CN116615216A - 用于鉴定和治疗微粒相关疾病和病症的组合物和方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于在对象中鉴定和治疗特征性MP相关疾病和病症的组合物和方法。特别地，本发明的治疗方法包括在对象中施用凝溶胶蛋白剂以产生针对特征性MP相关疾病或病症的治疗作用。

Description

用于鉴定和治疗微粒相关疾病和病症的组合物和方法

相关申请

本申请根据35U.S.C.§119(e)要求于2020年9月23日提交的美国临时申请序列号63/082,277和于2021年2月12日提交的美国临时申请序列号63/148,808的权益，其各自的公开内容通过引用整体并入本文。

政府利益

本发明是在由美国海军研究办公室授予的N00014-20-1-2641和N000-14-16-1-2868的政府支持下进行的。政府对本发明有一定的权利。

技术领域

在一些方面中，本发明涉及用于鉴定和治疗特征性微粒相关疾病或病症(signature microparticle-associated disease or condition)的组合物和方法。

背景技术

呼吸时吸入的惰性气体以与环境压力成比例地被组织吸收。当压力降低时，由于气体空化核(gas cavitation nuclei)的存在，因此从组织释放的一些气体形成气泡[参见例如Ljubkovic M et al.，Med Sci Sports Exerc 43：990-995，2011；Ljubkovic M etal.，J Appl Physiol 109：1670-1674，2010；Lu C-H et al.，Arch Biochem Biophys 529：146-156，2013]。

气泡作为减压病(decompression sickness，DCS)刺激剂(inciting agent)的中心地位被广泛接受。然而，因为基于超声研究大多数减压过程产生无症状的血源性气泡，因此加速DCS的其他因素正在研究中[参见例如

Madden D et al.，Med Sci Sports Exerc 46：1928-1935，2014；Madden D etal.，Eur J Appl Physiol 114：1955-1961，2014；Madden LA et al.，Aviat SpaceEnviron Med 81：41-51，2010]。高压气体也触发称为微粒(microparticle，MP)的小囊泡的形成[参见例如Miles LA et al.，J Neurosci 26：13017-13024，2006]。在暴露于高气压的小鼠和人中，血源性MP的数目加倍，并且在减压之后进一步上升[参见例如

Moroianu J et al.，PNAS 90：3815-3819，1993；Ordija CM et al.，Am JPhysiol Lung Cell Mol Physiol 312：L1018-L1028，2017；Osborn TM et al.，AmJPhysiol Cell Physiol 292：C1323-1330，2007；Osborn TM et al.，Arthritis Res Ther10：R117，2008；Overmyer KA et al.，medRxiv https：//doi.org/10.1101/2020.07.17.20156513：2020；Pardridge WM et al.，J Cereb Blood Flow Metab 9：675-680，1989；Peddada N et al.，Med Hypotheses 778：203-210，2012；PhilipRB.UnderseaBiomedRes 1：117-150，1974；Piktel E et al.，Int J Mol Sci 19：2516∶1-33，2018；Pontier JM et al.，4ppl Physiol Nutr Metab 37：1-5，2012]。

鼠研究表明，MP在高压气体病理生理和可能的气泡成核中发挥作用[参见例如Piktel E et al.，Int J Mol Sci 19：2516：1-33，2018；Por SB et al.，J HistochemCytochem 39：981-985_，1991；Rothmeier AS et al.，J Clin Invest 125：1471-1484，2015；Smalheiser NR.Mol Biol Cell 7：1003-1014，1996)。

减压病是由于气泡(通常是氮气)溶解到个体组织中而导致的病症。当个体暴露于相对快速下降的环境压力时，通常会引起溶解。

减压病可由多种因素引起，但最常见的是：从深度水肺潜水(scuba dive)(通常深度大于约10米或约33英尺)快速上升、在非承压舱下在飞机中的快速上升、飞机中压力的快速降低(例如，在高海拔处座舱压力的降低)、水下隧道作业(tunnel work)(例如沉箱作业(caisson work))、飞行时增压/脱氮不充分、以及在水肺潜水之后不久飞至高海拔。

在这些因素中，减压病最常见的原因是由水肺潜水员从相对深的潜水上升得太快而发生。在深潜水期间，潜水员随着其下潜而暴露于越来越高的环境压力。由于较高的压力，潜水员呼吸气体中所包含的惰性气体(例如氮气和氦气)以比正常情况下更高的浓度吸收到身体组织中。当潜水员从潜水中上升时，环境压力降低，这导致吸收的气体从溶液中出来并在血液中形成“微气泡”。如果缓慢完成上升，则微气泡将通过肺(即呼气)安全地离开身体。然而，在快速上升期间，并不是所有的微气泡都会离开身体，从而导致减压病。

减压病的主要治疗是高压氧治疗。高压氧治疗是患者在高于正常大气压的压力下呼吸100％的氧气的治疗模式。通常，高压氧治疗涉及全身性输送比大气压高2-3倍的氧气。在压力之下的氧气降低了患者中的微泡尺寸，产生了用于氮气排出的压力梯度，并迫使氧气进入缺血组织中。

高压氧治疗的缺点还在于，在较小的单容纳室(single occupancy chamber)中，使患者处于相对隔离的状态。这是患有重症减压病的患者或者除减压病之外还患有需要医务人员与患者密切接近的病症(例如，具有需要缝合的伤口)的患者特别关心的问题。小室成为屏障，阻止医务人员密切监视患者，并且阻止医务人员在患者接受HBO治疗时进行医学服务。对减压病的其他治疗也是已知的，例如通过面罩、右旋糖酐和标准置换液在大气压下100％吸氧来纠正低血容量。这些治疗在独立使用的情况下并不完全有效。相反，这些替代治疗是辅助治疗，即与主要治疗一起使用来辅助主要治疗的治疗。

炎症应答在减压病的病理生理中发挥作用[参见例如

Bigley NJ et al.，J Interferon Cytokine Res 28：55-63，2008；Khatri N etal.，J Diab Res 2014：152075：2014；Miles LA et al.,J Neurosci 26：13017-13024，2006；Overmyer KA et al.，medRxiv https：//doi.org/10.1101/2020.07.17.20156513：2020]。血浆凝溶胶蛋白(Plasma gelsolin，pGSN)是细胞质肌动蛋白结合蛋白的84kDa分泌同种型[参见例如Bucki R etal.，Am J Physiol Cell Physiol 299：C1516-1523，2010]。其使循环丝状肌动蛋白(F-肌动蛋白)解聚，结合/螯合(sequester)一系列炎性剂，并且其附着至微生物将加速吞噬作用和巨噬细胞杀菌作用[参见例如

Brett KD et al.，Sci ReP in press：https：//doi.org/10.1038/s41598-41019-49924-41591，2019；Bucki R et al.，J Immunol 181：4936-4944，2008；Bucki R etal.，Biochemistry 44：9590-9597,2005；Ljubkovic M et al，J Appl Physiol 109：1670-1674，2010；Lu C-H et al.，Arch Biochem Biophys 529：146-156，2013；Thom SR et al.，J Appl Physiol 119：427-434，2015；Thom SR et al.，J Biol Chem 292：18312-18324，2017]。

呼吸时吸入的惰性气体与环境压力成比例地被组织吸收，并且当压力降低时，由于气体空化核的存在，一些从组织释放的气体形成气泡[参见例如D.J.Kwiatkowski DJ etal.，Nature 323：455-458，1986；Thom SR et al.，J Appl Physiol(1985)125：1339-1348，2018；Thom SR et al.J Appl Physiol 112：1268-1278，2012]。

气泡作为减压病的刺激因素的中心位置被广泛接受，然而大多数减压过程产生无症状的血源性气泡[参见例如Cypryk W et al.，

Front Immunol 9：2188，2018；Kinosian HJ et al.，Biochemistry 35：16550-16556，1996；Lee PS et al.，PLoS One 3：e3712，2008]。

高压气体也触发称为微粒(MP)的小囊泡的形成[参见例如Philip RB，UnderseaBiomedRes 1：117-150，1974]。在暴露于高气压的小鼠和人中的血源性微粒的数目加倍，并且在减压之后进一步上升[参见例如Bohgaki M et al.，J Cell Mol Med 15：141-151，2011；Lind SE et al.，Am Rev Respir Dis 138：429-434，1988；Little T etal.，Aviat Space Environ Med 79：87-93，2008；Ljubkovic M et al.，Med Sci SportsExenc 43：990-995，2011；Ordija CM et al.，Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol312：L1018-L1028、2017；Pontier JM et al.，Appl Physiol Nutr Metab 37：1-5，2012；Por SB et al.，J Histochem Cytochem 39：981-985，1991；Rothmeier AS et al.，J ClinInvest 125：1471-1484，2015；Smalheiser NR，Mol Biol Cell 7：1003-1014，1996；ThomSR et al.，J Appl Physiol(1985)126：1006-1014，2019]。

触发微粒形成的途径也激活负责产生成熟白介素(IL)-1β的NOD样受体含pyrin 3(NOD-like receptor，pyrin containing 3，NLRP3)炎性体[参见例如Philip RB，UnderseaBiomed Res 1：117-150，1974；Piktel E et al.，Int J Mol Sci 19：2516：1-33,2018]。响应于高压而产生的微粒含有高量的IL-1β，并且是鼠减压病模型中引起弥漫性血管损伤的主要因素[参见例如Peddada N et al.，Med Hypotheses 778：203-210，2012；Pontier JMet al.，Appl Physiol Nutr Metab 37：1-5，2012]。当这些微粒被纯化并注射到未处理小鼠中时，它们引起与在减压的小鼠中看到的相同的组织损伤谱[参见例如Pontier JM etal.，Appl Physiol Nutr Metab 37：1-5，2012；Smalheiser NR，Mol Biol Cell 7：1003-1014，1996]。

现有技术在理解血浆蛋白凝溶胶蛋白与由高压和减压施加的压力之间的关系以及治疗减压病的方法方面存在缺陷。本发明满足了本领域中这种长期存在的需求和期望。

发明内容

根据本发明的一个方面，提供了在对象中确定特征性MP相关疾病或病症的存在的方法，该方法包括：(a)在从怀疑患有特征性MP相关疾病或病症的对象中获得的生物样品中检测微粒的存在；(b)将所检测的微粒鉴定为包含IL-1β特征、淋巴细胞抗原6复合基因座G6D(Ly6G)特征或CD66b特征；其中对IL-1β、Ly6G或CD66b特征的鉴定确定了对象中存在特征性MP相关疾病或病症；(c)至少部分地基于所确定的对象中特征性MP相关疾病或病症的存在而为对象选择治疗方案；以及(d)向对象施用所选择的治疗方案以治疗特征性MP相关疾病或病症。在一些实施方案中，IL-1β特征、Ly6G特征和CD66b特征基于：(1)生物样品中分别含有IL-1β、Ly6G和CD66b中一种或更多种的MP的存在；以及(2)相对于生物样品中MP的总数目，分别含有IL-1β、Ly6G和CD66b中一种或更多种的MP的数目。在某些实施方案中，该方法还包括确定生物样品中含有IL-1β、Ly6G和CD66b中一种或更多种的总微粒的相对数目。在一些实施方案中，该方法还包括确定生物样品中含有IL-1β、Ly6G和CD66b中一种或更多种的总微粒的百分比。在一些实施方案中，当样品中含有IL-1β的微粒的总数目的百分比为以下时，则指示IL-1β特征：至少2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在某些实施方案中，当样品中含有Ly6G的微粒的总数目的百分比为以下时，则指示Ly6G特征：至少2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在某些实施方案中，当样品中含有CD66b的微粒的总数目的百分比为以下时，则指示CD66b特征：至少2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在一些实施方案中，治疗方案包括向被确定为患有特征性MP相关疾病或病症的对象施用有效量的凝溶胶蛋白剂以治疗特征性MP相关疾病或病症。在一些实施方案中，与针对特征性MP相关疾病或病症的对照治疗作用相比，施用凝溶胶蛋白剂在对象中具有更大的针对特征性MP相关疾病或病症的治疗作用。在某些实施方案中，对照治疗作用等同于在没有施用凝溶胶蛋白剂的情况下在对象中针对特征性MP相关疾病或病症的作用。在一些实施方案中，特征性MP相关疾病或病症是：缺氧、减压病、急性高碳酸血症、慢性高碳酸血症、睡眠呼吸暂停、类固醇抗性哮喘、或缺氧缺血性脑病、毒性气体毒害、或窒息性气体毒害。在一些实施方案中，毒性气体包括一氧化碳和光气中的一者或二者。在一些实施方案中，窒息性气体包括以下中的一种或更多种：甲烷、氮气、氩气、氦气、丁烷和丙烷。在某些实施方案中，特征性MP相关疾病或病症为：视网膜病变、阿尔茨海默病、多发性硬化或2型糖尿病后遗症。在某些实施方案中，特征性MP相关疾病或病症是以下中之一：慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)、胸壁畸形、神经肌肉疾病、肥胖低通气综合征、呼吸衰竭、肺炎的缺氧后遗症或急性重度哮喘。在一些实施方案中，神经肌肉疾病是重症肌无力。在一些实施方案中，凝溶胶蛋白剂包括凝溶胶蛋白分子、其功能片段、或凝溶胶蛋白分子的功能衍生物。在某些实施方案中，凝溶胶蛋白分子是血浆凝溶胶蛋白(pGSN)。在一些实施方案中，凝溶胶蛋白分子是重组凝溶胶蛋白分子。在一些实施方案中，凝溶胶蛋白剂以约3mg/kg至约24mg/kg的剂量施用。在某些实施方案中，与不施用凝溶胶蛋白剂的对照的特征性MP相关疾病或病症的严重程度相比，施用凝溶胶蛋白剂将对象中的特征性MP相关疾病或病症的严重程度降低至少1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在一些实施方案中，该方法还包括确定对象中特征性MP相关疾病或病症的严重程度，其中用于所述确定的手段包括以下中的一种或更多种：测定、观察对象、评估对象中特征性MP相关疾病或病症的一种或更多种生理症状、评估对象的病史、以及评估对象存活的可能性。在一些实施方案中，生理症状包括以下中的一者或更多者：呼吸急促、低血氧饱和度、无意识、呼吸受损、头痛、血管通透性、中毒症状、虚弱、认知损害、肌肉痉挛、震颤、协调受损、视觉症状、视力丧失和目盲。在某些实施方案中，对象的病史包括以下中一者或更多者：暴露于显著高水平的CO₂、暴露于显著高水平的CO、水肺潜水和出现在高海拔。在一些实施方案中，生理症状包括肺部病变。在一些实施方案中，与对照存活可能性相比，施用有效量的凝溶胶蛋白剂提高对象的存活可能性。在某些实施方案中，对照存活可能性是在没有施用有效量的凝溶胶蛋白剂的情况下存活的可能性。在某些实施方案中，施用有效量的凝溶胶蛋白剂的对象的存活可能性是对照存活可能性的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或100倍高。在一些实施方案中，用于凝溶胶蛋白剂的施用手段是经口、舌下、经颊、鼻内、静脉内、肌内、鞘内、腹腔、皮下、皮内、表皮、直肠、阴道、滑膜内或眼内施用。在一些实施方案中，对象是哺乳动物，并且任选地是人。在某些实施方案中，生物样品包括和/或为血液样品。在一些实施方案中，特征性MP相关疾病或病症不是感染。在一些实施方案中，特征性MP相关疾病或病症是感染后后遗症。在一些实施方案中，对象不患有慢性哮喘。在某些实施方案中，对象不患有活动性肺感染。在某些实施方案中，凝溶胶蛋白剂施用于对象1、2、3、4、5、6、7、8次或更多次。

根据本发明的另一个方面，提供了用于在对象中治疗特征性MP相关疾病或病症的方法，该方法包括向患有或怀疑患有特征性MP相关疾病或病症的对象施用有效量的凝溶胶蛋白剂，其中与针对特征性MP相关疾病或病症的对照治疗作用相比，施用的凝溶胶蛋白剂针对特征性MP相关疾病或病症具有更好的治疗作用。在一些实施方案中，对照包括不施用凝溶胶蛋白剂的治疗作用。在一些实施方案中，治疗作用比对照治疗作用大1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、125％、150％、175％或200％中的至少一者。在某些实施方案中，与不施用凝溶胶蛋白剂的对照的特征性MP相关疾病或病症的严重程度相比，施用凝溶胶蛋白剂将对象中的特征性MP相关疾病或病症的严重程度降低以下中的至少一者：1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在一些实施方案中，特征性MP相关疾病或病症是：缺氧、减压病、急性高碳酸血症、慢性高碳酸血症、睡眠呼吸暂停、类固醇抗性哮喘、缺氧缺血性脑病、毒性气体毒害或窒息性气体毒害。在一些实施方案中，毒性气体包括一氧化碳和光气中的一者或更多者。在某些实施方案中，窒息性气体包括以下中的一种或更多种：甲烷、氮气、氩气、氦气、丁烷和丙烷。在一些实施方案中，特征性MP相关疾病或病症是：视网膜病变、阿尔茨海默病、多发性硬化或2型糖尿病后遗症。在一些实施方案中，特征性MP相关疾病或病症是以下中之一：慢性阻塞性肺病(COPD)、胸壁畸形、神经肌肉疾病、肥胖低通气综合征、呼吸衰竭、肺炎的缺氧后遗症或急性重度哮喘。在一些实施方案中，神经肌肉疾病是重症肌无力。在某些实施方案中，凝溶胶蛋白剂包括凝溶胶蛋白分子、其功能片段、或凝溶胶蛋白分子的功能衍生物。在某些实施方案中，凝溶胶蛋白分子是血浆凝溶胶蛋白(pGSN)。在一些实施方案中，凝溶胶蛋白分子是重组凝溶胶蛋白分子。在一些实施方案中，凝溶胶蛋白剂以约3mg/kg至约24mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，该方法还包括确定对象中特征性MP相关疾病或病症的严重程度，其中用于确定的手段包括以下中的一种或更多种：测定、观察对象、评估对象中特征性MP相关疾病或病症的一种或更多种生理症状、评估对象的病史、以及评估对象存活的可能性。在某些实施方案中，生理症状包括以下中一者或更多者：呼吸急促、低血氧饱和度、无意识、呼吸受损、头痛、血管通透性、中毒症状、虚弱、认知损害、肌肉痉挛、震颤、协调受损、视力丧失和目盲。在某些实施方案中，对象的病史包含以下中一者或更多者：暴露于显著高水平的CO₂、暴露于显著高水平的CO和水肺潜水、暴露于毒性气体、暴露于窒息性气体、出现在高海拔和阿片样物质使用。在一些实施方案中，测定包括用于检测从对象中获得的生物样品中IL-1β特征、Ly6G特征和CD66b特征中一种或更多种的存在或不存在的手段。在一些实施方案中，IL-1β特征包括样品中含有IL-1β的微粒的总数目的百分比，Ly6G特征包括样品中含有Ly6G的微粒的总数目的百分比，以及CD66b特征包括样品中含有CD66b的微粒的总数目的百分比。在某些实施方案中，生物样品中含有IL-1β的微粒的总数目的百分比为至少：2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在一些实施方案中，生物样品中含有Ly6G的微粒的总数目的百分比为至少：2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在某些实施方案中，生物样品中含有CD66b的微粒的总数目的百分比为至少：2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在一些实施方案中，与对照存活可能性相比，施用有效量的凝溶胶蛋白剂提高对象的存活可能性。在一些实施方案中，对照存活可能性是在没有施用有效量的凝溶胶蛋白剂的情况下的存活可能性。在某些实施方案中，施用有效量的凝溶胶蛋白剂的对象的存活可能性是对照存活可能性的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或100倍高。在某些实施方案中，用于凝溶胶蛋白剂的施用手段选自：经口、舌下、经颊、鼻内、静脉内、肌内、鞘内、腹腔、皮下、皮内、表皮、直肠、阴道、滑膜内和眼内施用。在一些实施方案中，对象是哺乳动物。在一些实施方案中，对象是人。在某些实施方案中，对象是小鼠。在某些实施方案中，特征性MP相关疾病或病症不是感染。在一些实施方案中，特征性MP相关疾病或病症是感染后后遗症。在一些实施方案中，对象不患有慢性哮喘。在一些实施方案中，对象不患有活动性肺感染。在某些实施方案中，凝溶胶蛋白剂施用于对象1、2、3、4、5、6、7、8或更多次。

根据本发明的另一个方面，提供了用于降低对象发生特征性MP相关疾病或病症的风险的方法，该方法包括：向被鉴定为处于发生特征性MP相关疾病或病症风险的对象施用有效量的凝溶胶蛋白剂，以降低对象发生特征性MP相关疾病或病症的风险。在某些实施方案中，与发生特征性MP相关疾病或病症的对照风险相比，施用凝溶胶蛋白剂降低了对象发生特征性MP相关疾病或病症的风险。在一些实施方案中，对照风险是在没有施用凝溶胶蛋白剂的情况下发生特征性MP相关疾病或病症的风险。在一些实施方案中，至少部分地基于以下中一者或更多者将对象鉴定为处于特征性MP疾病或病症的风险中：对象的先前、当前或将来活动；对象的先前、当前或将来的潜在暴露；或者对象中当前疾病或病症的存在。在某些实施方案中，对象的先前、当前或将来活动是以下中一者或更多者：水肺潜水、太空旅行、采矿、环境探索和潜艇旅行。在一些实施方案中，对象的先前、当前或将来潜在暴露是暴露于以下中的一种或更多种：窒息性气体、毒性气体、显著升高的二氧化碳(CO₂)水平、显著升高的一氧化碳(CO)水平、显著升高的大气压和非慢性哮喘触发剂。在某些实施方案中，施用凝溶胶蛋白剂的对象由于先前、当前或将来的活动或先前、当前或将来的暴露而发生特征性MP相关疾病或病症的风险比发生特征性MP相关疾病或病症的对照风险低至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在一些实施方案中，特征性MP相关疾病或病症为：缺氧、减压病、重度哮喘、急性高碳酸血症、一氧化碳(CO)毒害、毒性气体毒害、窒息性气体毒害或二氧化碳(CO₂)毒害。在一些实施方案中，凝溶胶蛋白剂包括凝溶胶蛋白分子、其功能片段或凝溶胶蛋白分子的功能衍生物。在某些实施方案中，凝溶胶蛋白分子是血浆凝溶胶蛋白(pGSN)。在一些实施方案中，凝溶胶蛋白分子是重组凝溶胶蛋白分子。在一些实施方案中，与对照存活可能性相比，施用凝溶胶蛋白剂提高了对象的存活可能性。在某些实施方案中，对照存活可能性是在没有施用有效量的凝溶胶蛋白剂的情况下的存活可能性。在某些实施方案中，其中施用有效量的凝溶胶蛋白剂的对象的存活可能性是对照存活可能性的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或100倍高。在一些实施方案中，用于凝溶胶蛋白剂的施用手段选自：经口、舌下、经颊、鼻内、静脉内、肌内、鞘内、腹腔、皮下、皮内、表皮、直肠、阴道、滑膜内和眼内施用。在一些实施方案中，在对象的活动或潜在暴露之前、期间和之后中一者或更多者，将凝溶胶蛋白剂施用于对象。在一些实施方案中，凝溶胶蛋白剂施用于对象1、2、3、4、5、6、7、8或更多次。在某些实施方案中，对象是哺乳动物。在某些实施方案中，对象是人。在一些实施方案中，特征性MP相关疾病或病症不是感染。在一些实施方案中，特征性MP相关疾病或病症是感染后后遗症。在某些实施方案中，对象不患有慢性哮喘。在某些实施方案中，对象不患有活动性肺感染。

根据本发明的另一个方面，提供了用于对易于发生减压病的个体(本文中也称为对象)进行预防性治疗的方法，该方法包括：向该个体施用治疗有效量的凝溶胶蛋白剂。在一些实施方案中，其中凝溶胶蛋白剂包括凝溶胶蛋白分子。在某些实施方案中，凝溶胶蛋白分子是重组凝溶胶蛋白分子。在一些实施方案中，凝溶胶蛋白分子以约3mg/kg至约24mg/kg的剂量施用。在某些实施方案中，凝溶胶蛋白静脉内施用。在一些实施方案中，施用凝溶胶蛋白抑制易于发生减压病的个体的血液或组织中气体微粒的产生。

根据本发明的另一个方面，提供了用于在需要这样的治疗的个体(本文中也称为对象)中治疗减压病的方法，该方法包括：向该个体施用切割丝状肌动蛋白和/或抑制白介素-1β的化合物，从而治疗该减压病。在一些实施方案中，化合物是重组凝溶胶蛋白。在某些实施方案中，该化合物是IL-1b抑制剂。在某些实施方案中，该化合物是康纳单抗(canakinumab)或阿那白滞素(Anakinra)。在一些实施方案中，该化合物切割丝状肌动蛋白。在一些实施方案中，该化合物是踝蛋白、丝切蛋白、双解丝蛋白、微丝切割蛋白、ECP32/grimelysin或蛋白水解素(protealysin)。在某些实施方案中，该方法还包括以有效治疗减压病的量向个体施用两种或更多种切割丝状肌动蛋白和/或抑制白介素-1β的化合物。

附图说明

当参照附图阅读以下详细描述时，可以更好地理解本公开内容的实施方案的这些和其他特征、方面和优点，其中，贯穿整个附图，相同的附图标记表示相同的部件，在附图中：

图1提供了举例说明显示来自人研究对象的血液变化的结果的图。如方法中所述，在暴露于300kPa之前、暴露于300kPa时和暴露于300kPa后，测量血浆样品中pGSN和IL-1β的浓度并对血源性MP进行定量。示出了单个数据点，并且每个图下方是平均值+SE，对于每个样品n＝6，*表示与暴露前具有显著性差异，p<0.05，RM ANOVA。

图2示出了举例说明实验小鼠中变化结果的条形图。使雄性小鼠暴露于环境压力下的空气中(对照)或者持续2小时暴露于790kPa的空气中，减压、并在2小时后使其安乐死(减压)。其中向所示暴露于空气的对照小鼠静脉内注射27mg/kg rhu-pGSN(对照+pGSN)并在4小时后实施安乐死。其他小鼠在增压之前注射rhu-pGSN(pGSN+减压)或者在减压之后立即注射rhu-pGSN(减压+pGSN)，并且其他小鼠静脉内注射了用于混悬rhu-pGSN的载体缓冲液(载剂+减压)，并且这些组在减压之后2小时实施安乐死。如方法中所述，通过小鼠特异性ELISA来测量血浆样品中pGSN和IL-1β的浓度并对血源性MP进行定量。数据为平均值±SE，示出了每个样品的(n)，*表示与对照具有显著性差异，p<0.05，ANOVA。

图3是示出了微粒(MP)蛋白质的生物素化的Western印迹。分离来自对照和减压雄性小鼠的MP，将其用200μg/ml rhu-pGSN(表示为+pGSN)或仅PBS进行孵育，并随后进行生物素化，如本文中实施例的方法部分中所述。然后在SDS缓冲液中裂解MP，并将来自45,500个MP的蛋白质加载到每个泳道中用于SDS-PAGE。示出了探测生物素和β-肌动蛋白的Western印迹。对IL-1β的探测没有显示出条带(未显示)。分子量标准(以kDa计)显示在左侧。

图4是示出了生物素化相对于非生物素化MP分离的Western印迹。对来自对照和减压雄性小鼠的MP进行分离、生物素化并随后裂解。如本文中实施例的方法部分中所述，将样品与磁性链霉亲和素珠一起孵育，并使其通过磁体以将生物素化(显示为+生物素)与非生物素化的蛋白质(显示为-生物素)分离。将来自165,000个MP的蛋白质加载到每个泳道中以用于SDS-PAGE。示出了探测β-肌动蛋白和生物素的Western印迹。对IL-1β的探测没有显示出条带(未显示)。分子量标准(以kDa计)显示在左侧。

图5A至C提供了显示rhu-pGSN对来自对照和减压小鼠的MP的作用的两幅图和一张表。从对照或减压的雄性小鼠中获得血液并进行离心，如方法中所述。将MP混悬液划分，并在所示的时间0时添加200μg/ml的rhu-pGSN。以30分钟的间隔固定样品。图5A中示出了剩余MP的数目。图5B示出了结合抗凝溶胶蛋白抗体和鬼笔环肽的MP的％。粗体值在统计学上显著不同于时间0时的值(p<0.05，ANOVA)。图5C示出了结合荧光鬼笔环肽的颗粒％。数据为平均值+SE，对于每个样品n＝5，*表示与时间0时的值具有显著性差异，p<0.05，RM-ANOVA。

图6示出了举例说明rhu-pGSN对人中性粒细胞和MP的作用的五幅图。分离中性粒细胞，在环境空气或在790kPa下孵育30分钟并减压。在时间0时，添加rhu-pGSN(200μg/ml)，并以30分钟的间隔固定部分样品，并进行处理(如方法中所述)，以量化MP及抗凝溶胶蛋白抗体和荧光鬼笔环肽的结合。数据为平均值+SE，对于每个样品n＝4，*表示与时间为0时的值具有显著性差异，p<0.05，RM-ANOVA。

序列简述

SEQ ID NO:1是具有登录No.X04412的人血浆凝溶胶蛋白的氨基酸序列：

具体实施方式

本发明部分基于以下发现：特定微粒(MP)“特征”的存在可用于检测对象中MP相关疾病和病症的存在或不存在。现已发现，可检测含有IL-1β、淋巴细胞抗原6复合基因座G6D(Ly6G)(小鼠)或CD66b(人)中至少一种的MP，并用于鉴定对象中特征性MP相关疾病或病症的存在。本发明方法的某些实施方案可用于将对象鉴定为患有MP相关疾病或病症、或者将处于患有微粒相关疾病或病症的风险中。现可以使用本发明方法的实施方案来鉴定需要治疗MP相关疾病或病症的对象，并基于对疾病或病症的鉴定来为对象选择治疗方案，在一些实施方案中，可以以在对象中有效治疗MP相关疾病或病症的量来施用所选择的治疗方案。本发明的某些方法包括这样的治疗方案，该方案包括向被鉴定为患有MP相关疾病或病症或处于其风险中的对象施用包含凝溶胶蛋白剂的治疗组合物。

本发明方法的某些实施方案包括在来自对象的生物样品中检测MP特征，例如IL-1βMP特征、LY6G MP特征和CD66b MP特征，其基于生物样品中分别含有IL-1β、LY6G和CD66b中至少一种的MP的存在和数目(相对于总MP数目)来指示。在本发明方法的一些实施方案中，如本文中所述，IL-1β特征、LY6G特征和CD66b特征中的一种或更多种的鉴定可用于(1)确定对象是否患有MP相关疾病或病症；(2)选择治疗方案并以其为被确定为患有MP相关疾病或病症的对象进行治疗；以及(3)向对象施用所选择的治疗方案。

现已确定，在对象中血浆凝溶胶蛋白(pGSN)水平响应于由高压和随后的减压所施加的压力而降低，并且向对象施用凝溶胶蛋白减轻了减压病和其它特征性MP相关疾病和病症中的损伤。本发明方法的某些实施方案可用于通过以有效减轻、预防特征性MP相关疾病或病症和/或降低特征性MP相关疾病或病症的严重程度之量向对象施用凝溶胶蛋白剂来预防和/或治疗对象。本发明的某些方法包括将凝溶胶蛋白剂施用于患有特征性MP相关疾病或病症的对象，或者将凝溶胶蛋白剂预防性地施用于处于MP相关疾病或病症风险中的对象。

某些定义

如本文中所用，当在权利要求书和/或说明书中结合术语“包括/包含”使用时，没有数量词修饰的名词可意指“一个/种”，但其也与“一个/种或更多个/种”、“至少一个/种”和“一个/种或多于一个/种”的含义一致。本发明的一些实施方案可由本发明的一个或更多个要素、方法步骤和/或方法组成或者基本上由其组成。预期本文中所述的任何方法可相对于本文中所述的任何其他方法来实施。

如本文中所用，除非明确地指出仅指替代方案或者替代方案相互排斥，否则权利要求书中术语“或/或者”用于意指“和/或”，但是本公开内容支持指仅替代方案和“和/或”的定义。

如本文中所用，“包含(comprise)”及其变化形式例如“含有(comprises)”和“包括(comprising)”将被理解为暗示包括所述条目、要素或步骤或者条目、要素或步骤的组，但不排除任何其他条目、要素或步骤或者条目、要素或步骤的组，除非上下文另有要求。类似地，“另一个”或“其它”可意指至少第二个或更多个相同或不同的权利要求要素或其组分。

如本文中所用，术语“接触”是指使抑制剂、化合物或药物组合物与细胞接触的任何合适的方法。对于体内应用，如本文中所述，任何已知的施用方法都是合适的。

术语pGLN和pGSN在本文中可互换使用。

微粒

微粒(microparticle，MP)(也称为微泡和胞外囊泡)是细胞来源的结构，其直径范围通常为50nm至1,000nm。天然产生的MP是异质的，并且可用作细胞与组织之间的通讯手段。MP通过从细胞质膜出芽的过程由细胞形成，并且从细胞释放的MP可包含对其细胞来源具有特异性的分子，例如核酸、蛋白质和脂质[参见例如van Niel，G.et al.，(2018)NatureReviews.Vol.19：213-228]。

现已确定特异性MP特征的存在可用于鉴定患有MP相关疾病或病症的对象的生理状态。如本文中提及MP所使用的术语“特征”意指MP的一个或更多个特点。可确定MP特征的特点包括但不限于：MP是否包含某些组分以及这样的MP的数目或量。本文中提及MP特征所使用的术语“组分”意指作为MP膜一部分的分子和/或MP膜内部的分子。例如，尽管不旨在限制，但MP的组分可以是MP的表面蛋白。作为另一个非限制性实例，MP的组分可以是MP内部的蛋白质或核酸分子。可以使用本发明的方法检测并作为某些MP的组分的表面蛋白的非限制性实例是IL-1β、Ly6G和CD66b。

除了鉴定MP的特定组分之外，本发明的方法还可以包括确定含有特定目的组分的MP的量或数目。在本发明方法的某些实施方案中，相对于不含有目的组分的MP的数目，来确定含有特定目的组分的MP的量或数目。例如，本发明方法的某些实施方案包括检测生物样品中的MP。如本文中所用的与确定特征性MP相关疾病或病症的存在相关的术语“检测(detecting)”或“检测(detection)”包括鉴定生物样品中含有一种或更多种特定目的组分的MP的存在，和/或确定相对于生物样品中MP总数目的所鉴定MP的数目或量。检测含有特定目的组分的MP和/或确定含有特定目的组分的MP的相对丰度指示了生物样品中的MP特征，该MP特征可用于确定从其获得生物样品的对象中特征性MP相关疾病或病症的存在。

可以用本发明的方法检测并用于确定对象中特征性MP相关疾病或病症的存在的MP组分的实例是白介素-1β(IL-1β)，其在本领域中也称为白细胞致热源、白细胞内源性介质、单核细胞因子和淋巴细胞活化因子。可以用本发明的方法检测并用于确定对象中特征性MP相关疾病或病症的存在的MP组分的另一个实例是淋巴细胞抗原6复合基因座蛋白G6D(Ly6D)，其在本领域中至少也称为巨核细胞增强的基因转录物1蛋白、G6D、NG25、LY6-D、MEGT1和C6orf23。LY6D特征可用于鉴定小鼠特征性MP相关疾病或病症。可以用本发明的方法检测并用于确定对象中特征性MP相关疾病或病症的存在的MP组分的另一个实例是CD66b，其在本领域中至少也称为CD67、CGM6和NCA-95。CD66b特征可用于鉴定小鼠特征性MP相关疾病或病症。本发明方法的某些实施方案包括在从对象中获得的生物样品中检测具有IL-1β、Ly6G和CD66b中一种或更多种的特征的MP，其中检测该特征确定对象中特征性MP相关疾病或病症的存在。

本发明方法的一些实施方案包括检测生物样品中一种或多种MP的存在，鉴定所检测的MP中含有IL-1β、Ly6G和CD66b中一种或更多种的MP的存在或不存在，以及任选地确定生物样品中检测为含有IL-1β、Ly6G和/或CD66b的MP的量。所确定的量可测量为相对于生物样品中所检测的MP的总量的含有IL-1β、Ly6G和CD66b中一种或更多种的MP的数目。生物样品中含有IL-1β、Ly6G和CD66b中一种或更多种的MP的相对量可以表示为生物样品中总MP的比例(例如作为比率)和/或表示为占生物样品中总MP的百分比。已经确定生物样品中含有IL-1β、Ly6G和CD66b中一种或更多种的MP的比例和/或百分比对应于从其获得生物样品的对象中特征性MP相关疾病或病症的存在或不存在。应当理解，可独立于另外两种组分测定生物样品中IL-1β、Ly6G和CD66b中每一种的存在。因此，本发明方法的一些实施方案包括检测含有IL-1β的MP，以及鉴定含有IL-1β的MP的存在和/或相对数目以确定生物样品是否具有MP IL-1β特征。本发明方法的一些实施方案包括检测含有LY6G的MP，以及鉴定含有LY6G的MP的存在和/或相对数目以确定生物样品是否具有LY6G特征。本发明方法的某些实施方案包括检测含有CD66b的MP，以及鉴定含有CD66b的MP的存在和/或相对数目以确定生物样品是否具有CD66b特征。在本发明的一些实施方案中，以人为对象获得生物样品，并且确定生物样品中IL-1βMP特征和CD66b MP特征中一者或两者的检测，这指示对象中特征性MP相关疾病或病症的存在。在本发明的某些实施方案中，生物样品从小鼠或其它啮齿动物中获得，并且在生物样品中确定IL-1βMP特征和Ly6G MP特征中的一者或两者，这指示对象中特征性MP相关疾病或病症的存在。

本发明的一些实施方案包括在从对象中获得的生物样品中检测含有IL-1β、Ly6G和CD66b中一种或更多种的MP占MP总数目的百分比。在一些实施方案中，IL-1β特征包含生物样品中含有IL-1β的MP占MP总数目的百分比。在一些实施方案中，Ly6G特征包含生物样品中含有Ly6G的MP占MP总数目的百分比。在一些实施方案中，CD66b特征包含生物样品中含有CD66b的MP占MP总数目的百分比。在本发明方法的一些实施方案中，在从对象中获得的生物样品中鉴定的IL-1β特征、Ly6G特征或CD66b特征是分别含有IL-1β、Ly6G或CD66b的MP的总MP的百分比，即生物样品中总MP的至少2％，3％，4％，5％，6％，7％，8％，9％,10％，11％，12％,13％，14％，15％，16％，17％，18％，19％，20％，21％，22％，23％，24％，25％，26％，27％，28％，29％，30％，31％，32％，33％，34％，35％，36％，37％，38％，39％，40％，41％，42，％，43％，44％，45％，46％,47％，48％,49％，50％，51％，52％，53％，54％，55％，56％，57％，58％，59％，60％，61％，62，％，63％，64％，65％，66％，67％，68％，69％，70％，71％，72％，73％，74％，75％，76％，77％,78％，79％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％，这确定了对象中特征性MP相关疾病或病症的存在。应当理解，IL-1β、Ly6G和CD66b特征可以表示为比率，该比率指示相对于生物样品中MP的总量或数目的生物样品中分别含有IL-1β、Ly6G和CD66b中一种或更多种的MP的量或数目，并且该比率可以用于鉴定患有特征性MP相关疾病或病症的对象，如本文中所述。

治疗选择

如本文中所述，可至少部分地基于以下为对象选择治疗方案：在获自对象的生物样品中检测含有IL-1β、Ly6G和CD66b中一种或更多种的MP的存在，和/或分别确定生物样品中含有IL-1β、Ly6G和CD66b中一种或更多种的MP相对于不含有IL-1β、Ly6G和CD66b中一种或更多种的MP的相对量。在本发明的一些实施方案中，治疗方案的选择也可至少部分地基于对象中特征性MP相关疾病或病症的严重程度。在本发明的一些实施方案中，选择的治疗方案可以包括向对象施用有效量的凝溶胶蛋白剂以治疗特征性MP相关疾病或病症，以及在对象中施用适合于特定疾病或病症的一种或更多种另外的治疗。作为非限制性实例，用于被鉴定为患有减压病或处于患有减压病的风险中的对象的另外的治疗可以是以下中一种或更多种：将对象置于高气压室中、高气压治疗、手术、溶栓治疗、抗凝治疗和施用补氧等。应当理解，在将对象鉴定为患有不同的特征性MP相关疾病和/或病症或处于其风险中的情况下，包括向对象施用凝溶胶蛋白剂的所选治疗方案也可包括一种或更多种适合于特定特征性MP相关疾病或病症的另外治疗。在确定对象中特征性MP相关疾病或病症的存在或风险之后，除了施用凝溶胶蛋白剂之外，实践者在没有过多实验的情况下将意识到并能够选择一种或更多种治疗以将其纳入对象的治疗方案中。

凝溶胶蛋白剂

凝溶胶蛋白是高度保守的多功能蛋白，其初始在巨噬细胞的胞质溶胶中描述，并随后在许多脊椎动物细胞中得到鉴定[参见例如Piktel E.et al.，Int J Mol Sci 2018；19：E2516；Silacci P.et al.，Cell Mol Life Sci 2004；61：2614-23)。凝溶胶蛋白的独特性质是其基因表达编码独特血浆同种型(pGSN)的剪接变体，其分泌到细胞外液中，并因表达额外的25个氨基酸序列而不同于其细胞质对应物(cGSN)。pGSN通常以200至300μg/ml的浓度在哺乳动物血液中循环，这使其成为最丰富的血浆蛋白之一。本文中使用的术语“凝溶胶蛋白剂”意指包含凝溶胶蛋白分子的组合物。在本发明方法的一些实施方案中，凝溶胶蛋白分子可以是全长天然亲本凝溶胶蛋白分子的功能片段或功能衍生物。在本发明的一些实施方案中，凝溶胶蛋白剂仅包括一种或更多种凝溶胶蛋白分子、其功能片段、或凝溶胶蛋白分子的功能衍生物。在本发明的某些实施方案中，凝溶胶蛋白剂可以包括一种或更多种另外的组分，其非限制性实例是可检测的标记、载体、递送剂等。在本发明的某些方面中，凝溶胶蛋白分子是血浆凝溶胶蛋白(pGSN)，并在某些情况下，凝溶胶蛋白分子是胞质GSN。包括在本发明的组合物和方法中的凝溶胶蛋白分子可以是重组凝溶胶蛋白分子。

如本文中所用，术语“凝溶胶蛋白剂”是包括外源凝溶胶蛋白分子的化合物。如本文中涉及凝溶胶蛋白分子使用的术语“外源”意指施用于对象的凝溶胶蛋白分子，即使相同的凝溶胶蛋白分子是对象中天然存在的，其也可称为内源凝溶胶蛋白分子。包括在本发明方法中的凝溶胶蛋白剂可以是野生型凝溶胶蛋白分子(例如GenBank登录号：X04412，其氨基酸序列在本文中作为SEQ ID NO：1列出)、凝溶胶蛋白分子的同种型、类似物、功能变体、功能片段或功能缺失衍生物。应当理解，在本发明的一些实施方案中，施用的凝溶胶蛋白分子是凝溶胶蛋白多肽，并且在本发明方法的某些实施方案中，施用的凝溶胶蛋白分子是编码凝溶胶蛋白多肽的多核苷酸。

本发明方法的一些实施方案包括施用“凝溶胶蛋白类似物”，其在本文中用于指在功能上与天然凝溶胶蛋白或其片段基本上相似的化合物。凝溶胶蛋白类似物包括与凝溶胶蛋白序列基本上相似的生物活性氨基酸序列，并且可具有经取代、缺失、延长、替换或以其它方式修饰的序列，所述序列具有与凝溶胶蛋白基本上相似的生物活性。例如，凝溶胶蛋白的类似物是不具有与凝溶胶蛋白相同的氨基酸序列，但与凝溶胶蛋白足够同源，以保留凝溶胶蛋白的生物活性的类似物。例如，可以通过确定凝溶胶蛋白类似物的特性和/或通过确定凝溶胶蛋白类似物减少或预防特征性MP相关疾病或病症的作用的能力来确定生物活性。本领域普通技术人员已知凝溶胶蛋白生物活性测定。

本发明方法的某些实施方案包括凝溶胶蛋白分子的片段。术语“片段”意指包括凝溶胶蛋白分子的任何部分，其提供了维持“亲本”凝溶胶蛋白的至少一部分或基本上全部生物活性水平的凝溶胶蛋白区段。术语凝溶胶蛋白片段意指包括来源于任何制备方式的凝溶胶蛋白片段，例如，如由天然存在的肽序列、合成或化学合成的肽序列和经遗传改造肽序列制成的凝溶胶蛋白片段。如本文中提及凝溶胶蛋白片段或衍生物分子时使用的术语“亲本”意指该片段或衍生物的序列所源自的凝溶胶蛋白分子。

在本发明方法的某些实施方案中，凝溶胶蛋白片段是功能片段，并且保留其亲本凝溶胶蛋白分子的至少一些多至全部功能。在一些实施方案中，本发明的方法可包括施用凝溶胶蛋白的“变体”。如本文中所用，凝溶胶蛋白变体可以是在结构和生物活性上与天然凝溶胶蛋白或其片段基本上相似的化合物。在本发明的某些方面中，凝溶胶蛋白变体被称为功能变体，并且保留其亲本凝溶胶蛋白分子的至少一些多至全部功能。

还考虑将凝溶胶蛋白衍生物包括在本发明方法的实施方案中。凝溶胶蛋白的“功能衍生物”是具有与凝溶胶蛋白基本上相似的生物活性的衍生物。“基本上相似”意指数量上不同但性质上相同的活性。例如，凝溶胶蛋白的功能衍生物可以含有与凝溶胶蛋白相同的氨基酸骨架，但也含有其它修饰，例如翻译后修饰，例如如结合的磷脂或共价连接的碳水化合物，这取决于本发明治疗方法的实施对这样的修饰的需要。如本文中所用，该术语还意指包括凝溶胶蛋白的化学衍生物。这样的衍生物可提高凝溶胶蛋白的溶解度、吸收、生物半衰期等。该衍生物还可以降低凝溶胶蛋白的毒性，或者消除或减弱凝溶胶蛋白的任何不期望副作用等。在Remington,The Science and Practice of Pharmacy,2012,编辑者：Allen,Loyd V.,Jr,第22版)中公开了能够介导这样的效应的衍生物，并且特别是化学部分。将这样的部分与分子例如凝溶胶蛋白偶联的程序是本领域中公知的。术语“功能衍生物”旨在包括凝溶胶蛋白的“片段”、“变体”、“类似物”或“化学衍生物”。

特征性MP相关的疾病和病症

本发明的方法可用于在对象中鉴定和/或治疗特征性MP相关疾病或病症。本文中所使用的术语“特征性MP相关疾病和病症”涵盖这样的疾病和病症：其中含有IL-1β、Ly6G和CD66b中一种或更多种的MP的产生量高于不存在特征性MP相关疾病或病症时的产生量，并且这样的MP的存在和/或量可用于确定对象中该疾病或病症的存在。

在本发明方法的一些实施方案中，特征性MP相关疾病或病症是其中在对象中组织对氧的可用性和/或获取性存在生理性降低的疾病或病症。这样的特征性MP相关疾病或病症的非限制性实例是减压病，其也称为DCS、潜水疾病、减压病(bends)、气肿病(aerobullosis)和凯松病(caisson disease)。在这种情况下，对象的减压，例如当从深潜上升，上升至高海拔时，导致溶解于对象身体组织中的气体从溶液中出来。由此产生的症状可包括关节痛、骨骼痛、呼吸困难、瘫痪、无意识、虚弱、头痛、神经障碍等。不太严重的DCS发作可包括涉及皮肤、肌肉和淋巴系统的症状，而更严重的DCS发作可另外包括指示对象神经系统和其他器官损伤的症状。

可以使用本发明方法的实施方案在对象中鉴定并通过向对象施用凝溶胶蛋白剂进行治疗的其它特征性MP相关疾病和病症的非限制性实例是：缺氧、减压病、急性高碳酸血症、慢性高碳酸血症、睡眠呼吸暂停、类固醇抗性哮喘、缺氧缺血性脑病、慢性阻塞性肺病(COPD)、胸壁畸形、神经肌肉疾病(例如但不限于重症肌无力)、肥胖低通气综合征、呼吸衰竭、肺炎的缺氧后遗症、急性重度哮喘和阿片样物质过量。

可以使用本发明的方法在对象中鉴定并通过向对象施用凝溶胶蛋白剂来治疗的另外的特征性MP相关疾病或病症是毒性气体毒害和窒息性气体毒害。毒性气体的非限制性实例是：一氧化碳、升高水平的二氧化碳和光气。窒息性气体是无毒或毒性极低的气体，其可以降低或替代呼吸的空气中的正常氧气浓度。窒息性气体的非限制性实例是：甲烷、氮气、氩气、氦气、丁烷和丙烷。应当理解，暴露于毒性气体或窒息性气体的对象并不总是发生特征性MP相关疾病或病症，并且对象暴露于一种或更多种毒性或窒息性气体是否导致特征性MP相关疾病或病症部分取决于多种因素，例如暴露时长、暴露水平、对象遇到的毒性或窒息性气体的浓度等。本文中所使用的涉及毒性气体毒性和窒息性气体毒性的术语“显著高水平”意指在对象中足够高地导致特征性MP相关疾病或病症的气体的量、水平和/或浓度。

可以使用本发明方法的实施方案在对象中鉴定并通过向对象施用凝溶胶蛋白剂来治疗的特征性MP相关疾病和病症的另外的非限制性实例是：2型糖尿病后遗症，例如但不限于：血管损伤、血管渗漏、糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy，DR)；自身炎性疾病，例如但不限于：冷吡啉相关周期性综合征(Cryopyrin-associated PeriodicSyndrome，CAPS)、晶体诱导性关节炎、嗜中性哮喘；神经炎性疾病，例如但不限于：阿尔茨海默病、多发性硬化、路易体痴呆；年龄相关性黄斑变性(age-related maculardegeneration，AMD)、干眼症、干燥性角膜结膜炎(Keratoconjunctivitis sicca，KCA)、缺血性视网膜病变。视网膜病变、早产儿视网膜病变(retinopathy of prematurity，ROP)、目盲、视力丧失；视网膜缺氧相关疾病，例如但不限于：视网膜神经节细胞(retinal ganglioncell，RGC)死亡、视网膜中央动脉阻塞、缺血性视网膜中央静脉血栓形成、糖尿病性眼病后遗症的并发症和青光眼。

本文中称为特征性MP相关疾病或病症的疾病和病症是这样的疾病和病症：其中含有IL-1β、Ly6G和CD66b中一种或更多种的MP的产生量高于不存在特征性MP相关疾病或病症时的产生量。如本文中所述，可以通过在从对象中获得的生物样品中检测含有IL-1β、Ly6G和CD66b中一种或更多种的特征性MP的存在的方法来确定对象患有特征性MP相关疾病或病症。在确定来自对象的样品中IL-1βMP特征、Ly6G MP特征和/或CD66b MP特征之后，本发明的方法可包括为对象选择治疗方案，其中治疗方案包括向对象施用凝溶胶蛋白剂。本发明的治疗方案还可以包括一种或更多种另外的治疗作用或施用的药物，这取决于特定的特征性MP相关疾病或病症、特征性MP相关疾病或病症的严重程度、或者实践者在选择治疗时作为考虑因素而意识到的其他因素。

本发明的方法还可包括向对象施用选定的治疗方案。

应当理解，本文中所列出的特征性MP相关疾病和病症不是感染，尽管在本发明方法的一些实施方案中，特征性MP相关疾病或病症可以是感染后后遗症。在本发明的某些实施方案中，对象不患有活动性肺感染。特征性MP相关病症可以是与慢性哮喘不同的气喘病症，因为其可以由吸入的气体或其他物质引起。在本发明的一些实施方案中，对象不患有慢性哮喘。在本发明方法的一些实施方案中，确定为存在于对象中的MP相关疾病或病症与对象中的活动性感染无关或由其引起。

风险降低

本发明部分地包括降低对象患特征性MP相关疾病或病症的风险的方法。本发明风险降低方法的某些实施方案包括向被鉴定为处于发生特征性MP相关疾病或病症风险中的对象施用凝溶胶蛋白剂，并且凝溶胶蛋白剂以有效降低对象发生特征性MP相关疾病或病症风险的量施用。本发明方法降低对象风险的效力可以通过将向对象施用凝溶胶蛋白剂的结果与对照结果进行比较来确定。在本发明的一些实施方案中，与发生特征性MP相关疾病或病症的对照风险相比，施用于对象的凝溶胶蛋白剂降低了对象发生特征性MP相关疾病或病症的风险，其中对照风险是在没有施用凝溶胶蛋白剂的情况下，对象在基本上相同的情况下发生特征性MP相关疾病或病症的风险。

本发明方法的某些实施方案包括将对象鉴定为处于发生特征性MP疾病或病症的风险中，并且该鉴定可以至少部分地基于例如但不限于以下的因素：对象先前、当前或将来的活动，以及对象先前、当前或将来潜在暴露于被认为可在对象中导致特征性MP相关疾病或病症发生的试剂或元素。本文中所使用的涉及特征性MP相关疾病或病症的风险的术语“活动”涵盖提高对象特征性MP相关疾病或病症风险的行为。对象先前、当前和将来的活动的非限制性实例是：水肺潜水、洞穴探险、爬山、高海拔旅行、太空旅行、太空中的舱外活动、深采矿、环境探索和潜艇旅行。如本文中所使用的术语环境探索意指对象出现于或足够接近这样的物理环境，其中存在对象暴露于可在对象中导致氧合降低相关疾病或病症的试剂或元素的风险。这样的环境的非限制性实例是：火山、火灾(fire)、工业事故、高海拔位置、深水下位置等。对象在先前、当前或将来的事件或活动中可能暴露于的、可能被认为导致特征性MP相关疾病或病症的试剂或元素的非限制性实例是毒性气体、窒息性气体、显著升高的二氧化碳(CO₂)水平、显著升高的一氧化碳(CO)水平、显著升高的大气压和非慢性哮喘触发剂。

除了可指示对象发生特征性MP相关疾病或病症的风险的活动或将来活动之外，对象中现有疾病或病症的存在可指示对象发生特征性MP相关疾病或病症的风险。例如，尽管不旨在是限制性的，对象可患有2型糖尿病，并因此被认为处于特征性MP相关疾病或病症(例如2型糖尿病后遗症、糖尿病视网膜病变等)的风险中。

本发明方法的某些实施方案包括向被鉴定为处于发生特征性MP相关疾病或病症风险中的对象施用凝溶胶蛋白剂。在本发明治疗方法的一些实施方案中，凝溶胶蛋白剂包括凝溶胶蛋白分子、凝溶胶蛋白分子的功能片段、或凝溶胶蛋白分子的功能衍生物。在本发明的一些实施方案中，施用的凝溶胶蛋白剂包含血浆凝溶胶蛋白(pGSN)。在本发明的一些实施方案中，施用的凝溶胶蛋白剂可包含重组凝溶胶蛋白分子。

本发明方法的某些实施方案包括以有效降低对象发生特征性MP相关疾病或病症的风险，和/或降低对象中存在的特征性MP相关疾病或病症的严重程度的量向对象施用凝溶胶蛋白剂。在一些实施方案中，治疗有效量是指施用于对象的抑制剂和/或化合物足以防止疾病或病症(例如特征性MP相关疾病或病症)进展的量。与对象发生特征性MP相关疾病或病症的对照风险百分比相比，施用凝溶胶蛋白剂可将对象由于先前、当前或将来的活动或者先前、当前或将来的暴露而发生特征性MP相关疾病或病症的风险降低至少

1％,2％，3％，4％，5％，6％，7％，8％，9％，10％，11％，12％、13％，14％，15％，16％，17％，18％，19％，20％，21％，22％，23％，24％，25％，26％，27％，28％，29％，30％，31％，32％，33％，34％，35％，36％，37％，38％，39％，40％，41％，42，％，43％，44％，45％，46％，47％，48％，49％，50％，51％，52％，53％，54％,55％，56％，57％，58％，59％，60％，61％，62，％，63％，64％，65％，66％，67％，68％，69％，70％，71％，72％、73％，74％，75％，76％，77％，78％，79％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％、99％或100％。例如，如果对象在即将到来的深水肺潜水活动中发生特征性MP相关疾病或病症的风险为20％，则向对象施用有效量的凝溶胶蛋白剂可以将对象20％风险的风险降低至小于19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％风险，或降低至0％风险。

在本发明方法的某些实施方案中，与对照存活可能性相比，基于对象先前、当前或将来的活动和/或对象先前、当前或将来潜在暴露于在对象中引起特征性MP相关疾病或病症发生的药剂或元素向对象施用有效量的凝溶胶蛋白剂提高了对象的存活可能性。在一些情况下，对照存活可能性是在没有施用有效量的凝溶胶蛋白剂的情况下，对象在基本上相同的活动或暴露中存活的可能性。向需要这样的治疗的对象施用有效量的凝溶胶蛋白剂可以将对象的存活可能性提高至是对照存活可能性的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、1u、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或100倍高。另一种表示存活可能性变化的方式是死亡可能性百分比的降低。例如，作为用凝溶胶蛋白剂治疗的结果，对象的死亡风险可高至未用凝溶胶蛋白剂治疗的对照对象死亡风险的

1％，2％，3％，4％，5％，6％，7％，8％，9％，10％，11％，12％，13％，14％，15％,16％，17％，18％,19％，20％，21％，22％，23％，24％，25％，26％，27％，28％，29％，30％，31％，32％，33％，34％，35％，36％，37％，38％，39％，40％，41％，42，％，43％，44％，45％，46％，47％，48％，49％，50％，51％，52％，53％，54％，55％，56％，57％，58％，59％，60％，61％，62，％、63％，64％，65％，66％，67％，68％，69％，70％，71％，72％，73％，74％，75％，76％，77％，78％，79％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％或95％。

例如，如果由于特征性MP相关疾病或病症而死亡的对照风险为20％，则向被鉴定为患有特征性MP相关疾病或病症的对象施用有效量的凝溶胶蛋白剂可能具有的由MP相关疾病或病症导致死亡的风险降低至低于20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％的风险，或者对象由于特征性MP相关疾病或病症而死亡的风险降低至0％。

凝溶胶蛋白剂的施用时间可以基于对象的活动和/或潜在暴露的时间来确定。在一些实施方案中，在对象的活动或潜在暴露之前、期间和之后中一者或多者，将凝溶胶蛋白剂施用于对象。凝溶胶蛋白剂可一次或多次施用于被确定为需要这样的治疗的对象。凝溶胶蛋白剂的多次施用意指凝溶胶蛋白剂施用于对象2、3、4、5、6、7、8、9、10次或更多次。应当理解，凝溶胶蛋白剂的施用可以与针对特征性MP相关疾病或病症的其他治疗组合进行，其非限制性实例是：氧气施用、插管、高压治疗等。

本发明的一些实施方案包括在需要这样的治疗的个体中治疗减压病的方法，其包括以下步骤：向该个体施用切割丝状肌动蛋白和/或抑制白介素-1β的化合物从而治疗减压病。在一个方面中，该化合物是重组凝溶胶蛋白或其类似物。在另一个方面中，该化合物是IL-1b抑制剂。

IL-1b抑制剂的代表性实例包括但不限于康纳单抗和IL-1b受体抑制剂阿那白滞素。在另一个方面中，该化合物是切割丝状肌动蛋白的化合物。切割丝状肌动蛋白的化合物的代表性实例包括但不限于：踝蛋白、丝切蛋白、双解丝蛋白、微丝切割蛋白和细菌蛋白酶ECP32/grimelysin或蛋白水解素。在本发明方法的一些实施方案中，凝溶胶蛋白剂与切割丝状肌动蛋白和/或抑制白介素-1βIL-1b抑制剂的药剂组合施用作为MP相关疾病或病症(例如但不限于减压病)的治疗。

治疗性组合物和方法以及监测效力

本发明的方法包括在患有特征性MP相关疾病或病症的对象中产生治疗作用以减轻和治疗特征性MP相关疾病或病症。本文中所使用的涉及药剂(例如凝溶胶蛋白剂)的术语“治疗作用”意指当将凝溶胶蛋白剂施用于患有特征性MP相关疾病或病症的对象时凝溶胶蛋白剂的治疗作用。凝溶胶蛋白的治疗作用(在本文中也称为对本发明治疗方法的“响应”)可以通过例如检测治疗的一种或更多种生理作用来确定，例如施用治疗之后症状的减轻或消失。监测和评估对象中特征性MP相关疾病或病症的另外的手段，以及评估和确定对象中特征性MP相关疾病或病症的水平、严重程度、严重程度变化等中一者或更多者的方式是本领域中已知的，并且可用于在包括向对象施用凝溶胶蛋白剂的治疗之后评估对象中的特征性MP相关病症。可以在本发明方法的某些实施方案中评估的生理症状的非限制性实例在本文中其他地方提供，并且在本领域中将是已知的，并且对于特定的疾病和病症是常规评估的。

本发明方法的一些实施方案还可包括确定所施用的治疗方案的效力。例如，可以在从患有特征性MP相关疾病或病症的对象中获得的第一次生物样品中测定含有IL-1β、Ly6G和CD66b中一种或更多种的MP的量，并且可以在随后的时间测定从对象中获得的生物样品中含有IL-1β、Ly6G和CD66b中一种或更多种的MP的量，并且对测定结果进行比较。如果在初始样品中检出的IL-1β、Ly6G和/或CD66b的量高于在随后样品中检出的量，则其可以指示对象中特征性MP相关疾病或病症的严重程度降低。如果在初始获得的生物样品中含有IL-1β、Ly6G和/或CD66b中一种或更多种的MP的量低于在随后从对象中获得的生物样品中检出的含有IL-1β、Ly6G和/或CD66b中一种或更多种的MP的量，则其可以指示对象中特征性MP相关疾病或病症的发作和/或严重程度的提高。

在从对象中获得第一生物样品之后向对象施用凝溶胶蛋白剂的情况下，可以在施用之后获得随后的生物样品，并且第一生物样品和随后的生物样品中含有IL-1β、Ly6G和/或CD66b的MP的量的差异可以指示所施用的凝溶胶蛋白在对象中治疗特征性MP相关疾病或病症的效力水平。如果在向对象施用凝溶胶蛋白治疗之前，在初始从对象中获得的生物样品中检出的含有IL-1β、Ly6G和/或CD66b的MP的量被确定为高于在凝溶胶蛋白治疗之后获得的样品中含有IL-1β、Ly6G和/或CD66b的MP的量，则其指示凝溶胶蛋白剂在对象中治疗并降低特征性MP相关疾病或病症的严重程度的效力。

在一些实施方案中，本发明的方法包括以在对象中有效产生治疗作用以降低特征性MP相关疾病或病症的严重程度的量向患有特征性MP相关疾病或病症或处于其风险中的对象施用凝溶胶蛋白剂。凝溶胶蛋白剂可以与在用于被鉴定为患有特征性MP相关疾病或病症或处于其风险中的对象的治疗方案中选择的其他治疗结合施用。

本发明的方法和组合物可用于治疗特征性MP相关疾病或病症。如本文中所用，术语“治疗”、“经治疗”或“正在治疗”当关于特征性MP相关疾病或病症使用时可以指降低对象发生特征性MP相关疾病或病症的可能性或风险的预防性治疗，并且可用于指在对象已经发生特征性MP相关疾病或病症之后的治疗，以便消除或改善特征性MP相关疾病或病症，防止特征性MP相关疾病或病症变得更晚期或更严重，和/或与不存在本发明的治疗方法的情况下的特征性MP相关疾病或病症的进展相比，减缓特征性MP相关疾病或病症的进展。

对象和样品

如本文中所用，对象可以是脊椎动物，包括但不限于人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、牛、狗、猫、马、山羊和非人灵长类，例如猴。对象可以是哺乳动物。在一些实施方案中，对象是本文中所述抑制剂、化合物或其药物组合物的任何人或非人接受体。在本发明的某些方面中，对象可以是家养动物、野生动物或农业动物。因此，本发明可用于在人和非人对象中治疗特征性MP相关疾病或病症。例如，本发明的方法和组合物可用于兽医应用以及人治疗方案。在本发明的一些实施方案中，对象是人。在本发明的一些实施方案中，对象患有特征性MP相关疾病或病症，或者处于患有特征性MP相关疾病或病症的风险中，并且需要治疗。

如本文中所用，生物样品可以是细胞样品、组织样品、血液样品、体液样品、唾液样品、痰样品、鼻分泌物样品、羊水样品、玻璃体液样品、泪样品、尿样品、淋巴样品、脊髓液样品等。生物样品可以包括细胞、组织或细胞器，并且可以包括细胞类型，例如但不限于：肌肉细胞、心脏细胞、循环细胞、神经元细胞、神经胶质细胞、脂肪细胞、肺细胞、皮肤细胞、造血细胞、上皮细胞、精子、卵母细胞、肌肉细胞、脂肪细胞、肾细胞、肝细胞、胰腺细胞等。

评估和对照

可使用本发明的方法来检测对象中的特征性MP相关疾病或病症。在本发明的一些实施方案中，本领域已知方法包括但不限于：评估特征性MP相关疾病或病症的一种或更多种特征，例如但不限于：疾病或病症的症状的存在可以与检测对象中特征性MP相关疾病或病症的方法结合使用。在一些情况下，本发明的方法可包括确定对象中特征性MP相关疾病或病症的严重程度的水平。确定严重程度的方式的非限制性实例包括以下中一种或更多种：测定，例如但不限于血气测定；观察对象；评估对象表现出的一种或更多种生理症状；评估对象的暴露和/或活动病史；以及评估对象存活的可能性。可以观察或监测以评估对象中氧合降低相关疾病或病症的严重程度的生理症状的非限制性实例是：呼吸急促、低血氧饱和度、头晕、肌肉疼痛、器官疼痛、肺部病变或损伤、意识丧失、呼吸受损、头痛、血管通透性和中毒症状。评估对象的暴露和/或活动的非限制性实例包括：确定对象暴露于显著高水平的CO₂，确定对象暴露于显著高水平的CO，鉴定对象的水肺潜水活动，鉴定对象是否出现在高海拔，确定对象是否暴露于毒性气体，确定对象是否暴露于窒息性气体，确定对象的阿片样物质使用史，以及确定对象是否摄入了毒物。

可以将在对象中检出的特征性MP相关疾病或病症的特征与特征性MP相关疾病或病症的特征的对照值进行比较。对照值可以是预定值，其可以采取多种形式。它可以是单一截止值，例如中值或平均值。它可以基于比较组来建立，例如具有特征性MP相关疾病或病症的个体组、已经对特征性MP相关疾病或病症施用治疗的个体组、还没有对特征性MP相关疾病或病症施用治疗的个体组等。比较组的另一个实例可以是具有特征性MP相关疾病或病症的一种或更多种症状或诊断的对象组，以及在没有特征性MP相关疾病或病症的一种或更多种症状或诊断的对象组。当然，预定值将取决于所选择的特定群体。因此，所选择的预定值可考虑其中个体落入的类别。本领域普通技术人员可仅仅用常规实验来选择适当的类别。

在本发明的方法中可使用对照来比较不同对照组的特征、对象的特征与对照组的特征等。

可基于相对差异对对象与对照之间、一个对照与另一个对照之间等进行比较。例如，尽管不旨在是限制性的，在用本发明的治疗方法中的凝溶胶蛋白剂治疗的对象中的生理症状可以与未施用凝溶胶蛋白剂的对照组的生理症状进行比较。该比较可以以相对术语来表示，例如，如果低血氧水平是特征性MP相关疾病或病症的特征，则可以将用包括施用凝溶胶蛋白剂的本发明治疗方法治疗的对象的血氧水平的测量值与血氧水平的对照水平进行比较。在一些实施方案中，合适的对照是未用本发明的治疗方法治疗的对象。治疗与对照的比较可包括比较经治疗对象与所选择对照之间的疾病严重程度差异。在一些情况下，用本发明方法治疗的对象的严重程度可确定为相对于所选择对照较低，其中该比较表明与对照相比，对象中的特征性MP相关疾病或病症的一个或更多个生理症状的严重程度降低高达

1％，2％，3％，4％，5％，6％，7％，8％，9％，10％，11％，12％，13％，14％，15％，16％，17％，18％，19％，20％，21％，22％，23％，24％，25％，26％，27％，28％，29％，30％，31％，32％，33％，34％，35％，36％，37％，38％，39％，40％，41％，42,％，43％，44％，45％，46％，47％，48％，49％，50％，51％，52％，53％，54％，55％，56％，57％，58％，59％，60％，61％，62，％，63％，64％，65％，66％，67％，68％，69％，70％，71％，72％，73％，74％，75％，76％，77％，78％，79％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％。

在一些实施方案中，经治疗对象的特征性MP相关疾病或病症的严重程度的水平低于特征性MP相关疾病或病症的对照严重程度水平的100％。在本发明的某些实施方案中，根据本发明方法治疗的对象中的特征性MP相关疾病或病症的一种或更多种生理症状的严重程度分别小于或等于特征性MP相关疾病或病症的一种或更多种生理症状的严重程度的对照水平的99％，98％，97％，96％，95％，94％，93％，92％，91％，90％，89％，88％，87％，86％，85％，84％，83％，82％，81％，80％，79％，78％，77％，76％，75％，74％，73％，72％，71％，70％，69％，68％，67％，66％，65％，64％，63％，62％，61％，60％，59％，58％，57％，56％，55％，54％，53％，52％，51％，50％，49％，48％，47％，46％，45％，44％，43％，42％，41％，40％，39％，38％，37％，36％，35％，34％，33％，32％，31％，30％，29％，28％，27％，26％，25％，24％，23％，22％，21％，20％,19％，18％，17％，16％，15％，14％,13％，12％，11％，10％，9％，8％，7％，6％，5％，4％，3％，2％，1％.0.9％，0.8％，0.7％，0.6％，0.5％，0.4％，0.3％，0.2％或0.1％。

在另一个非限制性实例中，可以通过对用本发明方法治疗的对象的存活可能性与对照存活可能性进行比较，来确定对象中特征性MP相关疾病或病症的水平，和/或者确定使用本发明的方法向对象施用凝溶胶蛋白剂的治疗作用的提高。对照存活可能性的非限制性实例是未用本发明方法治疗的患有特征性MP相关疾病或病症的对象的存活可能性。可以测量的存活可能性参数的非限制性实例包括：确定对象在本发明治疗之后仍然存活的时间长度(小时、天、周等)，以及对象在本发明治疗之后是否死亡或存活。应当理解，如何将这些和其它与存活可能性相关的参数与对照进行比较，以评估和确定本发明凝溶胶蛋白治疗方法的治疗效果。存活可能性的对照的一个非限制性实例是与没有施用有效量的凝溶胶蛋白剂情况下存活的对照天数相比，在用本发明方法治疗之后对象存活的天数。在本发明的一些实施方案中，用本发明方法治疗的对象的存活可能性比对照存活可能性高至少0.5％，1％，2％，3％，4％，5％，6％，7％，8％，9％，10％，11％，12％，13％，14％，15％，16％，17％，18％，19％，20％，21％，22％,23％，24％，25％，30％，35％，40％，45％，50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，95％，100％，125％，150％，175％，200％,300％，400％,500％。

应当理解，除了预定值之外，对照可以是与实验材料平行测试的材料样品。实例包括来自对照群体的样品或通过制备产生的对照样品，以与实验样品平行测试；并且对照也可以是来自在用本发明的方法或组合物的实施方案治疗之前、期间或之后的对象的样品。因此，为患有特征性MP相关疾病或病症的对象确定的一个或更多个特征可用作后来的时间该对象中这些特征的“对照”值。

施用的时间

本发明的一些实施方案包括对在治疗时未患有特征性MP相关疾病或病症的对象进行预治疗。在一些实施方案中，对象的预治疗发生在对象进行活动或具有使对象处于发生特征性MP相关疾病或病症的风险中的潜在暴露之前的时间。本发明治疗方法的一些实施方案包括向具有患有特征性MP相关疾病或病症的风险的对象施用有效量的凝溶胶蛋白剂，其中凝溶胶蛋白剂在对象的活动或潜在暴露之前恰好施用，或者在对象的活动或潜在暴露之前多达1、2、3、4、5、6、12、18、24、48、72、96、120、144小时或更长时间施用。在一些实施方案中，凝溶胶蛋白剂在对象的活动和/或潜在暴露时施用于对象。在一些实施方案中，凝溶胶蛋白剂在对象的活动或潜在暴露之后施用。在一些实施方案中，在对象的潜在暴露活动之前、期间和之后中两者或三者处，对象接受本发明治疗方法中的凝溶胶蛋白剂。应当理解，被鉴定为患有疾病或病症、在某个时间点可能发生特征性MP相关疾病或病症的对象可施用凝溶胶蛋白作为预防性治疗，以在对象中降低特征性MP相关疾病或病症发作的可能性。

药剂的制备和施用

本发明的方法和组合物对对象治疗以及对新治疗的临床开发具有重要意义。还期望临床研究人员现在将使用本发明方法来确定临床试验中人对象的录入标准。卫生保健实践者基于对象的预期净效益选择治疗方案以用于治疗。净效益来源于风险效益比。

可改变治疗的量，例如通过提高或降低施用于对象的凝溶胶蛋白剂的量、通过改变施用的治疗组合物、通过改变施用途径、通过改变给药时间等等。有效量将随着以下而变化：所治疗的特定特征性MP相关疾病或病症、所治疗的对象的年龄和身体状况、特征性MP相关疾病或病症的严重程度、治疗的持续时间、具体的施用途径，并且类似的因素均在健康实践者的知识和专业技能范围内。例如，有效量可取决于个体已暴露于或受暴露于毒性气体或可导致特征性MP相关疾病或病症的其他元素或情况影响的程度。

有效量

本发明的方法包括以有效治疗特征性MP相关疾病或病症的量施用凝溶胶蛋白剂。有效量是足以提供医学上所期望结果的凝溶胶蛋白剂的量。凝溶胶蛋白剂是可用于本发明治疗方法的某些实施方案中的药剂。应当理解的是，本发明的药剂用于治疗或预防特征性MP相关疾病或病症，即在一些实施方案中，它们可以用于治疗对象中现有的特征性MP相关疾病或病症，并且它们还可以预防性地用于处于发生特征性MP相关疾病或病症的风险中的对象。有效量是可以降低对象中特征性MP相关疾病或病症的风险、减缓或可能完全防止其发生的这种量。将认识到，当药剂用于急性情况时，其是用于防止通常从这样的不良事件中产生的一种或更多种医学上不期望的结果。

确定有效量所涉及的因素对于本领域普通技术人员来说是公知的并且可仅仅通过常规实验来解决。通常优选使用本发明药剂的最大剂量，即根据合理的医学判断的最高安全剂量。然而，本领域普通技术人员将理解，患者可能出于医学原因、心理原因或实际上任何其他原因坚持较低剂量或可耐受剂量。

本发明的药剂的治疗有效量是有效治疗病症，例如特征性MP相关疾病或病症的这种量。在特征性MP相关疾病或病症的情况下，所期望的响应是抑制特征性MP相关疾病或病症的进展和/或降低特征性MP相关疾病或病症的严重程度和/或水平。这可仅涉及暂时减缓特征性MP相关疾病或病症的进展，但是其可包括永久地停止特征性MP相关疾病或病症的进展。这可以通过本领域普通技术人员已知的常规诊断方法来监测。对特征性MP相关疾病或病症的治疗的期望响应也可以是预防特征性MP相关疾病或病症的发作。

药剂和递送

在本发明的方法中使用的药剂优选是无菌的并且包含有效量的以适合于施用于对象的重量或体积的单位产生期望响应的凝溶胶蛋白剂。可根据不同的参数，特别是根据所用的施用手段和对象的状态来选择施用于对象的药剂的剂量。另一些因素包括期望的治疗时间。在对象中的响应在施加的初始剂量下不足的情况下，可在患者耐受允许的程度上采用更高剂量(或通过不同的、更加局部的递送途径的有效更高的剂量)。药剂的剂量可由个体保健提供者或兽医调整，特别是在出现任何并发症的情况下。治疗有效量通常为0.01mg/kg至约1000mg/kg，约0.1mg/kg至约200mg/kg或约0.2mg/kg至约20mg/kg不等，以每天一个或更多个剂量施用，持续1天或更多天。凝溶胶蛋白剂在本文中也可称为药剂。

本发明方法的一些实施方案包括用于在需要这样的治疗的个体(本文中可互换地称为对象)中治疗减压病的方法，并且该治疗包括以下步骤：向个体施用治疗有效量的凝溶胶蛋白或其类似物。在一个非限制性实例中，凝溶胶蛋白(本文中也称为凝溶胶蛋白剂)以约3mg/kg至约24mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，凝溶胶蛋白静脉内施用。施用凝溶胶蛋白抑制了患有减压病的个体的血液或组织中气体微粒的产生。凝溶胶蛋白形式的代表性实例是重组凝溶胶蛋白。

本发明方法的一些实施方案包括用于预防性治疗易于发生减压病的个体的方法，其包括以下步骤：向该个体施用治疗有效量的凝溶胶蛋白或其类似物。在一些实施方案中，凝溶胶蛋白剂以约3mg/kg至约24mg/kg的剂量施用。

本领域普通技术人员已知多种施用方式，其将本发明的药剂有效地递送至期望的组织、细胞或体液。可由个体健康护理实践者或兽医调整施用的方式和剂量，特别是在出现任何并发症的情况下。施用的绝对量将取决于多种因素，包括选择用于施用的材料、施用是单剂量还是多剂量，以及个体对象参数，包括年龄、身体状况、尺寸、体重以及疾病或病症的阶段。这些因素对于本领域普通技术人员来说是公知的并且可以仅仅用常规实验来解决。

可药用载体包括稀释剂、填充剂、盐、缓冲剂、稳定剂、增溶剂和本领域公知的其他材料。如本文中所用，术语“可药用”是指当适当地施用于动物(例如如人)时不会产生不利的、变应性的或其它不良反应的分子实体和组合物。根据本公开内容，含有抑制性化合物和/或另外药物的药物组合物的制备将是本领域技术人员已知的，如由Remington′sPharmaceutical Sciences，18th Ed.Mack Printing Company，1990所举例说明的，其通过引用并入本文。

示例性的可药用载体在美国专利No.5,211,657中描述，并且其他是本领域技术人员已知的。在本发明的某些实施方案中，这样的制剂可以含有盐、缓冲剂、防腐剂、相容的载体、水溶液、水等。当用于药物时，盐可以是可药用的，但是非可药用盐可方便地用于制备其可药用盐，并且不排除在本发明的范围之外。这样的药理学上和药学上可接受的盐包括但不限于由以下酸制备的那些：盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、马来酸、乙酸、水杨酸、柠檬酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸等。而且，可药用盐可作为碱金属或碱土金属盐、例如钠盐、钾盐或钙盐制备。

本领域技术人员已知的多种施用方式可用于将本发明的包含凝溶胶蛋白剂的药物组合物有效递送至对象以在对象中产生针对特征性MP相关疾病或病症的治疗作用。用于施用本发明的这样的组合物或药物化合物的方法可以是表面、静脉内、经口、腔内、鞘内、滑膜内、经颊、舌下、鼻内、经皮、玻璃体内、皮下、肌内和皮内施用。在本发明的一些实施方案中，用于施用本发明组合物的方式是吸入。

本发明不受本文中公开的特定施用方式的限制。本领域的标准参考文献(例如，Remington，The Science and Practice of Pharmacy，2012，编辑：Allen，Loyd V.，Jr，第22版)提供了用于在药物载体中递送多种药物制备物和制剂的施用方式和制剂。本领域技术人员将已知可用于施用本发明治疗化合物的其他方案，其中剂量、施用方案、施用部位、施用方式(例如，器官内)等与本文中示出的那些不同。本领域普通技术人员将已知可用于施用本发明药剂的其他方案，其中剂量、施用方案、施用部位、施用方式等与本文中示出的那些不同。

向除人以外的哺乳动物施用本发明的药剂(例如用于测试目的或兽医治疗目的)是在与上述基本上相同的条件下进行的。本领域普通技术人员将理解，本发明适用于人和动物疾病二者。因此，本发明旨在用于畜牧业和兽医医学以及人治疗。可将药剂以药物制剂施用于对象。

当施用时，本发明的药物制剂以可药用量和以可药用组合物施加。术语“可药用”意指不干扰活性成分的生物活性的有效性的非毒性材料。这样的制剂通常可包含盐、缓冲剂、防腐剂、相容性载体和任选的其他治疗剂。当在医学中使用时，盐应该是可药用的，但不可药用盐可适当地用于制备其可药用盐，并且不排除在本发明的范围外。这样的药理学上和药学上可接受的盐包括但不限于由以下酸制备的那些：盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、马来酸、乙酸、水杨酸、柠檬酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸等。而且，可药用盐可作为碱金属或碱土金属盐、例如钠盐、钾盐或钙盐制备。

如果期望的话，可将药剂或药物组合物与可药用载体组合。本文中使用的术语“可药用载体”意指一种或更多种适合于施用到人中的相容性固体或液体填充剂、稀释剂或包封物质。术语“载体”表示与活性成分组合以有利于应用的天然或合成的有机或无机成分。药物组合物的组分还能够与本发明的药剂以及彼此以不存在会显著损害期望药物效力的相互作用的方式共混。

如上所述，药物组合物可含有合适的缓冲剂，包括：乙酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐、甘氨酸、硼酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、氢氧化物(和其他碱)和前述化合物的可药用盐。药物组合物还可任选含有合适的防腐剂，例如：苯扎氯铵；氯丁醇；对羟基苯甲酸酯和硫柳汞。

药物组合物可方便地以单位剂型存在，并且可通过药学领域中公知的任何方法制备。所有方法都包括使活性剂与构成一种或更多种辅助成分的载体缔合的步骤。一般而言，通过使活性化合物与液体载体、细碎固体载体或二者均匀且紧密地缔合，并随后使产品成型(如果需要的话)来制备组合物。

适用于经口施用的组合物可作为离散单元存在，例如胶囊剂、片剂、丸剂、锭剂，其各自包含预定量的活性化合物(例如凝溶胶蛋白)。另一些组合物包括在水性液体或非水性液体中的混悬剂，例如糖浆剂、酏剂、乳剂或凝胶剂。

用于经口使用的药物制剂可作为固体赋形剂获得，任选地研磨所得混合物，并且如果期望的话，在添加合适的助剂之后加工颗粒混合物以获得片剂或糖衣丸芯。合适的赋形剂特别是填充剂，例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇；纤维素制剂，例如如玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone，PVP)。如果期望的话，可添加崩解剂，例如交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、或者藻酸或其盐(例如藻酸钠)。任选地，经口制剂也可在盐水或缓冲剂(即，用于中和内部酸条件的EDTA)中配制，或者可在没有任何载体的情况下施用。

还具体考虑了上述一种或更多种组分的经口剂型。可对一种或更多种组分进行化学修饰，使得该衍生物的经口递送是有效的。通常来说，考虑的化学修饰是至少一个部分与组分分子本身的连接，其中所述部分允许(a)抑制蛋白酶解；以及(b)从胃或肠摄入到血流中。还期望提高一种或更多种组分的总体稳定性并增加体内循环时间。这样的部分的实例包括：聚乙二醇、乙二醇和丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、右旋糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮和聚脯氨酸。

Abuchowski and Davis，1981，“Soluble Polymer-Enzyme Adducts”ln：Enzymesas Drugs，Hocenberg and Roberts，eds.，Wiley-Interscience，New York，N.Y.，pp.367-383；Newmark，et al.，1982，J.Appl.Biochem.4：185-189.

可使用的另一些聚合物是聚-1，3-二氧戊环和聚-1，3，6-三氧杂环辛烷。

对于药剂，释放的位置可以是胃、小肠(十二指肠、空肠或回肠)或大肠。本领域的技术人员可获得不会在胃中溶解但会在十二指肠或肠中其他地方释放材料的制剂。优选地，释放将通过凝溶胶蛋白剂的保护或通过在胃环境外(例如在肠中)释放生物学活性物质来避免胃环境的有害影响。

也可使用配制用于经口施用的微球。这样的微球在本领域中已进行良好地定义。用于经口施用的所有制剂应该是适合于这样的施用的剂量。

对于经颊施用，组合物可采用以常规方式配制的片剂或锭剂的形式。

对于通过吸入施用，根据本发明使用的化合物可伴有使用合适的抛射剂(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体)从加压包装或喷雾器以气雾剂喷射呈现的形式方便的递送。在加压气雾剂的情况下，剂量单位可通过提供阀门以递送计量的量来确定。用于吸入器或吹入器的胶囊和药筒(cartridge)(例如，明胶的)可配制为包含化合物与合适的粉末基质(例如乳糖或淀粉)的粉末混合物。

本文中还考虑了凝溶胶蛋白的肺递送。凝溶胶蛋白在吸入时递送至哺乳动物的肺，并穿过肺上皮内衬(epithelial lining)进入血流。

还考虑了本发明药物组合物的经鼻(或鼻内)递送。经鼻递送允许在将治疗产品施用至鼻之后本发明药物组合物直接通过血流，而不需要该产品沉积在肺中。经鼻递送的制剂包括具有右旋糖或环糊精的制剂。

当期望全身递送化合物时，所述化合物可配制成用于通过注射(例如通过推注或连续输注)进行肠胃外施用。用于注射的制剂可在添加防腐剂的情况下以单位剂型的形式存在，例如在安瓿中，或在多剂量容器中。组合物可采用在油性或水性载剂中作为混悬液、溶液或乳剂的这样的形式，并且可含有配制剂，例如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。

用于肠胃外施用的药物制剂包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。另外的，可将活性化合物的混悬剂制备为适当的油性注射混悬剂。合适的亲脂性溶剂或载剂包含脂肪油，例如芝麻油；或合成脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油三酯，或脂质体。水性注射用混悬剂可包含提高混悬剂的黏度的物质，例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或葡聚糖。任选地，混悬液还可包含合适的稳定剂或提高化合物的溶解度以允许制备高度浓缩的溶液的试剂。或者，活性化合物可以是粉末形式，以用于在使用前用合适的载剂(例如无菌无热原水)构建。

可在颗粒中提供药剂，具体包括但不限于凝溶胶蛋白剂。本文中使用的术语“颗粒”意指纳米粒或微米粒(或在一些情况下是更大颗粒)，其可全部或部分地由本文中所述的凝溶胶蛋白剂组成。颗粒可在被包衣(包括但不限于肠溶包衣)包围的核心中包含药剂。药剂也可分散在整个颗粒中。药剂也可吸附到颗粒中。颗粒可具有任何级别的释放动力学，包括零级释放、一级释放、二级释放、延迟释放、持续释放、立即释放，以及其任何组合等。除了药剂之外，颗粒还可包括药学和医学领域中常规使用的那些材料中的任一种，包括但不限于可蚀解的、不可蚀解的、可生物降解的或不可生物降解的材料或其组合。颗粒可以是微胶囊，其含有呈溶液或半固态的凝溶胶蛋白。颗粒实际上可以是任何形状。

不可生物降解和可生物降解的聚合物材料二者均可用于制造用于递送药剂的颗粒。这样的聚合物可以是天然的或合成的聚合物。基于期望释放的时间段来选择聚合物。特别令人感兴趣的生物黏附性聚合物包括由H.S.Sawhney，C.P.Pathak and J.A.Hubell inMacromolecules，(1993)26：581-587(其教导并入本文)中描述的可生物蚀解的水凝胶。这些包括聚透明质酸、酪蛋白、明胶、明胶蛋白、聚酸酐、聚丙烯酸、藻酸盐、壳聚糖、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸异丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸异癸酯)、聚(甲基丙烯酸月桂酯)、聚(甲基丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸异丙酯)、聚(丙烯酸异丁酯)和聚(丙烯酸十八烷基酯)。

药剂可包含在控释系统中。术语“控释”旨在是指任何含药物的制剂，其中药物从制剂中释放的方式和谱受到控制。这指的是立即释放制剂和非立即释放制剂，其中非立即释放制剂包括但不限于持续释放和延迟释放制剂。术语“持续释放”(也称为“延长释放”)以其常规意义使用，是指在延长的时间段内提供药物的逐渐释放的药物制剂，并且优选地，尽管不是必须的，导致药物在延长的时间段内基本上恒定的血液水平。术语“延迟释放”以其常规意义使用，是指其中在制剂施用与药物从其中释放之间存在时间延迟的药物制剂。“延迟释放”可或可不涉及药物在延长的时间段内逐渐释放，并且因此可或可不是“持续释放”。

长期持续-释放植入物的使用可特别适用于治疗慢性特征性MP相关疾病或病症和/或发生特征性MP相关疾病或病症的慢性风险。本文中使用的“长期”释放意指植入物被构建和布置成递送治疗水平的药剂持续至少7天，并且优选30至60天。长期持续释放植入物是本领域普通技术人员公知的，并且包括一些上述释放系统。

本发明还考虑使用药盒。在本发明的一些方面中，药盒可包含一个或更多个药物制剂小瓶、药物制剂稀释剂小瓶和凝溶胶蛋白剂。包含药物制剂用稀释剂的小瓶是任选的。稀释剂小瓶可包含用于稀释可以是凝溶胶蛋白剂的浓缩溶液或冻干粉末的稀释剂，例如生理盐水。说明书可包括将特定量的稀释剂与特定量的浓缩药物制剂混合，由此制备用于注射或输注的最终制剂的说明书。说明书可包括用有效量的凝溶胶蛋白剂治疗对象的说明书。还应理解，包含制剂的容器，无论该容器是瓶子、带有隔膜的小瓶、带有隔膜的安瓿、输注袋等，都可包含标记，例如当制剂经过高压灭菌或以其他方式灭菌时改变颜色的常规标记。

通过以下实施例进一步举例说明本发明，所述实施例绝不应解释为进一步限制。在本申请通篇引用的所有参考文献(包括文献参考、授权专利、公开的专利申请和共同待决的专利申请)的全部内容在此明确地通过引用并入。

提供以下实施例以举例说明本发明实践的一些具体实例，并且不旨在限制本发明的范围。对本领域普通技术人员来说明显的是，本发明将以多种组合物和方法应用。

实施例

实施例1

概述

进行实验以评价来自先前报道的人高压暴露研究的血浆中pGSN的水平[参见例如Moroianu J et al..PNAS 90：3815-3819，1993]，并研究鼠DCS模型中的pGSN。进行的研究表明，pGSN水平随着暴露于高压和减压而降低，并且rhu-pGSN消除了鼠模型中的血管损伤。

进行实验以评估减压病并确定pGSN施用在鼠减压病(DCS)模型中是否会减轻损伤。发现研究对象在高压时表现出pGSN水平的适度降低，并且在减压之后显著降低。在一些研究中，该变化被鉴定为与携带白介素(IL)-1β的循环微粒(MP)的升高同时发生。小鼠在减压之后表现出pGSN相当的下降，同时携带IL-1β的MP升高。在压力暴露之前或之后将重组人(rhu)-pGSN输注到小鼠中消除了这些变化，并且防止了脑和骨骼肌中的毛细血管渗漏。

在高压之下产生的人和鼠MP表现出与pGSN结合的表面丝状(F-)肌动蛋白，其导致颗粒裂解。另外，暴露于高气压的人中性粒细胞表现出rhu-pGSN减少了表面F-肌动蛋白的增加，从而导致MP产生的抑制。结果表明施用rhu-pGSN作为对DCS的预防或治疗的益处。

材料：

除非另有说明，否则化学品均购自Sigma-Aldrich(St.Louis，MO)。压缩气体购自Air Products and Chemicals，Inc.(Allentown，PA)。BioAegis Therapeutics(NorthBrunswick，NJ)提供rhu-pGSN。抗体和流式细胞术试剂如下：抗肌动蛋白(Sigma-Aldrich，St.Louis，Mo，目录号A2066)、抗生物素(Sigma，目录号B3640)、抗Ly6G eFluor450(eBioscience，San Diego，CA，目录号#48-5931-82)、抗小鼠CD31BV510(BectonDickinson/Pharmingen，BD，San Jose，CA目录号563089)、膜联蛋白V-FITC(BD，目录号556419)、抗CD41 PerCP Cy5.5(BioLegend，San Diego，CA，目录号133918)、抗CD45 Cy7-A(BioLegend，San Diego，CA，目录号103114)、抗凝溶胶蛋白PE(Abcam，Cambridge，MA，目录号ab109014)、抗IL-1β(Abcam，Cambridge，MA，目录号ab9722)、N-(7-硝基苯并-2-氧杂-1，3-噻唑-4-基)鬼笔环肽(Life technologies，目录号N354)。在先前的出版物中，通过Western印迹和质谱显示了抗肌动蛋白作为识别β-肌动蛋白和抗生物素作为识别生物素化肌动蛋白的验证[参见例如Thom SR et al.，J Biol Chem 289：18831-18845，2014]。用于流式细胞术的所有抗体均由制造商专门记录了这种用法，并且以推荐的浓度使用。流式细胞术方法如下所述，其中在荧光减去一对照测试之后确定阳性染色。

动物：

本研究的所有方面都经过了机构动物护理和使用委员会(Institutional AnimalCare and Use Committee)的审查和批准。C57BL/6J小鼠(小家鼠(Mus musculus))购自Jackson实验室(Bar Harbor，ME)。将其安置在具有12/12小时光暗周期的大学动物设施中。安置(housing)和所有实验均在22℃至24℃和40％至70％的湿度下进行。它们均随意地取水并被饲喂实验室啮齿动物饮食(Laboratory Rodent Diet)5001(PMI NutritionalInc.，Brentwood，MO)。如先前出版物中所述，使小鼠呼吸室内空气(对照)或进行2小时暴露于790kPa(绝对压力)的空气[参见例如Thom SR et al.，J Appl Physiol 110：340-351，2011；Yang M et al.，J Appl hysiol 112：204-211，2012]。通过该室的空气流量确保没有CO₂积聚(build-up)。在之前的研究中，表明氮分压升高的作用是导致生理变化的关键应激源，而不是在传输或达到790kPa气压时发生的氧的轻度升高(Yang et al AJP 119：219，2015)。在文本中所示，在减压之前立即或减压之后立即向小鼠IV注射27mg/kg剂量的rhu-pGSN的无菌溶液(38.4mg/ml)，或仅注射载体缓冲液。在减压之后2小时，如前所述将动物麻醉并实施安乐死用于血液和组织收集[参见例如Thom SR etal，J Appl Physiol 110：340-351，2011；Yang M et al.，J Appl Physiol 112：204-211，2012]。通过以下来进行用于实验的小鼠的随机化：首先将一天中待使用的所有小鼠收集到单塑料笼中，并随后随机选择单只小鼠用作每日对照或干预组。以每两周一次的间隔，用6至12只一组购买的适应小鼠在4个月的时间内进行研究，并根据区组设计(block design)使用，其中单个区组代表被选择作为对照或仅用压力的小鼠，并随后进行进一步的实验，包括仅输注rhu-pGSN，在压力暴露之前或之后输注rhu-pGSN。数据以盲法方式进行评分和分析，使得评分者不知晓动物的组分配。参与本项目的所有小鼠均被纳入数据分析，无一排除在外。

人对象：

所有程序均根据赫尔辛基宣言(Declaration of Helsinki)来完成，并得到了参与本研究的组织的伦理委员会的批准。

参与者提供了知情书面同意书。本项目中分析的血浆样品作为最近发表的研究的一部分已被冷冻和储存[参见例如Brett KD et al.，Sci Rep in press:https:doi.org/10.1038s41598-41019-49924-41591，2019]。来自该研究的亚组包括6名男性研究对象(34±1.2(SE)岁)，其在2018年11月暴露于压力为300kPa的空气中，相当于30米的海水(metersof sea water，msw)持续35分钟，并随后根据加拿大部队标准空气减压表(CanadianForces Standard Air Decompression Table，DCIEM)进行分级减压。对象在暴露期间保持静坐休息，而不用力，并且不执行任何特定的任务。用过滤的纯空气进行增压和减压，并且不使用呼吸面罩以防止CO₂升高。来自这些个体的MP和IL-1β的数据包括在先前的出版物中[参见，例如，Brett KD et al.，sci Rep in press：https：//doi.org/10.1038/s41598-41019-49924-41591,2019]。在增压之前30分钟、处于压力25分钟之后和减压后2小时获得血液样品。将血液(约5mL)抽取到含有专有防腐剂(Streck Inc.，Omaha，NE)的Cyto-ChexBCT试管中，运送至高级作者的实验室，并进行处理，如前所述[参见例如Brett KD et al.，Sci Rep in press：https：//doi.org/10.1038/s41598-41019-49924-41591，2019]。在MP分析之前的15,000g离心步骤之后，在-80℃下储存的血浆用于pGSN测定。

对于离体人细胞研究，从健康的人志愿者中获得肝素抗凝的血液(4ml)，通过两层制备的Histopaque 1077和1119(Sigma)以400g离心30分钟以分离中性粒细胞。按照已发表的程序，将细胞在PBS中洗涤，并将浓度为9×10⁵个中性粒细胞/ml的PBS+1mM CaCl₂、1.5mMMgCl₂和5.5mM葡萄糖在室温下暴露于大气压(约100kPa)下的空气中或790kPa分压下的空气中[参见例如Thom SR et al.，J Biol Chem 289：18831-18845，2014]。

MP分离的标准程序：

用于MP分离和分析的所有试剂和溶液均用0.1μm过滤器(EMD Millipore，Billerica，MA)过滤。如前所述，通过流式细胞术分离并制备MP用于分析[参见例如Thom SRet al.，J Appl Phhysiol 110：340-351，2011；Yang M et al.，J Appl Physiol 112：204-211，2012]。简言之，将血液在1,500g下离心5分钟。向上清液添加EDTA以达到12.5mM以防止MP聚集，并在15,000g下离心30分钟。上清液用于通过流式细胞术进行亚型分析和MP计数，如[参见例如Thom SR et al.，J Appl Physiol 110：340-351，2011；Yang M et al.，JAppl Physiol 112：204-211，2012]中所述，并将样品在-80℃下冷冻用于随后的IL-1β和pGSN测定。

MP分析：

如前所述分析MP[参见例如Thom SR et al.，J Appl Physiol 110：340-351，2011；Yang M et al.，J Appl Physiol 112：204-211，2012]，简言之，用8色三激光分析仪(Miltenyi Biotec Corp.，Auburn，CA)使用MACSQuantify^TM软件第2.5版进行流式细胞术来分析数据。每隔一天用校准珠(Miltenyi Biotec Corp.，Auburn，CA)校准MACSQuant。以对数增益设置前向和侧向散射。光电倍增管电压和触发器被优化以检测亚微米颗粒。3种不同直径的微珠：0.3μm(Sigma，Inc.，St.Louis，MO)、1.0μm和3.0μm(Spherotech，Inc.，Lake Forest，IL)用于初始设置，并在每次实验之前作为内部对照。将样品混悬在膜联蛋白结合缓冲溶液(蒸馏水中1：10v/v，(BD Pharmingen，San Jose，CA))和所列抗体中。评估鬼笔环肽结合以探测F-肌动蛋白的存在。血源性颗粒分析的实例先前已经公开[参见例如Bhullar Jet al.，Fr Radic Biol Med 101：154-162，2016]。用于MP分析的所有试剂和溶液均是经灭菌和过滤的(0.1μm过滤器)。MP被定义为直径为0.3至1μm直径的膜联蛋白V阳性颗粒。通过/>分析仪根据所分析MP来自的溶液的精确体积来确定样品管中MP的浓度。

按照类似于其他人描述的那些的方法[参见例如Moroianu J et al.，PNAS 90：3815-3819，1993]，使用磺基琥珀酰亚胺基2-(生物素酰氨基)乙基-1，3-二硫代丙酸酯(NHS-SS-生物素)将来自对照和减压小鼠的MP上的表面蛋白质生物素化。将上述15,000g血浆上清液以100,000g离心1小时，并将MP重悬于不含或含100mg/ml rhu-pGSN的PBS中。在室温下孵育30分钟之后，添加冰冷的NHS-SS-生物素(0.9mg/ml)，并将样品在冰上孵育15分钟。通过添加100mM甘氨酸淬火生物素化，并通过在100,000g下离心1小时来沉淀MP。对MP沉淀进行Western印迹，或者从MP裂解物中分离生物素化的蛋白质以用于分析。

对于Western印迹，将MP重悬于含有2％十二烷基硫酸钠(sodium dodecylsulfate，SDS)、10％甘油、5％β巯基乙醇和0.00125％溴酚的100mM磷酸缓冲液中，随后使用4％至15％梯度聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)进行电泳，转移至硝化纤维素纸，并探测蛋白质中的生物素、肌动蛋白和IL-1β。或者，在超速离心之后，将MP沉淀重悬于100μl裂解缓冲液(20mM Tris、150mM NaCl、1％Nonidet P-40、0.5％脱氧胆酸钠、1mM EDTA和0.1％SDS(pH7.5)，以及蛋白酶抑制剂混合物(Sigma))中，并在冰上孵育30分钟。然后添加-streptavadin磁性纳米粒(Nvigen，Inc.，Sunnyvale，CA)并孵育12小时，然后使用磁体分离生物素化的蛋白质用于Western印迹，随后根据制造商推荐的程序进行洗涤和磁珠分离步骤。

血管通透性测定：

向小鼠注射赖氨酸可固定的四甲基罗丹明缀合的右旋糖酐(2×10⁶Da，Invitrogen，Carlsbad，CA)，以及使用胶体二氧化硅按照公开的方法制备富含内皮的组织匀浆[参见例如Thom SR et al.，Appl Physiol 110：340-351，2011；Yang M et al.，JAppl Physiol112：204-211，2012]。将实验组中量化为血管周右旋糖酐摄取的血管通透性相对于每个实验中包括的对照小鼠获得的值进行归一化。

IL-1β测量：

按照制造商说明使用检测IL-1β前体和成熟形式的人或小鼠特异性ELISA试剂盒(eBioscience，San Diego，CA)。如针对流式细胞术研究中所述，在将血液以15,000g离心之后，使用血浆上清液进行测量，并且还在通过以100,000g离心60分钟从血浆中分离的MP中进行测量。将沉淀中的MP置于0.3ml裂解缓冲液中，测量样品中的蛋白质含量，稀释至5mg/ml，并使用20μg蛋白质进行分析。

凝溶胶蛋白测定：

人和小鼠特异性的商业ELISA试剂盒(LSBio，Inc.Seattle，WA)用于根据制造商说明来测量pGSN。使用如上所述的在15,000g离心血浆之后的上清液来制备PBS中的系列稀释液，并用一系列已知的pGSN标准同时进行分析。

统计学分析：

结果表示为三个或更多个独立实验的平均值±SE。使用SigmaStat(JandelScientific，San Jose，CA)通过t检验或方差分析(ANOVA)和Newman-Keuls事后检验对数据进行比较。通过秩的重复测量方差分析(RM ANOVA)对来自人对象的数据进行比较。对于所有研究，统计学显著性水平定义为p＜0.05。

结果

人研究和鼠模型——MP、pGSN和IL-1β：

在高压室中暴露于300kPa气压之前、期间和之后2小时，从六个研究对象中获得血液样品。图1示出了MP、pGSN和血浆IL-1β之间的关系。暴露于压力导致MP和IL-1β统计学上显著的升高，并且在处于压力时pGSN降低，在减压之后pGSN水平进一步降低。

图2示出了将小鼠暴露于790kPa气压2小时对循环MP数目、pGSN和IL-1β的影响。发现了统计学上显著的变化，其中MP和血浆IL-1β的升高与pGSN的降低同时发生。当小鼠在增压之前或减压之后立即静脉内注射rhu-pGSN时，这些变化被消除。用于rhu-pGSN注射的载体缓冲液的输注对压力响应没有显著影响，并且将rhu-pGSN输注到暴露于空气的对照小鼠中没有引起统计学上显著的变化。

IL-1β分泌需要非常规途径，并且主要途径涉及包装到囊泡中以释放至胞外环境[参见例如Cypryk W et al., Front Immunol 9：2188，2018]，在六名人对象中以Pg/百万MP表示的MP内IL-1β浓度在压力前为24.5±5.4(SE)，处于压力时为98.2±17.5，在减压后为126.9±20.8(通过RM ANOVA，所有三项中均p＜0.05)。在小鼠中观察到减压之前与之后的类似关系(表1)。预防性rhu-pGSN施用不能阻止颗粒内IL-1β浓度的提高，而减压后的治疗确实消除了该升高(参见表1中的第5行和最后一行)。

表1鼠IL-1β/百万MP。数据示出了从如图2的说明中所述操作的雄性小鼠中获得的作为平均值+SE的MP内IL-1β的浓度(pg/百万MP)。示出了每组的(n)，*表示与对照显著不同，p＜0.05，ANOVA。

组	Pg/百万MP
		对照(22)	10.2±1.2
对照+pGSN(4)	9.6±1.3
		减压(11)	35.2±6.1*
载剂+减压(4)	33.8±5.2*
		pGSN+减压(4)	47.9±6.8*
减压+pGSN(4)	13.9±4.0

鼠模型-血管通透性：

进行研究以评价rhu-pGSN在减压模型中对组织损伤是否具有作用。在减压之后2小时，在骨骼肌和脑中，对罗丹明标记的右旋糖酐的血管通透性显著升高(表2)。在增压之前或者在减压之后立即接受rhu-pGSN的小鼠中，血管渗漏被消除。当正常暴露于空气中的小鼠注射了rhu-pGSN时，通透性与对照没有显著性差异。

表2.2×10⁶Da罗丹明标记的右旋糖酐的鼠血管渗漏。在如图2说明中所述操作的小鼠中，如方法中所述来评价脑和腿骨骼肌中右旋糖酐的外渗。数据是罗丹明-右旋糖酐/mg组织蛋白(平均值+SE)相对于与每个实验组同时处理的对照小鼠中值的倍数差异。样品号表示为(n)，*表示与对照显著不同，p＜0.05，ANOVA。

	脑	肌肉
			对照+pGSN(4)	1.1±0.1	1.1±0.1
减压(6)	4.8±1.4*	2.9±1.5*
			载剂+减压(6)	4.6±0.9*	2.3±0.7*
pGSN+减压(4)	1.3±0.2	1.1±0.2
			减压+pGSN(4)	1.4±0.2	1.0±0.2

MP表面蛋白表达模式：

MP亚型基于表面蛋白的表达来表征。如在过去的研究中，在减压的小鼠中发现了更高数目的各亚型[参见例如

Thom SR et al.，J Appl Physiol(1985)125：1339-1348，2018；Thom SR et al.，J Appl Physiol 112：1268-1278，2012；Thom SR et al.，J Appl Physiol 114：1396-1405，2013；Thom SR et al.，J Appl Physiol 110：340-351，2011]。将总MP数目乘以表3中所示各亚型的％，即可得出值。然而，值得注意的是，严格观察各类型的％洞察了MP可能的细胞来源的差异。表3示出了在来自减压小鼠和注射了载体缓冲液的减压小鼠的表达Ly6G(中性粒细胞膜蛋白)和符合内皮细胞的模式的那些(基于CD31[血小板-内皮细胞黏附蛋白]的表达，但对CD41[血小板特异性β₃黏附分子的组分]无效)的MP的分数与对照之间的统计学上显著性差异。在减压之前或之后施用rhu-pGSN的小鼠中，表达Ly6G的分数再次与对照显著不同，与接近对照水平的表达内皮细胞标志物的亚型形成对比。因此，施用rhu-pGSN防止了响应于减压而产生内皮来源MP。如基于先前报道所预期的，当将所有亚型相加时，总数超过100％，可表明由于血流中的碰撞，表面蛋白在MP中是共享的[参见例如Thom SR etal.，J Appl Physiol 110：340-351，2011]。

考虑到pGLN的一个生化作用是切割F-肌动蛋白，因此还检查了鬼笔环肽作为F-肌动蛋白指标的微粒结合[参见例如Fu L et al.，Front Immunol 8：917，2017；LjtibkovicM et al.，J Appl Physiol 109：1670-1 674，2010]，如所示的，在减压小鼠中，结合鬼笔环肽的微粒分数提高了8倍。值得注意的是，在注射了pGSN的小鼠中，微粒的鬼笔环肽结合与对照没有显著不同。

表3.小鼠中的MP亚型。在如图2的说明中所述操作的小鼠中，对血源性MP进行定量。进行流式细胞术测量以量化所有直径为0.3至1μm的膜联蛋白V阳性颗粒的数目(图2中的数据)以及表达特定于某些细胞的蛋白[Ly6G(成熟中性粒细胞)、CD14(所有白细胞)、CD31(血小板和内皮)、CD41(血小板)、CD31+/CD41-dim(内皮，标记的EC)]的那些的分数以及结合鬼笔环肽(Phall)的那些的分数。数据为平均值+SE，n针对每个样品示出，*表示与对照显著不同，p＜0.05，ANOVA。

存在于MP膜上的肌动蛋白：

在注射了rhu-pGSN的减压小鼠中MP的损失可表明F-肌动蛋白可以是其在颗粒表面上的靶标，鉴于pGSN的一个生化作用是结合并随后切割F-肌动蛋白[参见例如Lee PS etal.，Am Soc Nephrol 20：1140-1148，2009；Ordija CM et al.，Am J Physiol LumgCellMol Physiol 312：L101 8-L1028， 2017]。为了研究这种可能性，使用流式细胞术来评价荧光标记的鬼笔环肽是否与MP结合。如表3中所示，在减压小鼠中，结合鬼笔环肽的MP的分数提高了8倍。在注射了rhu-pGSN的减压小鼠中，MP的鬼笔环肽结合与对照没有显著不同。

使用NHS-SS-生物素通过选择性表面蛋白质生物素化来找寻评估肌动蛋白是否存在于MP表面上的支持证据(参见本文中方法)。图3是四个显示出显著的43kDa生物素化蛋白质带也被抗β-肌动蛋白识别的代表性Western印迹。在重复实验中，来自减压小鼠的MP的43kDa蛋白质条带是对照MP的条带的2.9±0.3倍浓密(n＝4，p＜0.05)。当与200μg/ml rhu-pGSN(与正常血浆相当-参见图1)一起孵育时，对照MP的条带密度降低了26.3±4.3％，而在来自减压小鼠的MP下，条带密度降低了61.1±3.2％(p＜0.05)。在成熟和前IL-1β分别位于的17或31kDa处没有观察到生物素化的蛋白质条带，当对IL-1β进行Western印迹探测时也没有检出条带。已报道了IL-1β存在于来自减压小鼠的MP内部，但不吸附于MP表面[参见例如Thom SR et al.，J Appl Physiol(1985)125：1339-1348，2018]，因此，NHS-SS-生物素标记的膜表面蛋白质并不能接近内部的MP蛋白。

还使生物素化的蛋白质与非生物素化的蛋白质分离以用于分析。图4示出了使用来自从对照和减压小鼠中分离的生物素化MP的裂解物来探测生物素和β-肌动蛋白的代表性Western印迹。在四次重复中，没有检测到IL-1β。此外，结果表明大多数MP β-肌动蛋白存在于膜表面，并在生物素阴性的MP中仅检测到少量。

rhu-pGSN与鼠MP孵育的离体研究：

当将从对照和减压小鼠中分离的MP混悬在缓冲液中时，颗粒数在2小时的离体孵育中是稳定的(图5A)。从对照或减压的雄性小鼠中获得血液并进行离心，如方法中所述。将MP混悬液划分，并在所示的时间0处添加200μg/ml的rhu-pGSN。以30分钟的间隔固定样品。图5A中示出了剩余MP的数目。图5B示出了结合抗凝溶胶蛋白抗体和鬼笔环肽的MP的％。仅深色阴影框(dark shaded box)中的值与时间0时的值在统计学上具有显著性差异(p＜0.05，ANOVA)。然而，如果将rhu-pGSN添加至混悬液，则来自减压但非对照小鼠的MP被裂解。在固定每个样品之后，添加荧光鬼笔环肽和识别小鼠和人pGSN的荧光团标记的抗体，以评价颗粒表面F-肌动蛋白和pGSN结合。图5C的图示出了，只有来自与rhu-pGSN孵育的减压小鼠的MP的结合鬼笔环肽的分数降低。四组的表面结合pGSN值为：对照MP为11.5±1.8％，添加rhu-pGSN的对照MP为12.1±3.3％(NS)，来自减压小鼠的MP为15.2±3.6(NS)，以及来自添加rhu-pGSN的减压小鼠的MP为26.6±4.4(p＜0.05，ANOVA)。在2小时的研究过程中，这些值没有显著变化。

由于F-肌动蛋白的切割以及还由于置换事件，因此凝溶胶蛋白可以降低鬼笔环肽与F-肌动蛋白的结合[参见例如Allen PG et al.，J Biol Chem 269：32916-32923，1994；Kinosian HJ et al.，Biochemistry 35：16550-16556，1996]。

本文中所述的实验结果表明，当在等浓度的非荧光和荧光鬼笔环肽存在下进行实验时，MP裂解和pGSN结合的动力学没有改变(数据未显示)，这表明与减压MP结合的荧光鬼笔环肽的降低是由于F-肌动蛋白切割引起。

rhu-pGSN与人中性粒细胞孵育的离体研究：

在某些研究中，分离来自对照和减压后小鼠的微粒并将其混悬在缓冲液中，在2小时的离体孵育中产生稳定的颗粒数(图5)。然而，如果将pGLN以200μg/ml的浓度(与血浆的浓度相当-参见图1)添加至混悬液，则来自减压小鼠的pGLN裂解。在固定每个样品之后，添加荧光鬼笔环肽和针对凝溶胶蛋白的荧光团标记的抗体，以评价颗粒表面F-肌动蛋白和pGLN的结合。在没有添加pGLN的减压后样品和对照二者中，变化是微不足道的，但是当减压微粒在存在pGLN下孵育时，鬼笔环肽和凝溶胶蛋白的存在以相反的方向变化。

检查rhu-pGSN对人中性粒细胞的作用，因为先前的研究已表明在DCS模型中中性粒细胞在MP产生和血管损伤中发挥主要作用[参见例如

Thom SR et al.，J Appl Physiol 119：427-434，2015；Thom SR et al.，J ApplPhysiol(1985)126：1006-1014，2019；Thom SR et al.，J Appl Physiol(1985)125：1339-1348，2018；Thom SR et al.，J Appl Physiol 110：340-351，2011]。已确定，当人细胞在高气压下孵育时，MP产生在30分钟内最大，无论细胞保持在压力下还是被减压，都没有进一步的产生[参见例如Thom SR et al.，J Biol Chem 289：18831-18845，2014]，当暴露于790kPa气压时，人中性粒细胞(1.5×10⁵个在200μl缓冲液中)在30分钟内产生1885±139(SE，n＝10)MP/μl。如果使细胞在存在200μg/ml rhu-pGSN的情况下在790kPa下孵育，则产生显著更少的MP，657±93/μl(n＝10，p＜0.05)。在环境压力下的空气中孵育的细胞悬液在孵育开始时为493±71MP/μl，在结束时为538±52MP/μl(无显著差异)，并且在rhu-pGSN存在下这些数值没有变化。

在以下这样的研究中研究了中性粒细胞混悬液：其中将混悬液首先在环境压力下或在790kPa下的空气中孵育30分钟，并在每次压力后添加rhu-pGSN。图6中的时间0表示添加了200μg/ml的rhu-pGSN。以30分钟的间隔固定样品中的细胞和MP，通过离心分离，并通过流式细胞术分析。虽然rhu-pGSN对中性粒细胞数目或生存力没有影响(数据未显示)，但其确实影响了减压细胞的表面染色模式。图6中的第一幅图示出了用荧光鬼笔环肽染色的中性粒细胞的分数。对照细胞表现出相对低的鬼笔环肽结合，并且随着时间没有显著变化。首先经受压力的细胞上的鬼笔环肽结合与对照显著不同，但在存在rhu-pGSN下随时间而降低。图6中的第二幅图示出了用凝溶胶蛋白抗体进行的中性粒细胞染色。同样，对照细胞表现出相对低的染色，并且随时间没有变化。然而，已经暴露于高压的细胞具有显著更多的凝溶胶蛋白抗体染色，并且在2小时内值下降，这与鬼笔环肽结合下降平行。

图6中接下来的三幅示出了与混悬液中存在的MP相关的数据。向对照制剂添加rhu-pGSN不会改变MP、鬼笔环肽结合或凝溶胶蛋白抗体结合的数目。在期中添加rhu-pGSN的暴露于压力的混悬液中，MP的数目和高鬼笔环肽结合的分数随时间显著降低，而用凝胶溶蛋白抗体染色的分数提高。值得注意的是，凝胶溶蛋白抗体结合在对照样品中开始时相当高。当中性粒细胞首先从血液中去除时，这些是存在于血浆中的微粒，因为当暴露于环境压力下的空气时，微粒不由细胞产生。与此相反，在2小时的孵育时间内，混悬在缓冲液中的暴露于压力的中性粒细胞产生的微粒表现出提高的凝溶胶蛋白抗体结合。

讨论：

暴露于高压降低了人和小鼠血液中的pGSN，同时升高了MP和IL-1β(图1和2)。在小鼠中，含有高浓度IL-1β的MP造成弥漫性毛细血管渗漏[参见例如

Thom SR et al.，J Appl Physiol(1985)126：1006-1014，2019；Thom SR et al.，J.Appl Physiol(1985)125：1339-1348，2018]。在减压的小鼠中，MP上表达的表面蛋白质表现出显著更多的CD31+/CD41-dim，这与内皮细胞的活化/损伤以及Ly6G一致，表明为中性粒细胞来源(表3)。在加压/减压之前或之后向小鼠施用rhu-pGSN防止了MP总数、血浆中IL-1β浓度、来自内皮的MP亚群和毛细血管渗漏的升高(图2，表2)。当预防性施用rhu-pGSN时，MP内IL-1β浓度在减压之后升高，而rhu-pGSN治疗在减压后导致MP内IL-1β浓度与对照无显著性差异(表1)。结果表明，这些差异可以通过离体评价rhu-pGSN对MP和中性粒细胞的影响的数据来解释。

pGSN的一个生化作用是结合并随后切割F-肌动蛋白，该过程被认为消除了血管内损伤和器官损伤[参见例如Lee PS et al.，Am Soc Nephrol 20：1140-1148，2009；OrdijaCM et al.，Am JPhysiol Lung Cell Mol Physiol 312：L1018-L1028，2017]。其他人已经表明循环F-肌动蛋白与pGSN水平之间的互补关系、血浆中pGSN-肌动蛋白复合物的存在、以及循环pGSN的损耗与损伤部位处的局部隔离(local sequestration)[参见例如Khatri Net al.，J Diab Res 2014：152075：2014；Lee PS et al.，Am Soc Nephrol 20：1140-1148，2009；Lind SE et al.，An Rev Respir Dis 138：429-434，1988；Lu C-H et al.，ArchBiochem Biophys 529：146-156，2013]。图3和4示出了肌动蛋白存在于MP膜表面上，尤其是来自减压小鼠的那些，并且鬼笔环肽结合(表3，图5)表明F-肌动蛋白的存在。类似地，由高气压刺激的人中性粒细胞离体产生的MP也表现出高的鬼笔环肽结合(图6)。当rhu-pGSN添加至鼠或人MP混悬液时，其优先与压力产生的MP结合，并且当结合鬼笔环肽的分数降低时，MP裂解。因此，本文中所述的实验结果表明pGSN与F-肌动蛋白结合，并且切割使得MP对渗透裂解敏感。

在压力暴露下的人和小鼠中，循环pGSN与MP之间的反比关系(图1和图2)被解释为上升，因为pGSN与递增数目的MP结合。此外，表3表明，注射了rhu-pGSN的减压小鼠中结合鬼笔环肽的MP的分数与对照没有显著性差异。这一观察表明MP裂解是选择性的，并且rhu-pGSN不破坏表现出低鬼笔环肽结合的MP。在图5中的离体鼠MP和图6中的人MP中观察到相同的关系。Rhu-pGSN裂解鬼笔环肽阳性MP，在孵育2小时之后在制剂中留下与对照样品中存在的相同数目的MP。然而，鬼笔环肽结合不是被rhu-pGSN裂解的易感性的定量指标。图5中约20％的压力后鼠MP和图6中的14％在时间0时表现出鬼笔环肽结合，并且该分数在2小时的研究中降至约4％。在同一时期，MP的总数目下降了约80％(从2600至2800/μl降至约500至520/μl)。这种差异可能是由于F-肌动蛋白在一些MP上的结合低于由流式细胞术检测的阈值，或者是由于MP上另外的pGSN配体，例如阴离子磷脂。

已经在血小板、中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、内皮细胞和交感肾上腺/儿茶酚胺能细胞的膜表面上检测到肌动蛋白[参见例如Dudani AK et al.，Br JHaematol 95：168-178，1996；Fu L et al.，Front Immunol8：917，2017；Miles LA et al.，J Neurosci26：13017-13024，2006；Pardridge WM et al.，J Cereb Blood Flow Metab 9：675-680，1989；Por SB et al.，J Histochem Cytochem 39：981-985，1991；Smalheiser NR，Proteins in unexpected locations.Mol Biol Cell 7：1003-1014，1996]。最近的一项研究发现，巨噬细胞MP的产生需要胞外F-肌动蛋白，其显示出影响丝状体(filopodia)处的胱天蛋白酶-1的激活[参见例如Rothmeier AS et al.，J Clin Invest 125：1471-1484，2015]。本文中所述的实验结果表明，离体暴露于高气压的约80％的人中性粒细胞表现出鬼笔环肽结合，相对于对照细胞中为仅20％(图6)。高压惰性气体通过触发氧化应激来刺激中性粒细胞[参见例如Thom SR et al.，J Biol Chem 289：18831-18845，2014]，并且现在显示出细胞表面上的F-肌动蛋白表达与该过程相关。显示胞外F-肌动蛋白响应于压力而被转移至从细胞表面出芽的新产生的MP是合理的，这解释了为什么压力产生的MP表现出更高的鬼笔环肽结合，以及为什么rhu-pGSN选择性地影响减压的小鼠MP相对于对照小鼠的MP(图2和5)和压力产生的人MP(图6)。

本文中所述的研究结果表明凝溶胶蛋白抗体结合控制小鼠和人MP。关于人中性粒细胞研究(图6)，在环境压力下孵育期间未产生MP，因此对照样品中存在的MP是从血浆中携带出来的。对照MP显示出仅具有少量的F-肌动蛋白，因为它们表现出相对低的鬼笔环肽结合(约3.5％)，但是pGSN显示出存在于约40％的MP上。除F-肌动蛋白外，pGSN结合可能存在替代机制。pGSN对与纤连蛋白结合具有高亲和力。其他人已经表明pGSN细胞附着可以通过可溶性纤连蛋白介导，该纤连蛋白将通过整联蛋白和糖蛋白附着至细胞膜[参见例如Bohgaki M et al.，J Cell Mol Med 15：141-151，2011；Giancotti FG et al.，J CellBiol 103：429-437，1986]。

图6还示出了rhu-pGSN切割减压后中性粒细胞表面上的F-肌动蛋白，如鬼笔环肽结合的下降所表明的。pGSN抗体的结合平行下降，表明随着F-肌动蛋白被切割，pGSN不能再与中性粒细胞膜结合。另外，发现在暴露于高压时，人中性粒细胞中包含rhu-pGSN将MP产生抑制约65％(1885±139MP/ul相对于657±93/ul)。因此，表面F-肌动蛋白可以是响应于气压产生MP所必需的。这反映了除直接MP裂解之外的单独作用，并且该作用可能是预防性输注了rhu-pGSN的小鼠与在减压之后注射的小鼠之间MP内IL-1β浓度所示的差异的基础(见表1)。减压后施用实际上破坏了所有压力诱导的MP，包括携带高IL-1β的MP，而预防性rhu-pGSN施用阻止但不能完全防止MP的产生。

来自这项研究的结果强调了MP作为细胞因子载体的作用。在减压小鼠中注射rhu-pGSN之后2小时内从血浆中清除了IL-1β(图2)。简单地裂解MP不会立即降低IL-1β的血浆浓度，但是裂解消除了由IL-1β介导的毛细血管渗漏[参见例如Thom SR et al.，J ApplPhysiol(1985)126：1006-1014，2019；Thom SR et al.，J Appl Physiol(1985)125：1339-1348，2018]。因此，MP显示出具有将IL-1β靶向内皮的重要作用。这是仍然了解贫乏的领域，并且值得进一步研究。本文中所述的研究结果表明，补充了rhu-pGSN可以通过降低炎性MP来预防或逆转DCS。这代表了可与许多炎性损伤有关的rhu-GSN的新作用。

实施例2

从对象中获得包含血液的生物样品并检测样品中的微粒。检查所检测的微粒以确定包含IL-1β特征、淋巴细胞抗原6复合基因座G6D(Ly6G)特征或CD66b特征的微粒的存在或不存在。

在样品中检测IL-1β特征的存在，能确定从其获得生物样品的对象中特征性MP相关疾病或病症的存在。至少部分地基于IL-1β特征的调查结果，为对象选择治疗方案以治疗特征性MP相关疾病或病症。向对象施用治疗方案。

实施例3

将对象鉴定为患有特征性MP相关疾病或病症，并向对象施用有效量的凝溶胶蛋白剂作为特征性MP相关疾病或病症的治疗。凝溶胶蛋白剂在对象中治疗特征性MP相关疾病或病症方面是有效的。

实施例4

在对象中预防了特征性MP相关疾病或病症。向处于暴露于使对象处于特征性MP相关疾病或病症的风险升高的事件或环境条件的风险中的对象施用有效量的凝溶胶蛋白剂，以与对照风险相比降低对象中特征性MP相关疾病或病症的风险和/或严重程度，所述对照风险例如但不限于在没有施用凝溶胶蛋白剂的情况下的对象的风险。凝溶胶蛋白剂在以下中一者或更多者处施用于对象：在对象暴露于该事件或环境条件之前、期间和之后。在一些研究中，该事件包括水肺潜水。在一些研究中，环境条件包括暴露于一氧化碳或使对象处于特征性MP相关疾病或病症的风险中的其他气体。

等同方案

虽然本文中已经描述并举例说明了本发明的数个实施方案，但是本领域普通技术人员将容易想到用于执行本文中所述功能和/或获得本文中所述结果和/或一个或更多个优点的多种其他方式和/或结构，并且每个这样的变化和/或修改均被认为在本发明的范围内。更一般地，本领域技术人员将容易理解，本文中所述的所有参数、尺寸、材料和配置意在是示例性的，并且实际的参数、尺寸、材料和/或配置将取决于使用本发明教导的具体的一个或更多个应用。本领域技术人员将认识到或仅使用常规实验就能够确定本文中所述的本发明具体实施方案的许多等同方案。因此，应理解，前述实施方案仅以实例的方式呈现，并且在所附权利要求书及其等同方案的范围内，本发明可以以不同于具体描述且要求保护的方式来实施。本发明涉及本文中所述的每个单独特征、系统、制品、材料和/或方法。此外，如果这样的特征、系统、制品、材料和/或方法不相互不一致，则这样的特征、系统、制品、材料和/或方法中的两个或更多个的任意组合包括在本发明的范围内。

如本文中所定义和使用的所有定义应理解为优先于字典定义、通过引用并入的文献中的定义和/或所定义术语的通常含义。

除非明确地指出相反，否则如本文在说明书和权利要求书中使用的没有数量词修饰的名词应理解成意指“至少一者”。

如本文在说明书中和权利要求书中使用的短语“和/或”应理解为意指如此结合的要素中的“任一者或两者”，即在一些情况下共同存在而在另一些情况下分开存在的要素。除非明确指出相反，否则除由“和/或”短语明确确定的要素之外可以任选地存在其他要素，不管与这些明确确定的要素相关还是不相关。

本申请中引用或参考的所有参考文献、专利和专利申请以及出版物在此通过引用整体并入本文。

序列表

<110> BioAegis Therapeutics Inc.

University of Maryland, Baltimore

Levinson, Susan L

Thom, Stephen R

DiNubile, Mark J

Stossel, Thomas P

<120> 用于鉴定和治疗微粒相关疾病和病症的组合物和方法

<130> BGS-002WO(01)

<140> 尚未分配

<141> 与此同时

<150> US 63/082,277

<151> 2020-09-23

<150> US 63/148,808

<151> 2021-02-12

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 782

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 1

Met Ala Pro His Arg Pro Ala Pro Ala Leu Leu Cys Ala Leu Ser Leu

1 5 10 15

Ala Leu Cys Ala Leu Ser Leu Pro Val Arg Ala Ala Thr Ala Ser Arg

20 25 30

Gly Ala Ser Gln Ala Gly Ala Pro Gln Gly Arg Val Pro Glu Ala Arg

35 40 45

Pro Asn Ser Met Val Val Glu His Pro Glu Phe Leu Lys Ala Gly Lys

50 55 60

Glu Pro Gly Leu Gln Ile Trp Arg Val Glu Lys Phe Asp Leu Val Pro

65 70 75 80

Val Pro Thr Asn Leu Tyr Gly Asp Phe Phe Thr Gly Asp Ala Tyr Val

85 90 95

Ile Leu Lys Thr Val Gln Leu Arg Asn Gly Asn Leu Gln Tyr Asp Leu

100 105 110

His Tyr Trp Leu Gly Asn Glu Cys Ser Gln Asp Glu Ser Gly Ala Ala

115 120 125

Ala Ile Phe Thr Val Gln Leu Asp Asp Tyr Leu Asn Gly Arg Ala Val

130 135 140

Gln His Arg Glu Val Gln Gly Phe Glu Ser Ala Thr Phe Leu Gly Tyr

145 150 155 160

Phe Lys Ser Gly Leu Lys Tyr Lys Lys Gly Gly Val Ala Ser Gly Phe

165 170 175

Lys His Val Val Pro Asn Glu Val Val Val Gln Arg Leu Phe Gln Val

180 185 190

Lys Gly Arg Arg Val Val Arg Ala Thr Glu Val Pro Val Ser Trp Glu

195 200 205

Ser Phe Asn Asn Gly Asp Cys Phe Ile Leu Asp Leu Gly Asn Asn Ile

210 215 220

His Gln Trp Cys Gly Ser Asn Ser Asn Arg Tyr Glu Arg Leu Lys Ala

225 230 235 240

Thr Gln Val Ser Lys Gly Ile Arg Asp Asn Glu Arg Ser Gly Arg Ala

245 250 255

Arg Val His Val Ser Glu Glu Gly Thr Glu Pro Glu Ala Met Leu Gln

260 265 270

Val Leu Gly Pro Lys Pro Ala Leu Pro Ala Gly Thr Glu Asp Thr Ala

275 280 285

Lys Glu Asp Ala Ala Asn Arg Lys Leu Ala Lys Leu Tyr Lys Val Ser

290 295 300

Asn Gly Ala Gly Thr Met Ser Val Ser Leu Val Ala Asp Glu Asn Pro

305 310 315 320

Phe Ala Gln Gly Ala Leu Lys Ser Glu Asp Cys Phe Ile Leu Asp His

325 330 335

Gly Lys Asp Gly Lys Ile Phe Val Trp Lys Gly Lys Gln Ala Asn Thr

340 345 350

Glu Glu Arg Lys Ala Ala Leu Lys Thr Ala Ser Asp Phe Ile Thr Lys

355 360 365

Met Asp Tyr Pro Lys Gln Thr Gln Val Ser Val Leu Pro Glu Gly Gly

370 375 380

Glu Thr Pro Leu Phe Lys Gln Phe Phe Lys Asn Trp Arg Asp Pro Asp

385 390 395 400

Gln Thr Asp Gly Leu Gly Leu Ser Tyr Leu Ser Ser His Ile Ala Asn

405 410 415

Val Glu Arg Val Pro Phe Asp Ala Ala Thr Leu His Thr Ser Thr Ala

420 425 430

Met Ala Ala Gln His Gly Met Asp Asp Asp Gly Thr Gly Gln Lys Gln

435 440 445

Ile Trp Arg Ile Glu Gly Ser Asn Lys Val Pro Val Asp Pro Ala Thr

450 455 460

Tyr Gly Gln Phe Tyr Gly Gly Asp Ser Tyr Ile Ile Leu Tyr Asn Tyr

465 470 475 480

Arg His Gly Gly Arg Gln Gly Gln Ile Ile Tyr Asn Trp Gln Gly Ala

485 490 495

Gln Ser Thr Gln Asp Glu Val Ala Ala Ser Ala Ile Leu Thr Ala Gln

500 505 510

Leu Asp Glu Glu Leu Gly Gly Thr Pro Val Gln Ser Arg Val Val Gln

515 520 525

Gly Lys Glu Pro Ala His Leu Met Ser Leu Phe Gly Gly Lys Pro Met

530 535 540

Ile Ile Tyr Lys Gly Gly Thr Ser Arg Glu Gly Gly Gln Thr Ala Pro

545 550 555 560

Ala Ser Thr Arg Leu Phe Gln Val Arg Ala Asn Ser Ala Gly Ala Thr

565 570 575

Arg Ala Val Glu Val Leu Pro Lys Ala Gly Ala Leu Asn Ser Asn Asp

580 585 590

Ala Phe Val Leu Lys Thr Pro Ser Ala Ala Tyr Leu Trp Val Gly Thr

595 600 605

Gly Ala Ser Glu Ala Glu Lys Thr Gly Ala Gln Glu Leu Leu Arg Val

610 615 620

Leu Arg Ala Gln Pro Val Gln Val Ala Glu Gly Ser Glu Pro Asp Gly

625 630 635 640

Phe Trp Glu Ala Leu Gly Gly Lys Ala Ala Tyr Arg Thr Ser Pro Arg

645 650 655

Leu Lys Asp Lys Lys Met Asp Ala His Pro Pro Arg Leu Phe Ala Cys

660 665 670

Ser Asn Lys Ile Gly Arg Phe Val Ile Glu Glu Val Pro Gly Glu Leu

675 680 685

Met Gln Glu Asp Leu Ala Thr Asp Asp Val Met Leu Leu Asp Thr Trp

690 695 700

Asp Gln Val Phe Val Trp Val Gly Lys Asp Ser Gln Glu Glu Glu Lys

705 710 715 720

Thr Glu Ala Leu Thr Ser Ala Lys Arg Tyr Ile Glu Thr Asp Pro Ala

725 730 735

Asn Arg Asp Arg Arg Thr Pro Ile Thr Val Val Lys Gln Gly Phe Glu

740 745 750

Pro Pro Ser Phe Val Gly Trp Phe Leu Gly Trp Asp Asp Asp Tyr Trp

755 760 765

Ser Val Asp Pro Leu Asp Arg Ala Met Ala Glu Leu Ala Ala

770 775 780

Claims (104)

1.在对象中确定特征性MP相关疾病或病症的存在的方法，其包括：

(a)在从怀疑患有特征性MP相关疾病或病症的对象中获得的生物样品中检测微粒的存在；

(b)将所检测的微粒鉴定为包含IL-1β特征、淋巴细胞抗原6复合基因座G6D(Ly6G)特征或CD66b特征；其中所述IL-1β、Ly6G或CD66b特征的鉴定确定了在所述对象中存在所述特征性MP相关疾病或病症；

(c)至少部分地基于所确定的所述对象中所述特征性MP相关疾病或病症的存在，为所述对象选择治疗方案；以及

(d)向所述对象施用所选择的治疗方案以治疗所述特征性MP相关疾病或病症。

2.权利要求1所述的方法，其中所述IL-1β特征、所述Ly6G特征和所述CD66b特征基于：(1)所述生物样品中存在分别含有IL-1β、Ly6G和CD66b中一种或更多种的MP；以及(2)相对于所述生物样品中MP总数目，分别含有IL-1β、Ly6G和CD66b中一种或更多种的MP的数目。

3.权利要求1所述的方法，其还包括在所述生物样品中确定含有IL-1β、Ly6G和CD66b中一种或更多种的总微粒的相对数目。

4.权利要求1所述的方法，其还包括在所述生物样品中确定含有IL-1β、Ly6G和CD66b中一种或更多种的总微粒的百分比。

5.权利要求4所述的方法，其中当所述样品中含有IL-1β的微粒的总数目的百分比为以下时，则指示所述IL-1β特征：至少2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。

6.权利要求4所述的方法，其中当所述样品中含有Ly6G的微粒的总数目的百分比为以下时，则指示所述Ly6G特征：至少2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。

7.权利要求4所述的方法，其中当所述样品中含有CD66b的微粒的总数目的百分比为以下时，则指示所述CD66b特征：至少2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。

8.权利要求1所述的方法，其中所述治疗方案包括向被确定为患有所述特征性MP相关疾病或病症的对象施用有效量的凝溶胶蛋白剂以治疗所述特征性MP相关疾病或病症。

9.权利要求8所述的方法，其中与针对所述特征性MP相关疾病或病症的对照治疗作用相比，施用所述凝溶胶蛋白剂针对所述对象中所述特征性MP相关疾病或病症具有更大的治疗作用。

10.权利要求9所述的方法，其中所述对照治疗作用等于在没有施用所述凝溶胶蛋白剂的情况下针对对象中所述特征性MP相关疾病或病症的作用。

11.权利要求1所述的方法，其中所述特征性MP相关疾病或病症为：缺氧、减压病、急性高碳酸血症、慢性高碳酸血症、睡眠呼吸暂停、类固醇抗性哮喘或缺氧缺血性脑病、毒性气体毒害或窒息性气体毒害。

12.权利要求11所述的方法，其中所述毒性气体包含一氧化碳或光气。

13.权利要求11所述的方法，其中所述窒息性气体包含：甲烷、氮气、氩气、氦气、丁烷或丙烷。

14.权利要求1所述的方法，其中所述特征性MP相关疾病或病症为：视网膜病变、阿尔茨海默病、多发性硬化、或者2型糖尿病后遗症。

15.权利要求1所述的方法，其中所述特征性MP相关疾病或病症是以下中之一：慢性阻塞性肺病(COPD)、胸壁畸形、神经肌肉疾病、肥胖低通气综合征、呼吸衰竭、肺炎的缺氧后遗症或急性重度哮喘。

16.权利要求15所述的方法，其中所述神经肌肉疾病为重症肌无力。

17.权利要求1所述的方法，其中所述凝溶胶蛋白剂包含凝溶胶蛋白分子、其功能片段、或所述凝溶胶蛋白分子的功能衍生物。

18.权利要求17所述的方法，其中所述凝溶胶蛋白分子是血浆凝溶胶蛋白(pGSN)。

19.权利要求17或18所述的方法，其中所述溶胶蛋白分子是重组凝溶胶蛋白分子。

20.权利要求8所述的方法，其中所述凝溶胶蛋白剂以约3mg/kg至约24mg/kg的剂量施用。

21.权利要求1所述的方法，其中与不施用所述凝溶胶蛋白剂的对照的所述特征性MP相关疾病或病症的严重程度相比，施用所述凝溶胶蛋白剂在所述对象中将所述特征性MP相关疾病或病症的严重程度降低至少1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。

22.权利要求1所述的方法，其还包括在所述对象中确定所述特征性MP相关疾病或病症的严重程度的水平，其中用于确定的手段包含以下中一种或更多种：测定、观察所述对象、评估所述对象中所述特征性MP相关疾病或病症的一种或更多种生理症状、评估所述对象的病史、以及评估所述对象的存活可能性。

23.权利要求22所述的方法，其中所述生理症状包含以下中一者或更多者：呼吸急促、低血氧饱和度、无意识、呼吸受损、头痛、血管通透性、中毒症状、虚弱、认知损害、肌肉痉挛、震颤、协调受损、视觉症状、视力丧失和目盲。

24.权利要求22所述的方法，其中所述对象的病史包含以下中一者或更多者：暴露于显著高水平的CO₂、暴露于显著高水平的CO、水肺潜水和出现在高海拔。

25.权利要求22所述的方法，其中所述生理症状包含肺病理。

26.权利要求21所述的方法，其中与对照存活可能性相比，施用有效量的所述凝溶胶蛋白剂提高了所述对象的存活可能性。

27.权利要求26所述的方法，其中所述对照存活可能性是在没有施用有效量的所述凝溶胶蛋白剂的情况下的存活可能性。

28.权利要求26或27所述的方法，其中施用有效量的所述凝溶胶蛋白剂的对象的存活可能性比所述对照存活可能性高至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或100倍。

29.权利要求1所述的方法，其中所述凝溶胶蛋白剂的施用手段是经口、舌下、经颊、鼻内、静脉内、肌内、鞘内、腹膜内、皮下、皮内、表面、直肠、阴道、滑膜内或眼内施用。

30.权利要求1所述的方法，其中所述对象是哺乳动物，并且任选地是人。

31.权利要求1所述的方法，其中所述生物样品包含血液样品。

32.权利要求1所述的方法，其中所述特征性MP相关疾病或病症不是感染。

33.权利要求1所述的方法，其中所述特征性MP相关疾病或病症是感染后后遗症。

34.权利要求1所述的方法，其中所述对象不患有慢性哮喘。

35.权利要求1所述的方法，其中所述对象不患有活动性肺感染。

36.权利要求1所述的方法，其中所述凝溶胶蛋白剂施用于所述对象1、2、3、4、5、6、7、8次或更多次。

37.用于在对象中治疗特征性MP相关疾病或病症的方法，所述方法包括向患有或怀疑患有所述特征性MP相关疾病或病症的对象施用有效量的凝溶胶蛋白剂，其中与针对所述特征性MP相关疾病或病症的对照治疗作用相比，施用的凝溶胶蛋白剂针对所述特征性MP相关疾病或病症具有更好的治疗作用。

38.权利要求37所述的方法，其中所述对照包含不施用所述凝溶胶蛋白剂的治疗作用。

39.权利要求37或38所述的方法，其中所述治疗作用比所述对照治疗作用大至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、125％、150％、175％或200％。

40.权利要求37所述的方法，其中与不施用所述凝溶胶蛋白剂的对照的所述特征性MP相关疾病或病症的严重程度相比，施用所述凝溶胶蛋白剂在所述对象中将所述特征性MP相关疾病或病症的严重程度降低至少1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。

41.权利要求37所述的方法，其中所述特征性MP相关疾病或病症为：缺氧、减压病、急性高碳酸血症、慢性高碳酸血症、睡眠呼吸暂停、类固醇抗性哮喘、缺氧缺血性脑病、毒性气体毒害或窒息性气体毒害。

42.权利要求41所述的方法，其中所述毒性气体包含一氧化碳或光气。

43.权利要求41所述的方法，其中所述窒息性气体包含：甲烷、氮气、氩气、氦气、丁烷或丙烷。

44.权利要求37所述的方法，其中所述特征性MP相关疾病或病症为：视网膜病变、阿尔茨海默病、多发性硬化或2型糖尿病后遗症。

45.权利要求37所述的方法，其中所述特征性MP相关疾病或病症为以下中之一：慢性阻塞性肺病(COPD)、胸壁畸形、神经肌肉疾病、肥胖低通气综合征、呼吸衰竭、肺炎的缺氧后遗症或急性重度哮喘。

46.权利要求37所述的方法，其中所述神经肌肉疾病为重症肌无力。

47.权利要求37所述的方法，其中所述凝溶胶蛋白剂包含凝溶胶蛋白分子、其功能片段、或所述凝溶胶蛋白分子的功能衍生物。

48.权利要求47所述的方法，其中所述凝溶胶蛋白分子是血浆凝溶胶蛋白(pGSN)。

49.权利要求47或48所述的方法，其中所述凝溶胶蛋白分子是重组凝溶胶蛋白分子。

50.权利要求37所述的方法，其还包括在所述对象中确定所述特征性MP相关疾病或病症的严重程度的水平，其中用于确定的手段包含以下中一种或更多种：测定、观察所述对象、评估所述对象中所述特征性MP相关疾病或病症的一种或更多种生理症状、评估所述对象的病史、以及评估所述对象的存活可能性。

51.权利要求50所述的方法，其中所述生理症状包含以下中一者或更多者：呼吸急促、低血氧饱和度、无意识、呼吸受损、头痛、血管通透性、中毒症状、虚弱、认知损害、肌肉痉挛、震颤、协调受损、视力丧失和目盲。

52.权利要求50所述的方法，其中所述对象的病史包含以下中一者或更多者：暴露于显著高水平的CO₂、暴露于显著高水平的CO、和水肺潜水、暴露于毒性气体、暴露于窒息性气体、出现在高海拔和阿片样物质使用。

53.权利要求50所述的方法，其中所述测定包含用于在从所述对象中获得的生物样品中检测IL-1β特征、Ly6G特征和CD66b特征中一种或更多种的存在或不存在的手段。

54.权利要求53所述的方法，其中所述IL-1β特征包含所述样品中含有IL-1β的微粒的总数目的百分比，所述Ly6G特征包含所述样品中含有Ly6G的微粒的总数目的百分比，并且所述CD66b特征包含所述样品中含有CD66b的微粒的总数目的百分比。

55.权利要求54所述的方法，其中所述生物样品中含有IL-1β的微粒的总数目的百分比为至少：2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。

56.权利要求54所述的方法，其中所述生物样品中含有Ly6G的微粒的总数目的百分比为至少：2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。

57.权利要求54所述的方法，其中所述生物样品中含有CD66b的微粒的总数目的百分比为至少：2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。

58.权利要求37所述的方法，其中与对照存活可能性相比，施用有效量的所述凝溶胶蛋白剂提高了所述对象的存活可能性。

59.权利要求58所述的方法，其中所述对照存活可能性是在没有施用有效量的所述凝溶胶蛋白剂的情况下的存活可能性。

60.权利要求58或59所述的方法，其中施用有效量的所述凝溶胶蛋白剂的对象的存活可能性比所述对照存活可能性高至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或100倍。

61.权利要求37所述的方法，其中所述凝溶胶蛋白剂的施用手段选自：经口、舌下、经颊、鼻内、静脉内、肌内、鞘内、腹膜内、皮下、皮内、表面、直肠、阴道、滑膜内和眼内施用。

62.权利要求37所述的方法，其中所述对象是哺乳动物。

63.权利要求37所述的方法，其中所述对象是人。

64.权利要求37所述的方法，其中所述对象是小鼠。

65.权利要求37所述的方法，其中所述特征性MP相关疾病或病症不是感染。

66.权利要求37所述的方法，其中所述特征性MP相关疾病或病症是感染后后遗症。

67.权利要求37所述的方法，其中所述对象不患有慢性哮喘。

68.权利要求37所述的方法，其中所述对象不患有活动性肺感染。

69.权利要求37所述的方法，其中所述凝溶胶蛋白剂施用于所述对象1、2、3、4、5、6、7、8次或更多次。

70.用于降低对象发生特征性MP相关疾病或病症的风险的方法，其包括：向被鉴定为处于发生所述特征性MP相关疾病或病症的风险中的对象施用有效量的凝溶胶蛋白剂以降低所述对象发生所述特征性MP相关疾病或病症的风险。

71.权利要求70所述的方法，其中与发生所述特征性MP相关疾病或病症的对照风险相比，施用所述凝溶胶蛋白剂降低了所述对象发生所述特征性MP相关疾病或病症的风险。

72.权利要求70所述的方法，其中所述对照风险是在没有施用所述凝溶胶蛋白剂的情况下发生所述特征性MP相关疾病或病症的风险。

73.权利要求70所述的方法，其中至少部分地基于以下中一者或更多者将所述对象鉴定为处于所述特征性MP疾病或病症的风险中：所述对象的先前、当前或将来活动；所述对象的先前、当前或将来的潜在暴露；或者所述对象中当前疾病或病症的存在。

74.权利要求73所述的方法，其中所述对象的先前、当前或将来活动是以下中一种或更多种：水肺潜水、太空旅行、采矿、环境探索和潜艇旅行。

75.权利要求73所述的方法，其中所述对象的先前、当前或将来的潜在暴露为暴露于以下中的一种或更多种：窒息性气体、毒性气体、显著升高的二氧化碳(CO₂)水平、显著升高的一氧化碳(CO)水平、显著升高的大气压和非慢性哮喘触发剂。

76.权利要求70所述的方法，其中施用所述凝溶胶蛋白剂的对象由于所述先前、当前或将来的活动或者所述先前、当前或将来的暴露而发生所述特征性MP相关疾病或病症的风险比发生所述特征性MP相关疾病或病症的对照风险低至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。

77.权利要求70所述的方法，其中所述特征性MP相关疾病或病症为：缺氧、减压病、重度哮喘、急性高碳酸血症、一氧化碳(CO)毒害、毒性气体毒害、窒息性气体毒害或二氧化碳(CO₂)毒害。

78.权利要求70所述的方法，其中所述凝溶胶蛋白剂包含凝溶胶蛋白分子、其功能片段、或所述凝溶胶蛋白分子的功能衍生物。

79.权利要求78所述的方法，其中所述凝溶胶蛋白分子是血浆凝溶胶蛋白(pGSN)。

80.权利要求78或79所述的方法，其中所述凝溶胶蛋白分子是重组凝溶胶蛋白分子。

81.权利要求70所述的方法，其中与对照存活可能性相比，施用所述凝溶胶蛋白剂提高了所述对象的存活可能性。

82.权利要求81所述的方法，其中所述对照存活可能性是在没有施用有效量的所述凝溶胶蛋白剂的情况下的存活可能性。

83.权利要求81或82所述的方法，其中施用有效量的所述凝溶胶蛋白剂的对象的存活可能性比所述对照存活可能性高至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或100倍。

84.权利要求70所述的方法，其中所述凝溶胶蛋白剂的施用手段选自：经口、舌下、经颊、鼻内、静脉内、肌内、鞘内、腹膜内、皮下、皮内、表面、直肠、阴道、滑膜内和眼内施用。

85.权利要求70所述的方法，其中在所述对象的所述活动或潜在暴露之前、期间和之后中一者或更多者，将所述凝溶胶蛋白剂施用于所述对象。

86.权利要求70所述的方法，其中所述凝溶胶蛋白剂施用于所述对象1、2、3、4、5、6、7、8次或更多次。

87.权利要求70所述的方法，其中所述对象是哺乳动物。

88.权利要求70所述的方法，其中所述对象是人。

89.权利要求70所述的方法，其中所述特征性MP相关疾病或病症不是感染。

90.权利要求70所述的方法，其中所述特征性MP相关疾病或病症是感染后后遗症。

91.权利要求70所述的方法，其中所述对象不患有慢性哮喘。

92.权利要求70所述的方法，其中所述对象不患有活动性肺感染。

93.用于预防性治疗易于发生减压病的个体的方法，其包括以下步骤：

向所述个体施用治疗有效量的凝溶胶蛋白。

94.权利要求93所述的方法，其中所述凝溶胶蛋白是重组凝溶胶蛋白。

95.权利要求93所述的方法，其中所述凝溶胶蛋白以约3mg/kg至约24mg/kg的剂量施用。

96.权利要求93所述的方法，其中所述凝溶胶蛋白静脉内施用。

97.权利要求93所述的方法，其中施用凝溶胶蛋白抑制易于发生减压病的个体的血液或组织中气体微粒的产生。

98.在需要这样的治疗的个体中治疗减压病的方法，其包括：

向所述个体施用切割丝状肌动蛋白和/或抑制白介素-1β的化合物，从而治疗所述减压病。

99.权利要求98所述的方法，其中所述化合物是重组凝溶胶蛋白。

100.权利要求98所述的方法，其中所述化合物是IL-1b抑制剂。

101.权利要求98所述的方法，其中所述化合物是康纳单抗或阿那白滞素。

102.权利要求98所述的方法，其中所述化合物切割丝状肌动蛋白。

103.权利要求98所述的方法，其中所述化合物是踝蛋白、丝切蛋白、双解丝蛋白、微丝切割蛋白、ECP32/grimelysin或蛋白水解素。

104.权利要求98所述的方法，其还包括以有效治疗所述减压病的量向所述个体施用两种或更多种切割丝状肌动蛋白和/或抑制白介素-1β的化合物。