CN117120826A - 监测粘膜愈合的方法 - Google Patents

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Abstract

本公开提供了用于监测患有消化性疾病的患者中粘膜愈合的方法或用于在疾病前状态并且包括其中消化道渗透性增加的肠以及肠外失调中使用。该方法可以包括建立患者的基线，治疗患者的消化性疾病或疾病前状态，测量治疗后患者的消化道渗透性，并且将回收的施用剂量的第二总百分比与回收的施用剂量的基线总百分比进行比较。

Description

监测粘膜愈合的方法
相关申请的引证
本申请要求于2021年4月1日提交的美国临时申请号63/169,568的优先权，其内容通过引用全部结合到本文中。
技术领域
本公开总体上涉及监测患者中肠粘膜愈合的方法。
背景技术
在健康状态下，肠屏障允许水、电解质和养分从消化道管腔选择性易位(吸收)到体循环中，同时防止未消化的食物、大分子和微生物进入身体中。增加的消化道渗透性意味着屏障完整性的丧失，这主要是通过破坏上皮细胞之间的紧密连接。在多种肠炎性病症(包括克罗恩氏病、移植物抗宿主病和乳糜泻病)中消化道渗透性增加。
内窥镜检查是评估粘膜愈合的主要方法。内窥镜检查使得胃肠病学家能够可视地检查粘膜并获得活组织检查，可显微镜检查该活组织检查的炎症或组织损伤的其他迹象。然而，炎性肠病(IBD)患者经历许多内窥镜检查，这可能是不满的原因，特别是由于肠准备(bowel prep)。内窥镜监测也是昂贵的(包括从工作中抽出时间)，并且有时会引起肠穿孔和出血。
肠渗透性的典型测量涉及口服摄入探针分子，探针分子在消化道或循环中不被代谢，并且在尿液中被排泄，可以在尿液中测量它们。最广泛使用的测试是双糖吸收测试(DSAT)，并且涉及用二糖(通常是乳果糖)和单糖(甘露醇或日益增加的鼠李糖)的口服攻击以及尿液的测定以确定糖被宿主吸收的程度。虽然DSAT被认为是用于评估消化道渗透性的现有技术，但一些限制削弱了其效用。这些中的大多数是与样品定时、处理和测定可变性相关的技术限制，它们中的每一个都降低了DSAT的理论吸引力。
因此，仍然需要改进的方法来监测粘膜愈合以及管理具有消化性疾病和其他涉及增加的肠渗透性的病症的患者，同时减少对重复内窥镜检查的需要。
发明内容
本公开的原理和实施方式总体上涉及监测患有消化性疾病或处于疾病前(pre-disease)状态的患者中粘膜愈合的方法。该方法可以包括建立该患者的基线，治疗该患者的消化性疾病或疾病前状态，测量治疗后该患者的消化道渗透性，并且将回收的施用剂量的第二总百分比与回收的施用剂量的基线总百分比进行比较。
建立患者的基线可以包括肠内施用第一剂量的包含基本上不被健康消化道吸收的荧光示踪剂的组合物，经由荧光测量在一段时间内能够在消化道外发现的施用剂量的第一量，以及确定回收的施用剂量的基线总百分比。测量治疗后患者的消化道渗透性可以包括肠内施用第二剂量的包含荧光示踪剂的组合物，经由荧光测量在一段时间内能够在消化道外发现的肠内施用剂量的第二量，以及确定回收的施用剂量的第二总百分比。
本公开的其他方面涉及用于确定患有消化性疾病的患者中粘膜愈合的方法。该方法可以包括肠内施用一定剂量的包含基本上不被健康消化道吸收的荧光示踪剂的组合物；经由荧光测量在一段时间内可以在消化道外发现的施用剂量的量；以及确定回收的施用剂量的总百分比。在一些方面，回收的施用剂量的总百分比与患者的粘膜愈合负相关，即吸收的越少、经由皮肤排泄或测量的越少、屏障完整性越大。
另外的实施方式和特征阐述于以下描述中，并且在检查说明书时对于本领域技术人员而言将变得显而易见或可以通过实践所公开的主题来学习。
附图说明
参考以下附图和数据表将更全面地理解本说明书，这些图和数据图作为本公开的不同实施方式来呈现并且不应被解释为本公开范围的完整叙述，其中：
图1示出了在肠内荧光体递送后的不同时间点具有吲哚美辛诱导的肠损伤的两只大鼠(红线和蓝线)和两只对照大鼠(绿线和黑线)的尿液中MB-404与MB-301的浓度的比率。
图2示出了使用双波长经皮荧光检测来监测具有吲哚美辛诱导的肠损伤的两只大鼠(红线和蓝线)和两只对照大鼠(绿线和黑线)中的荧光体浓度的MB-301和MB-404的经皮检测。示出了MB-301(虚线)和MB-404(实线)荧光随时间的曲线下面积(AUC)。
图3A和图3B示出了在两个单独的实验中在具有吲哚美辛诱导的肠损伤的两只大鼠(红线和蓝线)和两只对照大鼠(绿线和黑线)中MB-404浓度的经皮荧光检测。
图4A示出了在将MB-102递送至具有吲哚美辛诱导的肠损伤的两只大鼠(蓝线和橙线)和两只对照大鼠(灰线和黄线)之后的MB-102排泄。示出了在施用后不同时间点在尿液中回收的施用剂量％。
图4B示出了在具有吲哚美辛诱导的肠损伤的三只大鼠(红线、黑线和绿线)和四只对照大鼠(紫线、粉红线、青绿线和黄线)中MB-102浓度的经皮荧光检测。
图5示出了在对照研究参与者和患有克罗恩氏病的研究参与者中回收的乳果糖或MB-102的施用剂量的百分比。
具体实施方式
以下详细讨论本公开的不同实施方式。虽然讨论了具体的实现方式，但应当理解的是这仅仅是为了说明的目的。相关领域的技术人员将认识到在不背离本公开的精神和范围的情况下，可以使用其他组分和配置。因此，以下描述和附图是说明性的，并且不应被解释为限制性的。描述了许多具体细节以提供对本公开的透彻理解。然而，在某些情况下，并未描述众所周知的或常规的细节以避免使描述模糊。对本公开中的一个或一种实施方式的引用可以是对相同实施方式或任一实施方式的引用；并且，这样的引用意味着这些实施方式中的至少一个。
现在将提供贯穿本公开使用的许多定义。如本文所使用的，“约”是指数值，包括整数、分数、百分比等，无论是否明确指示。术语“约”通常是指数值范围，例如所述值的±0.5-1％、±1-5％或±5-10％，应当认为其等同于所述值，例如，具有相同的功能或结果。
术语“包括”或“具有”是指“包含但不必限于”；具体地表示在这样描述的组合、组、系列等中的开放式包括或成员关系。如本文所使用的术语“包括”和“包含”是包括性的和/或开放式的，并且不排除额外的、未陈述的要素或方法过程。术语“基本上由……组成”比“包括”更具限制性，但不与“由……组成”一样具有限制性。具体地，术语“基本上由……组成”限制指定材料或步骤和在本质上不影响要求保护的发明的基本特征的那些材料或步骤的成员关系。术语“一个”、“一种”和“该”应理解为包括复数以及单数。
如本文使用的，术语“粘膜愈合”被定义为与基线渗透性测量相比肠渗透性的显著降低并且接近正常群体的平均渗透性测量值。可以在治疗前诊断消化性疾病、确定疾病前状态时、在症状加重期间或在治疗部分完成后进行基线渗透性测量。
如本文使用的，术语“显著的”(例如，肠渗透性的显著降低)用于描述指示信息性临床效果或无效果(并且支持剂量/治疗升高、降低、或保持稳定的决定)的足够量级。
如本文使用的，术语“消化道(gut)”、“肠(intestine)”以及“GI”用于描述患者的胃肠道的中空器官，特别是胃、小肠、大肠以及食道。如本文使用的，术语“健康的消化道”可以由医师定义并且可以是在没有消化性疾病并且不处于疾病前状态的患者的消化道。
如本文使用的，术语“回收的(recovered)”是指示踪剂在血浆、尿液、循环血液、组织或消化道管腔外的身体的任何位置中的量的量度。例如，回收的示踪剂的施用剂量的总百分比可以是体液样品中示踪剂的量的直接测量，或者可以是通过示踪剂的经皮测量对消化道外的示踪剂的量的间接测量。
如本文使用的，术语“正常群体”可以由医师定义并且可以包括没有消化性疾病并且不处于疾病前状态的两个或更多个患者。在实例中，正常群体范围可以是参考正常群体的平均值之上/之下的两个标准偏差。标准偏差和百分位数可以经历正常群体值的正态分布，并且可以经历基于年龄、性别和/或种族的变化。
如本文使用的，术语“基本上”可以指最高达约95％、最高达约98％、最高达约99％、最高达约99.5％、或最高达约99.9％。例如，短语“基本上不被健康消化道吸收的荧光示踪剂”可以指少于5％、少于2％、少于1％、少于0.5％或少于0.1％被健康消化道吸收的荧光示踪剂。
在本说明书中使用的术语在本公开的背景下以及在其中使用每个术语的具体背景下总体上具有其在本领域中的普通含义。对于本文所讨论的术语中的任何一个或多个，可以使用替代的语言和同义词，并且无论术语是否在本文中被详述或讨论，都不应赋予特殊重要性。在一些情况下，提供了某些术语的同义词。陈述一个或多个同义词并不排除使用其他同义词。在本说明书中的任何地方(包括在此讨论的任何术语的实例)的实例的使用仅是说明性的，并且不旨在进一步限制本公开或任何举例术语的范围和含义。同样，本公开不限于本说明书中给出的各种实施方式。
本公开的原理和实施方式涉及监测患者中粘膜愈合、GI炎症和/或治疗功效的方法。因此，本公开的各种实施方式提供了监测患有消化性疾病或处于疾病前状态的患者中粘膜愈合、GI炎症和/或治疗功效的方法。
基于荧光示踪剂的监测系统可以提供实时地并且在管理与增加的肠渗透性相关的消化性疾病或病症的护理点处测量的胃肠(GI)渗透性量化。与增加的肠渗透性相关的消化性疾病或肠外病症的非限制性实例包括IBD，其广泛地由以下组成：克罗恩氏病和溃疡性结肠炎、肠的移植物抗宿主病、非酒精性脂肪肝病、乳糜泻病以及嗜酸性食管炎、以及1型或2型糖尿病。可以在经历治疗时监测患者以确定肠渗透性的程度并且随着治疗进程渗透性(或粘膜愈合)降低。在克罗恩氏病和溃疡性结肠炎中，粘膜愈合与最重要的患者结果相关，即避免手术和住院，并且维持高生活质量。对于这些IBD，粘膜愈合可以包括粘膜溃疡的愈合。在一些实施方式中，患者可处于症状前或疾病前状态。例如，由于遗传或代谢风险因素，患者可能是IBD前、糖尿病前、或脂肪肝前疾病、或纤维肝前疾病(脂肪肝疾病的延伸)。增加的渗透性可先于明显的胃肠疾病(例如，IBD)或肠外疾病(例如，1型糖尿病)。在这些情况下，增加的肠渗透性可以用作导致疾病的过程进程的标志物，并且迅速起作用，然后通过测试恢复的屏障功能(即，粘膜愈合)跟踪作用效果。
在治疗期间监测粘膜愈合为患者和保健系统提供了很大的益处，因为生物剂经常用作这些病症的主要治疗。生物剂是昂贵的并且在长期治疗下可能具有有害的副作用。粘膜愈合的早期检测可以为临床医生提供降低治疗成本和降低来自主要药物的副作用的能力(通过赋予它们降低剂量或延长给药之间的间隔的能力)。
在一个实施方式中，用于监测患有消化性疾病的患者中粘膜愈合、GI炎症和/或治疗功效的方法可以包括建立患者的基线、治疗患者的消化性疾病以及测量治疗后患者的消化道渗透性。
该基线可以是患者特异性的，使得可以在治疗前的诊断时或在症状加重期间建立该基线。在一些实施方式中，建立患者的基线可以包括肠内施用第一剂量的包含基本上不被健康消化道吸收的荧光示踪剂的组合物，经由荧光测量在一段时间内能够在消化道外发现的施用剂量的第一量，以及确定回收的施用剂量的基线总百分比。消化道外的示踪剂的出现和定量指示消化道具有增加的渗透性。基线可以用于与患者的治疗开始后进行的测量相比较。
在患者的治疗中，临床医生可以为患者开出用于治疗消化性疾病的药物，或者对于增加的肠渗透性病症可以开出对消化道渗透性具有直接或间接影响的其他干预。这些药物和/或干预包括但不限于膳食调控、益生菌、其他微生物管理策略、小分子治疗剂、改变用途的药物、诱导免疫耐受性的药物、抗生素、静脉内免疫球蛋白、latiglutenase或降解膳食谷蛋白的其他药物、和/或防止组织转谷氨酰胺酶修饰谷蛋白的药物。在至少一个实例中，治疗可以包括用药方案。用于治疗消化性疾病的药物的非限制性实例包括抗炎药物、抗生素、免疫系统抑制剂、Janus激酶抑制剂以及生物剂。抗炎药物可以包括但不限于皮质类固醇，例如泼尼松、泼尼松龙、甲泼尼松龙以及布地奈德；以及口服施用的5-氨基水杨酸盐，例如柳氮磺胺吡啶、巴柳氮、奥沙拉嗪以及美沙拉嗪。抗生素可以包括但不限于环丙沙星和甲硝唑。免疫系统抑制剂可以单独或组合使用，并且包括但不限于硫唑嘌呤、环孢霉素、6-巯基嘌呤、他克莫司和甲氨蝶呤。Janus激酶抑制剂如托法替尼可以用于治疗中度至重度溃疡性结肠炎。用于治疗克罗恩氏病的生物剂类型包括但不限于那他珠单抗、韦多利珠单抗、英夫利昔单抗、阿达木单抗、赛妥珠单抗、戈利木单抗以及乌司奴单抗。其他治疗可以包括称为靶向治疗的策略，该策略涉及治疗炎症靶标直到存在症状和内窥镜检查以及显微镜检查的改善或消退。
在一些实施方式中，测量治疗后患者的消化道渗透性可以包括肠内施用第二剂量的包含荧光示踪剂的组合物，经由荧光测量在一段时间内能够在消化道外发现的施用剂量的第二量，以及确定回收的施用剂量的第二总百分比。在患者开始治疗后，可以在治疗期间的不同时间点测量肠渗透性的变化，以确定药物、剂量和方案的功效。可以在治疗至少5天、至少1周、至少2周、至少3周、至少1个月、至少3个月和/或至少6个月后评估粘膜愈合。随后的评估可以每周或每两周进行，以确定药物和方案是否影响粘膜愈合。
在一个实施方式中，该方法可以进一步包括将回收的施用剂量的第二总百分比与回收的施用剂量的基线总百分比进行比较。在一些实施方式中，该方法可以另外包括基于回收的施用剂量的第二总百分比与回收的施用剂量的基线总百分比的比较评估患者的粘膜愈合。从基线至治疗开始后的指定时间点测量的荧光减少指示可能存在粘膜愈合并且药物和/或治疗方案可能是有效的。此时可以调整用于治疗的药物的剂量，可以修改方案，或者可以维持药物和/或方案。从基线至治疗开始后指定时间点测量的荧光无变化或增加指示没有粘膜愈合并且需要重新评估药物或用药方案。在一些实施方式中，可以评估患者的粘膜愈合多于一次。在病情严重时(例如，对于已知患有IBD的人加剧，或在诊断新鉴定的患者时的基线)，荧光值的显著降低可以视为粘膜愈合的改善。
在一个实例中，如果回收的施用剂量的第二总百分比小于或等于回收的施用剂量的基线总百分比的40％、50％、或60％，则该患者可能具有粘膜愈合并且该治疗可以继续、减少或停止。停止治疗可以包括使患者缓慢地脱离药物。在另一个实例中，如果回收的施用剂量的第二总百分比大于回收的施用剂量的基线总百分比的60％、50％、或40％，则该患者可能不具有粘膜愈合，并且实际上可能需要另外的干预。在一些实例中，未能从基线确定显著降低渗透率(例如，假设在患者处于高度未愈合状态时确定基线，从基线没有变化或有轻微变化)可能促使干预、升级或至少重新评估。
干预可以包括停止(discontinue)治疗、优化治疗、或提供一种或多种后续治疗。例如，干预可以包括用第二药物替换第一药物，增加或减少初始治疗的剂量，或调整提供剂量的时间。然后可以在干预后评估患者的粘膜愈合。在一些实例中，与没有治疗或粘膜愈合的患者相比，该干预可能导致更高的粘膜愈合速率、深度缓解和减少的泼尼松使用。
在另一实例中，可以将回收的施用剂量的第二总百分比与在正常群体中回收的施用剂量的平均总百分比进行比较。如果回收的施用剂量的第二总百分比小于回收的施用剂量的基线总百分比并且小于或等于在正常群体中回收的施用剂量的平均总百分比的第95百分位，则该患者可能具有粘膜愈合。在这种情况下，粘膜愈合的指示可能导致不升级治疗，或者甚至缓慢减少治疗。在另一实例中，如果回收的施用剂量的第二总百分比是在症状加重之前建立的个人基线处或附近，则该患者可能具有粘膜愈合。可替代地，如果回收的施用剂量的第二总百分比小于回收的施用剂量的基线总百分比，但高于正常人群中回收的施用剂量的平均总百分比的第95百分位，则该患者可能不具有粘膜愈合并且它可能是需要治疗侵袭性更强的指示，以尝试实现基于人群的正常范围。如果进一步的治疗没有进一步降低该值(这可能是可接受的)，那么回收的施用剂量的第二总百分比可能是患者的临时基线，并且与该临时基线相比，进一步的监测可以用于证实粘膜状态没有恶化。在一个实例中，具有粘膜愈合的结肠镜检查证据的良好控制的患者可能无法返回至回收的施用剂量的平均总百分比的第95百分位，但是更具侵袭性的副作用否定了完全粘膜愈合的理论值。在这种情况下，治疗可以不升级，或甚至可以缓慢降低。
在另一实施方式中，用于确定患有消化性疾病的患者中粘膜愈合的方法可以包括肠内施用一定剂量的包含基本上不被健康消化道吸收的荧光示踪剂的组合物；经由荧光测量在一段时间内能够在消化道外发现的施用剂量的量；以及基于所测量的量确定回收的施用剂量的总百分比。在一些实施方式中，回收的施用剂量的总百分比可以与患者的粘膜愈合相关。可以在患者的血液、组织或尿液中直接或经皮测量能够在消化道外发现的施用剂量的量。
在一些实施方式中，该方法可以进一步包括评估患者的粘膜愈合。如果在消化道外回收或测量的施用剂量的总百分比小于或等于约0.5％、1％或1.5％或者荧光的测量与小于或等于施用剂量的约0.5％、1％或1.5％相关，则该患者可能具有粘膜愈合。如果回收的施用剂量的总百分比大于约1.5％、2％或2.5％或者荧光的测量与大于回收的施用剂量的约1.5％、2％或2.5％相关，则该患者可能不具有粘膜愈合。可以在至少6小时、至少12小时、至少24小时或至少48小时对所回收的施用剂量的百分比进行评估。可以至少每天到至少每周评估粘膜愈合，持续至少5天、至少1周、至少2周、至少3周、至少1个月、至少3个月和/或至少6个月的时间段。粘膜愈合可以在评估期内测量一次或多次。
在一个实施方式中，可以通过将患者中消化道外回收或测量的施用剂量的总百分比与具有健康消化道的患者中回收的施用剂量的总百分比进行比较来评估患者的粘膜愈合。在一些实施方式中，可以将回收的或测量的施用剂量的总百分比与正常群体中回收的施用剂量的值的分布进行比较。给予患者的剂量可以是给予正常群体的相同或相似剂量。因此，可以在两组之间比较回收或测量的施用剂量的百分比。如果在患者中回收或测量的施用剂量的总百分比小于或等于在正常群体中回收或测量的施用剂量的平均总百分比的约100％、150％、200％或更多，则该患者可能具有粘膜愈合。在一个实例中，如果回收或测量的施用剂量的总百分比小于或等于在正常群体中回收或测量的施用剂量的平均总百分比的第95百分位，则该患者可能具有粘膜愈合。在另一实例中，如果回收或测量的施用剂量的总百分比小于或等于正常群体中回收或测量的施用剂量的平均值的两个标准偏差，则该患者可能具有粘膜愈合。如果患者中回收或测量的施用剂量的总百分比大于正常群体中消化道外回收或测量的施用剂量的平均总百分比的约200％、150％或100％，则该患者可能不具有粘膜愈合。在一个实例中，如果回收或测量的施用剂量的总百分比大于正常群体中回收的施用剂量的平均总百分比的第95百分位，则该患者可能不具有粘膜愈合。在一个实例中，如果回收的施用剂量的总百分比大于正常群体中回收的施用剂量的平均值之上的两个标准偏差，则该患者可能不具有粘膜愈合。在另一实例中，在患有消化性疾病的患者中回收的施用剂量的总百分比可能是正常群体中信号的2-2.5倍高。
在一些实施方式中，用于确定患有消化性疾病的患者中粘膜愈合的方法可以包括肠内施用一定剂量的包含基本上不被健康消化道吸收的第一荧光示踪剂的组合物，施用第二荧光示踪剂，经由荧光测量在一段时间内能够在消化道外发现的所施用的第一荧光示踪剂和第二荧光示踪剂的量，以及通过患者的血液、组织或尿液(直接地或经皮地)中第一荧光示踪剂的浓度与第二荧光示踪剂的浓度的比率确定患者的粘膜愈合，从而允许区分健康和患病的肠粘膜。
第一荧光示踪剂的浓度与第二荧光示踪剂的浓度的比率可以预测患者的粘膜愈合。例如，可以在治疗消化性疾病或其中在患者中存在增加的肠渗透性的另一种病症后改善该比率。在未治疗状态下该比率可以是正常群体(例如，正常范围)中该比率的上限的2-3倍。在一些实施方式中，疾病或病症的治疗可以将该比率降低至正常范围内。在不同的实施方式中，荧光体可以具有与甘露醇、鼠李糖和/或乳果糖类似的分子量。例如，第一荧光示踪剂可以具有类似于乳果糖的分子量，并且第二荧光示踪剂可以具有类似于鼠李糖和/或甘露醇的分子量。在一个实例中，约0.07–0.10范围内的比率可以指示克罗恩氏病中的炎症，并且正常范围可以是约0.05至0.02。
在一些实例中，患者的粘膜愈合的评估可以进一步由通过内窥镜或结肠镜获取的成像或活组织检查来支持。由于荧光示踪剂的使用和测量，这些评估可以较不频繁地进行。
在每个实施方式中，荧光示踪剂可以以单剂量或以多剂量施用。剂量可以根据例如所采用的具体荧光示踪剂或检测方法而变化。例如，示踪剂的剂量可以在约0.1mg/kg体重至约35mg/kg体重、约1.5至约50mg/kg体重、约0.5至约5mg/kg体重、约1.5至约3mg/kg体重、约5至约10mg/kg体重、约10至约15mg/kg体重、约15至约20mg/kg体重、约20至约25mg/kg体重、约25至约30mg/kg体重、约30至约35mg/kg体重、约35至约40mg/kg体重、约40至约45mg/kg体重或约45至约50mg/kg体重的范围内。在不同实例中，第一剂量和/或第二剂量可以是约0.5mg/kg、约1mg/kg、约1.5mg/kg、约2mg/kg、约2.5mg/kg、约3mg/kg、约3.5mg/kg、约4mg/kg、约4.5mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约20mg/kg、约25mg/mg、约30mg/kg、约35mg/kg体重、约40mg/kg体重、约45mg/kg体重或约50mg/kg体重。
荧光示踪剂在生理pH下可以是可溶的，不结合血液中的蛋白质，不被代谢，在肾小球肾处自由过滤，不被肾小管吸收，和/或抗胃酸或含胆汁液的降解或变性。荧光示踪剂可具有约340Da至2,500Da的分子量。例如，荧光示踪剂可以具有约340Da至约380Da、约350Da至约400Da、约375Da至约450Da、约400Da至约500Da、约450Da至约550Da、约500Da至约1,000Da或约1,500Da至约2,500Da的分子量。在一个实例中，荧光示踪剂可以具有372Da的分子量。荧光示踪剂可以具有约350nm或更大的吸收、激发和发射波长。在一些实施方式中，荧光示踪剂可以具有约400nm至约500nm的吸收波长并且具有约540nm至约620nm的发射波长。在一个实例中，荧光示踪剂可以具有约445nm的吸收波长和约560nm的发射波长。
荧光示踪剂可以包括但不限于吖啶类、吖啶酮类、蒽类、蒽环类、蒽醌类、氮杂-甘菊环类、偶氮-甘菊环类、苯类、苯并咪唑类、苯并呋喃类、苯并吲哚羰花青类、苯并吲哚类、苯并噻吩类、咔唑类、香豆素类、花青类、二苯并呋喃类、二苯并噻吩类、二吡咯并染料类(dipyrrolo dyes)、黄酮类、荧光素类、咪唑类、吲哚羰花青类、吲哚菁类、吲哚类、异吲哚类、异喹啉类、萘并萘二酮类、萘类、萘醌类、菲类、菲啶类、菲啶类、吩硒嗪类、吩噻嗪类、吩噁嗪类、苯基呫吨类、多氟苯类、嘌呤类、吡嗪类、吡唑类、吡啶类、嘧啶酮类、吡咯类、喹啉类、喹诺酮类、若丹明类、方酸菁类、并四苯类、噻吩类、三苯甲烷染料类、呫吨类、呫吨酮类及其衍生物。在一个实施方式中，该荧光示踪剂可以包括吡嗪。
吡嗪可以是化学式I的化合物，
X1和X2各自独立地是-CO2R1、-CONR1R2、-CO(AA)或-CONH(PS)；Y1和Y2各自独立地选自由以下各项组成的组：-NR1R2以及
Z1是单键、-CR1R2-、-O-、-NR1-、-NCOR1-、-S-、-SO-、或-SO2-；R1至R2各自独立地选自由以下各项组成的组：H、-CH2(CHOH)aH、-CH2(CHOH)aCH3、-CH2(CHOH)aCH2OH、-CH2(CHOH)aCO2H、-(CHCO2H)aCO2H、-(CH2CH2O)cH、-(CH2CH2O)cCH3、-(CH2)aSO3H、-(CH2)aSO3 -、-(CH2)aSO2H、-(CH2)aSO2 -、-(CH2)aNHSO3H、-(CH2)aNHSO3 -、-(CH2)aNHSO2H、-(CH2)aNHSO2 -、-(CH2)aPO4H3、-(CH2)aPO4H2 -、-(CH2)aPO4H2-、-(CH2)aPO4 3-、-(CH2)aPO3H2、-(CH2)aPO3H-以及-(CH2)aPO3 2-；AA是包含一个或多个选自由以下各项组成的组的氨基酸的肽链：通过肽或酰胺键连接在一起的天然和非天然氨基酸，并且AA的每个实例可以是与每个其他实例相同或不同的；PS是包含通过糖苷键连接的一个或多个单糖单元的硫酸化或非硫酸化多糖链；‘a’是1至10的数，‘c’是1至100的数，并且‘m’和‘n’各自独立地是1至3的数。
在一些实施方式中，X1和X2中的至少一个是-CO(PS)或-CO(AA)。在又一个实施方式中，X1和X2两者都是-CO(AA)。在一些实施方式中，(AA)是选自由21种必需氨基酸组成的组的单个氨基酸。在其他方面，AA选自由以下各项组成的组：D-精氨酸、D-天冬酰胺、D-天冬氨酸、D-谷氨酸、D-谷氨酰胺、D-组氨酸、D-高丝氨酸、D-赖氨酸和D-丝氨酸。优选地，AA是D-天冬氨酸、D-甘氨酸、D-丝氨酸或D-酪氨酸。最优选地，AA是D-丝氨酸。
表1提供了示例性荧光示踪剂的非限制性列表。在至少一个实例中，荧光示踪剂可以是3,6-二氨基-2,5-双{N-[(1R)-1-羧基-2-羟乙基]氨基甲酰基}吡嗪或3,6-二氨基-N2,N5-双(D-丝氨酸)-吡嗪-2,5-二甲酰胺。在另一个实例中，吡嗪可以是N2,N5-双(2,3-二羟基丙基)-3,6-双[(S)-2,3-二羟基丙基氨基]吡嗪-2,5-二甲酰胺。在另一个实例中，荧光示踪剂可以是3,6-二氨基-N2,N5-双((2R,3S,4S,5S)-2,3,4,5,6-五羟基己基)吡嗪-2,5-二甲酰胺。在另一个实例中，荧光示踪剂可以是3,6-二氨基-N2,N5-二(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68-二十三氧杂七十烷-70-基)吡嗪-2,5-二甲酰胺。在又一个实例中，荧光示踪剂可以是(2R,2’R)-2,2’-((3,6-双(((S)-2,3-二羟基丙基)氨基)吡嗪-2,5-二羰基)双(氮烷二基))双(3-羟基丙酸)。在再一个实例中，荧光示踪剂可以是3,6-双(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-十二氧杂三十七烷-37-基氨基)-N2,N5-二(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-十二氧杂三十七烷-37-基)吡嗪-2,5-二甲酰胺。在另一实例中，荧光示踪剂可以是3,6-双(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-十二氧杂三十八烷-38-基氨基)-N2,N5-二(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-十二氧杂三十七烷-37-基)吡嗪-2,5-二甲酰胺。在又一个实例中，荧光示踪剂可以是N,N’-[[3,6-双[[(2S)-2,3-二羟基丙基]氨基]-2,5-吡嗪二基]二羰基]双-D-丝氨酸(D-serine,N,N′-[[3,6-bis[[(2S)-2,3-dihydroxypropyl]amino]-2,5-pyrazinediyl]dicarbonyl]bis-)。在一个实例中，荧光示踪剂可以是3,6-二氨基-N2,N5-二(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-二十四氧杂七十三烷-73-基)吡嗪-2,5-二甲酰胺。在另一个实例中，荧光示踪剂可以是3,6-N,N’-双(2,3-二羟基丙基)-2,5-吡嗪二甲酰胺。
荧光示踪剂可以通过将其递送至患者的胃肠道的任何适合的方法来施用。肠内施用的实例包括但不限于口服、内窥镜滴注、舌下、颊部和直肠途径、以及通过吞咽的诊断装置(即，Pill-Cam)的递送。肠内剂型可以包括但不限于液体剂型，如用于肠内使用的溶液；水性悬浮液，如胶囊、乳液、凝胶、糖浆、酏剂、乳浆剂或它们的混合物；或固体剂型，如粉末、泡腾粉末、胶囊、片剂、泡腾片、缓释片剂和胶囊。在一个实例中，舌下和颊部剂型可以包括片剂和锭剂。直肠剂型可以包括栓剂、灌肠剂以及软膏。在一个实例中，作为获得对可视化额外敏感度的方法，通过内窥镜在结肠镜检查过程中在结肠中的最近侧点处可以递送荧光示踪剂丸。在这个实例中，可以评估器官健康并且可以采取活组织检查作为粘膜愈合的另外量度。
荧光示踪剂的检测和/或测量可以通过使用侵入性和/或非侵入性探针(如在皮肤上、在内窥镜、导管、耳夹、手带、头带、手指探针等中的光学传感器)的光学荧光、吸光度和/或光散射方法来实现。可以使用平面成像、光学断层摄影术、光学相干断层摄影术、内窥镜检查、光散射技术、激光辅助引导手术、共聚焦显微术和/或光散射装置实现成像。在一个实施方式中，在患者的尿液中测量所施用的剂量的量。可以使用光学传感器和/或高效液相色谱法(HPLC)测量患者尿液中荧光示踪剂的量。在另一实施方式中，可以使用光学经皮传感器测量指示患者的血液和组织中荧光示踪剂的量的荧光。可以使用可操作以通过完整皮肤照射和检测荧光示踪剂的任何经皮传感器来测量荧光示踪剂，如在美国专利号10,765,354、10,548,521、10,264,977和10,194,854、美国专利号11,261,165以及美国专利公开号20210369164和20220022820中描述的经皮传感器，并且通过引用将其并入本文。在一个实例中，经皮传感器可以用非电离辐射照射患者的血液和组织中的荧光剂，导致该试剂发荧光并检测荧光示踪剂的荧光。非电离辐射可以是在约350nm或更大的近红外(NIR)或可见光谱中的光。在一些实例中，非电离辐射可以具有至少350nm至约900nm的波长。
实施例
实施例1：在具有小肠损伤的大鼠的尿液中回收的较高比率的荧光体
使用具有与甘露醇和乳果糖相似分子量的两种荧光体(MB-301和MB-404)(参见表2)模拟DSAT。像乳果糖一样，MB-404太大而不能被健康消化道吸收，但可以穿过病变消化道中的细胞间隙，该病变消化道显示出增加的渗透性。
表2：荧光示踪剂
此外，类似于在DSAT中使用的两种糖，MB-301和MB-404不被代谢并且通过肾小球滤过排泄，既不具有(或具有可忽略的)肾小管分泌也不具有再吸收。为了测试区分健康消化道和患病消化道的能力，使用小肠损伤的大鼠模型，其中使用两只受伤大鼠和两只对照大鼠。吲哚美辛诱导肠损伤后当天，将大鼠麻醉，插入导管用于尿液收集，并且通过口服管饲法递送两种荧光体。在口服管饲之前和在管饲后的一系列时间点收集尿液。使用HPLC测定尿液中MB-301和MB-404的浓度，并且将它们的浓度比率随时间绘制在图1中。
如所预期的，与对照大鼠相比，在受伤大鼠中，尿液中MB-404与MB-301的比率较高，这反映了在受伤大鼠中增加的消化道渗透性。因此，MB-301和MB-404的使用有效地模拟了DSAT，它们在尿液中的浓度比率允许区分健康肠粘膜和患病肠粘膜。此外，荧光示踪剂提供更平滑的曲线，并且如果使用经皮检测系统，则可以在不取得样品的情况下测量。
实施例2：在肠损伤的大鼠模型中高分子量荧光体的经皮检测
为了以无样品和实时方式探测评估消化道功能的能力，利用双波长经皮荧光检测系统来监测肠损伤的大鼠模型中MB-301和MB-404。由于这些荧光体的激发和发射光谱不重叠，因此可以同时测定它们的存在。麻醉后，用医用粘合剂将荧光检测系统附着到每只大鼠背部的脱毛区域。然后，在通过口服管饲法递送MB-301和MB-404之前开始经皮荧光监测以检测基线荧光，并且连续监测。通过经皮荧光测量确定的MB-301的浓度在受伤动物和对照动物中保持较低(图2，虚线)，因为这种荧光体被小肠相对快速地吸收并且随后被清除。类似地，在整个实验过程中，对照动物中MB-404的浓度也保持较低，这表明这种荧光体没有穿过肠屏障并进入循环。另一方面，受伤动物中MB-404的经皮检测随时间增加，这反映了这些动物中增加的消化道渗透性。因此，MB-301和MB-404荧光的经皮检测可以用于提供消化道健康的非侵入性实时指示。
通过单独查看每个组分分子结果完成此数据的进一步分析。单独MB-404的经皮检测允许在健康大鼠和患有肠损伤的大鼠之间清楚区分，如图3所示。因此，可以使用单一的高分子量荧光体来评估消化道渗透性。这对于监管和商业需求是有利的。
为此，在小肠损伤的大鼠模型中测试MB-102(图4A和图4B)。在口服管饲MB-102之前开始经皮测量，并且随着时间收集经皮测量连同尿液。基于尿液样品，在患有肠损伤的大鼠中回收的施用剂量的百分比比对照更高(图4A)。如利用MB-404(图3A和图3B)所见，在经皮荧光数据(图4B)中，在受伤大鼠与健康对照之间也存在清楚区分，这证明可以单独使用MB-102来评估消化道渗透性。
实施例3：人克罗恩氏病中肠渗透性的定量
进行单一中心、随机、开放标记、交叉研究，以评估包含18.6mg/mL的1.5或3.0mg/kg的吡嗪衍生的荧光体(MB-102)的溶液相对于肠内施用的DSAT(L，1000mg和R，200mg)。在这项研究中使用的MB-102溶液的组成提供于表3中。
表3：用于口服摄入的MB-102溶液的组成
为了比较荧光体和DSAT清除率的动态范围，招募健康成人和在磁共振肠图上证明小肠克罗恩氏病的成人。将参与者随机化以在治疗第1天接受荧光体示踪剂或糖，随后在3-7天后接受另一种示踪剂。在基线和示踪剂摄入后1、2、4、6、8、10和12小时收集尿液。使用具有荧光检测和累积L、R和L：R比率的超高效液相色谱系统使用正相、等度HPLC-串联ESI质谱来计算荧光体示踪剂的累积尿液回收百分比。
5名健康成人和4名患有克罗恩氏病的成人完成了该研究而没有严重的不良事件。如图5所示，对于所有参与者，尿液中荧光体示踪剂(MB-102)的回收百分比与尿液中回收的乳果糖百分比相关(r＝0.867，p＝0.005)。此外，在对照中回收的乳果糖或MB-102的百分比在参与者中是相似的。在健康参与者给药后12小时，回收了施用剂量的约0.5％至1.0％，这反映了当消化道渗透性正常时MB-102不能穿过肠屏障。相反，克罗恩氏病患者具有宽范围的回收的乳果糖或MB-102百分比，这可能反映了测试时疾病控制的不同程度。
此外，给两个健康参与者和一个患有克罗恩氏病的参与者施用口服剂量的MB-102，并且在施用后6小时和12小时收集血液样品。通过HPLC测定MB-102血浆浓度水平。这些数据证明，在施用后6-12小时之间，在克罗恩氏病中可以看到增加的MB-102剂量排泄和升高的MB-102血浆浓度(表3)。
表3.健康参与者和患病参与者的血浆浓度中MB-102的检测
在小肠损伤动物模型的尿液中检测到MB-102，并且可以区分肠损伤和对照，如通过随时间回收的％剂量所测量的(图4A)。此外，在该相同动物模型中MB-102的经皮荧光检测还可以区分肠损伤和对照(图4B)。在转到人类时，相对于对照，口服施用MB-102导致患病参与者的尿液排泄增加(图5)。
口服施用MB-102没有引起严重的不良事件并且是良好耐受的。重要的是，乳果糖和MB-102排泄百分比在宽范围的值内是高度相关的。当进行研究时，对于MB-102尿液回收，缓解的患者显示出接近正常值，推测这可以解释为治疗后的粘膜愈合。
实施例4：结肠炎中粘膜愈合的测量
在结肠炎中，结肠渗透性增加。在结肠镜检查期间，内窥镜医生可以在结肠中的最近点处通过镜体递送MB-102丸，作为获得对可视化的额外敏感性和作为粘膜愈合度量的活组织检查的方法。在这个实施例中，可以在递送时开始经皮测量患者系统的摄取。在一些情况下，荧光体可以处于凝胶中，使得在取出时液体不使结肠镜的视野模糊。另外，在第一(诊断)结肠镜检查时，内窥镜医生可以递送MB-102的有效负载作为器官渗透性的“基线”治疗前测量。
在溃疡性结肠炎中，存在轴向梯度，使得该疾病总是最远端最差(或者，在严重情况下，它在整个结肠中同样异常，所谓的全结肠炎)。因此，结肠的远端部分是最后要改善的区域。MB-102向直肠中的较小体积滴注可以提供粘膜完整性的相对较快(短示踪持续时间)的评估。对于溃疡性结肠炎中的癌症监视，全结肠镜检查是有价值的，但是使用荧光示踪剂可允许将全结肠镜检查限制为每年一次或两次，其中通过直肠滴注荧光体来产生疾病控制的中间评估。
实施例5：移植物相对于宿主疾病(GVHD)的粘膜愈合的测量
肠的GVHD是骨髓/干细胞移植后发病率和死亡率的主要原因。在这种病症中，移植的(供体)细胞攻击受体的器官。治疗是经由增加的免疫抑制进行的。治疗的持续时间是根据经验指导的-当症状改善时，在一些间隔后，免疫抑制减轻。
可以施用MB-102，然后测量MB-102以基于骨髓/干细胞移植后回收/测量的荧光示踪剂的量的增加预测GVHD的启动。GVHD启动后，MB-102的使用可以用于指示消退(resolution)(例如，粘膜愈合)。一旦基于回收/测量的荧光示踪剂的量的减少确定粘膜愈合，则可以减轻免疫抑制。
实施例6：IBD中粘膜愈合的测量
患有可变持续时间的炎性肠病(例如克罗恩氏病)的患者需要证实他/她的粘膜是良好愈合的。传统上用于确定自最后治疗改变(从生物剂A到生物剂B)以来的改善的标准是基于实验室的(C反应蛋白、炎症标志物和粪便钙防卫蛋白的循环浓度)。如果这些值对当前治疗已经减小，则通过许多标准，患者已经大大地改善。然而，粪便钙防卫蛋白并不是完美的测试，因为它易于在样品内发生取样错误和影响收集时间以及运输中降解。
如果患者的Harvey-Bradshaw指数自最后一次药物改变/开始以来大大改善，但他们报告在一周的许多天具有轻度腹痛，并且粪便保持松散，那么医生和患者可以合理地满意该结果。患者也可以返回工作，具有增加的体重和食欲，并且对生物剂不具有副作用。以前，客观值(CRP，粪便钙防卫蛋白，体重)和主观评估(Harvey-Bradshaw指数，食欲改善)的这种改善将提供人们可以维持治疗的信心。然而，可能总是存在一些操作空间，例如增加生物剂的剂量、更频繁地给予它、添加辅助治疗、或甚至切换到不同的生物剂。这取决于确保粘膜实际上愈合的最佳可能技术。
在这种情况下，医生想要了解轻度症状是否反映不完全愈合的消化道。即使患者没有症状，鉴于具有完全粘膜愈合的高度需要，患者也可能经历内窥镜评估以观察肠(粘膜)的内膜(lining)。目前，关于是否取活组织检查添加到可视化评估几乎没有数据。如果粘膜(结肠、远端小肠)看起来正常，则这可能是评估的限制。如果全部表现良好，一般不会将治疗升级。然而，这种策略存在风险，因为患者在结肠镜到达的近侧仍可能具有活性疾病，并且甚至在正常出现的情况下，可能存在渗透性的散布性缺陷。
因此，可以施用MB-102，并且消化道外回收/测量的量可以用于评估粘膜愈合。尚没有此类全肠评估(粘膜表观倾向于不敏感，如上文刚指出的)。发现渗透性向正常逆转(由数据库定义的范围(参考范围))可以最初用于评估经内窥镜或结肠镜评估粘膜愈合的时间是正确的。可替代地，渗透性缺陷可能与治疗开始时或者当切换生物剂时的基线相关。如果渗透性没有恢复正常，这可能意味着在结肠镜检查之前继续治疗是必要的，或可能存在对增加的免疫抑制的需要。内窥镜程序之间的时间窗为约9-12个月，因此从渗透性测试收集的更快速的信息可提供相当大的中间值。
实施例7：肠外疾病中消化道渗透性的测量
在事件(例如，1型和2型糖尿病、非酒精性脂肪肝疾病以及必然的炎性肠病)发生时，肠渗透性增加。对于这些病症中的前三种，存在增加的肠渗透性先于它们发作的一些数据。该事件顺序表明增加的消化道渗透性可能导致对胰腺和肝脏的损害，或对胰岛素抗性。可以筛选患者检测这种屏障功能的缺陷(结合更多的标准评估，如血红蛋白A1C、空腹血糖、肝酶测试)，并且当这些血液测试开始从基线开始时，或甚至在这些替代测试变得异常之前，渗透性可以是用于治疗的靶标(消化道微生物组操作、饮食、药物)，或指示更努力和频繁的筛选。
已经描述了多个实施方式，本领域的技术人员将认识到，在不背离本发明的精神的情况下，可以使用各种修改、替代性构造和等效物。此外，为了避免不必要地模糊本发明，没有描述许多众所周知的过程和要素。因此，以上描述应被解释为说明性的，并且不被视为限制本发明的范围。随附权利要求旨在覆盖在此描述的所有上位和下位特征，以及本方法的范围的所有陈述，作为语言问题，可以说这些陈述落入它们之间。

Claims (27)

1.一种用于监测患有消化性疾病或处于疾病前状态的患者中粘膜愈合的方法，所述方法包括：
建立所述患者的基线，包括：
肠内施用第一剂量的包含基本上不被健康消化道吸收的荧光示踪剂的组合物；
经由荧光测量在一段时间内能够在消化道外发现的施用剂量的第一量；以及
确定回收的施用剂量的基线总百分比，
治疗所述患者的消化性疾病或疾病前状态；
测量治疗后所述患者的消化道渗透性，包括：
肠内施用第二剂量的包含荧光示踪剂的所述组合物；
经由荧光测量在一段时间内能够在消化道外发现的施用剂量的第二量；以及
确定回收的施用剂量的第二总百分比；以及
将回收的施用剂量的所述第二总百分比与回收的施用剂量的所述基线总百分比进行比较。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述患者的尿液中测量施用剂量的所述第一量和第二量。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，经由经皮传感器经皮测量施用剂量的所述第一量和第二量，其中，所述经皮传感器：
用非电离辐射照射所述患者的血液和/或组织中的所述组合物，导致所述组合物发荧光；以及
检测所述患者的血液和/或组织中所述荧光示踪剂的荧光。
4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述非电离辐射具有至少350nm的波长。
5.根据权利要求1所述的方法，进一步包括基于回收的施用剂量的所述第二总百分比与回收的施用剂量的所述基线总百分比的比较和与正常群体中回收的施用剂量的值的分布的比较评估所述患者的粘膜愈合。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，当回收的施用剂量的所述第二总百分比小于回收的施用剂量的所述基线总百分比并且小于或等于正常群体中回收的施用剂量的平均值之上的两个标准偏差时，所述患者可能具有粘膜愈合。
7.根据权利要求5所述的方法，其中，当回收的施用剂量的所述第二总百分比小于回收的施用剂量的所述基线总百分比，但仍然高于正常群体中回收的施用剂量的平均值之上的2个标准偏差时，所述患者可能不具有粘膜愈合。
8.根据权利要求7所述的方法，进一步包括为所述患者选择干预并且评估所述干预后的粘膜愈合。
9.根据权利要求1所述的方法，其中在治疗至少1周后评估所述粘膜愈合。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述消化性疾病选自由克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、乳糜泻病以及移植物抗宿主病组成的组。
11.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第一剂量和所述第二剂量为约1.5mg/kg至约50mg/kg。
12.根据权利要求1所述的方法，其中所述荧光示踪剂包含吡嗪。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述吡嗪是3,6-二氨基-2,5-双{N-[(1R)-1-羧基-2-羟乙基]氨基甲酰基}吡嗪或3,6-二氨基-N2,N5-双(D-丝氨酸)-吡嗪-2,5-二甲酰胺。
14.一种用于确定患有消化性疾病的患者中粘膜愈合的方法，所述方法包括：
肠内施用一定剂量的包含基本上不被健康消化道吸收的荧光示踪剂的组合物；
经由荧光测量在一段时间内能够在消化道外发现的施用剂量的量；以及
确定回收的施用剂量的总百分比，其中回收的施用剂量的所述总百分比与所述患者的粘膜愈合相关。
15.根据权利要求14所述的方法，其中，在所述患者的尿液中测量所述施用剂量的量。
16.根据权利要求14所述的方法，其中，经由经皮传感器经皮测量所述施用剂量的量，其中，所述经皮传感器：
用非电离辐射照射所述患者的血液和/或组织中的所述组合物，导致所述组合物发荧光；以及检测所述患者的血液和/或组织中所述荧光示踪剂的荧光。
17.根据权利要求16所述的方法，其中，所述非电离辐射具有至少350nm的波长。
18.根据权利要求14所述的方法，进一步包括评估所述患者的粘膜愈合。
19.根据权利要求18所述的方法，其中，如果回收的施用剂量的所述总百分比小于或等于1.5％，则所述患者可能具有粘膜愈合。
20.根据权利要求18所述的方法，其中，如果回收的施用剂量的所述总百分比大于2％，则所述患者可能不具有粘膜愈合。
21.根据权利要求18所述的方法，其中通过将回收的施用剂量的所述总百分比与正常群体中回收的施用剂量的值的分布进行比较来评估所述患者的粘膜愈合。
22.根据权利要求21所述的方法，其中，如果回收的施用剂量的所述总百分比小于或等于正常群体中回收的施用剂量的平均值之上的两个标准偏差，则所述患者可能具有粘膜愈合。
23.根据权利要求21所述的方法，其中，如果回收的施用剂量的所述总百分比大于正常群体中回收的施用剂量的平均值之上的两个标准偏差，则所述患者可能不具有粘膜愈合。
24.根据权利要求14所述的方法，其中，所述消化性疾病选自由克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、乳糜泻病以及移植物抗宿主病组成的组。
25.根据权利要求14所述的方法，其中，所述剂量为约1.5mg/kg至约50mg/kg。
26.根据权利要求14所述的方法，其中所述荧光示踪剂包含吡嗪。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述吡嗪是3,6-二氨基-2,5-双{N-[(1R)-1-羧基-2-羟乙基]氨基甲酰基}吡嗪或3,6-二氨基-N2,N5-双(D-丝氨酸)-吡嗪-2,5-二甲酰胺。
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