CN116867492A - 使用4-氨基-n-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺治疗肿瘤的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及治疗患有具有RET基因异常的癌症的患者的组合物和方法，其包括向(例如)患有非小细胞肺癌(NSCLC)并且还可以患有脑和/或脑膜转移或另一种实体瘤的患者施用HM06/TAS0953；其中向所述患者施用有效量的HM06/TAS0953，其中所述HM06/TAS0953可以配制成组合物并且以单一剂量或多剂量口服施用；并且其中所述患者先前可以接受另一种RET选择性抑制剂或多激酶抑制剂和/或已出现对另一种RET选择性抑制剂或多激酶抑制剂的耐药性。

Description

使用4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)- 6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-D]嘧啶-5-羧酰 胺治疗肿瘤的方法

相关申请

本发明申请主张2020年11月20日提交的美国临时专利申请No.63/116,282；和2021年8月5日提交的美国临时专利申请No.63/229,626的优先权；以上每项专利申请出于任何目的以其全部内容作为参考并入本文。

技术领域

本发明申请涉及治疗患有具有RET基因异常的癌症的患者的组合物和方法，其包括施用HM06。

背景技术

受体酪氨酸激酶(RTK)在多种细胞过程，包括生长、运动性、分化和代谢中起重要作用。照此，RTK信号转导的调控异常会导致各种各样的人类疾病，如癌症。在编码RTK，如EGFR、HER2/ErbB2、MET和RET(转染期间重排)的基因中存在多种改变。RET是一些组织和细胞类型的正常发育、成熟和维持所需的单次跨膜受体酪氨酸激酶。(Airaksinen MS等人,Nat Rev Neurosci.2002,3(5):383-394；Alberti L等人,J Cell Physiol.2003,195(2):168-186)。经由家族性和偶发癌症——例如，甲状腺癌(乳头状甲状腺癌/甲状腺髓样癌)和肺癌，如非小细胞肺癌(NSCLC)中的那些中的致癌突变发生RET激活。RET最近还涉及乳腺和胰腺肿瘤等的进展。(Mulligan LM,Nat Rev Cancer.2014,14(3):173-86)。RET基因异常还伴随脑和/或脑膜转移(leptomeningeal metastases)发生。RET-重排的晚期NSCLC患者可以具有中枢神经系统(CNS)转移。

已发现当通过基因异常，如染色体重排(RET基因融合)、点突变、拷贝数增加、过表达或者配体诱导的激活被激活时，RET基因作为致癌驱动因子(oncogenic driver)。导致细胞增殖、迁移和分化的激活的下游途径包括RAS/MEK/ERK、P13K/AKT、JAK/STAT、p38、MAPK和蛋白激酶C途径。RET激酶结构域部分在融合中保留，从而保持下游胞内激酶活性完整。RET基因融合可以发生在NSCLC(发病率1-2％)、乳头状甲状腺癌(PTC)、结肠直肠癌(例如，CCDC6-RET融合)和乳腺癌(例如，ERC1-RET融合)中。在甲状腺髓样癌(MTC)，包括多发性内分泌瘤2A(MEN2A)、家族性甲状腺髓样癌(FMTC)和MEN2B的多种遗传形式中发生了RET基因点突变。在偶发MTC中，在多至50％的患者中鉴别了RET突变。在NSCLC、乳腺癌、胰腺癌和胶质母细胞瘤中发生了RET基因拷贝数增加。(Ferrara R等人,J Thorac Oncol.2017,13(1):27-45；Mulligan LM,Nat Rev Cancer.2014,14(3):173-86；Mulligan LM,FrontPhysiol.2019,9:1873)。

RET基因融合是NSCLC中的新型致癌驱动因子。在多种情况下，NSCLC中的RET融合与EGFR、KRAS、ALK、HER2和BRAF中的突变互相排斥，表明RET融合是NSCLC中的独立致癌驱动因子。首先在2011年后期发现了这些复发性基因融合，并且此后被一些独立研究者确认。(Ju YS等人,Genome Res.2012,22(3):436-45；Suehara Y等人,Clin Cancer Res.2012,18(24):6599-608)。所述融合是致癌性的，例如，当在Ba/F3和NIH-3T3细胞中表达时，并且这些细胞可以对多种RET抑制剂，包括索拉非尼、舒尼替尼和凡德他尼获得敏感性。(Lipson D等人,Nat Med.2012,18(3):382-4；Takeuchi K等人,Nat Med.2012,18(3):378-81)。

对RET受体酪氨酸激酶具有活性的多激酶抑制剂(MKI)，如卡博替尼、凡德他尼和乐伐替尼，已证实在少数患有髓样甲状腺癌和患有RET-融合NSCLC的患者中具有有限效力。(Drilon A等人,Cancer Discov.2013,3(6):630-5；Drilon A等人,Lancet Oncol.2016,17(12):1653-60；Drilon A等人,Cancer Discov.2019,9(3):384-95)。通过这些MKI所实现的整体临床益处的大小可以低于具有不同NSCLC分子亚型的患者中的靶向疗法的结局。此外，通过由非RET激酶，如VEGFR2的更有效抑制所造成的严重毒性的观察结果，可以妨碍风险/收益谱。(Ferrara R等人,J Thorac Oncol.2017,13(1):27-45)。

US FDA在2020年批准了两种选择性RET抑制剂塞尔帕替尼(selpercatinib)(LOXO-292)(NCT03157128)和普雷西替尼(pralsetinib)(BLU-667)(NCT03037385)用于治疗患有转移性RET融合-阳性非小细胞肺癌的成年患者。(Wirth L等人,Ann Oncol.2019,30(Suppl 5):v933；Drilon A等人,J Thorac Oncol.2019,14(10):S6–S7)。在2018年12月和2019年11月，选择性RET抑制剂BOS-172738和TPX-0046进入临床阶段。(分别为NCT03780517和NCT04161391)。这些RET-特异性药物尚未在耐受多激酶抑制剂，如卡博替尼、凡德他尼和RXDX-105的样品或动物模型中广泛测试。

仍不清楚这些RET-特异性抑制剂对转移至脑的肺癌的有效性情况。CNS反应的持续时间以及对延迟脑转移发生的影响仍是未知的。通常，包括脑在内的CNS受血脑屏障(BBB)保护，血脑屏障是包围CNS的保护性内皮组织，它是高分子量治疗剂和诊断试剂向CNS的全身递送的主要障碍。部分由于广泛且不能渗透的BBB，用于治疗神经障碍的药物，如(例如)大型生物治疗药物或甚至具有低脑渗透的低分子量药物的脑渗透是有限的。

具有RET异常的患者患有具有高度未满足的医学需求的罕见病。尽管通过引入新型靶向疗法产生了临床改善，但是许多患者最终会复发。疾病进展的患者具有有限的治疗选择；因此，仍需要用于治疗复发性患者的新型试剂。此外，对于晚期NSCLC患者中RET-重排的CNS转移中的频率、反应性和整体结局可获得的信息有限。涉及这些患者的CNS的频率在诊断时为25％，但是终生患病率可以达到几乎一半。已在用多种多激酶抑制剂治疗的患者中报道了低颅内反应。(Drilon AE等人,J Clin Oncol.2017,35(15_Suppl):9069；Gautschi O等人,J Clin Oncol.2017,35(13):1403-10)。

因此，需要能够克服CNS复发且具有良好的耐药谱的新型RET抑制剂的可用性。有效且选择性RET抑制剂的可用性还可以为未用RET靶向试剂治疗的患者以及具有耐药突变的患者提供临床益处。高CNS渗透性还可以代表具有脑转移或脑膜疾病的NSCLC患者中的显著临床改善。

在本文中被称为“HM06”或“TAS0953/HM06”或“HM06/TAS0953”的RET-特异性抑制剂正在临床开发。HM06/TAS0953是RET磷酸化的有效且高度选择性的抑制剂。HM06/TAS0953在临床前模型中的抗肿瘤效力支持了这种选择性RET抑制剂用于临床应用的治疗兴趣。HM06/TAS0953抑制来源于从未被RET抑制剂治疗的患者样品的具有RET重排的肺癌细胞系的生长。结果显示HM06/TAS0953在抑制具有RET融合的细胞系的生长方面比RET多激酶抑制剂更有效。还对来源于耐受不同RET多激酶化合物的患者样品的细胞系测试了HM06/TAS0953。结果表明HM06/TAS0953还对耐受不同RET多激酶抑制剂且对卡博替尼、RXDX-105和凡德他尼的抑制作用是难治的细胞系有效。

本文所提供的其它临床前数据显示HM06/TAS0953对实体瘤异种移植，包括在肺癌向脑转移的原位异种移植模型中的实体瘤显示出抑制活性。这些数据表明HM06/TAS0953跨过并进入脑并且对脑中具有RET基因异常的肿瘤有效。

HM06/TAS0953可以提供潜在缺少由非RET激酶抑制所产生的不良反应的临床益处。例如，HM06/TAS0953可以为具有脑转移和/或脑膜疾病的NSCLC患者提供改善的治疗和疾病管理选项。另外，HM06/TAS0953可以对耐受其它RET-激酶或多激酶抑制剂的患者(例如，它们已对其它药物进展或出现不耐受性)有益。考虑到具有RET基因异常的肿瘤患者的有限数目以及具有高度未满足的医学需要的疾病的罕见性，患者可以受益于HM06/TAS0953的治疗。

发明概述

根据本发明，提供了治疗患有具有RET基因异常的癌症的患者的组合物和方法，其包括施用HM06/TAS0953。

本发明公开提供了治疗患有具有RET基因异常的非小细胞肺癌(NSCLC)的人患者的方法，其包括向所述人患者施用包含4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺的组合物，其中向所述人患者施用等价于约40mg至约3000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。

本发明公开还提供了治疗患有具有RET基因异常的局部晚期或转移性非小细胞肺癌(NSCLC)的人患者的方法，其包括向所述人患者施用包含4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺的组合物，其中向所述人患者施用等价于约40mg至约3000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。

此外，本发明公开提供了治疗患有具有RET基因异常的转移性非小细胞肺癌(NSCLC)且伴有脑和/或脑膜转移的人患者的方法，其包括向所述人患者施用包含4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺的组合物，其中向所述人患者施用有效量的4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺。

本发明公开提供了治疗患有具有RET基因异常的实体瘤的人患者的方法，其包括向所述人患者施用包含4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺的组合物，其中向所述人患者施用等价于约40mg至约3000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。

本发明公开还提供了治疗患有具有RET基因异常的实体瘤的人患者的方法，其包括向所述人患者施用包含4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺的组合物，其中所述RET基因异常包括RET蛋白的溶剂前沿突变。

本发明公开还提供了治疗患有具有RET基因异常的实体瘤且伴有脑和/或脑膜转移的人患者的方法，其包括向所述人患者施用包含4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺的组合物，其中向所述人患者施用有效量的4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺。

在一些实施方式中，所述有效量是等价于约40mg至约3000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。

在一些实施方式中，所述脑和/或脑膜转移是无症状的。

在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约150mg至约640mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约160mg至约640mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约320mg至约640mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约480mg至约640mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约640mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。

在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约480mg至约3000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约480mg至约2000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约480mg至约1500mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约480mg至约1280mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约480mg至约1000mg4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约640mg至约3000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约640mg至约2000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约640mg至约1500mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约640mg至约1280mg4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约640mg至约1000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约3000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约2000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约1500mg4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约1280mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约1000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。

在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约150mg至约500mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约160mg至约500mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约150mg或约160mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。

在一些实施方式中，口服施用所述组合物。在一些实施方式中，作为单一片剂或多个片剂口服施用所述组合物。在一些实施方式中，每个片剂包含等价于约10或约50mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

在一些实施方式中，所述组合物包含4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺的二盐酸盐。

在一些实施方式中，所述组合物还包含柠檬酸、微晶纤维素、乳糖、聚乙烯N-吡咯烷酮、月桂基硫酸钠和/或甘油山嵛酸酯。

在一些实施方式中，每天施用一次(QD)或者每天施用两次(BID)所述组合物。在一些实施方式中，每天施用两次(BID)所述组合物。

在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约160至约1500mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天两次(BID)的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约160至约1000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天两次(BID)的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约160至约750mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天两次(BID)的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约160至约640mg4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天两次(BID)的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约160至约500mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天两次(BID)的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约160至约320mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天两次(BID)的剂量。

在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约320mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天两次(BID)的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约500mg4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天两次(BID)的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约640mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天两次(BID)的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约750mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天两次(BID)的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约1000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天两次(BID)的剂量。在一些实施方式中，向所述人患者施用等价于约1500mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天两次(BID)的剂量。

在一些实施方式中，所述剂量对于体重大于50kg的患者和体重小于50kg的患者一样。

在一些实施方式中，在至少一个21天治疗周期中施用所述组合物。

在一些实施方式中，所述RET基因异常包括RET基因融合、点突变、缺失突变、RET基因拷贝数增加、其任何一种或多种的过表达和RET基因的过表达中的至少一种。在一些实施方式中，所述RET基因异常包括RET基因融合。在一些实施方式中，所述RET基因异常包括RET基因与CCDC6、KIF5B或TRIM33的融合。

在一些实施方式中，所述RET基因异常包括RET蛋白的耐药突变。在一些实施方式中，所述RET基因异常包括RET蛋白的溶剂前沿突变和/或RET蛋白的铰链区中的突变。在一些实施方式中，所述RET基因异常包括RET蛋白在氨基酸残基730、736、760、772、804、806、807、808、809、810和/或883处的突变。在一些实施方式中，所述RET基因异常包括RET蛋白在氨基酸残基804、806、807、808、809和/或810处的突变。在一些实施方式中，所述RET基因异常包括RET蛋白在氨基酸残基810处的突变。在一些实施方式中，RET基因异常包括包含下列突变的RET蛋白的突变：a)V804X突变，其中X是除缬氨酸或谷氨酸以外的任何氨基酸；b)Y806X突变，其中X是除酪氨酸以外的任何氨基酸；c)A807X突变，其中X是除丙氨酸以外的任何氨基酸；d)K808X突变，其中X是除丙氨酸以外的任何氨基酸；e)Y809X突变，其中X是除酪氨酸以外的任何氨基酸；和/或f)G810X突变，其中X是除甘氨酸以外的任何氨基酸。在一些实施方式中，RET基因异常包括包含下列突变的RET蛋白的突变：a)L730Q或L730R突变；b)G736A突变；c)L760Q突变；d)L772M突变；e)V804L或V804M突变；f)Y806C、Y806S、Y806H或Y806N突变；g)G810R、G810S、G810C、G810V、G810D或G810A；和/或A883V突变。在一些实施方式中，RET基因异常包括RET蛋白的突变，其包括：a)V804L或V804M突变；b)Y806C、Y806S、Y806H或Y806N突变；和/或c)G810R、G810S、G810C、G810V、G810D或G810A突变。在一些实施方式中，RET基因异常包括RET蛋白的G810R、G810S、G810C、G810V、G810D或G810A突变。在一些实施方式中，RET基因异常包括RET蛋白的G810R突变。

在一些实施方式中，所述癌症或所述肿瘤耐受至少一种多激酶抑制剂。在一些实施方式中，所述癌症或所述肿瘤耐受至少一种RET选择性抑制剂。在一些实施方式中，所述癌症或所述肿瘤不耐受4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺并且耐受至少一种其它RET选择性抑制剂。在一些实施方式中，所述癌症或所述肿瘤耐受塞尔帕替尼(selpercatinib)和/或普雷西替尼(pralsetinib)。在一些实施方式中，所述癌症或所述肿瘤包括对塞尔帕替尼(selpercatinib)和/或普雷西替尼(pralsetinib)耐受的细胞。

在一些实施方式中，所述人患者先前接受了对于所述癌症或所述肿瘤的在先治疗。在一些实施方式中，在对于所述癌症或肿瘤的在先治疗后，要治疗的所述癌症或肿瘤进展。在一些实施方式中，所述人患者对于对所述癌症或肿瘤的在先治疗出现了不耐受性。在一些实施方式中，所述人患者先前接受了多激酶抑制剂。在一些实施方式中，所述人患者先前接受了卡博替尼、凡德他尼、乐伐替尼和/或RXDX-105。在一些实施方式中，所述人患者先前接受了RET选择性抑制剂。在一些实施方式中，所述人患者先前接受了塞尔帕替尼(selpercatinib)和/或普雷西替尼(pralsetinib)。在一些实施方式中，所述人患者先前未接受RET选择性抑制剂。

在一些实施方式中，所述人患者患有唾液腺癌、肺癌、结肠直肠癌、甲状腺癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、皮肤癌和脑癌中的至少一种。在一些实施方式中，所述人患者患有甲状腺髓样癌或未分化甲状腺癌、转移性乳腺癌和转移性胰腺腺癌中的至少一种。

将在以下描述中部分说明其它目标和优势，并且将根据描述部分理解其它目标和优势或者可以通过实践学习其它目标和优势。将通过在所附权利要求中具体指明的元素和组合实现和获得目标和优势。

应理解上述一般说明以及以下详细说明两者仅是示例性和说明性的并且不是对权利要求的限制。

引入本说明书中并构成说明书的一部分的附图显示了一种(几种)实施方式，并且与说明一起用于解释本文所述的原理。

附图说明

图1A、1B、1C和1D描述了HM06/TAS0953在具有KIF5B-RET Luc融合的脑转移模型中的效力。图1A显示了当以50mg/kg BID施用时，与媒介物对照相比，HM06/TAS0953的抗肿瘤效力。图1B显示了与媒介物对照小鼠相比，用HM06/TAS0953处理的KIF5B-RET Luc融合脑转移小鼠中的体重变化百分比。图1C显示了与媒介物对照组相比，在HM06/TAS0953组中更高的存活率。图1D显示了与对照相比，在HM06/TAS0953处理的小鼠脑中的IVIS图像和病理学。

图2显示了与连续凡德他尼治疗相比，在凡德他尼-难治的小鼠模型中HM06/TAS0953对KIF5B-RET融合肿瘤体积的影响。

图3A、3B、3C、3D、3E和3F描述了与三种RET多激酶抑制剂：卡博替尼、RXDX-105和凡德他尼相比，HM06/TAS0953对抑制RET-融合阳性细胞系生长的效力。图3A显示了对来源于得自从未用抗癌疗法治疗的患者的样品的未治疗过的细胞系(KIF5B-RET)的处理。图3B显示了对CCDC6-RET融合细胞系的治疗。图3C显示了对表达空对照质粒的相同细胞系的等基因对应物的影响。图3D显示了对TRIM33-RET融合细胞系的治疗。图3E显示了对来源于得自耐受卡博替尼的患者的样品的细胞系(CCDC6-RET)的治疗。图3F显示了对得自耐受RXDX-105的患者的细胞系的治疗。

图4A、4B和4C描述了HM06/TAS0953对3T3-CCDC6-RET异种移植肿瘤生长的效力。图4A显示了从治疗开始到结束每个单个肿瘤的体积变化。结果为每个时间点处5个独立肿瘤的平均值±SE。图4B显示了每个肿瘤的体积变化。*P<0.05，与媒介物处理组相比。图4C显示了作为时间函数的动物体重。结果是每组5只动物的平均值±SE。

图5A、5B和5C描述了HM06/TAS0953对异种移植肿瘤(TRIM33-RET融合)生长的效力。图5A显示了作为时间函数的肿瘤体积。结果为每个时间点处5个独立肿瘤的平均值±SE。图5B显示了从治疗开始到结束每个单个肿瘤的体积变化。与媒介物处理组相比，所有组中的平均肿瘤体积显著减小(p<0.05)。图5C显示了作为时间函数的动物体重。结果是每组5只动物的平均值±SE。在治疗开始后，在所有时间点，凡德他尼-处理组中动物体重显著减小(p<0.05)。

图6A、6B和6C描述了HM06/TAS0953对来源于得自不再对卡博替尼起反应的患者的肿瘤样品的PDX肿瘤(CCDC6-RET)的生长的效力。图6A显示了作为时间函数的肿瘤体积。结果为每个时间点处5个独立肿瘤的平均值±SE。图6B显示了从治疗开始到结束每个单个肿瘤的体积变化。与媒介物处理组相比，所有组中的肿瘤体积显著减小(p<0.05)。图6C显示了作为时间函数的动物体重。结果是每组8只动物的平均值±SE。

图7A、7B和7C描述了HM06/TAS0953对来源于耐受RXDX-105疗法的患者的PDX肿瘤(CCDC6-RET)的生长的效力。图7A显示了作为时间函数的肿瘤体积。结果为每个时间点处5个独立肿瘤的平均值±SE。图7B显示了从治疗开始到结束每个单个肿瘤的体积变化。与媒介物处理组相比，所有组中的肿瘤体积显著减小(p<0.05)。图7C显示了作为时间函数的动物体重。结果是每组5只动物的平均值±SE。

图8A、8B和8C描述了HM06/TAS0953对来源于对RXDX-105具有不良反应的患者的PDX肿瘤(CCDC6-RET)的生长的效力。图8A显示了作为时间函数的肿瘤体积。结果为每个时间点处5个独立肿瘤的平均值±SE。与媒介物处理组相比，所有组中的肿瘤体积显著减小(p<0.05)。图8B显示了从治疗开始到结束每个单个肿瘤的体积变化。HM06/TAS0953 100mg/kgQD组中的一个肿瘤仅增加20.7％。图8C显示了作为时间函数的动物体重。结果是每组5只动物的平均值±SE。

图9A、9B和9C描述了HM06/TAS0953对植入小鼠脑中的肿瘤(TRIM33-RET融合)生长的效力。图9A显示了在治疗开始和结束时生物发光信号的图像。图9B显示了发光(左图)和动物重量测量(右图)的定量。与媒介物处理组相比，肿瘤体积显著减小(p<0.05)。结果表示为5(媒介物)或4(HM06)只动物的平均值±SE。图9C显示了Kaplan-Meier图，其显示了在整个研究期间具有-肿瘤的小鼠的存活。

图10A、10B、10C和10D显示了HM06/TAS0953、凡德他尼和LOXO-292对植入小鼠脑中的肿瘤(TRIM33-RET融合)生长的效力。图10A显示了在细胞植入后33和93天的代表性生物发光图象。图10B显示了发光信号的定量。结果表示每组6只动物的平均值±SE。图10C显示了Kaplan-Meier图，其显示了在整个研究期间具有-肿瘤的小鼠的存活。在图的下方提供了HM06-和LOXO-292-处理组比较的调整p值。图10D显示了随治疗时间的动物体重。

图11A、11B和11C显示了HM06/TAS0953在大鼠中的药物动力学谱。图11A显示了以3、10、30和50mg/kg单次口服施用HM06/TAS0953后随时间的血浆浓度。图11B显示了在单次3mg/kg IV施用HM06/TAS0953后，随时间的血浆浓度。图11C显示了在口服施用10mg/kg后，HM06/TAS0953在自由运动的成年雄性Wistar大鼠的PFC、CSF和血浆(全部或游离部分)中的药物动力学谱。1:1的游离血浆与游离脑浓度比表明HM06/TAS0953自由跨过血脑屏障。

图12A、12B和12C显示了在RET氨基酸残基806-810区内，野生型RET与TAS化合物1、BLU-667和LOXO-292的复合物的X射线晶体结构。图12A显示基于共晶体结构数据，BLU-667和LOXO-292结合至RET中相同的口袋(口袋B)，而TAS化合物1以不同结合模式结合至RET中的不同口袋(口袋A)。图12B显示了RET与TAS化合物1、BLU-667和LOXO-292的共晶体复合物并且图12C显示了RET与TAS化合物1的共晶体复合物。

图13A、13B和13C显示了HM06/TAS0953、LOXO-292和BLU-667在具有Ba/F3 KIF5B-RET^G810R细胞的裸鼠模型中的作用。图13A显示了对肿瘤体积的影响，其中分别以10mg/kg的每日两次剂量施用HM06/TAS0953、LOXO-292和BLU-667。图13B显示了30mg/kg的每日两次剂量的影响。图13C显示了在治疗期期间，在具有Ba/F3 KIF5B-RET^G810R细胞的裸鼠中体重的变化。

图14A和14B显示了HM06/TAS0953、LOXO-292和BLU-667在具有Ba/F3 KIF5B-RET^G810R细胞的裸鼠模型中的作用。图14A显示了对肿瘤体积的影响，其中以50mg/kg的每日两次剂量施用HM06/TAS0953，并且分别以30mg/kg的每日两次剂量施用LOXO-292和BLU-667。图14B显示了在治疗期期间，在具有Ba/F3KIF5B-RET^G810R细胞的裸鼠中体重的变化。

图15A和15B显示了在施用HM06/TAS0953、BLU-667和LOXO-292后1小时，在Ba/F3KIF5B-RET^G810R肿瘤中RET的磷酸化。对具有Ba/F3KIF5B-RET^G810R的小鼠分别以10、30或50mg/kg口服施用HM06/TAS0953或者以10或30mg/kg口服施用LOXO292和BLU667一次。在剂量施用后1小时收集并裂解肿瘤。将细胞裂解液免疫印迹以检测所指明的蛋白。

某些序列的描述

表1提供了本文中参考的某些序列的列表。

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发明详述

除非另外指明，否则如本文所使用的，“TAS0953/HM06”或“HM06/TAS0953”或“HM06”可互换地表示处于游离碱形式及其任何盐(包括二盐酸盐)形式的4-氨基-N-(4-(甲氧基甲基)苯基)-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺。4-氨基-N-(4-(甲氧基甲基)苯基)-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺的二盐酸盐还可互换地被称为“TAS0953-01/HM06-01”或者“HM06-01”或者“HM06-01/TAS0953-01”。HM06/TAS0953的游离碱形式的分子式是C26H30N6O3，并且分子量是474.57。游离碱的结构式是：

HM06-01/TAS0953-01的分子式是：C26H32O3N6Cl2并且分子量是547.54。所述二盐酸盐的化学结构是：

在一些实施方式中，所述游离碱形式是活性药物成分(API)。在一些实施方式中，所述二盐酸盐是活性药物成分(API)。在一些实施方式中，所述API是白色至黄白色固体。在一些实施方式中，所述API在水中易溶解。

包含HM06/TAS0953的组合物的剂量形式可以是任何口服或肠胃外形式。未具体限制这类制剂的形式，并且其实例包括：口服组合物，如片剂、糖衣片剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、混悬剂和乳液剂；肠胃外组合物，如注射剂、栓剂和吸入剂；等。可以单独或者作为混合物与一般佐剂，如葡萄糖或氨基酸一起静脉内施用，或者根据需要，单独动脉内、肌内、皮内、皮下或腹膜内施用注射剂。直肠内施用栓剂。

在一些实施方式中，将HM06/TAS0953制备为配制成片剂的二盐酸盐(HM06-01/TAS0953-01)。在一些实施方式中，所述片剂用于口服施用。在一些实施方式中，以约10或约50mg/单位的剂量(作为游离碱表示)或者本文所描述的另一种剂量配制片剂。在一些实施方式中，作为单一片剂或多个片剂口服施用片剂。

在一些实施方式中，所述组合物包含药典(compendial)且广泛使用的赋形剂。在一些实施方式中，所述组合物包含至少一种赋形剂。在一些实施方式中，所述组合物包含至少一种抗氧化剂、至少一种填充剂、至少一种崩解剂、至少一种表面活性剂和/或至少一种润滑剂。在一些实施方式中，所述组合物包含柠檬酸、微晶纤维素(例如，Avicel PH200LM)、乳糖(例如，Lactose 316Fast Flo)、聚乙烯N-吡咯烷酮(例如，交聚维酮)、月桂基硫酸钠和/或甘油山嵛酸酯(例如，Compritol ATO 888)。

通常，以有效剂量向人患者施用包含HM06/TAS0953的组合物。在一些实施方式中，以等价于约40mg至约3000mg HM06/TAS0953游离碱每天的范围的HM06/TAS0953剂量向人患者施用包含HM06/TAS0953的组合物。在一些实施方式中，以等价于约40mg至约1000mgHM06/TAS0953游离碱每天的范围的HM06/TAS0953剂量向人患者施用包含HM06/TAS0953的组合物。在一些实施方式中，每天一次(QD)或者每天多次(例如，BID或者TID)施用HM06/TAS0953剂量。在一些实施方式中，所施用的HM06/TAS0953剂量等价于每天两次(BID)约20mg至约1500mg HM06/TAS0953游离碱的范围。在一些实施方式中，所施用的HM06/TAS0953剂量等价于每天两次(BID)约20mg至约500mg HM06/TAS0953游离碱的范围。

在一些实施方式中，所施用的HM06/TAS0953的剂量等价于约150mg至约640mgHM06/TAS0953游离碱每天的范围(例如，每天两次约75mg至约320mg HM06/TAS0953游离碱的范围)。在一些实施方式中，所施用的HM06/TAS0953的剂量等价于约160mg至约640mgHM06/TAS0953游离碱每天的范围(例如，每天两次约80mg至约320mg HM06/TAS0953游离碱的范围)。在一些实施方式中，所施用的HM06/TAS0953的剂量等价于约150mg至约500mgHM06/TAS0953游离碱每天的范围(例如，每天两次约75mg至约250mg HM06/TAS0953游离碱的范围)。在一些实施方式中，所施用的HM06/TAS0953的剂量等价于约160mg至约500mgHM06/TAS0953游离碱每天的范围(例如，每天两次约80mg至约250mg HM06/TAS0953游离碱的范围)。在一些实施方式中，所施用的HM06/TAS0953的剂量等价于约320mg至约640mgHM06/TAS0953游离碱每天的范围(例如，每天两次约160mg至约320mg HM06/TAS0953游离碱的范围)。在一些实施方式中，所施用的HM06/TAS0953的剂量等价于约480mg至约640mgHM06/TAS0953游离碱每天的范围(例如，每天两次约240mg至约320mg HM06/TAS0953游离碱的范围)。在一些实施方式中，所施用的HM06/TAS0953的剂量等价于约480mg至约3000mgHM06/TAS0953游离碱每天的范围(例如，每天两次约240mg至约1500mg HM06/TAS0953游离碱的范围)。在一些实施方式中，所施用的HM06/TAS0953的剂量等价于约480mg至约2000mgHM06/TAS0953游离碱每天的范围(例如，每天两次约240mg至约1000mg HM06/TAS0953游离碱的范围)。在一些实施方式中，所施用的HM06/TAS0953的剂量等价于约480mg至约1500mgHM06/TAS0953游离碱每天的范围(例如，每天两次约240mg至约750mg HM06/TAS0953游离碱的范围)。在一些实施方式中，所施用的HM06/TAS0953的剂量等价于约480mg至约1280mgHM06/TAS0953游离碱每天的范围(例如，每天两次约240mg至约640mg HM06/TAS0953游离碱的范围)。在一些实施方式中，所施用的HM06/TAS0953的剂量等价于约480mg至约1000mgHM06/TAS0953游离碱每天的范围(例如，每天两次约240mg至约500mg HM06/TAS0953游离碱的范围)。

在一些实施方式中，所施用的HM06/TAS0953的剂量等价于约640mg至约3000mgHM06/TAS0953游离碱每天的范围(例如，每天两次约320mg至约1500mg HM06/TAS0953游离碱的范围)。在一些实施方式中，所施用的HM06/TAS0953的剂量等价于约640mg至约2000mgHM06/TAS0953游离碱每天的范围(例如，每天两次约320mg至约1000mg HM06/TAS0953游离碱的范围)。在一些实施方式中，所施用的HM06/TAS0953的剂量等价于约640mg至约1500mgHM06/TAS0953游离碱每天的范围(例如，每天两次约320mg至约750mg HM06/TAS0953游离碱的范围)。在一些实施方式中，所施用的HM06/TAS0953的剂量等价于约640mg至约1280mgHM06/TAS0953游离碱每天的范围(例如，每天两次约320mg至约640mg HM06/TAS0953游离碱的范围)。在一些实施方式中，所施用的HM06/TAS0953的剂量等价于约640mg至约1000mgHM06/TAS0953游离碱每天的范围(例如，每天两次约320mg至约500mg HM06/TAS0953游离碱的范围)。

在一些实施方式中，HM06/TAS0953的剂量(以游离碱表示)包括约40mg/天(例如，每天两次约20mg)、约60mg/天(例如，每天两次约30mg)、约80mg/天(例如，每天两次约40mg)、约100mg/天(例如，每天两次约50mg)、约120mg/天(例如，每天两次约60mg)、约140mg/天(例如，每天两次约70mg)、约160mg/天(例如，每天两次约80mg)、约180mg/天(例如，每天两次约90mg)、约200mg/天(例如，每天两次约100mg)、约220mg/天(例如，每天两次约110mg)、约240mg/天(例如，每天两次约120mg)、约260mg/天(例如，每天两次约130mg)、约280mg/天(例如，每天两次约140mg)、约300mg/天(例如，每天两次约150mg)、约320mg/天(例如，每天两次约160mg)、约340mg/天(例如，每天两次约170mg)、约360mg/天(例如，每天两次约180mg)、约380mg/天(例如，每天两次约190mg)、约400mg/天(例如，每天两次约200mg)、约420mg/天(例如，每天两次约210mg)、约440mg/天(例如，每天两次约220mg)、约460mg/天(例如，每天两次约230mg)、约480mg/天(例如，每天两次约240mg)、约500mg/天(例如，每天两次约250mg)、约750mg/天(例如，每天两次约375mg)、约1000mg/天(例如，每天两次约500mg)、约1280mg/天(例如，每天两次约640mg)、约1500mg/天(例如，每天两次约750mg)、约2000mg/天(例如，每天两次约1000mg)或者约3000mg/天(例如，每天两次约1500mg)。

在一些实施方式中，HM06/TAS0953的剂量(以游离碱表示)大于或等于约40mg/天(例如，每天两次约20mg)、大于或等于约60mg/天(例如，每天两次约30mg)、大于或等于约80mg/天(例如，每天两次约40mg)、大于或等于约100mg/天(例如，每天两次约50mg)、大于或等于约120mg/天(例如，每天两次约60mg)、大于或等于约140mg/天(例如，每天两次约70mg)、大于或等于约160mg/天(例如，每天两次约80mg)、大于或等于约180mg/天(例如，每天两次约90mg)、大于或等于约200mg/天(例如，每天两次约100mg)、大于或等于约220mg/天(例如，每天两次约110mg)、大于或等于约240mg/天(例如，每天两次约120mg)、大于或等于约260mg/天(例如，每天两次约130mg)、大于或等于约280mg/天(例如，每天两次约140mg)、大于或等于约300mg/天(例如，每天两次约150mg)、大于或等于约320mg/天(例如，每天两次约160mg)、大于或等于约340mg/天(例如，每天两次约170mg)、大于或等于约360mg/天(例如，每天两次约180mg)次、大于或等于约380mg/天(例如，每天两次约190mg)、大于或等于约400mg/天(例如，每天两次约200mg)、大于或等于约420mg/天(例如，每天两次约210mg)、大于或等于约440mg/天(例如，每天两次约220mg)、大于或等于约460mg/天(例如，每天两次约230mg)、大于或等于约480mg/天(例如，每天两次约240mg)、大于或等于约500mg每天(例如，每天两次约250mg)、大于或等于约640mg/天(例如，每天两次约320mg)、大于或等于约750mg/天(例如，每天两次约375mg)、大于或等于约1000mg/天(例如，每天两次约500mg)、大于或等于约1280mg/天(例如，每天两次约640mg)、大于或等于约1500mg/天(例如，每天两次约750mg)、大于或等于2000mg/天(例如，每天两次约2000mg)或者大于或等于约3000mg/天(例如，每天两次约1500mg)。

在一些实施方式中，HM06/TAS0953的剂量(以游离碱表示)大于或等于约640mg/天(例如，每天两次约320mg)。在一些实施方式中，HM06/TAS0953的剂量(以游离碱表示)大于或等于约1000mg/天(例如，每天两次约500mg)。在一些实施方式中，HM06/TAS0953的剂量(以游离碱表示)大于或等于约1280mg/天(例如，每天两次约640mg)。在一些实施方式中，HM06/TAS0953的剂量(以游离碱表示)大于或等于约1500mg/天(例如，每天两次约750mg)。在一些实施方式中，HM06/TAS0953的剂量(以游离碱表示)大于或等于约2000mg/天(例如，每天两次约1000mg)。

在一些实施方式中，HM06/TAS0953的剂量(以游离碱表示)小于或为约3000mg/天(例如，每天两次小于或为约1500mg)。在一些实施方式中，HM06/TAS0953的剂量(以游离碱表示)小于或为约2000mg/天(例如，每天两次小于或为约1000mg)。在一些实施方式中，HM06/TAS0953的剂量(以游离碱表示)小于或为约1500mg/天(例如，每天两次小于或为约750mg)。在一些实施方式中，HM06/TAS0953的剂量(以游离碱表示)小于或为约1280mg/天(例如，每天两次小于或为约640mg)。在一些实施方式中，HM06/TAS0953的剂量(以游离碱表示)小于或为约1000mg/天(例如，每天两次小于或为约500mg)。在一些实施方式中，HM06/TAS0953的剂量(以游离碱表示)小于或为约640mg/天(例如，每天两次小于或为约320mg)。在一些实施方式中，HM06/TAS0953的剂量(以游离碱表示)小于或为约400mg/天(例如，每天两次小于或为约200mg)。

在一些实施方式中，HM06/TAS0953的剂量(以游离碱表示)为约150mg/天(例如，每天两次约75mg)。在一些实施方式中，HM06/TAS0953的剂量为约160mg/天(例如，每天两次约80mg)。在一些实施方式中，HM06/TAS0953的剂量为约320mg/天(例如，每天两次约160mg)。在一些实施方式中，HM06/TAS0953的剂量为约640mg/天(例如，每天两次约320mg)。在一些实施方式中，HM06/TAS0953的剂量为约1000mg/天(例如，每天两次约500mg)。在一些实施方式中，HM06/TAS0953的剂量为约1280mg/天(例如，每天两次约640mg)。在一些实施方式中，HM06/TAS0953的剂量为约1500mg/天(例如，每天两次约750mg)。在一些实施方式中，HM06/TAS0953的剂量为约2000mg/天(例如，每天两次约1000mg)。在一些实施方式中，HM06/TAS0953的剂量为约3000mg/天(例如，每天两次约1500mg)。在一些实施方式中，可以在治疗期间进行剂量修改。

在一些实施方式中，所述人患者为12岁或以上。在一些实施方式中，12岁或以上的人患者的体重小于50kg。在一些实施方式中，所施用的剂量对于体重大于50kg的患者和体重小于50kg的患者一样。

在一些实施方式中，对于体重小于50kg的患者，HM06/TAS0953的剂量可以小于或为约3000mg/天(例如，每天两次1500mg)、小于或为约2000mg/天(例如，每天两次1000mg)、小于或为约1500mg/天(例如，每天两次750mg)、小于或为约1280mg/天(例如，每天两次640mg)、小于或为约1000mg/天(例如，每天两次500mg)、小于或为约640mg/天(例如，每天两次320mg)、小于或为约320mg/天(例如，每天两次160mg)、小于或为约160mg/天(例如，每天两次80mg)、小于或为约120mg/天(例如，每天两次60mg)、小于或为约80mg/天(例如，每天两次40mg)或者小于或为约每天一次40mg。对于体重大于50kg的患者，HM06/TAS0953的剂量可以小于或为约3000mg/天(例如，每天两次1500mg)、小于或为约2000mg/天(例如，每天两次1000mg)、小于或为约1500mg/天(例如，每天两次750mg)、小于或为约1280mg/天(例如，每天两次640mg)、小于或为约1000mg/天(例如，每天两次500mg)、小于或为约每天一次640mg(例如，每天两次320mg)、小于或为约480mg/天(例如，每天两次240mg)、小于或为约320mg/天(例如，每天两次160mg)、小于或为约240mg/天(例如，每天两次120mg)、小于或为约160mg/天(例如，每天两次80mg)或者小于或为约80mg/天(例如，每天两次40mg)。在一些实施方式中，可以在治疗期间进行剂量修改。

在一些实施方式中，所述人患者患有或已被诊断为患有唾液腺癌、肺癌、结肠直肠癌、甲状腺癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、甲状腺癌、皮肤癌、脑癌。在一些实施方式中，所述人患者患有或已被诊断患有甲状腺髓样癌或未分化甲状腺癌、转移性乳腺癌或者转移性胰腺腺癌。在一些实施方式中，所述人患者患有或已被诊断患有非小细胞肺癌(NSCLC)。NSCLC的实例包括腺癌和大细胞癌(非鳞状细胞癌)以及鳞状细胞癌。在一些实施方式中，所述人患者患有或已被诊断患有局部晚期或转移性NSCLC。

在一些实施方式中，人患者的原发肿瘤可以转移至中枢神经系统(CNS)。例如，人患者可以患有或者可以被诊断患有原发肿瘤和CNS转移。在一些实施方式中，人患有或已被诊断患有伴有脑和/或脑膜转移的转移性NSCLC。

如本文所使用的，“脑和/或脑膜转移”也被称为脑转移或脑膜疾病，包括无症状和有症状疾病，并且可以是可测量或不可测量的。

如本文所使用的，并且除非另外指明，否则“RET”是指编码RET蛋白的基因和/或RET蛋白，或者RET基因或蛋白的突变、变体或一部分。

如本文所使用的，“RET蛋白”或“RET多肽”是指通过RET基因所编码的酪氨酸激酶受体(也称为RET原癌基因)并且可以包含RET蛋白的全部或部分。

在一些实施方式中，RET蛋白包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列或其部分。

在一些实施方式中，RET蛋白是突变的RET蛋白。在一些实施方式中，RET蛋白包含SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7或SEQID NO：8所示的氨基酸序列或其部分。

在一些实施方式中，包含RET基因异常的RET基因编码RET蛋白。

如本文所使用的，“RET基因异常”是指与野生型RET基因序列相比，突变的RET基因序列中的差异。例如，RET基因异常可以是染色体重排、点突变、拷贝数增加、过表达和/或配体-诱导的激活。

可以通过本领域中所理解的一些方法中的任一项确定RET基因异常的存在或不存在，其包括(但不限于)测序DNA或RNA或者FISH分析。(例如，参见Subbiah,V等人,AnnOncol.2021,32(2):261-268；Lin JJ等人,Ann Oncol.2020,31(12):1725-1733；SolomonBJ等人,J Thorac Oncol.2020,15(4):541-549)。在一些实施方式中，通过对循环肿瘤DNA测序来检测RET基因异常。在一些实施方式中，通过靶向单扩增子测序来检测RET基因异常。

在一些实施方式中，包含RET基因异常的RET基因编码突变的RET蛋白，如RET蛋白融合体和/或包含溶剂前沿突变的RET蛋白。

在一些实施方式中，癌症或肿瘤包含RET基因异常。在一些实施方式中，所述患者具有RET基因异常，其选自染色体重排(RET基因融合)、点突变、拷贝数增加、过表达和配体-诱导的激活。拷贝数增加或者转录上调可以造成过表达，其可以导致受体局部浓度升高和异常激活。拷贝数增加或过表达可以是指野生型RET或者突变的RET。例如，突变体RET的过表达已存在于MEN2-相关肿瘤中。已在两个SCLC细胞系中发现了突变体M918T和野生型RET两者的稳定过表达。RET的配体-诱导的激活可以导致多个信号转导途径的刺激，包括MAP激酶/Erk和PI3激酶/Akt途径。对于野生型和突变RET可以发生这种激活。

在一些实施方式中，在NSCLC、乳头状甲状腺癌(PTC)、结肠直肠癌(CCDC6-RET融合)或者乳腺癌(ERC1-RET融合)中发生了RET基因融合。在一些实施方式中，在甲状腺髓样癌(MTC)，包括多发性内分泌瘤2A(MEN2A)、MEN2B或家族性甲状腺髓样癌(FMTC)中发生了RET基因点突变。在一些实施方式中，在NSCLC、乳腺癌、胰腺癌或胶质母细胞瘤中发生了RET基因拷贝数增加。

在一些实施方式中，癌症或肿瘤包括RET C末端激酶结构域与驱动蛋白家族成员5B(KIF5B-RET)、CCDC6-RET(RET-PTC1)、NCOA4-RET(RET-PTC3)或者TRIM33-RET(RET-PTC7)的N末端序列的融合。KIF5B-RET基因融合可以导致RET转录升高2倍至30倍，其表明在这些情况下RET激酶活性驱动肿瘤发生。在一些实施方式中，RET融合包括RET与PRKAR1A、TRIM24、GOLGA5、KTN1、MBD1或TRIM27的融合。在一些实施方式中，RET融合包括RET与TRIM33、KIF5B、CCDC6或KIF5B的融合。

在一些实施方式中，人患者不具有EGFR、KRAS、ALK、HER2、ROS1、BRAF和/或METex14激活突变。在绝大多数情况下，NSCLC中的RET融合与EGFR、KRAS、ALK、HER2和BRAF中的突变互相排斥。

具有抗RET受体酪氨酸激酶(RTK)活性的多激酶抑制剂(MKI)包括卡博替尼、凡德他尼、艾乐替尼、舒尼替尼、索拉非尼、帕唑帕尼、普纳替尼、瑞格菲尼、阿帕替尼、sitravatinib、RXDX-105和乐伐替尼。在一些实施方式中，先前已用卡博替尼、凡德他尼、乐伐替尼、RXDX-105或者另一种多激酶抑制剂治疗人患者。在一些实施方式中，在在先治疗后，人患者发展。在一些实施方式中，人患者对在先治疗出现不耐受性。在一些实施方式中，先前未用多激酶抑制剂治疗人患者。

在一些实施方式中，先前用塞尔帕替尼(selpercatinib)(LOXO-292)、普雷西替尼(pralsetinib)(BLU-667)、BOS-172738或者另一种RET选择性抑制剂治疗人患者。在一些实施方式中，在在先治疗后，人患者发展。在一些实施方式中，人患者对在先治疗出现不耐受性。在一些实施方式中，先前未用RET选择性抑制剂治疗人患者。

尽管通过靶向试剂观察到临床改善，但是患有RET异常的患者频繁复发。在一些实施方式中，癌症或肿瘤具有或出现耐药突变。在一些实施方式中，癌症或肿瘤耐受一种或多种多激酶抑制剂。在一些实施方式中，癌症或肿瘤耐受一种或多种RET选择性抑制剂。在一些实施方式中，癌症或肿瘤耐受塞尔帕替尼(selpercatinib)和/或普雷西替尼(pralsetinib)。在一些实施方式中，癌症或肿瘤包括对塞尔帕替尼(selpercatinib)和/或普雷西替尼(pralsetinib)耐受的细胞。

在一些实施方式中，HM06/TAS0953对于治疗具有或出现RET蛋白的耐药突变的癌症或肿瘤有效。在一些实施方式中，RET基因异常包括RET蛋白的溶剂前沿突变和/或RET蛋白的铰链区中的突变。在一些实施方式中，RET基因异常包括RET蛋白的溶剂前沿突变。

在一些实施方式中，RET基因异常包括RET蛋白在氨基酸残基730、736、760、772、804、806、807、808、809、810和/或883处的突变。在一些实施方式中，RET基因异常包括RET蛋白在氨基酸残基804、806、807、808、809和/或810处的突变。在一些实施方式中，RET基因异常包括RET蛋白在氨基酸残基810处的突变。

在一些实施方式中，RET基因异常包括包含下列突变的RET蛋白的突变：V804X突变，其中X是除缬氨酸或谷氨酸以外的任何氨基酸；b)Y806X突变，其中X是除酪氨酸以外的任何氨基酸；c)A807X突变，其中X是除丙氨酸以外的任何氨基酸；d)K808X突变，其中X是除丙氨酸以外的任何氨基酸；e)Y809X突变，其中X是除酪氨酸以外的任何氨基酸；和/或f)G810X突变，其中X是除甘氨酸以外的任何氨基酸。

在一些实施方式中，RET基因异常包括包含V804X突变的RET蛋白的突变，其中X是除缬氨酸或谷氨酸以外的任何氨基酸。在一些实施方式中，RET基因异常包括包含Y806X突变的RET蛋白的突变，其中X是除酪氨酸以外的任何氨基酸。在一些实施方式中，RET基因异常包括包含A807X突变的RET蛋白的突变，其中X是除丙氨酸以外的任何氨基酸。在一些实施方式中，RET基因异常包括包含K808X突变的RET蛋白的突变，其中X是除丙氨酸以外的任何氨基酸。在一些实施方式中，RET基因异常包括包含Y809X突变的RET蛋白的突变，其中X是除酪氨酸以外的任何氨基酸。在一些实施方式中，RET基因异常包括包含G810X突变的RET蛋白的突变，其中X是除甘氨酸以外的任何氨基酸。

在一些实施方式中，RET基因异常包括RET蛋白的突变，其包括：a)V804L或V804M突变；b)Y806C、Y806S、Y806H或Y806N突变；和/或c)G810R、G810S、G810C、G810V、G810D或G810A突变。在一些实施方式中，RET基因异常包括RET蛋白的V804L或V804M突变。在一些实施方式中，RET基因异常包括RET蛋白的Y806C、Y806S、Y806H或Y806N突变。在一些实施方式中，RET基因异常包括RET蛋白的G810R、G810S、G810C、G810V、G810D或G810A突变。在一些实施方式中，RET基因异常包括RET蛋白的G810R突变。

在一些实施方式中，RET基因异常包括RET蛋白的突变，其包括：a)L730Q或L730R突变；b)G736A突变；c)L760Q突变；d)L772M突变；和/或e)A883V突变。在一些实施方式中，RET基因异常包括RET蛋白的L730W或L730R突变。在一些实施方式中，RET基因异常包括RET蛋白的G736A突变。在一些实施方式中，RET基因异常包括RET蛋白的L760Q突变。在一些实施方式中，RET基因异常包括RET蛋白的L772M突变。在一些实施方式中，RET基因异常包括RET蛋白的A883V突变。

I.实施例

实施例1.HM06/TAS0953的脑迁移性质

在初始研究中，评价了HM06/TAS0953移动穿过血脑屏障的能力。将HM06/TAS0953溶于0.5％HPMC，0.1N盐酸并以单剂量口服施用于皮下植入了BaF3/KIF5B-RET_RFP细胞系(即具有KIF5B RET融合体的细胞系)的BALB/cAJcl-nu/nu小鼠(CLEA Japan,Inc.)。施用后一小时，在异氟烷麻醉下从下腔静脉收集血液，然后除去整个脑。将血液样品离心以获得血浆样品。使用超声波均质机以3-倍水量将脑均质化以获得脑的匀浆。

通过LC-MS/MS测量血浆和脑匀浆中HM06/TAS0953的化合物浓度，并且将脑匀浆中化合物的浓度乘以系数4以计算脑中化合物的浓度。参见下表2。根据脑/血浆中化合物浓度之比计算Kp值(＝脑匀浆中化合物浓度/血浆中化合物浓度)。根据血浆蛋白质未结合之比和脑蛋白未结合之比计算血浆和脑中未结合的化合物浓度，并且根据脑/血浆中未结合化合物浓度之比计算Kp,uu值。基于所计算的Kp值和Kp,uu值评价脑迁移性质。Kp值显示为0.1或以上的化合物被认为具有脑迁移性质，并且Kp,uu值显示为0.3或以上的化合物被认为具有优良的脑迁移性质(Varadharajan S等人,JPharm Sci.2015,104:1197-1206)。

表2-脑渗透

K_p,脑＝脑-比-血浆浓度之比₍C_脑/C_血浆)

K_p,uu,脑＝未结合的脑-比-血浆浓度之比((C脑×f_u,脑)/(C血浆×f_u,血浆))

f_u,血浆(小鼠)：0.074

f_u,脑(小鼠)：0.078

HM06/TAS0953显示出高Kp值和高Kp,uu值，表明了优良的脑迁移性质。该数据表明HM06/TAS0953对于治疗脑转移性病变或者其它CNS疾病可以是有效的。

实施例2.HM06/TAS0953在脑转移模型中具有有效的效力

在具有KIF5B-RET融合体的脑转移模型中测试了HM06/TAS0953在治疗具有RET异常的肿瘤中的效力。HM06/TAS0953显示出有效且稳定的作用。

在该模型中，将具有KIF5B-RET Luc融合体的NIH3T3细胞(2.5×10⁵个细胞/小鼠)在相对于lambda位于前方3mm和右侧2mm的位置处，在3mm深度植入无胸腺裸鼠(CharlesRiver Laboratories Japan)的脑中。植入后6天，对小鼠静脉内注射萤光素(FUJIFILMWako Pure Chemical Corporation)并通过体内成像系统(Lumina II,PerkinElmer)测量小鼠的发光。使用Living Image软件(PerkinElmer)分别定量小鼠背部和侧面所关心的区域中的总通量(p/s)，并且将通过将两个总通量值相加所获得的总光子用作发光信号。将小鼠随机分配到3个组中(每组10只小鼠)以使得每组中平均总光子相等，然后从第7天起每天两次(b.i.d)口服施用媒介物(含有0.5％羟丙基甲基纤维素的0.1mol/L盐酸)或者TAS0953(12.5mg/kg或50mg/kg)。每周测量一次小鼠的发光信号直至研究结束。

HM06/TAS0953显示出有效且稳定的作用。图1A显示了当以50mg/kg BID施用时，与媒介物对照相比，HM06/TAS0953的抗肿瘤效力。图1B显示了体重变化百分比并且用HM06/TAS0953处理的小鼠在所测试的剂量下良好耐受所述化合物，然而在媒介物对照组中，观察到由于肿瘤负荷和体重增加抑制所造成的动物死亡。图1C显示了与媒介物对照组相比，在HM06/TAS0953组中更高的存活率。图1D显示了体内成像系统(IVIS)图像和与媒介物对照相比，所处理的小鼠的脑中的病理学。

这些数据确立HM06/TAS0953可以在具有RET异常的患者中的脑转移中具有有效的抗肿瘤作用，并且表明了延长的存活期。这些数据还显示HM06/TAS0953在小鼠中具有优良的脑渗透性。

实施例3.HM06/TAS0953在凡德他尼-难治肿瘤模型中具有效力

在凡德他尼治疗后，与连续凡德他尼治疗相比，评价了HM06/TAS0953的作用以评价是否转换为HM06/TAS0953将对肿瘤尺寸具有显著作用。结果表明HM06/TAS0953将对难治肿瘤有效。

将用融合激酶KIF5B-RET(NIH3T3 KIF5B-RET)转染的小鼠成纤维细胞系以5×10⁶个细胞/小鼠植入到6-周大雄性BALB/cA Jcl-nu小鼠的右胸部。在肿瘤移植后，使用卡尺测量肿瘤的长轴(mm)和短轴(mm)以根据以下公式(A)计算肿瘤体积(TV)。然后，将小鼠分配给多个组，从而各个组的平均TV将是一致的。将进行这种分组(n＝5-6/组)的当天指定为第1天。

每天以100mg/kg/天口服施用凡德他尼直至凡德他尼处理小鼠中的平均肿瘤体积比第1天时的平均肿瘤体积大三倍的时间。在第16天，将凡德他尼处理组分成2个组：组1：连续凡德他尼处理组；组2：HM06/TAS0953处理组。在HM06/TAS0953处理组中，在从凡德他尼转换为HM06/TAS0953之后，每天以100mg/kg/天(50mg/kg，BID)口服施用HM06/TAS0953。

作为抗肿瘤作用的指数，对每个组测量第31天时的TV，并且通过以下公式(B)计算第1天时的相对肿瘤体积(RTV)以评价抗肿瘤作用。

图2显示了结果，其中符号*表示与连续凡德他尼处理组相比，HM06/TAS0953处理组之间的统计学差异。

(A)：TV(mm³)＝(长轴×短轴²)/2

(B)：RTV＝(第n天时的TV)/(第1天时的TV)

n：表示测量当天

在统计学上，HM06/TAS0953处理组的平均RTV值显著(学生t检验，p<0.05)小于连续凡德他尼处理组。这些数据显示HM06/TAS0953对凡德他尼-难治肿瘤有效。

实施例4.HM06/TAS0953在RET重排驱动的肺癌细胞系中的临床前评价

然后，与三种RET多激酶抑制剂(卡博替尼、RXDX-105和凡德他尼)相比，检验了HM06/TAS0953在抑制RET-融合阳性细胞系生长中的效力。在来源于未治疗过的样品的2个细胞系中检验了HM06/TAS0953的效力。细胞系之一来源于得自从未用任何抗癌疗法治疗过并且具有KIF5B-RET融合体的患者的样品。用HM06/TAS0953治疗抑制了细胞生长，其IC50＝0.03μM(图3A)。这比多激酶抑制剂卡博替尼、RXDX-105和凡德他尼更有效7-24倍。

还在细胞系的等基因对中测试了HM06/TAS0953以检验对CCDC6-RET融合体-驱动的细胞系的效力和在无致瘤性对照细胞系中的非特异性影响。HM06/TAS0953抑制CCDC6-RET融合细胞系的生长，其IC50＝0.1μM(图3B)。表达空对照质粒的该细胞系的等基因对应物对HM06/TAS0953的敏感性要低得多(低17倍)(图3C)。CCDC6-RET融合体-细胞系对卡博替尼、RXDX-105和凡德他尼的敏感性相同。

在具有TRIM33-RET融合体的细胞系中测试了HM06/TAS0953。HM06/TAS0953抑制细胞生长，其IC50＝0.006μM，它比通过3种多激酶RET抑制剂对生长的抑制的IC50小8-20倍(图3D)。

在耐受RET多激酶抑制剂的RET融合体-阳性细胞系中检查了HM06/TAS0953的抑制作用。HM06/TAS0953抑制来源于来自耐受卡博替尼的患者的样品的细胞系(CCDC6-RET融合体)，其IC50＝0.06μM。这比卡博替尼对这些细胞的生长抑制的IC50小11.5倍。与RXDX-105和凡德他尼相比，HM06/TAS0953对于抑制卡博替尼耐受细胞的生长也更有效(图3E)。

HM06/TAS0953抑制来源于得自获得对RXDX-105的耐药性的患者的样品的细胞系(KIF5B-RET融合体)的生长，其IC50＝0.07μM(图3F)。这显著低于卡博替尼(0.34μM，95％CI：0.21-0.54)、RXDX-105(0.49μM，95％CI：0.31-0.76)或者凡德他尼(0.38μM，95％CI：0.29-0.49)对生长的抑制的IC50。

结果表明HM06/TAS0953在抑制具有RET融合的细胞系的生长方面比其它RET多激酶抑制剂更有效。结果支持HM06/TAS0953对于对RET多激酶抑制剂的抑制作用来说难治的细胞系是有效的。另外，HM06/TAS0953对具有由三个不同的N末端融合伴侣(CCDC6、KIF5B和TRIM33)组成的RET融合体的细胞系有效。

实施例5.HM06/TAS0953在RET重排驱动的肺癌的临床前动物模型中的效力评价

确认了HM06/TAS0953在降低异种移植肿瘤生长中的效力，并且进一步检查了与凡德他尼，已知的具有抗-RET活性的多激酶抑制剂相比的效力。通过向免疫受损小鼠植入等基因(NIH-3T3-CCDC6-RET)或者患者-来源的细胞(TRIM33-RET融合体)以产生异种移植肿瘤(实施例5A和5B)，在对RET抑制剂敏感的RET融合体-阳性癌症的临床前动物模型中观察效力。另外，在从来自对RXDX-105或者卡博替尼出现耐药性的患者的样品所开发的几种患者来源的异种移植(PDX)模型中观察效力(实施例5C)。如以下详细描述的，在所有模型中，HM06/TAS0953在抑制肿瘤生长，并且在一些情况下，诱导肿瘤消退方面优于凡德他尼，或者与它一样有效。使用少至12.5mg/kg BID剂量，HM06/TAS0953对具有RET-依赖性异种移植肿瘤的小鼠的治疗导致肿瘤生长显著降低。在50mg/kg BID或100mg/kg QD的剂量下，肿瘤生长显著降低，包括TRIM33-RET融合体异种移植肿瘤的约100％消退。类似地，用50mg/kg BID或者100mg/kg QD HM06/TAS0953的治疗显著降低了卡博替尼-耐药PDX肿瘤的生长，其导致约50％的肿瘤消退。HM06/TAS0953治疗还导致两种来源于RXDX-105-耐药肿瘤的PDX模型的生长显著降低。在本研究中，用凡德他尼处理的小鼠体重显著减轻，而用HM06/TAS0953处理的小鼠在所有测试剂量下良好耐受所述化合物。

在临床前脑原位模型(TRIM33-RET融合体)中进一步观察了HM06/TAS0953对异种移植肿瘤生长的影响(实施例5D)。用50mg/kg BID HM06/TAS0953处理完全阻断脑中的肿瘤生长并且导致具有-肿瘤的小鼠的存活的显著升高。结果表明HM06/TAS0953是可以阻断植入小鼠皮下侧腹或脑中的RET融合体-阳性异种移植肿瘤的生长的有效的抗-RET抑制剂。

方法：将6-周大的雌性NSG(NOD/SCIDγ)小鼠(Envigo,Madison,WI)用于产生PDX模型并且用于除其中使用无胸腺裸鼠(Envigo,Madison,WI)的NIH-3T3异种移植研究外的所有效力研究。在检测到稳健信号后，将小鼠随机分配到5只小鼠的组中，并且在细胞植入后22天，用媒介物或50mg/kg HM06/TAS0953 BID开始治疗。每周记录荧光素酶信号，并且每周称量动物体重两次。当检测到疾病病征，如缺少协调性或过量重量减轻和疲劳时，处死小鼠。在处理组中，发现一只动物在研究初期死亡，并因此处理组减少为仅4只动物。

媒介物和化合物：将卡博替尼在30％丙二醇、5％吐温80、65％D5W(5％右旋糖在水中的溶液)中混合以产生混悬液。将凡德他尼在1％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)中混合以产生混悬液。将HM06/TAS0953在0.1N HCl和0.5％羟丙甲纤维素(HPMC)中混合以产生混悬液。将RXDX-105在15％卡布迪索(captisol)中混合以产生混悬液。用HM06/TAS0953游离碱处理NIH-3T3模型、TRIM33-RET融合体模型、得自对RXDX-105耐受后所获得的患者样品的PDX模型(CCDC6-RET)和得自对卡博替尼耐受的患者的模型(CCDC6-RET)。用HM06二盐酸盐形式处理所有其它模型。

统计分析：通过双向方差分析比较数据组，使用Tukey或Sidaks多重比较检验以确定显著性。认为P<0.05是2个值或数据组之间的统计学显著差异。使用Log-秩(Mantel-Cox)检验比较存活曲线。使用Graphpad Prism v7软件实施95％置信区间和所有统计分析。

实施例5A：HM06/TAS0953对于抑制RET抑制剂-敏感的异种移植肿瘤的生长有效。

检验了HM06/TAS0953抑制来源于从未被RET抑制剂处理的细胞的异种移植肿瘤的生长的能力。将稳定表达CCDC6-RET融合蛋白的NIH-3T3细胞植入无胸腺裸鼠的皮下侧腹。当肿瘤达到约100mm³时，将小鼠随机分配至5只动物的组中并起始治疗(第6天)。通过CCDC6-RET融合cDNA的稳定表达产生NIH-3T3-CCDC6-RET细胞系。用12.5-100mg/kg的HM06/TAS0953每天一次(QD)或每天两次(BID)处理具有NIH-3T3-CCDC6-RET异种移植肿瘤的无胸腺免疫缺陷型裸小鼠。使用凡德他尼(100mg/kg QD)进行比较。

在所有测试剂量下，使用HM06/TAS0953的治疗导致肿瘤生长显著降低(图4A和4B)。与媒介物-处理组相比，凡德他尼治疗还导致肿瘤体积显著降低。然而，当以50mg/kgBID或100mg/kg QD施用时，HM06/TAS0953比凡德他尼更有效。在这些实验中，使用了比显示抑制RET融合体-依赖性肿瘤生长(50mg/kg，QD)高得多的凡德他尼剂量(100mg/kg)。(Suzuki M等人,Cancer Sci.2013,104(7):896-903doi10.1111/cas.12175)。这些结果表明对于降低RET融合体-驱动的肿瘤生长，HM06/TAS0953比凡德他尼更有效。在所使用的任何HM06/TAS0953剂量下，动物重量无显著降低(图4C)。

实施例5B：HM06/TAS0953对于抑制RET融合体驱动的患者-来源的细胞系异种移植的生长有效。

将效力研究延伸至患者-来源的细胞系异种移植模型。将具有TRIM33-RET融合体的异种移植肿瘤植入NSG小鼠的皮下侧腹。当肿瘤达到约100mm³时，将小鼠随机分配至5只动物的组中并起始治疗(第22天)。(Somwar R等人,J Clin Oncol.2016,34(15_suppl):9068)。

在所尝试的3个不同剂量下，HM06/TAS0953的治疗导致肿瘤生长的显著降低(图5A)。在所有组中，每个异种移植肿瘤消退。当用50mg/kg HM06/TAS0953每天处理一次时，肿瘤缩小60.7±5％(图5B)。在用50mg/kg BID处理的小鼠上无明显肿瘤保留，并且当用100mg/kg QD HM06/TAS0953处理动物时，肿瘤生长降低90±4％(图5B)。当比较任何HM06-处理组中的起始和结束时的动物体重时，动物重量无显著变化。尽管用凡德他尼治疗导致肿瘤完全消退，但是动物体重显著减轻，并且到第47天，该组中所有动物必须被处死(图5C)。到治疗开始的第3天，凡德他尼处理组中的每只动物开始体重减轻。

实施例5C：HM06/TAS0953对于抑制RET多激酶抑制剂难治的PDX肿瘤的生长有效

为了进一步研究HM06/TAS0953抑制肿瘤生长的有效性，检查了抑制剂在三种耐受RXDX-105的PDX模型中以及一种耐受卡博替尼的模型中对肿瘤生长的效力。

将来源于得自对卡博替尼不再起反应的患者的肿瘤样品(CCDC6-RET)的PDX肿瘤切碎，与Matrigel混合，然后植入NSG小鼠的皮下侧腹。当肿瘤达到约100mm³时，将小鼠随机分配至8只动物的组中并起始治疗(第12天)。凡德他尼对具有肿瘤的小鼠的治疗导致肿瘤生长显著降低(图6A)，且在研究结束时无明显的肿瘤保留(图6B)。组中所有肿瘤缩小100％。然而，动物体重显著减轻(图6C)。尽管与媒介物处理组(p<0.05)相比时，卡博替尼(30mg/kg QD)治疗显著降低肿瘤生长，但是没有肿瘤收缩，且组中所有肿瘤显示出一定生长(图6B)。用50mg/kg BID或100mg/kg QD HM06/TAS0953的治疗导致肿瘤生长显著降低(图6A)，其中肿瘤分别缩小43.7±3.8％和47.7±0.9％。在第25天，发现HM06-50mg/kg BID组中一只动物死亡，并因此在实验结束时，该组仅有7只动物。动物死因不明。

在收集肿瘤样品(CCDC6-RET)时，将来源于耐受RXDX-105疗法的患者的PDX肿瘤切碎，与Matrigel混合，然后植入NSG小鼠的皮下侧腹。当肿瘤达到约100mm³时，将小鼠随机分配至5只动物的组中并起始治疗(第14天)。与媒介物处理组相比，使用RXDX-105(30mg/kgBID)的治疗不导致肿瘤体积显著变化(p>0.05)，从而证明该模型耐受RXDX-105(图7A)。凡德他尼(50mg/kg QD)的治疗导致肿瘤体积显著减小，其中肿瘤缩小27.2±5.2％(p<0.05)(图7A和7B)。对于该研究和所有后续研究，由于图5C中观察到的体重显著减轻，使用50mg/kg QD凡德他尼。类似地，与媒介物治疗的肿瘤相比，HM06/TAS0953(50mg/kg BID或100mg/kg，QD)治疗导致肿瘤体积显著减小，其中肿瘤分别缩小8.6±11.8％和30±7.7％(图7A和7B)。任一种剂量的HM06/TAS0953的治疗不显著影响该组中动物的体重(p>0.05)(图7C)。

将来源于对RXDX-105具有不良反应的患者的PDX肿瘤(CCDC6-RET)时切碎，与Matrigel混合，然后植入NSG小鼠的皮下侧腹。当肿瘤达到约100mm³时，将小鼠随机分配至8只动物的组中并起始治疗(第12天)。在该模型中测试50mg/kg BID和100mg/kg QD HM06/TAS0953的效力。与媒介物处理组相比，以50mg/kg BID剂量使用HM06/TAS0953的治疗导致肿瘤体积小但显著的减小(图8A)。以100mg/kg QD的剂量使用HM06/TAS0953的治疗对于减缓肿瘤生长更有效。如图8A所示，肿瘤没有收缩(图8B)。在任何组中，HM06/TAS0953不引起动物体重的任何显著变化(图8C)。

这些结果表明HM06/TAS0953对于降低卡博替尼和RXDX-105难治的PDX肿瘤的生长是有效的。

实施例5D：HM06/TAS0953对于抑制具有RET融合的脑原位异种移植肿瘤模型的生长有效。

为了评价HM06对存在于脑中的RET融合体阳性肿瘤的作用，将具有TRIM33-RET融合体的异种移植肿瘤植入NSG小鼠脑中。将这些细胞工程化以表达荧火虫荧光素酶以帮助体内生物发光成像。消化异种移植肿瘤，然后将单个细胞植入NSG小鼠的脑中。每周实施生物发光成像，并且当检测到稳健信号时，在肿瘤细胞植入后22天开始治疗(小组A和B上为第0天)。每周对小鼠成像并且在检测到稳健信号后，用50mg/kg HM06/TAS0953 BID或媒介物开始治疗(植入后22天)。如材料和方法部分所述，定量生物发光信号。媒介物处理的小鼠快速发展出肿瘤，如通过相对于平均起始信号的强生物发光信号(图9A和9B)(p<0.05)可见。然而，到第22天，在媒介物处理组和HM06处理组之间存在显著性差异(p<0.05)。HM06-处理的小鼠的存活比媒介物处理的小鼠显著更长(p<0.05)，其中三只小鼠在实验结束时仍存活，这是上一只来自媒介物处理组的动物由于肿瘤负荷而必须被处死后的第28天(图9C)。HM06/TAS0953治疗对实验动物的体重不具有任何不利影响(图9B，右图)。这些结果确认HM06/TAS0953穿过脑并且对其中存在的RET-重排的肿瘤有效。

观察到RET-特异性激酶抑制剂HM06/TAS0953阻断从未被RET抑制剂治疗的RET重排的肿瘤以及耐受多激酶RET抑制剂cabozatinib和RXDX-105的肿瘤的临床前模型的生长。HM06/TAS0953的效力与凡德他尼相当。然而，凡德他尼的治疗导致动物体重显著减轻，这对于HM06未观察到。重要地，HM06/TAS0953抑制脑中RET融合体-阳性肺癌的临床前模型的生长并且延长整体存活期。

实施例6.HM06/TAS0953在脑中的RET重排驱动的肺癌的原位异种移植模型中的效力的评价

比较了HM06/TAS0953与LOXO-292和凡德他尼在TRIM33-RET融合体-阳性肺癌的脑原位模型中的效力。使用HM06/TAS0953(50mg/kg BID)对脑中具有肿瘤的小鼠的治疗在阻断肿瘤生长方面比LOXO-292(10mg/kg和25mg/kg BID剂量)更有效。与两种剂量的LOXO-292相比，HM06/TAS0953显著延长了具有肿瘤的小鼠的存活。凡德他尼(50mg/kg QD)不降低具有肿瘤的动物的生长或存活。本文所提供的结果表明HM06/TAS0953在减低脑中肿瘤生长方面比LOXO-292更有效。

用于向动物脑中注射的细胞的制备和生物发光图像的定量：用具有GFP-荧光素酶构建体的反转录病毒转导TRIM33-RET融合细胞，然后通过FACS分离GFP-阳性细胞。将这些细胞注射至NSG小鼠的皮下侧腹以产生异种移植肿瘤。收获肿瘤并用一组肿瘤解离酶(Miltenyi Biotech)在GentleMACS组织处理器(Miltenyi Biotech)中消化60min，然后通过添加含有10％FBS的生长培养基中和消化酶，然后通过离心沉淀成粒。然后，将细胞在新鲜生长培养基中再混悬，通过75μm过滤器，计数，用PBS清洗一次，并以100,000个细胞/μL的密度在PBS中再混悬。使用具有26G针的Hamilton注射器(1μL)，将解离的肿瘤细胞在以下坐标注射至麻醉小鼠的脑中：前(X)：0.5，后(Y)：1.5，背侧(Z)：2.5。密封创口并使小鼠恢复。每周实施生物发光成像以监测肿瘤生长并使用Image J软件分析图像。测量使用阈函数所识别的涵盖单个小鼠的发光区域的所关心的区域(ROI)中的像素的面积(A)和平均强度(I)。根据非发光区域测量平均背景像素强度(B)。使用以下方程定量单个小鼠的总发光(L)：

L＝(I-B)×A，其对背景强度进行调整。

在检测到稳健信号后，将小鼠随机分配到6只小鼠的组中。在用媒介物、50mg/kgBID HM06、100mg/kg QD HM06/TAS0953和10mg/kg BID LOXO-292植入细胞后10天开始治疗。在植入后28天开始用凡德他尼(50mg/kg QD)和25mg/kg BID LOXO-292的治疗，因为它需要更长时间来从这些小鼠获得强健的生物发光信号。每周记录生物发光，并且每周称量动物体重两次。当检测到疾病病征，如缺少协调性或过量重量减轻和疲劳时，处死小鼠。

媒介物和化合物：将凡德他尼在1％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)中混合以产生混悬液。将HM06/TAS0953在0.1N HCl和0.5％羟丙甲纤维素(HPMC)中混合以产生混悬液。

统计分析：通过双向方差分析比较数据组，使用Tukey或Sidaks多重比较检验以确定显著性。认为P<0.05是2个值或数据组之间的统计学显著差异。使用Log-秩(Mantel-Cox)检验比较存活曲线。使用Graphpad Prism 8软件绘制所有图并实施统计分析。

HM06/TAS0953在抑制具有RET融合体的脑原位异种移植肿瘤模型的生长方面比LOXO-292更有效：媒介物处理的小鼠快速发展出肿瘤，如通过相对于平均起始信号的强生物发光信号(图10A和10B)可见。到治疗的第33天，媒介物组中具有-肿瘤的小鼠生病并且必须被处死。相反，处理开始后5天，得自用50mg/kg BID(p＝0.0012)或者100mg/kg QD HM06/TAS0953(p＝0.0008)处理的小鼠的荧光素酶信号显著降低。对于整个研究阶段(131天的治疗)，50mg/kg HM06/TAS0953 BID剂量阻断肿瘤生长。LOXO-292 10mg/kg BID的治疗不引起生物发光信号的任何降低，并且在用LOXO-292处理小鼠时，肿瘤继续生长(图10B)。更高剂量的LOXO-292(25mg/kg BID)在治疗前3周降低肿瘤生长，然后肿瘤继续扩大直至从处理开始后第64天开始，由于高肿瘤负荷将小鼠处死。(图10B)。与10mg/kg BID LOXO-292(p＝0.0012)和25mg/kg BID LOXO-292(p＝0.001)相比，HM06/TAS0953的处理引起具有肿瘤的小鼠的存活显著增加。在研究结束时，在HM06/TAS0953 50mg/kg BID组中的6只小鼠中，荧光素酶信号较低/不可检测，并且所有小鼠在研究结束时仍存活。在2个LOXO-292组之间，存活无差异。治疗对实验动物的体重不具有任何不利影响(图10D)。这些结果确认HM06/TAS0953穿过脑并且对其中存在的RET-重排的肿瘤有效。

RET-特异性激酶抑制剂HM06/TAS0953阻断植入小鼠脑中的具有RET融合体的肺癌细胞的生长，并且导致具有肿瘤的动物的存活的提高。考虑到10mg/kg BID剂量下的LOXO-292足以引起植入小鼠皮下侧腹的RET融合体-阳性肿瘤的消退，这些数据表明存在LOXO-292向脑中该肿瘤位点的不良递送，即使在25mg/kg BID的高剂量下仍存在。

实施例7.安全性药学研究

对于心血管系统、呼吸系统和中枢神经系统实施了安全性药学研究。HM06-01/TAS0953-01不在引发惊厥的活动和呼吸系统中发挥任何生物学相关改变。

中枢神经系统

由于HM06-01/TAS0953-01易于跨过血脑屏障，因此在几项非GLP和GLP安全性药学研究中评价了对CNS的影响。

在大鼠中的2-周毒理学GLP研究中，在第1天，在以25、50和125mg/kg BID的HM06-01/TAS0953-01的第二次每日施用后1.5小时，实施Irwin测试。每组包含10只雄性和10只雌性大鼠。以50和125mg/kg BID剂量施用的动物显示出减少的探索性活动和觉醒(arousal)。另外，以125mg/kg BID处理的雌性具有更高的平均尿池数(number of urine pools)(0.8相对于对照中的0.0)和较低的直肠温度(37.1℃相对于对照中的37.7℃)。然而，其它Irwin测试参数正常，并且动物的健康状况基本未改变，因为认为这些变化不是不利的。

为了评价潜在的促惊厥和抗惊厥作用，以0、30、100和200mg/kg SID的剂量水平经由口服灌胃向大鼠施用HM06-01/TAS0953-01。每组包含10只雄性大鼠。为了评价潜在的促惊厥活性，在25mg/kg PTZ的亚阈值剂量前1小时施用口服剂量水平的HM06-01/TAS0953-01或者35mg/kg的d-苯丙胺以评价促惊厥影响。HM06-01/TAS0953-01未显示出任何促惊厥活性。对照或HM06-01/TAS0953-01处理组中的大鼠均未表现出5级强直性/阵挛性惊厥。然而其中用d-苯丙胺预处理大鼠的阳性对照组显示出大鼠中多巴胺激动剂处理的典型重复行为以及10只大鼠中3只的完全强直性/阵挛性惊厥的诱导。为了评价相对抗惊厥作用，向Wistar大鼠口服施用HM06-01/TAS0953-01或地西泮。100和200mg/kg剂量下的HM06-01/TAS0953-01导致通过戊撑四唑的预加载测试所引起的惊厥总数的减少。这些数据表明HM06-01/TAS0953-01不具有促惊厥活性，并且值得注意的，它在大鼠中可以具有抗惊厥性质。

在狗中的2-周毒性研究和4-周毒性研究中(如实施例8中进一步描述的)，在常规临床观察期间≥15mg/kg BID的第一日剂量之后以及在PK研究中的第一施用之后的≥5mg/kg BID的剂量下，在狗中观察到了CNS症状。为了评价HM06-01的潜在神经毒剂影响，对对照狗和用45mg/kg BID HM06-01/TAS0953-01处理的狗(样品采集自2-周毒性研究的狗)的9个不同的脑区(即额叶极、视交叉、漏斗管、乳头体、第三脑神经底、脑桥前部和枕极部分、小脑和延髓)进行Fluoro-Jade C染色。另外，仅对一个对照和用45mg/kg BID处理的一只高剂量狗进行ATF3免疫染色以证实使用替代方法，不存在任何神经元退化或病痛的迹象。在对照狗和HM06-01/TAS0953-01处理狗的脑之间未观察到差异，这表示在所研究的任何狗的脑区中没有任何神经元退化和/或应激/损伤的迹象。

心血管系统

在第12天，在如以上所描述的狗中的2周毒理学GLP研究中研究了HM06-01/TAS0953-01对ECG的影响。在15、30和45mg/kg BID的剂量水平，在反复施用HM06-01/TAS0953-01后未观察到QT延长的迹象。在所有所测试的剂量水平，心率和ECG也未受影响。相反，用高剂量处理的雌性动物在第一每日剂量施用后5小时和在第二每日剂量后1小时显示出较低的动脉血压。平均动脉血压的平均值分别为91和93mmHg，相对于媒介物组中的127和115mmHg，和相对于基线中的119mmHg。在+8h，动脉血压已返回对照/基线水平。尽管这种减小相对于对照不是统计学显著的，但是它足够一致和引人注意，从而被认为是测试项目相关的。尽管如此，由于变化程度有限并且仅存在于高剂量雌性动物中并且因为这种血压降低对动物健康无不利影响，因此将它认为是非不利的。

还在第1周(第2天)、第4周(第23天)和在2周恢复期结束时，在如以上所描述的(和实施例8中进一步描述的)狗中的4-周毒理学GLP研究中研究了HM06-01/TAS0953-01对ECG的影响。在第2天，在第二每日剂量后2小时，在15、30和45mg/kg BID的剂量水平下未注意到HM06-01/TAS0953-01的影响。然而，在第23天，在15和30mg/kg BID下，在雄性动物中，未注意到对心电图参数的测试项目有关的影响。相反，在45mg/kg BID的剂量水平下，在雄性动物中，注意到心率非不利且潜在测试项目相关的轻微升高，并且在15、30和45mg/kg的剂量水平下，在雌性动物中，注意到轻微(相对于对照最多8％)的Fridericia and Van derWater修正的QTc间隔的延长。在2周恢复期结束时，不再观察到这些心电图影响。另外，在第2天和第23天以及在恢复期结束时，心电图节律和波形无异常。

呼吸系统

在实施例8中进一步描述的大鼠中的4周GLP研究中，以25、50和90mg/kg BID，通过HM06-01/TAS0953-01反复施用后，还研究了HM06-01/TAS0953-01对呼吸系统的影响。每组包含5只动物/组/性别。在第4周未观察到呼吸参数中的毒理学相关影响，并且在剂量施用期结束后2周的第6周，也未观察到延迟的长期影响。

实施例8.大鼠和狗中的4-周反复-剂量毒性研究

使用以上所提及的HM06/TAS0953二盐酸盐(HM06-01/TAS0953-01)，在大鼠和狗中的4周毒性GLP研究中评价了HM06/TAS0953的不利影响。

大鼠中的4周毒性研究

在大鼠中的4周GLP毒性研究中，动物通过口服灌胃接受0、25、50和90mg/kg BID的HM06-01/TAS0953-01。在90mg/kg BID的高剂量组中，观察了测试项目相关的死亡率：从第10天至第14天，发现3只雌性动物死亡或出于伦理原因提前处死(严重临床病征，如活动减少、异常呼吸率和皮毛直立(erected fur))。在尸检时，通常观察到肺褪色，并且肺褪色与肺中不良的中等至显著炎性变化(肺泡/血管周炎症、巨噬细胞聚集、肺泡水肿/出血)组织学相关。在剂量施用前的第7天，发现另一只雌性(卫星)动物死亡。然而，在尸检时在不存在临床病征以及异常的情况下，认为与测试项目施用的关系是可疑的。

在两种性别中均观察到了测试项目相关的临床病征并且具有剂量依赖性，如异常呼吸率、呼吸期间的异常音、活动减少/增加、运动刻板症、弓背姿势、低姿态(lowcarriage)、步态异常、垂足、闭眼、咀嚼动作、瞳孔异常以及触感冰冷。这些临床观察是瞬时的并且在剂量施用后30分钟具有更高的发病率。在剂量施用结束后，所有这些病征在恢复动物中不持续。

在25mg/kg BID和50mg/kg BID下，对体重无影响，而在90mg/kg BID，观察到两种性别体重10％的减轻，这与较低的体重增加和食物消耗减少有关。在恢复期结束时，这些影响是可逆的。

眼科学无变化，并且在呼吸功能评价中无毒理学相关的急性和慢性影响。对凝血参数无影响。

在血液学，在两种性别中均观察到了网织红细胞的剂量-依赖性增加。另外，仅在雄性动物中观察到中性粒细胞升高，并且在中等和高剂量雄性动物以及高剂量雌性动物中观察到血小板升高。还仅在高剂量下在雄性动物中观察到了统计学更高的白血球计数。在恢复期结束时，所有这些影响是可逆的。

与对照组相比，观察到平均临床化学参数的下列剂量依赖性变化，并且认为它们是测试项目相关的：

●在两种性别中观察到AST和ALT的剂量-依赖性升高。

●在所有剂量下，雄性动物中更高的AP

●在中等和高剂量下，观察到雄性动物中更高的胆固醇和较低的甘油三酯。

在恢复期结束时，所有这些影响是可逆的。

在两种性别中注意到尿蛋白浓度的剂量-依赖性升高，其中在高剂量雄性动物中具有更高的发病率(1g/L下，7/10只雄性动物)和在中等和高剂量雌性动物中具有更高的发病率(≥1g/L下，分别为4/10只雌性动物和3/7只雌性动物)。在恢复期结束时，这种影响是可逆的。通常，在第1天在第一每日剂量后7小时(第二每日剂量后1小时)和在第28天在第一每日剂量后1小时观察到T_max，并且C_max随着剂量水平的升高而升高。当在第二每日剂量后可估计时，观察到T1/2在2.03至3.67小时之间。对HM06-01/TAS0953-01的全身暴露随着剂量水平升高以大致剂量成比例的方式升高并且在性别间类似。在第28天，未注意到全身积累。

在剂量施用期结束时，在肺、胰脏(空泡形成/凋亡的腺泡细胞)、股骨(骨骺肥大(physeal hypertrophy))、睾丸/附睾(支持细胞的空泡形成、小管变性、小管内细胞碎片增加、精液含量减小)中观察到HM06-01/TAS0953-01-相关的炎性显微发现。在恢复期结束时，在终末处死和早期死亡中所观察到的测试项目相关发现对于胰脏是完全可逆的，并且主要在90mg/kg BID下，在肺和股骨中以最小严重程度显示出偶发发病率，这表明了进行性的恢复。在恢复期中，在90mg/kg BID下，睾丸和副睾中的测试项目相关变化的持续性以及发病率和严重程度的升高表明了不完全的可逆性。

基于这些结果，将严重毒性剂量10(STD 10)设置为50mg/kg BID，其对应于第1天时雄性动物50300ng·h/mL和雌性动物37200ng·h/mL的平均AUC_(0-t)，以及第28天时雄性动物73000ng·h/mL和雌性动物74300ng·h/mL的平均AUC_(0-t)。

狗中的4周毒性研究

在狗中的4-周GLP毒性研究中，动物通过口服灌胃接受0、15、30和45mg/kg BID的HM06-01/TAS0953-01连续4周，以及随后2周恢复期。在45mg/kg BID高剂量组中，观察到测试项目相关的死亡率：在第17天和第18天，出于伦理原因将2只雄性动物提前处死(与体重明显减轻有关的严重临床病征)。主要的死亡原因是轻度至中度多病灶亚急性炎症，其具有肺泡或支气管肺泡分布，在一只雄性动物中伴有肺泡异物肉芽肿。在其它雄性动物中，观察到最小胰腺腺泡空泡形成/细胞凋亡，以及前列腺腺泡细胞凋亡，对此不可以排除与测试项目的关系。

测试项目相关的临床病征是剂量-依赖性的并且在≥15mg/kg BID的剂量下，从第1天开始注意到。这些观察包括在所有剂量下，活动减少和震颤、侧卧、皮毛/皮肤染色、闭眼、步态异常、触感冰冷；在中等和高剂量水平，呕吐和流涎、尿液褪色/红色粪便、低迷/俯卧和明显的肌肉萎缩(下肢)。然而，这些临床病征是瞬时的并且在剂量施用后30分钟具有更高的发病率。

在低剂量下对体重无影响，然而在雌性动物中，在30和45mg/kg BID，并且在45mg/kg BID，在提前处死的雄性动物中在第1天和第29天之间注意到体重减轻(分别在第15天和第17天，对于雄性动物No.644，-25％，和对于雄性No.642-12％)。在恢复期结束时，中等和高剂量雌性动物体重增加，但是它们的体重增加小于对照动物。

眼科学、尿分析以及凝血和临床化学参数无变化。

在血液学中，在两种性别中由于单核细胞计数升高，总白细胞计数升高(在所有剂量下，具有剂量依赖性)并且中性粒细胞计数升高(仅在雌性动物中的高剂量以及雄性动物中的中等和高剂量)；仅在雄性动物中的高剂量下网织红细胞计数升高，并且在两种性别中在高和/或中等剂量下血小板计数升高。考虑到仅雌性动物不是剂量-依赖性的，嗜酸性粒细胞计数的减少被认为是可疑的。在恢复期结束时，所有这些影响是可逆的，除了雄性动物中的高剂量下的单核细胞和雌性动物中的嗜酸性粒细胞。

在第一每日剂量后1至8小时之间(第一每日剂量后1小时和第二每日剂量后2小时)观察到t_max。基于AUC_(0-t)，除了第28天雄性和雌性动物中的30和45mg/kg BID之间(其中升高小于按剂量成比例的)外，对HM06/TAS0953的全身暴露稍大于按剂量成比例的。在所有所施用的剂量下，在第1天和第28天，在雄性和雌性动物之间观察到对HM06/TAS0953的类似暴露。当与第1天相比时，第28天时对HM06/TAS0953的暴露在30mg/kg BID时是类似的，并且在15和45mg/kg BID，对于一些个体减小或保持类似。

在剂量施用期结束时，观察到在所有雌性动物中胸腺平均重量减小，并且在30mg/kg BID，在雄性动物中以及在45mg/kg BID时唯一存活的雄性动物中前列腺平均重量减小。在组织病理学中，HM06-01/TAS0953-01在肺(亚急性炎症，具有肺泡或支气管肺泡分布)、胰脏(腺泡细胞空泡形成/细胞凋亡)和胸腺(萎缩)中引起炎性显微发现。在恢复期结束时，肺中的测试项目相关发现显示出进行性的恢复。在恢复期结束时，在胰脏和胸腺中所观察到的组织学发现显示出在对照组和处理组中类似的严重程度和/或偶发发病率，且在比格犬研究中无自发遇到的毒性迹象或功能改变。

基于这些结果，在该研究中，将最高非严重毒性剂量(HNSTD)建立为30mg/kg BID，其对应于第1天时雄性动物中21400ng·h/mL和雌性动物中29200ng·h/mL的平均AUC(0-t)，以及在第28天时，雄性动物中22300ng·h/mL和雌性动物中29100ng·h/mL的平均AUC(0-t)。

实施例9.HM06/TAS0953的游离血浆浓度与脑和脑脊髓液中的游离浓度的相关性

根据下表3评价了在单剂量口服施用3、10和50mg/kg HM06/TAS0953二盐酸盐(剂量表示所施用的游离碱)后，HM06/TAS0953在自由移动的成年雄性Wistar大鼠的前额皮质、脑脊髓液(CSF)和血浆中的药物动力学。

表3—在葡萄糖5％中口服和IV施用后的大鼠PK参数。

在所使用的3至50mg/kg的剂量范围内，HM06/TAS0953在前额皮质(PFC)、血浆和脑脊髓液(CSF)中的暴露随剂量升高以基本剂量-成比例的方式升高。Tmax 0.5-1小时显示了HM06/TAS0953的快速吸收，其具有短半衰期、优良的F％(46-51％)、中等血浆清除率、大分布容积和微小肾清除率。图11A显示了以3、10、30和50mg/kg单次口服施用HM06/TAS0953后随时间的血浆浓度。图11B显示了以3mg/kg HM06/TAS0953单次口服和静脉内施用后随时间的血浆浓度。

一旦在室之间达到平衡，则在MetaQuant microdialysates中所观察到的来自PFC、CSF和血浆游离部分的HM06/TAS0953的浓度之比接近于1:1:1。在HM06/TAS0953施用后，该浓度比从2h维持至6.5h(对于CSF，长达8h)。图11C显示了在施用后从2h直至6.5h的血浆游离部分、PFC和CSF中的药物动力学谱的重叠。

游离血浆与游离脑浓度的1:1的浓度比表明HM06/TAS0953易于跨过血脑屏障。HM06/TAS0953的游离血浆浓度可以以良好近似用于估计脑和CSF中的游离浓度。高脑渗透性性质可以改善CNS结局(例如，控制、反应耐久性和/或保护避免CNS转移)。

实施例10.HM06/TAS0953对于RET的靶向选择性的评价

将HM06/TAS0953对RET的选择性与LOXO-292和BLU-667进行比较。如表4所示，基于IC₅₀值，与LOXO-292和BLU-667相比，HM06/TAS0953对于RET具有更高的激酶选择性。

表4——激酶抑制的IC₅₀值

从安全性角度，HM06/TAS0953对RET更大的靶向选择性可以使得由潜在脱靶激酶抑制所造成的不利影响最小化，其具有潜在临床益处。

实施例11.对于人试验的起始剂量确定

根据ICH S9指南，用于人研究的起始剂量计算基于来自4-周重复剂量GLP-顺应性毒理学研究的数据，基于10％处理大鼠中严重中毒剂量的1/10(STD 10)和狗中最高非严重中毒剂量(HNSTD)的1/6。

将4-周大鼠毒性研究中的STD 10设置在50mg/kg BID。50mg/kg BID的剂量(等于100mg/kg每日剂量)对应于8mg/kg BID的人等效剂量(HED)。应用安全系数10，对于60kg体重(BW)患者，人起始剂量可以高达0.8mg/kg或48mg BID。由于在大鼠中在2-和4-周毒性研究中所观察到的剂量-依赖性肺泡炎症以及睾丸和副睾中的测试项目相关变化，其中在口服施用≥50mg/kg SID后在大鼠中在FOB中所观察到的分别在2-周恢复期结束时的进行性恢复和不完全可逆性以及CNS影响，加上了另外2.5的安全系数。这导致提议人起始剂量为20mg BID。

狗中的最高非严重中毒剂量(HNSTD)是狗中4-周毒性研究中所测试的高剂量(30mg/kg BID)。对于60kg BW患者，30mg/kg BID的剂量(等于60mg/kg每日剂量)对应于16.2mg/kg BID或972mg BID的人等效剂量(HED)。如ICH S9指南中所指明的，应用安全系数6，对于60kg的患者，人起始剂量可以高达2.7mg/kg或162mg BID。与大鼠研究一致，由于在狗中也观察到的剂量-依赖性肺泡炎症以及在2-周恢复期结束时的进行性恢复，在狗中在4-周研究中所观察到的QTcF延长以及在从以≥15BIDmg/kg/天的剂量第一施用后第1天起在一般毒性研究期间所注意到的CNS-相关临床病征，应用了另外2.5的安全系数。这导致提议人起始剂量为64.8mg BID。

基于来自4-周重复剂量GLP-顺应性毒理学研究的数据，将人试验的起始剂量鉴定为20mg BID(即40mg/天每患者)。它基于10％处理大鼠中严重中毒剂量的1/10(STD 10)和狗中最高非严重中毒剂量(HNSTD)的1/6。加速滴定设计(ATD)将允许不将过多患者暴露于潜在无效的剂量，而施用在可接受的耐药范围内的研究药物剂量。

实施例12.HM06/TAS0953在患有具有RET基因异常的晚期实体瘤的患者中的安全性、耐药性、药物动力学(PK)和抗-肿瘤活性评价。

为了评价HM06/TAS0953的安全性、耐药性、药物动力学(PK)和抗-肿瘤活性，实施了I/II期开放标签、单臂、人类首次研究。该研究包括2个部分：I期部分，具有剂量递增和剂量扩大群组，和II期部分，具有3个群组。患有具有RET基因异常的晚期实体瘤的患者将接受治疗。在2个部分中，治疗周期为21天连续剂量施用，周期之间无治疗中断。剂量施用将继续直至疾病进展、临床益处丧失、不可接受的不良事件出现、新抗癌治疗开始、撤销同意、医师判断、死亡或失去随访。I/II期研究还将包括安全性评价，包括TEAE和严重不良事件(SAE)的频率、严重性和相关性的评价、血液学和血液化学值的变化、身体检查、生命体征和心电图(ECG)评价。

将在禁食条件(即在药物施用前2小时和后1小时之间的间隔中不应进食)下，口服BID(约每12小时)施用HM06/TAS0953片剂。

I期研究将包括HM06/TAS0953的口服治疗，起始剂量为每天两次20mg，直至实现最大耐受剂量(MTD)，连续每天剂量施用，周期持续21天。

基于临床前效力数据(在小鼠模型中口服3mg/kg/天的ED₅₀)、安全性数据(在4-周毒理学研究中在大鼠中25和50mg/kg BID的口服剂量)、通过孔搅拌模型从重组CYP数据并且采用人中50％的口服生物利用度预测的6.4mL/min/kg的人清除速率，预期从约40mg BID起始的HM06/TAS0953(其中HM06/TAS0953日暴露AUC_0-24,ss≥1650ng*h/mL)在癌症患者中显示出抗肿瘤效力迹象。最大施用剂量可以在500mg BID至1500mg BID的范围内并且提供≥22000ng*h/mL和≤63000ng*h/mL的日暴露AUC_0-24,ss。这些暴露分别等价于在大鼠中在小于STD10的25mg/kg BID安全剂量和在50mg/kg BID的STD10所实现的那些(通过乘以动物-比-人的未结合部分之比，动物中所测量的AUC值已对人进行调整)。基于以上假定，在本研究中要施用的最大剂量可以在500mg BID至1500mg BID的范围内。

II期研究将包括口服治疗，每天两次建议剂量，连续每天剂量施用，周期持续21天。

I期剂量递增

I期剂量递增研究将按照加速滴定设计(ATD)进行，其中初始加速期(每个剂量水平1位患者)为从20mg BID的起始剂量开始的100％剂量-逐步增加。在80mg BID群组之后，将加速期转换为3+3设计。如果在治疗第一周期(即治疗的前21天，周期1)中，在加速期中未观察到安全审查委员会(SRC)认为有临床意义的≥2级药物相关毒性或者剂量限制性毒性，并且0/3或<2/6的患者在标准期经历DLT，则新患者中的剂量递增将继续直至实现最大耐受剂量(MTD)。

第一群组将由1位患者组成，其将在21-天周期中连续接受21天的HM06/TAS0953。如果在周期1期间在该患者中未观察到相关毒性，则下一群组将是开放的；基于试验设计，在加速阶段中将包括1至最多3个群组，而标准阶段中群组的数目是不可预测的，因为剂量递增将继续直至达到MTD。

将MTD定义为：在周期1，与小于或等于33％的经历DLT患者有关的最高剂量水平。

将DLT定义为：第一治疗周期中的治疗紧急毒性，如在本研究规程中详细说明的(除了通过研究者确定与疾病进展或并发疾病明确相关或者与研究药物无关的AE之外)。

将建议2期剂量(RP2D)定义为：基于整体安全性、耐药性、PK数据和从来源于在剂量递增和扩大剂量水平中处理的患者的非临床数据外推的有效暴露的估计值，要在2期中测试的剂量。RP2D可以等于或小于，但不能大于MTD。如果未达到MTD，则RP2D可以不大于最大测试剂量。

I期剂量递增研究的第一目标是确定前21天治疗(周期1)内的最大耐受剂量(MTD)并鉴别建议2期剂量(RP2D)。

I期剂量递增研究的主要第二目标是评价在单次和多次剂量施用后血浆中HM06/TAS0953及其代谢产物的各个PK谱(密集采样)；在单次剂量施用后尿液中的排泄；安全性和耐药性；抗肿瘤活性；和在治疗期间通过液体活组织检查获得的循环游离核酸中RET基因状态的变化。可以经由测量HM06/TAS0953和主要代谢产物以及PK参数，包括(但不限于)从时间0至24小时的曲线下面积(AUC0-24)、最大药物浓度(Cmax)、达到最大血浆浓度的时间(Tmax)和积累程度来评价HM06/TAS0953和代谢产物的药物动力学评价。可以确定HM06/TAS0953在脑脊髓液(CSF)中的浓度。可以同时收集血浆样品以评价CSF/血浆比。

该研究可以包括多至36位对于DLT评价可评价的患者；患者的总数将取决于所需要的剂量递增数目和可能的患者替换。目标研究群体可以包括具有RET基因异常的晚期实体瘤患者。

I期剂量扩大：

在I期剂量扩大研究中，RP2D剂量水平将随额外患者的招募而扩大。在患者亚组中，将根据随机交叉设计评价食物对HM06/TAS0953生物利用度的影响。

I期剂量扩大研究的第一目标是确认将在3个II期群组中使用的目标群体中的建议2期剂量(RP2D)。时间框剂量递增将是前21天治疗(周期1)和约10个月(或者如果患者在研究中中止，则将更早)的每个周期(21天)。

I期剂量扩大研究的主要第二目标是评价通过对于个体PK鉴定在患者亚组中密集采样以及对于群体PK分析在所有其它患者中稀疏采样，HM06/TAS0953及其代谢产物稳态下在血浆中的个体PK谱；食品对患者亚组中HM06/TAS0953生物利用度的影响；安全性和耐药性；抗肿瘤活性；和在治疗期间通过液体活组织检查获得的循环游离核酸中RET基因状态的变化。

所述研究可以包括20至30位患者，包括至少10位患者在基线时CNS转移可测量(根据RANO工作组建议)。在剂量扩大期间，可以在PK评价中所包括的10位患者中发生对HM06/TAS0953生物利用度的初步食物影响评价。

目标研究群体包括患有具有原发性RET基因融合(具有或不具有耐药突变)的局部晚期或转移性NSCLC且对RET选择性抑制剂在先暴露的患者。患者必须具有在现有疗法后研究人员认为已显示出临床益处或者不能接受这些疗法的疾病所记录的进展。

II期：

在II期研究中，将在三个群组中在RP2D水平治疗患者：群组1和群组2(关键性)和群组3(探索性)。

II期研究的第一目标是评价所选的RP2D在3个不同群体中的抗肿瘤活性(整体和颅内(如果有的话))。前6个月约每6周(±1周)评价反应率，此后每9周(±1周)在未进展的患者中评价，直至疾病进展或研究完成。

II期研究的主要第二目标是评价三个群组中的安全性和耐药性；通过对于群体PK分析在所有患者中稀疏采样，HM06/TAS0953及其代谢产物稳态下在血浆中的个体PK谱；和在治疗期间通过液体活组织检查获得的循环游离核酸中RET基因状态的变化。可以确定HM06/TAS0953在脑脊髓液(CSF)中的浓度。可以同时收集血浆样品以评价CSF/血浆比。

其它第二结果测量可以包括通过研究人员的ORR(客观反应率)；疾病控制率；肿瘤反应时间；反应持续时间；进展时间；无恶化存活期；整体存活期；以及与中枢神经系统特别相关的任何上述测量。

II期研究可以包括在群组1中：单一阶段设计中的55位患者。该研究可以包括在群组2中：根据Simon二阶段设计，多至61位患者(第一阶段中继续的24位患者和第二阶段的37位)。该研究可以包括在群组3中：每个肿瘤类型组3位患者。如果观察到临床益处，则可以招募更多患者。

群组1(关键性)中的目标研究群体可以包括：患有具有原发性RET基因融合(具有或不具有耐药突变)的局部晚期或转移性NSCLC且对RET选择性抑制剂在先暴露的患者：具有在现有疗法后研究人员认为已显示出临床益处或者不能接受这些疗法的疾病所记录的进展的患者；具有和不具有可测量的脑和/或脑膜转移的患者。

群组2(关键性)中的目标研究群体可以包括：对RET选择性抑制剂未治疗过的具有RET基因融合的局部晚期或转移性NSCLC患者：具有在现有疗法后研究人员认为已显示出临床益处或者不能接受这些疗法的疾病所记录的进展的患者；具有和不具有可测量的脑和/或脑膜转移的患者。

群组3(探索性)中的目标研究群体可以包括：患有具有RET基因异常的晚期实体瘤(除具有原发性RET基因融合的NSCLC患者以外)且所有可用的治疗选择均失败或者根据研究人员的意见，不可能明显受益于其它疗法和/或如果患者拒绝其它疗法的患者。

I/II期研究的入选标准可以包括：

●I期—剂量递增/剂量扩大的常见入选标准：

○≥18岁的男性或女性患者。

○东部肿瘤学协作组(ECOG)表现得分为0或1。

○在基线对组织活组织检查或液体活组织检查确定的可用的RET-基因异常。

○如下所定义的，造血充足：

■血小板计数≥100,000/μL

■绝对中性粒白细胞计数≥1,500/μL

■血红蛋白水平≥9.0g/dL(可以使用红细胞输血和促红细胞生成素以达到至少9.0g/dL，但是在研究药物的第一剂量之前必须施用至少2周)。

○足够的肝功能，其定义为总血清胆红素水平≤1.5×正常值上限(ULN)，血清白蛋白≥2g/dL，如果不存在肝转移，AST和ALT水平≤2.5×ULN；如果存在肝转移，≤5×ULN。

○足够的肾功能，其定义为血清肌酐≤2×ULN或者估计的肌酐清除率≥60mL/min。

○具有生育潜能和处于妊娠风险的男性和女性患者必须同意在签署知情同意书之日起，在整个研究期间并且在最后一次分配治疗剂量后继续180天，使用高效避孕方法。如果根据研究人员的意见，患者具有生育潜能，则他/她是生物学上能够具有孩子的并且是性活跃的。

●I期剂量递增-具体入选标准：

○患有具有RET基因异常迹象的晚期实体瘤的患者。

○如通过RECIST 1.1所确定的，可测量和/或不可测量的疾病

○患者必须记录在用于晚期实体瘤的至少一种在先或多线疗法后的疾病进展或者患者已用尽了所有可用的疗法。

○如果患者具有脑和/或脑膜转移，他/她应是无症状的。根据RANO工作组(WG)建议，可测量和不可测量的病变两者都是允许的。

○如果已用在先RET选择性抑制剂治疗患者，则从在先RET选择性抑制剂治疗到HM06/TAS0953的第一剂量之间必须过去至少5个半衰期。

●I期剂量扩大-具体入选标准：

○患有具有原发性RET基因融合(具有或不具有耐药突变)的局部晚期或转移性NSCLC且对RET选择性抑制剂在先暴露的患者：

■具有在现有疗法后研究人员认为已显示出临床益处或者不能接受这些疗法的疾病所记录的进展；

■在基线具有或不具有脑和/或脑膜转移。

○如果患者具有脑和/或脑膜转移，他/她应具有：

■停止类固醇和抗惊厥剂至少7天的无症状、未处理的脑/脑膜转移(如果尺寸合格，则这些应作为目标病变采集)或者

■已用局部疗法(WBRT/SRT/手术)治疗并且在研究药物施用前通过类固醇和抗惊厥剂临床稳定至少7天的无症状脑转移。

○如通过RECIST 1.1所确定的，可测量的疾病。

○从在先RET选择性抑制剂治疗到HM06/TAS0953的第一剂量必须过去至少5个半衰期。

○优先通过NGS测试的任一种RET状态记录局部控制或显示出来自先前RET抑制剂治疗的明显且持久(>6个月)的临床益处。

●II期-对于群组1-3的常见入选标准

○≥18岁的男性或女性患者。

○东部肿瘤学协作组(ECOG)表现得分为0-2。

○在基线对组织活组织检查或液体活组织检查确定的可用的RET-基因异常。

○如通过RECIST 1.1所确定的，可测量的疾病。

○如果患者具有脑和/或脑膜转移，他/她应具有：

■停止类固醇和抗惊厥剂至少7天的无症状、未处理的脑/脑膜转移(如果尺寸合格，则这些应作为目标病变采集)或者

■已用局部疗法(WBRT/SRT/手术)治疗并且在研究药物施用前通过类固醇和抗惊厥剂临床稳定至少7天的无症状脑转移。

○如下所定义的，造血充足：

■血小板计数≥100,000/μL

■绝对中性粒白细胞计数≥1,500/μL

■血红蛋白水平≥9.0g/dL(可以使用红细胞输血和促红细胞生成素以达到至少9.0g/dL，但是在研究药物的第一剂量之前必须施用至少2周)。

○足够的肝功能，其定义为总血清胆红素水平≤1.5×ULN，血清白蛋白≥2g/dL，如果不存在肝转移，AST和ALT水平≤2.5×ULN；如果存在肝转移，≤5×ULN。

○足够的肾功能，其定义为血清肌酐≤2×ULN或者估计的肌酐清除率≥60mL/min。

○具有生育潜能和处于妊娠风险的男性和女性患者必须同意从筛选时第一次阴性妊娠测试时起，在整个研究期间并且在最后一次分配治疗剂量后继续180天，使用高效避孕方法。如果根据研究人员的意见，患者具有生育潜能，则他/她是生物学上能够具有孩子的并且是性活跃的。

●II期群组1-具体入选标准：

○患有具有原发性RET基因融合(具有或不具有耐药突变)的局部晚期或转移性NSCLC且对RET选择性抑制剂在先暴露的患者。

○在现有疗法后研究人员认为已显示出临床益处或者不能接受这些疗法的疾病所记录的进展。

○从在先RET选择性抑制剂治疗到HM06/TAS0953的第一剂量必须过去至少5个半衰期。

○优先通过NGS测试的任一种RET状态记录局部控制或显示出来自先前RET抑制剂治疗的明显且持久(>6个月)的临床益处。

●II期群组2-具体入选标准：

○患有具有RET基因融合的局部晚期或转移性NSCLC且对RET选择性抑制剂无在先暴露的患者。

○对于在现有疗法后研究人员认为已显示出临床益处或者不能接受这些疗法的疾病所记录的进展。

●II期群组3-具体入选标准：

○患有具有RET基因异常的晚期实体瘤(除具有原发性RET基因融合的NSCLC患者以外)且所有可用的治疗选择均失败或者根据研究人员的意见，不可能明显受益于其它疗法和/或如果患者拒绝其它疗法的患者；这可以包括(但不限于)：

■对选择性RET抑制剂已进展或出现不耐受性的甲状腺髓样癌或未分化甲状腺癌；

■转移性乳腺癌；

■转移性胰腺腺癌；

■在(但不限于)EGFR/ALK/ROS1/BRAF靶向疗法后，具有新出现的RET途径的NSCLC。

○如果已用在先RET选择性抑制剂治疗患者，则从在先RET选择性抑制剂治疗到HM06/TAS0953的第一剂量之间必须过去至少5个半衰期。

I/II期研究的排除标准可以包括：

●I期—剂量递增/剂量扩大的常见排除标准：

○哺乳的妇女。

○在第一研究药物剂量前5个半衰期内的研究性试剂或抗癌疗法(或者对于长效药物，如抗癌抗体及其它生物药物，1个半衰期，只要没有残余毒性)。

○第一研究药物剂量前4周内的大手术(不包括血管通路的放置)或者计划在研究治疗过程期间经历大手术。

○在第一研究药物剂量前14天内已接受WBRT或者在第一研究药物剂量前7天内已接受其它缓解性放射疗法的患者，或者如果根据研究人员的意见，这是有临床意义的，则尚未从这种疗法的副作用中恢复的患者。

○具有原发性CNS肿瘤的患者。

○临床显著的不受控制的心血管疾病，包括周期1的第1天之前3个月内的心肌梗塞、显著的瓣膜疾病或心包疾病、室性心动过速史、纽约心脏协会(NYHA)III-IV类的症状性充血性心力衰竭(CHF)和根据研究人员的意见，严重的不受控制的高动脉压。

○使用Fridericia公式修正的持续随时间的QT间隔(QTcF)>470msec；延长的QT综合征的个人史或家族史或者尖端扭转型室性心动过速(Torsades de pointes，TdP)史。TdP不受控制且持久的风险因素史(例如，心力衰竭、低钾血、尽管是最优治疗，延长QT/QTc间隔的伴随药物的使用)。

○ HIV、乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒的当前活动性感染。

○间质性肺病的记录史以及需要类固醇药物的间质性肺病的当前迹象。

○根据研究人员的意见，将影响药物吸收的临床显著的胃肠异常。

○根据研究人员的意见，将影响研究药物疗法的影响消化功能的临床显著的疾病(包括慢性腹泻)。

○第一研究药物剂量前1周(7天)内，使用强CYP3A4抑制剂的治疗。

○第一研究药物剂量前3周(21天)内使用强CYP3A4诱导剂的反复治疗。

○已知的对HM06/TAS0953中的添加剂的超敏反应。

○根据研究人员的意见，可能混淆研究结果或者在向患者施用研究性产品中具有无保证的风险的任何疾病或医学病况。

●I期剂量递增-具体排除标准：

○在基线具有有症状的CNS转移的患者。

●I期剂量扩大-具体排除标准：

○在基线具有不受局部和/或全身疗法控制的有症状的脑和/或脑膜转移的患者。

○已知的EGFR、KRAS、ALK、HER2、ROS1、BRAF和METex14激活突变的存在。

●II期-对于群组1-3的常见排除标准：

○哺乳的妇女。

○在第一研究药物剂量前5个半衰期内的研究性试剂或抗癌疗法(或者对于长效药物，如抗癌抗体或其它生物药物，1个半衰期，只要没有残余毒性)。

○第一研究药物剂量前4周内的大手术(不包括血管通路的放置)或者计划在研究治疗过程期间经历大手术。

○在第一研究药物剂量前14天内已接受WBRT或者在第一研究药物剂量前7天内已接受其它缓解性放射疗法的患者，或者如果根据研究人员的意见，这是有临床意义的，则尚未从这种疗法的副作用中恢复的患者。

○具有原发性CNS肿瘤的患者。

○在基线具有不受局部和/或全身疗法控制的有症状的脑和/或脑膜转移的患者。

○临床显著的不受控制的心血管疾病，包括周期1的第1天之前3个月内的心肌梗塞、显著的瓣膜疾病或心包疾病、室性心动过速史、纽约心脏协会(NYHA)III-IV类的症状性充血性心力衰竭(CHF)和根据研究人员的意见，严重的不受控制的高动脉压。

○使用Fridericia公式修正的持续随时间的QT间隔(QTcF)>470msec；延长的QT综合征的个人史或家族史或者尖端扭转型室性心动过速(Torsadesde pointes，TdP)史。TdP不受控制且持久的风险因素史(例如，心力衰竭、低钾血、尽管是最优治疗，延长QT/QTc间隔的伴随药物的使用)。

○ HIV、乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒的当前活动性感染。

○间质性肺病的记录史以及需要类固醇药物的间质性肺病的当前迹象。

○根据研究人员的意见，将影响药物吸收的临床显著的胃肠异常。

○根据研究人员的意见，将影响研究药物疗法的影响消化功能的临床显著的疾病(包括慢性腹泻)。

○第一研究药物剂量前1周(7天)内，使用强CYP3A4抑制剂的治疗。

○第一研究药物剂量前3周(21天)内使用强CYP3A4诱导剂的反复治疗。

○已知的对HM06/TAS0953中的添加剂的超敏反应。

○根据研究人员的意见，可能混淆研究结果或者在向患者施用研究性产品中具有无保证的风险的任何疾病或医学病况。

●II期群组1-具体排除标准：

○已知的EGFR、KRAS、ALK、HER2、ROS1、BRAF和METex14激活突变的存在。

●II期群组2-具体排除标准：

○已知的EGFR、KRAS、ALK、HER2、ROS1、BRAF和METex14激活突变的存在。

●II期群组3-具体排除标准：

○无。

药物施用：

作为二盐酸盐(HM06-01/TAS0953-01)制备用于临床使用的HM06/TAS0953。将该产品配制为用于口服使用的片剂。以10和50mg/单元(表示为游离碱)的剂量通过片剂进行研究。预期储存条件为冷藏条件(控制温度在2°至8℃[36°至46℉]之间)。

将在禁食条件(即在药物施用前2小时和后1小时之间的间隔中不应进食)下，使用20mg(起始剂量)BID，口服BID(约每12小时)施用HM06/TAS0953片剂。

实施例13.I期研究的剂量递增部分进行至320mg BID剂量水平

尽管I期研究的递增部分仍在进行中，但是在施用160mg BID的患者中来自第一治疗周期的安全性信息使得剂量递增至320mg BID的剂量水平。该过程符合以上实施例12中所列的研究规程，即当来自以具体剂量水平对根据规程招募的患者进行的第一治疗周期的安全性数据可用时，举行安全审查委员会(SRC)会议来递增该剂量。如以上实施例12中所讨论的，在本研究中要施用的最大剂量可以在500mg BID至1500mg BID的范围内。

实施例14.HM06/TAS0953对RET溶剂前沿突变的细胞效力

尽管选择性RET抑制剂LOXO-292(塞尔帕替尼)和BLU-667(普雷西替尼)在非小细胞肺癌中显示出临床抗肿瘤活性，但是已出现了受RET溶剂前沿突变驱动的获得性耐药性(例如，RET^G810R/S/C)。(参见Subbiah,V等人,Ann Oncol.2021,32(2):261-268；Lin JJ等人,Ann Oncol.2020,31(12):1725-1733；Solomon BJ等人,J Thorac Oncol.2020,15(4):541-549；Fancelli S等人,Cancers(Basel).2021,13(5):1091.doi:10.3390/cancers13051091)。在这些情况下，目前对于这些患者在用塞尔帕替尼或普雷西替尼复发后没有其它可用的治疗选择。

在工程化Ba/F3细胞中研究了对RET野生型融合和RET突变，包括看门基因突变V804L/M和塞尔帕替尼或普雷西替尼耐药突变G810R/S的细胞效力。在96-孔板中培养了约1,000个细胞/孔，并用HM06/TAS0953、凡德他尼、BLU-667或LOXO-292处理72小时(在37℃，3天)。使用CellTiter-Glo 2.0测定(Promega Corporation)通过发光评价细胞存活力。使用XLfit软件(ID Business Solutions)中的S形剂量反应模型计算GI50值(与未用化合物处理的对照相比，发挥50％生长抑制的浓度)。数据表示为得自3个独立实验的数据的平均值±SD。

表5显示了IC50数据。已发现Ba/F3 KIF5B-RET^G810R/S细胞不仅耐受BLU-667，而且还耐受LOXO-292。然而，Ba/F3 KIF5B-RET^G810R/S细胞对HM06/TAS0953敏感。

另外，Ba/F3 KIF5B-RET^V804L/M细胞对HM06/TAS0953、BLU-667和LOXO-292敏感，但对凡德他尼不敏感。

表5.

为了帮助阐明RET^G810R/S突变体仍对HM06/TAS0953敏感的机制，检查了与TAS化合物1(具有类似于HM06/TAS0953的结构)、BLU-667和LOXO-292复合的RET激酶结构域的晶体结构。所述复合物的X射线晶体结构显示与BLU-667和LOXO-292相比，TAS化合物1对RET具有独特的结合模式。如图12A所示，基于共晶体结构数据，BLU-667和LOXO-292结合至RET中相同的口袋(口袋B)，而TAS化合物1以不同结合模式结合至RET中的不同口袋(口袋A)。TAS化合物1不在G810的侧链方向上填充空间，表明HM06/TAS0953可以有效绕过来自溶剂前沿替换的空间位阻。这种特性可能有助于HM06/TAS0953在G810突变中维持其生物学效力的能力。

TAS化合物1的结构式是：

图12B和12C显示了在RET氨基酸残基806-810的区域内RET共晶体复合物的结构分析的放大图。图12B显示了RET和TAS化合物1、BLU-667和LOXO-292的共晶体复合物，并且图12C显示了RET和TAS化合物1的共晶体复合物。甘氨酸810接近BLU-667和LOXO-292两者，并且在该位置的替换可以影响对那些抑制剂的空间位阻。相反，TAS化合物1不插入由氨基酸残基806-810组成的口袋。

所述数据与对RET突变(例如，G810R/S)的抑制模式在HM06/TAS0953和BLU-667/LOXO-292之间不同的生物学数据一致。

实施例15.HM06/TAS0953对RET突变体的药理学效力

通过KIF5B-RET磷酸化的In-Cell Western^TM(ICW)分析，在瞬时转染的HEK293细胞中检验了多种RET突变，包括溶剂前沿KIF5B-RET^{G810R/A/C/D/S}突变体对HM06/TAS0953、BLU-667和LOXO-292的敏感性。基于三个单独的实验计算IC50值并且数据总结于下表6中。

HM06/TAS0953对野生型KIF5B-RET的效力等价于BLU-667和LOXO-292的效力。通过HM06/TAS0953抑制RET突变的模式不同于通过LOXO-292和BLU-667抑制的那些模式。HM06/TAS0953抑制G810X突变，其中HM06/TAS0953抑制RET^G810X磷酸化的IC50值在35.4至282nmol/L的范围内。HM06/TAS0953对G810X突变的效力高于BLU-667和LOXO-292的效力。另外，HM06/TAS0953对L730X、G736A、L760Q、L772M、Y806C和A883V的效力也高于BLU-667和LOXO-292的效力，而HM06/TAS0953对I788N和L865V的效力低于BLU-667和LOXO-292的效力。数据表明HM06/TAS0953对KIF5B-RET的点突变可以是有效的，其对其它RET抑制剂，如LOXO-292和/或BLU-667显示出耐药性。

表达载体的产生

使用Gateway技术产生表达载体。首先，使用KIF5B-RET PCR产物、pDONR 221载体(Invitrogen Corporation)和Gateway BP克隆酶酶混合(Invitrogen Corporation)构建入门载体(pENTR/KIF5B-RET)。然后，使用入门载体，pJTI FAST KO2-PuroR表达载体构建KIF5B-RET表达载体，所述pJTI FAST KO2-PuroR表达载体在Taiho PharmaceuticalCo.Ltd.使用pJTI-FAST DEST表达载体(Thermo Fisher Scientific)和Gateway LR克隆酶酶混合(Invitrogen Corporation)修饰。

In-Cell Western

使用TransIT-X2(Mirus Bio LLC.)用KIF5B-RET表达载体瞬时转染Jump-InGripTite HEK293细胞。在以多种浓度用每种测试化合物处理1小时后，用20％福尔马林中性缓冲溶液固定细胞。然后，用(PBS)封闭缓冲液(Li-COR Inc.)在室温下封闭微板1小时，并在4℃与/>(PBS)封闭缓冲液稀释的一抗(抗-磷酸化-RET(Tyr905)抗体(目录号No.3221，Cell Signaling Technology,Inc.)和抗-RET抗体(目录号No.sc-101422，Santa Cruz Biotechnology,Inc.))培育过夜。随后清洗微板并与第二抗体(山羊抗-兔IRDye 800CW和山羊抗-小鼠IRDye 680RD)(Li-COR Inc.)培育。

在清洗微板后，使用Odyssey CLx成像系统(Li-COR Inc.)定量每个孔的荧光。如下确定T/C(％)：

(测试化合物的平均信号)/(对照的平均信号)×100

平均信号：(磷酸化-RET的荧光-背景)/(RET的荧光-背景)

使用XLFit，通过对浓度vs.T/C(％)曲线拟合计算IC50值。通过三个单独的实验确定IC50值。

表6—IC₅₀值的总结

实施例16.HM06/TAS0953在皮下植入Ba/F3 KIF5B-RET^G810R细胞的裸鼠中的抗肿瘤作用的评价

HM06/TAS0953在KIF5B-RET^G810R动物肿瘤模型中显示出显著的抗肿瘤作用和明显的靶向抑制，从而表明HM06/TAS0953在治疗具有KIF5B-RET基因(所述KIF5B-RET基因具有G810R突变)的肿瘤中可以是有效的。在低至每天两次10mg/kg的剂量下，HM06/TAS0953显著抑制肿瘤生长和磷酸化-RET。除其对野生型RET的选择性高效力外，HM06/TAS0953显示出对G810R溶剂前沿突变的显著效力，所述G810R溶剂前沿突变在体外和体内对塞尔帕替尼和普雷西替尼高度耐受。

在第一研究中，将Ba/F3 KIF5B-RET^G810R细胞(5×10⁶个细胞/小鼠)混悬在50％matrigel(Corning Incorporated)/PBS中并皮下植入雄性无胸腺裸鼠(BALB/cAJcl-nu/nu,CLEA Japan,Inc.)。在含有0.1mol/L HCl的0.5w/v％HPMC(Shin-Etsu Chemical Co.,Ltd.)中配制HM06/TAS0953、LOXO-292和BLU-667。植入后1周，将小鼠随机分组至不同处理组以平衡每组中的平均肿瘤体积，并且口服施用媒介物(bid)、HM06/TAS0953(10，30mg/kg，bid)、LOXO-292(10，30mg/kg，bid)或者BLU-667(10，30mg/kg，bid)14天。施用含有0.1mol/LHCl的0.5w/v％HPMC的媒介物的组是对照组。使用数字卡尺(Mitutoyo)测量肿瘤的长度和宽度并如下计算肿瘤体积：[长度×(宽度)²]/2。每周测量两次小鼠的肿瘤体积和体重直至研究结束。

通过使用Dunnett检验确定统计显著性以将处理组中的肿瘤体积与对照组相比较。经由EXSUS 10.0版(CAC Exicare Corporation)，使用SAS 9.4版(SAS InstituteJapan)进行统计分析。P-值小于0.05被认为表示统计显著性。

图13A和13B显示了分别以10mg/kg的低剂量(图13A)和30mg/kg的高剂量(图13B)每天施用两次的HM06/TAS0953、LOXO-292和BLU-667的肿瘤体积的影响。将数据表示为平均值±SE(每组，n＝5)。如图13A中所反映的，在低剂量处理组中，仅用10mg/kg HM06/TAS0953处理的组显示在研究结束时与对照组相比，肿瘤体积显著减小(*反映p<0.05；Dunnett检验)。如图13B所示，在研究结束时，与对照组相比，每个高剂量处理组中的肿瘤体积减小(*反映p<0.05；Dunnett检验)。此外，如图13B所示，在研究结束时，仅以30mg/kg处理的HM06/TAS0953组未显示出肿瘤再生长，而LOXO-292和BLU-667组显示出平行于对照组的肿瘤再生长趋势。图13C显示了在治疗期期间，以上剂量对体重的影响。就组间的体重变化而言，无显著变化。将数据表示为平均值±SE(每组，n＝5)。BLU-667 30mg/kg组中的一只小鼠由于事故死亡。

在第二研究中，将Ba/F3 KIF5B-RET^G810R细胞(5×10⁶个细胞/小鼠)混悬在50％matrigel(Corning Incorporated)/PBS中并皮下植入6周大的雄性无胸腺裸鼠(BALB/cAJcl-nu/nu,CLEA Japan,Inc.)。在含有0.1mol/L HCl的0.5w/v％HPMC(Shin-EtsuChemical Co.,Ltd.)中配制HM06/TAS0953、LOXO-292和BLU-667。植入后5天，将小鼠随机分组至不同处理组以平衡每个组中的平均肿瘤体积，并且口服施用媒介物(bid)、HM06/TAS0953(50mg/kg，bid)、LOXO-292(30mg/kg，bid)或者BLU-667(30mg/kg，bid)14天。施用含有0.1mol/L HCl的0.5w/v％HPMC的媒介物的组是对照组。使用数字卡尺(Mitutoyo)测量肿瘤的长度和宽度并如下计算肿瘤体积：[长度×(宽度)2]/2。每周测量两次小鼠的肿瘤体积和体重直至研究结束。

通过使用Dunnett检验确定统计显著性以将处理组中的TV与对照组相比较。经由EXSUS 10.0版(CAC Exicare Corporation)，使用SAS 9.4版(SAS Institute Japan)进行统计分析。P-值小于0.05被认为表示统计显著性。

图14A显示了HM06/TAS0953、LOXO-292和BLU-667对肿瘤体积的影响，其中以每日两次50mg/kg的剂量施用HM06/TAS0953，并且分别以每日两次30mg/kg的剂量施用LOXO-292和BLU-667。将数据表示为平均值±SE(每组，n＝5)。第15天时，试剂处理组中的平均肿瘤体积显著小于对照组(p<0.05，Dunnet检验)。另外，第15天时HM06/TAS0953组中的平均肿瘤体积显著小于LOXO-292和BLU-667组(分别p<0.05，Turkey检验)。尽管在第15天时LOXO-292和BLU-667显示出肿瘤再生长的趋势，但是HM06/TAS0953显示出一致的肿瘤消退。图14B显示了在治疗期期间，剂量对体重的影响。就组间的体重变化而言，无显著变化。将数据表示为平均值±SE(每组，n＝5)。

在施用后1小时，通过免疫印迹评价了HM06/TAS0953、LOXO-292和BLU-667对Ba/F3KIF5B-RET^G810R肿瘤中的RET磷酸化的抑制作用。分别向具有Ba/F3KIF5B-RET^G810R的小鼠口服施用10、30或50mg/kg的HM06或者10或30mg/kg的LOXO292和BLU667一次。在剂量施用后1小时收集并裂解肿瘤。对细胞裂解液免疫印迹以检测磷酸化RET(pRET)、RET和GAPDH(对照)。如图15A(第一研究)和15B(第二研究)的免疫印迹所示，与对照组相比，在HM06/TAS0953组中观察到RET磷酸化显著降低，而在LOXO-292和BLU-667组中观察到轻微降低。

在以上所描述的2个研究中的每一个中进行免疫印迹。施用后1小时收集肿瘤。用补充有cOmplete^TM，mini蛋白酶抑制剂混合物(Roche Applied Science)和PhosSTOP^TM磷酸酶抑制剂混合物(Roche Applied Science)的样品稀释剂浓缩液2(Sample DiluentConcentrate 2，R&D Systems)裂解肿瘤组织。对裂解液进行SDS-PAGE并转移至PVDF膜(Trans-Blot turbo Blotting System；Bio-rad)。然后，用Blocking One-P(NacalaiTesque Inc.)封闭膜，并在4℃与一抗培育过夜。将磷酸化-Ret(Tyr905)抗体(#3221,CellSignaling Technology)、Ret(C31B4)兔mAb(#3223,Cell Signaling Technology)和GAPDH(D16H11)兔mAb(#5174,Cell Signaling Technology)用作一抗。随后，清洗膜，在室温下与二抗(#7074,Cell Signaling Technology)培育1小时并再次清洗。通过发光图像分析器(AmershamTM Imager 600QC,GE Healthcare Japan Corporation)获得化学发光图像。将GAPDH用作内部控制。

等价形式

以上书面说明书被认为足以使本领域技术人员能够实践实施方式。以上描述和实施例详细说明了某些实施方式并且描述了发明人所考虑的最佳方式。然而，将理解无论可以在正文中多么详细地描述上述内容，但是可以以多种方式实践实施方式并且应根据所附权利要求及其任何等价形式进行理解。

如本文所使用的，无论是否明确表示，术语约是指数值，包括(例如)整数、部份和百分比。术语约一般地表示本领域技术人员将认为等于所列举的数值(例如，具有相同功能或结果)的范围数值(例如，所列举范围的+/-5-10％)。当术语，如至少和约置于数值或范围列表之前时，该术语修饰该列表中所提供的所有的值或范围。在一些情况下，术语约可以包括圆整至最近的有效数字的数值。

SEQUENCE LISTING

<110> 赫尔森保健股份公司

大鹏药品工业株式会社

<120> 使用4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙

-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-D]嘧啶-5-羧酰胺治疗肿瘤的方法

<130> HEL050BWO

<150> US 63/116,282

<151> 2020-11-20

<150> US 63/229,626

<151> 2021-08-05

<160> 8

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 5617

<212> DNA

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 1

agtcccgcga ccgaagcagg gcgcgcagca gcgctgagtg ccccggaacg tgcgtcgcgc 60

ccccagtgtc cgtcgcgtcc gccgcgcccc gggcggggat ggggcggcca gactgagcgc 120

cgcacccgcc atccagaccc gccggcccta gccgcagtcc ctccagccgt ggccccagcg 180

cgcacgggcg atggcgaagg cgacgtccgg tgccgcgggg ctgcgtctgc tgttgctgct 240

gctgctgccg ctgctaggca aagtggcatt gggcctctac ttctcgaggg atgcttactg 300

ggagaagctg tatgtggacc aggcagccgg cacgcccttg ctgtacgtcc atgccctgcg 360

ggacgcccct gaggaggtgc ccagcttccg cctgggccag catctctacg gcacgtaccg 420

cacacggctg catgagaaca actggatctg catccaggag gacaccggcc tcctctacct 480

taaccggagc ctggaccata gctcctggga gaagctcagt gtccgcaacc gcggctttcc 540

cctgctcacc gtctacctca aggtcttcct gtcacccaca tcccttcgtg agggcgagtg 600

ccagtggcca ggctgtgccc gcgtatactt ctccttcttc aacacctcct ttccagcctg 660

cagctccctc aagccccggg agctctgctt cccagagaca aggccctcct tccgcattcg 720

ggagaaccga cccccaggca ccttccacca gttccgcctg ctgcctgtgc agttcttgtg 780

ccccaacatc agcgtggcct acaggctcct ggagggtgag ggtctgccct tccgctgcgc 840

cccggacagc ctggaggtga gcacgcgctg ggccctggac cgcgagcagc gggagaagta 900

cgagctggtg gccgtgtgca ccgtgcacgc cggcgcgcgc gaggaggtgg tgatggtgcc 960

cttcccggtg accgtgtacg acgaggacga ctcggcgccc accttccccg cgggcgtcga 1020

caccgccagc gccgtggtgg agttcaagcg gaaggaggac accgtggtgg ccacgctgcg 1080

tgtcttcgat gcagacgtgg tacctgcatc aggggagctg gtgaggcggt acacaagcac 1140

gctgctcccc ggggacacct gggcccagca gaccttccgg gtggaacact ggcccaacga 1200

gacctcggtc caggccaacg gcagcttcgt gcgggcgacc gtacatgact ataggctggt 1260

tctcaaccgg aacctctcca tctcggagaa ccgcaccatg cagctggcgg tgctggtcaa 1320

tgactcagac ttccagggcc caggagcggg cgtcctcttg ctccacttca acgtgtcggt 1380

gctgccggtc agcctgcacc tgcccagtac ctactccctc tccgtgagca ggagggctcg 1440

ccgatttgcc cagatcggga aagtctgtgt ggaaaactgc caggcattca gtggcatcaa 1500

cgtccagtac aagctgcatt cctctggtgc caactgcagc acgctagggg tggtcacctc 1560

agccgaggac acctcgggga tcctgtttgt gaatgacacc aaggccctgc ggcggcccaa 1620

gtgtgccgaa cttcactaca tggtggtggc caccgaccag cagacctcta ggcaggccca 1680

ggcccagctg cttgtaacag tggaggggtc atatgtggcc gaggaggcgg gctgccccct 1740

gtcctgtgca gtcagcaaga gacggctgga gtgtgaggag tgtggcggcc tgggctcccc 1800

aacaggcagg tgtgagtgga ggcaaggaga tggcaaaggg atcaccagga acttctccac 1860

ctgctctccc agcaccaaga cctgccccga cggccactgc gatgttgtgg agacccaaga 1920

catcaacatt tgccctcagg actgcctccg gggcagcatt gttgggggac acgagcctgg 1980

ggagccccgg gggattaaag ctggctatgg cacctgcaac tgcttccctg aggaggagaa 2040

gtgcttctgc gagcccgaag acatccagga tccactgtgc gacgagctgt gccgcacggt 2100

gatcgcagcc gctgtcctct tctccttcat cgtctcggtg ctgctgtctg ccttctgcat 2160

ccactgctac cacaagtttg cccacaagcc acccatctcc tcagctgaga tgaccttccg 2220

gaggcccgcc caggccttcc cggtcagcta ctcctcttcc ggtgcccgcc ggccctcgct 2280

ggactccatg gagaaccagg tctccgtgga tgccttcaag atcctggagg atccaaagtg 2340

ggaattccct cggaagaact tggttcttgg aaaaactcta ggagaaggcg aatttggaaa 2400

agtggtcaag gcaacggcct tccatctgaa aggcagagca gggtacacca cggtggccgt 2460

gaagatgctg aaagagaacg cctccccgag tgagctgcga gacctgctgt cagagttcaa 2520

cgtcctgaag caggtcaacc acccacatgt catcaaattg tatggggcct gcagccagga 2580

tggcccgctc ctcctcatcg tggagtacgc caaatacggc tccctgcggg gcttcctccg 2640

cgagagccgc aaagtggggc ctggctacct gggcagtgga ggcagccgca actccagctc 2700

cctggaccac ccggatgagc gggccctcac catgggcgac ctcatctcat ttgcctggca 2760

gatctcacag gggatgcagt atctggccga gatgaagctc gttcatcggg acttggcagc 2820

cagaaacatc ctggtagctg aggggcggaa gatgaagatt tcggatttcg gcttgtcccg 2880

agatgtttat gaagaggatt cctacgtgaa gaggagccag ggtcggattc cagttaaatg 2940

gatggcaatt gaatcccttt ttgatcatat ctacaccacg caaagtgatg tatggtcttt 3000

tggtgtcctg ctgtgggaga tcgtgaccct agggggaaac ccctatcctg ggattcctcc 3060

tgagcggctc ttcaaccttc tgaagaccgg ccaccggatg gagaggccag acaactgcag 3120

cgaggagatg taccgcctga tgctgcaatg ctggaagcag gagccggaca aaaggccggt 3180

gtttgcggac atcagcaaag acctggagaa gatgatggtt aagaggagag actacttgga 3240

ccttgcggcg tccactccat ctgactccct gatttatgac gacggcctct cagaggagga 3300

gacaccgctg gtggactgta ataatgcccc cctccctcga gccctccctt ccacatggat 3360

tgaaaacaaa ctctatggca tgtcagaccc gaactggcct ggagagagtc ctgtaccact 3420

cacgagagct gatggcacta acactgggtt tccaagatat ccaaatgata gtgtatatgc 3480

taactggatg ctttcaccct cagcggcaaa attaatggac acgtttgata gttaacattt 3540

ctttgtgaaa ggtaatggac tcacaagggg aagaaacatg ctgagaatgg aaagtctacc 3600

ggccctttct ttgtgaacgt cacattggcc gagccgtgtt cagttcccag gtggcagact 3660

cgtttttggt agtttgtttt aacttccaag gtggttttac ttctgatagc cggtgatttt 3720

ccctcctagc agacatgcca caccgggtaa gagctctgag tcttagtggt taagcattcc 3780

tttctcttca gtgcccagca gcacccagtg ttggtctgtg tccatcagtg accaccaaca 3840

ttctgtgttc acatgtgtgg gtccaacact tactacctgg tgtatgaaat tggacctgaa 3900

ctgttggatt tttctagttg ccgccaaaca aggcaaaaaa atttaaacat gaagcacaca 3960

cacaaaaaag gcagtaggaa aaatgctggc cctgatgacc tgtccttatt cagaatgaga 4020

gactgcgggg ggggcctggg ggtagtgtca atgcccctcc agggctggag gggaagaggg 4080

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tgcaaccttt ccttaggaag acatttggtt ttcatcatga ttaagatgat tcctagattt 4200

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tgtaacttcg cagaaaagag tcggattacc aaaacactgc ctgctcttca gacttaaagc 4920

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agtattaagt attactgagt attaagtagt aatctgtcag ttattaaaat ttgtaaaatc 5520

tatttatgaa aggtcattaa accagatcat gttccttttt ttgtaatcaa ggtgactaag 5580

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<213> 智人（Homo sapiens）

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<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 具有Y806X突变的示例性RET蛋白

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (806)..(806)

<223> X为除酪氨酸之外的任何氨基酸

<400> 4

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Phe Asn Leu Leu Lys Thr Gly His Arg Met Glu Arg Pro Asp Asn Cys

965 970 975

Ser Glu Glu Met Tyr Arg Leu Met Leu Gln Cys Trp Lys Gln Glu Pro

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1100 1105 1110

Ser

<210> 5

<211> 1114

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 具有A807X突变的示例性RET蛋白

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (807)..(807)

<223> X为除丙氨酸之外的任何氨基酸

<400> 5

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<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 具有K808X突变的示例性RET蛋白

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (808)..(808)

<223> X为除赖氨酸之外的任何氨基酸

<400> 6

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<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 具有Y809X突变的示例性RET蛋白

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (809)..(809)

<223> X为除酪氨酸之外的任何氨基酸

<400> 7

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1 5 10 15

Leu Leu Leu Pro Leu Leu Gly Lys Val Ala Leu Gly Leu Tyr Phe Ser

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Gly Asp Thr Trp Ala Gln Gln Thr Phe Arg Val Glu His Trp Pro Asn

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Glu Thr Ser Val Gln Ala Asn Gly Ser Phe Val Arg Ala Thr Val His

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405 410 415

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Phe Ser Gly Ile Asn Val Gln Tyr Lys Leu His Ser Ser Gly Ala Asn

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Phe Asn Leu Leu Lys Thr Gly His Arg Met Glu Arg Pro Asp Asn Cys

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980 985 990

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Ser

<210> 8

<211> 1114

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 具有G810X突变的示例性RET蛋白

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (810)..(810)

<223> X为除甘氨酸之外的任何氨基酸

<400> 8

Met Ala Lys Ala Thr Ser Gly Ala Ala Gly Leu Arg Leu Leu Leu Leu

1 5 10 15

Leu Leu Leu Pro Leu Leu Gly Lys Val Ala Leu Gly Leu Tyr Phe Ser

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Lys Pro Arg Glu Leu Cys Phe Pro Glu Thr Arg Pro Ser Phe Arg Ile

165 170 175

Arg Glu Asn Arg Pro Pro Gly Thr Phe His Gln Phe Arg Leu Leu Pro

180 185 190

Val Gln Phe Leu Cys Pro Asn Ile Ser Val Ala Tyr Arg Leu Leu Glu

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210 215 220

Thr Arg Trp Ala Leu Asp Arg Glu Gln Arg Glu Lys Tyr Glu Leu Val

225 230 235 240

Ala Val Cys Thr Val His Ala Gly Ala Arg Glu Glu Val Val Met Val

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260 265 270

Pro Ala Gly Val Asp Thr Ala Ser Ala Val Val Glu Phe Lys Arg Lys

275 280 285

Glu Asp Thr Val Val Ala Thr Leu Arg Val Phe Asp Ala Asp Val Val

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Pro Ala Ser Gly Glu Leu Val Arg Arg Tyr Thr Ser Thr Leu Leu Pro

305 310 315 320

Gly Asp Thr Trp Ala Gln Gln Thr Phe Arg Val Glu His Trp Pro Asn

325 330 335

Glu Thr Ser Val Gln Ala Asn Gly Ser Phe Val Arg Ala Thr Val His

340 345 350

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Gly Ala Gly Val Leu Leu Leu His Phe Asn Val Ser Val Leu Pro Val

385 390 395 400

Ser Leu His Leu Pro Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Val Ser Arg Arg Ala

405 410 415

Arg Arg Phe Ala Gln Ile Gly Lys Val Cys Val Glu Asn Cys Gln Ala

420 425 430

Phe Ser Gly Ile Asn Val Gln Tyr Lys Leu His Ser Ser Gly Ala Asn

435 440 445

Cys Ser Thr Leu Gly Val Val Thr Ser Ala Glu Asp Thr Ser Gly Ile

450 455 460

Leu Phe Val Asn Asp Thr Lys Ala Leu Arg Arg Pro Lys Cys Ala Glu

465 470 475 480

Leu His Tyr Met Val Val Ala Thr Asp Gln Gln Thr Ser Arg Gln Ala

485 490 495

Gln Ala Gln Leu Leu Val Thr Val Glu Gly Ser Tyr Val Ala Glu Glu

500 505 510

Ala Gly Cys Pro Leu Ser Cys Ala Val Ser Lys Arg Arg Leu Glu Cys

515 520 525

Glu Glu Cys Gly Gly Leu Gly Ser Pro Thr Gly Arg Cys Glu Trp Arg

530 535 540

Gln Gly Asp Gly Lys Gly Ile Thr Arg Asn Phe Ser Thr Cys Ser Pro

545 550 555 560

Ser Thr Lys Thr Cys Pro Asp Gly His Cys Asp Val Val Glu Thr Gln

565 570 575

Asp Ile Asn Ile Cys Pro Gln Asp Cys Leu Arg Gly Ser Ile Val Gly

580 585 590

Gly His Glu Pro Gly Glu Pro Arg Gly Ile Lys Ala Gly Tyr Gly Thr

595 600 605

Cys Asn Cys Phe Pro Glu Glu Glu Lys Cys Phe Cys Glu Pro Glu Asp

610 615 620

Ile Gln Asp Pro Leu Cys Asp Glu Leu Cys Arg Thr Val Ile Ala Ala

625 630 635 640

Ala Val Leu Phe Ser Phe Ile Val Ser Val Leu Leu Ser Ala Phe Cys

645 650 655

Ile His Cys Tyr His Lys Phe Ala His Lys Pro Pro Ile Ser Ser Ala

660 665 670

Glu Met Thr Phe Arg Arg Pro Ala Gln Ala Phe Pro Val Ser Tyr Ser

675 680 685

Ser Ser Gly Ala Arg Arg Pro Ser Leu Asp Ser Met Glu Asn Gln Val

690 695 700

Ser Val Asp Ala Phe Lys Ile Leu Glu Asp Pro Lys Trp Glu Phe Pro

705 710 715 720

Arg Lys Asn Leu Val Leu Gly Lys Thr Leu Gly Glu Gly Glu Phe Gly

725 730 735

Lys Val Val Lys Ala Thr Ala Phe His Leu Lys Gly Arg Ala Gly Tyr

740 745 750

Thr Thr Val Ala Val Lys Met Leu Lys Glu Asn Ala Ser Pro Ser Glu

755 760 765

Leu Arg Asp Leu Leu Ser Glu Phe Asn Val Leu Lys Gln Val Asn His

770 775 780

Pro His Val Ile Lys Leu Tyr Gly Ala Cys Ser Gln Asp Gly Pro Leu

785 790 795 800

Leu Leu Ile Val Glu Tyr Ala Lys Tyr Xaa Ser Leu Arg Gly Phe Leu

805 810 815

Arg Glu Ser Arg Lys Val Gly Pro Gly Tyr Leu Gly Ser Gly Gly Ser

820 825 830

Arg Asn Ser Ser Ser Leu Asp His Pro Asp Glu Arg Ala Leu Thr Met

835 840 845

Gly Asp Leu Ile Ser Phe Ala Trp Gln Ile Ser Gln Gly Met Gln Tyr

850 855 860

Leu Ala Glu Met Lys Leu Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile

865 870 875 880

Leu Val Ala Glu Gly Arg Lys Met Lys Ile Ser Asp Phe Gly Leu Ser

885 890 895

Arg Asp Val Tyr Glu Glu Asp Ser Tyr Val Lys Arg Ser Gln Gly Arg

900 905 910

Ile Pro Val Lys Trp Met Ala Ile Glu Ser Leu Phe Asp His Ile Tyr

915 920 925

Thr Thr Gln Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Val Leu Leu Trp Glu Ile

930 935 940

Val Thr Leu Gly Gly Asn Pro Tyr Pro Gly Ile Pro Pro Glu Arg Leu

945 950 955 960

Phe Asn Leu Leu Lys Thr Gly His Arg Met Glu Arg Pro Asp Asn Cys

965 970 975

Ser Glu Glu Met Tyr Arg Leu Met Leu Gln Cys Trp Lys Gln Glu Pro

980 985 990

Asp Lys Arg Pro Val Phe Ala Asp Ile Ser Lys Asp Leu Glu Lys Met

995 1000 1005

Met Val Lys Arg Arg Asp Tyr Leu Asp Leu Ala Ala Ser Thr Pro

1010 1015 1020

Ser Asp Ser Leu Ile Tyr Asp Asp Gly Leu Ser Glu Glu Glu Thr

1025 1030 1035

Pro Leu Val Asp Cys Asn Asn Ala Pro Leu Pro Arg Ala Leu Pro

1040 1045 1050

Ser Thr Trp Ile Glu Asn Lys Leu Tyr Gly Met Ser Asp Pro Asn

1055 1060 1065

Trp Pro Gly Glu Ser Pro Val Pro Leu Thr Arg Ala Asp Gly Thr

1070 1075 1080

Asn Thr Gly Phe Pro Arg Tyr Pro Asn Asp Ser Val Tyr Ala Asn

1085 1090 1095

Trp Met Leu Ser Pro Ser Ala Ala Lys Leu Met Asp Thr Phe Asp

1100 1105 1110

Ser

Claims (82)

1.治疗患有具有RET基因异常的非小细胞肺癌(NSCLC)的人患者的方法，其包括向所述人患者施用包含4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺的组合物，其中向所述人患者施用等价于每天约40mg至约3000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

2.治疗患有具有RET基因异常的局部晚期或转移性非小细胞肺癌(NSCLC)的人患者的方法，其包括向所述人患者施用包含4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺的组合物，其中向所述人患者施用等价于每天约40mg至约1000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

3.治疗患有具有RET基因异常且伴有脑和/或脑膜转移的转移性非小细胞肺癌(NSCLC)的人患者的方法，其包括向所述人患者施用包含4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺的组合物，其中向所述人患者施用有效量的4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述有效量是等价于每天约40mg至约3000mg4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

5.根据权利要求3或权利要求4所述的方法，其中所述脑和/或脑膜转移是无症状的。

6.治疗患有具有RET基因异常的实体瘤的人患者的方法，其包括向所述人患者施用包含4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺的组合物，其中向所述人患者施用等价于每天约40mg至约3000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

7.治疗患有具有RET基因异常的实体瘤的人患者的方法，其包括向所述人患者施用包含4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺的组合物，其中所述RET基因异常包括RET蛋白的溶剂前沿突变。

8.治疗患有具有RET基因异常且伴有脑和/或脑膜转移的实体瘤的人患者的方法，其包括向所述人患者施用包含4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺的组合物，其中向所述人患者施用有效量的4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺。

9.根据权利要求7或权利要求8所述的方法，其中所述有效量是等价于每天约40mg至约3000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

10.根据权利要求8或权利要求9所述的方法，其中所述脑和/或脑膜转移是无症状的。

11.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天约150mg至约640mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

12.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天约160mg至约640mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

13.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天约320mg至约640mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

14.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天约480mg至约640mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

15.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天约640mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

16.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天约480mg至约3000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

17.根据权利要求1至10和16中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天约480mg至约2000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

18.根据权利要求1至10、16和17中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天约480mg至约1500mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

19.根据权利要求1至10和16至18中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天约480mg至约1280mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

20.根据权利要求1至10和16至19中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于约480mg至约1000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。

21.根据权利要求1至10和16中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天约640mg至约3000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

22.根据权利要求1至10、16、17和21中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天约640mg至约2000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

23.根据权利要求1至10、16至18和20至22中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天约640mg至约1500mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

24.根据权利要求1至10、16至18和21至23中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天约640mg至约1280mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

25.根据权利要求1至10、16至24中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天约640mg至约1000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

26.根据权利要求1至10、16和21中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天3000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

27.根据权利要求1至10、16、17、21和22中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天2000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

28.根据权利要求1至10、16至18和21至23中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天1500mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

29.根据权利要求1至10、16至19和21至24中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天1280mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

30.根据权利要求1至10和16至25中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天1000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

31.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于约150mg至约500mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱每天的剂量。

32.根据权利要求1至12和31中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天约160mg至约500mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

33.根据权利要求1至11和31中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天约150mg或约160mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

34.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中口服施用所述组合物。

35.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中作为单一片剂或多个片剂口服施用所述组合物。

36.根据权利要求35所述的方法，其中每个片剂包含等价于约10或约50mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

37.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物包含4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺的二盐酸盐。

38.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含柠檬酸、微晶纤维素、乳糖、聚乙烯N-吡咯烷酮、月桂基硫酸钠和/或甘油山嵛酸酯。

39.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中每天施用一次(QD)或者每天施用两次(BID)所述组合物。

40.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中每天施用两次(BID)所述组合物。

41.根据权利要求1至10和34至40中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天两次(BID)约160至约1500mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

42.根据权利要求1至10和34至41中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天两次(BID)约160至约1000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

43.根据权利要求1至10和34至42中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天两次(BID)约160至约750mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

44.根据权利要求1至10和34至43中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天两次(BID)约160至约640mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

45.根据权利要求1至10和34至44中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天两次(BID)约160至约500mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

46.根据权利要求1至13和34至45中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天两次(BID)约160至约320mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

47.根据权利要求1至25和34至46中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天两次(BID)约320mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

48.根据权利要求1至10、16至25、30和34至45中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天两次(BID)的约500mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱剂量。

49.根据权利要求1至10、16至19、21至24和34至44中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天两次(BID)约640mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

50.根据权利要求1至10、16至18、21至23、28和34至43中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天两次(BID)约750mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

51.根据权利要求1至10、16、17、21、22、27和34至42中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天两次(BID)约1000mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

52.根据权利要求1至10、16、21、26和34至41中任一项所述的方法，其中向所述人患者施用等价于每天两次(BID)约1500mg 4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺游离碱的剂量。

53.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述剂量对于体重大于50kg的患者和体重小于50kg的患者一样。

54.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中在至少一个21天治疗周期中施用所述组合物。

55.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述RET基因异常包括RET基因融合、点突变、缺失突变、RET基因拷贝数增加、其任何一种或多种的过表达和RET基因的过表达中的至少一种。

56.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述RET基因异常包括RET基因融合。

57.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述RET基因异常包括RET基因与编码CCDC6、KIF5B或TRIM33的基因的融合。

58.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述RET基因异常包括RET蛋白的耐药突变。

59.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述RET基因异常包括RET蛋白的溶剂前沿突变和/或RET蛋白的铰链区中的突变。

60.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述RET基因异常包括RET蛋白在氨基酸残基730、736、760、772、804、806、807、808、809、810和/或883处的突变。

61.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述RET基因异常包括RET蛋白在氨基酸残基804、806、807、808、809和/或810处的突变。

62.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述RET基因异常包括RET蛋白在氨基酸残基810处的突变。

63.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述RET基因异常包括RET蛋白的突变，所述突变包括：

a)V804X突变，其中X是除缬氨酸或谷氨酸以外的任何氨基酸；

b)Y806X突变，其中X为除酪氨酸以外的任何氨基酸；

c)A807X突变，其中X为除丙氨酸以外的任何氨基酸；

d)K808X突变，其中X为除赖氨酸以外的任何氨基酸；

e)Y809X突变，其中X为除酪氨酸以外的任何氨基酸；和/或

f)G810X突变，其中X为除甘氨酸以外的任何氨基酸。

64.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述RET基因异常包括RET蛋白的突变，所述突变包括：

a)L730Q或L730R突变；

b)G736A突变；

c)L760Q突变；

d)L772M突变；

e)V804L或V804M突变；

F)Y806C、Y806S、Y806H或Y806N突变；

g)G810R、G810S、G810C、G810V、G810D或G810A突变；和/或

h)A883V突变。

65.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述RET基因异常包括RET蛋白的突变，所述突变包括：

a)V804L或V804M突变；

b)Y806C、Y806S、Y806H或Y806N突变；和/或

c)G810R、G810S、G810C、G810V、G810D或G810A突变。

66.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述RET基因异常包括RET蛋白的G810R、G810S、G810C、G810V、G810D或G810A突变。

67.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述RET基因异常包括RET蛋白的G810R突变。

68.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述癌症或所述肿瘤耐受至少一种多激酶抑制剂。

69.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述癌症或所述肿瘤耐受至少一种RET选择性抑制剂。

70.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述癌症或所述肿瘤耐受塞尔帕替尼(selpercatinib)和/或普雷西替尼(pralsetinib)。

71.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述癌症或所述肿瘤包括对塞尔帕替尼(selpercatinib)和/或普雷西替尼(pralsetinib)耐受的细胞。

72.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述癌症或所述肿瘤不耐受4-氨基-N-[4-(甲氧基甲基)苯基]-7-(1-甲基环丙基)-6-(3-吗啉代丙-1-炔-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酰胺并且耐受至少一种其它RET选择性抑制剂。

73.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述人患者先前接受了对于所述癌症或所述肿瘤的在先治疗。

74.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中在对于所述癌症或肿瘤的在先治疗后，要治疗的所述癌症或肿瘤进展。

75.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述人患者对于对所述癌症或肿瘤的在先治疗出现了不耐受性。

76.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述人患者先前接受了多激酶抑制剂。

77.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述人患者先前接受了卡博替尼、凡德他尼、乐伐替尼和/或RXDX-105。

78.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述人患者先前接受了RET选择性抑制剂。

79.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述人患者先前接受了塞尔帕替尼(selpercatinib)和/或普雷西替尼(pralsetinib)。

80.根据权利要求1至77中任一项所述的方法，其中所述人患者先前未接受RET选择性抑制剂。

81.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述人患者患有唾液腺癌、肺癌、结肠直肠癌、甲状腺癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、皮肤癌和脑癌中的至少一种。

82.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述人患者患有甲状腺髓样癌或未分化甲状腺癌、转移性乳腺癌和转移性胰腺腺癌中的至少一种。