CN117177771A - 一种诊断和治疗t细胞淋巴瘤的方法 - Google Patents

Abstract

T细胞淋巴瘤是一组涉及T淋巴细胞的异质性恶性肿瘤，一般预后较差。其中，皮肤T细胞淋巴瘤主要涉及皮肤。蕈样真菌病和Sezary综合征是最常见的皮肤T细胞淋巴瘤。发明人研究了Sezary细胞的调节性T表型，发现Sezary细胞和其他T细胞淋巴瘤细胞系都表达CCR8(CD198)，因此，CCR8是一种有用的诊断、预后和随访标志物，也是T细胞淋巴瘤的潜在治疗靶点。表达CCR8的癌细胞的治疗性缺失能够消除肿瘤细胞，还能够激活T细胞淋巴瘤的抗肿瘤免疫力。

Description

一种诊断和治疗T细胞淋巴瘤的方法

技术领域

本公开涉及医学领域，具体地，涉及肿瘤学领域。

背景技术

T细胞淋巴瘤是一种涉及T淋巴细胞的异质性恶性肿瘤，通常预后较差。其中，皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)主要涉及皮肤。真菌病和Sézary综合征(SS)是最常见的皮肤T细胞淋巴瘤。循环中的克隆肿瘤T细胞(Sézary细胞)表达CD4，并可能不表达CD7和CD26，而在大多数情况下表现出CD158k(KIR3DL2)的异常表达(1,2)。晚期CTCL中很少出现长期应答，因此需要研究新的治疗方法。最近，抗CCR4单克隆抗体(mogamulizumab)改善了CTCL患者的无进展生存期(3)。CCR4不仅可以在Sézary细胞中表达，也可以在外周血活化的调节性T细胞(Treg)中表达(4)，通过抗CCR4莫干单抗治疗对CCR4+循环Treg细胞的缺失与自身免疫不良事件的发生有关(5,6)。除CCR4外，Sézary细胞还表达多种Treg标记和免疫检查点抑制剂，如PD1(7)、CD39(8)和TIGIT(9)。Sézary细胞对这些标记的表达促使我们研究CCR8(CD198)的表达，CCR8是一种参与淋巴细胞归巢到皮肤的趋化因子受体(10)。

发明内容

本发明由权利要求书定义。

特别地，本发明涉及诊断和治疗T细胞淋巴瘤的方法。

发明详述

发明者研究了Sézary细胞的调节性T表型，发现Sézary细胞和其他T细胞淋巴瘤细胞系都表达CCR8(CD198)。CCR8是一种趋化因子受体，参与淋巴细胞向皮肤的归巢(10)。皮肤驻留记忆T细胞(T_RM)表达CCR8(11)，TRM被怀疑是蕈样真菌病的原发肿瘤细胞(12)。参与免疫逃逸的肿瘤浸润调节性T细胞也强烈表达CCR8，而外周血调节性T细胞的表达量较低(13)。在LLC-OVA和MC38肿瘤小鼠模型中，CCR8+调节性T细胞的单独缺失或与PD-1抑制剂联合使用均具有较强的抗肿瘤作用(13)。因此，CCR8是一种有用的诊断、预后和随访标志物，也是T细胞淋巴瘤的潜在治疗靶点。表达CCR8的癌细胞的治疗性缺失能够消除肿瘤细胞，还能够激活T细胞淋巴瘤的抗肿瘤免疫力。

主要定义

本文使用的术语“T细胞”具有本领域的一般含义，是免疫系统的重要组成部分，在细胞介导的免疫中发挥核心作用。T细胞被称为传统淋巴细胞，因为它们通过TCR(抗原的T细胞受体)识别抗原，并通过复杂的主要组织相容性分子呈现或限制抗原。T细胞有几个亚群，每个亚群都有不同的功能，CD8+ T细胞、CD4+ T细胞和γ-δT细胞。本文使用的术语“CD8+ T细胞”具有本领域的一般含义，是指表面表达CD8的T细胞亚群。它们受MHC I类限制，具有细胞毒性T细胞的功能。“CD8+ T细胞”也被称为细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、T杀手细胞、细胞溶解T细胞或杀手T细胞。CD8抗原是免疫球蛋白超基因家族的成员，是主要组织相容性复合体I类限制性相互作用中的关联识别元件。本文所用术语“肿瘤浸润性CD8+ T细胞”是指离开血流并迁移到肿瘤中的患者的CD8+ T细胞池。本文所用术语“CD4+ T细胞”(也T辅助细胞或TH细胞)是指在其表面表达CD4糖蛋白并在免疫过程中协助其他白细胞的T细胞，包括B细胞成熟转变为浆细胞和记忆B细胞，以及细胞毒性T细胞和巨噬细胞的激活。当抗原呈递细胞(APCs)表面表达的MHC II类分子向CD4+ T细胞递呈多肽抗原时，CD4+T细胞就会被激活。一旦被激活，它们就会迅速分裂，并分泌细胞因子来调节或协助主动免疫反应。这些细胞可分化成多种亚型之一，包括TH1、TH2、TH3、TH17、TH9、TFH或Treg，它们分泌不同的细胞因子，促进不同类型的免疫反应。来自APC的信号将T细胞导向特定的亚型。除CD4外，本领域已知的TH细胞表面生物标记物还包括CXCR3(Th1)、CCR4、Crth2(Th2)、CCR6(Th17)、CXCR5(Tfh)以及亚型特异性表达的细胞因子和转录因子，包括T-bet、GATA3、EOMES、RORγT、BCL6和FoxP3。本文所用术语“γ-δT细胞”具有本领域的一般含义。γ-δT细胞通常占健康人(人类、猴子)外周血淋巴细胞的1％至5％。它们参与建立保护性免疫反应，并且已经证明它们通过与抗原的直接相互作用来识别它们的抗原配体，而不需要抗原呈递细胞的MHC分子的任何呈递。γ9δ2T细胞(有时也称为γ2δ2T细胞)是带有可变结构域Vγ9和Vδ2的TCR受体的γδT细胞，它们构成人体血液中的γδT细胞的主体。激活后的γδT细胞具有强大的、不受MHC限制的细胞毒活性，尤其能有效杀死各种类型的细胞，特别是致病细胞。这些细胞可能是受病毒感染的细胞(Poccia et al.,J.Leukocyte Biology,1997,62:1-5)，也可能是受其他细胞内寄生虫感染的细胞，如分枝杆菌(Constant et al.,Infection and Immunity,December 1995,vol.63,no.12:4628-4633)或原生动物(Behr et al.,Infection andImmunity,1996,vol.64,no.8:2892-2896)。它们也可能是癌细胞(Poccia et al.,J.Immunol.,159:6009-6015；Fournie and Bonneville,Res.Immunol.,66th ForuminImmunology,147:338-347)。因此，在体外、离体或体内调节所述细胞活性的可能性将为治疗各种疾病，如传染病(特别是病毒性或寄生性疾病)、癌症、过敏，甚至自身免疫和/或炎症性疾病提供新颖、有效的治疗方法。

本文所用术语“T细胞淋巴瘤”具有本领域的一般含义，是指一种影响T细胞的罕见癌变淋巴瘤。淋巴瘤主要由T细胞不受控制的增殖引起，并可能癌变。T细胞淋巴瘤归类于非霍奇金淋巴瘤(NHL)，在所有非霍奇金类疾病中占比不到15％。T细胞淋巴瘤通常根据其生长模式分为侵袭性(快速生长)和隐匿性(缓慢生长)两种。其中，T细胞淋巴瘤包括外周T细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤(AITL)、肝脾T细胞淋巴瘤(HSTL)、自然杀伤T细胞淋巴瘤(NKTL)和皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)。

本文所用术语“皮肤T细胞淋巴瘤”或“CTCL”具有本领域的一般含义，是指一类罕见的异质性非霍奇金淋巴瘤，来源于归巢于皮肤的成熟T细胞。蕈样真菌病(MF)和Sezary综合征(SS)是原发性CTCL最常见的亚型，发病率为4.1/1,000,000人年，男性占多数。

本文中使用的术语“Sézary综合征”或“SS”具有本领域的一般含义，是指一种侵袭性皮肤T细胞淋巴瘤，其特征是红斑、淋巴结病和循环非典型淋巴细胞(Sézary细胞)三联征。SS多发于男性，多见于老年人，且进展迅速。SS相当于T细胞皮肤淋巴瘤的IVA2期和IVB期(参见本术语)。患者会出现脱屑性红斑和浸润，通常表现为鳞状面容和严重瘙痒，可能会出现脱发、外生殖器瘤、轻度掌跖角化症和甲癣，可观察到淋巴结病和肝脾肿大。患者经常发抖，主诉寒战和全身乏力。

本文所用术语“CCR8”具有本领域的一般含义，指C-C趋化因子受体8型，该术语也被命名为CD198、CKRL1、CMKBR8或CMKBRL2。CCR8的示例氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。该受体有几个胞外结构域，分别由SEQ ID NO:1中的1-35、94-107、172-202和264-280位定义。

SEQ ID NO:1>sp|P51685|CCR8_HUMAN C-C趋化因子受体8型OS＝Homo sapiensOX＝9606

GN＝CCR8 PE＝1 SV＝1

MDYTLDLSVTTVTDYYYPDIFSSPCDAELIQTNGKLLLAVFYCLLFVFSLLGNSLVILVLVVCKKLRSITDVYLLNLALSDLLFVFSFPFQTYYLLDQWVFGTVMCKVVSGFYYIGFYSSMFFITLMSVDRYLAVVHAVYALKVRTIRMGTTLCLAVWLTAIMATIPLLVFYQVASEDGVLQCYSFYNQQTLKWKIFTNFKMNILGLLIPFTIFMFCYIKILHQLKRCQNHNKTKAIRLVLIVVIASLLFWVPFNVVLFLTSLHSMHILDGCSISQQLTYATHVTEIISFTHCCVNPVIYAFVGEKFKKHLSEIFQKSCSQIFNYLGRQMPRESCEKSSSCQQHSSRSSSVDYIL

本文所用术语“能够诱导表达CCR8的癌细胞死亡的药物”是指在细胞和/或生理条件下能够诱导表达CCR8的癌细死胞亡的任何分子。特别是，该药物能够诱导表达CCR8的癌细胞死亡。在某些实施方案中，该制剂能够使CCR8癌细胞缺失。本文所用术语“缺失”，就癌细胞而言，是指患者体内表达CCR8的癌细胞数量出现可测量的减少。这种减少可以是至少约10％，例如，至少约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多。在某些实施方案中，该术语是指患者体内的CCR8癌细胞数量减少到可检测的限度以下。

本文所用术语“CCR8抑制剂”是指部分或完全阻断、抑制或中和CCR8生物活性或表达的分子。CCR8抑制剂可以是干扰细胞中与CCR8相关信号传导的任何类型的分子，例如，通过减少CCR8编码核酸的转录或翻译，或通过抑制或阻断CCR8多肽的活性，或两者都有。CCR8抑制剂的例子包括但不限于反义多核苷酸、干扰RNA、催化RNA、RNA-DNA嵌合体、CCR8特异性适配体、抗-CCR8抗体、抗-CCR8抗体的CCR8结合片段、CCR8结合小分子、CCR8结合肽、以及其他能特异性结合CCR8的多肽(包括但不限于一个或多个CCR8配体的CCR8结合片段，可选择与一个或多个附加结构域融合)，从而使CCR8抑制剂与CCR8之间发生相互作用导致CCR8活性或表达的降低或停止。

因此，本文所用术语“抗体”是指具有抗原结合区的任何抗体样分子，该术语包括包含抗原结合域的抗体片段，如Fab'、Fab、F(ab')2、单结构域抗体(DABs)、TandAbs二聚体、Fv、scFv(单链Fv)、dsFv、ds-scFv、Fd、线性抗体、微型抗体、双抗体、双特异性抗体片段、双特异性抗体、三特异性抗体(分别为双特异性或三特异性的scFv-Fab融合体)；sc-双特异性抗体；k(λ)体(scFv-CL融合体)；BiTE(双特异性T细胞接合体，用于吸引T细胞的scFv-scFv串联体)；DVD-Ig(双可变域抗体，双特异性形式)；SIP(小型免疫蛋白，一种微型抗体)；SMIP(“小型模块化免疫药物”scFv-Fc二聚体)；DART(ds稳定的双特异性抗体“双亲和重靶向”)；包含一个或多个CDR的小型抗体模拟物等。制备和使用各种基于抗体的构建体和片段的技术在本领域是众所周知的(Kabat等人，1991，在此特别纳入参考)。EP 404,097和WO 93/1 1161对Diabodies做了进一步描述；Zapata等人(1995)对线性抗体做了进一步描述。抗体可使用传统技术进行片段化，例如，用胃蛋白酶处理抗体可产生F(ab')2片段。由此产生的F(ab')2片段可通过还原二硫键来生成Fab'片段。木瓜蛋白酶消化可导致Fab片段的形成。Fab、Fab'和F(ab')2、scFv、Fv、dsFv、Fd、dAbs、TandAbs、ds-scFv、二聚体、微型抗体、双抗体、双特异性抗体片段和其他片段也可以通过重组技术合成或化学合成。生产抗体片段的技术是众所周知的，在本领域也有描述。例如，Beckman等人，2006；Holliger和Hudson，2005；Le Gall等人，2004；Reff和Heard，2001；Reiter等人，1996；以及Young等人，1995都进一步描述并实现了有效抗体片段的生产。在一些实施例中，本发明中的抗体是单链抗体。本文中使用的术语“单链抗体”具有本领域的一般含义，指的是指抗体的单重链可变结构域，可以在天然缺乏轻链的骆驼类哺乳动物中发现。这种单结构域抗体也是关于(单)结构域抗体的一般描述，还可参考上文引用的现有技术，以及EP 0 368 684、Ward等人(Nature 1989Oct12；341(6242):544-6)，Holt et al.,Trends Biotechnol.,2003,21(11):484-490；以及WO 06/030220,WO 06/003388。在天然抗体中，两条重链通过二硫键相互连接，每条重链通过一个二硫键与一条轻链相连。轻链分为两种：lambda(1)和kappa(k)。有五种主要的重链类型(或同型)决定了抗体分子的功能活性：IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。每条链都包含不同的序列结构域。轻链包括两个结构域，即可变结构域(VL)和恒定结构域(CL)。重链包括四个结构域，一个可变结构域(VH)和三个恒定结构域(CHI、CH2和CH3，统称CH)。轻链(VL)和重链(VH)的可变区决定了与抗原的结合识别性和特异性。轻链(CL)和重链(CH)的恒定区结构域赋予抗体链关联、分泌、跨胎盘流动性、补体结合和结合Fc受体(FcR)等重要的生物学特性。Fv片段是免疫球蛋白Fab片段的N端部分，由一条轻链和一条重链的可变部分组成。抗体的特异性在于抗体结合位点与抗原决定簇之间的结构互补性。抗体结合位点主要由来自超变区或互补决定区(CDRS)的残基组成。有时，非超变区或框架区(FR)的残基也会参与抗体结合位点或影响整个结构域的结构，从而影响结合位点。互补决定区或CDRs是指氨基酸序列，它们共同决定了天然免疫球蛋白结合位点的天然Fv区域的结合亲和力和特异性。免疫球蛋白的轻链和重链各有三个CDRs，分别称为L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3和H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3。因此，抗原结合位点通常包括六个CDRs，由重链和轻链V区各自的CDR组组成。框架区(FR)是指CDRs之间的氨基酸序列。抗体可变域中的残基按照Kabat等人设计的系统进行常规编号。该体系在Kabat等人，1987年，《免疫学意义的蛋白质序列》，美国卫生与公众服务部，美国国立卫生研究院(以下简称“Kabat等人”)中进行了阐述。本说明书中使用了这一编号系统。在SEQ ID序列中，Kabat残基的并不总是与氨基酸残基的线性编号直接对应。与严格的Kabat编号相比，实际的线性氨基酸序列可能包含更少或更多的氨基酸，这与基本可变域结构的结构成分(无论是框架还是互补决定区(CDR))的缩短或插入有关。通过将抗体序列中的同源残基与“标准”Kabat编号序列比对，可以确定给定抗体的正确Kabat编号。根据Kabat编号系统，重链可变结构域的CDRs位于残基31-35B(H-CDR1)、残基50-65(H-CDR2)和残基95-102(H-CDR3)。根据Kabat编号系统，轻链可变结构域的CDRs位于残基24-34(L-CDR1)、残基50-56(L-CDR2)和残基89-97(L-CDR3)处。

本文所用术语“结合”表示抗体对表面分子具有亲和力。本文所用术“亲和力”是指抗体与表位结合的强度。抗体的亲和力由解离常数Kd给出，定义为[Ab]×[Ag]/[Ab-Ag]，其中[Ab-Ag]是抗体-抗原复合物的摩尔浓度，[Ab]是未结合抗体的摩尔浓度，[Ag]是未结合抗原的摩尔浓度。亲和力常数Ka的定义是1/Kd。测定mAbs亲和力的首选方法见Harlow等人编著的Antibodies:ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,ColdSpring Harbor,N.Y.,(1988)，Coligan等编著的Current Protocols in Immunology,Greene Publishing Assoc.and Wiley Interscience,N.Y.,(1992,1993)和Muller,Meth.Enzymol.92:589-601(1983)，这些参考文献完全并入本文作为参考。确定mAbs亲和力的一种本领域众所周知的优选标准方法是使用Biacore仪器。

本文所用的“全人源”一词是指一种免疫球蛋白，如抗体或抗体片段，其整个分子来源于人类，或由与人类形式的抗体或免疫球蛋白相同的氨基酸序列组成。

本文所用术语“嵌合抗体”是指包含非人类抗体的VH结构域和VL结构域以及人类抗体的CH结构域和CL结构域的抗体。在一些实施方案中，“嵌合抗体”是一种抗体分子，其中(a)恒定区(即重链和/或轻链)或其一部分被改变、替换或交换，从而使抗原结合位点(可变区)与不同的或改变的类别、效应功能和/或种类的恒定区相连，或与赋予嵌合抗体新特性的完全不同的分子相连，如酶、毒素、激素、生长因子、药物等；或(b)可变区，或其一部分，被具有不同或改变的抗原特异性的可变区改变、替换或交换。嵌合抗体还包括原始化抗体，特别是人源化抗体。此外，嵌合抗体可能包含受体抗体或供体抗体中不存在的残基，这些修饰是为了进一步提高抗体的性能。更多详情，请参阅Jones等人，Nature 321:522-525(1986)；Riechmann et al.,Nature 332:323-329(1988)；以及Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992).(见U.S.Pat.No.4,816,567；以及Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984))。

本文所用术语“人源化抗体”是指具有人类抗体的可变区框架和常量区，但保留了先前非人类抗体的CDRs的抗体。在一些实施例中，人源化抗体包含来自非人类免疫球蛋白的最小序列。在大多数情况下，人源化抗体及其抗体片段可以是人类免疫球蛋白(受体抗体或抗体片段)，其中受体互补决定区(CDR)的残基被具有所需特异性、亲和力和能力的非人类物种(供体抗体)(如小鼠、大鼠或兔子)CDR的残基所取代。在某些情况下，人类免疫球蛋白的Fv框架区(FR)残基会被相应的非人类残基取代。此外，人源化抗体/抗体片段还可以包括既不存在于受体抗体中，也不存在于输入的CDR或框架序列中的残基。此类抗体的设计旨在保持其来源于结合区的非人类抗体的结合特异性，但避免对非人类抗体产生免疫反应。这些修饰可以进一步完善和优化抗体或抗体片段的性能。一般来说，人源化抗体或其抗体片段将包含至少一个、通常是两个可变结构域，其中所有或大部分CDR区域对应于非人免疫球蛋白的CDR区域，而所有或大部分FR区域对应于人免疫球蛋白序列的FR区域。人源化抗体或抗体片段还可以包含至少一部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常是人免疫球蛋白的恒定区。更多详情，请参阅Jones等，Nature,321:522-525,1986；Reichmann等，Nature,332:323-329,1988；Presta,Curr.Op.Struct.Biol.,2:593-596,1992。

本文使用的术语“双特异性抗体”具有本领域的一般含义，是指具有两对不同的重链和轻链以及两个不同的抗原结合位点的人工杂交抗体。

本文所用术语“嵌合抗原受体”或“CAR”具有本领域的一般含义，是指一种人工构建的杂交蛋白或多肽，含有与T细胞信号传导结构域相连的抗体(如scFv)的抗原结合结构域。CARs的特点包括能够利用单克隆抗体的抗原结合特性，以非MHC限制的方式将T细胞的特异性和反应性指向选定靶点。此外，CARs在T细胞中表达时，不会与内源性T细胞受体(TCR)α和β链发生二聚化，这也是其优势所在。本发明的嵌合抗原受体通常包括一个细胞外铰链结构域、一个跨膜结构域和一个细胞内T细胞信号传导结构域。

本文所用术语“CAR-T细胞”是指经过基因工程改造以表达CAR的T淋巴细胞。CAR T细胞的定义包括所有类别和亚类的T淋巴细胞，包括CD4+、CD8+ T细胞、γδT细胞以及效应T细胞、记忆T细胞、调节T细胞等。转基因T淋巴细胞可以“来源于”或“获得于”使用转基因T细胞接受治疗的患者，也可以“来源于”或“获得于”其他患者。

本文中使用的术语“处理”或“治疗”既指预防性或预防性治疗，也指治疗性或疾病改良治疗，包括对有感染疾病风险或疑似感染疾病的患者以及患病或已被诊断为患有疾病或医疗状况的患者的治疗，还包括抑制临床复发。该治疗可用于患有医学疾病或最终可能患上该疾病的患者，以预防、治愈、延缓疾病的发作、减轻疾病的严重程度或改善疾病或复发性疾病的一种或多种症状，或延长患者的生存期，使其超出在没有这种治疗的情况下预期的生存期。所谓“治疗方案”是指疾病的治疗模式，例如治疗过程中使用的给药模式。治疗方案可包括诱导方案和维持方案。“诱导方案”或“诱导期”是指用于疾病初始治疗的治疗方案(或治疗方案的一部分)。诱导方案的总体目标是在治疗方案的初始阶段为患者提供高水平的药物。诱导疗法可采用(部分或全部)"负荷疗法"，其中包括给药剂量大于医生在维持疗法中的给药剂量，给药频率高于医生在维持疗法中的给药频率，或两者兼而有之。短语“维持治疗方案”或“维持治疗期”是指在疾病治疗期间用于维持患者病情的治疗方案(或治疗方案的一部分)，例如，使患者长期(数月或数年)处于缓解状态。维持治疗方案可采用连续治疗(如定期给药，如每周、每月、每年等)或间歇治疗(如中断治疗、间歇治疗、复发时治疗或达到特定预定标准[如疾病表现等]时治疗)。

本文所使用的术语“治疗有效量”是指在必要的剂量和时间段内达到预期治疗效果的有效量。活性剂的治疗有效量可能因疾病状态、患者年龄、性别、体重以及活性剂在个体中引起预期反应的能力等因素而异。治疗有效量也是指药物的任何毒性或有害作用都大于治疗有益作用的量。活性剂的有效剂量和剂量方案取决于所要治疗的疾病或状况，可由本领域技术人员确定。具有本领域普通技术的医生可以很容易地确定和处方所需的药物组合物的有效量。例如，医生可以在药物组合物中使用的活性剂剂量低于达到预期治疗效果所需的剂量时开始给药，然后逐渐增加剂量，直到达到预期效果。一般来说，本发明组合物的合适剂量是指根据特定剂量方案产生治疗效果的最低有效剂量。这种有效剂量一般取决于上述因素。例如，用于治疗的有效量可以通过其稳定疾病进展的能力来衡量。通常，化合物抑制癌症的能力通常可以在预测人类肿瘤疗效的动物模型系统中进行评估。治疗有效量的治疗性化合物可以减小肿瘤大小，或以其他方式改善患者的症状。本领域的普通技术人员可以根据患者的体型、症状的严重程度以及所选的特定组合物或给药途径等因素来确定用量。本发明抑制剂治疗有效量的一个示例性、非限制性范围是约0.1-100mg/kg，例如约0.1-50mg/kg，例如约0.1-20mg/kg，例如约0.1-10mg/kg，例如约0.5、约0.3、约1、约3mg/kg、约5mg/kg或约8mg/kg。本发明抑制剂治疗有效量的一个示例性、非限制性范围是0.02-100mg/kg，如约0.02-30mg/kg，如约0.05-10mg/kg或0.1-3mg/kg，例如约0.5-2mg/kg。给药方式可以是静脉注射、肌内注射、腹膜内注射或皮下注射，例如在目标部位附近给药。上述治疗和使用方法中的剂量方案经过调整，以提供最佳的预期反应(如治疗反应)。例如，可以一次给药、分次给药或根据治疗情况按比例减少或增加剂量。在一些实施例中，在治疗过程中，例如在预定的时间点监测疗效。在一些实施例中，可通过疾病区域的可视化或本文进一步描述的其他诊断方法来监测疗效，例如，进行一次或多次PET-CT扫描，例如使用标记的本发明抑制剂、从本发明抑制剂衍生的片段或微型抗体。如果需要，药物组合物的有效日剂量可以在一天中以适当的间隔分别施用两、三、四、五、六或更多子剂量，可选择以单位剂型施用。在某些实施方案中，本发明的人类单克隆抗体通过长时间(如24小时以上)缓慢连续输注给药，以尽量减少任何不必要的副作用。本发明抑制剂的有效剂量也可采用每周、每两周或每三周给药一次的方式。给药期可限制在8周、12周或直到临床进展确定为止。作为参考的例子，根据本发明进行的治疗可作为本发明抑制剂的每日剂量提供，其用量约为0.1-100毫克/千克，如每天0.2、0.5、0.9、1.0、1.1、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、40、45、50、60、70、80、90或100mg/kg，在治疗开始后的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40天中的至少一天，或者可选地，在开始治疗后的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20周中的至少一个周，或其任意组合，每24、12、8、6、4或2小时使用一次或分次使用，或其任意组合。

治疗方法：

相应地，本发明的第一个目的涉及一种治疗有需要的患者的T细胞淋巴瘤的方法，该方法包括向患者施用治疗有效量的能够诱导CCR8表达癌细胞死亡的制剂。

在一些实施例中，T细胞淋巴瘤是血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤、自然杀伤T细胞淋巴瘤或皮肤T细胞淋巴瘤。在一些实施例中，T细胞淋巴瘤是皮肤T细胞淋巴瘤。更具体地说，T细胞淋巴瘤是Sézary综合征。

在一些实施例中，患者是人类婴儿。在一些实施例中，患者是人类儿童。在一些实施例中，患者是成人。在一些实施例中，患者是老年人。在一些实施例中，患者是早产儿。

在一些实施例中，能够诱导表达CCR8的癌细胞死亡的制剂是一种CCR8抑制剂。

CCR8抑制剂是本领域众所周知的。例如，CCR8抑制剂可以是AZ084(CasNo.929300-19-6)、ML604086(Cas No.850330-18-6)、R243(Cas No.688352-84-3)、LMD-A(Cas No.850330-77-7)、MC148、CDBP0728或CDBP5280。专利文献中也描述了CCR8抑制剂，例如WO/2004/058736。

CCR8抗体:

在一些实施例中，所述试剂是一种对CCR8具有结合亲和力的抗体。在一些实施例中，所述试剂是针对CCR8至少一个胞外结构域的抗体。在一些实施例中，所述抗体是抗CCR8中和抗体。在一些实施例中，所述抗体抑制CCL1、CCL8或CCL18介导的CCR8激活。在一些实施例中，所述抗体导致CCR8表达癌细胞的缺失。

在一些实施例中，所述抗体是人源化抗体或嵌合抗体。

在一些实施例中，所述抗体是全人源抗体。全人源单克隆抗体也可以通过转基因小鼠来制备，转基因小鼠大部分为人免疫球蛋白重链和轻链基因座。例如，请参阅U.S.Pat.5,591,669、5,598,369、5,545,806、5,545,807、6,150,584号以及其中引用的参考文献，其内容通过引用并入本文。

在一些实施例中，抗体可从ATCC登录号为PTA-6940的杂交瘤中获得。

在一些实施例中，抗体可从ATCC登录号为PTA-6938的杂交瘤中获得。

在一些实施例中，抗体可从ATCC登录号为PTA-6939的杂交瘤中获得。

在一些实施例中，所述抗体为Lu S,Hu S,Gan X等711中公开的HB M1022抗体。HBM1022是一种新型抗CCR8抗体，可通过增强ADCC活性消耗肿瘤浸润调节性T细胞，与Keytruda一起介导强效抗肿瘤活性，见期刊ImmunoTherapy of Cancer；2020；8:doi:10.1136/jitc-2020-SITC2020.0711。

在一些实施例中，所述抗体是Rankin A,Naik E861中披露的FPA157抗体，FPA157抗体是一种抗CCR8缺失抗体，经工程改造可优先消除肿瘤浸润T调节细胞。期刊ImmunoTherapy of Cancer 2020；8:doi:10.1136/jitc-2020-SITC2020.0861。

在一些实施例中，所述抗体是Lake A、Warren M、Das S等726中公开的SRF114抗体。SRF114是一种全人源的CCR8选择性IgG1抗体，可通过ADCC诱导肿瘤Tregs的破坏。期刊ImmunoTherapy of Cancer 2020；8:doi:10.1136/jitc-2020-SITC2020.0726。

在一些实施例中，所述抗体是Lan,Ruth等人在“在临床前模型中，高度选择性的抗CCR8抗体介导的调节性T细胞的缺失导致了强大的抗肿瘤活性，无论是单独使用还是与抗PD-1联合使用。”(2020):6694-6694and in Bayati F,Mohammadi M,Valadi M,JamshidiS,Foma AM,Sharif-Paghaleh E.The Therapeutic Potential of Regulatory T Cells:Challenges and Opportunities.Front Immunol.2021；11:585819.Published 2021 Jan15.doi:10.3389/fimmu.2020.585819公开的抗CCR8 hIgG1-非糖基化的BMS-986340抗体。

在一些实施例中，抗体是Van Damme H、Dombrecht B、Kiss M、Roose H、Allen E、Van Overmeire E、Kancheva D、Martens L、Murgaski A、Bardet PMR、Blancke G、Jans M,Bolli E,Martins MS,Elkrim Y,Dooley J,Boon L,Schwarze JK,Tacke F,Movahedi K,Vandamme N,Neyns B,Ocak S,Scheyltjens I,Vereecke L,Nana FA,Merchiers P,LaouiD,Van Ginderachter JA。CCR8+肿瘤浸润调节性T细胞的治疗性缺失可激发抗肿瘤免疫并与抗PD-1疗法协同作用。J Immunother Cancer.2021 Feb；9(2):e001749.doi:10.1136/jitc-2020-001749.PMID:33589525；PMCID:PMC7887378。

在一些实施例中，所述抗体是dsamis、Fabien等人在“JTX-1811(一种具有增强ADCC活性的抗CCR8抗体)优先使肿瘤浸润调节性T细胞缺失的临床前评估”(2020):4532-4532所公开的JTX-1811。

CCR8抗体的缺失

在一些实施例中，所述抗体适用于CCR8癌细胞介导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性的缺失。

本文所用术语“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”是指一种细胞介导的反应，在这种反应中，非特异性细胞毒性细胞(如自然杀伤(NK)细胞、中性粒细胞和巨噬细胞)识别靶细胞上的结合抗体，随后导致靶细胞裂解。虽然不希望局限于任何特定的作用机制，但这些介导ADCC的细胞毒性细胞通常表达Fc受体(FcRs)。

本文所用术语“Fc区”包括抗体恒定区的多肽，所述恒定区不包括第一恒定区免疫球蛋白结构域。因此，Fc是指IgA、IgD和IgG的最后两个恒定区免疫球蛋白结构域，IgE和IgM的最后三个恒定区免疫球蛋白结构域，以及这些结构域柔性铰链的N-末端。对于IgA和IgM，Fc可能包括J链。对于IgG，Fc包括免疫球蛋白结构域Cgamma2和Cgamma3(Cγ2和Cγ3)以及Cgamma1(Cγ1)和Cgamma2(Cγ2)之间的铰链。尽管Fc区的边界可能会有所不同，但人IgG重链Fc区通常被定义为包括残基C226或P230至其羧基末端，其中的编号是根据Kabat等人的研究中的EU指数。(1991,NIH Publication 91-3242,National Technical InformationService,Springfield,Va.)。“如Kabat所述的EU指数”是指Kabat等人在上文所述的人类IgG1 EU抗体的残基编号。Fc可单独指这一区域，也可指抗体、抗体片段或Fc融合蛋白中的这一区域。Fc变异蛋白可以是抗体、Fc融合蛋白或任何包含Fc区域的蛋白或蛋白结构域。特别优选的是包含变体Fc区的蛋白质，它们是Fc区的非天然变体。与野生型氨基酸序列相比，非天然出现的Fc区(此处也称为“变异Fc区”)的氨基酸序列包括至少一个氨基酸残基的取代、插入和/或缺失。变异Fc区序列中因插入或置换而出现的任何新氨基酸残基均可称为非天然存在的氨基酸残基。注：在许多Fc位置都观察到了多态性，包括但不限于Kabat 270、272、312、315、356和358，因此所展示的序列与现有技术中的序列可能存在细微差别。

本文所用术语“Fc受体”或“FcR”是指与抗体的Fc区结合的受体。介导ADCC的主要细胞NK细胞表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII、FcγRIII和/或FcγRIV。造血细胞上FcR的表达的总结见Ravetch and Kinet,Annu.Rev.Immunol.,9:457-92(1991)。为评估分子的ADCC活性，可进行体外ADCC试验，如美国专利号5,500,362或5,821,337中所述的试验。用于此类检测的有用效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和天然杀伤细胞(NK)。另外，也可以在体内评估相关分子的ADCC活性，例如在动物模型中，如Clynes等人在Proc.Natl.Sci.(USA)，95:652-656(1998)中披露的动物模型。

本文使用的术语“效应细胞”是指表达一种或多种FcR并执行效应功能的白细胞。这些细胞至少表达FcγRI、FCγRII、FcγRIII和/或FcγRIV并执行ADCC效应器功能。介导ADCC的人类白细胞包括外周血单核细胞(PBMC)、自然杀伤(NK)细胞、单核细胞、细胞毒性T细胞和中性粒细胞。

在一些实施例中，适用于消耗癌细胞的抗体是全长抗体。在一些实施例中，全长抗体是IgG1抗体。在一些实施例中，全长抗体是IgG3抗体。

在一些实施例中，适用于消耗癌细胞的抗体包含一个变体Fc区，它对FcγRIA、FcγRIIA、FcγRIIB、FcγRIIIA、FcγRIIIB和FcγRIV具有增强的亲和力。在一些实施例中，本发明的抗体包括包含至少一个氨基酸取代、插入或删除的变体Fc区，其中所述至少一个氨基酸残基取代、插入或删除导致对FcγRIA，FcγRIIA，FcγRIIB，FcγRIIIA，FcγRIIIB和FcγRIV的亲和力增加。在一些实施例中，本发明的抗体包括包含至少一个氨基酸取代、插入或删除的变体Fc区，其中所述至少一个氨基酸残基从由残基239、330和332组成的基团中选择，其中氨基酸残基按照EU索引编号。在一些实施例中，本发明的抗体包括包含至少一个氨基酸取代的变体Fc区，其中所述至少一个氨基酸取代选自由：S239D、A330L、A330Y和1332E组成的基团，其中氨基酸残基按照EU索引编号。

在一些实施例中，修饰了适用于清除癌细胞的抗体的糖基化。例如，可以制成糖基化抗体(即抗体缺乏糖基化)。例如，改变糖基化可以增加抗体对抗原的亲和力等。例如，可以通过改变抗体序列中的一个或多个糖基化位点来实现这种碳水化合物修饰。例如，可以进行一个或多个氨基酸替换，从而消除一个或多个可变区框架糖基化位点，从而消除该位点的糖基化。这种糖基化可能增加抗体对抗原的亲和力，Co等人在美国专利Nos.5,714,350和6,350,861中对这种方法进行了更详细的描述。此外，也可以制造改变的糖基化类型的抗体，如具有少量或无岩藻糖基残基的低岩藻糖基化或非岩藻糖基化抗体，或具有增加的双链GlcNac结构的抗体。这种改变的糖基化模式已被证明可以增加抗体的ADCC能力。这种碳水化合物修饰可以通过例如在具有改变的糖基化机制的宿主细胞中表达抗体来实现。糖基化机制改变的细胞在本领域已有描述，可用作表达本发明重组抗体的宿主细胞，从而产生糖基化改变的抗体。例如，Hang等人的EP1176195描述了一种功能紊乱的FUT8基因细胞系，该基因编码一种岩藻糖基转移酶，因此在这种细胞系中表达的抗体表现出低岩藻糖基化或没有岩藻糖基残基。因此，在某些实施方案中，本发明的人类单克隆抗体可以通过在表现出低岩藻糖基化或非岩藻糖基化模式的细胞系中重组表达来生产，例如，编码岩藻糖基转移酶的FUT8基因表达缺陷的哺乳动物细胞系。Presta发表的PCT出版物WO 03/035835描述了一种变异的CHO细胞系Lecl3细胞，在Asn(297)连接的碳水化合物上附着岩藻糖的能力降低，也会导致在宿主细胞中表达的抗体低岩藻糖基化(另见Shields,R.L.et al,2002J.Biol.Chem.277:26733-26740)。Umana等人的专利文献WO 99/54342描述了表达糖蛋白修饰糖基转移酶(如β(l,4)-N乙酰葡糖胺基转移酶III(GnTIII))的工程细胞系，这样在工程细胞系中表达的抗体显示出更多的二叉GlcNac结构，从而提高了抗体的ADCC活性(另见Umana等人，1999Nat.Biotech.17:176-180)。Eureka Therapeutics进一步描述了基因工程CHO哺乳动物细胞，这些细胞能产生缺乏岩藻糖基残基的哺乳动物糖基化模式改变的抗体(http://www.eurekainc.com/a&boutus/companyoverview.html)。另外，本发明的人类单克隆抗体可以在酵母或丝状真菌中生产，这些酵母或丝状真菌具有类似哺乳动物的糖基化模式，能够生产缺乏岩藻糖基化模式的抗体(例如，见EP1297172B1)。

在一些实施例中，所述抗体适用于消除癌细胞介导的补体依赖性细胞毒性。

本文所用术语“补体依赖性细胞毒性”或“CDC”是指分子在补体存在的情况下启动补体激活和裂解靶点的能力。补体激活途径是由补体系统的第一成分(C1q)与同源抗原复合物分子(如抗体)结合而启动的。为评估补体激活，可采用CDC检测法，如Gazzano-Santaro等人在J.Immunol.Methods，202:163(1996)中所述。

在某些实施方案中，适用于消除癌细胞的抗体可介导抗体依赖性吞噬作用。

本文所用术语“抗体依赖性吞噬作用”或“调理作用”是指细胞介导的反应，其中表达FcγRs的非特异性细胞毒性细胞可识别靶细胞上结合的抗体，并随后导致靶细胞被吞噬。

CCR8多特异性抗体：

在一些实施例中，适用于清除CCR8癌细胞的抗体是一种多特异性抗体，它包括一个针对CCR8的第一抗原结合位点和至少一个针对上述效应细胞的第二抗原结合位点。在所述实施例中，第二抗原结合位点用于招募杀伤机制，例如，通过将抗原结合在人类效应细胞上。在一些实施例中，效应细胞能够诱导ADCC，如自然杀伤细胞。例如，表达FcRs的单核细胞、巨噬细胞参与特异性杀伤靶细胞，并将抗原呈递给免疫系统的其他成分。在一些实施例中，效应细胞可吞噬靶抗原或靶细胞。效应细胞上特定FcR的表达可受细胞因子等体液因素的调节。效应细胞可吞噬靶抗原或吞噬或溶解靶细胞。下文举例说明了合适的细胞毒剂和第二治疗剂，包括毒素(如放射性标记肽)、化疗剂和原药。在一些实施例中，第二结合位点与上述定义的Fc受体结合。在一些实施例中，第二结合位点与NK细胞的表面分子结合，从而激活所述细胞。在一些实施例中，第二结合位点与NKp46结合。本发明的多特异性抗体分子的示例形式包括但不限于：(i)通过化学异质共轭交联的两种抗体，其中一种对ILC的特定表面分子具有特异性，另一种对第二种抗原具有特异性；(ii)包含两个不同抗原结合区的单一抗体；(iii)包含两个不同抗原结合区域的单链抗体，例如，通过额外的肽连接器串联连接的两个单链抗体；(iv)双可变域抗体(DVD-Ig)，其中每条轻链和重链包含通过短肽连接串联的两个可变域(Wu et al.,Generation and Characterization of a DualVariable Domain Immunoglobulin(DVD-Ig^TM)Molecule,In:Antibody Engineering,Springer Berlin Heidelberg(2010))；(v)化学连接的双特异性(Fab')2片段；(vi)Tandab，由两条单链二抗体融合而成的四价双特异性抗体，对每个目标抗原都有两个结合位点；(vii)柔性抗体，由单链抗体与产生多价分子的二抗体的组合；(viii)基于蛋白激酶a中的“二聚化和对接结构域”的所谓“对接和锁定”分子，当应用于Fabs时，可以产生由两个相同的Fab片段连接到不同Fab片段的三价双特异性结合蛋白；(ix)所谓的蝎形分子(Scorpion molecule)，例如由两个与人的Fab臂的两个末端融合的scFv组成；和(x)双抗体。双特异性抗体的另一种示例形式是具有互补CH3结构域的IgG样分子，以强制异源二聚化。这种分子可以使用已知的技术制备，例如，Triomab/Quadroma(Trion Pharma/Fresenius Biotech)，Knob-into-Hole(Genentech)，CrossMAb(Roche)和静电匹配(Amgen)，LUZ-Y(Genentech)，链交换工程结构域体(SEEDbody)(EMD Serono)，Biclonic(Merus)和DuoBody(Genmab A/S)技术。

在一些实施例中，多特异性抗体是双特异性抗体。

在一些实施例中，双特异性抗体是一种BiTE。本文所用术语“双特异性T细胞吸引子”或“BiTE”指的是一种双特异性抗体，它是由两个柔性连接的单链抗体(scFv)组成的重组蛋白构建体。其中一个scFv抗体与选定的、靶细胞表达的肿瘤抗原(即CCR8)特异性结合，第二个scFv抗体与另一个分子特异性结合，如CD3，CD3是T细胞上T细胞受体复合物的一个亚基。在一些实施例中，在某些实施方案中，BiTE抗体能够将T细胞瞬时结合到靶细胞上，同时激活T细胞的细胞溶解活性。BiTE介导的T细胞活化既不需要T细胞上的特异性T细胞受体，也不需要靶细胞上的MHC I分子、肽抗原或协同刺激分子。

CCR8抗体-药物共轭物：

在一些实施例中，适用于去除癌细胞的抗体被偶联到治疗部分，即药物。

在一些实施例中，在某些实施方案中，治疗分子可以是细胞毒素、化疗药物、细胞因子、免疫抑制剂、免疫刺激剂、溶肽或放射性同位素。这种共轭物在本文中称为“抗体-药物共轭物”或“ADCs”。

在一些实施例中，在某些实施方案中，适用于消耗癌细胞的抗体与细胞毒性分子共轭。例如，细胞毒性分子可以选自以下组别：紫杉醇；细胞松弛素B；克霉素D；溴化乙锭；依美汀；丝裂霉素；依托泊苷；替诺泊苷；长春新碱；长春碱；秋水仙碱；多柔比星；达柔比星；二羟基蒽二酮；微管蛋白抑制剂，如美坦辛或其类似物或衍生物；抗有丝分裂剂，如单甲基乌司他丁E或F或其类似物或衍生物；多拉他丁10或15或其类似物；伊立替康或其类似物；米托蒽醌；米曲霉素；放线菌素D；1-脱氢睾酮；糖皮质激素；普鲁卡因；四卡因；利多卡因；普萘洛尔；嘌呤霉素；卡利昔明或其类似物或衍生物；抗代谢药，如甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、氟达拉滨、5-氟尿嘧啶、地卡巴嗪、羟基脲、天冬酰胺酶、吉西他滨或克拉利宾；烷化剂，如甲氯雷他明、硫代埃帕、氯布嘧啶、美法兰、卡莫司汀(BSNU)、洛莫司汀(CCNU)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲霉素、达卡巴嗪(DTIC)、丙卡巴嗪、丝裂霉素C；铂衍生物，如顺铂或卡铂；二螫霉素A、二螫霉素SA、雷螫霉素(CC-1065)或其类似物或衍生物；抗生素，如达托霉素、博来霉素、达诺鲁比星、多柔比星、依达鲁比星、米曲霉素、丝裂霉素、米托蒽醌、普利霉素、炭疽霉素(AMC)；吡咯并[2,l-c][l,4]-苯并二氮杂卓(PDB)；白喉毒素和相关分子，如白喉A链及其活性片段和杂交分子；蓖麻毒素，如蓖麻毒素A或脱糖蓖麻毒素A链毒素；霍乱毒素；志贺类毒素，如SLT I、SLT II、SLT IIV、LT毒素、C3毒素、志贺毒素、百日咳毒素、破伤风毒素；大豆鲍曼-伯克蛋白酶抑制剂、假单胞菌外毒素、阿罗霉素、沙波霉素、莫德霉素、凝胶霉素、阿布霉素A链、莫德霉素A链、α-沙林霉素、Aleurites fordii蛋白质、dianthin蛋白质、Phytolacca americana蛋白质，如PAPI、PAPII和PAP-S、红豆杉抑制剂、姜黄素、克罗毒素、山菝葜抑制剂、凝胶素、丝裂霉素、限制素、苯霉素和霉素毒素；核糖核酸酶(RNase)、DNase I、葡萄球菌肠毒素A、pokeweed抗病毒蛋白、白喉毒素和假单胞菌内毒素。

在一些实施例中，适用于消耗癌细胞的抗体与金丝桃素或其多肽类似物、衍生物或原药结合。事实证明，阿里他汀能干扰微管动力学、GTP水解、核分裂和细胞分裂(Woykeet al(2001)Antimicrob.Agents and Chemother.45(12):3580-3584)，并具有抗癌(US5663149)和抗真菌活性(Pettit等人(1998)Antimicrob.Agents and Chemother.42:2961-2965。例如，阿里他汀E可与对乙酰苯甲酸或苯甲酰戊酸反应，分别生成AEB和AEVB。其他典型的阿里他汀衍生物包括AFP、MMAF(单甲基阿里他汀F)和MMAE(单甲基阿里他汀E)。合适的阿里他汀和阿里他汀类似物、衍生物和原药，以及用于将阿里他汀与Abs连接的合适连接剂，已在以下文献中作了描述，例如：U.S.Patent Nos、美国专利号5,635,483、5,780,588和6,214,345，以及国际专利申请出版物WO02088172、WO2004010957、WO2005081711、WO2005084390、WO2006132670、WO03026577、WO200700860、WO207011968和WO205082023。

在一些实施例中，适用于消耗癌细胞的抗体与吡咯并[2,l-c][l,4]-苯并二氮杂卓(PDB)或其类似物、衍生物或原药结合。合适的PDB和PDB衍生物以及相关技术已在Hartley J.A.等人，Cancer Res 2010；70(17)：6849-6858；Antonow D.等,Cancer J 2008；14(3)：154-169；Howard P.W.等.,Bioorg Med Chem Lett 2009；19:6463-6466和Sagnou等人,Bioorg Med Chem Lett 2000；10(18):2083-2086中描述。

在一些实施例中，适用于消耗癌细胞的抗体与细胞毒性分子共轭，细胞毒性分子选自由蒽环类、美坦星、卡利昔明、杜卡霉素、雷昔霉素(CC-1065)、多拉他汀10、多拉他汀15、伊立替康、单甲基金丝桃素E、单甲基金丝桃素F、PDB或它们中任何一种的类似物、衍生物或原药组成的组。

在一些实施例中，适用于消耗癌细胞的抗体与蒽环类或其类似物、衍生物或前药缀合。在一些实施例中，抗体与麦他辛或其类似物、衍生物或前药缀合。在一些实施例中，抗体与卡利昔明或其类似物、衍生物或前药缀合。在某些实施方案中，抗体与杜卡霉素或其类似物、衍生物或前药缀合。在某些实施方案中，抗体与雷切尔霉素(CC-1065)或其类似物、衍生物或前药缀合。在一些实施例中，抗体与多拉他汀10或其类似物、衍生物或前药缀合。在一些实施例中，抗体与多拉他汀15或其类似物、衍生物或前药缀合。在一些实施例中，抗体与单甲基阿司他汀E或其类似物、衍生物或前药缀合。在一些实施例中，抗体与单甲基阿司他汀F或其类似物、衍生物或前药缀合。在一些实施例中，抗体与吡咯并[2,l-c][l,4]-苯并二氮杂卓或其类似物、衍生物或前药缀合。在一些实施例中，抗体与伊立替康或其类似物、衍生物或前药缀合。

在一些实施例中，适用于消耗癌细胞的抗体与核酸或核酸相关分子缀合。在其中一个实施例中，缀合核酸是细胞毒性核糖核酸酶(RNase)或脱氧核糖核酸酶(如DNase I)、反义核酸、抑制性RNA分子(如siRNA分子)或免疫刺激核酸(如含免疫刺激CpG矩阵的DNA分子)。在一些实施例中，抗体与适配体或核酶结合。

将分子与抗体偶联的技术在本领域是众所周知的(见例如，Arnon等人，"Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy,"inMonoclonal Antibodies And Cancer Therapy(Reisfeld et al、Alan R.Liss，Inc.，1985年)；Hellstrom等人，"Antibodies For Drug Delivery,"in Controlled Drug Delivery(Robinson等人编，Marcel Deiker，Inc.，1987年第二版)；Thorpe,“Antibody Carriers OfCytotoxic Agents In Cancer Therapy:A Review,”in Monoclonal Antibodies'84:Biological And Clinical Applications(Pinchera等人编，1985)；“Analysis,Results,and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody InCancer Therapy,”in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy(Baldwin等人编，学术出版社，1985)；以及Thorpe等人，1982,Immunol.Rev.62:119-58。另见，例如，PCT出版物WO 89/12624)。通常情况下，核酸分子通过N-羟基琥珀酰亚胺酯或马来酰亚胺功能分别与抗体上的赖氨酸或半胱氨酸共价连接。据报道，使用工程半胱氨酸或加入非天然氨基酸的共轭方法可提高共轭物的均匀性(Axup,J.Y.,Bajjuri,K.M.,Ritland,M.,Hutchins,B.M.,Kim,C.H.,Kazane,S.A.,Halder,R.,Forsyth,J.S.,Santidrian,A.F.,Stafin,K.,et al.(2012).Synthesis of site-specific antibody-drug conjugatesusing unnatural amino acids.Proc.Natl.Acad.Sci.USA109,16101–16106.；Junutula,J.R.,Flagella,K.M.,Graham,R.A.,Parsons,K.L.,Ha,E.,Raab,H.,Bhakta,S.,Nguyen,T.,Dugger,D.L.,Li,G.,et al.(2010).Engineered thio-trastuzumab-DM1 conjugatewith an improved therapeutic index to target humanepidermal growth factorreceptor 2-positive breast cancer.Clin.Cancer Res.16,4769–4778.)，Junutula等人(2008年)开发了基于半胱氨酸的位点特异性共轭物，称为“THIOMABs”(TDCs)，据称与传统缀合方法相比，该缀合物的治疗指数更高。此外，还在探索将非天然氨基酸与已加入抗体的ADCs结合；不过，这种方法的通用性尚待确定(Axup等人，2012年)。特别是，本领域技术人员还可以设想用含酰基供体谷氨酰胺的标签(如含Gin肽标签或Q-标签)或通过多肽工程(如通过多肽上的氨基酸缺失、插入、替代或突变)使其具有反应性的内源性谷氨酰胺设计含Fc多肽。然后，转谷氨酰胺酶可与胺供体剂(如包含或连接到反应性胺的小分子)共价交联，形成稳定、均质的工程化含Fc多肽共轭物群体，其中胺供体剂通过含酰基供体谷氨酰胺的标签或可获得/暴露/反应性内源谷氨酰胺与含Fc多肽定点特异性缀合(WO 2012059882)。

CCR8 CAR-T细胞

在一些实施例中，制剂是CAR-T细胞，其中CAR至少包括一个特异于CCR8的胞外抗原结合域。

在一些实施例中，CAR至少包括一个胞外抗原结合结构域、一个跨膜结构域和一个胞质信号传导结构域(此处也称为“胞内信号传导结构域”)，其中包括源自下文定义的刺激分子和/或共刺激分子的功能性信号域。在某些方面，这组多肽彼此相邻。在一些实施例中，所述多肽包括二聚化开关，当存在二聚化分子时，二聚化开关可将多肽相互耦合，例如，可将抗原结合结构域与细胞内信号结构域耦合。在某些实施方案中，刺激分子是与T细胞受体复合物相关的Zeta链。在一些实施例中，胞质信号传导结构域还包含一个或多个衍生自至少一种如下定义的共刺激分子的功能性信号传导结构域。在一些实施方案中，共刺激分子选自本文所述的共刺激分子，例如4-1BB(即CD137)、CD27和/或CD28。

在一些实施例中，CAR包括嵌合融合蛋白，该嵌合融合蛋白包含特异于CCR8的细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号结构域，该细胞内信号结构域包含源自刺激分子的功能信号结构域。在一些实施例中，CAR包括嵌合融合蛋白，该嵌合融合蛋白包含特异于CCR8的胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内信号结构域，所述胞内信号结构域包含衍生自共刺激分子的功能信号结构域和衍生自刺激分子的功能信号结构域。在一些实施例中，CAR包括嵌合融合蛋白，所述嵌合融合蛋白包含特异于CCR8的细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号结构域，所述细胞内信号传导结构域包含源自一种或多种共刺激分子的两个功能性信号传导结构域和源自刺激分子的功能性信号传导结构域。在一些实施例中，CAR包括嵌合融合蛋白，该嵌合融合蛋白包含特异于CCR8的胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内信号结构域，所述胞内信号结构域包含至少两个衍生自一种或多种共刺激分子的功能性信号结构域和衍生自刺激分子的功能性信号结构域。

在一些实施例中，CAR包括位于CAR融合蛋白氨基末端(N-ter)的任选前导序列。在一些实施例中，CAR还包含位于胞外抗原结合结构域N端的前导序列，其中前导序列在细胞处理和将CAR定位于细胞膜期间任选地从抗原结合域(如scFv)上裂解。

在特定的方面，CAR包含单链可变片段(scFv)的融合体，所述单链可变片段衍生自对CCR8特异的单克隆抗体，该单链可变片段融合到CD3-ζ跨膜结构域和内结构域。在一些实施例中，CARs包含用于额外共刺激信号传导的结构域，例如CD3-ζ、FcR、CD27、CD28、CD137、DAP10和/或OX40。在一些实施方案中，分子可以与CAR共表达，包括共刺激分子、成像报告基因(如正电子发射断层扫描)、添加前药后有条件地消减T细胞的基因产物、归巢受体、趋化因子、趋化因子受体、细胞因子和细胞因子受体。

在一些实施例中，本发明的嵌合抗原受体包括至少一个对CCR8特异的抗体的VH和/或VL序列。在一些实施例中，本发明的CAR包含对CCR8特异性的抗体或抗体片段的部分可以以多种形式存在，其中抗原结合结构域作为连续多肽链的一部分表达，例如包括单结构域抗体片段(sdAb)、单链抗体(scFv)、人源化抗体或双特异性抗体(Harlow等人，1999,In:Using Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,NY；Harlow等人，1989,In:Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor,N.Y；Houston等人，1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883；Bird等人，1988,Science242:423-426)。在一些实施例中，本发明CAR组合物的抗原结合域包括CCR8特异的抗体片段。在另一方面，CAR包含一个抗体片段，该抗体片段包含对CCR8特异性的scFv。

制备CAR-T细胞的方法是本领域众所周知的。在一些实施例中，用编码CAR的病毒载体转导细胞(如T细胞)。在一些实施例中，病毒载体是逆转录病毒载体。在一些实施例中，病毒载体是慢病毒载体。在一些实施例中，细胞可稳定表达CAR。在一些实施例中，用编码CAR的核酸(如mRNA、cDNA、DNA)转染细胞(如T细胞)。在一些实施例中，本发明CAR的抗原结合结构域(例如，scFv)由核酸分子编码，该核酸分子的序列已经过密码子优化以在哺乳动物细胞中表达。在一些实施方案中，本发明的完整CAR构建体由核酸分子编码，该核酸分子的完整序列已被密码子优化以在哺乳动物细胞中表达。密码子优化是指发现编码DNA中同义密码子(即编码相同氨基酸的密码子)的出现频率在不同物种中存在偏差。这种密码子简并性使得相同的多肽可以由不同的核苷酸序列编码。本领域已知有多种密码子优化方法，例如至少在U.S.Pat.5,786,464号和6,114,148号专利中公开的方法。

在一些实施例中，本发明的嵌合抗原受体可以被糖基化、酰胺化、羧基化、磷酸化、酯化、N-酰化、通过例如二硫键环化、或转化成酸加成盐和/或任选二聚化或聚合。

在一些实施例中，如果需要，可以控制CAR活性以优化CAR治疗的安全性和有效性。有许多方法可以调节CAR的活动，例如，在本发明的CAR疗法中，可以使用例如与二聚化结构域融合的半胱氨酸蛋白酶等诱导细胞凋亡的方法(见例如Di等人，N Egnl.J.Med.2011Nov.3；365(18):1673-1683)作为安全开关。

药物成分：

通常，本发明的药剂以包含药学上可接受的载体的药物组合物的形式施用于患者。这些组合物中可使用的药学上可接受的载体包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白如人血清白蛋白、缓冲物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾，饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、盐或电解质，如硫酸原胺、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素类物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素类物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。为用于给患者用药，本发明组合物将配制成给患者用药的配方。本发明的组合物可以口服、肠道外、吸入喷雾、局部、直肠、鼻腔、口腔、阴道给药或通过植入式贮液器给药。这里使用的技术包括皮下注射、静脉注射、肌肉注射、关节内注射、鞘内注射、胸骨内注射、鞘内注射、肝内注射、病变内注射和颅内注射或输注技术。本发明组合物的无菌注射形式可以是水悬浮液或油悬浮液。这些悬浮液可以根据本领域已知的技术，使用合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂来配制。无菌注射制剂也可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或悬浮液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。可采用的可接受的载体和溶剂包括水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的不挥发油通常用作溶剂或悬浮介质。为此，可以使用任何温和的不挥发油，包括合成的单甘油酯或双甘油酯。脂肪酸，如油酸及其甘油酯衍生物可用于制备注射剂，天然药用油，如橄榄油或蓖麻油，尤其是其聚氧乙烯版本也可用于制备注射剂。这些油溶液或悬浮液还可含有长链醇稀释剂或分散剂，如羧甲基纤维素或类似的分散剂，这些分散剂通常用于包括乳剂和悬浮液在内的药学上可接受的剂型的配制。其他常用的表面活性剂，如Tweens、Spans和其他乳化剂或生物利用度增强剂，通常用于制造药学上可接受的固体、液体或其他剂型，也可用于制剂的目的。本发明的组合物可以任何口服可接受的剂型口服给药，包括但不限于胶囊、片剂、水悬剂或溶液。对于口服片剂，常用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还会添加润滑剂，如硬脂酸镁。以胶囊形式口服时，有用的稀释剂包括乳糖等。当需要口服水性悬浮剂时，可将活性成分与乳化剂和悬浮剂混合。如果需要，还可以添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。或者，本发明的组合物也可以栓剂的形式直肠给药。另外，本发明的组合物也可以栓剂的形式直肠给药。制备方法是将药剂与一种合适的无刺激赋形剂混合，这种赋形剂在室温下为固态，但在直肠温度下为液态，因此会在直肠中融化以释放药物。此类材料包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。本发明的组合物也可以局部给药，特别是当治疗目标包括容易通过局部给药到达的部位或器官时，包括眼部、皮肤或下肠道疾病。针对上述各部位或器官，均可制备合适的外用制剂。对于局部应用，本发明组合物可配制成适当的软膏，其中含有悬浮或溶解在一种或多种载体中的活性成分。局部施用本发明化合物的载体包括但不限于矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。另外，组合物也可以配制成适当的乳液或乳霜，其中含有悬浮或溶解在一种或多种药学上可接受的载体中的活性成分。合适的载体包括但不限于矿物油、山梨糖单硬脂酸酯、聚山梨酸酯60、十六烷基酯蜡、十六烷基醇、2-辛基十二醇、苯甲醇和水。下肠道局部用药可采用直肠栓剂制剂(见上文)或合适的灌肠制剂，也可使用贴剂。本发明的组合物也可以通过鼻腔气雾剂或吸入给药。本发明的组合物可根据药物制剂领域中众所周知的技术进行制备，并可制备成生理盐水溶液，使用苯甲醇或其它合适的防腐剂、提高生物利用度的吸收促进剂、碳氟化合物和/或其它常规增溶剂或分散剂。例如，本发明药物组合物中的抗体可以10毫克/毫升的浓度装入100毫克(10毫升)或500毫克(50毫升)的一次性小瓶中。例如，本发明药物组合物中的抗体可以10毫克/毫升的浓度装入100毫克(10毫升)或500毫克(50毫升)的一次性小瓶中。本产品以9.0毫克/毫升氯化钠、7.35毫克/毫升柠檬酸钠二水合物、0.7毫克/毫升聚山梨酯80和注射用无菌水配制，供静脉注射使用。pH值调至6.5。本发明的药物组合物中抗体的示例性合适剂量范围介于约1mg/m²和500mg/m²之间。然而，应当理解的是，这些方案是示例性的，考虑到必须在临床试验中确定特定抗体在药物组合物中的亲和力和耐受性，可以调整最佳计划和方案。本发明的用于注射(如肌肉注射、静脉注射)的药物组合物可制备成含有无菌缓冲水(如肌肉注射用1毫升)和约1ng至约100mg，如约50ng至约30mg或更优选约5mg至约25mg的本发明抑制剂。

诊断方法：

本发明的另一个目的涉及一种诊断患者T细胞淋巴瘤的方法，包括检测患者样本中CCR8的表达水平。

在一些实施例中，本发明涉及一种诊断患者T细胞淋巴瘤的方法，该方法包括检测从患者处获得的样本中CCR8的表达水平，其中与预定参考值相比，CCR8的过表达表明所述患者患有所述T细胞淋巴瘤。

在一些实施例中，本发明的方法尤其适用于诊断血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤、自然杀伤T细胞淋巴瘤或皮肤T细胞淋巴瘤。在一些实施例中，本发明的方法尤其适用于诊断皮肤T细胞淋巴瘤。更具体地说，本发明的方法尤其适用于诊断Sézary综合征。

本文所用术语“样本”是指为体外评估目的而获取的任何生物样本。在一些实施例中，所述样本是血液样本。在一些实施例中，所述样本是PBMC样品。在一些实施例中，所述样品是(i)纯化的血液白细胞，(ii)外周血单核细胞或PBMC，(iii)纯化的淋巴细胞，(iv)纯化的T细胞，(v)纯化的CD4+ T细胞或(vi)纯化的CD3+T细胞。在一些实施例中，样本是纯化的CD3+CD4+CD26-和/或CD7-KIR3DL2+淋巴细胞样本。在一些实施例中，生物样本是组织样本。术语“组织样本”包括组织切片，如活检或尸检样本和用于组织学目的的冷冻切片。因此，在一些实施例中，组织样品可能来自受试者的皮肤活检。

在某些实施方案中，标记物的水平是通过免疫组化(IHC)来确定的。免疫组化通常包括以下步骤i)用福尔马林固定所述组织样本；ii)将所述组织样本包埋在石蜡中；iii)将所述组织样本切成用于染色的切片；iv)将所述切片与标记特异性结合配偶体一起孵育；v)漂洗所述切片；vi)用生物素化二抗孵育所述切片；vii)用抗生物素-生物素-过氧化酶复合物技术显现抗原-抗体复合物。因此，组织样本首先要与结合配偶体一起孵育。洗涤后，根据标记抗体所带标记的种类(如放射性、荧光或酶标记)，采用适当的技术揭示与相关标记物结合的标记抗体。可以同时执行多个标记。或者，本发明的方法可以使用与扩增系统(以增强染色信号)和酶分子偶联的二抗。此类偶联二抗可在市场上买到，例如来自Dako，EnVision系统。可以使用复染，如H&E、DAPI、Hoechst。其它染色方法可以使用本领域技术人员显而易见的任何合适的方法或系统来完成，包括自动化、半自动或手动系统。例如，抗体上可以附着一个或多个标签，从而可以检测目标蛋白质(即标记物)。示例性标签包括放射性同位素、荧光团、配体、化学发光剂、酶及其组合。在一些实施例中，标签是一个量子点。可偶联至一级和/或二级亲和配体的标记物的非限制性示例包括荧光染料或金属(如荧光素、罗丹明、藻红蛋白、荧光胺)、显色染料(如紫红质)、化学发光化合物(如鲁米那、咪唑)、和生物发光蛋白(如荧光素、荧光素酶)、半抗原(如生物素)。Stryer L(1968)Science 162:526-533 and Brand L and Gohlke J R(1972)Annu.Rev.Biochem.41:843-868中描述了各种其他有用的荧光剂和发色团。亲和配体也可以用酶(如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-内酰胺酶)、放射性同位素(如3H、14C、32P、35S或125I)和颗粒(如金)进行标记。不同类型的标记物可通过各种化学反应(如胺反应或硫醇反应)与亲和配体连接。然而，除了胺和硫醇之外，还可以使用其他反应基团，如醛、羧酸和谷氨酰胺。本领域已知有多种酶染色方法可用于检测相关蛋白质。例如，可以使用不同的酶如过氧化物酶、碱性磷酸酶，或不同的显色剂如DAB、AEC或固红，来显现酶的相互作用。在其他例子中，抗体可与肽或蛋白质结合，所述肽或蛋白质可以通过标记的结合配偶体或抗体来检测。在间接IHC检测中，需要使用二抗或第二结合配体来检测第一结合配体的结合情况，因为第一结合配体没有被标记。所得到的染色标本均使用用于查看可检测信号和获取图像的系统进行成像，例如染色的数字图像。用于图像采集的方法是本领域技术人员所熟知的。例如，一旦样品被染色，任何光学或非光学成像设备都可以用来检测染色或生物标志标签，例如，直立或倒置光学显微镜、扫描共聚焦显微镜、照相机、扫描或隧道电子显微镜、罐装探针显微镜和成像红外探测器。在一些例子中，图像可以以数字方式捕获。然后，所获得的图像可用于定量或半定量地确定样品中所述标记物的量。本领域有各种适用于免疫组化的自动样本处理、扫描和分析系统。这种系统可以包括自动化染色和显微扫描、计算机化图像分析、连续切片比较(以控制样品的方向和大小的变化)、数字报告生成以及样品(例如放置组织切片的载玻片)的存档和跟踪。细胞成像系统是商业上可获得的，它结合了传统的光学显微镜和数字图像处理系统，可对细胞和组织(包括免疫染色样本)进行定量分析。如CAS-200系统(Becton,Dickinson&Co.)，具体来说，检测可以手工进行，也可以通过涉及计算机处理器和软件的图像处理技术进行。例如，使用这样的软件，可以根据染色质量或染色强度等因素，利用本领域技术人员已知的程序(例如，参见已公开的美国专利公开号US20100136549)对图像进行配置、校准、标准化和/或验证。可以基于样本的染色强度对图像进行定量或半定量分析和评分。定量或半定量组织化学是指对已经过组织化学的样品进行扫描和评分的方法，确定和量化指定生物标志物(即标记物)的存在。定量或半定量方法可以使用成像软件来检测染色密度或染色量，或者使用人眼检测染色的方法，其中受过训练的操作者对结果进行数字排序。例如，可以使用像素计数算法(如Aperio Spectrum软件、自动定量分析平台(平台)和其他测量或定量或半定量染色程度的标准方法)对图像进行定量分析；见U.S.Pat.No.8,023,714；U.S.Pat.No.7,257,268；U.S.Pat.No.7,219,016；U.S.Pat.No.7,646,905；已公布的美国专利公开号US20100136549和20110111435，Camp et al.(2002)Nature Medicine,8:1323-1327；Bacus et al.(1997)Analyt Quant Cytol Histol,19:316-328)。可以计算强阳性染色(如棕色染色)与总染色面积的比值并评分。检测到的生物标记物(即标记物)的量会被量化，并以阳性像素的百分比和/或分数的形式给出。例如，该量可以量化为阳性像素的百分比。在一些实例中，该量被量化为染色面积的百分比，例如阳性像素的百分比。例如，与总染色面积相比，样品可具有至少或大约至少或约0、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多的正像素。在一些实施例中，对样品给予分数，该分数是样品的组织化学染色的强度或量的数值表示，并且表示样品中存在的目标生物标记物(例如，标记物)的量。光密度或百分比面积值可以给出一个缩放分数，例如在整数比例上。因此，在一些实施例中，本发明的方法包括以下步骤：i)使用能与标记物选择性相互作用的结合剂(如上文所述的抗体)，提供由自动玻片染色系统获得的一片或多片免疫染色的组织切片；ii)通过高分辨率扫描捕捉，对步骤a中的切片进行数字化处理；iii)检测数字图像上的组织切片；iv)提供具有相同表面的均匀分布单元的尺寸参考网格，所述网格与待分析组织切片的尺寸相适应；v)检测、量化和测量每个单元中染色细胞的强度，从而评估每个单元中染色细胞的数量或密度。

在一些实施例中，标记物的水平通过流式细胞仪法确定。本文所用术语“流式细胞仪法”指的是将目标细胞悬浮在流体中并通过电子检测装置进行计数的技术。流式细胞仪方法可同时多参数分析每秒多达数千个事件的物理和/或化学参数，如荧光参数。现代流式细胞仪通常有多个激光器和荧光检测器。流式细胞仪技术的一个常见变体是基于颗粒的性质对颗粒进行物理分选，从而使用“荧光激活细胞分选”来纯化或检测相关群体。本文所用的“荧光激活细胞分选”(FACS)是指一种流式细胞仪方法，用于根据每个细胞的特定光散射和荧光特性，将生物样本中的异质细胞混合物分选到两个或更多容器中，每次分选一个细胞，并快速、客观、定量地记录单个细胞的荧光信号，以及特定目标细胞的物理分离。因此，FACS可与本文所述的方法一起用于分离和检测本发明的细胞群。例如，因此可以使用荧光激活细胞分选技术(FACS)，包括使用能够同时激发和检测多种荧光团的流式细胞仪，如BDBiosciences FACSCanto^TM流式细胞仪，基本上按照制造商的说明使用。细胞测定系统可以包括如下所述的细胞测定样品流体子系统。此外，细胞检测系统还包括与细胞检测样本流体子系统流体耦合的细胞检测仪。本公开的系统可包括许多附加组件，如数据输出设备，如显示器、打印机和/或扬声器、软件(如Flowjo、Laluza....)、数据输入设备，如接口端口、鼠标、键盘等、流体处理组件、电源等。更具体地说，将样品与目标细胞群的特定市场的特异性抗体组接触。这些抗体或抗原结合片段可从R&D Systems、BD Biosciences、e-Biosciences、Biolegend、Proimmune和Miltenyi等公司购买，也可通过本领域技术人员已知的方法针对这些细胞表面标记物进行培养。在一些实施例中，与细胞表面标记物(如抗体或抗原结合片段)特异性结合的制剂会被贴上标签，以便于分离和检测相关细胞群。本文中使用的术语“标签”或“标记”是指一种能够产生可检测信号的组合物，这种信号可指示靶标的存在，如生物样本中特定细胞表面标记的存在。合适的标记包括荧光分子、放射性同位素、核苷酸发色团、酶、底物、化学发光分子、磁性颗粒、生物发光分部分等。因此，标记是本发明分离和检测癌细胞的方法所需的可通过光谱、光化学、生物化学、免疫化学、电学、光学或化学方法可检测的任何成分。用于标记本发明方法中使用的抗体等制剂的荧光标签或标记的非限制性实例包括羟基香豆素、琥珀酰亚胺酯、氨基香豆素、琥珀酰亚胺酯、甲氧基香豆素、琥珀酰亚胺酯、级联蓝、酰肼、太平洋蓝、马来酰亚胺、太平洋橙、荧光黄、NBD、NBD-X、R-藻红蛋白(PE)、PE-Cy5偶联物(Cychrome、R670、三色、量子红)、PE-Cy7偶联物、红613、PE-Texas红、PerCP、PerCPeFluor 710、PE-CF594、多甲藻黄素-叶绿素-蛋白复合物、TruRed(PerCP-Cy5.5共轭物)、FluorX、异硫氰酸荧光素酯(FITC)、BODIPY-FL、TRITC、X-罗丹明(XRITC)、丽丝胺碱性蕊香红B磺酰氯、Texas红、别藻蓝素(APC)、APC-Cy7偶联物、AlexaFluor 350、Alexa Fluor 405、Alexa Fluor 430、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 500、Alexa Fluor 514、Alexa Fluor 532,Alexa Fluor 546,Alexa Fluor 555,Alexa Fluor568,Alexa Fluor 594,Alexa Fluor 610,Alexa Fluor 633,Alexa Fluor 647,AlexaFluor 660,Alexa Fluor 680,Alexa Fluor 700,Alexa Fluor 750,Alexa Fluor 790,Cy2,Cy3,Cy3B,Cy3.5,Cy5,Cy5.5,Cy7,BV 785,BV711,BV421,BV605,BV510或BV650。上述检测可能涉及抗体与固体载体的结合，固体表面可以是涂有抗体的微滴定板。或者，固体表面可以是珠子，如活性珠子、磁反应珠子。珠子可以由不同材料制成，包括但不限于玻璃、塑料、聚苯乙烯和丙烯酸。此外，珠子最好带有荧光标记。在一个优选的实施方案中，荧光珠是包含在TruCount(TM)管中的，可从Becton Dickinson Biosciences公司(加利福尼亚州圣何塞)购买。

在一些实施例中，该方法还包括检测至少一种其他标记物的表达水平。通常，该标记物选自由KIR3DL2、PLS3、Twist和NKp46组成的组。

在本说明书中，各种目标标记物的名称指的是国际公认的相应基因的名称，如在国际公认的基因序列和蛋白质序列数据库中所发现的，包括在HUGO基因命名委员会的数据库中，该数据库可在以下网址获得：http://www.gene.ucl.ac.uk/nomenclature/ index.html。在本说明书中，各种目标标记物的名称也可指国际公认的相应基因的名称，如国际公认的基因序列和蛋白质序列数据库Genbank中的名称。通过这些国际公认的序列数据库，本领域技术人员可以检索到与本文所述各目标标记物相对应的核酸和氨基酸序列。

多重组织分析技术尤其适用于量化组织样本中的几种标记物。此类技术应允许从单个组织样本中测量至少五种，或至少十种或更多的生物标志物。此外，该技术有利于保持生物标记物的定位，并能够区分生物标记物在癌细胞和非癌细胞中的存在。这种方法包括分层免疫组织化学(L-IHC)、分层表达扫描(LES)或多重组织免疫印迹(MTI)，例如美国专利Nos.6,602,661、6,969,615、7,214,477和7,838,222；美国出版，第2011/0306514号(通过引用并入本文)；以及Chung&Hewitt，Meth Mol Biol，Prot Blotting Detect，Kurlen&Scofield，eds.536:139-148，2009，每份参考文献都教导可使用分层和印迹膜、纸、滤纸等制作多达8、9、10、11或更多的组织切片图像，用于进行L-IHC/MTI过程的涂层膜可从20/20genessystems,Inc.(Rockville,MD)获得。

在一些实施例中，L-IHC方法可在多种组织样品中的任何一种上执行，无论是新鲜的还是保存的。样本包括在10％正常缓冲福尔马林中常规固定并在病理部门处理的核心针活检组织。从组织块上切下5μm厚的标准组织切片到用于L-IHC的载玻片上，因此，L-IHC可以通过获得从组织切片转移到多个生物亲和涂层膜上的分子副本来测试组织切片中的多个标记物，从而基本上产生组织“图像”的副本。在石蜡切片的情况下，组织切片按照本领域已知的方法进行去石蜡处理，例如，将切片暴露于二甲苯或二甲苯替代物(如)和分级乙醇溶液中。切片可以用蛋白酶处理，如木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、蛋白酶K等。然后，在组织切片上放置一叠膜基质，所述膜基质包括包括例如多片10μm厚的涂覆聚合物主链，所述主链具有0.4μm直径的孔以引导组织分子如蛋白质通过该叠膜。流体和组织分子的运动基本上垂直于膜表面。该部分的夹层、膜、间隔纸、吸水纸、砝码等可以受热，以促进组织中的分子运动到膜堆中。组织中的部分蛋白质被捕获到膜堆中的每一层生物亲和涂层膜上(可从20/20GeneSystems公司购买，Rockville,MD)。因此，每个膜包含一个组织的副本，并且可以使用标准免疫印迹技术探测不同的生物标志物，这使得在单个组织切片上进行的标记剖面可以无限扩展。由于在离组织更远的膜上蛋白质的量可以更低，这可能会导致，例如，组织样品中不同数量的分子，从组织样品中释放的分子的迁移率不同，分子与膜的结合亲和力不同，转移的长度不同等等，可将数值归一化、运行控制、评估组织分子的转移水平等纳入程序，以校正膜内、膜间和膜与膜之间发生的变化，并对膜内、层间和膜与膜之间的信息进行直接比较。因此，可以使用任何量化蛋白质的方法来测定每张膜上的总蛋白质，例如，使用标准试剂和方法对蛋白质等可用分子进行生物素化，然后将膜暴露于标记的阿维丁或链霉亲和素、蛋白质染色剂，如Blot fastStain、胭脂红、亮蓝染色剂等来显示结合的生物素。

在一些实施例中，本方法利用多重组织印迹(MTI)技术来测量生物标志物，其中该方法通过允许多种生物标志物(在某些情况下至少六种生物标志物)来保存宝贵的活检组织。

在一些实施例中，本发明还可采用其他多重组织分析系统。其中一种技术是基于质谱的选择反应监测(SRM)分析系统(“液体组织”，可从OncoPlexDx公司(Rockville,MD)获得)，该技术在美国专利No.7,473,532中有描述。

在一些实施例中，本发明的方法利用了GE全球研究公司(Niskayuna,NY)开发的多重IHC技术，该技术在美国专利2008/0118916和2008/0118934号中有描述。该技术对含有多个靶点的生物样本进行连续分析，包括以下步骤：将荧光探针与样本结合，然后检测信号，使探针失活，接着将探针与另一个靶点结合，检测并使探针失活，然后继续这一过程，直到检测出所有靶点。

在一些实施例中，当使用荧光(例如荧光团或量子点)时，可以使用多光谱成像系统测量信号，从而进行多重组织成像。多光谱成像是在图像的每个像素处收集光谱信息，并用光谱图像处理软件分析所得数据的一种技术。例如，该系统可以在不同的波长下拍摄一系列图像，这些图像可以通过电子方式连续选择，然后与专为处理这些数据而设计的分析程序一起使用。因此，只要光谱曲线不同，即使染料的光谱高度重叠或共定位，或出现在样品的同一点，系统也能同时从多种染料中获得定量信息。许多生物材料在受到高能量光激发时会自动发出荧光或发出低能量光。这个信号会导致图像和数据的对比度降低。不具备多光谱成像功能的高灵敏度相机，只会随着荧光信号的增加而增加自身荧光信号。多光谱成像可以从组织中分解或分离出自身荧光，从而提高可实现的信噪比。简单地说，可以通过以下步骤进行定量：i)提供从受试者获得的肿瘤组织微阵列(TMA)，ii)然后用对目标蛋白具有特异性的抗体对TMA样品进行染色；iii)进一步用上皮细胞标记物对TMA载玻片进行染色，以辅助自动分割肿瘤和基质；iv)然后使用多光谱成像系统扫描TMA玻片；v)使用自动图像分析软件(perkin Elmer Technology)对扫描图像进行处理，该软件可通过强大的模式识别算法对特定组织进行检测、量化和分割。机器学习算法通常在之前经过训练，以从基质中分割肿瘤并识别标记的细胞。

在一些实施例中，标记物的水平是在核酸水平上确定的。通常，基因水平可通过确定mRNA的数量来确定。通常，基因水平可通过确定mRNA的数量来确定。确定mRNA数量的方法是本领域众所周知的。例如，首先按照标准方法提取样本(如从受试者身上制备的细胞或组织)中所含的核酸，例如使用溶解酶或化学溶液，或按照制造商的说明使用核酸结合树脂提取。然后通过杂交(例如，Northern blot分析，原位杂交)和/或扩增(例如，RT-PCR)检测提取的mRNA。其他扩增方法包括连接酶链反应(LCR)、转录介导扩增(TMA)、链位移扩增(SDA)和核酸序列扩增(NASBA)。

在一些实施例中，本发明的方法还包括将标记物的表达水平与预定参考值进行比较，其中检测标记物的表达水平与预定参考值之间的差异表明受试者是否患有T细胞淋巴瘤。

在一些实施例中，所述预定参考值是相对于从人口研究中得出的数字或值的相对值，人口研究包括但不限于相同或相似年龄范围的受试者、相同或相似种族的受试者以及具有相同病变严重程度的受试者。这种预先确定的参考值可以从从数学算法和计算指数获得的人口的统计分析和/或风险预测数据中得出。在一些实施例中，在确定这些预定参考值时，可使用对适当保存的历史受试者样本中标记物水平的回顾性测量。因此，在一些实施例中，预定参考值是一个阈值或截止值。必须确定阈值，以便根据检测功能和效益/风险平衡(假阳性和假阴性的临床后果)来获得最佳灵敏度和特异性。通常情况下，最佳灵敏度和特异性(以及阈值)可根据实验数据，利用接收者工作特征曲线(ROC)来确定。例如，在确定一组参照物中标记物的水平后，可以使用算法分析对待测样本中标记物的测量水平行统计处理，从而得到对样本分类有意义的分类标准。ROC曲线的全称是接收者运算特征曲线，又称受试者操作特征曲线。它主要用于临床生化诊断检测。ROC曲线是反映真阳性率(灵敏度)和假阳性率(1-特异性)连续变量的综合指标。它揭示了图像合成方法中灵敏度与特异度的关系，将一系列不同的临界值(阈值或临界值，诊断测试结果正常与异常之间的边界值)设为连续变量，计算出一系列灵敏度和特异度值。然后以灵敏度为纵坐标，特异性为横坐标，绘制出一条曲线。曲线下面积(AUC)越大，诊断准确率越高。在ROC曲线上，最靠近坐标图最左上方的点是同时具有高灵敏度和高特异性值的临界点。ROC曲线的AUC值介于1.0和0.5之间。当AUC大于0.5时，随着AUC接近1，诊断结果会越来越好。当AUC介于0.5和0.7之间时，准确率较低。当AUC在0.7和0.9之间时，准确度为中等。当AUC高于0.9时，准确率相当高。这种算法最好使用计算机来完成。绘制ROC曲线可使用本领域现有的软件或系统，如MedCalc9.2.0.1医学统计软件、SPSS9.0、ROCPOWER.SAS、DESIGNROC.FOR、MULTIREADERPOWER.SAS、CREATE-ROC.SAS、GB STAT VI0.0(Dynamic Microsystems,Inc.SilverSpring,Md.,USA)等。

通常情况下，如实施例所示，CCR8的表达水平高于健康个体样品中测定的表达水平。在一些实施例中，CCR8表达水平由荧光强度确定。在一些实施例中，CCR8表达水平由CCR8平均荧光强度确定。在一些实施例中，该方法包括进一步的步骤，包括确定CCR8平均荧光强度，并且当CCR8平均荧光强度高于100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490或500时，推断患者患有T细胞淋巴瘤。在一些实施例中，该方法包括进一步的步骤，包括测定CCR8平均荧光强度，并且当CCR8平均荧光强度高于400时，推断患者患有T细胞淋巴瘤。在一些实施例中，用CCR8δ平均荧光强度测定CCR8表达水平。在一些实施例中，与IgG2a对照同型表达水平相比，计算得出CCR8δ平均荧光强度。在一些实施例中，与IgG2a对照异型表达水平相比，计算得出CCR8δ平均荧光强度。在一些实施例中，该方法包括进一步的步骤，该步骤包括确定CCR8δ平均荧光强度，当CCR8δ平均荧光强度高于100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490或500时，推断患者患有T细胞淋巴瘤。在一些实施例中，该方法包括进一步的步骤，该步骤包括确定CCR8δ平均荧光强度，并在CCR8δ平均荧光强度高于160时，推断患者患有T细胞淋巴瘤。

监测药剂(例如药物化合物)对CCR8表达水平的影响可用于监测患者T细胞淋巴瘤随时间的状态。例如，在接受抗T细胞淋巴瘤治疗的受试者的治疗期间，可以监测药物影响标志物表达的有效性。

因此，本发明还提供了一种用于监测T细胞淋巴瘤患者治疗效果的方法，包括以下步骤：

(i)在给药前从患者处获取给药前样本；

(ii)检测给药前样本中CCR8的表达水平；

(iii)从患者身上获取一个或多个给药后样本；

(iv)检测给药后样本中相同标记物的表达水平；

(v)比较给药前样本中CCR8的表达水平与给药后样本中CCR8的表达水平；以及

(vi)相应地改变对患者的给药剂量。

例如，在治疗过程中，如果通过评估CCR8的表达水平，确定诊断结果较差，则可能表明剂量无效，需要增加剂量。相反，如果通过评估CCR8的表达水平得出较好的诊断结果，则可能表明治疗有效，无需改变剂量。

因此，本发明还涉及一种用于使T细胞淋巴瘤患者适应治疗的方法，其中所述方法包括以下步骤：

a)对从所述患者身上采集的至少一份样本执行本文公开的体外诊断方法；以及

b)通过给所述患者用药，调整其治疗方法。

本发明还涉及用于实施上述诊断方法的试剂盒。该试剂盒包含多种试剂，特别是至少一种能够特异性结合CCR8标记的试剂。用于与标志蛋白结合的合适试剂包括抗体、抗体衍生物、抗体片段等。用于与标记核酸(例如基因组DNA、mRNA、剪接mRNA、cDNA或类似物)结合的合适试剂包括互补核酸。例如，核酸试剂可以包括固定在底物上的寡核苷酸(标记的或未标记的)、未与底物结合的标记的寡核苷酸、成对的PCR引物、分子信标探针等。本发明的试剂盒可以选择性地包含用于实施本发明方法的其他组分。举例来说，试剂盒可包括适用于互补核酸退火或抗体与其特异性结合的蛋白质结合的液体(如SSC缓冲液)、一个或多个样品室、描述本发明体外诊断方法性能的说明材料等。

本发明将通过以下附图和实施例进一步加以说明。然而，这些实施例和附图不应以任何方式解释为限制本发明的范围。

附图说明

图1.Sézary综合征患者新鲜外周血肿瘤细胞中的CCR8表达

图2.T细胞淋巴瘤细胞系(SNK6、DERL-2和HuT78细胞系)的CCR8表达情况

图3.CCR8在CTCL外周血肿瘤细胞表面过度表达，并参与Sezary细胞的活化和增 殖。外周血Sezary细胞、健康对照T细胞和T细胞淋巴瘤细胞系CCR8表达的流式细胞术分析。(A)外周血Sezary细胞的分选策略(左图)和2名Sezary患者的Sezary细胞(与对照同型)中CCR8表达的平均荧光强度(右图)。(B)与健康对照T细胞相比，来自Sezary患者的新鲜Sezary细胞的CCR8δ平均荧光强度(CCR8单抗对照同型)。(C)CCR8受其CCL1配体刺激可诱导Sezary细胞增殖。在CFSE中孵育新鲜的外周血单核细胞，并在IL-2(100IU/ml)、CCL-1(10ng/ml)或IL-2/CCL1中培养96h，计算CFSElo细胞在活的KIR3DL2+Sezary细胞中的百分比。(D)CD3/28体外激活3天前后，新鲜分离的健康对照外周血单核细胞中CCR8的表达。

图4.(A)CCR8在AITL中PDX细胞上的表达。取自AITL患者的脾细胞与对照同型或抗人CD4抗体和抗CCR8抗体(克隆L263.G8)在4℃孵育15分钟，然后用PBS冲洗并在LSRX2流式细胞仪上分析。直方图表示CCR8在CD4+细胞上的表达。(B)CCR8在HSTL细胞上的表达。用对照同型或抗CD3、CD5、TCRγδ和抗-CCR8抗体对脾细胞进行染色。直方图表示CCR8在CD3+CD5-TCRγδ+细胞中的表达。

实施例1：

研究方法

Sézary综合征患者新鲜外周血肿瘤细胞中的CCR8表达

在了解情况并签署知情同意书后，使用抗CD4、CD158k(＝KIR3DL2，Sézary细胞表面标志物)和CCR8(CD198)抗体(克隆L263.G8)或对照同型，通过流式细胞术对4名Sézary综合征患者的外周血单核细胞进行CCR8表达研究。

T细胞淋巴瘤细胞系的CCR8表达

在4℃下用对照同型或抗-CCR8(CD198)抗体(克隆L263.G8)孵育细胞15分钟，然后用PBS冲洗，并在LSRX20流式细胞仪上进行分析。

研究结果

Sézary综合征患者新鲜外周血肿瘤细胞中的CCR8表达

与反应性KIR3DL2-CD4 T细胞相比，Sézary综合征患者的循环CD4+KIR3DL2+肿瘤细胞过度表达了CCR8(CD198)(图1)。用抗CD4、抗KIR3DL2和抗CD198抗体对四种不同的Sezary患者的细胞进行染色。分析CD198在CD4+KIR3DL2+肿瘤细胞群中的表达。

T细胞淋巴瘤细胞系的CCR8表达

用抗-CCR8抗体或对照同型对SNK(EBV阳性NK/T细胞淋巴瘤)、DERL-2(肝脾γ-δT细胞淋巴瘤)和HuT78(Sezary综合征)细胞系进行染色，并用流式细胞术分析CCR8的表达(图2)。

实施例2：

我们对13名持续血液受累的SS患者外周血白细胞进行了流式细胞术分析。如前所述(14,15)，Sézary细胞被鉴定为CD3+CD4+CD26-和/或CD7-KIR3DL2+淋巴细胞(图3A)。使用L263G8单克隆抗体和对照IgG2a同型检测CCR8表达，并与健康供体的T细胞进行比较。在所有病例中，CCR8+肿瘤T细胞共表达CCR4(数据未显示)。Sézary患者的外周血CD4⁺CD25^hiCD127^lo不表达高水平的CCR8(数据未显示)。Sezary细胞的CCR8δ平均荧光强度(CCR8 mAb-对照同型)中位数为580(范围150-1420)，而健康对照为110(范围80-160)(p<0.001，图3B)。有趣的是，不仅CTCL HuT78(SS)细胞系，NK/T细胞淋巴瘤SNK6、肝脾γ-δT细胞淋巴瘤DERL-2细胞系和AITL细胞系也表达CCR8(图2和图4)，这表明CCR8是不同T细胞淋巴瘤亚型的潜在治疗靶点。CCR8与其配体CCL18和CCL1的结合在30分钟时诱导了Erk1/2的显著磷酸化，并且在Sézary患者的肿瘤细胞中不受IL-2的影响(数据未显示)。此外，在一些患者中，CCL1与IL-2一起诱导的Sezary细胞增殖似乎比单独使用IL-2要高(42％对12％ CFSElo Sezary细胞)(图3C)。在CD3/28激活前(第0天)或CD3/28激活后(第3天)，分析健康对照组新鲜分离的外周血淋巴细胞体外激活后CCR8的表达。体外激活3天后，T细胞的CCR8表达明显增加，与CD25intT细胞相比，CD25明亮的(bright)激活T细胞的CCR8表达更高(图3D)。

结论：

综上所述，这项研究证实，与健康对照组的T细胞相比，外周血Sézary细胞过量表达归巢标志物CCR8。由于该分子在其他T细胞淋巴瘤细胞系的细胞表面也有表达，我们的研究结果表明，CCR8可能是一个独特的侵袭性T细胞淋巴瘤亚型的治疗靶点。

我们的研究首次将CCR8作为CTCL的潜在治疗靶点进行分析。免疫调节治疗(16)，如PD-1抑制(7)或同种异体干细胞移植(17)，已显示能够在CTCL中产生长期反应，这表明激活抗肿瘤免疫反应可能会使疾病得到长期控制。在接受莫格利珠单抗治疗的患者中，表达CCR4的外周活化调节性T细胞的缺失与免疫副作用有关，但这些免疫反应与疾病反应和长期疾病控制有关(5,6,18)。最近，CCR8被认为是最佳的肿瘤Treg靶点(19)。与CCR4不同，CCR8在人类肿瘤Tregs上选择性表达，在促炎效应T细胞上最低限度表达。临床前小鼠肿瘤模型显示，通过一种与FcyR结合的抗CCR8抗体使CCR8+调节性T细胞缺失，能产生剂量依赖性、有效和持久的抗肿瘤免疫，并能与PD-1阻断协同作用(19)。Fc优化、非岩藻糖基化的抗人CCR8抗体能特异性地使调节性T细胞缺失，而不能使原发性人体标本体内外肿瘤培养物中的效应T细胞缺失(19)。

参考文献：

在本申请中，各种参考文献描述了与本发明相关的技术现状。这些参考文献的公开内容通过引用并入本公开内容中。

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Claims (16)

1.一种治疗患T细胞淋巴瘤的患者的方法，包括向患者施用治疗有效量的能够诱导CCR8表达癌细胞死亡的制剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述T细胞淋巴瘤是血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤、自然杀伤T细胞淋巴瘤或皮肤T细胞淋巴瘤。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述T细胞淋巴瘤为皮肤T细胞淋巴瘤。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述T细胞淋巴瘤是Sezary综合征。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述制剂是CCR8抑制剂。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述制剂是对CCR8具有结合亲和力的抗体。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述制剂是针对CCR8的至少一个胞外结构域的抗体，可导致CCR8表达癌细胞的缺失。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，适合所述CCR8癌细胞缺失的抗体可介导抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用。

9.根据权利要求7所述的方法，其中，所述抗体为多特异性抗体，包括一个针对CCR8的第一抗原结合位点和至少一个针对效应细胞的第二抗原结合位点。

10.根据权利要求7所述的方法，其中，所述抗体与细胞毒性分子连接。

11.根据权利要求1所述的方法，其中，所述制剂是CAR-T细胞，其中CAR至少包括对CCR8具有特异性的胞外抗原结合域。

12.一种诊断患者T细胞淋巴瘤的方法，包括检测患者样本中CCR8的表达水平。

13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述方法用于诊断血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤、自然杀伤T细胞淋巴瘤或皮肤T细胞淋巴瘤。

14.根据权利要求12所述的方法，其中，所述方法用于诊断皮肤T细胞淋巴瘤。

15.根据权利要求14所述的方法，其中，所述方法用于诊断Sezary综合征。

16.根据权利要求14所述的方法，其中，所述方法还包括检测选自由KIR3DL2、PLS3、Twist和NKp46组成的组中的至少一种标记物的表达水平。