CN116643005A - 一种基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法 - Google Patents
一种基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116643005A CN116643005A CN202310607440.2A CN202310607440A CN116643005A CN 116643005 A CN116643005 A CN 116643005A CN 202310607440 A CN202310607440 A CN 202310607440A CN 116643005 A CN116643005 A CN 116643005A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lipase
- solution
- surfactant
- sample
- content
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 title claims abstract description 99
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 title claims abstract description 99
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 title claims abstract description 98
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 title claims abstract description 98
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 title claims abstract description 70
- 229940086609 Lipase inhibitor Drugs 0.000 title claims abstract description 56
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 63
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims abstract description 32
- PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N triolein Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N 0.000 claims abstract description 31
- BAECOWNUKCLBPZ-HIUWNOOHSA-N Triolein Natural products O([C@H](OCC(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC)C(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC BAECOWNUKCLBPZ-HIUWNOOHSA-N 0.000 claims abstract description 30
- PHYFQTYBJUILEZ-UHFFFAOYSA-N Trioleoylglycerol Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 30
- 229940117972 triolein Drugs 0.000 claims abstract description 23
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 55
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims description 32
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 22
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 20
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 20
- AHLBNYSZXLDEJQ-FWEHEUNISA-N orlistat Chemical group CCCCCCCCCCC[C@H](OC(=O)[C@H](CC(C)C)NC=O)C[C@@H]1OC(=O)[C@H]1CCCCCC AHLBNYSZXLDEJQ-FWEHEUNISA-N 0.000 claims description 14
- 229960001243 orlistat Drugs 0.000 claims description 14
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 13
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 claims description 13
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 13
- 235000019626 lipase activity Nutrition 0.000 claims description 13
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 11
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 10
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 10
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 9
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 9
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 6
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 229940127470 Lipase Inhibitors Drugs 0.000 claims description 5
- XJWSAJYUBXQQDR-UHFFFAOYSA-M dodecyltrimethylammonium bromide Chemical group [Br-].CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C XJWSAJYUBXQQDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 4
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 claims 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 10
- 238000001035 drying Methods 0.000 abstract description 10
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 abstract description 2
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 2
- 206010033647 Pancreatitis acute Diseases 0.000 description 2
- 201000003229 acute pancreatitis Diseases 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 238000010146 3D printing Methods 0.000 description 1
- 108010051152 Carboxylesterase Proteins 0.000 description 1
- 102000013392 Carboxylesterase Human genes 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 108010058834 acylcarnitine hydrolase Proteins 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007641 inkjet printing Methods 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000004973 liquid crystal related substance Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 238000007805 zymography Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/38—Diluting, dispersing or mixing samples
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供一种基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法。本发明提供的检测方法是基于不同浓度测试溶液液滴蒸发后的面积不同来检测目标物(表面活性剂、脂肪酶或脂肪酶抑制剂)的含量。测试溶液中，表面活性剂(待测样品表面活性剂或者脂肪酶酶解三油酸甘油酯产生的表面活性剂)含量高，对应的液滴干燥后的面积大；测试溶液中，表面活性剂含量低，对应的液滴干燥后的面积小；从而将测试溶液中表面活性剂浓度和液滴干燥面积联系起来，进而检测目标物。本发明方法在无需复杂的仪器和操作程序的情况下，实现对表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂的高通量、快速、有效检测。
Description
技术领域
本发明涉及一种基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法，属于检测分析技术领域。
背景技术
表面活性剂是具有亲水头基和疏水尾链的两亲物质，可以使目标溶液的表面张力明显下降。由于表面活性剂分子允许定制设计官能团、电荷特性和链长，它们在传感方面有广泛的应用，包括电化学、荧光、比色和基于液晶的方法，通常将表面活性剂介导的化学和生物事件转换成可检测的信号。这些方法为生物医学诊断、食品安全、环境监测和药物筛选方面的应用提供了极为广阔的前景。在此，开发新型的表面活性剂介导的传感方法是非常有吸引力的。
液滴蒸发是一种广泛的现象，涉及许多行业和技术，如喷墨打印，DNA提取，以及生物材料的生产。溶液的表面张力随表面活性剂的链长和浓度而变化，从而导致液滴接触面积和接触角的不同。然而，这种现象很少被应用于监测生物化学相互作用，这限制了它在生物传感中的应用。因此，开发一个基于表面活性剂液滴蒸发的传感平台对于以简单、方便、经济的方式检测各种分析物是很有吸引力的。
以检测脂肪酶(Lipase)为例，脂肪酶是一种羧酸酯水解酶，可以逐渐将三油酸甘油酯水解成甘油和脂肪酸，对脂肪的分解至关重要。在正常情况下，胰腺分泌的脂肪酶主要进入肠道，用于分解甘油三酯，而进入血液中的量很少。在急性胰腺炎发生时，由于胰腺细胞坏死或细胞通透性增高，此时胰腺分泌的脂肪酶进入血液中增多，因此，在临床诊断中，测定血清脂肪酶对诊断急性胰腺炎极具参考价值。同时，脂肪酶抑制剂常用于治疗肥胖症，奥利司他是唯一被美国食品和药物管理局批准作为减肥药物的脂肪酶抑制剂。因此需要能检测脂肪酶活性抑制率的技术手段。
到目前为止，已经开发了几种检测脂肪酶及其抑制剂的分析方法，包括比色法，荧光法和酶谱法。然而，这些方法中的大多数通常需要复杂的操作程序，冗长的检测时间，或专业设备。因此，开发一个简单、方便、经济的检测脂肪酶及其抑制剂的方法是非常必要的。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供一种基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法。本发明方法在无需复杂的仪器和操作程序的情况下，实现对表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂的高通量、快速、有效检测。
本发明的技术方案如下：
一种基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法，包括步骤：
(1)标准溶液的配制：将表面活性剂、脂肪酶或脂肪酶抑制剂的标准品溶解于PBS缓冲溶液中，制得不同浓度的表面活性剂、脂肪酶或脂肪酶抑制剂的标准溶液；
(2)标准曲线的测定：将不同浓度的表面活性剂的标准液、脂肪酶酶解液或脂肪酶抑制剂酶解液分别滴加至底板上，当底板上的液滴完全蒸发后，测试底板上液滴印记的面积；根据液滴印记的面积和对应溶液浓度的对数值，绘制标准曲线；
(3)待测样品含量的测定：制备待测样品的测试溶液，滴加至底板上，当底板上的液滴完全蒸发后，测试底板上液滴印记的面积；然后根据步骤(2)中的标准曲线计算得到待测样品中表面活性剂、脂肪酶或脂肪酶抑制剂的含量。
根据本发明优选的，步骤(1)中，表面活性剂为十二烷基三甲基溴化铵(DTAB)、十二烷基硫酸钠(SDS)或十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)；表面活性剂的标准溶液的浓度取值范围为0.01～1mmol/L。
根据本发明优选的，步骤(1)中，脂肪酶抑制剂为奥利司他；脂肪酶抑制剂的标准溶液的浓度取值范围为0.001～100μmol/L。
根据本发明优选的，步骤(1)中，脂肪酶的标准溶液的浓度取值范围为5～50000ng/mL。
根据本发明优选的，步骤(1)中，PBS缓冲溶液的pH为7-8，优选为7.4。
根据本发明优选的，步骤(2)中，不同浓度的脂肪酶酶解液的制备方法包括步骤：分别向步骤(1)制得的不同浓度的脂肪酶的标准溶液中加入三油酸甘油酯(GT)，在20～60℃下孵育25～55min，得到不同浓度的脂肪酶酶解液。
优选的，三油酸甘油酯的体积为脂肪酶的标准溶液的体积的0.01～0.20％。本发明三油酸甘油酯为过量，以使在本发明脂肪酶浓度和孵育条件下不能完全反应。
根据本发明优选的，步骤(2)中，不同浓度的脂肪酶抑制剂酶解液的制备方法包括步骤：分别向步骤(1)制得的不同浓度的脂肪酶抑制剂的标准溶液中加入脂肪酶，溶解后得到混合液；混合液在20～60℃下孵育25～55min，得到孵育液；然后加入三油酸甘油酯(GT)，在20～60℃下孵育25～55min，得到不同浓度的脂肪酶抑制剂酶解液。
优选的，混合液中脂肪酶的浓度为50000ng/mL。
优选的，三油酸甘油酯的体积为孵育液体积的0.01～0.20％。
根据本发明优选的，步骤(2)中，每种浓度下的表面活性剂的标准液、脂肪酶酶解液或脂肪酶抑制剂酶解液多次滴加至底板上以形成多个球形液滴，当底板上的液滴完全蒸发后，测试底板上各液滴印记的面积，取平均值；然后根据液滴印记的平均面积和对应溶液浓度的对数值，绘制标准曲线。
根据本发明优选的，步骤(2)中，根据液滴印记的面积计算脂肪酶活性，然后根据脂肪酶活性和对应溶液浓度的对数值绘制脂肪酶抑制剂的标准曲线。
根据本发明，步骤(3)中，待测样品为表面活性剂、脂肪酶或脂肪酶抑制剂的固体样品或液体样品。
根据本发明优选的，步骤(3)中，待测样品为表面活性剂时，测试溶液的制备方法包括步骤：将固体待测样品使用PBS缓冲溶液溶解即得；或者，液体待测样品经PBS缓冲溶液稀释即得；或者，液体待测样品直接作为测试溶液；所述PBS缓冲溶液的pH为7-8，优选为7.4。
根据本发明优选的，步骤(3)中，待测样品为脂肪酶时，测试溶液的制备方法包括步骤：将固体待测样品使用PBS缓冲溶液溶解得待测样品溶液；或者，液体待测样品经PBS缓冲溶液稀释得待测样品溶液；或者，液体待测样品直接作为待测样品溶液；然后，加入三油酸甘油酯(GT)，在20～60℃下孵育25～55min，得到测试溶液。
优选的，三油酸甘油酯的体积为待测样品溶液体积的0.01～0.20％。
根据本发明优选的，步骤(3)中，待测样品为脂肪酶抑制剂时，测试溶液的制备方法包括步骤：将固体待测样品溶于二甲基亚砜(DMSO)中，随后用PBS缓冲溶液稀释得到待测样品溶液；或者，将液体待测样品用PBS缓冲溶液稀释得到待测样品溶液；或者，将液体待测样品直接作为待测样品溶液；加入脂肪酶，溶解后得到混合液；混合液在20～60℃下孵育25～55min，得到孵育液；然后加入三油酸甘油酯(GT)，在20～60℃下孵育25～55min，得到测试溶液。
优选的，混合液中脂肪酶的浓度为50000ng/mL。
优选的，三油酸甘油酯的体积为孵育液体积的0.01～0.20％。
根据本发明优选的，步骤(3)中，待测样品的测试溶液多次滴加至底板上以形成多个球形液滴，当底板上的液滴完全蒸发后，测试底板上各液滴印记的面积，取平均值；然后根据步骤(2)中的标准曲线，利用液滴印记的平均面积计算得到待测样品中表面活性剂、脂肪酶或脂肪酶抑制剂的含量。
根据本发明优选的，步骤(3)中，通过液滴印记的面积计算脂肪酶活性，然后根据步骤(2)中的标准曲线计算得到待测样品中脂肪酶抑制剂的含量。
根据本发明优选的，步骤(2)、(3)中，底板为疏水玻璃板。所述疏水玻璃板可市购获得或按现有技术制备得到。
根据本发明优选的，步骤(2)、(3)中，滴加量为1～5μL；滴加至底板上以形成一个球形液滴。
根据本发明优选的，步骤(2)、(3)中，蒸发温度为室温。
根据上述方法可开发各种各样的便携设备，如便携设备包括便携显微镜、3D打印装置(提供一个封闭的空间)；可根据上述方法开发数据分析系统，通过输入相关数据直接得到表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂的含量。
本发明的技术特点及有益效果
1、本发明提供的检测方法是基于不同浓度测试溶液液滴蒸发后的面积不同来检测目标物(表面活性剂、脂肪酶或脂肪酶抑制剂)的含量。测试溶液中，表面活性剂(待测样品表面活性剂或者脂肪酶酶解三油酸甘油酯产生的表面活性剂)含量高，对应的液滴干燥后的面积大；测试溶液中，表面活性剂含量低，对应的液滴干燥后的面积小；从而将测试溶液中表面活性剂浓度和液滴干燥面积联系起来，进而检测目标物，为以后的临床诊断和应用提供了发展前景。
2、检测表面活性剂的含量时，将表面活性剂或待测样品直接溶于PBS中，然后直接滴加至底板上，测试底板上液滴印记的面积。检测脂肪酶时，需要将脂肪酶PBS溶液或待测溶液和三油酸甘油酯混合孵育，使发生酶解反应，产生表面活性剂物质，从而通过表面活性剂物质将脂肪酶浓度与液滴干燥面积联系起来。检测脂肪酶抑制剂时，由于奥利司他对脂肪酶活性有抑制作用，酶解反应被抑制；脂肪酶的活性决定酶解反应的程度以及生成的表面活性剂的量，进而通过表面活性剂物质将脂肪酶抑制剂浓度与液滴干燥后的面积建立起联系。
3、本发明方法能够在不依赖复杂仪器的情况下，实现快速、实时、简单、经济、无标记、高通量(可以同时检测多个样品)、有效、准确的检测表面活性剂、脂肪酶或脂肪酶抑制剂的含量；脂肪酶定量检测限可低至1.94ng/mL。
附图说明
图1为实施例1中表面活性剂溶液浓度与液滴干燥面积之间关系的柱状图。
图2为实施例2中脂肪酶标准溶液浓度的对数值与液滴干燥面积之间关系的标准曲线。
图3为实施例3中奥利司他标准溶液浓度的对数值与脂肪酶活性之间关系的标准曲线。
具体实施方式
下面结合实施例及说明书附图对本发明的技术方案做进一步阐述，但本发明保护范围不限于此。同时下述的实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂、材料和设备，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1
测试表面活性剂含量与液滴干燥后面积(液滴印记的面积)的关系，步骤如下：
(1)表面活性剂溶液的配制：将DTAB、SDS、CTAB分别溶解于pH为7.4的PBS缓冲溶液中，制得浓度分别为0.01mM、0.1mM、1mM标准溶液。
(2)液滴干燥后面积的测定：分别取1μL上述标准溶液滴加在疏水玻璃上，以形成一个球形液滴；当液滴完全蒸发后开始记录液滴干燥后的面积；每种浓度、每种表面活性剂按上述测试多次，同种表面活性剂、同种浓度下测试的面积取平均值；然后根据液滴干燥后的面积和对应的表面活性剂溶液浓度，绘制柱状图，如图1所示。
由图可进一步证明，随着表面活性剂浓度的增加，液滴干燥后的面积逐渐增大。
实施例2、检测脂肪酶含量
一种基于液滴蒸发检测脂肪酶含量的方法，步骤如下：
(1)脂肪酶标准溶液的配制：将脂肪酶标准品溶解于pH为7.4的PBS缓冲溶液中，制得浓度分别为5ng/mL、50ng/mL、500ng/mL、5000ng/mL、50000ng/mL的脂肪酶标准溶液；
(2)脂肪酶标准曲线的测定：分别向1mL步骤(1)制得的不同浓度的脂肪酶标准溶液中加入1μL三油酸甘油酯，在30℃下孵育39min，得到不同浓度的脂肪酶酶解液；然后分别取1μL不同浓度的脂肪酶酶解液滴加在疏水玻璃上，以形成一个球形液滴，当液滴室温完全蒸发后记录液滴干燥后的面积即液滴印记的面积；每种浓度下的脂肪酶酶解液多次滴加至底板上以形成多个球形液滴，当底板上的液滴室温完全蒸发后，测试底板上各液滴印记的面积，取平均值；然后根据液滴印记的平均面积和对应的脂肪酶标准溶液浓度的对数值(Lg脂肪酶标准溶液浓度)，绘制标准曲线，如图2所示。
(3)待测样品脂肪酶含量的测定：将液体待测样品使用pH为7.4的PBS缓冲溶液稀释，得到待测样品溶液(或者，液体待测样品直接作为待测样品溶液)；取1mL待测样品溶液，加入1μL三油酸甘油酯，在30℃下孵育39min，得到测试溶液。然后取1μL测试溶液滴加在疏水玻璃上，以形成一个球形液滴，当液滴室温完全蒸发后记录液滴干燥后的面积即液滴印记的面积；测试溶液多次滴加至底板上以形成多个球形液滴，当底板上的液滴室温完全蒸发后，测试底板上各液滴印记的面积，取平均值；然后根据步骤(2)中的标准曲线(图2)，利用液滴印记的平均面积计算得到待测样品中脂肪酶的含量。
液体待测样品为已知脂肪酶含量的样品，已知液体待测样品中脂肪酶的含量为100ng/mL。经本发明方法测试得到样品中脂肪酶含量为98.9ng/mL。由上述，本发明方法能够准确地测试出样品中脂肪酶的含量。
实施例3、检测脂肪酶抑制剂奥利司他含量
一种基于液滴蒸发检测脂肪酶抑制剂含量的方法，步骤如下：
(1)脂肪酶抑制剂标准溶液的配制：将脂肪酶抑制剂奥利司他标准品溶解于pH为7.4的PBS缓冲溶液中，制得浓度分别为0.001μM、0.005μM、0.01μM、0.05μM、0.1μM、1μM、5μM、10μM、50μM的奥利司他标准溶液；
(2)奥利司他标准曲线的测定：分别向500μL步骤(1)制得的不同浓度的奥利司他标准溶液中加入脂肪酶(溶液中脂肪酶的浓度为50000ng/mL)，溶解后，在30℃下孵育39min，孵育完成后得到孵育液；继续加入1μL的三油酸甘油酯，在30℃下孵育39min，得到不同浓度的脂肪酶抑制剂酶解液。然后分别取1μL不同浓度的脂肪酶酶解液滴加在疏水玻璃上，以形成一个球形液滴，当液滴室温完全蒸发后记录液滴干燥后的面积即液滴印记的面积；每种浓度下的脂肪酶酶解液多次滴加至底板上以形成多个球形液滴，当底板上的液滴室温完全蒸发后，测试底板上各液滴印记的面积，取平均值，计为A(即加抑制剂的液滴印记面积)。
取500μL pH为7.4的PBS缓冲溶液，加入脂肪酶(溶液中脂肪酶的浓度为50000ng/mL)，加入1μL的三油酸甘油酯，在30℃下孵育39min，得到混合液。然后分别取1μL混合液滴加在疏水玻璃上，以形成一个球形液滴，当液滴室温完全蒸发后记录液滴干燥后的面积即液滴印记的面积；混合液多次滴加至底板上以形成多个球形液滴，当底板上的液滴室温完全蒸发后，测试底板上各液滴印记的面积，取平均值，记为B(即不加抑制剂的液滴印记面积)。
然后根据上述液滴印记的平均面积A、B和对应的奥利司他标准溶液浓度的对数值(Lg奥利司他标准溶液浓度)，绘制标准曲线，如图3所示。其中，纵坐标为脂肪酶活性，计算方法为：(B-A)/B。
(3)待测样品奥利司他含量的测定：将液体待测样品用pH为7.4的PBS缓冲溶液稀释得到待测样品溶液(或者液体待测样品直接作为待测样品溶液)；取500μL待测样品溶液加入脂肪酶(溶液中脂肪酶的浓度为50000ng/mL)，溶解后，在30℃下孵育39min，孵育完成后得到孵育液；继续加入1μL的三油酸甘油酯，在30℃下孵育39min，得到测试溶液。然后取1μL测试溶液滴加在疏水玻璃上，以形成一个球形液滴，当液滴室温完全蒸发后记录液滴干燥后的面积即液滴印记的面积；测试溶液多次滴加至底板上以形成多个球形液滴，当底板上的液滴室温完全蒸发后，测试底板上各液滴印记的面积，取平均值，记为B1。计算脂肪酶活性，即：脂肪酶活性＝(B1-A)/B1；然后根据步骤(2)中的标准曲线(图3)，计算得到待测样品中脂肪酶抑制剂奥利司他的含量。
以上所述仅为本发明的具体实施方式。本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求所界定的保护范围为准。
Claims (10)
1.一种基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法，包括步骤：
(1)标准溶液的配制：将表面活性剂、脂肪酶或脂肪酶抑制剂的标准品溶解于PBS缓冲溶液中，制得不同浓度的表面活性剂、脂肪酶或脂肪酶抑制剂的标准溶液；
(2)标准曲线的测定：将不同浓度的表面活性剂的标准液、脂肪酶酶解液或脂肪酶抑制剂酶解液分别滴加至底板上，当底板上的液滴完全蒸发后，测试底板上液滴印记的面积；根据液滴印记的面积和对应溶液浓度的对数值，绘制标准曲线；
(3)待测样品含量的测定：制备待测样品的测试溶液，滴加至底板上，当底板上的液滴完全蒸发后，测试底板上液滴印记的面积；然后根据步骤(2)中的标准曲线计算得到待测样品中表面活性剂、脂肪酶或脂肪酶抑制剂的含量。
2.根据权利要求1所述基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法，其特征在于，步骤(1)中，包括以下条件中的一项或多项：
i、表面活性剂为十二烷基三甲基溴化铵(DTAB)、十二烷基硫酸钠(SDS)或十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)；表面活性剂的标准溶液的浓度取值范围为0.01～1mmol/L；
ii、脂肪酶抑制剂为奥利司他；脂肪酶抑制剂的标准溶液的浓度取值范围为0.001～100μmol/L；
iii、脂肪酶的标准溶液的浓度取值范围为5～50000ng/mL；
iv、PBS缓冲溶液的pH为7-8，优选为7.4。
3.根据权利要求1所述基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法，其特征在于，步骤(2)中，不同浓度的脂肪酶酶解液的制备方法包括步骤：分别向步骤(1)制得的不同浓度的脂肪酶的标准溶液中加入三油酸甘油酯(GT)，在20～60℃下孵育25～55min，得到不同浓度的脂肪酶酶解液；
优选的，三油酸甘油酯的体积为脂肪酶的标准溶液的体积的0.01～0.20％。
4.根据权利要求1所述基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法，其特征在于，步骤(2)中，不同浓度的脂肪酶抑制剂酶解液的制备方法包括步骤：分别向步骤(1)制得的不同浓度的脂肪酶抑制剂的标准溶液中加入脂肪酶，溶解后得到混合液；混合液在20～60℃下孵育25～55min，得到孵育液；然后加入三油酸甘油酯(GT)，在20～60℃下孵育25～55min，得到不同浓度的脂肪酶抑制剂酶解液；
优选的，混合液中脂肪酶的浓度为50000ng/mL；
优选的，三油酸甘油酯的体积为孵育液体积的0.01～0.20％。
5.根据权利要求1所述基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法，其特征在于，步骤(2)中，包括以下条件中的一项或多项：
i、每种浓度下的表面活性剂的标准液、脂肪酶酶解液或脂肪酶抑制剂酶解液多次滴加至底板上以形成多个球形液滴，当底板上的液滴完全蒸发后，测试底板上各液滴印记的面积，取平均值；然后根据液滴印记的平均面积和对应溶液浓度的对数值，绘制标准曲线；
ii、根据液滴印记的面积计算脂肪酶活性，然后根据脂肪酶活性和对应溶液浓度的对数值绘制脂肪酶抑制剂的标准曲线。
6.根据权利要求1所述基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法，其特征在于，步骤(3)中，待测样品为表面活性剂时，测试溶液的制备方法包括步骤：将固体待测样品使用PBS缓冲溶液溶解即得；或者，液体待测样品经PBS缓冲溶液稀释即得；或者，液体待测样品直接作为测试溶液；所述PBS缓冲溶液的pH为7-8，优选为7.4。
7.根据权利要求1所述基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法，其特征在于，步骤(3)中，待测样品为脂肪酶时，测试溶液的制备方法包括步骤：将固体待测样品使用PBS缓冲溶液溶解得待测样品溶液；或者，液体待测样品经PBS缓冲溶液稀释得待测样品溶液；或者，液体待测样品直接作为待测样品溶液；然后，加入三油酸甘油酯(GT)，在20～60℃下孵育25～55min，得到测试溶液；
优选的，三油酸甘油酯的体积为待测样品溶液体积的0.01～0.20％。
8.根据权利要求1所述基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法，其特征在于，步骤(3)中，待测样品为脂肪酶抑制剂时，测试溶液的制备方法包括步骤：将固体待测样品溶于二甲基亚砜(DMSO)中，随后用PBS缓冲溶液稀释得到待测样品溶液；或者，将液体待测样品用PBS缓冲溶液稀释得到待测样品溶液；或者，将液体待测样品直接作为待测样品溶液；加入脂肪酶，溶解后得到混合液；混合液在20～60℃下孵育25～55min，得到孵育液；然后加入三油酸甘油酯(GT)，在20～60℃下孵育25～55min，得到测试溶液；
优选的，混合液中脂肪酶的浓度为50000ng/mL；
优选的，三油酸甘油酯的体积为孵育液体积的0.01～0.20％。
9.根据权利要求1所述基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法，其特征在于，步骤(3)中，包括以下条件中的一项或多项：
i、待测样品的测试溶液多次滴加至底板上以形成多个球形液滴，当底板上的液滴完全蒸发后，测试底板上各液滴印记的面积，取平均值；然后根据步骤(2)中的标准曲线，利用液滴印记的平均面积计算得到待测样品中表面活性剂、脂肪酶或脂肪酶抑制剂的含量；
ii、通过液滴印记的面积计算脂肪酶活性，然后根据步骤(2)中的标准曲线计算得到待测样品中脂肪酶抑制剂的含量。
10.根据权利要求1所述基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法，其特征在于，步骤(2)、(3)中，包括以下条件中的一项或多项：
i、底板为疏水玻璃板；
ii、滴加量为1～5μL；滴加至底板上以形成一个球形液滴；
iii、蒸发温度为室温。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310607440.2A CN116643005A (zh) | 2023-05-26 | 2023-05-26 | 一种基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310607440.2A CN116643005A (zh) | 2023-05-26 | 2023-05-26 | 一种基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116643005A true CN116643005A (zh) | 2023-08-25 |
Family
ID=87639311
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310607440.2A Pending CN116643005A (zh) | 2023-05-26 | 2023-05-26 | 一种基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116643005A (zh) |
-
2023
- 2023-05-26 CN CN202310607440.2A patent/CN116643005A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Werner et al. | Ultramicro determination of serum triglycerides by bioluminescent assay. | |
| US20060160166A1 (en) | Rapid triglyceride assay for use in pulp pitch control | |
| CN104237193B (zh) | 一种检测焦磷酸酶的荧光传感器及其制备方法 | |
| Deng et al. | Enzymatic reaction modulated synthesis of quantum dots for visual detection of cholinesterase activity and inhibitor | |
| CN110793929A (zh) | 一种基于多酶抑制的农药残留检测和区分方法 | |
| Volpe et al. | A bienzyme electrochemical probe for flow injection analysis of okadaic acid based on protein phosphatase-2A inhibition: an optimization study | |
| CN110923292B (zh) | 一种血清脂肪酶检测试剂盒及其制备方法与应用 | |
| CN116643005A (zh) | 一种基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法 | |
| JP4542541B2 (ja) | 安定化コリンエステラーゼ基質溶液 | |
| WO2007011778A2 (en) | Use of raman spectroscopy in enzyme activity assays | |
| Zdražilová et al. | Kinetics of total enzymatic hydrolysis of acetylcholine and acetylthiocholine | |
| Gibson et al. | A potentiometric assay of cholinesterase | |
| Campanella et al. | A new enzyme inhibition sensor for organophosphorus pesticides analysis | |
| US4347313A (en) | Analytical determination of lipase | |
| JP2001514903A (ja) | 酵素的な共有結合の形成および切断をアッセイする方法 | |
| CN110294720B (zh) | 用于检测丁酰胆碱酯酶的荧光探针及其应用 | |
| Kuusk et al. | Transient phase calibration of tyrosinase-based carbaryl biosensor | |
| CN111545257A (zh) | 一种多功能微流控芯片及其制备和应用 | |
| Kučera et al. | An enzymatic method for methanol quantification in methanol/ethanol mixtures with a microtiter plate fluorometer | |
| Lapierre et al. | Developing a fluorometric urease activity microplate assay suitable for automated microbioreactor experiments | |
| Lomolino et al. | A quantitative fluorescence-based lipase assay | |
| Li et al. | Resorcinol monophosphate ester as a new substrate for fluorometric detection of alkaline phosphatase activity in milk products | |
| US11162128B1 (en) | Mass spectrometry ionization based-assay for the detection of enzyme activity and/or presence | |
| Wolfbeis | Optical sensors in flow injection analysis | |
| Goriushkina et al. | Application of amperometric enzyme biosensors for wine and must analysis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |