CN116849299A

CN116849299A - 布氏乳杆菌的表型和基因型变体

Info

Publication number: CN116849299A
Application number: CN202310806956.XA
Authority: CN
Inventors: B.K.斯米利; S.M.亨特利; M.S.齐
Original assignee: Pioneer Hi Bred International Inc
Current assignee: Pioneer Hi Bred International Inc
Priority date: 2013-12-27
Filing date: 2013-12-27
Publication date: 2023-10-10
Also published as: CN104738356A

Abstract

本发明涉及布氏乳杆菌的表型和基因型变体。本发明还涉及包含细菌菌株、一种或多种细菌菌株和合适载体的用作青贮饲料接种物的组合物。本发明还涉及改善家畜动物青贮饲料和改善家畜动物的性能的方法。

Description

布氏乳杆菌的表型和基因型变体

本申请是申请日为201 3年12月27日的中国专利申请201 31 0741131.0“布氏乳杆菌的表型和基因型变体”的分案申请。

技术领域

本发明涉及保存青贮饲料使得有氧稳定性得以保持的组合物和方法。

背景技术

青贮处理是一种湿草料保存的方法并且在全世界范围内使用。仅在西欧和美国每年储存的干物质中青贮饲料占超过2亿吨。该概念涉及天然发酵，其中乳酸菌使水溶性碳水化合物在无氧条件下发酵而形成有机酸。这引起pH降低，pH降低则可抑制有害微生物使得湿草料得以保存。

有氧不稳定性是青贮饲料生产中的主要问题。即使是在打开存储单元进行饲喂之前，青贮饲料可因为管理问题(即差的包装或密封)而暴露于氧气。在这些类型的有氧条件下，酵母和霉菌的快速生长引起青贮饲料发热和腐败，从而降低其营养价值。即使是在已经经历传统上将被视为“好的”发酵阶段(即快速pH下降和低的终末pH)的接种青贮饲料中有氧不稳定性也可能是个问题。在这些条件下促成不稳定性的酵母可能是耐受酸性条件并且可代谢在发酵过程中由乳酸菌产生的乳酸的那些酵母。

可用于帮助预防该情况的管理技术涉及在青贮处理过程中小心将青贮饲料包好，以及小心移出青贮饲料来饲喂以使剩余的青贮饲料的曝气最少。

有可能将化学和生物添加剂二者用于制备青贮饲料以尤其是在次优条件下促进充分的发酵模式。生物添加剂包含细菌接种物和酶。细菌接种物优于化学添加剂，因为它们安全、易于使用、不腐蚀农用机械，它们不污染环境并且被认为是天然产物。

在开发青贮饲料接种物产品中，有若干要考虑的重要标准和必须回答的问题：

1)细菌菌株具有使植物材料发酵所需的活性吗？该问题可通过在实验室条件下的筛选和分析来回答。

2)在农业生产的挑战性条件下菌株可以行使该功能吗？这可通过田间测试和动物饲喂来回答。

3)菌株可否以商业量和有效成本生产和分配？这也必须在商业条件下测试。

生产用于青贮饲料接种物用途的活的有活力微生物使得需要在高容量发酵罐中大规模培养生物体、培养后进行细胞收获以及进一步的下游加工以确保培养物在储存过程中的生活力。所关注的微生物菌株的表型特征可对所有的生产阶段具有深远影响。

青贮饲料接种菌株的生产以及青贮处理是复杂的并且涉及多种不同化学和微生物过程的相互作用。甚至相同物种的不同菌株都不具有相同的性质并且它们的发酵和生产特性方面有差别。

另外，不同的青贮饲料和不同的青贮方法体现了各种不同需求。在本领域一直需要另外的组合物和方法来改善青贮饲料的有氧稳定性和青贮饲料接种物的生产。

发明内容

青贮工艺的特征在于四个不同的阶段：

密封于储存单元中时，第一个阶段为有氧的，这时氧气仍存在于植物颗粒之间并且pH为6.0至6.5。这些条件允许继续的植物呼吸、蛋白酶活性和需氧和兼性微生物的活性。第二个阶段是发酵，在青贮饲料变为无氧的后其持续数天至数周。乳酸菌发展并且成为主要的微生物群体，由此产生乳酸和其他有机酸，从而将pH降低至3.8至5.0。第三个阶段是稳定的，只要防止空气进入储存单元草料的特性就发生很少变化。最后的阶段为饲料移出，这时青贮饲料最终被卸出并暴露于空气。这导致可引起腐败的需氧微生物(主要是酵母、霉菌、杆菌和醋酸菌)重新活化。

主要含有同型发酵乳酸菌的青贮饲料接种物已成为世界许多部分的主流添加剂。它们的功能是促进作物的水溶性碳水化合物快速有效的利用，从而导致大量产生乳酸和pH快速降低。接种物还减少有氧腐败和改善动物性能。

接种物中的异型发酵乳酸菌的理念已获得了最近的欢迎。该想法是增加的不解离挥发性脂肪酸如乙酸的水平可抑制引发有氧变质的其他微生物。异型发酵菌如布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)具有在氧气的存在下将乳酸转化乙酸的能力，并且所产生的乙酸可抑制其他有害生物体。使用这一机制，所消耗的乳酸的三分之一将作为二氧化碳而损失。然而，1％或者最多2％干物质的小的损失可容易地抵消由有氧微生物引起的大得多的损失。对异型发酵乳酸菌的担忧包括对动物性能的影响以及可用于该程序的适当菌株的鉴别。

关于青贮处理和接种物的使用的综述可见于Weinberg，ZNG.和Muck，RE.(1996)FMS Microbiology Rev.19：53-68，将该文献的公开内容以引用的方式并入本文。

胞外多糖(EPS)的产生是许多乳酸菌的一个共同特征并且当在固体培养基上生长时赋予粘液样表型。胞外多糖显著影响对大规模生产活的活力细胞重要的参数。

胞外多糖通过负面影响培养过程中至关重要的营养物质和氧气向细胞的传输而在高容量发酵中起重要作用，通常导致较慢的生长速率和较低的总活细胞计数。较高的多糖浓度可影响培养基的粘度，这继而需要更多的能量输入来确保有效的营养和氧气传输，从而增加生产成本。

在培养后的细胞收获期间，增加的胞外多糖浓度以及所导致的粘度升高可显著降低活的活力细胞的回收率。通常从发酵罐收获细胞是通过过滤或离心来完成。对于粘性溶液过滤效率较低并且增加的多糖浓度可由于膜堵塞而降低过滤效率。较高的培养基粘度将负面地影响离心效率，从而导致许多活细胞损失浪费。

对收获的细胞的下游处理可包括冻干以产生干的、稳定的粉末用于商业应用。冻干依赖于从冻干培养物升华水。一些残留的水留在培养物中以确保生活力但过量的水将会导致细胞快速死亡和较短的储存寿命。胞外多糖以使得升华不会这样有效发生的方式结合水，同样导致干燥产品具有减少很多的储存寿命。

根据上面的例子，相当有利的是将不产生胞外多糖的培养物用于青贮饲料接种物生产。不具有粘液样表型的菌株生产成本较低，导致收率较高并且在商业储存过程中具有增加的储存寿命。

此前在美国专利No.6,337,068(2002年1月8日授予)中描述了特别有效的布氏乳杆菌青贮饲料接种菌株(LN3957)。已经从LN3957的培养物分离了所公开的菌株的功能性变体，其展示出非粘液样表型从而使得其尤其理想用于商业生产。该变体(LN6072)具有LN3957的所有青贮饲料保存特性，但在遗传上和表型上有区别。

物种布氏乳杆菌的这种特定菌株已经显示不仅通过代谢乳酸而且还通过产生对有助于引起青贮饲料的有氧不稳定性的微生物有毒的物质而增加青贮饲料的有氧稳定性。虽然不希望受任何一种理论的束缚，但有可能是代谢物(主要是挥发性脂肪酸)的组合是这种效果的原因。此外，布氏乳杆菌的代谢据信可产生乙酸和丙酸二者，这二者均已知可抑制酵母和霉菌的生长。

在本发明的实施例中，通过用物种布氏乳杆菌，尤其是菌株LN6072，或用含有LN6072和其他青贮饲料保存生物体的组合物处理青贮饲料来完成对造成腐败的生物体的抑制。

在详细描述本发明的实施例之前，应当理解本发明的实施例不限于改善青贮草料的有氧稳定性的具体组合物或方法，其当然可以有所差别。还应当理解，本文所使用的术语是仅出于描述具体实施例的目的，并非旨在进行限制。

如在本说明书和所附权利要求书中所用，单数形式“一种”、“一个”和“该”可包括多个指代物，除非上下文明确表明并非如此。因而，例如，提及“组分”可包括两种或更多种组分的组合；提及“饲料”可包括饲料的混合物，等等。

除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有本发明实施例所属技术领域的普通技术人员通常理解的含义。与本文所述方法和材料类似的、经修饰的或等价的许多方法和材料可用于实践本发明的实施例而无需过度实验，本文描述了优选的材料和方法。在对本发明的实施例进行描述和要求进行权利保护时，如下术语将根据下面列出的定义使用。

单位、前缀和符号可以以其国际单位制(SI)接受的形式表示。在本说明书内叙述的数值范围包括限定该范围的数字并且包括所限定范围内的每个整数。

如本文所用，术语“接种”是指将有活力的微生物引入至培养基或饲喂植物材料。

如本文所用，术语“植物材料”是指植物起源的材料。饲喂植物材料可以是旨在饲喂给动物的植物材料。

如本文所用，“分离的”意指从天然来源例如从未接种的青贮饲料或其他植物材料移出。

如本文所用，“纯化的”意指菌株实质上与分离该菌株的来源中存在的霉菌和/或其他酵母或细菌物种或菌株分离，并且相对于这些物质富集。

如本文所用，“改善的性能”意指肉、奶、蛋、子代或产品的收率或产量的增加。其也可以指动物的改善的增重和饲料效率以及改善的身体状况。

如本文所用，术语“青贮饲料”旨在包括所有类型的发酵农产品如草青贮饲料、苜蓿青贮饲料、小麦青贮饲料、豆类青贮饲料、向日葵青贮饲料、大麦青贮饲料、全株玉米青贮饲料(WPCS)、高粱青贮饲料、发酵的谷物和草混合物等等。

如本文所用，“青贮前(pre-ensiled)的植物材料”包括但不限于草、玉蜀黍、苜蓿和其他豆类、小麦、高粱、向日葵、大麦、谷物以及它们的混合物，它们全部可以用本发明实施例的接种物成功地处理。本发明实施例的接种物也可用于处理高水分玉米(HMC)。

如本文所用，术语“菌株”应理解为包括本文所公开的各种细菌的任何突变体或衍生物，例如布氏乳杆菌菌株LN6072(专利保藏号为NRRL B-50867)，其保留有改善草料的有氧稳定性的功能活性，以及所述的非粘液样状表型并且由本文所公开的方法和例子限定。

在本发明的一个实施例中，组合物含有约101至约10¹⁰个细菌菌株的活生物体/克青贮前植物材料。在本发明的另一个实施例中，组合物含有约10²至约10⁷个细菌菌株的活生物体/克青贮前植物材料。在本发明的又一个实施例中，组合物含有约10³至约10⁶个细菌菌株的活生物体/克青贮前植物材料。

本领域普通技术人员将了解其他合适的载体和剂型，或将能够使用惯常的实验确定这些。另外，可用本领域普通技术人员通用的标准技术进行各种组合物的施用。

根据应用方法，可用的制剂包括但不限于：液体剂，如溶液剂(包括可乳化浓缩剂)、混悬剂、乳剂(包括微乳剂和/或悬乳剂)等等，可任选将其增稠为凝胶剂。

可用的制剂还包括但不限于：固体剂，例如粉剂、散剂、颗粒剂、球剂、片剂、膜剂等等，其可以是水分散性的(“可湿性”)或水溶性的。活性成分可以是(微)胶囊化的并且进一步形成为混悬剂或固体制剂；或者可将活性成分的整个配方胶囊化(或“包外衣”)。胶囊化可控制或延缓活性成分的释放。可将可喷雾制剂扩充进合适的介质中，并且可以约一至数百升/公顷的喷洒体积使用。

合适的载体为液体或固体，并且是本领域技术人员所熟知的。举个非限制性的例子，固体载体可以由碳酸钙、淀粉、纤维素以及它们的组合制成。

保藏

布氏乳杆菌菌株LN6072于2013年9月5日按布达佩斯条约规定保藏于农业研究机构培养物保藏中心(Agricultural Research Service(ARS)Culture Collection，NRRL)。给予该菌株的专利保藏号为NRRL B-50867。分类命名为布氏乳杆菌(Lactobacillusbuchneri)。NCAUR的地址为1815N.University Street，Peoria，IL，61604。一旦专利授权，该保藏物将不可撤回地和无限制或者无条件地可供公众获取。但是，应当理解，保藏物的可获取性不构成许可在损害政府所授予的专利权的情况下实施本发明。

该保藏物将不受限制地在作为一家公共保藏单位的NRRL保藏单位维持30年时间，或在最近请求后5年，或持续至本专利的有效期限，选其长者，并且如果在这个时间期间它变得无活力的话将予以更换。

还公开了一种通过向青贮前植物材料添加有氧稳定性增强量的组合物来处理青贮前植材料以增强所得的青贮饲料的有氧稳定性的方法，该组合物含有本发明的细菌菌株、青贮饲料保存细菌菌株和合适的载体。

合适的青贮前植物材料包括但不限于：草、玉蜀黍、苜蓿和其他豆类、小麦、高粱、向日葵、大麦、谷物以及它们的混合物。

本发明的菌株可与其他青贮饲料保存微生物以正确的比率组合以提供青贮饲料或动物饲料的充分发酵以及在青贮饲料或饲料暴露于空气时增加的有氧稳定性。

合适的青贮饲料保存细菌菌株包括但不限于如下中的一种或多种：植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、布氏乳杆菌、食品乳杆菌(Lactobacillus alimentarius)、卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)、类食品乳杆菌(Lactobacillusparalimentarius)、短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、屎肠球菌(Enterococcusfacium)等。在一个实施例中，细菌菌株包含如下中的一种或多种：LP286、LP287、LP329、LP346、LP347、LP 318、LP 319、LN4017、LN4637、LN1391、LN4750、LN1284、LN1286、LN1297、LN1326、LN5665、LP7109或LN5689。参见：美国专利No.5,747,020；美国专利No.6,403,084；美国专利No.7,799,551；美国专利公布No.2009/0028991；美国专利公布No.2009/0028992；美国专利公布No.2008/0138461；美国专利公布No.2009/0028993；美国专利公布No.2008/0138462；美国专利公布No.2008/1038463；DSM保藏号：18113和DSM保藏号：18114。

合适的青贮饲料保存酵母菌株包括但不限于：酿酒酵母(Saccharomycescerevisae)菌株YE206、YE1241和YE1496；参见美国专利申请No.13/915254。

使用混合的培养物来改善青贮饲料的发酵或有氧稳定性的方法是本领域技术人员已知的并且另外公开于US 6,403,084中，将该专利以引用的方式并入本文。

饲喂给动物的组合物已经用有效催化量的细菌菌株进行了处理，该有效催化量是可容易地由畜牧领域的技术人员确定的。得益于本发明实施例的动物物种包括但不限于：反刍动物、马、牛、猪、山羊、绵羊和禽物种，例如家禽。

本发明的实施方式在以下实例中进一步限定。应当理解，这些实例虽然表明了本发明的某些实施例，但仅以举例说明的方式给出。由以上讨论和这些实例，本领域技术人员可以确定本发明的基本特征，并在不背离本发明的精神和范围的情况下，可对本发明的实施例作出各种改变和修饰以使之适应各种用法和条件。因此，除了本文显示和描述的那些实施例之外，本发明实施例的各种修改形式将因前面的描述而对本领域技术人员是显而易见的。这类修改形式也旨在落入所附权利要求的范围内。

本文给出的每个参考文献的公开内容以引用方式全文并入本文。

具体实施方式

实例1：布氏乳杆菌LN6072的分离

本发明的布氏乳杆菌菌株是布氏乳杆菌的一种新的基因型和表型变体，具有改善的生产特性，用于青贮饲料中以增加有氧稳定性。在改良De Man Rogosa Sharpe琼脂(Difco^TM Lactobacilli MRS；BD公司(Becton Dickinson and Company)，马里兰州斯帕克斯(Sparks，MD)21152美国)上从ATCC 202118(LN3957)的储用培养物分离作为非粘液样菌落形态变体的细菌菌株布氏乳杆菌LN6072。LN6072的菌落形态是圆的，具有平滑、有光泽的、微凸的外观，但缺少亲本菌株的特征性粘液样或黏滑的外观。

实例2：布氏乳杆菌青贮饲料接种物对全株玉米青贮饲料的有氧稳定性的影响。

于1998年9月10日在威斯康星州戴恩(Dane，WI)收获全株玉米(34％干物质)并青贮。如本领域已知的，对布氏乳杆菌菌株ATCC 202118和NRRL B-50867进行培养、稳定化和冻干。将每种菌株作为水溶液施加至草料以在以1ml/磅的比率施加时递送1×10⁵CFU/g草料。所有处理均通过注射器分散施加，并且通过在清洁的塑料上滚动彻底混合进草料中。包括一未处理对照用于比较。

对于每种处理，填充两个实验用4″×14″聚氯乙烯(PVC)管筒仓(大约100kg DM/m³)并用液压机压紧。实验筒仓在每一端配有橡胶快开盖，并且顶盖配有本生阀以允许气体逸出。在青贮28天和42天后对筒仓进行空气灌注24小时以有利于有氧不稳定性。

在青贮49天后，倒空筒仓并彻底混合青贮饲料。获取青贮饲料pH测量值。使用Honig的程序(Proc.of the Eurobac.Conf.(《Eurobac会议记录》)，P.Lingvall和S.Lindgren(编辑)(1986年8月12-16日)瑞典农业科学大学(Swed.Univ.of Agric.Sci.)Grass and Forage Report(《草和草料报告》)第3-1990期，第76-81页瑞典乌普萨拉(Uppsala，Sweden.))对100克各个处理重复物进行有氧稳定性评估7天。记录青贮饲料温度升高至高于环境温度1.7℃所需的时间(h)(ROT)。计算实际的青贮饲料温度曲线与环境温度所画的线条之间的积分面积(Cumm-DD)。较高的ROT和较低的Cumm-DD是所需的。

表1示出了49天青贮后接种物对全株玉米青贮饲料的影响。两种布氏乳杆菌接种物均相对于对照青贮饲料改善了青贮饲料的有氧稳定性并且这两种添加剂不明显彼此不同。

表1.布氏乳杆菌接种物对全株玉米青贮饲料的影响。

实例3：布氏乳杆菌青贮饲料接种物对全株玉米青贮饲料的影响。

在德国布克斯特胡德(Buxtehude，Germany)收获全株玉米(27-40％干物质)并青贮(1997年4次试验，1998年7次试验)。如本领域已知的，对布氏乳杆菌菌株ATCC 202118和NRRL B-50867ATCC进行培养、稳定化和冻干。ATCC 202118在1997和1998年施加，而ATCC B-50867仅在1998年施加。将每种菌株作为水溶液施加至草料以在以1ml/磅的比率施加时递送1×10⁵CFU/g草料。所有处理均通过注射器分散施加，并且通过在清洁的塑料上滚动彻底混合进草料中。包括一未处理对照用于比较。

在每个试验中，每种处理填充五个实验用4″×14″聚氯乙烯(PVC)管筒仓并用液压机压紧(大约100kg DM/m³)。实验筒仓在每一端配有橡胶快开盖，并且顶盖配有本生阀以允许气体逸出。在青贮28天和42天后对筒仓进行空气灌注24小时以有利于有氧不稳定性。

在青贮50天后，倒空筒仓并彻底混合青贮饲料。获取青贮饲料pH测量值并测定总酵母计数。使用Honig的程序(Proc.of the Eurobac.Conf.(《Eurobac会议记录》)，P.Lingvall和S.Lindgren(编辑)(1986年8月12-16日)瑞典农业科学大学(Swed.Univ.ofAgric.Sci.)Grass and Forage Report(《草和草料报告》)第3-1990期，第76-81页瑞典乌普萨拉(Uppsala，Sweden.))进行有氧稳定性评估。较高的ROT是所需的。

表2示出了50天青贮后接种物对全株玉米青贮饲料的影响。两种布氏乳杆菌接种物均相对于对照青贮饲料改善了青贮饲料的有氧稳定性和降低了其总酵母计数并且这两种添加剂不明显彼此不同。

表2.布氏乳杆菌接种物对全株玉米青贮饲料的影响。

对照和ATCC 202118-11个试验

NRRL 50867-7个试验

实例4：布氏乳杆菌LN6072在遗传上是独特的。

于2013年8月28日完成了LN6072变体的基因组测序和组装。LN3957在表型上不同于LN6072，最值得注意的是LN3957形成粘液样状菌落而LN6072不形成。

LN3957的组装目前处于接近完成状态，现有大小为1,628,963bp、939,500bp、50,005bp、3,241bp和1,551bp的5个支架(scaffold)。两个最大的支架代表了LN3957的几乎完整的染色体。

50kb支架代表一大的质粒，其未存在于LN6072中。该质粒含有可能涉及荚膜或胞外多糖(EPS)形成的大量基因。有可能该质粒在LN6072中丧失是所观察到的非粘液样状菌落表型的原因。

LN6072蛋白与其他乳杆菌属物种的更广泛比较

将序列读出信息定位至布氏乳杆菌CD034基因组(NCBI染色体登录号码为NC_018611.1，也命名为pCD034-3)，其在可获得的完整乳杆菌基因组中是与LN6072最相似的。LN6072序列读出信息中，～88％定位至CD034染色体；一个也没有定位至CD034质粒(一小部分除外，其定位至该大的CD034质粒上的转座酶)。来自LN6072组装物的四个区的读出信息未能定位至CD034(包括上面提到的50kb区段)，这表明这些可能是独特的LN6072染色体区。

将预测的LN6072蛋白序列与可用的来自专有菌株LN4017、LN4637、LN4888(参见美国专利No.7,799,551和6,403,084)和来自可公开获得的已测序菌株(布氏乳杆菌NRRL B-30929、布氏乳杆菌CD034、短乳杆菌ATCC367和短乳杆菌KB290)的蛋白质集进行比较。通过双向blast最佳匹配方法(reciprocal blast best hit method)鉴别LN6072与其他菌株之间的推定直系同源蛋白，其中将每种LN6072蛋白质针对来自其他菌株中的每一个的每个蛋白质集进行blast搜索。然后将来自对象蛋白质集的最相似蛋白质用于针对所有LN6072蛋白质进行反向blast搜索。如果在该第二blast比较中的最相似蛋白质为初始的LN6072蛋白质，则两个蛋白质被视为推定的青系同源物。对每种LN6072蛋白质针对其他菌株中的每一个的蛋白质集进行该分析(对每个菌株进行独立的分析)。

然后记录每种LN6072蛋白质的总体观察结果并根据蛋白质的谱系特异性进行分类。五十一种LN6072蛋白质未在任何其他乳杆菌属(Lactobacillus)比较菌株中找到。大部分这些蛋白质尚未表征，关于它们在LN6072的表型中的推定作用知之甚少。

在阐明和描述了本发明实施例的原理之后，将对本领域技术人员显而易见的是，本发明实施例可以在安排和细节上进行修改而不脱离这些原理。我们要求保护处于所附权利要求书的精神和范围内的全部修改形式。

本说明书中引用的全部出版物及公开的专利文件均以引用方式并入本文，就如同明确且单独地指明将每个单独的出版物或公开的专利文献以引用的方式并入一样。

Claims

1.用作青贮饲料接种物的组合物，其包含青贮饲料保存量的非粘液样表型布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)LN6072和合适的载体，其中所述布氏乳杆菌LN6072具有改善的升华并且缺乏布氏乳杆菌LN3957中存在的50kb质粒。

2.根据权利要求1所述的组合物，其还包含另外的青贮饲料保存微生物。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物含有约10²至约10¹²个活生物体/克青贮饲料湿重。

4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物含有约10⁷至约10¹⁰个活生物体/克青贮饲料湿重。

5.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物含有约10³至约10⁶个活生物体/克青贮饲料湿重。

6.根据权利要求1所述的组合物，其中所述载体为液体。

7.根据权利要求1所述的组合物，其中所述载体为固体。

8.根据权利要求1所述的组合物，其中所述载体为选自碳酸钙、淀粉和纤维素的固体载体。

9.非粘液样表型布氏乳杆菌菌株LN6072的生物学上纯的培养物，所述非粘液样表型布氏乳杆菌菌株LN6072的专利保藏号为NRRL B-50867并且特征在于缺乏胞外多糖产生，其中所述布氏乳杆菌LN6072具有改善的升华并且缺乏布氏乳杆菌LN3957中存在的50kb质粒。

10.通过抑制选自酵母、霉菌和形成孢子的细菌的腐败生物体在青贮饲料上的生长来处理青贮饲料的方法，所述方法包括：向所述青贮饲料添加腐败生物体抑制量的根据权利要求1所述的组合物。

11.根据权利要求10所述的方法，所述方法包括向所述青贮饲料添加另外的微生物。

12.根据权利要求10所述的方法，其中所述青贮饲料为如下中的任何一种或多种：

a.草；

b.玉蜀黍；

c.苜蓿

d.小麦；

e.豆类；

f.高粱；

g.向日葵；和

h.大麦。

13.根据权利要求10所述的方法，其中在储存所述青贮饲料之后添加所述组合物。

14.根据权利要求10所述的方法，所述方法包括将经处理的青贮饲料储存至少30天。

15.根据权利要求10所述的方法，其中所述处理青贮饲料方法为如下中的任何一种或多种：

a.在包中处理青贮饲料；

b.在袋中处理青贮饲料；

c.在贮槽中处理青贮饲料；

d.在青贮塔中处理青贮饲料；和

e.在筒仓中处理青贮饲料。

16.青贮饲料，其包含青贮饲料质量保持量的非粘液样表型布氏乳杆菌LN6072，其中所述布氏乳杆菌LN6072具有改善的升华并且缺乏布氏乳杆菌LN3957中存在的50kb质粒。

17.根据权利要求10所述的方法，其中所述青贮饲料为动物饲料的组分。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述动物为如下中的任何一种：马、牛、猪、山羊、绵羊和禽物种。