CN116268241A - 一种含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁及其制备方法 - Google Patents
一种含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁及其制备方法，利用猕猴桃果汁中单糖同时生产含阿洛酮糖和塔格糖制备功能性猕猴桃汁。将成熟猕猴桃去皮后榨汁，以猕猴桃果汁中的葡萄糖、果糖、半乳糖为底物，加入激活剂后再加入固定化双酶(葡萄糖异构酶和D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶)、固定化阿拉伯糖异构酶同时生产阿洛酮糖和塔格糖，其中固定化双酶的底物为葡萄糖和果糖，固定化阿拉伯糖异构酶的底物为半乳糖；异构化反应结束后对混合糖液进行分离纯化、杀菌得到含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁。
Description
技术领域
本发明属于阿洛酮糖和塔格糖制备技术领域，具体涉及一种含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁及其制备方法。
背景技术
可溶性糖作为猕猴桃风味的重要组成部分，主要有蔗糖、果糖、葡萄糖、半乳糖等，其中蔗糖含量在25～50mg/g，果糖17～72mg/g，葡萄糖21～74mg/g，半乳糖0.42～0.45mg/g。猕猴桃富含的单糖都是高热量物质，而如今新型甜味剂越来越受到消费者的青睐，很多食品饮料生产企业开始以天然低卡的甜味剂代替果糖或者蔗糖且取得了成功。因此本发明利用猕猴桃富含的单糖，通过生物合成方法制备低热量的含阿洛酮糖和塔格糖的功能猕猴桃果汁。
本发明将葡萄糖异构酶和D-阿洛酮糖3-差向异构酶进行固定化，形成固定化双酶使酶的稳定性增加，易从反应系统中分离，且易于控制，能反复多次使用，便于运输和贮存，有利于自动化生产。固定化酶与固定化阿拉伯糖异构酶形成混合酶系利用猕猴桃汁中的单糖制备阿洛酮糖和塔格糖。
D-阿洛酮糖是D-果糖的C3位差向异构体，是一种低能量甜味剂，它的甜度为蔗糖的70％，但热量只有0.4kcal/g，被认为是潜在的蔗糖替代品。具有降血糖和抑制脂肪堆积的功能，可用于研制治疗肥胖和糖尿病的药物。D-塔格糖是自然界中天然存在且含量稀少的低热量己酮糖,甜度为蔗糖的92％,其热量为1.5kcal/g,具有降血糖、抗龋齿、改善肠道菌群、促进血液健康和抗衰等作用,可广泛应用于食品、医药和化妆品行业。
目前阿洛酮糖和塔格糖的生产技术比较成熟，但是利用猕猴桃果汁中单糖同时生产含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁的技术还未报道。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁及其制备方法，突破果糖为单一底物的束缚，利用猕猴桃果汁中的多种单糖，对D-阿洛酮糖3-差向异构酶和葡萄糖异构酶进行共同固定化，使葡萄糖连续异构成阿洛酮糖。并且同时加入固定化阿拉伯糖异构酶，以果汁中的半乳糖为底物生产塔格糖。通过分离纯化后获得含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁，此技术生产的猕猴桃果汁热量大大降低，实现减糖的同时也保持整体口感和品质，有效的填补了行业的空白。
本发明是通过以下技术方案来实现：
一种含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁的制备方法，包括，
S1，采用阴离子交换树脂对葡萄糖异构酶与D-阿洛酮糖3-差向异构酶混合的混合酶液A进行双酶固定化反应后，得到混合酶液B；
S2，以猕猴桃汁为底物，加入金属离子激活剂，再加入混合酶液B和固定化阿拉伯糖异构酶进行异构化反应，得到混合糖液C；对混合糖液C进行过滤、脱色、离交和杀菌后，得到含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁。
优选的，所述猕猴桃汁与混合酶液A的重量份比为1～4:1，混合酶液A中的葡萄糖异构酶和D-阿洛酮糖3-差向异构酶的质量比例为1：1。
优选的，所述猕猴桃汁与固定化阿拉伯糖异构酶的重量份比为3:1，金属离子激活剂在猕猴桃汁中添加量为2g/L；所述金属离子激活剂的浓度为1.0mmol/L。
优选的，S1的具体过程为：
将预处理后的阴离子交换树脂加入葡萄糖异构酶和D-阿洛酮糖3-差向异构酶的混合酶液A中，以搅拌速度为80～120r/min，温度为4℃下旋转固定化酶5～8h后，再加入100～200ml PBS缓冲液对反应物进行过滤洗涤，并采用SDS-PAGE电泳分直至反应物的滤液中无蛋白后，随后将反应物进行干燥，并于温度为4℃下保存，得到双酶固定化后的混合酶液B。
优选的，所述预处理后的阴离子交换树脂与混合酶液A的添加量比为80～150g：100～200ml；PBS缓冲液与混合酶液A的添加量比为100～200ml：100～200ml。
优选的，阴离子交换树脂的预处理过程为：先将阴离子交换树脂在去离子水中浸泡洗涤数次，直到洗脱液中检测不到明显色素；再用浓度为2％盐酸溶液洗涤阴离子交换树脂，然后用质量分数为1％的氢氧化钠溶液去除阴离子交换树脂上的杂质，调节pH为8.0～9.0后，储存在蒸馏水中，得到预处理后的阴离子交换树脂。
优选的，所述异构化反应的条件为采用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调节反应体系的pH＝7.1～7.8，异构温度为50～60℃，在80～100r/min搅拌反应6～14h。
优选的，所述金属离子激活剂采用硫酸镁、硫酸锰、硫代硫酸钠和亚硫酸氢钠中的一种。
优选的，所述阴离子交换树脂采用二乙氨基乙基琼脂糖。
一种含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁，由上述的制备方法制得。
与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
本发明公开了一种含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁的制备方法，突破果糖为单一底物的束缚，利用猕猴桃果汁中多种单糖，对D-阿洛酮糖3-差向异构酶和葡萄糖异构酶进行共同固定化，使葡萄糖连续异构成阿洛酮糖，并且同时加入固定化阿拉伯糖异构酶，以果汁中的半乳糖为底物生产塔格糖，从而生产含阿洛酮糖和塔格糖制备功能性猕猴桃汁；通过将成熟猕猴桃去皮后榨汁，以猕猴桃果汁中的葡萄糖、果糖、半乳糖为底物，加入激活剂后再加入固定化双酶(葡萄糖异构酶和D-阿洛酮糖3-差向异构酶)、固定化阿拉伯糖异构酶同时生产阿洛酮糖和塔格糖，其中固定化双酶的底物为葡萄糖和果糖，固定化阿拉伯糖异构酶的底物为半乳糖；异构化反应结束后对混合糖液进行分离纯化、杀菌得到含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁本发明充分利用猕猴桃中单糖如葡萄糖、果糖、半乳糖，三种单糖得到充分转化利用，使这些高热量的单糖转化为低热量的功能性阿洛酮糖和塔格糖，让原本高热量的普通果汁转变为低热量、功能性果汁，适宜于糖尿病、肥胖症等人群。
进一步，本发明采用固定酶技术将葡萄糖异构酶和D-阿洛酮糖3-差向异构酶进行双酶固定化，经固定化的酶与游离酶相比具有稳定性高、回收方便、易于控制、可反复使用、成本低廉的优点。
进一步，本发明在加入酶之前加入某些金属离子激活剂，葡萄糖异构酶、D-阿洛酮糖3-差向异构酶、阿拉伯糖异构酶有严格赖金属离子的特性，需要金属离子作为激活因子来显示活性甚至提高酶活性；进而促进葡萄糖转变为果糖，而且金属离子除对葡萄糖异构酶有激活作用外，还对D-阿洛酮糖3-差向异构酶和阿拉伯糖异构酶有促进催化作用，减少了D-阿洛酮糖3差向异构酶转化阿洛酮糖和阿拉伯糖异构酶转化塔格糖时必需金属催化剂的添加。
进一步，本发明中过滤的两种固定化酶可重复利用，经过采用DEAE Sepharose(二乙氨基乙基琼脂糖)一种弱碱性阴离子交换树脂的分离提纯后得到的副产物(葡萄糖和果糖)可按比例加入猕猴桃汁做反应底物循环利用，提高了副产物和酶的利用率
附图说明
图1为本发明的工艺流程图。
图2为实施例一猕猴桃果汁中葡萄糖、果糖、半乳糖的利用情况及阿洛酮糖和塔格糖生成的含量分析图；
图3为实施五个案例和对比例一生成阿洛酮糖、塔格糖的含量分析对比图。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
如图1所示，本发明突破果糖为单一底物的束缚，利用猕猴桃果汁中的多种单糖，对D-阿洛酮糖3-差向异构酶和葡萄糖异构酶进行共同固定化，使葡萄糖连续异构成阿洛酮糖。并且同时加入固定化阿拉伯糖异构酶，以果汁中的半乳糖为底物生产塔格糖。通过分离纯化后获得含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁。此技术生产的猕猴桃果汁热量大大降低，实现减糖的同时也保持整体口感和品质。
实施例一：
(a)双酶固定化
采用阴离子交换树脂对葡萄糖异构酶与D-阿洛酮糖3-差向异构酶混合的混合酶液A进行双酶固定化；
先将阴离子交换树脂在去离子水中浸泡洗涤三次，直到洗脱液中检测不到明显色素。随后，用质量分数为2％盐酸洗涤，然后用质量分数为1％的氢氧化钠去除其他杂质，pH调整为8.0，储存在蒸馏水中。取100g阴离子交换树脂加入100ml混合酶液中(混合酶液中两种酶的添加质量比例为1:1)，以100r/min、4℃旋转固定化酶5h。加入200ml PBS缓冲液洗涤，采用SDS-PAGE电泳分析直至滤液中无蛋白，放入干燥器中干燥，4℃保存，得到双酶固定化后的混合酶液B。
(b)加入金属离子激活剂
以成熟猕猴桃经过去皮、榨汁、离心后得到的猕猴桃汁为底物，加入金属离子硫酸锰1.0mmol/L，在猕猴桃汁中添加量为2g/L。
(c)酶解
再在加入激活剂的猕猴桃汁中加入与葡萄糖异构酶与D-阿洛酮糖3-差向异构酶混合的混合酶液A和固定化阿拉伯糖异构酶进行异构化反应得到混合糖液。所述猕猴桃汁与混合酶液A的重量份比为4:1，混合酶液A中的葡萄糖异构酶和D-阿洛酮糖3-差向异构酶的质量比例为1：1；所述猕猴桃汁与固定化阿拉伯糖异构酶的重量份比为3:1。
异构化反应的条件为采用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调节反应体系的pH＝7.5，异构温度为60℃，在90r/min搅拌反应14h；
(d)分离提纯、杀菌
得到的混合糖液C进行过滤、脱色、离交和杀菌，得到含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁。步骤(d)中过滤的两种固定化酶可重复利用，经过采用DEAE Sepharose(二乙氨基乙基琼脂糖)一种弱碱性阴离子交换树脂的分离提纯后得到的副产物(葡萄糖和果糖)可按比例加入猕猴桃汁做反应底物循环利用，提高了副产物和酶的利用率。
实施例二：
(a)双酶固定化
采用阴离子交换树脂对葡萄糖异构酶与D-阿洛酮糖3-差向异构酶混合的混合酶液A进行双酶固定化；
先将阴离子交换树脂在去离子水中浸泡洗涤三次，直到洗脱液中检测不到明显色素。随后，用质量分数为2％盐酸洗涤，然后用质量分数为1％的氢氧化钠去除其他杂质，pH调整为9.0，储存在蒸馏水中。取100g阴离子交换树脂加入100ml混合酶液中(混合酶液中两种酶的添加质量比例为1:1)，以100r/min、4℃旋转固定化酶5h。加入200ml PBS缓冲液洗涤，采用SDS-PAGE电泳分析直至滤液中无蛋白，放入干燥器中干燥，4℃保存，得到双酶固定化后的混合酶液B。
(b)加入金属离子激活剂
以成熟猕猴桃经过去皮、榨汁、离心后得到的猕猴桃汁为底物，加入金属离子激活剂硫酸镁1.0mmol/L，在猕猴桃汁中添加量为2g/L。
(c)酶解
再在加入激活剂的猕猴桃汁中加入与葡萄糖异构酶与D-阿洛酮糖3-差向异构酶混合的混合酶液A和固定化阿拉伯糖异构酶进行异构化反应得到混合糖液。所述猕猴桃汁与混合酶液A的重量份比为1:1，混合酶液A中的葡萄糖异构酶和D-阿洛酮糖3-差向异构酶的质量比例为1：1；所述猕猴桃汁与固定化阿拉伯糖异构酶的重量份比为3:1。
异构化反应的条件为采用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调节反应体系的pH＝7.5，异构温度为50℃，在90r/min搅拌反应6h；
(d)分离提纯、杀菌
得到的混合糖液C进行过滤、脱色、离交和杀菌，得到含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁。
实施例三：
(a)双酶固定化
采用阴离子交换树脂对葡萄糖异构酶与D-阿洛酮糖3-差向异构酶混合的混合酶液A进行双酶固定化；
先将阴离子交换树脂在去离子水中浸泡洗涤三次，直到洗脱液中检测不到明显色素。随后，用质量分数为2％盐酸洗涤，然后用质量分数为1％的氢氧化钠去除其他杂质，pH调整为8.5，储存在蒸馏水中。取100g阴离子交换树脂加入100ml混合酶液中(混合酶液中两种酶的添加质量比例为1:1)，以100r/min、4℃旋转固定化酶5h。加入200ml PBS缓冲液洗涤，采用SDS-PAGE电泳分析直至滤液中无蛋白，放入干燥器中干燥，4℃保存，得到双酶固定化后的混合酶液B。
(b)加入金属离子激活剂
以成熟猕猴桃经过去皮、榨汁、离心后得到的猕猴桃汁为底物，加入金属离子激活剂硫代硫酸钠1.0mmol/L，在猕猴桃汁中添加量为2g/L。
(c)酶解
再在加入激活剂的猕猴桃汁中加入与葡萄糖异构酶与D-阿洛酮糖3-差向异构酶混合的混合酶液A和固定化阿拉伯糖异构酶进行异构化反应得到混合糖液。所述猕猴桃汁与混合酶液A的重量份比为3:1，混合酶液A中的葡萄糖异构酶和D-阿洛酮糖3-差向异构酶的质量比例为1:1；所述猕猴桃汁与固定化阿拉伯糖异构酶的重量份比为3:1。
异构化反应的条件为采用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调节反应体系的pH＝7.5，异构温度为55℃，在90r/min搅拌反应9h；
(d)分离提纯、杀菌
得到的混合糖液C进行过滤、脱色、离交和杀菌，得到含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁。
实施例四：
与实施例一步骤(d)中过滤出的两种混合固定化酶用清水洗涤2次，回收重复使用，其余步骤与实施例一相同。
实施例五：
以实施例一步骤(d)中分离纯化混合糖液后得副产物糖液(含葡萄糖和果糖)，与猕猴桃汁1:2混合作为底物，其余步骤与实施例一相同。
对比例一：
(a)不使用固定化酶，直接使用葡萄糖异构酶、D-阿洛酮糖3-差向异构酶和阿拉伯糖异构酶，以及硫酸锰激活剂。
(b)猕猴桃汁与三种混合酶的重量份比为4:1进行酶促反应，pH＝7.5，温度为60℃，90r/min搅拌反应14h。
(c)得到的混合糖液进行过滤、脱色、离交和杀菌，得到含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁。
实施例六
(a)双酶固定化
采用阴离子交换树脂对葡萄糖异构酶与D-阿洛酮糖3-差向异构酶混合的混合酶液A进行双酶固定化；
先将阴离子交换树脂在去离子水中浸泡洗涤五次，直到洗脱液中检测不到明显色素。随后，用质量分数为2％盐酸洗涤，然后用质量分数为1％的氢氧化钠去除其他杂质，pH调整为8.0，储存在蒸馏水中。取80g阴离子交换树脂加入150ml混合酶液中(混合酶液中两种酶的添加质量比例为1:1)，以80r/min、4℃旋转固定化酶8h。加入150ml PBS缓冲液洗涤至滤液中无蛋白，放入干燥器中干燥，4℃保存，得到双酶固定化后的混合酶液B。
(b)加入金属离子激活剂
以成熟猕猴桃经过去皮、榨汁、离心后得到的猕猴桃汁为底物，加入金属离子激活剂亚硫酸氢钠1.0mmol/L，在猕猴桃汁中添加量为2g/L。
(c)酶解
再在加入激活剂的猕猴桃汁中加入与葡萄糖异构酶与D-阿洛酮糖3-差向异构酶混合的混合酶液A和固定化阿拉伯糖异构酶进行异构化反应得到混合糖液。所述猕猴桃汁与混合酶液A的重量份比为2:1，混合酶液A中的葡萄糖异构酶和D-阿洛酮糖3-差向异构酶的质量比例为1：1；所述猕猴桃汁与固定化阿拉伯糖异构酶的重量份比为3:1。
异构化反应的条件为采用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调节反应体系的pH＝7.1，异构温度为60℃，在100r/min搅拌反应10h；
(d)分离提纯、杀菌
得到的混合糖液C进行过滤、脱色、离交和杀菌，得到含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁。
实施例七
(a)双酶固定化
采用阴离子交换树脂对葡萄糖异构酶与D-阿洛酮糖3-差向异构酶混合的混合酶液A进行双酶固定化；
先将阴离子交换树脂在去离子水中浸泡洗涤五次，直到洗脱液中检测不到明显色素。随后，用质量分数为2％盐酸洗涤，然后用质量分数为1％的氢氧化钠去除其他杂质，pH调整为9.0，储存在蒸馏水中。取150g阴离子交换树脂加入200ml混合酶液中(混合酶液中两种酶的添加质量比例为1:1)，以100r/min、4℃旋转固定化酶6h。加入100ml PBS缓冲液洗涤至滤液中无蛋白，放入干燥器中干燥，4℃保存，得到双酶固定化后的混合酶液B。
(b)加入金属离子激活剂
以成熟猕猴桃经过去皮、榨汁、离心后得到的猕猴桃汁为底物，加入金属离子激活剂亚硫酸氢钠1.0mmol/L，在猕猴桃汁中添加量为2g/L。
(c)酶解
再在加入激活剂的猕猴桃汁中加入与葡萄糖异构酶与D-阿洛酮糖3-差向异构酶混合的混合酶液A和固定化阿拉伯糖异构酶进行异构化反应得到混合糖液。所述猕猴桃汁与混合酶液A的重量份比为3:1，混合酶液A中的葡萄糖异构酶和D-阿洛酮糖3-差向异构酶的质量比例为1：1；所述猕猴桃汁与固定化阿拉伯糖异构酶的重量份比为3:1。
异构化反应的条件为采用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调节反应体系的pH＝7.8，异构温度为55℃，在100r/min搅拌反应8h；
(d)分离提纯、杀菌
得到的混合糖液C进行过滤、脱色、离交和杀菌，得到含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁。
综上所述，本发明采用阴离子交换树脂对葡萄糖异构酶和D-阿洛酮糖3-差向异构酶进行双酶固定化，而对于固定化阿拉伯糖异构酶则是直接利用购买渠道获得。如图2和图3所示通过采用不同类型但浓度相同的激活剂，改变底物与固定酶的混合比例，异构温度及反应时间得到较高产量的阿洛酮糖和塔格糖，4:1的底物与固定酶的比例，60℃下90r/min搅拌反应14h时阿洛酮糖和塔格糖的转化效率较高；而通过循环利用固定化酶或利用副产物作为部分底物再次进行该工艺后，仍然有阿洛酮糖和塔格糖的转化，但其转化率明显降低。因此可以通过循环使用固定化酶对底物或者副产物进行利用，避免底物浪费，生产更多的阿洛酮糖和塔格糖，使得最终产品中阿洛酮糖和塔格糖总含量与总果汁含量比为1:5。通过实施对比例一，即不使用固定化酶，直接加入相关酶催化猕猴桃汁产阿洛酮糖和塔格糖，结果有阿洛酮糖和塔格糖的生产，但是转化效率较低，产量也较低，同时副产物(葡萄糖)也较多，影响功能性果汁中的糖含量比例。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制；凡本行业的普通技术人员均可按说明书附图所示和以上所述而顺畅地实施本发明；但是,凡熟悉本专业的技术人员在不脱离本发明技术方案范围内，利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时,凡依据本发明的实质技术对以上实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变等，均仍属于本发明的技术方案的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁的制备方法，其特征在于，包括，
S1，采用阴离子交换树脂对葡萄糖异构酶与D-阿洛酮糖3-差向异构酶混合的混合酶液A进行双酶固定化反应后，得到混合酶液B；
S2，以猕猴桃汁为底物，加入金属离子激活剂，再加入混合酶液B和固定化阿拉伯糖异构酶进行异构化反应，得到混合糖液C；对混合糖液C进行过滤、脱色、离交和杀菌后，得到含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁。
2.根据权利要求1所述的一种含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁的制备方法，其特征在于，所述猕猴桃汁与混合酶液A的重量份比为1～4:1，混合酶液A中的葡萄糖异构酶和D-阿洛酮糖3-差向异构酶的质量比例为1：1。
3.根据权利要求1所述的一种含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁的制备方法，其特征在于，所述猕猴桃汁与固定化阿拉伯糖异构酶的重量份比为3:1，金属离子激活剂在猕猴桃汁中添加量为2g/L；所述金属离子激活剂的浓度为1.0mmol/L。
4.根据权利要求1所述的一种含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁的制备方法，其特征在于，S1的具体过程为：
将预处理后的阴离子交换树脂加入葡萄糖异构酶和D-阿洛酮糖3-差向异构酶的混合酶液A中，以搅拌速度为80～120r/min，温度为4℃下旋转固定化酶5～8h后，再加入100～200ml PBS缓冲液对反应物进行过滤洗涤，并采用SDS-PAGE电泳分直至反应物的滤液中无蛋白后，随后将反应物进行干燥，并于温度为4℃下保存，得到双酶固定化后的混合酶液B。
5.根据权利要求4所述的一种含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁的制备方法，其特征在于，所述预处理后的阴离子交换树脂与混合酶液A的添加量比为80～150g：100～200ml；PBS缓冲液与混合酶液A的添加量比为100～200ml：100～200ml。
6.根据权利要求4所述的一种含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁的制备方法，其特征在于，阴离子交换树脂的预处理过程为：先将阴离子交换树脂在去离子水中浸泡洗涤数次，直到洗脱液中检测不到明显色素；再用浓度为2％盐酸溶液洗涤阴离子交换树脂，然后用质量分数为1％的氢氧化钠溶液去除阴离子交换树脂上的杂质，调节pH为8.0～9.0后，储存在蒸馏水中，得到预处理后的阴离子交换树脂。
7.根据权利要求1所述的一种含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁的制备方法，其特征在于，所述异构化反应的条件为采用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调节反应体系的pH＝7.1～7.8，异构温度为50～60℃，在80～100r/min搅拌反应6～14h。
8.根据权利要求1所述的一种含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁的制备方法，其特征在于，所述金属离子激活剂采用硫酸镁、硫酸锰、硫代硫酸钠和亚硫酸氢钠中的一种。
9.根据权利要求1所述的一种含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁的制备方法，其特征在于，所述阴离子交换树脂采用二乙氨基乙基琼脂糖。
10.一种含阿洛酮糖和塔格糖的功能性猕猴桃汁，基于权利要求1-9任意一项所述的制备方法制得。
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