CN116806157A - 接头-有效载荷及其缀合物 - Google Patents

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CN116806157A CN202280013368.4A CN202280013368A CN116806157A CN 116806157 A CN116806157 A CN 116806157A CN 202280013368 A CN202280013368 A CN 202280013368A CN 116806157 A CN116806157 A CN 116806157A
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J·沙里宁
T·萨托马
H·品诺嫩
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Abstract

本发明公开了接头‑有效载荷及其缀合物。

Description

接头-有效载荷及其缀合物
技术领域
本公开涉及一种接头、接头-有效载荷缀合物(linker-payload conjugate)、靶向单元-接头-有效载荷缀合物、其制备方法、药物组合物以及治疗和/或调节肿瘤细胞的生长和/或预防肿瘤细胞的方法。
发明内容
公开了式I、式IG、式IGX或式III的接头-有效载荷缀合物
其中R1为氨基酸侧链；RX为直链C1-C6亚烷基、支链C1-C6亚烷基、-CH2CH2-或-CH(R2)-，其中R2为氨基酸侧链；Y不存在或为亲水基团；R3为氨基酸侧链；Z不存在或为自牺牲基团；D为有效载荷分子；且m为0或1。
公开了式II、式IIs、式IIG、式IIGs、式IIGX、式IIGXs、式IV或式IVs的靶向单元-接头-有效载荷缀合物
其中T为靶向单元；R1为氨基酸侧链；RX为直链C1-C6亚烷基、支链C1-C6亚烷基、-CH2CH2-或-CH(R2)-，其中R2为氨基酸侧链；Y不存在或为亲水基团；R3为氨基酸侧链；Z不存在或为自牺牲基团；D为有效载荷分子；m为0或1；且n≥1，或n在以下范围内：1至约20、或1至约15、或1至约10、或2至10、或2至6、或2至5、或2至4；或n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
附图说明
图1示出了马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU的基质辅助激光解吸-电离飞行时间(MALDI-TOF)质谱分析。对于[M+Na]+离子在m/z1621.752下及对于[M-H+2Na]+离子在m/z 1643.770下观察到的信号表明接头-药物缀合物的成功制备。
图2示出了马来酰亚胺稳定的MMAU-ADC在肿瘤异种移植小鼠中的体内功效。在HCC-1954肿瘤已生长到100mm3的平均体积(第0天)之后，以7天为间隔向六只小鼠/组(n＝6)静脉内给予4次(QWx4)，每次10mg/kg剂量的曲妥珠单抗或具有马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU有效载荷的曲妥珠单抗ADC(MMAU-ADC，DAR＝8，马来酰亚胺稳定的)。在61天的治疗和随访期里，MMAU-ADC有效地缩小了所有小鼠的肿瘤，没有再生，而在曲妥珠单抗治疗的小鼠中肿瘤稳定生长至>500mm3的平均体积。黑色三角形表示i.v.给药次数。误差条表示标准差(SD)。
图3示出了马来酰亚胺稳定的PNU-ADC在同基因肿瘤移植小鼠中的体内功效。在已经建立B16-F10小鼠黑色素瘤肿瘤(第2天)之后，向六只小鼠/组(n＝6)静脉内单次给予5mg/kg剂量的小鼠单克隆TA99 IgG2a抗体、具有DBCO-Val-Ser(GlcA)-EDA-PNU有效载荷的糖缀合的TA99 ADC(TA99-PNU ADC,DAR＝2)或具有马来酰亚胺乙酰基-EDA-PNU有效载荷的TA99 ADC(TA99-M-PNU ADC,DAR＝4)。两种ADC均能有效缩小所有小鼠的肿瘤，并存活至实验结束，而在抗体治疗小鼠和未治疗小鼠中，肿瘤生长都很快，并且大多数小鼠不得不在实验结束(第29天)之前被处死。黑色三角形表示i.v.给药次数。误差条显示平均值的标准误差(SEM)。当组中第一只小鼠因肿瘤生长而死亡时，对平均肿瘤体积的追踪便结束。
图4示出了法兰妥单抗(flanvotumab)PNU ADCs FLCPeMcv、FLCPeMg、FLCPeMa、FLCPeMala及FLPeD(图4A)和抗TYRP1 MMAU ADCs FLAuM、CHAuM及TAAuM(图4B)在IGR-1细胞中的细胞毒性。
图5示出了林妥珠单抗(lintuzumab)MMAU(LNAuM)和吉妥珠单抗(gemtuzumab)MMAU(GMAuM)ADCs在(图5A)HL-60细胞、(图5B)MOLM-13和(图5C)K-562细胞中的细胞毒性。
图6示出了抗CD33 ADCs对HL-60白血病细胞异种移植小鼠的体内功效。在皮下肿瘤的平均大小达到100mm3后，向五只小鼠/组(n＝5，接种后第12天)静脉内给予单次10mg/kg剂量的未缀合的抗体吉妥珠单抗(GM)或林妥珠单抗(LN)、或MMAU ADCs GMAuM或LNAuM(两者都具有AuM接头-有效载荷，DAR＝8)。对照组不接受治疗(n＝8)。在两个ADC治疗组中，所有小鼠的肿瘤均消失，显示出有效的抗癌活性。LN抗体治疗抑制肿瘤生长，并且组内小鼠存活至研究结束。在对照组和GM治疗组中，肿瘤生长迅速，导致小鼠在治疗后30天因肿瘤生长而在实验结束前死亡。黑色三角形表示i.v.给药次数。误差条显示平均值的标准误差(SEM)。当组中第一只小鼠因肿瘤生长而死亡时，对平均肿瘤体积的追踪便结束。
图7示出了在如图6所示的同一实验的各治疗组中小鼠平均体重。在研究期间，任何一组的体重增加都没有变化。黑色三角形表示i.v.给药次数。当组中第一只小鼠因肿瘤生长而死亡时，对平均体重的追踪便结束。
图8示出了通过具有马来酰亚胺己酰基接头的TRAuMc(图8A)与具有马来酰亚胺乙酰基-β-丙氨酰基接头的TRAuM(图8B)之间的水解稳定马来酰亚胺缀合物。两种ADC在37℃下在PBS中培育24h并且通过ADC的MALDI-TOF MS，稳定化反应分别在0h、5h和24h的时间点进行。在24h的培育过程中，TRAuMADC的马来酰亚胺得到了有效的稳定，而TRAuMc则没有稳定。
图9示出了马来酰亚胺缀合物ADCsTRAuMc和TRAuMin与氧化谷胱甘肽(图9A)和人血清白蛋白(图9B)一起培育的差异去缀合率。ADC在37℃下在生理pH下平行培育并且去缀合反应通过以下方法在不同时间点进行：MALDI-TOF MS(A)，其中谷胱甘肽-接头-有效载荷与内部标准的比率与去缀合率直接相关；和RP-HPLC(B)，其中药物-抗体比率(DAR)下降表示较高的去缀合率。
图10示出了在37℃下在生理pH下与人血清白蛋白一起培育期间，通过RP-HPLC对马来酰亚胺缀合物ADCs TRAuMc(图10A)和TRAuM(图10B)的DAR分析。TRAuMc的接头有效载荷的去缀合较高，导致实验结束时的DAR较低，而TRAuM的DAR仅略有降低。降低的ADC的各个组分如下所示：L0，轻链，无接头-有效载荷；L1，轻链，有1个接头-有效载荷；H0，重链，无接头-有效载荷；H1、H2、H3和H4，重链，分别有1-4个接头-有效载荷。x轴表示洗脱体积且y轴表示280nm处的吸光度。
具体实施方式
公开了缀合至有效载荷分子的接头。在一个实施方案中，接头包含稳定化基团。
接头中存在稳定化基团可以提供若干益处，诸如更高的体内稳定性，以及因此i)对靶标的提高的功效及ii)对非靶细胞和组织的提高的安全性。
在一个实施方案中，接头包含不可裂解基团。
在一个实施方案中，接头包含可裂解基团。
在一个实施方案中，接头包含可裂解基团和稳定化基团。
接头中存在可裂解基团可以提供若干益处，诸如i)对靶标的提高的功效及ii)对非靶细胞和组织的提高的安全性。
在一个实施方案中，接头包含可裂解的亲水基团和稳定化基团。
接头中存在可裂解的亲水基团可以提供若干益处，诸如i)最终产物的更高水溶性，ii)在水溶液中更高的抗聚集性，iii)每个细胞结合物分子连接更多有效载荷分子的能力，iv)更高的体内稳定性，和/或因此，v)对靶标的提高的功效及vi)对非靶细胞和组织的提高的安全性。
在一个实施方案中，接头中存在可裂解的亲水基团和稳定化基团可以防止在缀合物到达其靶标之前接头的过早裂解，这进一步有助于上述益处。
在一个实施方案中，接头中存在亲水基团和稳定化基团可改善缀合物的药代动力学，改善其体内暴露，这可进一步有助于上述益处。
在本上下文中，术语“接头”应理解为指由式I和III表示的不含D的分子的部分(moiety)或一部分(portion)，或指由式II、IIs、IV和IVs表示的不含D和T的分子的部分或一部分。
本公开提供式I的接头-有效载荷缀合物
其中R1为氨基酸侧链；RX为直链C1-C6亚烷基、支链C1-C6亚烷基、-CH2CH2-或CH(R2)，其中R2为氨基酸侧链；Y不存在或为亲水基团；R3为氨基酸侧链；Z不存在或为自牺牲基团；D为有效载荷分子；且m为0或1。
在一个实施方案中，m为1且RX为-CH2CH2-。
在一个实施方案中，m为0。
本公开还提供了式IG的接头-有效载荷缀合物
其中YR为CH2OH或COOH；D为有效载荷分子；m为0或1；z为0或1；两个α-氨基酸都呈L构型；且糖呈β-D-吡喃葡萄糖构型。
在一个实施方案中，m为1且z为1且YR为CH2OH。
在一个实施方案中，m为1且z为1且YR为COOH。
在一个实施方案中，m为1且z为0且YR为CH2OH。
在一个实施方案中，m为1且z为0且YR为COOH。
在一个实施方案中，m为0且z为1且YR为CH2OH。
在一个实施方案中，m为0且z为1且YR为COOH。
在一个实施方案中，m为0且z为0且YR为CH2OH。
在一个实施方案中，m为0且z为0且YR为COOH。
在一个实施方案中，接头-有效载荷缀合物具有式IGX
其中D为有效载荷分子。
本公开还提供了式II或式IIs的靶向单元-接头-有效载荷缀合物
其中T为靶向单元；R1为氨基酸侧链；RX为直链C1-C6亚烷基、支链C1-C6亚烷基、-CH2CH2-或-CH(R2)-，其中R2为氨基酸侧链；Y不存在或为亲水基团；R3为氨基酸侧链；Z不存在或为自牺牲基团；D为有效载荷分子；m为0或1；且n≥1。
本公开还提供了式IIG或IIGs的靶向单元-接头-有效载荷缀合物
其中T为靶向单元；YR为CH2OH或COOH；D为有效载荷分子；m为0或1；z为0或1；n≥1；两个α-氨基酸都呈L构型；且糖呈β-D-吡喃葡萄糖构型。
在一个实施方案中，m为1且z为1且YR为COOH。
在一个实施方案中，m为1且z为0且YR为CH2OH。
在一个实施方案中，m为1且z为0且YR为COOH。
在一个实施方案中，m为0且z为1且YR为CH2OH。
在一个实施方案中，m为0且z为1且YR为COOH。
在一个实施方案中，m为0且z为0且YR为CH2OH。
在一个实施方案中，m为0且z为0且YR为COOH。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物具有式IIGX或式IIGXs
其中T为靶向单元；D为有效载荷分子；且n≥1。
本公开还提供了式III的接头-有效载荷缀合物
其中RX为直链C1-C6亚烷基、支链C1-C6亚烷基、-CH2CH2-或CH(R2)，其中R2为氨基酸侧链；D为有效载荷分子；且m为0或1。
在一个实施方案中，m为1且RX为-CH2CH2-。
在一个实施方案中，m为0。
本公开还提供了式IV或式IVs的靶向单元-接头-有效载荷缀合物
其中T为靶向单元；RX为直链C1-C6亚烷基、支链C1-C6亚烷基、-CH2CH2-或CH(R2)，其中R2为氨基酸侧链；D为有效载荷分子；m为0或1；且n≥1。
在一个实施方案中，存在经由接头中的酰胺与分子其余部分结合的马来酰亚胺乙酰基，使得根据式II、式IIG、式IIGX或式IV的马来酰亚胺分别更有效地稳定为根据相应式II、式IIG、式IIGX或式IV的水解的马来酰亚胺。在一个实施方案中，根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺在游离硫醇的存在下对抗硫醚键向靶向单元的降解(所谓的逆迈克尔反应)。这具有附加的实用性，因为根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的靶向单元-接头-有效载荷缀合物可能更稳定，特别是在血流和组织中，从而提高了缀合物的体内功效。
在一个实施方案中，马来酰亚胺向水解的马来酰亚胺的稳定化是自发发生的，换言之，根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的靶向单元-接头-有效载荷缀合物的结构促进了水解反应。
在一个实施方案中，pH值的增加进一步促进马来酰亚胺向水解的马来酰亚胺的稳定化。在一个实施方案中，pH值增加到7以上、约7.4、介于7-8之间、约8、约8、介于8-9之间、约8.5、约9或9以上。在一个实施方案中，在马来酰亚胺稳定化后恢复pH值。
在一个实施方案中，温度的增加进一步促进马来酰亚胺向水解的马来酰亚胺的稳定化。在一个实施方案中，温度增加到+4℃以上、至约+10℃、+10℃以上、介于+10-20℃之间、约+20℃、约+22℃、介于+20-30℃之间、约+30℃、介于+30-40℃之间、约+37℃、约+40℃、或+40℃以上或+50℃以上。在一个实施方案中，在马来酰亚胺稳定化后恢复温度。
在一个实施方案中，温度的增加和pH值的增加进一步促进马来酰亚胺向水解的马来酰亚胺的稳定化。在一个实施方案中，温度增加到介于+20-40℃之间且pH值增加到介于7-9之间促进马来酰亚胺的稳定化。在一个实施方案中，温度增加到介于+20-40℃之间且pH值增加到8以上促进马来酰亚胺的稳定化。在一个实施方案中，温度增加到介于+30-40℃之间且pH值增加到约8促进马来酰亚胺的稳定化。在一个实施方案中，在马来酰亚胺稳定化后恢复温度和pH值二者。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物包含至少1种根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物包含至少2种根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物包含至少3种根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物包含至少4种根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物包含至少5种根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物包含至少6种根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物包含至少7种根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物包含至少8种根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物包含至少9种根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物包含至少10种根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物包含100％根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物包含至少1/n根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，其中n为至少1。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物包含至少2/n根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，其中n为至少2。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物包含至少3/n根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，其中n为至少3。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物包含至少4/n根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，其中n为至少4。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物包含至少5/n根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，其中n为至少5。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物包含至少6/n根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，其中n为至少6。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物包含至少7/n根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，其中n为至少7。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物包含至少8/n根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，其中n为至少8。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物包含至少9/n根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，其中n为至少9。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物包含至少10/n根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，其中n为至少10。
在一个实施方案中，n在以下范围内：1至约20、或1至约15、或1至约10、或2至10、或2至6、或2至5、或2至4；或n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
在一个实施方案中，n在以下范围内：3至约20、或3至约15、或3至约10、或3至约9、或3至约8、或3至约7、或3至约6、或3至5、或3至4。
在一个实施方案中，n在以下范围内：4至约20、或4至约15、或4至约10、或4至约9、或4至约8、或4至约7、或4至约6、或4至5。
在一个实施方案中，n为5。
在一个实施方案中，n为6。
在一个实施方案中，n为7。
在一个实施方案中，n为8。
在一个实施方案中，n为9。
在一个实施方案中，n为10。
在一个实施方案中，术语“药物-抗体比率”或“DAR”意指缀合至抗体的有效载荷分子的数量。在一个实施方案中，术语“药物-抗体比率”可简称为“DAR”。在一个实施方案中，术语“药物-抗体比率”与“DAR”可互换使用。在一个实施方案中，DAR可用于描述靶向单元-接头-有效载荷缀合物中每个靶向单元的有效载荷的数量。
在本公开的式中，变量n一般用于表示DAR。在一个实施方案中，变量n为整数。在一个实施方案中，当在本公开的式中使用时，变量n为整数。
在一个实施方案中，DAR意指在包含具有不同DAR值的靶向单元-接头-有效载荷缀合物的组合物中缀合至抗体的有效载荷分子的平均数量。在本上下文中，DAR等于组合物中有效载荷的总量与组合物中靶向单元的总量之比。在本上下文中，DAR也等于具有不同DAR值的靶向单元-接头-有效载荷缀合物的加权平均值。本领域技术人员可以用各种不同的分析方法测定DAR。例如，质谱法(MALDI-TOF MS)、RP-HPLC(PLRP-S色谱图)和UV分光光度法(A280/A480方法)用于测定本公开的实施例中的DAR值。
技术人员将认识到，连接到如式II所示的靶向单元的接头-有效载荷缀合物部分本质上与式I所示相同。在靶向单元-接头-有效载荷缀合物中，靶向单元T与有效载荷D因此在接头的两端发生反应。使用根据本公开的接头，可以将一个或多个有效载荷分子引入靶向单元。使用根据本公开的亲水接头，可以引入更多数量的有效载荷分子。因此，使用本公开的亲水接头，可以实现更高的DAR。
在一个实施方案中，Y选自由以下组成的组：糖、磷酸酯、硫酸酯、磷酸二酯和膦酸酯。
在一个实施方案中，Y为糖。
术语“糖”应理解为指代单个单糖部分或单糖或其衍生物，以及共价连接以形成二糖、寡糖和多糖的两个或更多个单糖部分或单糖的组合。
术语“单糖”应理解为包括三糖、四糖、戊糖、己糖、庚糖、辛糖或壬糖。化学结构中的一个或几个羟基可以被其他基团诸如氢、氨基、胺、酰胺基、乙酰胺基、卤素、巯基、酰基、乙酰基、磷酸酯或硫酸酯等置换；并且糖还可包含其他官能团，诸如羧基、羰基、半缩醛、缩醛和硫基。单糖可以选自包括但不限于以下的组：简单醛糖，诸如甘油醛、赤藓糖、苏阿糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、来苏糖、阿洛糖、阿卓糖、葡萄糖、甘露糖、古洛糖、艾杜糖、半乳糖、塔罗糖和甘露庚酮糖；简单酮糖，诸如二羟基丙酮、赤藓酮糖、核酮糖、木酮糖、阿洛酮糖、果糖、山梨糖、塔格糖和景天庚酮糖；脱氧糖，诸如岩藻糖、2-脱氧葡萄糖、2-脱氧核糖和鼠李糖；唾液酸，诸如酮基脱氧尤罗索尼克酸、N-乙酰神经氨酸和9-O-乙酰基-N-乙酰神经氨酸；糖醛酸，诸如葡糖醛酸、半乳糖醛酸和艾杜糖醛酸；氨基糖，诸如2-氨基-2-脱氧半乳糖和2-氨基-2-脱氧葡萄糖；酰氨基糖，诸如2-乙酰胺基-2-脱氧半乳糖、2-乙酰胺基-2-脱氧葡萄糖和N-羟乙酰神经氨酸；磷酸化和硫酸化糖，诸如6-磷酸甘露糖、6-磺基-N-乙酰氨基葡萄糖和3-磺基半乳糖；及其衍生物和修饰物。单糖也可以是非还原性碳水化合物，诸如肌醇或醛醇或其衍生物。
糖和单糖可以呈D-或L-构型；呈开链、吡喃糖或呋喃糖形式；α或β异构体；及其任何组合。
术语“寡糖”应理解为指代由两个或几个单糖构成的糖，这些单糖通过糖苷键连接在一起，其聚合度在2至约20的范围内。术语“寡糖”应理解为指代杂聚物和均聚物，它们可以是分支的、线性的或环状的。在一个实施方案中，寡糖具有还原端和非还原端，无论是与否，还原端上的糖实际上是还原糖。
术语“二糖”应理解为指代通过糖苷键连接在一起的两个单糖构成的寡糖。二糖的实例包括但不限于乳糖、N-乙酰乳糖胺、半乳二糖、麦芽糖、异麦芽糖和纤维二糖。
术语“三糖”应理解为指代由三个单糖通过糖苷键连接在一起构成的糖。三糖的实例包括但不限于麦芽三糖、唾液乳糖、红细胞三糖、乳-N-三糖和神经节三糖。
在一个实施方案中，糖为单糖、二糖、三糖或寡糖。
在一个实施方案中，糖包括β-D-半乳糖、N-乙酰基-β-D-半乳糖胺、N-乙酰基-α-D-半乳糖胺、N-乙酰基-β-D-葡萄糖胺、β-D-葡糖醛酸、α-L-艾杜糖醛酸、α-D-半乳糖、α-D-葡萄糖、β-D-葡萄糖、α-D-甘露糖、β-D-甘露糖、α-L-岩藻糖、β-D-木糖、神经氨酸或其任何类似物或修饰物。
在一个实施方案中，糖由以下组成：β-D-半乳糖、N-乙酰基-β-D-半乳糖胺、N-乙酰基-α-D-半乳糖胺、N-乙酰基-β-D-葡萄糖胺、β-D-葡糖醛酸、α-L-艾杜糖醛酸、α-D-半乳糖、α-D-葡萄糖、β-D-葡萄糖、α-D-甘露糖、β-D-甘露糖、α-L-岩藻糖、β-D-木糖、神经氨酸或其任何类似物或修饰物。
在一个实施方案中，糖由以下组成：β-D-葡萄糖、N-乙酰基-β-D-葡萄糖胺、β-D-葡糖醛酸或α-L-岩藻糖。
在一个实施方案中，糖包括β-D-葡萄糖。
在一个实施方案中，糖由β-D-葡萄糖组成。
在一个实施方案中，糖包括β-D-葡糖醛酸。
在一个实施方案中，糖由β-D-葡糖醛酸组成。
在一个实施方案中，修饰是单糖的硫酸、磷酸、羧基、氨基或O-乙酰基修饰。
术语“类似物”或“类似于”应理解为类似物或类似的单糖可被与其类似的单糖相同的酶裂解。
术语“修饰”或“单糖的修饰”应理解为所述修饰是由单糖的官能团或原子的取代产生的单糖的共价修饰。
在一个实施方案中，修饰选自以下的组：硫酸、磷酸、羧基、氨基和O-乙酰基修饰。
在一个实施方案中，Y可由酶裂解。
在一个实施方案中，Y可由例如细胞内酶、溶酶体酶或细胞质酶的酶裂解。
在一个实施方案中，可裂解的亲水基团Y为糖且可由酶裂解。
在一个实施方案中，糖为β-D-葡萄糖、N-乙酰基-β-D-葡萄糖胺、β-D-葡糖醛酸或α-L-岩藻糖。
在一个实施方案中，糖为β-D-葡萄糖。
在一个实施方案中，糖为β-D-葡糖醛酸。
在一个实施方案中，酶为细胞内酶、溶酶体酶或细胞质酶。
在一个实施方案中，细胞内酶为葡糖苷酶、氨基己糖苷酶、N-乙酰氨基葡糖苷酶、葡糖醛酸糖苷酶或岩藻糖苷酶。
在一个实施方案中，溶酶体酶为葡糖苷酶、氨基己糖苷酶、N-乙酰氨基葡糖苷酶、葡糖醛酸糖苷酶或岩藻糖苷酶。
在一个实施方案中，溶酶体酶为β-葡糖苷酶。
在一个实施方案中，溶酶体酶为葡糖醛酸糖苷酶。
在一个实施方案中，细胞质酶为葡糖苷酶、氨基己糖苷酶、N-乙酰氨基葡糖苷酶、葡糖醛酸糖苷酶或岩藻糖苷酶。
在一个实施方案中，诸如β-D-葡萄糖或β-D-葡糖醛酸的糖可由溶酶体酶或细胞内酶裂解。本实施例具有实用性，即溶酶体酶或细胞内酶可去除细胞内的糖。技术人员能够根据生化文献选择可被溶酶体酶或细胞内酶裂解的糖；具有不同特异性的各种此类酶是已知的。
在一个实施方案中，溶酶体酶或细胞内酶能够去除细胞内的全部糖。
在一个实施方案中，糖的一个或多个糖苷键在中性pH和/或血清中基本稳定。
在一个实施方案中，糖的所有糖苷键在中性pH和/或血清中基本稳定。
在一个实施方案中，在细胞外的肿瘤微环境中，糖的一个或多个糖苷键是可裂解的。本实施例具有附加的实用性，即在肿瘤内比在正常组织内更有效地去除糖，并且该分子可被癌细胞比正常细胞更有效地摄取。
在一个实施方案中，在糖被糖苷酶裂解之前，糖保护接头免受肽酶裂解。
在一个实施方案中，糖为β-D-葡萄糖，其在糖被β-葡糖苷酶裂解之前保护接头免受肽酶裂解。
在一个实施方案中，糖为β-D-葡糖醛酸，其在糖被葡糖醛酸酶裂解之前保护接头免受肽酶裂解。
在一个实施方案中，在糖被糖苷酶裂解之前，糖保护接头免受组织蛋白酶裂解。
在一个实施方案中，糖为β-D-葡萄糖，其在糖被β-葡糖苷酶裂解之前保护接头免受组织蛋白酶裂解。
在一个实施方案中，糖为β-D-葡糖醛酸，其在糖被葡糖醛酸酶裂解之前保护接头免受组织蛋白酶裂解。
在一个实施方案中，溶酶体酶或细胞内酶选自由以下组成的组：β-半乳糖苷酶、β-氨基己糖苷酶、α-N-乙酰氨基半乳糖苷酶、β-N-乙酰氨基葡糖苷酶、β-葡糖醛酸酶、α-L-艾杜糖醛酸酶、α-半乳糖苷酶、α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶、α-岩藻糖苷酶、β-木糖苷酶和神经氨酸苷酶。
在一个实施方案中，人糖水解酶选自由以下组成的组：β-半乳糖苷酶、β-氨基己糖苷酶、α-N-乙酰氨基半乳糖苷酶、β-N-乙酰氨基葡糖苷酶、β-葡糖醛酸酶、α-L-艾杜糖醛酸酶、α-半乳糖苷酶、α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶、α-岩藻糖苷酶、β-木糖苷酶和神经氨酸苷酶。
在一个实施方案中，Y为磷酸酯。
在一个实施方案中，Y为硫酸酯。
在一个实施方案中，Y为磷酸二酯。
在一个实施方案中，磷酸二酯为焦磷酸酯，O-P(＝O)(OH)-O-P(＝O)(OH)2。
在一个实施方案中，磷酸二酯为选自O-P(＝O)(OH)-O-P(＝O)(OH)OR和O-P(＝O)(OH)-O-P(＝O)(OH)R的组的取代的焦磷酸酯，其中R选自P(＝O)(OH)R、CH3、烷基和芳基的组。在一个实施方案中，烷基为CH2CH2NH2。在一个实施方案中，芳基为苄基。
在一个实施方案中，Y为膦酸酯。
在一个实施方案中，膦酸酯为双膦酸酯，O-P(＝O)(OH)-CH2-P(＝O)(OH)2。
在一个实施方案中，膦酸酯为选自O-P(＝O)(OH)-CH2-P(＝O)(OH)OR和O-P(＝O)(OH)-CH2-P(＝O)(OH)R的组的取代的双膦酸酯，其中R选自P(＝O)(OH)R、CH3、烷基和芳基的组。在一个实施方案中，烷基为CH2CH2NH2。在一个实施方案中，芳基为苄基。
磷酸二酯和二膦酸酯基团可如Yates和Fiedler,ACS Chem.Biol.2016,11,1066-1073中所述来制备，并且作为受保护的修饰氨基酸诸如受保护的磷酸二酯修饰的或受保护的二膦酸酯修饰的丝氨酸构建块在标准肽合成化学中并入以产生根据本公开的接头部分。
在一个实施方案中，可裂解的亲水基团Y抑制内肽酶从缀合物上释放有效载荷D，直到Y首先从缀合物上裂解掉。
在一个实施方案中，R3为氨基酸侧链。
在一个实施方案中，R3为α-氨基酸、丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸侧链。
在一个实施方案中，R3为丝氨酸侧链。
如本文所用，“氨基酸侧链”是指与α-氨基酸的α-碳键合的单价氢或非氢取代基，包括α-氨基酸和非α-氨基酸。示例性氨基酸侧链包括但不限于甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸和瓜氨酸的α-碳取代基。
在一个实施方案中，氨基酸侧链选自以下所示的氨基酸结构的α-碳取代基，其中氨基酸侧链在下面用虚线框突出显示。
氨基酸可以呈L-或D-构型；呈游离氨基酸或氨基酸残基形式；及其任何组合。
术语“烷基”应理解为指代具有所指示的碳原子数的直链或支链饱和或不饱和烃(例如，“C1-C8烷基”是指具有1至8个碳原子的烷基)。当没有指示碳原子数时，烷基具有1至8个碳原子。代表性“C1-C8烷基”包括(但不限于)甲基(Me，CH3)、乙基(Et，CH2CH3)、1-丙基(n-Pr，正丙基，CH2CH2CH3)、2-丙基(i-Pr，异丙基，CH(CH3)2)、1-丁基(n-Bu，正丁基，CH2CH2CH2CH3)、2-甲基-1-丙基(i-Bu，异丁基，CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu，异丁基，CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(t-Bu，叔丁基，C(CH3)3)、1-戊基(正戊基，CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(C(CH3)2CH(CH3)2)和3,3-二甲基-2-丁基(CH(CH3)C(CH3)3)。烷基可以是未取代的或被包括但不限于以下的一个或多个基团取代：OH、O(C1-C8烷基)、芳基、COR'、OCOR'、CONH2、CONHR'、CONR'2、NHCOR'、SH、SO2R'、SOR'、OSO2OH、OPO(OH)2、卤素、N3、NH2、NHR'、NR'2、NHCO(C1-C8烷基)或CN，其中每个R'独立地为H、C1-C8烷基或芳基。术语“烷基”还应理解为指代亚烷基，即1-18个碳原子的饱和、支链或直链或环状烃基，并且具有两个单价基团中心，其通过从母体烷烃的相同或两个不同的碳原子上去除两个氢原子而得到。典型的此类亚烷基包括(但不限于)亚甲基(CH2)1,2-乙基(CH2CH2)、1,3-丙基(CH2CH2CH2)、1,4-丁基(CH2CH2CH2CH2)等。术语“烷基”还应理解为指代如下所述的芳基烷基和杂芳基烷基。
术语“芳基烷基”应理解为指代无环烷基，其中与碳原子(通常是末端或sp3碳原子)键合的一个氢原子被芳基替代。典型的芳基烷基包括(但不限于)苄基、2-苯基乙-1-基、2-苯基乙-1-基、萘基甲基、2-萘基乙-1-基、2-萘基乙-1-基、萘苄基、2-萘苯基乙-1-基等。芳基烷基包含6至20个碳原子，例如，芳基烷基的烷基部分(包括烷基、烯基或炔基)为1至6个碳原子且芳基部分为5至14个碳原子。
术语“杂芳基烷基”应理解为指代无环烷基，其中与碳原子(通常是末端或sp3碳原子)键合的一个氢原子被杂芳基替代。典型的杂芳基烷基包括(但不限于)2-苯并咪唑基甲基、2-呋喃乙基等。杂芳基烷基包含6至20个碳原子，例如，所述杂芳基烷基的烷基部分(包括烷基、烯基或炔基)为1至6个碳原子且杂芳基部分为5至14个环原子，通常为1至3个选自N、O、P和S的杂原子，其余为碳原子。杂芳基烷基的杂芳基部分可以是具有3至7个环成员(2至6个碳原子)的单环或具有7至10个环成员(4至9个碳原子)和1至3个选自N、O、P和S的杂原子的双环，例如：双环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]体系。
术语“炔基”应理解为指代含有具有至少一个不饱和位点(即碳-碳sp三键)的正、仲、叔或环碳原子的C2-C18烃。实例包括但不限于乙炔(C≡CH)和炔丙基(CH2C≡CH)。术语“炔基”还应理解为指代亚炔基，即2-18个碳原子的不饱和、支链或直链或环状烃基，并且具有两个单价基团中心，其通过从母体炔的碳原子上去除两个氢原子而得到。典型的亚炔基包括(但不限于)乙炔(C≡C)、炔丙基(CH2C≡C)和4-戊炔基(CH2CH2CH2C≡C)。
术语“烯基”应理解为指代含有具有至少一个不饱和位点(即碳碳sp2双键)的正碳、仲碳、叔碳或环碳原子的C2-C18烃。实例包括但不限于乙烯或乙烯基(CH═CH2)、烯丙基(CH2CH═CH2)、环戊烯基(C5H7)和5-己烯基(CH2CH2CH2CH2CH═CH2)。术语“烯基”还应理解为指代亚烯基，即2-18个碳原子的不饱和、支链或直链或环状烃基，并且具有两个单价基团中心，其通过从母体烯的相同或两个不同碳原子上去除两个氢原子而得到。典型的亚烯基包括但不限于1,2-乙烯(CH═CH)。
在本说明书的上下文中，术语“取代的”当用作“烷基”、“杂烷基”、“环烷基”、“杂环烷基”、“芳基”、“杂芳基”、“烷基芳基”等的形容词时，表示所述“烷基”、“杂烷基”、“环烷基”、“杂环烷基”、“芳基”、“烷基芳基”或“杂芳基”基团含有一个或多个取代基，其可包括但不限于OH、═O、═S、═NRh、═N—ORh、SH、NH2、NO2、NO、N3、CF3、CN、OCN、SCN、NCO、NCS、C(O)NH2、C(O)H、C(O)OH、卤素、Rh、SRh、S(O)Rh、S(O)ORh、S(O)2Rh、S(O)2ORh、OS(O)Rh、OS(O)ORh、OS(O)2Rh、OS(O)2ORh、OP(O)(ORh)(ORi)、P(O)(ORh)(ORi)、ORh、NHRi、N(Rh)Ri、+N(Rh)(Ri)Rj、Si(Rh)(Ri)(Rj)、C(O)Rh、C(O)ORh、C(O)N(Ri)Rh、OC(O)Rh、OC(O)ORh、OC(O)N(Rh)Ri、N(Ri)C(O)Rh、N(Ri)C(O)ORh、N(Ri)C(O)N(Rj)Rh、以及这些取代基的硫代衍生物、或者这些取代基的任一者的质子化或去质子化形式，其中Rh、Ri和Rj独立地选自H和任选取代的C1-15烷基、C1-15杂烷基、C3-15环烷基、C3-15杂环烷基、C4-15芳基或C4-15杂芳基或其组合，Rh、Ri和Rj中的两个或更多个任选地结合以形成一个或多个碳环或杂环。
如本文所用，术语“烷基”可指直链或支链、饱和或不饱和烃取代基。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、辛基、癸基、异丙基、仲丁基、异丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、乙烯基、烯丙基、1-丁烯基、2-丁烯基、异丁烯基、1-戊烯基和2-戊烯基。
如本文所用，术语“杂烷基”可指其中至少一个碳被杂原子替代的直链或支链、饱和或不饱和烃取代基。实例包括但不限于甲氧基甲基、乙氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、甲氨基甲基、二甲氨基甲基、甲氨基乙基、二甲氨基乙基、甲硫基甲基、乙硫基甲基、乙硫基乙基和甲硫基乙基。
如本文所用，术语“环烷基”可指饱和或不饱和非芳族碳环取代基，其可由一个环或两个或更多个稠合在一起的环组成。实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环戊二烯基、环己基、环己烯基、1,3-环己二烯基、十氢萘基(decalinyl)和1,4-环己二烯基。
如本文所用，术语“杂环烷基”可指饱和或不饱和非芳族环烃取代基，其可由一个环或两个或更多个稠合在一起的环组成，其中一个环中的至少一个碳被杂原子替代。实例包括但不限于四氢呋喃基、吡咯烷基、哌啶基、1,4-二恶烷基、十氢喹啉基、哌嗪基、恶唑烷基和吗啉基。
如本文所用，术语“杂环烷基”可指饱和或不饱和非芳族环烃取代基，其可由一个环或两个或更多个稠合在一起的环组成，其中一个环中的至少一个碳被杂原子替代。实例包括但不限于四氢呋喃基、吡咯烷基、哌啶基、1,4-二恶烷基、十氢喹啉基、哌嗪基、恶唑烷基和吗啉基。
如本文所用，术语“烷基芳基”可指连接到烷基上的芳基，其中术语烷基和芳基如上所定义。实例包括但不限于苄基和乙苯基。
在与例如“烷基”相对的“亚烷基”中与“-基”相对的扩展名“亚-”表示所述例如“亚烷基”是通过两个共价单键或一个双键与一个或两个其他部分相连的二价部分，而不是通过所述例如“烷基”中的一个共价单键与一个部分相连的单价基团。因此，术语“亚烷基”可指直链或支链、饱和或不饱和烃部分；如本文所用的术语“杂亚烷基”可指其中至少一个碳被杂原子替代的直链或支链、饱和或不饱和烃部分；如本文所用的术语“亚芳基”可指碳环芳族部分，其可由一个环或两个或更多个稠合在一起的环组成；如本文所用的术语“杂亚芳基”可指碳环芳族部分，其可由一个环或两个或更多个稠合在一起的环组成，其中一个环中的至少一个碳被杂原子替代；如本文所用的术语“环亚烷基”可指饱和或不饱和非芳族碳环部分，其可由一个环或两个或更多个稠合在一起的环组成；如本文所用的术语“杂环亚烷基”可指饱和或不饱和非芳族环烃部分，其可由一个环或两个或更多个稠合在一起的环组成，其中一个环中的至少一个碳被杂原子替代。示例性二价部分包括为上述除去一个氢原子的单价基团给出的那些实例。
“聚亚烷基”、“聚杂亚烷基”、“聚亚芳基”、“聚杂亚芳基”、“聚环亚烷基”、“聚杂环亚烷基”等中的前缀“聚”表示两个或更多个这样的“亚-”部分(例如亚烷基部分)连接在一起形成支链或非支链的多价部分，其含有用于相邻部分的一个或多个连接位点。
在一个实施方案中，烷基是未取代的或取代的C1-C8烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基烷基、杂芳基烷基、炔基或烯基。
在一个实施方案中，R2为芳基。
如本文所用，术语“芳基”可指碳环芳族取代基，其可由一个环或两个或更多个稠合在一起的环组成。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基和蒽基。
如本文所用，术语“杂芳基”可指碳环芳族取代基，其可由一个环或两个或更多个稠合在一起的环组成，其中一个环中的至少一个碳被杂原子替代。杂芳基的实例包括但不限于吡啶基、呋喃基、吡咯基、三唑基、吡唑基、咪唑基、噻吩基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、吲唑基、苯并三唑基、苯并异恶唑基和喹啉基。
本公开的某些接头具有手性中心或双键；在任何组合物中，两种或更多种异构体的对映体、非对映体和几何混合物以及单独异构体都涵盖在本公开的范围内。
在一个实施方案中，芳基为芳基或杂芳基。
在一个实施方案中，m为0。
在一个实施方案中，Y为β-D-葡萄糖；R3为α-氨基酸丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸的侧链；且R1选自以下的组：α-氨基酸缬氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、精氨酸、丙氨酸、赖氨酸和甘氨酸的侧链。在一个实施方案中，Y为β-D-葡萄糖；R3为丝氨酸的侧链；且R1为缬氨酸的侧链。
在一个实施方案中，Y为β-D-葡糖醛酸；R3为α-氨基酸丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸的侧链；且R1选自以下的组：α-氨基酸缬氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、精氨酸、丙氨酸、赖氨酸和甘氨酸的侧链。
在一个实施方案中，Y为β-D-葡糖醛酸；R3为丝氨酸的侧链；且R1为缬氨酸的侧链。
在一个实施方案中，m为1。
在一个实施方案中，R1为氨基酸侧链。
在一个实施方案中，R1选自以下的组：α-氨基酸缬氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、精氨酸、丙氨酸、赖氨酸和甘氨酸的侧链。
在一个实施方案中，R1选自以下的组：缬氨酸、苯丙氨酸和丙氨酸的侧链。
在一个实施方案中，R1为缬氨酸的侧链。
在一个实施方案中，RX为直链C1-C6亚烷基。
在一个实施方案中，RX为支链C1-C6亚烷基。
在一个实施方案中，RX为CH(R2)，其中R2为氨基酸侧链。
在一个实施方案中，RX为-CH2CH2-。
在一个实施方案中，Y为糖；R3为氨基酸的侧链；m＝1；且R1选自以下的组：α-氨基酸缬氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、精氨酸、丙氨酸、赖氨酸和甘氨酸的侧链。
在一个实施方案中，Y为糖；R3为丝氨酸的侧链；m＝1；RX为-CH2CH2-；且R1为缬氨酸的侧链。
在一个实施方案中，Y为β-D-葡萄糖；R3为丝氨酸的侧链；m＝1；RX为-CH2CH2-；且R1为缬氨酸的侧链。
在一个实施方案中，Y为β-D-葡糖醛酸；R3为丝氨酸的侧链；m＝1；RX为-CH2CH2-；且R1为缬氨酸的侧链。在一个实施方案中，Z不存在。
在一个实施方案中，Z包括自牺牲基团。
在一个实施方案中，Z包括自牺牲基团，其连接本公开的接头和有效负载分子。术语“自牺牲”是指功能性化学部分，其能够将化学部分(例如，MMAU与本公开的接头)共价连接在一起并且如果其与接头其余部分的键裂解，则其将自发地与例如MMAU或细胞毒性药物分离。
在一个实施方案中，自牺牲基团为对氨基苄氧羰基(PABC)、邻氨基苄氧羰基、α-氨基酸和寡肽。在一个实施方案中，寡肽是α-氨基酸的二肽、三肽或四肽。所述基团能够在接头被酶裂解后自发地从缀合物上裂解自身。
在一个实施方案中，自牺牲基团为对氨基苄氧羰基(PABC)基团。
在一个实施方案中，Y为糖；R3为氨基酸的侧链；m＝1；R1选自以下的组：α-氨基酸缬氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、精氨酸、丙氨酸、赖氨酸和甘氨酸的侧链；且Z为PABC。
在一个实施方案中，Y为糖；R3为丝氨酸的侧链；m＝1；R1为缬氨酸的侧链；且Z为PABC。
在一个实施方案中，Y为β-D-葡萄糖；R3为丝氨酸的侧链；m＝1；R1为缬氨酸的侧链；且Z为PABC。
在一个实施方案中，Y为β-D-葡萄糖；R3为丝氨酸的侧链；m＝1；RX为-CH2CH2-；R1为缬氨酸的侧链；且Z为PABC。在一个实施方案中，Y为β-D-葡糖醛酸；R3为丝氨酸的侧链；m＝1；RX为-CH2CH2-；R1为缬氨酸的侧链；且Z为PABC。
在一个实施方案中，Y为β-D-葡萄糖；R3为丝氨酸的侧链；m＝1；RX为-CH2CH2-；R1为缬氨酸的侧链；且Z不存在。在一个实施方案中，Y为β-D-葡糖醛酸；R3为丝氨酸的侧链；m＝1；RX为-CH2CH2-；R1为缬氨酸的侧链；且Z不存在。
在一个实施方案中，D选自由以下组成的组：细胞毒性药物、免疫调节剂、标记剂、螯合剂和放射性剂。
在一个实施方案中，免疫调节剂选自以下的组：皮质类固醇，诸如皮质醇、可的松、强的松、泼尼松龙、甲基泼尼松龙、地塞米松、倍他米松、曲安奈德、氟氢可的松和脱氧皮质酮或其类似物；及沙利度胺、来那度胺(CC-5013)、CC-4047或其类似物。
在一个实施方案中，标记剂选自以下的组：荧光标记、磁性标记和同位素标记。
在一个实施方案中，螯合剂选自以下的组：NOTA、DOTA、TRAP及类似螯合剂。
在一个实施方案中，放射性剂选自以下的组：氧、氮、铁、碳或镓、43K、52Fe、57Co、67Cu、67Ga、68Ga、123I、125I、131I、132I或99Tc的正电子发射体。
在一个实施方案中，D为选自由以下组成的组的细胞毒性药物：微管蛋白结合剂、微管蛋白破坏剂、奥瑞他汀(auristatin)、DNA结合剂和DNA烷化剂和/或交联剂。
在一个实施方案中，D为奥瑞他汀。
在一个实施方案中，奥瑞他汀为式AS的单甲基奥瑞他汀E(MMAE)糖缀合物。
其中S为糖。
在一个实施方案中，糖包括或为选自由以下组成的组的单糖：β-D-半乳糖、N-乙酰基-β-D-半乳糖胺、N-乙酰基-α-D-半乳糖胺、N-乙酰基-β-D-葡萄糖胺、β-D-葡糖醛酸、α-L-艾杜糖醛酸、α-D-半乳糖、α-D-葡萄糖、β-D-葡萄糖、α-D-甘露糖、β-D-甘露糖、α-L-岩藻糖、β-D-木糖、神经氨酸及其任何类似物或修饰物。
在一个实施方案中，D为单甲基奥瑞他汀Eβ-D-葡糖苷酸(MMAU)。
在一个实施方案中，D为单甲基奥瑞他汀F 3-羟基丙酰胺(MMAFP)。
在一个实施方案中，D为根据式FS的单甲基奥瑞他汀F 3-羟基丙酰胺O-糖苷。
其中S为糖。
在一个实施方案中，糖包括或为选自由以下组成的组的单糖：β-D-半乳糖、N-乙酰基-β-D-半乳糖胺、N-乙酰基-α-D-半乳糖胺、N-乙酰基-β-D-葡萄糖胺、β-D-葡糖醛酸、α-L-艾杜糖醛酸、α-D-半乳糖、α-D-葡萄糖、β-D-葡萄糖、α-D-甘露糖、β-D-甘露糖、α-L-岩藻糖、β-D-木糖、神经氨酸及其任何类似物或修饰物。
在一个实施方案中，D为单甲基奥瑞他汀F3-羟基丙酰胺β-D-葡糖苷酸(MMAFU)。
在一个实施方案中，有效载荷分子D包含胺部分，通过胺部分结合有效载荷分子以形成仲胺或叔胺。
在本说明书的上下文中，术语“细胞毒性药物”可指任何细胞毒性药物或细胞毒性药物衍生物。术语“细胞毒性药物”也可以指代根据一个或多个实施方案的缀合物的细胞毒性药物部分；所述细胞毒性药物部分可以如本说明书中所述进行修饰，例如，通过添加本公开的接头。术语“细胞毒性药物”也可指细胞毒性剂。
细胞毒性药物可以是导致细胞死亡或诱导细胞死亡或以某种方式降低细胞活力的任何化合物。细胞毒性药物可为许多小分子药物中的任一种，包括但不限于尾海兔素；奥瑞他汀；埃博霉素；柔红霉素和多柔比星；烷化剂，诸如噻替派和环磷酰胺(CYTOXANTM)；烷基磺酸酯，诸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶，诸如苯佐多巴，卡波醌、米特多巴(meturedopa)和乌瑞替派(uredopa)；乙撑亚胺类和甲基蜜胺类(methylamelamine)，包括六甲蜜胺、三乙撑蜜胺、三乙撑磷酰胺、三乙撑硫代磷酰胺和三羟甲蜜胺；番荔枝内酯类(特别是布拉它辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；喜树碱(包括合成类似物拓扑替康)；苔藓抑素；卡利抑素(callystatin)；CC-1065(包括其阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物)；念珠藻素(特别是念珠藻素1和念珠藻素8)；倍癌霉素(duocarmycin)(包括合成类似物KW-2189和CBI-TMI)；五加素；水鬼蕉碱；匍枝珊瑚醇(sarcodictyins)；海绵抑素；氮芥类，诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥(chlomaphazine)、氯磷酰胺(cholophosphamide)、雌氮芥、异磷酰胺、双氯乙基甲胺、盐酸甲氧氮芥(mechlorethamine oxidehydrochloride)、美法仑、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀、曲磷胺、乌拉莫司汀；硝基脲类，诸如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀；抗生素，诸如烯二炔抗生素(例如卡里奇霉素，特别是卡里奇霉素γ1；达内霉素，包括达内霉素A；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新抑癌菌素发色团和相关色蛋白烯二炔抗生素发色团)、阿克拉霉素(aclacinomysins)、放线菌素C、氨曲霉素(authramycin)、氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素、卡拉比星(carabicin)、卡诺霉素(caminomycin)、嗜癌霉素；色霉素、放线菌素D、地托比星、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、其他多柔比星衍生物(包括吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯代-多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、依达比星、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素(nitomycins)、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星、链黑菌素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢物类，诸如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、多西氟尿啶、依诺他滨、氟尿苷、5-氟尿嘧啶；雄激素类，诸如卡鲁睾酮、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺类，诸如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂，诸如亚叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基酮戊酸；氨苯吖啶；阿莫斯汀(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依氟鸟氨酸(elfomithine)；醋酸羟吡咔唑(elliptinium acetate)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明(lonidamine)；美登素类化合物，诸如美登木素和N-葡糖基美登素、安丝菌素、DM-1、DM-4；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；二胺硝吖啶；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；雷佐生；根霉素；西索菲兰(sizofuran)；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2',2”-三氯三乙胺；单端孢霉烯族毒素类(尤其是T-2毒素、疣孢菌素A、杆孢菌素A(roridin A)和蛇形菌素(anguidine))；尿烷；长春地辛；达卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；加西托星(gacytosine)；阿糖胞苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；噻替哌；紫杉烷类，例如紫杉醇(/>Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)和多西他塞(/>Rhone-Poulenc Rorer,Antony,France)；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂配位络合物，诸如顺铂、卡铂和长春碱；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；丝裂霉素C；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；诺维苯；米托蒽醌；替尼泊苷；道诺霉素；氨基蝶呤；卡培他滨；伊班膦酸钠；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；视黄酸；卡培他滨；调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素剂，诸如抗雌激素类，包括例如它莫西芬、雷洛昔芬、抑制4(5)-咪唑的芳香酶、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛西芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮和托瑞米芬(Fareston)；以及抗雄激素类，诸如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；微管溶素(tubulysins)；鹅膏蕈碱，诸如α-鹅膏蕈碱；及药学上可接受的盐；以及以上任一种的糖衍生物，如国际专利公布号WO/2016/001485中所公开，其内容特此全部并入本文。
在一个实施方案中，细胞毒性药物为尾海兔素、奥瑞他汀、多柔比星、DM1、表柔比星、倍癌霉素或其任何类似物或衍生物。
在一个实施方案中，细胞毒性药物为尾海兔素、奥瑞他汀、多柔比星或其任何类似物或衍生物。
在一个实施方案中，细胞毒性药物为尾海兔素10或其任何衍生物。
在一个实施方案中，细胞毒性药物为尾海兔素15或其任何衍生物。
在一个实施方案中，细胞毒性药物为奥瑞他汀F或其任何衍生物。
在一个实施方案中，细胞毒性药物为尾海兔素10、尾海兔素15或奥瑞他汀F。
在一个实施方案中，细胞毒性药物为尾海兔素10。
在一个实施方案中，细胞毒性药物为尾海兔素15。
在一个实施方案中，细胞毒性药物为奥瑞他汀F。
在一个实施方案中，细胞毒性药物为奥瑞他汀U(MMAU)。
在一个实施方案中，细胞毒性药物为奥瑞他汀FP(MMAFP)。
在一个实施方案中，细胞毒性药物为奥瑞他汀FU(MMAFU)。合适的尾海兔素的实例包括单甲基和去甲基尾海兔素10、15、C、D和H，单甲基和去甲基异尾海兔素H，及其类似物和衍生物。尾海兔素10和15是α-氨基酸产生的尾海兔素中最有效的细胞毒性剂。单甲基和去甲基尾海兔素10和15可以根据标准肽合成化学通过化学合成来制备。
可使用的合适奥瑞他汀的实例包括(但不限于)单甲基和去甲基奥瑞他汀E、F、FP、FU、EB、EFP、PY、PYE、PE、PHE、TP、2-AQ和6-AQ。
在一个实施方案中，细胞毒性药物为柔红霉素或多柔比星。
在一个实施方案中，柔比星或多柔比星衍生物为奈莫柔比星(3'-去氨基-3′-[2”(S)-甲氧基-4”-吗啉基]多柔比星；MMDX)或其修饰物或衍生物。
在一个实施方案中，柔比星或多柔比星衍生物为3'-去氨基-3”,4'-去水-[2”(S)-甲氧基-3”(R)-氧基-4”-吗啉基]多柔比星(PNU-159682)或其修饰物或衍生物。
在一个实施方案中，柔比星或多柔比星衍生物为PNU-EDA、PNU-EDA'或其修饰物或衍生物。
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其中Rx为L-抗体且L为本说明书中所述的接头，其中所述“接头”应理解为指由式I和III表示的不含D的分子的部分(moiety)或一部分(portion)，或指由式II、IIs、IV和IVs表示的不含D和T的分子的部分或一部分。
在一个实施方案中，细胞毒性药物为美登素(maytansinoid)。美登素可为N-葡糖基美登素。
其中Rx为L-抗体且L为本说明书中所述的接头，其中所述“接头”应理解为指由式I和III表示的不含D的分子的部分(moiety)或一部分(portion)，或指由式II、IIs、IV和IVs表示的不含D和T的分子的部分或一部分。
在一个实施方案中，细胞毒性药物为美登木素(maytansine)、安丝菌素、DM1或DM4(也称为DM-4)。
在一个实施方案中，细胞毒性药物为DM1。DM1也称为DM-1和mertansine。
在一个实施方案中，细胞毒性药物为柔比星。合适的柔比星可为例如柔红霉素、多柔比星、地托比星、其他多柔比星衍生物，包括吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉代-多柔比星、脱氧多柔比星、表柔比星、依索比星、伊达比星、罗多比星、佐柔比星和吡柔比星。
在一个实施方案中，细胞毒性药物为表柔比星。
在一个实施方案中，细胞毒性药物为倍癌霉素。合适的倍癌霉素可为例如倍癌霉素A、倍癌霉素B1、倍癌霉素B2、倍癌霉素C1、倍癌霉素C2、倍癌霉素D、倍癌霉素SA、倍癌霉素MA和CC-1065。术语“倍癌霉素”应理解为也指代倍癌霉素的合成类似物，诸如阿多来新、比折来新、卡折来新、KW-2189和CBI-TMI。
在一个实施方案中，细胞毒性药物包括可烷基化DNA的倍癌霉素片段。在一个实施方案中，细胞毒性药物包括可烷基化DNA的两个或更多个倍癌霉素片段。在一个实施方案中，细胞毒性药物包括可烷基化DNA的两个倍癌霉素片段。
在一个实施方案中，倍癌霉素为式DS的倍癌霉素-糖缀合物。
其中S为糖。
在一个实施方案中，糖包括或为选自由以下组成的组的单糖：β-D-半乳糖、N-乙酰基-β-D-半乳糖胺、N-乙酰基-α-D-半乳糖胺、N-乙酰基-β-D-葡萄糖胺、β-D-葡糖醛酸、α-L-艾杜糖醛酸、α-D-半乳糖、α-D-葡萄糖、β-D-葡萄糖、α-D-甘露糖、β-D-甘露糖、α-L-岩藻糖、β-D-木糖、神经氨酸及其任何类似物或修饰物。
合适的尾海兔素的实例包括单甲基和去甲基尾海兔素10、15、C、D和H，单甲基和去甲基异尾海兔素H，及其类似物和衍生物。
在一实施方案中，细胞毒性药物为微管溶素。
在一个实施方案中，细胞毒性药物为鹅膏蕈碱，诸如α-鹅膏蕈碱。
在一个实施方案中，细胞毒性药物为念珠藻素。
在一个实施方案中，奥瑞他汀为单甲基奥瑞他汀E。
在一个实施方案中，奥瑞他汀为MMAU。
在一个实施方案中，奥瑞他汀为单甲基奥瑞他汀F、W或M。
在一个实施方案中，细胞毒性药物为吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)、PBD二聚物或其类似物。
在一个实施方案中，吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)、PBD二聚物或其类似物选自以下的组：天然存在的和合成的类似物、阿贝霉素(abbeymycin)、契卡霉素(chicamycin)、DC-81；甲基氨茴霉素(mazethramycin)、新茴霉素(neothramycins)A和B、泊罗霉素(porothramycin)、普拉卡素(prothracarcin)；西班米星(sibanomicin)(DC-102)、西伯利亚霉素(sibiromycin)和托马霉素。
在一个实施方案中，吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)、PBD二聚物或其类似物为Miller等人2016,Mol Cancer Ther；15(8)；1-9中所述的非交联类似物。
D可为选自由以下组成的组的细胞毒性药物：尾海兔素；奥瑞他汀；埃博霉素；柔红霉素；多柔比星；烷化剂，诸如噻替派和环磷酰胺(CYTOXANTM)；烷基磺酸酯，诸如白消安、英丙舒凡或哌泊舒凡；氮丙啶，诸如苯佐多巴，卡波醌、米特多巴或乌瑞替派；乙撑亚胺类和/或甲基蜜胺类，诸如六甲蜜胺、三乙撑蜜胺、三乙撑磷酰胺、三乙撑硫代磷酰胺或三羟甲蜜胺；番荔枝内酯类，诸如布拉它辛或布拉他辛酮；喜树碱，诸如合成类似物拓扑替康；苔藓抑素；卡利抑素；CC-1065和/或其阿多来新、卡折来新或比折来新合成类似物；念珠藻素，诸如念珠藻素1或念珠藻素8)；倍癌霉素(包括合成类似物KW-2189和CBI-TMI)；五加素；水鬼蕉碱；匍枝珊瑚醇；海绵抑素；氮芥类，诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺、雌氮芥、异磷酰胺、双氯乙基甲胺、盐酸甲氧氮芥、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲磷胺、乌拉莫司汀；硝基脲类，诸如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀；抗生素，诸如烯二炔抗生素(例如卡里奇霉素，特别是卡里奇霉素γ1；达内霉素，包括达内霉素A；埃斯波霉素；以及新抑癌菌素发色团和相关色蛋白烯二炔抗生素发色团)、阿克拉霉素、放线菌素C、氨曲霉素、氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素、卡拉比星、卡诺霉素、嗜癌霉素；色霉素、放线菌素D、地托比星、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、其他多柔比星衍生物(包括吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯代-多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、依达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑菌素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢物类，诸如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、多西氟尿啶、依诺他滨、氟尿苷、5-氟尿嘧啶；雄激素类，诸如卡鲁睾酮、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺类，诸如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂，诸如亚叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基酮戊酸；氨苯吖啶；阿莫斯汀；比生群；依达曲沙；地磷酰胺；地美可辛；地吖醌；依氟鸟氨酸；醋酸羟吡咔唑；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；美登素类化合物，诸如美登木素和N-葡糖基美登素、安丝菌素、DM-1、DM-4；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；二胺硝吖啶；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；雷佐生；根霉素；西索菲兰；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2',2”-三氯三乙胺；单端孢霉烯族毒素类(尤其是T-2毒素、疣孢菌素A、杆孢菌素A和蛇形菌素)；尿烷；长春地辛；达卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；加西托星；阿糖胞苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；噻替哌；紫杉烷类，例如紫杉醇(/>Bristol-MyersSquibb Oncology,Princeton,N.J.)和多西他塞(/>Rhone-Poulenc Rorer,Antony,France)；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂配位络合物，诸如顺铂、卡铂和长春碱；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；丝裂霉素C；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；诺维苯；米托蒽醌；替尼泊苷；道诺霉素；氨基蝶呤；卡培他滨；伊班膦酸钠；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；视黄酸；卡培他滨；它莫西芬、雷洛昔芬、抑制4(5)-咪唑的芳香酶、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛西芬、LY117018、奥那司酮和托瑞米芬(Fareston)；以及抗雄激素类，诸如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；微管溶素；鹅膏蕈碱，诸如α-鹅膏蕈碱；以及药学上可接受的盐、酸；尾海兔素10或其任何衍生物；尾海兔素15或其任何衍生物；奥瑞他汀F或其任何衍生物；单甲基和去甲基尾海兔素10、15、C、D和H，单甲基和去甲基异尾海兔素H，及其类似物或衍生物；单甲基和去甲基奥瑞他汀E、F、EB、EFP、PY、PYE、PE、PHE、TP、2-AQ和6-AQ；美登素类(maytansinoids)；N-葡糖基美登素；美登木素、安丝菌素、DM1(亦称为mertansine)或DM4(亦称为DM-4)；柔红霉素、多柔比星、地托比星、其他多柔比星衍生物，包括吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉代-多柔比星、脱氧多柔比星、表柔比星、依索比星、伊达比星、罗多比星、佐柔比星和吡柔比星；倍癌霉素A、倍癌霉素B1、倍癌霉素B2、倍癌霉素C1、倍癌霉素C2、倍癌霉素D、倍癌霉素SA、倍癌霉素MA和CC-1065；倍癌霉素的合成类似物，诸如阿多来新、比折来新、卡折来新、KW-2189和CBI-TMI；式DS的倍癌霉素-糖缀合物；微管溶素；α-鹅膏蕈碱；念珠藻素；单甲基奥瑞他汀E；式AS的奥瑞他汀糖缀合物；MMAU；单甲基奥瑞他汀F、W或M；吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)、阿贝霉素、契卡霉素、DC-81、甲基氨茴霉素、新茴霉素A和B、泊罗霉素、普拉卡素、西班米星、托马霉素和PBD二聚物；或以上任一种的类似物。
在一个实施方案中，接头-有效载荷缀合物是根据下式CMa-CMzz中的任一个。
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在一个实施方案中，靶向单元T为特异性结合至靶分子的分子。在本公开的上下文中，特异性结合的含义是靶向分子对其靶标具有比对不相关分子具有较高的结合亲和力。特异性结合的一个实例是抗体与其靶表位的结合。
在一个实施方案中，靶向单元T为特异性结合至靶细胞表面上的靶分子的分子。
在一个实施方案中，靶向单元T为小分子量配体、凝集素、肽、适体或抗体。
在一个实施方案中，靶向单元T为抗体。
在一个实施方案中，抗体为半胱氨酸工程化抗体。
抗体或半胱氨酸工程化抗体原则上可以是任何抗体或其结合片段，例如IgG、scFv、单域抗体、Fv、VHH抗体、双体抗体、串联双体抗体、Fab、Fab'、F(ab')2、Db、dAb-Fc、taFv、scDb、dAb2、DVD-Ig、Bs(scFv)4-IgG、taFv-Fc、scFv-Fc-scFv、Db-Fc、scDb-Fc、scDb-CH3或dAb-Fc-dAb。
在一个实施方案中，抗体或半胱氨酸工程化抗体为人抗体或人源化抗体。在此上下文中，术语“人抗体”，如其在本领域中通常使用的，应理解为具有可变区的抗体，其中框架和互补决定区(CDR)均来源于人类来源的序列。在此上下文中，术语“人源化抗体”，如其在本领域中通常使用的，应理解为意指来自人类来源的抗体的CDR的残基被具有所需特异性、亲和力和能力的来自非人物种(诸如小鼠、大鼠或兔)的CDR的残基替代。
本公开的抗体可以被半胱氨酸工程化以促进与有效载荷的缀合。基于本公开，本领域技术人员可以容易地制造如本文所述的半胱氨酸工程化抗体。如本文所用，“半胱氨酸工程化抗体”或“半胱氨酸工程化的”可指抗体或其免疫反应性片段，其中重链和/或轻链中的至少一个氨基酸是缺失、改变或取代的(优选用另一个氨基酸取代)以提供重链和/或轻链中的至少一个游离半胱氨酸或未配对半胱氨酸。如本文所用，“工程化半胱氨酸”可指存在于半胱氨酸工程化抗体(例如，半胱氨酸工程化的法兰妥单抗)中的半胱氨酸氨基酸。
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化抗体是半胱氨酸工程化抗体或抗体片段，并且半胱氨酸氨基酸通过用半胱氨酸氨基酸取代相应亲本抗体或抗体片段(例如，在重链恒定区的N297C(Kabat编号)处)中的非半胱氨酸氨基酸而引入。
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化抗体是半胱氨酸工程化抗体或抗体片段，并且半胱氨酸氨基酸通过用非半胱氨酸氨基酸取代相应亲本抗体或抗体片段(例如，在重链恒定区的C220S(Kabat编号)处)中的半胱氨酸氨基酸来替换。
如本文所用，“亲本抗体”是指在工程化过程(例如，引入工程化半胱氨酸的工程化过程)之前半胱氨酸工程化抗体的相应抗体。应理解，亲本抗体可以是野生型、突变的或合成的。
如本文所用，“半胱氨酸工程化的”是指抗体(例如，抗体或抗体片段))的特征，其包括至少一个工程化半胱氨酸或游离半胱氨酸。
根据本公开，术语“工程化半胱氨酸”或“半胱氨酸工程化的”是指缺失或取代抗体重链或轻链中的氨基酸，以在重链和/或轻链中提供至少一个游离半胱氨酸或未配对的半胱氨酸。
在一个实施方案中，“工程化的半胱氨酸”或“半胱氨酸工程化的”意指用半胱氨酸取代抗体重链和/或轻链中的非半胱氨酸氨基酸。
在一个实施方案中，“工程化的半胱氨酸”或“半胱氨酸工程化的”意指用非半胱氨酸氨基酸取代抗体重链和/或轻链中的半胱氨酸氨基酸。
在某些实施方案中，未配对的半胱氨酸残基将包括或为未配对的链内半胱氨酸残基。在其他实施方案中，游离半胱氨酸残基将包括或为未配对的链间半胱氨酸残基。在另外一些实施方案中，游离半胱氨酸可被工程化到抗体的氨基酸序列中(例如，在CH3结构域中)。在任何情况下，半胱氨酸工程化抗体可以是各种同型，例如IgG、IgE、IgA或IgD；并且在那些类别中，抗体可以是各种亚类，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。对于IgG构建体，抗体的轻链可以包括κ或λ同型，每个同型都并入有C214，其在选定的实施方案中，可由于IgG1重链中缺乏C220残基而不配对。
因此，除非上下文另有规定，否则如本文所用的术语“游离半胱氨酸”或“未配对的半胱氨酸”可互换使用，并且应意指抗体的任何半胱氨酸(或含硫醇的)成分(例如，半胱氨酸残基)，无论是天然存在的还是使用分子工程技术特异性地并入在选定的残基位置中，其不是在生理条件下天然存在的(或“天然的”)二硫键的一部分。在某些实施方案中，游离半胱氨酸可包括天然存在的半胱氨酸，其天然链间或链内二硫桥搭配物已被取代、消除或以其他方式改变以破坏生理条件下天然存在的二硫桥，从而使未配对的半胱氨酸适于缀合。在其他实施方案中，游离或未配对的半胱氨酸将包含选择性放置在抗体重链或轻链氨基酸序列内的预定位置处的半胱氨酸残基。应当理解，在缀合之前，游离或未配对的半胱氨酸可以作为硫醇(还原半胱氨酸)、作为封端半胱氨酸(氧化)或作为非天然分子内或分子间二硫键(氧化)的一部分(根据体系的氧化状态，另一半胱氨酸或硫醇基团在相同或不同分子上)存在。因此，在某些实施方案中，游离或未配对的半胱氨酸(无论是天然存在的还是并入的)将经受选择性还原及后续的缀合以提供本公开的接头-有效载荷缀合物的组合物或药物组合物。
在某些实施方案中，半胱氨酸工程化抗体包含链内或链间半胱氨酸残基的至少一个氨基酸缺失或取代。如本文所用，“链间半胱氨酸残基”意指参与抗体的轻链与重链之间或抗体的两条重链之间的天然二硫键的半胱氨酸残基，而“链内半胱氨酸残基”是指在同一重链或轻链中与另一半胱氨酸天然配对的半胱氨酸残基。在一个实施方案中，缺失或取代的链间半胱氨酸残基参与轻链与重链之间的二硫键形成。在另一实施方案中，缺失或取代的半胱氨酸残基参与两条重链之间的二硫键。在一个典型的实施方案中，由于抗体的互补结构(其中轻链与重链的VH和CH1结构域配对且其中一条重链的CH2和CH3结构域与互补重链的CH2和CH3结构域配对)，单个半胱氨酸在轻链或重链中的突变或缺失会导致半胱氨酸工程化抗体中两个未配对的半胱氨酸残基。
在一些实施方案中，链间半胱氨酸残基是缺失的。在其他实施方案中，链间半胱氨酸取代另一氨基酸(例如，天然存在的氨基酸)。例如，氨基酸取代可导致链间半胱氨酸被中性残基(例如丝氨酸、苏氨酸或甘氨酸)或亲水性残基(例如蛋氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸或异亮氨酸)替代。在某些实施方案中，链间半胱氨酸被丝氨酸替代。
在一些实施方案中，缺失或取代的半胱氨酸残基在轻链(κ或λ)上，从而在重链上留下游离半胱氨酸。在其他实施方案中，缺失或取代的半胱氨酸残基在重链上，而在轻链恒定区上留下游离半胱氨酸。组装后，将理解的是，在完整抗体的轻链或重链中单个半胱氨酸的缺失或取代会产生具有两个未配对半胱氨酸残基的半胱氨酸工程化抗体。
关于引入或添加一个或多个半胱氨酸残基以提供游离半胱氨酸(与破坏天然二硫键相反)，本领域技术人员可以容易地鉴别抗体或抗体片段上一个或多个相容位置。因此，在选定实施方案中，根据所需DAR、所选有效载荷和抗体靶标，可在CH1结构域、CH2结构域或CH3结构域或其任何组合中引入一个或多个半胱氨酸。在其他实施方案中，半胱氨酸可以引入κ或λCL结构域中，并且在某些实施方案中，可以引入CL结构域的C端区中。在各情况下，接近半胱氨酸插入位点的其他氨基酸残基都可以被改变、除去或取代，以促进分子稳定性、缀合效率或在有效载荷附着后为其提供保护环境。在某些实施方案中，取代的残基出现在抗体的任何可及位点处。通过用半胱氨酸取代这样的表面残基，反应性巯基因此被定位在抗体上易于可及的位点处，并且可以选择性地被还原。在某些实施方案中，取代的残基出现在抗体的可及位点处。通过用半胱氨酸取代那些残基，反应性巯基因此被定位在抗体的可及位点处，并可用于选择性地缀合抗体。
在一个实施方案中，半胱氨酸工程化抗体具有一个或多个选自由以下组成的组的重链氨基酸缺失或取代：A40、P41、A84、V89、S112、S113、A114、S115、T116、G118、V152、S153、N155、A168、Q171、C220、225、226、229、247、V278、N297、339、S371、375、376、S396和E400(根据Kabat)。
在一个实施方案中，IgG重链上的位置297(N297)处的天冬酰胺是缺失的或被取代的。
在一个实施方案中，重链为N297C。
在一个实施方案中，IgG重链上的位置220(C220)处的半胱氨酸是缺失的或被取代的。
在一个实施方案中，重链为C220S。
在一个实施方案中，重链上的位置226或位置229处的半胱氨酸是缺失的或被取代的。
在一个实施方案中，重链为C226S。
在一个实施方案中，重链为C229S。
在一个实施方案中，半胱氨酸工程化抗体具有一个或多个选自由以下组成的组的轻链氨基酸缺失或取代：V110、S114、S121、S127、143、147、A153、159、163、165、S168、V205和214(根据Kabat)。
在一个实施方案中，IgG轻链(κ或λ)的位置V205C或C214处的半胱氨酸是缺失的或被取代的。
在一个实施方案中，轻链为V205C。
在一个实施方案中，轻链为C214S。
另外的取代位置和制造半胱氨酸工程化抗体的方法在WO 2006/034488、WO 2006/065533和WO 2014/124316中列出，这些专利申请的全部并入本文。
表述“Kabat编号”是指在Kabat,E.A.等人,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,第5版Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,Md.(1991)中用于汇编抗体的重链可变结构域或轻链可变结构域的编号体系。使用此编号体系，实际线性氨基酸序列可以含有较少或额外的氨基酸，所述氨基酸对应于可变结构域的框架区(FR)或互补决定区(CDR)的缩短或对其进行的插入。通过在抗体序列同源性区域与“标准”Kabat编号序列的比对，可以确定给定抗体的残基的Kabat编号。除非另外明确指出，否则提及本说明书中重链或轻链的氨基酸(序列)的任何数字均根据Kabat编号。
表述“Eu编号”是指在Kabat,E.A.等人,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,第5版Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,Md.,NIH出版号91-3242,第662,680,689页(1991)中的Eu索引。“Kabat中的Eu索引”是指人IgG1 Eu抗体的残基编号(Edelman,G.M.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,63,78-85(1969))。
在一个实施方案中，抗体能够结合细胞表面抗原。
在一个实施方案中，细胞表面抗原是肿瘤抗原和/或癌抗原。
在一个实施方案中，抗体选自由以下组成的组：贝伐单抗、托西莫单抗、依那西普、曲妥珠单抗、阿达木单抗、阿仑单抗、吉妥珠单抗奥唑米星(gemtuzumab ozogamicin)、依法利珠单抗、利妥昔单抗、英夫利西单抗、阿昔单抗、巴利昔单抗、帕利珠单抗、奥马珠单抗、达克利珠单抗、西妥昔单抗、帕尼单抗、依帕珠单抗、2G12、林妥珠单抗、尼妥珠单抗、法兰妥单抗和替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)。
在一个实施方案中，抗体能够结合选自由以下组成的组的靶分子：CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD11、CD8、CD11a、CD19、CD20、CD22、CD25、CD26、CD30、CD33、CD34、CD37、CD38、CD40、CD44、CD46、CD52、CD56、CD79、CD105、CD138、表皮生长因子受体1(EGFR)、表皮生长因子受体2(HER2/neu)、HER3或HER4受体、LFA-1、Mac1、p150.95、VLA-4、ICAM-1、VCAM、EpCAM、α4/β7整合素、αv/β3整合素、包括其α或β亚单位(例如抗CD11a、抗CD18或抗CD11b抗体)、组织因子(TF)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、人血管内皮生长因子(VEGF)、糖蛋白IIb/IIIa、TGF-β、α干扰素(α-IFN)、IL-8、IL-2受体、IgE、呼吸道合胞病毒(RSV)、HIV-1包膜糖蛋白gp120、癌症相关的高甘露糖型N-聚糖、血型抗原Apo2、死亡受体、flk2/flt3受体、肥胖(OB)受体、mpl受体、CTLA-4、转铁蛋白受体、Lewis y、GD3、TYRP-1(黑色素瘤抗原TA99/gp75)、PD-L1、PD-L2、TIM-3、MUC1、CA6 MUC1抗原和蛋白C。
在一个实施方案中，抗体选自由以下组成的组：抗EGFR抗体、表皮生长因子受体2(HER2/neu)抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗Lewis y抗体、抗TYRP-1、抗CD20抗体和抗血液靶抗体(anti-hematologic target antibody)。
在一个实施方案中，抗体能够结合选自由以下组成的组的抗血液靶分子：CD19、CD20、CD22、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD52、CD56、CD70、CD74、CD79、CD98、CD117、CD105、CD123、CD138、CD157、BCMA和CD319(SLAMF7)。
在本说明书的上下文中，术语“抗血液”可以理解为指代可能涉及或与血液癌症相关的靶分子。
在一个实施方案中，靶分子选自由以下组成的组：CD19、CD22、CD33、CD52和CD123。
在一个实施方案中，抗体为抗血液靶抗体。
在一个实施方案中，抗血液靶抗体选自由以下组成的组：朗妥昔单抗(loncastuximab)、博纳吐单抗(blinatumomab)、塔法斯单抗(tafasitamab)、考妥昔单抗(coltuximab)、地宁妥珠单抗(denintuzumab)、奥贝利单抗(obexelimab)、伊比利珠单抗(inebilizumab)、MOR00208、MDX-1342、MEDI-551、SAR3419、利妥昔单抗、奥法木单抗(ofatumumab)、维妥组单抗(veltuzumab)、奥美珠单抗(ocrelizumab)、奥滨尤妥珠单抗(obinutuzumab)、奥拉妥珠单抗(oaratuzumab)、乌妥昔单抗(ublituximab)、诺非单抗(nofetumomab)、替伊莫单抗(ibritumomab)、依帕珠单抗、奥英妥珠单抗(inotuzumabzogamicin)、贝妥莫单抗(bectumomab)、莫妥昔单抗(moxetumomab)、匹那妥珠单抗(pinatuzumab)、DCDT2980S、巴利昔单抗、达克利珠单抗、卡利尤单抗(camidanlumab)、伊诺莫单抗、ADCT-301、IMTOX-25、本妥昔单抗、伊妥木单抗(iratumumab)、AVE9633、林妥珠单抗、吉妥珠单抗、伐达妥昔单抗(vadastuximab)、奥乐妥珠单抗(otlertuzumab)、利洛托单抗(lilotomab)、那妥昔单抗(naratuximab)、BI836826、AGS67E、IMGN529、达雷木单抗、艾沙妥昔单抗(isatuximab)、迈泽妥单抗(mezagitamab)、菲泽妥单抗(felzartamab)、MOR202、MOR03087、阿仑单抗、洛沃妥珠单抗(lorvotuzumab mertansine)、玛汀-沃瑟妥珠单抗(vorsetuzumab mafodotin)、SGN-70A、泊洛妥珠单抗(polatuzumab)、雷英妥昔单抗(indatuximab)、MDX-1203、米拉珠单抗(milatuzumab)-多柔比星、IGN523、LOP-628、CSL360、塔妥珠单抗(talacotuzumab)、XmAb14045、KHK2823、BT062、贝兰他单抗莫福汀(belantamab mafodotin)、特立妥单抗(teclistamab)和埃罗妥珠单抗(elotuzumab)。
在一个实施方案中，靶抗体选自由以下组成的组：依帕珠单抗、林妥珠单抗、考妥昔单抗、地宁妥珠单抗、朗妥昔单抗、阿仑单抗和塔妥珠单抗。
在一个实施方案中，抗体选自由以下组成的组：阿巴伏单抗、阿克托舒单抗(actoxumab)、阿德木单抗(adecatumumab)、阿夫土珠(afutuzumab)、阿妥莫单抗、阿马图昔单抗(amatuximab)、阿尼鲁单抗(anifrolumab)、阿泊珠单抗(apolizumab)、阿替奴单抗(atinumab)、阿替利珠单抗(atlizumab)、阿托木单抗(atorolimumab)、巴匹组单抗(bapineuzumab)、巴利昔单抗、巴维昔单抗(bavituximab)、贝利尤单抗、贝那利珠单抗(benralizumab)、柏替木单抗(bertilimumab)、贝索单抗(besilesomab)、贝洛托舒单抗(bezlotoxumab)、比玛卢单抗(bimagrumab)、比伐单抗(bivatuzumab)、博纳吐单抗、布索组单抗(blosozumab)、本妥昔单抗、布雷奴单抗(briakinumab)、柏达鲁单抗(brodalumab)、康纳单抗(canakinumab)、雷坎妥组单抗(cantuzumab)、卡帕珠单抗(caplacizumab)、卡罗单抗、卡芦单抗(carlumab)、卡妥索单抗(catumaxomab)、CC49、西利珠单抗(cedelizumab)、西妥木单抗(cixutumumab)、克拉扎珠单抗(clazakizumab)、克立昔单抗(clenoliximab)、克利妥珠单抗(clivatuzumab)、可那木单抗(conatumumab)、康赛珠单抗(concizumab)、克雷内治单抗(crenezumab)、CR6261、达西组单抗(dacetuzumab)、达罗托组单抗(dalotuzumab)、达雷木单抗、登赛珠单抗(demcizumab)、地诺单抗、地莫单抗、曲齐妥单抗(drozitumab)、杜力戈图单抗(duligotumab)、度普利尤单抗、度司妥单抗(dusigitumab)、依美昔单抗(ecromeximab)、依库丽单抗(eculizumab)、埃巴单抗(edobacomab)、依决洛单抗、埃迪鲁单抗(eldelumab)、埃罗妥珠单抗、伊斯利莫(elsilimomab)、依那妥组单抗(enavatuzumab)、恩莫单抗、依诺凯组单抗(enokizumab)、依诺苏单抗(enoticumab)、恩妥昔单抗(ensituximab)、西依匹莫单抗(epitumomab)、依帕珠单抗、厄妥索单抗(ertumaxomab)、伊瑞西珠(etaracizumab)、依曲利组单抗(etrolizumab)、依洛尤单抗、艾韦单抗(exbivirumab)、法索单抗(fanolesomab)、法拉莫单抗(faralimomab)、法妥组单抗(farletuzumab)、法司努单抗(fasinumab)、泛维珠单抗(felvizumab)、非扎奴单抗(fezakinumab)、非拉妥组单抗(ficlatuzumab)、芬妥木单抗(figitumumab)、法兰妥单抗、芳妥珠单抗(fontolizumab)、福雷芦单抗(foralumab)、福拉韦单抗(foravirumab)、非苏木单抗(fresolimumab)、福拉奴单抗(fulranumab)、伏妥昔单抗(futuximab)、加利昔单抗(galiximab)、加尼妥单抗(ganitumab)、更汀芦单抗(gantenerumab)、加维莫单抗(gavilimomab)、吉伏组单抗(gevokizumab)、吉妥昔单抗(girentuximab)、格巴妥木单抗(glembatumumab)、戈利木单抗、戈鲁昔单抗(gomiliximab)、古塞库单抗、伊巴珠单抗、艾芦库单抗(icrucumab)、英西单抗、伊马曲单抗(imgatuzumab)、英克勒库单抗(inclacumab)、雷英妥昔单抗、英妥木单抗(intetumumab)、伊诺莫单抗、奥英妥珠单抗、易普利姆玛(ipilimumab)、伊妥木单抗、伊利组单抗(itolizumab)、依奇珠单抗(ixekizumab)、凯利昔单抗(keliximab)、拉贝珠单抗(labetuzumab)、兰布鲁珠单抗(lambrolizumab)、兰帕利珠单抗(lampalizumab)、来瑞组单抗(lebrikizumab)、来马索单抗(lemalesomab)、乐德木单抗(lerdelimumab)、来沙木单抗(lexatumumab)、利韦单抗(libivirumab)、利戈组单抗(ligelizumab)、林妥珠单抗、利瑞鲁单抗(lirilumab)、洛迪赛珠单抗(lodelcizumab)、洛沃妥珠单抗、卢卡木单抗(lucatumumab)、鲁昔单抗(lumiliximab)、马帕木单抗(mapatumumab)、玛格妥昔单抗(margetuximab)、马司莫单抗、玛弗利木单抗(mavrilimumab)、马妥珠单抗(matuzumab)、美泊利单抗(mepolizumab)、美替木单抗(metelimumab)、米拉组单抗(milatuzumab)、明瑞莫单抗(minretumomab)、米妥莫单抗(mitumomab)、莫格利珠单抗(mogamulizumab)、莫罗木单抗(morolimumab)、莫维组单抗(motavizumab)、莫妥昔单抗、莫罗单抗、那美芦单抗(namilumab)、那呐妥单抗(narnatumab)、那他珠单抗、奈巴库单抗、耐昔妥珠单抗(necitumumab)、奈瑞莫单抗(nerelimomab)、奈伐苏单抗(nesvacumab)、尼妥珠单抗、纳武利尤单抗、比妥珠单抗(binutuzumab)、奥卡妥珠单抗(ocaratuzumab)、奥美珠单抗、奥度莫单抗、奥法木单抗(ofatumumab)、奥拉单抗(olaratumab)、奥洛组单抗(olokizumab)、奥那妥组单抗(onartuzumab)、奥戈伏单抗(oregovomab)、奥替苏单抗(orticumab)、奥昔珠单抗(otelixizumab)、奥塞芦单抗(oxelumab)、奥扎尼珠单抗(ozanezumab)、奥利组单抗(ozoralizumab)、帕吉昔单抗(pagibaximab)、帕巴库单抗(panobacumab)、帕萨妥珠单抗(parsatuzumab)、帕博利珠单抗(pascolizumab)、帕替组单抗(pateclizumab)、帕曲妥单抗(patritumab)、佩图莫单抗(pemtumomab)、培拉凯珠单抗(perakizumab)、帕妥珠单抗、匹地利珠单抗(pidilizumab)、匹那妥珠单抗、平妥单抗(pintumomab)、普拉鲁单抗(placulumab)、泊洛妥珠单抗、泊奈组单抗(ponezumab)、普立昔单抗、瑞托萨昔单抗(pritoxaximab)、普托木单抗(pritumumab)、奎利珠单抗(quilizumab)、雷妥莫单抗(racotumomab)、雷曲妥单抗(radretumab)、瑞非韦鲁(rafivirumab)、雷莫芦单抗、瑞西巴库(raxibacumab)、瑞加韦单抗、瑞利珠单抗(reslizumab)、利妥木单抗(rilotumumab)、罗妥木单抗(robatumumab)、罗来度单抗(roledumab)、罗莫单抗(romosozumab)、隆利组单抗(rontalizumab)、罗维珠单抗(rovelizumab)、卢利珠单抗(ruplizumab)、沙马组单抗(samalizumab)、沙利鲁单抗(sarilumab)、沙妥莫单抗、苏金单抗、瑟瑞妥单抗(seribantumab)、瑟托萨昔单抗(setoxaximab)、司韦单抗、西罗珠单抗(sibrotuzumab)、西法木单抗(sifalimumab)、司妥昔单抗(siltuximab)、辛妥珠单抗(simtuzumab)、西利珠单抗(siplizumab)、西鲁库单抗(sirukumab)、茄尼醇单抗、索利托单抗(solitomab)、索耐珠单抗(sonepcizumab)、索土珠单抗(sontuzumab)、司他莫鲁(stamulumab)、舒维组单抗(suvizumab)、他贝芦单抗(tabalumab)、替组单抗(tacatuzumab)、他利珠单抗(talizumab)、他尼珠(tanezumab)、他利妥莫单抗(taplitumomab)、替非组单抗(tefibazumab)、替妥莫单抗(tenatumomab)、替奈昔单抗(teneliximab)、替利组单抗(teplizumab)、替妥木单抗(teprotumumab)、TGN1412、曲美木单抗(ticilimumab)、替曲吉珠单抗(tildrakizumab)、替加组单抗(tiga-tuzumab)、托珠单抗、托利珠单抗(toralizumab)、托维妥单抗(tovetumab)、曲罗芦单抗(tralokinumab)、TRBS07、曲利组单抗(tregalizumab)、曲美木单抗(tremelimumab)、西莫白介素单抗(tucotuzumab)、妥韦单抗、乌妥昔单抗、乌瑞芦单抗(urelumab)、乌珠单抗(urtoxazumab)、优特克单抗(ustekinumab)、万替妥单抗(vantictumab)、伐利昔单抗(vapaliximab)、伐利组单抗(vatelizumab)、维多珠单抗、维妥组单抗、维帕莫单抗(vepalimomab)、维森库单抗(vesencumab)、维西珠单抗(visilizumab)、伏洛昔单抗(volociximab)、沃瑟妥珠单抗(vorsetuzumab)、伏妥莫单抗(votumumab)、扎芦木单抗(zalutumumab)、扎木单抗(zanolimumab)、佐妥昔单抗(zatuximab)、齐拉木单抗(ziralimumab)、2G12(抗HIV-1包膜糖蛋白gp120)、TA99、阿维鲁单抗(avelumab)、DS6、huDS6和阿佐莫单抗。
在一个实施方案中，抗体选自由以下组成的组：抗EGFR抗体、表皮生长因子受体2(HER2/neu)抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD20抗体、抗TYRP-1抗体、抗PD-L1抗体、抗PD-L2抗体、抗TIM-3抗体、抗MUC1抗体和抗CA6抗体。
在一个实施方案中，抗体为抗EGFR抗体。
在一个实施方案中，抗EGFR抗体为西妥昔单抗、伊马曲单抗、马妥珠单抗、尼妥珠单抗、耐昔妥珠单抗、帕尼单抗或扎芦木单抗。
在一个实施方案中，抗体为表皮生长因子受体2(HER2/neu)抗体。
在一个实施方案中，抗HER2抗体为玛格妥昔单抗、帕妥珠单抗、曲妥珠单抗、厄妥索单抗或520C9XH22。
在一个实施方案中，抗体为抗CD19抗体。
在一个实施方案中，抗CD19抗体为朗妥昔单抗、博纳吐单抗、塔法斯单抗、考妥昔单抗、地宁妥珠单抗、奥贝利单抗或伊比利珠单抗。
在一个实施方案中，朗妥昔单抗具有SEQ ID NO:1所列的重链序列。
在一个实施方案中，朗妥昔单抗具有SEQ ID NO:2所列的轻链序列。
在一个实施方案中，考妥昔单抗具有SEQ ID NO:3所列的重链序列。
在一个实施方案中，考妥昔单抗具有SEQ ID NO:4所列的轻链序列。
在一个实施方案中，地宁妥珠单抗具有SEQ ID NO:5所列的重链序列。
在一个实施方案中，地宁妥珠单抗具有SEQ ID NO:6所列的轻链序列。
在一个实施方案中，抗体为抗CD52抗体。
在一个实施方案中，抗CD52抗体为阿仑单抗。
在一个实施方案中，阿仑单抗具有SEQ ID NO:7所列的重链序列。
在一个实施方案中，阿仑单抗具有SEQ ID NO:8所列的轻链序列。
在一个实施方案中，抗体为抗CD37抗体。
在一个实施方案中，抗CD37抗体为奥乐妥珠单抗、利洛托单抗、那妥昔单抗或BI836826。
在一个实施方案中，抗体为抗CD38抗体。
在一个实施方案中，抗CD38抗体为达雷木单抗、艾沙妥昔单抗、迈泽妥单抗或菲泽妥单抗。
在一个实施方案中，达雷木单抗具有SEQ ID NO:9所列的重链序列。
在一个实施方案中，达雷木单抗具有SEQ ID NO:10所列的轻链序列。
在一个实施方案中，艾沙妥昔单抗具有SEQ ID NO:11所列的重链序列。
在一个实施方案中，艾沙妥昔单抗具有SEQ ID NO:12所列的轻链序列。
在一个实施方案中，迈泽妥单抗具有SEQ ID NO:13所列的重链序列。
在一个实施方案中，迈泽妥单抗具有SEQ ID NO:14所列的轻链序列。
在一个实施方案中，菲泽妥单抗具有SEQ ID NO:15所列的重链序列。
在一个实施方案中，菲泽妥单抗具有SEQ ID NO:16所列的轻链序列。
在一个实施方案中，抗体为抗CD56抗体。
在一个实施方案中，抗CD56抗体为洛沃妥珠单抗。
在一个实施方案中，洛沃妥珠单抗具有SEQ ID NO:17所列的重链序列。
在一个实施方案中，洛沃妥珠单抗具有SEQ ID NO:18所列的轻链序列。
在一个实施方案中，抗体为抗CD79抗体。
在一个实施方案中，抗CD79抗体为泊洛妥珠单抗。
在一个实施方案中，泊洛妥珠单抗具有SEQ ID NO:19所列的重链序列。
在一个实施方案中，泊洛妥珠单抗具有SEQ ID NO:20所列的轻链序列。
在一个实施方案中，抗体为抗CD138抗体。
在一个实施方案中，抗CD138抗体为雷英妥昔单抗。
在一个实施方案中，雷英妥昔单抗具有SEQ ID NO:21所列的重链序列。
在一个实施方案中，雷英妥昔单抗具有SEQ ID NO:22所列的轻链序列。
在一个实施方案中，抗体为抗BCMA抗体。
在一个实施方案中，抗BCMA抗体为贝兰他单抗或特立妥单抗。
在一个实施方案中，贝兰他单抗具有SEQ ID NO:23所列的重链序列。
在一个实施方案中，贝兰他单抗具有SEQ ID NO:24所列的轻链序列。
在一个实施方案中，抗体为抗CD20抗体。
在一个实施方案中，抗CD20抗体为利妥昔单抗、乌妥昔单抗、奥滨尤妥珠单抗、奥卡妥珠单抗、奥美珠单抗、维妥组单抗、奥法木单抗、诺非单抗或替伊莫单抗。
在一个实施方案中，奥美珠单抗具有SEQ ID NO:25所列的重链序列。
在一个实施方案中，奥美珠单抗具有SEQ ID NO:26所列的轻链序列。
在一个实施方案中，抗体为抗CD22抗体。
在一个实施方案中，抗CD22抗体为贝妥莫单抗、莫妥昔单抗、依帕珠单抗、奥英妥珠单抗或匹那妥珠单抗。
在一个实施方案中，奥英妥珠单抗具有SEQ ID NO:27所列的重链序列。
在一个实施方案中，奥英妥珠单抗具有SEQ ID NO:28所列的轻链序列。
在一个实施方案中，依帕珠单抗具有SEQ ID NO:29所列的重链序列。
在一个实施方案中，依帕珠单抗具有SEQ ID NO:30所列的轻链序列。
在一个实施方案中，抗体为抗CD25抗体。
在一个实施方案中，抗CD25抗体为卡利尤单抗、达克利珠单抗、伊诺莫单抗和巴利昔单抗。
在一个实施方案中，卡利尤单抗具有SEQ ID NO:31所列的重链序列。
在一个实施方案中，卡利尤单抗具有SEQ ID NO:32所列的轻链序列。
在一个实施方案中，抗体为抗CD30抗体。
在一个实施方案中，抗CD30抗体为维布妥昔单抗(或维布妥昔单抗的抗体部分)或伊妥木单抗。
在一个实施方案中，维布妥昔单抗具有SEQ ID NO:33所列的重链序列。
在一个实施方案中，维布妥昔单抗具有SEQ ID NO:34所列的轻链序列。
在一个实施方案中，抗体为抗CD33抗体。
在一个实施方案中，抗CD33抗体为吉妥珠单抗、SGN-CD33A或林妥珠单抗。
在一个实施方案中，林妥珠单抗具有SEQ ID NO:35所列的重链序列。
在一个实施方案中，林妥珠单抗具有SEQ ID NO:36所列的轻链序列。
在一个实施方案中，吉妥珠单抗具有SEQ ID NO:37所列的重链序列。
在一个实施方案中，吉妥珠单抗具有SEQ ID NO:38所列的轻链序列。
在一个实施方案中，抗CD33抗体为伐达妥昔单抗。
在一个实施方案中，伐达妥昔单抗具有SEQ ID NO:39所列的重链序列。
在一个实施方案中，伐达妥昔单抗具有SEQ ID NO:40所列的轻链序列。
在一个实施方案中，抗CD33抗体为半胱氨酸工程化抗体。
在一个实施方案中，半胱氨酸工程化的抗CD33抗体具有选自由N296C和C219S组成的组的重链。
在一个实施方案中，半胱氨酸工程化的抗CD33抗体为林妥珠单抗。换言之，半胱氨酸工程化的抗CD33抗体为半胱氨酸工程化的林妥珠单抗。
在本说明书的上下文中，术语“半胱氨酸工程化的林妥珠单抗”可以理解为指代具有林妥珠单抗的氨基酸序列和/或结构的抗体，只是其已被半胱氨酸工程化。因此，半胱氨酸工程化的林妥珠单抗是通过半胱氨酸工程化林妥珠单抗可获得或获得的。虽然林妥珠单抗已被用作该术语使用的实例，但同样可以适用于本文描述的任何亲本抗体。
在一个实施方案中，半胱氨酸工程化的林妥珠单抗具有含有SEQ ID NO:41所列的取代N296C的重链序列。
在一个实施方案中，半胱氨酸工程化的林妥珠单抗具有含有SEQ ID NO:42所列的取代C219S的重链序列。
在一个实施方案中，半胱氨酸工程化的抗CD33抗体为吉妥珠单抗。
在一个实施方案中，半胱氨酸工程化的吉妥珠单抗具有选自由N293C和C130S组成的组的重链。
在一个实施方案中，半胱氨酸工程化的吉妥珠单抗具有含有SEQ ID NO:43所列的取代N293C的重链序列。
在一个实施方案中，半胱氨酸工程化的吉妥珠单抗具有含有SEQ ID NO:44所列的取代C130S的重链序列。
在一个实施方案中，抗体为抗TYRP-1抗体。
在一个实施方案中，抗TYRP-1抗体为TA99、嵌合TA99或法兰妥单抗。
在一个实施方案中，抗TYRP-1抗体为法兰妥单抗。
在一个实施方案中，法兰妥单抗具有SEQ ID NO:45所列的重链序列。
在一个实施方案中，法兰妥单抗具有SEQ ID NO:46所列的轻链序列。
在一个实施方案中，嵌合TA99具有SEQ ID NO:47所列的重链序列。
在一个实施方案中，嵌合TA99具有SEQ ID NO:48所列的轻链序列。
在一个实施方案中，抗TYRP-1抗体为半胱氨酸工程化抗体。
在一个实施方案中，半胱氨酸工程化抗TYRP-1抗体为TA99、嵌合TA99或法兰妥单抗。
在一个实施方案中，半胱氨酸工程化抗TYRP-1抗体为法兰妥单抗。
在一个实施方案中，半胱氨酸工程化法兰妥单抗具有含有选自由N299C和C222S组成的组的取代的重链序列。
在一个实施方案中，半胱氨酸工程化法兰妥单抗具有含有SEQ ID NO:49所列的取代N299C的重链序列。
在一个实施方案中，半胱氨酸工程化法兰妥单抗具有含有SEQ ID NO:50所列的取代C222S的重链序列。
在一个实施方案中，半胱氨酸工程化嵌合TA99具有含有SEQ ID NO:51所列的取代N301C的重链序列。
在一个实施方案中，半胱氨酸工程化嵌合TA99具有含有SEQ ID NO:52所列的取代C224S的重链序列。
在一个实施方案中，抗体为抗PD-L1抗体。
在一个实施方案中，抗PD-L1抗体为阿维鲁单抗。
在一个实施方案中，抗体为抗PD-L2抗体。
在一个实施方案中，抗体为抗TIM-3抗体。
在一个实施方案中，抗体为抗MUC1抗体。
在一个实施方案中，抗体为抗CA6抗体。
在一个实施方案中，抗CA6抗体为DS6或huDS6。
在一个实施方案中，Y为β-D-葡糖醛酸；R3为α-氨基酸、丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸的侧链；m＝1；R1选自以下的组：α-氨基酸、缬氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、精氨酸、丙氨酸、赖氨酸和甘氨酸的侧链；Z不存在；RX为-CH2CH2-；且D为细胞毒性药物。
在一个实施方案中，Y为β-D-葡糖醛酸；R3为α-氨基酸、丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸的侧链；m＝1；R1选自以下的组：α-氨基酸、缬氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、精氨酸、丙氨酸、赖氨酸和甘氨酸的侧链；Z为PABC；RX为-CH2CH2-；且D为细胞毒性药物。
在一个实施方案中，Y为β-D-葡糖醛酸；R3为丝氨酸的侧链；m＝1；R1为缬氨酸的侧链；RX为-CH2CH2-；Z为PABC；且D为细胞毒性药物。
在一个实施方案中，Y为β-D-葡糖醛酸；R3为α-氨基酸、丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸的侧链；m＝1；R1选自以下的组：α-氨基酸、缬氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、精氨酸、丙氨酸、赖氨酸和甘氨酸的侧链；Z为PABC；RX为-CH2CH2-；且D为奥瑞他汀。
在一个实施方案中，Y为β-D-葡糖醛酸；R3为α-氨基酸、丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸的侧链；m＝1；R1选自以下的组：α-氨基酸、缬氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、精氨酸、丙氨酸、赖氨酸和甘氨酸的侧链；Z为PABC；RX为-CH2CH2-；且D为柔比星或多柔比星衍生物。
在一个实施方案中，Y为β-D-葡糖醛酸；R3为α-氨基酸、丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸的侧链；m＝1；R1选自以下的组：α-氨基酸、缬氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、精氨酸、丙氨酸、赖氨酸和甘氨酸的侧链；Z不存在；RX为-CH2CH2-；且D为柔比星或多柔比星衍生物。
在一个实施方案中，Y为糖；R3为丝氨酸的侧链；m＝1；R1为缬氨酸的侧链；Z为PABC；RX为-CH2CH2-；且D为柔比星或多柔比星衍生物。
在一个实施方案中，Y为糖；R3为丝氨酸的侧链；m＝1；R1为缬氨酸的侧链；Z不存在；RX为-CH2CH2-；且D为柔比星或多柔比星衍生物。
在一个实施方案中，Y为β-D-葡糖醛酸；R3为丝氨酸的侧链；m＝1；R1为缬氨酸的侧链；Z为PABC；RX为-CH2CH2-；且D为奥瑞他汀。
在一个实施方案中，Y为β-D-葡萄糖；R3为丝氨酸的侧链；m＝1；R1为缬氨酸的侧链；Z为PABC；RX为-CH2CH2-；且D为柔比星或多柔比星衍生物。
在一个实施方案中，Y为β-D-葡萄糖；R3为丝氨酸的侧链；m＝1；R1为缬氨酸的侧链；Z不存在；RX为-CH2CH2-；且D为柔比星或多柔比星衍生物。
在一个实施方案中，Y为β-D-葡糖醛酸；R3为丝氨酸的侧链；m＝1；R1为缬氨酸的侧链；Z为PABC；RX为-CH2CH2-；且D为柔比星或多柔比星衍生物。
在一个实施方案中，Y为β-D-葡糖醛酸；R3为丝氨酸的侧链；m＝1；R1为缬氨酸的侧链；Z不存在；RX is-CH2CH2-；且D为柔比星或多柔比星衍生物。
在一个实施方案中，
(i)R3选自由以下组成的组：α-氨基酸、丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的侧链，
(ii)Z选自由以下组成的组：对氨基苄氧羰基(PABC)；邻氨基苄氧羰基；氨基酸；和肽；或Z不存在；
(iii)R1选自由以下组成的组：缬氨酸的侧链、苯丙氨酸的侧链、酪氨酸的侧链、亮氨酸的侧链、异亮氨酸的侧链、精氨酸的侧链、丙氨酸的侧链、赖氨酸的侧链和甘氨酸的侧链；和/或
(iv)RX选自由以下组成的组：直链C1-C6亚烷基；支链C1-C6亚烷基；CH(R2)，其中R2为氨基酸侧链；及-CH2CH2-。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物是根据下式TMa-TMz中的任一个：
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在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物是根据下式TMsa-TMsz中的任一个：
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在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为抗体-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中T为抗体。n可为在本说明书中描述的任何n值或n值范围。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为抗体-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中T为抗体且n为8。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为抗HER2抗体-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中T为抗HER2抗体。在一个实施方案中，n为约8。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为曲妥珠单抗-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中T为曲妥珠单抗。在一个实施方案中，n为约8。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为抗HER2抗体-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(GlcA)-PAB-MMAU
其中T为抗HER2抗体。在一个实施方案中，n为约8。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为曲妥珠单抗-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(GlcA)-PAB-MMAU
/>
其中T为曲妥珠单抗。在一个实施方案中，n为约8。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为抗CD33抗体-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中T为抗CD33抗体。在一个实施方案中，n为6、7或8。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为林妥珠单抗-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中n为8。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为吉妥珠单抗-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中n为8。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为抗TYRP1抗体-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中T为抗TYRP1抗体。在一个实施方案中，n为6、7或8。在一个实施方案中，n为8。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为法兰妥单抗-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中n为6、7或8。在一个实施方案中，n为8。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为抗CD22抗体-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中T为抗CD22抗体。在一个实施方案中，n为6、7或8。在一个实施方案中，n为8。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为依帕珠单抗-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中n为6、7或8。在一个实施方案中，n为8。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为抗CD19抗体-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中T为抗CD19抗体。在一个实施方案中，n为6、7或8。在一个实施方案中，n为8。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为考妥昔单抗-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中n为6、7或8。在一个实施方案中，n为8。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为地宁妥珠单抗-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中n为6、7或8。在一个实施方案中，n为8。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为朗妥昔单抗-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中n为6、7或8。在一个实施方案中，n为8。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为抗CD52抗体-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中T为抗CD52抗体。在一个实施方案中，n为6、7或8。在一个实施方案中，n为8。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为阿仑单抗-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中n为6、7或8。在一个实施方案中，n为8。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物具有式TMsz
其中T为抗TYRP1抗体或半胱氨酸工程化的抗TYRP1抗体。在一个实施方案中，n为2、3或4。在一个实施方案中，n为2。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物具有式TMsz'
其中T为抗TYRP1抗体或半胱氨酸工程化的抗TYRP1抗体。在一个实施方案中，n为2、3或4。在一个实施方案中，n为2。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物具有式TMsz
其中T为法兰妥单抗或半胱氨酸工程化法兰妥单抗。在一个实施方案中，n为2、3或4。在一个实施方案中，n为2。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物具有式TMsz'
其中T为法兰妥单抗或半胱氨酸工程化法兰妥单抗。在一个实施方案中，n为2、3或4。在一个实施方案中，n为2。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为
其中T为具有HC N301C的半胱氨酸工程化抗体嵌合TA99。n可为在本说明书中描述的任何n值或n值范围。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为
其中T为具有HC N301C的半胱氨酸工程化抗体嵌合TA99。n可为在本说明书中描述的任何n值或n值范围。
在本说明书的上下文中，短语“HC N301C”可理解为在重链序列中具有取代N301C的抗体。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为
其中T为林妥珠单抗HC N296C。n可为在本说明书中描述的任何n值或n值范围。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为
其中T为林妥珠单抗HC N296C。n可为在本说明书中描述的任何n值或n值范围。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为
其中T为林妥珠单抗HC N296C。n可为在本说明书中描述的任何n值或n值范围。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为半胱氨酸工程化抗体-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中T为半胱氨酸工程化抗体且n为2、3、4、5、6、7或8。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为半胱氨酸工程化抗体-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中T为半胱氨酸工程化抗体，其具有在A40、P41、A84、V89、S112、S113、A114、S115、T116、G118、V152、S153、N155、A168、Q171、C220、225、226、229、247、V278、N297、339、S371、375、376、S396或E400中的重链取代和/或在V110、S114、S121、S127、143、147、A153、159、163、165、S168、V205或214中的轻链取代(根据Kabat)。n可为在本说明书中描述的任何n值或n值范围。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为半胱氨酸工程化抗体-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中T为半胱氨酸工程化抗体，其具有在220或297中的重链取代(根据Kabat)。n可为在本说明书中描述的任何n值或n值范围。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为半胱氨酸工程化抗体-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中T为半胱氨酸工程化抗TYRP1或抗CD33抗体。n可为在本说明书中描述的任何n值或n值范围。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为半胱氨酸工程化抗体-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中T为半胱氨酸工程化抗TYRP1或抗CD33抗体，其具有在220或297中的HC取代(根据Kabat)。n可为在本说明书中描述的任何n值或n值范围。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为半胱氨酸工程化抗体-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中T为半胱氨酸工程化林妥珠单抗、法兰妥单抗或吉妥珠单抗。n可为在本说明书中描述的任何n值或n值范围。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为半胱氨酸工程化抗体-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中T为半胱氨酸工程化林妥珠单抗、法兰妥单抗或吉妥珠单抗，其具有在220或297中的HC取代(根据Kabat)。n可为在本说明书中描述的任何n值或n值范围。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为半胱氨酸工程化林妥珠单抗-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU
其中T为具有HC取代N296C的半胱氨酸工程化林妥珠单抗。n可为在本说明书中描述的任何n值或n值范围。
在一个实施方案中，靶向单元为抗体并且生物正交连接基团以共价键将接头连接到抗体的氨基酸侧链上。
在一个实施方案中，生物正交连接基团为选自以下的组的炔烃：脂肪族炔烃，诸如炔丙基；或环炔烃，诸如DBCO、DIBO、环壬炔、环辛炔等。
在一个实施方案中，接头为或包括β-Ala-Val-Ser(Glc)。在一个实施方案中，接头是根据式IG、式IIG或式IIGs，其中m为1且n为0。
在一个实施方案中，接头为或包括β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB。在一个实施方案中，接头是根据式IGX、式IIGX或式IIGXs。
在一个实施方案中，接头-有效载荷缀合物是根据下式CBa-CBj中的任一个。
/>
/>
/>
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物是根据下式TBa-TBj中的任一个。
/>
/>
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式TBj。
在一个实施方案中，n在以下范围内：1至约20、或1至约15、或1至约10、或2至10、或2至6、或2至5、或2至4；或n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
在一个实施方案中，n在以下范围内：3至约20、或3至约15、或3至约10、或3至约9、或3至约8、或3至约7、或3至约6、或3至5、或3至4。
在一个实施方案中，n在以下范围内：4至约20、或4至约15、或4至约10、或4至约9、或4至约8、或4至约7、或4至约6、或4至5。
在一个实施方案中，n为5。
在一个实施方案中，n为6。
在一个实施方案中，n为7。
在一个实施方案中，n为8。
在一个实施方案中，n为9。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物的n或药物-抗体(DAR)比率可使用MALDI-TOF MS来测定。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物的n或药物抗体比率可使用ESI-MS来测定。
测定n或药物-抗体比率的示例性方法描述于Chen J,Yin S,Wu Y,OuyangJ.Development of a native nanoelectrospray mass spectrometry method fordetermination of the drug-to-antibody ratio of antibody-drug conjugates.AnalChem.2013Feb 5；85(3):1699-1704.doi:10.1021/ac302959p中。
如技术人员将理解，诸如药物组合物的组合物可包含其中n不同的不同靶向单元-接头-有效载荷缀合物分子的混合物。例如，当药物组合物的DAR为7.8时，所述药物组合物可主要包含n为8的靶向单元-接头-有效载荷缀合物分子，以及少量的其中n小于8(例如7和6)的靶向单元-接头-有效载荷缀合物分子，并且可能还包含痕量的其中n小于6的分子。n或DAR因此不一定是整数。如果有待缀合到靶向单元-接头-有效载荷缀合物分子上的有效载荷分子的(理论)最大数量为8，则DAR原则上不应超过8或约8，但组合物可包含少量的其中n大于8例如9或大于9的靶向单元-接头-有效载荷缀合物分子。DAR可以取决于例如靶向单元(诸如抗体)中可能的缀合位点数量、可缀合到单个缀合位点上的有效载荷分子的数量和/或靶向单元中可能的缀合位点实际上缀合到有效载荷分子上的程度。可以使用交联试剂制备靶向单元-接头-有效载荷缀合物。例如，半胱氨酸、硫醇或胺，例如抗体的N末端或氨基酸侧链诸如赖氨酸，可以与交联试剂的官能团形成键。
合适的接头可以通过本领域技术人员已知的标准方法来制备。例如，接头的中心氨基酸和肽基可以通过标准肽化学和自动化肽化学来制备，并从合成肽的商业制造商处订购；并且糖、硫酸盐、磷酸盐、磷酸二酯和膦酸酯基Y可以在由市售的受保护构建块合成氨基酸和肽基期间或之后添加到氨基酸和肽基上。此外，自牺牲基团Z可以通过标准化学方法添加到氨基酸和肽基上，从而与氨基酸和肽基团形成酰胺键。
制备靶向单元-有效载荷缀合物的一般方法，即有效载荷D、接头和靶向单元T的添加，对于技术人员来说是已知的，并且例如描述于以下文献中：美国专利号5635483；美国专利号5780588；Pettit等人(1989)J.Am.Chem.Soc.111:5463-5465；WO/2005/081711；Pettit等人(1998)Anti-Cancer Drug Design13:243-277；Pettit等人(1996)J.Chem.Soc.PerkinTrans.1 5:859-863；Doronina等人(2003)Nat.Biotech.21:778-784及Doronina等人(2006)Bioconjugate Chem.17:114-124；WO/2016/001485；WO/2014/096551；WO/2014/177771和WO/2018/234636。
可以通过本领域已知的各种测定来表征和选择靶向单元-接头-有效载荷缀合物和接头-有效载荷缀合物的物理/化学性质和/或生物活性。
例如，缀合物可以通过诸如ELISA、FACS、Biacore或蛋白质印迹的已知方法来测试其抗原结合活性。
转基因动物和细胞系在筛选缀合物方面特别有用，这些缀合物有可能作为肿瘤相关抗原和细胞表面受体的癌症的预防或治疗性治疗。筛选有用的缀合物可能涉及将候选缀合物在一定剂量范围内向转基因动物施用，并在不同时间点分析所述缀合物对所评估的疾病或病症的影响。替代地或另外地，如果适用，则在药物暴露于疾病诱导剂之前或同时施用所述药物。候选缀合物可以在中等或高通量筛选格式下连续和单独筛选、或并行筛选。
公开了一种用于制备根据一个或多个实施方案的靶向单元-接头-有效载荷缀合物的方法，其包括将根据一个或多个实施方案的接头-有效载荷缀合到靶向单元上。接头-有效载荷可以经由接头(诸如根据本说明书中描述的一个或多个实施方案的接头)缀合到靶向单元上。
已知将有效载荷分子缀合到靶向单元(例如抗体)上的许多方法，并且原则上可以使用任何适用于将有效载荷缀合到靶向单元上的方法。根据一个或多个实施方案的接头-有效载荷可以直接或间接地缀合到诸如抗体的靶向单元上。在一个实施方案中，根据一个或多个实施方案并且包含马来酰亚胺的接头-有效载荷通过用还原剂还原铰链区半胱氨酸并使还原的抗体与接头-有效载荷接触以形成硫醚键而缀合到抗体上。
在此上下文中，抗体原则上可以是任何抗体，且特别是本说明书中描述的任何抗体。
在此上下文中，有效载荷分子原则上可以是任何有效载荷分子，且特别是本说明书中描述的任何有效载荷分子。
在一个实施方案中，抗体选自由以下组成的组：抗EGFR抗体、表皮生长因子受体2(HER2/neu)抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD20抗体、抗TYRP-1抗体、抗PD-L1抗体、抗PD-L2抗体、抗TIM-3抗体、抗MUC1抗体和抗CA6抗体。
公开了一种药物组合物，其包含根据一个或多个实施方案的接头-有效载荷缀合物或根据一个或多个实施方案的靶向单元-接头-有效载荷缀合物。可通过根据本说明书中描述的一个或多个实施方案的方法获得靶向单元-接头-有效载荷缀合物。
药物组合物可以进一步包含药学上可接受的载剂。合适的药学上可接受的载剂的实例是本领域公知的，并且可以包括例如磷酸盐缓冲盐水溶液、水、油/水乳液、润湿剂和脂质体。包含此类载剂的组合物可以通过本领域公知的方法配制。药物组合物还可以包含其他组分，诸如媒介物、添加剂、防腐剂、同时施用的其他药物组合物等。
在一个实施方案中，药物组合物包含有效量的根据一个或多个实施方案的接头-有效载荷缀合物。
在一个实施方案中，药物组合物包含有效量的根据一个或多个实施方案的靶向单元-接头-有效载荷缀合物。
在一个实施方案中，药物组合物包含治疗有效量的根据一个或多个实施方案的接头-有效载荷缀合物。
在一个实施方案中，药物组合物包含治疗有效量的根据一个或多个实施方案的靶向单元-接头-有效载荷缀合物。
术语靶向单元-接头-有效载荷缀合物的“治疗有效量”或“有效量”应理解为指代用于调节癌细胞生长和/或治疗患者疾病的剂量方案。治疗有效量也可以通过参考标准医学文本诸如the Physicians Desk Reference 2004来确定。患者可以是男性或女性，并且可以是婴儿、儿童或成人。
术语“治疗(treatment)”或“治疗(treat)”是在传统意义上使用的并且意指照看、照顾和护理患者，目的是对抗、减少、减轻或缓解疾患或健康异常，并改善因该种疾患(例如像癌症疾病)而受损的生存状况。
在一个实施方案中，药物组合物包括用于例如经口、胃肠外、透皮、腔内、动脉内、鞘内和/或鼻内施用或用于直接注射到组织中的组合物。药物组合物的施用可以不同的方式进行，例如通过静脉内、腹膜内、皮下、肌肉内、肿瘤内、局部或皮内施用。
药物组合物可具有≥1或在以下范围内的药物-抗体比率：1至约20、或1至约15、或1至约10、或2至10、或2至6、或2至5、或2至4；或约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9、约10、约11、约12、约13、约14、约15、约16、约17、约18、约19或约20；或约1至约8、或约6至约8。
在一个实施方案中，药物组合物具有在以下范围内的药物-抗体比率：约1至约8、或2至9、或3至9、或4至9、或5至8.5、或6至8.5、或7至8.5、或7.5至8.5、或7至8、或7.5至8、或约8。
在一个实施方案中，药物组合物具有介于以下之间的平均药物-抗体比率：6至9、或7至8.5、或7至8、或7.5至8.5、或7.5至8、或约8。
在一个实施方案中，药物组合物具有在以下范围内的药物-抗体比率：0至约8、或1至7、或2至6、或3至5、或3.5至4.5、或约4。
在一个实施方案中，药物组合物具有介于以下之间的平均药物-抗体比率：3至5、或3.5至4.5、或约4。
在一个实施方案中，药物组合物具有在以下范围内的药物-抗体比率：0至约4、或1至3、或1.5至2.5、或约2。
在一个实施方案中，药物组合物具有介于以下之间的平均药物-抗体比率：1至3、或1.5至2.5、或约2。
在一个实施方案中，靶向单元-接头-有效载荷缀合物为由下式表示的靶向单元-接头-有效载荷缀合物
在上式的上下文中，n可为本说明书中描述的任何值或值的范围。在此类药物组合物中，药物-抗体比率可在以下范围内：约3至5、约3.5至4.5、约4、约7.5至8.3、或约7.8-8.1。靶向单元可以是本说明书中描述的任何靶向单元，诸如抗体。
公开了一种治疗和/或调节人或动物中肿瘤细胞生长的方法，其中向人或动物施用有效量的根据一个或多个实施方案的接头-有效载荷缀合物、根据一个或多个实施方案的靶向单元-接头-有效载荷缀合物或根据一个或多个实施方案的药物组合物。
公开了一种根据一个或多个实施方案的靶向单元-接头-有效载荷缀合物或根据一个或多个实施方案的药物组合物，其用作药剂。
公开了一种根据一个或多个实施方案的接头-有效载荷缀合物，其用作药剂。
公开了一种根据一个或多个实施方案的靶向单元-接头-有效载荷缀合物或根据一个或多个实施方案的药物组合物，其用于治疗癌症。
公开了一种根据一个或多个实施方案的接头-有效载荷缀合物，其用于治疗癌症。
根据一个或多个实施方案的靶向单元-接头-有效载荷缀合物或根据一个或多个实施方案的药物组合物在与抗癌剂组合时可特别有用。因此，本公开提供了式II、式IIs、式IIG、式IIGs、式IIGX、式IIGXs、式IV、式IVs、式TMa-TMz或式TMsa-TMsz的靶向单元-接头-有效载荷缀合物或它们的药物组合物与抗癌剂的组合，用于同时、单独或顺序施用。式II、式IIs、式IIG、式IIGs、式IIGX、式IIGXs、式IV、式IVs、式TMa-TMz或式TMsa-TMsz的靶向单元-接头-有效载荷缀合物与抗癌剂可以叠加地或协同地起作用。式II、式IIs、式IIG、式IIGs、式IIGX、式IIGXs、式IV、式IVs、式TMa-TMz或式TMsa-TMsz的靶向单元-接头-有效载荷缀合物与抗癌剂的协同组合可能允许使用较低剂量的这些剂中的一者或两者和/或较小频率剂量的式II、式IIs、式IIG、式IIGs、式IIGX、式IIGXs、式IV，式IV，式TMa-TMz或式TMsa-TMsz的靶向单元-接头-有效载荷缀合物和抗癌剂中的一者或两者，和/或以较小频率施用抗癌剂可以减少对患者造成的与施用所述剂有关的任何毒性，而不会降低所述剂治疗癌症的功效。此外，协同效应可能会提高这些剂治疗癌症的功效和/或减少与使用所述剂相关的任何不良或不希望的副作用。
抗癌剂可根据本领域公知的治疗方案施用。对本领域技术人员显而易见的是，抗癌剂的施用可以根据所治疗的疾病和抗癌剂对该疾病的已知作用而变化。此外，根据熟练临床医生的知识，治疗方案(例如，剂量和施用时间)可以根据所施用的抗癌剂对患者的观察到的作用，以及鉴于所观察到的疾病对所述剂的反应和观察到的不良作用而变化。
在一个实施方案中，式II、式IIs、式IIG、式IIGs、式IIGX、式IIGXs、式IV、式IVs、式TMa-TMz或式TMsa-TMsz的靶向单元-接头-有效载荷缀合物可以与一种或多种抗癌剂组合施用。
在一个实施方案中，靶向单元为抗体。
在一个实施方案中，式II、式IIs、式IIG、式IIGs、式IIGX、式IIGXs、式IV、式IVs、式TMa-TMz或式TMsa-TMsz的靶向单元-接头-有效载荷缀合物(其中靶向单元为抗体)能够结合选自由以下组成的组的抗血液靶分子：CD19、CD20、CD22、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD52、CD56、CD70、CD74、CD79、CD98、CD117、CD105、CD123、CD138、CD157、BCMA和CD319(SLAMF7)。
在一个实施方案中，式II、式IIs、式IIG、式IIGs、式IIGX、式IIGXs、式IV、式IVs、式TMa-TMz或式TMsa-TMsz的靶向单元-接头-有效载荷缀合物(其中靶向单元为抗体)能够结合选自由以下组成的组的靶分子：CD19、CD22、CD33、CD52和CD123。
在一个实施方案中，式II、式IIs、式IIG、式IIGs、式IIGX、式IIGXs、式IV、式IVs、式TMa-TMz或式TMsa-TMsz的靶向单元-接头-有效载荷缀合物，其中靶向单元为抗体，所述抗体为选自由以下组成的组的抗血液靶抗体：朗妥昔单抗、博纳吐单抗、塔法斯单抗、考妥昔单抗、地宁妥珠单抗、奥贝利单抗、伊比利珠单抗、MOR00208、MDX-1342、MEDI-551、SAR3419、利妥昔单抗、奥法木单抗、维妥组单抗、奥美珠单抗、奥滨尤妥珠单抗、奥卡妥珠单抗、乌妥昔单抗、诺非单抗、替伊莫单抗、依帕珠单抗、奥英妥珠单抗、贝妥莫单抗、莫妥昔单抗、匹那妥珠单抗、DCDT2980S、巴利昔单抗、达克利珠单抗、卡利尤单抗、伊诺莫单抗、ADCT-301、IMTOX-25、本妥昔单抗、伊妥木单抗、AVE9633、林妥珠单抗、吉妥珠单抗、伐达妥昔单抗、奥乐妥珠单抗、利洛托单抗、那妥昔单抗、BI836826、AGS67E、IMGN529、达雷木单抗、艾沙妥昔单抗、迈泽妥单抗、菲泽妥单抗、MOR202、MOR03087、阿仑单抗、洛沃妥珠单抗、沃瑟妥珠单抗、SGN-70A、泊洛妥珠单抗、雷英妥昔单抗、MDX-1203、米拉珠单抗、IGN523、LOP-628、CSL360、塔妥珠单抗、XmAb14045、KHK2823、BT062、贝兰他单抗莫福汀、特立妥单抗和埃罗妥珠单抗。
在式II、式IIs、式IIG、式IIGs、式IIGX、式IIGXs、式IV、式IVs、式TMa-TMz或式TMsa-TMsz的靶向单元-接头-有效载荷缀合物的一个实施方案中，其中靶向单元为抗体，所述抗体选自由以下组成的组：依帕珠单抗、林妥珠单抗、考妥昔单抗、地宁妥珠单抗、朗妥昔单抗、阿仑单抗和塔妥珠单抗。
靶向单元可以是抗体，其能够结合选自由以下组成的组的靶分子：CD19、CD22、CD33、CD52和CD123，并且靶向单元-接头-有效载荷缀合物或药物组合物与FLT3抑制剂、IDH1抑制剂、IDH2抑制剂、BCL2抑制剂、KRAS抑制剂、NRAS抑制剂或MEK1/2抑制剂组合施用。
FLT3抑制剂可以选自由以下组成的组：米多司他林、富马酸吉瑞替尼、奎扎替尼(quizartinib)、克莱拉尼(crenolanib)、舒尼替尼、帕纳替尼和索拉非尼。MEK1/2抑制剂可以是曲美替尼、考比替尼、司美替尼或贝美替尼。IDH1/IDH2抑制剂可以是恩西地平(enasidenib)或艾伏尼布(ivosidenib)。BCL2抑制剂可以是维奈托克(venetoclax)、纳维托克(navitoclax)或奥巴克拉(obatoclax)。KRAS抑制剂可以是索托拉西布(sotorasib)或阿达格拉西布(adagrasib)。
癌症的治疗还可以包括施用选自由以下组成的组的抗癌剂：阿卡替尼、三氧化砷、盐酸阿思尼布(asciminib hydrochloride)、阿基仑赛(axicabtagene ciloleucel)、氮杂胞苷、贝利司他(belinostat)、盐酸苯达莫司汀、硫酸博来霉素、硼替佐米、博舒替尼、brexucabtagene autoleucel、白消安、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、克拉屈滨、氯法拉滨、盐酸库潘尼西(copanlisib hydrochloride)、克里唑蒂尼、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、达沙替尼、盐酸柔红霉素、地尼白介素(denileukin diftitox)、地塞米松、盐酸多柔比星、杜韦利西布(duvelisib)、甲磺酸恩西地平、磷酸氟达拉滨、延胡索酸吉瑞替尼、马来酸格拉吉布、羟基脲、依鲁替尼、盐酸伊达比星、艾代拉里斯(idelalisib)、甲磺酸伊马替尼、艾伏尼布(ivosidenib)、来那度胺、利基迈仑赛(lisocabtagene maraleucel)、洛莫司汀(lomustine)、巯嘌呤、甲氨蝶呤钠、米多司他林、盐酸米托蒽醌、尼拉拉滨、尼罗替尼、纳武利尤单抗、高三尖杉酯碱(omacetaxine mepesuccinate)、普乐沙福(plerixafor)、盐酸帕纳替尼、普拉曲沙(pralatrexate)、强的松、盐酸丙卡巴肼、重组干扰素α-2b、利妥昔单抗、罗米地平、塞利尼索、塔法斯单抗-cxix、他拉福司(tagraxofusp-erzs)、氢溴酸泰泽司他(tazemetostat hydrobromide)、硫鸟嘌呤、司利弗明(tisagenlecleucel)、甲苯磺酸厄布利塞(umbralisib tosylate)、维奈托克、纳维托克、奥巴克拉、硫酸长春花碱、伏立诺他、泽布替尼、吉瑞替尼、奎扎替尼、克莱拉尼和索拉非尼。
靶向单元-接头-有效载荷缀合物或药物组合物可与以下组合施用：三氧化砷、氮杂胞苷、盐酸柔红霉素、环磷酰胺、阿糖胞苷、马来酸格拉吉布、地塞米松、盐酸多柔比星、米多司他林、延胡索酸吉瑞替尼、奎扎替尼、克莱拉尼、舒尼替尼、帕纳替尼、索拉非尼、恩西地平、艾伏尼布、索托拉西布、阿达格拉西布、盐酸依托泊苷、吉妥珠单抗、盐酸依达比星、米多司他林、盐酸米托蒽醌、强的松、硫鸟嘌呤、维奈托克、纳维托克、奥巴克拉或硫酸长春新碱。
在一个实施方案中，癌症选自由以下组成的组：白血病、淋巴瘤、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、结直肠癌、胃癌、鳞状癌、小细胞肺癌、头颈癌、多重耐药性癌症、胶质瘤、黑色素瘤和睾丸癌。
在一个实施方案中，肿瘤细胞选自由以下组成的组：白血病细胞、淋巴瘤细胞、乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、卵巢癌细胞、结直肠癌细胞、胃癌细胞、鳞状癌细胞、小细胞肺癌细胞、头颈癌细胞、多重耐药性癌细胞和睾丸癌细胞。
在一个实施方案中，抗癌剂选自由以下组成的组：阿卡替尼、三氧化砷、盐酸阿思尼布、阿基仑赛、氮杂胞苷、贝利司他、盐酸苯达莫司汀、硫酸博来霉素、硼替佐米、博舒替尼、brexucabtagene autoleucel、白消安、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、克拉屈滨、氯法拉滨、盐酸库潘尼西、克里唑蒂尼、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、达沙替尼、盐酸柔红霉素、地尼白介素、地塞米松、盐酸多柔比星、杜韦利西布、甲磺酸恩西地平、磷酸氟达拉滨、延胡索酸吉瑞替尼、马来酸格拉吉布、羟基脲、依鲁替尼、盐酸伊达比星、艾代拉里斯、甲磺酸伊马替尼、艾伏尼布、来那度胺、利基迈仑赛、洛莫司汀、巯嘌呤、甲氨蝶呤钠、米多司他林、盐酸米托蒽醌、尼拉拉滨、尼罗替尼、纳武利尤单抗、高三尖杉酯碱、普乐沙福、盐酸帕纳替尼、普拉曲沙、强的松、盐酸丙卡巴肼、重组干扰素α-2b、利妥昔单抗、罗米地平、塞利尼索、塔法斯单抗-cxix、他拉福司、氢溴酸泰泽司他、硫鸟嘌呤、司利弗明、甲苯磺酸厄布利塞、维奈托克、纳维托克、奥巴克拉、硫酸长春花碱、伏立诺他、泽布替尼、吉瑞替尼、奎扎替尼、克莱拉尼和索拉非尼。
在一个实施方案中，式II、式IIs、式IIG、式IIGs、式IIGX、式IIGXs、式IV、式IVs、式TMa-TMz或式TMsa-TMsz的靶向单元-接头-有效载荷缀合物(其中靶向单元为抗体，其能够结合选自由以下组成的组的抗血液靶分子：CD19、CD20、CD22、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD52、CD56、CD70、CD74、CD79、CD98、CD117、CD105、CD123、CD138、CD157、BCMA和CD319(SLAMF7))与选自由以下组成的组的抗癌剂组合施用：阿卡替尼、三氧化砷、盐酸阿思尼布、阿基仑赛、氮杂胞苷、贝利司他、盐酸苯达莫司汀、硫酸博来霉素、硼替佐米、博舒替尼、brexucabtagene autoleucel、白消安、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、克拉屈滨、氯法拉滨、盐酸库潘尼西、克里唑蒂尼、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、达沙替尼、盐酸柔红霉素、地尼白介素、地塞米松、盐酸多柔比星、杜韦利西布、甲磺酸恩西地平、磷酸氟达拉滨、延胡索酸吉瑞替尼、马来酸格拉吉布、羟基脲、依鲁替尼、盐酸伊达比星、艾代拉里斯、甲磺酸伊马替尼、艾伏尼布、来那度胺、利基迈仑赛、洛莫司汀、巯嘌呤、甲氨蝶呤钠、米多司他林、盐酸米托蒽醌、尼拉拉滨、尼罗替尼、纳武利尤单抗、高三尖杉酯碱、普乐沙福、盐酸帕纳替尼、普拉曲沙、强的松、盐酸丙卡巴肼、重组干扰素α-2b、利妥昔单抗、罗米地平、塞利尼索、塔法斯单抗-cxix、他拉福司、氢溴酸泰泽司他、硫鸟嘌呤、司利弗明、甲苯磺酸厄布利塞、维奈托克、纳维托克、奥巴克拉、硫酸长春花碱、伏立诺他、泽布替尼、吉瑞替尼、奎扎替尼、克莱拉尼和索拉非尼。
在一个实施方案中，式II、式IIs、式IIG、式IIGs、式IIGX、式IIGXs、式IV、式IVs、式TMa-TMz或式TMsa-TMsz的靶向单元-接头-有效载荷缀合物，(其中靶向单元为抗体，其能够结合选自由以下组成的组的靶分子：CD19、CD22、CD33、CD52和CD123)与选自由以下组成的组的抗癌剂组合施用：阿卡替尼、三氧化砷、盐酸阿思尼布、阿基仑赛、氮杂胞苷、贝利司他、盐酸苯达莫司汀、硫酸博来霉素、硼替佐米、博舒替尼、brexucabtagene autoleucel、白消安、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、克拉屈滨、氯法拉滨、盐酸库潘尼西、克里唑蒂尼、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、达沙替尼、盐酸柔红霉素、地尼白介素、地塞米松、盐酸多柔比星、杜韦利西布、甲磺酸恩西地平、磷酸氟达拉滨、延胡索酸吉瑞替尼、马来酸格拉吉布、羟基脲、依鲁替尼、盐酸伊达比星、艾代拉里斯、甲磺酸伊马替尼、艾伏尼布、来那度胺、利基迈仑赛、洛莫司汀、巯嘌呤、甲氨蝶呤钠、米多司他林、盐酸米托蒽醌、尼拉拉滨、尼罗替尼、纳武利尤单抗、高三尖杉酯碱、普乐沙福、盐酸帕纳替尼、普拉曲沙、强的松、盐酸丙卡巴肼、重组干扰素α-2b、利妥昔单抗、罗米地平、塞利尼索、塔法斯单抗-cxix、他拉福司、氢溴酸泰泽司他、硫鸟嘌呤、司利弗明、甲苯磺酸厄布利塞、维奈托克、纳维托克、奥巴克拉、硫酸长春花碱、伏立诺他、泽布替尼、吉瑞替尼、奎扎替尼、克莱拉尼和索拉非尼。
在一个实施方案中，式II、式IIs、式IIG、式IIGs、式IIGX、式IIGXs、式IV、式IVs、式TMa-TMz或式TMsa-TMsz的靶向单元-接头-有效载荷缀合物(其中靶向单元为抗体，其能够结合选自由以下组成的组的靶分子：CD19、CD22、CD33、CD52和CD123)与FLT3抑制剂、IDH1抑制剂、IDH2抑制剂、KRAS抑制剂、NRAS抑制剂或MEK1/2抑制剂组合施用。
在一个实施方案中，式II、式IIs、式IIG、式IIGs、式IIGX、式IIGXs、式IV、式IVs、式TMa-TMz或式TMsa-TMsz的靶向单元-接头-有效载荷缀合物(其中靶向单元为抗体，其能够结合CD33)与FLT3抑制剂、IDH1抑制剂、IDH2抑制剂、BCL2抑制剂、KRAS抑制剂、NRAS抑制剂或MEK1/2抑制剂组合施用。
在一个实施方案中，式II、式IIs、式IIG、式IIGs、式IIGX、式IIGXs、式IV、式IVs、式TMa-TMz或式TMsa-TMsz的靶向单元-接头-有效载荷缀合物(其中靶向单元为林妥珠单抗)与FLT3抑制剂、IDH1抑制剂、IDH2抑制剂、BCL2抑制剂、KRAS抑制剂、NRAS抑制剂或MEK1/2抑制剂组合施用。
在一个实施方案中，式LNAuM的靶向单元-接头-有效载荷缀合物
式LNAuM
(其中n为8)与FLT3抑制剂、IDH1抑制剂、IDH2抑制剂、BCL2抑制剂、KRAS抑制剂、NRAS抑制剂或MEK1/2抑制剂组合施用。
在一个实施方案中，FLT3抑制剂选自由以下组成的组：米多司他林、富马酸吉瑞替尼、奎扎替尼、克莱拉尼、舒尼替尼、帕纳替尼和索拉非尼。
在一个实施方案中，MEK1/2抑制剂为曲美替尼、考比替尼、司美替尼或贝美替尼。
在一个实施方案中，IDH1/IDH2抑制剂为恩西地平或艾伏尼布。
在一个实施方案中，BCL2抑制剂为维奈托克、纳维托克或奥巴克拉。
在一个实施方案中，KRAS抑制剂为索托拉西布或阿达格拉西布。
在一个实施方案中，式LNAuM的靶向单元-接头-有效载荷缀合物
式LNAuM
(其中n为8)与以下组合施用：三氧化砷、氮杂胞苷、盐酸柔红霉素、环磷酰胺、阿糖胞苷、马来酸格拉吉布、地塞米松、盐酸多柔比星、米多司他林、延胡索酸吉瑞替尼、奎扎替尼、克莱拉尼、舒尼替尼、帕纳替尼、索拉非尼、恩西地平、艾伏尼布、索托拉西布、阿达格拉西布、盐酸依托泊苷、吉妥珠单抗、盐酸伊达比星、米多司他林、盐酸米托蒽醌、强的松、硫鸟嘌呤、维奈托克、纳维托克、奥巴克拉或硫酸长春新碱。
公开了一种治疗人的癌症的方法，其中向人施用有效量的根据一个或多个实施方案的接头-有效载荷缀合物、根据一个或多个实施方案的靶向单位-接头-有效载荷缀合物或根据一个或多个实施方案的药物组合物。
在一个实施方案中，有效量为治疗有效量。
在一个实施方案中，向人静脉内施用治疗有效量的根据一个或多个实施方案的接头-有效载荷缀合物、根据一个或多个实施方案的靶向单元-接头-有效载荷缀合物或根据一个或多个实施方案的药物组合物。
在一个实施方案中，向人肿瘤内施用治疗有效量的根据一个或多个实施方案的接头-有效载荷缀合物、根据一个或多个实施方案的靶向单元-接头-有效载荷缀合物或根据一个或多个实施方案的药物组合物。
在一个实施方案中，癌症选自由以下组成的组：头颈癌、白血病、淋巴瘤、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、结直肠癌、胃癌、鳞状癌、小细胞肺癌、多重耐药性癌症和睾丸癌。
上述发明的实施方案可以与彼此的任何组合使用。几个实施方案可以组合在一起形成本发明的进一步实施方案。与本发明有关的产物或方法可以包括以上所述发明的实施方案中的至少一个。
根据一个或多个实施方案的接头-有效载荷缀合物和根据一个或多个实施方案的靶向单元-接头-有效载荷缀合物可具有许多有益的特性。
可裂解的亲水基团的存在使得水溶性相对较差的接头在水溶液和生理溶液中更容易溶解。溶解度的提高也提高了靶向单元-接头-有效载荷缀合物在血清中的保留度。其也可能在其所靶向的细胞中具有高摄取，而在其非靶向的细胞和器官中具有低摄取。
根据一个或多个实施方案的靶向单元-接头-有效载荷缀合物在溶酶体酶和细胞内酶不存在或活性低时毒性较小。由于癌细胞通常表现出高溶酶体酶和/或细胞内酶活性，因此与非癌细胞相比，毒性有效载荷部分优先在癌细胞中释放。
缀合物具有低抗原性。
根据一个或多个实施方案的靶向单元-接头-有效载荷缀合物也表现出良好的药代动力学。其具有在血液中的适当保留度，在其所靶向的细胞中的高摄取，以及在其非靶向细胞和器官中的低摄取。
根据一个或多个实施方案的靶向单元-接头-有效载荷缀合物在制造过程中或在生理条件下，例如在血液、血清、血浆或组织中，对化学或生化降解具有足够的稳定性。
实施例
在下文中，将更详细地描述本发明。现在将详细参考实施方案，其实施例在附图中说明。下面的描述如此详细地公开了一些实施方案，使得本领域技术人员能够基于本公开利用本发明。并没有详细讨论实施方案的所有步骤，因为在本说明书的基础上，对于本领域技术人员来说，许多步骤将是显而易见的。
实施例1.MMAU接头-有效载荷的合成
MMAU和MMAU接头-有效载荷的合成方案在WO2016001485，第57-60页及实施例1-2中提供。Fmoc-Val-Ser(GlcOAc4)-PAB-pNP、Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU和MMAU接头-有效载荷的合成方案在WO2018234636，实施例1-2和实施例36中提供。马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU根据方案1-1来制备。
方案1-1.马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU(AuM有效载荷-接头)的合成
将在二甲基甲酰胺(DMF；475μl)中的9.8mg(6.5μmol)Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU和Fmoc-β-Ala-OH(3.4x摩尔过量)、1.9x摩尔过量的Fmoc-Val-Ser(GlcOAc4)-PABC-对硝基苯、2.9x摩尔过量的HBTU和60μl二异丙基乙胺(DIPEA)在室温下反应1小时。用DMF/DEA去除Fmoc保护基后，通过采用C18反相柱的HPLC纯化产物。将AMAS(马来酰亚胺乙酰基N-羟基琥珀酰亚胺酯，4x摩尔过量)与200μl DMF和8μl DIPEA一起添加，并将混合物在室温下培育4小时。将成功制备的并经HPLC纯化的产物用基质辅助激光解吸-电离飞行时间(MALDI-TOF)质谱法，使用Bruker UltraFlex III TOF/TOF仪器进行分析，显示出对于[M+Na]+离子在m/z 1621.752的预期质量和对于[M-H+2Na]+在m/z 1643.770的预期质量(图1)，这证明了标题化合物的成功制备。
实施例2.马来酰亚胺乙酰基-接头-药物缀合物的制备
方案2-1.马来酰亚胺乙酰基-EDA-PNU(PeMa有效载荷-接头)
方案2-2.马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(GlcA)-PABC-MMAU
方案2-3.马来酰亚胺乙酰基-Val-Ser(Glc)-PABC-MMAU
马来酰亚胺乙酰基-EDA-PNU(方案2-1)如下制备：将在80μl DMSO中的1.5μmolEDA-PNU与在20μl DMSO中的等摩尔量的AMAS(N-α-马来酰亚胺乙酰-氧基琥珀酰亚胺酯；Thermo Fisher)以及2μl DIPEA:DMSO(1:2，体积/体积)合并，并且在室温(RT)下反应40分钟。通过具有Gemini C18柱的RP-HPLC，在20mM乙酸铵水溶液中，使用乙腈(ACN)梯度纯化产物。根据对色谱图中峰的吸光度积分得到产物的产量为1.04μmol。用MALDI-TOF MS核实产物的特性，显示出对于[M+H]+离子在m/z 807.3的预期质量和对于[M+Na]+离子在m/z 829.3的预期质量。
马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(GlcA)-PABC-MMAU(方案2-2)类似于马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PABC-MMAU(方案1-1)来制备，例外之处为对Ser(Glc)残基进行不同的处理，以便在最终产物中获得Ser(GlcA)残基。其可以作为Ser(GlcA)残基而已经掺入到合成中，以便得到Val-Ser(GlcA)-PAB-MMAU，然后类似于上面先添加Fmoc-β-Ala-OH，接着再添加AMAS。或者，首先获得Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU并且根据标准程序通过TEMPO氧化将Glc氧化成GlcA，之后类似于上面先添加Fmoc-β-Ala-OH，接着再添加AMAS。产物通过RP-HPLC来纯化并通过MALDI-TOF MS核实为对于[M+H]+离子在m/z 1613。
马来酰亚胺乙酰基-Val-Ser(Glc)-PABC-MMAU(方案2-3)类似于马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PABC-MMAU(方案1-1)来制备，例外之处为仅与上述类似地添加AMAS。产物通过RP-HPLC来纯化并通过MALDI-TOF MS核实为对于[M+H]+离子在m/z 1528。
实施例3.曲妥珠单抗-马来酰亚胺乙酰基-接头-MMAU缀合物的制备
方案3-1.曲妥珠单抗-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU；T为曲妥珠单抗且n为约8。
方案3-2.曲妥珠单抗-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(GlcA)-PAB-MMAU；T为曲妥珠单抗且n为约8。
将各自为在260μl体积的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的2mg曲妥珠单抗(赫塞汀；Roche)的两个等分试样在230nmol DTPA和600nmol TCEP存在下在+37℃下还原55分钟。反应之后，通过以下操作将还原的抗体与马来酰亚胺-有效载荷缀合：连同700μl PBS一起添加分别溶于23μl和17μl DMSO中的600nmol马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU或马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(GlcA)-PAB-MMAU，并在+37℃下培育3.5小时。根据制造商说明书，用Amicon 30K离心过滤器，通过缓冲液交换成PBS将试剂去除。在用FabRICATOR酶(Genovis,Sweden)消化并用Poros R1材料微尺度纯化所得抗体片段之后，通过MALDI-TOF质谱分析来分析ADC。分析显示，所制备的ADC具有约8的药物-抗体比率(DAR)，因为轻链(LC)和Fd片段基本上分别变为LC+1有效载荷和Fd+3有效载荷片段。原始曲妥珠单抗：LC在m/z 23442.2；曲妥珠单抗-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU：LC+有效载荷在m/z25044.8和Fd+3有效载荷；曲妥珠单抗-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(GlcA)-PAB-MMAU：LC+有效载荷在m/z 25059.6和Fd+3有效载荷在m/z 30246.8；所有[M+H]+离子。类似地制备更大等分试样的ADC，然而，用蛋白A HPLC纯化与在线脱盐代替Amicon缓冲液交换。
或者，将在PBS中的2mg曲妥珠单抗在20x摩尔过量的TCEP存在下在+37℃下还原1.5小时。然后添加28x摩尔过量的MA-Ac-β-Ala-Val-Ser(β-Glc)-PAB-MMAU并使反应在+37℃下继续进行1小时。
实施例4.马来酰亚胺的稳定化
与半胱氨酸缀合之后的马来酰亚胺稳定化用马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU(方案3-1，其中T为谷胱甘肽)和马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(GlcA)-PAB-MMAU(方案3-2，其中T为谷胱甘肽)的谷胱甘肽缀合物来研究。与谷胱甘肽的缀合在水溶液(PBS)中在RT下进行几小时，之后通过MALDI-TOF MS核实缀合物形成。谷胱甘肽-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU具有1929.5[M+Na]+的m/z并且谷胱甘肽-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(GlcA)-PAB-MMAU具有1943.4[M+Na]+的m/z。在平行实验中，缀合物溶液的pH值随缓冲液改变为6.0(MES缓冲液)、7.2(MOPS缓冲液)和8.0(Tris-HCl)。在+37℃下过夜培育之后，对于两种缀合物来说，Tris-HCl缓冲液培育过的缀合物的马来酰亚胺通过水解(+18质量单位)分别完全稳定至m/z 1947.6和m/z 1961.4，显示了在8.0的轻度碱性pH值下的有效稳定化。相比之下，在pH 6.0(轻度酸性)和pH 7.2(中性)缓冲液中，仅部分转化为稳定的马来酰亚胺。
实施例5.血清中的缀合物稳定性
与如上类似的谷胱甘肽缀合物也由马来酰亚胺己酰基-Val-Cit-PAB-MMAU和谷胱甘肽制备，纯化并通过MALDI-TOF MS表征为m/z 1822.2[M+Na]+。所有三种谷胱甘肽-接头-MMAU缀合物均在+37℃下在小鼠血清中并行培育，并且在过夜培育之后及4天培育之后通过MALDI-TOF MS来分析。对于谷胱甘肽-马来酰亚胺己酰基-Val-Cit-PAB-MMAU，过夜培育显示出现在m/z 916.8[M+Na]+处的游离MMAU。4天的培育之后，只有少量谷胱甘肽-接头-MMAU留在m/z 1821.9[M+Na]+处，而主峰为m/z 916.5[M+Na]+处的游离MMAU，表明了马来酰亚胺己酰基-Val-Cit-PAB接头在血清中相对不稳定。对于谷胱甘肽-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(GlcA)-PAB-MMAU，过夜培育显示出现在m/z916.8[M+Na]+处的游离MMAU的小峰。然而，在4天的培育之后，只有少量游离MMAU出现在m/z 916.5[M+Na]+处，而绝大多数谷胱甘肽-接头-MMAU留在m/z 1960.8[M+Na]+处。谷胱甘肽-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU表现类似，显示了马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(GlcA)-PAB和马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB接头在血清中具有优良的稳定性。
实施例6.ADC的制备
曲妥珠单抗-马来酰亚胺乙酰基-EDA-PNU ADC通过如上针对MMAU ADC所述缀合至还原的铰链半胱氨酸来制备。然而，DAR通过如下的部分还原被限制为2-4：将各自为在PBS中的5mg/ml的1.5mg曲妥珠单抗(赫塞汀；Roche)的两个等分试样在1mM DTPA和6x摩尔过量的或9x摩尔过量的TCEP存在下在+37℃下还原1小时。反应之后，将还原的抗体通过以下操作与10x摩尔过量的马来酰亚胺乙酰基-EDA-PNU有效载荷缀合：将溶于20μl DMSO中的有效载荷添加到反应混合物中，并在+37℃下培育1小时。通过蛋白A HPLC纯化(MabSelectSure,Thermo)来纯化ADC。在如上用FabRICATOR消化之后，通过MALDI-TOF MS分析ADC。分析显示ADC已经成功缀合，因为轻链(LC)有效变为LC+1有效载荷。原始曲妥珠单抗：LC在m/z23426.1；曲妥珠单抗-马来酰亚胺乙酰基-EDA-PNU：LC在m/z 23434.7且LC+有效载荷在m/z24241.0；所有[M+H]+离子。通过用Nanodrop One分光光度计(Thermo Fisher；通过在计算中使用多柔比星和原始抗体分别在280/480nm下的吸光系数)比较在480nm下的PNU特异性吸光度与在280nm下的吸光度(PNU与抗体两者)来从纯化的ADC分析DAR。两种ADC经测定分别具有DAR≈2.5和DAR≈3.3。
类似于上述，TA99-马来酰亚胺乙酰基-EDA-PNU DAR≈4ADC(TA99-M-PNU DAR＝4)由抗TYRP-1小鼠IgG2a抗体TA99(抗mGP75-mIgG2a,Invivogen,France)与马来酰亚胺乙酰基-EDA-PNU有效载荷产生。通过如上所述的MALDI-TOF MS，计算出DAR的平均值为4。
TA99-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU DAR＝10ADC如下制备。将在1ml的150mM NaCl、20mM磷酸钠、5％蔗糖中的2mg TA99抗体在1mM DTPA和针对抗体12x摩尔过量的TCEP存在下在+37℃下还原1小时。反应之后，将还原的抗体通过以下操作与马来酰亚胺-有效载荷缀合：添加溶于DMSO中的针对抗体20x摩尔过量的马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU，并在+37℃下培育1小时。通过蛋白A HPLC纯化ADC。通过MALDI-TOF质谱分析来分析ADC。分析显示所制备的ADC具有约10的药物-抗体比率(DAR)，因为轻链(LC)和重链(HC)片段基本上分别变为LC+1有效载荷和HC+4有效载荷片段。原始TA-99：LC在m/z 23594；TA-99-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU：LC+有效载荷在m/z 25189；原始TA-99：[HC]2+在m/z 25609；TA-99-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU：[HC+4有效载荷]2+在m/z 28803。
实施例7.ADC的细胞毒性
DAR≈2.5和DAR≈3.3曲妥珠单抗-马来酰亚胺乙酰基-EDA-PNU ADC对HER2+SK-BR-3卵巢癌细胞的细胞毒性通过以下操作来评估：在平行实验中，将一系列稀释的缀合物与细胞培育，并使用PrestoBlue试剂评估活力，基本上如Satomaa等人Antibodies 2018,7(2),15中所述。ADC具有高的特异性细胞毒性，IC50低于300pM，因为在此浓度下，几乎所有的SK-BR-3细胞在4天后在两个实验中都被杀死，表明两种ADC均对HER2+癌细胞有高活性。
实施例8.曲妥珠单抗和MMAU-ADC在肿瘤异种移植小鼠中的体内功效将曲妥珠单抗和马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU(DAR＝8，如上所述制备和马来酰亚胺稳定的(MMAU-ADC))ADC的体内抗肿瘤功效与曲妥珠单抗相比较。HCC-1954癌细胞由ATCC(USA)获得并根据制造商说明书培养以研究抗体-药物缀合物在免疫缺陷裸小鼠的曲妥珠单抗抗性Her2阳性异种移植肿瘤(Balb/cAnNRj-Foxn1nu-nu)中的功效。该研究在TCDM/Central Animal Laboratory,University of Turku,Finland处，按照适当的伦理委员会批准进行。制备用于小鼠接种的处于旺盛的指数生长期的细胞。在每只小鼠的胁侧s.c.接种500万个在50％ Matrigel中的细胞。定期观察动物的临床体征和一般行为。没有记录到潜在的毒性迹象。在研究结束时，检查了小鼠主要器官的潜在宏观变化，但没有检测到任何变化。通过触诊观察肿瘤生长。卡尺测量后，按0.5×长度×宽度2计算肿瘤体积。平均肿瘤体积达到100cm3时，进行第一次给药。将小鼠平均分到研究组中，每组6只，使每组接收相似分布的不同大小的肿瘤，并且平均肿瘤体积在各组中相似。静脉内(i.v.)给予在PBS中的10mg/kg抗体或ADC的治疗4次，间隔7天(QWx4，即每周1次，持续4周)。未缀合抗体(曲妥珠单抗：赫塞汀，Roche)在此项研究中用作对照治疗。图2示出了研究结果。在61天的治疗和随访期里，对照组(曲妥珠单抗)的肿瘤稳定生长至平均大小超过500mm3，而在MMAU-ADC组中，ADC有效地在体内抑制肿瘤生长并且肿瘤在所有六只小鼠(6/6)中缩小，同时在61天内无再生。
实施例9.马来酰亚胺稳定的PNU-ADC在同基因肿瘤小鼠中的体内功效
将单克隆TA99 IgG2a抗体、具有DBCO-Val-Ser(GlcA)-EDA-PNU有效载荷的糖缀合的TA99 ADC(TA99-PNU ADC,DAR＝2)和具有马来酰亚胺乙酰基-EDA-PNU有效载荷的TA99ADC(TA99-M-PNU ADC,DAR＝4)(如上所述制备和马来酰亚胺稳定的)的ADC的体内抗肿瘤功效与未治疗的小鼠进行比较。B16-F10小鼠黑色素瘤细胞由ATCC(USA)获得并根据制造商说明书培养以研究抗体-药物缀合物在约8-10周龄的雌性成年C57BL/6J小鼠的高治疗抗性同基因肿瘤中的功效。该研究在TCDM/Central Animal Laboratory,University of Turku,Finland处，按照适当的伦理委员会批准进行。制备用于小鼠接种的处于旺盛的指数生长期的细胞。在每只小鼠的胁侧s.c.接种25万个在50％ Matrigel中的细胞。定期观察动物的临床体征和一般行为。通过测量体重来监测毒性迹象，但在任何研究组中都没有观察到体重减轻。通过触诊观察肿瘤生长。卡尺测量后，按0.5×长度×宽度2计算肿瘤体积。第一次给药是在接种后两天进行的，因为接种率高并且肿瘤生长非常快。小鼠被随机分到研究组中。给予在PBS中的5mg/kg抗体或ADC的单次静脉内(i.v.)治疗。未缀合的抗体(TA99/抗gp75，Invivogen)在此项研究中用作对照治疗。图3示出了研究结果。在对照组(无治疗或抗体)中肿瘤生长迅速并且大部分小鼠必须在随访期(第26天)结束前被处死。两种ADC都能有效地缩小所有小鼠的肿瘤，并且它们存活到实验结束。
实施例10.分支接头-有效载荷和ADC
方案10.1.DBCO-N-双[PEG2-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU]
方案10.2.DBCO-N-双(PEG2-EDA-PNU)
根据方案10.1.的分支DBCO-接头-有效载荷通过将1.20μmol Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU与256nmol N-DBCO-N-双(PEG2-NHS酯)试剂(Broadpharm)在含有1/3μl DIPEA的110μlDMSO中在RT下反应30分钟来制备。来自反应混合物的MALDI-TOF MS显示对于[M+Na]+离子在2139.03处的预期信号，表明生成了正确的结构。分支DBCO-接头有效载荷通过RP-HPLC来纯化并通过如上的糖缀合来缀合至叠氮化物标记的抗体上以生成具有DAR＝4的ADC。
根据方案10.2.的分支DBCO-接头-有效载荷通过将1.20μmol EDA-PNU与256nmolN-DBCO-N-双(PEG2-NHS酯)试剂(Broadpharm)在含有1/3μl DIPEA的103μl DMSO中在RT下反应30分钟来制备。来自反应混合物的MALDI-TOF MS显示对于[M+Na]+离子在1949.82处的预期信号，表明生成了正确的结构。分支DBCO-接头有效载荷通过RP-HPLC来纯化并通过如上的糖缀合来缀合至叠氮化物标记的抗体上以生成具有DAR＝4的ADC。
实施例11.在CHO细胞中产生抗体的一般方法
天然抗体的克隆
向LC的氨基末端添加前导肽MVSTPQFLVFLLFWIPASRS(SEQ ID NO:53)并向HC的氨基末端添加前导肽MAVLGLLFCLVTFPSCVLS(SEQ ID NO:54)。然后对CHO细胞的重链和轻链编码序列进行密码子优化，并将其亚克隆到pcDNA3.4-TOPO表达载体(GeneArt)中。将质粒转化至大肠杆菌NEB10β感受态细胞(New England Biolabs)，并通过PureLinkHiPurePlasmid FP(Filter and Precipitator)Maxiprep Kit(Invitrogen)提取质粒maxipreps。
半胱氨酸工程化抗体构建体法兰妥单抗HC(N299C)、法兰妥单抗HC(C222S)、嵌合TA99 HC(N301C)、嵌合TA99 HC(N301C)、嵌合TA99 HC(C224S)、林妥珠单抗HC(N296C)、林妥珠单抗HC(C219S)和吉妥珠单抗HC(C130S)的克隆
为了生成半胱氨酸工程化抗体表达质粒，从GeneArt处订购具有所需取代的DNA串，用适当的限制性酶消化，并根据制造商说明书(New England Biolabs)，通过NEBuilderHiFi DNA组装方法与载体骨架组合。转化至大肠杆菌后，通过测序核实突变的DNA序列。
抗体的转染和表达
ExpiCHO-S细胞(Thermo Fisher Scientific；目录号A29133)的培养和转染根据制造商说明书进行。转染后，将ExpiCHO-S细胞培养6-8天，并且在收获时将培养基转移到50ml管中，离心，并过滤，随后纯化。
通过HPLC进行的抗体纯化
利用 HPLC纯化器系统，用HiTrapMabSelectSuRe柱纯化上清液样品中的抗体。HiTrapMabSelectSuRe柱(1ml或5ml,GE Healthcare)用于抗体纯化。将样品装载到柱中，并用12-14个柱体积的PBS洗涤。用5个柱体积的0.1M柠檬酸盐pH 3.0进行洗脱。洗脱后，使用1-4个HiTrap脱盐柱(5ml,GE Healthcare)将抗体样品的缓冲液更换为PBS。通过分光光度计(Nanodrop one,Thermo Fisher Scientific)测定浓度。
如果聚集水平超过10％，则用Superdex 200增加柱(10×300mm,GE Healthcare)纯化聚集体。抗体样品经Amicon Ultra离心过滤器(30K,Sigma Aldrich)浓缩后纯化。在一个循环中纯化10-27mg抗体。将样品进样至柱，并用PBS(0.75ml/min,34min)等度运行来纯化单体。
通过HPLC进行的ADC纯化
利用 HPLC纯化器系统，用Mab Select sure柱进行ADC纯化。Mab SelectSure柱(1ml,GE Healthcare)用于ADC纯化。将样品装载到柱中并用12个柱体积的PBS洗涤。用5个柱体积的0.1M柠檬酸盐pH 3.0来洗脱，然后用脱盐柱(5ml,GE Healthcare)进行PBS缓冲液更换。通过分光光度计(Nanodrop one,Thermo Fisher Scientific)测定浓度。
HIC方案
利用 HPLC纯化器系统，采用TSKgelButylNPR柱(4.6mm×3.5cm,TosohBiosciences)进行疏水相互作用色谱(HIC)分析。将80μg ADC或抗体装载到柱中，并通过梯度洗脱分离：100％缓冲液A(1.5M硫酸铵，25mM磷酸钾)至100％缓冲液B(25％异丙醇，25mM磷酸钾)持续15分钟(1ml/min)，继续用100％ B持续2分钟。
聚集分析
使用 HPLC纯化器系统，通过Superdex 200柱(10×300mm,GE Healthcare)分析聚集水平。将80-100μg抗体或ADC装载到柱中，并通过使用0.2M磷酸钾pH 7,0.25M KCl(0.75ml/min,34min)的等度运行来分离。
用PLRP-S柱测定DAR
如果样品体积超过100μl：
使用PLRP-S色谱图计算药物-抗体比率(DAR)。在+37℃下，将0.5-1.5ml PBS中的25μg抗体或50μg ADC用30μl 0.5M DTT还原30分钟。添加2％TFA，得到0.1％TFA溶液以供注入。通过HPLC纯化器系统，采用PLRP-S柱(/>8μM,150x2.1mm,Agilent)进行分析。将样品装载于5％ACN,0.1％TFA 0.4ml/min中并通过ACN梯度30-50％ACN，0.25ml/min洗脱40分钟。采用+70℃柱式烘箱。LC的DAR由具有有效载荷的LC(面积280nm)的相对部分来计算，且HC的DAR由具有1、2、3或4个有效载荷的HC的相对部分来计算。
如果样品体积小于100μl：
使用PLRP-S色谱图计算药物-抗体比率(DAR)。在+37℃下，将25μg抗体或50μg ADC用1μl 0.5M DTT还原30分钟。通过 HPLC纯化器系统，采用PLRP-S柱(/>8μM,150x2.1mm,Agilent)进行分析。将样品装载于柱中并通过ACN梯度30-50％ ACN，0.25ml/min洗脱40分钟。采用+70℃柱式烘箱。LC的DAR由具有有效载荷的LC(面积280nm)的相对部分来计算，且HC的DAR由具有1、2、3或4个有效载荷的HC的相对部分来计算。
用A280/A480方法测定DAR
利用NanoDrop分光光度计(Nanodrop one,Thermo Fisher Scientific)计算DAR，使用的方程为:
抗体消光系数＝210000M-1cm-1
有效载荷消光系数＝多柔比星消光系数＝10410M-1cm-1
有效载荷A280/A480＝针对马来酰亚胺乙酰基-EDA-PNU(PeMa)测量的A280/A480＝0.8
MALDI-TOF MS分析
在进行如上的MALDI分析前，将纯化的抗体通过用(IdeS；Genovis)和/>(EndoS2；Genovis)处理抗体来片段化。为了分析，将片段用TCEP处理。
实施例12.糖缀合的法兰妥单抗-DBCO-Val-Ser(GlcA)-EDA-PNU ADC(FLPeD)的制备
方案12-1.FLPeD；T为法兰妥单抗(法兰妥单抗重链SEQ ID NO:45和法兰妥单抗轻链SEQ ID NO:46)。
使用Amicon ultra-4 30K过滤器装置(Millipore)通过超滤将2mg法兰妥单抗缓冲液更换到50mM MOPS pH7.2,150mM NaCl中。具有DAR＝2的法兰妥单抗-GalNAz在一锅式反应中采用固定化的凝胶(Genovis)、UDP-GalNAz 2.1mg/ml(ThermoFisher Scientific)、β-1,4-半乳糖基转移酶Y289L133μg/ml(Thermo FischerScientific)、5mM MnCl2以600μl的总体积合成。将反应在37℃下伴随温和混合培育过夜。将针对GalNAz两倍摩尔过量的PeD,DBCO(C6)-ValSer(GlcA)-EDA-PNU-159682(LevenaBiopharma)与0.89mg的HPLC-纯化的法兰妥单抗-GalNAz DAR＝2在1ml PBS中混合，并将反应在室温下培育过夜。通过/>HPLC纯化器系统，用Mab Select sure柱纯化ADC。将反应的一个等分试样用/>(Genovis)消化并通过MALDI-TOF MS(法兰妥单抗-GalNAz：Fc在m/z 24380；FLPeD：Fc+有效载荷在m/z 25730；DAR＝2)来分析。
实施例13.糖缀合的嵌合TA99-DBCO-Val-Ser(GlcA)-EDA-PNU ADC(CHPeD)的制备
方案13-1.CHPeD；T为嵌合TA99(嵌合TA99重链SEQ ID NO:47和嵌合TA99轻链SEQID NO:48)。
通过超滤将2mg嵌合TA99抗体缓冲液更换到50mM MOPS pH7.2,150mM NaCl中并进行嵌合TA99-GalNAz的一锅式合成，并且如上针对FLPeD所述地纯化ADC并通过MALDI-TOFMS(嵌合TA99-GalNAz：Fc在m/z 24375；CHPeD：Fc+有效载荷在m/z 25724；DAR＝2)来分析。
实施例14.抗mGP75-马来酰亚胺乙酰基-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU(TAAuM)的制备
方案14-1.TAAuM；T为抗mGP75。n为9或10。
将PBS中的2mg抗mGP75(TA99抗体；Invivogen)在20x摩尔过量的TCEP存在下在+37℃下还原1.5小时。添加28x摩尔过量的MA-Ac-β-Ala-Val-Ser(β-Glc)-PAB-MMAU并使反应在+37℃下继续进行1小时。将TAAuM按上述方法进行纯化，通过Amicon超离心过滤器浓缩，无菌过滤并保存直至使用。
TAAuM的DAR用PLRP-S来测定。TAAuM的DAR为10.0。
实施例15.糖缀合的曲妥珠单抗-DBCO-Val-Ser(GlcA)-EDA-PNU ADC(TRPeD)的制备
方案15-1.TRPeD；T为曲妥珠单抗。制备TRPeD并且基本上如上针对TAPeD所述地(实施例14)通过MALDI-TOF MS来核实ADC的结构。TRPeD的DAR为2。
实施例16.半胱氨酸工程化法兰妥单抗ADCFLCPeMcv的制备
方案16-1.FLCPeMcv；T为法兰妥单抗HC N299C(法兰妥单抗HC N299CSEQ ID NO:49和法兰妥单抗轻链SEQ ID NO:46)。
制备PeMcv：MA-己酰基-Val-Cit-PAB-EDA-PNU：将0.9μmol MA-己酰基-Val-Cit-PAB-PNP和1.82μmol PNU-EDA在53μl DMF中混合。添加在DMF中的1.4μmol 0.5M HOBt并且使反应在室温下继续进行1小时。MA-己酰基-Val-Cit-PAB-EDA-PNU在不经纯化的情况下用于ADC反应中。
使用TCEP还原法兰妥单抗HC N299C的半胱氨酸二硫键，然后如针对FLCPeMg所述地再氧化铰链区二硫键。对于FLCpeMcv合成，将7mg(V＝3ml,c＝2.3mg/ml,47nmol)再氧化的法兰妥单抗HC N299C与DMSO中的约10摩尔当量的PeMcv：MA-己酰基-Val-Cit-PAB-EDA-PNU(55μL，据估计n＝450nmol)混合。添加有效载荷后，反应混合物变得不透明。在37℃下反应1.5小时的时间。在反应时间后，样品在3200rcf下离心5分钟，以除去沉淀。纯化澄清的上清液。使用HPLC纯化最终样品并使用A280/A480方法测定DAR。FLCPeMcv01：A280＝3.38,A480＝0.22。FLCPeMcv DAR为1.4。
实施例17.半胱氨酸工程化法兰妥单抗ADC FLCPeMg的制备
方案17-1.FLCPeMg；T为法兰妥单抗HC N299C(法兰妥单抗HC N299CSEQ ID NO:49和法兰妥单抗轻链SEQ ID NO:46)。
将法兰妥单抗HC N299C(45.0mg,c＝2.8mg/ml,V＝16ml,n＝300nmol)与PBS中的TCEP(30摩尔当量，9μmol)在37℃下一起培育1.5小时。如所述地使用HPLC从还原样品中去除过量的TCEP。一半的纯化样品用于FLCpeMg合成。将PBS中的30摩尔当量的L-脱氢抗坏血酸(L-DHAA)(350μL,c＝12.1nmol/μL n＝4.2μmol)添加到还原的法兰妥单抗HC N299C(20.9mg,c＝2.09mg/ml,V＝10.0ml,n＝139nmol)中并将样品在37℃下培育1小时。使用HPLC，从过量的L-DHAA中纯化再氧化的样品。对于FLCpeMg合成，将9mg(V＝4ml,c＝2.25mg/ml,60nmol)再氧化的法兰妥单抗HC N299C与DMSO中的10摩尔当量的PeMg：MA-Ac-β-Ala-VS(GlcA)-EDA-PNU(SyntaBio,San Diego)(21.8μL,c＝27.5nmol/μL n＝600nmol)混合。在37℃下反应1.5小时的时间。使用HPLC纯化最终样品。使用A280/A480方法测定DAR。FLCPeMg的DAR为2.2(A280＝4.68,A480＝0.47)。
实施例18.半胱氨酸工程化法兰妥单抗ADCFLCPeMa的制备
方案18-1.FLCPeMa；T为法兰妥单抗HC N299C(法兰妥单抗HC N299CSEQ ID NO:49和法兰妥单抗轻链SEQ ID NO:46)。
使用TCEP还原法兰妥单抗HC N299C的半胱氨酸二硫键，然后如针对FLCPeMg所述地再氧化铰链区二硫键。对于FLCpeMa合成，将7.7mg(V＝4ml,c＝1.93mg/ml,51nmol)再氧化的法兰妥单抗HC N299C与DMSO中的约2摩尔当量的PeMa:MA-Ac-EDA-PNU(5μL,据估计的n＝100nmol)混合。在37℃下反应1.5小时的时间。使用HPLC纯化最终样品。使用A280/A480方法测定DAR。FLCPeMg的DAR为1.7(A280＝3.80,A480＝0.30)。
实施例19.半胱氨酸工程化法兰妥单抗ADCFLCPeMala的制备
方案19-1.FLCPeMala；T为半胱氨酸工程化法兰妥单抗HC N299C(法兰妥单抗HCN299C SEQ ID NO:49和法兰妥单抗轻链SEQ ID NO:46)。n为约2。
制备PeMala,MA-Ac-β-Ala-EDA-PNU：将400nmol PNU-EDA和600nmol MA-Ac-β-Ala-Pfp在170ml DMSO中混合并使反应在室温下进行15分钟。采用 HPLC纯化器系统，通过Gemini-NX反相柱(4.6×250mm,Phenomenex)进行MA-Ac-β-Ala-EDA-PNU纯化。缓冲液A为20mM pH 5.6的乙酸铵且缓冲液B为ACN。用20％缓冲液B使柱稳定并用以下线性梯度洗脱MA-Ac-β-Ala-EDA-PNU：20％缓冲液B至80％缓冲液B，持续30分钟(1ml/min)。用真空浓缩器对纯化的PeMala进行干燥。
使用TCEP还原法兰妥单抗HC N299C的半胱氨酸二硫键，然后如针对FLCPeMg所述地再氧化铰链区二硫键。对于FLCPeMala合成，将7.7mg(V＝4ml,c＝1.93mg/ml,51nmol)再氧化的法兰妥单抗HC N299C与DMSO中的约2摩尔当量的PeMala:MA-Ac-β-Ala-EDA-PNU(5mL，据估计n＝100nmol)混合。在37℃下反应1.5小时的时间。使用HPLC纯化最终样品。使用A280/A480方法测定DAR。FLCPeMala的DAR为2.0(A280＝3.84,A480＝0.35)。
实施例20.林妥珠单抗-AuMADC LNAuM的制备
方案20-1.LNAuM；T为林妥珠单抗(林妥珠单抗HC SEQ ID NO:35和林妥珠单抗轻链SEQ ID NO:36)。n为6、7或8。
将林妥珠单抗(2.0-4.9mg；V＝1.17-2.9mL)与PBS中的TCEP(20-30摩尔当量)在37℃下一起培育1-1.5小时。将DMSO中的28-35摩尔当量的AuM:MA-Ac-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU(42mL,c＝27nmol/mL)添加到反应混合物中并将混合物在37℃下培育1小时。如上所述纯化LNAuM。
用PLRP-S方法测定DAR。三批所产生的LNAuM的DAR为7.8、8.0和8.1。
实例21.吉妥珠单抗-AuMADC GMAuM的制备
方案21-1.GMAuM；T为吉妥珠单抗(吉妥珠单抗HC SEQ ID NO:37和吉妥珠单抗轻链SEQ ID NO:38)。n为7、8或9。
对于23，将吉妥珠单抗(3.8mg)与PBS中的TCEP(50摩尔当量)在37℃下培育过夜。使用Amicon ultra 0.5ml 30K浓缩器管与PBS去除过量的TCEP。用PBS将体积调整至1.6ml并将在DMSO(28mL)中的30摩尔当量的AuM:MA-Ac-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU添加到反应混合物中，并将混合物在37℃下培育2.5小时。如上所述将GMAuM纯化，浓缩并无菌过滤。
用PLRP-S方法测定DAR。GMAuM DAR为8.0。
实施例22.半胱氨酸工程化林妥珠单抗-AuMADC LNCAuM的制备
方案22-1.LNCAuM；T为半胱氨酸工程化林妥珠单抗HC N296C(林妥珠单抗N296CHCSEQ ID NO:41和林妥珠单抗轻链SEQ ID NO:36)。n为1或2。
将林妥珠单抗HC N296C(4.2mg；V＝2.3ml)与在PBS中的TCEP(25摩尔当量)一起在37℃下培育1小时。使用Amicon ultra 0.5ml 30K浓缩器管与PBS从还原的样品中去除过量的TCEP并将体积调整至1.8ml。将在PBS中的30摩尔当量的L-脱氢抗坏血酸(L-DHAA)(84mL,c＝10nmol/mL)添加到还原的林妥珠单抗HC N296C中并将样品在37℃下培育1.5小时。使用Amicon ultra 0.5ml 30K浓缩器管与PBS从过量的L-DHAA中纯化再氧化的样品，并将体积调整至2mL，并且将样品用于合成LNCAuM和LNCauMb。
对于LNCAuM合成，将2.1mg(1mL)再氧化的林妥珠单抗HC N296C与在DMSO中的10摩尔当量的AuM:MA-Ac-β-Ala-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU(5.6mL,c＝25nmol/mL)混合，并将混合物在37℃下培育1h。如上所述地将LNCAuM纯化，浓缩并无菌过滤。用PLRP-S方法测定DAR。LNCAuM的DAR为1.7。
实施例23.半胱氨酸工程化林妥珠单抗MMAUADC LNCAuMb的制备
方案23-1.LNCAuMb；T为半胱氨酸工程化林妥珠单抗HC N296C(林妥珠单抗N296CHC SEQ ID NO:41和林妥珠单抗轻链SEQ ID NO:36)。n为2或4。
制备AuMb:N-MAL-N-双(Peg2)-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU：将1.4mmol Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU(SyntaBio)和280nmol N-Mal-N-双(PEG2-NHS酯)(Broadpharm,SanDiego)在200ml DMSO中混合。添加2ml1/4Dipea/DMSO，在室温下反应三小时。用纯化器系统，通过Gemini-NX反相柱(4.6×250mm,Phenomenex)完成N-MAL-N-双(Peg2)-Val-Ser(Glc)-PAB的纯化。缓冲液A为20mM pH 5.6的乙酸铵且缓冲液B为ACN。用20％缓冲液B使柱稳定并用以下线性梯度洗脱AuMb：20％缓冲液B至80％缓冲液B，持续40分钟(1ml/min)。用真空浓缩器对纯化的AuMb进行干燥。
对于LNCAuMb合成，将2.1mg(1mL,14nmol)再氧化的林妥珠单抗HC N296C与在20mLDMSO中的约10-20摩尔当量的分支有效载荷AuMb:N-MAL-N-双(Peg2)-Val-Ser(Glc)-PAB-MMAU混合，并将混合物在37℃下培育1h。如上所述地将LNCAuMb纯化，浓缩并无菌过滤。用PLRP-S方法测定DAR。LNCAuMb的DAR为3.3。
实施例24.半胱氨酸工程化林妥珠单抗MMAUADC LNCPeMa的制备
方案24-1.LNCPeMa；T为半胱氨酸工程化林妥珠单抗HC N296C(林妥珠单抗N296CHC SEQ ID NO:41和林妥珠单抗轻链SEQ ID NO:36)。
将林妥珠单抗HC N296C(4.0mg,V＝2.82mL)与在PBS中的TCEP(40摩尔当量)在37℃下培育1小时。使用Mab Select sure柱/纯化器系统从还原的样品中去除过量的TCEP。将PBS中的35摩尔当量的L-脱氢抗坏血酸(L-DHAA)(29mL,c＝17nmol/mL)添加到还原的林妥珠单抗HC N296C(2.1mg,V＝2.0mL)中，并将样品在37℃下培育1.5h。使用MabSelect sure柱//>纯化器系统，将再氧化的样品从过量的L-DHAA纯化。
对于LNCPeMa合成，将1.6mg(V＝2ml)再氧化的林妥珠单抗HC N296C与DMSO中的10摩尔当量的PeMa:MA-Ac-EDA-PNU(10mL,c＝10nmol/mL)混合，并将混合物在37℃下培育1小时。基于MALDI分析，LNCPeMa的DAR为约2。
实施例25.半胱氨酸工程化嵌合TA99 ADC CHCPeMg的制备
方案25-1.CHCPeMg；T为半胱氨酸工程化的嵌合TA99 HC N301C(嵌合TA99 HC SEQID NO:51和嵌合TA99轻链SEQ ID NO:48)。
将嵌合TA99 HC N301C(6.0mg,V＝4.55mL)与在PBS中的TCEP(40摩尔当量)在37℃下培育1.5小时。使用HPLC从还原的样品中去除过量的TCEP。将在PBS中的35摩尔当量的L-脱氢抗坏血酸(L-DHAA)(42.8mL,c＝24nmol/mL)添加到还原的嵌合TA99 HC N301C(4.4mg,V＝2.5ml)中，并将样品在37℃下培育1小时。将再氧化的样品从过量的L-DHAA HPLC纯化。
对于CHCpeMg合成，将3.7mg(V＝2.5ml)再氧化的嵌合TA99 HC N301C与在DMSO中的10摩尔当量的PeMg:MA-Ac-b-Ala-VS(GlcA)-EDA-PNU(9mL,c＝27.5nmol/mL)混合，并在37℃下培育过夜。如上所述地使用HPLC纯化最终样品。MALDI分析显示DAR为约2。
实施例26.法兰妥单抗-AuMADC FLAuM的制备
方案26-1.FLAuM；T为法兰妥单抗(法兰妥单抗重链SEQ ID NO:45和法兰妥单抗轻链SEQ ID NO:46)。N为7、8或9。
将5mg法兰妥单抗(c＝3.06mg/mL)用PBS稀释至2.0mg/mL并在25X摩尔过量的TCEP存在下在+37℃下还原1.5小时。对于FLAuM合成，添加30X摩尔过量的AuM:MA-Ac-β-Ala-Val-Ser(β-Glc)-PAB-MMAU，并将混合物在37℃下培育1.5h。如上所述地将最终FLAuM ADC纯化并无菌过滤。用PLRP-S测定DAR。FLAuM的DAR为7.9。
实施例27.嵌合TA99 ADC CHAuM的制备
方案26-1.CHAuM；T为嵌合TA99(嵌合TA99 HC SEQ ID NO:47和嵌合TA99轻链SEQID NO:48)。n为约6。
如FLAuM一样制备TA99 MMAU ADC并如上所述进行纯化。根据MALDI分析，所制备批次的CHAuM的DAR为6。
实施例28.己酰基相对于β-Ala的马来酰亚胺环稳定性
TRAuM的制备
将10mg曲妥珠单抗(Roche；c＝2.0mg/ml，在PBS中)在25x摩尔过量的TCEP存在下在+37℃下还原1.5h。添加30x摩尔过量的MA-Ac-β-Ala-Val-Ser(β-Glc)-PAB-MMAU并使反应在+37℃下继续进行1.5小时。将最终TRAuM如上所述纯化，无菌过滤并储存于4℃下。用PLRP-S测定DAR。TRAuM的DAR为7.9。
TRAuMc的制备(曲妥珠单抗-己酰基-MMAU)
方案28-1.TRAuMc.T为曲妥珠单抗。
将在300μl DMF中的MMAU-PAB-(Glc)SerVal(3μmol)与在500μl DMF中的5摩尔过量的EMCS反应。添加3μl Dipea，并将反应在室温下培育。一小时反应之后，添加2μl Dipea并继续培育1.5小时。MALDI：AuMcM+Na＝1606,M+2Na＝1628。
用HPLC纯化器系统，通过Gemini-NX反相柱(4.6×250mm,Phenomenex)完成AuMc(MA-己酰基-ValSer(Glc)PAB-MMAU)的纯化。缓冲液A为MilliQ-水中的0.1％ TFA且缓冲液B为ACN。用20％缓冲液B使柱稳定并用以下线性梯度洗脱AuMc：20％缓冲液B至60％缓冲液B，持续40分钟(1ml/min)。用真空浓缩器对纯化的AuMc进行干燥。
将在PBS中的2mg曲妥珠单抗(c＝2.5mg/ml)在25X摩尔过量的TCEP存在下在+37℃下还原1小时。添加据估计30X摩尔过量的MA-己酰基-Val-Ser(β-Glc)-PAB-MMAU并使反应在+37℃下继续进行1小时。
将ADC如上所述进行纯化，无菌过滤并储存于4℃下。将所纯化的曲妥珠单抗-己酰基-MMAU ADC无菌过滤，并对最终ADC样品分配编码TRAuMc，产量为1.4mg。用PLRP-S测定DAR。TRAuMc的DAR为7.9。
比较了TRAuMc与TRAuM之间通过水解的马来酰亚胺环稳定化。两种ADC在PBS中在37℃下培育24h。通过ADC的MALDI-TOF MS在0h、5h和24h的时间点对稳定化反应进行追踪。图8示出了TRAuMc(图8A)和TRAuM(图8B)二者的质谱轻链面积。TRAuMc的马来酰亚胺在24h的培育过程中没有通过水解稳定化，因为该ADC的轻链+有效载荷(LC+PL)组分的[M+H]+离子的m/z没有变化并且在每个时间点在介于25015-25018之间的m/z下检测到。相比之下，TRAuM的马来酰亚胺在24h的培育过程中通过水解有效地稳定化，因为LC+PL离子的m/z从0h时的m/z 25032.785变为24h时的25049.032，对应于水解反应(观察到的变化+16.2Da，所计算的添加的水+18.0Da)。在TRAuM培育的5h时间点下，原始未水解的LC+PL离子和水解/稳定化产物均可见。因此，包含马来酰亚胺乙酰基的AuM接头-有效载荷的ADC在pH 7.4和37℃的温和条件下，在几小时内容易地被稳定化。相比之下，包含马来酰亚胺己酰基的AuMc接头-有效载荷的ADC在相同的条件下没有被稳定化。
实施例29.在谷胱甘肽和白蛋白的存在下马来酰亚胺缀合物的稳定性
将TRAuMc和TRAuMADC在5mM氧化的谷胱甘肽(Sigma)存在下在含有1mM EDTA的50mM pH 7.4HEPES中在37℃下培育。接头-有效载荷从ADC向谷胱甘肽的转移通过MALDI-TOF MS在0、1、2、3、7和10天时监测。将通过MA-Ac-β-Ala-Val-Ser(β-Glc)-PAB-MMAU与过量的半胱胺在室温下培育两小时制得的半胱胺-接头-有效载荷用作内部标准，之后通过MALDI-TOF MS核实正确产物的形成。时间点样品(á5μL)用小型Poros R2柱和内部标准纯化，每次分析中加入等量的标准分子。样品被洗脱到靶板上并形成两个斑点。DHB用作基质。在流动的m/z值处计算两个斑点中内部标准和样品相应峰的平均值：半胱胺-AuM(内部标准，马来酰亚胺未水解的)[M+H]+1676.9，[M+Na]+1698.9，[M+2Na-H]+1720.9；谷胱甘肽-AuMc[M+H]+1892.1，[M+Na]+1914.1，[M+2Na-H]+1936.1；谷胱甘肽-AuM(水解的马来酰亚胺)[M+H]+1925.1，[M+Na]+1947.1，[M+2Na-H]+1969.1。对相应的峰值强度进行求和，并且计算接头相关信号与内部标准的比率。图9A示出了结果，表明在10天实验期间，构成TRAuMc的接头的马来酰亚胺己酰基的去缀合率比构成TRAuM的接头的马来酰亚胺乙酰基高10倍。
还在37℃下、在pH 7.4的PBS缓冲液中、在人血清白蛋白(HSA)存在下比较TRAuMc与TRAuMADC的稳定性。用RP-HPLC通过DAR分析监测有效载荷转移到HSA造成的有效载荷损失，如上所述。将ADC(100μg/ml)与HSA(40mg/ml)在37℃下培育并于0、1、5和10天时取样。分析前将样品储存于-20℃下，并如上所述地通过蛋白A HPLC纯化以去除HSA，从而避免HSA对DAR分析的任何潜在干扰。图9B示出了结果。TRAuM的DAR在10天的实验期间里具有从7.8至7.2的轻微下降，而TRAuMc的DAR则从7.9降至5.4。因此，具有包含马来酰亚胺乙酰基的AuM接头-有效载荷的ADC在HSA存在下对去缀合呈现出大大提高的稳定性。相比之下，具有包含马来酰亚胺己酰基的AuMc接头-有效载荷的ADC在相同条件下呈现出连续的时间依赖性有效载荷损失和较低的稳定性。图10示出了实验的RP-HPLC色谱图。
实施例30.ADC的体外功效
抗TYRP ADC的毒性用SK-MEL-28(ATCC:-72TM)、SK-MEL-30(DSMZ:ACC 151)和/或IGR-1(DSMZ:ACC 236)人黑色素瘤细胞来测试。
将SK-MEL-28细胞接种于96孔板中，2000个/孔，并且在标准细胞培养条件下，在10％ FBS/EMEM-培养基中培养。过夜培养后，将稀释的ADC或未缀合的抗体添加到细胞中(浓度范围0.02nM-200nM或0.1nM-300nM)，并且培育3-5天。关于细胞对照，用不含ADC的培养基处理细胞。根据制造商说明书，使用PrestoBlue细胞活力试剂(Life Technologies)评估细胞活力。
将SK-MEL-30接种于96孔板中，2000个细胞/孔或3000个细胞/孔，并且在标准细胞培养条件下，在10％ FBS/RPMI 1640培养基中培养。过夜培养后，将稀释的ADC或抗体添加到细胞中，并且培育3-5天。关于细胞对照，用不含ADC的培养基处理细胞。采用PrestoBlue细胞活力试剂评估细胞活力。
将IGR-1细胞接种于96孔板中，2000个细胞/孔，并且在标准细胞培养条件下，用10％ FBS/DMEM-培养基培养。过夜培养后，将稀释的ADC或未缀合抗体(浓度范围0.1nM-300nM)添加到细胞中，并且培育3-5天。采用PrestoBlue细胞活力试剂评估细胞活力。
将AVG％值和标准差转移到GraphPad Prism 9.1.2。生成剂量-反应曲线，并使用软件通过非线性回归分析(抑制剂相对于反应，变斜率(四个参数))获得样品的IC50％值(IC50％，与媒介物处理的细胞相比，使存活率降低50％所需的化合物浓度(对照＝100％)。
ADC的结果示于下表30-1至30-14中。在IGR-1和SK-MEL-30细胞中，未缀合的抗mGP75和法兰妥单抗抗体在高达300nM(测试的最高浓度)下没有效果。在HL-60和K-562细胞中，未缀合的抗CD33抗体林妥珠单抗和吉妥珠单抗在高达300nM(测试的最高浓度)下没有效果。在KG-1、Ramos和Daudi细胞中，未缀合的林妥珠单抗在高达300nM(测试的最高浓度)下没有效果。因此，观察到的ADC高细胞毒性是抗体-药物缀合物的特异性有效载荷细胞毒性和抗癌活性的直接证据。
表30-1.FLCPeMcv ADC(n＝2)的IC50值的范围
表30-2.FLCPeMg ADC(n＝2)的IC50值的范围
细胞系/ADC FLCPeMg DAR2.2
IGR-1 417pM-484pM
SK-MEL-30 4.3nM-10nM
表30-3.FLCPeMa ADC的IC50值
细胞系/ADC FLCPeMa DAR1.7
IGR-1 1.2nM (95％CI:0.94-1.5nM)
SK-MEL-30 22nM (95％CI:19-25nM)
表30-4.FLCPeMala ADC的IC50值
细胞系/ADC FLCPeMala DAR2.0
IGR-1 649pM (95％CI:394-903pM)
表30-5.FLPeD ADC的IC50值
细胞系/ADC FLPeD DAR2
SK-MEL-28 100nM (95％CI:93-107nM)
IGR-1 428pM-601pM(n＝3)
SK-MEL-30 1.3-8.2nM(n＝3)
表30-6.CHPeD ADC的IC50值
表30-7.TAPeD ADC的IC50值
细胞系/ADC TAPeD DAR2
IGR-1 1.2nM (95％CI:0.97-1.4nM)
SK-MEL-30 8.6nM (95％CI:7.9-9.3nM)
表30-8.TAAuM ADC的IC50值
细胞系/ADC TAAuM DAR10
IGR-1 1.3nM (95％CI:0.89-1.7nM)
SK-MEL-30 7.9-26nM(n＝2)
表30-9.FLAuM ADC的IC50值
细胞系/ADC FLAuM DAR6
SK-MEL-28 >300nM
IGR-1 4.1nM (95％CI:3.4-4.8nM)
SK-MEL-30 123nM (95％CI:96-158nM)
表30-10.CHAuM ADC的IC50值
细胞系/ADC CHAuM DAR6
SK-MEL-28 >300nM
IGR-1 2.2nM (95％CI:1.9-2.5nM)
SK-MEL-30 48nM (95％CI:36-62nM)
表30-11.LNAuM ADC的IC50值的范围(AVG±标准差)。处理HL-60细胞5天。处理KG-1细胞3或4天。处理MOLM-13、K562和Daudi细胞3天。
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表30-12.GMAuM ADC的IC50值。处理HL-60细胞5天。处理MOLM-13和K562细胞3天。
细胞系/ADC GMAuM DAR8
HL-60 583pM (95％CI:487-700pM)
MOLM-13 206pM (95％CI:189-224pM)
K-562(低CD33) 241nM (95％CI:217-266nM)
表30-13.在5天处理之后LNCAuM ADC的IC50值
细胞系/ADC LNCAuM DAR1.7
HL-60 16nM (95％CI:11-24nM)
表30-14.在5天处理之后LNCAuMb ADC的IC50值
细胞系/ADC LNCAuMb DAR3.3
HL-60 2.2nM (95％CI:1.5-3.1nM)
总的来说，表30-1至30-14显示，抗TYRP1 ADC和抗CD33 ADC二者对表达靶抗原的癌细胞都表现出高的特异性细胞毒性功效。
TYRP1抗原在细胞系中的表达量依次为IGR-1>SK-MEL-30>SK-MEL-28。因此，抗TYRP1 ADC对IGR-1细胞最有效，而其对SK-MEL-30细胞显示出中等活性，并且对SK-MEL-28细胞的有效性最低。由法兰妥单抗、TA99和嵌合TA99抗体制备的所有的抗TYRP1 ADC均具有有效的抗癌和抗黑色素瘤活性。然而，基于法兰妥单抗的ADC FLCPeMcv(表30-1)、FLCPeMg(表30-2)、FLCPeMala(表30-4)和FLCPeD(表30-5)对IGR-1细胞具有皮摩尔IC50值，表明基于法兰妥单抗的ADC具有最高的抗癌和抗黑色素瘤功效。无论缀合的是聚糖(例如，表30-5中的FLPeD，IGR-1细胞的IC50降至428pM)抑或工程化半胱氨酸(例如，表30-2中的FLCPeMg，IGR-1细胞的IC50降至417pM)，DAR＝2PNU ADC的功效都是相当的，显示出两种ADC向癌细胞有效的有效载荷递送。除了PNU有效载荷外，MMAU有效载荷也具有有效的抗癌和抗黑色素瘤活性，例如TAAuM(表30-8)、FLAuM(表30-9)和CHAuM(表30-10)，它们对IGR-1细胞都具有约1-4nM的IC50值。
LNAuM(表30-11)对所有测试的CD33+癌细胞系比GMAuM(表30-12)均更有效，但是这两种ADC都具有高活性，其具有皮摩尔IC50值。LNAuM对具有CD33高表达的CD33+细胞具有非常高的功效，对HL-60和MOLM-13细胞显示出降至低皮摩尔(23-24pM)的IC50值(表30-11)。此外，LNAuM对具有低CD33表达的细胞(诸如K-562)的IC50值为低纳摩尔(降至24nM)，对应于有效的抗癌细胞活性。然而，即使在300nM浓度下，LNAuM对CD33-细胞系Ramos和Daudi也未达到IC50(表30-11)，说明LNAuM的体外治疗窗口大于10000。使用具有不同DAR的ADC的实验表明，ADC的功效随着DAR的增加而提高，例如，对于具有相同MMAU有效载荷但DAR不同的HL-60细胞和LN ADC来说：LNCAuM(DAR＝1.7)、LNCAuMb(DAR＝3.3)和LNAuM(DAR＝8)分别具有16nM、2.2nM和降至24pM的抗HL-60细胞IC50值(表30-13、30-14和30-11)。虽然2.2nM和16nM的IC50值仍然具有有效的抗癌活性，但具有8个有效载荷/抗体的LNAuM(DAR＝8；IC50降至23pM)显示具有优异的抗癌活性。
实施例31.PNU-ADC的体内功效
在如上所述的B16-F10小鼠黑色素瘤模型中评估抗TYRP1 ADC(TAPeD、FLPeD、CHPeD和FLCPeMg)的体内抗肿瘤功效。在每只小鼠的胁侧s.c.接种25万个细胞。通过触诊追踪肿瘤生长，并在接种后2-7天，肿瘤大小达到60-110mm3时给予ADC剂量。在每个施用日，将肿瘤大小合适的小鼠随机分到研究组中，使各组在注射天数和肿瘤大小方面具有可比性(6只小鼠/组，平均肿瘤大小/组：81-83mm3)。注射当日单次i.v.注射5mg/kg在PBS中的ADC，并且追踪肿瘤大小持续至少28天。在所有的ADC治疗组中，2只小鼠显示出有效的肿瘤生长抑制(肿瘤<200mm3)。另一个异种移植物实验如上类似地进行。在此实验中，10只异种移植的小鼠不接受任何治疗，而10只异种移植的小鼠在接种后第2、7和12天i.v.给予剂量为10mg/kg的TA99抗体3次(3×10mg/kg，间隔5天)。在28天的随访期里，这20只小鼠中的每一只的肿瘤均生长至>200mm3。总的来说，对于所有四种测试的ADC，以5mg/kg的单次剂量治疗比10mg/kg的三次剂量的裸抗体更有效地减少肿瘤生长，显示出每种有效载荷-接头的抗肿瘤功效。这些实验的结果汇总于表31-1中。
表31-1.B16-F10异种移植物结果
实施例32.PNU-ADC的体内耐受性
在正常C57BL/6J小鼠中测试与PNU-EDA接头-有效载荷缀合的ADC的耐受性和安全性。使用8-10周龄的雌性成年小鼠，3只/组(n＝3)。该研究在TCDM/Central AnimalLaboratory,University of Turku,Finland处，按照适当的伦理委员会批准进行。定期观察动物的临床体征、体重和一般行为。观察到剂量限制毒性，要么组中平均体重减少超过10％，要么是组中任何动物出现急性毒性。最大耐受剂量(MTD)确定为低于剂量限制毒性剂量水平的下一个更低剂量。如上所述制备ADC，并在研究的第一天给予单次i.v.剂量的ADC。如果没有观察到剂量限制毒性，则对小鼠进行长达30天的随访。在20mg/kg或30mg/kg的TA99抗体的情况下均未观察到毒性，并且对照小鼠的平均体重在研究期间增长超过10％。研究结果示于表32-1中。总的来说，ADC在处于或高于有效剂量水平时在体内显示出安全性，因此证明了有用的治疗窗口。
表32-1.小鼠耐受性研究结果
实例33.抗CD33 ADC的体内功效
评估抗CD33 ADC LNAuM(DAR＝8.0)和GMAuM(DAR＝8.0)以及抗CD33抗体LN和GM的体内抗白血病异种移植物功效。HL-60急性髓系白血病(AML)细胞由ATCC获得并根据制造商说明书来培养。该研究在TCDM/Central Animal Laboratory,University of Turku,Finland处，按照适当的伦理委员会批准进行。制备用于小鼠接种的处于旺盛的指数生长期的细胞。在每只小鼠(8-10周龄的雌性无胸腺裸小鼠)的胁侧s.c.接种200万个在50％Matrigel中的细胞。定期观察动物的临床体征和一般行为。没有记录到毒性迹象。在研究结束时，检查了小鼠主要器官的潜在宏观变化，但没有检测到任何变化。通过触诊观察肿瘤生长。卡尺测量后，按0.5×长度×宽度2计算肿瘤体积。在平均肿瘤体积达到100cm3时，进行第一次给药。将小鼠平均分到研究组中，每个治疗组5只小鼠，而对照组有8只小鼠，使得各组接收相似分布的不同大小的肿瘤，并且平均肿瘤体积在各组中相似(100-102mm3)。给予在PBS中的10mg/kg抗体或ADC的静脉内(i.v.)治疗1次(单次给药方案)，而对照组则不接受治疗。
图6-7示出了研究结果。在30天的随访期里，对照组和GM治疗组的肿瘤生长速度都很快，并且在实验结束前，这两组都有部分动物因肿瘤生长而不得不被处死。LN治疗组的肿瘤生长被抑制约20天，之后所有肿瘤继续缓慢生长。在两个ADC治疗组中，所有5只小鼠的肿瘤均消失(5/5)，实验期间没有再生(图6)。在实验期间，所有组中小鼠的平均体重均有所增加，并且未检测到与治疗相关的体重下降(图7)。总的来说，LNAuM和GMAuM抗CD33 MMAU ADC二者均显示出有效的抗癌和抗AML活性，并且未检测到毒性。
在给药后第1天、第5天和第9天，从治疗组的每只小鼠以及对照组的两只小鼠采集血清样品(取自40μl血液)，以追踪化合物的全身暴露。使用FastELISA人免疫球蛋白定量试剂盒(RD-Biotech)，根据制造商说明书，通过ELISA分析血清样品中的ADC浓度。结果示于表15.1中。在1d-9d之间，LNAuM比GMAuM有更好的全身暴露，并且截至第9天GMAuM比LNAuM更快地从循环中被清除。
表15.1.在给药后1、5、9天血清样品中ADC的平均浓度，以μg/ml表示为平均ADC浓度±标准差(n＝5)。AUC(1-9d)显示第1天至第9天(1d-9d)之间的部分曲线下面积，单位为mg×d/L，采用梯形法计算。
/>
序列表
<110> 芬兰吉利科斯有限公司
<120> 接头-有效载荷及其缀合物
<130> P-WO142286M
<150> 20217033
<151> 2021-02-16
<150> 20217058
<151> 2021-04-01
<160> 54
<170> PatentIn版本3.5
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<212> PRT
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Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Asn
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Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Glu Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Asn Phe
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Met Glu Val Ser Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
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Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
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Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
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Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
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Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
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Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
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Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
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Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
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Gly
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 朗妥昔单抗轻链
<400> 2
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Gly Val Asn Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Arg Arg Trp Ile Tyr
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Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Arg Gly Ser Tyr Thr Phe Gly
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Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
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Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
165 170 175
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
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Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
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Gly Glu Cys
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<212> PRT
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<223> 考妥昔单抗重链
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Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Asn
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Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Glu Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Asn Phe
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Gln Gly Lys Ala Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
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Met Glu Val Ser Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
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Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
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Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
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Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
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Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
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Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Gly Val Asn Tyr Met
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His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Arg Arg Trp Ile Tyr
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210
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<223> 地宁妥珠单抗重链
<220>
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<222> (1)..(1)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
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Xaa Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Thr Ser
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Gly
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Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
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Asn Arg Gly Glu Cys
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Phe
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Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
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Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
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Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
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355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
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Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
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Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 8
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 阿仑单抗轻链
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asp Lys Tyr
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Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Ile Ser Arg Pro Arg
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Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
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Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
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195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<210> 9
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 达雷木单抗重链
<400> 9
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Asn Ser Phe
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Lys Ile Leu Trp Phe Gly Glu Pro Val Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 10
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 达雷木单抗轻链
<400> 10
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 11
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 艾沙妥昔单抗（Isatuximab）重链
<400> 11
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Ala Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Lys Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met His Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Asn Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 12
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 艾沙妥昔单抗（Isatuximab）轻链
<400> 12
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Leu Ser Met Ser Thr Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Pro Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Val
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ile Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 13
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 迈泽妥单抗(mezagitamab)重链
<400> 13
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Asp Ile Ser Trp Asn Gly Gly Lys Thr His Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Gln Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Leu Phe His Asp Ser Ser Gly Phe Tyr Phe Gly His
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 14
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 迈泽妥单抗(mezagitamab)轻链
<400> 14
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asp Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Asp Ser Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 15
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 菲泽妥单抗(felzartamab)重链
<400> 15
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Gly Asp Pro Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Pro Leu Val Tyr Thr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 16
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 菲泽妥单抗(felzartamab)轻链
<400> 16
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Ser Cys Ser Gly Asp Asn Leu Arg His Tyr Tyr Val
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gly Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Thr Tyr Thr Gly Gly Ala Ser Leu
85 90 95
Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala
115 120 125
Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala
130 135 140
Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val
145 150 155 160
Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser
165 170 175
Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr
180 185 190
Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala
195 200 205
Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 17
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 洛沃妥珠单抗(lorvotuzumab）重链
<400> 17
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Phe Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Met Arg Lys Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 18
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 洛沃妥珠单抗(lorvotuzumab）轻链
<400> 18
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ile Ile Ile His Ser
20 25 30
Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 19
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 泊洛妥珠单抗(polatuzumab)重链
<400> 19
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 20
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 泊洛妥珠单抗(polatuzumab)轻链
<400> 20
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Glu
20 25 30
Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 21
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 雷英妥昔单抗(indatuximab)重链
<400> 21
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ser Glu Leu Met Met Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Thr Gly Arg Thr Ile Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Ile Ser Ser Asn Thr Val Gln
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Tyr Tyr Gly Asn Phe Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr
210 215 220
Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440 445
Lys
<210> 22
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 雷英妥昔单抗(indatuximab)轻链
<400> 22
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Ala Ser Gln Gly Ile Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Glu Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Lys Leu Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 23
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 贝兰他单抗(belantamab ）重链
<400> 23
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ala Thr Tyr Arg Gly His Ser Asp Thr Tyr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Ile Tyr Asp Gly Tyr Asp Val Leu Asp Asn Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 24
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 贝兰他单抗(belantamab ）轻链
<400> 24
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Asn Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Arg Lys Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 25
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 奥美珠单抗(ocrelizumab)重链
<400> 25
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Val Tyr Tyr Ser Asn Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 26
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 奥美珠单抗(ocrelizumab)轻链
<400> 26
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Leu Ile Tyr
35 40 45
Ala Pro Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Phe Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 27
<211> 467
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 奥英妥珠单抗(inotuzumab）重链
<400> 27
Met Asp Phe Gly Phe Ser Leu Val Phe Leu Ala Leu Ile Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe
35 40 45
Thr Asn Tyr Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Gly Ile Asn Pro Gly Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Arg
65 70 75 80
Arg Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser
85 90 95
Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Thr Arg Glu Gly Tyr Gly Asn Tyr Gly Ala Trp Phe Ala
115 120 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
130 135 140
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
145 150 155 160
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
165 170 175
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
180 185 190
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
195 200 205
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn
210 215 220
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser
225 230 235 240
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly
245 250 255
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
260 265 270
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln
275 280 285
Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
290 295 300
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr
305 310 315 320
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
325 330 335
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile
340 345 350
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
355 360 365
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
370 375 380
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
385 390 395 400
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
405 410 415
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val
420 425 430
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
435 440 445
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
450 455 460
Leu Gly Lys
465
<210> 28
<211> 239
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 奥英妥珠单抗(inotuzumab）轻链
<400> 28
Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Leu Leu Phe Trp Ile Pro
1 5 10 15
Ala Ser Arg Gly Asp Val Gln Val Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser
35 40 45
Leu Ala Asn Ser Tyr Gly Asn Thr Phe Leu Ser Trp Tyr Leu His Lys
50 55 60
Pro Gly Lys Ala Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Ile Ser Asn Arg Phe
65 70 75 80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
85 90 95
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr
100 105 110
Cys Leu Gln Gly Thr His Gln Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
115 120 125
Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
130 135 140
Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
145 150 155 160
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
165 170 175
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
180 185 190
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
195 200 205
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
210 215 220
Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235
<210> 29
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 依帕珠单抗(Epratuzumab)重链
<400> 29
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Arg Asn Asp Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Phe Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Ile Thr Thr Phe Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 30
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 依帕珠单抗(Epratuzumab)轻链
<400> 30
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ala Asn His Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln
85 90 95
Tyr Leu Ser Ser Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Gln Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 31
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 卡利尤单抗(camidanlumab)重链
<400> 31
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Ile Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Val Glu Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Asp Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 32
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 卡利尤单抗(camidanlumab)轻链
<400> 32
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 33
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 本妥昔单抗(brentuximab)重链
<400> 33
Gln Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile Thr Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Phe
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Asn Tyr Gly Asn Tyr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln
100 105 110
Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 34
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 本妥昔单抗(brentuximab)轻链
<400> 34
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Phe Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Val Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 35
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 林妥珠单抗(lintuzumab)重链
<400> 35
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Arg Pro Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 36
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 林妥珠单抗（Lintuzumab）轻链
<400> 36
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 37
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 吉妥珠单抗(gemtuzumab)重链
<400> 37
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Ser
20 25 30
Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Pro Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Phe Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Asn Gly Asn Pro Trp Leu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
340 345 350
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<210> 38
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 吉妥珠单抗(gemtuzumab)轻链
<400> 38
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Leu Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Arg Phe Leu Thr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Met Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Lys
85 90 95
Glu Val Pro Trp Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Val Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 39
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 伐达妥昔单抗(vadastuximab)重链
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 39
Xaa Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Tyr Glu Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Cys Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 40
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 伐达妥昔单抗(vadastuximab)轻链
<400> 40
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 41
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 半胱氨酸工程化林妥珠单抗（Lintuzumab）重链 N296C
<400> 41
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Arg Pro Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Cys Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 42
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 半胱氨酸工程化林妥珠单抗（Lintuzumab）重链 C219S
<400> 42
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Arg Pro Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
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Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
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Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
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Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
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Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
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Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
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370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
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Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 半胱氨酸工程化吉妥珠单抗(gemtuzumab)重链 N293C
<400> 43
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1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Ser
20 25 30
Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
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165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
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195 200 205
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210 215 220
Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Phe Cys Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
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405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<210> 44
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 半胱氨酸工程化吉妥珠单抗(gemtuzumab)重链 C130S
<400> 44
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Ser
20 25 30
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50 55 60
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100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
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130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
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Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
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Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
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Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
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325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
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Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<210> 45
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 法兰妥单抗(flanvotumab)重链
<400> 45
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met
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Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe
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65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Pro Arg Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
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165 170 175
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Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
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Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
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Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 46
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 法兰妥单抗(flanvotumab)轻链
<400> 46
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Leu Met
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Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 47
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 嵌合TA99重链
<400> 47
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
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Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
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Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
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Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
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Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
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260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
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290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
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Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
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Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
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<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 嵌合TA99轻链
<400> 48
Ile Gln Met Ser Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Glu
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Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Asn Tyr Leu
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Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
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Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 49
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 半胱氨酸工程化法兰妥单抗(flanvotumab)重链 N299C
<400> 49
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
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Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
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Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
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Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
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Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
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Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
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Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
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Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Cys Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
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Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
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Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
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435 440 445
Lys
<210> 50
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 半胱氨酸工程化法兰妥单抗(flanvotumab)重链 C222S
<400> 50
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
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115 120 125
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145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 51
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 半胱氨酸工程化嵌合TA99重链 N301C
<400> 51
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
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Gln Gly Thr Ala Ser Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Asp Tyr Thr Tyr Glu Lys Ala Ala Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Thr Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Cys Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 52
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 半胱氨酸工程化嵌合TA99重链 C224S
<400> 52
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Leu Val Lys Leu Ser Cys Lys Thr Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Leu His Trp Val Arg Gln Arg Pro Asp Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asp Asn Gly Asn Thr Val Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Thr Ala Ser Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Asp Tyr Thr Tyr Glu Lys Ala Ala Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Thr Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Ser
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 53
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 前导肽
<400> 53
Met Val Ser Thr Pro Gln Phe Leu Val Phe Leu Leu Phe Trp Ile Pro
1 5 10 15
Ala Ser Arg Ser
20
<210> 54
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 前导肽HC
<400> 54
Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys
1 5 10 15
Val Leu Ser

Claims (39)

1.式I、式IG、式IGX或式III的接头-有效载荷缀合物，
其中R1为氨基酸侧链；RX为直链C1-C6亚烷基、支链C1-C6亚烷基、-CH2CH2-或-CH(R2)-，其中R2为氨基酸侧链；Y不存在或为亲水基团；R3为氨基酸侧链；Z不存在或为自牺牲基团；D为有效载荷分子；并且m为0或1。
2.式II、式IIs、式IIG、式IIGs、式IIGX、式IIGXs、式IV或式IVs的靶向单元-接头-有效载荷缀合物，
其中T为靶向单元；R1为氨基酸侧链；RX为直链C1-C6亚烷基、支链C1-C6亚烷基、-CH2CH2-、或-CH(R2)-，其中R2为氨基酸侧链；Y不存在或为亲水基团；R3为氨基酸侧链；Z不存在或为自牺牲基团；D为有效载荷分子；m为0或1；并且n≥1，或n在以下范围内：1至约20、或1至约15、或1至约10、或2至10、或2至6、或2至5、或2至4；或n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
3.如权利要求2所述的靶向单元-接头-有效载荷缀合物，其中所述靶向单元-接头-有效载荷缀合物包含：
i)至少1种根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，
ii)至少2种根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，
iii)至少3种根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，
iv)至少4种根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，v)至少5种根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，
vi)至少6种根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，vii)至少7种根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，viii)至少8种根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，
ix)至少9种根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，
x)至少10种根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，
xi)100％根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，
xii)至少1/n根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，其中n为至少1，
xiii)至少2/n根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，其中n为至少2，
xiv)至少3/n根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，其中n为至少3，
xv)至少4/n根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，其中n为至少4，
xvi)至少5/n根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，其中n为至少5，
xvii)至少6/n根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，其中n为至少6，
xviii)至少7/n根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，其中n为至少7，
xix)至少8/n根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，其中n为至少8，
xx)至少9/n根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，其中n为至少9或
xxi)至少10/n根据式IIs、式IIGs、式IIGXs或式IVs的水解的马来酰亚胺，其中n为至少10。
4.如权利要求1所述的接头-有效载荷缀合物或如权利要求2或3所述的靶向单元-接头-有效载荷缀合物，其中Y选自由以下组成的组：糖、磷酸酯、硫酸酯、磷酸二酯和膦酸酯。
5.如前述权利要求中任一项所述的接头-有效载荷缀合物或如前述权利要求中任一项所述的靶向单元-接头-有效载荷缀合物，其中所述糖包括或由以下组成：β-D-半乳糖、N-乙酰基-β-D-半乳糖胺、N-乙酰基-α-D-半乳糖胺、N-乙酰基-β-D-葡萄糖胺、β-D-葡糖醛酸、α-L-艾杜糖醛酸、α-D-半乳糖、α-D-葡萄糖、β-D-葡萄糖、α-D-甘露糖、β-D-甘露糖、α-L-岩藻糖、β-D-木糖、神经氨酸或其任何类似物或修饰物，或其硫酸、磷酸、羧基、氨基或O-乙酰基修饰物。
6.如前述权利要求中任一项所述的接头-有效载荷缀合物或如前述权利要求中任一项所述的靶向单元-接头-有效载荷缀合物，其中D为选自由以下组成的组的细胞毒性药物：尾海兔素；奥瑞他汀；埃博霉素；柔红霉素；多柔比星；烷化剂，诸如噻替派和环磷酰胺(CYTOXANTM)；烷基磺酸酯，诸如白消安、英丙舒凡或哌泊舒凡；氮丙啶，诸如苯佐多巴，卡波醌、米特多巴(meturedopa)或乌瑞替派；乙撑亚胺类和/或甲基蜜胺类，诸如六甲蜜胺、三乙撑蜜胺、三乙撑磷酰胺、三乙撑硫代磷酰胺或三羟甲蜜胺；番荔枝内酯类，诸如布拉它辛或布拉他辛酮；喜树碱，诸如合成类似物拓扑替康；苔藓抑素；卡利抑素；CC-1065和/或其阿多来新、卡折来新或比折来新合成类似物；念珠藻素，诸如念珠藻素1或念珠藻素8)；倍癌霉素(包括合成类似物KW-2189和CBI-TMI)；五加素；水鬼蕉碱；匍枝珊瑚醇；海绵抑素；氮芥类，诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺、雌氮芥、异磷酰胺、双氯乙基甲胺、盐酸甲氧氮芥、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲磷胺、乌拉莫司汀；硝基脲，诸如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀；抗生素，诸如烯二炔抗生素(例如卡里奇霉素，特别是卡里奇霉素γ1；达内霉素，包括达内霉素A；埃斯波霉素；以及新抑癌菌素发色团和相关色蛋白烯二炔抗生素发色团)、阿克拉霉素、放线菌素、氨曲霉素、氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、卡拉比星、卡诺霉素、嗜癌霉素；色霉素、放线菌素D、地托比星、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、包括吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯代-多柔比星和脱氧多柔比星的其他多柔比星衍生物、表柔比星、依索比星、依达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑菌素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢物类，诸如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、多西氟尿啶、依诺他滨、氟尿苷、5-氟尿嘧啶；雄激素类，诸如卡鲁睾酮、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺类，诸如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂，诸如亚叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基酮戊酸；氨苯吖啶；阿莫斯汀；比生群；依达曲沙；地磷酰胺；地美可辛；地吖醌；依氟鸟氨酸；醋酸羟吡咔唑；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；美登素类化合物，诸如美登木素和N-葡糖基美登素、安丝菌素、DM-1、DM-4；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；二胺硝吖啶；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；雷佐生；根霉素；西索菲兰；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2',2”-三氯三乙胺；单端孢霉烯族毒素类(尤其是T-2毒素、疣孢菌素A、漆斑菌素A和蛇形菌素)；尿烷；长春地辛；达卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；加西托星；阿糖胞苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；噻替哌；紫杉烷类，例如紫杉醇(/>Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)和多西他塞(/>Rhone-Poulenc Rorer,Antony,France)；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂配位络合物，诸如顺铂、卡铂和长春碱；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；丝裂霉素C；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；诺维苯；米托蒽醌；替尼泊苷；道诺霉素；氨基蝶呤；卡培他滨；伊班膦酸钠；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；视黄酸；卡培他滨；它莫西芬、雷洛昔芬、抑制4(5)-咪唑的芳香酶、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛西芬、LY117018、奥那司酮和托瑞米芬(Fareston)；以及抗雄激素类，诸如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；微管溶素；鹅膏蕈碱，诸如α-鹅膏蕈碱；以及药学上可接受的盐、酸；尾海兔素10或其任何衍生物；尾海兔素15或其任何衍生物；奥瑞他汀F或其任何衍生物；单甲基和去甲基尾海兔素10、15、C、D和H，单甲基和去甲基异尾海兔素H，及其类似物或衍生物；单甲基和去甲基奥瑞他汀E、F、EB、EFP、PY、PYE、PE、PHE、TP、2-AQ和6-AQ；美登素类；N-葡糖基美登素；美登木素、安丝菌素、DM1(亦称为mertansine)或DM4(亦称为DM-4)；柔红霉素、多柔比星、地托比星、包括吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉代-多柔比星、脱氧多柔比星的其他多柔比星衍生物、表柔比星、依索比星、伊达比星、罗多比星、佐柔比星和吡柔比星；倍癌霉素A、倍癌霉素B1、倍癌霉素B2、倍癌霉素C1、倍癌霉素C2、倍癌霉素D、倍癌霉素SA、倍癌霉素MA和CC-1065；倍癌霉素的合成类似物，诸如阿多来新、比折来新、卡折来新、KW-2189和CBI-TMI；式DS的倍癌霉素-糖缀合物；微管溶素；α-鹅膏蕈碱；念珠藻素；单甲基奥瑞他汀E；式AS的奥瑞他汀糖缀合物；MMAU；单甲基奥瑞他汀F、W或M；吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)、阿贝霉素、契卡霉素、DC-81、甲基氨茴霉素、新茴霉素A和B、泊罗霉素(porothramycin)、普拉卡素(prothracarcin)、西班米星、托马霉素和PBD二聚物；或以上任一种的类似物。
7.如前述权利要求中任一项所述的接头-有效载荷缀合物或如前述权利要求中任一项所述的靶向单元-接头-有效载荷缀合物，其中(i)R3选自由以下组成的组：α-氨基酸、丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的侧链，(ii)Z选自由以下组成的组：对氨基苄氧羰基(PABC)；邻氨基苄氧羰基；氨基酸；和肽；或Z不存在；(iii)R1选自由以下组成的组：缬氨酸的侧链、苯丙氨酸的侧链、酪氨酸的侧链、亮氨酸的侧链、异亮氨酸的侧链、精氨酸的侧链、丙氨酸的侧链、赖氨酸的侧链和甘氨酸的侧链；和/或(iv)RX选自由以下组成的组：直链C1-C6亚烷基；支链C1-C6亚烷基；CH(R2)，其中R2为氨基酸侧链；以及-CH2CH2-。
8.如前述权利要求中任一项所述的接头-有效载荷缀合物，其中所述缀合物为
/>
/>
/>
/>
/>
9.如前述权利要求中任一项所述的靶向单元-接头-有效载荷缀合物，其中所述靶向单元为抗体。
10.如权利要求9所述的靶向单元-接头-有效载荷缀合物，其中所述抗体选自由以下组成的组：贝伐单抗、托西图单抗、依那西普、曲妥珠单抗、阿达木单抗、阿仑单抗、吉妥珠单抗奥加米星(gemtuzumab ozogamicin)、依法利珠单抗、法兰妥单抗、利妥昔单抗、英夫利西单抗、阿昔单抗、巴利昔单抗、帕利珠单抗、奥马珠单抗、达克利珠单抗、西妥昔单抗、帕尼单抗、依帕珠单抗、2G12、林妥珠单抗、尼妥珠单抗和替伊莫单抗(britumomab tiuxetan)，或者所述抗体选自由以下组成的组：抗EGFR抗体、表皮生长因子受体2(HER2/neu)抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗Lewis y抗体、抗TYRP-1、抗CD20抗体和抗血液靶抗体。
11.如权利要求9或10所述的靶向单元-接头-有效载荷缀合物，其中所述抗体能够结合选自由以下组成的组的抗血液靶分子：CD19、CD20、CD22、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD52、CD56、CD70、CD74、CD79、CD98、CD117、CD105、CD123、CD138、CD157、BCMA和CD319(SLAMF7)。
12.如权利要求11所述的靶向单元-接头-有效载荷缀合物，其中所述靶分子选自由以下组成的组：CD19、CD22、CD33、CD52和CD123。
13.如权利要求9-12中任一项所述的靶向单元-接头-有效载荷缀合物，其中所述抗体为选自由以下组成的组的抗血液靶抗体：朗妥昔单抗(loncastuximab)、博纳吐单抗(blinatumomab)、塔法斯单抗(tafasitamab)、考妥昔单抗(coltuximab)、地宁妥珠单抗(denintuzumab)、奥贝利单抗(obexelimab)、伊比利珠单抗(inebilizumab)、MOR00208、MDX-1342、MEDI-551、SAR3419、利妥昔单抗、奥法木单抗(ofatumumab)、维妥组单抗(veltuzumab)、奥美珠单抗(ocrelizumab)、奥滨尤妥珠单抗(obinutuzumab)、奥卡妥珠单抗(ocaratuzumab)、乌妥昔单抗(ublituximab)、诺非单抗(nofetumomab)、替伊莫单抗(ibritumomab)、依帕珠单抗(Epratuzumab)、奥英妥珠单抗(inotuzumab zogamicin)、贝妥莫单抗(bectumomab)、莫妥昔单抗(moxetumomab)、匹那妥珠单抗(pinatuzumab)、DCDT2980S、巴利昔单抗、达克利珠单抗、卡利尤单抗(camidanlumab)、伊诺莫单抗、ADCT-301、IMTOX-25、本妥昔单抗、伊妥木单抗(iratumumab)、AVE9633、林妥珠单抗、吉妥珠单抗、伐达妥昔单抗(vadastuximab)、奥乐妥珠单抗(otlertuzumab)、利洛托单抗(lilotomab)、那妥昔单抗(naratuximab)、BI836826、AGS67E、IMGN529、达雷木单抗、艾沙妥昔单抗(isatuximab)、迈泽妥单抗(mezagitamab)、菲泽妥单抗(felzartamab)、MOR202、MOR03087、阿仑单抗、洛沃妥珠单抗(lorvotuzumab mertansine)、沃瑟妥珠单抗(Vorsetuzumabafodotin)、SGN-70A、泊洛妥珠单抗(polatuzumab)、雷英妥昔单抗(indatuximab)、MDX-1203、米拉组单抗(milatuzumab)-多柔比星、IGN523、LOP-628、CSL360、塔妥珠单抗(talacotuzumab)、XmAb14045、KHK2823、BT062、贝兰他单抗莫福汀(belantamabmafodotin)、特立妥单抗(teclistamab)和埃罗妥珠单抗(elotuzumab)。
14.如权利要求13所述的靶向单元-接头-有效载荷缀合物，其中所述抗体选自由以下组成的组：依帕珠单抗、林妥珠单抗、考妥昔单抗、地宁妥珠单抗、朗妥昔单抗、阿仑单抗和塔妥珠单抗。
15.如权利要求9至14中任一项所述的靶向单元-接头-有效载荷缀合物，其中所述抗体为半胱氨酸工程化抗体。
16.如权利要求15所述的靶向单元-接头-有效载荷缀合物，其中所述抗体具有一个或多个选自由以下组成的组的重链氨基酸缺失或取代：A40、P41、A84、V89、S112、S113、A114、S115、T116、G118、V152、S153、N155、A168、Q171、C220、225、226、229、247、V278、N297、339、S371、375、376、S396和E400(根据Kabat)。
17.如权利要求15所述的靶向单元-接头-有效载荷缀合物，其中所述抗体具有一个或多个选自由以下组成的组的轻链氨基酸缺失或取代：V110、S114、S121、S127、143、147、A153、159、163、165、S168、V205和214(根据Kabat)。
18.如权利要求16或17所述的靶向单元-接头-有效载荷缀合物，其中IgG重链上的位置297(N297)处的天冬酰胺是缺失的或被取代的，IgG重链上的位置220(C220)、C226或C229处的半胱氨酸是缺失的或被取代的，或者IgG轻链(κ或λ)的位置214(C214)处的半胱氨酸是缺失的或被取代的。
19.如前述权利要求中任一项所述的靶向单元-接头-有效载荷缀合物，其中所述缀合物为
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
20.一种靶向单元-接头-有效载荷缀合物，其选自由以下组成的组
其中T为抗体；
其中T为抗体且n为8；
其中T为抗HER2抗体；
/>
其中T为曲妥珠单抗；
其中T为抗HER2抗体；
其中T为曲妥珠单抗；
其中T为抗CD33；
其中T为抗TYRP1抗体；
其中T为抗CD22抗体；
其中T为抗CD19抗体；
其中T为抗CD52抗体；
其中T为林妥珠单抗HC N296C；
其中T为林妥珠单抗HC N296C；
其中T为具有HC取代N296C的半胱氨酸工程化林妥珠单抗；
其中T为具有HC取代N296C的半胱氨酸工程化林妥珠单抗；
其中T为具有HC取代N299C的半胱氨酸工程化法兰妥单抗；
其中T为具有HC取代N299C的半胱氨酸工程化法兰妥单抗；
其中T为抗TYRP1抗体；
其中T为抗TYRP1抗体；以及
其中T为具有HC取代N301C的半胱氨酸工程化抗体嵌合TA99
其中T为具有HC取代N301C的半胱氨酸工程化抗体嵌合TA99；并且
其中在上式的任一者中，n≥1，或n在以下范围内：1至约20、或1至约15、或1至约10、或2至10、或2至6、或2至5、或2至4；或n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20；或n为8。
21.一种接头-有效载荷缀合物或靶向单元-接头-有效载荷缀合物，其中所述接头-有效载荷缀合物为式CBa-CBj中的任一者或所述靶向单元-接头-有效载荷缀合物为式TBa-TBj中的任一者
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其中在式Tba至TBj的任一者中，n≥1，或n在以下范围内：1至约20、或1至约15、或1至约10、或2至10、或2至6、或2至5、或2至4；或n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20；或n为8。
22.一种用于制备如前述权利要求中任一项所述的靶向单元-接头-有效载荷缀合物的方法，其包括将如前述权利要求中任一项所述的接头-有效载荷缀合物缀合到靶向单元，例如抗体，并且任选地经由接头缀合。
23.一种药物组合物，其包含如前述权利要求中任一项所述的接头-有效载荷缀合物、如前述权利要求中任一项所述的靶向单元-接头-有效载荷缀合物或能够通过如权利要求22所述的方法获得的靶向单元-接头-有效载荷缀合物。
24.根据权利要求23所述的药物组合物，其中所述药物组合物具有≥1或在以下范围内的药物-抗体比率：1至约20、或1至约15、或1至约10、或2至10、或2至6、或2至5、或2至4；或约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9、约10、约11、约12、约13、约14、约15、约16、约17、约18、约19或约20；或约1至约8、或约6至约8。
25.根据权利要求23或24所述的药物组合物，其中所述靶向单元-接头-有效载荷缀合物为由下式表示的靶向单元-接头-有效载荷缀合物
其中n在以下范围内：1至约20、或1至约15、或1至约10、或2至10、或2至6、或2至5、或2至4；或n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20；或n为8。
26.根据权利要求25所述的药物组合物，其中所述组合物具有在以下范围内的药物-抗体比率：约7.5至8.4、或约7.8-8.1。
27.根据权利要求2-21中任一项所述的靶向单元-接头-有效载荷缀合物或根据权利要求23-26中任一项所述的药物组合物，其用作药剂或用于治疗癌症。
28.根据权利要求27所述的供使用的靶向单元-接头-有效载荷缀合物或药物组合物，其中癌症的治疗还包括施用选自由以下组成的组的抗癌剂：阿卡替尼、三氧化砷、盐酸阿思尼布(asciminib hydrochloride)、阿基仑赛(axicabtagene ciloleucel)、氮杂胞苷、贝利司他(belinostat)、盐酸苯达莫司汀、硫酸博来霉素、硼替佐米、博舒替尼、brexucabtageneautoleucel、白消安、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、克拉屈滨、氯法拉滨、盐酸库潘尼西(copanlisib hydrochloride)、克里唑蒂尼、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、达沙替尼、盐酸柔红霉素、地尼白介素(denileukin diftitox)、地塞米松、盐酸多柔比星、杜韦利西布(duvelisib)、甲磺酸恩西地平、磷酸氟达拉滨、延胡索酸吉瑞替尼、马来酸格拉吉布、羟基脲、依鲁替尼、盐酸伊达比星、艾代拉里斯(idelalisib)、甲磺酸伊马替尼、艾伏尼布(ivosidenib)、来那度胺、利基迈仑赛(lisocabtagene maraleucel)、洛莫司汀(lomustine)、巯嘌呤、甲氨蝶呤钠、米多司他林、盐酸米托蒽醌、尼拉拉滨、尼罗替尼、纳武利尤单抗、高三尖杉酯碱(omacetaxine mepesuccinate)、普乐沙福(plerixafor)、盐酸帕纳替尼、普拉曲沙(pralatrexate)、强的松、盐酸丙卡巴肼、重组干扰素α-2b、利妥昔单抗、罗米地平、塞利尼索、塔法斯单抗-cxix、他拉福司(tagraxofusp-erzs)、氢溴酸泰泽司他(tazemetostat hydrobromide)、硫鸟嘌呤、司利弗明(tisagenlecleucel)、甲苯磺酸厄布利塞(umbralisib tosylate)、维奈托克(venetoclax)、纳维托克(navitoclax)、奥巴克拉(obatoclax)、硫酸长春花碱、伏立诺他、泽布替尼、吉瑞替尼、奎扎替尼(quizartinib)、克莱拉尼(crenolanib)和索拉非尼。
29.根据权利要求27或28所述的供使用的靶向单元-接头-有效载荷缀合物或药物组合物，其中所述靶向单元为能够结合选自由以下组成的组的靶分子的抗体：CD19、CD22、CD33、CD52和CD123，并且所述靶向单元-接头-有效载荷缀合物或所述药物组合物与FLT3抑制剂、IDH1抑制剂、IDH2抑制剂、BCL2抑制剂、KRAS抑制剂、NRAS抑制剂或MEK1/2抑制剂组合施用。
30.根据权利要求29所述的供使用的靶向单元-接头-有效载荷缀合物或药物组合物，其中所述FLT3抑制剂选自由以下组成的组：米多司他林、富马酸吉瑞替尼、奎扎替尼、克莱拉尼、舒尼替尼、帕纳替尼和索拉非尼，所述MEK1/2抑制剂为曲美替尼、考比替尼、司美替尼或贝美替尼，所述IDH1/IDH2抑制剂为恩西地平(enasidenib)或艾伏尼布，所述BCL2抑制剂为维奈托克、纳维托克或奥巴克拉，且/或所述KRAS抑制剂为索托拉西布(sotorasib)或阿达格拉西布(adagrasib)。
31.根据权利要求27-30中任一项所述的供使用的靶向单元-接头-有效载荷缀合物或药物组合物，其中所述靶向单元-接头-有效载荷缀合物或药物组合物与以下组合施用：三氧化砷、氮杂胞苷、盐酸柔红霉素、环磷酰胺、阿糖胞苷、马来酸格拉吉布、地塞米松、盐酸多柔比星、米多司他林、延胡索酸吉瑞替尼、奎扎替尼、克莱拉尼、舒尼替尼、帕纳替尼、索拉非尼、恩西地平、艾伏尼布、索托拉西布、阿达格拉西布、盐酸依托泊苷、吉妥珠单抗奥唑米星、盐酸依达比星、米多司他林、盐酸米托蒽醌、强的松、硫鸟嘌呤、维奈托克、纳维托克、奥巴克拉或硫酸长春新碱。
32.根据权利要求27-31中任一项所述的供使用的靶向单元-接头-有效载荷缀合物或药物组合物，其中所述癌症选自由以下组成的组：白血病、淋巴瘤、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、结直肠癌、胃癌、鳞状癌、小细胞肺癌、头颈癌、多重耐药性癌症、胶质瘤、黑色素瘤和睾丸癌。
33.一种在人或动物中治疗和/或调节肿瘤细胞生长和/或预防肿瘤细胞的方法，其中向所述人或所述动物施用有效量的如前述权利要求中任一项所述的接头-有效载荷缀合物、如前述权利要求中任一项所述的靶向单元-接头-有效载荷缀合物、或根据权利要求23-26中任一项所述的药物组合物。
34.如权利要求33所述的在人或动物中治疗和/或调节肿瘤细胞生长和/或预防肿瘤细胞的方法，其还包括施用选自由以下组成的组的抗癌剂：阿卡替尼、三氧化砷、盐酸阿思尼布、阿基仑赛、氮杂胞苷、贝利司他、盐酸苯达莫司汀、硫酸博来霉素、硼替佐米、博舒替尼、brexucabtagene autoleucel、白消安、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、克拉屈滨、氯法拉滨、盐酸库潘尼西、克里唑蒂尼、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、达沙替尼、盐酸柔红霉素、地尼白介素、地塞米松、盐酸多柔比星、杜韦利西布、甲磺酸恩西地平、磷酸氟达拉滨、延胡索酸吉瑞替尼、马来酸格拉吉布、羟基脲、依鲁替尼、盐酸伊达比星、艾代拉里斯、甲磺酸伊马替尼、艾伏尼布、来那度胺、利基迈仑赛、洛莫司汀、巯嘌呤、甲氨蝶呤钠、米多司他林、盐酸米托蒽醌、尼拉拉滨、尼罗替尼、纳武利尤单抗、高三尖杉酯碱、普乐沙福、盐酸帕纳替尼、普拉曲沙、强的松、盐酸丙卡巴肼、重组干扰素α-2b、利妥昔单抗、罗米地平、塞利尼索、塔法斯单抗-cxix、他拉福司、氢溴酸泰泽司他、硫鸟嘌呤、司利弗明、甲苯磺酸厄布利塞、维奈托克、纳维托克、奥巴克拉、硫酸长春花碱、伏立诺他、泽布替尼、吉瑞替尼、奎扎替尼、克莱拉尼和索拉非尼。
35.如权利要求33或34所述的在人或动物中治疗和/或调节肿瘤细胞生长和/或预防肿瘤细胞的方法，其中所述靶向单元能够结合选自由以下组成的组的靶分子的抗体：CD19、CD22、CD33、CD52和CD123，并且所述靶向单元-接头-有效载荷缀合物与FLT3抑制剂、IDH1抑制剂、IDH2抑制剂、BCL2抑制剂、KRAS抑制剂、NRAS抑制剂或MEK1/2抑制剂组合施用。
36.如权利要求33-35中任一项所述的在人或动物中治疗和/或调节肿瘤细胞生长和/或预防肿瘤细胞的方法，其中式LNAuM的靶向单元-接头-有效载荷缀合物
式LNAuM
且其中n为8，与FLT3抑制剂、IDH1抑制剂、IDH2抑制剂、BCL2抑制剂、KRAS抑制剂、NRAS抑制剂或MEK1/2抑制剂组合施用。
37.如权利要求35-36中任一项所述的在人或动物中治疗和/或调节肿瘤细胞生长和/或预防肿瘤细胞的方法，其中所述FLT3抑制剂选自由以下组成的组：米多司他林、富马酸吉瑞替尼、奎扎替尼、克莱拉尼、舒尼替尼、帕纳替尼和索拉非尼，所述MEK1/2抑制剂为曲美替尼、考比替尼、司美替尼或贝美替尼，所述IDH1/IDH2抑制剂为恩西地平或艾伏尼布，所述BCL2抑制剂为维奈托克、纳维托克或奥巴克拉，且/或所述KRAS抑制剂为索托拉西布或阿达格拉西布。
38.如权利要求36或37所述的在人或动物中治疗和/或调节肿瘤细胞生长和/或预防肿瘤细胞的方法，其中式LNAuM的靶向单元-接头-有效载荷缀合物与以下组合施用：三氧化砷、氮杂胞苷、盐酸柔红霉素、环磷酰胺、阿糖胞苷、马来酸格拉吉布、地塞米松、盐酸多柔比星、米多司他林、延胡索酸吉瑞替尼、奎扎替尼、克莱拉尼、舒尼替尼、帕纳替尼、索拉非尼、恩西地平、艾伏尼布、索托拉西布、阿达格拉西布、盐酸依托泊苷、吉妥珠单抗奥唑米星、盐酸依达比星、米多司他林、盐酸米托蒽醌、强的松、硫鸟嘌呤、维奈托克、纳维托克、奥巴克拉或硫酸长春新碱。
39.如权利要求33-38中任一项所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的组：白血病、淋巴瘤、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、结直肠癌、胃癌、鳞状癌、小细胞肺癌、头颈癌、多重耐药性癌症、胶质瘤、黑色素瘤和睾丸癌；且/或所述肿瘤细胞选自由以下组成的组：白血病细胞、淋巴瘤细胞、乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、卵巢癌细胞、结直肠癌细胞、胃癌细胞、鳞状癌细胞、小细胞肺癌细胞、头颈癌细胞、多重耐药性癌细胞和睾丸癌细胞。
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