CN116410203A - 具有trk及其耐药突变抑制活性的化合物及其应用 - Google Patents

具有trk及其耐药突变抑制活性的化合物及其应用 Download PDF

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CN116410203A CN202111632767.2A CN202111632767A CN116410203A CN 116410203 A CN116410203 A CN 116410203A CN 202111632767 A CN202111632767 A CN 202111632767A CN 116410203 A CN116410203 A CN 116410203A
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Abstract

本发明属于化学医药领域，提供了一类具有TRK及其耐药突变抑制活性的化合物及其药学上可接受的盐。本发明还提供了式Ⅰ所示化合物。生物学实验表明，本发明的化合物能够选择性地抑制野生型TRKA、TRKB、TRKC、突变型TRKA、TRKB、TRKC，并有效地克服耐药性，特别针对多种点突变耐药TRKAG595R,TRKAG667C,TRKAG667S,TRKAF589L,TRKCG623R,及TRKCG696C具有较好的治疗效果，具有很好的药用潜力，为临床用药提供了一种新的潜在选择。
Figure DDA0003441519220000011

Description

具有TRK及其耐药突变抑制活性的化合物及其应用
技术领域
本发明涉及具有TRK及其耐药突变抑制活性的化合物及其制备方法和用途，属于化学医药领域。
背景技术
原肌球蛋白受体激酶(TRK)家族属于跨膜受体酪氨酸激酶(RTK)，共有三个成员：TRKA、TRKB和TRKC。TRK家族参与了调节细胞的分化、增殖等过程。其调控异常与肿瘤的发生发展密切相关，特别是TRK基因融合以及TRK结构域突变已在结肠癌、甲状腺癌、肺癌、卵巢癌、乳腺癌、唾液腺等多种肿瘤中被发现，并且与这些肿瘤的预后直接相关。经研究发现，在多种肿瘤类型中有7.4％的肿瘤出现TRKA突变，而TRKB和TRKC突变分别为0.4％和3.4％。在神经母细胞瘤患者中，TRKA和TRKC的过表达呈现出不良的预后。此外，TRKB过表达呈现在具有MYCN扩增的高级别肿瘤类型中。在乳腺癌模型中，异位表达的TRKA通过MAPK和PI3K途径激活可促进肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭。这表明TRKA的过度表达与这种恶性肿瘤的侵袭性相关。柱状瘤患者中已有TRKB和TRKC过表达的报道，柱状瘤可能在肿瘤抑制基因CYLD的种系突变患者以及散发性基底细胞癌患者中发展。
因TRK突变或TRK基因融合所导致的肿瘤细胞，其TRK细胞外域大概率会突变甚至消失，所以TRK抗体不能很好的发挥肿瘤抑制作用。基于此，目前靶向TRK疗法均以小分子抑制剂为主。关于TRK小分子抑制剂已有相关报道，其中Larotrectinib和Entrectinib作为第一代靶向TRK抗TRK基因融合癌症已被FDA批准上市。虽然第一代TRK靶向药Larotrectinib和Entrectinib对TRK融合实体瘤疗效非常好，但是治疗一段时间后患者就会逐渐出现耐药，肿瘤再次增大。研究发现，导致第一代靶向TRK产生耐药的主要原因是TRK激酶区出现点突变产生空间位阻，降低Larotrectinib和Entrectinib与TRK的有效结合。其中TRKAG595R、TRKAG667S、TrkAG667C、TrkAF589L、TrkCG623R及TrkCG696C点突变为目前临床上常见的耐药突变点。
因此，开发具有全新骨架结构、高TRK活性及克服第一代TRK耐药突变的新型TRK小分子抑制剂对于TRK融合基因导致的癌症靶向治疗具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供具有TRK及耐药突变抑制活性的小分子化合物，其通式如下：
Figure BDA0003441519200000011
Figure BDA0003441519200000021
其中，X、Y独立地选自CH2或者NH，且X、Y不同时为CH2；
R1、R2独立地选自H、C1-C8烷基，且R1、R2不同时为H；
R3选自H或C1-C8烷基；
R4选自氢、卤素、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C1-C8烷硫基，或者R4与主环形成6～10元芳环；
R4中，所述取代的C1-C8烷基、取代的C1-C8烷氧基、取代的C1-C8烷硫基的取代基为卤素；
R5选自取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的3～10元环烷基、取代或未取代的6～10元芳基、取代或未取代的5～10元杂芳基；
R5中，所述5～10元杂芳基的杂原子为N或O，杂原子数为1～3个；
R5中，所述取代的C1-C8烷基、取代的3～10元环烷基的取代基选自烯基、卤素、氰基、5～10元芳基、5～10元氮杂芳基；
R5中，所述取代的6～10元芳基、取代的5～10元杂芳基的取代基选自C1～C8烷基、3～8元环烷基、烯基、卤素、氰基、6～10元芳基、5～10元氮杂芳基。
其中，上述化合物中，R1、R2独立地选自H、C1-C6烷基，且R1、R2不同时为H。
进一步的，上述化合物中，R1、R2独立地选自H、C1-C4烷基，且R1、R2不同时为H。
进一步的，上述化合物中，R1、R2独立地选自C1-C8烷基。
进一步的，上述化合物中，R1、R2独立地选自C1-C6烷基。
进一步的，上述化合物中，R1、R2独立地选自C1-C4烷基。
其中，上述化合物中，R3选自H或C1-C6烷基。
进一步的，上述化合物中，R3选自H或C1-C4烷基。
其中，上述化合物中，R4选自氢、卤素、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C1-C6烷氧基、取代或未取代的C1-C6烷硫基，或者R4与主环形成6～10元芳环；R4中，所述取代的C1-C6烷基、取代的C1-C6烷氧基、取代的C1-C6烷硫基的取代基为卤素。
进一步的，上述化合物中，R4选自氢、卤素、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C1-C4烷氧基、取代或未取代的C1-C4烷硫基，或者R4与主环形成6元芳环；R4中，所述取代的C1-C4烷基、取代的C1-C4烷氧基、取代的C1-C4烷硫基的取代基为卤素。
进一步的，上述化合物中，R4选自氢、-F、甲硫基、三氟甲基、甲基、甲氧基，或者R4与主环形成6元芳环。
其中，上述化合物中，R5选自取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的5～10元环烷基；R5中，所述取代的C1-C6烷基、取代的5～10元环烷基的取代基的选自烯基、卤素、氰基。
进一步的，上述化合物中，R5选自取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的6～10元环烷基；R5中，所述取代的C1-C4烷基、取代的6～10元环烷基的取代基的选自烯基、卤素、氰基。
进一步的，上述化合物中，R5选自烯基取代或未取代的C1-C4烷基、未取代的6～10元环烷基。
进一步的，上述化合物中，R5选自乙基、叔丁基、烯丙基、环己基、
Figure BDA0003441519200000031
其中，上述化合物中，R5中，所述取代的6～10元芳基的取代基选自C1～C6烷基、烯基、卤素、氰基、6～10元芳基、5～10元氮杂芳基。
进一步的，上述化合物中，R5选自取代或未取代的6元芳基；R5中，所述取代的6元芳基的取代基选自卤素取代或未取代的C1～C4、卤素、氰基。
进一步的，上述化合物中，R5选自取代或未取代的6元芳基；R5中，所述取代的6元芳基的取代基选自三氟甲基、甲基、氟、氯、氰基。
进一步的，上述化合物中，R5选自
Figure BDA0003441519200000032
Figure BDA0003441519200000033
其中，上述化合物中，R5为取代或未取代的5元杂芳基；R5中，所述5元杂芳基的杂原子为N或O，杂原子数为1～2个，且至少一个为N；R5中，所述取代的5元杂芳基的取代基选自取代或未取代的C1～C6烷基、取代或未取代的3～6元环烷基、取代或未取代的6～10元芳基、取代或未取代的5～10元氮杂芳基；R5中，所述取代的C1～C6烷基的取代基为卤素，所述取代的3～6元环烷基、取代的6～10元芳基、取代的5～10元氮杂芳基的取代基选自卤素、卤素取代或未取代的C1～C6烷基、卤素取代或未取代的C1～C6烷氧基。
进一步的，上述化合物中，R5选自
Figure BDA0003441519200000034
其中，R6选自取代或未取代的C1～C6烷基、取代或未取代的3～6元环烷基、取代或未取代的6～10元芳基；R6中，所述取代的C1～C6烷基、取代的3～6元环烷基、取代的6～10元芳基的取代基为卤素；R7选自取代或未取代的C1～C6烷基、取代或未取代的3～6元环烷基、取代或未取代的6～10元芳基、取代或未取代的5～10元氮杂芳基；R7中，所述取代的C1～C6烷基的取代基为卤素，所述取代的3～6元环烷基、取代的6～10元芳基、取代的5～10元氮杂芳基的取代基选自卤素、卤素取代或未取代的C1～C6烷基、卤素取代或未取代的C1～C6烷氧基。
进一步的，上述化合物中，R6选自未取代的C1～C6烷基、未取代的3～6元环烷基、未取代的6～10元芳基；R7选自卤素取代或未取代的C1～C4烷基、未取代的5～6元环烷基、取代或未取代的6～10元芳基、取代或未取代的5～6元氮杂芳基；R7中，所述取代的6～10元芳基、取代的5～10元氮杂芳基的取代基选自卤素、三氟甲基、三氟甲氧基。
进一步的，上述化合物中，R6选自叔丁基、环丙基、苯基；R7选自甲基、异丙基、叔丁基、环己基、苯基、
Figure BDA0003441519200000041
Figure BDA0003441519200000042
进一步的，上述化合物中，R5选自
Figure BDA0003441519200000043
Figure BDA0003441519200000044
其中，上述化合物包括：
Figure BDA0003441519200000045
Figure BDA0003441519200000051
Figure BDA0003441519200000061
本发明的另一目的在于提供一种以上述化合物及其药学上可接受的盐、水合物为活性成分，添加药学上可接受的辅助性成分，组成的药物组合物。
本发明提供的上述化合物及其药学上可接受的盐、水合物或上述药物组合物，具有活性高，选择性好，成药性好等优点，具有在制备抗肿瘤药物中的用途。
进一步的，上述用途中，所述抗肿瘤药物为TRK小分子抑制剂。
进一步的，上述用途中，所述肿瘤为由TRK融合基因导致的癌症，如结肠癌、甲状腺癌、肺癌、卵巢癌、乳腺癌、唾液腺以及胰腺癌、黑素瘤、白血病、神经母细胞瘤和圆柱体瘤等。
本发明提供了上述具有TRK及其耐药突变抑制活性的小分子化合物及其盐、水合物或药物组合物在制备口服或静脉注射制剂中的用途。
本发明还提供一种上述具有TRK及其耐药突变抑制活性的小分子化合物的制备方法，具体包括以下步骤：
路线1：
Figure BDA0003441519200000062
(1)、将原料1在三溴化硼作用下，以二氯甲烷为溶剂，进行脱甲基，制备中间体2；所述原料1：三溴化硼的摩尔比为1:2；所述反应温度为0℃；反应时间为18小时；
(2)、中间体2在碳酸铯作用下，以N，N-二甲基甲酰胺为溶剂，与溴乙酸甲酯类衍生物反应，制备中间体3；所述原料2：氯乙酸甲酯类衍生物：碳酸铯的摩尔比为1：2：2；所述反应温度为室温至80℃；反应时间为18小时；
(3)、中间体3在碳酸铯作用下，以N，N-二甲基甲酰胺为溶剂，与溴代烷烃反应R3-Br，制备中间体4；所述原料2：R3-Br：碳酸铯的摩尔比为1：2：2；所述反应温度为室温；反应时间为18小时；
(4)、中间体3或4在Pd2(dba)3的催化作用下，以BrettPhos为配体，碳酸铯为碱，1，4-二氧六环为溶剂，与对硝基苯胺类或间硝基苯胺类化合物进行Buchwald-Hartwig偶联反应，制备中间体5；所述原料中间体3或4：苯胺类衍生物：Pd2(dba)3：BrettPhos：碳酸铯的摩尔比为1：1：0.1：0.1：2；所述反应温度为100℃；所述反应时间为16小时；
(5)、中间体5在10％Pd/C催化作用下，以甲醇为溶剂，进行氢化还原，制备中间体6；所述原料中间体5：Pd/C的摩尔比1：0.1；所述反应温度为50℃；所述反应时间为8小时；
(6)、中间体6在N，N-二异丙基乙胺作用下，以四氢呋喃为溶剂，与异氰酸酯进行反应，制备目标化合物I(左)；所述原料中间体6：异氰酸酯：N，N-二异丙基乙胺摩尔比为1：2：3；所述反应温度为66℃；所述反应时间为16小时。
(7)、中间体6在N，N-二异丙基乙胺作用下，以N，N-二甲基甲酰胺为溶剂，以HATU为缩合剂，乙酸类化合物进行酰胺键缩合反应，制备目标化合物I(右)；所述原料中间体6：乙酸类化合物：N，N-二异丙基乙胺:HATU摩尔比为1：1：2：1.5；所述反应温度为室温；所述反应时间为16小时。
路线2：
Figure BDA0003441519200000071
(1)、将原料1在三溴化硼作用下，以二氯甲烷为溶剂，进行脱甲基，制备中间体2；所述原料1：三溴化硼的摩尔比为1:2；所述反应温度为0℃；反应时间为18小时；
(2)、中间体2在碳酸铯作用下，以N，N-二甲基甲酰胺为溶剂，与溴乙酸甲酯类衍生物反应，制备中间体3；所述原料2：氯乙酸甲酯类衍生物：碳酸铯的摩尔比为1：2：2；所述反应温度为室温至80℃；反应时间为18小时；
(3)、中间体3在碳酸铯作用下，以N，N-二甲基甲酰胺为溶剂，与溴代烷烃反应R3-Br，制备中间体4；所述原料2：R3-Br：碳酸铯的摩尔比为1：2：2；所述反应温度为室温；反应时间为18小时；
(4)、中间体3或4在Pd2(dba)3的催化作用下，以BrettPhos为配体，碳酸铯为碱，1，4-二氧六环为溶剂，与苯胺类化合物进行Buchwald-Hartwig偶联反应，制备目标化合物I；所述原料中间体3或4：苯胺类衍生物：Pd2(dba)3：BrettPhos：碳酸铯的摩尔比为1：1：0.1：0.1：2；所述反应温度为100℃；所述反应时间为16小时；
术语定义：
本发明提供的化合物和衍生物可以根据IUPAC(国际纯粹与应用化学联合会)或CAS(化学文摘服务社，Columbus，OH)命名系统命名。
术语“烷基”是直链或支链的饱和烃基的基团。C1～C6烷基的实例包括但不限于甲基(C1)、乙基(C2)、正丙基(C3)、异丙基(C3)、正丁基(C4)、叔丁基(C4)、仲丁基(C4)、异丁基(C4)、正戊基(C5)、3-戊基(C5)、戊基(C5)、新戊基(C5)、3-甲基-2-丁基(C5)、叔戊基(C5)和正己基(C6)。
术语“环烷基”是指不包含杂原子的饱和的环状烃基，其可以是单环结构，也可以是多环结构，例如：环丙烷基(3元)、环己烷基(6元)。
术语“芳基”是指具有共轭的π电子体系的全碳单环或稠环基团，芳基可以是完全芳香族的基团，例如苯基、萘基、蒽基、菲基、芘基等。芳基中的碳原子可以被杂原子取代，杂原子选自硫、氧和/或氮，例如噻吩、呋喃、吡咯、吡啶、喹啉、吲哚等
术语“卤素”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)、碘(I)。
术语“药学上可接受的”是指某载体、运载物、稀释剂、辅料，和/或所形成的盐通常在化学上或物理上与构成某药物剂型的其它成分相兼容，并在生理上与受体相兼容。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的有机盐和无机盐，优选无机盐、药学上可接受的无毒的酸形成的盐，包括但不限于，与氨基反应形成的无机酸盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐、高氯酸盐、硝酸盐,有机酸盐如乙酸盐、草酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、丙二酸盐、盐酸盐、油酸盐、硬脂酸盐、抗坏血酸盐、甲酸盐、硼酸盐、樟脑酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐等。
本发明所述药学上可接受的辅助性成分，是指除活性成分以外包含在剂型中的物质，所述的辅助性成分如环糊精、精氨酸或葡甲胺。所述的环糊精选自α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、(C1-4烷基)-α-环糊精、(C1-4烷基)-β-环糊精、(C1-4烷基)-γ-环糊精、(羟基-C1-4烷基)-α-环糊精、(羟基-C1-4烷基)-β-环糊精、(羟基-C1-4烷基)-γ-环糊精、(羧基-C1-4烷基)-α-环糊精、(羧基-C1-4烷基)-β-环糊精、(羧基-C1-4烷基)-γ-环糊精、α-环糊精的糖类醚、β-环糊精的糖类醚、γ-环糊精的糖类醚、α-环糊精的磺丁基醚、β-环糊精的磺丁基醚和γ-环糊精的磺丁基醚。所述的辅助性成分还包含医学上可接受的载体、佐剂或媒剂。可用于药学上可接受的药物组合物还离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵凝脂；缓冲物质包括磷酸盐、甘氨酸、精氨酸、山梨酸等。
本发明抗肿瘤药物的药用载体或赋形剂为一种或多种固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。采用制药和食品领域公认的方法制备成各种剂型：喷剂、气雾剂、液体剂或固体制剂；所述的液体制剂包括注射剂、混悬剂、乳剂、溶液剂或糖浆剂；所述的固体制剂包括片剂、胶囊剂、颗粒剂或冲剂。其给药途径为口服、舌下给药或粘膜透析；所述的注射包括静脉注射、静脉滴注、肌肉注射、腹腔注射或皮下注射。
本发明的有益效果：
本发明提供的化合物能够有效抑制TRK及其耐药点突变，证实了该类化合物能够选择性地抑制野生型TRKA、TRKB、TRKC、突变型TRKA、TRKB、TRKC，并有效地克服上市药物Larotrectinib和Entrectinib产生的耐药，特别针对多种点突变耐药TRKAG595R,TRKAG667C,TRKAG667S,TRKAF589L,TRKCG623R,及TRKCG696C具有较好的治疗效果，具有很好的药用潜力，为临床用药提供了一种新的潜在选择；同时，本发明提供的化合物的制备方法简便，反应条件温和，便于操作和控制，产率高，成本低，可适合产业化生产，制备得到的化合物生物活性较高，对肿瘤细胞的选择性强，类药性显著，在医药行业具有良好的应用前景。
附图说明
图1为化合物I-35的激酶谱树图。
图2为化合物I-35对不同组别的肿瘤生长曲线及小鼠体重图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1 4-amino-6-chloropyrimidin-5-ol(中间体2)的制备
Figure BDA0003441519200000091
称取原料1(4-amino-6-chloropyrimidin-5-ol)(15.95g，100mmol)于500mL的圆底烧瓶中，后加入200mL的二氯甲烷，然后在冰浴中冷却到0℃，随后缓慢滴加三溴化硼(50.10g，200mmol)。滴加完后，将反应液升温至室温，继续反应过夜。TLC检测反应完全后，将反应液冷却到0℃，并缓慢加入适量的甲醇淬灭反应体系。随后旋干，柱层析纯化，得到白色粉末，即为中间体2(14g,收率96％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.67(s,1H),6.81(s,2H),5.84(s,1H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ157.75,147.40,140.93,135.04；ESI-MS m/z：146.01[M+H]+.
实施例2 4-chloro-6,6-dimethyl-6H-pyrimido[5,4-b][1,4]oxazin-7(8H)-one(中间体3a)的制备
Figure BDA0003441519200000101
在250mL的圆底烧瓶中加入中间体2(14.55g，10mmol)和碳酸铯(6.5g，20mmol)，然后加入100mL N，N-二甲基甲酰胺为溶剂，室温搅拌。随后缓慢滴加2-溴-2-甲基丙酸乙酯(3.88g,20mmol)。滴加完后，将反应液升温至80℃，继续反应过夜。TLC检测反应完全后，将反应液冷却到室温，随后抽滤旋干，柱层析分离纯化，得白色粉末，即为中间体3a(12.78g，收率60％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),1.49(s,6H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ170.06,151.19,149.48,144.57,132.67,80.59,24.39；ESI-MS m/z：214.04[M+H]+.
实施例3 4-chloro-6-methyl-6H-pyrimido[5,4-b][1,4]oxazin-7(8H)-one(中间体3b)的制备
Figure BDA0003441519200000102
合成方法与实施例2相同，反应处理得到白色粉末，即为中间体3b(收率为68％)。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ9.96(s,1H),8.40(s,1H),4.91(q,J＝6.9Hz,1H),1.70(d,J＝6.9Hz,3H)；ESI-MS m/z：200.02[M+H]+.
实施例4 6,6-dimethyl-4-((4-nitrophenyl)amino)-6H-pyrimido[5,4-b][1,4]oxazin-7(8H)-one(中间体4a)的制备
Figure BDA0003441519200000103
在50mL的圆底烧瓶中，加入中间体3a(1.07g,5mmol)、对硝基苯胺(0.69g，5mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0.46g,0.5mmol)、2-(二环己基膦)3,6-二甲氧基-2′,4′,6′-三异丙基-1,1′-联苯(0.54g，0.5mmol)以及碳酸铯(3.26g，10mmol)，随后加入20mL1,4-二氧六环作为该反应溶剂，紧接着在氮气保护下，100℃反应16小时。反应结束后，硅藻土抽滤旋干，柱层析分离纯化得淡黄色粉末，即为中间体4a(0.99g，63％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.34(s,1H),9.48(s,1H),8.22(s,1H),8.22(d,J＝10.2Hz,2H),8.13(d,J＝9.4Hz,2H),1.52(s,6H)；ESI-MS m/z：316.10[M+H]+.
通过实施例4中类似的方法制备表1中的目标化合物
表1中间体4
Figure BDA0003441519200000111
/>
Figure BDA0003441519200000121
实施例5 4-((4-aminophenyl)amino)-6,6-dimethyl-6H-pyrimido[5,4-b][1,4]oxazin-7(8H)-one(中间体5a)的制备
Figure BDA0003441519200000122
在50mL的圆底烧瓶中，加入中间体4a(0.63g,2mmol)、10％Pd/C(10mg)，紧接着在1atm的H2，50℃反应8小时。反应结束后，硅藻土抽滤旋干，即为中间体5a(无需纯化即可进行后续反应)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.33(s,1H),7.94(s,1H),7.35–7.18(m,2H),6.52(d,J＝8.7Hz,2H),4.87(s,2H),1.45(s,6H)；ESI-MS m/z：286.13[M+H]+.
可通过实施例5中类似的方法制备表2中的目标化合物
表2中间体5
Figure BDA0003441519200000123
/>
Figure BDA0003441519200000131
实施例6
1-(5-(tert-butyl)isoxazol-3-yl)-3-(4-((6,6-dimethyl-7-oxo-7,8-dihydro-6H-pyrimido[5,4-b][1,4]oxazin-4-yl)amino)phenyl)urea(化合物I-1)的制备
Figure BDA0003441519200000141
在50mL的圆底烧瓶中，加入中间体5a(0.285g,1mmol)、5-叔丁基-3-异恶唑基异氰酸酯(0.332g，2mmol)以及N,N-二异丙基乙胺(0.387g，3mmol)，随后加入15mL四氢呋喃作为该反应溶剂，紧接着在氮气保护下，66℃反应12小时。反应结束后，抽滤旋干，柱层析分离纯化得白色粉末，即为化合物I-1(0.60g，70％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.28(s,1H),9.71(s,1H),8.55(d,J＝19.3Hz,1H),8.04(s,1H),7.64(d,J＝9.0Hz,2H),7.42(d,J＝8.9Hz,2H),6.50(s,1H),1.48(s,6H),1.22(s,9H)；ESI-MS m/z：452.20[M+H]+.
通过实施例6中类似的方法制备表3中的目标化合物。
表3
Figure BDA0003441519200000142
/>
Figure BDA0003441519200000151
/>
Figure BDA0003441519200000161
/>
Figure BDA0003441519200000171
/>
Figure BDA0003441519200000181
/>
Figure BDA0003441519200000191
/>
Figure BDA0003441519200000201
Figure BDA0003441519200000211
实施例7TRKA，TRKB和TRKC体外激酶活性实验
体外激酶抑制分析采用Eurofins公司提供的Kinase Profiler服务完成。实验方法简述如下：将待测小分子化合物(0.001-10μM)或空白溶剂与待测的TRKA，TRKB和TRKC蛋白激酶以及相应的多肽底物共同加入到反应体缓冲液中孵育，其中反应缓冲液由8mM丙磺酸(MOPS，PH＝7.0)，0.2mM乙二胺四乙酸(EDTA)，10mM醋酸镁和Km浓度的γ-33P-ATP溶液组成。整个反应在室温下进行40min后，向反应缓冲液中加入3％的磷酸盐溶液以终止反应。随后定量吸取10μL反应混合液滴在P30滤纸上，并用75mM的磷酸盐清洗3次，再用甲醇清洗一次，将P30滤纸晾干后加入闪烁液进行闪烁计数。化合物的抑制活性用半抑制浓度IC50来表示，IC50值由各浓度梯度对应的抑制率拟合得到，结果见表4。
表4各化合物IC50值
Figure BDA0003441519200000212
/>
Figure BDA0003441519200000221
从表4中可以看出，化合物I-35对TRKA，TRKB和TRKC呈现出最好生物活性抑制效果，其IC50分别为0.002，0.003和0.002μM，与上市药物Larotrectinib(拉曲替尼)活性相当。
实施例8化合物对转染TRK野生型及点突变的Ba/F3细胞活性
利用基因工程技术，以野生型鼠源B淋巴细胞(Ba/F3)为母板，将TEL基因融合目标基因的催化功能区域，诱导细胞脱离对IL-3刺激因子的依赖，转而依赖外源融合或突变活化激酶的活性，如TRKA和TRKC。如果化合物选择性抑制TRKA和TRKC重组激酶的活性，就会导致相应的细胞发生凋亡。该Ba/F3-TEL-TRKA和Ba/F3-TEL-TRKC全细胞文库的建立为研究和发现抗癌小分子的作用靶点提供了高效易行的途径。
测试方法：将待测化合物溶于DMSO中配成10mM的母液，经3倍稀释制备成不同浓度存储于24*16的384孔透明药板，同时采用同等体积的DMSO溶剂作为空白对照，共9个浓度梯度。
取对数生长期细胞(1000-1500个/孔)接种于24*16的384孔白色透明细胞培养板，每孔体积为50mL，37℃，5％CO2培养箱中培养过夜。采用JANUS@自动工作站给细胞板加药(0.1μL/孔)，化合物最终浓度为10μM，3.3μM，1.1μM，0.37μM，0.12μM，0.04μM，0.014μM，0μM，37℃，5％CO2培养箱中孵育72小时后，加入10μM Celltiter-Glo细胞增殖荧光检测试剂，静置10min，Envision Plate-Reader读数。对本系列中酶活性较好的化合物进行细胞活性测定试验，结果如表5所示。针对Ba/F3的所有细胞活性数据均由安徽普瑞昇公司提供。
表5化合物对转染TRK质粒的Ba/F3细胞株的活性
Figure BDA0003441519200000231
从表5可以看出，化合物I-35对TRKA和TRKC野生型细胞株的活性优于第一代靶向TRK上市药物Larotrectinib，其IC50值分别为1nM和13nM。值得注意的是，化合物I-35可以有效的克服上市药物Larotrectinib产生的耐药点突变，对TRKAG595R,TRKAG667C,TRKAG667S,TRKAF589L,TRKCG623R以及TRKCG696C点突变耐药株IC50值分别为12nM,1nM,6nM,7nM,15nM以及2nM，其克服耐药活性优于目前临床上的第二代靶向TRK抑制剂LOXO-195。
实施例9化合物I-35激酶选择性测试
体外激酶抑制分析采用Eurofins公司提供的Kinase Profiler服务完成。测试方式与实施例7类似。将活性最好的化合物I-35在浓度为1μM的条件下对Eurofins公司现有的422个激酶进行单浓度抑制率筛选实验，并做绘制激酶谱树，如图1所示。该试验数据由Eurofins公司提供。
由图1结果显示，化合物I-35呈现良好的激酶选择性，其S(1)，S(10)以及S(35)分别为0.016，0.05以及0.08。化合物I-35在1μM浓度下除了可有效地抑制TRKA、TRKB以及TRKC，也可有效地抑制DDR1、EphA8、Fes、Mer、PTK5、Rse以及TAK1等激酶。
实施例10 BaF3-TEL-TRKCG623R体内模型试验
本实验的目的是检测本发明化合物的体内抗肿瘤效果.本实验使用NOD-SCID小鼠皮下BaF3-TEL-TRKCG623R模型，测试本发明化合物I-35的体内抗肿瘤活性。以第二代靶向TRK临床研究药物LOXO-195为阳性对照。
1、实验材料：
IMDM、胎牛血清、胰酶等购自Gibco BRL公司(Invitrogen Corporation,USA)，IMDM培养基购自ATCC(American Type Culture Collection)，NOD-SCID小鼠购于中国北京华康生物科技股份有限公司。
2、实验方法：
使用6-8周NOD-SCID小鼠，按照约1*107个/0.1mL/只BaF3-TEL-TRKCG623R细胞浓度接种于小鼠皮下后肋部，待肿瘤长到100-200mm3后，小鼠分组(n＝6)并开始灌胃或尾静脉给药。
实验分组：药物溶剂对照组(8.3％蓖麻油+8.3％乙醇+83.4％水)化合物I-35：10mg/kg iv；阳性对照LOXO-195：40mg/kg op；各组药物溶解于8.3％蓖麻油+8.3％乙醇+83.4％水。
观察指标：每3天测量一次小鼠体重及肿瘤长径、短径并计算肿瘤体积(length*width2*0.52)，观察有无腹泻，抽搐，皮疹及体重明显降低等反应。
3、实验结果：
实验测得的各种不同组别的肿瘤生长曲线及小鼠体重见图2。
由图2结果表明，受试化合物I-35对BaF3-TEL-TRKCG623R有明显的体内生长抑制作用，给药10天后，可以明显的抑制肿瘤生长，并略优于阳性对照LOXO-195.给药过程中并未发现小鼠出现体重降低、皮疹、腹泻等不良反应，表明在测试计量下，受试化合物I-35在给药剂量范围内毒性很低。

Claims (10)

1.式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：结构如下所示：
Figure FDA0003441519190000011
其中，X、Y独立地选自CH2或者NH，且X、Y不同时为CH2；
R1、R2独立地选自H、C1-C8烷基，且R1、R2不同时为H；
R3选自H或C1-C8烷基；
R4选自氢、卤素、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C1-C8烷硫基，或者R4与主环形成6～10元芳环；
R4中，所述取代的C1-C8烷基、取代的C1-C8烷氧基、取代的C1-C8烷硫基的取代基为卤素；
R5选自取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的3～10元环烷基、取代或未取代的6～10元芳基、取代或未取代的5～10元杂芳基；
R5中，所述5～10元杂芳基的杂原子为N或O，杂原子数为1～3个；
R5中，所述取代的C1-C8烷基、取代的3～10元环烷基的取代基选自烯基、卤素、氰基、5～10元芳基、5～10元氮杂芳基；
R5中，所述取代的6～10元芳基、取代的5～10元杂芳基的取代基选自C1～C8烷基、3～8元环烷基、烯基、卤素、氰基、6～10元芳基、5～10元氮杂芳基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：至少满足下列的一项：
R1、R2独立地选自H、C1-C6烷基，且R1、R2不同时为H；优选的，R1、R2独立地选自H、C1-C4烷基，且R1、R2不同时为H；
R3选自H或C1-C6烷基；R3选自H或C1-C4烷基。
3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：
R1、R2独立地选自C1-C8烷基；
优选的，R1、R2独立地选自C1-C6烷基；
更优选的，R1、R2独立地选自C1-C4烷基。
4.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：
R4选自氢、卤素、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C1-C6烷氧基、取代或未取代的C1-C6烷硫基，或者R4与主环形成6～10元芳环；R4中，所述取代的C1-C6烷基、取代的C1-C6烷氧基、取代的C1-C6烷硫基的取代基为卤素；
优选的，R4选自氢、卤素、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C1-C4烷氧基、取代或未取代的C1-C4烷硫基，或者R4与主环形成6元芳环；R4中，所述取代的C1-C4烷基、取代的C1-C4烷氧基、取代的C1-C4烷硫基的取代基为卤素；
更优选的，R4选自氢、-F、甲硫基、三氟甲基、甲基、甲氧基，或者R4与主环形成6元芳环。
5.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：
R5选自取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的5～10元环烷基；R5中，所述取代的C1-C6烷基、取代的5～10元环烷基的取代基的选自烯基、卤素、氰基；
优选的，R5选自取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的6～10元环烷基；R5中，所述取代的C1-C4烷基、取代的6～10元环烷基的取代基的选自烯基、卤素、氰基；
更优选的，R5选自烯基取代或未取代的C1-C4烷基、未取代的6～10元环烷基；
最优选的，R5选自乙基、叔丁基、烯丙基、环己基、
Figure FDA0003441519190000021
6.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：
R5中，所述取代的6～10元芳基的取代基选自C1～C6烷基、烯基、卤素、氰基、6～10元芳基、5～10元氮杂芳基；
优选的，R5选自取代或未取代的6元芳基；R5中，所述取代的6元芳基的取代基选自卤素取代或未取代的C1～C4、卤素、氰基；
更优选的，R5选自取代或未取代的6元芳基；R5中，所述取代的6元芳基的取代基选自三氟甲基、甲基、氟、氯、氰基；
最优选的，R5选自
Figure FDA0003441519190000022
7.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：
R5为取代或未取代的5元杂芳基；R5中，所述5元杂芳基的杂原子为N或O，杂原子数为1～2个，且至少一个为N；R5中，所述取代的5元杂芳基的取代基选自取代或未取代的C1～C6烷基、取代或未取代的3～6元环烷基、取代或未取代的6～10元芳基、取代或未取代的5～10元氮杂芳基；R5中，所述取代的C1～C6烷基的取代基为卤素，所述取代的3～6元环烷基、取代的6～10元芳基、取代的5～10元氮杂芳基的取代基选自卤素、卤素取代或未取代的C1～C6烷基、卤素取代或未取代的C1～C6烷氧基；
优选的，R5选自
Figure FDA0003441519190000031
其中，R6选自取代或未取代的C1～C6烷基、取代或未取代的3～6元环烷基、取代或未取代的6～10元芳基；R6中，所述取代的C1～C6烷基、取代的3～6元环烷基、取代的6～10元芳基的取代基为卤素；R7选自取代或未取代的C1～C6烷基、取代或未取代的3～6元环烷基、取代或未取代的6～10元芳基、取代或未取代的5～10元氮杂芳基；R7中，所述取代的C1～C6烷基的取代基为卤素，所述取代的3～6元环烷基、取代的6～10元芳基、取代的5～10元氮杂芳基的取代基选自卤素、卤素取代或未取代的C1～C6烷基、卤素取代或未取代的C1～C6烷氧基；
更优选的，R6选自未取代的C1～C6烷基、未取代的3～6元环烷基、未取代的6～10元芳基；R7选自卤素取代或未取代的C1～C4烷基、未取代的5～6元环烷基、取代或未取代的6～10元芳基、取代或未取代的5～6元氮杂芳基；R7中，所述取代的6～10元芳基、取代的5～10元氮杂芳基的取代基选自卤素、三氟甲基、三氟甲氧基；
再优选的，R6选自叔丁基、环丙基、苯基；R7选自甲基、异丙基、叔丁基、环己基、苯基、
Figure FDA0003441519190000032
Figure FDA0003441519190000033
最优选的，R5选自
Figure FDA0003441519190000034
Figure FDA0003441519190000035
8.根据权利要求1～7任一项所述的化合物，其特征在于：所述化合物包括：
Figure FDA0003441519190000036
Figure FDA0003441519190000041
Figure FDA0003441519190000051
9.药物组合物，由权利要求1～8任一项所述化合物或其药学上可接受的盐为活性成分，添加药学上可接受的辅助性成分组成。
10.权利要求1～8任一项所述化合物或其药学上可接受的盐、权利要求9所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的用途；优选的，所述抗肿瘤药物为TRK小分子抑制剂；优选的，所述肿瘤为由TRK融合基因导致的癌症。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108164548A (zh) * 2016-12-07 2018-06-15 四川大学 嘧啶并吗啉衍生物及其制备方法和用途
CN111249283A (zh) * 2018-11-30 2020-06-09 四川大学 具有抗癌作用的嘧啶衍生物
CN112225748A (zh) * 2020-10-20 2021-01-15 四川大学华西医院 一种具有flt3激酶抑制活性的小分子化合物及其应用
CN113416181A (zh) * 2021-08-02 2021-09-21 四川大学 喹唑啉类衍生物及其用途
CN113773316A (zh) * 2020-06-09 2021-12-10 四川大学 一种tnik抑制剂及其制备方法和用途

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108164548A (zh) * 2016-12-07 2018-06-15 四川大学 嘧啶并吗啉衍生物及其制备方法和用途
CN111249283A (zh) * 2018-11-30 2020-06-09 四川大学 具有抗癌作用的嘧啶衍生物
CN113773316A (zh) * 2020-06-09 2021-12-10 四川大学 一种tnik抑制剂及其制备方法和用途
CN112225748A (zh) * 2020-10-20 2021-01-15 四川大学华西医院 一种具有flt3激酶抑制活性的小分子化合物及其应用
CN113416181A (zh) * 2021-08-02 2021-09-21 四川大学 喹唑啉类衍生物及其用途

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