CN116267783A - 一种血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于模型构建技术领域，公开了一种血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法，血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法包括：于支架植入前三天利用阿司匹林与氯比格雷进对小鼠进行联合抗凝；于支架植入前半小时通过尾静脉注射肝素抗凝；将0.8mm*2.5mm的316L的BMS加载在1.20mm*8mm的球囊输送系统上，并阻断腹主动脉和左右髂动脉的血流；从腹主动脉‑髂动脉分叉处切口植入支架，并进行后处理。本发明成功构建了小鼠血管支架植入模型，同时本发明构建的小鼠血管支架植入模型能够通过Enface染色或电解支架后切片免疫组化/免疫荧光后共聚焦显微镜检测VSMC对血管内膜修复的贡献及命运变化。
Description
技术领域
本发明属于模型构建技术领域，尤其涉及一种血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法。
背景技术
目前，针对血管损伤后血管修复的基础研究较多，虽然发现了许多促进血管修复的活化因子，但是在血管损伤及再生的研究领域，缺乏固定的小鼠模型和造模的方法，很多学者使用兔子/小香猪等作为血管损伤研究的载体，但是类似动物体积较大，成本高，繁殖困难，所以饲养数量受到一定限制，无法开展样本量较大的研究；同时大动物的转基因技术尚在攻克，难以从机理层面进一步探究血管损伤修复过程。老鼠模型在生物医学研究领域得到了广泛的应用，鼠类体积相对较小，繁殖快，饲养条件及饲养成本低，很多成熟的老鼠模型对相关领域的同质化研究起到了至关重要的作用。所以，探索一种造模方法简单、模型性能稳定的血管损伤后支架植入老鼠模型，对血管领域的探索和研究意义。
通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有的血管支架植入模型体积较大，成本高，繁殖困难，机理探究浅显，无法应用于样本量较大的研究中；现有技术尚没有小鼠血管支架植入模型构建的方法。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法。
本发明是这样实现的，一种血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法，所述血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法包括：
步骤一，于支架植入前三天对小鼠进行联合抗凝；于支架植入前半小时通过尾静脉注射肝素抗凝；
步骤二，将BMS/DES加载于球囊输送系统上，并阻断腹主动脉和左右髂动脉的血流；植入支架，并进行后处理。
进一步，所述步骤一中，进行联合抗凝包括：利用阿司匹林与氯比格雷进行联合抗凝。
进一步，所述血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法还包括：支架植入时，小鼠全程呼吸麻醉。
进一步，所述步骤二中，将BMS/DES加载于球囊输送系统上包括：
将0.8mm*2.5mm的316L的BMS/DES加载在1.20mm*8mm的球囊输送系统上。
进一步，所述步骤二中，阻断腹主动脉和左右髂动脉的血流包括：
利用9-0手术结扎线阻断腹主动脉和左右髂动脉血流后。
进一步，所述步骤三中，植入支架包括：从右髂动脉靠近腹主动脉分叉处切口植入支架。
进一步，所述步骤三中，进行后处理包括：10atm维持30s后撤出球囊，用11-0手术线缝合血管切口，恢复血流。
进一步，所述血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法进一步包括：
于支架植入后7天和28天心脏灌注肝素化生理盐水冲净残留血液，利用固定剂在体固定30min后取出支架段血管样本。
进一步，所述固定剂为4％的多聚甲醛。
进一步，所述取出支架段血管样本之后还需进行：利用OCT检测血管支架内再狭窄，血栓发生以及新生内膜修复情况；同时，利用Enface染色或电解支架后切片免疫组化/免疫荧光后共聚焦显微镜检测VSMC。
结合上述的技术方案和解决的技术问题，请从以下几方面分析本发明所要保护的技术方案所具备的优点及积极效果为：
第一、针对上述现有技术存在的技术问题以及解决该问题的难度，紧密结合本发明的所要保护的技术方案以及研发过程中结果和数据等，详细、深刻地分析本发明技术方案如何解决的技术问题，解决问题之后带来的一些具备创造性的技术效果。具体描述如下：
本发明构建的小鼠血管支架植入模型能够通过Enface染色或电解支架后切片免疫组化/免疫荧光后共聚焦显微镜检测VSMC对血管内膜修复的贡献及命运变化；OCT分析血管支架内再狭窄，血栓发生以及新生内膜修复情况。
第二，把技术方案看做一个整体或者从产品的角度，本发明所要保护的技术方案具备的技术效果和优点，具体描述如下：
本发明提供的模型构建成功后的ApoE-/-小鼠，11-0号缝合线限制腹主动脉，左右髂动脉血流后经右髂动脉作动脉切开术，利用自制导鞘(1.0mm内径薄管)将加载特制小鼠用支架输送到目的血管处。负压取出支架后，缝合右髂动脉切口。手术时长约为30-45分钟，单人显微镜下操作即可。本发明拥有术中时间短、手术难度低、建模成功率高、整体费用至少减半等优势。
第三，作为本发明的权利要求的创造性辅助证据，还体现在以下几个重要方面：
本发明的技术方案填补了国内外业内技术空白：国外已有的小鼠支架植入模型采用的同窝小鼠A腹主动脉植入后移植至同窝小鼠B的颈总动脉，手术时间约2小时。手术时间长，存活率低，并且至少需要两倍的动物数量。同时，移植后的血管所处血液环境与正常支架植入流程不一致，无法复现临床效果。
本设计将血管支架植入至小鼠腹主动脉，与临床外周动脉支架植入流程近乎一致，并可在一定程度上模拟脑血管/冠脉血管支架植入的过程。手术时长仅为30-45分钟，在微血管缝合比较熟练的情况下术后存活率和成功率均在90％以上。
附图说明
图1是本发明实施例提供的血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法流程图；
图2是本发明实施例提供的恢复血流后的支架段血管示意图；
图3是本发明实施例提供的目前已有文献的建模方法。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
如图1所示，本发明实施例提供的血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法包括：
S101，于支架植入前三天利用阿司匹林与氯比格雷进对小鼠进行联合抗凝；于支架植入前半小时通过尾静脉注射肝素抗凝；
S102，将0.8mm*2.5mm的316L的BMS加载在1.20mm*8mm的球囊输送系统上，并阻断腹主动脉和左右髂动脉的血流；
S103，从腹主动脉-髂动脉分叉处切口植入支架，并进行后处理。
本发明实施例提供的血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法还包括：支架植入时，小鼠全程呼吸麻醉。
步骤S103中，本发明实施例提供的进行后处理包括：10atm维持30s后撤出球囊，用11-0手术线缝合切口，恢复血流。
本发明实施例提供的血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法进一步包括：
于支架植入后7天和28天心脏灌注肝素化生理盐水冲净残留血液，利用4％的多聚甲醛在体固定30min后取出支架段血管样本。
本发明实施例提供的取出支架段血管样本之后还需进行：利用Enface染色或电解支架后切片免疫组化/免疫荧光后共聚焦显微镜检测VSMC。
本发明实施例提供的血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法包括：TaglnCre/+；Rosa26tdTomato/+；ApoE-/-小鼠术前3天进行阿司匹林+氯比格雷(5mg/kg/天+1.5mg/kg/天)的联合抗凝，术前半小时尾静脉注射肝素抗凝，术中全程呼吸麻醉。0.8mm*2.5mm的316LBMS加载在1.20mm*8mm的球囊输送系统上，9-0手术结扎线阻断腹主动脉和左右髂动脉血流后。从腹主动脉-髂动脉分叉处切口植入支架，10atm维持30s后撤出球囊，用11-0手术线缝合切口，恢复血流，植入后效果。于支架植入后7天和28天心脏灌注肝素化生理盐水冲净残留血液，4％多聚甲醛在体固定30min后取出支架段血管样本，Enface染色或电解支架后切片免疫组化/免疫荧光后共聚焦显微镜检测VSMC对血管内膜修复的贡献及命运变化。
本发明提供的球囊输送系统可成功加载小鼠用支架植入至ApoE-/-小鼠腹主动脉。
本发明提供的模型构建成功后的ApoE-/-小鼠，11-0号缝合线限制腹主动脉，左右髂动脉血流后经右髂动脉作动脉切开术，利用自制导鞘(1.0mm内径薄管)将加载特制小鼠用支架输送到目的血管处。负压取出支架后，缝合右髂动脉切口。恢复血流后的支架段血管即为图2所示，手术时长约为30-45分钟，单人显微镜下操作即可。
目前已有文献的建模方法见图3(ANovelMouseModelofIn-Stent Restenosis,Atherosclerosis.2010April；209(2):359–366.)，方法手术难度高，且需要将同窝小鼠A的胸主动脉移植至小鼠B的颈总动脉，成功和成活率低的同时也会造成不必要的资源浪费。
相较于已有的建模方法，本发明拥有术中时间短、手术难度低、建模成功率高、整体费用至少减半等优势。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法包括：
步骤一，于支架植入前三天对小鼠进行联合抗凝；于支架植入前半小时通过尾静脉注射肝素抗凝；
步骤二，将BMS加载于球囊输送系统上，并阻断腹主动脉和左右髂动脉的血流；植入支架，并进行后处理。
2.如权利要求1所述血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述步骤一中，进行联合抗凝包括：利用阿司匹林与氯比格雷进行联合抗凝。
3.如权利要求1所述血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法还包括：支架植入时，小鼠全程呼吸麻醉。
4.如权利要求1所述血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述步骤二中，将BMS加载于球囊输送系统上包括：
将0.8mm*2.5mm的316L的BMS加载在1.20mm*8mm的球囊输送系统上。
5.如权利要求1所述血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述步骤二中，阻断腹主动脉和左右髂动脉的血流包括：
利用9-0手术结扎线阻断腹主动脉和左右髂动脉血流后。
6.如权利要求1所述血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述步骤三中，植入支架包括：从腹主动脉-髂动脉分叉处切口植入支架。
7.如权利要求1所述血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述步骤三中，进行后处理包括：10atm维持30s后撤出球囊，用11-0手术线缝合切口，恢复血流。
8.如权利要求1所述血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法进一步包括：
于支架植入后7天和28天心脏灌注肝素化生理盐水冲净残留血液，利用固定剂在体固定30min后取出支架段血管样本。
9.如权利要求8所述血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述固定剂为4％的多聚甲醛。
10.如权利要求8所述血管修复中血管支架植入小鼠模型的构建方法，其特征在于所述取出支架段血管样本之后还需进行：利用Enface染色或电解支架后切片免疫组化/免疫荧光后共聚焦显微镜检测VSMC；OCT分析血管支架内再狭窄，血栓发生以及新生内膜修复情况。
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