CN116322355A - 用于动物饲料的新颗粒 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了包含具有超氧化物歧化酶活性的多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽的用于动物饲料的颗粒，以及用于获得这样的颗粒的方法。

Description

用于动物饲料的新颗粒
序列表的引用
本申请含有计算机可读形式的序列表。该计算机可读形式通过引用并入本文。
技术领域
本发明涉及包含具有超氧化物歧化酶活性的多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽的用于动物饲料的颗粒，以及用于获得这样的颗粒的方法。
背景技术
已知，包含酶的动物饲料具有多个优点(取决于所使用的酶)。典型地，发现动物饲料呈以下两种形式中的一种：由将所有饮食组分混合在一起构成的糊状饲料，或其中不同的饮食组分被压缩成大小大致相同的丸粒的丸粒化饲料。出于多个原因(如所有所需成分的可用性以及易于储存和处理)，丸粒化饲料通常是有利的。
饲料丸粒可包括一种或多种酶，并且典型地通过将包含活性成分(如酶)的颗粒与其他成分(例如，谷类和营养物)混合，随后将混合物调节并加工成丸粒来产生。在调节和丸粒化过程中，温度升高并在一些情况下可达到高温。
重要的是营养物和酶在饲料中均匀分布，以确保所有动物经由饲料得到营养物和酶的最佳共混物。此外，调节和丸粒化工艺期间的高温可能对酶的稳定性产生负面影响，从而对其活性产生负面影响。
发明内容
本发明提供了包含具有超氧化物歧化酶活性的多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽的颗粒组合物，其中该具有超氧化物歧化酶活性的多肽和该具有过氧化氢酶活性的多肽之间的摩尔比大于5:1，如至少9:1，如在99:1至9:1之间。
在一个方面，本发明提供了包含具有超氧化物歧化酶活性的多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽的组合物，
其中在对所述组合物施加热应力后，该组合物中具有过氧化氢酶活性的多肽的活性高于已施加所述热应力的对照组合物中的，其中所述具有过氧化氢酶活性的多肽是所述对照组合物中唯一的多肽。
在一个方面，本发明提供了包含具有超氧化物歧化酶活性的多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽的共颗粒组合物，其中该共颗粒组合物中具有过氧化氢酶活性的多肽的活性高于其中所述具有过氧化氢酶活性的多肽是唯一多肽的颗粒组合物中的，在对所述共颗粒组合物和所述颗粒组合物施加热应力后测量所述过氧化氢酶活性。
在一个方面，本发明提供了改善组合物中过氧化氢酶稳定性的方法，该方法包括将具有超氧化物歧化酶活性的多肽添加到所述组合物中。换言之，本发明提供了改善过氧化氢酶稳定性的方法，该方法包括制备包含所述过氧化氢酶和具有超氧化物歧化酶活性的多肽的组合物。
在另一方面，本发明提供了改善过氧化氢酶稳定性的方法，该方法包括制备包含所述过氧化氢酶和具有超氧化物歧化酶活性的多肽的组合物，其中在对所述组合物施加热应力后，所述组合物中具有过氧化氢酶活性的多肽的活性高于已施加所述热应力的对照组合物中的，其中所述具有过氧化氢酶活性的多肽是所述对照组合物中唯一的多肽。
在一个方面，本发明提供了具有超氧化物歧化酶活性的多肽用于改善组合物中过氧化氢酶稳定性的用途。
在进一步的使用中，本发明提供了具有超氧化物歧化酶活性的多肽在动物饲料添加剂中用于改善动物饲料添加剂中过氧化氢酶稳定性的用途。
在本发明的一个方面，颗粒包含核心和包围该核心的层。
进一步提供了制备本发明的颗粒的工艺，该工艺包括以下步骤：
a.制备包含具有超氧化物歧化酶活性的多肽、具有过氧化氢酶活性的多肽和惰性材料(例如盐、糊精、纤维素)的核心
b.任选地，用包围该核心的层包衣该核心。
本发明还提供了包含饲料组分和本发明的颗粒的动物饲料组合物，以及本发明的颗粒用于经蒸汽处理的丸粒化饲料组合物的用途。本发明进一步提供了组合物，其中具有超氧化物歧化酶活性的多肽选自由以下组成的组：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5，优选地选自由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:5组成的组，并且具有过氧化氢酶活性的多肽选自由以下组成的组：SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9，优选地选自由SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7组成的组。
序列表综述
SEQ ID NO 1是包含287个氨基酸残基的、来自里氏木霉(Trichoderman reesei)的、具有超氧化物歧化酶(SOD)活性的成熟多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO 2是包含162个氨基酸残基的、来自日本曲霉(Aspergillusjaponicus)的、具有超氧化物歧化酶(SOD)活性的成熟多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO 3是包含166个氨基酸残基的、来自坦普利科拉曲霉(Aspergillustemplicola)的、具有超氧化物歧化酶(SOD)活性的成熟多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO 4是包含192个氨基酸残基的、来自对间座壳菌(Diaporthe nobilis)的、具有超氧化物歧化酶(SOD)活性的成熟多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO 5是包含159个氨基酸残基的、来自奥氏蜜环菌(Armillaria ostoyae)的具有超氧化物歧化酶(SOD)活性的成熟多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO 6是包含740个氨基酸残基的、来自橙色嗜热子囊菌(Thermoascusaurantiacus)的具有过氧化氢酶活性的成熟多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO 7是包含729个氨基酸残基的、来自橙色嗜热子囊菌的具有过氧化氢酶活性的成熟多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO 8是包含729个氨基酸残基的、来自橙色嗜热子囊菌的具有过氧化氢酶活性的成熟多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO 9是包含729个氨基酸残基的、来自橙色嗜热子囊菌的具有过氧化氢酶活性的成熟多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO 10是包含729个氨基酸残基的、来自橙色嗜热子囊菌的具有过氧化氢酶活性的成熟多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO 11是包含729个氨基酸残基的、来自橙色嗜热子囊菌的具有过氧化氢酶活性的成熟多肽的氨基酸序列。
定义
过氧化氢酶：“过氧化氢酶”(在本文中也称为“具有过氧化氢酶活性的多肽”)可分类为EC 1.11.1.6过氧化氢酶或EP 1.11.1.21过氧化氢酶过氧化物酶。
组合物：术语组合物旨在涵盖任何颗粒、颗粒剂(granulate)、共颗粒、共颗粒剂(co-granulate)、溶液、液体、凝胶、粉末、饲料添加剂或饲料。
真菌来源：提及超氧化物歧化酶或过氧化氢酶时，术语“真菌来源”旨在意指酶的来源是真菌。真菌是真核生物组中的任何成员，包括微生物(如酵母和霉菌)，以及更常见的蕈类。这些生物被分类为真菌界。目前，提出了七个门：微孢子虫门(Microsporidia)、壶菌门(Chytridiomycota)、芽枝霉门(Blastocladiomycota)、新美鞭菌门(Neocallimastigomycota)、球囊菌门(Glomeromycota)、子囊菌门(Ascomycota)、和担子菌门(Basidiomycota)。合适的实例包括但不限于里氏木霉、杂色曲霉(Aspergillusversicolor)、弯头曲霉(Aspergillus deflectus)、埃及曲霉(Aspergillus egyptiacus)、韦斯特壳属物种(Westerdykella sp.)AS85-2、曲霉属物种(Aspergillus sp.)XZ2669、栖土光黑壳(Preussia terricola)、锥毛壳属物种(Kionochaetasp.)、球芽泛普可尼亚菌(Metapochonia bulbillosa)、Xylomelasma属物种XZ0718、弗氏光黑壳(Preussiaflanaganii)、枝葡霉属物种(Cladobotryum sp.)、韦斯特壳属物种-46156、钩状木霉(Trichoderma hamatum)、嗜热分枝杆菌(Mycothermus thermophilus)、Cephalotrichiella penicillate、大果毛壳(Chaetomium megalocarpum)、嗜热毛壳菌嗜热变种(Chaetomium thermophilum var.thermophilum)、透明嗜热腐质霉(Humicolahyalothermophila)、变形沙氏壳(Subramaniula anamorphosa)、鞘氨醇杆菌属物种(Sphingobacteriumsp.)T2、俄罗斯木霉(Trichoderma rossicum)、力士木霉(Trichodermalixii)、木霉属物种(Trichoderma sp)-54723、霉白曲霉(Aspergillus niveus)、坦普利科拉曲霉、厚垣孢普可尼亚菌棘孢变种(Pochonia chlamydosporia var.spinulospora)、木霉属物种-44174、俄罗斯木霉、木霉属物种-54723、木霉属物种-44174、Metapochoniasuchlasporia、马昆德拟绿僵菌(Metarhizium marquandii)、对间座壳菌、弯颈霉属物种(Tolypocladium sp.)XZ2627、日本曲霉、绿僵菌属物种(Metarhizium sp.)XZ2431、奥氏蜜环菌、螺旋木霉(Trichoderma spirale)、雅致曲霉(Aspergillus elegans)、弯梗木霉(Trichoderma sinuosum)、绿木霉(Trichoderma virens)、哈茨木霉(Trichodermaharzianum)、Fusicolla acetilerea、小不整球壳属物种(Plectosphaerellasp.)1-29、紫红玛利亚霉(Mariannaea punicea)、草酸青霉菌(Penicillium oxalicum)、炭疽菌属物种(Colletotrichum sp)-71086、曲霉属新物种(Aspergillus sp.nov.)XZ3202、近洋大戟草木霉(Trichoderma parapiluliferum)、曲霉属新物种XZ3202、毛霉属物种(Mucor sp.)XZ2651、米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)、毛霉属物种XZ2651、圆孔壳科物种(Amphisphaeriaceae-sp)43674、棕黑腐质霉(Humicola fuscoatra)和红聚颈腔菌(Valsaria rubricosa)。
颗粒、颗粒剂、共颗粒、共颗粒剂旨在意指呈固体形式(如层状形式)的组合物或包含本发明的酶和允许形成固体单元的填充剂的核心。
热应激：当动物的热负荷大于其散热能力时，就会出现“热应激”。猪和其他动物在太热且水不足的情况下可能出现头痛、易怒和嗜睡。典型地在热应激时可观察到以下一种或多种情况：呼吸率和出汗增加、水摄入量增加、饲料摄入量减少。
氢化：术语“氢化”用于不饱和碳水化合物链的饱和，例如在甘油三酸酯中，其中碳＝碳双键被转化为碳-碳单键。
糊状组合物：糊状组合物是营养全面的谷类、谷类产品和任选的补充剂的组合物，呈磨碎的形式，例如包含尚未丸粒化和调节的小麦、玉蜀黍等。
粒度：颗粒的粒度意指颗粒的质量平均直径。
丸粒化饲料组合物：术语“丸粒化饲料组合物”旨在意指丸粒化和调节后的饲料组合物，即待饲喂至动物的饲料丸粒。
％RH：术语“％RH”应理解为空气的相对湿度。100％ RH是在固定温度下被水气饱和的空气，因此％RH反映了空气的百分比湿气饱和度(percent moisture saturation)。
溶液：将溶液定义为两种或更多种物质的均匀混合物。
超氧化物歧化酶：超氧化物歧化酶(SOD，EC 1.15.1.1)(本文也称为“具有超氧化物歧化酶活性的多肽”)是可替代地催化超氧化物(O2-)基团歧化(或分裂)为普通分子氧(O2)或过氧化氢(H2O2)的酶。
悬浮液：将悬浮液定义为悬浮在流体中的细小粒子。
具体实施方式
令人惊讶地发现，可以配制具有超氧化物歧化酶(具有歧化酶活性)的真菌来源的多肽，以便在丸粒化条件下基本保留其活性；即对热应力是基本稳定的。然而，与丸粒化相关的相同热应力条件大大降低了具有过氧化氢酶活性的多肽的活性。然而，另外令人惊讶地发现，将具有超氧化物歧化酶活性的多肽与具有过氧化氢酶活性的多肽组合提供了对与丸粒化相关的热应力基本稳定的过氧化氢酶。因此，具有超氧化物歧化酶活性的多肽对具有过氧化氢酶活性的多肽的活性具有稳定作用。
在一个方面，本发明提供了包含具有超氧化物歧化酶活性的多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽的组合物，
其中在对所述组合物施加热应力后，该组合物中具有过氧化氢酶活性的多肽的活性高于已施加所述热应力的对照组合物中的，其中所述具有过氧化氢酶活性的多肽是所述对照组合物中唯一的多肽。
在一个方面，本发明提供了包含具有超氧化物歧化酶活性的多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽的共颗粒组合物，其中该共颗粒组合物中具有过氧化氢酶活性的多肽的活性高于其中所述具有过氧化氢酶活性的多肽是唯一多肽的颗粒组合物中的，在对所述共颗粒组合物和所述颗粒组合物施加热应力后测量所述过氧化氢酶活性。
在一个方面，本发明提供了具有超氧化物歧化酶活性的多肽用于改善组合物中过氧化氢酶稳定性的用途。典型地，该用途涉及改善对热应力的稳定性，如在丸粒化时。出于比较的目的，可在95℃的温度和95％的相对湿度，90秒的调节时间下表现出热稳定性。这些是用于丸粒化(如用于制备动物饲料添加剂)的典型条件。
在一个方面，本发明提供了改善组合物中过氧化氢酶稳定性的方法，该方法包括将具有超氧化物歧化酶活性的多肽添加到所述组合物中。
本发明涉及包含具有超氧化物歧化酶活性的多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽的用于动物饲料的颗粒。根据本发明，本发明的发明人惊奇地发现了提供最佳量的具有超氧化物歧化酶活性的多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽的方法，其中当提供给动物时确保酶的均匀分布。在本发明的一个方面，提供了包含具有超氧化物歧化酶活性的多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽的颗粒，其中该具有超氧化物歧化酶活性的多肽和该具有过氧化氢酶活性的多肽之间的摩尔比大于5:1，如至少9:1，如在99:1至9:1之间。
如上所述，本发明的组合物典型地使得在对组合物施加热应力后，过氧化氢酶和超氧化物歧化酶二者的活性基本保持。合适地，与蒸汽丸粒化之前颗粒核心中具有超氧化物歧化酶(SOD)活性的多肽的活性相比，在90摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的具有超氧化物歧化酶(SOD)活性的多肽的活性保留了至少60％。
本发明的一方面涉及包含具有超氧化物歧化酶(SOD)活性的多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽的组合物，其中与蒸汽丸粒化之前颗粒核心中的过氧化氢酶的活性相比，在90摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的过氧化氢酶的活性基本保留。合适地，与蒸汽丸粒化之前颗粒核心中具有过氧化氢酶活性的多肽的活性相比，在90摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的具有过氧化氢酶活性的多肽的活性保留了至少60％。
优选地，在施加热应力后，具有过氧化氢酶活性的多肽的保留活性为至少65％，如至少70％、如至少75％、如至少80％。
优选地，在施加热应力后，具有超氧化物歧化酶活性的多肽的保留活性为至少65％，如至少70％、如至少75％、如至少80％。
该组合物典型地选自由以下组成的组：丸粒如饲料丸粒、颗粒、颗粒剂、动物饲料添加剂和动物饲料。
本发明的一方面涉及用作动物饲料添加剂或用于在动物饲料添加剂中使用的组合物。相关方面涉及本发明的组合物作为动物饲料添加剂或在制备动物饲料添加剂中的用途。
本发明的另一方面涉及包含具有超氧化物歧化酶活性的多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽的共颗粒组合物，其中该共颗粒组合物中具有过氧化氢酶活性的多肽的活性高于其中所述具有过氧化氢酶活性的多肽是唯一多肽的颗粒组合物中的，在对所述共颗粒组合物和所述颗粒组合物施加热应力后测量所述过氧化氢酶活性。
在一个方面，本发明提供了改善组合物中过氧化氢酶稳定性的方法，该方法包括将具有超氧化物歧化酶活性的多肽添加到所述组合物中。在另一方面，本发明提供了改善过氧化氢酶稳定性的方法，该方法包括制备包含所述过氧化氢酶和具有超氧化物歧化酶活性的多肽的组合物，其中在对所述组合物施加热应力后，所述组合物中具有过氧化氢酶活性的多肽的活性高于已施加所述热应力的对照组合物中的，其中所述具有过氧化氢酶活性的多肽是所述对照组合物中唯一的多肽。
在一个方面，本发明提供了改善组合物中超氧化物歧化酶稳定性的方法，该方法包括将具有过氧化氢酶活性的多肽添加到所述组合物中。在另一方面，本发明提供了改善超氧化物歧化酶稳定性的方法，该方法包括制备包含所述超氧化物歧化酶和具有过氧化氢酶活性的多肽的组合物，其中在对所述组合物施加热应力后，所述组合物中具有超氧化物歧化酶活性的多肽的活性高于已施加所述热应力的对照组合物中的，其中所述具有超氧化物歧化酶活性的多肽是所述对照组合物中唯一的多肽。
为了测量施加热应力后的保留活性，热应力是合适地在90摄氏度和95％相对湿度下蒸汽丸粒化，调节时间为90秒。
本发明的颗粒和生产这些颗粒的方法的另一个优点是颗粒和由这些颗粒生产的动物饲料是储存和热稳定的。此外，颗粒和由这些颗粒的饲料丸粒提供了用于喂食动物优化饲料的成本有效且环境友好的方式。
颗粒
当提及本发明的颗粒时，它可以是单个颗粒或几个颗粒。
特别地，本发明的颗粒非常适合于蒸汽丸粒化并且作为经蒸汽处理的丸粒化饲料组合物的一部分。颗粒包含核心和包围该核心的层，其中该核心包含具有超氧化物歧化酶活性的多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽。
发现本发明颗粒的合适的粒度是50μm-2000μm，更特别地是100μm-1500μm。在本发明的实施例中，颗粒的粒度大于250μm。在本发明的另一个实施例中，粒度低于1200μm。在又另一个实施例中，粒度在250-1200μm之间。在本发明的另一个实施例中，成品颗粒的粒度是250-900μm。在本发明的又另一个实施例中，成品颗粒的平均粒度是500-700μm。在本发明的仍另一个实施例中，成品颗粒的粒度是600-1200μm。在本发明的仍另一个实施例中，成品颗粒的粒度是600-900μm。
原始颗粒是不包含保护性包衣或外层的颗粒。例如，原始颗粒可以是没有盐外层或包衣，或者没有油或脂肪或蜡外层或包衣的核心，其中所述外层或包衣提供了增加的热稳定性。
核心
核心包含具有超氧化物歧化酶活性的多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽。
该核心可以是
酶的均匀共混物，这些酶包括具有超氧化物歧化酶活性的一种或多种多肽和具有过氧化氢酶活性的一种或多种多肽，
或
惰性粒子，该惰性粒子具有施加到其上的具有超氧化物歧化酶活性的多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽以及任选地另外的酶，
或
酶和材料的均匀共混物，这些酶包括具有超氧化物歧化酶活性的一种或多种多肽和具有过氧化氢酶活性的一种或多种多肽，并且这些材料充当被具有超氧化物歧化酶活性的一种或多种多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽包衣的粘合剂。
酶可以液体和/或浓缩的干物质的形式应用于核心。在一个方面，具有超氧化物歧化酶活性的多肽以液体的形式应用于核心，在另一方面，具有超氧化物歧化酶活性的多肽以浓缩的干物质的形式应用于核心，在又另一方面，具有超氧化物歧化酶活性的多肽部分以液体的形式并且部分以浓缩的干物质的形式应用于核心。在一个方面，具有过氧化氢酶活性的多肽以液体的形式应用于核心，在另一方面，具有过氧化氢酶活性的多肽以浓缩的干物质的形式应用于核心，在又另一方面，具有过氧化氢酶活性的多肽部分以液体的形式和部分以浓缩的干物质的形式应用于核心。
在核心包含惰性粒子的情况下，该惰性粒子可以是水溶性的或水不溶性的，例如淀粉(例如处于木薯或小麦的形式)；或糖(如，蔗糖或乳糖)，或盐(如，氯化钠或硫酸钠)。本发明的合适的惰性粒子材料包括无机盐、糖、糖醇、小的有机分子(如，有机酸或盐)、矿物质(如，粘土或硅酸盐)、或这些材料中两种或更多种的组合。惰性粒子可以通过多种造粒技术来生产，这些造粒技术包括结晶、沉淀、锅包衣(pan-coating)、流化床包衣、流化床凝集、旋转雾化、挤出、颗粒化(prilling)、球化(spherization)、粒度减小(size reduction)法、转鼓造粒(drum granulation)和/或高剪切造粒。
在核心包含一种或多种粘合剂的情况下，这些粘合剂可以是合成聚合物，如例如乙烯基聚合物、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙酸乙烯酯、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、聚磺酸盐、聚羧酸酯、及其共聚物，蜡(包括脂肪)，发酵液，碳水化合物，盐或多肽。在特定实施例中，粘合剂是多肽。多肽可选自明胶、胶原、酪蛋白、壳聚糖、聚天冬氨酸和聚谷氨酸。在另一个特定的实施例中，粘合剂是纤维素衍生物，例如羟丙基纤维素、甲基纤维素或CMC。合适的粘合剂是碳水化合物粘合剂，例如糊精，例如Glucidex 21D或Avedex W80。
在一个实施例中，核心可以包含盐。盐可以是无机盐，例如硫酸盐、亚硫酸盐、磷酸盐、膦酸盐、硝酸盐、氯盐或碳酸盐或者简单有机酸(少于10个碳原子，例如6个或更少的碳原子)的盐如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。这些盐中的阳离子的实例是碱金属或碱土金属离子，尽管铵离子或第一过渡系金属离子也可以，如钠、钾、镁、钙、锌或铝。阴离子的实例包括氯、碘、硫酸根、亚硫酸根、亚硫酸氢根、硫代硫酸根、磷酸根、磷酸二氢根、二碱式磷酸根、次磷酸根、焦磷酸二氢根、碳酸根、碳酸氢根、硅酸根、柠檬酸根、苹果酸根、马来酸根、丙二酸根、琥珀酸根、乳酸根、甲酸根、乙酸根、丁酸根、丙酸根、苯甲酸根、酒石酸根、抗坏血酸根或葡糖酸根。特别是，可以使用硫酸根、亚硫酸根、磷酸根、膦酸根、硝酸根、氯或碳酸根的碱或碱土金属盐或者简单有机酸的盐如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。特定的实例包括NaH2PO4、Na2HPO4、Na3PO4、(NH4)H2PO4、K2HPO4、KH2PO4、Na2SO4、K2SO4、KHSO4、ZnSO4、MgSO4、CuSO4、Mg(NO3)2、(NH4)2SO4、硼酸钠、乙酸镁和柠檬酸钠。粒子的核心中的盐也可以是水合盐，即带有结晶的一个或多个结合水的结晶盐水合物，例如WO 99/32595中所述。水合盐的实例包括七水合硫酸镁(MgSO4(7H2O))、七水合硫酸锌(ZnSO4(7H2O))、七水合磷酸氢二钠(Na2HPO4(7H2O))、六水合硝酸镁(Mg(NO3)2(6H2O))、十水合硼酸钠、二水合柠檬酸钠、和四水合乙酸镁。
在一个实施例中，核心和/或内盐层可以包含吸湿化合物。吸湿化合物充当缓冲剂，其能够通过减少与颗粒中的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶接触的游离水来降低水活度。如果将吸湿化合物添加至核心中，则重要的是要有足够的缓冲能力以去除内盐层应用后存在的水。在一个实施例中，吸湿化合物具有大于3％的水吸收，如大于5％，如大于10％的水吸收。发现水吸收为一周后在25℃和70％相对湿度下的平衡水吸收。添加至颗粒中的吸湿化合物的量大于颗粒的1％、大于颗粒的2％、大于颗粒的5％、或大于颗粒的10％w/w。
吸湿化合物可以是有机的或无机的化合物，并且可以选自但不限于由以下组成的组：面粉、淀粉、玉米芯产品、纤维素和硅胶。
颗粒可以包含另外的材料，例如加工助剂、填充剂、纤维材料、稳定剂、增溶剂、悬浮剂、粘度调节剂、轻球体、增塑剂、盐、润滑剂和香料。加工助剂可以例如以粉末形式提供，并且可以例如是CaCO3、滑石和/或高岭土。合适的填充剂是水溶性和/或水不溶性无机盐，如精细磨碎的碱性硫酸盐、碱性碳酸盐和/或碱性氯化物，粘土如高岭土(例如SPESWHITETM，英国中国粘土公司(English China Clay))、膨润土、滑石、沸石、白垩、碳酸钙和/或硅酸盐。典型的填充剂是硫酸二钠和木质素磺酸钙(calcium-lignosulphonate)。稳定剂或保护剂是如在造粒领域中常规使用的。稳定剂或保护剂可分为几类：碱性或中性材料、还原剂、抗氧化剂和/或第一过渡系金属离子的盐。这些中的每一种均可与相同或不同类别的其他保护剂联合使用。碱性保护剂的实例是碱金属硅酸盐、碳酸盐或碳酸氢盐。还原保护剂的实例是亚硫酸盐、硫代亚硫酸盐、硫代硫酸盐或MnSO4，而抗氧化剂的实例是甲硫氨酸、丁羟甲苯(BHT)或丁羟茴醚(BHA)。特别地，稳定剂可以是硫代硫酸盐，例如硫代硫酸钠或甲硫氨酸。有用的稳定剂的再其他实例是明胶、尿素、山梨醇、甘油、酪蛋白、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素(CMC)、羟乙基纤维素(HEC)、脱脂乳粉和/或食用油，如豆油或油菜油(canola oil)。在饲料颗粒中特定的稳定剂是乳酸源或淀粉。优选的乳酸源是玉米浆(corn steep liquor)。本领域还已知酶底物如淀粉、脂质、蛋白质等可作为酶的稳定剂。
超氧化物歧化酶
本发明的具有超氧化物歧化酶活性的多肽可以是真菌来源的。在一个方面，超氧化物歧化酶是真菌来源的。在另一方面，本发明的超氧化物歧化酶是可获得自真菌的超氧化物歧化酶，该真菌选自由以下组成的组：里氏木霉、杂色曲霉、弯头曲霉、埃及曲霉、韦斯特壳属物种AS85-2、曲霉属物种XZ2669、栖土光黑壳、锥毛壳属物种、球芽泛普可尼亚菌、Xylomelasma属物种XZ0718、弗氏光黑壳、枝葡霉属物种、韦斯特壳属物种-46156、钩状木霉、嗜热分枝杆菌、Cephalotrichiella penicillate、大果毛壳、嗜热毛壳菌嗜热变种、透明嗜热腐质霉、变形沙氏壳、鞘氨醇杆菌属物种T2、俄罗斯木霉、力士木霉、木霉属物种-54723、霉白曲霉、坦普利科拉曲霉、厚垣孢普可尼亚菌棘孢变种、木霉属物种-44174、俄罗斯木霉、木霉属物种-54723、木霉属物种-44174、Metapochonia suchlasporia、马昆德拟绿僵菌、对间座壳菌、弯颈霉属物种XZ2627、日本曲霉、绿僵菌属物种XZ2431、奥氏蜜环菌、螺旋木霉、雅致曲霉、弯梗木霉、绿木霉、哈茨木霉、Fusicolla acetilerea、小不整球壳属物种1-29、紫红玛利亚霉、草酸青霉菌、炭疽菌属物种-71086、曲霉属新物种XZ3202、近洋大戟草木霉、曲霉属新物种XZ3202、毛霉属物种XZ2651、米黑根毛霉、毛霉属物种XZ2651、圆孔壳科物种43674、棕黑腐质霉和红聚颈腔菌。
在一个方面，具有超氧化物歧化酶活性的分离的多肽选自由以下组成的组：
a.来自里氏木霉的多肽，该多肽与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
b.来自日本曲霉的多肽，该多肽与SEQ ID NO:2具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
c.来自坦普利科拉曲霉的多肽，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
d.来自对间座壳菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:4具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；以及
e.来自奥氏蜜环菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:5具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。
在一个方面，具有超氧化物歧化酶活性的分离的多肽是来自里氏木霉的多肽，该多肽与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。
在一个方面，具有超氧化物歧化酶活性的分离的多肽是来自日本曲霉的多肽，该多肽与SEQ ID NO:2具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。
在一个方面，具有超氧化物歧化酶活性的分离的多肽是来自坦普利科拉曲霉的多肽，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。
在一个方面，具有超氧化物歧化酶活性的分离的多肽是来自对间座壳菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:4具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。
在一个方面，具有超氧化物歧化酶活性的分离的多肽是来自奥氏蜜环菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:5具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性
过氧化氢酶
本发明的具有过氧化氢酶活性的多肽可以是真菌来源的。在一个方面，过氧化氢酶是真菌来源的。在另一方面，本发明的过氧化氢酶是可获得自以下来源的具有过氧化氢酶活性的多肽，该来源选自由以下组成的组：黑曲霉(Aspergillus niger)、橙色嗜热子囊菌、慢性曲霉(Aspergillus lentulus)、嗜热色串孢(Scytalidium thermophilum)、柄篮状菌(Talaromyces stipitatus)、樟绒枝霉(Malbranchea cinnamomea)、Crassicarponthermophilum、埃默森青霉(Penicillium emersonii)、杂色曲霉、Thermomucor indicae-seudaticae、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、Thermothelomyces thermophilus、疣枝弯孢(Curvularia verruculosa)、嗜热分枝杆菌、草酸青霉菌、透明嗜热腐质霉、坚脆嗜热子囊菌(Thermoascus crustaceus)、澳洲梭孢壳(Thielavia australiensis)、赫卡尼亚梭孢壳(Thielavia hyrcaniae)和粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)。
在优选的实施例中，过氧化氢酶是可获得自以下来源具有过氧化氢酶活性的多肽，该来源选自由以下组成的组：黑曲霉、嗜热色串孢和橙色嗜热子囊菌，更优选地选自黑曲霉和橙色嗜热子囊菌。
在一个方面，具有过氧化氢酶活性的分离的多肽选自由以下组成的组：
a.来自橙色嗜热子囊菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:6具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
b.来自橙色嗜热子囊菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
c.来自橙色嗜热子囊菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:8具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
d.来自橙色嗜热子囊菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:9具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
e.来自橙色嗜热子囊菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:10具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；以及
f.来自橙色嗜热子囊菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:11具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。
在一个方面，具有过氧化氢酶活性的分离的多肽是来自橙色嗜热子囊菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:6具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。
在一个方面，具有过氧化氢酶活性的分离的多肽是来自橙色嗜热子囊菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。
在一个方面，具有过氧化氢酶活性的分离的多肽是来自橙色嗜热子囊菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:8具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。
在一个方面，具有过氧化氢酶活性的分离的多肽是来自橙色嗜热子囊菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:9具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个方面，具有过氧化氢酶活性的分离的多肽是来自橙色嗜热子囊菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:10具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。
在一个方面，具有过氧化氢酶活性的分离的多肽是来自橙色嗜热子囊菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:11具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。
包围核心的层
本发明的颗粒组合物任选地具有包围核心的层。在本发明的一个方面，包围核心的层是疏水包衣材料，在另一方面，该层是蜡包衣。在又另一方面，该蜡包衣含选自由以下组成的组的蜡：蓖麻油、氢化蓖麻油、棕榈仁油、氢化棕榈仁油、棕榈油、氢化棕榈油、氢化棉籽油、大豆油、氢化大豆油、菜籽油、氢化菜籽油、氢化和未氢化植物油的共混物、12-羟基硬脂酸、微晶蜡、高熔点石蜡及其混合物。
在本发明的特定实施例中，包围核心的层可构成颗粒的10-30％w/w，如颗粒的15％-30％w/w之间或20％-30％w/w之间。在一个实施例中，包围核心的层构成颗粒的约24％w/w。
在本发明的特定实施例中，颗粒的包围核心的层中的疏水包衣材料的量构成该包围核心的层的至少60％w/w。
在本发明的特定实施例中，饲料组合物(如例如，经蒸汽处理的饲料组合物)中的颗粒的包围核心的层中的疏水包衣材料的量构成该包围核心的层的至少60％w/w。
在本发明的特定实施例中，待用于饲料组合物(例如，经蒸汽处理的饲料组合物)的颗粒的包围核心的层中的疏水包衣材料的量构成该包围核心的层的至少60％w/w。
为了能提供可接受的保护，包围核心的层优选地具有某一厚度。在本发明的特定实施例中，包围核心的层是至少7μm厚。在更特定的实施例中，包围核心的层的厚度是至少10μm。在甚至更特定的实施例中，包围核心的层的厚度在7-20μm之间。在最特定的实施例中，包围核心的层的厚度在10-20μm之间。在最特定的实施例中，包围核心的层的厚度在12-18μm之间。在本发明的特定实施例中，包围核心的层的厚度低于21μm。在更特定的实施例中，包围核心的层的厚度低于20μm。在甚至更特定的实施例中，包围核心的层的总厚度低于18μm。
在本发明的特定实施例中，待用于饲料组合物(例如，经蒸汽处理的丸粒化饲料组合物)的颗粒的包围核心的层的厚度是至少7μm。在本发明的另一个特定的实施例中，待用于饲料组合物(例如，经蒸汽处理的丸粒化饲料组合物)的颗粒的包围核心的层的厚度是至少10μm。
包围核心的层应通过形成基本上连续的层即，具有极少或没有孔的包围核心的层来密封该核心，使得其密封的核心具有极少或没有未包衣的区域。在优选的实施例中，包围核心的层应在厚度上是均匀的。
提及包围核心的层中的疏水包衣材料时，它可以是一种特定的疏水包衣材料或疏水包衣材料的混合物。
疏水包衣材料可以包括油和/或蜡，包括但不限于氢化植物油，例如氢化蓖麻油、氢化棕榈仁油、氢化棕榈油、氢化棉籽油、氢化大豆油和/或氢化菜籽油、氢化和未氢化植物油的共混物、12-羟基硬脂酸、微晶蜡(如，Cerit HOT)和高熔点石蜡(如，Mekon White)。
本发明中包括的另外的疏水包衣材料是与水不混溶液体或低熔点疏水固体的组合，其产生具有降低的熔点的混合物。这些包括蜡，C26(以及更高级的)，石蜡，胆固醇，脂肪醇(例如鲸蜡醇)，动物和植物来源的甘油一酸酯、甘油二酸酯和/或甘油三酸酯(如氢化牛脂、氢化脂肪、氢化蓖麻油)，脂肪衍生物(例如脂肪酸、皂、酯)，疏水淀粉(例如乙基纤维素)，卵磷脂。蜡可以具有天然来源，这意味着它们可以是动物、植物或矿物质来源的。动物蜡包括但不限于蜂蜡、羊毛脂、紫胶蜡和中国虫蜡。植物蜡包括但不限于巴西棕榈蜡、小烛树蜡、月桂蜡和甘蔗蜡。矿物蜡包括但不限于化石蜡或地蜡(earth wax)，包括矿蜡(ozokerite)、纯白地蜡(ceresin)和褐煤蜡或石油蜡，包括石蜡和微晶蜡。可替代地，蜡可以是合成蜡或天然蜡和合成蜡的混合物。例如，合成蜡或天然蜡和合成蜡的混合物可包括低分子量的部分氧化的聚乙烯，其可以优先与石蜡共熔。脂肪衍生物可以是脂肪酸、脂肪酸酰胺、脂肪醇、脂肪酯或这些的混合物。酸胺可以是硬脂酰胺。固醇或长链固醇酯也可以是如胆固醇或麦角固醇。
优选的疏水包衣材料是棕榈油或氢化棕榈油。
饲料组合物
本发明的颗粒适用于动物饲料组合物中。将颗粒与饲料物质混合。颗粒的特性使其可以用作非常适合作为动物饲料的组合物的组分，该组分经蒸汽处理且随后被丸粒化。
术语饲料或饲料组合物意指任何化合物、制剂、混合物或组合物。
本发明的饲料可包含植物性蛋白质。如本文所用，术语植物性蛋白质是指包括至少一种衍生自或源自植物的蛋白质的任何化合物、组合物、制剂或混合物，该蛋白质包括经修饰的蛋白质和蛋白质衍生物。在特定实施例中，植物性蛋白质的蛋白含量是至少10％、20％、30％、40％、50％、或60％(w/w)。
植物性蛋白质可以衍生自植物性蛋白质源，如豆类和谷类，例如得自蝶形花科(Fabaceae)(豆科(Leguminosae))、十字花科(Cruciferaceae)、藜科(Chenopodiaceae)和早熟禾科(Poaceae)植物的材料，如大豆粉、羽扇豆粉和油菜籽粉。
在特定实施例中，植物性蛋白质源是来自蝶形花科的一种或多种植物(例如大豆、羽扇豆、豌豆或菜豆)的材料。
在另一个特定的实施例中，植物性蛋白质源是来自藜科的一种或多种植物(例如甜菜、糖甜菜、菠菜或藜麦)的材料。
植物性蛋白质源的其他实例是油菜籽和卷心菜。
大豆是优选的植物性蛋白质源。
植物性蛋白质源的其他实例是谷类，如大麦、小麦、黑麦、燕麦、玉蜀黍(玉米)、稻和高粱。
合适的动物饲料添加剂是酶抑制剂、脂溶性维生素、水溶性维生素、痕量矿物质(trace mineral)和常量矿物质(macro mineral)。
另外，任选的饲料添加剂成分是着色剂、芳香族化合物、稳定剂、抗微生物肽、和/或选自以下中的至少一种其他酶：植酸酶EC 3.1.3.8或3.1.3.26；木聚糖酶EC 3.2.1.8；半乳聚糖酶EC 3.2.1.89；和/或β-葡聚糖酶EC 3.2.1.4。
抗微生物肽(AMP)的实例是CAP18、林可霉素(Leucocin)A、三色肽(Tritrpticin)、定点诱变抗菌肽(Protegrin)-1、死亡肽(Thanatin)、防御肽(Defensin)、奥维司匹林(Ovispirin)(例如诺维司匹林(Novispirin)(Robert Lehrer,2000))、以及它们的保留抗微生物活性的变体或片段。
抗真菌多肽(AFP)的实例是巨大曲霉(Aspergillus giganteus)和黑曲霉肽，及其保留抗真菌活性的变体和片段，如WO 94/01459和PCT/DK02/00289中所披露的。
通常，脂溶性维生素和水溶性维生素以及痕量矿物质形成所谓的旨在添加到饲料中的预混合物的一部分，而常量矿物质通常被分开地添加到饲料中。
以下列出了这些组分的非排他性实例列表：
脂溶性维生素的实例是维生素A、维生素D3、维生素E、和维生素K，例如维生素K3。
水溶性维生素的实例是维生素B12、生物素和胆碱、维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酸、叶酸和泛酸盐，例如Ca-D-泛酸盐。
痕量矿物质的实例是锰、锌、铁、铜、碘、硒和钴。
常量矿物质的实例是钙、磷和钠。
在又另外的特定的实施例中，本发明的动物饲料组合物含有0％-80％玉蜀黍；和/或0％-80％高粱；和/或0％-70％小麦；和/或0％-70％大麦；和/或0％-30％燕麦；和/或0％-40％大豆粉；和/或0％-10％鱼粉；和/或0％-20％乳清。
制备
颗粒核心的制备
本发明的颗粒核心可以包含呈浓缩的干物质形式的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶。在一个实施例中，通过喷雾干燥制备浓缩的干物质。
用于制备核心的方法可见于Handbook of Powder Technology[粉末技术手册]；C.E.Capes的Particle size enlargement[粒度增大]；第1卷；1980；Elsevier[爱思唯尔]中。制备方法包括已知的饲料和颗粒配制技术，即：
a)喷雾干燥产品，其中在喷雾干燥塔中雾化液体含超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的溶液以形成小液滴，在它们在沿干燥塔下降的过程中干燥形成含超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的微粒状材料。非常小的粒子可以通过这种方式产生(Michael S.Showell(编辑)；Powdered detergents[粉状洗涤剂]；Surfactant Science Series[表面活性剂科学系列]；1998；第71卷；第140-142页；Marcel Dekker[马塞尔德克尔出版社])。
b)层状产品，其中超氧化物歧化酶和过氧化氢酶在预形成的惰性核心粒子周围包衣成层，其中含超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的溶液典型地在流化床装置中被雾化，在该流化床装置中预形成的核心粒子被流体化并且含超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的溶液附着到核心粒子上并干燥，直到使得干的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶层留在核心粒子的表面上。如果可以发现具有希望尺寸的有用核心粒子，则通过这种方式能够获得具有希望尺寸的粒子。这种类型的产品描述于例如WO 97/23606中。
c)吸收的核心粒子，其中不是将超氧化物歧化酶和过氧化氢酶在核心周围包衣成层，而是在核心的表面上和/或表面中吸收该超氧化物歧化酶和过氧化氢酶。这样的工艺描述于WO 97/39116中。
d)挤出或丸粒化的产品，其中将含超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的糊剂压成丸粒或在压力下通过小的开口挤出并切割为粒子，随后干燥这些粒子。这样的粒子通常具有相当大的尺寸，因为开有挤出开口的材料(通常是具有钻孔的平板)限制了通过挤出开口可允许的压力降。此外，当使用小开口时，非常高的挤出压力增加了超氧化物歧化酶和过氧化氢酶糊剂中的热发生，这对超氧化物歧化酶和过氧化氢酶是有害的。(Michael S.Showell(编辑)；Powdered detergents[粉状洗涤剂]；Surfactant Science Series[表面活性剂科学系列]；1998；第71卷；第140-142页；Marcel Dekker[马塞尔德克尔出版社])。
e)颗粒化的产品，其中将活性粉末悬浮于熔化的蜡中并且例如通过转盘喷雾器将悬浮液喷洒到冷却室中，在此液滴快速地固化(Michael S.Showell(编辑)；Powdereddetergents[粉状洗涤剂]；Surfactant Science Series[表面活性剂科学系列]；1998；第71卷；第140-142页；Marcel Dekker[马塞尔德克尔出版社])。所获得的产品是超氧化物歧化酶和过氧化氢酶均匀分布遍及整个惰性材料而不是集中在其表面上的产品。此外，US 4,016,040和US 4,713,245是与此技术有关的文献。
f)混合器造粒产品，其中将含有活性物质的液体添加至常规造粒组分的干燥粉末组合物中。将液体和粉末以适合的比例混合，并且因为液体的水分为干燥粉末所吸收，干燥粉末的组分开始附着并凝集，并且粒子将累积，形成包含超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的颗粒。这样的工艺描述于US 4,106,991(诺和诺德公司(NOVO NORDISK))和相关文献EP170360B1(诺和诺德公司)、EP 304332B1(诺和诺德公司)、EP 304331(诺和诺德公司)、WO90/09440(诺和诺德公司)和WO 90/09428(诺和诺德公司)中。在其中可以用各种高剪切混合器作为造粒机的此工艺的特定产品中，将由作为超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的酶、填充剂和粘合剂等组成的颗粒与纤维素纤维混合以强化粒子，而得到所谓的T-颗粒(T-granulate)。经强化的粒子更加坚固，酶粉尘释放更少。
g)粒度减小，其中通过碾磨或压碎含有活性材料的更大的粒子、丸粒、片剂、坯块(briquette)等产生核心。通过将碾磨或压碎的产品过筛获得所需要的核心粒子级分。可以回收尺寸过大和尺寸过小的粒子。粒度减小描述于Martin Rhodes(编辑)；Principles ofPowder Technology[粉末技术原理]；1990；第10章；John Wiley&Sons[约翰威利父子公司]中。
h)流化床造粒。流化床造粒涉及将微粒悬浮于空气流中并经喷嘴喷洒液体到流体化粒子上。被喷洒的液滴击中的粒子湿润并发粘。发粘的粒子与其他粒子碰撞并附着到其上并形成颗粒。
i)这些核心可进行干燥，如在流化床干燥器中。技术人员可以使用在饲料或酶工业中用于干燥颗粒的其他已知的方法。干燥优选在从25℃至90℃的产品温度下进行。对于一些超氧化物歧化酶和/或过氧化氢酶来说，重要的是包含超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的核心在用包围核心的疏水层包衣之前含有少量的水。如果在过量水去除之前水敏性超氧化物歧化酶和过氧化氢酶被包衣，则水分会截留在核心中并可能消极地影响超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活性。干燥之后，这些核心优选含有0.1％-10％w/w的水。
包围核心的层的制备
本领域已知的常规包衣和方法可以合适地用作包围核心的层，如描述于丹麦PA2002 00473、WO 89/08694、WO 89/08695、270 608B1和/或WO 00/01793中的包衣。常规包衣材料的其他实例可以在如下文献中找到：US 4,106,991、EP 170360、EP 304332、EP304331、EP 458849、EP 458845、WO 97/39116、WO 92/12645A、WO 89/08695、WO 89/08694、WO 87/07292、WO 91/06638、WO 92/13030、WO 93/07260、WO 93/07263、WO 96/38527、WO96/16151、WO 97/23606、WO 01/25412、WO 02/20746、WO 02/28369、US 5879920、US 5,324,649、US 4,689,297、US 6,348,442、EP 206417、EP 193829、DE 4344215、DE 4322229 A、DE263790、JP 61162185 A和/或JP58179492。
可以通过与上述“核心的制备”部分中相同的方法来制备包衣。
所获得的颗粒可以例如在Marumeriser TM中进行圆整(rounding off)(例如，圆球化)，或者压实(compaction)。
这些颗粒可以如在流化床干燥器中进行干燥。技术人员可以使用在饲料或酶工业中用于干燥颗粒的其他已知的方法。干燥优选在从25℃至90℃的产品温度下进行。
饲料丸粒的制造
在饲料丸粒的制造中，优选在丸粒化之前引入蒸汽处理，该工艺称为调节(conditioning)。在随后的丸粒化步骤中，施力使饲料通过模具，并且将所得的条状物(strand)切成不同长度的合适的丸粒。在此调节步骤期间，加工温度可上升至60℃-100℃。
通过将包含超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的颗粒与希望的饲料组分混合来制备饲料混合物。将混合物导入调节器，例如，具有蒸汽注入的阶式混合器中。饲料在调节器中通过注入蒸汽被加热至在调节器出口所测量的指定的温度，60℃-100℃，例如60℃、70℃、80℃、90℃或100℃。停留时间可以从几秒到几分钟，并且甚至是几小时来变化。如5秒、10秒、15秒、30秒、1分钟、2分钟、5分钟、10分钟、15分钟、30分钟和1小时。在本发明的特定实施例中，温度是100℃，并且停留时间是60秒。
在本发明的特定实施例中，蒸汽处理过程中的加工温度是至少60℃。在本发明的更特定的实施例中，蒸汽处理过程中的加工温度是至少70℃。在本发明的甚至更特定的实施例中，蒸汽处理过程中的加工温度是至少80℃。在本发明的最特定的实施例中，蒸汽处理过程中的加工温度是至少90℃。
将饲料从调节器导入压制机(例如，Simon Heesen压制机)中并压成具有不同长度(例如，15mm)的丸粒。压制之后将丸粒置于空气冷却机中并冷却指定的时间，例如15分钟。
本发明的特定实施例是用于制造饲料组合物的方法，该方法包括以下步骤：
i.将饲料组分与包含核心、内盐层和包围核心的层的颗粒混合，其中该核心包含超氧化物歧化酶和过氧化氢酶，
ii.蒸汽处理所述组合物(i)，以及
iii.将所述组合物(ii)丸粒化。
在实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在85摄氏度下将饲料蒸汽丸粒化之后，颗粒核心中存在的超氧化物歧化酶保留了至少75％的颗粒核心中的超氧化物歧化酶的活性。在另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在90摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的超氧化物歧化酶保留了至少75％的颗粒核心中的超氧化物歧化酶的活性。在另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在95摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的超氧化物歧化酶保留了至少75％的颗粒核心中的超氧化物歧化酶的活性。在又另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在85摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的超氧化物歧化酶保留了至少80％的颗粒核心中的超氧化物歧化酶的活性。在又另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在90摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的超氧化物歧化酶保留了至少80％的颗粒核心中的超氧化物歧化酶的活性。在又另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在95摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的超氧化物歧化酶保留了至少80％的颗粒核心中的超氧化物歧化酶的活性。在仍另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在85摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的超氧化物歧化酶保留了至少85％的颗粒核心中的超氧化物歧化酶的活性。在仍另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在90摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的超氧化物歧化酶保留了至少85％的颗粒核心中的超氧化物歧化酶的活性。在仍另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在95摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的超氧化物歧化酶保留了至少85％的颗粒核心中的超氧化物歧化酶的活性。
在实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在85摄氏度下将饲料蒸汽丸粒化之后，颗粒核心中存在的过氧化氢酶保留了至少75％的颗粒核心中的过氧化氢酶的活性。在另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在90摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的过氧化氢酶保留了至少75％的颗粒核心中的过氧化氢酶的活性。在另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在95摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的过氧化氢酶保留了至少75％的颗粒核心中的过氧化氢酶的活性。在又另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在85摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的过氧化氢酶保留了至少80％的颗粒核心中的过氧化氢酶的活性。在又另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在90摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的过氧化氢酶保留了至少80％的颗粒核心中的过氧化氢酶的活性。在又另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在95摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的过氧化氢酶保留了至少80％的颗粒核心中的过氧化氢酶的活性。在仍另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在85摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的过氧化氢酶保留了至少85％的颗粒核心中的过氧化氢酶的活性。在仍另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在90摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的过氧化氢酶保留了至少85％的颗粒核心中的过氧化氢酶的活性。在仍另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在95摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的过氧化氢酶保留了至少85％的颗粒核心中的过氧化氢酶的活性。
在实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在85摄氏度下将饲料蒸汽丸粒化之后，颗粒核心中存在的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶保留了至少75％的颗粒核心中的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活性。在另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在90摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶保留了至少75％的颗粒核心中的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活性。在另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在95摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶保留了至少75％的颗粒核心中的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活性。在又另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在85摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶保留了至少80％的颗粒核心中的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活性。在又另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在90摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶保留了至少80％的颗粒核心中的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活性。在又另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在95摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶保留了至少80％的颗粒核心中的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活性。在仍另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在85摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶保留了至少85％的颗粒核心中的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活性。在仍另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在90摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶保留了至少85％的颗粒核心中的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活性。在仍另一个实施例中，与蒸汽丸粒化之前的活性相比，在95摄氏度下蒸汽丸粒化之后颗粒核心中存在的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶保留了至少85％的颗粒核心中的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活性。
改善动物健康或生长的方法
本发明的颗粒可用于改善动物健康和/或生长。
在一个方面，本发明涉及改善动物中一个或多个性能参数的方法，该方法包括向该动物施用包含本发明的颗粒的动物饲料或动物饲料添加剂，其中该一个或多个性能参数选自由以下组成的组：欧洲生产效率因子(EPEF)、饲料转化率(FCR)、生长速率(GR)、体增重(WG)、死亡率(MR)和群体均匀性(FU)。
在另一方面，本发明涉及在动物中改善或增强免疫应答和/或减少炎症和/或用于调节肠道菌群的方法，该方法包括向该动物施用包含本发明的颗粒的动物饲料或动物饲料添加剂。本发明的相关方面涉及单胃动物的预防性护理或管理、减少或预防肠道炎症。
在另一方面，本发明涉及减少或消除施用至动物饲料的抗生素的使用的方法，该方法包括向该动物施用包含本发明的颗粒的动物饲料或动物饲料添加剂。
在另一方面，本发明涉及减少动物体内活性氧或自由基的细胞标志物的方法，该方法包括向该动物施用包含本发明的颗粒的动物饲料或动物饲料添加剂。
本发明的另一方面涉及预防性护理或管理、减少或预防单胃动物中的氧化应激，包括向所述动物施用本发明的颗粒。氧化应激是抗氧化剂/氧化剂状态之间的干扰，偏向于自由基(例如活性氧(ROS))的过度生成或较缓慢地清除。过多的ROS含量会导致蛋白质、脂质和核酸的损害，从而导致其生物功能的丧失和随后的组织损伤。氧化应激与几种传染病的发生和发展有关。因此，本发明的另一方面是预防性护理或管理单胃动物的传染病，包括向所述动物施用本发明的颗粒。典型地通过向所述动物喂食包含颗粒的饲料添加剂来施用。
关于一个或多个性能参数的改善，本发明的特定的特征在于EPEF和/或FCR和/或GR和/或WG改善至少1％，并且MR降低至少1％。
术语动物包括所有动物。动物的实例是非反刍动物和反刍动物，如牛、绵羊和马。在一个方面，动物是单胃动物，例如猪或生猪(包括但不限于仔猪、生长猪、和母猪)；家禽(包括但不限于家禽、火鸡、鸭、鹌鹑、珍珠鸡、鹅、鸽子、乳鸽、鸡、肉鸡、下蛋鸡、小母鸡和雏鸡)；宠物(包括但不限于猫和狗)；鱼(包括但不限于琥珀鱼、巨滑舌鱼、鲃鱼(barb)、鲈鱼、蓝鱼、菖鲉(bocachico)、鲤科鱼、鲶鱼、卡叉马鱼(cachama)、鲤鱼、鲇鱼(catfish)、卡特拉鱼、遮目鱼、红点鲑(char)、丽鱼科鱼、军曹鱼、鳕鱼、小翻车鱼、金头鲷、石首鱼(drum)、鳗鱼、虾虎鱼、金鱼、丝足鱼、石斑鱼、瓜波特鱼(guapote)、大比目鱼、爪哇鱼(java)、野鲮属鱼、莱鱼(lai)、泥鳅、鲭鱼、牛奶鱼、银鲈、泥鱼、鲻鱼、帕高鱼、珍珠斑点鱼(pearlspot)、银汉鱼(pejerrey)、河鲈鱼、狗鱼、鲳参鱼、斜齿鳊、鲑鱼、虾米鱼、加拿大鰤鲈、黑鲈、海鲤、发光鱼(shiner)、睡鱼(sleeper)、黑鱼、鲷鱼、锯盖鱼(snook)、鳎目鱼(sole)、刺足鱼、鲟鱼、翻车鱼、香鱼、丁鲷、特罗尔鱼(terror)、罗非鱼、鳟鱼、鲔鱼、大菱鲆(turbot)、白鳟鱼、碧古鱼(walleye)、和白鱼)；以及甲壳动物(包括但不限于虾和对虾)。在更优选的实施例中，动物选自由以下组成的组：生猪、家禽、甲壳动物和鱼。在甚至更优选的实施例中，动物选自由以下组成的组：生猪、仔猪、生长猪、母猪、鸡、肉鸡、下蛋鸡、小母鸡和雏鸡，典型地，其中该动物经历了热应激、冷应激、营养应激和/或氧化应激。
本发明的另一方面涉及喂食家禽或猪的方法，该方法包括将本发明的动物饲料添加剂添加到饲料原料中。
本发明的另一方面涉及喂食动物的方法，其中动物饲料或动物饲料添加剂包含本发明的颗粒，并且进一步包含选自由以下组成的列表的一种或多种组分：
i.一种或多种载体；
ii.一种或多种微生物；
iii.一种或多种维生素；
iv.一种或多种矿物质；
v.一种或多种氨基酸；
vi.一种或多种有机酸；
vii.以及一种或多种其他饲料成分。
优选的实施例
以下是进一步描述本发明的优选的实施例的列表：
1.一种颗粒，其包含具有超氧化物歧化酶活性的多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽，其中该具有超氧化物歧化酶活性的多肽和该具有过氧化氢酶活性的多肽之间的摩尔比大于5:1，如至少9:1，如在99:1至9:1之间。
2.根据实施例1所述的颗粒，其中该具有超氧化物歧化酶活性的多肽和该具有过氧化氢酶活性的多肽之间的比率在74:1至9:1之间，如在49:1至9:1之间、39:1至9:1之间、39:1至19:1之间、34:1至19:1之间、或34:1至24:1之间。
3.根据实施例1所述的颗粒，其中该具有超氧化物歧化酶活性的多肽和该具有过氧化氢酶活性的多肽之间的比率为约29:1。
4.根据前述实施例中任一项所述的颗粒，其中该具有超氧化物歧化酶活性的多肽和该具有过氧化氢酶活性的多肽作为混合物存在于该颗粒中。
5.根据前述实施例中任一项所述的颗粒，其中该颗粒包含核心和包围该核心的层。
6.根据实施例5所述的颗粒，其中该具有超氧化物歧化酶活性的多肽和该具有过氧化氢酶活性的多肽存在于该颗粒的核心中。
7.根据前述实施例中任一项所述的颗粒，其中具有超氧化物歧化酶活性的多肽的量为该颗粒的1％-10％w/w之间。
8.根据前述实施例中任一项所述的颗粒，其中具有超氧化物歧化酶活性的多肽的量为该颗粒的1％-8％w/w之间，如该颗粒的1％-6％w/w、1％-5％w/w、1％-3,5％w/w、1％-3％、1％-2.5％或1.5％-2.5％w/w之间。
9.根据前述实施例中任一项所述的颗粒，其中具有超氧化物歧化酶活性的多肽的量为该颗粒的约2％w/w。
10.根据前述实施例中任一项所述的颗粒，其中具有过氧化氢酶活性的多肽的量为该颗粒的0.02％-1.5％w/w。
11.根据前述实施例中任一项所述的颗粒，其中具有过氧化氢酶活性的多肽的量为该颗粒的0.03％-1.2％w/w之间，如该颗粒的0.03％-1.0％、0.03％-0.8％、0.03％-0.5％、0.03％-0.1％、0.04％-0.1％、0.05％-0.1％、0.05％-0.09％或0.06％-0.08％w/w之间。
12.根据前述实施例中任一项所述的颗粒，其中具有过氧化氢酶活性的多肽的量为该颗粒的约0.1％w/w。
13.根据前述实施例中任一项所述的颗粒，其中具有过氧化氢酶活性的多肽的量为该颗粒的约0.07％w/w。
14.根据前述实施例中任一项所述的颗粒，其中该具有超氧化物歧化酶活性的多肽是真菌来源的。
15.根据前述实施例中任一项所述的颗粒，其中该具有超氧化物歧化酶(SOD)活性的多肽选自由以下组成的组：
a.来自里氏木霉的多肽，该多肽与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
b.来自日本曲霉的多肽，该多肽与SEQ ID NO:2具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
c.来自坦普利科拉曲霉的多肽，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
d.来自对间座壳菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:4具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；以及
e.来自奥氏蜜环菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:5具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。
16.根据前述实施例中任一项所述的颗粒，其中该具有过氧化氢酶活性的多肽是真菌来源的。
17.根据前述实施例中任一项所述的颗粒，其中该具有过氧化氢酶的多肽选自由以下组成的组：
a.来自橙色嗜热子囊菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:6具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
b.来自橙色嗜热子囊菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
c.来自橙色嗜热子囊菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:8具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
d.来自橙色嗜热子囊菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:9具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
e.来自橙色嗜热子囊菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:10具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；以及
f.来自橙色嗜热子囊菌的多肽，该多肽与SEQ ID NO:11具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。
18.根据前述实施例中任一项所述的颗粒，其中这些颗粒的粒度在50μm-2000μm之间。
19.根据前述实施例中任一项所述的颗粒，其中这些颗粒的粒度在100μm-1500μm之间。
20.根据前述实施例中任一项所述的颗粒，其中这些颗粒的粒度在100μm-700μm之间。
21.根据实施例1至19中任一项所述的颗粒，其中该颗粒的平均粒度在200至800μm之间。
22.根据前述实施例中任一项所述的颗粒，其中该颗粒的平均粒度在300至650μm之间。
23.根据前述实施例中任一项所述的颗粒，其中该颗粒的平均粒度为约300μm。
24.根据实施例1至22中任一项所述的颗粒，其中该颗粒的平均粒度为约650μm。
25.根据实施例5至24中任一项所述的颗粒，其中该核心包含惰性粒子。
26.根据实施例5至25中任一项所述的颗粒，其中该核心进一步包含选自由以下组成的组的一种或多种成分：一种或多种盐、一种或多种载体、一种或多种微粒填充剂和一种或多种造粒粘合剂。
27.根据实施例26所述的颗粒，其中该盐是稳定剂。
28.根据实施例26或27所述的颗粒，其中该盐选自由以下组成的组：Na2SO4、K2SO4、KHSO4、ZnSO4、MgSO4、CuSO4、(NH4)2SO4、Mg(CH3COO)2、Zn(CH3COO)2、乙酸镁和柠檬酸钠。
29.根据实施例28所述的颗粒，其中该盐是水合盐，如七水合硫酸镁(MgSO4(7H2O))、七水合硫酸锌(ZnSO4(7H2O))、二水合柠檬酸钠和/或四水合乙酸镁。
30.根据实施例26至29中任一项所述的颗粒，其中该盐是MgSO4或MgSO4(7H2O)。
31.根据实施例5至25中任一项所述的颗粒，其中该核心中的一种或多种成分选自由以下组成的组：纤维素、碳酸钙、硫酸钠、硫酸镁、硫酸锌、糊精、蔗糖、高岭土、以及任何这些的混合物。
32.根据实施例5至31中任一项所述的颗粒，其中该包围核心的层是疏水包衣层。
33.根据实施例32所述的颗粒，其中该包围核心的层是蜡包衣。
34.根据实施例33所述的颗粒，其中该蜡包衣包含选自由以下组成的组的蜡：蓖麻油、氢化蓖麻油、棕榈仁油、氢化棕榈仁油、棕榈油、氢化棕榈油、氢化棉籽油、大豆油、氢化大豆油、菜籽油、氢化菜籽油、氢化和未氢化植物油的共混物、12-羟基硬脂酸、微晶蜡、高熔点石蜡及其混合物。
35.根据实施例5至34中任一项所述的颗粒，其中该包围核心的层包含氢化棕榈油。
36.根据实施例5至35中任一项所述的颗粒，其中该包围核心的层构成该颗粒的10％-30％w/w之间。
37.根据实施例5至36中任一项所述的颗粒，其中该包围核心的层构成该颗粒的15％-30％w/w之间。
38.根据实施例5至37中任一项所述的颗粒，其中该包围核心的层构成该颗粒的20％-30％w/w之间。
39.根据实施例5至38中任一项所述的颗粒，其中该包围核心的层构成该颗粒的约24％w/w。
40.根据实施例5至39中任一项所述的颗粒，其中该包围核心的层的厚度为至少7μm。
41.根据实施例5至40中任一项所述的颗粒，其中该包围核心的层的厚度在7-20μm之间。
42.根据实施例5至41中任一项所述的颗粒，其中该包围核心的层的厚度在10-20μm之间。
43.根据实施例5至42中任一项所述的颗粒，其中该包围核心的层的厚度在12-18μm之间。
44.根据实施例5至43中任一项所述的颗粒，其中该包围核心的层的厚度为约15μm。
45.根据前述实施例中任一项所述的颗粒，其中该颗粒进一步包含加工助剂。
46.根据实施例45所述的颗粒，其中该加工助剂以粉末形式提供。
47.根据实施例46所述的颗粒，其中该加工助剂是CaCO3、滑石和/或高岭土。
48.根据前述实施例中任一项所述的颗粒，其中与蒸汽丸粒化之前该颗粒核心中具有超氧化物歧化酶(SOD)活性的多肽的活性相比，在90摄氏度下蒸汽丸粒化之后该颗粒核心中存在的具有超氧化物歧化酶(SOD)活性的多肽的活性保留了至少65％。
49.根据前述实施例中任一项所述的颗粒，其中与蒸汽丸粒化之前该颗粒核心中的过氧化氢酶的活性相比，在90摄氏度下蒸汽丸粒化之后该颗粒核心中存在的过氧化氢酶的活性保留了至少65％。
50.一种制备根据实施例1至49所述的颗粒的工艺，该工艺包括以下步骤：
a.制备包含具有超氧化物歧化酶活性的多肽、具有过氧化氢酶活性的多肽和惰性材料(例如盐、糊精、纤维素)的核心
b.用包围该核心的层包衣该核心。
51.根据实施例50所述的工艺，其中该颗粒在混合器、转鼓造粒机、流化床、流化喷雾干燥器、喷雾流化器、喷雾干燥器或挤出机中制备。
52.根据实施例50至51中任一项所述的工艺，其中通过将包含该具有超氧化物歧化酶活性的多肽、该具有过氧化氢酶活性的多肽和该核心的其它成分的混合物用造粒液转鼓造粒以形成颗粒来制备该核心。
53.根据实施例52所述的工艺，其中该核心的其它成分是选自由以下组成的组的一种或多种成分：一种或多种盐、一种或多种载体、一种或多种微粒填充剂和一种或多种造粒粘合剂。
54.根据实施例52所述的工艺，其中该核心的其它成分是选自由以下组成的组的一种或多种成分：纤维素、碳酸钙、硫酸钠、硫酸镁、硫酸锌、糊精、蔗糖、高岭土、以及任何这些的混合物。
55.根据实施例52至54中任一项所述的工艺，其中该造粒液是水。
56.根据实施例50至55中任一项所述的工艺，其中该包围核心的层是包含混合物的疏水包衣，该混合物包含蜡和无机填充材料如高岭土或CaCO3。
57.根据实施例50至56中任一项所述的工艺，其中该工艺包括以下步骤：
a.将一种或多种载体装载到流化床中，
b.将包含该具有超氧化物歧化酶活性的多肽、该具有过氧化氢酶活性的多肽和任选的其它成分的水溶液喷洒到该载体上，
c.在该流化床中干燥混合物以获得颗粒核心，
d.将包衣材料的水溶液喷洒到该流化床中的材料中，并干燥。
58.根据实施例50至56中任一项所述的工艺，其中该工艺包括以下步骤：
a.使能够吸收至少5％w/w(基于核心的重量)水的吸收核心与含有呈溶解和/或分散形式的该具有超氧化物歧化酶活性的多肽和该具有过氧化氢酶活性的多肽的液体介质接触，所使用的所述液体介质的量使得所得产物基本上不发生伴随的凝集，
b.从所述所得产物中至少部分地去除该液体介质的挥发性组分，以及
c.对这些颗粒包衣。
59.一种动物饲料组合物，其包含饲料组分和根据实施例1至49中任一项所述的颗粒。
60.根据实施例59所述的动物饲料组合物，其中这些饲料组分选自由以下组成的组：植物性蛋白质、脂溶性维生素、水溶性维生素、痕量矿物质、常量矿物质及其组合。
61.一种丸粒化饲料组合物，其包含根据实施例1至49中任一项所述的颗粒中的任一种。
62.一种经蒸汽处理的饲料组合物，其包含根据实施例1至49中任一项所述的颗粒中的任一种。
63.一种用于制造动物饲料组合物的方法，该方法包括以下步骤：
a.将饲料组分与根据实施例1至49中任一项所述的颗粒混合，
b.蒸汽处理步骤(a)的混合物，以及
c.任选地将步骤(b)的经蒸汽处理的混合物丸粒化。
64.根据实施例1至49中任一项所述的颗粒用于经蒸汽处理的丸粒化饲料组合物的用途。
65.一种组合物，其包含具有超氧化物歧化酶活性的多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽，
其中在对所述组合物施加热应力后，该组合物中具有过氧化氢酶活性的多肽的活性高于已施加所述热应力的对照组合物中的，其中所述具有过氧化氢酶活性的多肽是所述对照组合物中唯一的多肽。
66.一种共颗粒组合物，其包含具有超氧化物歧化酶活性的多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽，其中该共颗粒组合物中具有过氧化氢酶活性的多肽的活性高于其中所述具有过氧化氢酶活性的多肽是唯一多肽的颗粒组合物中的，在对所述共颗粒组合物和所述颗粒组合物施加热应力后测量所述过氧化氢酶活性。
67.一种颗粒组合物，其包含具有超氧化物歧化酶活性的多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽，其中该具有超氧化物歧化酶活性的多肽和该具有过氧化氢酶活性的多肽之间的摩尔比大于5:1，如至少9:1，如在99:1至9:1之间。
68.一种改善过氧化氢酶稳定性的方法，该方法包括制备包含所述过氧化氢酶和具有超氧化物歧化酶活性的多肽的组合物。
69.一种改善过氧化氢酶稳定性的方法，该方法包括制备包含所述过氧化氢酶和具有超氧化物歧化酶活性的多肽的组合物，其中在对所述组合物施加热应力后，所述组合物中具有过氧化氢酶活性的多肽的活性高于已施加所述热应力的对照组合物中的，其中所述具有过氧化氢酶活性的多肽是所述对照组合物中唯一的多肽。
70.根据实施例68或69所述的方法，其中制备该组合物，其中该具有超氧化物歧化酶活性的多肽和过氧化氢酶之间的摩尔比大于5:1，如至少9:1。
实例
实例1包含过氧化氢酶的颗粒
颗粒1(原始颗粒)
将具有以下组成的粉末混合物
1200g 纤维素，Arbocel BC200
1950g 蔗糖，CaCO3
10558g 磨碎的Na2SO4
在
Figure BDA0004165362170000391
混合器FM 50中用由以下组成的造粒液造粒：
1200g 蔗糖
196g 含有SEQ ID No:6的多肽的过氧化氢酶浓缩物
1696g 水
如美国专利4,106,991，实例1中所述进行造粒。将颗粒在流化床干燥器中干燥至含水量小于1％并过筛以获得具有250至1200微米之间的粒度的产物。
颗粒2(棕榈油包衣)
将2.0kg的上述颗粒1放入
Figure BDA0004165362170000392
混合器L 5中。
制备以下混合物，用于在核心上进行包衣：
200 g熔融氢化棕榈油
460 g高岭土
包衣后，将最终产物在MP 2流化床中冷却。
稳定性的测量
计算颗粒2的颗粒稳定性。
实验设置：
在40℃和50℃的温度下，将批次的15g重复样品储存在
Figure BDA0004165362170000401
Figure BDA0004165362170000402
的玻璃小瓶(具有28mm颈部)中。小瓶配有橡胶密封的金属盖。将储存在40℃/60％相对湿度下的样品储存在未密封的含有15g颗粒的类似小瓶中。储存期结束后，将所有样品冷藏储存直至分析。将初始样品保持在-18℃(测试期期间)并在不同时间点取出并与测试样品一起分析，以使变化最小。分析样品的过氧化氢酶活性(以单位/克(U/g)计)。
颗粒稳定性的测量
Figure BDA0004165362170000403
实例2包含过氧化氢酶的颗粒
颗粒3(原始颗粒)
将具有以下组成的粉末混合物
1200g 纤维素，Arbocel BC200
1950g 蔗糖，CaCO3
10108g 磨碎的Na2SO4
在
Figure BDA0004165362170000404
混合器FM 50中用由以下组成的造粒液造粒：
1200g 蔗糖
450g MgSO4.7H2O
196g 含有SEQ ID No:6的多肽的过氧化氢酶浓缩物
1696g 水
如美国专利4,106,991，实例1中所述进行造粒。
将颗粒在流化床干燥器中干燥至含水量小于1％并过筛以获得具有250至1200微米之间的粒度的产物。
颗粒4(棕榈油包衣)
将2.0kg的上述颗粒3放入
Figure BDA0004165362170000411
混合器L 5中。
制备以下混合物，用于在核心上进行包衣：
200 g熔融氢化棕榈油
460 g高岭土
包衣后，将最终产物在MP 2流化床中冷却。
稳定性的测量
计算颗粒4的颗粒稳定性。
实验设置：
在40℃和50℃的温度下，将批次的15g重复样品储存在
Figure BDA0004165362170000412
Figure BDA0004165362170000413
的玻璃小瓶(具有28mm颈部)中。小瓶配有橡胶密封的金属盖。将储存在40℃/60％相对湿度下的样品储存在未密封的含有15g颗粒的类似小瓶中。储存期结束后，将所有样品冷藏储存直至分析。将初始样品保持在-18℃(测试期期间)并在不同时间点取出并与测试样品一起分析，以使变化最小。
颗粒稳定性的测量。
Figure BDA0004165362170000414
实例3包含超氧化物歧化酶的颗粒
颗粒5(原始颗粒)
将具有以下组成的粉末混合物
960g纤维素，Arbocel BC200
1540g糊精，高岭土
8867g磨碎的Na2SO4
在
Figure BDA0004165362170000415
混合器FM 50中用由以下组成的造粒液造粒：
480g糊精
1331g含有SEQ ID No:1的多肽的超氧化物歧化酶浓缩物
242g水
如美国专利4,106,991，实例1中所述进行造粒。
将颗粒在流化床干燥器中干燥至含水量小于1％并过筛以获得具有250至1200微米的粒度的产物。
颗粒6(棕榈油包衣)
将2.0kg的上述颗粒5放入
Figure BDA0004165362170000421
混合器L 5中。
制备以下混合物，用于在核心上进行包衣：
200 g熔融氢化棕榈油
460 g高岭土
包衣后，将最终产物在MP 2流化床中冷却。
稳定性的测量
计算颗粒4的颗粒稳定性。
实验设置：
在40℃和50℃的温度下，将批次的15g重复样品储存在
Figure BDA0004165362170000422
Figure BDA0004165362170000423
的玻璃小瓶(具有28mm颈部)中。小瓶配有橡胶密封的金属盖。将储存在40℃/60％相对湿度下的样品储存在未密封的含有15g颗粒的类似小瓶中。储存期结束后，将所有样品冷藏储存直至分析。将初始样品保持在-18℃(测试期期间)并在不同时间点取出并与测试样品一起分析，以使变化最小。分析样品的超氧化物歧化酶活性(以单位/克(U/g)计)。/>
颗粒稳定性的测量
残余活性％
配制品 包含 4周/50℃
产物3 颗粒6 90
蒸汽稳定性的测量
将颗粒6在升高的温度和不同停留时间下进行蒸汽处理。
实验设置：
通过注入蒸汽，将大约1g酶颗粒在炉中加热到95℃。在调节器中的停留时间也从90秒至150秒变化。蒸汽处理之后将颗粒置于空气冷却机中并冷却15分钟。在蒸汽处理之前和之后测量颗粒中的酶活性。
Figure BDA0004165362170000431
实例4过氧化氢酶和超氧化物歧化酶共颗粒
颗粒7(原始颗粒)
将具有以下组成的粉末混合物
960g 纤维素，Arbocel BC200
960g 高岭土
957g 喷雾干燥的超氧化物歧化酶
8036g 磨碎的Na2SO4
在
Figure BDA0004165362170000432
混合器FM 50中用由以下组成的造粒液造粒：
720g 糊精
1926g 含有SEQ ID No:1的多肽的超氧化物歧化酶浓缩物
3g 含有SEQ ID No:6的多肽的过氧化氢酶浓缩物
如美国专利4,106,991，实例1中所述进行造粒。
将颗粒在流化床干燥器中干燥至含水量小于1％并过筛以获得具有250至1200微米的粒度的产物。
颗粒8(棕榈油包衣)
将2.0kg的上述颗粒7放入
Figure BDA0004165362170000433
混合器L 5中。
制备以下混合物，用于在核心上进行包衣：
200 g熔融氢化棕榈油
460 g高岭土
包衣后，将最终产物在MP 2流化床中冷却。
加工产率的测量
计算颗粒8的颗粒稳定性。
实验设置：
在40℃和50℃的温度下，将批次的15g重复样品储存在
Figure BDA0004165362170000441
Figure BDA0004165362170000442
的玻璃小瓶(具有28mm颈部)中。小瓶配有橡胶密封的金属盖。将储存在40℃/60％相对湿度下的样品储存在未密封的含有15g颗粒的类似小瓶中。储存期结束后，将所有样品冷藏储存直至分析。将初始样品保持在-18℃(测试期期间)并在不同时间点取出并与测试样品一起分析，以使变化最小。分析样品的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性(以单位/克(U/g)计)。
颗粒稳定性的测量
残余活性％
配制品 包含 4周/50℃
产物4 颗粒8 80 SOD
实例5过氧化氢酶和超氧化物歧化酶共颗粒
颗粒9(原始颗粒)-过氧化氢酶颗粒
将具有以下组成的粉末混合物
1200g 纤维素，Arbocel BC200
1200g 高岭土
11436g 磨碎的Na2SO4
在
Figure BDA0004165362170000443
混合器FM 50中用由以下组成的造粒液造粒：
900g 蔗糖
14g 过氧化氢酶浓缩物
1716g 超氧化物歧化酶浓缩物
484g 水
如美国专利4,106,991，实例1中所述进行造粒。
将颗粒在流化床干燥器中干燥至含水量小于1％并过筛以获得具有250至850微米的粒度的产物。
颗粒10(盐包衣)
将4.0kg的上述颗粒9装载到Glatt Procell顶喷流化床中。
将以下混合物包衣到核心上：
1400g Na2SO4
3430g 水
包衣之后，将颗粒干燥至60℃的产物温度。
实例6蒸汽箱的描述
将颗粒1至10置于实验室规模的蒸汽箱中，在其中它们暴露于95℃的温度和95％的相对湿度下，调节时间为90秒
实例7蒸汽箱稳定性-丸粒化条件和造粒类型对SOD稳定性的影响
对根据实例4制备的含SOD的颗粒进行了根据实例6的稳定性研究
表1a：SOD：SEQ ID NO 2
Figure BDA0004165362170000451
表1b：SOD：SEQ ID NO 6
Figure BDA0004165362170000461
/>
结论与观察
SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:6的真菌SOD在丸粒化的热应力条件下是高度稳定的。在包括原始颗粒的多种配制品下，多种真菌SOD(数据未示出)对热应力非常稳定。
MgSO4.7H20的添加改善了所有颗粒的稳定性。
实例8
在SEQ ID NO:6的过氧化氢酶上重复实例的热应力条件。
从结果可以得出结论，在热和湿处理期间，SOD的存在稳定了过氧化氢酶。所用的过氧化氢酶是来自橙色嗜热子囊菌的具有过氧化氢酶活性的多肽(SEQ ID NO:6)，该多肽以商品名TerminoxTM出售。
该实例说明，即使是SEQ ID NO 3(本发明中性能较低的SOD之一)也为过氧化氢酶提供了稳定作用。该实例用本发明的SOD进行，并显示对过氧化氢酶的高稳定作用。
Figure BDA0004165362170000471
/>
Figure IDA0004165362210000011
Figure IDA0004165362210000021
Figure IDA0004165362210000031
Figure IDA0004165362210000041
Figure IDA0004165362210000051
Figure IDA0004165362210000061
Figure IDA0004165362210000071
Figure IDA0004165362210000081
Figure IDA0004165362210000091
Figure IDA0004165362210000101
Figure IDA0004165362210000111
Figure IDA0004165362210000121
Figure IDA0004165362210000131
Figure IDA0004165362210000141
Figure IDA0004165362210000151
Figure IDA0004165362210000161
Figure IDA0004165362210000171
Figure IDA0004165362210000181
Figure IDA0004165362210000191
Figure IDA0004165362210000201
Figure IDA0004165362210000211
Figure IDA0004165362210000221
Figure IDA0004165362210000231
Figure IDA0004165362210000241
Figure IDA0004165362210000251
Figure IDA0004165362210000261
Figure IDA0004165362210000271
Figure IDA0004165362210000281
Figure IDA0004165362210000291
Figure IDA0004165362210000301
Figure IDA0004165362210000311
Figure IDA0004165362210000321
Figure IDA0004165362210000331

Claims (31)

1.一种组合物，其包含具有超氧化物歧化酶活性的多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽，
其中在对所述组合物施加热应力后，该组合物中具有过氧化氢酶活性的多肽的活性高于已施加所述热应力的对照组合物中的，其中所述具有过氧化氢酶活性的多肽是所述对照组合物中唯一的多肽。
2.一种共颗粒组合物，其包含具有超氧化物歧化酶活性的多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽，其中该共颗粒组合物中具有过氧化氢酶活性的多肽的活性高于其中所述具有过氧化氢酶活性的多肽是唯一多肽的颗粒组合物中的，在对所述共颗粒组合物和所述颗粒组合物施加热应力后测量所述过氧化氢酶活性。
3.一种颗粒组合物，其包含具有超氧化物歧化酶活性的多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽，其中该具有超氧化物歧化酶活性的多肽和该具有过氧化氢酶活性的多肽之间的摩尔比大于5:1，如至少9:1，如在99:1至9:1之间。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，其选自原始颗粒和包衣颗粒。
5.根据权利要求4所述的组合物，其中该颗粒包含核心和包围该核心的层。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中该具有超氧化物歧化酶活性的多肽和该具有过氧化氢酶活性的多肽存在于该颗粒的核心中。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中具有超氧化物歧化酶活性的多肽的量为该颗粒的1％-10％w/w之间。
8.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中具有过氧化氢酶活性的多肽的量为该颗粒的0.02％-1.5％w/w之间。
9.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中这些颗粒的粒度在50μm-2000μm之间。
10.根据权利要求5至9中任一项所述的组合物，其中该核心包含惰性粒子。
11.如权利要求5至10中任一项所述的组合物，其中该核心进一步包含选自由以下组成的组的一种或多种成分：一种或多种盐、一种或多种载体、一种或多种微粒填充剂和一种或多种造粒粘合剂。
12.如权利要求11所述的组合物，其中该盐选自由以下组成的组：Na2SO4、K2SO4、KHSO4、ZnSO4、MgSO4、CuSO4、(NH4)2SO4、Mg(CH3COO)2、Zn(CH3COO)2、乙酸镁和柠檬酸钠。
13.根据权利要求4至9中任一项所述的组合物，其中该包围核心的层是蜡包衣，该蜡包衣包含选自由以下组成的组的蜡：蓖麻油、氢化蓖麻油、棕榈仁油、氢化棕榈仁油、棕榈油、氢化棕榈油、氢化棉籽油、大豆油、氢化大豆油、菜籽油、氢化菜籽油、氢化和未氢化植物油的共混物、12-羟基硬脂酸、微晶蜡、高熔点石蜡及其混合物。
14.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与蒸汽丸粒化之前该颗粒核心中的具有超氧化物歧化酶(SOD)活性的多肽的活性相比，在90摄氏度下蒸汽丸粒化之后该颗粒核心中存在的具有超氧化物歧化酶(SOD)活性的多肽的活性保留了至少60％。
15.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与蒸汽丸粒化之前该颗粒核心中的过氧化氢酶的活性相比，在90摄氏度下蒸汽丸粒化之后该颗粒核心中存在的过氧化氢酶的活性保留了至少60％。
16.根据权利要求14或15中任一项所述的组合物，其中保留活性为至少65％，如至少70％、如至少75％、如至少80％。
17.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中该组合物选自由以下组成的组：丸粒如饲料丸粒、颗粒、动物饲料添加剂和动物饲料。
18.根据权利要求16所述的组合物，其中该组合物用于动物饲料添加剂中。
19.一种共颗粒组合物，其包含具有超氧化物歧化酶活性的多肽和具有过氧化氢酶活性的多肽，其中该共颗粒组合物中具有过氧化氢酶活性的多肽的活性高于其中所述具有过氧化氢酶活性的多肽是唯一多肽的颗粒组合物中的，在对所述共颗粒组合物和所述颗粒组合物施加热应力后测量所述过氧化氢酶活性。
20.根据权利要求15至18所述的组合物，其中该热应力是在90摄氏度和95％相对湿度下进行蒸汽丸粒化，调节时间为90秒。
21.一种制备根据权利要求1至18中任一项所述的颗粒的工艺，该工艺包括以下步骤：
a.制备包含具有超氧化物歧化酶活性的多肽、具有过氧化氢酶活性的多肽和惰性材料(例如盐、糊精、纤维素)的核心
b.任选地，用包围该核心的层包衣该核心。
22.根据权利要求21所述的工艺，其中通过将包含该具有超氧化物歧化酶活性的多肽、该具有过氧化氢酶活性的多肽和该核心的其它成分的混合物用造粒液转鼓造粒以形成颗粒来制备该核心。
23.根据权利要求21所述的工艺，其中该工艺包括以下步骤：
a.将一种或多种载体装载到流化床中，
b.将包含该具有超氧化物歧化酶活性的多肽、该具有过氧化氢酶活性的多肽和任选的其它成分的水溶液喷洒到该载体上，
c.在该流化床中干燥混合物以获得颗粒核心，
d.将包衣材料的水溶液喷洒到该流化床中的材料中，并干燥。
24.根据权利要求23所述的工艺，其中该工艺包括以下步骤：
a.使能够吸收至少5％w/w(基于核心的重量)水的吸收核心与含有呈溶解和/或分散形式的该具有超氧化物歧化酶活性的多肽和该具有过氧化氢酶活性的多肽的液体介质接触，所使用的所述液体介质的量使得所得产物基本上不发生伴随的凝集，
b.从所述所得产物中至少部分地去除该液体介质的挥发性组分，以及
c.对这些颗粒包衣。
25.一种动物饲料组合物，其包含饲料组分和根据权利要求1至18中任一项所述的颗粒。
26.根据权利要求1至18中任一项所述的组合物用于制备经蒸汽处理的丸粒化饲料组合物的用途。
27.一种改善过氧化氢酶稳定性的方法，该方法包括制备包含所述过氧化氢酶和具有超氧化物歧化酶活性的多肽的组合物。
28.一种改善过氧化氢酶稳定性的方法，该方法包括制备包含所述过氧化氢酶和具有超氧化物歧化酶活性的多肽的组合物，其中在对所述组合物施加热应力后，所述组合物中具有过氧化氢酶活性的多肽的活性高于已施加所述热应力的对照组合物中的，其中所述具有过氧化氢酶活性的多肽是所述对照组合物中唯一的多肽。
29.根据权利要求27或权利要求28所述的方法，其中制备该组合物，其中该具有超氧化物歧化酶活性的多肽和该过氧化氢酶之间的摩尔比大于5:1，如至少9:1。
30.具有超氧化物歧化酶活性的多肽在动物饲料添加剂中用于改善动物饲料添加剂中过氧化氢酶稳定性的用途。
31.根据权利要求1所述的组合物，其中该具有超氧化物歧化酶活性的多肽选自由以下组成的组：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5，优选地选自由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:5组成的组，并且该具有过氧化氢酶活性的多肽选自由以下组成的组：SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9，优选地选自由SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7组成的组。
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