CN117042785A

CN117042785A - 用于治疗痤疮的益生菌组合物

Info

Publication number: CN117042785A
Application number: CN202180076679.0A
Authority: CN
Inventors: V·纳瓦罗·洛佩兹; L·纳瓦罗·莫拉塔拉
Original assignee: Bainiu R&d Co ltd
Current assignee: Bainiu R&d Co ltd
Priority date: 2020-09-14
Filing date: 2021-09-14
Publication date: 2023-11-10
Also published as: EP4210720A1; PE20231500A1; DOP2023000047A; CA3195208A1; AU2021340244A9; EP3967318A1; AU2021340244A1; WO2022053711A1; CO2023004516A2; CR20230144A; US20240033308A1; EP4210720B1; JP2023541269A; MX2023002993A; CL2023000720A1; ECSP23025022A

Abstract

本发明提供益生菌组合物，其包含菌株鼠李糖乳杆菌CECT 30031和菌株钝顶螺旋藻(帕拉卡螺旋藻)。所公开的益生菌组合物可用于治疗痤疮。

Description

用于治疗痤疮的益生菌组合物

技术领域

提供了用于治疗痤疮的益生菌组合物。

背景技术

术语益生菌被定义为“当足量摄入时会对宿主产生健康影响的活体微生物”(世界卫生组织和联合国粮食及农业组织，2001年)。关于益生菌的最早报告可追溯到1907年，当时Elie Metchnikoff描述了摄入酸奶中的产乳酸细菌与延长寿命之间的相关性。在过去的几十年里，人们对益生菌重新产生了兴趣，不仅在消化系统健康方面，而且在炎性疾病的管理方面。

口服益生菌已被证明提高了动物模型的胰岛素敏感性，并通过其与肠道相关淋巴组织的相互作用调节皮肤中炎性细胞因子的释放(Hacini-Rachinel G.,Gheit H.,LeLuduec J.B.,Dif F.,Nancey S.,Kaiserlian D.Oral probiotic control skininflammation by acting on both effector and regulatory T cells.PLoS One.2009；4:e4903)。事实上，肠-脑-皮肤轴提出了一种机制，将受口服益生菌相互作用影响的胃肠道健康与皮肤的健康和舒适联系起来(Bowe W.P.,Logan A.C.Acne vulgaris,probioticsand the gut-brain-skin axis:back to the future？Gut Pathog.2011；3:1)。从这个意义上讲，已证明几种乳杆菌属(Lactobacillus)菌株具有全身抗炎作用。研究表明，罗伊氏乳杆菌诱导全身性抗炎细胞因子，例如白细胞介素(IL)-10。来自罗伊氏乳杆菌(L.reuteri)的可溶性因子抑制促炎细胞因子的产生，鼠源罗伊氏乳杆菌6798的培养上清液抑制活化巨噬细胞的肿瘤坏死因子(TNF)产生(Livingston M.,Loach D.,Wilson M.,Tannock G.W.,Baird M.Gut commensal Lactobacillus reuteri 100–23stimulates animmunoregulatory response.Immunol Cell Biol.2009；88:99–102)。

几种乳杆菌属菌株也表现出抗炎特性。添加副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)NCC2461已显示抑制皮肤模型中的神经性炎症(neutrogenic inflammation)，向淋巴细胞培养物中添加副干酪乳杆菌(L.paracasei)NCC2461已显示以剂量依赖性方式强烈抑制CD-4+T细胞的增殖活性，并诱导抗炎细胞因子IL-10和TGF-β。食用益生菌7天的小鼠表现出明显更高的抗体反应和体内T细胞介导的免疫反应，表明副干酪乳杆菌影响B细胞和T细胞功能。同样，用干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)处理的小鼠产生IL-10和促进T调节细胞功能的能力增强。T调节细胞的增加表明这种益生菌可有助于平衡免疫系统对刺激的反应(Hacini-Rachinel G.,Gheit H.,Le Luduec J.B.,Dif F.,Nancey S.,Kaiserlian D.Oral probiotic control skin inflammation by acting on botheffector and regulatory T cells.PLoS One.2009；4:e4903)。因此，某些益生菌菌株可能会增强适当的免疫反应，例如对有害病原体威胁的免疫反应，同时抑制慢性炎症状态下不必要的免疫反应。

破坏皮肤屏障功能是许多痤疮药物的已知副作用，包括外用维甲酸和过氧化苯甲酰。这些药物引起的刺激、刺痛和干燥会对痤疮治疗方案的依从性产生负面影响。酒渣鼻和特应性皮炎是皮肤屏障受损的其他皮肤病症，当皮肤屏障加强时症状会改善。口服摄入某些益生菌菌株已被证明改善皮肤屏障并影响皮肤水合作用和经表皮水分流失。事实上，Gueniche等人(2014)(Gueniche A.,Phillippe D.,Bastien P.,Reuteler G.,Blum S.,Castiel-Higounenc I.Randomised double-blind placebo-controlled study of theeffect of Lactobacillus paracasei NCC 2461on skin reactivity.BenefMicrobes.2014；5:137–145)在随机安慰剂对照临床试验中研究了口服补充副干酪乳杆菌NCC2461相比于安慰剂对健康女性志愿者的影响。使用辣椒素测试来监测皮肤敏感性，而经表皮水分流失和皮肤病学评估用于测量皮肤屏障功能。益生菌组的皮肤敏感性和皮肤屏障功能均得到改善。与安慰剂组没有增加相比，益生菌组在29天后还显示TGF-β血清浓度增加。TGF-β已被证明在皮肤完整性中发挥重要作用。

因此，总的来说，益生菌调节免疫系统的发展，通常将免疫反应转向调节和抗炎条件。益生菌改变慢性炎症状态的能力表明，益生菌可在治疗慢性炎症病况方面发挥作用，范围从炎症性肠病到反应性气道疾病，再到痤疮、酒渣鼻、特应性皮炎和光老化(BenyacoubJ.,Bosco N.,Blanchard C.,Demont A.,Phillippe D.,Castiel-Higounenc I.Immunemodulation property of Lactobacillus paracasei NCC2461(ST11)strain and impacton skin defenses.Benef Microbes.2014；5:129–136)。从这个意义上讲，人类研究中益生菌干预痤疮的证据总结在下表1中。

表1：有益益生菌干预寻常痤疮的证据。改编自：(11)

然而，仍然需要提供其他益生菌组合物，其提供显著改善的痤疮的整体治疗，特别是相对于众所周知和公认的分级系统如综合痤疮分级系统(GAGS)或AGSS(痤疮综合严重程度量表)而言的显著改善。

附图说明

图1.实施例1的益生菌共混物研究中使用的Consort图。

图2.该图显示了针对实施例1的益生菌共混物研究在6周和12周时的GAGS(综合痤疮分级系统)指数的评估。

图3.该图显示了针对实施例1的益生菌共混物研究在6周和12周时的AGSS(痤疮综合严重程度量表)指数的评估。

图4.该图显示了针对实施例1的益生菌共混物研究在6周和12周时的发炎痤疮病变数量的评估。

图5.该图显示了针对实施例1的益生菌共混物研究患者在6周和12周时的感知与主观评价的评估。

具体实施方式

在本发明中，我们已经测试了一种名为Bths-03的新的基于麦芽糖糊精的配方，该配方包含两种菌株的混合物，每克包含至少1x10⁹ cfu(菌落形成单位)(参见实施例1)。特别地，所述两种菌株的混合物包含菌株鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)CECT30031和菌株钝顶螺旋藻(Arthrospira platensis)BEA_IDA_0074B(也称为帕拉卡螺旋藻(Spirulina paraca(S.paraca)))。

鼠李糖乳杆菌是一种常用作益生菌的细菌，主要存在于酸奶和其他乳制品，包括婴儿配方。鼠李糖乳杆菌的科学分类是：域：细菌，门：厚壁菌门，纲：杆菌纲，目：乳杆菌目，科：乳杆菌科，属：乳杆菌属，种：鼠李糖乳杆菌。

钝顶螺旋藻是一种水生、原核丝状革兰氏阴性菌，属于：域：细菌；门：蓝细菌门；纲：蓝藻纲；属：蓝藻属，尽管它是原核细菌微生物，但通常被归类为蓝/绿微藻。其商业化生物质的通用名称是“螺旋藻”，这种微生物的生产使这种微生物成为世界上培植最多的微生物。因此，钝顶螺旋藻也以帕拉卡螺旋藻的名称为人所知。

通过使用上述混合物，并且如本说明书所附的实施例1所示，我们进行了一项先导研究，其中包括患有中度寻常痤疮并且被开出局部性和全身性抗生素治疗处方的患者。如其中所示，根据综合痤疮分级系统(GAGS)，益生菌组的反应百分比为61.8％，安慰剂组为35.4％。这种改善百分比的绝对值差异约为26个点，被认为具有临床相关性和统计学意义。另一个测量的临床重要变量是AGSS(痤疮综合严重程度量表)变量。还观察到该变量的组间差异，特别是，在益生菌组中该指数改善了58％，在安慰剂组中改善了33％。关于变量“炎性病变的数量”，该变量显示了两组的临床和统计学相关性的差异，益生菌组中76.5％的病变得到改善，而安慰剂组仅23.78％的病变显示改善。最后提到的变量是在使用益生菌共混物治疗组的治疗过程中得到最大改善的变量。此外，在治疗结束时，患者的主观印象改善显示益生菌组中为29.58％的改善，而安慰剂组中该变量则显示4.75％的改善。此外，与安慰剂组的数据相比，益生菌组的所有重要变量(主要和次要)都显示出更有利的评分，其中一些具有重要的临床相关性和统计学意义。两组的治疗依从性均为90％，而所描述的副作用数量很少，且与研究中使用的治疗无关。

基于这些结果，我们可以得出结论，本发明提供了一种使用益生菌组合物的新的改进的痤疮的治疗，该益生菌组合物包含至少两种菌株的组合，特别是属于鼠李糖乳杆菌种属和钝顶螺旋藻(帕拉卡螺旋藻)种属的细菌菌株。更具体地，本发明涉及至少以下的组合：2019年12月3日由Bioithas(西班牙，阿利坎特，圣文森特德尔拉斯佩格03080)保藏在西班牙典型培养物保藏中心(CECT)(西班牙，帕特纳(瓦伦西亚)，C/Catedrático AgustínEscardino)中的保藏号为CECT 30031的名为AcnéPro-Bths的菌株鼠李糖乳杆菌(在整个本说明书的下文中称为鼠李糖乳杆菌CECT 30031)；以及2019年10月25日由Bioithas(西班牙，阿利坎特，圣文森特德尔拉斯佩格03080)保藏在西班牙海藻数据库(Banco deAlgas)(塔里亚特码头，s/n 35214-特尔德大加那利-西班牙)中的保藏号为BEA_IDA_0074B的名为SPF-bioithas 001的钝顶螺旋藻菌株(在整个本说明书的下文中称为帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B或钝顶螺旋藻BEA_IDA_0074B)。

此外，如所附实施例所示，在实施例1中描述的研究或试验之前，鼠李糖乳杆菌CECT 30031菌株和帕拉卡螺旋藻菌株BEA_IDA_0074B中的每一种被单独评估用于治疗寻常痤疮。为此目的，在三分支研究中的每一个中，仅使用鼠李糖乳杆菌CECT 30031、仅使用帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B、或CECT 30031和帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B，对五名患者进行了小型先导研究。该研究的结果在实施例2中提供，其中反映了与单独使用每种菌株的效果相比，当两种菌株组合使用时效果如何显著增强并因此显著改善。

此外，同样在实施例1中描述的试验之前，将包含帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B菌株的益生菌组合物与包含已知菌株(菌株1.鼠李糖乳杆菌SP1)(“Fabbrocini G,BertonaM,PicazoPareja-Galeano H,Monfrecola G,Emanuele E.Supplementation withLactobacillus rhamnosus SP1 normalises skin expression of genes implicated ininsulin signaling and improves adult acne.Benef Microbes.2016；7(5):625-630.doi:10.3920/BM2016.0089”中公开)的益生菌组合物进行了具体比较。这种已知菌株在现有技术中被认为对治疗寻常痤疮有效(见上表1)。结果如实施例3所示。

因此，从实施例3中显示的与鼠李糖乳杆菌SP1菌株相关的结果和实施例2中显示的涉及鼠李糖乳杆菌CECT 30031的数据(两者单独使用时)可以清楚地看出，鼠李糖乳杆菌CECT 30031菌株与鼠李糖乳杆菌SP1菌株相比在治疗寻常痤疮方面显著地更有效。此外，基于实施例1至3中所示的结果，还清楚的是当鼠李糖乳杆菌CECT 30031与帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B菌株组合使用时，抗痤疮效果明显增强。

因此，本发明的第一方面涉及一种益生菌组合物，其包含鼠李糖乳杆菌CECT30031菌株和帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B菌株的组合。

在本发明中，如在任何上述方面中使用的，术语“益生菌组合物”被理解为包含至少一种微生物的组合物，当该组合物被摄取时，其与个体的新陈代谢相互作用并在其中产生有益效果。在本发明中，益生菌组合物因此至少包含微生物鼠李糖乳杆菌CECT 30031和帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B的组合。

本发明的第二方面涉及本发明第一方面的益生菌组合物，其用于在有需要的对象或个体中治疗和/或预防痤疮(特别是在缓解、减少、治疗和/或预防痤疮的方法中)，特别是寻常痤疮，更具体地用于预防或治疗粉刺(例如减少粉刺的数量和/或防止粉刺恶化)。

本发明的第三方面涉及一种益生菌组合物，其用于在有需要的对象、优选人类对象中缓解、减少、治疗和/或预防痤疮，特别是寻常痤疮，更具体地用于缓解、减少、治疗和/或预防粉刺的方法中，所述益生菌组合物包括保藏在西班牙海藻数据库的保藏号为BEA_IDA_0074B的钝顶螺旋藻(帕拉卡螺旋藻)菌株。

本发明的第四方面涉及一种益生菌组合物，其用于在有需要的对象、优选人类对象中缓解、减少、治疗和/或预防痤疮，特别是寻常痤疮，更具体地用于缓解、减少、治疗和/或预防粉刺的方法中，所述益生菌组合物包括根据布达佩斯条约保藏在西班牙典型培养物保藏中心(CECT)的保藏号为CECT 30031的鼠李糖乳杆菌菌株。

在本发明的第二、第三和第四方面的优选实施方式中，痤疮选自寻常痤疮、酒渣鼻、聚合性痤疮、暴发性痤疮、革兰氏阴性毛囊炎和面部脓皮病，优选其中痤疮是寻常痤疮。

在本发明的第二、第三和第四方面的另一个优选实施方式中，益生菌组合物被口服施用至对象。

本发明的其他方面涉及本文提供的用于治疗和/或预防以皮脂过度产生为特征的疾病、特别是那些阻塞毛囊皮脂腺单位从而形成粉刺的疾病的组合物。另一方面涉及本文提供的用于清洁皮肤、特别是在油性皮肤或易长痤疮皮肤的情况下清洁皮肤的组合物。

在本发明中，术语“对象”等同于术语“个体”，因此这两个术语在本文中可以互换使用。“对象”是指除任何个体外，属于任何物种的任何动物。对象的示例包括但不限于具有商业利益的动物，例如鸟类(母鸡、鸵鸟、小鸡、鹅、鹧鸪等)、家兔、野兔、宠物(狗、猫等)、绵羊、牛羊(山羊等)、猪(野猪、家猪等)、马类家畜(马、矮种马等)、牛(公牛、母牛、阉牛等)；有狩猎价值的动物，如牡鹿、鹿、驯鹿等；和人。然而，在特定的实施方式中，对象是哺乳动物，特别地，哺乳动物是任何种族、性别或年龄的人。

在本发明中，术语“预防”是指避免个体发生疾病或病理状况，特别是当个体具有该病理状况的倾向但尚未被诊断时。在本发明的优选实施方式中，疾病或病理状况是“痤疮”。

在本发明中，术语“治疗(treat/treatment)”包括抑制疾病或病理状况，即停止其发展；减轻疾病或病理状况，即引起疾病或病理状况的消退；减轻或减少疾病或病理状况的至少一种症状或体征；和/或稳定个体的疾病或病理状况。在本发明的优选实施方式中，疾病或病理状况是“痤疮”。

在本发明的上下文中，应注意术语“痤疮”应被理解为皮脂腺毛囊、通常称为毛孔的疾病。每个毛囊的基部都有一个叫做皮脂腺的腺体，它会产生皮脂。皮脂是一种使皮肤保持湿润和柔韧的油性物质，在正常情况下会沿着毛囊移动到皮肤表面。瑕疵开始于其出现在皮肤表面前的约2-3周。随着皮肤自我更新，旧细胞死亡并脱落。当细胞不均匀地脱落并与皮脂聚集在一起时，会形成堵塞物。通常排到表面的皮脂被阻塞，细菌开始生长。细菌的快速生长与积累的皮脂相结合导致毛囊扩大并导致一种称为粉刺的轻度痤疮，它是非炎性的。白头和黑头最初都是“微粉刺”，然后微粉刺变成称为粉刺的皮肤瑕疵，即白头粉刺或黑头粉刺。痤疮是在堵塞的毛囊中生长的被困住的皮脂和细菌(痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium Acnes))。面部、胸部、背部、颈部和头皮的皮脂腺数量最多；因此，这些是最常见的痤疮部位。引起痤疮的最常见因素是激素、皮脂产生增加、细菌(痤疮丙酸杆菌)、全身和局部炎症以及毛囊内部的变化。痤疮可发展为红色的炎症型痤疮病变，称为丘疹、脓疱和结节。

如在本发明中使用的，术语痤疮不限于任何特定类型，因为存在许多类型的痤疮，其严重程度从轻度到严重毁容。特别地，本发明中使用的术语“痤疮”是指任何类型的痤疮，特别是选自由以下组成的清单中的那些：寻常痤疮、酒渣鼻、聚合性痤疮、暴发性痤疮、革兰氏阴性毛囊炎和面部脓皮病。特别地，痤疮的类型是寻常痤疮。

寻常痤疮是最常见的痤疮形式，包括几种类型的面疱(pimple)。这些痤疮病变包括黑头、白头、丘疹、脓疱、结节和囊肿。轻度至中度寻常痤疮的特征是白头、黑头、丘疹和脓疱。当毛孔完全阻塞时会形成白头，其将皮脂、细菌和死皮细胞困在皮肤表面下方，从而导致表面呈现白色。白头的生命周期通常比黑头快。当毛孔仅被部分阻塞时，就会形成黑头，从而使一些被困的皮脂、细菌和死皮细胞慢慢排到表面。黑色是由于皮肤自身的色素-黑色素与空气中的氧气发生反应。黑头往往是一个稳定的结构。黑头通常需要很长时间才能清除，因为内容物非常缓慢地排到表面。丘疹是没有头部的小的、红色的、柔软的肿块。丘疹是通常被认为是典型“面疱”的最早发展阶段。丘疹是痤疮在非炎症和炎症阶段之间进展的中间产物。脓疱类似于白头，但有炎症，呈红色圆圈，中心为白色或黄色。

严重的寻常痤疮以结节和囊肿为特征。结节性痤疮由更大的痤疮斑组成，会非常疼痛，并且有时会持续数月。结节是皮肤表面下的大而硬的肿块。疤痕常伴于结节。痤疮囊肿可能看起来类似于结节，但充满脓液，并且可被描述为具有5mm或更大的直径。它们可能会疼痛，疤痕常伴于囊肿性痤疮。

酒渣鼻可能看起来类似于上述寻常痤疮，这两种类型的痤疮有时会相互混淆。酒渣鼻影响数百万人，其中大多数人年龄在30岁以上。它表现为红疹，通常局限于脸颊、鼻子、前额和下巴。泛红通常伴有肿块、面疱和皮肤瑕疵。血管也可能在皮肤上变得更加明显。黑头不是酒渣鼻的一部分。它在女性中更为普遍，但在男性中通常更为严重。如果不及时治疗，它会导致鼻子肿胀和多余组织的生长，这种情况称为肥大性酒渣鼻。

聚合性痤疮是寻常痤疮最严重的形式，在男性中更为常见。它的特点是有许多大的病变，有时相互连接，并伴有广泛的黑头。它会对皮肤造成严重的、不可挽回的伤害，并留下毁容性疤痕。它存在于面部、胸部、背部、臀部、上臂和大腿上。聚合性痤疮的发病年龄通常在18至30岁之间，并且该状况会持续多年。

暴发性痤疮是一种突然发作的聚合性痤疮，通常折磨年轻男性。严重结节囊肿性的、通常是溃疡性的痤疮的症状是明显的。与聚合性痤疮一样，严重的毁容性疤痕很常见。暴发性痤疮的独特之处在于它还包括发烧和关节疼痛。

革兰氏阴性毛囊炎是一种以脓疱和囊肿为特征的细菌感染，可能作为由于长期使用抗生素治疗寻常痤疮引起的并发症而发生。这是一种罕见的状况，男性与女性的患病率尚不清楚。

面部脓皮病是仅影响通常年龄在20至40岁之间的女性的严重面部痤疮，其特征是疼痛的大结节、脓疱和疮，可能会留下疤痕。它突然开始，可能发生在以前从未患过痤疮的女性的皮肤上。它局限于面部，通常不会持续超过一年，但会在很短的时间内造成严重破坏。

值得注意的是，本发明还考虑了那些衍生自微生物鼠李糖乳杆菌CECT 30031的微生物或细菌，这些微生物或细菌具有与鼠李糖乳杆菌CECT 30031的SEQ ID NO 1的鼠李糖乳杆菌菌株的16s rRNA序列至少99％相同的16s rRNA序列，并且保留了所述鼠李糖乳杆菌CECT 30031在有需要的个体中减少和/或改善痤疮演变的能力。

本发明还涵盖那些衍生自微生物帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B(钝顶螺旋藻BEA_IDA_0074B)的微生物或细菌，该微生物或细菌具有与帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B的16srRNA序列至少95％相同的16s rRNA序列，并且保留了帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B在有需要的个体中减少和/或改善痤疮演变的能力。

此类衍生细菌可以是本发明的任何上述益生菌组合物中任何微生物鼠李糖乳杆菌CECT 30031和/或帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B的一部分、或其全部或对其部分替代，只要它们保留在有需要的个体中减少和/或改善痤疮演变的能力。

在本发明的上下文中，“保留在有需要的个体中减少和/或改善痤疮演变的能力”应被理解为，与用安慰剂治疗的对象相比，GAGS(综合痤疮分级评分)指数至少26％的显著改善，同时益生菌组的AGSS(痤疮综合严重程度量表)指数的至少两个类别58％的改善，而安慰剂组对象为33％，并且可选地，与用口服抗生素治疗和/或用水杨酸、壬二酸和/或氨苯砜局部治疗患有痤疮的对象所获得的结果相比，发炎损伤数量的至少51％得到改善。

包含在本发明的任何上述益生菌组合物中的菌株或衍生自菌株的微生物的实例可以是突变体和遗传改造生物体，它们的基因组与它们所衍生自的本发明菌株的基因组相比显示出变异，但是这不会影响菌株减少和/或改善个体痤疮演变的能力。衍生自鼠李糖乳杆菌CECT 30031和帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B的菌株可以通过本领域已知的诱变方法自然地或有意地产生，例如但不限于，亲本菌株在诱变剂或应激源存在下的生长，或通过涉及修改、缺失和/或插入特定基因的基因工程。因此，如上所述，本发明还考虑了衍生自鼠李糖乳杆菌CECT 30031和帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B的遗传改造生物体，它们保留了在个体中减少和/或改善痤疮发展的能力，因此，用于治疗痤疮。特定的衍生菌株具有与亲本菌株(SEQ ID NO 1)的16s rRNA序列至少95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99.9％相同的16s rRNA序列，并保留亲本菌株在有需要的个体中减少和/或改善痤疮演变的能力。

SEQ ID NO 1:

AGAGTTTGATCCTGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAACGAGTTCTGATTATTGAAAGGTGCTTGCATCTTGATTTAATTTTGAACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCTTAAGTGGGGGATAACATTTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAAATCCAAGAACCGCATGGTTCTTGGCTGAAAGATGGCGTAAGCTATCGCTTTTGGATGGACCCGCGGCGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAATGATACGTAGCCGAACTGAGAGGTTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGCTTTCGGGTCGTAAAACTCTGTTGTTGGAGAAGAATGGTCGGCAGAGTAACTGTTGTCGGCGTGACGGTATCCAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCTCGGCTTAACCGAGGAAGTGCATCGGAAACTGGAAAACTTGAGTGCAGAAGAGGACAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAATGCTAGGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCTTTTGATCACCTGAGAGATCGGGTTTCCCCTTCGGGGGCAAAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATGACTAGTTGCCAGCATTTAGTTGGGCACTCTAGTAAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAACGAGTTGCGAGACCGCGAGGTCAAGCTAATCTCTTAAAGCCATTCTCAGTTCGGACTGTAGGCTGCAACTCGCCTACACGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCGAAGCCGGTGGCGTAACCCTTTTAGGGAGCGAGCCGTCTAAGGTGGGACAAATGATTAGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGAGAACCTGCGGCTGGATCACCT

此外，本发明还考虑了由鼠李糖乳杆菌CECT 30031和帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B菌株分泌的细胞组分、代谢物和分子，以及包含所述组分的组合物及其用于治疗和/或预防痤疮的用途。细菌的细胞组分可包括细胞壁组分(例如但不限于肽聚糖)、核酸、膜组分和其他组分，例如蛋白质、脂质和碳水化合物及其组合(例如脂蛋白、糖脂或糖蛋白)。代谢物包括细菌或微藻由于其在生长、技术流程中使用其的过程中或产品(本发明的第一益生菌组合物)的储存过程中的代谢活动而产生或改造的任何分子。这些代谢物的例子包括但不限于有机酸和无机酸、蛋白质、肽、氨基酸、酶、脂质、碳水化合物、脂蛋白、糖脂、糖蛋白、维生素、盐、矿物质或核酸。分泌的分子包括细菌在生长、技术流程(例如，食物加工或药物)中使用其的过程中或产品储存过程中分泌或释放到外部的任何分子。这些分子的实例包括但不限于有机酸和无机酸、蛋白质、肽、氨基酸、酶、脂质、碳水化合物、脂蛋白、糖脂、糖蛋白、维生素、盐、矿物质或核酸。

如本领域技术人员所理解的，本发明的任何益生菌组合物可以配制用于药物施用，即，形成药物产品的一部分以施用于对象(口服、局部等，优选口服)，和/或用于食物施用，即形成对象饮食中消耗的食物的一部分，从而被口服施用。因此，在特定的实施方式中，本发明的任何组合物或益生菌组合物可以是药物组合物(下文的本发明的药物组合物)和/或营养组合物(下文的本发明的营养组合物)。因此，这样的本发明的药物组合物可用于治疗和/或预防以皮脂过度产生为特征的疾病、特别是那些阻塞毛囊皮脂腺单位从而形成粉刺的疾病。特别地，这样的本发明的药物组合物用于预防或治疗痤疮，特别是寻常痤疮，更具体地用于预防或治疗粉刺。粉刺是皮肤着色的小肿块(丘疹)，经常出现在痤疮患者的前额和下巴上。单个病变是粉刺。开放性粉刺是黑头；黑色是因为表面色素(黑色素)，而不是污垢。闭合性粉刺是白头；毛囊被完全阻塞。

因此，本发明的药物组合物包含任何浓度的微生物鼠李糖乳杆菌CECT 30031和/或帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B(或如上所定义的衍生自它们的菌株)，并且可以另外包含一种或多种在预防和/或治疗痤疮、特别是治疗或预防粉刺方面具有任何生物学、药理学和/或兽用活性的组分或化合物。此类药物组合物可进一步包含一种或多种组分，其在施用于对象后可进一步增加、增强和/或促进包含在本发明的任何益生菌组合物中的菌株的活性。如本领域技术人员所理解的，另外的组分或化合物必须与本发明的任何益生菌组合物的菌株相容。在本发明的上下文中，术语“药物组合物”还包括兽用组合物。

在一个具体的实施方式中，本发明的药物组合物还包含药学上可接受的载体和/或赋形剂。

术语“赋形剂”是指有助于本发明的任何益生菌组合物(即本发明的任何菌株)的任何组分或化合物的吸收，或使所述组分或化合物稳定，和/或在赋予其稠度或风味以使其更令人愉快的意义上协助药物组合物制备的物质。因此，赋形剂可以具有，例如但不限于，粘结组分(例如淀粉、糖或纤维素)、增甜、着色、保护活性成分(例如使其与空气和/或水分隔绝)、填充药丸、胶囊或任何其他外观的功能，或具有崩解功能以促进组分溶解，但不排除本段未列出的其他赋形剂。因此，术语“赋形剂”被定义为包含在盖仑剂型中的物质，其被添加到活性成分或其组合中以使它们能够被制备且稳定，改变它们的感官特性或确定药物组合物的物理化学特性及其生物利用度。“药学上可接受的”赋形剂必须允许药物组合物的组分或化合物的活性，即与本发明的菌株相容。

“盖伦剂型”或“药物形式”是活性成分和赋形剂适于提供本发明的药物组合物或药物的构型。它由制造商提供药物组合物的形式及其施用的形式的组合来定义。

特别地，“溶媒”或“载体”是惰性物质。载体功能是为了促进其他组分或化合物的掺入，允许更好的用量和施用，和/或赋予药物组合物稠度和形式。因此，载体是药物中用于将本发明药物组合物的任何组分或化合物稀释至给定体积或重量的物质；或者即使不稀释这些组分或化合物，也能够允许更好的用量和施用，和/或赋予药物稠度和形式。当呈现为液体时，药学上可接受的载体是稀释剂。载体可以是天然的或非天然的。药学上可接受的载体的实例包括但不限于水、盐溶液、醇、植物油、聚乙二醇、明胶、乳糖、淀粉、直链淀粉、硬脂酸镁、滑石、表面活性剂、硅酸、粘性石蜡、芳香油、脂肪酸的单甘油酯和二甘油酯、石油醚脂肪酸酯(fatty acid esters petroetrals)、羟甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等。

此外，赋形剂和载体必须是药理学上可接受的，即赋形剂和载体是被许可和评估的，以便不会对其施用的对象造成损害。

在每种情况下，药物组合物的呈现将适应所使用的施用类型。因此，该组合物可以以溶液形式或任何其他临床允许的施用形式并以治疗有效量存在。药物组合物因此可以配制成固体、半固体或液体制剂，例如片剂、胶囊剂、粉剂(例如那些来自冻干(冷冻干燥)或空气干燥的那些)、颗粒剂、溶液剂、栓剂、凝胶剂或微球。在一个特定的实施方式中，药物组合物被配制用于以液体形式或固体形式施用。在一个实施方式中，该组合物是明胶胶囊的形式。

在另一个具体的实施方式中，固体制剂选自片剂、锭剂、糖果、咀嚼片、口香糖、胶囊剂、小袋剂(sachets)、粉剂、颗粒剂、包衣颗粒或包衣片剂、片剂、丸剂、锭剂、耐胃酸片剂和胶囊剂以及可分散性条和膜。

在另一个特定的实施方式中，液体制剂选自由口服溶液剂、混悬剂、乳剂和糖浆剂组成的组。

同样，已知可用于缓释施用本发明的任何益生菌药物组合物或营养组合物的各种系统，包括例如在脂质体、微泡、微粒或微胶囊等中封装。合适的缓释剂型以及制备它们的材料和方法在现有技术中是众所周知的。因此，本发明的任何益生菌组合物的口服施用形式是进一步包含至少一种包衣或基质的缓释形式。缓释包衣或基质包括但不限于天然半合成或合成聚合物，水不溶性或改性的蜡、脂肪、脂肪醇、脂肪酸，天然、半合成或合成的增塑剂，或它们中两种或更多种的组合。可以使用本领域技术人员已知的常规方法应用肠溶包衣。

除了上面已经描述的之外，本发明还涵盖以下可能：本发明的任何益生菌组合物、益生菌药物组合物或营养组合物(如在本说明书中通篇描述的任何方面或实施方式中所反映的)可以连同其他组分或化合物一起施用至对象，尽管这些不是本发明的益生菌组合物、益生菌药物组合物或营养组合物的一部分。在这个意义上，如果将本发明的组合物配制成营养组合物，则所述营养组合物可以是食物或被掺入到旨在供人和动物食用的食物或食品中。因此，在一个具体的实施方式中，营养组合物选自食物(其可以是用于特定营养目的的食物或药用食物)和营养补充剂。

在本发明中，术语“营养组合物”是指有益地影响身体的一种或多种功能从而提供更好的健康和保健的食物，无论这种食物是否向食用它的对象提供营养。在本发明中，所述营养组合物旨在减轻、减少、治疗和/或预防痤疮。

术语“补充剂”，与任何术语“膳食补充剂”、“营养补充剂”、“食物补充剂”或“消化补充剂(alimentary supplement)”或“消化补剂”同义，是指以补充正常饮食为目标的产品或制剂，由浓缩营养物或其他具有营养或生理作用的物质来源组成。在本发明中，当摄取消化补剂时对个体具有营养或生理作用的“物质”是微生物鼠李糖乳杆菌CECT 30031和/或帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B，它们是本发明任何组合物的一部分。食物补充剂可以是单一形式或组合形式，并以剂型销售，即胶囊剂、丸剂、片剂和其他类似形式、粉末小袋、液体安瓿和滴剂分配瓶和其他旨在一次性服用的类似形式的液体和粉末。

消化补剂中可能存在多种营养物和其他元素，包括维生素、矿物质、氨基酸、必需脂肪酸、纤维、酶、植物和植物提取物等。由于它们的作用是补充饮食中的营养供应，因此不应将它们用作均衡饮食的替代品，并且摄入量不应超过医生或营养师明确建议的每日剂量。益生菌组合物也可以是所谓的“特殊人群食物”的一部分，即满足特定营养需求的食物。

可包含本发明的组合物或益生菌组合物(微生物鼠李糖乳杆菌CECT 30031和/或帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B(或衍生自其的菌株))的食物的实例，包括但不限于，饲料、乳制品、蔬菜制品、肉制品、零食、巧克力、饮料、婴儿食品、谷物、油炸食品、工业烘焙产品和饼干。奶制品的例子包括但不限于源自发酵奶(例如但不限于酸奶或奶酪)或非发酵奶(例如但不限于冰淇淋、黄油、人造黄油或乳清)的产品。蔬菜制品是例如但不限于零食和任何展现形式的发酵的(例如，大豆酸奶、燕麦酸奶等)或未发酵的谷物。饮料可以是但不限于非发酵奶。在一个具体的实施方式中，食品或食物选自由以下组成的组：果汁或蔬菜汁、冰淇淋、婴儿配方、奶、酸奶、奶酪、发酵奶、奶粉、冻干或风干产品(适用于用液体溶媒重构)、谷物、烘焙食品、奶产品、肉制品和饮料。

如本领域技术人员所理解的，本发明的任何组合物或益生菌组合物可配制为例如局部施用给对象的个人护理产品或化妆品的一部分。因此，在特定的实施方式中，本发明的任何组合物或益生菌组合物可以是个人护理产品或化妆品。

个人护理产品的非限制性示例包括条皂、液体肥皂(例如洗手皂)、消毒洗手液(包括冲洗液和免洗型酒精基和水基手部消毒剂)、棉签和棉垫、剃须膏、滑石粉、卫生纸、术前皮肤消毒剂、湿纸、清洁湿巾、消毒湿巾、沐浴露、痤疮治疗产品、抗真菌尿布疹膏、抗真菌护肤霜、洗发水、护发素、化妆品除臭剂、抗菌霜、润肤露、护手霜、外用乳霜、须后水、爽肤水、口腔卫生用品和防晒露。本发明的组合物还可以应用于伤口护理用品，例如但不限于，伤口愈合软膏、乳霜和洗剂、伤口覆盖物、烧伤创面霜、绷带、胶带和无菌免缝胶带(steri-strips)，以及医疗用品例如医用罩袍、帽子、面罩和鞋套、手术滴剂等。在一个特定的实施方式中，个人护理产品是外用乳霜或凝胶。

此外，本发明的任何组合物、益生菌组合物、药物组合物或营养组合物(如在本说明书中通篇描述的任何方面或实施方式中所反映的)，可以包含除鼠李糖乳杆菌CECT30031和/或帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B之外的其他微生物。因此，在一个特定的实施方式中，本发明的任何组合物、益生菌药物组合物或营养组合物(如在本说明书中通篇描述的任何方面或实施方式中所反映的)可以进一步包含一种或多种选自以下的微生物：乳杆菌属、链球菌属、双歧杆菌属、酵母菌属及其组合等。

在另一个特定的实施方式中，本发明的任何组合物通过饮食施用于对象。

在另一个特定的实施方式中，本发明的任何组合物通过口服施用施用于对象。

如本领域技术人员所理解的，微生物鼠李糖乳杆菌CECT 30031和/或帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B(或从中衍生的任何微生物)必须以有效量、特别是治疗有效量存在于本发明的益生菌药物组合物或营养组合物中(如在本说明书中通篇描述的任何方面或实施方式中所反映的)，使得它们可以发挥其缓解、减少、治疗和/或预防痤疮、特别是寻常痤疮、更具体地缓解、减少、治疗和/或预防粉刺的作用。在本发明中，“有效量”或“治疗有效量”是当本发明的益生菌药物组合物或营养组合物的组分或化合物施用于对象时足以产生所需效果的量。本发明的益生菌药物组合物或营养组合物的所述组分或化合物(如在本说明书中通篇描述的任何方面或实施方式中所反映的)是指微生物鼠李糖乳杆菌CECT 30031和/或帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B。治疗有效量将根据例如对象的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食，以及根据施用方式和时间、排泄率或药物组合等因素而变化。

在另一个特定的实施方式中，本发明的任何组合物中的微生物鼠李糖乳杆菌CECT30031和/或帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B(或衍生自其的任何微生物)的总浓度为10³至10¹²cfu，特别地为大约10⁹cfu。在另一个特定的实施方式中，组合物中微生物鼠李糖乳杆菌CECT 30031和/或帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B(或衍生自其的任何微生物)的施用剂量为10⁶至10¹²cfu/天，特别是10⁹cfu/天，并且在另一个甚至更具体的实施方式中，施用方案是每天至少一次，特别是每天两次，更特别是每天三次，每次伴随各次进食(早餐、午餐和晚餐)进行。

在本发明的任何益生菌药物组合物或营养组合物的另一个特定的实施方式中(如在本说明书中通篇描述的任何方面或实施方式中所反映的)，，鼠李糖乳杆菌CECT 30031的浓度相对于存在于组合物中的微生物的总浓度为至少百分之三十(30％)，特别是相对于存在于本发明的任何组合物中的微生物的总浓度为至少31％、32％、33％、34％或35％。在另一个更具体的实施方式中，相对于存在于本发明的任何组合物中的微生物总量，鼠李糖乳杆菌CECT 30031的浓度为至少35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，优选至少60％、65％、70％、75％或80％，最优选至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％。

在本发明的另一个实施方式中，任何益生菌药物组合物或营养组合物包含10³至10¹²个菌落形成单位(cfu)的鼠李糖乳杆菌CECT 30031，更优选至少约10⁶cfu的鼠李糖乳杆菌CECT 30031，最优选至少约10⁹cfu的鼠李糖乳杆菌CECT 30031。

在本发明的优选实施方式中，鼠李糖乳杆菌CECT 30031的浓度相对于存在于本发明的组合物中的微生物总量而言在90％至95％之间。优选地，该浓度的鼠李糖乳杆菌CECT30031在所述组合物中提供10³至10¹²个菌落形成单位(cfu)的量，更优选至少约10⁶cfu的量，最优选约10⁹cfu的量的鼠李糖乳杆菌CECT 30031。

在本发明的一个实施方式中，帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B的量至少为本发明组合物中存在的微生物总干重的5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％。

在进一步的实施方式中，本发明的组合物包含2mg至20mg、优选3mg至15mg、最优选5mg至12mg(干重)的帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B。

在进一步的实施方式中，本发明的任何组合物包含至少0.5mg的藻蓝蛋白，所述藻蓝蛋白优选地来源于包含在所述组合物中的帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B。

在本发明的上下文中，应当理解，帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B总干重的约10％由菌株本身产生的藻蓝蛋白组成。因此，本发明的任何组合物优选包含至少5mg(干重)的帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B，从而导致所述组合物中藻蓝蛋白的量为至少0.5mg(干重)。

在本发明的任何益生菌药物组合物或营养组合物的优选实施方式中，组合物以日用量单位提供，每个日用量单位包含至少0.5mg(干重)的衍生自帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B的藻蓝蛋白和至少约10⁶、优选约10⁹cfu的鼠李糖乳杆菌CECT 30031。

在本发明的又一个实施方式中，本发明的益生菌药物组合物或营养组合物还包含至少一种填充剂和/或至少一种抗结块剂和/或至少一种包衣剂和可选的至少一种遮光剂。

优选地，所述至少一种本发明的填充剂是麦芽糖糊精和/或所述至少一种本发明的包衣剂是明胶和/或所述至少一种遮光剂是二氧化钛。

本发明的至少一种抗结块剂可选自由硬脂酸镁、硬脂酸钙、二氧化硅、硅酸盐如硅酸钠或硅酸钙、滑石、面粉、淀粉或其组合组成的组。

在优选的实施方式中，填充剂是麦芽糖糊精，抗结块剂是硬脂酸镁，包衣剂是明胶，遮光剂是二氧化钛。

具体而言，本发明的任何益生菌组合物、益生菌药物组合物或营养组合物(如在本说明书中通篇描述的任何方面或实施方式中所反映的)，用于在对象或个体中治疗或预防痤疮、特别是寻常痤疮的方法中，更特别是减轻、减少、治疗和/或预防粉刺的方法中，该方法包括特别是将有效量的组合物施用，特别是口服使用至所述对象或个体，从而治疗或预防所述痤疮或粉刺。如前所述，要注意的是，用于本发明组合物的适合口服的液体制剂可以是例如水性或油性混悬剂、溶液剂、乳剂、糖浆剂或酏剂的形式，或者可以是以干燥产品形式呈现，例如冻干(冷冻干燥)或风干产品，使用前用水或其他合适的液体溶媒重构。此类液体制剂可包含常规添加剂，例如悬浮剂、乳化剂、非水溶媒(其可包括食用油)或防腐剂。在一个其他的实施方式中，本发明用于治疗对象痤疮的方法还可以包括以下步骤：依次、随后或同时向所述对象施用有效量的另外的药剂，例如在其他实施方式中，异维甲酸、水杨酸、金缕梅或过氧化苯甲酰、局部或口服类视黄醇、螺内酯、口服避孕药、壬二酸、乙醇酸、局部或口服抗生素、磺胺类抗生素、spf/防晒霜、保湿剂或其组合。本领域技术人员将容易意识到，可以根据对象表现出的症状、它们的严重程度以及此类治疗的组分之间潜在的协同或拮抗相互作用来调整和优化任何治疗组合物的组分，而不超出本发明范围。

在一个其他的实施方式中，本发明的方法和组合物用作痤疮的补充或辅助治疗，其中如本文所定义的有效量的本发明的任何组合物通常单独口服施用或与另一种或多种化合物(同时、依次或随后)联合口服施用，所述化合物例如异维甲酸、水杨酸、金缕梅或过氧化苯甲酰、局部或口服类视黄醇、螺内酯、口服避孕药、壬二酸、乙醇酸、局部或口服抗生素、磺胺类抗生素、spf/防晒霜或保湿剂。特别地，使用抗生素例如但不限于局部或口服抗生素、磺胺类抗生素；或用于治疗痤疮的激素药物，例如口服避孕药或抗雄激素。施用可以任意地在一个实施方式中以持续治疗的单一单位剂型进行，或者在另一个实施方式中以单剂量疗法进行。施用的其他实施方式可有效治疗痤疮病症。在其他实施方式中，当缓解症状是特别需要的，或者在一个实施方式中是迫在眉睫时，使用本发明的任何组合物。最后，本发明的任何组合物可进一步用于另一个实施方式中，作为持续或预防性治疗。

整个说明书和权利要求书任意的词语“包括”及其变型，不旨在排除其他技术特征、添加剂、组分或步骤。对于本领域的技术人员来说，本发明的其他目的、优点和特征将部分地从描述中部分地从本发明的实践中变得明显。以下实施例和附图以说明的方式提供，并不旨在限制本发明的范围。

实施例

实施例1.益生菌共混物研究。

研究产品：益生菌共混物和安慰剂

第一个实施例中使用的益生菌共混物是一种名为Bths-03的新的基于麦芽糖糊精的配方，该配方包含两种菌株的混合物，该混合物包含至少1x10⁹ cfu(菌落形成单位)/克。

下表详细列出了该先导试验期间使用的治疗的组合物和功能(表2)：

表2：

上述组合物是白色明胶胶囊的形式(特别地，每个产品30个胶囊)，每粒570mg，每粒尺寸为21.7mm±0.5％。

安慰剂的生产方式与实验药物相同，每粒胶囊含有30mg木薯麦芽糖糊精。

研究的混合产品的生产方法

将来自益生菌鼠李糖乳杆菌的冻干菌和来自螺旋藻的冻干菌在封装前混合。混合在低温下在洁净室中进行的，以保持益生菌菌株的活力。混合后，将胶囊封装。

剂量和有关如何服用该产品的信息

每天1粒胶囊，持续12周。

胶囊大小合适，易于吞咽。

胶囊很容易打开，适合将其内容物分散在一杯水中。

研究的适应症

改善青少年和成人的痤疮症状。

研究规划

一项为期12周的随机、双盲、安慰剂对照研究，在活性臂中使用含有选定益生菌的产品。

人口群体

12至30岁患有中度痤疮的男女青少年和成人，以1:1的比例随机分配到两个研究组：实验组(益生菌组)和安慰剂组。

研究目标

主要目标

确定在青少年和成人中食用益生菌混合物Bths-03是否具有有益效果并减少痤疮症状。

次要目标

评估患者对治疗的依从性和他们的体验。确定研究治疗的安全性。

研究计划及方法

研究设计

双盲、安慰剂对照先导试验，在为期12周的试验治疗中，研究口服施用益生菌Bths-03对12-30岁中度痤疮患者的疗效。

患者选择标准

在本研究中，12至30岁的男女患有中度痤疮的青少年和成人参加，不包括健康患者。参与研究的对象必须满足所有纳入标准，并且不符合排除标准中的任一个，细节如下：

纳入标准

1.患者(及其未成年人的法定监护人)根据临床试验立法签署知情同意书。

2.年龄在12至30岁之间。

3.根据AGSS量表(痤疮综合严重程度量表)和/或GAGS(综合痤疮分级系统)为中度痤疮。

排除标准

1.研究中产品的任何组分的禁忌症。

2.在过去2周内局部或全身使用抗真菌药和抗生素。

3.在过去2个月摄入益生菌。

4.在过去6个月内使用全身性类视黄醇。

研究中的变量

主要变量

治疗开始、治疗6周和治疗12周时的GAGS指数评分(综合痤疮分级系统)。

次要变量

-AGSS量表(痤疮综合严重程度量表)

-痤疮病变数量，其通过拍摄数码照片评估。

-患者的感知与主观评价。

-研究患者对治疗的依从性。

-观察治疗可能产生的不良反应。

结构和研究结局

在每位患者的研究中，干预期的总持续时间为12周，在此期间患者被施用了研究产品Bths-03或安慰剂。该研究分为三次随访，在随访中患者出席就诊：初次随访(0周)、中间随访(6周)和最终随访(12周)。下图显示了每次研究随访包括的内容(表3)：

表3：

不良反应的汇总和说明

根据患者提供的信息，在研究的第2次和第3次随访中收集了不良事件。

同样，如果发生严重不良事件(AAG)，则有一个程序要遵循，但该事件在研究发展过程中没有发生。根据这项研究，AAG被认为是一种在任何剂量下都能产生以下情况的事件：

-死亡，

-立即威胁对象的生命，

-导致住院或延长住院时间，

-产生持续或严重的残疾或无能力(无法正确执行其重要功能)，

-导致出生异常或先天性畸形，

-对于女性，AAG也可以是怀孕，以及

-那些疑似被认为是重要的和临床相关的不良事件的情况，即使它们不符合上述标准。

统计分析

纳入研究的患者人数

估计研究中包括25名患者的样本量。在比较两个治疗组时，样本计算考虑的主要因素是：

1.两组之间要测量的变量差异的大小，以便可以检测到它。

2.兴趣因素中存在多少要分析的变异性。

3.预期用作统计学显著性标准的“p”值(α风险)。

4.假设这种差异存在，检测统计学显著差异的安全性(β风险)。

随机化方法

临床研究是双盲且随机的，也就是说，研究人员和患者都不知道每个参与患者所接受的产品(安慰剂或治疗)。

为了保持这种随机化并且不在参与患者的评估中产生偏差，使用随机化表对每位患者进行治疗分配，并为每种产品分配随机代码以避免其被识别。这些表由研究之外的负责人员负责，研究人员每次必须纳入一名新患者时都会联系该负责人员。

结果评价与分析

人口统计数据和其他基线特征

在这项研究中，对象的数据被收集在数据收集笔记本(CRD)中，它们被输入到使用统计程序SPSS v22生成的数据库中。

临床数据的管理是根据数据净化的规则和程序进行的，这些规则和程序继续确保数据的完整性，例如，消除数据的错误和不一致。不良事件和伴随药物的术语根据监管活动医学词典(MedDRA)进行编码。

为了测试与每个治疗组相关的变量的均值之间是否存在统计学显著差异，使用了学生t检验。在明显违反正态性条件的情况下，使用非参数Mann-Whitney U检验。

安全性分析

在每个干预组中，根据不良事件的数量、严重程度以及它们与所研究产品的关系来分析不良事件。

遗失、缺失或非典型数据

在研究设计中估计有10％的失访率。所有完成研究(方案)的预定随访的患者都包括在最终数据分析(可评估的对象)中，而所有其他患者被排除在分析之外，他们退出研究后不会被新患者取代。

结果

研究人群的特征

总共有25名符合纳入标准并且不符合排除标准的患者在研究期间进行了评估。在下表(表4)中，显示了研究中包括的总人群的一般特征。

表4：

值得注意的是，在研究开展过程中，共评估了32名患者，其中7名最终未被纳入，因为他们不符合方案中定义的纳入和排除标准和/或因为他们拒绝参与研究。从患者总数中，25名剩余和参与的患者在纳入时被随机分配，将他们分配到治疗组之一(益生菌或安慰剂)。在此过程中，患者分布均匀，自此12名患者进入益生菌组，13名患者进入安慰剂组。在研究期间，共有1名患者(安慰剂组中)决定自愿离开和/或在干预期间失去联系。本研究中使用的consort图如图1所示。

在分析基线中这些变量的数据时，实现了适当的随机化，因为两组之间的特征没有显著差异。这些数据如下表5所示：

表5：

疗效分析

主要变量.GAGS(综合痤疮分级系统)指数

主要变量的数据如图2所示。值得注意的是，益生菌组的GAGS指数(主要结局)的平均相对降低为61％，安慰剂组为24％。研究结束时，对比数值显示的差异为，益生菌组为61.8％，安慰剂组为35.4％。

次要变量

-AGSS(痤疮综合严重程度量表)指数

该次要变量的数据如图3所示。在研究结束时，变量“改善两个或更多类别的患者百分比”的差异为，益生菌组中为58％，在安慰剂组中为33％。组内差异在益生菌组中具有统计学意义，但在安慰剂组中不显著。

-发炎痤疮病变数量

这个变量是通过高分辨率数码照片评估的。对于这个变量，在干预后六周建立的研究中期分析中，益生菌组改善了47.58％，而安慰剂组改善了19.37％。研究结束时与该变量相关的数据如图4所示。研究结束时的差异为，益生菌组为76.5％，安慰剂组为23.38％。组间差异具有临床和统计学显著性(p＜0.05)。

-患者的感知与主观评价。

在这个变量中，在干预后六周建立的研究中期分析中，益生菌组改善了11.67％，而安慰剂组改善了3.33％。

研究结束时的差异为，益生菌组为29.58％，安慰剂组为4.75％。该变量在研究结束时的数据如图5所示。

-安全性分析和副作用

事件的数量、严重性和与产品的关系。不良事件的数量非常少，所有这些都不能归因于干预产品。该产品的最终制剂具有良好的耐受性，在干预后六周建立的研究中期分析中，益生菌组的治疗依从性为82.5％，安慰剂组为86.67％。该变量在研究结束时的数据为，益生菌组为86.25％，安慰剂组为86.67％。

实施例2.三分支研究.

分别评估鼠李糖乳杆菌CECT 30031和帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B菌株中的每一种菌株用于治疗寻常痤疮。为此目的，在三分支研究中的每一个中，使用鼠李糖乳杆菌CECT30031、帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B、或CECT 30031和帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B，对五名患者进行了小型先导研究。具体地，总共选择了15名患有寻常痤疮的志愿者，并以1:1:1的比例随机分配，分别进行以下三种干预治疗：

1.鼠李糖乳杆菌CECT 30031，每天一粒胶囊，含有100mg益生菌菌株，总剂量为10E9cfu/剂量。

2.帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B，每天一粒胶囊，含有总共100mg的益生菌菌株，总剂量为10E9 cfu/剂量。

3.单独使用的相同剂量的两种益生菌菌株的组合。

干预持续12周，在干预期间，患者在治疗开始时以及干预结束后一个月、两个月和最后三个月接受评估。在每次随访中，使用活动指数评估对治疗的反应。

三分支研究的结果总结如下：

这些结果包括每个变量的干预研究结束时获得的值与治疗开始前开始时获得的值之间的差异。此处包括三个干预组中每个干预组的结果：

菌株1.鼠李糖乳杆菌CECT 30031(单独使用时)

IL-10：研究期间从基线值增加23％。

血液中的脂多糖：下降14％。

血液中的DNA减少2％。

GAGS改善24％。

五分之一病例AGSS改善。

23％的病例的炎症斑点减少。

菌株2.帕拉卡螺旋藻(单独使用时)

IL-10：研究期间从基线值增加11％。

血液中的脂多糖：下降6％。

血液中的DNA减少3％。

GAGS改善13％。

AGSS没有改善。

11％的炎症斑点减少。

使用鼠李糖乳杆菌CECT 30031和帕拉卡螺旋藻共混(组合使用时)

IL-10：研究期间从基线值增加36％。

血液中的脂多糖：下降42％。

血液中的DNA减少68％。

GAGS改善68％。

五分之三病例AGSS改善。

57％的炎症斑点减少。

总之，本研究说明了与每种单独菌株的效果相比，当两种菌株联合使用时，效果如何得到加强并因此得到显著改善。

实施例3.比较分析

对于该实施例，将包含帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B菌株的益生菌组合物与包含已知菌株(菌株1.鼠李糖乳杆菌SP1)(“Fabbrocini G,Bertona M,Picazoó,Pareja-Galeano H,Monfrecola G,Emanuele E.Supplementation with Lactobacillusrhamnosus SP1 normalises skin expression of genes implicated in insulinsignaling and improves adult acne.Benef Microbes.2016；7(5):625-630.doi:10.3920/BM2016.0089”中公开)的益生菌组合物进行了具体比较。这种已知菌株在现有技术中被认为对治疗寻常痤疮有效(见上表1)。对于这项研究，设计、干预产品和结果总结如下。

研究中的变量

-治疗开始和治疗12周时的GAGS指数评分(综合痤疮分级系统)。

-治疗开始和治疗12周时的AGSS量表(痤疮综合严重程度量表)。

-治疗开始时和治疗12周时发炎痤疮病变数量，其通过拍摄数码照片进行评估。

结构和研究结局

每位患者的研究干预期总持续时间为12周，在此期间患者被施用任一研究产品：一组5名患者接受鼠李糖乳杆菌sp1；第二组中的另外5名患者接受了帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B；最后第三组的5名患者接受了鼠李糖乳杆菌sp1和帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B的混合物。该研究分为两次随访，在随访中患者出席就诊：初次随访(0周)和最终随访(12周)。

结果

主要变量.

-GAGS(综合痤疮分级系统)指数

值得注意的是，在接受鼠李糖乳杆菌SP1的组中，GAGS指数值的平均相对降低(研究结束时与治疗开始前的值相比的差异)为15％。这种降低在帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B患者组中为12％，在接受鼠李糖乳杆菌SP1和帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B的混合物组合物的5名患者组中为12％。

次要变量

-AGSS(痤疮综合严重程度量表)指数

鼠李糖乳杆菌SP1组中，治疗期间改善的患者人数(比较研究开始时与研究结束时的结果)为五分之一(20％)；帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B组中为5个中有0个(0％)，最后是鼠李糖乳杆菌和帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B组中为五分之一(20％)。

-发炎痤疮病变数量

这个变量是通过高分辨率数码照片评估的。对于这个变量，鼠李糖乳杆菌sp1组的发炎病变数量减少了17％(研究结束时的病变数量与研究开始时的值相比)。帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0074B组减少了9％，接受鼠李糖乳杆菌和帕拉卡螺旋藻BEA_IDA_0047B混合物的患者组减少了12％。

序列表

<110> 拜纽研发有限公司

<120> 用于治疗痤疮的益生菌组合物

<130> 906 375

<150> EP20382805.8

<151> 2020-09-14

<160> 1

<170> BiSSAP 1.3.6

<210> 1

<211> 1558

<212> RNA

<213> 鼠李糖乳杆菌

<220>

<223> 16s rRNA序列

<400> 1

agagtttgat cctggctcag gatgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgaac 60

gagttctgat tattgaaagg tgcttgcatc ttgatttaat tttgaacgag tggcggacgg 120

gtgagtaaca cgtgggtaac ctgcccttaa gtgggggata acatttggaa acagatgcta 180

ataccgcata aatccaagaa ccgcatggtt cttggctgaa agatggcgta agctatcgct 240

tttggatgga cccgcggcgt attagctagt tggtgaggta acggctcacc aaggcaatga 300

tacgtagccg aactgagagg ttgatcggcc acattgggac tgagacacgg cccaaactcc 360

tacgggaggc agcagtaggg aatcttccac aatggacgca agtctgatgg agcaacgccg 420

cgtgagtgaa gaaggctttc gggtcgtaaa actctgttgt tggagaagaa tggtcggcag 480

agtaactgtt gtcggcgtga cggtatccaa ccagaaagcc acggctaact acgtgccagc 540

agccgcggta atacgtaggt ggcaagcgtt atccggattt attgggcgta aagcgagcgc 600

aggcggtttt ttaagtctga tgtgaaagcc ctcggcttaa ccgaggaagt gcatcggaaa 660

ctggaaaact tgagtgcaga agaggacagt ggaactccat gtgtagcggt gaaatgcgta 720

gatatatgga agaacaccag tggcgaaggc ggctgtctgg tctgtaactg acgctgaggc 780

tcgaaagcat gggtagcgaa caggattaga taccctggta gtccatgccg taaacgatga 840

atgctaggtg ttggagggtt tccgcccttc agtgccgcag ctaacgcatt aagcattccg 900

cctggggagt acgaccgcaa ggttgaaact caaaggaatt gacgggggcc cgcacaagcg 960

gtggagcatg tggtttaatt cgaagcaacg cgaagaacct taccaggtct tgacatcttt 1020

tgatcacctg agagatcggg tttccccttc gggggcaaaa tgacaggtgg tgcatggttg 1080

tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccttatgac 1140

tagttgccag catttagttg ggcactctag taagactgcc ggtgacaaac cggaggaagg 1200

tggggatgac gtcaaatcat catgcccctt atgacctggg ctacacacgt gctacaatgg 1260

atggtacaac gagttgcgag accgcgaggt caagctaatc tcttaaagcc attctcagtt 1320

cggactgtag gctgcaactc gcctacacga agtcggaatc gctagtaatc gcggatcagc 1380

acgccgcggt gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc ccgtcacacc atgagagttt 1440

gtaacacccg aagccggtgg cgtaaccctt ttagggagcg agccgtctaa ggtgggacaa 1500

atgattaggg tgaagtcgta acaaggtagc cgtaggagaa cctgcggctg gatcacct 1558

Claims

1.一种益生菌组合物，包括：

a.根据布达佩斯条约保藏在西班牙典型培养物保藏中心(CECT)的保藏号为CECT30031的鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)菌株；和

b.保藏在西班牙海藻数据库的保藏号为BEA_IDA_0074B的钝顶螺旋藻(Arthrospiraplatensis(帕拉卡螺旋藻(S.paraca)))菌株。

2.根据权利要求1所述的益生菌组合物，其中，所述组合物为风干或冻干(冷冻干燥)粉末形式。

3.根据权利要求1或2所述的益生菌组合物，其中，所述组合物被配制用于以液体形式或固体形式施用，优选其中所述组合物被配制用于口服施用。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的益生菌组合物，其中，所述组合物是包含药学上可接受的赋形剂的药物组合物。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的益生菌组合物，其中，所述组合物是营养组合物或营养补充剂。

6.根据权利要求5所述的营养组合物或营养补充剂或根据权利要求4所述的药物组合物，其中，所述组合物为选自由片剂、锭剂、糖果、咀嚼片、口香糖、胶囊剂、小袋剂、粉剂、颗粒剂、包衣颗粒或包衣片剂、片剂和耐胃酸片剂和胶囊剂以及可分散性条和膜组成的组中的制剂形式，或为选自由口服溶液剂、混悬剂、乳剂和糖浆剂组成的组中的液体制剂形式。

7.用于治疗的根据权利要求1至6中任一项所述的组合物。

8.根据权利要求1至6中任一项所述的益生菌组合物，用于在有需要的对象、优选人类对象中缓解、减少、治疗和/或预防痤疮，特别是寻常痤疮，更具体地用于缓解、减少、治疗和/或预防粉刺的方法中。

9.根据权利要求8所述的益生菌组合物，用于在有需要的对象、优选人类对象中治疗痤疮的方法中，所述方法还包括向所述对象口服施用有效量的所述组合物从而治疗所述痤疮。

10.根据权利要求8或9中任一项所述的益生菌组合物，用于在有需要的对象、优选人类对象中治疗痤疮的方法中，其中，将至少一种另外的化合物以治疗痤疮的有效量施用至所述对象并且其中所述益生菌组合物用作佐剂。

11.根据权利要求8至10中任一项所述的用途的益生菌组合物，其中，所述痤疮选自由寻常痤疮、酒渣鼻、聚合性痤疮、暴发性痤疮、革兰氏阴性毛囊炎和面部脓皮病组成的组。

12.根据权利要求11所述的用途的益生菌组合物，其中，所述痤疮是寻常痤疮。

13.一种益生菌组合物，用于在有需要的对象、优选人类对象中缓解、减少、治疗和/或预防痤疮，特别是寻常痤疮，更具体地用于缓解、减少、治疗和/或预防粉刺的方法中，所述益生菌组合物包括保藏在西班牙海藻数据库的保藏号为BEA_IDA_0074B的钝顶螺旋藻(帕拉卡螺旋藻)菌株。

14.一种益生菌组合物，用于在有需要的对象、优选人类对象中缓解、减少、治疗和/或预防痤疮，特别是寻常痤疮，更具体地用于缓解、减少、治疗和/或预防粉刺的方法中，所述益生菌组合物包括根据布达佩斯条约保藏在西班牙典型培养物保藏中心(CECT)的保藏号为CECT 30031的鼠李糖乳杆菌菌株。

15.根据权利要求13或14所述的用途的益生菌组合物，其中，所述痤疮选自由寻常痤疮、酒渣鼻、聚合性痤疮、暴发性痤疮、革兰氏阴性毛囊炎和面部脓皮病组成的组，优选其中所述痤疮是寻常痤疮。

16.根据权利要求13至15中任一项所述的用途的益生菌组合物，其中，所述益生菌组合物经口服施用至有需要的对象。