg、约1450mg、约1500mg、约1550mg、约1600mg、约1650mg、约1700mg、约1750mg、约1800mg、约1850mg、约1900mg、约1950mg、约2000mg、约2050mg、约2100mg、约2150mg、约2200mg、约2250mg、约2300mg、约2350mg或约2400mg。

较高的剂量可以用作短期方案(例如，少于约一个月)，并且可以逐渐减少至所述范围较低端的剂量。在许多这样的情况下，当逐渐减少剂量时，不低于每天约40mg至100mg镁是有利的。或者，镁的适当剂量可以基于任何受试者的病况，如由许多重要变量所评估。或者，剂量可以取决于施用模式。或者，镁的剂量可以随着反义寡聚物CPP缀合物的量而变化。适当的剂量可以取决于许多因素，并且可以由本领域技术人员容易地确定

在一些方面，每天一次施用镁补充剂。在其他方面，每天两次施用镁补充剂。在又其他方面，每天三次施用镁补充剂。本公开还考虑了由治疗医师决定的更频繁的每日镁补充剂施用。

镁补充剂和反义寡聚物CPP缀合物可以以任何顺序施用给个体。在一个方面，同时施用镁补充剂和反义寡聚物CPP缀合物。例如，可以在彼此相同的时间内施用镁补充剂和反义寡聚物CPP缀合物。在一些方面，还可以在彼此约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时内施用镁补充剂和反义寡聚物CPP缀合物。

在其他方面，反义寡聚物CPP缀合物可以每2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天或每1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周一次施用，而镁补充剂每天一次、两次、三次、四次或更多次施用。在其他方面，反义寡聚物CPP缀合物可以每1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月一次施用，而镁补充剂每天一次、两次、三次、四次或更多次施用。

镁补充也可以在用反义寡聚物CPP缀合物开始治疗方案之前开始。例如，患者可以在用反义寡聚物CPP缀合物进行第一次治疗前1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天或更多天开始镁补充。或者，镁补充也可以在用反义寡聚物CPP缀合物开始治疗方案之后开始。例如，患者可以在用反义寡聚物CPP缀合物进行第一次治疗后1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天或更多天开始镁补充。

在另一方面，这些镁补充剂方面中的任何一个都可以与下述PPMO剂量方面中的一个组合。

在用反义寡聚物CPP缀合物治疗期间，应定期测量患者的血清镁水平。在一些方面，在施用反义寡聚物CPP缀合物之前测量患者的血清镁水平。在一些方面，在施用缀合物之后两周或更长时间测量患者的血清镁水平。取决于患者在给定测量中的血清镁水平，镁补充剂的剂量可以上调或下调，以维持正常的血清镁水平。因此，本公开也考虑了以基于所测量的血清镁水平的剂量施用第二剂量的镁补充剂。

反义寡聚物CPP缀合物(PPMO)的施用

在涉及剪接转换寡聚物(SSO)治疗DMD的先前临床设置中(例如，PMO，例如依特立生、戈洛迪森)，使用了基于重量(mg/kg)的方法。现在意外地发现，肌营养不良蛋白的表达和安全性(低镁血症)与PPMO的暴露(剂量)有关。

已经发现，使用基于体重(mg/kg)的PPMO给药方法，较高的体重(BW)与较高的药物暴露相关，导致较轻患者用药不足的风险和较重患者用药过量的风险。因此，已经发现基于体重的给药方法在较轻患者中导致次优的肌营养不良蛋白表达，而较重患者中存在潜在的低镁血症。

本公开提供了新的给药方案，其被开发用于优化肌营养不良蛋白的表达并最小化人类患者的低镁血症问题。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供靶向平均AUC的剂量施用，以便最大化肌营养不良蛋白表达并最小化患者的低镁血症。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约100ug·h/mL与约190ug·h/mL之间、约100ug·h/mL与约180ug·h/mL之间、约100ug·h/mL与约170ug·h/mL之间、约100ug·h/mL与约160ug·h/mL之间、约100ug·h/mL与约150ug·h/mL之间、约100ug·h/mL与约140ug·h/mL之间、约100ug·h/mL与约130ug·h/mL之间、约100ug·h/mL与约120ug·h/mL之间或约100与约110ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约110ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约130ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约150ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约160ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约170ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约180ug·h/mL与约200ug·h/mL之间或约190ug·h/mL与约200ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约110ug·h/mL与约190ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约190ug·h/mL之间、约130ug·h/mL与约190ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约190ug·h/mL之间、约150ug·h/mL与约190ug·h/mL之间、约160ug·h/mL与约190ug·h/mL之间、约170ug·h/mL与约190ug·h/mL之间或约180ug·h/mL与约190ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约110ug·h/mL与约180ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约180ug·h/mL之间、约130ug·h/mL与约180ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约180ug·h/mL之间、约150ug·h/mL与约180ug·h/mL之间、约160ug·h/mL与约180ug·h/mL之间或约170ug·h/mL与约180ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约110ug·h/mL与约170ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约170ug·h/mL之间、约130ug·h/mL与约170ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约170ug·h/mL之间、约150ug·h/mL与约170ug·h/mL之间或约160ug·h/mL与约170ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约110ug·h/mL与约160ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约160ug·h/mL之间、约130ug·h/mL与约160ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约160ug·h/mL之间或约150ug·h/mL与约160ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约110ug·h/mL与约150ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约150ug·h/mL之间、约130ug·h/mL与约150ug·h/mL之间或约140ug·h/mL与约150ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约120ug·h/mL与约240ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约230ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约220ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约210ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约190ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约180ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约170ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约160ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约150ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约140ug·h/mL之间或约120ug·h/mL与约130ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约130ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约130ug·h/mL与约190ug·h/mL之间、约130ug·h/mL与约180ug·h/mL之间、约130ug·h/mL与约170ug·h/mL之间、约130ug·h/mL与约160ug·h/mL之间、约130ug·h/mL与约150ug·h/mL之间或约130ug·h/mL与约140ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约140ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约190ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约180ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约170ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约160ug·h/mL之间或约140ug·h/mL与约150ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约150ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约150ug·h/mL与约190ug·h/mL之间、约150ug·h/mL与约180ug·h/mL之间、约150ug·h/mL与约170ug·h/mL之间或约150ug·h/mL与约160ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约160ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约160ug·h/mL与约190ug·h/mL之间、约160ug·h/mL与约180ug·h/mL之间或约160ug·h/mL与约170ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约170ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约170ug·h/mL与约190ug·h/mL之间或约170ug·h/mL与约180ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约130ug·h/mL与约240ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约240ug·h/mL之间、约150ug·h/mL与约240ug·h/mL之间、约160ug·h/mL与约240ug·h/mL之间、约170ug·h/mL与约240ug·h/mL之间、约180ug·h/mL与约240ug·h/mL之间、约190ug·h/mL与约240ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约240ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约240ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约240ug·h/mL之间或约230ug·h/mL与约240ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约130ug·h/mL与约230ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约230ug·h/mL之间、约150ug·h/mL与约230ug·h/mL之间、约160ug·h/mL与约230ug·h/mL之间、约170ug·h/mL与约230ug·h/mL之间、约180ug·h/mL与约230ug·h/mL之间、约190ug·h/mL与约230ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约230ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约230ug·h/mL之间或约220ug·h/mL与约230ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约130ug·h/mL与约220ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约220ug·h/mL之间、约150ug·h/mL与约220ug·h/mL之间、约160ug·h/mL与约220ug·h/mL之间、约170ug·h/mL与约220ug·h/mL之间、约180ug·h/mL与约220ug·h/mL之间或约190ug·h/mL与约220ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约220ug·h/mL之间或约210ug·h/mL与约220ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约130ug·h/mL与约210ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约210ug·h/mL之间、约150ug·h/mL与约210ug·h/mL之间、约160ug·h/mL与约210ug·h/mL之间、约170ug·h/mL与约210ug·h/mL之间、约180ug·h/mL与约210ug·h/mL之间、约190ug·h/mL与约210ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约210ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约130ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约150ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约160ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约170ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约180ug·h/mL与约200ug·h/mL之间或约190ug·h/mL与约200ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约130ug·h/mL与约190ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约190ug·h/mL之间、约150ug·h/mL与约190ug·h/mL之间或约160ug·h/mL与约190ug·h/mL之间、约170ug·h/mL与约190ug·h/mL之间或约180ug·h/mL与约190ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约130ug·h/mL与约180ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约180ug·h/mL之间、约150ug·h/mL与约180ug·h/mL之间、约160ug·h/mL与约180ug·h/mL之间或约170ug·h/mL与约180ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约130ug·h/mL与约170ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约170ug·h/mL之间、约150ug·h/mL与约170ug·h/mL之间或约160ug·h/mL与约170ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约130ug·h/mL与约160ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约160ug·h/mL之间或约150ug·h/mL与约160ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约130ug·h/mL与约150ug·h/mL之间或约140ug·h/mL与约150ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约140ug·h/mL与约240ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约230ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约220ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约210ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约190ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约180ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约170ug·h/mL之间、约140ug·h/mL与约160ug·h/mL之间或约140ug·h/mL与约150ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约150ug·h/mL与约240ug·h/mL之间、约150ug·h/mL与约230ug·h/mL之间、约150ug·h/mL与约220ug·h/mL之间、约150ug·h/mL与约210ug·h/mL之间、约150ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约150ug·h/mL与约190ug·h/mL之间、约150ug·h/mL与约180ug·h/mL之间、约150ug·h/mL与约170ug·h/mL之间或约150ug·h/mL与约160ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约160ug·h/mL与约240ug·h/mL之间、约160ug·h/mL与约230ug·h/mL之间、约160ug·h/mL与约220ug·h/mL之间、约160ug·h/mL与约210ug·h/mL之间、约160ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约160ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约160ug·h/mL与约180ug·h/mL之间或约160ug·h/mL与约170ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约170ug·h/mL与约240ug·h/mL之间、约170ug·h/mL与约230ug·h/mL之间、约170ug·h/mL与约220ug·h/mL之间、约170ug·h/mL与约210ug·h/mL之间、约170ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约170ug·h/mL与约190ug·h/mL之间或约170ug·h/mL与约180ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约180ug·h/mL与约240ug·h/mL之间、约180ug·h/mL与约230ug·h/mL之间、约180ug·h/mL与约220ug·h/mL之间或约180ug·h/mL与约210ug·h/mL之间、约180ug·h/mL与约200ug·h/mL之间或约180ug·h/mL与约190ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约190ug·h/mL与约240ug·h/mL之间、约190ug·h/mL与约230ug·h/mL之间、约190ug·h/mL与约220ug·h/mL之间、约190ug·h/mL与约210ug·h/mL之间或约190ug·h/mL与约200ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约200ug·h/mL与约240ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约230ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约220ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约210ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约210ug·h/mL与约240ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约230ug·h/mL之间或约210ug·h/mL与约220ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约490ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约480ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约470ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约460ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约450ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约440ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约430ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约420ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约410ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约400ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约390ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约380ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约370ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约360ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约350ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约340ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约330ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约320ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约310ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约300ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约290ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约280ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约270ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约260ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约250ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约240ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约230ug·h/mL之间、约200ug·h/mL与约220ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约210ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约210ug·h/mL与约500ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约490ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约480ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约470ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约460ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约450ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约440ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约430ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约420ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约410ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约400ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约390ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约380ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约370ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约360ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约350ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约340ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约330ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约320ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约310ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约300ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约290ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约280ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约270ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约260ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约250ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约240ug·h/mL之间、约210ug·h/mL与约230ug·h/mL之间或约210ug·h/mL与约220ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约220ug·h/mL与约500ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约490ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约480ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约470ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约460ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约450ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约440ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约430ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约420ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约410ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约400ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约390ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约380ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约370ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约360ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约350ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约340ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约330ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约320ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约310ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约300ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约290ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约280ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约270ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约260ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约250ug·h/mL之间、约220ug·h/mL与约240ug·h/mL之间或约220ug·h/mL与约230ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约230ug·h/mL与约500ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约490ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约480ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约470ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约460ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约450ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约440ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约430ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约420ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约410ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约400ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约390ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约380ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约370ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约360ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约350ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约340ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约330ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约320ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约310ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约300ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约290ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约280ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约270ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约260ug·h/mL之间、约230ug·h/mL与约250ug·h/mL之间或约230ug·h/mL与约240ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约240ug·h/mL与约500ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约490ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约480ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约470ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约460ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约450ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约440ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约430ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约420ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约410ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约400ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约390ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约380ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约370ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约360ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约350ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约340ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约330ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约320ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约310ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约300ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约290ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约280ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约270ug·h/mL之间、约240ug·h/mL与约260ug·h/mL之间或约240ug·h/mL与约250ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约300ug·h/mL与约500ug·h/mL之间、约300ug·h/mL与约490ug·h/mL之间、约300ug·h/mL与约480ug·h/mL之间、约300ug·h/mL与约470ug·h/mL之间、约300ug·h/mL与约460ug·h/mL之间、约300ug·h/mL与约450ug·h/mL之间、约300ug·h/mL与约440ug·h/mL之间、约300ug·h/mL与约430ug·h/mL之间、约300ug·h/mL与约420ug·h/mL之间、约300ug·h/mL与约410ug·h/mL之间、约300ug·h/mL与约400ug·h/mL之间、约300ug·h/mL与约390ug·h/mL之间、约300ug·h/mL与约380ug·h/mL之间、约300ug·h/mL与约370ug·h/mL之间、约300ug·h/mL与约360ug·h/mL之间、约300ug·h/mL与约350ug·h/mL之间、约300ug·h/mL与约340ug·h/mL之间、约300ug·h/mL与约330ug·h/mL之间、约300ug·h/mL与约320ug·h/mL之间或约300ug·h/mL与约310ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约325ug·h/mL与约500ug·h/mL之间、约325ug·h/mL与约490ug·h/mL之间、约325ug·h/mL与约480ug·h/mL之间、约325ug·h/mL与约470ug·h/mL之间、约325ug·h/mL与约460ug·h/mL之间、约325ug·h/mL与约450ug·h/mL之间、约325ug·h/mL与约440ug·h/mL之间、约325ug·h/mL与约430ug·h/mL之间、约325ug·h/mL与约420ug·h/mL之间、约325ug·h/mL与约410ug·h/mL之间、约325ug·h/mL与约400ug·h/mL之间、约325ug·h/mL与约390ug·h/mL之间、约325ug·h/mL与约380ug·h/mL之间、约325ug·h/mL与约370ug·h/mL之间、约325ug·h/mL与约360ug·h/mL之间、约325ug·h/mL与约350ug·h/mL之间、约325ug·h/mL与约340ug·h/mL之间或约325ug·h/mL与约330ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约330ug·h/mL与约500ug·h/mL之间、约330ug·h/mL与约490ug·h/mL之间、约330ug·h/mL与约480ug·h/mL之间、约330ug·h/mL与约470ug·h/mL之间、约330ug·h/mL与约460ug·h/mL之间、约330ug·h/mL与约450ug·h/mL之间、约330ug·h/mL与约440ug·h/mL之间、约330ug·h/mL与约430ug·h/mL之间、约330ug·h/mL与约420ug·h/mL之间、约330ug·h/mL与约410ug·h/mL之间、约330ug·h/mL与约400ug·h/mL之间、约330ug·h/mL与约390ug·h/mL之间、约330ug·h/mL与约380ug·h/mL之间、约330ug·h/mL与约370ug·h/mL之间、约330ug·h/mL与约360ug·h/mL之间、约330ug·h/mL与约350ug·h/mL之间或约330ug·h/mL与约340ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约335ug·h/mL与约500ug·h/mL之间、约335ug·h/mL与约490ug·h/mL之间、约335ug·h/mL与约480ug·h/mL之间、约335ug·h/mL与约470ug·h/mL之间、约335ug·h/mL与约460ug·h/mL之间、约335ug·h/mL与约450ug·h/mL之间、约335ug·h/mL与约440ug·h/mL之间、约335ug·h/mL与约430ug·h/mL之间、约335ug·h/mL与约420ug·h/mL之间、约335ug·h/mL与约410ug·h/mL之间、约335ug·h/mL与约400ug·h/mL之间、约335ug·h/mL与约390ug·h/mL之间、约335ug·h/mL与约380ug·h/mL之间、约335ug·h/mL与约370ug·h/mL之间、约335ug·h/mL与约360ug·h/mL之间、约335ug·h/mL与约350ug·h/mL之间或约335ug·h/mL与约340ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约340ug·h/mL与约500ug·h/mL之间、约340ug·h/mL与约490ug·h/mL之间、约340ug·h/mL与约480ug·h/mL之间、约340ug·h/mL与约470ug·h/mL之间、约340ug·h/mL与约460ug·h/mL之间、约340ug·h/mL与约450ug·h/mL之间、约340ug·h/mL与约440ug·h/mL之间、约340ug·h/mL与约430ug·h/mL之间、约340ug·h/mL与约420ug·h/mL之间、约340ug·h/mL与约410ug·h/mL之间、约340ug·h/mL与约400ug·h/mL之间、约340ug·h/mL与约390ug·h/mL之间、约340ug·h/mL与约380ug·h/mL之间、约340ug·h/mL与约370ug·h/mL之间、约340ug·h/mL与约360ug·h/mL之间或约340ug·h/mL与约350ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约100ug·h/mL、约110ug·h/mL、约120ug·h/mL、约130ug·h/mL、约140ug·h/mL、约150ug·h/mL、约160ug·h/mL、约170ug·h/mL、约171ug·h/mL、约175ug·h/mL、约178ug·h/mL、约180ug·h/mL、约190ug·h/mL、约200ug·h/mL、约210ug·h/mL、约220ug·h/mL、约230ug·h/mL、约240ug·h/mL、约250ug·h/mL、约260ug·h/mL、约270ug·h/mL、约280ug·h/mL、约290ug·h/mL、约296ug·h/mL、约298ug·h/mL、约300ug·h/mL、约310ug·h/mL、约320ug·h/mL、约330ug·h/mL、约340ug·h/mL、约350ug·h/mL、约360ug·h/mL、约370ug·h/mL、约380ug·h/mL、约390ug·h/mL、约400ug·h/mL、约410ug·h/mL、约420ug·h/mL、约430ug·h/mL、约450ug·h/mL、约460ug·h/mL、约470ug·h/mL、约480ug·h/mL、约490ug·h/mL或约500ug·h/mL的平均AUC的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供缀合物或其药学上可接受的盐的靶向平均C_max的剂量施用，以便最大化肌营养不良蛋白的表达并最小化患者的低镁血症。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约70ug/ml与约150ug/ml之间、约70ug/ml与约140ug/ml之间、约70ug/ml与约130ug/ml之间、约70ug/ml与约120ug/ml之间、约70ug/ml与约110ug/ml之间、约70ug/ml与约100ug/ml之间、约70ug/ml与约90ug/ml之间或约70ug/ml与约80ug/ml之间的缀合物或其药学上可接受的盐的平均C_max的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约75ug/ml与约150ug/ml之间、约75ug/ml与约140ug/ml之间、约75ug/ml与约130ug/ml之间、约75ug/ml与约120ug/ml之间、约75ug/ml与约110ug/ml之间、约75ug/ml与约100ug/ml之间、约75ug/ml与约90ug/ml之间或约75ug/ml与约80ug/ml之间的缀合物或其药学上可接受的盐的平均C_max的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约80ug/ml与约150ug/ml之间、约80ug/ml与约140ug/ml之间、约80ug/ml与约130ug/ml之间、约80ug/ml与约120ug/ml之间、约80ug/ml与约110ug/ml之间、约80ug/ml与约100ug/ml之间或约80ug/ml与约90ug/ml之间的缀合物或其药学上可接受的盐的平均C_max的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约85ug/ml与约150ug/ml之间、约85ug/ml与约140ug/ml之间、约85ug/ml与约130ug/ml之间、约85ug/ml与约120ug/ml之间、约85ug/ml与约110ug/ml之间、约85ug/ml与约100ug/ml之间或约85ug/ml与约90ug/ml之间的缀合物或其药学上可接受的盐的平均C_max的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约90ug/ml与约150ug/ml之间、约90ug/ml与约140ug/ml之间、约90ug/ml与约130ug/ml之间、约90ug/ml与约120ug/ml之间、约90ug/ml与约110ug/ml之间或约90ug/ml与约100ug/ml之间的缀合物或其药学上可接受的盐的平均C_max的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约95ug/ml与约150ug/ml之间、约95ug/ml与约140ug/ml之间、约95ug/ml与约130ug/ml之间、约95ug/ml与约120ug/ml之间、约95ug/ml与约110ug/ml之间或约95ug/ml与约100ug/ml之间的缀合物或其药学上可接受的盐的平均C_max的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约100ug/ml与约150ug/ml之间、约100ug/ml与约140ug/ml之间、约100ug/ml与约130ug/ml之间、约100ug/ml与约120ug/ml之间或约100ug/ml与约110ug/ml之间的缀合物或其药学上可接受的盐的平均C_max的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约130ug/ml与约250ug/ml之间、约140ug/ml与约250ug/ml之间、约150ug/ml与约250ug/ml之间、约160ug/ml与约250ug/ml之间、约170ug/ml与约250ug/ml之间、约180ug/ml与约250ug/ml之间、约190ug/ml与约250ug/ml之间、约200ug/ml与约250ug/ml之间、约210ug/ml与约250ug/ml之间、约220ug/ml与约250ug/ml之间、约230ug/ml与约250ug/ml之间或约240ug/ml与约250ug/ml之间的缀合物或其药学上可接受的盐的平均C_max的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约130ug/ml与约200ug/ml之间、约140ug/ml与约200ug/ml之间、约150ug/ml与约200ug/ml之间、约160ug/ml与约200ug/ml之间、约170ug/ml与约200ug/ml之间、约180ug/ml与约200ug/ml之间或约190ug/ml与约200ug/ml之间的缀合物或其药学上可接受的盐的平均C_max的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约130ug/ml与约190ug/ml之间、约140ug/ml与约190ug/ml之间、约150ug/ml与约190ug/ml之间、约160ug/ml与约190ug/ml之间、约170ug/ml与约190ug/ml之间或约180ug/ml与约190ug/ml之间的缀合物或其药学上可接受的盐的平均C_max的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约130ug/ml与约180ug/ml之间、约140ug/ml与约180ug/ml之间、约150ug/ml与约180ug/ml之间、约160ug/ml与约180ug/ml之间或约170ug/ml与约180ug/ml之间的缀合物或其药学上可接受的盐的平均C_max的剂量施用。在一些方面，反义寡聚物CPP缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约130ug/ml与约170ug/ml之间、约140ug/ml与约170ug/ml之间、约150ug/ml与约170ug/ml之间或约160ug/ml与约170ug/ml之间的缀合物或其药学上可接受的盐的平均C_max的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约80ug/ml、约85ug/ml、约90ug/ml、约95ug/ml、约100ug/ml、约105ug/ml、约110ug/ml、约115ug/ml、约120ug/ml、约125ug/ml、约130ug/ml、约135ug/ml、约140ug/ml、约145ug/ml、约150ug/ml、约155ug/ml、约160ug/ml、约165ug/ml、约170ug/ml、约175ug/ml、约180ug/ml、约185ug/ml、约190ug/ml、约195ug/ml、约200ug/ml、约205ug/ml、约210ug/ml、约215ug/ml、约220ug/ml、约225ug/ml、约230ug/ml、约235ug/ml、约240ug/ml、约245ug/ml或约250ug/ml的缀合物或其药学上可接受的盐的平均C_max的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以约300mg至约900mg、约300mg至约850mg、约300mg至约800mg、约300mg至约850mg、约300mg至约800mg、约300mg至约750mg、约300mg至约700mg、约300mg至约650mg、约300mg至约600mg、约300mg至约550mg、约300mg至约500mg、约300mg至约450mg、约300mg至约400mg或约300mg的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg至约900mg、约300mg至约850mg、约300mg至约800mg、约300mg至约850mg、约300mg至约800mg、约300mg至约750mg、约300mg至约700mg、约300mg至约650mg、约300mg至约600mg、约300mg至约550mg、约300mg至约500mg、约300mg至约450mg、约300mg至约400mg或约300mg至约350mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约350mg至约900mg、约400mg至约900mg、约500mg至约900mg、约550mg至约900mg、约600mg至约800mg、约650mg至约900mg、约700mg至约900mg、约750mg至约900mg、约800mg至约900mg或约850mg至约900mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约350mg至约850mg、约400mg至约850mg、约500mg至约850mg、约550mg至约850mg、约600mg至约800mg、约650mg至约850mg、约700mg至约850mg、约750mg至约850mg或约800mg至约850mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约350mg至约800mg、约400mg至约800mg、约500mg至约800mg、约550mg至约800mg、约600mg至约800mg、约650mg至约800mg、约700mg至约800mg或约750mg至约800mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约350mg至约750mg、约400mg至约750mg、约500mg至约750mg、约550mg至约750mg、约600mg至约750mg、约650mg至约750mg或约700mg至约750mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约350mg至约700mg、约400mg至约700mg、约500mg至约700mg、约550mg至约700mg、约600mg至约700mg或约650mg至约700mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约400mg至约900mg、约400mg至约850mg、约400mg至约800mg、约400mg至约750mg、约400mg至约700mg、约400mg至约650mg、约400mg至约600mg、约400mg至约550mg、约400mg至约500mg或约400mg至约450mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约950mg至约1500mg、约900mg至约1500mg、约850mg至约1500mg或约800mg至约1500mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约950mg至约1450mg、约900mg至约1450mg、约850mg至约1450mg或约800mg至约1450mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约950mg至约1400mg、约900mg至约1400mg、约850mg至约1400mg或约800mg至约1400mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约950mg至约1350mg、约900mg至约1350mg、约850mg至约1350mg或约800mg至约1350mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约950mg至约1300mg、约900mg至约1300mg、约850mg至约1300mg或约800mg至约1300mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约950mg至约1250mg、约900mg至约1250mg、约850mg至约1250mg或约800mg至约1250mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约950mg至约1200mg、约900mg至约1200mg、约850mg至约1200mg、约800mg至约1200mg、约900mg至约1100mg、约900mg至约1000mg、约800mg至约1100mg、约800mg至约1000mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1000mg至约1500mg、约1000mg至约1450mg、约1000mg至约1400mg、约1000mg至约1350mg、约1000mg至约1300mg、约1000mg至约1250mg、约1000mg至约1200mg、约1000mg至约1150mg或约1000mg至约1100mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg或约900mg的缀合物的.6HCl盐的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约950mg、约1000mg、约1050mg、约1100mg、约1150mg、约1200mg、约1250mg、约1300mg、约1350mg、约1400mg、约1450mg或约1500mg的缀合物的.6HCl盐的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐根据患者体重施用。本公开考虑了以下重量带：约5kg至约25kg、约10kg至约25kg、约15kg至约25kg、约20kg至约25kg、约18kg至约50kg、约25kg至约50kg、约30kg至约50kg、约35kg至约50kg、约40kg至约50kg、约50kg至约100kg、约55kg至约100kg、约60kg至约100kg、约65kg至约100kg、约70kg至约100kg、约75kg至约100kg、约80kg至约100kg、约85kg至约100kg、约90kg至约100kg、约50kg至约90kg、约55kg至约90kg、约60kg至约90kg、约65kg至约90kg、约70kg至约90kg、约75kg至约90kg、约80kg至约90kg或至约85kg至约90kg。

本公开还考虑了以下重量带：大于或等于5kg至小于25kg、大于或等于10kg至小于25kg、大于或等于15kg至小于25kg、大于或等于20kg至小于25kg、大于或等于18kg至小于50kg、大于或等于25kg至小于50kg、大于或等于30kg至小于50kg、大于或等于35kg至小于50kg、大于或等于40kg至小于50kg、大于或等于50kg、大于或等于50kg至小于100kg、大于或等于55kg至小于100kg、大于或等于60kg至小于100kg、大于或等于65kg至小于100kg、大于或等于70kg至小于100kg、大于或等于75kg至小于100kg、大于或等于80kg至小于100kg、大于或等于85kg至小于100kg、大于或等于90kg至小于100kg、大于或等于50kg至小于90kg、大于或等于55kg至小于90kg、大于或等于60kg至小于90kg、大于或等于65kg至小于90kg、大于或等于70kg至小于90kg、大于或等于75kg至小于90kg、大于或等于80kg至小于90kg或大于或等于85kg至小于90kg。

本公开还考虑了以下重量带：约5kg至约20kg、约10kg至约20kg、约15kg至约20kg、约25kg至约40kg、约30kg至约40kg、约35kg至约40kg、约18kg至约50kg、约50kg至约90kg、约55kg至约90kg、约60kg至约90kg、约65kg至约90kg、约70kg至约90kg、约75kg至约90kg、约80kg至约90kg或至约85kg至约90kg。

本公开还考虑了以下重量带：大于或等于5kg至小于20kg、大于或等于10kg至小于20kg、大于或等于15kg至小于20kg、大于或等于25kg至小于40kg、大于或等于30kg至小于40kg、大于或等于35kg至小于40kg、大于或等于50kg至小于90kg、大于或等于55kg至小于90kg、大于或等于60kg至小于90kg、大于或等于65kg至小于90kg、大于或等于70kg至小于90kg、大于或等于75kg至小于90kg、大于或等于80kg至小于90kg或大于或等于85kg至小于90kg。

本公开还考虑了以下重量带：5kg至约15kg、约10kg至约15kg、约25kg至约30kg、约30kg至约35kg、约30kg至约45kg、约50kg至约85kg、约55kg至约85kg、约60kg至约85kg、约65kg至约85kg、约70kg至约85kg、约75kg至约85kg、约50kg至约75kg、约55kg至约75kg、约60kg至约75kg、约65kg至约75kg、约70kg至约75kg或约80kg至约85kg。

本公开还考虑了以下重量带：大于或等于5kg至小于15kg、大于或等于10kg至小于15kg、大于或等于25kg至小于30kg、大于或等于30kg至小于35kg、大于或等于30kg至小于45kg、大于或等于50kg至小于85kg、大于或等于55kg至小于85kg、大于或等于60kg至小于85kg、大于或等于65kg至小于85kg、大于或等于70kg至小于85kg、大于或等于75kg至小于85kg、大于或等于50kg至小于75kg、大于或等于55kg至小于75kg、大于或等于60kg至小于75kg、大于或等于65kg至小于75kg、大于或等于70kg至小于75kg或大于或等于80kg至小于85kg。

本公开还考虑了以下重量带：约10kg至约50kg、约10kg至约45kg、约10kg至约40kg、约10kg至约35kg、约15kg至约50kg、约15kg至约45kg、约15kg至约40kg、约15kg至约35kg、约20kg至约50kg、约20kg至约45kg、约20kg至约40kg、约20kg至约35kg、约25kg至约50kg、约25kg至约45kg、约25kg至约40kg或至约25kg至约35kg。

本公开还考虑了以下重量带：大于或等于10kg至小于50kg、大于或等于10kg至小于45kg、大于或等于10kg至小于40kg、大于或等于10kg至小于35kg、大于或等于15kg至小于50kg、大于或等于15kg至小于45kg、大于或等于15kg至小于40kg、大于或等于15kg至小于35kg、大于或等于20kg至小于50kg、大于或等于20kg至小于45kg、大于或等于20kg至小于40kg、大于或等于20kg至小于35kg、大于或等于25kg至小于50kg、大于或等于25kg至小于45kg、大于或等于25kg至小于40kg或大于或等于25kg至小于35kg。

本公开还考虑了以下重量带：约20kg至约110kg、约30kg至约110kg、约40kg至约110kg、约50kg至约110kg、约60kg至约110kg、约20kg至约100kg、约30kg至约100kg、约40kg至约100kg、约50kg至约100kg、约60kg至约100kg、约20kg至约90kg、约30kg至约90kg、约40kg至约90kg、约50kg至约90kg或至约60kg至约90kg。

本公开还考虑了以下重量带：大于或等于20kg至小于110kg、大于或等于30kg至小于110kg、大于或等于40kg至小于110kg、大于或等于50kg至小于110kg、大于或等于60kg至小于110kg、大于或等于20kg至小于100kg、大于或等于30kg至小于100kg、大于或等于40kg至小于100kg、大于或等于50kg至小于100kg、大于或等于60kg至小于100kg、大于或等于20kg至小于90kg、大于或等于30kg至小于90kg、大于或等于40kg至小于90kg、大于或等于50kg至小于90kg或大于或等于60kg至小于90kg。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐根据重量带以有效实现特定重量带内患者的平均AUC为在约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间的剂量施用。在其他方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐根据重量带以有效实现特定重量带内患者的平均AUC在约120ug·h/mL与约240ug·h/mL之间的剂量施用。在其他方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐根据重量带以有效实现特定重量带内患者的平均AUC在约200ug·h/mL与约500ug h/mL之间的剂量施用。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐根据以下方案以相当于缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用：

vii)对于体重介于约10kg至约25kg的患者，约300mg至约700mg，或约900mg至约1200mg，每四周一次；

viii)对于体重介于约25kg至约50kg的患者，约600mg至约800mg，或约1000mg至约1300mg，每四周一次；或

ix)对于体重介于约50kg至约100kg的患者，约700mg至约900mg，或约1200mg至约1500mg，每四周一次；

以实现约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的平均AUC。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐按照以下方案以相当于缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用：

x)对于体重介于约15kg至约40kg的患者，约500mg至约700mg，或约1000mg至约1200mg，每四周一次；或

xi)对于体重介于约40kg至约100kg的患者，约600mg至约800mg，或约1100mg至约1400mg，每四周一次；

以实现约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的平均AUC。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐按照以下方案以相当于缀合物的·6HCl盐的剂量的剂量施用：

xii)对于体重大于或等于约18kg至小于约50kg的患者，约750mg至约1250mg，每四周一次；或

xiii)对于体重大于或等于约50kg的患者，约850mg至约1350mg，每四周一次；

以实现约120ug·h/mL与约240ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的平均AUC。

在一些方面，将反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg至约750mg、约350mg至约750mg、约400mg至约750mg、约450mg至约750mg、约400mg至约750mg、约450mg至约750mg、约500mg至约750mg、约550mg至约750mg、约600mg至约750mg、约650mg至约750mg、300mg至约700mg、约350mg至约700mg、约400mg至约700mg、约450mg至约700mg、约400mg至约700mg、约450mg至约700mg、约500mg至约700mg、约550mg至约700mg、约600mg至约700mg、约650mg至约700mg、约300mg至约650mg、约350mg至约650mg、约400mg至约650mg、约450mg至约650mg、约500mg至约650mg、约550mg至约650mg或约600mg至约650mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用给体重介于约5kg至约25kg、约10kg至约25kg、约15kg至约25kg、约20kg至约25kg、5kg至约20kg、约10kg至约20kg或约15kg至约20kg的患者。

在一些方面，将反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约600mg至约800mg、约650mg至约800mg、约700mg至约800mg、约750mg至约800mg、约600mg至约750mg、约650mg至约750mg、约700mg至约750mg、600mg至约700mg或约650mg至约700mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用给体重介于约25kg至约50kg、约30kg至约50kg、约35kg至约50kg、约40kg至约50kg、约25kg至约40kg、约30kg至约40kg、约35kg至约40kg、约25kg至约30kg、约30kg至约45kg、约35kg至约45kg、约40kg至约45kg、约30kg至约35kg、约35kg至约45kg、约25kg至约45kg、约25kg至约35kg或约35kg至约45kg的患者。

在一些方面，将反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约750mg至约1250mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用给体重大于或等于约18kg至小于约50kg的患者。在一些方面，将反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约850mg至约1350mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用给体重大于约50kg的患者。

在一些方面，将反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约700mg至约900mg、约750mg至约900mg、约800mg至约900mg或约850mg至约900mg、约700mg至约850mg、约750mg至约850mg或约800mg至约850mg、约700mg至约750mg、约750mg至约800mg、约750mg至约900mg或约800mg至约900mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用给体重介于约50kg至约100kg、约55kg至约100kg、约60kg至约100kg、约65kg至约100kg、约70kg至约100kg、约75kg至约100kg、约80kg至约100kg、约85kg至约100kg或约90kg至约100kg、约50kg至约90kg、约55kg至约90kg、约60kg至约90kg、约65kg至约90kg、约70kg至约90kg、约75kg至约90kg、约80kg至约90kg或约85kg至约90kg的患者。

在一些方面，将反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约900mg至约1200mg、约850mg至约1200mg、约800mg至约1200mg、约900mg至约1100mg、约900mg至约1000mg、约800mg至约1100mg或约800mg至约1000mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用给体重介于约5kg至约25kg、约10kg至约25kg、约15kg至约25kg、约20kg至约25kg、5kg至约20kg、约10kg至约20kg或约15kg至约20kg的患者。

在一些方面，将反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1000mg至约1300mg、约1000mg至约1250mg、约1000mg至约1200mg、约1000mg至约1150mg、约1050mg至约1100mg、约1050mg至约1300mg、约1050mg至约1250mg、约1050mg至约1200mg、约1050mg至约1150mg、约1050mg至约1100mg、约1050mg至约1250、约1100mg至约1250、约1150mg至约1250、约1200mg至约1250或约1250mg至约1300mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用给体重介于约25kg至约50kg、约30kg至约50kg、约35kg至约50kg、约40kg至约50kg、约25kg至约40kg、约30kg至约40kg、约35kg至约40kg、约25kg至约30kg、约30kg至约45kg、约35kg至约45kg、约40kg至约45kg、约30kg至约35kg、约35kg至约45kg、约25kg至约45kg、约25kg至约35kg或约35kg至约45kg的患者。

在一些方面，将反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1200mg至约1500mg、1000mg至约1500mg、约1000mg至约1450mg、约1000mg至约1400mg、约1000mg至约1350mg、约1000mg至约1300mg、约1000mg至约1250mg、约1200mg至约1450mg、约1200mg至约1400mg、约1200mg至约1350mg、约1200mg至约1300mg或约1200mg至约1250mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用给体重介于约50kg至约100kg、约55kg至约100kg、约60kg至约100kg、约65kg至约100kg、约70kg至约100kg、约75kg至约100kg、约80kg至约100kg、约85kg至约100kg或约90kg至约100kg、约50kg至约90kg、约55kg至约90kg、约60kg至约90kg、约65kg至约90kg、约70kg至约90kg、约75kg至约90kg、约80kg至约90kg或约85kg至约90kg的患者。

在一些方面，将反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约550mg、600mg、约650mg或约700mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用给体重介于约5kg至约25kg、约10kg至约25kg、约15kg至约25kg、约20kg至约25kg、5kg至约20kg、约10kg至约20kg或约15kg至约20kg的患者。

在一些方面，将反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1050mg、1100mg、1150mg或约1200mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用给体重介于约5kg至约25kg、约10kg至约25kg、约15kg至约25kg、约20kg至约25kg、5kg至约20kg、约10kg至约20kg或约15kg至约20kg的患者。

在一些方面，将反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约600mg、约650mg、约700mg或约700mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用给体重介于约25kg至约50kg、约30kg至约50kg、约35kg至约50kg、约40kg至约50kg、约25kg至约40kg、约30kg至约40kg、约35kg至约40kg、约25kg至约30kg、约30kg至约45kg、约35kg至约45kg、约40kg至约45kg、约30kg至约35kg、约35kg至约45kg、约25kg至约45kg、约25kg至约35kg或约35kg至约45kg的患者。

在一些方面，将反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1100mg、约1150mg、约1200mg、约1250mg或约1300mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用给体重介于约25kg至约50kg、约30kg至约50kg、约35kg至约50kg、约40kg至约50kg、约25kg至约40kg、约30kg至约40kg、约35kg至约40kg、约25kg至约30kg、约30kg至约45kg、约35kg至约45kg、约40kg至约45kg、约30kg至约35kg、约35kg至约45kg、约25kg至约45kg、约25kg至约35kg或约35kg至约45kg的患者。

在一些方面，将反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约700mg、约750mg、约800mg或约850mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用给体重介于约50kg至约100kg、约55kg至约100kg、约60kg至约100kg、约65kg至约100kg、约70kg至约100kg、约75kg至约100kg、约80kg至约100kg、约85kg至约100kg或约90kg至约100kg、约50kg至约90kg、约55kg至约90kg、约60kg至约90kg、约65kg至约90kg、约70kg至约90kg、约75kg至约90kg、约80kg至约90kg或约85kg至约90kg的患者。

在一些方面，将反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1300mg、约1350mg、约1400mg、约1450mg、约1500mg或约1550mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用给体重介于约50kg至约100kg、约55kg至约100kg、约60kg至约100kg、约65kg至约100kg、约70kg至约100kg、约75kg至约100kg、约80kg至约100kg、约85kg至约100kg或约90kg至约100kg、约50kg至约90kg、约55kg至约90kg、约60kg至约90kg、约65kg至约90kg、约70kg至约90kg、约75kg至约90kg、约80kg至约90kg或约85kg至约90kg的患者。

在一些方面，将反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约700mg、约750mg、约800mg、约850mg、约900mg、约950mg或约1100mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用给体重介于约80kg至约100kg、约85kg至约100kg、约90kg至约100kg、约95kg至约100kg、约80kg至约90kg、约75kg至约90kg、约75kg至约95kg、约75kg至约80kg或约80kg至约90kg的患者。

在一些方面，将反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1100mg、约1150mg、约1200mg、约1250mg、约1300mg、约1350mg或约1400mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用给体重介于约80kg至约100kg、约85kg至约100kg、约90kg至约100kg、约95kg至约100kg、约80kg至约90kg、约75kg至约90kg、约75kg至约95kg、约75kg至约80kg或约80kg至约90kg的患者。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约700mg、约750mg、约800mg、约850mg、约900mg、约950mg或约1000mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用给体重超过约45kg、约50kg、约55kg、约60kg或约65kg的患者。

在一些方面，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1100mg、约1150mg、约1200mg、约1250mg、约1300mg、约1350mg、约1400mg或约1450mg的缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用给体重超过约45kg、约50kg、约55kg、约60kg或约65kg的患者。

如果需要，反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐可作为两个、三个、四个、五个、六个或更多个子剂量在全天以适当的时间间隔单独施用，任选地，以单位剂型施用。在某些情形下，给药是每天施用一次。在某些实施方案中，根据需要，给药是每2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天，或每1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周，或每1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月一次或多次施用，以维持功能性肌营养不良蛋白的所需表达。在某些实施方案中，给药是每两周一次或多次施用。在一些实施方案中，给药是每两周一次施用。在各种实施方案中，给药是每月一次或多次施用。在某些实施方案中，给药是每月一次施用。

细胞穿透肽(CPP)

如上所述，细胞穿透肽(CPP)(例如，富含精氨酸的肽转运部分)在动物模型中已显示出能有效增强反义寡聚物穿透细胞并引起不同肌肉群中的外显子跳跃。

表1中提供了示例性的CPP。

表1.

aa＝甘氨酸或脯氨酸；B＝3-丙氨酸；X＝6-氨基己酸；tg.＝未经修饰的氨基末端，或用乙酰基、苯甲酰基或硬脂酰基基团(即乙酰酰胺、苯甲酰酰胺或硬脂酰胺)封端的氨基末端，并且和Y^b是：

NH-(CHR)-C(O)-，其中n是2至7，并且每个R在每次出现时独立地是氢或甲基。为了简单起见，并不是所有的序列都用末端tg基团标注；然而，上述序列中的每一个可以包含未经修饰的氨基末端或用乙酰基、苯甲酰基或

硬脂酰基封端的氨基末端。

在一些实施方案中，反义寡核苷酸包含取代基“Z”，其定义为CPP和接头的组合。接头将CPP在其羧基末端处桥接至寡核苷酸的3’端和/或5’端。在各种实施方案中，反义寡核苷酸可仅包含连接至寡聚物的3’端的一个CPP。在其他实施方案中，反义寡核苷酸可仅包含连接至寡聚物的5’端的一个CPP。

Z内的接头可包含例如1、2、3、4或5个氨基酸。例如，接头可以包含1个、2个、3个、4个或5个甘氨酸部分，其中CPP通过CPP羧基末端处的酰胺键连接至甘氨酸部分。在一个方面，接头包含一个甘氨酸部分。

在特定实施方案中，Z选自：

-C(O)(CH₂)₅NH-CPP；

-C(O)(CH₂)₂NH-CPP；

-C(O)(CH₂)₂NHC(O)(CH₂)₅NH-CPP；

-C(O)CH₂NH-CPP；和式：

其中CPP通过在CPP羧基末端处的酰胺键附接至接头部分。

在各种实施方案中，CPP是如上文所定义并且在表1中所见的富含精氨酸的肽。在某些实施方案中，富含精氨酸的CPP是-R₆-R^a(即，六个精氨酸残基)，其中R^a选自H、酰基、乙酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在某些实施方案中，R^a是乙酰基。

在某些实施方案中，Z是在寡聚物的5’和/或3’端共价键结至本公开的反义寡聚物的-C(O)CH₂NH-R₆-R^a，其中R^a是H、酰基、乙酰基、苯甲酰基或硬脂酰基，以封端R₆的氨基末端。在某些实施方案中，R^a是乙酰基。在这些非限制性的实例中，CPP是–R₆-R^a，并且接头是-C(O)CH₂NH-(即GLY)。Z＝-C(O)CH₂NH-R₆-R^a的特定实例也由以下结构例示：

其中R^a选自H、酰基、乙酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在一些实施方案中，R^a是H或酰基。在一些实施方案中，R^a是乙酰基。

在各种实施方案中，CPP是-R₆-R^a，也例示为下式：

其中R^a选自H、酰基、乙酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在某些实施方案中，CPP是SEQID NO:128.在一些实施方案中，R^a是H或酰基。在一些实施方案中，R^a是乙酰基。

在一些实施方案中，CPP是–(RXR)₄-R^a，也例示为下式：

在各种实施方案中，CPP是–R-(FFR)₃-R^a，也例示为下式：

在各种实施方案中，Z选自：

-C(O)(CH₂)₅NH-CPP；

-C(O)(CH₂)₂NH-CPP；

-C(O)(CH₂)₂NHC(O)(CH₂)₅NH-CPP；

-C(O)CH₂NH-CPP和式：

其中CPP通过在CPP羧基末端处的酰胺键附接至接头部分，并且其中CPP选自：

(-R-(FFR)₃-R^a)、

(-(RXR)₄-R^a)、

和(-R₆-R^a)。在一些实施方案中，R^a是H或酰基。在一些实施方案中，R^a是乙酰基。

在一些实施方案中，“-G-R₆”或“-G-R₆-Ac”与本公开的反义寡聚物的3’端缀合，并且具有下式：

反义寡聚物CPP缀合物

在各个方面，本公开提供了根据式(I)的反义寡聚物：

或其药学上可接受的盐，其中：

n是1-40；

每个Nu是核碱基，其合在一起形成靶向序列，

所述靶向序列与肌营养不良蛋白前体mRNA中的外显子退火位点互补；

T是选自以下的部分：

其中

R¹⁰⁰是细胞穿透肽，

R²⁰⁰是氢，并且

R¹是C₁-C₆烷基。

在各个方面，本公开的反义寡聚物缀合物是根据式(II)：

或其药学上可接受的盐，其中：

每个Nu是核碱基，其合在一起形成靶向序列；

T是选自以下的部分：

R¹是C₁-C₆烷基；

其中靶向序列与肌营养不良蛋白前体RNA中的退火位点互补。

在一些方面，组合物中的反义寡核苷酸缀合物包含与肌营养不良蛋白前体mRNA的外显子44、外显子45、外显子50、外显子51、外显子52或外显子53靶区域的15个至35个核碱基互补的序列。本领域已经描述了设计用于靶向和跳跃这些肌营养不良蛋白外显子的寡核苷酸序列。参见例如以下PCT公开的申请和授权的美国专利：WO2018/129384、WO2019/060775、WO2020/219820WO2018/007475、WO2018/091544、WO2020/089325、WO2004/048570、WO2020/028832、WO2017/062862、美国专利号10,683,322、美国专利号8,969,551、美国专利号10,781,448、美国专利号9,988,629、美国专利号9,840,706、美国专利号10,851,373、WO2020/004675和WO2020/0158792，其序列公开内容并入本文。

下面描述了许多示例性的靶向序列。这些序列可以作为吗啉代靶向序列提供并掺入式I的反义寡核苷酸缀合物中。

在一些方面，靶向序列与肌营养不良蛋白前体mRNA中的外显子51退火位点互补。在一些方面，位点被指定为H51A(+66+95)。在一些方面，靶向序列与肌营养不良蛋白前体mRNA中的外显子45退火位点互补。在一些方面，位点被指定为H45A(-03+19)。在一些方面，靶向序列与肌营养不良蛋白前体mRNA中的外显子53退火位点互补。在一些方面，位点被指定为H53A(+36+60)。

在各种实施方案中，T是

在各种实施方案中，R¹是甲基、CF₃、CCl₃、CFCl₂、CF₂Cl、乙基、CH₂CF₃、CF₂CF₃、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、己基、异己基、3-甲基戊基、2,2-二甲基丁基或2,3-二甲基丁基。

在一些实施方案中，式(I)的反义寡聚物缀合物是其HCl(盐酸)盐。在某些实施方案中，HCl盐是.6HCl盐。

在一些实施方案中，每个Nu独立地选自胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)、腺嘌呤(A)、5-甲基胞嘧啶(5mC)、尿嘧啶(U)和次黄嘌呤(I)。

在一些实施方案中，靶向序列是5’-CTCCAACATCAAGGAAGATGGCATTTCTAG-3’，其中每个胸腺嘧啶(T)任选地是尿嘧啶(U)(SEQ ID NO:31)。

在各种实施方案中，T是并且靶向序列是5’-CTCCAACATCAAGGAAGATGGCATTTCTAG-3’，其中每个胸腺嘧啶(T)任选地是尿嘧啶(U)(SEQ IDNO31)。

在各种实施方案中，T是并且靶向序列是5’-CTCCAACATCAAGGAAGATGGCATTTCTAG-3’(SEQ ID NO:32)。

在一些实施方案中，靶向序列是5’-CAATGCCATCCTGGAGTTCCTG-3’，其中每个胸腺嘧啶(T)任选地是尿嘧啶(U)(SEQ ID NO:28)。

在各种实施方案中，T是并且靶向序列是5’-CAATGCCATCCTGGAGTTCCTG-3’，其中每个胸腺嘧啶(T)任选地是尿嘧啶(U)(SEQ ID NO:28)。

在各种实施方案中，T是并且靶向序列是5’-CAATGCCATCCTGGAGTTCCTG-3’(SEQ ID NO:27)。

在一些实施方案中，靶向序列是5’-GTTGCCTCCGGTTCTGAAGGTGTTC-3’，其中每个胸腺嘧啶(T)任选地是尿嘧啶(U)(SEQ ID NO:30)。

在各种实施方案中，T是并且靶向序列是5’-GTTGCCTCCGGTTCTGAAGGTGTTC-3’，其中每个胸腺嘧啶(T)任选地是尿嘧啶(U)(SEQ ID NO:30)。

在各种实施方案中，T是并且靶向序列是5’-GTTGCCTCCGGTTCTGAAGGTGTTC-3’(SEQ ID NO:29)。

在包括例如式(I)的一些实施方案的一些实施方案中，本公开的反义寡聚物缀合物是根据式(III)：

或其药学上可接受的盐，其中：

每个Nu是核碱基，其合在一起形成与指定为H51A(+66+95)的肌营养不良蛋白前体mRNA中的外显子51退火位点互补的靶向序列。

在一些实施方案中，每个Nu独立地选自胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)、腺嘌呤(A)、5-甲基胞嘧啶(5mC)、尿嘧啶(U)和次黄嘌呤(I)。

在各种实施方案中，1至30和5’至3’的每个Nu为：

其中A是C是G是并且X是 在某些实施方案中，每个X独立地是

在一些实施方案中，式(III)的反义寡聚物缀合物是其HCl(盐酸)盐。在某些实施方案中，HCl盐是.6HCl盐。

在包括例如式(III)的一些实施例的一些实施方案中，本公开的反义寡聚物缀合物是根据式(IIIA)：

其中每个Nu是核碱基，其合在一起形成与指定为H51A(+66+95)的肌营养不良蛋白前体mRNA中的外显子51退火位点互补的靶向序列。

在一些实施方案中，每个Nu独立地选自胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)、腺嘌呤(A)、5-甲基胞嘧啶(5mC)、尿嘧啶(U)和次黄嘌呤(I)。

在各种实施方案中，1至30和5’至3’的每个Nu为：

其中A是C是G是并且X是 在某些实施方案中，每个X是

在包括例如式(III)和式(IIIA)的反义寡聚物缀合物的实施方案的一些实施方案中，靶向序列是5’-CTCCAACATCAAGGAAGATGGCATTTCTAG-3’，其中每个胸腺嘧啶(T)任选地是尿嘧啶(U)(SEQ ID NO:31)。在包括例如式(III)和式(IIIA)的反义寡聚物缀合物的实施方案的各种实施方案中，靶向序列是5’-CTCCAACATCAAGGAAGATGGCATTTCTAG-3’(SEQ ID NO:32)。

在包括例如式(I)的反义寡聚物缀合物的实施方案的一些实施方案中，本公开的反义寡聚物缀合物是根据式(IV)：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，式(IV)的反义寡聚物缀合物是其HCl(盐酸)盐。在某些实施方案中，HCl盐是.6HCl盐。

在包括例如式(IV)的反义寡聚物缀合物的实施方案的一些实施方案中，本公开的反义寡聚物缀合物是根据式(IVA)；

在包括式(I)的反义寡聚物缀合物的一些实施方案和式(IV)的反义寡聚物缀合物的实施方案的本公开的一些实施方案中，反义寡聚物缀合物是根据式(IVB)：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，式(IVB)的反义寡聚物缀合物是其HCl(盐酸)盐。在某些实施方案中，HCl盐是.6HCl盐。

在包括例如式(IVB)的反义寡聚物缀合物的实施方案的一些实施方案中，本公开的反义寡聚物缀合物是根据式(IVC)：

在包括例如式(I)的一些实施方案的一些实施方案中，本公开的反义寡聚物缀合物是根据式(V)：

或其药学上可接受的盐，其中：

每个Nu是核碱基，其合在一起形成与指定为H45A(-03+19)的肌营养不良蛋白前体mRNA中的外显子45退火位点互补的靶向序列。

在一些实施方案中，每个Nu独立地选自胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)、腺嘌呤(A)、5-甲基胞嘧啶(5mC)、尿嘧啶(U)和次黄嘌呤(I)。

在各种实施方案中，1至22和5’至3’的每个Nu为：

其中A是C是G是并且X是 在某些实施方案中，每个X独立地是

在一些实施方案中，式(V)的反义寡聚物缀合物是其HCl(盐酸)盐。在某些实施方案中，HCl盐是.6HCl盐。

在包括例如式(V)的一些实施方案的一些实施方案中，本公开的反义寡聚物缀合物是根据式(VA)：

其中每个Nu是核碱基，其合在一起形成与指定为H45A(-03+19)的肌营养不良蛋白前体mRNA中的外显子45退火位点互补的靶向序列。

在一些实施方案中，每个Nu独立地选自胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)、腺嘌呤(A)、5-甲基胞嘧啶(5mC)、尿嘧啶(U)和次黄嘌呤(I)。

在各种实施方案中，1至30和5’至3’的每个Nu为：

其中A是C是G是并且X是 在某些实施方案中，每个X是

在包括例如式(V)和式(VA)的反义寡聚物缀合物的实施方案的一些实施方案中，靶向序列是5’-CAATGCCATCCTGGAGTTCCTG-3’,其中每个胸腺嘧啶(T)任选地是尿嘧啶(U)(SEQ ID NO:28)。在包括例如式(V)和式(VA)的反义寡聚物缀合物的实施方案的各种实施方案中，靶向序列是5’-CAATGCCATCCTGGAGTTCCTG-3’(SEQ ID NO:27)。

在包括例如式(I)的反义寡聚物缀合物的实施方案的一些实施方案中，本公开的反义寡聚物缀合物根据是根据式(VI)：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，式(VI)的反义寡聚物缀合物是其HCl(盐酸)盐。在某些实施方案中，HCl盐是.6HCl盐。

在包括例如式(VI)的反义寡聚物缀合物的实施方案的一些实施方案中，本公开的反义寡聚物缀合物是根据式(VIA)：

在包括式(I)的反义寡聚物缀合物的一些实施方案和式(VI)的反义寡聚物缀合物的实施方案的本公开的一些实施方案中，反义寡聚物缀合物是根据式(VIB)：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，式(VIB)的反义寡聚物缀合物是其HCl(盐酸)盐。在某些实施方案中，HCl盐是.6HCl盐。

在包括例如式(VIB)的反义寡聚物缀合物的实施方案的一些实施方案中，本公开的反义寡聚物缀合物是根据式(VIC)：

在包括例如式(I)的一些实施方案的一些实施方案中，本公开的反义寡聚物缀合物是根据式(VII)：

或其药学上可接受的盐，其中：

每个Nu是核碱基，其合在一起形成与指定为H53A(+36+60)的肌营养不良蛋白前体mRNA中的外显子53退火位点互补的靶向序列。

在一些实施方案中，每个Nu独立地选自胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)、腺嘌呤(A)、5-甲基胞嘧啶(5mC)、尿嘧啶(U)和次黄嘌呤(I)。

在各种实施方案中，1至25和5’至3’的每个Nu为：

其中A是C是G是并且X是 在某些实施方案中，每个X独立地是

在一些实施方案中，式(VII)的反义寡聚物缀合物是其HCl(盐酸)盐。在某些实施方案中，HCl盐是.6HCl盐。

在包括例如式(VII)的一些实施方案的一些实施方案中，本公开的反义寡聚物缀合物是根据式(VIIA)：

其中每个Nu是核碱基，其合在一起形成与指定为H53A(+36+60)的肌营养不良蛋白前体mRNA中的外显子53退火位点互补的靶向序列。

在一些实施方案中，每个Nu独立地选自胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)、腺嘌呤(A)、5-甲基胞嘧啶(5mC)、尿嘧啶(U)和次黄嘌呤(I)。

在各种实施方案中，1至25和5’至3’的每个Nu为：

其中A是C是G是并且X是 在某些实施方案中，每个X是

在包括例如式(VII)和式(VIIA)的反义寡聚物缀合物的实施方案的一些实施方案中，靶向序列是5’-GTTGCCTCCGGTTCTGAAGGTGTTC-3’，其中每个胸腺嘧啶(T)任选地是尿嘧啶(U)(SEQ ID NO:30)。在包括例如式(VII)和式(VIIA)的反义寡聚物缀合物的实施方案的各种实施方案中，靶向序列是5’-GTTGCCTCCGGTTCTGAAGGTGTTC-3’(SEQ ID NO:29)。

在包括例如式(I)的反义寡聚物缀合物的实施方案的一些实施方案中，本公开的反义寡聚物缀合物是根据式(VIII)：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，式(VIII)的反义寡聚物缀合物是其HCl(盐酸)盐。在某些实施方案中，HCl盐是.6HCl盐。

在包括例如式(VIII)的反义寡聚物缀合物的实施方案的一些实施方案中，本公开的反义寡聚物缀合物是根据式(VIIIA)：

在包括式(I)的反义寡聚物缀合物的一些实施方案和式(VIII)的反义寡聚物缀合物的实施方案的本公开的一些实施方案中，反义寡聚物缀合物是根据式(VIIIB)：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，式(VIIIB)的反义寡聚物缀合物是其HCl(盐酸)盐。在某些实施方案中，HCl盐是.6HCl盐。

在包括例如式(VIIIB)的反义寡聚物缀合物的实施方案的一些实施方案中，本公开的反义寡聚物缀合物是根据式(VIIIC)：

在一个方面，本公开提供了反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐，其能够结合选定的靶以诱导人肌营养不良蛋白基因中的外显子跳跃，其中反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐包含与指定为退火位点的肌营养不良蛋白前体mRNA的外显子51靶区互补的碱基序列；其中碱基序列和退火位点选自以下中的一个：

其中A是C是G是并且T是

在一个方面，碱基序列和退火位点选自以下中的一个：

其中A为C为G为T为U为Gm为甲基化鸟嘌呤，Am为甲基化腺嘌呤，并且m5C为在另一方面，本公开提供了式(IX)的反义寡聚物：

或其药学上可接受的盐，其中1至n和5’至3’中的每个Nu对应于以下序列中的核碱基：

其中A是C是G是并且T是

在一个方面，碱基序列和退火位点选自以下中的一个：

其中A为C为G为T为U为Gm为甲基化鸟嘌呤，Am为甲基化腺嘌呤，并且m5C为在另一方面，本公开提供了式(X)的反义寡聚物：

或其药学上可接受的盐，其中1至(n+1)和5’至3’的每个Nu对应于以下序列中的核碱基：

其中A是C是G是并且T是

在一个方面，碱基序列和退火位点选自以下中的一个：

其中A为C为G为T为U为Gm为甲基化鸟嘌呤，Am为甲基化腺嘌呤，并且m5C为在另一方面，本公开提供了式(XA)的反义寡聚物：

(XA)

其中1至(n+1)和5’至3’的每个Nu对应于以下序列中的核碱基：

其中A是C是G是并且T是

在一个方面，碱基序列和退火位点选自以下中的一个：

其中A为C为G为T为U为Gm为甲基化鸟嘌呤，Am为甲基化腺嘌呤，并且m5C为

核碱基修饰和取代

在某些实施方案中，本公开的反义寡聚物缀合物由RNA核碱基和DNA核碱基(在本领域中通常简称为“碱基”)构成。RNA碱基通常称为腺嘌呤(A)、尿嘧啶(U)、胞嘧啶(C)和鸟嘌呤(G)。DNA碱基通常称为腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和鸟嘌呤(G)。在各种实施方案中，本公开的反义寡聚物缀合物由胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)、腺嘌呤(A)、5-甲基胞嘧啶(5mC)、尿嘧啶(U)和次黄嘌呤(I)构成。

在某些实施方案中，寡聚物中的一个或多个RNA碱基或DNA碱基可以被RNA碱基或DNA碱基以外的碱基修饰或取代。含有修饰的或取代的碱基的寡聚物包括一个或多个在核酸中最常见的嘌呤或嘧啶碱基被较不常见或非天然的碱基取代的寡聚物。

嘌呤碱基包含与咪唑环稠合的嘧啶环，如以下通式所描述。

腺嘌呤和鸟嘌呤是核酸中最常见的两种嘌呤核碱基。其他天然存在的嘌呤包括但不限于N⁶-甲基腺嘌呤、N²-甲基鸟嘌呤、次黄嘌呤和7-甲基鸟嘌呤。

嘧啶碱基包含如下通式所描述的六元嘧啶环。

胞嘧啶、尿嘧啶和胸腺嘧啶是在核酸中最常见的嘧啶碱基。其他天然存在的嘧啶包括但不限于5-甲基胞嘧啶、5-羟甲基胞嘧啶、假尿嘧啶和4-硫尿嘧啶。在一个实施方案中，本文所描述的寡聚物含有胸腺嘧啶碱基代替尿嘧啶。

其他合适的碱基包括但不限于：2,6-二氨基嘌呤、乳清酸、胍丁胺胞苷、赖胞苷、2-硫代嘧啶(例如2-硫代尿嘧啶、2-硫代胸腺嘧啶)、G-钳和其衍生物、5-取代的嘧啶(例如5-卤尿嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶、5-丙炔基胞嘧啶、5-氨基甲基尿嘧啶、5-羟甲基尿嘧啶、5-氨基甲基胞嘧啶、5-羟甲基胞嘧啶、Super T)、7-脱氮鸟嘌呤、7-脱氮腺嘌呤、7-氮杂-2,6-二氨基嘌呤、8-氮杂-7-脱氮鸟嘌呤、8-氮杂-7-脱氮腺嘌呤、8-氮杂-7-脱氮-2,6-二氨基嘌呤、Super G、Super A和N4-乙基胞嘧啶或其衍生物；N²-环戊基鸟嘌呤(cPent-G)、N²-环戊基-2-氨基嘌呤(cPent-AP)和N²-丙基-2-氨基嘌呤(Pr-AP)、假尿嘧啶或其衍生物；以及简并或通用碱基，如2,6-二氟甲苯，或不存在碱基，如无碱基位点(例如1-脱氧核糖、1,2-二脱氧核糖、l-脱氧-2-O-甲基核糖；或吡咯烷衍生物，其中环氧已被氮置换(氮杂核糖))。Super A、Super G和Super T的衍生物的实例可见于美国专利6,683,173(Epoch Biosciences)，其以引用的方式全部并入本文中。cPent-G、cPent-AP和Pr-AP被证明在掺入siRNA中时降低免疫刺激作用(Peacock H.等人J.Am.Chem.Soc.2011,133,9200)。假尿嘧啶是尿嘧啶的天然存在的异构化形式，具有C-糖苷而不是尿苷中的常规N-糖苷。与含尿苷的mPvNA相比，含假尿苷的合成mRNA可能具有改进的安全概况(WO 2009127230，以引用的方式全部并入本文中)。

某些核碱基对于增加本公开的反义寡聚物缀合物的结合亲和力特别有用。这些包括5-取代的嘧啶、6-氮杂嘧啶和N-2、N-6和O-6取代的嘌呤，包括2-氨基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶取代已被证明可使核酸双螺旋体稳定性提高0.6-1.2℃，并且是目前优选的碱基取代，尤其是与2'-O-甲氧基乙基糖修饰组合时，更是如此。额外的示例性修饰核碱基包括其中核碱基的至少一个氢原子被氟取代的那些核碱基。

反义寡聚物缀合物的药学上可接受的盐

本文所描述的反义寡聚物缀合物的某些实施方案可含有碱性官能团，例如氨基或烷基氨基，因此，能够与药学上可接受的酸形成药学上可接受的盐。在这方面，术语“药学上可接受的盐”是指本公开的反义寡聚物缀合物的相对无毒的无机和有机酸加成盐。这些盐可以在施用媒介物或剂型制造过程中原位制备，或通过将本公开的纯化的反义寡聚物缀合物以其游离碱形式与合适的有机或无机酸分别反应，并在随后的纯化过程中分离出这样形成的盐。代表性盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、甲苯磺酸酯、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘二甲酸盐、甲磺酸盐、葡萄糖庚酸盐、乳糖醛酸盐和月桂基磺酸盐等。(参见例如,Berge等人(1977)"Pharmaceutical Salts",J.Pharm.Sci.66:1-19)。

主题反义寡聚物缀合物的药学上可接受的盐包括反义寡聚物缀合物的常规无毒盐或季铵盐，例如来自无毒有机或无机酸的盐。举例来说，这种常规的无毒盐包括衍生自无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等的盐；以及由有机酸如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、棕榈酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙磺酸等制备的盐。

在某些实施方案中，本公开的反义寡聚物缀合物可以含有一个或多个酸性官能团，因此能够与药学上可接受的碱形成药学上可接受的盐。在这些情况下，术语“药学上可接受的盐”是指本公开的反义寡聚物缀合物的相对无毒的无机和有机碱加成盐。这些盐同样可以在施用媒介物或剂型制造过程中原位制备，或通过将纯化的反义寡聚物缀合物以其游离酸形式与合适的碱，例如药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐，与氨，或与药学上可接受的有机伯胺、仲胺或叔胺分别反应。代表性的碱金属或碱土金属盐包括锂盐、钠盐、钾盐、钙盐、镁盐和铝盐等。可用于形成碱加成盐的代表性有机胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等。(参见例如Berge等人,见上文)。

配制品和施用模式

在某些实施方案中，本公开提供了适合于如本文所描述的反义寡聚物缀合物的治疗性递送的配制品或药物组合物。在例如美国专利号10,888,578中描述了用于DMD的包含与细胞穿透肽(例如，PPMO)缀合的反义寡聚物的药物配制品，其公开内容以引用的方式并入本文。在某些实施方案中，本公开提供了药学上可接受的组合物，其包含与一种或多种药学上可接受的载剂(添加剂)和/或稀释剂一起配制的治疗有效量的一种或多种本文所描述的反义寡聚物缀合物。虽然本公开的反义寡聚物缀合物有可能单独施用，但优选以药物配制品(组合物)施用反义寡聚物缀合物。在一个实施方案中，配制品的反义寡聚物缀合物是根据式(I)。

另一方面，本公开提供了药物组合物，其包括本公开的反义寡聚物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。在一些实施方案中，药学上可接受的载体是包括磷酸盐缓冲液的盐溶液。

短语“药学上可接受的”是指物质或组合物必须在化学和/或毒理学上与包含配制品的其他成分和/或用其治疗的受试者兼容。

本文所用的短语“药学上可接受的载体”是指无毒的、惰性的固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、囊封材料或任何类型的配制助剂。可以充当药学上可接受的载剂的材料的一些实例是：糖类，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素和其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉末状黄蓍；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，例如丙二醇；酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原质水；等渗盐水；林格氏溶液(Ringer's solution)；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；无毒兼容润滑剂，例如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁；着色剂；脱模剂；涂布剂；甜味剂；调味剂；芳香剂；防腐剂和抗氧化剂；根据配方师的判断。

可以适用于本公开的反义寡聚物缀合物的核酸分子的递送方法描述于例如以下中：Akhtar等人,1992,Trends Cell Bio.,2:139；Delivery Strategies for AntisenseOligonucleotide Therapeutics,编者Akhtar,1995,CRC Press和Sullivan等人,PCT WO94/02595。这些和其他方案可用于几乎任何核酸分子的递送，包括本公开的反义寡聚物缀合物。

本公开的药物组合物可专门配制成以固体或液体形式施用，包括适应于下列情况的药物组合物：(1)口服施用，例如顿服药(水溶液或非水溶液或悬浮剂)、片剂(针对颊内、舌下或全身吸收)、大丸剂、散剂、颗粒剂、糊剂，施加至舌头；(2)肠胃外施用，例如，通过皮下、肌肉内、静脉内或硬膜外注射，例如，作为无菌溶液或悬浮液，或持续释放配制品；(3)局部施加，例如，作为乳膏、软膏或控释贴剂或喷雾剂施加至皮肤；(4)阴道内或直肠内，例如，作为子宫托、乳膏或泡沫；(5)舌下；(6)经眼；(7)透皮；或(8)经鼻。

可以充当药学上可接受的载剂的材料的一些实例包括但不限于：(1)糖类，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素和其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；(4)粉状黄蓍；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；(9)油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原质水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)pH缓冲溶液；(21)聚酯、聚碳酸酯和/或聚酸酐；以及(22)药物配制品中采用的其他无毒兼容物质。

适合与本公开的反义寡聚物缀合物一起配制的药剂的其他非限制性实例包括：PEG缀合的核酸；磷脂缀合的核酸；含有亲脂性部分的核酸；硫代磷酸酯；P-糖蛋白抑制剂(例如Pluronic P85)，其可增强药物进入各种组织；可生物降解的聚合物，例如聚(D,L-丙交酯-共乙交酯)微球，用于植入后的持续释放递送(Emerich,D F等人,1999,CellTransplant,8,47-58)Alkermes,Inc.Cambridge,Mass.；以及负载的纳米颗粒，例如由聚氰基丙烯酸丁酯制成的纳米颗粒，其可通过血脑屏障递送药物，并且可以改变神经元的摄取机制(Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry,23,941-949,1999)。

本公开的特征还在于使用包括含聚(乙二醇)(“PEG”)脂质的表面改性脂质体的组合物(PEG改性的、支链和非支链的或其组合，或长循环脂质体或隐形脂质体)。本公开的寡聚物缀合物也可以包含各种分子量的共价连接的PEG分子。这些配制品提供了一种增加药物在靶组织中的积累的方法。这类药物载体能抵抗单核吞噬系统(MPS或RES)的调理作用和消除作用，从而使囊封的药物有更长的血液循环时间和增强的组织暴露(Lasic等人Chem.Rev.1995,95,2601-2627；Ishiwata等人,Chem.Pharm.Bull.1995,43,1005-1011)。这样的脂质体已被证明在肿瘤中选择性地积累，推测是通过在新生血管化的靶组织中的外渗和捕获(Lasic等人,Science 1995,267,1275-1276；Oku等人,1995,Biochim.Biophys.Acta,1238,86-90)。长循环脂质体增强了DNA和RNA的药代动力学和药效学，特别是与已知在MPS的组织中积累的传统阳离子脂质体相比(Liu等人,J.Biol.Chem.1995,42,24864-24870；Choi等人,International PCT Publication No.WO96/10391；Ansell等人,国际PCT公开号WO 96/10390；Holland等人,国际PCT公开号WO 96/10392)。与阳离子脂质体相比，长循环脂质体也可能在更大程度上保护药物不被核酸酶降解，这是基于其能够避免在肝脏和脾脏等代谢侵袭性MPS组织中的积累。

在另一实施方案中，本公开包括如美国专利号：6,692,911；7,163,695；和7,070,807中所描述的制备用于递送的反义寡聚物缀合物药物组合物。在这方面，在一个实施方案中，本公开提供了在包含赖氨酸和组氨酸(HK)的共聚物的组合物中的本公开的反义寡聚物缀合物(如美国专利号：7,163,695、7,070,807和6,692,911中所描述)，其可以单独或与PEG(例如，支链或非支链PEG或两者的混合物)组合，与PEG和靶向部分组合，或上述任何一种与交联剂组合。在某些实施方案中，本公开提供了包含葡糖酸修饰的聚组氨酸或葡糖酸化聚组氨酸/转铁蛋白-聚赖氨酸的药物组合物中的反义寡聚物缀合物。本领域技术人员还将认识到，在组合物内可以取代具有与His和Lys相似性质的氨基酸。

润湿剂、乳化剂和润滑剂(例如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁)、着色剂、脱模剂、包衣剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可以存在于组合物中。

药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：(1)水溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸、半胱氨酸盐酸盐、硫酸氢钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；以及(3)金属螯合剂，例如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。

制备这些配制品或药物组合物的方法包括使本公开的反义寡聚物缀合物与载体和任选的一种或多种辅助成分缔合的步骤。通常，通过使本公开的反义寡聚物缀合物与液体载体或细分的固体载体或两者均匀且紧密地缔合，然后，如果需要，将产物成型来制备配制品。

适于口服施用的本公开的配制品可以呈胶囊、扁囊剂、丸剂、片剂、含片(使用调味基础，通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍)、散剂、颗粒剂的形式，或作为水性或非水性液体中的溶液或悬浮液，或作为水包油或油包水液体乳液，或作为酏剂或糖浆，或作为锭剂(使用惰性基质，例如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶)和/或作为漱口剂等，每个含有预定量的本公开的反义寡聚物缀合物作为活性成分。本公开的反义寡聚物缀合物也可作为大丸剂、舐剂或糊剂施用。

适用于肠胃外施用的药物组合物可以包含一种或多种本公开的寡聚物缀合物与一种或多种药学上可接受的无菌等渗的水性或非水性溶液、分散液、悬浮液或乳剂，或可在临使用之前重构成无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末的组合，其可以含有糖、醇、抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使配制品与预期接受者的血液等渗的溶质或悬浮剂或增稠剂。可以在本公开的药物组合物中采用的合适的水性和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)和其合适的混合物、植物油如橄榄油和可注射的有机酯，例如油酸乙酯。举例来说，通过使用包衣材料(例如卵磷脂)，通过在分散体的情况下保持所需的粒度，以及通过使用表面活性剂，可以保持适当的流动性。在一个实施方案中，药物组合物的反义寡聚物缀合物是根据式(I)。

这些药物组合物还可以含有佐剂，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。通过包含各种抗细菌剂和抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等)，可以确保防止微生物对主题寡聚物缀合物的作用。还可能需要在组合物中包含等渗剂，例如糖、氯化钠等。此外，可以通过包含延迟吸收的试剂如单硬脂酸铝和明胶来延长可注射药物形式的吸收。

在某些情况下，为了延长药物的作用，希望减慢皮下或肌肉内注射药物的吸收。这可以通过使用具有较差水溶性的结晶或无定形材料的液体悬浮液以及本领域已知的其他方法来实现。然后，药物的吸收率取决于其溶解率，而溶解率又取决于晶体大小和晶形。或者，通过将药物溶解或悬浮在油性媒介物中来实现胃肠外施用的药物形式的延迟吸收。

可注射储库形式可通过在可生物降解的聚合物(例如聚丙交酯-聚乙交酯)中形成主题寡聚物缀合物的微胶囊矩阵而制成。根据寡聚物与聚合物的比例，以及所采用的特定聚合物的性质，可以控制寡聚物的释放速率。其他可生物降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。还可以通过将药物夹带在与身体组织兼容的脂质体或微乳剂中来制备可注射储库配制品。

当本公开的反义寡聚物缀合物作为药物施用于人类和动物时，其可以本身给药，或可以作为药物组合物给药，例如含有0.1至99％(更优选10至30％)的反义寡聚物缀合物以及药学上可接受的载剂。

在某些方面，反义寡聚物缀合物以液体药物配制品的形式施用，其中缀合物的浓度为约50mg/ml。

无论所选择的施用途径如何，本公开的反义寡聚物缀合物(可以合适的水合形式使用)和/或本公开的药物组合物可以通过本领域技术人员已知的常规方法配制成药学上可接受的剂型。本公开的药物组合物中活性成分的实际剂量水平可以改变，以获得有效地实现特定患者、组合物和施用方式所需的治疗反应的活性成分的量，而不会对患者产生不可接受的毒性。

使用方法

本公开中描述的剂量方案可用于用反义寡聚物CPP缀合物治疗需要此类治疗的患者。

在一个方面，本公开提供一种用于治疗有此需要的受试者的DMD的方法，其中所述受试者具有适合于外显子跳跃的肌营养不良蛋白基因突变，所述方法包括根据本文所述的给药方案向受试者施用反义寡聚物CPP缀合物。在一些方面，外显子是人肌营养不良蛋白基因的外显子44、外显子45、外显子50、外显子51、外显子52或外显子53。

在另一方面，本公开提供一种恢复mRNA阅读框以在具有适合于外显子跳跃(例如，外显子44、外显子45、外显子50、外显子51、外显子52、外显子53跳跃)的肌营养不良蛋白基因突变的受试者中诱导肌营养不良蛋白产生的方法，所述方法包括根据本文所述的给药方案向受试者施用反义寡聚物CPP缀合物。

在另一方面，本公开提供一种在具有适合于外显子跳跃的肌营养不良蛋白基因突变的受试者的mRNA加工期间从肌营养不良蛋白前体mRNA中排除外显子(例如，外显子44、外显子45、外显子50、外显子51、外显子52、外显子53)的方法，所述方法包括根据本文所述的给药方案向受试者施用反义寡聚物CPP缀合物。在另一方面，本公开提供一种结合具有适合于外显子跳跃(例如，外显子44、外显子45、外显子50、外显子51、外显子52、外显子53跳跃)的肌营养不良蛋白基因突变的受试者中的肌营养不良蛋白前体mRNA的外显子(例如，外显子44、外显子45、外显子50、外显子51、外显子52、外显子53)的方法，所述方法包括根据本文所述的给药方案向受试者施用反义寡聚物CPP缀合物。

在另一方面，本公开提供一种在具有适合于外显子跳跃(例如，外显子44、外显子45、外显子50、外显子51、外显子52、外显子53跳跃)的突变的患有DMD的患者中靶向反义寡聚物CPP缀合物的暴露水平的方法，所述方法包括根据本文所述的给药方案向受试者施用反义寡聚物CPP缀合物。

在另一方面，本公开提供一种降低正用反义寡聚物CPP缀合物治疗的患者的低镁血症的严重程度和/或频率的方法，所述方法包括根据本文所述的给药方案向受试者施用反义寡聚物CPP缀合物和镁补充剂。

在另一方面，本公开提供一种用于减轻人类患者的一种或多种DMD症状的方法，其包括根据本文所述的给药方案向患者施用反义寡聚物CPP缀合物，其中患者正接受类固醇治疗。在一些方面，施用缀合物以诱导外显子(例如，人肌营养不良蛋白基因的外显子44、外显子45、外显子50、外显子51、外显子52、外显子53)跳跃。在一些方面，同时开始根据本文所述的给药方案施用缀合物和类固醇治疗。在其他方面，在根据本文所述的给药方案施用反义寡聚物CPP缀合物之前，患者正接受类固醇治疗。在这个方面，优选在根据本文所述的给药方案施用反义寡聚物CPP缀合物之前，施用所述类固醇至少一天，更优选至少一周，更优选至少两周，更优选至少三周。在一个具体的实施方案中，在根据本文所述的给药方案施用反义寡聚物CPP缀合物之前，预先的类固醇治疗持续至少三周的时间。

在一些方面，类固醇是糖皮质类固醇。糖皮质类固醇可选自例如泼尼松(prednisone)、地塞米松(dexamethasone)、泼尼松龙(prednisolone)或地夫可特(deflazacort)。如本文所述的治疗应用中使用的类固醇(例如，糖皮质类固醇)的剂量范围是基于临床试验中的剂量增加研究设计的，对这些研究存在严格的方案要求。泼尼松和泼尼松龙的常用剂量为约0.5-1.0毫克/千克/天，优选约0.75毫克/千克/天，地夫可特的常用剂量为约0.4-1.4毫克/千克/天，优选约0.9毫克/千克/天。

关于肌营养不良蛋白合成或生产的术语“恢复”一般是指用本文所描述的反义寡聚物缀合物治疗后，肌营养不良的患者产生肌营养不良蛋白，包括截短形式的肌营养不良蛋白。在一些实施方案中，治疗导致患者中的新肌营养不良蛋白产生增加1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％(包括其间的所有整数)。在一些实施方案中，治疗将受试者中的肌营养不良蛋白阳性纤维的数量增加至正常的至少约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或约95％至100％。在其他实施方案中，治疗将受试者中的肌营养不良蛋白阳性纤维的数量增加至正常的约20％至约60％或约30％至约50％。治疗后患者中肌营养不良蛋白阳性纤维的百分比可通过肌肉活检使用已知技术确定。举例来说，可从合适的肌肉，例如患者的肱二头肌中取肌肉活检。

阳性肌营养不良蛋白纤维的百分比分析可在治疗前和/或治疗后或在整个治疗过程中的时间点进行。在一些实施方案中，治疗后活检取自治疗前活检的对侧肌肉。治疗前和治疗后的肌营养不良蛋白表达分析可以使用任何合适的肌营养不良蛋白检测法进行。在一些实施方案中，使用作为肌营养不良蛋白的标志物的抗体，例如单克隆或多克隆抗体，对来自肌肉活检的组织切片进行免疫组织化学检测。举例来说，可以使用MANDYS106抗体，其是肌营养不良蛋白的高度敏感标志物。可以使用任何合适的二级抗体。

在一些实施方案中，肌营养不良蛋白阳性纤维的百分比通过将阳性纤维的数量除以计数的总纤维来计算。正常的肌肉样品具有100％的肌营养不良蛋白阳性纤维。因此，肌营养不良蛋白阳性纤维的百分比可以表示为正常的百分比。为了控制治疗前肌肉以及回复性纤维中痕量肌营养不良蛋白的存在，在计数治疗后肌肉中的肌营养不良蛋白阳性纤维时，可以使用患者治疗前肌肉的切片设置基线。这可以用作计数所述患者治疗后肌肉的切片中的肌营养不良蛋白阳性纤维的阈值。在其他实施方案中，抗体染色的组织切片也可以用于使用Bioquant图像分析软件(Bioquant Image Analysis Corporation,Nashville,TN)进行肌营养不良蛋白定量。总肌营养不良蛋白荧光信号强度可报告为正常的百分比。此外，使用单克隆或多克隆抗肌营养不良蛋白抗体的蛋白质印迹分析可用于确定肌营养不良蛋白阳性纤维的百分比。例如，可以使用来自Leica Biosystems的抗肌营养不良蛋白抗体NCL-Dys1。还可以通过确定肌聚糖复合物(β，γ)和/或神经元NOS的组分的表达来分析肌营养不良蛋白阳性纤维的百分比。

在一些实施方案中，用本公开的反义寡聚物缀合物进行的治疗减缓或减少了DMD患者的进行性呼吸肌功能障碍和/或衰竭，这在没有治疗的情况下是可以预期的。在一些实施方案中，用本公开的反义寡聚物缀合物进行的治疗可以减少或消除对通气辅助的需要，而这种需要在没有治疗的情况下是可以预期的。在一些实施方案中，用于跟踪疾病过程的呼吸功能测量以及潜在治疗干预的评估包括最大吸气压力(MIP)、最大呼气压力(MEP)和用力肺活量(FVC)。MIP和MEP分别测量一个人在吸气和呼气期间可能产生的压力水平，并且是呼吸肌力量的敏感测量。MIP是对膈膜肌无力的量度。

在一些实施方案中，MEP可能在其他肺功能测试(包括MIP和FVC)变化之前下降。在某些实施方案中，MEP可以是呼吸功能障碍的早期指标。在某些实施方案中，FVC可用于测量最大吸气后强制呼气期间排出的空气总量。在患有DMD的患者中，FVC与身体生长同时增加，直到十几岁初期。然而，随着生长减缓或因疾病进展而受阻，以及肌肉无力的进展，肺活量进入下降阶段，并在10至12岁后以平均每年约8至8.5％的速度下降。在某些实施方案中，MIP百分比预测(MIP根据体重调整)、MEP百分比预测(MEP根据年龄调整)和FVC百分比预测(FVC根据年龄和身高调整)是支持性分析。

如本文所用，术语“受试者”和“患者”包括表现出症状或有表现出症状风险的任何动物，所述症状可以用本公开的反义寡聚物缀合物进行治疗，例如患有或有风险患有DMD或BMD或与这些病况相关的任何症状(例如，肌纤维丧失)的受试者(或患者)。合适的受试者(或患者)包括实验室动物(例如小鼠、大鼠、兔子或豚鼠)、农场动物和家畜或宠物(例如猫或狗)。包括非人类的灵长类动物和优选人类患者(或受试者)。还包括在具有适合于外显子跳跃(例如，外显子44、外显子45、外显子50、外显子51、外显子52、外显子53跳跃)的肌营养不良蛋白基因的突变的受试者(或患者)中产生肌营养不良蛋白的方法。

本文所用的短语“全身施用(systemic administration/administeredsystemically)”和“外周施用(peripheral administration/administeredperipherally)”是指除直接进入中枢神经系统以外的化合物、药物或其他材料的施用，使得其进入患者的系统，从而经历代谢和其他类似过程，例如皮下施用。

短语“靶向序列”是指与靶前体mRNA中的核苷酸序列互补的寡聚物的核碱基序列。在本公开的一些方面，靶前体mRNA中的核苷酸序列是指定为H51A(+66+95)的肌营养不良蛋白前体mRNA中的外显子51退火位点。在本公开的一些方面，靶前体mRNA中的核苷酸序列是指定为H45A(-03+19)的肌营养不良蛋白前体mRNA中的外显子45退火位点。在一些方面，靶前体mRNA中的核苷酸序列是指定为H53A(+36+60)的肌营养不良蛋白前体mRNA中的外显子53退火位点。

对受试者(例如哺乳动物，如人类)的“治疗”是试图改变受试者的自然进程而使用的任何类型的干预。治疗包括但不限于施用反义寡聚物缀合物或其药物组合物，并且可以预防性地或在病理事件开始后或与病原体接触后进行。治疗包括对与肌营养不良蛋白相关的疾病或病况的症状或病理的任何理想效果，如在某些形式的肌营养不良中，并且可以包括例如在所治疗的疾病或病况的一个或多个可测量的标志物中的最小变化或改善。还包括“预防性”治疗，其可以针对降低正在治疗的疾病或病况的进展速率，延迟所述疾病或病况的发作，或降低其发作的严重程度。“治疗”或“预防”不一定表示完全根除、治愈或预防疾病或病况或其相关症状。

在一些实施方案中，用本公开的反义寡聚物CPP缀合物进行的治疗增加新型肌营养不良蛋白产生，延缓疾病进展，减缓或减少行走能力的丧失，减少肌肉炎症，减少肌肉损伤，改善肌肉功能，减少肺功能的丧失，和/或增强肌肉再生，这在没有治疗的情况下是可以预期的。在一些实施方案中，治疗维持、延缓或减缓疾病进展。在一些实施方案中，治疗维持行走能力或减少行走能力的丧失。在一些实施方案中，治疗维持肺功能或减少肺功能的丧失。在一些实施方案中，治疗维持或增加患者的稳定步行距离，如通过例如6分钟步行测试(6MWT)所测量。在一些实施例中，治疗维持或减少步行/跑步10米的时间(即，10米步行/跑步测试)。在一些实施方案中，治疗维持或减少从仰卧位站立的时间(即，站立时间测试)。在一些实施方案中，治疗维持或减少爬四层标准楼梯的时间(即，四层楼梯爬升测试)。在一些实施方案中，治疗维持或减少患者的肌肉炎症，如通过例如MRI(例如，腿部肌肉的MRI)所测量。在一些实施方案中，MRI测量T2和/或脂肪分数以识别肌肉退化。MRI可以识别由炎症、水肿、肌肉损伤和脂肪浸润引起的肌肉结构和组成的变化。

在一些实施方案中，用本公开的反义寡聚物缀合物进行的治疗增加新型肌营养不良蛋白的产生并且减缓或减少行走能力的丧失，这在没有治疗的情况下是可以预期的。举例来说，治疗可以稳定、维持、改善或增加受试者的行走能力(例如，步行的稳定)。在一些实施方案中，治疗维持或增加患者的稳定步行距离，如通过例如McDonald等人描述的6分钟步行测试(6MWT)所测量(Muscle Nerve,2010；42:966-74，以引用的方式并入本文中)。6分钟步行距离(6MWD)的变化可以表示为绝对值、百分比变化或％预测值的变化。在一些实施方案中，治疗维持或改善受试者相对于健康同伴的20％缺陷的6MWT中的稳定步行距离。可以通过计算％预测值来确定6MWT中相对于健康同伴的典型表现的DMD患者的表现。举例来说，对于男性，预测的6MWD％可以使用以下公式计算：196.72+(39.81x年龄)–(1.36x年龄²)+(132.28x身高(米))。对于女性，预测的6MWD％可以使用以下公式计算：188.61+(51.50x年龄)–(1.86x年龄²)+(86.10x身高(米))(Henricson等人PLoS Curr.,2012,第2版,以引用的方式并入本文中)。在一些实施方案中，用反义寡聚物进行的治疗使患者的稳定步行距离从基线增加到大于3、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30或50米(包括两者之间的所有整数)。

患有DMD的患者的肌肉功能丧失可能发生在儿童期正常生长发育的背景下。事实上，尽管进行性肌肉损伤，但患有DMD的较年幼的儿童在大约1年的过程中可能会在6MWT期间显示出步行距离的增加。在一些实施方案中，将来自DMD患者的6MWD与典型发育的对照受试者和来自年龄和性别匹配的受试者的现有正常数据进行比较。在一些实施方案中，可以使用基于年龄和身高的方程拟合到正常数据中来说明正常的生长和发育。这样的方程可用于将6MWD转换为患有DMD的受试者的预测百分比(预测％)值。在某些实施方案中，对预测的6MWD％数据的分析代表了一种解释正常生长和发育的方法，并且可以显示在早期年龄(例如，小于或等于7岁)的功能获得代表DMD患者的稳定而不是改善能力(Henricson等人PLoSCurr.,2012,第2版，以引用的方式并入本文中)。

提出并公开了一种反义分子命名系统，以区分不同的反义分子(参见Mann等人,(2002)J Gen Med 4,644-654)。当测试几种稍有不同的反义分子时，这种命名法变得特别贴切，这些反义分子都针对同一靶区，如下所示：

H#A/D(x:y)。

第一个字母表示物种(例如，H：人类，M：鼠类，C：犬类)。“#”表示目标肌营养不良蛋白外显子编号。“A/D”分别表示外显子起始和末端的受体或供体剪接位点。(x y)表示退火坐标，其中“-”或“+”分别表示内含子或外显子的序列。举例来说，A(-6+18)将表示目标外显子之前的内含子的最后6个碱基和目标外显子的前18个碱基。最近的剪接位点将是受体，所以这些坐标将以“A”开头。描述供体剪接位点的退火坐标可以是D(+2-18)，其中最后2个外显子碱基和前18个内显子碱基对应于反义分子的退火位点。完全外显子的退火坐标将用A(+65+85)表示，即从所述外显子开始的第65和85个核苷酸之间的位点。

使用外显子跳跃来恢复肌营养不良蛋白阅读框

治疗由肌营养不良蛋白基因的框外突变引起的DMD的潜在治疗方法是由称为BMD的肌营养不良蛋白的较轻形式提出的，这种较轻形式是由框内突变引起的。将框外突变转化为框内突变的能力将假设保留mRNA阅读框，并产生内部缩短但有功能的肌营养不良蛋白。本公开的反义寡聚物缀合物被设计来实现这一目的。

分析与人肌营养不良蛋白前体mRNA的靶区互补并诱导外显子跳跃的反义寡聚物缀合物的效果的临床结果包括肌营养不良蛋白阳性纤维百分比(PDPF)、六分钟步行测试(6MWT)、丧失行走能力(LOA)、北极星移动评价(NSAA)、肺功能测试(PFT)、无外力支持下起立(从仰卧位)的能力、从头肌营养素产生和其他功能测量。

在一些实施方案中，本公开提供在具有适合于外显子跳跃(例如，外显子44、45、50、51、52、53)的肌营养不良蛋白基因的突变的受试者中产生肌营养不良蛋白的方法，所述方法包含向所述受试者施用如本文所描述的反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐。在某些实施方案中，本公开提供在患有杜氏肌营养不良(DMD)的受试者中恢复mRNA阅读框以诱导肌营养不良蛋白产生的方法，所述受试者具有适合于外显子跳跃(例如，外显子44、45、50、51、52、53)的肌营养不良蛋白基因的突变。蛋白质的产生可以通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹分析或免疫组织化学(IHC)来测量。

在一些实施方案中，本公开提供了治疗有此需要的受试者的DMD的方法，其中所述受试者具有适合于外显子跳跃(例如，外显子44、45、50、51、52、53)的肌营养不良蛋白基因的突变，所述方法包含向所述受试者施用如本文所描述的反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐。在各种实施方案中，对受试者的治疗是通过延迟疾病进展来测量的。在一些实施方案中，对受试者的治疗是通过维持受试者的行走能力或减少受试者的行走能力丧失来测量的。在一些实施方案中，使用6分钟步行测试(6MWT)来测量行走能力。在某些实施方案中，使用北极星移动评价(NSAA)来测量行走能力。

在各种实施方案中，本公开提供用于维持患有DMD的受试者的肺功能或减少肺功能丧失的方法，其中所述受试者具有适合于外显子跳跃(例如，外显子44、45、50、51、52、53)的DMD基因突变，所述方法包含向所述受试者施用如本文所描述的反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，肺功能以最大呼气压力(MEP)测量。在某些实施方案中，肺功能以最大吸气压力(MIP)测量。在一些实施方案中，肺功能以用力肺活量(FVC)测量。

在某些方面，本公开的方法包括向患有DMD的受试者施用包含如本文所述的反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐的药物配制品，其中缀合物在配制品中的浓度为约50mg/ml。

在某些实施方案中，描述了如本文所描述的反义寡聚物缀合物，其用于疗法中。在某些实施方案中，描述了如本文所描述的反义寡聚物缀合物，其用于治疗杜氏肌营养不良。在某些实施方案中，描述了如本文所描述的反义寡聚物缀合物，其用于制造用于疗法中的药物。在某些实施方案中，描述了如本文所描述的反义寡聚物缀合物，其用于制造用于治疗杜氏肌营养不良的药物。

实施例

尽管出于清楚理解的目的已经通过图示和实例的方式对前述公开进行了一些详细的描述，但是根据本公开的教示内容，对于本领域的普通技术人员将显而易见的是，可以进行某些改变和修改。以下实施例仅作为说明而非限制的方式提供。本领域的技术人员将容易识别出多种可以被改变或修改以产生基本类似结果的非关键参数。

实施例1.PPMO-1在非人灵长类动物中的毒性和毒代动力学研究

研究1.在4周恢复的食蟹猴中进行的12周静脉输注(每4周一次)毒性和毒代动力学研究。

非人灵长类动物(NHP)在第1天、第29天和第57天接受三次1小时的媒介物对照或PPMO-1的IV输注，剂量水平为30mg/kg或60mg/kg。PPMO-1是具有以下结构的反义寡聚物CPP缀合物：

在第一次和第三次给药后，在给药前和输注后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时和24小时采集血样用于血浆PK分析。第1天的平均体重为5.99±0.84Kg(n＝7)，范围为5.1-7.5Kg。

研究2.在食蟹猴中每4周一次(Q4W)重复静脉给药四次后，PPMO-1的非GLP(良好实验室规范)药代动力学(PK)、药效学和肾脏安全性评估。

NHP在第1天、第29天、第57天和第85天接受四次1小时的媒介物对照或PPMO-1的IV输注，剂量水平为30mg/kg或60mg/kg。在第一次和第四次给药后，在给药前和输注后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时和24小时采集血样用于血浆PK分析。第1天的平均体重为2.25±0.1Kg(n＝8)，范围为2.1-2.4Kg。

如图1中所示，研究1中的动物比研究2中的动物具有更高的初始体重。

如图2中所示，与研究1中的动物相比，研究1中的动物在相同的60mg/kg剂量下具有更高的血浆AUC(AUC_last(h*μg/mL)和C_max(μg/kg)暴露。分析中使用了第一剂和最后一剂PK。

如图3中所示，剂量归一化PK与体重相关。较高的体重与较高的PK(AUC和Cmax)相关。

实施例2.开发新的剂量范例以实现DMD患者的目标药物暴露

在目前正在进行的临床试验中观察到体重与PPMO-1血浆暴露之间的相关性。如图4中所示，研究5051-102中20mg/kg的PPMO-1的C_max比研究5051-201中20mg/kg的高2.6倍。值得注意的是，观察到的C_max差异与显著的体重差异相关，5051-102中的55.9±17.1kg相比于33.0±16.5kg(平均值±SD)。事实上，在20mg/kg和30mg/kg时，C_max与体重之间存在良好的相关性(图5)。这表明，对于体重范围为约10kg至约100kg的广泛DMD患者群体，基于体重的固定mg/kg方法可能会导致明显不同的药物暴露，并且导致对疗效和安全性的治疗效果的异质性结果。例如，对于体重较轻的患者，药物暴露可能低于最佳目标暴露范围，导致疗效不佳甚至无效，而对于体重较重的患者，药物暴露可能超过最佳目标暴露范围，导致潜在的安全问题。

因此，已经开发了体重带方法(body-weight-band approach)来将DMD患者分组到某些体重带中，并且在每个体重带内选择不同的剂量以实现靶向药物暴露。目标暴露是根据暴露的临床数据相比于对疗效和安全性的反应关系来定义的。基于SRP-5051的现有临床数据开发了群体药代动力学模型，并且进行模拟以告知体重范围和剂量选择，以实现DMD群体的目标暴露。在基于模型的方法中描述了一种类似的方法，以用于优化感染HIV的儿科患者的阿扎那韦(Atazanir)剂量建议(Hong,Y.等人,Antimicrobial Agents andChemotherapy,2011年12月,第5746-5752页)。

选择血浆浓度相比于时间曲线下面积(AUC)的两个目标暴露：中值为150μg/mL*h且范围为100-200μg/mL*h的较低暴露和中值为300μg/mL*h且范围为200-500μg/mL*h的较高暴露。可以将DMD群体的体重分成不同的带(1、2、3或更多)，并且可以在每个体重带内选择固定的mg剂量。如表1B中所示，对于更高的目标暴露：

·如果体重带数量＝1，则预计1200mg的固定剂量可实现15kg至100kg体重的目标暴露。

·如果体重带数量＝2，则选择15-40kg作为第一个带，固定剂量为1100mg，并且选择40-100kg作为第二个带，固定剂量为1300mg。

·如果体重带数量＝3，则选择15-25kg作为第一个带，固定剂量为1100mg，选择25-50kg作为第二个带，固定剂量为1200mg，并且选择15-25kg作为第三个带，固定剂量为1400mg。

·选择的体重带越多，预计药物暴露的可变性越小。

·对于体重小于15kg的那些患者，可基于其药代动力学特征选择不同的剂量。

·总的来说，这表明体重带方法(带数量≥1，并且每个带内的剂量固定，例如900-1800mg)可以充分实现较高的目标暴露。

同样，表2A显示较低目标暴露的体重带方法。

总之，这表明体重带方法(带数量≥1，并且每个带内的剂量固定)可以充分实现较低和较高的目标暴露。

表2.PPMO-1实现较低(A)和较高(B)目标暴露的的体重带给药。

(A)

(B)

实施例3.临床给药原理

临床和非临床发现表明较高的药物暴露与较高的体重有关。这在DMD男孩、体重较重的成年健康志愿者和DMD男孩以及非临床研究中被一致观察到，并且提出了在多样化和广泛的DMD儿科人群中实现一致和较少变化的药物暴露的挑战。

为了避免体重较重的患者用药过量和体重较轻的患者用药不足，正在实施一种基于群体PK模型的体重分级给药方案：将研究中的目标DMD群体分为两个体重等级(18kg至50kg和>50kg)，并且在每个等级内使用统一剂量以实现目标暴露。

本研究的两个目标暴露通过锚定先前分别经历20mg/kg和30mg/kg肌肉活检的患者的药物血浆暴露来选择，如下所示：

1.AUC为180μg·h/mL的较低目标暴露(范围：120μg·h/mL至240μg·h/mL)。这是为了分类活检患者在20mg/kg下的暴露归(AUC几何平均值为128μg·h/mL，N＝2)和活检患者在30mg/kg下的较低暴露部分。基于肌营养不良蛋白表达与AUC之间的关系，180μg·h/mL的AUC似乎与肌营养不良蛋白水平相对于基线增加约5％相关。

2.AUC为300μg·h/mL的较高目标暴露(范围：200μg·h/mL至500μg·h/mL)。这是为了模拟活检患者在30mg/kg下的暴露(AUC几何平均值为310μg·h/mL，范围为184μg·h/mL至504μg·h/mL，N＝4)。基于肌营养不良蛋白表达与AUC之间的关系，300μg·h/mL的AUC似乎与肌营养不良蛋白水平相对于基线增加≥5％相关。

因此，这两个目标暴露相差约1.7倍，AUC略有重叠(重叠AUC介于200μg·h/mL至240μg·h/mL)，这是评估效益与风险之间的最佳平衡的暴露分离的合理差异。现有的非临床安全性数据支持建议的目标暴露。在SR-19-051(NHP非GLP)、SR-20-027(NHP GLP)和SR-20-028(幼年大鼠GLP)研究中，较高的目标AUC(300μg·h/mL)分别比60mg/kg的NOAEL低约1.6倍、2.7倍和1.3倍。较低的目标AUC存在较高的安全边际，分别低约2.7倍、4.6倍和2.2倍。

如表3中所示，为了实现300μg·h/mL的高目标暴露，建议体重较轻的等级使用较少的剂量(总毫克数),≥18kg至<50kg的等级为1250mg，≥50kg的等级为1350mg。AUC的预期95％预测区间落在目标范围内(200μg·h/mL至500μg·h/mL)；特别地，上限高达420μg·h/mL(远低于500μg·h/mL)，并且可以提供额外的安全缓冲，同时提供足够的肌营养不良蛋白表达。针对低目标暴露提出了类似的方案。

总之，靶向两次暴露的体重分级剂量方案最大限度地增加了实现最佳效益和风险比的机会。

表3.实现18kg至100kg目标暴露范围的体重分级给药方案

AUC＝浓度-时间曲线下面积

*出于模拟目的，将体重上限设定为100kg。

除了上述实施方案以外，本公开还考虑了以下实施方案：

在一个实施方案中，本公开涉及一种治疗有需要的患有杜兴肌营养不良(DMD)的患者的方法，所述患者具有适合于外显子跳跃的突变，所述方法包括向患者施用如上所述的式(IV)的反义寡聚物缀合物，其中以有效提供约100ug·h/mL与200ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约240ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的缀合物或其药学上可接受的盐的平均曲线下面积(AUC)的剂量施用所述缀合物。

在一个实施方案中，本公开涉及一种治疗有需要的患有杜氏肌营养不良(DMD)的患者的方法，所述患者具有适合于外显子跳跃的突变，所述方法包括向患者施用如上所述的式(IV)的反义寡聚物缀合物，其中所述缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg至约1500mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用，以实现约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约240ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的平均AUC。

在一个实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。在另一实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约120ug·h/mL与约240ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。在另一实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在某些实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg或约900mg的缀合物的6HCl盐的剂量施用。在某些其他实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约950mg、约1000mg、约1050mg、约1100mg、约1150mg、约1200mg、约1250mg、约1300mg、约1350mg、约1400mg、约1450mg或约1500mg的缀合物的6HCl盐的剂量施用。

在一个实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg至约700mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约10kg至约25kg的患者。

在一个实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约600mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约10kg至约25kg的患者。

在一个实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约900mg至约1200mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约10kg至约25kg的患者。

在一个实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1100mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约10kg至约25kg的患者。

在一个实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约750mg至约1250mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约18kg至约50kg的患者。

在一个实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约600mg至约800mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约25kg至约50kg的患者。

在一个实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约650mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约25kg至约50kg的患者。

在一个实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1000mg的缀合物的6HCl盐至约1300mg的剂量每四周一次施用给体重介于约25kg至约50kg的患者。

在一个实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1200mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约25kg至约50kg的患者。

在一个实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约750mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约18kg至约50kg的患者。

在一个实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1250mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约18kg至约50kg的患者。

在一个实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约700mg至约900mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约50kg至约100kg的患者。

在一个实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约750mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约50kg至约100kg的患者。

在一个实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1200mg至约1500mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约50kg至约100kg的患者。

在一个实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1400mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约50kg至约100kg的患者。

在一个实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约850mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重大于或等于约50kg的患者。

在另一实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1350mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重大于或等于约50kg的患者。

在一个实施方案中，本公开涉及一种治疗有需要的患有杜兴肌营养不良(DMD)的患者的方法，所述患者具有适合于外显子跳跃的突变，所述方法包括向患者施用如上所述的式(VI)的反义寡聚物缀合物，其中以有效提供约100ug·h/mL与200ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约240ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的缀合物或其药学上可接受的盐的平均曲线下面积(AUC)的剂量施用所述缀合物。

在一个实施方案中，本公开涉及一种治疗有需要的患有杜氏肌营养不良(DMD)的患者的方法，所述患者具有适合于外显子跳跃的突变，所述方法包括向患者施用如上所述的式(VI)的反义寡聚物缀合物，其中所述缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg至约1500mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用，以实现约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约240ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的平均AUC。

在一个实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。在另一实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约120ug·h/mL与约240ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。在另一实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在某些实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg或约900mg的缀合物的6HCl盐的剂量施用。在某些其他实施方案中，式(VI)缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约950mg、约1000mg、约1050mg、约1100mg、约1150mg、约1200mg、约1250mg、约1300mg、约1350mg、约1400mg、约1450mg或约1500mg的缀合物的6HCl盐的剂量施用。

在一个实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg至约700mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约10kg至约25kg的患者。

在一个实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约600mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约10kg至约25kg的患者。

在一个实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约900mg至约1200mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约10kg至约25kg的患者。

在一个实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1100mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约10kg至约25kg的患者。

在一个实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约750mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约18kg至约50kg的患者。

在一个实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1250mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约18kg至约50kg的患者。

在一个实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约600mg至约800mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约25kg至约50kg的患者。

在一个实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约650mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约25kg至约50kg的患者。

在一个实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1000mg的缀合物的6HCl盐至约1300mg的剂量每四周一次施用给体重介于约25kg至约50kg的患者。

在一个实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1200mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约25kg至约50kg的患者。

在一个实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约700mg至约900mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约50kg至约100kg的患者。

在一个实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约750mg至约950mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重大于或等于约50kg的患者。

在一个实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1250mg至约1500mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约50kg至约100kg的患者。

在一个实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约750mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约50kg至约100kg的患者。

在一个实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1200mg至约1500mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约50kg至约100kg的患者。

在一个实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1400mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约50kg至约100kg的患者。

在一个实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约850mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重大于或等于约50kg的患者。

在一个实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1350mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重大于或等于约50kg的患者。

在一个实施方案中，本公开涉及一种治疗有需要的患有杜兴肌营养不良(DMD)的患者的方法，所述患者具有适合于外显子跳跃的突变，所述方法包括向患者施用如上所述的式(VIII)的反义寡聚物缀合物，其中以有效提供约100ug·h/mL与200ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约240ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的缀合物或其药学上可接受的盐的平均曲线下面积(AUC)的剂量施用所述缀合物。

在一个实施方案中，本公开涉及一种治疗有需要的患有杜氏肌营养不良(DMD)的患者的方法，所述患者具有适合于外显子跳跃的突变，所述方法包括向患者施用如上所述的式(VIII)的反义寡聚物缀合物，其中所述缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg至约1500mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用，以实现约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间、约120ug·h/mL与约240ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的平均AUC。

在一个实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。在另一实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约120ug·h/mL与约240ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。在另一实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

在某些实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg或约900mg的缀合物的6HCl盐的剂量施用。在某些其他实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约950mg、约1000mg、约1050mg、约1100mg、约1150mg、约1200mg、约1250mg、约1300mg、约1350mg、约1400mg、约1450mg或约1500mg的缀合物的6HCl盐的剂量施用。

在一个实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg至约700mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约10kg至约25kg的患者。

在一个实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约600mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约10kg至约25kg的患者。

在一个实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约900mg至约1200mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约10kg至约25kg的患者。

在一个实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1100mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约10kg至约25kg的患者。

在一个实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约750mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约18kg至约50kg的患者。

在一个实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1250mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约18kg至约50kg的患者。

在一个实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约600mg至约800mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约25kg至约50kg的患者。

在一个实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约650mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约25kg至约50kg的患者。

在一个实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1000mg的缀合物的6HCl盐至约1300mg的剂量每四周一次施用给体重介于约25kg至约50kg的患者。

在一个实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1200mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约25kg至约50kg的患者。

在一个实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约700mg至约900mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约50kg至约100kg的患者。

在一个实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约750mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约50kg至约100kg的患者。

在一个实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1200mg至约1500mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约50kg至约100kg的患者。

在一个实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1400mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重介于约50kg至约100kg的患者。

在一个实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约850mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重大于约50kg的患者。

在一个实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1350mg的缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用给体重大于约50kg的患者。

本公开的一个实施方案涉及一种在患有杜兴氏肌营养不良(DMD)的患者中靶向如上所述的式(IV)的反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐的暴露水平的方法，所述患者具有适合于外显子51跳跃的突变，所述方法包括以相当于约300mg至约900mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向患者施用缀合物或其药学上可接受的盐，以实现对应于约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间的AUC的暴露水平。

本公开的一个实施方案涉及一种在患有杜兴氏肌营养不良(DMD)的患者中靶向如上所述的式(IV)的反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐的暴露水平的方法，所述患者具有适合于外显子51跳跃的突变，所述方法包括以相当于约700mg至约900mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向患者施用缀合物或其药学上可接受的盐，以实现对应于约120ug·h/mL与约240ug·h/mL之间的AUC的暴露水平。

本公开的一个实施方案涉及一种在患有杜兴氏肌营养不良(DMD)的患者中靶向如上所述的式(IV)的反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐的暴露水平的方法，所述患者具有适合于外显子51跳跃的突变，所述方法包括以相当于约800mg至约1400mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向患者施用缀合物或其药学上可接受的盐，以实现对应于约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的AUC的暴露水平。

本公开的一个实施方案涉及一种在患有杜兴氏肌营养不良(DMD)的患者中靶向如上所述的式(IV)的反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐的暴露水平的方法，所述患者具有适合于外显子51跳跃的突变，所述方法包括以相当于约950mg至约1500mg的缀合物的.6HCl盐的剂量每四周一次向患者施用缀合物或其药学上可接受的盐，以实现对应于约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的AUC的暴露水平。

本公开的一个实施方案涉及一种在患有杜氏肌营养不良(DMD)的患者中靶向如上所述的式(IV)的反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐的暴露水平的方法，所述患者具有适合于外显子51跳跃的突变，所述方法包括根据以下方案以相当于缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量向患者施用缀合物或其药学上可接受的盐：

i)对于体重介于约10kg至约25kg的患者，约300mg至约700mg，或约900mg至约1200mg，每四周一次；

ii)对于体重介于约25kg至约50kg的患者，约600mg至约800mg，或约1000mg至约1300mg，每四周一次；或

iii)对于体重介于约50kg至约100kg的患者，约700mg至约900mg，或约1200mg至约1500mg，每四周一次；

以实现对应于约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的的AUC的暴露水平。

本公开的一个实施方案涉及一种治疗患者的DMD的方法，其包括向患者施用如上所述的式(IV)的反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐，其中根据以下方案以相当于缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用缀合物或其药学上可接受的盐：

i)对于体重介于约15kg至约40kg的患者，约500mg至约700mg，或约1000mg至约1200mg，每四周一次；或

ii)对于体重介于约40kg至约100kg的患者，约600mg至约800mg，或约1100mg至约1400mg，每四周一次；

以实现约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的平均AUC。

本公开的一个实施方案涉及一种治疗患者的DMD的方法，其包括向患者施用如上所述的式(VI)的反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐，其中根据以下方案以相当于缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用缀合物或其药学上可接受的盐：

i)对于体重介于约15kg至约40kg的患者，约500mg至约700mg，或约1000mg至约1200mg，每四周一次；或

ii)对于体重介于约40kg至约100kg的患者，约600mg至约800mg，或约1100mg至约1400mg，每四周一次；

以实现约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的平均AUC。

本公开的一个实施方案涉及一种治疗患者的DMD的方法，其包括向患者施用如上所述的式(VIII)的反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐，其中根据以下方案以相当于缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用缀合物或其药学上可接受的盐：

i)对于体重介于约15kg至约40kg的患者，约500mg至约700mg，或约1000mg至约1200mg，每四周一次；或

ii)对于体重介于约40kg至约100kg的患者，约600mg至约800mg，或约1100mg至约1400mg，每四周一次；

以实现约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的平均AUC。

本公开的一个实施方案涉及一种治疗患者的DMD的方法，其包括向患者施用如上所述的式(VIII)的反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐，其中根据以下方案以相当于缀合物的.6HCl盐的剂量的剂量施用缀合物或其药学上可接受的盐：

iii)对于体重介于约18kg至约50kg的患者，约700mg至约800mg，或约1200mg至约1250mg，每四周一次；或

iv)对于体重介于约40kg至约100kg的患者，约800mg至约900mg，或约1300mg至约1400mg，每四周一次；

以实现约120ug·h/mL与约240ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的平均AUC。

本公开的一个实施方案涉及用反义寡聚物缀合物治疗患有杜氏肌营养不良(DMD)的患者的方法，其包括向患者施用：

i) 式(IV)的反义寡聚物缀合物；和

ii) 镁补充剂，

其中所述缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约20mg/kg、约30mg/kg或约40mg/kg的缀合物的6HCl盐的剂量每4周一次施用，并且其中镁补充剂以足以使患者的血清镁水平正常化的剂量施用。

本公开的一个实施方案涉及用反义寡聚物缀合物治疗患有杜氏肌营养不良(DMD)的患者的方法，其包括向患者施用：

iii)式(IV)的反义寡聚物缀合物；和

iv)镁补充剂。

在一些实施方案，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg至约1200mg、约300mg至约1000mg、约300mg至约750mg、约300mg至约500mg、约400mg至约1400mg、约400mg至约1100mg、约400mg至约900mg、约400mg至约600mg、约500mg至约1500mg、约500mg至约1300mg、约500mg至约1000mg、约500mg至约950mg、约500mg至约850mg、约500mg至约750mg、约500mg至约650mg、约600mg至约1400mg、约600mg至约1200mg、约600mg至约1200mg、约600mg至约1000或约600mg至约900mg的缀合物的.6HCl盐的剂量施用；并且镁补充剂以足以使患者的血清镁水平正常化的剂量施用。在一个实施方案中，缀合物每四周一次施用。在一个实施方案中，镁补充剂以相当于每天约400mg至约2400mg氧化镁的剂量施用。

在一些实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg或约900mg的缀合物的6HCl盐的剂量施用，并且镁补充剂以足以使患者的血清镁水平正常化的剂量施用。在一个实施方案中，缀合物每四周一次施用。在一个实施方案中，镁补充剂以相当于每天约400mg至约2400mg氧化镁的剂量施用。

在一些实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约950mg、约1000mg、约1050mg、约1100mg、约1150mg、约1200mg、约1250mg、约1300mg、约1350mg、约1400mg、约1450mg或约1500mg的缀合物的6HCl盐的剂量施用，并且镁补充剂以足以使患者的血清镁水平正常化的剂量施用。在一个实施方案中，缀合物每四周一次施用。在一个实施方案中，镁补充剂以相当于每天约400mg至约2400mg氧化镁的剂量施用。

在一些实施方案中，式(IV)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约20mg/kg、约30mg/kg或约40mg/kg的缀合物的6HCl盐的剂量每4周一次施用，并且镁补充剂以足以使患者的血清镁水平正常化的剂量施用。在一个实施方案中，缀合物每四周一次施用。在一个实施方案中，镁补充剂以相当于每天约400mg至约2400mg氧化镁的剂量施用。

本公开的一个实施方案涉及用反义寡聚物缀合物治疗患有杜氏肌营养不良(DMD)的患者的方法，其包括向患者施用：

v)式(VI)的反义寡聚物缀合物；和

vi)镁补充剂。

在一些实施方案，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg至约1200mg、约300mg至约1000mg、约300mg至约750mg、约300mg至约500mg、约400mg至约1400mg、约400mg至约1100mg、约400mg至约900mg、约400mg至约600mg、约500mg至约1500mg、约500mg至约1300mg、约500mg至约1000mg、约500mg至约950mg、约500mg至约850mg、约500mg至约750mg、约500mg至约650mg、约600mg至约1400mg、约600mg至约1200mg、约600mg至约1200mg、约600mg至约1000或约600mg至约900mg的缀合物的.6HCl盐的剂量施用；并且镁补充剂以足以使患者的血清镁水平正常化的剂量施用。在一个实施方案中，缀合物每四周一次施用。在一个实施方案中，镁补充剂以相当于每天约400mg至约2400mg氧化镁的剂量施用。

在一些实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg或约900mg的缀合物的6HCl盐的剂量施用，并且镁补充剂以足以使患者的血清镁水平正常化的剂量施用。在一个实施方案中，缀合物每四周一次施用。在一个实施方案中，镁补充剂以相当于每天约400mg至约2400mg氧化镁的剂量施用。

在一些实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约950mg、约1000mg、约1050mg、约1100mg、约1150mg、约1200mg、约1250mg、约1300mg、约1350mg、约1400mg、约1450mg或约1500mg的缀合物的6HCl盐的剂量施用，并且镁补充剂以足以使患者的血清镁水平正常化的剂量施用。在一个实施方案中，缀合物每四周一次施用。在一个实施方案中，镁补充剂以相当于每天约400mg至约2400mg氧化镁的剂量施用。

在一些实施方案中，式(VI)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约20mg/kg、约30mg/kg或约40mg/kg的缀合物的6HCl盐的剂量每4周一次施用，并且镁补充剂以足以使患者的血清镁水平正常化的剂量施用。在一个实施方案中，缀合物每四周一次施用。在一个实施方案中，镁补充剂以相当于每天约400mg至约2400mg氧化镁的剂量施用。

本公开的一个实施方案涉及用反义寡聚物缀合物治疗患有杜氏肌营养不良(DMD)的患者的方法，其包括向患者施用：

vii)式(VIII)的反义寡聚物缀合物；和

viii)镁补充剂。

在一些实施方案，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg至约1200mg、约300mg至约1000mg、约300mg至约750mg、约300mg至约500mg、约400mg至约1400mg、约400mg至约1100mg、约400mg至约900mg、约400mg至约600mg、约500mg至约1500mg、约500mg至约1300mg、约500mg至约1000mg、约500mg至约950mg、约500mg至约850mg、约500mg至约750mg、约500mg至约650mg、约600mg至约1400mg、约600mg至约1200mg、约600mg至约1200mg、约600mg至约1000或约600mg至约900mg的缀合物的.6HCl盐的剂量施用；并且镁补充剂以足以使患者的血清镁水平正常化的剂量施用。在一个实施方案中，缀合物每四周一次施用。在一个实施方案中，镁补充剂以相当于每天约400mg至约2400mg氧化镁的剂量施用。

在一些实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg或约900mg的缀合物的6HCl盐的剂量施用，并且镁补充剂以足以使患者的血清镁水平正常化的剂量施用。在一个实施方案中，缀合物每四周一次施用。在一个实施方案中，镁补充剂以相当于每天约400mg至约2400mg氧化镁的剂量施用。

在一些实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约950mg、约1000mg、约1050mg、约1100mg、约1150mg、约1200mg、约1250mg、约1300mg、约1350mg、约1400mg、约1450mg或约1500mg的缀合物的6HCl盐的剂量施用，并且镁补充剂以足以使患者的血清镁水平正常化的剂量施用。在一个实施方案中，缀合物每四周一次施用。在一个实施方案中，镁补充剂以相当于每天约400mg至约2400mg氧化镁的剂量施用。

在一些实施方案中，式(VIII)的缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约20mg/kg、约30mg/kg或约40mg/kg的缀合物的6HCl盐的剂量每4周一次施用，并且镁补充剂以足以使患者的血清镁水平正常化的剂量施用。在一个实施方案中，镁补充剂以相当于每天约400mg至约2400mg氧化镁的剂量施用。

Claims (56)

1.一种治疗有需要的患有杜氏肌营养不良(DMD)的患者的方法，所述患者具有适合于外显子跳跃的突变，所述方法包括向所述患者施用式(I)的反义寡聚物缀合物：

或其药学上可接受的盐，

其中：

n是1-40；

每个Nu是核碱基，其合在一起形成与肌营养不良蛋白前体mRNA中的外显子退火位点互补的靶向序列；

T是选自以下的部分：

其中

R¹⁰⁰是细胞穿透肽，R²⁰⁰是氢，并且R¹是C₁-C₆烷基，

并且其中所述缀合物以有效提供约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的所述缀合物或所述其药学上可接受的盐的平均AUC的剂量施用。

2.一种治疗有需要的患有杜氏肌营养不良(DMD)的患者的方法，所述患者具有适合于外显子51跳跃的突变，所述方法包括向所述患者施用式(I)的反义寡聚物缀合物：

或其药学上可接受的盐，

其中：

n是1-40；

每个Nu是核碱基，其合在一起形成与肌营养不良蛋白前体mRNA中的外显子退火位点互补的靶向序列；

T是选自以下的部分：

其中

R¹⁰⁰是细胞穿透肽，R²⁰⁰是氢，并且R¹是C₁-C₆烷基，

其中所述缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg至约1500mg所述缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次施用，

以实现约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的平均AUC。

3.如权利要求1至2中任一项所述的方法，其中所述缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg至约1200mg、约300mg至约1000mg、约300mg至约750mg、约300mg至约500mg、约400mg至约1400mg、约400mg至约1100mg、约400mg至约900mg、约400mg至约600mg、约500mg至约1500mg、约500mg至约1300mg、约500mg至约1000mg、约500mg至约950mg、约500mg至约850mg、约500mg至约750mg、约500mg至约650mg、约600mg至约1400mg、约600mg至约1200mg、约600mg至约1200mg、约600mg至约1000或约600mg至约900mg所述缀合物的6HCl盐的剂量施用。

4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

5.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述缀合物或其药学上可接受的盐以有效提供约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的平均AUC的剂量施用。

6.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg或约900mg所述缀合物的6HCl盐的剂量施用。

7.如权利要求1至3或5中任一项所述的方法，其中所述缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约950mg、约1000mg、约1050mg、约1100mg、约1150mg、约1200mg、约1250mg、约1300mg、约1350mg、约1400mg、约1450mg或约1500mg所述缀合物的6HCl盐的剂量施用。

8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述细胞穿透肽选自RXRRXRRXRRXR(SEQID NO:18)、RFFRFFRFFR(SEQ ID NO:19)、RXRRXRRXRRXRXB(SEQ ID NO:20)、RFFRFFRFFRG(SEQ ID NO:21)、RRRRRRG(SEQ ID NO:22)、RRRRRR(SEQ ID NO:23)、RRRRRG(SEQ ID NO:24)或RRRRR(SEQ ID NO:25)，其中R是精氨酸，X是6-氨基己酸，B是β-丙氨酸，F是苯丙氨酸，并且G是甘氨酸。

9.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述细胞穿透肽RRRRRRG(SEQ ID NO:22)、RRRRRR(SEQ ID NO:23)、RRRRRG(SEQ ID NO:24)或RRRRR(SEQ ID NO:25)，其中R是精氨酸并且G是甘氨酸。

10.如权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述细胞穿透肽是RRRRRRG(SEQ IDNO:22)，其中R是精氨酸并且G是甘氨酸。

11.如权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物引起人肌营养不良蛋白基因中外显子的跳跃。

12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述外显子选自外显子44、45、50、51、52或53。

13.如权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述外显子选自外显子45、51或53。

14.如权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物具有式(III)：

或其药学上可接受的盐，

其中每个Nu是核碱基，其合在一起形成与肌营养不良蛋白前体mRNA中的外显子退火位点互补的靶向序列。

15.如权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物具有式(IV)：

或其药学上可接受的盐。

16.如权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物具有式(IVA)：

17.如权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物具有式(VI)：

或其药学上可接受的盐。

18.如权利要求1至11或17中任一项所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物具有式(VIA)：

19.如权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物具有式(VIII)：

或其药学上可接受的盐。

20.如权利要求1至14或19中任一项所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物具有式(VIIIA)：

21.如权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg至约700mg所述缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约10kg至约25kg的患者施用。

22.如权利要求1至21中任一项所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约600mg所述缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约10kg至约25kg的患者施用。

23.如权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约900mg至约1200mg所述缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约10kg至约25kg的患者施用。

24.如权利要求1至20或23中任一项所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1100mg所述缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约10kg至约25kg的患者施用。

25.如权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约600mg至约800mg所述缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约25kg至约50kg的患者施用。

26.如权利要求1至20或25中任一项所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约650mg所述缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约25kg至约50kg的患者施用。

27.如权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1000mg所述缀合物的6HCl盐至约1300mg的剂量每四周一次向体重介于约25kg至约50kg的患者施用。

28.如权利要求1至20或27中任一项所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1200mg所述缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约25kg至约50kg的患者施用。

29.如权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约700mg至约900mg所述缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约50kg至约100kg的患者施用。

30.如权利要求1至20或29中任一项所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约750mg所述缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约50kg至约100kg的患者施用。

31.如权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1200mg至约1500mg所述缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约50kg至约100kg的患者施用。

32.如权利要求1至20或31中任一项所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约1400mg所述缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约50kg至约100kg的患者施用。

33.一种治疗有需要的患有杜氏肌营养不良(DMD)的患者的方法，所述患者具有适合于外显子51跳跃的突变，所述方法包括向所述患者施用式(I)的反义寡聚物缀合物：

或其药学上可接受的盐，

其中：

n是1-40；

每个Nu是核碱基，其合在一起形成与肌营养不良蛋白前体mRNA中的外显子退火位点互补的靶向序列；

T是选自以下的部分：

其中

R¹⁰⁰是细胞穿透肽，R²⁰⁰是氢，并且R¹是C₁-C₆烷基，

剂量相当于根据下列方案的所述缀合物的6HCl盐的剂量：

i)对于体重介于约10kg至约25kg的患者，约300mg至约700mg，或约900mg至约1200mg，每四周一次；

ii)对于体重介于约25kg至约50kg的患者，约600mg至约800mg，或约1000mg至约1300mg，每四周一次；或

iii)对于体重介于约50kg至约100kg的患者，约700mg至约900mg，或约1200mg至约1500mg，每四周一次；

以实现约100ug·h/mL与约200ug·h/mL之间或约200ug·h/mL与约500ug·h/mL之间的平均AUC。

34.如权利要求33所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约600mg或约1100mg所述缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约10kg至约25kg的患者施用。

35.如权利要求33所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约650mg或约1200mg所述缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约25kg至约50kg的患者施用。

36.如权利要求33所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约750mg或约1400mg所述缀合物的6HCl盐的剂量每四周一次向体重介于约50kg至约100kg的患者施用。

37.如权利要求1至36中任一项所述的方法，其中所述方法还包括向所述患者施用镁补充剂。

38.一种用反义寡聚物缀合物治疗患有杜氏肌营养不良(DMD)的患者的方法，其包括向所述患者施用：

iii)式(I)的反义寡聚物缀合物：

或其药学上可接受的盐，

其中：

n是1-40；

每个Nu是核碱基，其合在一起形成与肌营养不良蛋白前体mRNA中的外显子退火位点互补的靶向序列；

T是选自以下的部分：

其中

R¹⁰⁰是细胞穿透肽，R²⁰⁰是氢，并且R¹是C₁-C₆烷基；和

iv)镁补充剂。

39.如权利要求38所述的方法，其中所述缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg至约1200mg、约300mg至约1000mg、约300mg至约750mg、约300mg至约500mg、约400mg至约1400mg、约400mg至约1100mg、约400mg至约900mg、约400mg至约600mg、约500mg至约1500mg、约500mg至约1300mg、约500mg至约1000mg、约500mg至约950mg、约500mg至约850mg、约500mg至约750mg、约500mg至约650mg、约600mg至约1400mg、约600mg至约1200mg、约600mg至约1200mg、约600mg至约1000或约600mg至约900mg所述缀合物的6HCl盐的剂量施用。

40.如权利要求38至39中任一项所述的方法，其中所述缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg或约900mg所述缀合物的6HCl盐的剂量施用。

41.如权利要求38至40中任一项所述的方法，其中所述缀合物或其药学上可接受的盐以相当于约950mg、约1000mg、约1050mg、约1100mg、约1150mg、约1200mg、约1250mg、约1300mg、约1350mg、约1400mg、约1450mg或约1500mg所述缀合物的6HCl盐的剂量施用。

42.如权利要求38至41中任一项所述的方法，其中所述细胞穿透肽选自RXRRXRRXRRXR(SEQ ID NO:18)、RFFRFFRFFR(SEQ ID NO:19)、RXRRXRRXRRXRXB(SEQ ID NO:20)、RFFRFFRFFRG(SEQ ID NO:21)、RRRRRRG(SEQ ID NO:22)、RRRRRR(SEQ ID NO:23)、RRRRRG(SEQ ID NO:24)或RRRRR(SEQ ID NO:25)，其中R是精氨酸，X是6-氨基己酸，B是β-丙氨酸，F是苯丙氨酸，并且G是甘氨酸。

43.如权利要求38至42中任一项所述的方法，其中所述细胞穿透肽RRRRRRG(SEQ IDNO:22)、RRRRRR(SEQ ID NO:23)、RRRRRG(SEQ ID NO:24)或RRRRR(SEQ ID NO:25)，其中R是精氨酸并且G是甘氨酸。

44.如权利要求38至43中任一项所述的方法，其中所述细胞穿透肽是RRRRRRG(SEQ IDNO:22)，其中R是精氨酸并且G是甘氨酸。

45.如权利要求38至44中任一项所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐引起人肌营养不良蛋白基因中外显子的跳跃。

46.如权利要求38至45中任一项所述的方法，其中所述外显子选自外显子44、45、50、51、52或53。

47.如权利要求38至46中任一项所述的方法，其中所述外显子选自外显子45、51或53。

48.如权利要求38至47中任一项所述的方法，其中所述镁补充剂以有效提供正常血清镁水平的量施用。

49.如权利要求38至48中任一项所述的方法，其中所述镁补充剂以相当于每天约100mg至约2400mg氧化镁的剂量施用。

50.如权利要求38至49中任一项所述的方法，其中所述镁补充剂以相当于每天约400mg至约2400mg氧化镁的剂量施用。

51.如权利要求38至50中任一项所述的方法，其还包括在所述施用后两周或更多周测量所述患者的血清镁水平。

52.如权利要求38至51中任一项所述的方法，其还包括以基于所测量的血清镁水平的剂量施用第二剂量的镁补充剂。

53.如权利要求38至52中任一项所述的方法，其中所述镁补充剂选自氧化镁、柠檬酸镁、碳酸镁、磷酸氢镁、甘油磷酸镁、三硅酸镁、氢氧化镁、碳酸氢氧化镁、乙酸镁、柠檬酸镁、乳酸镁、葡萄糖酸镁、氯化镁、天冬氨酸镁、辛酸镁、抗坏血酸镁、牛磺酸镁、苹果酸镁和二甘氨酸镁、吡酮酸镁或硫酸镁。

54.如权利要求38至53中任一项所述的方法，其中所述镁补充剂来自氧化镁。

55.一种用反义寡聚物缀合物治疗患者的方法，其包括向需要所述治疗的患者施用反义寡聚物缀合物和镁补充剂。

56.如权利要求38至55中任一项所述的方法，其中所述反义寡聚物缀合物或其药学上可接受的盐以药物配制品的形式施用，其中所述缀合物在所述配制品中的浓度为约50mg/ml。