CN116963748A - 新方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及在个体的组织或器官中扩增调节性T细胞群体的方法，其中所述方法包括施用IL‑2和对所述组织或器官特异性的靶向部分，并且其中所述组织或器官是肺。本发明还涉及根据该方法产生的调节性T细胞群体以及所述群体的体内产生。还提供了包含IL‑2和本文定义的靶向部分的药物组合物以及用于治疗由炎症介导的疾病或病症或用于减轻炎症的方法，该方法包括本文定义的方法或施用本文定义的药物组合物。

Description

新方法
技术领域
本发明涉及扩增个体的组织或器官中的调节性T细胞群体的方法，其中所述方法包括施用IL-2和对所述组织或器官特异的靶向部分，并且其中所述组织或器官是肺。本发明还涉及根据该方法产生的调节性T细胞群体以及所述群体在体内的产生。本发明还提供包含IL-2和本文定义的靶向部分的药物组合物、以及治疗由炎症介导的疾病或病症或用于减轻炎症的方法，所述方法包括实施本文定义的方法或施用本文定义的药物组合物。
背景技术
急性呼吸窘迫综合征(ARDS)可以通过多种感染刺激引发。尽管有多种潜在的触发因素，但在每种情况下，病理过程都会汇集到几个保守的炎症途径上，导致不适当的炎症。例如，肺部严重的1型炎症会导致肺功能丧失，并可能致命。它参与多种非感染性形式，例如慢性阻塞性肺病(COPD)。然而，严重的呼吸系统感染也是由1型炎症驱动的免疫病理。此类感染包括季节性流感、H5N1(禽流感)、H1N1(猪流感)、SARS(严重急性呼吸系统综合症)、MERS(中东呼吸综合症)和COVID-19。对涉及新型呼吸系统病毒的大流行的反应通常包括：开发新疫苗来防止感染、或使用免疫抑制来防止患者的免疫病理学。疫苗的有效性和特异性高，但由于其开发时间长，会有相当大的延迟。相反，免疫抑制疗法使用通用/已知的治疗方法，例如地塞米松等，因此可以较快地被投入使用，但由于其高度的普适性，也很难实现最佳治疗，这是因为全身免疫抑制会阻碍针对感染病毒的健康免疫反应的发展。
因此，非常需要一种疗法，其能够提供一种可以在不知晓病毒的情况下快速部署并防止病理且同时仍然允许抗体产生的方式。
发明概述
根据本发明的第一方面，提供了在有需要的个体的组织或器官中扩增调节性T细胞群体的方法，其中所述方法包括施用IL-2和对所述组织或器官特异的靶向部分，其中所述组织或器官是肺。
根据本发明的另一方面，提供了包含IL-2和对个体的组织或器官特异的靶向部分的药物组合物，其中所述靶向部分对肺具有特异性。
根据本发明的又一方面，提供了治疗由炎症介导的疾病或病症和/或用于减轻炎症的方法，其中所述方法包括如本文所定义的方法或向有需要的个体施用如本文所定义的药物组合物。
附图简述
图1：肺调节性T细胞动力学的联体共生分析(Parabiotic analysis)。
A)对Foxp3Thy1.1CD45.1和Foxp3Thy1.1CD45.2小鼠进行联体共生手术，并在第1、2、4、8和12周时分析大脑和血液CD4 T细胞(n＝12、12、18、16、14)。
B)肺Tregs的最佳拟合曲线，显示CD69-和CD69+群体。
图2：IL-2的局部表达驱动调节性T细胞的肺特异性扩增。
A)在第-14天用他莫昔芬处理野生型同窝出生小鼠和Scgb1a1-ERT2Cre RosaIL2小鼠，以诱导细支气管无纤毛club细胞产生IL-2。使用流式细胞术评估血液、肺、脾、淋巴结和肺引流纵隔淋巴结中CD4 T细胞内Foxp3+细胞的频率。n＝5只小鼠/组。
B)19-21周龄的雄性Scgb1a1-ERT2Cre RosaIL2小鼠，通过口服管饲法，施用三剂0.2mg/克的他莫昔芬。第0天和第12天后，收集器官进行流式分析。Tregs百分比的定量数据在FlowJo中进行门控并使用GraphPad prism进行绘图。所有数据均使用双向方差分析，*P<0.05、**P<0.01和***P<0.001被认为具有显著性。n＝5只动物/组。
C)19-21周龄的雄性Scgb1a1-ERT2Cre RosaIL2小鼠，通过口服管饲法，施用三剂0.2mg/克的他莫昔芬。第0、1、4、7、15、21、29和35天后，处理肺，以用于IL-2的qPCR Taqman分析。首先使用Thermofisher ProQuantum软件制作标准曲线，并使用GraphPad prism绘图，采用外推法得到值。在第7天使用双向方差分析和T检验分析所有数据；*P<0.05、**P<0.01和***P<0.001被认为具有显著性。n＝5只动物/组。
D)还对C中动物的淋巴结进行处理，以用于IL 2的qPCR Taqman分析。使用双向方差分析分析所有数据；*P<0.05、**P<0.01和***P<0.001被认为具有显著性。n＝5只动物/组。
E)19-21周龄的雄性Scgb1a1-ERT2Cre RosaIL2小鼠，通过口服管饲法，施用三剂0.2mg/克的他莫昔芬。第0、1、4、7、15、21、29和35天后，处理肺，以用于流式细胞术分析。使用FlowJo分析数据，并在对Foxp3+、CD4+、CD3+细胞进行门控后获得百分比值，并使用GraphPad prism进行绘图。使用双向方差分析所有数据；*P<0.05、**P<0.01和***P<0.001被认为具有显著性。n＝5只动物/组。
F)也对来自E中动物的淋巴结进行处理以用于流式细胞术分析，并以相同的方式进行分析。
图3：IL-2的局部表达可防止流感诱导的中性粒细胞浸润。
在第-14天用他莫昔芬处理野生型同窝出生小鼠和Scgb1a1-ERT2Cre RosaIL2小鼠，以诱导细支气管无纤毛club细胞产生IL-2。然后用鼻内小鼠流感感染小鼠，并在感染后0、12和21天对小鼠群组进行解剖。使用流式细胞术评估受感染小鼠肺部中的中性粒细胞的频率。n＝5-6只小鼠/组。
图4：鼻内施用AAV6.2-mCC10-IL2导致调节性T细胞(Treg)在肺中的局部扩增。
12周龄的雄性小鼠被施用1011(vg/ml)的AAV6.2-mCC10-IL2或PBS，并在第14天收集器官用于流式细胞术分析。使用FlowJo分析数据，获得百分比值，并使用GraphPad prism制图。使用组间双向方差分析，以分析所有数据；*P<0.05、**P<0.01和***P<0.001被认为具有显著性。n＝5只动物/组。
发明详述
根据本发明的第一方面，提供了在有需要的个体的组织或器官中扩增调节性T细胞群体的方法，其中所述方法包括施用IL-2和对所述组织或器官具有特异性的靶向部分，并且其中所述组织或器官是肺。
在一个实施方案中，本文定义的所述方法包括扩增细胞群体，例如调节性T细胞群体。在进一步的实施方案中，所述细胞群体(例如调节性T细胞群体)的扩增是在有需要的个体的组织或器官中进行的，例如在目标特定组织或器官中进行。
本文中，提及术语“扩增”和“扩增的”或短语“扩增调节性T细胞群体”和“扩增的调节性T细胞群体”，涵盖了对以下细胞群体的提及：比未扩增的群体大的细胞群体、或比未扩增的群体包含更多数量细胞的细胞群体。因此，应当理解，根据本文定义的方法产生的这种“扩增的”群体，比未经历IL-2处理的群体，包含更多数量的细胞。因此，在某些实施方案中，根据本文定义的方法产生的扩增的细胞群体，例如扩增的调节性T细胞群体，与参考细胞群体相比包含更大数量的细胞。在一个实施方案中，参考细胞群体可以是未经历IL-2处理或未施用IL-2的细胞群体。在一个实施方案中，与任何IL-2施用之前的细胞群体相比，扩增的细胞群体包含更多数量的细胞。在进一步的实施方案中，参考细胞群体，可以与根据本文定义的方法产生的扩增细胞群体，位于不同的组织或器官中。在进一步的实施方案中，扩增的细胞群体是个体的组织或器官中的扩增群体，并且与不位于所述目标组织或器官中的细胞群体相比，包含更大数量的细胞。例如，与血液、脾、肝和/或淋巴结中的细胞(特别是调节性T细胞)群体相比，扩增的细胞群体(特别是扩增的调节性T细胞群体)在肺中扩增。
在一个实施方案中，根据本文定义的方法产生的扩增细胞群体，例如扩增的调节性T细胞群体，与未接受或施用过IL-2的细胞群体细胞，包含大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍、至少14倍或更多的群体。在进一步的实施方案中，扩增的细胞群体，与不位于所述目标组织或器官中的细胞群体相比，包含大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍、至少14倍或更多的群体。在一个具体实施方案中，扩增的细胞群体比参考群体大至少2倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少12倍、至少13倍或至少14倍，所述参考群体例如是未经历或施用过IL-2的目标组织或器官中的细胞群体、或不位于目标组织或器官中的细胞群体。在一些实施方案中，扩增的细胞群体中有较大比例的细胞构成群体子集(例如，在组织或器官的T细胞总群体中较大比例的调节性T细胞)。在进一步的实施方案中，扩增的细胞群体在施用后21天时达到最大，即细胞群体在施用后21天时最大扩增。在一些实施方案中，可以在施用后4至35天之间检测扩增的细胞群体，即可以在施用后4至35天之间检测所述细胞群体的扩增。因此，在一个实施方式中，可以在施用后4天检测扩增的细胞群体/细胞群体的扩增。在进一步的实施方案中，可以在施用后35天检测扩增的细胞群体/细胞群体的扩增。在又一个实施方案中，可以在施用后21天检测细胞群体的最大扩增。
因此，应当理解，本文定义的扩增的调节性T细胞群体，可以以依赖于所施用的IL-2的剂量的方式扩增。因此，在一些实施方案中，本文定义的扩增的调节性T细胞群体，与参考群体相比，包含更大的群体，其中增大的倍数是IL-2剂量依赖性的。
在进一步的实施方案中，根据本文定义的方法产生的扩增的调节性T细胞群体，包含具有增加的存活的细胞群体。因此，在一个实施方案中，根据本文定义的方法产生的扩增的调节性T细胞群体，包括增加的存活。在进一步的实施方案中，扩增的调节性T细胞群体包括减少的或降低的细胞死亡。在又一个实施方案中，扩增的调节性T细胞群体包括增加的增殖。因此，在一个实施方案中，由于扩增的调节性T细胞群体具有增加的存活，扩增的调节性T细胞群体大于参考群体(例如未经历IL-2或未施用IL-2的调节性T细胞群体，或不位于目标组织或器官中的细胞群体)。在进一步的实施方案中，由于扩增的调节性T细胞群体中细胞死亡的减少或降低，扩增的调节性T细胞群体大于参考群体。在又一个实施方案中，由于增殖增加，扩增的调节性T细胞群体大于参考群体。在又一个实施方案中，由于增加的存活、降低/减少的细胞死亡和增加的增殖中的一项或多项的组合，扩增的调节性T细胞群体大于参考群体。
应当理解，本文提及的根据本文定义的方法产生的“扩增的群体”，例如“扩增的调节性T细胞群体”，也可以包括激活的细胞群体。本文提及的“扩增”可以包括根据本文定义的方法产生的细胞群体例如调节性T细胞群体的激活。类似地，“扩增”还包括对激活的调节性T细胞群体的扩增，例如在施用IL-2之前已经激活的群体。根据本文定义的方法产生的细胞群体(例如调节性T细胞群体)的这种激活，可以独立于所述细胞群体的扩增，或可以与所述细胞群体的扩增并行。因此，在一个实施方式中，扩增的调节性T细胞群体包含激活的调节性T细胞。在进一步的实施方案中，扩增的调节性T细胞群体是激活的调节性T细胞群体。
在一个替代实施方案中，本文提及的“扩增”或根据本文定义的方法产生的“扩增的群体”，不包括激活所述群体或激活的细胞群体。因此，根据该实施方案，根据本文定义的方法产生的扩增细胞群体，例如扩增的调节性T细胞群体，不包含激活的表型。在进一步的实施方案中，所述扩增的调节性T细胞群体不包含激活的调节性T细胞。因此，在又一个实施方案中，所述扩增的调节性T细胞群体包含尚未经历或施用过IL-2的调节性T细胞群体的表型，例如表面表型。
调节性T细胞(也称为Tregs)是调节免疫系统、维持耐受性和防止自身免疫性疾病的T细胞亚群。它们通常抑制或下调效应T细胞的激活和/或增殖，并已被证明在免疫抑制中有用。因此，调节性T细胞是结合了多种免疫抑制和再生能力的高效细胞，并且使用外源性调节性T细胞作为细胞疗法、或使用刺激或激活或扩增内源性调节性T细胞的外源性因子，是非常有意义的。本发明人已经证明，肺中的调节性T细胞大约每六周再循环一次(图1)，因此修饰该组织的稳态动力学使得可以在肺部扩增这些细胞群体以用于免疫抑制治疗，例如抗炎症治疗。
因此，在一个实施方案中，根据本文定义的方法产生的扩增的调节性T细胞群体，包含增加的抗炎潜力。这种增加的抗炎潜力可以与未扩增的调节性T细胞群体(例如存在于组织或器官中的未扩增的调节性T细胞群体)或与存在于目标组织或器官之外的另一位置的调节性T细胞群体进行比较。在一个实施方案中，扩增的调节性T细胞群体，与所述目标组织或器官中的未扩增的调节性T细胞或来自目标组织或器官以外的位置的调节性T细胞，包含相似的表型。此类表型可以包括表面标志物表型、转录组表型/标签(signature)(例如基因表达标签)、基因和/或蛋白质表达谱和细胞因子表达谱。因此，在一个具体的实施方案中，扩增的调节性T细胞群体包含或保留未扩增的调节性T细胞群体或所述扩增的调节性T细胞群体在扩增之前的抗炎潜力。在进一步的实施方案中，扩增的调节性T细胞群体包含或保留来自目标组织或器官之外的另一位置的调节性T细胞群体的抗炎潜力。
在本文中，短语“在组织或器官中”是指个体中的离散位置，例如在特定的组织或器官中。应当理解，该术语不涉及：在全身或在目标组织或器官之外产生效应，或者对不位于目标组织或器官中的细胞类型或细胞群体产生影响(例如，扩增或激活)。因此，在一个实施方案中，根据本文定义的方法产生的调节性T细胞群体，在特定组织或器官中(即，局部地)受到影响(例如被扩增)。在进一步的实施方案中，仅特定组织或器官中的调节性T细胞群体受到影响(例如被扩增)。在又一个实施方案中，位于目标组织或器官之外或不在目标组织或器官内的调节性T细胞群不受影响(例如被扩增)。因此，在特定实施方案中，全身或外周的调节性T细胞群体不受影响(例如被扩增)。在进一步的实施方案中，淋巴结和/或脾中的调节性T细胞群体不受影响。在更进一步的实施方案中，血液中的调节性T细胞群体不受影响。在又进一步的实施方案中，肝脏中的调节性T细胞群不受影响。
本文定义的组织或器官包括身体或生物体的离散位置。例如，组织或器官可以包括肺。因此，在一个特定的实施方案中，组织或器官是肺。
IL-2是调节性T细胞的关键群体控制因子。与其他T细胞相比，调节性T细胞具有天然的高周转频率，具有快速增殖和高凋亡率。IL-2能够通过诱导抗凋亡蛋白Mcl1，从而降低Bim依赖性的凋亡速率，来增加调节性T细胞的比例(Pierson等人(2013)，doi：https://doi.org/10.1038/ni.2649)。因此，增加IL-2水平可以扩大调节性T细胞群体的规模(Liston和Gray(2014)，doi：https://doi.org/10.1038/nri3605)。在多项临床前研究中，IL-2递送已被证明是一种可以通过扩增调节性T细胞群而有效抗炎的方式，并且正在临床研究中优化IL-2的递送。因此，在肺部，局部递送的IL-2，可通过肺部特异性扩增或增加调节性T细胞的数量，为炎症提供高潜力的治疗，同时不出现全身免疫抑制的有害影响。在治疗呼吸系统感染的情况下，可以理解，这种能力至关重要，因为全身免疫抑制会阻碍身体产生抗体的能力，从而使病毒传播。因此，本发明使得能够在阻断肺部的破坏性炎症的同时允许全身产生抗体。
因此，根据本发明的某些实施方案，本文提供了一种方法，所述方法在有需要的个体的组织或器官中扩增调节性T细胞群体，由此避免泛化的外周或全身性免疫抑制，对于患者，这种泛化的外周或全身性免疫抑制是不可行的，因为这会例如使针对肺部免疫病理学的感染触发因子的抗体产生减少或增加继发感染的风险。
在本文中，“施用”应理解为指，在生物体的离散位置或位点(例如特定组织或器官)处提供IL-2或使IL-2可及。因此，这种施用与本文先前描述的“在组织或器官中”的定义相关联。因此，在一个实施方案中，IL-2的施用包括向特定组织或器官施用或在特定组织或器官中施用。在具体实施方案中，IL-2的施用包括IL-2在特定组织或器官(例如肺)中的表达，即包括IL-2在所述个体的所述组织或器官中的组织或器官特异性表达。在一个实施方案中，施用包括在特定组织或器官(例如肺)中表达编码IL 2的基因。因此，在一个实施方案中，IL-2的施用包括IL-2在所述个体的所述组织或器官中的组织或器官特异性表达。在一个具体实施方案中，IL-2的组织或器官特异性表达在肺中。在一些实施方案中，IL-2的组织或器官特异性表达在施用后15天达到最大。在一些实施方案中，可以在施用后4至35天之间检测IL-2的组织或器官特异性表达。因此，在一个实施方案中，可以在施用后4天检测IL-2的组织或器官特异性表达。在进一步的实施方案中，可以在施用后35天检测IL-2的组织或器官特异性表达。在又一个实施方案中，可以在施用后15天检测IL-2的最大组织或器官特异性表达。在进一步的实施方案中，IL-2的表达在目标组织或器官外部，例如在外周(例如在血液中)不可检测。在又一个实施方案中，在淋巴结和/或脾中检测不到IL-2的表达。在又一个实施方案中，IL-2的表达是局限于特定的目标组织或器官的表达。在进一步的实施方案中，IL-2的表达是组织或器官特异性表达。因此，在特定的实施方案中，IL-2的组织或器官特异性表达由组织或器官特异性启动子驱动。在某些实施方案中，可以在多于一个目标组织或器官中进行IL-2的施用或表达。在一个实施方案中，在一个、两个或更多个相关组织或器官中(例如在肺和呼吸道组织中)进行IL-2的施用或表达。在另一个实施方案中，在一个、两个或更多个被认为不相关的组织或器官中进行IL-2的施用或表达。
此外，在本文中，提及“施用”和“表达”还指，向组织或器官中的细胞群体提供IL-2。在一个实施方案中，这种IL-2的提供可以包括，向目标组织或器官施用蛋白质或肽形式的IL-2、或在目标组织或器官中施用蛋白质或肽形式的IL-2，即，局部施用。在进一步的实施方案中，IL-2的提供包括，在目标组织或器官的细胞中表达IL-2。因此，在一个具体的实施方案中，IL-2的表达包括：目标组织或器官的细胞(例如构成所述组织或器官的那些细胞)表达IL-2。在一些实施方案中，IL-2的表达包括上皮细胞；气道上皮细胞(如杯状细胞、纤毛细胞、club细胞、神经内分泌细胞(神经内分泌体)、基底细胞、中间(parabasal)细胞、浆细胞、刷细胞、具有大量胞浆内膜结合包涵体的特殊类型细胞、无纤毛柱状细胞和化生细胞)；和肺泡细胞(例如1型和2型肺细胞、移行1型和2型肺细胞以及立方形无纤毛细胞)。在一个实施方案中，IL 2的表达包括气道上皮细胞，例如club细胞，和/或肺泡细胞，例如2型肺泡细胞。在一个具体的实施方案中，IL 2的表达包括club细胞。在进一步的实施方案中，IL-2的表达包括在除如下调节性T细胞之外的细胞中表达，所述调节性T细胞构成根据本文定义的方法产生的扩增的调节性T细胞群体。因此，在又一个实施方案中，不在根据本文定义的方法产生的调节性T细胞群体中表达IL-2。
在一个替代实施方案中，IL-2的施用或表达包括，将编码IL-2的外源序列引入组织或器官的细胞中。因此，在一个实施方案中，IL-2的施用或表达包括来自外源序列的表达。在进一步的实施方案中，IL-2的施用或表达包括来自转基因的表达。在又一个实施方案中，所述转基因包含编码IL-2的基因或元件。在一个具体实施方案中，外源序列是IL-2编码序列。在进一步的实施方案中，转基因包含IL-2编码序列或基因。
在一个实施方案中，编码IL-2的外源序列是包含组织或器官特异性启动子的转基因的形式。此类组织或器官特异性启动子是本领域已知的并且包括驱动组织或器官特异性基因表达的启动子。在一个实施方案中，转基因包含组织或器官特异性启动子，其特异性驱动在目标组织或器官中的表达。在进一步的实施方案中，转基因包含组织或器官特异性启动子，其不导致在除了目标组织或器官之外的组织或器官中的表达。因此，在一个实施方案中，组织或器官特异性启动子是肺特异性启动子。在另一个实施方案中，转基因包含在肺细胞中特异性驱动表达的启动子。在另一个实施方案中，转基因包含在如上文所定义的上皮细胞、气道上皮细胞和/或肺泡细胞中特异性驱动表达的启动子。在一个实施方案中，转基因包含在肺中特异性驱动表达的启动子。在一个具体的实施方案中，转基因包含在气道上皮细胞(例如club细胞)和/或肺泡细胞(例如2型肺泡细胞)中特异性驱动表达的启动子。在进一步的实施方案中，转基因包含在club细胞中特异性驱动表达的启动子。在又一个实施方案中，转基因包含表面活性剂蛋白B(SFTPB)启动子。在另一个实施方案中，转基因包含club细胞特异性蛋白(CC10)启动子。
因此，在一个实施方案中，组织或器官特异性启动子是表面活性剂蛋白B(SFTPB)启动子。在另一个实施方案中，组织或器官特异性启动子是club细胞特异性蛋白(CC10)启动子。在一个具体实施方案中，组织或器官特异性启动子是SFTPB启动子并且特异性驱动在club细胞和/或2型肺泡细胞中的表达。在进一步的实施方案中，组织或器官特异性启动子是CC10启动子并且特异性驱动在club细胞中的表达。
在另一个实施方案中，IL-2的施用或表达包括转基因，该转基因包含在外源化合物存在下促进或诱导IL-2表达的元件。此类促进或诱导表达的元件是本领域已知的，包括例如四环素(Tet)诱导系统。Tet诱导系统提供对转录的可逆控制，其利用四环素控制的反式激活因子(tTA)，与位于感兴趣基因/编码区(及其启动子，例如组织特异性启动子)上游的四环素响应元件(TRE)中的四环素操纵子(TetO)序列结合。Tet诱导系统可以是TetOff或TetOn系统。TetOff诱导表达系统(也称为tTA依赖系统)使用tTA蛋白，该蛋白通过将大肠杆菌中发现的四环素阻遏蛋白(TetR)与单纯疱疹病毒中发现的另一种蛋白(VP16)的激活结构域融合而产生。所产生的该tTA在没有四环素的情况下能够结合TRE内的TetO序列，并促进下游基因/编码区的表达。在四环素存在的情况下，tTA与TetO序列的结合被阻止，导致基因表达减少。相反，TetOn系统(也称为rtTA依赖性系统)使用反向Tet阻遏物(rTetR)来创建反向四环素控制的反式激活蛋白(rtTA)，该蛋白依赖于四环素的存在来促进表达。因此，rtTA仅与TRE内的TetO序列结合，并在四环素存在的情况下促进表达。TetOn系统的具体示例包括，但不限于，TetOn Advanced、TetOn 3G和来自Life Technologies的T-REx系统。四环素的衍生物和类似物可以与TetOff或TetOn系统一起使用，并且包括但不限于多西环素。此类衍生物/类似物被认为与四环素相比提供显著的优点，例如在多西环素的情况下增加的稳定性。因此，在某些实施方案中，编码IL-2的外源序列，例如包含组织或器官特异性启动子的转基因，进一步包含四环素响应元件(TRE)。因此，在一个实施方案中，IL-2的施用或表达是四环素依赖性的或四环素诱导型的。在进一步的实施方案中，IL-2的施用或表达包括，将编码反向四环素控制的反式激活因子(rtTA)的外源序列引入组织或器官的细胞中。在一个实施方案中，编码rtTA的外源序列包含组织或器官特异性启动子，即rtTA编码序列在本文公开的组织或器官特异性启动子的控制下表达。因此，在另一个实施方案中，编码rtTA的外源序列包含肺特异性启动子。在又一个实施方案中，rtTA编码序列的表达处于肺特异性启动子的控制之下。在一个具体实施方案中，编码rtTA的外源序列包含在气道上皮细胞(例如club细胞)和/或肺泡细胞(例如2型肺泡细胞)中特异性驱动表达的启动子。在进一步的实施方案中，编码rtTA的外源序列包含表面活性剂蛋白B(SFTPB)启动子。在又一个实施方案中，编码rtTA的外源序列包含club细胞特异性蛋白(CC10)启动子。这种编码rtTA的外源序列可以是与编码IL-2的外源序列分开的序列，例如，它可以与包含组织或器官特异性启动子的IL-2转基因分开。或者，这样的rtTA编码外源序列可以与IL-2编码序列包含在一起，例如可以包含在同一转基因中。因此，在一些实施方案中，IL-2的施用或表达包含TetOn系统。因此，可以理解，在一个实施方案中，IL-2的施用或表达包括施用四环素或四环素的衍生物/类似物，例如多西环素。
使用四环素依赖性或四环素诱导型的IL-2施用或表达提供了另一种水平的控制，允许“打开”或关闭IL-2的施用或表达。可以理解，这种开关在本文描述的方法中是有利的，因为它允许在时间上控制调节性T细胞群体在组织或器官中的扩增。例如，当检测/诊断出肺部炎症，例如1型炎症时，可以通过施用四环素或其衍生物/类似物来“开启”IL-2的表达。或者，可以在感染(例如呼吸系统病毒感染)后“开启”IL-2的表达。当不再检测到炎症(例如1型炎症)或当炎症(例如1型炎症)已经减少时，可以通过去除四环素或其衍生物/类似物来“关闭”IL-2的表达。在认为个体不再处于感染(例如呼吸系统病毒感染)风险中后，也可以“关闭”表达。通过所述四环素依赖性或四环素诱导性的IL-2施用或表达的应用，可以进一步提供剂量依赖性的IL-2表达施用。例如，可以取决于组织或器官中炎症例如1型炎症的水平和/或量，来改变和/或滴定组织或器官中的IL-2施用或表达的水平和/或量。因此，当检测/诊断出肺部炎症，例如1型炎症时，可以通过施用特定剂量的四环素或其衍生物/类似物来“开启”IL-2的表达，并且如果炎症持续存在，则可以增加所述剂量。类似地，如果在最初施用四环素或其衍生物/类似物后炎症减轻，则可以减少所述剂量。
可以理解，在IL-2的施用或表达包含TetOn系统的实施方案中，可能不需要存在组织或器官特异性启动子来控制IL-2的表达。例如，rtTA编码序列的表达可以在组织或器官特异性启动子的控制下，而IL-2的表达在四环素响应元件(TRE)而非组织或器官特异性启动子的控制下。因此，在一个实施方案中，其中IL-2的施用或表达是四环素依赖性的或四环素诱导型的，编码rtTA的外源序列包含肺特异性启动子(例如SFTPB启动子或CC10启动子)，而编码IL-2的外源序列不包含肺特异性启动子。在进一步的实施方案中，其中IL-2的施用或表达是四环素依赖性的或四环素诱导型的，rtTA编码序列的表达在肺特异性启动子(例如SFTPB启动子或CC10启动子)的控制下，而编码IL-2的外源序列的表达不在肺特异性启动子的控制下。
在另一个实施方案中，其中IL-2的施用或表达是四环素依赖性的或四环素诱导型的，编码rtTA的外源序列和编码IL-2的外源序列均包含肺特异性启动子(例如SFTPB启动子或CC10启动子)。在另一个实施方案中，其中IL-2的施用或表达是四环素依赖性的或四环素诱导型的，rtTA编码序列和编码IL-2的外源序列两者的表达均在肺特异性启动子的控制下(例如SFTPB启动子或CC10启动子)。在此类实施方案中，IL-2的表达将受到进一步水平的控制以进一步确保组织或器官特异性施用或表达。
在一个实施方案中，通过转导，例如使用病毒或病毒载体转导，将本文定义的转基因引入目标组织或器官的细胞中。在一个具体实施方案中，转导使用腺相关病毒。因此，在一个实施方案中，IL-2的施用包括转导，例如病毒转导。在进一步的实施方案中，IL-2的施用包括腺相关病毒转导。
在一个实施方案中，本文定义的转基因的转导，利用特异性靶向或感染目标组织或器官的细胞的病毒载体进行。因此，在一个实施方案中，本文定义的转基因的转导，将特异性地靶向或感染目标组织或器官的细胞。根据该实施方案，可以理解，使用本文定义的转基因的病毒载体进行的转导，不靶向或感染调节性T细胞群体。在另一个实施方案中，本文定义的转基因的转导包含病毒载体，该病毒载体能够接近目标组织或器官，并且能够穿过分隔目标组织或器官与生物体的其他组织、器官或其余部分的屏障。因此，在一个实施方案中，转导包含能够特异性靶向或感染肺的病毒载体。在进一步的实施方案中，转导包含能够靶向或感染肺细胞的病毒载体。
在一个实施方案中，转导包括靶向或感染肺的病毒或病毒载体。肺靶向病毒/病毒载体的例子是但不限于，AAV6及其变体和衍生物(例如AAV6.2和AAV6.2FF)。在某些实施方案中，本文定义的转基因包含在病毒载体中，例如腺相关病毒载体(例如AAV6.2)。在进一步的实施方案中，转导包含腺相关病毒变体AAV6及其衍生物，例如AAV6.2和AAV6.2FF。在又一个实施方案中，转导包含AAV6.2病毒载体。在又一个实施方案中，转导包含AAV6.2FF病毒载体。在另一个实施方案中，本文定义的转基因包含在AAV6.2病毒载体中。在进一步的实施方案中，如本文定义的转基因包含在AAV6.2FF病毒载体中。因此，在一个实施方案中，转导和/或病毒载体包含AAV6.2-SFTPB-IL2，其是AAV6的AAV6.2衍生物，其中包含含有IL-2编码序列和肺特异性启动子SFTPB的转基因。在另一个实施方案中，转导和/或病毒载体包含AAV6.2FF-SFTPB-IL2，其是AAV6的AAV6.2FF衍生物，其中包含含有IL-2编码序列和肺特异性启动子SFTPB的转基因。在进一步的实施方案中，转导和/或病毒载体包含AAV6.2-CC10-IL2，其是AAV6的AAV6.2衍生物，其中包含含有IL-2编码序列和肺特异性启动子CC10的转基因。在另一个实施方案中，转导和/或病毒载体包含AAV6.2FF-CC10-IL2，其是AAV6的AAV6.2FF衍生物，其中包含含有IL-2编码序列和肺特异性启动子CC10的转基因。病毒载体可用于将靶序列(例如转基因)整合到宿主细胞基因组(例如目标组织或器官的细胞的基因组)中。因此，在某些实施方案中，转导包括将本文定义的转基因整合到目标组织或器官的细胞的基因组中，从而实现所述转基因在所述组织或器官中的长期表达。病毒载体，例如腺相关病毒载体，也可用于实现稳定或长期表达，而不将靶序列整合到宿主细胞基因组中。因此，在一个实施方案中，转基因和/或靶序列稳定地维持在宿主细胞基因组之外。
本文中，“病毒”和/或“病毒载体”包括非裂解性或溶原性病毒。可以理解，此类病毒实现对细胞(例如目标组织或器官的细胞)的感染，或将转基因引入到细胞中，而不导致所述细胞死亡或破坏。
从本文公开的内容中可以理解，特异性靶向或感染目标组织或器官的细胞的病毒或病毒载体(例如肺特异性病毒或病毒载体)与特异性驱动在目标组织或器官的细胞中表达的启动子的组合，提供了优异的特异性。这种特异性提供了所谓的“双锁”，既限制了转基因靶向或感染的细胞，又限制了转基因表达的细胞。因此，在一个实施方案中，本文定义的组织或器官特异性病毒载体和组织或器官特异性启动子的组合导致：仅目标组织或器官的那些细胞包含本文定义的转基因，并且仅目标组织或器官的那些细胞能够表达所述转基因。在另一个实施方案中，本文定义的组织或器官特异性病毒载体和组织或器官特异性启动子的组合导致：仅目标组织或器官的那些细胞包含IL-2编码基因，并且仅目标组织或器官的那些细胞能够表达所述基因。
在另一个实施方案中，通过本文定义的组织或器官特异性病毒载体和组织或器官特异性启动子与诱导性元件(例如四环素诱导性元件)的组合，仅有目标组织或器官的那些细胞包含本文定义的转基因，并且当施用诱导性元件的激活剂(例如四环素或多西环素)时，只有目标组织或器官的那些细胞能够表达所述转基因。在一个实施方案中，通过本文定义的组织或器官特异性病毒载体和组织或器官特异性启动子与诱导性元件(例如四环素诱导性元件)的组合，只有目标组织或器官的那些细胞包含IL-2编码基因，并且当施用诱导性元件的激活剂(例如四环素或多西环素)时，只有目标组织或器官的那些细胞能够表达所述基因。在进一步的实施方案中，通过所述组合，只有目标组织或器官的那些细胞包含诱导型IL-2编码基因，并且只有目标组织或器官的那些细胞能够表达反向四环素控制的反式激活因子(rtTA)，其中当施用诱导性元件的激活剂(例如四环素或多西环素)时，rtTA导致IL-2的表达。
本文定义的IL-2的施用还可包括将IL-2直接施用至目标组织或器官。直接施用的例子包括直接注射到目标组织或器官中或利用合适的递送装置。此类递送装置是本领域已知的，并且根据本公开，允许在治疗期间(例如长期地或在急性炎性疾病或病症的治疗持续期间)控制地和/或持续地施用IL-2。在施用/递送至肺的情况下，可以利用吸入和/或鼻内递送，例如使用吸入器或雾化器，或通过喷雾包含本文所述的IL-2和/或病毒载体的雾化溶液。
如本文所定义的IL-2施用的持续时间，可以根据待通过本文描述的方法治疗的特定炎性病症或疾病的特征和治疗而改变。例如，IL-2的施用可以是长期的。或者，IL-2的施用可以在疾病或病症的治疗期间，例如在急性炎症病症或感染的治疗中进行。因此，在某些实施方案中，IL-2的施用或表达的持续时间，取决于待治疗的疾病或病症或治疗的持续时间。在一个实施方案中，IL-2的施用或表达是急性的。在另一个实施方案中，IL-2的施用或表达是长期的。
应当理解，IL-2和对组织或器官特异的靶向部分可以组合或共同施用。因此，IL-2的施用可以包括IL-2在本文定义的目标组织或器官中的表达(例如组织或器官特异性表达)，并且可以与对所关注的组织或器官具有特异性的靶向部分组合。此外，IL-2的施用可以包括以蛋白质或肽形式施用IL-2，并且可以与对个体的组织或器官具有特异性的靶向部分组合。
本文中，术语“靶向部分”是指，提供如本文所定义的IL-2的组织或器官特异性施用或表达的任何结构部分。此外，可以理解，所述靶向部分提供如本文所定义的IL-2的局部施用或表达。
因此，在本发明的一个实施方案中，本文定义的方法包括，施用对个体的组织或器官特异的靶向部分。在进一步的实施方案中，对个体的组织或器官特异的靶向部分将IL-2定位于目标组织或器官中或将IL-2定位到目标组织或器官。因此，在一个实施方案中，对个体的组织或器官特异的靶向部分仅将IL-2定位于目标组织或器官中或定位至目标组织或器官。在进一步的实施方案中，对个体的组织或器官特异的靶向部分，阻止IL-2定位至目标组织或器官之外的其他组织或器官，或使IL-2定位于远离非目标组织或器官的其他组织或器官的位置。在另一个实施方案中，靶向部分提供IL-2在目标组织或器官中的表达。因此，在一个实施方案中，对个体的组织或器官特异的靶向部分使得IL-2仅在目标组织或器官中表达。本文中，“在目标组织或器官中”还包括其中所述效应发生在构成所述组织或器官的细胞(例如上皮细胞、气道上皮细胞和/或肺泡细胞)中的情形。
在一个实施方案中，对个体的组织或器官特异的靶向部分是如本文所定义的病毒或病毒载体。在进一步的实施方案中，所述病毒或病毒载体特异性靶向或感染目标组织或器官，或者特异性靶向或感染目标组织或器官的细胞。因此，根据该实施方案，所述对目标组织或器官具有特异性的靶向部分是病毒或病毒载体，其中所述病毒或病毒载体不靶向或感染除目标组织或器官之外的其他组织或器官中的细胞，或者不靶向或感染构成目标组织或器官以外的其他组织或器官的细胞。根据该实施方案，也应当理解，本文定义的对组织或器官具有特异性的所述靶向部分，不靶向或感染调节性T细胞群体。在进一步的实施方案中，本文定义的对个体的组织或器官特异的靶向部分，包含病毒或病毒载体，所述病毒或病毒载体能够接近目标组织或器官，并且能够穿过分隔目标组织或器官与其他组织、器官或个体其他部分的屏障。因此，在一个实施方案中，对组织或器官特异的靶向部分包含能够特异性靶向或感染肺的病毒或病毒载体。在进一步的实施方案中，对组织或器官特异的靶向部分包含能够靶向或感染上皮细胞、气道上皮细胞和/或肺泡细胞的病毒或病毒载体。在一个具体实施方案中，对组织或器官特异的靶向部分包含能够靶向或感染club细胞的病毒或病毒载体。在另一个实施方案中，对组织或器官特异的靶向部分包含能够靶向或感染2型肺泡细胞的病毒或病毒载体。
在一个实施方案中，对组织或器官具有特异性的靶向部分包含腺相关病毒。在进一步的实施方案中，靶向部分是选自以下的腺相关病毒：AAV6及其变体/衍生物，例如AAV6.2和AAV6.2FF。在一个具体实施方案中，对组织或器官特异的靶向部分包含腺相关病毒变体AAV6.2。在另一个实施方案中，对组织或器官特异的靶向部分包含腺相关病毒变体AAV6.2FF。在某些实施方案中，本文定义的转基因包含在对组织或器官特异的靶向部分中，例如腺相关病毒载体中，包含在本文定义的腺相关病毒内。在一个实施方案中，本文定义的转基因包含在选自以下的腺相关病毒中：AAV6及其变体/衍生物，例如AAV6.2和AAV6.2FF。因此，在一个实施方案中，含有IL-2编码序列和肺特异性启动子SFTPB的转基因包含在AAV6衍生物AAV6.2病毒/病毒载体中，并且该病毒/病毒载体是AAV6.2-SFTPB-IL2。在另一个实施方案中，含有IL-2编码序列和肺特异性启动子CC10的转基因包含在AAV6.2病毒/病毒载体中，并且该病毒/病毒载体是AAV6.2-CC10-IL2。在另一个实施方案中，含有IL-2编码序列和肺特异性启动子SFTPB的转基因包含在AAV6衍生物AAV6.2FF病毒/病毒载体中，并且该病毒/病毒载体是AAV6.2FF-SFTPB-IL2。在另一个实施方案中，含有IL-2编码序列和肺特异性启动子CC10的转基因包含在AAV6.2FF病毒/病毒载体中，并且该病毒/病毒载体是AAV6.2FF-CC10-IL2。
根据本发明的另一方面，提供了用于在体内组织或器官中扩增调节性T细胞群体的方法。可以理解，本方面的实施方案可以与本文先前描述的所有实施方案等同且相当。因此，在某些实施方案中，本文描述的术语“个体的”与“体内”同义。
在一个实施方案中，用于在体内组织或器官中扩增调节性T细胞群体的方法包括，施用如本文所述的IL-2。在进一步的实施方案中，用于在体内组织或器官中扩增调节性T细胞群体的方法包括，体内施用对个体的组织或器官特异的靶向部分。在一个实施方案中，IL-2的施用可包括IL-2表达，并与对组织或器官特异的靶向部分在体内组合。在进一步的实施方案中，用于在体内组织或器官中扩增调节性T细胞群体的方法包括，包含IL-2编码基因的病毒或病毒载体。在一个实施方案中，所述病毒或病毒载体能够靶向或感染目标组织或器官。在一个具体实施方案中，所述病毒或病毒载体能够靶向或感染目标组织或器官，特异性靶向或感染目标组织或器官的细胞。在另一个实施方案中，用于在体内组织或器官中扩增调节性T细胞群体的方法包括，包含组织或器官特异性启动子的病毒或病毒载体。因此，在一个具体的实施方案中，用于在体内组织或器官中扩增调节性T细胞群体的方法包括，施用对目标组织或器官特异的靶向部分，其中所述靶向部分是病毒或病毒载体，其特异地靶向或感染肺。在进一步的实施方案中，用于在体内组织或器官中扩增调节性T细胞群体的方法包括，施用对目标组织或器官具有特异性的靶向部分，其中所述靶向部分对上皮细胞、气道上皮细胞和/或肺泡细胞具有特异性。在又一个实施方案中，对目标组织或器官特异的靶向部分，对club细胞和/或2型肺泡细胞特异。在另一个实施方案中，用于在体内组织或器官中扩增调节性T细胞群体的方法包括，施用含有本文定义的转基因的肺特异性病毒或病毒载体，例如施用如本文所定义的AAV6.2-SFTPB-IL2、AAV6.2FF-SFTPB-1L2、AAV6.2-CC10-1L2或AAV6.2FF-CC10-1L2。
根据本发明的一方面，提供了根据本文所述的方法扩增或通过本文所述的方法获得的调节性T细胞群体。因此，在一个实施方案中，提供了扩增的调节性T细胞群体，其已通过施用IL-2和对所述组织或器官特异的靶向部分而在个体的组织或器官中扩增。
药物组合物
根据本发明的一个方面，提供了一种药物组合物，其包含IL-2和对个体的组织或器官特异的靶向部分，其中所述靶向部分对肺具有特异性。
在一个实施方案中，药物组合物包含促进调节性T细胞群体扩增的IL-2。在又一个实施方案中，药物组合物包含对个体的组织或器官特异的靶向部分。在一个实施方案中，对个体的组织或器官特异的靶向部分是病毒或病毒载体，其特异性靶向或感染所述组织或器官的细胞并驱动如本文所述的IL-2的组织或器官特异性表达。因此，根据本发明的此方面，提供了包含组织或器官特异性病毒载体的药物组合物，所述病毒载体在个体的所述组织或器官中导致调节性T细胞群体的扩增。在具体实施方案中，药物组合物特异性地或局部地导致个体的目标组织或器官中的调节性T细胞群体的扩增。
在一个实施方案中，本文定义的药物组合物包含能够穿过分隔目标组织或器官与生物体的其他组织或器官或其余部分的屏障的靶向部分。因此，在一个实施方案中，本文定义的药物组合物包含选自AAV6及其变体/衍生物，例如AAV6.2和AAV6.2FF的腺相关病毒。在进一步的实施方案中，本文定义的药物组合物包含腺相关病毒变体AAV6.2。在又一个实施方案中，本文定义的药物组合物包含腺相关病毒变体AAV6.2FF。在进一步的实施方案中，包含在本文定义的药物组合物中的病毒载体包含编码IL-2的基因，例如转基因。在又一个实施方案中，包含在药物组合物的病毒载体中的转基因进一步包含如本文所定义的组织或器官特异性启动子。
因此，在某些实施方案中，本文定义的药物组合物包含组织或器官特异性病毒或病毒载体，所述病毒或病毒载体能够靶向或感染目标组织或器官的细胞，并包含IL-2编码基因，其中所述IL-2编码基因的表达由组织或器官特异性启动子驱动。在一个具体实施方案中，本文定义的药物组合物包含病毒载体，例如腺相关病毒(例如AAV6及其变体/衍生物，例如AAV6.2和AAV6.2FF)，其特异性靶向或感染肺，例如肺细胞(例如上皮细胞、气道上皮细胞和/或肺泡细胞)，其包含IL-2编码基因，所述IL-2编码基因的表达由组织或器官特异性启动子驱动。在进一步的实施方案中，本文定义的药物组合物包含腺相关病毒AAV6.2，其包含IL-2编码基因，其中所述IL-2编码基因由SFTPB启动子驱动在肺或肺细胞中局部表达。在另一个实施方案中，药物组合物包含腺相关病毒AAV6.2FF，其包含IL-2编码基因，其中所述IL-2编码基因由SFTPB启动子驱动在肺或肺细胞中局部表达。在进一步的实施方案中，药物组合物包含腺相关病毒AAV6.2，其包含IL-2编码基因，其中所述IL-2编码基因由CC10启动子驱动在肺或肺细胞中局部表达。在又一个实施方案中，药物组合物包含腺相关病毒AAV6.2FF，其包含IL-2编码基因，其中所述IL-2编码基因由CC10启动子驱动在肺或肺细胞中局部表达。因此，在一个实施方案中，药物组合物包含AAV6.2-SFTPB-IL2。在另一个实施方案中，药物组合物包含AAV6.2FF-SFTPB-IL2。在进一步的实施方案中，药物组合物包含AAV6.2-CC10-IL2。在又一个实施方案中，药物组合物包含AAV6.2FF-CC10-IL2。
根据一些实施方案，除了本文定义的组织或器官特异性病毒或病毒载体之外，药物组合物还包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。
一般而言，本发明的药物组合物将与药理学上合适的赋形剂或载体一起使用。通常，这些赋形剂或载体包括水性或醇/水溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和/或缓冲介质。肠胃外载体包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠以及乳酸林格氏液。如果需要将包含本文定义的对组织或器官特异的靶向部分的组合物保持在离散位置(例如在目标组织或器官内)，则合适的生理学可接受的助剂可以选自：增稠剂，例如羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、明胶和藻酸盐。静脉内运载体包括液体和营养补充剂以及电解质补充剂，例如基于林格氏葡萄糖的那些。适于通过鼻内施用、吸入或使用喷雾器递送药物组合物的赋形剂、载体和运载体是已知的，并且可以理解其尤其可以用于本文定义的药物组合物。还可以存在防腐剂和其他添加剂，例如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体(Mack(1982)Remington's Pharmaceutical Sciences，第16版)。
治疗用途和方法
从本文中呈现的本公开内容，应当理解，本发明的扩增调节性T细胞群体的方法、药物组合物和治疗方法，尤其可用于治疗和/或改善由炎症介导的疾病或病症和/或用于减轻炎症。还应当理解，根据本文提出的方法和公开内容而扩增的调节性T细胞群体也可以用于治疗和/或改善由炎症介导的疾病或病症和/或用于减轻炎症。
因此，根据本发明的一个方面，提供了一种扩增个体的组织或器官中的调节性T细胞群体用于治疗和/或改善由炎症介导的疾病或病症的方法，其中所述组织或器官是肺。在本发明的另一个方面，提供了扩增个体的组织或器官中的调节性T细胞群体用于减轻炎症的方法，其中所述组织或器官是肺。在本发明的另一方面，提供了扩增个体的组织或器官中的调节性T细胞群体用于治疗和/或改善自身免疫性疾病的方法，其中所述组织或器官是肺。
在本发明的另一个方面，提供了根据本文定义的方法产生的在个体的组织或器官中扩增的调节性T细胞群体用于治疗和/或改善由炎症介导的疾病或病症或用于减少炎症。此类疾病或病症可包括炎性病症、自身免疫性疾病和/或与移植相关的疾病，例如移植排斥或移植物抗宿主病。在一个实施方案中，根据本文定义的方法产生的在个体的组织或器官中扩增的调节性T细胞群体，已经通过施用IL-2和对所述组织或器官特异的靶向部分而扩增。在另一个实施方案中，根据本文定义的方法产生的在个体的组织或器官中扩增的调节性T细胞群体已经通过如本文定义的IL-2的组织或器官特异性表达而扩增。在另一个实施方案中，在个体的组织或器官中扩增的调节性T细胞群体已通过由诱导性元件(例如四环素诱导性元件)促进或诱导的IL-2组织或器官特异性表达而扩增。在另一个实施方案中，根据本文定义的方法产生的在个体的组织或器官中扩增的调节性T细胞群体用于治疗和/或改善肺疾病或病症。在一个实施方案中，根据本文定义的方法产生的在个体的组织或器官中扩增的调节性T细胞群体用于治疗和/或改善肺。在又一个实施方案中，根据本文定义的方法产生的在个体的组织或器官中扩增的调节性T细胞群体用于治疗和/或改善1型炎症。在某些实施方案中，根据本文定义的方法产生的在个体的组织或器官中扩增的调节性T细胞群体用于治疗和/或改善肺部炎症。因此，根据一个实施方案，本文定义的炎症是肺部炎症。在进一步的实施方案中，肺部炎症是由于呼吸系统疾病或病症所致。因此，在一个实施方案中，肺部炎症是由于呼吸系统疾病或病症所致。在进一步的实施方案中，根据本文定义的方法产生的在个体的组织或器官中扩增的调节性T细胞群体用于治疗和/或改善肺部炎症，其中所述炎症是由呼吸系统感染所致或所述呼吸系统疾病或病症是呼吸系统感染，例如流感、冠状病毒或新出现的病毒的感染。在一个替代实施方案中，所述炎症由非感染性疾病或病症引起，或者所述呼吸系统疾病或病症是非感染性的，例如慢性阻塞性肺病(COPD)。另一个实例是自身免疫疾病或病症和/或其中所述炎症是由自身免疫疾病或病症引起的。
根据本发明的另一方面，提供了治疗由炎症介导的疾病或病症和/或用于减轻炎症的方法，其中所述方法包括如本文所定义的方法、或者包括向有需要的个体施用药物组合物，其中所述药物组合物包含IL-2和对本文定义的个体的组织或器官特异的靶向部分。在一个实施方案中，所述治疗方法包括向有需要的个体施用本文定义的包含IL-2编码基因的病毒或病毒载体。在一个实施方案中，本文定义的治疗方法包括向有需要的个体施用病毒或病毒载体，所述病毒或病毒载体特异性靶向或感染受炎症介导的疾病或病症影响的或受炎症影响的组织或器官。在某些实施方案中，本文定义的治疗方法进一步包括向有需要的个体施用包含IL-2编码基因的病毒或病毒载体，其中所述IL-2的表达由组织或器官特异性启动子驱动。在另一个实施方案中，本文定义的治疗方法包括向有需要的个体施用包含IL-2编码基因的病毒或病毒载体，其中所述IL-2的表达由组织或器官特异性启动子和诱导性元件例如四环素诱导性元件驱动。在一个替代的实施方案中，所述治疗方法包括向个体施用包含IL-2编码基因的病毒或病毒载体，其中所述IL-2的表达在组织或器官特异性启动子的控制下并由诱导性元件(例如四环素诱导性元件)驱动。在进一步的实施方案中，本文定义的治疗方法包括向有需要的个体施用包含IL-2编码基因的病毒或病毒载体，其中所述IL-2的表达由组织或器官特异性启动子驱动，例如施用AAV6.2-SFTPB-IL2、AAV6.2FF-SFTPB-IL2、AAV6.2-CC10-IL2或AAV6.2FF-CC10-IL2。
在某些实施方案中，所述有需要的个体患有由炎症介导的疾病或病症。在进一步的实施方案中，有需要的个体患有炎症。在又进一步的实施方案中，有需要的个体患有1型炎症。在其他实施方案中，有需要的个体患有自身免疫疾病或病症。在一个实施方案中，所述疾病或病症是肺疾病或病症。在进一步的实施方案中，所述疾病或病症是呼吸系统疾病或病症。在进一步的实施方案中，所述炎症或呼吸系统疾病或病症包括1型炎症。在另一个实施方案中，所述炎症由呼吸系统感染引起，或者呼吸系统疾病或病症是呼吸系统感染，例如感染流感或冠状病毒、或新出现的呼吸系统病毒。在一个替代实施方案中，所述炎症由非感染性疾病或病症引起，或者所述呼吸系统疾病或病症是非感染性的，例如慢性阻塞性肺病(COPD)。
实施例
实施例1：用于计算稳态群体交换的联体共生研究
联体共生研究允许计算稳态群体交换。通过Foxp3Thy1.1CD45.1小鼠与Foxp3Thy1.1CD45.2小鼠的联体共生以及在五个连续时间点的高维流式细胞术分析(图1A)，可以监测Tregs的血液和肺组织正常化的动力学。与血液在几天内恢复正常不同，交换速率计算确定了CD69-CD4 T细胞的中位肺停留时间约为2-3周，而CD69+对应物的中位肺停留时间约为7周(图1B)。
实施例2：用于肺特异性调节性T细胞扩增的原理验证的转基因小鼠模型
基于约7周的肺停留时间，推断肺驻留的调节性T细胞群体可以通过局部提供IL-2来扩大。为了测试这种可能性，开发了用于IL-2表达的遗传开关，其中IL-2只能在肺组织中被打开。使用组成型Rosa26启动子和floxed-stop表达系统，创建了一个通过Cre表达来诱导细胞谱系特异性IL-2表达的系统。使用弱的内源性Rosa26启动子来确保IL-2表达保持在生理水平；事实上，该系统中的转基因IL-2表达仅为常规CD4 T细胞的天然IL-2表达水平的约5％(数据未显示)。为了诱导肺特异性表达，将该转基因与Scgb1a1-ERT2Cre转基因小鼠系杂交，从而允许在细支气管无纤毛club细胞中实现他莫昔芬诱导的重组。Scgb1a1-ERT2CreRosaIL2小鼠用他莫昔芬处理，并评估调节性T细胞数量，观察到该群体的肺特异性扩增(图2A和2B)。血液、次级淋巴器官或其他非肺组织中，没有观察到调节性T细胞群体有重大变化(图2A和2B)。
为了确定肺中IL-2表达的动态，在施用他莫昔芬0、1、4、7、15、21、29和35天后，从Scgb1a1-ERT2Cre RosaIL2小鼠中取出淋巴结组织，并通过定量PCR(qPCR)进行分析。数据显示在图2C和2D中，证明与同窝出生对照小鼠相比，Scgb1a1-ERT2Cre RosaIL2小鼠中IL-2的表达具有肺特异性(图2C)。从施用后第4天开始检测表达，并在分析的最后一天，即第35天仍可检测到表达。表达峰值出现在他莫昔芬施用后第15天。与同窝出生对照小鼠相比，Scgb1a1-ERT2Cre RosaIL2小鼠淋巴结中IL-2表达没有显着差异(图2D)。
图2E表明，在肺特异性IL-2表达后第21天，在肺中观察到调节性T细胞的最大增加。从他莫昔芬给药后第4天开始，检测到肺部中Treg的比例增加，并且在分析的最后一天(第35天)与同窝出生对照相比仍然有升高。这与图2C中看到的IL 2表达动态相关联，其中细胞数量出现预计的稍微延迟。在整个时间过程中，在施用他莫昔芬的小鼠的淋巴结中没有观察到Treg百分比的显著变化(图2F)。
该数据表明，局部提供IL-2能够特异性扩增肺的调节性T细胞群体，而不出现外周数量扩增，并且IL-2可以在肺局部表达，而不在外周组织中，例如在淋巴结中表达。
实施例3：肺部扩增的调节性T细胞减少流感感染期间的炎症浸润
为了评估肺特异性调节性T细胞扩增在呼吸系统感染中提供的保护作用，Scgb1a1-ERT2Cre RosaIL2小鼠通过鼻内途径感染小鼠流感。与感染后表现出肺部炎症中性粒细胞浸润慢性增加的野生型小鼠不同，Scgb1a1-ERT2Cre RosaIL2小鼠表现出疾病规模和持续时间的减少(图3)。
这些结果表明，肺靶向性IL-2施用/递送有减轻呼吸系统感染的免疫病理学的潜力。与上述显示调节性T细胞的肺特异性扩增的数据一起，这表明可以在不增加全身调节性T细胞负担的情况下减少免疫病理学的潜力。
实施例4：AAV6.2-mCC10-IL2的鼻内施用导致调节性T细胞在肺中的局部扩增
为了测试使用病毒载体特异性和局部递送/表达IL-2的能力，给小鼠鼻内施用如上文所述的AAV6.2-mCC10-IL2或对照PBS，并在施用后14天分析肺中的免疫细胞。与给予对照PBS的小鼠相比，给予鼻内AAV6.2-mCC10-IL2的小鼠显示肺中Tregs的比例显著增加(图4)。这种增加在其他组织(例如淋巴结)或外周/血液中没有观察到。
因此，该数据表明，IL-2可以使用AAV6.2等病毒载体局部递送至肺部，从而导致肺部特异的Treg群体扩增。这种肺特异性扩增与肺靶向部分和肺特异性启动子CC10两者的使用是相符的。

Claims (23)

1.一种在有需要的个体的组织或器官中扩增调节性T细胞群体的方法，其中所述方法包括施用IL-2和对所述组织或器官特异性的靶向部分，并且其中所述组织或器官是肺。
2.权利要求1的方法，其中IL-2的施用包括IL-2在所述个体的所述组织或器官中的组织或器官特异性表达。
3.权利要求2的方法，其中IL-2的组织或器官特异性表达在肺中。
4.权利要求2或权利要求3的方法，其中IL-2的组织或器官特异性表达由组织或器官特异性启动子驱动。
5.权利要求4的方法，其中所述组织或器官特异性启动子是肺特异性启动子，例如表面活性剂蛋白B(SFTPB)启动子或club细胞特异性蛋白(CC10)启动子。
6.权利要求2至5中任一项的方法，其中所述IL-2的组织或器官特异性表达包含在外源化合物存在下促进或诱导IL-2表达的诱导性元件。
7.权利要求6的方法，其中所述诱导性元件是四环素依赖性元件或四环素诱导性元件，例如四环素响应元件(TRE)。
8.权利要求7的方法，其中IL-2的组织或器官特异性表达包括施用四环素或四环素的衍生物/类似物，例如多西环素(doxycycline)。
9.权利要求1至8中任一项的方法，其中IL-2在肺中的施用或IL-2在肺中的组织或器官特异性表达包含外源IL-2编码序列。
10.权利要求9的方法，其中所述外源IL-2编码序列进一步包含编码反向四环素控制反式激活因子(rtTA)的序列。
11.权利要求1至10中任一项的方法，其中所述肺特异性靶向部分包含病毒载体。
12.权利要求11的方法，其中所述病毒载体是选自AAV6及其变体和衍生物的腺相关病毒，特别是AAV6.2和AAV6.2FF。
13.权利要求11的方法，其中所述病毒载体是AAV6.2或AAV6.2FF。
14.一种药物组合物，其包含IL-2和对个体的组织或器官特异性的靶向部分，其中所述靶向部分对肺具有特异性。
15.权利要求14的药物组合物，其中所述肺特异性靶向部分包含病毒载体。
16.权利要求15的药物组合物，其中所述病毒载体是选自AAV6及其变体和衍生物的腺相关病毒，特别是AAV6.2或AAV6.2FF。
17.权利要求14至16中任一项的药物组合物用于治疗由炎症介导的疾病或病症和/或用于减轻炎症。
18.一种治疗由炎症介导的疾病或病症和/或用于减轻炎症的方法，其中所述方法包括权利要求1至13中任一项所述的方法、或向有需要的个体施用根据权利要求14至16中任一项所述的药物组合物。
19.权利要求17所述的药物组合物的用途或权利要求18所述的方法，其中所述炎症是肺部炎症。
20.权利要求17所述的药物组合物的用途或权利要求18所述的方法，其中所述疾病或病症是呼吸系统疾病或病症。
21.权利要求19或权利要求20所述的药物组合物用途或方法，其中所述炎症或呼吸系统疾病或病症包括1型炎症。
22.权利要求19至21中任一项所述的药物组合物用途或方法，其中所述炎症由呼吸系统感染引起，或者所述呼吸系统疾病或病症是呼吸系统感染，例如感染流感、冠状病毒或新出现的病毒。
23.权利要求19至21中任一项所述的药物组合物用途或方法，其中所述炎症由非感染性疾病或病症引起，或者所述呼吸系统疾病或病症是非感染性的，例如慢性阻塞性肺病(COPD)。
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