CN116973483A - 一种尼可地尔三聚体杂质的检测方法 - Google Patents
一种尼可地尔三聚体杂质的检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116973483A CN116973483A CN202310973078.0A CN202310973078A CN116973483A CN 116973483 A CN116973483 A CN 116973483A CN 202310973078 A CN202310973078 A CN 202310973078A CN 116973483 A CN116973483 A CN 116973483A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mobile phase
- trifluoroacetic acid
- solution
- nicorandil
- trimer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000013638 trimer Substances 0.000 title claims abstract description 51
- LBHIOVVIQHSOQN-UHFFFAOYSA-N nicorandil Chemical compound [O-][N+](=O)OCCNC(=O)C1=CC=CN=C1 LBHIOVVIQHSOQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 49
- 229960002497 nicorandil Drugs 0.000 title claims abstract description 49
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims description 36
- 239000012535 impurity Substances 0.000 title abstract description 32
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 8
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 3
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 66
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 64
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 40
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 20
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 5
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 claims description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 4
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Natural products CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 12
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 10
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 36
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 19
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 16
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 16
- 239000000047 product Substances 0.000 description 16
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 12
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 10
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 8
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 8
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 8
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 8
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 6
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 description 5
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 5
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 4
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 4
- AAEQXEDPVFIFDK-UHFFFAOYSA-N 3-(4-fluorobenzoyl)-2-(2-methylpropanoyl)-n,3-diphenyloxirane-2-carboxamide Chemical compound C=1C=CC=CC=1NC(=O)C1(C(=O)C(C)C)OC1(C=1C=CC=CC=1)C(=O)C1=CC=C(F)C=C1 AAEQXEDPVFIFDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011208 chromatographic data Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 2
- 230000000916 dilatatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 2
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 1
- 206010003225 Arteriospasm coronary Diseases 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000003890 Coronary Vasospasm Diseases 0.000 description 1
- 239000005696 Diammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N [14c]-nicotinamide Chemical class N[14C](=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 201000011634 coronary artery vasospasm Diseases 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000388 diammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019838 diammonium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- -1 ethyl-nicotinamido ethyl Chemical group 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 230000036284 oxygen consumption Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910001414 potassium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/86—Signal analysis
- G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
- G01N30/8679—Target compound analysis, i.e. whereby a limited number of peaks is analysed
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N2030/065—Preparation using different phases to separate parts of sample
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Library & Information Science (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
本发明涉及一种尼可地尔三聚体杂质的检测方法，所述方法采用高效液相色谱法。本发明以十八烷基硅烷键合硅胶作为色谱柱填料，酸性水溶液和有机溶剂的混合溶液作为流动相，具有简便、专属、准确、灵敏度高的特点。本发明解决了尼可地尔三聚体杂质的分离和测定问题，为确保尼可地尔质量以及后续的药品安全性提供了技术保障。
Description
技术领域
本发明属于化学分析领域，特别涉及一种尼可地尔三聚体杂质的检测方法。
背景技术
任何影响药物纯度的物质统称为杂质。杂质研究是药品研发的一项重要内容。药品在临床使用中产生的不良反应除了与药品本身的药理活性有关，与药品杂质也有很大关系。所以规范地进行杂质研究，将杂质控制在一个安全、合理的限度范围之内，直接关系到上市药品质量及安全性。
尼可地尔，化学名称为乙-烟酰胺基硝酸乙酯。尼可地尔属于硝酸酯类化合物，具有阻止细胞内钙离子游离，增加细胞膜对钾离子的通透性，扩张冠状血管，持续性增加冠状动脉血流量，抑制冠状动脉痉挛的作用，在扩张冠状血管时，并不影响血压、心率、心肌收缩力以及心肌耗氧量，还具有抑制血小板聚集防止血栓形成的作用。尼可地尔临床上用于冠心病，心绞痛的治疗。
尼可地尔是烟酰胺的衍生物，其侧链有个硝基，降解过程中容易发生聚合，生成尼可地尔三聚体。
尼可地尔及相关杂质的结构式见下表：
。
关于尼可地尔三聚体杂质的检测未见报道，因此，提供一种尼可地尔三聚体杂质的检测方法具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种尼可地尔三聚体杂质的检测方法，该方法能够有效测定尼可地尔相关产品，如原料药、制剂中三聚体杂质的含量，具有简便、专属、准确、灵敏度高的特点，适用于尼可地尔中三聚体杂质的的检测。
为实现上述目的，本发明通过以下技术方案来实现：
一种尼可地尔三聚体的检测方法，采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶作为色谱柱填料，酸性水溶液和有机溶剂的混合溶液作为流动相，进行等度洗脱；
所述尼可地尔三聚体，结构式如下：
。
进一步的，所述流动相分为流动相A、流动相B，以三氟乙酸溶液-甲醇-乙腈（960:25:15）为流动相A，甲醇为流动相B。
进一步的，所述流动相A中三氟乙酸溶液的pH值为2.4~2.8。
进一步的，所述流动相A与流动相B的比例为（83：17）~（87：13）。
进一步的，所述高效液相色谱法的色谱条件还包括以下Ⅰ~Ⅲ中的一项或者多项：
Ⅰ.检测波长为249 nm ~259nm；
Ⅱ.流动相的流速为0.7~1.0ml/min；
Ⅲ.色谱柱温度为30℃±5℃。
进一步的，所述色谱条件优选为：
Ⅰ.检测波长为254nm；
Ⅱ.流动相的流速为0.8ml/min；
Ⅲ.色谱柱温度为30℃。
此外，所述方法还包括将样品采用稀释剂溶解后得到样品溶液，所述稀释剂为三氟乙酸溶液-甲醇-乙腈（960:25:15），稀释剂中三氟乙酸溶液的pH值为2.0。
本发明的尼可地尔三聚体的检测方法，采用高效液相色谱法，包括如下步骤：
（1）样品溶液配制：取水1000ml加入三氟乙酸1.0ml调pH值至2.0，得pH2.0的三氟乙酸溶液，取pH2.0的三氟乙酸溶液、甲醇、乙腈按960:25:15混合得到稀释剂，取样品适量用稀释剂溶解，供检测；
（2）色谱检测：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，规格为4.6×150mm，3.0μm；流动相分为流动相A、流动相B，取水1000ml加入三氟乙酸1.0ml调pH值至2.6，得pH2.6的三氟乙酸溶液，以pH2.6三氟乙酸溶液、甲醇、乙腈按960:25:15混合作为流动相A，甲醇为流动相B，流动相A：流动相B的比例为85:15；等度洗脱；流速为0.8ml/min，柱温30℃，检测波长254nm，进样体积10µl。
本发明的有益效果如下：
1、本发明采用高效液相法检测尼可地尔的三聚体杂质，三聚体与相邻杂质峰能有效分离，分离度大于1.5，符合检测要求。
2、高效液相检测采集时长合理，试验效率高。
3、三聚体的回收率在99~102%之间，回收率RSD为0.39%，准确度好。
4、流动相仅为三氟乙酸溶液及少量甲醇、乙腈，不含无机盐，有效避免实验过程中无机盐析出对仪器和色谱柱造成损坏。试剂简单易得，流动相配制简单，操作方便。
附图说明
图1为实施例1空白溶剂色谱图。
图2为实施例1系统适用性溶液色谱图。
图3为实施例1供试品溶液色谱图。
图4为实施例2空白溶剂色谱图。
图5为实施例2系统适应性溶液色谱图。
图6为实施例2供试品溶液色谱图。
图7为实施例3空白溶剂色谱图。
图8为实施例3系统适应性溶液色谱图。
图9为实施例3供试品溶液色谱图。
图10为实施例4空白溶剂色谱图。
图11为实施例4系统适应性溶液色谱图。
图12为实施例4供试品溶液色谱图。
图13为实施例5空白溶剂色谱图。
图14为实施例5系统适应性溶液色谱图。
图15为实施例5供试品溶液色谱图。
图16为对比例1系统适应性溶液色谱图。
图17为对比例6系统适用性溶液色谱图。
图18为对比例7系统适用性溶液色谱图。
图19为尼可地尔三聚体线性图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面将通过实例对发明作进一步详细说明，下述实例仅用以解释本发明，并不代表本发明所限定的权利保护范围，本发明的权利保护范围以权利要求书为准。
本发明所用的试剂和原辅料均市售可得。
杂质检测均采用主成分外标法计算杂质含量。
实施例1
本发明的一种尼可地尔三聚体杂质的检测方法，包括以下步骤：
1、溶液配制
（1）三氟乙酸溶液配制
三氟乙酸溶液①：取水1000ml，加三氟乙酸1.0ml，用三乙胺调pH值至2.0。
三氟乙酸溶液②：取水1000ml，加三氟乙酸1.0ml，用三乙胺调pH值至2.60±0.02。
（2）稀释剂的配制
取三氟乙酸溶液①、甲醇、乙腈按960:25:15的比例混合，即得。
（3）流动相的配制
以三氟乙酸溶液②-甲醇-乙腈（960:25:15）为流动相A，甲醇为流动相B，将流动相A：流动相B按85:15的比例混合，即得。
（4）供试品溶液的配制
取尼可地尔片20片，精密称定，研细，精密称取细粉约250mg（约相当于尼可地尔25mg）置25ml量瓶中，加稀释剂适量，超声使尼可地尔溶解，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
（5）系统适用性溶液的配制
取于70℃加热3小时的尼可地尔对照品25mg，置25ml量瓶中，加稀释剂适量，置超声使尼可地尔溶解，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过。
2、色谱条件
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱型号为YMC park ODS AQ 4.6×150mm，3.0μm，或使用效能相当的色谱。
流动相为流动相A：流动相B=85:15，等度洗脱。
流速：0.8ml/min；
柱温：30℃；
检测波长：254nm；
进样体积：10µl；
运行时间：15 min。
3、测定方法
分别精密量取所述空白溶剂（即稀释剂）、系统适用性溶液、供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。
4、计算方法
按主成分外标法计算杂质含量。
5、检测结果
实施例1空白溶剂、系统适用性溶液、供试品溶液色谱图见图1~3，色谱数据如下所示。
。
。
由色谱图及色谱数据可知，在系统适用性溶液中，尼可地尔三聚体杂质与其他聚合物杂质能有效分离，分离度大于1.5，系统适用性符合要求；供试品溶液中尼可地尔、三聚体与相邻峰均能有效分离，分离度分别为6.601、6.539，峰型对称、理论塔板数均符合要求，该方法符合检测要求。
本发明的色谱条件下，三聚体与相邻杂质峰的分离度高，可以实现尼可地尔中三聚体杂质的含量检测。
实施例2~5
实施例2~5在实施例1的基础上，调整了流动相比例或流动相pH值考察三聚体的分离情况。色谱条件及色谱数据见表3。空白溶剂、系统适用性溶液、供试品溶液色谱图见图4~15。
。
由色谱图及数据可知，空白溶剂对三聚体检测无干扰，且在系统适用性溶液、供试品溶液中，尼可地尔、三聚体杂质与其他未知杂质均能有效分离，分离度大于1.5，理论塔板数符合要求。
对比例1
1、溶液配制
（1）稀释剂：80%甲醇溶液。
（2）系统适用性溶液：取尼可地尔原料药约80mg，置10ml量瓶中，80℃水浴加热2h后，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
2、色谱条件
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱（SunFire C18（150×4.6mm，3.5μm））为填充剂，
流动相以0.01mol/L磷酸氢二铵溶液-乙腈（90：10）（用磷酸调节 pH7.0）为流动相，等度洗脱。
检测波长：262nm，
进样量：10μl，
柱温：25℃，
流速：0.8ml/min，
运行时间：30min。
3、测定方法
精密量取系统适用性溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。
4、检测结果
对比例1系统适应性溶液色谱图见图16。
对比例1系统适应性溶液色谱图见图16。由图可知，在对比例1的条件下，除杂质D外，尼可地尔相关杂质峰在0-10min内出峰，三聚体与其他杂质峰基线不分离，不能满足分离和检测的要求。
对比例2~5
1、溶液配制
（1）稀释剂配制：
。
（2）流动相配制：
三氟乙酸溶液②：取水1000ml，加三氟乙酸1.0ml，用三乙胺调pH值至2.60±0.02。
以三氟乙酸溶液②-甲醇-乙腈（960:25:15）为流动相A，以甲醇为流动相B。
（3）系统适用性溶液：取尼可地尔适量，置70℃加热3.5小时，称取约25mg，置25ml量瓶中，加稀释剂适量，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。
（4）供试品溶液：取尼可地尔片20片，精密称定，研细，精密称取细粉约250mg（约相当于尼可地尔25mg）置25ml量瓶中，加稀释剂适量，超声使尼可地尔溶解，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过。
（5）回收率溶液：取尼可地尔片粉末约200mg（约相当于尼可地尔20mg），置20ml量瓶中，共9份，分别向其中加入一定浓度不同体积的三聚体对照品溶液，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
（6）三聚体对照品溶液：称取三聚体对照品适量，稀释剂稀释成10ug/ml溶液，即得。
2、色谱条件
色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶柱（YMC park ODS AQ 4.6×150mm,3.0μm或效能相当的色谱柱）为填充剂，
流速：1.0ml/min；
检测波长：254nm；
柱温：30℃；
进样体积：10μl，
运行时间：95min。
梯度洗脱，洗脱程序如下表所示：
。
3、测定方法
分别精密量取所述系统适用性溶液、供试品溶液、回收率溶液、三聚体对照品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。
4、检测结果
。
在对比例2的色谱条件下杂质聚能有效分离，但三聚体出峰时间晚，保留时间易漂移。
对比例2~5的区别主要在于稀释剂的调整，考察了回收率，检测结果如下：
。
由实验结果可知，对比例2~4回收率均不符合要求。对比例5的回收率符合要求，但溶液稳定性不好，杂质D在该实验条件下发生降解，20min内杂质D降解23%。尼可地尔三聚体与D不适合同时检测，需要开发一种尼可地尔片中三聚体杂质特定的分析方法。
。
对比例6、7
对比例6、7与实施例1相比，区别仅在于流动相比例不同：
。
对比例6、7系统适用性溶液色谱图见图17、18。实验结果表明，对比例6的色谱条件下，三聚体分离度符合要求，但三聚体出峰处基线不平影响积分，不能准确定量；对比例7色谱条件下三聚体与其前一个色谱峰分离度仅1.382，不符合检测要求。
为了进一步说明本发明的有益效果，本发明提供以下试验例。
试验例1
尼可地尔三聚体线性、准确度试验：
1、线性试验
线性溶液制备：取尼可地尔三聚体对照品适量，配制成一定浓度的对照品贮备液，再将该对照品贮备液稀释成6份不同浓度的线性溶液，即得。
。
尼可地尔三聚体线性图见图19。
由上述数据可知，尼可地尔三聚体在浓度范围峰面积与浓度呈现良好的线性关系。
2、准确度试验
尼可地尔对照品溶液：称取尼可地尔工作对照品①19.44mg②20.48mg，置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，移取1.0ml，置20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
系统适用性溶液：取于70℃加热3小时的尼可地尔对照品25.58mg，置25ml量瓶中，加稀释剂适量，置超声使尼可地尔溶解，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过。
三聚体对照品贮备液①：称取三聚体对照品6.684mg，置20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
三聚体对照品贮备液②：移取三聚体对照品贮备液①5ml，置50ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液：取本品粉末①200.77mg②199.76mg（约相当于尼可地尔20mg），置20ml量瓶中，加稀释剂适量，超声使尼可地尔溶解，放冷，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
低浓度回收率溶液（3份）：取本品粉末①200.33mg②200.68mg③201.48mg，置20ml量瓶中，加三聚体贮备液②2ml，加稀释剂适量，超声使尼可地尔溶解，放冷，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液1~3。平行配制三份（浓度水平为50%）。
中浓度回收率溶液（3份）：取本品粉末①200.93mg②200.73mg③199.99mg，置20ml量瓶中，加三聚体贮备液②4ml，加稀释剂适量，超声使尼可地尔溶解，放冷，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液1~3。平行配制三份（浓度水平为100%）。
高浓度回收率溶液（3份）：取本品粉末①100.90mg②100.42mg③99.98mg，置10ml量瓶中，加三聚体贮备液②3ml，加稀释剂适量，超声使尼可地尔溶解，放冷，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液1~3。平行配制三份（浓度水平为150%）。
。
由上述数据可知，按照上述方法对样品进行处理，测得的回收率均在99~102%之间，回收率RSD为0.39%，准确度良好。
以上内容是结合具体的实施方式对本申请所作的进一步详细说明，不能认定本申请的具体实施只局限于这些说明。对于本申请所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本申请的保护范围。
Claims (9)
1.一种尼可地尔三聚体的检测方法，其特征在于，所述方法采用高效液相色谱法，色谱条件为：十八烷基硅烷键合硅胶作为色谱柱填料，以酸性水溶液和有机溶剂的混合溶液作为流动相，进行等度洗脱；
所述尼可地尔三聚体，结构式如下：
。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相分为流动相A、流动相B，以三氟乙酸溶液-甲醇-乙腈（960:25:15）为流动相A，甲醇为流动相B。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述流动相A中三氟乙酸溶液的pH值为2.4~2.8。
4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述流动相A与流动相B的比例为（83：17）~（87：13）。
5.根据权利要求1~4任一项所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的色谱条件还包括以下Ⅰ~Ⅲ中的一项或者多项：
Ⅰ.检测波长为249 nm ~259nm；
Ⅱ.流动相的流速为0.7~1.0ml/min；
Ⅲ.色谱柱温度为30℃±5℃。
6.根据权利要求1~4所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的色谱条件还包括以下Ⅰ~Ⅲ中的一项或者多项：
Ⅰ.检测波长为254nm；
Ⅱ.流动相的流速为0.8ml/min；
Ⅲ.色谱柱温度为30℃。
7.根据权利要求1~4任一项所述的检测方法，其特征在于，所述方法还包括将样品采用稀释剂溶解后得到样品溶液。
8.根据权利要求7所述的检测方法，所述稀释剂为三氟乙酸溶液-甲醇-乙腈（960:25:15），稀释剂中三氟乙酸溶液的pH值为2.0。
9.一种尼可地尔三聚体的检测方法，其特征在于，所述方法采用高效液相色谱法，包括如下步骤：
（1）样品溶液配制：取水1000ml加入三氟乙酸1.0ml调pH值至2.0，得pH2.0的三氟乙酸溶液，取pH2.0的三氟乙酸溶液、甲醇、乙腈按960:25:15混合得到稀释剂，取样品适量用稀释剂溶解，供检测；
（2）色谱检测：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，规格为4.6×150mm，3.0μm；流动相分为流动相A、流动相B，取水1000ml加入三氟乙酸1.0ml调pH值至2.6，得pH2.6的三氟乙酸溶液，以pH2.6三氟乙酸溶液、甲醇、乙腈按960:25:15的比例混合作为流动相A，甲醇为流动相B，流动相A：流动相B的比例为85:15；等度洗脱；流速为0.8ml/min，柱温30℃，检测波长254nm，进样体积10µl。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310973078.0A CN116973483A (zh) | 2023-08-04 | 2023-08-04 | 一种尼可地尔三聚体杂质的检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310973078.0A CN116973483A (zh) | 2023-08-04 | 2023-08-04 | 一种尼可地尔三聚体杂质的检测方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116973483A true CN116973483A (zh) | 2023-10-31 |
Family
ID=88481079
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310973078.0A Pending CN116973483A (zh) | 2023-08-04 | 2023-08-04 | 一种尼可地尔三聚体杂质的检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116973483A (zh) |
-
2023
- 2023-08-04 CN CN202310973078.0A patent/CN116973483A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111239299B (zh) | 一种分离测定帕博西尼及其杂质的方法 | |
| CN106706768B (zh) | 一种分离测定恩格列净及其有关物质的方法 | |
| CN113390983B (zh) | 一种同时测定富马酸伏诺拉生中3种杂质的检测方法 | |
| CN114264745A (zh) | 甲磺酸伊马替尼有关物质及其制剂有关物质的检测方法 | |
| CN113281423A (zh) | 一种格列美脲杂质及其在格列美脲原料药与制剂中的分析方法 | |
| CN116973483A (zh) | 一种尼可地尔三聚体杂质的检测方法 | |
| CN106706769B (zh) | 一种恩格列净及其光学异构体的分离测定方法 | |
| CN112213424A (zh) | 一种阿托伐他汀钙中间体中共存杂质同时测定方法 | |
| CN110568121A (zh) | 一种艾日布林及含艾日布林的制剂中有关物质的检测方法 | |
| CN110988158A (zh) | 一种盐酸替罗非班注射液有关物质的检测方法 | |
| CN114113385B (zh) | β-烟酰胺单核酸含量和有关物质的测定方法 | |
| CN113759048B (zh) | 一种十八烷二酸单叔丁酯检验方法 | |
| CN114689737B (zh) | 一种s-邻氯苯甘氨酸甲酯酒石酸盐有关物质的分析方法 | |
| CN112034066B (zh) | 一种分离测定瑞博西尼及杂质的方法 | |
| CN114814026A (zh) | 一种氟比洛芬酯的杂质检测方法 | |
| CN114280191A (zh) | 一种双半胱氨酸及其制剂中有关物质的检测方法 | |
| CN115372528B (zh) | 一种同时测定呋喃妥因中多种杂质的检测方法 | |
| CN117269357B (zh) | 一种测定阿加曲班中杂质c的检测方法 | |
| CN112557558B (zh) | 一种检测依折麦布辛伐他汀片中sch59566杂质含量的方法 | |
| CN115327021B (zh) | 一种测定枸橼酸铁及其有机酸杂质的离子色谱法 | |
| CN116754705B (zh) | 一种醋酸及醋酸根含量的检测方法 | |
| CN114224904B (zh) | 一种克林霉素磷酸酯及质量控制方法 | |
| CN118010895A (zh) | 一种用hplc分离测定索格列净中间体的方法 | |
| CN116338021A (zh) | 一种用hplc分离测定达格列净关键起始原料有关物质的方法 | |
| CN118067860A (zh) | 一种依帕司他片中有关物质的检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |