CN116287136A - 一种用于多轮原位荧光成像的样品池及样品池组件 - Google Patents

一种用于多轮原位荧光成像的样品池及样品池组件 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于多轮原位荧光成像的样品池及样品池组件，属于生物实验容器技术领域，本发明的一种用于多轮原位荧光成像的样品池包括底座和压盖。底座和压盖配合能够将玻片牢牢地固定在样品池当中，在洗脱和复染过程中不会发生移动。在成像时，由第一输液管注入成像的缓冲液。一轮成像后，由第一输液管将成像的缓冲液排出，以便样品上的荧光分子的洗脱和复染。排干缓冲液后，由第二输液管注入和排除洗脱和复染的生化药剂，生化药剂被限制在压盖、玻片、弹性胶圈和弹性垫之间的很小的空间里，极大的节约了生化药剂的用量，节省了成本。

Description

一种用于多轮原位荧光成像的样品池及样品池组件
技术领域
本发明涉及生物实验容器技术领域，尤其涉及一种用于多轮原位荧光成像的样品池及样品池组件。
背景技术
RNA原位成像是一种近期才被用于神经细胞分型的技术。RNA原位成像技术指在不破坏细胞和组织原有结构的情况下，对细胞和组织内的RNA进行成像。通过多次荧光原位杂交技术(florescence in situ hybridization，FISH)或荧光原位序列技术，RNA原位成像技术可以获取细胞或组织内的不同种类的RNA信息，从而可以进行细胞分型。
多轮误差稳定荧光原位杂交技术(multiplexed error-robust FISH，MERFISH)是一种基于单分子荧光原位杂交技术(single molecule FISH，smFISH)的多轮RNA原位成像技术。MERFISH技术首先使用可以容许误差的编码对准备观察的RNA进行编码，然后依据编码对RNA分子进行组合染色，再通过多轮成像获取细胞内荧光分子的位置信息，最后根据编码信息解码出细胞内分子对应的RNA分子信息。由于MERFISH技术使用了误差稳定的编码，它可以在通过多轮成像提高识别RNA种类的同时保证较高的RNA识别正确率，因而为神经细胞精确分型提供了有利条件。
在MERFISH技术中，液态生化试剂发挥了十分重要的作用，根据MERFISH不同的阶段，加入不同功能的生化试剂。例如，在成像时，需要加入缓冲液，以保证样本的新鲜及水镜的折射率匹配。一轮成像结束后，需要抽干缓冲液，重新注入生化试剂及染料，以完成荧光分子探针的洗脱和样本的复染。重复以上步骤，实现多轮单分子荧光成像。需要注意的是，MERFISH技术属于原位成像的一种，因此在运行的过程中，样品全程固定在样品池中，不得移动。
现有的斜光片显微成像系统由于照明部分与成像部分相互垂直，且倾斜的探测镜头需要浸泡在缓冲液中，因此要求样品池内保证足够的空间，从而满足探测物镜的正常工作。但样品池内空间太大，会导致在样品需要很多的生化试剂才能完成洗脱和复染，造成很大的浪费。
发明内容
本申请实施例提供一种用于多轮原位荧光成像的样品池，通过底座和压盖的相互配合，在样品池内单独隔出一个单独的空间，用于洗脱和复染，减少了昂贵的生化试剂的浪费。
所述用于多轮原位荧光成像的样品池包括：
底座，所述底座具有一底板，所述底板上设有合围的第一侧壁，所述第一侧壁和所述底板构成具有上开口的容置腔，所述底板上设有第一凸台，所述第一凸台在底板上的投影位于所述第一侧壁在底板上的投影之内，所述第一凸台、所述第一侧壁和底板构成缓冲液池，所述第一侧壁上设有第一输液孔；第一凸台上沿所述第一侧壁的延伸方向设有第二凸台，所述第二凸台的上表面设有第一凹槽，所述第一凹槽的上表面设置有中空的弹性垫，所述第一凹槽用于容纳带样品的玻片；以及，
压盖，所述压盖上具有与所述第二凸台形状对应的开孔，所述开孔的边缘设置有第二侧壁，所述第二侧壁的内壁设置有弹性胶圈，所述第二侧壁可通过所述弹性胶圈卡接在所述第二凸台上，所述第二侧壁的第一端设置有向开孔中心延伸的压板，所述压盖在压板的对侧设有漂洗槽，所述漂洗槽与所述开孔连通，所述漂洗槽具有与所述第二侧壁相对的第三侧壁，所述第三侧壁上设有第二输液孔。
进一步地，所述第二凸台中部具有沿所述第一侧壁的延伸方向布置的一盲孔，所述盲孔的深度大于所述第二凸台的高度。
进一步地，所述底板上设有第四侧壁，所述第四侧壁和所述第一侧壁位于所述底板的同侧，所述第四侧壁位于所述第一侧壁的外侧，所述第一侧壁、第四侧壁和所述底板构成溢水槽。
进一步地，所述压板向开孔中心延伸的长度不超过开孔直径或边长的1/6。
进一步地，所述压盖为金属件。
进一步地，所述缓冲液池的底部边缘设有第一导水槽，所述第一导水槽的底面为斜面或V型面，所述第一输液孔对应所述第一导水槽的最低点。
进一步地，所述漂洗槽的底部边缘设有第二导水槽，所述第二导水槽的底面为斜面或V型面，所述第二输液孔对应所述第二导水槽的最低点。
进一步地，所述样品池还包括与所述第一输液孔连接的第一输液管，所述第一输液管用于更换缓冲液。
进一步地，所述样品池还包括与所述第二输液孔连接的第二输液管，所述第二输液管用于更换生化试剂。
本申请实施例还提供一种用于多轮原位荧光成像的样品池组件，包含多个前述用于多轮原位荧光成像的样品池，多个所述样品池的规则排布，多个所述样品池的所述底座为一体结构，所述底座边缘布置有固定孔，所述固定孔为螺孔。
本申请实施例中提供的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
本申请的一种用于多轮原位荧光成像的样品池包括底座和压盖，底座和压盖配合能够将玻片牢牢地固定在样品池当中，在洗脱和复染过程中不会发生移动。在成像时，由第一输液管注入成像时的缓冲液。一轮成像后，由第一输液管将成像时的缓冲液排出，以便样品上的荧光分子的洗脱和复染。排干缓冲液后，由第二输液管注入和排出洗脱和复染的生化药剂，生化药剂被限制在压盖、玻片、弹性胶圈和弹性垫之间的很小的空间里，极大的节约了生化药剂的用量，节省了成本。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例提供的一种用于多轮原位荧光成像的样品池的底座的结构示意图；
图2为本发明实施例提供的一种用于多轮原位荧光成像的样品池的底座的俯视图；
图3为图2的A向剖面图；
图4为本发明实施例提供的一种用于多轮原位荧光成像的样品池的压盖的结构示意图；
图5为本发明实施例提供的一种用于多轮原位荧光成像的样品池的压盖的俯视图；
图6为图5的B向剖面图；
图7为本发明实施例提供的一种用于多轮原位荧光成像的样品池的装配示意图；
图8为图5的C向剖面图；
图9为本发明实施例提供的一种用于多轮原位荧光成像的样品池组件的结构示意图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明实施方式作进一步地详细描述。
图1、图2和图3为本发明实施例提供的一种用于多轮原位荧光成像的样品池的底座100的结构示意图、俯视图和剖面图，如图1、图2和图3所示，底座100具有一底板110，底板110上设有合围的第一侧壁120，第一侧壁120和底板110构成具有上开口的容置腔。底板110上设有第一凸台140，第一凸台140在底板110上的投影位于第一侧壁120在底板110上的投影之内，第一凸台140、第一侧壁120和容置腔的底面130构成缓冲液池150。
第一侧壁120上设有第一输液孔121，第一输液孔121用于更换缓冲液池150中的成像缓冲液。
第一凸台140上沿第一侧壁120的延伸方向设有第二凸台160，第二凸台160的上表面设有第一凹槽161，第一凹槽161的上表面设置有中空的弹性垫162，第一凹槽161用于容纳带样品的玻片10。
可以理解的，第一凸台140在底板110上的投影可以是圆形、方形或其他几何图形，第一侧壁120在底板110上的投影可以是圆形、方形或其他几何图形，第一凸台140的投影和第一侧壁120的投影的几何图形可以相同，也可以不相同。
进一步地，第二凸台160中部具有沿第一侧壁120的延伸方向布置的一盲孔163，盲孔163的深度大于第二凸台160的高度。盲孔163为显微镜照明光投射穿过玻片提供了传播空间，降低照明光的漫反射对成像质量的影响。
进一步地，底板110上设有第四侧壁190，第四侧壁190和第一侧壁120位于底板110的同侧，第四侧壁190位于第一侧壁120的外侧。第一侧壁120、第四侧壁190和底板110构成溢水槽191，防止缓冲液溢出造成的污染。
进一步地，缓冲液池150的底部边缘设有第一导水槽151，第一导水槽151的底面为斜面或V型面，第一输液孔121位于第一导水槽151的最低点。优选地，如图3所示，容置腔的底面130可以向第一导水槽151倾斜，以方便腔内液体排出。
进一步地，样品池还包括与第一输液孔121连接的第一输液管170，第一输液管170用于更换缓冲液。
图4、图5和图6为本发明实施例提供的一种用于多轮原位荧光成像的样品池的压盖200的结构示意图、俯视图和剖面图，如图4、图5和图6所示，压盖200上具有与第二凸台160形状对应的开孔210，开孔210的边缘设置有第二侧壁220，第二侧壁220的内壁设置有弹性胶圈221，第二侧壁220可通过弹性胶圈221卡接在第二凸台160上，实现底座100和压盖200的固定。
第二侧壁220的第一端设置有向开孔210中心延伸的压板230，压盖200在压板230的对侧设有漂洗槽240，漂洗槽240与开孔210连通。漂洗槽240具有与第二侧壁220相对的第三侧壁241，第三侧壁241上设有第二输液孔242，第二输液孔242用于更换中对样品进行洗脱和复染的生化试剂。
图7为本发明实施例提供的一种用于多轮原位荧光成像的样品池的装配示意图。如图7所示，使用时，带样品的玻片10放置在弹性垫162上，第一凹槽161的内壁可以限制玻片10的滑动。
压盖200通过弹性胶圈221卡接在底座100的第二凸台160上。此时，第一凸台140的上表面与压盖200抵接，对压盖200进行垂直方向的定位。向开孔210中心延伸的压板230与玻片10接触，向玻片10产生向下的压力，玻片10与弹性垫162产生摩擦，从而将玻片10牢牢地固定在样品池当中，在洗脱和复染过程中不会发生移动。
压盖200的弹性胶圈221与第二凸台160的侧壁相互压迫，为压盖200的固定提供摩檫力，同时，起到密封作用。压盖200安装到位后，漂洗槽240、第二侧壁220、玻片10、弹性胶圈221和弹性垫162隔离出一个独立的储液空间。漂洗槽240与开孔210连通，生化试剂经由漂洗槽240和开孔210流到玻片10，实现对样品荧光分子的洗脱和复染。底座100和压盖200的分体设计，方便样品的拆卸更换。
进一步地，开孔210可以是圆孔(如图4所示)，也可以是方孔。压板230向开孔210中心延伸的长度不超过开孔210直径或边长的1/6，以防止显微镜的探测镜头工作距离较短时，压板230影响到显微镜的活动空间。
进一步地，压盖200为金属件，自重大封闭效果好，且加工成本低。
进一步地，漂洗槽240的底部边缘设有第二导水槽244，第二导水槽244的底面为斜面或V型面(如图8所示)，第二输液孔242位于第二导水槽244的最低点。
进一步地，样品池还包括与第二输液孔242连接的第二输液管250，第二输液管250用于更换生化试剂。样品池中用于更换成像的缓冲液的管道和用于更换样品荧光信号的洗脱和复染的管道相互独立，防止管道内环境相互污染。
本申请实施例还提供一种用于多轮原位荧光成像的样品池组件。图9为本发明实施例提供的一种用于多轮原位荧光成像的样品池组件的结构示意图，如图9所示，样品池组件包含多个前述的用于多轮原位荧光成像的样品池，多个样品池的规则排布，多个样品池的底座100为一体结构，底座100边缘布置有固定孔111，固定孔111为螺孔。
在成像时，由第一输液管170在缓冲液池150中注入成像时的缓冲液。一轮成像后，由第一输液管170将成像时的缓冲液排出，以便样品上的荧光分子的洗脱和复染。排干缓冲液后，由第二输液管250注入和排除洗脱和复染的生化药剂，生化药剂被限制在压盖、玻片、弹性胶圈和弹性垫之间的很小的空间里，极大的节约了生化药剂的用量，节省了成本。样品池组件包含三个腔体，三个腔体可以分别进行成像和洗脱复染的过程，即一个腔体内的样品进行成像，另外两个腔体内的样品进行洗脱和复染，三个腔体配合使用，可以提高多轮原位荧光成像系统的成像效率。
以上仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种用于多轮原位荧光成像的样品池，其特征在于，所述样品池包括：
底座，所述底座具有一底板，所述底板上设有合围的第一侧壁，所述第一侧壁和所述底板构成具有上开口的容置腔，所述底板上设有第一凸台，所述第一凸台在底板上的投影位于所述第一侧壁在底板上的投影内，所述第一侧壁上设有第一输液孔；第一凸台上沿所述第一侧壁的延伸方向设有第二凸台，所述第二凸台的上表面设有第一凹槽，所述第一凹槽的上表面设有中空的弹性垫；以及，
压盖，所述压盖上具有与所述第二凸台形状对应的开孔，所述开孔的边缘设置有第二侧壁，所述第二侧壁的内壁设置有弹性胶圈，所述第二侧壁可通过所述弹性胶圈卡接在所述第二凸台上，所述第二侧壁的第一端设置有向开孔中心延伸的压板，所述压盖在所述压板的对侧设有漂洗槽，所述漂洗槽与所述开孔连通，所述漂洗槽具有与所述第二侧壁相对的第三侧壁，所述第三侧壁上设有第二输液孔。
2.根据权利要求1所述的用于多轮原位荧光成像的样品池，其特征在于，
所述第二凸台中部具有沿所述第一侧壁的延伸方向布置的一盲孔，所述盲孔的深度大于所述第二凸台的高度。
3.根据权利要求1所述的用于多轮原位荧光成像的样品池，其特征在于，所述底板上设有第四侧壁，所述第四侧壁和所述第一侧壁位于所述底板的同侧，所述第四侧壁位于所述第一侧壁的外侧，所述第一侧壁、第四侧壁和所述底板构成溢水槽。
4.根据权利要求1所述的用于多轮原位荧光成像的样品池，其特征在于，所述压板向开孔中心延伸的长度不超过开孔直径或边长的1/6。
5.根据权利要求1所述的用于多轮原位荧光成像的样品池，其特征在于，所述压盖为金属件。
6.根据权利要求1～4所述的用于多轮原位荧光成像的样品池，其特征在于，所述缓冲液池的底部边缘设有第一导水槽，所述第一导水槽的底面为斜面或V型面，所述第一输液孔对应所述第一导水槽的最低点。
7.根据权利要求1～4所述的用于多轮原位荧光成像的样品池，其特征在于，所述漂洗槽的底部边缘设有第二导水槽，所述第二导水槽的底面为斜面或V型面，所述第二输液孔对应所述第二导水槽的最低点。
8.根据权利要求1～4所述的用于多轮原位荧光成像的样品池，其特征在于，所述样品池还包括与所述第一输液孔连接的第一输液管，所述第一输液管用于更换缓冲液。
9.根据权利要求1～4所述的用于多轮原位荧光成像的样品池，其特征在于，所述样品池还包括与所述第二输液孔连接的第二输液管，所述第二输液管用于更换生化试剂。
10.一种用于多轮原位荧光成像的样品池组件，其特征在于，包含多个所述权利要求1～9的用于多轮原位荧光成像的样品池，多个所述样品池的规则排布，多个所述样品池的所述底座为一体结构，所述底座边缘布置有固定孔，所述固定孔为螺孔。
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