CN116964098A - 抗cd30单克隆抗体和嵌合抗原受体 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了具有针对CD30的特异性结合活性的抗体、其片段和包含这些抗体、其片段的嵌合蛋白。有利地，所考虑的分子可用于药物组合物中，这些药物组合物用于特别是经诊断患有造血恶性肿瘤，包括霍奇金淋巴瘤、CD30阳性B细胞淋巴瘤、CD30阳性T细胞淋巴瘤、CD30阳性NK细胞淋巴瘤，的个体的免疫疗法。

Description

抗CD30单克隆抗体和嵌合抗原受体
本申请要求序列号为63/155,073的我们共同未决的美国临时专利申请的优先权，该美国临时专利申请于2021年03月01日提交并且通过引用以其全文并入。
序列表
名为102719.0034PRO_REV002_ST25.txt、大小为11KB的序列表的ASCII文本文件的内容创建于21年1月20日，经由EFS-Web与本申请一起以电子方式提交，并且通过引用以其全文并入。
技术领域
本发明的领域是靶特异性结合分子，特别是涉及具有针对CD30的结合特异性的抗体和嵌合抗原受体及其衍生物。
背景技术
背景描述包括可用于理解本发明的信息。并不承认本文提供的任何信息是现有技术或与当前要求保护的发明相关，也不承认具体地或隐含地引用的任何出版物是现有技术。
本文中的所有出版物和专利申请都通过引用并入，其程度如同每个单独的出版物或专利申请被具体地且单独地指明通过引用并入一样。在并入的参考文献中的术语的定义或用法与本文提供的该术语的定义不一致或相反时，适用本文提供的该术语的定义，而不适用该术语在该参考文献中的定义。
CD30(分化簇30，Ki-1，TNFRSF8)属于肿瘤坏死因子受体超家族，并且在人中以相对低的水平在淋巴组织中的毛囊内和毛囊周T和B细胞母细胞上瞬时表达。值得注意的是，CD30的表达随特定的造血恶性肿瘤(包括间变性大细胞淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤)显著增加。因此，CD30是霍奇金病(HD)和非霍奇金(NHL)淋巴瘤亚组(诸如间变性大细胞淋巴瘤(ALCL))中恶性细胞的常见诊断标志物。最近，CD30也已成为治疗各种血液疾病的治疗靶标，并且已经开发出许多特异性CD30结合分子。
例如，某些CD30结合部分和嵌合抗体示出于WO 2020/135559中，并且已被提议用于表达CD30的癌症或肿瘤的治疗中的过继性T细胞疗法。类似地，在US10,815,301中教导了具有针对CD30的结合活性的特异性嵌合抗原受体(CAR)以及这些CAR的各种用途，并且在仍另一实例中，构建了结合CD30的双特异性抗体，如WO 2020/068774中所示。
在另外的实例中，WO 2020/072519中教导了使用某些抗CD30抗体-药物缀合物与第二药物的组合治疗T细胞淋巴瘤的方法，并且在又另一组合治疗中，将特异性抗CD30抗体与检查点抑制剂一起施用以治疗霍奇金淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤，如US2019/0218293中所披露。WO 2018/027022和US 7,790,160中披露了仍另外的使用抗CD30抗体和蛋白酶体抑制剂的组合治疗，并且WO 03/043583中描述了用抗CD30抗体治疗除癌症以外的免疫障碍。尽管许多已知的抗CD30结合物将展现出至少一些诊断或治疗潜力，但仍然存在多种缺点。最明显的是，至少一些抗CD30抗体或抗CD30 CAR的结合亲和力和/或结合特异性低于期望或具有低于期望的治疗功效。
因此，即使本领域已知抗CD30抗体和CAR的各种系统和方法，但所有或几乎所有的这些系统和方法都存在若干缺点。因此，仍然需要用于改善的抗CD30抗体和CAR的组合物和方法及其用途。
发明内容
本发明的主题涉及CD30特异性治疗和诊断分子的各种组合物和方法以及它们在个体并且特别是癌细胞表达或过表达CD30的癌症的诊断和治疗中的用途。
在本发明主题的一个方面，诸位发明人考虑了分离的抗体或其片段，其中该抗体或其片段结合CD30并且包括可变重链(VH)结构域和可变轻链(VL)结构域，其中该VH结构域选自由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:5组成的组，并且其中该VL结构域选自由SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:6组成的组。
在一个实施例中，该抗体或片段包含VH52-2(SEQ ID NO:1)和VL52-2(SEQ ID NO:2)，任选地通过接头偶联在一起以形成scFv。在另一实施例中，该抗体或片段包含VH52-5(SEQ ID NO:3)和VL52-5(SEQ ID NO:4)，任选地通过接头偶联在一起以形成scFv。在另外的实施例中，该抗体或片段包含VH52-38(SEQ ID NO:5)和VL52-38(SEQ ID NO:6)，任选地通过接头偶联在一起以形成scFv。
最典型地，但不是必须地，抗体是IgG1抗体或scFv，和/或可以进一步包含治疗剂(例如，化疗药物、放射性核素，或免疫刺激剂诸如细胞因子、细胞因子类似物、趋化因子或检查点抑制剂)。替代性地，或另外，该抗体或片段也可以包含可检测标记。
在其他实施例中，诸位发明人还考虑了包含本文提供的抗体或片段的嵌合蛋白。例如，该嵌合蛋白可以形成嵌合抗原受体(CAR)，其可以具有CD3zeta(CD3ζ)或Fc受体ε(FcεRIγ)信号传导结构域，或者可以具有CD28信号传导结构域、4-1BB信号传导结构域和CD3zeta(CD3ζ)信号传导结构域中的一种或多种。最典型地，该CAR可以具有CD8铰链结构域和CD28跨膜结构域。将容易理解的是，该CAR将是在NK细胞或细胞毒性T细胞中表达并呈递在其表面的重组CAR。在其他实例中，嵌合蛋白可形成双特异性融合蛋白(例如，包含IgG Fc部分，并且任选地进一步包含IL15α受体部分、IL15部分和IL15超激动剂部分中的至少一种)，或可形成双特异性杀伤细胞衔接子(BiKE)或三特异性杀伤细胞衔接子(TriKe)。
因此，诸位发明人还考虑了编码本文提供的分离的抗体或片段或嵌合蛋白的重组核酸。例如，该核酸可以是表达载体的一部分或重组病毒基因组的一部分或可以呈线性DNA的形式。另一方面，该重组核酸也可以是RNA。
从不同的角度看，诸位发明人还考虑了一种药物组合物，该药物组合物包含与如本文所提供的分离的抗体或片段或嵌合蛋白组合的药学上可接受的载剂。类似地，诸位发明人还考虑了一种药物组合物，该药物组合物包含与如本文所提供的重组核酸组合的药学上可接受的载剂。
在本发明主题的另一方面，诸位发明人还提供了一种治疗个体的方法，其中将本文提供的药物组合物施用给该个体，典型地由此降低该个体的免疫抑制。最典型地，用癌症疫苗和/或检查点抑制剂治疗该个体。因此，诸位发明人还考虑了如本文所提供的药物组合物在治疗个体的血液癌症中的用途。
根据优选实施例的以下详细描述以及附图(其中相同的数字代表相同的组分)，本发明主题的各种目的、特征、方面和优点将变得更加清楚。
附图说明
图1是描绘抗CD30抗体在表达CD30的细胞和对照细胞(HL-60)上的结合的示例性FACS结果的图，其使用可商购的抗CD30抗体和根据本发明主题的IgG1抗体。
图2是描绘抗CD30抗体在表达CD30的细胞和对照细胞(HL-60)上的结合的示例性滴定结果的图，其使用可商购的抗CD30抗体和根据本发明主题的IgG1抗体。
图3是描绘表达CD30的靶细胞的CAR特异性靶细胞裂解的示例性结果的图，其使用表达根据本发明主题的示例性抗CD30 CAR构建体和模拟CAR的haNK细胞。
图4是描绘不表达CD30的对照靶细胞的CAR特异性靶细胞裂解的示例性结果的图，其使用表达根据本发明主题的示例性抗CD30CAR构建体和模拟CAR的haNK细胞。
图5是描绘图3和图4的靶细胞中CD30表达的示例性结果的图。
图6是描绘图3和图4的haNK细胞中抗CD30 CAR和模拟CAR表达的示例性结果的图
图7是描绘表达CD30的靶细胞(低、高、混合)的CAR特异性靶细胞裂解的示例性结果的图，其使用表达根据本发明主题的另一示例性抗CD30 CAR构建体和模拟CAR的haNK细胞。
图8是描绘图7的靶细胞中CD30表达的示例性结果的图。
具体实施方式
诸位发明人已经发现了对于与CD30的结合具有高亲和力和特异性的各种抗CD30抗体。在特别优选的方面，所考虑的抗体是具有如下所示的VH和VL结构域的人IgG1抗体。然而，应当理解，本文提供的序列可以在至少一定程度上变化，并因此可以具有一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失，如下面更详细讨论的。最典型地，但不是必须地，具有相同的在前数字(例如，52-2)的VH和VL结构域或重链和轻链将存在于CD30结合构建体中。然而，其他CD30结合构建体可以仅具有VH或VL结构域，或在前数字不同的VH和VL结构域。此外，CD30结合构建体可以包括具有如下所列的至少一些CDR(例如，至少来自VH结构域的那些CDR)的那些构建体。
52-2 VH结构域氨基酸序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMHWVRQAPGKGLEWVSAISWSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRFMPFIPNTLGFDVWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:1)
52-2 VL结构域氨基酸序列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYVASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQDADVPLTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO:2)
52-5 VH结构域氨基酸序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMHWVRQAPGKGLEWVSAISWSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRFMPFIPNTLGFDVWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:3)
52-5 VL结构域氨基酸序列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQDADVPLTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO:4)
52-38 VH结构域氨基酸序列：
MEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMHWVRQAPGKGLEWVSAISWSGDSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRSATWYYLGLGFDVWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:5)
52-38 VL结构域氨基酸序列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQVANVPLTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO:6)
将容易理解的是，VH和VL结构域的结合特异性由它们各自的CDR区决定，并且下表1显示了VH和VL结构域中CDR的氨基酸序列。因此，基于已知的CDR序列，考虑了可以制备结合CD30并且包括SEQ ID No:7-24中的至少一些CDR的抗体及其片段。
表1
例如，使用以上的CDR以及VH和VL结构域信息，可以制备IgG1抗体。最典型地，但不是必须地，具有相同的在前数字(例如，64-6)的HC和LC将存在于CD30结合抗体中。然而，其他CD30结合抗体可以具有在前数字不同的重链和轻链。
当然，应当理解，本发明的主题不限于上述的确切序列，而是一个或多个序列可以包括一个或多个氨基酸改变。最优选地，这些改变不会导致特异性和/或亲和力的显著降低。因此，所考虑的氨基酸改变将典型地在VH和/或VL结构域的框架区中，和/或在HC和/或LC的恒定区中。从不同的角度看，氨基酸改变将优选地不存在于CDR区中。例如，所考虑的序列将具有98％-99％的同一性或同源性，或96％-98％的同一性或同源性，或92％-96％的同一性或同源性，或85％-92％的同一性或同源性，或75％-85％的同一性或同源性，最典型地(但不是必须地)改变的氨基酸在CDR之外。在氨基酸改变的其他选择中，可以改变一个或多个氨基酸以“人源化”非人抗体，和/或移动或消除一个或多个糖基化位点。
此外，应当注意，所考虑的抗体将明确地包括诸如单克隆抗体、多特异性抗体、人抗体、人源化抗体、合成抗体、嵌合抗体、单结构域抗体、单链Fv(scFv)、单链抗体、二硫键连接的Fv(sdFv)、BiKe和TriKe的各种形式，如下面更详细描述的。当然，还应当注意，术语抗体明确地包括所有类别的免疫球蛋白分子(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)以及相应的亚类(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2)。
关于所考虑的抗体片段，应注意，片段将包括抗体的包含CDR(典型地VH和VL中至少一者的所有CDR)和任选的框架残基的一个或多个部分。因此，在大多数情况下，抗体片段将表现出与抗原(此处：CD30的表位)特异性结合的能力。在其他片段中，特别考虑的片段包括Fab'、F(ab')2、Fv、scFv、及其突变体、天然存在的变体、以及与各种非抗体多肽(例如毒素、不同抗原的抗原识别位点、酶、受体、受体配体等)的融合蛋白。从不同的角度看，所考虑的抗体片段将具有至少20个连续氨基酸残基、至少25个连续氨基酸残基、至少40个连续氨基酸残基、至少50个连续氨基酸残基、至少60个连续氨基酸残基、至少70个连续氨基酸残基、至少80个连续氨基酸残基、至少90个连续氨基酸残基、至少100个连续氨基酸残基、至少125个连续氨基酸残基、至少150个连续氨基酸残基、至少175个连续氨基酸残基、至少200个连续氨基酸残基或至少250个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
在进一步考虑的方面，抗体或其片段可以用于体外或体内诊断，并因此与可检测标记偶联。例如，合适的可检测标记包括各种酶、荧光材料、发光材料、生物发光材料、放射性材料、正电子发射金属和非放射性顺磁性金属离子。可检测标记可以使用本领域已知的技术直接偶联或缀合到抗体或通过中间体(例如化学或生物接头)间接偶联或缀合到抗体。另外地或替代性地，所考虑的抗体及其片段也可以偶联到固体支持物，其特别可用于CD30或表达CD30的细胞的免疫测定或纯化。例如，合适的支持物包括磁珠、玻璃、纤维素、聚丙烯酰胺、尼龙、聚苯乙烯、聚氯乙烯和聚丙烯。
所考虑的抗体及其片段也可以偶联到治疗剂或包含治疗剂，以将该治疗剂靶向表达CD30的细胞。例如，特别考虑的治疗剂包括化疗药物、放射性核素和免疫刺激剂(例如细胞因子、细胞因子类似物、趋化因子或检查点抑制剂)。存在许多制备抗体-药物缀合物的方式，并且所有这些都被认为适用于本文。
在特别优选的方面，所考虑的抗体或其片段也可以制备为嵌合蛋白，其中抗体的至少一部分与第二多肽连续(任选地通过优选柔性的接头)。例如，合适的嵌合蛋白可以被构造为嵌合抗原受体(CAR)，其可以具有细胞内信号传导部分、跨膜部分和细胞外识别结构域。在这种情况下，通常考虑的是，识别结构域包括抗体片段(例如scFv或单结构域)和/或细胞内信号传导结构域包括激活/ITAM基序。在其他选择中，所考虑的可以是具有本领域已知的多种结构域的第一代、第二代或第三代CAR。例如，合适的CAR将包括CD8铰链部分、CD28跨膜结构域和CD3zeta(CD3ζ)或Fc受体ε(FcεRIγ)信号传导结构域。替代性地，信号传导结构域还可以包括CD28信号传导结构域、4-1BB信号传导结构域和CD3zeta(CD3ζ)信号传导结构域中的一种或多种。在其他选择中，此类嵌合抗原受体优选地在细胞毒性免疫感受态细胞中表达，特别是在NK细胞和/或T细胞中表达。
另一方面，尤其是当抗CD30抗体或其片段用于另外介导细胞或受体/配体接触时，所考虑的嵌合蛋白可以被构建为双特异性融合蛋白、双特异性杀伤细胞衔接子(BiKE)或三特异性杀伤细胞衔接子(TriKe)。例如，双特异性融合蛋白可以包含抗CD30抗体或其部分和选择性结合至所需靶标的第二亲和配体。这种靶标可以是可溶性蛋白或细胞结合蛋白，特别考虑的靶标包括PD-L1。另一方面，所考虑的嵌合分子可以被构建为双特异性多肽(例如，经由接头偶联的第一scFv与第二scFv)，其中一部分包含抗CD30抗体或其部分，并且其中另一部分具有对免疫感受态细胞具有特异性的标志物的结合物(例如，抗CD3)。
在进一步考虑的方面，抗CD30抗体或其部分还可以偶联到IgG-Fc/IL15Rα/IL15杂合体(例如，ALT803)。例如，抗CD30抗体片段可以是scFv部分，该部分偶联到杂合体的一条或两条臂以形成TxM(参见URL:Altorbioscience.com的TxM技术)。或者，抗CD30抗体片段可以是偶联到杂合体的一条臂的scFv部分，而杂合体的另一条臂可以是结合PD-L1(或其他免疫相关配体)的scFv部分。
应当理解，编码所考虑的抗CD30抗体的核酸在本文中也被明确地考虑，并且技术人员将能够容易地制备这样的核酸(例如，DNA、RNA)和包含这样的核酸的重组实体。在其他选择中，合适的重组实体包括酵母、细菌和病毒表达载体、用于基因组编辑或其他整合的线性DNA、RNA等。当然，应当认识到，重组核酸将包括合适的调控元件以允许重组构建体的表达。此外，应该注意的是，关于包含和表达重组核酸的宿主细胞，核酸将通常利用密码子优化。
将容易理解的是，在靶向CD30阳性肿瘤细胞的情况下，使用抗CD30抗体、其片段、或含有抗CD30抗原或其片段的嵌合蛋白是特别有利的，其中抗CD30抗体和/或抗CD30 CAR在细胞毒性免疫细胞上。此外，在癌细胞表达并展示CD30的情况下，这些细胞可以提供另外的治疗靶标(例如，经由用具有CD30结合部分和免疫刺激部分的嵌合分子(例如，ALT-803)进行靶向)。
鉴于这些发现，诸位发明人还考虑了使用各种重组CD30结合分子(诸如抗体及其片段)以及表达抗CD30 CAR分子的细胞和包含它们的药物组合物。最典型地，这样的重组蛋白可以是抗体及其片段的可溶性形式、包含CD30结合部分的可溶性嵌合分子、或膜结合分子，诸如包含CD30结合部分的CAR。例如，重组CD30结合CAR可以在细胞毒性细胞(诸如T细胞、自然杀伤细胞或NKT细胞)中表达。
考虑了这样制备或产生的药物组合物可以施用于患有肿瘤的患者以增强免疫疗法的有效性从而治疗肿瘤(例如，调节(例如，减少、消除等)肿瘤的免疫抑制，减小肿瘤尺寸等)。在一些实施例中，药物组合物和/或肿瘤疫苗可以通过全身注射而施用，包括皮下(subcutaneous，subdermal)注射或静脉内注射。在其他实施例中，当全身注射可能不是有效的(例如，对于脑肿瘤等)或需要更局部的治疗时，考虑了重组免疫球蛋白复合物和/或药物组合物可以通过瘤内注射而施用。如本文所用，术语“施用”是指本文所考虑到的化合物和组合物的直接和间接施用，其中直接施用通常由医疗保健专业人员(例如，医师、护士等)进行，而间接施用通常包括提供或制备医疗保健专业人员可用的化合物和组合物以便直接施用的步骤。
关于施用的剂量和时间表，考虑了剂量和/或时间表可以根据蛋白、蛋白复合物的类型或药物组合物的类型(例如，病毒、细菌、酵母与重组蛋白复合物组合等)、疾病的类型和预后(例如，肿瘤类型、尺寸、位置)、患者的健康状态(例如，包括年龄，性别等)而变化。虽然剂量和时间表可以变化，但是可以选择和调节剂量和时间表，使得制剂不对宿主正常细胞产生任何显著的毒性作用，但足以通过减少肿瘤微环境中的T细胞分化和/或激活来减少免疫抑制。因此，在优选的实施例中，可以基于预定的阈值确定施用制剂的最佳或所需的条件。例如，预定的阈值可以是肿瘤微环境中T细胞激活性或T细胞释放的细胞因子(例如IL-2、IL-12、IFN-γ、IL-12、IL-23、IL-1b、IL-6或TGF-β等)的预定局部或全身浓度。因此，通常调整施用条件以使一种或多种这些细胞因子在肿瘤微环境中增加至少20％、至少30％、至少50％、至少60％、至少70％持续至少24小时、48小时、72小时、7天等。此外，考虑了本文提供的化合物和组合物可以与NK细胞共同施用(同时或依次)。例如，合适的NK细胞包括自体NK细胞以及NK92细胞及其衍生物(例如aNK细胞、haNK细胞、taNK细胞，均可从加利福尼亚州卡尔弗城杰弗逊大道9920号南特夸斯特公司(NantKwest,9920 Jefferson Blvd.CulverCity,CA)90232商购获得)。
实例
使用如上所述的VH和VL结构域，诸位发明人制备了各种CD30结合构建体，并且scFv和IgG1构建体的示例性结果在下面显示。例如，下表2显示了使用如表中所述的VH和VL结构域确定scFv和IgG1构建体的解离常数的示例性结果。更特别地，KD是通过SPR确定的，并且平均值以x10-9M显示。测量是在25℃、pH 7.4下进行的，其中在芯片表面上捕获scFv或IgG1，并且CD30是分析物。
表2
CD30克隆 scFv IgG1
52-2 0.8 3.0
52-5 27.1 22.3
52-38 0.77 2.5
为了证明抗CD30构建体与表达CD30的细胞的体外结合，诸位发明人构建并使用抗CD30 IgG1(52-5)，并使表达CD30的细胞(此处：Jurkat淋巴瘤细胞)暴露于抗CD30 IgG1抗体以及可商购的抗CD30抗体。不表达CD30的HL-60细胞用作阴性对照。如从图1中的流式细胞术结果可以容易地看出，抗CD30 IgG1(52-5)强烈且特异性结合至Jurkat细胞，并且基本上没有显示出与HL-60细胞的结合。此外，抗CD30 IgG1(52-5)的结合比可商购的抗CD30抗体更强。如从图2可见，当使用抗CD30 IgG1(52-38)对Jurkat细胞的结合进行滴定时，获得了剂量反应曲线，而IgG对照没有提供显著的结合。
在一系列另外的实验中，诸位发明人构建了抗CD30 CAR，其包括具有如上所述的VL和VH结构域(通过柔性接头部分偶联)的scFv部分，并且进一步包括CD8铰链部分、CD28跨膜部分和Fc受体ε(FcεRIγ)信号传导结构域。图3是描绘表达CD30的靶细胞的CAR特异性靶细胞裂解的示例性结果的图，其使用表达如所述的抗CD30CAR构建体和模拟CAR的haNK细胞。图4是描绘不表达CD30的对照靶细胞的CAR特异性靶细胞裂解的对应示例性结果的图。图5是描绘图3和图4的靶细胞中CD30表达的示例性结果的图，以及图6是描绘图3和图4的haNK细胞中抗CD30 CAR和模拟CAR表达的示例性结果的图。
值得注意的是，CAR介导的细胞毒性与靶细胞上存在的CD30的量严格相关，如从图7可见。此处，对于具有低和高的CD30表达水平的细胞以及这些细胞的混合物，显示了表达CD30的靶细胞的CAR特异性靶细胞裂解。图8示例性描绘了图7的靶细胞中CD30表达的结果。
在一些实施例中，用于描述和要求保护本发明某些实施例的表达成分、特性(如浓度)、反应条件等的量的数字应被理解为在一些情况下由术语“约”来修饰。因此，在一些实施例中，书面说明书和所附权利要求中列出的数值参数是近似值，其可以根据特定实施例试图获得的所需特性而变化。本文中对值的范围的描述仅旨在用作单独提及落入该范围内的每个单独值的简写方法。除非在本文中另有说明，将每个单独的值并入说明书中，如同其在本文中单独引用一样。
如本文所使用的，术语“施用”药物组合物或药物是指直接和间接施用药物组合物或药物，其中直接施用药物组合物或药物通常通过健康护理专业人员(例如，医师、护士等)进行，并且其中间接施用包括向健康护理专业人员提供药物组合物或药物或使健康护理专业人员可用药物组合物或药物的步骤，以用于直接施用(例如，经由注射、输注、口服递送、局部递送等)。还应注意，术语“预后”或“预测”病状、疾病发展的易感性或对预期治疗的应答旨在涵盖进行预测或预测病状、易感性和/或应答(包括受试者中病状的进展速度、改善和/或持续时间)的行为(但不包括治疗行为或诊断行为)。
除非在本文中另外指示或另外明显地与上下文矛盾，否则本文所述的所有方法能以任何合适顺序进行。关于本文某些实施例提供的任何和所有实例或示例性语言(例如，“诸如”)的使用仅旨在更好地说明本发明，而不对原本要求保护的本发明范围构成限制。本说明书中的任何语言都不应当被解释为指示任何未要求保护的要素是实践本发明所必需的。
如本文的说明书和随后的整个权利要求中所使用，“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”以及“该/这些(the)”的含义包括复数参照物，除非上下文清楚地另外指明。而且，如本文的说明书中所使用，“在……中(in)”的含义包括“在……中(in)”和“在……上(on)”，除非上下文另有明确说明。还如本文中所使用，并且除非上下文另有指示，否则术语“偶联到”旨在包括直接偶联(其中两个彼此偶联的元件彼此接触)和间接偶联(其中至少一个另外的元件位于两个元件之间)。因此，术语“偶联到”和“与……偶联”同义使用。
对于本领域技术人员应当清楚的是，在不脱离本文的发明构思的情况下，除了已经描述的那些之外的更多修改是可能的。因此，本发明主题仅受限于所附权利要求的范围。此外，在解释本说明书和权利要求时，所有术语都应当以与上下文一致的尽可能广泛的方式来解释。特别地，术语“包含/包括”(“comprises”和“comprising”)应当被解释为以非排他性方式提及要素、组分或步骤，从而指示所提及的要素、组分或步骤可以与未明确提及的其他要素、组分或步骤一起存在、或使用、或组合。在本说明书的权利要求提及选自由A、B、C……和N组成的组的某物中的至少一种的情况下，该文本应当被解释为仅需要该组中的一种要素，而不是A加N或B加N等。
序列表
<110> 南特生物公司（NantBio, Inc.）
<120> 抗CD30单克隆抗体和嵌合抗原受体
<130> 102719.0034PRO
<160> 24
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 52-2 VH氨基酸序列
<400> 1
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Trp Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Phe Met Pro Phe Ile Pro Asn Thr Leu Gly Phe Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 2
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 52-2 VL氨基酸序列
<400> 2
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Val Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Ala Asp Val Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 3
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 52-5 VH氨基酸序列
<400> 3
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Trp Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Phe Met Pro Phe Ile Pro Asn Thr Leu Gly Phe Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 4
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 52-5 VL氨基酸序列
<400> 4
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
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Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Ala Asp Val Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<210> 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 52-38 VH氨基酸序列
<400> 5
Met Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
1 5 10 15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser
20 25 30
Tyr Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
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Val Ser Ala Ile Ser Trp Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser
50 55 60
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu
65 70 75 80
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Arg Ser Ala Thr Trp Tyr Tyr Leu Gly Leu Gly Phe
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<210> 6
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 52-38 VL氨基酸序列
<400> 6
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Ala Asn Val Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 7
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 52-2 CDR-H1
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Ser Tyr Tyr Met His
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<210> 8
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 52-2 CDR-H2
<400> 8
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Gly
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 52-2 CDR-H3
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Asp Arg Phe Met Pro Phe Ile Pro Asn Thr Leu Gly Phe Asp Val
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<210> 10
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
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<210> 11
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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Val Ala Ser Asn Leu Glu Thr
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 52-2 CDR-L3
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<212> PRT
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<220>
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<212> PRT
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<220>
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Gly
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 52-5 CDR-H3
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Asp Arg Phe Met Pro Phe Ile Pro Asn Thr Leu Gly Phe Asp Val
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 52-5 CDR-L1
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Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
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<213> 人工序列
<220>
<223> 52-38 CDR-H1
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Ser Tyr Trp Met His
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<213> 人工序列
<220>
<223> 52-38 CDR-H2
<400> 20
Ala Ile Ser Trp Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 21
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 52-38 CDR-H3
<400> 21
Asp Arg Ser Ala Thr Trp Tyr Tyr Leu Gly Leu Gly Phe Asp Val
1 5 10 15
<210> 22
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 52-38 CDR-L1
<400> 22
Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 23
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 52-38 CDR-L2
<400> 23
Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr
1 5
<210> 24
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 52-38 CDR-L3
<400> 24
Gln Gln Val Ala Asn Val Pro Leu Thr
1 5

Claims (27)

1.一种分离的抗体或其片段，其中该抗体或其片段结合至CD30，该分离的抗体或其片段包含：
可变重链(VH)结构域和可变轻链(VL)结构域；
其中该VH结构域选自由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:5组成的组；并且
其中该VL结构域选自由SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:6组成的组。
2.如权利要求1所述的抗体或片段，其包含VH52-2(SEQ ID NO:1)和VL52-2(SEQ ID NO:2)，任选地通过接头偶联在一起以形成scFv。
3.如权利要求1所述的抗体或片段，其包含VH52-5(SEQ ID NO:3)和VL52-5(SEQ ID NO:4)，任选地通过接头偶联在一起以形成scFv。
4.如权利要求1所述的抗体或片段，其包含VH52-38(SEQ ID NO:5)和VL52-38(SEQ ID NO:6)，任选地通过接头偶联在一起以形成scFv。
5.如权利要求1所述的抗体或片段，其中该抗体是IgG1抗体或scFv。
6.如前述权利要求1中任一项所述的抗体或片段，其进一步包含治疗剂。
7.如权利要求6所述的抗体或片段，其中该治疗剂是化疗药物、放射性核素或免疫刺激剂。
8.如权利要求7所述的抗体或片段，其中该免疫刺激剂是细胞因子、细胞因子类似物、趋化因子或检查点抑制剂。
9.如前述权利要求中任一项所述的抗体或片段，其进一步包含可检测标记。
10.一种嵌合蛋白，其包含如权利要求1所述的抗体或片段。
11.如权利要求10所述的嵌合蛋白，其中该嵌合蛋白是嵌合抗原受体(CAR)。
12.如权利要求11所述的嵌合蛋白，其中该CAR具有CD3zeta(CD3ζ)或Fc受体ε(FcεRIγ)信号传导结构域。
13.如权利要求11所述的嵌合蛋白，其中该CAR具有CD28信号传导结构域、4-1BB信号传导结构域和CD3zeta(CD3ζ)信号传导结构域中的至少一种。
14.如权利要求11所述的嵌合蛋白，其中该CAR具有CD8铰链结构域和CD28跨膜结构域。
15.如权利要求11所述的嵌合蛋白，其中该CAR是在NK细胞或细胞毒性T细胞中表达并偶联到其表面的重组CAR。
16.如权利要求10所述的嵌合蛋白，其被构造为双特异性融合蛋白。
17.如权利要求16所述的嵌合蛋白，其中该双特异性融合蛋白包含IgG Fc部分，并且任选地进一步包含IL15α受体部分、IL15部分和IL15超激动剂部分中的至少一种。
18.如权利要求16所述的嵌合蛋白，其被构造为双特异性杀伤细胞衔接子(BiKE)或三特异性杀伤细胞衔接子(TriKe)。
19.一种重组核酸，其编码如权利要求1-9中任一项所述的分离的抗体或片段或如权利要求10-18中任一项所述的嵌合蛋白。
20.如权利要求19所述的重组核酸，其中该核酸在表达载体中或在重组病毒基因组中，或呈线性DNA的形式。
21.如权利要求19所述的重组核酸，其中该核酸是RNA。
22.一种药物组合物，其包含药学上可接受的载剂与如权利要求1-9中任一项所述的分离的抗体或片段或如权利要求10-18中任一项所述的嵌合蛋白的组合。
23.一种药物组合物，其包含药学上可接受的载剂与如权利要求19-21中任一项所述的重组核酸的组合。
24.一种治疗个体的方法，其包括施用如权利要求22-23中任一项所述的药物组合物。
25.如权利要求24所述的方法，其中将该药物组合物施用于该个体，由此降低该个体的免疫抑制。
26.如权利要求24所述的方法，其中用癌症疫苗和/或检查点抑制剂治疗该个体。
27.如权利要求22-23中任一项所述的药物组合物在治疗个体的血液癌症中的用途。
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