CN116472952A - 一种面包面条兼用型红皮高硬度强筋小麦的育种方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种面包面条兼用型红皮高硬度强筋小麦育种方法，以携带高硬度基因(Pin)、优质高分子量谷蛋白亚基（HMW‑GS）或Wx基因部分缺失材料为亲本，创制长江中下游麦区当前主栽红皮小麦品种背景的携不同优质基因材料，并进一步杂交、回交或复交；综合利用高通量分子标记检测，明确红皮强筋小麦品质评价指标和标准，高效全面品质跟踪测试，培育聚合高硬度基因(Pin)、优质高分子量谷蛋白亚基（HMW‑GS）和Wx基因部分缺失3个优质分子模块基因材料，定向设计改良红皮高硬度强筋小麦品质；同时加强产量性状和综合农艺鉴定，实现红皮强筋小麦产量和质量协同改良。本方法极大提高了面包面条兼用型红皮高硬度强筋小麦育种效率和精确性。
Description
技术领域
本发明属于小麦分子育种技术领域，涉及一种面包面条兼用型红皮高硬度强筋小麦的育种方法。
背景技术
长江中下游麦区是我国第二大麦区，以中、弱筋类型为主，江苏省腹地里下河地区土壤肥沃、自然条件优越，生产的红皮中强筋小麦深受市场欢迎。
籽粒硬度是最重要的小麦品质性状之一，影响润麦的加水量、出粉率、损伤淀粉和面粉颗粒度大小等，并最终决定磨粉品质和食品加工品质，是世界范围内小麦分类和市场分级重要依据。硬质小麦具有硬度大、出粉率高、破损淀粉含量高、面粉颗粒度大、吸水能力强等特点，适合制作面包和优质面条。籽粒硬度主要由位于5D染色体短臂的主效基因Pin（puroindoline）控制，包括Pina和Pinb控制，2个基因的氨基酸序列相似性达60%，共同作用影响籽粒质地；野生型Pina-D1a和Pinb-D1a形成软质胚乳，Pina或Pinb发生基因突变均会导致小麦胚乳变硬。Pina和Pinb具有多种变异类型，Pina-D1b和Pinb-D1b是最常见的2种变异类型，Pinb-D1b基因型在大多数国家和地区硬质麦中占主导地位。长江中下游麦区以软质麦居多，硬质麦少，Pin基因突变类型更少，迫切需要发掘更多高硬度基因型提高小麦籽粒硬度。
高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)解释45-70%小麦品质的变异。HMW-GS由染色体1A、1B和1D长臂的位点Glu-A1、Glu-B1和Glu-D1控制。每个位点有两个紧密连锁的基因，分别控制X-型和Y-型亚基。理论上，每个小麦品种存在6个HMW-GSs，但因为1Ay亚基及某些位点的沉默，通常表达3~5个HMW-GSs。目前普通小麦中Glu-1位点发现、克隆的亚基有20多个，优质HMW-GSs有1Ax1、1Ax2*、1Bx7OE+1By8、1Bx13+1By16、1Bx14+1By15、1Bx17+1By18、1Dx5+1Dy10、1S1x2.3*+1S1y16*。然而本麦区小麦品种HMW-GS类型以1AxNull、1Bx7+1By8、1Dx2+1Dy12为主，优质HMW-GS比例非常少(张晓等, 2015)。急需积累聚合多个优质HMW-GSs进行面团强度和加工品质改良。
淀粉是小麦籽粒中重要的组成部分，由直链淀粉和支链淀粉组成，直链淀粉和支链淀粉分别占小麦淀粉含量的20%~30%和70%~80%。直链淀粉主要由颗粒结合型淀粉合酶（granule-bound starch synthase，GBSS）合成，GBSS又称Waxy蛋白，由Wx基因编码。普通六倍体小麦（Triticim aestivumL.，AABBDD）含有3种Wx蛋白亚基：Wx-A1、Wx-B1和Wx-D1，分别由位于染色体7AS、4AL和7DS上的Wx-A1、Wx-B1和Wx-D1位点编码。同时含有3个Wx蛋白亚基的称为普通小麦，缺失1个或2个Wx蛋白亚基的突变体称为部分糯小麦，同时缺失3个Wx蛋白亚基的突变体称为糯小麦（Graybosch, 1998）。Wx基因缺失数量越多，小麦直链淀粉含量越低，淀粉糊化特性也会提升。但直链淀粉含量过低，将会造成面制食品适口性及弹性变差降低，糯小麦淀粉黏度高，流变学特性差，食品加工制作较为困难，需要通过配粉方式进行面包和面条的制作。Wx基因部分缺失也有利于淀粉糊化黏度、膨胀势的提高，在单独使用情况下也可明显改善面条品质。
强筋小麦胚乳为硬质，面粉筋力强，适用于制作面包或优质面条。当前市场优质强筋、中强筋小麦供应紧张，需大量进口来补足缺口；2022年全年我国小麦进口数量为996万吨，其中包含大量优质强筋小麦。本麦区当前推广中强筋品种仍存在籽粒硬度低、筋力弱、品质稳定性差等缺点，难以满足磨粉、面包和高端面条食品等机械化加工的品质要求，迫切需要进一步改良提升。
因此研究面包面条兼用型红皮高硬度强筋小麦的育种方法，通过硬度、高分子量谷蛋白亚基和Wx基因不同分子模块基因聚合，创新红皮强筋小麦品质评价和农艺性状选择技术，对于提升红皮强筋小麦品质具有理论指导意义。
发明内容
为了克服现有技术中存在的缺陷，本发明提供了一种面包面条兼用型红皮高硬度强筋小麦育种方法，以携带高硬度基因(Pin)、优质高分子量谷蛋白亚基（HMW-GS）或Wx基因部分缺失材料为亲本，创制本地主栽品种背景的携不同优质基因材料，并进一步杂交、回交或复交；综合利用高通量分子标记检测，明确红皮强筋小麦品质评价指标和标准，高效全面品质跟踪测试，培育聚合高硬度基因(Pin)、优质高分子量谷蛋白亚基（HMW-GS）和Wx基因部分缺失3个优质分子模块基因材料，定向设计改良红皮高硬度强筋小麦品质；同时加强产量性状和综合农艺鉴定，实现红皮强筋小麦产量和质量协同改良。
本发明提供了一种面包面条兼用型红皮高硬度强筋小麦的育种方法，包括以下步骤，
（1）亲本及杂交配组：亲本及杂交配组：利用长江中下游麦区当前主栽红皮小麦品种为母本，以携高硬度基因Pin或高分子量谷蛋白亚基HMW-GSs或Wx基因部分缺失材料为父本，进行杂交、回交，通过分子标记辅助筛选和农艺性状选择，创制长江中下游麦区当前主栽红皮小麦品种背景携不同优质基因BC2或BC3回交世代材料，将所述回交世代材料，进行杂交、回交或复交获得F1。
（2）低世代选择：杂种一代F1株行播种，F2代小区稀播，F3代至F4代均为优异单株株行播种；低世代选择采用单株选择，苗期提取单株的叶片基因组DNA，利用分子标记检测，筛选聚合高硬度基因(Pin)、优质高分子量谷蛋白亚基(HMW-GSs)、部分Wx基因缺失3个分子模块基因的单株；测定角质率、近红外蛋白质含量、近红外吸水率、SKCS籽粒硬度、微量SDS沉淀值和揉混仪参数，选择分蘖力强、矮杆大穗、抗倒性强、病害轻以及熟期早的单株；
（3）高世代选择：杂种F5代以上混合收系依次进入鉴定圃和品比圃产量鉴定试验，苗期混样进行分子标记检测，筛选聚合优质硬度基因(Pin)、高分子量谷蛋白亚基(HMW-GSs)、部分Wx基因缺失3个分子模块基因的品系；测定SKCS籽粒硬度、近红外蛋白质含量、面筋参数、粉质仪和拉伸仪面团特性；选择苗期繁茂性好、株型紧凑，穗数多、大穗大粒，抗病抗逆好，熟期早、产量高的稳定品系。
进一步地，所述方法还包括，
多点试验：连续参加鉴定圃、品比圃优异品系，升级进入多点试验及区域试验，混样进行分子标记检测，筛选聚合优质硬度基因(Pin)、高分子量谷蛋白亚基(HMW-GSs)、部分Wx基因缺失3个分子模块基因的品系，测定品质，首先测定SKCS籽粒硬度、蛋白质含量、面筋参数、粉质仪和拉伸仪面团特性，同时进行面包和面条加工品质鉴评，选择优质强筋高产多抗的优异品系。
根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）中面包评分≥80分，面条评分≥80分。
进一步地，所述步骤（1）中母本为扬麦16、扬麦25、扬麦29或镇麦12。
根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述硬度基因(Pin)为Pina-D1b或Pinb- D1b，其特异性检测引物分别为，
Pina-D1b-F: 5’-AATACCACATGGTTCTAGATACTG-3’（SEQ ID NO.1)
Pina-D1b-R: 5’-GCAATACAAAGGACCTCTAGATT-3’（SEQ ID NO.2)
Pinb-D1b-F: 5’- ATGAAGACCTTATTCCTCCTA-3’ （SEQ ID NO.3)
Pinb-D1b-R: 5’-CTCATGCTCACAGCCGCT-3’（SEQ ID NO.4)
进一步地，所述高分子量谷蛋白亚基(HMW-GSs)为7OE亚基两个显性STS标记和5+10亚基，其特异性检测引物分别为，
7OE亚基标记1:
TaBAC1215C06-F517: 5’-ACGTGTCCAAGCTTTGGTTC-3’（SEQ ID NO.5)
TaBAC1215C06-R964: 5’-GATTGGTGGGTGGATACAGG -3’（SEQ ID NO.6
7OE亚基标记2
TaBAC1215C06-F24671: 5’-CCACTTCCAAGGTGGGACTA -3’（SEQ ID NO.7)
TaBAC1215C06-R25515: 5’-TGCCAACACAAAAGAAGCTG-3’（SEQ ID NO.8)
进一步地，5+10亚基采用Xrj2标记，其特异性引物为
Xrj2-F: 5’-CTCGCTCGACGGTGTTGAA-3’（SEQ ID NO.9)
Xrj2-R: 5’-CCTTTGGCCCAGATAAAGTG-3’（SEQ ID NO.10)。
进一步地，所述Wx基因包括Wx-A1、Wx-B1和Wx-D1，其特异性检测引物分别为，
Wx-A1-F:5’- CCAAAGCAAAGCAGGAAACC-3’（SEQ ID NO.11)
Wx-A1-R: 5’-TACCTCGGAGATGACGCTGG-3’（SEQ ID NO.12)
Wx-B1-1-F: 5’-CTGGCCTGCTACCTCAAGAGCAACT-3’（SEQ ID NO.13)
Wx-B1-1-R:5’-GGTTGCGGTTGGGGTCGATGAC-3’（SEQ ID NO.14)
Wx-B1-2-F:5’-CGTAGTAAGGTGCAAAAAAGTGCCACG-3’（SEQ ID NO.15)
Wx-B1-2-R:5’-ACAGCCTTATTGTACCAAGACCCATGTGTG-3’（SEQ ID NO.16)
Wx-D1-F: 5’-ACAGGATCTCTCCTGGAAG-3’（SEQ ID NO.17)
Wx-D1-R: 5’-GCAAGGAAAATAGTGAAGC-3’（SEQ ID NO.18)。
进一步地，所述步骤（2）中低世代选择：角质率≥90%，近红外蛋白质含量≥14%，近红外吸水率≥60%，SKCS籽粒硬度≥60，微量SDS沉淀值（1g全麦粉）≥15mL，揉混仪8min带宽≥12%；所述步骤（3）中高世代选择：SKCS籽粒硬度≥60，近红外蛋白质含量≥14%，湿面筋含量≥30%，面筋指数≥80%，吸水率≥60%，稳定时间≥10min，拉伸面积≥90cm2。
进一步地，所述步骤（2）、（3）和（4）中均设置高产对照和强筋优质对照，强筋品质优于强筋对照，产量比高产对照增产。
本发明相对于现有技术而言，
（1）小麦品质性状是多基因控制的复杂性状，籽粒硬度是最重要的小麦品质性状之一，决定磨粉品质和食品加工品质；小麦贮藏蛋白包括醇溶蛋白和谷蛋白2大类，其中HMW-GSs只占麦谷蛋白的7%~15%，但可解释45%~70%面包品质的变异；淀粉品质尤其是直链淀粉含量也影响面包和面条品质。本发明方法将红皮强筋小麦品质改良目标分解成了硬度、高分子量谷蛋白亚基和淀粉三个不同分子模块单元，每个分子模块单元分别设计选配高硬度、优质HMW-GS和优异淀粉品质的材料，最后通过双交和复交等配组方式结合基因型和表型鉴定将不同分子模块优异基因组合在一起，实现多个优良基因快速聚合，同步改良三个性状，培育籽粒硬度高、面团筋力强以及淀粉糊化特性优良小麦种质，实现磨粉加工品质和面包面条加工品质协同改良提升的红皮强筋小麦。
（2）本发明方法将基因型高通量分子标记检测和品质高效快速系统测试相结合，明确了红皮强筋小麦品质评价指标和标准，低世代分离群体单株开始进行3个分子模块基因的检测，快速筛选不同组合的聚合系单株，同时采用微量快速品质测试，在低世代就实现了优质基因型和表型的定向选择，高世代增加了面团流变学特性和食品加工品质，系统评价红皮强筋小麦的加工品质，提高了红皮强筋小麦育种效率和精确性。
（3）传统认为优质强筋小麦一般产量水平会有所下降，本发明方法在对不同优质分子模块基因聚合和品质鉴定评价改良品质基础上，加强穗数、穗粒数和粒重等产量性状，株高、熟期以及抗病抗逆性筛选，培育品质性状优异且综合农艺性状好的红皮强筋小麦种质，实现了红皮强筋小麦产量和质量协同提高。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1 为强筋小麦新品系Pinb-D1b的KASP分析
图2为强筋小麦新品系HMW-GS的SDS-PAGE电泳图谱
图3 为强筋小麦新品系Wx-A1、Wx-D1位点检测结果
图4 为强筋小麦新品系面包加工品质
具体实施方式
下面将结合附图对本发明技术方案的实施例进行详细的描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，因此只是作为示例，而不能以此来限制本发明的保护范围。需要注意的是，除非另有说明，本申请使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域技术人员所理解的通常意义。作为专业性农业研究机构，申请人长期保存有相关种质材料，而且相关小麦品种均是可以市场或者现有种质库中公开获得的。
实施例
1、亲本选择
扬糯麦1号（苏审麦201003），由江苏里下河地区农业科学研究所选育，2010年通过江苏省审定。纺锤型穗，穗大粒多，结实性好。籽粒胚乳糯质，支链淀粉含量98.7%，属春性中熟糯小麦品种。硬度基因：Pina-D1a/Pinb-D1a，HMW-GS为1/7+9/2+12，Wx蛋白三个位点亚基Wx-A1、Wx-B1、Wx-D1全部缺失。
扬麦20（国审麦2010002），由江苏里下河地区农业科学研究所选育，2010年通过国家审定。分蘖力强，穗层整齐，籽粒饱满。自2013年被用作国家及江苏、安徽两省区试对照品种，2016年起被列为国家主导品种。硬度基因为Pina-D1a/Pinb-D1a，HMW-GS为Null/7+9/2+12，Wx蛋白亚基无缺失。
扬辐麦4号（苏审麦200801），由江苏里下河地区农业科学研究所选育，2008年通过江苏省审定。株型较紧凑，分蘖性和成穗数中等，穗大粒多，千粒重较高。2011年江苏小麦万亩示范片省级实产验收，单产689.9公斤，刷新了江苏省小麦亩产纪录。硬度基因为Pina- D1a/Pinb-D1a，HMW-GS为1/7+8/2+12，Wx蛋白亚基无缺失。
扬麦29（苏审麦20180004），由江苏里下河地区农业科学研究所选育，2018年通过江苏省审定。株型半紧凑，分蘖力强，抗倒性好，穗层整齐，熟相好。粗蛋白质含量（干基）16.8%，湿面筋33.7%，吸水率65.5%，稳定时间17.3min，最大拉伸阻力488E.U，最大拉伸阻力488E.U.，拉伸面积123cm2，硬度指数67.7，达强筋小麦品种标准。硬度基因为Pina-D1a/Pinb-D1b，HMW-GS为1/7+9/5+10，Wx蛋白亚基无缺失。
2、配制组合
2014年秋季，在温室种植扬糯麦1号、扬麦20、扬辐麦4号和扬麦29。以扬麦20为母本，扬糯麦1号为父本进行杂交产生F1；以扬麦29为母本，扬辐麦4号为父本进行杂交产生F1。
2015年春季，在温室种植上述2个杂交组合F1代种子，然后2个杂种F1之间再进行杂交产生复交F1。
2015年秋季，大田种植复交F1种子（约150株）。
3、低世代选择（F1~F4）
2016年秋季F2代小区稀播种植群体约2000株，F3代开始优异单株种植株行。低世代，苗期提取每个单株的叶片基因组DNA，利用分子标记检测高硬度基因(Pinb-D1b)、优质高分子量谷蛋白亚基(5+10)、部分Wx基因缺失，选择聚合3个分子模块优质基因的单株。
利用近红外分析仪和快速微量检测方法进行品质鉴定，角质率≥90%，近红外蛋白质含量≥14%，近红外吸水率≥60%，SKCS籽粒硬度≥60，微量SDS沉淀值（1g全麦粉）≥15mL，揉混仪8min带宽≥12%。兼顾选择分蘖力强、矮杆大穗、抗倒性强、病害轻以及熟期早的单株。
4、高世代选择（F5代以上）
2019年杂种F5代混合收系，依次进入鉴定圃和品比圃产量鉴定试验，苗期混样进行分子标记检测，筛选聚合优质硬度基因(Pinb-D1b)、高分子量谷蛋白亚基(5+10)、部分Wx基因缺失3个分子模块基因的品系。筛选材料SKCS籽粒硬度≥60，蛋白质含量≥14%，湿面筋含量≥30%，面筋指数≥80%，吸水率≥60%，稳定时间≥10min，拉伸面积≥90cm2。兼顾选择苗期繁茂性好、株型紧凑，穗数多、大穗大粒，抗病抗逆好，熟期早、产量高的稳定品系。
5、多点试验
升级进入多点试验及区域试验，混样进行分子标记检测，筛选聚合优质硬度基因(Pinb-D1b)、高分子量谷蛋白亚基(5+10)、部分Wx基因缺失3个分子模块基因的品系。筛选材料SKCS籽粒硬度≥60，近红外蛋白质含量≥14%，湿面筋含量≥30%，面筋指数≥80%，吸水率≥60%，稳定时间≥10min，拉伸面积≥90cm2，面包评分≥80，面条评分≥80。选择优质强筋高产多抗的优异品系。
6、不同世代育种试验设置同等种植条件下的高产对照和强筋对照，以扬麦20为产量对照，以强筋品种对照。
7、育成强筋小麦新品系
强筋小麦新品系：目前正在参加预备试验。硬度基因为Pinb-D1b（见图1）、高分子量谷蛋白亚基(1, 7+9, 5+10)（见图2）、部分Wx基因缺失（Wx-A1、Wx-D1双缺失）（见图3）。优质强筋，硬度指数64.05，蛋白质含量14.24%，湿面筋含量32.68%，面筋指数95.71%，吸水率63.20%，稳定时间20.4min，拉伸面积153cm2，面包品质优、评分86（见图4），面条评分84，产量比对照扬麦20增产2%。
除非另外具体说明，否则在这些实施例中阐述的数值并不限制本发明的范围。在这里示出和描述的所有示例中，除非另有规定，任何具体值应被解释为仅仅是示例性的，而不是作为限制，因此，示例性实施例的其他示例可以具有不同的值。
Claims (8)
1.一种面包面条兼用型红皮高硬度强筋小麦的育种方法，其特征在于，包括以下步骤，
（1）亲本及杂交配组：利用长江中下游麦区当前主栽红皮小麦品种为母本，以携高硬度基因Pin或高分子量谷蛋白亚基HMW-GSs或Wx基因部分缺失材料为父本，进行杂交、回交，通过分子标记辅助筛选和农艺性状选择，创制长江中下游麦区当前主栽红皮小麦品种背景携不同优质基因BC2或BC3回交世代材料，将所述回交世代材料，进行杂交、回交或复交获得F1。
（2）低世代选择：杂种一代F1株行播种，F2代小区稀播，F3代至F4代均为优异单株株行播种；低世代选择采用单株选择，苗期提取单株的叶片基因组DNA，利用分子标记检测，筛选聚合高硬度基因Pin、优质高分子量谷蛋白亚基HMW-GSs、部分Wx基因缺失3个分子模块基因的单株；测定角质率、近红外蛋白质含量、近红外吸水率、SKCS籽粒硬度、微量SDS沉淀值和揉混仪参数，选择分蘖力强、矮杆大穗、抗倒性强、病害轻以及熟期早的单株；
（3）高世代选择：杂种F5代以上混合收系，依次进入鉴定圃和品比圃产量鉴定试验，苗期混样进行分子标记检测，筛选聚合优质硬度基因Pin、高分子量谷蛋白亚基HMW-GSs、部分Wx基因缺失3个分子模块基因的品系；测定SKCS籽粒硬度、近红外蛋白质含量、面筋参数、粉质仪和拉伸仪面团特性；选择苗期繁茂性好、株型紧凑，穗数多、大穗大粒，抗病抗逆好，熟期早、产量高的稳定品系。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括，
（4）多点试验：连续参加鉴定圃、品比圃优异品系，升级进入多点试验及区域试验，混样进行分子标记检测，筛选聚合优质硬度基因Pin、高分子量谷蛋白亚基HMW-GSs、部分Wx基因缺失3个分子模块基因的品系，测定品质，首先测定SKCS籽粒硬度、蛋白质含量、面筋参数、粉质仪和拉伸仪面团特性，同时进行面包和面条加工品质鉴评，选择优质强筋高产多抗的优异品系。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）中面包和面条加工品质鉴评为面包评分≥80分，面条评分≥80分。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述硬度基因Pin为Pina-D1b或Pinb-D1b，其特异性检测引物分别为，
Pina-D1b-F: 5’-AATACCACATGGTTCTAGATACTG-3’（SEQ ID NO.1)
Pina-D1b-R: 5’-GCAATACAAAGGACCTCTAGATT-3’（SEQ ID NO.2)
Pinb-D1b-F: 5’- ATGAAGACCTTATTCCTCCTA-3’ （SEQ ID NO.3)
Pinb-D1b-R: 5’-CTCATGCTCACAGCCGCT-3’（SEQ ID NO.4)。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高分子量谷蛋白亚基HMW-GSs为7OE亚基两个显性STS标记和5+10亚基，其特异性检测引物分别为，
7OE亚基显性STS标记1:
TaBAC1215C06-F517: 5’-ACGTGTCCAAGCTTTGGTTC-3’（SEQ ID NO.5) ,
TaBAC1215C06-R964: 5’-GATTGGTGGGTGGATACAGG -3’（SEQ ID NO.6
7OE亚基显性STS标记2：
TaBAC1215C06-F24671: 5’-CCACTTCCAAGGTGGGACTA -3’（SEQ ID NO.7) ,
TaBAC1215C06-R25515: 5’-TGCCAACACAAAAGAAGCTG-3’（SEQ ID NO.8)
5+10亚基采用Xrj2标记，其特异性引物为
Xrj2-F: 5’-CTCGCTCGACGGTGTTGAA-3’（SEQ ID NO.9)
Xrj2-R: 5’-CCTTTGGCCCAGATAAAGTG-3’（SEQ ID NO.10)。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Wx基因包括Wx-A1、Wx-B1和Wx-D1，其特异性检测引物分别为，
Wx-A1-F:5’- CCAAAGCAAAGCAGGAAACC-3’（SEQ ID NO.11)
Wx-A1-R: 5’-TACCTCGGAGATGACGCTGG-3’（SEQ ID NO.12)
Wx-B1-1-F: 5’-CTGGCCTGCTACCTCAAGAGCAACT-3’（SEQ ID NO.13)
Wx-B1-1-R:5’-GGTTGCGGTTGGGGTCGATGAC-3’（SEQ ID NO.14)
Wx-B1-2-F:5’-CGTAGTAAGGTGCAAAAAAGTGCCACG-3’（SEQ ID NO.15)
Wx-B1-2-R:5’-ACAGCCTTATTGTACCAAGACCCATGTGTG-3’（SEQ ID NO.16)
Wx-D1-F: 5’-ACAGGATCTCTCCTGGAAG-3’（SEQ ID NO.17)
Wx-D1-R: 5’-GCAAGGAAAATAGTGAAGC-3’（SEQ ID NO.18)。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中低世代选择：角质率≥90%，近红外蛋白质含量≥14%，近红外吸水率≥60%，SKCS籽粒硬度≥60，微量SDS沉淀值≥15mL，揉混仪8min带宽≥12%；所述步骤（3）中高世代选择：SKCS籽粒硬度≥60，近红外蛋白质含量≥14%，湿面筋含量≥30%，面筋指数≥80%，吸水率≥60%，稳定时间≥10min，拉伸面积≥90cm2。
8.根据权利要求1-7任一所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）、（3）和（4）中均设置高产对照和强筋优质对照，强筋品质优于强筋对照，产量比高产对照增产。
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