CN116964072A - IL-2Rβγc结合化合物和其用途 - Google Patents
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Abstract
公开了IL‑2Rβγc结合化合物和包括所述IL‑2Rβγc结合化合物的药物组合物。IL‑2Rβγc结合化合物可以充当IL‑2R激动剂并且可用于治疗癌症、自身免疫性疾病和炎性疾病。
Description
本申请是于2020年11月4日提交的美国申请第17/089,515号的部分继续申请，所述申请根据35 U.S.C.§119(e)要求于2019年11月5日提交的美国临时申请第62/930,758号的权益，所述美国临时申请中的每一个通过引用整体并入。
技术领域
本公开涉及跨物种IL-2Rβγc结合化合物。跨物种IL-2Rβγc结合化合物可以充当IL-2R激动剂或部分IL-2R激动剂。
序列表
与本申请相关的序列表通过EFS-Web以电子格式提交并且通过引用整体并入。
背景技术
重组人白细胞介素-2(IL-2)是临床研究的首批免疫肿瘤药物之一并于20世纪90年代由FDA批准用于治疗一些特别具有挑战性的癌症，如黑色素瘤和肾癌。IL-2是有效的，在至多10％的患有这些肿瘤的患者中产生持久的应答，但其效用受到非常严重的剂量限制性毒性的限制。另外，IL-2在引导T细胞介导的抗肿瘤应答中的功效受到同时IL-2驱动的T细胞抑制系统上调的损害。人们一直在寻找降低IL-2疗法毒性的策略，并且以避免对抗肿瘤活性的免疫抑制限制。迄今为止，已经开发出适度有效的策略来控制这种强效生物的全身性暴露，并且由此控制毒性。对IL-2复杂生物学的阐明导致了对天然IL-2分子的修饰，从而改变了肿瘤毒性和抑制的平衡。然而，这些方法受到使用天然IL-2作为模板的限制，由此保留了亲本分子的不希望的、结构驱动的生物活性的元件。
对其抗肿瘤性质至关重要的是，IL-2对NK和细胞毒性CD8+ T细胞发挥有效的刺激作用。然而，抗肿瘤作用被IL-2引导的刺激T调节细胞(Treg)所矛盾地抑制，这有效地减弱了抗肿瘤免疫应答。IL-2的这种双重作用在很大程度上受在负责免疫稳态的各种细胞上表达的IL-2受体(IL-2R)亚基的性质控制。IL-2被在许多类型的免疫细胞上有差别地和有条件地表达的三种受体亚基的组合识别。被称为IL-2Rβ(β)和IL-2Rγ-共同(γc)的这两个信号传导亚基在通过与IL-2结合而进入正确取向的位置时启动信号传导。IL-2以约1nM的IC50与IL-2Rβγc结合以形成活性三元复合物。大多数免疫细胞以不同水平表达IL-2Rβ和IL-2Rγc亚基。还有第三种非信号传导IL-2R亚基，IL-2Rα(CD25)，其在免疫细胞亚群，特别是Treg上表达。IL-2Rαβγc的复合物对IL-2具有非常高的亲和力(约10pM)，并且因此表达所有三个亚基的细胞对IL-2更加敏感。用于提高IL-2R激动剂抗肿瘤效力的流行且得到充分支持的策略涉及对IL-2R选择性进行工程化，以降低IL-2与IL-2Rα亚基的结合，同时维持IL-2Rβγc结合和信号传导，以有利于细胞毒性效应子T细胞(Teff细胞)通过Treg在肿瘤位点处浸润和刺激。
临床环境中IL-2毒性的原因还不太清楚；但被认为是过度的外周免疫刺激表达IL-2Rβγc的T细胞并伴随过度释放炎性细胞因子的结果。由于天然细胞因子的半衰期短，所以经常施用维持充分肿瘤暴露所需的高剂量IL-2会诱发毒性。
解决IL-2作为有用的免疫肿瘤疗法的局限性的策略利用突变体、融合蛋白或经化学修饰的IL-2来改变免疫调节因子的复杂生物学。然而，在临床前和临床开发期间，很难优化选择性IL-2Rβγc结合和经修饰的IL-2的信号传导。这限制了生物活性IL-2蛋白作为用于赋予多种新性质的起点的用途。
发明内容
根据本发明，IL-2Rβ配体选自：SEQ ID NO:2661-2891、2900-2926、911-930、9301、9308、2859、2934、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207中的任一个中的任一个的氨基酸序列；SEQ ID NO:2661-2891、2900-2926、911-930、9301、9308、2859、2934、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207中的任一个的截短的氨基酸序列；具有1至4个氨基酸取代的SEQ ID NO:2661-2891、2900-2926、911-930、9301、9308、2859、2934、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207中的任一个的氨基酸序列；具有1至4个侧接甘氨酸的SEQ ID NO:2661-2891、2900-2926、911-930、9301、9308、2859、2934、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207中的任一个的氨基酸序列；与SEQ ID NO:2661-2891、2900-2926、911-930、9301、9308、2859、2934、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207中的任一个具有大于60％序列相似性的氨基酸序列；或前述任一种的组合，其中所述IL-2Rβ配体以小于100μM的IC50与hu-IL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
根据本发明，IL-2Rβ结合化合物包括根据本发明的IL-2Rβ配体。
根据本发明，IL-2Rβγc配体包括根据本发明的IL-2Rβ配体；以及IL-2Rγc配体，其中所述IL-2Rγc配体包括：SEQ ID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613中的任一个中的任一个的氨基酸序列；SEQ ID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613中的任一个的截短的氨基酸序列；具有1至4个氨基酸取代的SEQ ID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613中的任一个的氨基酸序列；具有1至4个侧接甘氨酸的SEQ ID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613中的任一个的氨基酸序列；与SEQ ID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613中的任一个具有大于60％序列相似性的氨基酸序列；或前述任一种的组合，其中所述IL-2Rγc配体以小于100μM的IC50与hu-IL-2Rγc亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
根据本发明，药物组合物包括：根据本发明的IL-2Rβ配体；根据本发明的IL-2Rβ结合化合物；根据本发明的IL-2Rβγc配体；根据本发明的IL-2Rβγc结合化合物；或前述任一种的组合。
根据本发明，治疗患者的疾病的方法包括向需要此类治疗的患者施用治疗有效量的：根据本发明的IL-2Rβ配体；根据本发明的IL-2Rβ结合化合物；根据本发明的IL-2Rβγc配体；根据本发明的IL-2Rβγc结合化合物；或根据本发明的药物组合物。
根据本发明，扩增免疫细胞的方法包括使免疫细胞群体与有效量的以下各项离体或体内接触：根据本发明的IL-2Rβ配体；根据本发明的IL-2Rβ结合化合物；根据本发明的IL-2Rβγc配体；或根据本发明的IL-2Rβγc结合化合物。
根据本发明，扩增免疫细胞的方法包括使免疫细胞群体与有效量的以下各项离体或体内接触：根据本发明的IL-2Rβ配体；根据本发明的IL-2Rβ结合化合物；根据本发明的IL-2Rβγc配体；或根据本发明的IL-2Rβγc结合化合物。
根据本发明，加强疫苗的方法包括向患者施用疫苗和治疗有效量的：根据本发明的IL-2Rβ配体；根据本发明的IL-2Rβ结合化合物；根据本发明的IL-2Rβγc配体；或根据本发明的IL-2Rβγc结合化合物。
根据本发明，修饰免疫应答的方法包括向患者施用有效量的：根据本发明的IL-2Rβ配体；根据本发明的IL-2Rβ结合化合物；根据本发明的IL-2Rβγc配体；或根据本发明的IL-2Rβγc结合化合物。
根据本发明，编码多肽的核酸包括：根据本发明的IL-2Rβ配体；根据本发明的IL-2Rβ结合化合物；根据本发明的IL-2Rβγc配体；或根据本发明的IL-2Rβγc结合化合物。
附图说明
本文描述的附图仅是为了说明的目的。这些附图不旨在限制本公开的范围。
图1示出了具有不同的C/N取向的IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体的IL-2Rβγc配体的实例。
图2示出了暴露于具有带有不同的C/N取向和不同的配体连接子长度的不同的IL-2Rβ和IL-2Rγc配体的各种IL-2Rβγc配体的TF-1β细胞中的STAT5磷酸化。
图3示出了暴露于具有带有C/C取向和相同的IL-2Rβγc配体连接子的不同的IL-2Rβ和IL-2Rγc配体的各种IL-2Rβγc配体的NK-92细胞中的STAT5磷酸化。
图4示出了暴露于具有带有不同的C/N取向的具有SEQ ID NO:865的IL-2Rβ配体(BL4)和SEQ ID NO:965的IL-2Rγc配体(GL2)的IL-2Rβγc配体的NK-92细胞中的STAT5磷酸化。
图5A和5B示出了暴露于具有带有C/N取向和相同的IL-2Rβγc配体连接子的不同的IL-2Rβ和IL-2Rγc配体的IL-2Rβγc配体的TF-1β细胞中的STAT5磷酸化。在图5A中，IL-2Rβ配体是(BL4)(SEQ ID NO:865)并且与不同的IL-2Rγc配体偶联。在图5B中，IL-2Rγc配体是(GL2)(SEQ ID NO:965)并且与不同的IL-2Rβ配体偶联。
图6示出了暴露于具有带有SEQ ID NO:865的IL-2Rβ配体(BL4)和带有-GGGGS-(G4S)(SEQ ID NO:9395)氨基酸连接子(IL-2Rβγc配体(BGL21))或点击化学源性含三唑的连接子(IL-2Rβγc配体(BGL20))的SEQ ID NO:965的IL-2Rγc配体(GL2)的IL-2Rβγc配体的NK-92细胞中的STAT5磷酸化。
图7A-7C分别示出了在暴露于IL-2Rβγc配体(BGL21)或IL-2之后的NK-92细胞中的STAT5磷酸化、NK-92细胞中的AKT磷酸化和NK-92细胞中的ERK1/2磷酸化。
图8A和8B分别示出了在暴露于以活细胞数或Ki-67+细胞％表示的IL-2或IL-2Rβγc配体(BGL21)之后的NK-92细胞增殖。
图9A-9C分别示出了在暴露于IL-2或IL-2Rβγc配体(BGL21)之后的静息CD8+ T细胞、Treg细胞或CD4+ T细胞中的STAT5磷酸化。
图10A和10B分别示出了在暴露于以Ki-67+细胞％和中值荧光强度表示的IL-2或IL-2Rβγc配体(BGL21)之后的NK-92细胞的增殖。
图11A示出了在与PBMC和IL-2或IL-2Rβγc配体(BGL21)共培养之后的A549肿瘤细胞中的PD-L1表达的上调。
图11B和11C分别示出了在与PBMC和IL-2或IL-2Rβγc配体(BGL21)共培养之后的LS180细胞中的细胞毒性％和COLO205细胞中的细胞毒性％。
图12示出了在暴露于IL-2或各种IL-2Rβγc配体(BGL21)融合蛋白之后的TF-1β细胞中的STAT5磷酸化。
图13示出了在暴露于IL-2或具有不同的IL-2Rβγc配体的各种IL-2Rβγc配体-Fc融合蛋白之后的TF-1β细胞中的STAT5磷酸化。
图14示出了在暴露于源自不同的IgG同种型的各种IL-2Rβγc配体(BGL21)-Fc融合蛋白之后的TF-1β细胞中的STAT5磷酸化。
图15示出了在暴露于具有不同的Fc连接子的IL-2Rβγc配体(BGL21)-Fc融合蛋白之后的TF-1β细胞中的STAT5磷酸化。
图16A和16B示出了在暴露于IL-2Rβγc配体(BGL21)或具有不同的Fc连接子的IL-2Rβγc配体(BGL21)-Fc融合蛋白之后的TF-1β细胞中的STAT5磷酸化(图16A)或NK-92细胞中的Ki-67活性％(图16B)。
图17A-17D示出了在暴露于抗PD-1抗体(派姆单抗(pembrolizumab)或西米普利单抗(cemiplimab))、IL-2Rβγc配体(BGL21)-Fc融合蛋白(FP1)(SEQ ID NO:1212)、或IL-2Rβγc配体(BGL21)-抗PD-1抗体(FP8)(SEQ ID NO:1219)和(FP10)(SEQID NO:1221)之后的TF-1β细胞中通过STAT5磷酸化(图17B和17D)测定的PD-1结合亲和力(图17A和17C)和IL-2R激动剂活性。
图18示出了在暴露于IL-2、IL-2Rβγc配体(BGL21)或聚乙二醇化IL-2Rβγc配体(BGL21)之后的NK-92细胞中的STAT5磷酸化。
图19A-19C示出了由本公开提供的某些IL-2Rβγc配体的氨基酸序列和连接子结构。如图19A-19C所示，IL-2Rβ配体通过连接子结构(L)与IL-2Rγc配体偶联。例如，在IL-2Rβγc配体(BGL1)中，具有SEQ ID NO:58的IL-2Rβ配体的C末端通过具有结构(L2)的连接子与具有SEQ ID NO:224的IL-2Rγc配体的C末端偶联。如所描述的，IL-2Rβγc配体(BGL1)是通过使具有SEQ ID NO:58且在N末端上具有H2N-基团且在C末端上具有炔烃部分(AL1)的IL-2Rβ配体与具有SEQ ID NO:224且在N末端上具有H2N-基团且在C末端上具有叠氮化物部分(AZ1)的IL-2Rγc配体反应而合成的。
图20A-20J示出了由本公开提供的某些IL-2Rβγc配体融合蛋白的氨基酸序列。
图21A-21C提供了图20A-20J中提供的IL-2Rβγc配体构建体的亚结构概述。图21A-C将“(G4S)2”公开为SEQ ID NO:9396、将“(G4S)3”公开为SEQ ID NO:9397、将“(GS)10”公开为SEQ ID NO:9407、将“(PA)10”公开为SEQ ID NO:9428、将“(G4S)1”公开为SEQ ID NO:9395、将“(GGS)1”公开为SEQ ID NO:9402、将“(G4S)4”公开为SEQ ID NO:9398、将“(G)2”公开为SEQ ID NO:9399、将“(G)5”公开为SEQ ID NO:9401、将“(PA)5”公开为SEQ ID NO:9426并将“(PA)7”公开为SEQ ID NO:9427。
图22A-22F示出了由本公开提供的IL-2Rβγc配体fc片段融合蛋白的各种构型的实例。
图23A-23F示出了由本公开提供的IL-2Rβγc配体免疫球蛋白融合蛋白的各种构型的实例。
图24示出了在pH 6.0和pH 7.5下暴露于pH偏向的IL-2Rβγc配体之后的NK-92细胞中的STAT5磷酸化。
图25示出了用于在pH 6.0和pH 7.4下pH偏向的IL-2Rβγc配体与IL-2Rβ亚基竞争结合的归一化ELISA信号。
图26示出了PEG-IL-2Rβγc配体构建体(PEG-1)在施用于小鼠后的PK曲线。
图27-33分别示出了PEG-IL-2Rβγc配体构建体PEG-1至PEG-7的实例。IL-2Rβγc配体具有SEQ ID NO:1263。
图34A-34B分别示出了在暴露于IL-2或具有SEQ ID NO:8135的hu-IgG2/IL-2RβγcFc融合蛋白之后的激活的人PBMC和经人IL-2Rβ转染的TF-1细胞中的STAT5磷酸化。
图34C-34D分别示出了在暴露于IL-2或具有SEQ ID NO:8135的hu-IgG2/IL-2RβγcFc融合蛋白之后的激活的cyno-PBMC和经cyno-IL-2Rβ转染的TF-1细胞中的STAT5磷酸化。
图35A-35B分别示出了具有SEQ ID NO:1263的IL-2Rβγc配体与人IL-2Rγc亚基和人IL-2Rβ亚基的竞争性结合。图35C-35D分别示出了具有SEQ ID NO:1263的IL-2Rβγc配体与cyano-IL-2Rγc亚基和cyno-IL-2Rβ亚基的竞争性结合。
图36A-36B分别示出了具有SEQ ID NO:4171和SEQ ID NO:1263的IL-2Rβγc配体与cyno-IL-2Rβ亚基和cyno-IL-2Rγc亚基的竞争结合。
图37A-37B分别示出了具有SEQ ID NO:4171和SEQ ID NO:1263的IL-2Rβγc配体与hu-IL-2Rβ亚基和hu-IL-2Rγc亚基的竞争结合。
图38A示出了由本公开提供的IL-2Rβγc Fc融合体的示意图。
图38B示出了在暴露于IL-2或具有SEQ ID NO:8127的hu-IgG2/IL-2Rβγc Fc融合蛋白之后的激活的cyno-PBMC细胞中的STAT5磷酸化。
图39A-39B分别示出了在暴露于肽或包括肽的Fc融合体之后的hu-TF-1β细胞中的STAT5磷酸化。
图40A-40B分别示出了在暴露于肽或包括肽的Fc融合体之后的激活的hu-PBMC细胞中的STAT5磷酸化。
图41示出了在暴露于rh-IL-2和各种hu-IgG2/IL-2Rβγc Fc融合蛋白之后的TF-1β细胞中的STAT5磷酸化。
具体实施方式
不在两个字母或符号之间的破折号(“-”)用于指示部分或取代基的连接点。例如，-CONH2通过碳原子连接，并且-X1-X2-表示通过单键共价键合的氨基酸X1和X2。
“烷基”是指通过从亲本烷烃、烯烃或炔烃的单个碳原子上去除一个氢原子衍生的饱和、支链或直链的单价烃基。烷基的实例包含甲基；乙基，如乙烷基、乙烯基和乙炔基；丙基，如丙-1-基、丙-2-基、丙-1-烯-1-基、丙-1-烯-2-基、丙-2-烯-1-基(烯丙基)、丙-1-炔-1-基、丙-2-炔-1-基等；丁基，如丁烷-1-基、丁烷-2-基、2-甲基-丙-1-基、2-甲基-丙-2-基、丁-1-烯-1-基、丁-1-烯-2-基、2-甲基-丙-1-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、丁-2-烯-2-基、丁-1,3-二烯-1-基、丁-1,3-二烯-2-基、丁-1-炔-1-基、丁-1-炔-3-基、丁-3-炔-1-基等；等等。术语“烷基”特别旨在包含具有任何饱和度或水平的基团，即仅具有碳-碳单键的基团、具有一个或多个碳-碳双键的基团、具有一个或多个碳-碳三键的基团以及具有碳-碳单键、双键和三键的组合的基团。在预期特定饱和水平的情况下，使用术语链烷基、烯基和炔基。在某些实施例中，烷基是C1-6烷基、C1-5烷基、C1-4烷基、C1-3烷基，并且在某些实施例中是乙基或甲基。
“环烷基”是指饱和或部分不饱和的环状烷基。在某些实施例中，环烷基是C3-6环烷基、C3-5环烷基、C5-6环烷基、环丙基、环戊基，并且在某些实施例中是环己基。在某些实施例中，环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
“杂环烷基”本身或作为另一取代基的一部分是指饱和环状烷基，其中一个或多个碳原子(和某些相关的氢原子)独立地被相同或不同的杂原子替代；或是指亲本芳香族环体系，其中一个或多个碳原子(和某些相关的氢原子)独立地被相同或不同的杂原子替代，使得环体系违反休克尔规则(Hückel-rule)。替代碳原子的杂原子的实例包含N、P、O、S和Si。杂环烷基的实例包含源自环氧化物、氮杂环丙烯、环硫乙烷、咪唑烷、吗啉、哌嗪、哌啶、吡唑烷、吡咯烷、奎宁环等的基团。在某些实施例中，杂环烷基是C5杂环烷基并且选自吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、咪唑烷基、噁唑烷基、噻唑烷基、多索环烷基和二氧戊烷基。在某些实施例中，杂环烷基是C6杂环烷基并且选自哌啶基、四氢吡喃基、哌嗪基、噁嗪基、二噻烷基和二噁烷基。杂环烷基可以是C3-6杂环烷基、C3-5杂环烷基、C5-6杂环烷基，并且在某些实施例中是C5杂环烷基或C6杂环烷基。杂原子基团可以选自-O-、-S-、-NH-、-N(-CH3)-、-SO-和-SO2-，在某些实施例中，杂原子基团选自-O-和-NH-，并且在某些实施例中，杂原子基团是-O-或-NH-。
“结合亲和力”是指单个生物分子与其配体/结合配偶体之间结合相互作用的强度。结合亲和力表示为IC50。
“结合比率”是指两个配体的相对结合的量度，以比率表示。例如，“IL-2R亚基结合比率”是指用于IL-2Rβ配体与IL-2Rβ亚基结合的IC50与用于IL-2Rγc配体与IL-2Rγc亚基结合的IC50的比率。例如，hu-IL-2R亚基结合比率是指用于IL-2Rβ配体与hu-IL-2Rβ亚基结合的IC50与用于IL-2Rγc配体与hu-IL-2Rγc亚基结合的IC50的比率。例如，cyno-IL-2R亚基结合比率是用于IL-2Rβ配体与cyno-IL-2Rβ亚基结合的IC50与用于IL-2Rγc配体与cyno-IL-2Rγc亚基结合的IC50的比率。“IL-2R结合比率”是指用于IL-2Rβ配体与IL-2R结合的IC50与用于IL-2Rγc配体与IL-2R结合的IC50的比率。hu-IL-2R结合比率是指用于IL-2Rβ配体与hu-IL-2R结合的IC50与用于IL-2Rγc配体与hu-IL-2R结合的IC50的比率。cyno-IL-2R结合比率是指用于IL-2Rβ配体与cyno-IL-2R结合的IC50与用于IL-2Rγc配体与cyno-IL-2R结合的IC50的比率。IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体的结合比率可以作为独立配体或作为如IL-2Rβγc配体或IL-2Rβγc构建体等IL-2Rβγc结合化合物结合时的配体来确定。
“激动剂”是指生物活性配体，所述生物活性配体与其互补的生物活性受体或亚基结合并激活受体以引起由受体介导的生物应答或增强由受体介导的预先存在的生物活性。
“部分激动剂”是指提供的激活水平例如小于最大激活的75％、小于最大激活的50％、小于25％、小于10％或小于1％的化合物。部分IL-2R激动剂表现出的激活水平低于由IL-2提供的激活水平。例如，部分IL-2R激动剂表现出的激活水平低于由IL-2提供的激活水平并且部分IL-2R激动剂表现出的激活水平低于由IL-2提供的激活水平。
“拮抗剂”是指生物活性配体或化合物，所述生物活性配体或化合物与其互补受体或亚基结合并阻断或降低受体的生物应答。例如，如例如使用实例中公开的任何功能测定所确定的，IL-2R拮抗剂以小于100μM的IC50与IL-2R结合并抑制IL-2的功能活性。例如，如例如使用实例中公开的任何功能测定所确定的，IL-2R拮抗剂以小于100μM的IC50与IL-2R结合并抑制IL-2的功能活性。
氨基酸残基缩写如下：丙氨酸是Ala或A；精氨酸是Arg或R；天冬酰胺是Asn或N；天冬氨酸是Asp或D；半胱氨酸是Cys或C；谷氨酸是Glu或E；谷氨酰胺是Gln或Q；甘氨酸是Gly或G；组氨酸是His或H；异亮氨酸是Ile或I；亮氨酸是Leu或L；赖氨酸是Lys或K；甲硫氨酸是Met或M；苯丙氨酸是Phe或F；脯氨酸是Pro或P；丝氨酸是Ser或S；苏氨酸是Thr或T；色氨酸是Trp或W；酪氨酸是Tyr或Y；以及缬氨酸是Val或V。
“非天然氨基酸”包含例如β-氨基酸、同型氨基酸(homo-amino acid)、脯氨酸和丙酮酸衍生物、具有与咪唑环连接的烷基或杂原子部分的组氨酸衍生物、具有含吡啶侧链的氨基酸、3-取代的丙氨酸衍生物、甘氨酸衍生物、经环取代的苯丙氨酸和酪氨酸衍生物以及N-甲基氨基酸。
具有大疏水侧链的氨基酸包含异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、缬氨酸(V)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)和色氨酸(W)。
具有小疏水侧链的氨基酸包含丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、脯氨酸(P)、丝氨酸(S)和苏氨酸(T)。
具有碱性侧链的氨基酸包含精氨酸(R)、赖氨酸(K)和组氨酸(H)。
具有酸性侧链的氨基酸包含天冬氨酸盐(D)和谷氨酸盐(E)。
具有极性/中性侧链的氨基酸包含组氨酸(H)、天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)和酪氨酸(Y)。
具有芳香族侧链的氨基酸包含苯丙氨酸(F)、组氨酸(H)、色氨酸(W)和酪氨酸(Y)。
具有羟基侧链的氨基酸包含丝氨酸(S)、苏氨酸(T)和酪氨酸(Y)。
“保守氨基酸取代”意指以下组中的每一组内的氨基酸可以被所述组内的另一个氨基酸取代：具有小疏水侧链的氨基酸，包括丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、脯氨酸(P)、丝氨酸(S)和苏氨酸(T)；具有含羟基侧链的氨基酸，包括丝氨酸(S)、苏氨酸(T)和酪氨酸(Y)；具有酸性侧链的氨基酸，包括天冬氨酸盐(D)和谷氨酸盐(E)；包括极性-中性侧链的氨基酸，包括组氨酸(H)、天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)和酪氨酸(Y)；具有碱性侧链的氨基酸，包括精氨酸(R)、赖氨酸(K)和组氨酸(H)；具有大疏水侧链的氨基酸，包括异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、缬氨酸(V)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)或色氨酸(W)；以及具有芳香族侧链的氨基酸，包括苯丙氨酸(F)、组氨酸(H)、色氨酸(W)和酪氨酸(Y)。
“PEG”、“聚乙二醇”和“聚(乙二醇)”是指任何合适的非肽水溶性聚(环氧乙烷)。PEG可以包括结构-(OCH2CH2)n-，其中n是例如1至4,000的整数。PEG还可以包含如-CH2CH2-O(CH2CH2O)n-CH2CH2-和/或-(OCH2CH2)nO-等部分，这取决于例如在合成转化期间末端氧是否已被替代。PEG可以用合适的端基封端。PEG的重复亚基的至少50％可以具有结构-CH2CH2-。PEG可以具有任何合适的分子量、结构和/或几何形状，如分支的、线性的、分岔的或多功能的。
“生理上可切割的”或“可水解的”或“可降解的”键是在生理条件下与水反应(即水解)的键。键在水中水解的趋势将不仅取决于连接两个中心原子的键的通用类型，而且取决于连接到这些中心原子的取代基。合适的水解不稳定或弱键包含例如羧酸酯、磷酸酯、酸酐、缩醛、缩酮、酰氧基烷基醚、亚胺、原酸酯、肽和寡核苷酸。
“可酶促降解的键”是指可以被一种或多种酶降解或切割的化学键。
“水解稳定的”键是指如共价键等化学键，所述化学键在水中基本上稳定，使得所述化学键在延长的时间段内不会发生任何明显程度的水解。水解稳定的键的实例包含但不限于以下：碳-碳键(例如，在脂肪族链中)、醚、酰胺、氨基甲酸酯等。通常，水解稳定的键是在生理条件下表现出小于约1％至2％/天的水解速率的键。
“IL-2Rα配体”是指能够以小于100μM的IC50与如人IL-2受体等哺乳动物IL-2受体的IL-2Rα亚基结合的肽。
“IL-2Rβ配体”是指能够以小于100μM的IC50与如人IL-2受体等哺乳动物IL-2受体的IL-2Rβ亚基结合的肽。
“IL-2Rβ配体”或“由本公开提供的IL-2Rβ配体”包含例如具有以下的肽：SEQ IDNO:805-903、911-930、2575-2655、2661-2891、2900-2986、2929-2941、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207中的任一个的氨基酸序列；基于SEQ ID NO:805-903、911-930、2575-2655、2661-2891、2900-2986、2929-2941、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207的截短的氨基酸序列；具有SEQ ID NO:805-903、911-930、2575-2655、2661-2891、2900-2986、2929-2941、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207以及侧接氨基酸的氨基酸序列；基于SEQ ID NO:805-903、911-930、2575-2655、2661-2891、2900-2986、2929-2941、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207的具有一个或多个保守或非保守氨基酸取代的氨基酸序列；掺入具有SEQ IDNO:805-903、911-930、2575-2655、2661-2891、2900-2986、2929-2941、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207的一个或多个氨基酸序列的化合物；或前述任一种的组合。
“IL-2Rγc配体”是指能够以小于100μM的IC50与如人IL-2受体等哺乳动物IL-2受体的IL-2Rγc亚基结合的肽。
“IL-2Rγc配体”或“由本公开提供的IL-2Rγc配体”包含例如具有以下的肽：SEQID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613中的任一个的氨基酸序列；基于SEQ ID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613的截短的氨基酸序列；具有SEQ ID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613以及侧接氨基酸的氨基酸序列；基于SEQ ID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613的具有一个或多个保守或非保守氨基酸取代的氨基酸序列；掺入具有SEQ ID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613的一个或多个氨基酸序列的化合物；或前述任一种的组合。
“IL-2Rβγc配体”或由本公开提供的IL-2Rβγc配体包含例如由本公开提供的至少一种IL-2Rβ配体和由本公开提供的至少一种IL-2Rγc配体。
包括具有SEQ ID NO:的氨基酸序列的配体是指具有以下的配体：由SEQ ID NO:鉴定的氨基酸序列；基于SEQ ID NO:的截短的氨基酸序列；具有SEQ ID NO:和侧接氨基酸的氨基酸序列；具有一个或多个保守或非保守氨基酸取代的基于SEQ ID NO:的氨基酸序列；掺入具有SEQ ID NO:的一个或多个氨基酸序列的化合物；或前述任一种的组合。
“hu-IL-2Rβ亚基”是指人(智人)白细胞介素-2受体亚基β前体NCBI参考序列NP_000689.1。
“hu-IL-2Rγc亚基”是指人(智人)白细胞介素-2受体亚基γc前体NCBI参考序列NP_000197.1。
“cyno-IL-2Rβ亚基”是指食蟹猴白细胞介素-2受体亚基β前体NCBI参考序列NP_001244989.1。
“cyno-IL-2Rγc亚基”是指食蟹猴白细胞介素-2受体亚基α前体NCBI参考序列XP_005593949。
重组“配体融合蛋白”是指通过重组DNA技术制备的蛋白质，其中哺乳动物IL-2受体的配体的翻译阅读框与另一种蛋白质，即，IL-2R配体融合配偶体的翻译阅读框融合，以产生单一重组多肽。配体融合蛋白可以包括IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体、IL-2Rβγc配体和/或串联IL-2Rβγc配体。融合配偶体可以是IgG分子的Fc结构域，其中IL-2Rβγc配体与Fc结构的两个C末端连接。配体融合蛋白可以包含肽基连接子，如位于构成融合蛋白的IL-2R配体与融合蛋白配偶体之间，使得肽基连接子氨基酸序列不源自IL-2R配体或融合蛋白配偶体中的任一个的氨基酸序列。肽基连接子可以作为间隔子掺入到融合蛋白中，以促进正确的蛋白质折叠和组成的蛋白质部分的稳定性，改善蛋白质表达和/或使两个融合配偶体具有更好的生物活性。肽基连接子可以包含例如柔性肽或刚性肽。
“IL-2Rβγc配体”是指由一个或多个IL-2Rβ配体和一个或多个IL-2Rγc配体组成或包括其的化合物。一个或多个IL-2Rβ配体和一个或多个IL-2Rγc配体可以与IL-2Rβγc配体连接子结合。IL-2Rβγc配体可以包括包含两个或更多个IL-2Rβγc配体的串联IL-2Rβγc配体，或其可以包括同时与IL-2Rβ亚基和IL-2Rγc亚基两者结合的单一配体。IL-2Rβγc配体能够以小于100μM的IC50与IL-2R的IL-2Rβ亚基和IL-2Rγc亚基结合。
“IL-2Rβγc配体构建体”是指包括与构建体配偶体结合的一个或多个IL-2Rβγc配体的化合物。IL-2Rβγc配体构建体还包含其中一个或多个IL-2Rβ配体和一个或多个IL-2Rγc配体与构建体配偶体结合的化合物。
“IL-2Rβγc结合化合物”是指能够与IL-2Rβ和IL-2Rγc亚基两者以及包括IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体的构建体结合并且包含IL-2Rβγc配体、串联IL-2Rβγc配体、IL-2Rβγc配体构建体的化合物。IL-2Rβγc结合化合物可以以例如小于100μM，如小于10μM、小于1μM或小于0.1μM的IC50与IL-2Rβ亚基和IL-2Rγc亚基两者结合。
生物电子等排体是符合电子等排体最广泛定义的原子或分子。生物电子等排性的概念是基于具有化学和物理相似性的单个原子、基团、部分或整个分子产生相似的生物效应的概念。亲本化合物的生物电子等排体仍可以被其适当的靶标识别和接受，但与亲本分子相比，其功能将发生改变。受生物电子等排替代影响的参数包含例如尺寸、构象、感应和中介效应、极化率、静电相互作用能力、电荷分布、氢键形成能力、pKa(酸度)、溶解度、疏水性、亲油性、亲水性、极性、效力、选择性、反应性或化学和代谢稳定性、ADME(吸收、分布、代谢和排泄)。尽管在药物中很常见，但亲本分子中的羧基基团或羧酸官能团(-CO2H)可以用合适的替代物或(生物)电子等排体替代，以克服化学或生物学缺陷，同时保留带有一个或多个羧基基团或羧酸官能团(-CO2H)的亲本分子的期望的属性。IL-2Rβγc配体包含由本公开提供的IL-2Rβγc配体的生物电子等排体。
“电子等排体”或“电子等排体替代”是指具有与指定氨基酸相似的物理化学和/或结构性质的任何氨基酸或其它类似物部分。氨基酸的“电子等排体”或“合适的电子等排体”是同一类中的另一种氨基酸，其中基于侧链与像水等极性溶剂接触的倾向，氨基酸属于以下类：疏水性(与水接触的倾向低)、极性或带电荷(与水进行能量上有利的接触)。带电荷的氨基酸残基的实例包含赖氨酸(+)、精氨酸(+)、天冬氨酸盐(-)和谷氨酸盐(-)。极性氨基酸的实例包含丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、组氨酸和酪氨酸。说明性疏水氨基酸包含丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、半胱氨酸和甲硫氨酸。氨基酸甘氨酸不具有侧链并且难以归属于上述类别之一。然而，甘氨酸通常存在于蛋白质表面，通常在环内，为这些区域提供高度灵活性，并且电子等排体可以具有类似的特征。脯氨酸具有相反的效果，从而通过在多肽链的片段上施加一定的扭转角来为蛋白质结构提供刚性。电子等排体可以是氨基酸的衍生物，例如与参考氨基酸相比具有一个或多个经修饰的侧链的衍生物。IL-2Rβγc配体包含由本公开提供的IL-2Rβγc配体的电子等排体。
“环化”是指肽或多肽分子的一部分如通过形成二硫桥或其它类似键，例如内酰胺键而与肽或多肽分子的另一部分连接以形成闭合环的反应。在特定实施例中，本文所描述的肽单体化合物或肽二聚体化合物的单体亚基通过肽单体或单体亚基中存在的两个氨基酸残基之间的分子内键环化。如IL-2Rβγc配体等肽可以包含通过二硫键结合在一起的半胱氨酸，并且因此是环化的IL-2Rβγc配体。
“患者”是指哺乳动物，例如人。
“肽”是指其中单体包含通过酰胺键连接在一起的氨基酸的聚合物。肽可以包括例如少于200个氨基酸、少于100个氨基酸、少于50个氨基酸、少于40个氨基酸、少于30个氨基酸或少于20个氨基酸。肽可以包括天然存在的氨基酸、非天然存在的氨基酸或其组合。
除了仅由天然存在的氨基酸组成的肽之外，还提供了肽模拟物或肽类似物。在结构上与治疗有用的肽相似的肽模拟物可以用于产生等效或增强的治疗或预防效果。通常，肽模拟物在结构上类似于范例肽，例如具有生物学或药理学活性的肽，如天然存在的受体结合肽，但一个或多个肽键任选地通过本领域已知的方法被如以下等键替代：-CH2-NH-、-CH2-S-、-CH2-CH2-、-CH＝CH-(顺式和反式)、-COCH2-、-CH(OH)CH2-和-CH2SO-。
用相同类型的D-氨基酸取代共有序列的一个或多个氨基酸，如D-赖氨酸代替L-赖氨酸可以用于产生更稳定的肽。另外，可以通过本领域已知的方法；例如通过添加能够形成使肽环化的分子内二硫键的内部半胱氨酸残基来产生包括共有序列或基本上相同的共有序列变异的受限肽。
合成的或非天然存在的氨基酸是指在体内不天然存在但可以掺入由本公开提供的肽配体中的氨基酸。合成氨基酸的合适实例包含：天然存在的L-α-氨基酸的D-α-氨基酸以及由式H2NCHR5COOH表示的非天然存在的D-和L-α-氨基酸，其中R5是C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基；6至10个碳原子的芳香族残基，在芳香族环上任选地具有1至3个选自羟基、低级烷氧基、氨基和羧基的取代基；-亚烷基-Y，其中亚烷基是1至7个碳原子的亚烷基，并且Y选自羟基、氨基、具有3至7个碳原子的环烷基和环烯基；6至10个碳原子的芳基，如芳香族环上具有1至3个选自羟基、低级烷氧基、氨基和羧基的取代基；3至7个碳原子和1至2个选自氧、硫和氮的杂原子的杂环；-C(O)R2，其中R2选自氢、羟基、低级烷基、低级烷氧基和-NR3R4，其中R3和R4中的每一个独立地选自氢和低级烷基；-S(O)nR6，其中n为1或2，并且R6为C1-6烷基，条件是R6不定义天然存在的氨基酸的侧链。
其它合成氨基酸的实例包含其中氨基基团与羧基基团被多于一个碳原子隔开的氨基酸，如β-丙氨酸和γ-氨基丁酸。
合适的合成氨基酸的实例包含天然存在的L-氨基酸的D-氨基酸、L-1-萘基-丙氨酸、L-2-萘基丙氨酸、L-环己基丙氨酸、L-2-氨基异丁酸、甲硫氨酸的亚砜和砜衍生物，即HOOC-(H2NCH)CH2CH2-S(O)nR，其中n和R如以上定义，以及甲硫氨酸的低级烷氧基衍生物，即HOOC-(H2NCH)CH2CH2OR，其中R如以上定义。
“N末端”是指与带有羧酸基团的羧基末端相反，肽或多肽的带有氨基基团的末端，如IL-2Rβγc配体、IL-2Rβγc配体构建体、IL-2Rβ配体或IL-2Rγc配体的N末端。
“C末端”是指与带有氨基基团的氨基末端相反，肽或多肽的带有羧酸基团的末端，如IL-2Rβγc配体、IL-2Rβγc配体构建体、IL-2Rβ配体或IL-2Rγc配体的C末端。在某些合成肽中，N末端不带有氨基基团和/或C末端不带有羧基基团。在此类情况下，所述命名是指肽主链的方向。
“药学上可接受的”是指由联邦或州政府的管理机构批准或认可的、或者在美国药典或其它公认的药典中列出的用于动物并且更特别用于人。
“药学上可接受的盐”是指具有亲本化合物的期望的药理学活性的化合物的盐。此类盐包含酸加成盐，其由无机酸和亲本化合物内的一个或多个可质子化官能团，如伯胺、仲胺或叔胺形成。无机酸的实例包含盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸和磷酸。盐可以由例如以下有机酸形成：乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙烷-二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基二环[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、3-苯丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸或粘康酸。在亲本化合物中存在的一个或多个酸性质子被金属离子，例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子或其组合替代；或与如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺或N-甲基葡糖胺等有机碱配位时，可以形成盐。药学上可接受的盐可以是盐酸盐。药学上可接受的盐可以是钠盐。化合物可以具有两个或更多个可电离基团，并且药学上可接受的盐可以包括一种或多种抗衡离子，如双盐，例如二盐酸盐。
“药学上可接受的盐”是指水合物和其它溶剂化物，以及结晶或非结晶形式的盐。在公开了特定的药学上可接受的盐的情况下，应当理解，特定的盐(例如，盐酸盐)是盐的实例，并且可以使用本领域的技术人员已知的技术形成其它盐。另外，使用本领域通常已知的技术将药学上可接受的盐转化成对应的化合物、游离碱和/或游离酸。还参见：Stahl和Wermuth,C.G.(编辑),《药用盐手册(Handbook of Pharmaceutical Salts)》,德国魏因海姆的威利出版社(Wiley-VCH,Weinheim,Germany),2008。
“药学上可接受的媒剂”是指可以与由本公开提供的化合物一起施用于患者并且不破坏其药理活性并且当以足以提供治疗有效量的化合物的剂量施用时是无毒的药学上可接受的稀释剂、药学上可接受的佐剂、药学上可接受的赋形剂、药学上可接受的载体或任何前述物质的组合。
“溶剂化物”是指化合物与化学计量或非化学计量的量的一种或多种溶剂分子的分子复合物。此类溶剂分子是制药领域中常用的已知对患者无害的溶剂分子，例如水、乙醇等。化合物或化合物的部分和溶剂的分子复合物可以通过非共价分子内力，例如静电力、范德华力或氢键来稳定。术语“水合物”是指一种或多种溶剂分子为水的溶剂化物。
“药物组合物”是指如IL-2Rβγc配体或其药学上可接受的盐和IL-2Rβγc配体构建体或其药学上可接受的盐等由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物和至少一种药学上可接受的媒剂，所述媒剂与IL-2Rβγc结合化合物或其药学上可接受的盐一起施用于患者。
“预防(preventing或prevention)”是指降低获得疾病或病症的风险，例如使可以暴露于或易患疾病但还未经历或显示疾病的症状的患者不产生疾病的临床症状中的至少一个临床症状。在一些实施例中，“预防(preventing或prevention)”是指通过以预防方式服用化合物来减轻疾病的症状。
“治疗有效量”是指当施用于患者以治疗疾病或疾病的至少一种临床症状时足以治疗疾病或其症状的化合物的量。“治疗有效量”可以根据例如化合物、疾病和/或疾病的症状、疾病的严重性和/或疾病或病症的症状、待治疗患者的年龄、体重和/或健康状况以及开处方医生的判断而变化。在任何给定情况下的适当量可以由本领域技术人员确定或能够通过常规实验确定。
“治疗有效剂量”是指提供对患者的疾病或病症的有效治疗的剂量。治疗有效剂量可能因化合物与化合物以及患者与患者的不同而不同，并且可以取决于多种因素，如患者的病状和递送途径。治疗有效剂量可以根据本领域的技术人员已知的常规药理学程序来确定。
疾病的“治疗(treating或treatment)”是指阻止或改善疾病或疾病或病症的至少一种临床症状，降低患有疾病或疾病的至少一种临床症状的风险，降低疾病或疾病的至少一种临床症状的发展或降低罹患疾病或疾病的至少一种临床症状的风险。“治疗”还指在物理上(例如，可辨别症状的稳定)、生理上(例如，物理参数的稳定)或在两者上抑制疾病，并指抑制至少一个物理参数或可能对患者可辨别或不可辨别的表现。在某些实施例中，“治疗”是指延迟可能暴露于或易患疾病或病症的患者的疾病或其至少一种或多种症状的发作，即使所述患者尚未经历或表现出疾病的症状。
“Treg”或“Treg细胞”是指调节性T细胞。调节性T细胞是一类抑制其它免疫细胞活性并且使用流式细胞术通过细胞标志物表型CD4+/CD25+/FOXP3+、CD4+CD25+CD127lo或CD4+/CD25+/FOXP3+/CD127lo定义的T细胞。因为FOXP3是细胞内蛋白质并且需要细胞固定和透化才能染色，所以细胞表面表型CD4+CD25+CD127lo-可以用于定义活Treg。Treg还包含各种Treg亚类，如tTreg(胸腺源性)和pTreg(外周源性，从外周的原初T细胞分化而来)。Treg在诱导和维持外周对包含由肿瘤表达的抗原的抗原的自身耐受性中起关键作用。“CD4+ T细胞”是一种淋巴细胞，其通过刺激其它免疫细胞，如巨噬细胞、B淋巴细胞(B细胞)、CD8淋巴细胞(CD8细胞)对抗感染来起到协调免疫应答的作用。CD4+ T细胞识别MHC II类分子上呈递的肽，所述分子存在于抗原呈递细胞上。
与CD4+ T细胞一样，“CD8+(细胞毒性)T细胞”在胸腺中产生并表达T细胞受体。细胞毒性T细胞表达通常包括一个CD8α和一个CD8β链的二聚辅助受体CD8。CD8+T细胞识别由大多数有核细胞上发现的MHC 1类分子呈递的肽。CD8异二聚体在T细胞/抗原呈递细胞相互作用期间与MHC 1类的保守部分结合。CD8+ T细胞(细胞毒性T淋巴细胞或CTL)对于针对包含病毒和细菌的细胞内病原体的免疫防御以及肿瘤监测非常重要。
“NK(自然杀伤)细胞”是先天免疫系统的淋巴细胞并且被归类为I组先天淋巴细胞(ILC)。NK细胞对各种病理攻击具有应答，包含通过杀死病毒感染的细胞以及检测和控制癌症的早期迹象。
“细胞的功能性激活”是指细胞，例如T细胞和NK细胞中IL-2介导的应答。细胞的功能性激活的测定包含刺激pSTAT5、细胞增殖或增殖标志物(如Ki67)、免疫细胞类型比率的变化以及效应子蛋白水平的刺激。
“效应子细胞”是指介导辅助(CD4+细胞)和细胞毒性(CD8+和NK细胞)效应的淋巴细胞群体。效应子细胞包含效应子T细胞，如CD4+辅助T细胞、CD8+细胞毒性T细胞、NK细胞、淋巴因子激活杀伤(LAK)细胞和巨噬细胞/单核细胞。
“原初T细胞”是指在骨髓中分化并在胸腺中经历中心选择的阳性和阴性过程的T细胞。原初T细胞包含原初形式的辅助T细胞(CD4+ T细胞)和原初细胞毒性T细胞(CD8+ T细胞)。原初T细胞的特征通常在于L-选择素(CD62L)和C-C趋化因子受体7型(CCR7)的表面表达和IL-7R(CD127)的表达以及激活标志物CD25、CD44和CD69的缺失。
“记忆T细胞”是包含CD4+和CD8+两者的T淋巴细胞的亚群。记忆T细胞的主要功能是在通过将相关抗原或病原体重新引入体内重新激活这些细胞后快速增强免疫应答。
“抗原结合部分”是指与抗原决定簇特异性结合的多肽分子。例如，抗原结合部分可以将其所连接的实体，如细胞因子或第二抗原结合部分引导到靶位点，例如引导到特定类型的肿瘤细胞或带有抗原决定簇的肿瘤基质。抗原结合部分包含抗体和其片段。抗原结合部分的实例包含抗体的抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包括抗体重链可变区和抗体轻链可变区。抗原结合部分可以包含抗体恒定区。有用的重链恒定区可以包含以下五种同种型中的任何一种：α、δ、ε、y或μ。有用的轻链恒定区可以包含两种同种型K和A中的任何一种。
“多肽”是指由通过酰胺键(也称为肽键)线性连接的单体(氨基酸)构成的分子。术语“多肽”是指两个或更多个氨基酸的任何链，而不是指产物的特定长度。因此，肽、二肽、三肽、寡肽、“蛋白质”、“氨基酸链”或用于指代两个或更多个氨基酸的链的任何其它术语均包含在“多肽”的定义内，并且术语“多肽”可以代替这些术语中的任何术语或与其互换使用。术语“多肽”还旨在指多肽的表达后修饰的产物，包含例如糖基化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、已知保护/封闭基团的衍生化、蛋白水解切割和/或通过非天然存在的氨基酸进行的修饰。多肽可以源自天然生物来源或通过重组技术产生，但不一定由指定的核酸序列翻译而来。可以以任何方式产生多肽，包含通过重组方法或通过化学合成。多肽可以具有例如超过100个氨基酸、超过200个氨基酸、超过500个氨基酸、超过1,000个氨基酸或超过2,000个氨基酸。多肽可以具有确定的三维结构，但是其不一定具有此类结构。具有限定的三维结构的多肽称为折叠的，并且不具有限定的三维结构而是可以采用大量不同构象的多肽称为未折叠的。
“多核苷酸”是指分离的核酸分子或构建体，例如信使RNA(mRNA)、病毒源性RNA或质粒DNA(pDNA)。多核苷酸可以包括常规的磷酸二酯键或非常规的键，如酰胺键，如在肽核酸(PNA)中发现的。
“核酸分子”是指以多核苷酸形式存在的任何一个或多个核酸段，如DNA或RNA片段。
“载体”或“表达载体”与“表达构建体”同义并且是指用于在靶细胞中引入与其可操作地缔合的特定基因并引导所述基因的表达的DNA分子。载体可以是自我复制的核酸结构以及掺入其已被引入的宿主细胞的基因组中的载体。表达载体可以包括表达盒。表达载体允许转录大量稳定的mRNA。一旦表达载体进入靶细胞，核糖核酸分子或由所述基因编码的蛋白质由细胞转录和/或翻译机器产生。表达载体可以包括表达盒，所述表达盒包括编码如由本公开提供的IL-2Rβγc配体或IL-2Rβγc配体构建体等由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物的多核苷酸序列。
“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”是指已引入外源核酸的细胞，包含此类细胞的子代。宿主细胞包含例如“转化子”和“转化细胞”，其包含初级转化细胞和源自初级转化细胞的子代，而不考虑传代次数。
广义上的“抗体”涵盖各种抗体结构，包含例如单克隆抗体、多克隆抗体、如双特异性抗体等多特异性抗体和表现出期望的抗原结合活性的抗体片段。术语“抗体”可以缩写为如表达Fab或抗噬菌体Ab中的“ab”。
“全长抗体”、“完整抗体”和“全抗体”是指具有与天然抗体结构基本上相似的结构或具有含有Fab和Fe区两者的重链的抗体。
“抗体片段”是指除了完整抗体之外的分子，所述分子包括完整抗体的结合所述完整抗体所结合的抗原的部分。抗体片段的实例包含Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、双抗体、线性抗体、如scFv等单链抗体分子和由抗体片段形成的多特异性抗体。双抗体是具有两个抗原结合位点的抗体片段，其可以是二价或双特异性的。抗体片段可以通过各种技术制备，所述技术包含但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及通过如大肠杆菌(E.coli)或噬菌体等重组宿主细胞产生。
“Fab”或“Fab区”是指包括VH、CHI、VL和CL免疫球蛋白结构域的多肽，所述结构域通常位于两条不同的多肽链上，如一条链上的VH-CHl和另一条链上的VL-CL。Fab可以单独指代此区或在双特异性抗体的情况下指代此区。在Fab的情况下，Fab包括除CHI和CL结构域之外的Fv区。
“Fv”或“Fv片段”或“Fv区”是指包括ABD的VL和VH结构域的多肽。Fv区可以被格式化为Fab(通常是还包含恒定区的两种不同的多肽)和scFv，其中vi和vh结构域组合(通常与所讨论的连接子)以形成scFv。
“单链Fv”或“scFv”是指通常使用如本文所讨论的scFv连接子与可变轻结构域共价连接以形成scFv或scFv结构域的可变重结构域。scFv结构域可以与多肽的N末端或C末端处的VL结构域处于任一种取向，而对于VH结构域则相反。
“效应子功能”是指由抗体Fc区与Fc受体或配体相互作用产生的生化事件。效应子功能包含例如抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)和补体依赖性细胞毒性(CDC)。
“Fc”或“Fc区”或“Fc链”是指包括抗体恒定区的多肽，在一些情况下，不包含全部或部分的第一恒定区免疫球蛋白结构域(例如，CHI)或其一部分，并且在一些情况下，进一步不包含铰链的全部或一部分。因此，Fc可以指lgA、IgD和IgG的最后两个恒定区免疫球蛋白结构域(例如，CH2和CH3)、IgE和IgM的最后三个恒定区免疫球蛋白结构域，以及任选地这些结构域的柔性铰链N末端的全部或一部分。对于IgA和IgM，Fc可以包含J链。对于IgG，Fc链包括免疫球蛋白结构域CH2和CH3(Cy2和Cy3)，以及任选地CHI(Cyl)与CH2(Cy2)之间的铰链区的全部或一部分。尽管Fc区的边界可以变化，但是人IgG重链Fc区通常被定义为包含其羧基端的残基E216、C226或A231，其中编号根据如Kabat中的EU索引进行。可以对Fc区进行氨基酸修饰，例如以改变与一种或多种FcyR或FcRn的结合。在对人IgG1进行EU编号时，CH2-CH3结构域包括氨基酸231至447，并且铰链为216至230。因此，Fc链的定义包含氨基酸231至447(CH2-CH3)或216至447(铰链-CH2-CH3)或其片段。Fc片段可以从N末端和C末端中的任一者或两者含有较少氨基酸，其保留与另一个Fc链或Fc片段形成二聚体的能力，如可以使用通常基于大小的标准方法(例如，非变性色谱法、尺寸排阻色谱法等)检测到的。人IgG Fc链是特别有用的，并且可以是来自人IgGl、IgG2或IgG4的Fc链。
“重恒定区”是指抗体或其片段的CH1-铰链-CH2-CH3部分，不包含可变重结构域；在人IgGl的EU编号中，如氨基酸118-447。
“重链恒定区片段”是指从N末端和C末端中的任一者或两者含有较少氨基酸的重链恒定区，其保留与另一个重链恒定区形成二聚体的能力。
“免疫球蛋白”是指具有天然存在的抗体的结构的蛋白质。例如，IgG类免疫球蛋白是约150,000Da的异四聚糖蛋白，由通过二硫键键合在一起的两条轻链和两条重链构成。从N末端到C末端，每条重链具有可变区(VH)，也称为可变重结构域或重链可变结构域，随后是三个恒定结构域(CHI、CH2和CH3)，也称为重链恒定区。同理，从N末端到C末端，每条轻链具有可变区(VL)，也称为可变轻结构域或轻链可变结构域，随后是恒定轻(CL)结构域，也称为轻链恒定区。免疫球蛋白的重链可以归类到称为α(IgA)、Ii(IgD)、E(IgE)、y(IgG)或μ(IgM)的五类之一，其中一些可以进一步分为亚类，例如γ1(IgG1)、γ2(IgG2)、γ3(IgG3)、γ4(gG4)、α1(IgA1)和α2(IgA2)。基于恒定结构域的氨基酸序列，免疫球蛋白的轻链可以被归类为两种类型kappa(k)或lambda(L)之一。免疫球蛋白基本上由通过免疫球蛋白铰链区连接的两个Fab分子和一条Fc链组成。
“免疫缀合物”是指包含至少一个IL-2Rβγc配体和至少一个抗原结合部分的多肽分子。免疫缀合物可以包括至少一个IL-2Rβγc配体和至少两个抗原结合部分。免疫缀合物可以包括至少一个IL-2Rβγc配体和两个由一个或多个连接子序列连接的抗原结合部分。抗原结合部分可以通过多种相互作用和多种构型与IL-2Rβγc配体连接。例如，IL-2Rβγc配体可以通过连接子与抗原结合部分结合。
“连接子”是指将一种化合物与另一种化合物结合的部分。连接子可以包含IL-2Rβγc配体连接子、串联IL-2Rβγc配体连接子和IL-2Rβγc配体构建体连接子。连接子可以是合成连接子。连接子可以是氨基酸连接子。例如，由本公开提供的连接子可以促进IL-2Rβγc配体与IL-2R相互作用、以低IC50与IL-2R结合和/或激活IL-2R的能力。连接子可以包括肽或非肽。非肽连接子包含含有例如源自Cu(I)催化的炔烃和叠氮化物官能团反应的三唑部分的那些连接子。IL-2Rβγc配体连接子是指将如IL-2Rβ配体和/或IL-2Rγc配体等至少一个IL-2R配体与另一个IL-2R配体结合的部分。连接子可以与另一个IL-2R配体结合，所述配体可以是相同的IL-2R配体或不同的IL-2R配体。连接子还可以与提供期望的生理功能的一个或多个另外的部分结合。连接子可以是二价或多价的。连接子可以是水解稳定的或可以包含可生理水解或可酶促降解或可切割的键。连接子可以与IL-2R配体结合以形成二聚体、三聚体或更高级的多配体肽(异聚体)和化合物。
“柔性连接子”是指包括如甘氨酸和丝氨酸等柔性氨基酸的肽基连接子。柔性连接子可以包括例如1至100个氨基酸，如1至50、1至40、1至30、1至20、1至10或1至5个氨基酸，其中每个氨基酸独立地选自甘氨酸和丝氨酸。柔性连接子的实例包含(G)n(SEQ ID NO:9380)、(GS)n(SEQ ID NO:9381)、(GGS)n(SEQ ID NO:9382)、(GGGS)n(SEQ ID NO:9383)或(GGGGS)n(SEQ ID NO:9384)，其中n可以是1至20的整数；(G)n(SEQ ID NO:9385)、(GS)n(SEQID NO:9386)、(GGS)n(SEQ ID NO:9387)、(GGGS)n(SEQ ID NO:9388)或(GGGGS)n(SEQ IDNO:9389)，其中n可以是1至10的整数；或(G)n(SEQ ID NO:9390)、(GS)n(SEQ ID NO:9391)、(GGS)n(SEQ ID NO:9392)、(GGGS)n(SEQ ID NO:9393)或(GGGGS)n(SEQ ID NO:9394)，其中n可以是1至5的整数。柔性连接子可以具有氨基酸序列，例如，(GGGGS)(SEQ ID NO:9395)、(GGGGS)2(SEQ ID NO:9396)、(GGGGS)3(SEQ ID NO:9397)、(GGGGS)4(SEQ ID NO:9398)、(GG)(SEQ ID NO:9399)、(GGG)(SEQ ID NO:9400)、(GGGGG)(SEQ ID NO:9401)、(GGS)(SEQID NO:9402)、(GGGS)(SEQ ID NO:9403)、(GGGGSGG)(SEQ ID NO:9404)、(GGS)2(SEQ IDNO:9405)、(G)5(SEQ ID NO:9406)或(GS)10(SEQ ID NO:9407)。
“刚性连接子”是指富含脯氨酸并且可以包含如丙氨酸、赖氨酸和/或谷氨酸等其它氨基酸的肽基连接子。刚性连接子可以包括例如1至100个氨基酸，如1至50、1至40、1至30、1至20、1至10或1至5个氨基酸，其中每个氨基酸独立地选自脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸和谷氨酸。刚性连接子可以包括例如1至100个氨基酸，如1至50、1至40、1至30、1至20、1至10或1至5个氨基酸，其中每个氨基酸独立地选自脯氨酸和丙氨酸。例如，刚性连接子可以具有序列(P)n(SEQ ID NO:9419)或(PA)n(SEQ ID NO:9418)，其中n是1至50的整数。
刚性连接子可以具有序列(P)n(SEQ ID NO:9420)或(PA)n(SEQ ID NO:9421)，其中n是1至20的整数。刚性连接子可以具有序列(P)n(SEQ ID NO:9422)或(PA)n(SEQID NO:9423)，其中n是1至10的整数。刚性连接子可以具有序列(P)n(SEQ ID NO:9424)或(PA)n(SEQID NO:9425)，其中n是1至5的整数。刚性连接子可以具有序列(PA)5(SEQ ID NO:9426)、(PA)7(SEQ ID NO:9427)、(PA)10(SEQ ID NO:9428)。
刚性连接子的实例包含α螺旋形成连接子和富含脯氨酸的连接子。合适的α螺旋形成连接子的实例包含具有氨基酸序列(EAAAK)n(SEQ ID NO:1450)的肽，其中n可以是例如1至10的整数，如1至5的整数或2至5的整数。合适的富含脯氨酸的连接子的实例包含具有氨基酸序列(PX)n(SEQ ID NO:1440)的肽，其中n是整数，例如，1至20(SEQ ID NO:1441)，如1至15(SEQ ID NO:1442)、1至10(SEQ ID NO:1443)、5至15(SEQ ID NO:1444)或5至10(SEQID NO:1445)，并且每个X可以独立地选自Ala、Lys和Glu。合适的富含脯氨酸的连接子的实例包含具有氨基酸序列(XP)n(SEQID NO:1446)的肽，其中n是整数，例如，1至20(SEQ IDNO:9421)，如1至15(SEQID NO:1448)、1至10(SEQ ID NO:9423)、5至15(SEQ ID NO:1450)或5至10(SEQID NO:1451)，并且每个X可以独立地选自Ala、Lys和Glu。在SEQ IN NO:1440-1451的富含脯氨酸的连接子中，n可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。在SEQIN NO:1440-1451的富含脯氨酸的连接子中，每个X可以是Ala，每个X可以是Lys或者每个X可以是Glu。在SEQ IN NO:1440-1451的富含脯氨酸的连接子中，每个X可以独立地选自Ala、Lys和Glu。刚性连接子可以具有氨基酸序列(PA)n，其中n是1至20的整数(SEQ ID NO:9421)，如1至15(SEQ ID NO:1452)、1至10(SEQ ID NO:9423)、5至15(SEQ ID NO:1453)或5至10(SEQID NO:1454)。刚性连接子可以选自(PA)4(SEQ ID NO:1442)、(PA)5(SEQ ID NO:9426)、(PA)6(SEQ ID NO:1443)、(PA)7(SEQID NO:9427)、(PA)8(SEQ ID NO:1444)、(PA)9(SEQ IDNO:1445)、(PA)10(SEQ ID NO:9428)、(PA)11(SEQ ID NO:1446)和(PA)12(SEQ ID NO:9421)。刚性连接子可以是，例如(PA)nG，其中n是1至20的整数(SEQ ID NO:1460)，或5至15(SEQ IDNO:1461)，如(PA)6G(SEQ ID NO:1462)、(PA)7G(SEQ ID NO:1463)、(PA)8G(SEQ ID NO:1464)、(PA)9G(SEQ ID NO:1465)、(PA)10G(SEQ ID NO:1466)或(PA)10G(SEQ ID NO:1467)。刚性连接子可以具有氨基酸序列，所述氨基酸序列具有2至50个氨基酸并且其中大于10％的氨基酸选自Pro、Arg、Phe、Thre、Glu和Gln。刚性连接子可以具有氨基酸序列，所述氨基酸序列具有例如2至50个氨基酸、5至40、10至30或10至25个氨基酸，并且其中10％至90％、15％至80％、20％至70％或30％至60％的氨基酸独立地选自Pro、Arg、Phe、Thr、Glu和Gln。
“蛋白质”是指至少两个共价连接的氨基酸，其包含蛋白质、多肽、寡肽和肽。另外，构成抗体的多肽可以包含一个或多个侧链或末端的合成衍生化、糖基化、PEG化、循环变换、环化、其它分子的连接子、与蛋白质或蛋白质结构域的融合以及肽标签或标记的添加。当生物功能分子包括两种或更多种蛋白质时，每种蛋白质可以被称为“单体”或“亚基”或“结构域”；并且生物功能分子可以被称为“复合物”。
“结合亲和力”是指单个生物分子与其配体/结合配偶体之间结合相互作用的强度。结合亲和力表示为IC50。例如，IL-2Rβγc结合化合物的结合亲和力是指如使用例如实例中描述的方法确定的IC50。
“氨基酸序列相似性”是指一种氨基酸序列，其中氨基的一个或多个氨基酸已被化学上相似的氨基酸替代。化学上相似的氨基酸的实例包含：(a)具有小疏水侧链的氨基酸，如丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、脯氨酸(P)、丝氨酸(S)或苏氨酸(T)；(b)具有含羟基侧链的氨基酸，如丝氨酸(S)、苏氨酸(T)或酪氨酸(Y)；(c)具有酸性侧链的氨基酸，如天冬氨酸盐(D)或谷氨酸盐(E)；(d)具有极性-中性侧链的氨基酸，如组氨酸(H)、天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)或酪氨酸(Y)；(e)具有碱性侧链的氨基酸，如精氨酸(R)、赖氨酸(K)或组氨酸(H)；(f)具有大疏水侧链的氨基酸，如异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、缬氨酸(V)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)或色氨酸(W)；以及(g)具有芳香族侧链的氨基酸，包括苯丙氨酸(F)、组氨酸(H)、色氨酸(W)或酪氨酸(Y)。化学上相似的氨基酸可以包括天然存在的氨基酸或非天然氨基酸。
“百分比(％)序列相似性”通过比较主题配体和参考配体中相同的氨基酸数量来确定。由本公开提供的配体可以包括例如与参考配体具有大于70％、大于80％或大于90％序列相似性。例如，基于具有SEQ ID NO:9001的参考配体，具有SEQ ID NO:9002-9007的配体具有1、2、3、4或5个氨基酸，其中参考配体的氨基酸已被氨基酸丙氨酸取代或替代。具有SEQ ID NO:9002-9007的配体的特征在于与参考配体分别具有95％、90％、85％、80％、75％或70％序列相似性。
例如，如IL-2Rβγc配体等由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物或者可以具有其中例如，参考氨基酸序列的1至10个氨基酸或1至5个氨基酸被另一个氨基酸取代的氨基酸序列。
例如，源自参考结合化合物的结合化合物可以具有1至5个氨基酸取代、1至4个、1至3个或1至2个氨基酸取代。例如，源自参考结合化合物的结合化合物可以具有1个氨基酸取代、2个氨基酸取代、3个氨基酸取代、4个氨基酸取代或5个氨基酸取代。
氨基酸取代可以独立于其它氨基酸取代。
每个氨基酸取代可以独立地是保守氨基酸取代或非保守氨基酸取代。
例如，参考配体可以具有SEQ ID NO:9011的氨基酸序列。具有SEQ ID NO:9012-9016的配体表示其中具有SEQ ID NO:9011的参考配体已分别被1至5个保守氨基酸取代取代的经取代的配体。
如由本公开提供的IL-2Rβγc配体构建体等IL-2Rβγc结合化合物可以与如由本公开提供的特定SEQ ID NO:鉴定的IL-2Rβγc配体构建体等IL-2Rβγc结合化合物具有例如大于80％、大于85％、大于90％、大于95％、大于96％、大于98％或大于99％序列相似性。
如IL-2Rβ配体、IL-2Rγc配体和IL-2Rβγc配体等由本公开提供的配体可以包括截短的配体。截短的配体是指其中例如从对应参考配体的N末端、C末端或N末端和C末端两者独立地去除1至10或1至5个氨基酸的配体。源自对应参考配体的截短的配体可以独立地使例如1至5个氨基酸，如1至4个氨基酸、1至3个氨基酸或1至2个氨基酸独立地从参考配体的N末端、C末端或N末端和C末端两者去除。源自对应的配体的截短的配体可以独立地使例如，1个氨基酸、2个氨基酸、3个氨基酸、4个氨基酸或5个氨基酸从参考配体的N末端、C末端或N末端和C末端两者去除。
例如，参考配体可以具有SEQ ID NO:9021的氨基酸序列。源自具有SEQ ID NO:9021的参考配体的截短的配体的实例包含具有SEQ ID NO:9022-9029的氨基酸序列的截短的配体。
SEQ ID NO:9022-9024的截短的配体使1至3个氨基酸分别从参考配体的N末端去除；具有SEQ ID NO:9025至9027的截短的结合化合物配体使1至3个氨基酸分别从参考配体的C末端去除；并且具有SEQ ID NO:9028和9029的截短的配体使氨基酸从参考配体的N末端和C末端去除。
作为另一个实例，参考配体可以包括式(A)的氨基酸序列：
-X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-C-X11-X12- (A)
其中每个-X-独立地表示氨基酸。式(A1)-(A5)的氨基酸序列表示源自包括式(A)的氨基酸序列的参考配体的截短的配体的实例：
-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-C-X11-X12- (A1)
-C-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-C-X11-X12- (A2)
-C-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-C- (A3)
-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-C-X11- (A4)
-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10- (A5)
由本公开提供的配体可以包括例如，其中如甘氨酸等1至3个侧接氨基酸独立地与参考配体的N末端、C末端或N末端和C末端两者键合的氨基酸序列。
例如，参考配体可以具有SEQ ID NO:9031。具有SEQ ID NO:9032-9034的配体使1至3个甘氨酸分别与参考配体的N末端键合；具有SEQ ID NO:9035-9037的配体使1至3个甘氨酸分别与参考配体的C末端键合；并且具有SEQ ID NO:9038和9039的配体使1或2个甘氨酸与参考配体的N末端和C末端键合。
由本公开提供的配体可以包括例如一个或多个侧接氨基酸，例如在相应配体的N末端和/或C末端上的侧接甘氨酸基团。例如，配体可以包括具有SEQ ID NO:9380-9407和9419-9428中的任一个的氨基酸序列的一个或多个侧接氨基酸。
“IL-2Rβγc结合化合物”是指由本公开提供的IL-2Rβγc配体、由本公开提供的串联IL-2Rβγc配体、由本公开提供的IL-2Rβγc配体构建体和包括由本公开提供的至少一个IL-2Rβ配体和至少一个IL-2Rγc配体的构建体。IL-2Rβ结合化合物可以以例如小于100μM、小于10μM、小于1μM、小于0.1μM或小于0.01μM的IC50与IL-2Rβ亚基和IL-2Rγc亚基两者结合。
IL-2R、IL-2Rβ亚基和IL-2Rγc亚基分别指哺乳动物IL-2R、IL-2Rβ亚基和IL-2Rγc亚基，如分别指人IL-2R、人IL-2Rβ亚基和人IL-2Rγc亚基。
表达“至少一个”是指“一个或多个”。例如，表达“至少一个”可以指1至10、1至8、1至6、1至5、1至4、1至3或1至2。例如，表达“至少一个”可以指1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
现在详细参考化合物、组合物和方法的某些实施例。所公开的实施例并不旨在限制权利要求。相反，权利要求旨在覆盖所有替代方案、修改和等效物。
白细胞介素-2(IL-2)具有免疫刺激和免疫调节功能两者，在调节免疫应答和维持外周自身耐受性方面发挥至关重要的作用。IL-2主要作为T细胞生长因子并且对于T细胞的增殖和存活以及效应子和记忆T细胞的产生是必需的。IL-2是属于包含IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的结构相关细胞因子家族的四α螺旋束细胞因子。IL-2由激活的CD4+ T细胞响应抗原刺激而产生并且也可以由CD8+ T细胞和如激活的树突细胞(DC)和自然杀伤(NK)细胞等先天免疫细胞产生。
IL-2与各种形式的IL-2受体(IL-2R)结合，特别是单体、二聚体和三聚体形式。单体IL-2R由膜相关IL-2Rα(CD25)链组成，其也以可溶形式存在；然而，IL-2Rα不能诱导信号传导事件。三聚体IL-2R由IL-2Rα、IL-2Rβ(CD122)和IL-2Rγc组成，也被称为共同γ链(γc)或CD132并且为IL-2细胞因子家族的所有成员共享。二聚体IL-2R包括IL-2Rγc和IL-2Rβ亚基。与单体IL-2R相反，二聚体IL-2R和三聚体IL-2R两者的激活导致IL-2结合后的下游信号传导级联。IL-2以高亲和力与三聚体IL-2R结合，但以低-中等亲和力与二聚体IL-2R结合，这随细胞对IL-2的敏感性而变化。另外地，IL-2可以与在激活的树突细胞的表面上表达的IL-2Rα结合，用于反式呈递至包含表达IL-2Rβ和IL-2Rγc亚基两者的抗原特异性原初T细胞和NK细胞的邻近细胞。IL-2的该反式呈递已被证明有助于初始高亲和力IL-2信号传导，这在免疫应答的早期是必需的，以引发原初T细胞产生IL-2。
IL-2首先被IL-2Rα捕获，引起IL-2的构象变化并增加其对IL-2Rβ的亲和力。IL-2与IL-2Rβγc亚基的缔合诱导IL-2Rβ和IL-2Rγc的胞质尾部中的信号传导基序的二聚化，导致Janus激酶JAK1和JAK3的磷酸化/激活，进而对IL-2Rβ亚基的尾部的关键酪氨酸残基产生激酶活性。
下游信号传导通过三种主要通路发生，JAK-STAT通路、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)-AKT通路和丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)通路。这些通路导致靶基因的转录，所述靶基因通过衔接蛋白Shc和转录因子STAT5的募集参与IL-2依赖性生物学作用。IL-2信号传导的靶基因包含细胞周期蛋白D2、bcl-2、fasL、cd25(编码IL-2Rα)、socs1-2和编码转录因子BLIMP1的IL-2沉默基因prdm1。IL-2的负调节子BLIMP1的产生维持了效应子T细胞与Treg细胞之间的平衡，这对免疫稳态很重要。
IL-2通过刺激T细胞的增殖和分化以及通过维持和扩大免疫抑制性Treg细胞群体在T细胞激活中发挥双重作用。原初CD4+和CD8+ T细胞表达二聚体IL-2R，并且因此需要高浓度的IL-2以诱导其初始增殖。一旦被激活，这些T细胞表达高亲和力三聚体IL-2R，驱动T细胞分化为效应子细胞(Teff)或记忆细胞。该分化取决于IL-2信号的强度和持续时间。
在存在低至中等水平的IL-2的情况下的CD8+ T细胞的初级扩增期间，CD8+ T细胞的亚群分化为记忆T细胞。细胞通过下调CD25和上调CD127(IL-7R)和CD62(L-选择素)来实现这一点，其是与再次感染时的次级应答相关的受体。在急性感染期间，持续高水平的IL-2导致CD25的快速上调和CD8+细胞向细胞毒性效应子细胞的分化。上调诱导IL-2驱动的死亡受体fas和fasL的表达，导致病原体清除后激活诱导的细胞死亡(AICD)。对于CD4+ T细胞，IL-2对STAT5信号传导的激活通过调节每种应答的适当受体的表达影响其分化为包含Th1、Th2和Th17的多种辅助T细胞群体。
通过维持FOXP3和CD25的表达，IL-2的稳态或背景水平对于Treg细胞的存活和功能是重要的。Treg细胞天然存在于胸腺中并且在与自身肽接触时被激活。另外地，Treg细胞可以通过在与外周淋巴器官中的抗原相互作用时刺激常规CD4+ T细胞来产生。因为Treg细胞不产生IL-2，所以Treg细胞依赖于如常规T细胞等产生IL-2的细胞。由于其IL-2Rα(CD25)的高表达，Treg能够消耗和限制IL-2的全身浓度，确保免疫平衡的调节。在不存在IL-2的情况下，Treg细胞的数量减少并且效应子T细胞的数量增加，导致对自身免疫和炎性病症的易感性增加。因此，在不激活CD4+或CD8+ T细胞的低水平IL-2下的Treg细胞的独特激活使得IL-2发展成为自身免疫性和炎性疾病的有前途的治疗剂。
免疫系统的双臂产生IL-2突出了这种细胞因子在感染早期以及继发性适应性免疫应答中的重要性。此外，IL-2在保护性免疫和免疫耐受两者中的双重功能使得IL-2在看似相反的疗法中成为潜在的治疗剂，分别作为癌症和自身免疫性疾病的免疫刺激剂和免疫抑制剂。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体包括IL-2Rβ配体、IL-2Rγc配体和将IL-2Rβ和IL-2Rγc配体偶联的IL-2Rβγc配体连接子。IL-2Rβγc配体可以是IL-2R激动剂、部分IL-2R激动剂或IL-2R拮抗剂。因为IL-2Rβγc配体不与IL-2Rα结合，所以IL-2Rβγc配体不优先激活Treg，具有降低受体介导的清除率的潜力，并且可以表现出降低的毒性。
由本公开提供的串联IL-2Rβγc配体包括通过一个或多个串联连接子偶联在一起的两个或更多个IL-2Rβγc配体。
由本公开提供的IL-2Rβγc构建体可以包括至少一个IL-2Rβγc配体，所述配体与称为构建体配偶体的另一分子，例如聚合物、蛋白质、Fc片段、免疫球蛋白片段或抗体偶联。
由本公开提供的IL-2Rβγc构建体可以包括与称为构建体配偶体的另一分子，如聚合物、蛋白质、Fc片段、免疫球蛋白片段或抗体偶联的至少一个IL-2Rβ配体和至少一个IL-2Rγc。
IL-2Rβγc配体可以包括IL-2Rβ配体。合适的IL-2Rβ配体的实例公开于美国专利公开第2020/0040034A1号中，所述美国专利公开通过引用整体并入。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以以例如小于100μM、小于10μM、小于1μM、小于0.1μM或小于0.01μM的IC50与人IL-2Rβ亚基结合。
IL-2Rβ配体可以以例如1pM至100μM、10pM至10μM、100pM至1μM、0.001μM至1μM或0.01μM至1μM的IC50与人IL-2Rβ亚基结合。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以以小于100μM、小于10μM、小于1μM、小于0.1μM或小于0.01μM的IC50与哺乳动物IL-2Rβ亚基结合。
IL-2Rβ配体可以以例如1pM至100μM、10pM至10μM、100pM至1μM、0.001μM至1μM或0.01μM至1μM的IC50与哺乳动物IL-2Rβ亚基结合。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以以例如小于100μM、小于10μM、小于1μM、小于0.1μM或小于0.01μM的IC50与人IL-2Rβ亚基和人IL-2Rγc亚基中的每一个结合。
IL-2β配体可以包括式(1)(SEQ ID NO:805)、式(1a)(SEQ ID NO:806)、式(1b)(SEQ ID NO:807)、式(1c)(SEQ ID NO:808)和/或式(1d)(SEQ ID NO:809)的氨基酸序列：
-X211-X212-X213-X214-C-X215-X216-X217-X218-X219-X220-X221-X222-C-X223-X224-X225- (1)
-X212-X213-X214-C-X215-X216-X217-X218-X219-X220-X221-X222-C-X223-X224- (1a)
-X213-X214-C-X215-X216-X217-X218-X219-X220-X221-X222-C-X223-X224- (1b)
-X214-C-X215-X216-X217-X218-X219-X220-X221-X222-C-X223- (1c)
-C-X215-X216-X217-X218-X219-X220-X221-X222-C- (1d)
其中，X211可以选自氨基酸；X212可以选自包括芳香族侧链的氨基酸；X213可以选自包括大疏水侧链或芳香族侧链的氨基酸；X214可以是P；X215可以选自包括芳香族侧链的氨基酸；X216可以选自包括大疏水侧链的氨基酸；X217可以是A；X218可以选自包括碱性侧链或极性/中性侧链的氨基酸；X219可以选自包括大疏水侧链的氨基酸；X220可以是G；X221可以选自包括酸性侧链或极性/中性侧链的氨基酸；X222可以是L；X223可以是D；X224可以选自包括大疏水侧链的氨基酸；并且X225可以选自包括酸性侧链的氨基酸。
在式(1)、(1a)、(1b)、(1c)和/或(1d)的IL-2Rβ配体中，X211可以选自氨基酸；X212可以选自F、H、W和Y；X213可以选自F、H、I、L、M、V、W和Y；X214可以是P；X215可以选自F、H、W和Y；X216可以选自F、I、L、M、V、W和Y；X217可以是A；X218可以选自K、R、H、N、Q、S、T和Y；X219可以选自F、I、L、M、V、W和Y；X220可以是G；X221可以选自D、E、H、N、Q、S、T和Y；X222可以是L；X223可以是D；X224可以选自F、I、L、M、V、W和Y；并且X225可以选自D和E。
在式(1)的IL-2Rβ配体中，X211可以选自氨基酸。
在式(1)的IL-2Rβ配体中，X211可以选自H、K和R。
在式(1)的IL-2Rβ配体中，X211可以选自H和R。
在式(1)-(1a)的IL-2Rβ配体中，X212可以选自F、H、W和Y。
在式(1)-(1a)的IL-2Rβ配体中，X212可以是W。
在式(1)-(1b)的IL-2Rβ配体中，X213可以选自F、H、I、L、M、V、W和Y。
在式(1)-(1b)的IL-2Rβ配体中，X213可以是L。
在式(1)-(1b)的IL-2Rβ配体中，X213可以是Y。
在式(1)-(1c)的IL-2Rβ配体中，X214可以是P。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配体中，X215可以选自F、H、W和Y。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配体中，X215可以是W。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配体中，X216可以选自F、I、L、M、V、W和Y。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配体中，X216可以是M。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配体中，X217可以是A。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配体中，X218可以选自K、R、H、N、Q、S、T和Y。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配体中，X218可以选自K和R。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配体中，X218可以是Q。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配体中，X219可以选自F、I、L、M、V、W和Y。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配体中，X219可以是L。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配体中，X220可以是G。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配体中，X221可以选自D、E、H、N、Q、S、T和Y。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配体中，X221可以是E。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配体中，X222可以是L。
在式(1)-(1c)的IL-2Rβ配体中，X223可以是D。
在式(1)-(1b)的IL-2Rβ配体中，X224可以选自F、I、L、M、V、W和Y。
在式(1)-(1b)的IL-2Rβ配体中，X224可以是L。
在式(1)-(1a)的IL-2Rβ配体中，X225可以选自D和E。
在式(1)、(1a)、(1b)、(1c)和/或(1d)的IL-2Rβ配体中，X211可以选自H、K和R；X212可以是W；X213可以是Y；X214可以是P；X215可以是W；X216可以是M；X217可以是A；X218可以选自N和Q；X219可以选自L和V；X220可以是G；X221可以选自E、D和Q；X222可以是L；X223可以是D；X224可以选自L和M；并且X225可以选自D和E。
在式(1)、(1a)、(1b)、(1c)和/或(1d)的IL-2Rβ配体中，X211可以选自A、D、E、G、H、L、M、N、Q、R、S、T和V；X212可以选自C、F、W和Y；X213可以选自F、H、K、L、N、Q、R、S、W和Y；X214可以是P；X215可以选自W和Y；X216可以选自F、I、K、L、M、R、S、T和V；X217可以是A；X218可以选自D、E、G、H、K、L、N、Q、R、S和Y；X219可以选自L、P和V；X220可以选自G、H和W；X221可以选自D、E和Q；X222可以选自L和M；X223可以是D；X224可以选自L、M、Q和V；并且X225可以选自A、D、E、F、G、H、L、N、Q、T和V。
在式(1)、(1a)、(1b)、(1c)和/或(1d)的IL-2Rβ配体中，X211可以选自H和R；X212可以选自F和W；X213可以选自F、L、W和Y；X214可以是P；X215可以选自W和Y；X216可以选自F、I、L、M和V；X217可以是A；X218可以选自D、E、H、K、N、Q和R；X219可以选自L和V；X220可以是G；X221可以选自D、E和Q；X222可以选自L和M；X223可以是D；X224可以选自L、M和V；并且X225可以选自D和E。
在式(1)、(1a)、(1b)、(1c)和/或(1d)的IL-2Rβ配体中，X211可以选自H和R；X212可以是W；X213可以是Y；X214可以是P；X215可以是W；X216可以是M；X217可以是A；X218可以是Q；X219可以是L；X220可以是G；X221可以是Q；X222可以是L；X223可以是D；X224可以是L；并且X225可以选自D和E。
在式(1)、(1a)、(1b)、(1c)和/或(1d)的IL-2Rβ配体中，X211可以选自H和R；X212可以是W；X213可以是L；X214可以是P；X215可以是W；X216可以是M；X217可以是A；X218可以是Q；X219可以是L；X220可以是G；X221可以是Q；X222可以是L；X223可以是D；X224可以是L；并且X225可以选自D和E。
在式(1)、(1a)、(1b)、(1c)和/或(1d)的IL-2Rβ配体中，X211可以选自H和R；X212可以是W；X213可以是Y；X214可以是P；X215可以是W；X216可以是M；X217可以是A；X218可以选自K和R；X219可以是L；X220可以是G；X221可以是Q；X222可以是L；X223可以是D；X224可以是L；并且X225可以选自D和E。
IL-2Rβ配体可以包括选自SEQ ID NO:810-903中的任一个的氨基酸序列。
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IL-2Rβ配体可以包括选自SEQ ID NO:805-903中的任一个的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以在N末端、C末端或N末端和C末端两者上以一个或多个氨基酸终止。例如，氨基酸序列可以包含末端甘氨酸和/或丝氨酸。例如，IL-2Rβ配体可以在N末端、C末端或N末端和C末端两者上包括-G-G-部分(SEQ ID NO:9399)。
IL-2Rβ配体可以包括选自SEQ ID NO:805-903中的任一个的氨基酸序列，其中每个氨基酸独立地包括以下保守取代中的一个或多个：具有包括丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、脯氨酸(P)、丝氨酸(S)或苏氨酸(T)的小疏水侧链的氨基酸；具有包括丝氨酸(S)、苏氨酸(T)或酪氨酸(Y)的含羟基侧链的氨基酸；具有包括天冬氨酸(D)或谷氨酸(E)的酸性侧链的氨基酸；具有包括组氨酸(H)、天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)或酪氨酸(Y)的极性-中性侧链的氨基酸；具有包括精氨酸(R)、赖氨酸(K)或组氨酸(H)的碱性侧链的氨基酸；以及具有包括异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、缬氨酸(V)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)或色氨酸(W)的大疏水侧链的氨基酸；以及具有包括苯丙氨酸(F)、组氨酸(H)、色氨酸(W)或酪氨酸(Y)的芳香侧链的氨基酸。
SEQ ID NO:805-903的IL-2Rβ配体可以以小于100μM的IC50与所述人IL-2Rβ亚基结合。
An-IL-2Rβ配体可以包括与SEQ ID NO:805-903中的任一个的氨基酸序列具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％相似性的氨基酸序列。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括SEQ ID NO:805-903中的任一个的截短的氨基酸序列。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括选自SEQ ID NO:805-903中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:805-903中的任一个的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以独立地在N末端、C末端或N末端和C末端两者上包括1至4个甘氨酸(G)(SEQ ID NO:9429)。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括选自SEQ ID NO:805-903中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:805-903中的任一个的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包括一个或多个氨基酸取代，如1至5个氨基酸取代。氨基酸取代可以包括保守氨基酸取代。
IL-2Rβ配体可以包括与SEQ ID NO:805-903中的任一个的氨基酸序列或SEQ IDNO:805-903中的任一个的截短的氨基酸序列具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
SEQ ID NO:805-903中的任一个的IL-2Rβ配体可以以小于10μM的IC50与所述hu-IL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
SEQ ID NO:805-903中的任一个的IL-2Rβ配体、SEQ ID NO:805-903中的任一个的截短的IL-2Rβ配体或SEQ ID NO:805-903中的任一个的经取代的IL-2Rβ配体可以以小于100μM或小于10μM的IC50与所述hu-IL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括式(2)(SEQ ID NO:2575)的氨基酸序列、式(2a)(SEQ ID NO:2576)的氨基酸序列、式(2b)(SEQ ID NO:2577)的氨基酸序列、式(2c)(SEQ ID NO:2578)的氨基酸序列或式(2d)(SEQ ID NO:2579)的氨基酸序列：
-X1-X2-X3-C-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-C-X12-X13-X14- (2)
-X2-X3-C-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-C-X12-X13- (2a)
-X3-C-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-C-X12- (2b)
-C-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-C- (2c)
-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11- (2d)
其中，
X1可以选自E、F、G、I、L、R、S、W和Y；
X2可以选自F、H、K、L、N、Q、S、T、V、W和Y；
X3可以选自E、G、L、P和S；
X4可以选自E、F、G、H、Q、R、S、W和Y；
X5可以选自E、I、K、L、M、N、R、S、T和V；
X6可以选自A、D、G和Y；
X7可以选自A、C、D、E、G、H、K、L、N、Q、R、S和T；
X8可以选自D、F、L、M、P、R和V；
X9可以选自G、R、W和Y；
X10可以选自A、D、E、Q、W和Y；
X11可以选自I、L、Q、V和Y；
X12可以选自D、E、G、H、V和Y；
X13可以选自D、F、H、I、K、L、M和V；并且
X14可以选自A、D、E、G、H、K、L、N、Q、V和W。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配体中，X1可以选自S、W和Y。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配体中，X1可以是W。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配体中，X2可以选自K、L、W和Y。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配体中，X3可以是P。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配体中，X4可以是W。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配体中，X5可以选自I、L和M。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配体中，X6可以是A。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配体中，X7可以是Q。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配体中，X8可以是L。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配体中，X9可以是G。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配体中，X10可以选自D和E。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配体中，X11可以是L。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配体中，X12可以选自D和E。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配体中，X13可以是L。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配体中，X14可以选自D和E。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配体中，IL-2Rβ配体可以通过如紧接着的前述十六(16)个段落中定义的X1至X14的任何组合定义。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配体中，
X1可以选自S、W和Y；
X2可以选自K、L、W和Y；
X3可以是P；
X4可以是W；
X5可以选自I、L和M；
X6可以是A；
X7可以是Q；
X8可以是L；
X9可以是G；
X10可以选自D和E；
X11可以是L；
X12可以选自D和E；
X13可以是L；并且
X14可以选自D和E。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配体中，
X1可以是W；
X2可以选自K、L、W和Y；
X3可以是P；
X4可以是W；
X5可以选自I、L和M；
X6可以是A；
X7可以是Q；
X8可以是L；
X9可以是G；
X10可以选自D和E；
X11可以是L；
X12可以选自D和E；
X13可以是L；并且
X14可以选自D和E。
IL-2Rβ配体可以包括SEQ ID NO:2580-2655中的任一个的氨基酸序列。
/>
/>
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括SEQ ID NO:2575-2655中的任一个的截短的氨基酸序列。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括选自SEQ ID NO:2575-2655中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:2575-2655中的任一个的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以独立地在N末端、C末端或N末端和C末端两者上包括1至4个甘氨酸(SEQ IDNO:9429)。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括选自SEQ ID NO:2575-2655中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:2575-2655中的任一个的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包括一个或多个氨基酸取代，如1至5个氨基酸取代。氨基酸取代可以包括保守氨基酸取代。
IL-2Rβ配体可以包括与SEQ ID NO:2575-2655中的任一个的氨基酸序列或SEQ IDNO:2575-2655中的任一个的截短的氨基酸序列具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
SEQ ID NO:2575-2655中的任一个的IL-2Rβ配体、SEQ ID NO:2575-2655中的任一个的截短的IL-2Rβ配体或SEQ ID NO:2575-2655中的任一个的经取代的IL-2Rβ配体以小于100μM或小于10μM的IC50与所述hu-IL-2Rβ亚基结合和/或以小于100μM或小于10μM的IC50与所述cyno-IL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
SEQ ID NO:2580-2655中的任一个的IL-2Rβ配体以小于100μM的IC50与所述hIL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括式(3)(SEQ ID NO:2661)的氨基酸序列、式(3a)(SEQ ID NO:2662)的氨基酸序列、式(3b)(SEQ ID NO:2663)的氨基酸序列、式(3c)(SEQ ID NO:2664)的氨基酸序列、式(3d)(SEQ ID NO:2665)的氨基酸序列、式(3e)(SEQ IDNO:2666)的氨基酸序列：
-X1-X2-X3-X4-C-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-C-X13-X14-X15-X16-X17- (3)
-X2-X3-X4-C-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-C-X13-X14-X15- (3a)
-X3-X4-C-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-C-X13-X14-(3b)
-X4-C-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-C-X13-(3c)
-C-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-C-(3d)
-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-(3e)
其中，
X1可以选自A、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y；
X2可以选自C、D、F、G、I、L、M、R、S、V、W和Y；
X3可以选自A、D、F、H、K、L、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y；
X4可以选自A、D、F、L、N、P、Q、S、T和W；
X5可以选自D、E、F、G、L、M、Q、R、S、W和Y；
X6可以选自A、F、I、K、L、M、N、Q、R、S、V、W和Y；
X7可以选自A、D、E、I、S、T、V和W；
X8可以选自A、E、F、G、H、K、L、N、P、Q、R、S、V、W和Y；
X9可以选自A、E、I、L、M、P、Q、V和W；
X10可以选自F、G和V；
X11可以选自D、E、N、P、Q、S、V、W和Y；
X12可以选自D、F、H、I、L、M、Q、S、T、V和W；
X13可以选自A、D、E、L、N、Q、S、T和V；
X14可以选自A、E、F、I、K、L、M、Q、R、S、T、V和W；
X15可以选自A、D、E、F、G、I、K、L、N、P、Q、R、T、V、W和Y；
X16可以选自A、C、D、E、F、G、H、I、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y；并且
X17可以选自A、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X1可以选自A、D、E、G、R、S、T、V和W。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X1可以选自G、R和W。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X2可以选自F、L、S、V、W和Y。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X2可以选自F和W。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X3可以选自F、H、K、L、N、Q、W和Y。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X3可以选自F、H、L、W和Y。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X4可以选自D和P。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X5可以选自F、L、S、W和Y。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X5可以选自F、W和Y。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X6可以选自F、I、K、L、M、R和V。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X6可以选自I、L和M。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X7可以是A。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X8可以选自H、K、L、Q、R和S。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X8可以是Q。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X9可以选自I、L和V。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X9可以选自L和V。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X10可以是G。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X11可以选自D和E。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X11可以是E。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X12可以选自L和V。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X12可以是L。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X13可以选自D和E。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X13可以是D。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X14可以选自F、I、L和M。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X14可以是L。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X15可以选自D、E、F、G和V。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X15可以选自D、E、F和G。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X16可以选自D、E、G、K、P、V和W。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X16可以是G。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X17可以选自A、E、G、P、Q、S、T、V和W。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，X17可以是G。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，IL-2Rβ配体可以通过如紧接着的前述三十一(31)个段落中定义的X1至X17的任何组合定义。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，
X1可以选自A、D、E、G、R、S、T、V和W；
X2可以选自F、L、S、V、W和Y；
X3可以选自F、H、K、L、N、Q、W和Y；
X4可以选自D和P；
X5可以选自F、L、S、W和Y；
X6可以选自F、I、K、L、M、R和V；
X7可以是A；
X8可以选自H、K、L、Q、R和S；
X9可以选自I、L和V；
X10可以是G；
X11可以选自D和E；
X12可以选自L和V；
X13可以选自D和E；
X14可以选自F、I、L和M；
X15可以选自D、E、F、G和V；
X16可以选自D、E、G、K、P、V和W；
X17可以选自A、E、G、P、Q、S、T、V和W。在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配体中，
X1可以选自G、R和W；
X2可以选自F和W；
X3可以选自F、H、L、W和Y；
X4可以选自D和P；
X5可以选自F、W和Y；
X6可以选自I、L和M；
X7可以是A；
X8可以是Q；
X9可以选自L和V；
X10可以是G；
X11可以是E；
X12可以是L；
X13可以是D；
X14可以是L；
X15可以选自D、E、F和G；
X16可以是G；并且
X17可以是G。
IL-2Rβ配体可以包括SEQ ID NO:2667-2891中的任一个的氨基酸序列。
/>
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由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括SEQ ID NO:2661-2853和2855-2891中的任一个的截短的氨基酸序列。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括选自SEQ ID NO:2661-2853和2855-2891中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:2661-2853和2855-2891中的任一个的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以独立地在N末端、C末端或N末端和C末端两者上包括1至4个甘氨酸(G)(SEQ ID NO:9429)。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括选自SEQ ID NO:2661-2853和2855-2891中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:2661-2853和2855-2891中的任一个的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包括一个或多个氨基酸取代，如1至5个氨基酸取代。氨基酸取代可以包括保守氨基酸取代。
IL-2Rβ配体可以包括与SEQ ID NO:2661-2853和2855-2891中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:2661-2853和2855-2891中的任一个的截短的氨基酸序列具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
SEQ ID NO:2661-2853和2855-2891中的任一个的IL-2Rβ配体、SEQ ID NO:2661-2853和2855-2891中的任一个的截短的IL-2Rβ配体或SEQ ID NO:2661-2853和2855-2891中的任一个的经取代的IL-2Rβ配体可以以小于100μM或小于10μM的IC50与所述hu-IL-2Rβ亚基结合和/或可以以小于100μM或小于10μM的IC50与所述cyno-IL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
SEQ ID NO:2667-2853和2855-2891中的任一个的IL-2Rβ配体可以以小于100μM的IC50与所述hu-IL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括式(4)(SEQ ID NO:2900)的氨基酸序列、式(4a)(SEQ ID NO:2901)的氨基酸序列、式(4b)(SEQ ID NO:2902)的氨基酸序列、式(4c)(SEQ ID NO:2903)的氨基酸序列、式(4d)(SEQ ID NO:2904)的氨基酸序列、式(4e)(SEQ IDNO:2905)的氨基酸序列或式(4f)(SEQ ID NO:2906)的氨基酸序列：
-X1-X2-X3-X4-X5-C-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-C-X14-X15-X16-X17-X18- (4)
-X2-X3-X4-X5-C-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-C-X14-X15-X16-X17- (4a)
-X3-X4-X5-C-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-C-X14-X15-X16- (4b)
-X4-X5-C-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-C-X14-X15- (4c)
-X5-C-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-C-X14- (4d)
-C-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-C- (4e)
-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13- (4f)
其中，
X1可以选自A、D、E、H、K、N、Q、R和T；
X2可以选自F、G、H、I、L、S、W和Y；
X3可以选自F、I、L和V；
X4可以选自H、K、L、P、R、V和Y；
X5可以是D；
X6可以选自F、L和Y；
X7可以选自F、I、K、L、V和W；
X8可以选自A和V；
X9可以选自K、L、N、Q和R；
X10可以选自A和V；
X11可以是G；
X12可以选自D和E；
X13可以选自L、T和V；
X14可以选自D、E、S和V；
X15可以选自F、I、K和L；
X16可以选自F和W；
X17可以选自D、F、G、I、L、N、P、V；并且
X18可以选自D、G、H、N、Q、S V和W。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配体中，X2可以是W。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配体中，X6可以是F。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配体中，X7可以选自F和L。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配体中，X8可以是A。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配体中，X9可以是K。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配体中，X10可以是V。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配体中，X13可以是L。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配体中，X14可以是D。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配体中，X15可以是L。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配体中，X16可以是F。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配体中，X17可以是L。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配体中，X18可以是W。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配体中，IL-2Rβ配体可以通过如紧接着的前述十二(12)个段落[273]-[286]中定义的X1至X18的任何组合定义。
IL-2Rβ配体可以包括SEQ ID NO:2907-2926中的任一个的氨基酸序列。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括SEQ ID NO:2900-2926中的任一个的截短的氨基酸序列。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括选自SEQ ID NO:2900-2926中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:2900-2926中的任一个的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以独立地在N末端、C末端或N末端和C末端两者上包括1至4个甘氨酸(G)(SEQID NO:9429)。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括选自SEQ ID NO:2900-2926中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:2900-2926中的任一个的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包括一个或多个氨基酸取代，如1至5个氨基酸取代。氨基酸取代可以包括保守氨基酸取代。
IL-2Rβ配体可以包括与SEQ ID NO:2900-2926中的任一个的氨基酸序列或SEQIDNO:2900-2926中的任一个的截短的氨基酸序列具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
SEQ ID NO:2900-2926中的任一个的IL-2Rβ配体、SEQ ID NO:2900-2926中的任一个的截短的IL-2Rβ配体或SEQ ID NO:2900-2926中的任一个的经取代的IL-2Rβ配体可以以小于100μM或小于10μM的IC50与所述hu-IL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
SEQ ID NO:2907-2926中的任一个的IL-2Rβ配体以小于100μM的IC50与所述hu-IL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
具有SEQ ID NO:2575-2655、2667-2853和2855-2891和2900-2926中的任一个的某些IL-2Rβ配体以小于100μM的IC50与所述hu-IL-2Rβ亚基结合并且以小于100μM的IC50与所述cyno-IL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
IL-2Rβ配体可以具有SEQ ID NO:911-930、9301、9308和2930-2941中的任一个的氨基酸序列。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括SEQ ID NO:911-930、9301、9308和2930-2941中的任一个的截短的氨基酸序列。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括选自SEQ ID NO:911-930、9301、9308和2930-2941中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:911-930、9301、9308和2930-2941中的任一个的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以独立地在N末端、C末端或N末端和C末端两者上包括1至4个甘氨酸(G)(SEQ ID NO:9429)。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括选自SEQ ID NO:911-930、9301、9308和2930-2941中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:911-930、9301、9308和2930-2941中的任一个的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包括一个或多个氨基酸取代，如1至5个氨基酸取代。氨基酸取代可以包括保守氨基酸取代。
IL-2Rβ配体可以包括与SEQ ID NO:911-930、9301、9308和2930-2941中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:911-930、9301、9308和2930-2941中的任一个的截短的氨基酸序列具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
SEQ ID NO:911-930、9301、9308和2930-2941中的任一个的IL-2Rβ配体、SEQ IDNO:911-930、9301、9308和2930-2941中的任一个的截短的IL-2Rβ配体或SEQ ID NO:911-930、9301、9308和2930-2941中的任一个的经取代的IL-2Rβ配体可以以小于100μM或小于10μM的IC50与所述hu-IL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
SEQ ID NO:2907-2926中的任一个的IL-2Rβ配体以小于100μM的IC50与所述hu-IL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
IL-2Rβ配体可以选自IL-2Rβ配体(BL1)-(BL12)中的任一个并且可以具有SEQ IDNO:612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875或901，如表1所示。
表1.IL-2Rβ配体。
IL-2Rβ配体可以包括与SEQ ID NO:612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中的任一个的氨基酸序列具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括SEQ ID NO:612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中的任一个的截短的氨基酸序列。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括选自SEQ ID NO:612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中的任一个的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以独立地在N末端、C末端或N末端和C末端两者上包括1至4个甘氨酸(G)(SEQ IDNO:9429)。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括选自SEQ ID NO:612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中的任一个的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包括一个或多个氨基酸取代，如1至5个氨基酸取代。氨基酸取代可以包括保守氨基酸取代。
IL-2Rβ配体可以包括与SEQ ID NO:612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中的任一个的截短的氨基酸序列具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
SEQ ID NO:612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中的任一个的IL-2Rβ配体可以以小于10μM的IC50与所述hu-IL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
SEQ ID NO:612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中的任一个的IL-2Rβ配体、SEQ ID NO:612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中的任一个的截短的IL-2Rβ配体或SEQ ID NO:612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中的任一个的经取代的IL-2Rβ配体可以以小于100μM或小于10μM的IC50与所述hu-IL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
IL-2Rβ配体可以包括：SEQ ID NO:3102的IL-2Rβ配体；具有SEQ ID NO:3102的截短的IL-2Rβ配体；基于具有1至5个保守氨基酸取代的SEQ ID NO:3102的IL-2Rβ配体；与SEQID NO:3102具有大于70％序列同一性的IL-2Rβ配体；在N末端和或C末端上具有1至5个甘氨酸的SEQ ID NO:3102的IL-2Rβ配体；或前述任一种的组合。
IL-2Rβ配体可以包括选自SEQ IS NO:2858和3100-3121中的任一个的氨基酸序列。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括SEQ ID NO:2858和3100-3121中的任一个的截短的氨基酸序列。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括选自SEQ ID NO:2858和3100-3121中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:2661-2891中的任一个的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以独立地在N末端、C末端或N末端和C末端两者上包括1至4个甘氨酸(G)(SEQ IDNO:9429)。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括选自SEQ ID NO:2858和3100-3121中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:2858和3100-3121中的任一个的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包括一个或多个氨基酸取代，如1至5个氨基酸取代。氨基酸取代可以包括保守氨基酸取代。
IL-2Rβ配体可以包括与SEQ ID NO:2858和3100-3121中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:2858和3100-3121中的任一个的截短的氨基酸序列具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
IL-2Rβ配体可以具有SEQ ID NO:2858和3100-3121中的任一个的氨基酸序列，SEQID NO:2858和3100-3121中的任一个的截短的IL-2Rβ配体或SEQ ID NO:2858和3100-3121中的任一个的经取代的IL-2Rβ配体可以以小于100μM或小于10μM的IC50与所述hu-IL-2Rβ亚基结合并且以小于100μM或小于10μM的IC50与所述cyno-IL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
SEQ ID NO:2858和3100-3121中的任一个的IL-2Rβ配体可以以小于100μM的IC50与所述hu-IL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
IL-2Rβ配体可以是SEQ ID NO:3120的截短的配体并且可以具有例如SEQ ID NO:3107、3114和3122-3128中的任一个的氨基酸序列。
IL-2Rβ配体可以包括：SEQ ID NO:2859的IL-2Rβ配体；具有SEQ ID NO:2859的截短的IL-2Rβ配体；基于具有1至5个保守氨基酸取代的SEQ ID NO:2859的IL-2Rβ配体；与SEQID NO:2859具有大于70％序列同一性的IL-2Rβ配体；在N末端和或C末端上具有1至5个甘氨酸的SEQ ID NO:2859的IL-2Rβ配体；或前述任一种的组合。
IL-2Rβ配体可以包括选自SEQ ID NO:2859和3130-3151中的任一个的氨基酸序列。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括SEQ ID NO:2859和3130-3151中的任一个的截短的氨基酸序列。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括选自SEQ ID NO:2859和3130-3151中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:2859和3130-3151中的任一个的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以独立地在N末端、C末端或N末端和C末端两者上包括1至4个甘氨酸(G)(SEQ ID NO:9429)。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括选自SEQ ID NO:2859和3130-3151中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:2859和3130-3151中的任一个的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包括一个或多个氨基酸取代，如1至5个氨基酸取代。氨基酸取代可以包括保守氨基酸取代。
IL-2Rβ配体可以包括与SEQ ID NO:2859和3130-3151中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:2859和3130-3151中的任一个的截短的氨基酸序列具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
SEQ ID NO:2859和3130-3151中的任一个的IL-2Rβ配体、SEQ ID NO:2859和3130-3151中的任一个的截短的IL-2Rβ配体或SEQ ID NO:2859和3130-3151中的任一个的经取代的IL-2Rβ配体可以以小于100μM或小于10μM的IC50与所述hu-IL-2Rβ亚基结合并且以小于100μM或小于10μM的IC50与所述cyno-IL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
SEQ ID NO:2859和3130-3151中的任一个的IL-2Rβ配体可以以小于100μM的IC50与所述hu-IL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括SEQ ID NO:3147中的任一个的氨基酸序列，其中1至3个，如1、2或3个氨基酸被丙氨酸取代。
例如，具有SEQ ID NO:3147的IL-2Rβ配体可以被一(1)个丙氨酸取代并且可以具有SEQ ID NO:3170-3186中的任一个的氨基酸序列。
例如，具有SEQ ID NO:2859的IL-2Rβ配体可以被两(2)个丙氨酸取代并且可以具有SEQ ID NO:31610-3166中的任一个的氨基酸序列。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以包括例如1至5个丙氨酸取代。例如，SEQ ID NO:3102和2859的IL-2Rβ配体可以具有1至5个丙氨酸取代。例如，基于SEQ ID NO:2859的IL-2Rβ配体可以在SEQ ID NO:3160中由X指示的氨基酸位置处具有丙氨酸取代。基于SEQ ID NO:2859的IL-2Rβ配体包含具有氨基酸SEQ ID NO:3161-3166的IL-2Rβ配体。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以以小于100μM、小于10μM、小于1μm、小于100nM、小于10nM或小于1nM的IC50与hu-IL-2Rβ亚基和cyno-IL-2Rβ亚基两者结合。
由本公开提供的以小于100μM的IC50与hu-IL-2Rβ亚基和cyno-IL-2Rβ亚基两者结合的IL-2Rβ配体被称为hu/cyno-IL-2Rβ配体。
hu/cyno-IL-2Rβ配体的实例包含具有SEQ ID NO:2661-2891、2900-2986、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207中的任一个的氨基酸序列的肽。
由本公开提供的某些IL-2Rβ配体可以与hu-IL-2Rβ亚基上的特异性结合位点结合，所述结合位点不同于hu-IL-2Rβ亚基上与IL-2结合的hu-IL-2Rβ结合位点。
这些IL-2Rβ配体不与IL-2竞争与特异性hu-IL-2结合位点结合，不具有与hu-IL-2Rγc亚基可检测的结合，并且以小于100μM或10μM的IC50与hu-IL-2Rβ亚基结合。
hu-IL-2Rβ亚基上的特异性结合位点的特征可以在于至少以下性质：(1)IL-2Rβ配体组以小于100μM或小于10μM的IC50与hu-IL-2Rβ亚基上的特异性结合位点结合；(2)组内的每个IL-2Rβ配体与组内的其它IL-2Rβ配体中的每一个竞争性结合hu-IL-2Rβ亚基上的特异性结合位点；(3)具有SEQ ID NO:1044的氨基酸序列的肽不与IL-2Rβ配体组内的肽竞争结合IL-2Rβ亚基上的特异性结合位点；以及(4)具有SEQ ID NO:58、169和1042的IL-2Rβ配体不与和IL-2Rβ结合的IL-2竞争性结合，从而表明此IL-2Rβ配体结合位点与IL-2的结合位点不同。
IL-2Rβ配体组至少包括具有SEQ ID NO:58、83、142、169、170和663中的任一个的氨基酸序列的IL-2Rβ配体。
具有SEQ ID NO:224的氨基酸序列的IL-2Rγc配体不与IL-2Rβ配体组竞争与特异性结合位点结合。
hu-IL-2Rβ亚基上与IL-2Rβ配体组结合的该特异性结合位点可以使用例如实例27和28中所述的竞争结合测定来表征。
由本公开提供的包含IL-2Rβ配体、IL-2Rβγc配体和IL-2Rβγc构建体的IL-2Rβ结合化合物以小于100μM，如小于10μM、小于1μM或小于0.1μM的IC50与hu-IL-2Rβ的特异性结合位点结合。
具有SEQ ID NO:805-903、911-930、2575-2655、2661-2891、2900-2986、2929-2941、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207的IL-2Rβ配体以小于100μM，如小于10μM、小于1μM或小于0.1μM的IC50与hu-IL-2Rβ的特异性结合位点结合。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以是pH偏向的IL-2Rβ配体。
pH偏向的IL-2Rβ配体可以在pH 6下以比在pH 7.5下用于与IL-2Rβ亚基结合的IC50低至少10％的IC50与IL-2Rβ亚基结合。
例如，在pH 6.0用于与人IL-2Rβ配体结合的IC50可以是0.5μM，并且在pH 7.5下用于与同一IL-2Rβ配体结合的IC50可以是1μM。pH偏向的IL-2Rβ配体可以在pH 6.0下以比在pH7.5下用于与人IL-2Rβ亚基结合的IC50低至少10％，比在pH 7.5下用于与人IL-2Rβ亚基结合的IC50低至少25％、至少50％、至少100％或至少200％的IC50与IL-2Rβ亚基结合。
pH偏向的结合亲和力(IC50)可以如实例24-27中所描述的来确定。
pH偏向的IL-2Rβ配体可以包括例如5至30个氨基酸。
pH偏向的IL-2Rβ配体可以在pH 6.0下例如以1pM至100μM的IC50与人IL-2Rβ亚基结合并且可以在pH 7.5下以大于100μM的IC50与人IL-2Rβ亚基结合。
pH偏向的IL-2Rβ配体可以在pH 6.0下例如以0.1μM至50μM的IC50与人IL-2Rβ亚基结合并且可以在pH 7.5下以大于100μM的IC50与人IL-2Rβ亚基结合。
pH偏向的IL-2Rβ配体可以在pH 6.0下例如以小于100μM的IC50与人IL-2Rβ亚基结合并且可以在pH 7.5下例如以大于100μM的IC50与人IL-2Rβ亚基结合。
pH偏向的IL-2Rβ配体可以在pH 6.0下例如以小于100μM的IC50与哺乳动物IL-2Rβ亚基结合并且可以在pH 7.5下以大于100μM的IC50与人IL-2Rβ亚基结合。
pH偏向的IL-2Rβ配体可以使用实例23和24中所描述的方法来鉴定。这些基于酸性偏向的亲和力选择的方法已经用于鉴定IL-2Rβ配体，所述配体在与实体瘤微环境相当的低于pH 6.5的pH下具有增加的结合亲和力并且在与正常组织相当的高于pH 7.0的pH下具有降低的结合亲和力。
IL-2Rγc配体可以包含在美国申请公开第2020/0040036A1号中公开的IL-2Rγc配体，所述美国申请公开通过引用整体并入。
由本公开提供的IL-2Rγc配体可以以小于100μM、小于10μM、小于1μM、小于0.1μM或小于0.01μM的IC50与人IL-2Rγc亚基结合。
由本公开提供的IL-2Rγc配体可以以1pM至100μM、10pM至10μM、100pM至1μM、0.001μM至1μM或0.01μM至1μM的IC50与人IL-2Rγc亚基结合。
由本公开提供的IL-2Rγc配体可以以例如小于100μM、小于10μM、小于1μM、小于0.1μM或小于0.01μM的IC50与哺乳动物IL-2Rγc亚基结合。
由本公开提供的IL-2Rγc配体可以以例如1pM至100μM、10pM至10μM、100pM至1μM、0.001μM至1μM或0.01μM至1μM的IC50与哺乳动物IL-2Rγc亚基结合。
IL-2Rγc配体可以包括式(5)(SEQ ID NO:944)、式(5a)(SEQ ID NO:945)、式(5b)(SEQ ID NO:946)、式(5c)(SEQ ID NO:947)、式(5d)(SEQ ID NO:948)和/或式(5e)(SEQ IDNO:949)的氨基酸序列：
-X171-X172-X173-X174-X175-C-X176-X177-X178-X179-X180-X181-X182-X183-C-X184-X185-X186-X187-X188- (5)
-X172-X173-X174-X175-C-X176-X177-X178-X179-X180-X181-X182-X183-C-X184-X185-X186-X187-
(5a)
-X173-X174-X175-C-X176-X177-X178-X179-X180-X181-X182-X183-C-X184-X185-X186- (5b)
-X174-X175-C-X176-X177-X178-X179-X180-X181-X182-X183-C-X184-X185- (5c)
-X175-C-X176-X177-X178-X179-X180-X181-X182-X183-C-X184- (5d)
-C-X176-X177-X178-X179-X180-X181-X182-X183-C- (5e)
其中，X171可以选自包括碱性侧链的氨基酸；X172可以选自包括含羟基侧链的氨基酸；X173可以选自包括酸性侧链或大疏水侧链的氨基酸；X174可以选自包括大疏水侧链的氨基酸；X175可以选自包括酸性侧链的氨基酸或大疏水侧链的氨基酸；X176可以选自包括酸性侧链或极性/中性侧链的氨基酸；X177可以选自包括酸性侧链的氨基酸；X178可以选自包括大疏水侧链或芳香族侧链的氨基酸；X179可以选自包括酸性侧链或极性/中性侧链的氨基酸；X180可以是G；X181可以是V；X182可以是E；X183可以是L；X184可以是W；X185可以选自包括大疏水侧链的氨基酸；X186可以是E；X187可以选自氨基酸；并且X188可以选自包括酸性侧链的氨基酸。
在式(5)、(5a)、(5b)、(5c)、(5d)和/或(5e)的IL-2Rγc配体中，X171可以选自H、K和R；X172可以选自S、T和Y；X173可以选自D、E、F、I、L、M、V、W和Y；X174可以选自F、I、L、M、V、W和Y；X175可以选自D、E、F、I、L、M、V、W和Y；X176可以选自D、E、H、N、Q、S、T和Y；X177可以选自D和E；X178可以选自F、H、I、L、M、V、W和Y；X179可以选自D、E、H、N、Q、S、T和Y；X180可以是G；X181可以是V；X182可以是E；X183可以是L；X184可以是W；X185可以选自F、I、L、M、V、W、Y、H、N、Q、S和T；X186可以是E；X187可以选自氨基酸；并且X188可以选自D和E。
在式(5)、(5a)、(5b)、(5c)、(5d)和/或(5e)的IL-2Rγc配体中，X171可以选自D、E、G、H、K、M、N、P、Q、R、S和T；X172可以选自A、D、E、G、I、K、L、P、Q、R、S、T、V、W和Y；X173可以选自A、D、E、F、G、I、Q、S、T、V、W和Y；X174可以选自A、I、E、I、L、M、N、Q、R、S、T和V；X175可以选自A、E、I、L、M、N、Q、R、S、T和V；X176可以选自D、E、H、L、Q、R和V；X177可以选自D、E、N、T和V；X178可以选自F、S、W和Y；X179可以选自A、D、E、G、H、K、N、Q、R和Y；X180可以选自G和R；X181可以是V；X182可以选自D、E和Y；X183可以选自F、I和L；X184可以是W；X185可以选自C、H、I、L、P、Q、T、V和Y；X186可以选自A、D、E、G、M、R、S、T和V；X187可以选自A、D、E、F、G、I、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y；并且X188可以选自A、C、D、E、F、G、I、K、L、N、P、Q、R、S和V。
在式(5)、(5a)、(5b)、(5c)、(5d)和/或(5e)的IL-2Rγc配体中，X171可以选自H、K和R；X172可以选自S、T和Y；X173可以选自D、E、F、I和V；X174可以选自I和V；X175可以选自E、I、L、M和V；X176可以选自D、E和Q；X177可以选自D和E；X178可以选自F和W；X179可以选自D、E、N和Q；X180可以是G；X181可以是V；X182可以选自D和E；X183可以是L；X184可以是W；X185可以选自I、L、Q和V；X186可以选自D和E；X187可以选自A、D、E、F、G、I、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y；并且X188可以选自D、E、N和Q。
在式(5)、(5a)、(5b)、(5c)、(5d)和/或(5e)的IL-2Rγc配体中，X171可以选自K和R；X172可以选自S、T和Y；X173可以选自D、E、F、I和V；X174可以是V；X175可以选自E、L、M和V；X176可以是Q；X177可以选自D和E；X178可以是W；X179可以选自D、E、N和Q；X180可以是G；X181可以是V；X182可以是E；X183可以是L；X184可以是W；X185可以选自I、L、Q和V；X186可以选自D和E；X187可以选自A、D、E、F、G、I、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y；并且X188可以选自D、E、N和Q。
在式(5)的IL-2Rγc配体中，X171可以选自H、K和R。
在式(5)-(5a)的IL-2Rγc配体中，X172可以选自S、T和Y。
在式(5)-(5b)的IL-2Rγc配体中，X173可以选自D、E、F、I、L、M、V、W和Y。
在式(5)-(5b)的IL-2Rγc配体中，X173可以选自D和E。
在式(5)-(5b)的IL-2Rγc配体中，X173可以选自F、I、L、M、V、W和Y。
在式(5)-(5c)的IL-2Rγc配体中，X174可以选自F、I、L、M、V、W和Y。
在式(5)-(5c)的IL-2Rγc配体中，X174可以是V。
在式(5)-(5d)的IL-2Rγc配体中，X175可以选自D、E、F、I、L、M、V、W和Y。
在式(5)-(5d)的IL-2Rγc配体中，X175可以选自D和E。
在式(5)-(5d)的IL-2Rγc配体中，X175可以选自F、I、L、M、V、W和Y。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配体中，X176可以选自D、E、H、N、Q、S、T和Y。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配体中，X176可以选自E和Q。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配体中，X177可以选自D和E。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配体中，X178可以选自F、H、I、L、M、V、W和Y。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配体中，X178可以选自F、H、W和Y。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配体中，X178可以是W。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配体中，X179可以选自D、E、H、N、Q、S、T和Y。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配体中，X179可以选自D、E和Q。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配体中，X180可以是G。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配体中，X181可以是V。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配体中，X182可以是E。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配体中，X183可以是L。
在式(5)-(5d)的IL-2Rγc配体中，X184可以是W。
在式(5)-(5c)的IL-2Rγc配体中，X185可以选自F、I、L、M、V、W和Y。
在式(5)-(5c)的IL-2Rγc配体中，X185可以是L。
在式(5)-(5b)的IL-2Rγc配体中，X186可以是E。
在式(5)-(5a)的IL-2Rγc配体中，X187可以选自氨基酸。
在式(5)的IL-2Rγc配体中，X188可以选自D和E。
在式(5)、(5a)、(5b)、(5c)、(5d)和/或(5e)的IL-2Rγc配体中，X171可以选自H、K和R；X172可以选自S、T和Y；X173可以选自D、E、F、I、L、M、V、W和Y；X174可以选自F、I、L、M、V、W和Y；X175可以选自D、E、F、I、L、M、V、W和Y；X176可以选自D、E、H、N、Q、S、T和Y；X177可以选自D和E；X178可以选自F、H、I、L、M、V、W和Y；X179可以选自D、E、H、N、Q、S、T和Y；X180可以是G；X181可以是V；X182可以是E；X183可以是L；X184可以选自W；X185可以选自F、I、L、M、V、W和Y；X186可以是E；X187可以选自氨基酸；并且X188可以选自D和E。
在式(5)、(5a)、(5b)、(5c)、(5d)和/或(5e)的IL-2Rγc配体中，X171可以选自H、K和R；X172可以选自S、T和Y；X173可以选自D和E；X174可以是V；X175可以选自D和E；X176可以选自E和Q；X177可以选自D和E；X178可以选自F、H、W和Y；X179可以选自D、E和Q；X180可以是G；X181可以是V；X182可以是E；X183可以是L；X184可以是W；X185可以选自F、I、L、M、V、W、Y、H、N、Q、S和T；X186可以是E；X187可以选自氨基酸；并且X188可以选自D和E。
在式(5)、(5a)、(5b)、(5c)、(5d)和/或(5e)的IL-2Rγc配体中，X171可以选自H、K和R；X172可以选自S、T和Y；X173可以选自F、I、L、M、V、W和Y；X174可以是V；X175可以选自F、I、L、M、V、W和Y；X176可以选自E和Q；X177可以选自D和E；X178可以选自F、H、W和Y；X179可以选自D、E和Q；X180可以是G；X181可以是V；X182可以是E；X183可以是L；X184可以是W；X185可以选自F、I、L、M、V、W、Y、H、N、Q、S和T；X186可以是E；X187可以选自氨基酸；并且X188可以选自D和E。
在式(5)、(5a)、(5b)、(5c)、(5d)和/或(5e)的IL-2Rγc配体中，X171可以选自H、K和R；X172可以选自S、T和Y；X173可以选自D、E、F、I、L、M、V、W和Y；X174可以是V；X175可以选自D、E、F、I、L、M、V、W和Y；X176可以选自D、E、H、N、Q、S、T和Y；X176可以选自E和Q；X177可以选自D和E；X178可以是W；X179可以选自D、E和Q；X180可以是G；X181可以是V；X182可以是E；X183可以是L；X184可以是W；X185可以选自F、I、L、M、V、W、Y、H、N、Q、S和T；X186可以是E；X187可以选自氨基酸；并且X188可以选自D和E。
IL-2Rγc配体可以包括选自SEQ ID NO:950-1028中的任一个的氨基酸序列。
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IL-2Rγc配体可以包括选自SEQ ID NO:944-1028中的任一个的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以在N末端、C末端或N末端和C末端两者上以如-G-G-(SEQ ID NO:9399)等侧接氨基酸终止。
IL-2Rβγc配体可以包括选自SEQ ID NO:944-1028中的任一个的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以在N末端、C末端或N末端和C末端两者上以一个或多个氨基酸终止。例如，氨基酸序列可以包含末端甘氨酸和/或丝氨酸。例如，IL-2Rγc配体可以在N末端、C末端或N末端和C末端两者上包括-G-G-(SEQ ID NO:9399)部分。
IL-2Rγc配体可以包括选自SEQ ID NO:944-1028中的任一个的氨基酸序列，其中每个氨基酸独立地包括以下保守取代中的一个或多个：具有包括丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、脯氨酸(P)、丝氨酸(S)或苏氨酸(T)的小疏水侧链的氨基酸；具有包括丝氨酸(S)、苏氨酸(T)或酪氨酸(Y)的含羟基侧链的氨基酸；具有包括天冬氨酸(D)或谷氨酸(E)的酸性侧链的氨基酸；具有包括组氨酸(H)、天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)或酪氨酸(Y)的极性-中性侧链的氨基酸；具有包括精氨酸(R)、赖氨酸(K)或组氨酸(H)的碱性侧链的氨基酸；具有包括异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、缬氨酸(V)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)或色氨酸(W)的大疏水侧链的氨基酸；以及具有包括苯丙氨酸(F)、组氨酸(H)、色氨酸(W)或酪氨酸(Y)的芳香侧链的氨基酸。
SEQ ID NO:944-1028的IL-2Rγc配体以小于100μM的IC50与所述人IL-2Rγc亚基结合。
IL-2Rγc配体可以包括与SEQ ID NO:944-1028中的任一个的氨基酸序列具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％的氨基酸相似性的氨基酸序列。
由本公开提供的IL-2Rγc配体可以包括SEQ ID NO:944-1028中的任一个的截短的氨基酸序列。
由本公开提供的IL-2Rγc配体可以包括选自SEQ ID NO:944-1028中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:944-1028中的任一个的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以独立地在N末端、C末端或N末端和C末端两者上包括1至4个甘氨酸(G)(SEQ ID NO:9429)。
由本公开提供的IL-2Rγc配体可以包括选自SEQ ID NO:944-1028中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:944-1028中的任一个的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包括一个或多个氨基酸取代，如1至5个氨基酸取代。氨基酸取代可以包括保守氨基酸取代。
IL-2Rγc配体可以包括与SEQ ID NO:944-1028中的任一个的氨基酸序列或SEQID NO:944-1028中的任一个的截短的氨基酸序列具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
SEQ ID NO:944-1028中的任一个的IL-2Rγc配体可以以小于10μM的IC50与所述hu-IL-2Rγc亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
SEQ ID NO:944-1028中的任一个的IL-2Rγc配体、SEQ ID NO:944-1028中的任一个的截短的IL-2Rγc配体或SEQ ID NO:944-1028中的任一个的经取代的IL-2Rγc配体可以以小于100μM或小于10μM的IC50与所述hu-IL-2Rγc亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
IL-2Rγc配体可以包括选自具有SEQ ID NO:965、980、981、985、1024、1026和1028的IL-2Rγc配体(GL1)-(GL7)中的任一个的氨基酸序列。这些IL-2Rγc配体的氨基酸序列在表2中示出。
表2.IL-2Rγc配体。
IL-2Rγc配体可以包括与SEQ ID NO:965、980、981、985、1024、1026和1028中的任一个的氨基酸序列具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
由本公开提供的IL-2Rγc配体可以包括SEQ ID NO:965、980、981、985、1024、1026和1028中的任一个的截短的氨基酸序列。
由本公开提供的IL-2Rγc配体可以包括选自SEQ ID NO:965、980、981、985、1024、1026和1028中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:965、980、981、985、1024、1026和1028中的任一个的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以独立地在N末端、C末端或N末端和C末端两者上包括1至4个甘氨酸(G)(SEQ ID NO:9429)。
由本公开提供的IL-2Rγc配体可以包括选自SEQ ID NO:965、980、981、985、1024、1026和1028中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:965、980、981、985、1024、1026和1028中的任一个的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包括一个或多个氨基酸取代，如1至5个氨基酸取代。氨基酸取代可以包括保守氨基酸取代。
IL-2Rγc配体可以包括与SEQ ID NO:965、980、981、985、1024、1026和1028中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:965、980、981、985、1024、1026和1028中的任一个的截短的氨基酸序列具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
SEQ ID NO:965、980、981、985、1024、1026和1028中的任一个的IL-2Rγc配体可以以小于10μM的IC50与所述hu-IL-2Rγc亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
SEQ ID NO:965、980、981、985、1024、1026和1028中的任一个的IL-2Rγc配体、SEQID NO:965、980、981、985、1024、1026和1028中的任一个的截短的IL-2Rγc配体或SEQ IDNO:965、980、981、985、1024、1026和1028中的任一个的经取代的IL-2Rγc配体可以以小于100μM或小于10μM的IC50与所述hu-IL-2Rγc亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
Rγc配体可以具有SEQ ID NO:1032、1034、1042、1044、1051-1060和1601-1613中的任一个。
由本公开提供的Rγc配体可以包括SEQ ID NO:1032、1034、1042、1044、1051-1060和1601-1613中的任一个的截短的氨基酸序列。
由本公开提供的Rγc配体可以包括选自SEQ ID NO:1032、1034、1042、1044、1051-1060和1601-1613中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:1032、1034、1042、1044、1051-1060和1601-1613中的任一个的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以独立地在N末端、C末端或N末端和C末端两者上包括1至4个甘氨酸(G)(SEQ ID NO:9429)。
由本公开提供的Rγc配体可以包括选自SEQ ID NO:1032、1034、1042、1044、1051-1060和1601-1613中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:1032、1034、1042、1044、1051-1060和1601-1613中的任一个的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包括一个或多个氨基酸取代，如1至5个氨基酸取代。氨基酸取代可以包括保守氨基酸取代。
Rγc配体可以包括与SEQ ID NO:1032、1034、1042、1044、1051-1060和1601-1613中的任一个的氨基酸序列或SEQ ID NO:1032、1034、1042、1044、1051-1060和1601-1613中的任一个的截短的氨基酸序列具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
SEQ ID NO:1032、1034、1042、1044、1051-1060和1601-1613中的任一个的Rγc配体、SEQ ID NO:1032、1034、1042、1044、1051-1060和1601-1613中的任一个的截短的Rγc配体或SEQ ID NO:1032、1034、1042、1044、1051-1060和1601-1613中的任一个的经取代的Rγc配体以小于100μM或小于10μM的IC50与所述hRγc亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
SEQ ID NO:1601-1613中的任一个的Rγc配体以小于100μM的IC50与所述hRγc亚基结合。
由本公开提供的某些IL-2Rγc配体可以与IL-2Rγc亚基上的特异性结合位点结合，所述结合位点不同于IL-2Rγc亚基上与IL-2结合的IL-2Rγc结合位点。
这些IL-2Rγc配体不与IL-2竞争与特异性IL-2Rγc结合位点结合，不具有与IL-2Rβ亚基可检测的结合，并且以小于10μM的IC50与IL-2Rγc亚基结合。
IL-2Rγc亚基上的特异性结合位点的特征可以在于至少以下性质：(1)IL-2Rγc配体组以小于10μM的IC50与hu-IL-2Rγc亚基上的特异性结合位点结合；(2)组内的IL-2Rγc配体与组内的其它IL-2Rγc配体竞争性结合IL-2Rγc亚基上的特异性结合位点；以及(3)组内的IL-2Rγc配体不与具有SEQ ID NO:1032的氨基酸序列的IL-2Rγc配体竞争结合所述特异性结合位点。
具有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的IL-2Rβ配体不与IL-2Rγc配体组竞争与结合位点结合。
IL-2Rγc配体组包括具有SEQ ID NO:198、202、224、236、248和266的氨基酸序列的IL-2Rγc配体。
IL-2Rγc配体组内的IL-2Rγc配体以小于100μM的IC50与IL-2Rγc亚基结合并且以大于100μM的IC50与IL-2Rβ亚基结合。
这些IL-2Rγc配体的IL-2Rβ亚基的特异性结合位点可以使用例如实例24-27中所述的竞争结合测定来表征。
由本公开提供的IL-2Rγc配体可以包括pH偏向的IL-2Rγc配体。
pH偏向的IL-2Rγc配体在pH 6下以小于在pH 7.5下用于相同的IL-2Rγc配体与IL-2Rγc亚基结合的IC50的IC50与IL-2Rγc亚基结合。pH偏向的结合亲和力可以如实例24-27中所描述的来确定。
pH偏向的IL-2Rγc配体可以在pH 6下以比在pH 7.5下用于与人IL-2Rγc亚基结合的IC50低至少至少10％，比在pH 7.5下用于与人IL-2Rγc亚基结合的IC50低至少25％、至少50％、至少100％或至少200％的IC50与人IL-2Rγc亚基结合。
pH偏向的IL-2Rγc配体可以包括例如5至30个氨基酸。
pH偏向的IL-2Rγc配体可以在pH 6.0下以1pM至100μM的IC50与人IL-2Rγc亚基结合并且可以在pH 7.5下以大于100μM的IC50与人IL-2Rγc亚基结合。
pH偏向的IL-2Rγc配体可以在pH 6.0下以0.1μM至50μM的IC50与人IL-2Rγc亚基结合并且在pH 7.5下以大于100μM的IC50与人IL-2Rγc亚基结合。
pH偏向的IL-2Rγc配体可以在pH 6.0下以小于100μM的IC50与人IL-2Rγc亚基结合。
pH偏向的IL-2Rγc配体可以在pH 7.5下以小于100μM的IC50与人IL-2Rγc亚基和人IL-2Rγc亚基中的每一个结合并且以大于100μM的IC50与人IL-2Rγc亚基结合。
pH偏向的IL-2Rγc配体可以在pH 6.0下以小于100μM的IC50与哺乳动物IL-2Rγc亚基结合并且在pH 7.5下以大于100μM的IC50与人IL-2Rγc亚基结合。
pH偏向的IL-2Rγc配体可以使用实例23和24中所描述的方法来鉴定。
IL-2Rβ配体、IL-2Rγc配体和IL-2Rβγc配体可以不包括与配体的N末端和/或C末端结合的任何侧接氨基酸。
IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体可以包括一个或多个与配体的N末端和/或C末端结合的侧接氨基酸。
侧接氨基酸可以将与IL-2R相互作用的配体部分与配体、IL-2Rβγc配体和/或配体构建体的其它部分分开。
配体可以包括与配体的N末端和/或C末端结合的侧接氨基酸，例如1至20个氨基酸、1至10个氨基酸，如1至8个氨基酸、2至6个氨基酸或2至4个氨基酸。
侧接氨基酸可以包括任何合适的天然存在的或非天然存在的氨基酸。
侧接氨基酸可以选自丝氨酸和如丝氨酸等柔性氨基酸。
配体可以包括侧接氨基酸，例如在相应配体的N末端和/或C末端上的末端甘氨酸基团。例如，配体可以包括具有SEQ ID NO:9380-9407和9419-9428中的任一个的氨基酸序列的侧接氨基酸。例如，IL-2Rβ配体、IL-2Rγc配体或IL-2Rβγc配体可以独立地包括侧接氨基酸，如1、2或3个末端甘氨酸。
IL-2Rβ配体、IL-2Rγc配体和IL-2Rβγc配体可以包括与IL-2Rβ和IL-2Rγc配体的N末端和/或C末端结合的例如1至20个氨基酸、1至10个氨基酸，如1至8个氨基酸、2至6个氨基酸或2至4个氨基酸。
侧接氨基酸可以包括任何合适的天然存在的或非天然存在的氨基酸。
侧接氨基酸可以选自柔性氨基酸，如甘氨酸和丝氨酸。IL-2Rβ配体和/或IL-2Rγc配体可以包括例如在相应配体的N末端和/或C末端上的末端甘氨酸基团。例如，IL-2Rβ和IL-2Rγc配体可以包括(G)n甘氨酸基团(SEQ ID NO:9380)，其中n是1至20。例如，IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体中的每一个可以独立地包括1、2或3个末端甘氨酸基团。例如，具有SEQID NO:878、具有氨基酸序列-W-H-P-C-W-I-A-Q-L-G-E-L-C-D-L-E-的配体可以独立地在N末端和C末端两者上包含例如一个、两个或三个甘氨酸，使得配体可以分别具有氨基酸序列-G-W-H-P-C-W-I-A-Q-L-G-E-L-C-D-L-E-G-(SEQ ID NO:1209)、-G-G-W-H-P-C-W-I-A-Q-L-G-E-L-C-D-L-E-G-G-(SEQ ID NO:1210)或-G-G-G-W-H-P-C-W-I-A-Q-L-G-E-L-C-D-L-E-G-G-G-(SEQ ID NO:1211)。
由本公开提供的IL-2Rβ配体、IL-2Rγc配体和IL-2Rβγc配体可以包括例如氨基酸取代，如1至10个氨基酸取代，1至8个、1至6个、1至4个，如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸取代。氨基酸取代可以是保守氨基酸取代。
配体可以包括截短的氨基酸序列。
截短的氨基酸序列是指不包含末端氨基酸中的一个或多个的氨基酸序列。例如，在截短的肽中，一个或多个氨基酸从N末端、C末端或N末端和C末端两者去除。从由本公开提供的氨基酸序列的N末端和/或C末端去除一个或多个氨基酸可以导致性质的改善。因此，如由本公开提供的IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体等配体包含截短的IL-2Rβ配体和截短的Rγc配体。
基于SEQ ID NO:9301的截短的IL-2Rβ配体的实例包含具有SEQ ID NO:9301-9314、865和612中的任一个的氨基酸序列的配体。
基于SEQ ID NO:9340的截短的IL-2Rγc配体的实例包含具有SEQ ID NO:9340-9353和965中的任一个的氨基酸序列的配体。
由本公开提供的IL-2Rβ配体可以与SEQ ID NO:805-903中的任一个具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性。由本公开提供的IL-2Rβ配体可以与SEQ ID NO:865具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性。
由本公开提供的IL-2Rγc配体可以与SEQ ID NO:944-1028中的任一个具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性。由本公开提供的IL-2Rγc配体可以与SEQ ID NO:965具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性。
由本公开提供的IL-2Rβ配体、IL-2Rγc配体和IL-2Rβγc配体可以在N末端包括乙酰基末端基团并且在C末端包括羧酰胺基团。
IL-2Rβγc配体可以包括与IL-2Rβγc配体连接子结合的IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体。
IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体中的每一个可以通过相应配体的N末端或C末端独立地与IL-2Rβγc配体连接子共价结合。例如，IL-2Rβ配体可以通过N末端与IL-2Rβγc配体连接子结合并且IL-2Rγc配体可以通过N末端与IL-2Rβγc配体连接子结合；IL-2Rβ配体可以通过N末端与IL-2Rβγc配体连接子结合并且IL-2Rγc配体可通过C末端与IL-2Rβγc配体连接子结合；IL-2Rβ配体可以通过C末端与IL-2Rβγc配体连接子结合并且IL-2Rγc配体可以通过N末端与IL-2Rβγc配体连接子结合；或者IL-2Rβ配体可以通过C末端与IL-2Rβγc配体连接子结合并且IL-2Rγc配体可以通过C末端与IL-2Rβγc连接子结合。
具有IL-2Rβ和IL-2Rγc配体的各种取向的IL-2Rβγc配体的实例在图1中示出。如图1所示，可以使用点击化学合成具有IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体的各种C/N取向的IL-2Rβγc配体。三唑键是IL-2Rγc配体连接子的示意性表示，其可以包括各种化学部分并且可以具有各种长度和性质。某些非肽基IL-2Rβγc配体连接子的实例在表3中示出。
IL-2Rβγc配体连接子可以被配置成促进IL-2Rβγc配体与IL-2R的IL-2Rβ亚基和IL-2Rγc亚基的结合。例如，IL-2Rβγc配体连接子可以被配置成促进IL-2Rβγc配体对IL-2R的激活。例如，IL-2Rβγc配体可以被配置成在TF-1β细胞和NK-92细胞中诱导IL-2R介导的STAT5磷酸化。
IL-2Rβγc配体连接子的长度可以为例如至/>至/>至 至/>至/>至/>至/>或/>至/>配体连接子的长度可以例如小于/>小于/>小于/>小于/>小于/>小于/>或小于
IL-2Rβγc配体连接子可以包括具有例如2至50个键、2至45个键、2至40个键、2至35个键、2至30个键、2至25个键、2至20个键、4至18个键、6至16个键或8至14个键的主链。IL-2Rβγc配体连接子可以包括具有例如少于50个键、少于40个键、少于30个键、少于20个键或少于10个键的主链。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体连接子可以包括肽基IL-2Rβγc配体或化学IL-2Rβγc连接子。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体连接子可以包括肽基IL-2Rβγc配体连接子。
肽基配体连接子可以包括例如2至100个氨基酸、2至80个氨基酸、2至60个氨基酸、2至40个氨基酸、2至20个氨基酸、5至10个氨基酸或2至5个氨基酸。肽基配体连接子可以包括例如少于100个氨基酸、少于80个氨基酸、少于40个氨基酸、少于20个氨基酸、少于15个氨基酸、少于10个氨基酸或少于5个氨基酸。形成肽基IL-2Rβγc配体连接子的氨基酸可以包括天然存在的氨基酸和/或非天然存在的氨基酸。
肽基IL-2Rβγc配体连接子可以包括例如柔性氨基酸，如甘氨酸、丝氨酸和/或苏氨酸。柔性连接子可以包含如甘氨酸等小的非极性氨基酸或如丝氨酸或苏氨酸等极性氨基酸。这些氨基酸的小尺寸提供了灵活性并允许连接功能结构域的移动。丝氨酸或苏氨酸的掺入可以通过与水分子形成氢键来维持连接子在水溶液中的稳定性，从而减少连接子与蛋白质部分之间的不利相互作用。可以包含如赖氨酸和谷氨酸等氨基酸以提高溶解度。可以选择肽基IL-2Rβγc连接子的长度以提供IL-2Rβ与IL-2Rγc配体之间的合适间隔，从而有利于与IL-2R的期望的相互作用，如增强激动剂活性。柔性连接子的实例包含具有SEQ IDNO:9380-9407中的任一个的氨基酸序列的肽。
肽基IL-2Rβγc配体连接子可以是刚性连接子。刚性连接子可以富含脯氨酸并且可以包含其它氨基酸，如丙氨酸、赖氨酸和/或谷氨酸。刚性肽基配体连接子的实例包含具有SEQ ID NO:9419-9428中的任一个的氨基酸序列的肽。
包括肽基IL-2Rβγc配体连接子的IL-2Rβγc配体可以使用非重组方法，如使用实例1中描述的固相合成来合成，或者可以使用重组DNA技术来合成。
IL-2Rβγc配体连接子可以包括合成化学IL-2Rβγc配体连接子。合成化学IL-2Rβγc配体连接子是指使用化学方法合成并且可以包含氨基酸或可以不包含氨基酸的连接子。合成化学IL-2Rβγc配体连接子可以包括三唑部分。
合成化学配体连接子可以具有例如式(L2)-(L13)的结构，如表3中所示。
表3.IL-2Rβγc合成化学连接子的实例。
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在IL-2Rγc配体连接子(L2)、(L4)-(L7)、(L12)和(L13)中，m和/或n可以是整数，例如1至10。
可以使用点击化学合成化学IL-2Rβγc配体连接子，以提供具有IL-2Rβ和IL-2Rγc配体的各种C/N取向的IL-2Rβγc配体。C/N取向是指与IL-2Rβγc配体连接子键合的IL-2Rβ和IL-2Rγc的末端。例如，对于具有C/N取向的IL-2Rβγc配体，IL-2Rβ配体的C末端与IL-2Rβγc配体连接子键合，并且IL-2Rγc配体的N末端与IL-2Rβγc配体连接子键合。作为另一个实例，对于具有N/C取向的IL-2Rβγc配体，IL-2Rβ配体的N末端与IL-2Rβγc配体连接子键合，并且IL-2Rγc配体的C末端与IL-2Rβγc配体连接子键合。
用于制备具有合成配体连接子的IL-2Rβγc配体的方法的实例在实例2中进行了描述。
可以使用标准固相肽合成和Fmoc保护的氨基酸制备IL-2Rβ和IL-2Rγc配体。可以用Fmoc-炔丙基甘氨酸或2-(Fmoc-NH)-叠氮基-戊酸的活化溶液处理溶胀的树脂，以提供对应的Fmoc保护树脂。含炔烃部分和含叠氮化物部分可以被配置成具有例如期望的长度、刚性/柔性、极性、亲油性和/或空间性质。可以使保护的树脂经受具有HATU活化的Fmoc-氨基酸偶联和Fmoc去除的重复循环，以合成相应的IL-2Rβ配体或IL-2Rγc配体。在从IL-2Rβ或IL-2Rγc配体的最终氨基酸上去除Fmoc并酰化末端胺基基团后，可以将配体从树脂上切割下来并纯化。
含炔烃部分和含叠氮化物部分可以例如在存在CuSO4和金属螯合剂的情况下反应以提供包括合成化学IL-2Rβγc配体连接子的IL-2Rβγc配体。反应的含炔烃部分和含叠氮化物部分形成化学配体连接子。例如，参考表3-5，表4中的式(AL)的含炔烃部分可以与表5中的式(AZ)的含叠氮化物部分反应，以提供表3中的式(L)的化学IL-2Rβγc配体连接子。
使用这种点击化学方法，可以合成包括具有不同N末端和C末端取向的IL-2Rβ和IL-2Rγc配体以及不同配体连接子长度的IL-2Rβγc配体。
表4中提供了含炔烃部分的实例，并且表5中提供了含叠氮化物部分的实例。
表4.含炔烃部分的实例。
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表5.含叠氮化物部分的实例。
IL-2Rβγc配体可以包括N末端和/或C末端修饰以防止或最小化氨肽酶和羧肽酶的降解。末端基团的实例包含N末端上的乙酰基团和C末端上的羧酰胺基团。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体可以包括例如具有式(6)结构的部分：
-BL-L-GL- (6)
其中BL包括IL-2Rβ配体，L包括IL-2Rβγc配体连接子，并且GL包括IL-2Rγc配体。
式(6)的部分可以以小的化学部分终止并且分子量可以例如小于12,000Da、小于11,000Da、小于10,000Da、小于9,000Da、小于8,000Da、小于7,000Da或小于6,000Da。IL-2Rβγc配体的分子量可以为例如6,000Da至12,000Da、7,000Da至11,000Da或8,000Da至10,000Da。
在式(6)的IL-2Rβγc配体中，BL可以包括由本公开提供的IL-2Rβ配体，如具有SEQID NO:805-903中的任一个的氨基酸序列或具有与SEQ ID NO:805-903中的任一个具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性的氨基酸序列的IL-2Rβ配体；GL可以包括由本公开提供的IL-2Rγc配体，如具有SEQ ID NO:944-1028的氨基酸序列或具有与SEQ ID NO:944-1028中的任一个具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性的氨基酸序列的IL-2Rγc配体；并且L可以包括肽基IL-2Rβγc配体连接子或化学IL-2Rβγc配体连接子。合适的肽基IL-2Rβγc配体连接子的实例公开于图21A-21C中，并且合适的非肽基配体连接子的实例公开于表3中。
在式(6)的IL-2Rβγc配体中，IL-2Rβ配体的N末端或C末端可以与IL-2Rβγc配体连接子结合，并且IL-2Rγc配体的N末端或C末端可以与IL-2Rβγc配体连接子结合。例如，IL-2Rβ配体(BL)的C末端可以与连接子(L)结合，并且IL-2Rγc配体(GL)的N末端可与连接子(L)结合。
在式(6)的IL-2Rβγc配体中，IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体中的每一个可以独立地包括一个或多个与配体的N末端和/或C末端结合的侧接氨基酸。例如，IL-2Rβ配体的N末端和C末端两者可以包括(G)n(SEQ ID NO:9380)，其中n是1至10的整数并且IL-2Rγc配体的N末端和C末端两者可以包括-(G)n(SEQ ID NO:9380)。侧接氨基酸可以与IL-2Rβγc配体连接子结合。
式(6)的IL-2Rβγc配体可以在N末端包括乙酰基末端基团和/或在C末端包括羧酰胺基团。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体可以包括式(6a)的结构：
-(A)n-BL-(A)n-L-(A)n-GL-(A)n-(6a)
其中，
每个n独立地是0至10的整数；
BL是IL-2Rβ配体，其包括：
来自SEQ ID NO:805-903、911-930、2575-2655、2661-2891、2900-2926、2929-2941、3100-3128、3130-3151和3147-3186中的任一个的氨基酸序列；
与SEQ ID NO:805-903、911-930、2575-2655、2661-2891、2900-2926、2929-2941、3100-3128、3130-3151和3147-3186中的任一个具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％或大于90％序列同一性的氨基酸序列；
SEQ ID NO:805-903、911-930、2575-2655、2661-2891、2900-2926、2929-2941、3100-3128、3130-3151和3147-3186中的任一个的截短的氨基酸序列；或
前述任一种的组合；
GL是IL-2Rγc配体，其包括：
选自SEQ ID NO:944-1028中的任一个的氨基酸序列；
与SEQ ID NO:944-1028中的任一个具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％或大于90％序列同一性的氨基酸序列；
SEQ ID NO:944-1028中的任一个的截短的氨基酸序列；或
前述任一种的组合；
每个A独立地选自氨基酸；并且
L是包括1至50个氨基酸的肽基配体连接子。
在式(6a)的IL-2Rβγc配体中，IL-2Rβ配体的C末端可以与肽基配体连接子结合，并且IL-2Rγc配体的N末端可以与肽基配体连接子结合。
在式(6a)的IL-2Rβγc配体中，每个n可以独立地选自例如0至8、0至6、0至4或0至2的整数。例如，n可以是0、1、2或3。(A)n表示侧接氨基酸。
每个A可以独立地选自天然存在的或非天然存在的氨基酸。每个A可以独立地选自柔性氨基酸，如甘氨酸和丝氨酸。每个A可以是甘氨酸。
L可以包括例如1至50个氨基酸、1至40个氨基酸、1至30个氨基酸、1至20个氨基酸、1至10个氨基酸或1至5个氨基酸。La可以选自肽基配体连接子。例如，L可以是由本公开提供的肽基配体连接子，如具有SEQ ID NO:9380-9407和9419-9428中的任一个的氨基酸序列的连接子。
L可以包括刚性连接子，如具有氨基酸序列(PA)n或(SEQ ID NO:9440)或(PX)n(SEQID NO:9441)的富含脯氨酸的连接子，其中n是整数，例如1至50、1至40、1至30、1至20，例如1至15、1至10、5至15或5至10，并且每个X可以独立地选自Ala、Lys和Glu。刚性连接子可以选自(PA)4(SEQ ID NO:9442)、(PA)5(SEQ ID NO:9426)、(PA)6(SEQ ID NO:9443)、(PA)7(SEQ ID NO:9427)、(PA)8(SEQ ID NO:9444)、(PA)9(SEQ ID NO:9445)、(PA)10(SEQ ID NO:9428)、{PA)11(SEQ ID NO:9446)和(PA)12(SEQ ID NO:9447)。连接子可以具有结构(PA)8。
具有化学IL-2Rβγc配体连接子的IL-2Rβγc配体的实例列出于图19A-19C中。
具有肽基IL-2Rβγc配体连接子的IL-2Rβγc配体的实例列出于图21A-21C中。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体可以包括二硫键。IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体可以包括至少两个半胱氨酸。IL-2Rβ配体的至少两个半胱氨酸可以通过二硫键结合并且IL-2Rγc配体的至少两个半胱氨酸中的每一个可以通过二硫键结合。
在IL-2Rβγc配体中，IL-2Rβ配体的两个半胱氨酸可以通过二硫键结合在一起和/或IL-2Rγc配体的两个半胱氨酸可以通过二硫键结合在一起。在IL-2Rβγc配体中，IL-2Rβ配体的半胱氨酸可以通过二硫键与IL-2Rγc配体的半胱氨酸结合，或者IL-2Rβ配体的两个半胱氨酸中的每一个可以与IL-2Rγc配体的半胱氨酸结合。例如，在具有式(7)的结构的IL-2Rβγc配体中：
-X-C1-X-C2-X-L-Y-C3-Y-C4-Y-(7)
其中-X-C1-X-C2-X-表示由本公开提供的具有两个半胱氨酸的IL-2Rβ配体的氨基酸序列，如SEQ ID NO:805-903、911-930、2575-2655、2661-2891、2900-2926、2929-2941、3100-3128、3130-3151和3147-3186中的任一个，并且其中X独立地是一个或多个氨基酸，-Y-C3-Y-C4-Y-表示具有两个半胱氨酸的IL-2Rγc配体的氨基酸序列，如SEQ ID NO:944-1028中的任一个并且其中每个Y独立地是一个或多个氨基酸，并且-L-是使IL-2Rβ配体与IL-2Rγc配体偶联的IL-2Rβγc配体连接子。
在式(7)的IL-2Rβγc配体中，C1可以与C2结合并且C3可以通过二硫键与C4结合；C1可以与C3结合并且C2可以通过二硫键与C4结合；或C1可以与C4结合并且C2可以通过二硫键与C3结合。
IL-2Rβγc配体可以包括：由本公开提供的IL-2Rβ配体，如选自SEQ ID NO:805-903、911-930、2575-2655、2661-2891、2900-2926、2929-2941、3100-3128、3130-3151和3147-3186中的任一个的氨基酸序列；由本公开提供的IL-2Rβ配体的IL-2Rβ配体的经取代的氨基酸序列；由本公开提供的在N末端和/或C末端上具有1至5个侧接甘氨酸(SEQ ID NO:9430)的IL-2Rβ配体的氨基酸序列；与由本公开提供的IL-2Rβ配体具有大于60％序列相似性的氨基酸序列；或前述任一种的组合；以及由本公开提供的Rγc配体，如选自SEQ ID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613中的任一个的氨基酸序列；由本公开提供的IL-2Rγc配体的经取代的氨基酸序列；由本公开提供的IL-2Rγc配体的截短的氨基酸序列；由本公开提供的在N末端和/或C末端上具有1至5个侧接甘氨酸(SEQ ID NO:9430)的IL-2Rγc配体的氨基酸序列；与由本公开提供的IL-2Rγc配体具有大于60％序列相似性的氨基酸序列；或前述任一种的组合。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体可以包括：具有SEQ ID NO:865和9301-9314中的任一个的氨基酸序列或与SEQ ID NO:865和9301-9314中的任一个具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性的氨基酸序列的IL-2Rβ配体；以及具有SEQ ID NO:965和9340-9353中的任一个的氨基酸序列或与SEQ ID NO:865和9301-9314中的任一个具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性的氨基酸序列的IL-2Rγc配体。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体可以包括：具有SEQ ID NO:865或与SEQ ID NO:865具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性的氨基酸序列的IL-2Rβ配体；以及具有SEQ ID NO:965或与SEQ ID NO:965具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性的氨基酸序列的IL-2Rγc配体。
在IL-2Rβγc配体中，IL-2Rβ配体的C末端可以与IL-2Rγc配体的N末端连接。
IL-2Rβγc配体可以包括具有SEQ ID NO:865的截短的氨基酸序列的IL-2Rβ配体和具有SEQ ID NO:965的截短的氨基酸序列的IL-2Rγc配体。
IL-2Rβγc配体可以包括具有经取代的SEQ ID NO:865的IL-2Rβ配体和具有经取代的SEQ ID NO:965的IL-2Rγc配体，其中取代可以包括1至5个保守氨基酸取代或非保守氨基酸取代，如1至2个保守氨基酸取代或非保守氨基酸取代。
IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体中的每一个可以独立地包括一个或多个侧接氨基酸，如一个或多个甘氨酸。例如，IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体的N末端和C末端中的每一个可以独立地包括1至5个甘氨酸(SEQ ID NO:9430)。
IL-2Rβ配体的N末端可以通过包括例如1至10个氨基酸的柔性连接子与IL-2Rγc配体的C末端偶联。连接子可以是例如具有SEQ ID NO:9380-9407和9419-9428中的任一个的氨基酸序列的肽基连接子。
IL-2Rβγc配体可以包括SEQ ID NO:1263的氨基酸序列(-GGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG-)或与SEQ ID NO:1263具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性的氨基酸序列。
IL-2Rβγc配体可以包括SEQ ID NO:1264的氨基酸序列(-WYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQ-)或与SEQ ID NO:1264具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性的氨基酸序列。
IL-2Rβγc配体可以包括SEQ ID NO:1265的氨基酸序列(-WYPCWMAQLGELCDLDGG-X300-GGVVCQDWEGVELCWQ-)或可以包括与SEQ ID NO:1265具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列，其中X300可以包含1至20个氨基酸。例如，X300可以选自具有SEQ ID NO:9380-9407和9419-9428中的任一个的氨基酸序列的肽基连接子。可以选择X300使得SEQ ID NO:1263-1265中的任一个或与SEQ IDNO:1263-1265中的任一个具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性的氨基酸序列的IL-2Rβγc配体是IL-2R的激动剂或IL-2R的部分激动剂。
IL-2Rβγc配体可以包括SEQ ID NO:1266的氨基酸序列(-WYPCWMAQLGELCDLD-X300-VVCQDWEGVELCWQ-)或与SEQ ID NO:1266具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列，其中-X300包含1至30个氨基酸。可以选择-X300使得SEQ ID NO:1266或与SEQ ID NO:1266具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性的氨基酸序列的IL-2Rβγc配体是IL-2R的激动剂或IL-2R的部分激动剂。
在SEQ ID NO:1263-1270中的任一个或与SEQ ID NO:1263-1270中的任一个具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性的氨基酸序列的IL-2Rβγc配体中，IL-2Rβ配体的半胱氨酸可以通过二硫键结合在一起，并且IL-2Rγc配体的半胱氨酸可以通过二硫键结合在一起。在某些IL-2Rβγc配体中，IL-2Rβ配体的半胱氨酸可以与IL-2Rγc配体的半胱氨酸结合。
IL-2Rβγc配体可以包括：选自SEQ ID NO:1263-1270中的任一个的氨基酸序列；SEQ ID NO:1263-1270中的任一个的经取代的氨基酸序列；SEQ ID NO:1263-1270中的任一个的截短的氨基酸序列；在N末端和/或C末端上具有1至5个侧接甘氨酸(SEQ ID NO:9430)的SEQ ID NO:1263-1270中的任一个的氨基酸序列；与SEQ ID NO:1263-1270中的任一个具有大于60％序列相似性的氨基酸序列；或前述任一种的组合。
在具有SEQ ID NO:1265和1270中的任一个的氨基酸序列的IL-2Rβγc配体中，X300可以包含1至20个氨基酸。例如，X300可以选自
具有SEQ ID NO:9380-9407中的任一个的氨基酸序列。例如，X300可以是GGS(SEQIDNO:9402)或GGGGSGG(SEQ ID NO:9404)。例如，X300可以选自具有SEQ ID NO:9419-9428中的任一个的氨基酸序列的肽基连接子。
在具有SEQ ID NO:1266和1270的配体中，每个X301可以独立地包括如甘氨酸等侧接氨基酸，其中每个n独立地是0至5的整数。
具有SEQ ID NO:1263-1270中的任一个的氨基酸序列的IL-2Rβγc配体、IL-2Rβ配体的半胱氨酸可以通过二硫键结合在一起，并且Rγc配体的半胱氨酸可以通过二硫键结合在一起。在某些IL-2Rβγc配体中，IL-2Rβ配体的半胱氨酸可以与Rγc配体的半胱氨酸结合。
IL-2Rβγc配体可以与SEQ ID NO:1263-1270中的任一个具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性。
IL-2Rβγc配体可以包括：选自SEQ ID NO:4070-4085中的任一个的氨基酸序列；SEQ ID NO:4070-4085中的任一个的经取代的氨基酸序列；SEQ ID NO:4070-4085中的任一个的截短的氨基酸序列；在N末端和/或C末端上具有1至5个侧接甘氨酸(SEQ ID NO:9430)的SEQ ID NO:4070-4085中的任一个的氨基酸序列；与SEQ ID NO:4070-4085中的任一个具有大于60％序列相似性的氨基酸序列；或前述任一种的组合。
具有SEQ ID NO:4070-4085中的任一个的氨基酸序列的IL-2Rβγc配体、IL-2Rβ配体的半胱氨酸可以通过二硫键结合在一起，并且Rγc配体的半胱氨酸可以通过二硫键结合在一起。在某些IL-2Rβγc配体中，IL-2Rβ配体的半胱氨酸可以与Rγc配体的半胱氨酸结合。
IL-2Rβγc配体可以与SEQ ID NO:4070-4085中的任一个具有大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性。
在具有SEQ ID NO:4070-4085的IL-2Rβγc配体中，配体连接子可以是另一种配体连接子，如本文所公开的那些中的任一种。
IL-2Rβγc配体可以具有SEQ ID NO:1264和4091-4094中的任一个的氨基酸序列。
具有SEQ ID NO:1264和4091-4094中的任一个的氨基酸序列的IL-2Rβγc配体可以以小于100μM的IC50与hu-IL-2Rβ和hu-IL-2Rγc亚基结合。
IL IL-2Rβγc配体可以具有SEQ ID NO:4095-4099中的任一个的氨基酸序列。
具有SEQ ID NO:4095-4099中的任一个的氨基酸序列的IL-2Rβγc配体可以以小于100μM的IC50与hu-IL-2Rβ亚基和hu-IL-2Rγc亚基结合。
具有SEQ ID NO:1263-1270、4070-4085和4090-4099中的任一个的氨基酸序列的某些IL-2Rβγc配体可以以小于100μM的IC50与hu-IL-2Rβ亚基、hu-IL-2Rγc亚基、cyno-IL-2Rβ亚基和cyno-IL-2Rγc亚基结合。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体可以以1pM至100μM、10pM至10μM、100pM至1μM、0.001μM至1μM或0.01μM至1μM的IC50与如人IL-2R等IL-2R结合。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体可以以小于100μM、小于10μm、小于1μm、小于100pM、小于10pM或小于1pM的IC50与如人IL-2R等IL-2R结合。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体可以以1pM至100μM、10pM至10μM、100pM至1μM、0.001μM至1μM或0.01μM至1μM的IC50与IL-2Rβ亚基和IL-2Rγc亚基中的每一个，如人IL-2Rβ亚基和人IL-2Rγc亚基中的每一个结合。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体可以以小于100μm、小于10μm、小于1μm、小于100pM、小于10pM或小于1pM的IC50与IL-2Rβ亚基和IL-2Rγc亚基中的每一个，如人IL-2Rβ亚基和人IL-2Rγc亚基中的每一个结合。
由本公开提供的IL-2Rγc配体可以表现出在TF-1β细胞和/或NK-92细胞中STAT5磷酸化的EC50例如小于100μM、小于10μM、小于1μM、小于100pM、小于10pM或小于1pM。
由本公开提供的IL-2Rγc配体可以表现出在TF-1β细胞和/或NK-92细胞中STAT5磷酸化的EC50为例如1pM至100μM、10pM至10μM、100pM至1μM、0.001μM至1μM或0.01μM至1μM。
实体瘤表现出与正常组织不同的代谢。实体瘤对糖酵解代谢的依赖程度越高，就会产生酸性更强的肿瘤微环境。例如，实体瘤微环境的pH可以比大多数正常组织低1pH至2pH单位。相对于正常外周组织中的活性，可以利用这种pH差异来增强治疗剂在实体瘤中的活性。
使用合适的pH选择性筛选方法，可以鉴定出在低pH下以比在中性pH下用于结合的IC50低的IC50与IL-2R结合的IL-2Rβ和IL-2Rγc配体。例如，在小于6的pH下用于结合的IC50可以是在大于6的pH下用于结合的IC50的至多1/10或至多1/100。这些pH偏向的IL-2Rβ和/或IL-2Rγc配体可以掺入IL-2Rβγc配体中，以提供pH偏向的IL-2Rβγc配体。
IL-2Rβγc配体可以包括pH偏向的IL-2Rβ配体和/或pH偏向的IL-2Rγc配体。这些pH偏向的IL-2Rβγc配体可以在靶向实体瘤的细胞毒性增加和对正常组织的毒性降低方面表现出增强的治疗指数。
包括pH偏向的IL-2Rβ配体和/或pH偏向的IL-2Rβγc配体的IL-2Rβγc配体可以表现出对IL-2Rβ亚基和/或IL-2Rγc亚基的pH偏向的结合亲和力(IC50)。
例如，pH偏向的IL-2Rβγc配体可以在pH 6下以比在pH 7.5下用于与如人IL-2R等IL-2R结合的IC50低至少至少10％，比在pH 7.5下用于与如人IL-2R等IL-2R结合的IC50低至少25％、至少50％、至少100％或至少200％的IC50与如人IL-2R等IL-2R结合。
pH偏向的IL-2Rβγc配体可以在pH 6.0下以1pM至100μM的IC50与如人IL-2R等IL-2R结合；并且在pH 7.5下以大于100μM的IC50与如人IL-2R等IL-2R结合。
pH偏向的IL-2Rβγc配体可以在pH 6.0下以0.1μM至50μM的IC50与如人IL-2Rγc等IL-2Rγc结合；并且在pH 7.5下以大于100μM的IC50与如人IL-2Rγc等IL-2Rγc结合。
pH偏向的IL-2Rβγc配体可以在pH 6.0下以小于100μM的IC50与如人IL-2Rβγc等IL-2Rγc结合；并且在pH 7.5下以大于100μM的IC50与如人IL-2Rγc等IL-2Rγc结合。
pH偏向的IL-2Rβγc配体可以在pH 6下以小于100μM的IC50与如人IL-2Rβ亚基和IL-2Rγc亚基等IL-2Rβ亚基和IL-2Rγc亚基中的每一个结合，并且在pH 7.5下以大于100μM的IC50与如人IL-2Rβ亚基和IL-2Rγc亚基等IL-2Rβ亚基和IL-2Rγc亚基中的每一个结合。
例如，与中性和高pH环境中的细胞相比，pH偏向的IL-2Rβγc配体可用于选择性激活在如实体瘤等低pH细胞环境中表达IL-2R的细胞。
使用合适的pH选择性筛选方法，可以鉴定出在较低pH下对IL-2R具有较高结合亲和力(较低IC50)和在中性pH下对IL-2R具有较低结合亲和力(较高IC50)的pH偏向的IL-2Rβγc配体。IL-2Rβγc配体、串联IL-2Rγc配体和IL-2Rβγc配体构建体可以一个或多个pH偏向的IL-2Rβ配体和/或一个或多个pH偏向的IL-2Rγc配体。这些pH偏向的IL-2Rβγc配体、pH偏向的串联IL-2Rβγc配体和pH偏向的IL-2Rβγc配体构建体可以表现出反映靶向实体瘤的细胞毒性增加和对正常组织的毒性降低的增强的治疗指数。
类似地，使用pH选择性功能筛选方法，可以选择在如pH 6等较低pH下与在如pH7等较高pH下相比表现出增强的IL-2R激动剂活性的IL-2Rβγc配体和IL-2Rβγc配体构建体。例如，相对于在pH 7.5下的相同IL-2Rβγc配体的EC50，由本公开提供的pH偏向的IL-2Rβγc配体在pH 6.0下可以提供TF-1β细胞和/或NK-92细胞中的STAT5磷酸化的较低EC50。此类pH偏向的IL-2Rβγc配体在较低pH下表现出增强的IL-2R激动剂活性或部分激动剂活性。
例如，pH偏向的IL-2Rβγc配体可以表现出在pH 6下的TF-1β和NK-92细胞中的STAT5磷酸化的EC50比在pH 7.5下的TF-1β和NK-92细胞中的STAT5磷酸化的EC50低至少至少10％，比在pH 7.5下的TF-1β和NK-92细胞中的STAT5磷酸化的EC50低至少25％、至少50％、至少100％或至少200％。
使用类似于实例中所描述的pH选择性筛选方法，可以鉴定具有如其它pH偏向的功能性质或降低的IC50或在pH值高于正常健康组织时的EC50等其它pH偏向的pH偏向的IL-2Rβ配体和/或IL-2Rγc配体，并将其掺入IL-2Rβγc配体中，以提供另外的偏向的IL-2Rβγc配体和IL-2Rβγc配体构建体。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体可以包括SEQ ID NO:4100-4137中的任一个的氨基酸序列。
SEQ ID NO:4100-(G)n-BL-(G)n-X100-(G)n-GL-(G)n-
SEQ ID NO:4101-(G)n-BL-(G)n-(PA)n-(G)n-GL-(G)n-
SEQ ID NO:4102-(G)n-BL-(G)n-(PA)8-(G)n-GL-(G)n-
SEQ ID NO:4103-(G)n-BL-(G)n-X100-(G)n-VVCQDWEGVELCWQ-(G)n-
SEQ ID NO:4104-(G)n-ELLVDCFKVKVGELCDLFF-(G)n-X100-(G)n-GL-(G)n-
SEQ ID NO:4105-(G)n-ELLVDCFKVKVGELCDLFF-(G)n-X100-(G)n-VVCQDWEGVELCWQ-(G)n-
SEQ ID NO:4106-(G)n-ELLVDCFKVKVGELCDLFF-(G)n-(PA)n-(G)n-VVCQDWEGVELCWQ-(G)n-
SEQ ID NO:4107-(G)n-ELLVDCFKVKVGELCDLFF-(G)n-(PA)8-(G)n-VVCQDWEGVELCWQ-(G)n-
SEQ ID NO:4108-(G)n-ELLVDCFKVKVGELCDLFF-G-(PA)n-G-VVCQDWEGVELCWQ-(G)n-
SEQ ID NO:4109-(G)n-ELLVDCFKVKVGELCDLFF-(PA)n-G-VVCQDWEGVELCWQ-(G)n-
SEQ ID NO:4110-(G)n-ELLVDCFKVKVGELCDLFF-G-(PA)n-VVCQDWEGVELCWQ-(G)n-
SEQ ID NO:4111-(G)n-ELLVDCFKVKVGELCDLFF-(PA)n-VVCQDWEGVELCWQ-(G)n-
SEQ ID NO:4112ELLVDCFKVKVGELCDLFF-G-(PA)n-G-VVCQDWEGVELCWQ
SEQ ID NO:4113ELLVDCFKVKVGELCDLFF-G-(PA)n-G-VVCQDWEGVELCWQG
SEQ ID NO:4114ELLVDCFKVKVGELCDLFF-G-(PA)n-G-VVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:4115GELLVDCFKVKVGELCDLFF-G-(PA)n-G-VVCQDWEGVELCWQ
SEQ ID NO:4116GGELLVDCFKVKVGELCDLFF-G-(PA)n-G-VVCQDWEGVELCWQ
SEQ ID NO:4117GGGELLVDCFKVKVGELCDLFF-G-(PA)n-G-VVCQDWEGVELCWQ
SEQ ID NO:4118GGGELLVDCFKVKVGELCDLFF-G-(PA)n-G-VVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:4119GGGELLVDCFKVKVGELCDLFF-G-(PA)8-G-VVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:4120-(G)n-BL-(G)n-X100-(G)n-GL-(G)n-
SEQ ID NO:4121-(G)n-BL-(G)n-X100-(G)n-VVCQDWEGVELCWQ-(G)n-
SEQ ID NO:4122-(G)n-RYVHDCFIAQVGDLCDLFLH-(G)n-X100-(G)n-GL-(G)n-
SEQ ID NO:4123-(G)n-RYVHDCFIAQVGDLCDLFLH-(G)n-X100-(G)n-VVCQDWEGVELCWQ-(G)n-
SEQ ID NO:4124-(G)n-RYVHDCFIAQVGDLCDLFLH-(G)n-(PA)n-(G)n-VVCQDWEGVELCWQ-(G)n-
SEQ ID NO:4125-(G)n-RYVHDCFIAQVGDLCDLFLH-(G)n-(PA)8-(G)n-VVCQDWEGVELCWQ-(G)n-
SEQ ID NO:4126-(G)n-RYVHDCFIAQVGDLCDLFLH-G-(PA)n-G-VVCQDWEGVELCWQ-(G)n-
SEQ ID NO:4127-(G)n-RYVHDCFIAQVGDLCDLFLH-(PA)n-G-VVCQDWEGVELCWQ-(G)n-
SEQ ID NO:4128-(G)n-RYVHDCFIAQVGDLCDLFLH9340-G-(PA)n-VVCQDWEGVELCWQ-(G)n-
SEQ ID NO:4129-(G)n-RYVHDCFIAQVGDLCDLFLH-(PA)n-VVCQDWEGVELCWQ-(G)n-
SEQ ID NO:4130-(G)n-RYVHDCFIAQVGDLCDLFLH-GG-(PA)n-G-VVCQDWEGVELCWQ-(G)n-
SEQ ID NO:4131RYVHDCFIAQVGDLCDLFLH-(PA)n-G-VVCQDWEGVELCWQ
SEQ ID NO:4132RYVHDCFIAQVGDLCDLFLH-(PA)n-G-VVCQDWEGVELCWQG
SEQ ID NO:4133RYVHDCFIAQVGDLCDLFLH-(PA)n-G-VVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:4134GRYVHDCFIAQVGDLCDLFLH-(PA)n-G-VVCQDWEGVELCWQ
SEQ ID NO:4135GGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLH-(PA)n-G-VVCQDWEGVELCWQ
SEQ ID NO:4136GGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLH-(PA)n-G-VVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:4137GGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLH-(PA)8-G-VVCQDWEGVELCWQGG
在SEQ ID NO:4100、4103、4104、4105和4120-4123中的任一个的IL-2Rβγc配体中，X100可以选自如本文所公开的配体连接子，并且(G)n和(PA)n如本文所定义。例如，X100可以是刚性配体连接子，如(P)n(SEQ ID NO:9420)或(PA)n(SEQ ID NO:9421)，其中n是1至20的整数。
具有SEQ ID NO:4100-4137中的任一个的氨基酸序列的IL-2Rβγc配体可以具有例如1至10个氨基酸取代。
IL-2Rβγc配体可以与SEQ ID NO:4100-4137中的任一个的氨基酸序列具有例如大于60％、大于70％、大于80％或大于90％序列相似性。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体可以包括SEQ ID NO:4160-4168中的任一个的氨基酸序列。
具有SEQ ID NO:4160-4168中的任一个的氨基酸序列的IL-2Rβγc配体可以具有例如1至10个氨基酸取代。
IL-2Rβγc配体可以与SEQ ID NO:4160-4168中的任一个的氨基酸序列具有例如大于60％、大于70％、大于80％或大于90％序列相似性。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体可以包括SEQ ID NO:4170-4185中的任一个的氨基酸序列。
/>
具有SEQ ID NO:4170-4185中的任一个的氨基酸序列的IL-2Rβγc配体可以具有例如1至10个氨基酸取代，如1至5个氨基酸取代。
IL-2Rβγc配体可以与SEQ ID NO:4170-4185中的任一个的氨基酸序列具有例如大于60％、大于70％、大于80％或大于90％序列相似性。
IL-2Rβγc配体可以通过使用点击化学将IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体组合来合成。使用点击化学合成的IL-2Rβγc配体的实例包含使用具有结构BGL22、BGL23或BGL24点击化学合成的配体。
BGL22 GGRYVHDCFIAQVGALCDLFLH(PA)8-(L11)-VVCQDWEGVELCWQGG
BGL23 GGRYVHACFIAQVGDLCDLFLH(PA)8-(L11)-VVCQDWEGVELCWQGG
BGL24 GGRYVHDCFIAQVGDLCDLALH(PA)8-(L11)-VVCQDWEGVELCWQGG
在IL-2Rβγc配体BGL22-BGL24中，IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体中的每一个可以独立地具有例如1至5个，如1、2、3、4或5个氨基酸取代。非肽基连接子(L11)的结构在表3中示出。
在IL-2Rβγc配体BGL22-BGL24中，IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体中的每一个可以独立地与IL-2Rβγc配体BGL22-BGL24的配体序列具有大于60％、大于70％、大于80％或大于90％序列相似性。
具有SEQ ID NO:4100-4137、4160-4168和4170-4178中的任一个的氨基酸序列或具有BGL22-BGL24的结构的IL-2Rβγc配体可以以小于100μM、小于10μM、小于1μM或小于100nM的IC50与hu-IL-2Rβ亚基和hu-IL-2Rγc亚基结合。
具有SEQ ID NO:4100-4137、4160-4168和4170-4178中的任一个的氨基酸序列或具有BGL22-BGL24的结构的IL-2Rβγc配体可以以小于100μM、小于10μM、小于1μM或小于100nM的IC50与cyno-IL-2Rβ亚基和cyno-IL-2Rγc亚基结合。
具有SEQ ID NO:4100-4137、4160-4168和4170-4178中的任一个的氨基酸序列或具有BGL22-BGL24的结构的IL-2Rβγc配体可以以小于100μM、小于10μM、小于1μM或小于100nM的IC50与hu-IL-2Rβ亚基、cyno-IL-2Rβ亚基、hu-IL-2Rγc亚基和cyno-IL-2Rγc亚基结合。
具有SEQ ID NO:4100-4137、4160-4168和4170-4178中的任一个的氨基酸序列或具有BGL22-BGL24的结构的IL-2Rβγc配体可以以小于100μM、小于10μM、小于1μM或小于100nM的IC50与hu-IL-2R和cyno-IL-2R结合。
具有SEQ ID NO:4100-4137、4160-4168和4170-4178中的任一个的氨基酸序列或具有BGL22-BGL24的结构的IL-2Rβγc配体可以以小于100μM、小于10μM、小于1μM或小于100nM的EC50激活hu-IL-2R和cyno-IL-2R，如使用在实例中所描述的STAT5磷酸化测定所确定的。
具有SEQ ID NO:4100-4137、4160-4168和4170-4178中的任一个的氨基酸序列或具有BGL22-BGL24的结构的IL-2Rβγc配体可以以小于100μM、小于10μM或小于1μM的IC50与特异性IL-2R结合位点结合。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体可以包括以小于100μM、小于10μM、小于1μM或小于100nM的IC50与hu-IL-2R和cyno-IL-2R两者结合的hu/cyno-IL-2Rβγc配体。hu/cyno-IL-2Rβγc配体可以包括以小于100μM的IC50与hu-IL-2Rβ亚基和cyno-IL-2Rγc亚基两者结合的IL-2Rβ配体，以及以小于100μM的IC50与hu-IL-2Rβ亚基和cyno-IL-2Rγc亚基两者结合的IL-2Rγc配体。
以小于1μM的IC50与hu-IL-2Rβ亚基和cyno-IL-2Rβ亚基两者结合的IL-2Rβ配体被称为hu/cyno-IL-2Rβ配体。
hu/cyno-IL-2Rβγc配体的实例包含具有SEQ ID NO:2661-2891、2900-2986、2100-3128、3130-3151和3147-3186的氨基酸序列的肽。
由本公开提供的hu/cyno-IL-2Rβγc配体可以是hu-IL-2R和cyno-IL-2R两者的激动剂或部分激动剂，如使用在实例中所描述的STAT5磷酸化测定所确定的。例如，hu/cyno-IL-2Rβγc配体可以表现出hu-IL-2R和cyno-IL-2R激活的EC50小于100μM、小于10μM、小于1μM或小于100nM，如使用在实例中所描述的STAT5磷酸化测定所确定的。
由本公开提供的hu-IL-2Rβγc配体可以包括IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体，其中两种配体以小于100μM、小于10μM、小于1μM、小于100nM的IC50与相应hu-IL-2R亚基结合。
由本公开提供的hu-IL-2Rβγc配体可以包括IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体，其中两种配体以小于100μM、小于10μM、小于1μM或小于100nM的IC50与hu-IL-2R结合。
由本公开提供的hu/cyno-IL-2Rβγc配体可以包括IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体，其中两种配体以小于100μM、小于10μM、小于1μM或小于100nM的IC50与相应hu-IL-2R亚基和cyno-IL-2R亚基结合。
如由本公开提供的IL-2Rβγc配体等IL-2Rβγc配体可以包括IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体，其中所述配体以相似的IC50与相应IL-2R亚基和/或IL-2R结合。
例如，在如由本公开提供的IL-2Rβγc配体等IL-2Rβγc配体中，IL-2R亚基结合比率可以是0.1至10或0.3至3。IL-2R亚基结合比率是用于IL-2Rβ配体与hu-IL-2Rβ亚基结合的IC50与用于IL-2Rγc配体与hu-IL-2Rγc亚基结合的IC50的比率。
例如，在如由本公开提供的IL-2Rβγc配体等IL-2Rβγc配体中，IL-2Rβ配体可以以1μM的IC50与hu-IL-2Rβ亚基结合并且IL-2Rγc配体可以以1μM的IC50与hu-IL-2Rγc亚基结合，并且hu-IL-2R亚基结合比率为1。
在如由本公开提供的IL-2Rβγc配体等IL-2Rβγc配体中，IL-2R结合比率可以是例如0.1至10或0.3至3。hu-IL-2R结合比率是用于IL-2Rβ配体与hu-IL-2R结合的IC50与用于IL-2Rγc配体与hu-IL-2R结合的IC50的比率。
例如，在如由本公开提供的IL-2Rβγc配体等IL-2Rβγc配体中，IL-2Rβ配体可以以1μM的IC50与hu-IL-2R结合并且IL-2Rγc亚基可以以1μM的IC50与hu-IL-2R结合，并且hu-IL-2R结合比率为1。
如由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物等IL-2Rβγc结合化合物可以包括IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体，其中所述配体可以以不同的IC50与相应IL-2R亚基和/或IL-2R结合。
例如，在如由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物等IL-2Rβγc结合化合物中，hu-IL-2R亚基结合比率可以是10,000至0.0001、10,000至0.001、3,000至0.001、1,000至0.001、300至0.003、100至0.01或30至0.03。
例如，在如由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物等IL-2Rβγc结合化合物中，hu-IL-2R亚基结合比率可以小于10,000、小于3,000、小于1,000、小于300、小于100、小于30、小于10、小于3、小于1、小于0.3、小于0.1、小于0.03、小于0.01、小于0.003、小于0.001或小于0.0003。
例如，在如由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物等IL-2Rβγc结合化合物中，hu-IL-2R亚基结合比率可以大于0.0001、大于0.0003、大于0.001、大于0.003、大于0.01、大于0.03、大于0.1、大于0.3、大于1、大于3、大于10、大于30、大于100、大于300、大于1,000或大于3,000。
例如，在如由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物等IL-2Rβγc结合化合物中，hu-IL-2R结合比率可以是10,000至0.0001、10,000至0.001、3,000至0.001、1000至0.001、300至0.003、100至0.01或30至0.03。
例如，在如由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物等IL-2Rβγc结合化合物中，hu-IL-2R结合比率可以小于10,000、小于3,000、小于1,000、小于300、小于100、小于30、小于10、小于3、小于1、小于0.3、小于0.1、小于0.03、小于0.01、小于0.003、小于0.001或小于0.0003。
例如，在如由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物等IL-2Rβγc结合化合物中，hu-IL-2R结合比率可以大于0.0001、大于0.0003、大于0.001、大于0.003、大于0.01、大于0.03、大于0.1、大于0.3、大于1、大于3、大于10、大于30、大于100、大于300、大于1,000或大于3,000。
在如由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物等IL-2Rβγc结合化合物中，hu-IL-2R亚基结合比率可以是例如10至10,000、10至3,000、10至1,000或30至300。在如由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物等IL-2Rβγc结合化合物中，hu-IL-2R亚基结合比率可以例如大于10、大于30、大于100、大于300、大于1,000或大于3,000。在由本公开提供的IL-2Rβγc配体中，hu-IL-2R亚基结合比率可以例如小于10,000、小于3,000、小于1,000、小于300、小于100或小于30。
在如由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物等IL-2Rβγc结合化合物中，hu-IL-2R亚基结合比率可以是例如0.1至0.0001、0.1至0.0003、0.1至0.001或0.03至0.003。在如由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物等IL-2Rβγc结合化合物中，hu-IL-2R亚基结合比率可以例如大于0.0001、大于0.0003、大于0.001、大于0.003、大于0.01或大于0.03。在如由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物等IL-2Rβγc结合化合物中，hu-IL-2R亚基结合比率可以例如小于0.1、小于0.03、小于0.01、小于0.003、小于0.001或小于0.0003。
在如由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物等IL-2Rβγc结合化合物中，hu-IL-2R亚基结合比率可以是例如0.1至10或0.3至3。在如由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物等IL-2Rβγc结合化合物中，hu-IL-2R亚基结合比率可以例如大于0.1、大于0.3、大于1或大于3。在如由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物等IL-2Rβγc结合化合物中，hu-IL-2R亚基结合比率可以例如小于10、小于3、小于1或小于0.3。
在如由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物等IL-2Rβγc结合化合物中，hu-IL-2R结合比率可以是例如10至10,000、10至3,000、10至1,000或30至300。在如由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物等IL-2Rβγc结合化合物中，hu-IL-2R结合比率可以例如大于10、大于30、大于100、大于300、大于1,000或大于3,000。在由本公开提供的IL-2Rβγc配体中，hu-IL-2R结合比率可以例如小于10,000、小于3,000、小于1,000、小于300、小于100或小于30。
在如由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物等IL-2Rβγc结合化合物中，hu-IL-2R结合比率可以是例如0.1至0.001或0.03至0.003。在如由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物等IL-2Rβγc结合化合物中，hu-IL-2R结合比率可以例如大于0.001、大于0.003、大于0.01或大于0.03。在如由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物等IL-2Rβγc结合化合物中，hu-IL-2R结合比率可以例如小于0.1、小于0.03、小于0.01或小于0.003。
在如由本公开提供的IL-2Rβγc配体等IL-2Rβγc配体中，hu-IL-2R结合比率可以是例如0.1至10或0.03至3。在如由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物等IL-2Rβγc结合化合物中，hu-IL-2R结合比率可以例如大于0.1、大于0.3、大于1或大于3。在如由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物等IL-2Rβγc结合化合物中，hu-IL-2R结合比率可以例如小于10、小于3、小于1或小于0.3。
用于IL-2与IL-2R亚基结合的IC50比率大于1,000，其中所述比率是用于IL-2与IL-2Rβ亚基结合的IC50与用于IL-2与IL-2Rγc亚基结合的IC50的比率。
用于IL-15与IL-15R亚基结合的IC50比率大于1,000，其中所述比率是用于IL-15与IL-15Rβ亚基结合的IC50与用于IL-15与IL-15Rγc亚基结合的IC50的比率。
IL-2Rβ和IL-2Rγc配体、IL-2、IL-15的结合IC50可以使用实例中所描述的竞争ELISA测定来确定。
由本公开提供的串联IL-2Rβγc配体可以包括两个或更多个IL-2Rβγc配体。两个或更多个IL-2Rβγc配体可以结合在一起以形成线性或非线性结构。例如，串联IL-2Rβγc配体可以具有式(8a)或式(8b)的结构：
BGL-(-Lt1-BGL-)n1-Lt1-BGL(8a)
Lt2{(-Lt1-BGL-)n2-Lt1-BGL}p(9b)
其中，
每个BGL独立地选自IL-2Rβγc配体；并且
Lt1是二价串联连接子；
Lt2可以是p价串联连接子；
n1是1至6的整数；并且
n2是0至6的整数；并且
p是3至8的整数。
在式(8a)和(8b)的串联IL-2Rβγc配体中，每个IL-2Rβγc配体可以是相同的。
在式(8a)和(8b)的串联IL-2Rβγc配体中，至少一个IL-2Rβγc配体可以不同于另一个IL-2Rβγc配体。
在式(8a)和(8b)的串联IL-2Rβγc配体中，每个IL-2Rβγc配体可以通过相应IL-2Rβγc配体的N末端或C末端独立地与串联连接子结合。
在式(8a)和(8b)的串联IL-2Rβγc配体中，IL-2Rβγc配体中的每一个可以包括一个或多个侧接氨基酸。
串联连接子Lt1和Lt2可以是肽基串联连接子并且可以例如1至50个氨基酸、2到40个氨基酸或5到30个氨基酸。
串联连接子可以包括化学连接子，如由本公开提供的含三唑连接子。
每个二价串联连接子Lt1可以与其它二价串联连接子中的每一个相同，或者二价串联连接子中的至少一个可以不同于另一个串联连接子。
在式(8a)的串联IL-2Rβγc配体中，n可以是例如1、2、3、4、5或6。
在式(8b)的串联IL-2Rβγc配体中，每个n可以独立地选自0、1、2、3、4、5或6。
在式(8b)的串联IL-2Rβγc配体中，p可以是例如3、4、5、6、7或8。
p价串联连接子可以包括任何合适的多官能化学部分。例如，式(8a)和(8b)的串联IL-2Rβγc配体的分子量可以小于10,000Da、小于6,000Da、小于2,000Da、小于1,000Da或小于500Da。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体可以与天然存在的蛋白质或合成分子结合以提供IL-2Rβγc配体构建体。合适的构建体配偶体的实例包含聚合物、蛋白质、Fc片段、免疫球蛋白片段、白蛋白结合化合物和抗体。
如由本公开提供的IL-2Rβγc构建体等IL-2Rβγc配体构建体可以被配置成提供期望的药代动力学性质，提供降低的免疫原性，靶向特定细胞群体，和/或提供增强的治疗功效。
如由本公开提供的IL-2Rβγc构建体等IL-2Rβγc构建体的hu-IL-2R结合比率可以是例如10至10,000、10至3,000、10至1,000或30至300。如由本公开提供的IL-2Rβγc构建体等IL-2Rβγc构建体的hu-IL-2R结合比率可以例如大于10、大于30、大于100、大于300、大于1,000或大于3,000。由本公开提供的IL-2Rβγc构建体的hu-IL-2R结合比率可以例如小于10,000、小于3,000、小于1,000、小于300、小于100或小于30。
如由本公开提供的IL-2Rβγc构建体等IL-2Rβγc构建体的hu-IL-2R结合比率可以是例如0.1至0.0001、0.1至0.0003、0.1至0.001或0.03至0.003。如由本公开提供的IL-2Rβγc构建体等IL-2Rβγc构建体的hu-IL-2R结合比率可以例如大于0.0001、大于0.0003、大于0.001、大于0.003、大于0.01或大于0.03。如由本公开提供的IL-2Rβγc构建体等IL-2Rβγc构建体的hu-IL-2R结合比率可以例如小于0.1、小于0.03、小于0.01、小于0.003、小于0.001或小于0.0003。。
如由本公开提供的IL-2Rβγc构建体等IL-2Rβγc构建体的hu-IL-2R结合比率可以是例如0.1至10或0.03至3。由本公开提供的IL-2Rβγc构建体的hu-IL-2R结合比率可以例如大于0.1、大于0.3、大于1或大于3。在如由本公开提供的IL-2Rβγc构建体等IL-2Rβγc构建体中，hu-IL-2R结合比率可以例如小于10、小于3、小于1或小于0.3。
如由本公开提供的IL-2Rβγc构建体等IL-2Rβγc构建体的hu-IL-2R亚基结合比率可以是例如10至10,000、10至3,000、10至1,000或30至300。如由本公开提供的IL-2Rβγc构建体等IL-2Rβγc构建体的hu-IL-2R亚基结合比率可以例如大于10、大于30、大于100、大于300、大于1,000或大于3,000。如由本公开提供的IL-2Rβγc构建体等IL-2Rβγc构建体的hu-IL-2R亚基结合比率可以例如小于10,000、小于3,000、小于1,000、小于300、小于100或小于30。
如由本公开提供的IL-2Rβγc构建体等IL-2Rβγc构建体的hu-IL-2R亚基结合比率可以是例如0.1至0.001或0.03至0.003。如由本公开提供的IL-2Rβγc构建体等IL-2Rβγc构建体的hu-IL-2R亚基结合比率可以例如大于0.001、大于0.003、大于0.01或大于0.03。如由本公开提供的IL-2Rβγc构建体等IL-2Rβγc构建体的hu-IL-2R亚基结合比率可以例如小于0.1、小于0.03、小于0.01或小于0.003。
如由本公开提供的IL-2Rβγc构建体等IL-2Rβγc构建体的hu-IL-2R亚基结合比率可以是例如0.1至10或0.3至3。如由本公开提供的IL-2Rβγc构建体等IL-2Rβγc构建体的hu-IL-2R亚基结合比率可以例如大于0.1、大于0.3、大于1或大于3。如由本公开提供的IL-2Rβγc构建体等IL-2Rβγc构建体的hu-IL-2R亚基结合比率可以例如小于10、小于3、小于1或小于0.3。
公开了IL-2Rβγc结合化合物，其中可以选择IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体来以期望的IC50与IL-2Rβ和IL-2Rγc亚基结合。用于IL-2Rβ配体结合的IC50与用于IL-2Rγc配体与IL-2Rγc亚基结合的IC50的比率可以在例如10,000至0.00001的范围内。IL-2Rβγc结合化合物可以包含除天然细胞因子或天然细胞因子突变蛋白以外的肽、蛋白质、抗体和抗体片段。IC50 IL-2Rβ/IL-2Rγc结合比率为10,000至0.00001的IL-2Rβγc结合化合物可以是IL-2R激动剂。IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体可以独立地合成和选择，以具有用于分别与IL-2Rβ和IL-2Rγc亚基结合的绝对和相对IC50，并维持激动剂活性水平。
IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体可以基于其对相应IL-2R亚基的绝对和相对结合亲和力独立选择，并掺入IL-2Rβγc异二聚体和/或IL-2Rβγc构建体中。IL-2Rβγc构建体可以包含例如肽、非天然细胞因子或天然细胞因子突变蛋白的蛋白质、抗体或抗体片段。IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体在掺入IL-2Rβγc异二聚体和/或构建体中时可以维持其对相应亚基的绝对和相对结合亲和力(IC50)。通过独立选择IL-2Rβ和IL-2Rγc配体的绝对和相对结合亲和力(IC50)，具有宽范围的亚基结合亲和力比率的所得IL-2Rβγc配体和IL-2Rβγc配体构建体可以表现出具有可用作选择性IL-2R激动剂并用于定制疗法的所选择的IL-2Rβ和IL-2Rγc亲和力(IC50)的IL-2Rβγc激动剂的期望的激动剂活性。
类似的方法可以应用于能够与如IL-7R、IL-10R、IL-11R、IL-12R、IL-15R、IL-20R、IFN-α受体、IFN-β受体、IFN-γ受体、C-CSF受体、GM-CSF受体、TNF-a受体、TRAP受体和TRAIL受体等其它细胞因子受体结合的化合物。
由本公开提供的方法包含基于IL-2Rβ和IL-2Rγc配体与其相应IL-2R亚基的绝对和相对结合来选择其配体的方法，以及组合所选择的IL-2Rβ和IL-2Rγc配体以提供如IL-2Rβγc异二聚体或IL-2Rβγc配体构建体等IL-2Rβγc结合化合物的方法，所述结合化合物具有期望的药理学性质，如激动剂活性水平、选择性和/或用于不同治疗目的的有偏向的功效。
可以选择IL-2Rβ和IL-2Rγc配体，使其对相应IL-2R亚基具有不同的结合亲和力，和/或与天然IL-2细胞因子相比，对相应IL-2R亚基具有不同的IC50结合比率。
所选择的IL-2Rβ和IL-2Rγc配体可以使用如本文所公开的肽或非肽基连接子偶联，以形成合成IL-2Rβγc配体。所选择的IL-2Rβ配体、所选择的IL-2Rγc配体和/或合成IL-2Rβγc配体可以使用本文所公开的方法与如蛋白质、抗体或抗体片段等构建体配偶体偶联。
IL-2Rβγc配体可以通过构建体连接子与构建体配偶体结合。
IL-2Rβγc配体构建体可以包括与构建体配偶体结合的单个IL-2Rβγc配体或与构建体配偶体结合的两个或更多个IL-2Rβγc配体。
与构建体配偶体结合的两个或更多个IL-2Rβγc配体中的每一个可以相同，或者IL-2Rβγc配体中的至少一个可以不同于与构建体配偶体结合的其它IL-2Rβγc配体中的至少一个。IL-2Rβγc配体可以例如在IL-2Rβ配体、IL-2Rγc配体、IL-2Rβγc配体连接子和/或侧接氨基酸方面不同。
IL-2Rβγc配体中的每一个可以通过相应的构建体连接子独立地与构建体配偶体结合。相应的构建体连接子中的每一个可以相同，或者构建体连接子中的至少一个可以不同于至少一个其它构建体连接子。构建体连接子可以例如在长度和/或化学组成方面不同。
IL-2Rβγc配体中的每一个可以通过相应IL-2Rβγc配体的N末端或C末端独立地与构建体配偶体结合。
IL-2Rβγc配体构建体可以包括与构建体配偶体结合的串联IL-2Rβγc配体。串联IL-2Rβγc配体可以通过构建体连接子与构建体配偶体结合。
IL-2Rβγc配体构建体可以包括与构建体配偶体结合的单个串联IL-2Rβγc配体或与构建体配偶体结合的两个或更多个串联IL-2Rβγc配体。
与构建体配偶体结合的两个或更多个串联IL-2Rβγc配体中的每一个可以相同，或者串联IL-2Rβγc配体中的至少一个可以不同于与构建体配偶体结合的其它串联IL-2Rβγc配体中的至少一个。串联IL-2Rβγc配体可以例如在IL-2Rβ配体、IL-2Rγc配体、IL-2Rβγc配体连接子、串联连接子和/或侧接氨基酸方面不同。
串联IL-2Rβγc配体中的每一个可以通过相应的构建体连接子与构建体配偶体结合。相应的构建体连接子中的每一个可以相同，或者构建体连接子中的至少一个可以不同于至少一个其它构建体连接子。构建体连接子可以例如在长度和/或化学组成方面不同。
串联IL-2Rβγc配体中的每一个可以通过相应串联IL-2Rβγc配体的N末端或C末端独立地与构建体配偶体结合。
IL-2Rβγc配体构建体可以包括与构建体配偶体结合的至少一个IL-2Rβ配体和至少一个串联IL-2Rγc配体。至少一个IL-2Rβ配体和至少一个IL-2Rγc配体中的每一个可以通过构建体连接子独立地与构建体配偶体结合。例如，IL-2Rβγc配体构建体可以包括1至10个由本公开提供的IL-2Rβ配体和1至10个由本公开提供的IL-2Rγc配体。
IL-2Rβγc配体构建体可以包括例如至少一个IL-2Rβγc配体、至少一个串联IL-2Rβγc配体、至少一个IL-2Rβ配体和/或至少一个IL-2Rγc配体，条件是IL-2Rβγc配体包括至少一个IL-2Rβ配体和至少一个IL-2Rγc配体。
IL-2Rβγc配体构建体可以损害与如形成聚合物或蛋白质的氨基酸等分子的侧链结合的一个或多个IL-2Rβγc配体。
IL-2Rβγc配体构建体可以包括一个或多个IL-2Rβγc配体，其中一个或多个IL-2Rβγc配体掺入聚合物或多肽的主链中。因此，IL-2Rβγc配体构建体可以包括一个或多个IL-2Rβγc配体，其中一个或多个IL-2Rβγc配体与多肽的N末端结合，与多肽的C末端结合，与多肽的氨基酸侧链结合，和/或掺入多肽的氨基酸序列中。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体构建体包含融合蛋白。
合适的融合蛋白配偶体的实例包含Fc片段、如IgG1、IgG2和IgG4等免疫球蛋白、如IgG1、IgG2和IgG4片段等免疫球蛋白片段、如人血清白蛋白(HSA)等天然存在的蛋白质、抗体、其它人类蛋白质及其突变体和/或变体、蛋白质和多肽。融合蛋白配偶体可以是天然存在的蛋白质、经修饰的天然存在的蛋白质或合成蛋白质。
融合配偶体可以用于提供期望的药代动力学曲线，以用于细胞靶向、双重药理学和/或增强治疗功效。
例如，由本公开提供的IL-2Rβγc配体可以与增加IL-2Rβγc配体循环半衰期的蛋白质融合。治疗性蛋白质与IgG或IgG-Fc链的融合可以通过增加蛋白质的流体动力学半径，从而降低肾脏清除率，并通过新生儿Fc受体(FcRn)介导的融合蛋白再循环，从而延长循环半衰期来实现这一点。可以设计其它融合蛋白来适应性质，如药代动力学、生物分布、药效学、药理学、细胞毒性、选择性和/或靶向性。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体融合蛋白可以包括一个或多个与融合蛋白配偶体结合的IL-2Rβγc配体。一个或多个IL-2Rβγc配体中的每一个可以通过相应IL-2Rβγc配体的N末端或C末端独立地与融合蛋白配偶体结合。一个或多个IL-2Rβγc配体中的每一个可以是相同的。一个或多个IL-2Rβγc配体中的至少一个可以不同于至少一个其它IL-2Rβγc配体。IL-2Rβγc配体与融合配偶体蛋白之间的连结部处的氨基酸序列可以是两种蛋白质序列的直接融合，或者可以是与中间肽基融合(构建体)连接子的融合。肽基连接子可以作为IL-2Rβγc配体与融合配偶体之间的间隔子被包含在内。肽基连接子可以促进组分蛋白质和一个或多个IL-2Rβγc配体的正确蛋白质折叠和稳定性，改善蛋白质表达，和/或可以增强IL-2Rβγc配体和/或融合配偶体的生物活性。
用于IL-2Rβγc配体融合蛋白的肽基连接子可以被设计为非结构化的柔性肽。肽基连接子可以例如富含甘氨酸和丝氨酸，如序列的重复序列，例如具有SEQ ID NO:9380-9401中的任一个的肽基连接子，其中n是1至10的整数。具有完全延伸的β链构象的柔性肽基连接子的每个残基的端到端长度可以为例如因此，5、10、15或10个残基的肽基连接子的最大完全延伸长度可以分别为/>或超过/>
肽基连接子可以是刚性连接子，如包含脯氨酸和如丙氨酸、赖氨酸或谷氨酸等其它氨基酸的连接子。例如，刚性连接子可以具有SEQ ID NO:9419-9425中的任一个的氨基酸序列。肽基连接子可以促进提供单个融合蛋白部分的适当构象和取向以促进IL-2Rβγc配体与IL-2R的IL-2Rβ亚基和/或IL-2Rγc亚基的接合，促进IL-2Rβγc配体与IL-2R的结合，使融合蛋白能够再循环，和/或延长IL-2Rβγc配体的循环半衰期。
包括一个或多个IL-2Rβγc配体的融合蛋白的设计和构建存在多种选项，并且可以对所述设计和构建进行选择以获得具有期望的生物活性和药学特性的IL-2Rβγc融合蛋白。设计选项包含例如：包含IL-2Rβ配体、IL-2Rγc配体和IL-2Rβγc配体连接子的选择的IL-2Rβγc配体；融合配偶体蛋白结合部分；融合蛋白中的融合配偶体结合部分的构型；将IL-2Rβγc配体与融合配偶体结合的肽基连接子；以及融合配偶体蛋白。
一般而言，由本公开提供的IL-2Rβγc配体融合蛋白的制剂可以使用公认的重组DNA技术来制备，所述技术涉及例如聚合酶链扩增反应(PCR)、质粒DNA的制备、用限制性酶切割DNA、寡核苷酸的制备、DNA的连接、mRNA的分离、将DNA引入合适的细胞、宿主的转化或转染以及宿主的培养。另外地，可以使用离液剂和众所周知的电泳、离心和色谱方法分离和纯化IL-2Rβγc配体融合蛋白。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体融合蛋白可以包括一种或多种小泛素相关修饰物(SUMO)蛋白。泛素样修饰剂SUMO对细胞蛋白的修饰可以调节各种细胞过程，如核转运、信号转导和蛋白质的稳定化。一旦与细胞靶标共价连接，SUMO就会调节蛋白质/蛋白质和蛋白质/DNA相互作用，并定位和稳定靶蛋白质。
例如，IL-2Rβγc配体可以与第一连接子结合，所述第一连接子与SUMO蛋白结合，所述SUMO蛋白进一步与第二连接子结合，所述第二连接子将SUMO蛋白与如IgG或Fc片段等融合配偶体结合。SUMO融合可以增强表达，促进溶解性和/或促进优化的蛋白质折叠。在融合配偶体蛋白的N末端或C末端处连接高度稳定的结构，如泛素或SUMO的结构可以通过增加稳定性来增加产量。泛素和泛素样蛋白的增溶作用也可以部分地通过泛素和SUMO的核心结构的外亲水性和内疏水性，从而对其它不溶性蛋白质发挥洗涤剂样作用来解释。
一个或多个IL-2Rβγc配体可以与提供期望的药代动力学性质的构建体配偶体结合。例如，一个或多个IL-2Rβγc配体可以与在体循环中表现出延长的半衰期的合成聚合物或如天然存在的蛋白质等蛋白质结合。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体可以缀合或融合到延长IL-2Rβγc配体的血清半衰期而不增加这种半衰期延长会增加患者的副作用或不良事件的可能性或强度的风险的分子。延长血清半衰期IL-2Rβγc配体的给药可以延长靶标覆盖率，同时降低全身最大暴露量(Cmax)。延长的血清半衰期可以允许使用IL-2Rβγc配体或IL-2Rβγc配体构建体的较低施用剂量和/或较低频率给药方案。
IL-2Rβγc配体的血清半衰期可以通过任何合适的方法延长。此类方法包含将IL-2Rβγc配体与和新生儿Fc受体结合的肽连接，或将IL-2Rβγc配体与具有延长的血清半衰期的蛋白质连接，如IgG、IgG Fc片段或人血清白蛋白(HSA)。
IL-2Rβγc配体药代动力学构建体的实例包含：(a)将一个或多个IL-2Rβγc配体重组融合到天然长半衰期蛋白质或蛋白质结构域，如Fc融合体、转铁蛋白融合体或白蛋白融合体；(b)将一个或多个IL-2Rβγc配体重组融合到惰性多肽，如同型氨基酸聚合物(HAP，HAP化)、脯氨酸-丙氨酸-丝氨酸聚合物(PAS，PAS化)、弹性蛋白样肽(ELP，ELP化)或明胶样蛋白GLK聚合物；(c)通过将一个或多个IL-2Rβγc配体化学缀合到重复化学部分如PEG化或透明质酸来增加流体动力学半径；(d)通过聚唾液酸化或通过融合到带负电荷的高度唾液酸化肽如羧基末端肽(绒毛膜促性腺激素(CG)β-链的CTP)来增加一个或多个IL-2Rβγc配体的负电荷；或者(e)将一个或多个IL-2Rβγc配体缀合到正常长半衰期蛋白质的肽或蛋白质结合结构域，如人血清白蛋白(HSA)、转铁蛋白、与人免疫球蛋白IgG的恒定片段Fc链融合或与如/>等非天然多肽融合。
一个或多个IL-2Rβγc配体可以与合成聚合物结合。
例如，IL-2Rβγc配体可以与聚乙二醇(PEG)链缀合以延长IL-2Rβγc配体在体循环中的半衰期。PEG可以具有例如5kDa到100kD、10kDa到80kDa或20kDa到60kDa的分子量。
PEG化可以化学地或酶促地实现，并且缀合物的生物物理和生物化学性质可以取决于例如PEG链的结构、大小、数量和位置。PEG化可以通过掩盖蛋白水解切割位点和/或通过增加配体的有效流体动力学半径来延长IL-2Rβγc配体的循环半衰期，从而降低肾清除率。
IL-2Rβγc配体可以与直链或支链单甲氧基聚乙二醇(mPEG)缀合，从而使得分子量和流体动力学半径增加，并降低肾脏的肾小球滤过率。PEG是高度灵活的不带电荷的、几乎非免疫原性、亲水性和不可生物降解的分子，与同等大小的蛋白质相比，其产生更大的流体动力学半径。PEG化已广泛用于延长药理活性化合物的半衰期。
与IgG相似，血清白蛋白显示出极长的循环半衰期。这些功能和结构无关的蛋白质的半衰期延长主要来源于与FcRn的相互作用。尽管HSA在与IgG不同的位点处结合FcRn，但两种相互作用都是pH依赖性的，并引起FcRn介导的细胞分解代谢的拯救。能够延长循环半衰期的IL-2Rβγc配体构建体包含例如与HSA的基因融合体、与HSA结合部分的缀合体以及与HSA键合抗体或抗体片段的融合体。
一个或多个IL-2Rβγc配体可以与多肽(Amunix Pharmaceuticals公司(Amunix Pharmaceuticals Inc.))结合。/>多肽的长度通常为200个氨基酸或更长，旨在掩盖scFv的抗原结合区，是非结构化的并具有低免疫原性。/>多肽可以增加治疗剂的循环半衰期。一个或多个IL-2Rβγc配体可以与/>多肽(AmunixPharmaceuticals公司)结合。/>多肽包含蛋白酶的底物，并且可以被设计成对一种或多种蛋白酶具有活性，以选择切割速率，并赋予特异性。
一个或多个IL-2Rβγc配体与血清转铁蛋白(Tf)的基因融合可以使药代动力学增强。血清转铁蛋白是介导铁从体循环到细胞和组织的转运的80kDa糖蛋白。当与铁离子结合时，转铁蛋白对大多数细胞类型的表面上显示的转铁蛋白受体(TfR)显示出高亲和力。相互作用后，Tf/TfR复合物通过受体介导的内吞作用被内化到内体中，其中铁被释放，然后Tf/TfR再循环到细胞表面。蛋白质治疗剂与Tf或TfR结合抗体的融合可以用于延长半衰期、靶向过度表达TfR的恶性细胞并靶向rai毛细血管内皮以跨血脑屏障转运治疗剂。
IL-2Rβγc配体与IgG或Fc的融合可以使IL-2Rβγc配体的亲合力增加，从而通过蛋白G./A亲和色谱法提供纯化，并且可以延长IL-2Rβγc配体的循环半衰期。
IL-2Rβγc配体/IgG融合蛋白的半衰期延长归因于由于分子大小增加引起的肾清除率降低和FcRn介导的再循环的组合。
一个或多个IL-2Rβγc配体可以与包含例如IgG1、IgG2或IgG4的任何合适的IgG结合。一个或多个IL-2Rβγc配体可以与IgG的如轻链VL等任何合适的部分结合或与包含N末端、C末端、氨基酸侧链的重链VH结合，或者可以是掺入IgG的轻链或重链的氨基酸序列中。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体构建体可以包括IL-2Rβγc配体/IgG构建体。
IgG构建体包括至少一条重链和至少一条轻链。IL-2Rβγc配体可以与重链的N末端、轻链的N末端或重链的N末端以及轻链的N末端结合。
IL-2Rβγc配体可以与重链的C末端，例如CH3结构域结合，与重链的N末端和/或轻链的N末端结合。
在IgG构建体中，IL-2Rβγc配体可以与一条或两条重链的N末端、一条或两条轻链的N末端和/或重链的一个或两个C末端结合。
在IgG构建体中，IL-2Rβγc配体可以与IgG的氨基酸侧链结合。
在IgG构建体中，IgG重链和/或IgG轻链可以包括掺入形成IgG重链和/或IgG轻链的氨基酸序列中的一个或多个IL-2Rβγc配体。
IL-2Rβγc配体IgG构建体的实例示出于图20A-20J中。
在IL-2Rβγc构建体中，将IL-2Rβγc配体与IgG键合的每个连接子可以独立地是相同的或者可以是不同的。
例如，IL-2Rβγc配体可以与一条或两条IgG重链的C末端、一条或两条IgG轻链的C末端、一条或两条IgG重链的N末端和/或一条或两条IgG轻链的N末端结合。示出其中IL-2Rβγc配体与IgG重链和/或轻链结合的IL-2Rβγc配体构建体的实例示出于图20A-20J中。IL-2Rβγc配体中的每一个可以通过合适的构建体连接子与IgG结合。
一个或多个IL-2Rβγc配体可以与IgG片段，如单个轻链VL结构域、单个重链VH结构域或Fc区结合。所述片段可以源自任何合适的免疫球蛋白，如IgA、IgD、IgE、IgG或IgM。所述片段可以源自任何合适的IgG，例如IgG1、IgG2或IgG4。
一个或多个IL-2Rβγc配体可以与Fc片段结合。Fc片段可以是单体的，可以是二聚的，或者可以是经修饰的Fc片段。二聚Fc片段可以在N末端上包括一个或多个二硫键。修饰的实例是杵臼结构(knob-into-hole)修饰，所述杵臼结构修饰包括免疫球蛋白重链之一的CH3结构域中的杵修饰和另一免疫球蛋白重链中的臼修饰。
由本公开提供的构建体包含IL-2Rβγc配体-Fc融合蛋白。Fc链可以包含自组装成同二聚Fc链或异二聚Fc链的两个不同的多肽。融合蛋白可以包含Fc链、一个或多个Fc链连接子和一个或多个IL-2Rβγc配体。Fc链连接子将由本公开提供的IL-2Rβγc配体与Fc链结合。
Fc链可以包括包含IgA、IgD、IgE、IgG和IgM免疫球蛋白同种型的任何合适的免疫球蛋白同种型的Fc链。Fc片段可以源自包含例如IgG1、IgG2或IgG4的任何合适的IgG免疫球蛋白。
IL-2Rβγc配体Fc融合蛋白可以包括一个或多个IL-2Rβγc配体。一个或多个IL-2Rβγc配体中的每一个可以与和Fc链结合的其它IL-2Rβγc配体相同或不同。
IL-2Rβγc配体Fc片段构建体，即IL-2Rβγc Fc融合体，可以包括与Fc片段的一条Fc链的C末端或两条Fc链的C末端结合的IL-2Rβγc配体。
IL-2Rβγc配体Fc融合体可以包括一个与Fc片段的N末端结合的IL-2Rβγc配体或两个与Fc片段的N末端结合的IL-2Rβγc配体。
IL-2Rβγc配体Fc融合体可以包括一个或两个与Fc片段的C末端结合的IL-2Rβγc配体，并且一个或两个IL-2Rβγc配体可以与Fc片段的N末端结合。
每个IL-2Rβγc配体可以通过Fc连接子与Fc片段共价结合。将IL-2Rβγc配体与Fc片段结合的每个Fc连接子可以相同或不同。
每个IL-2Rβγc配体可以通过IL-2Rβγc配体的N末端或C末端独立地与Fc连接子结合。
IL-2Rβγc配体Fc片段构建体的实例示出于图20A-20J和21A-21C中。
表6中提供了包括与hIgG1或hIgG2免疫球蛋白Fc片段结合的IL-2Rβγc配体的构建体的实例。
表6.配体免疫球蛋白构建体。
SEQ ID NO:8061hIgG2-Fc-(PA)10IL-2Rβγc配体
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGWYPCWIARVGELCDLEEGPVNRGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8062hIgG2-Fc-(PA)10IL-2Rβγc配体
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGAVEFYPCWLARIGELCDLVEPGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8063hIgG2-Fc-(PA)10IL-2Rβγc配体
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGWYPCWIARVGELCDMEGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8064hIgG2-Fc-(PA)10IL-2Rβγc配体
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGEWFHDCFLAKVGDLCDLFLWGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8065hIgG2-Fc-(PA)10IL-2Rβγc配体
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVD
GVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTK
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAP
APAPAGGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8066hG2-Fc-(PA)10IL-2Rβγc配体
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVD
GVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTK
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAP
APAPAGGRSLVDCFLVKVGDLCDFFNWGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8067hIgG2-Fc-(PA)10IL-2Rβγc配体
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVD
GVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTK
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAP
APAPAGGWYPCWIARVGELCDLEGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8068hIgG2-Fc-(PA)10IL-2Rβγc配体
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVD
GVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTK
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAP
APAPAGGWYPCWLAQVGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8069hIgG2-Fc-(PA)10IL-2Rβγc配体
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVD
GVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTK
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAP
APAPAGGWYPCWIARVGELCDLEEGPVNRGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8070hIgG2-Fc-(PA)10IL-2Rβγc配体
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVD
GVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTK
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAP
APAPAGGWYPCWIARVGELCDLEEGPVNRGGGGSGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELC
WQGG
SEQ ID NO:8071hIgG2-Fc-(PA)10IL-2Rβγc配体
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVD
GVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTK
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAP
APAPAGGWYPCWIARVGELCDLEEGPVNRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGVVCQDWE
GVELCWQGG
SEQ ID NO:8072hIgG2-Fc-(PA)10IL-2Rβγc配体
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVD
GVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTK
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAP
APAPAGGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8073hIgG2-Fc-(PA)10IL-2Rβγc配体
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVD
GVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTK
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAP
APAPAGGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQ
GG
SEQ ID NO:8074hIgG2-Fc-(PA)10IL-2Rβγc配体
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVD
GVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTK
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAP
APAPAGGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGV
ELCWQGG
SEQ ID NO:8075ZW1 A-(PA)10IL-2Rβγc配体
DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVD
GVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKA
KGQPREPQVYVYPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS
DGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPA
PAPAPAGGLVDCFKVKVGELCDLFGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8076ZW1_B
DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVD
GVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKA
KGQPREPQVYVLPPSRDELTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDS
DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
SEQ ID NO:8077Cys-杵-(PA)10IL-2Rβγc配体
DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVD
GVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKA
KGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS
DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPA
PAPAPAGGLVDCFKVKVGELCDLFGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8078Cys-臼
DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVD
GVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKA
KGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS
DGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
SEQ ID NO:8079ZW1_A-(PA)10IL-2Rβγc配体
DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVD
GVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKA
KGQPREPQVYVYPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS
DGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPA
PAPAPAGGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8080Cys-杵-(PA)10IL-2Rβγc配体
DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVD
GVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKA
KGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS
DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPA
PAPAPAGGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8081ZW1_A-(GS)10IL-2Rβγc配体
DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVD
GVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKA
KGQPREPQVYVYPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS
DGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGSGSGSGSGSGSGS
GSGSGSGGWYSCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8082Cys-杵-(GS)10IL-2Rβγc配体
DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVD
GVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKA
KGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS
DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGSGSGSGSGSGSGS
GSGSGSGGWYSCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
具有SEQ ID NO:8061-8082的IL-2Rβγc配体构建体的组分总结在表7中。
表7.IL-2Rβγc配体构建体的组分。
/>
表8中提供了包括与构建体配偶体结合的IL-2Rβγc配体的IL-2Rβγc配体构建体的另外实例。
表8.IL-2Rβγc配体构建体的组分。
/>
表9中提供了构建体配偶体和IL-2Rβγc配体构建体的氨基酸序列。
表9.IL-2Rβγc免疫球蛋白构建体。
/>
/>
/>
/>
/>
表10中提供了构建体配偶体和IL-2Rβγc配体构建体的氨基酸序列。
表10.IL-2Rβγc免疫球蛋白构建体。
SEQ ID NO:8127hIgG2-Fc-(PA)10-3115/9342(PA)8G连接子
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGA-(GS)10-GGGELLVDCFKVKVGELCDLFFG-(PA)8G-VVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8128hIgG2-Fc-(GS)10-3137/9342(PA)8G连接子
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGA-(GS)10-GGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLH-(PA)8G-VVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8129hIgG2-Fc-(GS)10-3170/9342(PA)8G连接子
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGA-(GS)10-GGRYVHDCFAAQVGDLCDLFLHGG-(PA)8G-VVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8130hIgG2-Fc-(GS)10-3182/9342(PA)8G连接子
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGA-(GS)10-GGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLAGG-(PA)8G-VVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8131hIgG2-Fc-(GS)10-3185/9342(PA)8G连接子
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGA-(GS)10-GGRYVHDCFIAQVGDLCDAFLHGG-(PA)8G-VVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8132hIgG2-Fc-(GS)10-3172/9342(PA)8G连接子
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGA-(GS)10-GGRYVHDCFIAAVGDLCDLFLHGG-(PA)8G-VVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8233hIgG2-Fc-(GS)10-3184/9342(PA)8G连接子
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVD
GVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTK
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGA-(GS)10-GGRYVHDCFIAQVGDLCDLFAHGG-(PA)8G-VVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8134hIgG2-Fc-(GS)10-3178/9342(PA)8G连接子
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVD
GVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTK
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGA-(GS)10-GGAYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGG-(PA)8G-VVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8135hIgG2-Fc-1264
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVD
GVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTK
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAP
APAPAGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO:8136hIgG2-Fc-5100
ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVD
GVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTK
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAGSGSGSGSGSGSGS
GSGSGSGGVHRIPWCTLDPGGLQCAWLRQMGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
Fc融合蛋白可以包括两条Fc链，其中Fc链中的至少一条Fc链包括融合的IL-2Rβγc配体和任选的Fc连接子。二聚Fc融合蛋白可以被配置成具有一个IL-2Rβγc配体，这可以称为单价IL-2Rβγc配体-Fc融合体，其中IL-2Rβγc配体与Fc链中的一条Fc链共价结合，并且另一条Fc链不与IL-2Rβγc配体结合。在二价IL-2Rβγc配体Fc融合体中，IL-2Rβγc配体与每条Fc链融合。
除了同二聚二价IL-2Rβγc配体Fc融合蛋白外，在单价IL-2Rβγc配体Fc融合蛋白中，一条Fc链可以是空的，并且可以使用异二聚化变体将两条Fc链连接在一起。这些实施例依赖于使用两种不同的变体Fc序列，它们可以自组装形成异二聚Fc链和异二聚Fe融合蛋白。有许多机制可以用于产生异二聚体。另外，可以将这些机制组合以确保高度异二聚化。异二聚化变体可以包含空间变体，如杵和臼或偏斜变体、电荷对变体和pH变体。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体构建体包含其中一个或多个IL-2Rβ配体与构建体配偶体结合并且一个或多个IL-2Rγc配体独立地与构建体配偶体结合的构建体。例如，IL-2Rβ配体可以与Fc片段或免疫球蛋白的C末端结合，并且IL-2Rγc配体可以与Fc片段或免疫球蛋白的N末端结合。作为另一个实例，IL-2Rβ配体可以与Fc片段或免疫球蛋白的一条重链的C末端结合，并且IL-2Rγc配体可以与Fc片段或免疫球蛋白的另一条重链结合。
包括一个或多个IL-2Rβ配体和/或一个或多个IL-2Rγc配体的构建体可以包括一个或多个与构建体配偶体结合的IL-2Rβγc配体。图22和23分别示出了Fc片段和免疫球蛋白的实例，其中配体与构建体配偶体的C末端和/或N末端结合。配体中的每一个可以独立地选自IL-2Rβγc配体、IL-2Rβ配体或IL-2Rγc配体。
在包括蛋白质或合成聚合物的构建体中，一个或多个IL-2Rβ配体、一个或多个IL-2Rγc配体和/或一个或多个IL-2Rβγc配体可以与构建体配偶体结合。例如，配体可以与蛋白质的C末端和N末端结合或与聚合物的末端基团结合和/或与官能化的侧链结合。
一个或多个IL-2Rβ配体和一个或多个IL-2Rγc配体中的每一个可以通过构建体连接子独立地与构建体配偶体结合。构建体连接子可以是例如本文公开的任何刚性或柔性连接子，并且可以被选择以促进与IL-2R的期望的相互作用。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体构建体可以包括将IL-2Rβγc配体或串联IL-2Rβγc配体与构建体配偶体共价结合的构建体连接子，所述构建体配偶体包含例如本文公开的肽、聚合物、Fc片段、免疫球蛋白片段和抗体中的任一种。
构建体连接子可以被配置成促进IL-2Rβγc配体与IL-2R上的结合位点的结合。构建体连接子可以被配置成促进IL-2Rβγc配体对IL-2R的激活。
构建体连接子可以是肽基构建体连接子。肽基构建体连接子可以包括例如2至30个氨基酸、2至25个氨基酸、2至20个氨基酸、2至15个氨基酸或2至10个氨基酸。肽基构建体连接子可以包括例如少于30个氨基酸、少于25个氨基酸、少于20个氨基酸、少于15个氨基酸、少于10个氨基酸或少于5个氨基酸。肽基构建体连接子可以包括例如超过2个氨基酸、超过4个氨基酸、超过8个氨基酸、超过12个氨基酸或超过16个氨基酸。
肽基构建体连接子的长度可以为例如至/>如/>至/>至或/>至/>肽基构建体连接子的长度可以例如大于/>大于/>大于大于/>大于/>大于/>或大于/>
构建体连接子可以是化学构建体连接子。化学构建体连接子的长度可以为例如至/>如/>至/>至/>或/>至/>化学连接子的长度可以例如大于/>大于10A、大于/>大于/>大于/>大于/>或大于/>
化学构建体连接子可以包括包含例如3至100个键、5至90个键、10至80个键或20至60个键的主链。化学构建体连接子可以包括包含例如多于3个键、多于5个键、多于10个键、多于20个键、多于50个键或多于100个键的主链。
合适的肽基构建体连接子的实例包含具有SEQ ID NO:9380-9401和9419-9425中的任一个的肽，其中n可以是1至30的整数，如2至25、2至20、2至16、3至12、4至10或6至8。
IL-2Rβγc配体可以通过IL-2Rβγc配体的N末端或C末端与构建体连接子结合。
具有不同连接子构型的IL-2Rβγc配体构建体的实例示出于图19A-19C中。
在具有多于一个IL-2Rβγc配体的IL-2Rβγc配体构建体中，IL-2Rβγc配体中的每一个可以通过独立的构建体与构建体配偶体结合。构建体连接子中的每一个可以相同，或构建体连接子中的至少一个可以不同。多于一个IL-2Rβγc配体中的每一个可以通过IL-2Rβγc配体的N末端或C末端与相应的构建体配偶体结合。
构建体连接子可以包括可切割构建体连接子。可切割构建体连接子可以在体内，例如在存在特定pH的情况下，酶促地或通过施加能量，如通过施加包含紫外光或红外辐射的电磁辐射被切割。
IL-2Rβγc配体构建体可以包括与检查点抑制剂结合的一个或多个IL-2Rβγc配体，所述检查点抑制剂如PD-1检查点抑制剂，包含例如抗体检查点抑制剂，如派姆单抗和西米普利单抗。
在IL-2Rβγc检查点抑制剂构建体中，一个或多个IL-2Rβγc配体可以具有SEQ IDNO:1263-1270中的任一个的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1263-1270中的任一个具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
在IL-2Rβγc检查点抑制剂抗体构建体中，一个或多个IL-2Rβγc配体可以具有：SEQID NO:1263-1270中的任一个的氨基酸序列或与和一条重链的C末端、两条重链的C末端、一条重链的N末端、两条重链的N末端、一条轻链的N末端、两条轻链的N末端结合的SEQID NO:1263-1270中的任一个具有氨基酸序列相似性的IL-2Rβγc配体；或前述任一种的组合。一个或多个IL-2Rβγc配体中的每一个可以通过构建体连接子独立地与检查点抑制剂抗体结合，所述构建体连接子可以包括例如1至50个氨基酸。
IL-2Rβγc配体的N末端可以通过构建体连接子与检查点抑制剂抗体结合。
IL-2Rβγc配体构建体可以是派姆单抗/IL-2Rβγc融合蛋白，其中轻链具有SEQID NO:1218(FP7)的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1218(FP7)具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列；并且重链具有SEQID NO:1219(FP8)的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1219(FP8)具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
派姆单抗/IL-2Rβγc融合蛋白可以包括两条派姆单抗重链和两条派姆单抗轻链，其中具有SEQ ID NO:1263-1270中的任一个的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1263-1270具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列的IL-2Rβγc配体与一条重链的C末端、两条重链的C末端、一条重链的N末端、两条重链的N末端、一条轻链的N末端、两条轻链的N末端或前述任一种的组合结合。一个或多个IL-2Rβγc配体中的每一个可以通过构建体连接子独立地与派姆单抗抗体结合，所述构建体连接子可以包括例如1至50个氨基酸。
IL-2Rβγc配体的N末端可以通过构建体连接子与派姆单抗结合。
IL-2Rβγc配体构建体可以是西米普利单抗/IL-2Rβγc融合蛋白，其中轻链具有SEQ ID NO:1220(FP9)的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1220(FP9)具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列；并且重链具有SEQ ID NO:1221(FP10)的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1221(FP10)具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
西米普利单抗/IL-2Rβγc融合蛋白可以包括两条西米普利单抗重链和两条西米普利单抗轻链，其中具有SEQ ID NO:1263-1270中的任一个的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1263-1270具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列的IL-2Rβγc配体与一条重链的C末端、两条重链的C末端、一条重链的N末端、两条重链的N末端、一条轻链的N末端、两条轻链的N末端或前述任一种的组合结合。一个或多个IL-2Rβγc配体中的每一个可以通过构建体连接子独立地与西米普利单抗抗体结合，所述构建体连接子可以包括例如1至50个氨基酸。
IL-2Rβγc配体的N末端可以通过构建体连接子与西米普利单抗结合。
IL-2Rβγc配体构建体可以是hIgG2/IL-2Rβγc融合蛋白，其中hIgG2具有SEQ IDNO:1268的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1268具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列并且具有SEQ ID NO:1263-1270中的任一个的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1263-1270具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列的一个或多个IL-2Rβγc配体与hIgG2的一个C末端、hIgG2的两个C末端、hIgG2的一个N末端、hIgG2的两个N末端或前述任一种的组合结合。一个或多个IL-2Rβγc配体中的每一个可以通过构建体连接子独立地与IgG2结合，所述构建体连接子可以包括例如1至50个氨基酸。IgG融合配偶体可以是hIgG1或hIgG4，并且一个或多个IL-2Rβγc配体可以如针对hIgG2所描述的那样与hIgG1或hIgG4融合配偶体结合。
IL-2Rβγc配体的N末端可以通过构建体连接子与hIgG2结合。
IL-2Rβγc配体/免疫球蛋白融合蛋白可以包括一个或多个与如hIgG1、hIgG2、hIgG3或hIgG4等免疫球蛋白结合的IL-2Rβγc配体。IL-2Rβγc配体/免疫球蛋白构建体的实例在图23A-23F中示出，其中免疫球蛋白包括重链231和轻链232以及与重链231和/或轻链232的C末端和/或N末端结合的IL-2Rβγc配体233。
IL-2Rβγc配体构建体可以包括一个或多个与免疫球蛋白Fc片段结合的IL-2Rβγc配体。一个或多个IL-2Rβγc配体可以具有SEQ ID NO:1263-1270中的任一个的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1263-1270中的任一个具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。IL-2Rβγc配体可以与C末端和/或N末端结合并且与Fc片段的Fc链中的一条或两条结合。如图22A-22F所示，IL-2Rβγc配体223可以与Fc链221和222中的一条或两条结合。
Fc片段可以源自例如任何合适的免疫球蛋白，如hIgG1、hIgG2、hIgG3或hIgG4。
IL-2Rβγc配体的N末端可以通过构建体连接子与Fc片段结合。构建体连接子可以选自例如具有SEQ ID NO:9380-9407中的任一个的氨基酸序列的构建体连接子。构建体连接子可以选自例如具有SEQ ID NO:9419-9428中的任一个的氨基酸序列的肽基构建体连接子。构建体连接子可以包括例如1至100个氨基酸，如1至50、1至20、1至10或1至5个氨基酸，其中每个氨基酸独立地选自S和G。构建体连接子可以包括例如1至100个氨基酸，如1至50、1至20、1至10或1至5氨基酸，其中每个氨基酸独立地选自脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸和谷氨酸。构建体连接子可以包括例如(PA)n(SEQ ID NO:9421)，其中n可以是例如1至20的整数。可以选择每个构建体连接子，使得与其结合的IL-2Rβγc配体是IL-2R激动剂。连接子可以是例如选自SEQ ID NO:9384、9389和9394-9398中的任一个的肽基连接子。
在功能上，由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物可以是例如完全IL-2R激动剂、部分IL-2R激动剂、诊断试剂、成像试剂、靶向化合物、细胞毒性化合物和/或表现双重药理学的化合物。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物可以与一个或多个部分连接，所述部分赋予化合物增强治疗功效的性质。性质的实例包含效力、水溶性、极性、亲油性、药代动力学、靶向性、生物利用度、pH依赖性结合、生物活性、药效学、细胞活性、代谢、功效、可逆失能(封闭)、选择性或前述任一种的组合。
细胞特异性靶向部分可以包括对细胞表面上的组分，如受体、蛋白质或表位具有亲和力的部分。靶向部分可以包括例如对细胞表面成分具有亲和力的配体或抗体。
靶向部分可以将包括IL-2Rβγc结合化合物的化合物引导和浓缩在由靶向部分靶向的细胞、细胞群体或组织处。
靶向部分可以增强IL-2R激动或IL-2R拮抗对被靶向的细胞或细胞群体的效力。
靶向部分可以在被靶向的细胞与未被靶向部分靶向的细胞之间提供对IL-2R激动或IL-2R拮抗的不同应答。
靶向部分可以在具有高靶向组分表达水平的细胞与具有较低靶向组分表达水平的细胞之间提供对IL-2R激动或IL-2R拮抗的不同应答。
IL-2Rβγc结合化合物可以进一步包括生物活性部分或生物活性分子。IL-2Rβγc化合物可以用于将生物活性部分或生物活性分子递送到表达IL-2Rβ亚基和Rγc亚基的细胞、细胞群体或组织。
生物活性部分或分子可以是不可切割的并且当与IL-2Rβγc结合化合物结合时能够发挥生物活性。
生物活性部分或分子可以是可切割的。所述部分可以通过任何合适的机制，如通过pH、酶、热和/或电磁机制来切割。电磁机制包含例如将化合物暴露于红外、可见或紫外辐射，其中生物活性部分通过能够被辐射切割的光不稳定部分与包括配体的化合物连接。
生物活性分子可以是不可切割的，但在其它方面是可激活的，例如可通过暴露于电磁辐射激活。
可以选择配体以在特定pH下增强与IL-2Rβ和/或Rγc亚基的结合。例如，pH选择性配体在与实体瘤微环境相称的低pH下可以具有与IL-2Rβ和/或Rγc亚基更大的结合亲和力。与在与健康组织相关的正常pH环境中的细胞相比，包括低pH选择性配体的IL-2Rβγc结合化合物可以用于优先激活在低pH环境中表达IL-2Rβ亚基和Rγc亚基的细胞。
因此，包括如pH选择性IL-2Rβ和/或Rγc配体等选择性IL-2Rβ和/或Rγc配体的IL-2Rβγc结合化合物可以与其它pH选择性生物活性部分和分子一起使用。
生物活性部分或生物活性分子本身可以对特定细胞群具有选择性。例如，生物活性部分或生物活性分子可以在被选择性配体靶向的细胞处表现出更大或更小的结合亲和力、效力和/或活性。例如，当被pH选择性配体靶向时，生物活性部分或分子可以在低pH肿瘤微环境中表现出更大的生物活性。在此实例中，生物活性部分通过pH选择性配体针对位于低pH肿瘤微环境中表达IL-2Rβ亚基的细胞。因此，pH选择性生物活性部分的活性在低pH肿瘤微环境中增强。
IL-2Rβγc结合化合物可以进一步包括细胞毒性部分或细胞毒性分子。此类化合物可以用于将细胞毒性部分或化合物递送到表达IL-2Rβγc亚基的细胞。细胞毒性部分或分子在与化合物结合时可以发挥细胞毒性，或者可以是可切割的，并且当从化合物中释放时，所述部分或分子可以是细胞毒性的；或者细胞毒性部分可以被电磁辐射激活。
细胞毒性部分或分子可以用于耗竭被靶向的表达IL-2Rβ亚基的细胞。
细胞毒性IL-2Rβγc结合化合物可以具有多于一个Il-2Rβγc配体，并且因此与具有较低IL-2Rβ亚基表达水平的细胞相比，可以表现出与高度表达IL-2Rβ亚基的细胞、细胞群体和组织的更高的亲和力和/或选择性。
细胞毒性IL-2Rβγc结合化合物可以进一步包含细胞表面靶向组分。此类细胞毒性化合物可以对表达IL-2Rβ亚基和表面靶组分的细胞、细胞群体和组织表现出增强的功效。
合适的细胞毒性分子的实例包含抗微管剂、烷化剂和DNA小沟结合剂。
IL-2Rβγc结合化合物可以包括具有除通过IL-2受体激活介导的药理学活性以外的另外的药理学活性的部分。药理学活性可以是具有与IL-2R激动剂或拮抗剂活性的治疗功效协同的治疗功效的活性，或者药理学活性可以是具有与IL-2R激动剂或拮抗剂活性的治疗功效不协同的治疗功效的活性拮抗剂活化剂。合适的药理学部分的实例包含抗体和抗体片段，所述抗体和抗体片段是检查点分子、促凋亡和抗凋亡分子、细胞毒性分子、趋化因子激动剂、趋化因子拮抗剂、细胞因子、生长因子和其它细胞表面受体的抑制剂，以及如整合素等细胞表面粘附分子的配体和抑制剂。
由本公开提供的一个或多个配体可以与包括靶向部分的分子结合，所述靶向部分赋予将一个或多个IL-2Rβγc配体靶向患者的特定组织或细胞的能力。靶向部分可以对在靶组织或靶细胞表面上表达的细胞表面蛋白或受体具有亲和力，并且因此可以将双配体引导到靶组织或细胞。靶向部分的实例包含抗原结合部分，包含对细胞表面蛋白、配体、生物受体和抗原具有特异性的抗体和其片段。
抗体可以与靶细胞类型的表面上表达的抗原结合。与不表达靶向抗原或靶向抗原的表达水平小于靶细胞类型或组织的表达水平的细胞类型或组织相比，抗体可能不具有任何有用或已知有用的药理学功能，但用于引导IL-2Rβγc结合构建体优先靶向细胞类型或组织。当与细胞表面抗原结合时，抗体可以具有有用的药理学功能。这些构建体被称为双重药理学IL-2Rβγc结合构建体。
IL-2Rβγc结合化合物可以包含例如肿瘤靶向部分，例如肿瘤特异性抗体、肿瘤特异性抗体片段、肿瘤特异性蛋白、肿瘤特异性肽、非肽基肿瘤细胞配体或前述任一种的组合。
IL-2Rβγc结合化合物可以包含免疫细胞靶向部分，例如免疫细胞特异性抗体、免疫细胞特异性抗体片段、免疫细胞特异性蛋白、免疫细胞特异性肽、非肽基免疫细胞配体或前述任一种的组合。
一个或多个IL-2Rβγc配体可以与包括靶向部分的分子结合，所述靶向部分赋予将一个或多个IL-2Rβγc配体靶向患者的特定组织或细胞的能力。靶向部分可以对在靶组织或靶细胞表面上表达的细胞表面蛋白或受体具有亲和力，并且因此可以将IL-2Rβγc配体引导到靶组织或细胞。靶向部分的实例包含抗原结合部分，包含对细胞表面蛋白、配体、生物受体和抗原具有特异性的抗体和其片段。
抗体可以与靶细胞类型的表面上表达的抗原结合。与不表达靶向抗原或靶向抗原的表达水平小于靶细胞类型或组织的表达水平的细胞类型或组织相比，抗体可能不具有任何有用或已知有用的药理学功能，但用于引导IL-2Rβγc配体构建体优先靶向细胞类型或组织。当与细胞表面抗原结合时，抗体可以具有有用的药理学功能。这些构建体被称为双重药理学IL-2Rβγc配体构建体。
IL-2Rβγc配体融合蛋白可以包括一个或多个抗原结合部分。两个以上的抗原结合部分可以针对相同的抗原或针对不同的抗原。
靶向部分可以是抗原结合部分，并且IL-2Rβγc融合蛋白可以是免疫缀合物。免疫缀合物可以包括一个或多个抗原结合部分，所述抗原结合部分能够与在细胞表面、血清中患病细胞的表面和/或细胞外基质中的病毒感染细胞的表面上表达的抗原结合。
抗原结合部分可以包括抗体或抗体片段。抗原结合部分可以是免疫球蛋白分子，例如IgG类免疫球蛋白，包含IgG1、IgG2或IgG4同种型。IL-2Rβγc配体可以如在CH3结构域的C末端处与一条或两条重链结合。抗原结合部分可以是Fab分子、scFv分子或肽。
抗原结合部分可以针对任何特定的抗原，例如在肿瘤细胞表面或肿瘤细胞环境中表达的抗原、在免疫细胞上表达的抗原、在如CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、Treg或NK细胞等主要表达IL-2R的IL-2Rβ和IL-2Rγc亚基的细胞的表面上表达的抗原。
在肿瘤细胞上表达的合适抗原靶标的实例包含成纤维细胞激活蛋白(FAP)、生腱蛋白-C的A1结构域(TNC A1)、生腱蛋白-C的A2结构域(TNC A2)、纤连蛋白的外结构域B(EDB)、癌胚抗原(CEA)和黑色素瘤相关硫酸软骨素蛋白聚糖(MCSP)。
可以用于靶向的合适肿瘤抗原的其它实例包含MAGE、MART-1/Melan-A、gplOO、二肽基肽酶IV(DPPIV)、腺苷脱氨酶结合蛋白(ADAbp)、亲环蛋白b、结肠直肠相关抗原(CRC)-0017-A/GA733、癌胚抗原(CEA)及其免疫原性表位CAP-1和CAP-2、etv6、amll、前列腺特异性抗原(PSA)及其免疫原性表位PSA-1、PSA-2和PSA-3、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、T细胞受体/CD3-ζ链、MAGE-肿瘤抗原家族(例如，MAGE-A1、MAGE-A2、MAGEA3、MAGE-A4、MAGE-AS、MAGE-A6、MAGE-A7、MAGE-AS、MAGE-A9、MAGE-AlO、MAGE-All、MAGE-A12、MAGE-Xp2(MAGE-B2)、MAGE-Xp3(MAGE-B3)、MAGE-Xp4(MAGE-B4)、MAGE-Cl、MAGE-C2、MAGE-C3、MAGE-C4、MAGE-CS)、GAGE-肿瘤抗原家族，如GAGE-I、GAGE-2、GAGE-3、GAGE-4、GAGE-5、GAGE-6、GAGE-7、GAGE-8、GAGE-9、BAGE、RAGE、LAGE-I、NAG、GnT-V、MUM-1、CDK4、酪氨酸酶、p53、MUC家族、HER2/neu、p21ras、RCAS1、甲胎蛋白、上皮钙粘蛋白、a-连环蛋白、-连环蛋白和y-连环蛋白、p120ctn、gplOO Pmel117、PRAME、NY-ES0-1、cdc27、腺瘤性结肠息肉病蛋白(APC)、胞衬蛋白、连接蛋白37、Ig-独特型、p15、gp75、GM2和GD2神经节苷脂、病毒产物如人乳头瘤病毒蛋白、Smad肿瘤抗原家族、lmp-1、PIA、EBY编码的核抗原(EBNA)-1、脑糖原磷酸化酶、SSX-1、SSX-2(HOM-MEL-40)、SSX-1、SSX-4、SSX-5、SCP-1和CT-7以及c-erbB-2。
病毒抗原的实例包含流感病毒血凝素、爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barrvirus)LMP-1、丙型肝炎病毒E2糖蛋白、HIV gp160和HIV gp120。
ECM抗原的实例包含多配体聚糖、乙酰肝素酶、整联蛋白、骨桥蛋白、连接蛋白(link)、钙粘蛋白、层粘连蛋白、层粘连蛋白型EGF、凝集素、纤连蛋白、缺口蛋白(notch)、腱生蛋白和基质蛋白(matrixin)。
靶向IL-2Rβγc配体融合蛋白可以被配置成例如与选自以下的细胞表面抗原结合：FAP、Her2、EGFR、IGF-lR、CD2(T细胞表面抗原)、CD3(与TCR相关的异多聚体)、CD22(B细胞受体)、CD23(低亲和力IgE受体)、CD30(细胞因子受体)、CD33(骨髓细胞表面抗原)、CD40(肿瘤坏死因子受体)、IL-6R(IL6受体)、CD20、MCSP和PDGFR(血小板源性生长因子受体)。
靶向IL-2Rβγc配体构建体可以包括抗原结合部分，所述抗原结合部分能够与由也表达IL-2R的细胞在细胞表面上表达的抗原或受体结合。表达IL-2R的细胞的实例包含例如Treg细胞、NK细胞、CD8+ T细胞、CD4+ T细胞和激活的T细胞。
靶向IL-2Rβγc配体构建体可以包括抗原结合部分，所述抗原结合部分能够与由表达IL-2R的IL-2Rβ和IL-2Rγc亚基的细胞所表达的抗原或受体结合。表达IL-2R的IL-2Rβ和IL-2Rγc亚基的细胞的实例包含例如NK细胞、CD4+ T细胞、CD8+ T细胞和激活的T细胞。
在原初CD4+ T细胞的表面上表达的抗原的实例包含CD4+、CD45RA+、CD45RO-、CCR7+和CD25。
在CD8+ T细胞的表面上表达的抗原的实例包含NKG2D、CD8+、CD45RA+、CD45O+、CCR7+和CD28+。
在CD4+ T细胞的表面上表达的抗原的实例包含Th1细胞标志物，如CD4+、CXCR3+、CCR5+和IL12Rβ2+；Th2细胞标志物，如CD4+、CCR4+和IL12Rβ2+；Th9细胞标志物，如CD4+、CCR3+和CCR5+；Th17细胞标志物，如CD4+、CCR6+、CCR4+和NK1.1+；Th22细胞标志物，如CD4+、CCR10+、CCR4+和CCR6+；Treg细胞标志物，如CD4+、CD127+、CD24+和CTLA-4+；以及Tfh细胞标志物，如CD4+、CXCR5+、CD40L+和ICOS+。
在细胞毒性CD8+ T细胞的表面上表达的抗原的实例包含CD8+和CCR7-。
记忆T细胞抗原的实例包含CCR5、CCR7、CD11a、CD27、CD28、CD45RA、CD45RO、CD57和/CD62。
原初T细胞抗原的实例包含CD45RA、CCR7、CD62L、CD127和CD132。
在NK细胞的表面上表达的抗原的实例包含TRAIL,CD16、NKp30ab、NKG2C、NKG2D、2B4、DNAM-1、NKH2A、KIRs、CD137、OX40、CD27、CD16、CD56、CD57和CD 27。
靶向IL-2Rβγc配体构建体可以包括抗原结合部分，所述抗原结合部分能够与在调节免疫应答方面发挥作用的细胞的表面上表达的抗原或受体结合。
由与调节免疫应答相关的细胞表达的抗原的实例包含PD-1、CTLA-4、CD20和CD30。
靶向IL-2Rβγc配体构建体可以包括抗原结合部分，所述抗原结合部分能够与Treg细胞表面上表达的抗原或受体，如CD25结合。例如，靶向Treg细胞的构建体可以包括IL-2Rβγc配体/达克珠单抗(daclizumab)抗体融合体。
由本公开提供的双重药理学IL-2Rβγc配体构建体可以包括由本公开提供的IL-2Rβγc配体和药理学部分。药理学部分可以对表达IL-2R的细胞或除表达IL-2R的细胞以外的细胞发挥治疗作用。一个或多个IL-2Rβγc配体可以与生物剂连接，所述生物剂包含治疗化合物，例如抗肿瘤剂、抗微生物剂、激素、免疫调节剂和抗炎剂。
双重药理学IL-2Rβγc配体构建体可以包括例如蛋白质，如抗体。抗体可以是IgA同种型、IgD同种型、IgE同种型、IgG同种型或IgM同种型。双重药理学IL-2Rβγc配体构建体可以包括通过连接子与药理学活性抗体偶联的IL-2Rβγc配体。连接子可以是天然存在的分子或合成分子。
双重药理学IL-2Rβγc配体构建体可以包括具有抗原结合部分的抗体和通过Fc连接子与Fc链结合的一个或多个IL-2Rβγc配体。
抗体可以包括针对细胞特异性抗原的抗体。针对细胞特异性抗原的抗体的实例包含阿仑单抗(alemtuzumab)(CD52抗原)、曲妥珠单抗(trastuzumab)(Her2蛋白)、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)(CD20抗原)、本妥昔单抗(brentuximab vedotin)(CD30抗原)、阿多曲妥珠单抗美坦新(ado-trastuzumab emtansine)(Her2蛋白)、博纳吐单抗(blinatumomab)(CD19蛋白和CD3蛋白)。
双重药理学IL-2Rβγc配体构建体可以包括已知可用于治疗癌症的部分。已知可用于治疗癌症的单克隆抗体的实例包含阿仑单抗、阿特珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、贝伐单抗(bevacizumab)、本妥昔单抗(brentuximab)、西米普利单抗、西妥昔单抗(cetuximab)、曲妥珠单抗、地诺单抗(denosumab)、利妥昔单抗(rituximab)、伊匹单抗(ipilimumab)、纳武单抗(nivolumab)、奥比妥珠单抗(obinutuzumab)、奥法木单抗(ofatumumab)、帕尼单抗(panitumumab)、派姆单抗、帕妥珠单抗(pertuzumab)、利妥昔单抗和曲妥珠单抗。
双重药理学IL-2Rβγc配体构建体可以包括已知作为检查点抑制剂的部分，如CTLA-4抑制剂、PD-1抑制剂、PD-L1和PD-L2抑制剂。
合适的PD-1抑制剂的实例包含纳武单抗、西米普利单抗和派姆单抗；CTLA-4抑制剂的实例包含伊匹单抗；并且PD-L1抑制剂的实例包含阿特珠单抗和德瓦鲁单抗(durvalumab)。
可用于治疗自身免疫性疾病和炎性疾病的单克隆抗体的实例包含阿昔单抗(abciximab)、阿达木单抗(adalimumab)、阿法西普(alefacept)、阿仑单抗、巴利昔单抗(basiliximab)、贝利单抗(belimumab)、贝珠单抗(bezlotuxumab)、卡那单抗(canakinumab)、赛妥珠单抗(certolizumab)、达克珠单抗、地诺单抗、依法珠单抗(efalizumab)、戈利木单抗(golimumab)、inflectra、伊匹单抗、依奇珠单抗(ixekizumab)、纳特利珠单抗(natlizumab)、纳武单抗、奥拉单抗(olaratumab)、阿马珠单抗(amalizumab)、帕利珠单抗(palivizumab)、帕尼单抗、派姆单抗、利妥昔单抗、托珠单抗(tocilizumab)、曲妥珠单抗、苏金单抗(secukinumab)和优特克单抗(ustekinumab)。
双重药理学IL-2Rβγc配体抗体构建体可以包括针对检查点抑制剂的抗体。检查点抑制剂的抗体包含：CTLA-4阻断物阻断抗体、PD-1抑制剂，如纳武单抗、派姆单抗和斯巴达珠单抗(spartalzumab)；PD-L1抑制剂，如阿特珠单抗；和其它靶向内在检查点阻断物的抗体，如CISH。
合适的FDA批准的抗体检查点抑制剂包含伊匹单抗(CTLA-4)、纳武单抗(PD-1)、派姆单抗(PD-1)、阿特珠单抗(PD-1)、阿维鲁单抗(PD-1)、德瓦鲁单抗(PD-1)和西米普利单抗(PD-1)。
双重药理学IL-2Rβγc配体构建体可以包括细胞因子融合体。IL-2Rβγc配体细胞因子构建体可以包括一个或多个IL-2Rβγc配体和一个或多个与天然存在的分子或合成分子结合的细胞因子。例如，一个或多个IL-2Rβγc配体和一个或多个细胞因子可以与多肽或蛋白质，如IgG或Fc片段结合。细胞因子可以选自例如白细胞介素、趋化因子、集落刺激因子、干扰素、转化生长因子和肿瘤坏死因子。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合构建体可以包括病毒学构建体。IL-2Rβγc结合病毒学构建体可以包括由本公开提供的配体以及在病毒表面上表达的蛋白质、在由病毒靶向的细胞表面上表达的抗原、由病毒靶向的细胞表面抗原或病毒样颗粒或疫苗。
由本公开提供的某些IL-2Rβγc配体和IL-2Rβγc配体构建体可以使用重组DNA技术合成。
由本公开提供的某些IL-2Rβγc配体和IL-2Rβγc配体构建体可以使用合成有机化学方法合成。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体和IL-2Rβγc配体构建体是IL-2R的激动剂。
IL-2Rβγc配体和IL-2Rβγc配体构建体可以与IL-2R的IL-2Rβ亚基和/或IL-2Rγc亚基结合并且可以激活IL-2R。IL-2Rβγc配体或IL-2Rβγc配体构建体与IL-2Rβ亚基和/或IL-2Rγc亚基的结合亲和力(IC50)可以独立地例如小于100μM、小于10μM、小于1μM、小于100nM、小于10nM或小于1nM。
IL-2Rβγc配体或IL-2Rβγc配体构建体与IL-2Rβ亚基和/或IL-2Rγc亚基的结合亲和力(IC50)可以例如小于100μM、小于10μM、小于1μM、小于100nM、小于10nM或小于1nM。IL-2Rβγc配体或IL-2Rβγc配体构建体可以与IL-2竞争性或非竞争性地与IL-2Rβ亚基和/或IL-2Rγc亚基结合。
IL-2Rβγc配体或IL-2Rβγc配体构建体可以被配置成更有效地激活表达IL-2Rβ亚基和IL-2Rγc亚基的细胞，由此促进通过控制IL-2Rβγc配体激动剂或IL-2Rβγc配体构建体激动剂的剂量来差异性地激活在不同细胞类型的表面上表达的IL-2R的能力。例如，当用IL-2Rβγc配体或IL-2Rβγc配体构建体温育时，表达IL-2Rβγc亚基的原代人外周血单核细胞(PBMC)磷酸化信号转导子和转录激活子5(STAT5)。
由IL-2Rβγc配体或IL-2Rβγc配体构建体诱导的TF-1β或NK-92细胞中STAT5磷酸化的EC50可以例如小于100μM、小于10μM、小于1μM、小于100nM、小于10nM或小于1nM。
由IL-2Rβγc配体或IL-2Rβγc配体构建体诱导的TF-1β或NK-92细胞中STAT5磷酸化的EC50可以例如在1pM至100μm、10pM至10μm或100pM至1μm的范围内。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体和IL-2Rβγc配体构建体可以激活NK-92细胞中的STAT5磷酸化通路、AKT磷酸化通路和ERK1/2磷酸化通路。
IL-2Rβγc配体或IL-2Rβγc配体构建体可以部分地激活IL-2R。部分激活是指例如小于最大激活的75％、小于最大激活的50％、25％、10％或1％的激活水平。IL-2R的最大激活(Emax)是指在高激动剂浓度，如高IL-2浓度下可实现的细胞信号(激活)的幅度。部分IL-2R激动剂可以在表达IL-2R的不同细胞类型中有效地调节IL-2R对IL-2Rβ和IL-2Rγc亚基激活的应答水平。例如，已知不同的细胞类型在IL-2R亚基中的每一个，IL-2Rα、IL-2Rβ和IL-2Rγc的表达水平上有所不同，并且对IL-2R激动剂表现出不同的敏感性。
IL-2Rβγc配体或IL-2Rβγc配体构建体可以包括经修饰的IL-2Rβ配体和/或IL-2Rγc配体。可以选择或设计经修饰的IL-2Rβ和IL-2Rγc配体以结合和激活IL-2R，但对IL-2R的亲和力和效力较低或适中。此类IL-2Rβγc配体和IL-2Rβγc配体构建体可以在高度表达IL-2Rα的细胞与具有低IL-2Rα表达水平的细胞之间；例如，在具有高IL-2Rα表达的Treg与具有低IL-2Rα表达水平的Teff细胞之间对IL-2R激活具有更大的差异敏感性。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体和IL-2Rβγc配体构建体可以充当完全IL-2R激动剂、部分IL-2R激动剂、偏向的IL-2R激动剂或pH偏向的IL-2R激动剂。
如实例8所示，在NK-92细胞中，相对于NK-92细胞中的STAT5磷酸化、AKT磷酸化和ERK1/2磷酸化，IL-2Rβγc配体(BGL21)充当与IL-2相当的完全激动剂。
如实例3-6和对应的图2-5B所示，由本公开提供的其它IL-2Rβγc配体在TF-1β细胞中表现出的STAT5磷酸化活性比在IL-2Rβγc配体(BGL21)中表现出的STAT5磷酸化活性更低并且可以被认为是TF-1β细胞中的STAT5磷酸化的部分激动剂。
如实例9所示，相对于静息CD8 T细胞、静息Treg细胞和静息CD4 T细胞中的STAT5磷酸化，IL-2Rβγc配体(BGL21)在不同细胞类型中表现出约1E-9(EC50)的非选择性激动剂活性。相比之下，IL-2的EC50变化约两(2)个数量级，并对静息Treg细胞中的STAT5磷酸化表现出高选择性。
在IL-2Rβγc配体构建体中观察到类似的效果，其中通过TF-1β细胞中的STAT5磷酸化确定的激动剂活性根据IL-2Rβγc配体、构建体连接子、构建体配偶体和构建体配偶体上的结合位置而修饰。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体和IL-2Rβγc配体构建体可以充当IL-2R拮抗剂。由本公开提供的IL-2Rβγc配体拮抗剂和IL-2Rβγc配体构建体拮抗剂可以以例如小于100μM、小于10μM、小于1μM、小于0.1μM或小于0.01μM的IC50与IL-2R结合，并且如例如使用实例中公开的任何功能测定如STAT5磷酸化测定所确定的，没有表现出可检测的功能活性。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物在与包含癌症新抗原疫苗的某些疫苗组合时可以是有用的。肿瘤DNA的突变会产生对身体来说是外来的新蛋白质序列。疫苗可以被设计成专门激活患者针对肿瘤特异性新抗原的免疫系统。当与新抗原疫苗组合施用时，由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物可以在肿瘤微环境中扩增和增殖新抗原特异性T细胞，并且因此驱动疫苗诱导的新抗原特异性T细胞的最大扩增，以用于治疗癌症。
例如，据报道，bempegaldesleukin(NKTR-214)是在临床前肿瘤模型中与新抗原疫苗VB10.NEO组合的偏向的IL-2Rβγc激动剂。观察到对新抗原特异性T细胞应答的协同效应。在CD4和CD8 T细胞两者中也观察到协同效应，对CD8 T细胞的效应最显著。新抗原疫苗VB10.NEO与NKTR-214和抗PD-1组合诱导小肿瘤的快速且持久的肿瘤消退和大肿瘤的长期稳定。NKTR-214和新抗原疫苗VB10.NEO的组合目前正在人类试验中进行研究。
作为另一个实例，在致癌物诱导的大鼠非肌肉浸润性膀胱癌症(NMIBC)模型中，将IL-15突变体和据报道是IL-2Rβγc激动剂的IL-15R的IL-15Rα亚基(ALT-803)的Fc融合体的复合物与卡介苗(BCG)、免疫刺激剂和结核病疫苗血管内共同施用。作为单一治疗剂，与对照相比，ALT-803降低了35％的肿瘤负荷，而单独的BCG仅降低了15％的肿瘤负荷。与对照相比，ALT-803和BCG的组合降低了46％的肿瘤负荷。这种组合目前正在人类临床试验中进行研究。
因此，由本公开提供的IL-2Rβγc配体和IL-2Rβγc构建体可以用作佐剂。佐剂是指增强疫苗功效而不直接参与保护性免疫的化合物。例如，由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物可以与癌症疫苗联合使用。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体和IL-2Rβγc配体构建体在被工程化为在也表达IL-2Rβγc亚基的细胞的膜表面上表达时可以用于细胞治疗。目前正在研究使用NK细胞或使用重新靶向嵌合抗原受体(CAR)T细胞的过继免疫疗法作为肿瘤和病毒感染的治疗方法。这些细胞疗法面临的一个挑战是输注的细胞的持续存活期未达最佳标准。
可以使用标准技术构建以使得IL-2Rβγc配体在细胞的细胞外表面表达的方式编码与膜蛋白融合的IL-2Rβγc配体的DNA。当包括IL-2Rβγc配体的融合蛋白表达时，细胞上的IL-2受体被激活，从而使得细胞长期存在。
作为实例，已经报道了通过肽基连接子(CIRB)连接的IL-2和其受体亚基IL-2Rβ的新的嵌合IL-2/IL-2Rβ融合蛋白。表达CIRB的NK-92细胞(NK-92CIRB)在没有外源IL-2的情况下高度激活并无限扩增。当与分泌IL-2的NK-92细胞系相比时，NK-92CIRB细胞比NK-92细胞更具活性、细胞毒性和生长抑制抗性。在存在癌细胞的情况下，NK-92CIRB细胞表现出增强的细胞毒性，从而在小鼠体内产生优异的抗肿瘤效果。
作为另一个实例，已经报道了CAR和膜结合嵌合IL-15(mbIL15)两者的共表达。已知IL-15通过激活IL-2Rβγc而起作用。mbIL15-CAR T细胞显示了不依赖于CAR信号传导的T细胞持久性并在动物模型中实现了对CD19+白血病的有效排斥。长寿命的T细胞拥有类似记忆的转录谱。结果表明，CAR+ T细胞可以发展为具有由通过mbIL15的信号传导维持的记忆干细胞表型的长期持久性。
编码IL-2Rβγc配体的DNA可以掺入细胞中并且可以被配置成产生由本公开提供的IL-2Rβγc配体。IL-2Rβγc配体可以从细胞中分泌出来，并且可以与分泌细胞(即自分泌信号传导)和/或分泌细胞附近的细胞(即旁分泌信号传导)相互作用。由本公开提供的分泌的IL-2Rβγc配体或IL-2Rβγc配体构建体可以是IL-2R激动剂并且可以被设计成定位在分泌细胞附近。
由本公开提供的IL-2Rβγc配体或IL-2Rβγc配体构建体可以用于在患者体内或生物样品内扩增非调节性T细胞。增加非调节性T细胞与Treg细胞的比率的方法可以包括使T细胞群体与有效量的IL-2Rβγc配体或IL-2Rβγc配体构建体接触。所述比率可以通过确定T细胞群体中CD3+FOXP3+细胞与CD3+FOXP3-细胞的比率来测量。人血液中的典型Treg频率为总CD4+CD3+ T细胞的5％至10％，然而在某些疾病中，此百分比可以更低或更高。
IL-2Rβγc配体或IL-2Rβγc配体构建体可以用于扩增NK细胞。用将免疫细胞活性重定向到靶癌细胞的嵌合抗原受体(CAR)修饰的NK细胞已被证明表现出改善的抗肿瘤应答。CAR可以包括抗体源性细胞外结构域，所述结构域与期望的肿瘤相关抗原(TAA)结合并触发细胞内信号传导级联反应以激活针对靶细胞的免疫细胞。
NK细胞可以利用膜结合的IL-2Rβγc配体进行基因工程化以增强如NKG2D等一种或多种肿瘤靶向受体的表达，这可以延长NK细胞的持久性和效力。
CAR T细胞可以被基因工程化以共表达由本公开提供的束缚形式的IL-2Rβγc配体，以支持未成熟分化状态的体内持久性和维持并表现出体内抗肿瘤活性。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物，即IL-2Rβγc配体、串联IL-2Rβγc配体和IL-2Rβγc配体构建体，可以掺入药物组合物中以通过任何适当的施用途径施用于患者，所述施用途径包含皮内、肌肉内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外、口服、经口、舌下、脑内、阴道内、透皮、直肠、吸入或局部。由本公开提供的药物组合物可以是可注射调配物。由本公开提供的药物组合物可以是可注射的静脉内调配物。由本公开提供的药物组合物可以是口服调配物。口服调配物可以是口服剂型。药物组合物可以被调配成用于静脉内施用或皮下施用。
由本公开提供的药物组合物可以包括治疗有效量的IL-2Rβγc结合化合物以及合适量的一种或多种药学上可接受的媒剂，以提供用于向患者适当施用的组合物。本领域描述了合适的药物媒剂和制备药物组合物的方法。
评估单个患者对疗法的应答并使患者获得最佳治疗的资格是现代医疗保健的最大挑战之一，并且与个性化医疗的趋势有关。IL-2Rβγc结合化合物可以具有靶选择性，例如对于某些癌症和免疫细胞。针对正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)放射性标记的IL-2Rβγc结合化合物可以用于基于单一研究、逐案患者分析来预测治疗的靶向性，因此排除了预计不会从治疗中受益的患者。使用IL-2Rβγc结合化合物的PET/SPECT扫描，一旦与浓度相关，就可以提供三维分布图，然后所述三维分布图可以用于宏观剂量计算。
因此，测定IL-2Rβγc结合化合物和/或其药物组合物并使用其进行治疗在本领域技术人员的能力范围内。
IL-2Rβγc结合化合物和/或其药物组合物通常可以以有效达到预期目的的量使用。为了用于治疗如癌症、自身免疫性疾病或炎性疾病等疾病，可以以治疗有效量施用或应用IL-2Rβγc结合化合物和/或其药物组合物。
将有效治疗本文公开的特定病症或病状的IL-2Rβγc结合化合物和/或前述任一种的药物组合物的量将部分取决于病症或病状的性质，并且可以通过本领域已知的标准临床技术来确定。另外，可以任选地采用体外或体内测定来帮助鉴定最佳剂量范围。除其它因素外，IL-2Rβγc结合化合物和/或前述任一种的药物组合物的施用量还将取决于被治疗的患者、患者的体重、病痛的严重程度、施用方式以及开处方医生的判断。
在用于人体之前，可以在体外和体内测定IL-2Rβγc结合化合物的期望的治疗活性。例如，体外测定可以用于确定是优选施用特定化合物还是化合物的组合。使用动物模型系统也可以证明所述化合物是有效且安全的。
在某些实施例中，治疗有效剂量的IL-2Rβγc结合化合物和/或前述任一种的药物组合物将提供治疗益处而不引起显著的毒性。IL-2Rβγc结合化合物和/或前述任一种的药物组合物的毒性可以使用标准药学程序确定并且可以由技术人员容易地确定。毒性与治疗效果之间的剂量比率是治疗指数。IL-2Rβγc结合化合物和/或前述任一种的药物组合物在治疗疾病和病症中表现出特别高的治疗指数。IL-2Rβγc结合化合物和/或前述任一种的药物组合物的剂量将在包含具有最小毒性的有效剂量的循环浓度的范围内。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以包含在试剂盒中，出于治疗目的，可以使用所述试剂盒将化合物施用于患者。试剂盒可以包含：药物组合物，所述药物组合物包括由本公开提供的适合施用于患者的IL-2Rβγc结合化合物；以及用于将药物组合物施用于患者的说明书。所述试剂盒可以是用于治疗癌症、用于治疗自身免疫性疾病或用于治疗炎性疾病的试剂盒。用于治疗患者的癌症的试剂盒可以包括由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物、用于施用所述化合物的药学上可接受的媒剂以及用于向患者施用所述化合物的说明书。
药物组合物可以与施用说明书一起包含在容器、包装或分配器中。
随试剂盒提供的说明书可以打印和/或例如以电子可读介质、录像带、录音带、闪存装置的形式提供，或者可以在互联网网站上发布或以电子通信的形式分发到患者和/或医疗保健提供者。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物在与包含癌症新抗原疫苗的某些疫苗组合时可以是有用的。肿瘤DNA的突变会产生对身体来说是外来的新蛋白质序列。疫苗可以被设计成专门激活患者针对肿瘤特异性新抗原的免疫系统。当与新抗原疫苗组合施用时，由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物可以在肿瘤微环境中扩增和增殖新抗原特异性T细胞，并且因此驱动疫苗诱导的新抗原特异性T细胞的最大扩增，以用于治疗癌症。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物可以用作疫苗佐剂。佐剂是指增强疫苗功效而不直接参与保护性免疫的化合物。例如，由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物可以与癌症疫苗或病毒疫苗联合使用。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物在被工程化为在也表达IL-2Rβ和Rγc亚基的细胞的膜表面上表达时可以用于细胞治疗。目前正在研究使用NK细胞或使用重新靶向嵌合抗原受体(CAR)T细胞的过继免疫疗法作为肿瘤和病毒感染的治疗方法。这些细胞疗法面临的一个挑战是输注的细胞的持续存活期未达最佳标准。
可以使用标准技术构建以使得IL-2Rβγc结合化合物在细胞的细胞外表面表达的方式编码与膜蛋白融合的配体的DNA。当包括IL-2Rβγc配体和/或IL-2Rβγc配体的融合蛋白表达时，细胞上的IL-2受体被激活，从而使得细胞长期存在。
编码配体的DNA可以掺入细胞中并且可以被配置成产生由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物。IL-2Rβγc结合化合物可以从细胞中分泌出来，并且可以与分泌细胞(即自分泌信号传导)和/或分泌细胞附近的细胞(即旁分泌信号传导)相互作用。由本公开提供的分泌的IL-2Rβγc结合化合物可以是IL-2R激动剂并且可以被设计成定位在分泌细胞附近。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物可以用于扩增患者体内或生物样品内的T细胞。增加非调节性T细胞与Treg细胞的比率的方法可以包括使T细胞群体与有效量的IL-2Rβγc结合化合物接触。所述比率可以通过确定T细胞群体中CD3+FOXP3+细胞与CD3+FOXP3-细胞的比率来测量。人血液中的典型Treg频率为总CD4+CD3+ T细胞的5％至10％，然而在某些疾病中，此百分比可以更低或更高。
IL-2Rβγc结合化合物可以用于扩增T细胞。用将免疫细胞活性重定向到靶癌细胞的嵌合抗原受体(CAR)修饰的T细胞已被证明表现出改善的抗肿瘤应答。CAR可以包括抗体源性细胞外结构域，所述结构域与期望的肿瘤相关抗原(TAA)结合并触发细胞内信号传导级联反应以激活针对靶细胞的免疫细胞。
固定到表面的IL-2Rβγc结合化合物可以在体外或离体暴露于T细胞群体，以诱导细胞群体的扩增。在转移给患者之前。CAR-T细胞可以通过暴露于固定形式的IL-2Rβγc结合化合物来扩增。在将CAR-T细胞转移给患者之前，可以将固定的IL-2Rβγc结合化合物与CAR-T细胞分离。
CAR T细胞可以被基因工程化以共表达由本公开提供的束缚形式的IL-2Rβγc结合化合物，以支持未成熟分化状态的体内持久性和维持并表现出体内抗肿瘤活性。
评估单个患者对疗法的应答并使患者获得最佳治疗的资格是现代医疗保健的最大挑战之一，并且与个性化医疗的趋势有关。IL-2Rβγc结合化合物可以具有靶选择性，例如对于某些癌症和免疫细胞。针对正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)放射性标记的IL-2Rβγc结合化合物可以用于基于单一研究、逐案患者分析来预测治疗的靶向性，因此排除了预计不会从治疗中受益的患者。使用IL-2Rβγc结合化合物的PET/SPECT扫描，一旦与浓度相关，就可以提供三维分布图，然后所述三维分布图可以用于剂量计算。
IL-2Rβγc结合化合物可以包括一种或多种成像剂。IL-2Rβγc结合化合物可以将化合物引导和定位到表达IL-2R的细胞、细胞群体和组织。成像化合物可以包括一种或多种成像剂，如放射性标记、荧光标记、酶标记或PET成像剂。
成像剂可以用于确定表达IL-2R的细胞的数量、表达IL-2R的细胞的表达水平或IL-2R的性质，如特定IL-2Rβγc结合化合物与IL-2R的结合亲和力。例如，成像剂可以用于评估表达IL-2Rβ亚基和Rγc亚基的癌细胞或评估Treg和/或Teff细胞。
可以检测标记以确定化合物在患者体内的生物分布或评估治疗功效的潜力。例如，表达高水平的IL-2R的肿瘤可能是由本公开提供的治疗性IL-2Rβγc结合化合物的有吸引力的靶标。
成像剂可以用于在治疗前、治疗期间和/或治疗后评估表达IL-2R的细胞。
包括配体的成像剂可以进一步包括能够与细胞表面结合并且特别是与在细胞表面上表达的蛋白质结合的部分。所述蛋白质可以指示某种细胞类型并且被称为细胞表面标志物。包括配体和细胞表面标志物两者的成像剂可以用于评估表达IL-2R和细胞表面标志物的细胞、细胞群体和/或组织。评估可以包含确定表达IL-2R和细胞表面标志物的细胞的数量、IL-2R和细胞表面标志物的表达水平、和/或成像剂与IL-2R和/或细胞表面标志物的结合亲和力。
成像剂可以用于在治疗前、治疗期间和/或治疗后评估表达IL-2R和细胞表面标志物的细胞。
可以标记由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物。标记的化合物可以用于诊断。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物可以用可检测标志物进行标记。所述标记可以用于确定化合物在患者体内的生物分布或评估治疗功效的潜力。例如，表达高水平的IL-2R的肿瘤可能是由本公开提供的选择性IL-2R激动剂和IL-2Rβγc结合化合物的有吸引力的靶标。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物包含标记的化合物。标记的化合物可以是可检测标志物，例如放射性标记的氨基酸或生物素基部分与多肽的连接，其中连接的生物素基部分可以通过如含有可以通过光学或比色方法检测到的荧光标志物或酶活性的链霉亲和素等标记的亲和素检测。本领域已知并且可以使用标记多肽和糖蛋白的各种方法。多肽的标记的实例包含例如如3H、14C、35S、125I和131I等放射性同位素、如FITC、罗丹明(rhodamine)和镧系元素磷光体等荧光标记、如辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶、荧光素酶和碱性磷酸酶等酶标记、生物素基团、如亮氨酸拉链对序列、二级抗体的结合位点等由二级报告基因识别的预定多肽表位、金属配体和表位标签。可以通过各种长度的间隔子臂连接标签，以减少潜在的空间位阻。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物可以用于例如治疗疾病，如癌症、炎性疾病、自身免疫性疾病、免疫缺陷或传染性疾病，包含病毒性疾病，如COVID-19。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物和前述任一种的药物组合物可以施用于患者以治疗器官移植。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物和前述任一种的药物组合物可以与另一种化合物一起施用于患者，以用于治疗受试者的炎性疾病或自身免疫性疾病。至少一种其它治疗剂可以是由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物。IL-2Rβγc结合化合物和至少一种其它治疗剂可以相加或协同作用。至少一种另外的治疗剂可以包含在包括IL-2Rβγc结合化合物的相同药物组合物或媒剂中，或者可以在单独的药物组合物或媒剂中。因此，由本公开提供的方法进一步包含除了施用IL-2Rβγc结合化合物之外，还施用一种或多种有效治疗炎性疾病或自身免疫性疾病或与炎性疾病或自身免疫性疾病不同的疾病、病症或病状的治疗剂。由本公开提供的方法包含施用IL-2Rβγc结合化合物和一种或多种其它治疗剂，条件是组合施用不抑制IL-2Rβγc结合化合物的治疗功效和/或不产生不利的组合作用。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物包括治疗患者的疾病，如癌症、炎性疾病或自身免疫性疾病，包括向有需要的患者施用治疗有效量的化合物，所述化合物能够以小于100μM、小于10μM、小于1μM、小于100nM或小于10nM的IC50与IL-2R的IL-2Rβ亚基和/或Rγc亚基的特异性结合位点结合。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物可以用于治疗患者的癌症。例如，癌症可以是实体瘤或转移瘤。
可以施用由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物以治疗已知通过激活IL-2R而治疗的癌症。可以施用由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物以治疗已知通过激活IL-2Rβγc亚基而治疗的癌症，并且其中IL-2Rα亚基的同时激活损害治疗功效和/或引起不希望的副作用。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以用于治疗例如以下癌症中的一种或多种：急性成淋巴细胞性白血病、急性髓性白血病、肾上腺皮质癌、阑尾癌、星形细胞瘤、非典型畸胎样/横纹肌瘤、基底细胞癌(非黑色素瘤)、B细胞淋巴瘤、膀胱癌、骨癌、脑和脊髓肿瘤、脑干癌、脑肿瘤、乳腺癌、支气管肿瘤、伯基特淋巴瘤(Burkittlymphoma)、类癌瘤、头颈癌、中枢神经系统胚胎肿瘤、小脑星形细胞瘤、脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤、宫颈癌、脊索瘤、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、结直肠癌、颅咽管瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、促纤维增生性小圆细胞瘤、导管癌、染料癌、胰腺内分泌肿瘤(胰岛细胞肿瘤)、子宫内膜癌、室管膜母细胞瘤、食道癌、嗅神经母细胞瘤、尤文肿瘤家族(Ewing family of tumors)、颅外生殖细胞肿瘤、肝外胆管癌、胆囊癌、胃癌、胃肠道类癌、胃肠道间质瘤、妊娠滋养细胞肿瘤、胶质母细胞瘤、神经胶质瘤、毛细胞白血病、头颈癌、心脏病、淋巴系造血肿瘤、肝细胞癌、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma)、下咽癌、下丘脑和视觉通路神经胶质瘤、ID相关淋巴瘤、眼内黑色素瘤、胰岛细胞肿瘤、卡波西肉瘤(Kaposisarcoma)、肾癌、朗格汉斯细胞组织细胞增多症(Langerhans cell histiocytosis)、喉癌、白血病、唇癌和口腔癌、男性乳腺癌、恶性纤维组织细胞瘤、恶性生殖细胞瘤、恶性间皮瘤、髓母细胞瘤、黑色素瘤、默克尔细胞癌(Merkel cell carcinoma)、间皮瘤、口腔癌、多发性内分泌瘤综合征、多发性骨髓瘤、蕈样肉芽肿、骨髓增生异常、骨髓增生性肿瘤、鼻腔和鼻窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢生殖细胞肿瘤、卵巢低恶性潜能肿瘤、胰腺癌、胰腺神经内分泌肿瘤(胰岛细胞肿瘤)、乳头状瘤病、副神经节瘤、鼻旁窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌、嗜铬细胞瘤、松果体实质瘤、松果体母细胞瘤和幕上原始神经外胚层肿瘤、垂体肿瘤、浆细胞肿瘤/多发性骨髓瘤、胸膜肺母细胞瘤、妊娠和乳腺癌、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性肝癌、具有隐匿性的原发性转移性鳞状颈癌、前列腺癌、直肠癌、肾细胞癌、肾盂和输尿管、呼吸道癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤、塞泽里综合征(Sézarysyndrome)、皮肤癌、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌(非黑色素瘤)、胃癌、幕上原始神经外胚层肿瘤、T细胞淋巴瘤、睾丸癌、喉癌、胸腺瘤和胸腺癌、甲状腺癌、移行细胞癌、尿道癌、子宫肉瘤、阴道癌、视觉通路和下丘脑神经胶质瘤、外阴癌、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症( macroglobulinemia)、维尔姆斯瘤(Wilmstumor)以及前述任一种的全身和中央转移。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以用于治疗实体瘤。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以用于治疗肿瘤转移。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以用于治疗循环肿瘤细胞。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以用于治疗例如选自以下的癌症：原发性成人和儿童脑和CNS癌症，包含胶质母细胞瘤(GBM)和星形细胞瘤；皮肤癌，包含黑色素瘤；肺癌，包含小细胞肺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)和大细胞肺癌；乳腺癌，包含三阴性乳腺癌(TNBC)；血癌，包含骨髓增生异常综合征(MDS)、多发性骨髓瘤(MM)和急性髓性白血病(AML)；前列腺癌，包含去势抵抗性前列腺癌(CRPC)；肝癌，包含肝细胞癌(HCC)；食道癌和胃癌；以及前述任一种的全身和中央转移。
将有效治疗癌症的由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物的量可以至少部分取决于疾病的性质，并且可以由本领域已知的标准临床技术确定。另外，可以采用体外或体内测定来帮助鉴定最佳剂量范围。给药方案和给药间隔也可以通过本领域技术人员已知的方法确定。除其它因素外，由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物的施用量还可以取决于被治疗的患者、患者的体重、疾病的严重程度、施用途径和开处方医生的判断。
对于全身施用，治疗有效剂量可以从体外测定初步估计。还可以使用本领域已知的技术从体内数据，例如，动物模型估计初始剂量。此类信息可以用于更准确地确定可用于人体的剂量。本领域普通技术人员可以基于动物数据优化对人的施用。
可以选择由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物的剂量和适当的给药间隔以维持由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物在患者血液中的持续治疗有效浓度，并且在某些实施例中，不超过最小不利浓度。
可以例如每周一次、每2周一次、每3周一次、每4周一次、每5周一次或每6周一次施用包括由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物的药物组合物。给药可以单独提供或者与其它药物组合提供，并且只要需要有效治疗疾病，就可以继续进行。也可以在一定时间段内使用连续或半连续施用进行给药。给药包含将药物组合物施用于处于进食或禁食状态的哺乳动物，如人。
药物组合物可以以单一剂型或多个剂型或在一定时间段内作为连续或累积剂量施用。当使用多个剂型时，多个剂型中的每一个中含有的由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物的量可以相同或不同。
用于施用的合适的日剂量范围可以是例如每千克体重约2μg至约200mg由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物。
用于施用的合适的日剂量范围可以是例如每平方米(m2)体表约1μg至约50mg由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物可以以例如0.001mg/天至100mg/天的量或以任何其它合适的日剂量施用以治疗患者的癌症。剂量可以是例如0.01μg/kg体重/周至100μg/kg体重/周或任何其它合适的剂量。
可以施用包括由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物的药物组合物以治疗患者的癌症，从而在患者的血液或血浆中提供治疗有效浓度的由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物。由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物的化合物在患者血液中的治疗有效浓度可以是例如0.01μg/L至1,000μg/L、0.1μg/L至500μg/L、1μg/L至250μg/L或约10μg/L至约100μg/L。由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物在患者血液中的治疗有效浓度可以是例如至少0.01μg/L、至少0.1μg/L、至少1μg/L、至少约10μg/L或至少100μg/L。IL-2Rβγc结合化合物在患者血液中的治疗有效浓度可以例如小于引起包含对内稳态的副作用的不可接受的副作用的量。IL-2Rβγc结合化合物在患者血液中的治疗有效浓度可以是足以恢复和/或维持患者内稳态的量。
可以施用包括IL-2Rβγc结合化合物的药物组合物以治疗患者的疾病，从而在患者血液中提供治疗有效浓度的IL-2Rβγc结合化合物，持续延长的时间段，例如持续至少1天、至少1周、至少2周、至少4周、至少5周或至少6周。
在治疗方案期间，IL-2Rβγc结合化合物的施用量可以变化。
由本公开提供的药物组合物除了由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物外，还可以进一步包括一种或多种药学活性化合物。可以提供此类化合物，例如以治疗用IL-2Rβγc结合化合物治疗的癌症，或治疗除用IL-2Rβγc结合化合物治疗的癌症以外的疾病、病症或病状，治疗由施用IL-2Rβγc结合化合物引起的副作用，增强IL-2Rβγc结合化合物的功效和/或调节IL-2Rβγc结合化合物的活性。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物可以与至少一种其它治疗剂组合使用。IL-2Rβγc结合化合物可以与另一种化合物一起施用于患者以治疗患者的癌症。至少一种其它治疗剂可以是第二种不同的IL-2Rβγc结合化合物。IL-2Rβγc结合化合物和至少一种其它治疗剂可以相加作用，或者在某些实施例中，与另一种IL-2Rβγc结合化合物协同作用。至少一种另外的治疗剂可以包含在包括IL-2Rβγc结合化合物的相同药物组合物或媒剂中，或者可以在单独的药物组合物或媒剂中。因此，由本公开提供的方法进一步包含除了施用IL-2Rβγc结合化合物之外，还施用一种或多种有效治疗癌症或与癌症不同的疾病、病症或病状的治疗剂。由本公开提供的方法包含施用IL-2Rβγc结合化合物和一种或多种其它治疗剂，条件是组合施用不抑制IL-2Rβγc结合化合物的治疗功效和/或不产生不利的组合作用。
包括IL-2Rβγc结合化合物的药物组合物可以与另一种治疗剂的施用同时施用，所述另一种治疗剂可以是与包括IL-2Rβγc结合化合物的药物组合物相同的药物组合物的一部分或在不同的药物组合物中。可以在施用另一种治疗剂之前或之后施用IL-2Rβγc结合化合物。在某些组合疗法中，组合疗法可以包括交替施用IL-2Rβγc结合化合物和包括另一种治疗剂的组合物，例如以最小化与特定药物相关的药物副作用。当IL-2Rβγc结合化合物与潜在地可以产生包含例如毒性的药物副作用的另一种治疗剂同时施用时，所述另一种治疗剂可以以落在引发不良药物反应的阈值以下的剂量施用。
包括由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物的药物组合物可以与一种或多种物质一起施用，例如以增强、调节和/或控制IL-2Rβγc结合化合物的释放、生物利用度、治疗功效、治疗效力和/或稳定性。例如，包括IL-2Rβγc结合化合物的药物组合物可以与具有增强IL-2Rβγc结合化合物的治疗功效的药理作用的活性剂共同施用。
IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以与已知或据信可有效治疗患者的疾病，如癌症、自身免疫性疾病或炎性疾病，如用IL-2Rβγc结合化合物治疗相同的疾病的药剂联合施用。
IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以与已知或据信干扰细胞增殖的药剂联合施用。
IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以与已知或据信干扰细胞代谢、作为抗代谢物、干扰RNA转录、干扰RNA翻译、干扰细胞蛋白质合成、干扰DNA合成和复制的前体的合成、干扰嘌呤合成、干扰核苷合成、与mTOR相互作用、作为mTOR抑制剂、干扰细胞周期检查点的药剂联合施用。
IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以与检查点抑制剂联合施用，所述检查点抑制剂包含CTLA-4抑制剂，如伊匹单抗；PD-1抑制剂，如派姆单抗和纳武单抗；和/或PD-LI抑制剂，如阿特珠单抗、阿维鲁单抗和德瓦鲁单抗。IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以与免疫调节剂，如CD137/4-1BB、CD27、GIYR和/或OC40联合施用。
IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以与已知或据信具有细胞毒性、引起DNA损伤、引起细胞周期停滞或引起有丝分裂灾难的药剂联合施用。
IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以与已知或据信调节谷胱甘肽浓度、调节细胞内谷胱甘肽浓度、降低细胞内谷胱甘肽浓度、减少摄取到细胞中的谷胱甘肽、减少谷胱甘肽合成或减少细胞内的谷胱甘肽合成的药剂联合施用。
IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以与已知或据信干扰新血管形成、减少新血管形成或促进新血管形成的药剂联合施用。
IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以与已知或据信干扰激素内稳态、干扰激素合成、干扰激素受体结合或干扰激素信号转导的药剂联合施用。
IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以与已知或据信干扰生长因子内稳态、干扰生长因子受体表达、干扰生长因子与生长因子受体结合、干扰生长因子受体信号转导、干扰Hedgehog(Hh)信号传导、抑制Hedgehog通路信号传导、抑制ALK(间变性淋巴瘤激酶)通路信号传导或抑制非同源末端连接(NHEJ)途径的药剂联合施用。
IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以与一种或多种药剂联合施用，所述药剂已知或据信是VEGFR(血管内皮生长因子受体)抑制剂、RTK(受体酪氨酸激酶)抑制剂、钠通道电流阻滞剂、FAK(粘着斑激酶)抑制剂、GLI(神经胶质瘤相关癌基因)抑制剂、GLI1抑制剂、GLI2抑制剂、GLI3抑制剂、MAPK(丝裂原激活蛋白激酶)抑制剂、MAPK/ERK通路(也称为Ras-Raf-MEK-ERK通路)抑制剂、MEK1抑制剂、MEK2抑制剂、MEK5抑制剂、MEK5/ERK5抑制剂、RTA(肾小管酸中毒)抑制剂、ALK(间变性淋巴瘤激酶)抑制剂、Aa LK激酶抑制剂、核转位抑制剂、PORCN(豪猪)抑制剂、5-ARI(5α-还原酶抑制剂)、拓扑异构酶抑制剂、Ras(大鼠肉瘤)抑制剂、K-ras抑制剂、CERK(神经酰胺激酶)抑制剂、PKB(蛋白激酶B，也称为AKT)抑制剂、AKT1抑制剂、EZH2(zeste同源物2的增强子)抑制剂、BET(溴结构域和额外末端结构域基序)抑制剂、SYK(脾酪氨酸激酶)抑制剂、JAK(janus激酶)抑制剂、SYK/JAK抑制剂、IDO(吲哚胺-吡咯2,3-双加氧酶)抑制剂、IDO1抑制剂、RXR(视黄酸X受体)激活剂、选择性RXR激活剂、p-糖蛋白抑制剂、ERK抑制剂、PI3K(磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶)抑制剂、BRD(含溴结构域蛋白)抑制剂、BRD2抑制剂、BRD3抑制剂、BRD4抑制剂、BRDT(溴结构域睾丸特异性蛋白)抑制剂、逆转录酶抑制剂、NRT(核苷类似物逆转录酶)抑制剂、PIM(莫洛尼病毒(moloney virus)的前病毒整合)抑制剂、EGFR(表皮生长因子受体)抑制剂、光敏剂、放射增敏剂、ROS(原癌基因，受体酪氨酸激酶)抑制剂、ROS1(原癌基因1)抑制剂、CK(酪蛋白激酶)抑制剂、CK2抑制剂、Bcr-Abl(断点簇区-Abelson原癌基因)酪氨酸激酶抑制剂如达沙替尼(dasatinib)、微管稳定剂、微管解聚/分解抑制剂、DNA嵌入剂、雄激素受体拮抗剂、化学保护剂、HDAC(组蛋白去乙酰化酶)抑制剂、DPP(二肽基肽酶)抑制剂、DPP-4抑制剂、BTK(布鲁顿氏酪氨酸激酶(Bruton's tyrosine kinase))抑制剂、激酶抑制剂如伊马替尼(imatinib)、酪氨酸激酶抑制剂如尼罗替尼(nilotinib)、ARP(聚(ADP-核糖)聚合酶)抑制剂、CDK(细胞周期蛋白依赖性激酶)抑制剂、CDK4抑制剂、CDK6抑制剂、CDK4/6抑制剂、HIF1α(缺氧诱导因子1-α)抑制剂、DNA连接酶抑制剂、DNA连接酶IV抑制剂、NHEJ(非同源末端连接)抑制剂、DNA连接酶IV、NHEJ抑制剂和RAF抑制剂、TKI和RAF抑制剂、TKI和RAF抑制剂如索拉非尼(sorafenib)、PDT(光动力疗法)致敏剂、ATR(共济失调毛细血管扩张症和Rad3相关蛋白激酶)抑制剂或前述任一种的组合。
IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以与一种或多种化疗剂联合施用，所述化疗剂如VEGFR抑制剂，如呋喹替尼(fruquintinib)、莫特塞尼(motesanib)/AMG-706、瓦他拉尼(vatalanib)；RTK抑制剂，如帕纳替尼(ponatinib)；钠通道阻滞剂，如GS967；FAK抑制剂，如TAE226；GLI1和GLI2抑制剂，如GANT61；MEK抑制剂，如比美替尼(binimetinib)；RTA抑制剂，如利尼伐尼(linifanib)；ALK抑制剂，如布格替尼(brigstinib)；溴丙酮酸；DNA烷化剂，如噻替哌(thiotepa)；核转位因子，如JSH-23；PORCn抑制剂，如Wnt-C59；5α-还原酶抑制剂，如度他雄胺(dutasteride)；拓扑异构酶抑制剂，如卡柔比星(carubicin)；RAS抑制剂，如Kobe0065；CerK抑制剂，如NVP-231；AKT抑制剂，如优泼色替(uprosertib)；EZH2抑制剂，如GSK-503；BET溴结构域抑制剂，如OTX015；MEK5/ERK5抑制剂，如BIX02189；Syl/JAK抑制剂，如瑟杜拉替尼(cerdulatinib)；IDO1抑制剂，如NLG919；视黄酸X受体激活剂，如蓓萨罗丁(bexsrotene)；PGP抑制剂，如阿考替胺(acotiamide)或阿考替胺HCl；Erk抑制剂，如SCH772984；PI3K抑制剂，如吉达利塞(gedatolisib)；JAK抑制剂，如鲁索替尼(ruxolitinib)；AKT抑制剂，如阿氟色替(afuresertib)或阿氟色替HCl；ALK1抑制剂，如色瑞替尼(ceritinib)；HDAC抑制剂，如艾贝司他(abexinostat)；DPP抑制剂，如奥马格列汀(oamarigliptin)；EGFR抑制剂，如吉非替尼(gefittinib)；EZH2抑制剂，如GSK126；BTK抑制剂，如依鲁替尼(ibrutinib)；激酶抑制剂，如伊马替宁HCl(imatininHCl)；IDO抑制剂，如INCB024360；DNA交联剂，如丝裂霉素C(mitomycin C)；酪氨酸激酶抑制剂，如尼罗替尼；PARP抑制剂，如奥拉帕尼(olaparib)；微管蛋白稳定促进剂，如紫杉醇(paclitaxel)；CDK4/6抑制剂，如帕博西尼(palbociclib)；RTK抑制剂，如舒尼替尼(sunitinib)；PDT敏化剂，如茨泊芬(tslsporfin)；p-糖蛋白抑制剂，如塔里基达(tariquidar)；ATR抑制剂，如VE-822；HDAC抑制剂，如PCI-24781；DPP抑制剂，如奥格列汀(omarigliptin)；EGFR抑制剂，如吉非尼布(gefinib)；EZH2抑制剂，如GSK126；BTK抑制剂，如伊布替尼(irbrutinib)；IDO抑制剂，如INCB024360；或前述任一种的组合。
例如，IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以与另一种化疗剂联合施用，所述另一种化疗剂如N-乙酰半胱氨酸(NAC)、阿霉素(adriamycin)、阿仑单抗、阿米福汀(amifostine)、三氧化二砷、抗坏血酸、苯达莫司汀(bendamustine)、贝伐单抗、硼替佐米(bortezomib)、白消安(busulfan)、丁硫氨酸亚砜胺(buthionine sulfoxime)、卡非佐米(carfilzomib)、卡莫司汀(carmustine)、氯法拉滨(clofarabine)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、环孢霉素(cyclosporine)、阿糖孢苷(cytarabine)、达沙替尼、放线菌素(datinomycin)、去纤苷(defibrotide)、地塞米松(dexamethasone)、多西他赛(docetaxel)、多柔比星(doxorubicin)、依托泊苷(etoposide)、非格司亭(filgrastim)、氟尿苷(floxuridine)、氟达拉滨(fludarabine)、吉西他滨(gemcitabine)、干扰素α、伊匹单抗、来那度胺(lenalidomide)、甲酰四氢叶酸(leucovorin)、美法仑(melphalan)、吗替麦考酚酯(mycofenolate mofetil)、紫杉醇、帕利夫明(palifermin)、帕比司他(panobinostat)、培非拉司亭(pegfilrastim)、泼尼松龙(prednisolone)、强的松(prednisone)、雷利米得(revlimid)、利妥昔单抗、西罗莫司(sirolimus)、2-巯基乙磺酸钠(MESNA)、硫代硫酸钠、他克莫司(tacrolimus)、替莫唑胺(temozolomide)、沙利度胺(thalidomide)、硫鸟嘌呤(thioguanine)、噻替派、拓扑替康(topotecan)、万珂(velcade)或前述任一种的组合。
IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以以组合疗法与其它化疗剂一起使用，所述其它化疗剂包含：一种或多种抗代谢物，如叶酸类似物；嘧啶类似物，如氟尿嘧啶、氟尿苷和阿糖胞苷；嘌呤类似物，如巯基嘌呤、硫代胍和喷司他丁；天然产物，例如长春碱、长春新碱、依托泊苷、特替泊苷(tertiposide)、放线菌素、柔红霉素、多柔比星、博来霉素、米他霉素、丝裂霉素C、L-天冬酰胺酶和干扰素α；铂配位络合物，如顺铂(cis-platinum)和卡铂(carboplatin)；米托蒽醌(mitoxantrone)；羟基脲(hydroxyurea)；丙卡巴肼(procarbazine)；激素和拮抗剂，如强的松、己酸羟孕酮、醋酸甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、己烯雌酚、乙炔雌二醇、他莫昔芬(tamoxifen)、丙酸睾酮、氟甲睾酮(fluoxymesterone)、氟他胺(flutamide)和亮丙瑞林(leuprolide)；抗血管生成剂或抑制剂，如血管抑制素(angiostatin)、视黄酸、紫杉醇、雌二醇衍生物和噻唑并嘧啶衍生物；细胞凋亡预防剂；雷公藤甲素(triptolide)；秋水仙碱(colchicine)；卢立康唑(luliconazole)；以及放射疗法。
IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以与抑制DNA修复的化合物共同施用，所述化合物如O6-苄基鸟嘌呤(O6-BG)。
IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以与一种或多种化疗剂联合施用，所述化疗剂如阿巴瑞克(abarelix)、阿比特龙(abiraterone)、醋酸阿比特龙(abirateroneacetate)、n-乙酰半胱氨酸、盐酸阿柔比星(aclarubicin hydrochloride)、阿霉素、腺嘌呤、阿法替尼(afatinib)、马来酸阿法替尼(afatinib dimaleate)、阿仑单抗、阿仑膦酸钠(alendronate sodium)、阿利维甲酸(alitretinoin)、别嘌醇钠(allopurinol sodium)、六甲蜜胺(altretamine)、阿米福汀、氨鲁米特(aminoglutethimide)、氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)、氨柔比星(amrubicin)、安吖啶(amsacrine)、阿那曲唑(anastrozole)、血管抑制素、阿普斯特(apremilast)、阿瑞匹坦(aprepitant)、三氧化二砷、抗坏血酸、左旋天冬酰胺酶、阿扎胞苷(azacitidine)、硫唑嘌呤钠(azathioprinesodium)、巴多昔芬(serm)(bazedoxifene(serm))、贝利司他(belinostat)、苯达莫司汀hcl(bendamustine hcl)、O6-苄基鸟嘌呤、贝伐单抗、蓓萨罗丁(bexarotene)、比卡鲁胺(bicalutamide)、比立考达(biricodar)、硫酸博莱霉素(bleomycin sulfate)、硼替佐米、博舒替尼(bosutinib)、溴夫定(brivudine)、布舍瑞林(buserelin)、白消安、丁硫氨酸亚砜胺、卡巴他赛(cabazitaxel)、卡博替尼(cabozantinib)、卡培他滨(capecitabine)、卡铂、卡波醌(carboquone)、卡非佐米、卡莫氟(carmofur)、卡莫司汀、色瑞替尼、瘤可宁(chlorambucil)、顺铂、克拉屈滨(cladribine)、氯膦酸二钠(clodronate disodium)、氯法拉滨、克里唑蒂尼(crizotinib)、环磷酰胺、环孢霉素、阿糖孢苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷、达拉菲尼(dabrafenib)、达卡巴嗪(dacarbazine)、放线菌素、达沙替尼、放线菌素、道诺霉素、地西他滨(decitabine)、去纤苷(defribrotide)、醋酸地加瑞克(degarelix acetate)、地塞米松、盐酸右丙亚胺(dexrazoxane hydrochloride)、地吖醌(diaziquone)、己烯雌酚(diethyl stilbestrol)、多西他赛、去氧氟尿苷(doxifluridine)、盐酸阿霉素(doxorubicin hydrochloride)、阿霉素游离碱、丙酸屈他雄酮(dromostanolonepropionate)、度他雄胺、艾曲波帕(eltrombopag)、恩杂鲁胺(enzalutamide)、盐酸表柔比星(epirubicin hydrochloride)、甲磺酸艾日布林(eribulin mesylate)、盐酸厄洛替尼(erlotinib hydrochloride)、雌莫司汀磷酸钠(estramustine phosphate sodium)、乙炔雌二醇、依托泊苷磷酸酯(etoposide phosphate)、依托泊苷、依维莫司(everolimus)、依西美坦(exemestane)、芬太尼(fentanyl)、非格司亭、芬戈莫德(fingolimod)、氟尿苷、磷酸氟达拉滨(fludarabine phosphate)、氟尿嘧啶、氟甲睾酮、氟他胺、福美司坦(formestane)、氮甲(formylmelphalan)、福沙吡坦(fosaprepitant)、福莫司汀(fotemustine)、氟维司群(fulvestrant)、吉非替尼(gefitinib)、盐酸吉西他滨(gemcitabine hydrochloride)、吉西他滨游离碱、谷胱甘肽、甘磷酰芥(glyciphosphoramide)、甘磷酰芥(glyfosfin)、醋酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、盐酸格拉司琼(granisetron hydrochloride)、庚铂(heptaplatin)、5-氨基乙酰丙酸己酯、醋酸组氨瑞林(histrelin acetate)、己酸羟孕酮、羟基脲、伊班膦酸钠(ibandronate sodium)、依鲁替尼、埃克替尼(icotinib)、盐酸伊达比星(idarubicin HCl)、艾代拉里斯(idelalisib)、疮疹净(idoxuridine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、干扰素α、甲磺酸伊马替尼(imatinibmesylate)、咪喹莫特(imiquimod)、巨大戟醇甲基丁烯酸酯(ingenol mebutate)、伊匹单抗、盐酸伊立替康(irinotecanhydrochloride)、伊沙匹隆(ixabepilone)、醋酸兰瑞肽(lanreotide acetate)、拉帕替尼游离碱(lapatinib free base)、甲苯磺酸拉帕替尼(lapatinib ditosylate)、拉索昔芬(lasofoxifene)、来那度胺、来曲唑(letrozole)、亚叶酸钙(leucovorin calcium)、醋酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)、盐酸左旋咪唑(levamisole hydrochloride)、左旋亚叶酸钙(levoleucovorin calcium)、碘苄胍(iobenguane)、洛铂(lobaplatin)、环己亚硝脲(lomustine)、马罗匹坦(maropitant)、马索罗酚(masoprocol)、盐酸氮芥(mechlorethamine hydrochloride)、醋酸甲地孕酮、醋酸甲羟孕酮、盐酸美法仑(melphalan hydrochloride)、巯嘌呤、巯基乙磺酸钠、甲氨蝶呤(methotrexate)、甲氧沙林(methoxsalen)、甲基氨基酮戊酸(methyl aminolevulinate)、亚甲蓝(methylene blue)、异甲靛(methylisoindigotin)、米伐木肽(mifamurtide)、米替福新(miltefosine)、米铂(miriplatin)、光神霉素、二溴甘露醇(mitobronitol)、丝裂霉素C、米托坦(mitotane)、盐酸米托蒽醌(mitoxantrone hydrochloride)、吗替麦考酚酯(mycophenolate mofetil)、萘比莫司(nabiximols)、那法瑞林(nafarelin)、诺龙(nandrolone)、奈达铂(nedaplatin)、奈拉滨(nelarabine)、奈妥吡坦(netupitant)、尼罗替尼、尼鲁米特(nilutamide)、尼莫司汀(nimustine)、尼达尼布(nintedanib)、诺考达唑(nocodazole)、奥曲肽(octreotide)、奥拉帕尼、高三尖杉酯碱(omacetaxine mepesuccinate)、盐酸昂丹司琼(ondansetronhydrochloride)、奥沙利铂(oxaliplatin)、紫杉醇、帕博西尼、帕利夫明、盐酸帕洛诺司琼(palonosetron hydrochloride)、帕米膦酸二钠(pamidronate disodium)、帕比司他、帕瑞肽(pasireotide)、盐酸帕唑帕尼(pazopanib hydrochloride)、培非拉司亭、培美曲塞二钠(pemetrexed disodium)、喷司他丁、培洛霉素(peplomycin)、哌泊溴烷(pipobroman)、吡柔比星(pirarubicin)、普乐沙福(plerixafor)、普卡霉素(plicamycin)、泊马度胺(pomalidomide)、帕纳替尼、卟吩姆钠(porfimer sodium)、泊非霉素(porfiromycin)、普拉曲沙(pralatrexate)、泼尼莫司汀(prednimustine)、泼尼松龙、强的松、盐酸丙卡巴肼(procarbazine hydrochloride)、盐酸喹高利特(quinagolide hydrochloride)、雷洛昔芬(raloxifene)、雷替曲塞(raltitrexed)、拉多替尼(radotinib)、雷诺氮芥(ranimustine)、视黄酸、瑞威美特(revlimide)、利妥昔耐(rituxinab)、罗米地辛(romidepsin)、鲁索替尼、磷酸鲁索替尼(ruxolitinib phosphate)、司莫司汀(semustine)、西罗莫司、硫代硫酸钠、索拉非尼游离碱(sorafenib free base)、甲苯磺酸索拉非尼(sorafenib tosylate)、链脲菌素(streptozocin)、舒芬太尼(sufentanil)、舒尼替尼、他克莫司、他拉泊芬钠(talaporfin sodium)、他米巴罗汀(tamibarotene)、柠檬酸它莫西芬(tamoxifencitrate)、他喷他多(tapentadol)、替莫泊芬(temoporfin)、替莫唑胺、替西罗莫司(temsirolimus)、替尼泊苷(teniposide)、特立氟胺(teriflunomide)、特替泊苷、睾内酯(testolactone)、丙酸睾酮、沙利度胺、硫鸟嘌呤、噻替派、胸腺法新(thymalfasin)、磷酸托塞尼布(toceranib phosphate)、盐酸拓扑替康(topotecan hydrochloride)、柠檬酸托瑞米芬(toremifenecitrate)、曲贝替定(trabectedin)、曲美替尼(trametinib)、维甲酸(tretinoin)、曲洛司坦(trilostane)、曲普瑞林(triptorelin)、托烷司琼(tropisetron)、乌拉莫司汀(uramustine)、戊柔比星(valrubicin)、凡德他尼(vandetanib)、瑞他汀(vedotin)、维莫非尼(vemurafenib)、维替泊芬(verteporfin)、长春碱、硫酸长春新碱、长春新碱游离碱、长春地辛(vindesine)、酒石酸长春瑞滨(vinorelbine tartrate)、伏立诺他(vorinostat)和唑来膦酸(zoledronicacid)。
IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以与一种或多种化疗剂联合施用，所述化疗剂如阿贝西利(abemaciclib)、醋酸阿比特龙、ABVD、ABVE、ABVE-PC、AC、阿卡拉布替尼(acalabrutinib)、AC-T、ADE、阿多曲妥珠单抗美坦新、马来酸阿法替尼、阿地白介素(aldesleukin)、艾乐替尼(alectinib)、阿仑单抗、阿培利司(alpelisib)、阿米福汀、盐酸氨酮戊酸(aminolevulinic acid hydrochloride)、阿那曲唑、阿帕鲁胺(apalutamide)、阿瑞匹坦、三氧化二砷、菊欧文氏菌重组门冬酰胺酶(asparaginase erwiniachrysanthemi)、阿特珠单抗、阿维鲁单抗、阿基仑赛(axicabtagene ciloleucel)、阿昔替尼(axitinib)、阿扎胞苷、BEACOPP、贝利司他、盐酸苯达莫司汀(bendamustinehydrochloride)、BEP、贝伐单抗、蓓萨罗丁、比卡鲁胺、比美替尼、硫酸博莱霉素、博纳吐单抗、硼替佐米、博舒替尼、本妥昔单抗、布加替尼(brigatinib)、BuMel、白消安、卡巴他赛、卡博替尼-s-苹果酸酯(cabozantinib-s-malate)、CAF、培戈卡门冬酶-mknl(calaspargase pegol-mknl)、卡培他滨、卡普赛珠单抗-yhdp(caplacizumab-yhdp)、CAPOX、卡铂、卡铂-泰素(carboplatin-taxol)、卡非佐米、卡莫司汀、卡莫司汀植入物、CEM、西米普利单抗-rwlc(cemiplimab-rwlc)、色瑞替尼、西妥昔单抗、CEV、瘤可宁、瘤可宁-强的松、CHOP、顺铂、克拉屈滨、氯法拉滨、CMF、考比替尼(cobimetinib)、盐酸考帕利西(copanlisib hydrochloride)、COPDAC、COPP、COPP-ABV、克里唑蒂尼、CVP、环磷酰胺、阿糖孢苷、阿糖胞苷脂质体、甲磺酸达拉菲尼(dabrafenib mesylate)、达卡巴嗪、达克替尼(dacomitinib)、放线菌素、达雷木单抗(daratumumab)、达贝泊汀α(darbepoetinα)、达沙替尼、盐酸柔红霉素(daunorubicinhydrochloride)、盐酸柔红霉素和阿糖胞苷脂质、地西他滨、去纤苷钠(defibrotidesodium)、地加瑞克(degarelix)、地尼白介素(denileukin diftitox)、地诺单抗、地塞米松、盐酸右丙亚胺、地努妥昔单抗(dinutuximab)、多西他赛、盐酸多柔比星、盐酸多柔比星脂质体、德瓦鲁单抗、杜韦利西布(duvelisib)、埃罗妥珠单抗(elotuzumab)、艾曲波帕乙醇胺(eltrombopag olamine)、依玛鲁单抗-lzsg(emapalumab-lzsg)、甲磺酸恩西地平(enasidenib mesylate)、恩考芬尼(encorafenib)、恩杂鲁胺、盐酸表柔比星、EPOCH、依泊汀α(epoetinα)、厄达替尼(erdafitinib)、甲磺酸艾日布林、盐酸厄洛替尼、依托泊苷、磷酸依托泊苷、依维莫司、依西美坦、fec、非格司亭、磷酸氟达拉滨、氟尿嘧啶注射液(fluorouracil injection)、氟尿嘧啶--局部(fluorouracil--topical)、氟他胺、folfiri、folfiri-贝伐单抗、folfiri-西妥昔单抗、folfirinox、folfox、福坦替尼二钠(fostamatinib disodium)、FU-LV、氟维司群、吉非替尼、盐酸吉西他滨、吉西他滨-顺铂、吉西他滨-奥沙利铂、吉妥珠单抗奥唑米星(gemtuzumab ozogamicin)、富马酸吉瑞替尼(gilteritinib fumarate)、马来酸格拉吉布(glasdegib maleate)、谷卡匹酶(glucarpidase)、醋酸戈舍瑞林、格拉司琼(granisetron)、HPV二价疫苗、HPV二价疫苗、重组HPV九价疫苗、重组HPV九价疫苗、HPV四价疫苗、重组HPV四价疫苗、羟基脲、hyper-CVAD、替伊莫单抗、依鲁替尼、ICE、盐酸伊达比星、艾代拉里斯、异环磷酰胺、甲磺酸伊马替尼、咪喹莫特、奥英妥珠单抗(inotuzumab ozogamicin)、重组干扰素α-2b、碘苄胍131I(iobenguane 131I)、伊匹单抗、盐酸伊立替康、盐酸伊立替康脂质体、艾伏尼布(ivosidenib)、伊沙匹隆、柠檬酸伊沙佐米(ixazomib citrate)、JEB、醋酸兰瑞肽、甲苯磺酸拉帕替尼、硫酸拉罗替尼(larotrectinib sulfate)、来那度胺、甲磺酸乐伐替尼(lenvatinib mesylate)、来曲唑、亚叶酸钙、醋酸亮丙瑞林、环己亚硝脲、劳拉替尼(lorlatinib)、镥Lu 177-多塔特(lutetium Lu177-dotatate)、盐酸氮芥、醋酸甲地孕酮、美法仑、盐酸美法仑、巯嘌呤、美司钠(mesna)、甲氨蝶呤、溴化甲基纳曲酮(methylnaltrexone bromide)、米哚妥林(midostaurin)、丝裂霉素c、盐酸米托蒽醌、莫格利珠单抗-kpkc(mogamulizumab-kpkc)、莫塞妥莫单抗-tdfk(moxetumomab pasudotox-tdfk)、MVAC、耐昔妥珠单抗(necitumumab)、奈拉滨、马来酸来那替尼(neratinibmaleate)、奈妥吡坦和盐酸帕洛诺司琼(netupitant and palonosetron hydrochloride)、尼罗替尼、尼鲁米特、甲苯磺酸尼拉帕利一水合物(niraparib tosylate monohydrate)、纳武单抗、奥比妥珠单抗、OEPA、奥法木单抗、OFF、奥拉帕尼、奥拉单抗、高三尖杉酯碱、盐酸昂丹司琼、OPPA、甲磺酸奥希替尼(osimertinib mesylate)、奥沙利铂、紫杉醇、白蛋白紫杉醇稳定的纳米颗粒调配物、PAD、帕博西尼、帕利夫明、盐酸帕洛诺司琼(palonosetronhydrochloride)、盐酸帕洛诺司琼和奈妥吡坦、帕米膦酸二钠、帕尼单抗、帕比司他、盐酸帕唑帕尼、PCV、PEB、培加帕加司(pegaspargase)、培非格司亭(pegfilgrastim)、聚乙二醇干扰素α-2b、派姆单抗、培美曲塞二钠、帕妥珠单抗、普乐沙福、泊洛妥珠单抗-piiq(polatuzumab vedotin-piiq)、泊马度胺、盐酸帕纳替尼(ponatinib hydrochloride)、普拉曲沙、强的松、盐酸丙卡巴肼、盐酸普萘洛尔(propranolol hydrochloride)、镭223二氯化物、盐酸雷洛昔芬(raloxifene hydrochloride)、雷莫芦单抗(ramucirumab)、拉布立酶(rasburicase)、依库珠单抗-cwvz(ravulizumab-cwvz)、R-CHOP、R-CVP、重组HPV二价疫苗、重组HPV九价疫苗、重组HPV四价疫苗、重组干扰素α-2b、瑞格拉非尼(regorafenib)、R-EPOCH、瑞博西利(ribociclib)、R-ICE、利妥昔单抗、利妥昔单抗和人透明质酸酶、盐酸罗拉匹坦(rolapitant hydrochloride)、罗米地辛、咯咪珀咯(romiplostim)、樟脑磺酸卢卡帕尼(rucaparib camsylate)、磷酸鲁索替尼、司妥昔单抗(siltuximab)、西普鲁塞-t(sipuleucel-t)、索尼德吉(sonidegib)、磺酸索拉非尼、STANFORD V、苹果酸舒尼替尼(sunitinib malate)、TAC、他拉福司-erzs(tagraxofusp-erzs)、甲苯磺酸他拉唑帕尼(talazoparib tosylate)、滑石、拉他莫基(talimogene laherparepvec)、柠檬酸它莫西芬、替莫唑胺、替西罗莫司、沙利度胺、硫鸟嘌呤、噻替派、替沙仑赛(tisagenlecleucel)、托珠单抗、盐酸拓扑替康、托瑞米芬(toremifene)、TPF、曲贝替定、曲美替尼、曲妥单抗(trastuzumab)、透明质酸酶-oysk(hyaluronidase-oysk)、三氟尿苷和盐酸地匹福林(trifluridine and tipiracil hydrochloride)、尿苷三乙酸酯(uridine triacetate)、VAC、戊柔比星、VAMP、凡德他尼、VeIP、维莫非尼、维奈托克(venetoclax)、硫酸长春碱、硫酸长春新碱脂质体、酒石酸长春瑞滨、vip、维莫德吉(vismodegib)、伏立诺他、XELIRI、XELOX、Ziv-阿柏西普(Ziv-aflibercept)、唑来膦酸和前述任一种的组合。
可以使用体外和动物研究以及临床试验来评估施用IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物治疗癌症的功效。
IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物在治疗癌症中的适用性可以通过本领域中描述的方法来确定。例如，证明溶瘤剂的抗肿瘤活性而开发的筛选是已知的(Miller等人,《药物化学杂志(J Med Chem)》,1977,20(3),409-413；Sweeney等人,《癌症研究(CancerRes)》,1978,38(9),2886-2891；以及Weiss和Von Hoff,《肿瘤学研讨会(Semin Oncol)》,1985,12(3增刊4),69-74)。
IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以用于治疗炎性疾病。
可以施用IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物来治疗炎性疾病。
炎性疾病的实例包含过敏、阿尔茨海默氏病(Alzheimer's disease)、贫血、强直性脊柱炎、关节炎、动脉粥样硬化、哮喘、自闭症、关节炎、腕管综合征、乳糜泻、结肠炎、克罗恩氏病(Crohn's disease)、充血性心力衰竭、皮炎、糖尿病、憩室炎、湿疹、纤维肌痛、纤维化、胆囊疾病、胃食管反流病、桥本氏甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis)、心脏病发作、肝炎、肠易激综合征、肾衰竭、狼疮、多发性硬化症、肾炎、神经病变、胰腺炎、帕金森氏病(Parkinson's disease)、牛皮癣、风湿性多肌痛、类风湿性关节炎、硬皮病、中风、手术并发症和溃疡性结肠炎。
IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以用于治疗自身免疫性疾病。自身免疫性疾病可以定义为免疫系统攻击其自身蛋白质、细胞和/或组织的人类疾病。例如，可以在《自身免疫性疾病(The Autoimmune Diseases)》,Rose和Mackay,2014,学术出版社(AcademicPress)中找到对自身免疫性疾病的全面列表和综述。
可以施用IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物来治疗自身免疫性疾病。
自身免疫性疾病的实例包含艾迪生氏病(Addison's disease)、血中丙球蛋白贫乏、斑秃、淀粉样变性、强直性脊柱炎、抗GBM/抗TBN肾炎、抗磷脂综合征、自身免疫性血管水肿、自身免疫性家族性自主神经异常、自身免疫性脑脊髓炎、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳疾病、自身免疫性心肌炎、自身免疫性胰腺炎、自身免疫性视网膜病、自身免疫性荨麻疹、轴突和神经元神经病、巴洛氏病(Balo disease)、贝赛特氏病(Behcet'sdisease)、良性粘膜类天疱疮、大疱性类天疱疮、卡斯特曼病(Castleman disease)、腹腔疾病、查加斯病(Chagas disease)、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、慢性复发性多灶性骨髓炎、变应性肉芽肿血管炎(Churg-Strauss)、瘢痕性天疱疮、科干综合征(Cogansyndrome)、冷凝集素病、先天性心脏传导阻滞、柯萨奇病毒性心肌炎(Coxcackiemyocarditits)、CREST综合征、克罗恩氏病、疱疹样皮炎、皮肌炎、德维克氏病(Devic'sdisease)、盘状狼疮、德勒综合征(Dressler's syndrome)、子宫内膜异位、嗜酸性食管炎、嗜酸性筋膜炎、结节性红斑、混合性冷凝球蛋白血症、伊文氏综合征(Evans syndrome)、纤维肌痛、纤维化性肺泡炎、巨细胞性动脉炎、巨细胞性心肌炎、血管球性肾炎、肺出血肾炎综合征(Goodpasture'ssyndrome)、肉芽肿性血管炎、格雷夫斯氏病(Graves'disease)、格林-巴利综合征(Gullain-Barre syndrome)、桥本氏甲状腺炎、溶血性贫血、亨-舍二氏紫癜(Henoch-Schonlein purpura)、妊娠疱疹或妊娠性类天疱疮、低丙球蛋白血症、IgA肾病、IgG4相关硬化性疾病、免疫性血小板减少性紫癜、包涵体肌炎、间质性膀胱炎、幼年型关节炎、幼年型糖尿病、幼年型肌炎、川崎病(Kawasaki disease)、兰伯特-伊顿综合征、白细胞破碎性血管炎、扁平苔藓、硬化性苔癣、木样结膜炎、线性IgA病、狼疮、慢性莱姆病、梅尼埃病(Meniere's disease)、显微镜下多发性血管炎、混合性结缔组织病、蚕蚀性角膜溃疡(Mooren'sulcer)、穆-哈二氏病(Mucha-Habermanndisease)、多发性硬化症、重症肌无力、肌炎、嗜睡症、视神经脊髓炎、中性粒细胞减少症、眼瘢痕性天疱疮、视神经炎、复发性风湿症、PANDAS、副肿瘤性小脑变性、阵发性夜间血红素尿症、帕-罗二氏综合征(Parry-Rombergsyndrome)、睫状体扁平部炎、帕森那-特纳综合征(Parsonnage-Turner syndrome)、天疱疮、周围神经病变、静脉周围脑脊髓炎、恶性贫血、POEMS综合征、结节性多发性动脉炎、多腺体综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、心肌梗死后综合征、心包切开术后综合征、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、孕酮皮炎、牛皮癣、银屑病关节炎、纯红细胞再生障碍性贫血、坏疽性脓皮病、雷诺现象(Raynaud's phenomenon)、反应性关节炎、反射性交感神经营养不良、复发性多软骨炎、多动腿综合征、腹膜后纤维化、风湿热、类风湿性关节炎、结节病、施密特综合征、巩膜炎、硬皮病、干燥综合征(Sjogren's syndrome)、精子和睾丸自身免疫、僵人综合征、亚急性细菌性心内膜炎、苏萨克氏综合征(Susac's syndrome)、交感性眼炎、大动脉炎(Takayasu's arteritis)、颞动脉炎、血小板减少性紫癜、痛性眼肌麻痹综合征(Tolosa-Hunt syndrome)、横贯性脊髓炎、1型糖尿病、溃疡性结肠炎、未分化结缔组织病、葡萄膜炎、血管炎、白癜风以及韦格纳氏肉芽肿病(Wegener'sgranulomatosis)。
IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以用于治疗自身免疫性病症，例如狼疮、移植物抗宿主病、丙型肝炎诱导的血管炎、I型糖尿病、多发性硬化、自发性流产、特应性疾病和炎性肠病。
IL-2Rβγc结合化合物可以与一种或多种另外的治疗剂一起施用以用于治疗自身免疫性疾病。IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以与一种或多种免疫抑制剂联合施用，所述免疫抑制剂包含例如皮质类固醇，如强的松、布地奈德(budesonide)和泼尼松龙；Janus激酶抑制剂，如托法替尼(tofacitinib)；钙调磷酸酶抑制剂，如环孢霉素和他克莫司；mTOR抑制剂，如西罗莫司和依维莫司；IMDH抑制剂，如咪唑硫嘌呤(azathioprine)、来氟米特(leflunomide)和霉酚酸酯(mycophenolate)；生物制剂，如阿巴西普(abatacept)、阿达木单抗、阿那白滞素(anakinra)、赛妥珠单抗、依那西普(etanercept)、戈利木单抗、英夫利昔单抗(infliximab)、依奇珠单抗、那他珠单抗(natalizumab)、利妥昔单抗、苏金单抗、托珠单抗、优特克单抗和维多珠单抗(vedolizumab)；以及单克隆抗体，如巴利昔单抗和达克珠单抗。
可以将IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物施用于患者以治疗与T细胞的激活、增殖、代谢和/或分化相关的疾病。
可以将IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物施用于患者以治疗器官移植。
IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以与已知或据信干扰增殖、干扰有丝分裂、干扰DNA复制或干扰DNA修复的药剂联合施用。
可以将IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物施用于患者以治疗免疫缺陷疾病。
原发性免疫缺陷疾病的实例包含自身免疫性淋巴增生综合征、1型自身免疫性多腺体综合征、BENTA病、胱天蛋白酶八缺乏状态、CARD9缺乏、慢性肉芽肿病、常见可变性免疫缺陷、先天性中性粒细胞减少综合征、CTLA4缺乏、DOCK8缺乏、GATA2缺乏、糖基化病症、高免疫球蛋白E综合征、高免疫球蛋白M综合征、干扰素γ、白细胞介素12和白细胞介素23缺乏、白细胞粘附缺陷、LRBA缺乏、PI2激酶疾病、PLCG2相关抗体缺乏和免疫失调、严重联合免疫缺陷、STAT3显性阴性疾病、STAT3功能获得性疾病、疣、低丙种球蛋白血症、感染和骨髓粒细胞缺乏症综合征、威斯科特-奥尔德里奇综合征(Wiskott-Aldrich syndrome)、X连锁无丙种球蛋白血症、X连锁淋巴组织增生性疾病和XMEN病。
当免疫系统受到如感染、化疗、严重烧伤或营养不良等环境因素的影响时，就会发生继发性免疫缺陷疾病。继发性免疫缺陷疾病的实例包含新生儿免疫缺陷，如未成熟的淋巴器官、缺乏记忆免疫、亲本IgG水平低、中性粒细胞储存池减少、中性粒细胞功能降低和自然杀伤细胞活性降低；与高龄相关的免疫缺陷，如抗原特异性细胞免疫降低、T细胞寡克隆性和B细胞库受限；营养不良相关的免疫缺陷，如细胞免疫应答降低和周末粘膜屏障；糖尿病相关的免疫缺陷，如有丝分裂原诱导的淋巴增殖减少、吞噬功能缺陷和趋化性降低；慢性尿毒症相关的免疫缺陷，如细胞免疫应答降低、记忆抗体应答产生减少和趋化性降低；遗传综合征，如吞噬功能缺陷、趋化性缺陷和抗原特异性免疫应答的可变缺陷；以及抗炎、免疫调节和免疫抑制药物治疗相关的免疫缺陷，如淋巴细胞减少、细胞免疫应答降低和无反应性、促炎细胞因子减少、吞噬作用降低、趋化性降低、中性粒细胞减少和粘膜屏障减弱；环境病状，如淋巴细胞凋亡增加、致耐受性细胞因子分泌增加、血细胞减少、细胞免疫降低和无反应性以及应激诱导的非特异性免疫激活；以及传染性疾病，如T细胞淋巴细胞减少症、细胞免疫应答降低和无反应性以及抗原特异性抗体应答缺陷。
可以将IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物施用于患者以增加免疫受损患者的免疫应答。
可以将IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物施用于患者以增加患者的免疫应答。
可以将IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物施用于患者以治疗传染性疾病。
传染性疾病的实例包含不动杆菌感染(Acinetobacter infection)、放射菌病(actinomycosis)、非洲昏睡病(非洲锥虫病(African trypanosomiasis))、AIDS(获得性免疫缺陷综合症)、阿米巴病(amoebiasis)、边虫病(anaplasmosis)、血管圆线虫病(angiostrongyliasis)、异尖线虫病(anisakiasis)、炭疽(anthrax)、溶血隐秘杆菌感染(Arcanobacterium haemolyticum infection)、阿根廷出血热(Argentine hemorrhagicfever)、蛔虫病(ascariasis)、曲霉病(aspergillosis)、星状病毒感染(astrovirusinfection)、巴贝西虫病(babesiosis)、蜡样芽胞杆菌感染(Bacillus cereusinfection)、细菌性脑膜炎、细菌性肺炎、细菌性阴道病、拟杆菌感染(Bacteroidesinfection)、小袋虫病(balantidiasis)、巴尔通氏体病(bartonellosis)、贝蛔虫感染(Baylisascaris infection)、非性病性梅毒(Bejel)、梅毒(syphilis)、雅司病(yaws)、BK病毒感染、黑色发结节病(black piedra)、芽囊原虫病(blastocystosis)、芽生菌病(blastomycosis)、玻利维亚出血热(Bolivian hemorrhagic fever)、肉毒中毒(和婴儿型肉毒中毒)、巴西出血热(Brazilian hemorrhagic fever)、布氏菌病(brucellosis)、黑死病(bubonic plague)、伯克霍尔德菌感染(Burkholderia infection)、布路里溃疡(buruliulcer)、杯状病毒感染(calicivirus infection)(诺瓦克病毒(Norovirus)和札幌病毒(Sapovirus))、弯杆菌病(campylobacteriosis)、念珠菌病(candidiasis)(禽真菌性口炎(Moniliasis)；鹅口疮(Thrush))、毛细线虫病(capillariasis)、卡里翁氏病(carrion'sdisease)、猫抓病(cat-scratch disease)、蜂窝组织炎(cellulitis)、查加斯病(南美洲锥虫病(American trypanosomiasis))、软性下疳(chancroid)、水痘(chickenpox)、基孔肯雅病(chikungunya)、衣原体(chlamydia)、肺炎嗜衣原体感染(Chlamydophila pneumoniaeinfection)、霍乱(cholera)、着色芽生菌病(chromoblastomycosis)、壶菌病(Chytridiomycosis)、支睾吸虫病(clonorchiasis)、难辨梭菌结肠炎(Clostridiumdifficile colitis)、球孢子菌病(coccidioidomycosis)、科罗拉多壁虱热(Coloradotick fever，CTF)、感冒(common cold)(急性病毒性鼻咽炎(acute viralrhinopharyngitis)；急性鼻卡他(Acute coryza))、冠状病毒疾病2019(Coronavirusdisease 2019，COVID-19)、克雅氏病(Creutzfeldt–Jakob disease，CJD)、克里米亚刚果出血热(Crimean-Congo hemorrhagic fever，CCHF)、隐球菌病(cryptococcosis)、隐孢子虫病(cryptosporidiosis)、皮肤幼虫移行症(cutaneous larva migrans，CLM)、圆孢球虫病(cyclosporiasis)、囊尾幼虫病(cysticercosis)、巨细胞病毒感染(cytomegalovirusinfection)、登革热(Dengue fever)、链带藻感染(desmodesmus infection)、双核阿米巴病(dientamoebiasis)、白喉(diphtheria)、裂头绦虫病(diphyllobothriasis)、麦地那龙线虫病(dracunculiasis)、埃博拉出血热(Ebola hemorrhagic fever)、包虫病(echinococcosis)、埃里希体病(Ehrlichiosis)、蛲虫病(enterobiasis)(蛲虫感染(pinworm infection))、肠球菌感染(Enterococcus infection)、肠病毒感染(enterovirus infection)、流行性斑疹伤寒(epidemic typhus)、艾普斯登-巴尔病毒传染性单核细胞增多(Mono)(Epstein-Barr virus infectious mononucleosis(Mono))、传染性红斑(erythema infectiosum)(第五种疾病)、幼儿急疹(fxanthem subitum)(第六种疾病)、肝片吸虫病(fasciolosis)、姜片虫病(fasciolopsiasis)、致命性家族性失眠症(fatal familial insomnia，FFI)、丝虫病(filariasis)、由产气荚膜梭状芽胞杆菌引起的食物中毒(food poisoning by Clostridium perfringens)、自由生活阿米巴感染(free-living amebic infection)、梭状杆菌感染(Fusobacteriuminfection)、气性坏疽(gasgangrene)(梭状芽胞杆菌性肌坏死(Clostridial myonecrosis))、地霉病(geotrichosis)、格斯特曼-斯特劳斯勒-申克综合征(Gerstmann--Scheinkersyndrome，GSS)、贾第鞭毛虫病(giardiasis)、鼻疽病(glanders)、颚口线虫病(gnathostomiasis)、淋病(gonorrhea)、腹股沟肉芽肿(granuloma inguinale)(杜诺凡病(Donovanosis))、A组链球菌感染(Group A streptococcal infection)、B组链球菌感染、流感嗜血杆菌感染(Haemophilus influenzae infection)、手足口病(hand,foot andmouth disease，HFMD)、汉坦病毒肺综合征(Hantavirus Pulmonary Syndrome，HPS)、哈特兰病毒病(Heartland virus disease)、幽门螺杆菌感染(Helicobacter pyloriinfection)、溶血性尿毒症综合征(hemolytic-uremic syndrome，HUS)、出血热伴肾综合征(hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS)、亨德拉病毒感染(Hendra virusinfection)、甲型肝炎、、乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、戊型肝炎、单纯性疱疹、组织胞浆菌病(histoplasmosis)、钩虫感染(hookworminfection)、人博卡病毒感染(humanbocavirus infection)、人伊氏埃利希病(human ewingii ehrlichiosis)、人粒细胞无形体病(human granulocytic anaplasmosis，HGA)、人偏肺病毒感染(humanmetapneumovirus infection)、人单核细胞埃立克体病(human monocyticehrlichiosis)、人乳头瘤病毒(HPV)感染(human papillomavirus(HPV)infection)、人副流感病毒感染(human parainfluenza virus infection)、膜壳绦虫病(hymenolepiasis)、流感(流行性感冒)、等孢球虫病(isosporiasis)、川崎病(Kawasaki disease)、角膜炎、金格杆菌感染(Kingella kingae infection)、库鲁病(Kuru)、拉沙热(Lassa fever)、军团病(Legionellosis)(莱金奈尔病(Legionnaires'disease))、利什曼病(leishmaniasis)、麻风病(leprosy)、钩端螺旋体病(leptospirosis)、李氏杆菌病(listeriosis)、(Lymedisease(Lyme borreliosis))、淋巴丝虫病(lymphatic filariasis)(象皮病(elephantiasis))、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎(lymphocytic choriomeningitis)、疟疾(malaria)、马尔堡出血热(Marburg hemorrhagic fever，MHF)、麻疹(measles)、类鼻疽(melioidosis)(惠特莫尔氏病(Whitmore's disease))、脑膜炎、脑膜炎球菌病(meningococcal disease)、后殖吸虫病(metagonimiasis)、微孢子虫病(microsporidiosis)、中东呼吸综合征(Middle East respiratory syndrome，MERS)、接触传染性软疣(molluscum contagiosum，MC)、猴痘(monkeypox)、流行性腮腺炎(mumps)、鼠型斑疹伤寒(murine typhus)(地方性斑疹伤寒(Endemic typhus))、足分支菌病(mycetoma)、生殖支原体感染(mycoplasma genitaliuminfection)、支原体肺炎(mycoplasmapneumonia)、蝇蛆病(myiasis)、新生儿结膜炎(neonatal conjunctivitis)(新生儿眼炎(Ophthalmia neonatorum))、尼帕病毒感染(Nipah virus infection)、诺卡氏菌病(nocardiosis)、诺如病毒(Norovirus)(儿童和婴儿)、盘尾丝虫病(onchocerciasis)(河盲症(River blindness))、后睾吸虫病(opisthorchiasis)、副球孢子菌病(paracoccidioidomycosis)(南美芽生菌病(South American blastomycosis))、肺吸虫病(paragonimiasis)、巴斯德菌病(pasteurellosis)、头虱病(pediculosis capitis)(头虱(Head lice))、体虱病(pediculosis corporis)(体虱(Body lice))、阴虱病(pediculosispubis)(阴虱(pubic lice)、毛虱(crab lice))、盆腔炎性疾病(pelvic inflammatorydisease，PID)、百日咳(pertussis)(顿咳(whooping cough))、鼠疫(plague)、肺炎球菌感染(pneumococcal infection)、肺孢子菌肺炎(pneumocystis pneumonia，PCP)、肺炎、脊髓灰质炎、庞蒂亚克热(Pontiac fever)、普雷沃氏菌感染(Prevotella infection)、原发性阿米巴脑膜脑炎(primary amoebic meningoencephalitis，PAM)、进行性多灶性白质脑病(progressive multifocal leukoencephalopathy)、鹦鹉热(psittacosis)、Q热(Qfever)、狂犬病(rabies)、回归热(relapsing fever)、呼吸道合胞病毒感染(respiratorysyncytial virus infection)鼻孢子虫病、(rhinosporidiosis)、鼻病毒感染(rhinovirusinfection)、立克次氏体感染(rickettsial infection)、立克次氏体痘(rickettsialpox)、里夫特裂谷热(Rift Valley fever，RVF)、落基山斑疹热(RockyMountain spotted fever，RMSF)、轮状病毒感染(rotavirus infection)、风疹(rubella)、沙门氏菌病(salmonellosis)、SARS(严重急性呼吸道综合征)、疥疮(scabies)、猩红热(scarlet fever)、血吸虫病(schistosomiasis)、败血症、志贺氏菌病(shigellosis)(杆菌痢疾(bacillary dysentery))、带状疱疹(shingles)(带状疱疹病毒(Herpes zoster))、天花(smallpox)(痘症(variola))、孢子丝菌病(sporotrichosis)、葡萄球菌性食物中毒(staphylococcal food poisoning)、葡萄球菌感染(staphylococcal infection)、类圆线虫病(strongyloidiasis)、亚急性硬化性全脑炎(subacute sclerosingpanencephalitis)、绦虫病(taeniasis)、破伤风(tetanus)(牙关紧闭症(lockjaw))、触染性须疮(tinea barbae)(须癣(barber's itch))、头癣(tinea capitis)(头皮癣(ringwormof the scalp))、体癣(tinea corporis)(身体癣(ringworm of the body))、股癣(tineacruris 或Jock itch)、手癣(tinea manum或ringworm of the hand)、黑癣(tineanigra)、脚癣(tinea pedis或athlete's foot)、甲癣(tinea unguium)(甲真菌病(onychomycosis))、花斑癣(tinea versicolor)(花斑糠疹(Pityriasis versicolor))、弓蛔虫病(toxocariasis)(眼幼虫移行症(ocular larva migrans，OLM))、弓蛔虫病(内脏幼虫移行症(visceral larva migrans，VLM))、弓形体病(toxoplasmosis)、沙眼(trachoma)、旋毛虫病(trichinosis)、滴虫病(trichomoniasis)、鞭虫病(trichuriasis)(鞭虫感染(whipworminfection))、结核病(tuberculosis)、兔热病(tularemia)、伤寒热(typhoidfever)、斑疹伤寒(typhus fever)、解脲支原体感染(Ureaplasmaurealyticuminfection)、山谷热(valley fever)、委内瑞拉马脑炎(Venezuelan equineencephalitis)、委内瑞拉出血热(Venezuelan hemorrhagic fever)、副溶血弧菌肠炎(vibrio parahaemolyticus enteritis)、创伤弧菌感染(vibrio vulnificusinfection)、病毒性肺炎(viral pneumonia)、西尼罗河热(West Nile fever)、白色毛结节菌病(white piedra)(白秃疮(tinea blanca))、黄热病(yellow fever)、假结核耶尔森菌感染(Yersinia pseudotuberculosis infection)、耶尔森菌病(yersiniosis)、兹斯保拉病(zeaspora)、寨卡热(Zika fever)和接合菌病(zygomycosis)。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物可以单独或组合使用以治疗疾病，所述疾病包含急性髓性白血病、B细胞淋巴瘤、慢性髓细胞性白血病、抑郁症、牙龈退缩、丙型肝炎、HIV感染、人乳头瘤病毒、特发性CD4淋巴细胞减少症、继发于器官移植的免疫缺陷、脂肪营养不良、卡波西肉瘤淋巴瘤、淋巴细胞减少症、套细胞淋巴瘤、多发性硬化症、骨髓增生异常综合征、非霍奇金淋巴瘤、复发性成人弥漫性大细胞淋巴瘤、复发性滤泡性淋巴瘤、类风湿关节炎、败血症和2型糖尿病。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物可以用于治疗癌症，如转移性乳腺癌、乳腺癌、结肠癌、膀胱癌、转移性前列腺癌、IV期前列腺癌、去势抵抗性前列腺癌、神经母细胞瘤、黑色素瘤、肾癌、骨髓增殖性肿瘤、肉瘤和神经真皮肿瘤。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物可以与替莫唑胺组合使用以治疗大胶质母细胞瘤，与阿特珠单抗组合使用以治疗如MCC、C5CC和黑色素瘤等皮肤癌，与派姆单抗组合使用以治疗三阴性乳腺癌，并且与CAR-T疗法组合以治疗小儿急性成淋巴细胞性白血病。
IL-2Rβγc结合化合物或其药物组合物可以与另一种化合物一起施用于患者，以治疗患者的炎性疾病或自身免疫性疾病。至少一种其它治疗剂可以是由本公开提供的不同的IL-2Rβγc结合化合物。IL-2Rβγc结合化合物和至少一种其它治疗剂可以相加或协同作用。至少一种另外的治疗剂可以包含在包括IL-2Rβγc结合化合物的相同药物组合物或媒剂中，或者可以在单独的药物组合物或媒剂中。因此，由本公开提供的方法进一步包含除了施用IL-2Rβγc结合化合物之外，还施用一种或多种有效治疗炎性疾病或自身免疫性疾病或与炎性疾病或自身免疫性疾病不同的疾病、病症或病状的治疗剂。由本公开提供的方法包含施用IL-2Rβγc结合化合物和一种或多种其它治疗剂，条件是组合施用不抑制IL-2Rβγc结合化合物的治疗功效和/或不产生不利的组合作用。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物可以在体外用作了解IL-2的生物学作用的工具，包含评估被认为影响IL-2的产生和受体结合过程并受其影响的许多因素。本发明化合物还可用于开发结合并激活IL-2R的其它化合物，因为本发明化合物提供了应有助于此类开发的关于结构与活性之间的关系的有用信息。
IL-2Rβγc结合化合物在用于筛选新的IL-2受体激动剂和拮抗剂的测定中也可用作竞争性结合剂。在此类测定中，IL-2Rβγc结合化合物可以在不进行修饰的情况下使用或可以以多种方式修饰；例如，通过标记，如共价或非共价连接直接或间接提供可检测信号的部分。在这些测定中的任何测定中，可以直接或间接标记其中的材料。直接标记的可能性包含标记组，如：放射性标记，如125I；酶，如过氧化物酶和碱性磷酸酶；以及能够监测荧光强度、波长偏移或荧光偏振的变化的荧光标记。间接标记的可能性包含一种成分的生物素化，然后与偶联到上述标记组之一的亲和素结合。在化合物要与固体支持物连接的情况下，化合物还可以包含间隔子或连接子。
基于它们与IL-2R结合的能力，由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物可以用作检测例如在活细胞、固定细胞上、在生物流体中、在组织匀浆中、在纯化和天然生物材料中的IL-2R的试剂。例如，通过标记此类肽，可以鉴定表达IL-2Rβ和IL-2Rγc亚基的细胞。另外，基于它们与IL-2R结合的能力，本公开的IL-2Rβγc结合化合物可以用于例如原位染色、FACS(荧光激活细胞分选)、蛋白质印迹和ELISA。另外，基于它们与IL-2R结合的能力，由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物可以用于受体纯化，或用于纯化在细胞表面(或透化细胞内部)表达IL-2R的细胞。
由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物也可以用作用于各种医学研究和诊断用途的商业试剂。此类用途包含例如：(1)在各种功能测定中用作量化候选IL-2激动剂的活性的校准标准物；(2)用于维持IL-2依赖性细胞系的增殖和生长；(3)通过共结晶用于IL-2R的结构分析；(4)用于研究IL-2信号转导/受体激活的机制；以及(5)其它研究和诊断应用，其中IL-2R被激活或者此类激活方便地针对已知量的IL-2R激动剂进行校准。
本发明的方面包含编码由本公开提供的IL-2Rβ配体、IL-2Rγc配体、IL-2Rβγc配体、串联IL-2Rβγc配体、IL-2Rβγc配体构建体和IL-2Rβγc结合化合物的核酸。
可以将编码由本公开提供的IL-2Rβ配体、IL-2Rγc配体和IL-2Rβγc结合化合物的核酸/分离的多核苷酸掺入表达载体中，这部分取决于用于产生IL-2Rβ配体、IL-2Rγc配体和IL-2Rβγc结合化合物的宿主细胞。通常，核酸可以与任何数量的调节元件，例如启动子、复制起点、可选择标志物、核糖体结合位点和/或诱导剂可操作地连接。表达载体可以是染色体外载体或整合载体。
核酸和/或表达可以用如CHO细胞等哺乳动物细胞转化到任何数量的不同类型的宿主细胞中，包含哺乳动物细胞、细菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞和/或真菌细胞。
编码IL-2Rβγc配体的核酸可以包括：编码IL-2Rβ配体的第一核酸序列；编码肽基配体连接子的第二核酸序列；以及编码IL-2Rγc配体的第三核酸序列。
编码IL-2Rβγc配体融合蛋白的核酸可以包括：编码由本公开提供的IL-2Rβγc配体的第一核酸序列；以及编码融合配偶体的第二核酸序列。编码IL-2Rβγc配体融合蛋白的核酸可以包括编码IL-2Rβγc配体和融合配偶体的核酸。编码IL-2Rβγc配体融合蛋白的核酸可以进一步包括编码构建体连接子的核酸区段，并且编码IL-2Rβγc配体融合蛋白的核酸可以包括编码IL-2Rβγc配体、融合配偶体和构建体连接子的核酸。
融合配偶体可以包括例如HSA、Fc片段、IgG、针对细胞特异性抗原的抗体和针对细胞特异性受体的抗体。
编码IL-2Rβγc融合蛋白的核酸可以进一步包括编码肽基连接子的核酸，其中肽基连接子被配置成将IL-2Rβγc配体与融合配偶体结合。
由本公开提供的核酸可以编码包括IL-2Rβγc配体和将IL-2Rβγc配体的C末端与HSA结合的连接子的融合蛋白。
由本公开提供的核酸可以编码融合蛋白，所述融合蛋白包括IgG1、IgG2或IgG4的二聚Fc片段、IL-2Rβγc配体和将IL-2Rβγc配体的N末端与二聚Fc片段的一个CH3结构域的C末端结合的连接子。
由本公开提供的核酸可以编码融合蛋白，所述融合蛋白包括IgG1、IgG2或IgG4的二聚Fc片段、两个IL-2Rβγc配体和将两个IL-2Rβγc配体中的每一个的N末端与二聚Fc片段的每个CH3结构域的C末端结合的连接子。
由本公开提供的核酸可以编码融合蛋白，所述融合蛋白包括如IgG1、IgG2或IgG4等免疫球蛋白分子的重链、IL-2Rβγc配体和将IL-2Rβγc配体的N末端与Fc区的C末端键合的Fc连接子。
由本公开提供的核酸可以包括编码由本公开提供的IL-2Rβγc结合化合物和RNA和/或DNA疫苗的核酸。
由本公开提供的核酸可以包括编码IL-2Rβγc结合疫苗构建体的核酸。所述疫苗可以包括例如癌症疫苗或病毒疫苗。
由本公开提供的核酸可以包括编码包括病毒表面抗原的IL-2Rβγc结合构建体的核酸。
由本公开提供的核酸可以包括编码包括病毒样颗粒的IL-2Rβγc结合构建体的核酸。
由本公开提供的核酸可以编码由本公开提供的IL-2Rβ配体，或者可以编码包括与由本公开提供的IL-2Rβ配体具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性的氨基酸序列的氨基酸序列。
由本公开提供的核酸可以编码包括SEQ ID NO:612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中的任一个的氨基酸序列的IL-2Rβ配体，或者可以编码包括与SEQID NO:612、664、671、865、856、864、858、869、870、874、875和901中的任一个具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性的氨基酸序列的氨基酸序列。
由本公开提供的核酸可以编码由本公开提供的IL-2Rγc配体，或者可以编码包括与由本公开提供的IL-2Rγc配体具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性的氨基酸序列的氨基酸序列。
由本公开提供的核酸可以编码包括SEQ ID NO:965、980、981、985、1024、1026和1028中的任一个的氨基酸序列的IL-2Rγc配体，或者可以编码包括与SEQ ID NO:965、980、981、985、1024、1026和1028中的任一个具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性的氨基酸序列的氨基酸序列。
由本公开提供的核酸可以编码由本公开提供的IL-2Rβγc配体，或者可以编码包括与由本公开提供的IL-2Rβγc配体具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性的氨基酸序列的氨基酸序列。
由本公开提供的核酸可以编码包括SEQ ID NO:1263-1270中的任一个的氨基酸序列的IL-2Rβγc配体，或者可以编码包括与SEQ ID NO:1263-1270中的任一个具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性的氨基酸序列的氨基酸序列。
由本公开提供的核酸可以编码由本公开提供的IL-2Rβγc配体融合蛋白，或者可以编码包括与由本公开提供的IL-2Rβγc配体融合蛋白具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性的氨基酸序列的氨基酸序列。
由本公开提供的核酸可以编码包括SEQ ID NO:1212-1252中的任一个的氨基酸序列的IL-2Rβγc配体融合蛋白，或者可以编码包括与SEQ ID NO:1212-1252中的任一个具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性的氨基酸序列的氨基酸序列。
由本公开提供的核酸可以编码IL-2Rβγc配体构建体，所述IL-2Rβγc配体构建体包括：IL-2Rβ配体，所述IL-2Rβ配体包括SEQ ID NO:865的氨基酸序列或包括与SEQ ID NO:865具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性的氨基酸序列的氨基酸序列；以及IL-2Rγc配体，所述IL-2Rγc配体包括SEQ ID NO:965的氨基酸序列或包括与SEQ ID NO:965具有大于60％、大于70％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％序列相似性的氨基酸序列的氨基酸序列。
由本公开提供的核酸可以编码包括两个或更多个由本公开提供的IL-2Rβγc配体的串联IL-2Rβγc配体。
本发明的方面包含表达载体，所述表达载体包括编码由本公开提供的IL-2Rβ配体、IL-2Rγc配体、IL-2Rβγc配体、串联IL-2Rβγc配体或IL-2Rβγc配体构建体的核酸。
本发明的方面进一步包含宿主细胞，所述宿主细胞包括表达载体，所述表达载体包括编码由本公开提供的IL-2Rβ配体、IL-2Rγc配体、IL-2Rβγc配体、串联IL-2Rβγc配体或IL-2Rβγc配体构建体的核酸。
由本公开提供的方法包含制备由本公开提供的IL-2Rβ配体、IL-2Rγc配体、IL-2Rβγc配体、串联IL-2Rβγc配体或IL-2Rβγc配体构建体的方法，所述方法包括：在表达IL-2Rβ配体、IL-2Rγc配体、IL-2Rβγc配体、串联IL-2Rβγc配体或IL-2Rβγc配体构建体的条件下培养宿主细胞，其中所述宿主细胞包括表达载体，所述表达载体包括编码由本公开提供的IL-2Rβ配体、IL-2Rγc配体、IL-2Rβγc配体、串联IL-2Rβγc配体或IL-2Rβγc配体构建体的核酸；以及回收所表达的IL-2Rβ配体、IL-2Rγc配体、IL-2Rβγc配体、串联IL-2Rβγc配体或IL-2Rβγc配体构建体。
本发明的方面
本发明由以下方面进一步限定。
方面1.一种IL-2Rβγc配体，其包括：
(a)IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体包括式(1)(SEQ ID NO:805)、式(1a)(SEQID NO:806)、式(1b)(SEQ ID NO:807)、式(1c)(SEQ ID NO:808)或式(1d)(SEQ ID NO:809)的氨基酸序列或与式(1)(SEQ ID NO:805)、式(1a)(SEQ ID NO:806)、式(1b)(SEQ ID NO:807)、式(1c)(SEQ ID NO:808)或式(1d)(SEQ ID NO:809)的氨基酸序列具有大于60％序列相似性的氨基酸序列：
-X211-X212-X213-X214-C-X215-X216-X217-X218-X219-X220-X221-X222-C-X223-X224-X225- (1)
-X212-X213-X214-C-X215-X216-X217-X218-X219-X220-X221-X222-C-X223-X224- (1a)
-X213-X214-C-X215-X216-X217-X218-X219-X220-X221-X222-C-X223-X224- (1b)
-X214-C-X215-X216-X217-X218-X219-X220-X221-X222-C-X223- (1c)
-C-X215-X216-X217-X218-X219-X220-X221-X222-C- (1d)
其中，
X211选自氨基酸；
X212选自F、H、W和Y；
X213选自F、H、I、L、M、V、W和Y；
X214是P；
X215选自F、H、W和Y；
X216选自F、I、L、M、V、W和Y；
X217是A；
X218选自K、R、H、N、Q、S、T和Y；
X219选自F、I、L、M、V、W和Y；
X220是G；
X221选自D、E、H、N、Q、S、T和Y；
X222是L；
X223是D；
X224选自F、I、L、M、V、W和Y；并且
X225选自D和E；
(b)IL-2Rγc配体，其中所述IL-2Rγc配体包括式(5)(SEQ ID NO:944)、式(5a)(SEQ ID NO:945)、式(5b)(SEQ ID NO:946)、式(5c)(SEQ ID NO:947)、式(5d)(SEQ ID NO:948)或式(5e)(SEQ ID NO:949)的氨基酸序列或与式(5)(SEQ ID NO:944)、式(5a)(SEQ IDNO:945)、式(5b)(SEQ ID NO:946)、式(5c)(SEQ ID NO:947)、式(5d)(SEQ ID NO:948)或式(5e)(SEQ ID NO:949)的氨基酸序列具有大于60％序列相似性的氨基酸序列：
-X171-X172-X173-X174-X175-C-X176-X177-X178-X179-X180-X181-X182-X183-C-X184-X185-X186-X187-X188- (5)
-X172-X173-X174-X175-C-X176-X177-X178-X179-X180-X181-X182-X183-C-X184-X185-X186-X187-
(5a)
-X173-X174-X175-C-X176-X177-X178-X179-X180-X181-X182-X183-C-X184-X185-X186- (5b)
-X174-X175-C-X176-X177-X178-X179-X180-X181-X182-X183-C-X184-X185- (5c)
-X175-C-X176-X177-X178-X179-X180-X181-X182-X183-C-X184- (5d)
-C-X176-X177-X178-X179-X180-X181-X182-X183-C- (5e)
其中，
X171选自H、K和R；
X172选自S、T和Y；
X173选自D、E、F、I、L、M、V、W和Y；
X174选自F、I、L、M、V、W和Y；
X175选自D、E、F、I、L、M、V、W和Y；
X176选自D、E、H、N、Q、S、T和Y；
X177选自D和E；
X178选自F、H、I、L、M、V、W和Y；
X179选自D、E、H、N、Q、S、T和Y；
X180是G；
X181是V；
X182是E；
X183是L；
X184选自W；
X185选自F、I、L、M、V、W、Y、H、N、Q、S和T；
X186是E；
X187选自氨基酸；并且
X188选自D和E；以及
(c)IL-2Rβγc配体连接子，其将所述IL-2Rβ配体与所述IL-2Rγc配体结合。
方面2.根据方面1所述的IL-2Rβγc配体，其中在式(5)-(5e)的IL-2Rβ配体中：
X211选自H、K和R；
X212是W；
X213是Y；
X214是P；
X215是W；
X216是M；
X217是A；
X218选自N和Q；
X219选自L和V；
X220是G；
X221选自E、D和Q；
X222是L；
X223是D；
X224选自L和M；并且
X225选自D和E。
方面3.根据方面1所述的IL-2Rβγc配体，其中在式(5)-(5e)的IL-2Rβ配体中：
X211选自A、D、E、G、H、L、M、N、Q、R、S、T和V；
X212选自C、F、W和Y；
X213选自F、H、K、L、N、Q、R、S、W和Y；
X214是P；
X215选自W和Y；
X216选自F、I、K、L、M、R、S、T和V；
X217是A；
X218选自D、E、G、H、K、L、N、Q、R、S和Y；
X219选自L、P和V；
X220选自G、H和W；
X221选自D、E和Q；
X222选自L和M；
X223是D；
X224选自L、M、Q和V；并且
X225选自A、D、E、F、G、H、L、N、Q、T和V。
方面4.根据方面1所述的IL-2Rβγc配体，其中在式(5)-(5e)的IL-2Rβ配体中：
X211选自H和R；
X212选自F和W；
X213选自F、L、W和Y；
X214是P；
X215选自W和Y；
X216选自F、I、L、M和V；
X217是A；
X218选自D、E、H、K、N、Q和R；
X219选自L和V；
X220是G；
X221选自D、E和Q；
X222选自L和M；
X223是D；
X224选自L、M和V；并且
X225选自D和E。
方面5.根据方面1所述的IL-2Rβγc配体，其中在式(5)-(5e)的IL-2Rβ配体中：
X211选自H和R；
X212是W；
X213是Y；
X214是P；
X215是W；
X216是M；
X217是A；
X218选自K和R；
X219是L；
X220是G；
X221选自E和Q；
X222是L；
X223是D；
X224是L；并且
X225选自D和E。
方面6.根据方面1至5中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配体中：
X171选自H、K和R；
X172选自S、T和Y；
X173选自D和E；
X174是V；
X175选自D和E；
X176选自E和Q；
X177选自D和E；
X178选自F、H、W和Y；
X179选自D、E和Q；
X180是G；
X181是V；
X182是E；
X183是L；
X184是W；
X185选自F、I、L、M、V、W、Y、H、N、Q、S和T；
X186是E；
X187选自氨基酸；并且
X188选自D和E。
方面7.根据方面1至5中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配体中：
X171选自H、K和R；
X172选自S、T和Y；
X173选自F、I、L、M、V、W和Y；
X174是V；
X175选自F、I、L、M、V、W和Y；
X176选自E和Q；
X177选自D和E；
X178选自F、H、W和Y；
X179选自D、E和Q；
X180是G；
X181是V；
X182是E；
X183是L；
X184是W；
X185选自F、I、L、M、V、W、Y、H、N、Q、S和T；
X186是E；
X187选自氨基酸；并且
X188选自D和E。
方面8.根据方面1至5中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配体中：
X171选自H、K和R；
X172选自S、T和Y；
X173选自D、E、F、I、L、M、V、W和Y；
X174是V；
X175选自D、E、F、I、L、M、V、W和Y；
X176选自D、E、H、N、Q、S、T和Y；
X176选自E和Q；
X177选自D和E；
X178是W；
X179选自D、E和Q；
X180是G；
X181是V；
X182是E；
X183是L；
X184是W；
X185选自F、I、L、M、V、W、Y、H、N、Q、S和T；
X186是E；
X187选自氨基酸；并且
X188选自D和E。
方面9.根据方面1所述的IL-2Rβγc配体，其中(a)所述IL-2Rβ配体包括式(1)、式(1a)、式(1b)、式(1c)或式(1d)的氨基酸序列；并且(b)所述IL-2Rγc配体包括式(5)、式(5a)、式(5b)、式(5c)、式(5d)或式(5e)的氨基酸序列。
方面10.根据方面1所述的IL-2Rβγc配体，其中(a)所述IL-2Rβ配体包括与式(1)、式(1a)、式(1b)、式(1c)或式(1d)的氨基酸序列具有大于60％序列相似性的氨基酸序列；并且(b)所述IL-2Rγc配体包括与式(12)、式(5a)、式(5b)、式(5c)、式(5d)或式(5e)的氨基酸序列具有大于60％序列相似性的氨基酸序列。
方面11.根据方面1所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβ配体包括选自SEQ IDNO:805-903中的任一个的氨基酸序列；并且所述IL-2Rγc配体包括选自SEQ ID NO:944-1028中的任一个的氨基酸序列。
方面12.根据方面1所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβ配体包括选自SEQ IDNO:612、664、865、856、858、864、869、870、874、875和901中的任一个的氨基酸序列；并且所述IL-2Rγc配体包括选自SEQ ID NO:965、980、981、985、1024、1026和1028中的任一个的氨基酸序列。
方面13.根据方面1所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβ配体与SEQ ID NO:805-903中的任一个具有大于60％氨基酸序列相似性。
方面14.根据方面1所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rγc配体与SEQ ID NO:944-1028中的任一个具有大于60％氨基酸序列相似性。
方面15.根据方面1所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβ配体与SEQ ID NO:612、664、865、856、858、864、869、870、874、875和901中的任一个具有大于60％氨基酸序列相似性；并且所述IL-2Rγc配体与SEQ ID NO:965、980、981、985、1024、1026和1028中的任一个具有大于60％氨基酸序列相似性。
方面16.根据方面1至15中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβ配体包括位于所述IL-2Rβ配体的两个半胱氨酸之间的二硫键。
方面17.根据方面1至15中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rγc配体包括位于所述IL-2Rβγc配体的两个半胱氨酸之间的二硫键。
方面18.根据方面1至15中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体包括位于所述IL-2Rβ配体的半胱氨酸与所述IL-2Rγc配体的半胱氨酸之间的二硫键。
方面19.根据方面1至15中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβ配体的半胱氨酸中的每一个通过二硫键与所述IL-2Rγc配体的半胱氨酸结合。
方面20.根据方面1至19中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβ配体是pH偏向的IL-2Rβ配体和/或所述IL-2Rγc配体是pH偏向的IL-2Rγc配体。
方面21.根据方面1至20中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体是pH偏向的IL-2Rβγc配体。
方面22.根据方面1至21中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβ配体与所述IL-2Rβ亚基的特异性结合位点结合，其中IL-2、包括SEQ ID NO:1044的氨基酸序列的IL-2Rβ配体和包括SEQ ID NO:224的IL-2Rγc配体不与所述IL-2Rβ配体竞争与所述IL-2Rβ亚基上的所述特异性结合位点结合。
方面23.根据方面1至22中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβ配体以小于100μM的IC50与所述IL-2Rβ亚基结合；并且所述IL-2Rβ配体以大于100μM的IC50与所述IL-2Rγc亚基结合。
方面24.根据方面1至23中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rγc配体与所述IL-2Rγc亚基的特异性结合位点结合，其中IL-2、包括SEQ ID NO:1032的氨基酸序列的IL-2Rγc配体和包括SEQ ID NO:58的IL-2Rβ配体不与所述IL-2Rγc配体竞争与所述IL-2Rγc亚基上的所述特异性结合位点结合。
方面25.根据方面1至24中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rγc配体以小于100μM的IC50与所述IL-2Rγc亚基结合；并且所述IL-2Rγc配体以大于100μM的IC50与所述IL-2Rβ亚基结合。
方面26.根据方面1至25中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβ配体的C末端和/或N末端中的每一个独立地包括2至10个侧接氨基酸。
方面27.根据方面1至26中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβ配体的C末端和/或N末端中的每一个独立地包括选自-G-(SEQ ID NO:9390)、-GG-(SEQID NO:9400)或-GGRR-(SEQ ID NO:9402)的侧接氨基酸。
方面28.根据方面1至27中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rγc配体的C末端和/或N末端中的每一个独立地包括2至10个侧接氨基酸。
方面29.根据方面1至28中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rγc配体的C末端和/或N末端中的每一个独立地包括选自-G-(SEQ ID NO:9390)、-GG-(SEQID NO:9400)或-GGRR-(SEQ ID NO:9402)的侧接氨基酸。
方面30.根据方面1至29中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβ配体的C末端和所述IL-2Rγc配体的C末端与所述IL-2Rβγc配体连接子结合。
方面31.根据方面1至29中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβ配体的C末端和所述IL-2Rγc配体的N末端与所述IL-2Rβγc配体连接子结合。
方面32.根据方面1至29中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβ配体的N末端和所述IL-2Rγc配体的C末端与所述IL-2Rβγc配体连接子结合。
方面33.根据方面1至29中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβ配体的N末端和所述IL-2Rγc配体的N末端与所述IL-2Rβγc配体连接子结合。
方面34.根据方面1至33中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体连接子的长度为至/>
方面35.根据方面1至34中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体连接子被配置成促进所述IL-2Rβγc配体与IL-2R结合。
方面36.根据方面1至35中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体连接子被配置成激活IL-2R。
方面37.根据方面1至36中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体连接子包括合成的IL-2Rβγc配体连接子。
方面38.根据方面1至36中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述合成的IL-2Rβγc配体连接子包括三唑。
方面39.根据方面1至36中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体连接子包括肽基IL-2Rβγc配体连接子。
方面40.根据方面37所述的IL-2Rβγc配体，其中所述肽基IL-2Rβγc配体连接子包括2至20个氨基酸。
方面41.根据方面37所述的IL-2Rβγc配体，其中所述肽基IL-2Rβγc配体连接子包括(G)n(SEQ ID NO:9380)、(GS)n(SEQ ID NO:9381)、(GGS)n(SEQ ID NO:9382)、(GGGS)n(SEQ ID NO:9383)或(GGGGS)n(SEQ ID NO:9384)，其中n是1至20的整数。
方面42.根据方面1至41中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc连接子包括可切割IL-2Rβγc配体连接子。
方面43.根据方面1所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体包括：包括SEQID NO:865的氨基酸序列的IL-2Rβ配体；以及包括SEQ ID NO:965的氨基酸序列的IL-2Rγc配体。
方面44.根据方面1所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体包括：包括与SEQ ID NO:865具有大于60％序列相似性的氨基酸序列的IL-2Rβ配体；以及包括与SEQ IDNO:965具有大于60％序列相似性的氨基酸序列的IL-2Rγc配体。
方面45.根据方面44所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体连接子包括(G)n(SEQ ID NO:9380)、(GS)n(SEQ ID NO:9381)、(GGS)n(SEQ ID NO:9382)、(GGGS)n(SEQID NO:9383)或(GGGGS)n(SEQ ID NO:9384)，其中n是1至20的整数。
方面46.根据方面44所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体连接子包括-GGS-(SEQ ID NO:9392)。
方面47.根据方面1所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体包括SEQ IDNO:1263的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1263具有大于60％序列相似性的氨基酸序列。
方面48.根据方面47所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体包括一个或多个侧接甘氨酸。
方面49.根据方面1所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体包括SEQ IDNO:1264的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1264具有大于60％序列相似性的氨基酸序列。
方面50.根据方面49所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβ配体的半胱氨酸通过二硫键彼此结合；并且所述IL-2Rγc配体的半胱氨酸通过二硫键彼此结合。
方面51.根据方面49所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβ配体的半胱氨酸与所述IL-2Rγc配体的半胱氨酸结合。
方面52.根据方面1至51中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体是完全IL-2R激动剂。
方面53.根据方面1至51中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体是部分IL-2R激动剂。
方面54.根据方面1至53中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体是pH偏向的IL-2R激动剂。
方面55.根据方面1至51中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体是NK-92细胞和TF-1β细胞中STAT5磷酸化、AKT磷酸化和ERK1/2磷酸化通路的IL-2R激动剂。
方面56.一种串联IL-2Rβγc配体，其中所述串联IL-2Rβγc配体包括根据方面1至55中任一项所述的IL-2Rβγc配体中的两个或更多个。
方面57.根据方面56所述的串联IL-2Rβγc配体，其中所述两个或更多个IL-2Rβγc配体中的每一个是相同的。
方面58.根据方面56至57中任一项所述的串联IL-2Rβγc配体，其中所述两个或更多个IL-2Rβγc配体中的至少一个不同于另一个IL-2Rβγc配体。
方面59.根据方面56至58中任一项所述的串联IL-2Rβγc配体，其中所述两个或更多个IL-2Rβγc配体中的每一个通过串联连接子与另一个IL-2Rβγc配体结合。
方面60.根据方面56至59中任一项所述的串联IL-2Rβγc配体，其中第一IL-2Rβγc配体的C末端与所述串联连接子结合；并且第二个IL-2Rβγc配体的N末端与所述串联连接子结合。
方面61.根据方面56至60中任一项所述的串联IL-2Rβγc配体，其中所述串联连接子包括肽基串联连接子。
方面62.根据方面61所述的串联IL-2Rβγc配体，其中所述肽基串联连接子包括2至20个氨基酸。
方面63.根据方面61至62中任一项所述的串联IL-2Rβγc配体，其中所述肽基串联连接子的长度为至/>
方面64.一种IL-2Rβγc配体构建体，其中所述IL-2Rβγc配体构建体包括与构建体配偶体结合的根据方面1至55中任一项所述的IL-2Rβγc配体中的一个或多个。
方面65.根据方面64所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述IL-2Rβγc配体构建体包括两个或更多个IL-2Rβγc配体；并且所述两个或更多个IL-2Rβγc配体中的每一个是相同的。
方面66.根据方面64所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述IL-2Rβγc配体构建体包括两个或更多个IL-2Rβγc配体；并且所述两个或更多个IL-2Rβγc配体中的至少一个不同于其它IL-2Rβγc配体中的至少一个。
方面67.根据方面64至66中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其进一步包括构建体连接子，其中IL-2Rβγc配体通过所述构建体连接子与所述构建体配偶体结合。
方面68.根据方面67所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述IL-2Rβγc配体通过所述IL-2Rβγc配体的C末端与所述构建体连接子结合。
方面69.根据方面67所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述IL-2Rβγc配体通过所述IL-2Rβγc配体的N末端与所述构建体连接子结合。
方面70.根据方面67至69中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述构建体连接子包括肽基构建体连接子。
方面71.根据方面70所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述肽基构建体连接子包括2至200个氨基酸。
方面72.根据方面70至71中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述肽基构建体连接子的长度为至/>
方面73.根据方面70所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述肽基构建体连接子包括(G)n(SEQ ID NO:9380)、(GS)n(SEQ ID NO:9381)、(GGS)n(SEQ ID NO:9382)、(GGGS)n(SEQ ID NO:9383)、(GGGGS)n(SEQ ID NO:9384)或(PA)n(SEQ ID NO:9421)，其中n是1至20的整数。
方面74.根据方面67所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述构建体连接子包括可切割构建体连接子。
方面75.根据方面64至74中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述构建体配偶体包括多肽；并且所述IL-2Rβγc配体与所述多肽的C末端和/或N末端结合。
方面76.根据方面64至74中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述构建体配偶体包括多肽；并且所述IL-2Rβγc配体与氨基酸侧链结合。
方面77.根据方面64至74中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述构建体配偶体包括多肽；并且所述IL-2Rβγc配体并入到所述多肽中。
方面78.根据方面64至77中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述构建体配偶体包括被配置成赋予所述IL-2Rβγc配体在患者的体循环中期望的药代动力学性质的化合物。
方面79.根据方面64至78中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述构建体配偶体包括被配置成赋予所述IL-2Rβγc配体在患者体内期望的生物分布性质的化合物。
方面80.根据方面64至79中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述构建体配偶体选自聚合物、多肽、Fc片段、免疫球蛋白片段和抗体。
方面81.根据方面64至79中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述构建体配偶体选自人血清白蛋白、多肽和聚乙二醇。
方面82.根据方面64至79中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述IL-2Rβγc配体构建体包括重组融合蛋白。
方面83.根据方面64至82中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述IL-2Rβγc配体构建体包括选自SEQ ID NO:1212-1252中的任一个的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1212-1252中的任一个具有大于60％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
方面84.根据方面64至82中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述IL-2Rβγc配体包括SEQ ID NO:1263的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1263具有大于60％序列相似性的氨基酸序列。
方面85.根据方面64至84中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述构建体配偶体包括Fc片段。
方面86.根据方面85所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述Fc片段源自IgG1、IgG2或IgG4或前述任一种的突变体。
方面87.根据方面85至86中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述IL-2Rβγc配体与所述Fc片段的C末端结合。
方面88.根据方面87所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述IL-2Rβγc配体与所述Fc片段的N末端结合。
方面89.根据方面87所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述IL-2Rβγc配体通过Fc片段连接子与所述Fc片段结合。
方面90.根据方面89所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述Fc片段连接子包括肽基Fc片段连接子。
方面91.根据方面89所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述肽基Fc片段连接子包括2至200个氨基酸。
方面92.根据方面89所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述肽基Fc片段连接子的长度为至/>
方面93.根据方面89所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述肽基Fc片段连接子包括(G)n(SEQ ID NO:9380)、(GS)n(SEQ ID NO:9381)、(GGS)n(SEQ ID NO:9382)、(GGGS)n(SEQ ID NO:9383)、(GGGGS)n(SEQ ID NO:9384)或(PA)n(SEQ ID NO:9421)，其中n是1至20的整数。
方面94.根据方面64至84中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述构建体配偶体是免疫球蛋白片段。
方面95.根据方面94所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述免疫球蛋白片段选自IgG1片段、IgG2片段和IgG4片段。
方面96.根据方面94所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述IL-2Rβγc配体与所述免疫球蛋白片段的C末端结合。
方面97.根据方面94所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述IL-2Rβγc配体与所述免疫球蛋白片段的N末端结合。
方面98.根据方面94所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述IL-2Rβγc配体通过免疫球蛋白连接子与所述免疫球蛋白片段结合。
方面99.根据方面98所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述免疫球蛋白连接子包括肽基免疫球蛋白连接子。
方面100.根据方面99所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述肽基免疫球蛋白连接子包括2至200个氨基酸。
方面101.根据方面99所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述肽基免疫球蛋白连接子的长度为至/>
方面102.根据方面99所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述肽基免疫球蛋白连接子包括((G)n(SEQ ID NO:9380)、(GS)n(SEQ ID NO:9381)、(GGS)n(SEQ ID NO:9382)、(GGGS)n(SEQ ID NO:9383)、(GGGGS)n(SEQ ID NO:9384)或(PA)n(SEQ ID NO:9421)，其中n是1至20的整数。
方面103.根据方面89所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中至少一个IL-2Rβγc配体与免疫球蛋白重链结合。
方面104.根据方面89所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中至少一个IL-2Rβγc配体与免疫球蛋白轻链结合。
方面105.根据方面64至84中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述构建体配偶体包括抗体。
方面106.根据方面99所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述抗体针对肿瘤抗原。
方面107.根据方面106所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述肿瘤抗原选自CEA和FAP。
方面108.根据方面105所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述抗体针对检查点抑制剂。
方面109.根据方面108所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述检查点抑制剂是PD-1。
方面110.根据方面109所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述PD-1抗体选自西米普利单抗和派姆单抗。
方面111.根据方面105所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述抗体针对细胞特异性抗原。
方面112.根据方面111所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述细胞特异性抗原选自CD25、NK62D和CD8。
方面113.根据方面105所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述抗体进一步包括细胞因子。
方面114.根据方面113所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述细胞因子包括白细胞介素。
方面115.根据方面64至84中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述IL-2Rβγc配体构建体包括细胞靶向部分。
方面116.根据方面115所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述细胞靶向部分包括肿瘤靶向部分。
方面117.根据方面115所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述细胞靶向部分包括免疫细胞靶向部分。
方面118.根据方面64至84中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述IL-2Rβγc配体构建体进一步包括泛素样修饰剂。
方面119.根据方面64至118中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中除了所述IL-2Rβγc配体之外，所述IL-2Rβγc配体构建体还进一步包括治疗有效部分。
方面120.根据方面64至119中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述IL-2Rβγc配体构建体是完全IL-2R激动剂。
方面121.根据方面64至119中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述IL-2Rβγc配体构建体是部分IL-2R激动剂。
方面122.根据方面64至121中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述IL-2Rβγc配体构建体是pH偏向的IL-2R激动剂。
方面123.一种IL-2Rβγc配体构建体，其中所述IL-2Rβγc配体构建体包括构建体配偶体、与所述构建体配偶体结合的至少一个IL-2Rβ配体以及与所述构建体配偶体结合的至少一个IL-2Rγc配体，其中
(a)所述IL-2Rβ配体包括式(11)(SEQ ID NO:805)、式(11a)(SEQ ID NO:806)、式(11b)(SEQ ID NO:807)、式(11c)(SEQ ID NO:808)或式(11d)(SEQ ID NO:809)的氨基酸序列或与式(11)(SEQ ID NO:805)、式(11a)(SEQ ID NO:806)、式(11b)(SEQ ID NO:807)、式(11c)(SEQ ID NO:808)或式(11d)(SEQ ID NO:809)的氨基酸序列具有大于60％序列相似性的氨基酸序列：
-X211-X212-X213-X214-C-X215-X216-X217-X218-X219-X220-X221-X222-C-X223-X224-X225-(11)
-X212-X213-X214-C-X215-X216-X217-X218-X219-X220-X221-X222-C-X223-X224- (11a)
-X213-X214-C-X215-X216-X217-X218-X219-X220-X221-X222-C-X223-X224- (11b)
-X214-C-X215-X216-X217-X218-X219-X220-X221-X222-C-X223- (11c)
-C-X215-X216-X217-X218-X219-X220-X221-X222-C- (11d)
其中，
X211选自氨基酸；
X212选自F、H、W和Y；
X213选自F、H、I、L、M、V、W和Y；
X214是P；
X215选自F、H、W和Y；
X216选自F、I、L、M、V、W和Y；
X217是A；
X218选自K、R、H、N、Q、S、T和Y；
X219选自F、I、L、M、V、W和Y；
X220是G；
X221选自D、E、H、N、Q、S、T和Y；
X222是L；
X223是D；
X224选自F、I、L、M、V、W和Y；并且
X225选自D和E；并且
(b)所述IL-2Rγc配体包括式(5)(SEQ ID NO:944)、式(5a)(SEQ ID NO:945)、式(5b)(SEQ ID NO:946)、式(5c)(SEQ ID NO:947)、式(5d)(SEQ ID NO:948)或式(5e)(SEQID NO:1949)的氨基酸序列或与式(5)(SEQ ID NO:944)、式(5a)(SEQ ID NO:945)、式(5b)(SEQ ID NO:946)、式(5c)(SEQ ID NO:947)、式(5d)(SEQ ID NO:948)或式(5e)(SEQ IDNO:949)的氨基酸序列具有大于60％序列相似性的氨基酸序列：
-X171-X172-X173-X174-X175-C-X176-X177-X178-X179-X180-X181-X182-X183-C-X184-X185-X186-X187-X188- (5)
-X172-X173-X174-X175-C-X176-X177-X178-X179-X180-X181-X182-X183-C-X184-X185-X186-X187-
(5a)
-X173-X174-X175-C-X176-X177-X178-X179-X180-X181-X182-X183-C-X184-X185-X186- (5b)
-X174-X175-C-X176-X177-X178-X179-X180-X181-X182-X183-C-X184-X185- (5c)
-X175-C-X176-X177-X178-X179-X180-X181-X182-X183-C-X184- (5d)
-C-X176-X177-X178-X179-X180-X181-X182-X183-C- (5e)
其中，
X171选自H、K和R；
X172选自S、T和Y；
X173选自D、E、F、I、L、M、V、W和Y；
X174选自F、I、L、M、V、W和Y；
X175选自D、E、F、I、L、M、V、W和Y；
X176选自D、E、H、N、Q、S、T和Y；
X177选自D和E；
X178选自F、H、I、L、M、V、W和Y；
X179选自D、E、H、N、Q、S、T和Y；
X180是G；
X181是V；
X182是E；
X183是L；
X184选自W；
X185选自F、I、L、M、V、W、Y、H、N、Q、S和T；
X186是E；
X187选自氨基酸；并且
X188选自D和E。
方面124.根据方面123所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβ配体包括SEQ IDNO:865的氨基酸序列或与SEQ ID NO:865具有大于60％序列相似性的氨基酸序列；并且所述IL-2Rγc配体包括SEQ ID NO:965的氨基酸序列或与SEQ ID NO:965具有大于60％序列相似性的氨基酸序列。
方面125.根据方面123至124中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβ配体的半胱氨酸通过二硫键彼此结合；并且所述IL-2Rγc配体的半胱氨酸通过二硫键彼此结合。
方面126.根据方面123至125中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述至少一个IL-2Rβ配体中的每一个和所述至少一个IL-2Rγc配体中的每一个通过构建体连接子与所述构建体配偶体结合。
方面127.根据方面123至126中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述至少一个IL-2Rβ配体中的每一个是相同的，并且所述至少一个IL-2Rγc配体中的每一个是相同的。
方面128.根据方面123至127中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，所述IL-2Rβ配体中的至少一个不同于其它IL-2Rβ配体中的至少一个和/或所述IL-2Rγc配体中的至少一个不同于其它IL-2Rγc配体中的至少一个。
方面129.根据方面123至128中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述构建体配偶体包括Fc片段、免疫球蛋白片段或免疫球蛋白。
方面130.根据方面123至128中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述构建体配偶体包括多肽或聚合物。
方面131.根据方面123至130中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其进一步包括至少一个IL-2Rβγc配体。
方面132.一种治疗患者的癌症的方法，所述方法包括向需要此类治疗的患者施用治疗有效量的根据方面1至155中任一项所述的IL-2Rβγc配体、根据方面56至63中任一项所述的串联IL-2Rβγc配体、根据方面64至122中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体、根据方面123至131中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体或前述任一种的组合。
方面133.一种治疗患者的自身免疫性疾病的方法，所述方法包括向需要此类治疗的患者施用治疗有效量的根据方面1至155中任一项所述的IL-2Rβγc配体、根据方面56至63中任一项所述的串联IL-2Rβγc配体、根据方面64至122中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体、根据方面123至131中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体或前述任一种的组合。
方面134.一种治疗患者的炎性疾病的方法，所述方法包括向需要此类治疗的患者施用治疗有效量的根据方面1至155中任一项所述的IL-2Rβγc配体、根据方面56至63中任一项所述的串联IL-2Rβγc配体、根据方面64至122中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体、根据方面123至131中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体或前述任一种的组合。
方面135.一种扩增免疫细胞的方法，所述方法包括使免疫细胞群体与有效量的根据方面1至155中任一项所述的IL-2Rβγc配体、根据方面56至63中任一项所述的串联IL-2Rβγc配体、根据方面64至122中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体、根据方面123至131中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体或前述任一种的组合离体或体内接触。
方面136.一种细胞疗法的方法，所述方法包括对细胞进行工程化以表达根据方面1至155中任一项所述的IL-2Rβγc配体或根据方面56至63中任一项所述的串联IL-2Rβγc配体，使得所述IL-2Rβγc配体或串联IL-2Rβγc配体在细胞表面上表达和/或由所述细胞分泌。
方面137.一种加强疫苗的方法，所述方法包括向患者施用疫苗和治疗有效量的根据方面1至155中任一项所述的IL-2Rβγc配体、根据方面56至63中任一项所述的串联IL-2Rβγc配体、根据方面64至122中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体、根据方面123至131中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体或前述任一种的组合。
方面138.一种修饰免疫应答的方法，所述方法包括向患者施用有效量的根据方面1至155中任一项所述的IL-2Rβγc配体、根据方面56至63中任一项所述的串联IL-2Rβγc配体、根据方面64至122中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体、根据方面123至131中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体或前述任一种的组合。
方面139.一种药物组合物，其包括根据方面1至155中任一项所述的IL-2Rβγc配体、根据方面56至63中任一项所述的串联IL-2Rβγc配体、根据方面64至122中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体、根据方面123至131中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体或前述任一种的组合。
方面140.根据方面139所述的药物组合物，其进一步包括化疗剂、免疫调节剂、检查点抑制剂、疫苗或前述任一种的组合。
方面141.一种核酸，其编码根据方面1至155中任一项所述的IL-2Rβγc配体、根据方面56至63中任一项所述的串联IL-2Rβγc配体、根据方面64至122中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体和/或根据方面123至131中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体。
方面142.一种核酸，其编码IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体包括选自SEQ IDNO:805-903中的任一个的氨基酸序列或与SEQ ID NO:805-903中的任一个具有大于60％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
方面143.一种核酸，其编码IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体包括选自SEQ IDNO:612、664、865、856、858、864、869、870、874、875和901中的任一个的氨基酸序列或与SEQID NO:612、664、865、856、858、864、869、870、874、875和901中的任一个具有大于60％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
方面144.一种核酸，其编码IL-2Rγc配体，其中所述IL-2Rγc配体包括选自SEQID NO:944-1028中的任一个的氨基酸序列或与SEQ ID NO:944-1028中的任一个具有大于60％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
方面145.一种核酸，其编码IL-2Rγc配体，其中所述IL-2Rγc配体包括选自SEQID NO:965、980、981、985、1024和1026中的任一个的氨基酸序列或与SEQ ID NO:965、980、981、985、1024、1026和1028中的任一个具有大于60％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
方面146.一种核酸，其编码根据方面1至155中任一项所述的IL-2Rβγc配体。
方面147.根据方面146所述的核酸，其中所述IL-2Rβγc配体包括：包括SEQ IDNO:865的氨基酸序列或与SEQ ID NO:865具有大于60％氨基酸序列相似性的氨基酸序列的IL-2Rβ配体；以及包括SEQ ID NO:965的氨基酸序列或与SEQ ID NO:865具有大于60％氨基酸序列相似性的氨基酸序列的IL-2Rγc配体。
方面148.根据方面146所述的核酸，其中所述IL-2Rβγc配体包括包含SEQ ID NO:1205的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1205具有大于60％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
方面149.一种核酸，其编码根据方面56至63中任一项所述的串联IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体连接子中的每一个独立地包括肽基IL-2Rβγc配体连接子；并且所述串联连接子中的每一个独立地包括肽基串联连接子。
方面150.一种核酸，其编码根据方面64至122中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述构建体连接子包括肽基构建体连接子。
方面151.一种核酸，其编码根据方面150所述的IL-2Rβγc配体构建体，其中所述IL-2Rβγc配体构建体包括与SEQ ID NO:1202-1252中的任一个具有大于60％氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
方面152.一种核酸，其编码IL-2Rβγc配体构建体，其中所述IL-2Rβγc配体构建体包括选自SEQ ID NO:1202-1252中的任一个的氨基酸序列。
方面153.一种核酸，其编码根据方面123至131中任一项所述的IL-2Rβγc配体构建体。
方面1A.一种IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体包括：式(1)-(1d)、式(2)-(2d)、式(3)-(3e)和式(4)-(4f)中的任一个的氨基酸序列；前述任一种的截短的氨基酸序列；前述任一种的经取代的氨基酸序列；具有侧接氨基酸的前述任一氨基酸序列；以及与前述任一种具有大于60％序列相似性的氨基酸序列。
方面2A.一种IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体包括：SEQ ID NO:805-903、911-930、2575-2655、2661-2891、2900-2926、2929-2941、3100-3128、3130-3151和3147-3186中的任一个的氨基酸序列；前述任一种的截短的氨基酸序列；前述任一种的经取代的氨基酸序列；具有侧接氨基酸的前述任一氨基酸序列；以及与前述任一种具有大于60％序列相似性的氨基酸序列。
方面3A.一种IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体包括式(1)-(1d)、式(2)-(2d)、式(3)-(3e)或式(4)-(4f)中的任一个的氨基酸序列。
方面4A.一种IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体包括SEQ ID NO:805-903、911-930、2575-2655、2661-2891、2900-2926、2929-2941、3100-3128、3130-3151或3147-3186中的任一个的氨基酸序列。
方面5A.一种IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体包括：SEQ ID NO:865的氨基酸序列；其截短的氨基酸序列；前述任一种的经取代的氨基酸序列；具有侧接氨基酸的前述任一氨基酸序列；以及与前述任一种具有大于60％序列相似性的氨基酸序列。
方面6A.根据方面1A至5A中任一项所述的IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体包括位于所述IL-2Rβ配体的两个半胱氨酸之间的二硫键。
方面7A.根据方面1A至6A中任一项所述的IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体以小于100μM的IC50与所述IL-2Rβ亚基的所述特异性结合位点结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
方面8A.根据方面1A至7A中任一项所述的IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体表现出的TF-1β细胞和/或NK-92细胞中的STAT5磷酸化的EC50小于100μM。
方面9A.根据方面1A至8A中任一项所述的IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体以小于100μM的IC50与所述hIL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
方面10A.根据方面1A至9A中任一项所述的IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体以小于100μM的IC50与所述cyno-IL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
方面11A.一种IL-2Rγc配体，其中所述IL-2Rγc配体包括：式(5)-(5e)中的任一个的氨基酸序列；前述任一种的截短的氨基酸序列；前述任一种的经取代的氨基酸序列；具有侧接氨基酸的前述任一氨基酸序列；以及与前述任一种具有大于60％序列相似性的氨基酸序列。
方面12A.一种IL-2Rγc配体，其中所述IL-2Rγc配体包括：SEQ ID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613中的任一个的氨基酸序列；前述任一种的截短的氨基酸序列；前述任一种的经取代的氨基酸序列；具有侧接氨基酸的前述任一氨基酸序列；以及与前述任一种具有大于60％序列相似性的氨基酸序列。
方面13A一种IL-2Rγc配体，其中所述IL-2Rγc配体包括式(5)-(5e)中的任一个的氨基酸序列。
方面14A.一种IL-2Rγc配体，其中所述IL-2Rγc配体包括SEQ ID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613中的任一个的氨基酸序列。
方面15A.一种IL-2Rγc配体，其中所述IL-2Rγc配体包括：SEQ ID NO:965的氨基酸序列；其截短的氨基酸序列；前述任一种的经取代的氨基酸序列；具有侧接氨基酸的前述任一氨基酸序列；以及与前述任一种具有大于60％序列相似性的氨基酸序列。
方面16A.根据方面11A至15A中任一项所述的IL-2Rγc配体，其中所述IL-2Rγc配体包括位于所述IL-2Rγc配体的两个半胱氨酸之间的二硫键。
方面17A.根据方面11A至16A中任一项所述的IL-2Rγc配体，其中所述IL-2Rγc配体以小于100μM的IC50与所述IL-2Rγc亚基的所述特异性结合位点结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
方面18A.根据方面11A至17A中任一项所述的IL-2Rγc配体，其中所述IL-2Rγc配体表现出的TF-1β细胞和/或NK-92细胞中的STAT5磷酸化的EC50小于100μM。
方面19A.根据方面11A至18A中任一项所述的IL-2Rγc配体，其中所述IL-2Rγc配体以小于100μM的IC50与所述hu-IL-2Rγc亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
方面20A.根据方面11A至19A中任一项所述的IL-2Rγc配体，其中所述IL-2Rγc配体以小于100μM的IC50与所述cyno-IL-2Rγc亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
方面21A.一种IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc结合化合物包括：根据方面1A至10A中任一项所述的IL-2Rβ配体；以及根据方面11A至20A中任一项所述的IL-2Rγc配体。
方面22A.根据方面21A所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc结合化合物包括IL-2Rβγc配体，其中所述2Rβγc配体包括：配体连接子；与所述配体连接子结合的IL-2Rβ配体；以及与所述配体连接子结合的IL-2Rγc配体。
方面23A.根据方面22A所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc配体包括位于所述IL-2Rβγc配体的两个半胱氨酸之间的二硫键。
方面24A.根据方面21A至22A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβ配体和所述IL-2Rγc配体以C/C取向、C/N取向、N/C取向或N/N取向与所述配体连接子键合。
方面25A.根据方面21A至24A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述配体连接子包括肽基配体连接子。
方面26A.根据方面21A至24A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述配体连接子包括化学配体连接子。
方面27A.根据方面21A至24A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述配体连接子包括(G)n(SEQ ID NO:9380)、(GS)n(SEQ ID NO:9381)、(GGS)n(SEQ ID NO:9382)、(GGGS)n(SEQ ID NO:9383)或(GGGGS)n(SEQ ID NO:9384)，其中n是1至20的整数。
方面28A.根据方面21A至24A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc配体包括：SEQ ID NO:1263-1270、4070-4085和4090至4099中的任一个的氨基酸序列；前述任一种的截短的氨基酸序列；前述任一种的经取代的氨基酸序列；具有侧接氨基酸的前述任一氨基酸序列；以及与前述任一种具有大于60％序列相似性的氨基酸序列。
方面29A.根据方面21A至24A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc配体包括SEQ ID NO:1263-1270、4070-4085和4090至4099中的任一个的氨基酸序列。
方面30A.根据方面21A至29A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc配体是完全IL-2R激动剂或部分IL-2R激动剂。
方面31A.根据方面21A至30A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc配体表现出的TF-1β细胞和/或NK-92细胞中的STAT5磷酸化的EC50小于100μM。
方面32A.根据方面21A至31A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc配体以小于100μM的IC50与hu-IL-2R结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
方面33A.根据方面21A至32A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc配体以小于100μM的IC50与cyno-IL-2R结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
方面34A.根据方面21A所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc结合化合物包括构建体配偶体，其中所述IL-2Rβ配体和所述IL-2Rγc配体与所述构建体配偶体结合。
方面35A.根据方面22A至33A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc结合化合物包括所述IL-2Rβγc配体，并且所述IL-2Rβγc配体与所述构建体配偶体结合。
方面36A.根据方面35A的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc配体通过所述IL-2Rβγc配体的C末端或N末端与所述构建体配偶体键合。
方面37A.根据方面35A至36A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc配体通过构建体连接子与所述构建体配偶体结合。
方面38A.根据方面37A所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述构建体连接子包括肽基配体连接子。
方面39A.根据方面37A所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述构建体连接子包括化学配体连接子。
方面40A.根据方面37A所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述构建体连接子包括(G)n(SEQ ID NO:9380)、(GS)n(SEQ ID NO:9381)、(GGS)n(SEQ ID NO:9382)、(GGGS)n(SEQID NO:9383)或(GGGGS)n(SEQ ID NO:9384)，其中n是1至20的整数。
方面41A.根据方面34A至40A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述构建体配偶体选自聚合物、多肽、Fc片段、免疫球蛋白片段和抗体。
方面42A.根据方面34A至40A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述构建体配偶体选自人血清白蛋白、多肽和聚乙二醇。
方面43A.根据方面34A至40A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述构建体配偶体包括病毒表面抗原或病毒样颗粒。
方面44A.根据方面34A至40A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述构建体配偶体包括细胞因子。
方面45A.根据方面34A至40A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述化合物包括重组融合蛋白。
方面46A.根据方面45A所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述重组融合蛋白选自hIgG-Fc重组融合蛋白和hIgG1-Fc重组融合蛋白。
方面47A.根据方面34A至40A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述构建体配偶体包括抗体并且所述抗体针对肿瘤抗原。
方面48A.根据方面34A至40A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述构建体配偶体包括细胞靶向部分。
方面49A.根据方面48A所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中细胞靶向部分包括肿瘤靶向部分、免疫细胞靶向部分或其组合。
方面50A.根据方面35A所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc结合化合物包括SEQ ID NO:1212-1252和8061-8082中的任一个的氨基酸序列；前述任一种的截短的氨基酸序列；前述任一种的经取代的氨基酸序列；具有侧接氨基酸的前述任一氨基酸序列；以及与前述任一种具有大于60％序列相似性的氨基酸序列。
方面51A.根据方面34A至50A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc结合化合物是完全IL-2R激动剂或部分IL-2R激动剂。
方面52A.根据方面34A至51A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc结合化合物表现出的TF-1β细胞和/或NK-92细胞中的STAT5磷酸化的EC50小于100μM。
方面53A.根据方面34A至52A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc结合化合物以小于100μM的IC50与hu-IL-2R结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
方面54A.根据方面34A至53A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc结合化合物以小于100μM的IC50与cyno-IL-2R结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
方面55A.一种药物组合物，其包括根据方面21A至54A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物。
方面56A.根据方面55A所述的药物组合物，其进一步包括化疗剂、免疫调节剂、检查点抑制剂、疫苗或前述任一种的组合。
方面57A.一种治疗患者的疾病的方法，所述方法包括向需要此类治疗的患者施用治疗有效量的根据方面21A至54A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物或根据方面55A至56A中任一项所述的药物组合物。
方面58A.根据方面57A所述的方法，其中所述疾病选自癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病、传染性疾病和病毒性疾病。
方面59A.一种扩增免疫细胞的方法，所述方法包括使免疫细胞群体与有效量的根据方面1A至10A中任一项所述的IL-2Rβ配体、根据方面11A至20A中任一项所述的IL-2Rγc配体或根据方面21A至54A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物离体或体内接触。
方面60A.一种细胞疗法的方法，所述方法包括对细胞进行工程化以表达根据方面21A至54A中任一项所述IL-2Rβγc结合化合物。
方面61A.一种加强疫苗的方法，所述方法包括向患者施用疫苗和治疗有效量的根据方面21A至54A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物或根据方面55A至56A中任一项所述的药物组合物。
方面62A.一种修饰免疫应答的方法，所述方法包括向患者施用有效量的根据方面21A至54A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物或根据方面55A至56A中任一项所述的药物组合物。
方面63A.一种核酸，其编码根据方面1A至10A中任一项所述的IL-2Rβ配体、根据方面11A至21A中任一项所述的IL-2Rγc配体或根据方面22A至54A中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物。
方面1B.一种IL-2Rβ配体，其选自：
SEQ ID NO:2661-2891、2900-2926、911-930、9301、9308、2859、2934、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207中的任一个中的任一个的氨基酸序列；
SEQ ID NO:2661-2891、2900-2926、911-930、9301、9308、2859、2934、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207中的任一个的截短的氨基酸序列；
具有1至4个氨基酸取代的SEQ ID NO:2661-2891、2900-2926、911-930、9301、9308、2859、2934、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207中的任一个的氨基酸序列；
具有1至4个侧接甘氨酸的SEQ ID NO:2661-2891、2900-2926、911-930、9301、9308、2859、2934、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207中的任一个的氨基酸序列；
与SEQ ID NO:2661-2891、2900-2926、911-930、9301、9308、2859、2934、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207中的任一个具有大于60％序列相似性的氨基酸序列；
或前述任一种的组合，
其中所述IL-2Rβ配体以小于100μM的IC50与hu-IL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
方面2B.根据方面1B所述的IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体包括SEQ ID NO:2859、2934、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207中的任一个的氨基酸序列。
方面3B.根据方面1B所述的IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体与具有SEQ ID NO:2859、2934、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207中的任一个的IL-2Rβ配体具有大于60％氨基酸序列相似性。
方面4B.根据方面1B至3B中任一项所述的IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体以小于100μM的IC50与hu-IL-2R结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
方面5B.根据方面1B至4B中任一项所述的IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体以小于100μM的IC50与所述cyno-IL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
方面6B.根据方面1B至5B中任一项所述的IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体以小于100μM的IC50与cyno-IL-2R结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
方面7B.根据方面1B所述的IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体具有选自SEQ IDNO:2858和SEQ ID NO:2859的氨基酸序列。
方面8B.根据方面1B所述的IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体具有与选自SEQ IDNO:2858和SEQ ID NO:2859的氨基酸序列具有大于60％序列相似性的氨基酸序列。
方面9B.根据方面1B至8B中任一项所述的IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体在C末端上、在N末端上或在C末端和N末端两者上独立地包括1至4个侧接甘氨酸。
方面10B.一种IL-2Rβ结合化合物，其包括根据方面1B至9B中任一项所述的IL-2Rβ配体。
方面11B.根据方面10B所述的IL-2Rβ结合化合物，其中所述IL-2Rβ配体与构建体配偶体结合。
方面12B.根据方面11B所述的IL-2Rβ结合化合物，其中所述构建体配偶体选自IgGFc片段、ZW1_A片段、Cys-臼片段、Cys-杵片段、抗体和蛋白质。
方面13B.根据方面11B至12B中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物，其中所述IL-2Rβ配体通过构建体连接子与所述构建体配偶体结合。
方面14B.根据方面10B至13B中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物，其中所述IL-2Rβ结合化合物以小于100μM的IC50与hu-IL-2R结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
方面15B.根据方面10B至14B中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物，其中所述IL-2Rβ结合化合物以小于100μM的IC50与cyno-IL-2R结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
方面16B.根据方面10B至15B中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物，其中所述IL-2Rβ结合化合物包括IL-2Rγc配体和IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rγc配体以小于100μM的IC50与所述hu-IL-2Rγc亚基结合；所述IL-2Rβ配体以小于100μM的IC50与所述hu-IL-2Rβ亚基结合；并且所述IC50是使用噬菌体ELISA竞争测定确定的。
方面17B.根据方面10B至16B中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物，其中所述IL-2Rβ结合化合物包括IL-2Rγc配体和IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rγc配体以小于100μM的IC50与所述cyno-IL-2Rγc亚基结合；所述IL-2Rβ配体以小于100μM的IC50与所述cyno-IL-2Rβ亚基结合；并且所述IC50是使用噬菌体ELISA竞争测定确定的。
方面18B.一种IL-2Rβγc配体，其包括：
根据方面1B至9B中任一项所述的IL-2Rβ配体；以及
IL-2Rγc配体，其中所述IL-2Rγc配体包括：
SEQ ID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613中的任一个中的任一个的氨基酸序列；
SEQ ID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613中的任一个的截短的氨基酸序列；
具有1至4个氨基酸取代的SEQ ID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613中的任一个的氨基酸序列；
具有1至4个侧接甘氨酸的SEQ ID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613中的任一个的氨基酸序列；
与SEQ ID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613中的任一个具有大于60％序列相似性的氨基酸序列；
或前述任一种的组合，
其中所述IL-2Rγc配体以小于100μM的IC50与hu-IL-2Rγc亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
方面19B.根据方面18所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rγc配体包括：
SEQ ID NO:965的氨基酸序列；
SEQ ID NO:965的截短的氨基酸序列；
具有1至4个氨基酸取代的SEQ ID NO:965的氨基酸序列；
具有1至4个侧接甘氨酸的SEQ ID NO:965的氨基酸序列；
与SEQ ID NO:965具有大于60％序列相似性的氨基酸序列；
或前述任一种的组合。
方面20B.根据方面18B所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rγc配体包括SEQ IDNO:965的氨基酸序列。
方面21B.根据方面18B所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβ配体包括选自SEQID NO:2858和SEQ ID NO:2859的氨基酸序列；并且所述IL-2Rγc配体包括SEQ ID NO:965的氨基酸序列。
方面22B.根据方面18B所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体包括SEQID NO:4100-4137、4160-4168和4170-4185中的任一个的氨基酸序列。
方面23B.根据方面18B所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体与选自SEQID NO:4100-4137、4160-4168和4170-4185中的任一个的氨基酸序列具有大于60％序列相似性。
方面24B.根据方面18B至23B中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβ配体通过配体连接子与所述IL-2Rγc配体结合。
方面25.根据方面24B所述的IL-2Rβγc配体，其中所述配体连接子包括刚性配体连接子。
方面26.根据方面25B所述的IL-2Rβγc配体，其中所述刚性配体连接子包括(PA)n，其中n是1至20的整数(SEQ ID NO:1447)。
方面27B.根据方面25B所述的IL-2Rβγc配体，其中所述刚性配体连接子包括(PA)n，其中n是5至15的整数(SEQ ID NO:1450)。
方面28B.根据方面18B至27B中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中hu-IL-2R亚基结合比率为10至1,000，其中所述hu-IL-2R亚基结合比率为用于将所述IL-2Rβ配体与所述hu-IL-2Rβ亚基结合的IC50与用于将所述IL-2Rγc配体与所述hu-IL-2Rγc亚基结合的IC50的比率。
方面29B.根据方面18B至27B中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中hu-IL-2R亚基结合比率为0.1至0.001，其中所述hu-IL-2R亚基结合比率为用于将hu-IL-2Rβ配体与所述IL-2Rβ亚基结合的IC50与用于将所述IL-2Rγc配体与所述hu-IL-2Rγc亚基结合的IC50的比率。
方面30B.根据方面18B至27B中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中hu-IL-2R亚基结合比率为0.1至10，其中所述hu-IL-2R亚基结合比率为用于将所述IL-2Rβ配体与所述hu-IL-2Rβ亚基结合的IC50与用于将所述IL-2Rγc配体与所述hu-IL-2Rγc亚基结合的IC50的比率。
方面31B.根据方面18B至27B中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中hu-IL-2R结合比率为10至1,000，其中所述hu-IL-2R结合比率为用于将所述IL-2Rβ配体与hu-IL-2R结合的IC50与用于将所述IL-2Rγc配体与所述hu-IL-2R结合的IC50的比率。
方面32B.根据方面18B至27B中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中hu-IL-2R结合比率为0.1至0.001，其中所述hu-IL-2R结合比率为用于将所述IL-2Rβ配体与IL-2R结合的IC50与用于将所述IL-2Rγc配体与IL-2R结合的IC50的比率。
方面33B.根据方面18B至27B中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中hu-IL-2R结合比率为0.1至10，其中所述hu-IL-2R结合比率为用于将所述IL-2Rβ配体与IL-2R结合的IC50与用于将所述IL-2Rγc配体与hu-IL-2R结合的IC50的比率。
方面34B.根据方面18B至33B中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体以小于100μM的IC50与hu-IL-2R结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
方面35B.根据方面18B至34B中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体以小于100μM的IC50与cyno-IL-2R结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
方面36B.根据方面18B至35B中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体是hu-IL-2R激动剂。
方面37B.根据方面18B至36B中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体是cyno-IL-2R激动剂。
方面38B.根据方面18B至37B中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体以小于100μM的EC50激活hu-IL-2R，如在TF-1-2Rβ工程化细胞系或PBMC细胞中使用STAT5磷酸化测定所确定的。
方面39B.根据方面18B至38B中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体以小于100μM的EC50激活cyno-IL-2R，如在cyno-PMBC细胞中使用STAT5磷酸化测定所确定的。
方面40B.一种IL-2Rβγc结合化合物，其包括根据权利要求1至9中任一项所述的IL-2Rβ配体和以小于100μM的IC50与所述IL-2Rγc亚基结合的IL-2Rγc配体；或根据方面18B至39B中任一项所述的IL-2Rβγc配体。
方面41B.根据方面40B所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc配体与构建体配偶体结合。
方面42B.根据方面41B所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述构建体配偶体选自IgG Fc片段、ZW1_A片段、Cys-臼片段、Cys-杵片段、抗体和蛋白质。
方面43B.根据方面41B至42B中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述构建体配偶体包括细胞靶向部分。
方面44B.根据方面43B所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中细胞靶向部分包括肿瘤靶向部分、免疫细胞靶向部分或其组合。
方面45B.根据方面41B至44B中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc配体通过构建体连接子与所述构建体配偶体结合。
方面46B.根据方面40B至45B中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc结合化合物以小于100μM的IC50与hu-IL-2R结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
方面47B.根据方面40B至46B中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc结合化合物以小于100μM的IC50与cyno-IL-2R结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
方面48B.根据方面40B至47B中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc结合化合物是hu-IL-2R激动剂。
方面49B.根据方面40B至48B中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc结合化合物是cyno-IL-2R激动剂。
方面50B.根据方面40B至49B中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc结合化合物以小于100μM的EC50激活hu-IL-2R，如在TF1-2Rβ工程化细胞系或PBMC细胞中使用STAT5磷酸化测定所确定的。
方面51B.根据方面40B至50B中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc结合化合物以小于10μM的EC50激活cyno-IL-2R，如在cyno-PMBC细胞中使用STAT5磷酸化测定所确定的。
方面52B.根据方面40B至51B中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中hu-IL-2R结合比率为10至1,000，其中所述hu-IL-2R结合比率为用于将所述IL-2Rβ配体与hu-IL-2R结合的IC50与用于将所述IL-2Rγc配体与所述hu-IL-2R结合的IC50的比率。
方面53B.根据方面40B至51B中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中hu-IL-2R结合比率为0.1至0.001，其中所述hu-IL-2R结合比率为用于将所述IL-2Rβ配体与IL-2R结合的IC50与用于将所述IL-2Rγc配体与IL-2R结合的IC50的比率。
方面54B.根据方面40B至51B中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中hu-IL-2R结合比率为0.1至10，其中所述hu-IL-2R结合比率为用于将所述IL-2Rβ配体与IL-2R结合的IC50与用于将所述IL-2Rγc配体与hu-IL-2R结合的IC50的比率。
方面55B.根据方面40B所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc结合化合物包括SEQ ID NO:8100-8136中的任一个的氨基酸序列或与SEQ ID NO:8100-8136中的任一个具有大于60％序列相似性的氨基酸序列。
方面56B.根据方面1B至9B中任一项所述的IL-2Rβ配体、根据方面10B至17B中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物、根据方面18B至39B中任一项所述的IL-2Rβγc配体或根据方面40B至55B中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβ配体、所述IL-2Rβ结合化合物、所述IL-2Rβγc配体或所述IL-2Rβγc结合化合物以小于100μM的IC50与所述IL-2Rβ亚基的特异性结合位点结合。
方面57B.根据方面18B至39B中任一项所述的IL-2Rβγc配体或根据方面40B至55B中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rγc配体、所述IL-2Rβγc配体或所述IL-2Rβγc结合化合物以小于100μM的IC50与所述IL-2Rγc亚基的特异性结合位点结合。
方面58B.一种药物组合物，其包括：根据方面1B至9B、56B和57B中任一项所述的IL-2Rβ配体；根据方面10B至17B、56B和57B中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物；根据方面18B至39B、56B和57B中任一项所述的IL-2Rβγc配体；根据方面40B至57B中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物；或前述任一种的组合。
方面59B.一种治疗患者的疾病的方法，所述方法包括向需要此类治疗的患者施用治疗有效量的：根据方面1B至9B、56B和57B中任一项所述的IL-2Rβ配体；根据方面10B至17B、56B和57B中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物；根据方面18B至39B、56B和57B中任一项所述的IL-2Rβγc配体；根据方面40B至57B中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物；或根据方面58B所述的药物组合物。
方面60B.根据方面59B所述的方法，其中所述疾病选自癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病、传染性疾病和病毒性疾病。
方面61B.一种扩增免疫细胞的方法，所述方法包括使免疫细胞群体与有效量的以下各项离体或体内接触：根据方面1B至9B、56B和57B中任一项所述的IL-2Rβ配体；根据方面10B至17B、56B和57B中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物；根据方面18B至39B、56B和57B中任一项所述的IL-2Rβγc配体；或根据方面40B至57B中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物。
方面62B.一种扩增免疫细胞的方法，所述方法包括使免疫细胞群体与有效量的以下各项离体或体内接触：根据方面1B至9B、56B和57B中任一项所述的IL-2Rβ配体；根据方面10B至17B、56B和57B中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物；根据方面18B至39B、56B和57B中任一项所述的IL-2Rβγc配体；或根据方面40B至57B中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物。
方面63B.一种加强疫苗的方法，所述方法包括向患者施用疫苗和治疗有效量的：根据方面1B至9B、56B和57B中任一项所述的IL-2Rβ配体；根据方面10B至17B、56B和57B中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物；根据方面18B至39B、56B和57B中任一项所述的IL-2Rβγc配体；或根据方面40B至57B中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物。
方面64B.一种修饰免疫应答的方法，所述方法包括向患者施用有效量的：根据方面1B至9B、56B和57B中任一项所述的IL-2Rβ配体；根据方面10B至17B、56B和57B中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物；根据方面18B至39B、56B和57B中任一项所述的IL-2Rβγc配体；或根据方面40B至57B中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物。
方面65B.一种编码多肽的核酸，所述多肽包括：根据方面1B至9B、56B和57B中任一项所述的IL-2Rβ配体；根据方面10B至17B、56B和57B中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物；根据方面18B至38B、56B和57B中任一项所述的IL-2Rβγc配体；或根据方面40B至57B中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物。
实例
以下实例详细描述了合成IL-2Rβγc配体的方法、合成IL-2Rβγc构建体的方法和确定由本公开提供的IL-2Rβγc配体和IL-2Rβγc配体构建体的活性的方法。以下实例还详细描述了用于确定由本公开提供的IL-2Rβγc配体和IL-2Rβγc构建体的性质的方法。对于本领域技术人员而言将显而易见的是，可以在不脱离本发明的范围的情况下对材料和方法两者进行许多修改。
在实例中，IL-2Rβ亚基是指人IL-2Rβ(CD122蛋白，Fc标签)(27-239)，登录号NP_000869.1，并且获自ACRObiosystems公司(ACRObiosystems,Inc.)，产品号ILB-H5253。
IL-2Rγc亚基是指人IL-2Rγc(CD132蛋白，Fc标签)(23-254)，登录号AAH14972，并且获自ACRObiosystems公司，产品号ILG-H5256。
cyno-IL-2Rβ亚基是指食蟹猴IL-2Rβ亚基，登录号NP_000869.1，并且获自新诺生物技术有限公司(Sino Biological Inc.)，产品号90328-C02H。
在实例中，IL-2Rγc亚基是指食蟹猴Rγc亚基，登录号XP_005503949.1。
实例1
IL-2Rβ配体、IL-2Rγc配体和肽基IL-2Rβγc配体的合成
通过单链固相合成合成IL-2Rβ配体、IL-2Rγc配体和肽基IL-2Rβγc配体。
将2-氯三苯甲基树脂(1g，1.5毫摩尔/g，来自Anaspec)用DMF(2×)洗涤，并且然后使其在50mL DMF中静置10分钟。用由以0.5M溶解在DMF中的5当量的氨基酸和5当量的HATU制备的Fmoc-甘氨酸的活化溶液处理溶胀树脂，然后添加10当量的DIEA，并且将混合物在25℃下轻轻搅拌30分钟。将树脂洗涤(DMF、THF、DCM和MeOH)并干燥，以得到Fmoc保护的树脂。然后通过在具有含30％哌啶的DMF的情况下轻轻摇动树脂20分钟来去除Fmoc基团，然后洗涤(DMF、THF、DCM和MeOH)并干燥。然后使树脂经受具有HATU活化的Fmoc-氨基酸偶联和用哌啶去除Fmoc的重复循环，以构建期望的氨基酸序列。除了序列的四个半胱氨酸残基外，使用标准的95％TFA不稳定氨基酸侧链保护基团。对于靠近树脂的两个半胱氨酸残基，使用Trt保护，并且对于远离树脂的两个半胱氨酸残基，使用Acm保护。在从二聚体序列的最终氨基酸中去除Fmoc后，将末端胺基团用含乙酸酐(10当量)和DIEA(20当量)的DMF酰化20分钟，然后如以上所描述的那样洗涤。
通过在TFA(95vol％)、水(2.5vol％)和三异丙基硅烷(2.5vol％)的溶液中在25℃下悬浮3小时，将完成的肽从树脂上切割下来。将TFA溶液冷却到5℃并倒入Et2O中以使肽沉淀。过滤并在减压下干燥得到期望的肽。通过使用C18柱的制备型HPLC进行纯化，得到具有处于还原状态的两个C末端硫醇基团的纯肽。将此肽溶解在20％DMSO/水(1mg干重肽/mL)中并在25℃下静置36小时，然后通过反相HPLC纯化以提供具有通过二硫桥连接的两个C末端硫醇的肽。然后通过将0.1毫摩尔肽溶解在25mL的50％乙酸/H2O和2.5mL的1M HCl中并在氮气气氛下在搅拌的情况下逐滴添加5mL的0.1M碘(在冰乙酸中；5当量)来将两个N末端Acm保护的半胱氨酸残基去保护。在经常监测(分析型HPLC)的情况下使脱保护/氧化反应在25℃下进行2小时，以确保反应完全。通过添加冰冷却的乙醚(9体积当量)来终止反应。将所得溶液在干冰上冷却(3分钟)，小心倾析醚溶液，并且将所得浅黄色固体通过制备型反相HPLC纯化(95％)，以得到最终单链肽二聚体。
实例2
使用点击化学合成IL-2Rβγc配体
使用如实例1中所描述的标准固相合成条件和Fmoc保护的氨基酸单独地合成IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体的肽序列。
将Rink酰胺-MBHA树脂(1g，1.5毫摩尔/g，Anaspec)用DMF(2×)洗涤，并且然后使其在50mL DMF中静置10分钟。用由以0.5M溶解在DMF中的5当量的氨基酸和5当量的HATU制备的Fmoc-炔丙基甘氨酸(IL-2Rβ配体)或2-(Fmoc-NH)-5-叠氮基-戊酸(IL-2Rγc配体)的活化溶液处理溶胀树脂的单独部分，然后添加10当量的DIEA，并且将混合物在25℃下轻轻搅拌30分钟。将树脂洗涤(DMF、THF、DCM和MeOH)并干燥，以得到Fmoc保护的树脂。然后通过在含30％哌啶的DMF中轻轻摇动树脂20分钟来去除Fmoc基团，然后洗涤(DMF、THF、DCM和MeOH)并干燥。然后使树脂经受具有HATU活化的Fmoc-氨基酸偶联和用哌啶去除Fmoc的重复循环，以提供期望的IL-2Rβ配体氨基酸序列和期望的IL-2Rβγc配体氨基酸序列。针对所有残基使用标准的95％TFA不稳定氨基酸侧链保护基团。在从每个配体序列的最终氨基酸中去除Fmoc后，将末端胺基团用含乙酸酐(10当量)和DIEA(20当量)的DMF酰化20分钟。
通过在TFA(95％)、水(2.5％)和三异丙基硅烷(2.5％)的溶液中在25℃下悬浮3小时，将每个完成的配体从树脂上切割下来。将TFA溶液冷却到5℃并倒入Et2O中以使肽沉淀。过滤并在减压下干燥得到期望的配体。通过使用C18柱的制备型HPLC进行纯化，得到具有处于还原状态的两个硫醇基团的纯肽。将配体单独地溶解在20％DMSO/水(1mg干重肽/mL)中，在25℃下静置36小时，并且然后通过反相HPLC纯化，以提供具有通过分子内二硫桥连接的两个硫醇的IL-2Rβ和IL-2Rγc配体。
通过将配体溶解在1:1H2O/tBuOH中制备十分之二(0.2)mL的2.0mM纯化的含炔烃IL-2Rβ配体溶液。类似地，使用相同的溶剂制备0.2mL的2.4mM纯化的含叠氮化物配体溶液。将两种配体溶液以及0.1mL的含100mM CuSO4的H2O、0.1mL的含250mM的如DIEPA、吡啶或THPTA(三(3-羟丙基三唑基甲基)胺)等Cu(I)螯合剂的3:1DMSO/tBuOH、0.1mL的含0.5M抗坏血酸的H2O和0.3mL的3:2tBuOH/H2O合并，并且使反应在45℃下在厌氧条件下进行。通过LC/MS频繁监测反应进程，并添加另外的含叠氮化物配体和CuSO4以推动反应完成。在消耗了最大量的炔烃后(大约3小时)，通过添加大约8mL的1:1H2O/ACN使反应淬灭，并且使用制备级C18 HPLC柱纯化肽二聚体(95％)。
实验实例中使用的IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体的结构提供于表11和12以及图19A-19C中。
表11.IL-2Rβ配体。
表12.IL-2Rγc配体。
实例3
带有具有不同配体/取向/连接子的IL-2Rβγc配体的TF-1β细胞中的STAT5磷酸化
评估了IL-2Rβγc配体在TF-1β细胞中对STAT5磷酸化的诱导。TF-1β细胞源自天然表达IL-2Rγc但不表达IL-2Rβ的生长因子依赖性人红白血病细胞系TF-1(ATCC#CRL-2003)。通过用人全长IL-2Rβ转染，将细胞工程化为对IL-2有应答。通过在IL-2中生长选择表达更高水平的IL-2Rβ的细胞系，并通过qPCR和FACS分析验证IL-2Rβ和IL-2Rγc亚基表达水平。
为了测试诱导STAT5磷酸化的化合物，使TF-1β细胞在T75烧瓶中的饥饿培养基(RPMI 1640+2.5g/L葡萄糖+5％FBS+2mM L-谷氨酰胺+1mM NaPyr+10mMHEPES，不含GM-CSF或rhu-IL-2补充剂)中以5×105个细胞/mL饥饿过夜。第二天，将细胞以2×105个细胞/孔铺板在96孔V型底板中。将IL-2Rβγc配体或IL-2在饥饿培养基中的三倍连续稀释液添加到细胞中，并在37℃下温育30分钟。通过将10×细胞裂解缓冲液(细胞信号传导技术公司(CellSignaling Technology)#9803)和1×HALT磷酸酶和蛋白酶抑制剂混合液(赛默飞世尔公司(Thermo Fisher)#78442)的混合物直接添加到孔中来制备细胞提取物。将板在25℃下摇动5分钟以制备细胞提取物以供立即使用或储存在-80℃下。使用Phospho-Stat5(Tyr694)夹心ELISA试剂盒(细胞信号传导技术公司#7113)执行对pSTAT5的检测。将细胞提取物添加到用小鼠抗phospho-STAT5抗体预先涂覆的微孔中，并在4℃下温育过夜。然后用PBS洗涤孔，并且通过添加兔抗STAT5检测抗体并在37℃下温育1小时来检测结合的phospho-STAT5(Tyr694)。用PBS洗涤孔，并且将抗兔IgG HRP连接的抗体添加到每个孔中。在最后一次洗涤后，添加TMB底物溶液以测量每个孔中HRP的量。在微孔板读板仪中读取在450nm下的吸光度。产生的信号与每个细胞提取物中磷酸化STAT5的量成正比。
结果呈现于图2中。
图2中评价的IL-2Rβγc配体的结构提供于图19A-19C中。
实例4
具有带有C/C取向和相同的配体连接子的不同的IL-2Rβ和IL-2Rγc配体的IL-2Rβ
γc配体的NK-92细胞中的STAT5磷酸化
评估IL-2Rβγc配体在NK-92细胞中的STAT5磷酸化的诱导，所述NK-92细胞是表达所有三种IL-2受体亚基的人细胞系，并且对IL-2Rβγc偏向的变体以及野生型IL-2有应答。为了测试诱导STAT5磷酸化的化合物，使NK-92细胞在T75烧瓶中的饥饿培养基(RPMI 1640+20％FBS+2mM L-谷氨酰胺+1mM NaPyr+10mM HEPES+0.1mM BME，不含rhu-IL-2补充剂)中在37℃下饥饿过夜。第二天，将NK-92细胞以2×105个细胞/孔铺板在96孔V型底板中。将测试化合物或IL-2在饥饿培养基中的三倍连续稀释液添加到细胞中，并在37℃下温育30分钟。
制备细胞提取物并使用Phospho-Stat5(Tyr694)夹心ELISA试剂盒测量磷酸化STAT5的量，如实例3中所描述的。
结果呈现于图3中。
图3中评价的IL-2Rβγc配体的结构提供于图19A-19C中。
实例5
带有具有不同取向的IL-2Rβγc配体的NK-92细胞中的STAT5磷酸化
在NK-92细胞中使用STAT5磷酸化测定来评估包括与相同配体连接子结合但具有不同N/C取向的相同IL-2Rβ和IL-2Rγc配体的IL-2Rβγc配体的激动剂活性。
将IL-2Rβγc配体与NK-92细胞一起温育，并使用实例4中描述的方法测量作为浓度函数的STAT5磷酸化。
结果呈现于图4中。
图4中评价的IL-2Rβγc配体的结构提供于图19A-19C中。
实例6
带有具有不同配体的IL-2Rβγc配体的TF-1β细胞中的STAT5磷酸化
在TF-1β细胞中使用STAT5磷酸化测定来评估包括与相同合成配体连接子结合并且具有相同N/C取向的不同IL-2Rβ和IL-2Rγc配体的IL-2Rβγc配体的激动剂活性。
将化合物与TF-1β细胞一起温育，并使用实例3中描述的方法测量作为浓度函数的STAT5磷酸化。
结果呈现于图5A和5B中。
图5A和5B中评价的IL-2Rβγc配体的结构提供于图19A-19C中。
实例7
带有具有不同连接子的IL-2Rβγc配体的NK-92细胞中的STAT5磷酸化
在NK-92细胞中使用STAT5磷酸化测定来评估包括与合成IL-2Rβγc配体连接子(IL-2Rβγc配体(BGL20))或肽基IL-2Rβγc配体连接子(IL-2Rβγc配体(BGL21))结合并且具有相同N/C取向的相同IL-2Rβ和IL-2Rγc配体的IL-2Rβγc配体的激动剂活性。
将IL-2Rβγc配体与NK-92细胞一起温育，并使用实例4中描述的方法测量作为浓度函数的STAT5磷酸化。
结果呈现于图6中。
图6中评价的IL-2Rβγc配体的结构提供于图19A-19C中。
实例8
具有IL-2和IL-2Rβγc配体的NK-92细胞中的STAT5、AKT和ERK1/2磷酸化
在NK-92细胞中使用STAT5磷酸化、AKT磷酸化和ERK1/2磷酸化测定来评估IL-2和IL-2Rβγc配体(BGL21)的激动剂活性。
将化合物与NK-92细胞一起温育，并使用实例4中描述的方法测量作为浓度函数的STAT5磷酸化。使用Phospho-AKT(Thr308)夹心ELISA试剂盒(细胞信号传导技术公司#7252)执行对磷酸化AKT的检测。使用/>Phospho-p44/42MAPK(Thr202/Tyr204)夹心ELISA试剂盒(细胞信号传导技术公司#7177)执行对磷酸化ERK1/2的检测。
STAT5磷酸化的结果呈现于图7A中，AKT磷酸化的结果呈现于图7B中，并且ERK1/2磷酸化的结果呈现于图7C中。
图7A-7C中评价的IL-2Rβγc配体的结构提供于图19A-19C中。
实例9
具有IL-2和IL-2Rβγc配体的NK-92的增殖
将NK-92细胞铺在饥饿培养基(减去生长因子)中并与IL-2Rβγc配体(BGL21)或IL-2的连续稀释液在37℃下温育48小时。通过使用CellTiter-测定试剂盒(普洛麦格公司(Promega)#G7571)测量作为代谢活性细胞的指标的ATP水平来定量每个孔中存在的活细胞的数量。将等体积的CellTiter-/>试剂添加到每个孔中，并在25℃下温育10分钟。使用Wallac Victor 1420板读取器测量发光信号。将值(相对光单位(RLU))绘制为测试化合物的浓度的函数。
结果在图8A中提供。
还使用Ki67染色测量了NK-92细胞对IL-2Rβγc配体(BGL21)或IL-2的增殖应答。核蛋白Ki67存在于细胞周期的所有活性相，但在静息细胞中不存在。将NK-92细胞重新悬浮在饥饿培养基中，并以2×105个细胞/孔铺板在96孔板中。然后将测试化合物的三倍连续稀释液添加到细胞中48小时。在温育期之后，用Live/可固定浅绿色染料(赛默飞世尔公司(ThermoFisher)#L34966)处理细胞30分钟，以对活细胞进行染色。然后将细胞用PBS进行洗涤并且然后用Foxp3转录因子Fix//>缓冲液(e生物科学公司(eBioscience)#00-5523)在25℃下固定和透化1小时。将细胞洗涤并且然后用抗Ki67 PE抗体染色。在最后一次洗涤后，在LSR II仪器(贝迪医疗公司(BectonDickinson))上通过流式细胞术分析细胞。使用/>软件进行数据分析。将Ki67+细胞的中值荧光强度绘制为测试化合物浓度的函数。
结果在图8B中提供。
IL-2Rβγc配体(BGL21)的结构提供于图19A-19C中。
实例10
静息CD8+
T细胞、CD4+ T细胞和Treg细胞中的STAT-5磷酸化
使用STAT5磷酸化测定来评估静息CD8+ T细胞、CD4+ T细胞和Treg细胞中的IL-2和IL-2Rβγc配体(IL-2Rβγc配体(BGL21))的激动剂活性。
使用(干细胞技术公司(Stemcell Technologies)#07811)密度梯度离心从血沉棕黄层中分离人外周血单核细胞(PBMC)。将回收的PBMC以2×106个细胞/mL重新悬浮于T细胞培养基(CTS/>培养基+2 mM L-谷氨酰胺+Pen/Strep，不含血清或IL-2)中，并在37℃下温育3小时。然后将PBMC以106个细胞/孔添加到96孔深孔板中。将IL-2Rβγc配体(BGL21)或IL-2的三倍连续稀释液添加到细胞中，并在37℃下温育30分钟。然后将细胞在冰上固定在/>缓冲液(转录因子磷酸缓冲液套装，BD生物科学公司(BD Biosciences)#563239)中50分钟，随后在冰上在Perm缓冲液III中透化20分钟。使用Perm//>缓冲液洗涤细胞数次。用于细胞表面和细胞内染色的抗体缀合物在表13中示出。
表13.用于细胞表面和细胞内染色的抗体缀合物。
1 BD生物科学公司。
将抗体混合物添加到细胞中并将其在冰上温育30分钟并避光。将细胞用Perm/缓冲液洗涤并重新悬浮于PBS+2％FBS中。在LSR II仪器(贝迪医疗公司)上通过流式细胞术分析每个测试样品。使用/>软件进行数据分析。将每个血细胞群体中的pSTAT5+细胞的百分比绘制为测试化合物的浓度的函数。
结果呈现于图9A-9C中。
实例11
来自人PBMC的NK细胞中的增殖
通过密度梯度离心(干细胞技术公司#07811)从血沉棕黄层中分离人PBMC，并将所述人PBMC以3×106个细胞/mL在T75烧瓶中的T细胞培养基(CTS/>赛默飞世尔公司#A1048501)中培养过夜。第二天，将细胞重新悬浮在新鲜培养基中，并以5×105个细胞/孔铺板在96孔细胞培养板中。将IL-2或IL-2Rβγc配体(BGL21)的三倍连续稀释液添加到细胞中，并在37℃下温育3天。处理后，将细胞在活力染料(Live//>可固定浅绿色细胞染色试剂盒，赛默飞世尔公司#L34965)中在37℃下温育30分钟，然后在冰上在PBS+2％FBS中进行表面抗体染色30分钟。用固定/透化缓冲液(e生物科学公司Foxp3/转录染色缓冲液套装，赛默飞世尔公司#00-5523-00)在冰上固定和透化细胞30分钟。在冰上在透化缓冲液中进行细胞内(Ki-67)染色30分钟，并且在FACS分析之前将经处理的细胞重新悬浮在PBS+2％FBS中。NK细胞被鉴定为来自CD3-和CD20-(非T细胞、非B细胞)群的CD56+和/或CD159a+细胞。用于细胞表面和细胞内染色的抗体缀合物在表14中示出。
表14.用于细胞表面和细胞内染色的抗体缀合物。
结果呈现于图10A和10B中。
实例12
A549肿瘤细胞中的PD-LI的上调和肿瘤细胞裂解
PD-L1上调
通过密度梯度离心从血沉棕黄层中分离人外周血单核细胞(PBMC)。将人肺癌A549细胞(ATCC CCL-185)以106个细胞/孔在6孔板中接种过夜。第二天，将新鲜分离的PBMC以107个细胞/孔添加到A549细胞中，使得最终效应子与靶标比率(E:T)为10:1。将IL-2Rβγc配体(BGL21)或IL-2的连续稀释液添加到孔中并将细胞在37℃下温育48小时。然后从孔中吸出PBMC，并使用0.25％(w/v)胰蛋白酶-0.53mM EDTA溶液收集粘附A549细胞。将细胞用PBS洗涤并用表15所示的抗体混合物染色，以定量A549细胞上的PD-L1表达的水平并从分析中排除PBMC。
表15.细胞染色抗体混合物。
| 标志物 | CD14 | PD-L1 | CD56 | CD20 | CD3 |
| 通道 | FITC | PE | PerCP-eFl710 | PE-Cy7 | BV421 |
在LSR II仪器(贝迪医疗公司)上通过流式细胞术分析样品。将对于PD-L1呈染色阳性的A549细胞的百分比绘制为测试化合物的浓度的函数。
结果呈现于图11A中。
实例13
PBMC肿瘤细胞裂解
将新鲜分离的PBMC(效应子细胞)重新悬浮于T细胞培养基(CTS培养基+2mM L-谷氨酰胺+Pen/Strep，不含血清或hu-IL-2)中，并以6×105个细胞/孔铺在96孔细胞培养板中。将人结肠癌细胞系LS180(ATCC CL-187)和COLO 205(ATCCCCL-222)(靶细胞)以3×104个细胞/孔添加到PBMC中，最终E:T比率为20:1。然后将IL-2Rβγc配体(BGL21)或IL-2的稀释液添加到孔中并将细胞在37℃下温育48小时。通过离心收集细胞上清液并将来自每个孔的50μL转移到96孔板中。通过用PromegaCytoTox/>非放射性细胞毒性测定试剂盒(#G1780)测量LDH释放来定量肿瘤细胞裂解。将等体积的CytoTox/>试剂添加到每个孔中，并在25℃下温育30分钟。然后将终止溶液(50μL)添加到每个孔中以终止反应，并在Wallac Victor 1420板读取器中在490nm下测量吸光度信号。通过将每个样品获得的值除以从用裂解缓冲液处理的孔中获得的上清液中获得的最大值来计算细胞毒性百分比。
结果呈现于图11B和11C中。
实例14
掺入IL-2Rβγc配体的重组融合蛋白
免疫球蛋白融合：构建多种哺乳动物表达载体以表达与全长人IgG或由人IgG1、IgG2或IgG4的重链和铰链区的CH2和CH3结构域组成的Fc片段连接的IL-2Rβγc配体。每个载体含有强组成型启动子(CMV或hEF1-HTLV)和用于将融合蛋白分泌到培养基中的IL-2信号肽序列。设计载体以使肽配体能够与免疫球蛋白的N端或C端融合，并在IL-2Rβγc配体与IgG之间掺入不同长度的构建体连接子。
通过使用聚乙烯亚胺试剂PEI MAX(波利塞斯公司(Polysciences,Inc.))将质粒DNA转染到细胞中，在293个人胚胎肾细胞(293-F)中瞬时表达融合蛋白。使经转染的细胞在以125rpm旋转的定轨摇床上的37℃加湿CO2温育器中的摇瓶中的/>293表达培养基(赛默飞世尔公司)中生长。通过离心在转染后96小时收获培养物，并使用蛋白A亲和色谱法从上清液中纯化分泌的融合蛋白。
将蛋白A琼脂糖树脂与培养上清液混合并在室温下温育数小时。然后将树脂用PBS洗涤三次，并且用0.1M甘氨酸缓冲液(pH 2.8)洗脱结合的IgG IL-2Rβγc配体融合物。将洗脱液用1M Tris缓冲液中和，并通过使用分光光度计测量在280nm下的吸光度来进行定量。使用源自蛋白质一级序列的计算消光系数确定蛋白质浓度。在生物测定中测量融合蛋白的活性之前，使用尺寸排阻色谱法去除高分子量杂质。
人血清白蛋白融合：构建哺乳动物表达载体以表达与人血清白蛋白(HSA)的C末端连接的IL-2Rβγc配体。为了纯化目的，将6×-His标签(SEQ ID NO:9431)与HSA的N末端连接。载体含有强组成型启动子(hEF1-HTLV)和用于将融合蛋白分泌到培养基中的IL-2信号肽序列。
通过使用聚乙烯亚胺试剂PEI MAX(波利塞斯公司)首先将质粒DNA转染到细胞中，在293个人胚胎肾细胞(293-F)中瞬时表达HSA-IL-2Rβγc配体融合蛋白。使经转染的细胞在以125rpm旋转的定轨摇床上的37℃加湿CO2温育器中的摇瓶中的/>293表达培养基(赛默飞世尔公司)中生长。通过离心在转染后96小时收获培养物，并通过Ni-NTA亲和色谱法从上清液中纯化分泌的HSA-IL-2Rβγc配体融合蛋白。
将Ni-NTA琼脂糖树脂添加到培养上清液中并在室温下温育数小时。然后用TBS洗涤缓冲液(25mM Tris pH 8.0，150mM NaCl，20mM咪唑)洗涤树脂三次。用洗脱缓冲液(25mMTris pH 8.0，150mM NaCl，250mM咪唑)从树脂上洗脱结合的HSA-IL-2Rβγc配体融合蛋白，然后使用旋转柱(赛默飞世尔公司)交换缓冲液以去除咪唑。通过使用/>分光光度计测量在280nm下的吸光度来定量蛋白质，并且使用源自蛋白质的一级序列的计算的消光系数来确定浓度。
实验实例中使用的IL-2Rβγc配体融合蛋白的氨基酸序列提供于图20A-20J和21A-21C中。
hIgG2 Fc片段是指由IgG2重链的CH2和CH3结构域以及铰链区组成的Fc区。铰链区的第一和第二半胱氨酸被丝氨酸替代，以防止有害的二硫桥。为了融合稳定性，将Fc区的最后一个氨基酸(赖氨酸)用丙氨酸替代。IgG2 Fc建体的N末端以Ala-Pro-Leu(源自InvivoGen载体)开始。
hIgG1v Fc片段是指由IgG1重链的CH2和CH3结构域以及铰链区组成的Fc区。铰链区的第一半胱氨酸被丝氨酸替代，以防止有害的二硫桥。为了融合稳定性，将Fc区的最后一个氨基酸(赖氨酸)用丙氨酸替代。效应子沉默突变P329G、L234A/L235A(LALA)包含在IgG1vFc-(BGL21)构建体(FP2)(SEQ ID NO:1213)中。IgG1v Fc建体的N末端以Ala(源自InvivoGen载体)开始。
hIgG4 Fc片段是指由IgG4重链的CH2和CH3结构域以及铰链区组成的Fc区。效应子沉默突变P329G、S228P/L235E(SPLE)包含在hIgG4 Fc变体(FP3)(SEQ ID NO:1214)中。
Fc-杵是指人铰链杵Fc IgG1 LALA-dK(效应子功能下降并且C末端异质性低)(L252A、L253A、T384W)。
Fc-臼是指人铰链臼Fc IgG1 LALA-dK(效应子功能下降并且C末端异质性低)(L252A、L253A、T384S、L386A、Y425V)。
hIgG1 Fc片段是指由IgG1重链的CH2和CH3结构域以及铰链区组成的Fc区。为了融合稳定性，将Fc区的最后一个氨基酸(赖氨酸)用丙氨酸替代。构建体包含效应子沉默突变N297A。
hIgG2 Fc片段是指由IgG2重链的CH2和CH3结构域以及铰链区组成的Fc区。铰链的第一和第二半胱氨酸被丝氨酸替代，以防止有害的二硫桥。为了融合稳定性，将Fc区的最后一个氨基酸(赖氨酸)用丙氨酸替代。
实验实例中使用的IL-2Rβγc配体融合蛋白的氨基酸序列提供于图20A-20J中。
实例15
带有IL-2Rβγc配体融合蛋白的TF-1β细胞中的STAT5磷酸化
IL-2Rβγc配体(BGL21)与由人IgG2的重链和铰链区的CH2和CH3结构域组成的IgGFc片段(C末端融合体SEQ ID NO:1212；N末端融合体SEQ ID NO:1215)融合，如实例14中所描述的。IL-2Rβγc配体(BGL21)也与由人IgG1的重链和铰链区的CH2和CH3结构域组成的异二聚体Fc片段(杵臼结构)变体融合。IL-2Rβγc配体(BGL21)与含有“杵”突变(T366W)和效应子沉默突变(L234A/L235A)的杵-Fc片段(SEQ IDNO:1216)的C末端融合。构建体与含有“臼”突变(T366S、L368A、Y407V)和效应子沉默突变(L234A/L235A)的臼-Fc片段(SEQ IDNO:1217)共表达，以产生在融合蛋白的C末端具有单拷贝IL-2Rβγc配体(BGL21)的异二聚体Fc片段。除了与Fc片段融合之外，IL-2Rβγc配体(BGL21)也与人血清白蛋白(SEQ ID NO:1252)的C末端融合，如实例14中所描述的。
将融合蛋白与TF-1β细胞一起温育，并使用实例3中描述的方法测量作为浓度函数的STAT5磷酸化。
IL-2Rβγc配体融合蛋白的结构提供于图20A-20J和21A-21C中。
结果呈现于图12中。
实例16
带有不同的IL-2Rβγc配体IgG2 Fc片段融合蛋白的TF-1β细胞中的STAT5磷酸化
将一系列IL-2Rβγc配体与由人IgG2的重链和铰链区的CH2和CH3结构域组成的IgG2 Fc片段的C末端融合，如实例14中所描述的。IL-2Rβγc配体包含对在两个肽序列之间用柔性连接子(GGGGS)2(SEQ ID NO:9396)连接在一起的IL-2R表现出不同结合亲和力的IL-2Rβ和IL-2Rγc配体。
将融合蛋白与TF-1β细胞一起温育，并使用实例3中描述的方法测量作为浓度函数的STAT5磷酸化。
被评估的Fc-IL-2Rβγc配体融合蛋白的结构在图20和23中以SEQ ID NO:1212、1239、1243、1244、1250和1251提供。
结果呈现于图13中。
实例17
具有包含与不同的IgG同种型的Fc片段结合的IL-2Rβγc配体的融合蛋白的NK-92
细胞中的STAT5磷酸化
IL-2Rβγc配体(BGL21)与由人IgG的三种不同的同种型的重链和铰链区的CH2和CH3结构域组成的Fc片段融合。在第一构建体(FP2；SEQ ID NO:1213)中，IL-2Rβγc配体(BGL21)与人IgG1 Fc片段变体的C末端融合，其中铰链区中的第一半胱氨酸被丝氨酸替代以防止有害的二硫键，并且最后一个氨基酸(赖氨酸)被丙氨酸替代以保持融合稳定性。效应子沉默突变也包含在该变体(P329G、L234A/L235A)中。第二构建体(FP1；SEQ ID NO:1212)，IL-2Rβγc配体(BGL21)与人IgG2 Fc片段变体的C末端融合，其中铰链区中的第一和第二半胱氨酸被丝氨酸替代以防止有害的二硫键，并且最后一个氨基酸(赖氨酸)被丙氨酸替代以保持融合稳定性。在第三构建体(FP3；SEQID NO:1214)中，IL-2Rβγc配体(BGL21)与含有效应子沉默突变(P329G、S228P/L235)的人IgG4 Fc片段变体的C末端融合。如实例中14所描述的表达和纯化每种融合蛋白。
将融合蛋白与TF-1β细胞一起温育，并使用实例3中描述的方法测量作为浓度函数的STAT5磷酸化。
IgG Fc-IL-2Rβγc配体融合蛋白(FP1)-(FP3)的结构提供于图20A和21A-21C中并且与SEQ ID NO:1212、1213和1214相对应。
结果呈现于图14中。
实例18
带有具有不同的Fc连接子的IL-2Rβγc配体IgG2 Fc片段融合蛋白的TF-1β细胞中
的STAT5磷酸化
制备含有一系列在Fc片段与C末端IL-2Rβγc配体(BGL21)之间具有甘氨酸或甘氨酸/丝氨酸重复序列的柔性构建体连接子，或具有脯氨酸/丙氨酸重复序列的刚性构建体连接子的IL-2Rβγc配体(BGL21)IgG2 Fc片段变体，如实例14中所描述的。
将融合蛋白与TF-1β细胞一起温育，并使用实例3中描述的方法测量作为浓度函数的STAT5磷酸化。
Fc-IL-2Rβγc配体融合蛋白的结构提供于图20A-20J和21A-21C中并与和SEQIDNO:1227-1235相对应的IL-2Rβγc配体融合蛋白(FP16)-(FP24)相对应。
结果呈现于图15中。
实例19
带有具有不同的Fc连接子的IL-2Rβγc配体IgG2 Fc片段融合蛋白的TF-1β细胞和
NK-92中的STAT5磷酸化
制备含有在IgG2 Fc片段与IL-2Rβγc配体(BGL21)的C末端之间的由(GS)10(SEQID NO:9407)(参见FP14；SEQ ID NO:1225)柔性连接子组成的柔性连接子或由(PA)10(SEQID NO:9428)(参见FP15；SEQ ID NO:1226)组成的刚性连接子的IL-2Rβγc配体(BGL21)IgG2 Fc片段变体，如实例14中所描述的。
将融合蛋白与TF-1β细胞一起温育，并使用实例3中描述的方法测量作为浓度函数的STAT5磷酸化。还在NK-92细胞增殖测定中使用Ki67染色来测试每种融合蛋白，以定量应答于如实例9中所描述的化合物而增殖的细胞。
Fc-IL-2Rβγc配体融合蛋白的结构提供于图20A-20J和21A-21C中。在图21A-21C中，参考了亲本IL-2Rβ配体和亲本IL-2Rγc配体的氨基酸序列。Fc-IL-2Rγc融合蛋白中使用的IL-2Rβ配体中的每一个和IL-2Rγc配体中的每一个在亲本配体的N末端和C末端中的每一个末端上包含两个侧接甘氨酸。例如，具有SEQ ID NO:1212的IL-2Rβγc配体融合蛋白(FP1)包含具有SEQ ID NO:914的IL-2Rβ配体，所述IL-2Rβ配体与具有SEQ ID NO:865的亲本IL-2Rβ配体(BL4)相对应，所述亲本IL-2Rβ配体在N末端和C末端中的每一个上具有甘氨酸，所述末端与具有SEQ ID NO:1052的IL-2Rγc配体结合，所述IL-2Rγc配体与具有SEQID NO:965的亲本IL-2Rγc(GL2)相对应，所述亲本IL-2Rγc在N末端和C末端中的每一个上具有两个甘氨酸。
结果呈现于图16A和16B中。
实例20
抗PD-1抗体-IL-2Rβγc配体(BGL21)融合蛋白的PD-1结合和IL-2激动剂活性
将IL-2Rβγc配体(BGL21)与靶向PD-1的两种治疗性检查点抑制剂抗体(派姆单抗(FP8)(SEQ ID NO:1219)；西米普利单抗(FP10)(SEQ ID NO:1221))的重链的C末端融合，如实例14中针对异二聚体肽与IgG Fc片段融合所描述的。构建体与其对应的轻链构建体(派姆单抗(FP7；SEQ ID NO:1218)；西米普利单抗(FP9；SEQ ID NO:1220)在HEK-293F细胞中瞬时共表达以产生完全IgG IL-2Rβγc配体(BGL21)融合体。
通过ELISA评估纯化的蛋白用于与PD-1靶蛋白的结合。将重组人PD-1his标签蛋白(研发系统公司(R&D Systems)8986-PD-100)以1μg/mL溶解于PBS中，并通过吸收直接固定在微量滴定孔中，随后用PBS/1％BSA封闭。将派姆单抗和西米普利单抗抗体或对应的IL-2Rβγc配体(BGL21)融合蛋白的连续稀释液添加到孔中，并在4℃下温育1小时。然后用PBS洗涤孔并且将抗人IgG HRP连接的抗体添加到每个孔中并在4℃下温育1小时。在最后一次洗涤后，添加TMB底物溶液以测量每个孔中HRP的量。在微孔板读板仪中读取在450nm下的吸光度。产生的信号与每个孔中与PD-1结合的抗体量成比例。与PD-1结合的结果示出于图17A和17C中。
将派姆单抗和西米普利单抗IL-2Rβγc配体(BGL21)融合蛋白与TF-1β细胞一起温育，并使用实例3中描述的方法测量作为浓度函数的STAT5磷酸化。STAT5磷酸化测定的结果分别示出于图17B和17D中。
Fc-IL-2Rβγc配体融合蛋白的结构提供于图20A-20J和21A-21C中。
实例21
聚乙二醇化IL-2Rβγc配体(BGL21)构建体的合成
制备IL-2Rβγc配体(BGL21)的类似物，如实例1中所描述的，除了使用最终的HATU介导的偶联步骤将Fmoc-PEG10-CH2CH2-CO2H(加利福尼亚州海沃德的Anaspec公司(Anaspec,Hayward,CA))添加到N末端，而不是用乙酸酐乙酰化N末端伯胺，并且去除Fmoc保护基团，如先前所描述的。如实例1中所描述的进行从树脂上的切割和二硫化物形成，以提供具有游离N末端伯胺的氧化肽。将IL-2Rβγc配体(BGL21)(1.5摩尔当量)与40kD支链PEG试剂(1.0摩尔当量)(日本东京的NOF公司(NOF Corp.,Tokyo,Japan))的NHS-酯在干DMF中混合。在25℃下温和搅拌15分钟之后添加DIEA(10摩尔当量)并使反应进行至完成(大约4小时；通过分析型C18反相HPLC进行分析)。最终产物(PEG-8)通过C18反相HPLC纯化，并且聚乙二醇化肽的结构通过MALDIToF(飞行时间)质谱法和反相HPLC确认。
实例22
PEG-IL-2Rβγc配体的激动剂活性
将在实例21中合成的PEG-IL-2Rβγc配体构建体(PEG-8)与NK-92细胞一起温育，并使用实例3和4中描述的方法测量作为浓度函数的STAT5磷酸化。
结果呈现于图18中。
实例23
产生方法
制备哺乳动物细胞表达构建体，其中IL-2Rβγc配体(BGL21)与人IgG1 Fc片段变体(FP13；SEQ ID NO:1224)的C末端融合。铰链区中的第一半胱氨酸被丝氨酸替代以防止有害的二硫键，并且最后一个氨基酸(赖氨酸)被丙氨酸替代以保持融合稳定性。效应子沉默突变也包含在该变体(N297A)中。柔性连接子(GS)10(SEQ ID NO:9407)位于Fc片段与IL-2Rβγc配体(BGL21)之间。
制备另外的哺乳动物细胞表达构建体，其中IL-2Rβγc配体(BGL21)与人IgG2 Fc片段变体的C末端融合，其中铰链区中的第一和第二半胱氨酸被丝氨酸替代以防止有害的二硫键，并且最后一个氨基酸(赖氨酸)被甘氨酸替代以保持融合稳定性。柔性连接子(GS)10(SEQ ID NO:0407)(参见FP14；SEQ ID NO:1225)或刚性连接子(PA)10(SEQ ID NO:9428)(参见FP15；SEQ ID NO:1226)位于Fc片段与IL-2Rβγc配体(BGL21)之间。
将表达质粒转染到CHO-K1细胞中并在含抗生素的培养基中选择表达IL-2Rβγc配体(BGL21)IgG Fc片段融合体的稳定池。通过有限稀释从这些池中分离出单个克隆，并测试IL-2Rβγc配体(BGL21)IgG Fc片段融合蛋白的高表达。通过离心收获高表达克隆的大规模培养物，并使用蛋白A亲和色谱法从上清液中纯化分泌的融合蛋白。尺寸排阻色谱法用于去除高分子量杂质。
实例24
pH选择性筛选
用两个肽文库筛选IL-2Rβ和IL-2Rγc配体，以鉴定对相应受体亚基表现出pH依赖性亲和力的肽。筛选方法利用了在各种酸性和中性pH条件下结合和洗脱的循环。
使用噬菌体ELISA在两个目标pH值下确定噬菌体与IL-2Rβ-GPI或IL-2Rγc-GPI的结合，并计算在pH 7.4下的结合相对于在pH 6.0下的结合的百分比变化。
对于pH依赖性噬菌体滴定，使用先前段落中描述的ELISA筛选方案，具有以下差异：(1)所有96孔ELISA板含有IL-2Rβ-GPI靶标或IL-2Rγc-GPI靶标；以及(2)在两种不同的PBT pH缓冲液，pH 6.0和pH 7.4中制备噬菌体上清液的滴定。
使用以下程序在96孔聚丙烯板中进行噬菌体滴定。在PBT pH 6缓冲液和pH 7.4缓冲液中制备3倍稀释的噬菌体。将一百(100)μL的稀释的噬菌体转移到经靶标涂覆的测定板上并在4℃下温育1小时。
用冷PT pH 6.0洗涤pH 6.0孔3次并且用冷PT pH 7.4洗涤pH 7.4孔2次。
用抗M13-HRP检测结合噬菌体。
实例25
生物素化肽pH依赖性结合(IL-2Rβ/Fc受体结合/多价)的ELISA方案
对于要测定的每种肽，将十六(16)个ELISA板孔以50μL/孔用中性亲和素(在PBSpH 7.2中为10μg/mL)涂覆。将经涂覆的孔在25℃下温育至少1小时。
从每个孔中去除中性亲和素。将三百(300)μL的封闭缓冲液(1×PBS，pH 7.2，1％BSA)添加到经中性亲和素涂覆的板的每个孔中。将所有板覆盖并在25℃下维持1小时或在4℃下维持过夜。
用PT(1×PBS pH 7.2，0.05％)缓冲液将温育的板洗涤4次。
将生物素化肽在PBT pH 7.2缓冲液中稀释至1μM，并将50μL添加到适当的16个孔中(每个结合pH为8)。将板在25℃下温育至少1小时。
在聚丙烯板中制备IL-2Rβ-Fc蛋白的两(2)次滴定，以2μg/mL开始，使用PBT pH6.0和pH 7.4并且稀释3倍。
用PT(1×PBS pH 7.2，0.05％)缓冲液将板洗涤4次。/>
将五十(50)μL的IL-2Rβ-Fc蛋白稀释液添加到缓冲至pH 6.0或pH 7.4的测定板中，并在4℃下温育1小时。
用对应的pH缓冲液PT(50 mM PBS pH 6.0，0.05％或50 mM PBS pH7.4，0.05％/>)将温育的板洗涤3次。
将五十(50)μL在冷PBT pH 6.0中以1:2500稀释的山羊抗huIgG-HRP添加到每个孔中。然后将板在4℃下温育1小时。然后用冷缓冲液PT pH 6.0将板洗涤4次。然后将五十(50)μL的TMB添加到每个孔中，并且将孔在25℃下温育1-10分钟。将五十(50)μL的“终止”溶液添加到每个孔中，并且在450 nm下对板进行读取。
实例26
带有具有pH偏向的IL-2Rβ配体的IL-2Rβγc配体的NK-92细胞中的STAT5磷酸化
在NK-92细胞中使用STAT5磷酸化测定来评估包括对IL-2Rβ具有pH偏向的亲和力的IL-2Rβ配体的pH偏向的IL-2Rβγc配体的IL-2R激动剂活性。
将IL-2Rβγc配体与NK-92细胞一起温育，并使用实例4中描述的方法测量作为浓度函数的STAT5磷酸化，其中将饥饿培养基调节至pH 6.0或pH 7.4。
结果呈现于图24中。
实例27
IL-2Rβ配体pH偏向的结合的竞争ELISA方案
对于要测定的每种肽，在25℃下用IL-2Rβ-Fc(50 ng/孔)涂覆十六(16)个ELISA板孔至少1小时或在4℃下过夜。
从每个孔中去除IL-2Rβ-Fc。将三百(300)μL的封闭缓冲液(1×PBS，pH 7.2，1％BSA)添加到经IL-2Rβ-Fc涂覆的板的每个孔中。将所有板覆盖并在25℃下维持至少1小时。
用PT(1×PBS pH 7.2，0.05％)缓冲液将温育的板洗涤3次。
将具有pH偏向的IL-2Rβ配体的pH偏向的IL-2Rβγc配体在PBT pH 6.0和pH 7.2缓冲液中稀释至2倍最终浓度(20μM)，并将50μL添加到适当的16个孔中(每个结合pH为8)。然后将板在4℃下温育1小时。
将与测试肽竞争的肽配体的生物素化版本与中性亲和素-HRP缀合物组合至少45分钟，其中结合亲和力在pH 6.0和7.4下相同，以制备肽-HRP复合物，然后将所述复合物在pH 6.0或pH 7.4PBT中稀释。
不经洗涤，将五十(50)μL的肽-HRP复合物稀释液添加到缓冲至pH 6.0或pH 7.4的测定板中，并在4℃下温育1小时。
用对应的pH缓冲液PT(50mM PBS pH 6.0，0.05％或50mM PBS pH 7.4，0.05％/>)将温育的板洗涤3次。
然后将五十(50)μL的TMB(3,3'5,5'-四甲基联苯胺)添加到每个孔中，并且将孔在25℃下温育1至15分钟。将五十(50)μL的终止溶液添加到每个孔中，并且在450nm下对板进行读取。结果呈现于图25中。
实例28
使用噬菌体示踪剂的竞争性结合ELISA
进行竞争性结合测定以表征IL-2Rβ配体、IL-2Rγc配体和IL-2Rβγc配体的IL-2R结合位点。
对于IL-2Rβ配体，将展示来自IL-2Rβ配体家族的肽的代表性噬菌体克隆与如实例27中固定在微量滴定孔中的IL-2Rβ亚基的细胞外结构域(ECD)结合。
在该实例中，将IL-2R配体在PBT(1×PBS pH 7.2，0.5％牛血清白蛋白，0.05％)中稀释至2倍最终测定浓度并连续稀释。将五十(50)μL添加到适当的孔中。然后将板在4℃下温育1小时。
不经洗涤，将五十(50)μL的代表性噬菌体添加到测定孔(噬菌体示踪剂)中。然后将板在4℃下温育45分钟。
用PT(50mM PBS pH 7.4，0.05％)将温育的板洗涤3次。
用五十(50)ul的抗M13-HRP(义翘神州公司(SinoBiological)#11973-MM05T-H)以0.22μg/μL检测结合的噬菌体。然后将板在4℃下温育1小时。然后如上文所描述的进行洗涤。
然后将五十(50)μL的TMB(3,3'5,5'-四甲基联苯胺)添加到每个孔中，并且将孔在25℃下温育1至15分钟。将五十(50)μL的终止溶液添加到每个孔中，并且在450nm下对板进行读取。
在存在和不存在合成测试肽的情况下进行噬菌体结合以确定噬菌体肽和测试肽是否竞争与IL-2Rβ上的相同位点结合。选择合成测试肽来表示来自IL-2Rβ配体家族的肽，以及阳性和阴性对照肽。表16中提供了评估的IL-2Rβ配体家族序列和特定IL-2Rβ配体。
表16.IL-2Rβ配体家族和配体。
IL-2Rβ配体以小于10μM的IC50与IL-2Rβ亚基结合并且以大于100μM的IC50与IL-2Rγc亚基结合。
噬菌体与固定化IL-2RβECD的结合通过用针对噬菌体外壳蛋白的抗体(抗噬菌体Ab)染色、用针对抗噬菌体Ab的标记二级抗体染色来检测，并通过读取微量滴定板光学读取器中的OD进行评分。
比较在存在和不存在测试肽的情况下每种噬菌体结合的ELISA信号以确定哪些合成肽与哪些噬菌体肽竞争结合IL-2Rβ亚基。表现出竞争性结合(即交叉抑制)的肽对被认为在IL-2受体上的同一功能位点处结合。结果呈现于表17中。
表17.IL-2Rβ配体与IL-2R的结合。
1IL-2Rβ配体与噬菌体结合竞争。
2IL-2Rβ配体不与噬菌体结合竞争。
IL-2Rβ配体不与IL-2竞争与IL-2Rβ亚基的结合位点结合。
进行类似的研究以评估IL-2Rγc配体的结合。表18中提供了评估的IL-2Rγc配体家族序列和特定IL-2Rγc配体。
表18.IL-2Rγc配体家族和配体。
IL-2Rγc配体以小于10μM的IC50与IL-2Rγc亚基结合并且以大于100μM的IC50与IL-2Rβ亚基结合。
竞争结合测定的结果呈现于表19中。
表19.IL-2Rγc配体与IL-2R的结合。
1IL-2Rγc配体与噬菌体结合竞争。
2IL-2Rγc配体不与噬菌体结合竞争。
实例29
PEG-IL-2Rβγc配体构建体的激动剂活性
如实例21中所描述的合成PEG-IL-2Rβγc配体构建体。PEG-IL-2Rβγc配体构建体的结构示出于图27-33中。用于构建体中的每一个的IL-2Rβγc配体具有SEQ ID NO:1263。将PEG构建体与NK-92细胞一起温育，并分别使用实例3和4中描述的方法测量作为浓度函数的STAT5磷酸化。
结果呈现于表20中。
表20.PEG-IL-2Rβγc配体构建体的激动剂活性。
1以Fmoc-NH-(PEGn)-CH2CH2-COOH的形式掺入，其中n＝4、10或20。
实例30
CD-1小鼠中的IL-2RβγcPEG-肽激动剂PK分析
在CD-1雄性小鼠中进行IL-2Rβγc PEG-肽激动剂的药代动力学研究。将IL-2RβγcPEG-肽激动剂(PEG-6)以1mg/kg的单剂量静脉内施用于每只小鼠(n＝5)。在给药后0小时(给药前)、1、2、6、24、48、72和96小时将血液样品收集到血清分离瓶中。将样品在4℃下以10,000×g离心5分钟并且将血清转移到新管中。在测试之前将样品冷冻并储存在-80℃下。
如实例3中所描述的TF-1βSTAT5磷酸化生物测定用于定量血清样品中的每一个中存在的PEG-6量。将每个血清样品的三倍连续稀释液或饥饿培养基中的化合物参考标准物添加到细胞中，并与细胞一起温育30分钟。制备细胞提取物并如实例3中所描述的来确定磷酸化STAT5的量。使用从参考标准物产生的标准曲线计算每个血清样品中的PEG-6浓度。
结果呈现于图26中。
实例31
针对磁珠上Fc受体融合的噬菌体展示pIII文库淘选(酸洗脱)
文库淘选程序
以下方案或类似方案用于筛选用于与hu-IL-2Rβ和hu-IL-2Rγc亚基结合的肽，以及用于与cyno-IL-2Rβ和cyno-IL-2Rγc亚基结合的一些肽。
针对每个文库样品使用五十(50)μL的蛋白G(英杰公司)。在使储备液瓶重新悬浮后，将期望体积的珠转移到无菌微量离心管中并施加到磁体上。
在珠位于磁体上的情况下，去除上清液，并且用1mL的PT缓冲液(1×PBS，0.05％)洗涤珠。
去除上清液，并且添加1mL的PBS+1％BSA+0.05％并在25℃下混合至少1小时以封闭珠。
将管施加到磁体上并且去除封闭溶液。对于每个要测试的文库，每轮将5μg所关注的Fc融合受体添加到每个文库样品中，以使总体积达到至少400μL。将样品在25℃下混合至少1小时。将样品施加到磁体上并去除上清液。
每50μL的珠添加(二百)200μL的PT缓冲液。将样品彻底混合，并且将200μL等分试样转移到针对每个要筛选的文库预先标记的管中。将另外的500μL的PT添加到每个管中，将样品混合，并且然后施加到磁体上。总共700μL/管用于洗涤。
从-20℃冰箱中取出一(1)mL的文库等分试样。将一百(100)μL的10×BT缓冲液(含5％BSA、0.5％的1×PBS)添加到每个管中并涡旋。将文库样品转移到含有珠的预先标记的管中。然后将样品在旋转器上在4℃下温育至少2小时。对于另外的筛选轮次，使用从前一轮次由每个文库扩增的1mL等分试样。用磁体回收珠并且去除噬菌体溶液。用1mL的PT缓冲液洗涤珠2次。添加五百(500)μL的PT缓冲液，并且将悬浮液转移到洁净的管中。在磁体上回收珠，并且去除最后的洗涤液。
将四百七十五(475)μL的噬菌体洗脱缓冲液添加到每个孔中(0.2M甘氨酸-HCL，pH2.2，1.0mg/mL BSA)。将样品在旋转器上于25℃下温育10分钟。在磁体上回收珠并且将洗脱的噬菌体转移到洁净的管中。
将二十五(25)μL的中和缓冲液(2M Tris碱)添加到475μL洗脱液中。将中和的样品保持在4℃下，直到TG1细胞准备好扩增。在筛选后将样品储存在-20℃下。将五十(50)μL(占总体积的约10％)转移到1.5mL微量离心管中并储存在-20℃下以用于深度测序。
实例32
TG1培养物和文库扩增
在将文库添加到珠后，使新鲜的TG1(或OmniMax)培养物生长约1至1.5小时。将2X-YT培养基(10mL)放置到50mL管中。将两百(200)μL的TG1过夜添加到falcon管中。将2X-YT培养基(600μL)放置于OD600空白的比色皿中。使培养物在37℃下在250rpm下生长，60分钟后进行第一次OD测量。TG1细胞在使用时应处于对数期，其中OD600为0.5-0.7。
将洗脱的噬菌体(400μL至450μL)添加到50mL管中0.5-0.7的OD600下的1.0mL的TG1细胞中。将噬菌体和TG1细胞在不摇动的情况下在37℃下温育30分钟。留出约50μL至100μL用于滴定和表征。
将2YT培养基(10.5mL)添加到12μL的羧苄青霉素(carb)(100mg/mL以制备100μg/mL)和24μL的50％葡萄糖(以制备0.1％葡萄糖)中，并且在在37℃下以250rpm摇动的同时温育细胞1小时。
然后添加M13K07辅助噬菌体(5×1010pfu，24μL的储备液，2×1012pfu/mL)并使其旋动以进行混合。将噬菌体和细胞在不摇动的情况下在37℃下温育30分钟。
将卡那霉素在2YT培养基/羧苄青霉素-100/0.1％葡萄糖中稀释到3mg/mL并且将阿拉伯糖稀释到2.4％，并且在每次扩增中添加100μL。将混合物在37℃和250rpm下温育过夜。
将培养物转移到50mL高速VWR离心管中，并且在JSP-F50C离心机中在4℃下以8,000g离心15分钟以使细胞沉淀。
将上清液转移到50mL高速VWR离心管中，并且添加0.2体积的PEG/NaCl(将体积乘以0.25mL至3mL PEG/NaCl进行12mL扩增)，将其混合并在冰上温育30分钟。
然后在JSP-F50C离心机中在4℃下以10,500g将细胞离心15分钟。去除上清液，并且通过移液将噬菌体沉淀重新悬浮于总共1mL的PBT(1×PBS，0.05％0.5％BSA)中。
将样品转移到Eppendorf管中，涡旋，并以12,000rpm离心30秒。将上清液转移到洁净的Eppendorf管中并储存在4℃下。此扩增的噬菌体样品(250-500μL)用于下一轮筛选。
实例33
由单独的菌落制备培养物
用1mL的2YT肉汤/氨苄青霉素-50/0.1％葡萄糖填充深孔板的九十六(96)个孔。使用P20尖端将九十六(96)个菌落放置于孔中。将尖端留在孔中以标记位置。在整个板完成后，使用多通道移液器去除尖端。将板用透气薄膜覆盖。
将接种的板在37℃的摇床中温育，直到培养物变得浑浊，通常在250rpm下在4小时内变得浑浊。
将板从温育器中取出，并且从每个孔中取出50μL培养物到另一个称为“存档块”的深孔块中，所述深孔块含有1mL的2YT肉汤/氨苄青霉素-50/0.1％葡萄糖。将板用透气薄膜覆盖并在37℃和250rpm下温育过夜。
在温育过夜后，将M13K07辅助噬菌体添加到2YT肉汤/氨苄青霉素-50/0.1％葡萄糖中的2×1010pfu/mL(使得每块6.0mL)。将五十(50)μL稀释的M13K07添加到深孔块中的每个培养孔中。将深孔块用透气薄膜覆盖并在37℃和250rpm下温育30分钟。
将卡那霉素在2YT肉汤/氨苄青霉素-50/0.1％葡萄糖(使得每块6.0mL)中稀释到0.5mg/mL，并且将阿拉伯糖稀释到0.4％，并且向每个孔中添加50μL。将板用透气薄膜覆盖并在37℃和250rpm下温育过夜。
从温育器中取出“存档块”培养物，并且将50μL转移到含有50μL的50％甘油的96孔板中。将板用箔密封并储存在-80℃下。将块中剩余的培养物用箔密封件覆盖并储存在4℃下。
将块以4000rpm离心15分钟并接种M13K07。在避免细菌沉淀的同时，将850μL的噬菌体上清液转移到新的深孔板中，用箔密封件覆盖，并在4℃下储存。
实例34
使用肽示踪剂的竞争结合ELISA
Fc融合体与IL-2Rβ和IL-2Rγc的结合通过使用生物素化肽/中性亲和素-HRP示踪剂的竞争结合ELISA来测量。如实例27中所描述的制备ELISA板。
如实例28中所描述的制备IL-2R配体。
从每个孔中去除受体Fc融合体。将三百(300)μL的封闭缓冲液(1×PBS，1％BSA)添加到经受体涂覆的板的每个孔中。
用PT(1×PBS，0.05％)缓冲液将板洗涤4次。将在PBT中连续稀释的五十(50)μL的IL-2R配体添加到合适的孔中，然后在4℃下温育1小时。
在该实例中，使用IL-2Rβ配体和IL-2Rγc配体的C末端生物素化形式(hu-IL-2Rβ肽SEQ ID NO:915、cyno-IL-2Rβ肽SEQ ID NO:2941和具有SEQ ID NO:1614(GGVVCQDWEGVELCWQGGR)的IL-2Rγc肽)制备生物素化肽/中性亲和素-HRP(赛默飞世尔公司目录#31030)预复合物。将Bn-肽与中性亲和素(NA)-HRP(1μm bn-肽，NA-HRP在PBS中稀释7.5倍)结合，并在4℃下温育至少45分钟以制备肽-HRP预复合物示踪剂。
在适当的时间，将预复合的bn-肽/NA-HRP示踪剂稀释至其预定结合EC80(通常为30至10nM)的2倍，无需洗涤。将五十(50)μL的bn-肽/NA-HRP示踪剂添加到每个孔中，并在4℃下温育45分钟。
然后将板用冷PT洗涤4次。然后将五十(50)μL的TMB添加到每个孔中，并且将孔在25℃下温育1-10分钟。添加五十(50)μL的“终止”溶液，并且在450nm下对板进行读取。
实例35
评估肽异二聚体二聚化IL-2Rβγc和激活IL-2反应性细胞的能力
在鉴定出表现出IL-2Rβ和IL-2Rγc结合活性的肽基配体之后，将鉴定出表现出IL-2R激动剂活性的化合物。这将涉及评估肽二聚化IL-2Rβγc亚基的能力以及在基于细胞的测定中发出信号的能力。二聚化是激活受体信号传导的必要步骤，但不是充分步骤。为了评估基于细胞的测定中的激动剂活性，将测试IL-2反应性细胞系的IL-2信号传导的指标，STAT5的磷酸化。然后在原代人外周血单核细胞(PBMC)中测试在这些细胞系中表现出IL-2Rβγc激动剂活性的化合物的IL-2R激动作用，以及有利于表达IL-2Rβγc亚基，但IL-2Rα(CD25)亚基表达低或无表达的细胞类型激活的期望的选择性。
将使用β-Gal互补系统评估二聚化潜力，其中每个相应IL-2受体亚基的细胞内结构域的一部分被β-Gal的功能互补片段替代，所述片段在足够接近时重新获得催化活性。当用IL-2处理时，表达这些构建体的细胞产生β-Gal活性，ED50为约26nM(参见DiscoverX产物规格)。所有合成的、潜在的激动剂肽将使用该测定进行测试。
将对候选化合物在两种细胞系中的STAT5磷酸化的诱导进行评分：(1)CTLL-2细胞，表达所有三种IL-2受体亚基的小鼠细胞毒性T淋巴细胞系，并且对IL-2Rβγc偏向的变体以及野生型IL-2有应答；以及(2)TF-1β细胞，源自人类红白血病细胞系TF-1，并且天然仅表达IL-2Rγc，并通过转染IL-2Rβ被工程化成对IL-2有应答。将构建TF-1β并且将通过QPCR和FACS分析验证两种细胞系中的IL-2R亚基表达水平。
将在两种细胞系中测试化合物。将进行剂量应答测定以确定测试化合物的EC50，并将测试化合物与作为IL-2Rβγc受体偏向的指标的IL-2进行比较。为了进一步表征亚基偏向，将在存在针对人IL-2Rβ亚基的中和抗体的情况下进行平行测定。
作为确认阳性化合物通过刺激IL-2受体起作用的对照，所述测定还将利用用中和抗huIL-2Rβ抗体处理的细胞进行。为了确定化合物活性不是由于细胞因子的污染，将用针对天然IL-2Rβγc激动剂、IL-2和IL-15的中和抗体(研发系统公司)处理测试化合物。
在细胞系中表现出IL-2R激动剂活性的化合物将在从个体供体收集的人原代免疫细胞PBMC(可从龙沙公司(Lonza)商购)上进行测试，并且在一些情况下在纯化的CD4+细胞(龙沙公司)上进行测试。来自正常供体的大部分PBMC对IL-2有应答。为了评估测试化合物的IL-2激动剂活性，细胞将暴露于化合物或IL-2，并通过蛋白质印迹分析对STAT5磷酸化进行评分。作为确认阳性化合物通过刺激IL-2受体起作用的对照，所述测定还将利用用中和抗huRβ抗体处理的细胞进行。
那些表现出PBMC的STAT5激活的化合物将接受被设计用于评估化合物与IL-2相比的亚基偏向的后续测定。该测定将涉及确定30分钟内测试化合物和IL-2(1至1000IU)的剂量应答，通过基于FACS的方案进行评分，允许检测作为IL-2R激活的指标的细胞内pSTAT5和细胞表面CD25，IL-2Rβ亚基两者。表达三种IL-2R亚基IL-2Rβγc的细胞以非常高的亲和力(约10pM)与IL-2结合并且因此对低浓度的IL-2具有敏感性；而仅表达IL-2Rβγc(约1nM亲和力)的细胞需要暴露于显著更高的IL-2水平才能激活。因为由本公开提供的化合物被选择用于IL-2Rβ与IL-2Rγc亚基而不是与IL-2Rα的结合，所以预期化合物的效力与细胞上的IL-2Rα的表达水平不相关；并且比较用由本公开提供的化合物处理的细胞或用IL-2处理的细胞的应答谱应该揭示任何偏向。
实例36
经鉴定的肽
已经筛选随机文库用于与人IL-2Rβ或人Il-2Rγc亚基的结合，每个文库含有大约1010个独立的重组体，每个克隆潜在地展示独特的肽序列。
实例37
用于测试hu-IL-2R的STAT5激活的NK-92细胞的制备
将NK-92细胞以4×105个细胞接种在1mL饥饿培养基(SM)中的24孔板中，并在37℃、5％CO2下温育过夜。饥饿培养基含有RPMI 1640+20％FBS+2mM L-谷氨酰胺+1mM NaPyr+10mM HEPES+0.1mM BME(不含rhu-IL-2补充剂)。
制备1μg/mL抗hu-IL-2中和抗体(0.2mg/mL储备液)或山羊IgG对照(1mg/mL储备液)的处理混合物。
将处理混合物和抗体混合物在37℃、5％CO2下添加到细胞中30分钟。然后将每个样品转移到1.5mL微量离心管中，并以1,500RPM向下旋转5分钟。将细胞在1mL PBS中洗涤并再次离心。
将磷酸酶和蛋白酶抑制剂混合物(赛默飞世尔公司#78442)以1:100稀释度添加到mPER缓冲液中。在细胞沉淀之后，将50μL的mPER缓冲液添加到每个样品中并反复吸移以均质化。
将裂解物在室温下以14,000RPM离心5分钟。将上清液转移到洁净的管中并在-80℃下冷冻储存。
人IL-2抗体(山羊IgG)获自研发系统公司编号AF-202-NA；正常山羊IgG对照获自研发系统公司编号为AB-108-C；抗STAT5抗体(兔)、细胞信号传导编号94205S、抗pSTAT5抗体(兔)、细胞信号传导编号4322S和山羊抗兔IgG-HRP获自杰克逊免疫研究公司(JacksonImmunoresearch)编号111-035-144。
表21中提供了样品中的每一个的抗体、处理和工作储备液制备。化合物A和B是由本公开提供的IL-2Rβγc激动剂。
表21.NK-92细胞中的STAT5激活样品。
将样品应用于蛋白质印迹。处理试剂包含抗STAT5抗体(兔)，细胞信号传导编号94205S；抗pSTAT5抗体(兔)，细胞信号传导编号4322S；以及山羊抗兔IgG-HRP，杰克逊免疫研究公司编号111-035-144。
为了进行测定，将NK-92细胞以20,000个细胞/孔铺在饥饿培养基中的96孔板中。用最大浓度为10μM的肽和最大浓度为6.67 nM的rhL-2以3倍连续稀释液对每个孔进行处理。然后将细胞在37℃下温育48小时。添加CellTiter-试剂并将细胞在25℃下温育10分钟，然后进行发光读取。/>
实例38
用于测试hu-IL-2R的STAT5激活的TF-1β和TF-1细胞的制备
对TF-1β和TF-1亲本细胞进行计数。收集细胞并将2.5×106个细胞在200×g下沉淀5分钟。用25 mL不含添加剂的RPMI洗涤沉淀的细胞。
将TF-1β和TF-1亲本细胞以5×105个细胞接种在5 mL饥饿培养基(SM)中的T25烧瓶中，并将烧瓶在37℃下在5％CO2下直立温育过夜。
对TF-1β和TF-1亲本细胞进行计数并确定其活性。如果需要，将细胞在SM中稀释至5×105个细胞/mL并且然后将1 mL的悬浮液添加到24孔培养皿的6孔/细胞系中，并在37℃下在5％CO2下温育。
将处理物在37℃下在5％CO2下添加到细胞中30分钟。然后将经处理的细胞转移到1.5 mL微量离心管中，并以1,500 RPM向下旋转5分钟。在1 mL PBS中洗涤细胞，再次离心，并吸出上清液。处理试剂包含抗STAT5抗体(兔)，细胞信号传导编号94205S；抗pSTAT5抗体(兔)，细胞信号传导编号4322S；以及山羊抗兔IgG-HRP，杰克逊免疫研究公司编号111-035-144。
将磷酸酶和蛋白酶抑制剂混合物(赛默飞世尔公司编号78442)以1:100稀释度添加到mPER缓冲液中。在细胞沉淀之后，将另外的50μL的mPER缓冲液添加到每个样品中并反复吸移混合物以均质化。
将裂解物在25℃下以14,000 RPM离心5分钟。将上清液转移到洁净的管中并在-80℃下冷冻储存。
表22中提供了样品中的每一个的抗体、处理和工作储备液制备。
表22.TF-1β和TF-1细胞中的STAT5激活样品。
1饥饿培养基：RPMI 1640、2.5g/L葡萄糖(总共4.5g/L)、5％FBS、2mM L-谷氨酰胺、1mMNaPyr和10mM HEPES(不含GM-CSF补充剂)。
实例39
IL-2Rβγc配体与hu-IL-2R和cyno-IL-2R亚基的竞争性结合
各种IL-2Rβγc配体与hu-IL-2R和cyno-IL-2R亚基的竞争性结合使用实例34中所描述的竞争结合ELISA测定来确定。
具有SEQ ID NO:4170-4185并且具有BGL22-BGL24的结构的IL-2Rβγc配体以小于100μM或小于10μM的IC50与hu-IL-2Rβ亚基、cyno-IL-2Rβ亚基、hu-IL-2Rγc亚基和cyno-IL-2Rγc亚基结合。
实例40
STAT5磷酸化
评估了IL-2Rβγc配体和IL-2Rβγc配体构建体在TF-1β细胞中对STAT5磷酸化的诱导。TF-1β细胞源自天然表达Rγc但不表达IL-2Rβ的生长因子依赖性人红白血病细胞系TF-1(ATCC编号CRL-2003)。通过用人全长IL-2Rβ转染，将细胞工程化为对IL-2有应答。通过在IL-2中生长选择表达更高水平的IL-2Rβ的细胞系，并通过qPCR和FACS分析验证IL-2Rβ和IL-2Rγc亚基表达水平。
为了测试诱导STAT5磷酸化的化合物，使TF-1β细胞在T75烧瓶中的饥饿培养基(RPMI 1640+2.5g/L葡萄糖+5％FBS+2mM L-谷氨酰胺+1mM NaPyr+10mMHEPES，不含GM-CSF或rhIL-2补充剂)中以5×105个细胞/mL饥饿过夜。第二天，将细胞以2×105个细胞/孔铺板在96孔V型底板中。将IL-2Rβγc配体或IL-2在饥饿培养基中的三倍连续稀释液添加到细胞中，并在37℃下温育30分钟。通过将10×细胞裂解缓冲液(细胞信号传导技术公司编号9803)和1×HALT磷酸酶和蛋白酶抑制剂混合液(赛默飞世尔公司编号78442)的混合物直接添加到孔中来制备细胞提取物。将板在25℃下摇动5分钟以制备细胞提取物以供立即使用或储存在-80℃下。使用Phospho-Stat5(Tyr694)夹心ELISA试剂盒(细胞信号传导技术公司编号7113)执行对pSTAT5的检测。将细胞提取物添加到用小鼠抗phospho-STAT5抗体预先涂覆的微孔中，并在4℃下温育过夜。然后用PBS洗涤孔，并且通过添加兔抗STAT5检测抗体并在37℃下温育1小时来检测结合的phospho-STAT5(Tyr694)。用PBS洗涤孔，并且将抗兔IgGHRP连接的抗体添加到每个孔中。在最后一次洗涤后，添加TMB底物溶液以测量每个孔中HRP的量。在微孔板读板仪中读取在450nm下的吸光度。产生的信号与每个细胞提取物中磷酸化STAT5的量成正比。
类似的方法用于确定新鲜分离和激活的PBMC中的激动剂活性。使用(干细胞技术公司编号07811)密度梯度离心从血沉棕黄层中分离人外周血单核细胞(PBMC)。将回收的PBMC以2×106个细胞/mL重新悬浮于无血清T细胞培养基(CTS细胞扩增SFM，赛默飞世尔科技公司(ThermoFisher Scientific)编号A1048501)+2mM L-谷氨酰胺+Pen/Strep中。在无刺激的情况下将新鲜分离的PBMC以2×106个细胞/mL在新鲜T细胞培养基中静置过夜。将激活的PBMC在37℃下用2μg/mL板固定的抗CD3抗体(纯化的NA/LE小鼠抗人CD3ε，BD生物科学公司#557052)和1μg/mL抗CD28抗体(纯化的NA/LE小鼠抗人CD28，BD生物科学公司#555725)刺激48小时。在温育之后，在无刺激的情况下将激活的PBMC以2×106个细胞/mL静置于新鲜T细胞培养基中72小时。然后将静置的PBMC以106个细胞/孔接种到96孔深孔板中。将IL-2Rβγc配体的三倍连续稀释液添加到细胞中，并在37℃下温育30分钟。使用/>Phospho-Stat5(Tyr694)夹心ELISA试剂盒(细胞信号传导技术公司编号7113)执行对pSTAT5的检测。除了cyno-PBMC被激活72小时之外，Cyno PBMCpSTAT5测定方案与人类相同。购买Cyno-PBMC并在冰上过夜接收。
实例41
Fc-IL-2Rβγc融合蛋白的激动剂活性
具有SEQ ID NO:8135的Fc-IL-2Rβγc融合蛋白的激动剂活性在新鲜分离和激活的原代人外周血单核细胞(PBMC)和新鲜分离和激活的cyno-PBMC中的STAT5磷酸化测定中进行评估。将融合蛋白与PBMC细胞一起温育，并使用实例40中描述的方法测量作为浓度函数的STAT5磷酸化并与IL-2的活性进行比较。
结果呈现于图34A-34D中。
图34A示出了激活的hu-PBMC中的STAT5磷酸化。
图34B示出了TF-1-hu-IL-2Rβ细胞中的STAT5磷酸化。
图34C示出了激活的cyno-PBMC中的STAT5磷酸化。
图34D示出了TF-1-cyno-IL-2Rβ细胞中的STAT5磷酸化。
结果表明，具有SEQ ID NO:8135的IL-2Rβγc配体激活hu-IL-2R，但不激活cyno-IL-2R。
实例42
IL-2Rβγc结合化合物和蛋白融合体的竞争性结合
合成肽和Fc-hu-IgG2/IL-2Rβγc融合蛋白与hu-IL-2Rβ亚基、cyno-IL-2Rβ亚基、hu-IL-2Rγc亚基和cyno-IL-2Rγc亚基结合的能力使用实例34中所描述的竞争性结合测定来确定。
IL-2Rβγc配体具有SEQ ID NO:1263的氨基酸序列。
结果呈现于图35A-35D中。
图35A示出了具有SEQ ID NO:1263的IL-2Rβγc配体与hu-IL-2Rγc亚基的竞争性结合。
图35B示出了具有SEQ ID NO:1263的IL-2Rβγc配体与hu-IL-2Rβ亚基的竞争性结合。
图35C示出了具有SEQ ID NO:1263的IL-2Rβγc配体与cyno-IL-2Rγc亚基的竞争性结合。
图35D示出了具有SEQ ID NO:1263的IL-2Rβγc配体与cyno-IL-2Rβ亚基的竞争性结合。
结果表明，具有SEQ ID NO:1263的IL-2Rβγc配体以约相同的IC50与hu-IL-2Rγc和cyno-IL-2Rγc亚基两者结合。然而，尽管IL-2Rβγc配体与hu-IL-2Rβ亚基结合，但IL-2Rβγc配体仅与cyno-IL-2Rβ亚基弱结合。
实例43
具有刚性配体连接子的IL-2Rβγc配体与hu-IL-2R和cyno-IL-2R亚基的结合
具有SEQ ID NO:1263或SEQ ID NO:4171的氨基酸序列的IL-2Rβγc配体与hu-IL-2Rβ、cyno-IL-2Rβ、hu-IL-2Rγc和cyno-IL-2Rγc亚基的结合使用实例39中所描述的竞争结合测定来确定。
如图36A-36B和图37A-37B所示，IL-2Rβγc配体以相当IC50的与hu-IL-2Rβ、hu-IL-2Rγc和cyno-IL-2Rγc亚基两者结合。然而，仅带有具有SEQ ID NO:4171的IL-2Rβγc配体的IL-2Rβγc配体与cyno-IL-2Rβ亚基结合。
图36A示出了IL-2Rβγc配体与cyno-IL-2Rβ亚基的竞争性结合，并且图36B示出了IL-2Rβγc配体与cyno-IL-2Rγc亚基的竞争性结合。
图37A示出了IL-2Rβγc配体与hu-IL-2Rβ亚基的结合，并且图37B示出了IL-2Rβγc配体与hu-IL-2Rγc亚基的竞争性结合。
实例44
Fc-IL-2Rβγc融合蛋白对cyno-PBMC中的IL-2Rβγc的激活
合成合成了在Fc片段中的每一个上具有带有SEQ ID NO:4171的IL-2Rβγc配体的Fc融合蛋白(SEQ ID NO:8127)。Fc融合体的示意图示出于图38A中。
将Fc融合蛋白或IL-2与新鲜或激活的cyno-PBMC一起温育，并如实例40中所描述测量STAT5磷酸化活性。
结果呈现于图38B中。
图38B示出了具有SEQ ID NO:8127的Fc融合蛋白在激活的cyno-PBMC中的STAT5磷酸化活性。
实例45
IL-2Rβγc配体和hu-IgG2/IL-2RβγcFc融合体对人-TF-1β细胞中的IL-2Rβγc的
激活
具有SEQ ID NO:1263和SEQ ID NO:4171的IL-2Rβγc配体激活TF-1β细胞的能力使用在实例40中所描述的STAT5磷酸化测定来确定。结果呈现于图39A中并与IL-2对TF-1β细胞的激活进行比较。
具有SEQ ID NO:8135和SEQ ID NO:8127的hu-IgG2/IL-2Rβγc Fc融合蛋白激活hu-TF-1β细胞的能力使用在实例40中所描述的STAT5磷酸化测定来确定。结果呈现于图39A-39B中并与IL-2对TF-1β细胞的激活进行比较。
结果表明，具有SEQ ID NO:1263和SEQ ID NO:4171的IL-2Rβγc配体和对应的hu-IgG2/IL-2Rβγc Fc融合蛋白激活hu-TF-1β细胞中的IL-2Rβγc。
实例46
IL-2Rβγc配体和hu-IgG2/IL-2Rβγc Fc融合体对人PBMC中的IL-2Rβγc的激活
具有SEQ ID NO:1263和4171的IL-2Rβγc配体和具有SEQ ID NO:8135和SEQIDNO:8127的对应的hu-IgG2/IL-2Rβγc Fc融合蛋白激活激活的hu-PBMC中的STAT5磷酸化的能力使用在实例40中所描述的STAT5磷酸化测定来确定。结果呈现于图40A-40B中并与由IL-2诱导的激活的hu-PBMC中的STAT5磷酸化进行比较。
结果表明，具有SEQ ID NO:4160和SEQ ID NO:4171的IL-2Rβγc配体和对应的hu-IgG2/IL-2Rβγc Fc融合蛋白激活激活的hu-PBMC中的IL-2Rβγc。
实例47
丙氨酸扫描肽的活性
合成了一系列肽，其中具有SEQ ID NO:1442的IL-2Rβ配体的一个或两个氨基酸残基被丙氨酸残基(丙氨酸扫描)替代。当亲本残基是丙氨酸时，其被甘氨酸取代。使用如实例1中所描述的标准固相合成条件和Fmoc保护的氨基酸合成肽序列。如实例34中所描述的，使用竞争结合测定评估Ala-扫描肽与hu-IL-2Rβ和cyno-IL-2Rβ的结合。
表23提供了具有单个丙氨酸取代的肽序列并且表24提供了具有两个丙氨酸取代的肽序列。
表23.基于具有SEQ ID NO:1442的肽的单一丙氨酸扫描肽。
表24.基于具有SEQ ID NO:1442的肽的双丙氨酸扫描肽。
具有SEQ ID NO:3137、3114、3107、3122、3124-3128、3147、3170-3174、3176-3180、3182、3183、3185、3186、3200、3202和3204的肽以小于100μM的IC50与hu-IL-2Rβ亚基和cyno-IL-2Rβ亚基两者结合，如使用实例39中所描述的竞争ELISA测定所确定的。
评估丙氨酸肽扫描中具有IL-2Rβγc配体的Fc融合蛋白激活hu-TF-1β细胞的能力。IL-2Rβγc配体的氨基酸序列呈现于表25中。如实例14中所描述的制备IgG2 Fc融合蛋白。
Fc融合蛋白激活hu-TF-1-β细胞中的STAT5磷酸化的能力如实例28中所描述的来确定并且结果呈现于图41中。
表25.hIgG2-Fc-IL-2Rβγc融合蛋白的氨基酸序列。
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最后，应当注意，存在实施本文所公开的实施例的替代性方式。因此，本发明实施例被认为是说明性的而不是限制性的，并且权利要求不限于本文给出的细节，而是可以在所述权利要求的范围和等同物内进行修改。
Claims (65)
1.一种IL-2Rβ配体，其选自：
SEQ ID NO:2661-2891、2900-2926、911-930、9301、9308、2859、2934、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207中的任一个中的任一个的氨基酸序列；
SEQ ID NO:2661-2891、2900-2926、911-930、9301、9308、2859、2934、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207中的任一个的截短的氨基酸序列；
具有1至4个氨基酸取代的SEQ ID NO:2661-2891、2900-2926、911-930、9301、9308、2859、2934、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207中的任一个的氨基酸序列；
具有1至4个侧接甘氨酸的SEQ ID NO:2661-2891、2900-2926、911-930、9301、9308、2859、2934、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207中的任一个的氨基酸序列；
与SEQ ID NO:2661-2891、2900-2926、911-930、9301、9308、2859、2934、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207中的任一个具有大于60％序列相似性的氨基酸序列；或
前述任一种的组合，
其中所述IL-2Rβ配体以小于100μM的IC50与hu-IL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
2.根据权利要求1所述的IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体包括SEQ ID NO:2859、2934、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207中的任一个的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体与具有SEQ ID NO:2859、2934、3100-3128、3130-3151、3160-3166、3170-3186和3200-3207中的任一个的IL-2Rβ配体具有大于60％氨基酸序列相似性。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体以小于100μM的IC50与hu-IL-2R结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体以小于100μM的IC50与cyno-IL-2Rβ亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体以小于100μM的IC50与cyno-IL-2R结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
7.根据权利要求1所述的IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体具有选自SEQ ID NO:2858和SEQ ID NO:2859的氨基酸序列。
8.根据权利要求1所述的IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体具有与选自SEQ ID NO:2858和SEQ ID NO:2859的氨基酸序列具有大于60％序列相似性的氨基酸序列。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的IL-2Rβ配体，其中所述IL-2Rβ配体在C末端上、在N末端上或在C末端和N末端两者上独立地包括1至4个侧接甘氨酸。
10.一种IL-2Rβ结合化合物，其包括根据权利要求1至9中任一项所述的IL-2Rβ配体。
11.根据权利要求10所述的IL-2Rβ结合化合物，其中所述IL-2Rβ配体与构建体配偶体结合。
12.根据权利要求11所述的IL-2Rβ结合化合物，其中所述构建体配偶体选自IgG Fc片段、ZW1_A片段、Cys-臼片段、Cys-杵片段、抗体和蛋白质。
13.根据权利要求11至12中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物，其中所述IL-2Rβ配体通过构建体连接子与所述构建体配偶体结合。
14.根据权利要求10至13中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物，其中所述IL-2Rβ结合化合物以小于100μM的IC50与hu-IL-2R结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
15.根据权利要求10至14中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物，其中所述IL-2Rβ结合化合物以小于100μM的IC50与cyno-IL-2R结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
16.根据权利要求10至15中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物，其中所述IL-2Rβ结合化合物包括IL-2Rγc配体和IL-2Rβ配体，其中
所述IL-2Rγc配体以小于100μM的IC50与hu-IL-2Rγc亚基结合；
所述IL-2Rβ配体以小于100μM的IC50与所述hu-IL-2Rβ亚基结合；并且
所述IC50是使用噬菌体ELISA竞争测定确定的。
17.根据权利要求10至16中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物，其中所述IL-2Rβ结合化合物包括IL-2Rγc配体和IL-2Rβ配体，其中
所述IL-2Rγc配体以小于100μM的IC50与cyno-IL-2Rγc亚基结合；
所述IL-2Rβ配体以小于100μM的IC50与cyno-IL-2Rβ亚基结合；并且所述IC50是使用噬菌体ELISA竞争测定确定的。
18.一种IL-2Rβγc配体，其包括：
根据权利要求1至9中任一项所述的IL-2Rβ配体；以及
IL-2Rγc配体，其中所述IL-2Rγc配体包括：
SEQ ID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613中的任一个的氨基酸序列；
SEQ ID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613中的任一个的截短的氨基酸序列；
具有1至4个氨基酸取代的SEQ ID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613中的任一个的氨基酸序列；
具有1至4个侧接甘氨酸的SEQ ID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613中的任一个的氨基酸序列；
与SEQ ID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613中的任一个具有大于60％序列相似性的氨基酸序列；
或前述任一种的组合，
其中所述IL-2Rγc配体以小于100μM的IC50与所述hu-IL-2Rγc亚基结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
19.根据权利要求18所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rγc配体包括：
SEQ ID NO:965的氨基酸序列；
SEQ ID NO:965的截短的氨基酸序列；
具有1至4个氨基酸取代的SEQ ID NO:965的氨基酸序列；
具有1至4个侧接甘氨酸的SEQ ID NO:965的氨基酸序列；
与SEQ ID NO:965具有大于60％序列相似性的氨基酸序列；
或前述任一种的组合。
20.根据权利要求18所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rγc配体包括SEQ ID NO:965的氨基酸序列。
21.根据权利要求18所述的IL-2Rβγc配体，其中
所述IL-2Rβ配体包括选自SEQ ID NO:2858和SEQ ID NO:2859的氨基酸序列；并且
所述IL-2Rγc配体包括SEQ ID NO:965的氨基酸序列。
22.根据权利要求18所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体包括SEQ ID NO:4100-4137、4160-4168和4170-4185中的任一个的氨基酸序列。
23.根据权利要求18所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体与选自SEQ IDNO:4100-4137、4160-4168和4170-4185中的任一个的氨基酸序列具有大于60％序列相似性。
24.根据权利要求18至23中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβ配体通过配体连接子与所述IL-2Rγc配体结合。
25.根据权利要求24所述的IL-2Rβγc配体，其中所述配体连接子包括刚性配体连接子。
26.根据权利要求25所述的IL-2Rβγc配体，其中所述刚性配体连接子包括(P)n，其中n是1至50的整数(SEQ ID NO:9419)。
27.根据权利要求25所述的IL-2Rβγc配体，其中所述刚性配体连接子包括(PA)n，其中n是1至50的整数(SEQ ID NO:9418)。
28.根据权利要求18至27中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中hu-IL-2R亚基结合比率为10至10,000，其中所述hu-IL-2R亚基结合比率为用于将所述IL-2Rβ配体与所述hu-IL-2Rβ亚基结合的IC50与用于将所述IL-2Rγc配体与所述hu-IL-2Rγc亚基结合的IC50的比率。
29.根据权利要求18至27中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中hu-IL-2R亚基结合比率为0.1至0.0001，其中所述hu-IL-2R亚基结合比率为用于将hu-IL-2Rβ配体与所述IL-2Rβ亚基结合的IC50与用于将所述IL-2Rγc配体与所述hu-IL-2Rγc亚基结合的IC50的比率。
30.根据权利要求18至27中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中hu-IL-2R亚基结合比率为0.1至10，其中所述hu-IL-2R亚基结合比率为用于将所述IL-2Rβ配体与所述hu-IL-2Rβ亚基结合的IC50与用于将所述IL-2Rγc配体与所述hu-IL-2Rγc亚基结合的IC50的比率。
31.根据权利要求18至27中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中hu-IL-2R结合比率为10至10,000，其中所述hu-IL-2R结合比率为用于将所述IL-2Rβ配体与hu-IL-2R结合的IC50与用于将所述IL-2Rγc配体与所述hu-IL-2R结合的IC50的比率。
32.根据权利要求18至27中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中hu-IL-2R结合比率为0.1至0.0001，其中所述hu-IL-2R结合比率为用于将所述IL-2Rβ配体与IL-2R结合的IC50与用于将所述IL-2Rγc配体与IL-2R结合的IC50的比率。
33.根据权利要求18至27中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中hu-IL-2R结合比率为0.1至10，其中所述hu-IL-2R结合比率为用于将所述IL-2Rβ配体与IL-2R结合的IC50与用于将所述IL-2Rγc配体与hu-IL-2R结合的IC50的比率。
34.根据权利要求18至33中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体以小于100μM的IC50与hu-IL-2R结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
35.根据权利要求18至34中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体以小于100μM的IC50与cyno-IL-2R结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
36.根据权利要求18至35中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体是hu-IL-2R激动剂。
37.根据权利要求18至36中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体是cyno-IL-2R激动剂。
38.根据权利要求18至37中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体以小于100μM的EC50激活hu-IL-2R，如在TF-1-2Rβ工程化细胞系或在PBMC细胞中使用STAT5磷酸化测定所确定的。
39.根据权利要求18至38中任一项所述的IL-2Rβγc配体，其中所述IL-2Rβγc配体以小于100μM的EC50激活cyno-IL-2R，如在cyno-PMBC细胞中使用STAT5磷酸化测定所确定的。
40.一种IL-2Rβγc结合化合物，其包括：
根据权利要求1至9中任一项所述的IL-2Rβ配体以及以小于100μM的IC50与所述IL-2Rγc亚基结合的IL-2Rγc配体；或
根据权利要求18至39中任一项所述的IL-2Rβγc配体。
41.根据权利要求40所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc配体与构建体配偶体结合。
42.根据权利要求41所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述构建体配偶体选自IgG Fc片段、ZW1_A片段、Cys-臼片段、Cys-杵片段、抗体和蛋白质。
43.根据权利要求41至42中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述构建体配偶体包括细胞靶向部分。
44.根据权利要求43所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中细胞靶向部分包括肿瘤靶向部分、免疫细胞靶向部分或其组合。
45.根据权利要求41至44中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc配体通过构建体连接子与所述构建体配偶体结合。
46.根据权利要求40至45中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc结合化合物以小于100μM的IC50与hu-IL-2R结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
47.根据权利要求40至46中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc结合化合物以小于100μM的IC50与cyno-IL-2R结合，如使用噬菌体ELISA竞争测定所确定的。
48.根据权利要求40至47中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc结合化合物是hu-IL-2R激动剂。
49.根据权利要求40至48中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc结合化合物是cyno-IL-2R激动剂。
50.根据权利要求40至49中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc结合化合物以小于100μM的EC50激活hu-IL-2R，如在TF1-2Rβ工程化细胞系或在PBMC细胞中使用STAT5磷酸化测定所确定的。
51.根据权利要求40至50中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物，其中所述IL-2Rβγc结合化合物以小于10μM的EC50激活cyno-IL-2R，如在cyno-PMBC细胞中使用STAT5磷酸化测定所确定的。
52.根据权利要求40至51中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中hu-IL-2R结合比率为10至1,000，其中所述hu-IL-2R结合比率为用于将所述IL-2Rβ配体与hu-IL-2R结合的IC50与用于将所述IL-2Rγc配体与所述hu-IL-2R结合的IC50的比率。
53.根据权利要求40至52中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中hu-IL-2R结合比率为0.1至0.001，其中所述hu-IL-2R结合比率为用于将所述IL-2Rβ配体与IL-2R结合的IC50与用于将所述IL-2Rγc配体与IL-2R结合的IC50的比率。
54.根据权利要求40至53中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中hu-IL-2R结合比率为0.1至10，其中所述hu-IL-2R结合比率为用于将所述IL-2Rβ配体与IL-2R结合的IC50与用于将所述IL-2Rγc配体与hu-IL-2R结合的IC50的比率。
55.根据权利要求40所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβγc结合化合物包括SEQ ID NO:8100-8136中的任一个的氨基酸序列或与SEQ ID NO:8100-8136中的任一个具有大于60％序列相似性的氨基酸序列。
56.根据权利要求1至9中任一项所述的IL-2Rβ配体、根据权利要求10至17中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物、根据权利要求18至39中任一项所述的IL-2Rβγc配体或根据权利要求40至55中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rβ配体、所述IL-2Rβ结合化合物、所述IL-2Rβγc配体或所述IL-2Rβγc结合化合物以小于100μM的IC50与所述IL-2Rβ亚基的特异性结合位点结合。
57.根据权利要求18至39中任一项所述的IL-2Rβγc配体或根据权利要求40至55中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物，其中所述IL-2Rγc配体、所述IL-2Rβγc配体或所述IL-2Rβγc结合化合物以小于100μM的IC50与所述IL-2Rγc亚基的特异性结合位点结合。
58.一种药物组合物，其包括：
根据权利要求1至9、56和57中任一项所述的IL-2Rβ配体；
根据权利要求10至17、56和57中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物；
根据权利要求18至39、56和57中任一项所述的IL-2Rβγc配体；
根据权利要求40至57中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物；或
前述任一种的组合。
59.一种治疗患者的疾病的方法，所述方法包括向需要此类治疗的患者施用治疗有效量的：
根据权利要求1至9、56和57中任一项所述的IL-2Rβ配体；
根据权利要求10至17、56和57中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物；
根据权利要求18至39、56和57中任一项所述的IL-2Rβγc配体；
根据权利要求40至57中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物；或
根据权利要求58所述的药物组合物。
60.根据权利要求59所述的方法，其中所述疾病选自癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病、传染性疾病和病毒性疾病。
61.一种扩增免疫细胞的方法，所述方法包括使免疫细胞群体与有效量的以下各项离体或体内接触：
根据权利要求1至9、56和57中任一项所述的IL-2Rβ配体；
根据权利要求10至17、56和57中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物；
根据权利要求18至39、56和57中任一项所述的IL-2Rβγc配体；或
根据权利要求40至57中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物。
62.一种扩增免疫细胞的方法，所述方法包括使免疫细胞群体与有效量的以下各项离体或体内接触：
根据权利要求1至9、56和57中任一项所述的IL-2Rβ配体；
根据权利要求10至17、56和57中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物；
根据权利要求18至39、56和57中任一项所述的IL-2Rβγc配体；或
根据权利要求40至57中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物。
63.一种加强疫苗的方法，所述方法包括向患者施用疫苗和治疗有效量的：
根据权利要求1至9、56和57中任一项所述的IL-2Rβ配体；
根据权利要求10至17、56和57中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物；
根据权利要求18至39、56和57中任一项所述的IL-2Rβγc配体；或
根据权利要求40至57中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物。
64.一种修饰免疫应答的方法，所述方法包括向患者施用有效量的：
根据权利要求1至9、56和57中任一项所述的IL-2Rβ配体；
根据权利要求10至17、56和57中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物；
根据权利要求18至39、56和57中任一项所述的IL-2Rβγc配体；或
根据权利要求40至57中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物。
65.一种编码多肽的核酸，所述多肽包括：
根据权利要求1至9、56和57中任一项所述的IL-2Rβ配体；
根据权利要求10至17、56和57中任一项所述的IL-2Rβ结合化合物；
根据权利要求18至39、56和57中任一项所述的IL-2Rβγc配体；或
根据权利要求40至57中任一项所述的IL-2Rβγc结合化合物。
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